ES2332588T3

ES2332588T3 - Tieno(2,3-c)isoquinolinas para usar como inhibidores de parp.

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Publication number: ES2332588T3
Application number: ES04076527T
Authority: ES
Inventors: Roberto Pellicciari; Flavio Moroni
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2000-10-31
Filing date: 2001-10-30
Publication date: 2010-02-09
Anticipated expiration: 2021-10-30
Also published as: WO2002036599A1; AU2002212575A1; EP1332147A1; ITMI20002358A1; EP1464646A1; ATE444298T1; US20110237617A1; JP4417622B2; EP1464646B1; DE60140086D1; US7825129B2; ITMI20002358A0; US6989388B2; US20060094746A1; JP2004520273A; US20040082789A1

Abstract

Un compuesto de fórmula I **(Ver fórmula)** en la que Y es un heteroátomo seleccionado de azufre (S) o nitrógeno (N), R1-R6 son los mismos o diferentes, y representan hidrógeno, hidroxi, un grupo OR7, carboxi, un grupo COOR7, un grupo amino, un grupo NHR7 o un halógeno, o R5 y R6 tomados conjuntamente forman un anillo condensado no aromático de 5 ó 6 miembros, R7 es un grupo alquilo de C1-C6, un grupo alquenilo de C2-C6 o un grupo cicloalquilo de C3-C7 opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste en grupos hidroxi, alcoxi de C1-C4, carboxi, alcoxi de C1-C4-carbonilo, amino, mono o dialquilo de C1-C6-amino o halógeno, o una de sus sales o solvatos.

Description

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Tieno[2,3-c]isoquinolinas para usar como inhibidores de PARP.

El tema de la presente invención es ciertos derivados heterocíclicos, incluyendo derivados de tieno[2,3-c]isoquinolin-3-ona y su uso en terapia como agentes inhibidores de la poli(ADP-ribosa) polimerasa (PARP).

Antecedentes de la invención

La poli(ADP-ribosa) polimerasa o poli(ADP-ribosa) sintasa (PARS) es una de las enzimas (EC 2.4.2.30) que cataliza la transferencia de ADP-ribosa desde NAD a los grupos carboxilo de las proteínas. Se encuentra principalmente en el núcleo celular y durante muchos años se ha considerado que su actividad se dirige hacia el mantenimiento de la integridad de la secuencia de DNA participando de algún modo en la reparación del daño sufrido por la secuencia de genes después de agresiones tóxicas o infecciosas. Algunas histonas, topoisomerasa I y II, DNA ligasa y otras proteínas nucleares

\hbox{son sustratos de esta enzima. Por
otra parte, la PARP en sí misma puede  sufrir auto
poli-ADP ribosilación.}

El cDNA que codifica a PARP ha sido clonado y la proteína ha sido purificada a partir de tejidos de muchas especies animales, incluyendo el hombre. La estructura de la PARP está disponible en varios bancos de datos, y consiste en:

1.: Un dominio amino terminal capaz de enlazarse a DNA (42 kDa),

2.: Una zona central también denominada dominio de auto-modificación (que puede así ser ADP-ribosilado y que en promedio pesa 16 kDa), y

3.: Un dominio carboxi terminal que contiene el sitio catalítico (55 kDa) y que tiene una composición de aminoácidos y una estructura terciaria muy conservada desde la mosca drosophila al hombre.

El estímulo necesario y suficiente para activar la enzima es el daño al DNA (formación de "muescas" u otras lesiones de la doble hélice) (de Murcia et al., 1992, Menisser-de Murcia et al., 1997). Esto ocurre comúnmente por la acción de oxidantes fuertes y/o de moléculas muy reactivas tales como los radicales libres que se forman abundantemente en los tejidos en el curso de varias situaciones patológicas. El óxido nítrico también puede directa o indirectamente dañar a la doble hélice del DNA, activar el PARP y llevar a la célula a la utilización masiva de NAD y a la disminución de ATP (Szabó et al., 1996).

Considerando entonces que la NAD es esencial para la fosforilación oxidativa y la resíntesis de ATP, puede entenderse cómo las células que están en esa situación no son capaces de mantener sus equilibrios iónicos y pueden sufrir degeneración tanto de tipo necrótica como de tipo apoptópica. La excesiva activación de la PARP bajo la acción de óxido nítrico recién formado puede ocurrir en el sistema nervioso central tras la activación de los receptores del glutamato del tipo NMDA asociados con la óxido nítrico sintasa neuronal (nNOS). También puede ocurrir en otros órganos o tejidos, ya que el óxido nítrico puede ser sintetizado por las NOS del endotelio o por las NOS inducibles de la microglía y los macrófagos, y difundirse en las células de alrededor. Muchos datos experimentales parecen estar en concordancia con esta hipótesis y se ha demostrado claramente que inhibiendo la PARP es posible reducir la muerte neuronal excitotóxica o la debida a los radicales libres en varios tipos cultivos neuronales (Schraufstatter et al., 1986; Cosi et al., 1994; Zhang et al., 1994). También se ha mostrado que los ratones recién nacidos con esta enzima estropeada son particularmente resistentes a la pérdida de tejido cerebral después de la oclusión de la arteria cerebral media o de la pérdida de células endocrinas después de la administración de toxinas. También se ha mostrado que las células extraídas de tales ratones son muy resistentes al estrés oxidante (Eliasson et al., 1997; Endres et al., 1997; Pieper et al., 1999). Los documentos WO99/59975 y WO99/11645 describen varias isoquinolinas condensadas como agentes inhibidores de la PARP.

