JP2005532319A - ロックト核酸誘導体の製造 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ロックト核酸誘導体(例えば、アミノ−LNA、チオ−LNA、セレノ−LNAおよびメチレン−LNA)の製造のための新規な方法に関し、該方法は、他のLNAアナログ(例えば、オキシ−LNA)を与えることもできる中間体を使用するスケーラブル(scalable)な高収率の反応を提供する。本発明は更に、α−L−LNAアナログおよび前駆体の製造のための新規な方法に関する。
イマニシ(Imanishi)教授(WO98/39352)およびウェンゲル教授(Wengel)(WO99/14226)は独立して、1997年にロックト(Locked)核酸(LNA)を発見し、そして該最初のLNAモノマーは、2'−O−CH2−4'二環構造(オキシ−LNA)をベースとした。それ以来、このLNAアナログは、アンチセンス薬物候補としての有望な結果を示した。他のLNAアナログもまた製造されており、これらは例えば、2'−NH−CH2−4',2'−N(CH3)−CH2−4'(アミノ−LNA)(Singh, S. K.; Kumar, R.; Wengel, J.による、J. Org. Chem. 1998, 63, 10035-10039; Singh, S. K.; Kumar, R.; Wengel, J.による、J. Org. Chem. 1998, 63, 6078-6079)、および2'−S−CH2−4'(チオ−LNA)(Singh, S. K.; Kumar, R.; Wengel, J.による、J. Org. Chem. 1998, 63, 6078-6079, Kumar, R.; Singh, S. Kらによる、Biorg. Med. Chem. Lett. 1998, 8, 2219-2222)に対する同様な高い結合力/特異性を示す。大量のアミノ−LNAが、アンチセンスにおけるその使用のために非常に重要である。アミノ−LNAの製造についてこれまでに記載されている方法をスケールアップすることは困難であると思われ、そしていくつかの大きな問題に出くわした。
本発明は、LNA誘導体(例えば、α−L−オキシ−LNA、アミノ−LNA、α−L−アミノ−LNA、チオ−LNA、α−L−チオ−LNA、セレノ−LNA、およびメチレン−LNA)の製造のための新規な方法を提供する。
幾何異性体の退屈な分離を排除する;
ベンジルアミンを用いる、ジ−O−トシルヌクレオシドの二重求核置換の低収率工程を避ける;
該方法により、公知のオキシ−LNA製造にとって一般的である出発中間体の利用が可能となる;
該方法は、適当な求核体と反応する場合に、様々なLNAアナログ(すなわち、アミノ−LNA、チオ−LNA、セレノ−LNA、メチレン−LNAおよびα−L−LNA)を与えることができる、新規な中間体を含む;
該方法は、N−メチル化のための別方法を含み、それによって核酸塩基でのメチル化を避ける;
安価で且つ商業的に入手可能な試薬を使用する;
大量のLNAアナログホスホルアミドが入手できるスケーラブルな反応を含む.
LNAアナログの製造
本発明の主な態様は、一般式IV:
Xは、−CH2−、−NRH−、−O−および−S−から選ばれ;
Zは、−CH2−、−NRH−、−S−および−Se−から選ばれ;
Bは、核酸塩基であり;
R3は、−RH、−N3、−NRHRH*、−NRHC(O)RH*、−C(O)NRHRH*、−ORH、−OC(O)RH、−C(O)ORH、−SRH、−SC(O)RH、およびトリ(C1〜6−アルキル/アリール)シリルオキシから選ばれ;
RHおよびRH*は各々独立して、水素、場合により置換されたC1〜6−アルキル、場合により置換されたアリール、および場合により置換されたアリール−C1〜6−アルキルから選ばれ;
A4およびA5は独立して、C1〜6−アルキレンから選ばれ;そして、
R5は、ヨード、ブロモ、クロロ、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲンおよびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキルおよび1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる]
で示されるLNAアナログの製造法に関する。該方法は、
一般式I:
X、B、R3、A4およびA5は、上で定義する通りであり;
R2は、ヨード、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲンおよびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれるか、あるいは、
R3およびR2は一緒になって、エポキシドを形成し得て;そして、
R4およびR5は独立して、上記のR5について定義する通りであるか、あるいは、
R4およびR5は一緒になって、テトラ(C1〜6−アルキル)ジシロキサニリデン基を構築する]
で示される中間体を、求核体(これは、ハロゲン、−N3、−NRHRH*、−SRH、−−S、−SeRH、−−Se、−NRHC(O)RH*、−SC(O)RH、および有機金属ヒドロカルビル基から選ばれる)を用いて処理してR2を置換し;そして、
C2'およびC4'位の間での閉環を有効として、式IVのLNAアナログを得る、
工程を含む。
R3は、場合により置換されたアリール(C1〜6−アルキル)オキシであり;そして、
R4およびR5は独立して、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる。
によって示されると考えられている。このことは、式IIの鏡像が等しく利用可能であることを意味する。1態様において、OR3およびR2はエポキシドを形成し得る。
R2は、1つ以上のハロゲンによって置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシから選ばれ;
R3は、ベンジルであり;
R4およびR5は独立して、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲンおよびC1〜6−アルキルから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる。
本発明はまた、一般式VIII:
Xは、−CH2−、−NRH−、−O−、および−S−から選ばれ;
Zは、−CH2−、−NRH−、−O−、−S−、および−Se−から選ばれ;
Bは、核酸塩基であり;
R3は、−RH、−N3、−NRHRH*、−NRHC(O)RH*、−C(O)NRHRH*、-ORH、−OC(O)RH、−C(O)ORH、−SRH、−SC(O)RH*、およびトリ(C1〜6−アルキル/アリール)シリルオキシから選ばれ;
RHおよびRH*は各々独立して、水素、場合により置換されたC1〜6−アルキル、場合により置換されたアリール、および場合により置換されたアリール−C1〜6−アルキルから選ばれ;
A4およびA5は独立して、C1〜6−アルキレンから選ばれ;そして、
R5は、ヨード、ブロモ、クロロ、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる]
で示されるα−L−LNAアナログ(例えば、α−L−オキシ−LNA、α−L−チオ−LNA、またはα−L−アミノ−LNA)の製造法であり得る。該方法は、
一般式IX:
X、B、R3、A4およびA5は上で定義する通りであり;
R2は、ヨード、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれるか;あるいは、
R3およびR2は一緒になって、エポキシドを形成し得て;そして、
R4およびR5は独立して、上記のR5について定義する通りであるか、あるいは、
R4およびR5は一緒になって、テトラ(C1〜6−アルキル)ジシロキサニリデン基を構築する]
で示される中間体を、求核体(これは、ハロゲン、−N3、−NRHRH*、−ORH、−OH、−SRH、−−S、−SeRH、−−Se、−NRHC(O)RH、−SC(O)RH、および有機金属ヒドロカルビル基から選ばれる)を用いて処理してR2を置換し;そして、
C2'およびC4'位の間での閉環を有効として、式VIIIのLNAアナログを得る、工程を含む。
大部分の中間体(式Iの化合物)は新規な化合物であると考えられ、従って本発明はまた、式I:
Xは、−CH2−、−NRH−、−O−、および−S−から選ばれ;
Bは、核酸塩基であり;
R2は、ヨード、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれて;
R3は、−RH、−N3、−NRHRH*、−NRHC(O)RH*、−C(O)NRHRH*、−ORH、−OC(O)RH、−C(O)ORH、−SRH、−SC(O)RH、およびトリ(C1〜6−アルキル/アリール)シリルオキシから選ばれるか;あるいは、
R3およびR2は一緒になって、エポキシドを形成し;
RHおよびRH*の各々は独立して、水素、場合により置換されたC1〜6−アルキル、場合により置換されたアリール、および場合により置換されたアリール−C1〜6−アルキルから選ばれ;
A4およびA5は独立して、C1〜6−アルキレンから選ばれ;そして、
R4およびR5は独立して、ヨード、ブロモ、クロロ、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールアルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれるか;あるいは、
R4およびR5は一緒になって、テトラ(C1〜6−アルキル)ジシロキサニリデン基を構築する]
で示される化合物をも与える。但し、
1−(3−アジド−3−デオキシ−2,5−ジ−O−メタンスルホニル−4−C−(メタンスルホニルオキシメチル)−β−D−エリスロ−ペントフラノシル)チミン、
1−(3−O−ベンジル−2,5−ジ−O−メタンスルホニル−4−C−(メタンスルホニルオキシメチル)−β−D−エリスロ−ペントフラノシル)チミン、および
1−(3−O−ベンジル−2,5−ジ−O−メタンスルホニル−4−C−(メタンスルホニルオキシメチル)−α−L−トレオ−ペントフラノシル)チミンからは選ばれない。
式Iの化合物(中間体)は、C2'置換基が脱離基である同様な化合物におけるC2'置換基の配向の反転によって製造することができる。従って、本発明はまた、式I:
Xは、−CH2−、−NRH−、−O−および−S−から選ばれ;
Bは、核酸塩基であり;
R2は、ヨード、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれ;
R3は、−RH、−N3、−NRHRH*、−NRHC(O)RH*、−C(O)NRHRH*、−ORH、−OC(O)RH、−C(O)ORH、−SRH、−SC(O)RH、およびトリ(C1〜6−アルキル/アリール)シリルオキシから選ばれ;
RHおよびRH*の各々は独立して、水素、場合により置換されたC1〜6−アルキル、場合により置換されたアリール、および場合により置換されたアリール−C1〜6−アルキルから選ばれ;
A4およびA5は独立して、C1〜6−アルキレンから選ばれ;
R3およびR2は一緒になって、エポキシドを形成し得て;そして、
R4およびR5は独立して、ヨード、ブロモ、クロロ、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲンおよびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる]
で示される化合物の製造法にも関する。該方法は、式VII:
R2*は、ヨード、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれ;そして、
X、B、R3、R4、A4、R5およびA5は上で定義する通りである]
で示される化合物のC2'位の置換基の配向の反転を含む。
本明細書中、用語「C1〜6−アルキル」は、炭素数が1〜6個の直鎖、環状または分枝の炭化水素基を意味し、例えばメチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、tert−ブチル、イソ−ブチル、ペンチル、シクロペンチル、ヘキシル、シクロへキシルが挙げられ、特にメチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、tert−ブチル、イソ−ブチルおよびシクロヘキシルを挙げられる。
無水条件下で行なう反応のために、ガラス製品を150℃でオーブン中、終夜乾燥し、そしてこのものをデシケーター中、無水KOH上で冷却した。無水反応は、アルゴン雰囲気下で行なった。溶媒はHPLCグレードとし、その内のDMF、ピリジン、アセトニトリルおよびジクロロメタンはモレキュラーシーブ(4Å(Grace Davison)社製)を用いて乾燥し、そしてTHFはNaベンゾフェノンから新たに蒸留して、水含有量を20ppm以下とした。TLCは、メルク製シリカ60 F254アルミニウムシート上で行なった。ドライカラムバキュームクロマトグラフィー(DCVC)は、公知の方法に従って行なった。1H、13C、19F、および31P NMRスペクトルは、それぞれ400MHz、100MHz、376MHz、および121MHzで記録し、そして内部標準(δH:CDCl3 7.26ppm、DMSO−d6 2.50;δC:CDCl3 77.0ppm、DMSO−d6 39.4ppm)としての溶媒を使用する。31P NMRは、外部標準である85% H3PO4を用いて行なった。J値は、Hz単位で示す。NMRスペクトルの帰属は2Dスペクトルに基づき、そして二環性のヌクレオシド誘導体の組織学的な化合物名はバイエル(Baeyer)命名法に従って示すが、標準的な炭水化物/ヌクレオシド命名法(4'−C−置換基の炭素原子はC1''と番号を付す)に従う。粗化合物は、それらがTLCおよびHPLC−MS(RP C18カラム、UV検出)によって95%以上である場合には、更に精製することなく使用した。元素分析値は、the University of Copenhagen, Microanalytical Departmentから入手した。
3−O−ベンジル−4−C−ヒドロキシメチル−1,2−O−イソプロピリデン−α−D−エリスロ−ペントフラノース1(Youssefyeh, R. D.; Verheyden, J. P. H.; Moffatt, J. G.による、J. Org. Chem. 1979, 44, 1301-1309)(200mg、0.64mmol)の酢酸(3.69mL、64.4mmol)の撹拌溶液に、濃H2SO4(0.34μL、6.44μmol)を加えた。25分後に、該反応混合物をrtまで昇温させた。撹拌を2時間続け、その後に該混合物を氷冷飽和NaHCO3水溶液(150mL)中にそそいだ。該溶液をジクロロメタン(2×150mL)を用いて抽出し、そして該有機層を合わせて、飽和NaHCO3水溶液(2×100mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発するまで乾固させて、無色液体のアセチル化グリコシド供与体の粗アノマー混合物(258mg、0.59mmol)を得た。該液体(246mg、0.56mmol)を無水アセトニトリル(5mL)中に撹拌しながら溶解した。チミン(144mg、1.14mmol)およびN,O−ビス(トリメチルシリル)アセトアミド(0.99mL、4.00mmol)を加え、そして該混合物を1.5時間加熱還流し、次いで0℃まで冷却した。トリメチルシリルトリフレート(0.23mL、1.25mmol)を5分間かけて滴下し、そして該混合物を80℃まで3.5時間加熱した。該反応混合物をrtまで冷却し、そして氷冷した飽和NaHCO3水溶液(10mL)を加えた。抽出をジクロロメタン(2×20mL)を用いて行ない、そして該有機層を合わせて、飽和NaHCO3水溶液(2×20mL)およびブライン(20mL)を用いて連続して洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、ろ過し、そして真空下で蒸発させて乾固した。該残渣をDCVC(0〜1%容量のMeOH/ジクロロメタンを使用)によって精製して、白色固体物質のヌクレオシド(259mg、91%)を得た。FAB−MS m/z 実測値:505.0([MH]+、計算値505.2)。1H NMR (CDCl3) δ 9.93 (s, 1H, NH), 7.37-7.28 (m, 5H, Ph), 7.09 (d, J = 0.9, 1H, H6), 5.79 (d, J = 3.5, 1H, H1'), 5.53 (dd, J = 6.3, 3.7, 1H, H2'), 4.64-4.08 (m, 7H, CH 2 Ph, H3', H5'a, H5'b, H1''a, H1''b), 2.11 (s, 3H, CH3C(O)), 2.10 (s, 3H, CH3C(O)), 2.07 (s, 3H, CH3C(O)), 1.91 (s, 3H, CH3); 13C NMR (CDCl3) δ 170.4, 169.9, 163.9, 149.9 (CH3 C(O), C2, C4), 137.1, 136.8, 128.3, 128.0, 127.8 (C6, Ph), 111.0 (C5), 90.6 (C1'), 84.2 (C4'), 77.0 (C3'), 74.2 (CH2Ph), 73.7 (C2'), 63.6, 62.2 (C5', C1''), 20.6, 20.5 (CH3 C(O)), 12.3 (CH3)。
