JPH09507838A

JPH09507838A - 二重鎖血液調節ペプチド

Info

Publication number: JPH09507838A
Application number: JP7515284A
Authority: JP
Inventors: ウンネアイム，チエル; ランゲ，マイノルフ; サンドシヤム，ジエシー
Original assignee: ニユコメド・イメージング・アクシエセルカペト
Priority date: 1993-12-01
Filing date: 1994-11-30
Publication date: 1997-08-12
Also published as: EP0731810A1; AU1113795A; WO1995015336A1; US5731289A; NO962204D0; NO962204L; GB9324691D0

Abstract

(57)【要約】本発明は少なくとも一方のC_α原子が独立してアルキル基により置換される非末端アミノ酸のC_α原子にその末端が結合した架橋基により結合された２つの一重鎖の血液調節作用、例えば造血阻害作用を有するペプチドからなるペプチド化合物に関する。開示された架橋ジペプチド化合物は細胞分割、特に骨髄造血細胞および骨髄細胞における刺激活性を有する。

Description

【発明の詳細な説明】二重鎖血液調節ペプチド本発明は細胞増殖における刺激作用を有するペプチドの使用、並びに特異的なおよび／または一般の細胞刺激作用を有する新規ペプチドに関する。哺乳動物の体内には種々の異なった構造および機能を有する細胞が存在し、その分化および発生の機構は多くの研究の対象になっている。連続交代を有する細胞系においてその機構は一般に分裂し、絶えず新しい細胞を細胞系に供給する多分化能性幹細胞の貯蔵所を含むことが知られいる。“貯蔵所”から供給された幹細胞は初めは同質であるが、やがて様々な形態になり、その後発達して必要な機能細胞になる。このような幹細胞系の例は骨髄の造血細胞系や上皮および表皮の細胞系である。幹細胞分裂の操作または調節は治療的に大きな可能性があり、その機構および関与する化学メッセンジャーを解明することに多くの研究が向けられている。今日まで幾つかの生体分子がその過程のある段階を刺激または阻害することにより細胞の産生および分化においてある役割を有するものと確認されている。この点に関して、骨髄造血は特によく研究されており、その調節機構に関与する分子は例えば顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)、マクロファージコロニー剌激因子(M-CS F)、顆粒球−マクロファージコロニー剌激因子(GM-CSF)、マルチ系コロニー刺激因子(マルチ−CSF；IL-3)〔Metcalfの Science 229：16（1985年）を参照〕のようなコロニー刺激因子(CSF)；インターロイキン11(IL-11)〔PaulらのProc．Natl ． Acad．Sci．USA 87：7521（1990年）を参照〕、ラクトフェリン〔Broxmeyerらの Blood Cells 11：429（1986年）を参照〕、プロストグランジン〔Pelus らのJ． Immuno．140：479（1988年）を参照〕、酸性（Ｈ−サブユニット）フェリチン〔 BroxmeyerらのBlood 68：1257（1986年）を参照〕、インターフェロン（α、β およびγ）〔上記のPelusらの論文およびBroxmeyerらのJ．Immunol．131：1300 （1983年）を参照〕、腫瘍壊死因子（αおよびβ）〔BroxmeyerらのJ．Immunol ．136：4487（1986年）を参照〕、形質転換成長因子−β〔OttmanらのJ．Immuno l．140：2661（1988年）を参照〕、並びにアクチビンおよびインヒビン〔Broxme yerらのProc．Natl．Acad．Sci．USA 86：779（1989年）を参照〕を含む。血液調節ペンタペプチド(pEEDCK)は骨髄造血細胞の増殖を選択的に阻害することもまた見い出されており〔PaukovitsらのZ．Naturforsch 37：1297（1982年）を参照〕、範囲の狭い一般式に相当する他のペプチドが造血に同様の阻害作用を及ぼすことがわかった〔EP-A-112656およびWO 90/02753を参照〕。ペプチドモノマーの酸化はシステインブリッジにより結合されたダイマー分子をもたらし、これらのダイマー分子は造血を剌激することがわかった〔LaerumらのExp．Hematol ．16：274（1988年）を参照〕。(pEEDCK)₂ダイマーおよび他の類似化合物はWO-A -88/03535に開示されている。さらに、ダイマーペプチド化合物はEP-A-408371に開示されており、その中でジスルフィド結合は選択されたペプチド鎖を結合する炭素または炭素／硫黄ブリッジにより置換されている。このようにブリッジは加水分解に対して比較的安定であるが、それ自体は不活性であり、受容体−ダイマー相互作用に関与できない。細胞増殖を阻害することのできる新規な一重鎖ペプチド化合物はまた、本出願人のPCT出願（No．PCT／GB 93／01172）に記載され、特許請求されており、さらに細胞増殖における刺激作用を有するダイマー化合物は本出願人のPCT出願（PCT ／GB 93／01170およびPCT／GB 93／01171）に開示されている。本発明者らは理論的な考察に束縛されることを望まないが、今のところこのようなペプチド化合物は生体内で間質細胞と相互作用し、その間質細胞は他の可溶性因子を介して細胞分裂を刺激または阻害するのに関与すると考えられている。このようにダイマーは刺激細胞調節因子の間質産生を誘発または促進し、他方モノマーペプチドはその過程を阻害するか、または細胞分裂を妨げる因子の産生をひき起こすと考えられている。したがって、現在の考え方によれば、間質細胞はダイマーおよびモノマーペプチドの剌激または阻害作用をそれぞれ増強する働きをする。生体内で細胞増殖を有用なレベルまで刺激することのできるダイマーペプチド化合物が継続して必要とされる。これに関して、異なる程度の刺激が他のより特定の臨床状態に対して適当であり、特に個々の細胞タイプの選択的刺激は重要であることに注目すべきである。本発明は、細胞増殖における刺激作用を有し、そしてペプチドの薬作用担持領域とペプチドが生物学的作用を働かせる受容体との相互作用を最大にする優先配座を有する特定の新規なペプチドに関する。特に、本発明はそれぞれの鎖のアミノ酸のα−炭素原子の間のブリッジにより結合された２つのペプチド鎖からなり、その配座が少なくとも一方のα−炭素原子上のアルキル基の存在により束縛されるダイマーペプチドに関する。α−炭素におけるアルキル化はまた、ブリッジのアミノ酸付近のペプチド結合の酵素的開裂の容易さを大幅に減らす働きをする。したがって、一つの態様において本発明は少なくとも一方のC_α原子が独立してアルキル基により置換される非末端アミノ酸のC_α原子にその末端が結合した架橋基により結合された２つの一重鎖の血液調節作用、例えば造血阻害作用を有するペプチドからなるペプチド化合物を提供する。好ましい本発明のペプチド化合物は式Ｉ〔式中、R¹およびR²は独立して水素原子またはC_1〜4−アルキル基であるが、R¹ およびR²は同時に水素原子ではなく；Ａは炭素−炭素結合、あるいは１個以上のＯもしくはＳ原子または-S-S-基により中断されうる場合により置換された飽和または不飽和のC_1〜8−アルキレンまたはアラルキレン基であり； R^aはそれぞれ独立してピログルタミン酸(pGlu)、ピリジン−２−カルボン酸(P ic)またはその３−アミノもしくは３−ヒドロキシ誘導体、アントラニル酸、ピリジン−３−カルボン酸(Nic)、ピラジン−２−カルボン酸、ピロール−２−カルボン酸、プロリンあるいはピペコリン酸であり； R^bはそれぞれ独立してセリン(Ser)、グルタミン酸(Glu)、アスパラギン酸(Asp)、トレオニン(Thr)またはアロトレオニン(aThr)であり； R^cはそれぞれ独立してアスパラギン酸(Asp)またはグルタミン酸(Glu)であり； R^dはそれぞれ独立してグリシン(Gly)またはアラニン(Ala)であり； R^eはそれぞれ独立してリシン(Lys)、オルニチン(Orn)またはアルギニン(Arg) であり；Ｙはそれぞれ独立してヒドロキシまたはアミノ基、あるいはアミノ酸のアミンであり；そしてｎは０または１である〕の化合物である。前記アミノ酸残基はすべてＤまたはＬ体である。しかしながら、Ｌ体のアミノ酸が好ましい。それぞれのペプチド鎖の架橋位置のC_α原子はそれぞれ(R,R)、(S,S)または(R, S)の立体化学を有する。特に好ましい本発明のペプチド化合物にはＡが炭素−炭素結合、C_1〜6−アルキレン基、シスまたはトランス-CH₂-CH=CH-CH₂-、CH₂-C≡C-CH₂-、-(CH₂)_p-Z-(C H₂)_q（ここで、Ｚ＝Ｏ、ＳまたはＳ₂であり、そしてｐおよびｑは独立して１または２である）、あるいは-(CH₂)_r-C₆H₄-(CH₂)_s（ここで、ｒおよびｓは独立して０または１である）である式Ｉの化合物が含まれる。さらに特に好ましい本発明のペプチド化合物にはＡが偶数の原子、例えばC₂− またはC₄−アルキレン基を含有する式Ｉの化合物が含まれる。特に好ましい式Ｉのペプチド化合物の１つはである。本発明は骨髄損傷、顆粒球減少症および無形成貧血などの、骨髄造血活性が低下した患者の骨髄造血を刺激するのに特に適用される。これには例えば骨髄移植手術において組織反応を抑制する免疫抑制治療により抑制された骨髄機能を有する患者の治療が含まれる。本化合物はまた、腫瘍形成およびウイルス性疾患の細胞増殖抑制化学療法および放射線療法後の骨髄のより迅速な再生を促進するために使用することができる。さらに、新規化合物は患者が骨髄の機能不全による免疫応答の欠乏のため深刻な感染症を有する場合、特に有用である。他の臨床上の適用として、骨髄細胞の高活性および低活性のピークを交互に誘発する、すなわち造血の本来の約24時間周期のリズムを増強するために、EP-A-1 12656またはWO-A-90/02753に開示されているようなその相当するモノマーまたは関連の骨髄造血阻害剤と組み合わされる。このようにして、細胞増殖抑制療法は骨髄活性が低い時期に施して骨髄損傷のリスクを減らすことができ、また続いて起こる活性ピークにより再生が促進される。