Así, la importancia de tener agentes inhibidores de la PARP farmacéuticamente aceptables es clara.

Descripción de la invención

El objeto de la invención es los compuestos de fórmula I

1

en la que

Y es un heteroátomo seleccionado de azufre (S), nitrógeno (N) u oxígeno (O),

R_{1}-R_{6} son los mismos o diferentes, y representan hidrógeno, hidroxi, un grupo OR_{7}, carboxi, un grupo COOR_{7}, un grupo amino, un grupo NHR_{7} o un halógeno, o R_{5} y R_{6} tomados conjuntamente forman un anillo condensado aromático o no aromático de 5 ó 6 miembros,

R_{7} es un grupo alquilo de C_{1}-C_{6}, un grupo alquenilo de C_{2}-C_{6} o un grupo cicloalquilo de C_{3}-C_{7} posiblemente sustituido con uno o más hidroxi, un grupo alcoxi de C_{1}-C_{4}, carboxi, un grupo alcoxi de C_{1}-C_{4}-carbonilo, amino, grupos mono o dialquilo de C_{1}-C_{6}-amino o halógeno.

La invención incluye además las sales y los solvatos no tóxicos.

Los compuestos de fórmula I que contienen grupos ionizables serán de hecho capaces de formar sales con ácidos y bases farmacéuticamente aceptables tales como los ácidos clorhídrico, sulfúrico, tartárico, maleico, cítrico, succínico, acético, fosfórico, benzoico, metanosulfónico y semejantes, o con bases tales como de metales alcalinos o alcalino térreos, amonio, alquilamonio y semejantes.

Ejemplos de solvatos adecuados incluyen las formas hidratadas de los compuestos I.

Se entiende que "derivado fisiológicamente equivalente" quiere decir un compuesto capaz de liberar in vivo un compuesto de fórmula I o uno de sus metabolitos activos.

Ejemplos de grupos alquilo de C_{1}-C_{6} incluyen metilo, etilo, isopropilo, n-propilo y butilo.

Ejemplos de grupos alquenilo de C_{2}-C_{6} incluyen vinilo y alilo.

Ejemplos de grupos cicloalquilo de C_{3}-C_{7} incluyen ciclopropilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

Ejemplos de grupos alcoxi de C_{1}-C_{4} incluyen metoxi y etoxi.

Ejemplos de grupos alcoxi de C_{1}-C_{4}-carbonilo incluyen metoxicarbonilo y etoxicarbonilo.

Ejemplos de grupos alquilo de C_{1}-C_{6}-amino incluyen metilamino, dimetilamino, metiletilamino e isopropilamino.

El término halógeno se refiere a cloro, bromo, yodo o flúor, preferiblemente cloro o flúor.

Preferiblemente, en los compuestos de fórmula I, Y es un átomo de azufre.

Los compuestos más particularmente preferidos son aquellos en los que R_{1}-R_{6} son hidrógeno o uno de R_{1}-R_{6} es diferente de hidrógeno, tal como hidroxi, alcoxi, carboxi, alcoxicarbonilo, amino, alquilamino o halógeno como se definió anteriormente y los otros son hidrógeno.

En un grupo particularmente preferido de compuestos, R_{4} es hidrógeno o un grupo diferente de hidrógeno, preferiblemente hidroxi o alcoxi o amino, Y es nitrógeno, oxígeno o azufre, preferiblemente azufre, y R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{5} y R6 son hidrógeno.

La invención también proporciona un método para la preparación de los compuestos de fórmula I, el cual comprende la reacción con cloruro de tionilo de un compuesto de fórmula

2

en la que R'_{2}-R'_{6} son R_{1}-R_{6} como se definieron anteriormente o son grupos convertibles en R_{1}-R_{6}, seguida por reacción con azida de sodio y subsiguiente transposición de Curtius (J. Heterocyclic Chem., 1978, 15, 301-305) por termólisis.

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Un ejemplo de un grupo convertible es nitro, el cual puede reducirse a amino.

