ES2346686T3

ES2346686T3 - Obtencion de monogliceridos a partir de trigliceridos por alcoholisis con empleo de lipasa de thermomyces lanuginosus, que es activada por medio de sales alcalinas.

Info

Publication number: ES2346686T3
Application number: ES06703801T
Authority: ES
Inventors: Ulrich Schorken; Sabine Both; Frank Bongardt; Diana Stuhlmann
Original assignee: Cognis IP Management GmbH
Current assignee: Cognis IP Management GmbH
Priority date: 2005-01-19
Filing date: 2006-01-10
Publication date: 2010-10-19
Anticipated expiration: 2026-01-10
Also published as: JP2008526265A; ATE470720T1; CA2595235C; WO2006077022A2; JP4989489B2; WO2006077022A3; BRPI0606620B1; EP1838861A2; US7935508B2; EP1838861B1; DE502006007160D1; BRPI0606620A2; US20080045606A1; DE102005002711A1; CA2595235A1

Abstract

Procedimiento para la obtención de monoglicéridos, caracterizado porque se hacen reaccionar por vía enzimática triglicéridos en presencia de alcoholes lineales o ramificados con un número de átomos de carbono comprendido entre 1 y 8 átomos de carbono con una lipasa de Thermomyces lanuginosus, que se activa por medio del aporte de sales alcalinas.

Description

Obtención de monoglicéridos a partir de triglicéridos por alcoholisis con empleo de lipasa de Thermomyces lanuginosus, que es activada por medio de sales alcalinas.

Campo de la invención

La invención se encuentra en el campo de los glicéridos y se refiere a un procedimiento para llevar a cabo la obtención de monoglicéridos por medio de una catálisis enzimática.

Estado de la técnica

En las síntesis químicas y bioquímicas son empleadas cada vez más enzimas a modo de catalizadores. De este modo, en muchos casos son empleadas ya las hidrolasas en procedimientos industriales, especialmente las lipasas (EC 3.1.1.3) para llevar a cabo la disociación de las grasas debido a que las condiciones de la reacción son frecuentemente suaves.

Estos enzimas son producidos por diversos microorganismos. Para llevar a cabo el aislamiento de los enzimas se efectúa un costoso procedimiento de purificación, una vez verificada la fermentación de los microorganismos,

La efectividad de estos catalizadores se enfrenta, muchas veces, con los elevados costes de la producción y del aislamiento de tal manera, que los grupos de investigación buscan permanentemente aumentar el rendimiento en enzimas o elevar la productividad de los enzimas.

Los métodos químicos clásicos para llevar a cabo la obtención de los monoglicéridos discurren a través de una glicerolisis de los triglicéridos, catalizada por medio de bases, obteniéndose de forma típica un rendimiento comprendido entre un 40 y un 60% de monoglicérido referido a los glicéridos totales. Se lleva a cabo otro enriquecimiento, hasta un contenido en monoglicérido > 90%, por medio de métodos físicos de separación tales como la destilación molecular o la cristalización.

En la literatura han sido descritas diversas rutas enzimáticas, que son adecuadas para llevar a cabo la obtención de monoglicéridos: 1) la síntesis enzimática a partir de ácidos grasos y de glicerina; 2) la glicerolisis enzimática a partir de triglicéridos y de glicerina, que corresponden al procedimiento químico; 3) la hidrólisis o la alcoholisis 1,3-regioselectiva de los triglicéridos. Se encuentran resúmenes correspondientes a los procedimientos por ejemplo en las publicaciones ((a) Recent Res. Devel. Oil Chem., 3 (1999), 93-106; (b) Hydrolases in Organic Synthesis, Wiley-VCH (1999), eds. Bornscheuer & Kazlaukas).

La síntesis enzimática de los monoglicéridos solamente funciona bien cuando se retira el agua del equilibrio de la reacción, lo cual se consigue por medio del aporte de tamices moleculares o por medio de una reacción bajo vacío. Por otra parte, para conseguir una buena síntesis son necesarios solubilizantes ((a) Recent Res. Devel. Oil Chem., 3 (1999)). Por lo tanto, la síntesis enzimática de los monoglicéridos no constituye una alternativa económica a los procedimientos químicos. La glicerolisis enzimática conduce a establecimientos del equilibrio similares a los de la glicerolisis química para llevar a cabo la obtención de monoglicéridos. Por lo tanto, para una síntesis de monoglicéridos enriquecidos (contenido > 60%) se requiere también un enriquecimiento por medio de una destilación o de una cristalización. De este modo, este procedimiento tampoco constituye una alternativa económica de los procedimientos químicos.

Las publicaciones WO 9013656 y WO 9004033 (Enzytech Inc.) así como US 5935828 y US 5316927 (Opta Food Ingredients Inc.) describen la obtención de monoglicéridos a través de la alcoholisis enzimática con diversos alcoholes y poca cantidad de agua en la carga. Se emplean lipasas en forma pulverulenta o inmovilizada. En los ejemplos son empleadas las lipasas aproximadamente en un 20% en peso con relación al triglicérido y el componente alcohólico es empleado con un exceso de 20 veces.

Las publicaciones WO 9116441, WO 9116442 y US 5116745 describen procedimientos, en los cuales se lleva a cabo una alcoholisis y una hidrólisis mixta regioselectiva para dar los 1,2-diglicéridos y los 2-monoglicéridos, con empleo de lipasas, en presencia de un disolvente, de un alcohol y de un tampón acuoso.

La publicación EP 407959 describe un procedimiento para llevar a cabo la obtención de monoésteres por medio de lipasas inmovilizadas termoestables en presencia de alcoholes secundarios o terciarios a título de solubilizante.

La publicación WO 0206505 (Nippon Suisan Kaisha Ltd) describe la alcoholisis regioselectiva con lipasas inmovilizadas con un elevado exceso de alcohol y con una elevada concentración del enzima empleado, seguido de una reesterificación del monoglicérido.

Las publicaciones JP 60102192 y JP 03187385 (Meito Sangyo Co. Ltd.) describen la hidrólisis de los triglicéridos con lipasas alcalinas con aporte de sales alcalinas. Se trata de una lipasa que no es activa bajo condiciones alcalinas.

La publicación JP 03103499 (Meito Sangyo Co. Ltd.) describe la alcoholisis regioselectiva de los triglicéridos PUFA con isobutanol en presencia de una lipasa alcalina.

