KR20010109316A

KR20010109316A - 항섬유증 활성을 나타내기위한 소형 펩타이드로의 치료

Info

Publication number: KR20010109316A
Application number: KR1020017012064A
Authority: KR
Inventors: 클라게트제임스
Original assignee: 추후보정; 히스타테크, 엘엘씨
Priority date: 1999-03-22
Filing date: 2000-03-20
Publication date: 2001-12-08
Also published as: IL145490A0; JP2007131635A; BR0009226A; WO2000056349A1; CN1348381A; EA200100997A1; HK1045649A1; NO20014594D0; ES2316359T3; EP1162990B1; JP2002539270A; AU3765100A; EP1162990A4; PL203758B1; KR100699509B1; DE60040730D1; JP4021147B2; MXPA01009504A; NO20014594L; PL350860A1

Abstract

포유동물에서 섬유증을 치료하기 위한 방법이 기술되어 있다. 항섬유증 유효량의 화학식 f-Met-Leu-X(X는 Tyr, Tyr-Phe, Phe-Phe 및 Phe-Tyr로 구성되는 그룹으로부터 선택된다)의 펩타이드를 포유동물에 투여한다. 섬유증은 예를들어 폐 섬유증, 아테롬성 경화증, 경변증, 사구체 경화증, 만성 췌장염 및 관상 동맥 질병(박테리아 클리미디아 뉴모니아에(Chlamydia pneumoniae)에 의한 감염에 의해 야기되는 것과 같은), 외상 또는 수술후 과정으로 인한 병리학적 변화에 기인할 수있다. 섬유증을 일으키는 수술후 과정의 예는 척추 수술후 경막 또는 신경근에서 신경 주위의 수술후 섬유증, 접착에 의한 손상된 또는 회복된 건(tendons)의 건유착박리, 접착에 의한 손상된 또는 회복된 말초 신경의 신경초박리, 여성생식계 및 복부 수술로부터의 수술후 접착, 숫컷 또는 암컷 불임의 역전을 위한 정관 또는 나팔관의 회복 수술, 및 요도, 장 또는 식도와 같은 다른 관 구조의 외과적 회복이다.

Description

항섬유증 활성을 나타내기 위한 소형 펩타이드로의 치료{Treatment with small peptides to effect antifibrotic activity}

손상에 의해 기인되는 내피 기능부전은 내피의 정상적인 호메오스타시스의 항상성을 변형시키는 상보적인 반응에 이른다. 따라서, 상이한 형태의 손상이 백혈구 또는 혈소판과 관련하여 내피의 접착성 및 그의 투과성을 증가시킨다. 손상은 또한 내피가 항응고약제 성질 대신에 응혈촉진성 성질을 갖고, 혈관작용성 분자, 시토카인 및 성장 인자를 형성하도록 유도한다.

염증 반응이 오펜딩 제(offending agents)를 효과적으로 중화시키거나 제거하지 않는다면, 이는 무한적으로 계속될 수 있다. 그렇게 하는데에, 염증 반응은 염증 지역과 상호 혼합되는 평활근 세포의 이주 및 증식을 자극하여 중간 손상을 형성한다. 이들 반응이 계속 감퇴되지 않는다면, 이들은 동맥 벽, 기관지 기도,또는 다른 염증이 생긴 관강을 두껍게 할 수 있다.

전형적으로, 아테롬성 경화증에서, 관강은 일정 수준까지 관강이 변형되지 않도록 점차적인 팽창에 의해 보상한다. 염증 세포와 관련해서는, 과립구가 아테로게네시스(atherogenesis)의 상(phase)동안 드물게 존재한다. 대신에 반응은 질병의 매 단계에서 단핵세포-유래된 대식 세포 및 특이한 서브 유형의 T 림프구에 의해 중재된다.

계속된 염증은 대식세포와 림프구의 수를 증가시키며, 이들 둘은 혈액으로부터 이동하여 손상 부위에서 증식한다. 이들 세포의 활성화는 가수분해 효소, 시토킨, 케모킨 및 성장인자(이들은 추가의 손상을 일으키고 결국에는 병소 괴사를 일으킨다)의 방출을 일으킨다. 따라서, 단핵세포의 축적, 평활근 세포의 이동 및 증식, 섬유 조직의 형성의 사이클은 추가로 손상 부위의 확대 및 재구성에 이르고, 이는 지질 코어위에 있는 섬유성 캡 및 괴사 조직-소위 진전되고 복잡해진 손상에 의해 덮혀진다. 일부 부위에서는 동맥은 더 이상 확장에 의해 보장될 수 없다. 그러므로, 손상부위는 관강에 침입하고 혈액의 흐름을 변경시킨다.

아테로게네시스에서 세포의 상호작용은 경변증, 류마티스성 관절염, 사구체경화증, 폐 섬유증, 및 만성 췌장염과 같은 만성 염증-섬유증식(fibroliferative) 질병에서의 것과 근본적으로 상이하지 않다. 각각의 특별한 조직 또는 기관의 반응은 그의 특성 세포 및 구조, 그의 혈액 및 림프 공급, 및 오펜딩 제의 명칭에 좌우된다. 따라서, 동맥에서(아테롬성 경화증), 간(경변증), 관절(류마티스성 관절염), 신장(사구체 경화증), 폐(폐 섬유증), 및 췌장(췌장염)에서의 세포 반응은 유사하고, 각 조직 또는 기관의 특성이다.

천식은 기도 호산구, 부종, 점액 과분비, 기관지 상피 손상 및 반응성항진의 복잡한 염증 반응에 의해 특징지워진다. 알러지성 천식에서 흡입된 알레르겐 챌린지(challenge)는 즉각적인 기도 과민성 반응, 지연된 기도 반응에 의해 수시간후 자주 이어지는 초기 기도 반응(EAR), 늦은 상 기도 반응(LAR)을 일으킨다.

천식에서 만성 염증의 메카니즘에 대한 통찰은 동물 모델에서 LAR의 조사로부터 나온다. 다수의 동물 모델이 마우스, 래트, 기니아 피그 및 비-인간 영장류를 포함하는 다수의 종에서 LAR의 전형적인 특징을 생성하는 것으로 나타났다.

Balb/C 마우스는 반복된 챌린지후 난형구(OVA)에 의한 면역화 반응에서 기실(airspace)/간질 호산구, 점액 분비, 부종 및 기도 수축을 포함하는 인간 알러지성 폐 질병을 닮은 알러지성 폐 질병을 일으키는 것으로 보고되어 있다. 만성 천식에서 폐조직 변화의 구조 및 기능은 인간 폐 생검 및 검시 물질에서 보고되어 있다. 지속적인 염증, 간질에서의 섬유증 콜라겐의 퇴적, 및 기도 좁힘은 이들 구조 변화를 특성화시킨다. 감소된 폐 능력은 만성 천식과 결합된 기능성 변화의 증명이다. 3개월 이상 OVA로 Balb/C 마우스를 면역화시키는 것은 섬유증, 기도 좁힘 및 지속적인 염증 침투를 갖는 인간 만성 천식의 것과 유사한 병상을 생성한다.