Los compuestos II son conocidos o pueden obtenerse por métodos conocidos. En el caso de los compuestos en los que Y sea, por ejemplo, azufre, los compuestos de fórmula II pueden obtenerse según el siguiente esquema:

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Esquema 1

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3

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El compuesto 3-bromotiofen-2-aldehído (2) se obtuvo a partir de 2,3-dibromotiofeno (1) comercialmente disponible vía 3-bromotienil-litio y reacción con N,N-dimetilformamida. El aldehído 2 se protegió por reacción con etilenglicol para dar 2-(3-bromo-2-tienil)-1,3-dioxolano (3). El último derivado se convirtió en ácido 2-formil-3-tiofenoborónico (4) usando interconversión halógeno-metal entre el sustrato (3) y butil-litio a -70ºC, seguida por tratamiento con borato de tributilo y subsiguiente hidrólisis. El derivado tienilborónico 4 es un compuesto intermedio muy útil, de hecho puede condensarse con varios compuestos bromo-aromáticos. Así, la reacción de condensación catalizada por paladio del derivado 4 con bromobenceno en una mezcla acuosa de carbonato de sodio-etanol como disolvente dio 3-fenil-tiofen-2-carboxaldehído (5). La oxidación de 5 con el reactivo de Jones dio el ácido 3-fenil-tiofen-2-carboxílico (6). La cloración de 6 con cloruro de tionilo seguida por reacción con azida de sodio dio el compuesto intermedio acil azida el cual tras termólisis en o-diclorobenceno a ebullición dio el derivado tieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona
(7).

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En el caso de la síntesis de compuestos en los que R_{4} sea un grupo amino o en el caso en los que los compuestos intermedios bromo-aromáticos adecuados no estén disponibles, puede utilizarse la siguiente ruta alternativa:

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Esquema 2

4

El compuesto intermedio 3-bromotiofen-2-aldehído (2) puede condensarse con varios ácidos fenilborónicos 2-sustituidos comercialmente disponibles o sintéticos, en particular con ácido 2-nitrofenilborónico para obtener 3-(2-nitrofenil)-tiofen-2-aldehído (8). La oxidación de 8 con el reactivo de Jones dio el ácido 3-(2-nitrofenil)-tiofen-2-carboxílico (9). La cloración de 9 con cloruro de tionilo seguida por reacción con azida de sodio dio el compuesto intermedio acil azida el cual tras termólisis en o-diclorobenceno a reflujo dio el compuesto intermedio 9-nitrotieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona (10), el cual tras reducción con hidrazina y níquel Raney como catalizador dio el derivado 9-aminotieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona (11).

En el caso de compuestos en los que Y sea, por ejemplo, nitrógeno, los compuestos de fórmula II pueden obtenerse análogamente siguiendo los esquemas 1 y 2 reemplazando el compuesto 3-bromotiofen-2-aldehído (2) con el compuesto intermedio 3-yodopirrol-2-aldehído obtenible mediante el siguiente esquema (Bull. Soc. Chim. 1973, 1, 351-359):

Esquema 3

5

En el caso de compuestos en los que Y sea oxígeno, los compuestos de fórmula II pueden obtenerse de una manera similar a la indicada en la bibliografía para derivados de furo[2,3-c]isoquinolina (J. Heterocyclic Chem., 1978, 15, 301-305).

Los compuestos de fórmula I pueden usarse tanto para la prevención como para el tratamiento de vastos sectores de la patología humana y animal. En particular, pueden utilizarse en la prevención y el tratamiento de:

1): Daño de tejidos debido a isquemia y reperfusión. Tal daño, con la consiguiente muerte celular apoptópica o necrótica, puede dar lugar a varias enfermedades neurológicas tales como: apoplejía, traumatismo cerebral o espinal, sucesos epilépticos, daño cerebral debido a paro cardíaco y/o situaciones de hipotensión prolongada, paro respiratorio, envenenamiento con monóxido de carbono o cianuro, ahogamiento o hidrocéfalo. La agresión cerebral también puede ser de una naturaleza tóxica (excitotoxinas y otros productos químicos), iatrogénica (incluyendo quirúrgica) y debida a radiación ionizante. El daño a los tejidos debido a isquemia y reperfusión también puede afectar al miocardio y estar presente en muchas cardiopatías tales como después del infarto, durante y después de cirugía de baipás coronario, tras la reanudación de la perfusión en corazones transplantados y realmente en cualquier momento en el que se realiza por razones quirúrgicas de paro cardíaco, y se inicia la reperfusión sanguínea. El riñón, el hígado, el intestino y la musculatura esqueletal son susceptibles de daño debido a isquemia y reperfusión. Esto ocurre en conmociones sépticas, endotóxicas, hemorrágicas y de compresión. También ocurre en la hernia estrangulada, la estrangulación de los recodos intestinales y después de compresión prolongada de articulaciones en pacientes con múltiples traumatismos.

