ES2284469T3 - Compuestos peptidomimeticos que contienen la secuencia rgd utiles como inhibidores de integrinas. - Google Patents
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Abstract
Compuestos de fórmula (I) en la que n es el número 0, 1 ó 2, Arg es el aminoácido L-arginina, Gly es el aminoácido glicina y Asp es el aminoácido ácido L-aspártico y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, sus racematos, diastereoisómeros y enantiómeros individuales.
Description
Compuestos peptidomiméticos que contienen la
secuencia RGD útiles como inhibidores de integrinas.
La presente invención se refiere a compuestos
peptidomiméticos cíclicos, en particular a compuestos
peptidomiméticos cíclicos que tienen estructura de azabicicloalcano
y que contienen la secuencia RGD
(Arg-Gly-Asp). Dichos compuestos
tienen acción inhibidora sobre el receptor
\alpha_{v}\beta_{3} de la familia de las integrinas. Los
compuestos de la presente invención están dotados de propiedades
antiangiogénicas, por tanto son útiles como medicamentos,
preferiblemente para el tratamiento de tumores.
La primera molécula con actividad
antiangiogénica se descubrió en 1975 por Henry Brem y Judah Folkman
en tejidos cartilaginosos.
En los años 80, se encontró que el interferón
(\alpha/\beta) es eficaz para inhibir la angiogénesis
tumoral.
En 1998, se publicó ampliamente, también en los
medios, que la angiostatina y la endostatina descubiertas por J.
Folkman en la Harvard Medicinal School (escuela de medicina Harvard)
y Boston Children's Hospital (hospital infantil de Boston) estaban
dando resultados muy esperanzadores en el tratamiento de
tumores.
Hasta la fecha, se someten a prueba
aproximadamente 30 moléculas en ensayos clínicos (fase
I-III).
De estas 30 moléculas, solamente dos fármacos,
de los que uno es un anticuerpo, están en ensayos clínicos para
determinar su actividad para inhibir las integrinas específicas del
endotelio.
Se calcula que solamente en los EE.UU.,
aproximadamente 9 millones de pacientes podrían beneficiarse de un
tratamiento antiangiogénico.
Recientemente, la FDA ha aprobado ensayos
clínicos para la combinación de IL-10 con talidomida
y metoxiestradiol.
La angiogénesis se entiende como la formación de
nuevos vasos sanguíneos capilares. Este fenómeno natural está
implicado tanto en procesos fisiológicos, tales como la
reproducción, como en acontecimientos patológicos, tales como
cicatrización, artritis y vascularización tumoral.
Se ha identificado que varios factores de
crecimiento pueden promover la angiogénesis, a través de la
inducción directa de la proliferación y/o quimiotaxis de células
endoteliales. Otros factores, en cambio, actúan indirectamente,
estimulando otros tipos de células (mastocitos, macrófagos), que, a
su vez, producen factores angiogénicos. La presencia de factores de
crecimiento, tales como bFGF y VEGF, cerca de una red capilar en
reposo, sugería que la angiogénesis puede ser la consecuencia de un
desequilibrio entre factores pro y antiangiogénicos.
En los últimos años, se informó de que el
crecimiento tumoral y la formación de metástasis dependen
estrictamente del desarrollo de nuevos vasos que pueden
vascularizar la masa tumoral.
Los médicos desean fuertemente un tratamiento
tumoral antiangiogénico por las siguientes razones:
- especificidad: el objetivo es la
neovascularización tumoral;
- biodisponibilidad: el agente antiangiogénico
se dirige hacia las células endoteliales, alcanzadas fácilmente sin
los problemas bien conocidos de la quimioterapia, que se dirige
sobre la célula tumoral;
- quimiorresistencia: ésta es la ventaja más
sorprendente, de hecho, las células endoteliales son genéticamente
estables y es bastante difícil observar resistencia a los
fármacos;
- el bloqueo angiogénico evita que las células
metastásicas se difundan a través de la circulación sanguínea;
- apoptosis: el bloqueo de la angiogénesis hace
que la célula tumoral experimente falta de oxígeno y nutrición,
induciendo así la apoptosis;
- tratamiento antiangiogénico no ocasiona
efectos secundarios típicos de la quimioterapia.
Los factores endógenos proangiogénicos conocidos
hasta la fecha son el factor de crecimiento de fibroblastos
ácido/básico (a/bFGF) y factor de crecimiento endotelial vascular
(VEGF), y sus subtipos B y C, angiogenina, factor de crecimiento
endotelial (EGF), factor de crecimiento de células endoteliales
derivado de plaquetas (PD-ECGF), factor de
crecimiento transformante-\alpha
(TGF-\alpha), factor de crecimiento
transformante-\beta
(TGF-\beta), factor de necrosis
tumoral-\alpha (TNF-\alpha).
Los retinoides se someten a prueba como posibles
agentes antiangiogénicos.
Algunos inhibidores de la PK-C,
tales como calfostina-C, ésteres de forbol y
estaurosporina, pueden bloquear la angiogénesis, o bien parcial o
bien totalmente.
Las integrinas son una clase de receptores
implicados en los mecanismos de la adhesión celular y las
alteraciones en la función de estos receptores son responsables de
la aparición de varias manifestaciones patológicas, por ejemplo
desarrollo embriógeno, coagulación sanguínea, osteoporosis,
insuficiencia renal aguda, retinopatía, cáncer, en particular
metástasis. Entre las dianas moleculares implicadas la en
angiogénesis, las integrinas \alpha_{v}\beta_{3} desempeñan
un papel importante en la adhesión, movimiento, crecimiento y
diferenciación de las células endoteliales. Las integrinas
\alpha_{v}\beta_{3} se unen a la secuencia RGD
(Arg-Gly-Asp), que constituye el
dominio de reconocimiento de diferentes proteínas, tales como
laminina, fibronectina y vitronectina. La secuencia RGD representa
el dominio de aminoácidos mínimos, en varias proteínas de matriz
extracelular, que se ha demostrado que es el sitio de unión de la
familia de proteínas integrinas transmembrana (G. Bazzoni, E.
Dejana y M. G. Lampugnani. 1999, Current Opinion in Cell Biology;
(11) págs. 573-581). De hecho, la sustitución de
sólo un único aminoácido de esta secuencia corta da como resultado
la pérdida de actividad de unión a integrinas (F.E. Ali, R. Calvo,
T. Romoff, I. Samanen, A. Nichols. 1990, Peptides: Chemistry.
Structure and Biology (Eds: J.E. Rivier, G.R. Marshall) ESCOM
Science Leiden (Países Bajos) págs. 94-96). En los
últimos años se ha demostrado que el péptido de RGD aislado de
bibliotecas de péptidos en fagos o sintetizado bioquímicamente,
podía competir con las proteínas de matriz extracelular para unirse
a las integrinas (R. Haubner, D. Fisinger y H. Kessler. 1997,
Angew. Chem. Int. Ed. Engl.; (36) págs.
1374-1389).
El papel de la secuencia RGD se describe, por
ejemplo, en Grant et al., J. Cell Physiology, 1992, Saiki
et al., Jpn. J. Cancer Res. 81; 668-75.
Carron et al, 1998, Cancer Res. 1;
58(9):1930-5 describió un tripéptido que
contiene RGD, denominado SC-68448, que puede inhibir
la unión entre la integrina \alpha_{v}\beta_{3} con
vitronectina (CI_{50} = 1 nM). Otros trabajos (Sheu et al.,
1197, BBA; 1336(3):445-54 - Buckle et
al., 1999, Nature 397:534-9) mostraron que los
péptidos de RGD pueden difundirse a través de la membrana celular y
unirse a la proteína caspasa-3, lo que induce la
apoptosis.
Por tanto, la secuencia RGD es la base para el
desarrollo de antagonistas de las diferentes integrinas. Hasta la
fecha, las razones por las que en muchos casos se observa una alta
selectividad por determinadas integrinas no están muy claras,
aunque puede tomarse como explicación una conformación diferente de
la secuencia RGD. Datos recientes demostraron que esta secuencia
está con frecuencia insertada en un giro \beta de tipo II entre
dos láminas \beta que se extienden desde el núcleo de la
proteína.
Por tanto, todavía no se ha satisfecho
totalmente el problema de proporcionar sustancias que tengan alta
selectividad hacia las integrinas.
Existe una restricción estructural para esta
investigación, concretamente, la secuencia RGD debe mantenerse
inalterada, ya que se sabe bien que cualquier modificación en esta
secuencia implica una pérdida de actividad.
Encontrar la estructura correcta que pueda
bloquear la molécula, en una conformación precisa de giro inverso,
que induce una geometría de giro \beta, es muy crítico.
Se conoce bien que el receptor
\alpha_{v}\beta_{3}, un miembro de la familia de las
integrinas, está implicado en la angiogénesis y en la metástasis de
tumores humanos.
La metástasis de varias líneas de células
tumorales, así como la angiogénesis inducida por tumor, pueden
inhibirse mediante anticuerpos o péptidos sintéticos pequeños que
actúan como ligandos para estos receptores (Friedlander et
al.: Science 1995, 270, 1500-1502).
Con el fin de tener una propiedad de inhibición,
todos los péptidos deben contener la secuencia
Arg-Gly-Asp (RGD). A pesar de esta
secuencia RGD, está presente una alta especificidad por el sustrato,
debido a diferentes conformaciones de la secuencia RGD en
diferentes proteínas de matriz (Ruoshlati et al. Science
1987, 238, 491-497). Esta flexibilidad de la parte
RGD en particular es un obstáculo para la determinación de la
conformación bioactiva que ha de usarse en el diseño de fármacos de
estructura-actividad amplia.
Se proporcionó una solución por Haubner et
al. (J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 7881-7891)
insertando la secuencia RGD en una estructura peptídica rígida,
cíclica. La selección espacial condujo al péptido de primera
generación sumamente activo c(RGDfV)
(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val
cíclico; documento WO 97/06791), que muestra una disposición
\betaII'/giro \gamma. Una reducción de la flexibilidad es un
objetivo técnico que ha de conseguirse con el fin de obtener
antagonistas de integrinas. Debido a la amplitud de la familia de
las integrinas y al número de actividades fisiológicas diferentes
de dichas integrinas, es sumamente deseable obtener principios
activos que tengan una acción inhibidora sumamente selectiva.
Una solución propuesta en la técnica fue
introducir en la estructura peptidomimética un elemento estructural
rígido (miméticos de giro).
A pesar de diferentes intentos y varias
estructuras propuestas, Haubner et al. (J. Am. Chem. Soc.
1996, 118, 7881-7891), identificaron una estructura
de "espiro" de RGD que puede proporcionar la disposición
\betaII'/giro \gamma deseada. En realidad, en este trabajo se
permiten cuatro estructuras diferentes: un derivado de
(S)-prolina, un derivado de
(R)-prolina, una estructura de tiazabiciclo y una
estructura diaza-espiro-bicíclica.
Se obtuvieron resultados no homogéneos. La estructura de espiro fue
la única que podía adoptar una conformación \betaII'/giro
\gamma, pero carece de actividad biológica. La
(R)-prolina es muy activa, pero menos selectiva. La
(S)-prolina es activa y selectiva. La estructura de
tiazabiciclo es activa, pero tiene la desventaja de ser menos
selectiva.
El documento WO 91/15515 describe péptidos
cíclicos, que contienen también la secuencia RGD, útiles para tratar
la trombosis, a través de la inhibición selectiva del receptor para
la agregación plaquetaria GPIIb/IIa.
El documento WO 92/17492 describe péptidos
cíclicos, que contienen también la secuencia RGD, útiles para tratar
la trombosis, a través de la inhibición selectiva del receptor para
la agregación plaquetaria GPIIb/IIa. Estos péptidos contienen
también un resto exocíclico que contiene nitrógeno cargado
positivamente unido de manera estable al péptido cíclico a través
de un carbonilo. En estas estructuras no está contenido ningún giro
beta.
El documento WO 94/29349 describe un péptido
largo que contiene una parte cíclica de
-Cys-S-S-Cys- para
el tratamiento de un estado de trombosis arterial o venosa. Este
péptido trifuncional combina la inhibición del exositio de unión
tanto catalítica como aniónica de trombina con la inhibición del
receptor GP IIb/IIIa.
Otros péptidos activos en el tratamiento de la
trombosis se describen en el documento WO 95/00544.
El documento WO 97/06791 describe el uso de
c(RGDfV) como inhibidor selectivo de
\alpha_{v}/\gamma_{5} y útil como inhibidor de la
angiogénesis
El documento WO 97/08203 describe péptidos que
contienen RGD circulares, que comprenden el motivo
(/P)DD(G/L)(W/L)(W/L/M).
Los documentos US 5.767.071 y US 5.780.426
describen péptidos cíclicos de aminoácidos distintos de receptor de
RGD que se unen a un receptor de integrina
\alpha_{v}/\gamma_{3}.
El documento US 5.766.591 describe los péptidos
de RGD para inhibir el receptor \alpha_{v}/\gamma_{3} y
útiles como agentes antiangiogénicos. No se enseñan partes de giro
beta.
Los documentos WO 98/56407 y WO 98/56408
describen antagonistas de fibronectina como agentes terapéuticos y
estimuladores de amplio espectro de tratamiento con antibióticos.
Dichos antagonistas de fibronectina se unen a la integrina
\alpha_{5}\beta_{1} para el fin de evitar la invasión
intracelular por patógenos microbianos. Algunos de estos
inhibidores son péptidos lineales o cíclicos que contienen la
estructura RGD o anticuerpos. Los antagonistas de integrina se
describen específicamente por su selectividad frente a la integrina
\alpha_{5}\beta_{1}. El mejor de ellos demostró ser el
ácido
(S)-2-[2,4,6-trimetilfenil)sulfonil]amino-3-[[7-benciloxicarbonil-8-(2-piridinilaminometil)-1-oxa-2,7-diazaespiro-[4,4]-non-2-en-3-il]carbonilamino]propiónico.
El documento US 5.773.412 describe un método
para alterar la unión mediada por el receptor de integrina
\alpha_{v}\beta_{3} de una célula a una matriz, siendo
dicha célula una célula del músculo liso o endotelial, poniendo en
contacto dicha célula con un péptido cíclico que contiene RGD.
También se describe un método para inhibir la angiogénesis usando
este péptido cíclico. El péptido cíclico descrito en el documento US
5.773.412 contiene al menos 6 aminoácidos y la secuencia RGD está
flanqueada, en el lado D, por un primer aminoácido que puede
proporcionar una interacción de enlace de hidrógeno con un receptor
de integrina (Asn, Ser o Thr) y un segundo aminoácido, que tiene
las características de hidrofobicidad o restricción conformacional
(Tic, es decir ácido
1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-3-carboxílico,
Pro, Phe o Ile). Una selección de estos péptidos se enseñan como
útiles para alterar la unión de osteoclastos a una matriz tal como
hueso o para alterar selectivamente la unión al receptor de
integrina. Se ha encontrado ahora que los pseudopéptidos cíclicos
que tienen una estructura mimética de RGD caracterizada por una
estructura de azabicicloalcano están dotados de inhibición
selectiva de la unión celular mediada por la integrina
\alpha_{v}\beta_{3}. Esta actividad los hace útiles como
agentes terapéuticos, en particular para tratar patologías debidas a
una angiogénesis alterada, por ejemplo tumores.
El documento WO 98/27112 describe un compuesto
en el que la secuencia RGD está unida a un residuo de
aminometilfenilo (AMP) en el lado de Asp y un residuo de
"glicina" en el lado de Arg, de modo que todo el residuo
completo que une los dos extremos de la secuencia RGD es una
"aminometilfenilglicina". Estos compuestos actúan como
inhibidores de integrina, especialmente con
\alpha_{v}\beta_{1}, \alpha_{v}\beta_{3},
\alpha_{v}\beta_{5}, \alpha_{IIb}\beta_{3} y
también \alpha_{v}\beta_{6} y \alpha_{v}\beta_{8}
(ibíd., líneas 34-35). Estos compuestos
bloquean la interacción de los receptores de integrina y ligandos,
tales como fibrinógeno y evitan la propagación de las células
tumorales (metástasis).
El documento WO 95/25543 describe la importancia
de la secuencia RGD para inhibir la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} y proporciona péptidos cíclicos que
contienen dicha secuencia.
El documento WO 96/00581 se ocupa exclusivamente
de \alpha_{4}\beta_{1} y su inhibición frente a
VCAM-1 y describe péptidos cíclicos que se modelan
tras el dominio Leu-Asp-Val de la
secuencia peptídica CS1 y se excluye específicamente la secuencia
Arg-Gly-Asp.
Belvisi et al., en Eur. J. Org. Chem.,
(1999) 2, 389-400, es una discusión minuciosa de las
preferencias conformacionales de los péptidos que contienen
lactamas bicíclicas miméticas de giro inverso. Sin embargo, este
artículo no da información sobre el efecto de las lactamas
bicíclicas miméticas de giro inverso sobre la selectividad dentro
de la familia de las integrinas y los péptidos estudiados en él son
lineales y no cíclicos.
El documento WO 97/065160 describe lactamas
bicíclicas con unión a un residuo de arginina dotado de actividad
antitrombótica, anticoagulante y antiplaquetaria.
El documento US 5.767.071 péptidos cíclicos de
nueve aminoácidos distintos de RGD como inhibidores de las
integrinas \alpha_{v}\beta_{3}.
Annis et al., Angew. Chem. Int. Ed.;
1993, 37, Nº 13/14, 1907-1909, tratan la síntesis en
fase sólida de derivados de péptidos de RGD cíclicos mediante
catálisis asimétrica y se busca la importancia de la estereoquímica
en especificidad y afinidad por un objetivo.
Un objeto de la presente invención son los
compuestos de fórmula (I)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que n es el número 0, 1 ó
2,
Arg es el aminoácido L-arginina,
Gly es el aminoácido glicina y Asp es el aminoácido ácido
L-aspártico, y las sales farmacéuticamente
aceptables de los mismos, sus racematos, estereoisómeros y
enantiómeros individuales.
Los compuestos de fórmula (I) son inhibidores
selectivos del receptor \alpha_{v}\beta_{3}. En
consecuencia, son útiles para tratar todas aquellas patologías
debidas a una unión celular mediada por integrina
\alpha_{v}\beta_{3} alterada; por ejemplo, retinopatías,
insuficiencia renal aguda, osteoporosis, tumores, también asociadas
a la metástasis. Los compuestos de la presente invención pueden
considerarse como agentes antiangiogénicos, en particular para el
tratamiento de tumores, comprendiendo tumores asociados a la
metástasis.
Otros objetos de la presente invención se tratan
para la preparación de los compuestos de fórmula (I).
Un objeto adicional de la presente invención es
un método para tratar a un sujeto, o bien ser humano o bien animal,
que padece un tumor, induciendo una inhibición de la angiogénesis,
en particular para inhibir o reducir o bloquear la proliferación
metastásica, con la administración de una dosis terapéutica o
preventiva de al menos un compuesto de fórmula (I). También son
objeto de la presente invención: un método para inhibir de manera
selectiva la unión celular mediada por la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} a un ligando que contiene RGD, que
comprende poner en contacto dicho ligando con una cantidad eficaz de
un compuesto de fórmula (I); un método para tratar a un sujeto que
padece una patología relacionada con una unión celular mediada por
integrina \alpha_{v}\beta_{3} alterada, que comprende
administrar a dicho sujeto un compuesto de fórmula (I); siendo
dichas patologías por ejemplo retinopatía, insuficiencia renal
aguda, osteoporosis.
Desde el punto de vista de la aplicación
industrial, la presente invención también comprende composiciones
farmacéuticas que comprenden una dosis eficaz de al menos un
compuesto de fórmula (I) mezclado con vehículos y/o excipientes
farmacéuticamente aceptables.
La presente invención se describirá en detalle
en lo anterior también por medio de ejemplos y figuras, en la que
las figuras:
la figura 1 representa, a modo de ejemplo, la
síntesis general de las lactamas;
la figura 2 representa una realización preferida
de la síntesis de lactamas "cis" condensadas en 6,5;
la figura 3 representa una realización preferida
de hidrogenación estereoselectiva con catalizador de fosfina
quiral-Rh;
la figura 4 representa una realización preferida
de la síntesis de lactamas "cis" condensadas en 7,5;
figura 5 representa una realización preferida de
la síntesis de lactamas "cis" condensadas en 5,5;
la figura 6 representa otra realización
preferida de la síntesis de lactamas "cis" condensadas en
5,5;
la figura 7 representa una realización preferida
de la síntesis de lactamas "trans" condensadas en 6,5;
la figura 8 representa una realización preferida
de la síntesis de lactamas "trans" condensadas en 7,5;
la figura 9 representa una realización preferida
de plantillas de lactamas bicíclicas protegidas con Fmoc;
la figura 10 representa una realización
preferida de pseudopéptidos lineales protegidos con tBu, Pmc;
la figura 11 representa una realización
preferida de pseudopéptidos cíclicos protegidos;
la figura 12 representa una realización
preferida de pseudopéptidos cíclicos de RGD;
En sus aspectos más amplios, la presente
invención se refiere a compuestos de fórmula (I) anterior.
Los compuestos de fórmula (I) son
peptidomiméticos que contienen una secuencia RGD. Dichos compuestos
pueden considerarse como formados por una estructura principal de
azabicicloalcano y una secuencia RGD.
Por motivos de claridad, en la fórmula (I), hay
una parte variable, dada por los diferentes valores de n y una
parte fija, dada por la secuencia RGD. Cuando n es 0, la estructura
principal se refiere a 5,5-azabicicloalcano, cuando
n es 1, la estructura principal se refiere a
6,5-azabicicloalcano y cuando n es 2, la estructura
principal se refiere a 7,5-azabicicloalcano. Los
enlaces escritos en la fórmula (I) como una línea ondulada
representan un enlace estereoquímico, que puede estar o bien por
encima del plano de la página (enlace grueso) o bien por debajo del
plano de la página (enlace fino). Los compuestos de fórmula (I)
pueden existir en estereoisómeros diferentes, según la orientación
del enlace ondulado.
Una primera clase de compuestos de fórmula (I)
preferidos son 7,5-azabicicloalcano, en particular
los que tienen configuración trans en las posiciones 7 y 10 y
configuración (R) en el átomo de carbono en la posición 3.