一般に、剌激効果を発揮するには、本発明のペプチドは人間の患者に１日につき体重70kqあたり0.001〜100mg、例えば１〜５mgの範囲の投与量で経口的にまたは注射により投与されうる。静脈内的にまたは皮下的に投与される場合、その投与量は10日間以内で１日につき体重70kgあたり１〜10mgの範囲、例えば約６mgである。もちろん経鼻的、局所的（経皮的）または経腸的投与もまた可能である。原則として、患者の細胞外液中のペプチド濃度を約10^-13Ｍ〜10^-5Ｍとすることが望ましい。本発明の別の特徴によれば、活性成分として１種以上の前記で定義されたような式（Ｉ）の化合物またはその生理学的に適合しうる塩を薬用基剤または賦形剤と一緒に含有する医薬組成物が提供される。本発明の組成物は例えば経口的、経鼻的、非経口的または経腸的投与に適した形態で提供されうる。本明細書で使用される「医薬」なる用語は獣医学における本発明の適用を包含する。本発明の化合物は慣用の薬理学的投与形態、例えば錠剤、コーティング錠、鼻用噴霧剤、液剤、乳剤、散剤、カプセル剤または特効性形態で投与されうる。これらの形態の製造において、慣用の薬用賦形剤および通常の製造法を使用することができる。錠剤は例えば活性成分を知られている賦形剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはラクトースのような希釈剤；コーンスターチまたはアルギン酸のような崩壊剤；スターチまたはゼラチンのような結合剤；ステアリン酸マグネシウムまたはタルクのような滑沢剤、および／またはカルボキシポリメチレン、カルボキシメチルセルロース、セルロースアセテートフタレートまたはポリビニルアセテートのような放出を持続させるための薬剤と混合することにより製造できる。錠剤は所望により幾つかの層で構成されうる。コーティング錠は錠剤と同様にして得られたコア（中心部）を錠剤のコーティングにおいて一般に使用されている薬剤、例えばポリビニルピロリドン、シェラック、アラビアゴム、タルク、二酸化チタンまたは糖でコートすることにより製造できる。放出を持続させるため、または不適合性を回避するため、コアもまた幾つかの層で構成されうる。上記の錠剤用賦形剤を使用する場合、放出を持続させるため錠剤コーティングもまた幾つかの層で構成できる。器官特異的な基剤系もまた使用することができる。注射用液剤は例えば慣用の方法で、例えばｐ−ヒドロキシベンゾエートのような保存剤、またはEDTAのような安定剤を加えることにより製造できる。次に、その液剤は注射用バイアルまたはアンプルに詰められる。鼻用噴霧剤もまた同様に水溶液として製剤化し、エーロゾル噴射剤を含むまたは手動圧縮手段を備えた噴霧器に詰めることができる。１種または数種の活性成分を含有するカプセル剤は例えば、活性成分をラクトースまたはソルビトールのような不活性基剤と混合し、その混合物をゼラチンカプセルに詰めることにより製造できる。適当な坐剤は例えば、活性成分または活性成分の組み合わせを天然脂肪、ポリエチレングリコールまたはその誘導体のような、このための慣用基剤と混合することにより製造できる。本発明の化合物を含有する投与単位は好ましくは0.1〜10mg、例えば１〜５mgの式（Ｉ）のペプチドまたはその塩を含有する。本発明のさらに別の特徴によれば、前記で定義されたような医薬組成物の有効量を患者に投与することからなる細胞分裂、特に骨髄造血を刺激する方法が提供される。しかしながら、新規ペプチドの主要な使用は免疫学的検定法のための物質の製造においてである。ペプチドは抗体産生動物（例えばウサギ、モルモットまたはヤギ）に注射するためにアルブミン、ポリリシンまたはポリプロリンのような適当な高分子基剤に共有結合されうる。試験管内の免疫感作法もまた使用されうる。高特異的抗血清は高分子基剤を使用し、よく知られている吸収法を利用して得られる。放射能（³H、¹²⁵I、¹⁴C、³⁵S）をペプチド分子に導入することにより、ラジオイムノアッセイを設計し、血清（血漿）、尿および脳脊髄液のような種々の生物学的液体中のペプチドを測定するために使用できる。本発明のペプチドは適当な方法で合成することができる。固相合成において、その成功は固相で起こるすべての反応を完全なものにする能力で決まる。慣用のペプチド合成には、それによりアシル化および脱保護の達成度を制御できる幾つかの方法が含まれる。これらの方法は典型的に大過剰のカップリングおよび脱保護試薬を使用する。これらはまた、樹脂ビーズの染色(ニンヒドリン、2,4,6-トリニトロベンゼンスルホン酸など)に基づいて固相反応を監視するよう設計された一群の方法を含む。しかしながら、慣用のペプチド合成監視技術は固相において過剰のアミノ酸またはペプチド基が必要なため、ジアミノ二酸の固定化アミノ酸またはペプチドへの結合には応用できない。まず第１に、ジアミノ二酸ブリッジの両方の酸官能基をリシンまたは他のＣ−末端アミノ酸と前配合した樹脂に結合させることが重要である。これには、樹脂の官能性と比べてより少ない当量のアミノ酸の使用が必要である。したがって、樹脂に結合される未反応のアミノ酸が大過剰であるため標準技術を使用してアシル化を監視することはできない。第２に、Fmoc−脱保護α−アルキルアミノ酸を含有する樹脂試料の分析は標準技術を応用できないという事実により妨げられる。ニンヒドリン反応、すなわちルーヘマン紫の生成を使用することができず、そして脱保護および例えばFmoc Asp(otBu)OHによるアシル化の完了を監視することはできない。α −アルキルジアミノ二酸の低い入手可能性および高いコストのため、これらの困難なカップリングサイクルの間、ある形態の監視が是非必要である。上記の問題はUV技術を使用してカップリング効率を正確に計算することにより克服された。脱保護工程中に生成したFmoc／ピペリジン混合物を使用してカップリング効率を正確に測定した。樹脂試料を様々な段階で反応容器から採取し、分析した。吸光度の値を標準曲線に当てはめるとアミノ酸結合(incorporation)の数値が得られる。アルキル化による種々のアミノ酸の製造を開示している（例えばTetrahedron 39 ：2085（1983年）およびTopics Curr．Chem．109：65（1983年）を参照）。アルキル化工程の代わりに、２つのビス−ラクチムエーテル基を結合する二官能性架橋試薬との反応を行なうこの方法の応用は、本発明のα−アルキル化架橋アミノ酸の製造において特に有用であることがわかった。特に、環化アラニン−アラニンジペプチドから誘導されたビス−ラクチムエーテルは金属化およびアルキル化後、その相当する2,2−ジ置換ビス−ラクチムエーテルを与え、その加水分解によりα−メチル−α−アミノ酸が得られる（例えばLiebigs Ann．Chem．696（ 1981年）を参照）。これを応用してα−メチルジアミノ二酸を製造することができる。同様に、（Ｌ）−または（Ｄ）−環化ロイシン−ロイシンジペプチドから誘導されたビス−ラクチムエーテルをα−イソブチル−α−アミノ酸に変換することができる(例えばSynthesis 271（1984年）を参照)。これを応用してα−イソブチルジアミノ二酸を製造することができる。一般に、より大きいα−アルキル誘導体の場合、その相当するα−アミノ酸のダイマー化およびビス−ラクチムエーテルへの変換は次の架橋アルキル化反応のための適当な出発物質を生成し；またメチルのようなより小さいアルキル基の場合、バリン−グリシンジペプチドから誘導された通常使用されるビス−ラクチムエーテルの最初のアルキル化の後、同じビス−ラクチム炭素、すなわち２−位で第２アルキル化が行われる。その後の加水分解により相当するα−アルキル−α −アミノ酸が得られる。別法として、α−メチル化アミノ酸は（Ｌ）−または（Ｄ）−バリンおよびアラニンから誘導されたビス−ラクチムエーテルから好都合に得られる。α−炭素から誘導されたアラニンの立体化学が金属化後に失われるため、ラセミ状のアラニンを使用することができる。この炭素上の新しい基は（Ｄ）−バリンが使用される場合、新しく生成したアミノ酸が（Ｌ）−配置を有するように、そして逆もまた同じであるようにイソプロピル基に対してトランス位に入る。よびＡは上記で定義された通りであり；R³およびR⁴はそれぞれR¹およびR²と同じであるか、またはそれらが結合しているα−炭素原子を立体的に保護するアルキル基であり；そしてR⁵、R⁶、R⁷およびR⁸は独立してC_1〜6−アルキル基、例えばメチルまたはC_1〜8−アラルキル基、例えばベンジルである）で示されるように本発明のα−アルキル化架橋アミノ酸の合成に応用することができる。上記の反応スキームからわかるように、ビス−ラクチムエーテル（１）の２− 位の立体化学は金属化により失われる。ブリッジＡとなるものでアルキル化すると、新しい置換基は６−位（３）のR³基（通常イソプロピル）に対してトランス位に入る。半アルキル化には１当量が使用され、その反応をこの段階で停止し、生成物（３）を単離することができる。最初のアルキル化で得られた生成物をさらに、２−位の置換基R²がR¹と同じであるかまたは異なる別のビス −ラクチムエーテルと反応させ、それぞれ対称または非対称のジアルキル化生成物（４）を得ることができる。次に、加水分解によりその相当する対称または非対称の架橋アミノ酸（５）を得る。両方のアルキル化において、ブリッジ基はR³ またはR⁴基に対してトランス位に入る。したがって、両方のビス−ラクチムの（Ｌ）−バリン（R³＝イソプロピル）は(R,R)−α,α′−ジアミノ二酸を与えるが、（Ｄ）−バリンビス−ラクチムエーテルは(S,S)−α,α′−ジアミノ二酸を与える。一方のビス−ラクチムエーテルのバリンが（Ｌ）−配置を有し、他方が（Ｄ）−配置を有する場合、相当する(R,S)−ジアミノ二酸を生成し、それはR¹がR² と同じである時メソ−形態である。アルキル化剤が1,2−ジブロモエタンのように２個の隣接する臭素原子を有する場合、ビス−ラクチムエーテルの臭素化はより速い反応となる。最初に生成した生成物は別のビス−ラクチムエーテルと結合する。ダイマーの加水分解により、2,3−ジアミノ−2,3−ジメチルブタン二酸（コハク酸；すなわちＡは炭素−炭素結合である）を生成する。したがって、エチレン架橋化合物の製造はアルキル化において１−ブロモ−２−クロロエタンを使用することにより達成できる。中間体の２−（２−クロロエチル）誘導体は単離され、そして第２のアルキル化を容易にするため、塩素置換基は好ましくは前の反応において臭化物または沃化物イオンと交換される。