La obtención enzimática de los monoglicéridos ha sido descrita ya en múltiples ocasiones pero, sin embargo, en todos los documentos, que han sido citados precedentemente, se requieren disolventes, el agua de la reacción tiene que ser retirada de forma costosa o las lipasas son muy especiales o bien están inmovilizadas. Como consecuencia de que las velocidades de reacción son en parte bajas, en comparación con las síntesis químicas clásicas, se requieren tiempos de reacción prolongados y, por lo tanto, elevados grados de utilización de la capacidad o elevadas concentraciones de alcohol que debe hacerse reaccionar o de lipasas con objeto de conseguir un rendimiento elevado en los monoglicéridos deseados. Aún cuando sean empleadas lipasas económicas, esto conduce a procedimientos que hacen que sea imposible un proceso industrial simplemente por motivos de costes.

La tarea de la presente invención consiste ahora en encontrar una variante económica con objeto de aumentar los rendimientos en monoglicéridos a partir de poliésteres tales como, por ejemplo, los triglicéridos, en el caso de las alcoholisis enzimáticas, y mantener tan bajo como fuera posible el contenido en enzima.

Descripción de la invención

El objeto de la invención es un procedimiento para la obtención de monoglicéridos, según el cual se hacen reaccionar por vía enzimática triglicéridos en presencia de alcoholes lineales o ramificados con un número de átomos de carbono comprendido entre 1 y 8 átomos de carbono con una lipasa procedente de Thermomyces lanuginosus, que es activada por medio del aporte de sales alcalinas.

De manera sorprendente, se ha encontrado que el aporte de sales alcalinas puede activar a la lipasa de Thermomyces lanuginosus y que, por lo tanto, puede alcanzarse un rendimiento en monoglicéridos con ocasión de la alcoholisis de los triglicéridos mayor que en comparación con el de los procedimientos conocidos. En el procedimiento de conformidad con la invención se disocia un triglicérido en presencia de un alcohol en un 2-monoglicérido y dos ésteres de ácidos grasos.

La reacción puede llevarse a cabo de una manera muy económica por medio del empleo de pequeñas cantidades de lipasa. La reacción se lleva a cabo directamente con el concentrado enzimático con aporte de una sal inorgánica alcalina, que provoque una fuerte activación del enzima. De este modo, se alcanza una buena conversión con una baja dosificación enzimática incluso sin estabilización del enzima por inmovilización. No se requiere el aporte de disolventes.

La alcoholisis se lleva a cabo a temperaturas comprendidas entre 10º y 40ºC, de manera preferente comprendidas entre 10º y 30ºC y, de manera especialmente preferente, se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre 15º y 25ºC.

La reacción se lleva a cabo con un contenido en agua comprendido entre un 0,1 y un 10% en peso, de manera preferente comprendido entre un 0,1 y un 5% en peso y, de manera especialmente preferente, comprendido entre un 0,1 y un 2% en peso, referido a la cantidad del triglicérido, estando incluido el contenido en agua de la preparación enzimática líquida. La reacción funciona también con mayores contenidos en agua pero, desde luego, aumenta el contenido en ácido graso libre formado. El ácido graso libre no es deseable puesto que puede intervenir en una reesterificación durante la separación por destilación de los ésteres y de la mezcla de glicéridos y, por lo tanto, se reduce el rendimiento en monoglicérido.

El tiempo de la reacción está comprendido de conformidad con la invención, de manera preferente, entre 12 y 48 horas en función de la concentración enzimática empleada. De manera preferente, se mezclan todos los reactivos y la reacción se inicia por medio del aporte de la preparación enzimática.

El aporte del componente alcohólico, preferentemente el metanol y/o el etanol, preferentemente el etanol, se lleva a cabo bien por completo al inicio o por medio de una dosificación durante el espacio de tiempo que dure la reacción.

La cantidad de alcohol empleada en la carga es variable, siendo como mínimo de 2 moles de alcohol por 1 mol de aceite, siendo como máximo de un 75% en peso de alcohol y de un 25% en peso de aceite.

En otra etapa del procedimiento de conformidad con la invención se desactiva la lipasa por calentamiento y a continuación se separa por filtración en caso dado la lipasa precipitada, pudiéndose conseguir, junto a la lipasa precipitada, la separación de aditivos o de componentes de formulación de la preparación enzimática, que ha sido empleada. Al mismo tiempo, puede eliminarse el componente alcohólico por medio de una destilación, por ejemplo a 80ºC y a un vacío de 100 mbares y puede obtenerse una mezcla constituida por el éster de alquilo y por el monoglicérido. El éster de alquilo y el monoglicérido pueden ser separados por destilación en una etapa subsiguiente, por ejemplo por medio de un evaporador de capa delgada o por medio de una columna. Las condiciones de la reacción son, por ejemplo, de 175ºC y de un vacío de 0,3 mbares. El monoglicérido permanece en la cola.

Para el procedimiento, de conformidad con la invención, se ha revelado como especialmente adecuada la lipasa de Thermomyces lanuginosus (fabricante Novozymes, denominación Lipozyme TL1001 o lipolasa 100 EX). Se ha observado, con ayuda de datos experimentales, que el aporte de pequeñas cantidades de sales inorgánicas alcalinas aumenta de forma drástica la actividad enzimática de esta lipasa. De manera especial, la lipasa no inmovilizada es activada por medio de las sales alcalinas.

De manera preferente, es empleada una concentración inicial comprendida entre un 0,05 y un 2% de la preparación líquida, que puede ser adquirida en el comercio, en relación a la cantidad de triglicérido empleado. Estos preparados líquidos enzimáticos, que pueden ser adquiridos en el comercio, presentan en promedio una actividad enzimática de 100.000 U/ml. Se define una unidad enzimática U (enzyme units) como la cantidad de enzima que transforma un micromol de substrato por minuto.

Para el procedimiento, de conformidad con la invención, son empleadas, de manera preferente, sales inorgánicas alcalinas para llevar a cabo la activación de las lipasas, cuyas sales se eligen entre el grupo que está constituido por los hidróxidos, los carbonatos y los fosfatos del sodio, del potasio, del calcio, del magnesio y del amonio, previamente disueltos en agua. La cantidad de sales inorgánicas alcalinas para llevar a cabo la activación de las lipasas está comprendida, de conformidad con la invención, entre un 0,00001 y un 1% en peso, de manera preferente entre un 0,0001 y un 0,2% en peso referido a la cantidad del triglicérido. La cantidad empleada de aditivo básico depende de la cantidad de la preparación líquida enzimática empleada, que está tamponada así como de la fuerza de la base. Cuando se emplea el NaOH y < 0,5% de preparación líquida enzimática, la concentración inicial se encuentra en el intervalo inferior de la concentración, encontrándose en el intervalo superior de la concentración la cantidad de aditivo básico cuando se utiliza el Na_{2}CO_{3} y un 2% de preparación líquida enzimática.