Una segunda clase de compuestos de fórmula (I)
proferidos son 6,5-azabicicloalcano, en particular
los que tienen configuración trans en las posiciones 6 y 9 y
configuración (S) en el átomo de carbono en la posición 3.
Un compuesto particularmente preferido es el de
siguiente fórmula (también denominado ST 1646).
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
En la siguiente tabla se representan los
compuestos de fórmula (I) preferidos:
Dentro de los límites de la presente invención,
se describe un procedimiento para la para la preparación de los
compuestos de fórmula (I), que comprende las siguientes etapas:
a) olefinación Horner-Emmons de
un compuesto de fórmula (II)
en la
que
R es un residuo de alquilo inferior;
R_{1} es un grupo protector de nitrógeno
adecuado,
para dar un compuesto de fórmula (III);
en la que R_{3} es un grupo
protector de nitrógeno adecuado, R_{4} es un residuo de alquilo
inferior;
b) hidrogenación de dicho compuesto de fórmula
(III) y ciclación; y, si se desea
c) separación de la mezcla estereoisomérica;
d) formación de la secuencia RGD cíclica, y si
se desea
e) separación de la mezcla estereoisomérica.
Un procedimiento para la para la síntesis
estereoselectiva de los compuestos de fórmula (I), comprende las
siguientes etapas:
a) olefinación Horner-Emmons de
un compuesto de fórmula (II)
en la
que
R es un residuo de alquilo inferior;
R_{1} es un grupo protector de nitrógeno
adecuado,
para dar un compuesto de fórmula (III);
en la que R_{3} es un grupo
protector de nitrógeno adecuado, R_{4} es un residuo de alquilo
inferior;
b) hidrogenación de dicho compuesto de fórmula
(III) mediante hidrogenación catalizada con fosfina
quiral-Rh y ciclación; y, si se desea
c) separación de la mezcla estereoisomérica;
d) formación de la secuencia RGD cíclica y si se
desea
e) separación de la mezcla estereoisomérica.
Como residuo de alquilo inferior se entiende
normalmente un alquilo C_{1}-C_{4}, por ejemplo,
metilo, etilo, propilo, butilo y todos los isómeros posibles, pero
también son adecuados alquilos superiores, siempre que sean
compatibles con las condiciones de reacción. Como grupos protectores
de nitrógeno adecuados, el experto puede seleccionar, según el
conocimiento común general, el grupo protector adecuado, tal como
aparecerá a partir de los siguientes ejemplos, pero también en la
bibliografía técnica disponible y catálogos comerciales.
También se describen composiciones farmacéuticas
que comprenden una dosis preventiva o terapéuticamente eficaz de al
menos un compuesto de fórmula (I) mezclado con vehículos y/o
excipientes farmacéuticamente aceptables.
En su aspecto más amplio, la presente invención
enseña de manera ventajosa un método para inhibir de manera
selectiva la unión celular mediada por la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} a un ligando que contiene RGD, que
comprende poner en contacto dicho ligando con una cantidad eficaz de
un compuesto de fórmula (I), un método para tratar a un sujeto que
padece angiogénesis alterada, que comprende la administración a
dicho sujeto de un compuesto de fórmula (I), un método para el
tratamiento de tumores en un sujeto que comprende la administración
a dicho sujeto un compuesto de fórmula (I), opcionalmente en
combinación con otros principios activos, en particular otros
agentes antitumorales.
La presente invención se describirá en detalle
también por medio de ejemplos y figuras, en la que,
La síntesis de las moléculas denominadas
peptidomiméticas ha sido un campo de investigación muy activo y
productivo en el diseño de fármacos (J. Gante, Angew. Chem., Int.
Ed. Engl. 1994, 33, 1699. - G.L. Olson, et al.: J. Med.
Chem. 1993, 36, 3039. - D.C. Horwell, Bioorg.Med. Chem. Lett. 1993,
3, 797. - A. Giannis et al.: Angew. Chem., Int. Ed. Engl.
1993, 32, 1244. - B.A. Morgan: Annu. Rep. Med. Chem. 1989, 24, 243).
Se espera que estas moléculas tengan los mismos efectos biológicos
que los péptidos naturales, pero al mismo tiempo, sean
metabólicamente más estables. Ha sido de particular interés la
sustitución de motivos dipeptídicos de giro inverso con moléculas
restringidas que reproducen sus características conformacionales
(ibíd; M. Kahn, Ed., Peptide Secondary Structur Mimetics.
Tetrahedron Symposia-in-Print Nº 50
1993, 49, 3433-3689 y referencias en el mismo).
Este objetivo se ha conseguido frecuentemente usando el esqueleto de
azaoxobiciclo[X.Y.O]alcano y/o análogos con
heteroátomos. Esto ha creado una demanda de enfoques sintéticos
eficaces hacia tales moléculas, y recientemente se han introducido
y revisado muchos métodos (S. Hanessian et al: Tetrahedron
1997, 38, 12789-12854). Una ruta particularmente
eficaz y versátil se ha desarrollado por Lubell et al. y se
ha empleado para la preparación de lactamas bicíclicas condensadas
en 6,5 de tipo indolizidinona enantioméricamente puras (H.-G.
Lombart et al.: J. Org. Chem. 1996, 61,
9437-9446. - F. Polyak et al.: J. Org. Chem.
1998, 63, 5937-5949 y referencias en el mismo para
la síntesis de aminoácidos de azabicicloalcano - - F. Gosselin
et al.: J. Org. Chem. 1998, 63, 7463-7471).
También están disponibles varios procedimientos para la síntesis de
lactamas bicíclicas condensadas en 7,5, de las que la mayoría
requiere secuencias sintéticas relativamente largas. Por el
contrario, no hay muchos protocolos publicados que permiten la
síntesis de lactamas bicíclicas condensadas en 5,5.
Según la presente invención, la parte de giro
beta del péptido cíclico consiste en una estructura principal de
aminoácido de azabicicloalcano, seleccionada de lactamas bicíclicas
condensadas en 5,5, 6,5, ó 7,5. Se han sintetizado varios
aminoácidos de
1-aza-2-oxabiciclo[X.3.0]alcano
condensados en 6,5 y 7,5, usando reacciones radicalarias (L.
Colombo et al.: Tetrahedron Lett. 1995, 36,
625-628. - L. Colombo et al.: Gazz. Chim.
It. 1996, 126, 543-554) o iónicas (L. Colombo et
al. Tetrahedron 1998, 54, 5325-5336). Estas
estructuras pueden considerarse como sustitutos de conformación
limitada unidades dipeptídicas Ala-Pro y
Phe-Pro, y, si sus conformaciones cumplen
determinados criterios, pueden usarse para sustituir los residuos
centrales (i+1 e i+2) de giros \beta.
La presente invención proporciona una secuencia
de reacciones mejorada, susceptible para la preparación a gran
escala, y que permite la síntesis de diferentes lactamas bicíclicas
a partir de productos intermedios comunes, tal como se describe en
la figura 1 adjunta.
Partiendo de
5-alil/formil-prolinas
13-18, se ha usado una olefinación
Horner-Emmons Z-selectiva seguida de
reducción de dobles enlaces para formar el segundo anillo. Los
aldehídos de partida se han sintetizado de manera estereoselectiva
mediante modificaciones de procedimientos conocidos (véase a
continuación). La reducción de dobles enlaces de
estereoquímicamente aleatoria puede realizarse usando H_{2}/Pd
para dar, tras la ciclación, mezclas de epímeros fácilmente
separables. Se estudia la hidrogenación estereoselectiva para la
síntesis de lactamas condensadas en 6,5, y se consigue con un e.d.
del 80% usando catalizadores de fosfina quiral-Rh.
La diversidad estructural, en cuanto al tamaño y la estereoquímica
del anillo del fragmento de azabicicloalcano, se proporciona por la
nueva estrategia, y también se garantiza el acceso a estructuras
principales bicíclicas condensadas en 5,5 menos comunes.
En la figura 2 se muestran ejemplos de derivados
dipeptídicos bicíclicos 1-12.
La síntesis de las lactamas 1-12
sigue las etapas comunes recogidas en la figura 1. Partiendo de los
aldehídos de 5-alquil-prolina cis o
trans 13-18, una olefinación
Horner-Emmons con el enolato de potasio del éster
trimetílico de
(\pm)-Z-\alpha-fosfonoglicina
(U. Schmidt, A. Lieberknecht, J. Wild, Synthesis 1984,
53-60) forma la cadena carbonada necesaria. Tras la
manipulación del grupo protector (véase a continuación), la
reducción de los ácidos enaminoacrílicos y tratamiento con agentes
de condensación da las lactamas de la serie tanto "cis" como
"trans" con buenos rendimientos.
En todos los casos en los que se forman mezclas
estereoisoméricas de lactamas, éstas pueden separarse fácilmente
mediante cromatografía en columna, y su configuración puede
asignarse con experimentos n.O.e. (nuclear Overhauser effect -
efecto nuclear Overhauser).
El esquema sintético se ilustra del mejor modo
mediante la síntesis de las lactamas "cis" condensadas en 6,5
2a y 8a (figura 3). El aldehído 14 cis necesario se obtiene del
derivado de 5-alil-prolina cis 25
(M. V. Chiesa, L. Manzoni, C. Scolastico, Synlett 1996,
441-443) y se hace reaccionar con el fosfonato 26
comercialmente disponible (U. Schmidt, A. Lieberknecht, J. Wild,
Synthesis 1984, 53-60) para dar 20 en rendimiento
del 98% y razón Z:E de 7:1.
Hidrogenación de 20 se produce inicialmente en
el grupo enamino-Cbz, y por tanto da como resultado
una mezcla compleja de productos. Para sortear este problema, se
trata el sustrato con Boc_{2}O para dar 27 (98%). La reducción de
27 con H_{2}/Pd(OH)_{2} seguida de reflujo en MeOH
da una mezcla 1:1 de 8a y 2a, que se separan fácilmente mediante
cromatografía en columna. A partir de 14 la secuencia completa
requiere solamente dos separaciones cromatográficas (purificación
de 20 y separación de 8a de 2a) y puede llevarse a cabo fácilmente
a escala de multigramos.
La preparación estereoselectiva de los dos
epímeros 8a y 2a (figura 3) se lleva a cabo usando hidrogenación
catalizada con fosfina quiral-Rh del enaminoácido
28.
Se sabe bien que el catalizador de fosfina
quiral-Rh representa una manera poderosa y bien
establecida de acceder a aminoácidos que se producen y no de manera
natural y la hidrogenación asimétrica catalítica de deshidropéptidos
es la extensión lógica de esta metodología para la preparación de
oligo y polipéptidos quirales biológicamente activos.
En las hidrogenaciones catalíticas asimétricas
que usan catalizadores de fosfina quiral-Rh, las
olefinas (Z) dan normalmente la mayor pureza estereoisomérica de
los productos, pero el requisito más riguroso para el sustrato
sigue siendo la presencia de un grupo acetamido o equivalente en el
doble enlace. (K.E. Koenig en Asymmetric Synthesis, J.D. Morrison
Editor, Vol 5, Academic Press Inc. 1985, 71). Se necesita el
carbonilo de tipo amida con el fin de permitir la coordinación de
dos puntos del sustrato con el metal, lo que aumenta la exigencia
estérica tal como se ha descubierto totalmente de manera
experimental. (J. Halpern, ibídem, 41). Para aplicaciones a
la síntesis de péptidos deben usarse grupos protectores distintos
del acetamido, tales como Boc o Cbz, permitiendo así la
desprotección diferencial. Sin embargo, se conocen muy pocos
ejemplos de hidrogenación catalítica asimétrica en los que estos
grupos protectores se encuentren en el nitrógeno de enamino: (B.
Basu, S.K. Chattopadhyay, A. Ritzen, T. Frejd, Tetrahedron
Asymmetry, 1997, 8, 1841) (S.D. Debenham, J.D. Debenham, M.J. Burk,
E.J. Toone, J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 9897) más frecuentemente,
los grupos protectores Boc o Cbz están presentes en una posición
diferente de los deshidropéptidos que se hidrogenan en el extremo
N-terminal. (A. Hammadi et al. Tetrahedron
Lett. 1998, 39, 2955 - I. Ojima, Pure & Appl. Chem. 1984, 56,
99). Para la hidrogenación asimétrica catalítica de 28 se usan
catalizadores de [Rh(fosfina)(COD)]ClO_{4}. Los
catalizadores se prepararon desplazando un ligando de ciclooctadieno
de
[Rh(COD)_{2}]ClO_{4} con la fosfina apropiada. Los ligandos investigados son (R)-Prophos 29 y (+) o (-) BitianP 30 y 31. BitianP es una fosfina quelatante atropisomérica quiral que pertenece a una nueva clase de ligandos basada en una estructura biheteroaromática, que da un % de e.e. muy alto en la hidrogenación asimétrica de olefinas y cetonas. (E. Cesarotti et al. J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1995, 685 - Cesarotti et al. J. Org. Chem. 1996, 61, 6244).
[Rh(COD)_{2}]ClO_{4} con la fosfina apropiada. Los ligandos investigados son (R)-Prophos 29 y (+) o (-) BitianP 30 y 31. BitianP es una fosfina quelatante atropisomérica quiral que pertenece a una nueva clase de ligandos basada en una estructura biheteroaromática, que da un % de e.e. muy alto en la hidrogenación asimétrica de olefinas y cetonas. (E. Cesarotti et al. J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1995, 685 - Cesarotti et al. J. Org. Chem. 1996, 61, 6244).
Los resultados de hidrogenación asimétrica se
notifican en la tabla 1. La conversión es siempre cuantitativa pero
se obtiene la mayor estereodiferenciación con
[Rh/(-)-BitianP] (entrada 3). Los resultados
sugieren que el estereocentro recién creado se determina
principalmente por el catalizador, que supera al efecto del
estereocentro sobre los sustratos (entradas 2 y 3). Los resultados
indican también que el grupo protector Boc en el nitrógeno de
enamino cumple los requisitos y permite a la olefina quelatarse con
el catalizador.
Las reacciones se llevaron a cabo a T.A. durante
24 h bajo 10 atm de H_{2}.
El tratamiento del producto bruto 32 y 33 con
CH_{2}N_{2}, seguido de hidrogenación y cristalización en las
condiciones habituales (H_{2}/Pd-C seguido de
reflujo en MeOH) permite una ruta estereoselectiva para las
lactamas 8a y 2a.
Todas las lactamas restantes
1-12 pueden sintetizarse siguiendo esencialmente la
misma secuencia descrita anteriormente. Así, las lactamas
condensadas en 7,5 3a y 9a (figura 4) pueden prepararse partiendo
del aldehído cis 15, preparado fácilmente a partir de la
5-alil prolina cis 25. (M. V. Chiesa, L. Manzoni, C.
Scolastico, Synlett 1996, 441-443) La reacción de
Horner-Emmons de 15 con 26 da una mezcla Z:E de 6:1
de enaminoacrilatos. Tras la protección de N se reducen con
H_{2}/Pd-C. La ciclación térmica del éster
metílico 34 puede llevarse a cabo en un disolvente adecuado, por
ejemplo xileno. Se obtienen mejores resultados en la hidrólisis del
éster seguida de la formación de lactama promovida por EDC/HOBT para
dar 3a y 9a, que pueden separarse fácilmente mediante cromatografía
en columna (rendimiento global del 51% a partir de 25).
El material de partida para la síntesis de las
lactamas "cis" condensadas en 5,5 (figura 5) es el alcohol 36.
La oxidación y reacción de Horner-Emmons con 26
seguido de la protección con N-Boc da 37 como una
mezcla Z:E de 5:1 con un rendimiento del 57%. La hidrogenación de
37 (H_{2}/Pd(OH)_{2}) da como resultado una
mezcla compleja de productos, de los que de de todas formas se aísla
1,2-diaminoéster 38 con un rendimiento del 40%. La
formación de 38 puede resultar de la
N-desbencilación inicial de 37 seguida de la adición
intramolecular de Michael al doble enlace del enaminoéster e
hidrogenolisis de la aziridina resultante. El problema puede
sortearse parcialmente realizando la hidrogenación partiendo del
ácido 39. El tratamiento de 39 con H_{2}/Pd-C
seguido de reflujo en MeOH da una mezcla 1:1 fácilmente separable de
1a y 7a con un rendimiento del 40%.
También se proporciona una síntesis alternativa
de estas lactamas partiendo del
trifluoroacetamido-aldehído 13 (figura 6). El
aldehído 13 se sintetiza a partir de 36 con una serie de 5 etapas de
alto rendimiento. La reacción de Horner-Emmons y la
protección del nitrógeno da 40 (46% tras 7 etapas), que se reduciría
directamente para dar una mezcla 1:1 del éster 41 (77%) totalmente
protegido. La eliminación del grupo protector de trifluoroacetamido
(NaBH_{4} en MeOH, 84%) seguida del tratamiento en xileno a
reflujo da las lactamas 1a y 7a con un rendimiento del 78%.
Los mismos esquemas sintéticos se adoptan
igualmente para la síntesis de la serie de lactama "trans".
El material de partida para las lactamas
"trans" condensadas en 6,5 5a y 11a es la prolina
trans-sustituida 17 (figura 7). El mejor modo de
obtener el aldehído 17 es a partir del éster 43, lo que se hace en
una etapa a partir del éster terc-butílico ce
N-Cbz-5-hidroxi-prolina
como mezcla trans:cis de 4:1, siguiendo un procedimiento publicado.
(I. Collado et al., Tetrahedron Lett., 1994, 43, 8037). La
reacción de Horner-Emmons con el enolato de potasio
de 26 tiene lugar con un rendimiento del 98%. El tratamiento con
Boc_{2}O y la separación de los isómeros cis/trans, seguido de la
hidrogenación con H_{2}/Pd-C no selectiva del
producto bruto y tratamiento en MeOH a reflujo da una mezcla 1:1 de
5a y 11a separados fácilmente.
Finalmente, la síntesis de las lactamas
"trans" condensadas en 7,5 6a y 12a se consigue partiendo de la
alilprolina "trans" 45 (figura 8). (M. V. Chiesa et al.
Synlett 1996, 441-443). La hidroboración y oxidación
de Swern (80% tras 2 etapas) da el aldehído 18, que reacciona con
26 para dar, tras la protección del nitrógeno, 46 como una mezcla
Z:E de 6:1. La secuencia habitual (NaOH;
H_{2}/Pd-C) permitió el aislamiento de 6a y 12a
con un rendimiento global del 40%.
En cuanto a la síntesis de la parte de RGD
cíclica, se conocen bien métodos sintéticos en la técnica. Es
conveniente usar el enfoque de síntesis en fase sólida, aunque
podrían usarse otros métodos.
Se prefiere la síntesis en fase sólida
clásica.
La síntesis en fase sólida se lleva a cabo tal
como se resume en C. Gennari et al. Eur. J. Org. Chem. 1999,
379-388.
El aminoácido protegido se condensa en una
resina adecuada, por ejemplo una resina de
Wang-Merrifield. En esta técnica se conocen grupos
protectores. Se prefiere 9-fluorenilmetoxicarbonilo
(FMOC).
Tras haber activado la resina,
N-FMOC-Gly se une a la resina de
Wang-Merrifield por medio de un agente de
condensación adecuado, preferiblemente diisopropilcarbodiimida
(DIC)/1-hidroxibenzotiazol
(HOBt)/4-dimetilaminopiridina (DMAP) (J. Org. Chem,
1996, 61, 6735-6738.
Posteriormente, se une
N-FMOC-Arg(Pmc)OH,
seguido de N-FMOC-lactama bicíclica
(IIIa) o (IIIb) y finalmente
N-FMOC-Asp(tBu)OH.
Todavía en una realización preferida de la
presente invención, la síntesis en fase sólida de péptidos cíclicos
que contienen la secuencia RGD unida a la lactama bicíclica se
realizó con la estrategia de
9-flourenolmetoxicarbonilo (Fmoc). Por tanto, el
grupo protector N-Boc tenía que cambiarse por el
grupo Fmoc en la lactama bicíclica. La síntesis se realizó usando
la síntesis peptídica en fase sólida de Merrifield con SASRIN (Super
Acid Sensitive Respuesta inmunitaria - resina sensible superácida))
aplicando la estrategia de Fmoc. Se protegió Asp en el grupo
carboxilo en la cadena lateral como éster t-butílico
y se protegió Arg en el grupo guanidino como Pmc
(2,2,5,7,8-pentametil-cromano-6-sulfonilo).
Los polipéptidos lineales se ensamblaron dejando al residuo de
glicina en el extremo C-terminal para evitar la
racemización y el impedimento estérico durante la etapa de
ciclación. El grupo Fmoc se escindió con piperidina al 20% en DMF.
Las lactamas bicíclicas y el aminoácido protegido con Fmoc se
acoplaron con HOAT (azahidroxi-benzotriazol) en
presencia de DIC (diisopropilcarbodiimida) o con HOAT/HATU
{azahidroxi-benzotriazol)/{hexafluorofosfato de
O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio}
usando colidina como base. Los péptidos se escindieron del soporte
sólido SASRIN mediante TFA al 1% en DCM y la posterior
neutralización de TFA con Py. Este procedimiento conduce a péptidos
con grupos protectores de cadena lateral intactos. La ciclación
final se realizó en las mismas condiciones, es decir, HOAT/HATU y
la desprotección final se hizo con ácido trifluoroacético en
presencia de eliminadores para evitar alquilaciones
secundarias.
Los compuestos de la presente invención están
dotados de interesantes propiedades fisiológicas, que los hacen
útiles como medicamentos. En particular, los compuestos de fórmula
(I) descritos en el presente documento, son antagonistas selectivos
de las integrinas \alpha_{v}\beta_{3}. Esta actividad
antagonista proporciona el uso de dichos compuestos para la
preparación de medicamentos útiles para inhibir la acción de las
integrinas \alpha_{v}\beta_{3}. En particular, dichos
medicamentos se usarán en el tratamiento de tumores, concretamente
para inhibir el crecimiento tumoral y/o angiogénesis o
metástasis.