本発明のペプチド化合物を製造するための別法は下記の一般反応スキーム（ここでR¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸およびＡは上記で定義された通りである）により示される。上記の反応スキームにおいて出発物質として使用されるジペプチド（６）は本出願人らの先の同時係属出願PCT／GB 93／01170およびPCT／GB 93／01171に記載のようにして製造することができる。また、金属化により２−位（７）のブリッジに結合した炭素の立体化学は失われる。示した例では、この炭素の配置はアルキル化（９）により反転する。反応をこの段階で停止し、その生成物（９）を加水分解して相当するジアミノ二酸を生成することができる。あるいは、配置の反転を伴なう第２のアルキル化後に加水分解して相当するジアミノ二酸（10）を得ることができる。上記の方法により製造されるビス−ラクチムジペプチドエーテル(４)、(７)、 (８)および(９)並びに架橋α,α′−ジアミノ酸(５)および（10）は本発明の別の態様を構成する。ジアミノ二酸は好ましくは固相プロトコールによるカップリング反応の前にＮ −Fmoc誘導体に変換される。ジオキサン：水および重炭酸ナトリウム中のジアミノ二酸ジエステルをFmoc-Cl試薬でアシル化し、次にFmoc−保護生成物のエステル基を６Ｎ HCl中で加熱することにより加水分解して二酸にすることができる。あるいは、ジアミノ二酸をナトリウム塩としてジオキサン：水中のFmoc-ClによりＮ−アシル化することができる。さらに別の方法では、TMS-Clを幾らか加えた HMDS中でジアミノ二酸を加熱することにより、ジアミノ二酸を最初に過シリル化することができる。過シリル化生成物はジクロロメタンに可溶性であり、そして Fmoc-Clを加え、得られる溶液を加熱することによりアシル化することができる。したがって、別の面から見て本発明は（ａ）式（式中、Ａ、R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷およびR⁸は上記の意味を有する）の化合物を加水分解して式のジアミノ二酸誘導体を生成し、（ｂ）前記ジアミノ二酸誘導体を逐次アミノ酸誘導体と反応させて式Ｉの架橋ペプチドの保護誘導体を増成し、そして（ｃ）存在する保護基を脱保護することからなるペプチド化合物の製造法を提供する。一般に、脱保護はいつも必要であり、また本発明の別の態様によれば、その保護誘導体が脱保護に付される上記で定義されたような式Ｉの化合物の製造法が提供される。架橋ジペプチドが生成してから、慣用の方法を使用してペプチド鎖の残りのアミノ酸を導入することができる。ペプチド鎖を増成するには、原則としてＣ−末端またはＮ−末端で開始することができる。したがって、ジアミノ二酸を例えばリシンの適当に保護された誘導体と反応させることにより、Ｃ−末端で開始することができる。リシン誘導体は遊離のα− アミノ基を有するが、ジアミノ二酸は遊離または活性化カルボキシル基および保護アミノ基を有する。カップリング後、中間体を例えばクロマトグラフィーにより精製し、そして選択的にＮ−脱保護して別のＮ−保護および遊離または活性化アミノ酸残基の付加を可能にする。この手順は必要なアミノ酸配列が完成するまで継続される。使用することのできるカルボン酸活性化置換基は例えば、対称または混成酸無水物、あるいはｐ−ニトロフェニルエステル、2,4,5−トリクロロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル(OBt)、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミジルエステル(OSu)またはペンタフルオロフェニルエステル(OPFP)のような活性化エステルである。遊離のアミノおよびカルボキシル基のカップリングは例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)を使用して行なうことができる。使用することのできる他のカップリング剤は例えばＮ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−1,2−ジヒドロキノリン(EEDQ)である。一般に、カップリング反応を好ましくは適当な溶媒系、例えばテトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメチルホルムアミド、塩化メチレンまたはこれらの溶媒の混合物中、低温、例えば−20℃〜周囲温度で行なうことが好ましい。合成を固相樹脂支持体上で行なうことがより好ましい。クロロメチル化ポリスチレン（１％ジビニルベンゼンを用いて架橋された）は１つの有用なタイプの支持体であり、この場合、合成は例えばＮ−保護リシンを支持体とカップリングすることにより、Ｃ−末端で開始する。幾つかの適当な固相法はFric Atherton，Christopher J．LoganおよびRobert C．SheppardのJ．Chem．Soc．Perkin I．538〜46（1981年）；James P．Tam，Fo e S．TjoengおよびR.B，MerrifieldのJ．Am．Chem．Soc.，102，6117〜27（1980 年）；James P．Tam．Richard D．DimarchiおよびR．B．MerrifieldのInt．J．P aptide Protein Res 16，412〜25（1980年）；Manfred MutterおよびDieter Bel lofのHelvetica Chimica Acta 67，2009〜16（1984年）に記載されている。カップリング反応を溶液中で行なうこともまたできる。アミノ酸の保護基については幅広く知られており、例えば Academic Press（1965年，1966年）；Pettit，G．R.の「合成ペプチド」，第１〜４巻、Van Nostrand，Reinhold，New York（1970年，1971年，1975年および19 76年）；Houben-WeylのMethoden der Organischen Chemie，Synthese von Pepti den，Band 15，Georg Thieme Verlag Stuttgart，NY(1983年);「ペプチド、分析、合成、生物学１〜７」，Erhard Gross，Johannes Meienhofer編，Academic Pr ess；「固相ペプチド合成」，第２版，John M．Stewart，Janis D．Young（Pier ce Chemical Company）に記載されている。したがって、使用することのできるアミン保護基は例えばカルボベンゾキシ( Ｚ−)、ｔ−ブトキシカルボニル(Boc−)、４−メトキシ−2,3,6−トリメチルベンゼンスルホニル(Mtr−)および９−フルオレニルメトキシカルボニル(Fmoc−) のような保護基である。ペプチドがＣ−末端部から増成される場合、アミン保護基は付加した新しい残基のそれぞれのα−アミノ基に存在し、次のカップリング工程の前に選択的に除去する必要があるということは理解できよう。固相系において、このような一時的なアミン保護のための特に有用な基の１つは有機溶媒中のピペリジンで処理することにより選択的に除去することができるFmoc基である。溶液合成においては、Boc−が好ましい保護基であり、それは慣用の方法で導入し、除去することができる。使用することのできるカルボキシル保護基は例えば、ベンジル(−OBZl)、ｐ− ニトロベンジル(−ONB)またはｔ−ブチル(−tOBu)のような容易に開裂されるエステル基、並びにポリスチレンに結合されたメチル基のような固体支持体上のカップリングである。例えば上記の参考文献に記載のような広範囲の他の基もまた存在し、上記の工程におけるすべてのこのような基の使用は本発明の範囲内であるということは理解できよう。アミンおよびカルボキシル保護基を除去するための広範囲の方法が存在する。しかしながら、これらは使用する合成法と調和したものでなければならない。側鎖保護基は次のカップリング工程の前に一時的なα−アミノ保護基を除去するために使用される条件に対して安定でなければならない。 Bocのようなアミン保護基およびtOBuのようなカルボキシル保護基は酸処理により、例えばトリフルオロ酢酸を用いて同時に除去することができる。下記の実施例により本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されない。下記の実施例において次の略語が使用される。 Asp＝アスパラギン酸 But＝ｔ−ブチル Ser＝セリン Glu＝グルタミン酸 pGlu＝ピログルタミン酸 PyBOP＝（ベンゾトリアゾリオキシ−トリス〔ピロリジノ〕−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート HOBt＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール NMM＝４−メチルモルホリン DMF＝ジメチルホルムアミド DMAP＝N,N−ジメチルアミノピリジン Pic＝２−ピコリン酸 Boc＝ｔ−ブチルオキシカルボニル DIC＝ジイソプロピルカルボジイミド DCM＝ジクロロメタン TFA＝トリフルオロ酢酸 HPLC＝高速液体クロマトグラフィー下記の実施例全体を通して、イソプロピル基は５位に存在するものとした。すべての¹H NMRを300MHzで記録し、すべての¹³C NMRを75MHzで記録した。実施例 2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチル−ピラジンのアルキル化の一般手順ヘキサン中におけるｎ−ブチルリチウムの溶液（1.60Ｍ溶液；3.44ml、5.5ミリモル）をTHF（50ml）中における(5R,2R,S)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ −５−イソプロピル−２−メチルピラジン（５ミリモル）およびDMEU（10モル）の溶液に注ぎ、混合物を15〜20分間撹拌してアザエノラートの生成を完了させた。次に、THF(10ml)中におけるハロゲン化アルキル（2.75ミリモル）の溶液を加え、混合物を−78℃で撹拌した。反応時間をTLCにより監視した（下文参照）。