JP2000509020A

JP2000509020A - コレステロールおよび他の脂質の取り込みを阻害する両親媒性分子

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Publication number: JP2000509020A
Application number: JP9535088A
Authority: JP
Inventors: ダリオ・ボッフェリ; ヘルムート・ハオザー
Original assignee: ダリオ・ボッフェリ; ヘルムート・ハオザー
Priority date: 1996-03-29
Filing date: 1997-03-27
Publication date: 2000-07-18
Also published as: CN1109047C; AU710061B2; WO1997036927A1; CN1216995A; NO984524L; US20010005714A1; AU2174197A; EP0889906A1; NO984524D0; NZ331980A; CA2249459A1

Abstract

(57)【要約】コレステロールの生合成はスタチンのような好適な阻害剤で阻害することができる。しかしながら、体内のコレステロールは内生の合成と同様、食餌からの取り込みによっても獲得されるので、家族性あるいは食餌誘因性の高コレステロール血症および、より一般的には高脂血症は、コレステロール生合成阻害剤だけでは十分に取り組むことができない。脂質もまた腸から取り込まれる。この問題は、コレステロールおよび他の脂質の腸からの取り込みを阻害するために、両親媒性部分を含有する１もしくはそれ以上の分子を提供することにより取り組まれる。アテローム性動脈硬化症と同様に、肥満もまたこの方法により治療もしくは予防してもよい。両親媒性部分を含有する好適な分子の例として、天然型もしくは変異型のアポタンパク質および他のタンパク質、そして、少なくとも約１５のアミノ酸からなる両親媒性α−ヘリックスを含有するペプチドがある。

Description

【発明の詳細な説明】コレステロールおよび他の脂質の取り込みを阻害する両親媒性分子本発明は、ある種の分子の医学への使用、特に、腸からのコレステロールおよび他の食餌性脂質の取り込み阻害剤としての使用に関する。従って本発明は、高コレステロール血症を含む高脂血症、および、肥満の管理に適用される。コレステロールは対称的な二面を有する分子である。一方では、その正確な機能はまだ解明されていないが、細胞の原形質膜の必須構成要素である。他方では、過剰に存在して血液中のコレステロール濃度が高い場合、動脈壁に沈着してアテローム性動脈硬化症の脂肪沈積が起こり、ついには心筋梗塞および脳卒中を引き起こす。西洋の工業国では、アテローム性動脈硬化症による死亡数が、他のいかなる病気による死亡数よりも高い。動物細胞のコレステロールの約３分の２は細胞内でのデノボ合成により供給され、残り３分の１は食餌に由来するもので、腸の上皮細胞によって取り込まれる。コレステロールは水および血液のような水溶性媒体に不溶であるため、安定な形態で分散させる必要がある。この方法を乳化と呼び、生ずる安定な粒子は血清リポタンパク質として知られる。血液中で最も重要なコレステロールの輸送媒体は低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）粒子である（Brownら,Science 232 34-47(19 86)）。細胞のコレステロール要求は、上記のような細胞のコレステロール合成能力、あるいは、受容体介在型エンドサイトーシスとして知られる機構により、血流から細胞内へＬＤＬ粒子を取り込む細胞のどちらかによって処理される。血液中の高濃度のＬＤＬと、アテローム性動脈硬化症の発現および次いで起こる心筋梗塞および脳卒中との間には、明確な因果関係がある。ＬＤＬの二つの役割を強調する必要がある。すなわち、一方では、ＬＤＬ粒子は細胞にコレステロールを供給し、他方では、動脈壁へのコレステロールの沈着およびアテローム性動脈硬化症の脂肪沈積の発現の原因となっている。血液中の高濃度のＬＤＬは、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）と呼ばれる遺伝的疾患か、あるいは高脂肪食のどちらかによって起こる。高コレステロール血症におけるＬＤＬ受容体の主要な役割は、BrownおよびGoldsteinの研究によって確立された（Brownら,Science 232 34-47(1986)）。どちらの場合も、細胞表面上のＬＤＬ受容体の数が有意に減少している：ＦＨの場合は、受け継いだ遺伝的欠陥によりＬＤＬ受容体が部分的にしか機能しないか、あるいは、最悪の場合は全く機能しない；そして、高脂肪、高コレステロール食の場合は、ＬＤＬ受容体の合成が転写レベルで抑制される。遺伝的か後天的かに関わらず、どちらの場合も同様の結果、すなわちＬＤＬ受容体の不足が生ずる。結果として、血液の循環からＬＤＬ粒子が効果的に除去されず、その血中濃度が上昇してアテローム性動脈硬化症が発現する。ヘテロ接合性のＦＨである患者には、Merck社からＺＯＣＯＲ^TMの名で市販されているシンバスタチンのような、スタチンと総称される種類の薬剤による治療が施与されてきた。この種の化合物は、コレステロール合成の律速酵素である３ −ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素を阻害し、従って、細胞の生合成経路を阻害する。スタチンはしばしば、コレスチラミンのような胆汁酸塩のキレート形成剤といわれる樹脂（resin）と合わせて投与される。後者の化合物は経口で多量に投与されるが、血液中のコレステロール濃度を低下させる効果のあることが証明されている。しかしながら、この効果を得るためには多量の投与が必要であり、そのような量では好ましくない副作用が起こるため、この種の化合物は患者には不評であり、広く使用されてきてはいない。にもかかわらず、BrownおよびGoldsteinは、スタチンおよびコレスチラミンのような樹脂を合わせて投与すれば、ヘテロ接合性ＦＨの患者のＬＤＬ受容体の数を正常レベルにまで増加させることができることを証明した（Brownら,Scienc e 232 34-47(1986)）。１９８８年、アメリカの国民コレステロール教育（National Cholesterol Edu cation）プログラムにより、血液中の総コレステロールおよびＬＤＬコレステロールの濃度の分類が行われ、高コレステロール血症と分類される人々のための食餌療法が推奨された。食餌療法に加え、血液中のコレステロールを低下させる予防的手段も歓迎されるものである。腸内でのコレステロールの吸収を低下もしくは阻害し、これによってコレステロールの血中濃度を低下させるという考えはもう古い；製薬産業によって多大な労力がこの目的のために当てられてきたが、これまでにはわずかな成果しか上げられていない。一例として、補助食品として使用されるサポニンが、実験動物において血液中のコレステロール濃度を低下させることが証明され、高コレステロール血症の治療に有用である可能性があると予告された(Harwoodら,Journal of Lipid Research 34 377-395(1993)）。しかしながら、サポニンの供給が困難であるために、そのアプローチはうまく行かなかった。天然物から純粋なサポニンを大量に得ることは、事実上不可能である。サポニンの類似体もしくは代替物質の合成品を使用する方法も、少なくとも今までのところは成功していない。１９９０年、我々は腸内の上皮細胞の刷子縁膜（brush border membrane）（ “ＢＢＭ”）によるコレステロールの吸収は、タンパク質が介在するものであることを報告した（Thurnhoferら,Biochemistry 29 2142-2148(1990)）。これはまた、コレステロールのエステル（Compassiら,Biochemistry 34 16473-(1995)）および他の食餌性脂質（Thurnhoferら,Biochem.Biophys.Acta.1024249-262(1990 )）にもあてはまる。我々の発見は、教科書や総説に記載され広く受け入れられている、脂質の吸収は濃度勾配に伴う食餌性脂質の拡散を含む受動的な過程によるものであるという見解と矛盾する。我々の発見は、腸内でのコレステロール吸収に干渉し、そしておそらくは阻害する、新しい方法および可能性を切り開くものである。１９９０年以前にこの目的のために取られた方法は、非特異的なものとして分類してもよい。例えば、コレスチラミンのようなポリマーもしくは植物のサポニンによる治療である。これらの化合物はコレステロールおよび他の食餌性脂質を吸収部位へ運搬する腸内において、胆汁酸塩と相互に作用し、この相互作用により、コレステロールおよび他の脂質が脂質吸収に利用されなくなると考えられている。この種の相互作用にこれらの試薬が大量に必要であるということは、反応が非特異的であることを意味する。対照的に、コレステロール、もしくはより一般的には脂質の、ＢＢＭにおける吸収に触媒作用を及ぼすタンパク質によるアプローチは、これと異なり特異的であるといってもよい。ここで目的は、脂質の吸収、ひいては脂質の吸収の阻害に関与するタンパク質と特異的に相互作用を持つ試薬を発見もしくは設計することである。その存在がよく知られ、その機能は確認されたと信じられており、しかし腸内での医学的利用は提案されていないタンパク質群が、コレステロールあるいは他の脂質の取り込み阻害剤として機能しうることがここに見出された。そのタンパク質はアポタンパク質である。