ES2290448T3 - Sistesis de derivados de acidos nucleicos bloqueados. - Google Patents
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Abstract
Un procedimiento para la síntesis de un análogo de LNA de fórmula general IV, Fórmula IV en la que X se selecciona de -CH2-, -NRH-, -O- y -S-; Z se selecciona de - CH2-, -NRH-, -S- y -Se-; B es una base nitrogenada; R3 se selecciona de -RH, -N3, -NRHRH*, -NRHC(O)RH*, -C(O)NRHRH*, -ORH, -OC(O)RH, -C(O)ORH, -SRH, -SC(O)RH y tri(alquil C1-6/aril)sililoxi; seleccionándose independientemente cada RH y RH* de hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y aril-alquilo C1-6 opcionalmente sustituido; A4 y A5 se seleccionan independientemente de alquileno C1-6; y R5 se selecciona de yodo, bromo, cloro, alquil C1-6-sulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro, halógeno, alquilo C1-6, y alquilo C1-6 sustituido con uno o más halógenos; comprendiendo dicho procedimiento las siguientes etapas: tratar un producto intermedio de fórmula general I: Fórmula I en laque X, B, R3, A4 y A5 son tal como se definieron anteriormente; R2 se selecciona de yodo, alquil C1-6-sulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro, halógeno, alquilo C1-6 y alquilo C1-6 sustituido con uno o más halógenos; R3 y R2 pueden formar juntos un epóxido y R4 y R5 independientemente son tal como se definieron para R5 anteriormente; con un nucleófilo seleccionado de halógeno, -N3, -NRHRH*, -SRH, --S, -SeRH, --Se, -NRHC(O)RH*, -SC(O)RH y radicales hidrocarbilo organometálicos, para sustituir R2, y realizar el cierre del anillo entre las posiciones C2'' y C4'' para dar el análogo de LNA de la fórmula IV; o un procedimiento para la síntesis de un análogo de LNA de fórmula general VIII Fórmula VIII comprendiendo dicho procedimiento las siguientes etapas: tratar un producto intermedio de fórmula general IX Fórmula IX con un nucleófilo seleccionado de halógeno, -N3, -NRHRH*, -ORH, -OH, -SRH, --S, -SeRH, --Se, -NRHC(O)RH*, -SC(O)RH y radicales hidrocarbilo organometálicos, para sustituir R2, y realizar el cierre del anillo entre las posiciones C2'' y C4'' para dar el análogo de LNA de la fórmula VIII, en la que X, B, R2, R3, R4, R5, A4 y A5 son tal como se definieron anteriormente y en la que Z se selecciona de -CH2-, -NRH-, -O- -S-, y -Se-.
Description
Síntesis de derivados de ácidos nucleicos
bloqueados.
La presente invención se refiere a una
estrategia novedosa para la síntesis de derivados de ácidos
nucleicos bloqueados, tales como amino-LNA,
tio-LNA, seleno-LNA y
metilen-LNA, que proporciona reacciones con alto
rendimiento modificables a escala utilizando productos intermedios
que también pueden producir otros análogos de LNA tales como
oxi-LNA. La invención se refiere además a una
estrategia novedosa para la síntesis de análogos y precursores de
\alpha-L-LNA.
El catedrático Imanishi (documento WO 98/39352)
y el catedrático Wengel (documento WO 99/14226) inventaron de
manera independiente el ácido nucleico bloqueado (LNA, Locked
Nucleic Acid) en 1997 y el primer monómero de LNA se basó en la
estructura bicíclica
2'-O-CH_{2}-4'
(oxi-LNA). Desde entonces este análogo de LNA ha
mostrado resultados prometedores como candidatos de fármacos
antisentido. También se han sintetizado otros análogos de LNA que
muestran una alta afinidad/especificidad similar por ejemplo,
2'-NH-CH_{2}-4',
2'-N(CH_{3})-CH_{2}-4'
(amino-LNA) (Singh, S. K.; Kumar, R.; Wengel, J. J.
Org. Chem. 1998, 63, 10035-10039; Singh, S. K.;
Kumar, R.; Wengel, J. J. Org. Chem. 1998, 63,
6078-6079), y
2'-S-CH_{2}-4'
(tio-LNA) (Singh, S. K.; Kumar, R.; Wengel, J. J.
Org. Chem. 1998,63, 6078-6079, Kumar, R.; Singh, S.
K et al. Biorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8,
2219-2222). Son cruciales grandes cantidades de
amino-LNA para su uso en antisentido. Parece que la
ampliación a escala del procedimiento descrito previamente de
síntesis de amino-LNA es difícil y se encuentra con
varios problemas importantes.
La primera reacción difícil en el trabajo de
ampliación a escala demostró ser la bencilación regioselectiva de
3-O-bencil-1,2-O-isopropiliden-4-C-hidroximetil-\alpha-D-eritro-pentofuranosa
(Koshkin, A.; Singh, S. K-; Nielsen, P.; Rajwanshi, V. K.; Kumar,
R.; Meldgaard, M.; Olsen, C. E.; Wengel, J. Tetrahedron 1998, 54,
3607-3630) (véase la figura 1, compuesto 1).
Trabajando en el intervalo de 100 g, la reacción
proporcionó una mezcla producto del compuesto 2, el material
1'-bencilado y el dibencilado incluso en condiciones
optimizadas. El rendimiento máximo del compuesto 2 deseado fue del
59% disminuyendo hasta un promedio del 45-50%
comparado con el 71% a menor escala. Además, el compuesto 2 sólo
podía aislarse mediante la tediosa cromatografía de productos que
eluyen muy cerca.
La segunda etapa clave en la estrategia original
que produce problemas durante la síntesis de ampliación a escala es
la doble sustitución nucleófila del
di-O-tosil-nucleósido
5 usando bencilamina para dar el nucleósido 6 (Singh, S. K.; Kumar,
R.; Wengel, J. J. Org. Chem. 1998, 63, 10035-10039).
La reacción a mayor escala (22 g) produjo aparentemente un segundo
producto identificado como el derivado de oxi-LNA.
El producto de amino-LNA
N-bencilado 6 deseado se obtuvo sólo en un 15% junto
con un 13% del subproducto de oxi-LNA. Para
comparación, la reacción da un 52% de nucleósido 6 a una escala de
8 g sin notificarse reacción secundaria (Singh, S. K.; Kumar, R.;
Wengel, J. J. Org. Chem. 1998, 63, 10035-10039).
Aún otro problema que se encuentra parece ser la
desbencilación del nucleósido 6 usando formiato de amonio y Pd al
10%/C en metanol. Parece ser sólo una desbencilación parcial, tal
como se verifica mediante espectroscopía de masas, y el producto 7
resultó ser difícil de aislar a partir de la mezcla de reacción.
La primera síntesis de un nucleósido de
oxi-LNA se realizó mediante un enfoque lineal usando
uridina como material de partida (Obika, S.; Nanbu, D.; Harl, Y.;
Morio, J. A. K.; In, Y.; Ishida, T.; Imanishi, T. Tet. Lett. 1997,
38, 8735-8738) pero en virtud de que es una síntesis
convergente, la ruta desarrollada por Wengel y colaboradores
(Koshkin, A.; Singh, S. K.; Nielsen, P.; Rajwanshi, V. K.; Kumar,
R.; Meldgaard, M.; Olsen, C. E.; Wengel, J. Tetrahedron 1998, 54,
3607-3630; Koshkin, A. A. et al., J. Org.
Chem. 2001, 66, 8504-8512) se convirtió en el
procedimiento de elección para la síntesis de nucleósidos de LNA. El
documento WO 02/28875 describe el uso de reacciones de sustitución
S_{N}2 en la síntesis de análogos de LNA. Sin embargo, las
reacciones de sustitución S_{N}2 mostradas en el documento WO
02/28875 implican dos reacciones independientes; una es una
sustitución nucleófila en la base nitrogenada y la otra es una etapa
de desprotección que facilita cierres de anillos nucleófilos.
Ninguna de las reacciones implica la inversión de la estereoquímica
en el resto de hidrato de carbono.
Amino- y tio-LNA se sintetizaron
originalmente de manera bastante diferente, pero según la presente
invención, hay productos intermedios comunes que pueden usarse para
amino-LNA, tio-LNA,
seleno-LNA,
\alpha-L-LNA así como
metilen-LNA en las últimas fases de la síntesis
global.
Ulrich et al. Indian Journal of
Chemistry, 1989, 28B, 294-296 y Popsavin et
al. Carbo. Res., 1995, 269,343-347) enseñan
ambos la construcción de sistemas bicíclicos sencillos usando un
nucleófilo de azufre pero ninguna de las reacciones implican
nucleósidos.
La presente invención proporciona una estrategia
novedosa para la síntesis de derivados de LNA, tales como
\alpha-L-oxi-LNA,
amino-LNA,
\alpha-L-amino-LNA,
tio-LNA,
\alpha-L-tio-LNA,
seleno-LNA y metilen-LNA.
Los compuestos de la fórmula I son importantes
productos intermedios que pueden hacerse reaccionar con variedades
de nucleófilos que conducen a una amplia variedad de análogos de
LNA, por ejemplo, amino-LNA,
tio-LNA, seleno-LNA y
metilen-LNA.
Un aspecto de la invención se refiere a un
procedimiento para la síntesis de análogos de LNA de la fórmula IV
partiendo de compuestos de la fórmula I, d. reivindicación 1.
Otro aspecto de la presente invención se refiere
a los compuestos (productos intermedios) novedosos de la fórmula I
y IX según se definen en las reivindicaciones 20 y 21.
Todavía otro aspecto de la invención se refiere
a oligonucleótidos que comprenden un compuesto de la fórmula XI,
véase la reivindicación 25.
Las principales ventajas de la presente
invención comprenden lo siguiente:
- \bullet
- se elimina la tediosa separación de regioisómeros,
- \bullet
- se evita la etapa de bajo rendimiento de doble sustitución nucleófila del di-O-tosil-nucleósido usando bencilamina,
- \bullet
- el procedimiento permite la utilización de un producto intermedio de partida que es común para la síntesis de oxi-LNA conocida,
- \bullet
- el procedimiento comprende un producto intermedio novedoso que cuando se hace reaccionar con un nucleófilo apropiado puede producir una variedad de análogos de LNA, es decir, amino-LNA, tio-LNA, seleno-LNA, metilen-LNA y \alpha-L-LNA,
- \bullet
- el procedimiento comprende un procedimiento alternativo para la N-metilación, y evita así metilación en la base nitrogenada,
- \bullet
- emplea reactivos baratos y disponibles comercialmente,
- \bullet
- comprende reacciones modificables a escala que dan acceso a grandes cantidades de fosforamiditas análogas de LNA.
La figura 1 ilustra un procedimiento conocido
para la preparación de amino-LNA según Singh, S. K.;
Kumar, R.; Wengel, J. J. Org. Chem. 1998, 63,
10035-10039.
La figura 2 ilustra el procedimiento
generalizado para la preparación de los análogos de LNA.
La figura 3 ilustra la inversión en C2' para un
compuesto que no tiene una base de pirimidina.
La figura 4 ilustra otra alternativa para la
inversión en C2'.
La figura 5 ilustra la síntesis de un compuesto
preferido de la fórmula VII. El compuesto conocido
1-(2-O-acetil-3-O-bencil-4-C-metansulfoniloximetil-5-O-metansulfonil-\beta-D-eritro-pentofuranosil)timina
(23) se convierte mediante una desacetilación suave, para la
liberación del grupo 2'-hidroxilo, en el compuesto
(24) sin el posterior cierre de anillo que proporciona el esqueleto
de oxi-LNA. Entonces se mesila el grupo
2'-hidroxilo para dar
1-(3-O-bencil-4-C-metansulfoniloximetil-2,5-O-dimetansulfonil-\beta-D-eritro-pentofuranosil)timina
(25). Leyenda: i) amoniaco metanólico al 50%; ii) MsCl,
piridina.
La figura 6 ilustra un ejemplo preferido para la
preparación de dos fosforamiditas de amino-LNA que
son útiles en la preparación de oligonucleótidos. Leyenda: i)
NH_{3} semisat. en MeOH; ii) MsCl, piridina anh., CH_{2}Cl_{2}
anh.; iii) DBU, DMF; iv) acetona, H_{2}SO_{4} 0,1 M; v)
Tf_{2}O, DMAP, piridina anh., CH_{2}Cl_{2} anh.; vi)
NaN_{3}, DMF anh.; vii) PMe_{3}, NaOH (ac.), THF; viii)
CH_{2}O, HCO_{2}H; ix) a) NaOBz, DMF, b) NaOMe; x)
Pd(OH)_{2} al 20%/C, H_{2}, AcOH; xi) DMTCl,
piridina anh.; xii)
NC(CH_{2})_{2}OP(N(iPr)_{2})_{2},
DCl, CH_{3}CN, CH_{2}Cl_{2}. xiii) AC_{2}O, piridina; xiv)
Et_{3}N, 1,2,4-triazol, POCl_{3}, MeCN; xv)
MeCN, NH_{3} sat. ac. 1:1; xvi) BzCl, piridina; xvii) LiOH (ac.),
THF.
La figura 7 ilustra la acilación y alquilación
adicionales del grupo 2'-amino de
amino-LNA.
\newpage
La figura 8 ilustra un ejemplo preferido para la
preparación de una fosforamidita de tio-LNA que es
útil en la preparación de oligonucleótidos. Leyenda: i) Pd/C,
H_{2}, acetona, MeOH; ii) BzCl, piridina, DMF; iii)
H_{2}SO_{4} ac. 0,25 M, DMF, 80ºC; iv) Tf_{2}O, DMAP,
CH_{2}Cl_{2}, 0ºC; v) Na_{2}S, DMF; vi) NaOBz, DMF, 100ºC;
vii) NH_{3}, MeOH; viii) DMT-Cl, piridina; ix)
P(OCH_{2}CH_{2}CN)(N(i-Pr)_{2})_{2},
4,5-dicianoimidazol, CH_{2}Cl_{2}.
La figura 9 Ilustra la síntesis de un análogo de
amino-LNA 33 y un análogo de tio-LNA
60 a partir del producto intermedio clave 31 (un ejemplo preferido
de un compuesto de fórmula I). Leyenda: i) tioacetato de potasio,
DMF, ii) azida sódica en DMF, iii) LiOH en THF, iv) NaOH (ac.),
Me_{3}P, THF.
La figura 10 ilustra la síntesis del
\alpha-L-oxi-LNA A
(63),
\alpha-L-amino-LNA
A (65), así como la síntesis de un epóxido (66) a partir del
producto intermedio clave 62, que se abre con diferentes nucleófilos
para formar una azida (67) o bien un tio-LNA (68).
Leyenda: i) Tf_{2}O, piridina, DCM, ii) LiOH, ac., THF, iii)
NaN_{3}, DMF, iv) NaOH, PMe_{3}, THF, v) MsOH, DCM, vi)
Na_{2}S, DMF.
La figura 11 ilustra un ejemplo preferido para
la preparación de una fosforamidita de
\alpha-L-tio-LNA
que es útil en la preparación de oligonucleótidos. Leyenda: i)
Na_{2}S, DMF, ii) NaOBz, DMSO, 100ºC, iii) MsOH, DCM, iv) LiOH,
ac., THF, v) DMT-Cl, DMAP, piridina vi)
P(OCH_{2}CH_{2}CN)-(N(i-Pr)_{2})_{2},
4,5-dicianoimidazol, CH_{2}Cl_{2}.
La figura 12 ilustra un ejemplo preferido para
la preparación de una fosforamidita de
\alpha-L-LNA-G que
es útil en la preparación de oligonucleótidos. Leyenda: i) BSA,
TMSOTf, ClCH_{2}CH_{2}Cl, ii) NH_{3} metanólico semisat.,
iii) Tf_{2}O, DMAP, piridina, CH_{2}Cl_{2}, iv)
HOCH_{2}CH_{2}CN, NaH, THF; v) NaOBz, DMSO; vi)
NH_{4}HCO_{2}, Pd(OH)_{2}-C,
MeOH; vii)
(CH_{3}O)_{2}CHN(CH_{3})_{2}, DMF;
viii) DMT-Cl, piridina, ix)
NC(CH_{2})_{2}OP(N(iPr)_{2})_{2},
4,5-dicianoimidazol, MeCN, CH_{2}Cl_{2}, x)
LiOH, ac., THF.
La figura 13 ilustra compuestos particularmente
interesantes según la invención.
Un aspecto principal de la presente invención se
refiere a un procedimiento para la síntesis un análogo de LNA de la
fórmula general IV
en la
que
- X se selecciona de -CH_{2}-, -NR^{H}-, -O- y -S-;
- Z se selecciona de -CH_{2}-, -NR^{H}-, -S- y -Se-;
- B es una base nitrogenada;
- R^{3} se selecciona de -R^{H}, -N_{3}, -NR^{H}R^{H}*, -NR^{H}C(O)R^{H}*, -C(O)NR^{H}R^{H}*, -OR^{H}, -OC(O)R^{H}, -C(O)OR^{H}, -SR^{H}, -SC(O)R^{H} y tri(alquil C_{1-6}/aril)sililoxi;
- seleccionándose independientemente cada R^{H} y R^{H}* de hidrógeno, alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y arilalquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido;
- A^{4} y A^{5} se seleccionan independientemente de alquileno C_{1-6}; y
- R^{5} se selecciona de yodo, bromo, cloro, alquil C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro, halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos;
comprendiendo dicho procedimiento las siguientes
etapas:
tratar un producto intermedio de fórmula general
I:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que
- X, B, R^{3}, A*, y A^{5} son tal como se definieron anteriormente;
- R^{2} se selecciona de yodo, alquil C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro, halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos; R^{3} y R^{2} pueden formar juntos un epóxido y R^{4} y R^{5} independientemente son tal como se definieron para R^{5} anteriormente;
- con un nucleófilo seleccionado de halógeno, -N_{3}, -NR^{H}R^{H}*, -SR^{H}, - -S, -SeR^{H}, - -Se, -NR^{H}C(O)R^{H}*, -SC(O)R^{H}, y radicales hidrocarbilo organometálicos,
- para sustituir R^{2}, y
- realizar el cierre del anillo entre las posiciones C2' y C4' para dar el análogo de LNA de la fórmula IV.
Se ha encontrado que los productos intermedios
de la fórmula I desempeñan un papel importante en la síntesis de
los análogos de LNA. Así, la selección particular de sustituyentes
en los productos intermedios ha demostrado ser importante para una
ruta eficaz hasta los análogos de LNA. Ha de entenderse que los
sustituyentes X, B, R^{3}, A^{4}, A^{5}, y R^{5} con mayor
frecuencia no se verán alterados en la síntesis, es decir, estos
sustituyentes se "transferirán" de la fórmula I a la fórmula
IV. Además, se conservará también la orientación absoluta de estos
sustituyentes.
Habiéndose dicho esto, puede ser necesario
proteger la base nitrogenada tal como apreciará el experto en la
técnica (véase adicionalmente a continuación bajo la definición de
"base nitrogenada" y la figura 3).
En una realización interesante, los
sustituyentes del compuesto de la fórmula I se seleccionan de modo
que R^{2} se selecciona de alquil
C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más halógenos, y arilsulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro,
halógeno, alquilo C_{1-6}, y alquilo
C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos;
R^{3} es aril(alquil
C_{1-6})oxi opcionalmente sustituido; y
R^{4} y R^{5} se seleccionan
independientemente de alquil
C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más halógenos, y arilsulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro,
halógeno, alquilo C_{1-6}, y alquilo
C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos.
Además, son interesantes las realizaciones en
las que A^{4} y A^{5} son ambos metileno, así como las
realizaciones en las que X es -O-.
Aunque la configuración del producto intermedio
(fórmula I) es generalmente abierta, actualmente se cree que una
configuración interesante para el producto intermedio está
representada por la fórmula II
en la que B, R^{2}, R^{3},
R^{4}, y R^{5} son tal como se definieron anteriormente.
Habiéndose dicho esto, la imagen especular de la fórmula II puede
aplicarse igualmente. En una realización, OR^{3} y R^{2} pueden
formar un
epóxido.
En una realización particularmente interesante,
los sustituyente del producto intermedio (fórmula I o fórmula II)
se escogen de manera que B se selecciona de adenina, guanina,
2,6-diaminopurina, timina,
2-tiotimina, citosina, metilcitosina, uracilo,
5-fluorocitosina, xantina,
6-aminopurina, 2-aminopurina,
6-cloro-2-amino-purina
y 6-cloropurina, R^{2} se selecciona de alquil
C_{1-6}-sulfoniloxi sustituido con
uno o más halógenos, R^{3} es bencilo, y R^{4} y R^{5} se
seleccionan independientemente de alquil
C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno y
fenilo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes
seleccionados de nitro, halógeno y alquilo
C_{1-6}, y arilsulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro,
halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo
C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos.
Los sustituyentes R^{4} y R^{5}
preferiblemente son idénticos porque ofrece ventajas en la
preparación del producto intermedio (véase adicionalmente más
adelante).
Ejemplos particulares de los grupos aplicables
(independientemente) como R^{4} y R^{5} son metansulfoniloxi,
trifluorometansulfoniloxi, etansulfoniloxi,
2,2,2-trifluoroetansulfoniloxi, propansulfoniloxi,
iso-propansulfoniloxi, butansulfoniloxi,
nonafluorobutansulfoniloxi, pentansulfoniloxi,
ciclopentansulfoniloxi, hexansulfoniloxi, ciclohexansulfoniloxi,
\alpha-toluensulfoniloxi,
2-cloro-\alpha-toluensulfoniloxi,
orto-toluensulfoniloxi,
meta-toluensulfoniloxi,
para-toluensulfoniloxi, bencensulfoniloxi,
orto-bromobencensulfoniloxi,
meta-bromobencensulfoniloxi,
para-bromobencensulfoniloxi,
orto-nitrobencensulfoniloxi,
meta-nitrobencensulfoniloxi y
para-nitrobencensulfoniloxi. El grupo más
prometedor en la actualidad es metansulfoniloxi.
En una variante particularmente interesante, el
producto intermedio tiene la fórmula III
en la que B, R^{3}, R^{4} y
R^{5} son tal como se definieron
anteriormente.
Otra variante interesante (en combinación con la
fórmula I, fórmula II o fórmula III) es cuando los sustituyentes se
escogen de manera que B se selecciona de adenina, guanina,
2,6-diaminopurina, timina,
2-tiotimina, citosina, metilcitosina, uracilo,
5-fluorocitosina, xantina,
6-aminopurina, 2-aminopurina,
6-cloro-2-amino-purina
y 6-cloropurina, R^{3} es bencilo, y R^{4} y
R^{5} son ambos metansulfoniloxi. En particular, A^{4} y
A^{5} preferiblemente son ambos metileno.
El producto intermedio de fórmula I se hace
reaccionar con un nucleófilo seleccionado de halógeno, -N_{3},
-NR^{H}R^{H}*, -SR^{H}, - -S,
-NR^{H}C(O)R^{H}*, -SC(O)R^{H} y
radicales hidrocarbilo organometálicos, para sustituir R^{2}.