反応をホスフェート緩衝液の添加により急冷し、混合物を室温まで昇温させ、溶媒を減圧下で蒸発させ、そして残留物を水（30ml）およびジエチルエーテル（50 ml）と一緒に振盪した。層を分離し、水層をエーテル（２×25ml）で２回抽出した。合一したエーテル溶液を乾燥(MgSO₄)し、エーテルを留去した。粗生成物をバルブ−バルブ蒸留またはフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。粗生成物のジアステレオマー比はキャピラリーGLCにより測定した。実施例１モノアルキル化中間体を単離しないジアルキル化 1,3−ビス〔(2S,5R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル−２ −メチル−２−ピラジニル〕プロパン上記の一般手順を使用した。使用した試薬は(5R,2R,S)−2,5−ジヒドロ−3,6 −ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン（3.1g、15.64ミリモル）、THF（170ml）、DMEU（3.57g、31.28ミリモル）、ｎ−ブチルリチウム(1.6Ｍ；10.75ml、17.20ミリモル)、およびTHF（25ml）中の1,3-ジブロモプロパン（1. 58g、7.82ミリモル）である。撹拌を−78℃で17時間続けた。過剰のジブロモプロパンを40℃／0.01トルで蒸発させて粗製混合物から除去した。生成物をヘキサン：ジエチルエーテル（15：１）を使用するシリカゲル60上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収量2.56g（75％）。融点65.2℃（ニトロメタン）。キャピラリーGLC：ジアステレオマー過剰率88％。 IR(KBr)：1690cm^-1(C=N)¹ H NMR(CDCl₃)：δ 0.66および1.05(2d; J 7.7Hz; 6H; -CH(CH ₃)₂),0.71-0.82(m ; 1H; -CH₂-CH ₂-CH₂-)，1.27(s; 3H; 2-CH ₃)，1.32-1.81(m; 2H; -CH ₂-CH₂-CH₂- )，2.20(dsp; J1 7.7Hz，J2 4.0Hz; 1H,-CH(CH₃)₂)，3.61(s; 6H; -OCH ₃)，3.87 (d; J 4.0Hz; 1H; 5-H)1,4−ビス〔(2S,5R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ −５−イソプロピル−２−メチル−２−ピラジニル〕ブタン上記の一般手順を使用した。使用した試薬は(5R,2R,S)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン(4.0g、20.1 8ミリモル)、THF（190ml）、DMEU(4.61g、40.36ミリモル)、ｎ−ブチルリチウム (1.6Ｍ；13.87ml、22.20ミリモル)、およびTHF（40ml）中の1,4−ジブロモブタン(2.18g、10.08ミリモル)である。撹拌を−78℃で18時間続けた。過剰のジブロモブタンを40℃／0.01トルで蒸発させて粗製混合物から除去した。生成物をヘキサン：ジエチルエーテル（15：１）を使用するシリカゲル60上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収量3.72g（82％）。融点57℃（ニトロメタン）。キャピラリーGLC：ジアステレオマー過剰率88.4％。 IR(KBr)：1690cm^-1(C=N)¹ H NMR(CDCl₃)：δ 0.66および1.40(2d; J 6.9Hz; 6H; -CH(CH ₃)₂)，0.89-1.07( m; 4H; -CH₂-CH ₂-CH ₂-CH₂-)，1.29(s; 3H; 2-CH ₃)，1.38-1.90(m; 4H; -CH ₂-CH₂ -CH₂-CH ₂-)，2.25(dsp; J1 6.9Hz，J23.4Hz; 1H; -CH(CH₃)₂)，3.64(s; 6H; -OCH ₃ )，3.91(d，J 3.4Hz; 1H; 5-H)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 16.81および19.38(-CH(CH₃)₂)，24.44(-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-) ，28.67(2-CH₃)，30.95(-CH(CH₃)₂)，41.39(-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-)，52.11(-OCH₃) ，58.40(5-C)，61.10(2-C)，161.71および165.41(C=N) 元素分析値（C₂₄H₄₂N₄O₄として）：計算値：Ｃ 63.97％Ｈ 9.39％実測値：Ｃ 63.91％Ｈ 9.32％ 1,5−ビス−〔(2S,5R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル− ２−メチル−２−ピラジニル〕ペンタン上記の一般手順を使用した。使用した試薬は(5R,2R,S)−2,5−ジヒドロ−3,6 −ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン(4.2g、21.19ミリモル）、THF(180ml)、DMEU（4.82g、42.38ミリモル)、ｎ−ブチルリチウム(1.6Ｍ；14. 57ml、23.31ミリモル)、およびTHF（25ml）中の1,5−ジブロモペンタン(2.44g、 10.60ミリモル）である。撹拌を−78℃で18時間続けた。過剰のジブロモペンタンを40℃／0.01トルで蒸発させて粗製混合物から除去した。生成物をヘキサン：ジエチルエーテル（20：１）を使用するシリカゲル60上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収量2.96g（60％）。融点65.2℃（ニトロメタン）。キャピラリーGLC：ジアステレオマー過剰率88.4％。 IR(KBr)：1690cm^-1(C=N)¹ H NMR(CDCl₃): δ 0.66および1.07(2d; J 6.9Hz; 6H; -CH(CH ₃)₂)，0.79-1.27( m; 6H; -CH₂-CH ₂-CH ₂-CH ₂-CH₂-)，1.30(s; 3H; 2-CH ₃)，1.38-1.90(m; 4H; -CH ₂ -CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-CH ₂-)，2.25(dsp; J1 6.9Hz，J2 3.4Hz; 1H; -CH(CH₃)₂)，3. 65(s; 6H; -OCH ₃)，3.93(d; J 3.4Hz; 1H; 5-H)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 16.73および19.30(-CH(CH₃)₂)，24.22(-CH₂-CH₂-CH₂-)，28 .59(2-CH₃)，29.36(-CH₂-CH₂-CH₂-)，30.89(-CH(CH₃)₂)，41.19(-CH₂-CH₂-CH₂-) ，52.03(-OCH₃)，58.36(2-C),61.03(5-C)，161.57および165.43(C=N) 1,6−ビス−〔(2S,5R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル− ２−メチル−２−ピラジニル〕ヘキサン上記の一般手順を使用した。使用した試薬は(5R,2R,S)−2,5−ジヒドロ−3,6 −ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン(3.8g、19.17ミリモル)、THF（170ml）、DMEU(4.38g、38.34ミリモル)、ｎ− ブチルリチウム(1.6Ｍ；13.18ml、21.09ミリモル)、およびTHF（40ml）中の1,6- ジブロモヘキサン（2.34g、9.59ミリモル）である。撹拌を−78℃で15時間続けた。過剰のジブロモヘキサンを40℃／0.01トルで蒸発させて粗製混合物から除去した。生成物をヘキサン：ジエチルエーテル（20：１）を使用するシリカゲル60 上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収量3.35g（73％）。融点5 1℃（ニトロメタン）。キャピラリーGLC：ジアステレオマー過剰率82.0％。 IR(KBr)：1690cm^-1 (C=N)¹ H NMR(CDCl₃): δ 0.66および1.07(2d; J 6.9Hz; 6H; -CH(CH ₃)₂)，0.79-1.27( m; 4H; -CH₂-CH ₂-CH ₂-CH ₂-CH₂-)，1.30(s; 3H; 2-CH ₃)，1.33-1.80(m; 2H; -CH ₂ -CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-CH ₂-)，2.25(dsp;J1 6.9Hz，J2 3.4Hz; 1H; -CH(CH₃)₂)，3.6 5(s; 6H; -OCH ₃)，3.93(d; J 3.4Hz; 1H; 5-H)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 16.82および19.36(-CH(CH₃)₂)，24.29(-CH₂-CH₂-CH₂-)，28 .65(2-CH₃)，29.40(-CH₂-CH₂-CH₂-)，30.97(-CH(CH₃)₂)，41.35(-CH₂-CH₂-CH₂-) ，52.10(-OCH₃)，58.44(2-C)，61.10(5-C)，161.67および165.50(C=N) ビス−〔(2S,5R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル−２− メチル−２−ピラジニル〕エタン上記の一般手順を使用して1,2−ジブロモエタンによる臭素化および複素環のダイマー化を行った。