また、本発明においてアポタンパク質が効果的であるらしいとする理由は、その構造中に両親媒性のα−ヘリックスが存在するためであり、そのため、タンパク質性の両親媒性α−ヘリックスに関連する特性（特にディメンション、ジオメトリー、および極性）を共有する両親媒性部分を１あるいはそれ以上含有する他の分子が本発明に有用であることが見出された。従って、本発明の第一の観点により、腸からのコレステロールもしくは他の脂質の取り込みを阻害する薬剤の調製における、両親媒性部分、特に両親媒性ヘリックスを１もしくはそれ以上含有する分子の使用を提供する。本発明の第二の観点により、高脂血症、特に高コレステロール血症および／もしくは肥満の治療もしくは予防のために腸に適用する薬剤の調製における、両親媒性部分、特に両親媒性ヘリックスを１もしくはそれ以上含有する分子の使用を提供する。その、あるいはそれぞれの両親媒性部分は、少なくとも１３、１４、もしくは１５のアミノ酸残基（数が増えるほど好ましい）からなるタンパク質性の両親媒性ヘリックスに関連する特性（特にディメンション、ジオメトリー、および極性）を共有する。従って本発明は、コレステロールもしくは他の脂質の腸からの取り込みを阻害する方法の提供を可能にするものであり、その方法は、患者もしくは被検体への、両親媒性部分、特に両親媒性ヘリックスを１もしくはそれ以上含有する分子の投与を含むものである。本発明はまた、高脂血症、特に高コレステロール血症および／もしくは肥満の治療もしくは予防方法の提供を可能にするものであり、その方法は、患者もしくは被検体の腸に、両親媒性部分、特に両親媒性ヘリックスを１もしくはそれ以上含有する効果的な量の分子を投与することを含むものである。数個の両親媒性α−ヘリックスを含有する特定のタンパク質分子がアポタンパク質である。上記のように、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）は最も重要な血液中のコレステロール輸送担体である。ＬＤＬはリポタンパク質群の一つであり、比重が上がるに従って以下のように分類される：カイロミクロン（chylomicrons）、カイロミクロンレムナント（chylomicron remnants）、超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、中間比重リポタンパク質（intermediate-density lipoprotein,ＩＤＬ）、低比重リポタンパク質、および高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）。それぞれのリポタンパク質は独自の機能を有する；例えば、上記のように、ＬＤＬは血液中のコレステロールの輸送において重要であり、また、ＨＤＬは細胞および血管からコレステロールを除去するものと考えられており、それらの点では、その役割は十分確認されている。リポタンパク質は、疎水性脂質の核心部分と、それを取り囲む極性脂質およびアポタンパク質（アポリポタンパク質とも呼ばれ、ａｐｏと略される）の外殻からなる粒子である。１０個の主要なアポタンパク質（Ａ −１、Ａ−２、Ａ−４、Ｂ−４８、Ｂ−１００、Ｃ−１、Ｃ−２、Ｃ−３、Ｄ、およびＥ）の単離および性状決定が行われている；それらは肝臓および腸で合成および分泌される。GoodmanおよびGilmanは“治療学における薬理学の基礎(The Pharmacological Basis of Therapeutics)”(McCraw-Hill第８版(1992))の中で、以下のような多様なリポタンパク質におけるアポタンパク質の分布について記載している：原則として、本発明においていかなるアポタンパク質を使用してもよいことは認識されるところである。アポタンパク質ＡおよびＣ（apo Ａおよびapo Ｃ）はin vitroのＢＢＭモデルにおいて、特に効果的であることが証明された。アポタンパク質Ｂは、サイズが大きい点と、脱脂された型での溶解性が相対的に不十分なため、より好ましくない。本発明は、特にヒトの疾病の治療もしくは予防に適用されるものであるが、他の動物（特に哺乳動物）に適用してもよい。いかなる特定の種（ヒトを含む）由来のアポタンパク質でも、その種の動物の治療に使用するのが最も好適と考えられるが、アポタンパク質の異種間での使用も本発明の範囲に含まれる。天然のアポタンパク質（全ての対立遺伝子による変異体を含む）およびそれらの変異体の使用は、いずれも本発明の範囲内である。変異体には付加、欠失、および置換された突然変異体が含まれる；突然変異体は一般に、少なくともコレステロール（そして、より一般的には脂質）の取り込み阻害の点からは、保存的な突然変異であってもよく、一般に天然物の配列と有意なアミノ酸ホモロジーを示す。有意なアミノ酸ホモロジーは、少なくとも４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、もしくは９９％ものホモロジーを含んでいてもよく、最も適合するという基準では、数字が大きいほど好ましい。非干渉型のアミノ酸配列を付加してもよく、必須ではないアミノ酸配列が欠失していてもよい。つまり、好ましい変異体には、二次構造が天然のアポタンパク質のものと十分に複製もしくは類似しており、腸からの脂質、特にコレステロールの取り込みを阻害する能力のあるタンパク質が含まれる。本発明においては、特性（ディメンション、ジオメトリー、および極性のような）が天然のアポタンパク質の両親媒性α−ヘリックスのものと対応する両親媒性部分を１もしくはそれ以上含有する他の分子を、アポタンパク質の変異体とみなしてもよい。しかしながら、好適な両親媒性部分を含有する、多様な非アポタンパク質分子を、それらが属する化合物の分類と比較して考慮する方がより便宜的である。そのような分類の中で最も融通性のあるものの一つは、両親媒性ヘリックスを形成する、または複数の両親媒性ヘリックスを形成する天然もしくは合成のペプチドおよびタンパク質の分類である。両親媒性ヘリックスは、本来の性質およびヘリックスを形成するアミノ酸の側鎖の立体配置により、疎水性の面（face）と親水性の面を有する。Ａに分類される両親媒性ヘリックスでは、親水性の面にある陽イオン残基は疎水性の面の近傍にあり、陰イオン残基は疎水性の面の遠隔にある。Ｒに分類される両親媒性ヘリックスでは、親水性の立体配置が逆であり、親水性の面の陰イオン残基が疎水性の面の近傍にあり、陽イオン残基は疎水性の面の遠隔にある。天然のアポタンパク質はＡに分類される両親媒性ヘリックスを含有する：ＡｐｏＡ-1はそれらを８個有する。この理由により、Ａに分類される両親媒性ヘリックスを１もしくはそれ以上含有する化合物が好ましい。ペプチドもしくはタンパク質の右手系のα−ヘリックスでは、１回転は３．６個のアミノ酸からなる。回転毎の高さは５．４Åで、１８個のアミノ酸からなる α−ヘリックスの長さは２７Å、１５個のアミノ酸からなるα−ヘリックスの長さは２２．５Åである。このα−ヘリックスのペプチド骨格は、観念上の（断面がほぼ円形である）直径約５Å（±０．５Ａ）の柱体の表面上に沿って延びている。その外側に突出するアミノ酸残基の側鎖を含めると、柱体の直径は約５から８Åである。側鎖は、極性、帯電型、または非極性でもよいが、柱体の長軸に対してほぼ垂直に突出している。柱体表面の約半分が電荷を有するアミノ酸残基および極性アミノ酸残基で、そしてもう半分が非極性残基で覆われている。上記のように、両親媒性α−ヘリックス（場合により分類Ａまたは分類Ｒ）は、柱体の軸に平行な、対立する極性および非極性の面を有する。本発明に有用なペプチドおよびタンパク質には、ヨーロッパ特許出願公開ＥＰ -Ａ-0162414号および米国特許ＵＳ-Ａ-4643988号に開示されているものが含まれるが、両者の内容は、法で認められる最大限の範囲で参照としてここに組み込まれる。両親媒性ヘリックスを形成できる好ましいペプチドおよびタンパク質には、以下の配列が含有される：式中、Ａ₁、Ａ₂、Ａ₃、およびＡ₄は、それぞれ独立して、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸、またはそれらの相同体もしくは類似体であり；Ｂ₁、Ｂ₂、Ｂ₃、Ｂ₄、Ｂ₅、Ｂ₆、Ｂ₇、Ｂ₈、およびＢ₉は、それぞれ独立して、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン、バリン、もしくはα−ナフチルアラニン、または、それらの相同体もしくは類似体であり；Ｃ₁、Ｃ₂、Ｃ₃、およびＣ₄は、それぞれ独立して、リジンまたはアルギニンであり；そして、Ｄは、セリン、スレオニン、アラニン、グリシン、もしくはヒスチジン、または、それらの相同体もしくは類似体である。そのようなペプチドはアミノ酸残基の特異的な配列を示し、そのため理想化された両親媒性ヘリックスが生ずる。負電荷を有する残基、正電荷を有する残基、および疎水性残基の特異的な配置が、両親媒性ヘリックスの形成、ひいては意図する機能を有するペプチドの形成に重要である。天然のアポリポタンパク質に存在する帯電した残基の配置によって逆転した正および負の残基を有する類似体は、脂質との会合度が低い、または会合しない。上記のペプチドの１８の残基の配列では、正電荷を有する残基（式ＩのＣ群）は４、９、１３、および１５の位置にあり、負電荷を有する残基（式ＩのＡ群）は１、８、１２、および１６の位置にある。疎水性残基（式ＩのＢ群）は２、３、６、７、１０、１１、１４、１７、および１８の位置にある。セリン、スレオニン、アラニン、グリシン、もしくはヒスチジン残基は、５の位置（“Ｄ”）にあるのが好ましい。例えば正電荷を有する位置のような、特別な機能を有する位置に配置するために選択する特異的な残基は、ペプチドの活性に過度の不都合な影響を与えない範囲で変化させてもよい。例えば、負電荷を有する残基であるアスパラギン酸およびグルタミン酸は、負電荷を有する残基が要求される配列の位置のいずれでも置換されてよい。