ES2316359T3 - Tratamiento con peptidos pequeños para inducir una actividad antifibrotica. - Google Patents

Abstract

Utilización de un péptido de fórmula f-Met-Leu-X, donde X se selecciona de entre el grupo consistente en Tyr, Tyr-Phe, Phe-Phe y Phe-Tyr, para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de la fibrosis en un mamífero, donde la fibrosis se debe a cambios patológicos que resultan de un estado seleccionado de entre el grupo compuesto por fibrosis pulmonar causada por asma crónica, ateroesclerosis, cirrosis, glomeruloesclerosis, pancreatitis crónica, enfermedad de las arterias coronarias, traumas y procedimientos quirúrgicos.

Description

Tratamiento con péptidos pequeños para inducir una actividad antifibrótica.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a la utilización de péptidos pequeños para tratar mamíferos con el fin de obtener una actividad antifibrótica y así inhibir, prevenir o incluso invertir la fibrolisis en un mamífero. Más en particular, tal tratamiento en mamíferos que muestran lesiones fibrosas en los lúmenes de las arterias o de las vías aéreas proporciona la remodelación del lumen tal como se demuestra por la reducción de la fibrosis.

Antecedentes de la invención

La disfunción endotelial que resulta de la lesión conduce a respuestas compensatorias que alteran las propiedades homeostáticas normales del endotelio. Así, las distintas formas de lesión aumentan la adhesividad del endotelio con respecto a los leucocitos o las plaquetas, así como la permeabilidad. La lesión induce también a que el endotelio tenga propiedades procoagulantes en lugar de anticoagulantes y forme moléculas vasoactivas, citoquinas, factores de crecimiento.

Si la respuesta inflamatoria no neutraliza o elimina eficazmente los agentes ofensores, puede continuar indefinidamente. Al hacerlo, la respuesta inflamatoria estimula la migración y proliferación de células de músculo liso que se van entremezclando con la zona de inflamación formando una lesión intermedia. Si estas respuestas siguen existiendo, pueden espesar la pared arterial, la vía aérea bronquial u otro lumen inflamado.

Típicamente, en la ateroesclerosis, el lumen se compensa con la dilatación gradual de modo, que hasta cierto punto, el lumen sigue sin alteraciones. En cuanto a las células inflamatorias, rara vez están presentes los granulocitos durante una fase de aterogénesis. En su lugar, la respuesta es mediada por macrófagos derivados de monocitos y subtipos específicos de linfocitos T en cada etapa de la enfermedad.

La inflamación continua resulta en un aumento de la cantidad de macrófagos y linfocitos, que emigran ambos desde la sangre y se multiplican dentro de la lesión. La activación de estas células conduce a la liberación de enzimas hidrolíticas, citoquinas, quimioquinas y factores de crecimiento, que pueden inducir otros perjuicios y finalmente llevan a la necrosis focal. Así, los ciclos de acumulación de células mononucleares, la migración y proliferación de células de músculo liso, así como la formación de tejido fibroso conducen a un aumento y reestructuración adicionales de la lesión, de forma que se recubre de una cápsula fibrosa que cubre un núcleo de tejido lipídico y necrótico -denominado lesión avanzada, complicada. En cierto punto, la arteria ya no puede compensar más con la dilatación. Entonces, la lesión se introduce en el lumen y altera el flujo sanguíneo.

Las interacciones celulares en la aterogénesis no son en esencia distintas a las interacciones celulares de las enfermedades inflamatorias-fibroproliferativas crónicas tales como cirrosis, artritis reumatoide, glomeruloesclerosis, fibrosis pulmonar y pancreatitis crónica. La respuesta de cada tejido u órgano particular depende de sus células y arquitectura características, de su suministro sanguíneo y linfático y de los agentes ofensores. Así, la respuesta celular en las arterias (ateroesclerosis), hígado (cirrosis), articulaciones (artritis reumatoide), riñones (glomeruloesclerosis), pulmones (fibrosis pulmonar) y páncreas (pancreatitis) es similar y característica de cada tejido u órgano.

El asma se caracteriza por una respuesta inflamatoria compleja eosinófila de las vías aéreas, edema, hipersecreción de mucosidad, lesión epitelial bronquial e hiperreactividad. El estímulo a alergenos inhalados en los asmáticos alérgicos provoca una reacción inmediata de hipersensibilidad de las vías aéreas, una respuesta temprana de la vía aérea (EAR), que con frecuencia es seguida, varias horas más tarde, de una reacción retardada de las vías aéreas, una respuesta tardía de la vía aérea (LAR).

La idea de un mecanismo de inflamación crónica en el asma procede de la investigación de la LAR en modelos animales. En diversos modelos animales se ha demostrado que se producen características típicas de LAR en una cantidad de especies, incluyendo el ratón, la rata, el conejillo de Indias y primates no humanos.

Se ha estudiado que los ratones Balb/c producen la enfermedad pulmonar alérgica imitando la enfermedad pulmonar alérgica humana, incluyendo la eosinofilia del espacio aéreo/intersticial, secreción mucosa, edema y contracción de la vía aérea, en respuesta a la inmunización con ovoalbúmina (OVA) después de un estímulo repetido. Se ha observado la estructura y la función de los cambios en el tejido pulmonar en el asma crónica en biopsias del pulmón humano y materiales de autopsia. La inflamación persistente, la deposición de colágeno fibrótico en el intersticio y el estrechamiento de la vía aérea caracterizan estos cambios estructurales. Una capacidad pulmonar reducida es una señal de distinción de los cambios funcionales asociados al asma crónica. Se ha demostrado que la inmunización de ratones Balb/c con OVA durante tres meses o más produce una patología similar a la del asma crónica humana con fibrosis, estrechamiento de las vías aéreas e infiltración inflamatoria persistente.

Los granulocitos son raros en la ateroesclerosis y entre la cirrosis, la glomeruloesclerosis y la pancreatitis crónica. Sólo están presentes en la artritis reumatoide y la fibrosis pulmonar. En el caso de la artritis, aunque la respuesta temprana empiece con granulocitos, éstos se encuentran esencialmente dentro de la cavidad articular. Los macrófagos y los linfocitos predominan en el sinovium, lo que conduce a la erosión del cartílago y del hueso, que se sustituye por tejido fibroso (pannus). En la fibrosis pulmonar, los granulocitos aparecen inicialmente en los espacios alveolares; sin embargo, en el parénquima pulmonar, donde tiene lugar finalmente la fibrosis, se infiltran macrófagos y linfocitos. Por tanto, existen paralelismos entre estas enfermedades inflamatorias. Se han identificado al menos tres tipos diferentes de macrófagos, cada uno regulado por distintas citoquinas de células-T (interferón-7, interleuquina-2, interleuquina-4 e interleuquina-10).