De manera sorprendente, se consiguió la activación máxima de la lipasa de Thermomyces lanuginosus, cuando se aportaron a la preparación líquida enzimática, que puede ser adquirida en el comercio, sales tales como por ejemplo el fosfato trisódico, el carbonato de sodio, el hidróxido de sodio o el hidróxido de amonio en cantidades comprendidas entre un 0,0001 y un 0,2% en peso (referido al contenido en triglicérido). De manera sorprendente, se consiguió una velocidad de síntesis más rápida de los monoglicéridos que con la lipasa adsorbida sobre polipropileno. La activación de la lipasa es tan intensa, que no puede ser explicada solamente por el desplazamiento del pH en el medio de la reacción. Cuando es empleada bajo las mismas condiciones la lipasa de Thermomyces lanuginosus inmovilizada, no puede reconocerse una activación de intensidad parecida por medio del aporte de sal. Esta activación intensa es muy sorprendente puesto que se acepta, en general, que en medio pobre en agua únicamente puede conseguirse una elevada actividad con lipasas, que estén enlazadas sobre un soporte. Como consecuencia de esta intensa activación pueden ser eliminados los costosos procesos de inmovilización y esto conduce a un concepto simple de las instalaciones.

Una medida del valor del pH de la mezcla de los producto transformados muestra, así mismo, que el valor del pH se encuentra entre el intervalo neutro hasta ligeramente ácido, lo cual hace improbable una activación enzimática sólo por medio del desplazamiento del pH.

En el caso del procedimiento, de conformidad con la invención, son empleados de manera preferente triglicéridos de grasas y de aceites que tengan una elevada proporción en ácidos grasos monoinsaturados y/o poliinsaturados y que son elegidos entre el grupo constituido por el aceite de girasol, el aceite de colza, el aceite de distel, el aceite de soja, el aceite de linaza, el aceite de cacahuete, el sebo, el aceite de oliva, el aceite de ricino, el aceite de palma y los aceite usados tales como por ejemplo las grasas para freír usadas.

El aceite de cacahuete contiene en promedio (referido a los ácidos grasos) un 54% en peso de ácido oleico, un 24% en peso de ácido linoleico, un 1% en peso de ácido linolénico, un 1% en peso de ácido araquínico, un 10% en peso de ácido palmítico así como un 4% en peso de ácido esteárico. El punto de fusión está comprendido entre 2 y 3ºC.

El ácido de linaza contiene, de forma típica, un 5% en peso de ácido palmítico, un 4% en peso de ácido esteárico, un 22% en peso de ácido oleico, un 17% en peso de ácido linoleico y un 52% en peso de ácido linolénico. El índice de yodo está situado en el intervalo comprendido entre 155 y 205. El índice de saponificación está comprendido entre 188 y 196 y el punto de fusión se encuentra aproximadamente a -20ºC.

El aceite de oliva contiene, preponderantemente, ácido oleico. El aceite de palma contiene como componentes de ácidos grasos aproximadamente un 2% en peso de ácido mirístico, un 42% en peso de ácido palmítico, un 5% en peso de ácido esteárico, un 41% en peso de ácido oleico, un 10% en peso de ácido linoleico.

El aceite de colza contiene a título de componentes de ácidos grasos de forma típica aproximadamente un 48% en peso de ácido erúcico, un 15% en peso de ácido oleico, un 14% en peso de ácido linoleico, un 8% en peso de ácido linolénico, un 5% en peso de ácido icosénico, un 3% en peso de ácido palmítico, un 2% en peso de ácido hexadecenoico y un 1% en peso de ácido docosadienoico. El aceite de colza de nueva cosecha está enriquecido con relación a las partes insaturadas. Las proporciones típicas de ácidos grasos en este caso son un 0,5% en peso de ácido erúcico, un 63% en peso de ácido oleico, un 20% en peso de ácido linoleico, un 9% en peso de ácido linolénico 9% en peso, un 1% en peso de icosénico, un 4% en peso de ácido palmítico, un 2% en peso de ácido hexadecenoico y un 1% en peso de ácido docosadienoico.

El aceite de ricino está constituido entre un 80 y un 85% en peso por el glicérido del ácido ricinoleico, además están contenidos hasta aproximadamente un 7% en peso de glicéridos del ácido oleico, hasta un 3% en peso de glicéridos del ácido linoleico y aproximadamente hasta un 2% en peso de glicéridos del ácido palmítico y del ácido esteárico.

El aceite de soja contiene entre un 55 y un 65% en peso, con relación a todos los ácidos grasos, de ácidos grasos poliinsaturados, especialmente de ácido linoleico y de ácido linolénico. La situación es similar en el caso del aceite de girasol, cuyo espectro típico de ácidos grasos, referido al total de los ácidos grasos, se presenta de la manera siguiente: aproximadamente un 1% en peso de ácido mirístico, entre un 3 y un 10% en peso de ácido palmítico, entre un 14 y un 65% en peso de ácido oleico y entre un 20 y un 75% en peso de ácido linoleico.

Todos los datos anteriormente indicados sobre las proporciones de los ácidos grasos en los triglicéridos dependen, como se sabe, de la calidad de las materias primas y por lo tanto, pueden oscilar en cuanto a su valor numérico:

La composición de los ácidos grasos en la mezcla está dada por la correspondiente composición nativa de los ácidos grasos del aceite vegetal empleado así como por la correspondiente calidad de la materia prima a partir de la cual son preparados los ésteres de metilo y/o de etilo, de manera conocida.

Para el procedimiento, de conformidad con la invención, son empleados de manera preferente alcoholes lineales o ramificados a título de componentes alcohólicos, que presenten un número de átomos de carbono comprendido entre 1 y 8 átomos de carbono. Estos alcoholes pueden representar, de manera preferente, alcoholes primarios o secundarios. Como componentes alcohólicos preferentes son empleados el etanol o el 1-propanol. El contenido en alcohol está comprendido, de manera preferente, entre un 10 y un 75% en peso, referido al triglicérido empleado, de manera preferente se emplea entre un 15 y un 40% en peso. El contenido en monoglicérido depende de la cantidad de alcohol empleada.

