CN1280501A - 载脂蛋白a－i激动剂及其在异常脂血相关病症的治疗中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供模拟人ApoA－I的结构和药理特性的肽和肽类似物。这样的肽和肽类似物可用于治疗多种异常脂血症相关性疾病。

Description

载脂蛋白A-Ⅰ激动剂及其在异常脂血相关病症的治疗中的应用

1．前言

本发明涉及载脂蛋白A-Ⅰ(ApoA-Ⅰ)激动剂组合物，此类组合物可用来治疗异常脂蛋白血症相关疾病，其中包括高胆固醇血症、心血管疾病、动脉粥样硬化、再狭窄，和诸如脓毒性休克等其它病症。

2．发明背景

负责循环胆固醇运输的是血浆脂蛋白--复合脂和在血液内运输脂类的蛋白组合物组成的微粒。胆固醇的主要载体为低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。一般认为，LDL负责在体内将胆固醇从肝脏(合成或从食物中摄取胆固醇的场所)运输到肝外组织。“反向胆固醇转运”是指胆固醇从肝外组织向肝脏转运，并在肝脏中分解和去除。血浆HDL颗粒则被认为在反向转运过程中作为组织胆固醇的清除剂而发挥重要作用。

很多证据表明，血清胆固醇的升高与冠心病相关。例如，动脉粥样硬化是一种进行性慢性疾病，其特征为胆固醇在动脉管壁内的逐渐积累。动脉粥样硬化性疾病中沉积的脂类主要来自于血浆LDL，这一观点得到众多证据的支持；因此，LDLs一般被称为“坏”胆固醇。相比之下，血清中HDL的水平与冠心病呈负相关-事实上，高水平的血清HDL被认为是一种负危险因子。据推测，高水平的血浆HDL不仅能够预防冠心病，而且实际上还能够诱导动脉粥样硬化性斑块的减退(例如，见Badimon et al．，1992，Circulation 86(Suppl．Ⅲ)：86-94)。因此，HDL一般被称为“好”胆固醇。

2．1．胆固醇转运

脂肪转运系统可划分为两条途径：外源途径转运由肠道吸收的胆固醇和甘油三酯，内源途径转运由肝脏和其他非肝性组织进入血液的胆固醇和甘油三酯。

在外源途径中，摄入的脂肪被包装成脂蛋白颗粒，称为乳糜微粒，乳糜微粒进入血液，并将其中的甘油三酯提供给脂肪组织(用于贮存)和肌肉(用于氧化供能)。包含有胆固醇酯的乳糜微粒残余物被仅在肝细胞上发现的一种特异受体从循环中清除。此后，该胆固醇还可用于细胞代谢，或作为血浆脂蛋白再循环到肝外组织中。

在内源途径中，肝脏将一种体积较大的极低密度脂蛋白颗粒(VLDL)分泌入血液。VLDLs的核心主要含有肝脏合成的甘油三酯，和少量胆固醇酯(在肝脏内合成或由乳糜微粒再循环而来)。载脂蛋白B-100和载脂蛋白E这两种主要蛋白分布于VLDLs表面。当VLDL到达脂肪组织或肌肉的毛细血管时，其中的甘油三酯被吸取，导致形成一种新的颗粒，该颗粒体积减小、胆固醇酯含量更高，但仍保留其两种载脂蛋白，此类颗粒被称为中间密度脂蛋白(IDL)。

在人体内约有一半的IDL颗粒被迅速从循环中清除(在其形成后2-6小时内)，这是由于它们紧紧结合于能够吸取其胆固醇以制造新VLDL和胆汁酸的肝细胞上。没有被肝细胞吸收的IDL颗粒则可在循环中保留较长的时间。此时，载脂蛋白E从循环颗粒上解离下来，使颗粒转变为只含有载脂蛋白B-100的LDL。

首先，肝脏将大部分胆固醇摄取并降解为胆汁酸，胆汁酸是胆固醇代谢的终产物。肝实质细胞上存在高浓度的LDL受体，这些受体可介导含胆固醇颗粒的吸收。LDL受体能够与载脂蛋白E和载脂蛋白B-100结合，并负责与IDLs和LDLs结合并将其从循环中清除。但载脂蛋白E与LDL受体的亲和力要比载脂蛋白B-100大得多。因此，LDL颗粒在循环中的寿命要比IDL颗粒长得多--在与肝脏或其他组织上的LDL受体结合之前，LDLs可平均循环2．5天。血清中较高的LDL(“坏”胆固醇)水平与冠心病呈正相关。例如在动脉粥样硬化中，来源于循环LDLs的胆固醇在动脉管壁上聚集而导致大斑块形成，从而抑制血液流动，并最终形成血凝块而阻塞动脉，导致心脏病发作。

从根本上讲，细胞胆固醇代谢受LDLs释放的胞内胆固醇量的控制。来源于VLDLs和LDLs的细胞胆固醇的积累可调节三个过程：首先，通过关闭HMGCoA还原酶--胆固醇生物合成途径中的一种关键酶--的合成来减少细胞的胆固醇合成。其次，来源于LDL的胆固醇的进入可通过激活ACAT--细胞中将胆固醇转化为沉积于贮存微滴中的胆固醇酯的酶--来促进胆固醇的储存。再次，胞内胆固醇的积累可驱动一种反馈机制，使细胞内新LDL受体的合成受到抑制。因此，细胞可调节其LDL受体的补充，以此来摄入足以满足其代谢需要但又不会过量的胆固醇。(综述见Brown & Goldstein，In，ThePharmacological Basis of Therapeutics，8th Ed．，Goodman &Gilman，Pergamon Press，NY，1 990，Ch．36，pp．874-896)。

2．2．反向胆固醇转运

从总体上而言，外周(非肝性)细胞是通过就地合成和从VLDLs和LDLs摄取现成固醇相结合的途径来获得胆固醇。相比之下，外周细胞的胆固醇则可通过反向胆固醇转运(RCT)途径返回肝脏，以再循环至肝外组织，或在胆汁中以胆汁酸修饰形式或氧化形式排泄到肠道内。RCT途径是从大多数肝外组织中去除胆固醇的唯一方法，它对体内大多数细胞的结构和功能维持至关重要。

RCT主要包括三个步骤：(a)胆固醇外流，将胆固醇从各种外周细胞库中去除；(b)利用卵磷脂：胆固醇酰基转移酶(LCAT)的作用将胆固醇酯化，防止流出的胆固醇再次进入细胞；以及(c)将HDL胆固醇酯摄取／转运至肝细胞。RCT途径由HDLs介导。HDL是具有高密度特点的脂蛋白颗粒的通称。HDL复合物的主要脂类成分为各种磷脂、胆固醇(酯)和甘油三酯。最主要的载脂蛋白成分为A-Ⅰ和A-Ⅱ，它们决定了HDL的功能特性；此外还观测到少量的载脂蛋白C-Ⅰ、C-Ⅱ、C-Ⅲ、D、E、J，等。HDL能够以很多种不同大小的形式，以及与上述成分的不同混合物的形式存在，这取决于它们在RCT级联代谢中的重塑情况。

LCAT是参与RCT途径的关键酶。LCAT主要在肝脏中产生并伴随HDL级分在血浆中循环。LCAT将来源于细胞的胆固醇转化为胆固醇酯，胆固醇酯由HDL捕获并最终被清除。胆固醇酯转运蛋白(CETP)和磷脂转运蛋白(PLTP)可在循环HDL群体的进一步重塑中发挥作用。CETP能够将LCAT产生的胆固醇酯转移至诸如VLDL和LDL等其它脂蛋白，尤其是含Apo-B的脂蛋白。PLTP则为HDL提供卵磷脂。HDL中的甘油三酯可被细胞外的肝甘油三酯酶分解，而脂蛋白胆固醇则通过某些机制由肝脏清除。

每个HDL颗粒中至少包含一分子(通常为2-4分子)的ApoA-Ⅰ。ApoA-Ⅰ在肝脏和小肠中以前载脂蛋白原形式合成，以蛋白原形式分泌，蛋白原则被迅速分解，产生一段含243个氨基酸残基的成熟多肽。ApoA-Ⅰ主要包含6-8个不同的22氨基酸重复区，彼此由衔接部分隔开，衔接部分通常为脯氨酸，在某些情况下也可由若干残基组成。ApoA-Ⅰ可与脂类形成三种类型的稳定复合物：低脂小复合物，称为前-β-1 HDL；含有极性脂类(磷脂和胆固醇)的扁平盘状颗粒，称为前-β-2 HDL；含有极性脂类和非极性脂类的球状颗粒，称为球形HDL或成熟HDL(HDL₃和HDL₂)。循环HDL群体中大多都既含有ApoA-Ⅰ又含有A-Ⅱ(第二种主要HDL蛋白)，在此称为HDL的AⅠ／AⅡ-HDL成分。但是仅含有ApoA-Ⅰ的HDL成分(在此称为AⅠ-HDL成分)似乎在RCT途径中更为有效。某些流行病学方面的研究支持关于AⅠ-HDL成分是抗动脉粥样硬化药的学说。(Parra et al．，1992，Arterioscler．Thromb．12：701-707；Decossin et al．，1997，Eur．J．Clin．Invest．27：299-307)。

尽管胆固醇从细胞表面转移(即胆固醇外流)的机制尚不清楚，但可认为低脂复合物，前-β-1 HDL是RCT中转运自外周组织的胆固醇的优选受体。(见Davidson et al．，1994，J．Biol．Chem．269：22975-22982；Bielicki et al．，1992，J．Lipid Res．33：1699-1709；Rothblat et al．，1992，J．Lipid Res．33：1091-1097；and Kawano et al．，1993，Biochemistry32：5025-5028；Kawano et al．，1997，Biochemistry 36：9816-9825)。在从细胞表面补充胆固醇的这一过程中，前-β-1 HDL迅速转变为前-β-2 HDL。PLTP可能会提高前-β-2盘状颗粒形成的速率，但是还没有资料能够表明PLTP在RCT中的作用。LCAT优先与盘状HDL和球形HDL反应，将卵磷脂或其它磷脂的2-酰基基团转移到胆固醇的自由羟基上以产生胆固醇酯(留在HDL中)和溶血卵磷脂。LCAT反应需要ApoA-Ⅰ作为活化剂；即，ApoA-Ⅰ是LCAT的天然辅助因子。将胆固醇转变为保留在HDL中的胆固醇酯可防止胆固醇重新进入细胞，结果是胆固醇酯最终将被去除。与来源于包含ApoA-Ⅰ和ApoA-Ⅱ的HDL(AⅠ／AⅡ-HDL成分)的胆固醇酯相比，AⅠ-HDL成分(即包含ApoA-Ⅰ不含ApoA-Ⅱ)的HDL成熟颗粒中的胆固醇酯能够更加有效地被肝脏清除并加工为胆汁。这在某种程度上可能是由于AⅠ-HDL能够与肝细胞膜更有效地结合。据推测有HDL受体存在，而最近有一种清除剂受体，SR-BI，被确认为一种HDL受体(Acton et al．，1996，Science271：518-520；Xu et al．，1997，Lipid Res．38：1289-1298)。SR-BI在类固醇生成组织(如肾上腺)和肝脏中表达的量最为丰富(Landshulz et al．，1996，J．Clin．Invest．98：984-995；Rigotti et al．，1996，J．Biol．Chem．271：33545-33549)。

CETP似乎在RCT中不发挥主要作用，而是参与来源于VLDL和LDL的脂类的代谢。但CETP活性或其受体，VLDL和LDL，的改变可对HDL群体的重塑发挥一定作用。例如在没有CETP的情况下，HDLs就变为增大的颗粒而不能被清除。(有关RCT和HDLs的综述，见Fielding& Fielding，1995，J．Lipid Res．36：211-228；Barrans et al．，1996，Biochem．Biophys．Acta．1300：73-85；Hirano et al．，1997，Arterioscler．Thromb．Vasc．Biol．17(6)：1053-1059)。

2．3．目前对异常脂蛋白血类病症的治疗

目前有多种疗法可用于降低血清中的胆固醇和甘油三酯(例如，见上文Brown & Goldstein)。但是在功效、副作用以及适合的患者群体方面，各疗法都有其自身的缺点及局限性。

胆汁酸结合树脂是一类能够切断由肠至肝脏的胆汁酸再循环的药物；如，消胆胺(Questran Light_，Bristol-Myers Squibb)和考来替泊盐酸盐(Colestid_，The Upjohn Company)。口服时，这些带正电荷的树脂可在肠中与带负电荷的胆汁酸结合。由于树脂不能由肠吸收，因此它们携带着胆汁酸被排出。然而，采用这类树脂最多也只能使血清中胆固醇的水平降低约20％，同时还伴有胃肠道副作用，如便秘和某些维生素缺乏症。此外，由于树脂还能够与其它药物结合，所以其它口服药剂必须在树脂摄入前至少1小时或摄入后4-6小时后才能服用；因此，会使心脏病患者的服药方案变得复杂。

抑制素是降胆固醇药，它可通过抑制HMGCoA还原酶-胆固醇生物合成途径中的关键酶-来阻断胆固醇的合成。抑制素，如洛伐他汀(Mevacor_，Merck & Co．，Inc．)和普伐他汀(Pravachol_，Bristol-Myers Squibb Co．)有时可与胆汁酸结合树脂共同使用。抑制素可显著降低血清胆固醇和LDL血清的水平，并减缓冠状动脉粥样硬化的继续发展。但血清HDL胆固醇的水平仅有适度增加。LDL降低效应的机制可能既涉及VLDL浓度的降低，也涉及细胞LDL受体的诱导表达，从而导致LDLs形成的减少和／或其代谢的增加。使用这些药物会伴有肝脏和肾脏功能障碍等副作用(Physicians Desk Reference，Medical Economics Co．，Inc．，Montvale，N．J．，1997)。最近，FDA已批准atorvastatin(Parke-Davis开发的一种HMGCoA还原酶抑制剂)(Warner Lambert)上市，以用于虽然罕见但却紧迫的家族性高胆固醇血症病例的治疗(1995，Scrip 20(19)：10)。

吡啶甲酸，或称烟酸，是一种用作饮食添加物和抗高脂血剂的水溶性维生素B复合物。烟酸可减少VLDL的产生并对降低LDL有效。在某些情况下，它能够与胆汁酸结合树脂共同使用。当使用足够剂量时，烟酸可增加HDL水平，但以如此高的剂量使用时可引起的严重的副作用，从而限制了它的使用。

fibrates是一类降脂药物，用于还可能伴随高胆固醇血症产生的各种形式的高脂血症(即，血清中甘油三酯升高)的治疗。fibrates似乎可降低VLDL，并适当增加HDL-但这些药物对血清胆固醇的效果不稳定。美国已批准将fibrates作为抗脂血药物使用，但还未被批准用作高胆固醇血药物。例如，安妥明(Atromid-S_，Wyeth-AyerstLaboratories)是一种可通过减少VLDL成分来降低血清甘油三酯(机制不清)的抗脂血药物。尽管在某些病人亚群中的血清胆固醇可能会降低，但是对药物的生化反应却是多种多样，而且不能始终预测哪些病人会收到良好的疗效。Atromid-S_在预防冠心病方面并没有显示出疗效。化学及药理学相关药物吉非贝齐(Lopid_，Parke-Davis)是一种脂类调节药物，它可以适度降低血清甘油三酯和VLDL胆固醇，并适度增加HDL胆固醇-HDL₂和HDL₃亚成分及ApoA-Ⅰ和A-Ⅱ(即，AⅠ／AⅡ-HDL成分)。但脂类应答却各不相同，在不同患者群体中更是如此。此外，虽然在40-55岁无冠心病史或冠心病症状的男性患者中观察到有预防冠心病的作用，但是还不清楚这些结果能够在多大程度上外推到其它患者群体中(例如，女性、年龄更大和年龄更小的男性)。事实上，在已确诊患有冠心病的患者中未观察到疗效。使用fibrates会伴随有严重的副作用，其中包括恶性瘤等的毒性(尤其是肠胃癌)、胆囊病以及非冠心病致死发生率的增加。这些药物不适用于仅具有高LDL或低HDL的脂质异常病人的治疗(Physician’s DeskReference，1997，Medical Economics Co．，Inc．Montvale，N．J．)。

对绝经后妇女的中度高胆固醇血症可考虑采用口服雌激素替代疗法。但HDL的增加可能伴有甘油三酯的升高。当然，雌激素治疗只能局限于特定的患者群体(绝经后妇女)，并且伴有严重的副作用，其中包括恶性肿瘤、胆囊病、血栓栓塞性疾病、肝腺瘤、血压升高、葡糖不耐性和高钙血症。

因此，有必要开发可有效降低血清胆固醇、增加HDL血清水平、预防冠心病，和／或治疗现有疾病，尤其是动脉粥样硬化，的更安全的药物。

2．4．将ApoA-Ⅰ作为突破口

目前所使用的降胆固醇药物中没有一种能够安全地提高HDL水平并促进RCT--大多数药物似乎只对胆固醇转运途径、饮食摄入调节、再循环、胆固醇合成以及VLDL群体产生影响。

人们希望找到可促进胆固醇外流和清除的药物，但RCT中却存在着几个可能的突破口--例如，LCAT、HDL及其不同成分(ApoA-Ⅰ，ApoA-Ⅱ和磷脂)、PLTP和CETP--并且人们不知道哪个突破口可更有效地获得理想的脂蛋白分布和保护效果。干扰RCT途径中的任何单一成分都可最终影响循环脂蛋白群体的组成以及RCT的效率。

以体内实验所得数据为基础的几方面证据都暗示，HDL及其主要蛋白组分，ApoA-Ⅰ，参与了动脉粥样硬化病变的预防、并可能参与粥样斑块的减退--从而使其成为具有吸引力的治疗性干预的突破口。首先，血清ApoA-Ⅰ(HDL)浓度与男性动脉粥样化形成之间存在有负相关性(Gordon & Rifkind，1989，N．Eng．J．Med．321：1311-1316；Gordon et al．，1989，Circulation 79：8-15)。事实上，人们已将HDL的特定亚群与人类动脉粥样化形成的风险降低联系起来(Miller，1987，Amer．Heart 113：589-597；Cheung et al．，1991，Lipid Res．32：383-394)；Fruchart ＆ Ailhaud，1992，Clin．Chem．38：79)。

其次，一些动物实验有利于说明ApoA-Ⅰ(HDL)的预防作用。用ApoA-Ⅰ或HDL处理胆固醇喂养的兔子可以减缓其粥样斑块(脂肪纹)的生长与增加。(Koizumi et al．，1988，J．Lipid Res．29：1405-1415：Badimon et al．，1989，Lab．Invest．60：455-461；Badimon et al．，1990，J．Clin．Invest．85：1234-1241)。但疗效随HDL来源的不同而不同(Beitz et al．，1992，Prostaglandins，Leukotrienes andEssential Fatty Acids 47：149-152；Mezdour et al．，1995，Atherosclerosis 113：237-246)。

第三，由涉及转基因动物的实验获得了有关ApoA-Ⅰ作用的直接证据。将人类ApoA-Ⅰ基因转入遗传上易于由食物诱导动脉粥样硬化的小鼠体内，该基因的表达可使防止其主动脉病变的继续发展(Rubinet al．，1991，Nature 353：265-267)。ApoA-Ⅰ转基因还在ApoE缺陷小鼠和Apo(a)转基因小鼠中显示出对动脉粥样硬化的抑制(Paszty et al．，1 994，J．Clin．Invest．94：899-903；Plump etal．，1994，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 91：9607-9611；Liu et al．，1994，J．Lipid Res．35：2263-2266)。在表达人类ApoA-Ⅰ的转基因兔上也观察到了类似的结果(Duverger，1996，Circulation94：713-717；Duverger et al．，1996，Arterioscler．Thromb．Vasc．Biol．16：1424-1429)，而在人类ApoA-Ⅰ水平上升的转基因大鼠中可使其免患动脉粥样硬化，并抑制球囊血管成形术后的再狭窄(Burkey et al．，1992，Circulation，Supplement Ⅰ，86：Ⅰ-472，Abstract No．1876；Burkey et al．，1995，J．Lipid Res．36：1463-1473)。

与AⅠ／AⅡ-HDL相比，AⅠ-HDL似乎在RCT中更为有效。对人类ApoA-Ⅰ转基因小鼠或Apo-Ⅰ和ApoA-Ⅰ(AⅠ／AⅠ)转基因小鼠的研究显示，HDL的蛋白组成能够显著影响其功能-AⅠ-HDL的抗动脉粥硬样能力比AⅠ／AⅡ-HDL更强(Schultz et al．，1993，Nature 365：762-764)。在表达人类LCAT基因的转基因小鼠上进行的平行实验表明，LCAT活性的适度增加可显著改变脂蛋白胆固醇的水平，而且LCAT对包含ApoA-Ⅰ的HDL有显著的优先选择性(Francone et al．，1995，J．Clinic．Invest．96：1440-1448；Berard et al．，1997，NatureMedicine 3(7)：744-749)。尽管这些数据有利于说明ApoA-Ⅰ在激活LCAT和促进RCT中的重要作用，但另外一些实验却显示出更为复杂的结果：调节细胞胆固醇外流的主要HDL成分是磷脂(Fournier etal．，1996，J．Lipid Res．37：1704-1711)。

考虑到HDL，即ApoA-Ⅰ及其结合的磷脂，在预防动脉粥样硬化中的潜在作用，UCB Belgium曾利用重组生产的ApoA-Ⅰ开始进行人类临床实验，其间曾中断实验，但目前显然又重新开始该实验(Pharmaprojects，Oct．27，1995；IMS R&D Focus，June 30，1997；Drug Status Update，1997，Atherosclerosis 2(6)：261-265)；另见M．Eriksson at Congress，″The Role of HDL in DiseasePrevention，″Nov．7-9，1996，Fort Worth；Lacko&Miller，1997，J．Lip．Res．38：1267-1273；and WO 94／13819)，Bio-Tech也曾开始此类实验，但现已中止(Pharmaprojects，April 7，1989)。人们还对利用ApoA-Ⅰ治疗脓毒性休克的实验进行了尝试(Opal，″Reconstituted HDL as a Treatment Strategy for Sepsis，″IBC’s7th International Conference on Sepsis，April 28-30，1997，Washington，D．C．；Gouni et al．，1993，J．Lipid Res．94：139-146；Levine，WO 96／04916)。然而，ApoA-Ⅰ的生产和使用伴随有许多缺陷，使其不足以成为理想的药物；例如，ApoA-Ⅰ是一种难于生产并且造价昂贵的大蛋白；就储存过程中的稳定性、活性产品的运输及在体内的半衰期等问题而言，还有许多重要的生产问题和重复性问题必须克服。

鉴于这些缺点，人们已经试图制备能够模拟ApoA-Ⅰ的肽。由于ApoA-Ⅰ的主要活性来自于蛋白中具有特殊二级结构部件--A类两亲性α-螺旋(Segrest，1974，FEBS lett．38：247-253)-的多个重复，因此设计能够模拟ApoA-Ⅰ活性的肽的大多数努力都集中在可形成A类两亲性α-螺旋(class A-type amphipathic α-helices)的肽的设计上。

A类两亲性α-螺旋的独特性在于，带正电荷的氨基酸残基聚集于疏水-亲水界面，而带负电荷的氨基酸残基聚集于亲水表面的中心。此外，A类α-螺旋肽具有的疏水角小于180°(Segrest et al．，1990，PROTEINS：Structure，Function and Genetics 8：103-117)。最初的ApoA-Ⅰ模拟物的重新设计策略不是基于天然存在的载脂蛋白的一级序列，而是将这些独特的A类螺旋部件与肽类似物的序列以及ApoA-Ⅰ结构域的某些属性结合起来(例如，见Davidson et al．，1996，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 93：13605-13610；Rogers et al．，1997，Biochemistry 36：288-300；Lins et al．，1993，Biochim．Biophys．Acta biomembranes 1151：137-142；Ji and Jonas，1995，J．Biol．Chem．270：11290-11297；Collet et al．，1997，Journal of LipidResearch，38：634-644；Sparrow and Gotto，1 980，Ann．N．Y．Acad．Sci．348：187-211；Sparrow and Gotto，1982，CRC Crit．Rev．Biochem．13：87-107；Sorci-Thomas et al．，1993，J．Biol．Chem．268：21403-21409；Wang et al．，1996，Biochim．Biophys．Acta174-184；Minnich et al．，1992，J．Biol．Chem．267：16553-16560；Holvoet et al．，1995，Biochemistry 34：13334-13342；Sorci-Thomas et al．，1997，J．Biol．Chem．272(11)：7278-7284；以及Frank et al．，1997，Biochemistry 36：1798-1806)。

Fukushima等人在一项研究中合成了一条22聚体肽，该肽完全由周期性排列的Glu、Lys和Leu残基组成，以形成一个具有相同亲水表面和疏水表面的两亲性α-螺旋(“ELK肽”)(Fukushima et al．，1979，J．Amer．Chem．Soc．101(13)：3703-3704；Fukushima et al．，1980，J．Biol．Chem．255：10651-10657)。ELK肽与ApoA-Ⅰ的198-219片段有41％的序列同源性。定量超滤、凝胶渗透层析和圆二色的研究显示，该ELK肽可与磷脂有效地结合，并能够模拟ApoA-Ⅰ的某些物理性质和化学性质(Kaiser et al．，1983，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 80：1137-1140；Kaiser et al．，1984，Science223：249-255；Fukushima et al．，1980，见上文；Nakagawa et al．，1985，J．Am．Chem．Soc．107：7087-7092)。Yokoyama等人从这些研究中推断，LCAT激活活性的关键因素仅在于存在一种足够大的两亲性结构(Yokoyama et al．，1980，J．Biol．Chem．255(15)：7333-7339)。此后发现该22-残基肽的二聚体比单体能够更精确地模拟ApoA-Ⅰ；人们根据这些结果推断，中间由螺旋阻断残基(Gly或Pro)打断的44-残基段代表了ApoA-Ⅰ的最小功能结构域(Nakagawa et al．，1985，见上文)。

另一项研究则涉及被称为“LAP肽”的两亲性肽模型(Pownall etal．，1980，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 77(6)：3154-3158；Sparrowet al．，1981，In：Peptides：Synthesis-Structure-Function，Roch and Gross，Eds．，Pierce Chem．Co．，Rockford，IL，253-256)。根据脂类与天然载脂蛋白片段结合的研究设计出了几种LAP肽，命名为LAP-16、LAP-20及LAP-24(分别包含16、20及24个氨基酸残基)。这些两亲性肽模型与载脂蛋白间无序列同源性，并且设计的亲水表面组织方式与结合于载脂蛋白的A-类两亲性螺旋结构域不同(Segrest et al．，1992，J．Lipid Res．33：141-166)。作者根据这些研究推断，要使两亲性肽模型具有与脂类结合的特性，必需的最小长度为20个残基。

在序列的不同位置含有一个脯氨酸残基的LAP20突变体的研究表明，脂类结合与LCAT激活之间有直接的关系，但只具有形成螺旋潜能的肽却不能导致其具有LCAT激活活性(Ponsin et al．，1986 J．Biol．Chem．261(20)：9202-9205)。此外，接近肽的中部存在的该螺旋阻断残基(Pro)可降低其对磷脂表面的亲和力以及激活LCAT的能力。尽管有某些LAP肽可显示出与磷脂结合(Sparrow et al．，见上文)，但是有关在脂类参与情况下LAP肽的螺旋长度的争论依然存在(Buchko et al．，1996，J．Biol．Chem．271(6)：3039-3045；Zhonget al．，1994，Peptide Research 7(2)：99-106)。

Segrest等人已合成了与ApoA-Ⅰ的螺旋没有序列同源性的含18-24个氨基酸残基的肽，(Kannelis et al．，1980，J．Biol．Chem．255(3)：11464-11472；Segrest et al．，1983，J．Biol．Chem．258：2290-2295)。根据疏水力矩(Eisenberg et al．，1982，Nature299：371-374)和电荷分布(Segrest et al．，1990，Proteins8：103-117；U．S．Patent No．4，643，988)将序列特别设计成能够模拟A类可转换载脂蛋白的两亲性螺旋结构域。一种18残基肽，记为“18A”肽，被设计成A类α-螺旋模型(Segrest et al．，1990，见上文)。对这些肽以及其它具有相反电荷分布的肽，如“18R”肽，的研究一致表明，电荷分布对活性是至关重要的；与18A A类模拟物相比，具有相反电荷分布的肽显示出对脂类亲和力的降低，以及在脂类参与情况下较低的螺旋含量(Kanellis et al．，1980，J．Biol．Chem．255：11464-11472；Anantharamaiah et al．，1985，J．Biol．Chem．260：10248-10255；Chung et al．，1985，J．Biol．Chem．260：10256-10262；Epand et al．，1987，J．Biol．Chem．262：9389-9396；Anantharamaiah et al．，1991，Adv．Exp．Med．Biol．285：131-140)。

其它已取得有限进展的与载脂蛋白间无序列同源性的合成肽包括，18A肽的二聚体和三聚体(Anantharamaiah et al．，1986，Proteins of Biological Fluids 34：63-66)，GALA肽和EALA肽(Subbarao et al．，1988，PROTEINS：Structure，Function andGenetics 3：187-198)以及ID肽(Labeur et al．，1997，Arteriosclerosis，Thrombosis and Vascular Biology 17：580-588)和18AM4肽(Brasseur et al．，1993，Biochim．Biophys．Acta1170：1-7)。

另外还设计出一种肽，该肽包含有基于人类ApoA-Ⅰ的螺旋序列的22个氨基酸残基(Anantharamaiah et al．，1990，Arteriosclerosis 10(1)：95-105；Yenkatachalapathi et al．，1991，Mol．Conformation and Biol．Interactions，Indian Acad．Sci．B：585-596)。该序列是通过确定人类ApoA-Ⅰ中假定螺旋的每个位置上最普遍的残基而加以构建的。与上文所述的肽类似，该肽所形成的螺旋的亲水-疏水界面处聚集着带正电荷的氨基酸残基，在亲水表面中心聚集有带负电荷的氨基酸残基，并且疏水角小于180°。尽管这种肽的二聚体在激活LCAT方面具有一些功效，但其单体几乎不显示出脂类结合特性(Venkatachalapathi et al．，1991，见上文)。

以上述肽的体外实验为主要依据，形成了一套可模拟ApoA-Ⅰ功能的肽的设计“标准”。值得注意的是，两亲性α-螺旋在亲水-疏水界面处聚集有带正电荷的残基以及在亲水表面中心聚集有带负电荷的残基被认为是脂类亲和性及LCAT激活所必需的(Venkatachalapathi et al．，1991，见上文)。Anantharamaiah等人还指出，共有22聚体肽的第13位Glu残基在LCAT激活中具有重要作用，该带负电荷的残基位于α-螺旋疏水表面内部(Anantharamaiah et al．，1991，见上文)。此外，Brasseur指出，一个小于180°的疏水角(pho角)是达到最佳的脂类-载脂蛋白复合物稳定性所必需的，同时也说明了多肽围绕在脂类双分子层边缘的盘状颗粒的形成原因(Brasseur，1991，J．Biol．Chem．66(24)：16120-16127)。Rosseneu等人还强调，小于180°的疏水角也是LCAT激活所必需的(WO 93／25581)。

但是，尽管迄今为止已有这些“标准”，但还没有人设计或制造出具有与ApoA-Ⅰ同样活性的肽-利用文中所述的LCAT激活活性测试法测定的最佳活性也还低于ApoA-Ⅰ的40％。文献中所描述的肽“模拟物”中没有一个可证明能够有效地用作药物。

鉴于上述原因，因此有必要开发一种可模拟ApoA-Ⅰ活性并且生产相对简单而又节省成本的稳定的ApoA-Ⅰ激动剂。但是，人们还未揭示出有效ApoA-Ⅰ模拟物的设计“标准”，并且还不了解具有ApoA-Ⅰ功能的有机分子的设计原则。

3．发明概述

本发明涉及可模拟ApoA-Ⅰ活性形成两亲性α-螺旋，而且其比活，即活性单位(LCAT激活活性)／质量单位，接近或超出天然分子比活的ApoA-Ⅰ激动剂。详细而言，本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂为：能够形成两亲性螺旋(在脂类参与情况下)、能够与脂类结合、能够形成前-β样或HDL样复合物、能够激活LCAT、能够提高血清中HDL成分的水平，以及能够提高胆固醇外流的肽或肽类似物。

在某种程度上，本发明是基于申请人所设计和发现的能够模拟ApoA-Ⅰ功能的肽。本发明所述肽的设计依据是来源于ApoA-Ⅰ螺旋重复的22氨基酸共有序列的假定螺旋结构和两亲性性质。令人惊奇的是，本发明所述肽的比活大大高于文献中所报道的ApoA-Ⅰ-衍生肽的比活。本发明中一些实施方案的活性确实100％接近于天然ApoA-Ⅰ的活性，而强激动剂的比活甚至超出了ApoA-Ⅰ的比活。

本发明以操作实例的方法加以阐明，这些操作实例对能够形成螺旋(在脂类参与情况下)、能够与脂类结合、能够形成复合物以及能够提高LGAT活性的特异两亲性肽的结构、制备和使用加以描述。根据这些典型的实施方案的结构和活性，申请人已发明出一套可用于设计亦处于本发明范围内的变化或变异形式的“标准”。

本发明还涉及将此类ApoA-Ⅰ激动剂(包括肽类或肽-脂复合物类)作为活性成分而包含在内的药剂，以及此类药剂的制备方法和在异常脂蛋白血相关疾病(如心血管疾病、动脉粥样硬化、代谢性综合症)、再狭窄，或内毒素血症(如脓毒性休克)的治疗中的应用。

3．1．缩略语

文中遗传编码的L-型氨基酸所采用的缩写符合常规惯例，如下所示：

氨基酸	单字母符号	常见缩写
			丙氨酸	A	Ala
精氨酸	R	Arg
			天冬酰胺	N	Asn
天冬氨酸	D	Asp
			半胱氨酸	C	Cys
谷氨酰胺	Q	Gln
			谷氨酸	E	Glu
甘氨酸	G	Gly
			组氨酸	H	His
异亮氨酸	I	Ile
			亮氨酸	L	Leu
赖氨酸	K	Lys
			甲硫氨酸	M	Met
苯丙氨酸	F	Phe
			脯氨酸	P	Pro
丝氨酸	S	Ser
			苏氨酸	T	Thr
色氨酸	W	Trp
			酪氨酸	Y	Tyr
缬氨酸	V	Val

遗传编码氨基酸的D-型对映体采用相同单字母符号的小写形式。例如，“R”表示L-精氨酸，则“r”表示D-精氨酸。

3．2．定义

文中使用的以下术语所具有的含义如下所述：

“烷基：”指支链、直链或环状的饱和烃基。典型的烷基基团包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基等，但并不局限于此。优选实施方案中的烷基基团为(C₁-C₆)烷基。