과립구는 아테롬성 경화증, 및 경변증, 사구체 경화증, 및 만성 췌장염에서 드물다. 이들은 오직 류마티스성 관절염 및 폐 섬유증에서만 존재한다. 관절염 경우, 초기 반응이 과립구와 함께 시작하지만, 이들은 주로 관절 강에서 발견된다. 대식세포 및 림프구가 활막에서 우세하여, 연골 및 뼈의 미란(erosion)에 이르고,이는 섬유증 조직(판누스)에 의해 대체된다. 폐 섬유증에서, 과립구는 초기에 폐포 공간에서 나타난다; 그러나, 섬유증이 최종적으로 발생하는 폐 실질(parenchyma)은 대식세포 및 림프구에 의해 침투된다. 따라서, 이들 염증 질병에는 유사점(parallels)이 있다. 각각 상이한 T-세포 시토킨(인터페론-7, 인터류킨-2, 인터류킨-4, 및 인터류킨-10)에 의해 각각 조절되는 적어도 3개의 상이한 유형의 대식세포가 동정되었다.

만성 염증 반응은 종종 특정 유형의 유해한 또는 육아종-유도제에 관련되어 있다. 유해제 또는 제제들이 염증 반응 및 염증 진행에 의해 제거되거나 폐기되지 않으면, 반응은 보호 반응으로부터 유해한 반응으로 변한다. 이러한 일정 또는 반복적인 손상은 각 조직이 과잉일 때 조직 또는 기관의 작용성 능력을 감소시키고 질병 진전의 일부분이 되는 피브로증식(fibropro-liferative) 반응에 의해 손상 부위를 회복 또는 월 오프(wall off)시키게 자극할 수 있다.

섬유증은 만성적으로 염증화된 조직의 뚜렷한 특징이다. 이는 섬유아세포(간질 콜라겐의 합성에 관련있는 주요 간엽 세포)의 증가된 증식의 결과로서 세포외 매트릭스 콜라겐의 점진적 및 과잉적 축적에 의해 특징지워진다. 섬유증 폐질병을 앓고있는 환자로부터의 폐 조직의 특징은 비만세포의 증가된 수이고, 많은 비만세포가 증식하는 섬유아세포에 밀접히 근접하여 위치하여 부분적인 탈과립화 상태에 있다.

주요 간질 콜라겐을 나타내는 콜라겐 I, II, III, V 및 XI 형이 단일 3중 나선 구조를 형성하도록 결합된 각각 95-100kD 분자량의 1 내지 3개의 α-쇄로 구성된다. I형 콜라겐은 2:1의 화학양론적 비율로 α1 및 α2쇄로 구성된 비대칭성 헤테로트리머릭(heterotrimeric) 배위를 가져, 쇄 조성물(α₁[I]₂, α₂[I])을 제공하고, 3개의 α1쇄의 호모트리머는 [α₁(I)]₃란 지칭을 갖는다. I형 콜라겐의 α1 및 α2 쇄는 환원(reducing) 조건하에서 약간 상이한 속도로 이동한다. 트립타제 처리에 의해 자극화된 콜라겐은 α쇄 조성을 기초로하여 및 I 형 콜라겐에 특이적인 항체로 면역블로팅화시켜 I 형으로 동정되었다.

콜라겐은 세포외 매트릭스의 통합적인 부분을 형성하고, 폐에 퇴적된 콜라겐의 양은 엄격하게 조절되어 생합성과 분해사이에 엄격한 균형을 보장한다. 이 균형의 부적절한 조절은 증가된 콜라겐 퇴적에 이르며, 섬유증을 가져올 수 있다. 급성 호흡 곤란 증후군, 특발성 섬유화 폐포염(cryptogenic fibrosing alveolitis), 유육종증에 보고된대로 콜라겐의 양 또는 정말로 콜라겐 형에서의 변화는 폐에서의 세포 비정상성에 기여할 수 있다.

정상 인간 폐는 65%의 I형 및 30%의 III형 콜라겐으로 구성되어 있다. III형에서의 동시적인 감소와 함께 I형 콜라겐의 양에서의 특이적 증가가 특발성 만성 폐 섬유증, 및 아테롬성 경화증과 결합된 섬유증, 및 간 경변증에서 보고되었다. 일반적으로, 순종적인 조직은 I 형 대 III 형의 낮은 비를 가진다. 폐 섬유증에서 발견되는 것과 같은 덜 순종적인 조직이 보다 높은 비를 갖는다.

동맥의 중막(media) 및 손상 부위에서 평활근 세포는 상이한 유형의 연결 조직에 의해 둘러싸여 있다. 동맥의 중막에서, 매트릭스는 주로 I 형 및 III 형 콜라겐으로 구성되어 있고, 반면에 아테롬성 경화증의 손상 부위에서, 이는 주로 느슨하게 흩어진 콜라겐 근원섬유와 상호 혼합된 프로테오글리에안으로 구성되어 있다.

다양한 질병 상태, 외상, 수술 과정에 의해 야기되는 염증으로부터 생성되는 섬유증을 치료하기 위한 새로운 방법이 계속 요구되고 있다.

발명의 요약

포유동물의 섬유증은 적절한 약학적 담체에 항섬유증 활성을 갖는 소형 펩타이드를 함유하는 약제학적 조성물을 포유동물에 투여하여 치료될 수 있다는 것이 밝혀졌다. 이러한 치료는 섬유증(fibrosis)을 억제할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 섬유증은 감소되거나 역전되어 통로나 그안의 유체 흐름을 거의 제한하지 않는 관강을 제공한다.

따라서, 본 발명은 적절한 약학적 담체안에 항섬유증 유효량의 항섬유증 활성을 갖는 N-포르밀-메티오닐-류실("F-Met-Leu") 펩타이드를 함유하는 약제학적 조성물을 사용하여 포유동물에서 섬유증을 치료하는 방법을 제공한다. 특히 유용한 펩타이드는 화학식 f-Met-Leu-X(여기에서, X는 Tyr, Tyr-Phe, Phe-Phe 및 Phe-Tyr로 구성된 그룹으로부터 선택된다)를 갖는 것이다.

