ES2326881T3 - Procedimientos de tratamiento del dolor administrando un anticuerpo antagonista contra el factor de crecimiento nervioso y un analgesico opiaceo y composiciones que los contienen. - Google Patents
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Abstract
Un antagonista del factor de crecimiento nervioso (NGF) y un analgésico opiáceo para su uso en el tratamiento del dolor, por el que el antagonista del NGF y el analgésico opiáceo en combinación proporcionan un alivio del dolor eficaz, en el que el antagonista del NGF es un anticuerpo anti-NGF.
Description
Procedimientos de tratamiento del dolor
administrando un anticuerpo antagonista contra el factor de
crecimiento nervioso y un analgésico opiáceo y composiciones que los
contienen.
La presente invención se refiere a
procedimientos y composiciones para la prevención o el tratamiento
del dolor en un paciente mediante la administración de una
combinación de un antagonista del factor de crecimiento nervioso y
un analgésico opiáceo.
El dolor agudo normalmente se trata con
analgésicos opiáceos que desafortunadamente presentan muchos efectos
secundarios no deseables que incluyen una movilidad gástrica
reducida, cólico renal, obnubilación mental, y depresión
respiratoria. El factor de crecimiento nervioso (NGF) fue la primera
neurotrofina identificada y ha sido bien caracterizado su papel en
el desarrollo y la supervivencia tanto de neuronas centrales como
periféricas. El NGF ha demostrado ser un factor crítico en la
supervivencia y mantenimiento en el desarrollo de neuronas
sensoriales simpáticas periféricas y embrionarias y neuronas
colinérgicas del prosencéfalo basal (Smeyne, y col., Nature
368:246-249 (1994); Crowley, y col., Cell 76:
1001-1011 (1994)). El NGF regula el incremento de
la expresión de neuropéptidos en neuronas sensoriales (Lindsay, y
col., Nature 337: 362-364 (1989)) y su actividad
está mediada a través de dos receptores unidos a membrana
diferentes, el receptor tirosina quinasa TrkA y el receptor p75,
que está estructuralmente relacionado con otros miembros de la
familia del receptor del factor de necrosis tumoral (Chao, y col.,
Science 232:518-521 (1986)).
Además de sus efectos sobre el sistema nervioso
central, el NGF se ha ido implicando progresivamente en procesos
ajenos al sistema nervioso. Por ejemplo, el NGF administrado
exógenamente ha demostrado mejorar la permeabilidad vascular
(Otten, y col., Euro. J. Pharmacol. 106: 199-201
(1984)), mejorar las respuestas inmunitarias de las células T y B
(Otten, y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:
10059-10063 (1989)), inducir la diferenciación de
linfocitos y la proliferación de mastocitos y provocar la liberación
de señales biológicas solubles de los mastocitos (Matsuda, y col.,
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85: 6508-6512 (1988);
Pearce, y col., J.Physiol. 372: 379-393 (1986);
Bischoff, y col., Blood 79: 2662-2669 (1992);
Horigome, y col., J. Biol. Chem. 268: 14881-14887
(1993)).
El NGF es producido por una serie de tipos
celulares que incluyen mastocitos (Leon, y col., Proc. Natl. Acad.
Sci. U.S.A. 91: 3739-3743 (1994)), linfocitos B
(Torcia, y col., Cell 85: 345-356 (1996),
queratinocitos (Di Marco, y col., J. Biol. Chem. 268:
22838-22846)), células de músculo liso (Ueyama, y
col., J. Hypertens. 11: 1061-1065 (1993)),
fibroblastos (Lindholm, y col., Eur. J. Neurosci. 2:
795-801 (1990)), células del epitelio bronquial
(Kassel, y col., Clin, Exp. Allergy 31: 1432-40
(2001)), células mesangiales renales (Steiner, y col., Am. J.
Physiol. 261: F792-798 (1991)) y miotubos de músculo
esquelético (Schwartz, y col., J Photochem. Photobiol. B 66:
195-200 (2002)). Los receptores NGF se han
encontrado en una variedad de tipos celulares ajenos al sistema
nervioso. Por ejemplo, la TrkA se ha encontrado en monocitos
humanos, linfocitos T y B y mastocitos.
Se ha observado una asociación entre niveles
incrementados de NGF y una variedad de dolencias inflamatorias en
pacientes humanos así como en diversos modelos animales. Estas
incluyen lupus eritematoso sistémico
(Bracci-Laudiero, y col., Neuroreport 4:
563-565 (1993)), esclerosis multiple
(Bracci-Laudiero, y col., Neurosci. Lett. 147:
9-12 (1992)), psoriasis (Raychaudhuri, y col., Acta
Derm. l'enereol. 78: 84-86 (1998)), artritis
(Falcimi, y col., Ann. Rheum. Dis. 55: 745-748
(1996)), cistitis intersticial (Okragly, y col., J. Urology 161:
438-441 (1999)) y asma (Braun, y col., Eur. J
Immunol. 28: 3240-3251 (1998)).
De forma consistente, un nivel elevado de NGF en
tejidos periféricos está asociado a hiperalgesia e inflamación y se
ha observado en una serie de formas de artritis. La sinovia de
pacientes afectados por artritis reumatoide expresa niveles
elevados de NGF mientras que en sinovia no inflamada se ha informado
de que el NGF es indetectable (Aloe, y col., Arch. Rheum. 35:
351-355 (1992)). Se observaron resultados similares
en ratas con artritis reumatoide inducida experimentalmente (Aloe,
y col., Clip. Exp. Rheumatol. 10: 203-204 (1992)).
Se ha informado de niveles elevados de NGF en ratones artríticos
transgénicos junto con un incremento en el número de mastocitos
(Aloe, el al., Int. J. Tissue Reactions-Exp.
Clin. Aspects 15: 139-143 (1993)).
Hay dos categorías de medicación generales para
el tratamiento del dolor, cada una que actúa a través de mecanismos
diferentes y con efectos diferentes, y las dos con desventajas. La
primera categoría incluye los fármacos antiinflamatorios no
esteroides (NSAIDs) que se usan para tratar el dolor suave, pero
cuyo uso terapéutico está limitado por efectos gastrointestinales
no deseables tales como erosión gástrica, formación de úlcera
péptica o inflamación del duodeno y del colon, y toxicidad renal con
un uso prolongado. La segunda categoría incluye morfina y opiáceos
relacionados que se usan para tratar el dolor moderado a agudo pero
cuyo uso terapéutico está limitado debido a efectos no deseables
tales como estreñimiento, sedación, confusión, depresión
respiratoria, obnubilación mental, cólico renal, tolerancia con el
uso prolongado y riesgo de adicción. Por tanto son necesarios
compuestos útiles para el tratamiento del dolor con menores o ningún
efecto secundario.
Los analgésicos opiáceos son una clase bien
establecida de agentes analgésicos. A veces también se denominan
opioides. El término opiáceo (denominado de forma intercambiable
"analgésico opiáceo") es aceptado de forma general para
referirse en un sentido genérico a todos los fármacos, naturales y
sintéticos, con actividades similares a la morfina. Los analgésicos
opiáceos sintéticos y semi-sintéticos son derivados
de cinco clases químicas de compuestos: fenantrenos;
fenilheptilaminas; fenilpiperidinas; morfinanos; y benzomorfanos.
Farmacológicamente estos compuestos tienen actividades diversas,
así, algunos son agonistas fuertes en los receptores opiáceos (por
ejemplo, morfina); otros son agonistas moderados a suaves (por
ejemplo, codeína); otros más presentan actividad
agonista-antagonista mixta (por ejemplo, nalbufina);
y otros más son agonistas parciales (por ejemplo, nalorfina). Un
opiáceo agonista parcial tal como la nalorfina, (el análogo de
N-alquilo de la morfina) puede antagonizar los
efectos analgésicos de la morfina, y cuando se administra sola puede
ser un potente analgésico por derecho propio.
El documento WO 0037103 describe un compuesto
para la administración de restos terapéuticos, tales como un
analgésico opiáceo en células nerviosas, por ejemplo, para aliviar
el dolor. Hongo y col.: Hybridoma, vol. 19, Nº 3; 2000, páginas
215-227 describe anticuerpos monoclonales
neutralizantes de ratón 911, 912 y 938 contra el NGF humano.
Brennan T J y col.: Society for Neuroscience Abstracts, vol. 24, Nº
1-2, 1998, página 880 describe el papel del NGF en
un modelo de ratón para dolor posoperatorio. El documento WO 0178698
describe el uso de antagonistas del NGF para la prevención y/o el
tratamiento del dolor. La patente de EE.UU. 6.022.875 describe
compuestos de 2,4-imidazolidindiona sustituidos como
analgésicos.
De todos los analgésicos opiáceos, la morfina es
la más ampliamente usada. Desafortunadamente, aparte de sus
propiedades terapéuticas útiles, la morfina también presenta una
serie de efectos secundarios. Otra característica desafortunada es
el desarrollo de tolerancia y dependencia física que puede limitar
el uso clínico de esos compuestos. Por tanto existe la necesidad de
desarrollar métodos de tratamiento que usen dosis inferiores de
analgésicos opiáceos tales como la morfina, reduciendo así la
incidencia de los efectos secundarios y la probabilidad de
tolerancia y dependencia, y evitando de este modo el problema
principal del síndrome de abstinencia asociado a la interrupción de
la administración. Existe una gran necesidad de desarrollar otras
formas de perfeccionamiento del tratamiento del dolor con
opiáceos.
La presente invención se basa en el
descubrimiento de que los antagonistas del NGF son eficaces en el
tratamiento del dolor en combinación con un analgésico opiáceo.
Dicha terapia generalmente permite una dosificación reducida del
analgésico opiáceo para lograr la misma cantidad de reducción del
dolor y/o otras formas de perfeccionamiento del tratamiento del
dolor con opiáceos.
En un primer aspecto, la presente invención
ofrece una cantidad de un antagonista anti-factor de
crecimiento nervioso (NGF) y una cantidad de un analgésico opiáceo
para su uso en el tratamiento (o, en otras formas de realización,
la prevención) del dolor, por lo que en combinación proporcionan un
alivio eficaz del dolor, en el que el antagonista del NGF es un
anticuerpo anti-NGF. Las cantidades y relaciones
relativas de anticuerpo anti-NGF y analgésico
opiáceo pueden variar. En algunas formas de realización, se
administrará suficiente anticuerpo anti-NGF para
así permitir la reducción de la dosis normal de analgésico opiáceo
necesario para lograr el mismo grado de mejora del dolor en al
menos el 50% aproximadamente. En algunas formas de realización, se
administrará suficiente anticuerpo anti-NGF para así
permitir una reducción de la dosis normal del analgésico opiáceo
necesario para lograr el mismo grado de mejora del dolor en al menos
el 5% aproximadamente, en al menos el 10% aproximadamente, en al
menos el 20% aproximadamente, en al menos el 30% aproximadamente, en
al menos el 40% aproximadamente, en al menos el 60%
aproximadamente, en al menos el 70% aproximadamente, en al menos el
80% aproximadamente, o en al menos el 90% aproximadamente o
superior.
En otro aspecto, la invención proporciona un
analgésico opiáceo en combinación con una cantidad eficaz de un
antagonista del NGF para su uso en la mejora del tratamiento del
dolor con un analgésico opiáceo, en el que el antagonista del NGF
es un anticuerpo anti-NGF.
La administración en combinación, como se usa en
el presente documento, comprende la administración simultánea y/o
la administración en momentos diferentes. La administración en
combinación también engloba la administración en forma de
co-formulación (es decir, el anticuerpo
anti-NGF y el analgésico opiáceo están presentes
(combinados) en la misma composición) y/o la administración en
forma de composiciones separadas. Como se usa en el presente
documento, "administración en combinación" está previsto que
englobe cualquier circunstancia en la que el analgésico opiáceo y
el anticuerpo anti-NGF se administran a un individuo
en cantidades eficaces. Como se describe posteriormente en el
presente documento, se entiende que el anticuerpo
anti-NGF y el analgésico opiáceo se pueden
administrar a frecuencias y/o intervalos de dosificación diferentes.
Por ejemplo, un anticuerpo anti-NGF se puede
administrar semanalmente, mientras que un analgésico opiáceo se
puede administrar más frecuentemente. Se entiende que el anticuerpo
anti-NGF y el analgésico opiáceo se pueden
administrar usando la misma vía de administración o vías de
administración diferentes, y que regímenes de dosificación
diferentes pueden variar durante el transcurso de la
administración(es). La administración puede ser antes del
comienzo del dolor.
En otro aspecto la invención proporciona una
cantidad eficaz de un analgésico opiáceo en combinación con una
cantidad eficaz de un antagonista del NGF para su uso en la
reducción de la incidencia del dolor, la mejora del dolor, la
paliación del dolor, y/o el retraso del desarrollo o la progresión
del dolor en un individuo, en el que el antagonista del NGF es un
anticuerpo anti-NGF.
Los usos de la invención son adecuados para el
tratamiento o la prevención de cualquier dolor de cualquier
etiología, incluyendo dolor en el que en general está prescrito el
uso de un analgésico opiáceo, por ejemplo, pancreatitis, cálculo
renal, dolor de cabeza, dismenorrea, dolor
músculo-esquelético (por ejemplo, dolor lumbar),
esguince, dolor visceral, quistes en los ovarios, prostatitis,
cistitis, quemaduras químicas o térmicas, o cáncer (tal como cáncer
de próstata metastatizado hasta el hueso, cáncer de mama que ha
metastatizado hasta el hueso, cáncer de pulmón que ha metastatizado
hasta hueso, cáncer pancreático).
En una forma de realización, el anticuerpo
anti-NGF reconoce el NGF humano. En otras formas de
realización adicionales, el anticuerpo anti-NGF se
une específicamente al NGF humano. En otras formas de realización
más el anticuerpo se une esencialmente al mismo epítopo 6 del NGF
que un anticuerpo seleccionado de uno cualquiera o más de los
siguientes anticuerpos monoclonales de ratón: MAb 911, MAb 912 y MAb
938 (véase Hongo, y col., Hybridoma 19: 215-227
(2000)). En alguna forma de realización, el antagonista del NGF se
une al NGF (tal como hNGF) y no se une significativamente a
neurotrofinas relacionadas, tales como NT-3, NT4/5,
y/o BDNF. En otras formas de realización más, el anticuerpo
anti-NGF está humanizado (tal como el anticuerpo E3
descrito en el presente documento). En otras formas de realización
más, el anticuerpo anti-NGF es anticuerpo E3 (como
se describe en el presente documento). En otras formas de
realización, el anticuerpo anti-NGF comprende una o
más CDR del anticuerpo E3 (tal como una, dos, tres, cuatro, cinco,
o, en algunas formas de realización, las seis CDR de E3). En otras
formas de realización, el anticuerpo es humano. En otras formas de
realización más, el anticuerpo anti-NGF comprende
la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena
pesada mostrada en la Tabla 1 (SEQ ID NO: 1) y la secuencia de
aminoácidos de la región variable de la cadena ligera mostrada en
la Tabla 2 (SEQ ID NO: 2). En otras formas de realización más, el
anticuerpo comprende una región constante modificada, tal como una
región constante que es inmunológicamente inerte, por ejemplo, no
desencadena la lisis mediada por el complemento, o no estimula la
citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos
(ADCC). En otras formas de realización, la región constante se
modifica como se describe en Eur. J. Immunol. (1999) 29:
2613-2624 y/o el documento WO 9958572.
En algunas formas de realización, el antagonista
del NGF se une a la molécula NGF. En otras formas de realización
más, el antagonista del NGF es un anticuerpo que se une
específicamente al NGF (tal como NGF humano).
El antagonista del NGF puede ser un anticuerpo
monoclonal anti-NGF humano
(anti-hNGF) que es capaz de unirse al hNGF e
inhibir eficazmente la unión del hNGF a la TrkA humana (hTrkA) y/o
inhibir eficazmente la activación del receptor TrkA.
La afinidad de unión de un anticuerpo
anti-NGF al NGF (tal como hNGF) puede ser de 0,10 nM
aproximadamente a 0,80 nM aproximadamente, de 0,15 nM
aproximadamente a 0,75 nM y de 0,18 aproximadamente a 0,72 nM
aproximadamente. En una forma de realización, la afinidad de unión
está entre 2 pM y 22 pM. En alguna forma de realización, la
afinidad de unión es de 10 nM aproximadamente. En otras formas de
realización, la afinidad de unión es inferior a 10 nM
aproximadamente. En otras formas de realización, la afinidad de
unión es de 0,1 nM aproximadamente o 0,07 nM aproximadamente. En
otras formas de realización, la afinidad de unión es inferior a 0,1
nM aproximadamente o inferior a 0,07 nM aproximadamente. En otras
formas de realización, la afinidad de unión es de cualquiera de 100
nM aproximadamente, 50 nM aproximadamente, 10 nM aproximadamente, 1
nM aproximadamente, 500 pM aproximadamente, 100 pM aproximadamente,
o 50 pM aproximadamente a cualquiera de 2 pM aproximadamente, 5 pM
aproximadamente, 10 pM aproximadamente, 15 pM aproximadamente, 20
pM aproximadamente, o 40 pM aproximadamente. En algunas formas de
realización, la afinidad de unión es cualquiera de 100 nM
aproximadamente, 50 nM aproximadamente, 10 nM aproximadamente, 1 nM
aproximadamente, 500 pM aproximadamente, 100 pM aproximadamente, o
50 pM aproximadamente o inferior a 50 pM aproximadamente. En
algunas formas de realización, la afinidad de unión es inferior a
cualquiera de 100 nM aproximadamente, 50 nM aproximadamente, 10 nM
aproximadamente, 1 nM aproximadamente, 500 pM aproximadamente, 100
pM aproximadamente, o 50 pM aproximadamente. En otras formas de
realización más, la afinidad de unión es 2 pM aproximadamente, 5 pM
aproximadamente, 10 pM aproximadamente, 15 pM aproximadamente, 20 pM
aproximadamente, 40 pM aproximadamente, o superior a 40 pM
aproximadamente. Como es bien sabido en la técnica, la afinidad de
unión se puede expresar como K_{D} o constante de disociación y
una afinidad incrementada se corresponde con una K_{D} reducida.
La afinidad de unión del anticuerpo monoclonal de ratón
anti-NGF 911 (Hongo y col., Hybridoma 19:
215-227 (2000)) al NGF humano es de 10 nM
aproximadamente, y la afinidad de unión del anticuerpo E3 (descrito
en el presente documento) humanizado al NGF humano es de 0,07 nM
aproximadamente.
El anticuerpo anti-NGF puede ser
un fragmento de anticuerpo, incluyendo un fragmento de anticuerpo
seleccionado del grupo constituido por fragmentos Fab, Fab',
F(ab')2, Fv, diacuerpos, moléculas de anticuerpo de cadena
sencilla y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de
fragmentos de anticuerpo, y una molécula Fv de cadena sencilla
(scFv).
El analgésico opiáceo puede ser cualquier
compuesto que presente actividad biológica similar a la morfina. En
algunas formas de realización, el analgésico opiáceo es uno o más de
los siguientes: morfina, codeína, dihidrocodeína, diacetilmorfina,
hidrocodona, hidromorfona, levorfanol, oximorfona, alfentanilo,
buprenorfina, butorfanol, fentanilo, sufentanilo, meperidina,
metadona, nalbufina, propoxifeno y pentazocina; o una de sus sales
farmacéuticamente aceptables.
\newpage
El anticuerpo anti-NGF y/o el
analgésico opiáceo se pueden administrar a un individuo a través de
cualquier vía de administración adecuada. Por ejemplo, se pueden
administrar juntos o por separado, y/o simultánea y/o
secuencialmente, oral, intravenosa, sublingual, subcutánea,
intraarterial, intramuscular, rectal, intraespinal, intratorácica,
intraperitoneal, intraventricular, sublingual, transdérmicamente o
por inhalación. La administración puede ser sistémica, por ejemplo,
intravenosa, o localizada.
En un segundo aspecto, la presente invención
ofrece composiciones que comprenden un anticuerpo
anti-NGF y/o un analgésico opiáceo. El anticuerpo
anti-NGF y el analgésico opiáceo pueden estar
presentes junto con uno o más vehículos o excipientes
farmacéuticamente aceptables, o pueden estar presentes en
composiciones separadas. En otro aspecto, la invención proporciona
una composición sinérgica de un anticuerpo anti-NGF
y un analgésico opiáceo.
