LT3614B - Peptide compounds, method for the preparation and use thereof - Google Patents
Peptide compounds, method for the preparation and use thereof Download PDFInfo
- Publication number
- LT3614B LT3614B LTIP607A LTIP607A LT3614B LT 3614 B LT3614 B LT 3614B LT IP607 A LTIP607 A LT IP607A LT IP607 A LTIP607 A LT IP607A LT 3614 B LT3614 B LT 3614B
- Authority
- LT
- Lithuania
- Prior art keywords
- mmol
- group
- solution
- acid
- nmr
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Šis išradimas yra apie ląstelių proliferaciją skatinančių peptidų panaudojimą ir naujus peptidus, pasižyminčius specifiniu ir/ar bendru ląsteles stimuliuojančiu poveikiu.The present invention relates to the use of peptides that stimulate cell proliferation and to novel peptides having a specific and / or general cell-stimulating effect.
Žinduolių kūnas sudarytas iš ląstelių, itin stipriai besiskiriančių struktūra ir funkcijomis, todėl ląstelių diferencijacijos ir vystymosi mechanizmai buvo daugelio tyrinėjimų objektu. Žinoma, kad nuolat atsinaujinančių ląstelių sistemoje paprastai būna rezervuaras daugiavaisių (pliuripotentinių) kamieninių ląstelių, kurios dalijasi ir pastoviai tiekia sistemai naujas ląsteles. Nors patiektos iš rezervuaro kamieninės ląstelės pradžioje yra vienodos, tačiau netrukus jos patiria vienoką ar kitokį morfologinį pakitimą ir vėliau išsivysto į ląsteles, atliekančias reikiamą funkciją.The mammalian body is made up of cells that are very different in structure and function, and the mechanisms of cell differentiation and development have been the subject of much research. It is known that a system of continuously regenerating cells usually has a reservoir of pluripotent stem cells that divide and continuously supply new cells to the system. Although the stem cells supplied from the reservoir are initially identical, they soon undergo some form of morphological alteration and subsequently develop into cells with the required function.
Minėtų kamieninių ląstelių sistemų pavyzdžiais yra kraujodaros sistema kaulų čiulpuose bei epitelio ir epidermio sistemos.Examples of these stem cell systems are the bone marrow hematopoietic system and the epithelial and epidermal systems.
Kamieninių ląstelių dalijimosi valdymas ar reguliavimas yra labai perspektyvi terapijos sritis, todėl daugelio tyrimų tikslas tebėra mechanizmų išaiškinimas ir specifinių cheminių mediatorių suradimas. Iki šiol buvo nustatytos kelios tikrai dalyvaujančios ląstelių gamyboje ir diferencijacijoje molekulės, kurios skatina arba slopina tam tirkrą proceso grandą. Tuo požiūriu itin gerai ištirta mielopoezė, nustatytos joje dalyvaujančios molekulės: kolonijas stimuliuojantys faktoriai (KSF), kaip antai, granulocitų kolonijas stimuliuojantis faktorius (G-KSF),' makrofagų kolonijas stimuliuojantis faktorius (M-KSF), granulocitų-makrofagų kolonijas stimuliuojantis faktorius (GM-KSF), ąvairiakilmes kolonijas stimuliuojantis faktorius (multi-KSF; IL-3)The management or regulation of stem cell division is a very promising field of therapy, and so much of the research remains focused on elucidating the mechanisms and finding specific chemical mediators. To date, several molecules that are truly involved in cell production and differentiation have been identified that stimulate or inhibit a particular process chain. In this regard, myelopoiesis has been particularly well studied and its molecules have been identified: colony stimulating factor (CSF), such as granulocyte colony stimulating factor (G-CSF), macrophage colony stimulating factor (M-CSF), granulocyte-macrophage colony stimulating factor ( GM-CSF), multi-origin colony stimulating factor (multi-CSF; IL-3)
11.11th
[ žiūr. Metcalf, Science 2_29: 16 (1985)1 , interleukinas (IL-11) [ žiūr. Paul et. ai, Proc. Natl. Acad Sci.,[see Metcalf, Science 2_29: 16 (1985) 1, interleukin (IL-11) [cf. Paul et. al., Proc. Natl. Acad Sci.,
USA, 87 : 7521 (1990)] , Laktoferinas [ žiūr. Broxmeyer et ai, Blood Cells, 11: 429 (1989)], prostaglandinai [ žiūr. Pelus et ai, J. Immunol. 140: 479 (1988)] , rūgštinis (H-subvienetas) feritinas [ žiūr. Broxmeyer et ai, Blood 68: 1257 (1986)], interferonai (α, β ir γ) [ žiūr.USA, 87: 7521 (1990)], lactoferrin [cf. Broxmeyer et al., Blood Cells, 11: 429 (1989)], prostaglandins [cf. Pelus et al., J. Immunol. 140: 479 (1988)], acidic (H-subunit) ferritin [cf. Broxmeyer et al., Blood 68: 1257 (1986)], interferons (α, β and γ) [cf.
Pelus et ai aukščiau, ir Broxmeyer et ai, J. Inununol., 131: 1300 (1983)] , auglio nekrozės faktoriai (a ir β) [ žiūr. Broxmeyer et ai, J. Immunol. 136: 4487 (1986)] , transformuojantis augimą faktorius - β [ žiūr. Ottrnan et ai, J. Immunol., 140: 2661 (1988)] , ir aktivinas bei inhibinas [ žiūr. Broxmeyer et ai., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 86: 779 (1989)] .Pelus et al., Supra, and Broxmeyer et al., J. Inununol., 131: 1300 (1983)], tumor necrosis factors (a and β) [cf. Broxmeyer et al., J. Immunol. 136: 4487 (1986)], β-transforming growth factor [cf. Ottrnan et al., J. Immunol., 140: 2661 (1988)], and activin and inhibin [cf. Broxmeyer et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 86: 779 (1989)].
Taip pat buvo rasta, kad hemoreguliacinis pentapeptidas (pEEDCK) selektyviai inhibuoja mielopoezės ląstelių proliferaciją [ žiūr. Paukovits et ai, Z. Naturforsch 37: 1297 (1982)] , ir buvo atskleisti kiti peptidai, atitinkantys siaurą bendrą formulę, duodantys panašų inhibicinį poveikį hemopoezėje [ žiūr. EP-A-112656 ir W090/02753] . Peptido monomerų oksidacija davė dimerines molekules, sujungtas cisteino tilteliu, ir buvo rasta, kad tos dimerinės molekulės stimuliuoja mielopoezę [ žiūr. Laerum et. ai, Exp. Heinatol., 16: 274 (1988)] .Hemorrhagic pentapeptide (pEEDCK) has also been found to selectively inhibit the proliferation of myelopoietic cells [cf. Paukovits et al., Z. Naturforsch 37: 1297 (1982)], and other peptides corresponding to a narrow general formula have been found to have a similar inhibitory effect in haemopoiesis [see, e.g. EP-A-112656 and WO90 / 02753]. Oxidation of peptide monomers gave dimeric molecules linked by a cysteine bridge and those dimeric molecules were found to stimulate myelopoiesis. Laerum et. al., Exp. Heinatol., 16: 274 (1988)].
(pEEDCK)2 dimeras ir kiti panašūs junginiai yra atskleisti WO-A-88/03535. Kiti dimeriniai peptidų junginiai yra atskleisti EP-A-408371, kuriame disulfidinė jungtis buvo pakeista anglimi arba anglies/sieros tilteliu, jungiančiu parinktas peptidines grandines. Tiltelis tuo būdu yra santykinai atsparus hidrolizei, bet pats yra inertinis ir negali dalyvauti receptoriaus dimero sąveikose.(pEEDCK) 2 dimer and other related compounds are disclosed in WO-A-88/03535. Other dimeric peptide compounds are disclosed in EP-A-408371 in which the disulfide bond has been replaced by a carbon or a carbon / sulfur bridge linking selected peptide chains. The bridge is thus relatively resistant to hydrolysis but is itself inert and cannot participate in receptor dimer interactions.
Nors mes nenorime būti surišti teorinių svarstymų, bet dabar manoma, kad tokie peptidiniai junginiai sąveikauja su stromos ląstelėmis i n vivo ir kad stromos ί ι tAlthough we do not wish to be bound by theoretical considerations, it is now believed that such peptide compounds interact with stromal cells in vivo and that stromal ί ι t
ląstelės atsakingos už ląstelinio dalijimosi stimuliaciją arba inhibiciją per kitus išaiškinamus faktorius. Tuo būdu manoma, kad dimerai indukuoja arba pagreitina stimuliuojančių ląstelinių reguliuojančių faktorių stromos gamybą, tuo tarpu kai monomeriniai peptidai gali arba inhibuoti šį procesą, arba sukelti faktorių, kurie užkerta kelią ar trukdo ląstelės dalijimuisi, gamybą. Tuo būdu pagal tokią galvoseną stromos ląstelės gali sustiprinti dimerų ir monomerinių peptidų atitinkamai stimųliacinį arba inhibicinį poveikį.cells are responsible for stimulating or inhibiting cell division by other elucidating factors. Thus, dimers are believed to induce or accelerate the production of stimulatory cellular regulatory factors in the stroma, whereas monomeric peptides may either inhibit this process or induce the production of factors that prevent or interfere with cell division. Thus, in this approach, stromal cells may potentiate the stimulatory or inhibitory effects of dimers and monomeric peptides, respectively.
Yra nuolatinis dimerinių peptidinių junginių, galinčių stimuliuoti ląstelės proliferaciją iki įprasto lygio in vivo, poreikis. Šiuo atžvilgiu reikėtų pastebėti, kad skirtingi stimuliavimo laipsniai gali būti labiau tinkami tam tikroms klinikinėms situacijoms negu kitoms, ir ypač yra svarbus individualių ląstelių tipų selektyvus stimuliavimas.There is a continuing need for dimeric peptide compounds capable of stimulating cell proliferation to normal levels in vivo. In this regard, it should be noted that different degrees of stimulation may be more appropriate for certain clinical situations than others, and selective stimulation of individual cell types is particularly important.
Šis išradimas pateikia peptidinį junginį, sudarytą iš dviejų vienos grandinės hemoreguliacinių, ypač inhibuojančių hemopoezę, peptidų, prijungtų kartu prie negalinių amino rūgščių Ca atomų ekvivalentiškose vietose kiekviename iš minėtų peptidų per jungtį anglis-anglis arba per terminaliai prijungtą dvivalentę jungiančią tilteliu grupę -A-, natyvios α-šoninės grandinės nėra prie minėtų Ca atomų, kur A yra Οχ_6 anglies grandinė, kuri yraThe present invention provides a peptide compound consisting of two single-chain hemoregulatory peptides, in particular inhibitors of haemopoiesis, linked together by non-amino acids at Ca equivalent at each of said peptides via a carbon-carbon bond or a terminal divalent bridging group -A-, the native α-side chain is absent at said Ca atoms, where A is a Ο χ _ 6 carbon chain that is
1) a) mono- arba poli-pakeista grupe -RA, -ORA, -SRA, -NRRa arba -COORA arba halogeno atomu, tokiu kaip fluoras, chloras, bromas arba jodas (kur kiekvienas RA nepriklausomai reiškia vandenilio atomą ar Ο7_6 -alkilo, -alkanoilo arba -alkoksialkilo grupę, kuri gali būti mono- arba poli-hidroksilinta) ir/arba1) a) mono- or poly-substituted with -R A , -OR A , -S A A , -NR R a or -COOR A or with a halogen atom such as fluorine, chlorine, bromine or iodine (where each R A independently represents a hydrogen atom or Ο 7 _ 6 alkyl, or alkanoyl -alkoksialkilo group which may be mono- or poly-hydroxylated) and / or
b) į kurią įterpta viena ar daugiau dvigubų arba trigubų jungčių anglis-anglis ir/arba(b) containing one or more double or triple carbon-carbon bonds and / or
c) į kurią įterpta viena ar daugiau grupių -Z-, kur kiekviena -Z- yra nepriklausomai -0-, -CO-, - NRB arba -NRB- (kur kiekvienas RB yra nepriklausomai vandeilio atomas arba C,_6 alkilo arba C6_10 arilo grupė) , arba kur vienas ar daugiau pakaitalų ar neprisotintų jungčių anglis-anglis yra grupėje -A-, -Z- gali taip pat būti -S- arba ii); (CH;)„, kur y yra 1, 5 arba 6.c) interrupted by one or more groups -Z-, where each -Z- is independently -0-, -CO-, - NR B, or -NR b - (wherein each R B is independently vandeilio atom or a C, _ 6 alkyl or C 6 _ 10 aryl group), wherein one or more substituents or unsaturated carbon-carbon links are the group -A-, -Z- may also be -S-or ii); (CH ; ) ', wherein y is 1, 5 or 6.
Geriau, kai jungiančioje tilteliu grupėje -A- bendras atomų skaičius yra ne didesnis už 6.Preferably, the total number of atoms in the bridging group -A- is not greater than 6.
Kur grupė RA reiškia alkilo, alkoksi arba alkanoilo grupę, kiekviena iš jų gali būti linijinė arba šakota grandinė. Tinkamos alkilo grupės apima metilą, etilą, 2-hidroksietilą, propilą, butilą, 1,3-dihidroksibutilą, 2-meti1-3-hidroksibutilą ir pentilą. Metoksi, etoksi, propoksi ir 2-bidroksipropoksi visos yra tinkamos alkoksi grupės grupei RA, tuo tarpu alkanoilo grupė, pvz., gali būti formilas, acetilas, propionilas.Where the group R A represents an alkyl, alkoxy or alkanoyl group, each may be a linear or branched chain. Suitable alkyl groups include methyl, ethyl, 2-hydroxyethyl, propyl, butyl, 1,3-dihydroxybutyl, 2-methyl-3-hydroxybutyl, and pentyl. Methoxy, ethoxy, propoxy and 2-hydroxypropoxy are all suitable for the alkoxy group R A , while the alkanoyl group may, for example, be formyl, acetyl, propionyl.
Grupei R , kaip alkilo grupei, alkilo anglies grandinė gali būti linijinė arba šakota., ir grupės, paminėtos aukščiau grupei R'1, čia yra tinkamos taip pat.For R, as the alkyl group, the alkyl carbon chain may be linear or branched, and the groups mentioned above for R ' 1 are also suitable herein.
Tuo būdu tinkamos grupės A skeleto struktūros (kurios gali būti toliau pakeistos, kaip išdėstyta aukščiau) apima:Suitable group A skeletal structures (which may be further modified as above) thus include:
-CH2-ch2ch2ch2ch2ch2LT 3614 B-CH 2 -ch 2 ch 2 ch 2 ch 2 ch 2 LT 3614 B
-ch2ch2ch2ch2ch2ch2-HC=CH-HC=C=CH-ch2-ch=ch-ch2—ch2 _c=c—ch2—-ch 2 ch 2 ch 2 ch 2 ch 2 ch 2 -HC = CH-HC = C = CH-ch 2 -ch = ch-ch 2 —ch 2 _ c = c — ch 2 -
-ch2-ch=ch-ch=ch-ch2-ch2-ch2-c=c-ch2-ch2-ch2-c=c-c=c-ch2ch3 ch3 -ch 2 -ch = ch-ch = ch-ch 2 -ch 2 -ch 2 -c = c-ch 2 -ch 2 -ch 2 -c = cc = c-ch 2 ch 3 ch 3
I II I
-ch-ch=ch-ch2-chOH OH-ch-ch = ch-ch 2 -chOH OH
I I ~CH-CH=CH-CH-CH2-O-CH2-ch2-nh-ch2ch2-ch2ch2-co-ch2ch2 II ~ CH-CH = CH-CH-CH 2 -O-CH 2 -CH 2 -NH-CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 -CO-CH 2 CH 2
-CH-CH=CH-CHI I och3 och3 -CH-CH = CH-CHI I och 3 och 3
-ch2-ch=ch-ch2-s-ch2-CH2-CsC-CH2-NH-CH2CH2- arba-ch 2 -ch = ch-ch 2 -s-ch 2 -CH 2 -CsC-CH 2 -NH-CH 2 CH 2 - or
-CH2-CH=CH-CH (COOH) ch2Bet kuris vienos grandinės peptidas, kuris parodo hemoreguliacinį poveikį, yra tinkamas kaip peptidas, kuris yra tiltelinis pagal šį išradimą.-CH 2 -CH = CH-CH (COOH) ch 2 Any single chain peptide that exhibits hemoregulatory activity is suitable as a peptide that is bridged according to the present invention.
Alternatyviai išreikštas, šis išradimas pateikia junginius pagal ši, išradimą, kuriuose minėtos hemoreguliacinės peptido grandinės apima šias formules:Alternatively, the present invention provides compounds of the present invention wherein said hemoregulatory peptide chains include the following formulas:
Ra - Rb - Rc - Rd - (Pe)n - Rf kurioje Ra reiškiaR a - R b - R c - R d - (P e ) n - R f where R a stands for
arbe r nh — c:: — co.arbe r nh - c :: - co.
<ch > i 2 p con aroa<ch> i 2 p con aroa
CH---CūCH --- Coo
II
CH OHCH OH
R reiškia • NH -CH —R stands for • NH -CH -
CO cch^>CO cch ^>
2 ‘ I A COR . NU- CH--CO . 2 'IA COR. NU-CH - CO.
II
CH . OH arbaCH. OH or
R reiškia . ni: —-- ch —. co tCH >R stands for. ni: —-- ch -. co tCH>
ί Vί V
COR . NH -— CH--COCOR. NH - CH - CO
I cn, on arbaI cn, on or
R reiškiaR stands for
--NH- NH
CH ~— COCH ~ - CO
-NH ·-NH ·
CH- COCH-CO
II
CH.CH.
• NHNH
CH SR arbiCH SR Arbi
CH CO —CH CO -
II
CH OHCH OH
Re reiškiaR e means
-NH- CH- COF-NH- CH- COF
R* reiškiaR * stands for
GOKGOK
II
CH, ,>CH,,>
-NH · arba-NH · or
- CH- CH
I (CH JI (CH J
CCSCCS
NH CH- CCRi0 NH CH-CCR i0
NHNH
NH ai'baNH ai'ba
NHNH
NH (kuriose n ir m nepriklausomai reiškia 0 arba 1;NH (wherein n and m independently represent 0 or 1;
p, q ir r nepriklausomai reiškia 1 arba 2;p, q and r independently represent 1 or 2;
s reiškia 3 arba 4;s represents 3 or 4;
R1 ir R2 abu yra vandenilio atomai arba kartu reiškia okso grupę;R 1 and R 2 are both hydrogen or together represent an oxo group;
R3 ir R4 abu yra vandenilio atomai arba kartu reiškia jungtį anglis- anglis;R 3 and R 4 are both hydrogen or taken together to represent a carbon-carbon bond;
R5 yra vandenilis arba acilo grupė;R 5 is hydrogen or acyl;
kiekvienas R6 ir R7 nepriklausomai reiškia hidroksilo grupę arba amino grupę, bet tinkamesnės yra hidroksilo grupės;each R 6 and R 7 independently represents a hydroxyl group or an amino group, but hydroxyl groups are more preferred;
J I;J I;
gg
R8 reiškia vandenilį, C2,.6 alkilo grupę, C7.2o aralkilo grupę, kuri gali turėti vieną arba daugiau hidroksilo, amino arba metoksi pakaitalą, arba metaboliškai labilią S-apsauginę grupę;R 8 represents hydrogen, C 2 ,. Alkyl group of 6 , C 7 . 2 o aralkyl group which may carry one or more hydroxy, amino or methoxy substituents; or a metabolically labile S-protecting group;
R reiškia vandenilį arba metilo grupę; irR represents hydrogen or a methyl group; and
RJ° reiškia hidroksilo arba amino grupę, aminorūgšties glutamino liekaną arba peptidą, turintį N-galinį glutamino fragmentą).R J ° represents a hydroxyl or amino group, an amino acid glutamine residue or a peptide containing an N-terminal glutamine moiety).
Visos minėtos amino rūgšties liekanos gali būti arba D, arba L formos. Tačiau aminorūgščių L forma yra tinkamesnė.All of the above amino acid residues may be in either the D or L form. However, the L form of amino acids is more preferred.
Kur yra N-galinė apsauginė grupė R°, tai gali būti, kaip pažymėta aukščiau, acilo grupė, turinti 1-20 anglies gtotnų, pvz., žemesniojo alkanoilo grupė, turinti 1-5 anglies atomų, tokia kaip acetilo grupė, arba aroilo ar aralkanoilo grupė, turinti nuo 7 iki 20 anglies atomų, tekia kaip benzoilo arba fenilacetilo grupė.Where the N-terminal protecting group R 0 is present, it may be, as noted above, an acyl group having 1-20 carbon atoms, e.g., a lower alkanoyl group having 1 to 5 carbon atoms such as an acetyl group, or an aroyl or the aralkanoyl group having from 7 to 20 carbon atoms flows as a benzoyl or phenylacetyl group.
R5 gali taip pat būti acilo grupė, išvesta iš aminorūgšties arba peptido grandinės. Konkrečiai, R5 gali būti acilo grupė, išvesta iš serino, arba iš bet kurio iš peptidų, išvestų iš tokios aminorūgšties sekos, pašalinant einančias iš eilės N-galines amino rūgštis:R 5 may also be an acyl group derived from an amino acid or peptide chain. Specifically, R 5 may be an acyl group derived from serine, or any of the peptides derived from the following amino acid sequence by removal of consecutive N-terminal amino acids:
Lys-Ile-Ile-His-Glu-Asp-Gly-Tyr-Ser.Lys-Ile-Ile-His-Glu-Asp-Gly-Tyr-Ser.
Yra geriau, kai bendros (į) formulės peptido galinė amino grupė yra apsaugota, pvz., acilinant alkanoilo, aralkanoilo arba aroilo grupe.It is preferred that the terminal amino group of the peptide of general formula (I) is protected, for example, by acylation with an alkanoyl, aralkanoyl or aroyl group.
Kur R8 yra C2_6 alkilo grupė, tai gali būti, pvz., etilo, butilo arba hek? o grupė. Kai R yra aralkilo grupė, tai gali patogia; būti arilmetilo grupė, tokia iWhere R 8 is a C 2 -C 6 alkyl group, it may be, for example, ethyl, butyl or hek? o the group. When R is an aralkyl group, it may be convenient; be an arylmethyl group such i
kaip benzilas, difenilmetilas arba trifenilmetilas. Kur R8 yra metaboliškai labili grupė, tai gali, pvz., būti ariltio grupė, turinti nuo 5 iki 10 anglies atomų, pvz., piridiltio arba acilo grupė, kaip apibrėžta aukščiau.such as benzyl, diphenylmethyl or triphenylmethyl. Where R 8 is a metabolically labile group, it may, for example, be an arylthio group having 5 to 10 carbon atoms, such as pyridylthio or acyl group as defined above.
Tinkamesni šio išradimo junginiai yra pentapeptidai, t.y. n yra geriau 0.More preferred compounds of the present invention are pentapeptides, i.e. n is better 0.
Geriau, kai ciklinės grupės Ra liekanoje yra penkių narių, t.y. m yra geriau 0.Preferably, the residue R a of the cyclic group has five members, i.e. m is better 0.
