ES2300125T3

ES2300125T3 - Agonistas de la apoliproteina a-i y su uso para tratar trastornos dislipidemicos.

Info

Publication number: ES2300125T3
Application number: ES98951978T
Authority: ES
Inventors: Jean-Louis Dasseux; Renate Sekul; Klaus Buttner; Isabelle Cornut; Gunther Metz; Jean Dufourcq
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1997-09-29
Filing date: 1998-09-28
Publication date: 2008-06-01
Anticipated expiration: 2018-09-28
Also published as: EP1019073A1; US6004925A; NZ503717A; CN1247254C; EP1019073A4; UA71553C2; AU746090B2; NO20001599L; US6753313B1; US20030203842A1; US6376464B1; US6329341B1; ATE437648T1; DK1854471T3; US6630450B1; KR20010030802A; DE69841030D1; US7312190B2; CN1280501A; ES2331808T3

Abstract

Agonista de ApoA-I que comprende: (i) un péptido o análogo de péptido de 15 a 29 residuos que forma una hélice anfipática en presencia de lípidos y que comprende la fórmula (I) estructural: Z1-X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-Z2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: X1 es Pro (P), Ala (A), Gly (G), Gln (Q), Asn (N), Asp (D) o D-Pro (p); X2 es un residuo alifático; X3 es Leu (L) o Phe (F); X4 es un residuo ácido; X5 es Leu (L) o Phe (F); X6 es Leu (L) o Phe (F); X7 es un residuo hidrófilo; X8 es un residuo ácido o básico; X9 es Leu (L) o Gly (G); X10 es Leu (L), Trp (W) o Gly (G); X11 es un residuo hidrófilo; X12 es un residuo hidrófilo; X13 es Gly (G) o un residuo alifático; X14 es Leu (L), Trp (W), Gly (G) o Nal; X15 es un residuo hidrófilo; X16 es un residuo hidrófobo; X17 es un residuo hidrófobo; X18 es Gln (Q), Asn (N) o un residuo básico; X19 es Gln (Q), Asn (N) o un residuo básico; X20 es un residuo básico; X21 es un residuo alifático; X22 es un residuo básico; X23 está ausente o es un residuo básico; Z1 es H2N- o RC(O)NH-; Z2 es -C(O)NRR, -C(O)OR o -C(O)OH o una sal del mismo; cada R es independientemente -H, alquilo (C1-C6), alquenilo (C1-C6), alquinilo (C1-C6), arilo (C5-C20), alcarilo (C6-C26), heteroarilo de 5-20 miembros, alq-heteroarilo de 6-26 miembros, o un péptido o análogo de péptido de 1 a 7 residuos; cada ¿-¿ entre los residuos Xn designa independientemente un enlace amida, un enlace amida sustituido, un isóstero de una amida o un mimético de amida; o (ii) una forma delecionada de la fórmula (I) estructural en la que al menos uno y hasta ocho de los residuos X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19, X20, X21 y X22 están delecionados; o (iii) una forma alterada de la fórmula (I) estructural en la que al menos uno de los residuos X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7, X8, X9, X10, X11, X12, X13, X14, X15, X16, X17, X18, X19, X20, X21, X22 o X23 está sustituido de manera conservativa por otro residuo.

Description

Agonistas de la apoliproteína A-I y su uso para tratar trastornos dislipidémicos.

\global\parskip0.900000\baselineskip

1. Introducción

La invención se refiere a composiciones de agonista de la apolipoproteína A-I (ApoA-I) para tratar trastornos asociados con dislipoproteinemia, incluyendo hipercolesterolemia, enfermedad cardiovascular, aterosclerosis, reestenosis y otros trastornos tales como choque septicémico.

2. Antecedentes de la invención

El colesterol circulante se porta por lipoproteínas plasmáticas, partículas de composición de compleja de lípido y proteína que transportan lípidos en la sangre. Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) y las lipoproteínas de alta densidad (HDL) son los principales portadores de colesterol. Se cree que las LDL son responsables del envío de colesterol desde el hígado (en el que se sintetiza u obtiene de fuentes de la dieta) hasta tejidos extrahepáticos en el cuerpo. La expresión "transporte inverso de colesterol" describe el transporte de colesterol desde tejidos extrahepáticos hasta el hígado, en el que se cataboliza y elimina. Se cree que las partículas de HDL plasmáticas desempeñan un papel principal en el proceso de transporte inverso, actuando como eliminadores de colesterol tisular.

La evidencia que conecta un elevado colesterol sérico con la cardiopatía coronaria es abrumadora. Por ejemplo, la aterosclerosis es una enfermedad lentamente progresiva caracterizada por la acumulación de colesterol dentro de la pared arterial. Una evidencia convincente apoya el concepto de que los lípidos depositados en lesiones ateroscleróticas derivan principalmente de LDL plasmáticas; por tanto, las LDL se conocen popularmente como el colesterol "malo". En cambio, los niveles séricos de HDL se correlacionan de manera inversa con la cardiopatía coronaria, de hecho, elevados niveles séricos de HDL se consideran como un factor de riesgo negativo. Se supone que los niveles elevados de HDL plasmática no sólo protegen frente a la arteriopatía coronaria, si no que inducen realmente la regresión de las placas ateroscleróticas (por ejemplo, véase Badimon y otros, 1992, Circulation 86 (Supl. III): 86-94). Por tanto, las HDL se conocen popularmente como el colesterol "bueno".

2.1. Transporte de colesterol

El sistema de transporte de grasas puede dividirse en dos rutas: una exógena para el colesterol y los triglicéridos absorbidos a partir del intestino y una endógena para el colesterol y los triglicéridos que entran en el torrente circulatorio a partir del hígado y otros tejidos no hepáticos.

En la ruta exógena, las grasas de la dieta se empaquetan para dar partículas de lipoproteínas denominadas quilomicrones, que entran en el torrente circulatorio y envían sus triglicéridos hasta el tejido adiposo (para almacenamiento) y hasta el músculo (para su oxidación para suministrar energía). El resto de los quilomicrones, que contienen ésteres de colesterol, se elimina de la circulación mediante un receptor específico que se encuentra sólo en células del hígado. Este colesterol está entonces disponible de nuevo para el metabolismo celular o para su reciclaje hasta tejidos extrahepáticos como lipoproteínas plasmáticas.

En la ruta endógena, el hígado secreta una partícula de lipoproteínas grande, de muy baja densidad (VLDL) en el torrente circulatorio. El núcleo de las VLDL consiste principalmente en triglicéridos sintetizados en el hígado, con una cantidad menor de ésteres de colesterol (o bien sintetizados en el hígado o bien reciclados de los quilomicrones). Están presentes dos proteínas predominantes sobre la superficie de las VLDL, la apoproteína B-100 y la apoproteína E. Cuando una VLDL alcanza los capilares del tejido adiposo o del músculo, se extraen sus triglicéridos, dando como resultado un nuevo tipo de partícula, de tamaño disminuido y enriquecida en ésteres de colesterol, pero que conserva sus dos apoproteínas, denominada lipoproteína de densidad intermedia (IDL).

En seres humanos, aproximadamente la mitad de las partículas de IDL se eliminan de la circulación rápidamente (en el plazo de seis horas de su formación), debido a que se unen fuertemente a las células hepáticas que extraen su colesterol para fabricar nuevas VLDL y ácidos biliares. Las partículas de IDL que no son captadas por el hígado permanecen en la circulación durante más tiempo. Con el tiempo, la apoproteína E se disocia de las partículas circulantes, convirtiéndolas en LDL que tienen la apoproteína B-100 como su única proteína.

Principalmente, el hígado capta y degrada la mayor parte del colesterol en ácidos biliares, que son los productos finales del metabolismo del colesterol. La captación de las partículas que contienen colesterol está mediada por receptores de LDL, que están presentes en elevadas concentraciones en los hepatocitos. El receptor de LDL se une tanto a la apoproteína E como a la apoproteína B-100, y es responsable de la unión y eliminación tanto de las IDL como de las LDL de la circulación. Sin embargo, la afinidad de la apoproteína E por el receptor de LDL es mayor que la de la apoproteína B-100. Como resultado, las partículas de LDL tienen una vida útil de circulación mucho más larga que las partículas de IDL (las LDL circulan durante un promedio de dos días y medio antes de su unión a los receptores de LDL en el hígado y otros tejidos). Niveles séricos elevados de LDL (el colesterol "malo") están asociados de manera positiva con la cardiopatía coronaria. Por ejemplo, en la aterosclerosis, el colesterol derivado de LDL circulantes se acumula en las paredes de las arterias, lo que conduce a la formación de placas voluminosas que inhiben el flujo de sangre hasta que finalmente se forma un coágulo, obstruyendo la arteria provocando un infarto de miocardio o accidente cerebrovascular.

\global\parskip1.000000\baselineskip

En última instancia, la cantidad de colesterol intracelular liberada de las LSL controla el metabolismo del colesterol celular. La acumulación de colesterol celular derivado de las VLDL y LDL controla tres procesos: en primer lugar, reduce la síntesis de colesterol celular desactivando la síntesis de la HMGCoA reductasa, una enzima clave en la ruta biosintética del colesterol. En segundo lugar, el colesterol derivado de LDL entrante promueve el almacenamiento de colesterol activando la ACAT, la enzima celular que convierte el colesterol en ésteres de colesterol que se depositan en gotitas de almacenamiento. En tercer lugar, la acumulación de colesterol dentro de la célula dirige un mecanismo de retroalimentación que inhibe la síntesis celular de nuevos receptores de LDL. Las células, por tanto, ajustan su complemento de receptores de LDL de modo que introducen suficiente colesterol para cumplir sus necesidades metabólicas, sin sobrecarga. (Para una revisión, véase Brown & Goldstein, In, The Pharmacological Basis Of Therapeutics, 8ª ed., Goodman & Gilman, Pergamon Press, NY, 1990, Cap. 36, págs. 874-896).

2.2. Transporte inverso de colesterol

En resumen, las células periféricas (no hepáticas) obtienen su colesterol a partir de una combinación de síntesis local y la captación de esterol preformado de las VLDL y LDL. En cambio, el transporte inverso de colesterol (TIC) es la ruta mediante la cual el colesterol de células periféricas puede devolverse al hígado para su reciclaje hasta tejidos extrahepáticos, o su excreción en el intestino en la bilis, o bien en forma modificada o bien oxidada como ácidos biliares. La ruta del TIC representa el único medio de eliminar colesterol de la mayoría de los tejidos extrahepáticos, y es crucial para mantener la estructura y función de la mayoría de las células en el cuerpo.

El TIC consiste principalmente en tres etapas: (a) salida de colesterol, la eliminación inicial del colesterol a partir de diversos grupos de células periféricas; (b) esterificación del colesterol mediante la acción de la lecitina:colesterol acetiltransferasa (LCAT), impidiendo una reentrada del colesterol que ha salido en las células; y (c) captación/envío del éster de colesterol-HDL hasta las células hepáticas. La ruta del TIC está mediada por las HDL. HDL es un término genérico para partículas de lipoproteínas que se zan por su alta densidad. Los constituyentes lipídicos principales de los complejos de HDL son diversos fosfolípidos, colesterol (éster) y triglicéridos. Los componentes de apolipoproteína más destacados son A-I y A-II, que determinan las características funcionales de las HDL; además se han observado cantidades menores de apoliproteína C-I, C-II, C-III, D, E, J, etc. Las HDL pueden existir en una amplia variedad de tamaños diferentes y mezclas diferentes de los constituyentes mencionados anteriormente, dependiendo del estado de remodelación durante la cascada metabólica del TIC.

La enzima clave implicada en la ruta del TIC es LCAT. La LCAT se produce principalmente en el hígado y circula en el plasma asociada con la fracción de HDL. La LCAT convierte el colesterol derivado de células en ésteres de colesterol que se secuestran en las HDL destinadas para su eliminación. La proteína de transferencia de ésteres de colesterol (CETP) y la proteína de transferencia de fosfolípidos (PLTP) contribuyen a remodelar adicionalmente la población de HDL circulante. La CETP puede mover los ésteres de colesterol producidos por LCAT hasta otras lipoproteínas, particularmente lipoproteínas que contienen ApoB, tales como VLDL y LDL. La PLTP suministra lecitina a las HDL. Los triglicéridos de las HDL pueden catabolizarse por la lipasa de triglicéridos hepática extracelular, y el colesterol de la lipoproteínas se elimina por el hígado mediante varios mecanismos.

Cada partícula de HDL contiene al menos una copia (y habitualmente de dos a cuatro copias) de ApoA-I. La ApoA-I se sintetiza por el hígado y el intestino delgado como preproapolipoproteína que se secreta como una proproteína que se escinde rápidamente para generar un polipéptido maduro que tiene 243 residuos de aminoácido. La ApoA-I consiste principalmente en de 6 a 8 repeticiones de 22 aminoácidos diferentes separados por un resto ligador que es a menudo prolina, y en algunos casos consiste en un tramo compuesto de varios residuos. La ApoA-I forma tres tipos de complejos estables con lípidos: complejos pequeños, escasos en lípidos denominados pre-beta-1-HDL; partículas discoidales aplanadas que contienen lípidos polares (fosfolípidos y colesterol) denominadas pre-beta-2-HDL; y partículas esféricas que contienen lípidos tanto polares como no polares, denominadas HDL esféricas o maduras (HDL_{3} y HDL_{2}). La mayoría de las HDL en la población circulante contienen tanto ApoA-I como ApoA-II (la segunda proteína principal de las HDL) y se denominan en el presente documento fracción AI/AII-HDL de las HDL. Sin embargo, la fracción de las HDL que contiene sólo ApoA-I (denominada en el presente documento fracción AI-HDL) parece ser más eficaz en el TIC. Ciertos estudios epidemiológicos apoyan la hipótesis de que la fracción AI-HDL es antiaterógena. (Parra y otros, 1992, Arterioscler. Thromb. 12:701-707; Decossin y otros, 1997, Eur. J. Clin. Invest. 27:299-307).

Aunque se desconoce el mecanismo para la transferencia del colesterol desde la superficie celular (es decir, salida de colesterol), se cree que el complejo escaso en lípidos, pre-beta-1-HDL es el aceptor preferido para el colesterol transferido desde el tejido periférico implicado en el TIC. (Véase Davidson y otros, 1994, J. Biol. Chem. 269:22975-22982; Bielicki y otros, 1992, J. Lipid Res. 33:1699-1709; Rothblat y otros, 1992, J. Lipid Res. 33:1091-1097; y Kawano y otros, 1993, Biochemistry 32:5025-5028; Kawano y otros, 1997, Biochemistry 36:9816-9825). Durante este proceso de reclutamiento de colesterol desde la superficie celular, pre-beta-1-HDL se convierte rápidamente en pre-beta-2-HDL. La PLTP puede aumentar la tasa de formación de discos de pre-beta-2, pero se carece de datos que indiquen un papel para la PLTP en el TIC. La LCAT reacciona preferiblemente con HDL discoidales y esféricas, transfiriendo el grupo 2-acilo de la lecitina u otros fosfolípidos hasta el residuo de hidroxilo libre del colesterol para general ésteres de colesterol (retenidos en las HDL) y lisolecitina. La reacción de la LCAT requiere ApoA-I como activador; es decir, ApoA-I es el cofactor natural para la LCAT. La conversión del colesterol en su éster secuestrado en las HDL impide la reentrada del colesterol en la célula, siendo el resultado que los ésteres de colesterol se destinen a su eliminación. Los ésteres de colesterol en las partículas de HDL maduras en la fracción AI-HDL (es decir, que contienen ApoA-I y no ApoA-II) se eliminan por el hígado y se procesan para dar bilis más eficazmente que los derivados de HDL que contienen tanto ApoA-I como ApoA-II (la fracción AI/AII-HDL). Esto puede deberse, en parte, a la unión más eficaz de AI-HDL a la membrana de hepatocito. Se ha supuesto la existencia de un receptor de HDL, y recientemente se identificó un receptor eliminador, SR-BI, como un receptor de HDL (Acton y otros, 1996, Science 271:518-520; Xu y otros, 1997, Lipid Res. 38:1289-1298). El SR-BI se expresa lo más abundantemente en tejidos esteroidógenos (por ejemplo, las glándulas anteriormenterrenales), y en el hígado (Landshulz y otros, 1996, J. Clin. Invest. 98:984-995; Rigotti y otros, 1996, J. Biol. Chem. 271:33545-33549).

La CETP no parece desempeñar un papel principal en el TIC, y en cambio está implicada en el metabolismo de lípidos derivados de VLDL y LDL. Sin embargo, los cambios en la actividad de CETP o sus aceptores, VLDL y LDL, desempeñan un papel en la "remodelación" de la población de HDL. Por ejemplo, en ausencia de CETP, las HDL se convierten en partículas agrandadas de las que no se produce el aclaramiento. (Para revisiones sobre el TIC y las HDL, véase Fielding & Fielding, 1995, J. Lipid Res. 36:211-228; Barrans y otros, 1996, Biochem. Biophys. Acta. 1300:73-85; Hirano y otros, 1997, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 17(6):1053-1059).

2.3. Tratamientos actuales para las dislipoproteinemias

Actualmente están disponibles varios tratamientos para disminuir el colesterol y triglicéridos séricos (véase, por ejemplo, Brown & Goldstein, citado anteriormente). Sin embargo, cada uno tiene sus propias desventajas y limitaciones en cuanto a la eficacia, efectos secundarios y población de pacientes que acceden.

Las resinas de unión a ácidos biliares son una clase de fármacos que interrumpen el reciclaje de los ácidos biliares desde el intestino hasta el hígado; por ejemplo, colestiramina (Questran Light®, Bristol-Myers Squibb), y clorhidrato de colestipol (Colestid®, The Upjohn Company). Cuando se toman por vía oral, estas resinas cargadas positivamente se unen a los ácidos biliares cargados negativamente en el intestino. Debido a que las resinas no pueden absorberse del intestino, se excretan portando los ácidos biliares con ellas. Sin embargo, el uso de tales resinas, en el mejor de los casos sólo disminuye los niveles de colesterol sérico en aproximadamente un 20%, y está asociado con efectos secundarios gastrointestinales, incluyendo estreñimiento y ciertas insuficiencias vitamínicas. Además, ya que las resinas se unen a otros fármacos, otras medicaciones orales deben tomarse al menos una hora antes o de cuatro a seis horas después de la ingestión de la resina, complicando así los regímenes farmacológicos del paciente de cardiología.

Las estatinas son agentes hipocolesterolemiantes que bloquean la síntesis de colesterol inhibiendo la HMGCoA reductasa, la enzima clave implicada en la ruta biosintética del colesterol. Las estatinas, por ejemplo, lovastatina (Mevacor®, Merck & Co., Inc.), y pravastatina (Pravachol®, Bristol-Myers Squibb Co.) se usan algunas veces en combinación con resinas de unión a ácidos biliares. Las estatinas reducen significativamente el colesterol sérico y los niveles séricos de LDL, y ralentizan la progresión de la aterosclerosis coronaria. Sin embargo, los niveles séricos de colesterol-HDL se aumentan sólo moderadamente. El mecanismo del efecto de disminución de las LDL puede implicar tanto la reducción de la concentración de VLDL como la inducción de la expresión celular del receptor de LDL, conduciendo a una reducción de la producción y/o un aumento del catabolismo de las LDL. Están asociados efectos secundarios, incluyendo disfunción hepática y renal, con el uso de estos fármacos (Physicians Desk Reference, Medical Economics Co., Inc., Montvale, N.J., 1997). Recientemente, la FDA ha aprobado la atorvastatina (un inhibidor de la HMGCoA reductasa desarrollado por Parke-Davis) (Warner Lambert) para su comercialización para tratar casos raros pero urgentes de hipercolesterolemia familiar (1995, Scrip 20(19):10).

La niacina, o ácido nicotínico, es un complejo de vitamina B soluble en agua usado como complemento dietético y agente antihiperlipidémico. La niacina disminuye la producción de VLDL y es eficaz en la disminución de LDL. En algunos casos, se usa en combinación con resinas de unión a ácidos biliares. La niacina puede aumentar las HDL cuando se usa a dosis adecuadas, sin embargo, su utilidad está limitada por efectos secundarios graves cuando se usa a dosis altas de ese tipo.

Los fibratos son una clase de fármacos hipolipemiantes usados para tratar diversas formas de hiperlipidemia (es decir, triglicéridos séricos elevados) que también pueden estar asociadas con hipercolesterolemia. Los fibratos parecen reducir la fracción de VLDL y aumentar moderadamente HDL; sin embargo, los efectos de estos fármacos sobre el colesterol sérico son variables. En los Estados Unidos, se han aprobado los fibratos para su uso como fármacos antilipidémicos, pero no han recibido aprobación como agentes para la hipercolesterolemia. Por ejemplo, el clofibrato (Atromid-S®, Wyeth-Ayerst Laboratories) es un agente antilipidémico que actúa (mediante un mecanismo desconocido) para disminuir los triglicéridos séricos reduciendo la fracción de VLDL. Aunque el colesterol sérico puede reducirse en ciertas subpoblaciones de pacientes, la respuesta bioquímica frente al fármaco es variable, y no siempre es posible predecir qué pacientes obtendrán resultados favorables. No se ha demostrado que Atromid-S® sea eficaz para la prevención de la cardiopatía coronaria. El fármaco química y farmacológicamente relacionado, gemfibrozil (Lopid®, Parke-Davis) es un agente regulador de lípidos que disminuye moderadamente los triglicéridos séricos y el colesterol-VLDL, y aumenta moderadamente el colesterol-HDL (las subfracciones HDL_{2} y HDL_{3} así como tanto la ApoA-I como la ApoA-II (es decir, la fracción AI/AII-HDL)). Sin embargo, la respuesta lipídica es heterogénea, especialmente entre poblaciones de pacientes diferentes. Además, aunque se observó prevención de la cardiopatía coronaria en pacientes varones entre 40-55 años sin historia o síntomas de existencia de cardiopatía coronaria, no está claro hasta qué punto pueden extrapolarse estos hallazgos a otras poblaciones de pacientes (por ejemplo, mujeres, varones de mayor o menor edad). De hecho, no se observó eficacia en pacientes con cardiopatía coronaria establecida. Están asociados efectos secundarios graves con el uso de fibratos, incluyendo toxicidad tal como tumores malignos, (especialmente cáncer gastrointestinal), enfermedad de la vesícula biliar y un aumento de la incidencia en la mortalidad no coronaria. Estos fármacos no están indicados para el tratamiento de pacientes con LDL elevadas o HDL bajas como su única anomalía lipídica (Physician's Desk Reference, 1997, Medical Economics Co., Inc. Montvale, N.J.).

La terapia oral de sustitución de estrógenos puede considerarse para hipercolesterolemia moderada en mujeres postmenopaúsicas. Sin embargo, los aumentos en HDL pueden ir acompañados de un aumento en triglicéridos. El tratamiento con estrógenos se limita, por supuesto, a una población específica de pacientes (mujeres postmenopaúsicas) y está asociado con efectos secundarios graves incluyendo inducción de neoplasias malignas, enfermedad de la vesícula biliar, enfermedad tromboembólica, adenoma hepático, tensión arterial elevada, intolerancia a la glucosa e hipercalcemia.

Por tanto, existe una necesidad de desarrollar fármacos más seguros que sean eficaces en la disminución del colesterol sérico, el aumento de los niveles séricos de HDL, en la prevención de la cardiopatía coronaria, y/o el tratamiento de la enfermedad existente, especialmente aterosclerosis.

2.4. ApoA-I como diana

Ninguno de los fármacos disponibles actualmente para disminuir el colesterol eleva de manera segura los niveles de HDL y estimulan el TIC; la mayoría parece funcionar sobre la ruta de transporte del colesterol, modulando la ingesta en la dieta, el reciclaje, la síntesis de colesterol y la población de VLDL.

Aunque es deseable encontrar fármacos que estimulen la salida y eliminación del colesterol, existen varias posibles dianas en el TIC, por ejemplo, LCAT, HDL y sus diversos componentes (ApoA-I, ApoA-II y fosfolípidos), PLTP y CETP, y no se sabe qué diana sería la más eficaz para lograr perfiles de lipoproteínas y efectos protectores deseables. La perturbación de cualquier componente individual en la ruta del TIC afecta en última instancia a la composición de las poblaciones de lipoproteínas circulantes, y a la eficacia del TIC.

Varias líneas de pruebas basadas en los datos obtenidos in vivo implican a las HDL y a su principal componente proteico, ApoA-I, en la prevención de lesiones ateroscleróticas, y potencialmente, en la regresión de las placas, haciéndolas dianas atractivas para intervención terapéutica. En primer lugar, existe una correlación inversa entre la concentración sérica de ApoA-I (HDL) y la aterogénesis en el hombre (Gordon & Rifkind, 1989, N. Eng. J. Med. 321:1311-1316; Gordon y otros, 1989, Circulation 79: 8-15). De hecho, se han asociado subpoblaciones específicas de HDL con un riesgo reducido de aterosclerosis en seres humanos (Miller, 1987, Amer. Heart 113:589-597; Cheung y otros, 1991, Lipid Res. 32:383-394); Fruchart & Ailhaud, 1992, Clin. Chem. 38:79).

En segundo lugar, los estudios en animales apoyan el papel protector de la ApoA-I (HDL). El tratamiento de conejos alimentados con colesterol con ApoA-I o HDL redujo el desarrollo y la progresión de las placas (franjas grasas) en los conejos alimentados con colesterol. (Koizumi y otros, 1988, J. Lipid Res. 29:1405-1415; Badimon y otros, 1989, Lab. Invest. 60:455-461; Badimon y otros, 1990, J. Clin. Invest. 85:1234-1241). Sin embargo, la eficacia variaba dependiendo de la fuente de HDL (Beitz y otros, 1992, Prostaglandins, Leukotrienes and Essential Fatty Acids 47:149-152; Mezdour y otros, 1995, Atherosclerosis 113:237-246).

En tercer lugar, se obtuvieron pruebas directas del papel de la ApoA-I a partir de experimentos que implicaban animales transgénicos. La expresión del gen humano de la ApoA-I transferido a ratones predispuestos genéticamente a aterosclerosis inducida por la dieta les protegió frente al desarrollo de lesiones aórticas (Rubin y otros, 1991, Nature 353:265-267). También se demostró que el transgén de ApoA-I suprimía la aterosclerosis en ratones deficientes en ApoE y en ratones transgénicos en Apo(a) (Paszty y otros, 1994, J. Clin. Invest. 94:899-903; Plump y otros, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:9607-9611; Liu y otros, 1994, J. Lipid Res. 35:2263-2266). Se observaron resultados similares en conejos transgénicos que expresaban la ApoA-I humana (Duverger, 1996, Circulation 94:713-717; Duverger y otros, 1996, Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 16:1424-1429), y en ratas transgénicas en las que niveles elevados de ApoA-I humana protegieron frente a la aterosclerosis e inhibieron la reestenosis tras angioplasia de balón (Burkey y otros, 1992, Circulation, Supl. I, 86:I-472, resumen nº 1876; Burkey y otros, 1995, J. Lipid Res. 36: 1463-1473).

La AI-HDL parece ser más eficaz en el TIC que la fracción AI/AII-HDL. Los estudios con ratones transgénicos para la ApoA-I o para la ApoI y la ApoA-II (AI/AII) humanas mostraron que la composición proteica de HDL afecta significativamente a su papel (AI-HDL es más antiaterógena que AI/AII-HDL) (Schultz y otros, 1993, Nature 365:762-764). Estudios paralelos que implicaban a ratones transgénicos que expresaban el gen de la LCAT humana demuestran que aumentos moderados en la actividad de LCAT cambian significativamente los niveles de colesterol de las lipoproteínas, y que LCAT tiene una preferencia significativa por las HDL que contienen ApoA-I (Francone y otros, 1995, J. Clinic. Invest. 96:1440-1448; Berard y otros, 1997, Nature Medicine 3(7):744-749). Mientras que estos datos apoyan un papel significativo de la ApoA-I en la activación de LCAT y la estimulación del TIC, estudios adicionales demuestran un panorama más complicado: un componente principal de las HDL que modula la salida de colesterol de las células son los fosfolípidos (Fournier y otros, 1996, J. Lipid Res. 37:1704-1711).

En vista del posible papel de las HDL, es decir, tanto de ApoA-I como sus fosfolípidos asociados, en la protección frente a la enfermedad aterosclerótica, se iniciaron ensayos clínicos en humanos que utilizaron ApoA-I producida de manera recombinante, se interrumpieron y aparentemente volvieron a comenzar por UCB de Bélgica (Pharmaprojects, 27 de octubre de 1995; IMS R&D Focus, 30 de junio de 1997; Drug Status Update, 1997, Atherosclerosis 2(6):261-265); véase también M. Eriksson en el congreso, "The Role of HDL in Disease Prevention", 7-9 de noviembre de 1996, Fort Worth; Lacko & Miller, 1997, J. Lip. Res. 38:1267-1273; y el documento WO94/13819) y se iniciaron e interrumpieron por Bio-Tech (Pharmaprojects, 7 de abril de 1989). También se intentaron ensayos usando ApoA-I para tratar el choque septicémico (Opal, "Reconstituted HDL as a Treatment Strategy for Sepsis", IBC's 7th International Conference on Sepsis, 28-30 de abril de 1997, Washington, D.C.; Gouni y otros, 1993, J. Lipid Res. 94:139-146; Levine, documento WO96/04916). Sin embargo, existen muchas dificultades asociadas con la producción y el uso de ApoA-I, haciéndola menos ideal como fármaco; por ejemplo, la ApoA-I es una proteína grande que es difícil y cara de producir; deben superarse problemas significativos de fabricación y reproducibilidad con respecto a la estabilidad durante el almacenamiento, la administración de un producto activo y la semivida in vivo.

En vista de estas desventajas, se han realizado intentos de preparar péptidos que imiten a la ApoA-I. Ya que las actividades clave de la ApoA-I se han atribuido a la presencia de repeticiones múltiples de una característica estructural secundaria única en la proteína (una hélice \alpha anfipática de clase A) (Segrest, 1974, FEBS Lett. 38:247-253), la mayoría de los esfuerzos para diseñar péptidos que imiten la actividad de ApoA-I se han centrado en el diseño de péptidos que formen hélices \alpha anfipáticas de tipo clase A.

Las hélices \alpha anfipáticas de tipo clase A son únicas porque están agrupados residuos de aminoácido cargados positivamente en la superficie de separación hidrófoba-hidrófila y están agrupados residuos de aminoácido cargados negativamente en el centro de la cara hidrófila. Además, los péptidos \alpha-helicoidales de clase A tienen un ángulo hidrófobo inferior a 180º (Segrest y otros, 1990, PROTEINS: Structure, Function and Genetics 8:103-117). Las estrategias iniciales de novo para diseñar miméticos de ApoA-I no se basaban en las secuencias primarias de apolipoproteínas que se producían de manera natural, si no en su lugar en la incorporación de estas características de hélice de clase A en las secuencias de los análogos de péptido, así como algunas de las propiedades de los dominios de ApoA-I (véase, por ejemplo., Davidson y otros, 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:13605-13610; Rogers y otros, 1997, Biochemistry 36:288-300; Lins y otros, 1993, Biochim. Biophys. Acta biomembranes 1151:137-142; Ji y Jonas, 1995, J. Biol. Chem. 270:11290-11297; Collet y otros, 1997, Journal of Lipid Research, 38:634-644; Sparrow y Gotto, 1980, Ann. N.Y. Acad. Sci. 348:187-211; Sparrow y Gotto, 1982, CRC Crit. Rev. Biochem. 13:87-107; Sorci-Thomas y otros, 1993, J. Biol. Chem. 268:21403-21409; Wang y otros, 1996, Biochim. Biophys. Acta 174-184; Minnich y otros, 1992, J. Biol. Chem. 267:16553-16560; Holvoet y otros, 1995, Biochemistry 34:13334-13342; Sorci-Thomas y otros, 1997, J. Biol. Chem. 272(11):7278-7284; y Frank y otros, 1997, Biochemistry 36:1798-1806).

En un estudio, Fukushima y otros sintetizaron un péptido de 22 residuos compuesto completamente por residuos de Glu, Lys y Leu dispuestos periódicamente de modo que formaban una hélice \alpha anfipática con caras hidrófila e hidrófoba iguales ("péptido ELK") (Fukushima y otros, 1979, J. Amer. Chem. Soc. 101(13):3703-3704; Fukushima y otros, 1980, J. Biol. Chem. 255: 10651-10657). El péptido ELK comparte un 41% de homología de secuencia con el fragmento 198-219 de la ApoA-I. Tal como se estudió mediante ultrafiltración cuantitativa, cromatografía de permeación en gel y dicroísmo circular, se demostró que este péptido ELK se asocia de manera eficaz con fosfolípidos e imita algunas de las propiedades físicas y químicas de ApoA-I (Kaiser y otros, 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:1137-1140; Kaiser y otros, 1984, Science 223:249-255; Fukushima y otros, 1980, citado anteriormente; Nakagawa y otros, 1985, J. Am. Chem. Soc. 107:7087-7092). Yokoyama y otros concluyeron a partir de tales estudios que el factor crucial para la activación de LCAT es simplemente la presencia de una estructura anfipática suficientemente grande (Yokoyama y otros, 1980, J. Biol. Chem. 255(15):7333-7339). Se encontró más tarde que un dímero de este péptido de 22 residuos imitaba más estrechamente a la ApoA-I que el monómero; basándose en estos resultados, se sugirió que el 44-mero, que está interrumpido en el medio por un interruptor de hélice (o bien Gly o bien Pro), representaba el dominio funcional mínimo en la ApoA-I (Nakagawa y otros, 1985, citado anteriormente).

Otro estudio implicaba a los péptidos anfipáticos modelo denominados "péptidos LAP" (Pownall y otros, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77(6):3154-3158; Sparrow y otros, 1981, En: Peptides: Synthesis-Structure-Function, Roch y Gross, Eds., Pierce Chem. Co., Rockford, IL, 253-256). Basándose en estudios de unión a lípidos con fragmentos de apolipoproteínas nativas, se diseñaron varios péptidos LAP, denominados LAP-16, LAP-20 y LAP-24 (que contenían 16, 20 y 24 residuos de aminoácido, respectivamente). Estos péptidos anfipáticos modelo no comparten homología de secuencia con las apolipoproteínas y se diseñaron para que tuviesen caras hidrófilas organizadas de una manera diferente a los dominios helicoidales anfipáticos de tipo clase A asociados con las apolipoproteínas (Segrest y otros, 1992, J. Lipid Res. 33:141-166). A partir de estos estudios, los autores concluyeron que es necesaria una longitud mínima de 20 residuos para conferir propiedades de unión a lípidos a los péptidos anfipáticos modelo.

Los estudios con mutantes de LAP20 que contenían un residuo de prolina en posiciones diferentes en la secuencia indicaron que existe una relación directa entre la unión a lípidos y la activación de LCAT, pero que el potencial helicoidal de un péptido solo no conduce a la activación de LCAT (Ponsin y otros, 1986 J. Biol. Chem. 261(20):9202-9205). Además, la presencia de este interruptor de hélice (Pro) cercano a la mitad del péptido redujo su afinidad por las superficies de fosfolípidos así como su capacidad para activar LCAT. Aunque se demostró que ciertos de los péptidos LAP se unían a fosfolípidos (Sparrow y otros, citado anteriormente), existe controversia sobre el grado hasta el que los péptidos LAP son helicoidales en presencia de lípidos (Buchko y otros, 1996, J. Biol. Chem. 271(6):3039-3045; Zhong y otros, 1994, Peptide Research 7(2): 99-106).

Segrest y otros han sintetizado péptidos compuestos por de 18 a 24 residuos de aminoácido que no comparten homología de secuencia con las hélices de la ApoA-I (Kannelis y otros, 1980, J. Biol. Chem. 255(3):11464-11472; Segrest y otros, 1983, J. Biol. Chem. 258:2290-2295). Las secuencias se diseñaron específicamente para que imitasen los dominios helicoidales anfipáticos de apolipoproteínas intercambiables de clase A en cuanto al momento hidrófobo (Eisenberg y otros, 1982, Nature 299:371-374) y la distribución de carga (Segrest y otros, 1990, Proteins 8:103-117; patente estadounidense número 4.643.988). Se diseñó un péptido de 18 residuos, el péptido "18A", para que fuese una hélice \alpha de clase A modelo (Segrest y otros, 1990, citado anteriormente). Los estudios con estos péptidos y otros péptidos que tienen una distribución de carga invertida, como el péptido "18R", han mostrado constantemente que la distribución de carga es crítica para la actividad; los péptidos con una distribución de carga invertida muestran una afinidad por lípidos disminuida en comparación con los miméticos de clase A de 18A y un contenido helicoidal inferior en presencia de lípidos (Kanellis y otros, 1980, J. Biol. Chem. 255: 11464-11472; Anantharamaiah y otros, 1985, J. Biol. Chem. 260:10248-10255; Chung y otros, 1985, J. Biol. Chem. 260: 10256-10262; Epand y otros, 1987, J. Biol. Chem. 262:9389-9396; Anantharamaiah y otros, 1991, Adv. Exp. Med. Biol. 285:131-140).