Con frecuencia, las respuestas inflamatorias crónicas se asocian a tipos específicos de agentes nocivos o inductores de granuloma. Euando el agente o los agentes nocivos no son eliminados o anulados por la respuesta inflamatoria y el progreso de la inflamación, la respuesta cambia de una respuesta protectora a una respuesta nociva. Esta lesión constante o repetitiva puede estimular cada tejido reparando o separando el daño por medio de una respuesta fibroproliferativa que, cuando es excesiva, disminuye la capacidad funcional del tejido u órgano y forma parte del proceso de la enfermedad.

La fibrosis es una característica manifiesta de tejido crónicamente inflamado. Se caracteriza por una acumulación progresiva y excesiva de colágeno de la matriz extracelular como consecuencia de un aumento de la proliferación de fibroblastos (la mayor célula mesenquimal responsable de la síntesis de colágeno intersticial). Una característica del tejido pulmonar en pacientes con enfermedad fibrótica de pulmón es un aumento del número de mastocitos, muchos de los cuales se encuentran en un estado de degranulación parcial localizada muy cerca de los fibroblastos proliferantes.

Los colágenos de los tipos I, II, III, V y XI, que representa los principales colágenos intersticiales, están compuestos de una a tres cadenas alfa asociadas, cada una de 95-100 kD de peso molecular, formando una única estructura de triple hélice. El colágeno de tipo I tiene una configuración heterotrimérica asimétrica compuesta de las cadenas \alpha1 y \alpha2 en una proporción estequiométrica de 2:1, dando lugar a la composición de la cadena (\alpha_{1}[I]_{2}, \alpha_{2}[I]), mientras que el colágeno de tipo III, homotrímero de tres cadenas \alpha1, se designa como [\alpha_{1}(I)]_{3}. Las cadenas \alpha1 y \alpha2 del colágeno de tipo I migran a velocidades ligeramente diferentes en condiciones reductoras. El colágeno estimulado por el tratamiento con triptasa fue identificado como del tipo I en base a la composición de la cadena \alpha y mediante inmunoblotting con un anticuerpo específico contra el colágeno de tipo I.

Los colágenos forman parte integrante de la matriz extracelular y la cantidad de colágeno depositado en el pulmón está estrictamente regulada de forma que se asegure un equilibrio estricto entre la biosíntesis y la degradación. Todo control inadecuado de este equilibrio puede conducir a una deposición intensificada de colágeno, que resulta en una fibrosis. Se reconoce ahora que cualquier alteración en la cantidad de colágeno, tal como se observa en el síndrome agudo de agotamiento respiratorio, alveolitis fibrosante criptogénica, sarcoidosis, o, realmente, el tipo de colágeno, puede contribuir a anormalidades celulares en el pulmón.

El pulmón humano normal se compone de un 65% de colágeno de tipo I y un 30% de colágeno de tipo III. Se ha observado un aumento específico de la cantidad de colágeno de tipo I, con una disminución concomitante del tipo III, en la fibrosis pulmonar idiopática crónica y en la fibrosis asociada a la ateroesclerosis, así como en la cirrosis hepática. En general, los tejidos distensibles (compliance) tienen un bajo coeficiente de colágeno de tipo I con respecto al tipo III. Los tejidos con menos compliance, tales como los que se encuentran en la fibrosis pulmonar, tienen un coeficiente más alto.

Las células de músculo liso en los medios de las arterias, así como en las lesiones, están rodeadas de distintos tipos de tejido conectivo. En los medios de las arterias, la matriz se compone en gran medida de colágeno fibroso de tipo I y III, mientras que en las lesiones ateroescleróticas se compone principalmente de proteoglicano entremezclado con fibrillas de colágeno ampliamente distribuidas.

I.Y.R. Adamson y col., en Experimental Lung Research 20: 223-233 (1994), describen una intensificación de la separación de sílice del pulmón del ratón después de la administración del pequeño péptido N-formil-L-metionil-leucil-fenilalanina (FMLP). La reducción posterior en el contenido de partículas del pulmón se asocia a un nivel más bajo de fibrosis pulmonar.

Se buscan continuamente nuevos conceptos para el tratamiento de la fibrosis que resulta de la inflamación causada por diversos estados de enfermedad, trauma o procedimientos quirúrgicos.

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Sumario de la invención

Se ha descubierto que la fibrosis en los mamíferos puede ser tratada mediante la administración a dichos mamíferos de composiciones farmacéuticas que contienen, en un soporte farmacológico adecuado, un pequeño péptido que posee actividad antifibrótica. Este tratamiento puede inhibir la fibrosis. En realizaciones preferentes de la presente invención, la fibrosis se reduce o revierte, proporcionando así lúmenes que tienen poca contracción de la vía de paso y un flujo fluido en la misma.

En consecuencia, la presente invención proporciona la utilización tal y como se define en la reivindicación 1. Las realizaciones preferentes están definidas en las subreivindicaciones.

En la presente invención se pueden utilizar composiciones farmacéuticas que contienen, en un soporte farmacológico adecuado, una cantidad antifibrótica eficaz de un péptido N-formil-metionil-leucil ("f-Met-Leu") que posee actividad antifibrótica, a saber: aquellos péptidos que tienen la fórmula f-Met-Leu-X, donde X se selecciona de entre el grupo consistente en Tyr, Tyr-Phe, Phe-Phe y Phe-Tyr.

La presente invención se utiliza para el tratamiento de mamíferos en una variedad de estados de enfermedad fibrótica seleccionados de entre el grupo consistente en fibrosis pulmonar causada por asma crónica, ateroesclerosis, cirrosis, glomeruloesclerosis, pancreatitis crónica y enfermedad de las arterias coronarias (tal como la causada por una infección con la bacteria Chlamydia pneumoniae). Una fibrosis excesiva debida a un trauma o a procedimientos quirúrgicos se puede tratar también por medio de los métodos de la presente invención, incluyendo, por ejemplo, la fibrosis perineural postoperatoria en la dura o en las raíces nerviosas después de una cirugía espinal, tenolisis de tendones lesionados o reparados con adhesiones, neurolisis de nervios periféricos dañados o reparados con adhesiones, adhesiones postoperatorias que resultan de cirugías ginecológicas y abdominales, cirugía reparativa del vas deferens o de las trompas de Falopio para la inversión de macho o esterilización de hembra y en la reparación quirúrgica de otras estructuras tubulares, tales como la uretra, intestino o esófago.

