CN100345588C - 提供载脂蛋白a－i激动剂的基因治疗方法及其治疗脂血症的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及基因治疗方法，该方法能够提供编码载脂蛋白A-I(ApoA-I)天然形式之改良形式的核苷酸序列：成熟ApoA-I、前ApoA-I原和ApoA-I原；其中经过改良的天然ApoA-I包括ApoA-I激动剂，即能模拟天然ApoA-I活性的肽，和超激动剂，即活性超过天然ApoA-I的肽并且修饰的天然ApoA-I含有一或多个由一或多个ApoA-I激动剂的核苷酸序列所替代的两导性螺旋；该基因疗法可以用于治疗异常脂蛋白血相关疾病，包括心血管疾病、动脉硬化症、再狭窄症、高血脂病以及其它其他疾病，例如脓毒性休克。

Description

提供载脂蛋白A-I激动剂的基因治疗方法及其治疗脂血症的用途

                        1.简介

本发明涉及基因治疗方法，该方法能够提供编码载脂蛋白A-I(ApoA-I)天然形式之改良形式的核苷酸序列，即成熟ApoA-I、前ApoA-I原和ApoA-I原；ApoA-I肽；ApoA-I激动剂和超激动剂，即能够模拟或超过天然ApoA-I的活性的肽；以及用于治疗异常脂蛋白血相关疾病的天然ApoA-I基因，所述疾病包括：心血管疾病、动脉硬化症、心瓣手术后的再狭窄症、高血脂病以及其它其他疾病，例如脓毒性休克。

                        2.发明背景

循环系统胆固醇携带者为血浆脂蛋白——能够转运血脂的由复合脂类和蛋白质形成的复合物颗粒。低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)是主要的胆固醇携带者。低密度脂蛋白负责把肝中的胆固醇(其中胆固醇是从饮食中合成或得到的)输送到体内的肝外组织。术语“逆向胆固醇转运”是指把肝外组织的胆固醇转运到肝中的过程，胆固醇在肝中代谢并排泄。血浆HDL颗粒在逆向转运过程中起着重要的作用，扮演着组织胆固醇清洁工的角色。

大量的证据表明升高的血清脂蛋白与冠心病有关。例如，动脉粥样硬化是以在动脉壁上积聚胆固醇的慢性进行性过程。明显的证据支持如下事实：储存在动脉粥样硬化病变处的脂类主要由从血浆LDL输送而来；因此，LDLs又被通俗地称为“坏”胆固醇。相反，HDL血清水平与冠心病负相关——实际上，高血清水平的HDL被认为是负危险度。认为高水平血浆脂蛋白不仅可以预防冠心病，而且确实可以导致动脉粥样硬化斑的衰退(例如，Badimon et al.，1992，Circulation 86(Suppl.III)：86-94)。因此，普遍地又将HDL称为“好”胆固醇。

                       2.1.胆固醇的转运

脂肪转运系统可以分为两种途径：一种为用于肠道吸收的胆固醇和甘油三酯的外源性途径，一种为用于从肝及其他非-肝组织进入血流的胆固醇和甘油三酯的内源性途径。

外源性途径中，饭食中的脂肪被包装成称为乳糜微粒的脂蛋白颗粒，乳糜微粒进入血流并将它们中的甘油三酯运输到脂肪组织(用于存储)和肌肉(用于氧化提供能量)。含有胆固醇酯的乳糜微粒剩余物被一种特殊受体从循环系统中清除，该受体只发现于肝细胞。然后，这种胆固醇又可以为细胞代谢所利用或者作为血浆脂蛋白再循环到肝外组织。

内源性途径中，肝向血流中分泌大的、极低密度脂蛋白(VLDL)。VLDLs的核心主要由肝中合成的甘油三脂组成，另有较少量的胆固醇脂(肝内合成或从乳糜微粒再循环而来)。两种主要的蛋白质，载脂蛋白B-100和载脂蛋白E。当VLDL到达脂肪组织或肌肉的毛细血管时，其中的甘油三脂被提出从而形成一种称为中间密度脂蛋白(IDL)的新颗粒，这种新颗粒大小减小并富集胆固醇酯，但仍保留了其两种载脂蛋白。

人体内，约一半的IDL颗粒被从循环系统中快速清除(它们合成的2～6小时内)，因为它们与肝细胞紧密结合，肝细胞提取出其中的胆固醇，生成新的VLDL和胆汁酸。未被肝细胞吸收的IDL颗粒则会在循环系统中保留更长的时间。此时，载脂蛋白E从循环颗粒中解离出来，使该颗粒转化为只有载脂蛋白B-100作为其唯一蛋白的LDL。

首先，肝细胞吸收并降解大部分胆固醇生成胆汁酸，胆汁酸是胆固醇代谢的终产物。含颗粒胆固醇的吸收由LDL受体介导，该受体以高浓度存在于肝细胞上。LDL受体结合载脂蛋白E和载脂蛋白B-100，并负责从循环系统中结合和去除IDLs和LDLs。但是，载脂蛋白E与LDL受体的结合力比载脂蛋白B-100大。因此，LDL颗粒具有比IDL颗粒大得多的半衰期范围——在结合肝和其他组织中LDL受体之前，LDL循环的时间段为2天半。高水平LDL(“坏”胆固醇)与冠心病正相关。例如，动脉硬化症中，来自循环LDLs的胆固醇积聚在动脉壁导致形成大块病变，这种大块病变抑制血流直到最终形成检塞，阻塞动脉引发心肌梗塞或心绞痛。

最后，从LDLs从释放出的胞内胆固醇的量控制细胞胆固醇代谢。来自VDLs和LDLs细胞胆固醇的积聚控制着3个途径：第一，它可以通过关闭HMGCoA还原酶-胆固醇生物合成途径中的一种关键酶，减少细胞胆固醇的合成。第二，通过激活ACAT-能够把胆固醇转化成储存在存储小滴中的胆固醇酯的酶，新进入的LDL-衍生胆固醇促进胆固醇的存储。第三，细胞中胆固醇的积聚驱动一种反馈机制，抑制新LDL受体的细胞合成。因此，细胞可以调节其对LDL受体的补充，从而能有足够量胆固醇满足代谢需要，而不过量。(综述，见Brown & Goldstein，In，The Pharmacological Basis Of Therapeutics，8th Ed.，Goodman &Gilman，Pergamon Press，NY，1990，Ch.36，pp.874～896)。

                  2.2.逆向胆固醇转运

总之，外周(非肝)细胞从原位合成以及吸收来自VLDLs和LDLs的预成固醇的结合，获得它们的胆固醇。反之，逆向胆固醇转运(RCT)是这样一种途径，即能够将外周细胞胆固醇返回到肝细胞，用于再循环到肝外组织，或者以胆汁排泄到肠道，经修饰或氧化形成胆汁酸。RCT途径是从大部分肝外组织中清除胆固醇的唯一方法，对维持体内多数细胞的结构和功能起着关键作用。

RCT主要包括3个步骤：(a)胆固醇的流出，最初从外周细胞的各种库中移取胆固醇；(b)卵磷脂：胆固醇脂酰基转移酶(LCAT)作用下的胆固醇酯化，防止流出的胆固醇再进入细胞；以及(c)把HDL胆固醇酯吸收/运输到肝细胞。RCT途径由HDLs介导。HDL是以其高密度为特征的脂蛋白颗粒的通用术语。HDL复合物中主要脂类成分有各种磷脂、胆固醇(酯)以及甘油三脂。最主要的载脂蛋白成分是A-I和A-II，这二者测定HDL的功能特征；另外还发现少量载脂蛋白C-I、C-II、C-III、D、E、J等。根据在代谢RCT级联反应过程中改形情况，HDL可以多种大小不同以及上述组分间混合比各异的形态存在。

参与RCT途径的关键酶是LCAT。LCAT主要由肝生成，并与HDL级分结合循环于血浆中。另外，胆固醇酯转运蛋白(CETP)与另外一种脂类转运蛋白，磷脂转运蛋白(PLTP)参与改形循环HDL群体。CETP能够把LCAT制备的胆固醇酯搬运到其他脂蛋白，具体为含ApoB脂蛋白，例如VLDL和LDL。PLTP向HDL供应卵磷脂。HDL甘油三脂可以被胞外肝甘油三酯脂酶代谢，脂蛋白被肝通过几种机制去除脂蛋白胆固醇。

每个HDL颗粒含有至少1个拷贝(通常为2～4拷贝)的ApoA-I。ApoA-I由肝和小肠作为前载脂蛋白原合成，前载脂蛋白原以蛋白原分泌，该原蛋白迅速地被切割生成具有243个氨基酸残基的成熟肽。ApoA-I主要由6～8个不同的22氨基酸残基重复单元组成，该重复单元被连接单元间隔，该连接单元通常为脯氨酸、某些情况下由数个成串残基构成。ApoA-I形成3种类型的含脂稳定复合物：称为前-β-1 HDL的小、贫脂复合物；称为前-β-2 HDL的含极性脂类(磷脂和胆固醇)的平盘状颗粒；以及称为球状或成熟HDL(HDL₃和HDL₂)的同时含极性和非极性脂类的球状颗粒。循环群体中的多数HDL含有ApoA-I和ApoA-II(次主要HDL蛋白)，本发明称其为HDL的AI/AII-HDL级分。但是，只含ApoA-I的HDL级分(本发明称为AI-HDL级分)在RCT中的效率更高。某些流行病学实验支持下列理论：AI-HDL具有抗-粥样硬化的特性。(Parra etal.，1992，Arterioscler.Thromb.12：701-707；Decossin et al.，1997，Eur.J.Clin.Invest.27：299-307)。

尽管从细胞表面转运出胆固醇的机制还不清楚，但是可以肯定的是贫脂复合物，前-β-1 HDL是从参与RCT的外周组织转运而来胆固醇的优选受体。新近从细胞表面转运到前-β-1 HDL的胆固醇迅速地出现在圆盘状前-β-2 HDL中。PLTP可以加快前-β-2 HDL圆盘状的形成，但是有结果表明PLTP不参与RCT。LCAT优选与圆盘状或球状HDL反应，把卵磷脂或其他磷脂上的2-酰基转移到胆固醇的羟基上生成胆固醇酯(保留在HDL中)和溶血卵磷脂。LCAT反应需要ApoA-I作为激活剂；即，ApoA-I是LCAT的天然辅因子。隐藏在HDL中进行的胆固醇向其酯的转化可以防止胆固醇再进入到细胞中，结果为胆固醇酯必然被清除。AI-HDL级分(即，含ApoA-I而不含ApoA-II)中成熟HDL颗粒内的胆固醇酯被肝清除并处理成胆汁，而且比来自同时含ApoA-I和ApoA-II的HDL(AI/AII-HDL级分)中的胆固醇酯效率更高。这部分取决于AI-HDL与肝细胞膜的结合更有效。现已提出存在着HDL受体，而且最近一种清洁受体，SR-BI被鉴定为HDL受体(Acton et al.，1996，Science271：518-520；Xu et al.，1997，J.Lipid Res.38：1289-1298)。SR-BI在类固醇生成组织(例如，肾上腺)和肝中的表达量最为丰富(Landshulzet al.，1996，J.Clin.Invest.98：984-995；Rigotti et al.，1996，J.Biol.Chem.271：33545-33549)。

CETP没在RCT中发挥主要作用，而是参与了VLDL-和LDL-衍生脂类的代谢。但是CETP活性或其受体VLDL和LDL的变化在“改形”HDL群体中发挥了作用。例如，在缺乏CETP的情况下，HDLs变成了无法清除的大颗粒。(有关RCT和HDLs的综述，见Fielding & Fielding，1995，J.Lipid Res.36：211-228；Barrans et al.，1996，Biochem.Biophys.Acta.1300：73-85；Hirano et al.，1997，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.17(6)：1053-1059)。

            2.3.血脂蛋白异常目前的治疗方法

目前，有大量治疗方法可以用于降低血清胆固醇及甘油三脂(见，例如，上述Brown & Goldstein)。但是，每种方法在治疗效果、副作用以及适合患者群方面都存在着其固有的缺陷。

胆汁酸结合树脂是能阻断胆汁酸从肠道向肝再循环的一类药物；例如，胆苯烯胺(Questran Light^，BristolMyers Squibb)和盐酸降胆宁(Colestid^，The Upjohn Company)。当口服时，这些阳性电荷树脂与肠道中带阴性电荷的胆汁酸结合。由于树脂不能被肠道吸收，它们就携带着胆汁酸被排泄出去。但是，使用这类树脂最多只能减低约20％的血清胆固醇水平，并且伴随有胃肠道副作用，包括便秘及某些维生素缺乏。此外，由于树脂会结合药物，所以必须在摄取该树脂前至少1小时，或过后4～6小时才可服用其他的口服药物；因此，使心脏病患者的治疗方案复杂化。

抑制素是通过抑制HMGCoA还原酶阻断胆固醇合成的降胆固醇药物，HMGCoA还原酶是参与胆固醇合成途径的关键酶。上述抑制素，例如，洛伐他汀(Mevacor^，Merck & Co.，Inc.)和帕伐他丁(Pravachol^，Bristol-Myers Sguibb Co.)有时与胆汁酸结合树脂联合用药。上述抑制素主要降低血清胆固醇和LDL-血清水平，减缓冠状动脉粥样硬化的病程。LDL降低效应的机制包括降低VLDL浓度和诱导LDL-受体的细胞表达，导致LDLs生成的减少和/或代谢的增加。副作用，包括与服用这些药相关的肝及肾功能异常(Physicians Desk Reference，MedicalEconomics Co.，Inc.，Montvale，N.J.，1997)。最近，FDA已批准将埃托伐丁(atorvastatin)(Parke-Davis开发的一种HMGCoA还原酶抑制剂)(Warner Lambert)投放市场用于治疗罕见但危急的家族性高胆甾醇血症病例(1995，Scrip 20(19)：10)。

烟酸是一种水溶性维生素B一复合物，它被用作食物添加剂和抗高血脂药的。烟酸可以减少VLDL的生成，有效降低LDL。某些情况下，它与胆汁酸结合树脂联用。足量使用烟酸可以增加HDL，但是如此高剂量使用带来的副作用限制了它的应用。

纤维是用于治疗各种高脂质血症(即血清甘油三脂升高)，也可以是与血胆脂醇过多有关。纤维可以减少VLDL级分并适当地增加HDL——但是这些药物对血清胆固醇的作用变化不定。在美国，纤维已被批准用作抗血脂药，但是还未被批准用作血胆脂醇过多的药物。例如，安妥明(Atromid-S^，Wyeth-Ayerst Laboratories)是一种能够通过减少VLDL级分减低血清甘油三脂的抗血脂药。尽管在特定患者亚群中血清胆固醇能够降低，而且对该药的生化反应各不相同，但是不总是能预见哪位患者将获得最好结果。还未表明Atromid-s^能有效预防冠心病。化学或药学上相关的药物，吉非贝齐(Lopid^，Parke-Davis)是一种脂类调节剂，能适当地减少血清甘油三脂和VLDL胆固醇，并能适当地增加HDL胆固醇——HDL2和HDL3亚级分以及ApoA-1和A-11二者(即，AI/AII-HDL级分)。但是，脂类反应是异源性的，尤其是在不同患者群之间。此外，虽然发现在年龄为40～55岁且无冠心病病史或症状的男性患者中能预防冠心病，但是还不清楚这些发现能在多大程度外推到其他患者群(例如，女性，年龄较大或较小的男性)。实际上，在已经患有冠心病的患者上未发现任何疗效。纤维的使用伴随着严重的副作用，包括毒性，例如恶性肿瘤(特别是胃肠癌)、胆囊疾病以及非-冠心病死亡率的增加。未指明这些药物能用于治疗只有高LDL或低HDL为唯一脂类异常的患者(Physician’s Desk Reference，1997，Medical Economics Co.，Inc.Montvale，N.J.)。

也可以将口服雌性激素替代疗法用于绝经后女性所患的良性血胆脂醇过多症。但是，增加HDL会伴随着甘油三脂的升高。当然，雌性激素治疗限于特定患者群(绝经后女性)并与伴随着严重的副作用，包括诱发恶性肿瘤、胆囊疾病、血栓栓塞性疾病、肝细胞性腺瘤、高血压、葡萄糖不耐受性、以及血钙过多。

因此，需要发展能有效降低血清胆固醇、增高HDL血清水平的更安全的药物，预防冠心病、以及/或者治疗已有疾病，尤其是动脉粥样硬化。

                    2.4.以ApoA-I作靶

目前，尚无一种降胆固醇药物能安全地升高HDL水平并刺激RCT——最可能控制胆固醇转运途径，调节胆固醇以及VLDL群的饮食摄入、再循环及合成。

希望发现能刺激胆固醇排出和去除的药物，RCT中存在着几个潜在目标——例如，LCAT、HDL及其各种成分(ApoA-I、ApoA-II及磷脂)、PLTP和CETP——但不知哪个目标在实现预期脂蛋白库和保护效应方面最有效。RCT途径中任一单个成分的混乱最终都会影响循环系统中脂蛋白群体的组成以及RCT的效率。

以体内获得结果为基础的几套证据表明，HDL及其主要蛋白成分ApoA-I能预防动脉粥样硬化斑，以及潜在地退化病变——使这些有吸引力的目标用于治疗干预。首先，男性的血清ApoA-I(HDL)浓度与动脉粥样化形成之间存在着负相关(Gordon & Rifkind，1.989，N.Eng.J.Med.321：131.1-1316；Gordon et al.，1989，Circulation 79：8-15)。实际上，已发现特定HDL亚群与人动脉粥样化发病率的减小有关(Miller，1987，AlDer.Heart 113：589-597；Cheung et al.，1991，Lipid Res.32：383-394)；Fruchart & Ailhaud，1992，Clin.Chem.38：79)。

其次，动物实验证明了ApoA-I(HDL)的保护作用。用ApoA-I或HDL治疗饲喂胆固醇的兔减少了饲喂胆固醇兔中病变(脂肪条纹)的发生和进行。(Koizumi et al.，J.～86，J.Lipid Res.2～：J.405-J.415；Badimon et al.，1989，Lab.Invest.60：455-461；Badimon et al.，1990，J.Clin.Invest.85：1234-1241)。但是，治疗效率却因HDL的来源而不同(Beitz et al.，1992-，前列腺素，白三烯和必须氨基酸47.149 152 Mezdour et al.，1995，Atherosclerosis 113：237-246)。

第三，从使用转基因动物的实验中获得了有关ApoA-I作用的直接证据。遗传学上，转移到小鼠中的人ApoA-I基因的表达能提前保证饮食诱发的动脉粥样硬化不生成大动脉病变(Rubin et al.，1991，Nature353：265-267)。另外还发现ApoA-I转基因能抑制ApoE缺陷小鼠及Apo(a)转基因小鼠发生动脉粥样硬化(Paszty et al.，1994，J.Clin.Invest.94：899-903；Plump et al.，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA91：9607-9611；Liu et al.，1994，J.Lipid Res.35：2263-2266)。在表达人ApoA-I的转基因兔(Duverger，1996，Circulation 94：713-717；Duverger et al.，1996，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.16：1424-1429)和转基因大鼠中也观察了类似的结果，在转基因大鼠中人ApoA-I水平的升高防止了动脉粥样硬化形成并抑制球囊血管成形术后继发的再狭窄(Burkey et al.，199.2，Circulation，Supplement I，86：I-472，Abstract No.1876；Burkey et al.，1995，J.Lipid Res.36：1463-1473)。

在RCT中，AI-HDL可能比AI/AII-HDL级分更有效。对转有人ApoA-I或Apo-I以及ApoA-II(AI/AII)基因的转基因小鼠的实验表明，HDL的蛋白组成会显著地影响它的作用——AI-HDL比AI/AII-HDL具有更强的抗-致动脉粥样硬化的性能(Schultz et al.，1993，Nature 365：762-764)。用表达人LCAT基因的转基因小鼠进行的平行实验表明适当地增强LCAT活性能明显地改变脂蛋白胆固醇水平，而且LCAT对于含ApoA-I的HDL具有明显的偏嗜性(Francone et al.，1995，J.Clinic.Invest.96：1440-1448；Berard et al.，1997，Nature Medicine 3(7)：744-749)。这些结果证实了ApoA-I在活化LCAT和刺激RCT中的作用，同时另外实验表明一种更加复杂假设：HDL中能调节细胞胆固醇排出的主要成分是磷脂(Fournier et al.，1996，J.Lipid Res.37：1704-1711)。

鉴于HDL，即ApoA-I及其相关磷脂在预防动脉粥样硬化疾病方面的潜在作用，使用重组制备的ApoA-I的人临床试验被UCB比利时(Pharmaprojects，Oct.27，1995；IMS R&D Focus，June 30，1997；Drug Status Update，1997，Atherosclerosis 2(6)：261-265)；另见M.Eriksson at Congress，“The Role of HDL in DiseasePrevention，”Nov.7-9，1996，Fort Worth；Lacko & Miller，1997，J.Lip.Res.38：1267-1273；and WO94/13819)开始、中断并且明确地再次开始，以及Bio-Tech(Pharmaprojects，April 7，1989)开始并中断。另外尝试了用ApoA-I治疗脓毒性休克的试验(Opal，″Reconstituted HDL as a Treatment Strategy for Sepsis，″IBC’s7th International Conference on Sepsis，April 28-30，1997，Washington，D.C.；Gouni et al.，1993，J.Lipid Res.94：139-146；Levine，WO96/04916)。但是，存在着与ApoA-I的制备和使用有关的许多缺陷，这就使得它无法成为理想药物，例如，ApoA-I是一种制备困难并昂贵的大蛋白；在存储稳定性、活性产物的运输和体内半衰期方面，必须克服明显的制备及重现性问题。

鉴于这些缺陷，已经尝试制备模拟ApoA-I的肽。由于ApoA-I的关键活性与该蛋白中独特的二级结构特征的多个重复单元—一种A类两亲性α-螺旋有关(Segrest，1974，FEBS Lett.38：247-253)，所以设计模拟ApoA-I活性肽的大部分努力都集中在设计能形成A类两亲性α-螺旋的肽上。

A类两亲性α-螺旋具有下述独特的特性：正电荷的氨基酸残基成簇于疏水性-亲水性交界面，负电荷氨基酸残基成簇于亲水表面的中央。而且，A类β-螺旋肽具有一个小于180度的疏水角(Segrest et al.，1990，PROTEINS：Structure，Function and Genetics 8：103-117)。设计ApoA-I模拟物的初始从头策略不以天然生成载脂蛋白的一级序列为基础，而是在将这些独特的A类螺旋特性以及ApoA-I结构域一些特性引入到肽类似物序列中的基础上进行设计的(参见，例如，Davidson etal.，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：13605-13610；Rogers etal.，1997，Biochemistry 36：288-300；Lins et al.，1993，Biochim.Biophys.Acta biomembranes 1151：137-142；Ji and Jonas，1995，J.Biol.Chem.270：11290-11297；Collet et al.，1997，Journal ofLipid Research，38：634-644；Sparrow and Gotto，1980，Ann.N.Y.Acad.Sci.348：187-211；Sparrow and Gotto，1982，CRC Crit.Rev.Biochem.13：87-107；Sorci-Thomas et al.，1993，J.Biol.Chem.268：21403-21409；Wang et al.，1996，Biochim.Biophys.Acta174-184；Minnich et al.，1992，J.Biol.Chem.267：16553-16560；Holvoet et al.，1995，Biochemistry 34：13334-13342；SorciThomaset al.，1997，J.Biol.Chem.272(11)：7278-7284；and Frank et al.，1997，Biochemistry 36：1798-1806)。

在一项实验中，Fukushima等人合成了一段22残基肽，该肽完全由有规律分布的Glu、Lys和Leu残基组成，从而形成具有均等亲水和疏水面的两亲性α-螺旋(″ELK peptide″)(Fukushima et al.，1979，J.Amer.Chem.Soc.101(13)：370-33704；Fukushima et al.，1980，J.Biol.Chem.255：10651-10657)。ELK肽与ApoA-I第198～219位残基节段见具有41％的序列同源性。通过定量超滤、凝胶渗透层析以及圆二色性研究，发现ELK肽能有效地与磷脂结合，并模拟了ApoA-I的一些理化特性(Kaiser et al.，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.USA80：1137-1140；Kaiser et al.，1984，Science 223：249-255；Fukushimaet al.，1980，上文；Nakagawa et al.，1985，J Am.Chem.Soc.107：7087-7092)。Yokoyama等人从这类研究中推断出LCAT活化的关键因素仅是存在大量足够的两亲性结构(Yokoyama et al.，1980，J.Biol.Chem.255(15)：7333-7339)。后来发现这种22残基肽的二聚体比其单体更精确地模拟了ApoA-I；根据这一结果，可以设想上述代表ApoA-I中最小功能结构域的44-残基被螺旋截断物(Gly或Pro)居中隔开。(Nakagawa et al.，1985，上述)。

另一项实验涉及模拟称为“LAP肽”的两亲性肽(Pownall et al.，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77(6)：3154-3158；Sparrowet al.，1981，In：Peptides：Synthesis-Structure-Function，Roch and Gross，Eds.，Pierce Chem.Co.，Rockford，IL，253-256)。在与天然载脂蛋白片段结合实验的基础上，设计了几种肽，定名为LAP-16，LAP-20和LAP-24(分别含16、20和24个氨基酸残基)。这些模拟两亲性肽与载脂蛋白间无同源性，而且被设计成具有以类似于载脂蛋白相关A类两亲性螺旋结构域的方式组成的亲水表面。从这些研究中，作者推断出20个残基的最小长度是赋予模拟两亲性肽脂类结合特性所必需的。

对在序列不同位置含有脯氨酸残基的LAP20突变体的研究表明，结合脂类与LCAT活化间直接相关，但是肽的螺旋潜力单独不能导致LCAT活化(Ponsin et al.，1986J.Biol.Chem.261(20)：9202-9205)。而且这种紧靠该肽中点的螺旋截断物(Pro)能够减小其与磷脂表面的亲和力及其活化LCAT的能力。表明某些LAP肽能结合磷脂(Sparrow etal.，上述)，关于脂类存在的条件下LAP肽以多大程度螺旋还存在着争论(Buchko et al.，1996，J.Biol.Chem.271(6)：3039-3045；Zhonget al.，1994，Peptide Research 7(2)：99-106)。

Segrest等人已经合成了由18～24个氨基酸残基组成的肽，该肽与上述ApoA-I螺旋间无序列同源性(Kannelis et al.，1980，J.Biol.Chem.255(3)：11464-11472；Segrest et al.，1983，J.Biol.Chem.258：2290-2295)。在疏水矩(Eisenberg et al.，1982，Nature299：371-374)和电荷分布(Segrest et al.，1990，Proteins 8：103-117；U.S.Patent No.4,643,988)方面，这些序列特异性地被设计成模拟A类可交换载脂蛋白的两亲性螺旋结构域。一种18-残基肽，即“18A”肽被设计成为一种模拟A类α-螺旋(Segrest et al.，1990，上述)。对这些肽和其他具有翻转电荷分布的肽，象“18R”肽的研究，一致表明电荷分布对于活性是关键的；翻转电荷分布的肽表现出相对18A A类类似物减小的脂类亲和力以及存在脂类条件下较低的螺旋含量(Kanellis et al.，1980，J.Biol.Chem.255：11464-11472；Anantharamaiah et al.，1985，J.Biol.Chem.260：10248-10255；Chung et al.，1985，J.Biol.Chem.260：10256-10262；Epand et al.，1987，J.Biol.Chem.262：9389-9396；Anantharamaiah et al.，1991，Adv.Exp.Med.Biol.285：131-140)。

与已被认定有限成功的与载脂蛋白间无同源性的其他合成肽包括18A肽的二聚体及三聚体(Anantharamaiah et al.，1986，生物体液的蛋白质34：63-66)、GALA和EALA肽(Subbarao et al.，1988，蛋白质：结构功能和遗传学3：187-198)和ID peptides(Labeur et al.，1997，动脉粥样硬化，血栓和血管生物学17：580-588)以及18AM4肽(Brasseuret al.，1993，7).Biochim.Biophys.Acta 1170：1-7)。

另外，已经构建出了一种以人ApoA-I序列为基础的含22个氨基酸残基的“共有”肽(Anantharamaiah et al.，1990，动脉粥样硬化10(1)：95-105；Venkatachalapathi et al.，1991，Mol.Conformationand Biol.Interactions，Indian Acad S.B.585-596)。通过鉴定人ApoA-I螺旋每个位置上的优势残基，构建出该序列。与上述肽一样，这种肽形成的螺旋也是，正电荷氨基酸残基成簇于疏水性-亲水性交界面，负电荷氨基酸残基成簇于亲水表面的中央，并且疏水角小于180度。这种肽的二聚体在活化LCAT方面有一定效果，但单体几乎未显示出任何脂类结合活性(Venkatachalapathi et al.，1991，上述)。

首先，对上述肽研究的基础上，已经显示出了设计模拟ApoA-I功能的肽的一套“规则”。重要的是，明白了正电荷残基成簇于疏水性-亲水性交界面而且负电荷氨基酸残基成簇于亲水表面的中央，具有这样特征的两亲性α-螺旋是脂类亲和和LCAT活化所必需的(Venkatachalapathi et al.，1991，上述)。另外，Anantharamaiah等人还指出上述22-残基共有肽中第13位上带负电荷的Glu位于α-螺旋疏水面中，它在LCAT活化中起着重要作用(Ananthararnaiah et al.，1991，上述)。此外，Brasseur已经提出小于180度的疏水角(pho角)是实现脂类-载脂蛋白复合物最佳稳定性所必需的，而且也使得肽围绕脂双层边缘肽的球形颗粒能够得以形成(Brasseur，1991，J.Biol.Chem.66(24)：16120-16127)。Rosseneu等认为小于180度的疏水角是LCAT活化所需的(WO93/25581)。

但是，尽管有了这些“规则”，但是迄今为止还没有人已经设计或制备出活性可与ApoA-I媲美的肽——通过本发明描述的LCAT活化实验测量出，现有的最佳活性不及ApoA-I活性的40％。文献中描述的肽中还没有一个能够用作药物。

鉴于上述原因，需要发展一种模拟ApoA-I活性并且制备上相对简便和经济的稳定的ApoA-I激动剂。但是，用于设计有效ApoA-I模拟物的“规则”仍未阐明，用于设计具有ApoA-I功能的有机分子的原理还不清楚。

