ES2286430T3 - Secuencia de nucledcotidos de maiz codificante de una proteina con actividad transglutaminasa, y su uso. - Google Patents
Secuencia de nucledcotidos de maiz codificante de una proteina con actividad transglutaminasa, y su uso. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2286430T3 ES2286430T3 ES03725225T ES03725225T ES2286430T3 ES 2286430 T3 ES2286430 T3 ES 2286430T3 ES 03725225 T ES03725225 T ES 03725225T ES 03725225 T ES03725225 T ES 03725225T ES 2286430 T3 ES2286430 T3 ES 2286430T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- protein
- tgase
- activity
- seq
- nucleotide sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 66
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 58
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 57
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 title description 33
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 title description 32
- 101710123874 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 27
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims abstract description 18
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 13
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 40
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 25
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 25
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 17
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 11
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 4
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 claims description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 4
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims description 4
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 claims description 3
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 claims description 3
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 claims description 3
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 2
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008268 mayonnaise Substances 0.000 claims description 2
- 235000010746 mayonnaise Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 claims 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract description 31
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 abstract description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 12
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 8
- 230000009466 transformation Effects 0.000 abstract description 8
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 abstract description 5
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 abstract description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 abstract description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 47
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 13
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 13
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 6
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 6
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 5
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 5
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 4
- 235000013527 bean curd Nutrition 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000008892 Helianthus tuberosus Species 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 235000021472 generally recognized as safe Nutrition 0.000 description 3
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- CCSGGWGTGOLEHK-OBJOEFQTSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(5-aminopentyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCN)SC[C@@H]21 CCSGGWGTGOLEHK-OBJOEFQTSA-N 0.000 description 2
- 102100032252 Antizyme inhibitor 2 Human genes 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 108700016156 Arginine decarboxylases Proteins 0.000 description 2
- 241000548230 Crassostrea angulata Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 235000003230 Helianthus tuberosus Nutrition 0.000 description 2
- 101000666171 Homo sapiens Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2 Proteins 0.000 description 2
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- 240000002129 Malva sylvestris Species 0.000 description 2
- 235000006770 Malva sylvestris Nutrition 0.000 description 2
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108700005126 Ornithine decarboxylases Proteins 0.000 description 2
- 102000052812 Ornithine decarboxylases Human genes 0.000 description 2
- 102100030944 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase K Human genes 0.000 description 2
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010043797 4-alpha-glucanotransferase Proteins 0.000 description 1
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 1
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000251571 Ciona intestinalis Species 0.000 description 1
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- YAHZABJORDUQGO-NQXXGFSBSA-N D-ribulose 1,5-bisphosphate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)C(=O)COP(O)(O)=O YAHZABJORDUQGO-NQXXGFSBSA-N 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000702191 Escherichia virus P1 Species 0.000 description 1
- 108010071289 Factor XIII Proteins 0.000 description 1
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 241000239218 Limulus Species 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 235000010624 Medicago sativa Nutrition 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 1
- 102000004020 Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108090000417 Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 101710182792 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase K Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 206010042602 Supraventricular extrasystoles Diseases 0.000 description 1
- 101000837778 Tachypleus tridentatus Hemocyte protein-glutamine gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 235000007244 Zea mays Nutrition 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003578 bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 229930002868 chlorophyll a Natural products 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 229930002869 chlorophyll b Natural products 0.000 description 1
- NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M chlorophyll b Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C=O)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 NSMUHPMZFPKNMZ-VBYMZDBQSA-M 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000005354 coacervation Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229940012444 factor xiii Drugs 0.000 description 1
- 239000010200 folin Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 230000014726 immortalization of host cell Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 102100039604 mRNA guanylyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010026228 mRNA guanylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000008121 plant development Effects 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000013573 potato product Nutrition 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 108040010926 protein-glutamine gamma-glutamyltransferase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003071 protein-glutamine gamma-glutamyltransferase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019465 surimi Nutrition 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 108010058734 transglutaminase 1 Proteins 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004319 trichloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1025—Acyltransferases (2.3)
- C12N9/104—Aminoacyltransferases (2.3.2)
- C12N9/1044—Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase (2.3.2.13), i.e. transglutaminase or factor XIII
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y203/00—Acyltransferases (2.3)
- C12Y203/02—Aminoacyltransferases (2.3.2)
- C12Y203/02013—Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase (2.3.2.13), i.e. transglutaminase or factor XIII
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
La invención proporciona una molécula de ADN proveniente de maiz y codificante de una proteína con actividad TGasa, asícomo un vector de expresión génica que comprende esta molécula de ADN. Un objeto adicional de esta invención lo constituye el empleo de dicha molécula de ADN o vector para producir células transformadas capaces de expresar proteínas recombinantes con actividad TGasa, o para introducir dicha secuencia codificante de una proteína con actividad TGasa en células de plantas. Las células de microorganismos y las plantas transgénicas resultantes también constituyen objetos adicionales de esta invención. Además, estas proteínas con actividad TGasa expresadas a partir de dichas secuencias de ADN pueden ser empleadas, entre otros usos, en la manipulación, procesamiento y transformación de alimentos.
Description
Secuencia de nucleótidos de maíz codificante de
una proteína con actividad transglutaminasa, y su uso.
La invención se relaciona con la identificación
de nuevas proteínas de origen vegetal con actividad TGasa y su uso
en el campo de la manipulación, procesamiento y transformación de
alimentos y en el desarrollo de plantas transgénicas con nuevas
capacidades.
Las transglutaminasas (TGasa; EC2.3.2.13)
(R-glutaminil-peptido-aminasa-\gamma-glutamil
transferasa) catalizan uniones amidas entre un grupo amino primario
de una poliamina o de una lisina (donador amino) y un grupo
\gamma-carboxiamida de un residuo glutamil de
algunas proteínas (amino receptor), mediante una reacción intermedia
por la que el enzima se une al sustrato por reacción entre el grupo
\gamma-carboxiamida del residuo glutamil de la
proteína y un grupo sulfidrilo de un residuo de cisteína del centro
activo del enzima (Serafini-Fracassini, D., Del
Duca, S., & Beninati, S. 1995. Plant Transglutaminases.
Phytochemistry 40:355-365). El resultado de la
actividad de la TGasa es: a) la modificación de la conformación de
la propia proteína y b) otros cambios de conformación más extensos
como resultado de uniones entre la misma proteína y entre proteínas
diferentes para formar conjugados de elevado peso
molecular.
molecular.
Existen estudios con TGasas en humanos, también
en animales, plantas, vertebrados inferiores, algunas bacterias,
algas y levaduras (Makarova, K.S., Aravind, L. & Koovin, E.V.