Para tratar las membranas de las vías aéreas, el modo preferente de administración es por inhalación. Para tratar lesiones superficiales, un modo preferente de administración es la aplicación tópica por medio de un soporte farmacológico adecuado. Se pueden utilizar la inyección intradérmica o tabletas para tratamientos sistémicos.

En ciertas realizaciones preferentes de la presente invención, los pacientes pueden beneficiarse mediante la administración del péptido de la presente invención en combinación con un segundo ingrediente activo. Otros ingredientes activos particularmente útiles para esta combinación de acuerdo con la presente invención son, por ejemplo, antileucotrienos, agonistas beta-2, corticoides y similares.

Breve descripción de las figuras

La Fig. 1 es un calendario que ilustra la inmunización para inducir asma crónica y el tratamiento posterior de acuerdo con la presente invención.

Las Figs. 2A y 2B son fotografías que ilustran una comparación de las características patológicas del tejido pulmonar de ratones con asma crónica después del tratamiento (A) de acuerdo con la presente invención y sin tratamiento (B).

Las Figs. 3A-3C son fotografías que ilustran una comparación del tejido pulmonar de ratones que muestran una acumulación fibrótica de colágeno después del tratamiento (A) de acuerdo con la presente invención, sin tratamiento (C) y de ratones control (B).

Las Figs. 4A-4C son fotografías que ilustran una comparación de tejido pulmonar de ratones que muestran una acumulación fibrótica de colágeno después del tratamiento (B) de acuerdo con la presente invención, sin tratamiento (C) y de control (A).

La Fig. 5 es un gráfico que ilustra los efectos del tratamiento de acuerdo con la presente invención sobre el tapón mucoso de las vías aéreas y la acumulación de células inflamatorias en ratones a los que se ha inducido asma crónica.

La Fig. 6 es un gráfico que ilustra los efectos del tratamiento de acuerdo con la presente invención sobre el número de células mucosas del pulmón en las vías aéreas de ratones a los que se ha inducido asma crónica.

La Fig. 7 es un gráfico de los efectos del tratamiento de acuerdo con la presente invención sobre el número de eosinófilos y neutrófilos en las vías aéreas de ratones a los que se ha inducido asma crónica.

La Fig. 8 es un gráfico de los efectos del tratamiento de acuerdo con la presente invención sobre el granuloma en los pulmones de ratones a los que se ha inducido asma crónica.

Las Figs. 9A-9C son fotografías que ilustran que no se induce ninguna toxicidad hepática debida al tratamiento de acuerdo con la presente invención de ratones a los que se ha inducido asma crónica; después del tratamiento (A) de acuerdo con la presente invención, sin tratamiento (C) y de control (B).

La Fig. 10 es un calendario que ilustra la inmunización para inducir asma crónica y el tratamiento posterior de acuerdo con la presente invención antes de estímulos intranasales adicionales.

Las Figs. 11A-11C son fotografías que ilustran una comparación del tejido pulmonar de ratones con asma crónica y posteriormente estimulados por vía intranasal, después del tratamiento (A) de acuerdo con la presente invención, sin tratamiento (C) y de control (B).

Las Figs. 12A-12C son fotografías que ilustran una comparación del colágeno en el tejido pulmonar de ratones con asma crónica y posteriormente estimulados por vía intranasal, después del tratamiento (A) de acuerdo con la presente invención, sin tratamiento (C) y en ratones control (B).

Las Figs. 13A-13C son fotografías que ilustran una comparación de células mucosas en el tejido pulmonar de ratones con asma crónica y posteriormente estimulados por vía intranasal, después del tratamiento (A) de acuerdo con la presente invención, sin tratamiento (C) y de control (B).

La Fig. 14 es un gráfico de los efectos del tratamiento de acuerdo con la presente invención sobre el número de eosinófilos y neutrófilos en las vías aéreas de ratones a los que se ha inducido asma crónica y que han sido sometidos a un estímulo alérgico repetido.

La Fig. 15 es un gráfico que ilustra los efectos del tratamiento de acuerdo con la presente invención sobre el tapón mucoso de las vías aéreas y acumulación de células inflamatorias en ratones a los que se ha inducido asma crónica y que se han sometido a un estímulo alérgico repetido.

La Fig. 16 es un gráfico que ilustra los efectos del tratamiento de acuerdo con la presente invención sobre la formación de tapones mucosos en las vías aéreas de ratones a los que se ha inducido asma crónica y que se han sometido a un estímulo alérgico repetido.

La Fig. 17 es un gráfico que ilustra los efectos del tratamiento de acuerdo con la presente invención sobre el número de células mucosas del pulmón en las vías aéreas de ratones a los que se ha inducido asma crónica y que se han sometido a un estímulo alérgico repetido.

La Fig. 18 es un gráfico de los efectos del tratamiento de acuerdo con la presente invención sobre el granuloma en los pulmones de ratones a los que se ha inducido asma crónica y que se han sometido a un estímulo alérgico repetido.

Descripción detallada de la invención

De acuerdo con la presente invención, se ha descubierto que ciertos péptidos pequeños de fórmula f-Met-Leu-X, donde X se selecciona de entre el grupo consistente en Tyr, Tyr-Phe, Phe-Phe y Phe-Tyr, tienen una actividad sorprendente para inhibir la fibrosis y, en realizaciones preferentes, para reducir las lesiones fibrosas y remodelar los lúmenes. Con respecto a esta invención, el término "remodelación" se utiliza para indicar que el lumen, por ejemplo el paso de una vía aérea o arteria o similar, se reestructura de vuelta a su condición original antes del efecto patológico. En realizaciones especialmente preferentes, el lumen vuelve a su condición original antes de la enfermedad. Como consecuencia, estos péptidos se utilizan para el tratamiento de mamíferos que muestran lesiones fibrosas seleccionadas de entre el grupo consistente en fibrosis pulmonar causada por asma crónica, ateroesclerosis, cirrosis, glomeruloesclerosis, pancreatitis crónica y enfermedad de las arterias coronarias. Una fibrosis excesiva debida a un trauma o a procedimientos quirúrgicos se puede tratar también por medio de los métodos de la presente invención, incluyendo, por ejemplo, la fibrosis perineural postoperatoria en la dura o en las raíces nerviosas después de una cirugía espinal, tenolisis de tendones lesionados o reparados con adhesiones, neurolisis de nervios periféricos dañados o reparados con adhesiones, adhesiones postoperatorias debidas a cirugías ginecológicas y abdominales, cirugía reparativa del vas deferens o de las trompas de Falopio para la inversión de macho o esterilización de hembra, y en la reparación quirúrgica de otras estructuras tubulares, tales como la uretra, el intestino o el esófago.