2): Enfermedades degenerativas. La inhibición de la PARP puede extender la capacidad reproductora de varias células y por tanto utilizarse para impedir enfermedades típicamente asociadas con la edad. Particularmente, son de mencionar las enfermedades degenerativas del sistema nervioso central tales como la enfermedad de Parkinson, la demencia de Alzheimer, la corea de Huntington, la esclerosis lateral amiotrófica, la degeneración macular y la isquemia retinal. Otras enfermedades degenerativas incluyen el envejecimiento de la piel, enfermedades degenerativas de los músculos (distrofia muscular), huesos (osteoporosis) y del sistema vascular (aterosclerosis), diabetes y enfermedades del sistema inmune presente durante la senectud.

3): Enfermedades inflamatorias. La excesiva activación de la PARP puede ser perjudicial en varias enfermedades de naturaleza predominantemente inflamatoria, tanto del sistema nervioso central como de los órganos periféricos. Los compuestos de la invención son por tanto útiles en las siguientes situaciones patológicas: esclerosis múltiple y otras enfermedades desmielinizantes, síndrome de Guillain-Barré, neuralgias del trigémino y/u otros nervios craneales, neuropatías periféricas y otros dolores crónicos, osteoartritis, enfermedades inflamatorias del intestino (enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y otras formas de colitis).

4): Enfermedades tumorales. Los agentes inhibidores de la PARP pueden facilitar la muerte de células tumorales inducidas por agentes ionizantes o por agentes quimioterapéuticos y se usarán, tanto solos como en combinación con otros tratamientos, en la prevención y en la terapia de varias formas de cáncer, leucemia y/o sarcoma, tanto si éstos son primarios como si están asociados con el SIDA.

Para los usos farmacéuticos pretendidos, los compuestos de fórmula I pueden administrarse solos o en la forma de una preparación farmacéutica convencional, cuya forma depende obviamente de la selección de la ruta de administración. Por ejemplo, para la administración oral, pueden formularse en la forma de comprimidos, cápsulas, gránulos, polvos, jarabes o semejantes, o, para la administración parenteral, pueden formularse en la forma de inyecciones, supositorios o semejantes. Estas preparaciones farmacéuticas pueden producirse por métodos convencionales usando ingredientes generalmente conocidos en la tecnología, tales como excipientes, agentes ligantes, agentes de desintegración, lubricantes, estabilizantes, agentes modificadores y semejantes. Aunque la dosificación puede variar dependiendo de los síntomas y de la edad del paciente, la naturaleza y la gravedad de la enfermedad o el trastorno y la ruta y el modo de administración, en el caso de la administración oral a un paciente adulto humano, los compuestos de la presente invención pueden administrarse comúnmente en una dosificación total diaria que cae entre 1 y 1000 mg, preferiblemente entre 5 y 500 mg, en una dosis única o en dosis subdivididas, por ejemplo de una a tres veces por día; en el caso de una inyección intravenosa, la dosificación cae entre 0,1 y 100 mg, preferiblemente entre 0,5 y 50 mg, y puede administrarse de una a tres veces por día.

Los siguientes ejemplos ilustran la invención con más detalle.

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Ejemplo 1

Tieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona a. 3-Bromotiofen-2-aldehído (2)

Se añadió gota a gota una disolución 1,4 N de n-butil-litio en hexano (34 mL) a 2,3-dibromo-tiofeno (1) (10 g, 41,1 mmol) en éter anhidro (20 mL) a -70ºC. Después de 10 min, la disolución se transfirió a una disolución de N,N-dimetilformamida (4,8 mL) en éter anhidro (15 mL) y la mezcla de reacción se dejó durante 30 min con agitación. La reacción se paró por adición de una disolución de ácido clorhídrico al 10% (20 mL). La capa de éter se lavó con una disolución de bicarbonato, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se evaporó a presión reducida para dar el compuesto aldehído 2 bruto (7,54 g, 39,5 mmol, 96% de rendimiento) como un aceite.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 7,19 (d, J = 5,1 Hz, 1H, th-H), 7,45 (d, J = 5,2, 1H, th-H), 10,32 (s, 1H, CHO).

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b. 2-(3-Bromo-2-tienil)-1,3-dioxolano (3)

Se mantuvieron a reflujo 3-bromotiofen-2-aldehído (2) (7,44 g, 39 mmol), etilenglicol (2,7 mL, 48 mmol), benceno anhidro (130 mL) y unos pocos cristales de ácido p-toluenosulfónico en un aparato Dean-Stark hasta que no se separó más agua. La capa de benceno se lavó con una disolución de bicarbonato, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se evaporó a presión reducida para dar el derivado 3 (6,8 g, 28,9 mmol, 74% de rendimiento) como un aceite.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 3,80-4,06 (m, 4H, diox), 6,03 (s, 1H, diox), 6,85 (d, J = 5,2 Hz, 1H, th-H), 7,16 (d, J = 5,7 Hz, 1H, th-H).