3.发明概述

本发明涉及基因治疗方法，该方法能够提供编码载脂蛋白A-I(ApoA-I)天然形式之改良形式的核苷酸序列，即成熟ApoA-I、前ApoA-I原和ApoA-I原；天然ApoA-I肽的改良形式包括ApoA-I激动剂，即能够模拟天然ApoA-I的活性的肽；ApoA-I超激动剂，即活性超过天然ApoA-I的肽；而且天然ApoA-I改良后，其中的一个或多个两亲性螺旋被一个或多个ApoA-I激动剂的核苷酸序列取代；该基因治疗方法可以用于治疗异常脂蛋白血症相关疾病，所述疾病包括：心血管疾病、动脉硬化症、心瓣手术后的再狭窄症、高血脂病以及其它其他疾病，例如脓毒性休克。

特别地，本发明涉及基因方法，该方法能够提供编码下述物质的核苷酸序列：天然载脂蛋白A-I(ApoA-I)的改良形式以及能够形成两亲性α-螺旋(在脂类存在时)可充当ApoA-I激动剂的肽，上述这蛋白及肽的活性接近或超过天然ApoA-I，例如，形成前-β-样或HDL-样的复合物、促进胆固醇的排出、结合脂类、增强LCAT活性、提高HDL血清水平。

本发明还涉及编码改良后的天然ApoA-I的序列，其中的一个或多个两亲性螺旋被一个或多个ApoA-I激动剂的核苷酸序列所取代。

本发明涉及包括编码下述物质的核苷酸序列的DNA载体或盒子：改良后的ApoA-I或可充当ApoA-I激动剂或超激动剂的肽。本发明进一步涉及包括核苷酸序列的DNA载体或盒子，该核苷酸序列编码天然ApoA-I基因的改良形式。在能导致ApoA-I高水平表达的强调控单元的调控下，所述的DNA载体或盒子可以编码天然ApoA-I的改良形式或ApoA-I激动剂。为了提高产率，可以将DNA表达载体或盒子设计成编码肽的多个单元，例如，所述盒子中可以包括编码几个串联在一起的ApoA-I肽的核苷酸序列，这些串联重复单元用一个内部核糖体结合位点隔开，从而使得这几个肽可以用同一个盒子编码。所述载体或盒子还可以单体物(重复的肽单位)或异聚物(不同的肽单位)的形式来表达ApoA-I肽。此外，本发明的盒子还可以编码前原肽或原肽ApoA-I序列，因而用与天然ApoA-I蛋白同样的方式处理本发明的肽。

本发明进一步还涉及遗传工程构建的宿主细胞，该宿主细胞能够表达天然ApoA-I的改良形式：成熟ApoA-I，、前ApoA-I或原ApoA-I、模拟ApoA-I活性的肽或天然ApoA-I基因的产品。所述宿主细胞可以在体内或体外用遗传功能的手段构建。本发明还涉及构建后用于表达本发明ApoA-I肽的转基因动物。

本发明还涉及用于基因治疗的体内传送，包括施用构建的病毒载体或脂质体，其中含有编码单体或多聚形式ApoA-I或ApoA-I激动剂肽的DNA序列。本发明还涉及离体基因疗法，该方法能够提供从患者或相容宿主衍生而来用来表达天然ApoA-I基因改良形式、单体或异聚形式的ApoA-I激动剂的构建细胞。并用此细胞以单体物或多聚物的形式表达原，ApoA-I激动剂的成熟形式。离体基因疗法还可以包括遗传工程构建的“细胞液囊”的传递，该细胞液囊用于表达本发明的ApoA-I基因，包括单体或异聚形式的ApoA-I激动剂以及附加的ApoA-I序列原。在一个优选实施方案中，可以对人肝细胞进行构建用于表达ApoA-I激动剂。

本发明部分基于申请者对于模拟ApoA-I螺旋结构和两亲性特性的肽的设计和发现。令人惊奇的是本发明的肽具有ApoA-I活性，即形成HDL-样复合物和促进胆固醇的排出，并且其活性超过现有技术中描述的ApoA-I衍生肽。实际上，本发明的一些实施方案接近ApoA-I活性的100％，而且本发明中描述的超激动剂超过了ApoA-I的特定的活性。

通过操作实施例对本发明加以阐明，这些实施例描述了由本发明所述核酸编码的ApoA-I肽和激动剂的体内和体外活性以及功效。在上述示范性是实施方案的基础上，本申请人设计出了一套“规则”，依据该规则可以设计出仍属于本发明范围之内的修饰或突变形式。

本发明还涉及药物制剂，其中包括作为活性成分的细胞系和载体，该细胞系和载体能够编码天然ApoA-I的改良形式，即，成熟ApoA-I、前ApoA-I原的形式或ApoA-I原的形式，或者ApoA-I激动剂(肽或肽-脂类复合物)。本发明还涉及用于制备这类制剂的方法以及它们在治疗详述疾病相关病症方面的用途：异常脂蛋白血症(例如，心血管疾病、动脉硬化症)、再狭窄症、高甘油三酯血症和/或内毒素血症(例如，脓毒性休克)。

3.1.缩写

本发明使用的基因编码氨基酸的缩写如下：

氨基酸	单字母符号	常用缩写
			丙氨酸	A	Ala
精氨酸	R	Arg
			天冬酰氨	N	Asn
天冬氨酸	D	Asp
			半胱氨酸	C	Cys
谷氨酰氨	Q	Gln
			谷氨酸	E	Glu
甘氨酸	G	Gly
			组氨酸	H	His
异亮氨酸	I	Ile
			亮氨酸	L	Leu
赖氨酸	K	Lys
			甲硫氨酸	M	Met
苯丙氨酸	F	Phe
			脯氨酸	P	Pro
丝氨酸	S	Ser
			苏氨酸	T	Thr
色氨酸	W	Trp
			酪氨酸	Y	Tyr
结氨酸	V	Val

3.2.定义

本发明中使用的下列术语应该具有下述的含义：

“亲水性氨基酸”是指带有的侧链具有下述特性的氨基酸：脂类存在时，往往与水相或磷脂的极性头部结合。基因编码的亲水性氨基包括Asp(D)、Glu(E)、His(H)、Lys(K)、Arg(R)、Asn(N)、Gln(Q)、Ser(S)和Thr(T)。

“酸性氨基酸”是指侧链pK值小于7的氨基酸。由于失去一个氢离子，所以在生理pH值下酸性氨基酸典型地具有带负电荷的侧链。基因编码的酸性氨基酸包括Glu(E)和Asp(D)。

“碱性氨基酸”是指侧链pK值大于7的氨基酸。由于结合了水合氢离子，所以在生理PH值下碱性氨基酸典型地具有带正电荷的侧链。基因编码的碱性氨基酸包括Arg(R)和Lys(K)。

“极性氨基酸”是指生理pH值下具有不带电侧链的亲水氨基酸，但具有至少1个这样的键，即其中被两个原子共同分享的电子对更靠近其中的一个原子。基因编码的极性氨基酸包括Asn(N)、Gln(Q)。

“疏水氨基酸”是指带有的侧链具有下述特性的氨基酸：脂类存在时，往往与磷脂的酰基侧链结合。基因编码的疏水性氨基包括Phe(F)、Tyr(Y)、Trp(W)、Leu(L)、Val(V)、Ile(I)、Met(M)、Gly(G)、Ala(A)和Pro(P)。

“芳香族氨基酸”是指侧链上具有至少1个芳香或杂合芳香环的疏水氨基酸。所述芳香或杂合芳香环可以包括1个或多个取代基。遗传学编码的芳香族氨基酸包括Phe(F)、Tyr(y)和Trp(W)。

“非极性氨基酸”是指生理pH值下具有不带电侧链的亲水氨基酸，但具有至少1个这样的键，即其中被两个原子共同分享的电子对通常被这两个原子同等程度地拥有(即侧链是非极性的)。

“脂肪族氨基酸”是指具有一个脂肪族碳水化合物侧链的疏水氨基酸。遗传学编码的脂肪族氨基酸包括Ala(A)、Val(V)、Leu(L)和Ile(I)。

4.附图简述：

图1.人ApoA-I的核苷酸序列(SEQ.ID No.：259)和氨基酸序列(SEQ.ID No.：260)。

图2.编码结构I核心肽的核苷酸序列(SEQ.ID No.：261、262和263)。

图3.编码结构II核心肽的核苷酸序列(SEQ.ID No.：264、265和266)。

图4.编码结构III核心肽的核苷酸序列(SEQ.ID No.：267、268和269)。

5.发明详述

本发明涉及到用于治疗同高胆固醇血症相关疾病的基因治疗方法，提供了编码天然ApoA-I基因修饰形式的核苷酸序列以及编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，ApoA-I激动剂可模仿ApoA-I功能和活性或超出其功能和活性。

本发明核苷酸序列编码的肽可形成两亲性螺旋(在有脂类存在时)，结合脂类，形成前β类或HDL类复合物，激活LCAT，增加血清HDL浓度和促进胆固醇输出。

被编码肽的生物学功能似乎同螺旋结构相关，或在有脂类存在时转变为螺旋结构。

根据本发明可设计构建至少3种类型的DNA载体或盒子，该载体包括人天然ApoA-I基因的核苷酸序列；天然或ApoA-I原的修饰形式；编码前ApoA-I原激动剂或ApoA-I原的核苷酸序列；编码ApoA-I激动剂或超激动剂的核苷酸序列。该载体或盒子也可以以同源多聚体(重复的肽单元)或异源多聚体(不同肽单元)表达来增加产率。

本发明进一步涉及到表达本发明中ApoA-I肽激动剂的遗传工程宿主细胞。宿主细胞可在体内或体外构建。本发明也进一步涉及到在宿主中表达ApoA-I肽激动剂的体内或体外基因治疗方法。本发明也涉及到表达本发明中ApoA-I和ApoA-I原激动剂或修饰形式的转基因动物。

编码本发明中ApoA-I激动剂的核苷酸序列可以以裸露的RNA或DNA序列在载体中出现，例如病毒载体或转染细胞的载体。本发明包括药理学药方和这种制备在治疗血脂蛋白异常症、高脂血症、高胆固醇血症、冠状心脏病、动脉粥样硬化及其他情形如内毒素症/败血性休克中的应用。

本发明部分基于申请人的发现：本发明中的ApoA-I激动剂同血浆中的HDL成分结合，可增加HDL和前β颗粒的浓度。本发明的ApoA-I激动剂可促进胆固醇从肝外组织的输出。该激动剂在激活LCAT进而促进RCT方面也非常有效。对本发明中ApoA-I激动剂在动物模型体内的应用可导致血清HDL浓度的增加。

下面将从以下几方面详述本发明：编码天然形式的ApoA-I、前原体形式ApoA-I，天然或原体ApoA-I和ApoA-I激动剂修饰形式的核苷酸序列以及设计用于表达这些核苷酸序列的载体和细胞系；提供用于体内或离体基因治疗方法的核苷酸序列；制备大量或单位剂量药方的方法以及这些方法的应用。

5.1.编码ApoA-I和ApoA-I激动剂的核苷酸序列

本发明中的核苷酸序列编码ApoA-I和ApoA-I激动剂，ApoA-I和ApoA-I激动剂在脂类存在时可形成两性α-螺旋，模仿ApoA-I活性。编码ApoA-I和ApoA-I激动剂的核苷酸序列在此描述。

本发明也包括编码全长ApoA-I基因(SEQ.ID No.：259(FIG.1))的核苷酸序列，该序列已经经过修饰可增强或增加表达基因产物的类ApoA-I活性，即：形成两亲性螺旋(在脂类存在时)、结合脂类、形成类前β或类HDL复合物，激活LCAT，增加血清HDL浓度和促进胆固醇输出。本发明也包括编码天然ApoA-I修饰形式的核苷酸序列，例如，1、2或多个两亲性螺旋被至少两个ApoA-I激动剂所代替的编码修饰ApoA-I的核苷酸序列。

本发明也涉及到编码修饰形式的ApoA-II、ApoA-III、ApoA-IV、

ApoA-IV、ApoB、ApoC-I、ApoC-2、ApoC-III、ApoD和ApoE的核苷酸序列，这些序列已经被修饰编码1、2或多个本发明中ApoA-I激动剂(参见Lusis，1988，J of Lipid Res.29：397-428.在此完全引入作为参考)。

本发明的核苷酸序列也包括编码结构I(即SEQ.ID No.261、262和263：(FIG 2))、结构II(即SEQ.ID No.264、265和266：(FIG 3))、结构III(即SEQ.ID No.：267、268和269(FIG 4))的核心肽序列。

本发明还包括：

(a)包含任何前述ApoA-I编码序列或其互补序列(即反义链)的DNA载体；

(b)包含任何前述ApoA-I编码序列并同指导编码序列表达的调控元件可操作地相连的DNA表达载体；

(c)编码串联重复的ApoA-I激动剂的DNA表达载体或盒子，串联重复被内部核糖体结合位点分开，因而可在同一盒子表达几个相同的编码序列或从相同的盒子表达几种不同的ApoA-I激动剂；

(d)包含任何前述的编码序列并同指导编码序列的调控元件可操作地相连的经遗传工程构建的宿主细胞。

此处所用的调控元件包括，但不局限于，可诱导的或不可诱导的启动子、增强子、操纵子或其它对本专业熟悉的人所知的可启动或调控表达的元件。这些调控元件包括但不局限于巨细胞病毒hCMV的极早期基因、SV40腺病毒的早或晚期启动子、lac系统、trp系统、TAC系统、TRC系统、噬菌体A的主要操纵子和启动子区、fd膜蛋白控制区、3-磷酸甘油激酶启动子、酸性磷酸酶启动子和酵母α-接合因子启动子。

5.1.1.天然ApoA-I基因

ApoA-I基因编码HDL的基本蛋白成分，同调控胆固醇输出和血清HDL浓度相关。此处描述了编码本发明ApoA-I基因的核苷酸序列，用于治疗同血脂异常相关疾病的基因治疗方法。本发明中的ApoA-I基因包括但不局限于：

(a)含有编码人ApoA-I cDNA的核酸分子，其中全长的人ApoA-IcDNA含842个核苷酸(SEQ ID No：259(图1))(参照Shoulders等，1983，Nucleic Acids Research 11：2827-2837，在此处完全引入作为参考)，其中编码至少一个22个氨基酸重复的序列被编码本发明中ApoA-I激动剂的核苷酸序列所代替；

(b)含人ApoA-I基因组序列的核酸分子，其中至少包括包含158和588个核苷酸的两个内含子(参照Shoulders等，1983，Nucleic AcidsResearch 11：2827-2837，在此处完全引入作为参考)。

(c)含人天然ApoA-I中发现的22个氨基酸重复中的1-8个的核酸分子，核酸分子也可进一步包含在重复之间编码接头或间隔子的DNA序列。

(d)含已修饰ApoA-I DNA序列的核酸分子，其中至少一个两亲性螺旋被至少一个ApoA-I激动剂序列所代替。

(e)含所有或一部分(a)、(b)、(c)、(d)，此外还有编码前肽原(prepropeptide)或导肽的核酸分子，导肽覆盖ApoA-I氨基端的18个氨基酸。人ApoA-I导肽，5’-AIKAAVLTLAVLFLTGSQA-3’(SEQ IDNo：270)，在ApoA-I从宿主细胞分泌后被切割掉

(f)含所有或一部分(a)、(b)、(c)、(d)或(e)，此外含有编码原肽节段的核酸分子，肽原(propeptide)序列包括6个氨基酸的序列，5′-RHFWQQ-3′(SEQ ID No：272)，经特异性蛋白切割后可产生成熟形式的ApoA-I，和/或

(g)包含编码在功能上同ApoA-I肽等价的基因产物的DNA序列的核酸分子。

“功能上同ApoA-I等价”在此处指，基因产物可表现出ApoA-I肽的其中一个生物学活性，这些活性包括：形成两亲性螺旋(在脂类存在时)、结合脂类、形成前-β类或HDL类复合物、激活LCAT、增加血清HDL浓度、促进胆固醇输出。根据这些，本发明也包括这些核苷酸序列：编码修饰形式的ApoA-II、ApoA-III、ApoA-IV、ApoB、ApoC-I、ApoC-II、ApoD或ApoE的核苷酸序列，这些分子已被修饰编码本发明中1，2或多个ApoA-I激动剂。

本发明也包括以下核酸分子，更优选为DNA分子，这些分子可同上述编码天然ApoA-I分子的DNA序列杂交或互补。如上所述，此处的杂交条件可能为高严谨条件或非高严谨条件。在此核酸分子指脱氧寡聚核苷酸(“oligos”)的实例中，高严谨条件指，例如在6×SSC/0.05％焦磷酸钠溶液中于37℃(对1碱基oligos)、48℃(对17碱基oligos)、55℃(对22碱基oligos)、60℃(对23碱基oligos)洗膜。这些核酸分子可作为ApoA-I激动剂的反义分子，可用于例如ApoA-I基因调控、在ApoA-I核酸序列扩增中用做反义引物。关于ApoA-I基因调控，此技术可用于调节例如高胆固醇血症等。此外，此序列可用于部分核酶或三链螺旋序列，也可用于调控表现为ApoA-I反激动剂特性的ApoA-I突变体。此外，此类分子可用做诊断方法中的成分，例如可检测出致高胆固醇血症的突变ApoA-I等位基因的出现。

除了此处所描述的人的序列，其它ApoA-I序列可用本领域熟知的分子生物学技术方法很容易分离鉴定。

5.1.2ApoA-I肽和ApoA-I激动剂

核苷酸序列可编码ApoA-I肽或激动剂，ApoA-I肽或激动剂的主要特征是一由15-23个氨基酸残基组成的“核心”肽。核心肽的序列是基于本申请所发现的一类肽序列，此类肽可模仿ApoA-I的结构和两亲性螺旋特性，表现为特异的活性，此活性接近或在某些实例中甚至超过了天然ApoA-I的活性

本发明编码ApoA-I肽和激动剂的核苷酸序列可以以单体、多聚体形式或同编码天然或ApoA-I原核苷酸序列嵌和的形式表达。

本发明ApoA-I激动剂是部分基于本申请人令人惊讶的发现：改变对活性起关键作用的22聚体共有序列(Venkatachalapathi，et al.，1991，Mol.Conformation and Biol.Interactions B：585-596(PVLDEFREKLNEELEALKQKLK；SEQ ID No：75；以后用“Segrest共有22聚体序列”或“一致22-mer序列”)的某些氨基酸残基可使合成肽表现出与天然ApoA-I活性接近甚至在某些实施例中超过其天然活性。特别地，申请者发现，用疏水性Leu残基替代Segrest一致22-mer序列中三个带电荷氨基酸(Glu-5，Lys-9和Glu-13)，可得到一在本领域无先例地模仿ApoA-I的结构和功能特性的肽。

尽管无意受到特定理论的束缚，同文献所描述的ApoA-I模仿肽形成的α-螺旋相比，ApoA-I形成的螺旋更合适的模仿了天然ApoA-I中的两亲性螺旋区的结构和功能特性，此结构和特性对影响脂类结合、胆固醇输出、LCAT激活很重要，因此，所得到的肽显示出显著高于其它肽类的类ApoA-I活性。事实上，本发明方法中的很多ApoA-I激动剂接近在某些实例中甚至超出了ApoA-I活性，而目前文献中所报道的最好的模仿肽-18AM4(SEQ ID No：246)；Corinjn等，1993，Biochim.Biophys.Acta 1170：8-16；Labeur等，Oct，1994，Arteriosclerosis：AbstractNos186 and 187；和N-乙酰化、C-酰胺化肽18AM4(SEQ ID No：239)(Brasseur，1993，Biochim.Biophys.Acta 1170：1-7)在此处的LCAT激活实验中活性同ApoA-I相比分别减少了4％和11％。

在本发明实施例说明中，核苷酸序列编码的组成本发明激动剂的核心肽(或类似物)遵循以下结构公式：

(I)X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆-X₁₇-X₁₈-X₁₉-X₂₀-X₂₁-X₂₂

此处：

X₁为Pro(P)、Ala(A)，Gly(G)，Gln(Q)，Asp(D)或Asn(N)；

X₂为一脂肪性氨基酸；

X₃为Leu(L)或Phe(F)；

X₄为酸性氨基酸；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为亲水性氨基酸；

X₈为酸性或碱性氨基酸；

X₉为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₀为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₁为亲水性氨基酸；

X₁₂为亲水性氨基酸；

X₁₃为Gly(G)或一脂肪氨基酸；

X₁₄为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₅为亲水性氨基酸；

X₁₆为疏水性氨基酸；

X₁₇为疏水性氨基酸；

X₁₈为一碱性氨基酸Gln(Q)或Asn(N)；

X₁₉为一碱性氨基酸Gln(Q)或Asn(N)；

X₂₀为一碱性氨基酸；

X₂₁为一脂肪性氨基酸；

X₂₂为一碱性氨基酸。

在结构I的核心肽中，氨基酸之间的符号“-”一般指起连接作用的骨架。因此，符号“-”通常指肽键或酰胺键连接。

本发明包括编码同结构I肽功能等价肽的核苷酸序列，详述请参照美国专利申请系列号＿＿＿＿＿，第25页，第6行～第58页第21行，在此完全引入作为参考。

在一进一步对本发明实施例的描述中，核苷酸序列编码组成具有下列通式的ApoA-I激动剂核心肽(或类似物)的：

(II)X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆-X₁₇-X₁₈-X₁₉-X₂₀-X₂₁-X₂₂

此处：

X₁为Pro(P)、Ala(A)，Gly(G)，Gln(Q)，Asn(N)或Asp(D)；

X₂为一脂肪性氨基酸；

X₃为Leu(L)或Phe(F)；

X₄为Glu(E)；

X₅为脂肪性氨基酸；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为Glu(E)或Leu(L)；

X₈为Asn(N)或Gln(Q)；

X₉为Leu(L)；

X₁₀为Leu(L)，Trp(W)或Gly(G)；

X₁₁为酸性氨基酸；

X₁₂为Arg(R)；

X₁₃为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₄为Leu(L)、Phe(F)或Gly(G)；

X₁₅为Asp(D)；

X₁₆为Ala(A)；

X₁₇为Leu(L)；

X₁₈为Gln(Q)或Asn(N)；

X₁₉为一碱性氨基酸；

X₂₀为一碱性氨基酸；

X₂₁为一Leu(L)；

X₂₂为一碱性氨基酸。

每一符号“-”一般独立的一个指肽键或酰胺键连接。

本发明包括编码同结构II肽功能等价的核苷酸序列，详述请参照美国专利申请系列号＿＿＿＿＿，第25页第6行～第58页第21行，在此完全引入作为参考。

在一进一步对本发明实施例的描述中，该核苷酸序列编码组成本发明的具有下述通式的ApoA-I激动剂的核心肽(或类似物)的：

(III)X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆-X₁₇-X₁₈

X₁为Pro(P)、Ala(A)，Gly(G)，Gln(Q)或Asn(N)；

X₂为一脂肪性氨基酸；

X₃为Leu(L)；

X₄为酸性氨基酸；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为一碱性氨基酸；

X₈为酸性氨基酸；

X₉为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₀为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₁为酸性氨基酸或Asn(N)；

X₁₂为酸性氨基酸；

X₁₃为Leu(L)，Trp(W)或Phe(F)；

X₁₄为一碱性氨基酸或Leu(L)；

X₁₅为Gln(Q)或Asn(N)；

X₁₆为碱性氨基酸；

X₁₇为Leu(L)；

X₁₈为一碱性氨基酸。

每一符号“-”一般独立的指一肽键或酰胺键连接。

本发明包括编码同结构III肽功能等价的核苷酸序列，详述请参照美国专利申请号＿＿＿第24页31行～58页3行，在此完全引入作为参考。

结构I、II和III的核心肽部分上以指定类型的氨基酸来定义。下面提供了各种指定类型的限制，同描述突变或改变的结构I、II和III相关。

结构I、II和III中的所有字母都同前述一样用本领域惯用的一个字母代表一个氨基酸。肽的核苷酸序列推断如下：

                          表I

尽管无意受到特定理论的束缚，同文献所描述的ApoA-I模仿肽形成的α-螺旋相比，ApoA-I形成的螺旋更合适的模仿了天然ApoA-I中的脂性螺旋区的结构和功能特性，此结构和特性对影响脂类结合、胆固醇输出、LCAT激活很重要，因此，所得到的肽显示出显著高于其它肽类的类ApoA-I活性。事实上，本发明方法中的很多结构I、II和III核心肽接近在某些实例中甚至超出了ApoA-I活性，而到目前文献中所报道的最好的模仿肽在此处的LCAT激活实验中活性同ApoA-I相比减少了40％。

尽管不愿受到任何特定理论的限制，结构I、II和III核心肽所形成的两亲性螺旋的某些结构和物理特性对活性至关重要。这些特性包括：两歧性、总疏水性、平均疏水性、疏水的角度、疏水力矩、平均疏水力矩、净电荷和偶极力矩。

结构I、II和III的核心肽的优选结构和物理特性总结于表II、III和IV。

              表II  优选ApoA-I激动剂结构I的物理特性

特性	范围	优选范围
			％疏水性氨基酸<H0><H0 pho><μH>Pho角度正电荷氨基酸负电荷氨基酸净电荷	40-70-0.050至-0.0700.90-1.20.45-0.65160°-220°3-53-5-1至+1	50-60-0.030至-0.0550.94-1.10.50-0.60180°-200°440
疏水簇酸性簇碱性簇	位置3、6、9、10为疏水氨基酸除了最后5个C端氨基酸外，每个转角至少有一酸性氨基酸在最后5个C端氨基酸中，有至少3个碱性氨基酸

            表III  优选ApoA-I激动剂结构II的物理特性

特性	范围	优选性
			％疏水性氨基酸<H0><H0 pho><μH>Pho角度正电荷氨基酸负电荷氨基酸	40-70-0.050至-0.0700.90-1.20.45-0.65160°-220°3-53-5	50-60-0.030至-0.0550.94-1.10.50-0.60180°-200°44

净电荷	-1至+1	0
			疏水簇酸性簇碱性簇	位置3、6、9、10为疏水氨基酸除了最后5个C端氨基酸外，每个转角至少有一酸性氨基酸在最后5个C端氨基酸中，有至少3个碱性氨基酸

              表IV  优选ApoA-I激动剂结构III的物理特性

特性	范围	优选范围
			％疏水性氨基酸<H0><H0 pho><μH>Pho角度正电荷氨基酸负电荷氨基酸净电荷	40-70-0.150至-0.0700.90-1.20.55-0.65120°-160°3-53-5-1至+1	50-60-0.130至-0.0500.95-1.100.58-0.62130°-150°440
疏水簇酸性簇碱性簇	位置3、6、9、10为疏水氨基酸除了最后5个C端氨基酸外，每个转角至少有一个酸性氨基酸在最后5个C端氨基酸中，有至少3个碱性氨基酸

本发明中核心肽形成的两性α-螺旋的特性同A类两性α-螺旋，尤其是Segrest’s 18A和22聚体共有肽序列的A类α-螺旋有很大差别。这些差异以核心肽210(SEQ ID No 210)为例说明。

肽210(SEQ ID No 210)同Segrest’s 18A肽(SEQ ID No 244)和22聚体共有序列肽(SEQ ID No 75)的差别比较见表V：

表V  肽210(SEQ ID No 210)同Segrest’s 18A肽(SEQ ID No 244)和22聚体共有序列肽(SEQ ID No 75)的特性比较

特性	18A	共有22聚体序列	肽210
				氨基酸编号亲水性氨基酸编号疏水性氨基酸编号％疏水性氨基酸	189950	2213941	189950

<Ho><Hopho><μH>pho角度#带正电氨基酸#带负电氨基酸净电荷

-0.430.7780.485100°440

-0.2930.9600.425100°56-1

-0.1251.0810.597140°440

这些性质上的差别导致活性上的显著差别。同本实验中天然ApoA-I的活性相比，Segrest’s 18A(SEQ ID No 244)和22聚体共有肽序列(SEQ ID No 75)仅分别表现出5％

和10％的LCAT活性，而肽210(SEQ ID No 210)表现出46％的活性。

结构I、II和III的核心肽的某些氨基酸残基可被其它残基代替而无有害影响，在很多情况下甚至可加强肽活性。因此，本发明也考虑将结构I、II和III的核心肽的至少一个氨基酸残基用别的代替成为突变形式的核心肽。对影响核心肽活性的一个关键特征被认为是在脂类存在时形成α-螺旋的能力，表现为两歧性和其它上述特性，要认识到在优选实施例中，氨基酸的替代时是保守的，即替代氨基酸残基在理化特性上同被替代残基相似。

为了测定保守氨基酸的替代，氨基酸可传统地分为两类—疏水性氨基酸和亲水性氨基酸—根据氨基酸侧链的理化特性。这两类可进一步分为不同亚类来说明侧链的不同理化特性。例如，亲水性氨基酸可分为酸性、碱性和极性氨基酸。疏水性氨基酸可分为非极性和芳香性氨基酸。结构I、II和III中各种类型的氨基酸残基类型说明如下：

“亲水性氨基酸”指根据Eisenberg，1984，Ann Rev.Biochem 53：595-623标准标尺中疏水性小于0的氨基酸。遗传编码的氨基酸包括Pro(P)、Thr(T)、Ser(S)、His(H)、Glu(E)、Asn(N)、Gln(Q)、Asp(D)、Lys(K)和Arg(R)。

“酸性氨基酸”指侧链Pk值小于7的亲水性氨基酸。酸性氨基酸典型地含负电荷侧链，因生理状态下失去H⁺。遗传编码的酸性氨基酸包括Glu(E)和Asp(D)。

“碱性氨基酸”指侧链Pk值大于7的亲水性氨基酸。酸性氨基酸典型地含正电荷侧链，因生理状态下结合OH⁺。遗传编码的碱性氨基酸包括His(H)、Arg(R)和Lys(K)。

“极性氨基酸”指在生理pH状态下侧链无电荷，但含有至少一个键，其中有两个原子共用一电子对，但更接近其中一个原子。遗传编码的极性氨基酸包括Cys(C)、Asn(N)、Gln(Q)、Ser(S)和Thr(T)。

“亲水性氨基酸”指根据Eisenberg，1984，Ann Rev.Biochem 53：595-623标准中疏水性大于0的氨基酸。遗传编码的氨基酸包括Ile(I)、Phe(F)、Val(V)、Leu(L)、Trp(W)、Met(M)、Ala(A)、Gly(G)和Tyr(Y)。

“芳香性氨基酸”指含有至少一个芳香性或异芳香环侧链的疏水氨基酸。芳香和异芳香环包括一个或多个替代如-OH，-SH，-CN，-F，-Cl，Br，-I，-NO₂，-NO，-NH₂，-NHR，-NRR，-C(O)R，-C(O)OH，-C(O)OR，-C(O)NH₂，-C(O)NHR，-C(O)NRR等类似基团。R指(C1-C6)烷基，替代的(C1-C6)烷基，(C1-C6)烯基，替代的(C1-C6)烯基，(C1-C6)烯基，替代的(C1-C6)烯基，(C5-C20)芳基，替代的(C5-C20)芳基，(C6-C26)烷芳基，替代的(C6-C26)烷芳基，5-20个芳香杂环或替代的5-20个芳香杂环。遗传编码的芳香氨基酸包括Phe(F)、Tyr(Y)和Trp(W)。