1999. A superfamily of archaeal, bacterial, and eukaryotic proteins
homologous to animal transglutaminases. Protein Science
8:1714-1719; Bergamini, C.M., Dean, M., Tanfani, F.,
Ferrari, C. & Scatturin. 1999. Conformational stability of
human erythrocyte transglutaminase: patterns of thermal unfolding
at acid and alkaline pH. Eur. J. Biochem.
266:575-582.; Cariello, L., Ristoratore, F. &
Zanitti, L. 1997. A new transglutaminase-like from
ascidian Ciona intestinalis. FEBS Lett 408:171-176;
Lorand, L. & Conrad, S.M. 1984. Transglutaminases. Mol Cell
Biochem 58:9-35;
Serafíni-Fracassini, D., Del Duca S. & Beninati
S. 1995. Plant Transglutaminases. Phytochemistry
40:355-365 ; Tokunaga, F., Muta, T., Iwanaga, S.,
Ichinose, A., Davie, EW, Kuma, K. & Miyata, T. 1993. Limulus
hemocyte transglutaminase. cDNA cloning, amino acid sequence and
tissue localization. J Biol Chem 268:262-268).
Las TGasas más conocidas son: el factor XIII de
la coagulación de la sangre, que es una proteína del plasma, y la
TGasa K implicada en la formación de la capa córnea de la epidermis.
Por otro lado, ya han sido clonados algunos de los genes
responsables de algunas de las TGasas citadas y se va conociendo la
implicación de las TGasas en importantes procesos como la
diferenciación celular, la estabilización de tejidos o la muerte
celular programada (Ichinose, A., Bottenus, R.E. & Davie E.W.
1990. Structure of transglutaminases. J. of Biol. Chemistry.
265(23):13411-13414; Bergamini, C.M., Dean,
M., Tanfani, F., Ferrari, C. & Scatturin. 1999. Conformational
stability of human erythrocyte transglutaminase: patterns of thermal
unfolding at acid and alkaline pH. Eur. J. Biochem. 266:
575-582; Nemes, Z., Marekov, L.N. & Steinert,
P.M. 1999. Involucrin cross-linking by
transglutaminase 1. J. of Biol. Chemistry.
274(16):11013-11021). También estas enzimas
parecen estar implicadas en enfermedades neurodegenerativas,
tumores, enfermedades celíacas, etc, por ello son un grupo de
enzimas de alto interés en los estudios clínicos. En torno a estos
estudios clínicos existen diferentes patentes relacionadas con
TGasas: US5,736,132 "Method of promoting adhesion between tissue
surfaces" solicitada por Orthogene, Inc. 1998; US 5,726,051
"Transglutaminase gene" solicitada por Oklahoma Medical
Research Foundation, 1998.
La función de las TGasas vegetales es menos
conocida aunque los primeros datos sobre su existencia se publicaron
hace ya unos años (Icekson I. & Apelbaun, A. 1987. Evidences
for transglutaminase activity in plant tissue. Plant
Physiol. 84. 972-974; Serafini-Fracassini D., Del Duca S., & D'Orazi D. 1988. First evidence for polyamine conjugation mediated by an enzyme activity in plants. Plant Physiol. 87:757). Los estudios en plantas se han centrado sobre todo en aspectos bioquímicos relacionados con la actividad, sustratos sobre los que actúa y tejidos donde abunda, pero no se ha estudiado su papel funcional en los muchos procesos en que se tienen datos parciales sobre su intervención, como son: crecimiento y desarrollo, morfogénesis en general, fotosíntesis y muerte celular (Margosiak, S.A., Drama,A., Bruce-Carver, M.R., Gonzalez, A.P. Louie, D. & Kuehn. 1990. Identification of the large subunit of ribulose1,5-bisphosphate carboxylase/oxigenase as a substrate for transglutaminase in Medicago sativa L. (Alfalfa). Plant Physiol. 92: 88-96; Del Ducca, S., Tidu, V., Bassi, R., Exposito, C., & Serafíni-Fracassini, D. 1994. Identification of chlorophyll-a/b proteins as substrates of transglutaminase activity in isolated chloroplasts of Helianthus tuberosus L. Planta 193:283-289; Del Ducca, S., Della Mea, M., Muñoz de Rueda, P. & Serafini-Fracassini, D. 2000 Factors
affecting transglutaminase activity catalizing polyamine conjugation to endogenous substrates in the entire chloroplast. Plant Physiol Biochem 38:429-439).
Physiol. 84. 972-974; Serafini-Fracassini D., Del Duca S., & D'Orazi D. 1988. First evidence for polyamine conjugation mediated by an enzyme activity in plants. Plant Physiol. 87:757). Los estudios en plantas se han centrado sobre todo en aspectos bioquímicos relacionados con la actividad, sustratos sobre los que actúa y tejidos donde abunda, pero no se ha estudiado su papel funcional en los muchos procesos en que se tienen datos parciales sobre su intervención, como son: crecimiento y desarrollo, morfogénesis en general, fotosíntesis y muerte celular (Margosiak, S.A., Drama,A., Bruce-Carver, M.R., Gonzalez, A.P. Louie, D. & Kuehn. 1990. Identification of the large subunit of ribulose1,5-bisphosphate carboxylase/oxigenase as a substrate for transglutaminase in Medicago sativa L. (Alfalfa). Plant Physiol. 92: 88-96; Del Ducca, S., Tidu, V., Bassi, R., Exposito, C., & Serafíni-Fracassini, D. 1994. Identification of chlorophyll-a/b proteins as substrates of transglutaminase activity in isolated chloroplasts of Helianthus tuberosus L. Planta 193:283-289; Del Ducca, S., Della Mea, M., Muñoz de Rueda, P. & Serafini-Fracassini, D. 2000 Factors
affecting transglutaminase activity catalizing polyamine conjugation to endogenous substrates in the entire chloroplast. Plant Physiol Biochem 38:429-439).
Además, se ha de destacar que la
transglutaminasa tiene un valor añadido para finalidades
biotecnológicas. Esta nueva faceta suplementaria como metabolito de
interés, proviene de su capacidad de crear uniones covalentes entre
proteínas distintas. Esta propiedad se ha usado por ejemplo para
mantener la textura de alimentos como pescado y carnes, reduciendo
la necesidad de utilizar sales (surimi, etc). Para la formulación de
gelatinas de distinta densidad etc. Para preparar cocinados con
menos grasas (tofú). También es capaz de mantener la consistencia,
elasticidad, humedad o viscosidad de un producto en diferentes
temperaturas. Se usa asimismo en distintos procesados lácticos:
quesos, yogures, helados, etc. Tanto es así, que actualmente se usa
como "aditivo" en muchos procesados bioalimentarios, siendo la
dosis recomendada en USA para este uso de 65 ppm.