“烯基：”指至少具有一个碳-碳双键的支链、直链或环状的不饱和烃基。该基团的双键可为顺式或反式构象。典型的烯基基团包括乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、叔丁烯基、戊烯基、己烯基等，但并不局限于此。优选实施方案中的烯基基团为(C₁-C₆)烯基。

“炔基：”指至少具有一个碳-碳三键的支链、直链或环状的不饱和烃基。典型的炔基基团包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、异丁炔基、戊炔基、己炔基等，但并不局限于此。优选实施方案中的炔基基团为(C₁-C₆)炔基。

“芳基：”指具有共轭π电子系统的环状不饱和烃基。典型的芳基基团包括戊-2，4-二烯、苯基、萘基、蒽基、薁基、_基、蒄基、荧蒽基、indacenyl、茚基(idenyl)、卵苯基、苝基、phenalenyl、菲基、苉基、pleiadenyl、芘基、皮蒽基、玉红省基等，但并不局限于此。优选实施方案中的芳基基团为(C₅-C₂₀)芳基，特别优选的为(C₅-C₁₀)芳基。

“烷芳基：”指直链烷基、烯基或炔基基团。其中与末端碳原子结合的一个氢原子被芳基部分所取代。典型的烷芳基基团包括苄基、亚苄基、次苄基、苯并苄基、萘并苄基等，但并不局限于此。优选实施方案中的烷芳基基团为(C₆-C₂₆)烷芳基，即烷芳基基团的烷基、烯基或炔基部分为(C₁-C₆)，而芳基部分为(C₅-C₂₀)。特别优选实施方案中的烷芳基基团为(C₆-C₁₃)烷芳基，即烷芳基基团的烷基、烯基或炔基部分为(C₁-C₃)，而芳基部分为(C₅-C₁₀)。

“杂芳基：”指芳基中一个或多个碳原子被另一种原子，如N、P、O、S、As、Se、Si、Te等所取代。典型的杂芳基基团包括acridarsine、吖啶、arsanthridine、砷杂茚、arsindoline、咔唑、β-咔啉、苯并吡喃、噌啉、呋喃、咪唑、吲唑、吲哚、中氮茚、异砷杂茚、异砷杂萘、异苯并呋喃、异苯并吡喃、异吲哚、isophosphoindole、isophosphinoline、异喹啉、异噻唑、异噁唑、1，5二氮杂萘、_啶、菲啶、菲咯啉、吩嗪、phosphoindole、phosphinoline、酞嗪、蝶啶、嘌呤、吡喃、吡嗪、吡唑、哒嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、pyrrolizine、喹唑啉、喹啉、喹嗪、喹喔啉、硒吩、碲吩、噻吩和呫吨，但并不局限于此。优选实施方案中的杂芳基基团为5-20元杂芳基，而特别优选的为5-10个主链原子。

“烷杂芳基：”指直链烷基、烯基或炔基基团其中与末端碳原子结合的一个氢原子被杂芳基部分所取代。优选实施方案中的烷杂芳基基团为6-26元烷杂芳基，即烷杂芳基的烷基、烯基或炔基部分为(C₁-C₆)，杂芳基为5-20元杂芳基。特别优选实施方案中的烷杂芳基基团为6-13元烷杂芳基，即烷基、烯基或炔基部分为5-10元杂芳基。

“取代的烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基：”指烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基基团中的一个或多个氢原子被另一种取代基所取代。优选的取代基包括-OR、-SR、-NRR、-NO₂、-CN、卤素、-C(O)R、-C(O)OR和-C(O)NR，而每个R各自独立地代表氢、烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基。

4．附图简述

图1A为理想化两亲性α-螺旋的Schiffer-Edmundson螺旋轮状示意图，其中空心圆圈代表亲水性氨基酸残基，加阴影的圆圈代表疏水性氨基酸残基。

图1B为图1A所示理想化两亲性螺旋的螺旋网状示意图。

图1C为图1A所示理想化两亲性螺旋的螺旋圆柱状示意图。

图2A为结构式(Ⅰ)的核心肽的Schiffer-Edmundson螺旋轮状示意图，说明螺旋的两亲性(空心圆圈代表亲水性氨基酸残基，加阴影的圆圈代表疏水性氨基酸残基，加颗粒状阴影的圆圈既可代表亲水性氨基酸残基，也可代表疏水性氨基酸残基)。

图2B为结构式(Ⅰ)的核心肽的螺旋网状示意图，说明螺旋的疏水表面。

图2C为结构式(Ⅰ)的核心肽的螺旋网状示意图，说明螺旋的亲水表面。

图3A所示螺旋网状示意图说明Segrest的共有22聚体肽(PVLDEFREKLNEELEALKQKLK；序列标识号：75)的亲水表面。

图3B所示螺旋网状示意图说明例举性的第4号核心肽(PVLDLFRELLNELLEALKQKLK；序列标识号：4)的亲水表面。

图4A所示螺旋网状示意图说明Segrest的共有22聚体肽(序列标识号：75)的疏水表面。

图4B所示螺旋网状示意图说明典型的第4号核心肽(序列标识号：4)的疏水表面。

图5A为Segrest的共有22聚体肽(序列标识号：75)的Schiffer-Edmundson螺旋轮状示意图。

图5B为典型的第4号核心肽(序列标识号：4)的Schiffer-Edmundson螺旋轮状示意图。

图6A显示两条第4号肽(序列标识号：4)以反平行方式排列的计算机模型，其中突出显示Glu-8和Gln-19以说明这两条肽与脂类结合时能够形成分子内氢键。

图6B显示两条第102号肽(PVLDLFRELLNLXLEALKEKLK；序列标识号：102)以反平行方式排列的计算机模型，其中突出显示Glu-8和Glu-19以说明这两条肽与脂类结合时不能够形成分子内氢键。

图7A显示本发明的三级分支网络。

图7B显示本发明的四级分支网络。

图7C显示本发明的混合分支网络。

图7D显示本发明的典型“Lys-树”分支网络。

图8A所示曲线图显示第4号肽(序列标识号：4)及Segrest的共有22聚体肽(序列标识号：75)的Hα化学位移观测值与无规线圈的Hα化学位移列表值的差异。

图8B所示曲线图显示第4号肽(序列标识号：4)及Segrest的共有22聚体肽(序列标识号：75)的酰胺质子化学位移观测值与无规线圈的酰胺质子化学位移列表值的差异。

图8C所示草图显示第4号肽(序列标识号：4)的Hα质子化学位移与其α-螺旋构象之间的周期性关系。

图9A-9D给出分离的人类HDL于37℃在缓冲液中保温2小时后采用吸光度测量法(一)和在¹⁴C标记的第4号肽参与情况下保温2小时后采用吸光度测量法(---)或¹⁴C-放射性计数法(◆)所得到的凝胶层析谱。层析谱采用的肽：HDL质量比为1∶15(图9A)、1∶10(图9B)、1∶5(图9C)和1∶3(图9D)。

图9E为¹⁴C标记的非结合游离型第4号肽采用吸光度测量法(---)和¹⁴C放射性计数法(◆)所得到的凝胶过滤对照谱。

图9F给出的凝胶过滤差异图谱显示图9A(---)、9B(-)、9C(---)和9D(-)中经肽处理的HDL的各吸光度图谱与图9E对照谱之间的差异(正值表明经处理的样品的吸光度更大；负值表明对照样品的吸光度更大)。

图10所示曲线图显示兔子注射10mg／kg第4号肽(序列标识号：4)(以肽／DPPC复合物形式)后的脂蛋白分布。

图11A显示可由本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂获得的各种聚合状态和肽-脂复合物。左图：由若干肽螺旋的相互作用引起的肽多聚体化过程，该过程在规定的肽浓度、pH和离子强度条件下可导致寡聚体的形成。中图：肽与脂类小体(如SUVs)的相互作用(在任意的这些聚合状态下)可导致脂类重组。右图：通过改变脂：肽的摩尔比率可获得不同类型的肽-脂复合物，低脂-肽比率可获得脂-肽共聚微胶粒，随着脂：肽比率的逐渐提高可获得盘状颗粒以及最终的多片层大复合物。

图11B显示在规定的脂：肽比率范围内形成的盘状肽-脂复合物的公认模型。环绕圆盘边缘的每个肽都与其最接近的两个肽分子紧密接触。

5．发明详述

本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂可模拟ApoA-Ⅰ的功能和活性。它们能够形成两亲性螺旋(在脂类参与情况下)，能够与脂类结合，可形成前-β样或HDL样复合物，能够激活LCAT，能够提高血清中的HDL浓度，也能够提高胆固醇外流。这些肽的生物活性与其螺旋结构相关，或在脂类参与情况下与其螺旋结构的转变相关。

本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂能够制备成固定容量或固定单位剂量的形式，如冻干制品，可于在体使用前重构或重新配制。本发明包括这些药剂以及这些制剂在高脂血症、高胆固醇血症、冠心病、动脉粥样硬化，和其它如内毒素血症造成的脓毒性休克等病情的治疗中的应用。

本发明以操作实例的方法加以阐明，这些操作实例可证明本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂能够与血浆中的HDL成分相结合，并能够增加HDL和前-β颗粒的浓度。本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂能够提高细胞的胆固醇外流。该激动剂在激活LCAT从而促进RCT方面也极为有效。在动物模型体内使用本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂可导致血清中HDL浓度的提高。

以下各小节将对本发明进行更详细的阐述，其中包括：ApoA-Ⅰ肽类激动剂的组成和结构；结构特性和功能特性；容量形式及单位剂量形式制剂的制备方法；以及使用方法。

5．1．肽的结构和功能

本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂通常为肽或其类似物，它们能够在脂类参与情况下形成两亲性α-螺旋，并模拟ApoA-Ⅰ的活性。这些激动剂的主要特征是具有一个包含15-29个氨基酸残基，优选的为22个氨基酸残基，的“核心”肽段，或其类似物，其肽段中至少有一个酰胺键被取代酰胺、酰胺等排体或酰胺模拟物所取代。

在某种程度上，本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂的基础是本申请人意外发现Venkatachalapathi et al．，1991，Mol．Conformation andBiol．Interactions，Indian Acad．Sci．B：585-596中被认为对活性至关重要的22聚体共有序列的一级序列(PVLDEFREKLNEELEALKQKLK；序列标识号：75；以下记为“Segrest的共有22聚体”或“共有22聚体”)中特定氨基酸残基的改变可导致合成肽表现的活性接近，或在某些实施方案中甚至超出，天然ApoA-Ⅰ的活性。特别是本发明人发现，将Segrest的共有22聚体肽中的三个荷电氨基酸残基(Glu-5，Lys-9，Glu-13)替换为疏水性Leu残基可使肽模拟ApoA-Ⅰ结构和功能特性的程度达到该领域前所未有的水平。

尽管不希望受到任何特定原理的约束，但与文献中描述的ApoA-Ⅰ模拟肽所形成的α-螺旋相比，可认为由本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂形成的螺旋能够更精确地模拟天然ApoA-Ⅰ中两亲性螺旋区域的结构性质和功能性质，这些性质对脂类结合、胆固醇外流和LCAT激活的实现十分重要。鉴于本发明中叙述的多种ApoA-Ⅰ激动剂的活性确实接近，在某些实施方案中甚至超出，ApoA-Ⅰ的活性，而到目前为止，文献中描述的最有效的ApoA-Ⅰ模拟肽-18AM4(EWLEAFYKKVLEKLKELF；序列标识号：246)(Corinjn et al．，1993，Biochim．Biophys．Acta 1170：8-16；Labeur et al．，Oct．1994，Arteriosclerosis：Abstract Nos．186 and 187)和N-乙酰化，C-酰胺化18AM4肽(序列标识号：293)(Brasseur，1993，Biochim．Biophys．Acta 1170：1-7)-在本文所述LCAT激活测试法中显示出的活性分别低于ApoA-Ⅰ活性的4％和11％。

通常，构成本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂的核心肽(或其类似物)具有以下结构式(Ⅰ)：X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆-X₁₇-X₁₈-X₁₉-X₂₀-X₂₁-X₂₂

其中：

X₁为Pro(P)、Ala(A)、Gly(G)、Gln(Q)、Asn(N)、Asp(D)或D-Pro(p)；

X₂为一种脂肪族氨基酸；

X₃为Leu(L)或Phe(F)；

X₄为一种酸性氨基酸；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为一种亲水性氨基酸；

X₈为一种酸性或碱性氨基酸；

X₉为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₀为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₁为一种亲水性氨基酸；

X₁₂为一种亲水性氨基酸；X₁₃为Gly(G)或一种脂肪族氨基酸；X₁₄为Leu(L)、Trp(W)、Gly(G)或Nal；X₁₅为一种亲水性氨基酸；X₁₆为一种疏水性氨基酸；X₁₇为一种疏水性氨基酸；X₁₈为一种碱性氨基酸、Gln(Q)或Asn(N)；X₁₉为一种碱性氨基酸、Gln(Q)或Asn(N)；X₂₀为一种碱性氨基酸；X₂₁为一种脂肪族氨基酸；以及X₂₂为一种碱性氨基酸。

在某种程度上，结构式(Ⅰ)的核心肽是根据特定种类的氨基酸来定义的。下文将给出各特定种类的定义并对结构式(Ⅰ)的变异或变化的实施方案加以描述。

在结构式(Ⅰ)的核心肽中，氨基酸残基X_n之间的“-”符号指一种主链结构的连接功能。因而符号“-”通常表示一种肽键或酰胺键(-C(O)NH-)。但是应该了解，本发明预期的肽类似物中的一个或多个酰胺键可被不同于酰胺键的其它键，优选的为取代酰胺或酰胺等排体，所取代。因此，尽管结构式(Ⅰ)中的各种X_n残基一般是按照氨基酸来加以描述，并且本发明的优选实施方案是以肽作为实例而加以说明，但具有该领域技能的专家都会认可，包含有非酰胺键的实施方案中所使用的“氨基酸”或“残基”等术语是指载有结构上与氨基酸侧链相似的基团的其它双功能部分。

取代酰胺通常包括公式-C(O)NR-的基团，其中R为(C₁-C₆)烷基、取代的(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烯基、取代的(C₁-C₆)烯基、(C₁-C₆)炔基、取代的(C₁-C₆)炔基、(C₅-C₂₀)芳基、取代的(C₅-C₂₀)芳基、(C₆-C₂₆)烷芳基、取代的(C₆-C₂₆)烷芳基、5-20元杂芳基、5-20元取代杂芳基、6-26元烷杂芳基、6-26元取代杂芳基，但并不局限于此。

酰胺等排体通常包括-CH₂NH-、-CH₂S-、-CH₂CH₂-、-CH=CH-(顺式和反式)、-C(O)CH₂-、-CH(OH)CH₂-和-CH₂SO-，但并不局限于此。具有这些非酰胺键的化合物以及这些化合物的制备方法已为该领域所熟知(例如，见Spatola，March 1983，Vega Data Vol．1，Issue3；Spatola，1983，“Peptide Backbone Modifications”In：Chemistry and Biochemistry of Amino Acids Peptides andProteins，Weinstein，ed．，Marcel Dekker，New York，p．267(general review)；Morley，1980，Trends Pharm．Sci．1：463-468；Hudson et al．，1979，Int．J．Prot．Res．14：177-185(-CH₂NH-、-CH₂CH₂-)；Spatola et al．，1986，Life Sci．38：1243-1249(-CH₂-S)；Hann，1982，J．Chem．Soc．Perkin Trans．I．1：307-314(-CH=CH-，顺式和反式)；Almquist et al．，1980，J．Med．Chem．23：1392-1398(-COCH₂-)；Jennings-White et al．，Tetrahedron．Lett．23：2533(-COCH₂-)；European Patent Application EP 45665(1982)CA 97：39405(-CH(OH)CH₂-)；Holladay et al．，1983，Tetrahedron Lett．24：4401-4404(-C(OH)CH₂-)；和Hruby，1982，Life Sci．31：189-199(-CH₂-S-))。

此外，一个或多个酰胺键可被不显著影响肽结构或活性的拟肽或拟酰胺部分所取代。例如在Olson et al．，1993，J．Med．Chem．36：3039-3049中即对适当的拟酰胺部分进行了描述。

结构式(Ⅰ)的核心肽的关键特征是其在脂类参与情况下形成两亲性α螺旋的能力。就两亲性而言，其含义是α螺旋沿其长轴方向具有相对的亲水和疏水表面，也就是说，螺旋的一侧表面主要投射亲水性侧链，而对侧表面主要投射疏水性侧链。图1A和1B给出的两个直观图显示典型的理想化两亲性α-螺旋的相对的亲水和疏水表面。图lA为Schiffer-Edmundson螺旋轮状示意图(Schiffer and Edmundson，1967，Biophys．J．7：121-135)。轮中的螺旋长轴垂直于页面。从N-末端开始，连续的氨基酸残基(用圆圈表示)以100°的间隔沿圆周呈放射状分布。因而第n+1个氨基酸残基的定位与第n个残基呈100°，第n+2个氨基酸残基的定位与第n+1个残基呈100°，等等。以100°为间隔的布局可解释为何在理想化α-螺旋中可典型观测到每圈含3．6个氨基酸残基。由图1A可明显看出螺旋相对的亲水和疏水表面；亲水性氨基酸以空心圆圈表示，疏水性氨基酸残基则以加阴影的圆圈表示。

图1B为图1A所示理想化两亲性螺旋的螺旋网状示意图(Lim，1978，FEBS Lett．89：10-14)。典型的螺旋网状示意图显示的α-螺旋相当于沿其亲水表面中心将圆柱切开并压平。因此，由螺旋疏水力矩(Eisenbery et al．，1982，Nature 299：371-274)决定的疏水表面中心即位于该图的中心并且其朝向为沿页平面向外。螺旋状圆柱被切开并压平之前的图示显示于图1C。沿不同平面切割圆柱可观测到同一两亲性螺旋的不同视图，并可获得有关螺旋属性的不同信息。

图2说明结构式(Ⅰ)的核心肽在脂类参与情况下形成的α-螺旋的两亲性性质。图2A为Schiffer-Edmundson螺旋轮状示意图，图2B的螺旋网状示意图显示疏水表面，而图2C的螺旋网状示意图显示亲水表面。在图2A、2B和2C各图中，亲水性残基以空心圆圈表示，疏水性残基以加阴影的圆圈表示。结构式(Ⅰ)的肽的特定氨基酸残基可被其它氨基酸残基所替代，从而使该肽形成的螺旋亲水表面和疏水表面各自并非完全由亲水性氨基酸和疏水性氨基酸构成，下文将对此以及该肽的变化或变异形式加以详述。因而应该了解，当涉及由本发明所述核心肽形成的两亲性α-螺旋时，短语“亲水表面”是指总体净属性为亲水性的螺旋表面。短语“疏水表面”是指总体净属性为疏水性的螺旋表面。

尽管不希望受到任何特定原理的约束，但可认为由结构式(Ⅰ)的核心肽形成的两亲性螺旋的特定结构性质和／或物理性质对活性而言十分重要。这些性质包括两亲性度、总疏水性、平均疏水性、疏水角和亲水角、疏水力矩、平均疏水力矩，以及α-螺旋的净电荷。

图2A的螺旋轮状示意图以简便方法直观显示出结构式(Ⅰ)的核心肽的两亲性属性，通过计算螺旋的疏水力矩(μ_H)可方便地确定两亲性度(疏水性的不对称程度)的大小。计算特定肽序列的μ_H的方法已为该领域所熟知，例如在Eisenberg，1984，Ann．Rev．Biochem．53：595-623中即有所描述。特定肽的实际μ_H取决于该肽包含的氨基酸总数。因此，直接比较不同长度肽的μ_H通常不会提供什么信息。

不同长度的肽的两亲性可用平均疏水力矩(<μ_H>)进行直接比较。将μ_H除以螺旋中的残基数(即，<μ_H>=μ_H／N)得平均疏水力矩。利用Eisenberg的标准化公用疏水性标准(Eisenberg，1984，J．Mol．Biol．179：125-142)确定的<μ_H>的范围为0．45-0．65的核心肽一般可认为处于本发明范围之内，优选的<μ_H>范围则为0．50-0．60。

通过计算肽段中各氨基酸残基的疏水性值的代数和(即， $H_0=\underset{i=1}{\overset{N}{\mathrm{\&Sigma;}}}{H}_i),$ 其中N为肽的氨基酸残基数，H_i为第i个氨基酸残基的疏水性值)可方便地得出该肽的总疏水性(H_O)。将该疏水性值除以氨基酸残基数(即，<μ_O>=μ_O／N)得平均疏水性(<μ_O>)。利用Eisenberg的标准化公用疏水性标准(Eisenberg，1984，J．Mol．Biol．179：125-142)确定的平均疏水性的范围为-0．050-0．070的核心肽一般可认为处于本发明范围之内，优选的平均疏水性范围则为-0．030-0．055。

通过计算处于如下文所定义的疏水角内的氨基酸残基的疏水性总和(即， $H_0^{\mathrm{pho}}=\underset{i=1}{\overset{N}{\mathrm{\&Sigma;}}}{H}_{i,}$ 其中H_i的定义与前文相同，N_H为疏水表面内疏水性氨基酸的总数)可得出两亲性螺旋疏水性表面的总疏水性(H_O ^pho)。疏水表面的平均疏水性(<H_O ^pho>)为H_O ^pho／N_B，其中N_H的定义与前文相同。利用Eisenberg的公用疏水性标准(Eisenberg，1984，见上文；Eisenberg et al．，1982，见上文)确定的<HOpho>的范围为0．90-1．20的核心肽一般可认为处于本发明范围之内，优选的<H_O ^pho>范围则为0．94-1．10。

疏水角(pho角)的常规定义为，当以Schiffer-Edmundson螺旋轮状表示法显示肽段时，疏水性氨基酸残基最长的连续序列stretch所覆盖的角度或弧度(即，轮上的连续疏水性残基数乘以20°)。亲水角(phi角)为360°与pho角的差值(即，360°-pho角)。具有该领域技能的专家都会认可，pho角和phi角在某种程度上取决于肽的氨基酸残基数。例如，参照图5A和5B可看出，只有18个氨基酸才恰好形成Schiffer-Edmundson螺旋轮的一圈。氨基酸较少会在轮上留下一个缺口；氨基酸较多则会造成轮上的某些位置被一个以上的氨基酸所占据。

在肽所包含的氨基酸残基多于18个的情况下，例如结构式(Ⅰ)的核心肽，一段疏水性氨基酸残基“连续”序列意味着，处在轮上含有两个或多个氨基酸的位置上的氨基酸至少有一个为疏水性氨基酸。因此，参照图5B，尽管位置20存在一个亲水性氨基酸，但pho角应为第5、16、9、2、13、6、17、10、3和14位残基所覆盖的弧度，因为与其在轮上处在同一位置的第2位残基为疏水性氨基酸。具有pho角范围为160°-220°的核心肽通常可认为处于本发明范围之内，优选的pho范围则为180°-200°

图3和图4显示结构式(Ⅰ)的核心肽的某些结构特性和／或物理特性。图3B给出的本发明典型核心肽，第4号肽(PVLDLFRELLNELLEALKQKLK；序列标识号：4)，的螺旋网状示意图显示沿螺旋亲水表面的电荷分布。在图3B中，螺旋柱沿疏水表面中心被切开并压平。替代Segrest共有22聚体中亲水性残基的三个疏水性Leu(L)残基被加上阴影。由图3B可以看出，带正电荷的氨基酸残基在螺旋的C-末端最后一圈处聚集成簇(C-末端处于页面上方)。尽管不希望受到任何特定原理的约束，但可认为C-末端的碱性残基簇可通过带(NH₃ ⁺)螺旋的偶极子静电相互作用而稳定螺旋。此外，一般认为赖氨酸侧链与螺旋核心的疏水性相互作用也可产生稳定作用(见，Groebke et al．，1996，Proc．Natl．Acad．Sci．U．S．A．93：4025-4029；Esposito et al．，1997，Biopolymers 41：27-35)。

除C-末端带正电荷的聚集簇之外，负电荷分布在亲水表面的其它部分，且每圈至少有一个带负电的(酸性)氨基酸残基，这导致沿螺旋亲水表面分布着一段连续的负电荷。第7位残基带有一个正电荷，它可能通过与螺旋上的一圈之隔的一个酸性残基形成盐键，从而有助于螺旋的稳定。

图4B的螺旋网状示意图显示由典型的第4号核心肽(序列标识号：4)形成的两亲性螺旋的疏水表面。在图4B中，螺旋柱沿亲水表面中心被切开并压平。除C-末端的最后一圈为碱性氨基酸占优势外，核心肽的疏水表面每圈都含两个疏水性残基。NMR研究显示，该核心肽的第3、6、9和10位氨基酸残基可在螺旋N-末端附近形成一个疏水性簇。Phe-6位于该簇的中心，并被认为在稳定疏水性簇中发挥重要作用。

尽管不希望受到任何特定原理的约束，但可认为由第3、6、9和10位残基形成的疏水性簇在实现脂类结合和LCAT激活方面具有重要意义。例如，鉴于典型的第4号核心肽(序列标识号：4)在文中所述测定中显示出93％的LCAT激活活性，而在第9位包含一个可破坏疏水性簇的Lys(K)残基的第4号肽衍生物(第33号肽；序列标识号：33)仅在相同测试中显示出33％的LCAT激活活性。两亲性肽能够通过将其疏水表面指向脂类部分的烷基侧链而与磷脂结合。因此，可认为该强疏水性簇在观测到的本发明所述核心肽与脂类的强亲和性中发挥作用。由于与脂类结合是LCAT激活的先决条件，因而可认为该疏水性簇对LCAT激活也是必不可少的。

芳香族残基通常在肽与脂类和蛋白与脂类的锚着方面具有重要作用(De Kruijff，1990，Biosci．Rep．10：127-130；O’Neil and DeGrado，1990，Science 250：645-651；Blondelle et al．，1993，Biochim．Biophys．Acta 1202：331-336)。因此可进一步认为，位于疏水性簇中心的Phe-6或许同样在结构式(Ⅰ)的核心肽与脂类的锚着方面发挥关键作用。

本发明所述核心肽与脂类的相互作用可导致肽-脂复合物的形成。如图11A所示，所得复合物的类型(共聚微胶粒、盘状胶粒、泡状胶粒或多片层胶粒)取决于脂：肽的摩尔比率，较低的脂：肽摩尔比通常会形成共聚微胶粒，随脂：肽比率的提高可获得盘状、泡状或多片层复合物。有关两亲性肽的该特性(Epand，The AmphipathicHelix，1993)和ApoA-Ⅰ的该特性(Jones，1992，Structue andFunction of Apolipoproteins，Chapter 8，pp．217-250)已有所描述。脂：肽摩尔比率同时还可决定复合物的大小和组成(见，下文，5．3．1节)。

由结构式(Ⅰ)的核心肽形成的α-螺旋的长轴总体上呈弯曲状。在典型的两亲性螺旋中发现亲水表面和疏水表面的氢键长度各不相同，使得螺旋的疏水侧呈凹形(Barlow and Thornton，1988，J．Mol．Biol．201：601-619；Zhou et al．，1992，J．Am．Chem．Soc．33：11174-11183；Gesell et al．，1997，J．Biomol．NMR9：127-135)。尽管不希望受到任何特定原理的约束，但可认为螺旋疏水表面总体上的弯曲也许对与盘状(discoidal)复合物的结合十分重要-曲面螺旋允许肽更适合于环绕在盘状颗粒的边缘，从而增加肽-盘状颗粒复合物的稳定性。

在ApoA-Ⅰ公认的结构模型中，两亲性α-螺旋环绕盘状HDL的边缘进行组装(见，图11B)。推测螺旋在该模型中的定位方式为其疏水表面指向脂类酰基链(Brasseur et al．，1990，Biochim．Biophys．Acta 1043：245-252)。螺旋以反平行反式排列，且螺旋间的协同效应有助于盘状HDL复合物的稳定(Brasseur et al．，上文)。有人提议，导致邻近的反平行螺旋残基间形成分子间盐键或氢键的酸性残基和碱性残基间存在的离子相互作用是有助于HDL盘状复合物稳定的因素之一。在此模型中，该肽并不被认为是一个单一实体，而是至少与邻近的两个其它肽分子具有相互作用(图11B)。

被大家所接受的还有，分别位于螺旋第i和第i+3位的酸性残基和碱性残基间形成的分子内氢键或盐键可稳定螺旋结构(Marqusee etal．，1985，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 84(24)：8898-8902)。

因此，结构式(Ⅰ)的核心肽的其它重要特性有，与另一分子核心肽以反平行方式排列且其疏水表面指向相同方向时能够形成分子间氢键的能力，与脂类结合时的情况也是如此(即，第4和8位酸性残基和第18、20和22位碱性残基之间)，而且在螺旋N-末端和C-末端附近还可形成分子内氢键或盐键(即，第4和7位酸性残基和第15和18位碱性残基之间)。

图6A阐明结构式(Ⅰ)的核心肽形成分子间氢键的能力。在图6A中，典型的第4号核心肽(序列识别号：4)的两个理想的α-螺旋以反平行方式排列，并且其各自的疏水表面指向相同方向(沿页平面向外)。E-8残基和Q-19残基间可产生氢键相互作用(Huyghues-Despointes et al．，1995，Biochemistry 34(41)：13267-13271)。

此外，当螺旋以此类反平行方式排列时可紧密组装；该过程中不存在妨碍螺旋间紧密接触的位阻效应。核心肽序列若发生可影响螺旋组装的改变，则会对该核心肽的活性产生负面影响。例如，参照图6B，Gln-19被Glu-19所替代从而不能形成分子间氢键的肽(第102号肽；PVLDLFRELLNLXLEALKEKLK，其中X为Aib；序列标识号：102)的二聚体不能够激活LCAT。值得注意的是，典型的第4号核心肽(序列标识号：4)在文中所述测试中显示出93％的LCAT激活活性，而第102号肽(序列标识号：102)仅在相同测试中显示出2％的活性。

因此，尽管不希望受到任何特定原理的约束，但可认为当结构式(Ⅰ)的核心肽以反平行方式与脂类结合时能够紧密组装并产生离子相互作用以形成分子内和／或分子间盐键和／或氢键的能力是本发明所述核心肽的重要特征。

此外，一般认为在没有脂类的情况下，核心肽可产生有利的分子间肽-肽相互作用的能力是恰当的。本发明所述核心肽能够自结合，这在某种程度上是由于其具有较大的，<μ_H>、<H_O>和疏水角(见，下文表Ⅰ)。自结合现象取决于pH、肽浓度和离子强度等条件，并可导致从单体到多体的不同状态(图11A)。肽聚体的疏水核心可促进与脂类的疏水性相互作用。此类肽的甚至在极低浓度下也可聚集的能力或许可促进它们与脂类的结合。一般认为，肽聚体核心内也同样具有肽-肽相互作用，并且可能与脂-肽相互作用相竞争。

除上述性质外，还有其它一些参数亦被认为对活性具有重要作用，其中包括疏水性残基总数、荷电残基总数，以及肽的净电荷。

以下表Ⅰ给出结构式(Ⅰ)的核心肽的优选物理性质和结构性质的总结：表Ⅰ结构式(Ⅰ)的优选ApoA-Ⅰ激动剂的物理性质

性质	范围	优选范围
			疏水性氨基酸百分数<HO><H0 Pho><μH>pho角带正电荷的氨基酸数	40-70-0．050--0．0700．90-1．20．45-0．65160°-220°3-5	50-60-0．030--0．0550．94-1．10．50-0．60180°-200°4

带负电荷的氨基酸数净电荷疏水性簇酸性簇碱性簇

3-5                         4-1-+1                       0第3、6、9、10位为疏水性氨基酸除C-末端的最后5个氨基酸外每圈至少有一个酸性氨基酸C-末端的最后5个氨基酸中至少有三个碱性氨基酸

由本发明所述核心肽形成的两亲性α-螺旋的性质与A类两亲性α-螺旋，尤其是Segrest的共有22聚体的A类α-螺旋，的性质明显不同。图3-5利用典型的第4号核心肽(序列标识号：4)来阐明这些差异。

参照图4A和4B可看出，与Segrest的共有22聚体的疏水表面相比，第4号肽的疏水表面的疏水性要强得多。详细而言，第4号肽(序列标识号：4)中的第5、9和13位残基(图4B的阴影区域)为疏水性Leu(L)残基，相比之下，在共有22聚体(序列标识号：75)中则为荷电残基。将Segrest的共有22聚体中这三个荷电残基替换为疏水性Leu(L)残基可导致螺旋的两亲性、疏水性、pho角和其它性质的显著差异。

下表Ⅱ给出结构式(Ⅰ)的两条典型核心肽，第4号肽(序列标识号：4)和第8号肽(序列标识号：8)，与Segrest的共有22聚体(序列标识号：75)的物理性质和结构性质比较：                  表Ⅱ典型核心肽与segrest的共有22-残基的性质比较

性质	共有序列	第4号肽	第8号肽
				#氨基酸数#亲水性氨基酸数#疏水性氨基酸数％疏水性氨基酸百分数<HO><HO Pho><μH>pho角#带正电荷的氨基酸数#带负电荷的氨基酸数净电荷	2213941-0．2930．9600．425100°56-1	22101255-0．0130．9900．547200°440	22101255-0．0400．9400．521200°440

最引人注目的是，结构式(Ⅰ)的核心肽中包含的疏水性残基的百分率更大，其<H_O>和<μ_H>显然更大，并且具有两倍大的pho角(见图5A和5B)。这些性质上的差异可导致活性的显著差异。与天然ApoA-Ⅰ相比，Segrest的共有22聚体(序列标识号：75)在文中所述测定中仅显示出10％的LCAT激活活性，而第4号肽(序列标识号：4)和第8号肽(序列标识号：8)在相同测试中分别显示出93％和83％的LCAT激活活性。与天然ApoA-Ⅰ相比，第1号肽(PVLDLFRELLNELLEZLKQKLK；序列标识号：1)和第2号肽(GVLDLFRELLNELLEALKQKLKK；序列标识号：2)在相同测试中分别显示出120％和105％的LCAT激活活性。

结构式(Ⅰ)的核心肽中的某些氨基酸残基可被其它氨基酸残基所替代，且不对肽的活性造成显著的负面影响，在很多情况下甚至还会提高肽的活性。因此，本发明还考虑了结构式(Ⅰ)的核心肽的变化或变异形式，其由结构式定义的氨基酸残基中至少有一个被另一种氨基酸残基所替代。由于核心肽在脂类参与情况下可形成具有两亲性及其它上述性质的α-螺旋的能力被认为是能够影响本发明所述核心肽的活性的关键特征之一，因此应承认本发明优选实施方案中的氨基酸替代为保守性的，即替代氨基酸残基具有与被替代氨基酸残基相类似的物理性质和化学性质。