En una forma preferente de realización del procedimiento de conformidad con la invención el alcohol puede ser separado, preferentemente por destilación. Por medio de esta etapa adicional del procedimiento se obtienen monoglicéridos en mezcla con ésteres de alquilo, que pueden ser empleados en la mezcla como aditivo lubrificante, como aditivo para combustibles o como componente emulsionante en artículos comestibles, en formulaciones cosméticas y/o en formulaciones farmacéuticas.

En otra forma preferente de realización del procedimiento, de conformidad con la invención, pueden ser separados de los monoglicéridos los ésteres de alquilo, preferentemente por medio de una destilación. Con ayuda de esta etapa adicional del procedimiento se obtienen monoglicéridos, que pueden ser empleados como aditivo lubrificante, como aditivo para combustibles o como componente emulsionante en artículos comestibles, en formulaciones cosméticas y/o en formulaciones farmacéuticas.

En la literatura se ha dado a conocer el empleo de diversos aditivos para combustibles. Los monoglicéridos y otros polioles parcialmente esterificados o eterificados (por ejemplo también glicolinonoésteres) son aportados como aditivos diésel, puesto que presentan una buena acción lubrificante. Las solicitudes de patente que describen tales aditivos son, por ejemplo, las publicaciones EP 0721492 (Infineum USA L.P.), WO 0119941 (Fina Research S.A.) o WO 0063322 (Pure Fuels USA Inc.). Las mezclas de glicéridos especiales con una elevada proporción en monoglicérido presentan buenas propiedades lubrificantes. De este modo, se ha podido observar, que los monoglicéridos, preparados según el procedimiento de conformidad con la invención, pueden ser empleados también como aditivos para combustibles en combustibles diésel y que presentan buenas propiedades lubrificantes.

Con el procedimiento, de conformidad con la invención, puede aprovecharse la composición regioespecífica de los ácidos grasos de los aceites de origen natural. La fracción de monoglicéridos contiene fundamentalmente la composición de los ácidos grasos que se encuentra en la posición 2 de los aceites. En la mayoría de los aceites de origen natural están enlazados preferentemente en la posición 2 los ácidos grasos insaturados superiores. De este modo, pueden prepararse los monoglicéridos con un elevado contenido en ácido linoleico por ejemplo a partir del aceite de girasol o del aceite de distel. Estos monoglicéridos tienen un punto de solidificación rebajado, que es especialmente importante para el empleo de los monoglicéridos como aditivo diésel. En base al aceite de palma puede obtenerse, por ejemplo, un monoglicérido con un elevado contenido en ácido oleico, lo cual es especialmente adecuado para el empleo en artículos comestibles o en cosmética.

El empleo de monoglicéridos en el sector de los artículos comestibles es igualmente conocido por la literatura. De conformidad con las normas de la Unión Europea, el contenido en monoglicéridos y el diglicéridos debe ser del 70% como mínimo, el índice de acidez no debe sobrepasar el valor de 6, el producto puede contener como máximo un 7% de glicerina libre y un 2% de agua. Por medio del procedimiento enzimático, acoplado con la separación por destilación de los ésteres de los ácidos grasos se consiguen monoglicéridos con un contenido en monoésteres y en diésteres > 90% así como un contenido en monoésteres > 70%. Los valores para el contenido en agua, en glicerina libre y el índice de acidez quedan claramente por debajo de los valores máximos. De este modo, se da el empleo en el sector de los artículos comestibles de los monoglicéridos preparados de acuerdo con el procedimiento de conformidad con la invención.

De la misma manera, se conoce por la literatura el empleo de los monoglicéridos en formulaciones cosméticas o farmacéuticas. Los monoglicéridos, preparados de conformidad con la invención, con un contenido en monoésteres y en diésteres > 90% así como un contenido en monoésteres > 70%, pueden ser empleados como emulsionantes agua-en-aceite (W/O), como coemulsionantes, como componentes para el reengrasado, como factores de consistencia o como generadores de consistencia en cremas, en lociones, en ungüentos, en preparados tensioactivos así como en emulsiones cosméticas y farmacéuticas de tipo agua-en-aceite (W/O) y de tipo aceite-en-agua (O/W).

Ejemplos Ejemplo 1 Alcoholisis regioselectiva con diversos enzimas en forma libre y en forma inmovilizada

Se depositaron inicialmente en vasos de vidrio, equipados con agitadores magnéticos, 16 cargas constituidas por 20 g de aceite de colza y 2,5 g de etanol. En las cargas 1-9 así como 15 + 16 se aportaron respectivamente 0,25 g de agua bajo agitación y en las cargas 10-14 se aportaron respectivamente 0,5 g de agua. A continuación se aportaron lipasas en forma libre así como en forma inmovilizada tal como se ha enumerado en la tabla que se encuentra más adelante. Las cargas se incubaron durante 24 horas bajo agitación, aportándose otros 2,5 g de etanol al cabo de 5 horas. La alcoholisis de las cargas 1-14 se llevó a cabo sobre una multiplaca con agitación a la temperatura ambiente. Las cargas 15 + 16 se incubaron a 45ºC sobre un dispositivo aplicador de sacudidas. Al cabo de 24 horas se retiraron las muestras y se analizó por medio de una cromatografía gaseosa el contenido en glicéridos y en ésteres de etilo. La evaluación se llevó a cabo por medio del porcentaje superficial. Las pequeñas proporciones de ácidos grasos formados están contenidas en la superficie de los ésteres de etilo.

Los inmovilizados de las cargas 1-3, así como 15 + 16 fueron comercializados directamente por el fabricante en forma inmovilizada. Los inmovilizados de las cargas 4-8 se prepararon por medio de una adsorción sobre Accurel MP 1000 (Membrana). Con esta finalidad se incubó en 10 ml de etanol durante 1 hora 1 Accurel MP 1000. Tras separación por decantación del etanol se aportaron 10 g de agua y, respectivamente, 0,5 g de la preparación de lipasa. La mezcla se incubó a la temperatura ambiente durante la noche. A continuación se separó el inmovilizado por medio de una filtración y se secó a la temperatura ambiente durante 24 horas sobre pliegos de papel.