ヌクレオシド1−(2,5−ジ−O−アセチル−4−C−アセチルオキシメチル−3−O−ベンジル−β−D−エリスロ−ペントフラノシル)チミン(149mg、0.30mmol)を、飽和NH3のMeOH(15mL)溶液中に溶解した。該混合物を封したフラスコ中、rtで終夜撹拌し、そして減圧下で蒸発させて乾固した。該残渣をEtOAc(30mL)中に溶解し、そして水洗した(10mL)。該水相をEtOAc(30mL)を用いて抽出し、そして該有機層を合わせて、アセトニトリル(2×10mL)と一緒に減圧下で共蒸発させて乾固した。該残渣をDCVC(1〜4容量%のMeOH/ジクロロメタンを使用)によって精製して、粘性液体のヌクレオシド(93mg、84%)を得た。Rf=0.32(10容量%のMeH/EtOAc);FAB−MS m/z(実測値379.0([MH]+、計算値379.1);1H NMR (DMSO-d6) δ 11.29 (br s, 1H, NH), 7.73 (d, J = 1.3, 1H, H6), 7.40-7.26 (m, 5H, Ph), 5.90 (d, J = 6.2, 1H, H1'), 5.51 (d, J = 7.5, 1H, OH), 5.18 (t, J = 5.0, 1H, OH), 4.86 (t, J = 5.49, 1H, OH), 4.81 (d, J = 11.7, 1H), 4.56 (d, J = 11.7, 1H), 4.36 (q, J = 6.3, 1H, H2'), 4.08 (d, J = 5.5, 1H, H3'), 3.60-3.50 (m, 4H) (H5', H1'', CH 2 Ph), 1.79 (d, J = 1.1, 3H, CH3); 13C NMR (DMSO-d6) δ 163.6 (C4), 150.7 (C2), 138.6, 136.3, 128.0, 127.2 (C6, Ph), 109.3 (C5), 87.7, 87.5 (C1', C4'), 78.5 (C3'), 73.3 (C2'), 72.7, 62.8, 61.3 (C5', C1'', CH2Ph), 12.2 (CH3);元素分析(C18H22N2O7・0.25H2Oとして計算)計算値:C 56.5;H 5.9;N 7.3。実測値:C 56.5;H 5.9;N 7.0。
ヌクレオシド1−(3−O−ベンジル−4−C−ヒドロキシメチル−β−D−エリスロ−ペントフラノシル)チミン(0.83g、3.2mmol)を無水ピリジン(20mL)中に溶解し、そして撹拌しながら0℃まで冷却した。メタンスルホニルクロリド(0.85mL、11mmol)を滴下し、そして該反応液を3時間かけて15℃とした。該反応液を飽和NaHCO3水溶液(50mL)を用いてクエンチし、そしてブライン(50mL)およびEtOAc(100mL)を有する分液ろうとに移した。相分離し、そして該水相をEtOAc(2×50mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて、ブライン(100mL)を用いて抽出し、乾燥し(Na2SO4)、ろ過し、そして真空下で蒸発して粘性黄色液体を得た。該液体を、ジクロロメタンおよびトルエンの混合物中に溶解し、そして真空下で蒸発して白色発泡体のヌクレオシド28(1.48g、93%)を得た。分析データは、これまでに公開されているものと同一であった(Hakansson, A. E.; Koshkin, A.; Sorensen, M. D.; Wengel, J.による、J. Org. Chem. 2000, 65, 5161-5166.)。
ヌクレオシド26(Koshkinらによる、J. Org. Chem. 2001, 66, 8504-8512)(30g、52mmol)をMeOH(600mL)中に溶解し、そして該溶液を0℃まで冷却した。新たに調製した飽和メタノール性アンモニア(600mL)を加え、そして該混合物をrtとした。rtで5時間後に、該反応液を氷酢酸(50mL)を用いてクエンチし、そしてこのものをビーカーへと移し、飽和NaHCO3水溶液を用いて中和した。EtOAc(900mL)およびブライン(500mL)を加え、そして相分離した。該水相をEtOAc(3×500mL)を用いて抽出し、そして該有機層を合わせて飽和NaHCO3水溶液(500mL)およびブライン(500mL)を用いて洗浄した。該有機層を乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして該溶媒を真空下で除去して、白色発泡体の27(27g、97%)を得た。Rf=0.33(100%EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 557.0([MNa]+、計算値557.1);1H NMR (CDCl3) δ 10.21 (br s, 1H, NH), 7.33-7.25 (m, 6H, Ph, H6), 5.77 (d, J = 3.9, 1H, H1'), 4.84 (d, J = 11.4, 1H, H3'), 4.59-4.57 (m, 3H), 4.42-4.37 (m, 3H), 4.26-4.19 (m, 2H) (H2', H2", H5", CH 2 Ph, OH), 2.98 (s, 3H, CH3), 2.76 (s, 3H, CH3), 1.80 (s, 3H, CH3); 13C NMR (CDCl3) δ 162.5 (C4), 151.0 (C2), 136.7 (Ph), 136.2 (C6), 128.5, 128.3, 128.2 (Ph), 111.3 (C5), 92.1 (C1'), 84.0 (C4'), 77.7 (C3'), 74.1, 73.5 (C2', CH2Ph), 68.6, 68.3 (C5', C1''), 37.2, 37.1 (Ms), 12.0 (CH3);元素分析(C20H26N2O11S2として計算)計算値:C 44.9;H 4.9;N 5.2。実測値:C 45.0;H 4.7;N 5.1。
ヌクレオシド27(20g、37mmol)を無水ジクロロメタン(100mL)中に溶解し、そして無水ピリジン(100mL)を加えた。該溶液を0℃まで冷却し、そしてメタンスルホニルクロリド(4.4mL、56mmol)を滴下した。2時間後に、該反応液を飽和NaHCO3水溶液(200mL)を用いてクエンチし、そして相分離した。該水相をジクロロメタン(2×150mL)を用いて抽出し、そして該有機層を合わせて、塩酸(1M、2×200mL)、飽和NaHCO3水溶液(2×250mL)およびブライン(250mL)を用いて洗浄した。該有機相を乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして該溶媒を真空下で除去した。該粗生成物をトルエンと一緒に共蒸発させて、白色発泡体の28(22g、96%)を得た。Rf=0.41(100%EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 635.0([MNa]+、計算値635.1)。分析データは、これまでに報告されているものと同一であった(Hakansson, A. E.; Koshkin, A.; Sorensen, M. D.; Wengel, J.による、J. Org. Chem. 2000, 65, 5161-5166)。
ヌクレオシド28(10g、16.3mmol)を無水アセトニトリル(100mL)中に溶解し、そしてDBU(2.69mL、18.0mmol)を加えた。該生成物を該反応混合物からゆっくりと沈降した。2時間後に、該反応を完結させ、そして真空下で濃縮して沈降を促進した。該反応混合物を−20℃まで冷却し、そして該生成物をろ過によって集めて、白色固体物質のヌクレオシド29(7.64g、91%)を得た。FAB−MS m/z 実測値 517.0([MH]+、計算値517.1);1H NMR (DMSO-d6) δ 7.79 (d, J = 1.3, 1H, H6), 7.45-7.32 (m, 5H, Ph), 6.40 (d, J = 6.0, 1H, H1'), 5.60 (dd, J = 6.1, 2.8, 1H, H2'), 4.82 (d, J = 11.5, 1H, CH 2 Ph), 4.70 (d, J = 11.5, 1H, CH 2 Ph), 4.51 (d, J = 2.8, 1H, H3'), 4.43 (d, J = 10.6, 1H), 4.36 (d, J = 6.2, 1H), 4.33 (d, J = 5.9, 1H), 4.25 (d, J = 11.0, 1H) (H5', H1''), 3.22 (s, 3H, Ms), 3.16 (s, 3H, Ms), 1.80 (s, J = 1.1, 3H, CH3); 13C NMR (DMSO-d6) δ 171.5 (C4), 159.1 (C2), 136.9, 132.1, 128.5, 128.1, 127.9 (C6, Ph), 117.1 (C5), 89.1 (C1'), 86.1 (C2'), 85.4 (C4'), 83.7 (C3'), 72.4 (CH2Ph), 68.6, 68.0 (C5', C1''), 36.9, 36.8 (Ms), 13.6 (CH3);元素分析(C20H24N2O10S2として計算)計算値:C 46.5;H 4.7;N 5.4。実測値:C 46.6;H 4.8;N 5.3。
ヌクレオシド29(3.70g、7.16mmol)を、アセトン(160mL)およびH2SO4水溶液(0.1M、160mL)混合物中に懸濁した。該混合物を撹拌しながら終夜加熱還流した。rtまで冷却後に、白色固体が沈降した。該容量を真空下で約1/2まで減少させ、そして白色固体をろ過によって単離した。該固体を十分に水洗し、そして真空下で乾燥して、白色固体のヌクレオシド30(3.77g、98%)を得た。FAB−MS m/z 実測値 535.0([MH]+、計算値 535.1);1H NMR (DMSO-d6) δ 11.35 (s, 1H, NH), 7.41-7.32 (m, 6H, H6, Ph), 6.20 (d, J = 5.0, 1H, H1'), 6.10 (d, J = 4.8, 1H, 2'-OH), 4.77 (d, J = 11.9, 1H, CH 2 Ph), 4.67 (d, J = 11.9, 1H, CH 2 Ph), 4.56 (d, J = 10.6, 1H), 4.50-4.41 (m, 3H), 4.32 (d, J = 10.6, 1H), 4.16 (d, J = 3.7, 1H , H3'), 3.25 (s, 3H, Ms), 3.20 (s, 3H, Ms), 1.79 (s, 3H, CH3); 13C NMR (DMSO-d6) δ 163.9 (C4), 150.6 (C2), 137.8, 137.6, 128.4, 127.9, 127.7 (C6, Ph), 108.2 (C5), 84.8 (C1'), 84.3 (C3'), 81.7 (C4'), 73.3 (C2'), 72.3 (CH2Ph), 68.1, 67.6 (C5', C1''), 37.0, 36.8 (Ms), 12.2 (CH3);元素分析(C20H26N2O11S2として計算)計算値:C 44.9;H 4.9;N 5.2。実測値:C 44.5;H 4.8;N 5.1。
ヌクレオシド30(300mg、0.56mmol)を無水ピリジン(2×5mL)中に溶解し、そして真空下で濃縮して微量の水を除去した。該化合物を無水ジクロロメタン(20mL)および無水ピリジン(0.45mL、5.60mmol)の混合物中に溶解し、続いてDMAP(274mg、2.24mmol)を加えた。0℃まで冷却後に、無水トリフルオロメタンスルホン酸(0.19mL、1.12mmol)を30分間かけて滴下した。該反応混合物を更に1.5時間撹拌し、そしてこのものを氷冷した飽和NaHCO3水溶液(20mL)中にそそいだ。該有機層を分離し、そして塩酸(1M、2×20mL)および飽和NaHCO3水溶液(2×20mL)を用いて連続して洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発した。該残渣をDCVC(0〜100容量%のEtOAc/n−ヘキサンを使用)によって精製して、白色発泡体のヌクレオシド31(302mg、80%)を得た。FAB−MS m/z 実測値 667.0([MH]+、計算値 667.0);1H NMR (DMSO-d6) δ 11.62 (br s, 1H, NH), 7.51 (s, 1H, H6), 7.40-7.33 (m, 5H, Ph), 6.45 (br s, 1H, H1'), 5.91 (t, J = 6.0, 1H, H2'), 4.97 (d, J = 5.7, 1H, H3'), 4.82-4.36 (m, 6H, CH 2 Ph, H5'a, H5'b, H1''a, H1''b), 3.30 (s, 3H, Ms), 3.24 (s, 3H, Ms), 1.81 (s, 3H, CH3); 13C NMR (DMSO-d6) δ 163.3 (C4), 150.0 (C2), 136.5, 128.3, 128.0, 127.8 (C6, Ph), 117.6 (q, J = 320, CF3), 110.1 (C5), 88.0 (C1'), 81.7, 81.0 (C3', C4'), 73.1 (CH2Ph), 68.0, 67.6 (C5', C1''), 36.7, 36.6 (Ms), 11.8 (CH3);元素分析(C21H25F3N2O13S3として計算)計算値:C 37.8;H 3.8;N 4.2。実測値:C 38.1;H 3.8;N 4.1。
(方法A):ヌクレオシド31(215mg、0.32mmol)の無水DMF(10mL)溶液に、NaN3(23mg、0.35mmol)および15−クラウン−5(64μL、0.32mmol)を加えた。該混合物を80℃で1時間撹拌し、次いでrtまで冷却し、その後に水(20mL)を加えた。該溶液をEtOAc(50mL)を用いて抽出し、そして該有機層を飽和NaHCO3(2×20mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発させて乾固した。該残渣をDCVC(50〜100容量%のEtOACのn−ヘキサンを使用)によって精製して、白色発泡体のヌクレオシド32(164mg、31から91%)。分析データは、上で報告したものと同一であった。
32(5.83g、10.4mmol)のTHF(300mL)溶液に、rtでNaOH水溶液(2.0M、104mL、208mmol)およびPMe3のTHF溶液(1.0M、20.8mL、20.8mmol)を撹拌しながら加えた。8時間後に、該THFを減圧下で一部除去した。ブライン(200mL)およびEtOAc(300mL)を加え、そして相分離した。該水相をEtOAc(2×300mL)およびジクロロメタン(2×300mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で濃縮して、白色固体のヌクレオシド33(4.22g、93%)を得た。Rf=0.15(10容量%のMeOH/EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 438.0([MH]+、計算値438.1); 1H NMR (DMSO-d6) δ 11.33 (br s, 1H, NH), 7.46 (s, 1H, H6), 7.36-7.27 (m, 5H, Ph), 5.44 (s, 1H, H1'), 4.67 (d, J = 11.7, 1H), 4.59 (d, J = 11.5, 1H), 4.56 (d, J = 11.9, 1H), 4.52 (d, J = 11.7, 1H) (H5', CH 2 Ph), 3.84 (s, 1H, H3'), 3.65 (s, 1H, H2'), 3.26 (s, 3H, Ms), 3.06 (d, J = 10.1, 1H, H1''a), 2.78 (d, J = 9.9, 1H, H1''b), 1.77 (s, 3H, CH3); 13C NMR (DMSO-d6) δ 163.9 (C4), 150.1 (C2), 137.9, 134.7, 128.2, 127.7, 127.6 (C6, Ph), 108.3 (C5), 88.4 (C1'), 85.6 (C4'), 76.3 (C3'), 70.9, 66.6 (CH2Ph, C5'), 59.4 (C2'), 50.1 (C1''), 36.9 (Ms), 12.3 (CH3);元素分析(C19H23N3O7Sとして計算)計算値:C 52.1;H 5.3;N 9.6。実測値:C 52.0;H 5.2;N 9.2。
33(4.22g、9.64mmol)のギ酸(20mL)溶液に、ホルムアルデヒド(37%水溶液、20mL)を撹拌しながら加え、そして該反応混合物を80℃まで加熱した。1時間後に、該反応液をEtOAc(150mL)を用いて希釈し、そして飽和NaHCO3水溶液(100mL)中に注意深くそそぐことによってクエンチした。相分離し、そして該有機層を飽和NaHCO3水溶液(4×100mL)を用いて洗浄した。該水相を合わせて、ジクロロメタン(2×200mL)を用いて抽出した。該有機相を合わせて、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。DCVC(φ6cm、0〜15容量%のMeOH/EtOAc、1%ずつ増加、100mLの画分)によって精製することにより、オフホワイト色固体のヌクレオシド34(3.89g、90%)を得た。Rf=0.30(10%容量のMeOH/EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 452.1([MH]+、計算値 452.1);1H NMR (DMSO-d6) δ 11.34 (br s, 1H, NH), 7.43 (s, 1H, H6), 7.34-7.28 (m, 5H, Ph), 5.58 (s, 1H, H1'), 4.67 (m, 4H, H5', CH 2 Ph), 3.88 (s, 1H, H3'), 3.58 (s, 1H, H2'), 3.27 (s, 3H, Ms), 2.98 (d, J = 9.7, 1H, H1''a), 2.76 (d, J = 9.7, 1H, H1''b), 2.57 (s, 3H, NCH3), 1.76 (s, 3H, CH3); 13C NMR (DMSO-d6) δ163.9 (C4), 149.9 (C2), 137.6 (Ph), 134.6 (C6), 128.3, 127.7 (Ph), 108.4 (C5), 86.1 (C1'), 85.3 (C4'), 77.3 (C3'), 71.0, 66.3 (CH2Ph, C5'), 64.9 (C2'), 58.7 (C1''), 40.8 (NCH3), 36.9 (Ms), 12.3 (CH3);元素分析(C20H25N3O7S・0.25H2Oとして計算)計算値:C 52.7;H 5.6;N 9.1。実測値:C 52.9;H 5.6;N 8.9。