A modo de ejemplo, las pruebas se realizaron
sobre el compuesto preferido ST 1646 (véase la reivindicación 9) y
para fines de comparación, se usó el compuesto sumamente activo de
la técnica anterior, concretamente c(RGDfV), es decir,
ciclo(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val),
en el informe adjunto denominado el péptido "KESSLER", descrito
en el documento WO 9706791. Tanto ST 1646 como "KESSLER" se
denominan también "RGD".
El ensayo de unión al receptor, tal como se
describe por Orlando y Cheresh
(Arginine-Glycine-Aspartic Acid
Binding Leading to Molecular Stabilization between Integrin
\alpha_{v}\beta_{3} and Its Ligand. J. Biol. Chem. 266:
19543-19550, 1991). Se diluyó
\alpha_{v}\beta_{3} a 500 ng/ml en tampón de recubrimiento
(Tris 20 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, CaCl_{2} 2 mM, MgCl_{2} 1 mM,
MnCl_{2} 1 mM) y se añadió una alícuota de 100 \mul/pocillo a
una placa de microtitulación de 96 pocillos y se incubó durante la
noche a 4ºC. Se lavó la placa una vez con tampón de bloqueo/unión
(Tris 50 mM, pH 7,4, NaCl 100 mM, CaCl_{2} 2 mM, MgCl_{2} 1 mM,
MnCl_{2} 1 mM, albúmina de suero bovino al 1%), y se incubó
durante 2 h adicionales a temperatura ambiente. Se aclaró la placa
dos veces con el mismo tampón y se incubó con ligando radiomarcado a
las concentraciones indicadas. Para la unión de competición, se
incluyeron péptidos de competición y competidores sin marcar a la
concentración descrita. Tras tres lavados adicionales, se
solubilizaron los recuentos con NaOH 2 N en ebullición y se
sometieron a recuento \gamma.
Se mantuvieron células endoteliales
microvasculares bovinas (BMEC) en DMEM complementado con suero de
ternero fetal al 20%, 50 unidades/ml de heparina, 50 \mug/ml
extracto cerebral bovino, 100 unidades/ml gentamicina.
Las BMEC se cultivaron en frascos de cultivo
cubiertos de gelatina al 1% y se emplearon en experimentos entre
los pasos 6-12.
Se adquirieron células de carcinoma de próstata
humano (PC3) de la colección americana de cultivos tipo (ATCC) y se
mantuvieron en RPMI complementado con suero de ternero fetal 10%,
L-glutamina 10 mM, piruvato de sodio al 1% y 100
unidades/ml gentamicina.
Se adquirieron células de carcinoma de pulmón
murino (M109) de la colección americana de cultivos tipo (ATCC) y
se mantuvieron en RPMI complementado con suero de ternero fetal al
10%, L-glutamina 10 mM y 100 unidades/ml
gentamicina.
Las células se pasaron y se usaron para los
experimentos antes de alcanzar la confluencia.
Se cubrieron placas de noventa y seis pocillos
(Falcon) con o bien fibronectina o bien vitronectina (ambas a 5
g/ml en solución salina tamponada con fosfato) durante la noche a
4ºC. Las células se despegaron usando EDTA (1 mM)/tripsina (0,25%)
y se resuspendieron en el propio medio descrito anteriormente. Se
aplicaron aproximadamente 40.000 células/100 l por cada pocillo y
se dejaron adherirse durante 60 min. a 37ºC en presencia de
cantidades diferentes de péptidos de RGD. Para todos los
experimentos se eliminaron las células no adherentes con PBS y se
fijaron las células restantes con paraformaldehído al 4% durante 10
min.
Se tiñeron las células con azul de toluidina al
1% durante 10 min. y se aclararon con agua.
Se solubilizaron las células teñidas con SDS al
1% y se cuantificaron sobre un lector de placas de microtitulación
a 600 nm.
Los experimentos descritos se realizaron por
cuadruplicado y se repitieron un mínimo de tres veces.
Los resultados se presentaron como la media y la
desviación estándar.
La integrina \alpha_{v}\beta_{3} tanto
purificada como unida a la membrana se une a la desintegrina
equistatina con alta afinidad, lo que puede competirse eficazmente
mediante péptidos cíclicos y lineales de RGD (C.C. Kumar,
Huimingnie, C.P. Rogers, M. Malkowski, E. Maxwell, J.J. Catino y L.
Armstrong. 1997, The Journal of Pharmacology and Experimental
Therapeutics; (283) págs. 843-853). Por tanto para
evaluar la afinidad de estos péptidos por esta integrina se usó un
protocolo experimental de competición con la
[^{125}]I-equistatina tal como se describe
en materiales y métodos.
Los resultados muestran que ST1646 (el compuesto
de la reivindicación 9) es el péptido más eficaz para desplazar la
equistatina de su interacción con la integrina
\alpha_{v}\beta_{3}. De hecho, la afinidad del péptido de
RGD ST1646 notificada en la tabla 2 como CI_{50} de la
concentración de unión fue casi 20 veces superior a la de los
péptidos cíclicos Kessler usados como péptido de referencia. Por
tanto, estos datos proporcionan claras evidencias de que la
restricción estructural de la secuencia RGD introducida por el ST
1646 da como resultado inesperadamente una afinidad para la
integrina \alpha_{v}\beta_{3} notablemente superior que el
péptido Kessler.
Efecto de los compuestos de RGD sobre la unión
de [^{125}I]-equistatina a la integrina
\alpha_{v}\beta_{3}.
CI_{50}, la concentración de los compuestos
requerida para la inhibición del 50% de la unión de equistatina, se
estimó gráficamente mediante el programa Allfit. La Ki de los
ligandos de competición se calculó según la ecuación de Cheng y
Prusoff.
Los valores son la media \pm desviación
estándar de las determinaciones por triplicado.
Las isotermas de la unión de saturación de la
unión de ^{125}I-equistatina al receptor
\alpha_{v}\beta_{3} se determinaron en un ensayo de unión
al receptor en fase sólida tal como se describe en materiales y
métodos. La integrina \alpha_{v}\beta_{3} se cubrió e
incubó con diversas concentraciones (0,05-10 nM) de
^{125}I-equistatina. Se evaluó la unión no
específica llevando a cabo el ensayo de unión en presencia de un
exceso de equistatina fría y se restó de la unión total para
calcular la unión específica.
En la unión de competición se añadió
^{125}I-equistatina a los pocillos hasta una
concentración final de 0,05 nM en tampón de unión en presencia de
ligando de competición. La equistatina sin marcar fría y los
péptidos se disolvieron en tampón de unión a concentraciones que
oscilaban entre 10^{-4} M y 10^{-9}.
Debido a que la familia de las integrinas
\alpha\beta transmembrana está implicada en la adhesión de las
células endoteliales a proteínas de matriz extracelular, se sometió
a ensayo la inhibición de la adhesión de células endoteliales
microvasculares bovinas (BMEC) tanto para vitronectina como
fibronectina cuando se trataban estas células con diferente
concentración de la RGD cíclica de la presente invención.
Según el experimento de unión, el péptico de RGD
cíclico ST1646 fue más eficaz para inhibir la adhesión que el otro
péptido sometido a prueba. Debido a que la vitronectina es un
ligando más específico de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}
que la fibronectina, se observó que las RGD sometidas a prueba
podían inhibir más eficazmente la adhesión de las células BMEC
sobre las placas cubiertas con vitronectina que a las cubiertas con
fibronectina (compárese la tabla 3 con la tabla 4). Comparando la
inhibición de la adhesión, se observó que la RGD cíclica ST1646 era
aproximadamente 10 veces más eficaz que el péptido Kessler que
inhibe la adhesión de las células BMEC tanto a fibronectina como a
vitronectina (véase la tabla 5).
Para evaluar la capacidad del péptido ST1646
para competir con vitronectina en el ensayo de adhesión también en
otros tipos de células, se realizó este experimento usando células
endoteliales microvasculares (HMEC), células de carcinoma de
próstata humano (PC3) y células de carcinoma de pulmón murino
(M109). La tabla 6 (a, b y c) muestra una buena actividad del
péptido ST1646 para inhibir la adhesión de todos los tipos de
células. De hecho, la inhibición de la adhesión notificada del
ST1646 a células HMEC, PC3 y M109 ha mostrado porcentajes
superiores a los del péptido Kessler de RGD.
Por tanto, reuniendo estos datos, se mostró la
alta actividad del péptido cíclico de RGD ST 1646 en varios tipos
celulares de manera coherente con el experimento de afinidad de
unión descrito previamente.
Los porcentajes de inhibición de la adhesión se
refieren a la concentración de 100 M de cada péptido y se calculan
mediante la siguiente fórmula
(control-muestra/control x 100) en la que el control
fue la muestra sin tratar de RGD. Cada porcentaje es la media de 4
muestras independientes tratadas con el mismo péptido. La prueba de
la t se ha calculado usando la prueba no paramétrica de Mann Witney,
mediante el programa instat.
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Los porcentajes de inhibición de la adhesión se
refieren a la concentración de 100 \muM de cada péptido y se
calculan mediante la siguiente fórmula
(control-muestra/control x 100) en la que el control
fue la muestra sin tratar de RGD. Cada porcentaje es la media de 4
muestras independientes tratadas con el mismo péptido. La prueba de
la t se ha calculado usando la prueba no paramétrica de Mann Witney,
mediante el programa instat.
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Varias concentraciones (por cuadruplicado) de
los péptidos de RGD indicados que oscilaban entre 100 y 0,6 \muM
se han sometido a prueba en experimentos de adhesión tal como se
describe en materiales y métodos. La CI_{50} que representa la
concentración de péptido de RGD que puede inhibir el 50% de la
adhesión de BMEC al sustrato indicado, se ha calculado mediante el
análisis de regresión lineal usando el programa Allfit. La
CI_{50} para cada RGD se ha recogido junto con la desviación
estándar.
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Las concentraciones en serie (por cuadruplicado)
del péptido de RGD indicado en un amplio intervalo
(0,01-100 \muM) se han sometido a prueba en la
prueba de adhesión, en vitronectina, tal como se describe en
materiales y métodos.
La CI_{50} representa el valor promedio de 3
experimentos e indica la concentración de péptido de RGD que puede
inhibir el 50% de la adhesión celular.
Los porcentajes de la inhibición de la adhesión
se refieren a la concentración 1,5 \muM de cada péptido y se
calcularon mediante la siguiente fórmula
(control-muestra/control x 100) en la que el control
era la muestra sin tratar de RGD.
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Las concentraciones en serie (por cuadruplicado)
del péptido de RGD indicado en un amplio intervalo
(0,01-100 \muM se han sometido a prueba en la
prueba de adhesión, en vitronectina, tal como se describe en
materiales y métodos.
La CI_{50} representa el valor promedio de 3
experimentos e indica la concentración de péptido de RGD péptido
concentración que puede inhibir el 50% de la adhesión celular.
Los porcentajes de la inhibición de la adhesión
se refieren a la concentración 1,5 \muM de cada péptido y se
calcularon mediante la siguiente fórmula
(control-muestra/control x 100) en la que el control
era la muestra sin tratar de RGD.
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Las concentraciones en serie (por cuadruplicado)
del péptido de RGD indicado en un amplio intervalo
(0,01-100 \muM) se han sometido a prueba en la
prueba de adhesión, en vitronectina, tal como se describe en
materiales y métodos.
La CI_{50} representa el valor promedio de 3
experimentos e indica la concentración de péptido de RGD que puede
inhibir el 50% de la adhesión celular.
Los porcentajes de inhibición de la adhesión se
refieren a la concentración 1,5 \muM de cada péptido y se
calcularon mediante la siguiente fórmula
(control-muestra/control x 100) en la que el control
era la muestra sin tratar de RGD.
La prueba de la t se ha calculado usando la
prueba no paramétrica de Mann Witney, mediante el programa instat.
En el lado superior izquierdo de los dos paneles se muestra el tipo
de células al que se refiere el experimento de adhesión.
Se inyectaron células de carcinoma de pulmón
M109 a ratones Balb/c por vía i.m. (3 x 10^{5} células/ratón) en
el músculo de la pata trasera. Un día después de la inyección del
tumor, se trataron los ratones con ST 1646 (300 \mug/ratón = 15
mg/kg) o péptido Kessler (200 \mug/ratón = 10 mg/kg) según un
programa de tratamiento qdx9 (cada día durante 9 administraciones,
por vía i.p.).
Los tumores se cortaron el día 10 tras el
implante del tumor. Los ratones se sacrificaron el día 16 desde el
implante del tumor y se extirparon los pulmones. Se evaluó el número
de metástasis pulmonar en los ratones a los que se les cortó el
tumor (3 ratones/grupo) usando un microscopio estereoscópico.
El % de TVI (tumor volume inhibition -
inhibición del volumen tumoral)) = 100 - [(peso medio del tumor de
del grupo tratado/peso medio del tumor del grupo control) x 100] se
calculó el día 16 tras el implante del tumor (justo antes de
sacrificar los ratones) en los ratones no operados.
Los resultados obtenidos, notificados en la
tabla 7, muestran que ST1646 es más eficaz que el péptido Kessler
para reducir tanto el número de metástasis como el volumen del
tumor.
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\vskip1.000000\baselineskip
La angiogénesis en el ensayo CAM (membrana
corioalantoidea de embrión de pollo) se ha cuantificado contando el
número de vasos que interconectan la esponja de gelatina implantada
en cada embrión y calculando el promedio para cada punto
experimental individual (6-8 huevos por
concentración de péptido). Un tratamiento único significa que el
embrión recibió el péptido, a la concentración indicada en la tabla,
solamente una vez al comienzo del experimento mientras que en el
tratamiento repetido el péptido se ha añadido al embrión cada día
durante tres días. En algunos experimentos la muestra se ha
referido al control en el que se producía la angiogénesis
espontáneamente en la membrana corioalantoidea durante el desarrollo
del embrión (tabla 8). En otro experimento (tabla 9) en cambio, se
ha usado el control en el que la angiogénesis se ha estimulado
mediante bFGF (400 ng/embrión).
Inhibición \
(%) = [(vasos \ medios \ del \ grupo \ tratado - vasos \ medios \
del \ grupo \ control)/ grupo \ control] \ x \
100
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Inhibición \
(%) = [(vasos \ medios \ del \ grupo \ tratado - vasos \ medios \
del \ grupo \ control)/ grupo \ control] \ x \
100
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados obtenidos proporcionan una clara
evidencia de que la restricción estructural de la secuencia RGD
introducida por el ST 1646 da como resultado inesperadamente una
afinidad por la integrina \alpha_{v}\beta_{3} notablemente
superior que el péptido Kessler. Paralelo a estos resultados en el
ensayo de unión de competición in vitro, ST 1646 evalúa su
actividad para inhibir la unión de varios tipos de células a las
proteínas fibronectina y vitronectina [tablas
3-4-5-6(a, b
y c)]. Según los experimentos de ensayo de unión (tabla 3), el
ensayo de inhibición celular muestra que ST 1646 es al menos 10
veces más activo que el péptido Kessler. Además, ST 1646 es
extremadamente específico para inhibir la unión celular a
vitronectina. Ésta es una evidencia adicional, en la que ST 1646
muestra una buena selectividad hacia la integrina
\alpha_{v}\beta_{3} celular implicada en la unión a
sustratos de vitronectina. En experimentos in vivo los
resultados obtenidos muestran que ST 1646 inhibe el crecimiento de
metástasis pulmonar de M109 (tabla 7). Además, ST 1646 inhibe
fuertemente la angiogénesis tanto en la angiogénesis espontánea como
inducida por FGF (tablas 8 y 9 respectivamente). Estos resultados
muestran que ST 1646 es un compuesto antitumoral y antiangiogénico
muy eficaz.
Los compuestos de la presente invención que
tienen estructura de azabicicloalcano y contienen la secuencia RGD
(Arg-Gly-Asp) son inhibidores
selectivos del receptor \alpha_{v}\beta_{3}, y son agentes
útiles para tratar patologías debidas a una activación alterada del
receptor \alpha_{v}\beta_{3}. Se sabe bien que la
activación del receptor \alpha_{v}\beta_{3} está unida a
varios procesos patológicos.
Tal como se mencionó anteriormente, los
resultados experimentales indicados anteriormente muestran que los
compuestos según la invención son/tienen: inhibidor selectivo del
receptor \alpha_{v}\beta_{3}; inhibidores de la adhesión de
líneas celulares a fibronectina; actividad antitumoral (reducción
del número de las metástasis); actividad antiangiogenética.
En cuanto a los aspectos industriales de la
presente invención, los compuestos de fórmula (I) se formularán de
manera adecuada en composiciones farmacéuticas. Dichas composiciones
comprenderán al menos un compuesto de fórmula (I) mezclado con
vehículos y/o excipientes farmacéuticamente aceptables. Según la
necesidad terapéutica, la biodisponibilidad del compuesto
seleccionado, sus características físico-químicas,
las composiciones farmacéuticas según la presente invención se
administrarán por vía enteral o parenteral. Las composiciones
farmacéuticas enterales pueden estar tanto en forma líquida como
sólida, por ejemplo comprimidos, cápsulas, píldoras, polvos,
sobres, polvos liofilizados para disolverse fácilmente o polvos
solubles de cualquier otro modo, disoluciones, suspensiones,
emulsiones. La formulación parenteral estará en forma inyectable,
como disoluciones, suspensiones, emulsiones o en forma pulverulenta
para disolverse inmediatamente antes del uso. También se
proporcionan otras vías de administración por ejemplo por implante
intranasal, transdérmico o subcutáneo. También pueden proporcionarse
composiciones farmacéuticas especiales. Por ejemplo formulaciones
de liberación controlada o vehículos particulares, por ejemplo
liposomas.
La preparación de las composiciones
farmacéuticas según la presente invención está absolutamente dentro
del conocimiento general del experto en esta técnica.
La dosificación se establecerá según el tipo de
patología que va de tratarse, su gravedad y las condiciones del
paciente (peso, edad y sexo).
Los siguientes ejemplos ilustran de manera
adicional la invención.
Los ejemplos 1-12 pueden leerse
más fácilmente haciendo referencia a las figuras
1-8.
General: los espectros de ^{1}H y ^{13}C RMN
se registraron en CDCl_{3} o C_{6}D_{6} tal como se indica, a
200 (o 300) y 50,3 MHz, respectivamente. Los valores del
desplazamiento químico se dan en ppm y las constantes de
acoplamiento en Hz. Los datos de rotación óptica se obtuvieron en un
polarímetro Perkin-Elmer modelo 241. La
cromatografía de capa fina (CCF) se lleva a cabo usando placas
F-254 de gel de sílice previamente recubiertas de
Merck. La cromatografía en columna se lleva a cabo con gel de
sílice de Merck 60, 200-400 de malla. Los
disolventes se secaron con procedimientos convencionales, y las
reacciones que requerían condiciones anhidras se realizaron bajo
atmósfera de nitrógeno. Las disoluciones del producto final se
secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se evaporaron a
presión reducida en un rotavapor Buchi.
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Ejemplo
1
Procedimiento general A: A una disolución
agitada de tBuOK (7,36 mmol) en 40 ml de CH_{2}Cl_{2} seco bajo
atmósfera de nitrógeno, a -78ºC, se añadió una disolución de éster
trimetílico de
Z-\alpha-fosfonoglicina 26 (7,36
mmol) en 5,0 ml de CH_{2}Cl_{2} seco. Se agitó la disolución
durante 30 min. a esta temperatura y luego se añadió una disolución
de aldehído (6,13 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (25 ml). Tras 5
horas la disolución se neutralizó con un tampón de fosfato. Se
extrajo la fase acuosa con CH_{2}Cl_{2}, se secó sobre
Na_{2}SO_{4} y se evaporó el disolvente a presión reducida. Se
purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna
(hexano/acetato de etilo), proporcionando la enamida en una mezcla
diastereoisomérica Z:E.
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Procedimiento general B: se agitó durante
30 min. una disolución de enamida (11,0 mmol), (Boc)_{2}O
(22,0 mmol) y una cantidad catalítica de DMAP en 40 ml de THF seco,
bajo nitrógeno. Luego se extinguió la disolución con 40 ml de agua
y se extrajo con acetato de etilo. Se secó la fase orgánica sobre
Na_{2}SO_{4} y se evaporó el disolvente a presión reducida. Se
purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna
(hexano/acetato de etilo), dando la enamida protegida con Boc.
\vskip1.000000\baselineskip
Procedimiento general C: A una disolución
de alilprolina (2,34 mmol) en THF seco (4,2 ml) se añadió una
disolución 0,5 M de 9-BBN en THF (1,26 mmol). Se
agitó la reacción durante 12 h y luego se enfrió a 0ºC y se
añadieron agua (0,6 ml), una disolución 3 N de NaOH (0,5 ml) y
H_{2}O_{2} al 30% (0,44 ml). Se agitó la reacción durante 1 h a
temperatura ambiente y luego se sometió a reflujo durante otras 2 h.
Se extrajo la fase acuosa con AcOEt, se secaron las fases orgánicas
recogidas sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y a presión reducida,
se purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna
(hexano/acetato de etilo), dando el alcohol como un aceite
amarillo.
Procedimiento general D: A una disolución
agitada de cloruro de oxalilo (16,9 mmol) en 35 ml de
CH_{2}Cl_{2}, enfriada a -60ºC, se añadieron DMSO (23,1 mmol),
alcohol (5,66 mmol) disuelto en 21 ml de CH_{2}Cl_{2}, TEA
(28,2 mmol). Se calentó la reacción a temperatura ambiente. Tras una
hora se lavó la reacción con 50 ml de agua y se extrajo la fase
acuosa con CH_{2}Cl_{2}. Se secaron sobre Na_{2}SO_{4} las
fases orgánicas recogidas. Se evaporó el disolvente a presión
reducida y se purificó el producto bruto mediante cromatografía en
columna(hexano/acetato de etilo), dando el
aldehído.
aldehído.
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Ejemplo
2
Se enfrió a -60ºC una disolución agitada de 25
(6,0 g, 17,4 mmol) en 84 ml de CH_{2}Cl_{2} y se burbujeó con
O_{3} (velocidad de flujo = 30 l/hora). Tras 1,5 horas se dejó
calentar la reacción hasta temperatura ambiente y se burbujeó con
N_{2} con el fin de eliminar el exceso de O_{3}. Luego se enfrió
la disolución a 0ºC con un baño de hielo y se añadió Me_{2}S
(101,8 mmol, 38 ml). Tras 5 días de agitación a temperatura
ambiente se evaporó el disolvente a presión reducida y se purificó
el producto bruto mediante cromatografía en columna (hexano/acetato
de etilo, 8:2), dando 4,53 g de 14 (75%) como un aceite amarillo.