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Ejemplo 2 Alcoholisis regioselectiva de aceite de girasol con lipasas no inmovilizadas

Se dispusieron inicialmente en vasos de vidrio, equipados con agitadores magnéticos, 6 cargas constituidas por 40 g de aceite de girasol y 10 g de etanol. Se aportaron 0,4 g de agua bajo agitación. Se aportaron 40 mg de Na_{3}PO_{4} x 12 H_{2}O sólido a las cargas 2, 4 y 6. En las cargas 1 y 2 se aportaron 0,4 g de lipolasa (preparación líquida de lipasa de Thermomyces lanuginosus), en las cargas 3 y 4 se aportaron 0,4 g de Novozym 525 (preparación líquida de lipasa de Candida antarctica B) y en las cargas 5 y 6 se aportaron 0,4 g de Novozym 388 (preparación líquida de lipasa de Rhizomucor miehei). La alcoholisis se llevó a cabo a la temperatura ambiente sobre una multiplaca con agitación. Al cabo de 16 horas y de 44 horas se retiraron muestras y se analizó por medio de una cromatografía gaseosa el contenido en glicéridos. La evaluación se llevó a cabo por medio del porcentaje superficial.

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Conclusión: la lipolasa en presencia de una sal básica mostró una actividad significativa (carga 2). Por el contrario, cuando no se aportó ninguna sal, solamente pudo detectarse una reacción de alcoholisis muy débil.

Se detecta una actividad débil con Novozym 388, que, sin embargo, es independiente del aporte de sal básica.

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Ejemplo 3 Comparación de la actividad de la lipolasa inmovilizada y de la preparación líquida de lipolasa

Se compararon cargas, que contenían 0,2 g de preparación líquida de lipolasa o una cantidad correspondiente de lipolasa enlazada sobre un soporte.

Inmovilización de lipolasa sobre Accurel MP 1000 (Membrana): se aportaron 5 g de MP 1000 a un matraz Erlenmeyer de 250 ml y se añadieron 15 ml de etanol. La mezcla se sometió a sacudidas durante 1 hora, a continuación se separó el etanol por decantación. Se aportaron 50 g de agua a MP 1000. Al cabo de 1 hora de agitación se eliminó el agua por decantación. Se aportaron 100 ml de tampón de fosfato, 20 mM, pH 6,0 y se inició la inmovilización por medio del aporte de 5 g de preparación líquida de lipolasa. Las cargas se agitaron durante la noche a 8ºC, a continuación el inmovilizado enzimático se separó por filtración. El inmovilizado se secó durante la noche entre pañuelos de papel a la temperatura ambiente. El inmovilizado se pesó y se empleó para la alcoholisis una cantidad de inmovilizado, que corresponde a 0,2 g de preparación líquida de lipolasa.

Inmovilización alternativa de lipolasa sobre Accurel MP 1000 (Membrana): la inmovilización se llevó a cabo como se ha descrito precedentemente. Tras la separación por filtración del inmovilizado se aportaron 5 ml de una solución de Na_{3}PO_{4} 200 mM. La mezcla completa se secó bajo vacío a la temperatura ambiente. El objeto de esta etapa adicional consistía en preparar un inmovilizado ya alcalino. El inmovilizado se pesó y se empleó para la alcoholisis una cantidad de inmovilizado, que correspondía a 0,2 g de preparación líquida de lipolasa.

Inmovilización de lipolasa sobre Dowex Marathon WBA (Dow Chemicals): se dispusieron inicialmente 200 mg de Dowex WBA en un vaso de precipitados pequeño. Se añadieron con una pipeta 0,2 g de preparación líquida de lipolasa y se mezclaron perfectamente con la punta de la pipeta. La carga se incubó durante 2 horas bajo mezcla ocasional a la temperatura ambiente. La carga completa (Dowex + sobrenadante) se empleó para la transformación.

Ensayos, realizados paralelamente, en los cuales se obtuvo lipolasa no enlazada por medio de un arrastre por lavado a partir del inmovilizado, mostraron que estaba presente de forma enlazada sobre el soporte aproximadamente el 90% de la lipolasa.

Inmovilización de lipolasa sobre Duolite A568 (Rohm & Haas): se dispusieron inicialmente 200 mg de Duolite A568 en un vaso de precipitados pequeño. Se añadieron con una pipeta 0,2 g de preparación líquida de lipolasa y se mezclaron perfectamente con la punta de la pipeta. La carga se incubó durante 2 horas bajo mezcla ocasional a la temperatura ambiente. La carga completa (Duolite + sobrenadante) se empleó para la transformación.

Ensayos realizados paralelamente, en los cuales se obtuvo lipolasa no enlazada por medio de un arrastre por lavado a partir del inmovilizado, mostraron que estaba presente de forma enlazada sobre el soporte aproximadamente el 80% de la lipolasa.

Realización de los ensayos:

Se dispusieron inicialmente 10 cargas, constituidas por 40 g de aceite de girasol y 10 g de etanol, en vasos de precipitados equipados con agitadores magnéticos. Se aportaron 0,4 g de agua bajo agitación. En las cargas 2, 4, 6, 8 y 10 se aportaron 50 mg de Na_{2}CO_{3} sólido. En las cargas 1 y 2 se aportaron 0,2 g de lipolasa (preparación líquida de lipasa de Thermomyces lanuginosus), en las cargas 3 y 4 se aportaron los inmovilizados Dowex, en las cargas 5 y 6 se aportaron los inmovilizados Duolite, en las cargas 7 y 8 se aportaron los inmovilizados MP 1000 y en las cargas 9 y 10 se aportaron los inmovilizados MP 1000 tratados ulteriormente con Na_{3}PO_{4}. La alcoholisis se llevó a cabo en una multiplaca con agitación a la temperatura ambiente. Las cargas 3-10 se realizaron dos veces. Al cabo de 16 horas se retiraron muestras y se analizaron por medio de una cromatografía gaseosa del contenido en glicéridos. La evaluación se llevó a cabo a través del porcentaje superficial.

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Conclusión: todos los inmovilizados con lipolasa muestran una actividad de alcoholisis. Con excepción del inmovilizado tratado previamente con Na_{3}PO_{4}, todos los inmovilizados muestran una activación adicional por medio del Na_{2}CO_{3}. Desde luego, la activación de la lipolasa líquida por medio del Na_{2}CO_{3} es esencialmente más intensa que la activación de los inmovilizados. La alcoholisis con lipolasa activada con sal (carga 2) es claramente más rápida que con los inmovilizados con el mismo peso total de enzima.