同様に、リジンもしくはアルギニンは正電荷を有する位置のいずれに配置されてもよい。好ましい疎水性残基は、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、およびα−ナフチルアラニンである。好ましいペプチドでは、疎水性残基の位置の多くがα−ナフチルアラニンで占められている。特に好ましい具体例には、以下のような配列がある：後者のペプチドは、Venkatachalapathiら,PROTEINS:Structure,Function,and Ge netics 15 349-359(1993)に記載されるものであり、その内容は、法で認められる最大限の範囲でここに組み込まれる。また、これに対応する遮断されていないペプチド、１８Ａも好ましい化合物である。使用されるアミノ酸は天然に存在する型であってもよく、または、特殊な好ましい性質を供えた合成アミノ酸を使用してもよい。例えば、合成アミノ酸である α−ナフチルアラニンは、天然に存在するいずれのアミノ酸より高度な疎水性を示し、本発明のペプチドに特に有用である。同様に、置換されたアミノ酸であるジメチルリジンは、置換されていないリジンより高い正電荷を有し、ある種の具体例に好ましい。従って、対象のペプチドに必要とされる、天然に存在するアミノ酸の有用な類似体もしくは相同体の置換も企図される。Ｄ−またはＬ−型のアミノ酸は、いずれも本発明への使用に好適である。Ｄ−アミノ酸の利点となりうる点は、それらを含有するペプチドおよびタンパク質は腸内で酵素的な加水分解を受ける傾向が低いことである。上記で予期されるように、Ｃ−またはＮ−末端のアミノ酸は、干渉作用を有しないように適当に遮断、あるいは誘導体化されていてもよい；例えば、Ｎ−末端のアミノ酸はアセチル化されていてもよく、また、Ｃ−末端のアミノ酸はアミド化されていてもよい。好ましいペプチドＡｃ-18 Ａ-ＮＨ₂のような、Ｎ−および／またはＣ−末端のこのような遮断は、脂質の存在下でα−ヘリックスを安定化する。上記の好ましいペプチドの機能性の両親媒性ヘリックスは１８個のアミノ酸配列からなるが、１８個のアミノ酸残基のペプチドのいずれの末端への付加も、ヘリックスの形成能に実質的な影響を与えることなく実施されてもよい。例えば、ヘリックス末端の影響を最少限度にするために、基本的な両親媒性ペプチド鎖のそれぞれの末端にトリペプチド伸長鎖を付加してもよい。複数の両親媒性ヘリックス領域も有用である。また、例えばプロリンで結合する二つの１８残基ペプチドからなる３７残基のペプチドも、リン脂質と円盤状の複合体を形成し、ＨＤＬ由来の天然アポタンパク質の代替として使用できる。しかしながら、本概要では、適当なヘリックスの形成には、１８残基のユニットが一般に重要であると考えられる。例えば配列の１０番目の位置のアミノ酸が欠失すると、極性−非極性の境界面が１００°回転し、そのため、本質的にＨＤＬ由来の天然アポタンパク質と代替できないペプチドとなる。その一方で、両親媒性ヘリックスの一部（例えばＡ₄−Ｂ₈−Ｂ₉残基）が欠失していても有用かつ機能的な分子もある。例えばＡｃ-15Ａ-ＮＨ₂で、Ａｃ-18Ａ-ＮＨ₂の15個のＮ− 末端アミノ酸を含有し、その構造は以下の通りである：Ａｃ-15Ａ-ＮＨ₂は、刷子縁膜小胞モデルで測定したところ、Ａｃ-18Ａ-ＮＨ₂の８５％のオレイン酸コレステロール取り込み阻害活性を示した。上記のペプチドは、単純な、および、複雑な低分子量タンパク質を合成するために現在可能な、かなりの数の技術によって合成してもよい。概して言えば、これらの技術には連続的により大きな分子を生成する、アミノ酸の逐次付加による段階的な合成法がある。アミノ酸は、一方のアミノ酸のカルボキシル基および他方のアミノ酸のアミノ基間を縮合してペプチド結合を生成することにより、結合される。この反応を制御するためには、一方のアミノ酸のアミノ基および他方のアミノ酸のカルボキシル基を遮断する必要がある。遮断基は、ラセミ化もしくは生成したペプチド結合の加水分解によって、ポリペプチドへ不都合な影響を及ぼすことなく、容易に除去できるものを選択すべきである。ある種のアミノ酸はチロシンの水酸基のような官能基が付加されている。これらの付加基は、通常、ペプチド結合を形成するための目的の縮合に影響を及ぼすことのないよう、容易に除去できる遮断基で遮断する必要がある。あらゆる種類のポリペプチド合成法が存在し、またあらゆる種類の遮断試薬が考案されてきた。これらの方法のほとんどは本発明のペプチドに適用できる。対象となるペプチドの好ましい合成法はメリフィールド法である。この方法では、アミノ酸をエステル結合により樹脂粒子に結合させ、伸長する鎖に保護されたアミノ酸を逐次付加することにより、段階的にペプチドを生成させるものである。一般的な方法はよく知られており、多くの論文に記載されている；例:Merrifiel d,Ｒ.Ｂ.,Jour.Amer.Chem.Soc.96 2986-2993,(1964)。しかしながら、既知の方法の改良法では、固相からペプチドを遊離させるために通常のＨＦ−段階を使用せず、代わりに、酸のドナーとしてギ酸を使用する転移型水素付加法を使用する。この方法によれば、リジンのε−ＮＨ₂基からの保護基の脱離、チロシンからのベンジルエステルの脱離とともに、ほぼ純粋なペプチドが遊離される。本発明で企図されるもう一つの可能性は、例えば当該分野で知られる方法による、非ペプチド結合によるアミノ酸残基の結合である。この方法により、腸内での酵素的な加水分解が低減される可能性がある。さらに一般的には、本発明に使用される天然のアポタンパク質は、上記のように、天然物（例えば血清）からの単離、または、組換えＤＮＡ技術もしくはペプチド合成のような他の方法によって調製してもよい。アポタンパク質はタンパク質的に等質な状態（調製品中に他のタンパク質が存在しないという意味で）に単離されるのが好ましいが、必ずしもその必要はない；さらにそれらは、完全に等質な状態（有意な量の他の分子が全く存在しないという意味で）に単離されてもよいが、必ずしもその必要はない。in vivoでは脂質がアポタンパク質と自然に会合するので、タンパク質的に等質な単離が、最適な戦略であるかも知れない。実際、脂質と会合したapo Ａ-1は脂質と会合していない分子より活性が高いため、好ましいということが見出されている。脂質との会合は自然に起こるものでもよく、その場合アポタンパク質を天然のリポタンパク質の対部分として投与してもよい。しかしながら、非天然のリポタンパク質と部分的に会合した（または会合していない）アポタンパク質、および、場合により会合したアポタンパク質もまた有用である。組換えＤＮＡ技術を、いずれの好適なホストにおけるアポタンパク質を生成するために使用してもよい。いくつかのアポタンパク質のタンパク質およびＤＮＡ配列がこれまで確認されてきており、以下に標本を示すが、リストは総合的なものではない：完全なリストは疑問符（query）“apo”を使用してＮＩＨＥＮＴＲＥＺ分子生物学データベースで照会できる。存在する配列の情報により、標準的な方法でまだクローニングされていないアポタンパク質の遺伝子（ｃＤＮＡまたはゲノムとして）をクローニングすることが可能となる。組換えをしたアポタンパク質、他のタンパク質、もしくはペプチドの発現は、それが微生物（例えば大腸菌のような細菌、またはサッカロミケスセレビジア（ Saccaromyces cerevisiae）のような真菌）であろうと昆虫または哺乳動物であろうと、いかなる好適なホストで行われてもよい。使用するホストによって、翻訳後の修飾（例えばグルコシル化）の種類および程度は、天然物と同一であっても、相違しても、または、修飾が行われなくてもよい。いかなる機能性アポタンパク質も、それが翻訳後に天然物に忠実に修飾されるかされないかに関わらず、本発明に有用である。本発明の実施にあたり、１あるいはそれ以上の異なる分子を投与してもよい。実際、ある種の天然のリポタンパク質（カイロミクロン、カイロミクロンレムナント、ＶＬＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬ、およびＨＤＬを含む）を投与する場合、１種類以上の型のアポタンパク質が存在する；例えば、上記のように、apo Ａ-1およびapo Ａ-2はＨＤＬと共に投与してもよく、apo Ａ−1、Ａ-2、Ａ-4、およびＢ- 48はカイロミクロンと共に投与してもよい。本発明がペプチドおよびタンパク質の使用に制限されるものではないことは、理解されるところである。本発明はむしろ、好適なディメンション、ジオメトリー、および極性を有する、あるいは、そのような部分を有する、いかなる分子の使用も包含するものである。糖、脂質、もしくは他の生体物質に基づく分子のように、合成した疑似ペプチドもしくは他の有機分子も有用である。本発明に有用な分子は、いずれかの好適な経路による投与のために、しばしば製薬学的もしくは獣医学的に使用できる担体と共に処方してもよい。そのような製剤は本発明の第三の観点である。非経口投与のための製剤は通常無菌である。非経口投与に適する薬剤には、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤、および製剤を目的の被検体の血液と等張にするための溶質を含有する、水溶性および非水溶性の無菌注射液がある；懸濁剤および増粘剤を含有する水溶性および非水溶性の懸濁液もまた、本発明の範囲に含まれる。製剤は、例えば密封されたアンプルおよびバイアルのような、一回の投与量ごとの容器または複数の投与量分の容器に封入してもよく、そして、凍結乾燥した状態で保存してもよく、その場合、例えば注射には水のような、無菌の液体担体を使用する直前に添加すればよい。即席の注射溶液および懸濁液を無菌の粉末、顆粒、および錠剤から調製してもよい。しかしながら、本発明に有用な分子は腸管から、特に経口で投与されるのが好ましい。