为确定保守的氨基酸替代，可方便地将氨基酸分为两种主要类型-亲水性氨基酸和疏水性氨基酸-这主要取决于氨基酸侧链的物理-化学特性。这两种主要类型可被进一步划分为更明确规定了氨基酸侧链特性的亚类。例如，亲水性氨基酸种类可被进一步细分为酸性氨基酸、碱性氨基酸和极性氨基酸。疏水性氨基酸种类可被进一步细分为非极性氨基酸和芳香族氨基酸。规定结构式(Ⅰ)的不同种类氨基酸的定义如下：

“亲水性氨基酸”是指根据Eisenberg et al．，1984，J．Mol．Biol．179：125-142的标准化公用疏水性标准所显示的疏水性小于零的氨基酸。遗传编码的亲水性氨基酸包括Thr(T)、Ser(S)、His(H)、Glu(E)、Asn(N)、Gln(Q)、Asp(D)、Lys(K)和Arg(R)。

“酸性氨基酸”是指具有的侧链pK值小于7的亲水性氨基酸。酸性氨基酸在生理pH下由于失去一个氢离子而通常具有带负电荷的侧链。遗传编码的酸性氨基酸包括Glu(E)和Asp(D)。

“碱性氨基酸”是指具有的侧链pK值大于7的亲水性氨基酸。碱性氨基酸在生理pH下由于结合一个氢离子而通常具有带正电荷的侧链。遗传编码的碱性氨基酸包括His(H)、Arg(R)和Lys(K)。

“极性氨基酸”是指具有的侧链在生理pH下不带电荷，但至少有一个键中由两个原子共用的电子对被二者之一更紧密地占有的亲水性氨基酸。遗传编码的碱性氨基酸包括Asn(N)、Gln(Q)、Ser(S)和Thr(T)。

“疏水性氨基酸”是指根据Eisenberg et al．，1984，J．Mol．Biol．179：125-142的标准化公用疏水性标准所显示的疏水性大于零的氨基酸。遗传编码的亲水性氨基酸包括Pro(P)、Ile(I)、Phe(F)、Val(V)、Leu(L)、Trp(W)、Met(M)、Ala(A)、Gly(G)和Tyr(Y)。

“芳香族氨基酸”是指侧链至少具有一个芳香环或杂芳香环的疏水性氨基酸。芳香环或杂芳香环可能包含一个或多个取代基，如-OH、-SH、-CN、-F、-Cl、-Br、-I、-NO₂、-NO、-NH₂、-NHR、-NRR、-C(O)R、-C(O)OH、-C(O)OR、-C(O)NH₂、-C(O)NHR、-C(O)NRR等，其中R各自独立地代表(C₁-C₆)烷基、取代的(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烯基、取代的(C₁-C₆)烯基、(C₁-C₆)炔基、取代的(C₁-C₆)炔基、(C₅-C₂₀)芳基、取代的(C₅-C₂₀)芳基、(C₆-C₂₆)烷芳基、取代的(C₆-C₂₆)烷芳基、5-20元杂芳基、5-20元取代杂芳基、6-26元烷杂芳基或6-26元取代杂芳基。遗传编码的芳香族氨基酸包括Phe(F)、Tyr(Y)和Trp(W)。

“非极性氨基酸”是指具有的侧链在生理pH下不带电荷，并且侧链的键中由两个原子共用的电子对通常被二者同等占有(即，侧链不是极性的)的疏水性氨基酸。遗传编码的非极性氨基酸包括Leu(L)、Val(V)、Ile(I)、Met(M)、Gly(G)和Ala(A)。

“脂肪族氨基酸”是指具有脂肪烃侧链的疏水性氨基酸。遗传编码的脂肪族氨基酸包括Ala(A)、Val(V)、Leu(L)和Ile(I)。

Cys(C)氨基酸残基的不寻常之处在于它能够与其它Cys(C)残基或其它含sulfanyl的氨基酸形成二硫键。Cys(C)残基(或带有含-SH侧链的其它氨基酸)在肽中能够以还原型游离-SH形式或氧化型二硫键形式存在，这种能力可影响Cys(C)残基对肽的净疏水性作用或净亲水性性能。尽管上文对一般分类进行了定义，但是当Cys(C)残基根据Eisenberg的标准化公用标准(Eisenberg，1984，见上文)显示出的疏水性为0．29时，应理解就本发明而言的Cys(C)则被归类为极性亲水性氨基酸。

具有该领域技能的专家都会意识到，上文定义的种类并非互不相容。因此，侧链显示出两种或多种物理-化学特性的氨基酸可被包括在多个种类之内。例如，侧链含有芳香族部分，而该部分又被极性取代基进一步取代的氨基酸，如Tyr(Y)，也许会既显示出芳香族疏水性性质，又显示出极性亲水性性质。任何氨基酸的适当分类，尤其是按照此处给出的详细公开内容进行的分类，对具有该领域技能的专家而言都是显而易见的。

当螺旋的内部位置中包含有某些称为“螺旋阻断”氨基酸的氨基酸残基时，这些残基具有破坏α-螺旋结构的倾向。目前这些具有螺旋阻断性质的氨基酸残基已为该领域所熟知(例如，见Chou andFasman，Ann．Rev．Biochem．47：251-276)，它们包括Pro(P)、Gly(G)以及可能所有的D-氨基酸(当被包含在L-肽中时；同样的，当L-氨基酸被包含在D-肽中时也可破坏螺旋结构)。虽然除Gly(G)之外(下文论述)，这些螺旋阻断氨基酸残基均处在上文所定义的种类之内，但这些残基不能用来替代螺旋内部位置中的氨基酸残基-它们只能用来替代肽的N-末端和／或C-末端的第1-3位氨基酸残基。

尽管前文定义的种类是以遗传编码的氨基酸来举例说明，但氨基酸替代物无须局限于遗传编码的氨基酸，在某些优选实施方案中也确实没有局限于遗传编码的氨基酸。事实上，结构式(Ⅰ)的许多优选肽中包含有非遗传编码的氨基酸。因此，除天然的遗传编码氨基酸之外，结构式(Ⅰ)的核心肽中的氨基酸残基也能够被天然的非编码氨基酸和合成氨基酸所替代。

能够为结构式(Ⅰ)的核心肽提供替代物的某些常见氨基酸包括，但并不局限于，β-丙氨酸(β-Ala)和其它诸如3-氨基丙酸、2，3-二氨基丙酸(Dpr)、4-氨基丁酸等ω-氨基酸；α-氨基异丁酸(Aib)；ε-氨基己酸(Aha)；δ-氨基戊酸(Ava)；N-甲基甘氨酸或肌氨酸(MeGly)；鸟氨酸(Orn)；瓜氨酸(Cit)；叔-丁基丙氨酸(t-BuA)；叔-丁基甘氨酸(t-BuG)；N-甲基异亮氨酸(MeIle)；苯基甘氨酸(Phg)；环己基丙氨酸(Cha)；正亮氨酸(Nle)；萘基丙氨酸(Nal)；4-氯苯丙氨酸(Phe(4-Cl))；2-氟苯丙氨酸(Phe(2-F))；3-氟苯丙氨酸(Phe(3-F))；4-氟苯丙氨酸(Phe(4-F))；青霉胺(Pen)；1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸(Tic)；β-2-噻吩丙氨酸(Thi)；蛋氨酸亚砜(MSO)；高精氨酸(hArg)；N-乙酰赖氨酸(AcLys)；2，4-二氨基丁酸(Dbu)；2，3-二氨基丁酸(Dba)；对-氨基苯丙氨酸(Phe(pNH2))；N-甲基缬氨酸；高半胱氨酸(hCys)、高苯丙氨酸(hPhe)和高丝氨酸(hSer)；羟脯氨酸(Hyp)、高脯氨酸(hPro)、N-甲基化氨基酸和类肽(N-取代甘氨酸)。

按照上文的种类定义对遗传编码的氨基酸和常见的非编码氨基酸进行的分类总结于下表Ⅲ。应了解的是，表Ⅲ的目的仅是为了起说明作用，而不是一份用于替代文中所述核心肽的氨基酸残基的详尽列表。此处没有特别提到的其它氨基酸残基则可基于其观测的物理性质和化学性质按文中的定义被轻易地分类。

                       表Ⅲ常见氨基酸的分类

分类	遗传编码的	非遗传编码的
			疏水性的芳香族	F、Y、W	Phg、Nal、Thi、Tic、Phe(4-Cl)、Phe(2-F)、Phe(3-F)、Phe(4-F)、hPhe
非极性	L、V、I、M、G、A、P	t-BuA、t-BuG、MeIle、Nle、MeVal、Cha、McGly、Aib
			脂肪族	A、V、L、I	b-Ala、Dpr、Aib、Aha、MeGly、t-BuA、t-BuG、MeIle、Cha、Nle、MeVal
亲水性的
			酸性碱性	D、EH、K、R	Dpr、Orn、hArg、Phe(p-NH2)、Dbu、Dab
极性螺旋阻断型	C、Q、N、S、TP、G	Cit、AcLys、MSO、bAla、hSerD-Pro和其它D-氨基酸(在L-肽中)

尽管在大多数实例中，结构式(Ⅰ)的核心肽中的氨基酸是被L-型氨基酸所替代，但该替代并不局限于L-型氨基酸。因此，“变异”形式或“变化”形式的定义还包括那些L-氨基酸被相同的D-氨基酸所替代(如，L-Arg→D-Arg)或被相同种类或亚类的氨基酸所替代(如，L-Arg→D-Lys)的情况以及相反的情况。事实上，在某些适合于以口服方式向动物研究对象给药的优选实施方案中的肽可能至少包含有一个有益的D-型氨基酸。与所含氨基酸全部为L-氨基酸的肽相比，这些含D-氨基酸的肽在口腔、肠道或血清的降解作用下可更加稳定。

如前所述，当L-肽的α-螺旋内部位置中包含有D-氨基酸时，会倾向于破坏α-螺旋的结构。此外还发现，结构式(Ⅰ)的核心肽的某些所含完全为D-氨基酸的变异形式在文中所述测试中显示的LCAT激活活性与所含完全为L-氨基酸的相同的肽相比要低得多。因此，内部L-氨基酸的替代不应采用D-氨基酸；D-氨基酸替代应局限于肽N-末端和／或C-末端的1-3位氨基酸残基。

如前所述，当肽内部位置中包含氨基酸Gly(G)时，Gly(G)通常会成为螺旋阻断残基。令人异常惊讶的是，该发明人发现，当内部氨基酸残基被Gly(G)替代时，尽管在没有脂类的情况下会破坏本发明所述核心肽的螺旋结构，但是这类包含Gly(G)的肽在有脂类参与的情况下仍显示出有效的螺旋结构和活性。例如，尽管第8号肽(序列标识号：8)在缓冲液中仅显示出20％的螺旋结构，但在脂类参与情况下可观测到61-93％的螺旋结构，而在有三氟乙醇(TFE)参与情况下可观测到93％的螺旋度。该肽在有TFE参与情况下的螺旋结构已得到了NMR的证实(见，下文，7．3．5节)。值得注意的是，该肽还显示出83％的LCAT激活活性。其它包含内部甘氨酸残基的核心肽显示的LCAT激活活性也都≥38％(例如，见下文，8．3节，表Ⅹ)。因此，尽管通常认为Gly(G)是一种螺旋阻断残基，但Gly(G)可被用来替代结构式(Ⅰ)的核心肽内部位置的氨基酸。优选而言，则只有位于该肽(尤其是包含的氨基酸数为偶数的肽)中心约±1螺旋圈范围内的内部残基可被Gly(G)替代。此外，优选方案为肽内只有一个内部氨基酸残基被Gly(G)所替代。本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂的包含内部甘氨酸的优选实施方案将于下文5．1．2节加以描述。

利用上文所述的氨基酸残基分类，并结合结构式(Ⅰ)的核心肽的Schiffer-Edmundson螺旋轮状和螺旋网状示意图以及文中对预期性质的详细描述，能够很容易地得到可基本保持两亲性和其它螺旋特性的结构式(Ⅰ)的核心肽的变化或变异形式，因此这些变化或变异形式也被认为处于本发明范围之内。

在本发明的优选实施方案中，结构式(Ⅰ)的核心肽的变化或变异形式是按照结构式(Ⅰ)确定亲水性和疏水性残基，并至少将一个不确定的残基用另一种氨基酸，优选的用相同种类或亚类的另一种氨基酸，替代而获得。也可确定碱性簇和／或疏水性簇所包含的残基并至少将一个不确定的残基替代。

在另一优选实施方案中，结构式(Ⅰ)的核心肽的变化或变异形式是按照结构式(Ⅰ)确定位于螺旋亲水表面范围内的亲水性氨基酸残基，并至少将一个不确定的氨基酸残基用另一种氨基酸，优选的用相同种类或亚类的另一种氨基酸残基，替代而获得。参照图2A可看到，第1、4、7、8、11、12、15、18、19和22位残基位于结构式(Ⅰ)的核心肽形成的两亲性螺旋的亲水表面范围内。在这些残基中，除第1位残基可以是亲水性残基或疏水性残基之外，其余均为亲水性残基。因此，在优选实施方案中，按照结构式(Ⅰ)确定第4、7、8、11、12、15、18、19和22位残基并至少将第2、3、5、6、9、10、13、14、16、17、20和21位残基之一用相同种类的另一种氨基酸替代，优选的用相同亚类的另一种氨基酸替代。作为选择，也可如上所述按照结构式(Ⅰ)确定第1位残基并至少将第2、3、5、6、9、10、13、14、16、17、20和21位残基之一替代。

在特定优选实施方案中，C-末端的碱性簇(第18、19、20和22位残基)也按照结构式(Ⅰ)被确定，并且只有第2、3、5、6、9、10、13、14、16、17和／或21位残基可被替代。

在另一特定优选实施方案中，疏水性簇也被确定，并且只有第2、5、13、14、16、17、20和／或21位残基可被替代。

在又一特定优选实施方案中，碱性簇和疏水性簇均被确定而只有第2、5、13、14、16、17和／或21位残基可被替代。

在本发明的另一优选实施方案中，本发明所述核心肽的变化或变异形式是通过确定位于螺旋疏水表面范围内的疏水性氨基酸残基，并至少将一个不确定的氨基酸残基用另一种氨基酸，优选的用相同种类或亚类的另一种氨基酸残基，替代而获得。

参照图2A可看到，第2、3、5、6、9、10、13、14、16、17、20和21位残基位于疏水表面范围内。在这些残基中，除第20位残基为亲水性残基之外，其余均为疏水性残基。因此，在优选实施方案中，按照结构式(Ⅰ)确定第2、3、5、6、9、10、13、14、16、17和21位残基并至少将第1、4、7、8、11、12、15、18、19、20和22位残基之一用另一种氨基酸残基替代，优选的用相同种类或亚类的另一种氨基酸替代。

在特定优选实施方案中，C-末端的碱性簇也被确定，并且只有第1、4、7、8、11、12和／或15位残基可被替代。

在另一实施方案中，结构式(Ⅰ)的肽的变化或变异形式是通过确定位于螺旋疏水表面或亲水表面范围内的所有氨基酸残基，并至少将一个位于其它表面的氨基酸残基用另一种氨基酸，优选的用保守的氨基酸残基，替代而获得。也可根据前文定义，按照结构式(Ⅰ)任意确定疏水性簇中包含的残基和／或碱性簇中包含的残基。

在本发明的另一实施方案中，结构式(Ⅰ)的变化或变异形式是通过至少将一个氨基酸用一种非保守的氨基酸替代而获得。具有该领域技能的专家都会承认，这种替代基本不会改变前文所述的螺旋两亲性性质和／或结构性质。因此，在某些实例中，将一对或多对氨基酸替代以保持螺旋的净属性或许是可取的。表Ⅹ所示肽序列可用于选择适当氨基酸替代的进一步指导(见，下文8．3节)。

在本发明的又一实施方案中，结构式(Ⅰ)的核心肽N-末端和／或C-末端前1-4位氨基酸残基被一种或多种据称能够赋予α-螺旋二级结构区域稳定性的氨基酸残基或肽段(“封端”(end-cap)残基或“封端”肽段)所替代。目前这类“封端”残基或“封端”肽段已为该领域所熟知(例如，见Richardson and Richardson，1988，Science240：1648-1652；Harper et al．，1993，Biochemistry32(30)：7605-7609；Dasgupta and Bell，1993，Int．J．PeptideProtein Res．41：499-511；Seale et al．，1994，Protein Science3：1741-1745；Doig et al．，1994，Biochemistry 33：3396-3403；Zhou et al．，1994，Proteins 18：1-7；Doig and Baldwin，1995，Protein Science 4：1325-1336；Odaert et al．，1995，Biochemistry 34：12820-12829；Petrukhov et al．，1996，Biochemistry 35：387-397；Doig et al．，1997，Protein Science6：147-155)。作为选择，结构式(Ⅰ)的N-末端和／或C-末端前1-4位氨基酸残基可被能够模拟封端残基或封端肽段的结构和／或特性的拟肽部分所替代。目前适当的封端模拟物已为该领域所熟知，例如对此加以描述的文献有Richardson and Richardson，1988，Science240：1648-1652；Harper et al．，1993，Biochemistry32(30)：7605-7609；Dasgupta and Bell，1993，Int．J．PeptideProtein Res．41：499-511；Seale et al．，1994，Protein Science3：1741-1745；Doig et al．，1994，Biochemistry 33：3396-3403；Zhou et al．，1994，Proteins 18：1-7；Doig and Baldwin，1995，Protein Science 4：1325-1336；Odaert et al．，1995，Biochemistry 34：12820-12829；Petrukhov et al．，1996，Biochemistry 35：387-397；Doig et al．，1997，Protein Science6：147-155。

尽管结构式(Ⅰ)包含22个特定氨基酸位置，但应了解的是，本发明所述核心肽所包含的氨基酸残基可少于22个。事实上，结构式(Ⅰ)的截短或内部缺失形式包含有18甚至15个氨基酸残基，这些氨基酸残基可基本保持结构式(Ⅰ)所述核心肽形成的两亲性螺旋的全部特征和性质，这些形式也被认为处于本发明范围之内。

结构式(Ⅰ)的肽的截短缺失形式是通过将结构式(Ⅰ)的N-末端和／或C-末端的一个或多个氨基酸去除而获得的。结构式(Ⅰ)的内部缺失形式是通过将结构式(Ⅰ)的肽内部位置的一个或多个氨基酸去除而获得的。去除的氨基酸残基可以是连续的，也可以是不连续的。

具有该领域技能的专家都会承认，从结构式(Ⅰ)的核心肽中去除内部氨基酸残基将导致靠近缺失部位的螺旋亲水-疏水交界面旋转100°。由于这种旋转能够显著改变螺旋产物的两亲性性质，因此在本发明的优选实施方案中，对氨基酸残基的去除要能够使亲水-疏水界面沿整个螺旋长轴的定位基本得以保持。

这一点可通过去除足够数量的连续或不连续氨基酸残基以使一整圈螺旋被去除的方法加以方便地实现。理想的α-螺旋每圈包含3．6个残基。因此，在优选实施方案中，3-4个连续或不连续氨基酸残基被成组地去除。是去除3个还是4个氨基酸则取决于要去除的第一个残基在螺旋中的位置。具有该领域技能的专家均能够很好地确定从两亲性螺旋特定起始位点开始构成一整圈螺旋的连续或不连续氨基酸残基的适当数量。

据推测，结构式(Ⅰ)的核心肽的C-末端碱性簇在稳定螺旋方面具有重要作用，而疏水性簇在实现脂类结合和LCAT激活方面具有重要作用，所以本发明优选实施方案中碱性簇和疏水性簇所包含的残基不被去除。因此，在优选实施方案中，第18、19、20和22位残基(碱性簇)以及第3、6、9和10位残基(疏水性簇)不被去除。

结构式(Ⅰ)的核心肽也可通过在一端或两端或内部加入基本不妨碍，在某些实施方案中甚至会增强，肽的结构和／或功能性质的氨基酸残基而被延长。事实上，包含23、25、26、29甚至更多个氨基酸残基的延长的核心肽也被认为处于本发明范围之内。优选而言，这些延长的肽将基本保持结构式(Ⅰ)的肽的两亲性性质和其它性质。当然，应该承认在内部加入氨基酸会类似于上述的内部缺失情况，导致靠近插入部位的螺旋亲水-疏水交界面旋转。因此，上文就内部缺失所考虑的事项也适用于内部增加的情况。

在一项实施方案中，核心肽在N-末端和／或C-末端至少延伸一个螺旋圈。优选而言，这种延伸在脂类参与下可稳定螺旋二级结构，类似于前文所述的封端氨基酸和封端肽段。

在特定优选实施方案中，结构式(Ⅰ)的核心肽在C-末端仅延伸一个碱性氨基酸残基，优选的为Lys(K)。当按此方式延伸时，优选的X₁为D-Pro(p)或Gly(G)；优选的X₂为Val(V)；优选的X₃为Leu(L)；优选的X₄为Asp(D)；优选的X₅为Leu(L)；优选的X₆为Phe(F)；优选的X₇为Arg(R)；优选的X₈为Glu(E)；优选的X₉为Leu(L)；优选的X₁₀为Leu(L)；优选的X₁₁为Asn(N)；优选的X₁₂为Glu(E)；优选的X₁₃为Leu(L)；优选的X₁₄为Leu(L)；优选的X₁₅为Glu(E)；优选的X₁₆为Ala(A)；优选的X₁₇为Leu(L)；优选的X₁₈为Lys(K)；优选的X₁₉为Gln(Q)；优选的X₂₀为Lys(K)；优选的X₂₁为Leu(L)；且／或优选的X₂₂为Lys(K)。

包括在本发明范围之内的还有ApoA-Ⅰ激动剂的“封闭”形式，即，N-末端和／或C-末端被一种能够与N-端-NH₂或C-端-C(O)OH反应的部分所封闭的ApoA-Ⅰ激动剂形式。现已发现，将包含18个或更少氨基酸残基的本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂的N-端和／或C-端电荷去除(通过合成N-酰化肽／酰胺／酯／酰肼／醇及其替代物)可导致激动剂的活性接近，在某些实施方案中甚至超出，未封闭形式激动剂的活性。在某些包含22个或更多氨基酸的实施方案中，N-端或C-端封闭会导致ApoA-Ⅰ激动剂显示出低于未封闭形式的活性。但将包含22个或更多氨基酸的ApoA-Ⅰ激动剂的N-端和C-端均封闭或许会使活性恢复。因此，在本发明的优选实施方案中，包含18个或更少氨基酸的核心肽的N-端和／或C-端(优选的为两端)被封闭，而包含22个或更多氨基酸的肽的N-端和C-端则均被封闭或均不封闭。典型的N-端封闭基团包括RC(O)-，其中R为-H、(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烯基、(C₁-C₆)炔基、(C₅-C₂₀)芳基、(C₆-C₂₆)烷芳基、5-20元杂芳基或6-26元烷杂芳基。优选的N-端封闭基团包括乙酰基、甲酰基和丹磺酰基。典型的C-端封闭基团包括-C(O)NRR和-C(O)OR，其中每个R各自独立，其定义如上文所述。优选的C-端封闭基团为每个R各自独立地为甲基的上述基团。尽管不希望受到任何特定原理的约束，但可认为这些末端封闭基团能够在脂类参与情况下稳定α-螺旋(例如，见Venkatachelapathi et al．，1993，PROTEINS：Structure，Functionand Genetics 15：349-359)。

ApoA-Ⅰ的天然结构中包含有八个螺旋单位，一般认为这些螺旋单位共同参与同脂类的结合(Nakagawa et al．，1985，J．Am．Chem．Soc．107：7087-7092；Anantharamaiah et al．，1985，J．Biol．Chem．260：10248-10262；Vanloo et al．，1991，J．Lipid Res．32：1253-1264；Mendez et al．，1994，J．Clin．Invest．94：1698-1705；Palgunari et al．，1996，Arterioscler．Thromb．Vasc．Biol．16：328-338；Demoor et al．，1996，Eur．J．Biochem．239：74-84)。因此，包含由文中所述核心肽形成的二聚体、三聚体、四聚体以及甚至更高级聚合物(“多聚物”)的ApoA-Ⅰ激动剂亦处于本发明范围之内。这些多聚物可采取串联重复、分支网络或二者相结合的形式。核心肽之间可直接相连，或是由一种或多种衔接物隔开。

构成多聚物的核心肽可以是结构式(Ⅰ)的肽、结构式(Ⅰ)的类似物、结构式(Ⅰ)的变异形式、结构式(Ⅰ)的截短或内部缺失形式、结构式(Ⅰ)的扩展形式和／或各种形式相结合。核心肽的连接方式可以是头对尾式(即，N-末端对C-末端)、头对头式(即，N-末端对N-末端)、尾对尾式(即，C-末端对C-末端)，或各种形式相结合。

在本发明的实施方案中，多聚物为两个、三个、四个以及多至大约十个核心肽的串联重复。优选而言，则多聚物为2-8个核心肽的串联重复。因此，在一个实施方案中，本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂包含具有如下结构式的多聚物：(Ⅱ)    HH{LL_m-HH}_nLL_m-HH其中：

每个m各自独立地为0-1的整数，优选为1；

n为0-10的整数，优选为0-8；

每个“HH”各自独立地代表结构式(Ⅰ)的核心肽或肽类似物或其文中所述的变异形式、截短缺失形式、内部缺失形式或扩展形式；

每个“LL”各自独立地代表一种衔接物；以及

每个“-”各自独立地指一种共价键。

在结构式(Ⅱ)中，衔接物LL可以是任意一种能够使两个肽相互共价连接的双功能分子。因此，其中的功能基团能够与肽的N-端和／或C-端相连接的双功能分子均可作为合适的衔接物。适合与肽的N-端或C-端连接的功能基团以及可导致这种共价键形成的适当化学物已为该领域所熟知。

衔接物可以是柔性的、刚性的或半刚性的，这取决于多聚物的预期性质。适当的衔接物包括，例如，Pro或Gly等氨基酸残基或大约包含2至5、10、15或20或更多氨基酸的肽段，双功能有机化合物如H₂N(CH₂)_nCOOH，其中n为1-12的整数，等等。这类衔接物的实例，以及这类衔接物和含有这类衔接物的肽的制备方法已为该领域所熟知(例如，见Hünig et al．，1974，Chem．Ber．100：3039-3044；Basak et al．，1994，Bioconjug．Chem．5(4)：301-305)。

在本发明的优选实施方案中，串联重复从内部被单个的脯氨酸残基打断。为此，在那些核心肽N-末端或C-末端终止于脯氨酸的实例中，例如结构式(Ⅰ)中的X1为Pro(P)或D-Pro(p)，结构式(Ⅱ)中优选的m为0。在那些核心肽不包含N-末端脯氨酸或C-末端脯氨酸的实例中，优选的LL为Pro(P)或D-Pro(p)，优选的m为1。

在本发明的某些实施方案中，可考虑采用那些在一定条件下能够使一个或多个螺旋段(HH)释放的可裂解型衔接物。适当的可裂解型衔接物包括，具有蛋白酶可识别的氨基酸序列的肽、可被核酸内切酶切断的寡核苷酸以及可通过化学方法，如在酸性、碱性或其它条件下，被切断的有机化合物。优选的裂解条件将是相对温和的，以便不会造成多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂中包含的螺旋段和／或非裂解型衔接物的变性或降解。

可选择性裂解的肽衔接物和寡核苷酸衔接物以及其裂解方法已为具有该领域技能的专家所熟知，或可容易理解，其中包括，例如在WO94／08051中所做的描述，以及本文中引用的参考资料。

优选实施方案中所采用的衔接物是可作为内源循环酶底物的肽，从而允许多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂在体内被选择性裂解。适用于裂解衔接物的内源酶包括，例如原载脂蛋白A-Ⅰ原肽酶。适当的酶以及充当该酶底物的肽段已为该领域所熟知(例如，见Edelstein et al．，1983，J．Biol．Chem．258：11430-11433；Zanis，1983，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 80：2574-2578)。

如上所述，本发明所述肽的关键特征是，当它们以反平行方式排列时能够形成分子间氢键或盐键。因此，在本发明的优选实施方案中采用具有足够长度和柔性的衔接物，以允许结构式(Ⅱ)的螺旋段(HH)以反平行方式排列，并在脂类参与情况下可形成分子间氢键或盐键。

具有足够长度和柔性的衔接物包括Pro(P)、Gly(G)、Cys-Cys、H₂N-(CH₂)_n-COOH其中n为1-12，优选的为4-6；H₂N-芳基-COOH以及碳水化合物，但并不局限于此。

作为选择，由于天然载脂蛋白的反平行螺旋段之间可协同结合，因此，在一级序列上与连接天然载脂蛋白邻近螺旋的肽段相符合的肽衔接物可方便地用于核心肽的连接，这些天然载脂蛋白包括，如ApoA-Ⅰ、apoA-Ⅱ、ApoA-Ⅳ、ApoC-Ⅰ、ApoC-Ⅱ、ApoC-Ⅲ、ApoD、ApoE和ApoJ等。这些序列已为该领域所熟知(例如，见Rosseneu etal．，“Analysis of the Primary and of the Secondary Structureof the Apolipoproteins，”In：Structure and Function ofLipoproteins，Ch．6，159-183，CRC Press，Inc．，1992)。

允许反平行螺旋段的串联重复之间形成分子间氢键或盐键的其它衔接物包括，肽反向转角，如β-转角和γ-转角，以及可模拟肽β-转角和／或γ-转角的结构的有机分子。反向转角通常是指将多肽链方向反转的肽段，它可使单条多肽链采用反平行β-折叠或反平行α-螺旋的结构区域。β-转角通常包含4个氨基酸残基，γ-转角则通常包含3个氨基酸残基。

目前该领域已对多种肽β-转角的构象和序列进行了详细描述，利用非限制性举例方法，则其中包括Ⅰ型、Ⅰ’型、Ⅱ型、Ⅱ’型、Ⅲ型、Ⅲ’型、Ⅳ型、Ⅴ型、Ⅴ’型、Ⅵa型、Ⅵb型、Ⅶ型和Ⅷ型(见，Richardson，1981，Adv．Protein Chem．34：167-339；Roseet al．，1985，Adv．Protein Chem．37：1-109；Wilmot et al．，1988，J．Mol．Biol．203：221-232；Sibanda et al．，1989，J．Mol．Biol．206：759-777；Tramontano et al．，1989，Proteins：Struct．Funct．Genet．6：382-394)。

β-转角等短肽转角的特定构象主要取决于某些氨基酸残基(通常为Gly、Asn或Pro)在转角中的位置。除Pro不能出现在第3位以外，Ⅰ型β-转角在转角的1-4位置可采用任意的氨基酸残基。Ⅰ和Ⅱ型转角的第4位主要为Gly，第2位主要为Pro、Asp、Asn、Ser和Cys残基则常出现在第1位，其侧链经常在此位置与第3位残基的NH形成氢键。

在Ⅱ型转角中，Gly和Asn最常出现在第3位，这是由于它们最容易采取所需的主链角度。在理想情况下，Ⅰ’型转角在第2和第3位上为Gly，Ⅱ’型转角则是第2位为Gly。通常大多数氨基酸残基都可包含在Ⅲ型转角内，但Ⅲ’型转角常需要第2和第3位是Gly。Ⅵa型和Ⅵb型转角经常具有一个顺式肽键，并且内部含有Pro残基。若读者需要回顾蛋白和肽中β-转角的不同类型和不同序列，可参考Wilmot et al．，1988，J．Mol．Biol．203：221-232。

目前该领域还对多种肽γ-转角的构象和序列进行了详细描述(例如，见Rose et al．，1985，Adv．Protein Chem．37：1-109；Wilmer-White et al．，1987，Trends Biochem．Sci．12：189-192；Wilmot et al．，1988，J．Mol．Biol．203：221-232；Sibanda et al．，1989，J．Mol．Biol．206：759-777；Tramontano et al．，1989，Proteins：Struct．Funct．Genet．6：382-394)。本发明对所有这些β-转角和γ-转角，以及后来发现的肽β-转角和γ-转角，的结构类型和其相应序列均加以明确考虑。

作为选择，衔接物(LL)可能包含有能够模拟肽β-转角或γ-转角结构的有机分子或部分。这种模拟β-转角和／或γ-转角的部分，以及含有该部分的肽的合成方法已为该领域所熟知，其中包括Giannis and Kolter，1993 Angew．Chem．Intl．Ed．Eng．32：1244-1267；Kahn et al．，1988，J．Molecular Recognition1：75-79；和Kahn et al．，1987，Tetrahedron Lett．28：1623-1626中所做的描述。

在本发明的又一实施方案中，多聚物以分支网络形式存在(例如，见图7)。利用能使两个以上的螺旋单位连接到单个连接部分上的多功能连接部分可方便地获得这些网络。因此，分支网络采用的分子可包含三个、四个甚至更多可与肽N-端和／或C-端共价结合的功能基团。适当的连接部分包括，例如，侧链中含有羟基、巯基(sulfanyl)、氨基、羧基、酰胺和／或酯功能基团的氨基酸残基，例如Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)、Lys(K)、Arg(R)、Orn、Asp(D)和Glu(E)；或其它包含有这种功能基团的有机分子。

与单个连接部分相连的螺旋段无需通过相同的末端来连接。事实上，某些实施方案中的螺旋段与单个连接部分相连而使其按反平行方式排列，即一些螺旋通过其N-末端连接，其它则通过C-末端连接。

螺旋段可直接与连接部分相连接，或如前所述，由一个或多个双功能衔接物(LL)隔开。

参照图7A和7B可看到，分支网络可根据构成该网络的“结点”数目来加以描述。在图7A和7B中，螺旋段(即，本发明所述核心肽)以圆柱体表示，多功能连接部分(或结点)以圆(●)表示，由圆所发出的线条数量表明多功能连接部分的“级”(或功能基团的数量)。

网络中结点的数量一般取决于螺旋段的预期总量，典型的约为1-2。当然，应意识到对于特定数量的预期螺旋段而言，具有更高级数连接部分的网络所具有的结点将更少。例如，参照图7A和7B，7个螺旋单位的三级网络(即，具有三功能连接部分的网络)有3个结点(图7A)，而7个螺旋单位的四级网络(即，具有四功能连接部分的网络)仅有两个结点(图7B)。

这些网络可以级数统一，即其中的所有结点均为，例如三功能连接部分或四功能连接部分的网络，也可以是混合级数，即其中的结点为，例如三功能连接部分和四功能连接部分混合的网络。当然，应该了解的是，甚至统一级数的网络中的连接部分也不必完全相同。例如，三级网络可采用两种、三种、四种甚至多种不同的三功能连接部分。