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c. Ácido 2-formiltiofen-3-borónico (4)

Se añadió gota a gota (10 min) una disolución 1,1 N de n-butil-litio en hexano (28 mL) a una disolución de 2-(3-bromo-2-tienil)-1,3-dioxolano (3) (6,6 g, 28,1 mmol) en éter anhidro (30 mL) a -70ºC. Después de agitar durante 10 min, se añadió en una única porción borato de butilo (9,1 mL, 33,7 mmol) en éter anhidro (20 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 4 h a -70ºC y a continuación se dejó que retornara a temperatura ambiente. Se añadió ácido clorhídrico 1N (20 mL) y la mezcla se dejó durante 1h con agitación. La fase acuosa se extrajo con éter y las fases de éter combinadas se lavaron con una disolución de bicarbonato de sodio, se secaron (Na_{2}SO_{4}), y se evaporaron a presión reducida para dar el compuesto intermedio (4) (2,2 g, 14,1 mmol, 50% de rendimiento) como un sólido
marrón.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 7,0 (brs, 2H, OH), 7,77 (d, J = 5,1 Hz, 1H, th-H), 7,85 (d, J = 5,2, 1H, th-H), 9,75 (s, 1H, CHO).

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d. 3-Feniltiofen-2-aldehído (5)

Se añadió gota a gota ácido 2-formiltiofen-3-borónico (4) (0,89 g, 5,7 mmol) disuelto en etanol al 96% a una mezcla de 2-bromobenceno (0,55 mL, 6,2 mmol) en benceno (12 mL), (Ph_{3}P)_{4}Pd (197 mg, 0,15 mmol) y una disolución acuosa de Na_{2}CO_{3} 2M (6,3 mL). A continuación, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, el disolvente se separó parcialmente a presión reducida y la mezcla resultante se extrajo con éter etílico (4 x 100 mL). La capa orgánica combinada se lavó con una disolución saturada de NaCl, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se evaporó a presión reducida. La mezcla se sometió a cromatografía usando éter de petróleo/acetato de etilo 95/5, dando así el derivado (5) (0,575 g, [laguna] mmol, 53% de rendimiento).

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 7,19 (d, J = 5,0 Hz, 1H, th-H), 7,40-7,43 (m, 5H, Ph-H), 7,70 (d, J = 5,2, 1H, th-H), 9,83 (s, 1H, CHO).

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e. Ácido 3-feniltiofen-2-carboxílico (6)

Se añadió gota a gota reactivo de Jones 8N (aprox. 10 mL) a una disolución de 3-feniltiofen-2-aldehído (5) (0,58 g, 3,1 mmol) en 32 mL de acetona, hasta que persistió un color naranja. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. Se añadió isopropanol (5 mL) para separar el exceso de reactivo de Jones y luego la mezcla se filtró, los disolventes orgánicos se evaporaron a vacío y se extrajo con acetato de etilo (4 x 100 mL). La capa orgánica combinada se lavó con una disolución saturada de NaCl, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se evaporó a presión reducida. La mezcla se sometió entonces a cromatografía usando cloroformo/metanol 95/5, dando así el compuesto (6) (0,44 g, 1,36 mmol, 46% de rendimiento) (p.f. 200-202ºC).

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 6,87-7,37 (m, 5H, Ph-H), 7,05 (d, J = 5,0 Hz, 1H, th-H4), 7,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H, th-H5).

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f. Tieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona (7)

Se añadieron 0,08 mL de cloruro de tionilo a una disolución de ácido 3-feniltiofen-2-carboxílico (6) (0,138 g, 0,68 mmol) en 2 mL de benceno anhidro y la mezcla se mantuvo a reflujo durante 2 h. El disolvente y el cloruro de tionilo en exceso se separaron a vacío y el residuo se tomó usando 3 mL de THF, y a esta disolución agitada se añadió rápidamente a 0ºC NaN_{3} (0,066 g, 1,02 mmol) en 1 mL de agua. La mezcla se dejó durante 1 h a temperatura ambiente con agitación, se vertió en 10 mL de hielo triturado y agua y se extrajo con éter etílico (4 x 10 mL) y la capa orgánica separada se lavó, se secó y se evaporó a vacío. El residuo se disolvió en 1 mL de o-diclorobenceno y luego se añadió gota a gota a 3 mL de o-diclorobenceno a ebullición con agitación. La mezcla se mantuvo a reflujo durante 5 h, a continuación se enfrió y se evaporó. La mezcla se sometió a cromatografía súbita, eluyendo con éter de petróleo-acetato de etilo 90:10 dando el compuesto final (7) (0,061 g, 0,3 mmol, 44% de rendimiento) como un sólido puro (p.f. 266-268ºC); IR: 2849, 1647 cm^{-1} (NHCO).

