ES2345775T3 - Utilizacion de saha para el tratamiento del mesotelioma. - Google Patents

Abstract

Utilización de ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA) representado por la estructura siguiente: **(Ver fórmula)** o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable, para la preparación de un medicamento oral para la administración en un sujeto destinado al tratamiento del mesotelioma.

Description

Utilización de SAHA para el tratamiento del mesotelioma.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas para la utilización en métodos de tratamiento de cánceres, por ejemplo el mesotelioma. Más específicamente, la presente invención se refiere a la utilización de composiciones farmacéuticas que comprenden ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA) para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento del mesotelioma. Las formulaciones orales de las composiciones farmacéuticas presentan perfiles farmacocinéticos favorables, tales como una elevada biodisponibilidad e inesperadamente dan lugar a niveles sanguíneos elevados de los compuestos activos durante un periodo prolongado de tiempo.

Antecedentes de la invención

En la totalidad de la presente solicitud, se hace referencia a diversas publicaciones mediante números arábigos dentro de paréntesis. Las citaciones completas de estas publicaciones pueden encontrarse al final de la memoria, inmediatamente antes de las reivindicaciones.

El cáncer es un trastorno en el que una población de células ha dejado de responder, en grados diversos, a los mecanismos de control que normalmente gobiernan la proliferación y la diferenciación.

El mesotelioma es una forma rara de cáncer en la que se encuentran células malignas (cancerosas) en el mesotelio, un saco protector que cubre la mayor parte de los órganos internos del cuerpo. El mesotelio es una membrana que cubre y protege la mayoría de los órganos internos del cuerpo. Está compuesto de dos capas de células: una capa inmediatamente circundante del órgano; la otra forma un saco que lo circunda. El mesotelio produce un líquido lubricante que se libera entre dichas capas, permitiendo que los órganos móviles (tales como el corazón pulsante y los pulmones en expansión y contracción) se deslicen fácilmente contra las estructuras contiguas.

El mesotelio presenta diferentes nombres, dependiendo de su localización en el cuerpo. El peritoneo es el tejido mesotelial que cubre la mayoría de los órganos en la cavidad abdominal. La pleura es la membrana que circunda los pulmones y reviste la pared de la cavidad torácica. El pericardio cubre y protege el corazón. El tejido mesotelial que circunda los órganos reproductores internos en el varón se denomina túnica vaginal testicular. La túnica serosa uterina cubre los órganos reproductivos internos en la mujer. La mayoría de casos de mesotelioma se inician en la pleura o en el peritoneo. Los tumores malignos que aparecen en el mesotelio pleural se encuentran fuertemente relacionados con la exposición a amianto.

Aunque las tasas de incidencia informadas se han incrementado en los últimos 20 años, el mesotelioma sigue siendo un cáncer relativamente raro. Se diagnostican aproximadamente 2.000 casos nuevos de mesotelioma en los Estados Unidos cada año. El mesotelioma aparece con más frecuencia en hombres que en mujeres y el riesgo se incrementa con la edad, aunque esta enfermedad puede aparecer tanto en hombres como en mujeres a cualquier edad.

La falta de aliento y el dolor torácico debido a la acumulación de líquido en la pleura con frecuencia son síntomas de mesotelioma pleural. Entre los síntomas del mesotelioma peritoneal se incluyen la pérdida de peso y el dolor e hinchazón abdominales debido a una acumulación de líquidos en el abdomen. Entre otros síntomas del mesotelioma peritoneal pueden incluirse la obstrucción intestinal, anormalidades de la coagulación sanguínea, anemia y fiebre. En el caso de que el cáncer se haya extendido más allá del mesotelio a otras partes del cuerpo, entre los síntomas pueden incluirse dolor, dificultad para deglutir o hinchazón del cuello o la cara.

El pronóstico del mesotelioma es grave, con una mala respuesta a la cirugía radical, la quimioterapia actual, la terapia de radiación y la terapia de combinación. La extensión microscópica de las células cancerosas hacia el interior de la pared torácica y el diafragma es común aunque esta extensión no pueda detectarse mediante ensayos rutinarios.

Durante muchos años han existido dos estrategias principales para el tratamiento quimioterapéutico del cáncer: 1) el bloqueo de la proliferación de células tumorales dependiente de hormonas mediante la interferencia con la producción o acción periférica de hormonas sexuales, y 2) la eliminación de las células cancerosas directamente mediante la exposición de las mismas a sustancias citotóxicas, que dañan las poblaciones celulares tanto neoplásicas como normales.

A pesar de los muchos avances en el campo de la oncología, la mayoría de los tumores sólidos siguen siendo incurables en los estadios avanzados. En muchos casos se utiliza la terapia citotóxica, sin embargo, con frecuencia provoca una morbilidad significativa en el paciente sin ningún beneficio clínico significativo. Resultan necesarios agentes menos tóxicos y más específicos para tratar y controlar las malignidades avanzadas.

Un enfoque alternativo a la quimioterapia del cáncer es la inducción de la diferenciación terminal de las células neoplásicas (1). En modelos de cultivo celular, se ha informado de diferenciación mediante la exposición de las células a una diversidad de estímulos, incluyendo: AMP cíclico y ácido retinoico (2, 3), aclarubicina y otras antraciclinas (4).

Existen abundante evidencia de que la transformación neoplásica no destruye necesariamente el potencial de las células cancerosas de diferenciarse (1, 5, 6). Existen muchos ejemplos de células tumorales que no responden a los reguladores normales de la proliferación y aparentemente se encuentran bloqueados en la expresión de su programa de diferenciación, y sin embargo puede inducirse a que se diferencien y cesen la replicación. Una diversidad de agentes, incluyendo algunos compuestos polares relativamente simples (5, 7-9), derivados de la vitamina D y el ácido retinoico (10-12), hormonas esteroides (13), factores de crecimiento (6, 14), proteasas (15, 16), promotores tumorales (17, 18) e inhibidores de la síntesis de ADN o de ARN (4, 19-24) pueden inducir que diversas líneas celulares transformadas y explantes tumorales humanos primarios expresen características más diferenciadas.

Los primeros estudios identificaron una serie de compuestos polares que eran inductores eficaces de la diferenciación en varias líneas celulares transformadas (8, 9). De éstas, el inductor más eficaz era el compuesto híbrido polar/apolar N,N'-hexametilén bisacetamida (HMBA) (9). La utilización de este compuesto polar/apolar para inducir que células de eritroleucemia murina (MELC) experimenten diferenciación eritroide con supresión de la oncogenicidad ha demostrado ser un modelo útil para el estudio de la diferenciación mediada por inductor de células transformadas (5, 7-9). La diferenciación eritroide terminal de MELC inducida por HMBA es un proceso multietapa. Tras la adición de HMBA a MELC (745A-DS19) en cultivo, se produce un periodo latente de 10 a 12 horas antes de que pueda detectarse la determinación de la diferenciación terminal. Se define la determinación como la capacidad de las células de expresar diferenciación terminal a pesar de la retirada del inductor (25). Tras la exposición continua a HMBA se produce un reclutamiento progresivo de las células a la diferenciación. Los presentes inventores han informado de que las líneas celulares MELC que se han convertido en resistentes a niveles relativamente reducidos de vincristina se sensibilizan marcadamente frente a la acción inductora del HMBA y puede inducirse su diferenciación con un periodo latente pequeño o sin él (26).

El HMBA es capaz de inducir cambios fenotípicos consistentes con la diferenciación en una amplia diversidad de líneas celulares (5). Las características del efecto inducido farmacológicamente se han estudiado más extensivamente en el sistema celular de la eritroleucemia murina (MELC) (5, 25, 27, 28). La inducción de MELC a diferenciarse depende tanto del tiempo como de la concentración. La concentración mínima necesaria para demostrar un efecto in vitro en la mayoría de cepas es de entre 2 y 3 mM; la duración mínima de la exposición continua generalmente necesaria para inducir la diferenciación en una parte sustancial (>20%) de la población sin exposición continua a un fármaco es aproximadamente 36 horas.

La diana principal de la acción de la HMBA es desconocida. Existe evidencia de que la proteína quinasa C se encuentra implicada en la ruta de la diferenciación mediada por inductor (29). Los estudios in vitro proporcionan una base para evaluar el potencial del HMBA como agente de citodiferenciación en el tratamiento de los cánceres humanos (30). Se han completado varios ensayos clínicos de fase I con HMBA (31-36). Los ensayos clínicos han demostrado que este compuesto puede inducir una respuesta terapéutica en pacientes con cáncer (35, 36). Sin embargo, estos ensayos clínicos de fase I también han demostrado que la eficacia potencial del HMBA se encuentra limitada, en parte, por toxicidad relacionada con la dosis, que impide alcanzar niveles sanguíneos óptimos, y por la necesidad de administrar por vía intravenosa grandes cantidades del agente, durante periodos prolongados.

Se ha informado de que varios compuestos relacionados con el HMBA con grupos polares separados por enlaces apolares que, en una base molar, son tan activos (37) ó 100 veces más activos que el HMBA (38). Sin embargo, como clase, se ha encontrado que los dímeros simétricos, tales como el HMBA y compuestos relacionados, no son los mejores agentes de citodiferenciación.

Inesperadamente se ha encontrado que los mejores compuestos comprenden dos grupos de extremo polar separados por una cadena flexible de grupos metileno, en los que uno o ambos grupos del extremo polar son grupos hidrofóbicos grandes. Preferentemente, los grupos del extremo polar son diferentes y únicamente uno es un grupo hidrofóbico grande. Estos compuestos inesperadamente son mil veces más activos que el HMBA y diez veces más activos que los compuestos relacionados con el HMBA.

Los inhibidores de la histona desacetilasa, tales como el ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA), pertenecen a esta clase de agentes que presentan la capacidad de inducir la detención del crecimiento de las células tumorales, la diferenciación y/o la apoptosis (39). Estos compuestos se dirigen a mecanismos inherentes a la capacidad de una célula neoplásica de convertirse en maligna, debido a que aparentemente no presentan toxicidad a dosis eficaces para la inhibición del crecimiento tumoral en animales (40). Existen varias líneas de evidencia de que la acetilación y desacetilación de las histonas son mecanismos por los que se consigue la regulación transcripcional en una célula (41). Estos efectos se cree que se producen mediante cambios de la estructura de la cromatina, mediante la alteración de la afinidad de las proteínas histonas por el ADN enrollado en el nucleosoma.

Se han identificado cinco tipos de histonas (denominadas H1, H2A, H2B, H3 y H4). Las histonas H2A, H2B, H3 y H4 se encuentran en los nucleosomas y H1 es un conector situado entre nucleosomas. Cada nucleosoma contiene dos de cada tipo de histona dentro de su núcleo, excepto en el caso de H1, que se encuentra presente individualmente en la parte exterior de la estructura del nucleosoma. Se cree que, en el caso de que las proteínas histonas se encuentren hipoacetiladas, existe una mayor afinidad de la histona para el esqueleto de fosfatos del ADN. Esta afinidad provoca que el ADN se una fuertemente a la histona y provoca que el ADN resulte inaccesible a los elementos reguladores y maquinaria de la transcripción.

La regulación del estado acetilado se produce mediante el equilibrio entre la actividad de dos complejos enzimáticos, la histona acetiltransferasa (HAT) y la histona desacetilasa (HDAC). El estado hipoacetilado se cree que inhibe la transcripción de ADN asociado. Este estado hipoacetilado está catalizado por grandes complejos multiproteína que incluyen enzimas HDAC. En particular, se ha demostrado que HDAC cataliza la eliminación de grupos acetilo de las histonas nucleares de la cromatina.

La inhibición de HDAC por parte de SAHA se cree que se produce por la interacción directa con el sitio catalítico del enzima, tal como se ha demostrado mediante estudios de cristalografía de rayos X (42). El resultado de la inhibición de HDAC no se cree que presente un efecto generalizado sobre el genoma, sino que únicamente afecta a un subconjunto pequeño del genoma (43). Los datos proporcionados por micromatrices de ADN utilizando líneas celulares malignas cultivadas con un inhibidor de HDAC demuestran que existe un número finito (1% a 2%) de genes cuyos productos se encuentran alterados. Por ejemplo, las células tratadas en cultivo con inhibidores de HDAC muestran una inducción consistente del inhibidor quinasa p21 dependiente de ciclina (44). Esta proteína desempeña un papel importante en la detención del ciclo celular. Se cree que los inhibidores de HDAC incrementan la tasa de transcripción de p21 mediante la propagación del estado hiperacetilado de las histonas en la región del gen p21, permitiendo de esta manera que el gen sea accesible a la maquinaria transcripcional. Los genes cuya expresión no resulta afectada por los inhibidores de HDAC no muestran cambios en la acetilación de las histonas asociadas regionales (45).