与线性多聚物相同，分支网络所包含的螺旋段可以完全相同，但并非必须如此。

图7c显示这种混合分支网络的实例。在图7c中，螺旋段(即本发明所述核心肽)以圆柱体表示，多功能连接部分以圆(●)表示，由圆所发出的线条数量表明多功能连接部分的“级”(或功能基团数量)。连接螺旋段的线条代表前文所述的双功能衔接物LL。如前文所述，组成分支网络的螺旋段可以是核心肽的串联重复。

在说明性的实施方案中，本发明的分支网络的描述可采用公式：其中：每个X各自独立地为HH-(LL_m-HH)_n-LL_m-HH；每个HH各自独立地为结构式(Ⅰ)的核心肽或类似物或其变异形式、截短缺失形式、内部缺失形式或扩展形式，如文中所述；

每个LL各自独立地为一种双功能衔接物；

每个m各自独立地为0-1的整数；

每个n各自独立地为0-8的整数；

N_ya和N_yb各自独立地为一种多功能连接部分，其中y_a和y_b分别代表N_ya和N_yb上的功能基团数；

每个y_a和y_b各自独立地为3-8的整数；

p为0-7的整数；以及

每个“-”各自独立地指一种共价键。

在一个优选实施方案中，分支网络包含一种“Lys-树”，即其中的多功能连接部分为一个或多个Lys(K)残基的网络(例如，见图7D)。

在说明性的实施方案中，本发明的“Lys树”分支网络的描述可采用公式：

其中：每个X各自独立地为

每个HH各自独立地为结构式(Ⅰ)的核心肽或类似物或其变异形式、截短缺失形式、内部缺失形式或扩展形式，如文中所述；

每个LL各自独立地为一种双功能衔接物；

每个n各自独立地为0-8的整数；

每个m各自独立地为0-1的整数；

R₁为-OR或-NRR；以及

每个R各自独立地为-H、(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烯基、(C₁-C₆)炔基；(C₅-C₂₀)芳基(C₆-C₂₈)烷芳基、5-20元杂芳基或6-26元烷杂芳基。

5．1．1．结构与功能分析为选择具有活性的ApoA-Ⅰ激动剂或模拟物，可对本发明所述核心肽或肽类似物，以及包含这类核心肽的ApoA-Ⅰ激动剂，包括上述的多聚体形式，的结构与功能进行测试。例如，可测定核心肽或肽类似物在脂类参与情况下形成α-螺旋的能力，与脂类结合的能力，与脂类形成复合物的能力，激活LCAT的能力，提高胆固醇外流的能力，等等。

肽的结构和／或功能的分析方法和测试方法已为该领域所熟知。下文操作实例中给出优选的方法。例如，下文第7节所述圆二色(CD)和核磁共振(NMR)测定法可用于分析肽或肽类似物的结构--尤其是在脂类参与情况下的螺旋度。使用下文第7节所述荧光光谱测定法可确定与脂类结合的能力。使用下文第8节所述LCAT激活测试法可容易地确定肽和／或肽类似物激活LCAT的能力。下文第9、10和11节所述体外和体内测定法可用来评价半寿期、分布、胆固醇外流以及对RCT的影响。

具有下表Ⅳ所列性质的本发明所述核心肽和／或肽类似物通常被认为是有活性的。

表Ⅳ活性肽的性质

	范围	优选范围
			在脂类参与情况下的螺旋度百分数(Ri=30)(未封闭的22氨基酸残基肽)	≥60％	≥80％
在脂类参与情况下的螺旋度百分数(Ri=30)(未封闭的18氨基酸残基肽)	≥40％	≥60％
			在脂类参与情况下的螺旋度百分数(Ri=30)(封闭的18氨基酸残基肽和更短的肽)	≥60％	≥80％
脂类结合(SUVs参与情况下)	0．5-10μM肽Ri=1-50
			LCAT激活活性	≥38％	≥80％

R_i为脂：肽摩尔比率

如下文操作实例所示，显示高LCAT激活活性(≥38％)的核心肽在脂类单层小泡(SUVs)参与的情况下通常会具有显著的α-螺旋结构(在包含22个或更多氨基酸残基的未封闭肽情况下以及包含18个或更少氨基酸残基的封闭肽情况下的螺旋结构≥60％，在包含18个或更少氨基酸残基的未封闭肽情况下的螺旋结构≥40％)，而那些显示极小或不显示LCAT激活活性的肽则具有极少的α-螺旋结构。但在某些实例中，在脂类参与情况下具有明显螺旋结构的肽却不产生显著的LCAT激活活性。

与此类似，具有显著LCAT激活活性的肽通常能够与脂类结合，但在某些实例中，具有脂类结合能力的肽却不产生显著的LCAT激活活性。

因此，具有该领域技能的专家都会承认，尽管文中所述核心肽形成α-螺旋(在脂类参与情况下)的能力和脂类结合能力对活性而言至关重要，但在许多实例中，这些性质或许还不充分。因此，在优选实施方案中，本发明所述核心肽须经过一系列筛选，以选出具有显著药理学活性的核心肽。

第一步，利用下文第7节所述CD测定法针对核心肽在脂类参与情况下形成α-螺旋的能力对其进行筛选。然后利用下文第7节所述荧光测定法对那些在脂类参与情况下至少40％为螺旋(包含18个或更少氨基酸的未封闭肽)或60％为螺旋(包含18个或更少氨基酸的封闭肽；包含22个或更多氨基酸的未封闭肽)的肽(浓度约5μM，脂∶肽的摩尔比约为30)进行针对其与脂类结合能力的筛选。当然，只有那些包含发荧光的Trp(W)或Nal残基的肽才可针对其脂类结合能力利用荧光进行筛选。但是，对那些不包含发荧光残基的肽而言，如果在脂类参与情况下螺旋度增加，则显然表明其能够与脂类结合。

然后对在SUVs参与情况下具有与脂类结合能力的核心肽(0．5-10μM肽；脂∶肽的摩尔比范围为1-50)进行药理学活性筛选。当然，筛选所针对的药理学活性将取决于ApoA-Ⅰ激动剂的预期用途。在优选实施方案中，针对核心肽的LCAT激活能力对其进行筛选，这是因为文中所述方法对可激活LCAT的肽尤其有效。与天然人类ApoA-Ⅰ相比，至少显示出约38％的LCAT激活活性的核心肽(利用下文第8节所述LCAT激活活性测试法测定)为优选的核心肽，特别优选的核心肽则可显示50％、60％、70％、80％甚至90％或更高的LCAT激活活性。

5．1．2．优选实施方案

利用优选实施方案可对本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂作进一步地定义。

在一项优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式。

在另一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X₇为碱性氨基酸、Asn(N)或Glu(E)；X₈为酸性氨基酸或Arg(R)；X₁₂为酸性氨基酸或Asn(N)；且／或X₁₅为酸性氨基酸、Gln(Q)或Lys(K)；而X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₉、X₁₀、X₁₁、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀和X₂₁与前文定义的结构式(Ⅰ)相同。

在另一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中：

X₁为Pro(P)、Gly(G)、Ala(A)、Gln(Q)、Asn(N)、Asp(D)或D-Pro(p)；

X₂为Ala(A)、Val(V)或Leu(L)；

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₇为Lys(K)、Arg(R)、Orn、Asn(N)或Glu(E)；

X₈为Asp(D)、Arg(R)或Glu(E)；

X₁₁为Asn(N)、Gln(Q)、Glu(E)或Arg(R)；

X₁₂为Asp(D)、Glu(E)或Asn(N)；

X₁₃为Leu(L)、Gly(G)或Aib；

X₁₅为Asp(D)、Glu(E)、Gln(Q)或Lys(K)；

X₁₆为Ala(A)、Trp(W)、Gly(G)、Leu(L)、Phe(F)或Nal；

X₁₇为Leu(L)、Gly(G)或Nal；

X₁₈为Lys(K)、Orn、Gln(Q)或Asn(N)；

X₁₉为Lys(K)、Orn、Gln(Q)或Asn(N)；

X₂₀为Lys(K)或Orn；

X₂₁为Leu(L)；且／或

X₂₂为Lys(K)或Orn，而X₃、X₅、X₆、X₉、X₁₀和X₁₄则与前文定义的结构式(Ⅰ)相同。

符合本发明该方面的更多优选实施方案为：

X₂为Val(V)；

X₃为Leu(L)；

X₅为Leu(L)；

X₆为Phe(F)；

X₇为Arg(R)或Lys(K)；

X₈为Glu(E)；

X₉为Leu(L)；

X₁₀为Leu(L)；

X₁₁为Asn(N)或Gln(Q)；

X₁₂为Glu(E)；且／或

X₁₅为Glu(E)；

而X₁、X₄、X₁₃、X₁₄、X₁₆、 X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀、X₂₁和X₂₂与前文定义的结构式(Ⅰ)相同或与前一段落的定义相同的肽。

在另一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中只有X₁₈或X₁₉之一为碱性氨基酸，而X₁₈或X₁₉中的另一个为Gln(Q)或Asn(N)。

在另一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X₁₈或X₁₉之一为Lys(K)或Orn，而X₁₈或X₁₉中的另一个为Gln(Q)或Asn(N)。

在又一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇之一为Gly(G)，其余为除Gly(G)以外的残基。

在又一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X₁₃为Gly(G)，而X₉、X₁₀、X₁₄、X₁₆、X₁₇各自均为除Gly(G)以外的残基。

在又一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中：

X₁为Pro(P)、Gly(G)或D-Pro(p)；

X₂为Val(V)；

X₃为Leu(L)；

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₅为L(Leu)或Phe(F)；

X₆为Phe(F)；

X₇为Arg(R)；

X₈为Glu(E)；

X₉为Leu(L)；

X₁₀为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₁为Asn(N)；

X₁₂为Glu(E)；

X₁₃为Gly(G)；

X₁₄为Leu(L)；

X₁₅为Glu(E)；

X₁₆为Ala(A)或Trp(W)；

X₁₇为Leu(L)或Nal；

X₁₈为Lys(K)或Orn；

X₁₉为Gln(Q)；

X₂₀为Lys(K)或Orn；

X₂₁为Leu(L)；以及

X₂₂为Lys(K)或Orn。

符合本发明该方面的特别优选ApoA-Ⅰ激动剂的选择组合包括：

第3号肽PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：3)；

第13号肽GVLDLFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：13)；

第19号肽PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：19)；

第137号肽PVLDLFRELLNEGLEAZKQKLK(序列识别号：137)；

第138号肽PVLDLFRELLNEGLEWLKQKLK(序列识别号：138)；

第139号肽PVLDLFRELWNEGLEALKQKLK(序列识别号：139)；

第140号肽PVLDLFRELLNEGLEALOQOLO(序列识另号：140)；

第141号肽PVLDFFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：141)；

第142号肽PVLELFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：142)；

和其C-端酰胺化或酯化形式和／或N-端酰化形式。

在另一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X₉为Gly(G)，而X₁₀、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇各自均为除Gly(G)以外的残基。符合本发明该方面的特别优选ApoA-Ⅰ激动剂为第20号肽：PVLDLFREGLNELLEALKQKLK(序列识别号：20)。

在另一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X₁₀为Gly(G)，而X₉、X₁₀、X₁₄、X₁₆、X₁₇各自均为除Gly(G)以外的残基。符合本发明该方面的特别优选ApoA-Ⅰ激动剂为第9号肽：PVLDLFRELGNELLEALKQKLK(序列识别号：9)。

在另一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X₁₄为Gly(G)，而X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₆、X₁₇各自均为除Gly(G)以外的残基。符合本发明该方面的特另优选ApoA-Ⅰ激动剂为第126号肽：PVLDLFRELLNELGEALKQKLK(序列识别号：126)。

在另一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X₁₆为Gly(G)，而X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄、X₁₇各自均为除Gly(G)以外的残基。符合本发明该方面的特别优选ApoA-Ⅰ激动剂为第22号肽：PVLDLFRELLNELLEGLKQKLK(序列识别号：22)。

在另一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X₁₇为Gly(G)，而X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄和X₁₆各自均为除Gly(G)以外的残基。符合本发明该方面的特别优选ApoA-Ⅰ激动剂为第12号肽：PVLDLFRELLNELLEAGKQKLK(序列识别号：12)。

利用片段缩合的方法能够很容易地高产量合成包含内部甘氨酸残基的实施方案，从而为大规模生产提供了重要的有利条件。片段缩合，即将小肽链组成部分连接起来形成更长的肽链，已用于多种生物活性肽的制备，其中包括ApoA-Ⅰ的44氨基酸残基模拟物(例如，见Nakagawa et al．，1985，J．Am．Chem．Soc．107：7087-7083；Nokihara et al．，1989，Peptides 1988：166-168；Kneib-Cordonnier et al．，1990，Int．J．Pept．Protein Res．35：527-538)，并且被认为是用于本发明所述核心肽的高产批量合成的费用最低廉的方法。

通过片段缩合进行合成的优点包括，能够在液相中将预形成的片段浓缩以及终产物易于纯化。该方法的缺点包括，缩合步骤的偶合效率及产量较低以及某些肽序列的溶解度较低。

通过增加偶合时间可显著提高缩合步骤的偶合效率。增加偶合时间通常会导致产物的外消旋作用提高(Sieber et al．，1970，Helv．Chim．Acta 53：2135-2150)。但由于甘氨酸缺乏手性中心，从而不会产生外消旋作用(由于位阻效应，脯氨酸残基在很长的结合时间内也不会或很少产生外消旋作用)。因此，利用甘氨酸不产生外消旋作用的事实而合成的组成片段可用来经片段缩合以高产率大批量生产包含内部甘氨酸残基的实施方案。所以说，包含内部甘氨酸残基的实施方案为大规模批量制备提供了重要的合成优势。

在又一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄、X₁₆和X₁₇各自均为除Gly(G)以外的残基。

在又一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式(Ⅰ)的22氨基酸残基肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中：

X₁为Pro(P)、Gly(G)、Ala(A)或D-Pro(p)；

X₂为Val(V)或Leu(L)；

X₃为Leu(L)；

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₅为L(Leu)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为Arg(R)或Lys(K)；

X₈为Glu(E)；

X₉为Leu(L)；

X₁₀为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₁为Asn(N)或Gln(Q)；

X₁₂为Glu(E)；

X₁₃为Leu(L)或Aib；

X₁₄为Leu(L)、Trp(W)或Nal；

X₁₅为Glu(E)；

X₁₆为Ala(A)、Leu(L)、Trp(W)或Nal；

X₁₇为Leu(L)或Nal；

X₁₈或X₁₉中一个为Gln(Q)而另一个为Lys(K)或Orn；

X₂₀为Lys(K)或Orn；

X₂₁为Leu(L)；以及

X₂₂为Lys(K)或Orn。

在符合本发明该方面的特别优选实施方案中，X₂为Val(V)；X₄为Asp(D)；X₅为Leu(L)；X₆为Phe(F)；X₇为Arg(R)；X₁₀为Leu(L)；X₁₁为Asn(N)；X₁₃为Leu(L)；X₁₄为Leu(L)；X₁₆为Ala(A)；X₁₇为Leu(L)；X₁₈为Lys(K)；X₁₉为Gln(Q)；X₂₀为Lys(K)且／或X₂₂为Lys(K)。

在另一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为结构式(Ⅰ)的肽的变化或变异形式，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中：

X₁为除Aib、Val(V)或Leu(L)以外的残基；

X₂为除D-Val(v)以外的残基；

X₅为除Lys(K)、Glu(E)、Trp(W)或Nal以外的残基；

X₆为除Trp(W)以外的残基；

X₇为除Trp(W)或Leu(L)以外的残基；

X₈为除Trp(W)以外的残基；

X₉为除Lys(K)或Trp(W)以外的残基；

X₁₁为除Trp(W)以外的残基；

X₁₂为除Trp(W)或Leu(L)以外的残基；

X₁₃为除Glu(E)或Trp(W)以外的残基；

X₁₅为除Trp(W)以外的残基；且／或

X₂₁为除Lys(K)以外的残基。

在又一优选实施方案中，本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂选自如下所列的肽的组合：

第1号肽PVLDLFRELLNELLEZLKQKLK(序列识别号：1)；

第2号肽GVLDLFRELLNELLEALKQKLKK(序列识别号：2)；

第3号肽PVLDLFRELLNELLEWLKQKLK(序列识别号：3)；

第4号肽PVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：4)；

第5号肽pVLDLFRELLNELLEALKQKLKK(序列识别号：5)；

第6号肽PVLDLFRELLNEXLEALKQKLK(序列识别号：6)；

第7号肽PVLDLFKELLNELLEALKQKLK(序列识别号：7)；

第8号肽PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：8)；

第9号肽PVLDLFRELGNELLEALKQKLK(序列识别号：9)；

第10号肽PVLDLFRELLNELLEAZKQKLK(序列识别号：10)；

第11号肽PVLDLFKELLQELLEALKQKLK(序列识别号：11)；

第12号肽PVLDLFRELLNELLEAGKQKLK(序列识别号：12)；

第13号肽GVLDLFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：13)；

第14号肽PVLDLFRELLNELLEALOQOLO(序列识别号：14)；

第15号肽PVLDLFRELWNELLEALKQKLK(序列识别号：15)；

第16号肽PVLDLLRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：16)；

第17号肽PVLELFKELLQELLEALKQKLK(序列识别号：17)；

第18号肽GVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：18)；

第19号肽pVLDLFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：19)；

第20号肽PVLDLFREGLNELLEALKQKLK(序列识别号：20)；

第21号肽pVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：21)；

第22号肽PVLDLFRELLNELLEGLKQKLK(序列识另号：22)；

第23号肽PLLELFKELLQELLEALKQKLK(序列识别号：23)；

第24号肽PVLDLFRELLNELLEALQKKLK(序列识另号：24)；

第25号肽PVLDFFRELLNEXLEALKQKLK(序列识别号：25)；

第26号肽PVLDLFRELLNELLELLKQKLK(序列识别号：26)；

第27号肽PVLDLFRELLNELZEALKQKLK(序列识别号：27)；

第28号肽PVLDLFRELLNELWEALKQKLK(序列识别号：28)；

第29号肽AVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：29)；

第123号肽QVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：123)；

第124号肽PVLDLFOELLNELLEALOQOLO(序列识别号：124)；

第125号肽NVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：125)；

第126号肽PVLDLFRELLNELGEALKQKLK(序列识别号：126)；

第127号肽PVLDLFRELLNELLELLKQKLK(序列识别号：127)；

第128号肽PVLDLFRELLNELLEFLKQKLK(序列识别号：128)；

第129号肽PVLELFNDLLRELLEALQKKLK(序列识别号：129)；

第130号肽PVLELFNDLLRELLEALKQKLK(序列识别号：130)；

第131号肽PVLELFKELLNELLDALRQKLK(序列识别号：131)；

第132号肽PVLDLFRELLENLLEALQKKLK(序列识别号：132)；

第133号肽PVLELFERLLEDLLQALNKKLK(序列识别号：133)；

第134号肽PVLELFERLLEDLLKALNQKLK(序列识别号：134)；

第135号肽DVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：135)；

第136号肽PALELFKDLLQELLEALKQKLK(序列识别号：136)；

第137号肽PVLDLFRELLNEGLEAZKQKLK(序列识别号：137)；

第138号肽PVLDLFRELLNEGLEWLKQKLK(序列识别号：138)；

第139号肽PVLDLFRELWNEGLEALKQKLK(序列识别号：139)；

第140号肽PVLDLFRELLNEGLEALOQOLO(序列识别号：140)；

第141号肽PVLDFFRELLNEGLEALKQKLK(序列识另号：141)；

第142号肽PVLELFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：142)；

和其N-端酰化(特别是乙酰化或丹磺酰化)形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X为Aib；Z为Nal；而O为Orn。

在另一优选实施方案中，本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂选自如下所列的肽的组合：

第1号肽PVLDLFRELLNELLEZLKQKLK(序列识别号：1)；

第2号肽GVLDLFRELLNELLEALKQKLKK(序列识另号：2)；

第3号肽PVLDLFRELLNELLEWLKQKLK(序列识别号：3)；

第4号肽PVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：4)；

第5号肽pVLDLFRELLNELLEALKQKLKK(序列识别号：5)；

第6号肽PVLDLFRELLNEXLEALKQKLK(序列识别号：6)；

第7号肽PVLDLFKELLNELLEALKQKLK(序列识别号：7)；

第8号肽PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：8)；

第9号肽PVLDLFRELGNELLEALKQKLK(序列识别号：9)；

第10号肽PVLDLFRELLNELLEAZKQKLK(序列识别号：10)；

第11号肽PVLDLFKELLQELLEALKQKLK(序列识别号：11)；

第12号肽PVLDLFRELLNELLEAGKQKLK(序列识别号：12)；

第13号肽GVLDLFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：13)；

第14号肽PVLDLFRELLNELLEALOQOLO(序列识别号：14)；

第15号肽PVLDLFRELWNELLEALKQKLK(序列识别号：15)；

第16号肽PVLDLLRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：16)；

第17号肽PVLELFKELLQELLEALKQKLK(序列识别号：17)；

第18号肽GVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：18)；

第19号肽pVLDLFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：19)；

第20号肽PVLDLFREGLNELLEALKQKLK(序列识别号：20)；

第21号肽pVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：21)；

第22号肽PVLDLFRELLNELLEGLKQKLK(序列识别号：22)；

第23号肽PLLELFKELLQELLEALKQKLK(序列识别号：23)；

第24号肽PVLDLFRELLNELLEALQKKLK(序列识别号：24)；

第25号肽PVLDFFRELLNEXLEALKQKLK(序列识别号：25)；

第26号肽PVLDLFRELLNELLELLKQKLK(序列识别号：26)；

第27号肽PVLDLFRELLNELZEALKQKLK(序列识别号：27)；

第28号肽PVLDLFRELLNELWEALKQKLK(序列识别号：28)；

第29号肽AVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：29)；

和其N-端酰化(特别是乙酰化或丹磺酰化)形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X为Aib；Z为Nal；而O为Orn。

在又一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂为符合结构式Ⅱ、Ⅲ和／或Ⅳ的多聚体形式，其中HH为符合结构式(Ⅰ)的肽，或其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，或任意的文中所述符合结构式(Ⅰ)的优选肽。

在又一优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂所包含的核心肽不是下列肽的任意一种：

第75号肽PVLDEFREKLNEELEALKQKLK(序列识别号：75)；

第94号肽PVLDEFREKLNEALEALKQKLK(序列识别号：94)；

第109号肽PVLDEFREKLNERLEALKQKLK(序列识别号：109)；

第237号肽LDDLLQKWAEAFNQLLKK    (序列识另号：237)；

第238号肽EWLKAFYEKVLEKLKELF*    (序列识别号：238)；

第241号肽DWFKAFYDKVFEKFKEFF    (序列识别号：241)；

第242号肽GIKKFLGSIWKFIKAFVG    (序列识别号：242)；

第243号肽DWFKAFYDKVAEKFKEAF    (序列识别号：243)；

第244号肽DWLKAFYDKVAEKLKEAF    (序列识别号：244)；

第245号肽DWLKAFYDKVFEKFKEFF    (序列识别号：245)；

第246号肽EWLEAFYKKVLEKLKELF    (序列识别号：246)；

第247号肽DWFKAFYDKFFEKFKEFF    (序列识别号：247)；

第248号肽EWLKAFYEKVLEKLKELF    (序列识别号：248)；

第249号肽EWLKAEYEKVEEKLKELF*    (序列识别号：249)；

第250号肽EWLKAEYEKVLEKLKELF*    (序列识别号：250)；以及

第251号肽EWLKAFYKKVLEKLKELF*    (序列识别号：251)。

在最后的优选实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂不是表Ⅹ(下文，8．3节)所列显示的LCAT激活活性与天然人类ApoA-Ⅰ相比低于38％的肽中的任意一种。

5．2 ApoA-Ⅰ肽类激动剂的合成与纯化

本发明所述核心肽实际上可采用任何已为该领域所熟知的肽制备技术加以制备。例如，该肽可采用传统的溶液或固相分段肽合成法或DNA重组技术加以制备。

5．2．1化学合成

核心肽的制备可采用传统的溶液或固相分段合成法(例如，见Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins．Williams et al．，Eds．，1997，CRC Press，Boca Raton Florida，以及文中引用的参考文献；Solid Phase Peptide Synthesis：A Practical Approach，Atherton & Sheppard，Eds．，1989，IRL Press，Oxford，England，以及文中引用的参考文献)。

作为选择，本发明所述肽可采用片段缩合法加以制备，例如可按Liu et al．，1996，Tetrahedron Lett．37(7)：933-936；Baca，etal．，1995，J．Am．Chem．Soc．117：1881-1887；Tam et al．，1995，Int．J．Peptide Protein Res．45：209-216；Schn_lzer and Kent，1992，Science 256：221-225；Liu and Tam，1994，J．Am．Chem．Soc．116(10)：4149-4153；Liu and Tam，1994，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 91：6584-6588；Yamashiro and Li，1988，Int．J．PeptideProtein Res．31：322-334中的描述进行。对包含甘氨酸的肽而言尤其如此。用于合成本发明所述肽的其它方法则在Nakagawa et al．，1985，J．Am．Chem．Soc．107：7087-7092中有所描述。

包含N-端和／或C-端封闭基团的ApoA-Ⅰ激动剂可采用有机化学的标准技术加以制备。例如，使一种肽的N-端酰化或使一种肽的C-端酰胺化或酯化方法已为该领域所熟知。在N-端和／或C-端施加其它修饰的方法，以及保护为连接末端封闭基团所必需的侧链功能团的方法对具有该领域技能的专家而言是显而易见的。

在药学上容许的盐类(抗衡离子)能够方便地通过离子交换层析或已为该领域所熟知的其它方法加以制备。

本发明所述以串联多聚体形式存在的组合物可方便地通过在适当合成步骤中将衔接物加入肽链来进行合成。作为选择，也可合成螺旋段且每段都与衔接物反应。当然，合成的具体方法取决于衔接物的组成。适当的保护方案和化学物已为具有该领域技能的专家所熟知，或对他们而言是显而易见的。

本发明所述以分支网络形式存在的复合物可利用三聚体树脂和四聚体树脂以及Tam，1988，Proc．Natl．Acad．Sci．USA85：5409-5413和Demoor et al．，1996，Eur．J．Biochem．239：74-84中描述的化学物加以方便地合成。合成树脂的修饰，以及更高级数或更低级数，或包含不同的核心肽螺旋段组合的分支网络的合成策略均完全处于具有肽化学和／或有机化学领域技能的专家所掌握的能力范围之内。

如果需要，通常可在温和氧化剂参与情况下形成二硫键。可使用化学氧化剂，或简单地将复合物暴露于空气中的氧来形成这些键。有多种不同的方法为该领域所熟知，其中包括，例如，在Tam et al．，1979，Synthesis 955-957；Stewart et al．，1984，Solid PhasePeptide Synthesis，2d Ed．，Pierce Chemical Company Rockford，IL；Ahmed et al．，1975，J．Biol．Chem．250：8477-8482；以及Pennington et al．，1991 Peptides 1990 164-166，Giralt andAndreu，Eds．，ESCOM Leiden，The Netherlands中所作的描述。其它的选择还有Kamber et al．，1980，Helv．Chim．Acta63：899-915中的描述。Albericio，1985，Int．J．Peptide ProteinRes．26：92-97对在固体支持物上的实现方法进行了描述。在本发明所述肽中形成二硫键可采用这些方法中的任意一种。

5．2．2重组合成

如果肽所含的氨基酸完全为基因编码的氨基酸，或其中的一部分完全为基因编码的氨基酸，则该肽或该相应部分也可采用传统的遗传工程重组技术加以合成。

进行重组生产需要将一段编码肽的多核苷酸序列插入适当表达载体，即包含了转录和翻译插入编码序列所必需的组件的载体，或在RNA病毒载体情况下为包含了复制和翻译所必需的组件的载体。然后将表达载体转染到用于表达肽的适当靶细胞中。然后按照所使用的表达载体，利用该领域沿用已久的步骤将表达的肽分离。重组蛋白和重组肽的生产方法已为该领域所熟知(例如，见Sambrood et al．，1989，Molecular Cloning A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory，N．Y．；以及Ausubel et al．，1989，Current Protocolsin Molecular Biology，Greene Publishing Associates and WileyInterscience，N．Y．各自全文引入以作参考)

若要提高生产效率，可将多聚核苷酸设计成编码多个肽单位，其间由酶切位点隔开-用这种方法既可设计共聚物(重复肽单位)也可设计杂聚物(不同的肽串接在一起)。为回收肽单位，可将合成的多肽切开(例如，用适当的酶处理)。这样可提高由单个启动子启动的肽的产量。在优选实施方案中，经操作将编码区各自与一种非末端依赖性翻译调控序列，如内部核糖体进入位点(IRES)，相连可设计出多顺反子性多聚核苷酸，使转录出的单条mRNA可编码多个肽(即，共聚物或杂聚物)。当在适当的病毒表达体系中使用时，可从转录子内部指导由mRNA编码的各种肽的翻译；例如通过IRES。因此，多顺反子结构可指导单一的多顺反子长mRNA的转录，进而可指导多个单肽的翻译。这种方法省去了多肽的生产和酶处理步骤，并且能够显著提高由单个启动子启动的肽的产量。

文中所述肽的表达可采用多种宿主表达载体系统。其中包括，经包含适当编码序列的噬菌体DNA或质粒DNA重组表达载体转化的诸如细菌等的微生物；经包含适当编码序列的酵母或真菌重组表达载体转化的酵母或丝状真菌；经包含适当编码序列的病毒重组表达载体(如，杆状病毒)转染的昆虫细胞体系；经包含适当编码序列的病毒重组表达载体(如，菜花样花叶病毒或烟草花叶病毒)转染或经包含适当编码序列的重组质粒表达载体(如，Ti质粒)转化的植物细胞体系；或动物细胞体系，但并不局限于此。

表达系统的表达元件在强度与特异性方面各不相同。根据所采用的宿主／载体系统的不同，可将多种适当的转录元件和翻译元件，如组成型和诱导型启动子，任意使用于表达载体中。例如，当在细菌体系中克隆时，可使用诸如λ噬菌体的pL、plac、ptrp、ptac(ptrp-lac杂交启动子)等诱导型启动子；当在昆虫细胞体系中克隆时，可使用多角体杆状病毒启动子等启动子；当在植物细胞体系中克隆时，可使用来源于植物细胞基因组的启动子(如，热休克启动子；用于RUBISCO小亚基的启动子；用于叶绿素a／b结合蛋白的启动子)或来源于植物病毒的启动子(如，CaMV的35S RNA启动子；TMV的外壳蛋白启动子)；当在哺乳动物细胞体系内克隆时，可使用来源于哺乳动物细胞基因组的启动子(如，金属硫蛋白启动子)或来源于哺乳动物病毒的启动子(如，腺病毒晚期启动子；痘苗病毒7．5K启动子)；当产生包含有多拷贝表达产物的细胞系时，可使用具有适当选择标记的基于SV40、BPV和EBV的载体。

在使用植物表达载体的情况下，可将多种启动子任意使用于本发明所述肽编码序列的表达。例如，可使用诸如CaMV的35S RNA和19SRNA启动子(Brisson et al．，1984，Nature 310：511-514)、或TMV的外壳蛋白启动子(Takamatsu et al．，1987，EMBO J．6：307-311)等病毒启动子；作为选择，也可使用诸如RUBISCO小亚基启动子(Coruzzi et al．，1984，EMBO J．3：1671-1680；Broglieet al．，1984，Science 224：838-843)或热休克启动子，如，大豆hsp17．5-E或hsp17．3-B(Gurley et al．，1986，Mol．Cell．Biol．6：559-565)等植物启动子。这些结构可通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、微注射、电穿孔等方法引入植物细胞。若需要回顾这些技术，可参考，例如，Weissbach & Weissbach，1988，Methods for Plant Molecular Biology，Academic Press，NY，Section Ⅷ，pp．421-463；以及Grierson & Corey，1988，PlantMolecular Biology，2d Ed．，Blackie，London，Ch．7-9。

在用于生产本发明所述肽的一种昆虫表达体系中，可将核型多角体病毒(AcNPV)Autographa Californica作为载体用于外源基因的表达。病毒在Spodoptera frugiperda细胞中增殖。编码序列可被克隆到病毒的非必需区域(如多角体基因)内并受AcNPV启动子(如，多角体启动子)的控制。编码序列的成功插入将导致多角体基因的失活并产生非包含型重组病毒(即，缺乏由多角体基因编码的蛋白质外壳的病毒)。然后用这些重组病毒转染Spodoptera frugiperda细胞，插入基因可在该细胞内表达(例如，见Smith et al．，1983，J．Virol．46：584；Smith，U．S．Patent No．4，215，051)。在CurrentProtocols in Molecular Biology，Vol．2，Ausubel et al．，eds．，Greene Publish．Assoc．& Wiley Interscience中可找到更多有关该表达系统的实例。

在哺乳动物宿主细胞内，可使用多种基于病毒的表达系统。在以腺病毒作为表达载体的情况下，可将编码序列与腺病毒转录／翻译调控复合物，如晚期启动子，相连接并将前导序列分为三部分。然后通过体外重组或体内重组将该嵌合基因插入到腺病毒基因组中。病毒基因组非必需区(如，E1区或E3区)内的插入将使重组病毒能够在转染的宿主细胞内存活并表达肽。(例如，见Logan & Shenk，1984，Proc．Natl．Acad．Sci．(USA)81：3655-3659)。作为选择，也可使用痘苗病毒的7．5K启动子，(例如，见Mackett et al．，1982，Proc．Natl．Acad．Sci．(USA)79：7415-7419；Mackett et al．，1984，J．Virol．49：857-864；Panicali et al．，1982，Proc．Natl．Acad．Sci．79：4927-4931)。

其它用于生产本发明所述肽的表达系统对具有该领域技能的专家而言将是显而易见的。

5．2．3肽的纯化

本发明所述肽可通过诸如反相层析、高效液相层析、离子交换层析、凝胶电泳、亲和层析等已为该领域所熟知的技术加以纯化。纯化特定肽所采用的实际条件将部分取决于合成策略以及诸如净电荷、疏水性、亲水性等因素，这些条件对具有该领域技能的专家而言将是显而易见的。分支状肽多聚物的纯化可采用，如离子交换层析或分子筛层析。