使用した試薬は(5R,2R,S)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン（3.3g、16.65ミリモル）、THF（ 200ml）、DMEU（3.80g、 33.29ミリモル）、ｎ−ブチルリチウム(1.6Ｍ；11.45ml、18.32ミリモル）およびTHF（30ml）中の1,2−ジブロモエタン（3.13g、16.65ミリモル）である。撹拌を−78℃で10時間続けた。過剰のジブロモエタンを40℃／0.01トルで蒸発させて粗製混合物から除去した。生成物をヘキサン：ジエチルエーテル（15：１）を使用するシリカゲル60上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収量2. 04g（62％）。融点65〜66℃。 IR(KBr)：1690cm^-1(C=N)¹ H NMR(CDCl₃):δ 0.59および0.99(2d; J 6.9Hz; 6H; -CH(CH ₃)₂)，1.53(s; 3H; 2-CH ₃)，2.18(dsp; J1 6.9Hz，J2 3.4Hz; 1H;-CH(CH₃)₂)，3.51および3.65(2s; 12H; -OCH ₃)，3.87(d;J 3.4Hz；1H; 5-H)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 16.50および19.14(-CH(CH₃)₂)，23.35(2-CH₃)，30.68(-CH( CH₃)₂)，51.67および51.96(-OCH₃)，59.82(5-C)，64.93(2-C)，161.95および163 .92(C=N) 元素分析値（C₂₀H₃₄N₄O₄として）：計算値：Ｃ 60.73％Ｈ 8.63％実測値：Ｃ 60.89％Ｈ 8.69％実施例２中間体のモノアルキル化および単離 (2S,5R)−２−ブロモメチル−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン上記の一般手順を使用した。使用した試薬は(5R,2R,S)−2,5−ジヒドロ−3,6 −ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン(2.8g、14.13ミリモル) 、THF（220ml）、DMEU(3.23g、28.26ミリモル)、ｎ−ブチルリチウム(1.6Ｍ；9. 71ml、15.54ミリモル)、およびTHF（30ml）中のジブロモメタン(1.23g、7.07ミリモル)である。撹拌を− 78℃で18時間続けた。過剰のジブロモメタンを40℃／0.01トルで蒸発させて粗製混合物から除去した。生成物をヘキサン：ジエチルエーテル（15：１）を使用するシリカゲル60上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収量3.17g （77％）。 IR（KBr）：1690cm^-1(C=N)¹ H NMR(CDCl₃):δ 0.68および1.08(2d; J 7.3Hz; 6H; -CH(CH ₃)₂)，1.45(s; 3H; 2-CH ₃)，2.29(dsp; J1 7.3Hz，J2 3.7Hz; 1H，-CH(CH₃)₂)，3.39および3.75(dd ，J1 12.4Hz，J2 10.4Hz; 2H; -CH ₂Br)，3.67および3.71(2s; 6H; -OCH ₃)，4.03 (d; J 3.7Hz; 1H；5-H)¹³ C NMR（CDCl₃）：δ16.77および19.28(-CH(CH₃)₂)，26.52(2-CH₃)，30.83(-CH (CH₃)₂)，43.04(-CH₂-Br)，52.40および52.48(-OCH₃)，58.32(2-C)，61.00(5-C) ，161.71および165.41(C=N)(2S,5R)−２−（２−クロロエチル）−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン上記の一般手順を使用した。使用した試薬は(5R,2R,S)−2,5−ジヒドロ−3,6 −ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン（3.5g、17.66ミリモル）、THF（200ml）、DMEU(4.03g、35.31ミリモル)、ｎ−ブチルリチウム(1.6Ｍ； 12.14ml、19.43ミリモル)、およびTHF（30ml）中の１−ブロモ−２−クロロエタン（6.33g、44.15ミリモル)である。撹拌を−78℃で18時間続けた。過剰の１− ブロモ−２−クロロエタンを40℃／0.01トルで蒸発させて粗製混合物から除去した。生成物をヘキサン：ジエチルエーテル（20：１）を使用するシリカゲル60上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収量2.44g（53％）。キャピラリーGLC：ジアステレオマー過剰率90％。 IR(KBr)：1690cm^-1(C=N)¹ H NMR(CDCl₃): δ 0.68および1.06(2d; J 7.7Hz; 6H; -CH(CH ₃)₂)，1.34(s; 3H ; 2-CH ₃)，1.97-2.37(m; 3H; -CH₂-CH ₂Clおよび-CH(CH₃)₂)，3.21および3.38(m; 2H; -CH₂-CH ₂Cl)，3.66および3.67(2s; 6H; -OCH ₃)，3.95(d; J 3.7Hz; H; 5-H )¹³ C NMR(CDCl₃):δ 16.91および19.30(-CH(CH₃)₂)，28.65(2-CH₃)，31.00(-CH(C H₃)₂)，40.51(-CH ₂-CH₂-Cl)，43.72(-CH₂-CH₂-Cl)，52.19および52.32(-OCH₃)， 57.29(2-C)，61.08(5-C)，162.49および164.31(C=N) (2S,5R)−２−（２−ブロモエチル）−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５− イソプロピル−２−メチルピラジン DMF（30ml）中における上記のようにして製造した(2S,5R)−２−（２−クロロエチル）−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン（1.0g、3.83ミリモル）およびNaBr（0.47９、4.60ミリモル）を70℃で12 時間撹拌した。次に、溶媒を40℃／0.01トルで除去し、生成物をヘキサン：ジエチルエーテル（20：１）を使用するシリカゲル60上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収量1.03g（88％）。 IR(KBr)：1690cm^-1(C=N)¹ H NMR(CDCl₃): δ 0.68および1.06(2d; J 7.7Hz; 6H; -CH(CH₃)₂)，1.34(s; 3H ; 2-CH₃)，1.97-2.37(m; 3H; -CH₂-CH₂Clおよび-CH(CH₃)₂)，3.21および3.38(m; 2H; -CH₂-CH ₂Cl)，3.66および3.67(2s; 6H; -OCH ₃)，3.95(d，J 3.7Hz; 1H; 5-H ) ¹³ C NMR(CDCl₃): δ 16.91および19.30(-CH(CH₃)₂)，28.65(2-CH₃)，31.00(-CH( CH₃)₂)，40.51(-CH ₂-CH₂-Cl)，43.72(-CH₂-CH₂-Cl)，52.19および52.32(-OCH₃) ，57.29(2-C)，61.08(5-C)，162.49および164.31(C=N) (2S,5R)−２−（２−ヨードエチル）−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５− イソプロピル−２−メチルピラジン DMF（30ml）中における上記のようにして製造した(2S,5R)−２−（２−クロロエチル）−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン（1.7g、6.52ミリモル）およびNal(0.47g、7.82ミリモル）を70℃で12時間撹拌した。次に、溶媒を40℃／0.01トルで除去し、生成物をヘキサン：ジエチルエーテル（20：１）を使用するシリカゲル60上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収量1.03g（88％）。 IR(KBr)：1690cm^-1(C=N)¹ H NMR(CDCl₃): δ 0.66および1.05(2d; J 7.7Hz; 6H; -CH(CH ₃)₂)，1.30(s; 3H ; 2-CH ₃)，2.12-2.49(m; 3H; -CH ₂-CH₂Iおよび-CH(CH₃)₂)，2.76-2.98(m; 2H; - CH₂-CH ₂I)，3.65および3.66(2s; 6H; -OCH ₃)，3.93(d; J 4.0Hz; 1H; 5-H)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 0.92(-CH₂-CH₂I)，16.89および19.30(-CH(CH₃)₂)，28.30(2 -CH₃)，31.00(-CH(CH₃)₂)，45.65(-CH₂-CH₂-I)，52.23および52.36(-OCH₃)，59. 77(2-C)，61.16(5-C)，162.59および163.96(C=N) 実施例３モノアルキル化中間体からのダイマー生成 1,2−ビス−〔(2S,5R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル− ２−メチル−２−ピラジニル〕エタン上記の一般手順を使用した。使用した試薬は(5R,2R,S)−2,5−ジヒドロ−3,6 −ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン（2.0g、10.08ミリモル）、THF（70ml）、DMEU（2.30g、20.16ミリモル）、ｎ−ブチルリチウム(1.6Ｍ；6.94ml、11.1ミリモル)、およびTHF（30ml）中の(2S,5R)−（２−ブロモエチル）−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル−２−メチルピラジン（1.09g、5.04ミリモル）である。撹拌を−78℃で18時間続けた。生成物をヘキサン：ジエチルエーテル（20：１）を使用するシリカゲル60上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。