En un tercer aspecto, la presente invención
ofrece un kit para su uso como se describe en el presente documento,
dicho kit que comprende un anticuerpo anti-NGF y/o
un analgésico opiáceo. El kit adicionalmente puede comprender
instrucciones para cualquiera de los usos descritos en el presente
documento. Las instrucciones pueden comprender la administración de
un anticuerpo anti-NGF en combinación con un opiáceo
(es decir, administración simultánea y/o administración en momentos
diferentes). En algunas formas de realización, el anticuerpo
anti-NGF y el analgésico opiáceo están empaquetados
juntos, pero pueden estar, o no, en el mismo contenedor. Así, en
algunas formas de realización, el kit comprende un anticuerpo
anti-NGF y un analgésico opiáceo presentes en el
mismo contenedor, e instrucciones para su uso en cualquiera de los
usos descritos en el presente documento.
En otras formas de realización, el kit comprende
un anticuerpo anti-NGF y un opiáceo presentes en
contenedores separados.
La Figura 1 representa que la puntuación de
dolor acumulativo se redujo en animales tratados con morfina en
combinación con un antagonista del NGF, el anticuerpo de ratón
anti-NGF 911, Hongo, y col., Hybridoma 19:
215-227 (2000). El tratamiento preoperatorio con
anticuerpo anti-NGF ("911") solo a 0,3 mg/kg
fue más eficaz en la reducción del dolor en reposo que 0,3 mg/kg de
morfina sola, y el tratamiento con anticuerpo
anti-NGF en combinación con morfina fue más eficaz
en la reducción del dolor en reposo que la morfina sola o el
anticuerpo anti-NGF solo.
La Figura 2 representa que la puntuación de
dolor acumulativo se redujo en animales tratados con morfina en
combinación con un agonista del NGF, el anticuerpo
anti-NGF 911. El tratamiento con un anticuerpo
anti-NGF más morfina fue más eficaz en la reducción
del dolor en reposo que la morfina sola o el anticuerpo
anti-NGF solo.
La Figura 3 representa la puntuación de dolor en
reposo observada después de cirugía y tratamiento con anticuerpo
anti-NGF y/o morfina. Los animales se trataron con
un antagonista del NGF, el anticuerpo anti-NGF 911,
15 horas antes de la cirugía y se sometieron a pruebas para el
comportamiento al dolor un día después de la cirugía. Los animales
se sometieron a pruebas sin morfina (curva continua), con 0,3 mg/kg
de morfina (curva rayada) o con 1,0 mg/kg de morfina (curva
punteada). El tratamiento con 0,3 mg/kg de morfina en combinación
con 0,3 mg/kg de anticuerpo anti-NGF o con 1,0
mg/kg de anticuerpo anti-NGF mejoró
significativamente el alivio del dolor (es decir, redujo el dolor
en reposo) comparado con el tratamiento con 0,3 mg/kg de morfina
sola. Además, el tratamiento con anticuerpo
anti-NGF solo proporcionó un alivio del dolor
similar a la morfina dosificada a 0,3 mg/kg. El tratamiento con
anticuerpo anti-NGF a 1,0 mg/kg más 0,3 mg/kg de
morfina produjo un alivio del dolor al menos igual al obtenido con
1,0 mg/kg de morfina sola.
Los inventores han descubierto que el dolor se
puede tratar o prevenir administrando una cantidad eficaz de un
anticuerpo anti-NGF, en combinación con un
analgésico opiáceo. Los usos y composiciones de la presente
invención son útiles para el tratamiento o la prevención del dolor
cuando está prescrito de forma general el uso de un analgésico
opiáceo. Con el uso de un antagonista de los factores de crecimiento
nerviosos (anticuerpo anti-NGF) y un analgésico
opiáceo en combinación, de acuerdo con la presente invención ahora
es posible tratar el dolor con una dosis inferior de analgésico
opiáceo, reduciendo así la probabilidad de los efectos secundarios
asociados al uso de analgésicos opiáceos (por ejemplo, depresión
respiratoria, estreñimiento, cólico renal, náuseas y vómitos, y
tolerancia y dependencia y los problemas asociados a la privación
del fármaco). En algunas formas de realización, se administrará
antagonista del NGF (anticuerpo anti-NGF) suficiente
para así permitir una reducción de la dosis normal de analgésico
opiáceo necesario para lograr el mismo grado de mejora del dolor en
al menos el 5% aproximadamente, al menos el 10% aproximadamente, al
menos el 20% aproximadamente, al menos el 30% aproximadamente, al
menos el 50% aproximadamente, al menos el 60% aproximadamente, al
menos el 70% aproximadamente, al menos el 80% aproximadamente, o al
menos el 90% aproximadamente, o superior.
El tratamiento del dolor con un analgésico
opiáceo también se puede mejorar como se describe en el presente
documento, mediante la administración del analgésico opiáceo en
combinación con un antagonista del NGF (anticuerpo
anti-NGF).
En un aspecto, la invención proporciona una
cantidad eficaz de un anticuerpo anti-NGF en
combinación con una cantidad eficaz de un analgésico opiáceo para
su uso en el tratamiento o la prevención del dolor en un individuo
(incluyendo un mamífero, tanto humano como no humano). En otro
aspecto, la invención proporciona una cantidad eficaz de un
anticuerpo anti-NGF en combinación con una cantidad
eficaz de un analgésico opiáceo para su uso en la mejora del
tratamiento o la prevención del dolor con un analgésico opiáceo en
un individuo. En otro aspecto, la invención proporciona un
anticuerpo anti-NGF y un analgésico opiáceo para su
uso en la mejora y/o prevención del desarrollo o la progresión del
dolor.
En algunas formas de realización, el anticuerpo
anti-NGF es capaz de unirse al NGF e inhibir
eficazmente la unión del NGF a su receptor TrkA y/o p75 in
vivo, y/o inhibir eficazmente la activación por parte del NGF
de su receptor TrkA y/o p75.
En otro aspecto, la invención proporciona un
anticuerpo anti-NGF y un analgésico opiáceo para
mejorar, retrasar el desarrollo y/o prevenir la progresión del
dolor.
Analgésicos opiáceos ejemplares de la presente
invención incluyen, pero no están limitados a, morfina, codeína,
dihidrocodeína, diacetilmorfina, hidrocodona, hidromorfona,
levorfanol, oximorfona, alfentanilo, buprenorfina, butorfanol,
fentanilo, sufentanilo, meperidina, metadona, nalbufina, propoxifeno
y pentazocina; o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. En
algunas formas de realización, el analgésico opiáceo es morfina; o
una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
Sales de analgésicos opiáceos ejemplares de uso
en la presente invención incluyen sulfato de morfina, clorhidrato
de morfina, tartrato de morfina, fosfato de codeína, sulfato de
codeína, bitartrato de dihidrocodeína, clorhidrato de
diacetilmorfina, bitartrato de hidrocodona, clorhidrato de
hidromorfona, tartrato de levorfanol, clorhidrato de oximorfona,
clorhidrato de alfentanilo, clorhidrato de buprenorfina, tartrato de
butorfanol, citrato de fentanilo, clorhidrato de meperidina,
clorhidrato de metadona, clorhidrato de nalbufina, clorhidrato de
propoxifeno, napsilato de propoxifeno (monohidrato del ácido
2-naftalensulfónico(1:1)), y clorhidrato de
pentazocina. En una forma de realización, el analgésico opiáceo es
sulfato de morfina.
Los usos y composiciones de la presente
invención son útiles para el tratamiento del dolor de cualquier
etiología, incluyendo dolor agudo y crónico, cualquier dolor con un
componente inflamatorio, y cualquier dolor en el que normalmente
está prescrito un analgésico opiáceo. Ejemplos de dolor incluyen
dolor post-quirúrgico, dolor posoperatorio
(incluyendo dolor dental), migrañas, dolores de cabeza y neuralgia
trigeminal, dolor asociado a quemaduras, heridas o cálculos
renales, dolor asociado a traumatismos (incluyendo traumatismos
craneoencefálicos), dolor neuropático, dolor asociado a trastornos
músculo-esqueléticos tales como artritis reumatoide,
artrosis, cistitis, pancreatitis, enfermedad inflamatoria del
intestino, espondilitis anquilosante, artropatías
sero-negativas (no reumatoides), reumatismo no
articular y trastornos peri-articulares, y dolor
asociado a cáncer (incluyendo "dolor irruptivo" y dolor
asociado a cáncer terminal), neuropatía periférica y neuralgia
postherpética. Ejemplos de dolor con un componente inflamatorio
(además de algunos de aquellos descritos anteriormente) incluyen
dolor reumático, dolor asociado a mucositis, y dismenorrea. En
algunas formas de realización, los usos y composiciones de la
presente invención se usan para el tratamiento o la prevención de
dolor post-quirúrgico y dolor por cáncer.
El anticuerpo anti-NGF y/o el
analgésico opiáceo se pueden administrar a un individuo a través de
cualquier vía de administración adecuada. Por ejemplo, se pueden
administrar juntos o por separado, y/o simultánea y/o
secuencialmente, oral, intravenosa, sublingual, subcutánea,
intraarterial, intramuscular, rectal, intraespinal, intratorácica,
intraperitoneal, intraventricular, sublingual, transdérmicamente o
por inhalación. La administración puede ser sistémica, por ejemplo,
intravenosa, o localizada.
En otro aspecto, la invención proporciona
composiciones y kits para el tratamiento del dolor que comprenden
un anticuerpo anti-NGF (tal como un anticuerpo
monoclonal anti-NGF) y/o un analgésico opiáceo
adecuado para su uso en cualquiera de los procedimientos descritos
en el presente documento. En algunas formas de realización, el
anticuerpo anti-NGF es capaz de inhibir eficazmente
la unión del NGF a su receptor(es) TrkA y/o p75 y/o inhibir
eficazmente la activación por parte del NGF de su
receptor(es) TrkA y/o p75.
La práctica de la presente invención empleará, a
menos que se indique otra cosa, técnicas convencionales de biología
molecular (incluyendo técnicas recombinantes), microbiología,
biología celular, bioquímica e inmunología, que están dentro de los
conocimientos en la técnica. Tales técnicas están completamente
explicadas en la bibliografía, tales como, Molecular Cloning: A
Laboratory Manual, second edition (Sambrook y col., 1989) Cold
Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed.,
1984); Methods in Molecular Biology, Human Press; Cell Biology: A
Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal
Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and
Tissue Culture (J.P. Mather y P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell
and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B.
Griffiths, y D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and
Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of
Experimental Immunology (D.M. Weir y C.C. Blackwell, eds.); Gene
Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller y M.P. Calos,
eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel y
col., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis y
col., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan y
col., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and
Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway y P. Travers, 1997);
Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D.
Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal
antibodies: a practical approach (P. Shepherd y C. Dean, eds.,
Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory
manual (E. Harlow y D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press,
1999); The Antibodies (M. Zanetti y J.D. Capra, eds., Harwood
Academic Publishers, 1995).
Un "anticuerpo" (usado de manera
intercambiable con su forma en plural) es una molécula de
inmunoglobulina capaz de unirse específicamente a una diana, tal
como un carbohidrato, polinucleótido, lípido, polipéptido, etc., a
través de al menos un sitio de reconocimiento del antígeno,
localizado en la región variable de la molécula de inmunoglobulina.
Como se usa en el presente documento, el término engloba no sólo
anticuerpos monoclonales o policlonales intactos, sino también sus
fragmentos (tales como Fab, Fab', F(ab')2, Fv), de cadena
sencilla (ScFv), sus mutantes, proteínas de fusión que comprenden
una porción de anticuerpo, anticuerpos humanizados, anticuerpos
quiméricos, diacuerpos, anticuerpos lineales, anticuerpos de cadena
sencilla, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos
biespecíficos) y cualquier otra configuración modificada de la
molécula de inmunoglobulina que comprenda un sitio de reconocimiento
del antígeno de la especificidad necesaria. Un anticuerpo incluye
un anticuerpo de cualquier clase, tal como IgG, IgA, o IgM (o de sus
subclases), y no es necesario que el anticuerpo sea de ninguna
clase particular. Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del
dominio constante de las cadenas pesadas del anticuerpo, las
inmunoglobulinas se pueden asignar a diferentes clases. Hay cinco
clases principales de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM, y
varias de éstas se pueden dividir a su vez en subclases (isotipos),
por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2. Los dominios
constantes de la cadena pesada que corresponden a las diferentes
clases de inmunoglobulinas se denominan alfa, delta, épsilon,
gamma, y mu, respectivamente. Las estructuras y configuraciones
tridimensionales de las subunidades de las diferentes clases de
inmunoglobulinas son bien conocidas.
Un "anticuerpo monoclonal" se refiere a una
población homogénea de anticuerpos en la que el anticuerpo
monoclonal está constituido de aminoácidos (de origen natural y no
de origen natural) que están involucrados en la unión selectiva de
un antígeno. Una población de anticuerpos monoclonales es altamente
específica, y está dirigida contra un único sitio antigénico. El
término "anticuerpo monoclonal" engloba no sólo anticuerpos
monoclonales intactos y anticuerpos monoclonales de longitud
completa, sino también sus fragmentos (tales como Fab, Fab',
F(ab')2, Fv), de cadena sencilla (ScFv), sus mutantes,
proteínas de fusión que comprenden una porción de anticuerpo,
anticuerpos monoclonales humanizados, anticuerpos monoclonales
quiméricos, y cualquier otra configuración modificada de la
molécula de inmunoglobulina que comprenda un sitio de reconocimiento
del antígeno de la especificidad necesaria y la capacidad de unirse
a un antígeno. No se pretende que esté limitado en lo que respecta a
la fuente del anticuerpo o a la manera en la que se prepara (por
ejemplo, mediante hibridoma, selección de fagos, expresión
recombinante, animales transgénicos, etc.).
Los anticuerpos "humanizados" se refieren a
una molécula que tiene un sitio de unión a un antígeno que se ha
obtenido sustancialmente de una inmunoglobulina procedente de
especies no humanas y el resto de la estructura de la molécula de
inmunoglobulina se basa en la estructura y/o secuencia de una
inmunoglobulina humana. El sitio de unión al antígeno puede
comprender dominios variables completos fusionados a dominios
constantes o solamente las regiones determinantes de
complementaridad (CDR) insertadas sobre regiones de entramado
apropiadas en los dominios variables. Los sitios de unión al
antígeno pueden ser de tipo silvestre o modificados por una o más
sustituciones de aminoácidos, por ejemplo, modificados para
asemejarse más a inmunoglobulinas humanas. Algunas formas de
anticuerpos humanizados conservan todas las secuencias CDR (por
ejemplo, un anticuerpo humanizado de ratón que contienen las seis
CDR de los anticuerpos de ratón). Otras formas de anticuerpos
humanizados tienen una o más CDR (una, dos, tres, cuatro, cinco,
seis) que están alteradas con respecto al anticuerpo original. En
algunos casos, los residuos de la región la región de entramado (FR)
u otros residuos de la inmunoglobulina humana son reemplazados por
residuos no humanos correspondientes. Además, los anticuerpos
humanizados pueden comprender residuos que no se encuentran en el
anticuerpo receptor o en el anticuerpo donante.
Como se usa en el presente documento, el término
"factor de crecimiento nervioso" y "NGF" se refiere al
factor de crecimiento nervioso y a sus variantes que retienen al
menos parte de la actividad del NGF. Como se usa en el presente
documento, el NGF incluye todos los NGF de secuencia nativa de
especies de mamíferos, incluyendo la especie humana, canina,
felina, equina, o bovina.
El "receptor NGF" se refiere a un
polipéptido que se une o se activa con el NGF. Los receptores NGF
incluyen el receptor TrkA y el receptor p75 de cualquier especie de
mamífero, incluyendo, pero no limitado a, la especie humana,
canina, felina, equina, primate, o bovina.
Un "antagonista del NGF" se refiere a
cualquier molécula que bloquea, suprime o reduce (incluyendo
significativamente) la actividad biológica del NGF, incluyendo las
vías aguas abajo mediadas por la señalización del NGF, tales como
la unión al receptor y/o la estimulación de una respuesta celular al
NGF. El término "antagonista" implica un mecanismo no
específico de cualquier acción biológica, y se considera para
incluir y englobar expresamente todas las posibles interacciones
farmacológicas, fisiológicas, y bioquímicas con el NGF, ya sean
directas o indirectas, o ya sea la interacción con el NGF, su
receptor, o a través de otro mecanismo, y sus consecuencias que se
pueden conseguir con una variedad de composiciones diferentes, y
químicamente divergentes. Antagonistas del NGF ejemplares incluyen,
pero no están limitados a, un anticuerpo anti-NGF,
una molécula antisentido dirigida a un NGF (incluyendo una molécula
antisentido dirigida a un ácido nucleico que codifica un NGF), un
compuesto inhibitorio del NGF, un análogo estructural del NGF, una
mutación negativa dominante de un receptor TrkA que se une a un
NGF, una inmunoadhesina TrkA, un anticuerpo
anti-TrkA, un anticuerpo anti-p75, y
un inhibidor quinasa. Para los propósitos de la presente invención,
se entenderá explícitamente que el término "antagonista"
engloba todos los términos, títulos, y estados y características
funcionales identificados previamente, por lo que el propio NGF,
una actividad biológica del NGF (incluyendo, pero no limitado a, su
capacidad para mediar en cualquier aspecto del dolor), o las
consecuencias de la actividad biológica, son sustancialmente
anulados, reducidos, o neutralizados en cualquier grado
significativo. En algunas formas de realización, un antagonista del
NGF (por ejemplo, un anticuerpo) se une (interacciona físicamente
con) al NGF, se une a un receptor NGF (tal como el receptor TrkA
y/o el receptor p75), reduce (impide y/o bloquea) la señalización
del receptor NGF aguas abajo, y/o inhibe (reduce) la síntesis,
producción o liberación del NGF. En otras formas de realización, un
antagonista del NGF se une al NGF y evita la dimerización del
receptor TrkA y/o la autofosforilación de TrkA. En otras formas de
realización, un antagonista del NGF inhibe o reduce la síntesis y/o
producción (liberación) del NGF. En el presente documento se
proporcionan ejemplos de tipos de antagonistas del NGF.
Como se usa en el presente documento, un
"anticuerpo anti-NGF" se refiere a un
anticuerpo que es capaz de unirse al NGF e inhibir la actividad
biológica del NGF y/o la(s) vía(s) aguas abajo mediada
por la señalización del NGF.
Una "inmunoadhesina TrkA" se refiere a una
molécula quimérica soluble que comprende un fragmento de un receptor
TrkA, por ejemplo, el dominio extracelular de un receptor TrkA y
una secuencia de una inmunoglobulina, que retiene la especificidad
de unión del receptor TrkA.
"Actividad biológica" del NGF generalmente
se refiere a la capacidad para unirse a receptores NGF y/o activar
las vías de señalización del receptor NGF. Sin limitación, una
actividad biológica incluye una cualquiera o más de las siguientes:
la capacidad para unirse a un receptor NGF (tal como p75 y/o TrkA);
la capacidad para promover la dimerización y/o la autofosforilación
del receptor TrkA; la capacidad para activar una vía de
señalización del receptor NGF; la capacidad para promover la
diferenciación, proliferación, supervivencia, crecimiento celular y
otros cambios en la fisiología celular, que incluye (en el caso de
neuronas, incluyendo neuronas centrales y periféricas) un cambio en
la morfología neuronal, sinaptogénesis, función sináptica,
liberación de neurotransmisores y/o neuropéptidos y regeneración
neuronal después de un daño; y la capacidad para mediar en el
dolor.
El término "epítopo" se usa para referirse
a sitios de unión para anticuerpos (monoclonales o policlonales)
sobre antígenos de proteínas.
Como se usa en el presente documento,
"tratamiento" es una aproximación para obtener resultados
clínicos beneficiosos o deseados. Para los propósitos de esta
invención, los resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen,
pero no están limitados a, uno o más de los siguientes: mejora o
alivio de cualquier aspecto del dolor, incluyendo dolor agudo,
crónico, inflamatorio, neuropático, o
post-quirúrgico. Para los propósitos de esta
invención, los resultados clínicos beneficiosos o deseados
incluyen, pero no están limitados a, uno o más de los siguientes:
reducción de la gravedad, alivio de uno o más síntomas asociados al
dolor, incluyendo cualquier aspecto del dolor (tal como
acortamiento de la duración del dolor, y/o reducción de la
sensibilidad o sensación de dolor).
La "reducción de la incidencia" del dolor
significa cualquiera de la reducción de la gravedad (que puede
incluir la reducción de la necesidad y/o cantidad de (por ejemplo,
exposición a) otros fármacos y/o terapias usados generalmente para
estas dolencias), duración, y/o frecuencia (incluyendo, por ejemplo,
el retraso o el incremento del tiempo hasta la aparición del dolor
en un individuo). Como es sabido por aquellos expertos en la
técnica, los individuos pueden variar en términos de su respuesta
al tratamiento, y, como tal, por ejemplo, un "procedimiento de
reducción de la incidencia del dolor en un individuo" refleja la
administración del antagonista del NGF descrito en el presente
documento en combinación con un analgésico opiáceo como se describe
en el presente documento, basándose en unas expectativas razonables
de que tal administración probablemente pueda provocar esa
reducción en la incidencia en ese individuo particular.