-[\alpha]_{D}^{22} = -22,03 (c = 1,27, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}), (las señales se dividieron por la
isomería amídica): \delta = 1,4-1,5 [2 s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,6-2,4 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 2,4-3,2 (2 m, 2
H, CH_{2}CHO), 4,3-4,5 (m, 2 H,
CH_{2}-CH-N,
N-CH-COOtBu), 5,15 (s, 2 H,
CH_{2}Ph), 7,30 (m, 5 H, aromáticos), 9,8 (2 s, 1 H, CHO). -
^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por
la isomería amídica): \delta = 200,8, 171,7, 154,0, 136,2, 128,3,
128,0, 127,8, 127,6, 81,4, 67,0, 66,9, 60,8, 60,3, 54,0, 53,2,
49,0, 48,3, 31,0, 30,2, 29,5, 28,9, 28,0, 27,7. - FAB^{+}EM:
calculado para C_{19}H_{25}NO_{5} 347,4, encontrado 348.
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Ejemplo
3
Se siguió el procedimiento general A usando 14 y
se purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna
(hexano/acetato de etilo, 65:35), proporcionando 20 (98%) en una
razón Z:E de 7:1 como aceites incoloros. Isómero
Z:-[\alpha]_{D}^{22} = +38,78 (c = 1,26, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la
isomería amídica): \delta = 1,3-1,5 [2 s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,3 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 2,4-2,7 (2 m, 2
H, =CH-CH_{2}), 3,7 (2 s, 3 H, COOCH_{3}), 4,2
(2 m, 2 H, -CH_{2}-CH-N,
N-CH-COOtBu), 5,10 (m, 4 H,
CH_{2}Ph), 6,15 (m, 1 H, =CH), 7,30 (m, 10 H, aromáticos). -
^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por
la isomería amídica): \delta = 172,4, 164,9, 154,5, 136,2, 132,5,
128,3, 128,2, 127,8, 127,7, 127,6, 81,8, 67,2, 66,9, 60,8, 60,3,
57,9, 57,2, 52,1, 33,8, 33,2, 30,7, 29,8, 29,5, 29,0, 28,0, 27,7,
27,6. - FAB^{+}EM: calculado para C_{30}H_{36}N_{2}O_{8}
552,6, encontrado 553. - Isómero E: -
[\alpha]_{D}^{22} =-4,08 (c = 1,17, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la
isomería amídica): \delta = 1,25-1,50 [3 s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,3 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 2,8-3,3 (2 m, 2
H, =CH-CH_{2}), 3,8 (2 s, 3 H, COOCH_{3}), 4,1
(m, 1 H, -CH_{2}-CH-N), 4,25 (m,
1 H, N-CH-COOtBu), 5,15 (2 s, 4 H,
CH_{2}Ph), 6,30 (m, 1 H, =CH), 7,30 (m, 10 H, aromáticos). -
^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por
la isomería amídica): \alpha = 171,8, 164,4, 154,1, 153,6, 136,4,
135,9, 128,7, 128,4, 128,2, 128,1, 128,0, 127,8, 127,7, 127,6,
126,5, 125,9, 81,2, 80,9, 66,7, 61,0, 60,6, 60,2, 58,8, 58,1, 52,2,
32,7, 32,0, 31,8, 29,9, 29,5, 29,2, 28,8, 27,8, 27,7, 22,5,
14,0.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
Se siguió el procedimiento general B usando 20 y
se purificó el producto bruto resultante mediante cromatografía en
columna (hexano/acetato de etilo, 7:3), dando 27 (98%) como un
aceite amarillo. - Isómero Z: - [\alpha]_{D}^{22} =
+16,95 (c = 1,86, CHCl_{3}). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3})
(las señales se dividieron por la isomería amídica): \delta =
1,3-1,5 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,6-2,2 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 2,3-2,8 (2 m, 2
H, =CH-CH_{2}), 3,7 (s, 3 H, COOCH_{3}),
4,1-4,2 (2 m, 2 H,
=CH-CH_{2}-CH-N,
N-CH-COOtBu), 5,15 (m, 4 H,
CH_{2}Ph), 6,95 (dd, J = 8,5, J = 6,4 Hz, 1 H, =CH), 7,30 (m, 10
H, aromáticos). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales
se dividieron por la isomería amídica): \delta = 171,4, 163,8,
154,6, 154,3, 152,1, 150,4, 139,0, 138,8, 136,2, 135,1, 129,7,
128,3, 128,2, 128,1, 127,8, 127,6, 83,3, 81,2, 77,1, 68,2, 66,8,
60,9, 60,4, 57,5, 56,7, 52,1, 32,8, 32,1, 29,9, 29,1, 28,8, 27,7. -
Isómero E: - [\alpha]_{D}^{22} = +7,34 (c = 1,33,
CHCl_{3}). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}) (las señales se
dividieron por la isomería amídica): \delta =
1,3-1,5 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,6-2,2 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,0-3,3 (m, 2
H, =CH-CH_{2}), 3,75 (2 s, 3 H, COOCH_{3}),
4,1-4,2 (2 m, 2 H,
=CH-CH_{2}-CH-N,
N-CH-COOtBu, 5,1-5,2
(m, 4 H, CH_{2}Ph), 6,3 (m, 1 H, =CH), 7,30 (m, 10 H,
aromáticos). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se
dividieron por la isomería amídica): \delta = 171,6, 163,8,
154,5, 154,3, 152,1, 150,4, 142,8, 142,5, 136,3, 135,2, 128,7,
128,3, 128,2, 128,1, 127,9, 127,8, 127,6, 83,2, 81,1, 68,2, 66,8,
61,1, 60,6, 58,1, 57,4, 51,7, 32,7, 32,0, 29,5, 29,4, 28,9, 28,7,
27,7.
\newpage
Ejemplo
5
Se agitó una disolución de 0,320 g de 27 (0,49
mmol) y una cantidad catalítica de Pd/C al 10% en 5 ml de MeOH bajo
H_{2} durante una noche. Luego se filtró el catalizador a través
de celite y se lavó el lecho de filtración con MeOH. Se evaporó el
disolvente a presión reducida, se disolvió el residuo en MeOH y se
sometió a reflujo durante 48 h. Se eliminó el disolvente y se
separaron los dos diastereoisómeros formados mediante cromatografía
en columna (hexano/acetato de etilo, 7:3), dando 0,122 g de 8a y 2a
(70%) en una razón diastereomérica de 1,4:1 como espuma blanca. -
[\alpha]_{D}^{22} = -10,70 (c = 1,29, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta =
1,43-1,45 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,5 (m, 8 H,
CH_{2}-CH_{2},
BocN-CH-CH_{2}-CH_{2}),
3-69 [m, 1 H, CH-N], 4,1 (m, 1 H,
CH-NBoc), 4,38 (dd, J = 7,7 Hz, J = 1,8 Hz, 1 H,
N-CH-COOtBu), 5,59 (d, J = 5,4 Hz,
1 H, NH). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}): \delta = 170,7,
165,8, 155,8, 147,1, 81,4, 79,3, 59,0, 56,2, 49,9, 32,0, 29,5,
29,1, 28,2, 27,8, 27,0, 26,5. - FAB^{+}EM: calculado para
C_{18}H_{32}N_{2}O_{5} 354,46, encontrado 354. - 8a -
[\alpha]_{D}^{22} = -45,07 (c = 1,69, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \alpha =
1,44-1,46 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,55-2,2 (m, 7H,
CH_{2}-CH_{2},
BocN-CH-CHH-CH_{2}),
2,5 (m, 1H, BocN-CH-CHH), 3,75 [tt,
J = 11,2 Hz, J = 4,2 Hz, 1 H, CH-N], 3,90 (m, 1 H,
CH-NBoc), 4,32 (d, J = 9,2 Hz, 1 H,
NCH-COOtBu), 5,59 (ancho, 1 H, NH). - ^{13}C RMN
(50,3 MHz, CDCl_{3}): \delta = 170,6, 167,9, 155,7, 81,2,
79,4, 77,5, 60,4, 59,0, 52,2, 31,4, 28,5, 28,3, 28,2, 27,8, 27,6. -
FAB^{+}EM: calculado para C_{18}H_{32}N_{2}O_{5} 354,46,
encontrado 354.
A una disolución de 27 (0,640 g, 0,980 mmol) en
4,9 ml de MeOH se añadieron 4,9 ml de NaOH 1 N (4,9 mmol). Tras 18
horas de agitación a temperatura ambiente se evaporó el disolvente a
presión reducida. Se disolvió el residuo sólido en 5 ml de agua y
se añadió HCl 2 N hasta pH 3, luego se extrajo la disolución acuosa
con CH_{2}Cl_{2}. La fase orgánica se secó con
Na_{2}SO_{4}, se evaporó el disolvente a presión reducida y se
purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna
(CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95:5), dando 0,420 g de 28 (85%) como un
sólido blanco.
Isómero Z: - [\alpha]_{D}^{22} =
-57,01 (c = 1,99, CHCl_{3}). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3})
(las señales se dividieron por la isomería amídica): \delta =
1,30-1,50 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,7-2,7 (m, 6 H,
CH_{2}-CH_{2}, =CH-CH_{2}),
4,2-4,3 (m, 2 H,
=CH-CH_{2}-CH-N,
N-CH-COOtBu), 5,1 (m, 2 H,
CH_{2}Ph), 6,6 (m, 1 H, =CH), 7,30 (m, 6 H, aromáticos, NHBoc). -
^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por
la isomería amídica): \delta = 171,5, 168,3, 154,8, 154,5, 140,6,
136,4, 136,1, 133,9, 133,5, 128,3, 128,2, 128,1, 127,8, 127,4,
126,9, 81,3, 80,9, 67,1, 66,9, 65,0, 66,9, 65,0, 57,5, 56,8, 33,4,
32,4, 29,5, 28,5, 28,5, 28,0, 27,8, 27,7, 27,4.
Isómero E: - [\alpha]_{D}^{22} =
-41,63 (c = 1,87, CHCl_{3}). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3})
(las señales se dividieron por la isomería amídica): \delta =
1,35-1,50 [3 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,7-2,4 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 2,7-3,2 (m, 2 H,
=CH-CH_{2}), 4,2-4,3 (m, 2 H,
=CH-CH_{2}-CH-N,
N-CH-COOtBu), 5,1 (m, 2 H,
CH_{2}Ph), 6,7-6,9 (m, 2 H, =CH, NHBoc), 7,30 (m,
5 H, aromáticos). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las
señales se dividieron por la isomería amídica): \delta = 171,7,
167,2, 154,9, 154,5, 154,3, 136,5, 136,2, 128,3, 128,2, 127,7,
127,5, 126,9, 126,3, 126,1, 81,2, 80,4, 66,9, 65,0, 60,7, 60,4,
58,3, 57,7, 32,9, 32,0, 29,5, 28,4, 28,1, 27,8, 27,7, 27,4, 27,1,
14,0.
Al catalizador de
[Rh-(-)-BitianP] preparado tal como se describe en
la bibliografía se le añadió 28 (0,16 mmol) y MeOH (30 ml), se
agitó la disolución resultante durante 30 min. Un autoclave de acero
inoxidable de 200 ml equipado con un agitador magnético y un baño
termostático se presurizó con hidrógeno y se ventiló tres veces. Se
transfirió la disolución al autoclave con una jeringuilla y se
presurizó el autoclave a 10 KPa con hidrógeno. Se agitó la
disolución durante 24 h a 30ºC. Se liberó la presión de hidrógeno,
se evaporó el disolvente. Se sometió el producto bruto a la
siguiente reacción sin purificación adicional.
A una disolución de 32 y 33 como mezcla
diastereomérica en MeOH (1,5 ml) se le añadió una disolución de
CH_{2}N_{2} en Et_{2}O hasta que la CCF mostró que se había
completado la reacción. Se evaporó la disolución y se disolvió el
producto bruto en MeOH (2 ml) y se añadió una cantidad catalítica de
Pd/C, se agitó la mezcla bajo H_{2} durante 12 h. Luego se filtró
el catalizador a través de una almohadilla de celite y se lavó con
MeOH. Se evaporó el disolvente a presión reducida y el producto
bruto, como una espuma blanca, se sometió a reflujo en MeOH durante
48 h. Se evaporó el disolvente a presión reducida y se purificó el
producto bruto mediante cromatografía en columna (hexano/acetato de
etilo 7:3) proporcionando 2a (85%) como un sólido blanco.
Ejemplo
6
Se consiguió esta lactama bicíclica con la misma
secuencia sintética seguida para la lactama 2a usando para la
hidrogenación asimétrica el catalizador de
[Rh-(+)-BitianP].
Se siguió el procedimiento general C usando 25 y
se purificó el residuo resultante mediante cromatografía en columna
(hexano/acetato de etilo, 7:3), dando el alcohol (95%) como un
aceite amarillo. - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta =
1,4 [s, 9 H, C (CH_{3})_{3}], 1,6-2,4 (m,
8 H, CH_{2}-CH_{2}), 3,5-3,8 (2
m, 2 H, CH_{2}OH), 4,1 (m, 1 H,
CH_{2}-CH-N), 4,25 (m, 1 H,
N-CH-COOtBu), 5,15 (s, 2 H,
CH_{2}Ph), 7,30 (m, 5 H, aromáticos).
Se siguió el procedimiento general D usando el
alcohol anterior y se purificó el residuo bruto resultante mediante
cromatografía en columna (hexano/acetato de etilo, 7:3), dando 15
(89%) como un aceite. - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}), (las
señales se dividieron por la isomería amídica): \delta =
1,4-1,5 [2 s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,6-2,8 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 4,05 (m, 1 H,
CH_{2}-CH-N), 4,25 (m, 1 H,
N-CH-COOtBu), 5,15 (s, 2 H,
CH_{2}Ph), 7,30 (m, 5 H, aromáticos), 9,6-9,8 (2
s, 1 H, CHO).
Se siguió el procedimiento general A usando 15 y
se purificó el residuo resultante mediante cromatografía en columna
dando la enamida (95%) como un aceite amarillo. Se sometió el
compuesto sintetizado previamente al procedimiento general B y se
purificó el residuo resultante mediante cromatografía en columna
dando el compuesto protegido con N-Boc (95%) como
sólido blanco. Se agitó una disolución de este compuesto (0,96 mmol)
en MeOH (1 ml) y una cantidad catalítica de Pd/C bajo atmósfera de
hidrógeno durante 12 h. Luego se filtró el catalizador a través de
una almohadilla de celite. Se evaporó el disolvente a presión
reducida dando 0,320 g de 34 (83%) como un sólido blanco (mezcla de
dos diastereoisómeros). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}):
\delta = 1,47, 1,48 [2 s, 18 H, C(CH_{3})_{3}],
1,40-2,1 (m, 10 H,
CH_{2}-CH_{2},
BocN-CH-CHH-CH_{2}),
3,00 (m, 1 H, CH-N), 3,6 (m, 1 H,
N-CH-COOtBu), 4,3 (m, 1 H,
CH-NBoc), 5,05 (da, 1H, NH).
A una disolución de 34 (0,288 g, 0,720 mmol) en
MeOH se añadió NaOH 1 N, tras 1,5 h se acidificó la disolución
hasta pH 3 con HCl 1 N, luego se evaporó la disolución. Se sometió
el producto bruto a la siguiente reacción sin purificación
adicional.
Ejemplo
7
A una disolución del producto bruto 35 (0,720
mmol) en CH_{2}Cl_{2} (80 ml) se le añadió en el orden:
Et_{3}N (0,720 mmol, 0,220 ml), HOBt (0,166 g, 1,22 mmol) y una
cantidad catalítica de DMAP. Tras 15 min. se añadió EDC (0,180 g,
0,937 mmol) y se agitó la disolución durante 24 h. Se añadió a la
disolución H_{2}O (40 ml), se extrajo la fase acuosa con
CH_{2}Cl_{2} y se secaron las fases orgánicas recogidas con
Na_{2}SO_{4}, se filtraron y evaporaron a presión reducida
proporcionando 0,191 g de 3a y 9a en una razón diastereomérica de
1:1 y un 72% de rendimiento en 2 etapas.
(3a). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}):
\delta = 1,41, 1,42 [2 s, 18 H, C(CH_{3})_{3}],
1,5-2,5 (m, 10 H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,80 (m, 1 H,
CH-N), 4,2 (m, 1 H, CH-NBoc), 4,51
(dd, J = 4,8 Hz, 1 H, N-CH-COOtBu),
5,54 (da, 1 H, NH). - (9a). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}):
\delta = 1,42, 1,43 [2 s, 18 H, C(CH_{3})_{3}],
1,50-2,2 (m, 10H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,8 [m, 1 H,
CH-N], 4,25 (dd, J = 4,6 Hz, J = 9,6 Hz, 1 H,
CH-NBoc), 4,42 (dd, J = 2,3 Hz, J = 7,2 Hz, 1 H,
N-CH-COOtBu), 5,30 (sa, 1 H,
NH).
Enamida (37): Se siguió el procedimiento general
D usando 36 y se purificó el producto bruto mediante cromatografía
en columna (hexano/acetato de etilo, 7:3), dando el aldehído (81%)
como un aceite. - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}), (las señales
se dividieron por la isomería amídica): \delta = 1,48 [s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,8-2,2 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,21 (m, 1 H,
CH_{2}-CH-N), 3,45 (m, 1 H,
N-CH-COOtBu), 3,70 (d, J = 12 Hz, 1
H, HCHPh), 4,10 (d, J = 12 Hz, 1 H, HCHPh), 7,30 (m, 5 H,
aromáticos), 9,12 (d, 1 H, CHO).
Se siguió el procedimiento general A usando
aldehído anterior y se purificó el producto bruto mediante
cromatografía en columna (hexano/acetato de etilo, 65:35),
proporcionando la enamida (98%) en una razón de Z:E de 9:1 como
aceites incoloros. Isómero Z - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3})
\delta = 1,31 [s, 9 H, C(CH_{3})_{3}],
1,7-2,2 (m, 4 H, CH_{2}-CH_{2}),
3,3 (m, 1 H, N-CH-COOtBu) 3,5 (s, 1
H, CH_{2}-CH-N), 3,66 (d, J = 13,2
Hz, HCHPh) 3,73 (s, 1 H, COOCH_{3}), 3,79 (d 1 H, HCHPh), 5,11
(d, J = 12,5 Hz, 1 H, OHCHPh), 5,15 (d, J = 12,5 Hz, 1 H, OHCHPh),
6,07 (d, J = 7,4 Hz, 1 H, =CH), 7,10-7,6 (m, 10 H,
aromáticos), 8,15 (sa, 1 H, -NH). - ^{13}C RMN (50,3 MHz,
CDCl_{3}): \delta = 173,7, 165,1, 154,1, 137,4, 136,1, 129,5,
128,5, 128,3, 128,0, 127,8, 127,7, 127,1, 80,5, 66,9, 65,3, 62,3,
57,5, 52,0, 30,1, 28,9,
27,7.
27,7.
Se siguió el procedimiento general B usando la
enamida sintetizada previamente. Se purificó el producto bruto
mediante cromatografía en columna (hexano/acetato de etilo, 7:3)
dando 37 (98%) como un sólido blanco. - ^{1}H RMN (200 MHz,
CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la isomería amídica):
\delta = 1,3-1,5 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,6-2,2 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,1 (m, 1 H,
NCH-COOtBu), 3,5 (m, 1 H,
CH_{2}-CH-N), 3,7 (s, 1 H,
COOCH_{3}), 3,7 (d, J = 12 Hz, 1 H, HCHPh), 3,9 (d, J = 12 Hz, 1
H, HCHPh), 5,20 (d, J = 12 Hz, 1 H, HCHPh), 7,0 (d, J = 8,6 Hz, 1
H, =CH), 7,1-7,4 (m, 10 H, aromáticos).
Amino ácido (39): A una disolución de 37 (0,424
g, 0,713 mmol) en MeOH (4 ml) se le añadió NaOH 1 N (4 mmol, 4 ml)
y se agitó durante 1,5 h. Se acidificó la disolución hasta pH 3 con
HCl 1 N, luego se evaporó la disolución. Se sometió el producto
bruto a la siguiente reacción sin purificación adicional. - ^{1}H
RMN (200 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la
isomería amídica): \delta = 1,35, 1,5 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,7-2,3 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,3 (m, 1 H,
N-CH-COOtBu), 3,65 (m, 1 H,
CH_{2}-CH-N), 3,7 (d, J = 12,8 Hz,
1 H, HCHPh), 3,9 (d, J = 12,8 Hz, 1 H, HCHPh), 6,5 (d, J = 7,6 Hz,
1 H, =CH), 7,1-7,4 (m, 10 H, aromáticos), 9,00 (sa,
1 H, -COOH).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
8
Se agitó una disolución de 39 (0,713 mmol) y una
cantidad catalítica de Pd(OH)_{2}/C al 20% en 1 ml
de MeOH (7 ml) bajo atmósfera de hidrógeno durante 12 h. Luego se
filtró el catalizador a través de una almohadilla de celite y se
evaporó el disolvente a presión reducida. Se disolvió el producto
bruto en MeOH y se sometió a reflujo durante 48 h. Se evaporó el
disolvente a presión reducida y se purificó el producto bruto
mediante cromatografía en columna (hexano/acetato de etilo 6:4)
proporcionando 0,097 g de 1a y 7a como un sólido blanco con un 40%
de rendimiento (en 2 etapas) y razón diastereomérica de 1:1. 1a: -
[\alpha]_{D}^{22} = -4,80 (c = 1,20, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,50, 1,51 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,6-2,4 (m, 5 H,
CH_{2}-CH_{2},
BocN-CH-CHH), 2,95 (m, 1 H,
BocN-CH-CHH), 3,85 [m, 1 H,
(CH-N], 4,15 (d, J = 8,8 Hz, 1 H,
N-CH-COOtBu), 4,60 (m 1 H,
CH-NBoc), 5,25 (ancho, 1 H, NH). - ^{13}C RMN
(50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la isomería
amídica): \delta = 171,7, 169,7, 155,6, 81,8, 79,5, 58,8, 56,5,
56,0, 55,8, 39,5, 33,4, 29,5, 28,2, 27,8. - FAB^{+}EM: calculado
para C_{17}H_{28}N_{2}O_{5} 340,41, encontrado 341. - 2a:
[\alpha]_{D}^{22} = -4,80 (c = 1,20, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,45 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,5 (m, 6 H,
CH_{2}-CH_{2},
BocN-CH-CH_{2}), 4,05 (d, J = 8,8
Hz, 1 H, N-CH-COOtBu), 4,12 (m, 1 H,
CH-N), 4,25 (m, 1 H, CH-NBoc), 5,05
(ancho, 1 H, NH).- ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales
se dividieron por la isomería amídica): \delta = 170,9, 169,8,
155,2, 82,2, 81,8, 79,9, 77,1, 61,2, 58,8, 57,6, 56,0, 55,8, 34,4,
33,8, 33,4, 29,9, 29,5, 29,2, 28,5, 28,1, 27,7. - FAB^{+}EM:
calculado para C_{17}H_{28}N_{2}O_{5} 340,41, encontrado
341.