収量2.44g（62％）。融点96℃。キャピラリーGLC：ジアステレオマー過剰率96％o IR(KBr)：1690cm^-1(C=N)¹ H NMR(CDCl₃): δ 0.65および1.05(2d; J 7.7Hz; 6H; -CH(CH ₃)₂)，1.28(s; 3H ; 2-CH ₃)，1.38-1.80(m; 4H; -CH ₂-CH ₂-)，2.24(dsp; J1 7.7Hz，J2 3.7Hz; 1H, -CH(CH₃)₂)，3.63(s; 6H; -OCH ₃)，3.90(d; J 3.7Hz; 1H; 5-H)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 16.72および19.30(-CH(CH₃)₂)，24.36(-CH₂-CH₂-)，28.61( 2-CH₃)，30.87(-CH(CH₃)₂)，41.31(-CH₂-CH₂-),52.00および52.02(-OCH₃)，58.3 1(5-C)，61.01(2-C)，161.62および165.32(C=N) 実施例４加水分解 (S,S)−2,3−ジアミノ−2,3−ジメチルブタン二酸ジメチルジエステル 1,2−ビス−〔(2S,5R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル −２−メチル−２−ピラジニル〕エタン(0.67g、1.70ミリモル)をアセトニトリル（20ml）に溶解し、0.5Ｎ HCl(20.4ml)を滴加し、溶液を室温で一晩撹拌した。アンモニア溶液を加えて溶液をpH11にした。次に、混合物をクロロホルムで抽出し、乾燥(MgSO₄)した。得られるクロロホルム溶液を蒸発させ、バリンメチルエステルを35℃／0.05トルでのバルブ−バルブ蒸留により残留生成物から除去した。収量0.29g（82％）。 (S,S)−2,5−ジアミノ−2,5−ジメチルヘキサン二酸ジメチルジエステル 1,2−ビス−〔(2S,5R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル −２−メチル−２−ピラジニル〕エタン(0.82g、1.94ミリモル）をアセトニトリル（25ml）に溶解し、0.5Ｎ HCl(23.3ml)を滴加し、溶液を室温で一晩撹拌した。アンモニア溶液を加えて溶液をpH11にした。次に、混合物をクロロホルムで抽出し、乾燥(MgSO₄)した。得られるクロロホルム溶液を蒸発させ、バリンメチルエステルを35℃／0.05トルでのバルブ−バルブ蒸留により残留生成物から除去した。収量0.41g（91％）。¹ H NMR(CDCl₃): δ 1.08-1.24(m; 1H; -CH ₂-)，1.30(s; 3H; -CH ₃),1.42-1.76(m ; 3H; -NH ₂および-CH ₂-)，3.69(s; 3H; -OCH ₃) (S,S)−2,6−ジアミノ−2,6−ジメチルヘプタン二酸ジメチルジエステル 1,3−ビス−〔(2S,5R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル −２−メチル−２−ピラジニル〕プロパン(0.77g、1.76ミリモル)をアセトニトリル（20ml）に溶解し、0.5Ｎ HCl（21.2ml）を滴加し、溶液を室温で一晩撹拌した。アンモニア溶液を加えて溶液をpH11にした。次に、混合物をクロロホルムで抽出し、乾燥(MgSO₄)した。得られるクロロホルム溶液を蒸発させ、バリンメチルエステルを35℃／0.05トルでのバルブ−バルブ蒸留により残留生成物から除去した。収量0.39g（91％）。¹ H NMR(CDCl₃): δ 1.02-1.34(m; 2H; -CH ₂-)，1.30(s; 3H; -CH ₃)，1.34-1.82( m; 3H; -NH ₂および-CH ₂-)，3.69(s; 3H; -OCH ₃) (S,S)−2,7−ジアミノ−2,7−ジメチルオクタン二酸ジメチルジエステル 1,4−ビス−〔(2S,5R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル −２−メチル−２−ピラジニル〕ブタン(0.90g、2.00ミリモル）をアセトニトリル（24ml）に溶解し、0.5Ｎ HCl（24ml）を滴加し、溶液を室温で一晩撹拌した。アンモニア溶液を加えて溶液をpH11にした。次に、混合物をクロロホルムで抽出し、乾燥(MgSO₄)した。得られるクロロホルム溶液を蒸発させ、バリンメチルエステルを35℃／0.05トルでのバルブ−バルブ蒸留により残留生成物から除去した。収量0.48g（92％）。¹ H NMR(CDCl₃): δ 1.02-1.28(m; 2H; -CH ₂-)，1.29(s; 3H; -CH ₃)，1.42-1.85( m; 4H; -NH ₂および-CH ₂-)，3.69(s; 3H; -OCH ₃)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 24.36(-CH₂-CH₂-)，26.27(-CH₃)，40.90(-CH₂-CH₂-)，52.0 5(-OCH₃)，57.65(-C-NH₂)，178.00(-COOCH₃) (S,S)−2,8−ジアミノ−2,8−ジメチルノナン二酸ジメチルジエステル 1,5−ビス−〔(2S,5R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル −２−メチル−２−ピラジニル〕ペンタン（0.75g、1.61ミリモル）をアセトニトリル（20ml）に溶解し、0.5Ｎ HCl（19.4ml）を滴加し、溶液を室温で一晩撹拌した。アンモニア溶液を加えて溶液をpH11にした。次に、混合物をクロロホルムで抽出し、乾燥(MgSO₄)した。得られるクロロホルム溶液を蒸発させ、バリンメチルエステルを35℃／0.05トルでのバルブ−バルブ蒸留により残留生成物から除去した。収量0.34g（78％）。¹ H NMR(CDCl₃): δ 0.98-1.38(m; 3H; -CH ₂-)，1.28(s; 3H; -CH ₃)，1.38-1.81( m; 4H; -NH ₂および-CH ₂-)，3.71(s; 3H; -OCH ₃)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 23.97(-CH₂-CH₂-CH₂-)，26.31(-CH₃)，29.95(-CH₂-CH₂-CH₂ -)，40.98(-CH₂-CH₂-CH₂-)，52.04(-OCH₃)，57.69(-C-NH₂)，178.08(-COOCH₃) (S,S)−2,9−ジアミノ−2,9−ジメチルデカン二酸ジメチルジエステル 1,6−ビス−〔(2S,5R)−2,5−ジヒドロ−3,6−ジメトキシ−５−イソプロピル −２−メチル−２−ピラジニル〕ヘキサン（0.87g、1.82ミリモル）をアセトニトリル（25ml）に溶解し、0.5Ｎ HCl（21.8ml）を滴加し、溶液を室温で一晩撹拌した。アンモニア溶液を加えて溶液をpH11にした。次に、混合物をクロロホルムで抽出し、乾燥(MgSO₄)した。得られるクロロホルム溶液を蒸発させ、バリンメチルエステルを35℃／0.05トルでのバルブ−バルブ蒸留により残留生成物から除去した。収量0.43g（82％）。¹ H NMR(CDCl₃): δ 1.00-1.40(m; 4H; -CH ₂-)，1.30(s; 3H; -CH ₃)， 1.40-1.83(m; 4H; -NH ₂および-CH ₂-)，3.69(s; 3H; -OCH ₃)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 24.04(-CH₂-CH₂-CH₂-)，26.34(-CH₃)，29.58(-CH₂-CH₂-CH₂ -)，41.05(-CH₂-CH₂-CH₂-)，52.03(-OCH₃)，57.73(-C-NH₂)，178.14(-COOCH₃) 実施例５Ｎ−保護 (S,S)−2,5−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,5 −ジメチルヘキサン二酸ジメチルジエステル Fmoc-Cl(1.33g、5.16ミリモル）および１Ｎ NaHCO₃（5.2ml）を同時にジオキサン（30ml）中における(S,S)−2,5−ジアミノ−2,5−ジメチルヘキサン二酸ジメチルジエステル（400mg、1.72ミリモル）の溶液に撹拌しながらゆっくりと加え、混合物を室温で20時間撹拌した。ジオキサンを蒸留により除去し、残留物をクロロホルムで抽出した。次に、クロロホルム溶液を洗浄し、乾燥（MgSO₄）し、蒸発濃縮した。表題化合物をヘキサン：EtOAc（４：１〜２：１）を使用するフラッシュクロマトグラフィーにより単離した。収量873mg（75％）。¹ H NMR(CDCl₃): δ 1.56(s; 3H; -CH ₃)，1.03，1.24，1.73および2.11(br s; 4H ; -CH ₂-CH ₂-)，3.74(br s; 3H; -OCH ₃)，4.22(t; J 6.2Hz; -Fmoc)，4.37(br s; 2H; -CH ₂-Fmoc)，5.59(br s; 1H; -NH-Fmoc)，7.23-7.81(m; 8H; -Fmoc)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 23.36，23.90，36.57，47.21，52.68，59.88，66.32，119. 90，124.94，126.97，127.90，141.27，143.87，174.66 (S,S)−2,6−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,6 −ジメチルヘプタン二酸ジメチルジエステル Fmoc-Cl(0.95g、3.66ミリモル）および１Ｎ NaHCO₃（3.7ml）を同時にジオキサン（30ml）中における(S,S)−2,6−ジアミノ−2,6−ジメチルヘプタン二酸ジメチルジエステル（300mg、1.22ミリモル）の溶液に撹拌しながらゆっくりと加え、混合物を室温で20時間撹拌した。ジオキサンを蒸留により除去し、残留物をクロロホルムで抽出した。次に、クロロホルム溶液を洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、蒸発濃縮した。