본 발명의 방법은 예를들어 폐 섬유증, 아테롬성 경화증, 경변증, 사구체 경화증, 만성 췌장염 및 관상 동맥 질병(박테리아 클리미디아 뉴모니아에(Chlamydia pneumoniae)에 의한 감염에 의해 야기되는 것과 같은)을 포함하는 다양한 섬유증 질병에 대해 포유동물을 치료하는데에 유용하다. 예를들어 척추 수술후 경막 또는신경근에서 신경 주위의 수술후 섬유증, 접착에 의한 손상 또는 회복된 건(tendons)의 건유착박리, 접착에 의한 손상 또는 회복된 말초신경의 신경초박리, 여성생식계 및 복부 수술로부터의 수술후 접착, 숫컷 또는 암컷 불임의 역전을 위한 정관 또는 나팔관의 회복 수술, 및 요도, 장 또는 식도와 같은 다른 관 구조의 외과적 회복을 포함하는 외상 또는 수술 과정에 기인한 과잉 섬유증이 또한 본 발명의 방법에 따라 치료될 수 있다.

기도 막을 치료하기 위해, 바람직한 투여 방식은 흡입이다. 표면 손상을 치료하기 위하여, 바람직한 투여 방식은 적절한 약리학적 담체를 사용하여 국소적으로 적용하는 것이다. 피하 주사 또는 정제가 전신 처리를 위해 사용될 수 있는 것이다.

본 발명의 특정한 바람직한 구체예에서, 환자는 제 2 활성 성분과 배합하여 본 발명의 펩타이드를 투여하여 이익을 얻을 수 있다. 본 발명에 따라 이러한 배합용의 특히 유용한 다른 활성 성분은 예를들어 안티류코트리엔, 베타₂작용제, 코르티코르스테로이드등이다.

본 발명은 항섬유증 활성을 수행하여 포유동물에서 역 피브로라이시스(reverse fibrolysis)를 방지 또는 예방하기 위하여 포유동물을 소형 펩타이드로 처리하는 방법에 관한 것이다. 보다 특히 동맥 또는 기도 관강에서 섬유 손상을 나타내는 포유동물을 이러한 처리는 섬유증의 감소에 의해 나타내지는 바와 같이 관강 리모델링을 제공한다.

도 1은 만성 천식을 유도하는 면역화 및 본 발명에 따른 방법에 의해 치료하는 것을 예시하는 스케줄이다.

도 2a 및 도 2b는 만성 천식을 앓고있는 마우스의 폐조직의 본 발명에 따라 처리후(A) 및 처리없는 경우(B)의 병리학상의 특징의 비교를 예시하는 사진이다.

도 3a-3c는 본 발명에 따라 처리후(A), 처리 없는 경우(C) 및 대조군(B)의콜라겐 섬유성 축적을 나타내는 마우스의 폐조직의 비교를 예시하는 사진이다.

도 4a-4c는 본 발명에 따라 처리후(B), 처리없이(C), 및 대조군 경우(A) 콜라겐의 섬유성 축적을 나타내는 마우스의 폐조직을 비교 예시하는 사진이다.

도 5는 천식 유발된 마우스에서 기도 점막 플러그 및 염증 세포 축적에 대한 본 발명에 따른 치료 효과를 예시하는 그래프이다.

도 6은 만성 천식이 유발된 마우스의 기도에서 폐 점액 세포수에 대한 본 발명에 따른 치료의 효과를 예시하는 그래프이다.

도 7은 만성 천식이 유발된 마우스의 기도에서 호산구 및 호중구 수에 대한 본 발명에 따른 치료 효과의 그래프이다.

도 8은 만성 천식이 유발된 마우스의 페에서 육아종에 대한 본 발명에 따른 치료효과의 그래프이다.

도 9a-9c는 만성 천식 유발된 마우스의 본 발명에 따른 치료에 의해 본 발명에 따른 치료후(A), 치료없이(C), 및 대조군(B)의 어떤 간장 독성도 유발되지 않음을 예시하는 그래프이다.

도 10은 추가의 비강내 챌린지전 만성 천식을 유발하는 면역화 및 본 발명에 따른 이어진 치료를 예시하는 스케줄이다.

도 11a-11c는 만성 천식을 앓고 추후 추가로 비강내 챌린지된 마우스의 본 발명에 따른 치료후(A), 치료없이(C), 및 대조군(B) 경우 폐조직의 비교를 예시하는 사진이다.

도 12a-12c는 만성 천식을 앓고 추후 추가로 비강내 챌린지된 마우스의 본발명에 따른 치료후(A), 치료없이(C), 및 대조군(B) 경우 폐조직의 콜라겐의 비교를 예시하는 사진이다.

도 13a-13c는 만성 천식을 앓고 추후 추가로 비강내 챌린지된 마우스의 본 발명에 따른 치료후(A), 치료없이(C), 및 대조군(B) 경우 폐조직의 점액 세포의 비교를 예시하는 사진이다.

도 14는 만성 천식이 유발되고 반복된 알러지성 챌린지를 받은 마우스의 기도에서 호산구 및 호중구 수에 대한 본 발명에 따른 치료 효과의 그래프이다.

도 15는 만성 천식이 유발되고 반복된 알러지성 챌린지를 받은 마우스에서 기도 점막 플러그(plug) 및 염증 세포 축적에 대한 본 발명에 따른 치료 효과를 예시하는 그래프이다.

도 16은 만성 천식이 유발되고 반복된 알러지성 챌린지를 받은 마우스의 기도에서 점액 플러그 형성에 대한 본 발명에 따른 치료 효과를 예시하는 그래프이다.

도 17은 만성 천식이 유발되고 반복된 알러지성 챌린지를 받은 마우스의 기도에서 폐 점막 세포수에 대한 본 발명에 따른 치료 효과를 예시하는 그래프이다.

도 18은 만성 천식이 유발되고 반복된 알러지성 챌린지를 받은 마우스의 폐에서 육아종에 대한 본 발명에 따른 치료 효과의 그래프이다.

본 발명에 따르면, 화학식 f-Met-Leu-X(여기에서, X는 Tyr, Tyr-Phe, Phe-Phe 및 Phe-Tyr로 구성되는 그룹으로부터 선택된다)을 갖는 소형 펩타이드는 섬유증을 억제하고, 바람직한 구체예에서는 섬유 손상을 감소시키고 관강을 리모델링하는데 있어서, 놀라운 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 본 발명과 관련하여, 용어 "리모델링"은 관강, 예를들어 기도 통로 또는 정맥등이 병리학적 효과전의 그의 원래의 상태로 재구성됨을 의미하는데에 사용된다. 매우 바람직한 구체예에서, 관강은 질병전의 원상태로 된다.

결과로서, 이러한 펩타이드는 예를들어 폐 섬유증, 아테롬성 경화증, 경변증, 사구체 경화증, 만성 췌장 및 관상 동맥 질병에 의해 야기된 섬유성 손상을 나타내는 포유동물을 치료하는데에 유용하다. 또한 예를들어 척추 수술후 경막 또는 신경근에서 신경 주위의 수술후 섬유증, 접착에 의한 손상 또는 회복돤 건의 건유착박리, 접착에 의한 손상 또는 회복된 말초 신경의 신경초박리, 여성생식계 및 복부 수술로부터의 수술후 접착, 숫컷 또는 암컷 불임의 역전을 위한 정관 또는 나팔관의 회복 수술, 및 요도, 장 또는 식도와 같은 다른 관 구조의 외과적 회복을 포함하는 외상 또는 수술 과정에 기인한 과잉 섬유증이 또한 본 발명의 방법에 따라 치료될 수 있다.