Se ha demostrado en varios casos que la interrupción de la actividad de HAT o de HDAC se encuentra implicada en el desarrollo de un fenotipo maligno. Por ejemplo, en la leucemia promielocítica aguda, la oncoproteína producida por la fusión de PML y RAR alfa aparentemente suprime la transcripción génica específica a través del reclutamiento de HDACs (46). De esta manera, la célula neoplásica es incapaz de completar la diferenciación y conduce a un exceso de proliferación de la línea celular leucémica.

Las patentes U.S. Nos. 5.369.108, 5.932.616, 5.700.811, 6.087.367 y 6.511.990, de algunos de los presentes inventores, dan a conocer compuestos útiles para inducir selectivamente la diferenciación terminal de las células neoplásicas, compuestos que presentan dos grupos de extremo polar separados por una cadena flexible de grupos metileno o por un grupo fenilo rígido, en donde uno o ambos grupos de extremo polar es un grupo hidrofóbico grande. Algunos de los compuestos presentan un grupo hidrofóbico grande adicional en el mismo extremo de la molécula como el primer grupo hidrofóbico, que incrementa adicionalmente la actividad de diferenciación aproximadamente 100 veces en un ensayo enzimático y aproximadamente 50 veces en un ensayo de diferenciación celular. Los métodos de síntesis de compuestos utilizados en los métodos y composiciones farmacéuticas de la presente invención se describen totalmente en las patentes anteriormente mencionadas.

Además de su actividad biológica como agentes antitumorales, los compuestos dados a conocer en las patentes anteriormente mencionadas han sido identificados recientemente como útiles para tratar o prevenir una amplia diversidad de enfermedades y condiciones mediadas por tiorredoxina (TRX), tales como enfermedades inflamatorias, enfermedades alérgicas, enfermedades autoinmunológicas, enfermedades asociadas a estrés oxidativo de enfermedades caracterizadas por la hiperproliferación celular (solicitud de patente U.S. No. 10/369.094, presentada el 15 de febrero de 2003). Además, estos compuestos han sido identificados como útiles para tratar enfermedades del sistema nervioso central (SNC), tales como las enfermedades neurodegenerativas y para el tratamiento del cáncer de cerebro (ver la solicitud de patente U.S. No. 10.273.401, presentada el 16 de octubre de 2002).

Las patentes anteriormente mencionadas no dan a conocer formulaciones orales específicas de los inhibidores de HDAC o dosis o programas de dosificación específicos de los compuestos indicados que resulten eficaces en el tratamiento de cáncer, por ejemplo del mesotelioma. Resulta importante que las patentes anteriormente mencionadas no den a conocer formulaciones orales que presentan perfiles farmacocinéticos favorables, tal como una elevada biodisponibilidad que produzca niveles sanguíneos elevados de los compuestos activos durante un periodo prolongado de tiempo.

Existe una necesidad urgente de descubrir dosis y programas de dosificación adecuados de estos compuestos, y de desarrollar formulaciones, preferentemente formulaciones orales, que produzcan niveles sanguíneos terapéuticamente eficaces estables de los compuestos activos durante un periodo prolongado de tiempo y que resulten eficaces para tratar el cáncer.

Kelly W. et al., Eur. J. Cancer. vol. 38, resumen 2321, 2003, se refieren a un ensayo clínico de fase 1 de una formulación oral de SAHA.

Heaney M. et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 22, resumen 2321, 2003, se refieren a la experiencia clínica con SAHA en pacientes fuertemente pretratados con malignidades hematológicas.

Kelly W.K. et al., Exp. Op. Invest. Drugs vol. 11, no. 12, págs.1695-1713, 2002, se refieren a inhibidores de histona desacetilasa y a su utilización en ensayos clínicos.

Cao X.X. et al., Am. J. Resp. Cell Mol. Biol. vol. 25, no. 5, págs. 562-568, 2001, informan de la regulación negativa de la expresión del gen bcI-xI por parte del inhibidor de la histona desacetilasa y de la muerte celular apoptótica en el mesotelioma.

Descripción resumida de la invención

La presente invención se refiere a la utilización del ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA), representada por la estructura siguiente:

1

o a una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y a un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable, para la preparación de un medicamento oral para la administración en un sujeto para el tratamiento de cánceres, por ejemplo el mesotelioma. Más específicamente, la presente invención se refiere a métodos para tratar el mesotelioma mediante la administración de composiciones farmacéuticas que comprenden inhibidores de HDAC, por ejemplo ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA).

Las formulaciones orales de las composiciones farmacéuticas presentan perfiles farmacocinéticos favorables, tales como una elevada biodisponibilidad e inesperadamente producen niveles sanguíneos elevados de los compuestos activos durante un periodo prolongado de tiempo. La presente invención proporciona además un régimen de dosificación diario seguro de estas composiciones farmacéuticas, que resulta fácil de cumplir, y que resulta en una cantidad terapéuticamente eficaz de los inhibidores de HDAC in vivo.

La presente invención proporciona un método de tratamiento del mesotelioma en un sujeto que necesita del mismo, mediante la administración en el sujeto de una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA) o de una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, tal como se describe en la presente memoria. Puede administrarse SAHA en una dosis diaria total de hasta 800 mg, preferentemente por vía oral, una vez, dos veces o tres veces al día, continuamente (cada día) o intermitentemente (por ejemplo 3 a 5 veces a la semana).

Se ha administrado con seguridad SAHA oral en estudios clínicos de fase I en pacientes que sufrían mesotelioma o DLBCL.

Además, la presente invención proporciona la utilización de una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un inhibidor de HDAC tal como se describe en la presente memoria, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo para la preparación de un medicamento para la administración en un sujeto que necesita del mismo destinado al tratamiento del mesotelioma. El inhibidor de HDAC puede administrarse en una dosis diaria total de hasta 800 mg, preferentemente por vía oral, una vez, dos veces o tres veces al día, continuamente (es decir, cada día) o intermitentemente (por ejemplo 3 a 5 días a la semana).

Los inhibidores de HDAC resultan útiles para tratar el mesotelioma.

Inhibidores de HDAC adecuados para utilizar en la presente invención incluyen, aunque sin limitación, derivados del ácido hidroxámico, ácidos grasos de cadena corta (SCFAs), tetrapéptidos cíclicos, derivados de benzamida o derivados de cetona electrofílicos, tal como se define en la presente memoria. Son ejemplos de inhibidores de HDAC adecuados para la utilización en los métodos de la presente invención:

A)

Derivados de ácido hidroxámico seleccionados de entre bishidroxamida de ácido m-carboxicinámico (CBHA), tricostatina A (TSA), tricostatina C, ácido salicilhidroxámico, ácido azelaico bishidroxámico (ABHA), azelaico-1-hidroxamato-9-anilida (AAHA), ácido 6-(3-clorofenilureido) carpoico hidroxámico (3-Cl-UCHA), oxamflatina, A-161906, scriptaid, PXD-101, LAQ-824, CHAP, MW2796 y MW2996.

Entre los inhibidores de HDAC específicos se incluyen, por ejemplo:

El ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA), que se encuentra representado por la fórmula estructural siguiente:

2

La piroxamida, que se encuentra representada por la fórmula estructural siguiente:

3

La bis-hidroxamida del ácido m-carboxicinámico (CBHA), que se encuentra representada por la fórmula estructural siguiente:

4

Las composiciones farmacéuticas que comprenden el inhibidor de HDAC se administran por vía oral, por ejemplo dentro de una cápsula de gelatina. En una forma de realización adicional, las composiciones farmacéuticas comprenden además celulosa microcristalina, croscarmelosa sódica y estearato de magnesio.

Los inhibidores de HDAC pueden administrarse en una dosis diaria total que puede variar de paciente a paciente, y pueden administrarse en programas de dosificación variables. Son dosis adecuadas una dosis diaria total comprendida entre aproximadamente 25 y 4.000 mg/m^{2} administrados por vía oral una vez al día, dos veces al día o tres veces al día, continuamente (cada día) o intermitentemente (por ejemplo 3 a 5 veces a la semana). Además, las composiciones pueden administrarse en ciclos, con periodos de reposo entre los ciclos (por ejemplo, tratamiento durante dos a ocho semanas con un periodo de reposo de hasta una semana entre tratamientos).

Preferentemente, la composición se administra una vez al día a una dosis de entre aproximadamente 200 y 600 mg. Preferentemente, la composición se administra dos veces al día a una dosis de entre aproximadamente 200 y 400 mg. Preferentemente, la composición se administra dos veces al día a una dosis de entre aproximadamente 200 y 400 mg intermitentemente, por ejemplo tres, cuatro o cinco veces a la semana. Preferentemente, la composición se administra tres veces al día a una dosis de entre aproximadamente 100 y 250 mg.

Preferentemente, la dosis diaria es 200 mg, que pueden administrarse una vez al día, dos veces al día o tres veces al día. En una forma de realización, la dosis diaria es 300 mg, que pueden administrarse una vez al día o dos veces al día. Preferentemente, la dosis diaria es 400 mg, que pueden administrarse una vez al día o dos veces al día.

También se describen en la presente memoria métodos para inducir selectivamente la diferenciación terminal, la detención del crecimiento celular y/o la apoptosis de las células neoplásicas, por ejemplo las células de linfoma en un sujeto, inhibiendo de esta manera la proliferación de dichas células en dicho sujeto, mediante la administración en el sujeto de una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un inhibidor de HDAC, por ejemplo SAHA o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Una cantidad eficaz de un inhibidor de HDAC en la presente invención puede ser de hasta una dosis diaria total de 800 mg.

También se describen en la presente memoria métodos para inhibir la actividad de una histona desacetilasa en un sujeto, mediante la administración en el sujeto de una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un inhibidor de HDAC, por ejemplo SAHA, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Una cantidad de un inhibidor de HDAC puede ser hasta una dosis diaria total de 800 mg.

También se describen en la presente memoria métodos in vitro para inducir selectivamente la diferenciación terminal, la detención del crecimiento celular y/o la apoptosis de las células neoplásicas, por ejemplo las células de linfoma, inhibiendo de esta manera la proliferación de dichas células, mediante la puesta en contacto de las células con una cantidad eficaz de un inhibidor de HDAC, por ejemplo SAHA, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.

También se describen en la presente memoria métodos in vitro para inhibir la actividad de una histona desacetilasa, con una cantidad eficaz de un inhibidor de HDAC, por ejemplo SAHA, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.

También se describe en la presente memoria un régimen de dosificación diaria y seguro de la formulación de composiciones farmacéuticas que comprende un inhibidor de HDAC, que resulta fácil de seguir y de cumplir. Estas composiciones farmacéuticas resultan adecuadas para la administración oral y resultan útiles para tratar el cáncer, por ejemplo el mesotelioma, mediante la inducción selectiva de la diferenciación terminal, la detención del crecimiento celular y/o la apoptosis de células neoplásicas, y/o mediante la inhibición de la histona desacetilasa (HDAC).

Breve descripción de los dibujos

Lo anteriormente expuesto y otros objetivos, características y ventajas de la invención resultarán evidentes a partir de la descripción más particular siguiente de las realizaciones preferentes de la invención, tal como se ilustra en los dibujos adjuntos, en los que caracteres de referencia iguales se refieren a partes iguales en la totalidad de las diferentes vistas. Los dibujos no necesariamente son a escala, enfatizando por el contrario la ilustración de los principios de la invención.

Fig. 1 es un dibujo de una transferencia western (panel superior) que muestra las cantidades de histona-4 acetilada (\alpha-AcH4) en el plasma sanguíneo de pacientes tras una dosis oral o intravenosa (i.v.) de SAHA. Se administró SAHA i.v. a una dosis de 200 mg infusionados durante dos horas. Se administró SAHA oral en una única cápsula a una dosis de 200 mg. Se muestra la cantidad de \alpha-AcH4 en los puntos temporales indicados. Panel inferior: tinción de azul de Coomassie.