就亲和层析纯化而言，可使用任何能够与该肽特异结合的抗体。至于抗体的生成，可利用肽对多种不同的宿主动物，包括但并不局限于家兔、小鼠、大鼠等，进行免疫注射。借助侧链功能基团或与侧链功能基团相连接的衔接物，可将肽连接到如BSA等适当媒介物上。根据宿主的种类，可采用多种不同的佐剂来提高免疫应答，其中包括但并不局限于Freund’s(完全的和不完全的)、氢氧化铝等矿物质凝胶、溶血卵磷脂等表面活性物质、复合多元醇、多聚阴离子、油乳剂、钥孔_血兰素、二硝基苯酚，以及具有现在用途的人类佐剂如BCG(卡介苗)和Corynebacterium parvum。

肽单克隆抗体的制备可采用任何在培养基中连续培养细胞系以用于产生抗体分子的技术。其中包括但并不局限于最初由Kohler andMilstein，1975，Nature 256：495-497或在此作为引文被包括在内的Kaprowski，U．S．Patent No．4，376，110描述的杂交瘤技术；人类B-细胞杂交瘤技术(Kosbor et al．，1983，Immunology Today 4：72；Cote et al．，1983，Proc．Natl．Acad．Sci．U．S．A．80：2026-2030)；以及EBV-杂交瘤技术(Cole et la．，1985，MonoclonalAntibodies and Cancer Therapy，Alan R．Liss，Inc．，pp．77-96(1985))。此外，也可采用将具有适当抗原特异性的小鼠抗体分子的基因与具有适当生物活性的人类抗体分子的基因连接在一起用于“嵌合抗体”生产的技术(Morrison et al．，1984，Proc．Natl．Acad．Sci．U．S．A．81：6851-6855；Neuberger et al．，1984，Nature312：604-608；Takeda et al．，1985，Nature 314：452-454，Boss，U．S．Patent No．4，816，397；Cabilly，U．S．Patent No．4，816，567；均在此作为引文被包括在内)。或者可以制备“人源化”抗体(例如，见在此作为引文被包括在内的Queen，U．S．Patent No．5，585，089)。作为选择，也可采用单链抗体生产技术(U．S．PatentNo．4，946，778)来生产肽-特异性单链抗体。

通过已知技术还可产生特异结合位点缺失的抗体片段。例如，这些片段包括但并不局限于，由胃蛋白酶消化抗体分子而产生的F(ab’)2片段以及由F(ab’)2的二硫键还原而产生的Fab片段。作为选择，也可构建Fab表达库(Huse et al．，1989，Science 246：1275-1281)，它能够快速而容易地鉴定出对特定肽具有预期特异性的单克隆抗体的Fab片段。

可将预定肽的特异抗体或抗体片段连接到，如琼脂糖上，并将该抗体-琼脂糖复合物用于免疫层析以纯化本发明所述肽。参见Scopes，1984，Protein Purification：Principles and Practice，Springer-Verlag New York，Inc．，NY，Livingstone，1974，Methods In Enzymology：Immunoaffinity Chromatography ofProteins 34：723-731。

5．3药剂及治疗方法

本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂可用来治疗动物，尤其是包括人类在内的哺乳动物的任何病患，通过提高血清中HDL浓度、激活LCAT，以及提高胆固醇外流和RCT可有益于其治疗的病症。这些病症包括高脂血症，尤其是高胆固醇血症，以及心血管疾病如动脉粥样硬化(包括动脉粥样硬化的治疗和预防)；再狭窄(例如，由球囊血管形成术等医疗操作后产生的动脉粥样硬化斑块的预防和治疗)；以及可导致脓毒性休克的内毒素血症等其它病症，但并不局限于此。

ApoA-Ⅰ激动剂可单独使用或在综合疗法中与其它药物结合使用于上述病症的治疗。这些疗法包括所涉及药物的同时或依次给药，但并不局限于此。

例如在高胆固醇血症或动脉粥样硬化的治疗中，ApoA-Ⅰ激动剂制剂可与诸如胆汁酸树脂、烟酸和／或抑制素等目前所使用的任何一种或多种旨在降低胆固醇的疗法中进行给药。这种联合方案可能会具有非常有益的治疗效果，这是由于每种药物可作用于胆固醇合成和运输的不同环节；即，胆汁酸树脂可影响胆固醇循环、乳糜微粒和LDL群体；烟酸主要影响VLDL群体和LDL群体；抑制素则抑制胆固醇的合成，降低LDL数量(并可能增加LDL受体的表达)；而ApoA-Ⅰ激动剂可影响RCT、提高HDL、增加LCAT活性并且促进胆固醇外流。

在另一实施方案中，ApoA-Ⅰ激动剂可与fibrates连同使用于高脂血症、高胆固醇血症和／或动脉粥样硬化等心血管疾病的治疗。

在又一实施方案中，本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂可与目前所使用的抗微生物剂和消炎剂共同使用于由内毒素血症诱发的脓毒性休克的治疗。

本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂可按配方制备成肽类或肽-脂复合物类制剂，能够以多种方式向主体给药以把ApoA-Ⅰ激动剂引入循环。以下对典型的制剂和治疗方案加以描述。

5．3．1作为活性成分的ApoA-Ⅰ激动剂与肽／脂复合物

肽类ApoA-Ⅰ激动剂可利用第5．2节及其各小节描述的任何技术加以合成或制造。将肽冻干可制成保存期较长的稳定制品-可制备成重新配制的散装形式，也可制备成向主体给药之前用灭菌水或适当灭菌缓冲液进行再水合重构的个体等分试样或剂量单位形式。

在某些实施方案中，肽-脂复合物为优选的ApoA-Ⅰ激动剂药剂和给药形式。由于复合物在循环中具有较长的半寿期，尤其当复合物与HDL，特别是与前-β-1或前-β-2 HDL群体，的大小和密度相似时更加明显，因而该方法具有若干优点。肽-脂复合物可通过下述多种方法中的任意一种加以方便地制备。利用冻干法可制成保存期较长的稳定制品-优选方法则为下文所述的联合冻干法。冻干的肽-脂复合物可用来制备成药剂重新配制的散装形式，也可制备成向主体给药之前用灭菌水或适当灭菌缓冲液进行再水合重构的个体等分试样或剂量单位形式。

为具有该领域技能的专家所熟知的多种方法均可用于肽-脂小泡或复合物的制备。为此，可使用多种用于脂质体或脂蛋白体制备的技术。例如，可将肽与适当的脂共同超声处理(利用水浴超声仪或探针超声仪)以形成复合物。作为选择，也可将肽与预制的脂囊泡结合以自发形成肽-脂复合物。也可选择另一种方法，通过去污剂透析法形成肽-脂复合物；比如，将肽、脂类和去污剂混合物透析以去除去污剂并重构或形成肽-脂复合物(例如，见Jonas et al．，1986，Methodsin Enzymol．128：553-582)。

虽然上述方法确实可行，但就成本、产量、可重复性以及安全性而言各方法均具有自身的生产问题。该申请人研究出一种用来制备与HDL性质相类似的肽-磷脂或蛋白-磷脂复合物的简单方法。该方法可用于ApoA-Ⅰ肽-脂复合物的制备，并且具有以下优点：(1)所包含的组分大多或全部可用于形成指定的复合物，从而避免了原材料的浪费，而这种浪费在其它方法中却很常见。(2)可制成在储存期间非常稳定的冻干复合物。所得复合物可在使用前直接重构。(3)所得复合物在制成后和使用前通常无需进一步纯化。(4)可避免含有包括胆酸盐等去污剂在内的毒性化合物。此外，该生产方法能够很容易地按比例扩大，并适合于GMP加工(即，在无内毒素的环境中加工)。

按照优选方法，将肽和脂类混合加入一种能使各组分共溶，并可通过冻干法完全去除的溶剂系统中。为此，必须仔细选择双溶剂以确保两亲性肽和脂类的共溶。在实施方案中，可把要结合到微粒中的蛋白或肽溶解于水性溶剂或有机溶剂或混合溶剂(溶剂1)。将(磷)脂成分溶解于能够与溶剂l互溶的水性溶剂或有机溶剂或混合溶剂(溶剂2)，并将两种溶液混合。作为选择，也可将肽和脂混合加入一种共溶剂系统；即可互溶的溶剂的混合物。根据经验，首先确定肽(蛋白)与脂的适当比率，以使所得复合物具有适当的物理和化学特性；即在大小上通常(而非必须)与HDL相似。将所得混合物冻结并冷冻干燥。有时必须加入附加溶剂以使混合物易于冻干。该冻干产品可长期保存并将保持稳定。

在下文所述操作实例中，第4号肽(序列标识号：4)与磷脂被分别溶解于甲醇并混合，然后在冻干前与二甲苯混合。也可将肽和脂一同加入这两种溶剂的混合溶剂中。作为选择，还可将溶解于甲醇的肽溶液与溶解于二甲苯的脂溶液相混合。为避免出现肽的盐析，应注意去除溶剂系统中的盐类。将含有共溶于甲醇／二甲苯的肽和脂的溶液冻干成粉末。

为获得肽-脂复合物溶液或悬液，可将冻干产品重构。为此，用水溶液将冻干粉末重新水化至适当体积(通常为5mgs肽／ml，便于静脉注射)。在优选实施方案中，用磷酸缓冲盐溶液或生理盐水将冻干粉末重新水化。为促进水化，可能需要搅拌或摇动混合物，多数情况下应该在等于或高于复合物脂类组分相变温度的温度下进行重构步骤。只需几分钟即可得到澄清的脂-蛋白复合物重构制剂。

所得重构制剂试样的特征在于可确定制剂中的复合物具有预期的粒度分布；如，HDL的粒度分布。为此，可采用凝胶过滤层析。下文所述操作实例中采用的是Pharmacia Superose 6 HPLC凝胶过滤层析系统。所使用的缓冲液为含有150mM NaCl的50mM磷酸缓冲液，pH7．4。标准的样品体积为20-200微升复合物，其中含5mgs肽／ml。柱流速为0．5mls／min。一系列已知分子量和Stokes半径的蛋白以及人类HDL作为标准用于柱的校准。蛋白和脂蛋白通过254或280nm下的吸光度或光散射加以监测。

本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂可与多种脂类形成复合物，其中包括饱和脂类、不饱和脂类、天然脂类和合成脂类及／或磷脂。适当的脂类包括短烷基链磷脂、卵磷脂酰胆碱、大豆磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-硬脂酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、鞘脂类、磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、脑磷脂酰丝氨酸、脑鞘磷脂、二棕榈酰鞘磷脂、二硬脂酰鞘磷脂、磷脂酸、半乳糖脑苷脂、神经节苷脂、脑苷脂类、二月桂酰磷脂酰胆碱、(1，3)-D-甘露糖基-(1，3)二甘油酯、氨苯基糖苷、3-胆甾醇基-6’-(硫代糖基)己基醚糖脂类、以及胆固醇和其衍生物，但并不局限于此。

该发明人发现，当本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂与鞘磷脂复合时，前-β-样微粒中所有的HDL均被去除。因此，在本发明的优选实施方案中，以ApoA-Ⅰ激动剂和鞘磷脂的复合物形式给药。

5．3．2治疗方法

本发明所述肽类或肽-脂复合物类ApoA-Ⅰ激动剂可通过任何能够确保在循环中生物利用度的适当途径加以给药。其最佳实现方式是通过非肠道途径给药，其中包括静脉内注射(IV)、肌内注射(IM)、皮内注射、皮下注射(SC)和腹腔内注射(IP)。但也可采用其它途径给药。例如，若采用适当制剂(如，肠溶衣)以使活性成分，如在口腔粘膜、胃和／或小肠等苛刻环境下，的降解得以避免或最小化，则通过口腔途径给药(包括但并不局限于口服方式、口腔粘膜方式和舌下方式)也可以实现胃肠道吸收。作为选择，也可使用如阴道给药和直肠给药等通过粘膜组织给药的方式以避免胃肠道降解或使之最小化。作为另一选择，本发明所述制剂也可经皮(如经皮肤)给药，或通过吸入给药。应该意识到优选方法可能随接受者的状况、年龄和顺应性的不同而变化。

所用ApoA-Ⅰ激动剂或肽-脂复合物的实际剂量将随给药方式的不同而不同，并且应调整至在循环血浆中的浓度为100mg／1-2g／l。由文中所述动物模型系统获得的数据表明，本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂与HDL组分相联系，并且预计在人体内的半寿期约为5天。因此，实施方案中ApoA-Ⅰ激动剂的给药可为每周一次，注射剂量0．5mg／kg-100mg／kg。在另一实施方案中，也可通过约0．5mg／kg／hr-100mg／kg／hr的连续输液或间歇输液来维持预定的血清水平。

不同ApoA-Ⅰ激动剂的毒性和疗效的确定可利用标准药学过程通过细胞培养或实验动物来确定LD₅₀(半数致死剂量)和ED₅₀(半数有效剂量)。毒性与疗效的剂量比为治疗指数，可用比率LD₅₀／ED₅₀表示。优选的为具有高治疗指数的肽类ApoA-Ⅰ激动剂。

5．3．3药剂

本发明所述药剂包括作为活性成分包含在适于体内给药及体内释放的药学上容许的载体内的ApoA-Ⅰ肽激动剂或肽-脂复合物。由于这些肽可能包含酸性和／或碱性的末端和／或侧链，因此能够以游离酸或游离碱形式，或以药学上容许的盐形式包含于制剂中。

注射制剂包括活性成分在水性或油性载体中的无菌混悬液、溶液或乳剂。其组成可能还包括诸如悬浮剂、稳定剂和／或分散剂等配制剂。注射制剂能够以单位剂量形式提供，如置于安瓿容器或多剂量容器中，并且可能含有添加的防腐剂。

作为选择，提供的注射制剂也可以是粉末形式，在使用前用适当载体，包括但并不局限于无菌无热原的水、缓冲液、葡萄糖溶液等，进行重构。为此，可将ApoA-Ⅰ激动剂冻干，或利用联合冻干法制备肽-脂复合物。储存制剂可以单位剂量形式提供并在体内使用前重构。

就长期供应而言，可将活性成分制成长效制剂以用于植入给药；如皮下注射、皮内注射或肌内注射。因此，例如可采用适当的聚合材料或疏水材料(如，在容许的油中形成乳剂)或离子交换树脂来配制活性成分，或将其制成微溶衍生物；如ApoA-Ⅰ激动剂的微溶盐形式。

作为选择，也可使用经皮释放系统，该系统可制成缓慢释放经皮吸收活性成分的吸附性盘片。为此，可使用促渗透剂以促进活性成分的经皮透入。通过将本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂或肽-脂复合物并入硝酸甘油片以用于缺血性心脏病和高胆固醇血症患者可获得独特的效果。

就口服给药而言，药物成分可采用由药学上容许的赋形剂经常规方法制备的片剂或胶囊形式，赋形剂包括粘合剂(如，预凝胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填料(如，乳糖、微晶体纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(如，硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂(如，马铃薯淀粉或淀粉羟基乙酸钠)；或湿润剂(如，月桂硫酸钠)。通过该领域熟知的方法可将片剂加上糖衣。用于口服给药的脂类制剂可采用，例如溶液、糖浆或悬浮液的形式，或以干制品方式提供，在使用前用水或其它适当载体重构。这些脂类制剂可由药学上容许的添加剂通过常规方法加以制备，添加剂包括悬浮剂(如，山梨醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂)；乳化剂(如，卵磷脂或阿拉伯胶)；非水性载体(如，杏仁油、油性酯、乙醇或分馏的植物油)；以及防腐剂(如，对甲基羟基苯甲酸盐或对丙基羟基苯甲酸盐或山梨酸)。制剂中可能还适当含有缓冲盐、调味剂、着色剂和甜味剂。口服给药的制剂可经适当配制使活性组合物受控释放。

就口腔粘膜给药而言，各成分可按传统配制方式采用片剂或药糖块形式。就直肠和阴道途径给药而言，活性成分可被制成溶液(用于潴留灌肠)、栓剂或软膏形式。

就吸入方式给药而言，利用适当的发射剂，如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适当气体，制成由气压式包装或喷雾器喷射的形式可方便地提供活性成分。就气压式喷雾剂而言，剂量单位的确定可通过提供一种能够计量喷射量的阀门加以实现。配制的用于吸入器或吹药器的如明胶胶囊和明胶筒中可包含有组合物与诸如乳糖或淀粉等适当粉基组成的混合粉末。

如果愿意，也能够以包含一单位或多单位剂量的包装或分样装置形式提供含活性成分的各组分。该包装可具有，例如金属薄片或塑料薄膜，如薄膜包装即属于该类型。该包装或分样装置可附有给药说明。

5．4其它用途

本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂可用于，例如出于诊断目的的体外测量血清HDL的测试。由于ApoA-Ⅰ激动剂与血清中的HDL相联系，因此可将该激动剂用作HDL群体的“标记物”。此外，也可将该激动剂用作在RCT中发挥效用的HDL亚群体的标记物。为此，可将该激动剂加入患者的血清样品或与之混合；经过适当时间的保温，可通过检测加入的ApoA-Ⅰ激动剂来测试HDL的组成。利用标记的激动剂(例如，放射性标记、荧光标记、酶标记、染料等)，或利用该激动剂的特异抗体(或抗体片段)经免疫测试可实现这一点。

作为选择，也可将标记的激动剂用于成像操作(如，CAT扫描、MRI扫描)来显现循环系统，或用于RCT监测，或显现HDL在脂肪纹、动脉粥样硬化性病变等中的积累(其中HDL在胆固醇外流方面应起积极作用)。

6．实施例：ApoA-Ⅰ肽激动剂的合成

以下各小节将叙述表Ⅹ(下文，第8．3节)所列各种肽的合成与特性。下文第7和第8小节还将对这些肽的结构分析与功能分析加以描述。

6．1核心肽的合成

肽在固相上的合成是按照Merrifield技术(Merrifield，1969，J．Am．Chem．Soc．85：2149-2154)使用0．25mmol ρ-烷氧基苄醇树脂(HMP树脂)(Wang，1973，J．Am．Chem．Soc．95：1328-1333)和Fmoc化学物。所有合成过程的实现均利用Applied Biosystems ABI的430A型肽自动合成仪(Perkin-Elmer，Foster City，CA)。每个耦合循环所使用的溶解时间和活化时间如下表Ⅴ所示：

表Ⅴ单次活化剂耦合循环

循环名称	特定氨基酸	溶解溶剂	时间	活化时间	转移时间*
						afmc31	Asn(trt)，His(trt)，Lys(Boc)，Trp	～0．4ml DCM～1．2ml NMP～1．0mlHOBt／NMP	～7分钟	～51分钟	1=50秒2=36秒
afmc32	Arg(Pmc)，Gln(trt)，Aib	～0．8ml DCM～1．2ml NMP～1．0mlHOBt／NMP	～32分钟	～51分钟	1=60秒2=40秒
						afmc33	Ala，    Asp(OtBu)， Glu(OtBu)，Gly，    Ile，Leu，    Met，Phe，    Pro	～0．4ml DCM～0．8ml NMP～0．1mlHOBt／NMP	～4分钟	～36．5分钟	1=38秒2=27秒
afmc34	Val	～0．4ml DCM～0．8ml NMP～0．1mlHOBt／NMP	～4分钟	～61．5分钟	1=38秒2=27秒
						*1=从筒转至活化剂2=从活化剂转至筒
DCC为二环己基碳二亚胺    BOC为叔丁氧羰基HOBt为1-羟基苯并三唑     Pmc为五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基NMP为N-甲基吡咯烷酮      OtBu为叔丁基酯trt为三苯甲基

在每次耦合步骤之间用NMP清洗树脂。单次合成循环的规程如下表Ⅵ所示：

表Ⅵ单次合成循环的耦合规程

操作	时间(分钟)
		1．脱保护(含10％哌啶的NMP)2．清洗(NMP)3．耦合(含有四倍当量的Fmoc-amino acid-HOBT ester的NMP，预活化50分钟)4．清洗5．用树脂处理样品(可选)	2056133
共计	92

除Fmoc-β-(1-萘基)丙氨酸之外的所有氨基酸均采用该方法耦合。Fmoc-β-(1-萘基)丙氨酸则为人工耦合。就人工耦合而言，可将1mmol Fmoc-β-(1-萘基)丙氨酸和1mmol 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)溶于5ml NMP，并与肽-树脂混合。

然后加入2mmol N-乙基二异丙胺，将混合物摇晃2小时，用10ml NMP清洗肽-树脂共6次。耦合效率的检验采用Kaiser检测法(Kaiser，1970，Anal．Biochem．34：59577)，如果需要还可重复耦合。在萘基丙氨酸耦合后，其余的合成可如上所述以自动方式进行。

6．2肽酰胺的合成

表Ⅹ(下文，第8．3节)所示肽酰胺的合成采用含有Fmoc-Rink酰胺柄4-(2’，4’-二甲基苯基)-Fmoc-苯氧基甲基的Rink酰胺树脂(Rink，1987，Tetrahedron Lett．28：3787-3790)，合成规程如上文第6．1节所述。

6．3 N-端酰化肽的合成

表Ⅹ(下文，第8．3节)所示肽的N-端酰化形式的制备是把按第6．1或6．2节所述制备的与树脂结合的肽暴露于适当的酰化剂。

对N-端酰化肽而言，每1g与树脂结合的肽加入15ml乙酸酐溶液(10％ v／v溶于NMP)，将混合物摇晃5分钟，并过滤回收树脂。回收的树脂用NMP(15ml)清洗3次，乙醇(15ml)清洗3次。

6．4裂解与脱保护

在合成之后，利用含92．5％三氟乙酸／3．75％苯甲醚／3．75％十二硫醇(v／v／v)的裂解液将上文第6．1、6．2和6．3节所述的肽从树脂上裂解和脱保护。要实现裂解，可在0．25mmol肽树脂中加入10ml裂解液并在室温下搅拌1．5小时。过滤去除树脂并用二乙醚沉淀裂解／脱保护的肽，乙醚清洗并真空干燥。

含有Trp(W)的肽以及肽酰胺的裂解剂中含86．5％的TFA、4．5％的水、4．5％的1，2-乙二硫醇、4．5％的苯甲醚和3％的苯酚。

6．5纯化

利用反相HPLC纯化第6．4节中的粗制裂解肽。利用不同的分析技术(分析HPLC、毛细管电泳)确定各种肽的纯度。毛细管电泳采用的是长70cm、内径75μm的熔凝石英毛细管(热分割产品)。分离条件为25℃、15kV，运行时间35分钟，并采用两种不同的缓冲液系统：缓冲液1(20mM Na₂B₄O₇，pH9．2)和缓冲液2(10mM Na₂HPO₄，pH2．5)。HPLC分离采用的是Nucleosil 7C18柱或Nucleosil 7C4柱(Macherey and Nagel，Germany)，250×21mm，流速8ml／min。梯度洗脱采用0．1％TFA水溶液(溶剂A)与0．1％TFA乙腈溶液(溶剂B)的合剂。调整所用梯度以满足各种肽的需要。

6．6特性鉴定

通过下文所述的质谱分析法和氨基酸分析法分别进行第6．5节所述纯化肽的质量分析和氨基酸分析。测序则采用Edman降解法。

6．6．1 LC-MS

质量的确定是利用作为普通商品销售的三级四倍质谱仪(TSQ 700型；Finnigan MAT，San Jose CA，USA)。通过气压辅助电喷射(ESI)接口将样品引入质谱仪的常压电离源。接口喷射器在4．5kV正电位下运转。钢制毛细管温度保持在200℃，岐管温度保持在70℃。由该离子蒸发过程产生的阳离子进入质谱仪分析器。倍增器电压调至1000V。质谱仪分析器室处于4E-6。在分辨率＜lu的情况下进行所有探测。

肽的分析是利用具有注射泵(140B型)、紫外检测器(785A型)和恒温器／注射器(112A型)的ABI(Applied Biosystems)微孔系统直接灌注纯化肽。溶剂系统包括水(溶剂A)和乙腈(溶剂B)，其中各含有0．1％TFA。采用梯度条件或无梯度条件灌注肽，然后将其从Aquapore C18柱上洗脱。流速通常为300μl／min。各肽的浓度约为0．03mg／ml，取20μl进行注射(如，30pmol)。

MS全扫描实验是由m／z 500-1500扫描四倍器1，时间4秒。数据采集使用Alpha DEC工作站，并利用Finnigan MAT(BIOWORKS)提供的软件包进行处理。

6．6．2氨基酸分析

氨基酸分析采用ABI(Applied Biosystems)420氨基酸分析仪。该系统包括三个组件：水解和衍生化装置、反相HPLC以及数据系统。将肽样品上样在多孔载玻片上(分成三份涂三次)，然后在气相条件下水解(155℃，90分钟)。去除HCL后，利用PITC(苯异硫氰酸盐)将所得氨基酸转变为PTC-AA(苯氨基硫酰基-氨基酸)。转到进样环管后，在温控条件下利用梯度方式(溶剂A：50mmol醋酸铵(NH4Ac)水溶液，pH5．4；溶剂B：32mmol醋酸钠(NaOAc)水性乙腈溶液)将所得混合物在Aquapore C18柱上分离。利用由Applied Biosystems提供的软件包处理HPLC数据。以Applied Biosystems提供的标准肽作为参比进行量化。

6．7分支网络的合成

按照Demoor et al．，1996，Eur．J．Biochem．239：74-84所述方法合成四聚核心肽酰树脂和三聚核心肽酰树脂。然后如前文所述将仍与4-甲基二苯甲基胺树脂相连的四聚和三聚核心基质作为最初的肽酰树脂用于核心肽的自动合成。包含由不同氨基酸组成的螺旋段的分支网络可利用该领域熟知的正交合成和保护策略加以合成。

7．ApoA-Ⅰ肽的结构分析和与脂类结合的分析

按上文第6节所述方法合成的纯化肽的结构特性和与脂类结合的特性可利用圆二色(CD)、荧光光谱和核磁共振(NMR)方法加以测定。

7．1圆二色

该实施例叙述一种用于本发明所述核心肽在缓冲液中游离状态下和在脂类参与情况下的螺旋度测定的优选方法。

7．1．1实验方法

利用配备了热电吸收池架和样品转换器的AVIV62DS光度计(AVIVAssociates，Lakewood，NJ，USA)记录190-260nm(以0．5nm或0．2nm的增量)的远紫外圆二色谱。仪器校准采用(+)-10-樟脑酸。每个样品分别利用10cm、5cm、1cm和0．1cm光径的Suprasil石英杯各扫描1-3次，肽浓度为10^-7-10^-4M。带宽固定为1．5nm，每次波长扫描步骤的扫描速率固定为1秒。所得数据至少为2或3次独立测量的平均值。

将减去背景值后的光谱转换为每残基的克分子椭圆率(θ)，单位是deg·cm^-2·dmol^-1。利用氨基酸分析法测定肽的浓度，如果肽包含有发色团(色氨酸、丹磺酰基、萘基丙氨酸)，则还在Perkin ElmerLambda 17紫外／可见分光光度计上进行吸收光谱测定以确定肽的浓度。

测定非结合游离肽(以5μM浓度溶于5mM磷酸缓冲液，pH7．4)；肽-SUV复合物(EPC∶Chol．比率为20∶1，Ri=30以及Ri=50)；肽-微胶粒复合物(1-肉豆蔻酰-2-羟基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱，Ri=100)；以及在2，2，2-三氟乙醇(TFE)参与情况下非结合游离肽(5μM肽，90％体积的TFE)的CD谱。

SUVs是通过将脂(10mM，EPC∶Chol．比率为20∶1，Avanti PolarLipids，AL)分散于磷酸缓冲液(5mM，pH7．4)，N₂通气5分钟，然后在水浴超声仪中超声(1．5小时)而获得。利用FPLC检验制备物的均一性。

微胶粒是通过将脂(6mM的1-肉豆蔻酰-2-羟基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱，Avanti Polar Lipids，AL)分散于磷酸缓冲液(5mM，pH7．4)，N₂通气5分钟，然后旋转混匀而获得。

将SUVs以30或50的磷脂-肽摩尔比率(Ri)加入肽溶液(以5μM的浓度溶于5mM磷酸缓冲液，pH7．4)获得肽-SUV复合物。

将微胶粒以100的Ri加入肽溶液(以5μM的浓度溶于5mM磷酸缓冲液，pH7．4)获得肽-微胶粒复合物。

所有光谱值均在37℃下记录。通过在一系列不同温度下记录光谱的方法测定第4号肽(序列标识号：4)(在缓冲液中的游离状态下和在微胶粒中)在不同温度下的稳定性。

另外还测定了作为浓度的函数的第4号肽(序列标识号：4)的螺旋度。

7．1．2螺旋度测定

肽在不同条件下的螺旋度由222nm下的残基平均椭圆率确定，或利用CD-1软件包2DP版(1982年八月)的CONTIN曲线拟合算法系统(Provencher，1982，Comput．Phys．Commun．27：213-227，229-242)将所得CD谱与数据库中可获得的参考谱(16个螺旋参考谱来自Provencher & Glockner，1981，Biochemistry 20：33-37；变性蛋白参考谱来自Venyaminov et al．，1993，Anal．Biochem．214：17-24)相比较而确定。利用由CONTIN算法系统提供的统计分析方法确定可接受的拟合结果。所有方法的螺旋度误差为±5％。

7．1．3结果

非结合游离肽(free)、肽-SUV复合物(SUVs)、肽-微胶粒复合物(mics)以及肽-TFE溶液(TFE)的螺旋度(％)公布于下文第8．3节表Ⅹ。表Ⅶ给出不同浓度的第4号肽(序列标识号：4)(未与脂类结合的游离状态)的螺旋度。

表Ⅶ不同浓度的第4号肽(序列标识号：4)的螺旋度百分数

浓度(μM)	Free	结合状态(微胶粒)的螺旋度百分数	TFE
				0．150．402．05．050．0	42586380-	6568-95-	----94

第4号肽(序列标识号：4)在缓冲液中的浓度为5μM时含有显著的α-螺旋结构。尽管肽的螺旋度随其浓度的降低而降低，但是甚至在0．15μM这样低的浓度下依然可保持明显的螺旋度(43％)。此外，在5-45℃的温度范围内，α-螺旋结构仍完全保持稳定(数据未给出)。

第4号肽(序列标识号：4)的螺旋度在SUVs(97％的螺旋度)和微胶粒(95％)参与情况下均有所增加，在TFE，一种由于其介电常数(ε=26．7)显著低于水(ε=78．4)从而在5-90％(v／v)的浓度范围内可稳定α-螺旋及肽内氢键的溶剂，参与情况下同样有所增加(94％的螺旋度)。

参照下文第8．3节表Ⅹ可看出，那些具有高LCAT激活活性(≥38％)的肽在脂类参与情况下通常都具有显著的α-螺旋结构(在包含22个或更多氨基酸残基的未封闭肽情况下或包含18个或更少氨基酸残基的封闭肽情况下的螺旋结构≥60％，在包含18个或更少氨基酸残基的未封闭肽情况下的螺旋结构≥40％)，而具有较低LCAT激活活性或无此活性的肽则具有极少的α-螺旋结构。但在某些实例中，在脂类参与情况下包含有显著螺旋结构的肽却不显示出明显的LCAT激活活性。因此，一般认为本发明所述核心肽可在脂类参与情况下采取α-螺旋结构的能力是本发明所述核心肽的关键特征，因为在脂类参与情况下可形成α-螺旋的能力似乎是LCAT激活活性的先决条件。

7．2荧光光谱

在肽中含有色氨酸(Trp或W)或萘基丙氨酸(Nal)的情况下，则利用标记的肽以荧光测量法测定上文第6节中合成的肽与脂类结合的性质。荧光谱的记录采用Spex(Jobin-Yvon)的Fluoromax荧光仪，该荧光仪配备了150W氙灯、两个单色器(激发和发射)、一个直到850nm红区都可感光的探测用R-928光电倍增管以及可磁力搅拌的热电吸收池架。微摩尔级浓度的测量采用Suprasil石英比色杯。利用狭缝调节(0．4-5nm)装置可根据所测肽的浓度调整入射光强度和发射光强度。所得值一般为2-4次光谱值的平均值。利用Trp吸收谱带(Tris缓冲液中的ε_280nm=5，550M^-1cm^-1)或Nal吸收谱带(甲醇中的ε_224nm=92，770M^-1cm^-1)在Philips PU 8800上进行吸收光谱测定以确定肽的浓度。

在有脂类参与和无脂类参与情况下记录肽在Tris-HCl缓冲液(20mM，pH=7．5)中的290-450nm荧光谱。用缓冲液将冻干磷脂再水化并分散，然后在N₂气流下进行尖端超声(tip sonification)处理以形成单层小泡。所用脂类为Egg PC／Chol。(20∶1)或POPC／Chol．(20∶1)。在37℃温度及2μM肽浓度条件下记录光谱。含有Trp情况下的荧光参比标准为N-乙酰色氨酰胺(NATA)。

通过将脂类载体逐步加入2μM肽溶液来进行脂类结合研究(激发狭缝：5nm，发射狭缝：1．5nm)。确定荧光密度时考虑到稀释效应。脂的浓度为10-600μM不等，脂肽摩尔比率(Ri)为5-300不等。Trp和Nal的激发波长均设为280nm。

7．2．1荧光光谱分析

直接记录数据，并利用来自Apex的DM3000F软件通过与荧光分光仪相连的IBM-PC进行处理。减去溶剂所造成的影响以对光谱加以修正，考虑到光电倍增管相对于不同波长的反应会发生变化，因此还运用设计者提供的系数对光谱加以修正。

肽产生最大发射荧光时的波长以及在色氨酸标记肽情况下相对于NATA的量子产率是其荧光光谱的特征所在。通过计算最大荧光发射时的波长(λ_max)位移以及相对发射荧光强度与脂类浓度比的变化进行来分析与脂类结合的过程。相对荧光强度的定义为下式比值：(I-I₀)λ_max／I₀λ_max。I与I₀均在(λ_max)下测量，相当于肽的最初游离状态，即没有脂类的状态。I为规定脂肽比率下的强度，I₀为没有脂类时以相同参数测量的强度。这些变量不发生变化则相当于肽与脂之间没有相互作用。

7．2．2结果和讨论

表Ⅷ给出第15号肽(序列标识号：15)(相当于第4号肽在第10位上包含一个Trp)与脂类的结合特性。

表Ⅷ荧光测量的第15号肽(序列标识号：15)与脂类载体结合的特性

脂：肽摩尔比率(Ri)	I／I0	λmax(nm)
			051030100200	010．813．217．526．443．5	332323323．5323323323

在332nm处具有最大色氨酸发射值，表明缓冲液中浓度为2μM的肽有轻微的自结合现象。Trp的埋入(最大Trp发射时的波长从332nm变为323nm)以及荧光强度的大幅度提高(见表Ⅷ)均表明肽与脂类囊(EPC／Chol 5％)能够以很高的亲和力相结合。脂与肽的摩尔比低于5时可使色氨酸残基的埋入程度达到最高。