^{1}H-RMN (DMSO) \delta 7,23 (d, J = 5,6 Hz, 1H, th-H1), 7,51 (m, 1H, th-H), 7,70(d, J = 5,3 Hz, 1H, th-H1), 7,78 (m, 1H, Ph-H), 8,10 (dd, J = 7,4, 1,1 Hz, 1H, Ph-H), 8,25 (dd, J = 8,0, 0,9 Hz, 1H, Ph-H), 12,3 (s, 1H, NH).

^{13}C-RMN (CDCl_{3}) \delta 116,4, 119,2, 120,6, 122,6, 123,3, 126,2, 128,4, 133,1, 134,1, 139,9, 163,2.

Los siguientes compuestos se prepararon por condensación del derivado (4) con 2-metoxibromobenceno según el procedimiento del ejemplo 1.

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Ejemplo 2

g. 9-Hidroxitieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona

(p.f.: 298-301ºC)

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 7,01 (d, J = 5,7 Hz, 1H, th-H1), 7,15 (dd, J = 7,83 Hz, J = 1,1 Hz, 1H, Ph-H6), 7,28 (t, J = 7,9 Hz, 1H, Ph-H7), 7,82 (dd, J = 7,8 Hz, J = 1,1 Hz, 1H, Ph-H8), 8,05 (d, J = 5,7 Hz, 1H, th-H2).

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Ejemplo 3

h. 9-Metoxitieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona

(p.f.: 198-200ºC)

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 4,00 (s, 3H, OCH_{3}), 6,95 (d, J = 5,7 Hz, 1H, th-H1), 7,20 (m, 1H, Ph-H6), 7,44 (t, J = 8,0 Hz, 1H, Ph-H7), 7,98 (dd, J = 5,7 Hz, 1H, th-H2), 8,13 (dd, J = 8,0, 1,1 Hz, 1H, Ph-H8).

El compuesto del ejemplo 2 se obtiene a partir del compuesto del ejemplo 3 por reacción con tribromuro de boro.

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Ejemplo 4

i. 3-(2-Nitrofenil)-tiofen-2-aldehído (8)

El compuesto 3-bromotiofen-2-aldehído (2) (5,20 g, 27 mmol), solubilizado en etilenglicol dimetil éter (105 mL), se trató con (Ph_{3}P)_{4}Pd (936 mg, 0,81 mmol), con ácido 2-nitrofenilborónico (5 g, 30 mmol) y una disolución de acuosa de NaHCO_{3} 2M (70 mL). A continuación, la mezcla de reacción se mantuvo a reflujo durante 5 h. Luego, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente, el disolvente se separó parcialmente a presión reducida y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (4 x 100 mL). La capa orgánica combinada se lavó con una disolución saturada de NaCl, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se evaporó a presión reducida. La mezcla se sometió a cromatografía usando éter de petróleo/acetato de etilo 80/20, dando así el derivado (8) (4,5 g, 83% de rendimiento).

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 7,04 (d, J = 5,1 Hz, 1H, th-H), 7,45 (dd, J = 5,2, 0,9 Hz, 1H, th-H), 7,58-7,74 (m, 3H, Ph-H), 7,98 (dd, J = 8,0, 0,9 Hz, 1H, Ph-H), 9,61 (s, 1H, CHO).

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l. Ácido 3-feniltiofen-2-carboxílico (9) [sic]

Se añadió gota a gota reactivo de Jones 8N (aprox. 30 mL) a una disolución de 3-(2-nitrofenil)-tiofen-2-aldehído (8) (4,4 g, 3,1 mmol) en 32 mL de acetona, hasta que persistió un color naranja. La mezcla se dejó a temperatura ambiente durante 18 h con agitación. Se añadió isopropanol (20 mL) para separar el exceso de reactivo de Jones y luego la mezcla se filtró, los disolventes orgánicos se evaporaron a vacío y se extrajo con acetato de etilo (4 x 100 mL). La capa orgánica combinada se lavó con una disolución saturada de NaCl, se secó (Na_{2}SO_{4}), y se evaporó a presión reducida. La mezcla se sometió entonces a cromatografía usando cloroformo/metanol 95/5, dando así el compuesto (9) (3,6 g, 66% de rendimiento).

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 6,80 (d, J = 5,1 Hz, 1H, th-H), 7,25 (dd, J = 5,2, 0,9 Hz, 1H, th-H), 7,30-7,60 (m, 3H, Ph-H), 7,95 (dd, J = 8,0, 0,9 Hz, 1H, Ph-H).