Otros péptidos sintéticos que no comparten homología de secuencia con las apolipoproteínas que se han propuesto con éxito limitado incluyen dímeros y trímeros del péptido 18A (Anantharamaiah y otros, 1986, Proteins of Biological Fluids 34:63-66), los péptidos GALA y EALA (Subbarao y otros, 1988, PROTEINS: Structure, Function and Genetics 3: 187-198) y los péptidos ID (Labeur y otros, 1997, Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology 17:580-588) y el péptido 18AM4 (Brasseur y otros, 1993, Biochim. Biophys. Acta 1170:1-7).

También se ha diseñado un péptido "consenso" que contiene 22 residuos de aminoácido basándose en las secuencias de las hélices de la ApoA-I humana (Anantharamaiah y otros, 1990, Arteriosclerosis 10(1):95-105; Venkatachalapathi y otros, 1991, Mol. Conformation and Biol. Interactions, Indian Acad. Sci. B:585-596). La secuencia se construyó identificando el residuo más prevalente en cada posición de las hélices supuestas de la ApoA-I humana. Al igual que los péptidos descritos anteriormente, la hélice formada por este péptido tiene residuos de aminoácido cargados positivamente agrupados en la superficie de contacto hidrófila-hidrófoba, residuos de aminoácido cargados negativamente agrupados en el centro de la cara hidrófila y un ángulo hidrófobo inferior a 180ºC. Aunque un dímero de este péptido es algo eficaz en la activación de LCAT, el monómero mostró malas propiedades de unión a lípidos (Venkatachalapathi y otros, 1991, citado anteriormente).

Basándose principalmente en estudios in vitro con los péptidos descritos anteriormente, ha surgido un conjunto de "normas" para diseñar péptidos que imitan la función de ApoA-I. De manera significativa, se cree que se requiere una hélice \alpha anfipática que tenga residuos cargados positivamente agrupados en la superficie de contacto hidrófila-hidrófoba y residuos de aminoácido cargados negativamente agrupados en el centro de la cara hidrófila para la afinidad por lípidos y la activación de LCAT (Venkatachalapathi y otros, 1991, citado anteriormente). Anantharamaiah y otros también han indicado que el residuo de Glu cargado negativamente en la posición 13 del péptido de 22-meros consenso, que está situado dentro de la cara hidrófoba de la hélice \alpha desempeña un papel importante en la activación de LCAT (Anantharamaiah y otros, 1991, citado anteriormente). Además, Brasseur ha indicado que se requiere un ángulo hidrófobo (ángulo pho) inferior a 180º para una estabilidad óptima del complejo de lípido-apolipoproteína, y también explica la formación de partículas discoidales que tienen los péptidos alrededor del borde de la bicapa lipídica (Brasseur, 1991, J. Biol. Chem. 66(24):16120-16127). Rosseneu y otros también han insistido en que se requiere un ángulo hidrófobo inferior a 180º para la activación de LCAT (documento WO93/25581).

Sin embargo, a pesar de estas "normas", hasta la fecha, nadie ha diseñado o producido un péptido tan activo como ApoA-I, teniendo el mejor menos del 40% de la actividad de ApoA-I según se mide mediante el ensayo de activación de LCAT descrito en el presente documento. NO Ninguno de los "miméticos" de péptido descritos en la bibliografía ha demostrado ser útil como fármaco.

En vista de lo anterior, existe una necesidad de desarrollo de un agonista de ApoA-I estable que imite la actividad de ApoA-I y que sea relativamente sencillo y económico de producir. Sin embargo, no se han aclarado las "normas" para diseñar miméticos de ApoA-I eficaces y se desconocen los principios para diseñar moléculas orgánicas con la función de la ApoA-I.

3. Sumario de la invención

La invención se refiere a agonistas de ApoA-I que pueden formar hélices \alpha anfipáticas que imitan la actividad de ApoA-I, con actividades específicas, es decir, unidades de actividad (activación de LCAT/unidad de masa), que se aproximan a o superan las de la molécula nativa. En particular, los agonistas de ApoA-I de la invención son péptidos o análogos de péptido que: forman hélices anfipáticas (en presencia de lípidos), se unen a lípidos, forman complejos de tipo HDL o de tipo pre-\beta, activan la LCAT, aumentan los niveles séricos de las fracciones de HDL y promueven la salida de colesterol.

La invención se basa, en parte, en el diseño y descubrimiento de los solicitantes de péptidos que imitan la función de ApoA-I. Los péptidos de la invención se diseñaron basándose en la estructura helicoidal supuesta y las propiedades anfipáticas de la secuencia consenso de 22 aminoácidos que se derivó a partir de las repeticiones helicoidales de la ApoA-I. De manera sorprendente, los péptidos de la invención tienen una actividad específica muy por encima de la notificada para los péptidos derivados de ApoA-I descritos en la bibliografía. De hecho, algunas realizaciones de la invención se aproximan al 100% de la actividad de la ApoA-I nativa, mientras que los superagonistas descritos en el presente documento exceden la actividad específica de la ApoA-I.

\newpage

La invención se ilustra mediante ejemplos de trabajo que describen la estructura, la preparación y el uso de péptidos anfipáticos particulares que forman hélices (en presencia de lípidos), se unen a lípidos, forman complejos y aumentan la actividad de LCAT. Basándose en la estructura y actividad de las realizaciones puestas como ejemplo, los solicitantes han ideado un conjunto de "normas" que pueden usarse para diseñar formas alteradas o mutadas que también están dentro del alcance de la invención.

La invención también se refiere a formulaciones farmacéuticas que contienen tales agonistas de ApoA-I (o bien como péptidos o bien complejos de péptido-lípido) como principio activo, así como a métodos para preparar tales formulaciones y a su uso para tratar enfermedades asociadas con la dislipoproteinemia (por ejemplo, enfermedades cardiovasculares, aterosclerosis, síndrome metabólico), reestenosis o endotoxemia (por ejemplo, choque septicémico).

3.1. Abreviaturas

Tal como se usa en el presente documento, las abreviaturas para los aminoácidos L-enantioméricos codificados genéticamente son convencionales y son tal como sigue:

1

Las abreviaturas usadas para los enantiómeros D de los aminoácidos codificados genéticamente son las equivalentes en minúsculas de los símbolos de una letra. Por ejemplo, "R" designa L-arginina y "r" designa D-arginina.

3.2. Definiciones

Tal como se usa en el presente documento, los siguientes términos tendrán los siguientes significados:

"Alquilo": se refiere a un radical hidrocarbonado saturado ramificado, de cadena lineal o cíclico. Los grupos alquilo típicos incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, isopentilo, hexilo y similares. En realizaciones preferidas, los grupos alquilo son alquilo (C_{1}-C_{6}).

"Alquenilo": se refiere a un radical hidrocarbonado insaturado ramificado, de cadena lineal o cíclico que tiene al menos un doble enlace carbono-carbono. El radical puede estar o bien en conformación cis o bien en trans alrededor del/de los doble(s) enlace(s). Los grupos alquenilo típicos incluyen, pero no se limitan a, etenilo, propenilo, isopropenilo, butenilo, isobutenilo, terc-butenilo, pentenilo, hexenilo y similares. En realizaciones preferidas, el grupo alquenilo es alquenilo (C_{1}-C_{6}).

"Alquinilo": se refiere a un radical hidrocarbonado insaturado ramificado, de cadena lineal o cíclico que tiene al menos un triple enlace carbono-carbono. Los grupos alquinilo típicos incluyen, pero no se limitan a, etinilo, propinilo, butinilo, isobutinilo, pentinilo, hexinilo y similares. En realizaciones preferidas, el grupo alquinilo es alquinilo (C_{1}-C_{6}).

"Arilo": se refiere a un radical hidrocarbonado insaturado cíclico que tiene un sistema electrónico \pi conjugado. Los grupos arilo típicos incluyen, pero no se limitan a, penta-2,4-dieno, fenilo, naftilo, antracilo, azulenilo, crisenilo, coronenilo, fluorantenilo, indacenilo, indenilo, ovalenilo, perilenilo, fenalenilo, fenantrenilo, picenilo, pleiadenilo, pirenilo, pirantrenilo, rubicenilo y similares. En realizaciones preferidas, el grupo arilo es arilo (C_{5}-C_{20}), prefiriéndose particularmente (C_{5}-C_{10}).

"Alcarilo": se refiere a un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo de cadena lineal en el que uno de los átomos de hidrógeno unidos a un carbono terminal está sustituido por un resto arilo. Los grupos alcarilo típicos incluyen, pero no se limitan a, bencilo, bencilideno, bencilidina, bencenobencilo, naftenobencilo y similares. En realizaciones preferidas, el grupo alcarilo es alcarilo (C_{6}-C_{26}), es decir, el resto alquilo, alquenilo o alquinilo del grupo alcarilo es (C_{1}-C_{6}) y el resto arilo es (C_{5}-C_{20}). En realizaciones particularmente preferidas, el grupo alcarilo es alcarilo (C_{6}-C_{13}), es decir, el resto alquilo, alquenilo o alquinilo del grupo alcarilo es (C_{1}-C_{3}) y el resto arilo es (C_{5}-C_{10}).

"Heteroarilo": se refiere a un resto arilo en el que uno o más átomos de carbono están sustituidos por otro átomo, tal como N, P, O, S, As, Se, Si, Te, etc. Los grupos heteroarilo típicos incluyen, pero no se limitan a, acridarsina, acridina, arsantridina, arsindol, arsindolina, carbazol, \beta-carbolina, cromeno, cinolina, furano, imidazol, indazol, indol, indolizina, isoarsindol, isoarsinolina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isofosfoindol, isofosfinolina, isoquinolina, isotiazol, isoxazol, naftiridina, perimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, fosfoindol, fosfinolina, ftalazina, pteridina, purina, pirano, pirazina, pirazol, piridazina, piridina, pirimidina, pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quinolizina, quinoxalina, selenofeno, telurofeno, tiofeno y xanteno. En realizaciones preferidas, el grupo heteroarilo es un heteroarilo de 5-20 miembros, prefiriéndose particularmente arilo de 5-10 miembros.

"Alq-heteroarilo": se refiere a un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo de cadena lineal en el que uno de los átomos de hidrógeno unidos a un átomo de carbono terminal está sustituido por un resto heteroarilo. En realizaciones preferidas, el grupo alq-heteroarilo es alq-heteroarilo de 6-26 miembros, es decir, el resto alquilo, alquenilo o alquinilo del alq-heteroarilo es (C_{1}-C_{6}) y el heteroarilo es un heteroarilo de 5-20 miembros. En realizaciones particularmente preferidas, el alq-heteroarilo es alq-heteroarilo de 6-13 miembros, es decir, el resto alquilo, alquenilo o alquinilo es un heteroarilo de 5-10 miembros.

"Alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alcarilo, heteroarilo o alq-heteroarilo sustituido": se refiere a un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alcarilo, heteroarilo o alq-heteroarilo en el que uno o más átomos de hidrógeno están sustituidos por otro sustituyente. Los sustituyentes preferidos incluyen -OR, -SR, -NRR, -NO_{2}, -CN, halógeno, -C(O)R, -C(O)OR y -C(O)NR, en los que cada R es independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alcarilo, heteroarilo o alq-heteroarilo.

4. Breve descripción de las figuras

La figura 1A es un diagrama de rueda helicoidal de Schiffer-Edmundson de una hélice \alpha anfipática idealizada en el que los círculos en blanco representan residuos de aminoácido hidrófilos y los círculos sombreados representan residuos de aminoácido hidrófobos.

La figura 1B es un diagrama de red helicoidal de la hélice anfipática idealizada de la figura 1A.

La figura 1C es un diagrama de cilindro helicoidal de la hélice anfipática idealizada de la figura 1A.

La figura 2A es un diagrama de rueda helicoidal de Schiffer-Edmundson del péptido del núcleo de estructura (I) que ilustra la anfipaticidad de la hélice (los círculos en blanco representan residuos de aminoácido hidrófilos, los círculos sombreados representan residuos de aminoácido hidrófobos y los círculos parcialmente sombreados representan residuos de aminoácido o bien hidrófilos o bien hidrófobos).

La figura 2B es un diagrama de red helicoidal del péptido del núcleo de estructura (I) que ilustra la cara hidrófoba de la hélice.

La figura 2C es un diagrama de red helicoidal del péptido del núcleo de estructura (I) que ilustra la cara hidrófila de la hélice.

\newpage

\global\parskip0.900000\baselineskip

La figura 3A es un diagrama de red helicoidal que ilustra la cara hidrófila del péptido de 22-meros consenso de Segrest (PVLDEFREKLNEELEALKQKLK; SEQ ID NO:75).

La figura 3B es un diagrama de red helicoidal que ilustra la cara hidrófila del péptido 4 (PVLDLFRELLNELLEALKQKLK; SEQ ID NO:4) del núcleo a modo de ejemplo.

La figura 4A es un diagrama de red helicoidal que ilustra la cara hidrófoba del péptido de 22-meros consenso de Segrest (SEQ ID NO:75).

La figura 4B es un diagrama de red helicoidal que ilustra la cara hidrófoba del péptido 4 (SEQ ID NO:4) del núcleo a modo de ejemplo.

La figura 5A es un diagrama de rueda helicoidal de Schiffer-Edmundson del péptido de 22-meros consenso de Segrest (SEQ ID NO:75).

La figura 5B es un diagrama de rueda helicoidal de Schiffer-Edmundson del péptido 4 (SEQ ID NO:4) del núcleo a modo de ejemplo.

La figura 6A es un modelo por ordenador de dos péptidos 4 (SEQ ID NO:4) dispuestos de una manera antiparalela en el que los residuos de Glu-8 y Gln-19 están destacados para ilustrar la capacidad de estos dos péptidos para formar puentes de hidrógeno intermoleculares cuando se unen a lípidos.

La figura 6B es un modelo por ordenador de dos péptidos 102 (PVLDLFRELLNLXLEALKEKLK; SEQ ID NO:102) dispuestos de una manera antiparalela en el que los residuos de Glu-8 y Glu-19 están destacados para ilustrar la incapacidad de estos dos péptidos para formar puentes de hidrógeno intermoleculares cuando se unen a lípidos.

La figura 7A ilustra una red ramificada de orden terciario de la invención.

La figura 7B ilustra una red ramificada de orden cuaternario de la invención.

La figura 7C ilustra una red ramificada de orden mixto de la invención.

La figura 7D ilustra redes ramificadas de "árbol de Lys" a modo de ejemplo de la invención.

La figura 8A es un gráfico que ilustra las diferencias entre los desplazamientos químicos de H\alpha observados y los desplazamientos químicos H\alpha de espiral aleatoria para el péptido 4 (SEQ ID NO:4) y el péptido de 22-meros consenso de Segrest (SEQ ID NO:75).

La figura 8B es un gráfico que ilustra las diferencias entre los desplazamientos químicos de protón de amida observados y los desplazamientos químicos de protón de amida de espiral aleatoria tabulados para el péptido 4 (SEQ ID NO:4) y el péptido de 22-meros consenso de Segrest (SEQ ID NO:75).

La figura 8C es un dibujo que ilustra la relación periódica entre los desplazamientos químicos del protón H\alpha del péptido 4 (SEQ ID NO:4) y su conformación \alpha-helicoidal.

Las figuras 9A-9D proporcionan cromatogramas en gel de HDL humanas incubadas durante 2 h a 37ºC en tampón según se mide mediante la absorbancia (-) y en presencia del péptido 4 marcado con ^{14}C según se mide mediante la absorbancia (- - -) o el recuento radiométrico de ^{14}C (\ding{117}). Los cromatogramas se obtuvieron a unas razones de masa de péptido:HDL de 1:15 (figura 9A), 1:10 (figura 9B), 1:5 (figura 9C) y 1:3 (figura 9D).

La figura 9E es un cromatograma de filtración en gel control del péptido 4 marcado con ^{14}C libre, no unido, según se mide mediante la absorbancia (- - -) y el recuento radiométrico de ^{14}C (\ding{117}).

La figura 9F proporciona cromatogramas de diferencia de filtración en gel que ilustran la diferencia entre cada uno de los cromatogramas de absorbancia de HDL tratadas con péptido presentados en las figuras 9A (- - -), 9B (-), 9C (- - -) y 9D (-) y el cromatograma control de la figura 9E (los valores positivos indican una absorbancia superior en la muestra tratada; los valores negativos indican una absorbancia mayor en la muestra control).

La figura 10 es un gráfico que ilustra el perfil de lipoproteínas de conejos a los que se inyectaron 10 mg/kg de péptido 4 (SEQ ID NO: 4) (en forma de complejos de péptido/DPPC).

La figura 11A es un dibujo que describe los diversos estados de agregación y complejos de péptido-lípido que pueden obtenerse con los agonistas de ApoA-I de la invención. Izquierda: proceso de multimerización de los péptidos que resulta de la interacción de varias hélices peptídicas y que conduce a la formación de oligómeros en condiciones de concentración peptídica, pH y fuerza iónica definidos. Centro: la interacción de los péptidos (en cualquiera de estos estados de agregación) con entidades lipídicas (tales como las SUV) conduce a la reorganización de lípidos. Derecha: cambiando la razón molar de lípido:proteína, pueden obtenerse diferentes tipos de complejos de péptido-lípido, desde micelas conjuntas de lípido-péptido a bajas razones de lípido-péptido, hasta partículas discoidales y finalmente hasta complejos multilamelares grandes a razones de lípido:péptido cada vez mayores.

\global\parskip1.000000\baselineskip

La figura 11B ilustra el modelo aceptado generalmente para complejos de péptido-lípido discoidales formados en un intervalo definido de razones de lípido:péptido. Cada péptido que rodea el borde del disco está en contacto estrecho con sus dos vecinos más próximos.

5. Descripción detallada de la invención

Los agonistas de ApoA-I de la invención imitan la función y actividad de la ApoA-I. Forman hélices anfipáticas (en presencia de lípidos), se unen a lípidos, forman complejos de tipo HDL o de tipo pre-\beta, activan la LCAT, aumentan la concentración sérica de HDL y promueven la salida de colesterol. La función biológica de los péptidos se correlaciona con su estructura helicoidal, o su conversión en estructuras helicoidales en presencia de lípidos.

Los agonistas de ApoA-I de la invención pueden prepararse en formas farmacéuticas unitarias o a granel estables, por ejemplo, productos liofilizados, que pueden reconstituirse antes de su uso in vivo o volverse a formular. La invención incluye las formulaciones farmacéuticas y el uso de tales preparaciones en el tratamiento de la hiperlipidemia, hipercolesterolemia, cardiopatía coronaria, aterosclerosis y otros estados tales como endotoxemia que produce choque septicémico.

La invención se ilustra mediante ejemplos de trabajo que demuestran que los agonistas de ApoA-I de la invención se asocian con el componente de HDL del plasma, y pueden aumentar la concentración de HDL y partículas pre-\beta. Los agonistas de ApoA-I de la invención aumentan la salida de colesterol celular. Los agonistas son extremadamente eficaces en la activación de LCAT, y por tanto promueven el TIC. El uso de los agonistas de ApoA-I de la invención in vivo en modelos animales da como resultado un aumento de la concentración sérica de HDL.

La invención se expone en más detalle en las subsecciones a continuación, que describen: la composición y estructura de los agonistas peptídicos de la ApoA-I; la zación estructural y funcional; los métodos de preparación de formulaciones de dosificación unitaria y a granel; y los métodos de uso.

5.1. Estructura y función peptídicas

Los agonistas de ApoA-I de la invención son generalmente péptidos, o análogos de los mismos, que pueden formar hélices \alpha anfipáticas en presencia de lípidos y que imitan la actividad de la ApoA-I. Los agonistas tienen como su característica principal un péptido del "núcleo" compuesto por de 15 a 29 residuos de aminoácido, preferiblemente 22 residuos de aminoácido, o un análogo del mismo en el que al menos un enlace amida en el péptido está sustituido por una amida sustituida, un isóstero de una amida o un mimético de amida.

Los agonistas de ApoA-I de la invención se basan, en parte, en el sorprendente descubrimiento de los solicitantes de que la alteración de ciertos residuos de aminoácido en la secuencia primaria de la secuencia consenso de 22-mero de Venkatachalapathi y otros, 1991, Mol. Conformation and Biol. Interactions, Indian Acad. Sci. B:585-596 (PVLDEFREKLNEELEALKQKLK; SEQ ID NO:75; más adelante en el presente documento "22-mero consenso de Segrest" o "22-mero consenso") que se pensaba que era crítica para la actividad, produce péptidos sintéticos que muestran actividades que se aproximan a, o en algunas realizaciones incluso superan, la actividad de la ApoA-I nativa. En particular, los solicitantes han descubierto que la sustitución de tres residuos de aminoácido cargados en el péptido de 22-meros consenso de Segrest (Glu-5, Lys-9 y Glu-13) por un residuo de Leu hidrófobo proporciona péptidos que imitan las propiedades estructurales y funcionales de ApoA-I hasta un grado que no tiene precedentes en la técnica.

Aunque sin pretender restringirse a ninguna teoría particular, se cree que la hélice formada por los agonistas de ApoA-I de la invención imita más estrechamente las propiedades estructurales y funcionales de las regiones helicoidales anfipáticas de la ApoA-I nativa que son importantes para efectuar la unión a lípidos, la salida de colesterol y la activación de LCAT, de lo que lo hace la hélice \alpha formada por los péptidos miméticos de la ApoA-I descritos en la bibliografía, dando como resultado de ese modo péptidos que muestran una actividad de tipo ApoA-I significativamente superior que estos otros péptidos. De hecho, mientras que muchos de los agonistas de ApoA-I de la invención se aproximan a, y en algunas realizaciones incluso superan la actividad de la ApoA-I, hasta la fecha, los mejores miméticos de ApoA-I peptídicos descritos en la bibliografía (el péptido 18AM4 (EWLEAFYKKVLEKLKELF; SEQ ID NO:246) (Corinjn y otros, 1993, Biochim. Biophys. Acta 1170:8-16; Labeur y otros, Oct. 1994, Arteriosclerosis: Abstract Nos. 186 y 187) y péptido 18AM4 N-acetilado, C-amidado (SEQ ID NO:239) (Brasseur, 1993, Biochim. Biophys. Acta 1170:1-7)) muestran menos del 4% y del 11%, respectivamente, de la actividad de la ApoA-I, según se mide mediante el ensayo de activación de LCAT descrito en el presente documento.

Generalmente, los péptidos del núcleo (o análogos de los mismos) que componen los agonistas de ApoA-I de la invención tienen la siguiente fórmula (I) estructural:

X_{1}-X_{2}-X_{3}-X_{4}-X_{5}-X_{6}-X_{7}-X_{8}-X_{9}-X_{10}-X_{11}-X_{12}-X_{13}-X_{14}-X_{15}-X_{16}-X_{17}-X_{18}-X_{19}-X_{20}-X_{21}-X_{22}

en la que:

X_{1} es Pro (P), Ala (A), Gly (G), Gln (Q), Asn (N), Asp (D) o D-Pro (p);

X_{2} es un aminoácido alifático;

X_{3} es Leu (L) o Phe (F);

X_{4} es aminoácido ácido;

X_{5} es Leu (L) o Phe (F);

X_{6} es Leu (L) o Phe (F);

X_{7} es un aminoácido hidrófilo;

X_{8} es un aminoácido ácido o básico;

X_{9} es Leu (L) o Gly (G);

X_{10} es Leu (L), Trp (W) o Gly (G);

X_{11} es un aminoácido hidrófilo;

X_{12} es un aminoácido hidrófilo;

X_{13} es Gly (G) o un aminoácido alifático;

X_{14} es Leu (L), Trp (W), Gly (G) o Nal;

X_{15} es un aminoácido hidrófilo;

X_{16} es un aminoácido hidrófobo;

X_{17} es un aminoácido hidrófobo;

X_{18} es un aminoácido básico, Gln (Q) o Asn (N);

X_{19} es un aminoácido básico, Gln (Q) o Asn (N);

X_{20} es un aminoácido básico;

X_{21} es un aminoácido alifático; y

X_{22} es un aminoácido básico.

Los péptidos del núcleo de estructura (I) se definen, en parte, en cuanto a aminoácidos de clases designadas. Las definiciones de las diversas clases designadas se proporcionan a continuación junto con la descripción de realizaciones mutadas o alteradas de la estructura (I).

En los péptidos del núcleo de estructura (I), el símbolo "-" entre los residuos X_{n} de aminoácido designa generalmente una función de enlace constitutiva de estructura principal. Por tanto, el símbolo "-" representa normalmente una unión peptídica o un enlace amida (-C(O)NH-). Sin embargo, debe entenderse que la presente invención contempla análogos de péptido en los que se sustituyen opcionalmente uno o más enlaces amida por un enlace diferente de amida, preferiblemente una amida sustituida o un isóstero de amida. Por tanto, mientras que los diversos residuos X_{n} dentro de la estructura (I) se describen generalmente en cuanto a los aminoácidos, y las realizaciones preferidas de la invención se muestran a modo de ejemplo mediante péptidos, un experto en la técnica reconocerá que en las realizaciones que tienen enlaces que no son amida, el término "aminoácido" o "residuo" tal como se usa en el presente documento se refiere a otros restos bifuncionales que portan grupos de estructura similar a las cadenas laterales de los aminoácidos.

Las amidas sustituidas incluyen generalmente, pero no se limitan a, grupos de fórmula -C(O)NR-, en la que R es alquilo (C_{1}-C_{6}), alquilo (C_{1}-C_{6}) sustituido, alquenilo (C_{1}-C_{6}), alquenilo (C_{1}-C_{6}) sustituido, alquinilo (C_{1}-C_{6}), alquinilo (C_{1}-C_{6}) sustituido, arilo (C_{5}-C_{20}), arilo (C_{5}-C_{20}) sustituido, alcarilo (C_{6}-C_{26}), alcarilo (C_{6}-C_{26}) sustituido, heteroarilo de 5-20 miembros, heteroarilo de 5-20 miembros sustituido, alq-heteroarilo de 6-26 miembros y alq-heteroarilo de 6-26 miembros sustituido.

Los isósteros de amida generalmente incluyen, pero no se limitan a, -CH_{2}NH-, -CH_{2}S-, -CH_{2}CH_{2}-, -CH=CH- (cis y trans), -C(O)CH_{2}-, -CH(OH)CH_{2}- y -CH_{2}SO-. Los compuestos que tienen tales enlaces que no son amida y los métodos para preparar tales compuestos se conocen bien en la técnica (véanse, por ejemplo, Spatola, marzo de 1983, Vega Data Vol. 1, Issue 3; Spatola, 1983, "Peptide Backbone Modifications" en: Chemistry and Biochemistry of Aminoácidos Peptides and Proteins, Weinstein, ed., Marcel Dekker, Nueva York, página 267 (revisión general); Morley, 1980, Trends Pharm. Sci. 1:463-468; Hudson y otros, 1979, Int. J. Prot. Res. 14:177-185 (-CH_{2}NH-, -CH_{2}CH_{2}-);
Spatola y otros, 1986, Life Sci. 38:1243-1249 (-CH_{2}-S); Hann, 1982, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I. 1:307-314 (-CH=CH-, cis y trans); Almquist y otros, 1980, J. Med. Chem. 23: 1392-1398 (-COCH_{2}-); Jennings-White y otros, Tetrahedron. Lett. 23:2533 (-COCH_{2}-); solicitud de patente europea EP 45665 (1982) CA 97:39405 (-CH(OH)CH_{2}-); Holladay y otros, 1983, Tetrahedron Lett. 24:4401-4404 (-C(OH)CH_{2}-) ; y Hruby, 1982, Life Sci. 31:189-199 (-CH_{2}-S-).

Adicionalmente, pueden sustituirse uno o más enlaces amida por restos miméticos de amida o peptidomiméticos que no interfieren significativamente con la estructura o actividad de los péptidos. Se describen restos miméticos de amida adecuados, por ejemplo, en Olson y otros, 1993, J. Med. Chem. 36:3039-3049.

Una característica crítica de los péptidos del núcleo de estructura (I) es su capacidad para formar una hélice \alpha anfipática en presencia de lípidos. Por anfipático se quiere decir que la hélice \alpha tiene caras hidrófila e hidrófoba que se oponen orientadas a lo largo de su eje longitudinal, es decir, una cara de la hélice proyecta principalmente cadenas laterales hidrófilas mientras que la cara opuesta proyecta principalmente cadenas laterales hidrófobas. Las figuras 1A y 1B presentan dos vistas ilustrativas de las caras hidrófila e hidrófoba que se oponen de una hélice \alpha anfipática idealizada a modo de ejemplo. La figura 1A es un diagrama de rueda helicoidal de Schiffer-Edmundson (Schiffer y Edmundson, 1967, Biophys. J. 7:121-135). En la rueda, el eje longitudinal de la hélice es perpendicular a la página. Comenzando con el extremo N-terminal, se distribuyen radialmente residuos de aminoácido sucesivos (representados por círculos) alrededor del perímetro de un círculo a intervalos de 100º. Por tanto, el residuo de aminoácido n+1 está situado a 100º del residuo n, el residuo n+2 está situado a 100º del residuo n+1 y así sucesivamente. La colocación a 100º explica los 3,6 residuos de aminoácido por giro que se observan normalmente en una hélice \alpha idealizada. En la figura 1A, las caras hidrófila e hidrófoba que se oponen de la hélice son claramente visibles; los aminoácido hidrófilos están representados como círculos en blanco y los residuos de aminoácido hidrófobos están representados como círculos sombreados.

La figura 1B presenta un diagrama de red helicoidal de la hélice anfipática idealizada de la figura 1A (Lim, 1978, FEBS Lett. 89:10-14). En un diagrama de red helicoidal típico, la hélice \alpha se presenta como un cilindro que se ha cortado a lo largo del centro de su cara hidrófila y se ha aplanado. Por tanto, el centro de la cara hidrófoba, determinado por el momento hidrófobo de la hélice (Eisenberg y otros, 1982, Nature 299:371-374), se encuentra en el centro de la figura y está orientado de modo que se eleva del plano de la página. En la figura 1C se representa una ilustración del cilindro helicoidal antes de cortarse y aplanarse. Cortando el cilindro a lo largo de diferentes planos, pueden observarse diferentes vistas de la misma hélice anfipática, y se obtiene diferente información sobre las propiedades de la
hélice.

La naturaleza anfipática de la hélice \alpha formada por los péptidos del núcleo de estructura (I) en presencia de lípidos se ilustra en la figura 2. La figura 2A presenta un diagrama de rueda helicoidal de Schiffer-Edmundson, la figura 2B presenta un diagrama de red helicoidal que ilustra la cara hidrófoba, y la figura 2C presenta un diagrama de red helicoidal que ilustra la cara hidrófila. En cada una de las figuras 2A, 2B y 2C, los residuos hidrófilos están representados como círculos en blanco y los residuos hidrófobos como círculos sombreados. Tal como se tratará más a fondo a continuación junto con formas mutadas o alteradas de los péptidos de estructura (I), ciertos residuos de aminoácido pueden sustituirse por otros residuos de aminoácido de modo que las caras hidrófila e hidrófoba de la hélice formada por los péptidos pueden no estar compuestas totalmente por aminoácidos hidrófilos e hidrófobos, respectivamente. Por tanto, ha de entenderse que cuando se refiere a la hélice \alpha anfipática formada por los péptidos del núcleo de la invención, la frase "cara hidrófila" se refiere a una cara de la hélice que tiene un carácter hidrófilo de red global. La frase "cara hidrófoba" se refiere a una cara del péptido que tiene un carácter hidrófobo de red
global.

Aunque sin pretender restringirse a ninguna teoría particular, se cree que ciertas propiedades estructurales y/o físicas de la hélice anfipática formada por los péptidos del núcleo de estructura (I) son importantes para la actividad. Estas propiedades incluyen el grado de anfipaticidad, la hidrofobicidad global, hidroficidad media, ángulos hidrófobo e hidrófilo, momento hidrófobo, momento hidrófobo medio y carga neta de la hélice \alpha.

Aunque los diagramas de rueda helicoidal de la figura 2A proporcionan un medio conveniente de visualización de la naturaleza anfipática de los péptidos del núcleo de estructura (I), el grado de anfipaticidad (grado de asimetría de la hidrofobicidad) puede cuantificarse convenientemente calculando el momento hidrófobo (\mu_{H}) de la hélice. Los métodos para calcular el \mu_{H} para una secuencia peptídica particular se conocen bien en la técnica, y se describen, por ejemplo, en Eisenberg, 1984, Ann. Rev. Biochem. 53:595-623. El \mu_{H} real obtenido para un péptido particular dependerá del número total de residuos de aminoácido que componen el péptido. Por tanto, generalmente no es informativo comparar directamente el \mu_{H} para péptidos de diferentes longitudes.

Pueden compararse directamente las anfipaticidades de péptidos de diferentes longitudes mediante el momento hidrófobo medio (<\mu_{H}>). El momento hidrófobo medio puede obtenerse dividiendo \mu_{H} por el número de residuos en la hélice (es decir, <\mu_{H}> = \mu_{H}/N). Generalmente, se considera que los péptidos del núcleo que muestran un <\mu_{H}> en el intervalo de 0,45 a 0,65, tal como se determina usando la escala de hidrofobicidad consenso normalizada de Eisenberg (Eisenberg, 1984, J. Mol. Biol. 179:125-142), están dentro del alcance de la presente invención, prefiriéndose un <\mu_{H}> en el intervalo de 0,50 a 0,60.

\newpage

La hidrofobicidad global o total (H_{o}) de un péptido puede calcularse convenientemente tomando la suma algebraica de las hidrofobicidades de cada residuo de aminoácido en el péptido (es decir, H_{o} = \sum\limits^{N}_{i=1}) H_{i}), en la que N es el número de residuos de aminoácido en el péptido y H_{i} es la hidrofobicidad del iº residuo de aminoácido). La hidrofobicidad media (<H_{o}>) es la hidrofobicidad dividida entre el número de residuos de aminoácido (es decir, <H_{o}> = H_{o}/N). Generalmente, se considera que los péptidos del núcleo que muestran una hidrofobicidad media en el intervalo de
-0,050 a -0,070, según se determina usando la escala de hidrofobicidad consenso normalizada de Eisenberg (Eisenberg, 1984, J. Mol. Biol. 179:125-142), están dentro del alcance de la presente invención, prefiriéndose una hidrofobicidad media en el intervalo de -0,030 a -0,055.

La hidrofobicidad total de la cara hidrófoba (H_{o}^{pho}) de una hélice anfipática puede obtenerse tomando la suma de las hidrofobicidades de los residuos de aminoácido hidrófobos que están dentro del ángulo hidrófobo tal como se define a continuación (es decir, H^{pho}_{o} = \sum\limits^{N}_{i=1} H_{i}, en la que H_{i} es tal como se definió previamente y N_{H} es el número total de aminoácidos hidrófobos en la cara hidrófoba). La hidrofobicidad media de la cara hidrófoba (<H_{o}^{pho}>) es H_{o}^{pho}/N_{H} en la que N_{H} es tal como se definió anteriormente. Generalmente, se considera que los péptidos del núcleo que muestran una <H_{o}^{pho}> en el intervalo de 0,90 a 1,20, según se determina usando la escala de hidrofobicidad consenso de Eisenberg (Eisenberg, 1984, citado anteriormente; Eisenberg y otros, 1982, citado anteriormente), están dentro del alcance de la presente invención, prefiriéndose una <H_{o}^{pho}> en el intervalo de 0,94 a 1,10.

El ángulo hidrófobo (ángulo pho) se define generalmente como el ángulo o arco cubierto por el tramo continuo más largo de residuos de aminoácido hidrófobos cuando el péptido está dispuesto en la representación de la rueda helicoidal de Schiffer-Edmundson (es decir, el número de residuos hidrófobos contiguos en la rueda multiplicado por 20º). El ángulo hidrófilo (ángulo phi) es la diferencia entre 360º y el ángulo pho (es decir, 360º-ángulo pho). Los expertos en la técnica reconocerán que los ángulos pho y phi dependerán, en parte, del número de residuos de aminoácido en el péptido. Por ejemplo, en referencia a las figura 5A y 5B, puede observarse que sólo 18 aminoácidos se ajustan alrededor de una rotación de la rueda helicoidal de Schiffer-Edmundson. Menos aminoácidos dejan un hueco en la rueda; más aminoácidos producen que ciertas posiciones de la rueda estén ocupadas por más de un residuo de aminoácido.