Nors bet kuris iš peptidų, apibrėžtų (I) formule aukščiau, yra žemo arba nereikšmingo hemoreguliacinio aktyvumo, nepaisant to, jie pagal ši, išradimą, gali būti efektyvūs tiltelio formos, stimuliuojant ląstelių proliferaciją.Although any of the peptides defined by Formula (I) above have low or negligible hemoregulatory activity, they may nonetheless be an effective bridge form of the present invention in stimulating cell proliferation.
Dimeriniuose peptiduose, sudarytuose iš peptidinių grandinių, kaip pavaizduota (I) formulėje, jungiantis grandinės taškas yra pageidaujamas ties Rd.In dimeric peptides consisting of peptide chains as depicted in formula (I), a linking chain point is desirable at R d .
Ypač tinkami peptidiniai junginiai pagal šį išradimą yra tie (II) formulės junginiaiParticularly suitable peptide compounds of the present invention are those compounds of formula (II)
Ra - Rb - Rc - NH - CH - CO- (Re)n - Rf R a - R b - R c - NH - CH - CO - (R e ) n - R f
II
A (II),A (II),
Ra - Rb - Rc - NH - CH - CO - (Re)n - Rf kuriuose Ra, Rb, Rc, Re, Rf, A' ir n visi yra tokie, kaip apibrėžta aukščiau, ir grupė -NH-CH-CO- yra Rd išvestinė forma, kuri yra prijungta prie jungiančios tilteliu grupės -A- tokiu būdu, kad jos nuosavos šoninės grandinės nėra.R a - R b - R c - NH - CH - CO - (R e ) n - R f wherein R a , R b , R c , R e , R f , A 'and n are all as defined above , and the group -NH-CH-CO- is a derivative of R d which is attached to the bridging group -A- such that it does not have its own side chain.
nn
Vienas ypač tinkamas peptidinis (II) formulės junginys yra pGlu-Glu-Asp-NH-CH-CO-LysOHOne particularly suitable peptide compound of formula (II) is pGlu-Glu-Asp-NH-CH-CO-LysOH
II
A (II),A (II),
I pGlu-Glu-Asp-NH-CH-CO-LysOH, kurioje grupė -A- yra dvivalentė jungianti tilteliu grupė, kaip svarstyta aukščiau.I pGlu-Glu-Asp-NH-CH-CO-LysOH wherein -A- is a divalent bridging group as discussed above.
Šis išradimas ypatingai tinkamas stimuliuoti mielopoezę pacientams, kurie kenčia nuo sumažinto mieiopoetinio aktyvumo, iškaitant kaulų čiulpų pažeidimą, agranuliocitozę ir aplastinę anemiją. Į tai įeina gydymas pacientų, turinčių sumažintą kaulų čiulpų funkciją dėl imunosupresinio gydymo slopinti audinių reakciją,- t.y. kaulų čiulpų transplantavimo chirurgijoje.The present invention is particularly suitable for stimulating myelopoiesis in patients suffering from diminished myelopoietic activity, including bone marrow injury, agranulocytosis, and aplastic anemia. This includes treatment of patients with reduced bone marrow function due to immunosuppressive therapy to suppress tissue response - i.e. in bone marrow transplant surgery.
Junginiai taip pat gali būti panaudoti pagreitinti kaulų čiulpų regeneraciją po citostatinės chemoterapijos ir radiacinės terapijos neoplastinėms ir virusinėms ligoms.The compounds may also be used to accelerate bone marrow regeneration following cytostatic chemotherapy and radiation therapy for neoplastic and viral diseases.
Be to, nauji junginiai gali būti labai vertingi, kur pacientai turi rimtas infekcijas dėl imunoreakcijos trūkumo po kaulų čiulpų pažeidimo.In addition, novel compounds can be of great value where patients have serious infections due to lack of immunoreaction after bone marrow injury.
Kitas klinikinis taikymas bus kartu su atitinkamais monomerais arba susijusiais mielopoezės inhibitoriais, kaip atskleista EP-A-112656. arba W0-A-90/02753, indukuoti kintamus aukšto ir žemo aktyvumo pikus kaulų čiulpų ląstelėse, tuo būdu sustiprinant natūralų cirkadinį hemopoezės ritmą. Taip citostatinė terapija gali būti panaudota žemo kaulų čiulpų aktyvumo periodais, tuo būdu sumažinant kaulų čiulpų pažeidimo riziką, tuo uAnother clinical application will be in combination with the appropriate monomers or related myelopoiesis inhibitors as disclosed in EP-A-112656. or WO-A-90/02753, induce variable high and low activity peaks in bone marrow cells, thereby enhancing the natural circadian rhythm of hemopoiesis. Thus, cytostatic therapy can be used during periods of low bone marrow activity, thereby reducing the risk of bone marrow damage
tarpu kai regeneracija bus pagreitinta iš eilės einančiais aktyvumo pikais.while regeneration will be accelerated by successive activity peaks.
Apskritai, kad būtų pasiektas stimųliacinis poveikis, šio išradimo peptidai gali būti paskirti pacientui oreliai arba injekcijomis 0.001-100 mg, pvz., 1-5 mg 70 kg kūno svoriui, dienos doze. Jei paskyrimas intraveninis arba paodinis, dozė gali būti 1-10 mg ribose 70 kg kūno svoriui per dieną, pvz., apie 6 mg, iki 10 dienų. Nazalinis, vietinis (transdermalinis) arba rektalinis paskyrimas taip pat yra, žinoma, lankstus. Iš esmės rei-13 -5 kia pagaminti peptido koncentracijas apie 10 M - 10 M neląsteliniame paciento skystyje.In general, to achieve a stimulatory effect, the peptides of the present invention may be administered to a patient by the oral route or by injection at a daily dose of 0.001-100 mg, e.g. 1-5 mg per 70 kg body weight. For intravenous or subcutaneous administration, the dose may be in the range of 1-10 mg for 70 kg body weight per day, for example about 6 mg, for up to 10 days. Nasal, topical (transdermal), or rectal prescription is also, of course, flexible. Basically, it is necessary to produce peptide concentrations of about 10 M to 10 M in the patient's extracellular fluid.
Pagal tolimesnius šio išradimo požymius, pateikiamos farmacinės kompozicijos, turinčios savyje kaip aktyvią komponentę vieną arba daugiau (I) formulės junginių, kaip čia apibūdinta anksčiau, arba fiziologiškai suderinamų jų druskų, kartų sų farmaciniu nešikliu arba užpildu. Kompozicijos pagal ši, išradimą gali būti pateiktos, pvz., tokio pavidalo, kad tiktų oraliniam, nazaliniam, parenteraliam arba rektaliniam paskyrimui.Further aspects of the present invention provide pharmaceutical compositions comprising, as active ingredient, one or more compounds of formula (I) as hereinbefore described, or a physiologically compatible salt thereof, in a pharmaceutically acceptable carrier or excipient. The compositions of the present invention may be presented, e.g., in a form suitable for oral, nasal, parenteral or rectal administration.
Čia naudojamas terminas farmacinis apima ir veterinarinius šio išradimo taikymus.As used herein, the term pharmaceutical includes veterinary applications of the present invention.
Junginiai pagal šį išradimą gali būti įprastų vaistų formų, tokių kaip tabletės, apvilktos tabletės, aerozoliai nosiai, tirpalai, emulsijos, milteliai, kapsulės arba ilgalaikio atpalaidavimo formos. Įprasti farmaciniai užpildai, kaip ir įprasti gamybos būdai, gali būti panaudoti šių formų paruošimui. Tabletės gali būti pagamintos, pvz., sumaišant aktyvią komponentę arba komponentes su žinomais užpildais, kaip, pvz., skiedikliais, tokiais kaip kalcio karbonatas, kalcio fosfatas arba laktozė, skaidytojais, tokiais kaip grūdų krakmolas arba algininė rūgštis, rišikliais, tokiaisThe compounds of the present invention may be in the form of conventional dosage forms such as tablets, coated tablets, nasal aerosols, solutions, emulsions, powders, capsules or sustained release formulations. Conventional pharmaceutical excipients, as well as conventional manufacturing techniques, can be used to prepare these forms. The tablets may be made, for example, by mixing the active component or components with known excipients such as diluents such as calcium carbonate, calcium phosphate or lactose, disintegrating agents such as cereal starch or alginic acid, binders,
II kaip krakmolas arba želatinas, tepa! 3c s magnio stearatas arba ta Iko mūreliai, laikio s i poli m· a o e t a t o ei spalaįdavimo agentais, tokiais i i e n a s, ka rbo ks ino 111 c e 1 i u 11 o z ė talatas arba polivinilacetatas.II like starch or gelatin, smear! 3c s magnesium stearate or Ico masonry with a poly (i) n, a c o r t i o n, or a polyvinylacetate.
tokiais kaip i r / a i b a ilga— Kaip karbokceiiuliozėssuch as carbohydrate
Tabletės, jeigu reikia, gali susidėti is Kelių sluoksnių. Apvilktos tabletės gali būti pagamintos, apvelkant vidurį, gautą panašiai kaip tabletės, su agentais, paprastai naudojamais tablečių apvilkimui, pvz., polivinilo pirolidonu arba belaku, gumiarabiku, talko milteliais, titano dioksidu arba cukrumi. Tam, kad būtų gautas ilgalaikis atpalaidavimas arba išvengta nesuderinamumu, vidurys gali susidėti iš kelių sluoksnių taip pat. Tablečių apvalkalas taip pat gali susidėti iš kelių sluoksnių, kad būtų gautas ilgalaikis atpalaidavimas, ir tuo atveju gali būti panaudoti anksčiau paminėti užpildai tabletėms.The tablets may consist of several layers, if necessary. Coated tablets may be made by coating the middle, similar to tablets, with agents commonly used to coat tablets, such as polyvinyl pyrrolidone or belac, gum arabic, talcum powder, titanium dioxide or sugar. The middle may consist of several layers in order to obtain sustained release or to avoid incompatibility. The tablet coating may also consist of several layers to provide sustained release, in which case the above-mentioned tablet fillers may be employed.
Organinės specifinės nešiklių sistemos taip pat gali būti panaudotos.Organic specific carrier systems may also be utilized.
Injekcijų tirpalai gali būti, pvz., pagaminti įprastu būdu, tokiu kaip konservavimo agentų, tokių kaip phidroksibenzoatai, arba stabilizatorių, tekių kaip EDTA, pridėjimas. Tirpalais paskui užpildomi injekcijų buteliukai arba ampulės.Injection solutions may be prepared, for example, by conventional means such as the addition of preservative agents such as hydroxybenzoates or stabilizers flowing as EDTA. The solutions are then filled into injection vials or ampoules.
Neazaliniai aerozoliai gali būti sudaryti panašiai vandens tirpale ir supakuoti į purškimo konteinerius arba su aerozoliniu išstūmėju, arba su priemonėmis rankiniam spaudimui. Kapsulės, turinčios vieną arba kelias aktyvias komponentes, gali būti pagamintos, pvz., sumaišant aktyvias komponentes su inertiniais nešikliais, tokiais kaip laktozė arba sorbitoiis, ir užpildant mišinį į želatino kapsules.Non-gaseous aerosols may be similarly formulated in aqueous solution and packaged in spray containers, either with an aerosol ejector or with hand-held means. Capsules containing one or more active components may be prepared, for example, by mixing the active components with inert carriers such as lactose or sorbitol and filling the mixture into gelatin capsules.
Tinkamos žvakutės gali, pvz., būti pagamintos, sumaišant aktyvią komponentę arba aktyvių komponenčių kombinacijas su Įprastais nešikliais, numatytais šiam tikslui, tokiais kaip natūralūs riebalai arba polietileno glikolis ar jo dariniai.Suitable suppositories may, for example, be prepared by mixing the active ingredient or combinations of active ingredients with conventional carriers for this purpose, such as natural fat or polyethylene glycol or derivatives thereof.
Tinkami dozavimo vienetai, turintys savyje šio išradimo junginius, turi 0.1-10 mg, pvz., 1-5 mg (I) formulės peptido arba jo druskos.Suitable dosage units containing the compounds of the present invention contain from 0.1 to 10 mg, for example 1-5 mg of the peptide of formula (I) or a salt thereof.
Taigi šis išradimas pateikia peptidinius junginius ir mišinius aprašytus aukščiau, skirtus naudoti ląstelės dalijimosi stimuliavimui. Peptidinių junginių pagal šį išradimą panaudojimas medikamentų, skirtų ląstelės dalijimosi stimuliavimui, gamyboje yra tolesnis šio išradimo aspektas. Mielopoezės ir kaulų čiulpų regeneracija turi ypatingą reikšmę.Thus, the present invention provides peptide compounds and mixtures as described above for use in stimulating cell division. The use of peptide compounds of the present invention in the manufacture of a medicament for stimulating cell division is a further aspect of the present invention. Myelopoiesis and bone marrow regeneration are of special importance.
Tačiau kitas svarbesnis naujų peptidų panaudojimas yra medžiagų, skirtų imunologinių tyrimų technikos gamybo-. je. Tada peptidas gali būti kovalentiškai prijungtas prie tinkamo didelio molekulinio nešiklio, tokio kaip albuminas, polilizinas arba poliprolinas tam, kad būtų įvestas antikūnus gaminantiems gyvuliams (pvz., triušiams, jūros kiaulytėms arba ožkoms) . In vitro imunizacijos metodai taip pat gali būti panaudoti. Aukšto specifiškumo antiserumai yra gaunami, naudojant gerai žinomus absorbcijos metodus, panaudojant didelį molekulinį nešiklį. įvedant radioaktyvumą (3H, 125I, 14C, 35S) į peptido molekulę, radioimuninis tyrimas gali būti suprojektuotas ir panaudotas peptido nustatymui įvairiuose biologiniuose skysčiuose, tokiuose kaip serumas (plazma), šlapimas ir cerebrospinalinis skystis.However, another major use of the new peptides is the production of materials for immunoassay techniques. yeah. The peptide can then be covalently attached to a suitable large molecular carrier such as albumin, polylysine or polyproline for introduction into antibody producing animals (e.g. rabbits, guinea pigs, or goats). In vitro immunization techniques may also be employed. High specificity antisera are prepared using well-known absorption techniques using a large molecular carrier. by introducing radioactivity ( 3 H, 125 I, 14 C, 35 S) into a peptide molecule, radioimmunoassay can be designed and used to detect the peptide in various biological fluids such as serum (plasma), urine, and cerebrospinal fluid.
Šio išradimo peptidai gali būti sintezuoti bet kuriuo patogiu būdu. Tinkami metodai aminorūgšties vienetų sudarymui yra aprašyti, pvz., Synthesis of OpticallyThe peptides of the present invention can be synthesized in any convenient manner. Suitable methods for forming amino acid units are described, for example, in Synthesis of Optically
II .1.II .1.
Active α-Amino Acids (Optiškai aktyvių α-Amino rūgščių sintezė), Robert M. Williams (Pergamon Press, 1989) . Apskritai, esančios reaktyvios šoninių grandinių grupės (amino, tiolo ir/arba karboksilo) bus apsaugotos per visos sintezės prijungimo reakcijas, bet galima palikti kai kurias šoninių grandinių grupes neapsaugotas (hidroksilo grupes, imidazolo grupes, pirmines amido grupes, amido grupes ciklinėse aminorūgštyse kaip piroGlu) per visą sintetinę procedūrą.Active α-Amino Acids (Synthesis of Optically Active α-Amino Acids), Robert M. Williams (Pergamon Press, 1989). In general, the reactive side chain groups (amino, thiol and / or carboxyl) will be protected throughout the fusion coupling reactions, but some side chain groups may be left unprotected (hydroxyl groups, imidazole groups, primary amide groups, cyclic amino acids such as pyroGlu). ) throughout the synthetic procedure.
Tuo būdu galutinė stadija bus visiškai apsaugoto arba iš dalies apsaugoto I bendros formulės peptido darinio blokavimas, ir šie procesai sudaro tolimesnį šio išradimo aspektą.Thus, the final step will be the blocking of a fully protected or partially protected peptide derivative of general formula I, and these processes form a further aspect of the present invention.
Schollkopf ir kt. aprašė įvairių aminorūgščių gavimą bis-laktimo eterių metalinimu ir po to alkilinimu (žiūr,, pvz., Tetrahedron 39: 2085 (1983) ir TopicsSchollkopf et al. described the preparation of various amino acids by metallization of bis-lactim ethers followed by alkylation (see, e.g., Tetrahedron 39: 2085 (1983) and Topics
Curr. CHEM., 109: 65 (1983)). Šio metodo pritaikymas pasirodė ypač naudingas tiltelinių amino rūgščių, kurios sudaro šio išradimo pagrindą, gavimui. Konkrečiai, bis-laktimo eteris, išvestas iš valinoglicino dipeptido, sudaro naudingą pradinį junginį jungimo tilteliu reakcijoje, kuri gali būti reziumuota taip:Curr. CHEM., 109: 65 (1983). Application of this method has proven to be particularly useful in the preparation of the bridged amino acids which form the basis of the present invention. Specifically, the bis-lactim ether derived from the valinoglycine dipeptide forms a useful starting compound in the bridging reaction which can be summarized as follows:
OCH,,OCH ,,
NH.NH.
NH^NH ^
II
CHCH
II
CH.CH.
-Α-Χ-Α-Χ
HG---ΛHG --- Λ
COOHCOOH
COOHCOOH
-78°C-78 ° C
CH..CH ..
CHCH
A ι ιThe ι ι
Ii, ιII, ι
(kurioje X yra nueinanti grupė, tokia kaip halogeno atomas, pvz., bromas).(wherein X is a leaving group such as a halogen atom such as bromine).
Tiltelines (S,S)-α,α'-diaminorūgštys gali būti gautos šiuo metodu, jei D-valinas yra iš pradžių naudojamas sudaryti bis-laktimo eterį. Lygiai taip pat (R,R)-α,α'diaminorūgštys gali būti sudarytos, panaudojant Lvaliną.The bridged (S, S) -α, α'-diamino acids can be obtained by this method if D-valine is initially used to form the bis-lactim ether. Similarly, (R, R) -α, α'-diamino acids can be formed using Lvaline.
Alternatyvi metodika, naudinga tiltelinių α,α'-diamino rūgščių, kurios sudaro šio išradimo tiltelinių dipeptidinių junginių pagrindą, gamybai yra metodo, išvystyto Vederas ir kt., pritaikymas (J. Am. Chem. Soc. 107: 7105 (1985) ir J. Am. Chem. Soc. 110: 2237 (1988)). Ši alternatyvi metodika paremta β-laktonų, išvestų iš serino, žiedo atidarymo reakcijomis, β-laktonai gali būti paveikti visa eile švelnių nukleofilų, kurie sukelia laktoninės alkilo-deguonies jungties skilimą. Aza-pakeistos tiltelines aminorūgštys, apimančios oksa- ir tia-analogus, gali būti susintetintos pagal metodiką, kuri iliustruota tokia schema:An alternative technique useful for the preparation of the α, α'-diamino bridges which form the basis of the bridged dipeptide compounds of the present invention is the application of the method developed by Vederas et al. (J. Am. Chem. Soc. 107: 7105 (1985) and J. Am. Chem. Soc. 110: 2237 (1988). Based on this alternative procedure based on ring opening reactions of β-lactones derived from serine, β-lactones can be subjected to a series of delicate nucleophiles which cause degradation of the lactone alkyl-oxygen bond. Aza-substituted bridging amino acids comprising oxa and thia analogs may be synthesized according to the procedure illustrated in the following scheme:
II fII f
Tiit-eliniams dipeptidiniams junginiams pagal šį išradimą,, kur —A— yra -CH2-, galima nuoroda į Belokon et ai·.,, Izv. Akad. Nauk. SSSR. Ser Khim, (1987), 852 (Chemi na.! -Abstracts 108 : 132255v) .For the titanium dipeptide compounds of the present invention, wherein -A- is -CH 2 -, reference may be made to Belokon et al. Okay. Nauk. USSR. Ser Khim, (1987), 852 (Chemi na. Abstracts 108: 132255v).
Tuo dudu šis išradimas taip pat pateikia peptidinio junginio gavimo būdą, susidedantį iš dalinai arba visiž-kai apsaugoto jo darinio blokavimo.In this respect, the present invention also provides a process for preparing a peptide compound comprising partially or completely blocking its derivative.
Kitu aspektu, šis išradimas pateikia peptidinio .junginio gavimo būdą, kuris apima:In another aspect, the present invention provides a process for preparing a peptide compound which comprises:
a) bis—laktimo eterio metalinimą ir nuoseklų alkilinimą·, kad būtų sudarytas bis-laktimo dipeptidinisa) bis-lactation ether metallization and sequential alkylation · to form the bis-lactim dipeptide
-eteris;-ether;
b) bis-laktimo eterio iš žingsnio a) hidrolizę, kad būtų gauta tiltelinė a,a’-dramino rūgštis;b) hydrolyzing the bis-lactim ether of step a) to obtain the α, α'-dramic acid bridged bridge;
oj pasiliekančių amino rūgščių įvedimą į peptidihes grandines; irintroducing into the peptide chains the remaining amino acids; and
d) bet kurios apsauginės grupės deblokavimą.(d) deploying any protecting group.
bis-laktimo dipeptidiniai eteriai ir tiltelinė rūgštis ©c,,ct''-diaminorūgštis, pagaminta pagal šį metodą, sudaro tolesnį šio išradimo aspektą.bis-lactim dipeptide ethers and bridging acid © c ,, ct '' - a diamino acid prepared by this method constitute a further aspect of the present invention.
Kai tilteliniai dipeptidai yra sudaryti,, pasiliekahčios aminorūgštys peptidinėje grandinėje gali būti įvestos Įprastais metodais.Once the bridge dipeptides are formed, the remaining amino acids in the peptide chain can be introduced by conventional methods.
Sudarant peptidines grandines, galima pradėti arba nuo C-galo, arba nuo N-galo, nors tik nuo C-galo pra35 sidedanti procedūra yra visuotinai naudojama.For peptide chains, one can start from either the C-terminus or the N-terminus, although only the C-terminal procedure is generally used.
,ι, ι
Tuo būdu, galima pradėti nuo tinkamai apsaugoto C-galo, pvz., lizino, darinio reakcija su tinkamai apsaugotu cisteino dariniu. Lizino darinys turės laisvą a-amino grupę, tuo tarpu kitas reagentas turės arba laisvą, arba aktyvuotą karboksilo grupę ir apsaugotą amino grupę. Po prijungimo, tarpiniai produktai gali būti išgryninti, pvz., chromatografija, ir tada selektyviai N-apsaugoti, kad galima būtų pridėti laisvą arba aktyvuotą aminorūgšties liekaną. Ši procedūra yra tęsiama, kol sudaroma reikalinga amino rūgščių seka.Thus, the reaction of a properly protected C-terminus, such as lysine, with a properly protected cysteine derivative can be initiated. The lysine derivative will have the free α-amino group, while the other reagent will have either the free or activated carboxyl group and the protected amino group. After coupling, the intermediates can be purified, e.g., by chromatography, and then selectively N-protected to add a free or activated amino acid residue. This procedure is continued until the required amino acid sequence is formed.