Todas estas posibilidades de la TGasa han
generado la formulación de diferentes patentes sobre: métodos de
obtención, utilización etc. y han hecho de esta substancia un
producto comercial como por ejemplo los que viene distribuyendo la
empresa Ajinomoto, con el nombre de: Activa TG®. Las empresas que
comercializan el producto son Ajinomoto Co. Inc de Tokio
(extendida también en Norteamérica) y Rohm Enzyme de USA
(www.skidmore-sales.com/whatsnew/newsletter/summer2001.pdf).
Sin embargo, en España no se ha localizado ninguna empresa que se
dedique a la producción industrial de TGasa.
La primera TGasa que se ha sobreexpresado para
fines comerciales como los antes indicados, se realizó en bacterias
(Streptoverticillium sp.) por la empresa Ajinomoto, quién
patentó el procedimiento y las diferentes mejoras posteriores de
este protocolo inicial (US5,156,956 "Transglutaminase" (1992)).
Asimismo esta misma empresa tiene patentado, otro sistema similar,
pero mediante la transformación de Crassostrea gigas
(US5,736,356 "Transglutaminase originating from Crassostrea
gigas" (1998)) y de Bacillus subtilus (US5,948,662
"Bacillus-derived transglutaminase"
(1999)).
En los últimos años, el grupo de investigación
autor de la presente invención ha realizado asimismo trabajos
previos a nivel bioquímico, sobre la implicación de la TGasa en la
morfogénesis de callos de maíz y su relación con la luz (Bernet,
E., Claparols, I., Dondini, L., Santos, M.A.,
Serafini-Fracassini, D. & Torné, J.Mª. 1999.
Changes in polyamine content, arginine and ornithine decarboxylases
and transglutaminase activities during light/dark phases (of initial
differentiation) in maize calluses and their chloroplast. Plant
Physiol Biochem. 37(12):899-909). Además,
recientemente se ha publicado la inmunolocalización de este enzima
en distintos sistemas celulares de maíz, en relación con el
desarrollo de los cloroplastos (Villalobos, E., Torné, J.M., Ollés,
C., Claparols, I. & Santos, M.A. 2001. Subcellular localization
of a transglutaminase related to grana development in different
maize cell types. Protoplasma. 216:155-163). Sin
embargo, no se han encontrado resultados sobre la identificación
molecular y actividad funcional con transglutaminasas vegetales, por
lo que es de alto interés comercial nuevos conocimientos sobre
dichas transglutaminasas.
La invención se enfrenta con el problema
asociado con la escasez de TGasas de origen vegetal necesarias en
el campo de la manipulación y transformación de alimentos y en el
desarrollo de plantas transgénicas con nuevas capacidades.
La solución proporcionada por esta invención se
basa en que los inventores han identificado unas secuencias de ADN
con actividad TGasa (TGasa; EC2.3.2.13) a partir del maíz. La
actividad TGasa de las proteínas codificadas a partir de dichas
secuencias de ADN se ha puesto de manifiesto en experimentos a
partir de extractos de estas proteínas.
Por tanto, un objeto de esta invención lo
constituyen dichas moléculas de ADN.
Otro objeto adicional de esta invención lo
constituye un vector que comprende, al menos, una de dichas
moléculas de ADN.
Un objeto adicional de esta invención lo
constituye el empleo de dichas moléculas de ADN o de dichos
vectores, para producir células transformadas capaces de expresar
proteínas recombinantes con actividad TGasa, o para introducir
dicha secuencia codificante de una proteína con actividad TGasa en
células de plantas. Las células de microorganismos y las plantas
transgénicas resultantes también constituyen objetos adicionales de
esta invención.
Un objeto adicional de la presente invención lo
constituye las proteínas con actividad TGasa expresadas a partir de
dichas secuencias de ADN y su empleo en la manipulación y
transformación de alimentos.
La invención proporciona una molécula de ADN, en
adelante molécula de ADN de la invención, proveniente de plantas y
codificante de una proteína con actividad TGasa que comprende una
secuencia de nucleótidos seleccionada entre:
- a)
- la secuencia de nucleótidos identificada como SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 3 o un fragmento de la misma; y
- b)
- una secuencia de nucleótidos análoga a la secuencia definida en a),
En el sentido utilizado en esta descripción, el
término "análoga" pretende incluir a cualquier secuencia de
ADN que pueda ser aislada o construida en base a la secuencia de
nucleótidos mostrada en la SEC. ID. NO 1 ó a la SEQ ID NO 3, por
ejemplo, mediante la introducción de sustituciones de nucleótidos
conservativas o no conservativas, incluyendo la inserción de uno o
más nucleótidos, la adición de uno o más nucleótidos en cualquiera
de los extremos de la molécula o la deleción de uno o más
nucleótidos en cualquier extremo o en el interior de la
secuencia.
En general, una molécula de ADN análoga es
sustancialmente homóloga a la secuencia de nucleótidos identificada
como la SEQ. ID. NO: 1 ó SEQ ID NO 3. En el sentido utilizado en
esta descripción, la expresión "sustancialmente homóloga"
significa que las secuencias de nucleótidos en cuestión tienen un
grado de identidad, a nivel de nucleótidos, de, al menos, un 60%,
preferentemente de, al menos un 85%, o más preferentemente de, al
menos, un 95%.
La molécula de ADN de la invención procede de
maíz y puede encontrarse en formas parecidas en otras especies de
plantas superiores, entre otras: arroz, trigo, Arabidopsis, etc,
donde pueden estar de forma natural o en otro caso, también podrían
estar como resultado de un proceso de transformación génica en el
que el organismo transformado reproduzca dichas moléculas de ADN.
La molécula de ADN de la invención puede ser aislada, mediante
técnicas convencionales, a partir del ADN de cualquier planta que la
contenga, mediante el empleo de sondas o de oligonucleótidos,
preparados gracias a la información de la secuencia de nucleótidos
de dicha molécula de ADN, proporcionada en esta invención.
La molécula de ADN de la invención incluye los
fragmentos de la misma que presentan dicha actividad GTasa.
En una realización particular, la molécula de
ADN de la invención es una molécula de ADN de maíz de SEQ ID NO 1 ó
de SEQ ID NO 3.