En el caso de péptidos que contienen más de 18 residuos de aminoácido, tales como los péptidos del núcleo de estructura (I), un tramo "continuo" de residuos de aminoácido hidrófobos quiere decir que al menos un aminoácido en las posiciones a lo largo de la rueda que contienen dos o más aminoácidos es un aminoácido hidrófobo. Por tanto, en referencia a la figura 5B, el ángulo pho es el ángulo cubierto por los residuos 5, 16, 9, 2, 13, 6, 17, 10, 3 y 14 a pesar de la existencia de un residuo hidrófilo en la posición 20, ya que el residuo en la posición 2, que comparte la misma posición en la rueda, es un residuo hidrófobo. Normalmente, se considera que los péptidos del núcleo que tienen un ángulo pho en el intervalo de 160º a 220º están dentro del alcance de la invención, prefiriéndose un ángulo pho en el intervalo de 180º a 200º.

En las figuras 3 y 4 se ilustran ciertas características estructurales y/o físicas de los péptidos del núcleo de estructura (I). La figura 3B presenta un diagrama de red helicoidal de un péptido del núcleo a modo de ejemplo de la invención, el péptido 4 (PVLDLFRELLNELLEALKQKLK; SEQ ID NO:4), que ilustra la distribución de carga a lo largo de la cara hidrófila de la hélice. En la figura 3B, el cilindro helicoidal se ha cortado a lo largo del centro de la cara hidrófoba y se ha aplanado. Los tres residuos de Leu (L) hidrófobos que sustituyen a los residuos hidrófilos en el 22-mero consenso de Segrest (figura 3A) están sombreados. Tal como puede observarse en la figura 3B, los residuos de aminoácido cargados positivamente están agrupados en el último giro C-terminal de la hélice (el extremo C-terminal está en la parte superior de la página). Aunque sin pretender restringirse a ninguna teoría particular, se cree que la agrupación de residuos básicos en el extremo C-terminal estabiliza la hélice a través de interacciones electrostáticas de carga (NH_{3}^{+})-dipolo de la hélice. Se cree también que la estabilización se produce a través de interacciones hidrófobas entre cadenas laterales de lisina y el núcleo de la hélice (véase Groebke y otros, 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:4025-4029; Esposito y otros, 1997, Biopolymers 41:27-35).

Con la excepción de la agrupación C-terminal cargada positivamente, las cargas negativas se distribuyen sobre el resto de la cara hidrófila, con al menos un residuo de aminoácido cargado negativamente (ácido) por giro, dando como resultado un tramo continuo de cargas negativas a lo largo de la cara hidrófila de la hélice. Una carga positiva está situada en el residuo 7, que contribuye potencialmente a la estabilidad de la hélice formando un puente salino con un residuo ácido un giro más allá en la hélice.

La figura 4B presenta un diagrama de red helicoidal que ilustra la cara hidrófoba de la hélice anfipática formada por el péptido 4 (SEQ ID NO:4) del núcleo a modo de ejemplo. En la figura 4B, el cilindro helicoidal está cortado a lo largo del centro de la cara hidrófila y está aplanado. La cara hidrófoba del péptido del núcleo consiste en dos residuos hidrófobos por giro, excepto para el último giro C-terminal, en el que dominan los residuos básicos. Los estudios de RMN indican que los residuos 3, 6, 9 y 10 de aminoácidos de este péptido del núcleo forman una agrupación hidrófoba cerca del extremo N-terminal de la hélice. La Phe-6 está centrada en esta agrupación y se cree que desempeña un papel importante en la estabilización de la agrupación hidrófoba.

\newpage

Aunque sin pretender restringirse a ninguna teoría particular, se cree que la agrupación hidrófoba formada por los residuos 3, 6, 9 y 10 es significativa para efectuar la unión a lípidos y la activación de LCAT. Por ejemplo, mientras que el péptido 4 (SEQ ID NO:4) a modo de ejemplo muestra un 93% de activación de LCAT en el ensayo descrito en el presente documento, un derivado del péptido 4 que contiene un residuo de Lys (K) en la posición 9 (péptido 33; SEQ ID NO:33), que destruye la agrupación hidrófoba, muestra sólo un 33% de activación de LCAT en el mismo ensayo. Se espera que los péptidos anfipáticos se unan a fosfolípidos dirigiendo sus caras hidrófobas hacia las cadenas de alquilo de los restos de lípidos. Por tanto, se cree que esta agrupación sumamente hidrófoba contribuye a las fuertes afinidades por lípidos observadas para los péptidos del núcleo de la invención. Ya que la unión a lípidos es un requisito previo
para la activación de LCAT, se cree que esta agrupación hidrófoba es también esencial para la activación de LCAT.

A menudo, se encuentra que los residuos aromáticos son importantes para anclar péptidos y proteínas a lípidos (De Kruijff, 1990, Biosci. Rep. 10:127-130; O'Neil y De Grado, 1990, Science 250:645-651; Blondelle y otros, 1993, Biochim. Biophys. Acta 1202:331-336). Por tanto, se cree además que la Phe-6, que está colocada en el centro de la agrupación hidrófoba, también puede desempeñar un papel clave en el anclaje de los péptidos del núcleo de estructura (I) a lípidos.

Las interacciones entre los péptidos del núcleo de la invención y los lípidos conducen a la formación de complejos de péptido-lípido. Tal como se ilustra en la figura 11A, el tipo de complejo obtenido (micelas conjuntas, discos, vesículas o múltiples capas) depende de la razón molar lípido:péptido, formándose generalmente micelas conjuntas a razones molares bajas de lípido:péptido y formándose complejos discoidales y vesiculares o de múltiples capas con razones molares crecientes de lípido:péptido. Esta característica se ha descrito para péptidos anfipáticos (Epand, The Amphipathic Helix, 1993) y para la ApoA-I (Jones, 1992, Structure and Function of Apolipoproteins, Capítulo 8, páginas 217-250). La razón molar de lípido:péptido también determina el tamaño y la composición de los complejos (véase la sección 5.3.1, a continuación).

El eje longitudinal de la hélice \alpha formada por los péptidos del núcleo de estructura (I) tiene una forma global curvada. En hélices anfipáticas típicas, se ha encontrado que las longitudes de los puentes de hidrógeno de las caras hidrófila e hidrófoba varían de manera que el lado hidrófobo de la hélice es cóncavo (Barlow y Thornton, 1988, J. Mol. Biol. 201:601-619; Zhou y otros, 1992, J. Am. Chem. Soc. 33:11174-11183; Gesell y otros, 1997, J. Biomol. RMN 9:127-135). Aunque sin pretender restringirse a la teoría, se cree que la curvatura global de la cara hidrófoba de la hélice puede ser importante en la unión a complejos discoidales (una hélice curvada permite que el péptido "se ajuste" mejor alre-
dedor de los bordes de las partículas discoidales, aumentado de ese modo la estabilidad del complejo de péptido-disco.

En el modelo estructural aceptado generalmente de la ApoA-I, las hélices \alpha anfipáticas se empaquetan alrededor del borde de HDL discoidal (véase la figura 11B). En este modelo, se asume que las hélices se alinean dirigiendo sus caras hidrófobas hacia las cadenas acilo de los lípidos (Brasseur y otros, 1990, Biochim. Biophys. Acta 1043:245-252). Las hélices se disponen de manera antiparalela, y se cree que un efecto cooperativo entre las hélices contribuye a la estabilidad del complejo de HDL discoidal (Brasseur y otros, citado anteriormente). Se ha propuesto que un factor que contribuye a la estabilidad del complejo discoidal de HDL es la existencia de interacciones iónicas entre residuos ácidos y básicos dando como resultado la formación de puentes salinos o puentes de hidrógeno intermoleculares entre residuos en hélices antiparalelas adyacentes. En este modelo, los péptidos no se consideran una entidad individual, sino en interacción con al menos otras dos moléculas peptídicas vecinas (figura 11B).

También está generalmente aceptado que la formación de puentes salinos o puentes de hidrógeno intramoleculares entre residuos ácidos y básicos, respectivamente, en las posiciones i e i+3 de la hélice, estabiliza la estructura helicoidal (Marqusee y otros, 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84(24):8898-8902).

Por tanto, son características clave adicionales de los péptidos del núcleo de estructura (I) su capacidad para formar puentes de hidrógeno intermoleculares entre sí cuando se alinean de una manera antiparalela dirigiendo sus caras hidrófobas en la misma dirección, tal como sería el caso cuando los péptidos se unen a lípidos (es decir, entre los residuos ácidos en las posiciones 4 y 8 y los residuos básicos en las posiciones 18, 20 y 22), y también su capacidad para formar puentes de hidrógeno o puentes salinos intramoleculares cerca de los extremos N y C-terminales de la hélice (es decir, entre los residuos ácidos y básicos en las posiciones 4 y 7 y 15 y 18).

La capacidad de los péptidos del núcleo de estructura (I) para formar puentes de hidrógeno intermoleculares se ilustra en la figura 6A. En la figura 6A, se alinean dos hélices \alpha ideales del péptido 4 (SEQ ID NO:4) del núcleo a modo de ejemplo de una manera antiparalela dirigiendo sus caras hidrófobas respectivas en la misma dirección (fuera del plano de la página). Podrían producirse interacciones de puentes de hidrógeno entre los residuos E-8 y Q-19 (Huyghues-Despointes y otros, 1995, Biochemistry 34(41):13267-13271).

Además, cuando se disponen de esta manera antiparalela, las hélices están estrechamente empaquetadas; no existe impedimento estérico que impida el contacto estrecho entre las hélices. Las alteraciones en la secuencia de los péptidos del núcleo que afectan al empaquetamiento de las hélices influyen negativamente en la actividad de los péptidos del núcleo. Por ejemplo, en referencia a la figura 6B, un dímero de péptidos que tiene Gln-19 sustituida por Glu-19 (péptido 102; PVLDLFRELLNLXLEALKEKLK en el que X es Aib; SEQ ID NO:102), y que por tanto no puede formar puentes de hidrógeno intermoleculares, no activaba la LCAT. De manera significativa, mientras que el péptido 4 (SEQ ID NO:4) mostraba un 93% de activación de LCAT en el ensayo descrito en el presente documento, el péptido 102 (SEQ ID NO:102) mostraba sólo un 2% de actividad en el mismo ensayo.

Por tanto, aunque sin pretender restringirse a ninguna teoría particular, se cree que la capacidad de los péptidos del núcleo de estructura (I) de empaquetarse estrechamente e interaccionar iónicamente para formar puentes salinos y/o puentes de hidrógeno intra y/o intermoleculares cuando se unen a lípidos de manera antiparalela es una característica importante de los péptidos del núcleo de la invención.

También se cree que la capacidad de los péptidos del núcleo para formar interacciones péptido-péptido intermoleculares favorables es de relevancia en ausencia de lípidos. Los péptidos del núcleo de la invención se autoasocian, debido en parte a sus <\mu_{H}>, <H_{o}> y ángulo hidrófobo altos (véase la tabla I, a continuación). El fenómeno de autoasociación depende de las condiciones de pH, concentración peptídica y fuerza iónica, y puede dar como resultado varios estados de asociación, desde formas monoméricas hasta varias multiméricas (figura 11A). El núcleo hidrófobo de los agregados peptídicos favorece las interacciones hidrófobas con los lípidos. La capacidad de los péptidos para agregarse incluso a muy bajas concentraciones puede favorecer su unión a lípidos. Se cree que en el núcleo de los agregados peptídicos también se producen interacciones péptido-péptido y pueden competir con las interacciones lípido-péptido.

Además de las propiedades descritas anteriormente, se cree que otros parámetros son importantes para la actividad también, incluyendo el número total de residuos hidrófobos, el número total de residuos cargados y la carga neta de los péptidos.

En la tabla I, a continuación se proporciona un resumen de las propiedades físicas y estructurales preferidas de los péptidos del núcleo de estructura (I):

TABLA I Propiedades físicas de los agonistas de ApoA-I preferidos de estructura (I)

3

4

Las propiedades de las hélices \alpha anfipáticas formadas por los péptidos del núcleo de la invención difieren significativamente de las propiedades de las hélices \alpha anfipáticas de clase A, particularmente la hélice \alpha de clase A del 22-mero consenso de Segrest. Estas diferencias se ilustran con el péptido 4 (SEQ ID NO:4) del núcleo a modo de ejemplo en las figuras 3-5.

En referencia a las figuras 4A y 4B, puede observarse que la cara hidrófoba del péptido 4 tiene un carácter hidrófobo mucho mayor que la cara hidrófoba del 22-mero consenso de Segrest. En particular, el residuo 5, 9 y 13 (región sombreada de la figura 4B) son residuos hidrófobos de Leu (L) en el péptido 4 (SEQ ID NO:4) en comparación con residuos cargados en el 22-mero consenso (SEQ ID NO:75). La sustitución de estos tres residuos cargados en el 22-mero consenso de Segrest con residuos hidrófobos de Leu (L) conduce a diferencias significativas en la anfipaticidad, hidrofobicidad, ángulo pho y otras propiedades de la hélice.

En la tabla II, a continuación se proporciona una comparación de las propiedades físicas y estructurales de dos péptidos del núcleo a modo de ejemplo de estructura (I), el péptido 4 (SEQ ID NO:4) y el péptido 8 (SEQ ID NO:8), y el 22-mero consenso de Segrest (SEQ ID NO:75):

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA II Comparación de propiedades de péptidos del núcleo a modo de ejemplo con el 22-mero consenso de Segrest

5

6

Lo más notablemente, los péptidos del núcleo de estructura (I) están compuestos por un porcentaje mayor de residuos hidrófobos, tienen una <H_{o}> y <\mu_{H}> significativamente mayores, y tienen un ángulo pho dos veces mayor (véanse las figuras 5A y 5B). Estas diferencias en las propiedades conducen a diferencias significativas en la actividad. Mientras que el 22-mero consenso de Segrest (SEQ ID NO:75) muestra sólo un 10% de activación de LCAT en comparación con la ApoA-I nativa en los ensayos descritos en el presente documento, los péptidos 4 (SEQ ID NO:4) y 8 (SEQ ID NO:8) muestran un 93% y 83% de activación de LCAT, respectivamente, en comparación con la ApoA-I nativa en los mismos ensayos. El péptido 1 (PVLDLFRELLNELLEZLKQKLK; SEQ ID NO:1) y el péptido 2 (GVLDLFRELLNEALKQKLKK; SEQ ID NO:2), mostraron un 120% y un 105% de activación de LCAT, respectivamente, en comparación con la ApoA-I en los mismos ensayos.

Ciertos residuos de aminoácido en los péptidos del núcleo de estructura (I) pueden sustituirse por otros residuos de aminoácido sin afectar significativamente de manera perjudicial, y en muchos casos incluso potenciando la actividad de los péptidos. Por tanto, también se contemplan por la presente invención formas alteradas o mutadas de los péptidos del núcleo de estructura (I) en las que al menos un residuo de aminoácido definido en la estructura se sustituye por otro residuo de aminoácido. Ya que se cree que una de las características críticas que afectan a la actividad de los péptidos del núcleo de la invención es su capacidad para formar hélices \alpha en presencia de lípidos que muestran las propiedades anfipáticas y otras descritas anteriormente, se reconocerá que en realizaciones preferidas de la invención, las sustituciones de aminoácidos son conservativas, es decir, el residuo de aminoácido de sustitución tiene propiedades físicas y químicas que son similares al residuo de aminoácido que se está sustituyendo.

Para los fines de determinar sustituciones de aminoácidos conservativas, los aminoácidos pueden clasificarse convenientemente en dos categorías principales, hidrófilos e hidrófobos, dependiendo principalmente de las características físico-químicas de la cadena lateral del aminoácido. Estas dos categorías principales pueden clasificarse además en subcategorías que definen más claramente las características de las cadenas laterales de los aminoácidos. Por ejemplo, la clase de aminoácidos hidrófilos puede subdividirse además en aminoácidos ácidos, básicos y polares. La clase de aminoácidos hidrófobos puede subdividirse además en aminoácidos apolares y aromáticos. Las definiciones de las diversas categorías de aminoácidos que definen la estructura (I) son las siguientes:

"Aminoácido hidrófilo" se refiere a un aminoácido que muestra una hidrofobicidad inferior a cero según la escala de hidrofobicidad consenso normalizada de Eisenberg y otros, 1984, J. Mol. Biol. 179:125-142. Los aminoácidos hidrófilos codificados genéticamente incluyen Thr (T), Ser (S), His (H), Glu (E), Asn (N), Gln (Q), Asp (D), Lys (K) y Arg (R).

"Aminoácido ácido" se refiere a un aminoácido hidrófilo que tiene un valor de pK de la cadena lateral inferior a 7. Los aminoácidos ácidos tienen normalmente cadenas laterales cargadas negativamente a pH fisiológico debido a la pérdida de un ion hidrógeno. Los aminoácidos ácidos codificados genéticamente incluyen Glu (E) y Asp (D).

"Aminoácido básico" se refiere a un aminoácido hidrófilo que tiene un valor de pK de la cadena lateral superior a 7. Los aminoácidos básicos tienen normalmente cadenas laterales cargadas positivamente a pH fisiológico debido a la asociación con el ion hidronio. Los aminoácidos básicos codificados genéticamente incluyen His (H), Arg (R) y Lys (K).

"Aminoácido polar" se refiere a un aminoácido hidrófilo que tiene una cadena lateral que no está cargada a pH fisiológico, pero que tiene al menos un enlace en el que el par de electrones compartido en común por los dos átomos está soportado más estrechamente por uno de los átomos. Los aminoácidos polares codificados genéticamente incluyen Asn (N), Gln (Q) Ser (S) y Thr (T).

"Aminoácido hidrófobo" se refiere a un aminoácido que muestra una hidrofobicidad mayor de cero según la escala de hidrofobicidad consenso normalizada de Eisenberg, 1984, J. Mol. Biol. 179:125-142. Los aminoácidos hidrófobos codificados genéticamente incluyen Pro (P), Ile (I), Phe (F), Val (V), Leu (L), Trp (W), Met (M), Ala (A), Gly (G) y Tyr (Y).

"Aminoácido aromático" se refiere a un aminoácido hidrófobo con una cadena lateral que tiene al menos un anillo aromático o heteroaromático. El anillo aromático o heteroaromático puede contener uno o más sustituyentes tales como -OH, -SH, -CN, -F, -Cl,-Br, -I, -NO_{2}, -NO, -NH_{2}, -NHR, -NRR, -C(O)R, -C(O)OH, -C(O)OR, -C(O)NH_{2}, -C(O)NHR, -C(O)NRR y similares en los que R es independientemente alquilo (C_{1}-C_{6}), alquilo (C_{1}-C_{6}) sustituido, alquenilo (C_{1}-C_{6}), alquenilo (C_{1}-C_{6}) sustituido, alquinilo (C_{1}-C_{6}), alquinilo (C_{1}-C_{6}) sustituido, arilo (C_{5}-C_{20}), arilo (C_{5}-C_{20}) sustituido, alcarilo (C_{6}-C_{26}), alcarilo (C_{6}-C_{26}) sustituido, heteroarilo de 5-20 miembros, heteroarilo de 5-20 miembros sustituido, alq-heteroarilo de 6-26 miembros o alq-heteroarilo de 6-26 miembros sustituido. Los aminoácidos aromáticos codificados genéticamente incluyen Phe (F), Tyr (Y) y Trp (W).

"Aminoácido no polar" se refiere a un aminoácido hidrófobo que tiene una cadena lateral que no está cargada a pH fisiológico y que tiene enlaces en los que el par de electrones compartido en común por los dos átomos está soportado generalmente de igual manera por cada uno de los dos átomos (es decir, la cadena lateral es no polar). Los aminoácidos apolares codificados genéticamente incluyen Leu (L), Val (V), Ile (I), Met (M), Gly (G) y Ala (A).

"Aminoácido alifático" se refiere a un aminoácido hidrófobo que tiene una cadena lateral hidrocarbonada alifática. Los aminoácidos alifáticos codificados genéticamente incluyen Ala (A), Val (V), Leu (L) e Ile (I).

El residuo de aminoácido Cys (C) es poco común porque puede formar puentes disulfuro con otros residuos de Cys (C) u otros aminoácidos que contienen sulfanilo. La capacidad de los residuos de Cys (C) (y otros aminoácidos con cadenas laterales que contienen -SH) de existir en un péptido o bien en forma -SH libre reducida o bien en forma con puentes disulfuro oxidada afecta a si los residuos de Cys (C) contribuyen al carácter hidrófilo o hidrófobo neto en un péptido. Mientras que la Cys (C) muestra una hidrofobicidad de 0,29 según la escala consenso normalizada de Eisenberg (Eisenberg, 1984, citado anteriormente), debe entenderse que para los fines de la presente invención la Cys (C) se clasifica como un aminoácido hidrófilo polar, a pesar de las clasificaciones generales definidas anteriormente.

Tal como apreciarán los expertos en la técnica, las categorías definidas anteriormente no son mutuamente exclusivas. Por tanto, los aminoácidos que tienen cadenas laterales que muestran dos o más propiedades físicas pueden incluirse en múltiples categorías. Por ejemplo, las cadenas laterales de aminoácidos que tienen restos aromáticos que están sustituidos adicionalmente con sustituyentes polares, tales como Tyr (Y), pueden mostrar tanto propiedades hidrófobas aromáticas como propiedades hidrófilas o polares, y por tanto pueden incluirse tanto en las categorías aromática como polar. La clasificación apropiada de cualquier aminoácido será evidente para los expertos en la técnica, especialmente a la luz de la descripción detallada proporcionada en el presente documento.

Ciertos residuos de aminoácido, denominados aminoácidos "interruptores de la hélice", tienen una propensión a deteriorar la estructura de las hélices \alpha cuando están contenidos en posiciones internas dentro de la hélice. Los residuos de aminoácido que muestran tales propiedades de interrupción de la hélice se conocen bien en la técnica (véase, por ejemplo, Chou y Fasman, Ann. Rev. Biochem. 47:251-276) e incluyen Pro (P), Gly (G) y potencialmente todos los D-aminoácidos (cuando están contenidos en un L-péptido; a la inversa, los L-aminoácidos deterioran la estructura helicoidal cuando están contenidos en un D-péptido). Aunque estos residuos de aminoácido interruptores de la hélice se encuentran dentro de las categorías definidas anteriormente, con la excepción de Gly (G) (tratado a continuación), estos residuos no deben usarse para sustituir residuos de aminoácido en posiciones internas dentro de la hélice (deben usarse sólo para sustituir 1-3 residuos de aminoácido en el extremo N-terminal y/o extremo C-terminal del péptido).

Aunque las categorías definidas anteriormente se han puesto como ejemplo en cuanto a los aminoácidos codificados genéticamente, las sustituciones de aminoácidos no necesitan limitarse, y en ciertas realizaciones preferiblemente no se limitan, a los aminoácidos codificados genéticamente. De hecho, muchos de los péptidos preferidos de estructura (I) contienen aminoácidos no codificados genéticamente. Por tanto, además de los aminoácidos codificados genéticamente que se producen de manera natural, los residuos de aminoácido en los péptidos del núcleo de estructura (I) pueden sustituirse por aminoácidos no codificados que se producen de manera natural y por aminoácidos sintéticos.

Ciertos aminoácidos encontrados comúnmente que proporcionan sustituciones útiles para los péptidos del núcleo de estructura (I) incluyen, pero no se limitan a, \beta-alanina (\beta-Ala) y otros omega-aminoácidos tales como ácido 3-aminopropiónico, ácido 2,3-diaminopropiónico (Dpr), ácido 4-aminobutírico y etc; ácido \alpha-aminoisobutírico (Aib); ácido \varepsilon-aminohexanoico (Aha); ácido \delta-aminovalérico (Ava); N-metilglicina o sarcosina (MeGly); ornitina (Orn); citrulina (Cit); t-butilalanina (t-BuA); t-butilglicina (t-BuG); N-metilisoleucina (MeIle); fenilglicina (Phg); ciclohexilalanina (Cha); norleucina (Nle); naftilalanina (Nal); 4-clorofenilalanina (Phe(4-Cl)); 2-fluorofenilalanina (Phe(2-F)); 3-fluorofenilalanina (Phe(3-F)); 4-fluorofenilalanina (Phe(4-F)); penicilamina (Pen); ácido 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-3-carboxílico (Tic); \beta-2-tienilalanina (Thi); metionina sulfóxido (MSO); homoarginina (hArg); N-acetillisina (AcLys); ácido 2,4-diaminobutírico (Dbu); ácido 2,3-diaminobutírico (Dab); p-aminofenilalanina (Phe(pNH_{2})); N-metilvalina (MeVal); homocisteína (hCys), homofenilalanina (hPhe) y homoserina (hSer); hidroxiprolina (Hyp), homoprolina (hPro), peptoides y aminoácidos N-metilados (glicinas N-sustituidas).

Las clasificaciones de los aminoácidos codificados genéticamente y no codificados comunes según las categorías definidas anteriormente se resumen en la tabla III, a continuación. Debe entenderse que la tabla III es únicamente para fines ilustrativos y no pretende ser una lista exhaustiva de residuos de aminoácido que pueden usarse para sustituir los péptidos del núcleo descritos en el presente documento. Otros residuos de aminoácido no mencionados específicamente en el presente documento pueden clasificarse fácilmente basándose en sus propiedades físicas y químicas observadas a la luz de las definiciones proporcionadas en el presente documento.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA III Clasificaciones de aminoácidos encontrados comúnmente

7

Aunque en la mayoría de los casos los aminoácidos de los péptidos del núcleo de estructura (I) estarán sustituidos por aminoácidos L-enantioméricos, las sustituciones no se limitan a aminoácidos L-enantioméricos. Por tanto, también se incluyen en la definición de formas "mutadas" o "alteradas" aquellas situaciones en las que un L-aminoácido está sustituido por un D-aminoácido idéntico (por ejemplo, L-Arg \rightarrow D-Arg) o por un D-aminoácido de la misma categoría o subcategoría (por ejemplo, L-Arg \rightarrow D-Lys), y viceversa. De hecho, en ciertas realizaciones preferidas que son adecuadas para administración oral a sujetos animales, los péptidos pueden estar compuestos ventajosamente por al menos un aminoácido D-enantiomérico. Se cree que los péptidos que contienen tales D-aminoácidos son más estables frente a la degradación en la cavidad oral, intestino o suero que los péptidos compuestos exclusivamente por L-aminoácidos.

Tal como se indicó anteriormente, los D-aminoácidos tienden a deteriorar la estructura de las hélices \alpha cuando están contenidos en posiciones internas con un L-péptido \alpha-helicoidal. Además, se ha observado que ciertas formas mutadas de los péptidos del núcleo de estructura (I) que están compuestos totalmente por D-aminoácidos muestran una activación de LCAT significativamente inferior en el ensayo descrito en el presente documento que los péptidos idénticos compuestos totalmente por L-aminoácidos. Como consecuencia, los D-aminoácidos no deben usarse para sustituir L-aminoácidos internos; las sustituciones con D-aminoácidos deben limitarse a 1-3 residuos de aminoácido en el extremo N-terminal y/o el extremo C-terminal del péptido.

Tal como se trató anteriormente, el aminoácido Gly (G) actúa generalmente como un residuo interruptor de la hélice cuando está contenido en posiciones internas de un péptido. De manera bastante sorprendente, los solicitantes han descubierto que mientras que la estructura helicoidal de los péptidos del núcleo de la invención se deteriora en ausencia de lípidos cuando residuos de aminoácido internos están sustituidos por Gly (G), en presencia de lípidos tales péptidos que contienen Gly (G) muestran una actividad, así como una estructura helicoidal significativa. Por ejemplo, mientras que el péptido 8 (SEQ ID NO:8) muestra sólo un 20% de estructura helicoidal en tampón, se observó un 61-93% de estructura helicoidal en presencia de lípidos y se observó un 93% de helicidad en presencia de trifluoroetanol (TFE). La estructura helicoidal de este péptido en presencia de TFE se confirmó mediante RMN (véase la sección 7.3.5, más adelante). De manera notable, este péptido también mostró un 83% de activación de LCAT. Otros péptidos del núcleo que contenían residuos de glicina internos también mostraron \geq38% de activación de LCAT (véase, por ejemplo, la tabla X, sección 8.3, a continuación). Por tanto, aunque se considera generalmente que la Gly (G) es un residuo interruptor de la hélice, puede usarse la Gly (G) para sustituir aminoácidos en posiciones internas de los péptidos del núcleo de estructura (I). Preferiblemente, sólo se sustituyen por Gly (G) residuos internos situados dentro de aproximadamente \pm 1 giro helicoidal del centro del péptido (particularmente para péptidos compuestos por un número par de aminoácidos). Adicionalmente, se prefiere que sólo se sustituya un residuo de aminoácido interno en el péptido por Gly (G). Las realizaciones preferidas de los agonistas de ApoA-I de la invención que contienen glicinas internas se describen en la sección 5.1.2, a continuación.

Usando las clasificaciones de residuos de aminoácido descritas anteriormente junto con las presentaciones de diagrama de red helicoidal y rueda helicoidal de Schiffer-Edmundson de los péptidos del núcleo de estructura (I), así como la descripción detallada de las propiedades deseadas proporcionadas en el presente documento, pueden obtenerse fácilmente formas alteradas o mutadas de los péptidos del núcleo de estructura (I) que conservan sustancialmente las propiedades anfipáticas y otras de la hélice, y que por tanto se considera que están dentro del alcance de la presente invención.

En una realización preferida de la invención, se obtienen formas alteradas o mutadas de los péptidos del núcleo de estructura (I) fijando los residuos hidrófilos o hidrófobos según la estructura (I) y sustituyendo al menos un residuo no fijado por otro aminoácido, preferiblemente por otro aminoácido de la misma categoría o subcategoría. Los residuos que componen las agrupaciones básicas y/o hidrófobas también pueden fijarse, y sustituirse al menos un residuo no fijado.

En otra realización preferida, se obtienen formas alteradas o mutadas de los péptidos del núcleo de estructura (I) fijando los residuos de aminoácido hidrófilos situados dentro de la cara hidrófila de la hélice según la estructura (I) y sustituyendo al menos un residuo de aminoácido no fijado por otro aminoácido, preferiblemente por otro residuo de aminoácido de la misma categoría o subcategoría. En referencia a la figura 2A, puede observarse que los residuos 1, 4, 7, 8, 11, 12, 15, 18, 19 y 22 están situados dentro de la cara hidrófila de la hélice anfipática formada por los péptidos del núcleo de estructura (I). De estos residuos, todos son hidrófilos excepto el residuo 1, que puede ser o bien hidrófilo o bien hidrófobo. Por tanto, en una realización preferida, los residuos 4, 7, 8, 11, 12, 15, 18, 19 y 22 se fijan según la estructura (I) y al menos uno de los residuos 2, 3, 5, 6, 9, 10, 13, 14, 16, 17, 20 y 21 se sustituye por otro aminoácido de la misma categoría, preferiblemente por otro aminoácido de la misma subcategoría. Alternativamente, el residuo 1 también se fija según la estructura (I) y al menos uno de los residuos 2, 3, 5, 6, 9, 10, 13, 14, 16, 17, 20 y 21 se sustituye tal como se describe.

En una realización particularmente preferida, la agrupación básica C-terminal (residuos 18, 19, 20 y 22) también se fija según la estructura (I), y sólo se sustituyen los residuos 2, 3, 5, 6, 9, 10, 13, 14, 16, 17 y/o 21.

En otra realización particularmente preferida, la agrupación hidrófoba también se fija, y sólo se sustituyen los residuos 2, 5, 13, 14, 16, 17, 20 y/o 21.

\newpage

Todavía en otra realización particularmente preferida, tanto las agrupaciones básica como la hidrófoba se fijan y sólo se sustituyen los residuos 2, 5, 13, 14, 16, 17 y/o 21.

En otra realización preferida de la invención, se obtienen formas alteradas o mutadas de los péptidos del núcleo de la invención fijando los residuos de aminoácido hidrófobos situados dentro de la cara hidrófoba de la hélice y sustituyendo al menos un residuo de aminoácido no fijado por otro residuo de aminoácido, preferiblemente por otro residuo de la misma categoría o subcategoría.

En referencia a la figura 2A, puede observarse que los residuos 2, 3, 5, 6, 9, 10, 13, 14, 16, 17, 20 y 21 están situados dentro de la cara hidrófoba. De éstos, todos son hidrófobos excepto el residuo 20, que es hidrófilo. Por tanto, en una realización preferida, los residuos 2, 3, 5, 6, 9, 10, 13, 14, 16, 17 y 21 se fijan según la estructura (I) y se sustituye al menos uno de los residuos 1, 4, 7, 8, 11, 12, 15, 18, 19, 20 y 22 por otro residuo de aminoácido, preferiblemente por otro aminoácido de la misma categoría o subcategoría.

En una realización particularmente preferida, la agrupación básica C-terminal también se fija, y sólo se sustituyen los residuos 1, 4, 7, 8, 11, 12 y/o 15.

En otra realización, se obtienen formas alteradas o mutadas de los péptidos de estructura (I) fijando todos los residuos de aminoácido que residen dentro de la cara hidrófoba o hidrófila de la hélice y sustituyendo, preferiblemente de manera conservativa, al menos un residuo de aminoácido que reside en la otra cara por otro residuo de aminoácido. Los residuos que comprenden la agrupación hidrófoba y/o la agrupación básica también pueden fijarse opcionalmente según la estructura (I), tal como se definió previamente.

En otra realización de la invención, las formas mutadas o alteradas de la estructura (I) se obtienen sustituyendo al menos un aminoácido por un aminoácido no conservativo. Los expertos en la técnica reconocerán que tales sustituciones no deben alterar sustancialmente las propiedades anfipáticas y/o estructurales de la hélice citadas anteriormente. Por tanto, en ciertos casos, puede ser deseable sustituir uno o más pares de aminoácidos de modo que se conserven las propiedades netas de la hélice. Se proporciona orientación adicional para seleccionar sustituciones de aminoácidos apropiadas mediante las secuencias peptídicas enumeradas en la tabla X (véase la sección 8.3, a continuación).

Todavía en otra realización de la invención, los primeros uno a cuatro residuos de aminoácido en el extremo N-terminal y/o C-terminal de los péptidos del núcleo de estructura (I) se sustituyen por uno o más residuos de aminoácido, o uno o más segmentos peptídicos, que se sabe que confieren estabilidad a las regiones de estructura secundaria \alpha-helicoidal (residuos o segmentos de "extremos tapados"). Tales residuos y segmentos de extremos tapados se conocen bien en la técnica (véase, por ejemplo, Richardson y Richardson, 1988, Science 240:1648-1652; Harper y otros, 1993, Biochemistry 32(30):7605-7609; Dasgupta y Bell, 1993, Int. J. Peptide Protein Res. 41:499-511; Seale y otros, 1994, Protein Science 3:1741-1745; Doig y otros, 1994, Biochemistry 33: 3396-3403; Zhou y otros, 1994, Proteins 18:1-7; Doig y Baldwin, 1995, Protein Science 4:1325-1336; Odaert y otros, 1995, Biochemistry 34:12820-12829; Petrukhov y otros, 1996, Biochemistry 35:387-397; Doig y otros, 1997, Protein Science 6:147-155). Alternativamente, los primeros uno a cuatro residuos de aminoácido N-terminales y/o C-terminales de la estructura (I) pueden sustituirse por restos peptidomiméticos que imitan la estructura y/o propiedades de los residuos o segmentos de extremos tapados. Se conocen en la técnica miméticos de extremos tapados adecuados, y se describen, por ejemplo, en Richardson y Richardson, 1988, Science 240:1648-1652; Harper y otros, 1993, Biochemistry 32(30):7605-7609; Dasgupta y Bell, 1993, Int. J. Peptide Protein Res. 41:499-511; Seale y otros, 1994, Protein Science 3:1741-1745; Doig y otros, 1994, Biochemistry 33: 3396-3403; Zhou y otros, 1994, Proteins 18:1-7; Doig y Baldwin, 1995, Protein Science 4:1325-1336; Odaert y otros, 1995, Biochemistry 34:12820-12829; Petrukhov y otros, 1996, Biochemistry 35:387-397; Doig y otros, 1997, Protein Science 6:147-155).