Fig. 2 es un dibujo de una transferencia western (paneles superiores) que muestra las cantidades de histona 4 acetilada (\alpha-AcH4) en el plasma sanguíneo de pacientes que presentan un tumor sólido, tras una dosis oral o intravenosa (i.v.) de SAHA. Se administró SAHA i.v. y oral tal como en la figura 1. La cantidad de \alpha-AcH4 se muestra en los puntos temporales indicados. Se muestra el experimento por duplicado (figs. 2A y 2B). Paneles inferiores: tinción de azul de Coomassie.

Fig. 3 es un dibujo de una transferencia western (paneles superiores) que muestra las cantidades de histona 4 acetilada (\alpha-AcH4) (figura 3A) y de histona 3 acetilada (\alpha-AcH3) (figuras 3B-E) en el plasma sanguíneo de pacientes tras una dosis oral o intravenosa (i.v.) de SAHA, los días 1 y 21. Se administró SAHA i.v. y oral tal como en la figura 1. Se muestra la cantidad de \alpha-AcH4 o de \alpha-AcH3 en los puntos temporales indicados. Paneles inferiores: tinción de azul de Coomassie.

Fig. 4 es un dibujo de una transferencia western (paneles superiores) que muestra las cantidades de histona 3 acetilada (\alpha-AcH3) en el plasma sanguíneo de pacientes que presentaban un tumor sólido, tras una dosis oral o intravenosa (i.v.) de SAHA. Se administró SAHA i.v. y oral tal como en la figura 1. La cantidad de \alpha-AcH3 se muestra en los puntos temporales indicados. Panel inferior: tinción de azul de Coomassie.

Fig. 5 es un dibujo de una transferencia western (paneles superiores) que muestra las cantidades de histona 3 acetilada (\alpha-AcH3) en el plasma sanguíneo de pacientes tras una dosis oral o intravenosa (i.v.) de SAHA. Se administró SAHA i.v. en una única cápsula una dosis de 400 mg. Se muestra la cantidad de \alpha-AcH4 en los puntos temporales indicados. El experimento se muestra por triplicado (fig. 5A y B). Paneles inferiores: tinción de azul de Coomassie.

Fig. 6 es un dibujo de una transferencia western (panel superior) que muestra las cantidades de histona 3 acetilada (\alpha-AcH3) en el plasma sanguíneo de pacientes que presentaban un tumor sólido, tras una dosis oral o intravenosa (i.v.) de SAHA. Se administró SAHA i.v. y oral tal como en la figura 5. Se muestra la cantidad de \alpha-AcH3 en los puntos temporales indicados. Panel inferior: tinción de azul de Coomassie.

Fig. 7 es un dibujo de una transferencia western (paneles superiores) que muestra las cantidades de histona 3 acetilada (\alpha-AcH3) en el plasma sanguíneo de pacientes que presentaban un tumor sólido tras una dosis oral o intravenosa (i.v.) de SAHA, los días 1 y 21. Se administró SAHA i.v. y oral tal como en la figura 4. Se muestra la cantidad de \alpha-AcH4 o de \alpha-AcH3 en los puntos temporales indicados. Se muestra el experimento por triplicado (fig. 7A-C). Paneles inferiores: tinción de azul de Coomassie.

Fig. 8 es un dibujo de una transferencia western (paneles superiores) que muestra las cantidades de histona 3 acetilada (\alpha-AcH3) en el plasma sanguíneo de pacientes tras una dosis oral o intravenosa (i.v.) de SAHA. Se administró SAHA oral e i.v. tal como en la figura 5. Se muestra la cantidad de \alpha-AcH3 en los puntos temporales indicados. Paneles inferiores: tinción de azul de Coomassie.

Figs. 9A-C son gráficos que muestran la concentración plasmática media de SAHA (ng/ml) en los puntos temporales indicados tras la administración. Fig. 9A: dosis oral (200 mg y 400 mg) bajo ayuno el día 8. Fig. 9B: dosis oral (200 mg y 400 mg) con alimentación el día 9. Fig. 9C: dosis i.v. el día 1.

Fig. 10 muestra la vida media aparente de una dosis oral de SAHA de 200 mg y de 400 mg, los días 8, 9 y 22.

Fig. 11 muestra la AUC (ng/ml/h) de una dosis oral de SAHA de 200 mg y de 400 mg, los días 8, 9 y 22.

Fig. 12 muestra la biodisponibilidad de SAHA tras una dosis oral de 200 mg y de 400 mg, los días 8, 9 y 22.

Fig. 13 es un barrido de TC de un tumor mesotelioma de un paciente antes (izquierda) y después (derecha) de seis meses de tratamiento con SAHA a una dosis de 300 mg dos veces al día 3 días a la semana.

Fig. 14 es un barrido de TC obtenido de un paciente que presentaba linfoma difuso de células grandes (A) antes del tratamiento y (B) tras 2 meses de tratamiento con SAHA a una dosis de 400 mg BID durante 1 mes seguido de 400 mg QD durante un mes.

Fig. 15 es un barrido de PET obtenido de un paciente que presentaba linfoma difuso de células grandes, antes del tratamiento (A) y tras (B) 2 meses de tratamiento con SAHA a una dosis de 400 mg BID durante 1 mes, seguido de 400 mg QD durante un mes.

Fig. 16 es un barrido de TC obtenido de un paciente que presentaba linfoma difuso de células grandes, (A) antes del tratamiento y (B) tras 1 mes de tratamiento con SAHA a una dosis de 600 mg QD.

Fig. 17 es un barrido de PET obtenido de un paciente que presentaba linfoma difuso de células grandes, (A) antes del tratamiento y (B) tras 2 meses de tratamiento con SAHA a una dosis de 200 mg BID.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas para la utilización en métodos de tratamiento de cánceres, por ejemplo el mesotelioma. Más específicamente, la presente invención se refiere a la utilización de composiciones farmacéuticas que comprenden inhibidores de HDAC, por ejemplo ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA), para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento del mesotelioma. En aspectos específicos, las composiciones de la invención se utilizan para tratar el mesotelioma.

Las formulaciones orales de las composiciones farmacéuticas de la invención presentan perfiles farmacocinéticos favorables, tales como la elevada biodisponibilidad e inesperadamente producen niveles sanguíneos elevados de los compuestos activos durante un periodo prolongado de tiempo. De esta manera, la presente invención proporciona además un régimen de dosificación diario seguro de dichas composiciones farmacéuticas, que es fácil de seguir, y que resulta en una cantidad terapéuticamente eficaz de los inhibidores de HDAC in vivo.

Por consiguiente, la presente invención proporciona un método de tratamiento del mesotelioma en un sujeto que necesita del mismo, mediante la administración en el sujeto de una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un inhibidor de HDAC tal como se describe en la presente memoria, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor de HDAC puede administrarse en una dosis diaria total de hasta 800 mg, preferentemente por vía oral, una vez, dos veces o tres veces al día, continuamente (es decir, cada día) o intermitentemente (por ejemplo 3 a 5 días a la semana).

El inhibidor de HDAC es ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA).

La presente invención proporciona un método de tratamiento del mesotelioma en un sujeto que necesita del mismo, mediante la administración en el sujeto de una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA) o de una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, tal como se describe en la presente memoria. SAHA puede administrarse en una dosis diaria total de hasta 800 mg, preferentemente por vía oral, una vez, dos veces o tres veces al día, continuamente (cada día) o intermitentemente (por ejemplo 3 a 5 días a la semana). SAHA se encuentra representada por la estructura siguiente:

5

El término "tratamiento" en sus diversas formas gramaticales en relación a la presente invención se refiere a la prevención (es decir, a la quimioprevención), cura, reversión, atenuación, alivio, minimización, supresión o detención de los efectos perjudiciales de un estado de enfermedad, de la progresión de la enfermedad, del agente causativo de la enfermedad (por ejemplo bacterias o virus) o de otra condición anormal. Por ejemplo, el tratamiento puede implicar aliviar un síntoma (es decir, no necesariamente todos los síntomas) de una enfermedad o atenuar la progresión de una enfermedad. Debido a que algunos de los métodos inventivos implican la eliminación física del agente etiológico, el experto reconocerá que son igualmente eficaces en situaciones en las que el compuesto inventivo se administra antes o simultáneamente a la exposición al agente etiológico (tratamiento profiláctico) y situaciones en las que los compuestos inventivos se administran después (incluso mucho después) de la exposición al agente etiológico.

El tratamiento del cáncer, tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a la inhibición, retraso o prevención parcial o total de la progresión del cáncer, incluyendo la metástasis del cáncer; inhibir, retrasar o prevenir la recurrencia del cáncer, incluyendo la metástasis del cáncer; o prevenir la aparición o desarrollo del cáncer (quimioprevención) en un mamífero, por ejemplo en un ser humano.

Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" pretende comprender cualquier cantidad que consiga la respuesta biológica deseada. En la presente invención, la respuesta biológica deseada es la inhibición, retraso o prevención parcial o total de la progresión del cáncer, incluyendo la metástasis del cáncer; la inhibición, retraso o prevención de la recurrencia del cáncer, incluyendo la metástasis del cáncer, o la prevención de la aparición o desarrollo del cáncer (quimioprevención) en un mamífero, por ejemplo un ser humano.

El método de la presente invención está destinado al tratamiento o quimioprevención en paciente humanos que presentan cáncer. Sin embargo, también es probable que el método resulte eficaz en el tratamiento del cáncer en otros mamíferos.

\global\parskip0.900000\baselineskip

Histona desacetilasas e inhibidores de histona desacetilasa

Las histona desacetilasas (HDACs), según el uso de la expresión en la presente memoria, son enzimas que catalizan la eliminación de grupos acetilo de residuos lisina en las colas aminoterminales de las histonas nucleares de los nucleosomas. Como tales, las HDACs conjuntamente con las histona acetiltransferasas (HATs) regulan el estado de acetilación de las histonas. La acetilación de las histonas afecta a la expresión génica, y los inhibidores de las HDACs, tales como el compuesto polar híbrido basado en el ácido hidroxámico llamado ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA), inducen la detención del crecimiento, la diferenciación y/o la apoptosis de células transformadas in vitro e inhiben el crecimiento tumoral in vivo. Las HDACs pueden dividirse en tres clases basándose en la homología estructural. Las HDACs de clase I (HDACs 1, 2, 3 y 8) presentan similitudes con la proteína RPD3 de levadura, se localizan en el núcleo y se encuentran en complejos asociados a correpresores transcripcionales. Las HDACs de clase II (HDACs 4, 5, 6, 7 y 9) son similares a la proteína HDA1 de levadura, y presentan localización subcelular tanto nuclear como citoplasmática. Las HDACs tanto de clase I como de clase II resultan inhibidas por inhibidores de HDAC basados en el ácido hidroxámico, tales como SAHA. Las HDACs de clase iII forman una clase estructuralmente distante de enzimas NAD-dependientes que se relacionan con las proteínas SIR2 de levadura y que no resultan inhibidas por los inhibidores de HDAC basados en el ácido hidroxámico.

Los inhibidores de las histona desacetilasas, o inhibidores de HDAC, según el uso de la expresión en la presente memoria, son compuestos que son capaces de inhibir la desacetilación de las histonas in vivo, in vitro o ambos. Como tales, los inhibidores de HDAC inhiben la actividad de por lo menos una histona desacetilasa. Como resultado de la inhibición de la desacetilación de por lo menos una histona, se produce un incremento de las histonas acetiladas y la acumulación de histonas acetiladas es un marcador biológico adecuado para evaluar la actividad de los inhibidores de HDAC. Por lo tanto, pueden utilizarse procedimientos que pueden someter a ensayo para la acumulación de histonas acetiladas para determinar la actividad de inhibición de HDAC de los compuestos de interés. Se entiende que los compuestos que pueden inhibir la actividad de las histona desacetilasas también pueden unirse a otros sustratos y como tales pueden inhibir otras moléculas biológicamente activas, tales como enzimas. También debe entenderse que los compuestos de la presente invención son capaces de inhibir cualquiera de las histona desacetilasas indicadas anteriormente, o cualquier otra histona desacetilasa.