Karboksilinę rūgštį aktyvuojantys pakaitalai, kurie gali, pvz., būti naudojami, apima simetrinius arba mišrius anhidridus arba aktyvuotus esterius, tokius kaip, pvz., p-nitrofenilo esteris, 2,4,5-trichlorofenil-esteris, N-hidroksibenzotriazolo esteris (OBt), N-hidroksisukcinimidilesteris (OSu) arba pentafluoro-fenilesteris (OPFP) .Carboxylic acid activating substituents which may, for example, be used include symmetric or mixed anhydrides or activated esters such as p-nitrophenyl ester, 2,4,5-trichlorophenyl ester, N-hydroxybenzotriazole ester (OBt). ), N-hydroxysuccinimidyl ester (OSu) or pentafluoro-phenyl ester (OPFP).
Laisvų amino ir karboksilo grupių prijungimas gali, pvz., būti atliktas, panaudojant dicikloheksilkarbodiimidą (DCC). Kitas prijungimo agentas, kuris gali, pvz., būti naudojamas, yra N-etoksikarbonil-2-etoksi1,2-dihidrochinolinas (EEDQ).The coupling of the free amino and carboxyl groups may, for example, be accomplished using dicyclohexylcarbodiimide (DCC). Another coupling agent that may be used, for example, is N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydroquinoline (EEDQ).
Apskritai yra patogu atlikti prijungimo reakcijas žemose temperatūrose, pvz., nuo -20°C iki kambario temperatūros, patogiai tinkamoje tirpiklio sistemoje, pvz., tetrahidrofurane, dioksane, dimetilformamide, metileno chloride arba šių tirpilių mišinyje.In general, coupling reactions at low temperatures, e.g., -20 ° C to room temperature, conveniently in a suitable solvent system such as tetrahydrofuran, dioxane, dimethylformamide, methylene chloride, or a mixture of these solvents are convenient.
Gali būti patogiau vykdyti sintezę ant kietos fazės dervos nešiklio. Chlorometilintas polistirenas (susiūtas su 1 % divinilo benzenu) yra vienas naudingas nešiklio tipas; tuo atveju sintezė prasidės nuo C-galo, pvz., prijungiant N-apsaugotą liziną prie nešiklio.Synthesis on a solid-phase resin carrier may be more convenient. Chloromethylated polystyrene (stitched with 1% divinylbenzene) is one useful type of carrier; in which case, the synthesis will begin at the C-terminus, e.g., by attaching the N-protected lysine to the carrier.
rr
Eilė tinkamų kietos fazės metodų yra aprašyta Eric Atherton, Christopher J. Logan, and Robert C. Sheppard, J. Chem. Soc. Perkin I, 533-46 (1981); James P. Tam,A number of suitable solid phase methods are described by Eric Atherton, Christopher J. Logan, and Robert C. Sheppard, J. Chem. Soc. Perkin I, 1981, 533-46; James P. Tam,
Foe S. Tjoeng, and R.3. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 102, 6117-27 (1980); James P. Tam, Richard D. Dimarchi and R.3. Merrifield, Int. J. Peptide Prctein Res 16, 412-25 . (1980); .Manfred Mutter and Dieter Bellof, Helvetica Chimica Actą, 67, 2009-16 (1984).Foe S. Tjoeng, and R.3. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 102, 6117-27 (1980); James P. Tam, Richard D. Dimarchi and R.3. Merrifield, Int. J. Peptide Prctein Res 16, 412-25. (1980); .Manfred Mutter and Dieter Bellof, Helvetica Chimica Act, 67, 2009-16 (1984).
Prijungimo reakcijos taip pat gali būti atliktos tirpale .The coupling reactions can also be performed in solution.
Yra žinomas platus apsauginių grupių amino rūgštims pasirinkimas ir pateikta pavyzdžių Schroder, E. and Lubke, K., The Peptides, Vols. 1 and 2, Academic Press, New York and London, 1965 and 1966; Pettit, G. R., Synthetic Peptides, Vols. 1-4, Van Nostrand, Reinhold, New York 1970 1971, 1975 and 1976; Houben~Weyl,A wide variety of amino acid protecting groups are known and exemplified by Schroder, E. and Lubke, K., The Peptides, Vols. 1 and 2, Academic Press, New York and London, 1965 and 1966; Pettit, G.R., Synthetic Peptides, Vols. 1-4, Van Nostrand, Reinhold, New York 1970 1971, 1975 and 1976; Houben ~ Weyl,
Methoden der organischen Chemie, Synthese von Peptiden, Band 15, Georg Thieme Verlag Stuttgart, NY, 1983; The Peptides, Analysis, synthesis, biology 1-7, Ed: Erhard Gross, Johannes Meienhofer, Academic Press, NY, San Fransisco, London; Solid phase peptide synthesis 2nd ed., John M. Stewart, Janis D. Young, Pierce Chemical Company.Methoden der Organic Chemie, Synthese von Peptiden, Band 15, Georg Thieme Verlag Stuttgart, NY, 1983; The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology 1-7, Ed: Erhard Gross, Johannes Meienhofer, Academic Press, NY, San Francisco, London; Solid Phase Peptide Synthesis 2nd ed., John M. Stewart, Janis D. Young, Pierce Chemical Company.
Tuo būdu, pvz., amino apsauginės grupės, kurios gali būti panaudotos, apima apsaugines grupes, tokias kaip karbobenzoksi (Z-), t-butoksikarbonilas (Boc-), 4-metoksi-2,3,6-trimetilbenzolo sulfonilas (Mtr-) ir 9-fluorenilmetoksikarbonilas (Fmoc-).Thus, for example, amino protecting groups which may be employed include protecting groups such as carbobenzoxy (Z-), t-butoxycarbonyl (Boc-), 4-methoxy-2,3,6-trimethylbenzene sulfonyl (Mtr-). ) and 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc-).
Bus suprantama, kad kai peptidas sudarytas nuo C-galo, amino apsauginė grupė bus kiekvienos naujos pridedamos liekanos α-amino grupėje ir ją reikės pašalinti selektyviai prieš kitą jungimo stadiją. Kietos fazės sistemoms viena ypač naudinga grupė tokiai laikinaiIt will be understood that when the peptide is composed of a C-terminus, the amino protecting group will be in the α-amino group of each new residue added and will need to be selectively removed before the next coupling step. For solid phase systems, one particularly useful group for such a temporary period
I ί amino apsaugai yra Fmoc grupė, kuri gali būti pašalinta selektyviai, paveikiant piperidinu organiniame tirpiklyje. Sintezei tirpale Boc- yra tinkamesnė apsauginė grupė, kuri gali būti įvesta ir pašalinta įprastu būdu.I amine protectors are an Fmoc group that can be removed selectively by treatment with piperidine in an organic solvent. For the synthesis in solution, Boc- is a more suitable protecting group which may be introduced and removed by conventional means.
Aminorūgštys arba peptidai dažnai reikalauja sililinimo prieš apsaugojimą, pvz., pridedant Fmoc, kad būtų pagerintas jų tirpumas organiniuose tirpikliuose. Sililinimas ir Fmoc apsaugos reakcijos yra reziumuotos žemiauAmino acids or peptides often require silylation before protection, for example by adding Fmoc to improve their solubility in organic solvents. Silylation and Fmoc protection reactions are summarized below
COOHCOOH
A CGH3>3S 1 HN-CH-GOOS1 <CH,)3 A CGH 3 > 3 S 1 HN - CH -GOOS1 <CH,) 3
A -—A -—
I CCHiSICl v >I CCHiSICl v>
H2N-CH-COOHH 2 N-CH-COOH
Pmoc-Cl <li> H^OPmoc-Cl <li> H ^ O
FmocN-CH-COOHFmocN-CH-COOH
FmocN-CH-COOHFmocN-CH-COOH
Karboksilo apsauginės grupės, kurios gali, pvz., būti panaudotos, apima suskaldytas esterio grupes, tokias kaip benzilas (-OBZI), p-nitrobenzilas (-ONB) arba tbutilas (-tOBu), kaip ir jungimus ant kieto nešiklio, pvz., metilo grupes, prijungtas prie polistireno.Carboxyl protecting groups which may be used, for example, include cleaved ester groups such as benzyl (-OBZI), p-nitrobenzyl (-ONB) or t-butyl (-tOBu) as well as linkages on a solid support, e.g. methyl groups attached to polystyrene.
Tiolo apsauginės grupės apima p-metoksibenzilą (Mob), tritilą (Trt) ir acetamidometilą (Acm).Thiol protecting groups include p-methoxybenzyl (Mob), trityl (Trt), and acetamidomethyl (Acm).
Bus suprantama, kad egzistuoja daug kitų tokių grupių, kaip, pvz., detaliai aprašyta aukščiau nurodytoje liτIt will be appreciated that there are many other groups such as those described in detail in the above liτ
TT
TT
II teratūroje, ir visų tokių grupių panaudojimas čia ankščiau aprašytuose procesuose įeina į šio išradimo sritį.II, and the use of all such groups in the processes described hereinabove is within the scope of the present invention.
Egzistuoja daug procedūrų amino- ir karboksil-apsauginių grupių pašalinimui. Tačiau jos turi būti suderintos su naudojama sintezės strategija. Šoninės grandinės apsauginės grupės turi būti atsparios sąlygoms, naudojamoms pašalinti laikinas «-amino apsaugines grupes prieš kitą jungimo stadiją.There are many procedures for removing amino and carboxyl protecting groups. However, they must be compatible with the fusion strategy used. The side-chain protecting groups must be resistant to the conditions used to remove the temporary γ-amino protecting groups before the next coupling step.
Amino apsauginės grupės, tokios kaip Boc, ir karboksilo apsauginės grupės, tokios kaip toBu, gali būti pašalintos vienu metu, paveikiant rūgštimi, pvz., trifluoracto rūgštimi. Tiolc apsauginės grupės, tokios kaip Trt, gali būti pašalintos selektyviai, panaudojantAmine protecting groups such as Boc and carboxyl protecting groups such as toBu can be removed simultaneously by treatment with an acid such as trifluoroacetic acid. Thiol protecting groups such as Trt can be removed selectively by utilization
pašalinimu, įskaitant tiolc apsaugines grupes kaip paskutinę sintezės stadiją.removal, including thiolc protecting groups as the final step in the synthesis.
Toliau einantys pavyzdžiai pateikiami tik kaip iliustracijos .The following examples are provided for illustrative purposes only.
PAVYZDYS (S,S)-2,7-Bis(9-fluorenilmetiloksikarbonilamino)- (E) okt-4-eno-l,8-dikarboksirūgštisEXAMPLE (S, S) -2,7-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylamino) - (E) oct-4-eno-1,8-dicarboxylic acid
a) 1,4-Bis((2R,5S)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropil-5-pirazinil)-(E)-but-2-enas į maišomą (2R)-2,5~dihidro-3, 6-dimetoksi.i zopropilpirazino (5.53 g, 30 mmol) tirpalą THE (100 ml) , esanta) 1,4-Bis ((2R, 5S) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropyl-5-pyrazinyl) - (E) -but-2-ene to stirred (2R) - A solution of 2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-1-zopropylpyrazine (5.53 g, 30 mmol) in THE (100 mL) at
-78~C, su švirkštu pridėta 1.55 M butilličio (19.62 ml,-78 ~ C, 1.55 M butyl lithium (19.62 ml,
TT ί ιTT ί ι
II mmol) tirpalo heksane, ir maišymas buvo tęsiamas 1 valandą, esant -78°C. Tada pridėta (E)-1,4-dibromobut-2-eno (3.21 g; 15 mmol) tirpalo THF (20 ml), ir maišymas buvo tęsiamas per naktį. Tirpiklis pašalintas sumažintame slėgyje, o likutis buvo ištirpintas dietilo eteryje bei ekstrahuotas vandeniu. Organinis sluoksnis išdžiovintas magnio sulfatu, eteris išgarintas ir likutis išgrynintas impulsine chromatografija (etilo acetatas/heksanas 1/4; silikagelis).II mmol) in hexane and stirring was continued for 1 hour at -78 ° C. A solution of (E) -1,4-dibromobut-2-ene (3.21 g; 15 mmol) in THF (20 mL) was then added and stirring was continued overnight. The solvent was removed under reduced pressure and the residue was dissolved in diethyl ether and extracted with water. The organic layer was dried over magnesium sulfate, the ether evaporated and the residue purified by flash chromatography (ethyl acetate / hexane 1/4; silica gel).
Išeiga 4.73 g (75 %), blyškiai geltonas skystis.Yield 4.73 g (75%), a pale yellow liquid.
XH BMR (CDC13): δ 1 H NMR (CDCl 3 ): δ
0.67 (d, 6H), 1.04 (d, 6H) , 2.1-2.4 (m, 2H) , 2.48 (dd, 4H) , 3.67 (s, 6H) , 3.68 (s, 6H) , 3.93 (dd, 2H) , 4.03 (dd, 2H), 5.35 (dd, 2H).0.67 (d, 6H), 1.04 (d, 6H), 2.1-2.4 (m, 2H), 2.48 (dd, 4H), 3.67 (s, 6H), 3.68 (s, 6H), 3.93 (dd, 2H) , 4.03 (dd, 2H), 5.35 (dd, 2H).
13C BMR (CDC13): δ 13 C NMR (CDCl 3 ): δ
16.52, 19.07, 31.65, 37.09, 52.16, 52.23, 55.62, 60.60, 127.5016.52, 19.07, 31.65, 37.09, 52.16, 52.23, 55.62, 60.60, 127.50
C22H35N4O4 (420)C 22 H 35 N 4 O 4 (420)
Pask.%: C: 62.86; H: 8.57 N: 13.33Final%: C: 62.86; H: 8.57 N: 13.33
Rasta %: C: 62.65; H: 8.62 N: 12.91Found: C: 62.65; H: 8.62 N: 12.91
b) (S,S)-2,7-Diamino-(E)-okt-4-eno-l,8-dikarboksirūgšties dimetilo esterisb) Dimethyl ester of (S, S) -2,7-diamino- (E) -oct-4-eno-1,8-dicarboxylic acid
Į 1,4-bis((2R,5S)-2,5-dihidroksi-3,6-dimetoksi-2-izopropil-5-pirazinil)-(E)-but-2-eno (4.02 g, 9.9 mmol) ir 0.5 N HCl (40 ml, 20 mmol) mišinį pridėta 40 ml dioksano, ir tirpalas maišomas kambario temperatūroje 4 valandas. Jis ekstrahuotas dietilo eteriu, į vandeninį tirpalą buvo pridėta vandeninio amonio, kol buvo iTo 1,4-bis ((2R, 5S) -2,5-dihydroxy-3,6-dimethoxy-2-isopropyl-5-pyrazinyl) - (E) -but-2-ene (4.02 g, 9.9 mmol) and 0.5 N HCl (40 mL, 20 mmol) in 40 mL dioxane were added and the solution was stirred at room temperature for 4 hours. It was extracted with diethyl ether, and aqueous ammonia was added to the aqueous solution until
pasiektas pH 9. Tada vandens fazė ekstrahuota chloroformu ir organinis sluoksnis išdžiovintas magnio sulfatu. Pašalinus tirpiklį, perdisti.liuota 30-40°C (0.04 mbar), atskiriant valino metilo esteri. Nedistiliuotas pavadinimo junginys buvo naudojamas be tolesnio gryninimo.pH was reached 9. The aqueous phase was then extracted with chloroform and the organic layer was dried over magnesium sulfate. After removal of the solvent, the solution was redissolved at 30-40 ° C (0.04 mbar), separating the valine methyl ester. The non-distilled title compound was used without further purification.
Išeiga 1.92 g (84.3 %), geltonas aliejus.Yield: 1.92 g (84.3%), yellow oil.
XH BMR (CDC13):5 1 H NMR (CDCl 3 ): δ
1.70 (s, 4H), 2.20-2.60 (m, 4H) , 3.51 (dd, 2H) , 3.69 (s, 6H), 5.46 (dd, 2H).1.70 (s, 4H), 2.20 - 2.60 (m, 4H), 3.51 (dd, 2H), 3.69 (s, 6H), 5.46 (dd, 2H).
13C BMR (CDC13):6 13 C NMR (CDCl 3 ): 6
37.99, 52.00, 54.11, 128.84, 175.3237.99, 52.00, 54.11, 128.84, 175.32
c) (S, S) -2,7-Diamino- (E) .-okt-4-eno-l, 8-dikarboksirūgšties dihidrochloridas (S, S)-2,7-Diamino-(E)-okt-4-eno-l,8-karboksirūgšties dimetilo esteris (1.65 g, 7.17 mmol) virinamas su grįžtamu šaldytuvu su 6 N HCl (10 ml, 60 mmol) , dvi valandas. Tada tirpiklis išgarintas, likutis ištirpintas vandenyje (10 ml) , ir pridėta etanolio (100 ml) . Balti kristalai nufiltruoti ir išdžiovinti vakuume, esant 40°C.c) (S, S) -2,7-Diamino- (E).-oct-4-eno-1,8-dicarboxylic acid dihydrochloride (S, S) -2,7-Diamino- (E) -oct-4 The dimethyl ester of -eno-1,8-carboxylic acid (1.65 g, 7.17 mmol) was refluxed with 6 N HCl (10 mL, 60 mmol) for two hours. The solvent was then evaporated, the residue dissolved in water (10 mL), and ethanol (100 mL) was added. The white crystals were filtered off and dried in vacuo at 40 ° C.
Išeiga 1.32 g (67 %); balti kristalai.Yield 1.32 g (67%); white crystals.
XH BMR (D2O):5 1 H NMR (D 2 O): 5
2.53 (dd, 4H), 3.93 (dd, 2H), 5.49 (dd, 2H).2.53 (dd, 4H), 3.93 (dd, 2H), 5.49 (dd, 2H).
13C BMR (ϋ2Ο):δ ι 13 C NMR (ϋ 2 Ο): δ ι
.11..11.
II
33.57, 53.07, 128.49, 171.4933.57, 53.07, 128.49, 171.49
C8H16N2O4C12 (275)C 8 H 16 N 2 O 4 C 1 2 (275)
FAB-MS signalas prie m/zFAB-MS signal at m / z
405.3(11), 203.2(100), 157.1(19), 130.1(7), 93.0 (18),405.3 (11), 203.2 (100), 157.1 (19), 130.1 (7), 93.0 (18),
73.9(13) .73.9 (13).
d) (S,S)-2,7-Bis(9-fluorenilmetiloksikarbonilamino)-E)okt-4-eno-l,8-dikarboksirūgštisd) (S, S) -2,7-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylamino) -E) oct-4-eno-1,8-dicarboxylic acid
Rūgšties hidrochloridas - (S, S)-2,7-diamino-E-okt-4eno-1,8-dikarboksirūgšties dihidrochloridas (1.59 g, 5.8 mmol) suspenduotas heksametildisilazane (20 ml), ir buvo pridėta 1 ml trimetilsililo chlorido. Tada suspensija virinama su grįžtamu šaldytuvu per naktį. Tirpiklis pašalintas sumažintame slėgyje ir likutis ištirpintas bevandeniame metileno chloride. Šis tirpalas atšaldytas iki 0°C, ir pridėtas 9-fluorenilmetilo chloroformiato (3.10 g, 12 mmol) tirpalas metileno chloride. Prieš pašalinant šaldymo vonią, tirpalas buvo maišomas 1 valandą. Kitą rytą tirpiklis išgarintas ir likutis ištirpintas THF. Tada mišinys užgesintas 1 N vandeniniu HCl, ir tirpalas buvo maišomas 2 valandas. Organinis tirpiklis pašalintas ir vandens fazė ekstrahuota chloroformu. Organinis sluoksnis išdžiovintas magnio sulfatu ir išgarintas. Likutis ištirpintas metileno chloride ir nusodintas eteriu.Acid Hydrochloride - (S, S) -2,7-Diamino-E-oct-4eno-1,8-dicarboxylic acid dihydrochloride (1.59 g, 5.8 mmol) was suspended in hexamethyldisilazane (20 mL) and 1 mL of trimethylsilyl chloride was added. The suspension is then refluxed overnight. The solvent was removed under reduced pressure and the residue was dissolved in anhydrous methylene chloride. This solution was cooled to 0 ° C and a solution of 9-fluorenylmethyl chloroformate (3.10 g, 12 mmol) in methylene chloride was added. The solution was stirred for 1 hour before being removed from the cooling bath. The next morning, the solvent was evaporated and the residue was dissolved in THF. The mixture was then quenched with 1N aqueous HCl and the solution was stirred for 2 hours. The organic solvent was removed and the aqueous phase was extracted with chloroform. The organic layer was dried over magnesium sulfate and evaporated. The residue was dissolved in methylene chloride and precipitated with ether.
Išeiga 2.50 g (67 %); balti kristalai.Yield: 2.50 g (67%); white crystals.
TiTi
IIII
^33^34^2θε (646)^ 33 ^ 34 ^ 2θε (646)
Pask. %: C: 70.59; H: 5.26; N: 4.33Shit. %: C: 70.59; H, 5.26; N: 4.33
Rasta %: C: 70.17; H: 5.58; N: 4.08Found: C: 70.17; H: 5.58; N: 4.08
FAB-MS signalas prie m/zFAB-MS signal at m / z
661.3(3), 647.4(3), 191.2(17), 179.2(100), 165.1(18),661.3 (3), 647.4 (3), 191.2 (17), 179.2 (100), 165.1 (18),
78.9(31).78.9 (31).
PAVYZDYS (S, S) -2,7-Bis (9-fluorenilmet.iloksikarbonilamino) - (Z) okt-4-eno-l,8-dikarbcksirūgštisEXAMPLE (S, S) -2,7-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylamino) - (Z) oct-4-eno-1,8-dicarboxylic acid
a) 1,4-Bis((2R,5S)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropil-5-pirazinil)-(Z)-but-2-enas (2R)-(-)-2,5-Dihidrc-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (1.3 ml, 6.4 mmol) ištirpintas sausame THF (20 ml) ir atšaldytas iki -78°C. Lašinant pridėta BuLi (1.6 M heksane, 3.9 ml, 6.4 mmol), ir tirpalas maišomas 30 minučių. Cis-1,4-dichlor-2-butenas (0.32 ml, 3 mmol) ištirpintas sausame THF (10 ml) ir sudėtas visas iš karto, esant -78°C. Reakcijos mišinys maišomas per naktį N2 atmosferoje. Reakcija užgesinta amonio chlo-. ridu (3 ml) , mišinys išgarintas. Likutis ekstrahuotas ιa) 1,4-Bis ((2R, 5S) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropyl-5-pyrazinyl) - (Z) -but-2-ene (2R) - (- ) -2,5-Dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropylpyrazine (1.3 mL, 6.4 mmol) was dissolved in dry THF (20 mL) and cooled to -78 ° C. BuLi (1.6 M in hexane, 3.9 mL, 6.4 mmol) was added dropwise and the solution was stirred for 30 min. Cis-1,4-dichloro-2-butene (0.32 mL, 3 mmol) was dissolved in dry THF (10 mL) and added all at once at -78 ° C. The reaction mixture was stirred overnight under N 2 . The reaction was quenched with ammonium chlo-. (3 mL), the mixture was evaporated. The residue was extracted ι
1!1!
dietilo eteriu, ir organinė fazė dukart išplauta vandeniu. Tada išdžiovinta MgSO4 ir išgarinta. Gryninimas atliekamas silikageliu (heptanas: EtOAc/2:l).diethyl ether, and the organic phase was washed twice with water. It was then dried over MgSO 4 and evaporated. Purification is carried out on silica gel (heptane: EtOAc / 2: 1).