なぜなら、本発明におけるそれらの役割は、腸からの取り込みを防止する、あるいは少なくとも阻害することだからである。経口および他の腸溶性の製剤は無菌である必要がなく、一回の投与量または複数回分の投与量の形態であってもよい。経口製剤の剤形は、粉末、顆粒、錠剤、カプセル（例えば硬質もしくは軟質のゼラチンカプセル）、もしくはトローチ剤のような固体、または、シロップもしくはエリキシルのような液体であってもよい。増量剤および／または担体も同様に存在してもよく、医薬製剤の分野に精通する者は、必要もしくは好ましいと思われる、付加的な、もしくは代替の賦形剤を提供することができる；香味料がその一例である。経口投与のための製剤はいずれも、胃もしくはそれと隣接する小腸部分におけるアポタンパク質の消化を防止もしくは緩和することによって小腸への到達を助勢するために、腸溶耐性を有するように処方してもよい。錠剤もしくはカプセルは、例えば従来法により、腸溶性の物質でコーティングしてもよい。液体製剤は、トリグリセリド媒体鎖のような好適な試薬を含有させる、もしくは共に投与することにより、効果的に腸溶耐性をもたせてもよい。経口製剤以外の腸溶性製剤には直腸製剤があり、それは坐薬の形態であってもよい。坐薬は一般にココア脂のような坐薬基剤を含有している。ここでもまた、医薬製剤の分野に精通する者によって、活性成分を含有する製剤を慣例に従って調製してもよい。予防もしくは治療において投与されるアポタンパク質もしくは他の活性分子の量は、医師によって管理される。日常的な臨床試験により最適量が決定される。本発明で必要なのは、有効な投与量のみである。しかしながら、指標のために記載するなら、in vitroの実験では、腸内の局部濃度が１から５μＭとなるのに十分な量のアポタンパク質（アポタンパク質Ａ-1として測定）を投与すればよいことが示唆された；これ基準にすると、１から１０μＭのapo Ａ-1を投与してもよく、最適なのはおそらく２から５μＭの範囲内である。他の活性分子を、上記の範囲内、または、有効かつ十分許容できるように決定した他の投与量で投与してもよい。本発明は、家族性の、または食餌により誘発された、いずれの原因による高コレステロール血症もしくは他の高脂血症の予防もしくは治療にも有用である。どちらも経口投与が好適と考えられる。従って本発明は、経口投与（または他の腸管投与）が可能な、アテローム性動脈硬化症の治療法もしくは予防法を提供する。コレステロールの供給は、内生コレステロールの生合成および外生コレステロールの腸からの取り込み間のバランスに依存しているので、コレステロール生合成阻害剤と共に投与するのが好ましい。コレステロール生合成阻害剤を本発明に有用なアポタンパク質もしくは他の分子と共に処方してもよいが、それは必須のことではない：別々に、もしくは逐次投与してもよく、上記の方法を含む好適な方法のいずれかを使用して独立して処方してもよい。本発明の第四の観点により、高コレステロール血症もしくは他の高脂血症の予防もしくは治療、および／または、肥満の予防もしくは治療における、同時投与、個別投与、もしくは逐次投与のための、上記に定義した両親媒性部分を有する分子およびコレステロール生合成阻害剤を含有する生産物を提供する。コレステロール生合成阻害剤は、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤であってもよい。スタチンはそのような化合物の例である。特に興味深いＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤には、天然の発酵生成物であるコンパクチンおよびメビノリン（ロバスタチンとして知られる）、ジヒドロコンパクチン、ジヒドロメビノリン、エプタスタチン、米国特許ＵＳ-Ａ-4293496号に開示されている半合成のメビノリン類似体、および、米国特許ＵＳ-Ａ.4444784号、4661483号、4668699号、および4 771071号に開示されている化合物（シンバスタチンを含む）、さらに、国際特許公開ＷＯ9100280号およびＷＯ9115482号に開示されている化合物がある。一種あるいはそれ以上のコレステロール生合成阻害剤を使用してもよい。必要により、コレスチラミンのような胆汁酸マスキング剤が含有されるか、または少なくとも付加的に投与されてもよい。しかしながら、本発明の利点の一つはそれらの使用を行わない、もしくは少なくとも低減することであるので、そのような試薬はしばしば含有しない。本発明のそれぞれの観点の好ましい特性は、必要な変更を加えることにより、他の観点にも当てはまる。本明細書中に引用される全ての特許および論文は、法で認められる最大限の範囲でここに組み込まれる。本発明について、以下の実施例で図示する。実施例中、種々の略号を使用するが、それらの意味は以下の通りである：ａｐｏＡ−１アポタンパク質Ａ−１（またはＡ−Ｉ）ａｐｏＡ−２アポタンパク質Ａ−２（またはＡ−II）ＢＢＭ刷子縁膜ＢＢＭＶ刷子縁膜小胞ＤＭＰＣジミリストイルホスファチジルコリンＥＤＴＡエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩ＦＨ家族性高コレステロール血症ＨＤＬ高比重リポタンパク質ＬＤＬ低比重リポタンパク質ＰＡＧＥポリアクリルアミドゲル電気泳動ＰＣホスファチジルコリンｒｐｍ一分間の回転数ＳＤＳドデシル硫酸ナトリウムＳＵＶ小型単層小胞（small unilamellar vesicles）ＴＣＡトリクロロ酢酸Ｔｒｉｓトリスヒドロキシメチルアミノメタンまた、実施例は付随する図と関連しているが、その中で：図−１に、一部精製したステロール取り込み阻害タンパク質のＰＢＥ９４による等電点クロマトグラフィーを示す。条件は実施例１に記載する。活性ピークは画分２８に溶出した。タンパク質濃度はPierce社ＢＣＡ^*タンパク質アッセイ試薬で測定した。四角はタンパク質の量、菱形は阻害活性を示す。図−２に、実施例１に記載するＰＢＥ９４カラムから溶出した画分のＳＤＳ１５％ＰＡＧＥを示す。電気泳動はMini-Protean II Dual Slab Cellで、使用説明書に従って実施した。ゲルは銀で染色した。標準タンパク質の電気泳動の移動度を、その分子量（ｋＤａ）と共に、ゲルの両側に付した。Ａｐ：ＰＢＥ９４カラムに適用した、一部精製したステロール取り込み阻害タンパク質。ＦＴ：未吸着画分。１１−４２：ＰＢＥ９４カラムから溶出した画分。それぞれのレーンの４５から６６ｋに存在する二重のバンドは銀染色により生じたものである。図−３の柱状グラフは、実施例３に記載する条件下での、ウサギのＢＢＭＶ（受容体）による、１ｍｏｌ％の標識したコレステロールを含有する卵ＰＣのＳＵＶ（ドナー）からのコレステロールの取り込みに対する、異なる型のアポタンパク質Ａ−１の効果を示すものである。バーは阻害剤が存在しない場合のコレステロールの取り込みに対するコレステロール取り込みの阻害率（％）を示す。上部の黒い部分は３つの異なる測定値の標準偏差を表す。ａｐｏＡ−Ｉ：ヒトのアポタンパク質Ａ−１。ａｐｏＡ−１／ＤＭＰＣ：ＤＭＰＣ二重層に再び取り込んだヒトのアポタンパク質Ａ−１（２．５ｍｇＤＭＰＣ／ｍｇａｐｏＡ−１）。ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４：ＰＢＥ９４の等電点カラムクロマトグラフィーの画分２８に溶出した精製された阻害剤。ＨＤＬ₃：ヒトの高比重リポタンパク質（密度ｄ＝１．１２５−１．２１ｇ／ｍｌ）。図−４Ａに、阻害剤のタンパク質量に対する、ウサギのＢＢＭＶ（受容体）による、１ｍｏｌ％のオレイン酸コレステロールおよび痕跡量の［³Ｈ］−コレステリルオレイルエーテルを含有した卵ＰＣのＳＵＶ（ドナー）からのオレイン酸コレステロールの取り込みの服量反応を示す。菱形：ヒトアポタンパク質Ａ−１による阻害。四角：ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４による阻害。エラーバーは３つの独立した測定値の標準偏差を示す。図−４Ｂに、図−４Ａと同様に、ヒトのａｐｏＡ−１、ヒトのａｐｏＡ−２、およびヒツジのＨＤＬの濃度と阻害効果の相関を示した。図−５に、正常なヒトの十二指腸から調製したＢＢＭＶによる、阻害剤非存在下（●）および６０μＭのＡｃ−１８Ａ−ＮＨ₂の存在下（■）でのコレステロールの取り込みを示した。１ｍｏｌ％の［¹⁴Ｃ］コレステロールおよび０．２５ｍｇ脂質／ｍｌのＢＢＭＶを含有する０．０１ｍｇ脂質／ｍｌのリン脂質小胞をインキュベートし、コレステロールの取り込みを実施例７に記載する方法で測定した。Ａｃ−１８Ａ−ＮＨ₂をドナーおよび受容体の小胞の懸濁液に添加した。データの点は３つの測定値の平均値±標準偏差を表す。破線はコンピューター処理による一次指数平滑（single-exponential computer fits）を表す。図−６に、正常（●）およびリポタンパク質欠損症（○）のＢＢＭＶによるタンパク質介在型のコレステロールの取り込みに対するＡｃ−１８Ａ−ＮＨ₂の濃度の影響を示した。リン脂質小胞からの［¹⁴Ｃ］コレステロールの取り込みを、天然およびプロテイナーゼＫ処理ＢＢＭＶを使用し、種々の濃度のＡｃ−１８Ａ −ＮＨ₂の存在下で測定した。天然およびプロテイナーゼＫ処理ＢＢＭＶによるコレステロールの取り込みの相違を、タンパク質介在型のコレステロールの取り込みとみなす。実験条件は実施例７に記載した；インキュベートは２０分間行った。正常なＢＢＭＶのデータの点は３つの測定値の平均値±標準偏差で表し、破線はRodbardら,Methods Enzmol.37 3-22(1975)に従って実験データに適合させた曲線を表す。