Por ejemplo, en pacientes que reciben inhibidores de HDAC, la acumulación de histonas acetiladas en células mononucleares periféricas, así como en tejido tratado con inhibidores de HDAC puede determinarse frente a un control adecuado.

La actividad inhibidora de HDAC de un compuesto particular puede determnarse in vitro utilizando, por ejemplo, ensayos enzimáticos que muestran inhibición de por lo menos una histona desacetilasa. Además, la determinación de la acumulación de histonas acetiladas en células tratadas con una composición particular puede ser determinante de la actividad inhibidora de HDAC de un compuesto.

Los ensayos de la acumulación de histonas acetiladas son bien conocidos en la literatura. Ver, por ejemplo, Marks P. A. et al., J. Natl. Cancer Inst. 92:1210-1215, 2000; Butler L.M. et al., Cancer Res. 60:5165-5170, 2000; Richon V.M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:3003-3007, 1998, y Yoshida M. et al., J. Biol. Chem. 265:17174-17179, 1990.

Por ejemplo, un ensayo enzimático para determinar la actividad de un compuesto inhibidor de HDAC puede llevarse a cabo de la manera siguiente. Brevemente, el efecto de un compuesto inhibidor de HDAC sobre HDAC1 etiquetado con epítopo (Flag) purificado por afinidad puede someterse a ensayo mediante la incubación de la preparación de enzima en ausencia de sustrato sobre hielo durante aproximadamente 20 minutos con la cantidad indicada de compuesto inhibidor. Puede añadirse sustrato (histonas derivadas de células de eritroleucemia murina marcadas con [^{3}H]-acetilo) y la muestra puede incubarse durante 20 minutos a 37ºC en un volumen total de 30 \mul. A continuación, la reacción puede detenerse y el acetato liberado puede extraerse y determinarse la radioactividad liberada mediante recuento de centelleo. Un ensayo alternativo que resulta útil para determinar la actividad de un compuesto inhibidor de HDAC es el ensayo de actividad fluorescente de HDAC; Drug Discovery Kit-AK-500, disponible de BIOMOL® Research Laboratories Inc., Plymouth Meeting, PA.

Pueden llevarse a cabo estudios in vivo de la manera siguiente. Puede inyectarse intraperitonealmente un compuesto inhibidor de HDAC en animales, por ejemplo en ratones. Pueden aislarse tejidos seleccionados, por ejemplo cerebro, bazo, hígado, etc., en tiempos predeterminados, tras la administración. Pueden aislarse histonas de los tejidos esencialmente tal como describen Yoshida et al., J. Biol. Chem. 265:17174-17179, 1990. Pueden someterse a electroforesis cantidades iguales de histona (aproximadamente 1 \mug) en geles de SDS-poliacrilamida al 15% y pueden transferirse a filtros Hybond-P (disponibles de Amersham). Los filtros pueden bloquearse con leche al 3% y pueden sondearse con un anticuerpo policlonal purificado anti-histona H4 acetilada de conejo (\alpha-Ac-H4) y anticuerpo anti-histona H3 acetilada de conejo (\alpha-Ac-H3) (Upstate Biotechnology Inc.). Pueden visualizarse los niveles de histona acetilada utilizando un anticuerpo anticonejo de cabra conjugado con peroxidasa de rábano picante (1:5.000) y el sustrato quimioluminiscente SuperSignal (Pierce). A modo de control de carga para la proteína histona, pueden correrse geles paralelos y teñirse con azul de Coomassie (CB).

Además, se ha demostrado que inhibidores de HDAC basados en ácido hdiroxámico regulan positivamente la expresión del gen p21^{WAFI}. La proteína p21^{WAFI} resulta inducida dentro de las 2 primeras horas de cultivo con inhibidores de HDAC en una diversidad de células transformadas utilizando métodos estándares. La inducción del gen p21^{WAFI} se asocia a la acumulación de histonas acetiladas en la región de la cromatina donde se localiza dicho gen. Por lo tanto, la inducción de p21^{WAFI} puede reconocerse como implicada en la detención del ciclo celular G1 causado por inhibidores de HDAC en células transformadas.

Típicamente, los inhibidores de HDAC se clasifican en cinco categorías generales: 1) derivados del ácido hidroxámico; 2) ácidos grasos de cadena corta (SCFAs); 3) tetrapéptidos cíclicos; 4) benzamidas; y 5) cetonas electrofílicas.

A.

Derivados de ácido hidroxámico, tales como el ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA) (Richon et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:3003-3007, 1998), la bis-hidroxamida del ácido m-carboxicinámico (CBHA) (Richon et al., supra); la piroxamida; análogos de la tricostatina, tales como la tricostatina A (TSA) y la tricostatina C (Koghe et al., Biochem. Pharmacol. 56:1359-1364, 1998); el ácido salicilhidroxámico (Andrews et al., International J. Parasitology 30:761-768, 2000); el ácido suberoil-bis-hidroxámico (SAHA) (patente U.S. No. 5.608.108); el ácido azelaico-bis-hidroxámico (ABHA) (Andrews et al., supra); la azelaico-1-hidroxamato-9-anilida (AAHA) (Qiu et al., Mol. Biol. Cell 11:2069-2083, 2000); el ácido 6-(3-clorofenilureido)carpoico (3C1-UCHA); la oxamflatina [ácido (2E)-5-[3-(fenilsulfonil)aminolfenil]-pent-2-en-4-inohidroxámico] (Kim et al., Oncogene 18:2461-2470, 1999); A-161906; Scriptaid (Su et al., Cancer Research 60:3137-3142, 2000); PXD-101 (Prolifix); LAQ-824; CHAP; MW2796 (Andrews et al., supra); MW2996 (Andrews et al., supra); o cualquier de los ácidos hidroxámicos dados a conocer en las patentes U.S. Nos. 5.369.108, 5.932.616, 5.700.811, 6.087.367 y 6.511.990.

Se ha demostrado que SAHA se une directamente al bolsillo catalítico del enzima histona desacetilasa. SAHA induce la detención del ciclo celular, la diferenciación y/o la apoptosis de las células transformadas en cultivo e inhibe el crecimiento tumoral en roedores. SAHA resulta eficaz para inducir dichos efectos tanto en tumores sólidos como en cánceres hematológicos. Se ha demostrado que SAHA resulta eficaz para inhibir el crecimiento tumoral en animales sin toxicidad para los mismos. La inhibición inducida por SAHA del crecimiento tumoral se asocia a una acumulación de histonas acetiladas en el tumor. SAHA resulta eficaz para inhibir el desarrollo y crecimiento continuo de tumores mamarios inducidos por carcinógeno (N-metilnitrosourea) en ratas. Se administró SAHA a las ratas en su dieta durante los 130 días del estudio. De esta manera, SAHA es un agente antitumoral oralmente activo no tóxico cuyo mecanismo de acción implica la inhibición de la actividad de histona desacetilasa.

Los inhibidores de HDAC preferidos son aquellos dados a conocer en las patentes U.S. Nos. 5.369.108, 5.932.616, 5.700.811, 6.087.367 y 6.511.990, de algunos de los presentes inventores.

El inhibidor de HDAC utilizado en la presente invención se encuentra representado por la estructura de la fórmula 3, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable de la misma, y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

6

en la que n es un número entero comprendido entre 5 y aproximadamente 8.

\global\parskip1.000000\baselineskip

En una forma de realización preferida de fórmula 3, n es 6. El inhibidor de HDAC es SAHA (4) o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. SAHA puede representarse mediante la fórmula estructural siguiente:

\vskip1.000000\baselineskip

7

\vskip1.000000\baselineskip

También se dan a conocer en la presente memoria composiciones que comprenden sales farmacéuticamente aceptables de los inhibidores de HDAC con ácidos orgánicos e inorgánicos, sales de adición de ácido que pueden ser, por ejemplo, ácido hidroclórico, ácido sulfúrico, ácido metanosulfónico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido succínico, ácido acético, ácido benzoico, ácido oxálico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbónico, ácido fosfórico y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables también pueden prepararse mediante tratamiento con bases inorgánicas, por ejemplo hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio o hierro, y bases orgánicas tales como isopropilamina, trimetilamina, 2-etilamino-etanol, histidina, procaína y similares.

También se dan a conocer en la presente memoria composiciones farmacéuticas que comprenden hidratos de los inhibidores de HDAC. El término "hidrato" incluye, aunque sin limitarse a ellos, hemidrato, monohidrato, dihidrato, trihidrato y similares.

La presente invención también comprende composiciones farmacéuticas que comprenden cualquier forma física sólida o líquida de SAHA. Los inhibidores de HDAC pueden encontrarse en forma cristalina, en forma amorfa y pueden presentar cualquier tamaño de partícula. Las partículas de inhibidor de HDAC pueden micronizarse o pueden encontrarse aglomeradas, en forma de gránulos particulados, aceites, suspensiones aceitosas o cualquier otra forma física sólida o líquida.

\vskip1.000000\baselineskip

Usos terapéuticos de los inhibidores de HDAC 1. Tratamiento del cáncer

Tal como se demuestra en la presente memoria, los inhibidores de HDAC resultan útiles para el tratamiento del cáncer, comprendiendo la administración en dicho sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de histona desacetilasa indicado en la presente memoria.

El término "cáncer" se refiere a cáncer causado por la proliferación de células neoplásicas, tal como el mesotelioma, por ejemplo mesoteliomas tales como el mesotelioma pleural, el mesotelioma peritoneal y el mesotelioma fibroso benigno.

\vskip1.000000\baselineskip

2. Tratamiento del mesotelioma

Tal como se demuestra en la presente memoria, los inhibidores de HDAC resultan útiles para el tratamiento del mesotelioma.

Existen diversos tipos de mesotelioma. Los mesoteliomas pleural y peritoneal (maligno) implican tumores del tejido mesotelial asociados a la exposición al amianto. Histológicamente estos tumores están compuestos de tipos celulares epitelioide, sarcomatoide, o fibroso, o una mezcla de tipos celulares (también denominados de tipo bifásico). El mesotelioma fibroso benigno es un tumor sólido raro de la pleura que produce dolor torácico, disnea, fiebre y osteoartropatía hipertrófica.

Un sistema de clasificación en estadios utilizado para el mesotelioma es el sistema de Butchart. Este sistema se basa principalmente en la extensión de la masa tumoral maligna primaria y divide los mesoteliomas en los estadios I a IV.

8

\vskip1.000000\baselineskip

Sistema de gradación

Tal como se contempla en la presente memoria, los inhibidores de HDAC de la presente invención resultan útiles para tratar todos los estadios del mesotelioma, es decir, los estadios I, II, III y IV indicados anteriormente.

Terapia de combinación

Los usos de la presente invención también pueden comprender administrar inicialmente en el sujeto un agente antitumoral para convertir a las células neoplásicas en el sujeto en resistentes a un agente antitumoral y posteriormente administrar una cantidad eficaz de cualquiera de las composiciones de la presente invención, eficaces para inducir selectivamente la diferenciación terminal, la detención del crecimiento celular y/o la apoptosis de dichas células, o para tratar el cáncer o proporcionar quimioprevención.

El agente antitumoral puede ser uno de entre numerosos agentes quimioterapéuticos, tales como un agente alquilante, un antimetabolito, un agente hormonal, un antibiótico, colchicina, un alcaloide vinca, L-asparaginasa, procarbazina, hidroxiurea, mitotano, nitrosoureas, o una carboxamida imidazol. Son agentes adecuados aquellos agentes que estimulan la despolarización de la tubulina. Preferentemente, el agente antitumoral es la colchicina o un alcaloide vinca; resulta especialmente preferente la vinblastina y la vincristina. En realizaciones en las que el agente antitumoral es la vincristina, las células preferentemente se tratan de manera que sean resistentes a la vincristina a una concentración de aproximadamente 5 mg/ml. El tratamiento de las células para que sean resistentes a un agente antitumoral puede llevarse a cabo poniendo en contacto las células con el agente durante un periodo de por lo menos 3 a 5 días. La puesta en contacto de las células resultantes con cualquiera de los compuestos anteriormente indicados se lleva a cabo tal como se ha indicado previamente. Además de los agentes quimioterapéuticos anteriormente indicados, los compuestos también pueden administrarse conjuntamente con terapia de radiación.