Išeiga: 0.81 g (60 %), gelsvas aliejus.Yield: 0.81 g (60%), yellowish oil.
PSG (plonasluoksnė chromatografija) (heptanas: EtOAc/2/1): Rf= 0.39PSG (thin layer chromatography) (heptane: EtOAc / 2/1): Rf = 0.39
HPLC (aukšto slėgio skystinė chromatografija) (50-100 % MeOH, 10 minučių): Rt = 6.75 minučių.HPLC (high performance liquid chromatography) (50-100% MeOH, 10 minutes): Rt = 6.75 minutes.
XH BMR (CDC13):5 1 H NMR (CDCl 3 ): δ
b) (S,S)-2,7-Diamino-(Z)-okt-4-eno-l,8-dikarboksirūgšties dimetilesterisb) Dimethyl ester of (S, S) -2,7-diamino- (Z) -oct-4-eno-1,8-dicarboxylic acid
1,4-Bis((2R,5S)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropil5-pirazinil)- (Z)-but-2-enas (0.58 g, 1.23 mmol) ištirpintas dioksane (8 ml), ir pridėta 0.25 M HCl (8 ml, 2.5 mmol) bei maišoma per naktį kambario temperatūroje. PSG (plonasluoksnė chromatografija) (MeCN:MeOH:H2O/4:1:1). Tirpalas ekstrahuotas dietilo eteriu, ir vandens fazė išgarinta. Likutis ištirpintas mažame kiekyje vandens, vandeninis amoniako tirpalas dedamas, kol buvo pasiektas pH 9. Vandens fazė dukart ekstrahuota dietilo eteriu, ir organinė fazė išdžiovinta MgSO4 bei išgarinta .1,4-Bis ((2R, 5S) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropyl-5-pyrazinyl) - (Z) -but-2-ene (0.58 g, 1.23 mmol) was dissolved in dioxane ( 8 mL) and 0.25 M HCl (8 mL, 2.5 mmol) was added and stirred overnight at room temperature. PSG (thin layer chromatography) (MeCN: MeOH: H 2 O / 4: 1: 1). The solution was extracted with diethyl ether and the aqueous phase evaporated. The residue was dissolved in a small amount of water and the aqueous ammonia solution was added until pH 9 was reached. The aqueous phase was extracted twice with diethyl ether and the organic phase was dried over MgSO 4 and evaporated.
Išeiga: 0,6 g, geltonas aliejusYield: 0.6 g, yellow oil
II
T ιT ι
i.i.
c) (S, S) -2,7-Diamino- (Z) -okt~4-eno-l8-karboksirūgšties dihidrochloridasc) (S, S) -2,7-Diamino- (Z) -oct-4-eno-18-carboxylic acid dihydrochloride
Į (S,S)-2,7-Diamino-(Z)-okt--4-eno-l,8-karboksirūgšties dimetilo esterio mišinį (0.6 g, 1.3 mmol) pridėta kone. HCI (1 ml) ir dioksano (10 ml) , ir tirpalas buvo deflegmuojamas 2 valandas, tada išgarintas.To the mixture of (S, S) -2,7-diamino- (Z) -oct-4-eno-1,8-carboxylic acid dimethyl ester (0.6 g, 1.3 mmol) was added almost. HCl (1 mL) and dioxane (10 mL) were added and the solution was refluxed for 2 hours then evaporated.
Išeiga 0.6 g, balta kieta medžiaga.Yield 0.6 g, white solid.
BMR (D2O):3NMR (D 2 O): 3
0.88 (2d, 6H), 2.15 (m, 1H) , 2.57 (2d, 4H) , 3.68 (m,0.88 (2d, 6H), 2.15 (m, 1H), 2.57 (2d, 4H), 3.68 (m,
1H), 3.86 (m, 2H), 5.51 (m, 2H).1H), 3.86 (m, 2H), 5.51 (m, 2H).
d) (S ,S) -2,7-Bis (9-fluoren.ilmetiloksikarbonilaniino) (Z) -ok.t-4-eno-l, e-dikarboksirūgštisd) (S, S) -2,7-Bis (9-Fluoro-phenylmethyloxycarbonylanino) (Z) -oct-4-eno-1,1'-dicarboxylic acid
Rūgšties hidrochloridas, gautas c) stadijoje (0.6 g, 2 mmol), suspenduotas heksametildisilazane (HMDS) (12 ml) ir trimetilsililo chloride. (TMS-Cl) suspensija deflegmuojama per naktį, azoto atmosferoje. HMDS ir TMS-Cl perteklius nudistiliuotas vakuume. Likutis buvo ištirpintas sausame metilchloride ir atšaldytas iki 0°C. Buvo pridėtas fluorenilmetilo chloroformiato (712 mg, 2.8 mmol) tirpalas sausame metilchloride, mišinys maišomas 2 valandas, tada išgarintas. Likutis ištirpintas THF, užgesintas i M HCI, ir maišomas 2 valandas. Organinis tirpiklis pašalintas, ir vandens fazė ekstrahuota chloroformu. Organinis sluoksnis išdžiovintas MgSO4 ir išgarintas. Gryninimas atliktas silicio dioksidu (heptanas: EtOAc:AcOH/3:6 :1) .The acid hydrochloride from step c) (0.6 g, 2 mmol) was suspended in hexamethyldisilazane (HMDS) (12 mL) and trimethylsilyl chloride. The (TMS-Cl) suspension was refluxed overnight under nitrogen. Excess HMDS and TMS-Cl were distilled in vacuo. The residue was dissolved in dry methyl chloride and cooled to 0 ° C. A solution of fluorenylmethyl chloroformate (712 mg, 2.8 mmol) in dry methyl chloride was added and the mixture was stirred for 2 hours then evaporated. The residue was dissolved in THF quenched with M HCl and stirred for 2 hours. The organic solvent was removed and the aqueous phase was extracted with chloroform. The organic layer was dried over MgSO 4 and evaporated. Purification was carried out on silica (heptane: EtOAc: AcOH / 3: 6: 1).
HPLC (40-70 % MeCN 0.1 % TFA, 10 minučių): Rt = 4.75 min.HPLC (40-70% MeCN 0.1% TFA, 10 min): R t = 4.75 min.
XH BMR (CDC13) : δ 1 H NMR (CDCl 3 ): δ
I II I
2.4-2.7 (s, 4H) , 3.7 (s, 2H) , 4.0-4.5 (m, 8H) , 5.5 (s, 2H), 7.1-7.8 (m, 16H) .2.4-2.7 (s, 4H), 3.7 (s, 2H), 4.0-4.5 (m, 8H), 5.5 (s, 2H), 7.1-7.8 (m, 16H).
PAVYZDYS (S ,S) -2,7-Bis (9-fluorenilmetiloksikarbonilaniino) -okt-4ino-1,8-dikarboksirūgštisEXAMPLE (S, S) -2,7-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylanino) -oct-4-amino-1,8-dicarboxylic acid
a) 1,4-Bis((2R,5S)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropil-5-pirazinil)-but-2-inas (2R)-(-)-2,5-Dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (2.76 g, 15 mmol) ištirpintas 100-e ml sauso THF ir atšaldytas iki -78°C, tada lašinant ir maišant pridėta 9.5 ml 1.6 M BuLi (15 mmol) tirpalo. Po valandos lėtai įvesta 0.92 g (7.5 mmol) 1,4-dichlor-2,3-butino. Reakcijos mišinio PSC (plonasluoksnė chromatografija) ir DC (dujinė chromatografija) po valandos parodė esminius nesureagavusio 2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazino ir monoalkilinto produkto kiekius. Reakcijai buvo leista tęstis per naktį ir palaipsniui pasiekti kambario temperatūrą. THF išgarintas, esant sumažintam slėgiui, ir likutis padalintas tarp eterio ir vandens. Vandens fazė dukart ekstrahuota eteriu, išdžiovinta (MgSO4) ir išgarinta. Reakcijos mišinio Kugelrohr'o distiliacija davė 2.3 g (77 %) gryno produkto.a) 1,4-Bis ((2R, 5S) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropyl-5-pyrazinyl) -but-2-one (2R) - (-) - 2, 5-Dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropylpyrazine (2.76 g, 15 mmol) was dissolved in 100 mL of dry THF and cooled to -78 ° C, then 9.5 mL of 1.6 M BuLi (15 mmol) was added dropwise with stirring. . After one hour, 0.92 g (7.5 mmol) of 1,4-dichloro-2,3-butine was slowly added. The reaction mixture PSC (thin layer chromatography) and DC (gas chromatography) after 1 hour showed substantial amounts of unreacted 2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropylpyrazine and monoalkylated product. The reaction was allowed to continue overnight and gradually reached room temperature. The THF was evaporated under reduced pressure and the residue partitioned between ether and water. The aqueous phase was extracted twice with ether, dried (MgSO 4 ) and evaporated. Kugelrohr distillation of the reaction mixture gave 2.3 g (77%) of the pure product.
3H BMR (CDC13):8 3 H NMR (CDCl 3 ): 8
4.03 (m, 4H, žiedas H’s), 3.68 (m, 12H, 4 x OCH3) , 2.63 (pi.AB q, 4H, 2 x CH2) , 2.27 (m, 2H, 2 x CH(CH3)2), 1.05 (d, J=6.8Hz, 6H, 2 x CH3) , 0.64 (d, J=6.8Hz, 6H, 2 x CH3) .4.03 (m, 4H, ring H's), 3.68 (m, 12H, 4 x OCH 3 ), 2.63 (pi.AB q, 4H, 2 x CH 2 ), 2.27 (m, 2H, 2 x CH (CH 3 )). 2 ), 1.05 (d, J = 6.8Hz, 6H, 2 x CH 3 ), 0.64 (d, J = 6.8Hz, 6H, 2 x CH 3 ).
13C BMR (CDC13): δ τ 13 C NMR (CDCl 3 ): δ τ
τ πτ π
IIII
I i:I i:
163.9, 161.0, 77.4, 60.6,163.9, 161.0, 77.4, 60.6,
52.2, 31.6 (31.20), 25.5 (6.9) .52.2, 31.6 (31.20), 25.5 (6.9).
(60.68), 54.6 (25.6), 19.3 (54.2), 52.3, (19.5), 16.7(60.68), 54.6 (25.6), 19.3 (54.2), 52.3, (19.5), 16.7
MS (Cl) 419 (M++, 55), 403 (4), 391 (7), 279 (15), 236 (17), 183 (44), 167 (34), 149 (100), 141 (41), 113 (44).MS (CI) 419 (M + +, 55), 403 (4), 391 (7), 279 (15), 236 (17), 183 (44), 167 (34), 149 (100), 141 ( 41), 113 (44).
b) (S, S)-2,7-Diamino-okt-4-in-l,8-karboksirūgšties dimetilesterisb) (S, S) -2,7-Diamino-oct-4-yn-1,8-carboxylic acid dimethyl ester
Į a) stadijos produktą pridėta 20 ml 1.0 M HCl ir 60 ml MeOH, kad būtų gauta 0.25 M HCl H2O/MeOH. Reakcijos mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį, ir, nustačius, kad nebeliko pradinės medžiagos, visas tirpiklis pašalintas. Likutis ištirpintas vandenyje, ekstrahuotas eteriu> ir vandens fazė neutralizuota iki pH 8 kone. NH-OH. Tirpalas išplautas eteriu ir ekstrahuotas kelis kartus EtOAc, kol visas produktas perėjo į EtOAc fazę. Tada išdžiovinta, tirpiklis pašalintas ir valino metilo esteris atskirtas iš tirpalo Kulgelrohr'o distiliacija, kad duotų 0.97 g (78 %) metilo esterio pavadinimo junginio.To the product of step a) was added 20 mL of 1.0 M HCl and 60 mL of MeOH to give 0.25 M HCl H 2 O / MeOH. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight, and when the starting material was found to be gone, all solvent was removed. The residue was dissolved in water, extracted with ether and the aqueous phase was neutralized to pH 8. NH-OH. The solution was washed with ether and extracted several times with EtOAc until all product had passed into the EtOAc phase. It was then dried, the solvent removed and the valine methyl ester separated from the solution by Kulgelrohr distillation to give 0.97 g (78%) of the methyl ester title compound.
*H BMR (D2O) : δ* H NMR (D 2 O): δ
4.0 (m, 2H, HC-α) , 3.6 (d, 6H, 2 x OCH3) , 2.6 (m, 4H, 2 x CH2) .4.0 (m, 2H, HC-α), 3.6 (d, 6H, 2 x OCH 3 ), 2.6 (m, 4H, 2 x CH 2 ).
13C BMR (D2O) : δ 13 C NMR (D 2 O): δ
171, 81.6, 61.6, 56.6, 20.5171, 81.6, 61.6, 56.6, 20.5
c) (S , S) -2,7-Diaxnino-okt-4-ino-l, 8-dikarboksirūgštisc) (S, S) -2,7-Diaxnino-oct-4-yno-1,8-dicarboxylic acid
Pakankamai MeOH, kad ištirptų b) stadijos produktas, ir ml 6 M HCl sumaišyta ir maišoma kambario temτSufficient MeOH to dissolve the product of step b) and ml of 6 M HCl was stirred and stirred at room temperature
IIII
I peratūroje per naktį. PSC, panaudojantI peratur overnight. PSC utilizing
1:1:1:1/nBuOH: EtOAc :MeOH:H,O mišinį ir ninhidrino pulverizatorių, parodė metilo esterio buvimą. Reakcijos mišinys deflegmuoj amas 60°C temperatūroje 24 valandas, kol buvo suhidrolizuotas visas metilo esteris. Tirpalas buvo išgarintas iki sausumo, likutis išdžiovintas aukštu vakuumu ir panaudotas be tolesnio gryninimo.1: 1: 1: 1 / nBuOH: EtOAc: MeOH: H, O, and ninhydrin nebulizer, showed the presence of methyl ester. The reaction mixture was refluxed at 60 ° C for 24 hours until all methyl ester was hydrolyzed. The solution was evaporated to dryness, the residue was dried under high vacuum and used without further purification.
13C BMR (D2O):8 13 C NMR (D 2 O): 8
172.3, 81.1, 55.0, 24.3172.3, 81.1, 55.0, 24.3
d) (S, S)-2,7-Bis(9-fluorenilmetiloksikarbonilamino)okt-4-ino-l,8-dikarboksirūgštis ml HMDS ir 1 ml TMSC1 pridėta į produktą iš aukščiau, ir mišinys buvo deflegmuoj amas, esant 120°C azoto atmosferoje, kol buvo gautas skaidrus tirpalas maždaug po 24 valandų. HMDS perteklius nudistiliuotas, o gautas produktas ištirpintas 50-tyje ml· sauso CH2C12 ir atšaldytas iki 0°C. Maišant, palaipsniui pridėti 3 g FMOC-C1, ištirpinto 20-tyje ml sauso CH2C12, ir reakcija vyko per naktį. Tirpiklis pašalintas sumažintame slėgyje, o produktas padalintas tarp prisotinto vandeninio NaHCO3 tirpalo ir eterio, kad būtų pašalintas nesureagavęs FMOC-C1 ir kiti FMOC skilimo produktai. Vandeninis tirpalas buvo atšaldytas iki 0°C bei parūgštintas 2 M HCl iki pH 3, produktas ekstrahuotas 5 kartus EtOAc, tada perplautas, išdžiovintas ir išgarintas. Chromatografija, panaudojant CHC13: MeOH/96:4, davė 2.35 g (66 %) pavadinimo junginio. Nors PSC parodė, kad jis grynas, atvirkštinės fazės HPLC parodė priemaišų buvimą, kas beveik sutapo su pagrindinio produkto piku. Produktas, ištirpintas 40 % MeCN su 0.1 % TFA išgrynintas preparatyvine HPLC, panaudojant Beckman'o ODC C-18 kolonėlę bei 0.1 % TFA H2O, ir 0.1 % TFA MeCN buvo kaip eliuentas.d) (S, S) -2,7-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylamino) oct-4-yno-1,8-dicarboxylic acid in 1 ml HMDS and 1 ml TMSC1 were added to the product from above and the mixture was refluxed at 120 ° C. Under nitrogen atmosphere until a clear solution was obtained after approximately 24 hours. Excess HMDS was distilled off and the product was dissolved in 50 mL · dry CH 2 Cl 2 and cooled to 0 ° C. While stirring, 3 g of FMOC-C1 dissolved in 20 ml of dry CH 2 Cl 2 were added gradually and the reaction was carried out overnight. The solvent was removed under reduced pressure and the product was partitioned between saturated aqueous NaHCO 3 solution and ether to remove unreacted FMOC-C1 and other FMOC decomposition products. The aqueous solution was cooled to 0 ° C and acidified with 2M HCl to pH 3, and the product was extracted 5 times with EtOAc, then washed, dried and evaporated. Chromatography using CHCl 3 : MeOH / 96: 4 gave 2.35 g (66%) of the title compound. Although PSC showed it to be pure, reverse phase HPLC showed the presence of impurities, which almost coincided with the peak of the parent product. The product dissolved in 40% MeCN with 0.1% TFA was purified by preparative HPLC using a Beckman ODC C-18 column and 0.1% TFA in H 2 O, and 0.1% TFA in MeCN as eluent.
TT
TT
TT
13c BMR (DMSO): δ 13 C NMR (DMSO): δ
170.4, 154.5, 142.5, 139.4, 126.5, 125.9, 124.2, 119.0,170.4, 154.5, 142.5, 139.4, 126.5, 125.9, 124.2, 119.0,
77.6, 65.5, 53.0, 46.5, 21.7.77.6, 65.5, 53.0, 46.5, 21.7.
PAVYZDYS (S,S) -2,4-Bis (9-fluorenilmetiloksikarbonilaniino) - (E) pentano-1,5-dikarboksirūgštisEXAMPLE (S, S) -2,4-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylanino) - (E) pentano-1,5-dicarboxylic acid
a) 1,1-Di((2R,5S)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropil-5-pirazinil)-(E)-metanasa) 1,1-Di ((2R, 5S) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropyl-5-pyrazinyl) - (E) -methane
Į maišomą (2R)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-izopropilpirazino (5.53 g, 30 mmol) tirpalą THF (100 ml), esant -78°C, per švirkštą pridedamas 1.55 M butilličio (19.62 ml, 31 mmol) tirpalas heksane, ir maišymas tęsiamas 1 valandą,· esant -78°C. Tada pridedamas (E)-bromochlorometano (15 mmol) tirpalas THF (20 ml) , ir maišymas tęsiamas per naktį. Tirpiklis pašalinamas sumažintame slėgyje ir likutis ištirpinamas dietilo eteryje bei e-kstrahuoj amas vandeniu. Organinis sluoksnis išdžiovinamas magnio sulfatu, eteris išgarinamas, o likutis gryninamas impulsine chromatografija (etilo acetatas/heksanas 1/4; silikagelis) .To a stirred solution of (2R) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-isopropylpyrazine (5.53 g, 30 mmol) in THF (100 mL) at -78 ° C was added 1.55 M butyl lithium (19.62 mL, 31 mL). mmol) in hexane and stirring is continued for 1 hour at -78 ° C. A solution of (E) -bromochloromethane (15 mmol) in THF (20 mL) was then added and stirring continued overnight. The solvent is removed under reduced pressure and the residue is dissolved in diethyl ether and extracted with water. The organic layer was dried over magnesium sulfate, the ether evaporated and the residue purified by flash chromatography (ethyl acetate / hexane 1/4; silica gel).
b) (S,S)-2,4-Diamino-(E)-pentan-1,5-dikarboksirūgšties esterisb) (S, S) -2,4-Diamino- (E) -pentane-1,5-dicarboxylic acid ester
Į 1,1-di((2R,5S)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropil5-pirazinil)-(E)-metano (4.02 g, 9.9 mmol) ir 0.5 N HClTo 1,1-di ((2R, 5S) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropyl-5-pyrazinyl) - (E) -methane (4.02 g, 9.9 mmol) and 0.5 N HCl
T' (40 ml, 20 mmol) mišinį pridedama 40 ml dioksano, ir tirpalas maišomas kambario temperatūroje 4 valandas. Po to ekstrahuojama dietilo eteriu, vandeninis amoniakas pilamas į vandeninį tirpalą, kol pasiekiamas pH 9. Tada vandeninė fazė ekstrahuojama chloroformu ir organinis sluoksnis išdžiovinamas magnio sulfatu. Pašalinus tirpiklį, valino metilo esteris pašalinamas distiliacija iš kolbos į kolbą, esant 30-40°C (0.04 mbar).T '(40 mL, 20 mmol) was added 40 mL of dioxane and the solution was stirred at room temperature for 4 hours. It is then extracted with diethyl ether and the aqueous ammonia is added to the aqueous solution until pH 9 is reached. The aqueous phase is then extracted with chloroform and the organic layer is dried over magnesium sulfate. After removal of the solvent, the valine methyl ester is removed by distillation from flask to flask at 30-40 ° C (0.04 mbar).