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Ejemplo 4 Conversión con diversos alcoholes

Se sometieron a una reacción de alcoholisis a la temperatura ambiente diversas cargas constituidas por 40 g de aceite de girasol y cantidades variables de diversos alcoholes con lipolasa. Las cargas tenían una composición como la que está indicada en la tabla siguiente:

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El contenido en glicéridos y en ésteres se analizó por medio de una cromatografía gaseosa. La evaluación se llevó a cabo por medio del porcentaje superficial, sin tenerse en consideración los alcoholes libres en exceso. Se tomaron muestras al cabo de los tiempos que están indicados en la tabla.

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Conclusión: se observó una reacción de alcoholisis con todos los alcoholes empleados. El enzima aceptó alcoholes primarios y secundarios así como alcoholes de cadena lineal y de cadena ramificada.

La mejor reacción se consiguió con los alcoholes constituidos por el etanol y por el propanol en un medio de reacción que contenía un 2% de agua:

Para los otros alcoholes tuvieron que ser modificadas ligeramente, en parte, las condiciones de la reacción con objeto de alcanzar una conversión óptima. Ensayos detallados con butanol (cargas 10-12) y con hexanol (cargas 13-15) han mostrado que también con estos alcoholes es posible la obtención de glicéridos con un contenido en monoglicérido > 60%. La reacción con butanol funciona en este caso mejor en medio pobre en agua, mientras que, por el contrario, la reacción con hexanol funciona únicamente bien en presencia de mayores cantidades de agua.

En general puede deducirse de lo que precede, que la concentración en agua tiene que ser aumentada cuando el alcohol sea más hidrófugo para alcanzar una velocidad de reacción óptima.

Ejemplo 5 Efecto de la concentración de etanol sobre la formación de glicerina, la formación de ácido y el contenido en monoglicérido

Se sometieron diversas cargas, constituidas por 40 g de aceite de girasol y cantidades variables de etanol respectivamente con 0,2 g de lipolasa a una reacción de alcoholisis a la temperatura ambiente. Se aportaron respectivamente 25 mg de Na_{2}CO_{3}. Las cargas tenían una composición que está indicada en la tabla siguiente:

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El contenido en glicéridos se analizó por medio de una cromatografía gaseosa. La evaluación se llevó a cabo a través del porcentaje superficial. El contenido en glicerina se analizó igualmente por medio de una cromatografía gaseosa y está indicado en el porcentaje superficial no calibrado. De conformidad con el balance de masas, los contenidos absolutos en glicerina son bajos pero, en este caso, es decisiva la comparación entre los valores relativos. Se tomaron muestras para cromatografía gaseosa (GC) con objeto de llevar a cabo la determinación de la glicerina al cabo de un tiempo de reacción de 16 horas y para la determinación de los glicéridos al cabo de un tiempo de reacción de 40 horas. Los índices de acidez se determinaron al cabo de 16 horas.

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Puesto que la glicerina presenta una adsorción comparativamente más intensa que el éster de etilo y que los glicéridos, en los métodos de cromatografía gaseosa (GC) empleados, se llevó a cabo una calibración directamente en una mezcla constituida por el éster de etilo, etanol libre y glicéridos. La adsorción a través de un intervalo de concentraciones comprendido entre 0 y un 1,0% en peso de glicerina, corresponde a la fórmula:

y = 2,3 x (y = adsorción, x = pesada).

De aquí se deduce para la analítica precedente:

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Conclusión: cuanto mayor es la concentración en alcohol empleado, tanto mayor serán los contenidos en monoglicérido. Con relación a los glicéridos totales pueden alcanzarse contenidos en monoglicérido por encima
del 90%.

Un aumento del contenido en alcohol condujo a una reducción de la formación de productos secundarios tales como ácidos grasos libres o glicerina, que se forma a partir de la hidrólisis total del aceite.

La velocidad de la reacción se redujo con un aumento del contenido en alcohol. Por medio de un aumento del contenido en agua pudo mejorarse la velocidad de la reacción de tal manera, que incluso con un elevado exceso molar en etanol se alcanzó una buena formación de monoglicérido (carga 6).

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Ejemplo 6 Conversión con diversos aceites

Se ensaya la hidrólisis con diversos aceites en cargas paralelas. Respectivamente se pesan 40 g del aceite con 10 g de etanol en el vaso de precipitados. Se aportan respectivamente 0,4 g de agua bajo agitación y se aportan 40 mg de Na_{3}PO_{4} x 12 H_{2}O sólido. La reacción se inicia por medio del aporte de 0,4 g de lipolasa. Al cabo de un tiempo de reacción de 16 horas se toma una muestra para el análisis por medio de una cromatografía gaseosa. La evaluación se lleva a cabo por medio del porcentaje superficial.

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Conclusión: se observó una buena alcoholisis con todos los aceites empleados. Se consiguió con todos los aceites una proporción en monoglicérido > 70% con relación a los glicéridos totales.

Ejemplo 7 Conversión con diversas sales alcalinas

Se pesaron 5 cargas respectivamente con 40 g de aceite de girasol y 10 g de etanol. Se aportaron 0,4 g de agua a todas las cargas, bajo agitación. En la carga 1 se aportaron 40 mg de Na_{3}PO_{4} x 12 H_{2}O, en la carga 2 se aportaron 11 mg de Na_{2}CO_{3}, en la carga 3 se aportaron 4 mg de Ca(OH)_{2}, en la carga 4 se aportaron 31 mg de citrato trisódico x 2 H_{2}O y la carga 5 se llevó a cabo sin aporte de una sal. Las reacciones se iniciaron por medio de la adición de 0,4 g de lipolasa. Al cabo de un tiempo de reacción de 16 horas se tomó una muestra para el análisis por medio de una cromatografía gaseosa. La evaluación se llevó a cabo por medio del porcentaje superficial.

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Conclusión: la reacción de alcoholisis funciona perfectamente cuando se lleva a cabo el aporte de sales de fosfato, de sales de carbonato y de hidróxidos.

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Ejemplo 8 Optimización de la concentración inicial de sal (para el Na_{2}CO_{3})

Se pesaron 12 cargas respectivamente con 40 g de aceite de girasol y 10 g de etanol. Se aportaron, bajo agitación, a las cargas 1 a 6 respectivamente 0,2 g de agua y a las cargas 7-12 respectivamente 0,4 g de agua. Se aportaron cantidades diferentes de sal, como se ha indicado en la tabla siguiente. Las reacciones se iniciaron por medio del aporte de 0,2 g de lipolasa. Al cabo de un tiempo de reacción de 16 horas se tomó una muestra para el análisis por medio de una cromatografía gaseosa. La evaluación se llevó a cabo por medio del porcentaje superficial.