Dosis y programas de dosificación

El régimen de dosificación que utiliza los inhibidores de HDAC puede seleccionarse de acuerdo con una diversidad de factores, incluyendo el tipo, especie, edad, peso, sexo y tipo de cáncer bajo tratamiento; la severidad (es decir, el estadio) del cáncer que debe tratarse, la vía de administración, la función renal y hepática del paciente, y el compuesto particular o sal del mismo utilizado. Un médico o veterinario ordinario podrá determinar fácilmente y prescribir la cantidad eficaz del fármaco requerido para tratar, por ejemplo para prevenir, inhibir (parcial o totalmente) o detener el progreso de la enfermedad.

Las dosis adecuadas son una dosis diaria total comprendida entre aproximadamente 25 y 4.000 mg/m^{2} administrados por vía oral una vez al día, dos veces al día o tres veces al día, continuamente (cada día) o intermitentemente (por ejemplo 3 a 5 días a la semana). Por ejemplo, puede administrarse SAHA en una dosis diaria total de hasta 800 mg. El inhibidor de HDAC puede administrarse una vez al día (QD) o dividirse en múltiples dosis diarias, tales como dos veces al día (BID) y tres veces al día (TID). El inhibidor de HDAC puede administrarse en una dosis diaria total de hasta 800 mg, por ejemplo 150 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 600 mg ó 800 mg, que pueden administrarse en una dosis diaria o pueden dividirse en múltiples dosis diarias tal como se ha indicado anteriormente. Preferentemente la administración es por vía oral.

La composición puede administrarse una vez al día a una dosis de aproximadamente 200 a 600 mg; dos veces al día a una dosis de aproximadamente 200 a 400 mg; dos veces al día a una dosis de aproximadamente 200 a 400 mg intermitentemente, por ejemplo tres, cuatro o cinco días a la semana; y tres veces al día a una dosis de aproximadamente 100 a 250 mg.

La dosis diaria es 200 mg, que pueden administrarse una vez al día, dos veces al día o tres veces al día; la dosis diaria puede ser 300 mg, que pueden administrarse una vez al día, dos veces al día o tres veces al día; la dosis diaria puede ser 400 mg, que pueden administrarse una vez al día o dos veces al día; la dosis diaria puede ser 150 mg, que pueden administrarse dos veces al día o tres veces al día.

Además, la administración puede ser continua, es decir cada día, o intermitente. Los términos "intermitente" o "intermitentemente" tal como se utilizan en la presente memoria se refieren a detener e iniciar a intervalos regulares o irregulares. Por ejemplo, la administración intermitente de un inhibidor de HDAC puede ser la administración en uno a seis días a la semana, o puede referirse a la administración en ciclos (por ejemplo la administración diaria durante dos a ocho semanas consecutivas, después un periodo de reposo sin administración durante hasta una semana) o puede referirse a la administración en días alternos.

Puede administrarse SAHA o cualquiera de los inhibidores de HDAC en el paciente a una dosis diaria total comprendida entre 25 y 4.000 mg/m^{2}.

Un protocolo de tratamiento comprende la administración continua (es decir, cada día) una vez, dos veces o tres veces al día a una dosis diaria total comprendida en el intervalo de entre aproximadamente 200 mg y aproximadamente 600 mg.

Otro protocolo de tratamiento comprende la administración intermitente de entre tres a cinco días a la semana, una vez, dos veces o tres veces al día a una dosis total diaria comprendida en el intervalo de entre aproximadamente 200 mg y aproximadamente 600 mg.

El inhibidor de HDAC puede administrarse continuamente una vez al día a una dosis de 400 mg o dos veces al día a una dosis de 200 mg.

El inhibidor de HDAC puede administrarse intermitentemente tres días a la semana, una vez al día a una dosis de 400 mg o dos veces al día a una dosis de 200 mg; cuatro días a la semana, una vez al día a una dosis de 400 mg o dos veces al día a una dosis de 200 mg, cinco días a la semana, una vez al día a una dosis de 400 mg o dos veces al día a una dosis de 200 mg; o puede administrarse continuamente una vez al día a una dosis de 600 mg, dos veces al día a una dosis de 300 mg, o tres veces al día a una dosis de 200 mg.

El inhibidor de HDAC puede administrarse intermitentemente tres veces a la semana, una vez al día a una dosis de 600 mg, dos veces al día a una dosis de 300 mg, o tres veces al día a una dosis de 200 mg; o cinco días a la semana, una vez al día a una dosis de 600 mg, dos veces al día a una dosis de 300 mg, o tres veces al día a una dosis de 200 mg.

Además, el inhibidor de HDAC puede administrarse según cualquiera de los programas indicados anteriormente, consecutivamente durante unas cuantas semanas, seguido de un periodo de reposo. Por ejemplo, el inhibidor de HDAC puede administrarse según cualquiera de los programas indicados anteriormente, durante dos a ocho semanas, seguido de un periodo de reposo de una semana, o dos veces al día a una dosis de 300 mg tres a cinco veces a la semana. El inhibidor de HDAC puede administrarse tres veces al día durante dos semanas consecutivas, seguido de una semana de reposo.

La presente invención proporciona un régimen de dosificación diaria segura de dichas formulaciones, que resulta fácil de seguir y de cumplir. Por lo tanto, las formulaciones de las composiciones de la presente invención resultan útiles para inducir selectivamente la diferenciación terminal, la detención del crecimiento celular, y/o la apoptosis de las células neoplásicas, y por lo tanto ayudan al tratamiento de tumores.

Composiciones farmacéuticas

Los compuestos de la invención, y derivados, fragmentos, análogos, homólogos, y sales o hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos, pueden incorporarse en composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración oral, conjuntamente con un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. Dichas composiciones típicamente comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos anteriormente indicados, y un portador farmacéuticamente aceptable. Preferentemente, la cantidad eficaz es una cantidad que resulta eficaz para inducir selectivamente la diferenciación terminal de células neoplásicas adecuadas, y una cantidad inferior a la que provoca toxicidad en un paciente.

Las composiciones de la presente invención pueden formularse en cualquier forma de dosificación unitaria (liquida o sólida) adecuada para la administración oral, por ejemplo en forma de un pellet, tableta, tableta recubierta, cápsula, cápsula de gelatina, solución, suspensión o dispersión. En una forma de realización actualmente preferida, la composición se encuentra en forma de una cápsula de gelatina.

Puede utilizarse en las formulaciones de la presente invención cualquier excipiente inerte utilizado comúnmente como portador o diluyente, tal como, por ejemplo, una goma, un almidón, un azúcar, un material celulósico, un acrilato, o mezclas de los mismos. Un diluyente preferente es la celulosa microcristalina. Las composiciones pueden comprender además un agente desintegrante (por ejemplo la croscarmelosa sódica) y un lubricante (por ejemplo el estearato de magnesio) y además pueden comprender uno o más aditivos seleccionados de entre un ligante, un tampón, un inhibidor de proteasa, un surfactante, un agente solubilizante, un plastificador, un emulsionante, un agente estabilizador, un agente potenciador de la viscosidad, un edulcorante, un agente formador de película, o cualquier combinación de los mismos. Además, las composiciones de la presente invención pueden presentarse en forma de formulaciones de liberación controlada o de liberación inmediata.

Una forma de realización es una composición farmacéutica para la administración oral que comprende SAHA o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, celulosa microcristalina, croscarmelosa sódica y estearato de magnesio. Preferentemente, la composición comprende 50% a 70% en peso de un inhibidor de HDAC, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable de la misma, 20% a 40% en peso de celulosa microcristalina, 5% a 1,5% en peso de croscarmelosa sódica y 0,1% a 5% en peso de estearato de magnesio. Las composiciones pueden comprender aproximadamente 50 a 200 mg de un inhibidor de HDAC.

Las composiciones farmacéuticas se administran oralmente, y de esta manera se formulan en una forma adecuada para la administración oral, es decir, en forma de una preparación sólida o líquida. Entre las formulaciones orales sólidas adecuadas se incluyen tabletas, cápsulas, píldoras, gránulos, pellets y similares. Entre las formulaciones orales líquidas adecuadas se incluyen soluciones, suspensiones, dispersiones, emulsiones, aceites y similares. En una forma de realización de la presente invención, la composición se formula en una cápsula. De acuerdo con lo anterior, las composiciones pueden comprender, además del compuesto activo inhibidor de HDAC y el portador o diluyente inerte, una cápsula de gelatina dura.

Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "portador farmacéuticamente aceptable" pretende incluir cualquiera de los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardantes de la absorción, y la totalidad de los mismos, y similares, y que resulten compatibles con la administración farmacéutica, tales como agua estéril libre de pirógenos. Los portadores adecuados se describen en la edición más reciente de Remington's Pharmaceutical Sciences, un texto de referencia estándar en el campo. Entre los ejemplos preferentes de dichos portadores o diluyentes se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, agua, solución salina, soluciones de Finger, solución de dextrosa, y albúmina de suero humano al 5%. También pueden utilizarse liposomas y vehículos no acuosos, tales como los aceites fijados. La utilización de dichos medios y agentes para las sustancias farmacéuticamente activas es bien conocida de la técnica. Excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional resulte incompatible con el compuesto activo, la utilización del mismo se encuentra contemplada. También pueden incorporarse en las composiciones compuestos activos suplementarios.

Entre los portadores/diluyentes sólidos se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, una goma, un almidón (por ejemplo almidón de maíz, almidón pregelatinizado), un azúcar (por ejemplo lactosa, manitol, sacarosa o dextrosa), un material celulósico (por ejemplo celulosa microcristalina), un acrilato (por ejemplo polimetilacrilato), carbonato de calcio, óxido de magnesio, talco, o mezclas de los mismos.

Para las formulaciones líquidas, los portadores farmacéuticamente aceptables pueden ser soluciones acuosas o no acuosas, suspensiones, emulsiones, o aceites. Son ejemplos de solventes no acuosos el propilenglicol, el polietilenglicol y los ésteres orgánicos inyectables, tales como el oleato de etilo. Entre los portadores acuosos se incluyen agua, soluciones alcohólicas/acuosas, emulsiones, o suspensiones, incluyendo la solución salina y los medios tamponados. Son ejemplos de aceites, aquellos obtenidos del petróleo, de origen animal, vegetal o sintético, por ejemplo aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de oliva, aceite de girasol y aceite de hígado de pescado. Las soluciones o suspensiones también pueden incluir los componentes siguientes: un diluyente estéril, tal como agua para inyección, solución salina, aceites fijados, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros solventes sintéticos; agentes antibacterianos, tales como alcohol bencílico o metilparabenes; antioxidantes, tales como ácido ascórbico o bisulfito sódico; agentes quelantes, tales como ácido etilendiamintetraacético (EDTA); tampones, tales como acetatos, citratos o fosfatos, y agentes para el ajuste de la tonicidad, tales como cloruro sódico o dextrosa. El pH puede ajustarse con ácidos o bases, tales como ácido hidroclórico o hidróxido sódico.

Además, las composiciones pueden comprender más ligantes (por ejemplo acacia, almidón de maíz, gelatina, carbómero, etilcelulosa, goma guar, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, povidona), agentes desintegrantes (por ejemplo almidón de maíz, almidón de patata, ácido algínico, dióxido de silicio, croscarmelosa sódica, crospovidona, goma guar, glicolato de almidón sódico, Primogel), tampones (por ejemplo, tris-HCl, acetato, fosfato) de diverso pH y fuerza iónica; aditivos, tales como albúmina o gelatina para evitar la adsorción a superficies, detergentes (por ejemplo Tween 20, Tween 80, Pluronic F68, sales de ácido biliar), inhibidores de proteasa, surfactantes (por ejemplo laurilsulfato sódico), potenciadores de permeación, agentes solubilizantes (por ejemplo glicerol, polietilenglicerol), un glidante (por ejemplo dióxido de silicio coloidal), antioxidantes (por ejemplo ácido ascórbico, metabisulfito sódico, hidroxianisol butilado), estabilizantes (por ejemplo hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa), agentes potenciadores de la viscosidad (por ejemplo carbómero, dióxido de silicio coloidal, etilcelulosa, goma guar), edulcorantes (por ejemplo sacarosa, aspartamo, ácido cítrico), agentes saborizantes (por ejemplo menta, salicilato de metilo o saborizante naranja), conservantes (por ejemplo timerosal, alcohol bencílico, parabenes), lubricantes (por ejemplo ácido esteárico, estearato de magnesio, polietilenglicol, laurilsulfato sódico), adyuvantes de flujo (por ejemplo dióxido de silicio coloidal), plastificadores (por ejemplo ftalato de dietilo, citrato de trietilo), emulsionantes (por ejemplo carbómero, hidroxipropilcelulosa, laurilsulfato sódico), recubrimiento de polómero (por ejemplo poloxámeros o poloxaminas), agentes de recubrimiento y formadores de película (por ejemplo etilcelulosa, acrilatos, polimetacrilatos) y/o adyuvantes.