La molécula de ADN de la invención puede ser
utilizada, en general, en la generación de un vector de expresión,
en adelante vector de expresión de la invención, que permite la
expresión de estas proteínas con actividad TGasa en una amplia gama
de células huésped. En general, el vector de expresión de la
presente invención comprende, al menos, una secuencia de ADN de la
invención y, al menos, un promotor que dirige la transcripción del
gen de interés, al que está operativamente enlazado, y otras
secuencias necesarias o apropiadas para la transcipción del gen de
interés y su regulación adecuada en tiempo y lugar, por ejemplo,
señales de inicio y terminación, sitios de corte, señal de
poliadenilación, origen de replicación, activadores
transcripcionales (enhancers), silenciadores transcripcionales
(silencers), etc. Ejemplos de vectores de expresión apropiados
pueden seleccionarse acuerdo con las condiciones y necesidades de
cada caso concreto entre plásmidos, cromosomas artificiales de
levadura (YACs), cromosomas artificiales de bacteria (BACs),
cromosomas artificiales basados en el bacteriófago P1 (PACs),
cósmidos o virus, que pueden contener, además, un origen bacteriano
o de levadura de replicación para que pueda ser amplificado en
bacterias o levaduras, así como un marcador utilizable para
seleccionar las células transfectadas diferente al gen o genes de
interés. Por tanto, la invención también se refiere a un vector que
comprende una molécula de ADN de la invención. La elección del
vector dependerá de la célula hospedadora en la que se va a
introducir posteriormente. A modo de ejemplo, el vector donde se
introduce dicha secuencia de ADN puede ser un plásmido que, cuando
se introduce en una célula hospedadora, se integra en el genoma de
dicha célula y se replica junto con el cromosoma de la célula
huésped.
El vector de la invención puede ser obtenido por
métodos convencionales conocidos por los técnicos en la materia
(Kovesdi et al. 1997. Curr Opin Biotech
8:583-589 Transgenic Res. 10:83-103;
Coffin et al. 1998. Retroviruses, CSHLP; Robbins et
al. 1998. Trends Biotech. 16:35-40; Anderson.
1998. Nature 392:25-30; Schindelhauer. 1999.
BioEssays 21:76-83). Un objeto particular de la
presente invención lo constituye los plásmidos pGEMT15 y el pGEMT21
que contienen las SEQ ID NO 1 y SEQ ID NO 3, respectivamente.
La invención también proporciona una célula que
comprende una molécula de ADN o vector de expresión de la
invención. Las células hospedadoras que se pueden transformar con
dicho vector de expresión pueden ser, por ejemplo, células
bacterianas y levaduras GRAS. Estas células que contienen el vector
de expresión de la presente invención pueden ser utilizadas para la
sobreproducción de las proteínas con actividad TGasa codificadas por
la molécula de ADN de la presente invención. Un objeto particular
de la presente invención lo constituye una proteína con actividad
TGasa, entre otras, con una secuencia de aminoácidos según se
describe en la SEQ ID NO 2 y SEQ ID NO 4.
Estos resultados permiten abrir nuevas
posibilidades de transformar un sistema bacteriano GRAS (Generally
Recognized as Safe) o una levadura que serviría, a través de la
expresión heteróloga, para producir las mencionadas nuevas
proteínas TGasas. Como se ha indicado anteriormente una proteína con
actividad TGasa puede ser utlizada en múltiples procesos de
manipulación, procesamiento y transformación de alimentos gracias a
su capacidad de crear uniones covalentes entre proteínas distintas.
Esta propiedad se ha usado por ejemplo para mantener la textura de
alimentos como pescado y carnes, reduciendo la necesidad de utilizar
sales vease patente US5928689 "Method for treating PSE meat with
transglutaminase", WO0162888 "Improved composition of marine
product"; para la formulación de gelatinas de distinta densidad;
para preparar cocinados con menos grasas (tofú) vease US 6342256
"Tofu products excellent in freeze resistance and process for
producing the same", US6042851 "Process for producing packed
tofu". También es capaz de mantener la consistencia, elasticidad,
humedad o viscosidad de un producto en diferentes temperaturas. Se
usa asimismo en distintos procesados lácticos: quesos (US6270814
"Incorporation of whey into process cheese", solicitud
US20010053398 "Cheese whey protein having improved texture
process for producing the same and use thereof"), yogures,
helados, mayonesas, salsas y en la producción de fideos (EP0948905
"Enzyme preparations comprising transglutaminase and process for
producing noodles", US6106887 "Process for obtaining a
modified cereal flour"), de chocolate (US6063408 "Process for
producing chocolate"), de productos derivados a partir de patata
(solicitud US20020004085 "Methods for producing potato
products"), de azúcar (JP2000354498 "Production of sugar from
cereal flour material by transglutaminase treatment"). Los
distintos usos, entre otros, descritos en las patentes anteriores
para las TGasas son ejemplos de los potenciales usos de las TGasas
de la presente invención. Por lo tanto, un objeto particular de la
presente invención es la utilización de las proteínas con actividad
TGasa de la presente invención, entre otras, las proteínas SEQ ID
NO 2 y SEQ ID NO 4, o soluciones que las contengan, en la
manipulación, preparación y transformación de alimentos. A
continuación se indica como ejemplo de las aplicaciones de las
proteínas con actividad TGasa de la presente invención la revisión
de Chiya Kuraishi et al, 2001 (Transglutaminase: Its
utilization in the food industry Food Reviews International 17
(2):221-246).
Finalmente, existen otras aplicaciones distintas
de las comentadas anteriormente de las proteínas con actividad
TGasa de la presente invención y de las que se indican como
ilustración de dichas aplicaciones las siguientes patentes, entre
otras:
-"Method for enzymatic treatment of wool"
Patente USA. Appl. Nº 161824 (1998) MacDevitt et al, April
2000.
-"Enzymatically protein encapsulating oil
particles by complex coacervation" Appl. Nº 791953 (1997). Soper,
Jon C. Et al. March 2000.
-"Cross-linked gelatin gels
and methods of making them" Appl. Nº 641463 (1996) Bishop, P.D.
et al. ZymoGenetics, Inc.(Seattle, WA. USA).
-"Process for obtaining a modified cereal
flour" Appl. Nº 977575 Ajinomoto Co. Inc (Tokyo JP). Yamazaki
et al. August 2000.
-"Microbial transglutaminase, their production
and use" Appl. Nº 294565, (1999). NovoNordisk A/S (Bagsvaerd, DK)
Bech et al. Feb. 2001.
Además, la molécula de ADN o vector de expresión
de la invención pueden emplearse en procedimientos de transformación
genética de plantas con finalidades tanto de investigación
fundamental y en el desarrollo de plantas transgénicas con nuevas
capacidades provocadas por la manipulación de las funciones
atribuidas a dicha TGasa (crecimiento y desarrollo de la planta,
morfogénesis, fotosíntesis y muerte celular) mediante la alteración
de la expresión de dichas proteínas.
\vskip1.000000\baselineskip
Figura 1.- Actividad TGasa (medida en pmol de
Put incorporada) de un extracto proteico correspondiente a cada uno
de los productos de lisis fágica descrito en el apartado de
metodología, correspondientes a los fagos positivos f1 y f2 (que
contienen un distinto cDNA de TGasa de maíz: f1 = SEQ 1D NO 1 y f2
= SEQ 1D NO 3) y al fago negativo f3 (que no contiene ningún cDNA de
TGasa). Además, se muestra el efecto de distintos factores que
influyen sobre la actividad TGasa de los extractos, descritos como
propios de dicha actividad enzimática TGasa en otros sistemas:
Calcio = el extracto proteico y en ausencia de calcio.