化合物34(3.00g、6.64mmol)を無水DMF(30mL)中に溶解し、そして安息香酸ナトリウム(1.93g、13.3mmol)を加えた。該反応混合物を100℃まで7時間加熱し、次いでrtまで冷却した。メトキシナトリウム(1.44g、26.6mmol)を加え、そして1時間後に、該反応液をジクロロメタン(100mL)を用いて希釈し、そしてブライン(2×100mL)を用いて洗浄した。該水相を合わせて、ジクロロメタン(2×50mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて乾燥し(Na2SO4を使用)、そして減圧下で濃縮した。該残渣を塩酸(1M、15mL)中に溶解し、そして凍結乾燥して、オフホワイト色固体を得た。DCVC(φ4cm、0〜10容量%のMeOH/ジクロロメタン、0.5%ずつ増加、50mLの画分)によって精製することにより、オフホワイト色固体のヌクレオシド35の塩酸塩(2.72g、98%)を得た。Rf=0.19(7%容量のMeOH/ジクロロメタン);ESI−MS m/z 実測値 374.1([MH]+、計算値374.2)、408.1、410.1([MCl]−、計算値 408.1、410.1);1H-NMR (DMSO-d6) δ 11.43 (br s, 1H, NH), 7.63 (s, 1H, H6), 7.45-7.29 (m, 5H, Ph), 5.60 (s, 1H, H1'), 4.80 (t, J = 5.7, 1H, 5'-OH), 4.67-4.50 (m, 2H, CH 2 Ph), 3.87 (s, 1H, H3'), 3.67 (d, J = 6.0, 2H, H5'), 3.38 (s, 1H, H2'), 2.88 (d, J = 9.2, 1H, H1''a), 2.66 (d, J = 9.5, 1H, H1''b), 2.57 (s, 3H, NCH3), 1.75 (s, 3H, CH3); 13C NMR (DMSO-d6) δ 164.0 (C4), 149.8 (C2), 137.0 (Ph), 134.4 (C6), 128.5, 127.8 (Ph), 108.9 (C5), 88.4 (C1'), 88.0 (C4'), 77.8 (C3'), 71.0, (CH2Ph), 66.0, 65.7 (C2', C5'), 61.4 (C1''), 40.1 (NCH3), 12.6 (CH3);元素分析(C19H23N3O5・HCl・H2Oとして計算)計算値:C 53.3;H 6.1;N 9.8。実測値:C 53.0;H 6.3;N 9.6。
化合物35(2.60g、6.64mmol)を氷酢酸(50mL)中に溶解し、そして該反応フラスコを除き、そしてアルゴンで数回充填した。Pd(OH)2−木炭(20%湿性、200mg)を加え、そして該反応フラスコを除き、そして水素ガスで数回充填した。該反応液を水素ガス雰囲気下で激しく8時間撹拌した。該触媒をセライトのパッドを通してろ過することによって除去した。該セライトを熱メタノール(200mL)を用いて十分に洗浄した。該溶媒を真空下で除去した。該残渣を水(10mL)中に溶解し、そして凍結乾燥して、オフホワイト色フレークのヌクレオシド36(2.10g、97%)を得た。Rf=0.11(0.5容量%Et3N、10容量%MeOH、89.5容量%EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 284.1([MH]+、計算値 284.1)。全ての分析データは、上で報告したものと同一であった。
化合物36(2.00g、5.83mmol)を無水ピリジン(2×50mL)中に溶解し、そして真空下で濃縮した。該ヌクレオシドを無水ピリジン(50mL)中に溶解し、そして4,4'−ジメトキシトリチルクロリド(2.96g、8.74mmol)を加え、そして該反応液をrtで9時間撹拌した。該反応液を真空下で1/2の容量まで濃縮し、そして該残渣をEtOAc(100mL)を用いて希釈した。該有機層を飽和NaHCO3水溶液(3×100mL)およびブライン(100mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。DCVC(φ4cm、0〜10容量%のMeOH/EtOAc+0.5容量%のTEA、0.5%ずつ増加、50mL画分)によって精製することにより、オフホワイト色固体のヌクレオシド37(3.13g、92%)を得た。Rf=0.38(0.5容量%Et3N、10容量%MeOH、89.5容量%EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 586.2([MH]+、計算値 586.2)。全ての分析データは、上で報告されているものと同一であった(Singh, S. K.; Kumar, R.; Wengel, J.による、J. Org. Chem. 1998, 63, 10035-10039)。
化合物37(500mg、0.85mmol)を無水ジクロロメタン(4mL)中に溶解し、そして4,5−ジシアノイミダゾールのMeCN(1.0M、0.59mL、0.59mmol)を周囲温度で撹拌しながら加えた。2−シアノエチル−N,N,N',N'−テトライソプロピルホスホロジアミダイト(0.27mL、0.85mmol)を該反応混合物に滴下した。2時間後に、該反応液をジクロロメタン(10mL)を用いて希釈し、そしてこのものを分液ろうとに移し、そして飽和NaHCO3水溶液(2×15mL)およびブライン(15mL)を用いて洗浄した。該水相を合わせてジクロロメタン(10mL)を用いて抽出した。該有機層を保存し、そして乾燥した(Na2SO4を使用)。ろ過後に、該有機層を真空下で蒸発させて、わずかに黄色発泡体のヌクレオシド29(660mg、98%収率)を得た。Rf=0.56(0.5%容量%Et3N、10容量%MeOH、89.5容量%EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 786.3([MH]+、計算値 786.4)。19P NMR (CDCl3) δ 149.8, 149.6.(Singh, S. K.; Kumar, R.; Wengel, J.による、J. Org. Chem. 1998, 63, 10035-10039)。
化合物37(1.5g、2.5mmol)を、無水ピリジン(25mL)中に溶解した。無水酢酸(2.4mL、25mmol)を加え、そして該反応液を周囲温度で24時間撹拌した。該反応液を水(25mL)を用いてクエンチし、そしてEtOAc(2×25ml)を用いて抽出した。該有機層を合わせて、飽和NaHCO3水溶液(2×50mL)、ブライン(50mL)を用いて洗浄し、そして乾燥した(Na2SO4を使用)。該有機層をろ過し、そして真空下で蒸発して、白色発泡体の化合物39を得た。残留水を該粗生成物から、無水MeCNからの蒸発によって該粗生成物から除去した。次いで、該生成物を無水MeCN(50mL)中に溶解し、そしてEt3N(3.5mL、25.3mmol)を加え、続いて1,2,4−トリアゾール(1.75g、25mmol)を加えた。該反応混合物を氷浴上で冷却し、そしてPOCl3(0.48mL、5.0mmol)を滴下して、白色スラリーを得た。15分後に、該反応混合物を室温とした。得られた黄色スラリーをアルゴン下、周囲温度で撹拌した。4.5時間後に、該反応混合物を飽和NaHCO3水溶液(50mL)および氷のスラリー中にそそぎ、そしてEtOAc(3×25mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて、ブライン(100mL)を用いて洗浄し、そして乾燥した(Na2SO4を使用)。ろ過および真空下での蒸発により、桃色発泡体のトリアゾリド40を得て、このものを直ちに無水MeCN(50mL)中に溶解し、そして飽和NH4OH水溶液(50mL)を加えた。16時間撹拌後に、固体のNaClを加えて、相分離した。該水相をEtOAc(3×50mL)を用いて抽出し、そして該有機層を合わせて乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして蒸発して、オフホワイト色固体のヌクレオシド41を得た。該生成物を無水ピリジン(50mL)中に溶解し、そしてベンゾイルクロリド(0.87mL、7.5mmol)を加えた。該反応液をアルゴン下で3時間撹拌し、次いで真空下で濃縮した。該残渣をEtOAc(100mL)を用いて希釈し、そして飽和NaHCO3水溶液(100mL)を用いて抽出した。相分離し、そして該水相をEtOAc(2×100mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて、ブライン(200mL)を用いて洗浄し、そして乾燥した(Na2SO4を使用)。該有機相のろ過および蒸発により、透明油状物42を得て、このものをTHF(100mL)中に溶解した。LiOH(1.0M水溶液、25mL)を加え、そして該反応液を2時間撹拌した。該反応混合物をEtOAc(100mL)およびブライン(100mL)を有する分液ろうとに移し、そしてEtOAc(2×100mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせてブライン(200mL)を用いて洗浄し、そして乾燥した(Na2SO4を使用)。ろ過および真空下での蒸発により、黄色発泡体を得て、このものをDCVC(φ4vm、50〜100容量%のEtOAc/n−ヘプタン(該カラムは、1容量%のEt3N/ヘプタンを用いて調製する)、5%ずつ増加、100mLの画分)により、白色固体のヌクレオシド43(1.12g、65%)を得た。Rf=0.56(EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 689.3([MH]+、計算値 689.3);1H NMR (DMSO-d6) δ 8.16 (s, 2H, Bz), 7.86 (s, 1H, H6), 7.61-7.44 (m, 5H, Bz, DMT), 7.36-7.24 (m, 7H, Bz, DMT), 6.92 (dd, 4H, J = 9.0, 2.4, DMT), 5.64 (s, 1H, H1'), 5.41 (d, J = 5.3, 1H, H3'), 4.14 (d, J = 5.3, 1H, H2'), 5.64 (s, 1H, H1'), 3.75 (s, 6H, OCH3), 3.39 (d, J = 10.8, 1H, H5'), 3.28 (d, J = 10.8 Hz, 1H, H5'), 2.89 (d, J = 9.5, 1H, H1''), 2.59 (s, 3H, NCH3), 2.58 (d, J = 9.2, 1H, H1''), 1.73 (s, 3H, CH3); 13C NMR (DMSO-d6) δ 178.2 (PhC(O)), 160.3 (C4), 158.2 (Ph), 147.0 (C2), 144.8 (Ph), 137.4 (C6), 135.4, 135.2, 132.5, 129.9, 129.3, 128.4, 128.0, 127.7, 126.9, 113.3 (Ph), 108.6 (C5), 88.9 (C1'), 85.7 (C4'), 85.0 (Ph), 70.5 (C3'), 67.0 (C5'), 59.6, 58.6 (C2', C1''), 55.1 (OCH3), 40.1 (NCH3), 14.1 (CH3);元素分析(C40H40N4O7として計算)計算値:C 69.7;H 5.9;N 8.1。実測値:C 69.5;H 5.9;N 7.7。
化合物43(0.50g、0.73mmol)を無水ジクロロメタン(10mL)中に溶解し、そして4,5−ジシアノイミダゾールのMeCN(1.0M、0.51mL、0.51mmol)を周囲温度で撹拌しながら加えた。2−シアノエチル−N,N,N',N'−テトライソプロピルホスホロジアミダイト(0.23mL、0.74mmol)を該反応混合物に滴下した。2時間後に、該反応液をジクロロメタン(20mL)を用いて希釈し、そして分液ろうとに移し、そして飽和NaHCO3水溶液(2×30mL)およびブライン(30mL)を用いて抽出した。該水相を合わせてジクロロメタン(30mL)を用いて抽出した。該有機層を保存し、そして乾燥した(Na2SO4を使用)。ろ過後に、該有機層を真空下で蒸発させて、黄色発泡体を得た。DCVC(φ4cm、0〜100容量%のEtOAc、n−ヘプタン、0.5容量%のEt3N(該カラムは、1容量%のEt3N/ヘプタンを用いて調製した)、5%ずつ増加、50mL画分)によって精製することにより、白色固体のヌクレオシド44(0.58g、92%)を得た。Rf=0.67(20容量%ヘプタン、79.5容量%EtOAc、0.5容量%Et3N);ESI−MS m/z 実測値 889.2([MH]+、計算値 889.4);31P NMR (DMSO-d6) δ 148.4, 147.4。
無水ヌクレオシド29(30.00g、58.1mmol)を、メタノール(1000mL)およびアセトン(1000mL)の混合物中で70℃まで加熱して透明溶液を得て、そして該溶液を室温とした。該反応フラスコをアルゴンでフラッシュして、そしてPd/C(10重量%のPd−炭素、6.2g、5.8mmol)を加えた。該混合物を水素ガス(バルーン)の雰囲気下で激しく撹拌した。23時間後に、該スラリーをセライトのパッドを通してろ過した。該触媒をセライトから回収し、そしてDMF(1000mL)中で1時間還流した。該熱DMFスラリーをセライトのパッドを通してろ過し、該有機層を保存し、そして真空下で蒸発して、黄色粉末の2,2'−アンヒドロ−1−(3−ヒドロキシ−5−O−メタンスルホニル−4−C−メタンスルホニルオキシメチル−β−トレオ−ペントフラノシル)チミン(50)を得た。残留溶媒を高真空ポンプを用いて終夜除去した。該粗ヌクレオシド50(23g)をDMF(300mL)中、70℃まで加熱して、透明な黄色溶液を得て、このものを室温まで冷却した。ベンゾイルクロリド(81.7g、581mmol、67.4mL)を加え、続いて無水ピリジン(70mL)を加えた。18時間後に、該反応液をメタノール(200mL)を用いてクエンチし、そして過剰量のメタノールを真空下で除去した。ヌクレオシド51(2,2'−アンヒドロ−1−(3−O−ベンゾイル−5−O−メタンスルホニル−4−C−メタンスルホニルオキシメチル−β−D−トレオ−ペントフラノシル)チミンの暗褐色溶液に、H2SO4水溶液(0.25M、400mL)を加えた。該溶液を油浴上で80℃まで加熱した(約50℃で、沈降が起こり、該溶液は80℃で再び透明になる)。80℃で22時間後に、該溶液を室温まで冷却した。該反応混合物をEtOAc(1000mL)を有する分液ろうとに移した。該有機層を飽和NaHCO3水溶液(2×1000mL)を用いて抽出した。該水相を合わせてEtOAc(1000+500mL)を用いて抽出した。該有機相を保存し、そして飽和NaHCO3水溶液(1000mL)を用いて1回以上抽出し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発して、黄色液体を得た。残留溶媒を、高真空ポンプを用いて終夜除去して、黄色シロップを得た。該生成物を、ドライカラムバキューム(Dry Column Vacuum)クロマトグラフィー(φ10cm、50〜100容量%のEtOAc/n−ヘプタン、100mL画分、10%ずつ増加、続いて2〜24容量%のMeOH/EtOAc、100mL画分、2%ずつ増加)によって精製した。該生成物を含有する画分を合わせて、そして真空下で蒸発させて、白色発泡体のヌクレオシド52(25.1g、79%)を得た。Rf=0.54(5容量%のMeOH/EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 549.0([MH]+、計算値 549.1);1H NMR (DMSO-d6) δ 11.39 (br s, 1H, NH), 8.10-8.08 (m, 2H, Ph), 7.74-7.70 (m, 1H, Ph), 7.60-7.56 (m, 2H, Ph), 7.51 (d, J = 1.1, 1H, H6), 6.35 (d, J = 4.9, 1H, H1'), 6.32 (d, J = 5.3, 1H, 2'-OH), 5.61 (d, J = 4.0, 1H, H3'), 4.69 (d, J = 10.8, 1H), 4.59 (m, 1H, H2'), 4.55 (d, J = 10.8, 1H), 4.52 (d, J = 10.8, 1H), 4.46 (d, J = 10.6, 1H) (H5'およびH1''), 3.28 (s, 3H, Ms), 3.23 (s, 3H, Ms), 1.81 (s, 3H, CH3); 13C NMR (DMSO-d6) δ 164.5, 163.6 (C4, PhC(O)), 150.3 (C2), 137.7 (C6), 133.8, 129.6, 128.7, 128.6 (Ph), 108.1 (C5), 84.8 (C1'), 81.1 (C4'), 78.0 (C3'), 73.2 (C2'), 68.0, 67.1 (C5', C1''), 36.7, 36.6 (Ms), 11.9 (CH3);元素分析(C20H24N2O12S2・0.33H2Oとして計算)計算値:C 44.34;H 4.65;N 4.85。実測値:C 44.32;H 4.58;N 4.77。