Preferentemente, los compuestos activos se preparan con portadores que protegen al compuesto frente a la rápida eliminación del cuerpo, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes y sistemas de administración microencapsulados. Pueden utilizarse polímeros biodegradables biocompatibles, tales como acetato de etilenvinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres y ácido poliláctico. Los métodos de preparación de dichas formulaciones resultarán evidentes para el experto en la materia. Los materiales también pueden obtenerse comercialmente de Alza Corporation y Nova Pharmaceuticals Inc. También pueden utilizarse suspensiones liposómicas (incluyendo liposomas dirigidos a células infectadas con anticuerpos monoclonales contra antígenos víricos) como portadores farmacéuticamente aceptables. Estos pueden prepararse según los métodos conocidos por el experto en la materia, por ejemplo tal como se describe en la patente U.S. No. 4.522.811.

Resulta especialmente ventajoso formular composiciones orales en forma de dosificación unitaria para facilitar la administración y uniformidad de la dosificación. La forma de dosificación unitaria tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas para dosis unitarias para el sujeto que debe tratarse; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo, calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. La especificación para las formas de dosificación unitaria de la invención están dictadas, y son directamente dependientes, de las características únicas del compuesto activo y del efecto terapéutico particular que deben conseguirse, y de las limitaciones inherentes en la técnica de preparación de compuestos, tales como un compuesto activo para el tratamiento de individuos.

Las composiciones farmacéuticas pueden incluirse en un recipiente, paquete, o dispensador conjuntamente con instrucciones para la administración.

La administración diaria puede repetirse continuamente durante un periodo de varios días a varios años. El tratamiento oral puede continuar durante una semana a toda la vida del paciente. Preferentemente la administración tiene lugar durante cinco días consecutivos, después de lo cual el paciente puede ser evaluado para determinar si resulta necesaria la administración adicional. La administración puede ser continua o intermitente, es decir, el tratamiento durante varios días consecutivos seguido de un periodo de reposo.

Las composiciones de la presente invención pueden administrarse por vía intravenosa el primer día de tratamiento, por vía oral el segundo día y todos los días consecutivos posteriores.

Las composiciones de la presente invención pueden administrarse con el propósito de prevenir la progresión de la enfermedad o para estabilizar el crecimiento tumoral.

La preparación de composiciones farmacéuticas que contienen un componente activo es bien conocida de la técnica, por ejemplo mediante procedimientos de mezcla, granulación o tableteo. El ingrediente terapéutico activo con frecuencia se mezcla con excipientes que son farmacéuticamente aceptables y compatibles con el ingrediente activo. Para la administración oral, los agentes activos se mezclan con aditivos habituales para este fin, tales como vehículos, estabilizadores, o diluyentes inertes, y se convierten mediante métodos rutinarios en formas adecuadas para la administración, tales como tabletas, tabletas recubiertas, cápsulas de gelatina dura o blanda, soluciones acuosas, alcohólicas o aceitosas, y similares, tal como se ha detallado anteriormente.

La cantidad de compuesto administrado en el paciente es inferior a una cantidad que causaría toxicidad en el mismo. La cantidad de compuesto que se administra en el paciente puede ser inferior a la cantidad que causa una concentración del compuesto en el plasma del paciente igual o superior al nivel tóxico del compuesto. Preferentemente, la concentración del compuesto en el plasma del paciente se mantiene a aproximadamente 10 nM. La concentración del compuesto en el plasma del paciente puede mantenerse a aproximadamente 25 nM. La concentración del compuesto en el plasma del paciente puede mantenerse a aproximadamente 50 nM. La concentración del compuesto en el plasma del paciente puede mantenerse a aproximadamente 100 nM. La concentración del compuesto en el plasma del paciente puede mantenerse a aproximadamente 500 nM. La concentración del compuesto en el plasma del paciente puede mantenerse a aproximadamente 1000 nM. La concentración del compuesto en el plasma del paciente puede mantenerse a aproximadamente 2500 nM. La concentración del compuesto en el plasma del paciente puede mantenerse a aproximadamente 5000 nM.

Se ha encontrado que con HMBA, la administración del compuesto en una cantidad de entre aproximadamente 5 g/m^{2}/día y aproximadamente 30 g/m^{2}/día, particularmente de aproximadamente 20 g/m^{2}/día, resulta eficaz sin producir toxicidad en el paciente. La cantidad óptima del compuesto que debe administrarse en el paciente en la práctica de la presente invención dependerá del compuesto particular utilizado y del tipo de cáncer bajo tratamiento.

En una forma de realización actualmente preferida de la presente invención, la composición farmacéutica comprende ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA), celulosa microcristalina como portador o diluyente, croscarmelosa sódica como desintegrante, y estearato de magnesio como lubricante. Otra forma de realización actualmente preferida de la invención es una formulación sólida de SAHA con celulosa microcristalina, NF (Avicel Ph 101), croscarmelosa sódica, NF (AC-Di-Sol) y estearato de magnesio, NF, contenido en una cápsula de gelatina.

El porcentaje de ingrediente activo y diversos excipientes en las formulaciones puede variar. Por ejemplo, la composición puede comprender entre 20% y 90%, preferentemente entre 50% y 70% en peso de la histona desacetilasa (HDAC). Además, la composición puede comprender entre 10% y 70%, preferentemente entre 20% y 40% en peso de celulosa microcristalina como portador o diluyente. Además, la composición puede comprender entre 1% y 30%, preferentemente entre 5% y 15% en peso de croscarmelosa sódica como desintegrante. Además, la composición puede comprender entre 0,1% y 5% en peso de estearato de magnesio como lubricante. En otra forma de realización preferida, la composición comprende aproximadamente 50 a 200 mg de inhibidor de HDAC (por ejemplo 50 mg, 100 mg y 200 mg del inhibidor de HDAC, es decir SAHA). En una forma de realización particularmente preferida, la composición se encuentra en la forma de una cápsula de gelatina.

Una forma de realización actualmente preferida es 200 mg de SAHA sólido con 89,5 mg de celulosa microcristalina, 9 mg de croscarmelosa sódica y 1,5 mg de estearato de magnesio contenidos en una cápsula de gelatina.

Usos in vitro

También se describe en la presente memoria métodos in vitro para inducir selectivamente la diferenciación terminal, la detención del crecimiento celular y/o la apoptosis de células neoplásicas, por ejemplo células de linfoma, inhibiendo de esta manera la proliferación de dichas células, mediante la puesta en contacto de las células in vitro con una cantidad eficaz de un inhibidor de HDAC, por ejemplo SAHA, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.

También se describen en la presente memoria métodos in vitro para inhibir la actividad de una histona desacetilasa, mediante la histona desacetilasa con una cantidad eficaz de un inhibidor de HDAC, por ejemplo SAHA, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo.

De esta manera, la presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas para la utilización en métodos para inducir selectivamente la diferenciación terminal, la detención del crecimiento celular y/o la apoptosis de las células neoplásicas, por ejemplo células de linfoma en un sujeto, inhibiendo de esta manera la proliferación de dichas células en dicho sujeto, mediante la administración en el mismo de dicha composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un inhibidor de HDAC, por ejemplo SAHA, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Una cantidad eficaz de un inhibidor de HDAC puede ser hasta una dosis diaria total de 800 mg.

La presente invención proporciona la utilización de SAHA en la preparación de un medicamento oral para inhibir la actividad de una histona desacetilasa en un sujeto, mediante la administración en un sujeto de una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de SAHA, o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Una cantidad eficaz de un inhibidor de HDAC en la presente invención puede ser hasta una dosis diaria total de 800 mg.

Ejemplos

La invención se ilustra en los Ejemplos siguientes. Esta sección se proporciona con el fin de ayudar a la comprensión de la invención, aunque no pretende, ni debe interpretarse que limita en modo alguno la invención según las reivindicaciones adjuntas.

Ejemplo 1 Síntesis de SAHA

Puede sintetizarse SAHA según el método descrito de manera general más abajo, o según el método proporcionado en la patente US 5.369.108, o según cualquier otro método.

Síntesis de SAHA

Etapa 1

Síntesis de ácido suberanílico

9

En un matraz de 22 litros se introdujeron 3.500 g (20,09 moles) de ácido subérico, y el ácido se fundió con calor. Se incrementó la temperatura hasta 175ºC y después se añadieron 2,040 g (21,92 moles) de anilina. Se incrementó la temperatura hasta 190ºC y se mantuvo a esta temperatura durante 20 minutos. Se vertió el fundido en un tanque Nalgene que contenía 4.017 g de hidróxido potásico disuelto en 50 litros de agua. Se agitó la mezcla durante 20 minutos, tras la adición del fundido. Se repitió la reacción a la misma escala, y el segundo fundido se vertió en la misma solución de hidróxido potásico. Tras agitar uniformemente la mezcla, se apagó el agitador, y se dejó que la mezcla sedimentase. A continuación, se filtró la mezcla a través de un filtro de Celite (4.200 g) (el producto se filtró para eliminar el producto secundario neutro (frente al ataque de la anilina en ambos extremos del ácido subérico). El filtrado contenía la sal del producto y también la sal de ácido subérico no reaccionado. Se dejó que la mezcla sedimentase debido a que la filtración era muy lenta, tardando varios días). Se acidificó el filtrado utilizando 5 litros de ácido hidroclórico concentrado; se agitó la mezcla durante una hora y después se dejó reposar durante la noche. Se recogió el producto mediante filtración y se lavó sobre el embudo con agua desionizada (4 x 5 litros). Se introdujo la torta de filtración húmeda en un matraz de 72 litros con 44 litros de agua desionizada, se calentó la mezcla a 50ºC y el sólido se aisló mediante una filtración en caliente (el producto deseado se encontraba contaminado con ácido subérico, que presenta una solubilidad mucho mayor en agua caliente. Se realizaron varias trituraciones en caliente para eliminar el ácido subérico. El producto se comprobó mediante RMN [D_{6}DMSO] para realizar un seguimiento de la eliminación del ácido subérico). Se repitió la trituración en caliente con 44 litros de agua a 50ºC. El producto nuevamente se aisló mediante filtración y se enjuagó con 4 litros de agua caliente. Se secó durante el fin de semana en un horno de vacío a 65ºC utilizando una bomba Nash como la fuente de vacío (la bomba Nash es una bomba de anillo líquido (agua) y genera un vacío de aproximadamente 29 pulgadas de mercurio. Se utilizó una purga intermitente de argón para ayudar a eliminar el agua); se obtuvieron 4.182,8 g de ácido suberanílico.

El producto todavía contenía una cantidad reducida de ácido subérico; por lo tanto, se realizó la trituración en caliente por partes a 65ºC utilizando aproximadamente 300 gramos de producto cada vez. Se filtró cada parte y se enjuagó intensamente con agua caliente adicional (un total de aproximadamente 6 litros). Esto se repitió para purificar el lote completo. Esto eliminó por completo el ácido subérico del producto. El producto sólido se agrupó en un matraz y se agitó con 6 litros de metanol/agua (1:2) y después se aisló mediante filtración y se secó al aire sobre el filtro durante el fin de semana. Se colocó en bandejas y se secó en un horno de vacío a 65ºC durante 45 horas utilizando una bomba Nash y una válvula de argón. El producto final presenta un peso de 3.278,4 g (rendimiento de 32,7%).

Etapa 2

Síntesis de suberanilato de metilo

10

En un matraz de 50 litros dotado de un agitador mecánico y condensador se introdujeron 3.229 gramos de ácido suberanílico de la etapa anterior, 20 litros de metanol y 398,7 gramos de resina Dowex 50WX2-400. Se calentó a reflujo la mezcla y se mantuvo bajo reflujo durante 18 horas. Se filtró la mezcla para eliminar las perlas de resina y el filtrado se redujo a un residuo en un evaporador giratorio.