본 발명의 펩타이드는 통상적인 소형 펩타이드 화학 기술에 의해 제조될 수 있다. 투여를 위해 사용될 때, 펩타이드는 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와 함께 무균 조건하에서 제조된다.

약제학적 조성물의 투여량은 대상에 따라 및 사용된 특별한 투여 경로에 따라 변한다. 투여량은 1일 0.1 내지 100,000 ㎍/kg, 보다 바람직하게는 1 내지 10,000 ㎍/kg 범위일 수 있다. 가장 바람직한 투여량은 체중 1 kg당 약 1 내지100 ㎍, 보다 바람직하게는 약 1 내지 10㎍/kg 및 가장 바람직하게는 1.0 내지 2.0 ㎍/kg의 범위이다. 투여량은 증상의 중증도에 따라 하루에 1회 내지 매 4-6 시간당 1회로 투여된다. 급성 상태인 경우, 매 4-6시간마다 펩타이드를 투여하는 것이 바람직하다. 유지 또는 치료 사용 경우, 하루에 오직 1회 또는 2회 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 바람직하게는, 투여 경로 및 증상의 중증도에 따라 약 0.18 내지 약 16 mg의 펩타이드를 하루에 투여한다. 특별한 조성물의 다중 투여량의 전달을 위해 원하는 시간 간격은 단지 일상적인 심험을 이용하여 본 분야에 숙련된자에 의해 결정될 수 있을 것이다.

투여 경로는 경구, 비경구, 직장, 질내, 국소적, 비강, 눈, 직접 주사 등을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 본 발명의 펩타이드는 환자에게 항염증 유효량 또는 비만 세포의 탈과립화를 억제하는 투여량으로 투여된다. 예시적인 약제학적 조성물은 전형적으로 약제학적으로 허용되는 담체안에 포함된 항염증 효과를 제공하거나 비만세포의 탈과립화를 억제하는 본 발명에 따른 펩타이드의 치료 유효량이다.

본 명세서에서 사용되고, 이하에서 보다 충분히 기술되는 용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 인간 또는 다른 동물에 투여하기에 적절한 하나이상의 상존성 고체 또는 액체 충진 희석제 또는 인캡슐레이팅 물질을 포함한다. 본 발명에서, 용어 "담체"는 따라서 본 발명의 분자가 적용을 용이하게 하기 위하여 함께 배합되는 천연 또는 합성의 유기 또는 무기 성분을 나타낸다. 용어 "치료적으로 유효량"은 원하는 결과를 생성하거나 치료하려는 특별한 증상에 원하는 영향을 나타내는본 약제학적 조성물의 양이다. 다양한 농도가 치료하려는 환자의 연령, 증상의 중증도, 치료 기간 및 투여 방식에 변화를 제공하기 위하여 동일한 성분을 혼입시키는 조성물을 제조하는데에 사용될 수 있다.

담체는 또한 적합성이어야 한다. 본 명에서에서 사용된 용어 "적합성"은 서로 원하는 약제학적 효능을 실질적으로 손상시키지 않는 방법으로 본 발명의 소형 펩타이드와 혼합될 수 있는 것을 의미한다.

본 발명의 소형 펩타이드는 전형적으로 그자체(니트)로 투여된다. 그러나, 이들은 약제학적으로 허용되는 염의 형태로 투여될 수 있다. 이러한 약제학적으로 허용되는 염은 제한되는 것은 아니지만 다음산: 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 말레산, 아세트산, 살리실산, p-톨루엔설폰산, 타르타르산, 시트르산, 메탄설폰산, 포름산, 말론산, 숙신산, 나프탈렌-2-설폰산 및 벤젠설폰산으로부터 제조된 것을 포함한다. 또한, 약제학적으로 허용되는 염은 카복실산 그룹의 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염과 같은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속염으로 제조될 수있다. 따라서, 본 발명은 하나이상의 약제학적으로 허용되는 담체 및 임의로 어떤 다른 치료 성분과 함께 본 발명의 펩타이드를 포함하는, 의학적 사용을 위한 약제학적 조성물을 제공한다.

조성물은 본 발명의 물질을 사용하는 투여 경로로서 사용될 수 있는 경구, 직장, 질내, 국소, 코, 눈 또는 비경구 투여에 적절한 것을 포함한다. 본 발명의 펩타이드를 함유하는 약제학적 조성물은 또한 안정화제(장기 저장을 조장하기위하여), 유화제, 결합제, 농후화제, 염, 방부제, 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제등과 같은 부형제를 포함할 수 있는 하나이상의 약제학적으로 허용될 수 있는 담체를 함유할 수 있다.

약제학적 활성 물질용의 이러한 매질 및 제제의 용도는 본 분야에 잘 알려져 있다. 통상적인 매질 또는 제제가 본 발명의 펩타이드와 비상존성인 경우이외에는, 약제학적 제조에서 그의 용도가 본 명세서에서 고려된다. 보충의 활성 성분이 또한 본 발명의 조성물에 혼입될 수 있다.

경구 투여에 적절한 조성물은 천식의 치료에 바람직하다. 전형적으로, 이러한 조성물은 흡입 에어로졸, 네불(nebule), 시럽 또한 정제로서 제조된다. 국소적 투여에 적절한 조성물은 경구 조성물이 또한 편리할 수있지만, 관절염의 치료에 바람직하다. 전형적으로, 이러한 국소적 조성물은 크림, 연고 또는 용액으로서 제조된다. 이러한 조성물에서 펩타이드 활성 성분의 농도는 전형적으로 50㎍/ml 미만, 보다 바람직하게는 30㎍/ml 미만, 및 가장 바람직하게는 약 5 내지 10 ㎍/ml이다.

조성물은 편리하게는 단위투여 형태로 제공될 수 있고, 약제학 분야에서 잘 알려진 방법에 의해서 제조될 수 있다. 방법은 전형적으로 본 발명의 활성 성분을 하나이상의 부속 성분을 구성하는 담체와 결합시키는 단계를 포함한다.

흡입 투여에 적절한 본 발명의 조성물은 예를들어 에어로졸 또는 흡입 용액으로서 제공될 수 있다. 전형적인 에어로졸 조성물의 예는 트리클로로모노플루오로메탄 및 디클로로디플루오로메탄 더하기 올레산의 혼합물에 현탁된 원하는 양의 미세결정성 펩타이드로 구성된다. 전형적인 용액의 예는 멸균 염수(용해도를 위하여 임의로 약 5% v/v 디메틸설폭사이드("DMSO"), 벤질알코늄 클로라이드, 및황산(pH를 조정하기 위하여)에 용해되거나 현탁된 원하는 양의 펩타이드로 구성된다.