Actualmente se cree que la sustitución de
R^{2} continúa mediante un mecanismo de S_{N}2 con inversión de
la orientación relativa del sustituyente en la posición C2'.
La "posición C2'" se refiere a la
nomenclatura normal para los nucleósidos, en la que el carbono que
lleva la base nitrogenada B es C1', el carbono que lleva R^{2} (o
R^{2}*) es C2' y el carbono que lleva R^{4}A^{4} es C4'.
Los radicales hidrocarbilo organometálicos
normalmente tienen la fórmula MR^{H}, en la que M es un metal tal
como Mg (por ejemplo, en la forma de R^{H}MgBr preparado a partir
del haluro y magnesio (Grignard)), Cu (R^{H}_{2}CuLi por
ejemplo, preparado a partir de 2R^{H}Li + CuI), U (por ejemplo,
BuLi)), etc.
Los radicales hidrocarbilo organometálicos son
aplicables para la preparación de los análogos de LNA cuando Z es
-CH_{2}- (metilen-LNA). Naturalmente, los
nucleófilos de azufre son aplicables cuando Z es -S-, y los
nucleófilos de nitrógeno son aplicables cuando Z es -NR^{H}-.
Habiéndose dicho esto, actualmente se cree que
los nucleófilos particularmente interesantes son los seleccionados
de -N_{3}, -NR^{H}R^{H}*, -SR^{H}, - -S,
-NR^{H}C(O)R^{H}* y
-SC(O)R^{H}.
Las condiciones para la reacción del compuesto
de fórmula I con un nucleófilo normalmente son de manera que la
temperatura es de 0-150ºC, tal como de
20-100ºC, el tiempo de reacción normalmente es de 5
min a 24 horas, tal como de 2-8 horas, y la
proporción molar del nucleófilo con respecto al compuesto de la
fórmula I normalmente está en el intervalo de 10:1 a 1:1, tal como
en el intervalo de 5:1 a 1:1. El disolvente utilizado para la
reacción normalmente es un disolvente aprótico polar.
Los ejemplos de disolventes apróticos polares
útiles para esta reacción son tetrahidrofurano (THF),
dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), acetonitrilo
(AcCN), dietil éter, etc.
Tras la sustitución del grupo R^{2} con el
nucleófilo, el (nuevo) grupo en la posición C2' (es decir, el
nucleófilo unido a la posición C2') se somete a unas condiciones
tales que se realiza el cierre del anillo entre las posiciones C2'
y C4' para dar el análogo de LNA de la fórmula IV. Las condiciones
exactas para realizar el cierre del anillo dependerán del
nucleófilo usado, o más bien del (nuevo) grupo en la posición
C2'.
Las condiciones para la reacción de cierre del
anillo normalmente son de manera que la temperatura es de
0-100ºC, tal como de 20-50ºC, y el
tiempo de reacción normalmente es de 5 min a 24 horas, tal como de
2-8 horas. El disolvente usado para la reacción
normalmente es un disolvente polar.
Los ejemplos de tales disolventes polares son
DMF, THF, acetonitrilo, DMSO, alcoholes C_{1-4} y
mezclas acuosas de los mismos.
El reactivo útil para facilitar el cierre del
anillo normalmente está en condiciones básicas usando bases tales
como hidróxidos, alcóxidos, aminas, aminas desprotonadas, etc.
En particular, en las realizaciones en las que Z
es -S-, Na_{2}S (del tipo S^{\text{- -}}) es un nucleófilo útil
que facilita la sustitución y el cierre del anillo (véase la
preparación del compuesto 54). La temperatura normalmente es de
0-100ºC, tal como de 15-40ºC, el
tiempo de reacción normalmente es de 5 min a 18 horas, tal como 10
min a 4 horas, y la proporción molar del nucleófilo con respecto al
compuesto de la fórmula I normalmente está en el intervalo de 10:1
a 1:1, tal como en el intervalo de 2:1 a 1:1. El disolvente aprótico
polar normalmente es DMF, THF, DMSO, acetonitrilo, piridina,
N-metilpirrolidona (NMP), hexametilfosforamida
(HMPA), etc.
En otra realización, el tioacetato de potasio
(del tipo -SC(O)R^{H}) es un nucleófilo útil. En
este caso, el cierre del anillo puede realizarse bajo la influencia
de hidróxido de litio en un disolvente aprótico polar (véase la
preparación del compuesto 60). La temperatura normalmente es de
0-100ºC, tal como de 15-40ºC, el
tiempo de reacción normalmente es de 5 min a 18 horas, tal como de 5
min a 2 horas, y la proporción molar del nucleófilo con respecto al
compuesto de la fórmula I normalmente está en el intervalo de 10:1 a
1:1, tal como en el intervalo de 3:1 a 1:1. El disolvente aprótico
polar normalmente es DMF, THF, DMSO, acetonitrilo, piridina,
N-metilpirrolidona (NMP), hexametilfosforamida
(HMPA), etc.
En la realización en la que Z es -NH-, la azida
sódica es un nucleófilo útil. En este caso, el cierre del anillo se
realiza bajo la influencia de hidróxido de sodio y trimetilfosfano
en un disolvente aprótico polar. La temperatura normalmente es de
0-50ºC, tal como de 15-30ºC, el
tiempo de reacción normalmente es de 1-24 horas,
tal como de 2-8 horas, y la proporción molar del
nucleófilo con respecto al compuesto de la fórmula I normalmente
está en el intervalo de 10:1 a 1:1, tal como en el intervalo de 5:1
a 1:1. El disolvente aprótico polar normalmente es DMF, THF, DMSO,
acetonitrilo, piridina, N-metilpirrolidona (NMP),
hexametilfosforamida (HMPA), etc.
Cuando los análogos de LNA resultantes son unos
en los que Z es -NH-, los inventores han encontrado que es posible
convertir los análogos de LNA en otro análogo de LNA en el que se
alquila el nitrógeno mediante la reacción con un alcanal. Por
tanto, el procedimiento en este caso (Z = -NH-) puede comprender
además la etapa de convertir el análogo de LNA, cuando Z es -NH-,
en análogos de LNA en los que Z es -N(alquil
C_{1-6})- o N(arilo) haciendo reaccionar
una disolución del análogo anterior de LNA con un agente reductor y
un alcanal C_{1-6} o un aldehído aromático, o
cuando Z es N(acilo) haciéndolo reaccionar con un cloruro de
ácido o un anhídrido de ácido. Preferiblemente, cuando el aldehído
es formaldehído, benzaldehído,
piren-1-carbaldehído, o
ftalimidoacetaldehído y el agente reductor es NaBCNH_{3}, o cuando
el cloruro de ácido es cloruro de benzoílo o cloruro de
piren-1-ilcarbonilo (véase la figura
7). El procedimiento de la invención se refiere, no sólo a los
compuestos de fórmula IV, sino igualmente a análogos de
amino-LNA en general. Los análogos de
amino-LNA son compuestos de la invención
particularmente interesantes. Por ejemplo, la secuencia mixta de
oligonucleótidos nonaméricos que contienen dos o tres de los
monómeros de 2'-amino-LNA
modificados novedosos 45-49 (véase la figura 7)
hibrida eficazmente y en general con estabilidades térmicas muy
altas comparables con las obtenidas para las referencias de LNA o
N-metil-2'-amino-LNA
(\DeltaT_{m}/ºC en un ensayo de desnaturalización térmica hacia
compuestos de ARN complementario calculado por monómero: 45 = +9,1,
46 = +7,3, 47 = +6,5, 48 = +3 y 49 = +7). Además, un
oligonucleótido nonamérico de
N-benzoil-2'-amino-LNA
(casi) completamente modificado muestra una unión notablemente
eficaz hacia complementos de ADN y ARN ((\DeltaT_{m}/ºC 75 y 73,
(\DeltaT_{m}/ºC +6,3 y +6,1).
El triflato para la fórmula III es
particularmente útil como un producto intermedio para un amplio
intervalo de análogos de LNA mediante la reacción con nucleófilos
apropiados. Como ejemplo, el triflato 31 (véase la figura 9) se
utiliza en la síntesis de tio-LNA (esqueleto de
(2-oxo-5-tiobiciclo[2.2.1]heptano))
llevada a cabo mediante una reacción de sustitución con el
nucleófilo tioacetato de potasio en DMF produciendo el compuesto
59. El cierre del anillo del nucleósido de tio-LNA
se logró mediante la hidrólisis del tioacetato con LiOH ac. en THF
para producir el compuesto 60 en rendimiento cuantitativo. Se
confirmó la estructura del compuesto 60 mediante experimentos de
NOE que muestran un efecto NOE inusualmente alto entre el H6 de la
base nitrogenada y el H3' (9,0%) tal como se espera debido a la
conformación de extremo norte adoptada por el nucleósido. De manera
similar, la reacción del triflato 31 con el nucleófilo azida sódica
en DMF produjo el compuesto 32, en el que posteriormente se cerró
el anillo para formar el nucleósido amino-LNA 33
bajo la influencia de hidróxido de sodio acuoso y trimetilfosfano
en THF.
En una realización particularmente interesante
de los productos intermedios de fórmula I, R^{3} y R^{2} forman
juntos un epóxido. Dentro de la realización en la que la fórmula I
es de manera que R^{3} y R^{2} forman juntos un epóxido,
A^{4} y A^{5} se seleccionan independientemente de alquileno
C_{1-6}; y R^{5} es alquil
C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de halógeno y
fenilo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes
seleccionados de nitro, halógeno y alquilo
C_{1-6} y arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido
con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro, halógeno,
alquilo C_{1-6} y alquilo
C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos; tal
como el compuesto 66 en la figura 10.
La presente invención también se refiere a un
procedimiento para la síntesis de un análogos de
\alpha-L-LNA, por ejemplo,
\alpha-L-oxi-LNA,
\alpha-L-tio-LNA o
\alpha-L-amino-LNA
de fórmula general VIII
en la
que
- X se selecciona de -CH_{2}-, -NR^{H}-, -O- y -S-;
- Z se selecciona de -CH_{2}-, -NR^{H}-, -O-, -S- y -Se-;
- B es una base nitrogenada;
- R^{3} se selecciona de -R^{H}, -N_{3}, -NR^{H}R^{H}, -NR^{H}(O)R^{H}*, -C(O)NR^{H}R^{H}*, -OR^{H}, OC(O)R^{H}, -C(O)OR^{H}, -SR^{H}, -SC(O)R^{H} y tri(alquil C_{1-6}/aril)sililoxi;
- seleccionándose independientemente cada R^{H} y R^{H}* de hidrógeno, alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, y aril-alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido; A^{4} y A^{5} se seleccionan independientemente de alquileno C_{1-6}; y R^{4} se selecciona de yodo, bromo, cloro, alquil C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro, halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos;
comprendiendo dicho procedimiento las siguientes
etapas:
tratar un producto intermedio de fórmula general
IX:
en la
que
- X, B, R^{3}, A^{4} y A^{5} son tal como se definieron anteriormente;
- R^{2} se selecciona de yodo, alquil C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro, halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos;
- R^{3} y R^{4} pueden formar juntos un epóxido; y
- R^{4} y R^{5} independientemente son tal como se definieron para R^{4} anteriormente;
con un nucleófilo seleccionado de halógeno,
-N_{3}, -NR^{H}R^{H}*,-OR^{H}, -OH, -SR^{H}, - -S,
-SeR^{H}, - -Se, -NR^{H}C(O)R^{H}*,
-SC(O)R^{H}, y radicales hidrocarbilo
organometálicos,
para sustituir R^{2}, y
realizar el cierre del anillo entre las
posiciones C2' y C4' para dar el análogo de LNA de la fórmula
VIII.
La realización interesante de los productos
intermedios de fórmula I en la que R2 y R3 forman juntos un epóxido
es particularmente interesante en la síntesis de
\alpha-L-oxi-LNA,
\alpha-L-tio-LNA o
\alpha-L-amino-LNA
usando un compuesto de fórmula IX, tratados más adelante.
En otra realización particularmente interesante,
el producto intermedio de fórmula IX tiene la fórmula X
en la que B, R^{3}, R^{4} y
R^{5} son tal como se definieron
anteriormente.
El producto intermedio de fórmula IX se hace
reaccionar con un nucleófilo seleccionado de halógeno,
-N_{3},
-NR^{H}R^{H}*, -OR^{H}, -OH, -SR^{H}, - -S, -NR^{H}C(O)R^{H}*, -SC(O)R^{H}, y radicales hidrocarbilo organometálicos, para sustituir R^{2}.
-NR^{H}R^{H}*, -OR^{H}, -OH, -SR^{H}, - -S, -NR^{H}C(O)R^{H}*, -SC(O)R^{H}, y radicales hidrocarbilo organometálicos, para sustituir R^{2}.
Una ventaja particular de usar el producto
intermedio común, X, en esta invención en la reacción con hidróxido
o un alcóxido tal como alcóxido de
3-hidroxilpropionitrilo como el nucleófilo es que la
estructura \alpha-L se obtiene en una sola etapa.
Por tanto, la sustitución del triflato por hidróxido o alcóxido de
3-hidroxilpropionitrilo produce un alcohol que se
cicla inmediatamente.
Las realizaciones que se refieren a la síntesis
de análogos de LNA descritas anteriormente también son aplicables a
la síntesis de análogos de
\alpha-L-LNA.
Se cree que la mayoría de los productos
intermedios (compuestos de fórmula I) representan compuestos
novedosos, por lo que la presente invención también proporciona
compuestos de la fórmula I
en la
que
- X se selecciona de -CH_{2}-, -NR^{H}-, -O- y -S-;
- B es una base nitrogenada;
- R^{2} se selecciona de yodo, alquil C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro, halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos;
- R^{3} se selecciona de -R^{H}, -N_{3}, -NR^{H}R^{H}*, -NR^{H}C(O)R^{H}*, -C(O)NR^{H}R^{H}*, -OR^{H}, -OC(O)R^{H}, -C(O)OR^{H}, -SR^{H}, -SC(O)R^{H} y tri(alquil C_{1-6}/aril)sililoxi;
- R^{3} y R^{2} pueden formar juntos un epóxido;
- seleccionándose independientemente cada R^{H} y R^{H}* de hidrógeno, alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y arilalquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido;
- A^{4} y A^{5} se seleccionan independientemente de alquileno C_{1-6}; y
- R^{4} y R^{5} se seleccionan independientemente de yodo, bromo, cloro, alquil C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro, halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos, o R^{4} y R^{5} constituyen juntos un grupo tetra(alquil C_{1-6})disiloxanilideno;
con la condición de que el compuesto no se
selecciona de
- 1-(3-azido-3-desoxi-2,5-di-O-metansulfonil-4-C-(metansulfoniloximetil)-\beta-D-eritro-pentofuranosil)timi- na, y
- 1-(3-O-bencil-2,5-di-O-metanosulfonil-4-C-(metansulfoniloximetil)-\beta-D-eritro-pentofuranosil)timina.
Los subgrupos particulares y preferidos de los
compuestos de fórmula I son tal como se describieron anteriormente
para el compuesto I en el apartado Síntesis de análogos de LNA. En
particular, las subclases particulares de los compuestos tienen la
fórmula II, en particular, y la fórmula III.
Los ejemplos de compuestos específicos
particularmente interesantes son los que se ilustran en la figura
13.
En la actualidad se cree que un compuesto
particularmente interesante que es particularmente útil para la
preparación de
(1R,3R,4R,7S)-7-benciloxi-1-metansulfoniloximetil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2:2:1]heptano
(33) y
(1R,3R,4R,7S)-7-benciloxi-1-metansulfoniloximetil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-tiabiciclo[2:2:1]heptano
(60) es
1-(3-O-bencil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-2-O-trifluorometansulfonil-\beta-D-treo-pentofuranosil)timina
(31) (véase la figura 9).
Los subgrupos particulares y preferidos de los
compuestos de fórmula I se describieron anteriormente en el
apartado Síntesis de análogos de
\alpha-L-LNA. En particular, una
subclase particular de compuestos tiene la fórmula IX y
particularmente la fórmula X, y en la que R^{2} y R^{3} forman
juntos un epóxido.
Los compuestos (productos intermedios) de la
fórmula I pueden prepararse mediante la inversión de la orientación
del sustituyente en C2' en un compuesto similar en el que el
sustituyente en C2' es un grupo saliente. Por tanto, un compuesto
de la fórmula I
en la
que
- X se selecciona de -CH_{2}-, -NR^{H}-, -O- y -S-;
- B es una base nitrogenada;
- R^{2} se selecciona de yodo, alquil C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro, halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos;
- R^{3} se selecciona de -R^{H}, -N_{3}, -NR^{H}R^{H}*, -NR^{H}C(O)R^{H}*, -C(O)NR^{H}R^{H}*, -OR^{H}, -OC(O)R^{H}, -C(O)OR^{H}, -SR^{H}, -SC(O)R^{H} y tri(alquil C1-6/aril)sililoxi;
- seleccionándose independientemente cada R^{H} y R^{H}* de hidrógeno, alquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y arilalquilo C_{1-6} opcionalmente sustituido;
- A^{4} y A^{5} se seleccionan independientemente de alquileno C_{1-6}; R^{3} y R^{2} pueden formar juntos un epóxido y R^{4} y R^{5} se seleccionan independientemente de yodo, bromo, cloro, alquil C_{1-3}-sulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro, halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos,
puede prepararse mediante la inversión de la
orientación del sustituyente en la posición C2' de un compuesto de
la fórmula VII
en la
que
- R^{2}* es un grupo saliente seleccionado de yodo, alquil C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro, halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos; y
- X, B, R^{3}, R^{4}, A^{4}, R^{5} y A^{5} son tal como se definieron anteriormente.
Ejemplos particulares de grupos R^{2}* son
yodo, metansulfoniloxi, trifluorometansulfoniloxi, etansulfoniloxi,
2,2,2-trifluoroetansulfoniloxi, propansulfoniloxi,
isopropansulfoniloxi, butansulfoniloxi, nonafluorobutansulfoniloxi,
pentansulfoniloxi, ciclopentansulfoniloxi, hexansulfoniloxi,
ciclohexansulfoniloxi, \alpha-toluensulfoniloxi,
2-cloro-\alpha-toluensulfoniloxi,
orto-toluensulfoniloxi,
meta-toluensulfoniloxi,
para-toluensulfoniloxi, bencensulfoniloxi,
orto-bromobencensulfoniloxi,
meta-bromobencensulfoniloxi,
para-bromobencensulfoniloxi,
orto-nitrobencensulfoniloxi,
meta-nitrobencensulfoniloxi y
para-nitrobencensulfoniloxi, de los que
trifluorometilsulfoniloxi es un ejemplo particularmente
preferido.
Los subgrupos particulares y preferidos de los
compuestos de fórmula VII corresponden a los descritos anteriormente
para el compuesto I en el apartado Síntesis de análogos de LNA,
cambiando lo que se deba de cambiar. En particular, las subclases
particulares de compuestos tienen la configuración correspondiente a
la fórmula II, especialmente la configuración correspondiente a la
fórmula III, excepto por la orientación del sustituyente en C2'.
En una realización particularmente interesante
de los compuestos de fórmula I, R^{3} y R^{2} forman juntos un
epóxido.
El compuesto novedoso ilustrado en la fórmula I
puede prepararse mediante la ruta general mostrada en la figura
2.
La inversión de la orientación del sustituyente
en C2' puede realizarse de varias formas. Si la base nitrogenada es
un base de pirimidina, la inversión puede facilitarse mediante la
formación de un producto intermedio 2,2'-anhidro en
las condiciones adecuadas, por ejemplo, el uso de una esponja de
protones, por ejemplo, DBU. La temperatura normalmente es de
0-100ºC, tal como de 15-30ºC, el
tiempo de reacción normalmente es de 5 min a 24 horas, tal como de
1-6 horas, y la proporción molar de la base con
respecto al compuesto de la fórmula VII normalmente está en el
intervalo de 5:1 a 1:1, tal como en el intervalo de 3:1 a 1:1. El
disolvente aprótico polar normalmente es DMF, THF, DMSO o
CH_{3}CN.
Aunque el procedimiento para la síntesis del
compuesto de fórmula I mencionado anteriormente aprovecha el
constructo de 2,2'-anhidronucleósido y, por tanto,
sólo es aplicable para bases nitrogenadas (tales como pirimidinas)
en las que tal constructo es posible, debe entenderse que serán
aplicables de manera similar otras rutas para la inversión de la
orientación del sustituyente en la posición C2' de un compuesto de
la fórmula VII.
Como ejemplo, que generalmente es aplicable para
todas las bases nitrogenadas, y muy útil en los casos en los que la
base nitrogenada es una base nitrogenada de tipo purina, la
inversión se realiza mediante la reacción del compuesto de la
fórmula VII con un nucleófilo de oxígeno.
En la figura 3 se ilustra un ejemplo más
específico de la estrategia de síntesis convergente para la síntesis
de un producto intermedio que tiene una base nitrogenada de tipo
purina. Se protege la base (14) del compuesto 13 tras lo que el
2'-OAc se hidroliza de manera selectiva tal como se
describe en otra parte en el presente documento (15). El
2'-OH liberado se trata con triflato (16) y se hace
reaccionar con un nucleófilo de oxígeno adecuado (por ejemplo, un
acetato, benzoato, etc.) para invertir la estereoquímica (17). El
éster resultante se hidroliza entonces de manera selectiva tal como
se describe en otra parte en el presente documento y el
2'-OH está ahora en la configuración treo (18). El
compuesto 18 es un equivalente de purina al compuesto 30 que
posteriormente puede convertirse en
2'-O-mesilato, es decir, un producto
intermedio de la fórmula I, tras la ruta ilustrada en la figura
6.
Como otra alternativa, también puede realizarse
la inversión mediante la oxidación de un compuesto de fórmula VII,
en la que R^{2}* es OH, seguido por reducción estéreo y
regioselectiva posterior, por ejemplo, tal como se subraya en la
figura 4.
Los materiales de partida de fórmula VII para el
procedimiento según la invención pueden prepararse tal como se
describe en la bibliografía (Koshkin, A.; Fensholdt, J.;
Pfundheller, H. M.; Lomholt, C. J.Org. Chem. 2001. 66,
8504-8512).
Como un ejemplo más específico, el producto
intermedio general preferido mostrado en la fórmula III puede
prepararse tal como se muestra más adelante (figura 5). Por tanto,
(2-O-acetil-3-O-bencil-4-C-metanosulfonil-oximetil-5-O-metansulfonil-\beta-D-eritropentofuranosil)-base
nitrogenada) (23) se convierte, mediante una desacetilación suave
para la liberación del grupo 2'-hidroxilo es el
compuesto (24) sin el posterior cierre del anillo que proporciona la
formación del esqueleto de oxi-LNA. El grupo
2'-hidroxilo se mesila entonces para proporcionar
(3-O-bencil-4-C-metansulfoniloximetil-2,5-O-dimetansulfonil-\beta-D-eritro-pentofuranosil)-base
nitrogenada) (25).