El residuo del evaporador giratorio se transfirió a un matraz de 50 litros dotado de un condensador y agitador mecánico. Al matraz se añadieron 6 litros de metanol y la mezcla se calentó para proporcionar una solución. A continuación se añadieron 2 litros de agua desionizada y se apagó el calor. La mezcla agitada se dejó enfriar y después se introdujo el matraz en un baño de hielo y se enfrió la mezcla. El producto sólido se aisló mediante filtración y se enjuagó la torta de filtración con 4 litros de metanol frío/agua (1:1). Se secó el producto a 45ºC en un horno de vacío utilizando una bomba Nash durante un total de 64 horas para proporcionar 2.850,2 gramos (rendimiento de 84%) de suberanilato de metilo, CSL lote nº 98-794-92-3 1.

Etapa 3

Síntesis de SAHA crudo

11

A un matraz de 50 litros con un agitador mecánico, termopar y entrada para atmósfera inerte se añadieron 1.451,9 gramos de hidroxilamina, hidrocloruro, 19 litros de metanol anhidro y 3,93 litros de una solución de metóxido sódico al 30% en metanol. A continuación, el matraz se cargó con 2.748,0 gramos de suberanilato de metilo, seguido de 1,9 litros de una solución de metóxido sódico al 30% en metanol. La mezcla se dejó bajo agitación durante 16 horas y 10 minutos. Se transfirió aproximadamente la mitad de la mezcla de reacción del matraz de reacción (matraz 1) a un matraz de 50 litros (matraz 2) dotado de un agitador mecánico. A continuación, se añadieron 27 litros de agua desionizada al matraz 1 y la mezcla se agitó durante 10 minutos. Se midió el pH utilizando un pHímetro; el pH era de 11,56. El pH de la mezcla se ajustó a 12,02 mediante la adición de 100 ml de la solución de metóxido sódico al 30% en metanol; esto proporcionó una solución transparente (la mezcla de reacción en este momento contenía una cantidad reducida de sólido. El pH se ajustó para proporcionar una solución transparente a partir de la que se precipitaría el producto). La mezcla de reacción en el matraz 2 se diluyó de la misma manera, se añadieron 27 litros de agua desionizada, y se ajustó el pH mediante la adición de 100 ml de una solución de metóxido sódico al 30% a la mezcla, proporcionando un pH de 12,01 (solución transparente).

\newpage

La mezcla de reacción en cada matraz se acidificó mediante la adición de ácido acético glacial para precipitar el producto. El matraz 1 presentaba un pH final de 8,98, y el matraz 2 presentaba un pH final de 8,70. El producto de ambos matraces se aisló mediante filtración utilizando un embudo Buchner y filtro de tela. La torta de filtración se lavó con 15 litros de agua desionizada, y el embudo se cubrió y el producto se secó parcialmente sobre el embudo bajo vacío durante 15,5 horas. Se retiró el producto y se colocó en cinco bandejas de vidrio. Las bandejas se introdujeron en un horno de vacío y el producto se secó a peso constante. El primer periodo de secado fue de 22 horas a 60ºC utilizando una bomba Nash como la fuente de vacío con una válvula de argón. Se sacaron las bandejas del horno de vacío y se pesaron. Se devolvieron las bandejas al horno y el producto se secó durante 4 horas y 10 minutos adicionales utilizando una bomba de aceite como la fuente de vacío y sin válvula de argón. Se empaquetó el material en bolsas dobles de polietileno de 4 milipulgadas y se introdujo en un recipiente exterior de plástico. El peso final tras el muestreo fue de 2.633,4 gramos (95,6%).

Etapa 4

Recristalización de SAHA crudo

Se recristalizó el SAHA crudo a partir de metanol/agua. Se cargó un matraz de 50 litros dotado de un agitador mecánico, termopar, condensador y entrada para atmósfera inerte, con el SAHA crudo que debía cristalizarse (2.525,7 gramos), seguido de 2.625 ml de agua desionizada y 15.755 ml de metanol. Se calentó el material hasta el reflujo, proporcionando una solución. A continuación, se añadieron 5.250 ml de agua desionizada a la mezcla de reacción. Se apagó el calor, y la mezcla se dejó enfriar. Tras enfriarse suficientemente la mezcla, de manera que pudiese manipularse el matraz con seguridad (28ºC), éste se sacó de la camisa de calentamiento y se introdujo en una cuba para la utilización como baño de enfriamiento. Se añadió hielo/agua a la cuba para enfriar la mezcla a -5ºC. Se mantuvo la mezcla por debajo de dicha temperatura durante 2 horas. Se aisló el producto mediante filtración y se lavó la torta de filtración con 1,5 litros de metanol frío/agua (2:1). Se cubrió el embudo, y el producto se secó parcialmente bajo vacío durante 1,75 horas. Se sacó el producto del embudo y se colocó en 6 bandejas de vidrio. Las bandejas se introdujeron en un horno de vacío, y el producto se secó durante 64,75 horas a 60ºC utilizando una bomba Nash como la fuente de vacío y utilizando una válvula de argón. Se sacaron las bandejas para pesarlas, y después se devolvieron al horno y se secaron durante 4 horas adicionales a 60ºC hasta proporcionar un peso constante. La fuente de vacío para el segundo periodo de secado era una bomba de aceite y no se utilizó válvula de argón. El material se empaquetó en bolsas dobles de polietileno de 4 milipulgadas y se introdujeron en un recipiente exterior de plástico. El peso final tras el muestreo fue de 2.540,9 gramos (92,5%).

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 2 Dosificación oral de ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA)

Antecedentes: el tratamiento con agentes de diferenciación celular polares híbridos ha dado como resultado la inhibición del crecimiento de líneas celulares y xenoinjertos derivados de tumores sólidos humanos. El efecto se encuentra mediado en parte por la inhibición de la histona desacetilasa. SAHA es un potente inhibidor de la histona desacetilasa que se ha demostrado que presenta la capacidad de inducir la detección del crecimiento de las células tumorales, la diferenciación y la apoptosis en el laboratorio y en estudios preclínicos.

Objetivos: definir un régimen oral diario seguro de SAHA que pueda utilizarse en estudios de fase II. Además, evaluar el perfil farmacocinético de la formulación oral de SAHA. También se realizó un seguimiento de la biodisponibilidad oral de SAHA en seres humanos en estado de ayuno frente a estado de no ayuno y de los efectos antitumorales del tratamiento. Además, se evaluaron los efectos biológicos de SAHA sobre tejidos normales y células tumorales y se documentaron las respuestas con respecto a los niveles de acetilación de las histonas.

Pacientes: pacientes con tumores sólidos adultos de estado avanzado, primarios o metastásicos documentados histológicamente que eran refractarios a la terapia estándar o para los que no existen ninguna terapia curativa estándar. Los pacientes debían presentar un estado funcional de Karnofsky de \geq70% y funciones hematológicas, hepáticas y renales adecuadas. Para cada paciente debían haber pasado por lo menos cuatro semanas desde cualquier quimioterapia, terapia de radiación o administración de otros fármacos anticáncer investigacionales anteriores.

Programa de dosificación: el primer día, los pacientes se trataron en primer lugar con 200 mg de SAHA administrado por vía intravenosa. A partir del segundo día, los pacientes se trataron con dosis diarias de SAHA oral según la Tabla 1. Cada cohorte recibió una dosis diferente de SAHA. "QD" indica la dosificación de una vez al día; "Q12 horas" indica la dosificación de dos veces al día. Por ejemplo, los pacientes en la cohorte IV recibieron dos dosis de 800 mg de SAHA al día. Las dosis se administraron a los pacientes diaria y continuamente. Se extrajeron muestras de sangre el día uno y el día 21 del tratamiento oral. Se fueron retirando los pacientes del tratamiento de SAHA oral según la progresión de la enfermedad, la regresión tumoral, los efectos secundarios inaceptables o el tratamiento con otras terapias.

TABLA 1 Programa de dosificación oral de SAHA

12

\vskip1.000000\baselineskip

Resultados: la comparación entre los niveles plasmáticos séricos demuestra la elevada biodisponibilidad de SAHA administrado oralmente, tanto en el caso de que el paciente estuviera en ayuno como en el caso de que no estuviera en ayuno, en comparación con SAHA administrado por vía intravenosa (SAHA i.v.). "AUC" es una estimación de la biodisponibilidad de SAHA, en (ng/ml)minuto, en donde 660 ng/ml es igual a 2,5 \muM de SAHA. AUC conjuntamente con la vida media (t_{1/2}) muestran la biodisponibilidad global del SAHA oral de mejor manera que la biodisponibilidad de SAHA i.v. La concentración máxima de SAHA observada tras la administración es C_{max}. Se administró SAHA i.v. a una dosis de 200 mg infusionados durante dos horas. Se administró SAHA oral en una única cápsula de 200 mg. Las Tablas 2 y 3 resumen los resultados de un ensayo de HPLC (LCMS utilizando un estándar deuterado) que cuantifica la cantidad de SAHA en el plasma sanguíneo del paciente frente al tiempo utilizando histona-4 acetilada (\alpha-AcH4) como marcador.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 2 Niveles plasmáticos séricos de SAHA oral - paciente nº 1

13

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 3 Niveles plasmáticos séricos de SAHA oral - paciente nº 2

14

\vskip1.000000\baselineskip

Las figuras 1 a 8 son gráficos de HPLC que muestran la cantidad de \alpha-AcH4 en pacientes en las cohortes I y II, medida hasta las 10 horas tras recibir la dosis oral, en comparación con los niveles de \alpha-AcH4 al administrar SAHA por vía intravenosa. La fig. 9 muestra la concentración plasmática media de SAHA (ng/ml) en los puntos temporales indicados tras la administración. Fig. 9A: dosis oral (200 mg y 400 mg) en ayuno el día 8. Fig. 9B: dosis oral (200 mg y 400 mg) con alimentación el día 9. Fig. 9C: dosis i.v. el día 1. La fig. 10 muestra la vida media aparente de dosis orales de 200 mg y 400 mg de SAHA, los días 8, 9 y 22. La fig. 11 muestra la AUC (ng/ml/h) de dosis orales de 200 mg y 400 mg de SAHA los días 8, 9 y 22. La figura 12 muestra la biodisponibilidad de SAHA tras dosis orales de 200 mg y 400 mg los días 8, 9 y 22.

Ejemplo 3 Dosificación oral de ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA) - escalado de dosis

En otro experimento, se alistaron veinticinco pacientes que presentaban tumores sólidos, en el brazo A, trece pacientes que presentaban linfomas de Hodgkin o no de Hodgkin, en el brazo B, y un paciente que presentaba leucemia aguda y un paciente con síndrome mielodisplásico, en el brazo C, tal como se muestra en la Tabla 4.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 4 Esquema de escalado de dosis y número de pacientes en cada nivel de dosis

15

\vskip1.000000\baselineskip

Resultados:

De entre once pacientes tratados en la cohorte II, un paciente experimentó DLT de diarrea de grado 3 y deshidratación de grado 3 durante el primer ciclo de tratamiento. Nueve pacientes entraron en la cohorte III. Dos pacientes no fueron evaluables durante la evaluación de toxicidad de 28 días debido a la terminación precoz del estudio por la rápida progresión de la enfermedad. De los siete pacientes restantes, cinco experimentaron DLT durante el primer ciclo de tratamiento: diarrea/deshidratación (n=1), fatiga/deshidratación (n=1), anorexia (n=1), deshidratación (n=1) y anorexia/deshidratación (n=1). Estos cinco pacientes se recuperaron en aproximadamente una semana tras detener la administración del fármaco de estudio. Posteriormente se les redujo la dosis a 400 mg QD, que aparentemente resultó bien tolerada. La mediana de días con 400 mg BID para todos los pacientes de la cohorte III fue de 21 días. Basándose en estos resultados, se consideró que el programa de dosificación de 400 mg q12 horas había excedido la dosis máxima tolerada. Tras corregir el protocolo, se continuó la acumulación en la cohorte IV a una dosis de 600 mg una vez al día. De entre los siete pacientes alistados en la cohorte IV, dos no eran evaluables en evaluación de toxicidad de los 28 días debido a la terminación precoz del estudio por la rápida progresión de la enfermedad. Tres pacientes experimentaron DLT durante el primer ciclo de tratamiento: anorexia/deshidratación/fatiga (n=1) y diarrea/deshidratación (n=2). Por lo tanto, se consideró que la dosis de 600 mg había excedido la dosis máxima tolerada y se definió la dosis de 400 mg una vez al día como la dosis máxima tolerada para la administración oral de una vez al día. Se corrigió el protocolo para evaluar los niveles de dosis adicionales del programa de dosificación de dos veces al día de 200 mg BID y de 300 mg BID administrados continuamente.