"Mejora" del dolor o de uno o más síntomas
de dolor significa una reducción o mejora de uno o más síntomas de
un dolor comparado con la no administración de un antagonista del
NGF en combinación con un analgésico opiáceo. "Mejora" también
incluye el acortamiento o la reducción en la duración de un
síntoma.
"Paliación" del dolor o de uno o más
síntomas de dolor significa la reducción del grado de una o más
manifestaciones clínicas de dolor no deseables en un individuo o en
una población de individuos tratados con un antagonista del NGF en
combinación con un analgésico opiáceo de acuerdo con la
invención.
Como se usa en el presente documento,
"retrasar" el desarrollo del dolor significa aplazar,
dificultar, atrasar, retardar, estabilizar, y/o posponer la
progresión del dolor. Este retraso puede ser de longitudes variables
de tiempo, dependiendo del historial de la enfermedad y/o de los
individuos tratados. Como es evidente para alguien experto en la
técnica, un retraso suficiente o significativo puede, en efecto,
englobar la prevención, en la que el individuo no desarrolla dolor.
Un procedimiento que "retrasa" el desarrollo de los síntomas es
un procedimiento que reduce la probabilidad de desarrollar los
síntomas en un marco temporal dado y/o reduce el grado de los
síntomas en un marco temporal dado, cuando se compara con el no uso
del método. Tales comparaciones normalmente se basan en estudios
clínicos, usando un número de sujetos estadísticamente
significativo.
"Desarrollo" o "progresión" del dolor
significa manifestaciones iniciales y/o la progresión resultante del
trastorno. El desarrollo del dolor puede ser detectable y se puede
valorar usando técnicas clínicas habituales muy conocidas en la
técnica. No obstante, el desarrollo también se refiere a una
progresión que puede ser indetectable. Para los propósitos de esta
invención, el desarrollo o la progresión se refiere a la evolución
biológica de los síntomas. "Desarrollo" incluye aparición,
recurrencia, y comienzo. Como se usa en el presente documento,
"comienzo" o "aparición" del dolor incluye comienzo y/o
aparición iniciales.
Una "cantidad eficaz" es una cantidad
suficiente para llevar a cabo los resultados clínicos beneficiosos o
deseados incluyendo el alivio o la reducción en la sensación de
dolor. Para los propósitos de esta invención, una cantidad eficaz
de un antagonista del NGF y un opiáceo incluye una cantidad
suficiente para tratar, mejorar, reducir la intensidad, o prevenir
el dolor (incluyendo nocicepción y la sensación de dolor) de
cualquier tipo, incluyendo dolor agudo, crónico, inflamatorio,
neuropático, o post-quirúrgico. En algunas formas de
realización, una cantidad eficaz de un analgésico opiáceo y de un
antagonista del NGF es una cantidad del antagonista del NGF y del
analgésico opiáceo capaz de modular el umbral de sensibilidad a
estímulos externos a un nivel comparable al observado en sujetos
sanos. En otras formas de realización, este nivel puede no ser
comparable a aquel observado en sujetos sanos, pero está reducido
comparado con los que no reciben la terapia de combinación. Una
cantidad eficaz de un antagonista del NGF también engloba una
cantidad de un antagonista del NGF suficiente para mejorar el
tratamiento (efecto terapéutico) del dolor con el opiáceo, como se
describe en el presente documento, o para reducir la dosis de
opiáceo necesaria para el tratamiento o la prevención del dolor,
como se describe en el presente documento. Como es sabido en la
técnica, una cantidad eficaz de un antagonista del NGF en
combinación con un opiáceo puede variar, dependiendo de, entre
otros, el tipo de dolor (y el historial del paciente) así como de
otros factores tales como el tipo (y/o la dosificación) o el
antagonista del NGF y/o el opiáceo usado. Una cantidad eficaz, en
el contexto de esta invención, también pueden ser cantidades de un
antagonista del NGF y de un antagonista del opiáceo tal que se
consigue un efecto sinérgico. Una cantidad eficaz de un antagonista
en el contexto de esta invención generalmente significa una cantidad
suficiente para conseguir una mejora del efecto terapéutico de un
opiáceo para el dolor (que puede, a su vez, significar que se
reduce la dosificación y/o se observa algún otro efecto beneficioso)
y/o que da como resultado un efecto beneficioso comparado con el
tratamiento con el opiáceo solo. Una "cantidad eficaz" de un
antagonista del NGF también puede dar como resultado un efecto
sinérgico comparado con la administración de un antagonista del NGF
o del opiáceo solo. En algunas formas de realización, una
"cantidad eficaz" es una cantidad suficiente para retrasar el
desarrollo del dolor.
Un "individuo" es un vertebrado,
preferentemente un mamífero, más preferentemente un humano. Los
mamíferos incluyen, pero no están limitados a, animales de granja,
animales de deporte, simios, caballos, vacas, perros, gatos,
ratones y ratas.
El término "analgésico opiáceo" se refiere
a todos los fármacos, naturales o sintéticos, con acciones similares
a la morfina. Los analgésicos opiáceos sintéticos y semisintéticos
son derivados de cinco clases de compuestos químicos: fenantrenos;
fenilheptilaminas; fenilpiperidinas; morfinanos; y benzomorfanos,
todos los cuales están dentro del alcance del término. Analgésicos
opiáceos ejemplos incluyen codeína, dihidrocodeína, diacetilmorfina,
hidrocodona, hidromorfona, levorfanol, oximorfona, alfentanilo,
buprenorfina, butorfanol, fentanilo, sufentanilo, meperidina,
metadona, nalbufina, propoxifeno y pentazocina y sus sales
farmacéuticamente aceptables.
Como se usa en el presente documento, la
administración "en combinación" incluye la administración
simultánea y/o la administración en momentos diferentes. La
administración en combinación también engloba la administración en
forma de co-formulación (es decir, el antagonista
del NGF y el opiáceo están presentes en la misma composición) o la
administración en forma de composiciones separadas. Como se usa en
el presente documento, administración en combinación se pretende
que englobe cualquier circunstancia en la que un opiáceo y un
antagonista del NGF se administren a un individuo, que puede
ocurrir simultáneamente y/o por separado. Como se describe
posteriormente en el presente documento, se entiende que el
antagonista del NGF y el opiáceo se pueden administrar a frecuencias
o en intervalos de dosificación diferentes. Por ejemplo, un
anticuerpo anti-NGF se puede administrar
semanalmente, mientras que un opiáceo se puede administrar más
frecuentemente. Se entiende que el antagonista del NGF y el
analgésico opiáceo se pueden administrar usando la misma vía de
administración o vías de administración diferentes.
"Dolor post-quirúrgico"
(denominado de manera intercambiable "dolor
post-incisional" o "dolor postraumático")
se refiere al dolor que surge o resulta de un traumatismo externo
tal como un corte, punción, incisión, desgarro, o herida en el
tejido de un individuo (incluyendo el que surge de todos los
procedimientos quirúrgicos, sean invasivos o no invasivos). Como se
usa en el presente documento, dolor post-quirúrgico
no incluye el dolor que se produce (surge o se origina) sin un
traumatismo físico externo. En algunas formas de realización, el
dolor post-quirúrgico es dolor interno o externo
(incluyendo dolor periférico), y la herida, corte, traumatismo,
desgarro o incisión se puede producir accidentalmente (como con una
herida traumática) o deliberadamente (como con una incisión
quirúrgica). Como se usa en el presente documento, "dolor"
incluye nocicepción y la sensación de dolor, y el dolor se puede
valorar objetiva y subjetivamente, usando puntuación del dolor y
otros procedimientos bien conocidos en la técnica. Dolor
post-quirúrgico, como se usa en el presente
documento, incluye alodinia (es decir, respuesta incrementada a un
estímulo normalmente no nocivo) e hiperalgesia (es decir, respuesta
incrementada a un estímulo normalmente nocivo o desagradable), que a
su vez, puede ser de naturaleza térmica o mecánica (táctil). En
algunas formas de realización, el dolor se caracteriza por
sensibilidad térmica, sensibilidad mecánica y/o dolor en reposo. En
algunas formas de realización, el dolor
post-quirúrgico comprende dolor inducido
mecánicamente o dolor en reposo. En otras formas de realización, el
dolor post-quirúrgico comprende dolor en reposo. El
dolor puede ser dolor primario o secundario, como es bien sabido en
la técnica.
El tratamiento del dolor con opiáceos se
"mejora" cuando se mejora un aspecto del tratamiento con
opiáceos (comparado con la administración de opiáceos y la
administración de un antagonista del NGF). Por ejemplo, la eficacia
del tratamiento del dolor con opiáceos se puede incrementar en
presencia de un antagonista del NGF en relación a la eficacia de un
analgésico opiáceo en ausencia de un antagonista del NGF. Como un
ejemplo más, el tratamiento o la prevención del dolor con un
opiáceo se puede "mejorar" mediante el uso de un antagonista
del NGF en combinación con un analgésico opiáceo cuando ese uso
permite un mejor alivio del dolor (por ejemplo, cuando se usa una
dosis de opiáceo que no permite el tratamiento o la prevención
eficaz del dolor).
Con respecto a todos los procedimientos
descritos en el presente documento, la referencia a un anticuerpo
anti-NGF y a analgésicos opiáceos también incluye
composiciones que comprenden uno o más de estos agentes. La
presente invención es útil para el tratamiento del dolor en
individuos, incluyendo todos los mamíferos, tanto humanos como no
humanos.
En un aspecto, la invención proporciona una
cantidad eficaz de un anticuerpo anti-NGF en
combinación con una cantidad eficaz de un analgésico opiáceo para
su uso en el tratamiento del dolor en un individuo. En algunas
formas de realización, se administrará suficiente anticuerpo
anti-NGF para así permitir la reducción de la dosis
normal del analgésico opiáceo necesaria para lograr el mismo grado
de mejora del dolor en al menos un 5% aproximadamente, al menos un
10% aproximadamente, al menos un 20% aproximadamente, al menos un
30% aproximadamente, al menos un 50% aproximadamente, al menos un
60% aproximadamente, al menos un 70% aproximadamente, al menos un
80% aproximadamente, o al menos un 90% aproximadamente, o
superior.
En otro aspecto, la invención proporciona una
cantidad eficaz de un anticuerpo anti-NGF en
combinación con una cantidad eficaz de un analgésico opiáceo para
su uso en la mejora del tratamiento del dolor con analgésicos
opiáceos en un individuo.
En algunas formas de realización, dolor
comprende uno cualquiera o más de los siguientes: dolor agudo y/o
crónico, cualquier dolor con un componente inflamatorio, dolor
post-quirúrgico, dolor posoperatorio (incluyendo
dolor dental), migraña, dolor de cabeza y neuralgia trigeminal,
dolor asociado a quemaduras, heridas o cálculos renales, dolor
asociado a traumatismos (incluyendo traumatismos craneoencefálicos),
dolor neuropático, y dolor asociado a cáncer (incluyendo "dolor
irruptivo" y dolor asociado a cáncer terminal). En otras formas
de realización, el dolor es cualquier dolor que normalmente se
trata con un analgésico opiáceo (tal como morfina), por ejemplo,
pancreatitis, cálculo renal, dolor de cabeza, dismenorrea, dolor
músculo-esquelético (por ejemplo, dolor lumbar),
esguince, dolor visceral, quistes en los ovarios, prostatitis,
cistitis, quemaduras químicas o térmicas, cáncer (tal como cáncer
de próstata metastatizado hasta el hueso, cáncer de mama que ha
metastatizado hasta el hueso, cáncer de pulmón que ha metastatizado
hasta hueso, cáncer pancreático).
En otro aspecto, la invención proporciona un
anticuerpo anti-NGF y un analgésico opiáceo para su
uso en la prevención, mejora y/o prevención del desarrollo o
progresión del dolor. Así, en algunas formas de realización, el
anticuerpo anti-NGF, y/o el analgésico opiáceo se
administran antes de un evento doloroso (tal como cirugía). Por
ejemplo, el anticuerpo anti-NGF se puede administrar
30 minutos, una hora, 5 horas, 10 horas, 15 horas, 24 horas o
incluso superior, tal como 1 día, varios días, o incluso una semana,
2 semanas, 3 semanas o más antes de la actividad que probablemente
dé como resultado, o con riesgo de causar, dolor (tal como
traumatismo externo o
una operación).
una operación).
El tratamiento o la prevención del dolor se
valora usando procedimientos muy conocidos en la técnica. La
valoración se puede realizar basándose en mediciones objetivas,
tales como la observación de comportamientos como la reacción a los
estímulos, expresiones faciales y similares. La valoración también
puede estar basada en mediciones subjetivas, tales como la
caracterización del dolor por parte del paciente usando diversas
escalas de dolor. Véase, por ejemplo, Katz y col., Surg Clin North
Am. (1999) 79 (2):231-52; Caraceni y col. J Pain
Symptom Manage (2002) 23(3): 239-55.
Se entiende que cuando un anticuerpo
anti-NGF y un analgésico opiáceo se administran en
combinación, ya sea en forma de composición única o como
composiciones separadas, el anticuerpo anti-NGF y el
analgésico opiáceo están presentes en una relación que es
consistente con la manifestación del efecto deseado. En algunas
formas de realización, la relación ponderal del anticuerpo
anti-NGF al analgésico opiáceo puede ser de 1 a 1
aproximadamente. En algunas formas de realización, esta relación
puede estar entre 0,001 aproximadamente a 1 aproximadamente y 1000
aproximadamente a 1 aproximadamente, o entre 0,01 aproximadamente a
1 aproximadamente y 100 aproximadamente a 1 aproximadamente.
También están contempladas otras relaciones.
Se apreciará que la cantidad de un antagonista
del anticuerpo anti-NGF y un analgésico opiáceo
necesario para su uso en el tratamiento o la prevención del dolor
variará no sólo con los compuestos o composiciones particulares
seleccionados, sino también con la vía de administración, la
naturaleza de la dolencia a tratar, y la edad y estado del
paciente, y en último caso estará a la discreción del facultativo
que atiende.
La presente invención se refiere a anticuerpos
anti-NGF como antagonistas del NGF. Se describen con
fines comparativos otros antagonistas del NGF, que se refieren a
cualquier molécula que bloquee, suprima o reduzca (incluyendo
significativamente) la actividad biológica del NGF, incluyendo las
vías aguas abajo mediadas por la señalización del NGF, tales como
la unión del receptor y/o la estimulación de una respuesta celular
al NGF. El término "antagonista" implica un mecanismo no
específico de cualquier acción biológica, y se considera para
incluir y englobar expresamente todas las posibles interacciones
farmacológicas, fisiológicas, y bioquímicas con el NGF y sus
consecuencias que se pueden conseguir con una variedad de
composiciones diferentes, y químicamente divergentes. Antagonistas
del NGF ejemplares incluyen, pero no están limitados a, un
anticuerpo anti-NGF, una molécula antisentido
dirigida a un NGF (incluyendo una molécula antisentido dirigida a un
ácido nucleico que codifica para el NGF), una molécula antisentido
dirigida a un receptor NGF (tal como un receptor TrkA y/o un
receptor p75) (incluyendo una molécula antisentido dirigida a un
ácido nucleico que codifica para TrkA y/o p75), un compuesto
inhibitorio del NGF, un análogo estructural del NGF, una mutación
negativa dominante de un receptor TrkA que se une a un NGF, una
inmunoadhesina TrkA, un anticuerpo anti-TrkA, un
anticuerpo anti-p75, y un inhibidor quinasa. Para
los propósitos de la presente invención, se entenderá explícitamente
que el término "antagonista" engloba todos los términos,
títulos, y estados y características funcionales identificados
previamente por lo que el propio NGF, una actividad biológica del
NGF (incluyendo, pero no limitado a, su capacidad para mediar en
cualquier aspecto del dolor), o las consecuencias de la actividad
biológica, son sustancialmente anulados, reducidos, o neutralizados
en cualquier grado significativo. En algunas formas de realización,
un antagonista del NGF (por ejemplo, un anticuerpo) se une
(interacciona físicamente con) al NGF, se une a un receptor NGF
(tal como el receptor TrkA y/o el receptor p75), y/o reduce (impide
y/o bloquea) la señalización del receptor NGF aguas abajo. Por
consiguiente, en algunas formas de realización, un antagonista del
NGF se une (interacciona físicamente con) al NGF. En otra forma de
realización, un antagonista del NGF se une a un receptor NGF (tal
como el receptor TrkA o p75). En otras formas de realización, un
antagonista del NGF reduce (impide y/o bloquea) la señalización del
receptor NGF aguas abajo (por ejemplo, señalización de los
inhibidores de quinasa). En otras formas de realización, un
antagonista del NGF inhibe (reduce) la síntesis y/o liberación de
NGF. En otra forma de realización, el antagonista del NGF es una
inmunoadhesina TrkA. En otra forma de realización, el antagonista
del NGF es distinto de un anticuerpo anti-NGF. En
alguna forma de realización, el antagonista del NGF se une al NGF
(tal como hNGF) y no se une significativamente a neurotrofinas
relacionadas, tales como la NT-3, NT 4/5, y/o BDNF.
En otras formas de realización, el antagonista del NGF es un
anticuerpo anti-NGF. En otras formas de realización
más, el anticuerpo anti-NGF está humanizado (tal
como el anticuerpo E3 descrito en el presente documento). En
algunas formas de realización, el anticuerpo
anti-NGF es anticuerpo E3 (como se describe en el
presente documento). En otras formas de realización, el anticuerpo
anti-NGF comprende una o más CDR del anticuerpo E3
(tal como una, dos, tres, cuatro, cinco, o, en algunas formas de
realización, las seis CDR de E3). En otras formas de realización,
el anticuerpo es humano. En otras formas de realización más, el
anticuerpo anti-NGF comprende la secuencia de
aminoácidos de la región variable de la cadena pesada mostrada en
la Tabla 1 (SEQ ID NO: 1) y la secuencia de aminoácidos de la región
variable de la cadena ligera mostrada en la Tabla 2 (SEQ ID NO: 2).
En otras formas de realización más, el anticuerpo comprende una
región constante modificada, tal como una región constante que es
inmunológicamente inerte, por ejemplo, no desencadena la lisis
mediada por el complemento, o no estimula la citotoxicidad mediada
por células dependientes de anticuerpos (ADCC). En otras formas de
realización, la región constante se modifica como se describe en
Eur. J. Immunol. (1999) 29: 2613-2624; Solicitud
PCT Nº PCT/GB99/01441; y/o solicitud de patente del RU Nº
9809951.8.
En algunas formas de realización de la
invención, el antagonista del NGF comprende un anticuerpo
anti-NGF. Un anticuerpo anti-NGF
debe presentar una cualquiera o más de las siguientes
características: (a) unirse al NGF; (b) inhibir la actividad
biológica del NGF o las vías aguas abajo mediadas por la función de
señalización del NGF; (c) tratar o prevenir cualquier aspecto del
dolor, particularmente en combinación con un analgésico opiáceo;
(d) bloquear o reducir la activación del receptor NGF (incluyendo la
dimerización y/o autofosforilación del receptor TrkA); (e)
incrementar el aclaramiento del NGF; (f) inhibir (reducir) la
síntesis, producción o liberación del NGF; (g) mejorar el
tratamiento del dolor con opiáceos.
Los anticuerpos anti-NGF son
conocidos en la técnica, véanse, por ejemplo, los documentos
Publicación PCT Nº WO 01/78698, WO 01/64247, patentes de EE.UU. Nº
5.844.092, 5.877.016, y 6.153.189; Hongo y col., Hybridoma, 19:
215-227 (2000); Cell. Molec. Biol. 13:
559-568 (1993); GenBank Nº de acceso U39608, U39609,
L17078, o L17077.
En algunas formas de realización, el anticuerpo
anti-NGF es un anticuerpo monoclonal
anti-NGF de ratón humanizado denominado anticuerpo
"E3", que comprende la región constante IgG2a de la cadena
pesada humana que contiene las siguientes mutaciones: A330P331 a
S330S331 (numeración de los aminoácidos con referencia a la
secuencia IgG2a de tipo silvestre; véase Eur. J. Immunol. (1999)
29: 2613-2624); la región constante kappa de la
cadena ligera humana; y las regiones variables de las cadenas
pesada y ligera mostradas en las Tablas 1 y 2.
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Los siguientes polinucleótidos que codifican la
región variable de la cadena pesada de E3 o la región variable de
la cadena ligera de E3 se depositaron en la ATCC el 8 de enero de
2003:
El vector Eb.911.3E es un polinucleótido que
codifica la región variable de la cadena ligera mostrada en la
Tabla 2; el vector Eb.pur.911.3E es un polinucleótido que codifica
la región variable de la cadena ligera mostrada en la Tabla 2 y el
vector Db.911.3E es un polinucleótido que codifica la región
variable de la cadena pesada mostrada en la Tabla 1.