実施例（Nutfield、イギリス）、マウスモノクローナル抗ヒトアポリポタンパク質Ａ− １抗体(非複合型)、およびＢＣＡ^TMタンパク質アッセイ試薬はPierce社(Lausann e、スイス)、コレステロール（純度≧９９％）およびタウロコール酸ナトリウム（純度≧９７％）はFluka社（Buchs、スイス）、オレイン酸コレステロール（純度≧９８％）、オレイン酸（純度＝９９％）、およびヤギ抗マウス免疫グロブリンＧ（アルカリホスファターゼ複合体）はSigma社（Buchs、スイス）、使用した全ての放射性薬品はAmersham社（Bucks、イギリス）、ポリプロピレン低領域分子量スタンダード、および３０％アクリルアミド／ビス溶液はBioRad L aboratories社（Glattbrugg、スイス）よりそれぞれ購入した。他の全ての薬品は入手可能な最高品質のものを使用した。水は常に２回蒸留した。凍結したヒツジの血清はバーゼル免疫研究所（Basle、スイス）より入手し、使用前に−８０ ℃で保存した。ヒトのアポタンパク質Ａ−１およびＡ−２、そしてヒトのＨＤＬ₃ はペンシルバニア医科大学（Philadelphia,ＰＡ、米国）のDr.Ｍ.Ｃ.Phillips 氏より享受した。実施例１：コレステロール取り込み阻害剤の単離ステロールの取り込み活性の阻害は、ドナーとして１ｍｏｌ％の［³Ｈ］−コレステロールを含有する卵ＰＣのＳＵＶ、受容体としてウサギのＢＢＭＶを使用して、交換反応で測定した。ウサギのＢＢＭＶはHauserら,Biochimica et Bioph ysica Acta 602 567-577(1980)に従って調製した。痕跡量のコレステロールおよびコレステリルオレイルエーテルを個々に含有した卵ＰＣのＳＵＶは、前述のように（Thurnhoferら,Biochimica et Biophysica Acta 1024 249-262(1990)）、トリス／ＮａＣｌ（５０ｍＭトリス（ｐＨ＝７．４）、１５０ｍＭＮａＣｌ、０．２％ＮａＮ₃）に分散させた脂質のチップソニケーション（tip-sonicatio n）により調製した。トリス／ＮａＣｌに分散したドナーおよび受容体を、Beckm an社ＡＩＲＦＵＧＥ^TMにより１０００００ｇで、４℃において２分間、遠心分離した。受容体の分散液から得られたペレットを、最終濃度が１．７ｍｇタンパク質／ｍｌとなるよう、トリス／ＮａＣｌおよび同じ緩衝液に溶解した種々の量の阻害活性物質に再び懸濁した。この懸濁液を、ドナー分散液の上清(上部８０％) の一定画分と混合し、この時点を０分とした。混合液中のドナーの最終濃度は０．２ｍｇ総脂質／ｍｌであった。混合液を２５℃で２０分間インキュベートし、２倍量のトリス／ＮａＣｌでサンプルを希釈して交換反応を停止させ、４℃において２分間、１００，０００ｇのエアフュージで遠心分離してドナーと受容体を分離した。ドナー小胞を含有する上清およびＢＢＭＶ（受容体）を含有するペレットの放射活性を、Beckman社ＬＳ 7500シンチレーションカウンターを用いて測定した。結果は、阻害活性物質の非存在下での受容体によるステロールの取り込みに対する、阻害活性物質の存在下での取り込みの百分率として表した。阻害活性物質はヒツジの血清から単離した。血清を硫酸デキストランを用いて以下のように分画した：１００ｍｌの血清を解凍し、０．１５ＭＮａＣｌに溶解した１０％デキストラン硫酸ナトリウム０．５ｍｌ、および１ＭＭｎＣｌ₂ ５ｍｌと室温で混合した。特に記載のない限り、全ての操作は室温で行った。直ちに沈澱が開始し、サンプルを６０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して完了し、上清Ｓ１およびペレットＰ１を得た。Ｓ１を回収して、６ｍｌの１０％硫酸デキストラン溶液および１５ｍｌの１ＭＭｎＣｌ₂と混合した。混合液を２時間インキュベートし、２００００ｇで３０分間遠心分離した。上清（Ｓ２）をデカントした。ペレット（Ｐ２）を洗浄するために、０．１％硫酸デキストランおよび０．１ＭＭｎＣｌ₂を含有する５０ｍｌのトリス／ＮａＣｌに再び懸濁し、上記のように遠心分離した。上清（Ｓ３）を廃棄し、ペレット（Ｐ３）を、１％ＮａＣｌを含有する２％クエン酸ナトリウム１０ｍｌに分散させ、撹拌しながら１ＭＮａＯＨを滴下してｐＨを８に調整した。混濁した分散液を６０００ｒｐｍで１０分間遠心分離してＭｎＯを除去した。上清（Ｓ４）を回収した。Ｐ１を２ｍｌの１０％ＮａＨＣＯ₃に再び溶解した。ＭＳＥスウィング式遠心分離器を使用し、５００ｇで２分間遠心分離して、生成したＭｎＣＯ₃を除去した。上清（Ｓ５）を回収し、１００ｍｌの５０ｍＭトリス（ｐＨ７．４）および２．５ｍｌの２ＭＭｇＣｌ₂を添加して沈澱を生成し、６０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。ペレット（Ｐ６）を２ｍｌの５％ＮａＣｌに再び懸濁し、上記のように、２回あるいはそれ以上、再沈澱させた。最終ペレット（Ｐ７）を１．５ｍｌの１０％クエン酸ナトリウムに懸濁し、１％ＮａＣｌを含有するトリス（ｐＨ７．４）に透析してＭｇ²⁺を除去した。Ｓ２、Ｓ４、および透析したＰ７を１％ＢａＣｌ₂、１％ＮａＣｌに透析し、６０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して沈澱した硫酸デキストランのバリウム塩を除去し、さらにトリス／ＮａＣｌに透析した。タンパク質濃度および阻害活性を測定し、結果の概要を表−１に示す。表−１の注釈；ヒツジ血清の硫酸デキストラン分画：ヒツジの血清を、本実施例に記載したように、硫酸デキストランで逐次分画した。タンパク質濃度はPierce社のＢＣＡ^TMタンパク質アッセイ試薬で測定した。阻害活性は、受容体によるステロールの、阻害剤非存在下での取り込みに対する阻害剤存在下での取り込みの百分率と定義し、任意単位（ａｕ）で表示した。括弧内の数値は、同量のヒツジ血清に対する百分率である。阻害活性のほとんどを含有するＳ４を、疎水相互作用クロマトグラフィーによりさらに精製した。カラム（内径＝２．８ｃｍ）に４０ｍｌのPhenyl Sepharose 6 Fast Flowを充填し、２ＭＮａＣｌを含有する５０ｍＭトリス（ｐＨ７．４）で平衡化した。クロマトグラフィーは流速４ｍｌ／ｍｉｎで実施した。十分量の固形ＮａＣｌをＳ４（６００ｍｇタンパク質）に添加し、濃度を２ＭＮａＣｌとした。同緩衝液で未吸着タンパク質を溶出した。ＮａＣｌ濃度を０．１５Ｍまで低下させながら逐次カラムを洗浄し（画分１）、水（画分２）、および１５％エタノール（画分３）で溶出した。タンパク質濃度および阻害活性を測定し、結果の概要を表−２に示した。表−２の注釈；Ｓ４の疎水相互作用クロマトグラフィー：ヒツジ血清の硫酸デキストラン分画により得てステロール取り込み阻害活性を高めた画分Ｓ４を、本実施例に記載した、Phenyl Sepharose 6 Fast Flowを使用した疎水相互作用クロマトグラフィーでさらに精製した。タンパク質濃度をPierce社のＢＣＡ^TMタンパク質アッセイ試薬で測定した。阻害活性は、アクセプターによるステロールの、阻害剤非存在下での取り込みに対する阻害剤存在下での取り込みの百分率と定義し、任意単位（ａｕ）で表示した。括弧内の数値は、同量の画分Ｓ４に対する百分率である。画分２は最終的に、等電点クロマトグラフィーにより精製した。カラム（内径＝１ｃｍ）に２０ｍｌのＰＢＥ９４を充填し、２５ｍＭイミダゾール−ＨＣｌ（ｐＨ７．３）で平衡化した。クロマトグラフィーは流速０．５ｍｌ／ｍｉｎで実施した。画分２（３４ｍｇタンパク質）を適用し、２８０ｎｍでの吸収がベースラインに到達するまでカラムを洗浄した（画分ＰＢＥ−ＦＴ）。ＰＯＬＹＢＵＦＦＥＲ 74を水で１：８まで希釈するリニアｐＨグラジエントによりタンパク質を溶出し、ＨＣｌを用いてｐＨ＝４．０に平衡化した。８ｍｌの画分を回収した。画分のタンパク質および阻害活性を測定する前に、２．０ｍｌのＳＥＰＨＡＤＥＸＧ-50を充填しトリス／ＮａＣｌで平衡化したポリプロピレンＥＣＯＮＯ-ＣＯＬＵＭＮに０．５ｍｌの画分を適用して、ＰＯＬＹＢＵＦＦＥＲ74を除去した。タンパク質および阻害活性の回収率はそれぞれ１００％および８２％であった（図 −１）。画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、図−２に示した。実施例２：精製した阻害剤のアポタンパク質Ａ−１としての性状決定実施例１に記載したＰＢＥ９４カラムから得た画分２８（ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４）の物理的性質を表−３に示す。表−３の注釈；精製した阻害剤（ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４）の物理的性質：ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４の等電点はＰＢＥ９４カラムからの溶出物のｐＨとして測定し、分子量はＳＤＳ−ＰＡＧＥまたは質量分析法(ＭＳ)により測定した。Chapman,Academic Pre ss,Inc.San Diego,New York,Boston,London,Sydney,Tokyo,Toronto 70-143(1986 )によるヒトおよびウサギのａｐｏＡ−１の値を比較のため併記する。ヒツジのａｐｏＡ−１の性状決定はこれまで報告されていないので、ヒトおよびウサギのａｐｏＡ−１の物理的性質を比較のため報告する（Chapman,Academic Press,Inc.San Diego,New York,Boston,London,Sydney,Tokyo,Toronto 70-143( 1986)）。ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４のＮ−末端アミノ酸分析を実施した。ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４の最初の２９のアミノ酸は、ラットのａｐｏＡ−１と７９．