Aunque la estructura (I) contiene 22 posiciones de residuos de aminoácido especificadas, debe entenderse que los péptidos del núcleo de la invención pueden contener menos de 22 residuos de aminoácido. De hecho, las formas truncadas o delecionadas internamente de la estructura (I) que contienen tan sólo 18 o incluso 15 residuos de aminoácido que conservan sustancialmente las características y propiedades globales de la hélice anfipática formada por los péptidos del núcleo de estructura (I) se considera que están dentro del alcance de la presente invención.

Las formas truncadas de los péptidos de estructura (I) se obtienen delecionando uno o más aminoácidos de los extremos N y/o C-terminales de la estructura (I). Las formas delecionadas internamente de la estructura (I) se obtienen delecionando uno o más aminoácidos de las posiciones internas dentro del péptido de estructura (I). Los residuos de aminoácido internos delecionados pueden ser o no residuos consecutivos.

Los expertos en la técnica reconocerán que la deleción de un residuo de aminoácido interno de un péptido del núcleo de estructura (I) producirá que el plano de la interfase hidrófila-hidrófoba rote 100º en el punto de la deleción. Dado que tales rotaciones pueden alterar significativamente las propiedades anfipáticas de la hélice resultante, en una realización preferida de la invención se delecionan residuos de aminoácido de modo que se conserva sustancialmente la alineación del plano de la interfase hidrófila-hidrófoba a lo largo del eje longitudinal completo de la hélice.

Esto puede lograrse convenientemente delecionando un número suficiente de residuos de aminoácido consecutivos o no consecutivos de manera que se delecione un giro helicoidal completo. Una hélice \alpha idealizada contiene 3,6 residuos por giro. Por tanto, en una realización preferida, se delecionan grupos de 3-4 residuos de aminoácido consecutivos o no consecutivos. Si se delecionan 3 aminoácidos o 4 aminoácidos dependerá de la posición dentro de la hélice del primer residuo que va a delecionarse. La determinación del número apropiado de residuos de aminoácido consecutivos o no consecutivos que constituyen un giro helicoidal completo a partir de cualquier punto de partida particular dentro de una hélice anfipática está dentro de las capacidades de los expertos en la técnica.

Debido a la importancia supuesta de la agrupación básica en el extremo C-terminal de los péptidos del núcleo de estructura (I) en la estabilización de la hélice y a la importancia de la agrupación hidrófoba para efectuar la unión a lípidos y la activación de LCAT, en realizaciones preferidas de la invención, no se delecionan los residuos que comprenden las agrupaciones básica e hidrófoba. Por tanto, en realizaciones preferidas, no se delecionan los residuos 18, 19, 20 y 22 (agrupación básica) y los residuos 3, 6, 9 y 10 (agrupación hidrófoba).

Los péptidos del núcleo de estructura (I) también pueden extenderse en uno o ambos extremos o internamente con residuos de aminoácido adicionales que no interfieren sustancialmente con, y en algunas realizaciones incluso potencian, las propiedades funcionales y/o estructurales de los péptidos. De hecho, se considera que los péptidos del núcleo extendidos que contienen hasta 23, 25, 26, 29 o incluso más residuos de aminoácido están dentro del alcance de la presente invención. Preferiblemente, tales péptidos extendidos conservarán sustancialmente la anfipaticidad neta y otras propiedades de los péptidos de estructura (I). Por supuesto, se reconocerá que la adición de aminoácidos internamente hará rotar el plano de la interfase hidrófoba-hidrófila en el punto de la inserción de una manera similar a la descrita anteriormente para las deleciones internas. Por tanto, las consideraciones tratadas anteriormente en conexión con las deleciones internas se aplican también a las adiciones internas.

En una realización, los péptidos del núcleo están extendidos en el extremo N y/o C-terminal mediante al menos un giro helicoidal. Preferiblemente, tales extensiones estabilizarán la estructura secundaria helicoidal en presencia de lípidos, tal como los aminoácidos y segmentos de extremos tapados descritos anteriormente.

En una realización particularmente preferida, el péptido del núcleo de estructura (I) se extiende en el extremo C-terminal mediante un único residuo de aminoácido básico, preferiblemente Lys (K). Cuando se extiende así, X_{1} es preferiblemente D-Pro (p) o Gly (G); X_{2} es preferiblemente Val (V); X_{3} es preferiblemente Leu (L); X_{4} es preferiblemente Asp (D); X_{5} es preferiblemente Leu (L); X_{6} es preferiblemente Phe (F); X_{7} es preferiblemente Arg (R); X_{8} es preferiblemente Glu (E); X_{9} es preferiblemente Leu (L); X_{10} es preferiblemente Leu (L); X_{11} es preferiblemente Asn (N); X_{12} es preferiblemente Glu (E); X_{13} es preferiblemente Leu (L); X_{14} es preferiblemente Leu (L); X_{15} es preferiblemente Glu (E); X_{16} es preferiblemente Ala (A); X_{17} es preferiblemente Leu (L); X_{18} es preferiblemente Lys (K); X_{19} es preferiblemente Gln (Q); X_{20} es preferiblemente Lys (K); X_{21} es preferiblemente Leu (L); y/o X_{22} es preferiblemente Lys (K).

También se incluyen dentro del alcance de la presente invención formas "bloqueadas" del agonista de ApoA-I, es decir, formas de los agonistas de ApoA-I en las que el extremo N y/o C-terminal está bloqueado con un resto que puede reaccionar con el -NH_{2} N-terminal o el -C(O)OH C-terminal. Se ha descubierto que la eliminación de las cargas N- y/o C-terminales de los agonistas de ApoA-I de la invención que contienen 18 residuos de aminoácido o menos (sintetizando amidas/éster/hidrazidas/alcoholes de péptido N-acilado y sustituciones de los mismos) da como resultado agonistas que se aproximan, y en algunas realizaciones incluso superan, la actividad de la forma no bloqueada del agonista. En algunas realizaciones que contienen 22 o más aminoácidos, el bloqueo del extremo N o C-terminal da como resultado agonistas de ApoA-I que muestran una actividad inferior que la de las formas no bloqueadas. Sin embargo, se espera que el bloqueo tanto del extremo N como C-terminal de los agonistas de ApoA-I compuestos por 22 o más aminoácidos restaure la actividad. Por tanto, en una realización preferida de la invención, se bloquean o bien el extremo N-terminal o bien el C-terminal (preferiblemente ambos extremos) de los péptidos del núcleo que contienen 18 o menos aminoácidos, mientras que los extremos N y C-terminales de los péptidos que contienen 22 o más aminoácidos están o bien ambos bloqueados o bien ambos no bloqueados. Los grupos de bloqueo de extremos N-terminales típicos incluyen RC(O)-, en el que R es -H, alquilo (C_{1}-C_{5}), alquenilo (C_{1}-C_{6}), alquinilo (C_{1}-C_{6}), arilo (C_{5}-C_{20}), alcarilo (C_{6}-C_{26}), heteroarilo de 5-20 miembros o alq-heteroarilo de 6-26 miembros. Los grupos de bloqueo de extremos N-terminales preferidos incluyen acetilo, formilo y dansilo. Los grupos de bloqueo de extremos C-terminales típicos incluyen -C(O)NRR y -C(O)OR, en los que cada R se define independientemente tal como anteriormente. Los grupos de bloqueo de extremos C-terminales preferidos incluyen aquellos en los que cada R es independientemente metilo. Aunque sin pretender restringirse a ninguna teoría particular, se cree que tales grupos de bloqueo terminales estabilizan la hélice \alpha en presencia de lípidos (véase, por ejemplo, Venkatachelapathi y otros, 1993, PROTEINS: Structure, Function and Genetics 15:349-359).

La estructura nativa de la ApoA-I contiene ocho unidades helicoidales que se cree que actúan en concierto para unirse a lípidos (Nakagawa y otros, 1985, J. Am. Chem. Soc. 107:7087-7092; Anantharamaiah y otros, 1985, J. Biol. Chem. 260: 10248-10262; Vanloo y otros, 1991, J. Lipid Res. 32:1253-1264; Mendez y otros, 1994, J. Clin. Invest. 94:1698-1705; Palgunari y otros, 1996, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 16:328-338; Demoor y otros, 1996, Eur. J. Biochem. 239:74-84). Por tanto, también se incluyen en la presente invención agonistas de ApoA-I compuestos de dímeros, trímeros, tetrámeros e incluso polímeros de orden superior ("multímeros") de los péptidos del núcleo descritos en el presente documento. Tales multímeros pueden estar en forma de repeticiones en tándem, redes ramificadas o combinaciones de los mismos. Los péptidos del núcleo pueden estar unidos directamente entre sí o separados por uno o más ligadores.

\newpage

Los péptidos del núcleo que comprenden los multímeros pueden ser los péptidos de estructura (I), análogos de la estructura (I), formas mutadas de estructura (I), formas truncadas o delecionadas internamente de la estructura (I), formas extendidas de la estructura (I) y/o combinaciones de los mismos. Los péptidos del núcleo pueden estar conectados de una manera cabeza con cola (es decir, extremo N-terminal con extremo C-terminal), de una manera cabeza con cabeza (es decir, extremo N-terminal con extremo N-terminal), de una manera cola con cola (es decir, extremo C-terminal a extremo C-terminal), o combinaciones de las mismas.

En una realización de la invención, los multímeros son repeticiones en tándem de dos, tres, cuatro y hasta aproximadamente diez péptidos del núcleo. Preferiblemente, los multímeros son repeticiones en tándem de desde 2 hasta 8 péptidos del núcleo. Por tanto, en una realización, los agonistas de ApoA-I de la invención comprenden multímeros que tienen la siguiente fórmula estructural:

(II)HH[LL_{m}-HH]_{n}LL_{m}-HH

en la que:

cada m es independientemente un número entero desde 0 hasta 1, preferiblemente 1;

n es un número entero desde 0 hasta 10, preferiblemente de 0 a 8;

cada "HH" representa independientemente un péptido o análogo de péptido del núcleo de estructura (I) o una forma mutada, truncada, delecionada o extendida internamente del mismo tal como se describe en el presente documento;

cada "LL" representa independientemente un ligador; y

cada "-" designa independientemente un enlace covalente.

En la estructura (II), el ligador LL puede ser cualquier molécula bifuncional que pueda conectar covalentemente dos péptidos entre sí. Por tanto, los ligadores adecuados son moléculas bifuncionales en las que los grupos funcionales pueden unirse covalentemente al extremo N y/o C terminal de un péptido. Los grupos funcionales adecuados para la unión al extremo N o C-terminal de péptidos se conocen bien en la técnica, tal como lo son los productos químicos adecuados para efectuar tal formación de enlace covalente.

El ligador puede se flexible, rígido o semirrígido, dependiendo de las propiedades deseadas del multímero. Los ligadores adecuados incluyen, por ejemplo, residuos de aminoácido tales como Pro o Gly o segmentos peptídicos que contienen desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 5, 10, 15 ó 20 o incluso más aminoácidos, compuestos orgánicos bifuncionales tales como H_{2}N(CH_{2})NCOOH en los que n es un número entero desde 1 hasta 12, y similares. Ejemplos de tales ligadores, así como métodos para preparar tales ligadores y péptidos que incorporan tales ligadores se conocen bien en la técnica (véase, por ejemplo, Hünig y otros, 1974, Chem. Ber. 100:3039-3044; Basak y otros, 1994, Bioconjug. Chem. 5(4): 301-305).

En una realización preferida de la invención, las repeticiones en tándem están interrumpidas internamente por un único residuo de prolina. Con este fin, en los casos en que los péptidos del núcleo se terminan en su extremo N o C terminal con prolina, tal como, por ejemplo, en los que X_{1} en la estructura (I) es Pro (P) o D-Pro (p), m en la estructura (II) es preferiblemente 0. En los casos en que los péptidos del núcleo no contienen una prolina N o C-terminal, LL es preferiblemente Pro (P) o D-Pro (p) y m es preferiblemente 1.

En ciertas realizaciones de la invención, puede desearse emplear ligadores escindibles que permitan la liberación de uno o más segmentos helicoidales (HH) en ciertas condiciones. Los ligadores escindibles adecuados incluyen péptidos que tienen secuencias de aminoácidos que son reconocidas por proteasas, oligonucleótidos que se escinden por endonucleasas y compuestos orgánicos que pueden escindirse por medios químicos, tales como en condiciones ácidas, básicas u otras. Preferiblemente, las condiciones de escisión serán relativamente suaves de modo que no se desnaturalicen o se degraden de otra manera los segmentos helicoidales y/o ligadores no escindidos que componen los agonistas multiméricos de ApoA-I.

Los ligadores de péptido y oligonucleótido que pueden escindirse selectivamente, así como medios para escindir los ligadores se conocen bien y serán fácilmente evidentes para los expertos en la técnica. Los ligadores de compuestos orgánicos adecuados que pueden escindirse selectivamente serán evidentes para los expertos en la técnica, e incluyen los descritos, por ejemplo, en el documento WO 94/08051, así como las referencias citadas en él.

En una realización preferida, los ligadores empleados son péptidos que son sustratos para enzimas circulatorias endógenas, permitiendo así a los agonistas multiméricos de ApoA-I escindirse selectivamente in vivo. Las enzimas endógenas adecuadas para escindir los ligadores incluyen, por ejemplo, proapolipoproteína A-I propeptidasa. Las enzimas apropiadas, así como los segmentos peptídicos que actúan como sustratos para tales enzimas se conocen bien en la técnica (véase, por ejemplo, Edelstein y otros, 1983, J. Biol. Chem. 258:11430-11433; Zanis, 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:2574-2578).

Tal como se discutió anteriormente, una característica clave de los péptidos del núcleo de la invención es su capacidad para formar puentes de hidrógeno o puentes salinos intermoleculares cuando se disponen de una manera antiparalela. Por tanto, en una realización preferida de la invención, se usan ligadores de suficiente longitud y flexibilidad de modo que se permite que los segmentos helicoidales (HH) de estructura (II) se alineen de una forma antiparalela y formen puentes de hidrógeno o puentes salinos intermoleculares en presencia de lípidos.

Los ligadores de suficiente longitud y flexibilidad incluyen, pero no se limitan a, Pro (P), Gly (G), Cys-Cys, H_{2}N-(CH_{2})N-COOH en los que n es de 1 a 12, preferiblemente de 4 a 6; H_{2}N-aril-COOH e hidratos de carbono.

Alternativamente, debido a que las apolipoproteínas nativas permiten la unión conjunta entre segmentos helicoidales antiparalelos, los ligadores peptídicos que corresponden en la secuencia primaria a los segmentos peptídicos que conectan hélices adyacentes de las apolipoproteínas nativas, incluyendo, por ejemplo, ApoA-I, ApoA-II, ApoA-IV, ApoC-I, ApoC-II, ApoC-III, ApoD, ApoE y ApoJ pueden usarse convenientemente para unir los péptidos del núcleo. Estas secuencias se conocen bien en la técnica (véase, por ejemplo, Rosseneu y otros, "Analysis of the Primary and of the Secondary Structure of the Apolipoproteins," En: Structure and Function of Lipoproteins, capítulo 6, 159-183, CRC Press, Inc., 1992).

Otros ligadores que permiten la formación de puentes de hidrógeno o puentes salinos intermoleculares entre repeticiones en tándem de segmentos helicoidales antiparalelos incluyen giros inversos peptídicos tales como giros \beta y giros \gamma, así como las moléculas orgánicas que imitan las estructuras de giros \beta y/o giros \gamma peptídicos. Generalmente, los giros inversos son segmentos de péptido que invierten la dirección de la cadena polipeptídica de modo que le permite a una cadena polipetídica sencilla adoptar regiones de estructura de lámina \beta antiparalela o \alpha-helicoidal antiparalela. Los giros \beta están compuestos generalmente por cuatro residuos de aminoácido y los giros \gamma están compuestos generalmente por tres residuos de aminoácido.

Las conformaciones y secuencias de muchos giros \beta peptídicos se han descrito bien en la técnica e incluyen, a modo de ejemplo y no de limitación, tipo-I, tipo-I', tipo-II, tipo-II', tipo-III, tipo-III', tipo-IV, tipo-V, tipo-V', tipo-VIa, tipo-VIb, tipo-VII y tipo-VIII (véase, Richardson, 1981, Adv. Proten Chem. 34:167-339; Rose y otros, 1985, Adv. Protein Chem. 37:1-109; Wilmot y otros, 1988, J. Mol. Biol. 203:221-232; Sibanda y otros, 1989, J. Mol. Biol. 206:759-777; Tramontano y otros, 1989, Proteins: Struct. Funct. Genet. 6:382-394).

Las conformaciones específicas de giros peptídicos cortos tales como giros \beta dependen principalmente de las posiciones de ciertos residuos de aminoácido en el giro (habitualmente Gly, Asn o Pro). Generalmente, el giro \beta de tipo-I es compatible con cualquier residuo de aminoácido en las posiciones 1 a 4 del giro, excepto en que la Pro no puede encontrarse en la posición 3. La Gly predomina en la posición 4 y la Pro predomina en la posición 2 de los giros tanto de tipo-I como de tipo-II. Los residuos de Asp, Asn, Ser y Cys se encuentran frecuentemente en la posición 1, en la que sus cadenas laterales se unen con frecuencia mediante puentes de hidrógeno al NH del residuo 3.

En los giros de tipo-II, la Gly y Asn se encuentran con la mayor frecuencia en la posición 3, debido a que adoptan los ángulos de estructura principal requeridos más fácilmente. Idealmente, los giros de tipo-I' tienen Gly en las posiciones 2 y 3, y los giros de tipo-II' tienen Gly en la posición 2. Los giros de tipo-III generalmente pueden tener la mayoría de los residuos de aminoácido, pero los giros de tipo-III' habitualmente requieren Gly en las posiciones 2 y 3. Los giros de tipo-VIa y VIb generalmente tienen un enlace peptídico cis y Pro como un residuo interno. Para una revisión de los diferentes tipos y secuencias de giros \beta en proteínas y péptidos véase Wilmot y otros, 1988, J. Mol. Biol. 203:221-232.

La conformación y las secuencias de muchos giros \gamma peptídicos también se han descrito bien en la técnica (véase, por ejemplo, Rose y otros, 1985, Adv. Protein Chem. 37:1-109; Wilmer-White y otros, 1987, Trends Biochem. Sci. 12:189-192; Wilmot y otros, 1988, J. Mol. Biol. 203:221-232; Sibanda y otros, 1989, J. Mol. Biol. 206:759-777; Tramontano y otros, 1989, Proteins: Struct. Funct. Genet. 6:382-394). Todos estos tipos de estructuras de giros \beta y de giros \gamma y sus secuencias correspondientes, así como estructuras y secuencias de giros \beta y de giros \gamma peptídicos descubiertas posteriormente se contemplan específicamente por la invención.

Alternativamente, el ligador (LL) puede comprender una molécula o resto orgánico que imita la estructura de un giro \beta o giro \gamma peptídico. Tales restos miméticos de giro \beta y/o giro \gamma, así como métodos para sintetizar péptidos que contienen tales restos, se conocen bien en la técnica, e incluyen, entre otros, los descritos en Giannis y Kolter, 1993 Angew. Chem. Intl. Ed. Eng. 32:1244-1267; Kahn y otros, 1988, J. Molecular Recognition 1:75-79; y Kahn y otros, 1987, Tetrahedron Lett. 28:1623-1626.

Aún en otra realización de la invención, los multímeros están en forma de redes ramificadas (véase, por ejemplo, la figura 7). Tales redes se obtienen convenientemente a través del uso de restos de enlace multifunción que permiten que se unan más de dos unidades helicoidales a un único resto de unión. Por tanto, las redes ramificadas emplean moléculas que tienen tres, cuatro o incluso más grupos funcionales que pueden unirse covalentemente al extremo N y/o C-terminal de un péptido. Los restos de unión adecuados incluyen, por ejemplo, cadenas laterales que tienen residuos de aminoácido que portan funcionalidades hidroxilo, sulfanilo, amino, carboxilo, amido y/o éster, tales como, por ejemplo, Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q), Lys (K), Arg (R), Orn, Asp (D) y Glu (E); u otras moléculas orgánicas que contienen tales grupos funcionales.

Los segmentos helicoidales unidos a un único resto de unión necesitan no estar unidos por medio de extremos terminales iguales. De hecho, en algunas realizaciones los segmentos helicoidales están unidos a un único resto de unión de modo que se disponen de una forma antiparalela, es decir, algunas de las hélices están unidas por medio de sus extremos N-terminales, otras por medio de sus extremos C-terminales.

Los segmentos helicoidales pueden estar unidos directamente al resto de unión, o pueden estar separados del resto de unión mediante uno o más ligadores (LL) bifuncionales, tal como se describió anteriormente.

En referencia a las figuras 7A y 7B, puede observarse que una red ramificada puede describirse en cuanto al número de "nudos" que comprende la red, en la que cada resto de unión multifuncional constituye un nudo. En las figuras 7A y 7B, los segmentos helicoidales (es decir, los péptidos del núcleo de la invención) se ilustran como cilindros, y los restos de unión multifuncionales (o nudos) como círculos (\ding{108}), en los que el número de líneas que emana del círculo indica el "orden" (o número de grupos funcionales) del resto de unión multifuncional.

El número de nudos en la red dependerá generalmente del número total deseado de segmentos helicoidales, y será normalmente desde aproximadamente 1 hasta 2. Por supuesto, se apreciará que para un número dado de segmentos helicoidales deseados, las redes que tienen restos de unión de orden superior tendrán menos nudos. Por ejemplo, en referencia a las figuras 7A y 7B, una red de orden terciario (es decir, una red que tiene restos de unión trifuncionales) de siete unidades helicoidales tiene tres nudos (figura 7A), mientras que una red de orden cuaternario (es decir, una red que tiene restos de unión tetrafuncionales) de siete unidades helicoidales tiene solamente dos nudos (figura 7B).

Las redes pueden ser de orden uniforme, es decir, redes en las que todos los nudos sean, por ejemplo, restos de unión trifuncionales o tetrafuncionales, o pueden ser de orden mixto, por ejemplo, redes en las que los nudos son mezclas de, por ejemplo, restos de unión trifuncionales y tetrafuncionales. Por supuesto, ha de entenderse que incluso en las redes de orden uniforme, los restos de unión no necesitan ser idénticos. Una red de orden terciario puede emplear, por ejemplo, dos, tres, cuatro o incluso más restos de unión trifuncionales diferentes.

Igual que los multímeros lineales, los segmentos helicoidales que comprenden la red ramificada pueden ser, pero no necesitan ser, idénticos.

Un ejemplo de una red ramificada de orden mixto de este tipo se ilustra en la figura 7C. En la figura 7C, los segmentos helicoidales (es decir, péptidos del núcleo de la invención) se ilustran como cilindros y los restos de unión multifuncionales como círculos (\ding{108}), en los que el número de líneas que emanan del círculo indica el "orden" (o número de grupos funcionales) del resto de unión multifuncional. Las líneas que conectan segmentos helicoidales representan ligadores LL bifuncionales, tal como se describió previamente. Los segmentos helicoidales que comprenden las redes ramificadas pueden ser repeticiones en tándem de péptidos del núcleo, tal como se describió previamente.

En una realización ilustrativa, las redes ramificadas de la invención se describen mediante la fórmula:

\vskip1.000000\baselineskip

(III)X-N_{ya}-X_{(ya-1)}-(N_{yb}-X_{(yb-1)})_{p}

en la que:

cada X es independientemente HH-(LL_{m}-HH)-_{n} LL_{m}-HH;

cada HH es independientemente un péptido del núcleo de estructura (I) o una forma análoga o mutada, truncada, extendida o delecionada internamente del mismo tal como se describe en el presente documento;

cada LL es independientemente un ligador bifuncional;

cada m es independientemente un número entero desde 0 hasta 1;

cada n es independientemente un número entero desde 0 hasta 8;

N_{ya} y N_{yb} son cada uno independientemente un resto de unión multifuncional en los que y_{a} e y_{b} representan el número de grupos funcionales en N_{ya} y N_{yb}, respectivamente;

cada y_{a} o y_{b} es independientemente un número entero desde 3 hasta 8;

p es un número entero desde 0 hasta 7; y

cada "-" designa independientemente un enlace covalente.

En una realización preferida, la red ramificada comprende un "árbol de Lys", es decir, una red en la que el resto de unión multifuncional es uno o más residuos de Lys (K) (véase, por ejemplo, la figura 7D).

En una realización ilustrativa, las redes ramificadas con "árbol de Lys" de la invención se describen mediante las fórmulas:

9

en las que:

cada X es independientemente HH-(LL_{m}-HH)-_{n}LL_{m}-HH;

cada HH es independientemente un péptido o análogo de péptido del núcleo de estructura (I) o una forma mutada, truncada, extendida o delecionada internamente del mismo tal como se describe en el presente documento;

cada LL es independientemente un ligador bifuncional;

cada n es independientemente un número entero desde 0 hasta 8;

cada m es independientemente un número entero desde 0 hasta 1;

R_{1} es -O o -NRR; y

cada R es independientemente -H, alquilo (C_{1}-C_{6}), alquenilo (C_{1}-C_{6}), alquinilo (C_{1}-C_{6}); arilo (C_{5}-C_{20}) alcarilo (C_{6}-C_{26}), heteroarilo de 5-20 miembros o alq-heteroarilo de 6-26 miembros.

5.1.1. Análisis de estructura y función

La estructura y función de los péptidos o análogos de péptido del núcleo de la invención, así como los agonistas de ApoA-I compuestos por tales péptidos del núcleo, incluyendo las formas multiméricas descritas anteriormente, pueden someterse a ensayo con el fin de seleccionar agonistas o miméticos activos de ApoA-I. Por ejemplo, los péptidos del núcleo o análogos de péptido pueden someterse a ensayo para determinar su capacidad para formar hélices \alpha en presencia de lípidos, para unirse a lípidos, para formar complejos con lípidos, para activar la LCAT, para promover la salida de colesterol, etc.

En la técnica se conocen bien métodos y ensayos para analizar la estructura y/o función de los péptidos. Se proporcionan métodos preferidos en los ejemplos de trabajo, a continuación. Por ejemplo, pueden usarse los ensayos de dicroísmos circular (DC) y resonancia magnética nuclear (RMN) descritos en la sección 7, citados a continuación, para analizar la estructura de los péptidos o análogos de péptido (particularmente el grado de helicidad en presencia de lípidos). La capacidad para unirse a lípidos puede determinarse usando el ensayo de espectroscopía de fluorescencia descrito en la sección 7, citado a continuación. La capacidad de los péptidos y/o análogos de péptido para activar LCAT puede determinarse fácilmente usando la activación de LCAT descrita en la sección 8, citada a continuación. Los ensayos in vitro e in vivo descritos en las secciones 9, 10 y 11, citados a continuación, pueden usarse para evaluar la semivida, distribución, salida de colesterol y efectos sobre el TIC.

Generalmente, se considera que son activos los péptidos del núcleo y/o análogos de péptido según la invención que muestran las propiedades enumeradas en la tabla IV, citada a continuación.

TABLA IV Propiedades de péptidos activos

10

Tal como se ilustra en los ejemplos de trabajo, citados a continuación, los péptidos del núcleo que muestran un alto grado de activación de LCAT (\geq 38%) generalmente tienen una estructura de hélice \alpha significativa en presencia de vesículas unilamelares pequeñas (SUV) lipídicas (\geq 60% de estructura helicoidal en el caso de péptidos no bloqueados que contienen 22 o más residuos de aminoácido y péptidos bloqueados que contienen 18 o menos residuos de aminoácido; \geq 40% de estructura helicoidal en el caso de péptidos no bloqueados que contienen 18 o menos aminoácidos), y aquellos péptidos que muestran poco o nada de activación de la LCAT tienen poca estructura de hélice \alpha. Sin embargo, en ciertos casos, los péptidos que muestran una estructura helicoidal significativa en presencia de lípidos no efectúan una activación de LCAT significativa.

De manera similar, mientras que los péptidos del núcleo que muestran una activación de LCAT significativa normalmente se unen a lípidos, en ciertos casos, los péptidos que muestran unión a lípidos no efectúan una activación de LCAT significativa.

Como consecuencia, los expertos en la técnica reconocerán que mientras que la capacidad de los péptidos del núcleo descrita en el presente documento para formar hélices \alpha (en presencia de lípidos) y para unirse a lípidos es crítica para la actividad, en muchos casos estas propiedades pueden no ser suficientes. Por tanto, en una realización preferida, los péptidos del núcleo de la invención se someten a una serie de exámenes para seleccionar los péptidos del núcleo que muestran una actividad farmacológica significativa.

En una primera etapa, se examina un péptido del núcleo para determinar su capacidad para formar una hélice \alpha en presencia de lípidos usando el ensayo de DC descrito en la sección 7, citado a continuación. Los péptidos que son helicoidales al menos al 40% (péptidos no bloqueados que contienen 18 o menos aminoácidos) o helicoidales al 60% (péptidos bloqueados que contienen 18 o menos aminoácidos; péptidos no bloqueados que contienen 22 o más aminoácidos) en presencia de lípidos (a una concentración de aproximadamente 5 \muM y una razón molar de lípido:péptido de aproximadamente 30) se examinan entonces para determinar su capacidad de unión a lípidos usando el ensayo de fluorescencia descrito en la sección 7, citado a continuación. Por supuesto, sólo se examinan los péptidos del núcleo que contengan un residuo de Trp (W) o Nal fluorescente para determinar la unión a lípidos mediante fluorescencia. Sin embargo, para los péptidos que no contienen residuos fluorescentes, la unión a lípidos es obvia cuando la helicidad aumenta en presencia de lípidos.

Los péptidos del núcleo que muestran unión a lípidos en presencia de SUV (péptido 0,5-10 \muM; razón molar de lípido:péptido en el intervalo de 1 a 50) se examinan entonces para determinar su actividad farmacológica. Por supuesto, la actividad farmacológica examinada dependerá del uso deseado de los agonistas de ApoA-I. En una realización preferida, se examinan los péptidos del núcleo para determinar su capacidad para activar la LCAT, ya que los péptidos que activan la LCAT son particularmente útiles en los métodos descritos en el presente documento. Se prefieren los péptidos del núcleo que muestran al menos aproximadamente un 38% de activación de LCAT en comparación con ApoA-I humana nativa (tal como se determina usando el ensayo de activación de LCAT descrito en la sección 8, citado a continuación), prefiriéndose particularmente los péptidos del núcleo que muestran el 50%, 60%, 70%, 80% o incluso el 90% o más.

5.1.2. Realizaciones preferidas

Los agonistas de ApoA-I de la invención pueden definirse adicionalmente mediante las realizaciones preferidas.

En una realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos.

En otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que X_{7} es un aminoácido básico, Asn (N) o Glu (E); X_{8} es un aminoácido ácido o Arg (R); X_{12} es un aminoácido ácido o Asn (N); y/o X_{15} es un aminoácido ácido, Gln (Q) o Lys (K); y X_{1}, X_{2}, X_{3}, X_{4}, X_{5}, X_{6}, X_{9}, X_{10}, X_{11}, X_{13}, X_{14}, X_{16}, X_{17}, X_{18}, X_{19}, X_{20} y X_{21} son tal como se definieron previamente para la estructura (I).

En otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que:

X_{1} es Pro (P), Gly (G), Ala (A), Gln (Q), Asn (N), Asp (D) o D-Pro (p);

X_{2} es Ala (A), Val (V) o Leu (L);

X_{4} es Asp (D) o Glu (E);

X_{7} es Lys (K), Arg (R), Orn, Asn (N) o Glu (E);

X_{8} es Asp (D), Arg (R) o Glu (E);

X_{11} es Asn (N), Gln (Q), Glu (E) o Arg (R);

X_{12} es Asp (D), Glu (E) o Asn (N);

X_{13} es Leu (L), Gly (G) o Aib;

X_{15} es Asp (D), Glu (E), Gln (Q) o Lys (K);

X_{16} es Ala (A), Trp (W), Gly (G), Leu (L), Phe (F) o Nal;

X_{17} es Leu (L), Gly (G) o Nal;

X_{18} es Lys (K), Orn, Gln (Q) o Asn (N);

X_{19} es Lys (K), Orn, Gln (Q) o Asn (N);

X_{20} es Lys (K) u Orn;

X_{21} es Leu (L); y/o

X_{22} es Lys (K) u Orn, y X_{3}, X_{5}, X_{6}, X_{9}, X_{10} y X_{14} son tal como se definieron previamente para la estructura (I).

\vskip1.000000\baselineskip

Una realización incluso más preferida según este aspecto de la invención son aquellos péptidos en los que:

X_{2} es Val (V);

X_{3} es Leu (L);

X_{5} es Leu (L);

X_{6} es Phe (F);

X_{7} es Arg (R) o Lys (K);

X_{8} es Glu (E);

X_{9} es Leu (L);

X_{10} es Leu (L);

X_{11} es Asn (N) o Glu (Q);

X_{12} es Glu (E); y/o

X_{15} es Glu (E);

y X_{1}, X_{4}, X_{13}, X_{14}, X_{16}, X_{17}, X_{18}, X_{19}, X_{20}, X_{21} y X_{22} son tal como se definieron previamente para la estructura (I) o son tal como se definieron en el párrafo anterior.

Todavía en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que sólo uno de X_{18} o X_{19} es un amino ácido básico y el otro de X_{18} o X_{19} es Gln (Q) o Asn (N).

Todavía en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que uno de X_{18} o X_{19} es Lys (K) u Orn y el otro de X_{18} o X_{19} es Gln (Q) o Asn (N).

Aun en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que uno de X_{9}, X_{10}, X_{13}, X_{14}, X_{16} o X_{17} es Gly (G) y los otros son distintos de Gly (G).

Aun en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que X_{13} es Gly (G) y cada uno de X_{9}, X_{10}, X_{14}, X_{16} y X_{17} es distinto de Gly (G).

Todavía en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que:

X_{1} es Pro (P), Gly (G) o D-Pro (p);

X_{2} es Val (V);

X_{3} es Leu (L);

X_{4} es Asp (D) o Glu (E);

X_{5} es L (Leu) o Phe (F);

X_{6} es Phe (F);

X_{7} es Arg (R);

X_{8} es Glu (E);

X_{9} es Leu (L);

X_{10} es Leu (L) o Trp (W);

X_{11} es Asn (N);

X_{12} es Glu (E);

X_{13} es Gly (G);

X_{14} es Leu (L);

X_{15} es Glu (E);

X_{16} es Ala (A) o Trp (W);

X_{17} es Leu (L) o Nal;

X_{18} es Lys (K) u Orn;

X_{19} es Gln (Q);

X_{20} es Lys (K) u Orn;

X_{21} es Leu (L); y

X_{22} es Lys (K) u Orn.

\vskip1.000000\baselineskip

Los agonistas de ApoA-I particularmente preferidos según este aspecto de la invención se seleccionan del grupo que consiste en:

11

y las formas amidada o esterificada en el extremo C-terminal y/o acilada en el extremo N-terminal de los mismos.

Aun en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que X_{9} es Gly (G) y cada uno de X_{10}, X_{13}, X_{14}, X_{16} y X_{17} es distinto de Gly (G). Un agonista de ApoA-I particularmente preferido según este aspecto de la invención es el péptido 20: PVLDLFREGLNELLEALKQKLK (SEQ ID NO:20).

Aun en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que X_{10} es Gly (G) y cada uno de X_{9}, X_{13} X_{14}, X_{16} y X_{17} es distinto de Gly (G). Un agonista de ApoA-I particularmente preferido según este aspecto de la invención es el péptido 9: PVLDLFRELGNELLEALKQKLK (SEQ ID NO:9).

Aun en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que X_{14} es Gly (G) y cada uno de X_{9}, X_{10}, X_{13}, X_{16} y X_{17} es distinto de Gly (G). Un agonista de ApoA-I particularmente preferido según este aspecto de la invención es el péptido 126: PVLDLFRELLNELGEALKQKLK (SEQ ID NO:126).

Aun en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que X_{16} es Gly (G) y cada uno de X_{9}, X_{10}, X_{13}, X_{14} y X_{17} es distinto de Gly (G). Un agonista de ApoA-I particularmente preferido según este aspecto de la invención es el péptido 22: PVLDLFRELLNELLEGLKQKLK (SEQ ID NO:22).

Aun en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que X_{17} es Gly (G) y cada uno de X_{9}, X_{10}, X_{13}, X_{14} y X_{16} es distinto de Gly (G). Un agonista de ApoA-I particularmente preferido según este aspecto de la invención es el péptido 12: PVLDLFRELLNELLEAGKQKLK (SEQ ID NO:12).