Los péptidos a utilizar en esta invención se pueden preparar mediante técnicas químicas convencionales de pequeños péptidos. Los péptidos, cuando se utilizan para su administración, se preparan en condiciones asépticas con un soporte o con un diluyente farmacéuticamente aceptable.

La dosis de la composición farmacéutica variará según el sujeto y según la vía particular de administración utilizada. Las dosificaciones pueden oscilar entre 0,1 y 100.000 \mug/kg al día, en especial entre 1 y 10.000 \mug/kg.

Las dosificaciones especialmente preferentes oscilan entre aproximadamente 1 y 100 \mug/kg, en particular entre aproximadamente 1 y 10 \mug/kg y con total preferencia entre 1,0 y 2,0 \mug/kg. Las dosis se administran típicamente entre una vez al día y cada 4-6 horas, dependiendo de la gravedad del estado. Para estados agudos, se prefiere administrar el péptido cada 4-6 horas. Para el mantenimiento o uso terapéutico, puede resultar preferente una administración de sólo una o dos veces al día. Preferentemente, se administran desde aproximadamente 0,18 hasta aproximadamente 16 mg de péptido al día dependiendo de la vía de administración y de la gravedad del estado. Los intervalos de tiempo deseados para el suministro de múltiples dosis en un estado particular pueden ser determinados por un especialista en la técnica empleando sencillos ensayos de rutina.

Las vías de administración incluyen la vía oral, parenteral, rectal, intravaginal, tópica, nasal, oftálmica, inyección directa, etc. En una realización preferente, los péptidos de esta invención se administran al paciente en una cantidad antiinflamatoria eficaz o en una dosificación que inhibe la degranulación de los mastocitos. Una composición farmacéutica típica es una cantidad terapéuticamente eficaz de un péptido de acuerdo con la presente invención que proporciona un efecto antiinflamatorio o que inhibe la degranulación de los mastocitos, típicamente incluido en un soporte farmacéuticamente aceptable.

El término "soporte farmacéuticamente aceptable" tal como se utiliza aquí, y descrito más ampliamente a continuación, incluye una o más cargas con diluyentes sólidos o líquidos compatibles o sustancias encapsuladas que son adecuadas para la administración a un humano u otro animal. Así, en la presente invención, el término "soporte" indica un ingrediente orgánico o inorgánico, natural o sintético, con el que las moléculas de la invención se combinan para facilitar la aplicación. El término "cantidad terapéuticamente eficaz" es aquella cantidad de las presentes composiciones farmacéuticas que produce un resultado deseado o ejerce una influencia deseada sobre el estado particular que se está tratando. Se pueden utilizar varias concentraciones en la preparación de composiciones que incorporan el mismo ingrediente para adecuarse a las variaciones de la edad del paciente que haya de ser tratado, a la gravedad del estado, a la duración del tratamiento y al modo de administración.

El soporte debe ser también compatible. El término "compatible", tal como se utiliza aquí, significa que los componentes de las composiciones farmacéuticas se pueden mezclar con los pequeños péptidos de la presente invención y unos con otros, de manera que no perjudiquen sustancialmente la eficacia farmacéutica deseada.

Los pequeños péptidos a utilizar de acuerdo con la invención se administran típicamente en sí mismos (puros). Sin embargo, se pueden administrar en forma de sales farmacéuticamente aceptables. Estas sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, aquellas preparadas a partir de los siguientes ácidos: clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, maleico, acético, salicílico, p-toluensulfónico, tartárico, cítrico, metanosulfónico, fórmico, malónico, succínico, naftaleno-2-sulfónico y bencenosulfónico. Igualmente, las sales farmacéuticamente aceptables se pueden preparar como sales de metales alcalinos o alcalinotérreos, por ejemplo sales sódicas, potásicas o cálcicas del grupo ácido carboxílico. Así, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas para su uso médico que comprenden los péptidos de la invención junto con uno o más soportes farmacéuticamente aceptables y opcionalmente cualquier otro ingrediente terapéutico.

Las composiciones incluyen aquellas que son adecuadas para la administración oral, rectal, intravaginal, tópica, nasal, oftálmica o parenteral, pudiendo utilizarse todas ellas como vías de administración empleando los materiales de la presente invención. Las composiciones farmacéuticas que contienen los péptidos de la presente invención pueden contener también uno o más soportes farmacéuticamente aceptables, que pueden incluir excipientes, tales como estabilizadores (para favorecer un almacenamiento prolongado), emulsionantes, agentes ligantes, agentes espesantes, sales, conservantes, disolventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardantes de absorción, y similares. Se conoce bien en la técnica la utilización de estos medios y agentes en sustancias activas farmacéuticas. Excepto en la medida en que todo medio o agente convencional sea incompatible con el péptido de esta invención, se contempla aquí su uso en las preparaciones farmacéuticas. Se pueden incorporar también ingredientes activos adicionales en las composiciones utilizadas para la presente invención.

Son preferentes para el tratamiento del asma las composiciones adecuadas para la administración oral. Típicamente, estas composiciones se preparan como aerosoles de inhalación, vahos, jarabes o tabletas. Para el tratamiento de la artritis, son preferentes composiciones apropiadas para la administración tópica, aunque pueden ser convenientes también composiciones orales. Típicamente, estas composiciones tópicas se preparan en forma de crema, ungüento o solución. Las concentraciones de ingrediente peptídico activo en estas composiciones son típicamente inferiores a
50 \mug/ml, preferentemente inferiores a 30 \mug/ml, y especialmente entre aproximadamente 5 y 10 \mug/ml.

Las composiciones se pueden presentar adecuadamente en forma de dosificación unitaria y se pueden preparar por medio de cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica farmacéutica. Los métodos incluyen típicamente el paso de aportar los ingredientes activos de la invención en asociación con un soporte, que constituye uno o más ingredientes secundarios.

Las composiciones a utilizar de acuerdo con la presente invención y que son adecuadas para la administración por inhalación se pueden presentar, por ejemplo, como aerosoles o soluciones para inhalación. Un ejemplo de composición típica para aerosol consiste en la cantidad deseada de péptido microcristalino suspendido en una mezcla de tricloromonofluorometano y diclorodifluorometano más ácido oleico. Un ejemplo de solución típica se compone de la cantidad deseada de péptido disuelto o suspendido en una solución salina estéril (opcionalmente al 5% volumen/volumen aproximadamente de dimetilsulfóxido ("DMSO") para la solubilidad), cloruro de benzalconio y ácido sulfúrico (para ajustar el pH).