由上文第7．1节所示圆二色法测量的其它在脂类参与情况下可显示高螺旋度的肽(在包含22个或更多氨基酸残基的未封闭肽情况下或包含18个或更少氨基酸残基的封闭肽情况下的螺旋结构≥60％，在包含18个或更少氨基酸残基的未封闭肽情况下的螺旋结构≥40％)可同样显示出良好的与脂类结合的能力。当然，在利用圆二色法筛选出的所有肽中，只有能够继而进行荧光检测的肽才对其脂类结合特性加以测试。

7．3核磁共振(NMR)

该实施例叙述用于本发明所述核心肽结构分析的NMR方法。

7．3．1 NMR样品制备

样品的制备是将5mg肽溶解于含有痕量作为化学位移内标的2，2-二甲基-2-硅杂-5-戊磺酸盐(DSS)的90％H₂O／10％D₂O中。一些样品中含有三氟乙醇(TFE)(以体积百分数表示)。样品总体积为500μl，肽浓度约为5mM。

7．3．2 NMR光谱学

¹H的NMR谱是利用配备了B-VT2000温控部件的Bruker DRX500频谱仪在500MHz频率下测得。利用标准脉冲序列对一维和二维实验进行记录(Two Dimensional NMR Spectroscopy，Eds．W．R．Croasmun and RMK Carlson，1994，VCH Publishers，New York，USA)。通过2秒的低功率预磁饱和实现水抑制。在相敏方式下利用随时间的相增量(TPPI)以及二维谱宽均为6000Hz的条件进行二维实验。通常对400个t₁增量联合进行40次扫描，获得2048个数据点。利用FELIX95软件(Molecular Simulations)在INDIGO2工作站(Silicon Graphics)上对数据进行处理。将数据进行零点填充以给出2K×2K的数据矩阵，并通过正弦-锥函数的平方和45°变换进行变迹。

7．3．3 NMR排布

按文献所述(Wüthrich，NMR of Proteins and Nucleic Acids，1986，John Wiley & Sons，New York，USA)利用DQFCOSY谱、TOCSY谱和NOESY谱通过顺序排布技术获得完整的质子共振排布图。将相应实验值减去无规线圈的化学位移列表值计算出HN和H α质子的次级化学位移(Wishart and Sykes，1994，Method．Enz．239：363-392)。

7．3．4结果和讨论

一般注意事项两亲性螺旋肽水溶液在NMR光谱测定所需的高浓度下会倾向于聚集，使得难以获得高分辨率光谱。例如，典型的第4号核心肽(序列标识号：4)水溶液的NMR谱即显示出很宽的谱线。从而不能分辨每个氨基酸残基的共振。样品中加入TFE可提高光谱的分辨率。已知TFE可溶解肽，此外还能够稳定具有形成螺旋倾向的肽的螺旋构象。以第4号肽(序列标识号：4)作为代表性实例对NMR光谱测定结果进行论证。并将Segrest的共有22聚体(序列标识号：75)作为参比加以研究。

次级化学位移氨基酸的质子化学位移取决于残基的类型以及肽或蛋白内部的局部二级结构(Szlagyi，1995，Progress in NuclearMagnetic Resonance Spectroscopy 27：325-443)。因此，规则二级结构的测定可通过将实验所得位移结果与无规线圈构象的列表值加以比较而实现。

α-螺旋的形成通常会导致Hα共振向高磁场区域(负值)位移。若可观测到某些连续残基在高磁场区域的Hα位移，则通常可作为螺旋结构的证据。溶于25％TFE的第4号肽(序列标识号：4)在295 K下的Hα次级位移结果显示，第4-19位残基明显向负值转移(图9A)，说明其具有高度螺旋的构象。第4号肽(序列标识号：4)与共有22聚体(序列标识号：75)的Hα化学位移之间仅存在很小的差异。

相对于无规线圈的化学位移，α-螺旋区域内氨基酸残基的酰胺氢原子的化学位移同样向高磁场区域转移。此外，还观测到HN位移的周期性，这反映了螺旋圈的周期性。位移沿序列的变化幅度与螺旋肽的两亲性度有关。疏水力矩越大，导致摆动越明显(Zhou et al．，1992，J．Am．Chem．Soc．114：4320-4326)。溶于25％TFE的第4号肽(序列标识号：4)在295 K下的HN次级位移显示出摆动状态，这与螺旋的两亲性质相符合(图9B)。共有22聚体肽(序列标识号：75)的酰胺化学位移模式与第4号肽(序列标识号：4)的明显不同。尤其是把第4号肽(序列标识号：4)的第5、9和13位残基替换为Leu(L)可导致化学位移具有更明显的周期性。这种影响甚至可扩展到第17位残基，在少数情况下还可扩展到第21位残基。由NMR数据可辨另出序列中存在5-6圈螺旋。因此，三个氨基酸的替换可影响肽沿整个序列的折叠。NMR图谱清晰地反映出第4号肽(序列标识号：4)具有比Segrest的共有22聚体肽(序列标识号：75)更强的两亲性性质。

酰胺质子与一圈螺旋之隔的羰基氧间形成的氢键长度可影响其次级位移。因此，化学位移观测值的周期性反映了不同的氢键长度。这种差异与螺旋骨架的总体螺旋弯曲形状有关。疏水性残基位于内弧侧。第4号肽(序列标识号：4)的次级位移预示着一种弯曲的α-螺旋构象。

7．3．5包含内部甘氨酸的肽在TFE参与情况下呈螺旋状

利用由核磁欧氏效应(NOEs)导致的质子间距离限制来确定第8号肽(序列标识号：8)在TFE参与情况下的三维结构。值得注意的是，中程NOE’s(dαN₃、dαβ₃、daN₄)沿整个序列的存在情况与总体α-螺旋结构相一致。由NMR数据组生成一族构象体，所得结构的第4-19位残基重叠良好，骨架的RMSD＜0．8_。平均结构的立体条纹表示法以及15个能量最低的构象异构体的骨架轨迹均证实弯曲螺旋形状的存在。据近似估计，肽的N-端半段和C-端半段之间有20°角的弯曲。除Leu-5外，疏水性氨基酸主要发现于内弧侧。以Phe-6为中心存在一个清晰的疏水性簇，其中包括了Leu-3、Leu-9和Leu-10。尽管螺旋圈约起始于N-端第3位残基，但直到第22位残基依然存在很多NOE，这表明螺旋向C-末端的延伸。

8．实施例：LCAT激活活性测试

将按照上文第6节所述合成的肽进行其激活LCAT能力的体外分析。在LCAT测试中，将含有卵磷脂酰胆碱(EPC)或1-棕榈酰-2-油基-磷脂酰-胆碱(POPC)以及放射性标记的胆固醇的基质囊(单层小泡或“SUVs”)与相同质量的肽或ApoA-Ⅰ(从人类血浆中分离)预保温。加入LCAT(从人类血浆中纯化)开始反应。用作阳性对照的天然ApoA-Ⅰ代表100％的激活活性。肽的“比活”(即，活性单位(LCAT激活活性)／质量单位)可由达到最大LCAT激活活性时的肽浓度来加以计算。例如，可测试肽的一系列浓度(如，有限稀释)以确定其“比活”--在测试中特定时点(如，1小时)达到最大LCAT激活活性(即，胆固醇转化为胆固醇酯的百分数)时的浓度。将，例如1小时后的，胆固醇转化百分数对所用肽浓度作图，即可以由所绘制曲线平稳段时的肽浓度来确定其“比活”。

8．1基质囊的制备

LCAT测试所使用的囊为SUYs，其中含有摩尔比为20∶1的卵磷脂酰胆碱(EPC)或1-棕榈酰-2-油基-磷脂酰胆碱(POPC)和胆固醇。要制备足够40次测试使用的囊贮液，可将7．7mg EPC(或7．6mgPOPC；10μmol)、78μg(0．2μmol)4-¹⁴C-胆固醇、116μg胆固醇(0．3μmol)溶解于5ml二甲苯并冻干。此后，可利用4ml测试缓冲液溶解干粉，并于4℃及氮气环境中超声。超声条件：Branson 250超声仪，10mm探头，6×5分钟；测试缓冲液：10mM Tris，0．14 MNaCl，1mM EDTA，pH7．4。将超声混合物在14，000 rpm(16，000×g)下离心6次，每次5分钟，以去除钛颗粒。所得澄清溶液即可用于酶的测试。

8．2 LCAT纯化

对LCAT纯化而言，可利用葡聚糖硫酸镁处理人类血浆以获得脂蛋白缺乏血清(LPDS)，然后将其依次在Phenylsepharose、Affigelblue、ConcanavalinA琼脂糖凝胶以及抗-ApoA-Ⅰ亲和层析柱上进行层析，代表性纯化方法总结于下表Ⅸ：

表ⅨLCAT纯化

部分	总体积(ml)	总蛋白(mg)	总活性(nmol CE／mg*hr)	产量(％)	纯化(倍)
						血浆LPDSPhenylsepharoseAffigelblue	55050021095	4455031000363153	63706626205190925092	988239	1．4100115

ConAsepharoSe抗-A-I亲和层析

43120

363．5

112455500

189

2201109

8．2．1 LPDS的制备

要制备LPDS，可在500ml血浆中加入50ml葡聚糖硫酸酯(MW=500000)溶液。搅拌20分钟。在3000rpm(16，000×g)及4℃条件下离心30分钟。上清液用于进一步纯化(ca．500ml)。

8．2．2 Phenylsepharose层析

苯基琼脂糖凝胶层析使用以下材料和条件。

固相：Phenylsepharose fast flow，high subst．级，Pharmacia

柱：XK26／40，胶床高度：33cm，V=ca．175ml

流速：200ml／hr(样品)

清洗：200ml／hr(缓冲液)

洗脱：80ml／hr(蒸馏水)

缓冲液：10mM Tris ，140mM NaCl，1mM EDTA pH7．4，0．01％叠氮化钠。

柱体用Tris-缓冲液平衡，将29g NaCl加入500ml LPDS中，过柱。用若干柱体积的Tris缓冲液清洗柱体，直至280nm波长下的光吸近似达到基线值，然后开始用蒸馏水洗脱。将含有蛋白的组分合并(合并体积：180ml)，用于Affigelblue层析。

8．2．3 Affigelblue层析

将Phenylsepharose层析后的合并液在4℃条件下对20mMTris-HCl，pH7．4，0．01％叠氮化钠透析过夜。通过超滤(Amicon YM30)使合并体积减少至50-60ml，并上样到Affigelblue柱上。

固相：Affigelblue，Biorad，153-7301柱，XK26／20，胶床高度：ca．13cm；柱体积：约70ml。

流速：上样：15ml／h

清洗：50ml／h

柱体用Tris-缓冲液平衡，将Phenylsepharose层析后的合并液上柱。同时收集组分。Tris-缓冲液清洗。合并后的组分(170ml)用于ConA层析。

8．2．4 ConA层析

通过Amicon(YM30)使Affigelblue层析后的合并液体积减少至30-40ml，并在4℃条件下对起始缓冲液(1mM Tris HCl pH7．4；1mM MgCl₂，1mM MnCl₂，1mM CaCl₂，0．01％叠氮化钠)透析过夜。固相：ConA sepharose(Pharmacia)柱：XK26／20，胶床高度：14cm(75ml)流速：上样40ml／h

清洗(用起始缓冲液)：90ml／h

洗脱：50ml／h，甲基-α-D-甘露糖苷以0．2M浓度溶于1mMTris，pH7．4。

收集甘露糖苷洗脱的蛋白组分(110ml)，并通过超滤(YM30)使体积减少至44ml。将ConA合并液分为2ml的等分试样，保存于-20℃。

8．2．5抗-ApoA-Ⅰ亲和层析

利用已共价连接了抗-ApoA-Ⅰ抗体的Affigel-Hz填料(Biorad)进行抗-ApoA-Ⅰ亲和层析。柱：XK16／20，V=16ml。利用PBS pH7．4平衡柱。将2ml ConA合并液对PBS透析2小时，然后上柱。流速：上样：15ml／hour清洗(PBS)40ml／hour。合并的蛋白组分(V=14ml)用于LCAT测试。

柱的再生使用0．1M柠檬酸盐缓冲液洗脱结合的A-Ⅰ(200ml)，并在此步骤后立即用PBS再平衡。

8．3结果

下文表Ⅹ给出LCAT激活活性测试的结果。

表Ⅹ典型的肽展示的LCAT激活活性

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LCAT	He(％)free	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								1	(SEQ ID NO：1)	PVLDLFRELLNELLEZLKQKLK	120％	77	85	81	69
2	(SEQ ID NO：2)	GVLDLFRELLNELLEALKQKLKK	105％
								3	(SEQ ID NO：3)	PVLDLFRELLNELLEWLKQKLK	98％	70	95	80	95
4	(SEQ ID NO：4)	PVLDLFRELLNELLEALKQKLK	93％	80	95	97	94
								5	(SEQ ID NO：5)	pVLDLFRELLNELLEALKQKLKK	90％
6	(SEQ ID NO：6)	PVLDLFRELLNEXLEALKQKLK	80％	57	93	70	99
								7	(SEQ ID NO：7)	PVLDLFKELLNELLEALKQKLK	83％	77	89	85	73
8	(SEQ ID NO：8)	PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK	83％	20	90	61	93
								9	(SEQ ID NO：9)	PVLDLFRELGNELLEALKQKLK	83％
10	(SEQ ID NO：10)	PVLDLFRELLNELLEAZKQKLK	79％	60	87	70	71
								11	(SEQ ID NO：11)	PVLDLFKELLQELLEALKQKLK	72％
12	(SEQ ID NO：12)	PVLDLFRELLNELLEAGKQKLK	70％
								13	(SEQ ID NO：13)	GVLDLFRELLNEGLEALKQKLK	67％
14	(SEQ ID NO：14)	PVLDLFRELLNELLEALOQOLO	61％	70	96	80
								15	(SEQ ID NO：15)	PVLDLFRELWNELLEALKQKLK	60％	55	60	64	68
16	(SEQ ID NO：16)	PVLDLLRELLNELLEALKQKLK	59％
								17	(SEQ ID NO：17)	PVLELFKELLQELLEALKQKLK	59％

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LCAT	He(％)free	He (％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								18	(SEQ ID NO：18)	GVLDLFRELLNELLEALKQKLK	58％
19	(SEQ ID NO：19)	pVLDLFRELLNEGLEALKQKLK	58％
								20	(SEQ ID NO：20)	pVLDLFREGLNELLEALKQKLK	57％
21	(SEQ ID NO：21)	pVLDLFRELLNELLEALKQKLK	57％
								22	(SEQ ID NO：22)	PVLDLFRELLNELLEGLKQKLK	54％
23	(SEQ ID NO：23)	PLLELFKELLQELLEALKQKLK	54％
								24	(SEQ ID NO：24)	PVLDLFRELLNELLEALQKKLK	53％
25	(SEQ ID NO：25)	PVLDFFRELLNEXLEALKQKLK	51％	46	82		93
								26	(SEQ ID NO：26)	PVLDLFRELLNELLELLKQKLK	47％
27	(SEQ ID NO：27)	PVLDLFRELLNELZEALKQKLK	44％	72	92	82	81
								28	(SEQ ID NO：28)	PVLDLFRELLNELWEALKQKLK	40％	82	98	90	81
29	(SEQ ID NO：29)	AVLDLFRELLNELLEALKQKLK	39％
								30	(SEQ ID NO：30)	PVLDLFRELLNELLEALKQKLK′	38％	85	90	98	90
31	(SEQ ID NO：31)	PVLDLFLELLNEXLEALKQKLK	34％	49	98		90
								32	(SEQ ID NO：32)	XVLDLFRELLNELLEALKQKLK	33％
33	(SEQ ID NO：33)	PVLDLFREKLNELLEALKQKLK	33％
								34	(SEQ ID NO：34)	PVLDZFRELLNELLEALKQKLK		58	67	68	62
35	(SEQ ID NO：35)	PVLDWFRELLNELLEALKQKLK	31％	49(sp)	59	61
								36	(SEQ ID NO：36)	PLLELLKELLQELLEALKQKLK	31％	95	100		95

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LCAT	He(％)free	He (％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								37	(SEQ ID NO：37)	PVLDLFREWLNELLEALKQKLK	29％	65	75	76	73
38	(SEQ ID NO：38)	PVLDLFRELLNEXLEAWKQKLK	29％	25	49	21	49
								39	(SEQ ID NO：39)	PVLDLFRELLEELLKALKKKLK	25％	66	69	68	72
40	(SEQ ID NO：40)	PVLDLFNELLRELLEALQKKLK	25％	66	84	79	77
								41	(SEQ ID NO：41)	PVLDLWRELLNEXLEALKQKLK	25％	53	73	85	69
42	(SEQ ID NO：42)	PVLDEFREKLNEXWEALKQKLK	25％	15	74	27	76
								43	(SEQ ID NO：43)	PVLDEFREKLWEXLEALKQKLK	25％
44	(SEQ ID NO：44)	pvldefreklneXlealkqklk	25％	20	86
								45	(SEQ ID NO：45)	PVLDEFREKLNEXLEALKQKLK	24％	24	84	25	86
46	(SEQ ID NO：46)	PVLDLFREKLNEXLEALKQKLK	23％	30	86	58	85
								47	(SEQ ID NO：47)	～VLDLFRELLNEGLEALKQKLK	23％
48	(SEQ ID NO：48)	pvLDLFRELLNELLEALKQKLK	22％
								49	(SEQ ID NO：49)	PVLDLFRNLLEKLLEALEQKLK	22％	57	65	52	57
50	(SEQ ID NO：50)	PVLDLFRELLWEXLEALKQKLK	21％	68	84	89	76
								51	(SEQ ID NO：51)	PVLDLFWELLNEXLEALKQKLK	20％	63	82	81	73
52	(SEQ ID NO：52)	PVWDEFREKLNEXLEALKQKLK	20％	sp	sp	sp
								53	(SEQ ID NO：53)	VVLDLFRELLNELLEALKQKLK	19％
54	(SEQ ID NO：54)	PVLDLFRELLNEWLEALKQKLK	19％	76	71	84	78
								55	(SEQ ID NO：55)	P～～～LFRELLNELLEALKQKLK	19％	38	72	78	75

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LCAT	He(％)free	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								56	(SEQ ID NO：56)	PVLDLFRELLNELLEALKQKKK	18％
57	(SEQ ID NO：57)	PVLDLFRNLLEELLKALEQKLK	18％
								58	(SEQ ID NO：58)	PVLDEFREKLNEXLEALKQKL～	18％
59	(SEQ ID NO：59)	LVLDLFRELLNELLEALKQKLK	17％
								60	(SEQ ID NO：60)	PVLDLFRELLNELLEALKQ～～～	16％	39	83	66	84
61	(SEQ ID NO：61)	PVLDEFRWKLNEXLEALKQKLK	16％
								62	(SEQ ID NO：62)	PVLDEWREKLNEXLEALKQKLK	16％	15	85	43
63	(SEQ ID NO：63)	PVLDFFREKLNEXLEALKQKLK	16％
								64	(SEQ ID NO：64)	PWLDEFREKLNEXLEALKQKLK	15％
65	(SEQ ID NO：65)	～VLDEFREKLNEXLEALKQKLK	15％
								66	(SEQ ID NO：66)	PVLDLFRNLLEELLEALQKKLK	15％	64	82	66	70
67	(SEQ ID NO：67)	～VLDLFRELLNELLEALKQKLK	14％	81	90	84	94
								68	(SEQ ID NO：68)	PVLDEFRELLKEXLEALKQKLK	14％
69	(SEQ ID NO：69)	PVLDEFRKKLNEXLEALKQKLK	13％
								70	(SEQ ID NO：70)	PVLDEFRELLYEXLEALKQKLK	12％	27	78	33	66
71	(SEQ ID NO：71)	PVLDEFREKLNELXEALKQKLK	11％
								72	(SEQ ID NO：72)	PVLDLFRELLNEXLWALKQKLK	11％	sp	sp	sp
73	(SEQ ID NO：73)	PVLDEFWEKLNEXLEALKQKLK	10％
								74	(SEQ ID NO：74)	PVLDKFREKLNEXLEALKQKLK	10％

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LCAT	He(％)free	He (％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								752／	(SEQ ID NO：75)	PVLDEFREKLNEELEALKQKLK	10％	18	28	23	55
76	(SEQ ID NO：76)	PVLDEFRELLFEXLEALKQKLK	9％	41	88		66
								77	(SEQ ID NO：77)	PVLDEFREKLNKXLEALKQKLK	9％
78	(SEQ ID NO：78)	PVLDEFRDKLNEXLEALKQKLK
								79	(SEQ ID NO：79)	PVLDEFRELLNELLEALKQKLK	9％
80	(SEQ ID NO：80)	PVLDLFERLLNELLEALQKKLK	9％
								81	(SEQ ID NO：81)	PVLDEFREKLNWXLEALKQKLK
82	(SEQ ID NO：82)	～～LDEFREKLNEXLEALKQKLK	8％
								83	(SEQ ID NO：83)	PVLDEFREKLNEXLEALWQKLK
84	(SEQ ID NO：84)	PVLDEFREKLNELLEALKQKLK	7％
								85	(SEQ ID NO：85)	P～LDLFRELLNELLEALKQKLK	7％	58	61	64	69
86	(SEQ ID NO：86)	PVLELFERLLDELLNALQKKLK	7％
								87	(SEQ ID NO：87)	pllellkellqellealkqklk	7％	100	100		100
88	(SEQ ID NO：88)	PVIDKFRELLNEXLEALKQKLK	7％
								89	(SEQ ID NO：89)	PVLDEFREKLNEXLWALKQKLK	6％
90	(SEQ ID NO：90)	～～～DEFREKLNEXLEALKQKLK	6％
								91	(SEQ ID NO：91)	PVLDEFRELLNEXLEALKQKLK	6％	43	100		100

^1／segrest’s 共有22聚物肽 (Anantharamaiah et al．，1990，Arteriosclerosis 10(1)：95-105)

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LCAT	He(％)free	He(％)mics	He (％)SUVs	He (％)TFE
								92	(SEQ ID NO：92)	PVLDEFRELYNEXLEALKQKLK	5％
93	(SEQ ID NO：93)	PVLDEFREKLNEXLKALKQKLK	5％
								942／	(SEQ ID NO：94)	PVLDEFREKLNEALEALKQKLK	5％	18	70	27	63
95	(SEQ ID NO：95)	PVLDLFRELLNLXLEALKQKLK	5％		sp	sp
								96	(SEQ ID NO：96)	pvldlfrellneXlealkqklk	5％	52	85	63	81
97	(SEQ ID NO：97)	PVLDLFRELLNELLE～～～～～～～	4％
								98	(SEQ ID NO：98)	PVLDLFRELLNEELEALKQKLK	2％
99	(SEQ ID NO：99)	KLKQKLAELLENLLERFLDLVP	2％	72	88	80	80
								100	(SEQ ID NO：100)	pvldlfrellnellealkqklk	2％	83	92		98
101	(SEQ ID NO：101)	PVLDLFRELLNWXLEALKQKLK	2％		sp	sp
								102	(SEQ ID NO：102)	PVLDLFRELLNLXLEALKEKLK	2％	sp
103	(SEQ ID NO：103)	PVLDEFRELLNEELEALKQKLK	1％
								104	(SEQ ID No：104)	P～～～～～～～LLNELLEALKQKLK	1％	21	49	29	55
105	(SEQ ID NO：105)	PAADAFREAANEAAEAAKQKAK	1％	29	28	32	65
								106	(SEQ ID NO：106)	PVLDLFREKLNEELEALKQKLK	0％
107	(SEQ ID NO：107)	klkqklaellenllerfldlvp	0％	sp	sp		77
								108	(SEQ ID NO：108)	PVLDLFRWLLNEXLEALKQKLK	0％	28	55		54

^2／[A¹³]- 共有22聚物肽 (Anantharamaiah et al．，1990，Arteriosclerosis 10(1)：95-105)。

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LCAT	He (％)free	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								1093／	(SEQ ID NO：109)	PVLDEFREKLNERLEALKQKLK	0％	19	45	23	58
110	(SEQ ID NO：110)	PVLDEFREKLNEXXEALKQKLK	0％
								111	(SEQ ID NO：111)	PVLDEFREKLWEXWEALKQKLK	0％
112	(SEQ ID NO：112)	PVLDEFREKLNEXSEALKQKLK	0％
								113	(SEQ ID NO：113)	PVLDEFREKLNEpLEALKQKLK	0％	6	22
114	(SEQ ID NO：114)	PVLDEFREKLNEXMEALKQKLK	0％
								115	(SEQ ID NO：115	PKLDEFREKLNEXLEALKQKLK	0％
116	(SEQ ID NO：116)	PHLDEFREKLNEXLEALKQKLK	0％
								117	(SEQ ID NO：117)	PELDEFREKLNEXLEALKQKLK	0％
118	(SEQ ID NO：118)	PVLDEFREKLNEXLEALEQKLK	0％
								119	(SEQ ID NO：119)	PVLDEFREKLNEELEAXKQKLK	0％
120	(SEQ ID NO：120)	PVLDEFREKLNEELEXLKQKLK	0％
								121	(SEQ ID NO：121)	PVLDEFREKLNEELEALWQKLK	0％
122	(SEQ ID NO：122)	PVLDEFREKLNEELEWLKQKLK	0％
								123	(SEQ ID NO：123)	QVLDLFRELLNELLEALKQKLK
124	(SEQ ID NO：124)	PVLDLFOELLNELLEALOQOLO
								125	(SEQ ID NO：125)	NVLDLFRELLNELLEALKQKLK

^3／[R¹³]-共有22聚物肽    (Anantharamaiah et al．，1990，Arteriosclerosis 10(1)：95-105)。

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LcAT	He(％)free	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								126	(SEQ ID NO：126)	PVLDLFRELLNELGEALKQKLK
127	(SEQ ID NO：127)	PVLDLFRELLNELLELLKQKLK	47％
								128	(SEQ ID NO：128)	PVLDLFRELLNELLEFLKQKLK
129	(SEQ ID NO：129)	PVLELFNDLLRELLEALQKKLK
								130	(SEQ ID NO：130)	PVLELFNDLLRELLEALKQKLK
131	(SEQ ID NO：131)	PVLELFKELLNELLDALRQKLK
								132	(SEQ ID NO：132)	PVLDLFRELLENLLEALQKKLK
133	(SEQ ID NO：133)	PVLELFERLLEDLLQALNKKLK
								134	(SEQ ID NO：134)	PVLELFERLLEDLLKALNQKLK
135	(SEQ ID NO：135)	DVLDLFRELLNELLEALKQKLK
								136	(SEQ ID NO：136)	PALELFKDLLQELLEALKQKLK
137	(SEQ ID NO：137)	PVLDLFRELLNEGLEAZKQKLK
								138	(SEQ ID NO：138)	PVLDLFRELLNEGLEWLKQKLK
139	(SEQ ID NO：139)	PVLDLFRELWNEGLEALKQKLK
								141	(SEQ ID NO：140)	PVLDLFRELLNEGLEALOQOLQ
141	(SEQ ID NO：141)	PVLDFFRELLNEGLEALKQKLK
								142	(SEQ ID NO：142)	PVLELFRELLNEGLEALKQKLK
143	(sEQ ID NO：143)	PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK*
								144	(SEQ ID NO：144)	pVLELFENLLERLLDALQKKLK	111％	89	88		95

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LCAT	He(％)free	He(％)mics	He(％)SUVs	He (％)TFE
								145	(SEQ ID NO：145)	GVLELFENLLERLLDALQKKLK	100％	55	51		58
146	(SEQ ID NO：146)	PVLELFENLLERLLDALQKKLK	86％	97	100	100	95
								147	(SEQ ID NO：147)	PVLELFENLLERLFDALQKKLK	76％
148	(SEQ ID NO：148)	PVLELFENLLERLGDALQKKLK	75％	10	76	23	80
								149	(SEQ ID NO：149)	PVLELFENLWERLLDALQKKLK	63％	28	54		47
150	(SEQ ID NO：150)	PLLELFENLLERLLDALQKKLK	57％
								151	(SEQ ID NO：151)	PVLELFENLGERLLDALQKKLK	55％
152	(SEQ ID NO：152)	PVFELFENLLERLLDALQKKLK	50％
								153	(SEQ ID NO：153)	AVLELFENLLERLLDALQKKLK	49％
154	(SEQ ID NO：154)	PVLELFENLLERGLDALQKKLK	39％	13	76	25	80
								155	(SEQ ID NO：155)	PVLELFLNLWERLLDALQKKLK	38％
156	(SEQ ID NO：156)	PVLELFLNLLERLLDALQKKLK	35％
								157	(SEQ ID NO：157)	PVLEFFENLLERLLDALQKKLK	30％
158	(SEQ ID NO：158)	PVLELFLNLLERLLDWLQKKLK	30％
								159	(SEQ ID NO：159)	PVLDLFENLLERLLDALQKKLK	28％
160	(SEQ ID NO：160)	PVLELFENLLERLLDWLQKKLK	28％	65	73	75	61
								161	(SEQ ID NO：161)	PVLELFENLLERLLEALQKKLK	27％
162	(SEQ ID NO：162)	PVLELFENWLERLLDALQKKLK	27％	68	83	81
								163	(SEQ ID NO：163)	PVLELFENLLERLWDALQKKLK	26％	27	53		55

肽		氨基酸序列	激活活性(％)ICAT	He(％)free	He(％)mics	He (％)SUVs	He(％)TFE
								164	(SEQ ID NO：164)	PVLELFENLLERLLDAWQKKLK	24％	37	66	51	61
165	(SEQ ID NO：165)	PVLELFENLLERLLDLLQKKLK	23％
								166	(SEQ ID NO：166)	PVLELFLNLLEKLLDALQKKLK	22％
167	(SEQ ID NO：167)	PVLELFENGLERLLDALQKKLK	18％
								168	(SEQ ID NO：168)	PVLELFEQLLEKLLDALQKKLX	17％
169	(SEQ ID NO：169)	PVLELFENLLEKLLDALQKKLK	17％
								170	(SEQ ID NO：170)	PVLELFENLLEOLLDALQOOLO	17％
171	(SEQ ID NO：171)	PVLELFENLLEKLLDLLQKKLK	16％
								172	(SEQ ID NO：172)	PVLELFLNLLERLGDALQKKLK	16％
173	(SEQ ID NO：173)	PVLDLFDNLLDRLLDLLNKKLK	15％
								174	(SEQ ID NO：174)	pvlelfenllerlldalqkklk	13％
175	(SEQ ID NO：175)	PVLELFENLLERLLELLNKKLK	13％
								176	(SEQ ID NO：176)	PVLELWENLLERLLDALQKKLK	11％
177	(SEQ ID No：177)	GVLELFLNLLERLLDALQKKLK	10％
								178	(SEQ ID NO：178)	PVLELFDNLLEKLLEALQKKLR	9％
179	(SEQ ID NO：179)	PVLELFDNLLERLLDALQKKLK	8％
								180	(SEQ ID NO：180)	PVLELFDNLLDKLLDALQKKLR	8％
181	(SEQ ID NO：181)	PVLELFENLLERWLDALQKKLK	8％
								182	(SEQ ID NO：182)	PVLELFENLLEKLLEALQKKLK	7％

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LCAT	He (％)free	He (％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								183	(SEQ ID NO：183)	PLLELFENLLEKLLDALQKKLK	6％
184	(SEQ ID NO：184)	PVLELFLNLLERLLDAWQKKLK	4％
								185	(SEQ ID NO：185)	PVLELFENLLERLLDALQOOLO	3％
186	(SEQ ID NO：186)	PVLELFEQLLERLLDALQKKLK
								187	(SEQ ID NO：187)	PVLELFENLLERLLDALNKKLK
188	(SEQ ID NO：188)	PVLELFENLLDRLLDALQKKLK
								189	(SEQ ID NO：189)	DVLELFENLLERLLDALQKKLK
190	(SEQ ID NO：190)	PVLEFWDNLLDKLLDALQKKLR
								191	(SEQ ID NO：191)	PVLDLLRELLEELKQKLK*	100％
192	(SEQ ID NO：192)	PVLDLFKELLEELKQKLK*	100％	36			56
								193	(SEQ ID NO：193)	PVLDLFRELLEELKQKLK*	96％	34	88	87	87
194	(SEQ ID NO：194)	PVLELFRELLEELKQKLK*	88％	38	93		93
								195	(SEQ ID NO：195)	PVLELFKELLEELKQKLK*	87％
196	(SEQ ID No：196)	PVLDLFRELLEELKNKLK*	81％
								197	(SEQ ID NO：197)	PLLDLFRELLEELKQKLK*	81％	43	70		69
198	(SEQ ID NO：198)	GVLDLFRELLEELKQKLK*	80％
								199	(SEQ ID NO：199)	PVLDLFRELWEELKQKLK*	76％	35	77	80	79
200	(SEQ ID NO：200)	NVLDLFRELLEELKQKLK*	75％
								201	(SEQ ID NO：201)	PLLDLFKELLEELKQKLK*	74％

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LCAT	He (％)free	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								202	(SEQ ID NO：202)	PALELFKDLLEELRQKLR*	70％
203	(SEQID NO：203)	AVLDLFRELLEELKQKLK*	66％
								204	(SEQ ID NO：204)	PVLDFFRELLEELKQKLK*	63％
205	(SEQ ID NO：205)	PVLDLFREWLEELKQKLK*	60％
								206	(SEQ ID NO：206)	PLLELLKELLEELKQKLK*	57％
207	(SEQ ID NO：207)	PVLELLKELLEELKQKLK*	50％
								208	(SEQ ID NO：208)	PALELFKDLLEELRQRLK*	48％
209	(sEQ ID NO：209)	PVLDLFRELLNELLQKLK	47％	54	71	67	62
								210	(SEQ ID NO：210)	PVLDLFRELLEELKQKLK	46％	20	63	37	53
211	(SEQ ID NO：211)	PVLDLFRELLEELOQOLO*	45％
								212	(SEQ ID NO：212)	PVLDLFOELLEELOQOLK*	43％
213	(SEQ ID NO：213)	PALELFKDLLEEFRQRLK*	42％
								214	(SEQ ID NO：214)	PVLDLFRELLEELKQKLK*	39％
215	(SEQ ID NO：215)	PVLDLFRELLEEWKQKLK*	38％	28	63	53	68
								216	(SEQ ID NO：216)	PVLELFKELLEELKQKLK	35％
217	(SEQ ID NO：217)	PVLDLFRELLELLKQKLK	30％	52	78	76	70
								218	(SEQ ID NO：218)	PVLDLFRELLNELLQKLK*	29％
219	(SEQ ID NO：219)	PVLDLFRELLNELWQKLK	24％
								220	(SEQ ID NO：220)	PVLDLFRELLEELQKKLK	22％	27	64	54	64