경구 투여에 적절한 본 발명의 조성물은 또한 각각 예정된 양의 본 발명의 펩타이드를 함유하는 캡슐, 카세(cachets), 정제 또는 로젠지와 같은 분리 유니트로서, 또는 리포좀내에 함유되어 또는 시럽, 엘릭서르, 또는 유제와 같은 수성 액체 또는 비수성 액체중의 현탁액으로서 제공될 수 있다. 정제 제제 베이스의 예는 불활성 성분으로서 옥수수 전분, 락토즈, 마그네슘 스테아레이트를 포함한다. 시럽 제제 베이스의 예는 시트르산, 착색 염료, 향미제, 하이드록시프로필메틸셀룰로즈, 사카린, 소듐 벤조에이트, 소듐 시트레이트 및 정제수를 포함한다.

비경구 투여에 적절한 조성물은 편리하게는 바람직하게는 수용체의 혈액과 등장성인 본 발명의 분자의 멸균 수성 제제를 포함한다. 이 수성 제제는 적절한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사 제제는 또한 예를들어 1,3-부탄디올중의 용액으로서 비독성 의 경구적으로-허용가능한 희석제 또는 용매중의 멸균성 주사가능한 용액 또는 현탁제일 수 있다. 이용될 수 있는 허용가능한 비히클 및 용매중에는 물, 링게르 용액 및 등장성 염화 나트륨 용액이 있다. 수용액중에서, 약 10% v/v이하의 DMSO 또는 트랩솔(trappsol)이 일부 펩타이드의 용해도를 유지하기 위하여 사용될 수 있다. 또한, 멸균, 고정된 오일은 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로서 이용될 수 있다. 이를 위해, 합성 모노- 또는 디글리세리드를 포함하는 다수의 고정된 오일이 이용될 수 있다. 또한, 지방산(올레산 또는 중성 지방산)이 주사제의 제조에 사용될수 있다. 또한, 플루로닉(Pluronic) 블록 공중합체가 수주 또는 수개월의 기간에 걸쳐 37℃에서 고체 형태로부터 시간에 따른 방출 기초로 화합물 주입 경우 4℃에서 지질과 제형화될 수 있다.

국소적 투여에 적절한 조성물은 트랩졸 또는 DMSO중에서, 또는 크림, 연고, 또는 로션중의 펩타이드 용액으로서 제공될 수 있다.

전형적으로, 약 0.1 내지 약 2.5% 활성 성분이 베이스 또는 담체에 혼입된다. 크림 제제 베이스의 예는 정제수, 페트로라툼, 벤질 알콜, 스테아릴 알콜, 프로필렌 글리콜, 이소프로필 미리스테이트, 폴리옥실 40 스테아레이트, 카보머(carbomer) 934, 소듐 라우릴 설페이트, 아세테이트 디소듐, 수산화 나트륨, 및 임의로 DMSO를 포함한다. 연고 제제 베이스의 예는 백색 페트로라툼 및 임의의 미네랄 오일, 소르비탄 세스퀴올리에이트, 및 DMSO를 포함한다. 로션 제제 베이스의 예는 카보머 940, 프로필렌 글리콜, 폴리소르베이트 40, 프로필렌 글리콜 스테아레이트, 콜레스테롤 및 관련된 스테롤, 이소프로필 미리스테이트, 소르비탄 팔미테이트, 아세틸 알콜, 트리에탄올아민, 아스코르브 산, 시메티콘, 및 정제수를 포함한다.

OVA-유도된 기관지 천식 마우스 모델

천식의 만성 뮤린 모델을 지속적인 천식에 대한 f-Met-Leu-Phe-Phe(HK-X)의 효과를 시험하기 위하여 사용하였다. 이 뮤린 시스템은 기도 베이스 라미나의 외부 경계와 결합하여 수많은 염증세포 침투가 있는 만성 천식의 모델이다. 첫달에 마우스를 초기 면역화시키고 이어서 주마다 OVA로 비강내 챌린지시키는 5개월간의면역화 기간은 마우스에서 지속적인 천식의 조건을 설정했다. 면역화된 마우스는 혈관 및 기도주위에 콜라겐의 축적이 증가되어 섬유증 증상을 나타냈다. 면역화된 마우스를 16일동안에 걸쳐 8회(즉, 하루걸러) HK-X로 처리하였다.

실시예 1

재료 및 방법

시약: 결정성 OVA를 Pierce Chem. Co.(Rockford, IL)로부터 수득하고, 알루미늄 포타슘 설페이트(알룸, alum)을 Sigma Chem. Co. (St.Louis, MO)로 부터 수득하며, 피로겐이 없는 증류수를 Baxter, Healthcare Corporation(Deerfield, IL)로부터 입수하였다. OVA(500 ㎍/ml)를 증류수중에서 동일한 부피의 10%(wt/vol) 알룸과 혼합했다. 실온에서 60분간 인큐베이션후의 혼합물(10 N NaOH를 사용하여 pH 6.5로 조정하였다)을 750 g에서 5분동안 원심분리하였다; 펠릿을 증류수중의 본래 부피로 재현탁시키고, 1시간안에 사용하였다.

암컷 BALB/c 마우스(구입시 6-8주령; D and K, Seattle WA)를 연구를 위하여 통상적인 조건하에 수용하였다.

만성 천식을 유도하기 위한 알레르겐 면역화/챌린지 프로토콜:

마우스에 1일에 알룸중의 OVA 0.2 ml(100 ㎍)를 복강내("i.p.")주사하고, 14일에 비강내 OVA(염수중의 100 ㎍)와 배합된 복강내 주사(알룸중의 OVA 100 ㎍)를 복강내 주사하였다. 25, 26, 및 27일, 마우스를 추가로 비강내 OVA(염수중의 100 ㎍)로 챌린지하였다. 이어서 마우스를 추가의 5개월 동안 비강내 OVA(염수중의 100 ㎍)로 매주 챌린지하였다. 도 1 참조.

만성 천식의 치료

도 1에 나타난 바와같이, 50 ㎍의 HK-X를 16일에 걸쳐 전달된 총 8회 투여량으로 비강내("IN") 투여하였다. 동물을 마지막 HK-X투여하고 1일후 희생시켰다.

투여를 위한 HK-X의 제조

50 ㎍의 HK-X(2.5% 미만으로 DMSO를 함유하는 50 ㎕의 염수중의).

충분한 DMSO(2.5% 부피 이하로)를 화합물을 용해시키는데 사용하였다. 수용체를 마취시키는 동안 용액을 코를 통해 폐에 주입시켰다.