Nedistiliuotas pavadinimo junginys yra naudojamas be tolesnio gryninimo.The non-distilled title compound is used without further purification.
c) (S,S)-2,4-Diamino(E)-pentan-1,5-dikarboksirūgšties dihidrochloridas (S,S)-2,4-Diamino-(E)-pentano-1,5-dikarboksirūgšties dimetilo esteris (1.65 g, 7.17 mmol) virinamas su grįžtamu šaldytuvu su 6 N HCl (10 ml, 60 mmol) 2 valandas. Tada tirpiklis išgarinamas, likutis ištirpinamas vandenyje (10 ml) ir pridedama 100 ml etanolio. Balti kristalai nufiltruojami ir išdžiovinami vakuume, esant 40°C.c) Dimethyl ester of (S, S) -2,4-Diamino (E) -pentane-1,5-dicarboxylic acid (S, S) -2,4-Diamino- (E) -pentano-1,5-dicarboxylic acid (1.65 g, 7.17 mmol) was refluxed with 6 N HCl (10 mL, 60 mmol) for 2 hours. The solvent is then evaporated and the residue is dissolved in water (10 ml) and 100 ml of ethanol are added. The white crystals were filtered off and dried in vacuo at 40 ° C.
d) (S,S)-2,4-Bis(9-fluorenilmetiloksikarbonilamino)(E)-pentan-1,5-dikarboksirūgštisd) (S, S) -2,4-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylamino) (E) -pentane-1,5-dicarboxylic acid
Rūgšties hidrochloridas - (S,S)-2,4-Diamino-(E)-pentano-1 , 5-dikarboksirūgšties dihidrochloridas (1.59 g, 5.8 mmol) yra suspenduojamas heksametildisilazane (20 ml) ir pridedamas 1 ml trimetilsililo chlorido. Tada suspensija deflegmuojama per naktį. Tirpiklis pašalinamas sumažintame slėgyje, o likutis ištirpinamas bevandeniame metileno chloride. Šis tirpalas atšaldomas iki 0°C, ir pridedamas 9-fluorenilmetilchloroformiato (3.10 g, 12 mmol) tirpalas metileno chloride. Tirpalas maišomas 1 valandą, prieš pašalinant šaldymo vonią. Kitą rytą tirpiklis išgarinamas ir likutis ištirpinamas THF. Tada mišinys paveikiamas 1 N vandenine HCl ir tirpalas maiT ~T ί '“ΊΓAcid hydrochloride - (S, S) -2,4-Diamino- (E) -pentane-1,5-dicarboxylic acid dihydrochloride (1.59 g, 5.8 mmol) is suspended in hexamethyldisilazane (20 mL) and 1 mL of trimethylsilyl chloride is added. The suspension is then deflegmated overnight. The solvent is removed under reduced pressure and the residue is dissolved in anhydrous methylene chloride. The solution was cooled to 0 ° C and a solution of 9-fluorenylmethyl chloroformate (3.10 g, 12 mmol) in methylene chloride was added. Stir the solution for 1 hour before removing the freeze bath. The next morning, the solvent was evaporated and the residue was dissolved in THF. The mixture is then treated with 1 N aqueous HCl and the solution is stirred
T somas 2 valandas. Organinis tirpiklis pašalinamas ir vandens fazė ekstrahuojama chloroformu. Organinis sluoksnis išdžiovinamas magnio sulfatu ir išgarinamas. Likutis ištirpinamas metileno chloride ir nusodinamas eteriu.T somas for 2 hours. The organic solvent is removed and the aqueous phase is extracted with chloroform. The organic layer was dried over magnesium sulfate and evaporated. The residue is dissolved in methylene chloride and precipitated with ether.
PAVYZDYS (S,S)-2,9-DiamindekandikarboksirūgštisEXAMPLE (S, S) -2,9-Diamindecandicarboxylic acid
a) 1,6-Bis[(2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5-dihidro-5-pirazinil]heksanas (R)-2,5-Dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (4.12 g, 22.4 mmol) ištirpintas bevandeniame THF, ir tirpalas atšaldytas iki -78°C. Buvo pridėtas BuLi tirpalas heksane (22.42 mmol, 14.0 ml) . Po 30 minučių, esant -78°C, 1.6-dibromoheksano (11.2 mmol, 2.73 g) tirpalas THF sulašintas, ir tirpalas įgijo kambario temperatūrą per naktį. Po hidrolizės su fosfato buferiu (pH=7) mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu, ir organinis sluoksnis plautas vandeniu ir sūrymu. Po išdžiovinimo (MgSO4) tirpiklis išgarintas, o likutis išgrynintas impulsine chromatografija (heksanas/etilo acetatas 9/1) .a) 1,6-Bis [(2R, 5S) -3,6-dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl] hexane (R) -2,5-Dihydro-3,6-dimethoxy -2-Isopropylpyrazine (4.12 g, 22.4 mmol) was dissolved in anhydrous THF and the solution was cooled to -78 ° C. BuLi solution in hexane (22.42 mmol, 14.0 mL) was added. After 30 minutes at -78 ° C, a solution of 1.6-dibromohexane (11.2 mmol, 2.73 g) in THF was added dropwise and the solution was allowed to reach room temperature overnight. After hydrolysis with phosphate buffer (pH = 7), the mixture was extracted with diethyl ether and the organic layer was washed with water and brine. After drying (MgSO 4 ), the solvent was evaporated and the residue was purified by flash chromatography (hexane / ethyl acetate 9/1).
Išeiga: 2.57 g (51 %) .Yield: 2.57 g (51%).
XH BMR (CDC13): δ 1 H NMR (CDCl 3 ): δ
“T---—·r· i“T ---— · r · i
I 1I 1
16.54, 19.08, 24.44, 29.46, 31.63, 34.15, 52.27,16.54, 19.08, 24.44, 29.46, 31.63, 34.15, 52.27,
52.28, 55.47, 60.68, 163.41, 163.96.52.28, 55.47, 60.68, 163.41, 163.96.
FAB-MS signalai prie m/z 451.2(80), 407.2(33),FAB-MS signals at m / z 451.2 (80), 407.2 (33),
141.0(100). C24H42N4O4 (450).141.0 (100). C 24 H 42 N 4 O 4 (450).
b) (S,S)-2,9-Diamindekandikarboksirūgšties dimetilo diesterisb) dimethyl diester of (S, S) -2,9-Diamindecandicarboxylic acid
1,6-Bis[ (2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5-dihidro5-pirazinil] -heksano tirpalas 40-tyje ml dioksano ir 22.8 mmol HCl (1.90 ml) 36-iuose ml vandens buvo maišoma kambario temperatūroje 6 valandas, tirpiklis pašalintas ir tirpalas ekstrahuotas dietilo eteriu. Vandeninis amoniako tirpalas pridedamas, kol pasiektas pH 9, ir tada tirpalas ekstrahuotas chloroformu. Organinis sluoksnis išdžiovintas (MgSO4) . Valino metilo esteris nudistiliuotas vakuume (0.03 torų, kambario temperatūra).A solution of 1,6-bis [(2R, 5S) -3,6-dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl] -hexane in 40 mL of dioxane and 22.8 mmol of HCl (1.90 mL) in 36 mL water was stirred at room temperature for 6 hours, the solvent removed and the solution extracted with diethyl ether. Aqueous ammonia solution was added until pH 9 was reached and then the solution was extracted with chloroform. The organic layer was dried (MgSO 4 ). Valine methyl ester was distilled in vacuo (0.03 torr, room temperature).
Išeiga: 1.48 g (100 %) .Yield: 1.48 g (100%).
XH BMR (CDC13): δ 1 H NMR (CDCl 3 ): δ
1.20-1.70 (m, 16H), 3.36 (dd, 2H), 3.65 (s, 6H).1.20-1.70 (m, 16H), 3.36 (dd, 2H), 3.65 (s, 6H).
13C BMR (CDC13):6 13 C NMR (CDCl 3 ): 6
25.40, 29.06, 34.77, 51.76, 54.30, 176.51.25.40, 29.06, 34.77, 51.76, 54.30, 176.51.
c) (S,S)-2,9-Diaminodekandikarboksirūgštis·2HC1c) (S, S) -2,9-Diaminodecandicarboxylic acid · 2HCl
Dimetilo diesteris iš b) stadijos (1.40 g, 5.38 mmol) ištirpintas 6 N HCl (40 ml, 240 mmol) ir maišomas, N2 atmosferoje, 60°C temperatūroje 12 valandų. Tirpiklis išgarintas, likutis ištirpintas EtOH ir kristalizuotas, pridedant dietilo eterio. Kristalai nufiltruoti.The dimethyl diester from step b) (1.40 g, 5.38 mmol) was dissolved in 6 N HCl (40 mL, 240 mmol) and stirred under N 2 at 60 ° C for 12 h. The solvent was evaporated, the residue was dissolved in EtOH and crystallized by addition of diethyl ether. The crystals were filtered off.
Išeiga: 0.700 g, balti kristalai (42.7 %) .Yield: 0.700 g, white crystals (42.7%).
:H BMR (D2O): δ : H NMR (D 2 O): δ
1.07-1.37 (m, 8H) , 1.60-1.90 (m, 4H), 3.85 (m, 2H) .1.07-1.37 (m, 8H), 1.60-1.90 (m, 4H), 3.85 (m, 2H).
I3C BMR (D2O):6 13 C NMR (D 2 O): 6
23.81, 27.65, 29.61, 53.09, 172.55.23.81, 27.65, 29.61, 53.09, 172.55.
FAB-MS signalai prie m/z 439.3(15), 340.3(100),FAB-MS signals at m / z 439.3 (15), 340.3 (100),
233.2 (11) .233.2 (11).
C10H22N2Cl2O4 (450): Pask., %: N, 9.18.C 10 H 22 N 2 Cl 2 O 4 (450): Final%: N, 9.18.
Rasta, %: N, 9.13.Found,%: N, 9.13.
d) (S,S)-2,9-Bis(9-fluorenilmetiloksikarbonilamino)-dekandikarboksirūgštis (S, S) -2, 6-Diam.inodekandikarboksirūgšties dihidrochloridas (0.50 g, 1.64 mmol) suspenduotas HMDS bei TMSC1 ir deflegmuoj amas azoto atmosferoje per naktį. Tirpikliai pašalinti, likutis ištirpintas bevandeniame CH2C12. Tirpalas atšaldytas iki 0°C, ir pridėta FmocCl (1.69 g, 6.56 mmol) tirpalo CH2C12. Tirpalas maišomas per naktį, tirpalas pašalintas ir likutis ištirpintas THF. Pridėjus 5 ml 0.5 M HC1, mišinys maišomas 2 valandas, ekstrahuotas chloroformu ir išdžiovintas (MgSO4) . Likutis išgrynintas impulsine chromatografija (heptanas/etilo acetatas/acto rūgštis 4/6/1).d) (S, S) -2,9-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylamino) -decandicarboxylic acid (S, S) -2,6-Diaminodecandicarboxylic acid dihydrochloride (0.50 g, 1.64 mmol) suspended in HMDS and TMSC1 and deprotected under nitrogen. overnight. The solvents were removed and the residue was dissolved in anhydrous CH 2 Cl 2 . The solution was cooled to 0 ° C and a solution of FmocCl (1.69 g, 6.56 mmol) in CH 2 Cl 2 was added . The solution was stirred overnight, the solution removed and the residue dissolved in THF. After addition of 5 ml of 0.5 M HCl, the mixture was stirred for 2 hours, extracted with chloroform and dried (MgSO 4 ). The residue was purified by flash chromatography (heptane / ethyl acetate / acetic acid 4/6/1).
Išeiga: 0.580 g (52.5 %).Yield: 0.580 g (52.5%).
XH BMR (DMSO):δ 1 H NMR (DMSO): δ
1.00-1.44 (m, 8H) , 1.44-1.80 (m, 4H) , 3.90 (s, 2H) ,1.00-1.44 (m, 8H), 1.44-1.80 (m, 4H), 3.90 (s, 2H),
4.13-4,43 (m, 4H), 7.25-8.05 (m, 16H);4.13-4.43 (m, 4H); 7.25-8.05 (m, 16H);
I 13C BMR (DMSO): δ 13 C NMR (DMSO): δ
21.29, 25.63, 28.62, 31.08, 46.86, 54.17, 65.70, 120.25, 125.44, 127.20, 127.77, 140.86, 143.96, 144.04, 156.21, 174.2821.29, 25.63, 28.62, 31.08, 46.86, 54.17, 65.70, 120.25, 125.44, 127.20, 127.77, 140.86, 143.96, 144.04, 156.21, 174.28
FAB-MS signalai prie m/z 699.5(6), 677.4(2), 603.6(4),FAB-MS signals at m / z 699.5 (6), 677.4 (2), 603.6 (4),
409.3(4), 339.3(4); 179.1(55), 72.9(100).409.3 (4), 339.3 (4); 179.1 (55), 72.9 (100).
PAVYZDYS (S,S)-2,8-DiaminononandikarboksirūgštisEXAMPLE (S, S) -2,8-Diaminonone-dicarboxylic acid
a) 1,5-Bis[(2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5-dihidro-5-pirazinil]-pentanasa) 1,5-Bis [(2R, 5S) -3,6-dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl] -pentane
Į (R)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazino (3.68 g, 20 mmol) tirpalą THF (68 ml) lašinant (10 minučių) pridėta 1.6 M n-BuLi tirpalo heksane (12.8 ml, 20.4 mmol), ir maišymas buvo tęsiamas, esant -78°C, 1 valandą. Tada sulašintas 1,5-dibromopentano (2.3 g, 10 mmol) tirpalas THF (13.2 ml), ir mišiniui buvo leista įsigyti kambario temperatūrą per naktį. Reakcija užgesinta, pridedant 50 ml NaHCO3, ir mišinys padalintas tarp eterio (50 ml) ir vandens (20 ml). Po atskyrimo, vandens sluoksnis dukart ekstrahuotas eteriu (50 ml) , ir sujungti organiniai sluoksniai išdžiovinti (MgSO4), nufiltruota, sukoncentruota ir išgryninta impulsine chromatografija (silikagelis, heksanas: etilo acetatas = 12:1).To a solution of (R) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropylpyrazine (3.68 g, 20 mmol) in THF (68 mL) was added dropwise (10 min) a solution of 1.6 M n-BuLi in hexane (12.8 mL, 20.4 mmol) and stirring was continued at -78 ° C for 1 hour. A solution of 1,5-dibromopentane (2.3 g, 10 mmol) in THF (13.2 mL) was then added dropwise and the mixture was allowed to come to room temperature overnight. The reaction was quenched by the addition of 50 mL of NaHCO 3 and the mixture was partitioned between ether (50 mL) and water (20 mL). After separation, the aqueous layer was extracted twice with ether (50 mL) and the combined organic layers were dried (MgSO 4 ), filtered, concentrated, and purified by flash chromatography (silica gel, hexane: ethyl acetate = 12: 1).
Išeiga: 3.68 g (8.43 mmol, 84.3 %).Yield: 3.68 g (8.43 mmol, 84.3%).
XH BMR (300 MHz, CDC13): δ 1 H NMR (300 MHz, CDCl 3 ): δ
4.02 (kv. 2H, J. 2.1 Hz), 3.92 (t, 2H, J 3.3 Hz), 3.68 (s, 12H), 2.28 (d sept, 2H, J 3.3, 6.8 Hz), 1.71 (m,4.02 (s 2H, J 2.1 Hz), 3.92 (t, 2H, J 3.3 Hz), 3.68 (s, 12H), 2.28 (d sept, 2H, J 3.3, 6.8 Hz), 1.71 (m,
IIII
JJ
4H) , 1.21 (m, 6H), 1.05 (d, 6H, J 6.8), 0.68 (d, 6H, J 6.8) ;4H), 1.21 (m, 6H), 1.05 (d, 6H, J 6.8), 0.68 (d, 6H, J 6.8);
i3C BMR (75 MHz, CDC13): δ 13 C NMR (75 MHz, CDCl 3 ): δ
163.89, 163.31, 60.62, 55.40, 52.22. 52.19, 34.02,163.89, 163.31, 60.62, 55.40, 52.22. 52.19, 34.02,
34.56, 29.31, 24.33, 19.01, 16.48.34.56, 29.31, 24.33, 19.01, 16.48.
FAB-MS m/z 437 (M+l).FAB-MS m / z 437 (M + 1).
C23H40N4O4 (436.59): Pask., %: C, 63.28; H, 9.23; N, 12.83.C 23 H 40 N 4 O 4 (436.59): Final%: C, 63.28; H, 9.23; N, 12.83.
Rasta %: C, 62.95; H, 9.01; N, 129.91Found: C, 62.95; H, 9.01; N, 129.91
b) (S,S)-2,8-Diaminononandikarboksirūgšties dimetilo diesterisb) dimethyl diester of (S, S) -2,8-diaminononandicarboxylic acid
1,5-Bi s[ (1S, 4R) -3, 6-4 -izopropi1-2,5-dihidropirazinil] pentanas (2.8 g, 6.4 mmol) ištirpintas dioksane (51.2 ml) bei 0.5 M HCl (51.2 ml) ir maišomas 4 valandas kambario temperatūroje. Šis mišinys plautas dietilo eteriu (100 ml) , pH padarytas 9, pridedant 25 % amoniako vandenyje, ir greitai ekstrahuotas CHC'l3 (3 x 75 ml) . Organinis sluoksnis buvo išdžiovintas MgSO4, nufiltruotas ir sukoncentruotas. Metilo valinatas buvo pašalintas Kulgelrohr'o distiliacija (25-50°C, 0.01 torų), ir gauta 1.505 g (0.11 mmol, 95.5 %) išeiga.1,5-Bis [(1S, 4R) -3,6-4 -isopropyl-2,5-dihydropyrazinyl] pentane (2.8 g, 6.4 mmol) was dissolved in dioxane (51.2 mL) and 0.5 M HCl (51.2 mL) and stirred for 4 hours at room temperature. This mixture was washed with diethyl ether (100 ml) and made pH 9 by adding 25% ammonia water, and quickly extracted CHC'l 3 (3 x 75 ml). The organic layer was dried over MgSO 4 , filtered, and concentrated. Methyl valinate was removed by Kulgelrohr distillation (25-50 ° C, 0.01 torr) to give 1.505 g (0.11 mmol, 95.5%).
JH BMR (300 MHz, CDC13):5 1 H NMR (300 MHz, CDCl 3 ): δ
3.71 (s, 6H) , 3.43 (t, 2H, . J 6.0 Hz), 1.70 (m, 2H)3.71 (s, 6H), 3.43 (t, 2H, J 6.0 Hz), 1.70 (m, 2H)
1.57-1.34 (m, 8H).1.57-1.34 (m, 8H).
13C BMR (75 MHz, CDC.U): δ 13 C NMR (75 MHz, CDC.U): δ
176.40, 54.33, 51.86, 34.79, 29.08, 25.42.176.40, 54.33, 51.86, 34.79, 29.08, 25.42.
I) : ιιI): ιι
c) (S,S)-2,8-Diaminononandikarboksirūgštisc) (S, S) -2,8-Diaminononandicarboxylic acid
Esteris iš b) stadijos buvo maišomas deflegmuojant 6 M HCl (7.2 ml) 2 valandas azoto atmosferoje. Lakūs junginiai išgarinti. Likutis ištirpintas vandenyje (5 ml) , pridėta etanolio (20 ml), ir lėtas eterio įdėjimas davė baltas, kristalines nuosėdas. Šis mišinys laikomas 12 valandų šaldytuve, nufiltruotas, plautas eteriu ir išdžiovintas vakuume.The ester from step b) was stirred under refluxing in 6 M HCl (7.2 mL) for 2 hours under nitrogen. The volatile compounds were evaporated. The residue was dissolved in water (5 mL), ethanol (20 mL) was added and the slow addition of ether gave a white, crystalline precipitate. This mixture was kept in a refrigerator for 12 hours, filtered, rinsed with ether and vacuum dried.
d) (S,S)-2,8-Bis(9-fluorenilmetiloksikarbonilamino)-nonandikarboksirūgštis (S,S)-2,8-Diaminononano dirūgštis (291 mg, 1 mmol) TMSC1 (260 mg; 2.4 mmol) ir HMDS (3.5 ml) deflegmuojama azoto atmosferoje per naktį. Atšaldžius iki kambario temperatūros, lakios dalys pašalintos (iki 50°C, 0.01 torų), likutis ištirpintas CH2C12 (6.6 ml), atšaldytas iki 0°C, ir lašinant pridėta FmocCl (905 mg, 3.5 mmol) CH2C12 (6.6 ml). Mišiniui leista įgyti kambario temperatūrą per naktį. Tirpiklis išgarintas, likutis ištirpintas THF (7.5 ml) , ir pridėta 1 M HCl (7.5 ml) .d) (S, S) -2,8-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylamino) -nonandicarboxylic acid (S, S) -2,8-Diaminononanoic acid (291 mg, 1 mmol) TMSC1 (260 mg; 2.4 mmol) and HMDS ( 3.5 ml) was refluxed under nitrogen overnight. After cooling to room temperature, the volatiles were removed (to 50 ° C, 0.01 Torr), the residue dissolved in CH 2 Cl 2 (6.6 mL), cooled to 0 ° C, and FmocCl (905 mg, 3.5 mmol) in CH 2 Cl 2 was added dropwise. (6.6 mL). The mixture was allowed to reach room temperature overnight. The solvent was evaporated and the residue was dissolved in THF (7.5 mL) and 1M HCl (7.5 mL) was added.
I IIII III
Šis mišinys maišomas 4 valandas kambario temperatūroje. Tada pridėta chloroformo (50 ml) ir sūrymo (40 ml) , ir fazės atskirtos. Vandens sluoksnis ekstrahuotas 2 x CHC13 (50 ml) . Sujungti organiniai sluoksniai išdžiovinti (MgSO4) , sukoncentruoti ir išgryninti impulsine chromatografija (silikagelis, heksanas: etilo acetatas: acto rūgštis = 50 : 50 : 5) . Produktą turinčios frakcijos buvo sukoncentruotos ir liofilizuotos, gauta 615 mg (0.928 mmol, 92.8 %) išeigą.The mixture was stirred for 4 hours at room temperature. Chloroform (50 mL) and brine (40 mL) were then added and the phases separated. The aqueous layer was extracted with 2 x CHCl 3 (50 mL). The combined organic layers were dried (MgSO 4 ), concentrated, and purified by flash chromatography (silica gel, hexane: ethyl acetate: acetic acid = 50: 50: 5). The product-containing fractions were concentrated and lyophilized to yield 615 mg (0.928 mmol, 92.8%).
BMR (300 MHz, d6-DMSO):5NMR (300 MHz, d 6 -DMSO): δ
13C BMR (75 MHz, CDC13) : 5 13 C NMR (75 MHz, CDCl 3 ): δ
PAVYZDYSEXAMPLE
2,3-Diaminogintaro rūgštis2,3-Diaminoglyceric acid
a) 2,3-Bis(benzilamino)gintaro rūgštisa) 2,3-Bis (benzylamino) succinic acid
Į mechaniškai maišomą mezo-2,3-dibrom.ogintaro rūgšties (27.6 g, 0.1 mol) tirpalą alkoholyje (200 ml) lėtai pridėta benzilamino (85 g, 0.8 mol) kambario temperatūroje. Sudėjus viską, mišinys deflegmuoj amas per nakII ί .1 jjj :Benzylamine (85 g, 0.8 mol) was slowly added at room temperature to a mechanically stirred solution of meso-2,3-dibromo-succinic acid (27.6 g, 0.1 mol) in alcohol (200 mL). After adding everything up, the mixture deflates overnight.
tį. Pasirodė sunkios druskų nuosėdos. Mišinys atšaldytas iki 50°C, ir pridėta koncentruotos hidrochloro rūgšties, kol pH pasiekė 4-5. Nuosėdos nufiltruotos, kelis kartus vandeniu bei alkoholiu ir išdžiovintos.t. A heavy salt precipitate appeared. The mixture was cooled to 50 ° C and concentrated hydrochloric acid was added until the pH reached 4-5. The precipitate was filtered off, washed several times with water and alcohol and dried.
Išeiga 24.5 g (75 %).Yield 24.5 g (75%).
BMR (300 MHz, D2O/NaOD); δNMR (300 MHz, D 2 O / NaOD); δ
3.08 (2H, s), 3.30 (2H, d, J 13 Hz), 3.55 (2H, d, J 13 Hz), 7.2 (10H, m).3.08 (2H, s), 3.30 (2H, d, J 13 Hz), 3.55 (2H, d, J 13 Hz), 7.2 (10H, m).