En el presente contexto, el término "alquil
C_{1-6}" significa un grupo de hidrocarburo
lineal, cíclico o ramificado que tiene de 1 a 6 átomos de carbono,
tal como metilo, etilo, propilo, iso-propilo,
butilo, terc-butilo, iso-butilo,
pentilo, ciclopentilo, hexilo, ciclohexilo, en particular metilo,
etilo, propilo, iso-propilo,
terc-butilo, iso-butilo y
ciclohexilo.
El término "alquileno
C_{1-6}" se pretende que signifique un
birradical de hidrocarburo lineal que tiene 1-6
átomos de carbono, tal como metileno, 1,2-etileno,
1,3-propileno, 1,2-propileno,
1,4-butileno, etc.
El término "opcionalmente sustituido" en
relación con los términos "alquilo C_{1-6}" y
"alquileno C_{1-6}" se pretende que
signifique que el grupo en cuestión puede estar sustituido una o
varias veces, preferiblemente 1-3 veces, con
grupo(s) seleccionado(s) de hidroxi alcoxilo C_{1-6} (es decir, alquil C_{1-6}-oxilo), carboxilo, alcoxi C_{1-6}-carbonilo, alquil C_{1-6}-carbonilo, arilo, ariloxicarbonilo, ariloxilo, arilcarbonilo, amino, mono y di(alquil C_{1-6})amino; carbamoílo, mono y di(alquil C_{1-6})aminocarbonilo, alquil C_{1-6}-carbonilamino, ciano, carbamido, halógeno, en los que cualquier arilo puede estar sustituido tal como se describe específicamente más adelante en "arilo opcionalmente sustituido".
grupo(s) seleccionado(s) de hidroxi alcoxilo C_{1-6} (es decir, alquil C_{1-6}-oxilo), carboxilo, alcoxi C_{1-6}-carbonilo, alquil C_{1-6}-carbonilo, arilo, ariloxicarbonilo, ariloxilo, arilcarbonilo, amino, mono y di(alquil C_{1-6})amino; carbamoílo, mono y di(alquil C_{1-6})aminocarbonilo, alquil C_{1-6}-carbonilamino, ciano, carbamido, halógeno, en los que cualquier arilo puede estar sustituido tal como se describe específicamente más adelante en "arilo opcionalmente sustituido".
En el presente contexto, el término "arilo"
significa un sistema de anillos o anillo carbocíclico completa o
parcialmente aromático, tal como fenilo, naftilo,
1,2,3,4-tetrahidronaftilo, antracilo y fenantracilo,
entre los que fenilo es un ejemplo preferido.
El término "opcionalmente sustituido" en
relación con el término "arilo" se pretende que signifique que
el grupo en cuestión puede estar sustituido una o varias veces, en
particular 1-3 veces) con grupo(s)
seleccionado(s) de hidroxilo, alquilo
C_{1-6}, alcoxilo C_{1-6},
carboxilo, alcoxi
C_{1-6}-carbonilo, alquil
C_{1-6}-carbonilo, arilo, amino,
mono y di(alquil C_{1-6})amino y
halógeno, en los que arilo puede estar sustituido
1-3 veces con alquilo C_{1-4},
alcoxilo C_{1-4}, nitro, ciano, amino o
halógeno.
En el presente contexto, el término
"tri(alquil
C_{1-6}/aril)sililoxi" significa un
grupo sililo sustituido con 0-3 grupos alquilo
C_{1-6} y/o 0-3 grupos arilo, con
la condición de que el número total de grupos alquilo y arilo sea
3. Los ejemplos ilustrativos son trimetilsililoxi,
alildimetilsililoxi, dimetilfenilsililoxi, difenilmetilsililoxi,
isopropildimetilsililoxi, terc-butildimetilsililoxi,
terc-butildifenilsililoxi, trietilsililoxi,
triisopropilsililoxi, dietilisopropilsililoxi,
dimetilexilisopropilsililoxi, tribencilsililoxi,
tri-para-xililsililoxi,
trifenilsililoxi, difenilmetilsililoxi,
di-terc-butilmetilsililoxi,
tris(trimetilsililoxi)sililoxi,
terc-butilmetoxifenilsililoxi y
terc-butoxidifenilsililoxi.
En el presente contexto, el término
"tetra(alquil
C_{1-6})disiloxanilideno" significa un
birradical -O-Si(alquil
C_{1-6})_{2}-O- Si
(alquil C_{1-6})_{2}-O-.
Un ejemplo típico es el
1,3-(1,1,3,3-tetraisopropil)-disiloxanilideno.
"Halógeno" incluye flúor, cloro, bromo y
yodo.
En el presente contexto, el término "base
nitrogenada" cubre las bases nitrogenadas que se producen en la
naturaleza, así como las bases nitrogenadas que no se producen en la
naturaleza, es decir, grupos cíclicos heteroaromáticos, por
ejemplo, grupos monocíclicos, grupos bicíclicos, grupos tricíclicos,
etc. Debe quedar claro para el experto en la técnica que diversas
bases nitrogenadas que anteriormente se han considerado como "que
no se producen en la naturaleza" posteriormente se han encontrado
en la naturaleza. Por tanto, "base nitrogenada" incluye no
sólo los heterociclos de purina y pirimidina conocidos, sino también
tautómeros y análogos heterocíclicos de los mismos. Los ejemplos
ilustrativos de bases nitrogenadas son adenina, guanina, timina,
citosina, uracilo, purina, xantina, diaminopurina,
8-oxo-N^{6}-metiladenina,
7-deazaxantina, 7-deazaguanina,
N^{4},N^{4}-etanocitosina,
N^{6},N^{6}-etano-2,6-diaminopurina,
5-metilcitosina,
5-(C^{3}-C^{6})-alquinilcitosina,
5-fluorouracilo, 5-bromouracilo,
pseudoisocitosina,
2-hidroxi-5-metil-4-triazolopiridina,
isocitosina, isoguanina, inosina,
N^{6}-alilpurinas,
N^{6}-acilpurinas,
N^{6}-bencilpurina,
N^{6}-halopurina,
N^{6}-vinilpurina, N^{6}-purina
acetilénica, N^{6}-acilpurina,
N^{6}-hidroxialquilpurina,
N^{6}-tioalquilpurina,
N^{2}-alquilpurinas,
N^{4}-alquilpirimidinas,
N^{4}-acilpirimidinas,
N^{4}-bencilpurina,
N^{4}-halopirimidinas,
N^{4}-vinilpirimidinas,
N^{4}-pirimidinas acetilénicas,
N^{4}-acilpirimidinas,
N^{4}-hidroxialquilpirimidinas,
N^{6}-tioalquilpirimidinas,
6-azapirimidina, incluyendo
6-azacitosina, 2 y/o
4-mercaptopirimidina, uracilo,
C^{5}-alquilpirimidinas,
C^{5}-bencilpirimidinas,
C^{5}-halopirimidinas,
C^{5}-vinilpirimidina, C^{5}- pirimidina
acetilénica, C^{5}-acilpirimidina,
C^{5}-hidroxialquilpurina,
C^{5}-amidopirimidina,
C^{5}-cianopirimidina,
C^{5}-nitropirimidina,
C^{5}-aminopirimidina,
N^{2}-alquilpurinas,
N^{2}-alquil-6-tiopurinas,
5-azacitidinilo, 5-azauracililo,
trazolopiridinilo, imidazolopiridinilo, pirrolopirimidinilo y
pirazolopirimidinilo. Los grupos de nitrógeno y oxígeno funcionales
en la base puede protegerse y desprotegerse si es necesario o
deseable. Los grupos protectores adecuados son bien conocidos por
los expertos en la técnica y se incluyen trimetilsililo,
dimetilhexilsililo, t-butildimetilsililo y
t-butildifenilsililo, tritilo, grupos alquilo,
grupos acilo tales como acetilo y propionilo, metansulfonilo y
p-toluensulfonilo. Las bases preferidas incluyen
adenina, guanina, 2,6-diaminopurina, timina,
2-tiotimina, citosina, metilcitosina, uracilo,
5-fluorocitosina, xantina,
6-aminopurina, 2-aminopurina,
6-cloro-2-amino-purina
y 6-cloropurina. Las bases nitrogenadas
especialmente interesantes son adenina, guanina, timina, citosina y
uracilo, que se considera como las bases nitrogenadas que se
producen en la naturaleza en relación con la aplicación terapéutica
y de diagnóstico en seres humanos.
Para las reacciones llevadas a cabo en
condiciones anhidras, se secó el material de vidrio durante la noche
en un horno a 150ºC y se dejó enfriar en un desecador sobre KOH
anhidro. Las reacciones anhidras se llevaron a cabo bajo una
atmósfera de argón. Los disolventes eran de calidad para HPLC, de
los cuales se secaron DMF, piridina, acetonitrilo y diclorometano
sobre tamices moleculares (4 \ring{A} de Grace Davison) y THF se
destiló recientemente a partir de Na-benzofenona
hasta un contenido en agua inferior a 20 ppm. Se llevó a cabo la
CCF en láminas de aluminio de sílice 60 F_{254} de Merck. Se
realizó una cromatografía a vacío en columna seca (DCVC) según el
procedimiento publicado. Se registraron espectros de RMN de ^{1}H,
^{13}C, ^{19}F y ^{31}P a 400 MHz, 100 MHz, 376 MHz y 121
MHz, respectivamente, con disolventes como patrón interno
(\delta_{H}: CDCl_{3} 7,26 ppm, DMSO-d_{6}
2,50; \delta_{C}: CDCl_{3} 77,0 ppm,
DMSO-d_{6} 39,4 ppm). Se llevó a cabo RMN de
^{31}P con H_{3}PO_{4} al 85% como patrón externo. Los valores
de J se dan en Hz. La asignación de los espectros de RMN se basan
en espectros 2D y siguen la nomenclatura convencional de hidratos de
carbono/nucleósidos (el átomo de carbono del sustituyente
4'-C se numera con C1'') incluso aunque los nombres
sistemáticos de los compuestos de los derivados de nucleósido
bicíclicos se dan según la nomenclatura de von Baeyer. Se usaron
los compuestos brutos sin purificación adicional si eran de una
pureza \geq 95% por CCF y HPLC-EM (columna C18
RP, detección UV). Se obtuvieron los análisis elementales de la
Universidad de Copenhague, Departamento de Microanalítica
(University of Copenhagen, Microanalytical Department).
1-(2,5-Di-O-acetil-4-C-acetiloximetil-3-O-bencil-\beta-D-eritropentofuranosil)timina.
A una disolución con agitación de
3-O-bencil-4-C-hidroximetil-1,2-O-isopropiliden-\alpha-D-eritro-pentofuranosa
1 (Youssefyeh, R. D.; Verheyden, J. P. H.; Moffatt, J. G. J. Org.
Chem. 1979, 44, 1301-1309). (200 mg, 0,64 mmol) en
ácido acético (3,69 ml, 64,4 mmol) a 0ºC se añadió anhídrido
acético (0,61 ml, 6,44 mmol) y H_{2}SO_{4} conc. (0,34 \mul,
6,44 \mumol). Tras 25 min. se dejó calentar la mezcla de reacción
hasta t.a. Se continuó la agitación durante 2 h tras las cuales se
vertió la mezcla en NaHCO_{3} ac. sat. enfriado en hielo (150 ml).
Se extrajo la disolución con diclorometano (2 x 150 ml), y se
lavaron las fases orgánicas combinadas con NaHCO_{3} ac. sat. (2
x 100 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se
evaporaron hasta sequedad a vacío para dar la mezcla anomérica
bruta del dador de glucósido acetilado como un líquido incoloro (258
mg, 0,59 mmol). Se disolvió el líquido (246 mg, 0,56 mmol) en
acetonitrilo anhidro (5 ml) con agitación. Se añadieron timina (144
mg, 1,14 mmol) y
N,O-bis(trimetilsilil)acetamida (0,99
ml, 4,00 mmol), y se calentó la mezcla hasta reflujo durante 1,5 h
y después se enfrió hasta 0ºC. Se añadió gota a gota triflato de
trimetilsililo (0,23 ml, 1,25 mmol) durante 5 min. y se calentó la
mezcla hasta 80ºC durante 3,5 h. Se dejó enfriar la mezcla de
reacción hasta t.a., y se añadió NaHCO_{3} ac. sat. enfriado en
hielo (10 ml). Se llevó a cabo la extracción con diclorometano (2 x
20 ml), y se lavaron las fases orgánicas combinadas sucesivamente
con NaHCO_{3} ac. sat. (2 x 20 ml) y salmuera (20 ml), se secaron
(Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se evaporaron hasta sequedad a
vacío. Se purificó el residuo mediante DCVC (MeOH al
0-1% en diclorometano v/v) para dar el nucleósido
(259 mg, 91%) como un material sólido blanco.
EM-FAB m/z hallado 505,0 ([MH]^{+}, calc.
505,2); RMN de ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,93 (s, 1H, NH),
7,37-7,28 (m, 5H, Ph), 7,09 (d, J = 0,9, 1H, H6),
5,79 (d, J = 3,5, 1H, H1'), 5,53 (dd, J = 6,3, 3,7, 1H, H2'),
4,64-4,08 (m, 7H, CH_{2}Ph,H3', H5'a, H5'b,
H1''a, H1''b), 2,11 (s, 3H, CH_{3}C(O)), 2,10 (s, 3H,
CH_{3}C(O)), 2,07 (s, 3H, CH_{3}C(O)), 1,91 (s,
3H, CH_{3}); RMN de ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 170,4, 169,9,
163,9, 149,9 (CH_{3}C(O), C2, C4), 137,1, 136,8, 128,3,
128,0, 127,8 (C6, Ph), 111,0 (C5), 90,6 (C1'), 84,2 (C4'), 77,0
(C3'), 74,2 (CH_{2}Ph), 73,7 (C2'), 63,6, 62,2 (C5',
C1''), 20,6, 20,5 (CH_{3}C(O)), 12,3 (CH_{3}).
1-(3-O-Bencil-4-C-hidroximetil-\beta-D-eritro-pentofuranosil)timina.
Se disolvió el nucleósido
1-(2,5-di-O-acetil-4-C-acetiloximetil-3-O-bencil-\beta-D-eritropentofuranosil)timina
(149 mg, 0,30 mmol) en una disolución sat. de NH_{3} en MeOH (15
ml). Se agitó la mezcla durante la noche a t.a. en un matraz
sellado y se evaporó hasta sequedad a presión reducida. Se disolvió
el resto en EtOAc (30 ml) y se lavó con agua (10 ml). Se extrajo la
fase ac. con EtOAc (30 ml) y se evaporaron de manera conjunta las
fases orgánicas combinadas hasta sequedad con acetonitrilo (2 x 10
ml) a presión reducida. Se purificó el resto mediante DCVC (MeOH al
1-4% en diclorometano v/v), produciendo el
nucleósido (93 mg, 84%) como un líquido viscoso. R_{f} = 0,32
(MeOH al 10% en EtOAc, v/v); EM-FAB m/z hallado
379,0 ([MH]^{+}, calc. 379,1); RMN de ^{1}H
(DMSO-d_{6}) \delta 11,29 (s a, 1H, NH), 7,73
(d, J = 1,3, 1H, H6), 7,40-7,26 (m, 5H, Ph), 5,90
(d, J =6,2, 1H, H1'), 5,51 (d, J = 7,5,-1H, OH), 5,18 (t, J = 5,0,
1H, OH), 4,86 (t, J = 5,49, 1H, OH), 4,81 (d, J = 11,7, 1H), 4,56
(d, J = 11,7, 1H), 4,36 (q, J = 6,3, 1H, H2'), 4,08 (d, J = 5,5, 1H,
H3'), 3,60-3,50 (m, 4H) (H5', H1'',
CH_{2}Ph), 1,79 (d, J =1,1, 3H, CH_{3}); RMN de ^{13}C
(DMSO-d_{6}) \delta 163,6 (C4), 150,7 (C2),
138,6, 136,3, 128,0, 127,2 (C6, Ph), 109,3 (C5), 87,7,87,5 (C1',
C4'), 78,5 (C3'), 73,3 (C2'), 72,7, 62,8, 61,3 (C5', C1'',
CH_{2}Ph), 12,2 (CH_{3}); Anál. calc. para
C_{18}H_{22}N_{2}O_{7}\cdot0,25H_{2}O: C, 56,5; H, 5,9;
N, 7,3. Hallado: C, 56,5; H, 5,9; N, 7,0.
1-(3-O-Bencil-2,5-di-O-metansulfonil-4-C-(metansulfoniloximetil)-\beta-D-eritro-pentofuranosil)timina
(28). Se disolvió el nucleósido
1-(3-O-bencil-4-C-hidroximetil-\beta-D-eritro-pentofuranosil)timina
(0,83 g, 3,2 mmol) en piridina anhidra (20 ml) y se enfrió hasta
0ºC con agitación. Se añadió gota a gota cloruro de metansulfonilo
(0,85 ml, 11 mmol) y se dejó que la reacción alcanzase los 15ºC
durante 3 h. Se extinguió la reacción con NaHCO_{3} ac. sat. (50
ml) y se transfirió a un embudo de separación con salmuera (50 ml) y
EtOAc (100 ml). Se separaron las fases y se extrajo la fase ac. con
EtOAc (2 x 50 ml). Se extrajeron las fases orgánicas combinadas con
salmuera (100 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se
evaporaron a vacío para dar un líquido amarillo viscoso. Se
disolvió el líquido en una mezcla de diclorometano y tolueno y se
evaporó a vacío para dar el nucleósido 28 (1,48 g, 93%) como una
espuma blanca. Los datos analíticos eran idénticos a los publicados
anteriormente. (H\ring{a}kansson, A. E.; Koshkin, A.; Sørensen, M.
D.; Wengel, J. J. Org. Chem. 2000, 65,
5161-5166).
1-(3-O-Bencil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-\beta-D-eritropentofuranosil)timina
(27). Se disolvió el nucleósido 26 (Koshkin et al., J.
Org. Chem. 2001, 66, 8504-8512) (30 g, 52 mmol) en
MeOH (600 ml), y se enfrió la disolución hasta 0ºC. Se añadió
amonio metanólico sat. recién preparado (600 ml), y se dejó que la
mezcla alcanzase la t.a. Tras 5 h a t.a. se extinguió la reacción
con ácido acético glacial (50 ml) y se transfirió a un vaso de
precipitados, en el que se neutralizó con NaHCO_{3} ac. sat. Se
añadieron EtOAc (900 ml) y salmuera (500 ml) y se separaron las
fases. Se extrajo la fase ac. con EtOAc (3 x 500 ml) y se lavaron
las fases orgánicas combinadas con NaHCO_{3} ac. sat. (500 ml) y
salmuera (500 ml). Se secó (Na_{2}SO_{4}) la fase orgánica, se
filtró y se eliminó el disolvente a vacío para proporcionar 27 (27
g, 97%) como una espuma blanca. R_{f} = 0,33 (EtOAc al 100%);
EM-ESI m/z hallado 557,0 ([MNa]^{+}, calc.
557,1); RMN de ^{1}H (CDCl_{3} \delta 10,21 (s a, 1H, NH),
7,33-7,25 (m, 6H, Ph, H6), 5,77 (d, J = 3,9, 1H,
H1'), 4,84 (d, J = 11,4, 1H, H3'), 4,59-4,57 (m,
3H), 4,42-4,37 (m, 3H), 4,26-4,19
(m, 2H) (H2', H2'', H5'', CH_{2}Ph, OH), 2,98 (s, 3H,
CH_{3}), 2,76 (s, 3H, CH_{3}), 1,80 (s, 3H, CH_{3}); RMN de
^{13}C (CDCl_{3}) \delta 162,5 (C4), 151,0 (C2), 136,7 (Ph),
136,2 (C6), 128,5, 128,3, 128,2 (Ph), 111,3 (C5), 92,1 (C1'), 84,0
(C4'), 77,7 (C3'), 74,1, 73,5 (C2', CH_{2}Ph), 68,6, 68,3
(C5',C1''), 37,2, 37,1 (Ms), 12,0 (CH_{3}); Anál. calc. para
C_{20}H_{26}N_{2}O_{11}S_{2}: C, 44,9; H, 4,9; N, 5,2.
Hallado: C, 45,0; H, 4,7; N, 5,1.
1-(3-O-Bencil-2,5-di-O-metansulfonil-4-C-(metansulfoniloximetil)-\beta-D-eritro-pentofuranosil)timina
(28). Se disolvió el nucleósido 27 (20 g, 37 mmol) en
diclorometano anhidro (100 ml) y se añadió piridina anhidra (100
ml). Se enfrió la disolución hasta 0ºC y se añadió gota a gota
cloruro de metansulfonilo (4,4 ml, 56 mmol). Tras 2 h, se extinguió
la reacción con NaHCO_{3} ac. sat. (200 ml), y se separaron las
fases. Se extrajo la fase ac. con diclorometano (2 x 150 ml), y se
lavaron las fases orgánicas combinadas con HCl ac. (1 M, 2 x 200
ml), NaHCO_{3} ac. sat. (2 x 250 ml) y salmuera (250 ml). Se secó
la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se eliminó el
disolvente a vacío. Se evaporó de manera conjunta el producto bruto
con tolueno produciendo 28 (22 g, 96%) como una espuma blanca.
R_{f} = 0,41 (EtOAc al 100%); EM-ESI m/z hallado
635,0 ([MNa]^{+}, calc. 635,1). Todos los datos analíticos
eran idénticos a los notificados anteriormente. (H\ring{a}kansson,
A. E.; Koshkin, A.; S\diameterrensen, M. D.; Wengel, J. J. Org.
Chem. 2000, 65, 5161-5166).
2,2'-Anhidro-1-(3-O-bencil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-\beta-D-treo-pentofuranosil)timina
(29). Se disolvió el nucleósido 28 (10 g, 16,3 mmol) en
acetonitrilo anhidro (100 ml) y se añadió DBU (2,69 ml, 18,0 mmol).
El producto precipitó lentamente en la mezcla de reacción. Tras 2 h,
se completó la reacción y se concentró a vacío para facilitar la
precipitación. Se enfrió la mezcla de reacción hasta -20ºC y se
recogió el producto mediante filtración para proporcionar el
nucleósido 29 (7,64 g, 91%) como un material sólido blanco.