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m. 9-Nitrotieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona (10)

Se añadieron 2 mL de cloruro de tionilo a una disolución de ácido 3-(2-nitrofenil)tiofen-2-carboxílico (9) (3,5 g, 14 mmol) en 20 mL de benceno anhidro y la mezcla se mantuvo a reflujo durante 2 h. El disolvente y el cloruro de tionilo en exceso se separaron a vacío y el residuo se tomó usando 50 mL de THF, y se añadió rápidamente a esta disolución agitada a 0ºC NaN_{3} (1,37 g, 21 mmol) en 10 mL de agua. La mezcla se dejó durante 1 h a temperatura ambiente con agitación, se vertió en 100 mL de hielo y agua y se extrajo con éter etílico (4 x 50 mL), la capa orgánica separada se secó sobre sulfato de sodio anhidro dejándola durante 2 h con agitación. Se evaporó a vacío y se coevaporó con benceno anhidro (3 x 50 mL). Se evaporó y el residuo se solubilizó en 60 mL de o-diclorobenceno y se mantuvo a reflujo usando un aparato Dean-Stark. La mezcla se dejó a reflujo durante 20 h con agitación, a continuación se enfrió y se evaporó. La mezcla se sometió a cromatografía súbita, y la elución con cloroformo dio el compuesto 9-nitrotieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona (0,075 g, 2,2% de rendimiento) como un sólido amarillo (p.f. 255-258ºC).

^{1}H-RMN (DMSO) \delta 6,83 (d, J = 5,8 Hz, 1H, Th-H), 7,22 (d, J = 5,8 Hz, 1H, Th-H), 7,61 (t, J = 7,9 Hz, 1H, Ph-H), 8,16 (dd, J = 7,8, 0,8 Hz, 1H, Ph-H), 8,47 (dd, J = 8,0, 0,8 Hz, 1H, Ph-H), 12,8 (bs, 1H, NH).

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n. 9-Aminotieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona (11)

El compuesto 9-nitrotieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona (0,028 g, 0,113 mmol) se solubilizó en dimetoxietanol (20 mL), se añadió níquel Raney (aprox. 10 mg) y la mezcla se trató gota a gota con hidrazina hidrato (aprox. 1 mL). La mezcla se dejó durante 3 h con agitación, se filtró por Celite y se evaporó a vacío. El residuo se sometió a cromatografía eluyendo con cloroformo/metanol 99/1 para dar 9-aminotieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona (10) [sic] como el sólido puro (0,015 g, 61% de rendimiento) (p.f. 297-299ºC).

^{1}H-RMN (DMSO) \delta 5,31 (s, 2H, NH_{2}), 7,11 (m, 2H, Ph-H y Th-H), 7,17 (t, J = 7,8 Hz, 1H, Ph-H), 7,57 (dd, J = 7,8, 1,3 Hz, 1H, Ph-H), 7,83 (d, J = 5,8 Hz, 1H, Th-H), 12,21 (bs, 1H, NH).

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Actividad Farmacológica

La actividad inhibidora de los compuestos de los ejemplos 1-3 sobre la enzima poli(ADP-ribosa) polimerasa (PARP) se evaluó en modelos de cultivo de secciones del hipocampo de isquemia cerebral organotípica in vitro (cultivos neuronales primarios) e in vivo (oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) en ratas).

Los métodos usados fueron:

1) Purificación y medida de la actividad contra PARP

La actividad sobre la PARP se evaluó usando PARP purificada derivada de timo de ternero fetal, de acuerdo con Ito et al. (J. Biol. Chem. 274: 3647, 1979). Se homogeneizó una porción (aprox. 1 g) de timo en 4 volúmenes de una disolución amortiguadora del pH que contenía Tris-HCl 50 mM, NaCl 0,3 M, glicerol al 10%, mercaptoetanol 10 mM y bisulfito de sodio 50 mM.

Después de centrifugar (12.000 rpm/15 min), el sobrenadante se trató con 150 mL de sulfato de protamina al 3,75% y se agitó en hielo durante 5 minutos. La actividad enzimática se purificó más por cromatografía de afinidad en una columna de DNA-agarosa (25 x 0,5 cm; 0,75 mg DNA/mL de lecho de agarosa al 4%). Las fracciones activas se usaron para los ensayos de actividad llevados a cabo de acuerdo con Banasik et al. (J. Biol. Chem. 267: 1569, 1992). La mezcla de ensayo (100 mL) que contenía Tris-HCl 100 mM pH 8, 50 mg de DNA sonicado, 60 mL de preparación de enzima parcialmente purificada y 0,2 mC de 3[H]NAD (1-5 Ci/mmol, New England Nuclear, Boston, Ma, EE.UU.) se incubó a 37ºC durante 30 min. La reacción se terminó con 10% de ácido tricloroacético y la radioactividad asociada con la proteína se evaluó en un espectrómetro de centelleo líquido.

2) La actividad biológica se evaluó en cultivos neuronales primarios expuestos a privación de oxígeno y de glucosa (véase: Neuropharmacology 38: 1007-1619) e in vivo en ratas con MCA [sic]. El volumen del infarto se midió 72 h después de la oclusión usando un método descrito previamente (Cozzi et al., J. Cerebrali Blood Flow Metabolism 19: 771-777; 1999).