“非极性氨基酸”指在生理pH状态下侧链无电荷，所含共价键的两个原子等价的共用一电子对。遗传编码的极性氨基酸包括Leu(L)、Val(V)、Ile(I)、Met(M)、Gly(G)和Ala(A)。

“脂肪性氨基酸”指具有脂肪性烃基侧链的疏水性氨基酸。遗传编码的脂肪性氨基酸包括Ala(A)、Val(V)、Leu(L)和Ile(I)。

氨基酸残基Cys(C)的不同之处在于它可以同其它Cys(C)残基或其它含磺酰基的残基形成二硫键。Cys(C)残基(和其它含SH侧链的残基)在肽中以还原的自由-SH状态还是氧化的二硫键状态可影响到Cys(C)的疏水和亲水特性。尽管根据Eisenberg一致标准(Eisenberg，1984，supra)Cys(C)表现为0.04的疏水性，需指出本发明Cys(C)划分为疏水性氨基酸，而不受上述一般分类的制约。

对熟悉本领域的专业人员来讲，上述划分并不互相排斥。因此，侧链表现两个或多个理化特性的氨基酸可划分到多个类型中。例如，具有芳香侧链的氨基酸侧链如果进一步以极性部分代替，如Tyr(T)，可能表现为芳香疏水特性和极性亲水特性，因而可划分为芳香和极性氨基酸。对任何氨基酸的合适分类对熟悉本领域的人都很明了，尤其是此处所提供的详细分类方法。

某些氨基酸残基，称为“螺旋中断”氨基酸，当包含在螺旋中时有破坏螺旋结构的倾向。表现为此类特性的氨基酸在本领域众所周知(参见例如Chou和Fasmen，Ann.Rev.Biochem.47：251-276)，包括Pro(P)、D-Pro(P)和Gly(G)。尽管这些氨基酸也在上述分类范围之内，除Gly(G)外，这些残基不应该用于螺旋内替代其它氨基酸残基--它们仅用于替代肽N端或C端的1-3个氨基酸残基。

ApoA-I天然结构含8个同结合脂类有关的螺旋单元(Nakagawa etal.，1985，J.Am.Chem.Soc.107：7087-7092；Anantharamaiah et al.，1985，J.Biol.Chem.260：10248-10262；Vanloo et al.，1991，J.Lipid Res.32：1253-1264；Mendez et al.，1994，J.Clin.Invest.94：1698-1705；Palgunari et al.，1996，Eur.J.Biochem.239：74-84)。因此，本发明也包括此处所描述的核心肽所形成的二聚体、三聚体、四聚体甚至更多聚体(“multimers”)的ApoA-I激动剂。这些多聚体可以串联形式、分支网或二者的组合形式。核心肽可直接连在一起或被一个或多个接头连在一起。

构成多聚体的核心肽可以是结构I、II和III类似体、突变形式、截短或内部缺失形式、延伸扩展形式或这些形式的组合。核心肽可以头尾方式(即N端到C端)、头头方式(即N端到N端)、尾尾方式(即C端到C端)或这些方式的组合。

在本发明的一实施例中，多聚体为2、3、4到不多于10个核心肽的串联重复。更优选的，为2-8个核心肽的重复。因此，在一实施例中，本发明ApoA-I激动剂构成的多聚体有以下结构公式：

此处：每一m为0到1的一个整数，优选1；

每一n为0到10一个的整数，优选0到8；

每一HH表示核心肽或结构(I)的一个肽类似物或上述的突变、截短、内部缺失或扩展形式。

每一LL表示一个接头如Pro(P)、Gly(G)和Cys-Cys。

在一优选实施方案中，串联重复内部插入一单个脯氨酸残基。为了达到此目的，核心肽在N或C末端以脯氨酸结尾，如结构I中X1为Pro(P)。对不含N末端或C末端脯氨酸的核心肽，LL优选为脯氨酸Pro(P)。

在本发明的某些实施方案中，预期用可切割接头从而达到在某些条件下允许释放一个或多个螺旋节段(HH)的目的。合适的可切割接头包括含蛋白酶识别序列的肽、内切酶切割的寡核苷酸。优选的，切割条件应比较相对温和，不至于使螺旋和组成多聚体激动剂的非切割接头变性或降解。

肽和寡核苷酸接头可选择性切割。切割的方法对熟悉本领域的人是众所周知的。

在一优选实施方案中，所用的肽接头为内源性循环系统的酶底物，允许多聚体ApoA-I激动剂在体内选择性切割。合适的切割接头的内源性酶包括，例如，载脂蛋白A-I原肽酶原(propeptidase)。合适的酶以及适合于此酶的肽段对本领域人员是众所周知的。(参照，例如，Edelstein et al.，1983，J.Biol.Chem.258：11430-11433；Zanis，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80：2574-2578)。

如上述讨论的，本发明的一个关键特征是当核心肽以反平行方式排列时有能力形成分子间氢键和盐桥。因此，在一优选方案中，用足够长度和折叠性的接头允许结构(II)的螺旋段以反方向排列，在脂类存在时可形成分子间氢键和盐桥。这类接头包括但不局限于Pro(P)，Gly(G)和Cys-Cys。

选择性的，用天然载脂蛋白允许反平行螺旋节段的相互结合，肽接头相应于连接天然载脂蛋白中连接相应螺旋的肽段，因此天然载脂蛋白的肽接头可很方便用于连接核心肽，这些载脂蛋白包括ApoA-I、ApoA-II、ApoA-III、ApoA-IV、ApoB、ApoC-I、ApoC-II、ApoD或ApoE。这些序列对本领域众所周知(参照例如Rosseneu et al.，“载脂蛋白一级和二级结构分析”In：载脂蛋白结构和功能，第6章，159-183，CRC出版社公司1992)。

另外一些允许在反向平行螺旋节段串联重复之间形成分子内氢键和盐桥的接头包括肽反向转角如β-转角和γ-转角。一般的，反向转角指可使肽链反向从而允许单链肽形成反平行β-转角或反平行α螺旋的结构。β-转角由4个氨基酸残基组成而γ-转角由3个氨基酸残基组成。

许肽β-转角的构型和序列已在本领域有很多描述，包括但不局限于，I型、I’型、II型、II’型、III型、III’型、IV型、V型、V’型、VIa型、VIb型、VII型和VIII型(参照，Richardson，1981，Adv.ProteinChem.34：167-339；Rose et al.，1985，Adv.Protein Chem.37：1-109；Wilmot et a.，1988，J.Mol.Biol.203：221-232；Sibanda etal.，1989，J.Mol.Biol.206：759-777；Tramontano et al.，1989，Proteins：Struct.Funct.Genet.6：382-394)。

短肽转角如β-转角的特异构型基本上依赖于其转角中某些氨基酸残基的位置(通常为Gly，Asn或Pro)。一般的，I型转角1-4位氨基酸除第3位不能用Pro外，可用任何残基。在I型和II型转角中4位和2位分别以Gly和Pro占优势。Asp，Asn，Ser和Cys残基经常出现在1位。它们的侧链常常同残基3的NH形成氢键。

在II型转角中，Gly和Asn常出现在3位。因为它们可使支架角度更易发生。理想的，I型转角在2和3位为Gly，而II型转角2位为Gly。III型转角一般有最多的残基。但它通常需要2和3位为Gly。VIa型、VIb型通常含一反式肽段，以Pro作为内部残基。蛋白和肽类的不同类型和序列的折叠参照综述Wilmot et al.，1998，J.Mol.Biol.203：221-232。

许肽γ-转角的构型和序列在本领域也有很多描述(参照例如，Rose etal.，1985，Adv.Protein Chem.37：1-109；Wilmer-White et al.，1987，Trends Biochem.Sci.12：189-192；Wilmot et al.，1988，J.Mol.Biol.203：221-232；Sibanda et al.，1989，J.Mol.Biol.206：759-777；Tramontano et al.，1989，Proteins：Struct.Funct.Genet.6：382-394)。所有这些类型的转角和转角结构以及它们相应的序列以及以后发现的β-转角和γ-转角都是本发明特别考虑的。

尽管结构I、II和III含22个指定位置的氨基酸。但要明白的是，本发现的核心肽可少于22个残基。事实上，本质上保持结构I、II和III的两亲性螺旋的特性的仅含18个或15个残基的截短或内部缺失形式的结构I、II和III也在本发明的考虑范围之内。

截短形式的肽可通过删除结构I、II和III的N或C端的1个或多个氨基酸残基来实现。内部缺失肽可通过删除结构I、II和III的内部的1个或多个氨基酸残基来实现。内部缺失的氨基酸残基可以也可以不采取连续形式。

熟悉本领域的人知道，从结构I、II和III核心肽内部删除残基可导致螺旋疏水-亲水平面在删除点旋转100℃。因为这样的旋转可以明显改变螺旋的脂结合性，在一优选实施方案中，缺失的氨基酸可基本保持疏水-亲水平面的螺旋长轴对齐。

这可以很容易通过删除足够数量的连续或非连续残基从而删除一个完整的螺旋转角来实现。每个理想螺旋的每个转角含3.6个残基，因此在一优选方案中，可删除连续或非连续的3-4个残基。删除3或4个残基依赖于第一个删除残基的位置。在一两亲性螺旋中，任何特定起点构成的一完整转角所需的连续或非连续残基数目的确定对熟悉本领域的人员是完全可以实现的。

可以猜想，由于结构I、II和III核心肽中C末端的碱性簇在稳定螺旋、疏水性簇在影响脂结合和LCAT激活中的重要性，在一优选方案中，不删除组成碱性簇和疏水性簇的残基。因此在优选方案中，残基19、20和22(碱性簇)和3、6、9、10(疏水簇)不能被删除。

结构I、II和III的核心肽可在一端、两端或内部添加别的扩展残基，这些残基不干预，在某些情况下甚至可加强肽的结构和功能特性。事实上，扩展的核心肽包括23、25、26、29甚至更多的残基在本发明的考虑范围之内。优选的，此类扩展肽基本上保持净两歧性和结构I、II和III肽的其它特性。当然，要考虑到内部增加残基可使插入点处疏水-亲水平面旋转，情况同上述的内部缺失类似。因此，上述的讨论同样适用于内部添加。

在一实施方案中，核心肽在N端或C端加少至一个的螺旋转角。优选的，此类扩展在有脂类存在时可稳定螺旋的二级结构，例如前述的末端加帽氨基酸和节段。

在一特别优选方案中，结构I、II和III核心肽的C端加一碱性氨基酸，优选Lys(K).

5.1.3.优选实施方案

本发明的核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂进一步用优选方案限制如下。

在一优选实施方案中，本发明的核苷酸序列编码由含22个氨基酸残基的结构I的核心肽组成之ApoA-I激动剂：

X₁为Pro(P)，Gly(G)或Ala(A)；

X₂为Val(V)或Leu(L)；

X₃为Leu(L))；

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为Lys(K)或Arg(R)；

X₈为Glu(E)；

X₉为Leu(L)；

X₁₀为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₁为Asn(N)或Gln(Q)；

X₁₂为Giu(E)；

X₁₃为Leu(L)；

X₁₄为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₅为Glu(E)；

X₁₆为Ala(A)或Trp(W)；

X₁₇为Leu(L)；

X₁₈和X₁₉的其中之一为Gln(Q)另一为Lys(K)；

X₂₀为Lys(K)；

X₂₁为Leu(L)；

X₂₂为Lys(K)。

在另一优选实施方案中，核苷酸序列编码组成ApoA-I激动剂的结构I核心肽22个氨基酸残基：

X₁为Pro(P)、Gly(G)或Ala(A)；

X₂为Val(V)；

X₃为Leu(L))；

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Phe(F)；

X₇为Arg(R)；

X₈为Glu(E)；

X₉为Leu(L)；

X₁₀为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₁为Asn(N)；

X₁₂为Glu(E)；

X₁₃为Gly(G)；

X₁₄为Leu(L)；

X₁₅为Glu(E)；

X₁₆为Ala(A)或Trp(W)；

X₁₇为Leu(L)；

X₁₈为Lys(K)；

X₁₉为Gln(Q)；

X₂₀为Lys(K)；

X₂₁为Leu(L)；

X₂₂为Lys(K)。

根据本发明的这一方面，特别优选的核苷酸序列编码选自下组的核心肽：

肽  3    PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK    (SEQ ID NO：3)；

肽  13   GVLDLFRELLNEGLEALKQKLK    (SEQ ID NO：13)；

肽  138  PVLDLFRELLNEGLEWLKQKLK    (SEQ ID NO：138)；

肽  139  PVLDLFRELWNEGLEALKQKLK    (SEQ ID NO：139)；

肽  141  PVLDFFRELLNEGLEALKQKLK    (SEQ ID NO：141)；

肽  142  PVLELFRELLNEGLEALKQKLK    (SEQ ID NO：142)。

在另一优选方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂为一根据结构I而来的22残基肽，其中X₉为Gly(G)，X₁₀、X₁₃、X₁₄、X₁₆和X₁₇为除Gly(G)外的残基。根据此方面，特别优选的激动剂为肽20：

PVLDLFREGLNELLEALKQKLK  (SEQID NO：20).

在另一优选方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂为一根据结构I而来的22残基肽，其中X₁₀为Gly(G)，X₉、X₁₃、X₁₄、X₁₆和X₁₇为除Gly(G)外的残基。根据此方面，特别优选的激动剂为肽9：

PVLDLFRELGNELLEALKQKLK  (SEQ ID NO：9).

在另一优选方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂为一根据结构I而来的22残基肽，其中X₁₄为Gly(G)，X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₆和X₁₇为除Gly(G)外的残基。根据此方面，特别优选的激动剂为肽126：

PVLDLFRELLNELGEALKQKLK  (SEQ ID NO：26).

在另一优选方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂为一根据结构I而来的22残基肽，其中X₁₆为Gly(G)，X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄和X₁₇为除Gly(G)外的残基。根据此方面，特别优选的激动剂为肽22：

PVLDLFRELLNELLEGLKQKLK  (SEQ ID NO：22).

在另一优选方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂为一根据结构I而来的22残基肽，其中X₁₇为Gly(G)，X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄和X₁₆为除Gly(G)外的残基。根据此方面，特别优选的激动剂为肽12：

PVLDLFRELLNELLEAGKQKLK  (SEQ ID NO：12).

在另一优选方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂为一根据结构I而来的22残基肽，其中X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄、X₁₆和X₁₇为除Gly(G)外的残基。

激动剂为根据结构I而来的22残基肽，其中

X₁为Pro(P)、Gly(G)或Ala(A)；

X₂为Val(V)或Leu(L)；

X₃为Leu(L)；

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为Lys(K)或Arg(R)；

X₈为Glu(E)；

X₉为Leu(L)；

X₁₀为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₁为Asn(N)或Gln(Q)；

X₁₂为Glu(E)；

X₁₃为Leu(L)；

X₁₄为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₅为Glu(E)；

X₁₆为Ala(A)、Leu(L)或Trp(W)；

X₁₇为Leu(L)；

X₁₈和X₁₉的其中之一为Gln(Q)另一为Lys(K)；

X₂₀为Lys(K)；

X₂₁为Leu(L)；

X₂₂为Lys(K)。

根据此方面，在一特别优选的实施例中，；X₂为Val(V)；X₄为Asp(D)；X₅为Leu(L)；X₆为Phe(F)；X₇为Arg(R)；X₁₀为Leu(L)；X₁₁为Asn(N)；X₁₃为Leu(L)；X₁₄为Leu(L)；X₁₆为Ala(A)；X₁₇为Leu(L)；X₁₈为Lys(K)；X₁₉为Gln(Q)；X₂₀为Lys(K)；X₂₂为Lys(K)。

在另一优选方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂是以结构I为基础的突变或改变，其中：

X₁不为Val(V)或Leu(L)；

X₅不为Lys(K)、Glu(E)或Trp(W)；

X₆不为Trp(W)；

X₇不为Trp(W)或Leu(L)；

X₈不为Trp(W)；

X₉不为Lys(K)或Trp(W)；

X₁₁不为Trp(W)；

X₁₂不为Trp(W)或Leu(L)；

X₁₃不为Glu(E)或Trp(W)；

X₁₅不为Trp(W)；

X₂₁不为Lys(K)。

在另一优选方案中，本发明的核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂从下述肽中选出：

肽  2     GVLDLFRELLNELLEALKQKLKK   (SEQ ID NO：2)；

肽  3     PVLDLFRELLNELLEWLKQKLK    (SEQ ID NO：3)；

肽  4     PVLDLFRELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：4)；

肽  7     PVLDLFKELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：7)；

肽  8     PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK    (SEQ ID NO：7)；

肽  9     PVLDLFRELGNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：8)；

肽  11    PVLDLFKELLQELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：9)；

肽  12    PVLDLFRELLNELLEAGKQKLK    (SEQ ID NO：10)；

肽  13    GVLDLFRELLNEGLEALKQKLK    (SEQ ID NO：11)；

肽  15    PVLDLFRELWNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：12)；

肽  16    PVLDLLRELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：13)；

肽  17    PVLELFKELLQELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：14)；

肽  18     GVLDLFRELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：15)；

肽  20     PVLDLFREGLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：16)；

肽  22     PVLDLFRELLNELLEGLKQKLK    (SEQ ID NO：17)；

肽  23     PLLELFKELLQELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：18)；

肽  24     PVLDLFRELLNELLEALQKKLK    (SEQ ID NO：19)；

肽  26     PVLDLFRELLNELLELLKQKLK    (SEQ ID NO：21)；

肽  28     PVLDLFRELLNELWEALKQKLK    (SEQ ID NO：23)；

肽  29     AVLDLFRELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：24)；

肽  123    QVLDLFRELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：123)；

肽  125    NVLDLFRELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：124)；

肽  126    PVLDLFRELLNELGEALKQKLK    (SEQ ID NO：125)；

肽  127    PVLDLFRELLNELLELLKQKLK    (SEQ ID NO：126)；

肽  128    PVLDLFRELLNELLEFLKQKLK    (SEQ ID NO：127)；

肽  129    PVLELFNDLLRELLEALQKKLK    (SEQ ID NO：128)；

肽  130    PVLELFNDLLRELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：129)；

肽  131    PVLELFKELLNELLDALRQKLK    (SEQ ID NO：130)；

肽  132    PVLDLFRELLENLLEALQKKLK    (SEQ ID NO：131)；

肽  133    PVLELFERLLEDLLQALNKKLK    (SEQ ID NO：132)；

肽  134    PVLELFERLLEDLLKALNQKLK    (SEQ ID NO：133)；

肽  135    DVLDLFRELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：134)；

肽  136    PALELFKDLLQELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：135)；

肽  138    PVLDLFRELLNEGLEWLKQKLK    (SEQ ID NO：136)；

肽  139    PVLDLFRELWNEGLEALKQKLK    (SEQ ID NO：137)；

肽  141    PVLDFFRELLNEGLEALKQKLK    (SEQ ID NO：138)；

肽  142    PVLELFRELLNEGLEALKQKLK    (SEQ ID NO：139).

在另一优选方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂为一根据结构II而来的22残基肽，其中

X₁为Pro(P)、Gly(G)、Ala(A)或Asn(N)；

X₂为Ala(A)、Val(V)或Leu(L)；

X₅为Leu(L)；

X₆为Phe(F)；

X₁₁为Glu(E)；

X₁₉为Lys(K)；

X₂₀为Lys(K)；

X₂₁为Leu(L)；

X₂₂为Lys(K)。

X₃、X₄、X₇、X₈、X₉、X₁₀、X₁₂、X₁₃、X₁₄、X₁₅、X₁₆、X₁₇、X₁₈和X₂₁如前述的对结构II的限定。

根据此方面，特别优选的ApoA-I激动剂的X2为Val(V)和/或X₁₆为Gln(Q)。

在另一优选实施方案中，ApoA-II激动剂为一根据结构I而来的22残基肽，其中X₁₀、X₁₃、X₁₄的其中之一为Gly(G)，其余不为Gly(G)。当X₁₄为Gly(G)时，X₇优选Glu(E)。

根据本发明特别优选的核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂从下述肽中选出：

肽  148：PVLELFENLLERLGDALQKKLK  (SEQ ID NO：148)；

肽  151：PVLELFENLGERLLDALQKKLK  (SEQ ID NO：151)；

肽  154：PVLELFENLLERGLDALQKKLK  (SEQ ID NO：154).

在另一优选实施方案中，ApoA-I激动剂为一根据结构II而来的22残基肽，其中X₁₀、X₁₃、X₁₄不为Gly(G)。

在另一优选方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂是以结构II为基础的突变或改变，其中：

X₄不为Asp(D)；

X₅不为Phe(F)；

X₆不为Trp(W)；

X₇不为Leu(L)或Asp(D)；

X₉不为Gly(G)或Trp(W)；

X₁₂不为Lys(K)；

X₁₃不为Trp(W)；

X₁₄不为Trp(W)；

X₁₅不为Glu(E)；

X₁₆不为Trp(W)或Leu(L)；

X₁₇不为Trp(W)。

在另一优选实施方案中，ApoA-II激动剂为一根据结构II而来的22残基肽，其中X₇为Leu(L)、X₁₀为Trp(W)、X₁不为Gly(G)和/或X₁₄不为Gly(G)。根据此方面特别优选肽155(PVLELFLNLWERLLDALQKKLK；SEQID No：155)。

在另一优选实施方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂从下述肽中选出：

肽  145：GVLELFENLLERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：145)；

肽  146：PVLELFENLLERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：146)；

肽  147：PVLELFENLLERLFDALQKKLK    (SEQ ID NO：147)；

肽  148：PVLELFENLLERLGDALQKKLK    (SEQ ID NO：148)；

肽  149：PVLELFENLWERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：149)；

肽  150：PLLELFENLLERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：150)；

肽  151：PVLELFENLGERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：151)；

肽  152：PVFELFENLLERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：152)；

肽  153：AVLELFENLLERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：153)；

肽  154：PVLELFENLLERGLDALQKKLK    (SEQ ID NO：154)；

肽  155：PVLELFLNLWERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：155)；

肽  186：PVLELFEQLLERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：186)；

肽  187：PVLELFENLLERLLDALNKKLK    (SEQ ID NO：187)；

肽  188：PVLELFENLLDRLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：188)；

肽  189：DVLELFENLLERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：189).

在一优选方案中，ApoA-I激动剂为一根据结构III而来的18残基肽。

在另一优选方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂为一根据结构III而来的18残基肽，其中

X₂为Ala(A)、Val(V)或Leu(L)；

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₇为Arg(R)或Lys(K)；

X₈为Asp(D)或Glu(E)；

X₁₁为Glu(E)或Asn(N)；

X₁₂为Glu(E)；

X₁₄为Arg(R)、Lys(K)或Leu(L)；

X₁₆为Arg(R)或Lys(K)；和/或

X₁₈为Arg(R)或Lys(K)。

X₁、X₃、X₅、X₆、X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₅、X₁₇如前述的对结构III的限定。

在另一优选实施方案中，ApoA-II激动剂为一根据结构III而来的18残基肽，其中当X₁₁为Asn(N)则X₁₄为Leu(L)、当X₁₁不为Asn(N)则X₁₄不为。根据此方面特别优选肽209(PVLDLFRELLNELLQKLK；SEQ ID No：209)。

在另一优选方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂是以结构III为基础的突变或改变，其中：

X₁不为Asp(D)；

X₉不为Gly(G)；

X₁₀不为Gly(G)；

X₁₂不为Leu(L)；

X₁₃不为Gly(G)。

在另一优选实施方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂从下述肽中选出：

肽    191  PVLDLLRELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：191)；

肽    192  PVLDLFKELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：192)；

肽    193  PVLDLFRELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：193)；

肽    194  PVLELFRELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：194)；

肽    195  PVLELFKELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：195)；

肽    196  PVLDLFRELLEELKNKLK*    (SEQ ID NO：196)；

肽    197  PLLDLFRELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：197)；

肽    198  GVLDLFRELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：198)；

肽    199  PVLDLFRELWEELKQKLK*    (SEQ ID NO：199)；

肽    200  NVLDLFRELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：200)；

肽    201  PLLDLFKELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：201)；

肽    202  PALELFKDLLEELRQKLR*    (SEQ ID NO：202)；

肽    203  AVLDLFRELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：203)；

肽    204  PVLDFFRELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：204)；

肽    205  PVLDLFREWLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：205)；

肽    206  PLLELLKELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：206)；

肽    207  PVLELLKELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：207)；

肽    208  PALELFKDLLEELRQRLK*    (SEQ ID NO：208)；

肽    209  PVLDLFRELLNELLQKLK     (SEQ ID NO：209)；

肽    210  PVLDLFRELLEELKQKLK     (SEQ ID NO：21O)；

肽    213  PALELFKDLLEEFRQRLK*    (SEQ ID NO：213)；

肽    215  PVLDLFRELLEEWKQKLK*    (SEQ ID NO：215)；

肽    229  PVLELFERLLEDLQKKLK     (SEQ ID NO：229)；

肽    230  PVLDLFRELLEKLEQKLK     (SEQ ID NO：230)；

肽    231  PLLELFKELLEELKQKLK*    (SEQ ID NO：231).

在另一优选方案中，核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂为根据结构IV的多聚体形式，其中HH为根据结构I、II、III而来的独立的一个肽或任何此处所描述的根据结构I、II、III而来的优选肽。

在一最终优选方案中，ApoA-I激动剂不是那些在表VIII中所列的由非遗传密码氨基酸编码的或表现出的LCAT激活同天然人ApoA-I激动剂相比少于38％的活性的肽。

5.1.4.结构和功能分析

为了选择活性激动剂或ApoA-I的模拟物，需对本发明核心肽、肽类似物以及由此核心肽组成的ApoA-I激动剂的结构和功能进行分析，也包括上述的多聚体形式。例如，分析核心肽或肽类似物在有脂类存在时形成螺旋、结合脂类、同脂类形成复合物、激活LCAT和促进胆固醇输出等能力。

用于分析肽结构和功能的方法和实验在本领域众所周知。下面提供了优选的方法工作例子。例如，在下面第7节中描述的CD和NMR分析可用于分析肽和肽类似物的结构--尤其是在脂类存在时的螺旋形成程度。同脂类结合的能力可用下述第7节中荧光色谱仪分析来检测。肽和肽类似物激活LCAT用下面第8节中描述的方法可以很容易测定。下述第9节和10中描述的方法可用于评估半衰期、分布、胆固醇输出及对RCT的影响。

一般来说，表现为下述表VI所列出性质的核心肽或肽类似物被认为是有活性的。

                  表VI  活性肽的性质

特性	范围	优选范围
			％脂存在时的螺旋(Ri＝30)(未封闭的22氨基酸残基肽)％脂存在时的螺旋(Ri＝30)(未封闭的18氨基酸残基肽)％脂存在时的螺旋(Ri＝30)(未封闭的18或更短氨基酸残基肽)脂结合(在SUVs存在时)LCAT激活	≥60％≥40％≥60％0.5-10μM肽Ri＝1-50≥38％	≥80％≥60％≥80％≥80％

R_i为脂类与肽的摩尔比。

如下述工作例中所述，表现为较高LCAT激活(≥38％)活性的核心肽在脂性小单层囊泡(SUVs)存在时一般能形成显著的螺旋结构(未封闭的含22或更多氨基酸残基肽存在情况下和封闭的18或更短氨基酸残基肽存在的情况下有≥60％的α-螺旋结构；在有未封闭的18或更短氨基酸残基肽的情况下有≥40％的α-螺旋结构)。而那些仅显示很小或无LCAT激活活性的肽则有很少的α-螺旋结构。但是在某些情况下，在脂类存在时有显著螺旋结构的肽并不一定有显著的LCAT激活活性。

相似的，尽管有显著LCAT活性的核心肽都典型地结合脂类，在某些情况下，有脂结合活性的核心肽则无显著的LCAT激活。

因此，熟悉本领域的人应该认识到，此处所述的核心肽形成α-螺旋的能力(在脂类存在时)和结合脂的能力对活性很关键，在很多情况下这些特性可能并不完全具备。因此，在一优选方案中，本发明的核心肽要经过一系列筛选从而选择有显著药理活性的核心肽。

第一步，用第7节，下文的CD法筛选核心肽形成α-螺旋的能力，对那些在脂类存在时(浓度大约为5μM，脂∶肽摩尔比为30)至少能形成40％或60％螺旋的肽可进一步用第7节，下文所述的荧光方法筛选结合脂的能力。当然，只有那些含荧光Trp(W)残基的核心肽(用荧光法)才能用于荧光筛选。但是，对于不含荧光残基的核心肽，当脂类存在时，能增加螺旋结构，其对脂的结合是显而易见的。

在SUVs(0.5-10μM肽；脂∶肽摩尔比在1-50范围内)存在时表现为脂结合能力的核心肽进一步用于筛选其药理活性。当然，药理活性的筛选依赖于ApoA-I激动剂的预期用途。在一优选方案中，筛选能激活LCAT的核心肽，因为LCAT激活活性在此处的方法中特别有用。同人天然ApoA-I相比(用第8节，下文，中LCAT激活分析方法)，至少38％的LCAT激活活性的肽是优选的，更优选50％、60％、70％、80％甚至90％或更高活性的核心肽。

5.2.编码ApoA-I的DNA载体和盒子

根据本发明，编码天然、修饰ApoA-I或具有ApoA-I活性的肽，包括ApoA-I激动剂和超激动剂的核苷酸序列要插入到一盒子或合适的表达载体，即含有对插入编码序列必须的转录和翻译元件的载体，或是含必须的复制和转译元件的RNA病毒载体。本发明的核苷酸序列可以“裸露”的DNA构建体用于离体或体内基因治疗给药。编码ApoA-I肽和激动剂的裸露DNA质粒可直接注射给目标个体并成功的被细胞吸收并表达肽(Felgner et al.，U.S.Patent No.5,580,859，在此完全引入作为参考)。“裸露”的DNA也可与非脂类阴离子聚合物或与脂质体形成复合物给药以促进细胞摄入。

在本发明的另一实施方案中，表达载体可转染到一合适的能够表达此肽的靶细胞。依赖于所用的不同表达系统，用本领域成熟的方法分离表达肽。生产重组蛋白和肽的方法在本领域众所周知(参照例如，Maniatis等，1989，分子克隆实验室手册，冷泉港实验室，纽约；Ausubel等，1989，现代分子生物学实验手册，Greene Publishing Associates andWiley Interscience，纽约)。