EM-FAB m/z hallado 517,0 ([MH]^{+},
calc. 517,1); RMN de ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 7,79 (d, J = 1,3, 1H, H6), 7,45-7,32 (m, 5H, Ph), 6,40 (d, J = 6,0, 1H, H1'), 5,60 (dd, J = 6,1, 2,8, 1H, H2'), 4,82 (d, J = 11,5, 1H, CH_{2}Ph), 4,70 (d, J = 11,5, 1H, CH_{2}Ph), 4,51 (d, J = 2,8, 1H, H3'), 4,43 (d, J = 10,6, 1H), 4,36 (d, J = 6,2, 1H), 4,33 (d, J = 5,9, 1H), 4,25 (d, J = 11,0, 1H) (H5', H1''), 3,22 (s, 3H, Ms), 3,16 (s, 3H,Ms), 1,80 (s, J = 1,1, 3H, CH_{3}); RMN de ^{13}C (DMSO-d_{6}) \delta 171,5 (C4), 159,1 (C2), 136,9, 132,1, 128,5, 128,1, 127,9 (C6,Ph), 117,1 (C5), 89,1 (C1'), 86,1 (C2'), 85,4 (C4'), 83,7 (C3'), 72,4 (CH_{2}Ph), 68,6, 68,0 (C5', C1''), 36,9, 36,8 (Ms), 13,6(CH_{3}); Anál. calc. para C_{20}H_{24}N_{2}O_{10}S_{2}: C, 46,5; H, 4,7; N, 5,4. Hallado: C, 46,6; H, 4,8; N, 5,3.
calc. 517,1); RMN de ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 7,79 (d, J = 1,3, 1H, H6), 7,45-7,32 (m, 5H, Ph), 6,40 (d, J = 6,0, 1H, H1'), 5,60 (dd, J = 6,1, 2,8, 1H, H2'), 4,82 (d, J = 11,5, 1H, CH_{2}Ph), 4,70 (d, J = 11,5, 1H, CH_{2}Ph), 4,51 (d, J = 2,8, 1H, H3'), 4,43 (d, J = 10,6, 1H), 4,36 (d, J = 6,2, 1H), 4,33 (d, J = 5,9, 1H), 4,25 (d, J = 11,0, 1H) (H5', H1''), 3,22 (s, 3H, Ms), 3,16 (s, 3H,Ms), 1,80 (s, J = 1,1, 3H, CH_{3}); RMN de ^{13}C (DMSO-d_{6}) \delta 171,5 (C4), 159,1 (C2), 136,9, 132,1, 128,5, 128,1, 127,9 (C6,Ph), 117,1 (C5), 89,1 (C1'), 86,1 (C2'), 85,4 (C4'), 83,7 (C3'), 72,4 (CH_{2}Ph), 68,6, 68,0 (C5', C1''), 36,9, 36,8 (Ms), 13,6(CH_{3}); Anál. calc. para C_{20}H_{24}N_{2}O_{10}S_{2}: C, 46,5; H, 4,7; N, 5,4. Hallado: C, 46,6; H, 4,8; N, 5,3.
1-(3-O-Bencil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-\beta-D-treopentofuranosil)timina
(30). Se suspendió el nucleósido 29 (3,70 g, 7,16 mmol) en una
mezcla de acetona (160 ml) y H_{2}SO_{4} ac. (0,1 M, 160 ml).
Se calentó la mezcla hasta reflujo durante la noche con agitación.
Tras enfriar hasta t.a. precipitó un sólido blanco. Se redujo el
volumen hasta aproximadamente ½ a vacío y se aisló un sólido blanco
mediante filtración. Se lavó el sólido meticulosamente con agua y
se secó a vacío para dar el nucleósido 30 (3,77 g, 98%) como un
sólido blanco. EM-FAB m/z hallado 535,0
([MH]^{+}, calc. 535,1); RMN de ^{1}H
(DMSO-d_{6}) \delta 11,35 (s, 1H, NH),
7,41-7,32 (m, 6H, H6, Ph), 6,20 (d, J = 5,0, 1H,
H1'), 6,10 (d, J = 4,8,1H, 2'-OH), 4,77 (d, J =
11,9, 1H, CH_{2}Ph), 4,67 (d, J = 11,9, 1H,
CH_{2}Ph), 4,56 (d, J = 10,6, 1H),
4,50-4,41 (m, 3H), 4,32 (d, J = 10,6, 1H), 4,16 (d,
J = 3,7, 1H, H3'), 3,25 (s, 3H, Ms), 3,20 (s, 3H, Ms), 1,79 (s, 3H,
CH_{3}); RMN de ^{13}C (DMSO-d_{6}) \delta
163,9 (C4), 150,6 (C2), 137,8, 137,6, 128,4, 127,9, 127,7 (C6, Ph),
108,2 (C5), 84,8 (C1'), 84,3 (C3'), 81,7 (C4'), 73,3 (C2'), 72,3
(CH_{2}Ph), 68,1, 67,6 (C5', C1''), 37,0, 36,8 (Ms), 12,2
(CH_{3}); Anál. calc. para C_{20}H_{26}N_{2}O_{11}S_{2}:
C, 44,9; H, 4,9;N, 5,2. Hallado: C, 44,5; H, 4,8; N, 5,1.
1-(3-O-Bencil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-2-O-trifluorometansulfonil-\beta-D-treo-pentofuranosil)timina
(31). Se disolvió el nucleósido 30 (300 mg, 0,56 mmol) en
piridina anhidra (2 x 5 ml) y se concentró a vacío para eliminar
las trazas de agua. Se disolvió el compuesto en una mezcla de
diclorometano anhidro (20 ml) y piridina anhidra (0,45 ml, 5,60
mmol) seguido por la adición de DMAP (274 mg, 2,24 mmol). Tras
enfriar hasta 0ºC, se añadió gota a gota anhídrido
trifluorometansulfónico (0,19 ml, 1,12 mmol) durante 30 min. Se
agitó la mezcla de reacción durante otra 1,5 h y se vertió en
NaHCO_{3} ac. sat. enfriado en hielo (20 ml). Se separó la fase
orgánica y se lavó sucesivamente con HCl ac. (1 M, 2 x 20 ml) y
NaHCO_{3} ac. sat. (2 x 20 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se
filtró y se evaporó a vacío. Se purificó el resto mediante DCVC
(EtOAc al 0-100% en n-heptano v/v)
produciendo el nucleósido 31 (302 mg, 80%) como una espuma blanca.
EM-FAB m/z hallado 667,0 ([MH]^{+}, calc.
667,0); RMN de ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,62
(s a, 1H, NH), 7,51 (s, 1H, H6), 7,40-7,33 (m, 5H,
Ph), 6,45 (s a, 1H, H1'), 5,91 (t, J = 6,0, 1H, H2'), 4,97 (d, J=
5,7, 1H, H3'), 4,82-4,36 (m, 6H, CH_{2}Ph,
H5'a, H5'b, H1''a, H1''b), 3,30 (s, 3H, Ms), 3,24 (s, 3H, Ms), 1,81
(s, 3H,CH_{3}); RMN de ^{13}C (DMSO-d_{6})
\delta 163,3 (C4), 150,0 (C2), 136,5, 128,3, 128,0, 127,8 (C6,
Ph), 117,6 (q, J = 320, CF_{3}), 110,1 (C5), 88,0 (C1'), 81,7,
81,0 (C3', C4'), 73,1 (CH_{2}Ph), 68,0, 67,6 (C5', C1''), 36,7,
36,6 (Ms), 11,8 (CH_{3}); Anál. calc. para
C_{21}H_{25}F_{3}N_{2}O_{13}S_{3}: C, 37,8; H, 3,8; N,
4,2. Hallado: C, 38,1; H, 3,8; N, 4,1.
A una disolución de nucleósido 31 (215 mg, 0,32
mmol) en DMF anhidra (10 ml) se añadieron NaN_{3} (23 mg, 0,35
mmol) y 15-corona-5 (64 \mul, 0,32
mmol). Se agitó la mezcla a 80ºC durante 1 h y después se enfrió
hasta t.a. sobre la cual se añadió agua (20 ml). Se extrajo la
disolución con EtOAc (50 ml) y se lavó la fase orgánica con
NaHCO_{3} ac. sat. (2 x 20 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se
filtró y se evaporó hasta sequedad a vacío. Se purificó el resto
mediante DCVC (EtOAc al 50-100% en
n-heptano v/v) produciendo el nucleósido 32 (164
mg, 91% a partir de 31) como una espuma blanca. Los datos analíticos
eran idénticos a los notificados anteriormente.
Se enfrió una disolución de nucleósido 30 (5,35
g, 10 mmol) en diclorometano anhidro (300 ml) hasta 0ºC. Se
añadieron piridina anhidra (8,08 ml, 100 mmol) y DMAP (4,89 g, 40
mmol) seguido por la adición gota a gota de anhídrido
triflourometansulfónico (3,3 ml, 20 mmol). Tras 2 h a 0ºC, se
extinguió la reacción mediante la adición de NaHCO_{3} ac. sat.
enfriado en hielo (200 ml) y la mezcla de reacción se transfirió a
un embudo de decantación. Se separaron las fases y se extrajo la
fase ac. con diclorometano (200 ml). Se lavaron las fases orgánicas
combinadas con HCl ac. (1,0 M, 2 x 300 ml) y NaHCO_{3} ac. sat.
(300 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se
concentraron a vacío para dar un sólido blanco. Se disolvió el
sólido en DMF anhidra (300 ml) y se añadió NaN_{3} (1,86 g, 30
mmol). Tras agitar a t.a. durante 4 h se añadió salmuera (300 ml) y
se transfirió la mezcla a un embudo de decantación. Se extrajo la
fase ac. con diclorometano (3 x 200 ml) y se secaron
(Na_{2}SO_{4}) las fases orgánicas combinadas, se filtraron y
se concentraron a vacío produciendo un resto amarillo que se
purificó mediante DCVC (\diameter 5 cm, EtOAc al
25-100% en n-heptano v/v,
incrementos del 5%, fracciones de 100 ml) produciendo el nucleósido
32 (5,1 g, 91% a partir de 30) como un sólido blanco. Los datos
analíticos eran idénticos a los notificados anteriormente.
(1R,3R,4R,7S)-7-Benciloxi-1-metansulfoniloximetil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2:2:1]heptano
(33). A una disolución de 32 (5,83 g, 10,4 mmol) en THF (300
ml) a t.a. se añadieron NaOH ac. (2,0 M, 104 ml, 208 mmol) y
PMe_{3} en THF (1,0 M, 20,8 ml, 20,8 mmol) con agitación. Tras 8
h, se eliminó parcialmente el THF a presión reducida. Se añadieron
salmuera (200 ml) y EtOAc (300 ml) y se separaron las fases. Se
extrajo la fase ac. con EtOAc (2 x 300 ml) y diclorometano (2 x 300
ml). Se secaron (Na_{2}SO_{4}) las fases orgánicas combinadas,
se filtraron y se concentraron a vacío para dar el nucleósido 33
(4,22 g, 93%) como un sólido blanco. R_{f} = 0,15 (MeOH al 10% en
EtOAc, v/v); EM-ESI m/z hallado 438,0
([MH]^{+}, calc. 438,1); RMN de ^{1}H
(DMSO-d_{6}) \delta 11,33 (s a, 1H, NH), 7,46
(s, 1H, H6), 7,36-7,27(m, 5H, Ph), 5,44 (s,
1H, H1'), 4,67 (d, J = 11,7, 1H), 4,59 (d, J = 11,5, 1H), 4,56 (d, J
= 11,9, 1H), 4,52 (d, J = 11,7, 1H) (H5', CH_{2}Ph), 3,84 (s, 1H,
H3'), 3,65 (s, 1H, H2'), 3,26 (s, 3H, Ms), 3,06 (d, J = 10,1, 1H,
H1''a), 2,78 (d, J = 9,9, 1H, H1''b), 1,77 (s, 3H, CH_{3}); RMN
de ^{13}C (DMSO-d_{6}) \delta 163,9 (C4),
150,1 (C2), 137,9, 134,7, 128,2, 127,7, 127,6 (C6, Ph),108,3 (C5),
88,4 (C1'), 85,6 (C4'), 76,3 (C3'), 70,9, 66,6 (CH_{2}Ph,
C5'), 59,4 (C2'), 50,1 (C1''), 36,9 (Ms), 12,3 (CH_{3}); Anál.
calc. para C_{19}H_{23}N_{3}O_{7}S: C, 52,1; H, 5,3; N,
9,6. Hallado: C, 52,0; H, 5,2; N, 9,2.
(1R,3R,4R,7S)-7-Benciloxi-1-metansulfoniloximetil-5-metil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2:2:1]heptano
(34). A una disolución de 33 (4,22 g, 9,64 mmol) en ácido
fórmico (20 ml) se añadió formaldehído (disolución ac. al 37%, 20
ml) con agitación y se calentó la mezcla de reacción hasta 80ºC.
Tras 1 h, se diluyó la reacción con EtOAc (150 ml) y se extinguió
vertiéndola cuidadosamente en NaHCO_{3} ac. sat. (100 ml). Se
separaron las fases y se lavó la fase orgánica con NaHCO_{3} ac.
sat. (4 x 100 ml). Se extrajeron las fases ac. combinadas con
diclorometano (2 x 200 ml). Se secaron (Na_{2}SO_{4}) las fases
orgánicas combinadas, se filtraron y se concentraron a presión
reducida. La purificación mediante DCVC (\diameter 6 cm, MeOH al
0-15% en EtOAc v/v, incrementos del 1%, fracciones
de 100 ml) proporcionaron el nucleósido 34 (3,89 g, 90%) como un
sólido color crema. R_{f} = 0,30 (MeOH al 10% en EtOAc, v/v);
EM-ESI m/z hallado 452,1 ([MH]^{+}, calc.
452,1); RMN de ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta
11,34 (s a, 1H, NH), 7,43 (s, 1H, H6), 7,34-7,28 (m,
5H, Ph), 5,58 (s, 1H, H1'), 4,67 (m, 4H, H5', CH_{2}Ph),
3,88 (s, 1H, H3'), 3,58 (s, 1H, H2'), 3,27 (s, 3H, Ms), 2,98 (d, J
= 9,7, 1H, H1''a), 2,76 (d, J = 9,7, 1H, H1''b), 2,57 (s, 3H,
NCH_{3}), 1,76 (s, 3H, CH_{3}); RMN de ^{13}C
(DMSO-d_{6}) \delta 163,9 (C4), 149,9 (C2),
137,6 (Ph), 134,6 (C6),128,3, 127,7 (Ph), 108,4 (C5), 86,1 (C1'),
85,3 (C4'), 77,3 (C3'), 71,0, 66,3 (CH_{2}Ph, C5'), 64,9
(C2'), 58,7 (C1''), 40,8 (NCH_{3}), 36,9 (Ms), 12,3 (CH_{3});
Anál. calc. para C_{20}H_{25}N_{3}O_{7}S\cdot0,25
H_{2}O: C, 52,7; H, 5,6; N, 9,1. Hallado: C, 52,9; H, 5,6;N,
8,9.
(1R,3R,4R,7S)-7-Benciloxi-1-hidroximetil-5-metil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2:2:1]heptano
(35). Se disolvió el compuesto 34 (3,00 g, 6,64 mmol) en DMF
anhidra (30 ml) y se añadió benzoato de sodio (1,93 g, 13,3 mmol).
Se calentó la mezcla de reacción hasta 100ºC durante 7 h y después
se enfrió hasta t.a. Se añadió metóxido de sodio (1,44 g, 26,6
mmol) y tras 1 h se diluyó la reacción con diclorometano (100 ml) y
se lavó con salmuera (2 100 ml). Se extrajeron las fases ac.
combinadas con diclorometano (2 x 50 ml). Se secaron
(Na_{2}SO_{4}) las fases orgánicas combinadas y se concentraron
a presión reducida. Se disolvió el resto en HCl ac. (1 M, 15 ml) y
se liofilizó produciendo un sólido color crema. La purificación
mediante DCVC (\diameter 4 cm, MeOH al 0-10% en
diclorometano v/v, incrementos del 0,5%, fracciones de 50 ml)
proporcionó la sal clorhidrato del nucleósido 35 (2,72 g, 98%) como
un sólido color crema. R_{f} = 0,19 (MeOH al 7% en diclorometano,
v/v); EM-ESI m/z hallado 374,1 ([MH]^{+},
calc. 374,2), 408,1, 410,1 ([MCl]^{-}, calc. 408,1,410,1);
RMN de ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,43 (s a,
1H, NH), 7,63 (s, 1H, H6), 7,45-7,29 (m, 5H, Ph),
5,60 (s, 1H, H1'), 4,80 (t, J = 5,7, 1H, 5'-OH),
4,67-4,50 (m, 2H, CH_{2}Ph), 3,87 (s, 1H,
H3'), 3,67 (d, J = 6,0, 2H, H5'), 3,38 (s, 1H, H2'), 2,88 (d, J=
9,2, 1H, H1''a), 2,66 (d, J = 9,5, 1H, H1''b), 2,57 (s, 3H,
NCH_{3}), 1,75 (s, 3H, CH_{3}); RMN de ^{13}C
(DMSO-d_{6}) \delta 164,0 (C4),149,8 (C2), 137,0
(Ph), 134,4 (C6), 128,5, 127,8 (Ph), 108,9 (C5), 88,4 (C1'), 88,0
(C4'), 77,8 (C3'), 71,0, (CH_{2}Ph), 66,0,65,7 (C2', C5'),
61,4 (C1''), 40,1 (NCH_{3}), 12,6 (CH_{3}); Anál. calc. para
C_{19}H_{23}N_{3}O_{5}\cdotHCl\cdotH_{2}O: C, 53,3;
H, 6,1; N, 9,8. Hallado: C, 53,0; H, 6,3; N, 9,6.
(1R,3R,4R,7S)-7-Hidroxi-7-hidroximetil-5-metil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2:2:1]heptano
(36). Se disolvió el compuesto 35 (2,60 g, 6,64 mmol) en ácido
acético glacial (50 ml) y se extrajo el aire del matraz de reacción
y se llenó con argón varias veces. Se añadió
Pd(OH)_{2} sobre carbón (20% de humedad, 200 mg) y
se extrajo el aire del matraz de reacción y se llenó con gas
hidrógeno varias veces. Se agitó vigorosamente la reacción bajo una
atmósfera de gas hidrógeno durante 8 h. Se eliminó el catalizador
mediante filtración a través de un lecho de celita. Se lavó
meticulosamente la celita con metanol caliente (200 ml). Se
eliminaron los disolventes a vacío. Se disolvió el resto en agua
(10 ml) y se liofilizó produciendo la sal acetato del nucleósido 36
(2,10 g, 97%) como escamas color crema. R_{f} = 0,11 (0,5% de
Et_{3}N, 10% de MeOH, 89,5% de EtOAc, v/v/v);
EM-ESI m/z hallado 284,1 ([MH]^{+}, calc.
284,1). Todos los datos analíticos eran idénticos a los notificados
previamente. ^{7}
(1R,3R,4R,7S)-1-(4,4'-Dimetoxitritiloximetil)-7-hidroxi-5-metil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2:2:1]heptano
(37). Se disolvió el compuesto 36 (2,00 g, 5,83 mmol) en
piridina anhidra (2 x 50 ml) y se concentró a vacío. Se disolvió el
nucleósido en piridina anhidra (50 ml) y se añadió cloruro de
4,4'-dimetoxitritilo (2,96 g, 8,74 mmol) y se agitó
la reacción a t.a. durante 9 h. Se concentró la reacción hasta ½ del
volumen a vacío y se diluyó el resto con EtOAc (100 ml). Se lavó la
fase orgánica con NaHCO_{3} ac. sat. (3 x 100 ml) y salmuera (100
ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a presión
reducida. La purificación mediante DCVC (\diameter 4 cm, MeOH al
0-10% en EtOAc + TEA al 0,5% v/v, incrementos del
0,5%, fracciones de 50 ml) proporcionó el nucleósido 37 (3,13 g,
92%) como un sólido color crema. R_{f} = 0,38 (0,5% de Et_{3}N,
10% de MeOH, 89,5% de EtOAc, v/v/v); EM-ESI m/z
hallado 586,2 ([MH]^{+}, calc. 586,2). Todos los datos
analíticos eran idénticos a los notificados previamente. (Singh, S.
K.; Kumar, R.; Wengel, J. J. Org. Chem. 1998,63,
10035-10039).
(1R,3R,4R,7S)-7-(2-Cianoetoxi(di-isopropilamino)fosfinoxi)-1-(4,4'-dimetoxitritiloximetil)-5-metil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptano
(38). Se disolvió el compuesto 37 (500 mg, 0,85 mmol) en
diclorometano anhidro (4 ml) y se añadió
4,5-dicianoimidazol en MeCN (1,0 M, 0,59 ml, 0,59
mmol) a temperatura ambiente con agitación. Se añadió gota a gota
2-cianoetil-N,N,N',N'-tetraisopropilfosforodiamidita
(0,27 ml, 0,85 mmol) a la mezcla de reacción. Tras 2 h, se diluyó
la reacción con diclorometano (10 ml) y se transfirió a un embudo
de decantación y se extrajo con NaHCO_{3} ac. sat. (2 x 15 ml) y
salmuera (15 ml). Se extrajeron las fases ac. combinadas con
diclorometano (10 ml). Se combinaron las fases orgánicas y se
secaron (Na_{2}SO_{4}). Tras la filtración se evaporó a vacío la
fase orgánica para dar el nucleósido 29 como una espuma ligeramente
amarilla (660 mg, rendimiento del 98%). R_{f} = 0,56 (0,5% de
Et_{3}N, 10% de MeOH, 89,5% de EtOAc, v/v/v);
EM-ESI m/z hallado 786,3 ([MH]^{+}, calc
786,4). RMN de ^{19}P (CDCl_{3}) \delta 149,8, 149,6. (Singh,
S. K.; Kumar, R.; Wengel, J. J. Org. Chem. 1998, 63,
10035-10039).