３％、ウサギのａｐｏＡ−１と６９．０％、ウシのａｐｏＡ−１と８６．２％、そしてヒトのａｐｏＡ−１と６５．０％の同一性を示した。ウェスタンブロッド法により、ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４をマウスモノクローナル抗ヒトａｐｏＡ−１抗体と交差反応させた。ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４は、タンパク質ｍｇあたり０．２６ｍｇの総コレステロール（遊離型およびエステル化型）を含有し、密度ｄ＝１．２１ｇ／ｍｌのＮａＢｒ溶液での遠心分離に対して浮遊していた。これは高比重リポタンパク質の浮遊密度である。ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４をNicholsらの方法（Nicholsら,Biochimica et Biophysica Acta 446 226-239(1 976)）に従ってグアニジンＨＣｌ処理した後、ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４を脱脂したところ、ヒトのａｐｏＡ−１と同様の性質を示した。阻害活性がタンパク質によるものであることを証明するために、ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４およびヒトのａｐｏＡ−１（コントロールとして）を、１０％トリクロロ酢酸で沈澱させるか、または５分間の煮沸および５分間の冷却を４回繰り返した。変性したタンパク質を遠心分離により除去し、上清に残存するタンパク質および阻害活性を測定した（表−４）。表−４の注釈；阻害活性物質の変性：阻害活性物質を、本実施例に記載した、１０％ＴＣＡ処理または４サイクルの煮沸／冷却処理により変性させた。遠心分離により変性タンパク質を除去した後の上清に残存するタンパク質およびステロール取り込みの阻害活性の百分率をここに示す。実施例３：ウサギＢＢＭＶによるコレステロールの取り込みに対するａｐｏＡ− １およびａｐｏＡ−２の影響ドナーであるＳＵＶからのウサギのＢＢＭＶによるステロール（遊離またはエステル化されたコレステロール）の取り込みを、実施例１に記載したように、それぞれ２０μｇの、ヒトａｐｏＡ−１、ＤＭＰＣの二重層に取り込まれたヒトａｐｏＡ−１（２．５ｍｇＤＭＰＣ／ｍｇａｐｏＡ−１）、ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４、およびヒトＨＤＬ₃の存在下で測定した：図−３に、（ａ）ヒトａｐｏＡ−１；（ｂ）Brouillette & Anantharamaiah Biochim.Biophys.Acta 1256 103 -109(1995)に従って再構成したヒトａｐｏＡ−１およびＤＭＰＣのリポタンパク質複合体（１：２．５＝重量比）；（ｃ）実施例１記載の方法に従って精製したヒツジａｐｏＡ−１；および（ｄ）密度範囲ｄ＝１．１２５−１．２１ｇ／ｍｌのヒトＨＤＬ₃の存在下でのコレステロール取り込みの阻害を柱状グラフで示す。コレステロールの吸収は、ドナーとして１ｍｏｌ％の標識したコレステロールを含有する卵ＰＣのＳＵＶ、受容体としてウサギの小腸のＢＢＭＶを使用し、阻害剤の非存在下および存在下で、２５℃で測定した。５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．４）、０．１５ＭＮａＣｌ、０．２％ＮａＮ₃に分散したドナーおよび受容体を混合して、最終濃度をそれぞれ０．０５ｍｇ総脂質／ｍｌおよび１．７ｍｇタンパク質／ｍｌとした。これら全てのサンプル中のａｐｏＡ−１の量は２０μｇタンパク質／ｍｌに保持した。ａｐｏＡ−１存在下での阻害を、阻害剤非存在下で測定したコレステロール取り込みの％で示した。それぞれのバー上部の黒色部分は３つの測定値の標準偏差を表す。図−４Ａに、種々の量のｆｒ．２８−ＰＢＥ９４（四角）およびヒトａｐｏＡ −１（菱形）の存在下でのステロール取り込み阻害を示す。ドナーとして１ｍｏｌ％のオレイン酸コレステロールおよび痕跡量の［１，２−³Ｈ₂（Ｎ）］−コレステリルオレイルエーテル（３７Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Amersham社、イギリス）を含有する卵のホスファチジルコリンの小型単層小胞を実施例１に記載した方法で調製し、受容体としてＢＢＭＶをウサギの小腸から調製した（実施例１参照）。ドナーおよび受容体は共にトリス／ＮａＣｌ緩衝液(０．０５ＭトリスＨＣｌ（ｐＨ７．４）、０．１５ＭＮａＣｌ、０．０２％ＮａＮ₃)に分散させ、ドナーおよび受容体の最終濃度がそれぞれ０．０５ｍｇ／ｍｌ総脂質および１．７ｍｇタンパク質／ｍｌとなるように、同じ緩衝液で調製したヒトａｐｏＡ−１もしくはヒツジＨＤＬの溶液を混合し（総容量：０．１ｍｌ）、その時点を０分とした。ドナーおよび受容体の懸濁液を阻害剤存在下、２５℃で２０分間インキュベートした後、２倍量のトリス／ＮａＣｌ緩衝液で希釈して反応を停止した。４ ℃で２分間、１１５，０００ｇでエアフュージ（airfuge）遠心分離をしてドナーおよび受容体を分離し、ドナー小胞を含有する上清およびＢＢＭＶを含有するペレットの放射活性を、ＢＥＣＫＭＡＮ^TM ＬＳ 7500シンチレーションカウンターで測定した。脱脂（Scanu & Edelstein,Anal.Biochem.44 576-588(1971)）およびＱ-Sepharose^TMのイオン交換カラムクロマトグラフィー（Weisweiler,Clin. Chim.Acta.169 249-254(1987)）により、ヒトのＨＤＬから純粋なａｐｏＡ−１およびａｐｏＡ−２を調製した。ＰＨＡＳＴ^TM電気泳動システム（Pharmacia社）を使用し、８−２５％のグラジエントゲルのＳＤＳ−ＰＡＧＥで、ａｐｏＡ− １およびａｐｏＡ−２の純度を確認した。どちらのタンパク質も、過負荷したゲルでシングルバンドを生じた。使用に先立ち、３ＭグアニジンＨＣｌでタンパク質を可溶化し、トリス／ＮａＣｌ緩衝液に透析した。図−４Ｂに、種々の濃度のヒトａｐｏＡ−１、ヒトａｐｏＡ−２、ヒツジＨＤＬ、およびヒトＬＤＬと阻害効果の相関を示す。実験条件は図−４Ａに記載した通りである。阻害剤非存在下で測定したＢＢＭＶのコレステロール吸収活性を１００％とし、阻害剤存在下で測定した活性の減量を％として示した。Rodbard & Frazierの方法（Method Enzymol.37 3-22(1975)）により、実験で得た点から実線を得た。ヒツジＨＤＬ（◆）、ヒトａｐｏＡ−１（■）、ヒトａｐｏＡ−２（ △）、ヒツジＬＤＬ（▲）。ＩＣ₅₀は、５０％の阻害が観測された阻害剤濃度である。ＩＣ₅₀値は図−４Ｂに示すグラフのカーブから得られるが、それらを以下の表−５に示す：実施例４：ウサギＢＢＭＶのａｐｏＡ−１とのプレインキュベーションの効果ステロール吸収の阻害が単にａｐｏＡ−１（脂質を含有しないもの、または、ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４の型で一部脱脂されたもの）のドナーとの相互作用だけによるものではないことを証明するために、１．７ｍｇタンパク質／ｍｌのウサギＢＢＭＶを０．４６μＭのヒトａｐｏＡ−１もしくは０．５９μＭのｆｒ．２８−ＰＢＥ９４と共に５分間インキュベートした。分散液をBeckman社のエアフュージで１０００００ｇ、２分間、４℃で遠心分離し、上清を除去し、ウサギＢＢＭＶおよび結合した阻害剤タンパク質を含有するペレットを、等量のトリス／ＮａＣｌに再び懸濁した。ドナーのＳＵＶを添加し、コレステロールの取り込みを実施例２に記載した方法で測定した。０．４６μＭのヒトａｐｏＡ−１もしくは０．５９μＭのｆｒ．２８−ＰＢＥ９４の存在下での取り込み阻害をコントロールとして測定した。取り込み測定に先だって阻害剤タンパク質で処理したウサギＢＢＭＶは、コントロールサンプルで測定した阻害活性の３０±４％を保持していた。実施例５：ドナーとして混合胆汁酸塩ミセルを使用したステロール取り込みの阻害胆汁酸塩ミセルは小腸における最も重要な脂質担体であるため、ドナーとして混合胆汁酸塩ミセルを使用してステロールの取り込み阻害を測定するのは好適である。５０ｍＭのタウロコール酸、６ｍＭのオレイン酸、および２０μＭの標識したコレステロールを含有するドナーミセルを以下のように調製した：脂質をこれらの濃度でクロロホルム：メタノール（２：１）に混合し、有機溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。精製した脂質の薄膜を高真空下で少なくとも１時間乾燥した。乾燥した薄膜を適当な量のトリス／ＮａＣｌに分散し、所望のミセル濃度とした。実施例２記載の方法により調製した受容体であるウサギＢＢＭＶを、１．５６μＭのヒトａｐｏＡ−１もしくは１．９８μＭのｆｒ．２８−ＰＢＥ９４のどちらかと混合した。ドナーである混合ミセルを受容体／阻害剤分散液に添加して最終濃度を５ｍＭのタウロコール酸、０．６ｍＭのオレイン酸、および２μＭの標識したコレステロールとし、混合液を２５℃で１０分間インキュベートした。混合液をBeckman社のエアフュージで１０００００Ｏｇ、２分間、４℃で遠心分離して反応を停止した。ペレットおよび上清の放射活性を測定し、実施例２に記載した方法により結果を評価した。ａｐｏＡ−１とのインキュベーションは、ドナーとしてＳＵＶを使用し、同濃度の阻害剤で測定した阻害活性の１２％であり、ｆｒ．２８−ＰＢＥ９４とのインキュベーションは、ドナーとしてＳＵＶを使用し、同濃度の阻害剤で測定した阻害活性の２３％であった。