13C BMR (75 MHz, D2O/NaOD); δ 13 C NMR (75 MHz, D 2 O / NaOD); δ
50.9, 64.7, 127.1, 128.5 (br), 139.2, 179.0.50.9, 64.7, 127.1, 128.5 (br), 139.2, 179.0.
b) Mezo-2,3-diaminogintaro rūgštisb) Meso-2,3-diaminogutaric acid
Mezo-2,3-bis(benzilamino)gintaro rūgštis (9.5 g, 0.029 mol) ištirpinta ledinės acto rūgšties (50 ml) ir koncentruotos hidrochloro rūgšties (50 ml) mišinyje. Hidro atliekama kambario temperatūroje 10 % paladžiu/medžio anglies (1.0 g) kaip katalizatoriumi. Reakcija vyko, kol BMR parodė, kad daugiau nėra nesureagavusios pradinės medžiagos. Buvo pridėta vandens (100 ml) , ir katalizatorius pašalintas filtruojant. Filtratas sukoncentruotas (rotaciniu garintuvu), o likutis ištirpintas atskiestame vandeniniame natrio hidrokside. pH sureguliuotas iki apytikriai 5, įdedant ledinės acto rūgšties. Kristalai nufiltruoti ir perplauti.Meso-2,3-bis (benzylamino) succinic acid (9.5 g, 0.029 mol) was dissolved in a mixture of glacial acetic acid (50 mL) and concentrated hydrochloric acid (50 mL). The hydro is carried out at room temperature in 10% palladium on charcoal (1.0 g) as a catalyst. The reaction continued until the NMR showed no further unreacted starting material. Water (100 mL) was added and the catalyst was removed by filtration. The filtrate was concentrated (rotary evaporator) and the residue was dissolved in dilute aqueous sodium hydroxide. The pH was adjusted to about 5 by the addition of glacial acetic acid. The crystals were filtered off and washed.
Išeiga 3.8 g (88 %), balta kieta medžiaga.Yield 3.8 g (88%) as a white solid.
XH BMR (300 MHz, D2O/NaOD):8 1 H NMR (300 MHz, D 2 O / NaOD):?
3.21 (s).3.21 (s).
IIHU.I 33C BMR (75 MHz, D2O/NaOD):6II C H 33 C NMR (75 MHz, D 2 O / NaOD):?
60.3, 180.0.60.3, 180.0.
C4H8N2O4 C 4 H 8 N 2 O 4
Pask. %: C, 32.44; H,Shit. %: C, 32.44; H,
Rasta %: C, 31.51; H,Found: C, 31.51; H,
5.44; N, 18.91.5.44; N, 18.91.
5.41; N, 18.32.5.41; N, 18.32.
c) Mezo~2,3~bis(trimetilsililamino)gintaro rūgšties di(trimetilsilil)esteris(c) Di (trimethylsilyl) ester of meso-2,3-bis (trimethylsilylamino) succinic acid
Reakcija buvo atliekama azoto atmosferoje. Mezo-2,3diaminogintaro rūgšties (296 mg, 2.00 mmol) suspensija heksametildisilazane (10 ml) ir trimetilchiorsilane (1 ml) maišoma, esant 100°C per naktį, davė skaidrų tirpalą. Sililinančių reagentų perteklius nudistiliuotas sumažintame slėgyje. Kietas baltas likutis tiesiai panaudotas acilin.imo reakcijose.The reaction was carried out under a nitrogen atmosphere. A suspension of meso-2,3-diaminogenic acid (296 mg, 2.00 mmol) in hexamethyldisilazane (10 mL) and trimethylchlorosilane (1 mL) was stirred at 100 ° C overnight to give a clear solution. The excess silylating reagents were distilled off under reduced pressure. The solid white residue was directly used in the acylline reaction.
2H BMR (300 MHz, CDC13):5 2 H NMR (300 MHz, CDCl 3 ): δ
0.03 (18H, s), 0.28 (18H, s), 3.5 (2H, m).0.03 (18H, s), 0.28 (18H, s), 3.5 (2H, m).
13C BMR (75 MHz, CDC13):0 13 C NMR (75 MHz, CDCl 3 ): δ
-0.3, 0.03, 60.9, 174.1.-0.3, 0.03, 60.9, 174.1.
d) Mezo-2,3-bis[(9-fluorenilmetoksikarbonil)amino)gintaro rūgštisd) Meso-2,3-bis [(9-fluorenylmethoxycarbonyl) amino) succinic acid
Reakcija atliekama azoto atmosferoje. Sililinta dramino gintaro rūgštis, gauta c) stadijoje, ištirpinta sausame dichlormetane (10 ml) ir atšaldyta iki 0°C. Buvo pridėtas 9-fluorenilmetilo chloroformiato (1.14 g, 4.4 mmol) tirpalas sausame dichlormetane (4 ml) . Reakcijos mišinys maišomas per naktį rr po to sukoncentruotas. Likutis ištirpintas THF (10 ml), ir buvo pridėta vandens (apytikriai 1 ml) . Mišinys maišomas 10 minučių ir tada sukoncentruotas. Produktas ekstrahuotas etilo acetatu, tirpalas plautas vandeniu, išdžiovintas (MgSO4) ir nufiltruotas. Buvo pridėta heksano, ir nuosėdos nufiltruotos bei plautos heksanu. Galiausiai produktas gryninamas kolonėlės chromatografija (silicio dioksidas, heksanas/etilo acetatas/acto rūgštis 1:3:1).The reaction is carried out under a nitrogen atmosphere. The silylated draminic succinic acid obtained in step c) was dissolved in dry dichloromethane (10 mL) and cooled to 0 ° C. A solution of 9-fluorenylmethyl chloroformate (1.14 g, 4.4 mmol) in dry dichloromethane (4 mL) was added. The reaction mixture was stirred overnight and then concentrated. The residue was dissolved in THF (10 mL) and water (approximately 1 mL) was added. The mixture was stirred for 10 minutes and then concentrated. The product was extracted with ethyl acetate, the solution was washed with water, dried (MgSO 4 ) and filtered. Hexane was added and the precipitate was filtered off and washed with hexane. Finally, the product was purified by column chromatography (silica, hexane / ethyl acetate / acetic acid 1: 3: 1).
Išeiga 0.85 g (72 %), balti kristalai.Yield 0.85 g (72%), white crystals.
2H BMR (300 MHz DMSO-d6):8 2 H NMR (300 MHz DMSO-d 6 ): δ
4.1-4.3 (6H, m), 4.5 (2H, d), 7.2-7.4 (12H, m), 7.6-7.7 (4H, 7.8-7.9 (4H, m).4.1-4.3 (6H, m), 4.5 (2H, d), 7.2-7.4 (12H, m), 7.6-7.7 (4H, 7.8-7.9 (4H, m)).
13C BMR (75 MHz DMSO-d6): δ 13 C NMR (75 MHz DMSO-d 6 ): δ
47.0, 56.1, 66.5, 120.5, 125.9, 127.5, 128.0, 141.0,47.0, 56.1, 66.5, 120.5, 125.9, 127.5, 128.0, 141.0,
144.1, 156.4, 171.1.144.1, 156.4, 171.1.
FAB-MS signalai prie m/z 637.2(3), 631.1(5), 615.2(21),FAB-MS signals at m / z 637.2 (3), 631.1 (5), 615.2 (21),
593.2, 435.1(9), 326.3(15), 179.1(100).593.2, 435.1 (9), 326.3 (15), 179.1 (100).
e) Raceminis-2,3-bis[(9-fluorenilmetoksikarbonil)amino] gintaro rūgšties anhidridas(e) Racemic-2,3-bis [(9-fluorenylmethoxycarbonyl) amino] succinic anhydride
Mezo-2, 3-bis[ (9-fluorenilmetoksikarbonil)-amino] gintaro rūgšties (150 mg, 0.25 mmol) suspensija acto rūgšties anhidride maišoma, esant 120°C, kol ištirpo visa medžiaga (1-2 minutes) . Anhidrido perteklius atskirtas vakuume. Žalias produktas buvo panaudotas peptido sintezėje be tolesnio gryninimo.A suspension of meso-2,3-bis [(9-fluorenylmethoxycarbonyl) -amino] succinic acid (150 mg, 0.25 mmol) in acetic anhydride was stirred at 120 ° C until all material was dissolved (1-2 minutes). The excess anhydride was separated in vacuo. The crude product was used in peptide synthesis without further purification.
XH BMR (300 MHz DMSO-d6): δ 1 H NMR (300 MHz DMSO-d 6 ): δ
4.25 (2H, t), 4.39 (4H, d), 4.80 (2H, d), 7.2-7.4 (8H, m), 7.66 (4H, d), 7.88 (4H, d), 8.30 (2H, d).4.25 (2H, t), 4.39 (4H, d), 4.80 (2H, d), 7.2-7.4 (8H, m), 7.66 (4H, d), 7.88 (4H, d), 8.30 (2H, d) .
II 13C BMR (75 MHz DMSO-d6):8 13 C NMR (75 MHz DMSO-d 6 ): δ
46.8, 55.6, 66.9, 120.6, 125.5, 127.5, 128.1, 141.1,46.8, 55.6, 66.9, 120.6, 125.5, 127.5, 128.1, 141.1,
143.9, 156.4, 168.2.143.9, 156.4, 168.2.
PAVYZDYS (S,S)-2,7-Diamino-E-okt-4-endikarboksirūgštisEXAMPLE (S, S) -2,7-Diamino-E-oct-4-endicarboxylic acid
a) 1,4-Bis[(2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5-dihidro-5-pirazinil]-E-but-2-enas (2R)-2,5-Dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (5.53 g, 30 mmol) ištirpintas bevandeniame THF ir tirpalas atšaldytas iki -78°C. Buvo pridėtas BuLi tirpalas heksane (19.62 ml, 31.0 mmol). Po 60 minučių -78°C temperatūroje lašinant buvo pridėtas E-l,4-dibromobut2-eno (3.21 g, 15 mmol) tirpalas 30-tyje ml THF, ir tirpalas per naktį įgijo kambario temperatūrą. Po hidrolizės su fosfato buferiu (pH 7) mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu, organinis sluoksnis plautas vandeniu ir sūrymu. Po išdžiovinimo (MgSO4) , tirpiklis išgarintas ir likutis išgrynintas impulsine chromatografija (heksanas/etilo acetatas 4/1).a) 1,4-Bis [(2R, 5S) -3,6-dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl] -E-but-2-ene (2R) -2,5- Dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropylpyrazine (5.53 g, 30 mmol) was dissolved in anhydrous THF and the solution cooled to -78 ° C. A solution of BuLi in hexane (19.62 mL, 31.0 mmol) was added. After 60 minutes at -78 ° C, a solution of E1, 4-dibromobut2-ene (3.21 g, 15 mmol) in 30 mL of THF was added dropwise and the solution was brought to room temperature overnight. After hydrolysis with phosphate buffer (pH 7), the mixture was extracted with diethyl ether and the organic layer was washed with water and brine. After drying (MgSO 4 ), the solvent was evaporated and the residue was purified by flash chromatography (hexane / ethyl acetate 4/1).
Išeiga 4.73 (75 %).Yield 4.73 (75%).
3H BMR (CDC13) : δ 3 H NMR (CDCl 3 ): δ
I!I!
.i j:.i j:
C33H36N,O„ (420) :C 33 H 36 N, O (420):
Pask., %: C, 62.86; H, 8.57.Found,%: C, 62.86; H, 8.57.
Rasta %: C, 62.65; H, 8.62.Found: C, 62.65; H, 8.62.
b) (S,S)-2,7-diamino-E-okt-4-enodikarboksirūgšties dimetilo diesterisb) Dimethyl diester of (S, S) -2,7-diamino-E-oct-4-enodicarboxylic acid
1,4-Bis[ (2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5-dihidro5-pirazinil] -E-but-2-eno (4.02 g, 9.9 mmol) tirpalas 40-tyje ml dioksano ir 20.0 mmol HCl (1.67 ml) 38-iuose ml vandens maišomas kambario temperatūroje 4 valandas, po to tirpalas ekstrahuotas dietilo eteriu. Buvo pridėta vandeninio amoniako tirpalo, kol buvo pasiektas pH 9, ir tirpalas ekstrahuotas chloroformu. Organinis sluoksnis išdžiovintas (MgSO4) . Valino metilo esteris nudistiliuotas vakuume (0.04 torų, kambario temperatūra).A solution of 1,4-bis [(2R, 5S) -3,6-dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl] -E-but-2-ene (4.02 g, 9.9 mmol) in 40 mL dioxane and 20.0 mmol HCl (1.67 mL) in 38 mL of water were stirred at room temperature for 4 hours, after which the solution was extracted with diethyl ether. Aqueous ammonia solution was added until pH 9 was reached and the solution was extracted with chloroform. The organic layer was dried (MgSO 4 ). Valine methyl ester was distilled in vacuo (0.04 torr, room temperature).
Išeiga: 192 g (84.3 %).Yield: 192 g (84.3%).
3H BMR (CDC13):5 3 H NMR (CDCl 3 ): δ
1.70 (s, 4H) , 2.2-2.6 (m, 4H) , 3.51 (dd, 2H), 3.69 (s, 6H), 5.46 (dd, 2H) .1.70 (s, 4H), 2.2-2.6 (m, 4H), 3.51 (dd, 2H), 3.69 (s, 6H), 5.46 (dd, 2H).
13C - (CDC13):5 13 C - (CDCl 3 ): 5
37.99, 52.00, 54.11, 128.84, 175.32.37.99, 52.00, 54.11, 128.84, 175.32.
c) (S,S)-2,7-Diamino-E-okt-4-enodikarboksirūgštis · 2 HClc) (S, S) -2,7-Diamino-E-oct-4-enodicarboxylic acid · 2 HCl
Dimetilo diesteris iš b) stadijos (1.65 g, 7.17 mmol) ištirpintas 6N HCl (10 ml, 60 mmol) ir def legmuo j amas azoto atmosferoje 2 valandas. Tirpiklis išgarintas, likutis ištirpintas 10-tyje ml vandens ir kristalizuotas, pridedant EtOH (100 ml). Kristalai nufiltruoti .The dimethyl diester from step b) (1.65 g, 7.17 mmol) was dissolved in 6N HCl (10 mL, 60 mmol) and the reaction mixture was stirred under nitrogen for 2 hours. The solvent was evaporated and the residue was dissolved in 10 mL of water and crystallized by adding EtOH (100 mL). The crystals were filtered off.
Išeiga 132 g = 67 %.Yield 132 g = 67%.
ιιιι
BMR (D2O) : δNMR (D 2 O): δ
2.53 (dd, 4H) , 3.97 (dd, 2H), 5.52 (dd, 2H).2.53 (dd, 4H), 3.97 (dd, 2H), 5.52 (dd, 2H).
13C - (D2O):6 13 C - (D 2 O): 6
33.57, 53.07, 128.85, 171.49.33.57, 53.07, 128.85, 171.49.
FAB-MS signalai prie m/z 405.3(11), 203.2(100),FAB-MS signals at m / z 405.3 (11), 203.2 (100),
157.(19), 130.1(7), 93.0(18), 73.9(13).157. (19), 130.1 (7), 93.0 (18), 73.9 (13).
C8H16N2O4C12 (275) :C 8 H 16 N 2 O 4 C 1 2 (275):
Pask. %: C, 34.91; H, 5.81; N, 10.18; Cl, 25.78.Shit. %: C, 34.91; H, 5.81; N, 10.18; Cl, 25.78.
Rasta %: C, 36.58; H, 5.80; N, 9.70; Cl, 26.01.Found: C, 36.58; H, 5.80; N, 9.70; Cl, 26.01.
d) (S,S) -2,7-Bis (9‘-fluorenilrietiloksikarbonilamino) -Eokt-4-enodikarboksirūgštis (S, S) -2,7-Diamino-E-oct-4-enodikarboksirūgšt.ies dihidrochloridas (1.59 g, 5.8 mmol) suspenduotas HMDS (20 ml) bei TMSC1 ir deflegmuojamas per naktį. Tirpikliai pašalinti, likutis ištirpintas bevandeniame dichlormetane. Šis tirpalas atšaldytas iki 0°C, ir pridėtas FmocCl (3.10 g, 12 mmol) tirpalas dichlormetane. Tirpalas buvo maišomas 1 valandą, esant šiai temperatūrai, ir per naktį, esant kambario temperatūrai. Tirpiklis išgarintas, likutis ištirpintas THF. Pridėjus 1 N vandeninio HCl, tirpalas maišomas dvi valandas, ekstrahuotas chloroformu ir išdžiovintas (MgSO4) . Likutis ištirpintas dichlormetane ir kristalizuotas, pridėjus dietileterio.d) (S, S) -2,7-Bis (9'-Fluorenylethylethyloxycarbonylamino) -Ect-4-enodicarboxylic acid (S, S) -2,7-Diamino-E-oct-4-enodicarboxylic acid dihydrochloride (1.59 g) , 5.8 mmol) in HMDS (20 mL) and TMSC1 suspended and refluxed overnight. The solvents were removed and the residue was dissolved in anhydrous dichloromethane. This solution was cooled to 0 ° C and a solution of FmocCl (3.10 g, 12 mmol) in dichloromethane was added. The solution was stirred for 1 hour at this temperature and overnight at room temperature. The solvent was evaporated and the residue was dissolved in THF. After addition of 1 N aqueous HCl, the solution was stirred for two hours, extracted with chloroform and dried (MgSO 4 ). The residue was dissolved in dichloromethane and crystallized with diethyl ether.
Išeiga: 2.50 g (66.8 %).Yield: 2.50 g (66.8%).
3H - (DMSO):δ 3 H - (DMSO): δ
Ml.GMl.G.
2.2-2.4 (s, 4H), 3.6 (s, 2H) , 3.9-4.5 (m, 8H) , 5.55 (s, 2H), 7.2-8.1 (m, 16H).2.2-2.4 (s, 4H), 3.6 (s, 2H), 3.9-4.5 (m, 8H), 5.55 (s, 2H), 7.2-8.1 (m, 16H).
C - (DMSO):δC - (DMSO): δ
33.98, 46.56, 53.93, 65.49, 119.66, 124.81, 126.61,33.98, 46.56, 53.93, 65.49, 119.66, 124.81, 126.61,
127.17, 127.98, 140.19, 143.28, 155.43, 172.59 ^38^34^2^8 (646) :127.17, 127.98, 140.19, 143.28, 155.43, 172.59 ^ 38 ^ 34 ^ 2 ^ 8 (646):
Pask.Shit.
C, 70.59; N, 5.26; N, 4.33,C, 70.59; N, 5.26; N, 4.33.
Rasta %: C, 70.17; N, 5.58; N, 4.08.Found: C, 70.17; N, 5.58; N, 4.08.
FAB-MS signalas prie m/z 661.3(3), 647.4(3), 191.2(17), 179.2(100), 165.1(18), 78.9(31).FAB-MS signal at m / z 661.3 (3), 647.4 (3), 191.2 (17), 179.2 (100), 165.1 (18), 78.9 (31).
PAVYZDYS (S,S)-2,7-Diamino-Z-okt-4-enodikarboksirūgštisEXAMPLE (S, S) -2,7-Diamino-Z-oct-4-enodicarboxylic acid
a) 1,4-Bis[(2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5-dihidro-5-pirazinil]-Z-but-2-enas (2R)-2,5-Dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (7.3 g, 39.2 mmol) ištirpintas bevandeniame THF, ir tirpalas atšaldytas iki -78°C. Buvo pridėtas BuLi tirpalas heksane (24.5 ml, 39.2 mmol). Po 15 minučių, esant -78°C temperatūrai, pridėta 16.9 ml 1,3-dimetil2-imidazolindikarboksi rūgšties (156 mmol), o po 5 minučių lašinant pridėtas Z-l, 4-dichlorobut-2-eno (2.45 g,a) 1,4-Bis [(2R, 5S) -3,6-dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl] -Z-but-2-ene (2R) -2,5- Dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropylpyrazine (7.3 g, 39.2 mmol) was dissolved in anhydrous THF and the solution was cooled to -78 ° C. BuLi solution in hexane (24.5 mL, 39.2 mmol) was added. After 15 minutes at -78 ° C, 16.9 ml of 1,3-dimethyl-2-imidazolindicarboxylic acid (156 mmol) was added, and after 5 minutes Z-1,4-dichlorobut-2-ene (2.45 g,
19.6 mmol) tirpalas 10-tyje ml THF, ir tirpalas maišomas 6 valandas bei laikomas -20°C, per naktį. Po hidrolizės su fosfato buferiu (pH=7), mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu, o organinis sluoksnis plautas vandeniu bei sūrymu. Po išdžiovinimo (MgSO4) , tirpiklis išgarintas, o likutis išgrynintas impulsine chromatografija (heksanas/etilo acetatas 9/1) .19.6 mmol) in 10 mL of THF and the solution stirred for 6 h and stored at -20 ° C overnight. After hydrolysis with phosphate buffer (pH = 7), the mixture was extracted with diethyl ether and the organic layer was washed with water and brine. After drying (MgSO 4 ), the solvent was evaporated and the residue was purified by flash chromatography (hexane / ethyl acetate 9/1).
Išeiga: 710 mg (10.2 %) .Yield: 710 mg (10.2%).
*H BMR (CDC13) : δ1 H NMR (CDCl 3 ): δ
0.67 (d, 6H), 1.03 (d, 6H), 2.25 (m, 2H), 2.55 (m, 4H), 3.66 (s, 6H) , 3.68 (s, 6H) , 3.91 (dd, 2H) , 4.07 (m,0.67 (d, 6H), 1.03 (d, 6H), 2.25 (m, 2H), 2.55 (m, 4H), 3.66 (s, 6H), 3.68 (s, 6H), 3.91 (dd, 2H), 4.07 (m,
2H), 5.38 (dd, 2H) .2H), 5.38 (dd, 2H).
13C BMR (CDC13): δ 13 C NMR (CDCl 3 ): δ
16.50, 19.01, 31.57, 32.01, 52.22, 52.31, 55.46, 60.67, 127.30, 163.19, 163.66.16.50, 19.01, 31.57, 32.01, 52.22, 52.31, 55.46, 60.67, 127.30, 163.19, 163.66.
b) (S,S)-2,7-Dianinc-Z~okt-4-endikarboksirūgšties dimetilo diesterisb) Dimethyl diester of (S, S) -2,7-Dianinc-Z-oct-4-endicarboxylic acid
1,4-bis[ (IS,4R)-3,6-dimetoksi-4-izopropil-2, 5-dihidro5-pirazinil]-Z-but-2-eno (0.23 g, 0.55 mmol) tirpalas 30-tyje ml dioksano ir 2.2 mmol HCl (0.183 ml) 10-tyje ml vandens maišoma kambario temperatūroje 12 valandų. Tirpalas ekstrahuotas dietileteriu. Buvo pridėta vandeninio amoniako tirpalo, kol pasiektas pH 9, ir tirpalas ekstrahuotas chloroformu. Organinis sluoksnis išdžiovintas (MgSO4) . Valino metilo esteris nudistiliuotas (0.02 torų, kambario temperatūra).A solution of 1,4-bis [(1S, 4R) -3,6-dimethoxy-4-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl] -Z-but-2-ene (0.23 g, 0.55 mmol) in 30 mL dioxane and 2.2 mmol HCl (0.183 mL) in 10 mL of water were stirred at room temperature for 12 hours. The solution was extracted with diethyl ether. Aqueous ammonia solution was added until pH 9 was reached and the solution was extracted with chloroform. The organic layer was dried (MgSO 4 ). Valine methyl ester was distilled off (0.02 torr, room temperature).