1−(3−O−ベンゾイル−5−O−メタンスルホニル−4−C−メタンスルホニル−オキシメチル−β−D−トレオ−ペントフラノシル)チミン(52)(10.00g、18.23mmol)を、無水ジクロロメタン(500mL)中に溶解し、そして0℃まで冷却した。ピリジン(15mL)およびDMAP(8.91g、72.9mmol)を加え、続いてトリフルオロメタンスルホン酸無水物(10.30g、36.5mmol、6.0mL)を滴下した。1時間後に、該反応液を飽和NaHCO3水溶液(500mL)を用いてクエンチし、そしてこのものを分液ろうとに移した。該有機層を1.0Mの塩酸(500mL)、飽和NaHCO3水溶液(500mL)およびブライン(500mL)を用いて抽出した。該有機層をトルエン(100mL)と一緒に真空下で蒸発させて、黄色粉末の1−(3−O−ベンゾイル−5−O−メタンスルホニル−4−C−メタンスルホニルオキシメチル−2−O−トリフルオロメタンスルホニル−β−D−トレオ−ペントフラノシル)チミン(53)を得た。該粗ヌクレオシド53を無水DMF(250mL)中に溶解し、そしてNa2S(1.57g、20.1mmol)を加えて、該暗緑色スラリーを得た。3時間後に、該反応液を半飽和NaHCO3水溶液(500mL)を用いてクエンチし、そしてCH2Cl2(500+2×250mL)を用いて抽出した。該有機相を合わせて、ブライン(500mL)を用いて抽出し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で濃縮して、黄色液体を得た。残留溶媒を高真空ポンプを用いて終夜除去して、黄色ガムを得て、このものをドライカラムバキュームクロマトグラフィー(φ6cm、50〜100容量%のEtOAc/n−ヘプタン、50mL画分、10%ずつ増加、続いて2〜20容量%のMeOH/EtOAc、50mL画分、2%ずつ増加)によって精製して、黄色発泡体のヌクレオシド54(6.15g、72%)を得た。Rf=0.27(20容量%のn−ヘプタン/EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 469.0([MH]+、計算値 469.1);1H NMR (CDCl3) δ 8.70 (br s, 1H, NH), 8.01-7.99 (m, 2H, Ph), 7.67 (d, J = 1.1, 1H, H6), 7.65-7.61 (m, 1H, Ph), 7.50-7.46 (m, 2H, Ph), 5.98 (s, 1H, H1'), 5.34 (d, J = 2.4, 1H, H3'), 4.66 (d, J = 11.7, 1H, H5'a), 4.53 (d, J = 11.5, 1H, H5'b), 4.12 (m (残留EtOAcと重なり), 1H, H2'), 3.15-3.13 (m, 4H, H1''aおよびMs), 3.06 (d, J = 10.6, 1H, H1''b), 1.98 (d, J = 1.1, 3H, CH3); 13C NMR (CDCl3) δ 165.2, 163.5 (C4, PhC(O)), 149.9 (C2), 134.1, 133.9, 129.8, 128.7, 128.3 (C6, Ph), 110.7 (C5), 91.1 (C1'), 86.8 (C4'), 72.6 (C3'), 65.8 (C5'), 50.5 (C2'), 37.9 (Ms), 35.1 (C1''), 12.5 (CH3);元素分析(C19H20N2O8S2・0.33EtOAcとして計算)計算値:C 49.21;H 4.72;N 5.47。実測値:C 49.25;H 4.64;N 5.48。
ヌクレオシド54(1.92g、4.1mmol)を、無水DMF(110mL)中に溶解した。安息香酸ナトリウム(1.2g、8.2mmol)を加え、そして該混合物を110℃まで24時間加熱した。該反応混合物を半飽和ブライン(200mL)を有する分液ろうとに移し、そしてEtOAc(3×100mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発して褐色液体を得た。該生成物を高真空ポンプの上に置いて、残留溶媒を除去した。該得られた褐色ガムをドライカラムバキュームクロマトグラフィー(φ4cm、0〜100容量%のEtOAc/n−ヘプタン、50mL画分、10%ずつ増加、続いて2〜10容量%のMeOH/EtOAc、50mL画分、2%ずつ増加)によって精製して、わずかに黄色発泡体のヌクレオシド55(1.64g、81%)を得た。Rf=0.57(20容量%のn−ヘプタン/EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 495.1([MH]+、計算値 495.1);1H NMR (CDCl3) δ 9.02 (br s, 1H, NH), 8.07-7.99 (m, 4H, Ph), 7.62-7.58 (m, 2H, Ph), 7.47-7.42 (m, 5H, PhおよびH6), 5.95 (s, 1H, H1'), 5.46 (d, J = 2.2, 1H, H3'), 4.93 (d, J = 12.8, 1H, H5'a), 4.60 (d, J = 12.8, 1H, H5'b), 4.17 (d, J = 2.2, 1H, H2'), 3.27 (d, J = 10.6, 1H, H1''a), 3.16 (d, J = 10.6, 1H, H1''b), 1.55 (d, J = 1.1, 3H, CH3); 13C NMR (CDCl3) δ 165.8, 165.1, 163.7 (C4, 2×PhC(O)), 150.0 (C2), 133.9, 133.7, 133.6, 129.8, 129.6, 129.0, 128.8, 128.6, 128.5 (C6, 2×Ph), 110.3 (C5), 91.3 (C1'), 87.5 (C4'), 72.9 (C3'), 61.3 (C5'), 50.6 (C2'), 35.6 (C1''), 12.3 (CH3);元素分析(C25H22N2O7Sとして計算)計算値:C 60.72;H 4.48;N 5.66。実測値:C 60.34;H 4.49;N 5.35。
ヌクレオシド55(1.50g、3.0mmol)をアンモニアを用いて飽和としたメタノール(50mL)中に溶解した。該反応フラスコを封し、そして周囲温度で20時間撹拌した。該反応混合物を真空下で濃縮して黄色ガムを得て、このものをドライカラムバキュームクロマトグラフィー(φ4cm、0〜16容量%のMeOH/EtOAc、1%ずつ増加、50mL画分)によって精製して、透明結晶のヌクレオシド56(0.65g、76%)を得た。Rf=0.31(10容量%のMeOH/EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 287.1([MH]+、計算値 287.1);1H NMR (DMSO-d6) δ 11.32 (br s, 1H, NH), 7.96 (d, J = 1.1, 1H, H6), 5.95 (s, 1H, H6), 5.70 (d, J = 4.2, 1H, 3'-OH), 5.62 (s, 1H, H1'), 4.49 (t, J = 5.3, 1H, 5'-OH), 4.20 (dd, J = 4.1および2.1, 1H, H3'), 3.77-3.67 (m, 2H, H5'), 3.42 (d, J = 2.0, 1H, H2'), 2.83 (d, J = 10.1, 1H, H1''a), 2.64 (d, J = 10.1, 1H, H1''b), 1.75 (d, J = 1.1, 3H, CH3); 13C NMR (DMSO-d6) δ 163.8 (C4), 150.0 (C2), 135.3 (C6), 107.5 (C5), 90.2, 89.6 (C1'およびC4'), 69.4 (C3'), 58.0 (C5'), 52.1 (C2'), 34.6 (C1''), 12.4 (CH3);元素分析(C11H14N2O5Sとして計算)計算値:C 46.15;H 4.93;N 9.78。実測値:C 46.35;H 4.91;N 9.54。
ヌクレオシド56(0.60g、2.1mmol)を無水ピリジン(10mL)中に溶解した。4,4'−ジメトキシトリチルクロリド(0.88g、2.6mmol)を加え、そして該反応液を周囲温度で3時間撹拌した。該反応混合物を水(100mL)を有する分液ろうとに移し、そしてEtOAc(100+2×50mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて飽和NaHCO3水溶液(100mL)、ブライン(100mL)を用いて洗浄し、そして真空下で蒸発させて乾固して粘性黄色液体を得た。該生成物をトルエン(50mL)中に再溶解し、そして真空下で濃縮して、黄色発泡体を得た。該発泡体を高真空ポンプ上に置き、そしてこのものをドライカラムバキュームクロマトグラフィー(φ4cm、10〜100容量%のEtOAc/n−ヘプタン、10%ずつ増加、50mL画分))によって精製して、白色発泡体のヌクレオシド57(1.08g、88%)を得た。Rf=0.24(20容量%のn−ヘプタン/EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 587.1([M−H]+、計算値 587.19);1H NMR (CDCl3) δ 8.96 (br s, 1H, NH), 7.74 (d, J = 1.1, 1H, H6), 7.46-7.44 (m, 2H, Ph), 7.35-7.22 (m, 9H, Ph), 7.19-7.7.15 (m, 2H, Ph), 6.86-6.80 (m, 2H, Ph), 5.82 (s, 1H, H1'), 4.55 (dd, J = 9.3および2.1, 1H, H3'), 3.79 (s, 6H, OCH3), 3.71 (d, J = 2.0, 1H, H2'), 3.50 (s, 2H, H5'), 2.81 (d, J = 10.8, 1H, H1''a), 2.77 (d, J = 10.8, 1H, H1''b), 2.69 (d, J = 9.2, 1H, 3'-OH), 1.42 (s, 3H, CH3); 13C NMR (CDCl3) δ 158.7(C4), 150.1 (C2), 144.1, 135.2, 135.1, 130.1, 129.1, 128.1, 128.0, 127.1, 127.0 (C6, Ph), 113.3 (Ph), 110.0 (C5), 90.2 (C(Ph)3), 89.6 (C1'), 87.0 (C4'), 71.7 (C3'), 60.9 (C5'), 55.2 (C2'), 34.7 (C1''), 12.2 (CH3);元素分析(C32H32N2O7S・0.5H2Oとして計算)計算値:C 64.31;H 5.57;N 4.69。実測値:C 64.22;H 5.67;N 4.47。
ヌクレオシド57(0.78g、1.33mmol)を無水ジクロロメタン(5mL)中に溶解し、そして1.0M 4,5−ジシアノイミダゾールのアセトニトリル溶液(0.93mL、0.93mmol)を加え、続いて2−シアノエチル−N,N,N',N'−テトライソプロピルホスホロジアミダイト(0.44mL、1.33mmol)を滴下した。2時間後に、該反応液をジクロロメタン(40mL)を有する分液ろうとに移し、そして飽和なNaHCO3水溶液(2×25mL)およびブライン(25mL)を用いて抽出した。該有機層を乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発して、白色発泡体のヌクレオシド58(1.04g、99%)を得た。Rf=0.29および0.37−2個のジアステレオマー(20容量%のn−ヘプタン/EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 789.3([MH]+、計算値 789.30);31P NMR (DMSO-d6) δ 150.39, 150.26。
ヌクレオシド31(0.10g、0.17mmol)を無水DMF(1mL)中に溶解し、そしてチオ酢酸カリウム(25mg、0.22mmol)を加えた。該反応液を周囲温度で5時間撹拌し、そしてこのものをブライン(10mL)を有する分液ろうとに移した。該水相をジクロロメタン(3×10mL)を用いて抽出し、そして該有機層を合わせて乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発して黄色液体を得た。該粗生成物59をTHF(2mL)中に溶解し、そしてLiOH・H2O(水(1mL)中に35mg、0.84mmol)を加えた。20分後に該反応は完結し、そして氷酢酸(0.5mL)を加えることによってクエンチした。該THFを真空下で除去し、該残渣をジクロロメタン(10mL)中に溶解し、そして飽和NaHCO3水溶液(2×10mL)を用いて抽出した。該水相をジクロロメタン(10mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発して黄色液体を得て、このものをDCVC(φ1cm、0〜80容量%のEtOAc/n−ヘプタン、2.5%ずつ増加、10mL画分)によって精製した。ヌクレオシド60を含有する画分を合わせて、そして真空下で蒸発して、白色粉末(36mg、31から47%)を得た。Rf=0.38(80容量%のEtOAc/n−ヘプタン);ESI−MS m/z 実測値 455.0([MH]+、計算値 455.1);1H NMR (DMSO-d6) δ 11.38 (br s, 1H, NH), 7.50 (d, J = 1.1, 1H, H6), 7.36-7.27 (m, 5H, Ph), 5.77 (s, 1H, H1'), 4.68 (d, J = 11.7, 1H), 4.61 (d, J = 11.7, 1H), 4.60 (d, J = 11.7, 1H), 4.56 (d, J = 11.5, 1H) (H5', CH 2Ph), 4.20 (d, J = 1.8, 1H, H3'), 4.00 (d, J = 2.0, 1H, H2'), 3.29 (s, 3H, Ms), 3.02 (d, J = 10.6, 1H, H1''a), 2.90 (d, J = 10.4, 1H, H1''b), 1.78 (s, 3H, CH3); 13C NMR (DMSO-d6) δ 163.9 (C4), 150.1 (C2), 137.5, 134.1, 128.3, 127.7 (C6, Ph), 108.3 (C5), 90.5 (C1'), 86.6 (C4'), 76.9 (C3'), 70.9, 66.8 (C5', CH2Ph), 49.5 (C2'), 36.8 (Ms), 35.1 (C1''), 12.3 (CH3);元素分析(C19H22N2O7S2・0.33EtOAcとして計算)計算値:C 50.5;H 5.1;N 5.8。実測値:C 50.8;H 5.1;N 5.8。
化合物61 1(9.58g、15mmol)を乾燥アセトニトリルから濃縮して、残留水を除去した。該残渣を乾燥ジクロロメタン(100mL)中に溶解し、そしてAr下で撹拌しながら−30℃まで冷却した。該溶液に乾燥ピリジン(3.6mL、44mmol)を加え、続いてTf2O(3.7mL、22mmol)を滴下した。該反応混合物を0℃とした。TLC(溶出液:EtOAc)は、生成物(Rf=0.66)への十分な変換を示す。該反応液を飽和NaHCO3溶液(100mL)を加えることによってクエンチし、そしてジクロロメタン(100mL)を用いて希釈した。相分離し、そして該有機層を飽和NaHCO3溶液(100mL)、ブライン(100mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして該溶媒を真空下で除去して、橙色発泡体を得て、このものをドライカラムクロマトグラフィー(溶出液:ヘプタン→EtOAc)によって精製して、トリフレート62(8.53g、74%収率)を得た。Rf=0.60(溶出液:EtOAc)。ESI−MS m/z 実測値 780.0([MH]+、計算値 780.0);1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 9.05 (1H, s, N-H), 8.80 (1H, s, 塩基), 8.21 (1H, s, 塩基), 8.00 (2H, d, J = 7.3 Hz, Bz), 7.61 (1H, t, J = 7.3 Hz, Bz), 7.52 (2H, t, J = 7.3 Hz, Bz), 7.41-7.30 (5H, m, Bn), 6.56 (1H, t, J = 5.5 Hz, H-2'), 6.34 (1H, d, J = 5.5 Hz, H-1'), 4.81 (2H, d, J = 10.4 Hz, CH2), 4.73 (1H, d, J = 5.9 Hz, H-3'), 4.65 (1H, d, J = 11.3 Hz, CH2), 4.44 (1H, d, J = 11.3 Hz, CH2), 4.34 (1H, d, J = 11.1 Hz, CH2), 4.14 (1H, d, J = 11.4 Hz, CH2), 3.05 (3H, s, OMs), 2.91 (3H, s, OMs); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz): δ 164.34, 152.94, 151.26, 149.88, 141.55, 135.07, 133.24, 132.84, 128.98, 128.83, 128.80, 128.49, 127.70, 86.49, 85.03, 83.62, 80.33, 74.49, 67.51, 67.22, 37.76 (OMs), 37.41 (OMs);1化合物61を、JACS, 124, 2164-2176頁 (2002)中に記載する方法に従って製造した。トリフレート62もまたこの刊行物中に記載されているが、単離生成物としてではない。