根据本发明，DNA盒子可含编码前原体或原体ApoA-I序列以保证ApoA-I肽在宿主细胞中的正确加工和分泌。前ApoA-I原含一18个氨基酸的导肽或信号肽，位于氨基端，在从宿主细胞分泌后被切割掉。ApoA-I导肽具有标准的长度和疏水性(参照Davis等，1980，Nature283：433-438)，以小侧链氨基酸结尾，例如丙氨酸。以下述序列实例，但并不局限于下述序列，下述导肽序列5’MKAAVLTLAVLFLTGCQA3’(SEQ IDNO：270)或5’MKAAVLAVALVFLTGCQA3’(SEQ ID NO：271)可整和入DNA载体或盒子。根据本发明，任何可使肽从宿主细胞分泌的序列都可以用于本发明。

ApoA-I原即proApoA-I含一6氨基酸的氨基末端延伸：R-H-F-W-Q-Q(SEQ ID NO：272)或X-E-F-X-Q-Q(SEQ ID NO：273)。通过一特异的蛋白酶在细胞外对前节段的切割可产生ApoA-I的血浆形式。根据本发明，编码6个延伸氨基酸的序列可整和入本发明的载体以保证在从宿主细胞分泌后编码肽的正确加工。

为了增加产率，可设计被酶切位点分开的编码多单元肽的多聚核苷酸--可用此法得到同源多聚体(重复肽单元)或异源多聚体(不同肽连在一起)。得到的肽可通过切割(例如经合适的酶处理)得到肽单元。这样通过一个启动子便可增加产量。在一优选方案中，可设计一多顺反子的多聚核苷酸从而在一个mRNA中编码多个肽(即同源或异源多聚体)，每一编码区和一不依赖于帽子的翻译控制区连在一起，例如内部核糖体结合位点(IRES)，例如Pelletier等。Pelletier et al.1988 Nature334：320-325。在一优选方案中，IRES来自人免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)mRNA的5’非编码区(Macejak et al.1991 Nature 353：90-94)。优选地，IRES区来自细小病毒IRES区序列；IRES可为来自肠道病毒、鼻病毒、心病毒和口疮病毒的IRES；甲肝、乙肝、丙肝病毒的IRES。当用合适的病毒表达系统时，被编码肽的转译可在转录本内部受到指导，即受IRES指导。因此，多顺反子构建体指导单一的大顺反子mRNA转录，同时指导多个单一肽的翻译。此法省去了酶处理过程，可显著增加受单一启动子驱动的肽产量。

不同的宿主表达载体系统可用于表达此处所描述的肽。根据本发明，任何宿主表达系统都可用于：1)表达本发明的ApoA-I肽；2)利用可在哺乳动物细胞中操做的表达控制元件(例如启动子和增强子)；3)高拷贝表达ApoA-I核苷酸序列。在一优选方案中，当用于离体或体内基因治疗时，优选任何可使编码ApoA-I肽和激动剂的核苷酸序列在人细胞高拷贝表达的表达系统。这些包括，但不局限于微生物，如用重组噬菌体DNA或含合适编码序列的质粒DNA表达载体转化的细菌；用重组酵母或含合适编码序列的真菌表达载体转化的酵母或丝状真菌；用含合适编码序列的重组病毒载体(例如杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用含合适序列的重组质粒转化(如Ti质粒)或病毒载体转染(例如花椰菜花叶病毒或烟草花叶病毒)的植物细胞；或动物细胞系统。

表达系统中的表达元件在强度和特征上各不相同。依赖于所用的宿主/表达系统，任何可在哺乳动物(优选人)宿主细胞系统操作的转录和翻译元件，其中包括组成性和可诱导的启动子，都可用于表达载体。在一优选方案中，用于调节天然ApoA-I基因表达的顺式和反式元件整和入载体或盒子。特别地，在ApoA-I基因上游-222--110位核苷酸序列发现转录调控和增强子元件。例如，ApoA-I调控蛋白(ARP-1)的结合位点，在肝特异的转录增强子之内，位于ApoA-I基因上游-222--110区，此蛋白为甾类激素受体超家族成员。APR-1结合的共有序列为5’TGAACCCTTGACCCCT3’(SEQ ID NO：274)(参照Ladias等，1991 Science251：561-565)。另外的ApoA-I转录调控序列和增强子元件公开在Sorci-Thoma等1991 Journal of Biol.Chem.266：18045-18050，Daiet al.，1990 Eur.J.Biochem.190：305-310，Rottman et al.1991Molecular and Cell Biology 11：3814-3820。

当在细菌、植物、昆虫或哺乳动物细胞克隆时，可用来自哺乳动物细胞(例金属硫蛋白启动子)或哺乳动物病毒(如腺病毒晚期启动子；痘苗病毒7.5K启动子)的启动子；当用于产生含多拷贝表达产物的细胞系时，可用含有合适选择标记的SV40、BPV-和EBV-基于的载体。

在哺乳动物细胞中，可选用很多基于病毒的表达系统，在腺病毒为表达载体的例子中，目的ApoA-I肽编码区连接到腺病毒转录/转译控制复合物，例如，晚期启动子或三联前导序列。这种嵌和基因随后可用体内或体外重组插入到腺病毒基因组。插入腺病毒基因组的非必需区如E1或E3区，可产生能存活的并在宿主细胞表达肽的重组病毒(例如，参照Logan and Shenk，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81，3655-3659)。所插入编码肽序列的有效转译需特殊的起始信号。这些信号包括ATG起始密码子和附近序列。含有自身完整的起始密码子和附近序列的插入ApoA-I序列不需额外的转译控制信号。但是，在某些仅部分ApoA-I插入的情况下，必须包括外源性的转译控制信号，可能为ATG起始密码子。此外，起始密码子必须与预期的编码序列读框一致，以保障对整个插入序列的翻译。外源性的转译控制信号或起始密码子可有不同来源；可以是天然或合成的。表达的效率可能通过加入合适的转录增强元件、转录终止子等来加强(参照Bittner，et al.，1987，酶学方法。153，516-544)。

另一些用于产生本发明肽的表达系统对熟悉本领域的人员是显而易见的。

5.2.1.编码ApoA-I的病毒载体

根据本发明，上述所描述编码ApoA-I激动剂或具有ApoA-I活性肽的核苷酸序列和DNA盒子可以连接到合适的病毒载体上。此处所描述的病毒载体对本发明核苷酸序列的体内遗传操作特别有用。根据本发明，用于表达天然ApoA-I的病毒载体不在本发明之列。

在本发明的应用中，将病毒同编码ApoA-I的核苷酸序列用基因工程方法连在一起，所用病毒一般对疾病靶细胞有合适的嗜性，例如，肝细胞、大肠和小肠细胞、内皮细胞等，或者在病毒经遗传操作后对靶细胞有嗜性。在本发明的应用中，对肝细胞、大肠和小肠细胞表现嗜性的病毒为本发明的一个特别优选实施方案。根据本发明，可使用的病毒载体包括，但不局限于，肝DNA病毒、腺病毒、腺伴随病毒、疱疹病毒、逆转录病毒、细小病毒和痘苗病毒等。

在一特别实施方案中，减毒病毒，如对肝细胞有天然嗜性的肝DNA病毒，可以根据本发明经遗传操作用于基因治疗。肝DNA病毒可经遗传操作携带编码天然ApoA-I或ApoA-I的核苷酸序列，在其天然表达的细胞或器官中表达。在病毒基因组中有一些可用于插入外源DNA序列的区域。特别地，编码乙肝病毒表面抗原蛋白pre-S1和pre-S2的序列可以被作为插入编码ApoA-I和ApoA-I激动剂序列的靶区域。例如，编码ApoA-I和ApoA-I激动剂序列可以插入到pre-S1 mRNA启动子的类TATA序列(第278位)的下游或pre-S2 mRNA启动子的类SV40序列(第3166位)的下游。将外源编码序列插入到这些区域的下游可使这些序列在病毒基因表达的调控之下，而又不影响病毒的其他必需活性。

腺病毒是另一可用于基因治疗的病毒载体。腺病毒是将基因导入肝或呼吸上皮的特别有用的载体。它可以自然感染呼吸道上皮引致温和性疾病。腺病毒载体另外的靶目标为肝、中枢神经系统、内皮细胞和肌肉。腺病毒具有优先感染非分裂细胞的能力。Kozarsky和Wilson于1996年在Current opinion in Genetics and Development 3：499-503中有关于基于腺病毒的基因治疗综述。此外，Gerald等于1996年在CurrentOpin.In Lipidology 7：105-111中描述了腺病毒介导的ApoA-I转基因。Boul等于1994年在Human Gene Therapy 5：3-10中将腺病毒介导的转基因用于恒河猴呼吸道上皮。另外一些腺病毒载体用于转基因的例子可在以下文献中查找：Rosenfeld等，1991，Science 252：431-434；Rosenfeld等，1992，Cell 68：143-155；Mastrangeli等，1993，J.Clin.Invest，91：225-234。腺伴随病毒(AAV)也被提出用于基因治疗(Walsh等，1993，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.204：289-300.)。

例如，编码ApoA-I肽异源多聚体(即含有由酶切位点或IRES序列隔开的ApoA-I激动剂和ApoA-I超激动剂的异源多聚体)的盒子可优先插入到腺病毒载体。根据本发明，调控腺病毒基因表达所需的序列包括E1区、E3区或右侧ITR和E4区。这些区域可以被目的TRE代替并通过重组腺病毒基因组的包装整合到病毒颗粒。

对于基因工程重组病毒，腺病毒的三个区域优选为外源DNA序列的插入位点。这些区域包括：(a)EIA区和主要晚期启动子(MLP)；(b)MLP和三联前导序列；(c)置换E3区。已经证明E3区对病毒在组织培养中包装是非必需的。由外源DNA序列在EIA和MLP区插入得到的嵌合病毒可通过在293细胞生长或同能提供反式互补的辅助病毒共培养得到获救。

单纯疱疹病毒表现为自然的神经系统嗜性，可改造感染肝细胞或内皮细胞并包含编码ApoA-I肽的核苷酸序列。例如，为了加强这些序列的表达，编码ApoA-I肽异源多聚体的盒子可优先插入到HSV早期启动子区的下游如ICP4序列或VP16序列。HSV病毒的几个结构基因可作为外源DNA序列的插入靶位点。例如，编码结构糖蛋白gB，gD和gE区可插入外源序列。但是，基因产物被置换或阻断需反式互补，如通过载体或宿主细胞产生重组病毒所需的成分。

人反转录病毒，如HTLV-1和HTLV-2，或表现为人淋巴细胞嗜性的动物反转录病毒，如牛白血病病毒、鼠白血病病毒、Rous相关病毒和猫白血病病毒，可把肝细胞作为靶细胞。反转录病毒复制所需序列位于LTR，因此外源DNA序列即目的ApoA-I肽编码序列应插入到下游。在反转录病毒感染的细胞中，病毒转录来自整和的病毒DNA，即作为含有自身调控序列的一个转录单位的前病毒。前病毒的表达依赖于：(1)前病毒的整和位点；(2)细胞的生理状态；(3)病毒LTR。前病毒的表达几乎完全依赖于宿主编码的酶。

病毒LTR来自病毒RNA的3个节段：R、U5和U3序列。R或冗余序列为病毒中出现两次的短序列(30-60核苷酸)，在最左(5’)或右(3’)端。U5序列位于病毒RNA的5’端。U3序列位于R序列的上游，在长度(0.2-1.2kb)和同源性上具有最大的变异性。

病毒的特异表达调控主要依赖于含有RNA合成所需的加强、启动、起始和多聚A加尾信号的长末端重复(LTR)。转录起始在左端LTR的R序列。病毒的转录受细胞的II型聚合酶催化，转录后在右端LTR的右端加Poly(A)尾。所有LTRs的U3区含CCAAT和TATAA框。增强子功能位于U3中一可变长度(72-101)的重复序列中，位于启动子区的上游。在Moloney鼠白血病病毒(MMTV)LTR的U3序列中发现了在糖皮质激素处理MMTV感染细胞时具有增强病毒表达功能的序列。

对人T细胞表现天然嗜性的鼠细小病毒(MVM)可被改造用于感染肝细胞和消化道内皮细胞。在MVM中，对病毒复制第一步起关键作用的顺式因子位于“早期”启动子P4(Cotmore等，1992，Virology 190：365-377)的上游。早期启动子为病毒转录的起始启动子，它的TATAA框位于MVM基因组左端4个图距单位，大约在150位核苷酸。病毒DNA复制起始的关键反式作用功能也位于此区。外源序列如ApoA-I肽编码序列在其下游的插入可受病毒基因表达的调控，而不影响病毒的其它必需活性，即DNA复制。

水疱性口炎病毒(VSV)为典型弹状病毒，可以在哺乳动物细胞表达本发明的ApoA-I肽，用以基因治疗。VSV为最简单的包膜病毒，可以以很高的滴度生长，能大量制备。外源糖蛋白可整和入VSV的G包膜蛋白，病毒载体的靶目标为肝细胞和大、小肠细胞。VSV的G包膜蛋白基因很大，足以容纳编码本发明ApoA-I肽的核苷酸序列。(参照Schnell等，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：11359-11365)。

α-病毒基于的表达载体为典形的有包膜正链RNA病毒，可用以介导高效表达本发明的ApoA-I肽。尽管正常情况下对脊椎动物细胞有杀伤作用，其适应性突变株可以在细胞非病理状况下复制α-病毒载体。编码本发明ApoA-I肽的核苷酸序列可以整和入复制缺陷型α-病毒基因组的结构基因。缺陷辅助病毒含复制所需的顺式序列和包装复制缺陷α-病毒载体的RNA启动子(Frolov等，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：11371-11377)。除了VSV和α-病毒外，包括流感病毒、小棒状病毒(rhababviruses)、副流感病毒和博雅(bunya)病毒，也可用相似的技术来表达编码本发明ApoA-I肽的核苷酸序列。

上述描述的病毒载体仅为示例，决不是限制本发明。任何能通过基因工程安全地将编码本发明ApoA-I肽或激动剂的核苷酸序列导入靶细胞的病毒载体均可用于本发明。

5.2.2表达ApoA-I的宿主细胞

本发明包括用动物细胞或细胞系，优选可用于体内给药的人细胞或细胞系，表达具有上述ApoA-I活性的ApoA-I或肽。用于表达具ApoA-I活性的ApoA-I或肽的宿主细胞包括，但不局限于，成纤维细胞、Caco-2细胞、表皮细胞、内皮细胞、肌肉细胞、肝细胞和从大小肠分离的细胞。在本发明的一优选实施方案中，肝细胞和从大、小肠分离的细胞用作表达具ApoA-I活性的ApoA-I或肽的宿主细胞。本发明的宿主细胞也可用作进一步研究ApoA-I在脂代谢中作用的模型体系。

本发明的一实施方案中，宿主细胞来自受体，即接受转导细胞的个体，或供体。根据本发明可进行基因工程操作的细胞类型例子包括，但不局限于，肝细胞、胆囊细胞、表皮细胞、内皮细胞和从大、小血管分离的细胞。分离的细胞可用此处描述的DNA或病毒载体转染或转导。转导的细胞可随之移植入受体。

在本发明的另一实施方案中，用于表达天然载脂蛋白或其它编码序列的短暂或永久性重组细胞系被编码修饰形式的前原载脂蛋白A-I、修饰形式的载脂蛋白A-I原、修饰形式的载脂蛋白A-I和ApoA-I激动剂的序列代替。

可以选择能调节插入序列表达或在特殊的预期情形下对基因产物进行修饰或处理的宿主细胞株。蛋白产物修饰(例如糖基化)和处理(如切割)对蛋白的功能可能很重要。不同的宿主细胞在对蛋白和基因产物的处理和修饰上有特征性的或特异的机制。合适的细胞系或宿主系统应能保证所表达外源蛋白的正确修饰。为了达到此目的，使用那些含有能对基因产物初始转录本进行正确加工、糖基化和磷酸化的细胞机器的真核宿主细胞。这种类型的细胞包括，但不局限于，CHO，VERO，BHK，HeLa，COS，MDCK，293，3T3和WI38细胞系。

从长远看，哺乳动物细胞应选择能稳定、高效表达具有ApoA-I活性的天然ApoA-I或肽的细胞。宿主细胞可用由合适表达控制元件(例如启动子、增强子、转录终止子，Poly(A)加尾信号等)和可选择标记的DNA进行转化，而不用含病毒复制起始子的表达载体。在导入外源DNA后，细胞在营养丰富的培养基中生长1-2天后转入一选择性培养基。重组质粒中的选择性标记赋予选择抗性，使质粒稳定整和进细胞染色体，形成可进一步被复制和扩增的细胞系。此方法优先用于产生细胞系。此方法优先用于产生表达ApoA-I或肽的细胞系。此类细胞系在筛选和评价影响ApoA-I或肽基因产物内源性活性的化合物中有特别的用途。

许多筛选系统可被选用，包括但不局限于，单纯疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等，1997，Cell 11：223)、次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(Szybalska & Szybalski，1962，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48：2026)和腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(Lowy，et al.，1980，Cell 22：817)基因可分别用于tk^-、hgprt^-、aprt^-细胞。此外，抗代谢产物抗性也可用作下述基因的筛选：对甲氨喋呤抗性的dhfr(Wigler等，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：3567；O’Hare等，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78：1527)；对霉酚酸抗性的gpt(Mulligan & Berg，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78：2072)；对氨基糖苷抗性的neo(Colberre-Garapin等，1981，J.Mol.Biol.150：1)和对潮霉素抗性的hygro(Santerre等，1984，Gene 30：147)。

例如，编码ApoA-I肽的异源多聚体的盒子优先插入到上面详述的腺病毒中。

5.2.3.表达ApoA-I的转基因动物

本发明也包含了用转基因动物表达ApoA-I核苷酸序列，作为基因治疗或阐明ApoA-I在脂类代谢中作用的模型体系。任何种类的动物，包括但不局限于，小鼠、大鼠、兔子、荷兰猪、micropigs、山羊、非人灵长类例如baboons、猴子和大猩猩，可用作生产ApoA-I的转基因动物。

任何本领域熟知的技术可将ApoA-I基因导入动物体用于产生转基因动物建成系。这些技术包括但不局限于，原核显微注射(Hoppe，P.C.和Wagner，T.E.，1989，U.S.Pat.No.4,813,191)；反转录介导的基因转入生殖细胞系(Van der Putten等，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 82：6148-6152)；胚胎干细胞基因靶向技术(Thompson等，1989，Cell 56：313-321)；胚胎电穿孔(Lo，1983，Mol.Cell.Biol.3：1803-1814)和精子介导的转基因(Lavitrano等，1989，Cell 57；717-723)等。对于这些技术的综述请参照Gordan，1989，转基因动物，Intl.Rev.Cytol.115：171-229，在此完全引入作为参考。

本发明的转基因动物所携带的ApoA-I既可在动物的所有细胞类型携带，也可仅仅为部分细胞类型携带，即嵌和体动物。转基因既可以单一基因整和，也可以多联体(concatamer)形式，即头-头或头-尾连接。转基因可选择性导入某一特定细胞类型，或在特定细胞类型激活，参照Lasko，M.等。(Lasko，M.等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：6232-6236)。这种细胞类型特异性激活所需的调控序列依赖于特定的细胞类型，对本领域人员是熟知的。当需要将ApoA-I转基因整和在染色体内源ApoA-I基因位点时，优选基因打靶技术。简单来说，当使用该技术时，为达到整和目的，需设计含同内源ApoA-I具有同源性序列的载体，经过同染色体序列的同源重组，整和入染色体并破坏了内源ApoA-I基因的功能。转基因也可选择性的导入一特定细胞类型，仅仅使此类细胞的内源性ApoA-I基因失活，例如参照Gu等(Gu等，1994，Science 265：103-106)。这种细胞类型特异性失活所需的调控序列依赖于特定的细胞类型，对本领域人员是熟知的。

5.3.导入ApoA-I肽的基因治疗方法

导入本发明中编码天然ApoA-I或ApoA-I肽的核苷酸序列可用于基因治疗。

本发明中的基因治疗方法可用于治疗动物以下任何疾病，尤其哺乳动物，包括人，这些疾病需增加血清HDL浓度、激活LCAT、促进胆固醇输出和RCT。这些情况包括但不局限于：高胆固醇血症、心血管疾病如动脉粥样硬化(包括预防和治疗)、再狭窄(例如预防和治疗因气腔血管成型术等手术程序引致的动脉粥样硬化空斑)及其它疾病如常导致败血性休克的内毒素症(例如，Gouni等，1993，J.Lipid Research94：139-146；Levine，WO96/04914)。

本发明的基因治疗方法可单独或与其它药物配合使用治疗前述疾病。这种治疗方法包括但不局限于同时或先后给药。

5.3.1.基因替换治疗

用上述第5.1节中的ApoA-I肽的核酸序列，在增加正常ApoA-I肽表达或ApoA-I肽活性的基础上，可治疗例如异常脂血症和高脂血症疾病。这种治疗可采取例如基因替换治疗的方法。特别的，可以将指导其基因产物产生正常ApoA-I肽活性的一个或多个拷贝的正常ApoA-I肽或其一部分，插入到病人合适的细胞内，所用的方法除了用将DNA导入细胞的其它颗粒性方法如脂质体外，还可使用包括，但不局限于腺病毒、腺伴随病毒和反转录病毒载体。

因为ApoA-I蛋白在肝中表达，这种基因替换技术应该能够将ApoA-I肽序列导入到病人的这些细胞类型。

在另一实施方案中，可以使用直接将ApoA-I肽序列导入到其将要表达的细胞位点的方法。

其它用以增加ApoA-I肽表达水平和ApoA-I肽产物活性的方法包括将表达ApoA-I的细胞，优选自身细胞，以合适的数量导入到病人合适位置，足以消除高脂血症疾病的症状。这些细胞可以是重组或非重组细胞。

在用以增加病人ApoA-I肽表达水平的细胞类型为表达ApoA-I肽的正常细胞类型中，优选肝细胞。

可选择地，表达ApoA-I的细胞，优选自身细胞，导入到病人合适位置，足以消除异常脂血症疾病的症状。可替代地，可使用表达未受损害ApoA-I肽且来自MHC匹配个体的细胞，包括，例如肝细胞。ApoA-I肽序列的表达受合适的基因调控序列控制，允许在所需的细胞类型中表达。这些基因调控序列对本领域的人员是众所周知的，参照例如，Anderson，U.S.Patent No.5,399,349，在此完全引入作为参考。

当所使用的细胞为非自身细胞时，可以使用众所周知的技术防止宿主对介入细胞的免疫应答。例如，可以将细胞以包裹的形式介入，尽管可以同相邻细胞外环境交换成分，但却不被宿主免疫系统识别。

5.3.2.体内导入核酸

核酸导入病人包括直接和间接两种方法，前者是将核酸或携带核酸的载体直接暴露给病人，后者则是在体外先用核酸转化细胞，然后移植到病人体内进行细胞置换治疗。这两种方法分别称为体内和离体基因治疗。

在一特别实施方案中，直接在体内导入核酸使之产生表达产物。这可以通过本领域熟知的大量方法来实现，例如，将其构建表达载体，导入细胞内，如通过缺陷或致弱反转录病毒或其它病毒载体感染(参照U.S.Patent No.4,980,286)、直接注射裸露DNA、微粒轰击(如基因枪；Biolistic，Dupont)、用脂类、细胞表面受体或转染试剂包裹、用脂质体、微粒或微囊使之胶囊化、同一已知能进入细胞或核的肽联合共同使用，例如将其同受体介导的内吞配体共同使用(参照Wu和Wu等，1987，J.Biol.Chem.262：4429-4432)(可用于特异表达受体的细胞类型)等。在一特别实施方案中，通过特异受体的靶向作用，核酸在体内可以特异的吸收和表达(参照例如，PCT Publications WO 92/06180，April16，1992(Wu et al.)；WO 92/22635，December 23，1992(Wilson etal.)；WO 92/20316，November 26，1992(Findeis et al.)；WO 93/14188，July 22，1993(Clarke et al.)；WO 93/20221dated October14，1993(Young))。在另一实施方案中，核酸同一配体形成复合物，配体包含能破坏核内体的融合病毒肽，从而避免核酸被溶酶体降解。可选择地，核酸可导入细胞内，通过同源重组与细胞DNA整和表达(Koll er &Smithies，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：8923-8935；Zijlstra等，1989，Nature 342：435-438)。

在另一实施方案中，核酸可通过一时间控制的释放装置导入体内。也可使用一装置，其中含能表达ApoA-I肽和激动剂的细胞，防止受体和宿主的排斥。使用此装置，蛋白和肽通过一分子量截断在3500-50000道尔顿的通透膜扩散。

将DNA和病毒载体导入肝细胞可通过肝细胞表面的唾液酸糖蛋白策略来实现。此类受体特异表达在肝细胞。唾液酸糖肽-蛋白偶合物和唾液酸糖肽包裹泡已用于将生物活性剂特异性导入肝内。Aitie等，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 27：5923-5927；Hildenbrandt等，1980，BBA 631：499-502.

另一将核酸序列导入肝细胞的策略是用遗传修饰的病毒载体，即表达ASPG受体配体的腺病毒和反转录病毒。病毒的内部化通过病毒囊膜同细胞表面受体的特异作用，然后由受体介导的对病毒/受体复合物的内吞作用来实现。本发明可使用的病毒载体如上述第5.2.2.节的讨论。

5.3.3.核酸的离体导入

另一用于本发明中细胞替换基因治疗的方法是通过电穿孔、脂质体转染、磷酸钙介导的转染或病毒感染等方法将基因转入组织培养的细胞中。通常的转染方法包括将一可选择的标记转入细胞。然后筛选那些摄入并表达所转基因的细胞。然后将细胞导入病人。

在此实施方案中，在将得到的重组细胞导入体内之前需先将核酸导入细胞。这些导入方法对本领域众所周知，包括但不局限于，转染、电穿孔、显微注射、用含核酸序列的病毒载体感染、细胞融合、染色体介导的基因转移、微细胞介导的基因转移、原生质体融合等。大量的对本领域众所周知的将外源基因导入细胞的方法(参照例如，Loeffler &Behr，1993，Meth.Enzymol.217：599-618；Cohen等，1993，Meth.Enzymol.217：618-644；Cline，1985，Pharmac.Ther.29：69-92)可用于本发明，只要受体细胞的发育和生理功能不被破坏。此技术应能将核酸稳定的转入细胞，使细胞能表达此核酸，优选能遗传并在子代细胞表达的技术。

得到的重组细胞可通过本领域众所周知的方法导入病人。在一优选方案中，注射表皮细胞，例如皮下注射。在另一实施方案中，重组的皮肤细胞(例如角质细胞)可用于病人的皮肤移植。重组血细胞(例如造血干细胞和祖细胞)优选静脉注射。所用细胞的数量依赖于预期的效果、病人的状态等，可以被熟悉本领域的人测定。

在另一重组细胞用于基因治疗的实施方案中，编码基因或启动子阻遏子的核苷酸可导入细胞使细胞和其子代表达，然后将重组细胞导入观察治疗效果。在一特别实施方案中，使用干细胞或天然细胞。任何可潜在在体外分离培养的干细胞或天然细胞均可用于本发明的实施方案。

对于离体基因治疗的示例，但不限于，可用下述程序程序分离肝细胞进行遗传操作，使之表达本发明的ApoA-I肽，然后将基因工程细胞移植入受体

在此实施方案中，肝细胞来自已经接受基因工程肝细胞的供体或受体个体。该程序需去除一部分肝，然后原位灌注胶原酶溶液分离肝细胞。如果从完整的肝中分离细胞，将导管插入到进出肝的静脉中，用带导管的容器灌注胶原酶溶液分离肝细胞。一旦分离后，将肝细胞放置在适于转染的条件下。

例如，关于分离高度富集群大鼠肝细胞并培养很长时间的一些方法已有描述。Koch，K.S.和H.L.Leffert，纽约科学院年鉴，349：111-127(1980)；McGowan，J.A.等，Journal of Cellular Physiology，108：353-363(1981)；Bissell，D.M.and P.S.Guzelian，纽约科学院年鉴，349：85-98(1981)；Enat，R等，美国国家科学院院刊，81：1411-1415(1984)。这些方法可用于分离和培养本发明转导用的肝细胞。也可用Barry和Friend建立方法的改进方法制备肝细胞，在下述实施例1中描述，灌注的混合物按Leffert，H.L.等描述的方法。Leffert，H.L.等，酶学方法，58：536-544(1979)，在此引入作为参考。

选择性的，在肝细胞中整和和表达的遗传物质可包括一筛选标记，从而容易鉴定和筛选含有和表达目的遗传物质的细胞。

因此，导入细胞的DNA或RNA含有目标遗传物质和可选择的编码筛选标记的遗传物质；这些DNA或RNA称之为整和的遗传物质(整和DNA或RNA)。含有整和遗传物质的肝细胞称之为转导细胞；它们表达目的DNA或RNA并产生编码蛋白或肽。

编码目的蛋白或肽的外源DNA和选择性的选择标记的DNA(例如，编码新霉素抗性的neo)在体外按下述实施例I-III的方法整和入肝细胞。上述分离的肝细胞以半丰满的数量置于基质底物平板中，在合适激素培养基中培养，如Enat等所描述，在此引入作为参考。Enat，R等，美国国家科学院院刊，81：1411-1415(1984)。培养基随所培养细胞的需要而改变。

细胞随后用含有目的DNA和，编码筛选标记的DNA的兼嗜性反转录病毒感染(例如，编码预期在肝中表达蛋白的DNA)整和入肝细胞。重组腺病毒和反转录病毒(目的DNA转导的)感染肝细胞是通过将细胞暴露给含重组基因组的病毒。这样可导致重组病毒感染细胞。可通过用高滴度的兼嗜性病毒感染来优化条件。

用上述方法收集用于将目的遗传物质导入肝细胞的病毒贮液，补加Polybrene(Aldrich)并加入到培养的肝细胞。如果病毒的滴度很高(例如大约10⁶cfu/ml)，则所有的肝细胞都被感染，因此没必要对转导细胞进行筛选。如果病毒滴度比较低，则需要用含有如neo或his等筛选标记的反转录病毒载体。如果使用选择标记，在病毒感染后，细胞长至丰满时，分加到选择培养基中(例如，如果选择标记为neo，则加到含G418的培养基中，如果为his，则用含组氨醇和不含组氨酸的培养基)。