(1R,3R,4R,7S)-1-(4,4'-Dimetoxitritiloximetil)-7-hidroxi-5-N-metil-3-(4-N-benzoil-5-metil-citosin-1-il)-2-oxa-5-
azabiciclo[2:2:1]heptano (43). Se disolvió el
compuesto 37 (1,5 g, 2,5 mmol) en piridina anhidra (25 ml). Se
añadió anhídrido acético (2,4 ml, 25 mmol) y se agitó la reacción
durante 24 h a temperatura ambiente. Se extinguió la reacción con
agua (25 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 25 ml). Se lavaron las
fases orgánicas combinadas con NaHCO_{3} ac. sat. (2 x 50 ml),
salmuera (50 ml), y se secaron (Na_{2}SO_{4}). Se filtró la fase
orgánica y se evaporó a vacío para dar el compuesto 39 como una
espuma blanca. Se eliminó el agua residual del producto bruto
mediante evaporación en MeCN anhidro. Entonces se disolvió el
producto en MeCN anhidro (50 ml) y se añadió Et_{3}N (3,5 ml,
25,3 mmol) seguido por 1,2,4-triazol (1,75 g, 25
mmol). Se enfrió la mezcla de reacción en un baño de hielo y se
añadió gota a gota POCl_{3} (0,48 ml, 5,0 mmol) para dar una
suspensión blanca. Tras 15 min., se dejó que la mezcla de reacción
alcanzase la temperatura ambiente. Se agitó la suspensión amarilla
resultante bajo argón a temperatura ambiente. Tras 4,5 h, se vertió
la mezcla de reacción en una suspensión de NaHCO_{3} ac. sat. (50
ml) y hielo y se extrajo con EtOAc (3 x 25 ml). Se lavaron las fases
orgánicas combinadas con salmuera (100 ml) y se secaron
(Na_{2}SO_{4}). La filtración y evaporación a vacío
proporcionaron la trialzolida 40 como una espuma rosa que se
disolvió inmediatamente en MeCN anhidro (50 ml) y se añadió
NH_{4}OH ac. sat. (50 ml). Tras agitar durante 16 h, se añadió
NaCl sólido hasta que se separaron las fases. Se extrajo la fase
ac. con EtOAc (3 x 50 ml) y se secaron (Na_{2}SO_{4}) las fases
orgánicas combinadas, se filtraron y se evaporaron para dar el
nucleósido 41 como un sólido color crema. Se disolvió el producto en
piridina anhidra (50 ml) y se añadió cloruro de benzoílo (0,87 ml,
7,5 mmol). Se agitó la reacción durante 3 h bajo argón y después se
concentró a vacío. Se diluyó el resto con EtOAc (100 ml) y se
extrajo con NaHCO_{3} ac. sat. (100 ml). Se separaron las fases y
se extrajo la fase ac. con EtOAc (2 x 100 ml). Se lavaron las fases
orgánicas combinadas con salmuera (200 ml) y se secaron
(Na_{2}SO_{4}). La filtración y evaporación de la fase orgánica
produjeron un aceite transparente 42 que se disolvió en THF (100
ml). Se añadió LiOH (ac., 1,0 M, 25 ml) y se agitó la reacción
durante 2 h. Se transfirió la mezcla de reacción a un embudo de
decantación con EtOAc (100 ml) y salmuera (100 ml) y se extrajo con
EtOAc (2 x 100 ml). Se lavaron las fases orgánicas combinadas con
salmuera (200 ml) y se secaron (Na_{2}SO_{4}). La filtración y
evaporación a vacío dieron una espuma amarilla que se purificó
mediante DCVC (\diameter 4 cm, EtOAc al 50-100%,
n-heptano v/v (la columna se trató previamente con
Et_{3}N al 1% en heptano v/v), incrementos del 5%, fracciones de
100 ml)) produciendo el nucleósido 43 (1,12 g, 65%) como un sólido
blanco. R_{f} = 0,56 (EtOAc); EM-ESI m/z hallado
689,3 ([MH]^{+},calc. 689,3); RMN de ^{1}H
(DMSO-d_{6}) \delta 8,16 (s, 2H, Bz), 7,86 (s,
^{1}H, H6), 7,61-7,44 (m, 5H, Bz, DMT),
7,36-7,24 (m, 7H, Bz, DMT), 6,92 (dd, 4H, J = 9,0,
2,4, DMT), 5,64 (s, 1H, H1'), 5,41 (d, J = 5,3, 1H, H3'), 4,14 (d,
J = 5,3, 1H, H2'), 5,64(s, 1H, H1'), 3,75 (s, 6H,
OCH_{3}), 3,39 (d, J = 10,8, 1H, H5 '), 3,28 (d, J = 10,8 Hz, 1H,
H5'), 2,89 (d, J = 9,5, 1H, H1''), 2,59 (s, 3H, NCH_{3}), 2,58
(d, J = 9,2, 1H, H1''), 1,73 (s, 3H, CH_{3}); RMN de ^{13}C
(DMSO-d_{6}) \delta 178,2 (PhC(O)),
160,3 (C4), 158,2 (Ph), 147,0 (C2), 144,8 (Ph), 137,4 (C6), 135,4,
135,2, 132,5, 129,9, 129,3, 128,4'' 128,0, 127,7, 126,9, 113,3
(Ph), 108,6 (C5), 88,9 (C1'), 85,7 (C4'), 85,0 (Ph), 70,5 (C3'),
67,0 (C5'), 59,6, 58,6 (C2', C1''), 55,1 (OCH_{3}), 40,1
(NCH_{3}),14,1 (CH_{3}); Anál. calc. para
C_{40}H_{40}N_{4}O_{7}: C, 69,7; H, 5,9; N, 8,1. Hallado:
C, 69,5; H, 5,9; N, 7,7.
(1R,3R,4R,7S)-1-(4,4'-Dimetoxitritiloximetil)-7-(2-cianoetoxi(di-isopropilamino)fosfinoxi)-5-N-metil-3-(4-N-benzoil-5-metil-citosin-1-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2:2:1]heptano
(44). Se disolvió el compuesto 43 (0,50g, 0,73 mmol) en
diclorometano anhidro (10 ml) y se añadió
4,5-dicianoimidazol en MeCN (1,0 M, 0,51 ml, 0,51
mmol) a temperatura ambiente con agitación. Se añadió gota a gota
2-cianoetil-N,N,N',N'-tetraisopropilfosforodiamidita
(0,23 ml, 0,74 mmol) a la mezcla de reacción. Tras 2 h, se diluyó
la reacción con diclorometano (20 ml) y se transfirió a un embudo
de decantación y se extrajo con NaHCO_{3} ac. sat. (2 x 30 ml) y
salmuera (30 ml). Se extrajeron las fases ac. combinadas con
diclorometano (30 ml). Se combinaron las fases orgánicas y se
secaron (Na_{2}SO_{4}). Tras la filtración, se evaporó a vacío
la fase orgánica para dar una espuma amarilla. La purificación
mediante DCVC (\diameter 4 cm, EtOAc al 0-100%,
n-heptano, Et_{3}N al 0,5% v/v/v (se trató
previamente la columna con Et_{3}N al 1% en heptano v/v),
incrementos del 5%, fracciones de 50 ml) proporcionó el nucleósido
44 (0,58 g, 92%) como un sólido blanco. R_{f} = 0,67 (20% de
heptano, 79,5% de EtOAc, 0,5% de Et_{3}N, v/v/v);
EM-ESI m/z hallado 889,2 ([MH]^{+}, calc.
889,4); RMN de ^{31}P (DMSO-d_{6}) \delta
148,4, 147,4.
1-(3-O-Benzoil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-\beta-D-treopentofuranosil)timina
(52). Se calentó el anhidronucleósido 29 (30,00 g, 58,1 mmol)
hasta 70ºC en una mezcla de metanol (1000 ml) y acetona (1000 ml)
hasta que se obtuvo una disolución transparente y se dejó que la
disolución alcanzase la temperatura ambiente. Se purgó el matraz de
reacción con argón y se añadió Pd/C (Pd al 10% en peso sobre
carbono, 6,2 g, 5,8 mmol). Se agitó vigorosamente la mezcla bajo
una atmósfera de gas hidrógeno (globo). Tras 23 h, se filtró la
suspensión a través de un lecho de celita. Se recuperó el
catalizador de la celita y se sometió a reflujo en DMF (1000 ml)
durante 1 h. Se filtró la suspensión de DMF caliente a través de un
lecho de celita y se combinaron las fases orgánicas y se evaporaron
a vacío para dar
2,2'-anhidro-1-(3-hidroxi-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-\beta-D-treopentofuranosil)timina
(50) como un polvo amarillo. Se eliminaron los disolventes
residuales en una bomba de alto vacío durante la noche. Se calentó
el nucleósido bruto 50 (23 g) hasta 70ºC en DMF (300 ml) para dar
una disolución amarilla transparente que se dejó enfriar hasta
temperatura ambiente. Se añadió cloruro de benzoílo (81,7 g, 581
mmol, 67,4 ml) seguido por piridina anhidra (70 ml). Tras 18 h, se
extinguió la reacción con metanol (200 ml) y se eliminó el metanol
en exceso a vacío. A la disolución marrón oscura de nucleósido 51
(2,2'-anhidro-1-(3-O-benzoil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-\beta-D-treopentofuranosil)timina)
se añadió H_{2}SO_{4} acuoso (0,25 M, 400 ml). Se calentó la
disolución hasta 80ºC en un baño de aceite (A aprox. 50ºC se
produce la precipitación. La disolución se vuelve transparente de
nuevo a 80ºC). Tras 22 h a 80ºC, se dejó que la disolución se
enfriase hasta temperatura ambiente. Se transfirió la mezcla de
reacción a un embudo de decantación con EtOAc (1000 ml). Se extrajo
la fase orgánica con NaHCO_{3} ac. sat. (2 x 1000 ml). Se
extrajeron las fases acuosas combinadas con EtOAc (1000 ml + 500
ml). Se combinaron las fases orgánicas y se extrajeron una vez más
con NaHCO_{3} ac. sat. (1000 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}),
se filtraron y se evaporaron a vacío para dar un líquido amarillo.
Se eliminaron los disolventes residuales en una bomba de alto vacío
durante la noche para dar un jarabe amarillo. Se purificó el
producto mediante cromatografía a vacío en columna seca
(\diameter 10 cm, EtOAc al 50-100% en
n-heptano (v/v), fracciones de 100 ml, incrementos
del 10%, seguido por MeOH al 2-24% en EtOAc (v/v),
fracciones de 100 ml, incrementos del 2%). Se combinaron las
fracciones que contenían el producto y se evaporaron a vacío
produciendo el nucleósido 52 (25,1 g, 79%) como una espuma
blanca.
R_{f} = 0,54 (MeOH al 5% en EtOAc, v/v);
EM-ESI m/z hallado 549,0 ([MH]^{+}, calc.
549,1); RMN de ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta
11,39 (s a,1H, NH), 8,10-8,08 (m, 2H, Ph),
7,74-7,70 (m, 1H, Ph), 7,60-7,56
(m, 2H, Ph), 7,51 (d, J = 1,1, 1H, H6), 6,35 (d, J = 4,9,1H, H1'),
6,32 (d, J = 5,3, 1H, 2'-OH), 5,61 (d, J = 4,0, 1H,
H3'), 4,69 (d, J = 10,8, 1H), 4,59 (m, 1H, H2'), 4,55 (d, J =10,8,
1H), 4,52 (d, J = 10,8, 1H), 4,46 (d, J = 10,6, 1H) (H5' y H1''),
3,28 (s, 3H, Ms), 3,23 (s, 3H, Ms), 1,81 (s, 3H,CH_{3}); RMN de
^{13}C (DMSO-d_{6}) \delta 164,5, 163,6 (C4,
PhC(O)), 150,3 (C2), 137,7 (C6), 133,8, 129,6, 128,7, 128,6
(Ph), 108,1 (C5), 84,8 (C1'), 81,1 (C4'), 78,0 (C3'), 73,2 (C2'),
68,0, 67,1 (C5', C1''), 36,7, 36,6 (Ms), 11,9 (CH_{3}); Anál.
calc para C_{20}H_{24}N_{2}O_{12}S_{2}\cdot0,33
H_{2}O: C, 44,34; H, 4,65; N, 4,85. Hallado: C, 44,32; H, 4,58;
N, 4,77.
(1R,3R,4R,7R)-7-Benzoiloxi-1-metansulfoniloximetil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-tiabiciclo[2:2:1]heptano
(54). Se disolvió
1-(3-O-benzoil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfonil-oximetil-\beta-D-treo-pentofuranosil)timina
(52) (10,00 g, 18,23 mmol) en diclorometano anhidro (500 ml) y se
enfrió hasta 0ºC. Se añadieron piridina (15 ml) y DMAP (8,91 g,
72,9 mmol) seguido por la adición gota a gota de anhídrido
trifluorometansulfónico (10,30 g, 36,5 mmol, 6,0 ml). Tras 1 h, se
extinguió la reacción con NaHCO_{3} ac. sat. (500 ml) y se
transfirió a un embudo de decantación. Se extrajo la fase orgánica
con HCl ac. 1,0 M (500 ml), NaHCO_{3} ac. sat. (500 ml) y
salmuera (500 ml). Se evaporó a vacío la fase orgánica con tolueno
(100 ml) para dar
1-(3-O-benzoil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-2-O-trifluorometansulfonil-\beta-D-treo-pentofuranosil)timina
(53) como un polvo amarillo. Se disolvió el nucleósido bruto 53 en
DMF anhidra (250 ml) y se añadió Na_{2}S (1,57 g, 20,1 mmol) para
dar una suspensión verde oscura. Tras 3 h, se extinguió la reacción
con NaHCO_{3} ac. semisat. (500 ml) y se extrajo con
CH_{2}Cl_{2} (500 ml + 2 x 250 ml). Se extrajeron las fases
orgánicas combinadas con salmuera (500 ml), se secaron
(Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron a vacío para dar
un líquido amarillo. Se eliminó el disolvente residual durante la
noche en una bomba de alto vacío para dar una goma amarilla que se
purificó mediante cromatografía a vacío en columna seca (\diameter
6 cm, EtOAc al 50-100% en
n-heptano (v/v), fracciones de 50 ml, incrementos
del 10%, seguido por MeOH al 2-20% en EtOAc (v/v),
fracciones de 50 ml, incrementos del 2%) para dar el nucleósido 54
(6,15 g, 72%) como una espuma amarilla.
R_{f} = 0,27 (n-heptano al 20%
en EtOAc, v/v); EM-ESI m/z hallado 469,0
([MH]^{+}, calc. 469,1); RMN de ^{1}H (CDCl_{3})
\delta 8,70 (s a,1H, NH), 8,01-7,99 (m, 2H, Ph),
7,67 (d, J = 1,1, 1H, H6), 7,65-7,61 (m, 1H, Ph),
7,50-7,46 (m, 2H, Ph), 5,98 (s, 1H, H1'), 5,34 (d, J
= 2,4, 1H, H3'), 4,66 (d, J = 11,7, 1H, H5'a), 4,53 (d, J = 11,5,
1H, H5'b), 4,12 (m (que solapa con EtOAc residual), 1H, H2'),
3,15-3,13 (m, 4H, H1''a y Ms), 3,06 (d, J = 10,6,
1H, H1''b), 1,98 (d, J = 1,1, 3H, CH_{3}); RMN de ^{13}C
(CDCl_{3}) \delta 165,2, 163,5 (C4, PhC(O)), 149,9
(C2), 134,1, 133,9, 129,8, 128,7, 128,3 (C6, Ph), 110,7 (C5),
91,1(C1'), 86,8 (C4'), 72,6 (C3'), 65,8 (C5'), 50,5 (C2'),
37,9 (Ms), 35,1 (C1''), 12,5 (CH_{3}); Anál. calc para
C_{19}H_{20}N_{2}O_{8}S_{2}\cdot0,33 EtOAc: C, 49,21; H,
4,72; N, 5,47. Hallado: C, 49,25; H, 4,64; N, 5,48.
(1R,3R,4R,7R)-7-Benzoiloxi-1-benzoiloximetil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-tiabiciclo[2:2:1]heptano
(55). Se disolvió el nucleósido 54 (1,92 g, 4,1 mmol) en DMF
anhidra (110 ml). Se añadió benzoato de sodio (1,2 g, 8,2 mmol) y
se calentó la mezcla hasta 100ºC durante 24 h. Se transfirió la
mezcla de reacción a un embudo de decantación con salmuera semisat.
(200 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). Se secaron
(Na_{2}SO_{4}) las fases orgánicas combinadas, se filtraron y
se evaporaron a vacío para dar un líquido marrón. Se puso el
producto en una bomba de alto vacío para eliminar el disolvente
residual. Se purificó la goma marrón resultante mediante
cromatografía a vacío en columna seca (\diameter 4 cm, EtOAc al
0-100% en n-heptano (v/v),
fracciones de 50 ml, incrementos del 10%, seguido por MeOH al
2-10% en EtOAc (v/v), fracciones de 50 ml,
incrementos del 2%) para proporcionar el nucleósido 55 (1,64 g,
81%) como una espuma ligeramente amarilla. R_{f} = 0,57
(n-heptano al 20% en EtOAc, v/v);
EM-ESI m/z hallado 495,1 ([MH]^{+}, calc.
495,1); RMN de ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,02 (s a, 1H, NH),
8,07-7,99 (m, 4H, Ph), 7,62-7,58 (m,
2H, Ph), 7,47-7,42 (m, 5H, Ph y H6), 5,95 (s, 1H,
H1'), 5,46 (d, J = 2,2, 1H, H3'), 4,93 (d, J = 12,8, 1H, H5'a), 4,60
(d, J = 12,8,1H, H5'b), 4,17 (d, J = 2,2, 1H, H2'), 3,27 (d, J =
10,6, 1H, H1''a), 3,16 (d, J = 10,6, 1H, H1''b), 1,55 (d, J = 1,1,
3H,CH_{3}); RMN de ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 165,8, 165,1,
163,7 (C4, 2 x PhC(O)), 150,0 (C2), 133,9, 133,7, 133,6,
129,8, 129,6, 129,0,128,8, 128,6, 128,5 (C6, 2 x Ph), 110,3 (C5),
91,3 (C1'), 87,5 (C4'), 72,9 (C3'), 61,3 (C5'), 50,6 (C2'), 35,6
(C1''), 12,3 (CH_{3}); Anál. calc para
C_{25}H_{22}N_{2}O_{7}S: C, 60,72; H, 4,48; N, 5,66.
Hallado: C, 60, 34; H, 4,49; N, 5,35.
(1R,3R,4R,7R)-7-Hidroxi-1-hidroximetil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-tiabiciclo[2:2:1]heptano
(56). Se disolvió el nucleósido 55 (1,50 g, 3,0 mmol) en
metanol saturado con amoniaco (50 ml). Se selló el matraz de
reacción y se agitó a temperatura ambiente durante 20 h. Se
concentró la mezcla de reacción a vacío para dar una goma amarilla
que se purificó mediante cromatografía a vacío en columna seca
(\diameter 4 cm, MeOH al 0-16% en EtOAc (v/v),
incrementos del 1%, fracciones de 50 ml) proporcionando el
nucleósido 56 (0,65 g, 76%) como cristales transparentes. R_{f} =
0,31 (MeOH al 10% en EtOAc, v/v); EM-ESI m/z hallado
287,1 ([MH]^{+}, calc. 287,1); RMN de ^{1}H
(DMSO-d_{6}) \delta 11,32 (s a, 1H, NH), 7,96
(d, J = 1,1, 1H, H6), 5,95 (s, 1H, H6), 5,70 (d, J = 4,2, 1H,
3'-OH), 5,62 (s, 1H, H1'), 4,49 (t, J = 5,3,
1H, 5'-OH), 4,20 (dd, J = 4,1 y 2,1, 1H,
H3'),3,77-3,67 (m, 2H, H5'), 3,42 (d, J = 2,0, 1H,
H2'), 2,83 (d, J = 10,1, 1H, H1''a), 2,64 (d, J = 10,1, 1H, H1''b),
1,75 (d, J =1,1, 3H, CH_{3}); RMN de ^{13}C
(DMSO-d_{6}) \delta 163,8 (C4), 150,0 (C2),
135,3 (C6), 107,5 (C5), 90,2, 89,6 (C1' y C4'), 69,4 (C3'), 58,0
(C5'), 52,1 (C2'), 34,6 (C1''), 12,4 (CH_{3}); Anál. calc para
C_{11}H_{14}N_{2}O_{5}S: C, 46,15; H, 4,93; N, 9,78.
Hallado: C, 46,35; H, 4,91; N, 9,54.
(1R,3R,4R,7R)-1-(4,4'-Dimetoxitritiloximetil)-7-hidroxi-5-metil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-tiabiciclo[2:2:1]heptano
(57). Se disolvió el nucleósido 56 (0,60 g, 2,1 mmol) en
piridina anhidra (10 ml). Se añadió cloruro de
4,4'-dimetoxitritilo (0,88 g, 2,6 mmol) y se agitó
la reacción a temperatura ambiente durante 3 h. Se transfirió la
mezcla de reacción a un embudo de decantación con agua (100 ml) y
se extrajo con EtOAc (100 ml + 2 x 50 ml). Se lavaron las fases
orgánicas combinadas con NaHCO_{3} ac. sat. (100 ml), salmuera
(100 ml) y se evaporó hasta sequedad a vacío para dar un líquido
amarillo viscoso. Se redisolvió el producto en tolueno (50 ml) y se
concentró a vacío para dar una espuma amarilla. Se secó la espuma
en una bomba de alto vacío durante la noche y se purificó mediante
cromatografía a vacío en columna seca (\diameter 4 cm, EtOAc al
10-100% en n-heptano (v/v),
incrementos del 10%, fracciones de 50 ml) proporcionando el
nucleósido 57 (1,08 g, 88%) como una espuma blanca. R_{f} = 0,24
(n-heptano al 20% en EtOAc, v/v);
EM-ESI m/z hallado 587,1 ([M-H]+,
calc. 587,19); RMN de ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,96 (s a 1H,
NH), 7,74 (d, J = 1,1, 1H, H6), 7,46-7,44 (m, 2H,
Ph), 7,35-7,22 (m, 9H, Ph),
7,19-7,7,15 (m, 2H, Ph), 6,86-6,80
(m, 2H, Ph), 5,82 (s, 1H, H1'), 4,55 (dd, J = 9,3 y 2,1, 1H, H3'),
3,79 (s, 6H, OCH_{3}), 3,71 (d, J = 2,0, 1H, H2'), 3,50 (s, 2H,
H5'), 2,81 (d, J = 10,8, 1H, H1''a), 2,77 (d, J = 10,8; 1H, H1''b),
2,69 (d, J = 9,2, 1H, 3'-OH), 1,42 (s, 3H,
CH_{3}); RMN de ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 158,7 (C4), 150,1
(C2), 144,1, 135,2, 135,1, 130,1, 129,1, 128,1, 128,0, 127,1, 127,0
(C6, Ph), 113,3 (Ph), 110,0 (C5), 90,2 (C(Ph)_{3}),
89,6 (C1'), 87,0 (C4'), 71,7 (C3'), 60,9 (C5'), 55,2 (C2'), 34,7
(C1''), 12,2 (CH_{3}); Anál. calc para
C_{32}H_{32}N_{2}O_{7}S\cdot0,5 H_{2}O: C, 64,31; H,
5,57; N, 4,69. Hallado: C, 64,22; H, 5,67; N, 4,47.
(1R,3R,4R,7R)-7-(2-Cianoetoxi(di-isopropilamino)fosfinoxi)-1-(4,4'-dimetoxitritiloximetil)-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-tiabiciclo[2.2.1]heptano
(58). Se disolvió el nucleósido 57 (0,78 g, 1,33 mmol) en
diclorometano anhidro (5 ml) y se añadió una disolución 1,0 M de
4,5-dicianoimidazol en acetonitrilo (0,93 ml, 0,93
mmol) seguido por la adición gota a gota de
2-cianoetil-N,N,N;N'-tetraisopropilfosforodiamidita
(0,44 ml, 1,33 mmol). Tras 2 h, se transfirió la reacción a un
embudo de decantación con diclorometano (40 ml) y se extrajo con
NaHCO_{3} ac. sat. (2 x 25 ml) y salmuera (25 ml). Se secó
(Na_{2}SO_{4}) la fase orgánica, se filtró y se evaporó a vacío
para dar el nucleósido 58 (1,04 g, 99%) como una espuma blanca.
R_{f} = 0,29 y 0,37 - dos diastereoisómeros
(n-heptano al 20% en EtOAc, v/v);
EM-ESI m/z hallado 789,3 ([MH]^{+}, calc.
789,30); RMN de ^{31}P (DMSO-d_{6}) \delta
150,39, 150,26.