대조군 비히클 경우, 마취시키면서 동물에 코를 통해(비강내) 동일한 양의 염수를 주입하였다.

조직학

모든 동물을 마지막 HK-X처리 또는 마지막 OVA 챌린지후 마취제 주사에 의해 희생시켰다. 페를 절개하고, 10% 포르말린으로 고정시켰다. 하나의 폐엽을 면역세포화학 연구를 위하여 카노이(Carnoy's) 고정제중에서 고정시켰다. 24시간 고정후, 폐를 탈수시키고 파라핀 블록에 넣었다. 모든 파라핀 블록을 블라인드 분석을 위하여 실험 번호로 코드화했다.

파라핀 블록을 절단하고, 1 mm 간격으로 분리된 각 폐의 2개 레벨(level)을 선택하고 각 레벨에 대해 8개의 슬라이드(slide)를 만들었다. 슬라이드를 일반적인 세포 및 조직의 구성을 시각화하기 위하여 헤마톡실린 및 에오신으로, 점액 함유 세포 및 기도로 방출된 점액의 동정을 위하여 알시안 블루로, 섬유형성에서 콜라겐 퇴적에 대한 마손(Mason) 트리크롬 염색, 및 폐조직에서 호산구를 동정하기위하여 메틸렌 블루 및 에오신으로 염색하였다.

생물형태계측 분석:알러지성 만성 폐 질병의 하기 파라미터를 분석하였다.

1. 기도 플러그 스코어- + 내지 ++++의 스코어 시스템을 사용하여, 매질 및 대형-크기의 기도로의 점액 분비의 중증도를 선행 보고서(Henderson et al., J. Exp. Medicine, vol. 1-84, pp. 1483-94, Oct. 1996)에 따라 측정할 수 있었다.

2. 점액 과립을 함유하는 상피세포의 분획을 - 매질내지 대형 기도(600 ㎛ 내지 1,000 ㎛ 직경)중의 100개 상피 세포로부터 점액 함유 상피 세포의 수를 랜덤하게 계수하여 평가하였다. 총 10군데를 상이한 폐엽들에서 계수하여 평균 스코어를 표로 만들었다.

3. 침투 세포의 세포 밀도 - 기도와 결합하고 혈관주위 부분에 위치한 축적된 염증세포(호중구, 호산구, 단핵세포 및 림프구)를 + 내지 ++++ 범위의 스코어 시스템을 사용하여 평가하였다. +의 스코어는 3 내지 5개 미만의 세포의 염증 세포층을 나타내고; ++는 5개 세포 내지 10개 세포의 염증 밀도를 나타내며; +++는 10 내지 20개 세포의 염증 밀도를 나타내고; ++++는 20 내지 40개 세포의 염증 밀도를 나타낸다.

4. 다양한 세포형-호산구 및 호중구의 수를 기도와 관련하여 2,200 u²면적에서 고 파워(power) 필드(field)(40 x)당 수를 계수하여 정량화했다.

5. 육아종 스코어 - 육아종-유사 구조를 저 파워(5x)에서 계수하였다. 기도 또는 혈관과 관련된 세포 응집을 육아종으로서 계수하였다.

생물형태계측 데이터의 통계학적 분석: SigmaStat버젼 2.0을 실험 그룹과 대조군사이의 통계학적 비교를 수행하기 위하여 사용하였다. 차이를 ANOVA에 의해 유의성(p<0.05)에 대해 분석하였다. SigmaPlot version 4.0 또는 GraphPad Prism을 데이터를 그래프적으로 나타내기위하여 이용하였다.

결과:

OVA로 마우스를 면역화시키고 이어서 HK-X로 처리하는 동안 어떤 역반응 또는 병의 신호도 관찰되지 않았다. 마우스는 전 실험 기간동안 활동적이었다.

그러나, 동물을 희생시키고 폐 조직에 조직학적 조사를 수행한 후, OVA로 면역화된 동물만이 인간에서 관찰되는 만성 천식과 일치하는 심각한 폐 병리학적 변화를 가졌다. 따라서, 이 뮤린 시스템은 기도 베이스 라미나의 외부 층과 결합하여 많은 수의 염증세포의 침투가 있는 만성 천식의 모델이다(참조 도 2b).

동물을 16일 기간에 걸쳐 HK-X의 8회 투여량으로 처리했을 때, 염증 세포의 수는 기도 및 혈관 주위에서 분명히 감소되었다(도 2a 참조).

도 3에 예시된 바와 같이, OVA 면역화된 마우스는 혈관 및 기도주위에 콜라겐의 축적(푸른색)이 증가되었다. 그러나, HK-X로 처리된 폐는 감소된 수준의 콜라겐 축적을 나타냈다(도 3a 참조). 대조군 마우스(염수중의 HK-X 투여)에서, 폐조직은 염증 세포 및 섬유증 콜라겐의 퇴적이 없었다(도 3b 참조).

유사한 패턴의 결과가 pH 2.3에서 알시안 블루로 시각화된 점액-염색 세포에서 관찰되었다. OVA 면역화된 마우스에서 매우 고비율의 상피 세포가 점액 과립을 함유했다(도 4c 참조). 대조적으로, HK-X에 의한 처리는 기도에서 점액 함유 세포의 수를 극적으로 감소시켰다(도 4b 참조). 사실, 빈도는 대조군 또는 HK-X를 함유하는 염수만 투여된 비-면역화된 동물의 것과 다르지 않았다(도 4a 참조).

6개월된 만성 천식 마우스의 기도의 50 내지 60퍼센트가 점액으로 막혀있었다(도 5). 16일간에 걸쳐 비강내로 HK-X의 8회 투여량을 투여했을 때, 기도의 점액 축적 및 점액 세포에서 놀랄만한 감소가 있었다(도 6). 또한 단위 면적당 호산구 및 호중구를 포함하는- 침투 염증세포의 수도 또한 감소되었다(도 7). OVA 면역화되고 HK-X 처리된 동물의 조직병리학적 관찰은 염수 또는 HK-X만 함유하는 염수로 처리된 동물의 것을 닮았다.

뮤린 모델에서 만성 천식의 중요한 특징의 하나는 폐에서 육아종성 구조의 외관이다. HK-X는 처리된 동물의 페에서 이들 구조의 수 및 크기를 감소시킨다(도 8).

비교시, HK-X로 처리된 만성 천식 마우스 및 정상 염수로 처리된 동물 경우, 간의 조직 병리학에서 명백한 차이가 없었다(도 9). 그러므로, 여기에서 측정된 바와 같이, 마우스에 HK-X의 잦은 비강내 투여된 투여량에 의해 간독성이 생성되지 않았다.