En otra forma de realización, el anticuerpo
anti-NGF comprende una o más CDR del anticuerpo E3
(tal como una, dos, tres, cuatro, cinco, o, en algunas formas de
realización, las seis CDR de E3). La determinación de las regiones
CDR está dentro de los conocimientos ordinarios en la técnica.
Los anticuerpos útiles en la presente invención
pueden englobar anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales,
fragmentos de anticuerpos (por ejemplo, Fab, Fab', F(ab')2,
Fv, Fc, etc.), anticuerpos quiméricos, anticuerpos biespecíficos,
anticuerpos heteroconjugados, de cadena sencilla (ScFv), sus
mutantes, proteínas de fusión que comprenden una porción de
anticuerpo, anticuerpos humanizados, y cualquier otra configuración
modificada de la molécula de inmunoglobulina que comprende un sitio
de reconocimiento del antígeno de la especificidad necesaria,
incluyendo variantes de glicosilación de anticuerpos, variantes de
secuencias de aminoácidos de anticuerpos, y anticuerpos modificados
covalentemente. Los anticuerpos pueden ser murinos, de rata,
humanos, o de cualquier otro origen (incluyendo anticuerpos
quiméricos o humanizados). Para los propósitos de esta invención,
el anticuerpo reacciona con el NGF de una manera que inhibe al NGF
y/o las vías aguas abajo mediadas por la función de señalización
del NGF. En una forma de realización, el anticuerpo es un anticuerpo
humano que reconoce uno o más epítopos sobre el NGF humano. En otra
forma de realización, el anticuerpo es un anticuerpo de ratón o de
rata que reconoce uno o más epítopos sobre el NGF humano. En otra
forma de realización, el anticuerpo reconoce uno o más epítopos
sobre un NGF seleccionado del grupo constituido por: primate,
canino, felino, equino, y bovino. En otras formas de realización,
el anticuerpo comprende una región constante modificada, tal como
una región constante que es inmunológicamente inerte, por ejemplo,
no desencadena la lisis mediada por el complemento, o no estimula
la citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos
(ADCC). La actividad ADCC se puede valorar usando los
procedimientos descritos en la patente de EE.UU. Nº 5.500.362. En
otras formas de realización, la región constante se modifica como se
describe en Eur. J. Immunol. (1999) 29: 2613-2624;
Publicación PCT Nº PCT/GB99/01441; y/o solicitud de patente del RU
Nº 9809951.8.
La afinidad de unión de un anticuerpo
anti-NGF al NGF (tal como hNGF) puede ser de 0,10 nM
aproximadamente a 0,80 nM aproximadamente, de 0,15 nM
aproximadamente a 0,75 nM y de 0,18 aproximadamente a 0,72 nM
aproximadamente. En algunas formas de realización, la afinidad de
unión es de 2 pM aproximadamente, 5 pM aproximadamente, 10 pM
aproximadamente, 15 pM aproximadamente, 20 pM aproximadamente, o 40
pM aproximadamente, o superior a 40 pM aproximadamente. En una
forma de realización, la afinidad de unión está entre 2 pM y 22 pM.
En otras formas de realización, la afinidad de unión es inferior a
100 nM aproximadamente, 50 nM aproximadamente, 10 nM
aproximadamente, 1 nM aproximadamente, 500 pM aproximadamente, 100
pM aproximadamente, 50 pM aproximadamente, 10 pM aproximadamente.
En alguna forma de realización, la afinidad de unión es de 10 nM
aproximadamente. En otras formas de realización, la afinidad de
unión es inferior a 10 nM aproximadamente. En otras formas de
realización, la afinidad de unión es de 0,1 nM aproximadamente o
0,07 nM aproximadamente. En otras formas de realización, la afinidad
de unión es inferior a 0,1 nM aproximadamente o inferior a 0,07 nM
aproximadamente. En otras formas de realización, la afinidad de
unión es de cualquiera de 100 nM aproximadamente, 50 nM
aproximadamente, 10 nM aproximadamente, 1 nM aproximadamente, 500
pM aproximadamente, 100 pM aproximadamente, o 50 pM aproximadamente
a cualquiera de 2 pM aproximadamente, 5 pM aproximadamente, 10 pM
aproximadamente, 15 pM aproximadamente, 20 pM aproximadamente, o 40
pM aproximadamente. En algunas formas de realización, la afinidad de
unión es cualquiera de 100 nM aproximadamente, 50 nM
aproximadamente, 10 nM aproximadamente, 1 nM aproximadamente, 500 pM
aproximadamente, 100 pM aproximadamente, o 50 pM aproximadamente o
inferior a 50 pM aproximadamente. En otras formas de realización
más, la afinidad de unión es 2 pM aproximadamente, 5 pM
aproximadamente, 10 pM aproximadamente, 15 pM aproximadamente, 20 pM
aproximadamente, 40 pM aproximadamente, o superior a 40 pM
aproximadamente.
Un modo de determinar la afinidad de unión de
los anticuerpos al NGF es midiendo la afinidad de fragmentos Fab
monofuncionales del anticuerpo. Para obtener fragmentos Fab
monofuncionales, un anticuerpo (por ejemplo, IgG) se puede escindir
con papaína o se puede expresar de manera recombinante. La afinidad
de un fragmento Fab de un anticuerpo anti-NGF se
puede determinar mediante resonancia de plasmón superficial (sistema
BlAcore3000^{TM} de resonancia de plasmón superficial (SPR),
BIAcore, INC, Piscaway NJ). Los chips CM5 chips se pueden activar
con clorhidrato de
N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida
(EDC) y N-hidroxisuccinimida (NHS) según las
instrucciones del fabricante. El NGF humano se puede diluir en
acetato sódico 10 mM a pH 4,0 y se puede inyectar sobre el chip
activado a una concentración de 0,005 mg/ml. Usando tiempos de flujo
variables a lo largo de los canales individuales del chip, se
pueden conseguir dos rangos de densidad de antígeno:
100-200 unidades de respuesta (RU) para estudios
cinéticos detallados y 500-600 RU para ensayos de
selección. El chip se puede bloquear con etanolamina. Los estudios
de regeneración han demostrado que una mezcla de tampón de elución
Pierce (Producto Nº 21004, Pierce Biotechnology, Rockford IL) y NaCl
4 M (2:1) elimina eficazmente la Fab mientras mantiene la actividad
del hNGF sobre el chip durante unas 200 inyecciones. Se usa tampón
HBS-EP (HEPES 0,01 M, pH 7,4, NaCl 0,15, EDTA 3 mM,
0,005% de tensiactivo P29) como tampón de carrera para los ensayos
con BIAcore. Se inyectan diluciones seriadas
(0,1-10x K_{D} estimada) de muestras purificadas
de Fab durante 1 minuto a 100 \mul/min y se permiten tiempos de
disociación de hasta 2 horas. Las concentraciones de las proteínas
Fab se determinan mediante ELISA y/o electroforesis
SDS-PAGE usando una Fab de concentración conocida
(determinada mediante análisis de aminoácidos) como patrón. Se
obtienen simultáneamente las velocidades de asociación (k_{on}) y
velocidades de disociación (k_{off}) cinéticas ajustando los datos
a un modelo de unión Langmuir 1:1 (Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam,
L. Petersson, B. (1994). Methods Enzyology 6:
99-110) usando el programa BIAevaluation. Los
valores de la constante de disociación en equilibrio (K_{D}) se
pueden calcular como k_{off}/k_{on}. Este protocolo es adecuado
para su uso en la determinación de la afinidad de unión de un
anticuerpo al NGF de cualquier especie, incluyendo el NGF humano,
NGF de otro vertebrado (en algunas formas de realización, un
mamífero) (tal como NGF de ratón, NGF de rata, NGF de primates), así
como para su uso con otras neurotrofinas, tales como las
neurotrofinas relacionadas NT3, NT4/5, y/o BDNF.
En algunas formas de realización, el anticuerpo
se une al NGF humano, y no se une significativamente a un NGF de
otra especie de vertebrado (en alguna forma de realización, un
mamífero). En algunas formas de realización, el anticuerpo se une
al NGF humano así como a uno o más NGF de otras especies de
vertebrados (en algunas formas de realización, un mamífero). En
otras formas de realización más, el anticuerpo se une al NGF y no
sufre una reacción cruzada significativa con otras neurotrofinas
(tales como las neurotrofinas relacionadas, NT3, NT4/5, y/o BDNF).
En algunas formas de realización, el anticuerpo se une al NGF así
como al menos a otra neurotrofina. En algunas formas de
realización, el anticuerpo se une al NGF de especies de mamíferos
tales como caballo o perro, pero no se une significativamente al
NGF de otras especies de mamíferos.
\newpage
El epítopo(s) puede ser continuo o
discontinuo. En una forma de realización, el anticuerpo se une
esencialmente al mismo epítopo del hNGF que un anticuerpo
seleccionado del grupo constituido por MAb 911, MAb 912, y MAb 938
como se describe en Hongo y col., Hybridoma, 19:
215-227 (2000). En otra forma de realización, el
anticuerpo se une esencialmente al mismo epítopo del hNGF que MAb
911. En otra forma de realización, el anticuerpo se une
esencialmente al mismo epítopo que MAb 909. Hongo y col.,
supra. Por ejemplo, el epítopo puede comprender uno o más de
los residuos: K32, K34 y E35 dentro de la región variable 1
(aminoácidos 23-35) de hNGF; residuos F79 y T81
dentro de la región variable 4 (aminoácidos 81-88)
de hNGF; residuos H84 y K88 dentro de la región variable 4; residuo
R103 entre la región variable 5 (aminoácidos 94-98)
de hNGF y el C-término (aminoácidos
111-118) de hNGF; residuo E11 dentro de la región
pre-variable 1 (aminoácidos 10-23)
de hNGF; Y52 entre la región variable 2 (aminoácidos
40-49) de hNGF y la región variable 3 (aminoácidos
59-66) de hNGF; residuos L112 y S113 dentro del
C-término de hNGF; residuos R59 y R69 dentro de la
región variable 3 de hNGF; o residuos V18, V20, y G23 dentro de la
región pre-variable 1 de hNGF. Además, un epítopo
puede comprender una o más de la región variable 1, región variable
3, región variable 4, región variable 5, la región del
N-término, y/o el C-término de
hNGF. En otra forma de realización más, el anticuerpo reduce
significativamente la accesibilidad al disolvente del residuo R103
de hNGF. Se entiende que aunque los epítopos descritos anteriormente
se refieren al NGF humano, alguien con conocimientos ordinarios
puede alinear las estructuras del NGF humano con el NGF de otras
especies e identificar homólogos probables de estos epítopos.
En un aspecto, los anticuerpos (por ejemplo,
humanos, humanizados, de ratón, quiméricos) que pueden inhibir el
NGF se pueden preparar usando inmunógenos que expresan la secuencia
parcial o de longitud completa del NGF. En otro aspecto, se puede
usar un inmunógeno que comprende una célula que sobreexpresa el NGF.
Otro ejemplo de un inmunógeno que se puede usar es una proteína NGF
que contiene el NGF de longitud completa o una porción de la
proteína NGF.
Los anticuerpos anti-NGF se
pueden preparar mediante cualquier procedimiento conocido en la
técnica. La vía y el calendario de inmunización del animal
hospedador generalmente se mantienen con las técnicas establecidas
y convencionales para la estimulación y producción de anticuerpos,
como se describe posteriormente en el presente documento. Las
técnicas generales para la producción de anticuerpos humanos y de
ratón son conocidas en la técnica y se describen en el presente
documento.
Se contempla que cualquier sujeto mamífero,
incluyendo humanos o células procedentes de humanos que producen
anticuerpos, se puede manipular para servir como base para la
producción de líneas celulares de hibridoma de mamífero, incluyendo
humanos. Normalmente, el animal hospedador es inoculado
intraperitoneal, intramuscular, oral, subcutánea, intraplantar, y/o
intradérmicamente con una cantidad de inmunógeno, incluyendo como se
describe en el presente documento.
Los hibridomas se pueden preparar a partir de
linfocitos y células de mieloma inmortalizadas usando la técnica de
hibridación de células somáticas general de Kohler, B. y Milstein,
C. (1975) Nature 256: 495-497 o la modificación de
Buck, D. W., y col., In vitro, 18: 377-381
(1982). Las líneas de mieloma disponibles, incluyen, pero no están
limitadas a X63-Ag8.653 y se pueden usar en la
hibridación aquéllas del Salk Institute, Cell Distribution Center,
San Diego, Calif., USA. En general, la técnica supone la fusión de
células de mieloma y células linfoides usando un fusógeno tal como
polietilenglicol, o por medios eléctricos bien conocidos por
aquellos expertos en la técnica. Después de la fusión, las células
se separan del medio de fusión y se crecen en un medio de
crecimiento selectivo, tal como medio
hipoxantina-aminopterina-timidina
(HAT), para eliminar las células parentales no hibridadas. Se puede
usar cualquiera de los medios descritos en el presente documento,
suplementados con o sin suero, para el cultivo de hibridomas que
segregan anticuerpos monoclonales. Como alternativa a técnica de
fusión celular, se pueden utilizar células B inmortalizadas con EBV
para producir los anticuerpos monoclonales anti-NGF
de la presente invención. Los hibridomas se expanden y se subclonan,
si se desea, y los sobrenadantes se someten a ensayo para la
actividad anti-inmunógena mediante procedimientos de
inmunoensayo convencionales (por ejemplo, radioinmunoensayo,
inmunoensayo enzimático, o inmunoensayo de fluorescencia).
Los hibridomas que se pueden usar como fuente de
anticuerpos engloban todas las células de la progenie derivadas de
los hibridomas parentales que producen anticuerpos monoclonales
específicos para el NGF, o una fracción de los mismos.
Los hibridomas que producen tales anticuerpos se
pueden crecer in vitro o in vivo usando procedimientos
conocidos. Los anticuerpos monoclonales se pueden aislar a partir
del medio de cultivo o de fluidos corporales, mediante
procedimientos de purificación de inmunoglobulinas convencionales
tales como precipitación con sulfato de amonio, electroforesis en
gel, diálisis, cromatografía, y ultrafiltración, si se desea. La
actividad no deseada, si está presente, se puede eliminar, por
ejemplo, pasando la preparación por adsorbentes hechos del
inmunógeno unido a una fase sólida y eluyendo o liberando los
anticuerpos deseados del inmunógeno. La inmunización de un animal
hospedador con un NGF humano, o un fragmento que contienen la
secuencia de aminoácidos diana conjugada a una proteína que es
inmunógena en la especie a inmunizar como por ejemplo, hemocianina
de Keyhole limpet, seroalbúmina, tiroalbúmina bovina, o
inhibidor de tripsina de soja usando un agente bifuncional o
derivante, por ejemplo, éster de maleimidobenzoil sulfosuccinimida
(conjugación a través de los residuos cisteína),
N-hidroxisuccinimida (a través de los residuos
lisina), glutaraldehído, anhídrido succínico, SOCl_{2}, o
R^{1}N=C=NR, en la que R y R^{1} son diferentes grupos alquilo,
pueden producir una población de anticuerpos (por ejemplo,
anticuerpos monoclonales).
Si se desea, el anticuerpo
anti-NGF (monoclonal o policlonal) de interés se
puede secuenciar y la secuencia de polinucleótidos a continuación
se puede clonar en un vector para su expresión o propagación. La
secuencia que codifica el anticuerpo de interés se puede mantener
en un vector en una célula hospedadora y la célula hospedadora a
continuación se puede expandir y congelar para su uso futuro. En una
alternativa, la secuencia de polinucleótidos se puede usar por
manipulación genética para "humanizar" el anticuerpo o mejorar
la afinidad, u otras características del anticuerpo. Por ejemplo,
la región constante se puede hibridar por ingeniería genética a
regiones constantes humanas más parecidas para evitar la respuesta
inmunitaria, si el anticuerpo se usa en ensayos clínicos y
tratamientos en humanos. Puede ser deseable manipular genéticamente
la secuencia del anticuerpo para obtener una mayor afinidad al NGF
y una mayor eficacia en la inhibición del NGF. Será evidente para
alguien experto en la técnica que se pueden realizar uno o más
cambios de polinucleótidos en el anticuerpo
anti-NGF y aún así mantener su capacidad de unión al
NGF.
Hay cuatro etapas generales para humanizar un
anticuerpo monoclonal.
Éstas son: (1) determinar el nucleótido y
predecir la secuencia de aminoácidos de los dominios variables
ligero y pesado del anticuerpo de partida, (2) diseñar el
anticuerpo humanizado, es decir, decidir qué región del entramado
del anticuerpo usar durante el proceso de humanización, (3) las
metodologías/técnicas de humanización en sí y (4) la transfección y
expresión del anticuerpo humanizado. Véanse, por ejemplo, patentes
de EE.UU. Nº 4.816.567; 5.807.715; 5.866.692; 6.331.415; 5.530.101;
5.693.761; 5.693.762; 5.585.089; y 6.180.370.
Se han descrito una serie de moléculas de
anticuerpo "humanizadas" que comprenden un sitio de unión del
antígeno derivado de una inmunoglobulina no humana, incluyendo
anticuerpos quiméricos con regiones V de roedor o de roedor
modificadas y sus regiones determinantes de complementaridad (CDR)
asociadas fusionadas a dominios constantes humanos. Véase, por
ejemplo, Winter y col. Nature 349: 293-299 (1991),
Lobuglio y col. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86:
4220-4224 (1989), Shaw y col. J Immunol. 138:
4534-4538 (1987), y Brown y col. Cancer Res. 47:
3577-3583 (1987). Otras referencias describen CDR de
roedor injertadas en una región de entramado (FR) de soporte humana
antes de fusionarse con un dominio constante de un anticuerpo humano
apropiado. Véase, por ejemplo, Riechmann y col. Nature 332:
323-327 (1988), Verhoeyen y col. Science 239:
1534-1536 (1988), y Jones y col. Nature 321:
522-525 (1986). Otra referencia describe CDR de
roedor soportadas por regiones de entramado de roedor hibridadas
por recombinación. Véase, por ejemplo, Publicación de patente
europea Nº 519.596. Estas moléculas "humanizadas" están
diseñadas para minimizar una respuesta inmunológica no deseada
contra las moléculas de anticuerpo anti-humano de
roedor que limita la duración y eficacia de las aplicaciones
terapéuticas de estos restos en receptores humanos. Otros
procedimientos de humanización de anticuerpos que también se pueden
utilizar se describen por Daugherty y col., Nucl. Acids Res. 19:
2471-2476 (1991) y las patentes de EE.UU. Nº
6.180.377; 6.054.297; 5.997.867; 5.866.692; 6.210.671; 6.350.861; y
Publicación PCT Nº WO 01/27160.
En otra alternativa más, se pueden obtener
anticuerpos completamente humanos usando ratones disponibles
comercialmente que han sido tratados por ingeniería genética para
expresar proteínas inmunoglobulinas humanas específicas. También se
pueden usar animales transgénicos que están diseñados para producir
una respuesta inmunitaria más deseable (por ejemplo, anticuerpos
completamente humanos) o más robusta para la generación de
anticuerpos humanos o humanizados. Ejemplos de esa tecnología son
Xenomouse^{TM} de Abgenix, Inc. (Fremont, CA) y
HuMAb-Mouse® y TC Mouse^{TM} de Medarex, Inc.
(Princeton, NJ).
Es evidente que aunque la descripción anterior
pertenece a anticuerpos humanizados, los principios generales
descritos son aplicables a la adaptación de anticuerpos para su uso,
por ejemplo, en perros, gatos, primates, equinos y bovinos. También
es evidente que se pueden combinar uno o más aspectos de la
humanización de un anticuerpo descritos en el presente documento,
por ejemplo, injerto de CDR, mutación del entramado y mutación de
CDR.
En una alternativa, los anticuerpos se pueden
preparar de manera recombinante y se pueden expresar usando
cualquier procedimiento conocido en la técnica. En otra alternativa,
los anticuerpos se pueden preparar de manera recombinante mediante
tecnología de presentación de fagos. Véanse, por ejemplo, patentes
de EE.UU. Nº 5.565.332; 5.580.717; 5.733.743; 6.265.150; y Winter y
col., Annu. Rev. Immunol. 12: 433-455 (1994).