(1R,3R,4R,7S)-7-Benriloxi-1-metansulfoniloximetil-3-(timin-1-il)-2-oxa-5-tiabiciclo[2:2:1]heptano
(60). Se disolvió el nucleósido 31 (0,10 g, 0,17 mmol) en DMF
anhidra (1 ml) y se añadió tioacetato de potasio (25 mg, 0,22
mmol). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 5 h y se
transfirió a un embudo de decantación con salmuera (10 ml). Se
extrajo la fase ac. con diclorometano (3 x 10 ml) y se secaron
(Na_{2}SO_{4}) las fases orgánicas combinadas, se filtraron y
se evaporaron a vacío para dar un líquido amarillo. Se disolvió el
producto bruto 59 en THF (2 ml) y se añadió LiOH\cdotH_{2}O (35
mg en 1 ml de agua, 0,84 mmol). Tras 20 min., se completó la
reacción y se extinguió mediante la adición de ácido acético glacial
(0,5 ml). Se eliminó a vacío el THF y se disolvió el resto en
diclorometano (10 ml) y se extrajo con NaHCO_{3} ac. sat. (2 x 10
ml). Se extrajeron las fases ac. con diclorometano (10 ml). Se
secaron (Na_{2}SO_{4}) las fases orgánicas combinadas, se
filtraron y se evaporaron a vacío para dar un líquido amarillo que
se purificó mediante DCVC (\diameter 1 cm, EtOAc al
0-80% en n-heptano v/v, incrementos
del 2,5%, fracciones de 10 ml). Se combinaron las fracciones que
contenían el nucleósido 60 y se evaporaron a vacío para proporcionar
un polvo blanco (36 mg, 47% a partir de 31). R_{f} = 0,38 (EtOAc
al 80% en n-heptano, v/v); EM-ESI
m/z hallado 455,0 ([MH]^{+}, calc. 455,1); RMN de ^{1}H
(DMSO-d_{6}) \delta 11,38 (s a, 1H, NH), 7,50
(d, J = 1,1, 1H, H6), 7,36-7,27 (m, 5H, Ph), 5,77
(s, 1H, H1'), 4,68 (d, J = 11,7, 1H), 4,61 (d, J = 11,7, 1H), 4,60
(d, J = 11,7, 1H), 4,56 (d, J = 11,5, 1H) (H5', CH_{2}Ph),
4,20 (d, J = 1,8, ^{1}H, H3'), 4,00 (d, J = 2,0, 1H, H2'), 3,29
(s, 3H, Ms), 3,02 (d, J = 10,6, 1H, H1''a), 2,90 (d, J = 10,4, 1H,
H1''b), 1,78 (s, 3H, CH_{3}); RMN de ^{13}C
(DMSO-d_{6}) \delta 163,9 (C4), 150,1 (C2),
137,5, 134,1, 128,3, 127,7 (C6, Ph), 108,3 (C5), 90,5 (C1'), 86,6
(C4'), 76,9 (C3'), 70,9, 66,8 (C5', CH_{2}Ph), 49,5 (C2'),
36,8 (Ms), 35,1 (C1''), 12,3 (CH_{3}); Anál. calc para
C_{19}H_{22}N_{2}O_{7}S_{2}\cdot0,33 EtOAc: C, 50,5;
H,5,1; N, 5,8. Hallado: C, 50,8; H, 5,1; N, 5,8.
9-(3-O-bencil-5-O-(metansulfonil)-4-C-[[(metansulfonil)oxi]metil]-2-O-trifluorometansulfonil-\alpha-L-treo-pentofuranosil)6-N-benzoiladenina
(62). Se concentró el compuesto 61^{1} (9,58 g, 15 mmol) en
acetonitrilo seco con el fin de eliminar el agua residual. Se
disolvió el resto en diclorometano seco (100 ml) y se enfrío hasta
-30ºC mientras se agitaba bajo Ar. Se añadió piridina seca (3,6 ml,
44 mmol) a la disolución, seguido por la adición gota a gota de
Tf_{2}O (3,7 ml, 22 mmol). Se dejó que la mezcla de reacción
alcanzase los 0ºC. La CCF (eluyente: EtOAc) muestra la conversión
total en el producto (R_{f} = 0,66). Se extinguió la reacción
mediante la adición de disolución sat. de NaHCO_{3} (100 ml) y se
diluyó con diclorometano (100 ml). Se separaron las fases y se lavó
la fase org. con disolución sat. de NaHCO_{3} (100 ml), salmuera
(100 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se eliminó el
disolvente a vacío para proporcionar una espuma naranja, que se
purificó mediante cromatografía en columna seca (eluyente: heptano
\rightarrow EtOAc) para proporcionar triflato puro 62 (8,53 g,
rendimiento del 74%). R_{f} = 0,60 (eluyente: EtOAc).
EM-ESI m/z hallado 780,0 ([MH]^{+}, calc.
780,0); RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta 9,05
(^{1}H, s, N-H), 8,80 (1H, s, base), 8,21 (1H, s,
base), 8,00 (2H, d, J = 7,3 Hz, Bz), 7,61 (1H, t, J = 7,3 Hz, Bz),
7,52 (2H, t, J = 7,3 Hz, Bz), 7,41-7,30 (5H, m,
Bn), 6,56 (1H, t, J = 5,5 Hz, H-2'), 6,34 (1H, d, J
= 5,5 Hz, H-1'), 4,81 (2H, d, J = 10,4 Hz,
CH_{2}), 4,73 (1H, d, J= 5,9 Hz, H-3'), 4,65 (1H,
d, J = 11,3 Hz, CH_{2}), 4,44 (1H, d, J = 11,3 Hz, CH_{2}),
4,34 (1H, d, J = 11,1 Hz, CH_{2}), 4,14 (1H, d, J = 11,4 Hz,
CH_{2}), 3,05 (3H, s, OMs), 2,91 (3H, s, OMs); RMN de ^{13}C
(CDCl_{3}, 100 MHz): \delta 164,34, 152,94, 151,26, 149,88,
141,55, 135,07, 133,24, 132,84, 128,98, 128,83, 128,80, 128,49,
127,70, 86,49, 85,03, 83,62, 80,33, 74,49, 67,51, 67,22, 37,76
(OMs), 37,41 (OMs);^{1} Se preparó el compuesto 61 según el
procedimiento descrito en JACS, 124, pág. 2164-2176
(2002). También se describe en este artículo el triflato 62, pero no
como un producto aislado.
(1S,3R,4S,7R)-7-benciloxi-3-(6-N-benzoiladenin-9-il)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptano
(53). Se disolvió 62 puro (100 mg, 0,128 mmol) en THF (7 ml),
se enfrió hasta 0ºC y se añadió LiOH 1 M (1,3 ml, 10 equiv.). Se
dejó que la mezcla de reacción alcanzase lentamente la t.a. Cuando
CL-EM confirmó la conversión completa de 62 en 63,
se neutralizó la reacción con HCl 1 M sat. con NaCl (1,3 ml), se
diluyó con DCM (20 ml) y salmuera (10 ml). Se separaron las fases y
se extrajo la fase acuosa con DCM (2 x 20 ml). Se secaron
(Na_{2}SO_{4}) las fases orgánicas combinadas, se filtraron y
se eliminó el disolvente a vacío para proporcionar un aceite
transparente (63)^{2} (rendimiento cuantitativo). R_{f} =
0,49 (Eluyente: EtOAc). EM-ESI m/z hallado 552,2
([MH]^{+}, calc. 552,1); RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 400
MHz): 8,64 (1H, s, N-H), 8,44 (1H, s, adenina),
7,95 (2H, d, J = 7,1 Hz, Bz), 7,50 (1H, t, J = 7,3 Hz, Bz), 7,40
(1H, t, J = 7,3 Hz, Bz), 7,07-6,79 (5H, m, OBn),
6,11 (1H, s, H-1'), 4,66 (1H, d, J = 11,5Hz,
CH_{2}), 4,61 (1H, d, J = 11,5 Hz, CH_{2}), 4,48 (1H, d, J =
1,8 Hz, H-2'/H-3'), 4,30 (1H, d, J =
11,9 Hz, CH_{2}), 4,12 (1H,d, J = 11,9 Hz, CH_{2}), 4,07 (1H,
d, J = 1,8 Hz, H-3'/H-2'), 4,02 (1H,
d, J = 8,6 Hz, CH_{2}), 3,94 (1H, d, J = 8,6 Hz, CH_{2}), 3,02
(3H, s, OMs); RMN de ^{13}C (CDCl_{3}, 100 MHz): \delta
165,31, 152,03, 150,45, 148,54, 141,99, 135,38, 132,90, 132,84,
128,63, 128,37, 128,26, 127,98, 127,88, 121,34, 87,90, 86,16, 79,84,
76,29, 73,45, 72,51, 67,76, 64,47, 37,48 (OMs). ^{2} El compuesto
63 también se describe en JACS 124, pág. 2164-2176
(2002) pero no como un producto aislado.
1-(2-azido-3-O-bencil-4-C-metansulfoniloximetil-5-O-metansulfonil-2-desoxi-\alpha-L-eritro-pentofuranosil)-6-ben-
zoil-adenin-9-ilo
(64). Se disolvió 62 no bastante puro (6,23 g, 0,008 mol) en DMF
seca (70 ml), se añadió NaN_{3} (5,2 g, 10 equiv.) y se dejó
agitar a t.a. durante 3 días. Se extinguió mediante la adición de
agua (100 ml) y se diluyó con DCM (200 ml). Se separaron las fases
y se lavó la fase org. con salmuera (2 x 125 ml), se secó
(Na_{2}SO_{4}) y se eliminó el disolvente a vacío. Se purificó
el resto mediante cromatografía líquida en columna seca (eluyente:
heptano \rightarrow EtOAc) para proporcionar 64 puro (5,38 g,
rendimiento cuantitativo). R_{f} = 0,60 (Eluyente: EtOAc).
EM-ESI m/z hallado 673,0 ([MH]^{+}, calc.
673,1); RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta 9,14 (1H,
s), 8,70 (1H, s), 8,93 (1H, s), 8,00 (3H, d, J = 7,3 Hz),
7,59-7,50 (3H, 2 x t, J = 7,3 Hz),
7,41-7,37 (5H, m), 6,51 (1H, d, J = 4 Hz,
H-1), 4,92 (1H, d, J = 11,7 Hz), 4,77 (1H, d, J =
11,3 Hz), 4,75 (1H, d, J = 4,8 Hz, H-3), 4,70 (1H,
d, J = 11,3 Hz), 4,50 (1H, dd, J = 4,2 Hz, J = 4,6 Hz,
H-2), 4,41 (2H, d, J = 11-12 Hz),
4,27 (1H, d, J = 11 Hz), 3,05 (3H, s, OMs), 3,02 (3H, s, OMs). RMN
de ^{13}C (CDCl_{3}, 100 MHz): \delta 164,4, 162,3, 152,5,
151,1, 149,3, 142,1, 135,5, 133,3, 132,6, 128,9, 128,8, 128,8,
128,7, 128,4, 127,6, 122,3 (A^{BZ} y OBn), 82,35, 81,79, 79,55,
74,58 (OBn), 68,51, 68,06, 62,59, 37,78 (OMs), 37,57 (OMs).
(1S,3R,4R,7S)-7-Benciloxi-1-metansulfoniloximetil-3-(6-benzoiladenin-9-il)-2-oxa-5-azabiciclo[2:2:1]heptano
(65). A una disolución de 64 (2,28 g, 3,4 mmol) en THF (100 ml)
a t.a. se añadió NaOH ac. (2,0 M, 34 ml) y PMe_{3} en THF (1,0 M,
7 ml) con agitación. Tras toda la noche a t.a., se eliminó
parcialmente el THF a presión reducida. Se añadieron salmuera (100
ml) y EtOAc (200 ml) y se separaron las fases. Se lavó la fase org.
con salmuera (100 ml). Se extrajo la fase acuosa combinada con
diclorometano (200 ml). Se secaron (Na_{2}SO_{4}) las fases
orgánicas combinadas, se filtraron y se concentraron a vacío para
dar una espuma amarilla (1,73 g) que se purificó mediante
cromatografía líquida en columna seca para proporcionar el
nucleósido puro 65 (848 mg) como una espuma amarilla. R_{f} =
0,13 (EtOAc). *Comb. con restos de reacciones similares antes de la
purificación; R_{f} = 0,21 (eluyente: EtOAc).
EM-ESI m/z hallado 551,1 ([MH]^{+}, calc.
551,1); RMN de ^{1}H (DMSO-d_{6}, 400 MHz):
\delta 11,18 (^{1}H, s a, NH), 8,77 (1H, s, ABz), 8,73 (1H, s,
A^{Bz}), 8,06 (2 H, d, J = 7,3 Hz), 7,64 (1H, t, J = 7,3 Hz, Bz),
7,55 (2H, t, J = 7,3 Hz, Bz), 7,45 (2H, d, J = 7,2 Hz, Bn), 7,38
(2H, t, J = 7,2 Hz, Bn), 7,31 (1H, t, J = 7,2 Hz, Bn), 6,52 (1H, d,
J = 1,6 Hz, H-1'), 4,74 (1H, d, J = 11,9 Hz,
H-5'a/H-1''a), 4,65 (1H, d, J = 11,9
Hz, H-5'b/H-1''b), 4,59 (1H, d, J =
11,9 Hz, H-1''a/H-5'a), 4,52 (1H, d,
J = 11,8 Hz, H-1''b/H-5'b), 4,44
(1H, s, H-3'), 4,04 (1H, d, J =7,2 Hz, Bn), 4,01
(1H, d, J = 7,2 Hz, Bn), 3,91 (1H, s a, H-2'), 3,22
(3H, s, OMs); RMN de ^{13}C (DMSO-d_{6}, 100
MHz): \delta 170,34, 165,59, 152,12, 151,47, 150,09, 143,20,
137,89, 133,44, 132,43, 128,48, 128,31, 127,70, 125,19 (Bz y Bn),
87,30, 84,45, 80,47, 71,13 (Bn), 66,99, 59,92, 59,80, 51,27, 36,93
(OMs).
2',3'-epóxido (66). A una
disolución de 62 (50 mg) en DCM seco (1,5 ml) a t.a. se añadió MsOH
(0,5 ml) gota a gota. Se agitó la reacción a t.a. hasta que se
confirmó la conversión completa de m.p. mediante
CL-EM. Se diluyó la reacción con DCM (20 ml), se
enfrió hasta 0ºC, se neutralizó con Et_{3}N (1,1 ml), se lavó con
disolución sat. de NaHCO_{3} (20 ml), salmuera (20 ml), se secó
(Na_{2}SO_{4}), se filtró y se eliminó el disolvente a vacío
para proporcionar un aceite transparente (66) (49 mg, rendimiento
cuantitativo). R_{f} = 0,24 (eluyente: EtOAc).
EM-ESI m/z hallado 540,2 ([MH]^{+}, calc.
540,1); RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta 9,3 (1H, s
a, N-H), 8,67 (1H, s, base), 8,33 (1H, s, base),
7,94 (2H, d, J = 7,5 Hz), 7,51 (1H, t, J = 7,4 Hz), 7,42 (2H, t, J
= 7,5 Hz), 6,61 (1H, s, H-1'); 4,57 (1H, d, J = 11,3
Hz), 4,47 (1H, d, J = 10,8 Hz), 4,44 (1H, d, J = 11,3 Hz), 4,36
(1H, d, J = 10,8 Hz), 4,25 (1H, d, J = 2,7 Hz,
H-2'/H-3'), 4,13 (1H, d, J = 2,7 Hz,
H-3'/H-2'), 3,11 (3H, s, OMs), 3,01
(3H, s, OMs); RMN de ^{13}C (CDCl_{3}, 100 MHz): \delta
164,7, 152,6, 151,5, 149,4, 141,3, 133,2, 132,6, 128,6, 128,6,
128,3, 128,3, 127,7, 122,2 (A^{Bz}), 81,45, 81,23, 68,64, 66,58,
57,59, 57,27, 37,66 (OMs), 37,50 (OMs).
1-(2-azido-3-O-bencil-4-C-metansulfoniloximetil-5-O-metansulfonil-2-desoxi-\alpha-L-treo-pentofuranosil)-6-benzoil-adenin-9-ilo
(67). A una disolución de 66 (50 mg, 0,093 mmol) en DMF anhidra
(2 ml) se añadió NaN_{3} (60 mg, 10 equiv.). Se calentó la mezcla
hasta 50ºC durante la noche. La CL-EM confirma la
conversión completa de 66 en 67. Se diluyó la mezcla de reacción
con agua (15 ml) y DCM (15 ml). Se separaron las fases y se lavó la
fase org. con salmuera (15 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se
filtró y se eliminó el disolvente a vacío para proporcionar 67 (43
mg, rendimiento del 80%). R_{f} = 0,51 (eluyente: EtOAc).
EM-ESI m/z hallado 583,0 ([MH]^{+}, calc.
583,1); RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta 11,27 (1H, s,
N-H), 8,79 (1H, s, base), 8,05 (2H, d, J = 7,3 Hz,
Bz), 7,95 (1H, s, base), 7,65 (1H, t, J = 7,5 Hz), 7,55 (2H, t, J =
7,5 Hz), 6,70 (1H, d, J = 5,5 Hz, H-1'), 6,18 (1H,
d, J = 8,6 Hz, 3'-OH), 5,27 (1H, t, J = 8,6 Hz,
H-3'), 4,66 (1H, d, J = 10,7 Hz, CH_{2}), 4,57
(1H, dd, J = 5,6 Hz, J = 8,5 Hz, H-2'), 4,47 (1H, d,
J = 10,8 Hz, CH_{2}), 4,41 (2H, d, J = 10,8 Hz, CH_{2}), 3,29
(3H, s, OMs), 3,22 (3H, s, OMs); RMN de ^{13}C (CDCl_{3}, 100
MHz): \delta 165,67, 162,33, 152,33, 152,20, 150,75, 142,63,
133,28, 132,56, 128,57, 128,52, 125,52, 82,34, 81,79, 74,77, 69,00,
68,46, 66,11, 36,87 (OMs), 35,85 (OMs).
(1R,3R,4R,7S)-7-hidroxi-1-metansulfoniloximetil-3-(6-benzoiladenin-9-il)-2-oxa-5-tiobiciclo[2:2:1]heptano
(68). Se disolvió el compuesto 66 (1,0 g, 1,9 mmol) en DMF seca
y se añadió Na_{2}S (290 mg, 2 equiv.). La reacción se vuelve
verde. Se dejó agitar a t.a. durante la noche. La
CL-EM confirma la conversión completa del compuesto
1. Se dividió la mezcla de reacción entre salmuera (100 ml) y EtOAc
(100 ml). Se separaron las fases y se extrajo la fase ac. con EtOAc
(2 x 100 ml) y DCM (2 x 100 ml). Se lavó la fase orgánica combinada
con salmuera (200 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se
eliminó el disolvente a vacío. Se purificó el resto mediante DCLC
para proporcionar el compuesto 2 (268 mg, rendimiento 30%).
CL-EM: hallado 478,0, calc. 478,0 (M+H). RMN de
^{1}H (CDCl_{3}, 400 MHz): \delta 9,5-7,3 (8H,
A^{Bz}), 6,46 (1H, s, H-1), 4,64 (2H, 2 x d, J =
11,4 Hz, H-1''a y b), 4,56 (1H, d, J = 1 Hz,
H-3'), 3,75 (1H, d, J = 1 Hz, H-2'),
3,04, 5,97 (2H, 2 x d, J = 10,8 Hz, H-5' a y b),
3,02 (3H, s, OMs).
(1S,3R,4S,7S)-7-Benciloxi-1-metansulfoniloximetil-3-(6-benzoiladenin-9-il)-2-oxa-5-tiobiciclo[2:2:1]heptano
(69). Se disolvió el compuesto 62 (3,30 g, 4,2 mmol) en DMF
seca (33 ml) y se añadió Na_{2}S (1,65 g, 5 equiv.). El color de
la reacción va de verde a naranja en 30 min. La
CL-EM confirma la conversión completa en el
compuesto 2. Se dividió la mezcla de reacción entre disolución sat.
de NaHCO_{3} (150 ml) y DCM (150 ml). Se separaron las fases y se
extrajo la fase acuosa con DCM (2 x 75 ml). Se lavó la fase org.
combinada con disolución sat. de NaHCO_{3} (150 ml), salmuera
(150 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se eliminó el
disolvente a vacío para proporcionar un resto oleoso (\sim3 g) que
se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
CL-EM: hallado 568,0, calc. 568,1 (M+H). RMN de
^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) : \delta 9,5 (1H, s a,
N-H), 8,65 (1H, s, A^{Bz}), 8,36 (1H, s,
A^{Bz}), 7,99 (2H, 2 x d, J = 7,3 Hz, A^{Bz}), 7,54 (1H, t, J =
7,3 Hz, A^{Bz}), 7,45 (2H, t, J = 7,3 Hz, A^{Bz}),
7,30-7,36 (5H, m, OBn), 6,61 (1H, d, J = 2,2 Hz,
H-1'), 4,72 (1H, d, J = 11,6 Hz,
H-1''a), 4,59 (1H, d, J = 11,3 Hz,
H-1''b), 4,59 (1H, d, J = 1,6 Hz,
H-3'), 4,91, (2H, s, OBn), 4,05 (1H, t, J = 2,0 Hz,
H-2'), 3,17 (1H, d, J = 10,5 Hz,
H-5'a), 3,05 (1H, d, J = 11,0 Hz,
H-5'b), 3,02 (3H, s, OMs). RMN de ^{13}C (100 MHz,
CDCl_{3}): \delta 152,1, 150,8, 149,2, 141,3, 136,1, 133,4,
132,5, 128,6, 128,6, 128,5, 128,2, 127,8, 127,7, 123,0, (A^{Bz},
OBn), 87,34 (C-4'), 87,25 (C-1'),
80,35 (C-3'), 72,05 (C-1''), 66,48
(OBn), 51,80 (C-2'), 37,67 (OMs), 36,00
(C-5').
Se disolvió el compuesto 69 (2,38 g, 4,2 mmol)
en DMSO seco (25 ml), se añadió NaOBz (1,24 g, 2 equiv.) y se
calentó hasta 100ºC durante la noche. La CL-EM
confirma la conversión completa en el compuesto 4. Se dividió la
mezcla de reacción entre agua (150 ml) y DCM (150 ml). Se separaron
las fases y se extrajo la fase acuosa con DCM (2 x 100 ml). Se lavó
la fase orgánica comb. con salmuera (2 x 150 ml), se secó
(Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró sobre sílice. Se
purificó mediante DCLC para proporcionar el compuesto 3 (945 mg,
38% en dos etapas). CL-EM: hallado 594,2, calc.
594,1 (M+H). RMN de ^{1}H (400MHz, CDCl_{3}): \delta
8,63-7,18 (17 H, A^{Bz}, OBz, OBn), 6,56 (1H, d,
J = 2,2 Hz, H-1'), 4,72 (1H, d, J = 11,5 Hz,
H-1''a), 4,69 (1H, d, J = 11,0 Hz,
H-1''b), 4,57 (1H, d, J = 1,6 Hz,
H-3'), 4,53 (1H, d, J = 11,6 Hz, OBn), 4,49 (1H, d,
J = 12 Hz, OBn), 4,01 (1H, s a, H-2'), 3,24 (1H, d,
J = 10,4 Hz, H-5'a), 2,99 (1H, d, J = 10,4 Hz,
H-5'b). RMN de ^{13}C (100 MHz, CDCl_{3}):
\delta 165,5, 152,1, 150,7, 149,2, 141,4, 136,2, 133,5, 133,2,
132,5, 129,5, 129,1, 128,6, 128,4, 128,3, 128,1, 127,7, 127,6
(A^{Bz}, OBz, OBn), 87,73 (C-4'), 87,32
(C-1'), 80,47 (C-3'), 71,88
(C-1''), 61,73 (OBn), 51,80 (C-2'),
36,43 (C-5').