純粋な62(100mg、0.128mmol)をTHF(7mL)中に溶解し、0℃まで冷却し、そして1M LiOH(1.3mL、10当量)を加えた。該反応混合物をゆっくりとr.t.とした。LCMSにより62の63への十分な変換を確認した後に、該反応液を、NaCl(1.3mL)を用いて飽和とした1M HClを用いて中和し、DCM(20mL)およびブライン(10mL)を用いて希釈した。相分離し、そして水相をDCM(2×20mL)を用いて抽出した。合わせた有機層を乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして溶媒を真空下で除去して、透明油状物(63)2(定量)を得た。Rf=0.49(溶出液:EtOAc)。ESI−MS m/z 実測値 552.2([MH]+、計算値 552.1);1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): 8.64 (1H, s, N-H), 8.44 (1H, s, Adenin), 7.95 (2H, d, J = 7.1 Hz, Bz), 7.50 (1H, t, J = 7.3 Hz, Bz), 7.40 (1H, t, J = 7.3 Hz, Bz), 7.07-6.79 (5H, m, OBn), 6.11 (1H, s, H-1'), 4.66 (1H, d, J = 11.5 Hz, CH2), 4.61 (1H, d, J = 11.5 Hz, CH2), 4.48 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2'/H-3'), 4.30 (1H, d, J = 11.9 Hz, CH2), 4.12 (1H, d, J = 11.9 Hz, CH2), 4.07 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-3'/H-2'), 4.02 (1H, d, J = 8.6 Hz, CH2), 3.94 (1H, d, J = 8.6 Hz, CH2), 3.02 (3H, s, OMs); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz): δ 165.31, 152.03, 150.45, 148.54, 141.99, 135.38, 132.90, 132.84, 128.63, 128.37, 128.26, 127.98, 127.88, 121.34, 87.90, 86.16, 79.84, 76.29, 73.45, 72.51, 67.76, 64.47, 37.48 (OMs)。2化合物63もまたJACS 124, 2164-2176頁 (2002)中に記載されているが、単離生成物としてではない。
全く純粋でない62(6.23g、0.008mmol)を乾燥DMF(70mL)中に溶解し、NaN3(5.2g、10当量)を加え、そしてこのものをr.t.で3日間撹拌した。水(100mL)を加えることによってクエンチし、そしてDCM(200mL)を用いて希釈した。相分離し、そして該有機層をブライン(2×125mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、そして該溶媒を真空下で除去した。該残渣をドライカラム液体クロマトグラフィー(溶出液:ヘプタン→EtOAc)によって精製して。純粋な64(5.38g、定量)を得た。Rf=0.60(溶出液:EtOAc)。ESI−MS m/z 実測値 673.0([MH]+、計算値 673.1);1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 9.14 (1H, s), 8.70 (1H, s), 8.93 (1H, s), 8.00 (3H, d, J = 7.3 Hz), 7.59-7.50 (3H, 2×t, J = 7.3 Hz), 7.41-7.37 (5H, m), 6.51 (1H, d, J = 4 Hz, H-1), 4.92 (1H, d, J = 11.7 Hz), 4.77 (1H, d, J = 11.3 Hz), 4.75 (1H, d, J = 4.8 Hz, H-3), 4.70 (1H, d, J = 11.3 Hz), 4.50 (1H, dd, J = 4.2 Hz, J = 4.6 Hz, H-2), 4.41 (2H, d, J = 11-12 Hz), 4.27 (1H, d, J = 11 Hz), 3.05 (3H, s, OMs), 3.02 (3H, s, OMs)。13C-NMR (CDCl3, 100 MHz): δ 164.4, 162.3, 152.5, 151.1, 149.3, 142.1, 135.5, 133.3, 132.6, 128.9, 128.8, 128.8, 128.7, 128.4, 127.6, 122.3 (ABzおよびOBn), 82.35, 81.79, 79.55, 74.58 (OBn), 68.51, 68.06, 62.59, 37.78 (OMs), 37.57 (OMs)。
64(2.28g、3.4mmol)のTHF(100mL)溶液に、rtでNaOH水溶液(2.0M、34mL)およびPMe3のTHF(1.0M、7mL)溶液を撹拌しながら加えた。r.t.で終夜の後に、該THFを減圧下で一部除去した。ブライン(100mL)およびEtOAc(200mL)を加え、そして相分離した。該有機層をブライン(100mL)を用いて洗浄した。該水相を合わせてジクロロメタン(200mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で濃縮して黄色発泡体(1.73g)を得て、このものをドライカラム液体カラムクロマトグラフィーによって精製して、黄色発泡体の純粋なヌクレオシド65(848mg)を得た。Rf=0.1(EtOAc)。*精製前の同じ反応液からの残渣と合わせる;Rf=0.21(溶出液:EtOAc)。ESI−MS m/z 実測値 551.1([MH]+、計算値 551.1);1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 11.18 (1H, br s, NH), 8.77 (1H, s, ABz), 8.73 (1H, s, ABz), 8.06 (2 H, d, J = 7.3 Hz), 7.64 (1H, t, J = 7.3 Hz, Bz), 7.55 (2H, t, J = 7.3 Hz, Bz), 7.45 (2H, d, J = 7.2 Hz, Bn), 7.38 (2H, t, J = 7.2 Hz, Bn), 7.31 (1H, t, J = 7.2 Hz, Bn), 6.52 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-1'), 4.74 (1H, d, J = 11.9 Hz, H-5'a/H-1''a), 4.65 (1H, d, J = 11.9 Hz, H-5'b/H-1''b), 4.59 (1H, d, J = 11.9 Hz, H-1''a/H-5'a), 4.52 (1H, d, J = 11.8 Hz, H-1''b/H-5'b), 4.44 (1H, s, H-3'), 4.04 (1H, d, J = 7.2 Hz, Bn), 4.01 (1H, d, J = 7.2 Hz, Bn), 3.91 (1H, br s, H-2'), 3.22 (3H, s, OMs); 13C-NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ 170.34, 165.59, 152.12, 151.47, 150.09, 143.20, 137.89, 133.44, 132.43, 128.48, 128.31, 127.70, 125.19 (BzおよびBn), 87.30, 84.45, 80.47, 71.13 (Bn), 66.99, 59.92, 59.80, 51.27, 36.93 (OMs)。
62(50mg)の乾燥DCM(1.5mL)溶液に、r.t.でMeOH(0.5mL)を滴下した。s.m.の十分な変換がLCMSによって確認されるまで、反応液をr.t.で撹拌した。反応液をDCM(20mL)を用いて希釈し、0℃まで冷却し、Et3N(1.1mL)を用いて中和し、飽和NaHCO3溶液(20mL)、ブライン(20mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして溶媒を真空下で除去して透明油状物(66)(49mg、定量)を得た。Rf=0.24(溶出液:EtOAc)。ESI−MS m/z 実測値 540.2([MH]+、計算値 540.1);1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 9.3 (1H, br s, N-H), 8.67 (1H, s, 塩基), 8.33 (1H, s, 塩基), 7.94 (2H, d, J = 7.5 Hz), 7.51 (1H, t, J = 7.4 Hz), 7.42 (2H, t, J = 7.5 Hz), 6.61 (1H, s, H-1'), 4.57 (1H, d, J = 11.3 Hz), 4.47 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.44 (1H, d, J = 11.3 Hz), 4.36 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.25 (1H, d, J = 2.7 Hz, H-2'/H-3'), 4.13 (1H, d, J = 2.7 Hz, H-3'/H-2'), 3.11 (3H, s, OMs), 3.01 (3H, s, OMs); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz): δ 164.7, 152.6, 151.5, 149.4, 141.3, 133.2, 132.6, 128.6, 128.6, 128.3, 128.3, 127.7, 122.2 (ABz), 81.45, 81.23, 68.64, 66.58, 57.59, 57.27, 37.66 (OMs), 37.50 (OMs);
66(50mg、0.093mmol)の無水DMF(2mL)溶液に、NaN3(60mg、10当量)を加えた。該混合物を50℃まで終夜加熱した。LCMSにより、66の67への十分な変換を確認する。反応混合物を水(15mL)およびDCM(15mL)を用いて希釈した。相分離し、そして該有機相をブライン(15mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして該溶媒を真空下で除去して67(43mg、80%収率)を得た。Rf=0.51(溶出液:EtOAc)。ESI−MS m/z 実測値 583.0([MH]+、計算値 583.1);1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 11.27 (1H, s, N-H), 8.79 (1H, s, 塩基), 8.05 (2H, d, J = 7.3 Hz, Bz), 7.95 (1H, s, base), 7.65 (1H, t, J = 7.5 Hz), 7.55 (2H, t, J = 7.5 Hz), 6.70 (1H, d, J = 5.5 Hz, H-1'), 6.18 (1H, d, J = 8.6 Hz, 3'-OH), 5.27 (1H, t, J = 8.6 Hz, H-3'), 4.66 (1H, d, J = 10.7 Hz, CH2), 4.57 (1H, dd, J = 5.6 Hz, J = 8.5 Hz, H-2'), 4.47 (1H, d, J = 10.8 Hz, CH2), 4.41 (2H, d, J = 10.8 Hz, CH2), 3.29 (3H, s, OMs), 3.22 (3H, s, OMs); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz): δ 165.67, 162.33, 152.33, 152.20, 150.75, 142.63, 133.28, 132.56, 128.57, 128.52, 125.52, 82.34, 81.79, 74.77, 69.00, 68.46, 66.11, 36.87 (OMs), 35.85 (OMs)
化合物66(1.0g、1.9mmol)を乾燥DMF中に溶解し、そしてNa2S(290mg、2当量)を加えた。反応液は緑色に変化した。r.t.で終夜撹拌した。LCMSにより、化合物1の十分な変換を確認する。反応混合物をブライン(100mL)およびEtOAc(100mL)の間で分配した。相分離し、そして該水相をEtOAc(2×100mL)を用いて抽出した。有機相を合わせてブライン(200mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして該溶媒を真空下で除去した。
残渣をDCLCによって精製して、化合物2(268mg、30%収率)を得た。LCMS:実測値 478.0、計算値 478.0(M+H)。1H-NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 9.5-7.3 (8H, ABz), 6.46 (1H, s, H-1), 4.64 (2H, 2×d, J = 11.4 Hz, H-1''aおよびb), 4.56 (1H, d, J = 1 Hz, H-3'), 3.75 (1H, d, J = 1 Hz, H-2'), 3.04, 5.97 (2H, 2×d, J = 10.8 Hz, H-5'aおよびb), 3.02 (3H, s, OMs)。
化合物62(3.30g、4.2mmol)を乾燥DMF(33mL)中に溶解し、そしてNa2S(1.65g、5当量)を加えた。30分で、反応液の色は緑色から橙色に変化する。LCMSにより、化合物2の十分な変換を確認する。反応混合物を飽和NaHCO3溶液(150mL)およびDCM(150mL)の間で分配した。相分離し、そして該水相をDCM(2×75mL)を用いて抽出した。合わせた有機層を飽和NaHCO3溶液(150mL)、ブライン(150mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして該溶媒を真空下で除去して油状残渣(〜3g)を得て、このものを更に精製することなく次の工程に使用した。LCMS:実測値 568.0、計算値 568.1(M+H)。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.5 (1H, br s, N-H), 8.65 (1H, s, ABz), 8.36 (1H, s, ABz), 7.99 (2H, 2×d, J = 7.3 Hz, ABz), 7.54 (1H, t, J = 7.3 Hz, ABz), 7.45 (2H, t, J = 7.3 Hz, ABz), 7.30-7.36 (5H, m, OBn), 6.61 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-1'), 4.72 (1H, d, J = 11.6 Hz, H-1''a), 4.59 (1H, d, J = 11.3 Hz, H-1''b), 4.59 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-3'), 4.91, (2H, s, OBn), 4.05 (1H, t, J = 2.0 Hz, H-2'), 3.17 (1H, d, J = 10.5 Hz, H-5'a), 3.05 (1H, d, J = 11.0 Hz, H-5'b), 3.02 (3H, s, OMs)。13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ 152.1, 150.8, 149.2, 141.3, 136.1, 133.4, 132.5, 128.6, 128.6, 128.5, 128.2, 127.8, 127.7, 123.0, (ABz, OBn), 87.34 (C-4'), 87.25 (C-1'), 80.35 (C-3'), 72.05 (C-1''), 66.48 (OBn), 51.80 (C-2'), 37.67 (OMs), 36.00 (C-5')。
化合物69(2.38g、4.2mmol)を乾燥DMSO(25mL)中に溶解し、NaOBz(1.24g、2当量)を加え、そして100℃まで終夜加熱した。LCMSにより、化合物4への十分な変換を確認する。反応混合物を水(150mL)およびDCM(150mL)の間で分配した。相分離し、そして該水相をDCM(2×100mL)を用いて抽出した。合わせた有機層をブライン(2×150mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そしてシリカ上で濃縮した。DCLCによる精製により、化合物3(945mg、2工程で38%)を得る。LCMS:実測値 594.2、計算値 594.1(M+H)。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.63-7.18 (17 H, ABz, OBz, OBn), 6.56 (1H, d, J = 2.2 Hz, H-1'), 4.72 (1H, d, J = 11.5 Hz, H-1''a), 4.69 (1H, d, J = 11.0 Hz, H-1''b), 4.57 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-3'), 4.53 (1H, d, J = 11.6 Hz, OBn), 4.49 (1H, d, J = 12 Hz, OBn), 4.01 (1H, br s, H-2'), 3.24 (1H, d, J = 10.4 Hz, H-5'a), 2.99 (1H, d, J = 10.4 Hz, H-5'b)。13C-NMR (100 MHz, CDCl3): δ 165.5, 152.1, 150.7, 149.2, 141.4, 136.2, 133.5, 133.2, 132.5, 129.5, 129.1, 128.6, 128.4, 128.3, 128.1, 127.7, 127.6 (ABz, OBz, OBn), 87.73 (C-4'), 87.32 (C-1'), 80.47 (C-3'), 71.88 (C-1''), 61.73 (OBn), 51.80 (C-2'), 36.43 (C-5')。