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Conclusión: un aumento del contenido en agua en la carga desplaza el óptimo ligeramente para la cantidad de Na_{2}CO_{3}. En el caso de una adición de 0,2 g de agua el intervalo de la cantidad óptima de sal está comprendido entre 25 mg y 100 mg, mientras que, por el contrario, en el caso de la adición de 0,4 g de agua el intervalo óptimo está comprendido entre 50 mg y 200 mg.

Debe observarse que el óptimo de aditivo básico depende de la cantidad empleada de la solución enzimática tamponada así como de la fuerza de la base. La serie de ensayos con el Na_{2}CO_{3} debe ser considerada como ejemplificativa.

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Ejemplo 9 Efecto de la temperatura sobre la velocidad de la transesterificación

Se pesan 6 cargas respectivamente con 40 g de aceite de girasol y 10 g de etanol. Se aportan a las cargas, bajo agitación, 0,4 g de agua y 50 mg de Na_{2}CO_{3}. Las reacciones se inician por medio del aporte de 0,2 g de lipolasa. Las conversiones se llevan a cabo a diversas temperaturas, tal como se ha indicado en la tabla siguiente. Al cabo de un tiempo de reacción de 24 horas se toma una muestra para el análisis por medio de una cromatografía gaseosa. La evaluación se lleva a cabo por medio del porcentaje superficial.

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Conclusión:

La lipasa está claramente desactivada ya a partir de temperaturas situadas por encima de los 30ºC. La temperatura óptima de la reacción se encuentra en el intervalo comprendido entre 20 y 25ºC.

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Ejemplo 10 Alcoholisis del aceite de girasol y enriquecimiento por destilación del monoglicérido

Se pesaron 1,6 kg de aceite de girasol y 0,4 kg de etanol en un reactor de doble camisa que puede ser calentado. Se aportaron bajo agitación 16 g de agua y 0,44 g de Na_{2}CO_{3}. La reacción se inició por medio el aporte de 8 g de lipolasa y se llevó a cabo a la temperatura ambiente bajo agitación. Al cabo de 8 horas se aportaron 0,8 kg de etanol a la carga. Al cabo de 40 horas se interrumpió la reacción y se ensayó una muestra por medio de una cromatografía gaseosa. La carga de la reacción se calienta a 80ºC, bajo agitación. Se aplica un vacío y el etanol en exceso se evaporó a partir de la carga de la reacción. A continuación se descomprimió la mezcla de la reacción hasta la presión normal y se aportaron 16 g de Tonsil y 6 g de agua. La mezcla se agitó a 80ºC durante 30 minutos, a continuación se agitó durante una hora bajo vacío a 80ºC para eliminar el agua residual de la carga de la reacción. Tras descompresión de la carga de la reacción hasta la presión normal se filtró en caliente la carga. Se tomó una muestra para el análisis por medio de una cromatografía gaseosa. La carga se separó a continuación a través de una destilación de vía corta. Los parámetros de la reacción son 180ºC y 0,5 mbares con una temperatura del dedo de refrigeración de 25ºC y con una temperatura de la carga inicial de 80ºC. Un balance de masas de la destilación dio un 29,8% en peso de producto de cola y un 70,2% en peso de destilado. El producto de cola que contiene al monoglicérido se sometió a un análisis por medio de una cromatografía gaseosa.

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Ejemplo 11 Alcoholisis del aceite de girasol nuevo y enriquecimiento por destilación del monoglicérido

Se pesaron 1,5 kg de aceite de girasol nuevo y 0,75 kg de etanol en un reactor de doble camisa que puede ser calentado. Se aportaron, bajo agitación, 15 g de agua y 1,5 g de Na_{2}CO_{3}. La reacción se inició por medio del aporte de 7,5 g de lipolasa y se llevó a cabo a la temperatura ambiente bajo agitación. Al cabo de 46 horas se interrumpió la reacción y se ensayó una muestra por medio de una cromatografía gaseosa. La carga de la reacción se calentó bajo agitación hasta 80ºC. Se aplicó vacío y el etanol en exceso se evaporó a partir de la carga de la reacción. A continuación se descomprimió la mezcla de la reacción hasta la presión normal y se aportaron 10 g de Tonsil y 6 g de agua. La mezcla se agitó durante 30 minutos a 80ºC, a continuación se agitó durante una hora bajo vacío a 80ºC para eliminar el agua residual de la carga de la reacción. Tras descompresión de la carga de la reacción hasta la presión normal se filtró en caliente la carga. Se tomó una muestra para el análisis por medio de una cromatografía gaseosa. La carga se separó a continuación por medio de una destilación de vía corta. Los parámetros de la reacción son 180ºC y 0,5 mbares a una temperatura del dedo de refrigeración de 25ºC y a una temperatura de la carga inicial de 80ºC. El producto de cola que contiene al monoglicérido se sometió a un análisis por medio de una cromatografía gaseosa.

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Ejemplo 12 Alcoholisis del aceite de distel y enriquecimiento por destilación del monoglicérido

Se pesaron 1,5 kg de aceite de distel y 0,75 kg de etanol en un reactor de doble camisa que puede ser calentado. Se aportaron, bajo agitación, 15 g de agua y 1,5 g de Na_{2}CO_{3}. La reacción se inició por medio del aporte de 15 g de lipolasa y se llevó a cabo bajo agitación a la temperatura ambiente. Al cabo de 20 horas se interrumpió la reacción y se ensayó una muestra por medio de una cromatografía gaseosa. La carga de la reacción se calentó bajo agitación hasta 80ºC. Se aplicó vacío y se evaporó el etanol en exceso a partir de la carga de la reacción. A continuación se descomprimió la mezcla de la reacción hasta la presión normal y se aportaron 10 g de Tonsil y 6 g de agua. La mezcla se agitó durante 30 minutos a 80ºC, a continuación se agitó durante una hora bajo vacío a 80ºC para eliminar el agua residual de la carga de la reacción. Tras la descompresión de la carga de la reacción hasta la presión normal se filtró en caliente la carga. Se tomó una muestra para el análisis por medio de una cromatografía gaseosa. La carga se separó a continuación por medio de una destilación de vía corta. Los parámetros de la reacción son 180ºC y 0,5 mbares con una temperatura del dedo de refrigeración de 25ºC y con una temperatura de la carga inicial de 80ºC. El producto de cola, que contiene al monoglicérido, se sometió a un análisis por medio de una cromatografía gaseosa.