\vskip1.000000\baselineskip
A una disolución agitada de 36 (1,5 g, 5,14
mmol) en 39 ml de CH_{2}Cl_{2} seco bajo nitrógeno se le
añadieron en el orden: TBDMSCl (0,931 g, 6,17 mmol), TEA (6,17
mmol, 0,94 ml) y DMAP (0,063 g, 0,51 mmol). Tras 12 h se evaporó el
disolvente a presión reducida y se purificó el producto bruto
mediante cromatografía en columna (hexano/acetato de etilo, 9:1),
dando 1,910 g de compuesto (94%) como un aceite incoloro. -
[\alpha]_{D}^{22} = -3,61 (c = 2,52, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta = -0,5 (s, 6
H,CH_{3}Si), 0,85 [s, 9 H,
(CH_{3})_{3}C-Si], 1,4 [s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,1 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 2,9 (m, 1 H,
SiOCH_{2}-CH-N),
3,3-3,4 (m, 3 H,
N-CH-COOtBu,
SiO-CH_{2}), 3,9 (s, 2 H, CH_{2}Ph), 7,3 (m, 5
H, aromáticos). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}): \delta =
173,6, 139,3, 129,1, 127,9, 126,7, 19,9, 67,5, 66,8, 65,8, 58,8,
28,4, 28,0, 27,8, 25,8, 18,1, -3,6.
Se agitó una disolución del alcohol protegido
con sililo (1,850 g, 4,55 mmol) y Pd(OH)_{2}/C al
20% (0,250 g, 0,45 mmol) en 45 ml de MeOH bajo atmósfera de
hidrógeno durante 4 horas. Luego se filtró el catalizador a través
de almohadilla de celite y se lavó con MeOH, se evaporó el
disolvente a presión reducida, dando 1,34 g de compuesto
hidrogenado (94%) como aceite incoloro. -
[\alpha]_{D}^{22} = -5,80 (c = 1,99, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCI3): \delta = 0,4 (s, 6 H,CH_{3}Si),
0,92 [s, 9 H, (CH_{3})_{3}C-Si], 1,49
[s, 9 H, C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,1
(m, 4 H, CH_{2}-CH_{2}), 2,35 (ancho, 1 H, NH),
3,2 (m, 1 H,
SiO-CH_{2}-CH-N),
3,65 (m, 3 H, N-CH-COOtBu,
SiO-CH_{2}).
A una disolución agitada del compuesto anterior
(1,2 g, 3,79 mmol) en 38 ml de CH_{2}Cl_{2} se añadieron
piridina (11,39 mmol, 0,92 ml) y (CF_{3}CO)_{2}O (8,35
mmol, 1,16 ml). Tras 1,5 horas se evaporó el disolvente a presión
reducida y se purificó el producto bruto mediante cromatografía en
columna (hexano/acetato de etilo, 9:1), dando 1,4 g de la
pirrolidina protegida en N (89%) como aceite incoloro.
-[\alpha]_{D}^{22} = -8,62 (c = 2,11, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta = 0,4 (s, 6 H,
CH_{3}Si), 0,9 [s, 9 H,
(CH_{3})_{3}C-Si], 1,47 [s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,7-2,4 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,5 (m, 1 H,
SiO-CHH), 3,75 (dd, J = 10,6 Hz, J = 4,2 Hz, 1 H,
SiO-CHH), 4,2 (m, 1 H,
SiO-CH_{2}-CH-N),
4,35 (t, J = 8,5 Hz 1 H,
N-CH-COOtBu).
A una disolución agitada de pirrolidina
protegida en N (1,2 g, 2,91 mmol) en 29 ml de THF, enfriada a -40ºC,
se le añadió una disolución 1 M de TBAF en THF (3,20 mmol, 3,2 ml).
Luego se dejó calentar la disolución a temperatura ambiente. Tras
2,5 horas se añadieron 30 ml de salmuera y se extrajo la mezcla
resultante con acetato de etilo. Se secó la fase orgánica con
Na_{2}SO_{4} y se evaporó el disolvente a presión reducida. Se
purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna
(hexano/acetato de etilo, 6:4), dando 0,850 g de compuesto
desprotegido en O (98%) como aceite incoloro. -
[\alpha]_{D}^{22} = -6,40 (c = 1,45, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,5 [s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 2,0-2,4 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,4-3,7 (m, 2 H,
HO-CH_{2}), 4,2-4,6 (m, 3 H,
N-CH-COOtBu,
HO-CH_{2}-CH-N).
Se siguió el procedimiento general D usando el
alcohol y se purificó el residuo mediante cromatografía en columna,
(hexano/acetato de etilo, 6:4), dando el aldehído (93%) como sólido
blanco. - [\alpha]_{D}^{22} = +22,48 (c = 1,53,
CHCl_{3}). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,5 [s,
9 H, C(CH_{3})_{3}], 1,8-2,5 (m,
4 H, CH_{2}-CH_{2}), 4,5-4,7 (m,
2 H, CHO-CH-N,
N-CH-COOtBu), 9,7 (s, 1 H, CHO).
Se siguió el procedimiento general A usando 13 y
se purificó el residuo bruto mediante cromatografía en columna
proporcionando la enamida (68%) como aceite incoloro (razón
diastereomérica Z:E = 1:1). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3})
(las señales se dividieron por la isomería amídica y se referían a
la mezcla de dos diastereoisómeros): \delta = 1,5 [s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,6-2,45 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,75 (s, 3 H, COOCH_{3}), 4,6
(m, 1 H, N-CH-COOtBu), 4,8 (dd, J =
18 Hz, J = 10 Hz, 1 H, =CH-CH-N),
5,12 (s, 2 H, CH_{2}Ph), 6,3, 6,8 (2d, J = 10 Hz, 1 H, =CH de
isómero Z, isómero E), 7,35 (m, 5 H, aromáticos).
Se siguió el procedimiento general B usando la
enamida y se purificó el producto bruto mediante cromatografía en
columna proporcionando 40 con un 95% de rendimiento como aceite
incoloro. - ^{1}H RMN (200 MHz, C_{6}D_{6}) (las señales se
dividieron por la isomería amídica y se referían a la mezcla de dos
diastereoisómeros): \delta = 1,3, 1,5 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,6-2,35 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,7 (s, 3 H, COOCH_{3}),
4,6-4,8 (m, 2 H,
N-CH-COOtBu,
=CH-CH-N), 5,25 (m, 2 H,
CH_{2}Ph), 7,0 (m, 1 H, =CH), 7,35 (m, 5 H, aromáticos). -
^{13}C RMN (50,3 MHz, C_{6}D_{6}) (las señales se dividieron
por la isomería amídica y se referían a la mezcla de dos
diastereoisómeros): \delta = 169,1, 163,9, 141,2, 136,1, 129,9,
128,4, 128,2, 127,4, 119,4, 113,7, 83,6, 82,5, 82,0, 68,8, 68,5,
68,2, 62,5, 60,9, 60,8, 58,5, 57,6, 56,8, 53,2, 51,9, 51,7, 51,6,
33,7, 31,8, 30,2, 27,7, 27,5, 26,9.
\vskip1.000000\baselineskip
Se agitó una mezcla Z/E de 40 (0,609 g, 1,01
mmol) y Pd(OH)_{2}/C al 20% (0,054 g) en 10 ml de
MeOH bajo atmósfera de hidrógeno durante 18 h. Se filtró el
catalizador a través de una almohadilla de celite y se lavó con
MeOH. Se evaporó el disolvente a presión reducida y se purificó el
producto bruto mediante cromatografía en columna
(tolueno/Et_{2}O, 85:15), dando 0,365 g de 40 (77%) como un aceite
amarillo. - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}) (las señales se
dividieron por la isomería amídica y se referían a la mezcla de dos
diastereoisómeros): \delta = 1,45 [s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,6-2,7 (m, 6 H, CH_{2}-CH_{2}, BocN-CH-CH_{2}), 3,75 (2 s, 3 H, COOCH_{3}), 4,25-4,4 (2 m, 2 H, BocN-CH, BocN-CH-CH_{2}-CH), 4,55 (m, 1 H, N-CH-COOtBu), 5,30 (d, J = 8,5 Hz, 1 H, NH). -^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la isomería amídica y se referían a la mezcla de dos diastereoisómeros): \delta = 172,4, 170,0, 155,8, 128,9, 128,0, 82,7, 82,0, 79,7, 61,4, 60,6, 58,0, 56,5, 52,2, 51,5, 37,7, 36,4, 35,5, 30,2, 29,7, 29,0, 28,4, 28,1, 27,6, 25,5. - FAB^{+}EM: calculado para C_{20}H_{31}F_{3}N_{2}O_{7} 468,47, encontrado 468.
C(CH_{3})_{3}], 1,6-2,7 (m, 6 H, CH_{2}-CH_{2}, BocN-CH-CH_{2}), 3,75 (2 s, 3 H, COOCH_{3}), 4,25-4,4 (2 m, 2 H, BocN-CH, BocN-CH-CH_{2}-CH), 4,55 (m, 1 H, N-CH-COOtBu), 5,30 (d, J = 8,5 Hz, 1 H, NH). -^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la isomería amídica y se referían a la mezcla de dos diastereoisómeros): \delta = 172,4, 170,0, 155,8, 128,9, 128,0, 82,7, 82,0, 79,7, 61,4, 60,6, 58,0, 56,5, 52,2, 51,5, 37,7, 36,4, 35,5, 30,2, 29,7, 29,0, 28,4, 28,1, 27,6, 25,5. - FAB^{+}EM: calculado para C_{20}H_{31}F_{3}N_{2}O_{7} 468,47, encontrado 468.
\vskip1.000000\baselineskip
Se agitó una disolución de 41 (0,184 g, 0,393
mmol) y NaBH_{4} (0,0298 g, 0,781 mmol) en 8 ml de MeOH durante 1
hora a temperatura ambiente. Se concentró la disolución y se
añadieron 10 ml de agua. Se extrajo la disolución acuosa con
acetato de etilo, se secaron las fases orgánicas recogidas sobre
Na_{2}SO_{4} y se evaporó el disolvente a presión reducida. Se
separaron los dos diastereoisómeros formados en las reacciones
anteriores a esta etapa mediante cromatografía en columna (acetato
de etilo/hexano, 6:4), consiguiendo 0,123 g de 42 (R) y 42 (S)
(84%) en una razón diastereomérica de 2,6:1 como aceite incoloro. -
42 (R): - ^{1}H RMN (200 MHz, C_{6}D_{6}) (las señales se
dividieron por la isomería amídica): \delta = 1,30, 1,45 [2 s, 18
H, C(CH_{3})_{3}], 1,5-1,9 (m, 6
H, CH_{2}-CH_{2},
BocN-CH-CH_{2}), 2,85 (m, 1 H,
BocN-CH-CH_{2}-CH),
3,2-3,4 (m, 4 H, COOCH_{3},
N-CH-COOtBu), 4,65 (m, 1 H,
BocN-CH), 6,6 (ancho, 1 H, NHBoc). - ^{13}C RMN
(50,3 MHz, C_{6}D_{6}) (las señales se dividieron por la
isomería amídica): \delta = 174,1, 173,2, 155,8, 81,4, 81,3,
79,5, 60,6, 60,4, 56,5, 56,3, 52,5, 52,0, 37,7, 31,9, 30,0, 29,8,
28,2, 28,0, 27,9. - FAB^{+}EM: calculado para
C_{18}H_{32}N_{2}O_{6} 372,46, encontrado 373. - 42 (S): -
^{1}H RMN (200 MHz, C_{6}D_{6}) (las señales se dividieron
por la isomería amídica): \delta = 1,30, 1,50 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,50-1,80 (m, 6
H, CH_{2}-CH_{2},
BocN-CH-CH_{2}), 2,8 (m, 1 H,
BocN-CH-CH_{2}-CH),
3,3 (s, 3 H, COOCH_{3}), 3,4 (dd, J = 9,1 Hz, J = 5,9 Hz, 1 H,
NCH-COOtBu), 4,45 (m, 1 H, BocN-CH),
5,3 (ancho, 1 H, NHBoc). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, C_{6}D_{6})
(las señales se dividieron por la isomería amídica): \delta =
171,7, 171,5, 164,2, 164,0, 154,7, 154,3, 153,5, 136,6, 136,4,
135,8, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 127,7, 126,2, 125,9, 125,8,
81,0, 87,1, 66,8, 66,6, 60,8, 60,4, 58,2, 57,5, 52,3, 52,2, 32,8,
31,9, 28,5, 28,1, 27,8, 27,7, 27,4, 27,1. - FAB^{+}EM: calculado
para C_{18}H_{32}N_{2}O_{6} 372,46, encontrado 373.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
9
Se calentó una disolución agitada de 42 (S)
(0,028 g, 0,075 mmol) en 1,5 ml de p-xileno a 130ºC
durante 24 horas. Luego se evaporó el disolvente a presión reducida
y se purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna
(hexano/acetato de etilo, 7:3), dando 19 mg de 1a (74%) como una
espuma blanca. -\alpha_{D}^{22} = -4,80 (c = 1,20,
CHCl_{3}). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,50,
1,51 [2 s, 18 H, C(CH_{3})_{3}],
1,6-2,4 (m, 5 H, CH_{2}-CH_{2},
BocN-CH-CHH), 2,95 (m, 1 H,
BocN-CH-CHH), 3,85 [m, 1 H,
(CH-N], 4,15 (d, J = 8,8 Hz, 1 H,
N-CH-COOtBu), 4,60 (m 1 H,
CH-NBoc), 5,25 (ancho, 1 H, NH). - ^{13}C RMN
(50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la isomería
amídica): \delta = 171,7, 169,7, 155,6, 81,8, 79,5, 58,8, 56,5,
56,0, 55,8, 39,5, 33,4, 29,5, 28,2, 27,8. - FAB^{+}EM: calculado
para C_{17}H_{28}N_{2}O_{5} 340,41, encontrado 341.
\newpage
Ejemplo
10
Se consiguió el compuesto [7a] a partir del
compuesto 42 (R), usando el mismo procedimiento descrito para la
síntesis del compuesto 1a, con un 65% de rendimiento como espuma
blanca. -[\alpha]_{D}^{22} = -4,80 (c = 1,20,
CHCl_{3}). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDC_{l3}): \delta = 1,45 [2
s, 18 H, C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,5
(m, 6 H, CH_{2}-CH_{2},
BocN-CH-CH_{2}), 4,05 (d, J = 8,8
Hz, 1 H, N-CH-COOtBu), 4,12 (m, 1
H, CH-N ), 4,25 (m, 1 H, CH-NBoc),
5,05 (ancho, 1 H, NH). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las
señales se dividieron por la isomería amídica): \delta = 170,9,
169,8, 155,2, 82,2, 81,8, 79,9, 77,1, 61,2, 58,8, 57,6, 56,0, 55,8,
34,4, 33,8, 33,4, 29,9, 29,5, 29,2, 28,5, 28,1, 27,7. - FAB+EM:
calculado para C_{17}H_{28}N_{2}O_{5} 340,41, encontrado
341.
A una suspensión agitada de KH (0,777 g, 19,4
mmol) en DMF anhidro (80 ml) se le añadió el fosfonoacetato de
trietilo (19,4 mmol, 3,9 ml). Se agitó la mezcla a temperatura
ambiente durante 1 h y luego se añadió una disolución hemiaminal
(5,2 g, 16,2 mmol) en DMF (80 ml). Se agitó la reacción durante la
noche a temperatura ambiente, se extinguió con disolución acuosa
saturada de NH_{4}Cl y se extrajo con AcOEt. Se secaron los
extractos orgánicos combinados sobre Na_{2}SO_{4} y se evaporó
el disolvente hasta sequedad y se purificó mediante cromatografía
en columna dando 4,8 g de 43 (75%) en una razón diastereoisomérica
trans:cis de 4:1. - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}) (las señales
se dividieron por la isomería amídica): \delta =
1,2-1,35 (m, 3 H, CH_{3}CH_{2}O), 1,35, 1,40,
1,45, 1,50 [ 4 s, 9 H, C(CH_{3})_{3}],
1,60-2,60 (m, 5 H,
CH_{2}-CH_{2}, CHCO_{2}Et),
2,70-3,1 (2 dd, J_{1} = 4 Hz, J_{2} = 15 Hz, 1
H, CHCO_{2}Et, isómero trans), 3,2-3,5 (2 dd,
J_{1} = 4 Hz, J_{2} = 15 Hz, 1 H, CHCO_{2}Et, isómero cis),
4,13 (dq, J_{1} = J_{2} = 7 Hz, 2 H, CH_{3}CH_{2}O) 4,27 (m,
1 H, CHCO_{2}tBu), 4,45 (m, 1 H,
CH_{2}-CH-N),
5,15-5,35 (m, 2 H, CH_{2}Ph),
7,3-7,4 (m, 5 H, aromáticos). - ^{13}C RMN (50,3
MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la isomería
amídica): \delta = 171,4, 171,3, 171,1, 171,0, 154,4, 154,1,
153,8, 136,5, 136,3, 128,3, 128,2, 127,7, 127,6, 81,2, 66,9, 66,8,
60,8, 60,5, 60,3, 60,2, 55,5, 55,2, 54,5, 39,1, 38,0, 30,4, 29,7,
28,9, 28,7, 28,2, 28,0, 27,8, 27,7, 27,1, 14,1. - FAB+EM: calculado
para C_{21}H_{29}NO_{6} 391,2, encontrado 392.
A una disolución agitada de 43 (1,205 g, 3,08
mmol) en dietil éter seco (31 ml) a -10ºC, se le añadió LiBH_{4}
2 M en THF (1,5 ml, 3,08 mmol). Tras 24 h se añadió una disolución
saturada de NaHCO_{3} (40 ml) y se extrajo la mezcla resultante
con AcOEt. Se secó la fase orgánica sobre Na_{2}SO_{4} y se
evaporó hasta sequedad. Se purificó el producto bruto mediante
cromatografía en columna (hexano/acetato de etilo 1:1), dando 1,01
g de alcohol (94%) como un aceite amarillo. - Isómero trans:
[\alpha]_{D}^{22} = -32,3 (c = 1,02, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,35 [s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,4 (m, 6 H, CH_{2}-CH_{2}, CH_{2}-CH_{2}-O), 3,5-3,7 (m, 2 H, CH_{2}OH), 3,82 (sa, 1 H, OH), 4,22 (dd, J = 7,5, J \sim 0, 1 H, CHCO_{2}tBu), 4,38 (m, 1 H, CH_{2}-CH-N), 5,15 (m, 2 H, CH_{2}Ph), 7,32 (s, 5 H, aromáticos). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la isomería amídica): \delta = 171,4, 156,1, 136,0, 128,4, 128,3, 127,9, 127,8, 127,7, 81,2, 81,1, 67,2, 67,0, 60,4, 59,9, 59,0, 55,2, 55,1, 38,6, 37,7, 28,9, 28,7, 27,8, 27,7. - Isómero cis: [\alpha]_{D}^{22} = -54,0 (c = 1,51, CHCl_{3}). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,33 [s, 9 H, C(CH_{3})_{3}], 1,4-1,24 (m, 6 H, CH_{2}-CH_{2}, CH_{2}-CH_{2}-O), 3,6-3,9 (m, 2 H, CH_{2}OH), 4,08 (dd, J = 9,5, J = 4, 1 H, OH), 4,25 (dd, J = J 8,5, 1 H, CHCO_{2}tBu), 4,40 (m, 1 H, CH_{2}-CH-N), 5,15 (m, 2 H, CH_{2}Ph), 7,35 (s, 5 H, aromáticos). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}): \delta = 27,7, 28,9, 30,4, 37,4, 55,4, 58,8, 60,5, 67,4, 81,3, 127,7, 127,9, 128,3, 136,1, 155,9, 171,8.
C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,4 (m, 6 H, CH_{2}-CH_{2}, CH_{2}-CH_{2}-O), 3,5-3,7 (m, 2 H, CH_{2}OH), 3,82 (sa, 1 H, OH), 4,22 (dd, J = 7,5, J \sim 0, 1 H, CHCO_{2}tBu), 4,38 (m, 1 H, CH_{2}-CH-N), 5,15 (m, 2 H, CH_{2}Ph), 7,32 (s, 5 H, aromáticos). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la isomería amídica): \delta = 171,4, 156,1, 136,0, 128,4, 128,3, 127,9, 127,8, 127,7, 81,2, 81,1, 67,2, 67,0, 60,4, 59,9, 59,0, 55,2, 55,1, 38,6, 37,7, 28,9, 28,7, 27,8, 27,7. - Isómero cis: [\alpha]_{D}^{22} = -54,0 (c = 1,51, CHCl_{3}). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta = 1,33 [s, 9 H, C(CH_{3})_{3}], 1,4-1,24 (m, 6 H, CH_{2}-CH_{2}, CH_{2}-CH_{2}-O), 3,6-3,9 (m, 2 H, CH_{2}OH), 4,08 (dd, J = 9,5, J = 4, 1 H, OH), 4,25 (dd, J = J 8,5, 1 H, CHCO_{2}tBu), 4,40 (m, 1 H, CH_{2}-CH-N), 5,15 (m, 2 H, CH_{2}Ph), 7,35 (s, 5 H, aromáticos). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}): \delta = 27,7, 28,9, 30,4, 37,4, 55,4, 58,8, 60,5, 67,4, 81,3, 127,7, 127,9, 128,3, 136,1, 155,9, 171,8.