Se disolvió el compuesto 70 (966 mg, 1,627 mmol)
en DCM seco (27 ml) y se añadió MSOH (9 ml). Se agitó a t.a.
durante 1 h. La CL-EM confirma la desbencilación
completa.* Se diluyó la mezcla de reacción con DCM (30 ml), se lavó
con salmuera (50 ml), disolución sat. de NaHCO_{3} (50 ml), se
secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se eliminó el disolvente a
vacío para proporcionar el compuesto 6 (739 mg, rendimiento del
90%). CL-EM: hallado 504,1, calc. 504,1 (M+H).
*También se detecta la despurinación, por lo que el enfriamiento
podría ser ventajoso.
Se disolvió el compuesto 71 (739 mg, 1,468 mmol)
en THF (60 ml) y se añadió LiOH 1 M (7,5 ml). Se agitó la reacción
a t.a. Se añadió más LiOH 1 M (1 ml) tras 90 min. Se confirmó la
finalización de la reacción mediante CCF (eluyente: EtOAc/MeOH 9:
1) tras otros 60 min. Se extinguió la reacción con HCl sat. 1 M con
NaCl (8,5 ml) y se dividió la mezcla entre salmuera (100 ml) y
EtOAc (100 ml). Se separaron las fases y se extrajo la fase acuosa
con EtOAc (2 x 100 ml). Se lavó la fase org. combinada con salmuera
(100 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se eliminó el
disolvente a vacío para proporcionar un sólido amarillo (compuesto
72), que se evaporó de manera conjunta con piridina seca. Se
disolvió el resto en piridina seca (25 ml), se añadió DMAP (180 mg,
1 equiv.) seguido por DMTCI (597 mg, 1,2 equiv.) y se agitó a t.a.
Se añadió más DMTCl (200 mg). La CCF (eluyente: EtOAc/MeOH 9:1)
tras 24 h muestra la conversión completa en el compuesto 73. Se
diluyó la reacción con DCM (100 ml) y se lavó con agua (100 ml). Se
extrajo la fase acuosa con DCM (50 ml) y se lavó la fase org.
combinada con disolución sat. de NaHCO_{3} (100 ml), salmuera
(100 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se eliminó el
disolvente a vacío para proporcionar un resto que se purificó
mediante DCLC para proporcionar el compuesto 6 (518 mg, 50% en dos
etapas). CL-EM: hallado 702,2, calc. 702,2
(M+H).
Se disolvió el compuesto 73 (518 mg, 0,738 mmol)
en DCM (10 ml), se añadió DCI 1 M (520 \mul, 0,7 equiv., disuelto
en acetonitrilo) seguido por reactivo de bisamidita (244 \mul, 1
equiv.) y se agitó a t.a., bajo una atmósfera de N_{2}. Se añadió
más reactivo de bisamidita (2 x 40 \mul) y se transfirió el matraz
a la nevera durante el fin de semana. La CL-EM
confirma la conversión completa en amidita. Se diluyó la mezcla de
reacción con DCM (100 ml), se lavó con disolución sat. de
NaHCO_{3} (2 x 100 ml), salmuera (100 ml), se secó
(Na_{2}SO_{4}), se filtró y se eliminó el disolvente a vacío
para proporcionar el compuesto 74 (642 mg, rendimiento del 97%).
CL-EM: hallado 902,2, calc. 903,3 (M+H).
9-(2-O-Acetil-3-O-bencil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-\beta-L-treo-furanosil)-2-amino-6-clorpurina
(75). Se disolvió
1,2-di-O-acetil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-3-O-bencil-L-treopentofuranosa
(20,6 g, 40,0 mmol) en 1,2-dicloroetano anhidro
(250 ml) y se añadió
2-amino-6-cloropurina
(7,5 g, 44,4 mmol) seguido por
N,O-bis(trimetilsilil)acetamida (19,6
ml, 80,0 mmol). Se sometió a reflujo la mezcla de reacción hasta
que se volvió transparente (1 h) y se enfrió hasta temperatura
ambiente. Se añadió triflato de trimetilsililo (14,5 ml, 80,0 mmol)
durante 15 min. y se sometió a reflujo la mezcla de reacción durante
3 h. Se dejó enfriar la mezcla de reacción hasta temperatura
ambiente y se vertió en NaHCO_{3} ac. sat. (500 ml). Se añadió
CHCl_{3} (300 ml) y tras 30 min. de agitación vigorosa, se
transfirió la mezcla a un embudo de decantación. Se separaron las
fases y se extrajo la fase ac. con CHCl_{3} (3 x 250 ml). Se
lavaron las fases orgánicas combinadas con NaHCO_{3} ac. sat.:
salmuera (1:1, 500 ml), se secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron
y se evaporaron a vacío para dar una espuma roja. Se purificó el
producto mediante cromatografía a vacío en columna seca (\diameter
10 cm, EtOAc al 50-100% en
n-heptano v/v, incrementos del 10%, fracciones de 2
x 100 ml, seguido por: MeOH al 1-10% en EtOAc v/v,
incrementos del 1%, fracciones de 100 ml). Se combinaron las
fracciones que contenían el nucleósido 75 y se evaporaron a vacío
para dar una espuma blanca (15,6 g, 65%). Además se aisló el isómero
N7 (2,0 g). Compuesto 75: R_{f} = 0,59 (MeOH al 10% en EtOAc,
v/v), EM-ESI m/z hallado 620,1; 622,0
([MH]^{+}, calc. 620,1). RMN de ^{1}H (CDCl_{3}, 400
MHz): \delta 8,03 (s, 1H, H8), 7,38-7,29 (m, 5H,
Ar-H), 6,14 (d, 1H, J = 3,3 Hz, H1'), 5,90 (dd
(parece t), 1H, J = 3,3 Hz y 3,0 Hz, H2'), 5,29 (s a, 2H, NH_{2}),
4,78 (d, 1 H, J = 10,6 Hz, CH_{2}), 4,70 (d, 1 H, J = 11,3 Hz,
CH_{2}), 4,67 (d, 1 H, J = 11,8 Hz, CH_{2}), 4,44 (d, 1H, J =
11,3 Hz, CH_{2}), 4,37 (d, 1 H, J = 10,6 Hz, CH_{2}), 4,37 (d,
1H, J = 3,0 Hz, H3'), 3,01 (s, 3H, Ms), 2,96 (s, 3 H, Ms), 2,14 (s,
3H, Ac). RMN de ^{13}C (CDCl_{3}, 100 MHz): \delta 169,4
(CH_{3}C(O)), 159,1, 153,2, 151,7 (C2, C4, C6), 140,4 (C8),
136,5, 128,8, 128,5, 128,4 (Ph), 125,3 (C5), 87,0 (C1'), 85,4
(C4'), 81,2 (C3'), 78,8 (C2'), 73,4 (CH_{2}), 67,5, 65,8 (2 x
CH_{2}), 37,7, 37,6 (2 x Ms), 20,6 (CH_{3}C(O)).
Anál. calc. para C_{22}H_{26}ClN_{5}O_{10}S_{2} : C, 42,6;
H, 4,2; N, 11,3. Hallado: C, 42,5; H, 4,2; N, 11,0.
9-(3-O-bencil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-\beta-L-treofuranosil)-2-amino-6-clorpurina
(76). Se disolvió el compuesto 75 (5,0 g, 8,1 mmol) en metanol
(100 ml) y se enfrió hasta 0ºC y se añadió amoniaco metanólico sat.
(100 ml). Se agitó la mezcla a 0ºC durante 1 h y después se
extinguió la reacción mediante neutralización con ácido acético
glacial (aprox. 30 ml). Se añadieron NaHCO_{3} ac. sat. (100 ml) y
CHCl_{3} (100 ml) y tras 5 min. de agitación vigorosa, se
transfirió la mezcla a un embudo de decantación. Se separaron las
fases y se extrajo la fase ac. con CHCl_{3} (3 x 200 ml). Se secó
(Na_{2}SO_{4}) la fase orgánica combinada, se filtró y se
eliminó el disolvente a vacío para proporcionar 76 (4,60 g, 99%)
como un sólido blanco. R_{f} = 0,67 (EtOAc).
EM-ESI m/z hallado 578,1; 580,0 ([MH]^{+},
calc. 578,1). RMN de ^{1}H (CD_{3}CN, 400 MHz): \delta 8,03
(s, 1H, H8), 7,41-7,33 (m, 5H,
Ar-H), 5,86 (d, 1H, J = 6,2 Hz, H1'), 5,71 (s a,
2H, NH_{2}), 5,90 ("q" 1H, J = 4,6 Hz, H2'),4,82 (d, 1 H, J =
11,5 Hz, CH_{2}), 4,72 (d, 1 H, J = 11,5 Hz, CH_{2}), 4,68 (d,
1 H, J = 11,0 Hz, CH_{2}), 4,44-4,32 (m, 5H,
CH_{2}(3), H3', OH), 3,10 (s, 3H, Ms), 2,98 (s, 3 H, Ms).
RMN de ^{13}C (CD_{3}CN, 100 MHz): \delta 160,6, 154,7,
151,5, 142,3 (C2, C4, C6, C8), 138,4, 129,3, 129,0, 128,9 (Ph),
125,8 (C5), 88,4 (C1'), 83,8, 83,6 (C2', C4'), 77,5 (C3'), 73,9
(CH_{2}), 69,6, 69,5 (2 x CH_{2}), 37,7, 37,5 (2 x M_{5}).
Anál. calc. para C_{22}H_{26}ClN_{5}O_{10}S_{2}: C, 42,6;
H, 4,2; N, 11,3. Hallado: C, 42,5; H, 4,2; N, 11,0.
9-(3-O-bencil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-2-O-trifluorometansulfonil-\beta-L-treo-furanosil)-2-
amino-6-cloropurina (77). Se
disolvió el compuesto 75 (4,50 g, 7,8 mmol) en CH_{3}CN anhidro (2
x 50 ml) y se concentró a vacío para eliminar las trazas de agua.
Se disolvió el compuesto en diclorometano anhidro (50 ml) y se
añadió piridina anhidra (6,30 ml, 77,8 mmol) seguido por la adición
de DMAP (3,80 g, 31,1 mmol). Tras enfriar hasta 0ºC, se añadió gota
a gota anhídrido trifluorometansulfónico (2,57 ml, 15,6 mmol)
durante 20 min. Se agitó la mezcla de reacción durante otros 40
min. y se añadió NaHCO_{3} ac. sat. enfriado en hielo (100 ml) y
tras 5 min. de agitación vigorosa, se transfirió la mezcla a un
embudo de decantación. Se separaron las fases y se extrajo la fase
ac. con CH_{2}Cl_{2} (2 x 100 ml). Se lavó la fase orgánica
combinada sucesivamente con HCl ac. (0,1 M, 2 x 100 ml) y
NaHCO_{3} ac. sat. (100 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró
y se evaporó a vacío. Se purificó el residuo mediante DCVC
(\diameter = 6 cm, EtOAc al 0-100% en
n-heptano v/v, incrementos del 5%, fracciones de
100 ml) produciendo el nucleósido 77 (5,05 g, 91%) como un polvo
blanco. R_{f} = 0,18 (EtOAc en n-heptano 1:1
v/v). EM-ESI m/z hallado 710,0; 711,9
([MH]^{+}, calc. 710,0). RMN de ^{1}H
(DMSO-d_{6}, 400 MHz): \delta 8,45 (s, 1H, H8),
7,42-7,36 (m, 5H, Ar-H), 7,16 (s a.,
2H NH_{2}), 6,48-6,48 (m, 2H), 5,02 (dd, 1H, J =
6,2, 1,6 Hz), 4,85 (dd, 2H, J = 10,8, 1,1 Hz), 4,67 (d, 1H, J = 11,0
Hz), 4,57-4,48 (m, 3H), 3,34 (s, 3H, Me),
3,18(s, 3 H, Me). RMN de ^{13}C
(DMSO-d_{6}, 100 MHz): \delta 160,0, 153,8,
150,2, 141,2 (C2, C4, C6, C8), 136,4, 128,5, 128,5,
128,4(Ph), 123,4 (C5), 117,7 (q, J = 319,7 Hz, CF_{3}),
87,0 (C1'), 80,8, 80,2 (C3', C4'), 73,8 (CH_{2}), 68,6, 68,4
(2xCH_{2}), 59,8 (C2'), 36,9, 36,5 (2 x Ms). Anál. calc. para
C_{21}H_{23}ClF_{3}N_{5}O_{11}S_{3}\cdot0,25 EtOAc: C,
36,1; H, 3,4; N, 9,6. Hallado: C, 36,1; H,3,2; N, 9,5. NOTA:
También se registró ^{19}F y sólo mostró un único pico.
(1S,3R,4S,7R)-7-benciloxi-1-(mesiloximetil)-3-(guanin-9-il)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptano
(78). Se disolvió 3-hidroxipropionitrilo (3,55
ml, 52 mmol) en THF anhidro (75 ml) y se enfrió hasta 0ºC. Se añadió
en porciones hidruro de sodio (al 60% en aceite mineral, 2,50 g,
62,4 mmol) y se permitió que se elevara la temperatura hasta t.a. y
se agitó la mezcla durante 30 min. a t.a. Se enfrió la mezcla de
reacción hasta 0ºC de nuevo y se añadió gota a gota
9-(3-O-bencil-5-O-metansulfonil-4-C-metansulfoniloximetil-2-O-trifluorometansulfonil-\beta-L-treo-furanosil)-2-amino-6-cloropurina
(77) (7,37 g, 10,4 mmol) disuelto en THF anhidro (75 ml) durante 20
min. y se permitió que se elevara la temperatura hasta t.a. Tras 8
h, se extinguió la reacción mediante la adición de HCl (1 M, ac.):
salmuera (1:9, 250 ml) y se transfirió la mezcla a un embudo de
decantación. Se separaron las fases y se extrajo la fase ac. con
EtOAc (3 x 200 ml). Se secaron (Na_{2}SO_{4}) las fases
orgánicas combinadas, se filtraron y se evaporaron a vacío para dar
un aceite rojo. Se purificó el producto en primer lugar mediante
filtración a través de un lecho corto de sílice (\diameter 6 cm,
MeOH al 10% en EtOAc v/v, 500 ml) y después se precipitó el
material resultante en EtOH:H_{2}O (1:1) dando como resultado 78
como un sólido tostado (4,64 g, 96%). R_{f} = 0,31 (MeOH al 10%
en EtOAc v/v); EM-ESI m/z hallado 464,1
([MH]^{+}, calc. 464,1); RMN de ^{1}H
(DMSO-d_{6}, 400 MHz): \delta = 10,63 (s a, 1
H, NH), 7,72 (s,1 H, H8), 7,30-7,24 (m, 3 H,
Ar-H), 7,16-7,11 (m, 2 H,
Ar-H), 6,65 (s a, 2 H, NH_{2}), 5,86 (s, 1 H,
H1'), 4,83 (d, 1 H, J =11,5 Hz, H1''), 4,71 (d, 1 H, J = 11,4 Hz,
H1''), 4,60 (d, 1 H, J = 1,8 Hz, H2'/H3'), 4,52 (d, 1 H, J = 11,9
Hz, PhCH_{2}), 4,34 (d, 1 H, J = 11,9 Hz,
PhCH_{2}), 4,27 (d, 1 H, J = 1,8 Hz, H2'/H3'), 4,08 (d, 1
H, J = 8,4 Hz, H5'), 3,86 (d, 1 H, J = 8,2 Hz, H5'), 3,27 (s, 3 H,
Me); RMN de ^{13}C (DMSO-d_{6}, 100 MHz):
\delta = 156,7 (C6), 153,8 (C2), 150,5 (C4), 137,0 (Ph), 135,6
(C8),128,3, 127,9, 127,9 (Ph), 116,2 (C5), 86,8 (C4'), 85,5 (C1'),
80,2 (C3'), 76,4 (C2'), 72,5, 72,2 (Ph CH_{2}, C5'), 66,4
(C1''),36,8 (Me). Anál. calc. para C_{19}H_{21}N_{5}O_{7}S:
C, 49,2; H, 4,6; N, 15,1. Hallado: C, 49,4; H, 4,5; N, 15,2.
(1S,3R,4S,7R)-7-benciloxi-1-(benzoiloximetil)-3-(guanin-9-il)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptano
(79). Se disolvió el compuesto 78 en DMSO (25 ml) y se añadió
BzONa (2,22 g, 15,24 mmol). Se calentó hasta 100ºC durante 6 h y
después hasta 120ºC durante 3 h. Se diluyó la reacción con EtOAc (50
ml) y se extinguió con agua: NaHCO_{3} ac. sat. (1:1, 100 ml). Se
separaron las fases y se extrajo la fase ac. con EtOAc (3 x 50 ml).
Se lavaron las fases org. comb. con salmuera (2 x 100 ml), se
secaron (Na_{2}SO_{4}), se filtraron y se concentraron. Se
purificó el producto mediante cromatografía a vacío en columna seca
(\diameter 4 cm, MeOH al 0-15% en diclorometano
v/v, incrementos del 1%, fracciones de 100 ml). Se combinaron las
fracciones que contenían el nucleósido 79 y se evaporaron a vacío
para dar un sólido blanco (1190 mg, 95%). R_{f} = 0,15 (MeOH al
5% en DCM v/v); EM-ESI m/z hallado 488,3
([M-H]^{-}, calc. 488,2); RMN de ^{1}H
(DMSO-d_{6}, 400 MHz): \delta = 10,63 (s, 1 H,
NH), 7,95 (d, 2 H, J = 7,3 Hz, Bz), 7,67 (s, 1 H, H8), 7,64 (t, 1 H,
J = 7,3 Hz, Bz), 7,50 (t, 3 H, J = 7,3 Hz, Bz),
7,24-7,18 (m, 3 H, Bn), 7,12-7,06
(m, 2 H, Bn), 6,54 (s a, 2 H, -NH_{2}), 5,86 (s, 1 H, H1'), 4,79
(s, 2 H, H1''), 4,59 (d, 1 H, J = 1,8 Hz, H2'/H3'), 4,49 (d, 1 H, J
= 11,9 Hz, PhCH_{2}O), 4,34 (d, 1 H, J = 11,9 Hz,
PhCH_{2}O), 4,29 (d, 1 H, J = 1,8 Hz, H2'/H3'), 4,11 (d, 1
H, J = 8,4 Hz, H5'a), 3,93 (d, 1 H, J = 8,2 Hz, H5'b); RMN de
^{13}C (DMSO-d_{6}, 100 MHz): \delta = 165,3
(C(O)Ph), 156,7,-153,8, 150,1 (C2; C4; C6), 137,0
(Bn), 135,5 (C8), 133,7 (Bz), 129,4, 129,1, 128,9, 128,3, 127,9
(Ph), 116,3 (C5), 86,8, 85,9 (C4', C1'), 80,0, 76,4 (C2', C3'),
72,7, 72,2 (Ph CH_{2}, C5'), 60,6 (C1'').
(1R,3R,4S,7R)-3-(guanin-9-il)-7-hidroxi-1-hidroximetil-2,5-dioxabiciclo-[2.2.1]heptano
(80). Se suspendió el
compuesto 79 (2,33 g, 4,16 mmol) en MeOH (100 ml) y se añadieron Pd(OH)_{2}-C (20%, 292 mg, Pd al 10% en mol) y formiato de amonio (5,24 g; 83,2 mmol). Se calentó hasta reflujo la mezcla. Tras 4 h se añadió más Pd(OH)_{2}-
C (20%, 292 mg, Pd al 10% en mol) y tras otras 4 h se añadió el último Pd(OH)_{2}-C (20%, 292 mg, Pd al 10% en mol). Se sometió a reflujo durante otras 12 h. Se eliminó el catalizador mediante filtración a través de papel, se llevó a ebullición el papel de filtro con el catalizador en MeOH durante 30 min. y después se filtró de nuevo. Se combinaron las dos disoluciones metanólicas y se filtraron a través de Celite. Se lavó el Celite meticulosamente con MeOH caliente. Se combinaron todas las disoluciones metanólicas y se concentraron. Se recogió en H_{2}O y se liofilizó dando como resultado 79 como un sólido blanco. (1100 mg, 90%). R_{f} = 0,01 (MeOH al 10% en EtOAc v/v); EM-ESI m/z hallado 296,1 ([MH]^{+},calc. 296,1); RMN de ^{1}H (D_{2}O, 400 MHz): \delta = 7,90 (s, 1 H, H8), 5,91 (s, 1 H, H1'), 4,74 (d, 1 H, J = 2,4 Hz, H2'/H3'), 4,40 (d, 1 H, J = 2,4 Hz, H2'/H3'), 4,12 (d, 1 H, J = 8,6 Hz, H5'), 4,02 (d, 1 H, J = 8,7 Hz, H5'), 4,01 (s, 2 H, H5'); RMN de ^{13}C (D_{2}O, 100 MHz): \delta = 158,7 (C6), 153,7 (C2), 150,8 (C4), 138,4 (C8), 115,4 (C5), 88,7 (C4'), 86,3 (C1'), 78,1 (C3'), 73,2, 72,4 (C2', C5'), 57,4 (C1''); Anál. calc. para C_{11}H_{13}N_{5}O_{5}\cdotH_{2}O: C, 42,2; H, 4,8; N, 22,4. Hallado: C, 42,0; H, 4,5; N, 22,2.
compuesto 79 (2,33 g, 4,16 mmol) en MeOH (100 ml) y se añadieron Pd(OH)_{2}-C (20%, 292 mg, Pd al 10% en mol) y formiato de amonio (5,24 g; 83,2 mmol). Se calentó hasta reflujo la mezcla. Tras 4 h se añadió más Pd(OH)_{2}-
C (20%, 292 mg, Pd al 10% en mol) y tras otras 4 h se añadió el último Pd(OH)_{2}-C (20%, 292 mg, Pd al 10% en mol). Se sometió a reflujo durante otras 12 h. Se eliminó el catalizador mediante filtración a través de papel, se llevó a ebullición el papel de filtro con el catalizador en MeOH durante 30 min. y después se filtró de nuevo. Se combinaron las dos disoluciones metanólicas y se filtraron a través de Celite. Se lavó el Celite meticulosamente con MeOH caliente. Se combinaron todas las disoluciones metanólicas y se concentraron. Se recogió en H_{2}O y se liofilizó dando como resultado 79 como un sólido blanco. (1100 mg, 90%). R_{f} = 0,01 (MeOH al 10% en EtOAc v/v); EM-ESI m/z hallado 296,1 ([MH]^{+},calc. 296,1); RMN de ^{1}H (D_{2}O, 400 MHz): \delta = 7,90 (s, 1 H, H8), 5,91 (s, 1 H, H1'), 4,74 (d, 1 H, J = 2,4 Hz, H2'/H3'), 4,40 (d, 1 H, J = 2,4 Hz, H2'/H3'), 4,12 (d, 1 H, J = 8,6 Hz, H5'), 4,02 (d, 1 H, J = 8,7 Hz, H5'), 4,01 (s, 2 H, H5'); RMN de ^{13}C (D_{2}O, 100 MHz): \delta = 158,7 (C6), 153,7 (C2), 150,8 (C4), 138,4 (C8), 115,4 (C5), 88,7 (C4'), 86,3 (C1'), 78,1 (C3'), 73,2, 72,4 (C2', C5'), 57,4 (C1''); Anál. calc. para C_{11}H_{13}N_{5}O_{5}\cdotH_{2}O: C, 42,2; H, 4,8; N, 22,4. Hallado: C, 42,0; H, 4,5; N, 22,2.