\newpage

Las realizaciones que contienen residuos de glicina internos pueden sintetizarse fácilmente con un alto rendimiento mediante la condensación de segmentos, proporcionando así ventajas significativas para la producción a gran escala. La condensación de segmentos, es decir, la unión entre sí de cadenas peptídicas constituyentes pequeñas para formar una cadena peptídica más grande, se ha usado para preparar muchos péptidos biológicamente activos, incluyendo miméticos de 44 residuos de aminoácido de ApoA-I (véase, por ejemplo, Nakagawa y otros, 1985, J. Am Chem. Soc. 107:7087-7083; Nokihara y otros, 1989, Peptides 1988:166-168; Kneib-Cordonnier y otros, 1990, Int. J. Pept. Protein Res. 35:527-538), y se considera que es el método más rentable para la síntesis a granel de alto rendimiento de los péptidos del núcleo de la invención.

Las ventajas de la síntesis mediante la condensación de segmentos incluyen la capacidad para condensar segmentos formados previamente en la fase de disolución y la facilidad de purificación del producto final. Los inconvenientes del método incluyen bajos rendimiento y eficacia de acoplamiento en la etapa de condensación y baja solubilidad de ciertas secuencias peptídicas.

La eficacia de acoplamiento de la etapa de condensación puede aumentarse de manera significativa aumentado el tiempo de acoplamiento. Normalmente, aumentar el tiempo de acoplamiento da como resultado un aumento de la racemización del producto (Sieber y otros, 1970, Helv. Chim. Acta 53:2135-2150). Sin embargo, debido a que la glicina carece de un centro quiral, ésta no experimenta racemización (los residuos de prolina, debido al impedimento estérico, experimentan también poco o nada de racemización en largos tiempos de acoplamiento). Por tanto, las realizaciones que contienen residuos de glicina internos pueden sintetizarse a granel con un alto rendimiento mediante la condensación de segmentos sintetizando los segmentos constituyentes que se aprovechan del hecho de que los residuos de glicina no experimentan racemización. Por tanto, las realizaciones que contienen residuos de glicina internos proporcionan ventajas sintéticas significativas para la preparación a granel a gran escala.

Todavía en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son péptidos de 22 residuos de aminoácido según la estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que cada uno de X_{9}, X_{10}, X_{13}, X_{14} X_{16} y X_{17} es distinto de Gly (G).

X_{1} es Pro (P), Gly (G), Ala (A) o D-Pro (p);

X_{2} es Val (V) o Leu (L);

X_{3} es Leu (L);

X_{4} es Asp (D) o Glu (E);

X_{5} es Leu (L) o Phe (F);

X_{6} es Leu (L) o Phe (F);

X_{7} es Arg (R) o Lys (K);

X_{8} es Glu (E);

X_{9} es Leu (L);

X_{10} es Leu (L) o Trp (W);

X_{11} es Asn (N) o Gln (Q);

X_{12} es Glu (E);

X_{13} es Leu (L) o Aib;

X_{14} es Leu (L), Trp (W) o Nal;

X_{15} es Glu (E);

X_{16} es Ala (A), Leu (L), Trp (W) o Nal;

X_{17} es Leu (L) o Nal;

uno de X_{18} o X_{19} es Gln (Q) y el otro es Lys (K) u Orn;

X_{20} es Lys (K) u Orn;

X_{21} es Leu (L); y

X_{22} es Lys (K) u Orn.

\vskip1.000000\baselineskip

En una realización particularmente preferida según este aspecto de la invención, X_{2} es Val (V); X_{4} es Asp (D); X_{5} es Leu (L); X_{6} es Phe (F); X_{7} es Arg R); X_{10} es Leu (L); X_{11} es Asn (N); X_{13} es Leu (L); X_{14} es Leu (L); X_{16} es Ala (A); X_{17} es Leu (L); X_{18} es Lys (K); X_{19} es Gln (Q); X_{20} es Lys (K) y/o X_{22} es Lys (K).

Aun en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son formas alteradas o mutadas de los péptidos de estructura (I), o las formas acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que:

X_{1} es distinto de Aib, Val (V) o Leu (L);

X_{2} es distinto de D-Val (v);

X_{5} es distinto de Lys (K), Glu (E), Trp (W) o Nal;

X_{6} es distinto de Trp (W);

X_{7} es distinto de Trp (W) o Leu (L);

X_{8} es distinto de Trp (W);

X_{9} es distinto de Lys (K) o Trp (W);

X_{11} es distinto de Trp (W);

X_{12} es distinto de Trp (W) o Leu (L);

X_{13} es distinto de Glu (E) o Trp (W);

X_{15} es distinto de Trp (W); y/o

X_{21} es distinto de Lys (K).

\vskip1.000000\baselineskip

Todavía en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I de la invención se seleccionan del grupo de péptidos expuesto a continuación:

12

13

14

y las formas acilada en el extremo N-terminal (particularmente acetilada o dansilada) y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal de los mismos, en los que X es Aib; Z es Nal; y O es Orn.

Aun en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I de la invención se seleccionan del grupo de péptidos expuesto a continuación:

15

Todavía en otra realización preferida, los agonistas de ApoA-I son formas multiméricas según las estructuras II, III y/o IV en las que HH es un péptido según la estructura (I), o una forma acilada en el extremo N-terminal y/o amidada o esterificada en el extremo C-terminal del mismo, o cualquiera de los péptidos preferidos según la estructura (I) descrita en el presente documento.

Todavía en otra realización preferida, los péptidos del núcleo que componen los agonistas de ApoA-I no son ninguno de los siguientes péptidos:

17

En una realización preferida final, los agonistas de ApoA-I no son ninguno de los péptidos enumerados en la tabla X (sección 8.3, citado a continuación) que muestran una actividad de activación de LCAT inferior al 38% en comparación con ApoA-I humana nativa.

5.2 Síntesis y purificación de los agonistas peptídicos de ApoA-I

Los péptidos del núcleo de la invención pueden prepararse usando prácticamente cualquier técnica conocida en la técnica para la preparación de péptidos. Por ejemplo, pueden prepararse los péptidos usando síntesis en fase sólida o en disolución por etapas convencional, o técnicas de ADN recombinante.

5.2.1 Síntesis química

Los péptidos del núcleo pueden prepararse usando la síntesis en fase sólida o en disolución por etapas convencional (véanse, por ejemplo, Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, Williams y otros, Eds., 1997, CRC Press, Boca Raton Florida, y referencias citadas en el mismo; Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, Atherton & Sheppard, Eds., 1989, IRL Press, Oxford, Inglaterra, y referencias citadas en el mismo).

Alternativamente, los péptidos de la invención pueden prepararse mediante la condensación de segmentos, tal como se describe, por ejemplo, en Liu y otros, 1996, Tetrahedron Lett. 37(7):933-936; Baca, y otros, 1995, J. Am. Chem. Soc. 117:1881-1887; Tam y otros, 1995, Int. J. Peptide Protein Res. 45:209-216; Schnölzer y Kent, 1992, Science 256:221-225; Liu y Tam, 1994, J. Am. Chem. Soc. 116(10):4149-4153; Liu y Tam, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:6584-6588; Yamashiro y Li, 1988, Int. J. Peptide Protein Res. 31:322-334). Éste es particularmente el caso de los péptidos que contienen glicina. Otros métodos útiles para sintetizar los péptidos de la invención se describen en Nakagawa y otros, 1985, J. Am. Chem. Soc. 107:7087-7092.

Pueden prepararse agonistas de ApoA-I que contienen grupos de bloqueo del extremo N y/o C-terminal usando técnicas convencionales de la química orgánica. Por ejemplo, los métodos para acilar el extremo N-terminal de un péptido o amidar o esterificar el extremo C-terminal de un péptido se conocen bien en la técnica. Los modos de llevar otras modificaciones en el extremo N y/o C-terminal serán evidentes para los expertos en la técnica, tal como lo serán los modos de proteger cualquier funcionalidad de cadena lateral que pueda ser necesaria para unir grupos de bloqueo de grupos terminales.

Pueden prepararse convenientemente sales farmacéuticamente aceptables (contraiones) mediante cromatografía de intercambio iónico u otros métodos que se conocen bien en la técnica.

Los compuestos de la invención que están en forma de multímeros en tándem pueden sintetizarse convenientemente añadiendo el/los ligador(es) a la cadena peptídica en la etapa apropiada de la síntesis. Alternativamente, pueden sintetizarse los segmentos helicoidales y hacerse reaccionar cada segmento con el ligador. Por supuesto, el método real de síntesis dependerá de la composición del ligador. Los esquemas y las químicas de protección adecuados se conocen bien, y serán evidentes para los expertos en la técnica.

Los compuestos de la invención que están en forma de redes ramificadas pueden sintetizarse convenientemente usando las resinas triméricas y tetraméricas y las químicas descritas en Tam, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5409-5413 y Demoor y otros, 1996, Eur. J. Biochem. 239:74-84. Modificar las estrategias y resinas sintéticas para sintetizar redes ramificadas de orden superior o inferior, o que contienen combinaciones de diferentes segmentos helicoidales de péptidos del núcleo, está bien dentro de las aptitudes de los expertos en la técnica de la química de péptidos y/ química orgánica.

La formación de enlaces disulfuro, si se desea, se lleva a cabo generalmente en presencia de agentes oxidantes suaves. Pueden usarse agentes oxidantes químicos, o puede simplemente exponerse los compuestos al oxígeno atmosférico para efectuar estos enlaces. En la técnica se conocen diversos métodos, incluyendo los descritos, por ejemplo, por Tam y otros, 1979, Synthesis 955-957; Stewart y otros, 1984, Solid Phase Peptide Synthesis, 2ª Ed., Pierce Chemical Company Rockford, IL; Ahmed y otros, 1975, J. Biol. Chem. 250:8477-8482; y Pennington y otros, 1991 Peptides 1990 164-166, Giralt y Andreu, Eds., ESCOM Leiden, los Países Bajos. Una alternativa adicional se describe por Kamber y otros, 1980, Helv. Chim. Acta 63:899-915. Un método llevado a cabo sobre soportes sólidos se describe por Albericio, 1985, Int. J. Peptide Protein Res. 26:92-97. Cualquiera de estos métodos puede usarse para formar enlaces disulfuro en los péptidos de la invención.

5.2.2 Síntesis recombinante

Si el péptido está compuesto por completo por aminoácidos codificados por genes, o si una parte de éste está compuesta de este modo, el péptido o la parte pertinente pueden sintetizarse también usando técnicas de ingeniería genética recombinantes convencionales.

Para la producción recombinante, se inserta una secuencia polinucleotídica que codifica para el péptido en un vehículo de expresión apropiado, es decir, un vector que contiene los elementos necesarios para la transcripción y traducción de la secuencia codificante insertada, o en el caso de un vector viral de ARN, los elementos necesarios para la replicación y traducción. Entonces se transfecta el vehículo de expresión en una célula diana adecuada que expresará el péptido. Dependiendo del sistema de expresión utilizado, se aísla entonces el péptido expresado mediante procedimientos bien establecidos en la técnica. Los métodos para la producción de péptidos y proteínas recombinantes se conocen bien en la técnica (véase, por ejemplo, Sambrook y otros, 1989, Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y.; y Ausubel y otros, 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y., cada uno de los cuales se incorpora como referencia al presente documento en su totalidad).

Para aumentar la eficacia de la producción, puede diseñarse el polinucleótido para que codifique para múltiples unidades del péptido separadas por sitios de escisión enzimática (de este modo pueden producirse mediante ingeniería genética o bien homopolímeros (unidades peptídicas de repetición) o bien heteropolímeros (péptidos diferentes unidos entre sí). El polipéptido resultante puede escindirse (por ejemplo, mediante tratamiento con la enzima apropiada) con el fin de recuperar las unidades peptídicas. Esto puede aumentar el rendimiento de de los péptidos dirigidos por un único promotor. En una realización preferida, puede diseñarse un polinucleótido policistrónico de modo que se transcribe un único ARNm que codifica para múltiples péptidos (es decir, homopolímeros o heteropolímeros), estando cada región codificante operativamente unida a una secuencia de control de la traducción independiente de cap; por ejemplo, un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES). Cuando se usa en sistemas de expresión viral apropiados, la traducción de cada péptido codificado por el ARNm está dirigida internamente en el transcrito; por ejemplo, por el IRES. Por tanto, el constructo policistrónico dirige la transcripción de un único ARNm policistrónico grande que, a su vez, dirige la traducción de múltiples péptidos individuales. Este enfoque elimina la producción y el tratamiento enzimático de poliproteínas y puede aumentar significativamente el rendimiento del péptido dirigido por un único promotor.

Puede utilizarse una variedad de sistemas de vector de expresión-huésped para expresar los péptidos descritos en el presente documento. Éstos incluyen, pero no se limitan a, microorganismos tales como bacterias transformadas con vectores de expresión de ADN de plásmido o ADN de bacteriófago recombinantes que contienen una secuencia codificante apropiada; levaduras u hongos filamentosos transformados con vectores de expresión de hongos o levaduras recombinantes que contienen una secuencia codificante apropiada; sistemas de células de insecto infectados con vectores de expresión de virus recombinantes (por ejemplo, baculovirus) que contienen una secuencia codificante apropiada; sistemas de células vegetales infectados con vectores de expresión de virus recombinantes (por ejemplo, virus del mosaico de la coliflor o virus del mosaico del tabaco) o transformados con vectores de expresión de plásmido recombinantes (por ejemplo, plásmido Ti) que contienen una secuencia codificante apropiada; o sistemas de células animales.

Los elementos de expresión de los sistemas de expresión varían en su potencia y especificidades. Dependiendo del sistema huésped/vector utilizado, puede usarse cualquiera de varios elementos de traducción y transcripción adecuados, incluyendo promotores inducibles y constitutivos, en el vector de expresión. Por ejemplo, cuando se realiza la clonación en sistemas bacterianos, pueden usarse promotores inducibles tales como pL del bacteriófago \lambda, plac, ptrp, ptac (promotor híbrido ptrp-lac) y similares; cuando se realiza la clonación en sistemas de células de insecto, pueden usarse promotores tales como el promotor de la polihedrina de baculovirus; cuando se realiza la clonación en sistemas de células vegetales, pueden usarse promotores derivados del genoma de células vegetales (por ejemplo, promotores de choque térmico; el promotor para la subunidad pequeña de RUBISCO; el promotor para la proteína de unión a clorofila a/b) o de virus vegetales (por ejemplo, el promotor de ARN 35S de CaMV; el promotor de la proteína de envoltura de TMV); cuando se realiza la clonación en sistemas de células de mamífero, pueden usarse promotores derivados del genoma de células de mamífero (por ejemplo, promotor de la metalotioneina) o de virus de mamífero (por ejemplo, el promotor tardío del adenovirus; el promotor 7.5 K del virus vaccinia); cuando se generan líneas celulares que contienen múltiples copias de producto de expresión, pueden usarse vectores basados en SV40, BPV y EBV con un marcador seleccionable adecuado.

En los casos en que se usan vectores de expresión vegetales, la expresión de secuencias que codifican los péptidos de la invención puede dirigirse por cualquiera de varios promotores. Por ejemplo, pueden usarse promotores virales tales como los promotores de ARN 35S y ARN 19S de CaMV (Brisson y otros, 1984, Nature 310:511-514), o el promotor de la proteína de envoltura de TMV (Takamatsu y otros, 1987, EMBO J. 6:307-311); alternativamente pueden usarse promotores vegetales tales como la subunidad pequeña de RUBISCO (Coruzzi y otros, 1984, EMBO J. 3:1671-1680; Broglie y otros, 1984, Science 224:838-843) o promotores de choque térmico, por ejemplo, hsp17.5-E o hsp17.3-B de soja (Gurley y otros, 1986, Mol. Cell. Biol. 6:559-565). Estos constructos pueden introducirse en células vegetales usando plásmidos Ti, plásmidos Ri, vectores de virus vegetales, transformación de ADN directa, microinyección, electroporación, etc. Para revisiones de tales técnicas véase, por ejemplo, Weissbach & Weissbach, 1988, Methos for Plant Molecular Biology, Academic Press, NY, sección VIII, páginas 421-463; y Grierson & Corey, 1988, Plant Molecular Biology, 2ª Ed., Blackie, Londres, Cap. 7-9.

En un sistema de expresión de insectos que puede usarse para producir los péptidos de la invención, Autographa californica, se usa el virus de la polihedrosis nuclear (AcNPV) como vector para expresar los genes foráneos. El virus crece en células de Spodoptera frugiperda. Puede clonarse una secuencia codificante en regiones no esenciales (por ejemplo el gen de polihedrina) del virus y situarse bajo el control de un promotor de AcNPV (por ejemplo, el promotor de polihedrina). La inserción satisfactoria de una secuencia codificante dará como resultado la inactivación del gen de polihedrina y la producción de virus recombinantes no ocluidos (es decir, virus que carecen de la envoltura proteica codificada por el gen de polihedrina). Estos virus recombinantes se usan entonces para infectar las células de Spodoptera frugiperda en las que se expresa el gen insertado (por ejemplo, véase Smith y otros, 1983, J. Virol. 46: 584; Smith, patente estadounidense número 4.215.051). Ejemplos adicionales de este sistema de expresión pueden encontrarse en Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 2, Ausubel y otros, ediciones., Greene Publish. Assoc. & Wiley Interscience.

En células huésped de mamífero pueden utilizarse varios sistemas de expresión basados en virus. En los casos en que se usa un adenovirus como vector de expresión, una secuencia codificante puede estar ligada a un complejo de control de la transcripción/traducción de adenovirus, por ejemplo, el promotor tardío y la secuencia líder tripartita. Entonces puede insertarse este gen quimérico en el genoma del adenovirus mediante recombinación in vitro o in vivo. La inserción en una región no esencial del genoma viral (por ejemplo, región E1 o E3) dará como resultado un virus recombinante que es viable y que puede expresar péptido en los huéspedes infectados (por ejemplo, véase Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 81:3655-3659). Alternativamente, puede usarse el promotor 7.5 K de vaccinia, (véanse, por ejemplo, Mackett y otros, 1982, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 79:7415-7419; Mackett y otros, 1984, J. Virol. 49:857-864; Panicali y otros, 1982, Proc. Natl. Acad. Sci. 79:4927-4931).

Otros sistemas de expresión para producir los péptidos de la invención serán evidentes para los expertos en la técnica.

5.2.3 Purificación de péptidos

Los péptidos de la invención pueden purificarse mediante técnicas conocidas en la técnica tales como cromatografía en fase inversa, cromatografía líquida de alta resolución, cromatografía de intercambio iónico, electroforesis en gel, cromatografía de afinidad y similares. Las condiciones reales utilizadas para purificar un péptido particular dependerán, en parte, de la estrategia de síntesis y de factores tales como la carga neta, hidrofobicidad, hidrofilicidad, etc., y serán evidentes para los expertos en la técnica. Los péptidos ramificados multiméricos pueden purificarse, por ejemplo, mediante cromatografía de exclusión molecular y de intercambio iónico.

Para la purificación mediante cromatografía de afinidad puede usarse cualquier anticuerpo que se una específicamente al péptido. Para la producción de anticuerpos, pueden inmunizarse diversos animales huésped, incluyendo pero sin limitarse a conejos, ratones, ratas, etc., mediante inyección con un péptido. El péptido puede estar unido a un vehículo adecuado, tal como BSA, por medio de un grupo funcional de cadena lateral o ligadores unidos a un grupo funcional de cadena lateral. Pueden usarse diversos adyuvantes para aumentar la respuesta inmunitaria, dependiendo de la especie huésped, incluyendo pero sin limitarse a adyuvante de Freund (completo e incompleto), geles minerales tales como hidróxido de aluminio, sustancias tensioactivas tales como lisolecitina, polioles plurónicos, polianiones, péptidos, emulsiones de aceite, hemocianina de lapa californiana, dinitrofenol y adyuvantes humanos potencialmente útiles tales como BCG (bacilos de Calmette-Guerin) y Corynebacterium parvum.

Pueden prepararse anticuerpos monoclonales frente a un péptido usando cualquier técnica que proporciona la producción moléculas de anticuerpo mediante líneas celulares continuas en cultivo. Éstas incluyen pero no se limitan a la técnica del hibridoma descrita originalmente por Kohler y Milstein, 1975, Nature 256:495-497, o Kaprowski, patente estadounidense número 4.376.110 que se incorpora como referencia al presente documento; la técnica del hibridoma de células B humanas) Kosbor y otros, 1983, Immunology Today 4: 72; Cote y otros, 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:2026-2030); y la técnica del hibridoma de VEB (Cole y otros, 1985, Monoclonal Antibody and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., páginas 77-96 (1985)). Además, pueden usarse técnicas desarrolladas para la producción de "anticuerpos quiméricos" Morrison y otros, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81:6851-6855; Neuberger y otros, 1984, Nature 312:604-608; Takeda y otros, 1985, Nature 314:452-454, Boss, patente estadounidense número 4.816.397; Cabilly, patente estadounidense número 4.816.567; que se incorporan como referencia al presente documento) cortando y empalmando los genes de una molécula de anticuerpo de ratón de especificidad de antígeno apropiada junto con genes de una molécula de anticuerpo humano de actividad biológica apropiada. O pueden prepararse anticuerpos "humanizados" (véase, por ejemplo, Queen, patente estadounidense número 5.585.089 que se incorpora como referencia al presente documento). Alternativamente, pueden adaptarse técnicas descritas para la producción de anticuerpos de cadena sencilla (patente estadounidense número 4.946.778) para producir anticuerpos de cadena sencilla específicos de péptido.

Pueden generarse fragmentos de anticuerpo que contienen deleciones de sitios de unión específicos mediante técnicas conocidas. Por ejemplo, tales fragmentos incluyen pero no se limitan a fragmentos F(ab')_{2}, que pueden producirse mediante digestión con pepsina de la molécula de anticuerpo y fragmentos Fab, que pueden generarse reduciendo los puentes disulfuro de los fragmentos F(ab')_{2}. Alternativamente, pueden construirse bibliotecas de expresión de Fab (Huse y otros, 1989, Science 246: 1275-1281) para permitir la fácil y rápida identificación de los fragmentos de Fab monoclonales con la especificidad deseada por el péptido de interés.

El anticuerpo o fragmento de anticuerpo específico para el péptido deseado puede unirse, por ejemplo, a agarosa, y el complejo anticuerpo-agarosa se usa en inmunocromatografía para purificar los péptidos de la invención. Véase, Scopes, 1984, Protein Purifiction: Principles and Practice, Springer-Verlag Nueva York, Inc., NY, Livingstone, 1974, Methos in Enzymology: Immunoaffinity Chromatography of Proteins 34:723-731.

5.3 Formulaciones farmacéuticas y métodos de tratamiento

Los agonistas de ApoA-I de la invención pueden usarse para tratar cualquier trastorno en animales, especialmente mamíferos incluyendo seres humanos, para los que es beneficioso aumentar la concentración sérica de HDL, activar la LCAT, y promover la salida de colesterol y el TIC. Tales estados incluyen, pero no se limitan a hiperlipidemia, y especialmente hipercolesterolemia, y enfermedad cardiovascular tal como aterosclerosis (incluyendo el tratamiento y la prevención de la aterosclerosis); reestenosis (por ejemplo, prevenir o tratar placas ateroscleróticas que se desarrolla como consecuencia de procedimientos médicos tales como angioplastia de balón); y otros trastornos, tales como endotoxemia, que con frecuencia da como resultado choque septicémico.

Los agonistas de ApoA-I pueden usarse solos o en terapia de combinación con otros fármacos utilizados para tratar los estados anteriores. Tales terapias incluyen, pero no se limitan a la administración simultánea o secuencial de los fármacos implicados.

Por ejemplo, en el tratamiento de hipercolesterolemia o aterosclerosis, las formulaciones de agonistas de ApoA-I pueden administrarse con uno o más cualquiera de los tratamientos hipocolesterolemiantes utilizados actualmente; por ejemplo, resinas de ácidos biliares, niacina, y/o estatinas. Un régimen combinado de este tipo puede producir efectos terapéuticos particularmente beneficiosos debido a que cada fármaco actúa sobre una diana diferente en el transporte y la síntesis del colesterol; es decir, las resinas de ácidos biliares afectan al reciclaje del colesterol, a la población de quilomicrones y LDL; la niacina afecta principalmente a la población de VLDL y LDL; las estatinas inhiben la síntesis del colesterol, disminuyendo la población de LDL (y tal vez aumentando la expresión del receptor de LDL); mientras que los agonistas de ApoA-I afectan al TIC, aumentan las HDL, aumentan la actividad de LCAT y promueven la salida de colesterol.

En otra realización, los agonistas de ApoA-I pueden usarse junto con fibratos para tratar la hiperlipidemia, hipercolesterolemia y/o enfermedad cardiovascular tal como aterosclerosis.

Todavía en otra realización, los agonistas de ApoA-I de la invención pueden usarse en combinación con los agentes antimicrobianos y antiinflamatorios utilizados actualmente para tratar el choque septicémico inducido por endotoxinas.

Los agonistas de ApoA-I de la invención pueden formularse como péptidos o como complejos de péptido-lípido que pueden administrarse a sujetos en una variedad de maneras para suministrar el agonista de ApoA-I a la circulación. A continuación se describen formulaciones y regímenes de tratamiento a modo de ejemplo.

5.3.1 Agonistas de ApoA-I complejos de péptido/lípido como principio activo

Los péptidos de agonista de ApoA-I pueden sintetizarse o fabricarse usando cualquier técnica descrita en la sección 5.2 y sus subsecciones. Pueden prepararse preparaciones estables que tienen una larga vida útil en almacenamiento liofilizando los péptidos (o bien para preparar grandes cantidades para la reformulación, o bien para preparar alícuotas individuales o unidades de dosificación que pueden reconstituirse mediante rehidratación con agua estéril o una disolución tamponada estéril apropiada antes de la administración a un sujeto).

En ciertas realizaciones, puede preferirse formular y administrar el agonista de ApoA-I en un complejo de péptido-lípido. Este enfoque tiene varias ventajas debido a que el complejo debe tener una semivida aumentada en la circulación, particularmente cuando el complejo tiene un tamaño y una densidad similares a HDL, y especialmente las poblaciones de pre-\beta-1 o pre-\beta-2-HDL. Los complejos de péptido-lípido pueden prepararse convenientemente mediante cualquiera de varios métodos descritos a continuación. Pueden prepararse preparaciones estables que tienen una larga vida útil de almacenamiento mediante liofilización (siendo el procedimiento de liofilización conjunta descrito a continuación el enfoque preferido). Los complejos de péptido-lípido liofilizados pueden usarse para preparar grandes cantidades para la reformulación farmacéutica, o para preparar alícuotas individuales o unidades de dosificación que pueden reconstituirse mediante rehidratación con agua estéril o una disolución tamponada apropiada antes de la administración a un sujeto.

Puede usarse una variedad de métodos bien conocidos por los expertos en la técnica para preparar las vesículas o los complejos de péptido-lípido. Para este fin, pueden usarse varias técnicas disponibles para preparar liposomas o proteoliposomas. Por ejemplo, puede sonicarse conjuntamente el péptido (usando un sonicador de baño o de sonda) con lípidos apropiados para formar complejos. Alternativamente puede combinarse el péptido con vesículas de lípido formadas previamente dando como resultado la formación espontánea de complejos de péptido-lípido. Todavía en otra alternativa, los complejos péptido-lípido pueden formarse mediante un método de diálisis de detergente; por ejemplo, se dializa una mezcla de péptido, lípido y detergente para eliminar el detergente y reconstituir o formar complejos de péptido-lípido (por ejemplo, véase Jonas y otros, 1986, Methods in Enzymol. 128:553-582).

Aunque los enfoques anteriores son viables, cada método presenta sus propios problemas peculiares de producción con respecto al coste, rendimiento, reproducibilidad y seguridad. Los solicitantes han desarrollado un método simple para preparar complejos de péptido o proteína-fosfolípido que tienen características similares a las HDL. Puede usarse este método para preparar los complejos de péptido ApoA-I-lípido, y tiene las siguientes ventajas: (1) la mayoría o todos los componentes incluidos se usan para formar los complejos diseñados, evitando así el desperdicio de material de partida que es común en los otros métodos. (2) Se forman compuestos liofilizados que son muy estables durante el almacenamiento. Los complejos resultantes pueden reconstituirse inmediatamente antes de su uso. (3) Habitualmente, los complejos resultantes no necesitan purificarse adicionalmente tras la formación y antes de su uso. (4) Se evitan los compuestos tóxicos, incluyendo detergentes tales como colato. Además, el método de producción puede aumentarse en escala fácilmente y es adecuado para la fabricación según las BPF (es decir, en un entorno libre de endotoxinas).

Según el método preferido, el péptido y el lípido se combinan en un sistema de disolvente que solubiliza conjuntamente cada componente y que puede eliminarse completamente mediante liofilización. Para este fin, las parejas de disolventes deben seleccionarse cuidadosamente para garantizar una solubilidad conjunta tanto del péptido anfipático como del lípido. En una realización, la(s) proteína(s) o el/los péptido(s) que van a incorporarse en las partículas pueden disolverse en una mezcla de disolventes o un disolvente (disolvente 1) acuoso u orgánico. El componente (fosfo)lipídico se disuelve en una mezcla de disolventes o un disolvente (disolvente 2) acuoso u orgánico que es miscible con el disolvente 1, y se mezclan las dos disoluciones. Alternativamente, el péptido y el lípido pueden incorporarse en un sistema de codisolvente; es decir, una mezcla de disolventes miscibles. En primer lugar, se determina empíricamente una proporción adecuada de péptido (proteína) con respecto a lípidos de modo que los complejos resultantes tienen las propiedades físicas y químicas apropiadas; es decir, habitualmente (pero no necesariamente) de tamaño similar a las HDL. Se congela la mezcla resultante y se liofiliza hasta sequedad. Algunas veces debe añadirse un disolvente adicional a la mezcla para facilitar la liofilización. Este producto liofilizado puede almacenarse durante largos periodos y permanecerá estable.

En los ejemplos de trabajo descritos a continuación, se disolvieron el péptido 4 (SEQ ID NO:4) y los fosfolípidos por separado en metanol, se combinaron, luego se mezclaron con xileno antes de la liofilización. Tanto el péptido como el lípido pueden añadirse a una mezcla de los dos disolventes. Alternativamente, puede mezclarse una disolución del péptido disuelto en metanol con una disolución de lípido disuelto en xileno. Debe tenerse cuidado de eliminar la sal del sistema de disolvente con el fin de evitar que el péptido precipite con sales. Se liofiliza la disolución resultante que contiene el péptido y el lípido solubilizados conjuntamente en metanol/xileno para formar un polvo.

Puede reconstituirse el producto liofilizado con el fin de obtener una disolución o suspensión del complejo de péptido-lípido. Para este fin, se rehidrata el polvo liofilizado con una disolución acuosa hasta un volumen adecuado (a menudo 5 mg de péptido/ml que es conveniente para inyección intravenosa). En una realización preferida, se rehidrata el polvo liofilizado con solución salina tamponada con fosfato o una solución salina fisiológica. Puede tenerse que agitar o remover con vórtex la mezcla para facilitar la rehidratación, y en la mayoría de los casos, la etapa de reconstitución debe llevarse a cabo a una temperatura igual o superior a la temperatura de transición de fase del componente lipídico de los complejos. En el plazo de minutos, resulta una preparación transparente de complejos de lípido-proteína reconstituidos.

Puede caracterizarse una alícuota de la preparación reconstituida resultante para confirmar que los complejos en la preparación tienen la distribución de tamaño deseada; por ejemplo, la distribución de tamaño de HDL. Para este fin, puede usarse cromatografía de filtración en gel. En los ejemplos de trabajo descritos a continuación, se usó un sistema de cromatografía de filtración en gel de Pharmacia Superose 6 FPLC. El tampón usado contiene NaCl 150 mM en tampón fosfato 50 mM, pH 7,4. Un volumen típico de muestra es de 20 a 200 microlitros de complejos que contienen 5 mg de péptido/ml. La velocidad de flujo de la columna es de 0,5 ml/min. Se usa una serie de proteínas de diámetro de Stoke y peso molecular conocidos así como HDL humana como patrones para calibrar la columna. Las proteínas y complejos de lipoproteína se monitorizan mediante la absorbancia o dispersión de luz de longitud de onda de 254 ó 280 nm.

Los agonistas de ApoA-I de la invención pueden complejarse con una variedad de lípidos, incluyendo lípidos y/o fosfolípidos saturados, insaturados, naturales y sintéticos. Los lípidos adecuados incluyen, pero no se limitan a, fosfolípidos de cadena de alquilo pequeña, fosfatidilcolina de huevo, fosfatidilcolina de soja, dipalmitoilfosfatidilcolina, dimiristoilfosfatidilcolina, diestearoilfosfatidilcolina 1-miristoil-2-palmitoilfosfatidilcolina, 1-palmitoil-2-miristoilfosfatidilcolina, 1-palmitoil-2-estearoilfosfatidilcolina, 1-estearoil-2-palmitoilfosfatidilcolina, dioleoilfosfatidilcolina, dioleofosfatidiletanolamina, dilauroilfosfatidilglicerol fosfatidilcolina, fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol, esfingomielina, esfingolípidos, fosfatidilglicerol, difosfatidilglicerol, dimiristoilfosfatidilglicerol, dipalmitoilfosfatidilglicerol, diestearoilfosfatidilglicerol, dioleoilfosfatidilglicerol, ácido dimiristoilfosfatídico, ácido dipalmitoilfosfatídico, dimiristoilfosfatidiletanolamina, dipalmitoilfosfatidiletanolamina, dimiristoilfosfatidilserina, dipalmitoilfosfatidilserina, fosfatidilserina del cerebro, esfingomielina del cerebro, dipalmitoilesfingomielina, diestearoilesfingomielina, ácido fosfatídico, galactocerebrósido, gangliósidos, cerebrósidos, dilaurilfosfatidilcolina, (1,3)-D-manosil-(1,3)-diglicérido, aminofenilglicósido, glicolípidos de 3-colesteril-6'-(glicosiltio)hexil éter, y colesterol y sus derivados.

Los solicitantes han descubierto que cuando los agonistas de ApoA-I de la invención se complejan con esfingomielina, se elimina la totalidad de las HDL de las partículas de tipo pre-\beta. En consecuencia, en una realización preferida de la invención, se administran los agonistas de ApoA-I como un complejo con esfingomielina.

5.3.2 Métodos del tratamiento

Los agonistas de péptido ApoA-I o complejos de péptido-lípido de la invención pueden administrarse mediante cualquier vía adecuada que garantice la biodisponibilidad en la circulación. Esto puede conseguirse del mejor modo mediante vías parenterales de administración, incluyendo inyecciones intravenosa, (IV), intramuscular (IM), intradérmica, subcutánea (SC) e intraperitoneal (IP). Sin embargo, pueden usarse otras vías de administración. Por ejemplo, la absorción a través del tubo digestivo puede conseguirse mediante vías orales de administración (incluyendo, pero sin limitarse a ingestión, vías bucal y sublingual), las formulaciones apropiadas proporcionadas (por ejemplo, recubrimientos entéricos) se usan para evitar o minimizar la degradación del principio activo, por ejemplo, en los entornos arduos de la mucosa bucal, estómago y/o intestino delgado. Alternativamente, puede utilizarse la administración mediante tejido mucoso, tal como los modos de administración vaginal y rectal, para evitar o minimizar la degradación en el tubo digestivo. Todavía en otra alternativa, pueden administrarse las formulaciones de la invención por vía transcutánea (por ejemplo, por vía transdérmica), o mediante inhalación. Se apreciará que la vía preferida puede variar con el estado, edad y cumplimiento del receptor.

La dosis real de agonistas de ApoA-I o complejo de péptido-lípido utilizada variará con la vía de administración, y debe ajustarse para conseguir concentraciones plasmáticas en la circulación de 100 mg/l a 2 g/l. Los datos obtenidos en sistemas de modelo animal descritos en el presente documento muestran que los agonistas de ApoA-I de la invención se asocian con el componente de HDL, y tienen una semivida prevista en seres humanos de aproximadamente cinco días. Por tanto, en una realización, los agonistas de ApoA-I pueden administrarse mediante inyección a una dosis de entre 0,5 mg/kg y 100 mg/kg una vez a la semana. En otra realización, pueden mantenerse los niveles séricos deseados mediante infusión continua o mediante infusión intermitente proporcionando aproximadamente de 0,5 mg/kg/h a 100 mg/kg/h.

Puede determinarse la toxicidad y la eficacia terapéutica de los diversos agonistas de ApoA-I usando procedimientos farmacéuticos convencionales en cultivo celular o animales experimentales para determinar la DL_{50} (la dosis letal para el 50% de la población) y la DE_{50} (la dosis terapéuticamente eficaz en el 50% de la población). La razón de dosis entre los efectos tóxico y terapéutico es el índice terapéutico y puede expresarse como la razón de DL_{50}/DE_{50}. Se prefieren los agonistas de péptido ApoA-I que muestran grandes índices terapéuticos.