Se añadió una disolución del alcohol (0,304 g,
0,87 mmol) en CH_{2}Cl_{2} seco (2,5 ml) a una suspensión de
peryodinano de Dess-Martin (0,408 g, 1,13 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} seco (2,5 ml) a temperatura ambiente. Tras 1 h se
añadieron Et_{2}O y NaOH 1 N hasta disolución transparente. Se
extrajo la fase acuosa dos veces con Et_{2}O; se lavaron las
fases orgánicas recogidas con H_{2}O, se secaron con
Na_{2}SO_{4}, y se evaporó hasta sequedad. Se purificó el
producto bruto mediante cromatografía en columna (hexano/acetato de
etilo 7:3) produciendo 0,277 g de 17 (92%). - Isómero trans:
[\alpha]_{D}^{22} = -48,65 (c = 1,01, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la
isomería amídica): \delta = 1,35-1,45 [2 s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,6-2,6 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 2,8-3,1 (2 m, 2
H, CH_{2}CHO), 4,3 (m, 1 H,
CHO-CH_{2}-CH-N),
4,6 (m, 1 H, N-CH-COOR), 5,15 (m, 2
H, CH_{2}Ph), 7,30 (m, 5 H, aromáticos), 9,1, 9,3 (2 m, 1H, CHO).
- ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por
la isomería amídica): \delta = 200,3, 171,4, 154,1, 136,2, 128,4,
128,2, 128,0, 127,8, 127,7, 81,3, 67,1, 66,9, 60,5, 60,1, 53,4,
52,5, 49,0, 48,4, 29,5, 28,6, 28,3, 27,8, 27,7, 27,3.
Se hizo reaccionar la mezcla de aldehídos 14 y
17 siguiendo el procedimiento general A. Se purificó el producto
bruto mediante cromatografía en columna (hexano/acetato de etilo
7:3), produciendo la enamida con un 99% de rendimiento, como una
mezcla trans:cis, Z/E. Isómero trans-Z:
[\alpha]_{D}^{22} = -61,84 (c = 1,01, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la
isomería amídica): \delta = 1,35-1,50 [2 s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,6-2,3 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 2,3-2,8 (2 m, 2
H, =CH-CH_{2}), 3,75 (s, 3 H, COOCH_{3}),
4,15-4,25 (2 m, 2 H,
-CH_{2}-CH-N y
N-CH-COOtBu), 5,15 (m, 4 H,
CH_{2}Ph), 6,55 (t, J = 8,5 Hz, 1 H, =CH), 7,35 (m, 10 H,
aromáticos). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se
dividieron por la isomería amídica): \delta = 171,4, 164,8, 164,6,
154,4, 153,9, 153,7, 136,4, 136,2, 135,9, 135,7, 133,0, 132,0,
128,4, 128,3, 128,2, 128,1, 128,0, 127,9, 127,8, 127,6, 126,7, 81,2,
67,3, 67,2, 67,0, 66,8, 60,6, 60,2, 57,6, 56,7, 52,3, 33,5, 32,5,
28,5, 27,7, 27,4. - FAB^{+}EM: calculado para
C_{30}H_{36}N_{2}O_{8} 552,6, encontrado 552.
Isómero trans E: [\alpha]_{D}^{22}
= -50,16 (c = 1,48, CHCl_{3}). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3})
(las señales se dividieron por la isomería amídica): \delta =
1,35-1,45 [2 s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}] 1,6-2,4 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 2,7-3,1 (2 m, 2
H, =CH-CH_{2}), 3,8 (2 s, 3 H, COOCH_{3}),
4,1-4,3 (2 m, 2 H,
-CH_{2}-CH-N e
N-CH-COOtBu), 5,10 (m, 4 H,
CH_{2}Ph), 6,50 (m, 1 H, =CH), 7,25 (m, 10 H, aromáticos). -
^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por
la isomería amídica): \delta = 171,7, 171,5, 164,2, 164,0, 154,7,
154,3, 153,5, 136,6, 136,4, 135,8, 128,4, 128,3, 128,2, 128,1,
127,7, 126,2, 125,9, 125,8, 81,0, 87,1, 66,8, 66,6, 60,8, 60,4,
58,2, 57,3, 52,2, 32,8, 31,9, 28,5, 28,1, 27,8, 27,7, 27,4,
27,1.
Se hizo reaccionar la mezcla de enamidas (0,394
g, 0,71 mmol) siguiendo el procedimiento general B. La cromatografía
en columna del producto bruto (hexano/acetato de etilo 75:25)
proporcionó 0,287 g (73%) del isómero trans puro 23. - Isómero Z:
[\alpha]_{D}^{22} = -50,98 (c = 1,56, CHCl_{3}). -
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la
isomería amídica): \delta = 1,3-1,5 [4 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,7-2,6 (m, 6 H,
CH_{2}-CH_{2} y =CH-CH_{2}),
3,7 (s, 3 H, COOCH_{3}), 4,1-4,3 (m, 2 H,
-CH_{2}-CH-N y
N-CH-COOtBu), 5,15 (m, 4 H,
CH_{2}Ph), 6,8 (m, 1 H, =CH), 7,30 (m. 10 H, aromáticos). -
^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por
la isomería amídica): \delta = 171,4, 163,9, 154,6, 154,5, 150,0,
146,2, 138,5, 138,0, 136,2, 129,9, 128,3, 128,2, 128,1, 127,8, 83,4,
81,2, 68,3, 67,0, 66,8, 60,6, 60,2, 56,9, 56,2, 52,2, 32,9, 32,0,
28,3, 27,8, 27,7, 27,3. - FAB^{+}EM: calculado para
C_{35}H_{44}N_{2}O_{10} 652,7, encontrado 652.
Isómero E: ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}):
\delta = 1,3-1,4 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,3 (m, 4 H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,0 (2 m, 2 H,
=CH-CH_{2}), 3,65 (2 s, 3 H, COOCH_{3}), 4,2 (m,
2 H, -CH_{2}-CH-N y
N-CH-COOtBu), 5,15 (m, 4 H,
CH_{2}Ph), 6,1 (2 t, J = 8,5 Hz, 1 H, =CH), 7,30 (m, 10 H,
aromáticos). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}): \delta =
171,5, 163,7, 154,6, 154,3, 152,2, 150,4, 142,7, 142,2, 136,3,
135,1, 128,9, 128,3, 128,2, 128,0, 127,8, 127,7, 83,4, 83,3, 81,1,
77,1, 68,3, 66,9, 66,7, 60,7, 60,3, 57,6, 56,8, 51,7, 32,9, 32,0,
28,4, 28,0, 27,7, 27,3, 27,0.
Ejemplo
11
Se agitó una disolución de 44 (0,489 g, 0,75
mmol) y Pd(OH)_{2}/C al 20% (catalítico) en MeOH
(7,5 ml) bajo H_{2} durante una noche. Se eliminó el catalizador
por filtración y la mezcla se sometió a reflujo durante 24 h. Luego
se eliminó el disolvente y se separaron los dos productos
diastereoisómeros mediante cromatografía en columna (hexano/acetato
de etilo 6:4), dando 0,186 g de 5a y 11a (70%) en una razón
diastereisomérica de 1,4:1. - 5a: ^{1}H RMN (200 MHz,
CDCl_{3}): \delta = 1,45-1,50 [2 s, 18 H, C
(CH_{3})_{3}], 1,55-2,60 (m, 8 H,
CH_{2}-CH_{2} y
BocN-CH-CH_{2}-CH_{2}),
3,68 [tt, J = 14,9 Hz y 4,2 Hz, 1 H,
(R)_{2}CH-N], 4,05 (m, 1 H,
CH-NBoc), 4,35 (t, J = 8,5 Hz, 1H,
N-CH-COOtBu), 5,28 (ancho, 1 H, NH).
- FAB^{+}EM: calculado para C_{18}H_{32}N_{2}O_{5}
354,46, encontrado 354.
11a: [\alpha]_{D}^{22} = -107,9 (c
= 1,7, CHCl_{3}). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta =
1,45-1,50 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,75-2,50 (m, 8 H,
CH_{2}-CH_{2} y
BocN-CH-CH_{2}-CH_{2}),
3,70 [m, 1 H, CH-N], 4,15 (m, 1 H,
CH-NBoc), 4,50 (t, J = 7,0 Hz, 1H,
NCH-COOtBu), 5,55 (ancho, 1 H, NH). - ^{13}C RMN
(50,3 MHz, CDCl_{3}): \delta = 170,6, 168,5, 155,5, 81,4, 79,3,
59,0, 56,2, 49,9, 32,3, 28,1, 27,8, 26,5, 25,9. - FAB^{+}EM:
calculado para C_{18}H_{32}N_{2}O_{5} 354,46, encontrado
354.
Se siguió el procedimiento general C usando 43 y
se purificó el residuo bruto mediante cromatografía en columna
proporcionando el alcohol con un rendimiento del 98%. - ^{1}H RMN
(200 MHz, CDCl_{3}) \delta = 1,32 [s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,4-2,4 (m, 8 H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,5-3,7 (m, 2 H,
CH_{2}OH), 4,1 (m, 1 H,
CH_{2}-CH-N), 4,24 (m, 1 H,
N-CH-COOtBu), 5,05 (s, 2 H,
CH_{2}Ph), 7,25 (m, 5 H, aromáticos).
Se siguió el procedimiento general D usando el
alcohol y se purificó el producto bruto mediante cromatografía en
columna (hexano/acetato de etilo 6:4) proporcionando 18 con un
rendimiento del 82% - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}), (las
señales se dividieron por la isomería amídica): \delta = 1,32,
1,45 [2 s, 9 H, C(CH_{3})_{3}],
1,5-2,7 (m, 8 H, CH_{2}-CH_{2}),
4,1 (m, 1 H, CH_{2}-CH-N), 4,25
(m, 1 H, NCH-COOR), 5,15 (s, 2 H, CH_{2}Ph),
7,20-7,40 (m, 5 H, aromáticos),
9,6-9,8 (2 m, 1 H, CHO).
Se siguió el procedimiento general A usando 18 y
se purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna
(hexano/acetato de etilo 6:4) proporcionando la enamida con un
rendimiento del 90% (razón diastereomérica Z/E = 7:1) - ^{1}H RMN
(200 MHz, CDCl_{3}), (las señales se dividieron por la isomería
amídica): \delta = 1,32, 1,42 [s, 9 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,7 (m, 8 H, CH_{2}-CH_{2}), 3,71 (s, 1 H, COOCH_{3}), 4,1 (m, 1 H, CH_{2}-CH-N), 4,22 (m, 1 H, N-CH-COOtBu), 5,0-5,20 (m, 4 H, CH_{2}Ph), 6,6 (m, 1 H, =CH), 7,20-7,45 (m, 10 H, aromáticos).
C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,7 (m, 8 H, CH_{2}-CH_{2}), 3,71 (s, 1 H, COOCH_{3}), 4,1 (m, 1 H, CH_{2}-CH-N), 4,22 (m, 1 H, N-CH-COOtBu), 5,0-5,20 (m, 4 H, CH_{2}Ph), 6,6 (m, 1 H, =CH), 7,20-7,45 (m, 10 H, aromáticos).
Se siguió el procedimiento general B usando la
enamida y se purificó el residuo bruto mediante cromatografía en
columna dando 46 (98%). - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}), (las
señales se dividieron por la isomería amídica): \delta = 1,32,
1,42 [2 s, 18 H, C(CH_{3})_{3}],
1,5-2,2 (m, 8 H, CH_{2}-CH_{2}),
3,71 (s, 1 H, COOCH_{3}), 3,9 (m, 1 H,
CH_{2}-CH-N), 4,22 (m, 1 H,
NCH-COOtBu), 5,0-5,20 (m, 4 H,
CH_{2}Ph), 6,9 (m, 1 H, =CH), 7,20-7,45 (m, 10 H,
aromáticos). - ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) (las señales se
dividieron por la isomería amídica): \delta = 141,6, 128,4,
128,2, 128,1, 127,8, 127,7, 68,2, 66,8, 60,5, 58,1, 52,1, 31,3,
29,5, 27,1, 27,3, 24,6.
\newpage
Ejemplo
12
A una disolución de 46 (0,093 g, 0,141 mmol) en
MeOH (2 ml) se le añadió NaOH 1 N (0,705 mmol, 0,705 ml) y se agitó
durante 1,5 h. Se acidificó la disolución hasta pH 3 con HCl 1 N,
luego se evaporó la disolución. Se sometió el producto bruto a la
siguiente reacción sin purificación adicional. - ^{1}H RMN (200
MHz, CDCl_{3}) (las señales se dividieron por la isomería
amídica): \delta = 1,25, 1,48 [2 s, 18 H,
C(CH_{3})_{3}], 1,5-2,4 (m, 8 H,
CH_{2}-CH_{2}), 4,1 (m, 1 H,
CH_{2}-CH-N), 4,3 (m, 1 H,
NCH-COOtBu), 5,12 (s, 2 H, CH_{2}Ph), 6,65 (m, 1
H, =CH), 7,1-7,4 (m, 5 H, aromáticos), 9,00 (sa, 1
H, -COOH).
Se sometió a reflujo una disolución del
compuesto anterior en xileno durante 48 h. Se evaporó el disolvente
y se purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna
dando 6a y 12a con un 40% de rendimiento.
6a - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}) (las
señales se dividieron por la isomería amídica): \delta = 1,43,
1,45 [2 s, 18 H, C(CH_{3})_{3}],
1,51-2,40 (m, 10 H,
CH_{2}-CH_{2}), 3,75 [m, 1 H,
CH-N], 4,22 (m, 1 H, CH-NBoc), 4,48
(t, J = 17 Hz, 1H, N-CH-COOtBu), 5,7
(ancho, 1 H, NH).
12a - ^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}) (las
señales se dividieron por la isomería amídica): \delta = 1,47,
1,48 [2 s, 18 H, C(CH_{3})_{3}],
1,55-2,50 (m, 8 H,
CH_{2}-CH_{2}), 4,0 (m, 1 H,
CH-N), 4,30 (m, 1 H, CH-NBoc), 4,50
(dd, J = 5,4 Hz, J = 17 Hz, 1H, NCH-COOtBu), 6,0
(da, 1 H, NH).
Ejemplo
13
Usando las lactamas bicíclicas preparadas según
los ejemplos anteriores, se prepararon los compuestos
peptidomiméticos respectivos que contienen la secuencia RGD según
el método descrito en Gennari et al.: Eur. J. Org. Chem.,
1999, 379-388.
Los ejemplos 14-47 pueden leerse
más fácilmente haciendo referencia a las figuras
9-12.
Ejemplo
14
Reactivos y disolventes: la resina Sasrin
(200-400 de malla, 1,02 mmol/g) se adquirió de
Bachem. Todos los disolventes usados para la síntesis en fase
sólida fueron de calidad HPLC o de calidad de reactivo analítico y
se secaron sobre tamices moleculares antes de su uso. Cromatografía
en columna: gel de sílice (Kieselgel 60, 230-400 de
malla). CCF: placas de sílice (60 F_{254}, 0,25 mm, Merck). RMN:
Bruker AC-200, AC-300 y
Avance-400 (200 MHz, 300 MHz y 400 MHz para ^{1}H,
50,3 MHz, 75,4 MHz y 100,5 MHz para ^{13}C). Rotaciones ópticas:
polarímetro Perkin Elmer 241. Espectrometría de masas: VG 7070
EQ-HF y PESCIEX API-100. Análisis
elemental: Perkin Elmer 240. Todas las reacciones en fase sólida se
llevaron a cabo en un agitador de muñeca.
Abreviaturas: DCM: diclorometano, DIC:
N,N'-diisopropilcarbodiimida, HOAt
1-hidroxi-7-azabenzotriazol,
HOBt: 1-hidroxibenzotriazol, HATU: hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio,
TNBS: ácido 2,4,6-trinitrobencenosulfónico.
HOBt: 1-hidroxibenzotriazol, HATU: hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio,
TNBS: ácido 2,4,6-trinitrobencenosulfónico.
La prueba de TNBS se realizó siguiendo este
procedimiento: se tomaron muestras de unas pocas perlas de resina y
se lavaron varias veces con etanol. Luego se colocó la muestra en un
vial y se añadieron 1 gota de una disolución al 10% de DEPEA en DMF
y 1 gota de ácido 2,4,6-trinitrobencenosulfónico
(TNBS) al 1% en DMF. Luego se observó la muestra y se observaron
cambios de color. La prueba de TNBS se considera positiva (presencia
de grupos amino libres) cuando las perlas de resina se vuelven
naranjas o rojas en el plazo de 1 min. y negativa (sin grupos amino
libres) cuando las perlas permanecen incoloras.
Procedimiento general 1. Preparación de
N-Fmoc-Plant.-OH
(Plant.1-8). A una disolución del
N-Boc-Plant.-OtBu de partida (0,62
mmol) en diclorometano (4,8 ml) se le añadió, bajo N_{2}, ácido
trifluoroacético (4,8 ml) y se agitó la mezcla resultante a
temperatura ambiente durante 1 h. Luego se evaporaron los
disolventes a presión reducida, se disolvió el residuo bruto en THF
(0,32 ml) y se añadió Na_{2}CO_{3} al 10% (0,77 ml). Tras 15
min. se enfrió la disolución hasta 0ºC, se añadió una disolución de
Fmoc-ONSu (95 mg) en THF (1,4 ml) y se agitó la
mezcla resultante a temperatura ambiente durante 3 h (CCF
CHCl_{3}/MeOH/AcOH 75:25:5). Luego se evaporó el THF a presión
reducida, se lavó la fase acuosa con AcOEt, se añadió HCl conc.
hasta pH 3-4 y se extrajo la disolución con AcOEt
(3 x 5 ml). Se secaron las fases orgánicas combinadas con
Na_{2}SO_{4} y se evaporaron a presión reducida para producir
el producto bruto como una espuma blanca, que se usó sin
purificación adicional.
Ejemplo
15
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
global siguiendo el procedimiento general 1. ^{1}H RMN (200 MHz,
C_{6}D_{6}, 3 23ºK) \delta = 1,1-2,0 (m, 8 H,
4 CH_{2}), 2,9 (m, 1 H, CH-N), 4,12 (dd, J_{1} =
J_{2} = 6,5 Hz, 1 H, CH-CH_{2}O),
4,20-4,50 (m, 4 H, CH-NHFmoc,
CHCO_{2}H, CH_{2}O) 6,30 (d, J = 7 Hz, 1 H, NH),
7,10-7,30 (m, 4 H, aromáticos),
7,45-7,65 (m, 4 H, aromáticos), 11,2 (sa, 1 H,
CO_{2}H).
^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) \delta =
26,5, 26,9, 28,8, 31,9, 47,0, 50,2, 56,9, 58,5, 67,1, 119,8, 125,2,
127,1, 127,6, 141,2, 143,7, 143,9, 15 6,6, 170,3, 173,2, 174,0.
EM (FAB^{+}): 421 (M+1).
Ejemplo
16
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
global siguiendo el procedimiento general 1. ^{1}H RMN - (200
MHz, C_{6}D_{6}, 323ºK) \delta = 1,1-2,0 (m,
8 H, 4 CH_{2}), 3,0 (m, 1 H, CH-N), 3,9 (m, 1 H,
CH-NHFmoc), 4,12 (dd, J, = J_{2} = 6,5 Hz, 1 H,
CH-CH_{2}O), 4,25-4,55 (m, 3 H,
CHCO_{2}H, CH_{2}O), 6,02 (sa, 1 H, NH),
7,10-7,25 (m, 4 H, aromáticos),
7,45-7,60 (m, 4 H, aromáticos), 7,70 (sa, 1 H
CO_{2}H). ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) \delta = 27,7,
27,8, 28,1, 31,3, 47,0, 51,8, 58,6, 60,5, 67,0, 119,8, 125,1, 127,0,
127,6, 141,1, 143,8, 156,5, 170,0, 173,2, 174,3.
EM (FAB^{+}): 421 (M+1).
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
global siguiendo el procedimiento general 1.
^{1}H-RMN (200 MHz, C_{6}D_{6}, 323ºK)
\delta = 1,1-2,0 (m, 8 H, 4 CH_{2}),
3,0-3,2 (m, 1 H, CH-N), 4,20 (dd,
J_{1} = J_{2} = 7 Hz, 1 H, CH-CH_{2}O),
4,25-4,50 (m, 4 H, CH-NHFmoc,
CHCO_{2}H, CH_{2}O), 6,43 (d, J = 7 Hz, 1 H, NH),
7,10-7,30 (m, 4 H, aromáticos),
7,40-7,80 (m, 4 H, aromáticos), 10,80 (sa, 1 H,
CO_{2}H). ^{13}C-RMN (50,3 MHz, CDC 13)
\delta = 27,3, 27,4, 28,0, 32,5, 47,1, 51,9, 58,9, 60,2, 67,1,
119,8, 125,2, 127,0, 127,6, 141,2, 143,8, 143,9, 156,8, 169,5,
173,8. EM (FAB^{+}): 421
(M+1).
(M+1).
Ejemplo
18
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
global siguiendo el procedimiento general 1.
^{1}H-RMN (200 MHz, C_{6}D_{6}, 323ºK)
\delta = 0,8-1,9 (m, 8 H, 4 CH_{2}), 3,15 (m, 1
H, CH-N), 4,10 (dd, J_{1} = J_{2} = 6 Hz, 1 H,
CH-CH_{2}O), 4,30-4,60 (m, 4 H,
CH-NHFmoc, CHCO_{2}H, CH_{2}O), 6,20 (sa, 1 H,
NH), 7,10-7,30 (m, 4 H, aromáticos),
7,50-7,60 (m, 4 H aromáticos), 9,80 (sa, 1 H,
CO_{2}H). ^{13}C-RMN (50,3 MHz, CDCl_{3})
\delta = 25,3, 26,6, 27,5, 32,1, 46,9, 49,9, 57,7, 58,8, 67,2,
119,8, 125,1, 127,0, 127,6, 141,1, 143,7, 143,8, 156,6, 173,1,
174,2. EM (FAB^{+}): 421 (M+1).