(1S,3R,4S,7R)-1-(4,4'-dimetoxitritiloximetil)-3-(2-N-((dimetilamino)-metiliden)-7-hidroxiguanin-9-il)-2,5-dioxa-
biciclo[2.2.1]heptano (82). Se disolvió el
compuesto 80 (860 mg, 2,91 mmol) en DMF anhidra (25 ml) y se añadió
N,N-dimetilformamida-dimetilacetal
(0,77 ml, 5,83 mmol). Tras 4 h, se completó la reacción y se eliminó
la mayor parte del DMF a vacío. Se evaporó conjuntamente la
suspensión resultante 81 dos veces en piridina anhidra (2 x 25 ml) y
se suspendió en piridina anhidra (10 ml). Se añadió cloruro de
4,4'-dimetoxitritilo (1,48 g, 4,37 mmol) y se agitó
la mezcla de reacción durante 16 h a t.a. Se eliminó la mayor parte
de la piridina a vacío y se recogió el resto en DCM (50 ml) y se
lavó con NaHCO_{3} ac. semisat. (2 x 50 ml) y salmuera (50 ml). Se
extrajeron las fases ac. comb. con DCM (2 x 50 ml) y se secaron
(Na_{2}SO_{4}) las fases org. comb., se filtraron y se
evaporaron a vacío para dar una espuma amarilla. Se purificó el
producto mediante cromatografía a vacío en columna seca (\diameter
4 cm, MeOH al 0-10% en DCM v/v, incrementos del
0,5%, fracciones de 100 ml). Se combinaron las fracciones que
contenían el nucleósido 82 y se evaporaron a vacío para dar una
espuma blanca (1,10 g, 58%). R_{f} = 0,08 (MeOH al 10% en EtOAc,
v/v); EM-ESI m/z hallado 653,3 ([MH]^{+},
calc. 653,3; RMN de ^{1}H (DMSO, 400 MHz): \delta = 11,29 (s,
1H, NH), 8,57 (s, 1H, N=CH), 7,87 (s, 1 H, H8),
7,46-7,40 (m, 2H, DMT), 7,35-7,22
(m, 7H, DMT), 6,93-6,88 (m, 4H, DMT), 6,00 (s, 1 H,
H1'), 5,92 (d, 1 H, J = 3,8 Hz, H2'), 4,51 (d, 1 H, J = 2,0 Hz,
OH), 4,21 (dd, 1 H, J = 3,5 ,2,2 Hz, H3'), 4,05 (d, 1 H, J = 8,2 Hz,
H1''), 3,98 (d, 1 H, J = 8,2 Hz, H1''), 3,74 (s, 6H, OCH_{3}),
3,51 (d, 1 H, J = 10,2 Hz, H5'), 3,38 (d, 1 H, J = 10,2 Hz, H5'),
3,33 (s, 3H, NCH_{3}), 3,15 (s, 3H, NCH_{3}); RMN de ^{13}C
(DMSO,100 MHz): \delta 158,0 (DMT), 157,8, 157,4, 157,1 (C2, C6,
N=CH), 149,2 (C4), 144,5 (DMT), 137,3 (C8), 135,2 (DMT), 129,6,
129,6, 127,7, 127,5, 126,6 (DMT), 118,9 (C5), 113,1 (DMT), 87,3,
(C4'), 86,1 (C1'), 85,5 (DMT), 78,1 (C3'), 73,0, 72,7 (C1'', C2'),
60,0 (C5'), 54,9 (OCH_{3}), 40,5, 34,6
(N(CH_{3})2); Anál. calc. para
C_{35}H_{36}N_{6}O_{7}H_{2}O: C, 62,7; H, 5,7; N, 12,5.
Hallado: C, 62,8; H, 5,4; N, 12,6.
(1S,3R,4S,7R)-1-(4,4'-dimetoxitritiloximetil)-7-(2-cianoetoxi(diisopropilamino)fosfinoxi)-3-[2-N-((N',N'-dime-
tilamino)metiliden)-guanin-9-il]-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptano
(83). Se disolvió el compuesto 82 (750 mg, 1,15 mmol) en DMF
anhidra (25 ml) y se añadió 4,5-dicianoimidazol en
MeCN (1,0 M, 0,80 ml, 0,8 mmol) a temperatura ambiente con
agitación. Se añadió
2-cianoetil-N,N,N;N'-tetraisopropilfosforodiamidita
(0,40 ml, 1,26 mmol) gota a gota a la mezcla de reacción. Tras 4 h,
se diluyó la reacción con EtOAc (70 ml) y se transfirió a un embudo
de decantación y se extrajo con NaHCO_{3} ac. sat. (2 x 50 ml) y
salmuera (50 ml). Se extrajeron las fases ac. combinadas con EtOAC
(100 ml). Se combinaron las fases orgánicas y se secaron
(Na_{2}SO_{4}). Tras la filtración, se evaporó la fase orgánica
a vacío para dar una espuma amarilla. La purificación mediante DCVC
(\diameter 2 cm, MeOH al 1-10%, EtOAc, v/v,
incrementos del 0,5%, fracciones de 50 ml (se trató previamente la
columna con Et_{3}N al 1% en EtOAc v/v)) produjo amidita 83 (480
mg, 49%) como un sólido blanco. R_{f} = 0,50 (TEA al 1%, MeOH al
10% en DCM v/v/v); EM-ESI m/z hallado 853,2
([MH]^{+}, calc. 853,4); RMN de ^{31}P (CDCl_{3} 121
MHz) \delta 151,7, 150,3.
(1S,3R,4S,7R)-7-benciloxi-3-(2-amino-6-cloro-purin-9-il)-1-(metansulfoniloximetil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]hep-
tano (84). Se disolvió el compuesto 77 (7,44 g, 10,4 mmol) en
THF (300 ml). Tras enfriar hasta 0ºC se añadió LiOH ac. (1,0 M, 105
ml). Se agitó la mezcla de reacción a 0ºC durante 4 h y después
durante otras 2 h a t.a. Se extinguió la reacción mediante la
adición de HCl ac. (1,0 M, sat. con NaCl, 100 ml) y tras 5 min. de
agitación vigorosa, se transfirió la mezcla a un embudo de
decantación. Se separaron las fases y se extrajo la fase ac. con
EtOAc (3 x 150 ml). Se lavó la fase orgánica combinada con salmuera:
NaHCO_{3} ac. sat. (1:1, 200 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se
filtró y se evaporó a vacío. Se purificó el resto mediante DCVC
(\diameter=6 cm, EtOAc al 50-100% en
n-heptano v/v, incrementos del 5%, fracciones de 2 x
100 ml) produciendo el nucleósido 84 (4,49 g mg, 89%) como un polvo
blanco. R_{f} = 0,49 (n-heptano al 20% en EtOAc
(v/v)). EM-ESI m/z hallado 482,1.; 484,0
([MH]^{+}, calc. 482,1). RMN de ^{1}H
(DMSO-d_{6}, 400 MHz): \delta 8,09 (s, 1H, H8),
7,26-7,19 (m, 3H, Ar-H),
7,08-7,04 (m, 2H, Ar-H), 7,01 (s a.,
2H, NH_{2}), 5,96 (s, 1H, H1'), 4,86 (d, 1H, J = 11,3 Hz, H5''),
4,76 (d, 1H, J = 11,3 Hz, H5''), 4,65 (d, 1H, J = 2,0 Hz, H2'), 4,51
(d, 1H, J = 11,9 Hz, CH_{2}), 4,32 (d, 1H, J = 11,7 Hz,
CH_{2}), 4,31 (d, 1H, J = 2,0 Hz, H3'), 4,10 (d, 1H, J = 8,2 Hz,
CH_{2}), 3,89 (d, 1H, J = 8,4 Hz, CH_{2}), 3,28 (s, 3H, Me). RMN
de ^{13}C (DMSO-d_{6}, 100 MHz): \delta
159,6, 153,0, 149,0 (C2, C4, C6), 140,8 (C8), 136,7, 128,0, 127,8,
127,7 (Ph), 123,2 (C5), 86,8 (C4'), 85,6 (C1'), 80,0 (C3'), 75,8
(C2'), 72,3, 72,2 (C5', CH_{2}Ph), 66,2 (C5''), 36,6
(Ms).
(1S,3R,4S,7R)-7-benciloxi-3-(2-amino-6-cloro-purin-9-il)-1-(benzoiloximetil)-2,5-dioxabiciclo[2.2.1]heptano
(85). Se disolvió el compuesto 84 (4,49 g, 9,32 mmol) en DMSO
(200 ml) y se añadió BzONa (6,76 g, 46,6 mmol). Se agitó la
reacción a 100ºC durante 16 h. Se dejó enfriar la reacción hasta
temperatura ambiente y se añadieron EtOAc (200 ml) y salmuera :
NaHCO_{3} ac. sat. (1:1, 400 ml). Se transfirió la mezcla a un
embudo de decantación. Se separaron las fases y se extrajo la fase
ac. con EtOAc (3 x 200 ml). Se lavó la fase orgánica combinada con
salmuera (semisat., 2 x 200 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se
filtró y se evaporó a vacío. Se purificó el resto mediante DCVC
(\diameter=6 cm, EtOAc al 50-100% en
n-heptano v/v, incrementos del 5%, fracciones de 2
x 100 ml, MeOH al 0-10% en EtOAc v/v, incrementos
del 1%, 100 ml) produciendo el nucleósido 85 (3,30 g, 70%) como un
polvo blanco. R_{f} = 0,40 (n-heptano al 35% en
EtOAc (v/v)). EM-ESI m/z hallado 508,2; 510,1
([MH]^{+}, calc. 508,1). RMN de ^{1}H
(DMSO-d_{6}, 400 MHz): \delta 8,05 (s, 1H, H8),
7,98 (d, 2H, J = 7,3 Hz, Bz), 7,68 (t, 1H, J =7,3 Hz, Bz), 7,53 (t,
2H, J =7,7 Hz, Bz), 7,25-7,15 (m, 3H, Bn),
7,05-7,00 (m, 4H, Bn, NH_{2}), 5,98 (s, 1H, H1'),
4,85 (s, 2H, H5''), 4,67 (d, 1H, J = 1,8 Hz, H2'), 4,50 (d, 1H, J =
12,1 Hz, CH_{2}), 4,35 (d, 1H, J = 2,0 Hz, H3'), 4,34 (d, 1H, J =
11,7 Hz, CH_{2}), 4,16 (d, 1H, J = 8,4 Hz, CH_{2}), 3,98 (d,
1H, J = 8,1 Hz, CH_{2}). RMN de ^{13}C
(DMSO-d_{6}, 100 MHz): \delta 165,1 (PhCO),
159,6, 152,9, 149,0 (C2, C4, C6), 140,6 (C8), 136,7, 133,5, 129,2,
128,9, 128,7, 128,0, 127,9, 127,7, 127,6 (Ph), 123,2 (C5), 86,7
(C4'), 85,9 (C1'), 79,9 (C3'), 75,8 (C2'), 72,5, 72,1 (5',
CH_{2}Ph), 60,4 (C5'').
9-(3-O-Bencil-2-desoxi-2-yodo-5-O-metansulfonil-4-C-(metansulfoniloximetil)-\beta-D-treo-pentofuranosil)-6-N-
benzoiladenina (87). Se disolvió
9-(3-O-bencil-5-O-metansulfonil-4-C-(metansulfoniloximetil)-2-O-trifluorometansulfonil-\beta-D-eritro-pentofuranosil)-6-N-benzoiladenina
(589 mg, 0,755 mmol) en acetonitrilo seco (15 ml), se añadió yoduro
de litio (202 mg, 2 equiv.) y se calentó hasta reflujo. Tras 2 h,
la CL-EM muestra una conversión completa. Se eliminó
el disolvente a vacío y se dividió el resto entre DCM (50 ml) y
agua (50 ml). Se separaron las fases y se lavó la fase orgánica con
salmuera (50 ml), se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se
eliminó el disolvente a vacío para proporcionar una espuma naranja
(514 mg, rendimiento del 90%).
9-(2-Azido-3-O-bencil-2-desoxi-5-O-metansulfonil-4-C-(metansulfoniloximetil)-\beta-D-eritro-pentofuranosil)-6-N-
benzoiladenina (88). Se disolvió el compuesto 87 (30 mg) en
DMF/agua 1:1 (2 ml) y seguido por azida de sodio (26 mg, 10 equiv.).
Se agitó la mezcla de reacción a 80ºC durante la noche. La
CL-EM confirma la conversión del material de partida
en el producto sustituido con azida.
Claims (25)
1. Un procedimiento para la síntesis de un
análogo de LNA de fórmula general IV,
en la
que
X se selecciona de -CH_{2}-, -NR^{H}-, -O- y
-S-;
Z se selecciona de - CH_{2}-, -NR^{H}-, -S-
y -Se-;
B es una base nitrogenada;
R^{3} se selecciona de -R^{H}, -N_{3},
-NR^{H}R^{H}*, -NR^{H}C(O)R^{H}*,
-C(O)NR^{H}R^{H}*, -OR^{H},
-OC(O)R^{H}, -C(O)OR^{H}, -SR^{H},
-SC(O)R^{H} y tri(alquil
C_{1-6}/aril)sililoxi;
seleccionándose independientemente cada R^{H}
y R^{H}* de hidrógeno, alquilo C_{1-6}
opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y
aril-alquilo C_{1-6} opcionalmente
sustituido;
A^{4} y A^{5} se seleccionan
independientemente de alquileno C_{1-6}; y
R^{5} se selecciona de yodo, bromo, cloro,
alquil C_{1-6}-sulfoniloxi
opcionalmente sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi
opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados
de nitro, halógeno, alquilo C_{1-6}, y alquilo
C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos;
comprendiendo dicho procedimiento las siguientes
etapas:
tratar un producto intermedio de fórmula general
I:
en la
que
X, B, R^{3}, A^{4} y A^{5} son tal como se
definieron anteriormente;
R^{2} se selecciona de yodo, alquil
C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro,
halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo
C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos;
R^{3} y
R^{2} pueden formar juntos un epóxido y
R^{4} y R^{5} independientemente son tal
como se definieron para R^{5} anteriormente;
con un nucleófilo seleccionado de halógeno,
-N_{3}, -NR^{H}R^{H}*, -SR^{H}, - -S, -SeR^{H},
- -Se, -NR^{H}C(O)R^{H}*,
-SC(O)R^{H} y radicales hidrocarbilo
organometálicos,
para sustituir R^{2}, y
realizar el cierre del anillo entre las
posiciones C2' y C4' para dar el análogo de LNA de la fórmula IV;
o
un procedimiento para la síntesis de un análogo
de LNA de fórmula general VIII
comprendiendo dicho procedimiento
las siguientes
etapas:
tratar un producto intermedio de fórmula general
IX
\vskip1.000000\baselineskip
con un nucleófilo seleccionado de
halógeno, -N_{3}, -NR^{H}R^{H}*, -OR^{H}, -OH, -SR^{H},
- -S, -SeR^{H}, - -Se,
-NR^{H}C(O)R^{H}*, -SC(O)R^{H} y
radicales hidrocarbilo
organometálicos,
para sustituir R^{2}, y
realizar el cierre del anillo entre las
posiciones C2' y C4' para dar el análogo de LNA de la fórmula VIII,
en la que X, B, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5}, A^{4} y
A^{5} son tal como se definieron anteriormente y en la que Z se
selecciona de -CH_{2}-, -NR^{H}-, -O- -S-, y -Se-.
2. El procedimiento según la reivindicación 1,
en el que R^{2} se selecciona de alquil
C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro,
halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo
C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos;
R^{3} es aril(alquil
C_{1-6})oxilo opcionalmente sustituido;
y
R^{4} y R^{5} se seleccionan
independientemente de alquil
C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro,
halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo
C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos.
3. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que A^{4} y A^{5} son
metileno.
4. El procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que R^{4} y R^{5} son
idénticos.
5. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que X es -O-.
6. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que B se selecciona de adenina,
guanina, 2,6- diaminopurina, timina, 2-tiotimina,
citosina, metilcitosina, uracilo, 5-fluorocitosina,
xantina, 6-aminopurina,
2-aminopurina,
6-cloro-2-aminopurina,
y 6-cloropurina; R^{2} se selecciona de alquil
C_{1-6}-sulfoniloxi sustituido
con uno o más halógenos; R^{3} es bencilo; y R^{4} y R^{5} se
seleccionan independientemente de alquil
C_{1-6}-sulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más halógenos y arilsulfoniloxi opcionalmente
sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de nitro,
halógeno, alquilo C_{1-6} y alquilo
C_{1-6} sustituido con uno o más halógenos.
7. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que R^{4} y R^{5} se
seleccionan independientemente de metansulfoniloxi,
trifluorometansulfoniloxi, etansulfoniloxi,
2,2,2-trifluoroetansulfoniloxi, propansulfoniloxi,
isopropansulfoniloxi, butansulfoniloxi, nonafluorobutansulfoniloxi,
pentansulfoniloxi, ciclopentansulfoniloxi, hexansulfoniloxi,
ciclohexansulfoniloxi, \alpha-toluensulfoniloxi,
2-cloro-\alpha-toluensulfoniloxi,
orto-toluensulfoniloxi,
meta-toluensulfoniloxi,
para-toluensulfoniloxi, bencensulfoniloxi,
orto-bromobencensulfoniloxi,
meta-bromobencensulfoniloxi,
para-bromobencensulfoniloxi,
orto-nitrobencensulfoniloxi,
meta-nitrobencensulfoniloxi y
para-nitrobencensulfoniloxi.
8. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que el producto intermedio tiene
la fórmula III
en la que B, R^{4} y R^{5} son
tal como se definieron en cualquiera de las reivindicaciones
anteriores y en la que R^{3} es -OR^{H} o
-OC(O)R^{H} en la que R^{H} es tal como se definió
en la reivindicación
1.
9. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-7, en el que el producto
intermedio tiene la fórmula X
en la que B, R^{4} y R^{5} son
tal como se definieron en cualquiera de las reivindicaciones
anteriores y en la que R^{3} es -OR^{H} o
-OC(O)R^{H} en la que R^{H} es tal como se definió
en la reivindicación
1.
10. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que B se selecciona de adenina,
guanina, 2,6-diaminopurina, timina,
2-tiotimina, citosina, metilcitosina, uracilo,
5-fluorocitosina, xantina,
6-aminopurina, 2-aminopurina,
6-cloro-2-aminopurina
y 6-cloropurina; R^{3} es benciloxi; y R^{4} y
R^{5} son ambos metilsulfoniloxi.
11. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que el nucleófilo se selecciona
de -N_{3}, -NR^{H}R^{H}*, -SR^{H}, - -S,
-NR^{H}C(O)R^{H}* y
-SC(O)R^{H}.
12. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que Z es -S-.
13. El procedimiento según la reivindicación 12,
en el que el nucleófilo es Na_{2}S o tioacetato de potasio.
14. El procedimiento según la reivindicación 13,
en el que el cierre del anillo se realiza bajo la influencia de
hidróxido de litio en un disolvente aprótico polar.
15. El procedimiento según una cualquiera de las
reivindicaciones 1-11, en el que Z es -NH-.
16. El procedimiento según la reivindicación 15,
en el que el nucleófilo es azida sódica.
17. El procedimiento según la reivindicación 16,
en el que el cierre del anillo se realiza bajo la influencia de
hidróxido de sodio y trimetilfosfano en un disolvente aprótico
polar.
18. El procedimiento según una cualquiera de
las reivindicaciones 15-17, en el que la síntesis
comprende además la etapa de convertir el análogo de LNA cuando Z
es -NH- en un análogo de LNA en el que Z es -N(alquil
C_{1-6})- o 14(arilo) haciendo reaccionar
una disolución del análogo anterior de LNA con un agente reductor y
un alcanal C_{1-6} o un aldehído aromático o
cuando Z es N(acilo) haciéndolo reaccionar con un cloruro de
ácido o un anhídrido de ácido.
19. El procedimiento según la reivindicación 18,
en el que el alcanal C_{1-6} es formaldehído, o el
aldehído aromático es benzaldehído,
piren-1-carbaldehído, o
ftalimidoacetaldehído y el agente reductor es NaBCNH_{3}, o en el
que el cloruro de ácido es cloruro de benzoílo o cloruro de
piren-1-ilcarbonilo.
20. Un compuesto de la fórmula 1
en la que X, B, R^{2}, R^{3},
R^{4}, R^{5}, A^{4} y A^{5} son tal como se definieron en
una cualquiera de las reivindicaciones 1-19, con la
condición de que el compuesto no se selecciona
de
- 1-(3-azido-3-desoxi-2,5-di-O-metansulfonil-4-C-(metansulfoniloximetil)-\beta-D-eritro-pentofuranosil)timina y
- 1-(3-O-bencil-2,5-di-O-metansulfonil-4-C-(metansulfoniloximetil)-\beta-D-eritropentofuranosil)timina.
21. Un compuesto de la fórmula IX
en la que X, B, R^{2}, R^{3},
R^{4}, R^{5}, A^{4} y A^{5} son tal como se definieron en
una cualquiera de las reivindicaciones 1-19, con la
condición de que el compuesto no es
1-(3-O-bencil-2,5-di-O-metansulfonil-4-C-(metansulfoniloximetil)-\alpha-L-treo-pentofuranosil)timina.
22. El compuesto según la reivindicación 20, en
el que el compuesto tiene la fórmula III
y en la que B, R^{4} y R^{5}
son tal como se definieron en cualquiera de las reivindicaciones
anteriores y en la que R^{3} es -OR^{H} o
-OC(O)R^{H} en la que R^{H} es tal como se definió
en la reivindicación
1.
23. El compuesto según la reivindicación 21, en
el que el compuesto tiene la fórmula X
y en la que B, R^{4} y R^{5}
son tal como se definieron en cualquiera de las reivindicaciones
anteriores y en la que R^{3} es -OR^{H} o
-OC(O)R^{H} en la que R^{H} es tal como se definió
en la reivindicación
1.
24. Un oligonucleótido que comprende un
compuesto de fórmula XI
en la que R se selecciona de
benzoílo , bencilo,
pirin-1-ilcarbonilo,
1-piren-1-ilmetilo y
2-aminoetilo.
25. El oligonucleótido según la reivindicación
24, en el que dicho oligonucleótido es un nonámero y contiene dos o
tres monómeros de LNA de fórmula XI.
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