Las composiciones a utilizar de acuerdo con la presente invención adecuadas para la administración oral se pueden presentar también como unidades discretas, tales como cápsulas, comprimidos, tabletas o pastillas, conteniendo cada una una cantidad predeterminada del péptido de la invención, o pueden estar incluidas en liposomas o en suspensión en un licor acuoso o liquido no acuoso, tal como un jarabe, un elixir o una emulsión. Un ejemplo de formulación base en forma de tableta incluye almidón de maíz, lactosa y estearato de magnesio como ingredientes inactivos. Un ejemplo de formulación base en forma de jarabe incluye ácido cítrico, colorante, agente aromatizante, hidroxipropilmetilcelulosa, sacarina, benzoato de sodio, citrato de sodio y agua purificada.

Las composiciones adecuadas para la administración parenteral comprenden apropiadamente una preparación acuosa estéril de la molécula a utilizar para la invención, preferentemente isotónica con la sangre del receptor. Esta preparación acuosa puede ser formulada de acuerdo con métodos conocidos utilizando aquellos agentes dispersantes o humidificadores adecuados, así como agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril puede ser también una solución o una suspensión estéril inyectable en un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo en solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que se pueden emplear se encuentran agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. En las soluciones acuosas, se puede utilizar hasta aproximadamente un 10% en volumen/volumen de DMSO o Trappsol para mantener la solubilidad de algunos péptidos. Igualmente, se pueden emplear convencionalmente aceites estériles fijos como disolventes o medios de suspensión. Con este propósito, se pueden emplear diversos aceites fijos, incluyendo mono- o di-glicéridos sintéticos. Además, se pueden utilizar ácidos grasos (tales como ácido oleico o ácidos grasos neutros) en la preparación de los inyectables. También se pueden formular copolímeros en bloque Pluronic con lípidos a 4ºC para la inyección del compuesto en base a un tiempo de liberación de la forma sólida a 37ºC durante un período de semanas o meses.

Las composiciones apropiadas para administración tópica se pueden presentar como solución del péptido en Trappsol o DMSO, o en forma de crema, ungüento o loción. Típicamente, se incorpora en la base o soporte aproximadamente de un 0,1 a aproximadamente un 2,5% de ingrediente activo. Un ejemplo de formulación base en forma de crema incluye agua purificada, petrolato, alcohol de bencilo, alcohol de estearilo, propilenglicol, miristato de isopropilo, estearato de polioxil-40, carbómero 934, sulfato de lauril-sodio, acetato de disodio, hidróxido de sodio y opcionalmente DMSO. Un ejemplo de formulación base para un ungüento incluye petrolato blanco y opcionalmente aceite mineral, sesquioleato de sorbitano y DMSO. Un ejemplo de formulación base para loción incluye carbómero 940, propilenglicol, polisorbato 40, estearato de propilenglicol, colesterol y esteroles asociados, miristato de isopropilo, palmitato de sorbitano, alcohol de acetilo, trietanolamina, ácido ascórbico, simeticona y agua purificada.

Modelo de Ratón con Asma Bronquial inducido por OVA

El modelo murino crónico de asma se utilizó para someter a prueba los efectos de f-Met-Leu-Phe-Phe (HK-X) sobre el asma persistente. Este sistema murino es un modelo de asma crónica en el que existe una enorme infiltración de células inflamatorias asociadas a los límites exteriores de la membrana basal de la vía aérea. Un período de inmunización de cinco (5) meses durante los cuales se sometieron los ratones a un procedimiento inicial de inmunización durante el primer mes, seguido de estímulos intranasales semanales con OVA, estableció un estado de asma persistente en los ratones. Los ratones inmunizados presentaban un aumento de la acumulación de colágeno alrededor de los vasos sanguíneos y las vías aéreas, lo que demuestra un estado fibrótico. Se trataron los ratones inmunizados con HK-X ocho veces durante un período de dieciséis días (es decir, cada dos días).

Ejemplo 1

Materiales y Métodos

Reactivos: Se obtuvo OVA cristalina de Pierce Chem. Co. (Rockford, IL) y sulfato de potasio-aluminio (alumbre) de Sigma Chem. Co. (St. Louis, MO), así como agua destilada libre de pirógenos de Baxter, Healthcare Corporation (Deerfield, IL). Se mezcló la OVA (500 \mug/ml) con volúmenes iguales de alumbre al 10% (peso/volumen) en agua destilada. La mezcla (ajustada a un pH de 6,5 con NaOH 10N), después de incubación durante 60 minutos a temperatura ambiente, se sometió a centrifugación a 750 g durante 5 minutos; se resuspendió el gránulo a su volumen original en agua destilada y se utilizó en un plazo de una hora.

Se alojaron ratones hembras BALB/c (6-8 semanas de edad en el momento de la compra; D and K, Seattle WA) bajo las condiciones convencionales para el estudio.

Inmunización alergénica / Protocolos de Estímulo para Inducir Asma crónica

Los ratones recibieron una inyección intraperitoneal ("i.p.") de 0,2 ml (100 \mug) de OVA en alumbre el día 1 y una inyección i.p. (100 \mug de OVA en alumbre) combinada con OVA por vía intranasal (100 \mug en solución salina) el día 14. Los días 25, 26 y 27, los ratones fueron estimulados además con OVA por vía intranasal (100 \mug en solución salina). Posteriormente, se estimularon los ratones semanalmente con OVA por vía intranasal (100 \mug en solución salina) durante cinco meses más. Véase la Fig. 1.

Tratamiento del asma crónica

Tal como se indica en la Fig. 1, se administraron por vía intranasal ("IN") 50 \mug de HK-X en un total de 8 dosificaciones suministradas durante un período de 16 días. Se sacrificaron los animales 1 día después de la última dosis de HK-X.

Preparación de HK-X para la Administración

50 \mug de HK-X (en 50 \mul de solución salina que contenía menos del 2,5% de DMSO). Se utilizó suficiente DMSO para disolver el compuesto, pero no más del 2,5% en volumen. Se instiló la solución en el pulmón a través de la nariz mientras el receptor estaba bajo anestesia.

Para el vehículo control, los animales recibieron la misma cantidad de solución salina a través de la nariz (intranasal) mientras estaban bajo anestesia.

Histología

Todos los animales fueron sacrificados después del último tratamiento con HK-X o del último estímulo con OVA mediante inyección de anestésico. Se extirparon los pulmones y se fijaron con formalina al 10%. Se fijó un lóbulo de pulmón en un fijador de Carnoy para los estudios inmunocitoquímicos. Después de 24 horas de fijación, se deshidrataron los pulmones y se colocaron en bloques de parafina. Todos los bloques de parafina se codificaron con números de laboratorio para un análisis ciego.