5.3.3 Formulaciones farmacéuticas

La formulación farmacéutica de la invención contiene el agonista de péptido ApoA-I o el complejo de péptido-lípido como principio activo en un vehículo farmacéuticamente aceptable para la administración y el suministro in vivo. Ya que los péptidos pueden contener cadenas laterales y/o extremos terminales ácidos y/o básicos, pueden incluirse los péptidos en las formulaciones o bien en forma de ácidos o bases libres, o bien en forma de sales farmacéuticamente aceptables.

Las preparaciones inyectables incluyen suspensiones, disoluciones o emulsiones estériles del principio activo en vehículos acuosos o aceitosos. Las composiciones pueden contener también agentes de formulación, tales como agentes de suspensión, estabilizadores y/o de dispersión. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en formas farmacéuticas unitarias, por ejemplo, en ampollas o envases de múltiples dosis, y pueden contener conservantes añadidos.

Alternativamente, la formulación inyectable puede proporcionarse en forma de polvo para su reconstitución con un vehículo adecuado, incluyendo pero sin limitarse a agua estéril libre de pirógenos, tampón, disolución de dextrosa, etc., antes de su uso. Para este fin, puede liofilizarse el agonista de ApoA-I, o puede prepararse el complejo de péptido-lípido liofilizado conjuntamente. Las preparaciones almacenadas pueden suministrarse en formas farmacéuticas unitarias y se reconstituyeron antes de su uso in vivo.

Para un suministro prolongado, puede formularse el principio activo como una preparación de liberación prolongada, para la administración mediante implante; por ejemplo, inyección subcutánea, intradérmica o intramuscular. Por tanto, por ejemplo, puede formularse el principio activo con materiales hidrófobos o poliméricos adecuados (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados ligeramente solubles; por ejemplo, como una forma de sal ligeramente soluble del agonista de ApoA-I.

Alternativamente, pueden usarse sistemas de administración transdérmica fabricados como un parche o disco adhesivo que libera lentamente el principio activo para su absorción percutánea. Para este fin, pueden usarse potenciadores de la permeación para facilitar la penetración transdérmica del principio activo. Puede conseguirse un beneficio particular incorporando los agonistas de ApoA-I de la invención o el complejo de péptido-lípido en un parche de nitroglicerina para su uso en pacientes con cardiopatía isquémica e hipercolesterolemia.

Para la administración oral, las composiciones farmacéuticas pueden tomar forma de, por ejemplo, comprimidos o cápsulas preparados por medios convencionales con excipientes farmacéuticamente aceptables tales como agentes de unión (por ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropilmetilcelulosa); cargas (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina o hidrogenofosfato de calcio); lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco o sílice); disgregantes (por ejemplo, almidón de patata o glicolato sódico de almidón); o agentes humectantes (por ejemplo, laurilsulfato de sodio). Los comprimidos pueden recubrirse mediante métodos bien conocidos en la técnica. Las preparaciones líquidas para la administración oral pueden tomar forma de, por ejemplo, disoluciones, jarabes o suspensiones, o pueden presentarse como un producto seco para su constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Tales preparaciones líquidas pueden prepararse mediante medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables tales como agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas); agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitina o goma arábiga); vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendra, ésteres aceitosos, alcohol etílico o aceites vegetales fraccionados); y conservantes (por ejemplo, p-hidroxibenzoatos de metilo o propilo o ácido sórbico). Las preparaciones pueden contener también sales de tampón, agentes aromatizantes, colorantes y edulcorantes según sea apropiado. Las preparaciones para la administración oral pueden formularse de manera adecuada para proporcionar una liberación controlada del compuesto activo.

Para la administración bucal, las composiciones pueden tomar forma de comprimidos o pastillas para chupar formuladas de manera convencional. Para las vías de administración rectal y vaginal, el principio activo puede formularse como disoluciones (para enemas de retención), supositorios o pomadas.

Para la administración mediante inhalación, el principio activo puede suministrarse convenientemente en forma de una presentación de pulverización de aerosol en envases presurizados o un nebulizador, con el uso de un propelente adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse proporcionando una válvula para suministrar una cantidad dosificada. Las cápsulas y cartuchos de, por ejemplo, gelatina para su uso en un inhalador o insuflador pueden formularse conteniendo una mezcla de polvo del compuesto y una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón.

Las composiciones pueden presentarse, si se desea, en un envase o dispositivo dosificador que contenga una o más formas farmacéuticas unitarias que contienen el principio activo. El envase puede comprender, por ejemplo, una lámina plástica o metálica, tal como un envase de blister. El envase o dispositivo dosificador puede ir acompañado de las instrucciones para su administración.

5.4 Otros usos

Los agonistas de ApoA-I de la invención pueden usarse en ensayos in vitro para medir las HDL séricas, por ejemplo, para fines diagnósticos. Debido a que los agonistas de ApoA-I se asocian con el componente de HDL del suero, los agonistas pueden usarse como "marcadores" para la población de HDL. Además, los agonistas pueden usarse como marcadores para la subpoblación de HDL que son eficaces en el TIC. Para este fin, puede añadirse el agonista o mezclarse con una muestra de suero del paciente; tras un tiempo de incubación apropiado, puede someterse a ensayo el componente de HDL detectando el agonista de ApoA-I incorporado. Esto puede conseguirse usando un agonista marcado (por ejemplo, radiomarcadores, marcadores fluorescentes, marcadores enzimáticos, tintes, etc.), o mediante inmunoensayos usando anticuerpos (o fragmentos de anticuerpo) específicos para el agonista.

Alternativamente, puede usarse el agonista marcado en procedimientos de obtención de imágenes (por ejemplo, exploraciones CAT, exploraciones MRI) para visualizar el sistema circulatorio, o para monitorizar el TIC, o para visualizar la acumulación HDL en franjas de grasa, lesiones ateroscleróticas, etc. (en las que las HDL deben ser activas en la salida de colesterol).

6. Ejemplo Síntesis de agonistas peptídicos de ApoA-I

Los péptidos que se describen en la Tabla X (Párrafo 8.3, a continuación) fueron sintetizados y caracterizados como se describe en los subpárrafos siguientes. Los péptidos fueron también analizados estructural y funcionalmente como se describe en los Párrafos 7 y 8, a continuación.

6.1 Síntesis de péptidos nucleares

Los péptidos fueron sintetizados en fase sólida según la técnica de Merrifield (Merrifield, 1969, J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2154) usando 0,25 mmoles de resina \rho-alcoxibencilalcohólica (resina HMP) (Wang, 1973, J. Am. Chem. Soc. 95:1328-1333) y química Fmoc. Todas las síntesis fueron realizadas en un sintetizador de péptidos automatizado ABI modelo 430A de Applied Biosystems (Perkin-Elmer, Foster City, CA). Se indican en la siguiente Tabla V los tiempos de solvatación y activación que se usaron para cada ciclo de acoplamiento:

TABLA V Ciclos de acoplamiento individuales en el activador

18

Las resinas fueron lavadas con NMP entre cada paso de acoplamiento. Está indicado en la siguiente Tabla VI el protocolo para un ciclo de síntesis:

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA VI Protocolo de acoplamiento para un ciclo de síntesis

19

\vskip1.000000\baselineskip

Fueron acoplados de esta manera todos los aminoácidos exceptuando la Fmoc-\beta-(1-naftil)alanina. La Fmoc-\beta-(1-naftil)alanina fue acoplada manualmente. Para el acoplamiento manual, 1 mmol de Fmoc-\beta-(1-naftil)alanina y 1 mmol de tetrafluoroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (TBTU) fueron disueltos en 5 ml de NMP y mezclados con la resina peptídica.

A continuación de ello fueron añadidos 2 mmoles de N-etildiisopropilamina, la mezcla fue sacudida por espacio de 2 horas, y la resina peptídica fue lavada 6 veces con 10 ml de NMP. El rendimiento de acoplamiento fue verificado usando el Ensayo de Kaiser (Kaiser, 1970 Anal. Biochem. 34:59577), y el acoplamiento fue repetido de ser necesario. Tras el acoplamiento de naftilalanina, el resto de la síntesis fue llevado a cabo automáticamente como se ha descrito anteriormente.

6.2 Síntesis de amidas peptídicas

Donde se indica en la Tabla X (Apartado 8.3, a continuación), las amidas peptídicas fueron sintetizadas usando una resina de amida Rink que contenía el espaciador bifuncional Fmoc-amida Rink 4-(2',4'-dimetilfenil)-Fmoc-fenoximetilo (Rink, 1987, Tetrahedron Lett. 28:3787-3790) y los protocolos de síntesis que se describen en el Apartado 6.1, anteriormente.

6.3 Síntesis de péptidos acilados N-terminales

Donde se indica en la Tabla X (Apartado 8.3, a continuación), las formas aciladas N-terminales de los péptidos fueron preparadas exponiendo el péptido combinado con resina preparado como se ha descrito en el Apartado 6.1 o 6.2, anteriormente, a un apropiado agente acilante.

Para los péptidos acetilados N-terminales, 15 ml de solución de anhídrido acético (al 10% volumétrico en NMP) fueron añadidos respectivamente a 1 g de péptido combinado con resina, la mezcla fue sacudida por espacio de 5 min., y la resina fue recuperada por filtración. La resina recuperada fue lavada tres veces con NMP (15 ml) y tres veces con etanol (15 ml).

6.4 Disociación y desprotección

A continuación de la síntesis, los péptidos que se describen en los Apartados 6.1, 5.2 y 6.3, anteriormente, fueron disociados de la resina y desprotegidos con una solución de disociación que contenía un 92,5% de ácido trifluoroacético (TFA)/3,75% de anisol/3,75% de dodecantiol (en volumen). Para efectuar la disociación, 10 ml de solución de disociación fueron añadidos a 0,25 mmoles de resina peptídica y agitados por espacio de 1,5 horas a temperatura ambiente. La resina fue retirada mediante filtración y se hizo que el péptido disociado/desprotegido precipitase con éter dietílico, y se efectuó lavado con éter y secado in vacuo.

El cóctel de disociación para péptidos con contenido de Trp (W), así como para amidas peptídicas, se componía de un 86,5% de TFA, un 4,5% de H_{2}O, un 4,5% de 1,2-etanoditiol, un 4,5% de anisol y un 3% de fenol.

6.5 Purificación

Los péptidos disociados crudos del Apartado 6.4 fueron purificados por HPLC de fase inversa. La pureza de cada péptido fue confirmada mediante distintas técnicas analíticas (HPLC analítica, electroforesis capilar). Las electroforesis capilares fueron realizadas en capilares de sílice fusionada de 70 cm de longitud y un diámetro interior de 75 \mum (Thermo Separation Products). Las separaciones fueron llevadas a cabo a 25ºC, 15 kV, tiempo de ciclo 35 min., en dos distintos sistemas tampón: Tampón 1 (Na_{2}B_{4}O_{7} 20 mM, pH 9,2) y Tampón 2 (Na_{2}HPO_{4} 10 mM, pH 2,5). Las separaciones por HPLC fueron realizadas en columnas Nucleosil 7C18 o Nucleosil 7C4 (Macherey and Nagel, Alemania), de 250 x 21 mm, a un caudal de 8 ml/min. La elución en gradiente fue llevada a cabo usando una mezcla de TFA al 0,1% en agua (Disolvente A) y TFA al 0,1% en acetonitrilo (Disolvente B). Los gradientes usados fueron ajustados para satisfacer las necesidades de cada péptido.

6.6 Caracterización

Los análisis másicos y de aminoácidos de los péptidos purificados que se describen en el Aparato 6.5 fueron confirmados mediante espectrometría de masas y análisis de aminoácidos, respectivamente, como se describe a continuación. Se usó degradación de Edman para la secuenciación.

6.6.1 LC-MS (cromatografía líquida-espectrometría de masas)

Fue usado para la determinación de masas un espectrómetro de masa cuádruple y triple etapa estándar disponible comercialmente (modelo TSQ 700; Finnigan MAT, San Jose CA, EE.UU.). Fue usada una interfaz de electropulverización (ESI) asistida neumáticamente para la introducción de la muestra en la fuente de ionización a presión atmosférica del espectrómetro de masas. Se hizo que el pulverizador de interfaz funcionase a un potencial positivo de 4,5 kV. La temperatura del capilar de acero fue mantenida al nivel de 200ºC, mientras que el colector estaba a 70ºC. Los iones positivos generados por este proceso de evaporación iónica entraban en el analizador del espectrómetro de masas. El multiplicador fue ajustado a 1000 V. El compartimento del analizador del espectrómetro de masas estaba a 4E-6. Todas las adquisiciones fueron llevadas a cabo con una resolución < 1 u.

Los péptidos fueron analizados mediante infusión directa de los péptidos purificados usando un sistema microbore de ABI (Applied Biosystems) que constaba de una bomba de jeringa (modelo 140B), un detector UV (modelo 785A) y un inyector/estufa (modelo 112A). El sistema disolvente constaba de agua (disolvente A) y acetonitrilo (disolvente B) que en cada caso contenían un 0,1% de TFA. Los péptidos fueron infusionados usando un gradiente o condiciones isocráticas y fueron eluídos desde una columna Aquapore C18. El caudal era típicamente de 300 \mul/min. La concentración de cada péptido era de aproximadamente 0,03 mg/ml, 20 \mul de los cuales fueron inyectados (p. ej. 30 pmoles).

Los experimentos de MS de barrido total fueron obtenidos mediante cuádruple 1 de barrido de m/z 500-1500 en 4 seg. Los datos fueron adquiridos usando una estación Alpha DEC y fueron procesados usando el paquete de software proporcionado por la Finnigan MAT (BIOWORKS).

6.6.2 Análisis de aminoácidos

El análisis de aminoácidos fue llevado a cabo en un Analizador de Aminoácidos 420 de ABI (Applied Biosystems). Este sistema consta de tres módulos: un aparato de hidrólisis y derivatización, una HPLC de fase inversa y un sistema de datos. Las muestras peptídicas fueron aplicadas (3 veces por triplicado) a portaobjetos de vidrio poroso y fueron a continuación hidrolizadas bajo condiciones de fase gaseosa (155ºC, 90 min.). Tras la remoción del HCL, los aminoácidos resultantes fueron convertidos en PTC-AA (feniltiocarbamoil-aminoácidos) usando PITC (fenilisotiocianato). Tras transferencia al bucle de muestra de HPC las mezclas resultantes fueron fraccionadas en una columna Aquapore C18 usando el modo de gradiente (disolvente A: 50 mmoles de acetato amónico (NH_{4}Ac), pH 5,4, en agua; disolvente B: 32 mmoles de acetato sódico (NaOAc) en acetonitrilo acuoso) bajo condiciones de control de temperatura. Los datos de HPLC fueron procesados mediante el paquete de software que es proporcionado por la Applied Biosystems. La cuantificación fue llevada a cabo con respecto al patrón peptídico que es suministrado por la Applied
Biosystems.

6.7 Síntesis de redes ramificadas

La resina peptidílica de núcleo tetramérico y la resina peptidílica de núcleo trimérico son sintetizadas como se describe en Demoor y otros, 1996, Eur. J. Biochem. 239:74-84. La matriz nuclear tetramérica y trimérica aún unida a la resina 4-metilbenzhidrilamínica es entonces usada como resina peptidílica inicial para la síntesis automatizada de péptidos nucleares como se ha descrito anteriormente.

Pueden sintetizarse redes ramificadas que contengan segmentos helicoidales de distintas composiciones de aminoácidos usando estrategias de protección y síntesis ortogonal que son perfectamente conocidas en la técnica.

\newpage

\global\parskip0.930000\baselineskip

7. Ejemplo Análisis estructural y de unión de lípidos de péptidos ApoA-I

La características estructurales y de fijación de lípidos de los péptidos purificados sintetizados como se ha descrito en el Apartado 6, anteriormente, fueron determinadas mediante dicroismo circular (CD), espectroscopia de fluorescencia y resonancia magnética nuclear (RMN).

7.1 Dicroismo circular

Este Ejemplo describe un método preferido para determinar el grado de helicidad de los péptidos nucleares de la invención tanto libres en tampón como en presencia de lípidos.

7.1.1 Método experimental

Los espectros de dicroismo circular UV lejano fueron registrados entre 190 y 260 nm (en incrementos de 0,5 nm o 0,2 nm) con un espectrómetro AVIV62DS (AVIV Associates, Lakewood, NJ, EE.UU.) equipado con un portaceldas termoeléctrico y cambiador de muestras. El aparato de medida fue calibrado con ácido (+)-10-canfórico. Fueron recogidos para cada muestra entre uno y tres barridos usando celdas de cuarzo Anteriormentesil de una longitud de recorrido de 10 cm, 5 cm, 1 cm y 0,1 cm, respectivamente, para concentraciones de péptidos de 10^{-7}M a 10^{-4}M. La anchura de banda se fijó en 1,5 nm y la velocidad de barrido a 1 seg. por paso de longitud de onda. Los datos que se indican son la media de al menos 2 o 3 mediciones independientes.

Tras la resta del fondo, los espectros fueron convertidos en elipticidad molar (\theta) por residuo en grds. cm^{-2} dmol^{-1}. La concentración peptídica fue determinada mediante análisis de aminoácidos y también mediante espectrometría de absorción en un espectrofotómetro Perkin Elmer Lambda 17 UV/Visible cuando el péptido contenía un cromóforo (triptófano, dansil, naftilalanina).

Los espectros de CD fueron obtenidos con péptido libre no combinado (5 \muM en tampón de fosfato 5 mM, pH 7,4); con complejos de péptido-SUV (20:1 EPC:Chol., Ri = 30 y Ri = 50); con complejos de péptido-micela (1-miristoil-2-hidroxi-sn-glicero-3-fosfatidilcolina, Ri = 100); y con péptido libre no combinado en presencia de 2,2,2-trifluoroetanol (TFE) (péptido 5 \muM, TFE al 90% volumétrico).

Las SUVs fueron obtenidas dispersando los lípidos (10 mM, 20:1 EPC:Chol., Avanti Polar Lipids, AL) en tampón de fosfato (5 mM, pH 7,4) con N_{2} de borboteo por espacio de 5 min., efectuando a continuación sonicación (1,5 h) en un sonicador discontinuo. La homogeneidad de la preparación fue verificada por FPLC.

Las micelas fueron obtenidas dispersando el lípido (1-miristoil-2-hidroxi-sn-glicero-3-fosfatidilcolina 6 mM, Avanti Polar Lipids, AL) en tampón de fosfato (5 mM, pH 7,4) con N_{2} de borboteo por espacio de 5 min., efectuando a continuación agitación vorticial.

Para obtener los complejos de péptido-SUV, las SUVs fueron añadidas al péptido (5 \muM en tampón de fosfato 5 mM, pH 7,4) a una relación molar de fosfolípido-péptido (Ri) de 30 o 50.

Para obtener los complejos de péptido-micela, las micelas fueron añadidas al péptido (5 \muM en tampón de fosfato 5 mM, pH 7,4) a una Ri de 100.

Todos los espectros fueron registrados a 37ºC. La estabilidad del péptido 4 (ID SEC Nº:4) en función de la temperatura (tanto libre en tampón como en micelas) fue determinada registrando espectros a las de una serie de distintas temperaturas.

Fue también determinado el grado de helicidad del péptido 4 (ID SEC Nº:4) en función de la concentración.

7.1.2 Determinación de la helicidad

El grado de helicidad de los péptidos en las distintas condiciones fue determinado a partir de la elipticidad residual media a 222 nm (Chen y otros, 1974, Biochemistry 13:3350-3359) o comparando los espectros de CD obtenidos con espectros de referencia disponibles en bases de datos (16 espectros de referencia helicoidal de Provencher & Glockner, 1981, Biochemistry 20:33-37; espectros de referencia de proteína desnaturalizada de Venyaminov y otros, 1993, Anal. Biochem. 214:17-24) usando el algoritmo de ajuste de curva CONTIN de la versión 2DP, paquete CD-1 (ago. 1982) (Provencher, 1982, Comput. Phys. Commun. 27:213-227, 229-242). El ajuste aceptable fue determinado usando la metodología de análisis estadístico que es proporcionada por el algoritmo CONTIN. El error de todos los métodos fue de \pm5% de helicidad.

7.1.3. Resultados

Se indica en la Tabla X, Apartado 8.3, a continuación, el grado de helicidad (%) de los péptidos libres no combinados (libres), los complejos de péptido-SUV (SUVs), los complejos de péptido-micela (mics) y la solución de péptido-TFE (TFE). Se da en la Tabla VII el grado de helicidad del péptido 4 (ID SEC Nº:4) en función de la concentración.

\global\parskip1.000000\baselineskip

TABLA VII % de helicidad del péptido 4 (ID SEC Nº:4) en función de la concentración

21

El péptido 4 (ID SEC Nº:4) contiene una importante estructura \alpha-helicoidal (80% de helicidad) en tampón a una concentración de 5 \muM. Mientras que el grado de helicidad disminuye al disminuir la concentración de péptido, incluso a concentraciones tan bajas como la de 0,15 \muM se mantiene una importante helicidad (42%). Además, la estructura \alpha-helicoidal es completamente estable dentro de una gama de temperaturas de 5-45ºC (datos no indicados).

La helicidad del péptido 4 (ID SEC Nº:4) aumenta en presencia tanto de SUVs (helicidad del 97%) como de micelas (helicidad del 95%), y también en presencia de TFE (helicidad del 94%), que es un disolvente que, debido al hecho de tener una constante dieléctrica (\varepsilon = 26,7) bastante más baja que la del agua (\varepsilon = 78,4), estabiliza las hélices \alpha y los enlaces de hidrógeno intrapeptídicos a concentraciones de entre un 5 y un 90% (volumétrico).

Haciendo referencia a la Tabla X, Apartado 8.3, a continuación, puede verse que aquellos péptidos que presentan un alto grado de activación de LCAT (\geq 38%) generalmente poseen una importante estructura \alpha-helicoidal en presencia de lípidos (\geq 60% de estructura helicoidal en el caso de los péptidos no bloqueados que contienen 22 o más aminoácidos o de los péptidos bloqueados que contienen 18 o menos aminoácidos; \geq 40% de estructura helicoidal en el caso de los péptidos no bloqueados que contienen 18 o menos aminoácidos), mientras que los péptidos que presentan poca o ninguna activación de LCAT poseen poca estructura \alpha-helicoidal. Sin embargo, en algunos casos, los péptidos que contienen una importante estructura \alpha-helicoidal en presencia de lípidos no presentan una importante activación de LCAT. En consecuencia, se considera que la capacidad de los péptidos nucleares de la invención para adoptar una estructura \alpha-helicoidal en presencia de lípidos es una característica decisiva de los péptidos nucleares de la invención, puesto que la capacidad para formar una hélice \alpha en presencia de lípidos parece ser un prerrequisito para la activación de LCAT.

7.2 Espectroscopia de fluorescencia

Las propiedades de fijación de lípidos de los péptidos sintetizados en el Apartado 6, anteriormente, fueron verificadas mediante mediciones de fluorescencia con péptidos marcados, en el caso presente Triptófano (Trp o W) o Naftilalanina (Nal). Los espectros de fluorescencia fueron registrados en un Fluoromax de Spex (Jobin-Yvon) equipado con una lámpara de xenón de 150 W, dos monocromadores (de excitación y de emisión), un fotomultiplicador R-928 para detección sensible en el rojo hasta 850 nm y un portaceldas termoeléctrico con agitación magnética. Fueron usadas cubetas de cuarzo Anteriormentesil para las mediciones en la gama de concentraciones micromolares. Un dispositivo de rendijas variables (de 0,4 a 5 nm) permite la modulación de las intensidades incidente y emitida según la concentración de péptido usada. Los valores que se indican son en general la media de entre 2 y 4 espectros. La concentración de péptido es determinada mediante espectrometría de absorción en un Philips PU 8800 usando la banda de absorción del Trp (\varepsilon_{280 \ nm} = 5.550 M^{-1}cm^{-1} en tampón Tris) o de la Nal (\varepsilon_{224 \ nm} = 92.770 M^{-1}cm^{-1} en metanol).

Los espectros de fluorescencia de los péptidos fueron registrados entre 290 nm y 450 nm en tampón de Tris-HCl (20 mM, pH = 7,5), en presencia y en ausencia de vesículas lipídicas. Las pequeñas vesículas unilamelares quedaron formadas tras rehidratación en tampón de los fosfolípidos liofilizados, dispersión y sonificación con punta bajo una corriente de N_{2}. Los lípidos usados fueron los PC de huevo/Col. (20:1) o POPC/Col. (20:1). Los espectros fueron registrados a una concentración de péptido de 2 \muM y a una temperatura de 37ºC. El patrón de referencia de fluorescencia en el caso de Trp era N-acetiltriptofanilamida (NATA).

Los estudios de fijación de lípidos se hicieron mediante progresiva adición de vesículas lipídicas al péptido en solución a 2 \muM (rendijas: 5 nm en excitación y 1,5 nm en emisión). Los efectos de dilución fueron tomados en consideración para la determinación de la intensidad de fluorescencia. Las concentraciones de lípidos fueron variadas desde 10 hasta 600 \muM y la relación molar de lípido a péptido (Ri) fue variada desde 5 hasta 300. La longitud de onda de excitación fue ajustada a 280 nm tanto para Trp como para Nal.

7.2.1 Análisis espectral de fluoresencia

Los datos fueron directamente registrados y tratados por un PC IBM ligado al espectrofluorímetro a través del software DM3000F de Spex. Los espectros fueron corregidos mediante la resta de la contribución del disolvente y mediante la aplicación de un coeficiente dado por el fabricante teniendo en cuenta la variación de la respuesta del fotomultiplicador frente a la longitud de onda.

Los espectros de fluorescencia de los péptidos eran caracterizados por la longitud de onda a su máximo de emisión de fluorescencia y por su rendimiento cuántico en comparación con la NATA en el caso de los péptidos marcados con un triptófano. El proceso de fijación a lípidos fue analizado calculando el desplazamiento de la longitud de onda al máximo de emisión de fluorescencia, (\lambda_{max}) y la variación de la intensidad de fluorescencia relativa de emisión frente a la concentración de lípido. La intensidad de fluorescencia relativa está definida como la relación siguiente:
(I-I_{0})_{\lambda max}/I_{0 \lambda max}. I e I_{0} son ambas medidas a la (\lambda_{max}) correspondiente al estado libre inicial del péptido, es decir, sin lípidos. I es la intensidad a una definida relación de lípido a péptido, e I_{0} es el mismo parámetro medido en ausencia de lípidos. La ausencia de estas variaciones es relevante de la ausencia de interacciones de los péptidos con los lípidos.

7.2.2 Resultados y discusión

Se indican en la Tabla VIII las propiedades de fijación de lípidos del péptido 15 (ID SEC Nº:15) (que es péptido 4 que contiene un residuo de Trp en posición 10).

TABLA VIII Propiedades de fijación del péptido 15 (ID SEC Nº:15) a vesículas lipídicas según medición efectuada por fluorescencia

22

23

El máximo de la emisión del triptófano (\lambda_{max}) a 332 nm indica que en el tampón a una concentración de 2 \muM el péptido está ligeramente autoasociado. El péptido se fija a las vesículas lipídicas (EPC/Col 5%) con una muy alta afinidad como queda demostrado por el soterramiento del Trp (el máximo de la longitud de onda de emisión del Trp pasa de 332 nm a 323 nm) y por la alta exaltación de la intensidad de fluorescencia (véase la Tabla VIII). El máximo soterramiento del residuo de Triptófano es obtenido para una muy baja relación molar de lípido a péptido de menos de 5.

También mostraron una buena fijación de lípidos otros péptidos que presentaban un alto grado de helicidad en presencia de lípidos (\geq 60% para péptidos no bloqueados de \geq 22 aminoácidos o péptidos bloqueados de \leq 18 aminoácidos; \geq 40% para péptidos no bloqueados de \leq 18 aminoácidos) según medición efectuada por dicroismo circular como se describe en el Apartado 7.1, anteriormente. Naturalmente, de entre todos los péptidos seleccionados mediante la selección por dicroismo circular solamente fueron sometidos a ensayo para determinar sus propiedades de fijación de lípidos los que podían ser seguidos por fluorescencia.

7.3 Resonancia magnética nuclear (RMN)

Este Ejemplo describe un método de RMN para analizar la estructura de los péptidos nucleares de la invención

7.3.1 Preparación de las muestras de RMN

Las muestras fueron preparadas disolviendo 5 mg de péptido en un 90% de H_{2}O/10% de D_{2}O con contenido de trazas de sulfonato de 2,2-dimetil-2-sila-5-pentano (DSS) como referencia de desplazamiento químico interna. Algunas de las muestras contenían trifluoroetanol (TFE) (expresado en % volumétrico). El volumen de muestra total era de 500 \mul y la concentración de péptido era de aproximadamente 5 mM.

7.3.2 Espectroscopia de RMN

Los espectros de ^{1}H RMN fueron adquiridos a 500 MHz usando un espectrómetro Bruker DRX500 equipado con una unidad de control de temperatura B-VT2000. Los experimentos unidimensionales y bidimensionales fueron registrados usando secuencias de impulsos estándar. (Two Dimensional NMR Spectroscopy, Eds. W.R. Croasmun and RMK Carlson, 1994, VCH Publishers, Nueva York, EE.UU.). La supresión de agua se logró con baja presaturación de potencia por espacio de 2 seg. Los experimentos bidimensionales fueron realizados en el modo sensible a la fase usando la incrementación de fase proporcional al tiempo (TPPI) y una anchura espectral de 6000 Hz en ambas dimensiones. Típicamente fueron coadicionados 40 barridos para 400 incrementos t_{1} con 2048 puntos de datos. Los datos fueron procesados usando el software FELIX95 (Molecular Simulations) en una estación de trabajo INDIGO2 (Silicon Graphics). Los datos fueron llenados con ceros para dar una matriz de datos de 2K x 2K y apodizados mediante una función seno-campana cuadrada desplazada 45º.

7.3.3 Asignación por RMN

Las asignaciones de resonancia protónica completas fueron obtenidas aplicando la técnica de asignación secuencial usando los espectros DQFCOSY, TOCSY y NOESY que se describen en la literatura (Wüthrich, NMR of Proteins and Nucleic Acids, 1986, John Wiley & Sons, Nueva York, EE.UU.). Los desplazamiento químicos secundarios fueron calculados para los protones HN y H\alpha restando los desplazamientos químicos de ovillo aleatorio tabulados (Wishart and Sykes, 1994, Method. Enz. 239:363-392) de los correspondientes valores experimentales.

7.3.4 Resultados y discusión

Consideración General. Los péptidos helicoidales anfipáticos tienden a agregarse en soluciones acuosas a las altas concentraciones que son necesarias para la espectroscopia por RMN, haciendo que sea difícil obtener espectros de alta resolución. Por ejemplo, los espectros de RMN del péptido nuclear 4 como ejemplo (ID SEC Nº:4) en agua presentan líneas muy anchas. Así, no pueden resolverse las resonancias de cada residuo de aminoácido. La adición de TFE a la muestra mejora la resolución de los espectros. Se sabe de la TFE que solubiliza los péptidos y además estabiliza las conformaciones helicoidales de los péptidos que tienen propensión helicoidal. Se muestran como ejemplo representativo los hallazgos para espectroscopia por RMN para el péptido 4 (ID SEC Nº:4). Fue estudiado en comparación el 22-mero consenso de Segrest (ID SEC Nº:75).

Desplazamientos químicos secundarios. Los desplazamientos químicos protónicos de los aminoácidos dependen tanto del tipo de residuo como de la estructura secundaria local dentro de un péptido o proteína (Szlagyi, 1995, Progress in Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy 27:325-443). Por consiguiente, la identificación de estructura secundaria regular es posible comparando los desplazamientos experimentales con valores tabulados para conformación no ordenada.

La formación de una hélice \alpha típicamente redunda en un desplazamiento campo arriba (negativo) para la resonancia H\alpha. La observación de un desplazamiento H\alpha campo arriba para varios residuos secuenciales es generalmente tomada como evidencia de una estructura helicoidal. Los desplazamientos secundarios H\alpha para péptido 4 (ID SEC Nº:4) en TFE al 25% a 295 K muestran un importante desplazamiento negativo para los residuos 4 a 19 (Fig. 9A), demostrando una conformación altamente helicoidal. Se observan pequeñas diferencias en los desplazamientos químicos H\alpha del 22-mero consenso (ID SEC Nº:75) en comparación con el péptido 4 (ID SEC Nº:4).

Los desplazamientos químicos de los hidrógenos amídicos de los residuos de aminoácidos que residen en regiones de la hélice \alpha están también desplazados campo arriba con respecto a los desplazamientos químicos que se observan para ovillo aleatorio. Adicionalmente puede observarse una periodicidad de los desplazamientos HN, y la misma refleja el periodo de las vueltas helicoidales. La amplitud de la variación del desplazamiento a lo largo de la secuencia está relacionada con la anfipaticidad de un péptido helicoidal. Un más alto momento hidrofóbico conduce a una oscilación más pronunciada (Zhou y otros, 1992, J. Am Chem. Soc. 114:4320-4326). Los desplazamientos secundarios HN para péptido 4 (ID SEC Nº:4) en TFE al 25% a 925 K presentan un comportamiento oscilatorio de acuerdo con la naturaleza anfipática de la hélice (Fig. 9B). La configuración del desplazamiento químico amídico del péptido 22-mero consenso (ID SEC Nº:75) se diferencia significativamente de la del péptido 4 (ID SEC Nº:4). En particular, la sustitución de los residuos 5, 9 y 13 por Leu (L) redunda en desplazamientos químicos con una periodicidad más pronunciada en el caso del péptido 4 (ID SEC Nº:4). El efecto se extiende incluso al residuo 17, y en menor grado al residuo 21. Por los datos de RMN puede discernirse la existencia de 5-6 vueltas en la secuencia. Así, la sustitución de tres aminoácidos afecta al plegamiento del péptido a lo largo de toda la secuencia. La configuración de RMN refleja claramente la más fuerte naturaleza anfipática del péptido 4 (ID SEC Nº:4) en comparación con el péptido 22-mero consenso de Segrest (ID SEC Nº:75).

El desplazamiento secundario de un protón amídico es influenciado por la longitud del enlace de hidrógeno al oxígeno carbonílico a una vuelta de distancia de la hélice. Por consiguiente, la periodicidad de los valores de desplazamiento químico observados refleja distintas longitudes de enlace de hidrógeno. Esta diferencia es asociada a una forma helicoidal curvada global de la cadena principal de la hélice. Los residuos hidrofóbicos están situados en el lado cóncavo. Los desplazamientos secundarios del péptido 4 (ID SEC Nº:4) indican una conformación \alpha-helicoidal curvada.

7.3.5 Los péptidos que contienen glicinas internas son helicoidales en presencia de TFE

La estructura tridimensional del péptido 8 (ID SEC Nº:8) fue determinada en presencia de TFE usando constricciones de distancia interprotónica derivadas de Efectos Overhauser Nucleares (NOEs). En particular, la presencia de NOE's de medio alcance (d\alphaN_{3}, d\alpha\beta_{3}, daN_{4}) a lo largo de toda la secuencia es coherente con una estructura \alpha-helicoidal global. Fue generada una familia de conformadores a partir del conjunto de datos de RMN y las estructuras se superponen bien del residuo 4 al 19 con una RMSD de cadena principal < 0,8 \ring{A}. Una representación en forma de cinta estéreo de la estructura media junto con la traza de cadena principal de los 15 conformadores de la mínima energía confirma una forma helicoidal curvada. En una estimación aproximada, la curvatura redunda en un ángulo de 20ºC entre la mitad N-terminal y la mitad C-terminal del péptido. Los residuos hidrofóbicos se encuentran principalmente en el lado cóncavo, con la excepción de Leu-5. Una agrupación hidrofóbica bien definida está centrada en torno a Phe-6 incluyendo Leu-3, Leu-9 y Leu-10. Mientras que las vueltas helicoidales comienzan en torno al residuo 3 en el N-terminus, la existencia de muchos NOE's hasta el residuo 22 indica que la hélice se extiende hacia el extremo del C-terminus.