Išeiga: 0.127 g (85 %).Yield: 0.127 g (85%).
3H BMR (CDC13):6 3 H NMR (CDCl 3 ): 6
1.54 (s, 4H) , 2.3-2.6 (m, 4H) , 3.52 (dd, 2H) , 3.71 (s,1.54 (s, 4H), 2.3-2.6 (m, 4H), 3.52 (dd, 2H), 3.71 (s,
6H) , 5.54 (m, 2H) .6H), 5.54 (m, 2H).
13C BMR (CDC13):0 13 C NMR (CDCl 3 ): 0
32.55, 52.02, 54.17, 127.94, 175.67.32.55, 52.02, 54.17, 127.94, 175.67.
c) (S,S)-2,7-Diamino-Z-okt-4-endikarboksirūgštis · HClc) (S, S) -2,7-Diamino-Z-oct-4-endicarboxylic acid · HCl
Į dimetilo diesterio iš b) stadijos (0.108 g, 0.47 mmol) tirpalą 0.7 ml metanolio pridėtas 2N LiOH tirpalas vandenyje (1.41 mmol, 0.71 ml) . Mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį, tada parūgštintas, lašinant pridėjus 1 N HCl. Kristalai nufiltruoti.To a solution of dimethyl diester from step b) (0.108 g, 0.47 mmol) in 0.7 mL of methanol was added 2N LiOH in water (1.41 mmol, 0.71 mL). The mixture was stirred at room temperature overnight then acidified by the dropwise addition of 1 N HCl. The crystals were filtered off.
Išeiga 50 mg (38.7 %).Yield: 50 mg (38.7%).
3H BMR (ϋ20):δ 3 H NMR (ϋ 2 0): δ
2.58 (m, 4H), 3.99 (m, 2H), 5.51 (m, 2H).2.58 (m, 4H), 3.99 (m, 2H), 5.51 (m, 2H).
13C BMR (ϋ2Ο):δ 13 C NMR (ϋ 2 Ο): δ
27.59, 52.20, 126.84, 171.10.27.59, 52.20, 126.84, 171.10.
d) (S,S)-2,7-Bis(9-fluorenilmetiloksikarbonilamino)-Zokt-4-endikarboksirūgštis (S,S)-2,7-Diamino-Z-okt-4-endikarboksirūgštis (0.050 g, .0.25 mmol) ir Na2CO3 (0.21 g, 20.0 mmol) ištirpinta 3juose ml vandens ir 2-juose ml dioksano. Tirpalas atšaldytas iki 0°C, ir pridėtas FmocCl (0.26 g, 1.0 mmol) tirpalas 1-ame ml dioksano. Šis mišinys maišomas 0°C 3 valandas, ir įgijo kambario temperatūrą per naktį. Po ekstrahavimo dietilo eteriu, jis parūgštintas, pridėjus hidrochloro rūgšties. Tirpalas ekstrahuotas chloroformu, o aminorūgštis kristalizuota iš chloroformo/heksano. Junginys toliau gryninamas impulsine chromatografija (chloroformas/acto rūgštis 9/1).d) (S, S) -2,7-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylamino) -Zoct-4-endicarboxylic acid (S, S) -2,7-Diamino-Z-oct-4-endicarboxylic acid (0.050 g, .0.25 mmol ) and Na 2 CO 3 (0.21 g, 20.0 mmol) were dissolved in 3 mL of water and 2 mL of dioxane. The solution was cooled to 0 ° C and a solution of FmocCl (0.26 g, 1.0 mmol) in 1 mL of dioxane was added. The mixture was stirred at 0 ° C for 3 hours and gained room temperature overnight. After extraction with diethyl ether, it was acidified by the addition of hydrochloric acid. The solution was extracted with chloroform and the amino acid crystallized from chloroform / hexane. The compound was further purified by flash chromatography (chloroform / acetic acid 9/1).
Išeiga: 90.0 mg (55.9 %) .Yield: 90.0 mg (55.9%).
XH BMR (DMSO):δ 1 H NMR (DMSO): δ
I!I!
2.12-2.64 (m, 4H) , 3.88 (s, 2H) , 4.04-4.37 (m, 6H) ,2.12-2.64 (m, 4H), 3.88 (s, 2H), 4.04-4.37 (m, 6H),
5.42 (s, 2H), 7.02 (s, 2H>, 7.20-8.00 (m, 16H).5.42 (s, 2H), 7.02 (s, 2H>, 7.20-8.00 (m, 16H).
13C BMR (DMSO): δ 13 C NMR (DMSO): δ
29.77, 46.88, 55.53, 65.66, 120.23, 125.43, 127.23,29.77, 46.88, 55.53, 65.66, 120.23, 125.43, 127.23,
127.74, 129.08, 140.84, 144.11, 155.59, 174.10.127.74, 129.08, 140.84, 144.11, 155.59, 174.10.
FAB-MS signalai prie m/z 676.2(2), 587.5(5), 447.4(10), 419.3(45), 391.3(100), 363.3(38), 261.2(45), 233.2(29).FAB-MS signals at m / z 676.2 (2), 587.5 (5), 447.4 (10), 419.3 (45), 391.3 (100), 363.3 (38), 261.2 (45), 233.2 (29).
PAVYZDYS (S,S)-2,7-Diamino-okt-4-indikarboksirūgštisEXAMPLE (S, S) -2,7-Diamino-oct-4-indicator carboxylic acid
a) 1,4-Bis-{(2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5-dihidro-5-pirazinil)but-2-inasa) 1,4-Bis - {(2R, 5S) -3,6-dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl) but-2-one
Į (2R)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazino (4.605 g, 25 mmol) ir 1,3-dimetil-2-imidazolidinono (11.4 g, 102 mmol) tirpalą THF (48 ml) lašinant pridėtaTo a solution of (2R) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropylpyrazine (4.605 g, 25 mmol) and 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone (11.4 g, 102 mmol) in THF (48 mL) drip added
1.6 M n-BuLi (16 ml, 25.5 mmol). Po 1 valandos lašinant pridėtas 1,4-dichlor-2-butino (1.54 g, 12.5 mmol) tirpalas THF. Mišiniui leista įgyti kambario temperatūrą per naktį, ir jis užgesintas 1 M fosfato buferiu (pH 7). Mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu (150 ml) bei vandeniu (40 ml) , ir sluoksniai atskirti. Vandens sluoksnis dukart ekstrahuotas eteriu (2 x 150 ml), ir sujungti organiniai sluoksniai išdžiovinti (MgSO4) , nufiltruoti, sukoncentruoti ir išgryninti impulsine chromatografija (silikagelis, heksanai: eteris = 7:1).1.6 M n-BuLi (16 mL, 25.5 mmol). After 1 hour, a solution of 1,4-dichloro-2-butine (1.54 g, 12.5 mmol) in THF was added dropwise. The mixture was allowed to reach room temperature overnight and quenched with 1 M phosphate buffer (pH 7). The mixture was extracted with diethyl ether (150 mL) and water (40 mL), and the layers were separated. The aqueous layer was extracted twice with ether (2 x 150 mL), and the combined organic layers were dried (MgSO 4 ), filtered, concentrated and purified by flash chromatography (silica gel, hexanes: ether = 7: 1).
Išeiga 3.325 g (7.94 mmol, 63.6 %).Yield 3.325 g (7.94 mmol, 63.6%).
XH BMR (300 MHz, CDC13) : δ 1 H NMR (300 MHz, CDCl 3 ): δ
4.05-3.99 (m, 4H) , 3.68 (s, 6H) , 3.67 (s, 6H) , 2.70 (dd, 2H, J -14.1, 3.0 Hz), 2.57 (dd, 2H, J -14.1, 3.04.05-3.99 (m, 4H), 3.68 (s, 6H), 3.67 (s, 6H), 2.70 (dd, 2H, J -14.1, 3.0 Hz), 2.57 (dd, 2H, J -14.1, 3.0
Hz), 2.26 (d sept, 2H, J 6.9, 3.0 Hz), 1.05 (d, 6H, JHz), 2.26 (d Sept, 2H, J 6.9, 3.0 Hz), 1.05 (d, 6H, J
6.9 Hz), 0.64 (d, 6H, J 6.9 Hz).6.9 Hz), 0.64 (d, 6H, J 6.9 Hz).
13C BMR (75 MHz, CDC13) : δ 13 C NMR (75 MHz, CDCl 3 ): δ
164.56, 161.53, 77.52, 60.51, 54.46, 52.34, 52.22,164.56, 161.53, 77.52, 60.51, 54.46, 52.34, 52.22,
31.43, 25.26, 19.07, 16.40.31.43, 25.26, 19.07, 16.40.
FAB-MS m/z 419 (M+ +1) .FAB-MS m / z 419 (M + +1).
C22H34N4O4 (418.53):C 22 H 34 N 4 O 4 (418.53):
Pask. %: C, 63.14; H, 8.19; N, 13.39.Shit. %: C, 63.14; H, 8.19; N, 13.39.
Rasta %: C, 63.27; H, 8.12; N, 13.54.Found: C, 63.27; H, 8.12; N, 13.54.
b) (S,S)-2,7-Diamino-okt-4-indikarboksirūgšties dimetilo diesterisb) Dimethyl diester of (S, S) -2,7-Diamino-oct-4-indoic acid
1,4-Bis-((2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5-dihidro5-pirazinil)but-2-inas (920 mg, 2.2 mmol) ištirpintas dioksane (18 ml) bei 0.5 M HCl (18 ml) ir maišomas kambario temperatūroje 12 valandų. Šis mišinys plautas dietilo eteriu (30 ml), pridėjus 25 % amoniako vandenyje, vandens sluoksnio pH padarytas 9, ir greitai ekstrahuotas CHC13 (3 x 75 ml) . Organinis sluoksnis išdžiovintas MgSO4, nufiltruotas ir sukoncentruotas. Metilo valinatas pašalintas Kugelrohr’o distiliacija (25-50°C, 0.01 torų).1,4-Bis - ((2R, 5S) -3,6-dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl) but-2-one (920 mg, 2.2 mmol) was dissolved in dioxane (18 mL) and 0.5 M HCl (18 mL) and stirred at room temperature for 12 hours. The mixture was washed with diethyl ether (30 mL), 25% ammonia in water was added, the pH of the aqueous layer was adjusted to 9, and rapidly extracted with CHCl 3 (3 x 75 mL). The organic layer was dried over MgSO 4 , filtered, and concentrated. Methyl valinate was removed by Kugelrohr distillation (25-50 ° C, 0.01 tor).
Išeiga 486 mg (2.13 mmol, 96.8 %) geltonas aliejus.Yield: 486 mg (2.13 mmol, 96.8%) of a yellow oil.
XH BMR (300 MHz, CDC13): δ 1 H NMR (300 MHz, CDCl 3 ): δ
3.74 (s, 6H) , 3.59 (t, 2H, J 5.4 Hz), 2.60 (d, 4H, J3.74 (s, 6H), 3.59 (t, 2H, J 5.4 Hz), 2.60 (d, 4H, J
5.4 Hz) .5.4 Hz).
nc BMR (75 MHz, CDC13): δ n c NMR (75 MHz, CDC1 3) δ
174.46, 78.31, 53.31, 52.22, 25.15.174.46, 78.31, 53.31, 52.22, 25.15.
c) (S,S) -2,7-Diainino-Z-okt-4-indikarboksirūgštis · 2 HC1c) (S, S) -2,7-Diainino-Z-oct-4-indole-carboxylic acid · 2 HCl
Dimetilo diesterio iš b) stadijos (450 mg, 1.97 mmol) tirpalas šildomas su 6 M HC1 (7.2 ml) iki 50-60°C 12 valandų, azoto atmosferoje. Lakūs junginiai išgarinti (rotacinis garintuvas, vandens vonia 40°C). Likutis ištirpintas vandenyje (1 mi, drumstas), pridėta etanolio (20 ml) , ir lėtas eterio pridėjimas davė baltas kristalines nuosėdas. Šis mišinys laikomas 12 valandų šaldytuve, nufiltruotas, plautas eteriu ir išdžiovintas vakuume.A solution of dimethyl diester from step b) (450 mg, 1.97 mmol) was heated with 6 M HCl (7.2 mL) to 50-60 ° C for 12 h under a nitrogen atmosphere. Volatile compounds evaporated (rotary evaporator, water bath 40 ° C). The residue was dissolved in water (1 mL, cloudy), ethanol (20 mL) was added and a slow addition of ether gave a white crystalline precipitate. This mixture was kept in a refrigerator for 12 hours, filtered, rinsed with ether and vacuum dried.
Išeiga 399 mg (1.46 mmol, 74.2 %) 3H BMR (300 MHz, D2O/DC1):0Yield 399 mg (1.46 mmol, 74.2%) 3 H NMR (300 MHz, D 2 O / DC 1): 0
4.18 (t, 2H, J 4.8 Hz), 2.85 (m, ΑΑ’Χ, 4H);4.18 (t, 2H, J 4.8 Hz), 2.85 (m, ΑΑ'Χ, 4H);
13C BMR (75 MHz, D2O/DC1):6 13 C NMR (75 MHz, D 2 O / DC 1): δ
172.62, 79.88, 53.75, 22.60.172.62, 79.88, 53.75, 22.60.
FAB-MS m/z 201 (M+ -72) .FAB-MS m / z 201 (M + -72).
d) (S,S)-2,7-Bis(9-fluorenilmetiloksikarbonilamino)okt-4-indikarboksirūgštis (S,S)-2,7-Diamino-Z-okt-4-indikarboksirūgšties · 2 HC1 (400 mg, 1.46 mmol) tirpalas dioksane ir 1 M Na2CO3 tirpalas (10.22 ml, 10.22 mmol) atšaldyti iki 0°C, ir pridėta FmocCl (1.14 g, 4.39 mmol) tirpalo 4-iuose ml dioksano. Šis mišinys maišomas 0°C temperatūroje 1 valandą, ir jam leista igyti kambario temperatūrą perd) (S, S) -2,7-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylamino) oct-4-indole-carboxylic acid (S, S) -2,7-Diamino-Z-oct-4-indo-carboxylic acid · 2 HCl (400 mg, 1.46) solution of dioxane and 1 M Na 2 CO 3 solution (10.22 mL, 10.22 mmol) was cooled to 0 ° C and a solution of FmocCl (1.14 g, 4.39 mmol) in 4 mL of dioxane was added. The mixture was stirred at 0 ° C for 1 h and allowed to come to room temperature over
ι.ι.ι.ι.
naktį. Po ekstrahavimo dietilo eteriu, (2 x 50 ml) vandens sluoksnis parūgštintas, pridėjus atskiestos HCl. Tirpalas ekstrahuotas chloroformu (3 x 50 ml), išdžiovintas (MgSO4) ir sukoncentruotas. Likutis išgrynintas impulsine chromatografija (silikagelis, heksanas: etilo acetatas: acto rūgštis = 10:10:1).at night. After extraction with diethyl ether, (2 x 50 mL) the aqueous layer was acidified with dilute HCl. The solution was extracted with chloroform (3 x 50 mL), dried (MgSO 4 ), and concentrated. The residue was purified by flash chromatography (silica gel, hexane: ethyl acetate: acetic acid = 10: 10: 1).
Išeiga 376 mg (0.58 mmol, 39 %) JH BMR (300 MHz, DMSO): δYield 376 mg (0:58 mmol, 39%) J H NMR (300 MHz, DMSO) δ
7.87 (d, 4H, J 7.5 Hz), 7.73 (d, 4H, J 7.5 Hz), 7.41 (t, 4H, J 7.5 Hz), 7.33 (d, 4H, J 7.5 Hz), 4.26 (m, 8H), 2.52 (m, 4H).7.87 (d, 4H, J 7.5 Hz), 7.73 (d, 4H, J 7.5 Hz), 7.41 (t, 4H, J 7.5 Hz), 7.33 (d, 4H, J 7.5 Hz), 4.26 (m, 8H) , 2.52 (m, 4H).
13C(DMSO):6 13 C (DMSO): 6
170.43, 154.62, 124.35, 119.12,170.43, 154.62, 124.35, 119.12,
FAB-MS m/z 645 (M+ ^-38^32^2^8 (644.67) :FAB-MS m / z 645 (M + + -38-32-32-8-8 (644.67):
Pask. %: C, 70.80;Shit. %: C, 70.80;
Rasta %: C, 69.20;Found: C, 69.20;
152.58, 142.32. 139.47, 77.68, 65.45, 53.08, 46 + 1) ·152.58, 142.32. 139.47, 77.68, 65.45, 53.08, 46 + 1) ·
H, 5.00; N, 4.35.H, 5.00; N, 4.35.
H, 5.34; N, 4.13.H, 5.34; N, 4.13.
126.22, 125.94, 57, 21.77.126.22, 125.94, 57, 21.77.
PAVYZDYS (2S,4R,5R,7S)-2,7-Diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,0-izopropilidenoktandikarboksirūgštisEXAMPLE (2S, 4R, 5R, 7S) -2,7-Diamino-4,5-dihydroxy-4,5-0,0-isopropylideneoctandicarboxylic acid
a) (2R,3R,)-1,4-Bis(2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil2,5-dihidro-5-pirazinil)-2,3-dihidroksi-2,3-0,0izopropilidenbutanas (2R)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (7.36 g, 40 mmol) ištirpintas vandeniniame THF, ir tirLT 3614 B palas atšaldytas iki ~76°C. Buvo pridėtas BuLi tirpalas heksane (40.0 mmol, 25 ml) . Po 20 minučių, esant -78°C, (2R, 3R)-1,4-dibrom-2,3-dihidroksi-2,3-O-izopropilidenobutano (3.78 g, 13.1 mmol) tirpalas 10-tyje ml THF pridėtas lašinant, ir tirpalas laikomas 4°C temperatūroje 36 valandas. Po hidrolizės fosfato buferiu (pH 7), mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu, organinis sluoksnis išplautas vandeniu ir sūrymu. Po išdžiovinimo (MgSO4) , tirpiklis išgarintas, ir likutis išgrynintas pakartotinu kristalizavimu iš acetonitrilo.a) (2R, 3R,) - 1,4-Bis (2R, 5S) -3,6-Dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl) -2,3-dihydroxy-2,3-0 , 0isopropylidenebutane (2R) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropylpyrazine (7.36 g, 40 mmol) was dissolved in aqueous THF, and the melt 3636B was cooled to ~ 76 ° C. A solution of BuLi in hexane (40.0 mmol, 25 mL) was added. After 20 minutes at -78 ° C, a solution of (2R, 3R) -1,4-dibromo-2,3-dihydroxy-2,3-O-isopropylidenobutane (3.78 g, 13.1 mmol) in 10 mL of THF was added dropwise , and the solution is kept at 4 ° C for 36 hours. After hydrolysis with phosphate buffer (pH 7), the mixture was extracted with diethyl ether and the organic layer was washed with water and brine. After drying (MgSO 4 ), the solvent was evaporated and the residue was purified by recrystallization from acetonitrile.
Išeiga: 3.70 g (57 %).Yield: 3.70 g (57%).
C25H42N4O (494):C 25 H 42 N 4 O (494):
Pask. %: C, 60.71; H, 8.56; N, 11.33.Shit. %: C, 60.71; H, 8.56; N, 11.33.
Rasta %: C, 60.76; H, 8.32; N, 11.36.Found: C, 60.76; H, 8.32; N, 11.36.
b) (2S, 4R,5R,7S) -2,7-diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,0-izopropilidenoktandikarboksirūgšties dimetilo diesteris (2R,3R,)-1,4-Bis((2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5dihidro-5-pirazinil)-2,3-dihidroksi-2,3-0,0-izopropilidenobutanas (1.22 g, 2.47 mmol) ištirpintas 10-tyje ml dioksano ir 20-tyje ml MeOH. Buvo pridėta 9.88 mmol HCIb) Dimethyl diester of (2S, 4R, 5R, 7S) -2,7-diamino-4,5-dihydroxy-4,5-0,0-isopropylideneoctandicarboxylic acid (2R, 3R,) - 1,4-Bis ((2R , 5S) -3,6-Dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl) -2,3-dihydroxy-2,3-0,0-isopropylidenobutane (1.22 g, 2.47 mmol) was dissolved in 10 mL dioxane and 20 mL of MeOH. 9.88 mmol HCl was added
II .JI ί tirpalo vandenyje, ir tirpalas maišomas kambario temperatūroje per naktį. Tirpikliai pašalinti, likutis ištirpintas vandenyje ir ekstrahuotas dietilo esteriu, į vandeninį sluoksnį pridėta amoniako, kol pasiektas pH 9, ir šis sluoksnis ekstrahuotas chloroformu. Po išdžiovinimo (MgSO4), tirpiklis pašalintas ir valino metilo esteris nudistiliuotas (30-40°C, 0.04 torų).II. It is dissolved in water, and the solution is stirred at room temperature overnight. The solvents were removed, the residue was dissolved in water and extracted with diethyl ester, ammonia was added to the aqueous layer until pH 9 and this layer was extracted with chloroform. After drying (MgSO 4 ), the solvent was removed and the valine methyl ester was distilled (30-40 ° C, 0.04 torr).
Išeiga: 0.67 g (89.3 %).Yield: 0.67 g (89.3%).
7H BMR (CDC13): δ 7 H NMR (CDCl 3 ): δ
1.34 (s, 6H), 1.64 (pi s, 4H), 1.72-1.84 (m, 2H), 1.992.08 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.71 (s, 6H), 3.80 (m, 2H).1.34 (s, 6H), 1.64 (pi s, 4H), 1.72-1.84 (m, 2H), 1.992.08 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.71 (s, 6H), 3.80 (m) , 2H).
13C BMR (CDC13):6 13 C NMR (CDCl 3 ): 6
27.17, 37.54, 52.04, 52.74, 78.78, 108.99, 175.51.27.17, 37.54, 52.04, 52.74, 78.78, 108.99, 175.51.
c) (2S,4R,5R,7S)-2,7-Diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,0-izopropilidenoktandikarboksirūgštisc) (2S, 4R, 5R, 7S) -2,7-Diamino-4,5-dihydroxy-4,5-0,0-isopropylideneoctandicarboxylic acid
Dimetilo diesteris iš b) stadijos (0.62 g, 2.04 mmol) ištirpintas 2.5 ml dioksano ir pridėta 2.1 ml 2N LiOH tirpalo vandenyje (4.1 mmol), ir tirpalas maišomas argono atmosferoje per naktį. PSC parodė kiekybinį pavadinimo junginio susidarymą. Nevalytas reakcijos tirpalas buvo panaudotas kitoje stadijoje.The dimethyl diester from step b) (0.62 g, 2.04 mmol) was dissolved in 2.5 mL of dioxane and 2.1 mL of 2N LiOH in water (4.1 mmol) was added and the solution was stirred under argon overnight. PSC showed quantitative formation of the title compound. The crude reaction solution was used in the next step.
d) (2S,4R,5R,7S)-2,7-Bis(9-fluorenilmetiloksikarbonilamino)-4,5-dihidroksi-4,5-0,0-izopropilidenoktandikarboksirūgštisd) (2S, 4R, 5R, 7S) -2,7-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylamino) -4,5-dihydroxy-4,5-0,0-isopropylideneoctandicarboxylic acid
Nevalytas (2S,4R,5R,7S)-2,7-diamino-4,5-dihidroksi-4,535 0,O-izopropilidenoktandikarboksirūgšties (2.04 mmol) tirpalas atšaldytas iki 0°C ir pridėta 10 ml dioksano bei IN NaOH (10 mmol) tirpalo. Tada pridėta 2.07 gThe crude solution of (2S, 4R, 5R, 7S) -2,7-diamino-4,5-dihydroxy-4,535, O-isopropylideneoctanedicarboxylic acid (2.04 mmol) was cooled to 0 ° C and 10 mL of dioxane and 1N NaOH (10 mmol) were added. ) solution. Then 2.07 g was added
K ι , .ui·.K ι, .ui ·.