表达整和遗传物质的肝细胞在组织培养容器中培养至丰满时，从容器中取出细胞导入到体内。例如，这种操作可以手术进行。在此情况下，将能表达目的核苷酸序列的转导肝细胞所组成的组织移植到体内。例如，可以移植到肝或置于腹腔内和肝接触或接近的地方。可选择地，含转导肝细胞的组织可连在一微载体珠上，然后导入(例如，通过注射)到受体的腹膜。这种方法在将野生型肝细胞导入白蛋白合成缺陷的大鼠(Nagase无白蛋白血大鼠)时证明是成功的，在移植大鼠的血清中可检测到一定水平的白蛋白。直接将遗传修饰的肝细胞注射到肝内也是可能的。

一旦导入到个体内，转导的细胞可持续的提供目的遗传物质编码的激素、酶或药物。以此种方式提供的激素、酶或药物的量可以根据需要来调节(例如，通过能控制或影响产量的外源性因子，通过控制移植体的大小或导入体内成纤维细胞的数量，或去除移植体。

5.4.药物制剂和给药方法

本发明包括将编码ApoA-I或ApoA-I肽的DNA或病毒载体在体外转化细胞的药物制剂，以及将用DNA或病毒载体转化的宿主细胞用于离体或体内基因治疗方法的药物制剂。

本发明中的基因治疗方法可用于治疗动物以下任何疾病，尤其哺乳动物，包括人，这些疾病需增加血清HDL浓度、激活LCAT、促进胆固醇输出和RCT。这些情况包括但不局限于：高胆固醇血症、心血管疾病如动脉粥样硬化(包括预防和治疗)、再狭窄(例如预防和治疗因球囊血管成型术等手术程序引致的动脉粥样硬化空斑)及其它疾病如常导致败血性休克的内毒素症(例如，Gouni等，1993，J.Lipid Research94：139-146；Levine，WO96/04914)。

本发明的基因治疗方法可单独或与其它药物配合使用治疗前述疾病。这种治疗方法包括但不局限于同时或先后给药。

例如，在治疗高胆固醇血症或粥样动脉硬化时，表达ApoA-I激动剂的哺乳动物细胞可与目前使用的一或多中降胆固醇疗法联合使用；例如胆汁酸树脂、烟酸和/或抑制素。这种联合使用的程序可产生特别好的疗效，因为每种药物在胆固醇合成和运输中有不同的靶位；即：胆汁酸树脂影响胆固醇再循环、乳糜微粒和LDL群；烟酸可根本的影响VLDL和LDL群；抑制素抑制胆固醇合成，降低LDL群(可能增加LDL受体表达)；而ApoA-I激动剂影响RCT、增加HDL、增加LCAT活性并促进胆固醇输出。

在另一实施方案中，表达ApoA-I激动剂的哺乳动物细胞可与fibrate联合使用治疗异常脂血症、异常胆固醇血症和/或心血管疾病如动脉粥样硬化。这种联合使用同样非常有益，因为fibrate对心血管疾病尚无确证的疗效。

在另一实施方案中，本发明ApoA-I激动剂可与当前使用的抗微生物或抗炎症因子联合使用治疗内毒素引起的败血性休克。

本发明核苷酸序列表达的ApoA-I激动剂可以以肽或肽-脂复合物的形式用各种方法将ApoA-I激动剂导入到受体循环系统。程序实例和治疗方案描述如下。

表达ApoA-I激动剂的哺乳动物细胞、DNA-脂复合物或“裸露”的编码本发明ApoA-I激动剂的质粒DNA可用合适的给药途径以保证循环系统的生物药效率。这最好通过肠外途径给药来实现，包括静脉内(IV)、肌肉内(IM)、皮下(SC)和皮内(IP)注射。但是也可以使用另外的途径。例如，通过口服在胃肠道吸收(包括但不限于摄入，口腔和舌下途径)，只要合适的制剂在口黏膜、胃和/或小肠的严酷环境中(例如肠包衣)能够避免或减小活性成分的减小。此外，本发明药物的给药也可采取靶向给药系统，例如在导向肝的脂质体中。脂质体可被肝细胞选择性吸收。可选择的，通过黏膜组织如阴道和直肠给药可避免或减小在消化道中的降解。在另一选择中，可通过经皮(例如，经皮地)或吸入等给药。优选的途径随受体条件、年龄和顺从性而变。

所用ApoA-I激动剂或肽-脂复合物的实际剂量随给药途径而变，应调整达到循环血浆中的浓度为100mg-2g/l。在动物模型中获得的数据表明ApoA-I激动剂同HDL成分结合，在人的实验半衰期为5天。因此，在一实施方案中，ApoA-I激动剂的每周一次的注射剂量在0.5-100mg/kg(剂量/IV；IM；SC)。在另一实施方案中，可以0.5-100mg/kg/hr连续灌注或以0.5-100mg/kg间断灌注从而使血清ApoA-I激动剂维持在预期水平。

各种ApoA-I激动剂毒性和疗效的测定可用在细胞或实验动物标准的测定LD50(半致死量)和ED50(半疗效量)的程序来进行。毒性和疗效的剂量比例就为治疗指数，可表示为LD50/ED50。优选治疗指数大的ApoA-I激动剂。

5.4.1.药物制剂

本发明的药物制剂含有作为活性成分的表达ApoA-I激动剂的细胞、编码ApoA-I激动剂的裸露或同脂、脂质体或非脂类阴离子聚合物形成复合物的DNA，该活性成分存在于适于体内施用和投药的药学上可接受的载体中。

可注射制品包含在水相或油相赋剂中的活性成分的天菌悬浊液、溶液或乳浊液。也可能包含成剂型试剂如悬浮剂、稳定剂和分散剂。注射制剂可以是单位剂量形式例如，以安瓿或多剂量容器，也可包含另加的防腐剂。

可选择的，可注射制剂可以粉末形式提供，用前同合适的赋形剂组合，包括但不局限于灭菌的无致热源水、缓冲液、葡萄糖溶液等。为此，可将ApoA-I激动剂或肽-脂复合物冻干。储存制品可以单位剂量形式提供，在用于体内前重新配制。

对于长期导入，可将活性成分制成储藏制品，通过植入给药；例如，皮下、皮内或肌内注射。因此，例如，活性成分同合适的聚全物或疏水性物质(如在可接受的油中乳化)或离子交换树脂或少量的可溶性衍生物例如ApoA-I激动剂的少量的可溶性盐形式制剂。

可选择的，可将其制成粘附圆片(adhesive disc)或药膏通过皮肤传送系统慢慢释放活性成分使表皮吸收。为此，用渗透增强剂来帮助活性成分的皮肤吸收。对患局部缺血性心脏病和胆固醇异常病人，用ApoA-I激动剂或肽-脂复合物同硝化甘油药膏一起使用可能有特别的好处。

对口服给药，药物组合物可采取，例如常规制药制备中所用的赋形剂制成片剂或胶囊，这些赋形剂例如粘合剂(例如，明胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙甲基甲基纤维素)；填充剂(例如，岩藻糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁，滑石粉或硅石)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或羟乙酸钠淀粉)；潮湿剂(例如，十二烷基磺酸钠)。片剂可以众所周知的方法包裹。用于口服的液体制剂可采取，例如溶液、糖浆或悬浊液，或以干品提供在用前加水或其它合适成分。此类液体制品可用常规方法制备并加有药学上可接受的添加剂如悬浮剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或还原的可食脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)；非水性赋形剂(如杏仁油、油性酯、乙二醇或分馏的植物油)；防腐剂(例如对羟基苯甲西安甲酯或丙酯)。制品中也可包含合适的盐缓冲液、香味剂、着色剂和甜味剂。口服制品给药可合适的控制活性化合物的释放。

对口腔给药，组合物可采取常规的片剂或锭剂形式。对于直肠和阴道途径给药，活性成分以溶液(用于潴留灌肠)栓剂或软膏。

对吸入给药，活性成分可以以气雾剂的形式从压力包或喷雾器给药，辅之以合适的推进剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯一氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适气体。对于压力气雾剂的情形，剂量单位可通过一阀门来计量。用于吸入器(inhaler)或吸入器(insufflator)的胶囊和药筒例如明胶可用含化合物和一合适粉末如岩藻糖或淀粉的混合物来给药。

如果需要，包装或分配器装置可以包含一或多个单位剂量活性成分。包装例如可包含金属或塑料箔，如发泡药包装。包装或分配器装置可辅之以使用说明书。

5.5.其它用途

本发明核苷酸序列编码的ApoA-I肽和激动剂可用于体外测定血清HDL，例如用于诊断。因为ApoA-I激动剂同血清HDL成分结合，因此可用做HDL群的标记。此外，激动剂也可用做在RCT中有效的HDL亚群的标记。为此，激动剂可加入或同病人血清样品混合；经过一段合适的孵育时间后，通过检测结合的ApoA-I激动剂来检测HDL成分。这可通过用标记的激动剂(例如放射标记，荧光标记，酶标记，染料等)或对激动剂特异的抗体(或抗体片段)来进行免疫分析。

可选择的，标记的激动剂可用于造影程序(如CAT扫描，MRI扫描)来观察循环系统、监测RCT、观察HDL在脂肪层的积累和动脉粥样硬化病变等(HDL在胆固醇输出中是起作用的)。

6.实例：LCAT激活分析

本发明核苷酸所可能编码的肽例列于表VIII，包括化学合成肽。本发明仅包括由遗传编码氨基酸组成或同天然ApoA-I相比大于或等于38％LCAT活性的肽。所列肽均体外分析其激活LCAT的能力。在LCAT分析中，由p88(POPC)底物泡(小单层泡或“SUVs”)和放射标记的胆固醇同等量的肽或ApoA-I(从血浆分离)提前孵育。通过加入LCAT(从人血浆纯化)来启动反应。用做阳性对照的天然ApoA-I代表100％活性。肽的“比活”(即单位活性(LCAT激活)/单位重量)可换算为得到最大LCAT激活的肽浓度。例如，可用一系列浓度的肽(例如，有限稀释)来测定肽的比活--在一特定时间点(例如1小时)得到最大LCAT激活的肽浓度(即胆固醇向胆固醇酯的转换百分率)。当绘制例如1小时胆固醇百分转换率对所用肽浓度的曲线时，曲线中最高点的肽浓度即为比活。

6.1.底物泡的制备

在LCAT分析中，所用的底物泡是由卵磷脂酰胆碱(EPC)或1-棕榈酰-2-油酰-磷脂酰胆碱(POPC)同胆固醇以20∶1的比例组成的SUVs。为了制备足以40个分析的底物泡储存液，需将7.7mg EPC(或7.6mgPOPC)、7.8μg(0.2μM)4-¹⁴C-胆固醇和116μg胆固醇(0.3μM)溶解在5ml二甲苯并冻干。此后将4ml分析缓冲液加入冻干的粉末中，并在4℃的氮气中超声处理。超声处理条件：Branson 250超声处理仪，10mm超声头，6.5分钟。分析缓冲液：10mM Tris，0.14M NaCl，1mM EDTA，pH7.4。为了去除钛颗粒，超声混合物在14000rpm(16000g)离心6次，每次5分钟。得到的清亮溶液用于酶分析。

6.2.LCAT的纯化

对于LCAT的纯化，需用硫酸葡聚糖/Mg²⁺处理的人血浆，以获取缺乏脂蛋白的血清(LPDS)，随后分别用Phenyl sepharose、Affigelblue、ConcanavalinA sepharose和抗ApoA-I的亲和层析依次进行层析，典型的纯化总结于下面的表VII：

                                   表VII  LCAT纯化

组分	总体积(mL)	总蛋白(mg)	总活性(nmol CE/mg*h)	产量	纯化(倍数)
						血浆LPDSPhenylsepharoseAffigelblueConcanavalinAsepharose抗ApoA-I亲和	5505002109543120	4455031000363153363.5	63706626205190925092112455500	988239189	1.41001152201109

6.2.1 LPDS制备

将500ml血浆加入到50ml硫酸葡聚糖(分子量＝500000)溶液制备LPDS。混合20分钟。于4℃3000rpm(16000g)离心30分钟。上清(LPDS)用于进一步纯化。(大约500ml)。

6.2.2.Phenylsepharose层析

下述材料和条件用于Phenyl sepharose层析。

固相：Phenylsepharose fast flow，high subst.Grade，Pharmacia

柱子：XK26/40，胶床高：33cm，V＝大约175ml

流速：200ml/hr(样品)

洗涤：200ml/hr(缓冲液)

洗脱：200ml/hr(蒸馏水)

缓冲液：10mM Tris、0.14M NaCl、1mM EDTA、pH 7.4、0.01％叠氮化钠。

在Tris缓冲液中平衡柱子，加29克NaCl到500ml LPDS中上柱。用几倍体积的Tris缓冲液洗涤直至在波长280nm的吸收大约在基线，用蒸馏水洗脱。分步收集包含蛋白的部分(每部分180ml)用于Affigelblue层析。

6.2.3.Affigelblue层析

Phenylsepharose收集部分在4℃用20mM Tris，pH 7.4，0.01％叠氮化钠透析过夜。用超滤(Amicon YM30)使体积减少到50-60ml并上Affigelblue柱。

固相：Affigelblue，Biorad，153-7301柱，XK26/20，胶床高：大约13cm；柱体积：大约70ml。

流速：加样：15ml/hr

洗涤：50ml/hr

用Tris缓冲液平衡柱子。用Phenylsepharose收集级分上柱。开始并分步收集。用Tris缓冲液洗涤。收集(每级分170ml)并用于ConA层析。

6.2.4.ConA层析

Affigelblue收集的级分用Amicon(YM30)超滤将体积减少到30-40ml并用ConA起始缓冲液(1mM Tris pH 7.4，1mM MgCl2，1mM MnCl2，1mM CaCl2，0.01％叠氮化钠)在4℃透析过夜。

固相：ConcanavalinA sepharose(Pharmacia)

柱子：XK26/20，胶床高：14cm(75ml)

流速：上样：40ml/hr

洗涤(用起始缓冲液)：90ml/hr

洗脱：50ml/hr，0.2M溶在1mM Tris，pH7.4溶液中的甲基-α-D-甘露糖苷。

收集用甘露糖洗脱的蛋白级分(110ml)，用超滤(YM30)将体积减少到44ml。ConA收集部分分成两份，保存在-20℃。

6.2.5.抗ApoA-I亲和层析

ApoA-I亲和层析是在已共价偶连抗ApoA-I抗体的Affigel-Hz材料(Biorad)上进行。

柱子：XK26/20，V＝16ml.柱子用pH7.4的PBS平衡。在上柱前，2ml的ConA收集级分用PBS透析2小时。

流速：加样：15ml/hr洗涤(用起始缓冲液)：90ml/hr

收集的蛋白级分(V＝14ml)用于LCAT分析。

柱子可用0.1M柠檬酸缓冲液(pH4.5)洗脱结合的A-I(100ml)，并立即用PBS平衡再生。

6.3.结果

LCAT激活的结果列于下述表VIII。

                                                       表VIII

                                            用示范性核心肽显示LCAT的活化

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								1	(SEQ ID NO：1)	PVLDLFRELLNELLEZLKQKLK	120％	77	85	81	69
2	(SEQ ID NO：2)	GVLDLFRELLNELLEALKQKLKK	105％
								3	(SEQ ID NO：3)	PVLDLFRELLNELLEWLKQKLK	98％	70	95	80	95
4	(SEQ ID NO：4)	PVLDLFRELLNELLEALKQKLK	93％	80	95	97	94
								5	(SEQ ID NO：5)	PVLDLFRELLNELLEALKQKLKK	90％
6	(SEQ ID NO：6)	PVLDLFRELLNEXLEALKQKLK	80％	57	93	70	99
								7	(SEQ ID NO：7)	PVLDLFKELLNELLEALKQKLK	83％	77	89	85	73
8	(SEQ ID NO：8)	PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK	83％	20	90	61	93
								9	(SEQ ID NO：9)	PVLDLFRELGNELLEALKQKLK	83％
10	(SEQ ID NO：10)	PVLDLFRELLNELLEAZKQKLK	79％	60	87	70	71
								11	(SEQ ID NO：11)	PVLDLFKELLQELLEALKQKLK	72％
12	(SEQ ID NO：12)	PVLDLFRELLNELLEAGKQKLK	70％
								13	(SEQ ID NO：13)	GVLDLFRELLNEGLEALKQKLK	67％
14	(SEQ ID NO：14)	PVLDLFRELLNELLEALOQOLO	61％	70	96	80
								15	(SEQ ID NO：15)	PVLDLFRELWNELLEALKQKLK	60％	55	60	64	68
16	(SEQ ID NO：16)	PVLDLLRELLNELLEALKQKLK	59％
								17	(SEQ ID NO：17)	PVLELFKELLQELLEALKQKLK	59％

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								18	(SEQ ID NO：18)	GVLDLFRELLNELLEALKQKLK	58％
19	(SEQ ID NO：19)	pVLDLFRELLNEGLEALKQKLK	58％
								20	(SEQ ID NO：20)	PVLDLFREGLNELLEALKQKLK	57％
21	(SEQ ID NO：21)	pVLDLFRELLNELLEALKQKLK	57％
								22	(SEQ ID NO：22)	PVLDLFRELLNELLEGLKQKLK	54％
23	(SEQ ID NO：23)	PLLELFKELLQELLEALKQKLK	54％
								24	(SEQ ID NO：24)	PVLDLFRELLNELLEALQKKLK	53％
25	(SEQ ID NO：25)	PVLDFFRELLNEXLEALKQKLK	51％	46	82		93
								26	(SEQ ID NO：26)	PVLDLFRELLNELLELLKQKLK	47％
27	(SEQ ID NO：27)	PVLDLFRELLNELZEALKQKLK	44％	72	92	82	81
								28	(SEQ ID NO：28)	PVLDLFRELLNELWEALKQKLK	40％	82	98	90	81
29	(SEQ ID NO：29)	AVLDLFRELLNELLEALKQKLK	39％
								30	(SEQ ID NO：30)	PVLDLFRELLNELLEALKQKLK′	38％	85	90	98	90
31	(SEQ ID NO：31)	PVLDLFLELLNEXLEALKQKLK	34％	49	98		90
								32	(SEQ ID NO：32)	XVLDLFRELLNELLEALKQKLK	33％
33	(SEQ ID NO：33)	PVLDLFREKLNELLEALKQKLK	33％
								34	(SEQ ID NO：34)	PVLDZFRELLNELLEALKQKLK	32％	58	67	68	62
35	(SEQ ID NO：35)	PVLDWFRELLNELLEALKQKLK	31％	49(sp)	59	61
								36	(SEQ ID NO：36)	PLLELLKELLQELLEALKQKLK	31％	95	100		95
37	(SEQ ID No：37)	PVLDLFREWLNELLEALKQKLK	29％	65	75	76	73

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								38	(SEQ ID NO：38)	PVLDLFRELLNEXLEAWKQKLK	29％	25	49	21	49
39	(SEQ ID NO：39)	PVLDLFRELLEELLKALKKKLK	25％	66	69	68	72
								40	(SEQ ID NO：40)	PVLDLFNELLRELLEALQKKLK	25％	66	84	79	77
41	(SEQ ID NO：41)	PVLDLWRELLNEXLEALKQKLK	25％	53	73	85	69
								42	(SEQ ID NO：42)	PVLDEFREKLNEXWEALKQKLK	25％	15	74	27	76
43	(SEQ ID NO：43)	PVLDEFREKLWEXLEALKQKLK	25％
								44	(SEQ ID NO：44)	pvldefreklnexlealkqklk	25％	20	86
45	(SEQ ID NO：45)	PVLDEFREKLNEXLEALKQKLK	24％	24	84	25	86
								46	(SEQ ID NO：46)	PVLDLFREKLNEXLEALKQKLK	23％	30	86	58	85
47	(SEQ ID NO：47)	～VLDLFRELLNEGLEALKQKLK	23％
								48	(SEQ ID NO：48)	pvLDLFRELLNELLEALKQKLK	22％
49	(SEQ ID NO：49)	PVLDLFRNLLEKLLEALEQKLK	22％	57	65	52	57
								50	(SEQ ID NO：50)	PVLDLFRELLWEXLEALKQKLK	21％	68	84	89	76
51	(SEQ ID NO：51)	PVLDLFWELLNEXLEALKQKLK	20％	63	82	81	73
								52	(SEQ ID NO：52)	PVWDEFREKLNEXLEALKQKLK	20％	sp	sp	sp
53	(SEQ ID NO：53)	VVLDLFRELLNELLEALKQKLK	19％
								54	(SEQ ID NO：54)	PVLDLFRELLNEWLEALKQKLK	19％	76	71	84	78
55	(SEQ ID NO：55)	P～～～LFRELLNELLEALKQKLK	19％	38	72	78	75
								56	(SEQ ID NO：56)	PVLDLFRELLNELLEALKQKKK	18％
57	(SEQ ID NO：57)	PVLDLFRNLLEELLKALEQKLK	18％

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								58	(SEQ ID NO：58)	PVLDEFREKLNEXLEALKQKL～	18％
59	(SEQ ID NO：59)	LVLDLFRELLNELLEALKQKLK	17％
								60	(SEQ ID NO：60)	PVLDLFRELLNELLEALKQ～～～	16％	39	83	66	84
61	(SEQ ID NO：61)	PVLDEFRWKLNEXLEALKQKLK	16％
								62	(SEQ ID NO：62)	PVLDEWREKLNEXLEALKQKLK	16％	15	85	43
63	(SEQ ID NO：63)	PVLDFFREKLNEXLEALKQKLK	16％
								64	(SEQ ID NO：64)	PWLDEFREKLNEXLEALKQKLK	15％
65	(SEQ ID NO：65)	～VLDEFREKLNEXLEALKQKLK	15％
								66	(SEQ ID NO：66)	PVLDLFRNLLEELLEALQKKLK	15％	64	82	66	70
67	(SEQ ID NO：67)	～VLDLFRELLNELLEALKQKLK	14％	81	90	84	94
								68	(SEQ ID NO：68)	PVLDEFRELLKEXLEALKQKLK	14％
69	(SEQ ID NO：69)	PVLDEFRKKLNEXLEALKQKLK	13％
								70	(SEQ ID NO：70)	PVLDEFRELLYEXLEALKQKLK	12％	27	78	33	66
71	(SEQ ID NO：71)	PVLDEFREKLNELXEALKQKLK	11％
								72	(SEQ ID NO：72)	PVLDLFRELLNEXLWALKQKLK	11％	sp	sp	sp
73	(SEQ ID NO：73)	PVLDEFWEKLNEXLEALKQKLK	10％
								74	(SEQ ID NO：74)	PVLDKFREKLNEXLEALKQXLK	10％
751	(SEQ ID NO：75)	PVLDEFREKLNEELEALKQKLK	10％	18	28	23	55

¹Segrest′s共有22聚体肽(Anantharamaiah et al.，1990，Arteriosclerosis 10(1)：95-105).

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								76	(SEQ ID NO：76)	PVLDEFRELLFEXLEALKQKLK	9％	41	88		66
77	(SEQ ID NO：77)	PVLDEFREKLNKXLEALKQKLK	9％
								78	(SEQ ID NO：78)	PVLDEFRDKLNEXLEALKQKLK
79	(SEQ ID NO：79)	PVLDEFRELLNELLEALKQKLK	9％
								80	(SEQ ID NO：80)	PVLDLFERLLNELLEALQKKLK	9％
81	(SEQ ID NO：81)	PVLDEFREKLNWXLEALKQKLK
								82	(SEQ ID NO：82)	～～LDEFREKLNEXLEALKQKLK	8％
83	(SEQ ID NO：83)	PVLDEFREKLNEXLEALWQKLK
								84	(SEQ ID NO：84)	PVLDEFREKLNELLEALKQKLK	7％
85	(SEQ ID NO：85)	P-LDLFRELLNELLEALKQKLK	7％	58	61	64	69
								86	(SEQ ID NO：86)	PVLELFERLLDELLNALQKKLK	7％
87	(SEQ ID NO：87)	pllellkellqellealkqklk	7％	100	100		100
								88	(SEQ ID NO：88)	PVLDKFRELLNEXLEALKQKLK	7％
89	(SEQ ID NO：89)	PVLDEFREKLNEXLWALKQKLK	6％
								90	(SEQ ID NO：90)	～～～DEFREKLNEXLEALKQKLK	6％
91	(SEQ ID NO：91)	PVLDEFRELLNEXLEALKQKLK	6％	43	100		100
								92	(SEQ ID NO：92)	PVLDEFRELYNEXLEALKQKLK	5％

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								93	(SEQ ID NO：93)	PVLDEFREKLNEXLKALKQKLK	5％
942	(SEQ ID NO：94)	PVLDEFREKLNEALEALKQKLK	5％	18	70	27	63
								95	(SEQ ID NO：95)	PVLDLFRELLNLXLEALKQKLK	5％		sp	sp
96	(SEQ ID NO：96)	pvldlfrellnexlealkqklk	5％	52	85	63	81
								97	(SEQ ID NO：97)	PVLDLFRELLNELLE～～～～～～～	4％
98	(SEQ ID NO：98)	PVLDLFRELLNEELEALKQKLK	2％
								99	(SEQ ID NO：99)	KLKQKLAELLENLLERFLDLVP	2％	72	88	80	80
100	(SEQ ID NO：100)	pvldlfrellnellealkqklk	2％	83	92		98
								101	(SEQ ID NO：101)	PVLDLFRELLNWXLEALKQKLK	2％		sp	sp
102	(SEQ ID NO：102)	PVLDLFRELLNLXLEALKE KLK	2％	sp
								103	(SEQ ID NO：103)	PVLDEFRELLNEELEALKQKLK	1％
104	(SEQ ID NO：104)	P～～～～～～～LLNELLEALKQKLK	1％	21	49	29	55
								105	(SEQ ID NO：105)	PAADAFREAANEAAEAAKQKAK	1％	29	28	32	65
106	(SEQ ID NO：106)	PVLDLFREKLNEELEALKQKLK	0％
								107	(SEQ ID NO：107)	klkqklaellenllerfldlvp	0％	sp	sp		77

²[A¹³]-共有22聚体肽(Anantharamaiah et al.，1990，Arteriosclerosis 10(1)：95-105).

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								108	(SEQ ID NO：108)	PVLDLFRWLLNEXLEALKQKLK	0％	28	55		54
1093	(SEQ ID NO：109)	PVLDEFREKLNERLEALKQKLK	0％	19	45	23	58
								110	(SEQ ID NO：110)	PVLDEFREKLNEXXEALKQKLK	0％
111	(SEQ ID NO：111)	PVLDEFREKLWEXWEALKQKLK	0％
								112	(SEQ ID NO：112)	PVLDEFREKLNEXSEALKQKLK	0％
113	(SEQ ID NO：113)	PVLDEFREKLNEPLEALKQKLK	0％	6	22
								114	(SEQ ID NO：114)	PVLDEFREKLNEXMEALKQKLK	0％
115	(SEQ ID NO：115	PKLDEFREKLNEXLEALKQKLK	0％
								116	(SEQ ID NO：116)	PHLDEFREKLNEXLEALKQKLK	0％
117	(SEQ ID NO：117)	PELDEFREKLNEXLEALKQKLK	0％
								118	(SEQ ID NO：118)	PVLDEFREKLNEXLEALEQKLK	0％
119	(SEQ ID NO：119)	PVLDEFREKLNEELEAXKQKLK	0％
								120	(SEQ ID NO：120)	PVLDEFREKLNEELEXLKQKLK	0％
121	(SEQ ID NO：121)	PVLDEFREKLNEELEALWQKLK	0％
								122	(SEQ ID NO：122)	PVLDEFREKLNEELEWLKQKLK	0％

³[R¹³]-共有22聚体肽(Anantharamaiah et al.，1990，Arteriosclerosis 10(1)：95-105).