Alternativamente, la tecnología de presentación de fagos
(McCafferty y col., Nature 348: 552-553 (1990)) se
puede usar para producir anticuerpos humanos y fragmentos de
anticuerpo in vitro, a partir de repertorios de genes del
dominio variable (V) de inmunoglobulinas procedentes de donantes no
inmunizados. Según esta técnica, los genes del dominio V del
anticuerpo se clonan en el marco de lectura en un gen de una
proteína de cubierta principal o secundaria de un bacteriófago
filamentoso, tal como M13 o Fd, y se presentan como fragmentos de
anticuerpos funcionales sobre la superficie de la partícula del
fago. Debido a que la partícula filamentosa contiene una copia de
ADN de cadena sencilla del genoma del fago, las elecciones basadas
en las propiedades funcionales del anticuerpo también dan como
resultado la selección del gen que codifica el anticuerpo que
presenta esas propiedades. Así, el fago mimetiza alguna de las
propiedades de la célula B. La presentación del fago se puede
realizar en una variedad de formatos; para una revisión véase, por
ejemplo, Johnson, Kevin S. y Chiswell, David J., Current Opinion in
Structural Biology 3, 564-571 (1993). Se pueden usar
varias fuentes de segmentos de genes V para la presentación de
fagos. Clackson y col., Nature 352: 624-628 (1991)
aislaron una colección diversa de anticuerpos
anti-oxazolona a partir de una pequeña librería
combinatoria aleatoria de genes V procedentes de los bazos de
ratones inmunizados. Se puede construir un repertorio de genes V a
partir de donantes humanos no inmunizados y los anticuerpos para
una colección diversa de antígenos (incluyendo
autos-antígenos) se pueden aislar esencialmente
siguiendo las técnicas descritas por Mark y col., J. Mol. Biol. 222:
581-597 (1991), o Griffith y col., EMBO J. 12:
725-734 (1993). En una respuesta inmunitaria
natural, los genes de anticuerpos acumulan mutaciones a una tasa
elevada (hipermutación somática). Algunos de los cambios
introducidos conferirán una mayor afinidad, y las células B que
presentan inmunoglobulinas de superficie de alta afinidad
preferentemente se replican y se diferencian durante la posterior
exposición al antígeno. Este proceso natural se puede mimetizar
empleando la técnica conocida como "barajado de la cadena"
Marks, y col., Bio/Technol. 10: 779-783 (1992)). En
este procedimiento, la afinidad de los anticuerpos humanos
"primarios" obtenidos mediante presentación de fagos se puede
mejorar sustituyendo secuencialmente los genes de la región V de la
cadena pesada y ligera con repertorios de variantes de origen
natural de genes del dominio V obtenidos a partir de donantes no
inmunizados. Esta técnica permite la producción de anticuerpos y
fragmentos de anticuerpos con afinidades en el intervalo de
pM-nM. Una estrategia para preparar repertorios de
anticuerpos de fagos muy grandes (también conocida como "la madre
de todas las librerías") ha sido descrita por Waterhouse y col.,
Nucl. Acids Res. 21: 2265-2266 (1993). El barajado
de genes también se puede usar para derivar anticuerpos humanos a
partir de anticuerpos de roedor, en los que el anticuerpo humano
tiene afinidades y especificidades similares al anticuerpo de roedor
de partida. Según este procedimiento, que también se denomina
"impronta del epítopo", el gen del dominio V de la cadena
pesada o ligera de anticuerpos de roedor obtenidos mediante la
técnica de presentación de fagos es sustituido con un repertorio de
genes del dominio V humano, creando quimeras
roedor-humano. La selección sobre el antígeno da
como resultado el aislamiento de las regiones variables humanas
capaces de restaurar un sitio funcional de unión al antígeno, es
decir, el epítopo gobierna (imprime) la elección del compañero.
Cuando el proceso se repite para reemplazar el dominio V de roedor
restante, se obtiene un anticuerpo humano (véase, Solicitud de
patente PCT WO 9306213, publicada el 1 de abril de 1993). A
diferencia de la humanización tradicional de anticuerpos de roedor
mediante injerto de CDR, esta técnica proporciona anticuerpos
completamente humanos, que no tienen residuos del entramado o CDR
de origen murino. Es evidente que aunque la descripción anterior
pertenece a anticuerpos humanizados, los principios generales
descritos son aplicables a la personalización de anticuerpos para
su uso, por ejemplo, en perros, gatos, primates, equinos y
bovinos.
Los anticuerpos se pueden preparar de manera
recombinante aislando primero los anticuerpos y las células que
producen anticuerpos de los animales hospedadores, obteniendo la
secuencia de genes, y usando la secuencia de genes para expresar el
anticuerpo de manera recombinante en células hospedadoras (por
ejemplo, células CHO). Otro procedimiento que se puede emplear es
expresar la secuencia del anticuerpo en plantas (por ejemplo,
tabaco) o leche transgénica. Ya han sido descritos los
procedimientos para la expresión anticuerpos de manera recombinante
en plantas o leche. Véase, por ejemplo, Peeters, y col. Vaccine 19:
2756 (2001); Lonberg, N. y D. Huszar Int. Rev. Immunol 13: 65
(1995); y Pollock, y col., J Immunol Methods 231: 147 (1999). Los
procedimientos para la preparación de derivados de anticuerpos, por
ejemplo, humanizados, de cadena sencilla, etc., son conocidos en la
técnica.
También se pueden emplear inmunoensayos y
técnicas de clasificación de citometría de flujo tales como
clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) para
aislar anticuerpos que son específicos para el NGF.
Los anticuerpos se pueden unir a muchos
portadores diferentes. Los portadores pueden ser activos y/o
inertes. Ejemplos de portadores bien conocidos incluyen
polipropileno, poliestireno, polietileno, dextrano, nailon,
amilasas, vidrio, celulosas naturales y modificadas,
poliacrilamidas, agarosas y magnetita. La naturaleza del portador
puede ser soluble o insoluble para los propósitos de la invención.
Aquellos expertos en la técnica reconocerán otros portadores
adecuados para la unión de anticuerpos, o serán capaces de
determinarlos, usando experimentación rutinaria.
El ADN que codifica los anticuerpos monoclonales
se aísla fácilmente y se secuencia usando procedimientos
convencionales (por ejemplo, usando sondas de oligonucleótidos que
son capaces de unirse específicamente a genes que codifican las
cadenas pesada y ligera de los anticuerpos monoclonales). Las
células de hibridoma sirven como fuente preferida de ese ADN. Una
vez aislado, el ADN se puede introducir en vectores de expresión
(tales como los vectores de expresión descritos en el documento WO
87/04462), que a continuación se transfectan en células
hospedadoras tales como células de E. coli, células COS de
simio, células de ovario de hámster chino (CHO), o células de
mieloma que no producen de otra manera proteínas inmunoglobulinas,
para obtener la síntesis de anticuerpos monoclonales en las células
hospedadoras recombinantes. Véase, por ejemplo, Publicación PCT Nº
WO 87/04462. El ADN también se pueden modificar, por ejemplo,
sustituyendo la secuencia codificante para los dominios constantes
de la cadena ligera y pesada humana en lugar de las secuencias
murinas homólogas, Morrison y col., Proc. Nat. Acad. Sci. 81: 6851
(1984), o uniendo covalentemente a la secuencia codificante de la
inmunoglobulina toda o parte de la secuencia codificante para un
polipéptido no inmunoglobulina. De esa manera, en el presente
documento se preparan anticuerpos "quiméricos" o
"híbridos" que tienen la especificidad de unión de un
anticuerpo monoclonal anti-NGF.
Los anticuerpos anti-NGF se
pueden caracterizar usando procedimientos muy conocidos en la
técnica. Por ejemplo, un procedimiento es identificar el epítopo al
cual se unen, o "mapeo de epítopo". Hay muchos procedimientos
conocidos en la técnica para el mapeo y la caracterización de la
localización de epítopos en proteínas, incluyendo la resolución de
la estructura cristalina de un complejo
anticuerpo-antígeno, ensayos de competición, ensayos
de expresión de fragmentos génicos, y ensayos basados en péptidos
sintéticos, como se describe, por ejemplo, en el Capítulo 11 de
Harlow y Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring
Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nueva York, 1999. En
un ejemplo adicional, el mapeo del epítopo se puede usar para
determinar la secuencia a la cual se une el anticuerpo
anti-NGF. El mapeo del epítopo está disponible
comercialmente en varias fuentes, por ejemplo, Pepscan Systems
(Edelhertweg 15, 8219 PH Lelystad, Holanda). El epítopo puede ser
un epítopo lineal, es decir, contenido en una sola extensión de
aminoácidos, o un epítopo conformacional formado por una
interacción tridimensional de aminoácidos que pueden no
necesariamente estar contenidos en una única extensión. Se pueden
aislar o sintetizar (por ejemplo, de manera recombinante) péptidos
de longitudes variables (por ejemplo, al menos 4-6
aminoácidos de largo) y se pueden usar para ensayos de unión con un
anticuerpo anti-NGF. En otro ejemplo, el epítopo al
cual se une el anticuerpo anti-NGF se puede
determinar en una selección sistemática usando el solapamiento de
péptidos derivados de la secuencia NGF y determinando la unión
mediante el anticuerpo anti-NGF. Según los ensayos
de expresión de fragmentos génicos, el marco de lectura abierto que
codifica el NGF se fragmenta aleatoriamente o mediante
construcciones genéticas específicas y la reactividad de los
fragmentos del NGF expresados se determina con el anticuerpo a
probar. Los fragmentos génicos se pueden producir, por ejemplo,
mediante PCR y a continuación se pueden transcribir y traducir en
proteínas in vitro, en presencia de aminoácidos radiactivos.
La unión del anticuerpo a los fragmentos del NGF marcados
radiactivamente se determina a continuación por inmunoprecipitación
y electroforesis en gel. Ciertos epítopos también se pueden
identificar usando grandes librerías de secuencias de péptidos
aleatorios presentados en la superficie de partículas de fago
(librerías de fagos). Alternativamente, una librería definida de
solapamiento de fragmentos peptídicos se puede probar para la unión
al anticuerpo de prueba en simples ensayos de unión. En un ejemplo
adicional, se puede realizar mutagénesis de un dominio de unión al
antígeno, experimentos de intercambio de dominios y mutagénesis de
barrido de alanina para identificar los residuos requeridos,
suficientes, y/o necesarios para la unión al epítopo. Por ejemplo,
los experimentos de intercambio de dominios se pueden realizar
usando un NGF mutante en el que diversos fragmentos del polipéptido
NGF han sido sustituidos (intercambiados) con secuencias de una
proteína íntimamente relacionada, pero antigénicamente distinta (tal
como otro miembro de la familia de proteínas neurotrofina).
Valorando la unión del anticuerpo al NGF mutante, se puede valorar
la importancia del fragmento NGF particular para la unión al
anticuerpo.
Otro procedimiento más que se puede usar para
caracterizar un anticuerpo anti-NGF es usar ensayos
de competición con otros anticuerpos conocidos por unirse al mismo
antígeno, es decir, diversos fragmentos sobre el NGF, para
determinar si el anticuerpo anti-NGF se une al mismo
epítopo como los otros anticuerpos. Los ensayos de competición son
muy conocidos por aquellos expertos en la técnica. Ejemplos de
anticuerpos que se pueden usar en los ensayos de competición para
la presente invención incluyen MAb 911, 912, 938, como se describe
en Hongo, y col., Hybridoma 19: 215-227 (2000).
Se describen otros antagonistas del NGF
distintos de los anticuerpos anti-NGF con fines
comparativos. En algunas formas de realización, el antagonista del
NGF comprende al menos una molécula antisentido capaz de bloquear o
reducir la expresión de un NGF funcional. Las secuencias de
nucleótidos del NGF son conocidas y están fácilmente disponibles en
bases de datos abiertas a consulta por el público. Véase, por
ejemplo, Borsani y col., Nuc. Acids Res. 1990, 18, 4020; Número de
acceso NM 002506; Ullrich y col., Nature 303:
821-825 (1983). Es rutinario preparar moléculas de
oligonucleótidos antisentido que se unirán específicamente al ARNm
del NGF sin reacción cruzada con otros polinucleótidos. Sitios
diana ejemplares incluyen, pero no están limitados a, el codón de
iniciación, las regiones reguladoras 5', la secuencia codificante y
la región sin traducir 3'. En algunas formas de realización, los
oligonucleótidos tienen de 10 a 100 nucleótidos de longitud
aproximadamente, de 15 a 50 nucleótidos de longitud
aproximadamente, 18 a 25 nucleótidos de longitud aproximadamente, o
superior. Los oligonucleótidos pueden comprender modificaciones
estructurales tales como, por ejemplo, enlaces de fosforotioato, y
modificaciones 2'-O-azúcar muy
conocidas en la técnica. Moléculas antisentido ejemplares incluyen
las moléculas antisentido del NGF descritas en la Publicación de
EE.UU. Nº 20010046959; véase también
http://www.rna-tec.com/repair.htm.
En otras formas de realización, el antagonista
del NGF comprende al menos una molécula antisentido capaz de
bloquear o reducir la expresión de un receptor NGF funcional (tal
como TrkA y/o p75). Woolf y col., J. Neuroscie (2001) 21 (3):
1047-55; Taglialetela y col., J Neurochem (1996) 66
(5): 1826-35. Las secuencias de nucleótidos de TrkA
y p75 son conocidas y están fácilmente disponibles en bases de datos
abiertas a consulta por el público.
Alternativamente, la expresión y/o liberación
del NGF se puede reducir usando silenciamento génico,
oligonucleótidos morfolino, ARNi, o ribozimas, procedimientos que
son muy conocidos en la técnica. Véase, http://www.
macalester.edu/\simmontgomery/RNAi.html; http://pub32.ezboard.com/fmorpholinosfrm19.showMessage?topicID=6.
topic; http://www.highveld.com/ribozyme.html.
macalester.edu/\simmontgomery/RNAi.html; http://pub32.ezboard.com/fmorpholinosfrm19.showMessage?topicID=6.
topic; http://www.highveld.com/ribozyme.html.
En otras formas de realización, el antagonista
del NGF comprende al menos un compuesto inhibitorio del NGF. Como
se usa en el presente documento, "compuesto inhibitorio del
NGF" se refiere a un compuesto distinto del anticuerpo
anti-NGF que reduce, inhibe, neutraliza, o anula
directa o indirectamente la actividad biológica del NGF. Un
compuesto inhibitorio del NGF debe presentar una cualquiera o más de
las siguientes características: (a) unirse al NGF; (b) inhibir la
actividad biológica del NGF y/o las vías aguas abajo mediadas por la
función de la señalización del NGF; (c) tratar o prevenir cualquier
aspecto del dolor, particularmente en combinación con un analgésico
opiáceo; (d) bloquear o reducir la activación del receptor NGF
(incluyendo la dimerización y/o autofosforilación del receptor
TrkA); (e) incrementar el aclaramiento del NGF; (f) inhibir
(reducir) la síntesis, producción o liberación de NGF; (g) mejorar
el tratamiento del dolor con opiáceos. Compuestos inhibitorios del
NGF ejemplares incluyen las moléculas pequeñas inhibidoras del NGF
descritas en la Publicación de EE.UU. Nº 20010046959; los
compuestos que inhiben la unión del NGF a p75, como se describe en
la Publicación PCT Nº WO 00/69829; los compuestos que inhiben la
unión del NGF a TrkA/p75, como se describe en la Publicación PCT Nº
WO 98/17278. Ejemplos adicionales de compuestos inhibitorios del NGF
incluyen los compuestos descritos en las Publicaciones PCT Nº WO
02/17914, WO 02/20479, patentes de EE.UU. Nº 5.342.942, 6.127.401, y
6.359.130. Compuestos inhibitorios del NGF ejemplares adicionales
son los compuestos que son inhibidores competitivos del NGF. Véase
patente de EE.UU. Nº 6.291.247. Además, un experto en la técnica
puede preparar otras moléculas pequeñas inhibitorias del NGF.
En algunas formas de realización, un compuesto
inhibitorio del NGF se une al NGF. Sitios diana (de unión)
ejemplares incluyen, pero no están limitados a, la fracción del NGF
que se une al receptor Trka y/o p75, y aquellas fracciones del NGF
que son adyacentes a la región de unión del receptor y que son
responsables, en parte, de la forma tridimensional correcta de la
fracción de unión del receptor. En otra forma de realización, un
compuesto inhibitorio del NGF se une al receptor NGF (tal como Trka
y/o p75) e inhibe una actividad biológica del NGF. Sitios diana
ejemplares incluyen aquellas fracciones de Trka y/o p75 que se unen
al NGF.
En formas de realización comprenden moléculas
pequeñas, una molécula pequeña puede tener un peso molecular entre
cualquiera de 100 y 20.000 Daltons, 500 y 15.000 Daltons, o 1000 y
10.000 Daltons aproximadamente. Están disponibles comercialmente
librerías de moléculas pequeñas.
Las moléculas pequeñas se pueden administrar
usando cualquier medio conocido en la técnica, incluyendo
inhalación, intraperitoneal, intravenosa, intramuscular,
subcutánea, intratecal, intraventricular, oral, enteral, parenteral,
intranasal, o dérmicamente. En algunas formas de realización,
cuando el antagonista del NGF es una molécula pequeña, se
administrará a una tasa de 0,1 a 300 mg/kg de peso corporal del
paciente dividido en una a tres o más dosis. Para un paciente
adulto de peso normal, se pueden administrar dosis que abarcan entre
1 mg y 5 g por dosis.
En otras formas de realización, el antagonista
del NGF comprende al menos un análogo estructural del NGF.
"Análogos estructurales del NGF" en la presente invención se
refieren a compuestos que tienen una estructura tridimensional
similar a una parte de la del NGF y que se unen a un receptor NGF en
condiciones fisiológicas in vitro o in vivo. En una
forma de realización, el análogo estructural del NGF se une a un
receptor TrkA y/o p75. Análogos estructurales del NGF ejemplares
incluyen, pero no están limitados a, péptidos bicíclicos descritos
en la Publicación PCT Nº WO 97/15593; los péptidos bicíclicos
descritos en la patente de EE.UU. Nº 6.291.247; los compuestos
cíclicos descritos en la patente de EE.UU. Nº 6.017.878; y los
péptidos derivados del NGF descritos en la Publicación PCT Nº WO
89/09225. También se pueden diseñar y sintetizar análogos
estructurales del NGF adecuados mediante modelización molecular de
la unión NGF-receptor, por ejemplo, mediante el
procedimiento descrito en la Publicación PCT Nº WO 98/06048. Los
análogos estructurales del NGF pueden ser monómeros o
dímeros/oligómeros en cualquier combinación deseada de las mismas
estructuras o diferentes para obtener afinidades y efectos
biológicos mejorados.
En otras formas de realización, la invención
proporciona un antagonista del NGF que comprende al menos un
mutante dominante negativo del receptor TrkA y/o p75. Alguien
experto en la técnica puede preparar mutantes dominantes negativos
de, por ejemplo, el receptor TrkA tal que el receptor se unirá al
NGF y, así, actuará como "sumidero" para capturar NGFs. No
obstante, los mutantes dominantes negativos no tendrán la
bioactividad normal del receptor (tal como el receptor TrkA) tras
la unión al NGF. Mutantes dominantes negativos ejemplares incluyen,
pero no están limitados a, los mutantes descritos en las siguientes
referencias: Li y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 10884;
Eide y col., J. Neurosci. 1996, 16, 3123; Liu y col., J. Neurosci
1997, 17, 8749; Klein y col., Cell 1990, 61, 647; Valenzuela y
col., Neuron 1993, 10, 963; Tsoulfas y col., Neuron 1993,10, 975; y
Lamballe y col., EMBO J. 1993, 12, 3083, cada una de las cuales se
incorpora en su totalidad en el presente documento por referencia.
Los mutantes dominantes negativos se pueden administrar en forma de
proteínas o en forma de un vector de expresión tal que el mutante
dominante negativo (por ejemplo, un mutante del receptor TrkA) se
exprese in vivo. La proteína o el vector de expresión se
pueden administrar usando cualquier medio conocido en la técnica,
tal como intraperitoneal, intravenosa, intramuscular, subcutánea,
intratecal, intraventricular, oral, enteral, parenteral, intranasal,
dérmicamente, o por inhalación. Por ejemplo, la administración de
vectores de expresión incluye la administración local o sistémica,
incluyendo inyección, administración por vía oral, administración
con pistola de partículas o por catéter, y administración por vía
tópica. Alguien experto en la técnica está familiarizado con la
administración de vectores de expresión para obtener la expresión
de una proteína exógena in vivo. Véase, por ejemplo, patentes
de EE.UU. Nº 6.436.908; 6.413.942; 6.376.471.
También se puede usar la administración dirigida
de composiciones terapéuticas que contienen un polinucleótido
antisentido, un vector de expresión, o polinucleótidos subgenómicos.