Se cortaron los bloques de parafina, se seleccionaron 2 niveles de cada pulmón separado por una distancia de 1 mm y se realizaron 8 diapositivas de cada nivel. Se colorearon las diapositivas con Hematoxilina y eosina para visualizar la organización general celular y tisular, azul Alcian para la la identificación de células que contenían mucosidad y la mucosidad liberada en las vías aéreas, tinción tricrómica de Mason para la deposición de colágeno en la fibrosis, así como azul de Metileno y eosina para identificar los eosinófilos en el tejido pulmonar.

Análisis morfométrico

Se analizaron los siguientes parámetros de la enfermedad pulmonar alérgica crónica:

1.

Puntuación del Tapón de las Vías Aéreas - por medio de un sistema de puntuación de + a ++++, se pudo medir la gravedad de la secreción de mucosidad en las vías aéreas de tamaño medio y largo de acuerdo con el informe previo (Henderson y col., J. Exp. Medicine, vol. 1-84, pp. 1483-94, Oct. 1996).

2.

Fracción de Células Epiteliales conteniendo Gránulos de Mucosidad - se evaluó mediante conteo aleatorio del número de células epiteliales que contenían mucosidad de entre 100 células epiteliales de las vías aéreas de tamaño medio a largo (diámetros de 600 \mum a 1.000 \mum). Se contó un total de 10 campos en distintos lóbulos de pulmón y se tabuló la puntuación media.

3.

Densidad Celular de las Células Infiltrantes - las células inflamatorias acumuladas (neutrófilos, eosinófilos, monocitos y linfocitos) asociadas a las vías aéreas y localizadas en el compartimento perivascular se evaluaron por medio de un sistema de puntuación que oscilaba entre + y ++++. Una puntuación + indica una capa de células inflamatorias de 3 pero inferior a 5 células; ++ indica una densidad inflamatoria de 5 células a 10 células; +++ indica una densidad inflamatoria de 10 a 20 células; y ++++ indica una densidad inflamatoria de 20 a 40 células.

4.

Número de diversos tipos celulares - se cuantificaron los eosinófilos y neutrófilos mediante conteo de los números por campo de alta densidad (40x) en una zona de 2.200 u^{2} en relación con las vías aéreas.

5.

Recuento de granulomas - se contaron las estructuras parecidas a granulomas de poca densidad (5x). La agregación celular asociada a las vías aéreas o a los vasos sanguíneos se contó como granuloma.

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Análisis Estadísticos de los datos Histomorfométricos

Se utilizó la versión 2.0 de SigmaStat para realizar las comparaciones estadísticas entre los grupos control y experimentales. Se analizaron las diferencias por significancia (p<0,05) mediante ANOVA. Se empleó la versión 4.0 de SigmaPlot o el Prisma GraphPad para la construcción de la representación gráfica de los datos.

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Resultados

No se observaron reacciones negativas o señales de enfermedad durante la inmunización de ratones con OVA y el tratamiento posterior con HK-X. Los ratones estuvieron activos durante todo el período experimental.

Sin embargo, después de haber sacrificado los animales y realizado el estudio histológico en los tejidos pulmonares, los animales inmunizados con OVA presentaban graves cambios pulmonares patológicos coherentes con el asma crónica observada en los humanos. Por tanto, este sistema murino es un modelo de asma crónica en el que existe una enorme infiltración de células inflamatorias en relación con los límites exteriores de la membrana basal de las vías aéreas (véase la Fig. 2B).

Cuando los animales fueron tratados con 8 dosis de HK-X durante un período de 16 días, el número de células inflamatorias se redujo claramente alrededor de las vías aéreas y de los vasos sanguíneos (véase la Fig. 2A).

Tal como se ilustra en la Fig. 3, los ratones inmunizados con OVA contenían acumulaciones incrementadas de colágeno (de color azul) alrededor de los vasos y las vías aéreas (véase la Fig. 3C). Sin embargo, los pulmones tratados con HK-X demostraron un nivel reducido de deposición de colágeno (véase la Fig. 3A). En los ratones control (HK-X administrado en solución salina), el tejido pulmonar estaba libre de células inflamatorias y depósitos fibróticos de colágeno (véase la Fig. 3B).

Se observó una patrón de resultado similar cuando se hicieron visibles con el azul Alcian, a un pH 2,3, células que contenían mucosidad. Una proporción muy alta de células epiteliales en los ratones inmunizados con OVA contenía gránulos de mucosidad (véase la Fig. 4C). Por el contrario, el tratamiento con HK-X redujo drásticamente el número de células con mucosidad en las vías aéreas (véase la Fig. 4B). De hecho, la frecuencia no era diferente a la del control o de los animales no inmunizados, con sólo HK-X en solución salina (véase la Fig. 4A).

Del cincuenta al sesenta por ciento de las vías aéreas de estos ratones asmáticos crónicos de 6 meses de edad estaban obstruidas por mucosidades (Fig. 5). Cuando se les dieron 8 dosis de HK-X por vía intranasal durante un período de 16 días, se observó una notable reducción en la acumulación de mucosidades y de células mucosas en la vía aérea (Fig. 6). Asimismo, el número de células inflamatorias infiltrantes -incluyendo eosinófilos y neutrófilos- por zona unitaria también se redujo (Fig. 7). Las observaciones histopatológicas de los animales inmunizados con OVA y tratados con HK-X se parecían a las de los animales tratados solamente con la solución salina o con HK-X en solución salina.

Una de las características importantes del asma crónica en el modelo murino es la aparición de estructuras granulomatosas en el pulmón. HK-X reduce el número y el tamaño de estas estructuras en los pulmones de los animales tratados (Fig. 8).

En comparación, tanto para los ratones asmáticos crónicos tratados con HK-X como para los animales tratados con una solución salina normal, no existen diferencias obvias en la histopatología hepática (Fig. 9). Por tanto, tal como se determina aquí, no existe toxicidad hepática producida por frecuentes dosis administradas por vía intranasal de HK-X en ratones.

Estos estudios fueron diseñados para determinar si la administración de HK-X reducía o no la inflamación de las vías aéreas y la hiperactividad de las células mucosas en un modelo murino de asma crónica inducida por alérgenos. En este modelo, los ratones fueron sensibilizados con OVA y expuestos a la OVA por vía intranasal semanalmente durante 5 meses y fueron tratados con HK-X por vía intranasal 8 veces durante un período de 16 días. Esta inmunización alergénica y el régimen de estímulos condujo a una infiltración crónica de las vías aéreas con eosinófilos y otros tipos de células inflamatorias, a acumulación de mucosidad en las vías aéreas y a hiperplasia de las células secretoras de mucosidad.