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Ejemplo 13 Alcoholisis del aceite de ricino

Se pesaron 1,5 kg de aceite de ricino y 0,75 kg de etanol en un reactor de doble camisa, que puede ser calentado. Se aportaron, bajo agitación, 15 g de agua y 1,5 g de Na_{2}CO_{3}. La reacción se inició por medio del aporte de 15 g de lipolasa y se llevó a cabo bajo agitación a la temperatura ambiente. Al cabo de 46 horas se interrumpió la reacción y se ensayó una muestra por medio de una cromatografía gaseosa. La carga de la reacción se calentó bajo agitación hasta 80ºC. Se aplicó vacío y se evaporó el etanol en exceso a partir de la carga de la reacción. A continuación se descomprimió la mezcla de la reacción hasta la presión normal y se aportaron 10 g de Tonsil y 6 g de agua. La mezcla se agitó durante 30 minutos a 80ºC, a continuación se agitó durante una hora bajo vacío a 80ºC para eliminar el agua residual de la carga de la reacción. Tras descompresión de la carga de la reacción hasta la presión normal se filtró en caliente la carga. Se tomó una muestra para el análisis por medio de una cromatografía gaseosa.

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Ejemplo 14 Ensayo del efecto emulsionante de los monoglicéridos

Se ensaya la propiedad emulsionante de los monoglicéridos preparados por vía enzimática y destilados en un sistema constituido por un 80% de agua y un 20% de aceite. Como aceites son empleados el Myritol 312 (triglicéridos de cadena media) y el aceite de parafina. Como substancia comparativa sirve un monoglicérido sometido a una destilación molecular (Monomuls 90 O) con un contenido en monoglicérido > 90%. Las propiedades emulsionantes en el sistema constituido por Myritol 312/agua son determinadas con concentraciones de substancia activa de un 1%, de un 2,5% y de un 5%. Las propiedades emulsionantes en el sistema constituido por aceite de parafina/agua son determinadas con concentraciones de substancia activa de un 1% y de un 5%. El tipo de la emulsión formada es determinado por medio de la medida de la conductibilidad. Se llevan a cabo ensayos en las mezclas de monoglicéridos de los ejemplos 9, 10 y 11.

Formación de la emulsión en el sistema constituido por Myritol 312/agua

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Formación de la emulsión en el sistema constituido por aceite de parafina/agua

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Conclusión: todos los monoglicéridos preparados por vía enzimática presentan buenas propiedades emulsionantes. El monoglicérido preparado a partir del aceite de girasol tiene propiedades emulsionantes comparables con las del producto Monomuls 90 O sometido a una destilación molecular. Los monoglicéridos preparados a partir de aceite de girasol nuevo y de aceite de distel muestran un efecto emulsionante algo más débil, que probablemente se debe a las mayores proporciones de éster de etilo, que están contenidas todavía.

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Ejemplo 15 Ensayo de las propiedades lubrificantes en combustibles diésel

Las propiedades lubrificantes se llevaron a cabo con un ensayo HFFR (ensayo de instalación oscilante de alta frecuencia -High Frequency Reciprocating Rig Test-) según el método CEC F-06-T-94. Se emplearon diversos combustibles diésel y mezclas de monoglicéridos a base de aceite de girasol y de aceite de colza tal como se ha indicado en la tabla mostrada a continuación.

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Resultados

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Conclusión: todos los modelos mejoran de manera significativa las propiedades lubrificantes de los combustibles diésel empleados y reducen los valores HFFR por debajo de los valores límite preestablecidos (por ejemplo actualmente 450 \mum en Suiza).

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Ejemplo 16 Ensayo de la composición de ácidos grasos del monoglicérido de aceite de girasol

Se ensayan la fracción de los monoglicéridos o bien la fracción del destilado del ejemplo 10, una vez completada la metilación con TMSH en diclorometano, por medio de una cromatografía gaseosa, con respecto a su composición en ácidos grasos y se comparan con el material de partida constituido por el aceite de girasol.

Resultado

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Conclusión: puede reconocerse en la fracción de monoglicéridos un enriquecimiento en ácido linoleico y un fuerte empobrecimiento de los ácidos grasos saturados en comparación con el producto de partida.

Claims

1. Procedimiento para la obtención de monoglicéridos, caracterizado porque se hacen reaccionar por vía enzimática triglicéridos en presencia de alcoholes lineales o ramificados con un número de átomos de carbono comprendido entre 1 y 8 átomos de carbono con una lipasa de Thermomyces lanuginosus, que se activa por medio del aporte de sales alcalinas.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque se desactiva la lipasa en otra etapa.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 y/o 2, caracterizado porque la alcoholisis se lleva a cabo a temperaturas comprendidas entre 10º y 40ºC y con un contenido en agua comprendido entre un 0,1 y un 10% en peso referido a la cantidad del triglicérido.

4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la lipasa se emplea en cantidades comprendidas entre un 0,05 y un 2% de la preparación líquida, que puede ser adquirida en el comercio, en relación a la cantidad de triglicérido empleado.

5. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque las sales inorgánicas alcalinas para la activación de la lipasa están constituidas por sales que se eligen entre el grupo formado por los hidróxidos, los carbonatos y los fosfatos del sodio, del potasio, del calcio, del magnesio y del amonio, previamente disueltas en agua.

6. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque las sales inorgánicas alcalinas son empleadas para la activación de las lipasas en cantidades comprendidas entre un 0,00001 y un 1% en peso referido a la cantidad del triglicérido.

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque son empleados triglicéridos procedentes de grasas y de aceites, que tienen una elevada proporción en ácidos grasos monoinsaturados y/o poliinsaturados y que se eligen entre el grupo constituido por el aceite de girasol, el aceite de colza, el aceite de distel, el aceite de soja, del aceite de linaza, el aceite de cacahuete, el sebo, el aceite de oliva, el aceite de ricino, el aceite de palma y los aceites viejos tales como por ejemplo las grasas para freír usadas.

8. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque como componente alcohólico preferente son empleados el etanol o el 1-propanol y el contenido en alcohol está comprendido entre un 10 y un 75% en peso referido al triglicérido.

9. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el componente alcohólico se separa, preferentemente por medio de una destilación.

10. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque se separan los ésteres de alquilo de los monoglicéridos, preferentemente por medio de una destilación.