化合物70(966mg、1.627mmol)を乾燥DCM(27mL)中に溶解し、そしてMsOH(9mL)を加えた。r.t.で1時間撹拌した。LCMSにより、十分な脱ベンジル化を確認する。*反応混合物を、DCM(30mL)を用いて希釈し、ブライン(50mL)および飽和NaHCO3溶液(50mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして該溶媒を真空下で除去して化合物6(739mg、90%収率)を得た。LCMS:実測値 504.1、計算値 504.1(M+H)。*脱プリン化もまた検出され、従って冷却は有利であり得る。
化合物71(739mg、1.468mmol)をTHF(60mL)中に溶解し、そして1M LiOH(7.5mL)を加えた。該反応液をr.t.で撹拌した。更なる1M LiOH(1mL)を90分後に加えた。更に60分後に、反応の完結をTLC(溶出液:EtOAc/MeOH(9:1))によって確認した。該反応液をNaCl(8.5mL)を用いて飽和とした1M HClを用いてクエンチし、そして該混合物をブライン(100mL)およびEtOAc(100mL)の間で分配した。相分離し、そして該水相をEtOAc(2×100mL)を用いて抽出した。相分離し、そして該水相をEtOAc(2×100mL)を用いて抽出した。合わせた有機層をブライン(100mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして該溶媒を真空下で除去して黄色固体(化合物72)を得て、このものを乾燥ピリジンと一緒に共蒸発した。該残渣を乾燥ピリジン(25mL)中に溶解し、DMAP(180mg、1当量)を加え、続いてDMTCl(597mg、1.2当量)を加え、そしてr.t.で撹拌した。更なるDMTCl(200mg)を加えた。24時間後にTLC(溶出液:EtOAc/MeOH(9:1))は、化合物73への十分な変換を示す。反応液をDCM(100mL)を用いて希釈し、そして水(100mL)を用いて洗浄した。水相をDCM(50mL)を用いて抽出し、そして有機相を合わせて飽和NaHCO3溶液(100mL)、ブライン(100mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして該溶媒を真空下で除去して残渣を得て、このものをDCLCによって精製して、化合物6(518mg、2工程で50%)を得た。LCMS:実測値 702.2、計算値 702.2(M+H)。
化合物73(518mg、0.738mmol)をDCM(10mL)中に溶解し、1M DCI(520μL、0.7当量、アセトニトリル中に溶解する)を加え、続いてビスアミダイト試薬(244μL、1当量)を加え、そしてN2雰囲気下、r.t.で撹拌した。更なるビスアミダイト試薬を加え(2×40μL)、そして該フラスコを週末にわたって冷凍庫(frigde)に移した。LCMSにより、アミダイトへの十分な変換を確認する。該反応混合物をDCM(100mL)を用いて希釈し、飽和NaHCO3溶液(2×100mL)およびブライン(100mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして該溶媒を真空下で除去して化合物74(642mg、97%収率)を得た。LCMS:実測値 902.2、計算値 903.3(M+H)。
1,2−ジ−O−アセチル−5−O−メタンスルホニル−4−メタンスルホニルオキシメチル−3−O−ベンジル−L−トレオ−ペントフラノース(20.6g、40.0mol)を無水1,2−ジクロロメタン(250mL)中に溶解し、そして2−アミノ−6−クロロプリン(7.5g、44.4mmol)を加え、続いてN,O−ビス(トリメチルシリル)アセトアミド(19.6mL、80.0mmol)を加えた。該反応混合物を、そのものが透明になるまで(1時間)還流し、そして室温まで冷却した。トリメチルシリルトリフレート(14.5mL、80.0mmol)を15分間かけて加え、そして該反応混合物を3時間還流した。該反応混合物を室緒まで冷却し、そして飽和NaHCO3水溶液(500mL)中にそそいだ。CHCl3(300mL)を加え、そして30分間激しく撹拌後に、該混合物を分液ろうとに移した。相分離し、そして該水相をCHCl3(3×250mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて飽和NaHCO3:ブライン(1:1、500mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発して赤色発泡体を得た。該生成物をドライカラムバキュームクロマトグラフィー(φ10cm、50〜100容量%のEtOAc/n−ヘプタン、10%ずつ増加、2×100mL画分、続いて1〜10容量%のMeOH/EtOAc、1%ずつ増加、100mL画分)によって精製した。ヌクレオシド75を含有する該画分を貯蔵し、そして真空下で蒸発して白色発泡体(15.6g、65%)を得た。更に、N7異性体(2.0g)を単離した。化合物75:Rf=0.59(10容量%のMeOH/EtOAc)、ESI−MS m/z 実測値 620.1;622.0([MH]+、計算値 620.1)。1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 8.03 (s, 1H, H8), 7.38-7.29 (m, 5H, Ar-H), 6.14 (d, 1H, J = 3.3 Hz, H1'), 5.90 (dd (t様), 1H, J = 3.3 Hzおよび3.0 Hz, H2'), 5.29 (s br, 2H, NH2), 4.78 (d, 1 H, J = 10.6 Hz, CH2), 4.70 (d, 1 H, J = 11.3 Hz, CH2), 4.67 (d, 1 H, J = 11.8 Hz, CH2), 4.44 (d, 1 H, J = 11.3 Hz, CH2), 4.37 (d, 1 H, J = 10.6 Hz, CH2), 4.37 (d, 1H, J = 3.0 Hz, H3'), 3.01 (s, 3H, Ms), 2.96 (s, 3 H, Ms), 2.14 (s, 3H, Ac)。13C NMR (CDCl3, 100 MHz): δ 169.4 (CH3C(O)), 159.1, 153.2, 151.7 (C2, C4, C6), 140.4 (C8), 136.5, 128.8, 128.5, 128.4 (Ph), 125.3 (C5), 87.0 (C1'), 85.4 (C4'), 81.2 (C3'), 78.8 (C2'), 73.4 (CH2), 67.5, 65.8 (2×CH2), 37.7, 37.6 (2×Ms), 20.6 (CH3C(O))。元素分析(C22H26ClN5O10S2として計算)計算値:C 42.6;H 4.2;N 11.3。実測値:C 42.5;H 4.2;N 11.0。
化合物75(5.0g、8.1mmol)をメタノール(100mL)中に溶解し、0℃まで冷却し、そして飽和メタノール性アンモニア(100mL)を加えた。該混合物を0℃で1時間撹拌し、次いで該反応液を氷酢酸(約30mL)を用いて中和することによってクエンチした。飽和NaHCO3水溶液(100mL)およびCHCl3(100mL)を加え、そして激しい撹拌の5分後に、該混合物を分液ろうとに移した。相分離し、そして該水相をCHCl3(3×200mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして該溶媒を真空下で除去して白色固体の76(4.60g、99%)を得た。Rf=0.67(EtOAc)。ESI−MS m/z 実測値 578.1;580.0([MH]+、計算値 578.1)。1H NMR (CD3CN, 400 MHz): δ 8.03 (s, 1H, H8), 7.41-7.33 (m, 5H, Ar-H), 5.86 (d, 1H, J = 6.2 Hz, H1'), 5.71 (s br, 2H, NH2), 5.90 (“q”, 1H, J = 4.6 Hz, H2'), 4.82 (d, 1 H, J = 11.5 Hz, CH2), 4.72 (d, 1 H, J = 11.5 Hz, CH2), 4.68 (d, 1 H, J = 11.0 Hz, CH2), 4.44-4.32 (m, 5H, CH2(3), H3', OH), 3.10 (s, 3H, Ms), 2.98 (s, 3 H, Ms)。13C NMR (CD3CN, 100 MHz): δ 160.6, 154.7, 151.5, 142.3 (C2, C4, C6, C8), 138.4, 129.3, 129.0, 128.9 (Ph), 125.8 (C5), 88.4 (C1'), 83.8, 83.6 (C2', C4'), 77.5 (C3'), 73.9 (CH2), 69.6, 69.5 (2×CH2), 37.7, 37.5 (2×Ms)。元素分析(C22H26ClN5O10S2として計算)計算値:C 42.6;H 4.2;N 11.3。実測値:C 42.5;H 4.2;N 11.0。
化合物75(4.50g、7.8mmol)を無水CH3CN(2×50mL)中に溶解し、そして真空下で濃縮して微量の水を除去した。該化合物を無水ジクロロメタン(50mL)中に溶解し、そして無水ピリジン(6.30mL、77.8mmol)を加え、続いてDMAP(3.80g、31.1mmol)を加えた。0℃まで冷却後に、トリフルオロメタンスルホン酸無水物(2.57mL、15.6mmol)を20分間かけて滴下した。該反応混合物を更に40分間撹拌し、そして氷冷した飽和NaHCO3水溶液(100mL)を加え、そして激しい撹拌の5分後に、該混合物を分液ろうとに移した。相分離し、そして該水相をCH2Cl2(2×100mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて塩酸(0.1M、2×100mL)および飽和NaHCO3水溶液(100mL)を用いて連続して洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発した。該残渣をDCVC(φ6cm、0〜100容量%のEtOAc/n−ヘプタン、5%ずつ増加、100mL画分)によって精製した。Rf=0.18(容量比1:1のEtOAc/n−ヘプタン)。ESI−MS m/z 実測値 710.0;711.9([MH]+、計算値 710.0)。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 8.45 (s, 1H, H8), 7.42-7.36 (m, 5H, Ar-H), 7.16 (br. s, 2H NH2), 6.48-6.48 (m, 2H), 5.02 (dd, 1H, J = 6.2, 1.6 Hz), 4.85 (dd, 2H, J = 10.8, 1.1 Hz), 4.67 (d, 1H, J = 11.0 Hz), 4.57-4.48 (m, 3H), 3.34 (s, 3H, Ms), 3.18 (s, 3 H, Ms)。13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ 160.0, 153.8, 150.2, 141.2 (C2, C4, C6, C8), 136.4, 128.5, 128.5, 128.4 (Ph), 123.4 (C5), 117.7 (q, J = 319.7 Hz, CF3), 87.0 (C1'), 80.8, 80.2 (C3', C4'), 73.8 (CH2), 68.6, 68.4 (2×CH2), 59.8 (C2'), 36.9, 36.5 (2×Ms)。元素分析(C21H23ClF3N5O11S3・0.25EtOAcとして計算)計算値:C 36.1;H 3.4;N 9.6。実測値:C 36.1;H 3.2;N 9.5。注意:19Fもまた記録し、たった1個のピークを示した。
3−ヒドロキシプロピオニトリル(3.55mL、52mmol)を無水THF(75mL)中に溶解し、そして0℃まで冷却した。水素化ナトリウム(鉱油中60%、2.50g、62.4mmol)を数回に分けて加え、該温度をrtまで昇温させ、そして該混合物をrtで30分間撹拌した。該反応混合物を0℃まで再び冷却し、そして無水THF(75mL)中に溶解した9−(3−O−ベンジル−5−O−メタンスルホニル−4−C−メタンスルホニルオキシメチル−2−O−トリフルオロメタンスルホニル−β−L−トレオ−フラノシル)−2−アミノ−6−クロロプリン(77)(7.34g、10.4mmol)を20分間かけて滴下し、そして該温度をrtまで昇温した。8時間後に、該反応液をHCl(1M、水溶液):ブライン(1:9、250mL)を加えることによってクエンチし、そして該混合物を分液ろうとに移した。相分離し、そして該水相をEtOAc(3×200mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせて乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発して赤色油状物を得た。該生成物を最初に短いシリカプラグ(φ6cm、10容量%のMeOH/EtOAc、500mL)を通してろ過することによって精製し、次いで得られた物質をEtOH:H2O(1:1)から沈降させて、黄褐色固体の78(4.64g、96%)を得た。Rf=0.31(10容量%のMeOH/EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 464.1([MH]+、計算値 464.1);1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 10.63 (s br, 1 H, NH), 7.72 (s, 1 H, H8), 7.30-7.24 (m, 3 H, Ar-H), 7.16-7.11 (m, 2 H, Ar-H), 6.65 (s br, 2 H, NH2), 5.86 (s, 1 H, H1'), 4.83 (d, 1 H, J = 11.5 Hz, H1''), 4.71 (d, 1 H, J = 11.4 Hz, H1''), 4.60 (d, 1 H, J = 1.8 Hz, H2'/H3'), 4.52 (d, 1 H, J = 11.9 Hz, PhCH 2), 4.34 (d, 1 H, J = 11.9 Hz, PhCH 2), 4.27 (d, 1 H, J = 1.8 Hz, H2'/H3'), 4.08 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, H5'), 3.86 (d, 1 H, J = 8.2 Hz, H5'), 3.27 (s, 3 H, Ms);13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ = 156.7 (C6), 153.8 (C2), 150.5 (C4), 137.0 (Ph), 135.6 (C8), 128.3, 127.9, 127.9 (Ph), 116.2 (C5), 86.8 (C4'), 85.5 (C1'), 80.2 (C3'), 76.4 (C2'), 72.5, 72.2 (Ph CH2, C5'), 66.4 (C1''), 36.8 (Ms)。元素分析(C19H21ClN5O7Sとして計算)計算値:C 49.2;H 4.6;N 15.1。実測値:C 49.4;H 4.5;N 15.2。
化合物78をDMSO(25mL)中に溶解し、そしてBzONa(2.22g、15.24mmol)を加えた。100℃まで6時間、次いで120℃まで3時間加熱した。該反応液をEtOAc(50mL)を用いて希釈し、そして水:飽和NaHCO3水溶液(1:1、100mL)を用いてクエンチした。相分離し、そして該水相をEtOAc(3×50mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせてブライン(2×100mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして濃縮した。該生成物をドライカラムバキュームクロマトグラフィー(φ4cm、0〜15容量%のMeOH/ジクロロメタン、1%ずつ増加、100mL画分)によって精製した。ヌクレオシド79を含有する該画分を貯蔵し、そしてこのものを真空下で蒸発して、白色固体(1190mg、95%)を得た。Rf=0.15(5容量%のMeOH/DCM);ESI−MS m/z 実測値 488.3([M−H]−、計算値 488.2);1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 10.63 (s, 1 H, NH), 7.95 (d, 2 H, J = 7.3 Hz, Bz), 7.67 (s, 1 H, H8), 7.64 (t, 1 H, J = 7.3 Hz, Bz), 7.50 (t, 3 H, J = 7.3 Hz, Bz), 7.24-7.18 (m, 3 H, Bn), 7.12-7.06 (m, 2 H, Bn), 6.54 (br s, 2 H. -NH2), 5.86 (s, 1 H, H1'), 4.79 (s, 2 H, H1''), 4.59 (d, 1 H, J = 1.8 Hz, H2'/H3'), 4.49 (d, 1 H, J = 11.9 Hz, PhCH 2O), 4.34 (d, 1 H, J = 11.9 Hz, PhCH 2O), 4.29 (d, 1 H, J = 1.8 Hz, H2'/H3'), 4.11 (d, 1 H, J = 8.4 Hz, H5'a), 3.93 (d, 1 H, J = 8.2 Hz, H5'b);13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ = 165.3 (C(O)Ph), 156.7, 153.8, 150.1 (C2, C4, C6), 137.0 (Bn), 135.5 (C8), 133.7 (Bz), 129.4, 129.1, 128.9, 128.3, 127.9 (Ph), 116.3 (C5), 86.8, 85.9 (C4', C1'), 80.0, 76.4 (C2', C3'), 72.7, 72.2 (Ph CH2, C5'), 60.6 (C1'')。