\vskip1.000000\baselineskip

8. Ejemplo Ensayo de activación de LCAT

Los péptidos sintetizados como se ha descrito en el Apartado 6, anteriormente, fueron analizados in vitro para determinar su capacidad para activar LCAT. En el ensayo de LCAT, las vesículas de sustrato (vesículas unilamelares pequeñas o "SUVs") compuestas de fosfatidilcolina de huevo (EPC) o 1-palmitoil-2-oleil-fosfatidilcolina (POPC) y colesterol radiomarcado son preincubadas con más equivalentes ya sea de péptido o bien de ApoA-I (aislada de plasma humano). La reacción es iniciada mediante la adición de LCAT (purificada a partir de plasma humano). La ApoA-I nativa, que fue usada como control positivo, representa un 100% de actividad de activación. La "actividad específica" (es decir, las unidades de actividad (activación de LCAT)/unidad de masa) de los péptidos puede ser calculada como la concentración de péptido que alcanza la máxima activación de LCAT. Por ejemplo, pueden ser sometidas a ensayo las de una serie de concentraciones del péptido (como p. ej. una dilución limitadora) para determinar la "actividad específica" para el péptido - la concentración que alcanza la máxima activación de LCAT (es decir, la conversión porcentual de colesterol en éster de colesterol) en un específico punto en el tiempo en el ensayo (p. ej. en 1 h). Al registrar gráficamente la conversión porcentual de colesterol, p. ej. en 1 h, referida a la concentración de péptido usada, la "actividad específica" puede ser identificada como la concentración de péptido que alcanza un plató en la curva registrada.

8.1 Preparación de vesículas de sustrato

Las vesículas usadas en el ensayo LCAT son SUVs que se componen de fosfatidilcolina de huevo (EPC) o 1-palmitoil-2-oleil-fosfatidilcolina (POPC) y colesterol con una relación moral de 20:1. Para preparar una solución concentrada de vesículas suficiente para 40 ensayos, se disuelven en 5 ml de xileno y se liofilizan 7,7 mg de EPC (o 7,6 mg de POPC; 10 \mumoles), 78 \mug (0,2 \mumoles) de 4-^{14}C-colesterol y 116 \mug de colesterol (0,3 \mumoles). A continuación de ello, 4 ml de tampón de ensayo son añadidos al polvo seco y sonicados bajo atmósfera de nitrógeno a 4ºC. Condiciones de sonicación: sonicador Branson 250, punta de 10 mm, 6 x 5 minutos; tampón de ensayo: Tris 10 mM, NaCl 0,14M, EDTA 1 mM, pH 7,4. La mezcla sonicada es centrifugada 6 veces por espacio de 5 minutos cada vez a 14.000 rpm (16.000 x g) para retirar las partículas de titanio. La solución transparente resultante es usada para el ensayo enzimático.

8.2 Purificación de LCAT

Para la purificación de LCAT, se usa tratamiento del plasma humano con sulfato de dextrano/Mg^{2+} para obtener suero deficiente en lipoproteína (LPDS), que es cromatografiado secuencialmente en cromatografía de Fenilsefarosa, Affigelblue, Concavalina A-sefarosa y de afinidad anti-ApoA-I, como se resume para una purificación representativa en la siguiente Tabla IX:

TABLA IX Purificación de LCAT

24

\vskip1.000000\baselineskip

8.2.1 Preparación de LPDS

Para preparar LPDS, se añaden 500 ml de plasma a 50 ml de solución de sulfato de dextrano (PM = 500000). Agitar durante 20 minutos. Centrifugar por espacio de 30 minutos a 3000 rpm (16.000 x g) a 4ºC. Usar el supernatante (LPDS) para adicional purificación (500 ml aprox.).

8.2.2 Cromatografía de fenilsefarosa

Se usaron los siguientes materiales y condiciones para la cromatografía de fenilsefarosa.

fase sólida:: Fenilsefarosa de alta calidad de sustancia de flujo rápido, Pharmacia

columna:: XK26/40, altura lecho gel: 33 cm, V = 175 ml aprox.

caudales:: 200 ml/h (muestra)

lavado:: 200 ml/h (tampón)

elución:: 80 ml/h (agua destilada)

tampón:: Tris 10 mM, NaCl 140 mM, EDTA 1 mM pH 7,4, azida sódica al 0,01%.

Equilibrar la columna en tampón de Tris, añadir 29 g de NaCl a 500 ml de LPDS, y aplicarlo a la columna. Lavar con varios volúmenes de tampón de Tris hasta que la absorción a una longitud de onda de 280 nm esté aproximadamente en la línea base, y entonces iniciar la elución con agua destilada. Las fracciones que contienen proteína son reunidas (medida del combinado: 180 ml) y son usadas para cromatografía en Affigelblue.

8.2.3 Cromatografía en affigelblue

El combinado de Fenilsefarosa es dializado durante la noche a 4ºC contra Tris-HCl 20 mM, pH 7,4, azida sódica al 0,01%. El volumen del combinado es reducido mediante ultrafiltración (Amicon YM30) hasta 50-60 ml y cargado en una columna de Affigelblue.

fase sólida:: Affigelglue, Biorad, columna 153-7301, XK26/20, altura del lecho de gel: 13 cm aprox; volumen de columna: 70 ml aprox.

caudales:: carga: 15 ml/h

\quad: lavado: 50 ml/h

Equilibrar la columna en tampón de Tris. Aplicar el combinado de Fenilsefarosa a la columna. Empezar paralelamente a recoger las fracciones. Lavar con tampón de Tris. Las fracciones reunidas (170 ml) fueron usadas para cromatografía con ConA.

8.2.4 Cromatografía con ConA

El combinado de Affigelblue fue reducido mediante Amicon (YM30) a 30-40 ml y dializado contra tampón de iniciación de ConA (Tris HCl 1 mM pH 7,4; MgCl_{2} 1 mM, MnCl_{2} 1 mM, CaCl_{2} 1 mM, azida sódica al 0,01%) durante la noche a 4ºC.

fase sólida:: ConA Sefarosa (Pharmacia)

columna:: XK26/20, altura lecho de gel: 14 cm (75 ml)

caudales:: 40 ml/h

\quad: lavado (con tampón de iniciación): 90 ml/h

\quad: elución: 50 ml/h, metil-\alpha-D-manosido 0,2M en Tris 1 mM, pH 7,4.

Las fracciones de proteína de las eluciones con manosido fueron recogidas (110 ml), y el volumen fue reducido mediante ultrafiltración (YM30) hasta 44 ml. El combinado de ConA fue dividido en partes alícuotas de 2 ml, que fueron almacenadas a -20ºC.

8.2.5 Cromatografía de afinidad anti-ApoA-I

La cromatografía de afinidad anti-ApoA-I fue llevada a cabo sobre material Affigel-Hz (Biorad) al cual los anticuerpos anti-ApoA-I habían sido acoplados covalentemente.

columna:: XK16/20, V = 16 ml. La columna fue equilibrada con PBS pH

\quad: 7,4. dos ml del combinado de Con A fueron dializados por espacio

\quad: de 2 horas contra PBS antes de cargarlos en la columna

caudales:: carga: 15 ml/hora lavado (PBS) 40 ml/hora.

Las fracciones de proteína reunidas (V = 14 ml) son usadas para ensayos con LCAT.

La columna es regenerada con tampón de citrato 0,1M (pH 4,5) para eluir la A-I combinada (100 ml), e inmediatamente después de este procedimiento es reequilibrada con PBS.

\vskip1.000000\baselineskip

8.3 Resultados

Se presentan en la Tabla X, a continuación, los resultados del ensayo de activación de LCAT.

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(Tabla pasa a página siguiente)

25

26

27

28

29

30

31

32

33

34

35

36

37

38

39

En la Tabla X, * indica péptidos que son N-terminal acetilados y C-terminal amidados; ^{1} indica péptidos que son N-terminal dansilados; sp indica péptidos que presentaban problemas de solubilidad bajo las condiciones experimentales; X es Aib; Z es Nal; O es Orn; He (%) designa helicidad porcentual; mics designa micelas; y - indica aminoácidos delecionados.

\vskip1.000000\baselineskip

9. Ejemplo La farmacocinética de los agonistas de ApoA-I

Los experimentos siguientes demuestran que los agonistas de ApoA-I son estables en la circulación y se asocian con el componente de HDL (HDL = lipoproteínas de alta densidad) del plasma.

En particular, el péptido 4 marcado radioactivamente inyectado por vía intraperitoneal en ratones se asoció con el componente de HDL y se mantuvo estable por espacio de al menos 6 horas. Al ser añadido a plasma humano (ex vivo), el péptido 4 también se asoció con el componente de HDL.

9.1. Síntesis de péptidos radiomarcados

Los péptidos radiomarcados 4 (ID SEC Nº:4) y 8 (ID SEC Nº:8) fueron sintetizados acoplando Fmoc-Pro marcado con ^{14}C como aminoácido N-terminal.

L-[U-^{14}C)Prolina, con una actividad específica de 9,25 GBq/mmol, fue usada para la síntesis de Fmoc-L-Prolina marcada. La síntesis fue realizada según Lapatsanis, Synthesis, 1983, 671-173. Brevemente, 250 \muM (29,6 mg) de L-Prolina no marcada fueron disueltos en 225 \mul de una solución de Na_{2}CO_{3} al 9% y añadidos a una solución (Na_{2}CO_{3} al 9%) de 9,25 MBq (250 \muM) de L-Prolina marcada con ^{14}C. El líquido fue enfriado hasta 0ºC, mezclado con 600 \muM (202 mg) de 9-fluorenilmetil-N-succinimidilcarbonato (Fmoc-OSu) en 0,75 ml de DMF y sacudido a temperatura ambiente por espacio de 4 horas. A continuación de ello, la mezcla fue sometida a extracción con éter dietílico (2 x 5 ml) y cloroformo (1 x 5 ml), y la fase acuosa restante fue acidificada con HCl al 30% y sometida a extracción con cloroformo (5 x 8 ml). La fase orgánica fue secada con Na_{2}SO_{4} y separada por filtración y el volumen fue reducido bajo flujo de nitrógeno hasta 5 ml. La pureza fue estimada por TLC (CHCl_{3}:MeOH:Hac, 9:1:0,1 en volumen, fase estacionaria gel de sílice 60 para HPTLC, Merck, Alemania) y presentaba un único pico (detección UV, pureza radioquímica: Analizador Lineal, Berthold, Alemania); rendimiento de reacción: 90% (determinado por LSC).

La solución de cloroformo que contenía ^{14}C-Fmoc Prolina fue usada directamente para la síntesis de péptidos. Se usó para la síntesis una resina peptídica que contenía los aminoácidos 2-22, sintetizada automáticamente como se ha descrito en el Párrafo 6. La secuencia del péptido fue determinada por degradación de Edman. El acoplamiento fue llevado a cabo como se describe en el Párrafo 6.1 (acoplamiento manual de Fmoc-Nal), exceptuando el hecho de que en lugar de TBTU se usó HATU (hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)1-,1,3,3-tetrametiluronio). Fue realizado manualmente como se describe en el Párrafo 6.1 un segundo acoplamiento con Fmoc-L-Pro no marcada. La disociación y desprotección del péptido fueron como se describe en el Párrafo 6.4. Las actividades específicas de los péptidos marcados eran las siguientes:

péptido 4 (ID SEC Nº:4) = 3,9 x 10^{5} dpm/mg

péptido 8 (ID SEC Nº:8) = 1,0 x 10^{5} dpm/mg

9.2. Farmacocinética en ratones

En cada experimento, 2,5 mg/kg de péptido radiomarcado fueron inyectados por vía intraperitoneal a ratones que eran alimentados con comida de ratón normal o con la dieta modificada aterogénica de Thomas-Harcroft (que redundaba en una importante elevación del colesterol VLDL e IDL). Se tomaron muestras de sangre en múltiples intervalos en el tiempo para la valoración de la radiactividad en plasma. Los resultados están resumidos en la siguiente Tabla XI.

TABLA XI Vida media del péptido 4 (ID SEC Nº:4) en ratones

40

9.3. Estabilidad en suero humano 9.3.1. Métodos experimentales

100 \mug de péptido 4 marcado con ^{14}C (ID SEC Nº:4) preparado como se describe en el Párrafo 9.1, anteriormente, fueron mezclados con 2 ml de plasma humano fresco (a 37ºC) y deslipidados ya sea inmediatamente (muestra de control) o bien a los 8 días de incubación a 37ºC (muestra de ensayo). La deslipidación fue realizada extrayendo los lípidos con un volumen igual de cloroformo:metanol 2:1 (en volumen).

Las muestras fueron cargadas en una columna de C_{18} HPLC de fase inversa y eluídas con un gradiente lineal (25-58% en 33 min.) de acetonitrilo (que contenía un 0,1% de TFA). Los perfiles de elución se siguieron por absorbancia (220 nm) y radiactividad.

9.3.2. Resultados

La muestra de control se eluyó como pico único con un tiempo de retención de aproximadamente 30 min. Toda la radiactividad fue eluída en este pico.

La muestra de ensayo se eluyó como dos picos: uno que tenía un tiempo de retención de aproximadamente 3 min., teniendo el otro un tiempo de retención de aproximadamente 30 min. El pico de 3 min. (péptido degradado) correspondía aproximadamente un 15% de la radiactividad total cargada en la columna. El resto de la radiactividad fue eluído con el pico de 30 min. (péptido intacto), indicando que el péptido 4 (ID SEC Nº:4) es extremadamente estable al suero humano; habiendo permanecido intacto más de un 80% del péptido 4 incluso después de una incubación de 8 días en suero humano.

9.4. Formación de partículas tipo pre-\beta 9.4.1 Método experimental

HDL humana fue aislada por ultracentrifugación de ajuste de la densidad con KBr a la densidad d = 1,21 g/ml para obtener una fracción superior, siendo a continuación efectuada cromatografía de filtración en gel Superosa 6 para separar la HDL de las otras lipoproteínas. La HDL aislada fue ajustada a una concentración final de 1,0 mg/ml con salina fisiológica sobre la base del contenido de proteína según determinación efectuada mediante ensayo de cuantificación de proteínas de Bradford. Una parte alícuota de 300 \mul fue retirada de la preparación de HDL aislada e incubada con 100 \mul de péptido 4 marcado con ^{14}C (0,2-1,0 \mug/\mul) por espacio de dos horas a 37ºC. Fueron analizadas cinco incubaciones independientes que incluían un testigo que contenía 100 \mul de salina fisiológica y cuatro diluciones de péptido 4 marcado con ^{14}C: (I) 0,20 \mug/\mul relación péptido:HDL = 1:15; (II) 0,30 \mug/\mul relación péptido:HDL = 1:10; (III) 0,60 \mug/\mul relación péptido:HDL = 1:5; y (IV) 0,00 \mug/\mul relación péptido:HDL = 1:3. A continuación de la incubación de dos horas, una parte alícuota de 200 \mul de la muestra (volumen total = 400 \mul) fue cargada en una columna de filtración en gel Superosa 6 para la separación y análisis de las lipoproteínas, y se usaron 100 \mul para determinar la radiactividad total cargada. Las condiciones para todas las cromatografías FPLC fueron como se describe en el Apartado 9.4, a continuación.

9.4.2 Resultados

Los resultados se presentan en la Tabla XII, a continuación, y en las Figs. 9A-9F.

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA XII Desplazamiento de APOA-I humana de HDL humana aislada por el péptido 4 marcado con ^{14}C (ID SEC Nº:4)

41

\hskip1.2cm

42

\newpage

A la luz de los datos que se presentan en la Tabla XII es evidente que fue recuperado de la columna más de un 90% de la radiactividad tras la separación de las partículas de lipoproteína. A baja concentración de péptido (es decir, para una relación másica de péptido:HDL de 1:15), el pico de HDL estaba dividido en dos picos independientes (Fig. 9A), lo que sugiere que se daba una interacción entre el péptido y la HDL que redundaba en cierta remodelación de la partícula de lipoproteína, pero puesto que no se observó un pico desplazado, la interacción no era suficiente para desplazar la ApoA-I nativa. Al ser incrementada la concentración de péptido, se observaba un desplazamiento de ApoA-I, que se incrementaba al incrementarse la concentración de péptido (Fig. 9B-9D). Adicionalmente, todos los ciclos cromatográficos presentaban un tercer pico detectado por cuenta radiométrica (exceptuando el que tenía una relación másica de 1:10, para el cual no se indican resultados) que está en consecuencia con el volumen de elución de péptido libre (Fig. 9E).

Para analizar adicionalmente el efecto de la concentración de péptido en la interacción del péptido 4 marcado con ^{14}C y de la HDL, a partir de los cuatro ciclos cromatográficos (Figs. 9A-9D) fue generado un registro gráfico diferencial y el mismo se muestra en la Fig. 9F. El registro gráfico diferencial muestra el desplazamiento en el pico de HDL así como el incrementado desplazamiento de ApoA-I al aumentar la concentración de péptido. El desplazamiento de ApoA-I redunda en la formación de partículas tipo pre-\beta.

\vskip1.000000\baselineskip

9.5. Asociación del péptido 4 con lipoproteínas humanas 9.5.1. Métodos experimentales

La asociación del péptido 4 (ID SEC Nº:4) con fracciones de lipoproteína humana fue determinada incubando péptido 4 marcado con ^{14}C (ID SEC Nº:4) con cada clase de lipoproteína (HDL, LDL y VLDL) y una mezcla de las distintas clases de lipoproteína.

Las HDL, LDL y VLDL fueron aisladas por ultracentrifugación en gradiente de ajuste de la densidad con KBr a d = 1,21 g/ml y purificadas por FPLC en una columna de exclusión de tamaño en columna de Superosa 6B (la cromatografía fue realizada con un caudal de 0,7 ml/min. y un tampón de corrida de Tris 10 mM (pH 8), NaCl 115 mM, EDTA 2 mM y NaN_{3} al 0,01%. El péptido 4 marcado con ^{14}C fue incubado con HDL, LDL y VLDL a una relación de péptido:fosfolípido de 1:5 (relación másica) por espacio de 2 h a 37ºC. La cantidad requerida de lipoproteína (volúmenes basados en la cantidad necesaria para producir 1000 \mug) fue mezclada con 0,2 ml de solución concentrada de péptido (1 mg/ml) y la solución fue llevada a 2,2 ml usando un 0,9% de NaCl según la
Tabla XIII:

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA XIII Preparación de muestras de péptido-lipoproteína

44

\vskip1.000000\baselineskip

Tras incubación por espacio de 2 h a 37ºC fue retirada una parte alícuota (0,1 ml) para cuenta de escintilación líquida para determinar la radiactividad total, la densidad de la restante mezcla de incubación fue ajustada a 1,21 g/ml con KBr, y las muestras fueron centrifugadas a 100.000 rpm (300.000 g) por espacio de 24 horas a 4ºC en un rotor TLA 100.3 usando una ultracentrífuga de sobremesa Beckman. El supernatante resultante fue fraccionado retirando partes alícuotas de 0,3 ml de la parte superior de cada muestra para un total de 5 fracciones, y 0,05 ml de cada fracción fueron usados para cuenta de escintilación líquida. Las dos fracciones superiores contienen las lipoproteínas flotantes, y las otras fracciones (3-5) corresponden a proteínas/péptidos en solución.

\newpage

9.5.2. Resultados

Los resultados se presentan en la Tabla XIV, a continuación. La incubación de péptido 4 marcado con ^{14}C con las fracciones de lipoproteína aisladas reveló una fuerte asociación con HDL (un 88% de radiactividad total en las fracciones 1 y 2) así como con VLDL (85%), y una considerablemente más débil afinidad para con LDL (66%). La mezcla de incubación que constaba de todas las fracciones de lipoproteína y péptido 4 marcado con ^{14}C (LP/Péptido) presentaba un 88% del péptido marcado asociado con la fracción de lipoproteína. El análisis por FPLC de la mezcla de incubación de LP/péptido demostró que casi la totalidad del péptido 4 marcado con ^{14}C estaba asociada con la fracción de HDL, indicando una alta selectividad para esta clase de lipoproteína.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA XIV Asociación del péptido 4 (ID SEC Nº:4) con varios lípidos

45

\hskip0.5cm

* antes de la centrifugación

\vskip1.000000\baselineskip

9.6. El péptido 4 (ID SEC Nº:4) fija selectivamente los lípidos HDL en plasma humano 9.6.1. Método experimental

Plasma humano (2 ml) fue incubado con 20, 40, 60, 80 y 100 \mug de péptido 4 marcado con ^{14}C por espacio de 2 h a 37ºC. Las lipoproteínas fueron separadas ajustando la densidad a 1,21 g/ml y mediante centrifugación en rotor TLA 100.3 a 100.000 rpm (300.000 g) por espacio de 36 h a 4ºC. Se tomaron para el análisis los 900 \mul de la parte superior (en fracciones de 300 \mul). 50 \mul de cada fracción de 300 \mul fueron sometidos a contaje de radiactividad y 200 \mul de cada fracción fueron analizados por FPLC (columna combinada de Superosa 6/Superosa 12).

9.6.2. Resultados

Se presenta en la Tabla XV, a continuación, la cantidad de radiactividad recuperada para cada fracción. La mayor parte de la radiactividad fue recuperada en las tres fracciones superiores. Todos los perfiles de separación de lipoproteína de la muestra de plasma incubada con péptido 4 marcado con ^{14}C (ID SEC Nº:4) (no indicado) indican que en cada caso está presente en la fracción de HDL casi toda la radiactividad. Así, a pesar de que otras lipoproteínas están presentes en el suero humano, el péptido 4 (ID SEC Nº:4) presenta una fijación altamente selectiva a la HDL.

TABLA XV Radiactividad recuperada de la incubación de péptido 4 marcado con ^{14}C con suero humano

46

\vskip1.000000\baselineskip

10. Ejemplo Los agonistas de ApoA-I promueven la evacuación del colesterol

Células de hepatoma HepG2 fueron puestas en cultivo en placa en placas de cultivo de 6 pocillos y cultivadas hasta la confluencia. Las células fueron marcadas con ^{3}H-colesterol secando el colesterol y luego añadiendo albúmina de suero bovino (BSA) al 1% en salina tamponada con fosfato (PBS), sonicando la solución y añadiendo 0,2 ml de solución de marcación y 1,8 ml de medio de cultivo a las células, con lo cual cada pocillo contenía 2 \muCi de radiactividad. Las células fueron incubadas por espacio de 24 h con el medio de marcación.

Se prepararon complejos de péptido (o proteína):DMPC a razón de una relación de péptido (o proteína):DMPC de 1:2 (en peso). Para preparar los complejos, péptido 4 (ID SEC Nº:4) o proteína ApoA-I humana nativa fue añadido(a) a una solución de DMPC en PBS e incubado(a) a temperatura ambiente durante la noche, al cabo de cuyo tiempo la solución queda clarificada. La concentración de péptido o proteína en la solución final era de 1 mg/ml.

El medio de marcación fue retirado de las células y las células fueron lavadas con PBS antes de la adición de los complejos. 1,6 ml de medio de cultivo fueron añadidos a cada pocillo, seguidos por complejo de péptido (o proteína):DMPC y PBS suficiente para llevar el volumen final a 2 ml por pocillo. Las concentraciones finales de péptido o ApoA-I eran de 1, 2,5, 5, 7,5 y 25 \mug/ml de medio. Tras 24 horas de incubación a 37ºC, el medio fue retirado y las células fueron lavadas con 2 ml de BSA al 1%/PBS, siendo a continuación efectuados 2 lavados cada uno con 2 ml de PBS. La cantidad de ^{3}H-colesterol evacuada al medio fue determinada mediante cuenta de escintilación líquida.

Los resultados demuestran que el péptido 4 (ID SEC Nº:4) era más eficaz que la ApoA-I para la evacuación del colesterol.

11. Ejemplo Uso de los agonistas de ApoA-I en sistemas de modelo animal

La eficacia de los agonistas de ApoA-I de la invención fue demostrada en conejos. Los resultados demuestran que la administración de los agonistas de ApoA-I incrementa la concentración en suero de partículas tipo HDL.

11.1. Preparación de los complejos de fosfolípido/péptido

Se prepararon pequeñas partículas discoidales que constaban de fosfolípido (DPPC) y péptido siguiendo el método de diálisis de colato. El fosfolípido fue disuelto en cloroformo y secado bajo una corriente de nitrógeno. El péptido fue disuelto en tampón (salina) a una concentración de 1-2 mg/ml. La película de lípido fue disuelta de nuevo en tampón que contenía colato (a 43ºC) y la solución de péptido fue añadida a razón de una relación de fosfolípido/péptido de 3:1 en peso. La mezcla fue incubada durante la noche a 43ºC y luego dializada a 43ºC (durante 24 h), a temperatura ambiente (durante 24 h) y a 4ºC (durante 24 h), con tres cambios de tampón (grandes volúmenes) en el punto de temperatura. Los complejos fueron esterilizados por filtración (0,22 \mum) para inyección y almacenamiento a 4ºC.

11.2. Aislamiento y caracterización de las partículas de péptido/fosfolípido

Las partículas fueron separadas en una columna de filtración en gel (Superosa 6 HR). La posición del pico que contenía las partículas fue identificada midiendo la concentración de fosfolípido en cada fracción. Se determinó el radio de Stokes para el volumen de elución. La concentración de péptido en el complejo fue determinada midiendo el contenido de fenilalanina (por HPLC) a continuación de una hidrólisis ácida de 16 h.

11.3. Inyección en el conejo

A conejos blancos de Nueva Zelanda machos (de 2,5-3 kg) les fue inyectada por vía intravenosa una dosis de complejo de fosfolípido/péptido (de 5 o 10 mg/kg de peso corporal, expresados como péptido) en una única inyección en bolo de no más de 10-15 ml. Los animales fueron sedados ligeramente antes de las manipulaciones. Fueron tomadas muestras de sangre (recogidas en EDTA) antes de la inyección y 5, 15, 30, 60, 240 y 1440 minutos después de la misma. Se determinó el hematócrito (Hct) para cada muestra. Se hicieron partes alícuotas de las muestras y las mismas se almacenaron a -20ºC antes del análisis.

11.4. Análisis de los sueros de conejo

Lípidos en Plasma. El colesterol en plasma total, los triglicéridos en plasma y los fosfolípidos en plasma fueron determinados enzimáticamente usando ensayos disponibles comercialmente según los protocolos del fabricante (Boehringer Mannheim, Mannheim, Alemania y Biomérieux, 69280, Marcy-L'étoile, Francia).

Perfiles de Lipoproteínas. Los perfiles de lipoproteínas en plasma de las fracciones obtenidas tras la separación del plasma en sus fracciones de lipoproteínas fueron determinados mediante centrifugación en un gradiente de densidad de sucrosa. Las fracciones fueron recogidas y en cada fracción individual fue medido enzimáticamente el contenido de fosfolípido y colesterol.

11.5. Resultados

Se muestra en la Fig. 10 el perfil de lipoproteínas de conejos a los que les fueron inyectados 10 mg/kg de péptido 4 (ID SEC Nº:4) (en forma de complejos de péptido/DPPC) en función del tiempo. Un considerable incremento del colesterol de las fracciones de colesterol HDL (fracciones > 1,06 mg/ml) es manifiesto a los 5 min. de la inyección y dura aproximadamente 1 h.

Se presenta en la siguiente Tabla XVI el colesterol de las fracciones de HDL combinadas obtenidas mediante ultracentrifugación en gradiente de densidad. El máximo incremento del colesterol HDL (31,3%) se produjo a los 15 min. de la administración.

Estos datos indican que la administración de complejos de péptido 4/DPPC (10 mg/kg) induce una rápida y eficaz movilización del colesterol periférico.

TABLA XVI Colesterol HDL en conejos a continuación de la administración de 10 mg/kg de péptido 4 (ID SEC Nº:4)

48

Se muestra en la siguiente Tabla XVII la dependencia de la dosis de los complejos de péptido 4/DPPC. Sobre la base de estos dos puntos en el tiempo, fue observada una dependencia de la dosis aproximadamente lineal.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA XVII Dependencia de la dosis de los niveles de colesterol HDL a continuación de la administración de complejos de péptido 4/DPPC

49

Se indica en la siguiente Tabla XVIII el incremento porcentual del colesterol HDL a continuación de la inyección de 5 mg/kg de péptido 1 (ID SEC Nº:1) (en forma de complejos de péptido/DPPC) o de 10 mg/kg de péptido 3 (ID SEC Nº:3) (en forma de complejos de péptido/DPPC).

\vskip1.000000\baselineskip

50

51

\newpage

Estos experimentos demuestran la capacidad de los agonistas de ApoA-I de la invención para incrementar el colesterol HDL. Se observa un considerable incremento del colesterol HDL incluso a las 4 horas de la administración para el péptido 1 (ID SEC Nº:1) y para el péptido 3 (ID SEC Nº:3).

\vskip1.000000\baselineskip

12. Ejemplo Preparación de complejo de péptido-lípido por el procedimiento de coliofilización

Se utilizó el protocolo siguiente para preparar complejos de péptido-lípido.

Un mg de péptido 4 (ID SEC Nº:4) fue disuelto en 250 \mul de metanol de la calidad para HPLC (Perkin Elmer) en un vial de vidrio transparente de un ml con tapón (Waters #WAT025054). Se ayudó a la disolución del péptido mediante ocasional agitación vorticial a lo largo de un periodo de tiempo de 10 minutos a temperatura ambiente. A esta mezcla le fue añadida una parte alícuota que contenía 1, 2, 3, 4, 5, 7,5, 10 o 15 mg de dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC; Avanti Polar Lipids, Pureza del 99%, producto Nº 850355) de una solución concentrada de 100 mg/ml en metanol. El volumen de la mezcla fue llevado a 400 \mul mediante adición de metanol, y la mezcla fue adicionalmente sometida a agitación vorticial intermitentemente a lo largo de un periodo de tiempo de 10 minutos a temperatura ambiente. Fueron añadidos a cada tubo 200 \mul de xileno (Sigma-Aldrich, pureza del 99%, calidad para HPLC) y los tubos fueron sometidos a agitación vorticial por espacio de 10 segundos cada uno. Se perforaron dos pequeños orificios en las partes superiores de cada tubo con una aguja de jeringa del calibre 20, los tubos fueron congelados por espacio de 15 segundos cada uno en nitrógeno líquido, y los tubos fueron liofilizados durante la noche bajo vacío. Fueron añadidos a cada tubo 200 ml de solución de NaCl al 0,9%. Los tubos fueron sometidos a agitación vorticial por espacio de 20 segundos cada uno. En este punto en el tiempo las soluciones contenidas en los tubos tenían un aspecto lechoso. Los tubos fueron entonces incubados en un baño de agua por espacio de 30 minutos a 41ºC. Las soluciones contenidas en todos los tubos se volvieron transparentes (es decir que adquirieron un aspecto similar al del agua), exceptuando el tubo que contenía 15 mg de DPPC, que seguía siendo turbio.

Se usó el protocolo siguiente para preparar una mayor cantidad de complejos de péptido-lípido para experimentos in vivo.

Se disolvió péptido 4 (ID SEC Nº:4) (22,4 mg) en metanol a una concentración de 3,5 mg/ml mediante incubación por espacio de varios minutos y mezcla mediante agitación vorticial intermitentemente. A esta solución le fue añadida dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) en metanol (solución concentrada de 100 mg/ml) de forma tal que la relación final de DPPC/péptido era de 2,5:1 (en peso). Esta solución fue mezclada mediante agitación vorticial. Se añadió xileno a esta solución hasta una concentración final de un 36%. Fueron retiradas partes alícuotas de la solución resultante para posterior análisis por cromatografía de filtración en gel. Las soluciones fueron congeladas en nitrógeno líquido y liofilizadas hasta la sequedad mediante vacío. Una parte alícuota que contenía 20 mg de péptido y 50 mg de DPPC fue rehidratada en solución salina estéril (NaCl al 0,9%), mezclada y calentada hasta 41ºC por espacio de varios minutos hasta ser obtenida como resultado de ello una solución transparente de complejos de péptido/fosfolípido reconstituidos.

12.1 Caracterización de complejos mediante cromatografía de filtración en gel de superosa 6

Se prepararon mediante coliofilización como se describe en el texto complejos de péptido-fosfolípido que contenían péptido 4 marcado con ^{14}C (ID SEC Nº:4) (radiactividad específica 159.000 DPM/mg de péptido en peso, suponiendo un contenido de péptido de un 50%). La preparación contenía 1 mg de péptido y 4 mg de DPPC en peso. Tras haber reconstituido los complejos en 200 \mul de NaCl al 0,9%, 20 \mul (100 \mug) de los complejos fueron aplicados a una columna de Superosa 6 de Pharmacia usando NaCl al 0,9% como fase líquida a un caudal de 0,5 ml/minuto. Tras un retardo de 5 ml (volumen vacío de columna = 7,7 ml), fueron recogidas fracciones de 1 ml. Partes alícuotas que contenían 20 \mul de las fracciones fueron analizadas para determinar el contenido de fosfolípidos usando el kit bioMerieux Phospholipides Enzymatique PAP 150 (Nº 61491) según las instrucciones facilitadas por el fabricante. Los restos de cada fracción fueron contados por espacio de 3 minutos en un contador de escintilación líquida Wallach 1410 (Pharmacia) usando el programa Easy Count. La inmensa mayoría tanto del fosfolípido como del péptido fue recuperada juntamente en unas pocas fracciones con picos a razón de aproximadamente 16 ml. El perfil de absorbancia UV para esta muestra (no ilustrado) indica que los complejos se eluyen desde la columna a razón de un volumen de 14,7 ml. La discrepancia entre el volumen de elución según medición efectuada mediante análisis de radiactividad/fosfolípidos y absorbancia UV es debida al volumen muerto de 1,3 ml de tubería entre la celda del flujo de absorbancia UV y la salida del colector de fracciones. Este volumen de elución corresponde a un diámetro de Stokes de 114 angstroms. Los volúmenes de elución de aproximadamente 15-19 ml corresponden a diámetros de Stokes de las partículas de 50-120 angstroms, la cual es la gama de tamaños de las HDL humanas.

12.2. Cromatografía de filtración en gel de superosa 6 de HDL humana

Se preparó de la manera siguiente HDL_{2} humana: 300 ml de plasma humano congelado (Mannheim Blutspendzentrale Nº 1185190) fueron descongelados, ajustados a una densidad de 1,25 con bromuro potásico sólido y centrifugados por espacio de 45 horas a 40.000 rpm usando un rotor Ti45 (Beckman) a 20ºC. La capa flotante fue recogida, dializada contra agua destilada, ajustada a una densidad de 1,7 con bromuro potásico sólido y centrifugada como se ha descrito anteriormente por espacio de 70 horas. La capa de fondo (a un nivel de un cm por encima del fondo del tubo) fue recogida, llevada a azida sódica al 0,01% y almacenada a 4ºC por espacio de 4 días hasta la cromatografía. 20 \mul de la HDL_{2} fueron cargados en un sistema de cromatografía de filtración en gel para FPLC de Superosa 6 de Pharmacia usando NaCl al 0,9% como eluído de columna. El caudal de columna era de 0,5 ml/min. El eluído de la columna fue verificado mediante absorbancia o dispersión de luz de una longitud de onda de 254 nm. Las de una serie de proteínas de peso molecular y diámetro de Stokes conocidos fueron usadas como patrones para calibrar la columna para el cálculo de los diámetros de Stokes de las partículas (Manual de Instrucciones del Kit para Calibración por Filtración en Gel Pharmacia, Pharmacia Laboratory Separation, Piscataway, NJ, revisado en abril de 1985). La HDL era eluída con un volumen de retención de 14,8 ml, que corresponde a un diámetro de Stokes de 108 nm.

\vskip1.000000\baselineskip

13.2 Ejemplo Preparación de anticuerpos

Péptidos 4 u 8 fueron conjugados con hemocianina de lapa californiana (KLH; 1 mg de péptido por 10 mg de KLH). El conjugado con KLH (LMG) fue puesto en suspensión en adyuvante completo de Freund e inyectado a conejos en el punto 0 en el tiempo, y potenciado con 0,25 mg de conjugado con KLH a las 4 semanas y de nuevo a las 5 semanas. Los presangrados y los postsangrados a las seis semanas fueron sometidos a ensayo para determinar el título de anticuerpos contra antígeno auténtico mediante ELISA.

Los sangrados de producción fueron reunidos de 2 conejos en cada caso. Los anticuerpos dirigidos exclusivamente contra los antígenos peptídicos fueron aislados de la manera siguiente:

1. El péptido libre fue unido a Sefarosa 4B activada con bromuro de cianógeno (Pharmacia) según el protocolo del fabricante.

2. El antisuero fue preabsorbido en una columna de péptidos irrelevantes y en columnas de proteínas séricas murinas y humanas irrelevantes.

3. El antisuero preabsorbido fue pasado por la columna del péptido correspondiente (véase el punto 1).

4. Las columnas fueron lavadas con salina tamponada con borato 0,1M (pH 8,2) y los anticuerpos combinados fueron eluídos usando un escalonamiento del gradiente de bajo pH de pH 4,0 a pH 3,0 a pH 2,0 (tampón de glicina 0,1M) y finalmente con HCl 0,1M.