GTP = adición de 1 mM de GTP. MDC = adición de 1 mM
de MDC.
Figura 2.- Actividad de los dos extractos
proteicos correspondientes a los dos fagos independientes que
contienen los dos cDNA de la TGasa (f1 = SEQ 1D Nº 1; f2 = SEQ 1D Nº
2), frente a un fago que no contiene ninguno de estos cDNA (f3), con
respecto a la cantidad de proteína del ensayo. La actividad se mide
en miliunidades (mU) de TGasa, por incorporación de
biotincadaverina, como se describe en el apartado de
metodología.
a = 40 mg proteína/ml. b = 60 mg prot/ml. c = 80
mg prot./ml.
\vskip1.000000\baselineskip
Los cDNA de la presente invención, fueron
aislados a partir de un banco de expresión de cDNA, en
Lambda-ZAP II®, construida con las dianas EcoRI y
XhoI, partiendo de ARN mensajero de plántulas de dos semanas de edad
de Zea mays subsp. mays, cultivar homocigoto B73,
creciendo bajo condiciones de invernadero (donada por la Dra. Alice
Barkan, de la Universidad de Oregon, USA).
Se utilizó como antígeno una transglutaminasa
vegetal de 58 kDa purificada a partir de extractos de cloroplastos
de hojas de Helianthus tuberosus. Se obtuvo un anticuerpo
policlonal en gallina (Villalobos, E., Torné, J.M., Ollés, C.,
Claparols, I. & Santos, M.A. 2001. Subcellular localization of a
transglutaminase related to grana development in different maize
cell types. Protoplasma. 216:155-163). La
especificidad del anticuerpo se determinó por la técnica de "dot
blot", utilizando transglutaminasa comercial de hígado de cerdo,
así como por western blot con proteína purificada (Dondini, L. 1998.
Poliammine legate e transglutaminasi nelle plante. PhD tesis.
Universidad de Bolonia. Italia). La titulación se realizó mediante
la técnica de western blot. (La metodología completa se detalla en
nuestro trabajo: Villalobos, E., Torné, J.M., Ollés, C., Claparols,
I. & Santos, M.A. 2001. Subcellular localization of a
transglutaminase related to grana development in different maize
cell types. Protoplasma. 216:155-163).
Una vez conocido el título del banco utilizado,
se inocula una colonia de la cepa XL-Blue® en medio
LB líquido conteniendo MgSO4 (1M) y maltosa al 20%.
Después de cultivar las bacterias hasta alcanzar
una DO de 2,0 (600 nm), se realiza la mezcla del cultivo bacteriano
con 4,5 x 10^{4} pfu de la librería, a la que se añade IPTG 10 mM.
Después de la infección e inoculación en placas con el medio LB + 10
mM de MgSO4, se coloca sobre ellas un disco de nitrocelulosa
saturado con 10 mM de IPTG. Después de incubar las placas con el
filtro durante 4 horas, se enfrían y se lava el filtro con PBS.
Finalmente, una vez bloqueada la membrana con leche desnatada o BSA,
se procede al revelado y marcado con anticuerpo. Para detectar las
lisis donde se encuentran los fagos positivos que han de
interaccionar con el anticuerpo contra la Transglutaminasa de H.
tuberosus, se realiza un análisis western blot de dicha membrana
y se revela en placa fotográfica, mediante el reactivo ECL.
Una vez aislados y purificados los dos fagos,
que contienen los cDNAs que codifican respectivamente para una
proteína que interacciona con el anticuerpo, se procede a su
excisión mediante el sistema "ExAssist^{TM}
Interference-Resistant Helper Phage
(Stratagene)". La coinfección se realizó en cepas
XL1-Blue y la infección en cepas XLOLR®. El plaqueo
se realiza en un medio selectivo que determina el vector utilizado
(pBluescript). En nuestro caso, el medio de cultivo que selecciona
las colonias transformantes es LB-agar adicionado
con Ampicilina (50 \mug/ml), IPTG 1 mM y el sustrato
X-Gal (40 \mug/ml), del enzima
\beta-galactosidasa, cuyo gen es interrumpido por
el inserto o cDNA.
Para cada excisión, el aislamiento del ADN
plasmídico, que contiene el cDNA de interés, se realiza mediante la
técnica de MINIPREP a pequeña escala de la lisis bacteriana
utilizando SDS y NaOH, neutralizada con acetato de potasio, y
purificada con una mezcla de
fenol:cloroformo:isoamil-alcohol (25:24:1) y
precipitando con etanol. Posteriormente se resuspende en Tampón TE
1X adicionado con el enzima ARNasa.
En cada caso, la comprobación de la presencia
del inserto en el pBluescript se realiza mediante digestiones de
una muestra del ADN plasmídico, obtenido con las mismas enzimas
endonucleasas con las que se construyó el banco (EcoRI y XhoI). La
digestión se realiza según los requerimientos de cada enzima de
restricción (Tampón y temperatura). Una vez realizada la digestión,
el cDNA o inserto ha quedado liberado del vector. Esto se verifica
con una electroforesis convencional en gel de agarosa 0.5% en Tampón
TBE 1X o TAE 1X.
Una vez identificadas las muestras de las
minipreparaciones que contienen los cDNA de interés, que resultaron
ser dos en nuestro caso, se precipitan y purifican mediante el uso
de la mezcla de fenol, cloroformo y alcohol isoamílico y cloroformo
puro antes del proceso de secuenciación. Las muestras a secuenciar
se disolvieron en agua.
Las excisiones de los dos fagos en pBluescript
SK-, permitieron obtener dos cDNA parciales cuya secuencia
codificante completa se definió mediante la técnica de RACE. Para
ello, a partir de ARN total extraído de hoja de maíz, se obtiene el
ARN mensajero purificado por columna de polydT, el cual se emplea
como molde para la síntesis de ADN de cadena sencilla. Para ello,
se utiliza un oligonucleótido específico deducido de la secuencia
de cDNA conocida (el oligo E1, 3'-5':
GATTCTCCCTGATAAG, SEQ ID NO 5) y el enzima transcriptasa inversa.
Después de añadir al ADN de cadena sencilla una cola de poliT
mediante el enzima "terminal deoxytransferase" (TdT), se
procede a obtener la segunda cadena de ADN. Esto se realiza mediante
la técnica de PCR utilizando el oligonucleótido 5' RACE Abridged
Anchor Primer (GIBCO BRL®), específico para ADN con cola de poliT
(oligo ANCHOR 5'-3':
GGCCAGGCGTC
GACTAGTACGGGIIGGGIIGGGIIG, SEQ ID NO 6) y un segundo oligonucleótido específico del cDNA parcial de secuencia conocida, detallado anteriormente, y que corresponde al oligo E2 3'-5': GTTCTCCAGCATCTCCAG, SEQ ID NO 7).