表題化合物をヘキサン：EtOAc（４：１〜２：１）を使用するフラッシュクロマトグラフィーにより単離した。収量632mg（75％）。¹ H NMR(CDCl₃): δ 1.56(s; 3H; -CH ₃)，1.03，1.24，1.73および2.11(br s; 4H ; -CH ₂-CH ₂-)，3.74(br s; 3H; -OCH ₃)，4.22(t; J 6.2Hz; -Fmoc)，4.37(br s; 2H; -CH ₂-Fmoc)，5.59(br s; 1H; ーNH-Fmoc)，7.23-7.81(m; 8H; -Fmoc)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 23.36，36.31，47.16，52.66，59.90，66.43，119.93，124 .94，127.02，127.63，141.26，143.85，174.51 (S,S)−2,7−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,7 −ジメチルオクタン二酸ジメチルジエステル Fmoc-Cl（1.20g、4.62ミリモル）および１Ｎ NaHCO₃（4.6ml）を同時にジオキサン（30ml）中における(S,S)−2,7−ジアミノ−2,7−ジメチルオクタン二酸ジメチルジエステル（400mg、1.54ミリモル）の溶液を撹拌しながらゆっくりと加え、混合物を室温で20時間撹拌した。ジオキサンを蒸留により除去し、残留物をクロロホルムで抽出した。次に、クロロホルム溶液を洗浄し、乾燥（MgSO₄）し、蒸発濃縮した。表題化合物をヘキサン：EtOAc（４：１〜２：１）を使用するフラッシュクロマトグラフィーにより単離した。収量955mg （88％）。¹ H NMR(CDCl₃): δ 1.59(s; 3H; -CH ₃)，1.02，1.55，1.75および2.13(br s; 4H ; -CH ₂-CH ₂-)，3.74(br s; 3H; -OCH ₃)，4.21(t; J 6.2Hz; -Fmoc)，4.37(br s; 2H; -CH ₂-Fmoc)，5.59(br s; 1H; -NH-Fmoc)，7.21-7.79(m; 8H; -Fmoc)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 23.36，23.90，36.56，47.20，52.68，59.87，66.32，119. 90，124.93，126.96，127.59，141.26，143.86，174.65 (S,S)−2,8−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,8 −ジメチルノナン二酸ジメチルジエステル Fmoc-Cl(0.85g、3.27ミリモル)および１Ｎ NaHCO₃(3.3ml)を同時にジオキサン（30ml）中における(S,S)−2,8−ジアミノ−2,8−ジメチルノナン二酸ジメチルジエステル（300mg、1.09ミリモル）の溶液に撹拌しながらゆっくりと加え、混合物を室温で20時間撹拌した。ジオキサンを蒸留により除去し、残留物をクロロホルムで抽出した。次に、クロロホルム溶液を洗浄し、乾燥(MgS0,)し、蒸発濃縮したC表題化合物をヘキサン：EtOAc（４：１〜２：１）を使用するフラッシュクロマトグラフィーにより単離した。収量478mg（61％）。¹ H NMR(CDCl₃): δ 1.55(br s; 3H; -CH ₃)，1.18，1.78および2.17(br s; 5H; - CH ₂-CH ₂-CH ₂-)，3.69(br s; 3H; -OCH ₃)，4.20(t; J 6.2Hz; -Fmoc)，4.35(br s ; 2H; -CH ₂-Fmoc)，5.63(br s; 1H; -NH-Fmoc)，7.23-7.79(m; 8H; -Fmoc)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 23.39，23.86，29.15，36.61，47.21，52.66，59.95，66.3 1，119.90，124.95，126.95，127.59，141.27，143.89，174.72 (S,S)−2,9−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,9 −ジメチルデカン二酸ジメチルジエステル Fmoc-Cl(1.08g、4.17ミリモル）および１Ｎ NaHCO₃（4.2ml）を同時にジオキサン(30ml)中における(S,S)−2,9−ジアミノ−2,9−ジメチルデカン二酸ジメチルジエステル（400mg、1.39ミリモル）に溶液に撹拌しながらゆっくりと加え、混合物を室温で20時間撹拌した。ジオキサンを蒸留により除去し、残留物をクロロホルムで抽出した。次に、クロロホルム溶液を洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、蒸発濃縮した。表題化合物をヘキサン：EtOAc（４：１〜２：１）を使用するフラッシュクロマトグラフィーにより単離した。収量560mg（55％）。¹ H NMR(CDCl₃): δ 1.55(s; 3H; -CH ₃)，1.01，1.22，1.77および2.12(br s; 6H ; -CH ₂-CH ₂-CH ₂-)，3.74(br s; 3H; -OCH ₃)，4.21(t; J 6.2Hz; -Fmoc)，4.36(b r s; 2H; -CH ₂-Fmoc)，5.61(br s; 1H; -NH-Fmoc)，7.21-7.79(m; 8H; -Fmoc)¹³ C NMR(CDCl₃): δ 23.35，23.96，29.15，36.71，47.22，52.64，59.98，66.3 0，119.89，124.94，126.95，127.58，141.27，143.89，174.78 実施例６エステル加水分解 (S,S)−2,5−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,5 −ジメチルヘキサン二酸６Ｎ HCl（0.6ml、3.55ミリモル）をジオキサン（10ml）中における(S,S)−2, 5−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,5−ジメチルヘキサン二酸ジメチルジエステル（600mg、0.887ミリモル）の溶液に加え、得られる溶液を90℃で24時間加熱した。次に、ジオキサンを留去し、残留物をクロロホルム（２×20ml）で抽出した。クロロホルム溶液を洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、蒸発濃縮した。表題化合物をヘキサン：EtOAc：HOAc（１：１：0.1）を使用するフラッシュクロマトグラフィーにより単離した。白色の粉末。収量409mg（71％）。¹ H NMR(DMSO-d₆): δ 1.13(s(br); 1H; -CH₂-CH ₂-CH ₂-)，1.30(s; 3H; -CH ₃)，1 .68(s(br); 1H; -CH ₂-CH₂-)，4.22(m; 3H; -Fmoc)，7.21-7.96(m; 9H; -Fmocおよび-NH)，12.40(s(br); 1H; -COOH)¹³ C NMR(DMSO-d₆): δ 22.97，23.98，37.09，44.00，47.17，58.76，65.59，12 0.46，125.63，127.44，127.98，141.10，144.27，155.01，175.71 (S,S)−2,7−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,7 −ジメチルオクタン二酸６Ｎ HCl（0.76ml、4.54ミリモル）をジオキサン（10ml）中における(S,S)−2 ,7−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,7−ジメチルオクタン二酸ジメチルジエステル（800mg、1.14ミリモル）の溶液に加え、得られる溶液を90℃で24時間加熱した。次に、ジオキサンを留去し、残留物をクロロホルム（２×20ml）で抽出した。クロロホルム溶液を洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、蒸発濃縮した。表題化合物をヘキサン：EtOAc：HOAc（１：１：0.1）を使用するフラッシュクロマトグラフィーにより単離した。白色の粉末。収量679mg（88 ％）。¹ H NMR(DMSO-d₆): δ 1.13(s(br); 1H; -CH₂-CH ₂-CH ₂-)，1.30(s; 3H; -CH ₃)，1 .68(s(br); 1H; -CH ₂-CH₂-)，4.22(m; 3H; -Fmoc)，7.21-7.96(m; 9H; -Fmocおよび-NH)，12.40(s(br); 1H; -COOH) ¹³ C NMR(DMSO-d₆): δ 22.97，23.98，37.09，44.00，47.17，58.76，65.59，12 0.46，125.63，127.44，127.98，141.10，144.27，155.01，175.71 (S,S)−2,8−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,8 −ジメチルノナン二酸６Ｎ HCl（0.37ml、2.23ミリモル）をジオキサン（10ml）中における(S,S)−2 ,8−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,8−ジメチルノナン二酸ジメチルジエステル（400mg、0.556ミリモル）の溶液に加え、得られる溶液を90℃で24時間加熱した。次に、ジオキサンを留去し、残留物をクロロホルム（２×20ml）で抽出した。クロロホルム溶液を洗浄し、乾燥（MgSO₄）し、蒸発濃縮した。表題化合物をヘキサン：EtOAc：HOAc（１：１：0.1）を使用するフラッシュクロマトグラフィーにより単離した。白色の粉末。収量280mg（73 ％）。