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								123	(SEQ ID NO：123)	QVLDLFRELLNELLEALKQKLK
124	(SEQ ID NO：124)	PVLDLFOELLNELLEALOQOLO
								125	(SEQ ID NO：125)	NVLDLFRELLNELLEALKQKLK
126	(SEQ ID NO：126)	PVLDLFRELLNELGEALKQKLK
								127	(SEQ ID NO：127)	PVLDLFRELLNELLELLKQKLK	47％
128	(SEQ ID NO：128)	PVLDLFRELLNELLEFLKQKLK
								129	(SEQ ID NO：129)	PVLELFNDLLRELLEALQKKLK
130	(SEQ ID NO：130)	PVLELFNDLLRELLEALKQKLK
								131	(SEQ ID NO：131)	PVLELFKELLNELLDALRQKLK
132	(SEQ ID NO：132)	PVLDLFRELLENLLEALQKKLK
								133	(SEQ ID NO：133)	PVLELFERLLEDLLQALNKKLK
134	(SEQ ID NO：134)	PVLELFERLLEDLLKALNQKLK
								135	(SEQ ID NO：135)	DVLDLFRELLNELLEALKQKLK
136	(SEQ ID NO：136)	PALELFKDLLQELLEALKQKLK
								137	(SEQ ID NO：137)	PVLDLFRELLNEGLEAZKQKLK
138	(SEQ ID NO：138)	PVLDLFRELLNEGLEWLKQKLK
								139	(SEQ ID NO：139)	PVLDLFRELWNEGLEALKQKLK
140	(SEQ ID NO：140)	PVLDLFRELLNEGLEALOQOLO
								141	(SEQ ID NO：141)	PVLDFFRELLNEGLEALKQKLK
142	(SEQ ID NO：142)	PVLELFRELLNEGLEALKQKLK

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								143	(SEQ ID NO  143)	PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK*
144	(SEQ ID NO：144)	pVLELFENLLERLLDALQKKLK	111％	89	88		95
								145	(SEQ ID NO：145)	GVLELFENLLERLLDALQKKLK	100％	55	51		58
146	(SEQ ID NO：146)	PVLELFENLLERLLDALQKKLK	86％	97	100	100	95
								147	(SEQ ID NO：147)	PVLELFENLLERLFDALQKKLK	76％
148	(SEQ ID NO：148)	PVLELFENLLERLGDALQKKLK	75％	10	76	23	80
								149	(SEQ ID NO：149)	PVLELFENLWERLLDALQKKLK	63％	28	54		47
150	(SEQ ID NO：150)	PLLELFENLLERLLDALQKKLK	57％
								151	(SEQ ID NO：151)	PVLELFENLGERLLDALQKKLK	55％
152	(SEQ ID NO：152)	PVFELFENLLERLLDALQKKLK	50％
								153	(SEQ ID NO：153)	AVLELFENLLERLLDALQKKLK	49％
154	(SEQ ID NO：154)	PVLELFENLLERGLDALQKKLK	39％	13	76	25	80
								155	(SEQ ID NO：155)	PVLELFLNLWERLLDALQKKLK	38％
156	(SEQ ID NO：156)	PVLELFLNLLERLLDALQKKLK	35％
								157	(SEQ ID NO：157)	PVLEFFENLLERLLDALQKKLK	30％
158	(SEQ ID NO：158)	PVLELFLNLLERLLDWLQKKLK	30％
								159	(SEQ ID NO：159)	PVLDLFENLLERLLDALQKKLK	28％
160	(SEQ ID NO：160)	PVLELFENLLERLLDWLQKKLK	28％	65	73	75	61
								161	(SEQ ID NO：161)	PVLELFENLLERLLEALQKKLK	27％
162	(SEQ ID NO：162)	PVLELFENWLERLLDALQKKLK	27％	68	83	81

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								163	(SEQ ID NO：163)	PVLELFENLLERLWDALQKKLK	26％	27	53		55
164	(SEQ ID NO：164)	PVLELFENLLERLLDAWQKKLK	24％	37	66	51	61
								165	(SEQ ID NO：165)	PVLELFENLLERLLDLLQKKLK	23％
166	(SEQ ID NO：166)	PVLELFLNLLEKLLDALQKKLK	22％
								167	(SEQ ID NO：167)	PVLELFENGLERLLDALQKKLK	18％
168	(SEQ ID NO：168)	PVLELFEQLLEKLLDALQKKLK	17％
								169	(SEQ ID NO：169)	PVLELFENLLEKLLDALQKKLK	17％
170	(SEQ ID NO：170)	PVLELFENLLEOLLDALQOOLO	17％
								171	(SEQ ID NO：171)	PVLELFENLLEKLLDLLQKKLK	16％
172	(SEQ ID NO：172)	PVLELFLNLLERLGDALQKKLK	16％
								173	(SEQ ID NO：173)	PVLDLFDNLLDRLLDLLNKKLK	15％
174	(SEQ ID NO：174)	pvlelfenllerlldalqkklk	13％
								175	(SEQ ID NO：175)	PVLELFENLLERLLELLNKKLK	13％
176	(SEQ ID NO：176)	PVLELWENLLERLLDALQKKLK	11％
								177	(SEQ ID NO：177)	GVLELFLNLLERLLDALQKKLK	10％
178	(SEQ ID NO：178)	PVLELFDNLLEKLLEALQKKLR	9％
								179	(SEQ ID NO：179)	PVLELFDNLLERLLDALQKKLK	8％
180	(SEQ ID NO：180)	PVLELFDNLLDKLLDALQKKLR	8％
								181	(SEQ ID NO：181)	PVLELFENLLERWLDALQKKLK	8％
182	(SEQ ID NO：182)	PVLELFENLLEKLLEALQKKLK	7％

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								183	(SEQ ID NO：183)	PLLELFENLLEKLLDALQKKLK	6％
184	(SEQ ID NO：184)	PVLELFLNLLERLLDAWQKKLK	4％
								185	(SEQ ID NO：185)	PVLELFENLLERLLDALQOOLO	3％
186	(SEQ ID NO：186)	PVLELFEQLLERLLDALQKKLK
								187	(SEQ ID NO：187)	PVLELFENLLERLLDALNKKLK
188	(SEQ ID NO：188)	PVLELFENLLDRLLDALQKKLK
								189	(SEQ ID NO：189)	DVLELFENLLERLLDALQKKLK
190	(SEQ ID NO：190)	PVLEFWDNLLDKLLDALQKKLR
								191	(SEQ ID NO：191)	PVLDLLRELLEELKQKLK*	100％
192	(SEQ ID NO：192)	PVLDLFKELLEELKQKLK*	100％	36			56
								193	(SEQ ID NO：193)	PVLDLFRELLEELKQKLK*	96％	34	88	87	87
194	(SEQ ID NO：194)	PVLELFRELLEELKQKLK*	88％	38	93		93
								195	(SEQ ID NO：195)	PVLELFKELLEELKQKLK*	87％
196	(SEQ ID NO：196)	PVLDLFRELLEELKNKLK*	81％
								197	(SEQ ID NO：197)	PLLDLFRELLEELKQKLK*	81％	43	70		69
198	(SEQ ID NO：198)	GVLDLFRELLEELKQKLK*	80％
								199	(SEQ ID NO：199)	PVLDLFRELWEELKQKLK*	76％	35	77	80	79
200	(SEQ ID NO：200)	NVLDLFRELLEELKQKLK*	75％
								201	(SEQ ID NO：201)	PLLDLFKELLEELKQKLK*	74％
202	(SEQ ID NO：202)	PALELFKDLLEELRQKLR*	70％

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs		He(％)TFE
									203	(SEQ ID NO：203)	AVLDLFRELLEELKQKLK*	66％
204	(SEQ ID NO：204)	PVLDFFRELLEELKQKLK*	63％
									205	(SEQ ID NO：205)	PVLDLFREWLEELKQKLK*	60％
206	(SEQ ID NO：206)	PLLELLKELLEELKQKLK*	57％
									207	(SEQ ID NO：207)	PVLELLKELLEELKQKLK*	50％
208	(SEQ ID NO：208)	PALELFKDLLEELRQRLK*	48％
									209	(SEQ ID NO：209)	PVLDLFRELLNELLQKLK	47％	54	71	67		62
210	(SEQ ID NO：210)	PVLDLFRELLEELKQKLK	46％	20	63	37		53
									211	(SEQ ID NO：211)	PVLDLFRELLEELOQOLO*	45％
212	(SEQ ID NO：212)	PVLDLFOELLEELOQOLK*	43％
									213	(SEQ ID NO：213)	PALELFKDLLEEFRQRLK*	42％
214	(SEQ ID NO：214)	pVLDLFRELLEELKQKLK*	39％
									215	(SEQ ID NO：215)	PVLDLFRELLEEWKQKLK*	38％	28	63	53		68
216	(SEQ ID NO：216)	PVLELFKELLEELKQKLK	35％
									217	(SEQ ID NO：217)	PVLDLFRELLELLKQKLK	30％	52	78	76		70
218	(SEQ ID NO：218)	PVLDLFRELLNELLQKLK*	29％
									219	(SEQ ID NO：219)	PVLDLFRELLNELWQKLK	24％
220	(SEQ ID NO：220)	PVLDLFRELLEELQKKLK	22％	27	64	54		64
									221	(SEQ ID NO：221)	DVLDLFRELLEELKQKLK*	12％
222	(SEQ ID NO：222)	PVLDAFRELLEALLQLKK	8％

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								223	(SEQ ID NO：223)	PVLDAFRELLEALAQLKK	8％	21	56	23	51
224	(SEQ ID NO：224)	PVLDLFREGWEELKQKLK	8％
								225	(SEQ ID NO：225)	PVLDAFRELAEALAQLKK	1％
226	(SEQ ID NO：226)	PVLDAFRELGEALLQLKK	1％
								227	(SEQ ID NO：227)	PVLDLFRELGEELKQKLK*	0％
228	(SEQ ID NO：228)	PVLDLFREGLEELKQKLK*	0％
								229	(SEQ ID NO：229)	PVLDLFRELLEEGKQKLK*	0％
230	(SEQ ID NO：230)	PVLELFERLLEDLQKKLK
								231	(SEQ ID NO：231)	PVLDLFRELLEKLEQKLK
232	(SEQ ID NO：232)	PLLELFKELLEELKQKLK*
								2374	(SEQ ID NO：237)	LDDLLQKWAEAFNQLLKK	11％	30	66	45	-
2385	(SEQ ID NO：238)	EWLKAFYEKVLEKLKELF*	19％	49	72	60	58
								2396	(SEQ ID NO：239)	EWLEAFYKKVLEKLKELF*	11％	44	49		sp
240	(SEQ ID NO：240)	DWLKAFYDKVAEKLKEAF*	10％	16	68	59	57
								241	(SEQ ID NO：241)	DWFKAFYDKVFEKFKEFF	8％

⁴ID-3肽(Labeur et al.，1997，Arteriosclerosis，Thrombosis and Vascular Biology 17(3)：580-588).

⁵Ac-18AMOD-C(O)NH₂ peptide(Epand et al.，1987，J.Biol.Chem.262(19)：9389-9396).

⁶Ac-18AM4-C(O)NH₂ peptide(Brasseur，1993，Biochim.Biophys.Acta 1170：1-7).

肽		氨基酸序列	活性(％)LCAT	He(％)游离	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								2427	(SEQ ID NO：242)	GIKKFLGSIWKFIKAFVG	7％
243	(SEQ ID NO：243)	DWFKAFYDKVAEKFKEAF	5％	10	64	50
								2448	(SEQ ID NO：244)	DWLKAFYDKVAEKLKEAF	5％	9	40	13	48
245	(SEQ ID NO：245)	DWLKAFYDKVFEKFKEFF	4％	38	77	70	sp
								2469	(SEQ ID NO：246)	EWLEAFYKKVLEKLKELF	4％	18	44	47
247	(SEQ ID NO：247)	DWFKAFYDKFFEKFKEFF	3％
								24810	(SEQ ID NO：248)	EWLKAFYEKVLEKLKELF	3％	18	45	13
24911	(SEQ ID NO：249)	EWLKAEYEKVEEKLKELF*
								25012	(SEQ ID NO：250)	EWLKAEYEKVLEKLKELF*
25113	(SEQ ID NO：251)	EWLKAFYKKVLEKLKELF*

⁷18L    肽(Segrest et al.，1990，Proteins：Structure，Function and Genetics 8：103-117).

⁸18A    肽(Anantharamaiah et al.，1985，J.Biol.Chem.260(18)：10248-10255).

⁹18AM4  肽(Rosseneu et al.，WO93/25581；Corijn et al.，1993，Biochim.Biophys.Acta 1170：8-16).

¹⁰[Glu^1，8；Leu^5，11，17]18A  肽(Epand et al.，1987，J.Biol.Chem.262(19)：9389-9396).

¹¹Ac-¹⁸AM3-C(O)NH₂(Rosseneu et al.，WO93/25581).

¹²Ac-18AM2-C(O)NH₂(Rosseneu et al.，WO93/25581).

¹³Ac-18AM1-C(O)NH₂(Rosseneu et al.，WO93/25581).

PEPTIDE		AMINO ACID SEQUENCE	ACTIVITY(％)LCAT	He(％)free	He(％)mics	He(％)SUVs	He(％)TFE
								252	(SEQ ID NO：252)	PVLDLFRELLEQKLK*
253	(SEQ ID NO：253)	PVLDLFRELLEELKQK*
								254	(SEQ ID NO：254)	PVLDLFRELLEKLKQK*
255	(SEQ ID NO：255)	PVLDLFRELLEKLQK*
								256	(SEQ ID NO：256)	PVLDLFRELLEALKQK*
257	(SEQ ID NO：257)	PVLDLFENLLERLKQK*
								258	(SEQ ID NO：258)	PVLDLFRELLNELKQK*

在表VIII中，*表示N末端乙酰化且C末端酰胺化的肽。↑表示N末端丹酰化的肽；sp表明在实验条件下出现溶解性问题的肽；X是Aib；Z是Nal；O代表Orn；He(％)表示螺旋的百分率；mics表示胶束；-表示缺失的氨基酸。

7.实施例：ApoA-I肽的结构与脂类结合分析

用圆二色法(CD)、荧光光谱法和核磁共振(NMR)，测定按上述第6节中描述合成的纯化肽的结构和脂类结合特性.

7.1.圆二色法

该实施例描述了一种用于测定肽本身以及在脂类存在时时α-螺旋二级结构百分比的优选方法。

7.1.1.实验方法

用带有一个热电池支架和样品交换器的AVIV62D分光光度计(AVIVAssociates，Lakewood，NJ，USA)，记录190-260nm(增量范围为0.5nm或0.2nm)范围内的远紫外圆二色光谱。这个仪器用(+)-10-樟脑酸进行校准。每一个样品用分别用10cm、5cm、1cm和0.1cm光程长的石英Suprasil比色皿在扫描1-3次后集中到一块儿，肽的浓度从10^-7M到10^-4M。带宽固定在1.5nm，扫描的速度为每个波长1秒。报告的数据至少是2-3次独立测量的平均值。

在去除背景之后，光谱在每个残基deg.cm^-2dmol^-1时转变成摩尔椭圆率(θ)。肽的浓度由氨基酸分析法和当肽有一个发色团(色氨酸，丹酰，萘丙氨酸)时用一Perkin Elmerλ17UV/可见分光光度计进行吸收光谱法测定。

CD光谱法由自由的，不受束缚的肽(5μM于5mM磷酸盐缓冲液中，Ph7.4)，肽-SUV混合物(20∶1 EPC∶Chol.，Ri＝50)，肽-胶束复合物(1-肉豆蔻酰-2-羟基sn-丙三基-3-磷脂酰胆碱，Ri＝100)，以及在有2，2，2，-三氟乙醇(TFE)(5μM肽，90％体积的TFE)存在时自由的不受束缚的肽而得到。

在磷酸盐缓冲液(5mM，pH7.4)中吹N₂鼓泡5分钟，然后在超声波仪中超声(1.5小时)以分散脂类(10Mm，20∶1 EPC∶Chol.，Avanti极性脂，AL)，由此法来获得SUVs。配制物的同质性由FPLC检查。

胶束由在磷酸盐缓冲液(5mM，pH7.4)中吹N₂鼓泡5分钟，然后振荡以分散脂(6mM 1-肉豆蔻酰-2-羟基sn-丙三基-3-磷脂酰胆碱，Avanti极性脂，AL)而得到。

为了得到肽-SUV复合物，以磷脂-肽摩尔Ri＝100的速度把SUVs加到肽中(5μM于5mM磷酸盐缓冲液中，PH7.4)。

为了得到肽-胶束复合物，以Ri＝100的速度把胶束加到肽中(5μM于5mM磷酸盐缓冲液中，PH7.4)。

所有的光谱在37℃时被记录。作为一个温度功能(在缓冲液和胶束中)，肽210(SEQ ID NO：200)的稳定性由在一系列不同的温度下的记录光谱来测定。

作为一个浓度功能，肽210(EQ ID NO：200)的螺旋程度也被测定。

                     7.1.2.螺旋度的测定

从222nm处平均残基椭圆率(Chen et al.，1974，Biochemistry13：3350-3359)，或用CONTIN曲线拟合算法，版本2DP，CD-l pack(Aug.1982)(Provencher，1982，Comput.Phys.Commun.27：213-227，229-242)将得到的CD谱与从数据库得到的标准谱(1.6螺旋标准谱出自Provencher & Glockner，1981，Biochemistry 20：3337；变性蛋白标准谱出自Venyaminov et al.，1993，Ahal.Biochem.21.4：17-24)进行对比，测定出各种条件下肽的螺旋程度。用CONTIN算法提供的统计学分析法测定出可接受的非特(fit)。所有方法的误差为±5％螺旋度。

                        7.1.3.结果

       表VIII报道了游离的未结合肽(游离)、肽-SUV复合物(SUVs)、肽-胶束复合物(mics)以及肽-TFE溶液(TFE)的螺旋程度(％)。

肽210(SEQ ID NO：210)在胶束中含有明显的α-螺旋结构(63％螺旋度)。而且，该α-螺旋结构在5℃～45℃温度范围内时完全稳定的(数据未显示)。存在TFE时，肽210(SEQ ID NO：210)的螺旋度也增加，由于TFE的介电常数(ε＝26.7)明显小于水(ε＝78.4)，所以TFE是一种浓度为5～90％(V/V)时能够稳定α螺旋和肽间氢键的溶剂。

从下文表VIII中可以看出，脂类存在时，那些表现出较高LCAT活性度(≥38％)的肽通常具有明显的α螺旋结构(含22或更多个氨基酸的未封闭肽或含18或更少个氨基酸的封闭肽具有≥60％螺旋结构；含18或更少个氨基酸的未封闭肽具有≥40％螺旋结构)，而几乎或根本不表现LCAT活性的肽几乎不具有α螺旋结构。但是，一些情况下，脂类存在时含有明显α螺旋结构的肽不表现明显的LCAT活性。因此，由于在脂类存在时能够形成α螺旋结构的能力似乎是LCAT活化的先决条件，所以在脂类存在时本发明核心肽调整α螺旋结构的能力被认为本发明核心肽的关键特征。

                      7.2荧光光谱学

含色氨酸(Trp或W)或萘基丙氨酸(Nal)的情况下，用标记后的肽通过荧光测量来测试第6节，上文中合成的肽的脂类结合特性。在装有一个150W氙灯、两个单色器(激发和发射)、一个用于检测850nm处敏感度的光电倍增管R928以及一个热电磁搅拌池控制器(thermoelectricmagnetic stirred cell holder)的来自Spex Fluoromax(Jobin-Yvon)上记录荧光光谱。微摩尔浓度范围内用Quartz Suprasil比色杯进行测量。一种裂缝可变(0.4～5nm)的仪器使得能够根据所用肽的浓度调整入射和发射强度。报道数值通常是2～4谱的平均值。通过PhilipsPU 8800上的吸收光谱，用Trp(Tris缓冲液中ε₂₈₀nm＝5，550M^-1cm^-1)或Nal(甲醇中ε₂₂₄nm＝92，770M^-1cm^-1)的吸收谱带测定肽浓度。

含有和不含脂类载体的(20mM，pH＝7.5)的情况下，在Tris-HCl缓冲液中记录290nm～450nm之间的荧光光谱。用缓冲液再水合冻干磷脂、分散以及在N₂气流下尖端超声处理后，形成小单层脂质体。使用的脂类为卵PC/Chol.(20∶1)或POPC/Chol.(20∶1)。在肽浓度为2μM和温度为37℃的条件下记录光谱。含Trp的荧光标准参照物为N-乙酰色氨酰胺(NATA)。

通过向浓度为2μM的肽溶液中连续加入脂类载体(裂缝：5nm激发以及1.5nm发射)，进行脂类结合研究。要将稀释效应考虑到荧光浓度测定中。脂类浓度在10～600μM的范围内变化，脂类与肽的摩尔比(Ri)在5～300之间变化。对于Trp和Nal两种情况下激发波长均设定在280nm。

7.2.1荧光光谱分析

直接记录数据，并用来自Spex的DM3000F的软件通过连接到分光荧光计上的IBM-PC进行处理。通过扣除溶剂作用，并通过把构造器给定系数的应用考虑到与波长对应的光电倍增器效应中，校正光谱。用它们的荧光发射最大值和与NATA相比色氨酸标记肽的量子产量，对所述肽的荧光光谱进行定性。通过计算荧光发射最大值处波长的迁移(λmax)以及相对于脂类浓度的发射荧光相对值，分析结合脂类的过程。相对荧光强度定义为下述比值：(I-I₀)λ_max/I_0λmax。在对应于肽初始游离态，即不含脂类的(λmax)处测定I和I₀两个值。I是在特定的脂类与肽比值处的强度，I₀是不含脂类时测定的同一参数。这些变化的缺乏同所述肽与脂类之间的相互作用的缺乏相关。

                      7.2.2结果和讨论

肽199(SEQ ID NO：199)的脂类结合特性见表VII，除在第10位上含有一个W(Trp)残基外，肽199的一级序列与肽210(SEQ ID NO：210)相似。

                        表IX

荧光测定的肽199(SEQ ID NO：199)与脂类载体的结合特性

脂类∶肽摩尔比	I/I0	λmax(nm)
			05103060100200	08818222741	348344339328326325

在浓度为2μM的缓冲液中，肽199(SEQ ID NO：199)的色氨酸荧光发射最大值(λ_max)为348nm。这一点与当同NATA相比时相对暴露于水环境的色氨酸一致。如同色氨酸的包埋(色氨酸的最大荧光发射的波长从348nm变化到325nm)以及高荧光强度的升高表明的那样(见表VII)，肽199(SEQ ID NO：199)能够非常有效地结合EPC/Chol(20∶1)小单层脂质体。当脂类与肽之间的摩尔比约100时，色氨酸的包埋程度最大。

用第7.1节，上文中描述的圆二色法测定时存在脂类条件下表现出高度螺旋(对于≥22个氨基酸的未封闭肽或≤18个氨基酸的封闭肽来说≥60％；对于≤18个氨基酸的未封闭肽来说≥40％)的其他肽也显示出良好的脂类结合特性。当然，在用圆二色法筛选选定的所有肽中，只对那些能随后发出荧光的肽才对其脂类结合特性进行测试。

                   7.2核磁共振(NMR)

该实施例描述了用于测定本发明核心肽结构的NMR方法。

                   7.3.1NMR样品制备

把5mg肽溶解于其中含有痕量2，2-二甲基-2-硅杂-5-戊磺酸盐(DSS)作为内源化学位移参照物的90％H₂O/1.0％D₂O中，制备成样品。上述样品中的一些含有三氟乙醇(TFE)(表示为体积百分比)。样品总体积为500μl，肽浓度约为5mM。

                   7.2.2核磁共振(NMR)谱学

用装有一个B-VT2000温控单元的Bruker DRX500分光计，获得500MHz处的¹H核磁共振谱。用标准脉冲序列记录一及二维实验。(二维NMR谱学，Eds.W.R.Croasmun and RMK Carlson，1994，VCH Publishers，New York，USA)。低功率预饱和2秒钟完成水抑制。使用与时间成比例的相增量(TPPI)和两个方向均为600Hz的谱宽，按照相敏模式(phasesensitive mode)进行二维实验。典型地，把40扫描共加入到带有2048个数据点的400t₁。用FELIX95软件(分子模拟)在INDIGO2工作站(Silicon Graphics)上处理数据。数据充零，产生一个2K×2K数据矩阵，并用45°移位直角正弦-圆锥函数(45°shifted squaredsine-bell function)变迹(apodized)。

                       7.3.3NMR测定

用文献(Wüthrich，蛋白质和核酸的NMR，1986，John Wiley & Sons，New York，USA)中描述的DQFCOSY、TOCSY和NOESY波谱，应用连续测定技术得到完全质子共振测定。通过从相应的实验数值中减去列表显示的无规卷曲化学位移(Wishart and Sykes，1994，Method.Enz.239：363-392)，计算出HN和Hα质子的次级化学位移。

                       7.3.4结果与讨论

常规考虑.由于在NMR波谱所需的高浓度下两亲性螺旋肽往往会在水溶液中聚集，所以这就使得难以得到高分辨率波谱。已知TFE能够溶解肽，此外还能稳定具有螺旋特性的肽的螺旋构象。从NMR波谱的发现的表明肽210(SEQ ID NO：210)是一个代表性的实例。对Segrest的共有22聚体(SEQ ID NO：75)进行了对照研究。

次级化学位移.氨基酸的质子化学位移取决于残基类型以及肽或蛋白中的局部二级结构(Szlagyi，1.995，核磁共振光谱进展27：325-443)。因此，通过比较实验位移和无规卷曲构象列表显示的数值，能够鉴定规则二级结构。

典型地，α螺旋的形成能导致Hα共振的高磁场(负)位移。通常，把观察到几个连续残基的高磁场(负)位移作为螺旋结构的证据。肽210(SEQ ID NO：21.0)在25％TFE、295K条件下，的Hα次级位移表明4～15位残基出现明显的负位移，这说明了高度螺旋构象的存在。与肽21(SEQ ID NO：21.0)相比，在共有22聚体的Hα化学位移中发现了细微的差别。

相对于从无规卷曲观察到的化学位移，存在于α螺旋区域中的氨基酸残基酰胺氢(amide hydrogens)的化学位移也是高磁场位移。此外，还能观察到HN位移的周期性，这反映了螺旋翻转的周期。沿序列位移变化的幅度与螺旋肽的两亲性相关。疏水越大，振动振动越明显(Zhouetal.，1992，J.Am.Chem.Soc.11.4：4320-4326)。肽210(SEQ ID NO：210)在25％TFE、295K条件下的HN次级位移表明了一种与螺旋的两亲性本质一致的摆动性(图7B)。

氨基酸的取代能够导致更加明显的沿全序列的周期性。该模式清楚地反映了与Segrest的共有22聚体相比，肽210(SEQ ID NO：21.0)较强的两亲性本质。可以识别出存在着4～5个螺圈。

酰胺质子的次级位移受从氢键到距离螺旋一个螺圈的羰基氧的长度影响。因此，观察到的化学位移值的周期性反映出不同的氢键长度。这种差异与螺旋骨架的整个弯曲螺旋的形状有关。疏水残基位于凹面上。肽210(SEQ ID NO：210)的次级位移表明了一种弯曲的α螺旋构象。

            8.实施例：AboA-I激动剂的药物动力学

用下列实验能够表明，ApoA-I激动剂能稳定地存在于循环系统，并于血浆中的HDL成分结合。

                    8.1.放射性标记肽的合成

偶联¹⁴C-标记氨基酸作为N-末端氨基酸，合成放射性标记肽。根据L.Lapatsanis，Synthesis，1983，671-173，进行合成。简而言之，将250μM未标记N-末端氨基酸溶解于225μl 9％Na₂CO₃溶液中，并加入到9.25MBq(250μM)¹⁴C-标记的N-末端氨基酸溶液(9％Na₂CO₃)中。将该液体冷却到0℃，与溶解于0.75ml DMF中的600μM(202mg)9-芴基甲基-N-琥珀酰碳酸酯(Fmoc-OSu)混合，室温振荡4小时。然后用二乙醚(2×5ml)和氯仿(1×5ml)抽提混合物，用30％HCl酸化剩余的水相(5×8ml)。Na₂SO₄干燥有机相，滤出，在氮流下将体积缩小到5ml。用TLC(CHCl)∶MeOH∶Hac，9∶1∶0.1v/v/v，固定相RPTLC silicagel60，Merck，Germany)测算纯度。

                 8.2.小鼠体内的药物动力学

每个实验中，向用一般鼠料或特殊的Thomas-Harcroft改良食物(导致VLDL和IDL胆固醇剧烈升高)饲喂的小鼠腹膜内注射2.5mg/kg放射性标记后的肽。在多个时间间隙，取血样用于血浆放射性分析。

                 8.3.人血清中的稳定性

下面的描述显示了本发明ApoA-I激动剂在人血清中的稳定性。

                      8.3.1.实验方法

取100μg ¹⁴C-标记肽(按照第9.1节，下文中的描述制备而成)，与2ml新鲜的人血浆混合(37℃下)，然后立即(对照样品)或37℃下温育8天后分层。用等体积的2∶1(v/v)氯仿∶甲醇抽提，实现分层.