GACTAGTACGGGIIGGGIIGGGIIG, SEQ ID NO 6) y un segundo oligonucleótido específico del cDNA parcial de secuencia conocida, detallado anteriormente, y que corresponde al oligo E2 3'-5': GTTCTCCAGCATCTCCAG, SEQ ID NO 7).
Con los subsiguientes ciclos de PCR se amplifica
dicho ADN. La secuencia de los ciclos fue la siguiente: primero 2
minutos a 94ºC y seguidamente 34 ciclos de: 30 segundos a 94ºC, 30
segundos a 46ºC para el oligo nº 1, pero 30 segundos a 60ºC para el
oligo nº 2, seguidos en ambos casos de 7 minutos a 72ºC. Finalmente
se deja unas horas a 5ºC.
El producto de PCR se clona en un vector
adecuado (como es el pGEMT), utilizando el enzima ligasa. A
continuación, se transforman cepas de E. coli del tipo
DH5-alfa y se crecen las bacterias en un medio
selectivo. Se extrae el ADN plasmídico mediante la técnica de
Miniprep, ya descrita, se purifica y se secuencia el fragmento
obtenido. En nuestro caso, para ambas secuencias parciales de cDNA,
el fragmento necesario para completar la secuencia codificante
resultó ser de solo cuatro nucleótidos. Las secuencias codificantes
completas de nucleótidos, incluyendo los cuatro nucleotidos
obtenidos con la técnica RACE, se encuentran descritas en la SEQ ID
NO 1 y SEQ ID NO 3, respectivamente. Los vectores de expresión
conteniendo las secuencias SEQ ID NO 1 y SEQ ID NO 3 y utilizados
para la transformación de las células huésped son el plásmido
pGEMT15 y el pGEMT21, respectiva-
mente.
mente.
Las secuencias de aminoácidos obtenidas a partir
de las secuencias de nucleótidos presentan homologías con los
dominios del centro activo tipo transglutaminasa de otros sistemas
descritos, no vegetales, en la zona correspondiente a los
aminoácidos: 431-474 para la proteína de SEQ ID NO 2
(60,97 kDa) y 485-528 para la proteína de SEQ ID NO
4 (67 kDa). En estas zonas se encuentra en ambos casos una cisteína
(Cys) descrita como aminoácido esencial para la actividad del
enzima (Cys439 en SEQ ID NO 2 y Cys493 en SEQ ID NO 4). Base de
Datos consultada: www.ncbi.nlm.nih/). Además, como se indican en
las secuencias SEQ ID NO 1 y SEQ ID NO 3 se observan unas regiones
de 27 nucleótidos repetidas en tandem en ambas secuencias, SEQ ID NO
1 y SEQ ID NO 3, aunque en número distinto, de 15 y 21
repeticiones, respectivamente y con pequeñas variaciones de
nucleotidos entre algunas de ellas. Hay que destacar que estas
mencionadas regiones repetidas no se han descrito anteriormente en
las TGasas conocidas, por lo que son características de la molécula
de ADN de la presente invención.
Con cada uno de los dos clones de los fagos
conteniendo los cDNA de interés, se infecta un cultivo de E.
coli (cepa XL-Blue), en medio de cultivo LB
líquido, al que se añade IPTG 10 mM. Después de la lisis a 37ºC, se
cuantifica por el método de Lowry la concentración de proteína total
del extracto (Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr, AL& Randall RJ.
1951. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. Biol.
Chem. 193:265-275) y con él se realizan los ensayos
descritos a continuación, para determinar su actividad
transglutaminasa frente a un extracto de lisis con un fago que no
contiene el cDNA de interés.
Se prepara un extracto enzimático con cada uno
de los extractos de lisis obtenidos con ambos fagos (f1 que contiene
la TGasa de SEQ ID NO 2 y f2 que contiene la TGasa de SQ ID NO 4),
en una concentración de proteínas totales de 600 \mug, y se
realiza un ensayo enzimático a 30ºC durante 30 minutos. La mezcla
enzimática contiene, además del extracto proteico, 0.6 mM de
putrescina, 185 kBq de putrescina tritiada (0.85 TBq/nmol), 20 mM de
tampón Tris.ClH pH 8 y 3 mM de CaCl_{2}. La reacción se bloquea
con ácido tricloracético al 10% conteniendo 2 mM de putrescina. Las
muestras se precipitan repetidamente y se mide la radioactividad del
pellet (Bernet, E., Claparols, I., Dondini, L., Santos, M.A.,
Serafini-Fracassini, D. & Torné, J.Mª. 1999).
Changes in polyamine content, arginine and ornithine decarboxylases
and transglutaminase activities during light/dark phases (of
initial differentiation) in maize calluses and their chloroplast.
Plant Physiol Biochem. 37(12):899-909). La
actividad TGasa se mide en pmols de putrescina por miligramo de
proteína y por hora y fue mayor en los extratos proteicos obtenidos
de los fagos f1 y f2 con respecto al extracto a partir de un fago
que no contiene ninguno de los cDNA de estas TGasa.
Este ensayo consiste en un kit suministrado por
la empresa Covalab®, que determina, a partir de pequeñas cantidades
de proteína total, la actividad TGasa de la muestra, frente a la de
una TGasa comercial de hígado de cerdo. El método detecta los
glutamil-derivados formados a partir del péptido y
de la poliamina sustrato, por actividad TGasa de la muestra,
mediante un ensayo colorimétrico. La actividad se mide en Unidades
de TGasa (U), considerando que 0.6 mU de TGasa comercial corresponde
a un valor de absorbancia a 450 nm de 1 \pm 0.05 OD.
Los dos extractos proteicos correspondientes a
los dos productos de lisis, muestran actividad tipo TGasa en los
dos métodos de detección de dicha actividad utilizados y descritos
anteriormente (f1 y f2) en comparación con el extracto proveniente
de un fago que no contiene ninguno de estos cDNA (f3). Los datos se
muestran en las Figuras 1 y 2.
Además, en la Figura 1 se muestra el efecto de
distintos factores sobre la actividad TGasa de los extractos,
descritos como propios de dicha actividad enzimática TGasa en otros
sistemas. Así, la actividad de la proteína expresada disminuye
significativamente: a] en ausencia de calcio, b] en presencia de 1
mM de GTP, c] en presencia de 1 mM denodansilcadaverina (MDC) y d]
en el extracto de lisis con un fago que no posee el cDNA de interés
(f3).