이들 연구는 알레르겐-유도된 만성 천식의 뮤린 모델에서 HK-X의 투여가 기도 염증 및 점액 세포의 활동항진을 감소시키는 지를 결정하기 위하여 설계되었다. 이 모델에서, 마우스를 OVA로 감작화시키고, 5개월동안 매주 비강내 경로를 통해 OVA에 노출시키며, 16일간에 걸쳐 HK-X로 8회 비강내 처리하였다. 이 알레르겐 면역화 및 챌린지 요법은 호산구 및 다른 유형의 염증 세포의 만성 기도 침투, 기도에서의 점액의 축적 및 점액 분비 세포의 과형성에 이른다.

기도 과분비, 점액 세포의 과형성, 및 호산구 및 호중구의 모집이 HK-X의 투여에의해 감소되었다. 이들 결과는 HK-X가 만성 천식을 앓는 이 알레르겐-유도된 모델에서 일어나는 점액의 기도 과분비 및 후기상(late-phase) 염증에서 중요한 역할을 한다는 것을 나타낸다. HK-X에 의해 폐 염증의 절제(moderation) 및 점액 분비 및 점액 세포 분열의 감소가 관찰되었다.

추가로 흥미롭게는, HK-X가 16일 처리 기간에 걸쳐 계속적으로 효과적인데, 이는 타키필락시스가 이 모델에서 일어나지 않는다는 것을 나타낸다. 추가로, HK-X의 비강내 투여는 체중 1kg당 1 mg으로 연장된 기간에 걸쳐 마우스에 투여했을 때, 어떤 검출될만한 간장독성을 생성시키지 않았다.

실시예 2

뮤린 만성 천식 모델에서, 병리학적 변화는 인간 질병을 매우 닮았다. 상기 실시예 1은 본 발명에 따른 처리가 섬유증을 포함하는 만성 천식에 의해 야기되는 병리학적 변화를 감소시킨다는 것을 예시하였다. 섬유증, 기도 주변의 염증세포의 수, 및 기도내의 점액세포의 수 및 점액 방출의 놀라운 감소가 관찰되었다.

본 실시예는 유도된 만성 천식을 앓고 본 발명에 따라 처리된 마우스가 추후 추가로 OVA로 추가로 비강내("IN") 챌린지된 시험의 결과를 보고한다. 재료는 실시예 1에서와 같다.

방법:

Balb/C 마우스를 실시예 1에서와 같이 6개월에 걸쳐 OVA로 반복적으로 면역화시켰다. 그후, 마우스를 실시예 1에서 처럼 16일에 걸쳐 8회 투여로 투여당 50 ㎍의 HK-X로 처리하였다. 이어서 추가의 요법으로 비강내 OVA 챌린지전 15-30분동안 50㎍ 투여량의 HK-X를 투여하였다. 이 요법은 총 3일동안 반복하였다. 마지막 처리한 다음날 마우스를 희생시켰다. 도 10 참조

HK-X를 실시예1에서와 같은 방법으로 제조하였다.

HK-X의 투여:

동물의 HK-X/OVA 그룹에 체중 1 kg당 0.4 mg의 HK-X 투여량(1일 체중 20 gm당 50 ㎍)을 투여하였고, 한편 염수 그룹에는 OVA없이 같은 투여량의 HK-X를 투여하였다. 선행의 약력학적 연구는 마우스중의 HK-X의 플라즈마 T1/2(반감기)이 30분미만임을 나타냈다. 그러므로, 알레르겐 챌린지 과정동안 플라즈마 수준을 유지하기 위하여 이들 마우스에 OVA 챌린지 바로직전 추가의 HK-X를 비강내 투여하였다.

폐 조직학:

기관(trachea) 및 좌측 폐(상부 및 하부 엽)를 수집하고 10% 포르말린에 20℃에서 15시간동안 고정시켰다. 파라핀에 묻은후, 조직을 5㎛ 단편으로 절단했다. 폐 조직에 있는 호산구를 변형된 Discombe 용액으로 염색하였다. 단위 기도 면적(2,000 ㎛²)당 호산구의 수를 이미 기술된 바와 같이(Henderson et al., J. Exp. Medicine, vol. 1-84, pp. 1483-94, Oct. 1996, Su et al., American Review Repetitive Diseases, Vol. 147, pp. 448-56, 1993) 생물형태계측 분석에 의해 측정하였다. 기도 점액 및 점액 세포를 다음 염색 방법: 메틸렌 블루, 무시카르민,톨루이딘 블루, 및 알시안 블루로 확인하였다.

점액에 의한 기도 직경의 폐색은 0 내지 5+ 범위의 반양론적 규모로 평가하였다. 각 마우스 경우, 프로토콜 설계에 블라인된 개개인이 생물형태계측 분석에 의해 점액 폐색에 대해 좌측 폐를 통해 랜덤하게 분포된 10개의 기도 단편을 평가하였다. 각 기도 단편에 하기 기준에 기초한 점액에 의한 기도 직경 폐색에 대해 스코어를 배정했다: 0, 점액 없음; 1+, -10% 폐색; 2+, -30% 폐색; 3+, -50% 폐색; 4+, -80% 폐색; 및 5+, -90-100% 폐색.

결과:

알러지적으로 챌린지된 마우스로부터의 폐조직의 광학 현미경 사진

6개월에 걸쳐 OVA로 면역화되고, OVA로 반복적으로 챌린지된 동물은 인간에서 관찰되는 만성 천식과 일치하는 심한 폐구조 변화를 가졌다. 막대한 염증세포의 침투가 기도 베이스 라미나의 외부 경계와 결합하여 관찰되었다(도 11c 참조). 동물이 16일동안에 걸쳐 HK-X의 8회 투여로 처리되고, 알러지 챌린지 30 분전 HK-X를 투여받았을 때, 염증 세포의 수는 기도 및 혈관주위에서 분명히 감소되었고(도 11a 참조) 염수 처리된 마우스에서 관찰된 패턴(도 11b)과 유사하였다.

OVA 면역화된 마우스는 관 및 기도주위의 콜라겐(푸른 색)의 축적이 증가되었다(도 12c). 그러나, HK-X로 처리된 폐는 콜라겐 퇴적의 수준이 감소되었다(도 12a 참조). 염수중의 HK-X가 투여된 대조군 마우스 경우, 폐조직에는 염증세포 및 섬유증 콜라겐 퇴적이 없었다(도 12b 참조).

유사한 패턴의 결과가 pH 2.3의 알시안 블루로 시각화된 점액-함유 세포에서관찰되었다. OVA 면역화된 마우스중의 매우 고비율의 상피 세포는 점액 과립을 함유했다(도 13c 참조). 대조적으로, HK-X로 처리하면 기도중의 점액 함유 세포의 수가 극적으로 감소되었다(도 13a 참조). 사실 빈도는 HK-X를 함유하는 염수가 투여된 대조군 또는 비면역화된 동물과 다르지 않았다(참조 도 13b).