将样品上样到一个反相C18 HPLC柱上，并用线性梯度(33min内25～58％)的乙腈(含0.1％TFA)洗脱。然后，测定洗脱分布图的吸光度(220nm)和放射活性。

                     8.4.前-β类颗短的形成

下面的描述显示了ApoA-I激动剂形成前-β类颗粒的能力。

                     8.4.1.实验方法

在浓度为d＝1.21g/ml的条件下，通过KBr浓度超速离心分离人HDL得到顶层级分，然后进行Superose 6凝胶过滤层析从其他脂蛋白中分离出HDL。根据用Bradford蛋白分析测定的蛋白成分，用生理盐水将分离到的HDL调整到终浓度为1.0mg/ml。从分离的HDL制剂中取出300μl的一份试样，用100μl ¹⁴C-标记肽37℃下温育2分钟。对5份单独温育实验样品进行分析，其中包括一份含100μl生理盐水的空白对照和4份¹⁴C-标记肽的稀释液：(i)0.20μg肽∶HDL，比例为1∶15；(ii)0.30μg肽∶HDL，比例为1∶10；(iii)0.60μg肽∶HDL，比例为1∶5；以及(iv)1.00μg肽∶HDL，比例为1∶3。温育2小时后，将200μl等份试样(总体积＝400μl)上样到Superose 6凝胶层析柱上，进行脂蛋白分离和分析，取100μl用于测定上样到柱体上的总放射性。

            8.5.ApoA-I激动剂与人脂蛋白的结合

                    8.5.1.实验方法

将¹⁴C-标记肽与每种脂蛋白(HDL，LDL和VLDL)以及不同脂蛋白混合物进行温育，测定本发明ApoA-I激动剂与人脂蛋白级分结合的能力。

在d＝1.21g/ml条件下，用KBr浓度超速离心分离人HDL、LDL和VLDL，在Superose 6B大小排阻层析柱上通过FPLC纯化(进行层析的条件：流速为0.7ml/min，载样缓冲液为10mM Tris(pH 8)、115mMNaCl、2mM EDTA和0.01％NaN₃)。按肽∶脂蛋白为1∶5(质量比)的比例，37℃下用HDL、LDL和VLDL温育脂蛋白2小时。将所需量的脂蛋白(根据生产1000μg需要量确定的体积)与0.2ml肽原液(1mg/ml)混合，用0.9％的NaCl将溶液扩容到2.2ml。

37℃温育2小时后，取一等份试样(0.1ml)用于液体闪烁计数，测定总放射性，用KBr将剩余温育混合液的浓度调整到1.21g/ml，用Beckman台式离心机及TLA 100.3转头，样品在4℃、100,000rpm(300,000g)下离心样品24小时。从每个样品顶层各取0.3ml，对得到的上清液进行总共5级分的分级分离。每个级分取0.05ml用于液体闪烁计数。顶层的两个级分中含有浮选脂蛋白，其他级分(3～5)中对应于溶液中的蛋白质/肽。

8.6.人血浆中本发明ApoA-I激动剂选择性地结合HDL脂类

                      8.6.1.实验方法

为了说明在人血浆中本发明ApoA-I激动剂能选择性地结合HDL蛋白，将20、40、60、80和100μg ¹⁴C-标记肽与2ml人血浆在37℃下温育2小时。把浓度调整至1.21g/ml分离脂蛋白，用TLA 100.3转头在4℃、100,000rpm(300,000g)下离心36小时。取顶层的900μl(从300μl级分中)用于分析。每300μl级分中取50μl用于放射性计数，每300μl级分中取200μl用FPLC(Superose 6/Superose 12混成柱)进行分析。

        9.实施例：ApoA-I激动剂能促进胆固醇的排出

为了说明本发明ApoA-I激动剂能促进胆固醇的排出，将肝癌细胞铺板在6-孔培养皿，生长至铺满状态。干燥胆固醇用³H-胆固醇标记细胞，然后向磷酸盐缓冲液(PBS)中加入1％牛血清白蛋白(BSA)，超声处理该溶液，向细胞中加入0.2ml该标记溶液和1.8ml培养基，从而使每孔中含有2μCi放射活性。用标记培养基温育细胞24小时。

肽(或蛋白)：制备肽(蛋白)∶DMPC之间的比例为1∶2的DMPC复合物。为了制备出该复合物，向DMPC的PBS溶液中加入肽或天然人ApoA-I蛋白，室温温育过夜，期间该溶液变得澄清。终溶液中肽或蛋白浓度约为1mg/ml。

除去细胞中的标记培养基，加入复合物前用PBS洗涤细胞。向每种细胞中加入1.6ml培养基，接着用肽(或蛋白)∶DMPC复合物和足量PBS将终体积调至每孔2ml。肽或ApoA-I终浓度约为1、2.5、5、7.5和25μg/ml培养基。37℃下温育24小时后，除去培养基，用2ml 1％BSA/PBS洗涤细胞，接着用PBS洗涤2次，每次2ml。用液体闪烁计数测定排出到培养基中的³H-胆固醇的量。

    10.实施例：ApoA-I激动剂在动物模型系统中的应用

用下列方法可以显示出本发明ApoA-I在兔体内的功效。结果表明施用ApoA-I激动剂能够增加HDL样颗粒的浓度。

                11.1.磷脂/肽复合物的制备

用胆固醇透析法制备由磷脂(DPPC)和肽组成的小圆盘状颗粒。将磷脂溶解于氯仿中，氮气流下干燥。以1～2mg/ml的浓度将肽溶解于缓冲液(盐)。将脂类薄膜再溶解在含胆固醇的缓冲液中(43℃)，按3∶1的磷脂/肽比例加入肽溶液。43℃下过夜温育该混合物，然后43℃透析(24小时)，室温透析(24小时)，4℃透析(24小时)，在温度点3次更换缓冲液。过滤(0.22μ)消毒该复合物用于注射，4℃保存。

               10.2.肽/磷脂颗粒的分离和层析

用凝胶过滤柱(Superose 6 HR)分离所述颗粒。通过测算各种级分中的磷脂浓度，鉴定出含该颗粒峰的位置。从洗脱体积中可以测定出Stokes半径。通过16小时酸解后测定苯丙氨酸含量(用HPLC)，测定出复合物中的肽浓度。

                      10.3.注射兔子

按照单次快速浓注不超过10-15ml的剂量，用磷脂/肽复合物静脉注射(8mg/kg体重肽146(SEQ ID NO：146)或10mg/kg体重ApoA-I(对照)，表示为肽或蛋白含量)雄性新西兰大白兔(2.5～3kg)。操作前轻微地镇静动物。在注射前和注射后5、15、30、60、240和1440分钟这几个时间点，取血样(收集于EDTA液)。测定每种样品的血细胞比容(Hct)。分装样品，-20℃保存备用。

                    11.4.兔血清的分析

血浆脂类.按照制造商的建议(Boehringer Mannheim，Mannheim，Germany and Biomerieux，69280，Marcy-l’etoile，France)，用商业化的分析手段酶学方法测定总血浆胆固醇、血浆甘油三酯和血浆磷脂。

脂蛋白谱  用蔗糖浓度梯度离心，测定出将血浆分离成为其脂蛋白级分后所得级分的血浆脂蛋白谱。收集级分，用酶学方法测量胆固醇含量。

                        10.5.结果

以时间为函数，用8mg/kg肽(SEQ ID NO：146)(以肽/DPPC复合物)注射兔子的脂蛋白谱。注射后5min，HDL胆固醇级分中的明显增加，并持续约24小时。

用密度梯度超速离心，得到联合HDL级分中的胆固醇，并显示于下表X。HDL胆固醇的最大增加发生在注射后第240min。注射后24小时，增加仍为71.2％。

这些数据施用肽146/DPPC复合物(8mg/kg)能导致外周胆固醇迅速并有效地代谢。

                         表X

施用8mg/kg 146(SEQ ID NO：146)或10mg/kg天然ApoA-I后兔

                  体内的HDL胆固醇

时间(min.)	增加在HDL内胆固醇(％)天然的ApoA-I	增加在HDL内胆固醇(％)肽146
			515602401440	19.31615.8-24.1*	31.360.442.990.271.2

*时间点前死亡的动物

      11.实施例：用共冻干方法制备肽-脂类复合物

用下列方法制备肽-脂类复合物。

将1mg肽149(SEQ ID NO：149)溶解于盛在一个1ml清澈带盖细颈瓶(Waters #WAT025054)内的250μl HPLC级甲醇(Perkin Elmer)中。室温下，不时地振荡10分钟加速肽的溶解。向该混合物中加入含3mg二棕榈酰-磷脂酰胆碱(DPPC；Avanti极性脂，99％纯度，产品号850355)的等份试样，该等份试样取自100mg/ml的甲醇原液。加入甲醇使混合物体积扩容到400μl，室温下，进一步间歇地振荡该混合物10分钟。向试管中加入200μl二甲苯(Sigma-Aldrich 99％纯，HPLC-级)，振荡该试管10秒钟。用20号注射针头在试管顶部穿2个小孔，将该试管置于液氮中冷冻15秒，将该试管真空冻干过夜。向试管中加入200ml0.9％NaCl溶液。振荡该试管20秒钟。此时，试管中的溶液呈乳状。然后，41℃水浴温育该试管30分钟。41℃温育几分钟后，溶液变得澄清(即，外观类似于水)。

11.1通过Superose 6分子筛层析鉴定复合物

如上所述通过共冻干所制备的，含有肽149(SEQ ID NO：149)的肽-磷脂复合物。此制备物含有1mg肽和3mgs DPPC。用200μl 0.9％的NaCl溶解后，取20μl此复合物上Pharmacia Superose 6柱，用0.9％的NaCl洗脱，流速为0.5ml/min。用波长280nm的紫外监测器记录层析的吸光值或透光率。按一份1ml连续收集。用bioMerieux PhospholipidesEnzymatique PAP 150试剂盒检测含有20μl以上组份的收集管的磷脂含量。在洗脱后大约15.8ml处的峰值处可见到同时有磷脂和紫外吸收峰值，所对应的收集管只有几管。这个洗脱条体积对应于87埃的Stokes直径。

作为比较，每20μl人HDL₂在相同条件下使用相同的层析柱，象肽149复合物一样的处理。HDL₂制备如下：先解冻300mls冰冻的人的血浆(Mannheim Blutspendzentrale #1185190)，用固态的溴化钾调密度为1.25，然后用Ti45转头(Beckman)，20℃，40,000RPM，离心45小时。收集上面飘浮的一层，然后放在蒸馏水中透析，并用固态的溴化钾调密度为1.07，如上述方法离心70小时。收集底层(管底上面1cm处)，加到0.01％的叠氮化钠中，贮存于4μ4天，然后用色谱法分析。柱子洗脱液用254nm波长的光的吸收或散射来监测。一系列知道其分子重量和Stokes直径的蛋白被用为校准计算颗粒的Stokes直径的柱子的标准(Pharmacia Gel Filtration Calibration Kit Instruction Manual，Pharmacia Laboratory separation，Piscataway，NJ，revisedApril，1985).HDLs用14.8mls的共有体积洗脱，14.8mls是相应于Stokes直径为108nm的蛋白颗粒而设定的。

本发明并不限于本发明描述的特定实施方案的范围。实际上，除本发明申请案中的描述外对本发明所做的各种修改，本领域技术人员可以容易地从上述说明书和附图中得出。这类修改落在所附权利要求的范围之内。

本发明中引用了各种公开出版物，这些出版物的内容作为整体在此引入作为参考。

序列表

(1)一般资料：

     (i)申请人：Dasseux，Jean-Louis

  Sekul，Renate

  Buttner，Klaus

  Cornut，Isabelle

  Metz，Gunther

     (ii)发明题目：提供载脂蛋白A-I激动剂的基因

  治疗方法及其治疗脂血异常症的用途

     (iii)序列数：270

     (iv)通信地址：

  (A)收信人：Pennie & Edmonds LLP

    (B)街道：美国大道1155

      (C)城市：纽约

       (D)州：纽约

      (E)国家：美国

      (F)邮政编码：10036-2811

    (V)计算机可读形式：

      (A)介质类型：软盘

      (B)计算机：IBM兼容机

      (C)操作系统：DOS

      (D)软件：FastSEQ Version 2.0

    (vi)目前的申请资料：

      (A)申请号：08/940,136

      (B)申请日：1997.9.29

(C)分类号：

    (vii)在先申请资料：

         (A)申请号：

         (B)申请日：

(viii)律师/代理人信息：

         (A)姓名：Coruzzi，Laura A

        (B)注册号：30,742

        (C)资料/文档号：009196-0007-999

(ix)通讯信息：

      (A)电话：650-493-4935

      (B)传真：650-493-5556

      (C)电报：66141 PENNIE

(2)SEQ ID NO：1的资料：

  (i)序列特征：

     (A)长度：22个氨基酸

     (B)类型：氨基酸

     (C)链型：单链

     (D)拓扑结构：线性

  (ii)分子类型：不确定

  (ix)特征：

     (A)名称/关键词：其他

     (B)位置：16

  (xi)序列描述：Xaa＝萘基丙氨酸

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Xaa

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：2的资料：

   (i)序列特征：

        (A)长度：23个氨基酸

        (B)类型：氨基酸

     (C)链型：单链

     (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：2：

Gly Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys Lys

            20

(2)SEQ ID NO：3的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：3：

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Trp

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：4的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：4：

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：5的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：23个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

       (A)名称/关键词：其他

       (B)位置：1

       (D)其他信息：Xaa＝D-Pro

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：5

Xaa Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys Lys

            20

(2)SEQ ID NO：6的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：6

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：7的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

    (ii)分子类型：不确定

    (xi)序列描述：SEQ ID NO：7

Pro Val Leu Asp Leu Phe Lys Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：8的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：8

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：9的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：9

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Gly Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：10的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：17

      (D)其他信息：Xaa＝萘基丙氨酸

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：10

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Xaa Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：11的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：11

Pro Val Leu Asp Leu Phe Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：12的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

       (C)链型：单链

       (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：12

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Gly Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：13的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：13

Gly Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：14的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：18

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：20

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：22

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：14

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Xaa Gln Xaa Leu Xaa

            20

(2)SEQ ID NO：15的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：15

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Trp Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：16的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：16

Pro Val Leu Asp Leu Leu Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：17的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：17

Pro Val Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：18的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：18

Gly Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：19的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1

      (D)其他信息：Xaa＝D-Pro

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：19

Xaa Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：20的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：20

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Gly Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：21的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1

      (D)其他信息：Xaa＝D-Pro

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：21

Xaa Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：22的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：22

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Gly

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：23的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：23

Pro Leu Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：24的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：24

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：25的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：25

Pro Val Leu Asp Phe Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：26的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：26

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Leu

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：27的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：14

      (D)其他信息：Xaa＝萘基丙氨酸

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：27

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Xaa Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：28的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

  (ii)分子类型：不确定

  (xi)序列描述：SEQ ID NO：28

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Trp Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：29的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：29

Ala Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：30的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...22

      (D)其他信息：N-末端丹酰化肽

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：30

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：31的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：31

Pro Val Leu Asp Leu Phe Leu Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

              20

(2)SEQ ID NO：32的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：32

Xaa Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：33的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：33

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：34的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：5

      (D)其他信息：Xaa＝萘基丙氨酸

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：34

Pro Val Leu Asp Xaa Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：35的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

  (ii)分子类型：不确定

  (xi)序列描述：SEQ ID NO：35

Pro Val Leu Asp Trp Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：36的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：36

Pro Leu Leu Glu Leu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：37的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：37

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Trp Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：38的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：38

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Trp Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：39的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：39

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：40的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：40

Pro Val Leu Asp Leu Phe Asn Glu Leu Leu Arg Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：41的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：41

Pro Val Leu Asp Leu Trp Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：42的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：42

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Trp Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：43的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：43

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Trp Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：44的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

  (ii)分子类型：不确定

  (ix)特征：

(A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...22

      (D)其他信息：所有遗传编码氨基酸都为D-构象

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：44

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：45的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：45

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：46的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：46

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：47的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：47

Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala Leu

 1               5                  10                  15

Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：48的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1

      (D)其他信息：Xaa＝D-Pro

(A)名称/关键词：其他

      (B)位置：2

      (D)其他信息：Xaa＝D-Val

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：48

Xaa Xaa Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：49的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：49

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Glu Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：50的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：50

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Trp Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：51的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：51

Pro Val Leu Asp Leu Phe Trp Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：52的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：52

Pro Val Trp Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：53的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：53

Val Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：54的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：54

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Trp Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：55的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：19个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：55

Pro Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala Leu Lys Gln

 1               5                  10                  15

Lys Leu Lys

(2)SEQ ID NO：56的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：56

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Lys Lys

            20

(2)SEQ ID NO：57的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：57

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Asn Leu Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ala

 1               5                  10                  15

Leu Glu Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：58的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：21个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：58

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu

            20

(2)SEQ ID NO：59的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：59

Leu Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：60的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：19个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：60

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln

(2)SEQ ID NO：61的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：61

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Trp Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：62的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：62

Pro Val Leu Asp Glu Trp Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：63的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：63

Pro Val Leu Asp Phe Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：64的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：64

Pro Trp Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：65的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：21个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：12

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：65

Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala Leu

 1              5                   10                  15

Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：66的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：66

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Asn Leu Leu Glu Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：67的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：21个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：67

Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala Leu

 1               5                  10                  15

Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：68的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：68

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Lys Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：69的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：69

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Lys Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：70的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：70

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Tyr Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：71的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：14

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：71

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Leu Xaa Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：72的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：72

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Trp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：73的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：73

Pro Val Leu Asp Glu Phe TrP Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：74的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：74

Pro Val Leu Asp Lys Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：75的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：75

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：76的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：76

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Phe Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：77的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：77

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Lys Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：78的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：78

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Asp Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：79的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：79

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：80的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：80

Pro Val Leu Asp Leu Phe Glu Arg Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：81的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：81

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Trp Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：82的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：20个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：11

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：46

Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala Leu Lys

 1               5                  10                  15

Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：83的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：83

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Trp Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：84的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：84

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：85的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：21个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：85

Pro Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala Leu

 1               5                  10                  15

Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：86的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：86

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Arg Leu Leu Asp Glu Leu Leu Asn Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：87的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...22

      (D)其他信息：所有氨基酸都为D-构象

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：87

Pro Leu Leu Glu Leu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：88的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：88

Pro Val Leu Asp Lys Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：89的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：89

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Trp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：90的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：19个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：10

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：90

Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala Leu Lys Gln

 1               5                  10                  15

Lys Leu Lys

(2)SEQ ID NO：91的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：91

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：92的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：92

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Tyr Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：93的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：93

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Lys Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：94的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：94

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Ala Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：95的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：95

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Leu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：96的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

(A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...22

      (D)其他信息：所有遗传编码氨基酸都为D-构象

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

(xi)序列描述：SEQ ID NO：96

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：97的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：15个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：97

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu

 1               5                  10                  15

(2)SEQ ID NO：98的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：98

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：99的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：99

Lys Leu Lys Gln Lys Leu Ala Glu Leu Leu Glu Asn Leu Leu Glu Arg

 1               5                  10                  15

Phe Leu Asp Leu Val Pro

            20

(2)SEQ ID NO：100的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...22

      (D)其他信息：所有氨基酸均为D-构象

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：100

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：101的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：101

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Trp Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：102的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：102

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Leu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Glu Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：103的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：103

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：104的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：15个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：104

Pro Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala Leu Lys Gln Lys Leu Lys

 1               5                  10                  15

(2)SEQ ID NO：105的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：105

Pro Ala Ala Asp Ala Phe Arg Glu Ala Ala Asn Glu Ala Ala Glu Ala

 1               5                  10                  15

Ala Lys Gln Lys Ala Lys

            20

(2)SEQ ID NO：106的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：106

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：107的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...22

      (D)其他信息：所有氨基酸均为D-构象

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：107

Lys Leu Lys Gln Lys Leu Ala Glu Leu Leu Glu Asn Leu Leu Glu Arg

 1               5                  10                  15

Phe Leu Asp Leu Val Pro

            20

(2)SEQ ID NO：108的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：108

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Trp Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：109的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：109

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Arg Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：110的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

(A)名称/关键词：其他

      (B)位置：14

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：110

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Xaa Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：111的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：111

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Trp Glu Xaa Trp Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：112的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：112

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Ser Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：113的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：113

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Pro Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：114的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：114

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Met Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：115的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：115

Pro Lys Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：116的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：116

Pro His Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：117的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：117

Pro Glu Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：118的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：13

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：118

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Glu Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：119的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：17

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：119

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Xaa Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：120的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其它

      (B)位置：16

      (D)其他信息：Xaa＝Aib

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：120

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Xaa

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：121的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：121

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Trp Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：122的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：122

Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Trp

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：123的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：123

Gln Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：124的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：18

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：20

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：22

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：124

Pro Val Leu Asp Leu Phe Xaa Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Xaa Gln Xaa Leu Xaa

            20

(2)SEQ ID NO：125的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：125

Asn Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：126的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：126

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Gly Glu Ala

 1               5                  10              15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：127的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：127

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Leu

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：128的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：128

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Phe

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：129的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：129

Pro Val Leu Glu Leu Phe Asn Asp Leu Leu Arg Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：130的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：130

Pro Val Leu Glu Leu Phe Asn Asp Leu Leu Arg Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：131的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：131

Pro Val Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Arg Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：132的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：132

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Asn Leu Leu Glu Ala

 1              5                   10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：133的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：133

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Arg Leu Leu Glu Asp Leu Leu Gln Ala

 1               5                  10                  15

Leu Asn Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：134的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：134

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Arg Leu Leu Glu Asp Leu Leu Lys Ala

 1               5                  10                  15

Leu Asn Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：135的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：135

Asp Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：136的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：136

Pro Ala Leu Glu Leu Phe Lys Asp Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：137的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：17

      (D)其他信息：Xaa＝萘基丙氨酸

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：137

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Xaa Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：138的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：138

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Trp

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：139的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：139

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Trp Asn Glu Gly Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：140的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：18

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：20

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：22

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：140

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Xaa Gln Xaa Leu Xaa

            20

(2)SEQ ID NO：141的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：141

Pro Val Leu Asp Phe Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：142的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：142

Pro Val Leu Glu Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：143的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...22

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化的肽

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：143

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Lys Gln Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：144的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1

      (D)其他信息：Xaa＝D-Pro

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：144

Xaa Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：145的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：145

Gly Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：146的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：146

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：147的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：147

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Phe Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：148的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：148

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Gly Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：149的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：149

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Trp Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：150的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：150

Pro Leu Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：151的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：151

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Gly Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：152的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：152

Pro Val Phe Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：153的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：153

Ala Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：154的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：154

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Gly Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：155的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：155

Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Trp Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：156的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：156

Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：157的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：157

Pro Val Leu Glu Phe Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：158的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：158

Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Trp

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：159的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：159

Pro Val Leu Asp Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：160的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：160

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Trp

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：161的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：161

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：162的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：162

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Trp Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：163的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：163

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Trp Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：164的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：164

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Trp Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：165的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：165

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Leu

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：166的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：166

Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：167的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

 (ii)分子类型：不确定

 (xi)序列描述：SEQ ID NO：167

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Gly Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：168的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：168

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Gln Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：169的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：169

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：170的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

(A)名称/关键词：其他

      (B)位置：12

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：19

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：20

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：22

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：170

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Xaa Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Xaa Xaa Leu Xaa

            20

2)SEQ ID NO：171的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：171

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Leu

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：172的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：172

Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Gly Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：173的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：173

Pro Val Leu Asp Leu Phe Asp Asn Leu Leu Asp Arg Leu Leu Asp Leu

 1               5                  10                  15

Leu Asn Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：174的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...22

      (D)其他信息：所有氨基酸均为D-构象

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：174

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：175的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：175

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Leu

 1               5                  10                  15

Leu Asn Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：176的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：176

Pro Val Leu Glu Leu Trp Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：177的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：177

Gly Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：178的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：178

Pro Val Leu Glu Leu Phe Asp Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Arg

            20

2)SEQ ID NO：179的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：179

Pro Val Leu Glu Leu Phe Asp Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：180的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：180

Pro Val Leu Glu Leu Phe Asp Asn Leu Leu Asp Lys Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Arg

            20

2)SEQ ID NO：181的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：181

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Trp Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：182的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：182

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

 2)SEQ ID NO：183的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：183

Pro Leu Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Ala

 1              5                   10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：184的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：184

Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Trp Gln Lys Lys Leu Lys

            20

(2)SEQ ID NO：185的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：19

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：20

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：22

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：185

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Xaa Xaa Leu Xaa

            20

2)SEQ ID NO：186的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：186

Pro Val Leu Glu Leu Pne Glu Gln Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：187的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：187

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Asn Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：188的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：188

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Asp Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：189的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：189

Asp Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Lys

            20

2)SEQ ID NO：190的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：22个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：190

Pro Val Leu Glu Phe Trp Asp Asn Leu Leu Asp Lys Leu Leu Asp Ala

 1               5                  10                  15

Leu Gln Lys Lys Leu Arg

            20

(2)SEQ ID NO：191的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：191

Pro Val Leu Asp Leu Leu Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：192的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：192

Pro Val Leu Asp Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：193的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：193

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1              5                   10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：194的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：194

Pro Val Leu Glu Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：195的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：195

Pro Val Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：196的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：196

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Asn Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：197的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：197

Pro Leu Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：198的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：198

Gly Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：199的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：199

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Trp Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：200的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：200

Asn Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：201的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：201

Pro Leu Leu Asp Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：202的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：202

Pro Ala Leu Glu Leu Phe Lys Asp Leu Leu Glu Glu Leu Arg Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Arg

(2)SEQ ID NO：203的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：203

Ala Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：204的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：204

Pro Val Leu Asp Phe Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：205的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：205

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Trp Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：206的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：206

Pro Leu Leu Glu Leu Leu Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：207的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：207

Pro Val Leu Glu Leu Leu Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：208的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：208

Pro Ala Leu Glu Leu Phe Lys Asp Leu Leu Glu Glu Leu Arg Gln Arg

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：209的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：209

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Gln Lys

1                5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：210的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：210

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：211的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

(A)名称/关键词：其他

      (B)位置：14

     (D)其他信息：Xaa＝Orn

(A)名称/关键词：其他

      (B)位置：16

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：18

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：211

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Xaa Gln Xaa

 1               5                  10                  15

Leu Xaa

(2)SEQ ID NO：212的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

(A)名称/关键词：其他

      (B)位置：7

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

(A)名称/关键词：其他

      (B)位置：14

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：16

      (D)其他信息：Xaa＝Orn

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：212

Pro Val Leu Asp Leu Phe Xaa Glu Leu Leu Glu Glu Leu Xaa Gln Xaa

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：213的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：213

Pro Ala Leu Glu Leu Phe Lys Asp Leu Leu Glu Glu Phe Arg Gln Arg

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：214的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

(A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1

      (D)其他信息：Pro的D-构象

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：214

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：215的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：215

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Trp Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：216的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：216

Pro Val Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：217的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：217

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Leu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：218的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：218

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：219的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：219

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Trp Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：220的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：220

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Gln Lys Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：221的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：221

Asp Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：222的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：222

Pro Val Leu Asp Ala Phe Arg Glu Leu Leu Glu Ala Leu Leu Gln Leu

 1               5                  10                  15

Lys Lys

(2)SEQ ID NO：223的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：223

Pro Val Leu Asp Ala Phe Arg Glu Leu Leu Glu Ala Leu Ala Gln Leu

 1               5                  10                  15

Lys Lys

(2)SEQ ID NO：224的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：224

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Gly Trp Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：225的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：225

Pro Val Leu Asp Ala Phe Arg Glu Leu Ala Glu Ala Leu Ala Gln Leu

 1               5                  10                  15

Lys Lys

(2)SEQ ID NO：226的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：226

Pro Val Leu Asp Ala Phe Arg Glu Leu Gly Glu Ala Leu Leu Gln Leu

 1               5                  10                  15

Lys Lys

(2)SEQ ID NO：227的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：227

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Gly Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：228的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：228

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Gly Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：229的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：229

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Gly Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：230的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：230

Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Arg Leu Leu Glu Asp Leu Gln Lys Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：231的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：231

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Glu Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：232的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：232

Pro Leu Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

Leu Lys

(2)SEQ ID NO：233的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：

      (B)类型：

      (C)链型：

      (D)拓扑结构：

   (ii)分子类型：

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：233

该序列被有意省略

(2)SEQ ID NO：234的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：

      (B)类型：

      (C)链型：

      (D)拓扑结构：

   (ii)分子类型：

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：234

该序列被有意省略

(2)SEQ ID NO：235的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：

      (B)类型：

      (C)链型：

      (D)拓扑结构：

   (ii)分子类型：

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：235

该序列被有意省略

(2)SEQ ID NO：236的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：

      (B)类型：

      (C)链型：

      (D)拓扑结构：

   (ii)分子类型：

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：236

该序列被有意省略

(2)SEQ ID NO：237的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：237

Leu Asp Asp Leu Leu Gln Lys Trp Ala Glu Ala Phe Asn Gln Leu Leu

 1               5                  10                  15

Lys Lys

(2)SEQ ID NO：238的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：238

Glu Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Glu Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu

1                5                  10                  15

Leu Phe

(2)SEQ ID NO：239的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：239

Glu Trp Leu Glu Ala Phe Tyr Lys Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu

 1               5                  10                  15

Leu Phe

(2)SEQ ID NO：240的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu

 1               5                  10                  15

Ala Phe

(2)SEQ ID NO：241的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：241

Asp Trp Phe Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Phe Glu Lys Phe Lys Glu

 1               5                  10                  15

Phe Phe

(2)SEQ ID NO：242的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：242

Gly Ile Lys Lys Phe Leu Gly Ser Ile Trp Lys Phe Ile Lys Ala Phe

 1               5                  10                  15

Val Gly

(2)SEQ ID NO：243的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：243

Asp Trp Phe Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Phe Lys Glu

 1               5                  10                  15

Ala Phe

(2)SEQ ID NO：244的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：244

Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu

 1               5                  10                  15

Ala Phe

(2)SEQ ID NO：245的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：245

Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Phe Glu Lys Phe Lys Glu

 1               5                  10                  15

Phe Phe

(2)SEQ ID NO：246的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：不确定

(xi)序列描述：SEQ ID NO：246

Glu Trp Leu Glu Ala Phe Tyr Lys Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu

 1               5                  10                  15

Leu Phe

(2)SEQ ID NO：247的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：247

Asp Trp Phe Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Phe Phe Glu Lys Phe Lys Glu

 1               5                  10                  15

Phe Phe

(2)SEQ ID NO：248的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：248

Glu Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Glu Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu

 1               5                  10                  15

Leu Phe

(2)SEQ ID NO：249的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：249

Glu Trp Leu Lys Ala Glu Tyr Glu Lys Val Glu Glu Lys Leu Lys Glu

 1               5                  10                  15

Leu Phe

(2)SEQ ID NO：250的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：250

Glu Trp Leu Lys Ala Glu Tyr Glu Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu

 1               5                  10                  15

Leu Phe

(2)SEQ ID NO：251的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...18

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：251

Glu Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Lys Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu

 1               5                  10                  15

Leu Phe

(2)SEQ ID NO：252的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：15个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...15

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：252

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Gln Lys Leu Lys

 1               5                  10                  15

(2)SEQ ID NO：253的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：16个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...16

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：253

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

(2)SEQ ID NO：254的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：16个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...16

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：254

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

(2)SEQ ID NO：255的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：15个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...15

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：255

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Gln Lys

1                5                  10                  15

(2)SEQ ID NO：256的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：16个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...16

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：256

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Ala Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

(2)SEQ ID NO：257的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：16个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...16

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：257

Pro Val Leu Asp Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

(2)SEQ ID NO：258的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：16个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：其他

      (B)位置：1...16

      (D)其他信息：N-末端乙酰化且C-末端酰胺化

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：258

Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Lys Gln Lys

 1               5                  10                  15

(2)SEQ ID NO：259的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：842个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (ix)特征：

      (A)名称/关键词：编码序列

      (B)位置：1...801

      (D)其他信息：

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：259

ATG AAA GCT GCG GTG CTG ACC TTG GCC GTG CTC TTC CTG ACG GGG AGC    48

Met Lys Ala Ala Val Leu Thr Leu Ala Val Leu Phe Leu Thr Gly Ser

 1               5                  10                  15

CAG GCT CGG CAT TTC TGG CAG CAA GAT GAA CCC CCC CAG AGC CCC TGG    96

Gln Ala Arg His Phe TrP Gln Gln Asp Glu Pro Pro Gln Ser Pro Trp

            20                  25                  30

GAT CGA GTG AAG GAC CTG GCC ACT GTG TAC GTG GAT GTG CTC AAA GAC    144

Asp Arg Val Lys Asp Leu Ala Thr Val Tyr Val Asp Val Leu Lys Asp

        35                  40                  45

AGC GGC AGA GAC TAT GTG TCC CAG TTT GAA GGC TCC GCC TTG GGA AAA    192

Ser Gly Arg AsP Tyr Val Ser Gln Phe Glu Gly Ser Ala Leu Gly Lys

    50                  55                  60

CAG CTA AAC CTA AAG CTC CTT GAC AAC TGG GAC AGC GTG ACC TCC ACC    240

Gln Leu Asn Leu Lys Leu Leu Asp Asn Trp Asp Ser Val Thr Ser Thr

65                  70                  75                  80

TTC AGC AAG CTG CGC GAA CAG CTC GGC CCT GTG ACC CAG GAG TTC TGG    288

Phe Ser Lys Leu Arg Glu Gln Leu Gly Pro Val Thr Gln Glu Phe Trp

                85                  90                  95

GAT AAC CTG GAA AAG GAG ACA GAG GGC CTG AGG CAG GAG ATG AGC AAG    336

Asp Asn Leu Glu Lys Glu Thr Glu Gly Leu Arg Gln Glu Met Ser Lys

            100                 105                 110

GAT CTG GAG GAG GTG AAG GCC AAG GTG CAG CCC TAC CTG GAC GAC TTC    384

Asp Leu Glu Glu Val Lys Ala Lys Val Gln Pro Tyr Leu Asp Asp Phe

        115                 120                 125

CAG AAG AAG TGG CAG GAG GAG ATG GAG CTC TAC CGC CAG AAG GTG GAG    432

Gln Lys Lys Trp Gln Glu Glu Met Glu Leu Tyr Arg Gln Lys Val Glu

    130                 135                 140

CCG CTG CGC GCA GAG CTC CAA GAG GGC GCG CGC CAG AAG CTG CAC GAG    480

Pro Leu Arg Ala Glu Leu Gln Glu Gly Ala Arg Gln Lys Leu His Glu

145                 150                 155                 160

CTG CAA GAG AAG CTG AGC CCA CTG GGC GAG GAG ATG CGC GAC CGC GCG    528

Leu Gln Glu Lys Leu Ser Pro Leu Gly Glu Glu Met Arg Asp Arg Ala

                165                 170                 175

CGC GCC CAT GTG GAC GCG CTG CGC ACG CAT CTG GCC CCC TAC AGC GAC    576

Arg Ala His Val Asp Ala Leu Arg Thr His Leu Ala Pro Tyr Ser Asp

            180                 185                 190

GAG CTG CGC CAG CGC TTG GCC GCG CGC CTT GAG GCT CTC AAG GAG AAC    624

Glu Leu Arg Gln Arg Leu Ala Ala Arg Leu Glu Ala Leu Lys Glu Asn

        195                 200                 205

GGC GGC GCC AGA CTG GCC GAG TAC CAC GCC AAG GCC ACC GAG CAT CTG    672

Gly Gly Ala Arg Leu Ala Glu Tyr His Ala Lys Ala Thr Glu His Leu

    210                 215                 220

AGC ACG CTC AGC GAG AAG GCC AAG CCC GCG CTC GAG GAC CTC CGC CAA    720

Ser Thr Leu Ser Glu Lys Ala Lys Pro Ala Leu Glu Asp Leu Arg Gln

225                 230                 235                 240

GGC CTG CTG CCC GTG CTG GAG AGC TTC AAG GTC AGC TTC CTG AGC GCT    768

Gly Leu Leu Pro Val Leu Glu Ser Phe Lys Val Ser Phe Leu Ser Ala

                245                 250                 255

CTC GAG GAG TAC ACT AAG AAG CTC AAC ACC CAG TGAGGCGCCC GCCGCCGCCC  821

Leu Glu Glu Tyr Thr Lys Lys Leu Asn Thr Gln

            260                 265

CCCTTCCCGG TGCTCAGAAT A                                            842

(2)SEQ ID NO：260的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：267个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：蛋白质