Técnicas de administración de ADN mediadas por el receptor se
describen en, por ejemplo, Findeis y col., Trends Biotechnol. (1993)
11: 202; Chiou y col., Gene Therapeutics: Methods And Applications
Of Direct Gene Transfer (J.A. Wolff, ed.) (1994); Wu y col., J.
Biol. Chem. (1988) 263: 621; Wu y col., J. Biol. Chem. (1994) 269:
542; Zenke y col., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) (1990) 87: 3655; Wu
y col., J. Biol. Chem. (1991) 266: 338. Las composiciones
terapéuticas que contienen un polinucleótido se administran en un
intervalo de 100 ng aproximadamente a 200 mg (o superior) de ADN
aproximadamente para la administración local en un protocolo de
terapia génica. En algunas formas de realización, también se pueden
usar intervalos de concentración inferiores a 500 ng
aproximadamente, de 500 ng aproximadamente a 50 mg aproximadamente,
de 1 \mug aproximadamente a 2 mg aproximadamente, de 5 \mug
aproximadamente a 500 \mug aproximadamente, y de 20 \mug
aproximadamente a 100 \mug aproximadamente o superior de ADN
durante un protocolo de terapia génica. Los polinucleótidos y
polipéptidos terapéuticos de la presente invención se pueden
administrar usando vehículos de administración de genes. El vehículo
de administración de genes puede ser de origen vírico o no vírico
(véase, en general, Jolly, Cancer Gene Therapy (1994) 1: 51; Kimura,
Human Gene Therapy (1994) 5: 845; Connelly, Human Gene Therapy
(1995) 1: 185; y Kaplitt, Nature Genetics (1994) 6: 148). La
expresión de estas secuencias codificantes se pueden inducir usando
promotores y/o potenciadores endógenos de mamífero o heterólogos.
La expresión de la secuencia codificante puede ser constitutiva o
regulada.
Los vectores basados en virus para la
administración de un polinucleótido deseado y su expresión en una
célula deseada son muy conocidos en la técnica. Vehículos basados
en virus ejemplares incluyen, pero no están limitados a, retrovirus
recombinantes (véase, por ejemplo, Publicación PCT Nº WO 90/07936;
WO 94/03622; WO 93/25698; WO 93/25234; WO 93/11230; WO 93/10218; WO
91/02805; patentes de EE.UU. Nº 5.219.740; 4.777.127; patente de GB
Nº 2.200.651; y patente EP Nº 0 345 242), vectores basados en
alfavirus (por ejemplo, vectores de virus Sindbis, virus del bosque
Semliki (ATCC VR-67; ATCC VR-1247),
virus del río Ross (ATCC VR-373; ATCC
VR-1246) y virus de la encefalitis equina
venezolana (ATCC VR-923; ATCC
VR-1250; ATCC VR 1249; ATCC
VR-532)), y vectores asociados a adenovirus (AAV)
(véase, por ejemplo, Publicación PCT Nº WO 94/12649, WO 93/03769; WO
93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 y WO 95/00655). También se puede
emplear la administración de ADN unido a adenovirus muertos como se
describe en Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3: 147.
También se pueden emplear vehículos y
procedimientos de administración no víricos, incluyendo, pero no
limitado a, condensados policatiónicos de ADN unidos o no unidos a
adenovirus solo (véase, por ejemplo, Curiel, Hum. Gene Ther. (1992)
3: 147); ADN unido a ligando (véase, por ejemplo, Wu, J. Biol. Chem.
(1989) 264: 16985); células vehículo para la administración en
células eucariotas (véase, por ejemplo, patente de EE.UU. Nº
5.814.482; Publicación PCT Nº WO 95/07994; WO 96/17072; WO
95/30763; y WO 97/42338) neutralización o fusión de la carga
nucleica con membranas celulares. También se puede emplear ADN
desnudo. Procedimientos de introducción de ADN desnudo ejemplares
se describen en la Publicación PCT Nº WO 90/11092 y en la patente de
EE.UU. Nº 5.580.859. Los liposomas que pueden actuar como vehículos
de administración de genes se describen en la patente de EE.UU. Nº
5.422.120; Publicación PCT Nº WO 95/13796; WO 94/23697; WO 91/14445;
y patente EP Nº 0 524 968.
Aproximaciones adicionales se describen en
Philip, Mol. Cell Biol. (1994) 14: 2411, y en Woffendin, Proc.
Natl. Acad. Sci. (1994) 91: 1581.
También es evidente que se puede usar un vector
de expresión para dirigir la expresión de cualquiera de los
antagonistas del NGF basados en proteínas descritos en el presente
documento (por ejemplo, anticuerpo anti-NGF,
inmunoadhesina TrkA, etc.). Por ejemplo, son conocidos en la técnica
otros fragmentos del receptor TrkA que son capaces de bloquear
(desde el bloqueo parcial al bloqueo completo) del NGF y/o una
actividad biológica del NGF.
En otra forma de realización, el antagonista del
NGF comprende al menos una inmunoadhesina TrkA. Las inmunoadhesinas
TrkA como se usan en el presente documento se refieren a moléculas
quiméricas solubles que comprenden el dominio extracelular de un
receptor TrkA (o una fracción del mismo) y una secuencia de
inmunoglobulina, que retiene la especificidad de unión (en algunas
formas de realización, retiene sustancialmente la especificidad de
unión) del receptor TrkA y es capaz de unirse al NGF. Una
inmunoadhesina TrkA es capaz de bloquear (reducir y/o suprimir) una
actividad biológica del NGF, como se describe en el presente
documento.
Las inmunoadhesinas TrkA son conocidas en la
técnica, y se ha encontrado que bloquean (reducen o suprimen) la
unión del NGF al receptor TrkA. Véase, por ejemplo, patente de
EE.UU. Nº 6.153.189. En una forma de realización, la inmunoadhesina
TrkA comprende la fusión de una secuencia de aminoácidos del
receptor TrkA capaz de unirse al NGF (o una secuencia de
aminoácidos que retiene sustancialmente la especificidad de unión
del receptor TrkA) y una secuencia de inmunoglobulina (o una
secuencia de aminoácidos que retiene sustancialmente la
especificidad de unión al receptor TrkA). En algunas formas de
realización, el receptor TrkA es una secuencia de un receptor TrkA
humano, y la fusión es con una secuencia del dominio constante de la
inmunoglobulina. En otras formas de realización, la secuencia del
dominio constante de la inmunoglobulina es una secuencia del dominio
constante de la cadena pesada de la inmunoglobulina. En otras
formas de realización, la asociación de dos fusiones de la cadena
pesada de la inmunoglobulina-receptor TrkA (por
ejemplo, a través del enlace covalente mediante puente
disulfuro(s)) da como resultado una estructura homodimérica
de tipo inmunoglobulina. Una cadena ligera de la inmunoglobulina
además se puede asociar a una o ambas de las quimeras receptor
TrkA-inmunoglobulina en el dímero con el puente
disulfuro para dar una estructura homotrimérica u homotetramérica.
Ejemplos de inmunoadhesinas TrkA adecuadas incluyen aquellas
descritas en la patente de EE.UU. Nº 6.153.189.
En otra forma de realización, el antagonista del
NGF comprende al menos un anticuerpo anti-TrkA capaz
de bloquear, suprimir, alterar, y/o reducir la interacción física
del NGF con el receptor TrkA y/o la señalización aguas abajo, por
lo que se reduce y/o bloquea la actividad biológica del NGF. Los
anticuerpos anti-TrkA son conocidos en la técnica.
Anticuerpos anti-TrkA ejemplares incluyen aquellos
descritos en la Publicación PCT Nº WO 97/21732, WO 00/73344, WO
02/15924, y en la Publicación de EE.UU. Nº 20010046959. En otra
forma de realización, el antagonista del NGF comprende al menos un
anticuerpo anti-p75 capaz de bloquear, suprimir, y/o
reducir la interacción física del NGF con el receptor p75 y/o la
señalización aguas abajo, por lo que se reduce y/o bloquea la
actividad biológica del NGF.
En otra forma de realización, el antagonista del
NGF comprende al menos un inhibidor quinasa capaz de inhibir la
señalización quinasa aguas abajo asociada a la actividad del
receptor TrkA y/o p75. Un inhibidor quinasa ejemplar es K252a o
K252b, que es conocido en la técnica y se describe en Knusel y col.,
J. Neurochem. 59: 715-722 (1992); Knusel y col., J.
Neurochemistry 57: 955-962 (1991); Koizumi y col.,
J. Neuroscience 8: 715-721 (1988); Hirata y col.,
Chemical Abstracts 111: 728, XP00204135, véase resumen y 12th
Collective Chemical Substance Index, p. 34237, c. 3
(5-7), 55-60,
66-69), p. 34238, c. 1 (41-44), c. 2
(25-27, 32-33), p. 3423, c. 3
(48-50, 52-53); patente de EE.UU.
Nº 6.306.849.
Si el facultativo investiga se espera que sean
identificadas una serie de otras categorías de antagonistas del
NGF.
Los anticuerpos anti-NGF y otros
antagonistas del NGF se pueden identificar o caracterizar usando
procedimientos conocidos en la técnica, mediante los que se detecta
y/o mide la reducción, mejora, o neutralización de una actividad
biológica del NGF. Por ejemplo, se puede usar un ensayo de
activación del receptor quinasa (KIRA) descrito en la patente de
EE.UU. Nº 5.766.863 y 5.891.650, para identificar antagonistas del
NGF. Este ensayo de tipo ELISA es adecuado para la medida
cualitativa o cuantitativa de la activación quinasa midiendo la
autofosforilación del dominio quinasa de una proteína receptora
tirosina quinasa (en lo sucesivo "rPTK"), por ejemplo, el
receptor TrkA, así como para la identificación y caracterización de
antagonistas potenciales de una rPTK, por ejemplo, TrkA. La primera
fase del ensayo supone la fosforilación del dominio quinasa de un
receptor quinasa, por ejemplo, un receptor TrkA, en el que el
receptor está presente en la membrana celular de una célula
eucariota. El receptor puede ser un receptor endógeno o un ácido
nucleico que codifica el receptor, o una construcción del receptor,
que se puede transformar en la célula. Normalmente, una primera fase
sólida (por ejemplo, un pocillo de una primera placa de ensayo) se
recubre con una población sustancialmente homogénea de tales células
(normalmente una línea celular de mamífero) de manera que las
células se adhieren a la fase sólida. A menudo, las células son
adherentes y por tanto se adhieren naturalmente a la primera fase
sólida. Si se usa una "construcción del receptor", normalmente
comprende una fusión de un receptor quinasa y un polipéptido
bandera. El polipéptido bandera es reconocido por el agente de
captura, a menudo un anticuerpo de captura, en la parte ELISA del
ensayo. A continuación se añade un analito, tal como un anticuerpo
anti-NGF u otro antagonista del NGF candidato,
junto con el NGF a los pocillos con las células adherentes, de
manera que el receptor tirosina quinasa (por ejemplo, el receptor
TrkA) se expone a (o se pone en contacto con) el NGF y el analito.
Este ensayo permite la identificación de anticuerpos (u otro
antagonista del NGF) que inhiban la activación de TrkA por su
ligando NGF. Después de la exposición al NGF y al analito, las
células adherentes se solubilizan usando un tampón de lisis (que
contiene un detergente solubilizante) y agitación suave, liberando
así el lisado celular que se puede someter directamente a la parte
ELISA del ensayo, sin la necesidad de concentrar o clarificar el
lisado celular.
El lisado celular así preparado está listo
entonces para ser sometido a la fase ELISA del ensayo. Como una
primera etapa en la fase ELISA, una segunda fase sólida (normalmente
un pocillo de una placa de microtitulación de ELISA) se recubre con
un agente de captura (a menudo un anticuerpo de captura) que se une
específicamente al receptor tirosina quinasa, o, en el caso de una
construcción del receptor, al polipéptido bandera. El recubrimiento
de la segunda fase sólida se lleva a cabo de manera que el agente de
captura se adhiere a la segunda fase sólida. El agente de captura
generalmente es un anticuerpo monoclonal, pero, como se describe en
los ejemplos del presente documento, también se pueden usar
anticuerpos policlonales. El lisado celular obtenido a continuación
se expone a, o se pone en contacto con, el agente de captura
adherente de manera que el receptor o la construcción del receptor
se adhiere a (o es capturado en) la segunda fase sólida. A
continuación se lleva a cabo una etapa de lavado, para así eliminar
el lisado celular no unido, dejando el receptor o la construcción
del receptor capturado. El receptor o la construcción del receptor
capturado o adherido a continuación se expone a, o se pone en
contacto con, un anticuerpo anti-fosfotirosina que
identifica los residuos tirosina fosforilados en el receptor
tirosina quinasa. En una forma de realización, el anticuerpo
anti-fosfotirosina está conjugado (directa o
indirectamente) a una enzima que cataliza un cambio de color de un
reactivo coloreado no radiactivo. Por consiguiente, la
fosforilación del receptor se puede medir mediante un posterior
cambio de color del reactivo. La enzima puede estar unida
directamente al anticuerpo anti-fosfotirosina, o una
molécula de conjugación (por ejemplo, biotina) puede estar
conjugada al anticuerpo anti-fosfotirosina y la
enzima se puede unir posteriormente al anticuerpo
anti-fosfotirosina a través de la molécula de
conjugación. Finalmente, se mide la unión del anticuerpo
anti-fosfotirosina al receptor o la construcción del
receptor capturado, por ejemplo, mediante un cambio de color en el
reactivo coloreado.
El antagonista del NGF también se puede
identificar incubando un agente candidato con NGF y controlando una
cualquiera o más de las siguientes características: (a) unión al
NGF; (b) inhibición de la actividad biológica del NGF o de las vías
aguas abajo mediadas por la función de señalización del NGF; (c)
bloqueo o reducción de la activación del receptor NGF (incluyendo
la dimerización y/o autofosforilación de TrkA); (d) incremento del
aclaramiento del NGF; (e) tratamiento, mejora o prevención de
cualquier aspecto del dolor, particularmente en combinación con un
analgésico opiáceo; (f) inhibición (reducción) de la síntesis,
producción o liberación del NGF; (g) mejora del tratamiento del
dolor con opiáceos. En algunas formas de realización, un antagonista
del NGF se identifica incubando un agente candidato con NGF y
controlando la unión y la reducción o neutralización asistida de la
actividad biológica del NGF. El ensayo de unión se puede realizar
con polipéptidos de NGF purificados, o con células que expresan
naturalmente, o transfectadas para expresar, polipéptidos de NGF. En
una forma de realización, el ensayo de unión es un ensayo de unión
competitivo, en el que se evalúa la capacidad de un anticuerpo
candidato para competir con un antagonista del NGF conocido por
unirse al NGF. El ensayo se puede realizar en diversos formatos,
incluyendo el formato ELISA. En otras formas de realización, se
identifica un antagonista del NGF incubando un agente candidato con
NGF y controlando la inhibición asistida de la dimerización y/o
autofosforilación del receptor TrkA.
Después de la identificación inicial, la
actividad de un antagonista anti-NGF candidato se
puede confirmar y refinar posteriormente mediante bioensayos,
conocidos por probar las actividades biológicas dirigidas.
Alternativamente, se pueden usar bioensayos para seleccionar
directamente los candidatos. Por ejemplo, el NGF promueve una serie
de cambios morfológicamente reconocibles en células sensibles. Éstos
incluyen, pero no están limitados a, promoción de la diferenciación
de células PC12 y mejora del crecimiento de neuritas en estas
células (Urfer y col., Biochem 36: 4775-4781
(1997); Tsoulfas y col., Neuron 10: 975-990 (1993)),
promoción de la extensión de neuritas en explantes de ganglios
sensoriales y simpáticos sensibles (Levi-Montalcini,
R. y Angeletti, P. Nerve growth factor. Physiol. Rev. 48,
534-569, 1968) y promoción de la supervivencia de
neuronas dependientes del NGF tales como neuronas del ganglio de la
raíz dorsal embrionaria, del ganglio trigeminal, o el ganglio
simpático (por ejemplo, Chun & Patterson, Dev. Biol. 75:
705-711, (1977); Buchman & Davies, Development
118: 989-1001, (1993)). Así, el ensayo para la
inhibición de la actividad biológica del NGF supone el cultivo de
células sensibles al NGF con NGF más un analito, tal como un
anticuerpo anti-NGF candidato o un antagonista del
NGF candidato. Después de un tiempo apropiado la respuesta celular
se someterá a ensayo (diferenciación celular, extensión de neuritas
o supervivencia celular).
La capacidad de un antagonista del NGF candidato
para bloquear o neutralizar la actividad biológica del NGF también
se puede valorar controlando la capacidad del agente candidato para
inhibir la supervivencia mediada por el NGF en el bioensayo de
supervivencia del ganglio de la raíz dorsal de rata embrionaria como
se describe en Hongo y col., Hybridoma 19: 215-227
(2000).
Las composiciones de la invención comprenden una
cantidad eficaz de un anticuerpo anti-NGF y/o un
analgésico opiáceo, como se describe en las diversas formas de
realización del presente documento. En algunas formas de
realización, las composiciones comprenden adicionalmente un
excipiente farmacéuticamente aceptable. En algunas formas de
realización, la composición es para su uso en cualquiera de los
procedimientos descritos en el presente documento (tales como los
procedimientos para el tratamiento del dolor
post-quirúrgico). Ejemplos de tales composiciones,
así como cómo se formulan, también se describen en la sección previa
y a continuación. El anticuerpo anti-NGF y el
opiáceo pueden estar presentes en una sola composición o pueden
estar presentes como composiciones separadas. Por consiguiente, en
algunas formas de realización, el anticuerpo
anti-NGF y el analgésico opiáceo están presentes en
la misma composición. En otras formas de realización, el anticuerpo
anti-NGF y el analgésico opiáceo están presentes en
composiciones separadas.
En otro aspecto, la invención proporciona una
composición sinérgica de un anticuerpo anti-NGF y un
analgésico opiáceo.
En algunas formas de realización, la invención
proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo
anti-NGF para su uso en el tratamiento del dolor
(tal como dolor post-quirúrgico), en el que dicho
uso comprende la administración simultánea y/o secuencial de un
analgésico opiáceo. En algunas formas de realización, la invención
proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un analgésico
opiáceo para su uso en el tratamiento del dolor, en el que dicho
uso comprende la administración simultánea y/o secuencial de un
anticuerpo anti-NGF. En algunas formas de
realización, la invención proporciona composiciones farmacéuticas
que comprenden un anticuerpo anti-NGF, y un
analgésico opiáceo para su uso separado, simultánea y/o secuencial
para el tratamiento del dolor. En algunas formas de realización, el
anticuerpo anti-NGF es un anticuerpo
anti-NGF tal como un anticuerpo E3 como se describe
en el presente documento. En otras formas de realización, el
analgésico opiáceo es morfina.
Se entiende que las composiciones pueden
comprender más de un antagonista del NGF. Por ejemplo, una
composición puede comprender más de un miembro de una clase de
antagonistas del NGF (por ejemplo, una mezcla de anticuerpos
anti-NGF que reconocen diferentes epítopos del NGF),
así como miembros de clases diferentes de antagonistas del NGF (por
ejemplo, un anticuerpo anti-NGF y un compuesto
inhibitorio del NGF). Otras composiciones ejemplares comprenden más
de un anticuerpo anti-NGF que reconoce el mismo
epítopo(s), especies diferentes de anticuerpos
anti-NGF que se unen a epítopos diferentes del NGF,
o compuestos inhibitorios del NGF diferentes. En otras formas de
realización, la composición comprende uno o más antagonistas del NGF
seleccionados del grupo constituido por un antagonista (por
ejemplo, un anticuerpo) que se une (interacciona físicamente con) el
NGF, un antagonista que se une a un receptor NGF (tal como el
receptor TrkA o el receptor p75), y/o un antagonista que reduce
(impide y/o bloquea) la señalización del receptor NGF aguas
abajo.
La composición usada en la presente invención
adicionalmente puede comprender vehículos, excipientes, o
estabilizantes farmacéuticamente aceptables (Remington: The Science
and Practice of Pharmacy 20th Ed. (2000) Lippincott Williams y
Wilkins, Ed. K. E. Hoover), en forma de formulaciones liofilizadas o
disoluciones acuosas. Los vehículos, excipientes o estabilizantes
aceptables son no tóxicos para los receptores a las dosificaciones y
concentraciones usadas, y pueden comprender tampones tales como
fosfato, citrato, y otros ácidos orgánicos; antioxidantes
incluyendo ácido sórbico y metionina; conservantes (tales como
cloruro de octadecildimetilbencilamonio; cloruro de hexametonio;
cloruro de benzalconio; cloruro de bencetonio; fenol, alcohol
butílico o bencílico; alquil parabenos tales como metil o
propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol;
3-pentanol; y m-cresol);
polipéptidos de bajo peso molecular (menos de 10 residuos
aproximadamente); proteínas, tales como seroalbúmina, gelatina, o
inmunoglobulinas; polímeros hidrófilos tales como
polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina,
asparagina, histidina, arginina, o lisina; monosacáridos,
disacáridos, y otros carbohidratos incluyendo glucosa, manosa, o
dextranos; agentes quelantes tales como EDTA; azúcares tales como
sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones que forman
sales tales como sodio; complejos metálicos (por ejemplo, complejos
de Zn-proteína); y/o tensioactivos no iónicos tales
como TWEEN^{TM}, PLURONICS^{TM} o polietilenglicol (PEG). Los
excipientes farmacéuticamente aceptables se describen en profundidad
en el presente documento.