Ejemplo
19
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
global siguiendo el procedimiento general 1.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta =
1,2-2,4 (m, 10 H, 5 CH_{2}), 2,72 (s, 1 H
CH-CH_{2}O), 3,90 (m, 1 H, CH-N),
4,25 (m, 1 H, CH-CO_{2}H), 4,4 (m, 2 H,
CH_{2}O), 4,75 (m, 1 H, CH-NHFmoc), 6,35 (d, J = 5
Hz, 1 H, NH), 7,3-7,9 (m, 8 H, aromáticos), 9,6 (s,
CO_{2}H). ^{13}C-RMN (50,3 MHz, CDCl3) \delta
= 25,36, 27,15, 27,39, 31,34, 32,97, 34,00, 47,20, 54,75, 59,39,
60,67, 67,08, 119,84, 125,07, 127,02, 127,59, 141,23, 143,84,
143,92, 155,78, 172,04, 174,67. EM (FAB^{+}): 435 (M+1).
Ejemplo
20
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
global siguiendo el procedimiento general 1.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta =
1,6-2,3 (m, 10 H, 5 CH_{2}), 2,65 (s, 1 H,
CH-CH_{2}O), 3,98 (m, 1 H, CH-N),
4,22 (m, 1 H, CH-CO_{2}H), 4,5 (m, 3 H,
CH-NHFmoc, CH_{2}O), 6,3 (sa, 1 H, NH),
7,28-7,85 (m, 8 H, aromáticos), 9,6 (sa, 1 H,
CO_{2}H). ^{13}C-RMN (50,3 MHz, CDCl_{3})
\delta = 22,02, 25,25, 26,63, 32,96, 46,92, 58,54, 60,60, 61,76,
68,74, 119,91, 124,77, 124,82, 127,00, 127,71. EM (FAB^{+}): 435
(M+1).
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
global siguiendo el procedimiento general 1.
^{1}H-RMN (200 MHz, CDCl_{3}) \delta =
1,70-2,35 (m, 10 H, 5 CH_{2}), 2,70 (m, 1 H,
CH-CH_{2}O), 4,05 (m, 1 H, CH-N),
4,25 (m, 1 H, CH-NHFmoc), 4,40 (m, 2 H, CH_{2}O),
4,65 (m, 1 H, CH-CO_{2}H), 6,15 (sa, 1 H, NH),
7,10-7,80 (8 H, aromáticos).
^{13}C-RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) \delta = 25,3,
26,9, 29,6, 32,1, 34,0, 47,0, 54,7, 59,4, 60,4, 67,1, 119,8, 119,9,
124,6, 125,1, 127,0, 127,5, 127,6, 131,1. EM (FAB^{+}): 435
(M+1).
En un recipiente de reacción en fase sólida se
suspendió resina Sasrin (500 mg, 0,51 mmol) en una disolución de
N-Fmoc-Gly-OH (455
mg, 1,53 mmol), HOBt (206 mg, 1,53 mmol), DIC (0,24 ml, 1,53 mmol) y
DMAP (19 mg, 0,15 mmol) en DMF (10 ml) durante 15 h. Se drenó la
disolución y se lavó la resina con DMF (3 x 10 ml) y DCM (3 x 10
ml). Los grupos hidroxilo que posiblemente no reaccionaron presentes
se taparon mediante tratamiento con una disolución de anhídrido
acético (0,096 ml, 1 mmol) y DMAP (57 mg, 0,51 mmol) en DMF (12 ml)
durante 2 h. Se drenó la disolución y se lavó la resina con DMF (3
x 10 ml) y DCM (3 x 10 ml).
En un recipiente de reacción en fase sólida, se
trató la resina
N-Fmoc-Gly-O-Sasrin
(0,51 mmol) con una disolución de piperidina al 20%/DMF (10 ml, 1 x
3 min., 2 x 17 min.). Se drenó la disolución y se lavó la resina con
DMF (3 x 10 ml), MeOH (2 x 10 ml) y DCM (3 x 10 ml). Se evaluó la
desprotección realizando una prueba de TNBS. Se disolvieron
N-Fmoc-Arg(Pmc)-OH
(1,014 g, 1,53 mmol) y HOAt (208 mg, 1,53 mmol) en DCM/DMF 2:1 (10
ml). A 0ºC, se añadió DIC (0,24 ml, 1,53 mmol) gota a gota a esta
disolución. Se agitó la mezcla resultante durante 10 min. a esta
temperatura y durante 10 min. adicionales a temperatura ambiente,
luego se añadió a la resina. Se agitó esta mezcla a temperatura
ambiente durante 2,5 h. Se drenó la disolución y se lavó la resina
con DMF (3 x 10 ml) y DCM (3 x 10 ml). Se evaluó el éxito del
acoplamiento realizando una prueba de TNBS. Se taparon los grupos
amino que no reaccionaron posiblemente presentes mediante
tratamiento con una disolución de acetilimidazol (560 mg, 5,1 mmol)
en DCM (12 ml) durante 2 h. Se drenó la disolución y se lavó la
resina con DCM (3 x 10 ml).
Ejemplo
24
En un recipiente de reacción en fase sólida, se
trató la resina de
N-Fmoc-Arg(Pmc)-Gly-O-Sasrin
(0,51 mmol) con una disolución de piperidina al 20%/DMF (10 ml, 1 x
3 min., 2 x 17 min.). Se drenó la disolución y se lavó la resina
con DMF (3 x 10 ml), MeOH (2 x 10 ml) y DCM (3 x 10 ml). Se evaluó
la desprotección realizando una prueba de TNBS. Se suspendió la
resina en una disolución de
N-Fmoc-Plant.-OH (0,54 mmol), HATU
(387 mg, 1,02 mmol), HOAt (139 mg, 1,02 mmol) y
2,4,6-colidina (0,135 ml, 1,02 mmol) en DMF/DCM 3:1
(13 ml) durante 15 h. Se drenó la disolución y se lavó la resina
con DMF (3 x 10 ml), MeOH (2 x 10 ml) y DCM (3 x 10 ml). Se evaluó
el éxito del acoplamiento realizando una prueba de TNBS. Se taparon
los grupos amino sin reaccionar posiblemente presentes mediante
tratamiento con una disolución de acetilimidazol (560 mg, 5,1 mmol)
en DCM (12 ml) durante 2 h. Se drenó la disolución y se lavó la
resina con DCM (3 x 10 ml).
Ejemplo
25
En un recipiente de reacción en fase sólida, se
trató la resina de
N-Fmoc-Plant.-Arg(Pmc)-Gly-O-Sasrin
(0,51 mmol) con una disolución de piperidina al 20%/DMF (10 ml, 1 x
3 min., 2 x 17 min.). Se drenó la disolución y se lavó la resina
con DMF (3 x 10 ml), MeOH (2 x 10 ml) y DCM (3 x 10 ml). Se evaluó
la desprotección realizando una prueba de TN-BS. Se
suspendió la resina en una disolución de
N-Fmoc-Asp(tBu)-OH
(840 mg, 2,04 mmol), HATU (776 mg, 2,04 mmol), HOAt (278 mg, 2,04
mmol) y 2,4,6-colidina (0,27 ml, 2,04 mmol) en
DMF/DCM 3:1 (13 ml) durante 15 h. Se drenó la disolución y se lavó
la resina con DMF (3 x 10 ml), MeOH (2 x 10 ml) y DCM (3 x 10 ml).
Se evaluó el éxito del acoplamiento realizando una prueba de TNBS.
Se taparon los grupos amino sin reaccionar posiblemente presentes
mediante tratamiento con una disolución de acetilimidazol (560 mg,
5,1 mmol) en DCM (12 ml) durante 2 h. Se drenó la disolución y se
lavó la resina con DCM (3 x 10 ml).
En un recipiente de reacción en fase sólida, se
trató la resina de
N-Fmoc-Asp(tBu)-Plant.-Arg(Pmc)-Gly-O-Sasrin
(739 mg) con una disolución de piperidina al 20%/DMF (10 ml, 1 x 3
min., 2 x 17 min.). Se drenó la disolución y se lavó la resina con
DMF (3 x 10 ml), MeOH (2 x 10 ml) y DCM (3 x 10 ml). Se evaluó la
desprotección realizando una prueba de TNBS. La resina se trató con
disolución de TFA al 1%/DCM (7,4 ml x 3 min.). Se neutralizaron
inmediatamente los filtrados con una disolución de piridina al
18%/MeOH (0,89 ml). Se combinaron las fracciones que contenían el
producto (CCF DCM/MeOH 8:2) y se concentraron a presión reducida
para dar un residuo, que se purificó a partir de las sales de
piridinio mediante cromatografía de exclusión molecular (resina
AMBERLITE XAD-2, H_{2}O después MeOH). La
evaporación de las fracciones de MeOH combinadas que contenían el
producto produjo un residuo amarillo que se usó en la reacción
consecutiva sin purificación adicional.
Ejemplo
27
Se preparó a partir de la plantilla
correspondiente en rendimiento global del 40% siguiendo los
procedimientos generales 2-6. ^{1}H RMN (300 MHz,
CD_{3}OD) \delta = 1,30, 1,32 [2 s, 6 H,
(CH_{3})_{2}C-O], 1,43 [s, 9 H
(CH_{3})_{3}CO], 1,70 (m, 2 H,
H-\gamma, Arg), 1,79-1,98 (m, 2
H, H-C\betaArg), 1,85 (m, 2 H,
CH_{2}CH_{2}Ar), 1,9 (m, 2 H, H-C_{4} Plant.),
2,1 (m, 4 H, H-C_{5} Plant.,
H-C_{7} Plant.), 2,1 (s, 3 H CH_{3}Ar), 2,2 (m,
2 H, H-C_{8} Plant.), 2,4 (dd, J = 9, 17, 1 H,
H-C\betaAsp), 2,55, 2,57 (2s, 6 H, CH_{3}Ar),
2,65 (m, 3 H, H-C\betaAsp, CH_{2}CH_{2}Ar),
3,25 (m, 2 H, H-C\deltaArg), 3,65 (m, 1 H,
H-C_{6} Plant.), 3,71 (d, J = 17, 1 H,
H-C\alphaGly), 3,75-3,95 (m, 1 H,
H-C\alphaAsp), 3,87 (m, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,25 (m, 1 H,
H-C_{3} Plant.), 4,4 (dd, J = 0,8, 1 H,
H-C_{9} Plant.), 4,88 (m, 1 H,
H-C\alphaArg). ^{13}C-RMN (50,3
MHz, CD_{3}OD) \delta = 12,3, 17,9, 19,0, 22,4, 24,2, 27,0,
28,4, 29,0, 30,7, 33,8, 38,1, 41,4, 42,2, 48,4. 49,2, 50,5, 52,7,
55,2, 55,8, 62,2, 62,3. EM (FAB^{+}): 849 (M+1).
Se preparó a partir de la plantilla
correspondiente en rendimiento global del 40% siguiendo los
procedimientos generales 2-6. EM (FAB^{+}): 849
(M+1).
Ejemplo
29
Se preparó a partir de la plantilla
correspondiente en rendimiento global de 55% siguiendo los
procedimientos generales 2-6.
^{1}H-RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta = 1,30
[2 s, 6 H, (CH_{3})_{2}C-O], 1,46 [s, 9
H, (CH_{3})_{3}CO], 1,6 (m, 2 H,
H-C_{7} Plant.), 1,70 (m, 2 H,
H-C\gammaArg), 1,85 (m, 2 H, CH_{2}CH_{2}Ar),
1,95-2,2 (m, 2 H H-C_{4} Plant.),
2,0 (m, 2 H, H-C\betaArg), 2,1 (s, 3 H,
CH_{3}Ar), 2,2 (m, 2 H, H-C_{5} Plant.),
2,4-2,6 (m, 2 H, H-C\betaAsp),
2,55-2,6 (2s, 6 H, CH_{3}Ar), 2,65 (m, 2 H,
CH_{2}CH_{2}Ar), 2,9 (m, 2 H, H-C_{8} Plant.),
3,2 (m, 2 H, H-C\deltaArg), 3,6 (d, J = 18, 1 H,
H-C\alphaGly), 3,80 (m, 1 H,
H-C_{6} Plant.), 4,0 (m, 1 H,
H-C_{3} Plant.), 4,05 (d, J = 18, 1 H
H-C\alphaGly), 4,2 (dd, J = 6,6, 1 H,
H-C_{9} Plant.), 4,4 (m, 1 H,
H-C\alphaArg), 4,45 (m, 1 H,
H-C\alphaAsp). ^{13}C-RMN (50,3
MHz, CD_{3}OD) \delta = 12,3, 17,9, 19,0, 22,4, 27,0, 28,3,
28,6, 29,6, 30,0, 33,8, 37,0, 41,5, 43,3, 52,7, 54,2, 62,2, 74,9,
83,8, 119,4, 136,5, 169,7, 170,6, 173,9, 174,3. EM (FAB^{+}): 849
(M+1).
Ejemplo
30
Se preparó a partir de la plantilla
correspondiente en rendimiento global del 30% siguiendo los
procedimientos generales 2-6. EM (FAB^{+}): 850
(M+2).
Ejemplo
31
Se preparó a partir de la plantilla
correspondiente en rendimiento global del 67% siguiendo los
procedimientos generales 2-6. EM (FAB^{+}): 863
(M+1).
Ejemplo
32
Se preparó a partir de la plantilla
correspondiente en rendimiento global del 54% siguiendo los
procedimientos generales 2-6. EM (FAB^{+}): 863
(M+1).
Ejemplo
33
Se preparó a partir de la plantilla
correspondiente en rendimiento global del 63% siguiendo los
procedimientos generales 2-6. EM (FAB^{+}): 863
(M+1).
\newpage
Ejemplo
34
Se preparó a partir de la plantilla
correspondiente en rendimiento global del 50% siguiendo los
procedimientos generales 2-6. EM (FAB^{+}): 863
(M+1).
Ejemplo
35
Se disolvió el péptido lineal (0,18 mmol) en
DMF (45 ml) bajo N_{2}. Se añadieron HATU (205 mg, 0. 54 mmol),
HOAt (73 mg, 0,54 mmol) y 2,4,6-colidina (0,072 ml,
0,54 mmol) y se agitó la mezcla resultante durante 24 h a
temperatura ambiente. Se evaporó el disolvente a presión reducida y
se disolvió el residuo en AcOEt. Se lavó la fase orgánica dos veces
con 5% NaHCO_{3}, se secó con Na_{2}SO_{4} y se evaporó a
presión reducida. Se purificó el residuo bruto mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice (DCM/MeOH desde 95:5
hasta 9: 1) para producir el ciclopéptido protegido con cadenas
laterales como una espuma amarilla.
Ejemplo
36
Se preparó con un 70% de rendimiento siguiendo
el procedimiento general 7. ^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta = 1,25, 1,3 [2 s, 6 H
(CH_{3})_{2}C-O], 1,46 [s, 9 H,
(CH_{3})_{3}CO], 1,5 (m, 2 H,
H-C\gammaArg), 1,6 (m, 2 H,
H-C_{4} Plant.), 1,8 (m, 4 H, CH_{2}CH_{2}Ar,
H-C_{5} Plant.), 2,0 (m, 2 H,
H-C\betaArg), 2,1 (s, 3 H, CH_{3}Ar), 2,2 (m, 4
H, H-C_{7} Plant., H-C_{8}
Plant.), 2,52, 2,56 (2 s, 6 H, CH_{3}Ar), 2,6 (m, 3 H,
CH_{2}CH_{2}Ar, H-C\betaAsp), 3,1 (dd, J = 5,
17,6, 1 H, H-C\betaAsp), 3,25 (m, 2 H,
H-C\deltaArg), 3,55 (m, 1 H,
H-C_{6} Plant.), 3,65 (dd, J = 6, 13,6, 1 H,
H-C\alphaGly), 3,85 (dd, J = 4, 13,6, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,22 (dd, J = 0, 9, 1 H
H-C_{9} Plant.), 4,45 (m, 1 H,
H-C_{3} Plant.), 4,54 (m, 1 H,
H-C\alphaArg), 4,68 (m, 1 H,
H-C\alphaAsp), 6,3 (s, 3 H,
H-N\varepsilonArg, HNSO_{2}, = NH), 6,8 (d, J =
6, 1 H, NH Plant.), 7,61 (d, J = 9, 1 NH Asp), 7,8 (d, J = 8, 1 H,
NH Arg), 8,9 (sa, 1 H, NH Gly). ^{13}C-RMN (75,4
MHz, CDCl_{3}) \delta = 12,1, 17,4, 18,5, 21,4, 25,2, 26,2,
26,8, 27,5, 28,0, 29,6, 31,4, 32,2, 32,9, 36,4, 40,2, 46,0, 47,7,
50,3, 51,9, 60,6, 62,1, 73,5, 81,8, 117,8, 123,8, 134,8, 134,9,
135,5, 153,3, 156,5, 168,0, 169,8, 170,2, 170,9, 173,6, 175,0.
[\alpha]_{D}^{20} = -36,1 (c = 1,0, CHCl_{3}). EM
(FAB^{+}): 830 (M+), 853 (M+Na).
Ejemplo
37
Se preparó con un 60% de rendimiento siguiendo
el procedimiento general 7. ^{1}H-RMN (400 MHz,
CDCl_{3}) \delta = 1,3 [2 s, 6 H,
(CH_{3})_{2}C-O], 1,45 [s, 9 H,
(CH_{3})_{3}CO], 1,5 (m, 4 H,
H-C\gammaArg, H-C_{7} Plant.),
1,7 (m, 1 H, H-C\betaArg), 1,8 (m, 3 H,
CH_{2}CH_{2}Ar, H-C_{8} Plant.), 1,9 (m, 1 H,
H-C_{4} Plant.), 2,0 (m, 1 H,
H-C\betaArg), 2,05 (s, 3 H CH_{3}Ar), 2,2 (m, 3
H, H-C_{4} Plant., H-C_{5}
Plant.), 2,50 (m, 2 H, H-C\betaAsp,
H-C_{8} Plant.), 2,52, 2,56 (2 s, 6 H,
CH_{3}Ar), 2,6 (m, 2 H, CH_{2}CH_{2}Ar), 2,80 (dd, J = 8, 16,
1 H, H-C\betaAsp), 3,25 (m, 2 H,
H-C\deltaArg), 3,45 (dd, J = 5, 16, 1 H,
H-C\alphaGly), 3,80 (m, 1 H,
H-C_{6} Plant.), 4,10 (m, 1 H,
H-C_{3} Plant.), 4,15 (m, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,35 (dd, J= 10, 10, 1 H,
H-C_{9} Plant.), 4,5 (m, 1 H,
H-C\alphaArg), 4,70 (m, 1 H,
H-C\alpha Asp), 6,22 (sa, 3 H,
H-N\varepsilonArg, HNSO_{2}, =NH), 7,1 (d, J =
8, 1 H, NH Arg), 7,20 (d, J = 8, 1 H, NH Asp), 7,70 (d, J = 8, 1 H,
NH Plant.), 8,1 (sa, 1 H, NH Gly). ^{13}C RMN (50,3 MHz,
CDCl_{3}) \delta = 12,0, 17,4, 19,4, 21,3, 25,3, 26,7, 27,4,
27,9, 28,6, 29,6, 32,8, 36,7, 40,4, 45,1, 50,2, 50,7, 51,9, 60,7,
61,6, 73,5, 81,6, 117,8, 123,8, 133,7, 134,7, 135,3, 153,3, 156,3,
168,7, 169,8, 170,7, 171,4, 173,3. [\alpha]_{D}^{20} =
-57,1 (c = 1,0, CHCl_{3}). EM (FAB^{+}): 832 (M+2).
Ejemplo
38
Se preparó con un 40% de rendimiento siguiendo
el procedimiento general 7. ^{1}H-RMN (400 MHz,
CDCl_{3}) \delta = 1,3 [2 s, 6 H (CH_{3})_{2}CO] 1,4
(m, 1 H, H-C_{5} Plant.), 1,45 [s, 9 H
(CH_{3})_{3}CO], 1,5-1,6 (m, 4 H,
H-C\gammaArg, H-C_{4} Plant.,
H-C_{8} Plant.), 1,8 (m, 2 H, CH_{2}CH_{2}Ar),
1,97 (m, 1 H, H-C_{8} Plant.), 2,0 (m, 4 H,
H-C\betaArg, H-C_{4} Plant.,
H-C_{5} Plant.), 2,15 (s, 3 H, CH_{3}Ar), 2,17,
2,43 (m, 2 H, H-C_{7} Plant.), 2,5 (m, 1 H,
H-C\betaAsp), 2,60 (s, 3 H, CH_{3}Ar), 2,60 (m,
2 H, CH_{2}CH_{2}Ar), 2,62 (s, 3 H, CH_{3}Ar), 2,9 (dd, J = 7,
17, 1 H, H-C\betaAsp), 3,2 (m, 2 H,
H-C\deltaArg), 3,55 (dd, J = 0, 12, 1 H
H-C\alphaGly), 4,05 (m, 1 H,
H-C_{9} Plant.), 4,1 (m, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,2 (m, 1 H,
H-C_{6} Plant.), 4,3 (m, 1 H,
H-C_{3} Plant.), 4,6 (m, 1 H,
H-C\alphaArg), 4,65 (m, 1 H,
H-C\alpha Asp), 6,2-6,4 (sa, 3 H
H-N\varepsilonArg, HNSO_{2}, =NH), 7,3 (sa, 1
H, NH Plant.), 7,45 (sa, 1 H NH Arg), 7,90 (sa, 1 H, NH Gly), 8,0
(sa, 1 H NH Asp). ^{13}C-RMN (50,3 MHz,
CDCl_{3}) \delta = 12,0, 17,4, 18,4, 21,3, 22,0, 25,6, 26,2,
26,7, 27,9, 30,1, 32,7, 34,0, 35,0, 50,9, 51,0, 51,8, 56,5, 62,5,
73,5, 81,2, 95,0, 117,8, 123,9, 133,3, 134,7, 135,3, 153,4, 156,2,
170,4, 170,7, 171,9, 172,5, 173,3. [\alpha]_{D}^{20}=
-71,0 (c = 0,7, CHCl_{3}). EM (FAB^{+}): 832 (M+2).