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LCAT	He(％)free	He (％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								221	(SEQ ID NO：221)	DVLDLFRELLEELKQKLK*	12％
222	(SEQ ID NO：222)	PVLDAFRELLEALLQLKK	8％
								223	(SEQ ID NO：223)	PVLDAFRELLEALAQLKK	8％	21	56	23	51
224	(SEQ ID NO：224)	PVLDLFREGWEELKQKLK	8％
								225	(SEQ ID NO：225)	PVLDAFRELAEALAQLKK	1％
226	(SEQ ID NO：226)	PVLDAFRELGEALLQLKK	1％
								227	(SEQ ID NO：227)	PVLDLFRELGEELKQKLK*	0％
228	(SEQ ID NO：228)	PVLDLFREGLEELKQKLK*	0％
								229	(SEQ ID NO：229)	PVLDLFRELLEEGKQKLK*	0％
230	(SEQ ID NO：230)	PVLELFERLLEDLQKKLK
								231	(SEQ ID NO：231)	PVLDLFRELLEKLEQKLK
232	(SEQ ID NO：232)	PLLELFKELLEELKQKLK*
								2374／	(SEQ ID NO：237)	LDDLLQKWAEAFNQLLKK	11％	30	66	45
2385／	(SEQ ID NO：238)	EWLKAFYEKVLEKLKELF*	19％	49	72	60	58
								2396／	(SEQ ID NO：239)	EWLEAFYKKVLEKLKELF*	11％	44	49		sp

^4／ID-3肽      (Labeur et al．，1997，Arteriosclerosis，Thrombosis and Vascular Biology 17(3)：580-588)

^5／Ac-1BAMOD-C(O)NH₂肽    (Epand et al．，1987，J．Biol．Chem．262(19)：9389-9396)．

^6／Ac-18AM4-C(O)NH₂肽    (Brasseur，1993，Biochim．Biophys．Acta 1170：1-7)。

肽		氨基酸序列	激活活性(％)LCAT	He(％)free	He(％)mics	He(％)SUVs	He (％)TFE
								240	(SEQ ID NO：240)	DWLKAFYDKVAEKLKEAF*	10％	16	68	59	57
241	(SEQ ID NO：241)	DWFKAFYDKVFEKFKEFF	8％
								2427／	(SEQ ID NO：242)	GIKKFLGSIWKFrKAFVG	7％
243	(SEQ ID NO：243)	DWFKAFYDKVAEKFKEAF	5％	10	64	50
								2443／	(SEQ ID NO：244)	DWLKAFYDKVAEKLKEAF	5％	9	40	13	48
245	(SEQ ID NO：245)	DWLKAFYDKVFEKFKEFF	4％	38	77	70	sp
								2469／	(SEQ ID NO：246)	EWLEAFYKKVLEKLKELF	4％	18	44	47
247	(SEQ ID NO：247)	DWFKAFYDKFFEKFKEFF	3％
								24810／	(SEQ ID NO：248)	EWLKAFYEKVLEKLKELF	3％	18	45	13
24912／	(SEQ ID NO：249)	EWLKAEYEKVEEKLKELF*
								25012／	(SEQ ID NO：250)	EWLKAEYEKVLEKLKELF*

^7／18L肽    (segrest et al．，1990，Proteins：structure，Function and Genetics 8：103-117)。

^8／18A 肽    (Anantharamaiah et al．，1985，J．Biol．Chem．260(18)：10248-10255)。

^9／18AM4肽    (Rosseneu et al．，WO 93／25581；Corijn／et al．，1993，Biochim·Biophys·Acta 1170：8-16)。

^10／[Glu^1，8； Leu^5，11，17]18A肽    (Epand et al．，1987，J．Biol．Chem．262(19)：9389-9396)。

^11／Ac-18AM3-C(O)NH₂(Rosseneu et al．，WO 93／25581)。

^12／Ac-18AM2-C(O)NH₂(Rosseneu et al．，WO 93／25581)。

肽		氨基酸序列	激活活性(％) LCAT	He(％)free	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								25113／	(SEQ ID NO：251)	EWLKAFYKKVLEKLKELF*
252	(SEQ ID NO：252)	PVLDLFRELLEQKLK*
								253	(SEQ ID NO：253)	PVLDLFRELLEELKQK*
254	(SEQ ID NO：254)	PVLDLFRELLEKLKQK*
								255	(SEQ ID NO：255)	PVLDLFRELLEKLQK*
256	(SEQ ID NO：256)	PVLDLFRELLEALKQK*
								257	(SEQ ID NO：257)	PVLDLFENLLERLKQK*
258	(SEQ ID NO：258)	PVLDLFRELLNELKQK*

^13／Ac-18AM1-C(O)NH₂ (Rosseneu et al．，WO 93／25581)。

表Ⅹ中的*指明N-端乙酰化且C-端酰胺化的肽；↑指明N-端丹磺酰化的肽；sp指明在实验条件下溶解困难的肽；X为Aib；Z为Nal；0为Orn；He(％)代表螺旋度百分数；mics代表微胶粒；而-指明缺失的氨基酸。

9．实施例：ApoA-Ⅰ激动剂的药物动力学

以下实验论证ApoA-Ⅰ激动剂在循环过程中呈稳定状态，并且与血浆中HDL成分相结合。

尤其是以腹腔内注射方式注入小鼠体内的放射性标记的第4号肽与HDL成分相结合，并且至少保持6小时的稳定状态。加入人类血浆(先体外后体内)的第4号肽同样与HDL成分相结合。

9．1．放射性标记肽的合成

将¹⁴C-标记的Fmoc-Pro作为N-端氨基酸加以偶联以合成放射性标记的第4号肽(序列标识号：4)和第8号肽(序列标识号：8)。

利用比活为9．25 GBq／mmol的L-[U-¹⁴C]脯氨酸合成标记的Fmoe-L-脯氨酸。根据Lapatsanis，Synthesis，1983，671-173加以合成。简要地说，即把250μM(29．6mg)未标记的L-脯氨酸溶解于225μl的9％ Na₂CO₃溶液中，然后加入到9．25MBq(250μM)¹⁴C-标记L-脯氨酸溶液(9％ Na₂CO₃)中。将溶液冷却至0℃，并与0．75ml含600μM(202mg)9-芴甲基-N-琥珀酰亚氨基碳酸酯(Fmoc-OSu)的DMF混合，室温摇晃4小时。然后用二乙醚(2×5ml)和氯仿(1×5ml)抽提混合物，剩余水相用30％HCl酸化，并用氯仿抽提(5×8ml)。有机相用Na₂SO₄干燥，过滤，在氮气气流中将体积减少至5ml。利用TLC(CHCl₃∶MeOH∶Hac，9∶1∶0．1v／v／v，固定相HPTLC硅胶60，Merck，Germany)判断纯度，并显示单峰(UV检测，放射化学纯度：线性分析仪，Berthold，Germany)；反应产率：90％(利用LSC测定)。

肽的合成直接采用含有¹⁴C-Fmoc脯氨酸的氯仿溶液。合成中使用如第6节所述自动合成的包含第2-22位氨基酸的肽树脂。肽序列的测定采用Edman降解法。除了用HATU(0-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐)代替TBTU外，耦合过程均按照第6．1节所述进行(Fmoc-Nal耦合为人工操作)。按第6．1节所述人工完成与非标记Fmoc-L-Pro的第二次耦合。按第6．4节所述将肽裂解并脱保护。标记的肽的比活如下：

第4号肽(序列标识号：4)=3．9×10⁵dpm／mg

第8号肽(序列标识号：8)=1．0×10⁵dpm／mg

9．2在小鼠中的药物动力学

每次实验均将2．5mg／kg的放射性标记肽以腹腔内注射方式注入用普通鼠食或可导致动脉粥样化的Thomas-Harcroft改进型食物(导致VLDL和IDL胆固醇的急剧上升)饲养的小鼠体内。以多重时间间隔采集血样用于血浆放射性评定。结果总结于下表Ⅺ。

表Ⅺ第4号肽(序列标识号：4)在小鼠体内的半寿期

物种	制剂	半寿期(小时)
			C57BL／6(普通食物)C57B1／6(高脂肪食物)	第4号肽／PBS第4号肽／PBS第4号肽／POPC复合物3	5．7215．9826．394
ApoE-6	第4号肽／PBS	14．25

1注射后1．9小时时达到最大血清浓度，为注射的cpm的25．7％。r²=0．960。

2注射后2．98小时时达到最大血清浓度，为注射的cpm的20．3％。r²=0．973。

3包含磷脂(POPC)和第4号肽的复合物的制备采用胆酸盐透析法。

4注射后4．2小时时达到最大血清浓度，为注射的cpm的39．4％。r²=0．893。

5注射后1．46小时时达到最大血清浓度，为注射的cpm的17．4％。r²=0．973。

6ApoE敲除。

9．3．在人类血清中的稳定性

9．3．1实验方法

将100μg按照上文第9．1节所述制备的¹⁴C-标记的第4号肽(序列标识号：4)与2ml新鲜人血浆相混合(于37℃)，并立即脱脂化(对照样品)或于37℃保温8天后脱脂化(测试样品)。脱脂化的实现是通过加入等体积的2∶1(v／v)的氯仿∶甲醇来抽提脂类。

将样品加载到反相C₁₈HPLC柱上，并利用线性梯度(25-58％，时间33分钟)的乙腈(含0．1％TFA)洗脱。然后测量吸光度(220nm)和放射性以绘制洗脱曲线。

9．3．2．结果

对照样品具有单一洗脱峰，保留时间约30分钟。所有放射性均在该峰位处洗脱。

测试样品具有两个洗脱峰：一个的保留时间约3分钟，另一个的保留时间约30分钟。3分钟峰位处(降解的肽)的放射性约占上样至柱上的总放射性的15％。剩余放射性则在30分钟峰位处(完整的肽)洗脱，这表明第4号肽(序列标识号：4)在人类血清中极为稳定-甚至在人类血清中保温8天后依然有80％的第4号肽保持完整。

9．4．前-β样颗粒的形成

9．4．1．实验方法

人类HDL的分离是在密度d=1．21g／ml下进行KBr密度梯度超速离心，收集顶部组分，并通过Superose 6的凝胶过滤层析而将HDL与其它脂蛋白分离开来。根据由Bradford蛋白测试法测定的蛋白含量用生理盐水将分离的HDL终浓度调至1．0mg／ml。从分离的HDL制剂中取出300μl样品，并与100μl经¹⁴C-标记的第4号肽(0．2-1．0μg／μl)在37℃下保温2小时。分析5份独立保温的样品，其中包括一份含100μl生理盐水的空白样品和4份经¹⁴C-标记的第4号肽的稀释样品：(ⅰ)0．20μg／μl的肽∶HDL比率=1∶15；(ⅱ)0．30μg／μl的肽∶HDL比率=1∶10；(ⅲ)0．60μg／μl的肽∶HDL比率=1∶5；以及(ⅳ)1．00μg／μl的肽∶HDL比率=1∶3。在保温2小时后，从样品(总体积=400μl)中取200μl上样到Superose 6凝胶过滤柱上进行脂蛋白分离和分析，取100μl用于测定上样的总放射性。所有FPLC层析的条件如下文第9．4节所述。

9．4．2．结果

结果显示于下表Ⅻ以及图9A-9F。

表Ⅻ经¹⁴C-标记的第4号肽(序列标识号：4)对分离的人类HDL中

      人类APOA-I的置换作用

		1号峰		2号峰	3号峰	上样的14c量(cpm)	柱的14c量(cpm)	回收率(％)
									1a	1b
		P∶LP=1∶15对照肽	EV								30.5
AUC	9.95
			EV							29.4	30.9
AUC	4.09			6.26
			14C							7,920			1,622	10,361	9,542	92.1
P∶LP=1∶10对照肽	EV			30.7
		AUC	9.15
	EV			30.7		33.0
		AUC	8.42								0.67
	14C			N/A			N/A	N/A	N/A							N/A

		1号峰		2号峰	3号峰	上样的14C量(cpm)	柱的14C量(cpm)	回收率(％)
									1a	1b
		P∶LP=1∶5对照肽	EV								30.9
AUC	9.87
			EV							30.8		34.3
AUC	8.19				1.53
			14C							20,768			5,281	28,794	26,049	90.5
P∶LP=1∶3对照肽	EV			30.5
		AUC	10.22
	EV			30.6		34.3
		AUC	7.93								1.97
	14C			43,495			7,832	54,593	51,321							94

P∶LP=肽与脂蛋白的质量(μg)比

EV=洗脱体积(ml)

AUC=曲线下面积(Peakfit程序)

¹⁴C=放射性计数测定的Cpms

1号峰=29-33组分

2号峰=34-35组分

3号峰=41-47组分

由表Ⅻ所示数据可明显看出，将脂蛋白颗粒分离后柱的放射性回收率在90％以上。在较低肽浓度下(即，肽∶HDL的质量比为1∶15)，HDL峰分离为两个单独的峰(图9A)，这表明肽和HDL之间存在有相互作用，可导致脂蛋白颗粒一定程度的重塑，但由于未记录到置换峰，因此这种相互作用还不足以取代ApoA-Ⅰ。当肽浓度增加时，即可观测到ApoA-Ⅰ的置换现象，并且该现象随肽浓度的增加而增加(图9B-9D)。此外，由放射性计数测定的所有层析谱图均显示出第3个峰(不包括质量比为1∶10的那份样品，其结果未给出)，这与游离肽的洗脱体积相符合(图9E)。

为进一步分析肽浓度对¹⁴C-标记的第4号肽与HDL相互作用的影响，由四个层析谱图(图9A-9D)得出差示图，并显示于图9F。差示图证明了HDL峰的位移以及ApoA-Ⅰ置换随肽浓度的增加而增加。ApoA-Ⅰ置换可导致前-β样颗粒的形成。

9．5．第4号肽与人类脂蛋白的结合

9．5．1．实验方法

通过将¹⁴C-标记的第4号肽(序列标识号：4)与各种类型的脂蛋白(HDL、LDL和VLDL)以及不同类型脂蛋白的混合物共同保温来测定第4号肽(序列标识号：4)与人类脂蛋白组分的结合。

HDL、LDL和VLDL的分离是在d=1．21g／ml下进行KBr密度梯度超速离心，并通过Superose 6B分子筛柱的FPLC而得以实现(层析的实现条件是流速为0．7ml／min，流动缓冲液为10mM Tris(pH8)，115mM NaCl，2mM EDTA和0．01％NaN₃)。将¹⁴C-标记的第4号肽与HDL、LDL和VLDL以1∶5的肽：脂比率(质量比)于37℃共保温2小时。将所需量的脂蛋白(体积取决于要能够满足1000μg的所需量)与0．2ml肽贮液(1mg／ml)混合，并根据表ⅩⅢ用0．9％的NaCl定容至2．2ml：

表ⅩⅢ肽-脂蛋白样品的制备

	HDL(ml)	LDL(ml)	VLDL(ml)	0．9％NaCl(ml)	14C-标记的第4号肽(ml)	总体积(ml)
							对照				2．0	0．2	2．2
LP／肽	0．4	0．3	0．9	0．4	0．2	2．2
							HDL／肽	0．4			1．6	0．2	2．2
LDL／肽		0．3		1．7	0．2	2．2
							VLDL／酞			0．9	1．1	0．2	2．2

于37℃保温2小时后，取样(0．1ml)用于液体闪烁计数以确定总放射性，用KBr将剩余的保温混合物的密度调至1．21g／ml，并利用Beckman桌面超速离心机及ILA 100．3转头将样品于100，000rpm(300，000g)和4℃条件下离心24小时。从所得各上清液的顶部每次吸取0．3ml试样，共吸取5份，每份组分取0．05ml用于液体闪烁计数。前两份中包含漂浮的脂蛋白，其余组分(3-5)则相当于溶解的蛋白／肽。

9．5．2．结果

结果显示于下表ⅩⅣ。¹⁴C-标记的第4号肽与分离的脂蛋白组分的保温结果揭示了肽与HDL的强结合作用(第1和第2组分的总放射性为88％)以及与VLDL的强结合作用(85％)，而与LDL的亲和力则弱得多(66％)。包含所有脂蛋白成分以及¹⁴C-标记的第4号肽的保温混合物(LP／肽)则显示出有88％的标记肽与脂蛋白成分相结合。LP／肽保温混合物的FPLC分析表明，几乎所有的¹⁴C-标记的第4号肽均与HDL成分相结合，显示出对该脂蛋白类型有很高的选择性。

表ⅩⅣ第4号肽(序列标识号：4)与不同脂类的结合

组分	对照	LP／肽	HDL／酞	LDL／肽	VLDL／肽
						1234共计总数*	6501000659036550343807917088550	60250129903810151050908365096646	61510176202260313054508997098494	43740151401188010860771089330100452	42920192803930260045507328097306
回收率(％)	89	87	91	89	75

*离心前

9．6．第4号肽(序列标识号：4)在人类血浆中可选择性结

合HDL脂类

9．6．1．实验方法

将人类血浆(2ml)与20、40、60、80和100μg¹⁴C-标记的第4号肽在37℃条件下保温2小时。将其密度调整至1．21g／ml，并用TLA 100．3转头在100，000rpm(300，000g)及4℃条件下离心36小时以分离脂蛋白。从顶部取900μl(每份300μl)用于分析。从300μl的组分中各取50μl进行放射性计数，各取200μl进行FPLC分析(Superose 6／Superose 12柱联合使用)。

9．6．2．结果

各组分的放射性回收率显示于下表ⅩⅤ。在顶部的三份组分中回收了大多数的放射性。与¹⁴C-标记的第4号肽(序列标识号：4)共保温的血浆样品的所有脂蛋白分离曲线(未给出)均表明，在各种情况下，几乎全部的放射性都出现在HDL组分中。因此，尽管人类血清中存在其它脂蛋白，但第4号肽(序列标识号：4)仍显示出与HDL的高度选择性结合。

表ⅩⅤ

由¹⁴C-标记的第4号肽与人类血清的保温产物回收的放射性

肽	组分	放射性(cpm*)		回收率**
					(μg)	编号	50μl中	300μl中	(％)
20	123	1407405152	84422430912	71.620.67.7
					40	123	2538721347	1522843262082	70.4209.6
60	123	44921107354	2695266422124	75.518.65.9
					80	123	471 52251851	28290135065346	6028.611.3
100	123	54241708907	32544102485442	67.521.211.3

*300μl中的值为50μl中的值乘以6。**根据用于与血浆混合的最初总数。

10．    实施例：AooA-I激动剂可提高胆固醇外流

将HepG2肝癌细胞铺于6孔培养皿上并生长至相互汇合，通过胆固醇干燥使³H-胆固醇标记细胞，然后在磷酸缓冲盐溶液中加入1％牛血清白蛋白(BSA)，将溶液超声，再将细胞加入0．2 ml标记液及1．8ml生长培养基中，使每孔的放射性达到2μCi。将细胞在标记培养基中培养24小时。

以1∶2的肽(或蛋白)∶DMPC比率(w∶w)制备肽(或蛋白)∶DMPc复合物。制备该复合物可第4号肽(序列标识号：4)或天然人类ApoA-Ⅰ蛋白加入溶于PBS的DMPC溶液并在室温下保温过夜，以使溶液澄清。终溶液中的肽或蛋白浓度为1mg／ml。

从标记培养基中分离细胞，并用PBS清洗，然后加入复合物。每孔加1．6ml生长培养基，然后加入肽(或蛋白)∶DMPC复合物，并加入足够的PBS使每孔的终体积为2ml。肽或ApoA-Ⅰ的终浓度为1、2．5、5、7．5和25μg／ml培养基。37℃培养24小时，然后去除培养基，并将细胞用2ml 1％的BSA／PBS清洗，再用PBS清洗2次，每次2ml。通过液体闪烁计数测定培养基中的3H-胆固醇外流。

结果表明第4号肽(序列标识号：4)在胆固醇外流方面比ApoA-Ⅰ更有效。

11．实施例：ApoA-Ⅰ激动剂在动物模型系统中的使用

利用兔子来论证本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂的疗效。结果表明，ApoA-Ⅰ激动剂的给药可提高血清中HDL-样颗粒的浓度。

11．1．磷脂／肽复合物的制备

包含磷脂(DPPC)及肽的盘状微粒的制备采用胆酸盐透析法。将磷脂溶于氯仿并在氮气气流下干燥。肽以1-2mg／ml的浓度溶于缓冲液(生理盐水)。将脂膜重溶于含胆酸盐的缓冲液(43℃)并以3∶1的磷脂／肽质量比加入肽溶液。混合物于43℃保温过夜，然后在43℃(24小时)、室温(24小时)和4℃(24小时)下透析，在改变温度时更换缓冲液，共换三次。将复合物过滤消毒(0．22μm)以用于注射或4℃保存。

11．2．肽／磷脂颗粒的分离及特征鉴定

利用凝胶过滤柱(Superose 6HR)分离颗粒。通过测量每个组分中磷脂的浓度来确定包含该颗粒的峰位。由洗脱体积确定Stokes半径。通过16小时酸解后测量苯基丙氨酸含量(利用HPLC)的方法来确定复合物中肽的浓度。

11．3．注射兔子

用一服磷脂／肽复合物(5或10mg／kg体重，以肽的量来计算)以静脉内注射方式注射雄性新西兰大白兔(2．5-3kg)，单次快速浓注的体积不超过10-15ml。处理兔子前为其注射少量镇静剂。在注射前以及注射后5、15、30、60、240和1440分钟时采集血样(采血时加EDTA)。测定每份样品的血细胞比容。将样品分装，分析前保存于-20℃。

11．4．兔血清分析

血脂。总血胆固醇、血浆甘油三酯以及血磷脂的测定是以酶法利用商品化的测试制剂按厂商提供的规程加以操作(BoehringerMammheim，Mannheim，Germany and Biomérieux，69280，Marcy-L’étoile，France)。

脂蛋白分布。通过在蔗糖密度梯度中的离心来确定血浆按其脂蛋白组分分离后各组分的血浆脂蛋白分布情况。收集各组分并以酶法对各组分的磷脂和胆固醇含量加以分别测定。

11．5．结果

注射10mg／kg第4号肽(序列标识号：4)(以肽／DPPC复合物形式)的兔子中脂蛋白随时间的分布情况显示于图10。注射后5分钟时可明显观测到HDL胆固醇组分(组分＞1．06mg／ml)中胆固醇的显著增加，并持续约1小时。

经密度梯度超速离心获得的HDL组分合并后的胆固醇水平显示于下表ⅩⅥ。HDL胆固醇最大的增加量(31．3％)出现在给药后15分钟。

这些数据表明，第4号肽／DPPC复合物的给药(10mg／kg)可快速而有效地引起外周胆固醇的动员。

表ⅩⅥ将第4号肽(序列标识号：4)按10mg／kg给药后的兔子中的HDL

胆固醇情况

时间(分)	HDL胆固醇	HDL胆固醇的增加(％)
			0	325
	408	25．2
			15602401440	428387291347	31．318．9-10．76．6

第4号肽／DPPC复合物对剂量的依赖性显示于下表ⅩⅦ。由这两个时间点可近似看出对剂量的线性依赖性。表ⅩⅦ将第4号肽／DPPC复合物给药后的HDL胆固醇水平的剂量依赖性

剂量	HDL胆固醇(5分钟)	HDL胆固醇(15分钟)	HDL胆固醇(60分钟)
				5mg／kg5mg／kg平均增加(％)	33．74941．4	284035．0	602040．0
10mg／kg10mg／kg平均增加(％)	60．73547．9	7542．558．8	121．335．678．5

注射5mg／ml第1号肽(序列标识号：1)(以肽／DPPC复合物形式)或10mg／ml第3号肽(序列标识号：3)(以肽／DPPC复合物形式)后HDL胆固醇的增加百分率显示于下表ⅩⅧ。

表ⅩⅧ

时间(分钟)	增加(％)(第1号肽，5mg／kg)	增加(％)(第3号肽，10mg／kg)
			153060240	24．39540．729	84716014．5

这些实验表明，本发明所述ApoA-Ⅰ激动剂能够增加HDL-胆固醇的量。第1号肽(序列标识号：1)及第3号肽(序列标识号：3)给药后甚至4小时时还可观测到HDL胆固醇的显著增加。

12．实施例：利用联合冻干法制备肽-脂复合物

以下为肽-脂复合物的制备规程。

利用带帽的1ml透明指管(Waters #WAT025054)将1mg第4号肽(序列标识号：4)溶于250μl纯度为HPLC级的甲醇(PerkinElmer)中。室温下以10分钟周期不时旋转振荡以促进肽的溶解。从100mg／ml的二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC；Avanti Polar Lipids，99％纯度，产品编号 #850355)贮液中吸取含1、2、3、4、5、7．5、10或15mg DPPC的试样加入上述混合物中。加入甲醇使混合液体积达400μl，并进一步在室温下以10分钟周期不时旋转振荡。每管加入200μl二甲苯(Sigma-Aldrich 99％纯度，HPLC级)，并每10秒钟旋转振荡一次。用规格为20的注射器针头在每管的顶部穿两个小孔，并将各管置液氮中冷冻15秒，然后在真空下透析过夜。每管加入200μl 0．9％的NaCl溶液。并各振荡20秒。此时管中溶液从外观上为乳状。然后将各管置41℃水浴中保温30分钟。除含有15ml DPPC的那一管仍呈浑浊状外，其余所有管中的溶液均变澄清(即，从外观上与水类似)。

以下为用于在体实验的肽-脂复合物的更大批量制备规程。

通过共保温数分钟并不时振荡混合的方法将第4号肽(序列标识号：4)(22．4mg)以3．5mg／ml浓度溶于甲醇。在该溶液中加入溶于甲醇的二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)(100mg／ml贮液)，使DPPC／肽的最终比率为2．5∶1(w／w)。通过旋转振荡将溶液混合。然后在该溶液中加入二甲苯，终浓度36％。从所得溶液中取出试样用于后面的凝胶过滤层析。将溶液冷冻于液氮中并在真空下冻干。用无菌生理盐水溶液(0．9％ NaCl)将一份含20mg肽和50mg DPPC的试样重新水化，混匀，并在41℃下加热数分钟，直至所得肽磷脂复合物溶液重新变为澄清。

12．1．利用Superose 6凝胶过滤层析鉴定复合物的特性

利用文中所述的联合冻干法制备包含有14C-标记的第4号肽(序列标识号：4)(比放射性159，000 DPM／mg肽重量，假定肽含量为50％)的肽-磷脂复合物。按重量计算，则该制剂中包含有1mg肽和4mg DPPC。将该复合物重构于200μl 0．9％的NaCl，然后取20μl(100μg)上样到Pharmacia Superose 6柱上，流动相用0．9％NaCl，流速0．5ml／minute。延迟5ml后(柱的外水体积=7．7ml)，以每份1ml收集组分。各组分取20μl试样用于磷脂含量测试，测试采用bioMerieux Phospholipides Enzymatique PAP 150试剂盒(#61491)，并按厂商提供的说明加以操作。各组分的剩余部分用于Wallach 1410液体闪烁计数仪(Pharmacia)的计数，计数采用EasyCount程序，时间3分钟。大多数的磷脂和肽都被共同回收在少数几份组分中，峰位约为16ml。该样品的紫外吸光度曲线(未给出)表明，复合物从柱上被洗脱下来时的体积为14．7ml。由放射性／磷脂测试和紫外吸光度法测定的洗脱体积之间存在的差异是由紫外吸光流动池和分部收集器出口间的导液管存在1．3ml的死体积而导致的。该洗脱体积与114埃的Stokes半径相符合。约15-19ml的洗脱体积相当于颗粒的Stokes半径为50-120埃，这正是人类HDL的尺寸范围。

12．2．人类HDL的Superose 6凝胶过滤层析

人类HDL₂的制备如下：将300ml冻结的人类血浆(MannheimBlutspendzentrale #1185190)解冻，用固体溴化钾将其密度调至1．25，然后用Ti45转头(Beckman)在40，000 RPM和20℃条件下离心45小时。收集浮层，并对蒸馏水透析，用固体溴化钾将其密度调至1．07，然后在上述条件下再离心70小时。收集底层(在离心管底部以上1cm)，加入叠氮化钠至0．01％，在进行层析前于4℃保存4天。将20μl HDL2上样至Pharmacia Superose6 FPLC凝胶过滤层析系统中，以0．9％的NaCl作为柱的洗出液。柱的流速为0．5 ml／min。利用在254nm波长下的吸光度或光散射监控柱洗出液。用一系列已知分子量和Stokes半径的蛋白作为柱的校准标准，以计算颗粒的Stokes半径(Pharmacia Gel Filtration Calibration KitInstruction Manual，Pharmacia Laboratory Separation，Piscataway，NJ，Revised April 1985)。洗脱的HDL的保留体积为14．8ml，相当于Stokes半径为108nm。

13．实施例：抗体的制备

将第4或第8号肽与钥孔_血蓝素(KLH；1mg肽用10mg KLH)结合。将KLH结合物(LMG)悬浮于Freund’s完全佐剂，并注射兔子，记为时间0，4周及5周后再两次进行0．25mg的促升注射。利用ELISA测定免疫前血样和免疫六周后血样对可靠抗原的抗体效价。

分别收集2只兔子的血液产品。专门与肽抗原作用的抗体的纯化方法如下：

1．按厂商规程将游离肽连接到经溴化氰活化的Sepharose 4B(Pharmacia)上。

2．利用含有不相关肽的柱和含有不相关的人类和小鼠血清蛋白的柱预吸收抗血清。

3．使经过预吸收的抗血清穿过含有相关肽的柱(见第1点)。

4．用0．1M硼酸缓冲盐溶液(pH8．2)清洗柱，结合抗体的洗脱是利用较小的pH梯度变化从pH4．0到pH3．0再到pH2．0(0．1M甘氨酸缓冲液)，最后用0．1M HCl洗柱。

5．洗脱液用过量硼酸盐溶液中和，并超滤浓缩(Amicon，YM30)，然后对硼酸盐溶液透析。

6．利用280nm波长下的吸光度测量蛋白的浓度。

所得抗体的物种特异性已在ELISA直接结合测试中利用纯化的人类ApoA-Ⅰ或纯化的小鼠ApoA-Ⅰ进行了检验。人类和小鼠抗体均对人类ApoA-Ⅰ具有特异性，并显示出极小的交叉活性。

本发明并非局限于打算用作本发明个别方面的个别例证的那些特定实施方案所规定的范围之内，从功能上等价的方法和成分亦处在本发明范围内。除文中已给出及已描述的之外，确实有许多改进对具有该领域技能的专家而言显然源于前文的描述和附图。这些改进将处于附加权利要求的范围之内。

从各方面而言，文中引用的所有参考资料都将作为引文被包括在内。

                          序列表

(1)一般信息(ⅰ)申请人：Dasseux, Jean-Louis

          Sekul, Renate

          Buttner, Klaus

          Cornut, Isabelle

          Metz,  Gunther

          Dufourcq, Jean(ⅱ)发明名称：APOLIPOPROTEIN A-I AGONISTS

    AND THEIR USE TO TREAT DYSLIPIDEMIC DISORDERS(ⅲ)序列数：254(ⅳ)通讯地址

(A)住址：pennie & Edmonds LLP

(B)街道：1155 Avenue of the Americas

(C)城市：New York

(D)州：NY

(E)国家    USA

(F)邮编：10036-2811(ⅴ)计算机可读形式

(A)媒介类型：盘

(B)计算机：IBM兼容

(C)操作系统：DOS

(D)软件：FastSEQ Version 2．0(ⅵ)现有申请资料

(A)申请号：PCT／US98／20327

(B)提交日：28-SEP-1998

(C)分类：(ⅶ)在先申请数据

(A)申请号：08／940，095

(B)提交日    29-SEP-1997(ⅷ)律师／代理人资料

(A)姓名：Coruzzi，Laura A

(B)登记号：30，742

(C)参考／案卷号：009196-0004-228(ⅸ)电信资料

(A)电话：650-493-4935

(B)传真：650-493-5556

(C)电传：66141 PENNIE

(2)SEQ ID NO：1资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：16

  (D)其他信息：          Xaa=Naphthylalanine

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：1：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Xaa1              5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：2资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  23氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

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(ⅹⅰ)序列描述：  SEQ ID NO：2：Gly Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：3资料：

(ⅰ)序列特征：

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  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：3：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Trp1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：4资料：

(ⅰ)序列特征：

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  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

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(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：4：Pro Val Leu Asp Leu Pha Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

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  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1

  (D)其他信息：          Xaa=D-Pro

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：5：Xaa val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：6资料：

(ⅰ)序列特征：

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  (A)名称／关键词：其他

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  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：6：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

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(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：7：Pro Val Leu Asp Leu Phe Lys Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

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(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：8：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

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        20

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  (A)名称／关键词：其他

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(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：10：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Lau Glu Ala1               5                  10                  15Xaa Lys Gln Lys Leu Lys

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        20

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(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：12：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Gly Lys Gln Lys Leu Lys

        20

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(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

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(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：13：Gly Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Ash Glu Gly Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

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(ⅰ)序列特征：

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  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：18

  (D)其他信息：            Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：20

  (D)其他信息：            Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：22

  (D)其他信息：            Xaa=Orn

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：14：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Xaa Gln Xaa Leu Xaa

        20

  (2)SEQ ID NO：15资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：15：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Trp Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：16资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：16：Pro Val Leu Asp Leu Leu Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：17资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：17：Pro Val Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

       20

  (2)SEQ ID NO：18资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：18：Gly Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：19资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1

  (D)其他信息：          Xaa=D-Pro

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：19：Xaa Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：20资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：20：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Gly Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：21资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1

  (D)其他信息：            Xaa=D-Pro

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：21：Xaa Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：22资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：22：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Gly1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：23资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：23Pro Leu Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：24资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：24：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：25资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：25：Pro Val Leu Asp Phe Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：26资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：26：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Leu1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：27资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：14

  (D)其他信息：          Xaa=Naphthylalanine

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：27：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Xaa Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：28资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：28：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Trp Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：29资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：29：Ala Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：30资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…22

  (D)其他信息：          N-terminal dansylated peptide

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：30：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：31资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：31：Pro Val Leu Asp Leu Phe Leu Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：32资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：32：Xaa Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：33资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度： 22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：33：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：34资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：5

  (D)其他信息：              Xaa=Napntnylalanine

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：34：Pro Val Leu Asp Xaa Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：35资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：35：Pro Val Leu Asp Trp Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：36资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：36：Pro Leu Leu Glu Leu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：37资料：(ⅰ)序列特征：(A)长度：    22氨基酸(B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：37：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Trp Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：38资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：38：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Trp Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：39资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：39：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ala1               5                  10                  15Leu Lys Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：40资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：40：Pro Val Leu Asp Leu Phe Asn Glu Leu Leu Arg Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