Las composiciones descritas en el presente
documento pueden contener compuestos adicionales conocidos por ser
útiles para el tratamiento del dolor. El anticuerpo
anti-NGF y el analgésico opiáceo, y sus
composiciones también se pueden usar en combinación con otros
agentes que sirven para mejorar y/o complementar la eficacia de los
agentes.
La invención también proporciona kits para su
uso en los presentes procedimientos. Los kits de la invención
incluyen uno o más contenedores que comprenden un anticuerpo
anti-NGF (tal como el anticuerpo E3 humanizado
descrito en el presente documento), y/o un analgésico opiáceo, y en
algunas formas de realización, además comprenden instrucciones para
su uso de acuerdo con cualquiera de los procedimientos descritos en
el presente documento. En alguna forma de realización, el kit
comprende un anticuerpo anti-NGF (tal como el
anticuerpo E3 descrito en el presente documento). En otras formas
de realización, el kit comprende un anticuerpo
anti-NGF que comprende una o más CDR del anticuerpo
E3 (tal como una, dos, tres, cuatro, cinco, o, en algunas formas de
realización, las seis CDR de E3). El kit además puede comprender la
descripción de la selección de un individuo adecuado para el
tratamiento basándose en la identificación de si ese individuo tiene
dolor o si el individuo presenta riesgo de dolor. En algunas formas
de realización, la invención proporciona kits para su uso con
cualquiera de los procedimientos descritos en el presente documento,
dicho kit que comprende un antagonista del NGF. En otras formas de
realización adicionales, el kit comprende un anticuerpo humanizado,
(tal como el anticuerpo E3 descrito en el presente documento). En
otras formas de realización más, las instrucciones comprenden la
descripción de la administración de un anticuerpo
anti-NGF en combinación con un analgésico opiáceo
para tratar, prevenir y/o mejorar cualquier dolor (tal como dolor
post-quirúrgico).
En algunas formas de realización, el kit
comprende un anticuerpo anti-NGF, un analgésico
opiáceo, e instrucciones para la administración del antagonista del
NGF y el analgésico opiáceo simultánea y/o secuencialmente, para el
tratamiento eficaz del dolor. En otra forma de realización, el kit
comprende un anticuerpo anti-NGF, e instrucciones
para la administración del anticuerpo anti-NGF y un
analgésico opiáceo simultánea y/o secuencialmente, para el
tratamiento eficaz del dolor. En otras formas de realización, el kit
comprende un anticuerpo anti-NGF, y un analgésico
opiáceo (tal como morfina), instrucciones para la administración del
anticuerpo anti-NGF y del analgésico opiáceo
separada, simultánea y/o secuencialmente, para el tratamiento eficaz
del dolor.
En algunas formas de realización, el kit
comprende un anticuerpo anti-NGF. En otras formas de
realización, el anticuerpo anti-NGF es un
anticuerpo que comprende la región variable de la cadena pesada
mostrada en la Tabla 1 y la región variable de la cadena ligera
mostrada en la Tabla 2. En otras formas de realización adicionales,
el anticuerpo anti-NGF es un anticuerpo E3 como se
describe en el presente documento.
El anticuerpo anti-NGF y el
analgésico opiáceo se pueden presentar en contenedores separados o
en un único contenedor. Se entiende que el kit puede comprender una
composición distinta o dos o más composiciones en las que una
composición comprende un antagonista del NGF y otra composición
comprende un analgésico opiáceo.
Los kits de la presente invención están en
envases adecuados. Los envases adecuados incluyen, pero no están
limitados a, viales, botellas, jarras, envases flexibles (por
ejemplo, bolsas Mylar o de plástico selladas), y similares. Los
kits opcionalmente pueden proporcionar componentes adicionales tales
como tampones e información interpretativa.
Las instrucciones que se refieren al uso de un
anticuerpo anti-NGF generalmente incluyen
información sobre la posología, calendario de dosificación, y vía
de administración para el tratamiento previsto. Los contenedores
pueden ser de dosis unitaria, paquetes en bruto (por ejemplo,
paquetes multidosis) o dosis subunitarias. Las instrucciones
suministradas en los kits de la invención normalmente son
instrucciones escritas en una etiqueta o introducidas en el paquete
(por ejemplo, una hoja de papel incluida en el kit), pero también
son aceptables instrucciones legibles por máquinas (por ejemplo,
instrucciones contenidas en un disco de almacenamiento óptico o
magnético).
La etiqueta o la hoja introducida en el paquete
indica que la composición se usa para tratar, mejorar y/o prevenir
el dolor post-quirúrgico. Las instrucciones se
pueden proporcionar para llevar a la práctica cualquiera de los
procedimientos descritos en el presente documento.
Los kits de la presente invención están en
envases adecuados. Los envases adecuados incluyen, pero no están
limitados a, viales, botellas, jarras, envases flexibles (por
ejemplo, bolsas Mylar o de plástico selladas), y similares. También
están contemplados envases para su uso en combinación con un
dispositivo específico, tal como un inhalador, un dispositivo de
administración nasal (por ejemplo, un atomizador) o un dispositivo
de infusión tal como una minibomba. Un kit puede tener un puerto de
acceso estéril (por ejemplo, el contenedor puede ser una bolsa con
disolución intravenosa o un vial que tiene un tapón perforable con
la aguja de una inyección hipodérmica). El contenedor también puede
tener un puerto de acceso estéril (por ejemplo, el contenedor puede
ser una bolsa con disolución intravenosa o un vial que tiene un
tapón perforable con la aguja de una inyección hipodérmica). Al
menos un agente activo de la composición es un antagonista del NGF,
tal como un anticuerpo anti-NGF. El contenedor
además puede comprender un segundo agente farmacéuticamente
activo.
Los kits opcionalmente pueden proporcionar
componentes adicionales tales como tampones e información
interpretativa. Normalmente, el kit comprende un contenedor y una
etiqueta o una hoja insertada en el paquete o asociada al
contenedor.
\newpage
El anticuerpo anti-NGF y el
analgésico opiáceo se pueden administrar a un individuo a través de
cualquier vía adecuada. Por ejemplo, se pueden administrar juntos o
por separado oral, intravenosa, sublingual, subcutánea,
intraarterial, intramuscular, rectal, intraespinal, intratorácica,
intraperitoneal, intraventricular, sublingual, transdérmicamente o
por inhalación. Se pueden administrar oralmente, por ejemplo, en
forma de comprimidos, trociscos, cápsulas, elixires, suspensiones,
jarabes, obleas, chicles, caramelos, supositorios o similares
preparados mediante procedimientos reconocidos en la técnica. Será
evidente para una persona experta en la técnica que los ejemplos
descritos en el presente documento no se pretende que sean
limitantes sino ilustrativos de las técnicas disponibles.
Por consiguiente, en algunas formas de
realización, el anticuerpo anti-NGF se administra a
un individuo de acuerdo con procedimientos conocidos, tales como
administración por vía intravenosa, por ejemplo, en forma de bolo o
mediante infusión continua durante un periodo de tiempo, a través de
la vía intramuscular, intraperitoneal, intracerebroespinal,
subcutánea, intra-articular, intrasinovial,
intratecal, oral, por inhalación o por vía tópica. Los
nebulizadores disponibles comercialmente para formulaciones
líquidas, que incluyen nebulizadores a propulsión y nebulizadores
ultrasónicos son útiles para la administración. Las formulaciones
líquidas se pueden nebulizar directamente y el polvo liofilizado se
puede nebulizar después de su reconstitución. Alternativamente, el
antagonista del NGF se puede convertir en aerosol usando una
formulación fluorocarbonada y un inhalador de dosis medida, o se
puede inhalar en forma de polvo liofilizado y molido.
También son útiles para la administración las
técnicas de administración local dirigida o específica de sitio.
Ejemplos de técnicas de administración local dirigidas o específicas
de sitio incluyen diversas fuentes de depósitos implantables del
antagonista del NGF y/o el analgésico opiáceo, o catéteres de
administración local, tales como catéteres para infusión, un
catéter de aspiración, o un catéter de aguja, injerto sintéticos,
espiras, derivaciones y endoprótesis adventicias u otros
dispositivos implantables, vehículos específicos de sitio,
inyección directa, uso de una técnica o dispositivo de analgesia
controlada en el paciente (PCA), y/o aplicación directa. Véase, por
ejemplo, Publicación PCT Nº WO 00/53211 y patente de EE.UU. Nº
5.981.568.
Para la administración se pueden usar diversas
formulaciones de antagonistas del NGF tales como un anticuerpo
anti-NGF. En algunas formas de realización, el
antagonista del NGF se puede administrar puro. En algunas formas de
realización, el antagonista del NGF comprende un anticuerpo
anti-NGF, y puede estar en diversas formulaciones,
incluyendo formulaciones que comprenden un excipiente
farmacéuticamente aceptable. Los excipientes farmacéuticamente
aceptables son conocidos en la técnica, y son sustancias
relativamente inertes que facilitan la administración de una
sustancia farmacológicamente eficaz. Por ejemplo, un excipiente
puede dar forma o consistencia, o actuar como diluyente. Los
excipientes adecuados incluyen, pero no están limitados a, agentes
solubilizantes, agentes humectantes y emulsionantes, sales de
osmolaridad variable, agentes de encapsulación, tampones, y
potenciadores de penetración cutánea. Los excipientes, así como las
formulaciones para la administración parenteral y no parenteral de
fármacos, se exponen en Remington, y col., The Science and Practice
of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing (2000).
En algunas formas de realización, el antagonista
del NGF se formula para su administración mediante inyección (por
ejemplo, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea,
intramuscularmente, etc.). Por consiguiente, estos agentes se
pueden combinar con vehículos farmacéuticamente aceptables tales
como solución salina, solución de Ringer, solución de dextrosa, y
similares. El régimen de dosificación particular, es decir, la
dosis, el tiempo y la repetición, dependerá del individuo
particular y del historial clínico del individuo. El régimen de
dosificación (incluyendo el antagonista(s) del NGF usado)
puede variar a lo largo del tiempo.
Un anticuerpo anti-NGF se puede
administrar usando cualquier procedimiento adecuado, incluyendo
mediante inyección (por ejemplo, intraperitoneal, intravenosa,
subcutánea, intramuscularmente, etc.). Un anticuerpo
anti-NGF también se puede administrar por
inhalación, como se describe en el presente documento. En general,
para la administración de anticuerpos anti-NGF, una
dosificación candidata inicial puede ser de 2 mg/kg aproximadamente.
En algunas formas de realización, una dosificación diaria típica
puede abarcar entre cualquiera de 3 \mug/kg a 30 \mug/kg a 300
\mug/kg a 3 mg/kg a 30 mg/kg a 100 mg/kg aproximadamente o
superior, dependiendo de los factores mencionados anteriormente.
Para las administraciones repetidas a lo largo de varios días o más
tiempo, dependiendo de la dolencia, el tratamiento se mantiene hasta
que se produzca una supresión deseada de los síntomas o hasta que
se consigan niveles terapéuticos suficientes para reducir el dolor.
Un régimen de dosificación ejemplar comprende la administración de
una dosis inicial de 2 mg/kg aproximadamente, seguido del
mantenimiento de la dosis durante una semana a 1 mg/kg de anticuerpo
anti-NGF aproximadamente, o seguido del
mantenimiento de la dosis a 1 mg/kg durante otra semana. No
obstante, pueden ser útiles otros regímenes de dosificación,
dependiendo del patrón de caída farmacocinética que el facultativo
desee conseguir. Por ejemplo, está contemplada una dosificación de
una-cuatro veces por semana. Otros regímenes de
dosificación incluyen un régimen de hasta 1 vez al día, de 1 a 4
veces por semana, o menos frecuentemente.
En algunas formas de realización, los compuestos
se administran aproximadamente una vez por semana, aproximadamente
de 1 a 4 veces al mes. En el presente documento se describe la
dosificación de anticuerpos anti-NGF. El progreso
de esta terapia se controla fácilmente mediante técnicas y ensayos
convencionales.
En algunas formas de realización, cuando no es
un anticuerpo, un antagonista del NGF según la invención se puede
administrar (en algunas formas de realización) a una tasa de 0,1 a
300 mg/kg de peso corporal del paciente dividido de una a tres
dosis, como se describe en el presente documento. En algunos
pacientes adultos de peso normal, se pueden administrar en
dosificaciones que abarcan entre 0,3 y 5,00 mg/kg aproximadamente.
El régimen de dosificación particular, es decir, la dosis, el
tiempo y la repetición, dependerá del individuo particular y del
historial clínico del individuo, así como las propiedades de los
agentes individuales (tales como la semi-vida del
agente, y otras consideraciones bien conocidas en la técnica).
Los analgésicos opiáceos se pueden administrar a
un nivel de dosificación hasta los niveles de dosificación
convencionales para esos analgésicos. En alguna forma de
realización, el analgésico opiáceo se administra a un nivel
reducido. Los niveles de dosificación adecuados dependerán del
efecto analgésico del analgésico opiáceo elegido, pero normalmente
los niveles adecuados serán de 0,001 a 25 mg/kg al día
aproximadamente, de 0,005 a 10 mg/kg al día aproximadamente, o de
0,05 a 1 mg/kg al día aproximadamente, o inferior. El compuesto se
puede administrar a un régimen de hasta 6 veces al día (o superior),
1 a 4 veces al día, o se puede administrar menos a menudo. En
algunas formas de realización, el analgésico opiáceo se administra
continuamente, o muy frecuentemente (como con, por ejemplo,
PCA).
Cuando se administran en combinación, ya sea
como composición única o como composiciones separadas, el
antagonista del factor de crecimiento nervioso y el analgésico
opiáceo se presentan en una relación que es consistente con la
manifestación del efecto deseado. En algunas formas de realización,
la relación ponderal del antagonista del factor de crecimiento
nervioso al analgésico opiáceo será de 1 a 1 aproximadamente. En
algunas formas de realización, esta relación puede estar entre
0,001 aproximadamente a 1 aproximadamente y 1000 aproximadamente a
1 aproximadamente, o entre 0,01 aproximadamente a 1 aproximadamente
y 100 aproximadamente a 1 aproximadamente. Están contempladas otras
relaciones.
Se apreciará que la cantidad de un antagonista
del factor de crecimiento nervioso y el analgésico opiáceo
necesario para su uso en el tratamiento o prevención del dolor
variará no sólo con los compuestos y composiciones particulares
seleccionados, sino también con la vía de administración, la
naturaleza de la dolencia a tratar, y la edad y condición del
paciente, la evolución o la fase del tratamiento, y en último
término estará a discreción del facultativo que atiende. Por
ejemplo, la dosificación apropiada de un antagonista del NGF (tal
como un anticuerpo anti-NGF) dependerá del
antagonista(s) del NGF (o sus composiciones) empleado, el
tipo y gravedad de dolor a tratar, si el agente se administra con
fines preventivos o terapéuticos, la terapia previa, el historial
clínico del paciente y la respuesta al agente, y la discreción del
facultativo que atiende. Normalmente el facultativo administrará un
antagonista del NGF, tal como un anticuerpo
anti-NGF, hasta que se alcance una dosificación que
consiga el resultado deseado.
Las consideraciones empíricas, tales como la
semi-vida, generalmente contribuirán a la
determinación de la dosificación. Por ejemplo, se pueden usar
anticuerpos que son compatibles con el sistema inmunitario humano,
tales como anticuerpos humanizados o anticuerpos completamente
humanos, para prolongar la semi-vida del anticuerpo
y evitar que el anticuerpo sea atacado por el sistema inmunitario
del hospedador. La frecuencia de la administración se puede
determinar y ajustarse durante el transcurso de la terapia, en
general se basa, pero no necesariamente, en el tratamiento y/o
supresión y/o mejora y/o retraso del dolor. Alternativamente, pueden
ser apropiadas formulaciones de liberación continua sostenida de un
antagonista del NGF y/o un analgésico opiáceo. En la técnica se
conocen diversas formulaciones y dispositivos para conseguir una
liberación sostenida.
En una forma de realización, las dosificaciones
para un antagonista del NGF se pueden determinar empíricamente en
individuos que hayan recibido una o más administraciones de un
antagonista del NGF para tratar el dolor. Los individuos reciben
dosificaciones crecientes de un antagonista del NGF, por ejemplo, un
anticuerpo anti-NGF, en combinación con un
analgésico opiáceo. Para valorar la eficacia del tratamiento, se
puede seguir un indicador del dolor.
La administración de un antagonista del NGF y el
analgésico opiáceo de acuerdo con el procedimiento de la presente
invención puede ser continua o intermitente, dependiendo, por
ejemplo, de la condición fisiológica del receptor, si el propósito
de la administración es terapéutico o profiláctico, y otros factores
conocidos por facultativos expertos. La administración de un
antagonista del NGF puede ser esencialmente continua durante un
periodo de tiempo preseleccionado o puede ser en una serie de dosis
espaciadas, por ejemplo, ya sea antes; durante; o después del
desarrollo del dolor; antes y después; durante y después; antes y
durante; o antes, durante, o después del desarrollo del dolor. Por
ejemplo, la administración puede ser antes, durante y/o después de
que se produzca una herida, incisión, traumatismo, cirugía, y
cualquier otro acontecimiento que probablemente dé lugar a
dolor.
En algunas formas de realización, puede estar
presente más de un antagonista del NGF, tal como un anticuerpo. Los
antagonistas pueden ser iguales o diferentes entre sí. Pueden estar
presentes al menos uno, al menos dos, al menos tres, al menos
cuatro, al menos cinco o más antagonistas del NGF diferentes.
Generalmente, esos antagonistas del NGF tienen actividades
complementarias que no interfieren adversamente entre sí. Los
antagonistas del NGF también se puede usar en combinación con otros
agentes que sirven para mejorar y/o complementar la eficacia del
agentes.
En algunas formas de realización, puede estar
presente más de un analgésico opiáceo. Los analgésicos opiáceos
pueden ser iguales o diferentes entre sí. Pueden estar presentes al
menos uno, al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, al menos
cinco o más analgésicos opiáceos diferentes pueden estar presentes.
Generalmente, esos analgésicos opiáceos tienen actividades
complementarias que no interfieren adversamente entre sí. Un
analgésico(s) opiáceo también
se puede usar en combinación con otros agentes que sirven para mejorar y/o complementar la eficacia del agente(s).
se puede usar en combinación con otros agentes que sirven para mejorar y/o complementar la eficacia del agente(s).
Las formulaciones terapéuticas del antagonista
del NGF (tal como un anticuerpo) y el analgésico opiáceo usadas de
acuerdo con la presente invención se preparan para el almacenamiento
mezclando un anticuerpo con el grado de pureza deseado con
vehículos, excipientes o estabilizantes opcionales farmacéuticamente
aceptables (Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th
Ed. Mack Publishing (2000)), en forma de formulaciones liofilizadas
o disoluciones acuosas. Los vehículos, excipientes, o estabilizantes
aceptables son no tóxicos para los receptores a las dosificaciones
y concentraciones empleadas, y pueden comprender tampones tales como
fosfato, citrato, y otros ácidos orgánicos; antioxidantes
incluyendo ácido sórbico y metionina; conservantes (tales como
cloruro de octadecildimetilbencilamonio; cloruro de hexametonio;
cloruro de benzalconio; cloruro de bencetonio; fenol, alcohol
butílico o bencílico; alquil parabenos tales como metil o
propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol;
3-pentanol; y m-cresol);
polipéptidos de bajo peso molecular (menos de 10 residuos
aproximadamente); proteínas, tales como seroalbúmina, gelatina, o
inmunoglobulinas; polímeros hidrófilos tales como
polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina,
asparagina, histidina, arginina, o lisina; monosacáridos,
disacáridos, y otros carbohidratos incluyendo glucosa, manosa, o
dextrina; agentes quelantes tales como EDTA; azúcares tales como
sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones que forman
sales tales como sodio; complejos metálicos (por ejemplo, complejos
de Zn-proteína); y/o tensioactivos no iónicos tales
como TWEEN^{TM}, PLURONICS^{TM} o polietilenglicol (PEG).