\newpage
Un par cultivos de la bacteria derivada de
Escherichia coli, tipo dH5\alpha, transformadas con un
plásmido (pBlueScript) que contiene un cDNA de maíz y portadoras de
un plásmido que contiene el gen que codifica la proteína de
secuencia SEQ ID NO 2 y SEQ ID NO 4 de maíz respectivamente,
identificados como 15TGZM02 y 21TGZM02, han sido depositados en la
Colección Española de Cultivos Tipo (CECT), Universidad de Valencia,
Edificio de Investigación, Campus de Burjasot, 46100 Burjasot,
Valencia, España, el ¿7? de Mayo de 2002, correspondiéndoles el
número de depósito CECT: 5705 para 15TGZM02 y 5706 para 21TGZM02,
respectivamente.
Claims (12)
1. Secuencia de nucleótidos codificante de una
proteína con actividad TGasa caracterizada porque proviene
del maíz.
2. Secuencia de nucleótidos según la
reivindicación 1 caracterizada por la SEQ ID NO 1.
3. Secuencia de nucleótidos según la
reivindicación 1 caracterizada por la SEQ ID NO 3.
4. Secuencia de nucleótidos caracterizada
porque presenta, con respecto a una secuencia de nucleótidos según
una cualquiera de las reivindicaciones 1 a la 3, un grado de
identidad, a nivel de nucleótidos, de, al menos, un 60%,
preferentemente de, al menos un 85%, o más preferentemente de, al
menos, un 95%.y porque codifica una proteína con actividad
Tgasa.
5. Vector de expresión caracterizado
porque contiene una secuencia de nucleótidos según una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a la 4.
6. Vector de expresión según la reivindicación 5
caracterizado porque pertenece, entre otros, al siguiente
grupo: plásmido pGEMT15 y el pGEMT21.
7. Proteína con actividad TGasa
caracterizada porqué está codificada por una secuencia de
nucleótidos según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a la
4.
8. Proteína con actividad TGasa según la
reivindicación 7 caracterizada porque pertenece, entre otras,
al siguiente grupo: SEQ ID NO 2 y SEQ ID NO 4.
9. Célula transformada caracterizada
porque contiene un vector de expresión según una cualquiera de las
reivindicaciones 5 y 6 y porque permite la expresión de proteínas
con actividad TGasa, entre otras, las cepas E. coli CECT
5705 y 5706.
10. Uso de la célula transformada según la
reivindicación 9 en procedimientos para la producción de proteína
recombinante con actividad TGasa según una cualquiera de las
reivindicaciones 7 y 8.
11. Uso de la proteína con actividad TGasa según
una cualquiera de las reivindicaciones 7 y 8 en la manipulación,
procesamiento y transformación de alimentos, entre otros procesos,
para mantener o mejorar la textura, consistencia, elasticidad,
humedad o viscosidad de alimentos como pescado, queso, yogures,
helados, mayonesas y carnes, para la formulación de gelatinas de
distinta densidad y para preparar cocinados con menos grasas.
12. Uso de los vectores de expresión según las
reivindicaciones 5 y 6 en el desarrollo de plantas transgénicas con
nuevas capacidades provocadas por la manipulación de las funciones
atribuidas a dicha TGasa, entre otras, crecimiento y desarrollo de
la planta, morfogénesis, fotosíntesis y muerte celular.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES200201253 | 2002-05-31 | ||
ES200201253A ES2223227B1 (es) | 2002-05-31 | 2002-05-31 | Secuencia de nucleotidos de maiz codificante de una proteina con actividad transglutaminasa, y su uso. |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2286430T3 true ES2286430T3 (es) | 2007-12-01 |
Family
ID=29595112
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES200201253A Expired - Fee Related ES2223227B1 (es) | 2002-05-31 | 2002-05-31 | Secuencia de nucleotidos de maiz codificante de una proteina con actividad transglutaminasa, y su uso. |
ES03725225T Expired - Lifetime ES2286430T3 (es) | 2002-05-31 | 2003-05-23 | Secuencia de nucledcotidos de maiz codificante de una proteina con actividad transglutaminasa, y su uso. |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES200201253A Expired - Fee Related ES2223227B1 (es) | 2002-05-31 | 2002-05-31 | Secuencia de nucleotidos de maiz codificante de una proteina con actividad transglutaminasa, y su uso. |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7262057B2 (es) |
EP (1) | EP1535992B1 (es) |
JP (1) | JP2005528104A (es) |
CN (1) | CN1329515C (es) |
AT (1) | ATE360681T1 (es) |
AU (1) | AU2003227778A1 (es) |
DE (1) | DE60313469T2 (es) |
ES (2) | ES2223227B1 (es) |
MX (1) | MXPA04011918A (es) |
WO (1) | WO2003102128A1 (es) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ITBO20020714A1 (it) * | 2002-11-13 | 2004-05-14 | Plantechno Srl | Farine ad uso alimentare con specifiche caratteristiche tecnologiche a bassa allergenicita'. |
MX2010013622A (es) | 2008-06-26 | 2011-02-15 | Basf Plant Science Gmbh | Plantas que tienen rasgos mejorados relacionados con el rendimiento y un metodo para obtenerlas. |
Family Cites Families (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0665280B2 (ja) | 1987-03-04 | 1994-08-24 | 味の素株式会社 | タンパクゲル化剤及びそれを用いるタンパクのゲル化方法 |
EP0555649B1 (en) * | 1992-01-14 | 2004-12-08 | Ajinomoto Co., Inc. | Gene encoding transglutaminase derived from fish |
AU5590394A (en) | 1992-11-03 | 1994-05-24 | Oklahoma Medical Research Foundation | Transglutaminase gene |
US5549904A (en) | 1993-06-03 | 1996-08-27 | Orthogene, Inc. | Biological adhesive composition and method of promoting adhesion between tissue surfaces |
JP3758187B2 (ja) | 1994-01-28 | 2006-03-22 | 味の素株式会社 | マガキ由来のトランスグルタミナーゼ |
JP3720363B2 (ja) | 1994-08-26 | 2005-11-24 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 微生物のトランスグルタミナーゼ、それらの産生及び使用 |
JP3669390B2 (ja) | 1995-02-09 | 2005-07-06 | 味の素株式会社 | バチルス属細菌由来のトランスグルタミナーゼ |