La hipersecreción de las vías aéreas, la hiperplasia de las células mucosas, así como el reclutamiento de eosinófilos y neutrófilos se redujo mediante la administración de HK-X. Estos resultados indican que el HK-X está desempeñando un papel importante tanto en la reducción de la hipersecreción de la mucosidad en las vías aéreas como en la inflamación en fase tardía que tiene lugar en este modelo de asma crónica inducida por alérgenos. Se observó una moderación de la inflamación pulmonar y una reducción de la secreción mucosal, así como una diferenciación de células mucosales por HK-X.

También es interesante observar que el HK-X fue continuamente eficaz durante un período de 16 días de tratamiento, lo que indica que no tuvo lugar en este modelo una taquifilaxis. Además, la administración intranasal de HK-X no produjo ninguna hepatotoxicidad cuando se administró a ratones durante un período prolongado a 1 mg por kg de peso corporal.

Ejemplo 2

En el modelo de asma crónica murina, los cambios patológicos emulan perfectamente la enfermedad humana. El Ejemplo 1 anterior ilustró que el tratamiento de acuerdo con la presente invención redujo los cambios patológicos causados por asma crónica, incluida la fibrosis. Se observó una reducción notable de la fibrosis, del número de células inflamatorias alrededor de las vías aéreas, así como de células mucosas y de la liberación de mucosidad dentro de las vías aéreas.

Este ejemplo indica los resultados de pruebas en las que ratones con asma crónica inducida y tratados de acuerdo con la presente invención posteriormente son estimulados además por vía intranasal ("IN") con OVA. Los materiales fueron los mismos que en el Ejemplo 1.

Métodos

Se inmunizaron repetidas veces ratones Balb/c con OVA durante un período de seis meses como en el Ejemplo 1. A continuación, se trataron los ratones con 50 \mug por dosis de HK-X por vía intranasal en ocho dosis durante un período de 16 días, como en el Ejemplo 1. Luego, en otro régimen se administró una dosis de 50 \mug de HK-X 15-30 minutos antes del estímulo con OVA por vía intranasal. Este régimen se repitió durante tres días en total. El día después del último tratamiento, se sacrificaron los ratones. Véase la Fig. 10.

Se preparó HK-X de la misma forma que en el Ejemplo 1.

Administración de HK-X

El grupo de animales con HK-X/OVA recibió una dosificación de HK-X de 0,4 mg/kg de peso corporal (50 \mug por 20 gm de peso corporal al día), mientras que el grupo con solución salina recibió la misma dosificación de HK-X sin OVA. Los estudios farmacocinéticos previos indicaron que la T½ (vida media) de plasma de HK-X en el ratón era inferior a 30 minutos. Por tanto, para mantener los niveles de plasma durante el estímulo alergénico, estos ratones recibieron dosis adicionales de HK-X por vía intranasal inmediatamente antes del estímulo con OVA.

Histología del pulmón

Se recogieron la tráquea y el pulmón izquierdo (lóbulos superior e inferior) y se fijaron en formalina al 10% a 20ºC durante 15 horas. Después de introducirlos en parafina, se cortaron los tejidos en secciones de 5 \mum. Se coloraron los eosinófilos del tejido pulmonar con una Solución Modificada de Discombe. El número de eosinófilos por área unitaria de la vía aérea (2.000 \mum^{2}) fue determinado por análisis morfométrico tal como se ha descrito anteriormente (Henderson y col., J. Exp. Medicine, vol. 1-84, pp. 1483-94, Oct. 1996, Su y col., American Review Repetitive Diseases, Vol. 147, pp. 448-56, 1993). La mucosidad de las vías aéreas y las células mucosas se identificaron por medio de los siguientes métodos de tinción: azul de metileno, Mucicarmina, azul de toluidina y azul Alciano.

La oclusión del diámetro de las vías aéreas por la mucosidad se evaluó en una escala semicuantitativa que oscilaba entre 0 y 5+. En cada ratón, los individuos cegados al diseño del protocolo evaluaron 10 secciones de las vías aéreas distribuidas aleatoriamente por el pulmón izquierdo en busca de la oclusión mucosa por análisis morfométrico. Se asignó a cada sección de la vía aérea una puntuación para la oclusión del diámetro de la vía aérea debida a la mucosidad en base a los siguientes criterios: 0, ninguna mucosidad; 1+, -10% de oclusión; 2+, -30% de oclusión; 3+, -50% de oclusión; 4+, -80% de oclusión; y 5+, -90-100% de oclusión.

Resultados Micrografías luminosas de tejidos pulmonares procedentes de ratones estimulados alérgicamente

Los animales que fueron inmunizados con OVA durante un período de 6 meses y luego estimulados repetidas veces con OVA presentaban graves cambios estructurales pulmonares coherentes con el asma crónica observada en los humanos. Se observó una enorme infiltración de células inflamatorias asociada a los límites exteriores de la membrana basal de las vías aéreas (véase la Fig. 11C). Cuando los animales se trataron con 8 dosis de HK-X durante un período de 16 días y se les dio HK-X 30 minutos antes del estímulo alérgico, el número de células inflamatorias se redujo claramente alrededor de las vías aéreas y de los vasos sanguíneos (véase la Fig. 11A) y fue similar a la muestra observada en los ratones tratados con una solución salina (véase la Fig. 11B).

Los ratones inmunizados con OVA contenían acumulaciones de colágeno (de color azul) alrededor de los vasos y vías aéreas (véase la Fig. 12C). Sin embargo, los pulmones tratados con HK-X demostraron un nivel reducido de deposición de colágeno (véase la Fig. 12A). En los ratones control, a los que se administró HK-X en solución salina, el tejido pulmonar estaba libre de células inflamatorias y de depósitos fibróticos de colágeno (véase la Fig. 12B).

Se observaron resultados similares cuando, mediante azul Alciano a pH 2,3, se visualizaron las células que contenían mucosidad. Una proporción muy elevada de células epiteliales en los ratones inmunizados con OVA contenía gránulos mucosos (véase la Fig. 13C). Por el contrario, el tratamiento con HK-X redujo drásticamente el número de células con mucosidad en las vías aéreas (véase la Fig. 13A). De hecho, la frecuencia no era diferente de la de los animales control o no inmunizados dada con HK-X en solución salina (véase la Fig. 13B).