実施例６：刷子縁膜におけるオレイン酸コレステロールの取り込みに対する種々の天然型および変異型アポタンパク質のＩＣ₅₀値天然型（ヒト）アポタンパク質ａｐｏＡ−Ｉ、ａｐｏＡ−II、ａｐｏＡ−III 、ａｐｏＡ−IV、ａｐｏＣ−Ｉ、ａｐｏＣ−II、ａｐｏＣ−III₁、ａｐｏＣ−II I₂、およびａｐｏＥ、そして、変異型アポタンパク質Ａｃ−１８Ａ−ＮＨ₂のＩＣ₅₀値を測定した。Ａｃ−１８Ａ−ＮＨ₂は：Ａｃ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ− Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ− Ａ１ａ−Ｐｈｅ−ＮＨ₂ であり、Venkatachalapathiら,ＰＲＯＴＥＩＮＳ:Structure,Function,and gene tics 15 349-259(1993)に開示されている。８４．５μｌの緩衝液（０．０５Ｍトリス（ｐＨ７．４）、０．１５ＭＮａＣｌ）に溶解した適当な量の阻害剤を、エッペンドルフチューブ内で、同様の緩衝液に分散した５μｌの分散液および１０．５μｌの受容体分散液（すなわち刷子縁膜小胞（ＢＢＭＶ））と混合し、この時点を０分とした。ドナー小胞の最終濃度は０．１ｍｇ総脂質／ｍｌ、受容体の最終濃度は２ｍｇタンパク質／ｍｌであった。調製した混合液を２５℃で２０分間インキュベートし、エアフュージチューブに入れた氷冷緩衝液１２０μｌにインキュベートした混合液６０μｌを添加し、反応を停止させた。希釈した分散液を直ちに１０００００ｇのエアフュージで、４℃で２分間遠心分離し、ＢＢＭＶからドナー小胞を分離した。二画分の６０μｌのドナー（＝上清）をBeckman社ＬＳ 7500液体シンチレーションカウンターでカウントし、ドナーに残存する放射活性を測定した。ドナー小胞の調製適当な量の脂質をＣＨＣｌ₃／ＣＨ₃ＯＨ（２：１（ｖ／ｖ））に溶解し、溶液をロータリーエバポレーターで乾燥し、さらに残渣を真空で乾燥して、１ｍｏｌ％のオレイン酸コレステロールおよび痕跡量の³Ｈ−コレステロールオレイルエーテルを含有する小型単層卵ホスファチジルコリン（ＰＣ）小胞を調製した。乾燥した脂質の皮膜に適当量の緩衝液を添加し、手で撹拌して分散した。脂質分散液をBrunnerら,J.Biol.Chem.253 7538-7546(1978)に記載されるようにチップソニケーション処理をした。得られた緩衝液に分散したドナーを１０００００ｇのエアフュージで４℃で２分間遠心分離した。遠心分離後のドナー分散液の上部８０％だけを脂質取り込みの実験に使用した。ＢＢＭＶ分散液の調製 Hauserらの方法（Biochim.Biophys.Acta 602 567-577(1980)）に従って、凍結したウサギの小腸からＢＢＭＶを調製した。ＩＣ₅₀値を測定する取り込み実験への使用に先立ち、ＢＢＭＶを洗浄してＢＢＭから遊離した遊離型タンパク質を除去した。このために、エアフュージチューブ内でＢＢＭＶ分散液を緩衝液で１：１に希釈し、１０００００ｇのエアフュージで、４℃で２分間遠心分離した。上清を注意深くデカントし、ペレットを緩衝液で再び懸濁して元のＢＢＭＶ分散液の容量とし、分散液をホモジナイズした。アポリポタンパク質溶液の調製アポリポタンパク質を約１ｍｇ／ｍｌとなるように３ＭグアニジンＨＣｌに溶解し、８ｋＤａを分離する透析チューブを使用して緩衝液に対して徹底的に透析して、アポリポタンパク質の緩衝液溶液を調製した。ＩＣ₅₀値を以下の表−６に示す。実施例７：Ａｃ−１８Ａ−ＮＨ₂に関する更なる実験小胞の調製；ヒトの十二指腸の生検サンプル（それぞれ２０から３０ｍｇの湿組織）を２００μｌの緩衝液（１２ｍＭトリス／ＮａＣｌ（ｐＨ７．２）、３００ｍＭマンニトール、５ｍＭ−ＥＧＴＡ、１ｍＭフッ化フェニルメチルスルホニル）に懸濁し、液体窒素で凍結して、使用まで−８０℃で保存した。Ｍｇ²⁺沈澱によりＢＢＭＶを調製した（Hauserら,Biochim.Biophys.Acta 602 567-577(1980)。Boothら,L ancet 1 1066-1069(1985)に詳細に記載されている）。ＢＢＭＶのプロテイナーゼＫ処理は、ThurnhoferおよびHauserの方法（Biochim.Biophys.Acta 102 4249-262(1990)）に従って実施した。タンパク質の分解処理により、ＢＢＭＶのタンパク質含量および比スクラーゼ活性が〜６０％まで低下した。小型単層リン脂質小胞はチップソニケーションによって調製した（Schulthess,Biochemistr y 33 4500-4508(1994)）。反応速度に関する実験；反応速度に関する実験は報告されている方法に従って行った（Compassi,Bioch emistry 34 16473-16482(1995)、および、Tsoら,Am.J.Physiol.241Ｇ487-497(19 81)）。（Ｉ）１ｍｏｌ％［¹⁴Ｃ］コレステロールを含有する卵ＰＣ小型単層小胞およびＢＢＭＶを共に１０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．２）、０．１５ＭＮａＣｌ、５ｍＭＥＤＴＡに分散し、室温でインキュベートした。設定時間後、Beck man社のエアフュージで１１５０００ｇ、２分間、遠心分離して、リン脂質小胞およびＢＢＭＶを分離した。ペレットおよび上清の一定画分をBeckman社ＬＳ 75 00液体シンチレーションカウンターでカウントし、放射活性を測定した。先の研究(ThurnhoferおよびHauser,Biochemistry 29 2142-2148(1990)；Compassi,Bioc hemistry 34 16473-16482(1995)；および、Schuithess,J.Lipid.Res.37 2405-24 19(1996))で詳細に検討されているように、コレステロール取り込み機構の可能性として、卵ＰＣ小型単層小胞およびＢＢＭＶの拡散は除外した。（II）同様に、ドナーである１ｍｏｌ％［¹⁴Ｃ］コレステロールを含有する卵ＰＣ小型単層小胞、および、受容体である卵ＰＣ／卵ＰＡ（８５：１５（モル比））の小型単層小胞を室温でインキュベートした。設定時間後、インキュベーション混合物の一定画分を、負帯電小胞を保持する、ＤＥＡＥセファロースＣｌ− ＣＢカラムで濾過した。純粋な卵ＰＣ小胞を溶出し、その放射活性を測定した。結果を図−５に示す。実験データを一次指数平滑による交換反応に当てはまる以下の方程式を用いてコンピュータ一処理した：Ｘ＝Ｘ_∞＋［Ｘ₀−Ｘ_∞］ｅ−^k１^[(a+b)/a]t（式中、Ｘ₀、Ｘ、およびＸ_∞はそれぞれ時間０、ｔ、および平衡時の、ドナーにおける標識された脂質の画分を表す）。Ｋ₁は疑似一次反応速度定数であり、ａおよびｂはそれぞれ受容体およびドナーの脂質プールである（McKay,Nature 142 反応速度の測定は阻害剤の存在下でも実施した；合成ペプチドまたはアポリポタンパク質をドナーおよび受容体小胞のサプレッサーに添加した。天然およびプロテイナーゼＫ処理ＢＢＭＶによるコレステロールの取り込みを種々の濃度のＡｃ−１８Ａ−ＮＨ₂の存在下で測定し、天然およびプロテイナーゼＫ処理ＢＢＭＶによるコレステロールの取り込みの相違をタンパク質介在型コレステロールの取り込みであるとして図−６に示した。ＩＣ₅₀値はMethods Enzymol.373-22（19 75）に従って測定した。結果ヒト十二指腸ＢＢＭＶによるコレステロールの取り込みを、Ａｃ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＮＨ₂（Ａｃ−１８Ａ−ＮＨ₂）の組成を持つ両親媒性ペプチドの存在下で測定した。このぺプチドは分類Ａの両親媒性α−ヘリックスを形成し、アポリポタンパク質Ａ− １（ａｐｏＡ−１）の性質との類似性を示した（Methds Enzymol.128 627-647(1 986)）。Ｈ₂Ｎ−末端のアセチル化およびカルボキシル末端のアミド化により、溶液中および脂質結合時のペプチドの螺旋性が増大した（Proteins 15 349-359( 1993)）。Ａｃ−１８Ａ−ＮＨ₂は、タンパク質介在型コレステロールの取り込みを効果的かつ完全に阻害した（図−３および４）。タンパク質介在型コレステロールの取り込みを５０％低下させるのに必要なＡｃ−１８Ａ−ＮＨ₂の濃度（ＩＣ₅₀）は２３±１μＭであった（図−６）。正常およびリポタンパク質欠損症のＢＢＭＶでも同様の阻害が観測された（図−６）。一方、Ａｃ−１８Ａ−ＮＨ₂ は受動的コレステロール輸送に何ら影響を示さなかった。6６０Ｍの濃度でＡｃ −１８Ａ−ＮＨ₂による阻害を受けない天然のＢＢＭＶによるコレステロールの取り込み活性が残存していたのは（図−３の四角）、受動的なコレステロール取り込みのためである。プロテイナーゼＫ−処理ＢＢＭＶによるコレステロールの取り込みは実験誤差範囲内であり、半量期が６．７±１．４ｈであるという特徴があった。また、プロテイナーゼＫ−処理ＢＢＭＶによるコレステロールの取り込みおよびリン脂質小胞間でのコレステロール輸送に対しては、Ａｃ−１８Ａ−ＮＨ₂による阻害効果がないことを証明した（表７）。ペプチドＡｃ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ −Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ −Ａｌａ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂が不活性であることは、両親媒性α−ヘリックスが阻害の基礎となる構造的素因である証拠である。このペプチドは、Ac−１８Ａ−ＮＨ₂と同一のアミノ酸組成であるが、そのアミノ酸配列が無作為でペプチドの両親媒性の性質が失われているという意味で、“スクランブルされたＡｃ−１８Ａ −ＮＨ₂”である。 