\newpage
Ejemplo
39
Se preparó con un 35% de rendimiento siguiendo
el procedimiento general 7. ^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-D_{6}) \delta = 1,25, 1,38 [2 s, 6 H
(CH_{3})_{2}CO] 1,31 (m, 2 H,
H-C\gammaArg), 1,38 [s, 9 H,
(CH_{3})_{3}CO], 1,8 (m, 2 H, CH_{2}CH_{2}Ar), 2,05
(s, 3 H, CH_{3}Ar), 2,05 (m, 1 H, H-C_{9}
Plant.), 2,15 (m, 2 H, H-C\betaArg), 2,35 (dd, J=
6,8, 17, 1 H H-C\betaAsp), 2,50,2,52 (2 s, 6 H, 3
CH_{3}Ar), 2,5 (m, 1 H, H-C_{9} Plant.), 2,6
(m, 2 H, CH_{2}CH_{2}Ar), 2,8 (dd, J = 8,6, 17, 1 H,
H-C\betaAsp), 3,1 (m, 2 H,
H-C\deltaArg), 3,61 (d, J = 9,8, 1 H,
H-C\alphaGly), 3,98 (d, J = 9,8, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,0 (m, 2 H,
H-C\alphaArg, H-C_{7} Plant.),
4,31 (m, 2 H, H-C_{3} Plant.,
H-C_{1}0 Plant.), 4,55 (m, 1 H,
H-C\alphaAsp), 6,48 (sa, 2 H,
H-N\varepsilonArg, HNSO_{2}), 6,78 (sa, 1 H,
=NH), 7,68 (d, J = 5,1, 1 H, NH Plant.), 7,84 (da, 1 NH Asp), 8,22
(m, 1 H, NH Arg), 8,5 (ta, 1 H, NH Gly).
^{13}C-RMN (50,3 MHz,
DMSO-D_{6}) \delta = 11,9, 17,1, 18,2, 26,4,
27,7, 20,8, 25,3, 27,0, 30,6, 32,2, 32,5, 36,3, 38,7, 40,3, 42,4,
49,6, 53,1, 58,8, 62,0, 73,5, 80,3. [\alpha]_{D}^{20}
=-36,7 (c = 1, CHCl_{3}). EM (FAB^{+}): 844 (M+).
Ejemplo
40
Se preparó con un 26% de rendimiento siguiendo
el procedimiento general 7.
^{1}H-RMN (300 MHz,
DMSO-D_{6}) \delta = 1,3 [s, 3 H
(CH_{3})_{2}C-O], 1,31 (m, 2 H,
H-C\gammaArg), 1,38 [s, 9 H,
(CH_{3})_{3}CO], 1,4 [s, 3 H
(CH_{3})_{2}C-O],
1,8-1,95 (m, 6 H, CH_{2}CH_{2}Ar,
H-C_{9} Plant., H-C\betaArg),
2,05 (s, 3 H CH_{3}Ar), 2,39 (dd, J = 4,3, 10,6, 1 H,
H-C\betaAsp), 2,50, 2,52 (2 s, 6 H, 3
CH_{3}Ar), 2,6 (m, 2 H, CH_{2}CH_{2}Ar), 2,9 (dd, J = 4,3,
10,6, 1 H H-C\betaAsp), 3,1 (m, 2 H
H-C\deltaArg), 3,80 (m, 3 H,
H-C\alphaGly, H-C\alphaArg), 4,3
(m, 1 H, H-C_{3} Plant.), 4,35 (m, 1 H,
H-C_{1}0 Plant.), 4,48 (m, 1 H,
H-C\alphaAsp), 6,45 (sa, 2 H,
H-N\varepsilonArg, HNSO_{2}), 6,60 (sa, 1 H,
=NH), 7,5 (da, 1 H, NH Asp), 7,51 (da, 1 H, NH Plant.), 8,55 (m, 1
H, NH Arg), 8,75 (ta, 1 H, NH Gly). ^{13}C-RMN
(75,4 MHz, CDCl_{3}) \delta = 12,1, 14,3, 17,5, 18,6, 21,4,
23,5, 26,8, 28,1, 29,7, 31,7, 32,8, 33,6, 49,7, 60,8, 73,6, 117,9,
124,0, 134,8, 135,5, 153,6, 171,5. [\alpha]_{D}^{20} =
-72,9 (c = 1, CHCl_{3}), EM (FAB^{+}): 844 (M+).
Ejemplo
41
Se preparó con un 15% de rendimiento siguiendo
el procedimiento general 7.
^{1}H-RMN (400 MHz,
CDCl_{3}) \delta = 1,30 [s, 6 H,
(CH_{3})_{2}C-O], 1,41 [s, 9 H,
(CH_{3})_{3}CO], 1,49 (m, 1 H,
H-C\gammaArg), 1,50-1,90 (10 H,
CH_{2}CH_{2}Ar, H-C_{5} Plant.,
H-C_{6} Plant., H-C_{8}
Plant.), 1,51 (m, 2 H, H-C_{4} Plant.), 1,60 (m, 1
H, H-C\gammaArg), 1,90 (m, 2 H,
H-C\betaArg), 1,98 (m, 1 H,
H-C_{9} Plant.), 2,15 (s, 3 H CH_{3}Ar), 2,53
(s, 3 H, CH_{3}Ar), 2,58 (s, 3 H, CH_{3}Ar), 2,32 (m, 1 H,
H-C_{9} Plant.), 2,51 (m, 1 H,
H-C\betaAsp), 2,85 (m, 1 H,
H-C\betaAsp), 3,20 (m, 2 H,
H-C\deltaArg), 3,51 (da, 1 H,
H-C\alpha, Gly), 4,12 (m, 1 H,
H-C_{7} Plant.), 4,18 (m, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,32 (m, 1 H,
H-C_{1}0 Plant.), 4,5 (m, 1 H,
H-C_{3} Plant.), 4,58 (m, 1 H,
H-C\alphaArg), 4,80 (m, 1 H,
H-C\alphaAsp), 6,3 (sa, 3 H,
H-N\varepsilonArg, HNSO_{2}, =NH), 7,2 (da, 1 H,
NH Arg), 7,65 (da, 1 H, NH Plant.), 7,80 (ta, 1 H, NH Gly), 7,95
(da, 1 H, NH Asp).
Ejemplo
42
Se preparó con un 55% de rendimiento siguiendo
el procedimiento general 7. ^{1}H-RMN (400 MHz,
CDCl_{3}) \delta = 1,27, 1,31 [2 s, 6 R
(CH_{3})_{2}C-O], 1,44 [s, 9 H,
(CH_{3})_{3}CO], 1,50 (m, 3 H,
H-C\gammaArg, H-C_{6} Plant.),
1,60 (m, 2 H, H-C\betaArg,
H-C\gammaArg), 1,70 (m, 2 H,
H-C_{8} Plant.), 1,8 (m, 2 H, CH_{2}CH_{2}Ar),
1,85 (m, 1 H, H-C_{4} Plant.), 1,95 (m, 2 H,
H-C\betaArg, H-C_{4} Plant.),
1,98 (m, 2 H, H-C_{5} Plant.), 2,11 (s, 3 H,
CH_{3}Ar), 2,32 (m, 1 H, H-C_{9} Plant.), 2,56
(s, 3 H CH_{3}Ar), 2,57 (dd, J = 7,4, 16,7, 1 H,
H-C\betaAsp), 2,58 (s, 3 H CH_{3}Ar), 2,65 (m,
2 H, CH_{2}CH_{2}Ar), 2,87 (dd, J = 7,4, 16,7, 1 H,
H-C\betaAsp), 3,20 (m, 2 H,
H-C_{3} Arg), 3,54 (da, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,18 (m, 1 H, H-Ca
Gly), 4,22 (m, 1 H, H-C_{7} Plant.), 4,36 (m, 1
H, H-C_{1}0 Plant.), 4,55 (m, 1H,
H-C_{3} Plant.), 4,6 (m, 1 H,
H-C\alphaArg), 4,83 (m, 1 H,
H-C\alphaAsp), 6,33 (sa, 3 H,
H-N\varepsilonArg, HNSO_{2}, =NH), 7,49 (da, 1
H, NH Arg), 7,71 (ta, 1 H, NH Gly), 7,80 (da, 1 H, NH Plant.), 7,95
(da, 1 H, NH Asp). ^{13}C RMN (50,3 MHz, CDCl_{3}) \delta =
12,0, 17,4, 18,4, 26,7, 27,4, 36,4, 21,4, 25,3, 28,5, 29,6, 30,8,
33,0, 34,9, 40,6, 44,3, 49,9, 51,9, 54,1, 59,3, 63,2, 73,5, 81,3,
117,8, 123,9, 133,4, 134,7, 135,3, 153,5, 156,3, 170,3, 170,5,
172,3, 172,6. [\alpha]_{D}^{20} = -54 (c = 0,05,
CHCl_{3}). EM (FAB^{+}): 844 (M+).
Ejemplo
43
Se trató el ciclopéptido protegido con cadenas
laterales (0,1 mmol) con
TFA/tioanisol/1,2-etanoditiol/anisol 90:53:2 (35
ml) durante 2 h. Se evaporó la mezcla de reacción a presión reducida
y se disolvió el residuo en H_{2}O. Se lavó la fase acuosa dos
veces con iPr_{2}O y se evaporó a presión reducida para producir
ciclopéptido desprotegido con cadenas laterales como una espuma
blanca. Se sustituyó el ion trifluoroacetato con cloruro mediante
cromatografía de intercambio iónico (resina AMBERLITE
IRA-93, forma de cloruro).
\global\parskip0.850000\baselineskip
Ejemplo
44
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
siguiendo el procedimiento general 8. ^{1}H-RMN
(400 MHz, D_{2}O) \delta = 1,6-1,75 (m, 2 H,
H-C\gammaArg), 1,65-1,95 (m, 6 H,
H-C_{4} Plant., H-C_{5} Plant.,
H-C_{7} Plant.), 2,2 (m, 2 H,
H-C\betaArg), 2,3-2,45 (m, 2 H,
H-C_{8} Plant.), 2,73 (dd, J= 0, 6, 2 H,
H-C\betaAsp), 3,25-3,50 (m, 2 H,
H-C\deltaArg), 3,8-3,95 (m, 1 H,
H-C_{6} Plant.), 3,82 (d, J=13,5, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,25 (d, J = 13,5, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,50 (dd, J = 0, 10, 1 H,
H-C_{9} Plant.), 4,55 (dd, J= 0, 8, 1 H,
H-C\alpha, Arg), 4,58 (m, 1 H,
H-C_{3} Plant.), 4,75 (m, 1 H,
H-C\alphaAsp). ^{13}C RMN (75,4 MHz, D_{2}O)
\delta = 25,0, 26,4, 28,2, 29,8, 30,8, 32,2, 39,0, 41,3, 45,8,
48,3, 52,7, 53,1, 61,7, 62,6, 157,7, 170,1, 172,6, 174,0, 175,4,
175,7, 178,4. [\alpha]_{D}^{20} = -52,6 (c = 0,88,
H_{2}O). EM (FAB^{+}: 509 (M+1).
Ejemplo
45
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
siguiendo el procedimiento general 8. ^{1}H-RMN
(400 MHz, D_{2}O) \delta = 1,5 (m, 2 H,
H-C_{5} Plant.), 1,6 (m, 2 H,
H-C\betaArg), 1,8 (m, 2 H,
H-C_{4} Plant.), 1,9 (m, 2 H,
H-C\gammaArg), 2,2 (m, 2 H,
H-C_{7} Plant.), 2,42-2,52 (m, 2
H, H-C_{8} Plant.), 2,7-2,85 (m, 2
H, H-C\betaAsp), 3,15-3,30 (m, 2
H, H-C\deltaArg), 3,55 (d, J = 14, 1 H,
H-C\alphaGly), 3,83-3,95 (m, 1 H,
H-C_{6} Plant.), 4,10 (d, J = 14, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,28 (m, 1 H,
H-C_{3} Plant.), 4,37 (dd, J = 0, 9, 1 H,
H-C_{8} Plant.), 4,45 (dd, J = 5, 10, 1 H,
H-C\alphaArg), 4,65 (m, 1 H,
H-C\alphaAsp). ^{13}C-RMN (50,3
MHz, _{D2}O) \delta = 27,1, 29,3, 30,4, 31,4, 31,8, 35,1, 38,1,
43,3, 47,2, 52,8, 53,5, 54,8, 64,0, 64,5, 159,6, 166,1, 172,5,
174,8, 175,2, 176,4, 176,6, 177,9. [\alpha]_{D}^{20} =
-94,6 (c = 1,32, H_{2}O) EM (IS+): 508 (M+).
Ejemplo
46
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
siguiendo el procedimiento general 8. Este compuesto no era estable
en disolución acuosa tras unos pocos días a temperatura ambiente.
^{1}H-RMN (400 MHz, D_{2}O) \delta =
1,6-1,7 (m, 2 H, H-C_{4} Plant.),
1,7 (m, 2 H, H-C\gammaArg), 2,0 (m, 2 H,
H-C_{7} Plant.), 2,2 (m, 2 H,
H-C\betaArg), 2,4 (m, 2 H,
H-C_{5} Plant.), 2,6 (m, 2 H,
H-C_{8} Plant.), 2,70 (dd, J = 7, 17, 1 H,
H-C\betaAsp), 3,05 (dd, J = 7, 17, 1 H,
H-C\betaAsp), 3,15-3,25 (m, 2 H,
H-C_{8} Arg), 3,52 (d, J = 15, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,05 (m, 1 H,
H-C_{6} Plant.), 4,28 (d, J = 15, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,3 (m, 1 H,
H-C_{3} Plant.), 4,35 (m, 1 H,
H-C_{1}0 Plant.), 4,53 (dd, J = 7, 7,
H-C\alphaAsp), 4,6 (m, 1H,
H-C\alphaArg). [\alpha]_{D}^{20} =
-63,7 (c = 0,95, H_{2}O). EM (IS+): 508 (M+).
Ejemplo
47
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
siguiendo el procedimiento general 8. ^{1}H-RMN
(400 MHz, D_{2}O) \delta = 1,5-1,8 (m, 2 H,
H-C\gammaArg), 1,7-2,0 (m, 2 H,
H-C\betaArg), 2,8 (m, 2 H,
H-C\betaAsp), 3,22 (m, 2 H,
H-C\deltaArg), 4. 0 (m, 2 H,
H-C\alphaGly, H-C_{7} Plant.),
4,3 (dd, J = 7, 7, 1 H, H-C\alphaArg),
4,5-4,6 (m, 1 H, H-C_{3} Plant.,
H-C_{1}0 Plant.), 4,68 (m, 1 H
H-C\alphaAsp). ^{13}C-RMN (50,3
MHz, D_{2}O) \delta = 27,2, 29,8, 30,1, 31,0, 33,6, 35,3, 36,2,
39,0, 43,3, 45,7, 53,8, 56,3, 62,8, 65,2, 159,5, 174,3, 174,4,
175,6, 176,4, 178,5. [\alpha]_{D}^{20} = -87,4 (c =
1,2, H_{2}O). EM (IS+): 522 (M+).
Ejemplo
48
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
siguiendo el procedimiento general 8. ^{1}H-RMN
(400 MHz, D_{2}O) \delta = 1,5-1,8 (m, 2 H,
H-C_{6} Plant.), 1,6 (m, 2 H,
H-C\gammaArg), 1,75-1,9 (m, 2 H,
H-C\betaArg), 1,8-1,95 (m, 2 H,
H-C_{4} Plant.), 2,15 (m, 4 H,
H-C_{8} Plant., H-C_{9}
Plant.), 2,65-2,8 (m, 2 H,
H-C\betaAsp), 3,2 (m, 2 H,
H-C\deltaArg), 3,82 (d, J = 17, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,05 (d, J = 17, 1 H
H-C\alphaGly), 4,1 (m, 1 H,
H-C_{7} Plant.), 4,37 (dd, J = 0, 7, 1 H,
H-C_{10} Plant.), 4,42 (dd, J = 0, 10, 1 H,
H-C_{3} Plant.), 4,52 (dd, J = 5, 10, 1 H,
H-C\alphaArg), 4,70 (m, 1 H,
H-C\alphaAsp). ^{13}C-RMN (75,4
MHz, D_{2}O) \delta = 22,3, 25,0, 25,9, 28,7, 30,4, 33,7, 34,2,
37,7, 41,4, 43,2, 51,5, 53,3, 57,5, 59,1, 63,6, 157,6, 171,6, 173,7,
174,2, 175,0, 176,9. [\alpha]_{D}^{20} = -47,9 (c =
0,71, H_{2}O). EM (IS+): 522 (M+).
Ejemplo
49
Se preparó con un rendimiento cuantitativo
siguiendo el procedimiento general 8. ^{1}H-RMN
(400 MHz, D_{2}O) \delta = 1,4 (m, 3 H,
H-C_{5} Plant., H-C_{8} Plant.),
1,55-1,7 (m, 2H, H-C\gammaArg),
1,8 (m, 4 H, H-C_{4} Plant.,
H-C_{8} Plant., H-C_{9} Plant.),
2,0 (m, 2 H, H-C\betaArg), 2,26 (m, 2 H,
H-C_{6} Plant.), 2,38 (m, 1 H,
H-C_{9} Plant.), 2,68 (dd, J = 7, 18, 1 H,
H-C\alphaAsp), 2,98 (dd, J = 7,18, 1 H,
H-C\alphaAsp), 3,2 (m, 2 H,
H-C\gammaArg), 3,5 (d, J = 15, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,2 (d, J = 15, 1 H,
H-C\alphaGly), 4,2 (m, 1 H,
H-C_{7} Plant.), 4,38 (m, 1 H,
H-C_{1}0 Plant.), 4,48 (dd, J = 5, 11, 1 H,
H-C\alphaArg), 4,53 (dd, J = 0, 11, 1 H,
H-C_{3} Plant.), 4,63 (dd, J = 7, 7, 2 H,
H-C\betaAsp). ^{13}C-RMN (75,4
MHz, D_{2}O) \delta = 27,4, 29,3, 30,2, 30,6, 33,0, 35,1, 36,2,
41,3, 46,1, 53,8, 54,9, 56,8, 62,8, 66,1, 159,5, 174,2, 174,8,
175,9, 176,4, 177,6. [\alpha]_{D}^{20} = -38,1 (c =
1,2, H_{2}O). EM (IS+): 522 (M+).
\global\parskip1.000000\baselineskip
Claims (21)
1. Compuestos de fórmula (I)
en la que n es el número 0, 1 ó
2,
Arg es el aminoácido L-arginina,
Gly es el aminoácido glicina y Asp es el aminoácido ácido
L-aspártico y las sales farmacéuticamente
aceptables de los mismos, sus racematos, diastereoisómeros y
enantiómeros individuales.
2. Compuesto según la reivindicación 1 que
es
3. Compuesto según la reivindicación 1, que
es
4. Compuesto según la reivindicación 1, que
es
5. Compuesto según la reivindicación 1, que
es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
6. Compuesto según la reivindicación 1, que
es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
7. Compuesto según la reivindicación 1, que
es
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
8. Compuesto según la reivindicación 1, que
es
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
9. Compuesto según la reivindicación 1, que
es
10. Procedimiento para la preparación de los
compuestos según la reivindicación 1 que comprende las siguientes
etapas:
a) olefinación Horner-Emmons de
un compuesto de fórmula (II)
en la
que
R es un residuo de alquilo inferior;
R_{1} es un grupo protector de nitrógeno
adecuado,
para dar un compuesto de fórmula (III);
en la que R_{3} es un grupo
protector de nitrógeno adecuado, R_{4} es un residuo de alquilo
inferior;
b) hidrogenación de dicho compuesto de fórmula
(III) y ciclación; y, si se desea
c) separación de la mezcla estereoisomérica;
d) formación de la secuencia RGD cíclica; y, si
se desea
e) separación de la mezcla estereoisomérica.
11. Procedimiento para la síntesis
estereoselectiva de los compuestos según la reivindicación 1, que
comprende las siguientes etapas:
\vskip1.000000\baselineskip
a) olefinación Horner-Emmons de
un compuesto de fórmula (II)
en la
que
R es un residuo de alquilo inferior;
R_{1} es un grupo protector de nitrógeno
adecuado,
para dar un compuesto de fórmula (III);
en la que R_{3} es un grupo
protector de nitrógeno adecuado, R_{4} es un residuo de alquilo
inferior;
b) hidrogenación de dicho compuesto de fórmula
(III) mediante hidrogenación catalizada con fosfina
quiral-Rh y ciclación; y, si se desea
c) separación de la mezcla estereoisomérica;
d) formación de la secuencia RGD cíclica; y, si
se desea
e) separación de la mezcla estereoisomérica.
12. Composición farmacéutica que comprende una
dosis preventiva o terapéuticamente eficaz de al menos un compuesto
según la reivindicación 1 mezclado con vehículos y/o excipientes
farmacéuticamente aceptables.
13. Método in vitro para inhibir de
manera selectiva la unión celular mediada por integrina
\hat{a}_{v}\hat{a}_{3} a un ligando que contiene RGD, que
comprende poner en contacto dicho ligando con una cantidad eficaz de
un compuesto según la reivindicación 1.
14. Uso de los compuestos según las
reivindicaciones 1-9 para la preparación de un
medicamento útil para tratar una patología relacionada con una unión
celular mediada por integrina \alpha_{v}\beta_{3}
alterada.
15. Uso según la reivindicación 14, en el que
dicha patología es retinopatía.
16. Uso según la reivindicación 14, en el que
dicha patología es insuficiencia renal aguda.
17. Uso según la reivindicación 14, en el que
dicha patología es osteoporosis.
18. Uso de los compuestos según las
reivindicaciones 1-9 para la preparación de un
medicamento útil para tratar la angiogénesis alterada.
19. Uso de los compuestos según las
reivindicaciones 1-9 para la preparación de un
medicamento útil para tratar tumores.
20. Uso según la reivindicación 19, en el que
dicho tumor está asociado a la metástasis.
21. Compuestos según las reivindicaciones
1-9 para su uso como medicamentos.
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|---|---|---|---|
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