   (V)片段类型：内源性

      (xi)序列描述：SEQ ID NO：260

Met Lys Ala Ala Val Leu Thr Leu Ala Val Leu Phe Leu Thr Gly Ser

 1               5                  10                  15

Gln Ala Arg His Phe Trp Gln Gln Asp Glu Pro Pro Gln Ser Pro Trp

            20                  25                  30

Asp Arg Val Lys Asp Leu Ala Thr Val Tyr Val Asp Val Leu Lys Asp

        35                  40                  45

Ser Gly Arg Asp Tyr Val Ser Gln Phe Glu Gly Ser Ala Leu Gly Lys

    50                  55                  60

Gln Leu Asn Leu Lys Leu Leu Asp Asn Trp Asp Ser Val Thr Ser Thr

65                  70                  75                  80

Phe Ser Lys Leu Arg Glu Gln Leu Gly Pro Val Thr Gln Glu Phe Trp

                85                  90                  95

Asp Asn Leu Glu Lys Glu Thr Glu Gly Leu Arg Gln Glu Met Ser Lys

            100                 105                 110

Asp Leu Glu Glu Val Lys Ala Lys Val Gln Pro Tyr Leu Asp Asp Phe

        115                 120                 125

Gln Lys Lys Trp Gln Glu Glu Met Glu Leu Tyr Arg Gln Lys Val Glu

    130                 135                 140

Pro Leu Arg Ala Glu Leu Gln Glu Gly Ala Arg Gln Lys Leu His Glu

1451                 50                 155                 160

Leu Gln Glu Lys Leu Ser Pro Leu Gly Glu Glu Met Arg Asp Arg Ala

                165                 170                 175

Arg Ala His Val Asp Ala Leu Arg Thr His Leu Ala Pro Tyr Ser Asp

            180                 185                 190

Glu Leu Arg Gln Arg Leu Ala Ala Arg Leu Glu Ala Leu Lys Glu Asn

        195                 200                 205

Gly Gly Ala Arg Leu Ala Glu Tyr His Ala Lys Ala Thr Glu His Leu

    210                 215                 220

Ser Thr Leu Ser Glu Lys Ala Lys Pro Ala Leu Glu Asp Leu Arg Gln

225                 230                 235                 240

Gly Leu Leu Pro Val Leu Glu Ser Phe Lys Val Ser Phe Leu Ser Ala

                245                 250                 255

Leu Glu Glu Tyr Thr Lys Lys Leu Asn Thr Gln

            260                 265

(2)SEQ ID NO：261的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：66个碱基对

      (B)类型：核酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

        (xi)序列描述：SEQ ID NO：261

CCTGTTCTTG ACCTCTTCCG TGAACTTCTT AACGAAGGCC TCGAGGCACT GAAACAGAAA  60

CTAAAA                                                             66

(2)SEQ ID NO：262的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：63个碱基对

      (B)类型：核酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

        (xi)序列描述：SEQ ID NO：262

GGTGTTCTGG ACCTCTTCCG TGAACTTCTT AACGAAGGCC TAGCGCTAAA ACAAAAACTA  60

AAA                                                                63

(2)SEQ ID NO：263的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：66个碱基对

      (B)类型：核酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

        (xi)序列描述：SEQ ID NO：263

CCCGTGTTGG ACTTGTTCCG AGAACTACTA AACGAAGGAC TAGAATGGTT GAAACTAAAA  60

CTAAAA                                                             66

(2)SEQ ID NO：264的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：66个碱基对

      (B)类型：核酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

        (xi)序列描述：SEQ ID NO：264

GGTGTTTTGG AACTTTTCGA AAACTTATTG GAAAGATTGT TGGACGCACT GCAAAAAAAA  60

TTGAAA                                                             66

(2)SEQ ID NO：265的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：66个碱基对

      (B)类型：核酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

        (xi)序列描述：SEQ ID NO：265

CCAGTCTTGG AACTTTTCGA GAACTTGTGG GAGCGATTGT TGGATGCTTT GCAAAAAAAA  60

TTGAAA                                                             66

(2)SEQ ID NO：266的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：66个碱基对

      (B)类型：核酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

        (xi)序列描述：SEQ ID NO：266

GCCGTGTTGG AGCTGTTCGA AAACTTATTA GAGCGATTAT TAGACGCATT ACAGAAAAAA  60

TTGAAA                                                             66

(2)SEQ ID NO：267的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：54个碱基对

      (B)类型：核酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

        (xi)序列描述：SEQ ID NO：267

CCTGTGTTGG ACTTGTTCCG CGAGTTATTA AACGAGTTAT TACAGAAATT AAAA    54

(2)SEQ ID NO：268的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：54个碱基对

      (B)类型：核酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

        (xi)序列描述：SEQ ID NO：268

CCTGTGTTGG ACTTGTTGCG AGAATTATTA GAGGAATTAA AACAAAAACT AAAA    54

(2)SEQ ID NO：269的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：54个碱基对

      (B)类型：核酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

        (xi)序列描述：SEQ ID NO：269

CCATTATTAG AATTATTTAA GGAATTATTG GAGGAGCTGG AACAGGAACT AGAA    54

(2)SEQ ID NO：270的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：270

Met Lys Ala Ala Val Leu Thr Leu Ala Val Leu Phe Leu Thr Gly Ser

 1               5                  10                  15

Gln Ala

(2)SEQ ID NO：271的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：18个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：271

Met Lys Ala Ala Val Leu Ala Val Ala Leu Val Phe Leu Thr Gly Cys

 1               5                  10                  15

Gln Ala

(2)SEQ ID NO：272的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：6个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：272

Arg His Phe Trp Gln Gln

 1               5

(2)SEQ ID NO：273的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：6个氨基酸

      (B)类型：氨基酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

   (ii)分子类型：不确定

   (xi)序列描述：SEQ ID NO：273

Xaa Glu Phe Xaa Gln Gln

 1               5

(2)SEQ ID NO：274的资料：

   (i)序列特征：

      (A)长度：16个碱基对

      (B)类型：核酸

      (C)链型：单链

      (D)拓扑结构：线性

        (xi)序列描述：SEQ ID NO：274

TGAACCCTTG ACCCCT                                              16

Claims (65)

1.编码载脂蛋白ApoA-I激动剂的核苷酸序列，所述激动剂包括：

(i)15～29个氨基酸残基的肽，它能在脂类存在时形成两亲性α螺旋并且包括下列结构通式(I)：

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆-X₁₇-X₁₈-X₁₉-X₂₀-X₂₁-X₂₂-X₂₃

或其药学上可接受的盐，其中

X₁为Pro(P)、Ala(A)、Gly(G)、Gln(Q)、Asn(N)或Asp(D)；

X₂为脂族氨基酸残基；

X₃为Leu(L)或Phe(F)；

X₄为酸性氨基酸残基；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为一个亲水性氨基酸残基；

X₈为一个酸性或碱性氨基酸残基；

X₉为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₀为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₁为一个亲水性氨基酸残基；

X₁₂为一个亲水性氨基酸残基；

X₁₃为Gly(G)或脂族氨基酸残基；

X₁₄为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₅为一个亲水性氨基酸残基；

X₁₆为一个疏水性氨基酸残基；

X₁₇为一个疏水性氨基酸残基；

X₁₈为Gln(Q)、Asn(N)或一个碱性氨基酸残基；

X₁₉为Gln(Q)、Asn(N)或一个碱性氨基酸残基；

X₂₀为一个碱性氨基酸残基；

X₂₁为一个脂族氨基酸残基；

X₂₂为一个碱性氨基酸残基；

X₂₃空缺或为一个碱性氨基酸残基；或者

(ii)结构通式(I)的缺失形式，氨基酸残基X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇、X₈、X₉、X₁₀、X₁₁、X₁₂、X₁₃、X₁₄、X₁₅、X₁₆、X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀、X₂₁和X₂₂中有至少1个、至多8个氨基酸残基被缺失，其中所述结构通式(I)能在脂类存在时形成两亲性α螺旋；或者

(iii)结构通式(I)的变化形式，氨基酸残基X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇、X₈、X₉、X₁₀、X₁₁、X₁₂、X₁₃、X₁₄、X₁₅、X₁₆、X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀、X₂₁、X₂₂或X₂₃中至少有1个被另外的一个氨基酸残基保守性地取代，

其中与人ApoA-I相比，上述(i)-(iii)所述结构的激动剂表现出至少38％的LCAT活化活性。

2.权利要求1所述的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，该激动剂为权利要求1中(iii)所述的结构通式(I)的变化形式。

3.权利要求2中所述的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中按照通式(I)固定疏水氨基酸残基并且至少一个非固定氨基酸残基被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

4.权利要求3中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中

X₁为Pro(P)、Gly(G)或Ala(A)；

X₂为Ala(A)、Leu(L)或Val(V)；

X₃为Leu(L)或Phe(F)；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₉为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₀为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₃为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₄为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₆为Ala(A)、Trp(W)、Gly(G)、Leu(L)或Phe(F)；

X₁₇为Leu(L)或Gly(G)；

X₂₁为Leu(L)；以及

X₄、X₇、X₈、X₁₁、X₁₂、X₁₅、X₁₈、X₁₉、X₂₀、X₂₂和X₂₃中至少一个被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

5.权利要求2中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中按照通式(I)固定亲水氨基酸残基并且至少一个非固定氨基酸残基被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

6.权利要求5中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中：

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₇为Lys(K)或Arg(R)；

X₈为Asp(D)或Glu(E)；

X₁₁为Asn(N)或Gln(Q)；

X₁₂为Glu(E)或Asp(D)；

X₁₅为Asp(D)或Glu(E)；

X₁₈为Gln(Q)、Asn(N)或Lys(K)；

X₁₉为Gln(Q)、Asn(N)或Lys(K)；

X₂₀为Lys(K)；

X₂₂为Lys(K)；

X₂₃空缺或为Lys(K)；以及

X₁、X₂、X₃、X₅、X₆、X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇和X₂₁中至少一个被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

7.权利要求6中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中

X₃为Leu(L)或Phe(F)，X₆为Phe(F)，X₉为Leu(L)或Gly(G)，X₁₀为Leu(L)或Trp(W)或Gly(G)，并且X₁、X₂、X₅、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇和X₂₁中至少一个被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

8.权利要求4或6中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中所述的取代氨基酸残基和被取代氨基酸残基属于同一亚类。

9.权利要求1中所述的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，该激动剂是权利要求1中(ii)所述的结构通式(I)的缺失形式，其中所述结构通式(I)能在脂类存在时形成两亲性α螺旋。

10.权利要求9中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中所述肽缺失了1个螺圈，其中所述结构通式(I)能在脂类存在时形成两亲性α螺旋。

11.权利要求1中所述的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，该激动剂是结构通式(I)所示的22-23个氨基酸残基的肽。

12.权利要求1中所述的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中：

X₁为Pro(P)、Ala(A)、Gly(G)、Asn(N)、Gln(Q)或Asp(D)；

X₂为Ala(A)、Val(V)或Leu(L)；

X₃为Leu(L)或Phe(F)；

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为Lys(K)或Arg(R)；

X₈为Asp(D)或Glu(E)；

X₉为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₀为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₁为Asn(N)或Gln(Q)；

X₁₂为Glu(E)或Asp(D)；

X₁₃为Gly(G)或Leu(L)；

X₁₄为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₅为Asp(D)或Glu(E)；

X₁₆为Ala(A)、Trp(W)、Leu(L)、Phe(F)或Gly(G)；

X₁₇为Gly(G)或Leu(L)；

X₁₈为Gln(Q)、Asn(N)或Lys(K)；

X₁₉为Gln(Q)、Asn(N)或Lys(K)；

X₂₀为Lys(K)；

X₂₁为Leu(L)；

X₂₂为Lys(K)；以及

X₂₃空缺或为Lys(K)。

13.权利要求12中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中X₂₃空缺。

14.权利要求12中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中X₁₈或X₁₉中有一个为Gln(Q)或Asn(N)，并且X₁₈或X₁₉中的另一个为Lys(K)。

15.权利要求12中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄、X₁₅和X₁₇中的每个都不是Gly(G)。

16.权利要求12中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄和X₁₇中有一个是Gly(G)，而其余都不是Gly(G)。

17.权利要求1中所述的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，该激动剂的氨基酸序列选自下列序列：

肽    2     GVLDLFRELLNELLEALKQKLKK   (SEQ ID NO：2)；

肽    3     PVLDLFRELLNELLEWLKQKLK    (SEQ ID NO：3)；

肽    4     PVLDLFRELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：4)；

肽    7     PVLDLFKELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：7)；

肽    8     PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK    (SEQ ID NO：8)；

肽    9     PVLDLFRELGNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：9)；

肽    11    PVLDLFKELLQELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：11)；

肽    12    PVLDLFRELLNELLEAGKQKLK    (SEQ ID NO：12)；

肽    13    PVLDLFRELLNEGLEALKQKLK    (SEQ ID NO：13)；

肽    15    PVLDLFRELWNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：15)；

肽    16    PVLDLLRELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：16)；

肽    17    PVLELFKELLQELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：17)；

肽    18    GVLDLFRELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：18)；

肽    20    PVLDLFREGLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：20)；

肽    22    PVLDLFRELLNELLEGLKQKLK    (SEQ ID NO：22)；

肽    23    PLLELFKELLQELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：23)；

肽    24    PVLDLFRELLNELLEALQKKLK    (SEQ ID NO：24)；

肽    26    PVLDLFRELLNELLELLKQKLK    (SEQ ID NO：26)；

肽    28    PVLDLFRELLNELWEALKQKLK    (SEQ ID NO：28)；

肽    29    AVLDLFRELLNELLEALKQKLK    (SEQ ID NO：29)；或

肽    127   PVLDLFRELLNELLELLKQKLK    (SEQ ID NO：127)。

18.一段编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，所述激动剂包括：

(i)15～29个氨基酸残基的肽，它能在脂类存在时形成两亲性α螺旋并且包括下列结构通式(II)：

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆-X₁₇-X₁₈-X₁₉-X₂₀-X₂₁-X₂₂-X₂₃

或其一种药物学上可接受的盐，其中

X₁为Pro(P)、Ala(A)、Gly(G)、Gln(Q)、Asn(N)或Asp(D)；

X₂为脂族氨基酸残基Val(V)或Leu(L)；

X₃为Leu(L)或Phe(F)；

X₄为Glu(E)；

X₅为脂族氨基酸残基；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为Glu(E)或Leu(L)；

X₈为Asn(N)、Gln(Q)；

X₉为Leu(L)；

X₁₀为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₁为一个酸性氨基酸残基；

X₁₂为Arg(R)；

X₁₃为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₄为Leu(L)、Phe(P)或Gly(G)；

X₁₅为Asp(D)；

X₁₆为Ala(A)；

X₁₇为Leu(L)；

X₁₈为Asn(N)或Gln(Q)；

X₁₉为一个碱性氨基酸残基；

X₂₀为一个碱性氨基酸残基；

X₂₁为Leu(L)；

X₂₂为一个碱性氨基酸残基；

X₂₃空缺或为一个碱性氨基酸残基；或者

(ii)结构通式(II)的缺失形式，氨基酸残基X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇、X₈、X₉、X₁₀、X₁₁、X₁₂、X₁₃、X₁₄、X₁₅、X₁₆、X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀、X₂₁和X₂₂中有至少1个、至多8个氨基酸残基被缺失，其中所述结构通式(II)能在脂类存在时形成两亲性α螺旋；或者

(iii)结构通式(II)的变化形式，氨基酸残基X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇、X₈、X₉、X₁₀、X₁₁、X₁₂、X₁₃、X₁₄、X₁₅、X₁₆、X₁₇、X₁₈、X₁₉、X₂₀、X₂₁、X₂₂或X₂₃中至少有1个被另外的一个氨基酸残基保守性地取代，

其中与人ApoA-I相比，上述(i)-(iii)所述结构的激动剂表现出至少38％的LCAT活化活性。

19.权利要求18的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列编码的ApoA-I激动剂，该激动剂是权利要求18中(iii)所述的变化形式。

20.权利要求18的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中按照通式(II)固定疏水氨基酸残基并且至少一个非固定氨基酸残基被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

21.权利要求19的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中：

X₁为Pro(P)、Gly(G)、Asn(N)或Ala(A)；

X₂为Ala(A)、Leu(L)或Val(V)；

X₃为Leu(L)或Phe(F)；

X₅为Leu(L)；

X₆为Phe(F)；

X₉为Leu(L)；

X₁₀为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₃为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₄为Leu(L)、Phe(P)或Gly(G)；

X₁₆为Ala(A)；

X₁₇为Leu(L)；

X₂₁为Leu(L)；以及

X₄、X₇、X₈、X₁₁、X₁₂、X₁₅、X₁₆、X₁₉、X₂₂和X₂₃中至少有一个被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

22.权利要求18的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中按照通式(II)固定亲水性氨基酸残基并且至少一个非固定氨基酸残基被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

23.权利要求21的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中：

X₄为Glu(E)；

X₇为Glu(E)；

X₈为Asn(N)或Gln(Q)；

X₁₁为Asp(D)或Glu(E)；

X₁₂为Arg(R)；

X₁₅为Asp(D)；

X₁₈为Asn(N)或Gln(Q)；

X₁₉为Lys(K)；

X₂₀为Lys(K)；

X₂₂为Lys(K)；

X₂₃空缺或为Lys(K)；以及

X₁、X₂、X₃、X₅、X₆、X₉、X₁₀、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇和X₂₁中至少有一个被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

24.权利要求21中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中X₃为Leu(L)或Phe(F)，X₆为Phe(F)，X₉为Leu(L)，X₁₀为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)，并且X₁、X₂、X₅、X₁₃、X₁₄、X₁₆、X₁₇和X₂中至少一个被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

25.权利要求20或22中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中所述的取代氨基酸残基和被取代氨基酸残基属于同一亚类。

26.权利要求18中所述的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，该激动剂是权利要求18中(ii)所述的缺失形式，其中所述结构通式(II)能在脂类存在时形成两亲性α螺旋。

27.权利要求26中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中所述肽缺失了1个螺圈，其中所述结构通式(II)能在脂类存在时形成两亲性α螺旋。

28.权利要求18中所述的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，该激动剂是结构通式(II)所示的22～23个氨基酸残基的肽。

29.权利要求18中所述的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中：

X₁为Pro(P)、Ala(A)、Gly(G)或Asn(N)；

X₂为Ala(A)、Val(V)或Leu(L)；

X₃为Leu(L)或Phe(F)；

X₄为Glu(E)；

X₅为Leu(L)；

X₆为Phe(F)；

X₇为Leu(L)或Glu(E)；

X₈为Asn(N)或Gln(Q)；

X₉为Leu(L)；

X₁₀为Leu(L)、Trp(W)或Gly(G)；

X₁₁为Glu(E)；

X₁₂为Arg(R)；

X₁₃为Leu(L)或Gly(G)；

X₁₄为Leu(L)、Phe(F)或Gly(G)；

X₁₅为Asp(D)；

X₁₆为Ala(A)；

X₁₇为Leu(L)；

X₁₈为Asn(N)或Gln(Q)；

X₁₉为Lys(K)；

X₂₀为Lys(K)；

X₂₁为Leu(L)；

X₂₂为Lys(K)；以及

X₂₃空缺或为Lys(K)。

30.权利要求28中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中X₂₃空缺。

31.权利要求28中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中X₁₀、X₁₃和X₁₄中的每个都不是Gly(G)。

32.权利要求29中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中X₁₀、X₁₃或X₁₄中有一个是Gly(G)，而其余都不是Gly(G)。

33.权利要求18中所述的核苷酸序列，它编码一种ApoA-I激动剂，该激动剂的氨基酸序列选自下列序列：

肽145    GVLELFENLLERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：145)；

肽146    PVLELFENLLERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：146)；

肽147    PVLELFENLLERLFDALQKKLK    (SEQ ID NO：147)；

肽148    PVLELFENLLERLGDALQKKLK    (SEQ ID NO：148)；

肽149    PVLELFENLWERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：149)；

肽150    PLLELFENLLERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：150)；

肽151    PVLELFENLGERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：151)；

肽152    PVFELFENLLERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：152)；

肽153    AVLELFENLLERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：153)；

肽154    PVLELFENLLERGLDALQKKLK    (SEQ ID NO：154)；

肽155    PVLELFLNLWERLLDALQKKLK    (SEQ ID NO：155)。

34.一段编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，所述激动剂包括：

(i)14～22个氨基酸残基的肽，它能在脂类存在时形成两亲性α螺旋并且包括下列结构通式(III)：

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆-X₁₇-X₁₈

X₁为Pro(P)、Ala(A)、Gly(G)、Asn(N)或Gln(Q)；

X₂为脂族氨基酸；

X₃为Leu(L)；

X₄为酸性氨基酸；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为一个碱性氨基酸；

X₈为一个酸性氨基酸；

X₉为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₀为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₁为一个酸性氨基酸或Asn(N)；

X₁₂为一个酸性氨基酸；

X₁₃为Leu(L)、Trp(W)或Phe(F)；

X₁₄为一个碱性氨基酸或Leu(L)；

X₁₅为Gln(Q)或Asn(N)；

X₁₆为一个碱性氨基酸；

X₁₇为Leu(L)；

X₁₈为一个碱性氨基酸；

(ii)结构通式(III)的缺失形式，氨基酸残基X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇、X₈、X₉、X₁₀、X₁₁、X₁₂、X₁₃、X₁₄、X₁₅、X₁₆、X₁₇和X₁₈中有至少1个、至多8个氨基酸残基被缺失，其中所述结构通式(III)能在脂类存在时形成两亲性α螺旋；或者

(iii)结构通式(III)的变化形式，氨基酸残基X₁、X₂、X₃、X₄、X₅、X₆、X₇、X₈、X₉、X₁₀、X₁₁、X₁₂、X₁₃、X₁₄、X₁₅、X₁₆、X₁₇或X₁₈中至少有1个被另外的一个氨基酸残基保守性地取代，

其中与人ApoA-I相比，上述(i)-(iii)所述结构激动剂表现出至少38％的LCAT活化活性。

35.权利要求34所述的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，该激动剂是结构通式(III)的修饰形式。

36.权利要求35中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中按照通式(III)固定疏水性氨基酸残基并且至少一个非固定氨基酸残基被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

37.权利要求36中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中

X₁为Pro(P)、Gly(G)、Asn(N)或Ala(A)；

X₂为Ala(A)、Leu(L)或Val(V)；

X₃为Leu(L)；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₉为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₀为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₃为Leu(L)、Trp(W)或Phe(F)；

X₁₇为Leu(L)；以及

X₄、X₇、X₈、X₁₁、X₁₂、X₁₄、X₁₅、X₁₆和X₁₈中至少一个被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

38.权利要求35中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中按照通式(III)固定亲水性氨基酸残基并且至少一个非固定氨基酸残基被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

39.权利要求38中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中：

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₇为Arg(R)或Lys(K)；

X₈为Asp(D)或Glu(E)；

X₁₁为Asn(N)或Glu(E)；

X₁₂为Glu(E)；

X₁₄为Lys(K)或Arg(R)；

X₁₅为Gln(Q)或Asn(N)；

X₁₆为Lys(K)或Arg(R)；

X₁₈为Asn(N)或Gln(Q)；以及

X₁、X₂、X₃、X₅、X₆、X₉、X₁₀、X₁₃和X₁₇中至少有一个被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

40.权利要求38中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中X₃为Leu(L)，X₆为Phe(F)，X₉为Leu(L)或Trp(W)，X₁₀为Leu(L)或Trp(W)，并且X₁、X₂、X₅、X₁₃和X₁₇中至少一个被另外一个氨基酸残基保守性地取代。

41.权利要求37或39中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中所述的取代氨基酸残基和被取代氨基酸残基属于同一亚类。

42.权利要求34的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，该激动剂是权利要求34中(ii)所述的缺失形式，其中所述结构通式(III)能在脂类存在时形成两亲性α螺旋。

43.权利要求42中的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中所述肽缺失了1个螺圈，其中所述结构通式(III)能在脂类存在时形成两亲性α螺旋。

44.权利要求34的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，该激动剂是结构通式(III)所示的18个氨基酸残基的肽。

45.权利要求34中所述的编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列，其中：

X₁为Pro(P)、Ala(A)、Gly(G)或Asn(N)；

X₂为Ala(A)、Val(V)或Leu(L)；

X₃为Leu(L)；

X₄为Asp(D)或Glu(E)；

X₅为Leu(L)或Phe(F)；

X₆为Leu(L)或Phe(F)；

X₇为Arg(R)或Lys(K)；

X₈为Asp(D)或Glu(E)；

X₉为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₀为Leu(L)或Trp(W)；

X₁₁为Glu(E)或Asn(N)；

X₁₂为Glu(E)；

X₁₃为Leu(L)、Trp(W)或Phe(F)；

X₁₄为Arg(R)或Lys(K)；

X₁₅为Gln(Q)或Asn(N)；

X₁₆为Arg(R)或Lys(K)；

X₁₇为Leu(L)；

X₁₈为Arg(R)或Lys(K)。

46.权利要求34中所述的核苷酸序列，它编码一种ApoA-I激动剂，该激动剂的氨基酸序列选自下列序列：

肽    191    PVLDLLRELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：191)；

肽    192    PVLDLFKELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：192)；

肽    193    PVLDLFRELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：193)；

肽    194    PVLELFRELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：194)；

肽    195    PVLELFKELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：195)；

肽    196    PVLDLFRELLEELKNKLK^*    (SEQ ID NO：196)；

肽    197    PLLDLFRELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：197)；

肽    198    GVLDLFRELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：198)；

肽    199    PVLDLFRELWEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：199)；

肽    200    NVLDLFRELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：200)；

肽    201    PLLDLFKELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：201)；

肽    202    PALELFKDLLEELRQKLR^*    (SEQ ID NO：202)；

肽    203    AVLDLFRELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：203)；

肽    204    PVLDFFRELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：204)；

肽    205    PVLDLFREWLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：205)；

肽    206    PLLELLKELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：206)；

肽    207    PVLELLKELLEELKQKLK^*    (SEQ ID NO：207)；

肽    208    PALELFKDLLEELRQRLK^*    (SEQ ID NO：208)；

肽    209    PVLDLFRELLNELLQKLK     (SEQ ID NO：209)；

肽    210    PVLDLFRELLEELKQKLK     (SEQ ID NO：210)；

肽    213    PALELFKDLLEEFRQRLK^*    (SEQ ID NO：213)；

肽    215    PVLDLFRELLEEWKQKLK^*    (SEQ ID NO：215)

47.编码多聚ApoA-I激动剂的核苷酸序列，与人ApoA-I相比该激动剂表现出至少38％的LCAT活化活性并且具有下述结构通式(IV)：

或其药物学上可接受的盐，其中：

每个m都单独为0～1的整数；

n是0～10的整数；

每个“HH”都单独是一个权利要求1或18或34所述的肽；以及

每个“LL”都单独是1个接头。

48.一种宿主细胞，该细胞表达有权利要求1、18或34所述核苷酸序列编码的肽。

49.一种宿主细胞，该细胞表达有权利要求17、33或46所述核苷酸序列编码的肽。

50.一种宿主细胞，该细胞表达有权利要求47所述核苷酸序列编码的肽。

51.一种药用组合物，其中包括编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列和一种药物学上可接受的载体、赋形剂或稀释液，其中所述ApoA-I激动剂由权利要求1、18或34所述核苷酸序列编码。

52.一种药用组合物，其中包括编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列和一种药物学上可接受的载体、赋形剂或稀释液，其中所述ApoA-I激动剂由权利要求17、33或46所述核苷酸序列编码。

53.一种药用组合物，其中包括编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列和一种药物学上可接受的载体、赋形剂或稀释液，其中所述ApoA-I激动剂由权利要求47所述核苷酸序列编码。

54.权利要求51中的药用组合物，其中所述的核苷酸序列以核苷酸脂类复合物的形式存在，该复合物包括编码ApoA-I激动剂的核苷酸序列和一种脂类。

55.权利要求1、18或34所述核苷酸序列或表达所述核苷酸序列的宿主细胞在制备用于治疗患有脂血异常相关疾病的药物中的应用。

56.权利要求55中的应用，其中所述的ApoA-I激动剂以ApoA-I激动剂-脂类复合物的形式存在，该复合物中包括所述的ApoA-I激动剂和一种脂类。

57.权利要求55中的应用，其中所述的ApoA-I激动剂以药用组合物形式存在，该组合物中包括所述的ApoA-I激动剂和一种药物学上可接受的载体、赋形剂或稀释液。

58.权利要求55中的应用，其中所述的脂血异常相关疾病是胆脂醇过多。

59.权利要求55中的应用，其中所述的脂血异常相关疾病是心血管病。

60.权利要求55中的应用，其中所述的脂血异常相关疾病是动脉粥样硬化。

61.权利要求55中的应用，其中所述的脂血异常相关疾病是再狭窄。

62.权利要求55中的应用，其中所述的脂血异常相关疾病是高密度脂蛋白HDL或载脂蛋白ApoA-I缺乏。

63.权利要求55中的应用，其中所述的脂血异常相关疾病是高甘油三酯血症。

64.权利要求55中的应用，其中所述的脂血异常相关疾病是代谢综合征。

65.权利要求1、18或34所述核苷酸序列或表达所述核苷酸序列的宿主细胞在制备用于治疗患有内毒素性血症脓毒性休克患者的药物中的应用。

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