化合物79(2.33g、4.16mmol)をMeOH(100mL)中に懸濁し、そしてPd(OH)2−C(20%、292mg、10%molのPd)およびギ酸(formiat)アンモニウム(5.24g、83.2mmol)を加えた。該混合物を加熱還流した。4時間後に、更なるPd(OH)2−C(20%、292mg、10%molのPd)を加え、そして更に4時間後に最後のPd(OH)2−C(20%、292mg、10%molのPd)を加えた。更に12時間還流した。該触媒をろ紙を通してろ過することによって除去し、触媒を有する該ろ紙をMeOH中で30分間沸騰させ、次いで再びろ過した。該2個のメタノール性溶液を貯蔵し、そしてセライトを通してろ過した。該セライトを熱MeOHを用いて十分に洗浄した。全てのメタノール性溶液を貯蔵し、そして濃縮した。H2O中に溶かし、そして2回凍結乾燥して、白色固体の79(1100mg、90%)を得た。Rf=0.01(10容量%のMeOH/EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 296.1([MH]+、計算値 296.1);1H NMR (D2O, 400 MHz): δ = 7.90 (s, 1 H, H8), 5.91 (s, 1 H, H1'), 4.74 (d, 1 H, J = 2.4 Hz, H2'/H3'), 4.40 (d, 1 H, J = 2.4 Hz, H2'/H3'), 4.12 (d, 1 H, J = 8.6 Hz, H5'), 4.02 (d, 1 H, J = 8.7 Hz, H5'), 4.01 (s, 2 H, H5'); 13C NMR (D2O, 100 MHz): δ = 158.7 (C6), 153.7 (C2), 150.8 (C4), 138.4 (C8), 115.4 (C5), 88.7 (C4'), 86.3 (C1'), 78.1 (C3'), 73.2, 72.4 (C2', C5'), 57.4 (C1'');元素分析(C11H13N5O5・H2Oとして計算)計算値:C 42.2;H 4.8;N 22.4。実測値:C 42.0;H 4.5;N 22.2。
化合物80(860mg、2.91mmol)を無水DMF(25mL)中に溶解し、そしてN,N−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール(0.77mL、5.83mmol)を加えた。4時間後に該反応は完結し、そしてほとんどのDMFを真空下で除去した。得られたスラリー81を無水ピリジン(2×25mL)から2回共蒸発させ、そして無水ピリジン(10mL)中に懸濁した。4,4'−ジメトキシトリチルクロリド(1.48g、4.37mmol)を加え、そして該反応混合物をrtで16時間撹拌した。ほとんどのピリジンを真空下で除去し、そして該残渣をDCM(50mL)中に溶かし、そして半飽和NaHCO3水溶液(2×50mL)およびブライン(50mL)を用いて洗浄した。該水相を合わせてDCM(2×50mL)を用いて抽出し、そして該有機層を合わせて乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発して黄色発泡体を得た。該生成物をドライカラムバキュームクロマトグラフィー(φ4cm、0〜10容量%のMeOH/DCM、0.5%ずつ増加、100mL画分)によって精製した。ヌクレオシド82を含有する画分を貯蔵し、そして真空下で蒸発して、白色発泡体(1.10g、58%)を得た。Rf=0.08(10容量%のMeOH/EtOAc);ESI−MS m/z 実測値 653.3([MH]+、計算値 653.3);1H NMR (DMSO, 400 MHz): δ = 11.29 (s, 1H, NH), 8.57 (s, 1H, N=CH), 7.87 (s, 1 H, H8), 7.46-7.40 (m, 2H, DMT), 7.35-7.22 (m, 7H, DMT), 6.93-6.88 (m, 4H, DMT), 6.00 (s, 1 H, H1'), 5.92 (d, 1 H, J = 3.8 Hz, H2'), 4.51 (d, 1 H, J = 2.0 Hz, OH), 4.21 (dd, 1 H, J = 3.5 ,2.2 Hz, H3'), 4.05 (d, 1 H, J = 8.2 Hz, H1''), 3.98 (d, 1 H, J = 8.2 Hz, H1''), 3.74 (s, 6H, OCH3), 3.51 (d, 1 H, J = 10.2 Hz, H5'), 3.38 (d, 1 H, J = 10.2 Hz, H5'), 3.33 (s, 3H, NCH3), 3.15 (s, 3H, NCH3);13C NMR (DMSO, 100 MHz): δ 158.0 (DMT), 157.8, 157.4, 157.1 (C2, C6, N=CH), 149.2 (C4), 144.5 (DMT), 137.3 (C8), 135.2 (DMT), 129.6, 129.6, 127.7, 127.5, 126.6 (DMT), 118.9 (C5), 113.1 (DMT), 87.3, (C4'), 86.1 (C1'), 85.5 (DMT), 78.1 (C3'), 73.0, 72.7 (C1'', C2'), 60.0 (C5'), 54.9 (OCH3), 40.5, 34.6 (N(CH3)2);元素分析(C35H36N6O7・H2Oとして計算)計算値:C 62.7;H 5.7;N 12.5。実測値:C 62.8;H 5.4;N 12.6。
化合物82(750mg、1.15mmol)を無水DMF(25mL)中に溶解し、そして4,5−ジシアノイミダゾールのMeCN(1.0M、0.80mL、0.8mmol)を周囲温度で撹拌しながら加えた。2−シアノエチル−N,N,N',N'−テトライソプロピルホスホロジアミダイト(0.40mL、1.26mmol)を該反応混合物に滴下した。4時間後に、該反応液をEtOAc(70mL)を用いて希釈し、このものを分液ろうとに移し、そして飽和NaHCO3水溶液(2×50mL)およびブライン(50m)を用いて抽出した。該水相を合わせてEtOAc(100mL)を用いて抽出した。該有機層を貯蔵し、そして乾燥した(Na2SO4を使用)。ろ過後に、該有機層を真空下で蒸発させて黄色発泡体を得た。DCVC(φ2cm、1〜10容量%のMeOH/EtOAc、0.5%ずつ増加、50mL画分(該カラムは、1容量%のEt3N/EtOAcを用いて調製する))による精製により、白色固体のアミダイト83(480mg、49%)を得た。Rf=0.50(1容量%のTEA、10容量%MeOHのDCM);ESI−MS m/z 実測値 853.2([MH]+、計算値 853.4);31P NMR (CDCl3 121 MHz) δ 151.7, 150.3。
化合物77(7.44g、10.4mmol)をTHF(300mL)中に溶解した。0℃まで冷却後に、LiOH水溶液(1.0M、105mL)を加えた。該反応混合物を0℃で4時間撹拌し、次いでrtで更に2時間撹拌した。該反応液を塩酸(1.0M、飽和NaClを用いて飽和、100mL)を加えることによってクエンチし、そして激しい撹拌の5分後に、該混合物を分液ろうとに移した。相分離し、そして該水相をEtOAc(3×150mL)を用いて抽出した。該有機層を合わせてブライン:飽和NaHCO3水溶液(1:1、200mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発した。該残渣をDCVC(φ6cm、50〜100容量%のEtOAc/n−ヘプタン、5%ずつ増加、2×100mL画分)によって精製して、白色粉末のヌクレオシド84(4.49gmg、89%)を得た。Rf=0.49(20容量%のn−ヘプタン/EtOAc)。ESI−MS m/z 実測値 482.1;484.0([MH]+、計算値 482.1)。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 8.09 (s, 1H, H8), 7.26-7.19 (m, 3H, Ar-H), 7.08-7.04 (m, 2H, Ar-H), 7.01 (br. s, 2H, NH2), 5.96 (s, 1H, H1'), 4.86 (d, 1H, J = 11.3 Hz, H5''), 4.76 (d, 1H, J = 11.3 Hz, H5''), 4.65 (d, 1H, J = 2.0 Hz, H2'), 4.51 (d, 1H, J = 11.9 Hz, CH2), 4.32 (d, 1H, J = 11.7 Hz, CH2), 4.31 (d, 1H, J = 2.0 Hz, H3'), 4.10 (d, 1H, J = 8.2 Hz, CH2), 3.89 (d, 1H, J = 8.4 Hz, CH2), 3.28 (s, 3H, Ms)。13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ 159.6, 153.0, 149.0 (C2, C4, C6), 140.8 (C8), 136.7, 128.0, 127.8, 127.7 (Ph), 123.2 (C5), 86.8 (C4'), 85.6 (C1'), 80.0 (C3'), 75.8 (C2'), 72.3, 72.2 (C5', CH2Ph), 66.2 (C5''), 36.6 (Ms)。
化合物84(4.49g、9.32mmol)をDMSO(200mL)中に溶解し、そしてBzONa(6.76g、46.6mmol)を加えた。該反応液を100℃で16時間撹拌した。該反応液を室温まで冷却し、EtOAc(200mL)およびブライン:飽和NaHCO3水溶液(1:1、400mL)を加えた。該混合物を分液ろうとに移した。相分離し、そして該水相をEtOAc(3×200mL)を用いて抽出した。該有機相を合わせてブライン(半飽和、2×200mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして真空下で蒸発した。該残渣をDCVC(φ6cm、50〜100容量%のEtOAc/n−ヘプタン、5%ずつ増加、2×100mL画分;0〜10容量%のMeOH/EtOAc、1%ずつ増加、100mL画分)によって精製して、白色粉末のヌクレオシド85(3.30g、70%)を得た。Rf=0.40(35容量%のn−ヘプタン/EtOAc)。ESI−MS m/z 実測値 508.2;510.1([MH]+、計算値 508.1)。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 8.05 (s, 1H, H8), 7.98 (d, 2H, J = 7.3 Hz, Bz), 7.68 (t, 1H, J = 7.3 Hz, Bz), 7.53 (t, 2H, J = 7.7 Hz, Bz), 7.25-7.15 (m, 3H, Bn), 7.05-7.00 (m, 4H, Bn, NH2), 5.98 (s, 1H, H1'), 4.85 (s, 2H, H5''), 4.67 (d, 1H, J = 1.8 Hz, H2'), 4.50 (d, 1H, J = 12.1 Hz, CH2), 4.35 (d, 1H, J = 2.0 Hz, H3'), 4.34 (d, 1H, J = 11.7 Hz, CH2), 4.16 (d, 1H, J = 8.4 Hz, CH2), 3.98 (d, 1H, J = 8.1 Hz, CH2)。13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz): δ 165.1 (PhCO), 159.6, 152.9, 149.0 (C2, C4, C6), 140.6 (C8), 136.7, 133.5, 129.2, 128.9, 128.7, 128.0, 127.9, 127.7,127.6 (Ph), 123.2 (C5), 86.7 (C4'), 85.9 (C1'), 79.9 (C3'), 75.8 (C2'), 72.5, 72.1 (5', CH2Ph), 60.4 (C5'')。
9−(3−O−ベンジル−5−O−メタンスルホニル−4−C−(メタンスルホニルオキシメチル)−2−O−トリフルオロメタンスルホニル−β−D−エリスロ−ペントフラノシル)−6−N−ベンゾイルアデニン(589mg、0.775mmol)を乾燥アセトニトリル(15mL)中に溶解し、ヨウ化リチウム(202mg、2当量)を加え、そして加熱還流した。2時間後に、LCMSは、十分な変換を示す。溶媒を真空下で除去し、そして該残渣をDCM(50mL)および水(50mL)の間で分配した。相分離し、そして該有機層をブライン(50mL)を用いて洗浄し、乾燥し(Na2SO4を使用)、ろ過し、そして該溶媒を真空下で除去して橙色発泡体(514mg、90%収率)を得た。
化合物87(30mg)をDMF/水(1:1)(2mL)中に溶解し、そして続いてアジ化ナトリウム(26mg、10当量)を加えた。該反応混合物を80℃で終夜撹拌した。LCMSにより、出発物質がアジドで置換された生成物へ変換されたことを確認する。
Claims (55)
- 一般式IV:
Xは、−CH2−、−NRH−、−O−および−S−から選ばれ;
Zは、−CH2−、−NRH−、−S−および−Se−から選ばれ;
Bは、核酸塩基であり;
R3は、−RH、−N3、−NRHRH*、−NRHC(O)RH*、−C(O)NRHRH*、−ORH、−OC(O)RH、−C(O)ORH、−SRH、−SC(O)RH、およびトリ(C1〜6−アルキル/アリール)シリルオキシから選ばれ;
RHおよびRH*は各々独立して、水素、場合により置換されたC1〜6−アルキル、場合により置換されたアリール、および場合により置換されたアリール−C1〜6−アルキルから選ばれ;
A4およびA5は独立して、C1〜6−アルキレンから選ばれ;そして、
R5は、ヨード、ブロモ、クロロ、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲンおよびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキルおよび1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる]
で示されるLNAアナログの製造法であって、
該方法は、
一般式I:
X、B、R3、A4およびA5は、上で定義する通りであり;
R2は、ヨード、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲンおよびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれるか、あるいは、
R3およびR2は一緒になって、エポキシドを形成し得て;そして、
R4およびR5は独立して、上記のR5について定義する通りであるか、あるいは、
R4およびR5は一緒になって、テトラ(C1〜6−アルキル)ジシロキサニリデン基を構築する]
で示される中間体を、求核体(これは、ハロゲン、−N3、−NRHRH*、−SRH、−−S、−SeRH、−−Se、−NRHC(O)RH*、−SC(O)RH、および有機金属ヒドロカルビル基から選ばれる)を用いて処理してR2を置換し;そして、
C2'およびC4'位の間での閉環を有効として、式IVのLNAアナログを得る、
工程を含む、該製造法。 - R2は、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれ;
R3は、場合により置換されたアリール(C1〜6−アルキル)オキシであり;そして、
R4およびR5は独立して、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる、
請求項1記載の方法。 - A4およびA5はメチレンである、請求項1または2のいずれかに記載の方法。
- Xは−O−である、請求項1〜3のいずれか1つに記載の方法。
- Bは、アデニン、グアニン、2,6−ジアミノプリン、チミン、2−チオチミン、シトシン、メチルシトシン、ウラシル、5−フルオロシトシン、キサンチン、6−アミノプリン、2−アミノプリン、6−クロロ−2−アミノ−プリン、および6−クロロプリンから選ばれ;
R2は、1つ以上のハロゲンによって置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシから選ばれ;
R3は、ベンジルであり;
R4およびR5は独立して、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲンおよびC1〜6−アルキルから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる、
請求項1〜5のいずれか1つに記載の方法。 - R4およびR5は独立して、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、エタンスルホニルオキシ、2,2,2−トリフルオロエタンスルホニルオキシ、プロパンスルホニルオキシ、イソ−プロパンスルホニルオキシ、ブタンスルホニルオキシ、ノナフルオロブタンスルホニルオキシ、ペンタンスルホニルオキシ、シクロペンタンスルホニルオキシ、ヘキサンスルホニルオキシ、ヘキサンスルホニルオキシ、シクロヘキサンスルホニルオキシ、α−トルエンスルホニルオキシ、2−クロロ−α−トルエンスルホニルオキシ、オルト−トルエンスルホニルオキシ、メタ−トルエンスルホニルオキシ、パラ−トルエンスルホニルオキシ、ベンゼンスルホニルオキシ、オルト−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、メタ−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、パラ−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、オルト−ニトロベンゼンスルホニルオキシ、メタ−ニトロベンゼンスルホニルオキシ、およびパラ−ニトロベンゼンスルホニルオキシから選ばれる、請求項1〜6のいずれか1つに記載の方法。