in vitroで観測される阻害効果の生物学的関連は、Sprague-Dawlyラットの小腸におけるコレステロール吸収が両親媒性素因によって８０％以上まで阻害されうるという、in vivoの実験によって確認される。ａｐｏＡ−１はヒトの血清から十分な量が精製されるので、食餌に添加したこのタンパク質を阻害剤として使用した。得られた実験証拠に基づき、われわれは、コレステロールの取り込みに対する阻害効果は特定の両親媒性分子に限定されないことを主張する。両親媒性化合物の化学的性質は第二の重要度であり、化合物のジオメトリーおよび極性が決定的因子であると考えられる。脂質、タンパク質、もしくは炭水化物のようないかなる種類の生物学的化合物に属する両親媒性化合物も、刷子縁膜によるコレステロールの取り込みを阻害しうるので、ここに示す結果は重要な意味を内包している。実施例８：種々の長さの両親媒性螺旋型ペプチドの阻害効果Ａｃ−１５Ａ−ＮＨ₂、Ａｃ−１２Ａ−ＮＨ₂、およびＡｃ−９Ａ−ＮＨ₂の活性（阻害効果）を測定した。これらのペプチドのアミノ酸配列は以下の通りである：ペプチドが一つ進む（上→下）毎に３個のアミノ酸がＮ−末端から除去されている。上記の４個のペプチドの阻害効果を１２０μｇペプチド／ｍｌで比較した。ＢＢＭＶによる脂質の取り込みは、以下に記載するように、それぞれ１２０μｇペプチド／ｍｌの存在下で測定した。トリス／ＮａＣｌ緩衝液に分散したドナーおよび受容体粒子をBeckman社のエアフュージで１１５０００ｇ、４℃で２分間、遠心分離した。アクセプターの分散液から得たペレットをトリス／ＮａＣｌ緩衝液に再び懸濁した。同じ緩衝液に溶解した種々の量の阻害剤を受容体分散液に添加し、阻害剤含有、もしくは非含有受容体分散液を、ドナー分散液の遠心分離で得た上清の上部８０％と混合し、この時点を０分とした。ドナーの最終濃度は０．０５ｍｇ総脂質／ｍｌ、受容体の最終濃度は５ｍｇタンパク質／ｍｌであった。得られた分散液を２３℃でインキュベートし、設定時間後、２倍量のトリス／ＮａＣｌ緩衝液でインキュベート混合液を希釈してステロールの取り込みを停止した。Beckman社のエアフュージで１１５０００ｇ、４℃で２分間、遠心分離し、ＢＢＭＶをドナーから分離した。ドナーを含有する上清およびＢＢＭＶ（受容体）を含有するペレットの放射活性をBeckman社ＬＳ 7500シンチレーションカウンターで測定した。結果を阻害の％として表し、概要を以下の表−８に示す：Ｎｏ．１および２のペプチドで有用な阻害効果が観測された。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 47/42 Ａ６１Ｋ 47/42 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ヘルムート・ハオザースイス国ツェーハー―8713 ウエリコン, ヘルマン―ヒルトブルンネルヴェーク 25

Claims

【特許請求の範囲】１．腸からのコレステロールまたは他の脂質の取り込みを阻害する薬剤の調製における、１あるいはそれ以上の両親媒性部分を含有する分子の使用。２．高脂血症、特に高コレステロール血症および／もしくは肥満の治療もしくは予防のための腸管投与型の薬剤の調製における、１あるいはそれ以上の両親媒性部分を含有する分子の使用。３．分子が１あるいはそれ以上の両親媒性α−ヘリックスを含有するペプチドもしくはタンパク質である、請求項１もしくは２記載の使用。４．分子がアポタンパク質である、請求項３記載の使用。５．アポタンパク質がアポタンパク質Ａである、請求項４記載の使用。６．アポタンパク質がアポタンパク質Ａ−１である、請求項５記載の使用。７．アポタンパク質がアポタンパク質Ａ−２である、請求項５記載の使用。８．アポタンパク質がアポタンパク質Ａ−４である、請求項５記載の使用。９．アポタンパク質がアポタンパク質Ｂである、請求項４記載の使用。１０．アポタンパク質がアポタンパク質Ｂ−４８である、請求項９記載の使用。１１．アポタンパク質がアポタンパク質Ｂ−１００である、請求項９記載の使用。１２．アポタンパク質がアポタンパク質Ｃである、請求項４記載の使用。１３．アポタンパク質がアポタンパク質Ｃ−１である、請求項１２記載の使用。１４．アポタンパク質がアポタンパク質Ｃ−２である、請求項１２記載の使用。１５．アポタンパク質がアポタンパク質Ｃ−３である、請求項１２記載の使用。１６．アポタンパク質がアポタンパク質Ｄである、請求項４記載の使用。１７．アポタンパク質がアポタンパク質Ｅである、請求項４記載の使用。１８．分子が天然型アポタンパク質の変異体である、請求項３記載の使用。１９．ペプチドもしくはタンパク質が１もしくはそれ以上、しかし８より少ない両親媒性ヘリックスを含有する、請求項３記載の使用。２０．分子が１またはそれ以上の下記の配列のペプチド：Ａ₁−Ｂ₁−Ｂ₂−Ｃ₁−Ｄ−Ｂ₃−Ｂ₄−Ａ₂−Ｃ₂−Ｂ₅−Ｂ₆−Ａ₃−Ｃ₃−Ｂ₇−Ｃ₄ −Ａ₄−Ｂ₈−Ｂ₉ （Ｉ）［式中：Ａ₁、Ａ₂、Ａ₃、およびＡ₄は、それぞれ独立して、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸、またはそれらの相同体もしくは類似体であり；Ｂ₁、Ｂ₂、Ｂ₃、Ｂ₄、Ｂ₅、Ｂ₆、Ｂ₇、Ｂ₈、およびＢ₉は、それぞれ独立して、トリプトファン、フェニルアラニン、アラニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン、バリン、もしくはα−ナフチルアラニン、または、それらの相同体もしくは類似体であり；Ｃ₁、Ｃ₂、Ｃ₃、およびＣ₄は、それぞれ独立して、リジンまたはアルギニンであり；Ｄは、セリン、スレオニン、アラニン、グリシン、もしくはヒスチジン、または、それらの相同体もしくは類似体である；そして、Ａ₄、Ｂ₈、およびＢ₉はオプションである。］を含有する、請求項３、１８、または１９記載の使用。２１．分子がＡｃ−１８Ａ−ＮＨ₂もしくはＡｃ−１５Ａ−ＮＨ₂、またはそのいずれかに相当する遮断されていない、もしくは遮断された型である、請求項２０記載の使用。２２．アポタンパク質が天然物から単離された、請求項４から１７のいずれかに記載される使用。２３．アポタンパク質がタンパク質的に等質な状態に（他のタンパク質が存在しないという意味で）精製された、請求項２２記載の使用。２４．アポタンパク質が完全に等質な状態に（有意な量の他の分子が存在しないという意味で）精製された、請求項２２記載の使用。２５．ペプチドもしくはタンパク質が組換えＤＮＡ技術もしくはペプチド合成によって調製された、請求項３から２１のいずれかに記載される使用。２６．アポタンパク質がリポタンパク質の形態である、請求項４記載の使用。２７．リポタンパク質がカイロミクロンを含有する、請求項２６記載の使用。２８．リポタンパク質がカイロミクロンレムナントを含有する、請求項２６記載の使用。２９．リポタンパク質がＶＬＤＬを含有する、請求項２６記載の使用。３０．リポタンパク質がＩＤＬを含有する、請求項２６記載の使用。３１．リポタンパク質がＬＤＬを含有する、請求項２６記載の使用。３２．リポタンパク質がＨＤＬを含有する、請求項２６記載の使用。３３．分子が、少なくともその一部が非ペプチド結合で結合するアミノ酸残基を含有する、請求項１または２記載の使用。３４．少なくとも一個のアミノ酸がＤ−アミノ酸である、請求項３記載の使用。３５．分子が合成ペプチド疑似体である、もしくはそれを含有する、請求項１または２記載の使用。３６．分子が糖および／または脂質部分を含有する、請求項１または２記載の使用。３７．１もしくはそれ以上の請求項１から３６のいずれかに定義される分子、および、製薬学的もしくは獣医学的に使用できる担体を含有し、腸管投与に適合する製剤。３８．単位投与量の型である、請求項３７記載の製剤。３９．経口投与に適合する、請求項３７または３８記載の製剤。４０．固型である、請求項３７、３８、または３９記載の製剤。４１．腸溶耐性を有するように処方された、請求項３９または４０記載の製剤。４２．直腸投与のために処方された、請求項３７記載の製剤。４３．コレステロール生合成阻害剤を含有する、請求項３７から４２のいずれかに記載される製剤。４４．コレステロール生合成阻害剤が３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素の阻害剤である、請求項４３記載の製剤。４５．ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤がスタチンである、請求項４４記載の製剤。４６．スタチンがシンバスタチンである、請求項４５記載の製剤。４７．高コレステロール血症もしくは他の高脂血症の予防もしくは治療、および／または、肥満の予防もしくは治療における、同時投与、個別投与、もしくは逐次投与のための、請求項１から３６のいずれかに定義した分子およびコレステロール生合成阻害剤を含有する生産物。４８．コレステロール生合成阻害剤が３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素の阻害剤である、請求項４７記載の生産物。４９．ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤がスタチンである、請求項４８記載の生産物。５０．スタチンがシンバスタチンである、請求項４９記載の生産物。５１．１もしくはそれ以上の両親媒性部分を含有する効果的な量の分子を患者もしくは被検体に腸管投与することを含む、高脂血症もしくは高コレステロール血症の治療もしくは予防の方法。５２．１もしくはそれ以上の両親媒性部分を含有する効果的な量の分子を患者もしくは被検体に腸管投与することを含む、肥満の治療もしくは予防の方法。５３．効果的な量のアポタンパク質を患者もしくは被検体に腸管投与することを含む、アテローム性動脈硬化症の治療もしくは予防の方法。