5. El material eluído fue neutralizado con salina de borato sobrante, concentrado mediante ultrafiltración (Amicon, YM30) y dializado contra salina de borato.

6. La concentración de proteína fue determinada mediante absorbancia a 280 nm.

Los anticuerpos resultantes fueron sometidos a ensayo para determinar la especificidad de especie usando ApoA-I humana purificada o ApoA-I murina purificada en un ensayo de fijación ELISA directa. Los anticuerpos humanos y murinos eran específicos para la ApoA-I humana, y mostraron una actividad cruzada mínima.

\global\parskip0.000000\baselineskip

(1) INFORMACIÓN GENERAL

\vskip0.800000\baselineskip

(i): SOLICITANTE: Dasseux, Jean-Louis

\hskip3.9cm

Sekul, Renate

\hskip3.9cm

Buttner, Klaus

\hskip3.9cm

Cornut, Isabelle

\hskip3.9cm

Metz, Gunther

\hskip3.9cm

Dufourcq, Jean

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TÍTULO DE LA INVENCIÓN: AGONISTAS DE LA APOLIPROTEÍNA A-I Y SU USO PARA TRATAR TRASTORNOS DISLIPIDÉMICOS

\vskip0.800000\baselineskip

(iii): NÚMERO DE SECUENCIAS: 254

\vskip0.800000\baselineskip

(iv): DIRECCIÓN DE CORRESPONDENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): DESTINATARIO: Pennie & Edmonds LLP

\vskip0.500000\baselineskip

(B): CALLE: 1155 Avenue of the Americas

\vskip0.500000\baselineskip

(C): CIUDAD: New York

\vskip0.500000\baselineskip

(D): ESTADO: NY

\vskip0.500000\baselineskip

(E): PAÍS: USA

\vskip0.500000\baselineskip

(F): ZIP: 10036-2811

\vskip0.800000\baselineskip

(v): FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): TIPO DE MEDIO: Disquette

\vskip0.500000\baselineskip

(B): ORDENADOR: IBM Compatible

\vskip0.500000\baselineskip

(C): SISTEMA OPERATIVO: DOS

\vskip0.500000\baselineskip

(D): SOFTWARE: FastSEQ Version 2.0

\vskip0.800000\baselineskip

(vi): DATOS DE SOLICITUD ACTUALES:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NÚMERO DE SOLICITUD: PCT/US98/20327

\vskip0.500000\baselineskip

(B): FECHA DE PRESENTACIÓN: 28-SEP-1998

\vskip0.500000\baselineskip

(C): CLASIFICACIÓN:

\vskip0.800000\baselineskip

(vii): DATOS DE SOLICITUD ANTERIORES:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NÚMERO DE SOLICITUD: 08/940,095

\vskip0.500000\baselineskip

(B): FECHA DE PRESENTACIÓN: 29-SEP-1997

\vskip0.800000\baselineskip

(viii): INFORMACIÓN DEL ABOGADO/AGENTE:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE: Coruzzi, Laura A

\vskip0.500000\baselineskip

(B): NÚMERO DE REGISTRO: 30,742

\vskip0.500000\baselineskip

(C): NÚMERO DE REFERENCIA/EXPEDIENTE: 009196-0004-228

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): INFORMACIÓN DE TELECOMUNICACIÓN:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): TELÉFONO: 650-493-4935

\vskip0.500000\baselineskip

(B): FAX: 650-493-5556

\vskip0.500000\baselineskip

(C): TELEX: 66141 PENNIE

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:1:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguna

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 16

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Naftilalanina

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:1:

\vskip1.000000\baselineskip

52

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:2:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 23 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:2:

\vskip1.000000\baselineskip

53

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:3:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:3:

\vskip1.000000\baselineskip

54

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:4:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:4:

\vskip1.000000\baselineskip

55

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:5:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 23 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = D-Pro

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:5:

\vskip1.000000\baselineskip

56

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:6:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:6:

\vskip1.000000\baselineskip

57

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:7:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:7:

\vskip1.000000\baselineskip

58

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:8:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:8:

\vskip1.000000\baselineskip

59

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:9:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:9:

\vskip1.000000\baselineskip

60

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:10:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 17

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Naftilalanina

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:10:

\vskip1.000000\baselineskip

61

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:11:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:11:

\vskip1.000000\baselineskip

62

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:12:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:12:

\vskip1.000000\baselineskip

63

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:13:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:13:

64

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:14:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 18

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 22

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:14:

\vskip1.000000\baselineskip

65

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:15:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 15:

\vskip1.000000\baselineskip

66

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:16:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:16:

\vskip1.000000\baselineskip

67

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:17:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:17:

\vskip1.000000\baselineskip

68

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 18:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:18:

\vskip1.000000\baselineskip

69

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:19:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = D-Pro

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:19:

\vskip1.000000\baselineskip

70

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:20:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:20:

\vskip1.000000\baselineskip

71

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:21:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = D-Pro

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:21:

\vskip1.000000\baselineskip

72

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:22:

\vskip1.000000\baselineskip

73

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:23:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:23:

\vskip1.000000\baselineskip

74

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:24:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:24:

\vskip1.000000\baselineskip

75

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:25:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:25:

\vskip1.000000\baselineskip

76

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:26:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:26:

\vskip1.000000\baselineskip

77

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:27:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 14

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Naftilalanina

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:27:

\vskip1.000000\baselineskip

78

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:28:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:28:

\vskip1.000000\baselineskip

79

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:29:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:29:

\vskip1.000000\baselineskip

80

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:30:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...22

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Péptido con terminal-N dansilado

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:30:

\vskip1.000000\baselineskip

81

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:31:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:31:

\vskip1.000000\baselineskip

82

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:32:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:32:

\vskip1.000000\baselineskip

83

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:33:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:33:

\vskip1.000000\baselineskip

84

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:34:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 5

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Naftilalanina

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:34:

\vskip1.000000\baselineskip

85

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:35:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:35:

\vskip1.000000\baselineskip

86

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:36:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:36:

\vskip1.000000\baselineskip

87

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:37:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:37:

\vskip1.000000\baselineskip

88

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:38:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:38:

\vskip1.000000\baselineskip

89

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:39:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:39:

\vskip1.000000\baselineskip

90

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:40:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:40:

\vskip1.000000\baselineskip

91

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:41:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:41:

\vskip1.000000\baselineskip

92

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:42:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:42:

\vskip1.000000\baselineskip

93

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:43:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:43:

\vskip1.000000\baselineskip

94

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:44:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...22

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Todos los aminoácidos codificados genéticamente están en configuración-D

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:44:

\vskip1.000000\baselineskip

95

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:45:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:45:

\vskip1.000000\baselineskip

96

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:46:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:46:

\vskip1.000000\baselineskip

97

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:47:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 21 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:47:

\vskip1.000000\baselineskip

98

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:48:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = D-Pro

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 2

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = D-Val

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:48:

\vskip1.000000\baselineskip

99

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:49:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:49:

\vskip1.000000\baselineskip

100

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:50:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:50:

\vskip1.000000\baselineskip

101

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:51:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:51:

\vskip1.000000\baselineskip

102

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:52:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE. Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:52:

\vskip1.000000\baselineskip

103

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 53:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:53:

\vskip1.000000\baselineskip

104

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:54:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:54:

\vskip1.000000\baselineskip

105

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:55:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:55:

\vskip1.000000\baselineskip

106

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:56:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:56:

\vskip1.000000\baselineskip

107

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:57:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:57:

\vskip1.000000\baselineskip

108

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:58:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 21 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:58:

\vskip1.000000\baselineskip

109

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:59:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): STRANDEDMESS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:59:

\vskip1.000000\baselineskip

110

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:60:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:60:

\vskip1.000000\baselineskip

111

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:61:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:61:

\vskip1.000000\baselineskip

112

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:62:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:62:

\vskip1.000000\baselineskip

113

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:63:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:63:

\vskip1.000000\baselineskip

114

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:64:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:64:

\vskip1.000000\baselineskip

115

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:65:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 21 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 12

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:65:

\vskip1.000000\baselineskip

116

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:66:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:66:

\vskip1.000000\baselineskip

117

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 67:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 21 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:67:

\vskip1.000000\baselineskip

118

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:68:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:68:

\vskip1.000000\baselineskip

119

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:69:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:69:

\vskip1.000000\baselineskip

120

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:70:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:70:

\vskip1.000000\baselineskip

121

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:71:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 14

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:71:

\vskip1.000000\baselineskip

122

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:72:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:72:

\vskip1.000000\baselineskip

123

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:73:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:73:

\vskip1.000000\baselineskip

124

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:74:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:74:

\vskip1.000000\baselineskip

125

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:75:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:75:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

126

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:76:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:76:

\vskip1.000000\baselineskip

127

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:77:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:77:

\vskip1.000000\baselineskip

128

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:78:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:78:

\vskip1.000000\baselineskip

129

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:79:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:79:

\vskip1.000000\baselineskip

130

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:80:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:80:

\vskip1.000000\baselineskip

131

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:81:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:81:

\vskip1.000000\baselineskip

132

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:82:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 20 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 11

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:82:

\vskip1.000000\baselineskip

133

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:83:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:83:

\vskip1.000000\baselineskip

134

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:84:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:84:

\vskip1.000000\baselineskip

135

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:85:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 21 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:85:

\vskip1.000000\baselineskip

136

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:86:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:86:

\vskip1.000000\baselineskip

137

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:87:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...22

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Todos los aminoácidos están en la configuración-D

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:87:

\vskip1.000000\baselineskip

138

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:88:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:88:

\vskip1.000000\baselineskip

139

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:89:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:89:

\vskip1.000000\baselineskip

140

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:90:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 19 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 10

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:90:

\vskip1.000000\baselineskip

141

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:91:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:91:

\vskip1.000000\baselineskip

142

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:92:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:92:

\vskip1.000000\baselineskip

143

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:93:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:93:

\vskip1.000000\baselineskip

144

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:94:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:94:

\vskip1.000000\baselineskip

145

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:95:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:95:

\vskip1.000000\baselineskip

146

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:96:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...22

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Todos los aminoácidos codificados genéticamente están en la configuración-D

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:96:

\vskip1.000000\baselineskip

147

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:97:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:97:

\vskip1.000000\baselineskip

148

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:98:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:98:

\vskip1.000000\baselineskip

149

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:99:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:99:

\vskip1.000000\baselineskip

150

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:100:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...22

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:100:

\vskip1.000000\baselineskip

151

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:101:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:101:

\vskip1.000000\baselineskip

152

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:102:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:102:

\vskip1.000000\baselineskip

153

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:103:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:103:

\vskip1.000000\baselineskip

154

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:104:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:104:

\vskip1.000000\baselineskip

155

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:105:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:105:

\vskip1.000000\baselineskip

156

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:106:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:106:

\vskip1.000000\baselineskip

157

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:107:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...22

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:107:

\vskip1.000000\baselineskip

158

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:108:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:108:

\vskip1.000000\baselineskip

159

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:109:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:109:

\vskip1.000000\baselineskip

160

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:110:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 14

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:110:

\vskip1.000000\baselineskip

161

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:111:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:111:

\vskip1.000000\baselineskip

162

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:112:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:112:

\vskip1.000000\baselineskip

163

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:113:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:113:

\vskip1.000000\baselineskip

164

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:114:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:114:

\vskip1.000000\baselineskip

165

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:115:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:115:

\vskip1.000000\baselineskip

166

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:116:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:116:

\vskip1.000000\baselineskip

167

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 117:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:117:

\vskip1.000000\baselineskip

168

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:118:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:118:

169

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:119:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 17

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:119:

\vskip1.000000\baselineskip

170

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:120:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 16

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Aib

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:120:

\vskip1.000000\baselineskip

171

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:121:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:121:

\vskip1.000000\baselineskip

172

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:122:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:122:

\vskip1.000000\baselineskip

173

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:123:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:123:

\vskip1.000000\baselineskip

174

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:124:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 18

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 22

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:124:

\vskip1.000000\baselineskip

175

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:125:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:125:

\vskip1.000000\baselineskip

176

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:126:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:126:

\vskip1.000000\baselineskip

177

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:127:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:127:

\vskip1.000000\baselineskip

178

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:128:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:128:

\vskip1.000000\baselineskip

179

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:129:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:129:

\vskip1.000000\baselineskip

180

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:130:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:130:

\vskip1.000000\baselineskip

181

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:131:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:131:

\vskip1.000000\baselineskip

182

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:132:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:132:

\vskip1.000000\baselineskip

183

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:133:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:133:

\vskip1.000000\baselineskip

184

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:134:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:134:

\vskip1.000000\baselineskip

185

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:135:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple.

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:135:

\vskip1.000000\baselineskip

186

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:136:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:136:

\vskip1.000000\baselineskip

187

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:137:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 17

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Naftilalanina

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:137:

\vskip1.000000\baselineskip

188

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:138:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:138:

\vskip1.000000\baselineskip

189

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:139:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:139:

\vskip1.000000\baselineskip

190

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:140:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 18

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 22

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:140:

\vskip1.000000\baselineskip

191

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:141:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:141:

\vskip1.000000\baselineskip

192

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:142:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:142:

\vskip1.000000\baselineskip

193

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:143:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...22

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Péptido con el terminal-N acetilado y el terminal-C amidado

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:143:

\vskip1.000000\baselineskip

194

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:144:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = D-Pro

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:144:

\vskip1.000000\baselineskip

195

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:145:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:145:

\vskip1.000000\baselineskip

196

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:146:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:146:

\vskip1.000000\baselineskip

197

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:147:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:147:

\vskip1.000000\baselineskip

198

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:148:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:148:

\vskip1.000000\baselineskip

199

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:149:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:149:

\vskip1.000000\baselineskip

200

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:150:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:150:

\vskip1.000000\baselineskip

201

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:151:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:151:

\vskip1.000000\baselineskip

202

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:152:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:152:

\vskip1.000000\baselineskip

203

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:153:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:153:

\vskip1.000000\baselineskip

204

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:154:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:154:

\vskip1.000000\baselineskip

205

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:155:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:155:

\vskip1.000000\baselineskip

206

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:156:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:156:

\vskip1.000000\baselineskip

207

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:157:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:157:

\vskip1.000000\baselineskip

208

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:158:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:158:

\vskip1.000000\baselineskip

209

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:159:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:159:

\vskip1.000000\baselineskip

210

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:160:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:160:

\vskip1.000000\baselineskip

211

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 161:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:161:

\vskip1.000000\baselineskip

212

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:162:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:162:

\vskip1.000000\baselineskip

213

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:163:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:163:

\vskip1.000000\baselineskip

214

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:164:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:164:

\vskip1.000000\baselineskip

215

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:165:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:165:

\vskip1.000000\baselineskip

216

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:166:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:166:

\vskip1.000000\baselineskip

217

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:167:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:167:

\vskip1.000000\baselineskip

218

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:168:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:168:

\vskip1.000000\baselineskip

219

220

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:169:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:169:

\vskip1.000000\baselineskip

221

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 170:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 12

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 19

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 22

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:170:

\vskip1.000000\baselineskip

222

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:171:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:171:

\vskip1.000000\baselineskip

223

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:172:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:172:

\vskip1.000000\baselineskip

224

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:173:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:173:

\vskip1.000000\baselineskip

225

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:174:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...22

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:174:

\vskip1.000000\baselineskip

226

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:175:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:175:

\vskip1.000000\baselineskip

227

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:176:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:176:

\vskip1.000000\baselineskip

228

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:177:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:177:

\vskip1.000000\baselineskip

229

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:178:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:178:

\vskip1.000000\baselineskip

230

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:179:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:179:

\vskip1.000000\baselineskip

231

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:180:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:180:

\vskip1.000000\baselineskip

232

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:181:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:181:

\vskip1.000000\baselineskip

233

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:182:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:182:

\vskip1.000000\baselineskip

234

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:183:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:183:

\vskip1.000000\baselineskip

235

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:184:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:184:

\vskip1.000000\baselineskip

236

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:185:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 19

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 22

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:185:

\vskip1.000000\baselineskip

237

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:186:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:186:

\vskip1.000000\baselineskip

238

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:187:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:187:

\vskip1.000000\baselineskip

239

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:188:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:188:

\vskip1.000000\baselineskip

240

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:189:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:189:

\vskip1.000000\baselineskip

241

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:190:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 22 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:190:

\vskip1.000000\baselineskip

242

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 191:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:191:

\vskip1.000000\baselineskip

243

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:192:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:192:

\vskip1.000000\baselineskip

244

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:193:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1... 18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:193:

\vskip1.000000\baselineskip

245

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:194:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:194:

\vskip1.000000\baselineskip

246

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:195:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:195:

\vskip1.000000\baselineskip

247

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:196:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:196:

\vskip1.000000\baselineskip

248

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:197:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:197:

\vskip1.000000\baselineskip

249

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:198:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:198:

\vskip1.000000\baselineskip

250

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:199:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:199:

\vskip1.000000\baselineskip

251

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:200:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:200:

\vskip1.000000\baselineskip

252

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:201:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 13 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:201:

\vskip1.000000\baselineskip

253

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:202:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:202:

\vskip1.000000\baselineskip

254

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:203:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:203:

\vskip1.000000\baselineskip

255

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:204:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:204:

\vskip1.000000\baselineskip

256

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:205:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:205:

\vskip1.000000\baselineskip

257

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:206:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:206:

\vskip1.000000\baselineskip

258

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:207:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:207:

\vskip1.000000\baselineskip

259

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:208:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:208:

\vskip1.000000\baselineskip

260

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:209:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:209:

\vskip1.000000\baselineskip

261

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:210:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:210:

\vskip1.000000\baselineskip

262

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:211:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 14

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 16

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 18

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:211:

\vskip1.000000\baselineskip

263

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:212:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 7

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 14

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 16

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: Xaa = Orn

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:212:

\vskip1.000000\baselineskip

264

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 213:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:213:

\vskip1.000000\baselineskip

265

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:214:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1

\vskip0.500000\baselineskip

(D): OTRA INFORMACIÓN: D-configuration of Pro

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:214:

\vskip1.000000\baselineskip

266

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:215:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:215:

\vskip1.000000\baselineskip

267

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:216:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:216:

\vskip1.000000\baselineskip

268

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 217:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:217:

\vskip1.000000\baselineskip

269

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:218:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:218:

\vskip1.000000\baselineskip

270

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:219:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:219:

\vskip1.000000\baselineskip

271

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:220:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:220:

\vskip1.000000\baselineskip

272

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:221:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:221:

\vskip1.000000\baselineskip

273

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:222:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:222:

\vskip1.000000\baselineskip

274

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:223:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:223:

\vskip1.000000\baselineskip

275

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:224:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:224:

\vskip1.000000\baselineskip

276

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:225:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:225:

\vskip1.000000\baselineskip

277

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:226:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:226:

\vskip1.000000\baselineskip

278

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 227:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:227:

\vskip1.000000\baselineskip

279

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:228:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:228:

\vskip1.000000\baselineskip

280

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:229:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:229:

\vskip1.000000\baselineskip

281

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:230:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:230:

\vskip1.000000\baselineskip

282

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:231:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:231:

\vskip1.000000\baselineskip

283

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:232:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:232:

\vskip1.000000\baselineskip

284

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:233:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD:

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO:

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA:

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA:

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:233:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

Esta secuencia se ha obviado intencionalmente

\hfill

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:234:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD:

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO:

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA:

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA:

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:234:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

Esta secuencia se ha obviado intencionalmente

\hfill

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:235:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD:

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO:

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA:

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA:

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:235:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

Esta secuencia se ha obviado intencionalmente

\hfill

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:236:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD:

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO:

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA:

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA:

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:236:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

Esta secuencia se ha obviado intencionalmente

\hfill

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:237:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:237:

\vskip1.000000\baselineskip

285

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:238:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:238:

\vskip1.000000\baselineskip

286

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:239:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:239:

\vskip1.000000\baselineskip

287

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:240:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:240:

\vskip1.000000\baselineskip

288

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:241:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:241:

\vskip1.000000\baselineskip

289

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:242:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:242:

\vskip1.000000\baselineskip

290

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:243:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:243:

\vskip1.000000\baselineskip

291

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:244:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:244:

\vskip1.000000\baselineskip

292

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:245:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:245:

\vskip1.000000\baselineskip

293

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:246:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:246:

\vskip1.000000\baselineskip

294

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:247:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:247:

\vskip1.000000\baselineskip

295

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:248:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:248:

\vskip1.000000\baselineskip

296

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:249:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:249:

\vskip1.000000\baselineskip

297

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:250:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:250:

\vskip1.000000\baselineskip

298

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:251:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 18 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...18

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:251:

\vskip1.000000\baselineskip

299

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:252:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...15

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:252:

\vskip1.000000\baselineskip

1000

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:253:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...16

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:253:

\vskip1.000000\baselineskip

1001

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:254:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...16

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:254:

\vskip1.000000\baselineskip

1002

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:255:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 15 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...15

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:255:

\vskip1.000000\baselineskip

1003

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:256:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...16

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:256:

\vskip1.000000\baselineskip

1004

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:257:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...16

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:257:

\vskip1.000000\baselineskip

1005

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:258:

\vskip0.800000\baselineskip

(i): CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): LONGITUD: 16 aminoácidos

\vskip0.500000\baselineskip

(B): TIPO: aminoácido

\vskip0.500000\baselineskip

(C): DISPOSICIÓN EN HEBRAS: simple

\vskip0.500000\baselineskip

(D): TOPOLOGÍA: lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(ii): TIPO DE MOLÉCULA: Ninguno

\vskip0.800000\baselineskip

(ix): CARACTERÍSTICAS:

\vskip0.500000\baselineskip

(A): NOMBRE/CLAVE: Otro

\vskip0.500000\baselineskip

(B): SITUACIÓN: 1...16

\vskip0.500000\baselineskip

\vskip0.800000\baselineskip

(xi): DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:258:

\vskip1.000000\baselineskip

1006

Claims

1. Agonista de ApoA-I que comprende:

(i) un péptido o análogo de péptido de 15 a 29 residuos que forma una hélice \alpha anfipática en presencia de lípidos y que comprende la fórmula (I) estructural:

\vskip1.000000\baselineskip

Z_{1}-X_{1}-X_{2}-X_{3}-X_{4}-X_{5}-X_{6}-X_{7}-X_{8}-X_{9}-X_{10}-X_{11}-X_{12}-X_{13}-X_{14}-X_{15}-X_{16}-X_{17}-X_{18}-X_{19}-X_{20}-X_{21}-X_{22}-X_{23}-Z_{2}

\vskip1.000000\baselineskip

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

X_{1} es Pro (P), Ala (A), Gly (G), Gln (Q), Asn (N), Asp (D) o D-Pro (p);

X_{2} es un residuo alifático;

X_{3} es Leu (L) o Phe (F);

X_{4} es un residuo ácido;

X_{5} es Leu (L) o Phe (F);

X_{6} es Leu (L) o Phe (F);

X_{7} es un residuo hidrófilo;

X_{8} es un residuo ácido o básico;

X_{9} es Leu (L) o Gly (G);

X_{10} es Leu (L), Trp (W) o Gly (G);

X_{11} es un residuo hidrófilo;

X_{12} es un residuo hidrófilo;

X_{13} es Gly (G) o un residuo alifático;

X_{14} es Leu (L), Trp (W), Gly (G) o Nal;

X_{15} es un residuo hidrófilo;

X_{16} es un residuo hidrófobo;

X_{17} es un residuo hidrófobo;

X_{18} es Gln (Q), Asn (N) o un residuo básico;

X_{19} es Gln (Q), Asn (N) o un residuo básico;

X_{20} es un residuo básico;

X_{21} es un residuo alifático;

X_{22} es un residuo básico;

X_{23} está ausente o es un residuo básico;

Z_{1} es H_{2}N- o RC(O)NH-;

Z_{2} es -C(O)NRR, -C(O)OR o -C(O)OH o una sal del mismo;

cada R es independientemente -H, alquilo (C_{1}-C_{6}), alquenilo (C_{1}-C_{6}), alquinilo (C_{1}-C_{6}), arilo (C_{5}-C_{20}), alcarilo (C_{6}-C_{26}), heteroarilo de 5-20 miembros, alq-heteroarilo de 6-26 miembros, o un péptido o análogo de péptido de 1 a 7 residuos;

cada "-" entre los residuos X_{n} designa independientemente un enlace amida, un enlace amida sustituido, un isóstero de una amida o un mimético de amida; o

(ii) una forma delecionada de la fórmula (I) estructural en la que al menos uno y hasta ocho de los residuos X_{1}, X_{2}, X_{3}, X_{4}, X_{5}, X_{6}, X_{7}, X_{8}, X_{9}, X_{10}, X_{11}, X_{12}, X_{13}, X_{14}, X_{15}, X_{16}, X_{17}, X_{18}, X_{19}, X_{20}, X_{21} y X_{22} están delecionados;
o

(iii) una forma alterada de la fórmula (I) estructural en la que al menos uno de los residuos X_{1}, X_{2}, X_{3}, X_{4}, X_{5}, X_{6}, X_{7}, X_{8}, X_{9}, X_{10}, X_{11}, X_{12}, X_{13}, X_{14}, X_{15}, X_{16}, X_{17}, X_{18}, X_{19}, X_{20}, X_{21}, X_{22} o X_{23} está sustituido de manera conservativa por otro residuo.

2. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 1, que muestra al menos aproximadamente un 38% de actividad de activación de LCAT en comparación con la ApoA-I humana.

3. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 1, que es la forma alterada de la fórmula (I) estructural.

4. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 3, en el que los residuos hidrófobos están fijados según la fórmula (I) estructural y al menos un residuo no fijado está sustituido de manera conservativa por otro residuo.

5. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 4, en el que:

X_{1} es Pro (P), D-Pro (p), Gly (G) o Ala (A);

X_{2} es Ala (A), Leu (L) o Val (V);

X_{3} es Leu (L) o Phe (F);

X_{5} es Leu (L) o Phe (F);

X_{6} es Leu (L) o Phe (F);

X_{9} es Leu (L) o Gly (G);

X_{10} es Leu (L), Trp (W) o Gly (G);

X_{13} es Leu (L), Gly (G) o Aib;

X_{14} es Leu, Nal, Trp (W) o Gly (G);

X_{16} es Ala (A), Nal, Trp (W), Gly (G), Leu (L) o Phe (F);

X_{17} es Leu (L), Gly (G) o Nal;

X_{21} es Leu (L); y

al menos uno de X_{4}, X_{7}, X_{8}, X_{11}, X_{12}, X_{15}, X_{18}, X_{19}, X_{20}, X_{22} y X_{23} está sustituido de manera conservativa por otro residuo.

6. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 3, en el que los residuos hidrófilos están fijados según la fórmula (I) estructural y al menos un residuo no fijado está sustituido de manera conservativa por otro residuo.

7. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 6, en el que:

X_{4} es Asp (D) o Glu (E);

X_{7} es Lys (K), Arg (R) u Orn;

X_{9} es Asp (D) o Glu (E);

X_{11} es Asn (N) o Gln (Q);

X_{12} es Glu (E) o Asp (D);

X_{15} es Asp (D) o Glu (E);

X_{18} es Gln (Q), Asn (N), Lys (K) u Orn;

X_{19} es Gln (Q), Asn (N), Lys (K) u Orn;

X_{20} es Lys (K) u Orn;

X_{22} es Lys (K) u Orn;

X_{23} está ausente o es Lys (K); y

al menos uno de X_{1}, X_{2}, X_{3}, X_{5}, X_{6}, X_{9}, X_{10}, X_{13}, X_{14}, X_{16}, X_{17} y X_{21} está sustituido de manera conservativa por otro residuo.

8. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 7, en el que X_{3} es Leu (L) o Phe (F), X_{6} es Phe (F), X_{9} es Leu (L) o Gly (G), X_{10} es Leu (L) o Trp (W) o Gly (G) y al menos uno de X_{1}, X_{2}, X_{5}, X_{13} X_{14}, X_{16}, X_{17} y X_{21} está sustituido de manera conservativa por otro residuo.

9. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 5 ó 7, en el que el residuo de sustitución se clasifica dentro de la misma subcategoría que el residuo sustituido.

10. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 1, que es la forma delecionada de la fórmula (I) estructural.

11. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 10, en el que está delecionado un giro helicoidal del péptido o análogo de péptido.

12. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 1, que es un péptido o análogo de péptido de 22-23 residuos de fórmula (I) estructural.

13. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 12, en el que:

el "-" entre los residuos designa -C(O)NH-;

Z_{1} es H_{2}N-; y

Z_{2} es -C(O)OH o una sal del mismo.

14. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 13, en el que:

X_{1} es Pro (P), Ala (A), Gly (G), Asn (N), Gln (Q), Asp (D) o D-Pro (p);

X_{2} es Ala (A), Val (V) o Leu (L);

X_{3} es Leu (L) o Phe (F);

X_{4} es Asp (D) o Glu (E);

X_{5} es Leu (L) o Phe (F);

X_{6} es Leu (L) o Phe (F);

X_{7} es Lys (K), Arg (R) u Orn;

X_{8} es Asp (D) o Glu (E);

X_{9} es Leu (L) o Gly (G);

X_{10} es Leu (L), Trp (W) o Gly (G);

X_{11} es Asn (N) o Gln (Q);

X_{12} es Glu (E) o Asp (D);

X_{13} es Gly (G), Leu (L) o Aib;

X_{14} es Leu (L), Nal, Trp (W) o Gly (G);

X_{15} es Asp (D) o Glu (E);

X_{16} es Ala (A), Nal, Trp (W), Leu (L), Phe (F) o Gly (G);

X_{17} es Gly (G), Leu (L) o Nal;

X_{18} es Gln (Q), Asn (N), Lys (K) u Orn;

X_{19} es Gln (Q), Asn (N), Lys (K) u Orn;

X_{20} es Lys (K) u Orn;

X_{21} es Leu (L);

X_{22} es Lys (K) u Orn; y

X_{23} está ausente o es Lys (K).

15. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 14, en el que X_{23} está ausente.

16. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 13 ó 14, en el que uno de X_{18} o X_{19} es Gln (Q) o Asn (N) y el otro de X_{18} o X_{19} es Lys (K) u Orn.

17. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 14, en el que cada uno de X_{9}, X_{10}, X_{13}, X_{14}, X_{15} y X_{17} es distinto de Gly (G).

18. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 14, en el que uno de X_{9}, X_{10}, X_{13}, X_{14}, X_{15} y X_{17} es Gly (G) y los otros son distintos de Gly (G).

19. Agonista de ApoA-I según la reivindicación 1, que se selecciona del grupo que consiste en:

300

301

302

y las formas aciladas en el extremo N-terminal y/o amidadas o esterificadas en el extremo C-terminal de los mismos, en los que X es Aib; Z es Nal; y O es Orn.

20. Péptido PVLDLFRELLNELLEZLKQKLK (SEQ ID NO:1) en el que Z es Nal.

21. Péptido GVLDLFRELLNELLEALKQKLKK (SEQ ID NO:2).

22. Péptido PVLDLFRELLNELLEWLKQKLK (SEQ ID NO:3).

23. Péptido PVLDLFRELLNELLEALKQKLK (SEQ ID NO:4).

24. Péptido PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK (SEQ ID NO:8).

25. Agonista multimérico de la ApoA-I que muestra al menos aproximadamente un 38% de actividad de activación de LCAT en comparación con la ApoA-I humana y que tiene la fórmula (II) estructural:

\vskip1.000000\baselineskip

(II)HH-[LL_{m}-HH]-_{n}LL_{m}-HH

\vskip1.000000\baselineskip

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

cada m es independientemente un número entero desde 0 hasta 1;

n es un número entero desde 0 hasta 10;

cada "HH" es independientemente un péptido o análogo de péptido según la reivindicación 1;

cada "LL" es independientemente un ligador bifuncional;

y

cada "-" designa independientemente un enlace covalente.

26. Agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 25, en el que el ligador bifuncional es cindible.

27. Agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 25, en el que n es 0.

28. Agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 27, en el que m es 0.

29. Agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 25, en el que cada HH es independientemente un péptido según la reivindicación 13.

30. Agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 25, en el que cada HH es independientemente un péptido según la reivindicación 14.

31. Agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 25, en el que cada HH es independientemente un péptido según la reivindicación 19.

32. Agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 25, en el que cada HH es independientemente un péptido según la reivindicación 20.

33. Agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 25, en el que cada HH es independientemente un péptido según la reivindicación 21.

34. Agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 25, en el que cada HH es independientemente un péptido según la reivindicación 22.

35. Agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 25, en el que cada HH es independientemente un péptido según la reivindicación 23.

36. Agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 25, en el que cada HH es independientemente un péptido según la reivindicación 24.

37. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido que comprende un agonista de ApoA-I y un lípido, en el que el agonista de ApoA-I es un péptido o análogo de péptido según la reivindicación 1 o un agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 25.

38. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido según la reivindicación 37, en el que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 12.

39. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido según la reivindicación 37, en el que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 13.

40. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido según la reivindicación 37, en el que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 14.

41. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido según la reivindicación 37, en el que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 19.

42. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido según la reivindicación 37, en el que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 20.

43. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido según la reivindicación 37, en el que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 21.

44. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido según la reivindicación 37, en el que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 22.

45. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido según la reivindicación 37, en el que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 23.

46. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido según la reivindicación 37, en el que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 24.

47. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido según la reivindicación 37, en el que el lípido es esfingomielina.

48. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido según la reivindicación 37, que está en forma de un polvo liofilizado.

49. Complejo de agonista de ApoA-I-lípido según la reivindicación 38, que está en forma de una disolución.

50. Composición farmacéutica que comprende un agonista de ApoA-I y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable, en la que el agonista de ApoA-I es un péptido o análogo de péptido según la reivindicación 1 o un agonista multimérico de la ApoA-I según la reivindicación 30.

51. Composición farmacéutica según la reivindicación 50, en la que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 12.

52. Composición farmacéutica según la reivindicación 50, en la que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 13.

53. Composición farmacéutica según la reivindicación 50, en la que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 14.

54. Composición farmacéutica según la reivindicación 50, en la que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 19.

55. Composición farmacéutica según la reivindicación 50, en la que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 20.

56. Composición farmacéutica según la reivindicación 50, en la que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 21.

57. Composición farmacéutica según la reivindicación 50, en la que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 22.

58. Composición farmacéutica según la reivindicación 50, en la que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 23.

59. Composición farmacéutica según la reivindicación 50, en la que el agonista de ApoA-I es un péptido según la reivindicación 24.

60. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 50-59, en la que el agonista de ApoA-I está en forma de un complejo de agonista de ApoA-I-lípido, comprendiendo dicho complejo el agonista de ApoA-I y un lípido.

61. Composición farmacéutica según la reivindicación 60, en la que el complejo de agonista de ApoA-I-lípido está en forma de un polvo liofilizado.

62. Uso de un agonista de ApoA-I según la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para tratar a un sujeto que padece un trastorno asociado con la dislipidemia.

63. Uso según la reivindicación 62, en el que el medicamento está en forma de una composición farmacéutica, comprendiendo dicha composición el agonista de ApoA-I y un vehículo, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

64. Uso según la reivindicación 62, en el que el agonista de ApoA-I está en forma de un complejo de agonista de la ApoA-1-lípido, comprendiendo dicho complejo el agonista de la ApoA-1 y un lípido.

65. Uso según la reivindicación 62, en el que el trastorno asociado con la dislipidemia es hipercolesterolemia.

66. Uso según la reivindicación 62, en el que el trastorno asociado con la dislipidemia es enfermedad cardiovascular.

67. Uso según la reivindicación 62, en el que el trastorno asociado con la dislipidemia es aterosclerosis.

68. Uso según la reivindicación 62, en el que el trastorno asociado con la dislipidemia es reestenosis.

69. Uso según la reivindicación 62, en el que el trastorno asociado con la dislipidemia es insuficiencia de HDL o ApoA-I.

70. Uso según la reivindicación 62, en el que el trastorno asociado con la dislipidemia es hipertrigliceridemia.

71. Uso según la reivindicación 62, en el que el trastorno asociado con la dislipidemia es síndrome metabólico.

72. Uso de un agonista de ApoA-I según la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para tratar a un sujeto que padece choque septicémico.

73. Uso según la reivindicación 62 ó 72, en el que dicho sujeto es un ser humano.

74. Uso según la reivindicación 62 ó 72, en el que se administran de aproximadamente 0,5 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg de agonista de ApoA-I a dicho sujeto.