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TABLA IC_{50} (\muM) de agentes inhibidores de PARP ensayados en la enzima preparada a partir de timo bovino

6

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Conclusión: los compuestos de la invención son patentes agentes inhibidores de la PARP.

3) Actividad biológica de agentes inhibidores de la PARP en modelos de isquemia

Se ensayaron algunos agentes inhibidores de la PARP sobre muerte neuronal inducida por isquemia en cultivos neuronales primarios expuestos a un período de privación de oxígeno y de glucosa (véase: Neuropharmacology 38: 1007-1619) y los resultados mostraron que los agentes inhibidores de la PARP ejercen una potente actividad inhibidora sobre la muerte neuronal posterior a la isquemia del tipo necrótico.

Entre los compuestos de la invención, se encontró que el compuesto del ejemplo 1 era extremadamente potente en reducir la muerte neuronal posterior a la isquemia, teniendo una IC_{50} de aprox. 3 \muM.

La actividad neuroprotectora del compuesto del ejemplo 1 también se ensayó en el modelo MCAO en ratas. En este modelo de apoplejía, el compuesto (3-10 mg/kg i.p.) redujo un 40% el volumen de cerebro necrótico inducido mediante la oclusión permanente de la arteria cerebral media.

Claims

1. Un compuesto de fórmula I

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7

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en la que

Y es un heteroátomo seleccionado de azufre (S) o nitrógeno (N),

R_{1}-R_{6} son los mismos o diferentes, y representan hidrógeno, hidroxi, un grupo OR_{7}, carboxi, un grupo COOR_{7}, un grupo amino, un grupo NHR_{7} o un halógeno, o R_{5} y R_{6} tomados conjuntamente forman un anillo condensado no aromático de 5 ó 6 miembros,

R_{7} es un grupo alquilo de C_{1}-C_{6}, un grupo alquenilo de C_{2}-C_{6} o un grupo cicloalquilo de C_{3}-C_{7} opcionalmente sustituidos con uno o más grupos seleccionados del grupo que consiste en grupos hidroxi, alcoxi de C_{1}-C_{4}, carboxi, alcoxi de C_{1}-C_{4}-carbonilo, amino, mono o dialquilo de C_{1}-C_{6}-amino o halógeno,

o una de sus sales o solvatos.

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2. Compuestos según la reivindicación 1, en los que Y es un átomo de azufre.

3. Un compuesto de fórmula I,

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8

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en la que

Y es oxígeno,

R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} son los mismos o diferentes, y representan hidrógeno, hidroxi, OR_{7}, carboxi, COOR_{7}, amino, NHR_{7} o halógeno, o R_{5} y R_{6} tomados conjuntamente forman un anillo condensado aromático o no aromático de 5 ó 6 miembros,

R_{7} es alquenilo de C_{2}-C_{6} o cicloalquilo de C_{3}-C_{7} opcionalmente sustituidos con uno o más grupos hidroxi, alcoxi de C_{1}-C_{4}, carboxi, alcoxi de C_{1}-C_{4}-carbonilo, amino, mono o dialquilo de C_{1}-C_{6}-amino o halógeno,

o una de sus sales o solvatos.

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4. Compuestos según las reivindicaciones 1 a 3, en los que R_{1}-R_{6} son cada uno hidrógeno.

5. Un compuesto según las reivindicaciones 1 a 3, en el que uno de R_{1}-R_{6} es hidroxi, alcoxi, carboxi, alcoxicarbonilo, amino, alquilamino o halógeno, y los otros son hidrógeno.

6. Compuestos según las reivindicaciones 1 a 3, en los que R_{4} es hidrógeno, hidroxi o alcoxi o amino, y R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} son hidrógeno.

7. Un compuesto según la reivindicación 1, seleccionado de:

Tieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona,

9-Hidroxitieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona,

9-Metoxitieno[2,3-c]isoquinolin-5(4H)-ona,

o una de sus sales o solvatos.

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8. El compuesto 3-(2-nitrofenil)tiofen-2-aldehído (8), o una de sus sales o solvatos.

9. Una composición farmacéutica, que comprende un compuesto según las reivindicaciones 1 a 7 mezclado con un vehículo adecuado.

10. Un compuesto según las reivindicaciones 1 a 7, para usar en la profilaxis o el tratamiento del daño debido a isquemia y reperfusión, enfermedades degenerativas, enfermedades inflamatorias, enfermedades tumorales, leucemia y/o sarcoma.

11. Un compuesto según las reivindicaciones 1 a 7, para usar en la inhibición de poli(ADP-ribosa) polimerasa en un animal o en un ser humano.

12. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento del daño debido a isquemia y reperfusión, enfermedades degenerativas, enfermedades inflamatorias, enfermedades tumorales, leucemia y/o sarcoma.