¹ H NMR(DMSO-d₆): δ 1.22(s(br); 3H; -CH₂-CH ₂)，1.31(s; 3H; -CH ₃)，1.69(s (br); 2H; -CH ₂-CH₂-)，4.22(m; 3H; -Fmoc)，7.17-7.96(m; 9H; -Fmocおよび-NH )，12.14(s(br); 1H; -COOH)¹³ C NMR(DMSO-d₆): δ 23.05，23.66，36.95，47.18，58.83，65.57，120.46，1 25.63，127.44，127.98，141.11，144.28，155.95，175.77 (S,S)−2,9−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,9 −ジメチルデカン二酸６Ｎ HCl（0.45ml、2.73ミリモル）をジオキサン（10ml）中における(S,S)−2 ,9−ビス−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）−2,9−ジメチルデカン二酸ジメチルジエステル（500mg、 0.682ミリモル）の溶液を加え、得られる溶液を90℃で24時間加熱した。次に、ジオキサンを留去し、残留物をクロロホルム（２×20ml）で抽出した。クロロホルム溶液を洗浄し、乾燥(MgSO₄)し、蒸発濃縮した。表題化合物をヘキサン：EtO Ac：HOAc（１：１：0.1）を使用するフラッシュクロマトグラフィーにより単離した。白色の粉末。収量375mg（78％）。¹ H NMR(DMSO-d₆): δ 1.16(s(br); 4H; -CH₂-CH ₂-CH ₂)，1.31(s; 3H; -CH ₃)，1. 70(s(br); 2H; -CH ₂-CH₂-CH₂)，4.23(m; 3H; -Fmoc),7.18-8.04(m; 9H; -Fmocおよび-NH)，12.20(s(br); 1H; -COOH)¹³ C NMR(DMSO-d₆): δ 21.51，23.19，29.31，36.83，47.20，58.95，65.43，12 0.46，125.59，127.42，127.97，141.12，144.31，154.80，172.37 実施例７ (Pic-Ser-Asp)₂-α,α′-Me₂-Sub(Lys-OH)₂の製造 FmocLys(Boc)-Sasrin−樹脂(0.6ミリモル、1.0g）を窒素下、20％ピペリジン／DMF中で10分間脱保護した。次に、樹脂をDMF（８×15ml）でよく洗浄した。 (S,S)−ジ−Ｎ−Fmoc−2,7−ジアミノ−2,7−ジメチルスベリン酸(0.15ミリモル、0.1g）を、PyBOP（0.3ミリモル、0.16g）およびHOBt(0.3ミリモル、0.04g）と一緒に、きれいなガラスびんに計り取った。DMF（10ml）、次にNMM（0.45ミリモル、0.05ml）を加え、混合物を４分間撹拌した。活性アミノ酸を窒素バブラーで脱保護樹脂に移した。一定の間隔で樹脂試料を採取し、荷重分析に付した。 22時間のカップリング後、樹脂試料（10mg）を反応容器から採取した。試料を DMF（４×10ml）、DCM（３×10ml）およびジエチルエーテル（３×10ml）でよく洗浄し、真空デシケーター中で３時間乾燥した。次に、２つの樹脂試料をきれいなUVセルに正確に計り取り、３mlの20％ピペリジンを加えた。両方のキュベットを１分間超音波処理し、樹脂を沈降させてから290nmで吸光度の値を読み取った。結合度はFmoc／ピペリジンを含有する標準溶液の分光測光により得られる相関グラフから読み取ることができる。平均吸光度＝0.7または40％アミノ酸結合＝0.12ミリモル／ｇ次に、窒素バブラー中の樹脂をDMF（５×10ml）でよく洗浄し、未反応の酸官能基を10mlのDMF中のPyBOP、HOBtおよびNMMからなる第２バッチでさらに３時間処理した。 DMF洗浄（５×10ml）を数回行った後、すべての残留するリシン残基をDMF中、 10％無水酢酸で10分間キャップした。樹脂をDMF（５×10ml）で洗浄し、次にFmocを20％ピペリジン中でそれぞれ10 分間、５分間、５分間の３回脱保護し、その後DMF（５×19ml）で洗浄した。 FmocAsp(OtBu)OH（２ミリモル、0.82g）をPyBOP（2.0ミリモル、1.04g）およびHOBt（2.0ミリモル、0.27g）と一緒に、きれいなガラスびんに計り取った。DM F（10ml）、次にNMM（3.0ミリモル、0.33ml）を加え、混合物を４分間撹拌した。活性アミノ酸を窒素バブラーで脱保護樹脂に移した。再び樹脂試料を採取し、荷重分析に付した。16時間のアシル化後、樹脂へのFmocAsp(OtBu)OHの結合は97 ％に達したのでカップリングを終了させた。 FmocSer(tBu)OHおよびPicOHを標準PyBOPカップリング法およびニンヒドリン反応による監視法を使用して結合させた。樹脂からのペプチドの開裂を５％水性TFA中で１時間行った。粗製ペプチドを沈殿させ、ジエチルエーテルで摩砕し、空気乾燥した。 150分間にわたって０〜20％Ｂ（Ｂ＝４０％アセトニトリル）のグラジエント溶離液を使用する分取用HPLC（Vydac TP1002、20cmのカラム）により粗製ペプチド（40mg）を精製し、凍結乾燥して６mgの表題ペプチドを得た。FAB-MS: M⁺1099 （実測値1199）。 HPLC(Vydac 218TP54、20分間にわたって０〜30％Ｂ）。保持時間＝17.9分。実施例８ (ピロ-Glu-Glu-Asp)₂-α-Me-C4-(Lys-OH)₂の製造 C4＝2,7−ジアミノ−2,7−ジメチルオクタン二酸実施例７と同様にして製造した。 FAB-MS: 期待値1198；実測値1199.4。 HPLC：０〜30％Ｂ；Ｂ＝0.1％TFA水溶液中の40％MeCN(Vydac)：保持時間17.9分。実施例９ (ピロ-Glu-Glu-Asp)₂-α-Me-C2-(Lys-OH)₂の製造 C2＝2,5−ジアミノ−2,5−ジメチルヘキサンジオン酸実施例７と同様にして製造した。 FAB-MS: 期待値1198；実測値 HPLC：０〜30％Ｂ；Ｂ＝0.1％TFA水溶液中の40％MeCN。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｄ 241/18 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＧＺ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者サンドシヤム，ジエシーノールウエー国エン−0386 オスロ．トロステリユードヴエアイエン５

Claims

【特許請求の範囲】１．式Ｉ〔式中、R¹およびR²は独立して水素原子またはC_1〜4−アルキル基であるが、R¹ およびR²は同時に水素原子ではなく；Ａは炭素−炭素結合、あるいは１個以上のＯもしくはＳ原子または-S-S-基により中断されうる場合により置換された飽和または不飽和のC_1〜8−アルキレンまたはアラルキレン基であり； R^aはそれぞれ独立してピログルタミン酸(pGlu)、ピリジン−２−カルボン酸 (Pic)またはその３−アミノもしくは３−ヒドロキシ誘導体、アントラニル酸、ピリジン−３−カルボン酸(Nic)、ピラジン−２−カルボン酸、ピロール−２− カルボン酸、プロリン(Pro)あるいはピペコリン酸であり； R^bはそれぞれ独立してセリン(Ser)、グルタミン酸(Glu)、アスパラギン酸(A sp)、トレオニン(Thr)またはアロトレオニン(aThr)であり； R^cはそれぞれ独立してアスパラギン酸(Asp)またはグルタミン酸(Glu)であり； R^dはそれぞれ独立してグリシン(Gly)またはアラニン(Ala)であり； R^eはそれぞれ独立してリシン(Lys)、オルニチン(Orn)またはアルギニン(Arg)であり；Ｙはそれぞれ独立してヒドロキシまたはアミノ基、あるいはアミノ酸のアミンであり；ｎは０または１であり；そしてアミノ酸残基はＤまたはＬ体で存在する〕のペプチド化合物。２．R^aがそれぞれ独立してpGlu、PicまたはProであり；R^bがそれぞれ独立してSe r、GluまたはAspであり；Ｙがそれぞれ独立してヒドロキシまたはアミノ基であり；そしてｎが０である請求項１記載のペプチド化合物。３．Ａが炭素−炭素結合、C_1〜6−アルキレン基、シスまたはトランス-CH₂-CH=C H-CH₂-、-CH₂-C≡C-CH₂-、-(CH₂)_p-Z-(CH₂)_q(ここで、Ｚ＝Ｏ、ＳまたはＳ₂であり、そしてｐおよびｑは独立して１または２である）、あるいは-(CH₂)_r-C₆H₄-( CH₂)_s（ここで、ｒおよびｓは独立して０または１である）である請求項１または２記載のペプチド化合物。４．R¹およびR²が独立して水素原子またはメチル基である請求項１〜３の何れか一項記載のペプチド化合物。５．式の請求項１〜４の何れか一項記載のペプチド化合物。６．請求項１〜５の何れか一項記載のペプチド化合物を薬用基剤または賦形剤と一緒に含有する医薬組成物。７．細胞増殖を刺激するのに使用される請求項１〜５の何れか一項記載のペプチド化合物。８．骨髄造血または骨髄の再生を刺激するのに使用される請求項１〜５の何れか一項記載のペプチド化合物。９．細胞増殖を刺激する医薬の製造における請求項１〜５の何れか一項記載のペプチド化合物の使用。 10．骨髄造血または骨髄の再生を刺激する医薬の製造における請求項９記載の使用。 11．細胞増殖を刺激するための請求項１〜５の何れか一項記載のペプチド化合物の使用。 12．骨髄造血または骨髄の再生を剌激するための請求項11記載の使用。 13．患者に有効量の請求項６記載の組成物を投与することからなる、患者の細胞増殖を刺激する方法。 14．細胞増殖抑制療法において同時に、別々に、または逐次使用される組合わせ製剤として請求項１〜５の何れか一項記載のペプチド化合物および骨髄造血阻害剤を含有する医薬品。 15．その部分的にまたは完全に保護された誘導体を脱保護することを含む請求項１〜５の何れか一項記載のペプチド化合物の製造法。 16．（ａ）式（式中、Ａ、R¹およびR²は請求項１〜５の何れか一項で定義された通りであり；R³およびR⁴はそれぞれR¹およびR²と同じであるか、またはアルキル基であり；そしてR⁵、R⁶、R⁷およびR⁸は独立してC_1〜6−アルキル基またはC_1〜8−アラルキル基である）の化合物を加水分解して式のジアミノ二酸誘導体を生成し、（ｂ）前記ジアミノ二酸誘導体を逐次アミノ酸誘導体と反応させて式Ｉの架橋ペプチドの保護誘導体を増成し、そして（ｃ）存在する保護基を脱保護することからなる請求項１〜５の何れか一項記載のペプチド化合物の製造法。