- Bは、アデニン、グアニン、2,6−ジアミノプリン、チミン、2−チオチミン、シトシン、メチルシトシン、ウラシル、5−フルオロシトシン、キサンチン、6−アミノプリン、2−アミノプリン、6−クロロ−2−アミノ−プリン、および6−クロロプリンから選ばれ;
R3はベンジルであり;そして、
R4およびR5は共に、メチルスルホニルオキシである、
請求項1〜8のいずれか1つに記載の方法。 - 求核体は、−N3、−NRHRH*、−SRH、−−S、−NRHC(O)RH*、および−SC(O)RHから選ばれる、請求項1〜9のいずれか1つに記載の方法。
- Zは−S−である、請求項1〜10のいずれか1つに記載の方法。
- 求核体はNa2Sまたはチオ酢酸カリウムである、請求項11記載の方法。
- 閉環は、極性の非プロトン性溶媒中の水酸化リチウムの影響下で有効である、請求項12記載の方法。
- Zは−NH−である、請求項1〜10のいずれか1つに記載の方法。
- 求核体はアジ化ナトリウムである、請求項14記載の方法。
- 閉環は、極性の非プロトン性溶媒中の水酸化ナトリウムおよびトリメチルホスファンの影響下で有効である、請求項15記載の方法。
- 該製造は更に、Zが−NH−であるLNAアナログを、該LNAアナログ溶液を還元試薬およびC1〜6−アルカナールもしくは芳香族アルデヒドと反応させることによって、Zが−N(C1〜6−アルキル)−またはN(アリール)であるLNAアナログに;あるいは、酸クロリドまたは酸無水物と反応させることによって、ZがN(アシル)であるLNAアナログに、変換する工程を含む、請求項14〜16のいずれか1つに記載の方法。
- C1〜6−アルカナールがホルムアルデヒドであるか、または芳香族アルデヒドがベンズアルデヒド、ピレン−1−カルバルデヒドもしくはフタルイミドアセトアルデヒドであって、そして還元剤はNaBCNH3であるか;あるいは、
酸クロリドは、塩化ベンゾイルまたはピレン−1−イルカルボニルクロリドである、
請求項17に記載の方法。 - 式I;
Xは、−CH2−、−NRH−、−O−および−S−から選ばれ;
Bは、核酸塩基であり;
R2は、ヨード、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれ;
R3は、−RH、−N3、−NRHRH*、−NRHC(O)RH*、−C(O)NRHRH*、−ORH、−OC(O)RH、−C(O)ORH、−SRH、−SC(O)RH、およびトリ(C1〜6−アルキル/アリール)シリルオキシから選ばれ;
RHおよびRH*の各々は独立して、水素、場合により置換されたC1〜6−アルキル、場合により置換されたアリール、および場合により置換されたアリール−C1〜6−アルキルから選ばれ;
A4およびA5は独立して、C1〜6−アルキレンから選ばれ;そして、
R4およびR5は独立して、ヨード、ブロモ、クロロ、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲンおよびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる]
で示される化合物の製造法であって、
式VII:
R2*は、ヨード、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれ;そして、
X、B、R3、R4、A4、R5およびA5は上で定義する通りである]
で示される化合物のC2'位の置換基の配向の反転を含む、該方法。 - R2*は、ヨード、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、エタンスルホニルオキシ、2,2,2−トリフルオロ−エタンスルホニルオキシ、プロパンスルホニルオキシ、イソ−プロパンスルオニルオキシ、ブタンスルホニルオキシ、ノナフルオロブタンスルホニルオキシ、ペンタンスルホニルオキシ、シクロペンタンスルホニルオキシ、ヘキサンスルホニルオキシ、シクロヘキサンスルホニルオキシ、α−トルエンスルホニルオキシ、2−クロロ−α−トルエンスルホニルオキシ、オルト−トルエンスルホニルオキシ、メタ−トルエンスルホニルオキシ、パラ−トルエンスルホニルオキシ、ベンゼンスルホニルオキシ、オルト−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、メタ−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、パラ−ブロモ−ベンゼンスルホニルオキシ、オルト−ニトロベンゼンスルホニルオキシ、メタ−ニトロベンゼンスルホニルオキシ、およびパラ−ニトロベンゼンスルホニルオキシから選ばれる、請求項19記載の方法。
- R2*はトリフルオロメチルスルホニルオキシである、請求項20記載の方法。
- R2は、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれ;
R3は、場合により置換されたアリール(C1〜6−アルキル)オキシであり;そして、
R4およびR5は独立して、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる、
請求項19〜21のいずれか1つに記載の方法。 - A4およびA5はメチレンである、請求項19〜22のいずれか1つに記載の方法。
- Xは−O−である、請求項19〜23のいずれか1つに記載の方法。
- Bは、アデニン、グアニン、2,6−ジアミノプリン、チミン、2−チオチミン、シトシン、メチルシトシン、ウラシル、5−フルオロシトシン、キサンチン、6−アミノプリン、2−アミノプリン、6−クロロ−2−アミノプリン、および6−クロロプリンから選ばれ;
R2は、1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシから選ばれ;
R3は、ベンジルであり;そして、
R4およびR5は独立して、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる。
請求項19〜25のいずれか1つに記載の方法。 - R4およびR5は独立して、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、エタンスルホニルオキシ、2,2,2−トリフルオロエタンスルホニルオキシ、プロパンスルホニルオキシ、イソ−プロパンスルホニルオキシ、ブタンスルホニルオキシ、ノナフルオロブタンスルホニルオキシ、ペンタンスルホニルオキシ、シクロペンタンスルホニルオキシ、ヘキサンスルホニルオキシ、シクロヘキサンスルホニルオキシ、α−トルエンスルホニルオキシ、2−クロロ−α−トルエンスルホニルオキシ、オルト−トルエンスルホニルオキシ、メタ−トルエンスルホニルオキシ、パラ−トルエンスルホニルオキシ、ベンゼンスルホニルオキシ、オルト−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、メタ−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、ベンゼンスルホニルオキシ、オルト−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、メタ−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、パラ−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、オルト−ニトロベンゼンスルホニルオキシ、メタ−ニトロベンゼンスルホニルオキシ、およびパラ−ニトロベンゼンスルホニルオキシから選ばれる、
請求項19〜26のいずれか1つに記載する方法。 - Bは、アデニン、グアニン、2,6−ジアミノプリン、チミン、2−チオチミン、シトシン、メチルシトシン、ウラシル、5−フルオロシトシン、キサンチン、6−アミノプリン、2−アミノプリン、6−クロロ−2−アミノ−プリン、および6−クロロプリンから選ばれ;
R3は、ベンジルであり;そして、
R4およびR5は共に、メチルスルホニルオキシである、
請求項19〜28のいずれか1つに記載の方法。 - Bがピリミジンタイプの塩基であり、そして反転は2,2'−アンヒドロヌクレオシドの形成によって促進される、請求項19〜29のいずれか1つに記載の方法。
- Bはプリンタイプの塩基であり、そして反転は式VIの化合物を酸素求核体またはハロゲンと反応させることによって有効となる、請求項19〜30のいずれか1つに記載の方法。
- 酸素求核体は、アセテート、ベンゾエート、およびアルコシド(例えば、3−ヒドロキシプロピオニトリルアルコキド)から選ばれ、そしてハロゲンはブロミドおよびヨードから選ばれる、請求項31記載の方法。
- 式I:
Xは、−CH2−、−NRH−、−O−、および−S−から選ばれ;
Bは、核酸塩基であり;
R2は、ヨード、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれて;
R3は、−RH、−N3、−NRHRH*、−NRHC(O)RH*、−C(O)NRHRH*、−ORH、−OC(O)RH、−C(O)ORH、−SRH、−SC(O)RH、およびトリ(C1〜6−アルキル/アリール)シリルオキシから選ばれるか;あるいは、
R3およびR2は一緒になって、エポキシドを形成し;
RHおよびRH*の各々は独立して、水素、場合により置換されたC1〜6−アルキル、場合により置換されたアリール、および場合により置換されたアリール−C1〜6−アルキルから選ばれ;
A4およびA5は独立して、C1〜6−アルキレンから選ばれ;そして、
R4およびR5は独立して、ヨード、ブロモ、クロロ、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールアルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれるか;あるいは、
R4およびR5は一緒になって、テトラ(C1〜6−アルキル)ジシロキサニリデン基を構築する]
で示される化合物であって、
但し、
1−(3−アジド−3−デオキシ−2,5−ジ−O−メタンスルホニル−4−C−(メタンスルホニルオキシメチル)−β−D−エリスロ−ペントフラノシル)チミン、
1−(3−O−ベンジル−2,5−ジ−O−メタンスルホニル−4−C−(メタンスルホニルオキシメチル)−β−D−エリスロ−ペントフラノシル)チミン、および
1−(3−O−ベンジル−2,5−ジ−O−メタンスルホニル−4−C−(メタンスルホニルオキシメチル)−α−L−トレオ−ペントフラノシル)チミンからは選ばれない、該化合物。 - R2は、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれ;
R3は、場合により置換されたアリール(C1〜6−アルキル)オキシであり;そして、
R4およびR5は独立して、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたアリール、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる、
請求項33記載の化合物。 - A4およびA5はメチレンである、請求項34または35のいずれかに記載の化合物。
- Xは−O−である、請求項33〜35のいずれか1つに記載の化合物。
- R3およびR2は一緒になってエポキシドを形成する、請求項33〜36のいずれか1つに記載の化合物。
- Bは、アデニン、グアニン、2,6−ジアミノプリン、チミン、2−チオチミン、シトシン、メチルシトシン、ウラシル、5−フルオロシトシン、キサンチン、6−アミノプリン、2−アミノプリン、6−クロロ−2−アミノ−プリン、および6−クロロプリンから選ばれ;
R2は、1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシから選ばれ;
R3は、ベンジルであり;そして、
R4およびR5は独立して、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる、
請求項33〜38のいずれか1つに記載の化合物。 - R4およびR5は独立して、メタンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、エタンスルホニルオキシ、2,2,2−トリフルオロエタンスルホニルオキシ、プロパンスルホニルオキシ、イソ−プロパンスルホニルオキシ、ブタンスルホニルオキシ、ノナフルオロブタンスルホニルオキシ、ペンタンスルホニルオキシ、シクロペンタンスルホニルオキシ、ヘキサンスルホニルオキシ、シクロヘキサンスルホニルオキシ、α−トルエンスルホニルオキシ、2−クロロ−α−トルエンスルホニルオキシ、オルト−トルエンスルホニルオキシ、メタ−トルエンスルホニルオキシ、パラ−トルエンスルホニルオキシ、ベンゼンスルホニルオキシ、オルト−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、メタ−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、パラ−ブロモベンゼンスルホニルオキシ、オルト−ニトロベンゼンスルホニルオキシ、メタ−ニトロベンゼンスルホニルオキシ、およびパラ−ニトロベンゼンスルホニルオキシからなる群から選ばれる、請求項33〜39のいずれか1つに記載の化合物。
- Bは、アデニン、グアニン、2,6−ジアミノプリン、チミン、2−チオチミン、シトシン、ウラシル、5−フルオロシトシン、キサンチン、6−アミノプリン、2−アミノプリン、6−クロロ−2−アミノ−プリン、および6−クロロプリンから選ばれ;
R3は、ベンジルであり;そして、
R4およびR5は共に、メチルスルホニルオキシである、
請求項33〜41のいずれか1つに記載の化合物。 - 図13中に例示する化合物である、請求項33記載の化合物。
- 一般式VIII:
Xは、−CH2−、−NRH−、−O−、および−S−から選ばれ;
Zは、−CH2−、−NRH−、−O−、−S−、および−Se−から選ばれ;
Bは、核酸塩基であり;
R3は、−RH、−N3、−NRHRH*、−NRHC(O)RH*、−C(O)NRHRH*、-ORH、−OC(O)RH、−C(O)ORH、−SRH、−SC(O)RH*、およびトリ(C1〜6−アルキル/アリール)シリルオキシから選ばれ;
RHおよびRH*は各々独立して、水素、場合により置換されたC1〜6−アルキル、場合により置換されたアリール、および場合により置換されたアリール−C1〜6−アルキルから選ばれ;
A4およびA5は独立して、C1〜6−アルキレンから選ばれ;そして、
R5は、ヨード、ブロモ、クロロ、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる]
で示されるLNAアナログの製造法であって、該方法は、
一般式IX:
X、B、R3、A4およびA5は上で定義する通りであり;
R2は、ヨード、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれるか;あるいは、
R3およびR2は一緒になって、エポキシドを形成し得て;そして、
R4およびR5は独立して、上記のR5について定義する通りであるか、あるいは、
R4およびR5は一緒になって、テトラ(C1〜6−アルキル)ジシロキサニリデン基を構築する]
で示される中間体を、求核体(これは、ハロゲン、−N3、−NRHRH*、−ORH、−OH、−SRH、−−S、−SeRH、−−Se、−NRHC(O)RH、−SC(O)RH、および有機金属ヒドロカルビル基から選ばれる)を用いて処理してR2を置換し;そして、
C2'およびC4'位の間での閉環を有効として、式VIIIのLNAアナログを得る、工程を含む、該方法。 - 一般式IXの中間体におけるR3およびR2は一緒になってエポキシドを形成する、請求項45記載の方法。
- R2は、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれ;
R3は、場合により置換されたアリール(C1〜6−アルキル)オキシであり;そして、
R4およびR5は独立して、場合により1つ以上の置換基で置換されたC1〜6−アルキルスルホニルオキシ(該置換基は、ハロゲンから選ばれる)、場合により1つ以上の置換基で置換されたフェニル(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、およびC1〜6−アルキルから選ばれる)、および場合により1つ以上の置換基で置換されたアリールスルホニルオキシ(該置換基は、ニトロ、ハロゲン、C1〜6−アルキル、および1つ以上のハロゲンで置換されたC1〜6−アルキルから選ばれる)から選ばれる、
請求項45記載の方法。 - A4およびA5はメチレンである、請求項45〜47のいずれか1つに記載の方法。
- Xは−O−である、請求項45〜48のいずれか1つに記載の方法。
- 求核体は、−N3、−NRHRH*、−SRH、−−S、−ORH、−OH、−NRHC(O)RH*および−SC(O)RHから選ばれる、請求項45〜49のいずれか1つに記載の方法。
- 求核体は水酸化物である、請求項45〜51のいずれか1つに記載の方法。
- Bは、アデニン、グアニン、2,6−ジアミノプリン、チミン、2−チオチミン、シトシン、メチルシトシン、ウラシル、5−フルオロシトシン、キサンチン、6−アミノプリン、2−アミノプリン、6−クロロ−2−アミノ−プリン、および6−クロロプリンから選ばれ;
R3は、ベンジルであり;そして、
R4およびR5は共に、メチルスルホニルオキシである、
請求項53記載の化合物。
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