Los liposomas que contienen el antagonista del
NGF (tal como un anticuerpo) se preparan mediante procedimientos
conocidos en la técnica, como se describe en Epstein, y col., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 82: 3688 (1985); Hwang, y col., Proc. Natl
Acad. Sci. USA 77: 4030 (1980); y las patentes de EE.UU. Nº
4.485.045 y 4.544.545. Liposomas con tiempos de circulación
mejorados se describen en la patente de EE.UU. Nº 5.013.556. Se
pueden generar liposomas particularmente útiles mediante el
procedimiento de evaporación de fase inversa con una composición
lipídica que comprende fosfatidilcolina, colesterol y
fosfatidiletanolamina derivada con PEG (PEG-PE).
Los liposomas se extruden a través de filtros de tamaño de poro
definidos para dar liposomas con el diámetro deseado.
Los principios activos también se pueden atrapar
en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de
coacervación o por polimerización interfacial, por ejemplo,
microcápsulas de hidroximetilcelulosa o de gelatina y microcápsulas
de poli-(metilmetacrilato), respectivamente, en sistemas de
administración de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas,
microesferas de albúmina, microemulsiones, nanoparticuladas y
nanocápsulas) y en macroemulsiones. Esas técnicas se describen en
Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack
Publishing (2000).
Se pueden preparar preparaciones de liberación
sostenida. Ejemplos adecuados de preparaciones de liberación
sostenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrófobos
sólidos que contienen el anticuerpo, cuyas matrices están en forma
de artículos moldeados, por ejemplo, películas, o microcápsulas.
Ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres,
hidrogeles (por ejemplo,
poli(2-hidroxietilmetacrilato), o
poli(vinilalcohol), poliláctidos (patente de EE.UU. Nº
3.773.919), copolímeros de ácido L-glutámico y
L-glutamato de 7-etilo,
etileno-acetato de vinilo no degradable, copolímeros
de ácido láctico-ácido glicólico degradables tales como el LUPRON
DEPOT^{TM} (microesferas inyectables compuestas de copolímero de
ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprolida), acetato
isobutirato de sacarosa, y ácido
poli-D-(-)-3-hidroxibutírico.
Las formulaciones a usar para la administración
in vivo deben ser estériles. Esto se puede conseguir
fácilmente, por ejemplo, mediante filtración a través de membranas
de filtración estériles. Por ejemplo, generalmente se ponen
composiciones del anticuerpo anti-NGF terapéutico en
un contenedor con un puerto de acceso estéril, por ejemplo, una
bolsa con disolución intravenosa o un vial con un tapón perforable
con la aguja de una inyección hipodérmica.
Las composiciones según la presente invención
pueden estar en formas de dosificación unitarias tales como
comprimidos, píldoras, cápsulas, polvos, gránulos, disoluciones,
suspensiones, o supositorios, para la administración por vía oral,
parenteral o rectal, o para la administración por inhalación o
insuflación.
Para la preparación de composiciones sólidas
tales como comprimidos, el principio activo principal se mezcla con
un vehículo farmacéutico, por ejemplo, principios de formación de
comprimidos convencionales tales como fécula de maíz, lactosa,
sacarosa, sorbitol, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio,
fosfato de dicalcio o gomas, y otros diluyentes farmacéuticos, por
ejemplo, agua, para formar una composición de preformulación sólida
que contiene una mezcla homogénea de un compuesto de la presente
invención, o una de sus sales no tóxicas farmacéuticamente
aceptables. Cuando se hace referencia a estas composiciones de
preformulación como homogéneas, se quiere decir que el principio
activo se dispersa homogéneamente por toda la composición de manera
que la composición se puede subdividir fácilmente en formas de
dosificación unitarias igualmente eficaces tales como comprimidos,
píldoras y cápsulas. Esta composición de preformulación sólida a
continuación se subdivide en formas de dosificación unitarias del
tipo descrito anteriormente que contienen de 0,01 mg aproximadamente
a 0,1 mg aproximadamente a 500 mg aproximadamente del principio
activo de la presente invención. Los comprimidos o píldoras de la
nueva composición se pueden recubrir o se pueden componer de otra
forma para proporcionar una forma de dosificación que produzca la
ventaja de una acción prolongada. Por ejemplo, el comprimido o la
píldora puede comprender un componente de dosificación interno y de
dosificación externo, este último que está en forma de envuelta
sobre el primero. Los dos componentes pueden estar separados por una
capa entérica que sirve para resistir la desintegración en el
estómago y permite que el componente interno pase intacto al
duodeno o que se retrase su liberación. Se pueden usar una variedad
de materiales para esas capas o cubiertas entéricas, tales
materiales que incluyen una serie de ácidos poliméricos y mezclas de
ácidos poliméricos con materiales tales como shellac, alcohol
cetílico y acetato de celulosa.
Las formas líquidas en las que las composiciones
de la presente invención se pueden incorporar para la administración
por vía oral o mediante inyección incluyen disoluciones acuosas,
jarabes convenientemente aromatizados, suspensiones acuosas u
oleosas, emulsiones aromatizadas con aceites comestibles tales como
aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, aceite de coco o
aceite de cacahuete, así como elixires y vehículos farmacéuticos
similares. Los agentes dispersantes o suspensores adecuados para
suspensiones acuosas incluyen gomas naturales y sintéticas tales
como tragacanto, goma arábiga, alginato, dextrano,
carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, polivinilpirrolidona o
gelatina. Los principios activos también se pueden incorporar en
productos de liberación controlada muy viscosos tales como acetato
isobutirato de sacarosa u otros. Estas formulaciones se pueden usar
para dosificación oral, o para inyección. La inyección puede dar
como resultado un depósito local del fármaco que se libera
localmente durante el transcurso de 1 día a tres meses.
Las composiciones para la administración
mediante inyección incluyen aquellas que comprenden un antagonista
del NGF y un analgésico opiáceo, como principios activos, en
asociación con un agente de superficie activa (o agente humectante
o tensioactivo) o en forma de emulsión (como una emulsión de agua en
aceite o de aceite en agua).
Los agentes de superficie activa adecuados
incluyen, en particular, agentes no iónicos, tal como
polioxietilensorbitanes (por ejemplo, Tween^{TM} 20, 40, 60, 80 u
85) y otros sorbitanes (por ejemplo, Span^{TM} 20, 40, 60, 80 u
85). Las composiciones con un agente de superficie activa
comprenderán de manera conveniente entre el 0,05 y el 5% del agente
de superficie activa, o entre el 0,1 y el 2,5%. Se apreciará que, si
fuera necesario, se pueden añadir otros principios, por ejemplo,
manitol u otros vehículos farmacéuticamente aceptables.
Las emulsiones adecuadas se pueden preparar
usando emulsiones grasas disponibles comercialmente, tales como
Intralipid^{TM}, Liposyn^{TM}, Infonutrol^{TM},
Lipofundin^{TM} y Lipiphysan^{TM}. El principio activo se puede
disolver en una composición en emulsión premezclada o
alternativamente se puede disolver en un aceite (por ejemplo,
aceite de soja, aceite de alazor, aceite de semilla de algodón,
aceite de sésamo, aceite de maíz o aceite de almendra) y una
emulsión formada tras la mezcla con un fosfolípido (por ejemplo,
fosfolípidos de huevo, fosfolípidos de soja o lecitina de soja) y
agua. Se apreciará que se pueden añadir otros principios, por
ejemplo, glicerol o glucosa, para ajustar la tonicidad de la
emulsión. Las emulsiones adecuadas normalmente contendrán hasta el
20% de aceite, por ejemplo, entre el 5 y el 20%. La emulsión grasa
puede comprender gotículas de grasa de entre 0,1 y 1,0 \mum,
particularmente entre 0,1 y 0,5 \mum, y tener un pH en el
intervalo de 5,5 a 8,0.
En algunas formas de realización, las
composiciones en emulsión son aquellas preparadas mezclando un
antagonista del factor de crecimiento nervioso con
Intralipid^{TM} o sus componentes (aceite de soja, fosfolípidos de
huevo, glicerol y agua).
Las composiciones para inhalación o insuflación
incluyen disoluciones y suspensiones en disolventes orgánicos o
acuosos farmacéuticamente aceptables, o sus mezclas, y polvos. Las
composiciones líquidas o sólidas pueden contener excipientes
farmacéuticamente aceptables adecuados como los expuestos
anteriormente. Las composiciones se administran mediante la vía
respiratoria oral o nasal para un efecto local o sistémico. Las
composiciones en disolventes farmacéuticamente aceptables
preferentemente estériles se pueden nebulizar mediante el uso de
gases. Las disoluciones nebulizadas se pueden inhalar directamente
del dispositivo de nebulización o el dispositivo de nebulización se
puede acoplar a una máscara facial, una cabina o una máquina de
respiración de presión positiva intermitente. Las composiciones en
disolución, suspensión, o en polvo se pueden administrar
(incluyendo oral o nasalmente) desde dispositivos que administran la
formulación de una manera apropiada.
La eficacia del tratamiento se puede valorar
mediante procedimientos muy conocidos en la técnica.
Los siguientes ejemplos se proporcionan para
ilustrar, pero no para limitar, la invención.
Usamos un modelo de dolor que mimetiza el dolor
post-quirúrgico para valorar la eficacia de un
anticuerpo anti-NGF en combinación con un
analgésico opiáceo, la morfina. Cada experimento utiliza 16 animales
(n = 8 por grupo).
Animales. Para cada experimento, se estabularon
16 ratas macho Sprague-Dawley adultas con un peso de
200-220 g (Harlan; Indianápolis, IN) en condiciones
de luz normal durante al menos una semana antes de utilizaras, con
comida y agua a voluntad. Después de un periodo de 2 horas de
aclimatación en las cámaras de prueba el día previo a la cirugía,
las ratas se dividieron en dos grupos: uno que recibe anticuerpo 15
horas antes de cirugía, y el otro que recibe el vehículo (5% de
dextrosa/0,45% de USP salino) a ese tiempo. Se administró
anticuerpo anti-NGF antagonista Mab 911 (véase,
Hongo, y col., Hybridoma 19: 215-227 (2000)) a
concentraciones que abarcan entre 0,3 y 20 mg/kg
intraperitonealmente (i.p.). Se administró sulfato de morfina a
diversas concentraciones que abarcan entre 0,1, 0,3, 1 y 3 mg/kg
subcutáneamente (s.c.) 24 horas después de cirugía a todos los
animales. A ningún animal se le administró más de dos dosis
diferentes de morfina, las dosis tenían una separación de al menos
2 horas, y la dosis más alta siempre se administró en segundo lugar.
Por ejemplo, en un experimento típico, a la mitad de los animales
se les administró una dosis de anticuerpo anti-NGF
15 horas antes de cirugía, intraperitonealmente (i.p.), los
animales se sometieron a cirugía en una pata y se dejaron
recuperar. 22 horas después de la cirugía, las ratas se sometieron a
pruebas para su dolor en reposo "basal" y dos horas más tarde
se les administró una dosis más baja de morfina (normalmente 0,3
mg/kg). 30 minutos después de la dosis de morfina, se determinó el
dolor en reposo como anteriormente, y dos horas después de la dosis
inicial de morfina se administró la dosis más alta (normalmente 1,0
mg/kg). Después de 30 minutos más, se determinó de nuevo el dolor
en reposo como anteriormente.
La cirugía se basó en el procedimiento descrito
por Brennan, y col., Pain 64: 493-501 (1996). Se
anestesió a los animales con el 2% de isoflurano y mezcla de aire
que se mantuvo durante la cirugía a través de un cono nasal. La
superficie plantar de la pata derecha se preparó con una gasa de
povidona yodada, y se realizó una incisión longitudinal central de
1 cm a través de la piel y la fascia, comenzando a 0,5 cm del borde
del talón y que se extiende hacia los dedos. Se realizaron
mediciones con una regla con el pie sujeto en posición flexionada.
Los músculos plantares se levantaron usando un fórceps curvado y se
realizó una incisión longitudinal. Se hizo una incisión a lo largo
de la profundidad completa del músculo, entre el origen y la
inserción. El sangrado se controló a lo largo de toda la cirugía
mediante presión aplicada con una gasa. La herida se cerró con dos
suturas no absorbibles (neurofilamento negro de ethilon
5-0). Estas suturas se anudaron 5-6
veces, con el primer nudo atado flojo. La zona de la herida se lavó
con una disolución de bacitracina. Se dejó recuperarse a los
animales y descansar en jaulas limpias durante al menos dos horas
antes de comenzar las pruebas de comportamiento.
Evaluación del dolor en reposo. Se usó una
puntuación del dolor acumulativo para valorar el dolor relacionado
con la carga de peso. Los animales se pusieron en una red de
plástico (rejilla: 8 mm^{2}) en jaulas de plástico limpias que se
elevaron sobre una plataforma (h: 18'') que permiten la inspección
de la parte inferior de las patas. Después de un periodo de
aclimatación de 20 minutos, se valoró la carga de peso en una escala
de 0 a 2. Se dio una puntuación de 0 si la pata se blanquea o se
presiona contra la red, que indica una carga de peso completa. Se
dio una puntuación de 1 si la pata se coloca con la piel justo
tocando la red, sin blanqueo o indentación de la piel. Se dio una
puntuación de 2 si la pata se mantiene completamente fuera de la
red. La retirada de la pata se considera un 2 si la rata aún está
en reposo. Cada animal se observó durante 1 minuto cada 5 minutos
durante 30 minutos. La suma de las 6 puntuaciones
(0-12) durante un periodo de media hora se usó para
valorar el dolor en la pata con incisión. También se calculó la
frecuencia de las puntuaciones de 2 y se usó para valorar la
incidencia de dolor grave o defensa total de la pata por el animal.
Cada animal se sometió a pruebas 24 horas antes de cirugía (línea
basal), y 2 h, y 24 h después de cirugía. El carga de peso era una
buena correlación de cuán dispuestos estaban los animales a usar el
miembro, y por tanto era una medida eficaz del alivio del
dolor.
El siguiente protocolo se usó para los
experimentos representados en las figuras 1, 2, y 3. Los animales se
dividieron en dos grupos (control y tratados con anticuerpo). Se
administró anticuerpo anti-NGF de ratón Mab 911
(Hongo y col., supra) intraperitonealmente 15 horas antes de
cirugía (a 0,3 mg/kg de peso corporal y/o 1 mg/kg de peso corporal,
dependiendo del experimento). Los animales control no recibieron
anticuerpo pero recibieron nada, 0,3 mg/kg, o 1 mg/kg de morfina
como se describe en el presente documento. La cirugía se realizó
como se ha descrito anteriormente, y el dolor en reposo se valoró 22
horas después de la cirugía en ambos grupos ("basal"). A las
24 horas de la cirugía, todos los animales se trataron con morfina a
0,3 mg/kg y se valoró el dolor en reposo empezando 30 minutos
después del tratamiento con morfina. Se administró una dosis de 1,0
mg/kg de morfina adicional 26 horas después de la cirugía y se
volvió a valorar el dolor en reposo comenzando 30 minutos después
de esta última dosis de morfina. Todos los tratamientos con morfina
se administraron subcutáneamente, bajo la nuca del animal. Los
resultados de estos experimentos se representan en las figuras 1,
2, y 3.
La Figura 1 representa la puntuación del dolor
en reposo medido en animales que recibieron 0,3 mg/kg de anticuerpo
anti-NGF 911 y 0, 0,3 mg/kg de peso corporal o 1,0
mg/kg de peso corporal de morfina. Este experimento demuestra que
la puntuación del dolor acumulativo se redujo en animales tratados
con morfina en combinación con un antagonista del NGF, el
anticuerpo anti-NGF 911, comparado con el
tratamiento con morfina sola o anticuerpo anti-NGF
solo. Estos resultados también demuestran que el tratamiento con
antagonista del NGF solo antes de cirugía a 0,3 mg/kg fue más
eficaz en la reducción del dolor en reposo que el tratamiento con
0,3 mg/kg de morfina sola.
La Figura 2 representa la puntuación del dolor
en reposo medido en animales que recibieron 1,0 mg/kg de anticuerpo
anti-NGF 911, y 0, 0,3 mg/kg de peso corporal o 1,0
mg/kg de peso corporal de morfina. Estos resultados demuestran que
la puntuación del dolor acumulativo se redujo en animales tratados
con morfina en combinación con un anticuerpo
anti-NGF, comparado con el tratamiento con
anticuerpo anti-NGF solo o morfina sola. Así, el
anticuerpo anti-NGF más morfina fue más eficaz en
la reducción del dolor en reposo que la morfina sola o el anticuerpo
anti-NGF solo. Estos resultados también demuestran
que el tratamiento con anticuerpo anti-NGF solo
antes de cirugía a 1 mg/kg fue más eficaz en la reducción del dolor
en reposo que el tratamiento con 0,3 mg/kg de morfina sola.
La Figura 3 representa las puntuaciones del
dolor en reposo después del tratamiento con 0,3 mg/kg o 1 mg/kg de
anticuerpo anti-NGF y con 0, 0,3 mg/kg o 1,0 mg/kg
de peso corporal de morfina según el procedimiento descrito
anteriormente. El tratamiento con 0,3 mg/kg de morfina en
combinación con 0,3 mg/kg de anticuerpo anti-NGF o
1 mg/kg de anticuerpo anti-NGF mejoró
significativamente el alivio del dolor comparado con el tratamiento
con 0,3 mg/kg de morfina sola. Los resultados mostrados en la Figura
3 también demuestran que el tratamiento con 0,3 mg/kg o 1 mg/kg de
anticuerpo anti-NGF solo (es decir, en ausencia de
tratamiento con morfina) proporcionó un alivio del dolor
equivalente al alivio del dolor siguiendo el tratamiento con una
dosis de 0,3 mg/kg de morfina. Además, el tratamiento con un
anticuerpo anti-NGF a 1,0 mg/kg en combinación con
el tratamiento con morfina a 0,3 mg/kg dio un alivio del dolor al
menos igual al obtenido con 1 mg/kg de morfina sola. Estos
resultados demuestran que el tratamiento con un anticuerpo
anti-NGF reduce la cantidad de morfina necesaria
para un alivio eficaz del dolor.
Estos experimentos demuestran que el tratamiento
con anticuerpo anti-NGF más morfina es más eficaz en
la reducción del dolor en reposo que la morfina sola o el
tratamiento con anticuerpo solo.
Claims (12)
1. Un antagonista del factor de crecimiento
nervioso (NGF) y un analgésico opiáceo para su uso en el tratamiento
del dolor, por el que el antagonista del NGF y el analgésico
opiáceo en combinación proporcionan un alivio del dolor eficaz, en
el que el antagonista del NGF es un anticuerpo
anti-NGF.
2. Un antagonista del NGF y un analgésico
opiáceo de la reivindicación 1, en el que el analgésico opiáceo se
selecciona del grupo constituido por morfina, codeína,
dihidrocodeína, diacetilmorfina, hidrocodona, hidromorfona,
levorfanol, oximorfona, alfentanilo, buprenorfina, butorfanol,
fentanilo, sufentanilo, meperidina, metadona, nalbufina,
propoxifeno y pentazocina.
3. Un antagonista de NGF y un analgésico opiáceo
de la reivindicación 2, en el que el analgésico opiáceo es
morfina.
4. Un antagonista del NGF y un analgésico
opiáceo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que
el anticuerpo anti-NGF se une al NGF humano.
5. Un antagonista del NGF y un analgésico
opiáceo de la reivindicación 4, en el que el anticuerpo
anti-NGF se une al NGF humano con una afinidad de
unión de 10 nM aproximadamente o inferior a 10 nM
aproximadamente.
6. Un antagonista del NGF y un analgésico
opiáceo de las reivindicaciones 4 ó 5, en el que el anticuerpo
anti-NGF es un anticuerpo humano.
7. Un antagonista del NGF y un analgésico
opiáceo de las reivindicaciones 4 ó 5, en el que el anticuerpo
anti-NGF es un anticuerpo humanizado.
8. Un antagonista del NGF y un analgésico
opiáceo de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en
el que el dolor es dolor post-quirúrgico.
9. Un producto que comprende un antagonista del
NGF y un analgésico opiáceo como una preparación combinada para su
uso en el tratamiento del dolor, en el que el antagonista del NGF es
un anticuerpo anti-NGF.
10. Una composición farmacéutica que comprende
un antagonista del NGF y un analgésico opiáceo, en el que el
antagonista del NGF es un anticuerpo anti-NGF.
11. Una composición farmacéutica de la
reivindicación 10, para su uso en el tratamiento del dolor.
12. Un kit para tratar el dolor que comprende un
antagonista del NGF e instrucciones para la administración del
antagonista del NGF y un analgésico opiáceo simultánea, separada o
secuencialmente para el tratamiento eficaz del dolor, en el que el
antagonista del NGF es un anticuerpo anti-NGF.
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