El análisis farmacocinético preliminar se basó en 18 pacientes tratados con los niveles de dosis de 200 mg QD, 400 mg QD y 400 mg BID. En general, las estimaciones medias de C_{max} y AUC_{inf} de SAHA administrado oralmente bajo la condición de ayuno o con alimentación que se incrementó proporcionalmente a la dosis en el intervalo de dosis de 200 mg a 400 mg. Globalmente, la fracción de AUC_{inf} debido a la extrapolación era 1% o inferior. Las estimaciones medidas para la vida media aparente eran variables en los grupos de dosis bajo la condición de ayuno o de alimentación, encontrándose comprendidas entre 61 y 114 minutos. Las estimaciones medias de C_{max} variaban entre 233 ng/ml (0,88 \muM) y 570 ng/ml (2,3 \muM). La fracción biodisponible de SAHA, calculada a partir de los valores de AUC_{inf} tras la infusión i.v. o la administración oral, se encontró que era de aproximadamente 0,48.

Se recogieron células mononucleares sanguíneas periféricas preterapia, inmediatamente tras la infusión y entre 2 y 10 horas después de la ingestión oral de las cápsulas de SAHA para evaluar el efecto de SAHA sobre el grado de acetilación de histonas en una célula huésped normal. Las histonas se aislaron y se sondearon utilizando anticuerpo anti-histona acetilada (H3), seguido de anticuerpo secundario-HRP. El análisis preliminar demostró un incremento de la acumulación de histonas acetiladas en células mononucleares periféricas que podía detectarse hasta 10 horas después de la ingestión de las cápsulas de SAHA al nivel de dosis de 400 mg al día.

Trece pacientes continuaron el tratamiento durante 3 a 12 meses con enfermedad sensible o estable: tiroides (n=3), glándula sudorípara (n=1), renal (n=2), laringe (n=1), próstata (n=1), linfoma de Hodgkin (n=2), linfoma no de
Hodgkin (n=2) y leucemia (n=1).

Seis pacientes mostraron reducción del tumor en los barridos de TC. Tres de estos seis pacientes cumplían los criterios de respuesta parcial (un paciente con cáncer laríngeo metastásico y dos pacientes con linfomas no de Hodgkin). Estas respuestas parciales se produjeron a los niveles de dosis de 400 mg BID (n=2) y 600 mg QD (n=1).

Las dosis indicadas anteriormente también se administraron dos veces al día intermitentemente. Los pacientes recibieron SAHA dos veces al día tres a cinco días a la semana. Se observó una respuesta de los pacientes con la administración de SAHA dos veces al día a una dosis de 300 mg tres días a la semana.

Ejemplo 4 Dosificación intravenosa de SAHA

La Tabla 5 muestra un programa de dosificación para pacientes que recibieron SAHA por vía intravenosa. Los pacientes se iniciaron en la cohorte I, recibiendo 300 mg/m^{2} de SAHA durante cinco días consecutivos en una semana durante una semana, para una dosis total de 1500 mg/m^{2}. A continuación, se observaron los pacientes durante un periodo de dos semanas y se continuó hasta la cohorte II, después se progresó a través de las cohortes a menos que se terminase el tratamiento debido a la progresión de la enfermedad, la regresión tumoral, efectos secundarios inaceptables o que el paciente recibiría otro tratamiento.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 5 Escalado de dosis estándar para SAHA administrado por vía intravenosa

16

\vskip1.000000\baselineskip

Ejemplo 5 Tratamiento del mesotelioma con SAHA

Se alistaron tres pacientes que presentaban mesotelioma en estudios de fase I con SAHA. Se administró SAHA oral dos veces al día en los pacientes a una dosis de 300 mg o de 400 mg tres días a la semana. Se observó una respuesta parcial tras el tratamiento de SAHA según el régimen anterior durante 6 meses.

La figura 13 es un barrido de TC de un tumor de mesotelioma de un paciente antes (PRE - panel izquierdo) y después (POST - panel derecho) del tratamiento con SAHA dos veces al día a una dosis de 300 mg tres días a la semana durante 6 meses. Los datos demuestran que SAHA resulta eficaz para tratar los tumores de mesotelioma en los pacientes.

Aunque la presente invención se ha mostrado y descrito particularmente haciendo referencia a realizaciones preferentes de la misma, el experto en la materia entenderá que pueden realizarse diversos cambios de forma y detalles en la misma sin apartarse del alcance de la invención descrita. El alcance de la invención incluye el objeto de las reivindicaciones siguientes.

Referencias

1. Spoin, M. B., Roberts, A. B., and Driscoll, J. S. (1985) in Cancer: Principles and Practice of Oncology, eds. Hellman, S., et al., Ed. 2, (J. B. Lippincott, Philadelphia), P. 49.

2. Breitman, T. R, Selonick, S. E., and Collins, S. J. (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77; 2936-2940.

3. Olsson, L L. and Breitman, T. R. (1982) Cancer Res. 42: 3924-3927.

4. Schwartz, E. L. and Sartorelli, A. C. (1982) Cancer Res. 42: 2651-2655.

5. Marks, P. A., Sheffery, M., and Rifkind, R. A. (1987) Cancer Res. 47: 659.

6. Sachs, L. (1978) Nature (Lond.) 274: 535.

7: Friend, C:, Scher, W., Holland, J. W., and Sato, T. (1971) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 68: 378-382.

8. Tanaka, M., Levy, J., Terada, M., Breslow, R., Rifkind, R. A., and Marks, P. A. (1975) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 72: 1003-1006.

9. Reuben, R. C., Wife, R. L., Breslow, R., Rifkind, R. A., and Marks, P. A. (1976) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 73: 862-866.

10. Abe, E., Miyaura, C., Sakagami, H., Takeda, M., Konno, K., Yamazaki, T., Yoshika, S., and Suda, T. (1981) Proc. Natl. Acad. Sci, (USA) 78: 4990-4994.

11. Schwartz, E. L., Snoddy, J. R., Kreutter, D., Rasmussen, H., and Sartorelli, A. C. (1983) Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 24: 18.

12. Tanenaga, K., Hozumi, M., and Sakagami, Y. (1980) Cancer Res. 40: 914-919.

13. Lotem, J. and Sachs, L. (1975) Int. J. Cancer 15: 731-740.

14. Metcalf, D. (1985) Science, 229: 16-22.

15. Scher, W., Scher, B. M., and Waxman, S. (1983) Exp. Hematol. 11: 490-498.

16. Scher, W., Scher, B. M., and Waxman, S. (1982) Biochem. & Biophys. Res. Comm. 109: 348-354.

17. Huberman, E. and Callaham, M. F. (1979) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 76: 1293-1297.

18. Lottem, J. and Sachs, L. (1979) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 76: 5158-5162.

19. Terada, M., Epner, E., Nudel, U., Salmon, J., Fibach, E., Rifkind, R. A., and Marks, P. A. (1978) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 75: 2795-2799.

20. Morin, M. J. and Sartorelli, A. C. (1984) Cancer Res. 44: 2807-2812.

21. Schwartz, E. L., Brown, B. J., Nierenberg, M., Marsh, J. C., and Sartorelli, A. C. (1983) Cancer Res. 43: 2725-2730.

22. Sugano, H., Furusawa, M., Kawaguchi, T., and Ikawa, Y. (1973) Bibl. Hematol. 39: 943-954.

23. Ebert, P. S., Wars, I., and Buell, D. N. (1976) Cancer Res 36: 1809-1813.

24. Hayashi, M., Okabe, J., and Hozumi, M. (1979) Gann 70: 235-238.

25. Fibach, E., Reuben, R. C., Rifkind, R. A., and Marks, P. A. (1977) Cancer Res. 37: 440-444.

26. Melloni, E., Pontremoli, S., Damiani, G., Viotti, P., Weich, N., Rifkind, R. A., and Marks, P. A. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 85: 3835-3839.

27. Reuben, R., Khanna, P. L., Gazitt, Y., Breslow, R., Rifkind, R. A., and Marks, P. A. (1978) J. Biol. Chem. 253: 4214-4218.

28. Marks, P. A. and Rifkind, R A. (1988) Int. Journal of Cell Cloning 6: 230-240.

29. Melloni, E., Pontremoli, S., Michetti, M., Sacco, O., Cakiroglu, A. G., Jackson, J. F., Rifkind, R. A., and Marks, P. A. (1987) Proc. Natl. Acad. Sciences (USA) 84: 5282-5286.

30. Marks, P. A. and Rifkind, R. A. (1984) Cancer 54: 2766-2769.

\newpage

31. Egorin, M. J., Sigman, L. M. VanEcho, D. A., Forrest, A., Whitacre, M. Y., and Aisner, J. (1987) Cancer. Res. 47: 617-623.

32. Rowinsky, E. W., Ettinger, D. S., Grochow, L. B., Brundrett, R. B., Cates, A. E., and Donehower, R. C. (1986) J. Clin. Oncol. 4: 1835-1844.

33. Rowinsky, E. L. Ettinger, D. S., McGuire, W. P., Noe, D. A., Grochow, L. B., and Donehower, R. C. (1987) Cancer Res. 47: 5788-5795.

34. Callery, P. S., Egorin, M. J., Geelhaar, L. A., and Nayer, M. S. B. (1986) Cancer Res. 46: 4900-4903.

35. Young, C. W. Fanucchi, M. P., Walsh, T. B., Blatzer, L., Yaldaie, S., Stevens, Y. W., Gordon, C., Tong, W., Rifkind, R. A., and Marks, P. A. (1988) Cancer Res. 48: 7304-7309.

36. Andreeff, M., Young, C., Clarkson, B., Fetten, J., Rifkind, R. A., and Marks, P. A. (1988) Blood 72: 186a.

37. Marks, P. A., Breslow, R., Rifkind, R. A., Ngo, L., and Singh, R. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 86: 6358-6362.

38. Breslow, R., Jursic, B., Yan, Z. F., Friedman, E., Leng, L., Ngo, L., Rifkind, R. A., and Marks, P. A. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 88: 5542-5546.

39. Richon, V.M., Webb, Y., Merger, R., et al. (1996) PNAS 93: 5705-8.

40. Cohen, L.A., Amin, S., Marks, P.A., Rifkind, R.A., Desai, D., and Richon, V.M. (1999) Anticancer Research 19: 4999-5006.

41. Grunstein, M. (1997) Nature 389: 349-52.

42. Finnin, M.S., Donigian, J.R., Cohen, A., et al. (1999) Nature 401: 188-193.

43. Van Lint, C., Emiliani, S., Verdin, E. (1996) Gene Expression 5: 245-53.

44. Archer, S. Shufen, M. Shei, A., Hodin, R. (1998) PNAS 95: 6791-96.

45. Dressel, U., et al. (2000) Anticancer Research 20 (2A): 1017-22.

46. Lin, R.J., Nagy, L., Inoue, S., et al. (1998) Nature 391: 811-14.

Claims (5)

1. Utilización de ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA) representado por la estructura siguiente:

17

o una sal o hidrato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable, para la preparación de un medicamento oral para la administración en un sujeto destinado al tratamiento del mesotelioma.

2. Utilización según la reivindicación 1, en la que dicho medicamento es para la administración dos veces al día a una dosis de 300 mg intermitentemente.

3. Utilización según la reivindicación 2, en la que dicho medicamento es para la administración tres a cinco días a la semana.

4. Utilización según la reivindicación 2, en la que dicho medicamento es para la administración tres días a la semana.

5. Utilización según la reivindicación 1, en la que SAHA es el ingrediente activo en dicho medicamento.