호산구 및 호중구의 폐에로의 모집에 대한 HK-X의 효과:

폐로 호산구 및 호중구 모집에 대한 HK-X의 효과를 도 14에 나타낸다. HK-X로 예비처리하면, OVA 면역화되고, 챌린지된 마우스의 폐조직으로 침투 호산구의 수가 70% 및 침투 호중구의 수가 30%가 각각 감소되었다. 염수 처리된 폐에서 관찰된 호산구의 평균 수는 2,200 ㎛²당 0.3±0.1 세포이었다. 염수중의 HK-X로만 처리한후, 폐 조직에서의 호산구의 수는 약간 증가되어 2,200 ㎛²당 0.75 ±0.18 세포이었다. 대조적으로, HK-X 처리는 기도 및 혈관과 관련하여 총 염증 세포 침투의 수를 상당히 감소시켰다(도 15).

HK-X에 의한 처리로 감소된 폐에서의 점액 축적

3일 연속 비강내 알레르겐 챌린지에 이어, 기도 점액 플러그 스코어 및 기도 점막 세포의 수를 측정하였다. 기도 점막 플러그 스코어는 방법에서 상기된 바와 같이 0-5의 규모로 평가했다. 점액 세포 수는 실시예 1에서 기술된 바와 같이 반양론적으로 결정하였다. 염수 처리된 그룹에서, 평균 기도 점액 축적 스코어는 0.1±0.05이었다(도 16 참조). OVA 챌린지된 그룹에서, 기도 플러그 스코어는 2.33±0.17의 스코어로 23.3배 증가되었다(염수 그룹 대 OVA 그룹, P<0.001; MannWhitney Rank Sum Test). 기도 점막 플러그 스코어 또는 기도 폐색은 OVA 챌린지전 15-30분 HK-X처리로 78% 감소되었다(P<0.001; Mann Whitney Rank Sum Test). 유사하게, 기도에서의 점액 세포의 수가 감소되었다(도 17 참조). 특이하게 HK-X 처리없이 OVA 챌린지된 폐에서는 상피세포의 34.66±6.45%가 점액 분비 세포로 분열되었으나, HK-X 처리된 폐에서는 오직 11.24±4.73%가 점액을 함유했다(P<0.001; Mann Whitney Rank Sum Test).

만성 천식 페에서의 육아종과 같은 구조의 형성 수준:

육아종 형성을 6개월간 OVA로 면역화된 동물에서 OVA 및 HK-X 또는 OVA로만 반복적으로 챌린지된 폐에서 측정하였다. 도 18에 나타난 바와 같이, HK-X 처리에 의해 폐에서 육아종 형성의 3배 감소가 있었다(P<0.001; Mann Whitney Rank Sum Test).

본 연구는 HK-X의 투여가 알레르겐-유도된 만성 천식을 앓고 있는 뮤린 모델에서 기도 염증 및 점액 세포의 활동항진을 감소시키는 가를 결정하기 위하여 설계되었다. 이 모델에서, 마우스는 OVA로 감작시키고, 이어서 5개월동안 매주 비강내 경로를 통해 OVA에 노출시키고, 3일 연속 OVA 비강내 챌린지에 노출시켰다. 이 알레르겐 면역화 및 챌린지 요법은 호산구 및 다른 유형의 염증세포의 만성 기도 침투, 기도에서의 점액의 축적 및 점액 분비 세포의 과형성에 이르게 된다.

또한, 이 모델에서, 기도 과분비, 점막 세포의 과형성, 및 호산구 및 호중구의 모집이 HK-X의 투여에 의해 감소된다. 이들 결과는 HK-X가 알레르겐 유도된 만성 천식을 앓고있는 모델에서 일어나는 점액의 기도 과분비, 후기상 염증의 감소에서 중요한 역할을 하는 것을 나타낸다. HK-X에 의한 폐 염증의 절제 및 점액 분비 및 점액 세포 분열의 감소가 인간에서 만성 천식의 치료에 유용할 것이다.

본 발명은 바람직한 구체예를 참조하여 상세히 기술되었다. 그러나, 본 명세서 및 도면을 고려하여, 본 분야에 숙련된자는 청구범위에 의해 정의된 바와 같은 본 발명의 취지 및 범위내에서 변화 및 개선을 할 수 있을 것이다.

Claims

항섬유증 유효량의 화학식 f-Met-Leu-X(여기서, X는 Tyr, Tyr-Phe, Phe-Phe 및 Phe-Tyr로 구성되는 그룹으로부터 선택된다)의 펩타이드를 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 포유동물에서 섬유증(fibrosis)을 치료하는 방법.
제 1 항에 있어서, 섬유증이 폐 섬유증(pulmonary fibrosis), 아테롬성 경화증(atherosclerosis), 경변증(cirrhosis), 사구체 경화증(glomerulosclerosis), 만성 췌장염(chronic pancreatitus) 및 관상 동맥 질병(coronary artery disease)으로 구성되는 그룹으로부터 선택된 증상으로 인한 병리학적 변화에 기인한 방법.
제 1 항에 있어서, 섬유증이 폐 섬유증으로 인한 병리학적 변화에 기인한 방법.
제 1 항에 있어서, 섬유증이 아테롬성 경화증으로 인한 병리학적 변화에 기인한 방법.
제 1 항에 있어서, 섬유증이 경변증으로 인한 병리학적 변화에 기인한 방법.
제 1 항에 있어서, 섬유증이 사구체 경화증으로 인한 병리학적 변화에 기인한 방법.
제 1 항에 있어서, 섬유증이 만성 췌장염으로 인한 병리학적 변화인 방법.
제 1 항에 있어서, 섬유증이 관상 동맥 질병으로 인한 병리학적 변화에 기인한 방법.
제 1 항에 있어서, 섬유증이 외상(trauma) 및 수술 과정으로부터 선택된 증상으로 인한 병리학적 변화에 기인한 방법.
제 1 항에 있어서, 섬유증이 외상으로 인한 병리학적 변화에 기인한 방법.
제 1 항에 있어서, 섬유증이 수술과정으로 인한 병리학적 변화에 기인한 방법.
제 10항에 있어서, 섬유증이 척추 수술후 경막 또는 신경근에서 신경 주위의 수술후 섬유증, 접착에 의한 손상 또는 회복된 건(tendons)의 건유착박리, 접착에 의한 손상 또는 회복된 말초 신경의 신경초박리, 여성생식계 및 복부 수술로부터의 수술후 접착, 숫컷 또는 암컷 불임의 역전을 위한 정관 또는 나팔관의 회복 수술, 및 요도, 장 또는 식도와 같은 다른 관 구조의 외과적 회복으로 구성되는 그룹으로부터 선택된 증상으로 인한 병리학적 변화에 기인한 방법.