Efectos de HK-X sobre el reclutamiento de eosinófilos y neutrófilos en los pulmones

El efecto del tratamiento con HK-X sobre el reclutamiento de eosinófilos y neutrófilos en el pulmón se muestra en la Figura 14. El pretratamiento con HK-X redujo en un 70% el número de eosinófilos infiltrantes y en un 30% el número de neutrófilos infiltrantes en el tejido pulmonar de ratones inmunizados y estimulados con OVA, respectivamente. El número medio de eosinófilos observados en los pulmones tratados con solución salina era de 0,3 \pm 0,1 células por 2.200 \mum^{2}. Después del tratamiento solamente con HK-X en solución salina, el número de eosinófilos en los tejidos pulmonares aumentó ligeramente, 0,75 \pm 0,18 células por 2.200 \mum^{2}. Por el contrario, el tratamiento con HK-X redujo notablemente el número total de infiltraciones celulares inflamatorias asociadas a las vías aéreas y vasos sanguíneos (Fig. 15).

Reducción de la acumulación de mucosidad en los pulmones por el tratamiento con HK-X

Después de los estímulos alergénicos por vía intranasal durante 3 días consecutivos, se determinaron los grados de tapón mucoso en las vías aéreas y el número de células mucosas de las vías aéreas. Los grados de tapón mucoso de las vías aéreas se evaluaron en una escala de 0-5, tal como se ha descrito anteriormente en Métodos. El número de células mucosas se determinó de forma semicuantitativa, tal como se describe en el Ejemplo 1. En el grupo tratado con solución salina, el grado medio de acumulación mucosa en las vías aéreas fue de 0,1 \pm 0,05 (véase la Fig. 16). En el grupo estimulado con OVA, el grado de tapón en la vías aéreas aumentó en 23,3 veces hasta un grado de 2,33 \pm 0,17 (grupos de solución salina contra grupo de OVA, p < 0,001; por Mann Whitney Rank Sum Test). Los grados de tapón mucoso en las vías aéreas o de oclusión de las vías aéreas se redujeron en un 78% por el tratamiento con HK-X, 15-30 minutos antes del estímulo con OVA (p < 0,001; por Mann Whitney Rank Sum Test). De forma similar, el número de células mucosas en las vías aéreas se redujo (véase la Fig. 17). De forma específica, en los pulmones estimulados con OVA sin tratamiento con HK-X, el 34,66 \pm 6,45% de las células epiteliales se había diferenciado en secreción mucosa mientras que, en los pulmones tratados con HK-X, sólo el 11,24 \pm 4,73% de células contenían mucosidad (p < 0,001; por Mann Whitney Rank Sum Test).

Nivel de formación de estructuras análogas a granulomas en el pulmón con asma crónica

La formación de granulomas se determinó en pulmones estimulados repetidas veces con OVA y HK-X u OVA sola en animales inmunizados con OVA durante 6 meses. Tal como se muestra en la Fig. 18, se observa una reducción multiplicada por tres de la formación de granulomas en el pulmón por el tratamiento con HK-X (p < 0,001; por Mann Whitney Rank Sum Test).

Se diseñaron estos estudios para determinar si la administración de HK-X reducía o no la inflamación de las vías aéreas y la hiperactividad de las células mucosas en un modelo murino de asma crónica inducida por alérgenos. En este modelo, los ratones fueron sensibilizados con OVA y posteriormente expuestos a OVA por vía intranasal semanalmente durante 5 meses, y expuestos después a estímulos con OVA por vía intranasal durante tres días consecutivos. Esta inmunización alergénica y el régimen de estímulos condujeron a una infiltración crónica en las vías aéreas de eosinófilos y otros tipos de células inflamatorias, a acumulación de mucosidad en las vías aéreas y a hiperplasia de las células secretoras de mucosidad.

Además, en este modelo la hipersecreción en las vías aéreas, la hiperplasia de células mucosas y el reclutamiento de eosinófilos y neutrófilos se reducen mediante la administración de HK-X. Estos resultados indican que el HK-X está desempeñando un papel importante tanto en la reducción de la hipersecreción de mucosidad en las vías aéreas como en la inflamación en fase tardía que tiene lugar en este modelo de asma crónica inducida por alérgenos. La moderación de la inflamación del pulmón y la reducción de la secreción de mucosidad, así como la diferenciación de células mucosas por HK-X indica que HK-X será útil en el tratamiento del asma crónica en humanos.

La invención ha sido descrita en detalle con referencia a las realizaciones preferentes de la misma. Sin embargo, se valorará que, al considerar la presente especificación y figuras, los especialistas en la técnica puedan realizar modificaciones y mejoras.

Claims (11)

1. Utilización de un péptido de fórmula f-Met-Leu-X, donde X se selecciona de entre el grupo consistente en Tyr, Tyr-Phe, Phe-Phe y Phe-Tyr, para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de la fibrosis en un mamífero, donde la fibrosis se debe a cambios patológicos que resultan de un estado seleccionado de entre el grupo compuesto por fibrosis pulmonar causada por asma crónica, ateroesclerosis, cirrosis, glomeruloesclerosis, pancreatitis crónica, enfermedad de las arterias coronarias, traumas y procedimientos quirúrgicos.

2. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque la fibrosis se debe a cambios patológicos que resultan de una fibrosis pulmonar causada por asma crónica.

3. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque la fibrosis se debe a cambios patológicos que resultan de una ateroesclerosis.

4. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque la fibrosis se debe a cambios patológicos que resultan de una cirrosis.

5. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque la fibrosis se debe a cambios patológicos que resultan de una glomeruloesclerosis.

6. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque la fibrosis se debe a cambios patológicos que resultan de una pancreatitis crónica.

7. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque la fibrosis se debe a cambios patológicos que resultan de una enfermedad de las arterias coronarias.

8. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque la fibrosis se debe a cambios patológicos que resultan de un estado seleccionado de entre el grupo consistente en traumas y procedimientos quirúrgicos.

9. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque la fibrosis se debe a cambios patológicos que resultan de un trauma.

10. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque la fibrosis se debe a cambios patológicos que resultan de procedimientos quirúrgicos.

11. Utilización según la reivindicación 9, caracterizada porque la fibrosis se debe a cambios patológicos que resultan de un estado seleccionado de entre el grupo consistente en fibrosis perineural postoperatoria en la dura o en las raíces nerviosas después de una cirugía espinal, tenolisis de tendones lesionados o reparados con adhesiones, neurolisis de nervios periféricos dañados o reparados con adhesiones, adhesiones postoperatorias que proceden de cirugías ginecológicas y abdominales, cirugía reparativa del vas deferens o de las trompas de Falopio para la inversión de macho o esterilización de hembra, y reparación quirúrgica de otras estructuras tubulares tales como la uretra, el intestino o el esófago.