CN1230529C (zh) * | 1995-02-09 | 2005-12-07 | 味之素株式会社 | 杆菌衍生的转谷氨酰胺酶 |
JP3637718B2 (ja) | 1996-04-10 | 2005-04-13 | 味の素株式会社 | チョコレートの製造方法 |
US5834232A (en) | 1996-05-01 | 1998-11-10 | Zymogenetics, Inc. | Cross-linked gelatin gels and methods of making them |
US5928689A (en) | 1996-06-05 | 1999-07-27 | Kraft Foods, Inc. | Method for treating PSE meat with transglutaminase |
JP3582265B2 (ja) | 1996-11-28 | 2004-10-27 | 味の素株式会社 | 改質穀粉及びこれを使用した穀粉加工食品 |
US6039901A (en) | 1997-01-31 | 2000-03-21 | Givaudan Roure Flavors Corporation | Enzymatically protein encapsulating oil particles by complex coacervation |
EP0889133B1 (en) * | 1997-07-04 | 2004-03-10 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing microbial transglutaminase |
US6042851A (en) | 1997-12-03 | 2000-03-28 | Kikkoman Corporation | Process for producing packed tofu |
JP3867261B2 (ja) | 1998-04-08 | 2007-01-10 | 味の素株式会社 | 酵素製剤及び麺類の製造方法 |
EP1088128A1 (en) | 1998-05-20 | 2001-04-04 | Novo Nordisk Biochem North America, Inc. | A method for enzymatic treatment of wool |
JP3733748B2 (ja) | 1998-06-24 | 2006-01-11 | 味の素株式会社 | 食感が改善されたチーズホエイ蛋白、その製造方法及びその利用 |
CN1121823C (zh) | 1998-10-13 | 2003-09-24 | 不二制油株式会社 | 具有优异抗冻性的豆腐制品及其制备方法 |
CA2356597A1 (en) * | 1998-12-28 | 2000-07-13 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing transglutaminase |
US20090087878A9 (en) * | 1999-05-06 | 2009-04-02 | La Rosa Thomas J | Nucleic acid molecules associated with plants |
US6270814B1 (en) | 1999-06-03 | 2001-08-07 | Kraft Foods, Inc. | Incorporation of whey into process cheese |
JP2000354498A (ja) | 1999-06-14 | 2000-12-26 | Ajinomoto Co Inc | トランスグルタミナーゼ処理による穀粉原料からの糖類の製造方法 |
WO2001062888A2 (en) | 2000-02-23 | 2001-08-30 | Hindustan Lever Limited | Improved composition of marine product |
EP1276389A2 (en) | 2000-04-14 | 2003-01-22 | Novozymes Biotech, Inc. | Enzymatic treatment of potato products |
-
2002
- 2002-05-31 ES ES200201253A patent/ES2223227B1/es not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-05-23 DE DE60313469T patent/DE60313469T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2003-05-23 WO PCT/ES2003/000247 patent/WO2003102128A1/es active IP Right Grant
- 2003-05-23 CN CNB038175525A patent/CN1329515C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-05-23 MX MXPA04011918A patent/MXPA04011918A/es active IP Right Grant
- 2003-05-23 AT AT03725225T patent/ATE360681T1/de not_active IP Right Cessation
- 2003-05-23 ES ES03725225T patent/ES2286430T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-05-23 EP EP03725225A patent/EP1535992B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-05-23 AU AU2003227778A patent/AU2003227778A1/en not_active Abandoned
- 2003-05-23 JP JP2004510370A patent/JP2005528104A/ja active Pending
-
2004
- 2004-11-30 US US11/000,530 patent/US7262057B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-08-27 US US11/895,752 patent/US20100092606A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2003227778A1 (en) | 2003-12-19 |
DE60313469T2 (de) | 2008-01-03 |
EP1535992B1 (en) | 2007-04-25 |
ATE360681T1 (de) | 2007-05-15 |
JP2005528104A (ja) | 2005-09-22 |
ES2223227A1 (es) | 2005-02-16 |
WO2003102128A1 (es) | 2003-12-11 |
US20060005266A1 (en) | 2006-01-05 |
MXPA04011918A (es) | 2005-03-31 |
EP1535992A1 (en) | 2005-06-01 |
US7262057B2 (en) | 2007-08-28 |
DE60313469D1 (de) | 2007-06-06 |
CN1671846A (zh) | 2005-09-21 |
US20100092606A1 (en) | 2010-04-15 |
CN1329515C (zh) | 2007-08-01 |
ES2223227B1 (es) | 2006-04-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
von Schaewen et al. | Molecular characterization of the plastidic glucose-6-phosphate dehydrogenase from potato in comparison to its cytosolic counterpart | |
KR20210089629A (ko) | Rna-가이드된 뉴클레아제 및 그의 활성 단편 및 변이체 및 사용 방법 | |
EP0555649B1 (en) | Gene encoding transglutaminase derived from fish | |
JPH05508774A (ja) | 植物中の増加された澱粉含量 | |
JP5774809B2 (ja) | 種子収量が向上した植物 | |
Luciano et al. | Use of transglutaminases in foods and potential utilization of plants as a transglutaminase source–Review | |
ES2543130T3 (es) | Transferasas, epimerasas, polinucleótidos que las codifican y usos de los mismos | |
Haslam et al. | Arabidopsis ECERIFERUM2-LIKEs are mediators of condensing enzyme function | |
BRPI0610816A2 (pt) | semente e planta de milho transgênicas, método de produzir a referida planta, farinha de milho com proteìna aumentada e alimento | |
Arikado et al. | Enzyme level of enterococcal F1Fo‐ATPase is regulated by pH at the step of assembly | |
Peng et al. | CsAKT1 is a key gene for the CeO 2 nanoparticle's improved cucumber salt tolerance: a validation from CRISPR-Cas9 lines | |
WO2019101179A1 (zh) | 抗除草剂基因及其在植物育种中的应用 | |
ES2286430T3 (es) | Secuencia de nucledcotidos de maiz codificante de una proteina con actividad transglutaminasa, y su uso. | |
TW201106867A (en) | Genetically purified gellan gum | |
CN109337884B9 (zh) | 一种丙酮酸激酶基因及其应用 | |
KR20170011474A (ko) | 플라보놀 합성 유전자 및 이로 형질전환된 형질전환 식물 | |
Snowden et al. | In vivo analysis of the lumenal binding protein (BiP) reveals multiple functions of its ATPase domain | |
CN109912704A (zh) | 玉米锌指结合蛋白互作因子基因Actin及其重组表达载体和应用 | |
AU750970B2 (en) | HVD1 gene induced by salt stress | |
Wang et al. | Overexpression of cphA gene from Nostoc flagelliforme improves the drought tolerance of Arabidopsis thaliana | |
Akter et al. | Expression of Curculin, a New Type of Alternative Sweetener in Transgenic Rice | |
RU2771826C2 (ru) | Новые ферменты crispr и системы | |
US20040068769A1 (en) | Enhancement of freezing tolerance in transgenic plants | |
WO2024042489A1 (en) | Chemical modification of guide rnas with locked nucleic acid for rna guided nuclease-mediated gene editing | |
JP2003199582A (ja) | 植物由来のプロモーター |