         20

  (2)SEQ ID NO：41资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：41：Pro Val Leu Asp Leu Trp Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：42资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：42：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Trp Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：43资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：43：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Trp Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：44资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…22

  (D)其他信息：所有遗传编码的氨基酸均为D型

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：              SEQ ID NO：44：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：45资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：45：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：46资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其它信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：46：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：47资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：47：Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala Leu1               5                  10                  15Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：48资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1

  (D)其他信息：          Xaa=D-Pro

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：2

  (D)其他信息：          Xaa=D-Val

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：4B：Xaa Xaa Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               S                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：49资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：49：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Glu Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：50资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：50：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Trp Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：51资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：51：Pro Val Leu Asp Leu Phe Trp Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：52资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：52：Pro Val Trp Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：53资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：53：Val Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：54资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：54：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Trp Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

       20

  (2)SEQ ID NO：55资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  19氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：55：Pro Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala Leu Lys Gln1               5                  10                  15Lys Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：56资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：56：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Lys Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：57资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：57：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Asn Leu Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ala1               5                  10                  15Leu Glu Gln Lys Leu Lys

20

  (2)SEQ ID NO：58资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  21氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：58：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu

        20

  (2)SEQ ID NO：59资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：59：Leu Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：60资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：60：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln

  (2)SEQ ID NO：61资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓扑：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：61：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Trp Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        2O

  (2)SEQ ID NO：62资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (D)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：62：Pro Val Leu Asp Glu Trp Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15LeU Lys Gln Lys Leu Lys

        2O

  (2)SEQ ID NO：63资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEO ID NO：63：Pro Val Leu Asp Phe Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        2O

  (2)SEQ ID NO：64资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：64：Pro Trp Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu ASh Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：65资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  21氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：12

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：65：Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala Leu1               5                  10                  15Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：66资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：66：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Asn Leu Leu Glu Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：67资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  21氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性(ⅱ)分子类型：无(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：67：Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala Leu1               5                  10                  15Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：68资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：68：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Lys Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：69资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：69：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Lys Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                   15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：70资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：70：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Tyr Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：71资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：14

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：71：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Leu Xaa Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：72资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：72：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Trp Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：73资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：73：Pro Val Leu Asp Glu Phe Trp Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：74资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：74：Pro val Leu Asp Lys Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：75资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：75：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：76资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：76：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Phe Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        2O

  (2)SEQ ID NO：77资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：    22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)搭型：革譬

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：    Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：77：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Lys Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID No：78资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：    22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：    Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：78：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Asp Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala 1               5                   10               15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：79资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO：79：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：80资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO：80：Pro Val Leu Asp Leu Phe Glu Arg Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：81资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：        Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：81：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Trp Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：82资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：11

  (D)其他信息：        Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：82：Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala Leu Lys1               5                  10                  15Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：83资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：        Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：83：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Trp Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：84资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：84：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        2O

  (2)SEQ ID NO：85资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：85：Pro Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala Leu1               5                  10                  15Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：86资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：86：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Arg Leu Leu Asp Glu Leu Leu Asn Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：87资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…22

  (D)其他信息：所有氨基酸为D型

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：87：Pro Leu Leu Glu Leu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：88资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：88：Pro Val Leu Asp Lys Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：89资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：89：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Trp Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

          20

  (2)SEQ ID NO：90资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  19氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：10

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：90：Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala Leu Lys Gln1               5                  10                  15Lys Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：91资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：91：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：92资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：        Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：92：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Tyr Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：93资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：        Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：93：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Lys Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：94资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：94：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Ala Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：95资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：95：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Leu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

         20

  (2)SEQ ID NO：96资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…22

  (D)其他信息：所有遗传编码的氨基酸为D型

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：96：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

       20

  (2)SEQ ID NO：97资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  15氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：97：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu1               5                  10              15

  (2)SEQ ID NO：98资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：98：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Lau Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：99资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：99：Lys Leu Lys Gln Lys Leu Ala Glu Leu Leu Glu Asn Leu Leu Glu Arg1               5                  10                  15Phe Leu Asp Leu Val Pro

        2O

  (2)SEQ ID NO：100资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…2

  (D)其他信息：所有氨基酸均为D型

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：100：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：101资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：101：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Trp Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：102资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：102：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Leu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Glu Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：103资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：103：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：104资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  15氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：104：Pro Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala Leu Lys Gln Lys Leu Lys1               5                  10                  15

  (2)SEQ ID NO：105资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：105：Pro Ala Ala Asp Ala Phe Arg Glu Ala Ala Asn Glu Ala Ala Glu Ala1               5                  10                  15Ala Lys Gln Lys Ala Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：106资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：107资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…22

  (D)其他信息：All

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO：107Lys Leu Lys Gln Lys Leu Ala Glu Leu Leu Glu Asn Leu Leu Glu Arg1               5                  10                  15Phe Leu Asp Leu Val Pro

        2O

  (2)SEQ ID NO：108资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (D)其他信息：

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO：108Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Trp Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

       20

  (2)SEQ ID NO：109资料：

(ⅰ)序列特征：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：109：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Arg Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：110资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：14

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：110：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Xaa Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：111资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：111：Pro Val Lau Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Trp Glu Xaa Trp Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：112资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：        Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：112：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Ser Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：113资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：113：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Pro Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：114资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：114：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Met Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：115资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：115：Pro Lys Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：116资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：116：Pro His Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：117资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (D)其他信息：            Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：117：Pro Glu Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：118资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：13

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：118：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Glu Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：119资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：17

  (D)其他信息：        Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：119：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Xaa Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：120资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：16

  (D)其他信息：          Xaa=Aib

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：120：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Xaa1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：121资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：121：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Trp Gln Lys Leu Lys

     20

  (2)SEQ ID NO：122资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：122：Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Trp1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

       20

  (2)SEQ ID NO：123资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：123：Gln Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：124资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：18

  (D)其他信息：          Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：20

  (D)其他信息：          Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：22

  (D)其他信息：    Xaa=Orn

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：124：Pro Val Leu Asp Leu Phe Xaa Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Xaa Gln Xaa Leu Xaa

        20

  (2)SEQ ID NO：125资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度： 22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：125：Asn Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：126资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：126：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu ASn Glu Leu Gly Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        2O

  (2)SEQ ID NO：127资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO：127：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Leu1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：128资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：128：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Phe1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：129资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：129：Pro Val Leu Glu Leu Phe Asn Asp Leu Leu Arg Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：130资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：130：Pro Val Leu Glu Leu Phe Asn Asp Leu Leu Arg Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

   20

  (2)SEQ ID NO：131资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：131：Pro Val Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Arg Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：132资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：  SEQ ID NO：132：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Asn Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：133资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：133：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Arg Leu Leu Glu Asp Leu Leu Gln Ala1               5                  10                  15Leu Asn Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：134资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：134：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Arg Leu Leu Glu Asp Leu Leu Lys Ala1               5                  10                  15Leu Asn Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：135资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：135：Asp Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

       20

  (2)SEQ ID NO：136资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：136：Pro Ala Leu Glu Leu Phe Lys Asp Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：137资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：17

  (D)其他信息：          Xaa=Naphthylalanine

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：137：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1               5                  10                  15Xaa Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：138资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：138：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Trp1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：139资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：139：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Trp Asn Glu Gly Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：140资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：18

  (D)其他信息：        Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：20

  (D)其他信息：        Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：22

  (D)其他信息：        Xaa=Orn

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：140：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Xaa Gln Xaa Leu Xaa

        20

  (2)SEQ ID NO：141资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：141：Pro Val Leu Asp Phe Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：142资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：142：Pro Val Leu Glu Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：143资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…22

  (D)其他信息：N-未端乙酰化和C-未端酰胺化的肽

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：143：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Lys Gln Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：144资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1

  (D)其他信息：          Xaa=D-Pro

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：144：Xaa Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：145资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：145：Gly Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：146资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：146：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：147资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：147：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Phe Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：148资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：148：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Gly Asp Ala  1              5                 10                 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

       20

  (2)SEQ ID NO：149资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：149：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Trp Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：150资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：150：Pro Leu Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：151资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：151：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Gly Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：152资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：152：Pro Val Phe Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：153资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：153：Ala Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：154资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：154：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Gly Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：155资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：155：Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Trp Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：156资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：156：Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：157资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：157：Pro Val Leu Glu Phe Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：158资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：              SEQ ID NO：158：Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Trp  1              5                         10                          15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：159资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：159：Pro Val Leu Asp Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：160资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：160：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Trp1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：161资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：161：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：162资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：162：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Trp Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：163资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：163：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Trp Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：164资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：              SEQ ID NO：164：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Trp Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：165资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：165：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Leu1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：166资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：166：Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：167资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：167：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Gly Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：168资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：168：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Gln Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Ala 1               5                    10                   15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：169资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：169：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：170资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：12

  (D)其他信息：        Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：19

  (D)其他信息：        Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：20

  (D)其他信息：        Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：22

  (D)其他信息：        Xaa=Orn

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：170：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Xaa Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Xaa Xaa Leu Xaa

        20

  (2)SEQ ID NO：171资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：171：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Leu1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：172资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：172：Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Gly Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：173资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：173：Pro Val Leu Asp Leu Phe Asp Asn Leu Leu Asp Arg Leu Leu Asp Leu1               5                  10                  15Leu Asn Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：174资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)：特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…22

  (D)其他信息：所有氨基酸均为D型

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：174：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：175资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：175：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Leu1               5                  10                  15Leu Asn Lys Lys Leu Lys

        2O

  (2)SEQ ID NO：176资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：176：Pro Val Leu Glu Leu Trp Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        2O

  (2)SEQ ID NO：177资料：Gly Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：178资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：178：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：177：Pro Val Leu Glu Leu Phe Asp Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Arg

        20

  (2)SEQ ID NO：179资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：179：Pro Val Leu Glu Leu Phe Asp Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：180资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：180：Pro Val Leu Glu Leu Phe Asp Asn Leu Leu Asp Lys Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Arg

        20

  (2)SEQ ID NO：181资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：181：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Trp Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：182资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：182：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：183资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：183：Pro Leu Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Ala 1               5                          10                         15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：184资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：184：Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Trp Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：185资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：19

  (D)其他信息：        Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：20

  (D)其他信息：        Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：22

  (D)其他信息：        Xaa=Orn

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：185：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Xaa Xaa Leu Xaa

        20

  (2)SEQ ID NO：186资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：186：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Gln Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：187资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：187：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Asn Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：188资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：188：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Asp Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID NO：189资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：189：Asp Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Lys

        20

  (2)SEQ ID No：190资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  22氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓扑：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：190：Pro Val Leu Glu Phe Trp Asp Asn Leu Leu Asp Lys Leu Leu Asp Ala1               5                  10                  15Leu Gln Lys Lys Leu Arg

        20

  (2)SEQ ID NO：191资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEO ID NO：191：Pro Val Leu Asp Leu Leu Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：192资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息： N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：192：Pro Val Leu Asp Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：193资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：193：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：194资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：194：Pro Val Leu Glu Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：195资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：195：Pro Val Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：196资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：196：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Asn Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：197资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型号：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1...18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅸ)序列描述：    SEQ ID NO：197：Pro Leu Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu GlU Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                     15Leu Lys

(2)SEQ ID NO：198资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：SEQ ID NO：198：Gly Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1                5                  10                      15Leu Lys

(2)SEQ ID NO：199资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1...18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：199：

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：199：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Trp Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：200资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：200：Asn Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：201资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：201：Pro Leu Leu Asp Leu Phe Lya Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：202资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (c)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：202：Pro Ala Leu Glu Leu Phe Lys Asp Leu Lau Glu Glu Leu Arg Gln Lys1                  5                10                   15Leu Arg

  (2)SEQ ID NO：203资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：    18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：203：Ala Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1                5                 10                     15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：204资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：204：Pro Val Leu Asp Phe Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：205资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：205：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Trp Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：206资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：206：Pro Leu Leu Glu Leu Leu Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：207资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：207：Pro Val Leu Glu Leu Leu Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：208资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：208：Pro Ala Leu Glu Leu Phe Lys Asp Leu Leu Glu Glu Leu Arg Gln Arg1               5                   10                 15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：209资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：209：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：210资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：210：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：211资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：14

  (D)其他信息：          Xaa=Orn

  (A)名称／美键词：其他

  (B)位置：16

  (D)其他信息：          Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：18

  (D)其他信息：          Xaa=Orn

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：211：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Xaa Gln Xaa1               5                  10                  15Leu Xaa

  (2)SEQ ID NO：212资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：7

  (D)其他信息：          Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：14

  (D)其他信息：          Xaa=Orn

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：16

  (D)其他信息：          Xaa=Orn

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：212：Pro Val Leu Asp Leu Phe Xaa Glu Leu Leu Glu Glu Leu Xaa Gln Xaa1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：213资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：213：Pro Ala Leu Glu Leu Phe Lys Asp Leu Leu Glu Glu Phe Arg Gln Arg1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：214资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：

  (D)其他信息：Pro为D型

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：214：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：215资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：215：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Trp Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：216资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：216：Pro Val Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：217资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：217：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Leu Leu Lys Gln Lys1                     5                          10                          15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：218资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：218：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：219资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：219：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Trp Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：220资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：220：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Gln Lys Lys1               5                  10                  15Leu Lys

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(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：221：Asp Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

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(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：222：Pro Val Leu Asp Ala Phe Arg Glu Leu Leu Glu Ala Leu Leu Gln Leu1               5                  10                  15Lys Lys

  (2)SEQ ID NO：223资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：223：Pro Val Leu Asp Ala Phe Arg Glu Leu Leu Glu Ala Leu Ala Gln Leu1               5                  10                  15Lys Lys

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(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：224：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Gly Trp Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：225资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：225：Pro Val Leu Asp Ala Phe Arg Glu Leu Ala Glu Ala Leu Ala Gln Leu1               5                  10                  15Lys Lys

  (2)SEQ ID NO：226资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：226：Pro Val Leu Asp Ala Phe Arg Glu Leu Gly Glu Ala Leu Leu Gln Leu1               5                  10                  15Lys Lys

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(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：227：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Gly Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

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(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

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(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位詈：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：228：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Gly Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1              5                   10                  15Leu Lys

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(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

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(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：229：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Gly Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

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(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

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(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：230：Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Arg Leu Leu Glu Asp Leu Gln Lys Lys1               5                  10                  15Leu Lys

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(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：231：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Glu Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

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(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

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  (D)拓朴：线性

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(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：232：Pro Leu Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15Leu Lys

  (2)SEQ ID NO：233资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：233：This sequence has been intentionally skipped

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(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：

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(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：234：This sequence has been intentionally skipped

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(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：

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  (C)链型：

  (D)拓朴：

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(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：235：This sequence has been intentionally skipped

  (2)SEQ ID NO：236资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：

  (B)类型：

  (C)链型：

  (D)拓朴：

(ⅱ)分子类型：

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：236：This sequence has been intentionally skipped

  (2)SEQ ID NO：237资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：      SEQ ID NO：237：Leu Asp Asp Leu Leu Gln Lys Trp Ala Glu Ala Phe Asn Gln Leu Leu1               5                  10                  15Lys Lys

  (2)SEQ ID NO：238资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：238：Glu Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Glu Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu1               5                  10                  15Leu Phe

  (2)SEQ ID NO：239资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：239Glu Trp Leu Glu Ala Phe Tyr Lys Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu1               5                  10                  15Leu Phe

  (2)SEQ ID NO：240资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：240：Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu1               5                  10                  15Ala Phe

  (2)SEQ ID NO：241资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：241：Asp Trp Phe Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Phe Glu Lys Phe Lys Glu1               5                  10                  15Phe Phe

  (2)SEQ ID NO：242资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：242：Gly Ile Lys Lys Phe Leu Gly Ser Ile Trp Lys Phe Ile Lys Ala Phe1               5                  10                  15Val Gly

  (2)SEQ ID NO：243资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：243：Asp Trp Phe Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Phe Lys Glu1               5                  10                  15Ala Phe

  (2)SEQ ID NO：244资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：244：Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu1               5                  10                  15Ala Phe

  (2)SEQ ID NO：245资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：        SEQ ID NO：245：Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Phe Glu Lys Phe Lys Glu1               5                  10                  15Phe Phe

  (2)SEQ ID NO：246资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：246：Glu Trp Leu Glu Ala Phe Tyr Lys Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu1               5                  10                  15Leu Phe

  (2)SEQ ID NO：247资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：247：Asp Trp Phe Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Phe Phe Glu Lys Phe Lys Glu1               5                  10                  15Phe Phe

  (2)SEQ ID NO：248资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：248：Glu Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Glu Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu1               5                  10                  15Leu Phe

  (2)SEQ ID NO：249资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：249：Glu Trp Leu Lys Ala Glu Tyr Glu Lys Val Glu Glu Lys Leu Lys Glu1               5                  10                  15Leu Phe

  (2)SEQ ID NO：250资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：    SEQ ID NO：250Glu Trp Leu Lys Ala Glu Tyr Glu Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys GluI               5                  10                  15Leu Phe

  (2)SEQ ID NO：251资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  18氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…18

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：251：Glu Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Lys Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu1               5                  10                  15Leu Phe

  (2)SEQ ID NO：252资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  15氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…15

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：252：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Gln Lys Leu Lys1               5                  10                  15

  (2)SEQ ID NO：253资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  16氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…16

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：253：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15

  (2)SEQ ID NO：254资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  16氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…16

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：254：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15

  (2)SEQ ID NO：255资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  15氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…15

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：            SEQ ID NO：255：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Gln Lys1               5                  10              15

  (2)SEQ ID NO：256资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  16氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…16

  (D)其它信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：256：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Ala Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15

  (2)SEQ ID NO：257资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  16氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…16

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：257：Pro Val Leu Asp Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15

  (2)SEQ ID NO：258资料：

(ⅰ)序列特征：

  (A)长度：  16氨基酸

  (B)类型：氨基酸

  (C)链型：单链

  (D)拓朴：线性

(ⅱ)分子类型：无

(ⅸ)特征：

  (A)名称／关键词：其他

  (B)位置：1…16

  (D)其他信息：N端乙酰化，C端酰胺化

(ⅹⅰ)序列描述：          SEQ ID NO：258：Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Lys Gln Lys1               5                  10                  15

Claims (56)

1．一种ApoA-Ⅰ激动剂，包括：

(ⅰ)一种含15-29个残基的肽或肽类似物，该肽或肽类似物在脂类参与情况下可形成两亲性α-螺旋，并且包含结构式(Ⅰ)：Z₁-X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆-X₁₇-X₁₈-X₁₉-X₂₀-X₂₁-X₂₂-X₂₃-Z₂

或其药学上容许的盐，其中：

X₁为Pro(P)、Ala(A)、Gly(G)、Gln(Q)、Asn(N)、Asp(D)或D-Pro(p)；

X₂为一种脂肪族残基；

X₃为Leu(L)或Phe(F)；

X₄为一种酸性残基；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为一种亲水性残基；

X₈为一种酸性或碱性残基；

X₉为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₀为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₁为一种亲水性残基；

X₁₂为一种亲水性残基；

X₁₃为Gly(G)或一种脂肪族残基；

X₁₄为Leu(L)、Trp(W)、Gly(G)或Nal；

X₁₅为一种亲水性残基；

X₁₆为一种疏水性残基；

X₁₇为一种疏水性残基；

X₁₈为Gln(Q)、Asn(N)或一种碱性残基；

X₁₉为Gln(Q)、Asn(N)或一种碱性残基；

X₂₀为一种碱性残基；

X₂₁为一种脂肪族残基；

X₂₂为一种碱性残基；

X₂₃可不存在或为一种碱性残基；

Z₁为H₂N-或RC(O)NH-；

Z₂为-C(O)NRR、-C(O)OR或-C(O)OH或其盐；

每个R各自独立地为-H、(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烯基、(C₁-C₆)炔基、(C₅-C₂₀)芳基、(C₆-C₂₆)烷芳基、5-20元杂芳基、6-26元烷杂芳基或一种含1-7个残基的肽或肽类似物；

残基X_n间的每个“-”各自独立地指一种酰胺键、取代的酰胺键、酰胺等排体或一种酰胺模拟物；或

(ⅱ)结构式(Ⅰ)的缺失形式，其中残基X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₉、X₁₀、X₁₁、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀、X₂₁和X₂₂中至少有一个并且可多至8个残基缺失；或

(ⅲ)结构式(Ⅰ)的变化形式，其中残基X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₉、X₁₀、X₁₁、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀、X₂₁、X₂₂或X₂₃中至少有一个残基被另一种残基保守地替代。

2．权利要求1的ApoA-Ⅰ激动剂，该激动剂与人类ApoA-Ⅰ相比至少可显示出约38％的LCAT-激活活性。

3．权利要求1的ApoA-Ⅰ激动剂，该激动剂为结构式(Ⅰ)的变化形式。

4．权利要求3的ApoA-Ⅰ激动剂，其中结构式(Ⅰ)的疏水性残基为确定的，并且至少有一个非确定的残基被另一种残基保守地替代。

5．权利要求4的ApoA-Ⅰ激动剂，其中：

X₁为Pro(P)、D-Pro(p)、Gly(G)或Ala(A)；

X₂为Ala(A)、Leu(L)或Val(V)；

X₃为Leu(L)或Phe(F)；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₉为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₀为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₃为Leu(L)、Gly(G)或Aib；

X₁₄为Leu、Nal、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₆为Ala(A)、Nal、Trp(W)、Gly(G)、Leu(L)或Phe(F)；

X₁₇为Leu(L)、Gly(G)或Nal；

X₂₁为Leu(L)；并且

X₄、X₇、X₈、X₁₁、X₁₂、X₁₅、X₁₈、X₁₉、X₂₀、X₂₂和X₂₃中至少有一个被另一种残基保守地替代。

6．权利要求3的ApoA-Ⅰ激动剂，其中符合结构式(Ⅰ)的亲水性残基是确定的，并且至少有一个非确定的残基被另一种残基保守地替代。

7．权利要求6的ApoA-Ⅰ激动剂，其中：

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₇为Lys(K)、Arg(R)或Orn；

X₈为Asp(D)或Glu(E)；

X₁₁为Asn(N)或Gln(Q)；

X₁₂为Glu(E)或Asp(D)；

X₁₅为Asp(D)或Glu(E)；

X₁₈为Gln(Q)、Asn(N)、Lys(K)或Orn；

X₁₉为Gln(Q)、Asn(N)、Lys(K)或Orn；

X₂₀为Lys(K)或Orn；

X₂₂为Lys(K)或Orn；

X₂₃可不存在或为Lys(K)；并且

X₁、X₂、X₃、X₅、X₆、X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇和X₂₁中至少有一个被另一种残基保守地替代。

8．权利要求7的ApoA-Ⅰ激动剂，其中X₃为Leu(L)或Phe(F)，X₆为Phe(F)，X₉为Leu(L)或Gly(G)，X₁₀为Leu(L)或Trp(W)或Gly(G)，并且X₁、X₂、X₅、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇和X₂₁中至少有一个被另一种残基保守地替代。

9．权利要求5或权利要求7的ApoA-Ⅰ激动剂，其中替代残基与被替代残基属于同一亚类。

10．权利要求1的ApoA-Ⅰ激动剂，该激动剂为结构式(Ⅰ)的缺失形式。

11．权利要求10的ApoA-Ⅰ激动剂，其中肽或肽类似物的一个螺旋圈缺失。

12．权利要求1的ApoA-Ⅰ激动剂，该激动剂为结构式(Ⅰ)的含22-23个残基的肽或肽类似物。

13．权利要求12的ApoA-Ⅰ激动剂，其中：

残基间的“-”指-C(O)NH-；

Z₁为H₂N-；并且

Z₂为-C(O)OH或其盐。

14．权利要求13的ApoA-Ⅰ激动剂，其中：

X₁为Pro(P)、Ala(A)、Gly(G)、Asn(N)、Gln(Q)、Asp(D)或D-Pro(p)；

X₂为Ala(A)、Val(V)或Leu(L)；

X₃为Leu(L)或Phe(F)；

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为Lys(K)、Arg(R)或Orn；

X₈为Asp(D)或Glu(E)；

X₉为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₀为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₁为Asn(N)或Gln(Q)；

X₁₂为Glu(E)或Asp(D)；

X₁₃为Gly(G)、Leu(L)或Aib；

X₁₄为Leu(L)、Nal、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₅为Asp(D)或Glu(E)；

X₁₆为Ala(A)、Nal、Trp(W)、Leu(L)、Phe(F)或Gly(G)；

X₁₇为Gly(G)、Leu(L)或Nal；

X₁₈为Gln(Q)、Asn(N)、Lys(K)或Orn；

X₁₉为Gln(Q)、Asn(N)、Lys(K)或Orn；

X₂₀为Lys(K)或Orn；

X₂₁为Leu(L)；

X₂₂为Lys(K)或Orn；并且

X₂₃可不存在或为Lys(K)。

15．权利要求14的ApoA-Ⅰ激动剂，其中X₂₃不存在。

16．权利要求13或权利要求14的ApoA-Ⅰ激动剂，其中X₁₈或X₁₉中的一个为Gln(Q)、Asn(N)，而X₁₈或X₁₉中的另一个为Lys(K)或Orn。

17．权利要求14的ApoA-Ⅰ激动剂，其中X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄、X₁₅和X₁₇各自为除Gly(G)以外的残基。

18．权利要求14的ApoA-Ⅰ激动剂，其中X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄、X₁₅和X₁₇中的一个为Gly(G)，而其余的为除Gly(G)以外的残基。

19．权利要求1的ApoA-Ⅰ激动剂，该激动剂的选择组合包括：

第1号肽PVLDLFRELLNELLEZLKQKLK(序列识别号：1)；

第2号肽GVLDLFRELLNELLEALKQKLKK(序列识别号：2)；

第3号肽PVLDLFRELLNELLEWLKQKLK(序列识别号：3)；

第4号肽PVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识另号：4)；

第5号肽pVLDLFRELLNELLEALKQKLKK(序列识别号：5)；

第6号肽PVLDLFRELLNEXLEALKQKLK(序列识别号：6)；

第7号肽PVLDLFKELLNELLEALKQKLK(序列识另号：7)；

第8号肽PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：8)；

第9号肽PVLDLFRELGNELLEALKQKLK(序列识别号：9)；

第10号肽PVLDLFRELLNELLEAZKQKLK(序列识别号：10)；

第11号肽PVLDLFKELLQELLEALKQKLK(序列识另号：11)；

第12号肽PVLDLFRELLNELLEAGKQKLK(序列识别号：12)；

第13号肽GVLDLFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：13)；

第14号肽PVLDLFRELLNELLEALOQOLO(序列识另号：14)；

第15号肽PVLDLFRELWNELLEALKQKLK(序列识别号：15)；

第16号肽PVLDLLRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：16)；

第17号肽PVLELFKELLQELLEALKQKLK(序列识别号：17)；

第18号肽GVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：18)；

第19号肽pVLDLFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：19)；

第20号肽PVLDLFREGLNELLEALKQKLK(序列识另号：20)；

第21号肽pVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：21)；

第22号肽PVLDLFRELLNELLEGLKQKLK(序列识别号：22)；

第23号肽PLLELFKELLQELLEALKQKLK(序列识别号：23)；

第24号肽PVLDLFRELLNELLEALQKKLK(序列识别号：24)；

第25号肽PVLDFFRELLNEXLEALKQKLK(序列识别号：25)；

第26号肽PVLDLFRELLNELLELLKQKLK(序列识别号：26)；

第27号肽PVLDLFRELLNELZEALKQKLK(序列识别号：27)；

第28号肽PVLDLFRELLNELWEALKQKLK(序列识别号：28)；

第29号肽AVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：29)；

第123号肽QVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：123)；

第124号肽PVLDLFOELLNELLEALOQOLO(序列识别号：124)；

第125号肽NVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：125)；

第126号肽PVLDLFRELLNELGEALKQKLK(序列识别号：126)；

第127号肽PVLDLFRELLNELLELLKQKLK(序列识别号：127)；

第128号肽PVLDLFRELLNELLEFLKQKLK(序列识别号：128)；

第129号肽PVLELFNDLLRELLEALQKKLK(序列识别号：129)；

第130号肽PVLELFNDLLRELLEALKQKLK(序列识别号：130)；

第131号肽PVLELFKELLNELLDALRQKLK(序列识别号：131)；

第132号肽PVLDLFRELLENLLEALQKKLK(序列识别号：132)；

第133号肽PVLELFERLLEDLLQALNKKLK(序列识别号：133)；

第134号肽PVLELFERLLEDLLKALNQKLK(序列识别号：134)；

第135号肽DVLDLFRELLNELLEALKQKLK(序列识别号：135)；

第136号肽PALELFKDLLQELLEALKQKLK(序列识另号：136)；

第137号肽PVLDLFRELLNEGLEAZKQKLK(序列识别号：137)；

第138号肽PVLDLFRELLNEGLEWLKQKLK(序列识别号：138)；

第139号肽PVLDLFRELWNEGLEALKQKLK(序列识别号：139)；

第140号肽PVLDLFRELLNEGLEALOQOLO(序列识别号：140)；

第141号肽PVLDFFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：141)；

第142号肽PVLELFRELLNEGLEALKQKLK(序列识别号：142)；

及其N-端酰化形式和／或C-端酰胺化或酯化形式，其中X为Aib；Z为Nal；而O为Orn。

20．一种多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂，该激动剂与人类ApoA-Ⅰ相比至少可显示出约38％的LCAT激活活性，并且具有结构式(Ⅱ)：或其药学上容许的盐，其中：每个m各自独立地为0-1的整数；n为0-10的整数；每个“HH”各自独立地为权利要求1的肽或肽类似物；每个“LL”各自独立地为一种双功能衔接物；以及每个“-”各自独立地指一种共价键。

21．一种多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂，该激动剂与人类ApoA-Ⅰ相比至少可显示出约38％的LCAT激活活性，并且具有结构式(Ⅲ)：

或其药学上容许的盐，其中：每个X各自独立地为

每个HH各自独立地为结构式(Ⅰ)的核心肽或类似物或其如文中所述的变异形式、截短缺失形式、内部缺失形式或扩展形式；每个LL各自独立地为一种双功能衔接物；每个m各自独立地为0-1的整数；每个n各自独立地为0-8的整数；

N_ya和N_yb各自独立地为一种多功能连接部分，其中y_a和y_b分别代表N_ya和N_yb上的功能基团数；

每个y_a或y_b各自独立地为3-8的整数；

p为0-7的整数；以及

每个“-”各自独立地指一种共价键。

22．一种多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂，该激动剂与人类ApoA-Ⅰ相比至少可显示出约38％的LCAT激活活性，并且具有结构式(Ⅳ)或结构式(Ⅴ)：

或其药学上容许的盐，其中：每个x各自独立地为

每个HH各自独立地为权利要求1的肽或肽类似物；

每个LL各自独立地为一种双功能衔接物；

每个n各自独立地为0-1的整数；

每个m各自独立地为0-8的整数；

R₁为-OR或-NRR；以及

每个R各自独立地为-H、(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烯基、(C₁-C₆)炔基；(C₆-C₂₀)芳基(C₆-C₂₆)烷芳基、5-20元杂芳基或6-26元烷杂芳基。

23．权利要求20、21或22的多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂，其中的双功能衔接物为可裂解的。

24．权利要求20、21或22的ApoA-Ⅰ多聚体激动剂，其中的n为0。

25．权利要求24的多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂，其中的m为0。

26．权利要求20、21或22的多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂，其中的每个HH各自独立地为权利要求13的肽。

27．权利要求20、21或22的多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂，其中的每个HH各自独立地为权利要求14的肽。

28．权利要求20、21或22的多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂，其中的每个HH各自独立地为权利要求19的肽。

29．一种ApoA-Ⅰ激动剂-脂类复合物，该复合物包含一种ApoA-Ⅰ激动剂和一种脂类，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为权利要求1的肽或肽类似物、权利要求20的多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂、权利要求21的多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂，或权利要求22的多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂。

30．权利要求29的ApoA-Ⅰ激动剂-脂类复合物，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为权利要求12的肽。

31．权利要求29的ApoA-Ⅰ激动剂-脂类复合物，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为权利要求13的肽。

32．权利要求29的ApoA-Ⅰ激动剂-脂类复合物，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为权利要求14的肽。

33．权利要求29的ApoA-Ⅰ激动剂-脂类复合物，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为权利要求19的肽。

34．权利要求29的ApoA-Ⅰ激动剂-脂类复合物，其中的脂类为鞘磷脂。

35．权利要求29的ApoA-Ⅰ激动剂-脂类复合物，该复合物为冻干粉末形式。

36．权利要求29的ApoA-Ⅰ激动剂-脂类复合物，该复合物为溶液形式。

37．一种药用组合物，该组合物包含一种ApoA-Ⅰ激动剂和一种药学上容许的载体、赋形剂或稀释剂，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为权利要求1的肽或肽类似物、权利要求20的多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂、权利要求21的多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂，或权利要求22的多聚体型ApoA-Ⅰ激动剂。

38．权利要求37的药用组合物，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为权利要求12的肽。

39．权利要求37的药用组合物，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为权利要求13的肽。

40．权利要求37的药用组合物，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为权利要求14的肽。

41．权利要求37的药用组合物，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为权利要求19的肽。

42．权利要求37、38、39、40或41的药用组合物，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为ApoA-Ⅰ激动剂-脂类复合物形式，所述复合物包含ApoA-Ⅰ激动剂和一种脂类。

43．权利要求42的药用组合物，其中的ApoA-Ⅰ激动剂-脂类复合物为冻干粉末形式。

44．一种对患有异常脂血症相关病症的受治疗者进行治疗的方法，该方法包括将有效剂量的权利要求1的ApoA-Ⅰ激动剂向受治疗者给药的步骤。

45．权利要求44的方法，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为药用组合物形式，该组合物包含ApoA-Ⅰ激动剂和一种药学上容许的载体、赋形剂或稀释剂。

46．权利要求44的方法，其中的ApoA-Ⅰ激动剂为ApoA-Ⅰ激动剂-脂类复合物形式，该复合物包含ApoA-Ⅰ激动剂和一种脂类。

47．权利要求44的方法，其中的异常脂血症相关病症为高胆固醇血症。

48．权利要求44的方法，其中的异常脂血症相关病症为心血管疾病。

49．权利要求44的方法，其中的异常脂血症相关病症为动脉粥样硬化。

50．权利要求44的方法，其中的异常脂血症相关病症为再狭窄。

51．权利要求44的方法，其中的异常脂血症相关病症为HDL缺乏或ApoA-Ⅰ缺乏。

52．权利要求44的方法，其中的异常脂血症相关病症为高甘油三酯血症。

53．权利要求44的方法，其中的异常脂血症相关病症为代谢性综合症。

54．一种对患有脓毒性休克的受治疗者进行治疗的方法，该方法包括将有效剂量的权利要求1的ApoA-Ⅰ激动剂向受治疗者给药的步骤。

55．权利要求44或权利要求54的方法，其中所述的受治疗者为人。

56．权利要求44或权利要求54的方法，其中将大约0．5mg／kg至大约100mg／kg的ApoA-Ⅰ激动剂向所述受治疗者给药。

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