FmocCl (8.0 mmol) maišomas, esant 0°C, per naktį. Mišinys mažomis porcijomis, ir mišinys 5 valandas kambario temperatūroje ekstrahuotas dietilo eteriu ir parūgštintas, pridedant KHSO4.FmocCl (8.0 mmol) was stirred at 0 ° C overnight. The mixture was small portions and the mixture was extracted with diethyl ether for 5 hours at room temperature and acidified by addition of KHSO 4 .
Iš ekstrahavus C'HC13, organinis sluoksnis išdžiovintas (MgSO4) , tirpiklis pašalintas. Nesureagavusio FmocCl perteklius atskirtas filtracija ant silikagelio acetonu/MeOH, ir likutis buvo išgrynintas, nusodinant iš CHCl3/EtOEt.The extraction C'HC1 3 and the organic layer was dried (MgSO 4) and solvent removed. The excess unreacted FmocCl was isolated by filtration on silica gel with acetone / MeOH and the residue was purified by precipitation from CHCl 3 / EtOEt.
Išeiga: 0.49 g (33.6 %)Yield: 0.49 g (33.6%)
BMR (DMSO/D2O) δ:NMR (DMSO / D 2 O) δ:
1.20 (s, 6H), 1.73 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 3.87 (m, 2H) , 4.14-4.2Φ (m, 6H) , 7.23-7.82 m, 16H) .1.20 (s, 6H), 1.73 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 3.87 (m, 2H), 4.14-4.2Φ (m, 6H), 7.23-7.82 m, 16H).
13C BMR (DMSO) δ: 13 C NMR (DMSO) δ:
27.78, 36.21, 47.27, 53.75, 66.19, 78.82, 107.89, 120.67, 125.81, 127.76, 128.32, 141.24, 144.39, 156.12, 175.96.27.78, 36.21, 47.27, 53.75, 66.19, 78.82, 107.89, 120.67, 125.81, 127.76, 128.32, 141.24, 144.39, 156.12, 175.96.
FAB-MS signalas prie m/z 563.2(2), 179.1 (100)FAB-MS signal at m / z 563.2 (2), 179.1 (100)
C41H40N2O10 (720): Pask.: N, 3.89C 41 H 40 N 2 O 10 (720): Last: N, 3.89
Rasta: N, 3.81.Found: N, 3.81.
PAVYZDYS (2S,4S,5S,7S)-2,7-Diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,0izopropilidenoktandikarboksirūgštisEXAMPLE (2S, 4S, 5S, 7S) -2,7-Diamino-4,5-dihydroxy-4,5-0,0-isopropylideneoctandicarboxylic acid
a) (2S,3S)-1,4-Bis((2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropiIa) (2S, 3S) -1,4-Bis ((2R, 5S) -3,6-dimethoxy-2-isopropyl)
2,5-dihidro-5-pirazinil)-2,3-dihidroksi-2,3-0,O-izopr pilidenbutanas ιι .11 (2R)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (9.59 g, 52.1 mmol) ištirpintas bevandeniame THF, ir tirpalas atšaldytas iki -78°C. Buvo pridėta BuLi tirpalo heksane (52 mmol, 32.5 ml) . Po 60 minučių, esant -78°C, lašinant pridėta (2S,3S)-1,4-dibrom-2,3-dihidroksi-2,3-0,O-izopropilideno-butano (6.0 g, 20.83 mmol) tirpalo 10-tyje ml THF, .ir tirpalas įgijo kambario temperatūrą per naktį, bei buvo maišomas dar 24 valandas. Po hidrolizės fosfato buferiu (pH 7), mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu, o organinis sluoksnis plautas vandeniu bei sūrymu. Po išdžiovinimo (MgSO4) , tirpiklis išgarintas, o likutis išgrynintas pakartotinu kristalizavimu iš MeCN.2,5-Dihydro-5-pyrazinyl) -2,3-dihydroxy-2,3-O, O-isopropylidene butane ιι .11 (2R) -2,5-Dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropylpyrazine ( 9.59 g, 52.1 mmol) was dissolved in anhydrous THF and the solution was cooled to -78 ° C. BuLi solution in hexane (52 mmol, 32.5 mL) was added. After 60 minutes at -78 ° C, a solution of (2S, 3S) -1,4-dibromo-2,3-dihydroxy-2,3-O, O-isopropylidene-butane (6.0 g, 20.83 mmol) was added dropwise 10 and the solution reached room temperature overnight and stirred for an additional 24 hours. After hydrolysis with phosphate buffer (pH 7), the mixture was extracted with diethyl ether and the organic layer was washed with water and brine. After drying (MgSO 4 ), the solvent was evaporated and the residue was purified by recrystallization from MeCN.
Išeiga: 3.43 g (33.3 %Yield: 3.43 g (33.3%)
FAB-MS signalas prie m/z 495.4(53), 253.2(40),FAB-MS signal at m / z 495.4 (53), 253.2 (40),
197.2(58), 141.1(100)197.2 (58), 141.1 (100)
C25H42N4O (494) :C 25 H 42 N 4 O (494):
Pask. %: C, 60.71; H, 8.56; N, 11.33Shit. %: C, 60.71; H, 8.56; N, 11.33
Rasta %: C, 60.89; H, 8.42; N, 11.45.Found: C, 60.89; H, 8.42; N, 11.45.
I !. IHJ·I!. IHJ ·
b) (2R,4S,5S,7S)-2,7-Dramino-4,5-dihidroksi-4,5-0,0-izopropilidenoktandikarboksirūgšties dimetilo diesteris (2S,3S)-1,4-Bis((2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil-2,5dihidro-5-pirazinil)-2,3-dihidroksi-2,3-0,0-izopropilidenbutanas (2.5 g, 5.06 mmol) ištirpintas 40-tyje ml dioksano. Buvo pridėta 20.0 mmol HC1 tirpalo 40-tyje ml vandens, ir tirpalas maišomas kambario temperatūroje per naktį. Tirpikliai pašalinti, likutis ištirpintas vandenyje ir ekstrahuotas dietilo eteriu. į vandeninį sluoksnį pridėta amoniako, kol buvo pasiektas pH 9, ir šis sluoksnis ekstrahuotas chloroformu. Po išdžiovinimo (MgSOJ , tirpiklis atskirtas ir valino metilo esteris nudistiliuotas (30-40°C, 0.04 torų).b) (2S, 3S) -1,4-Bis ((2R, 4S, 5S, 7S) -2,7-Dramino-4,5-dihydroxy-4,5-0,0-isopropylideneoctanedicarboxylic acid dimethyl diester) 5S) -3,6-Dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl) -2,3-dihydroxy-2,3-0,0-isopropylidenebutane (2.5 g, 5.06 mmol) was dissolved in 40 mL of dioxane . 20.0 mmol of HCl solution in 40 mL of water was added and the solution was stirred at room temperature overnight. The solvents were removed, the residue was dissolved in water and extracted with diethyl ether. ammonia was added to the aqueous layer until pH 9 was reached and this layer was extracted with chloroform. After drying (MgSO4, solvent removed and valine methyl ester distilled (30-40 ° C, 0.04 torr).
Išeiga: 1.507 g (98.0 %).Yield: 1.507 g (98.0%).
hl BMR (CBC13) δ:hl NMR (CBC1 3) δ:
1.32 (s,6H), 1.53 (br s,4H) 1.60-1.68 (m,2H), 1.85-1.94 (m,2H), 3.63 (m,2H), 3.67 (s,6H), 3.80 (m,2H).1.32 (s, 6H), 1.53 (br s, 4H) 1.60-1.68 (m, 2H), 1.85-1.94 (m, 2H), 3.63 (m, 2H), 3.67 (s, 6H), 3.80 (m, 2H).
13C BMR (CDC13) δ: 13 C NMR (CDCl 3 ) δ:
27.25, 37.20, 51.96, 52.74, 77.58, 108.80, 176.10.27.25, 37.20, 51.96, 52.74, 77.58, 108.80, 176.10.
c) (2S,4S,5S,7S)-2,7-Diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,0-izopropilideno-oktandikarboksirūgštisc) (2S, 4S, 5S, 7S) -2,7-Diamino-4,5-dihydroxy-4,5-0,0-isopropylideno-octanedicarboxylic acid
Dimetilo diesteris iš b) stadijų (1.51 g, 4.96 mmol) ištirpintas 5-iuose ml dioksano, buvo pridėta 4.95 ml 2N LiOH tirpalo vandenyje (9.91 mmol), ir tirpalas maišomas argono atmosferoje per naktį. PSC parodė kiekybinį (2S, 4S, 5S, 7S)-2,7-diamino-4,5-dihidroksi-4,50,0-izopropilidenoktandikarboksirūgšties susidarymą. Nevalytas tirpalas buvo panaudotas kitoje stadijoje.The dimethyl diester from steps b) (1.51 g, 4.96 mmol) was dissolved in 5 mL of dioxane, 4.95 mL of 2N LiOH in water (9.91 mmol) was added and the solution was stirred under argon overnight. PSC showed quantitative formation of (2S, 4S, 5S, 7S) -2,7-diamino-4,5-dihydroxy-4,50,0-isopropylideneoctandicarboxylic acid. The crude solution was used in the next step.
.11.11
d) (2S,4S,5S,7S)-2,7-Bis(9-fluorenilmetiloksikarbonilamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,O-izopropilidenoktandikarboksirūgštis (2S,4S,5S,7S)-2,7-diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,0-izopropilidenoktandioinės rūgšties nevalytas tirpalas (4.96 mmol) atšaldytas iki 0°C ir pridėta 16 ml 1 N NaOH tirpalo (16 mmol). Tada mažomis porcijomis pridėta 3.89 g FmocCl (15.0 mmol) tirpalo 16-yje ml dioksano, ir mišinys maišomas kambario temperatūroje 90 minučių. Tirpalas parūgštinamas, pridedant KHSO4. Po ekstrahavimo CHC13, organinis sluoksnis išdžiovintas (MgSO4) , tirpiklis pašalintas. Likučio mėginys išgrynintas impulsine chromatografija (heksanas/etilo acetatas/acto rūgštis 5/5/1) .d) (2S, 4S, 5S, 7S) -2,7-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylamino-4,5-dihydroxy-4,5-O, O-isopropylideneoctandicarboxylic acid (2S, 4S, 5S, 7S) -2.7 The crude solution of -diamino-4,5-dihydroxy-4,5-0,0-isopropylideneoctandioic acid (4.96 mmol) was cooled to 0 ° C and 16 mL of 1 N NaOH solution (16 mmol) was added, followed by small portions of 3.89 g of FmocCl. (15.0 mmol) in 16 mL of dioxane and the mixture was stirred at room temperature for 90 min. The solution was acidified by addition of KHSO 4. After extraction with CHCl 3 , the organic layer was dried (MgSO 4 ), the solvent removed and the residue purified by flash chromatography (hexane / ethyl acetate / acetic acid 5/5/1).
Išeiga: 1.69 (46%).Yield: 1.69 (46%).
XH BMR (DMSO/D2O) δ: 1 H NMR (DMSO / D 2 O) δ:
1.23 (s,6H), 1.7-2.0 (m,4H) , 3.62 (m,2H), 4.02 (m,2H),1.23 (s, 6H), 1.7-2.0 (m, 4H), 3.62 (m, 2H), 4.02 (m, 2H),
4.1-4.35 (m,6H), 7.2-7.9 (m,16H).4.1-4.35 (m, 6H), 7.2-7.9 (m, 16H).
13C BMR (DMSO) δ: 13 C NMR (DMSO) δ:
27.94, 34.59, 47.39, 52.29, 66.45, 77.49, 109.13, 120.90, 125.91, 127.97, 128.59, 141.44, 144.44, 157.02, 174.75.27.94, 34.59, 47.39, 52.29, 66.45, 77.49, 109.13, 120.90, 125.91, 127.97, 128.59, 141.44, 144.44, 157.02, 174.75.
FAB-MS signalas prie m/z 743.3(28), 563.2(58),FAB-MS signal at m / z 743.3 (28), 563.2 (58),
502.2 (72) .502.2 (72).
C41H40N2O10 (720) :C 41 H 40 N 2 O 10 (720):
Pask. %: N, 3.89.Shit. %: N, 3.89.
Rasta %: N, 4.09.Found: N, 4.09.
I L iumI L ium
PAVYZDYS (2S,4R,5S,7S)-2,7-Diamino-4,5-dihidroksi-4,5-izopropilidenoktandikarboksirūgštisEXAMPLE (2S, 4R, 5S, 7S) -2,7-Diamino-4,5-dihydroxy-4,5-isopropylideneoctandicarboxylic acid
a) (2R,3S)-1,4-Bis[(2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropil2,5-dihidro-5-pirazinil]-2,3-dihidroksi-2,3-0,0-izopropilidenobutanas (2R)-2,5-dihidro-3, 5-dimetoksi-2-izopropilpirazinas (6.08 g, 33.0 mmol) ištirpintas bevandeniame THF, ir tirpalas atšaldytas iki -78°C. Buvo pridėta BuLi tirpalo heksane (33.0 mmol, 20.6 ml). Po 45 minučių, esant -78°C, lašinant pridėta (2R,3S)-1,4-dibromo-2,3dihidroksi-2,3-0-izopropilidenobutano (4.52 g 15.7 mmol) tirpalo 10-tyje ml THF. Per naktį tirpalas įgavo kambario temperatūrą bei buvo maišomas dar 24 valandas. Po hidrolizes fosfato buferiu (pH 7), mišinys ekstrahuotas dietilo eteriu, o organinis sluoksnis plautas vandeniu ir sūrymu. Po išdžiovinimo (MgSCų) , tirpiklis išgarintas ir likutis išgrynintas impulsine chromatografija (heksanas/etilo acetatas 9/1).a) (2R, 3S) -1,4-Bis [(2R, 5S) -3,6-dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl] -2,3-dihydroxy-2,3-0 , 0-Isopropylidenobutane (2R) -2,5-dihydro-3,5-dimethoxy-2-isopropylpyrazine (6.08 g, 33.0 mmol) was dissolved in anhydrous THF and the solution was cooled to -78 ° C. BuLi solution in hexane (33.0 mmol, 20.6 mL) was added. After 45 minutes at -78 ° C, a solution of (2R, 3S) -1,4-dibromo-2,3-dihydroxy-2,3-O-isopropylidenobutane (4.52 g, 15.7 mmol) in 10 mL of THF was added dropwise. The solution was brought to room temperature overnight and stirred for an additional 24 hours. After hydrolysis with phosphate buffer (pH 7), the mixture was extracted with diethyl ether and the organic layer was washed with water and brine. After drying (MgSO 4), the solvent was evaporated and the residue was purified by flash chromatography (hexane / ethyl acetate 9/1).
Išeiga: 0.77 g (10 %).Yield: 0.77 g (10%).
XH BMR (CDC13) δ: 1 H NMR (CDCl 3 ) δ:
0.68 (m,6H), 1.03 (m, 6H) , 1.32 (s,3H), 1.45 (s,3H),0.68 (m, 6H), 1.03 (m, 6H), 1.32 (s, 3H), 1.45 (s, 3H),
1.30-1.55 (m,lH), 1.85-2.30 (m,5H), 3.62 (s,3H), 3.66 (s,3H), 3.68 (s, 6H), 3.92 (m,2H), 4.06-4.26 (m,3H),1.30-1.55 (m, 1H), 1.85-2.30 (m, 5H), 3.62 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.68 (s, 6H), 3.92 (m, 2H), 4.06-4.26 ( m, 3H),
4.45 (m,1H).4.45 (m, 1H).
13C BMR (CDC13) δ: 13 C NMR (CDCl 3 ) δ:
16.62, 16.77, 19.04, 19.08, 26.20, 28.49, 31.71, 31.91, 33.69, 35.07, 52.21, 52.27, 52.32, 52.35, 52.40, 52.98, „!,E16.62, 16.77, 19.04, 19.08, 26.20, 28.49, 31.71, 31.91, 33.69, 35.07, 52.21, 52.27, 52.32, 52.35, 52.40, 52.98, "!, E
60.58, 60.80, 74.31, 74.66, 107.16, 163.03, 163.40,60.58, 60.80, 74.31, 74.66, 107.16, 163.03, 163.40,
163.91, 164.30.163.91, 164.30.
b) (2S,4R,5S,7S)-2,7-Diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,0-izopropilidenoktanodikarboksirūgšties dimetilo diesteris (2R,3S)-1,4-Bis((2R,5S)-3,6-dimetoksi-2-izopropii-2,5dihidro-5-pirazinil)-2,3-dihidroksi-2,3-0,0-izopropilidenbutanas (0.77 g, 1.55 mmol) ištirpintas 12-oje ml dioksano. Buvo pridėta 6.0 mmol HCl tirpalo 12-oje ml vandens, ir tirpalas maišomas kambario temperatūroje 5 valandas. Buvo pridėta amoniako, kol pasiektas pH 9, ir tirpalas ekstrahuotas chloroformu. Po išdžiovinimo (MgSO4) , tirpiklis pašalintas ir valino metilo esterisb) Dimethyl diester of (2S, 4R, 5S, 7S) -2,7-diamino-4,5-dihydroxy-4,5-0,0-isopropylidenectanodicarboxylic acid (2R, 3S) -1,4-Bis ((2R, 5S) -3,6-Dimethoxy-2-isopropyl-2,5-dihydro-5-pyrazinyl) -2,3-dihydroxy-2,3-0,0-isopropylidenebutane (0.77 g, 1.55 mmol) was dissolved in 12 mL of dioxane . 6.0 mmol HCl in 12 mL water was added and the solution was stirred at room temperature for 5 hours. Ammonia was added until pH 9 was reached and the solution was extracted with chloroform. After drying (MgSO 4 ), the solvent was removed and the valine methyl ester was removed
74.26, 75.20, 108.23, 175.43, 176.51.74.26, 75.20, 108.23, 175.43, 176.51.
c) (2S,4R,5S,7S)-2,7-Diamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,0-izopropilidenoktandikarboksirūgštisc) (2S, 4R, 5S, 7S) -2,7-Diamino-4,5-dihydroxy-4,5-0,0-isopropylideneoctandicarboxylic acid
Dimetilo diesteris iš b) stadijos (0.36 g, 1.19 mmol) ištirpintas 5-iuose ml dioksano, pridėta 1.19 ml 2 NThe dimethyl diester from step b) (0.36 g, 1.19 mmol) was dissolved in 5 mL of dioxane, and 1.19 mL of 2 N was added.
LiOH tirpalo vandenyje (2.38 mmol), ir tirpalas maišomas argono atmosferoje per naktį. PSC kontrolė parodė kiekybinį (2S,4R,5S,7S)-2,7-diamino-4,5-dihidroksi-4,5I L 1111·.LiOH solution in water (2.38 mmol) and the solution was stirred under argon overnight. PSC control showed quantitative (2S, 4R, 5S, 7S) -2,7-diamino-4,5-dihydroxy-4,5I L 1111 ·.
0,O-izopropilidenoktandioinės rūgšties susidarymą. Žalias reakcijos tirpalas panaudotas kitoje stadijoje.0, O-isopropylideneoctandioic acid. The crude reaction solution was used in the next step.
d) (2S,4R,5S,7S)-2,7-Bis(9-fluorenilmetiloksikarbonilamino-4,5-dihidroksi-4,5-0,O-izopropilidenoktandikarboksirūgštisd) (2S, 4R, 5S, 7S) -2,7-Bis (9-Fluorenylmethyloxycarbonylamino-4,5-dihydroxy-4,5-O, O-isopropylideneoctandicarboxylic acid
Nevalytas (2S,4R,5S,7S)-2,7-diamino-4,5-dihidroksi-4,50,O-izopropilidenoktandikarboksirūgšties tirpalas (1.19 mmol) atšaldytas iki 0°C ir pridėta 4.0 ml 1 N NaHC03 tirpalo (4.0 mmol). Tada mažomis porcijomis pridėta 1.03 g FmocCl (4.0 mmol) tirpalo 4-iuose ml dioksano ir mišinys maišomas kambario temperatūroje 60 minučių. Tirpalas parūgštintas, pridedant KHSO4. Po ekstrahavimo CHC13, organinis sluoksnis išdžiovintas (MgSO4) ir tirpiklis pašalintas. Likutis išgrynintas impulsine chromatografija, (heksanas/etilo acetatas/acto rūgštis 5/5/1).The crude solution of (2S, 4R, 5S, 7S) -2,7-diamino-4,5-dihydroxy-4,50, O-isopropylideneoctanedicarboxylic acid (1.19 mmol) was cooled to 0 ° C and 4.0 mL of 1 N NaHCO 3 was added ( 4.0 mmol). Then 1.03 g of a solution of FmocCl (4.0 mmol) in 4 ml of dioxane was added in small portions and the mixture was stirred at room temperature for 60 minutes. The solution was acidified by addition of KHSO 4 . After extraction with CHCl 3 , the organic layer was dried (MgSO 4 ) and the solvent removed. The residue was purified by flash chromatography (hexane / ethyl acetate / acetic acid 5/5/1).
Išeiga: 0.566 (66 %).Yield: 0.566 (66%).
2H BMR (DMSO, D2O) δ: 2 H NMR (DMSO, D 2 O) δ:
1.16 (s,3H), 1.30 (s, 3H), 1.50-2.05 (m,4H), 3.80-4.40 (m,8H), 7.15-8.0 (m,16H).1.16 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.50-2.05 (m, 4H), 3.80-4.40 (m, 8H), 7.15-8.0 (m, 16H).
uu
PAVYZDYS (S,S)-2,6-Diamino-4-oksaheptandikarboksirūgštisEXAMPLE (S, S) -2,6-Diamino-4-oxaheptandicarboxylic acid
a) Bis[(2R,5S)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropil-5pirazinil]metilo eterisa) Bis [(2R, 5S) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropyl-5-pyrazinyl] methyl ether
Butillitis heksane (1.6 M, 6.25 ml, 10 mmol) pridėtas į (2R)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropilpirazino (1.84 g, 10.0 mmol) tirpalą sausame THF (8 ml), esant -78°C. Mišinys maišomas 15 minučių. Buvo pridėta bis(chlormetil)eterio (0.67 g, 5.0 mmol) tirpalo sausame THF (2 ml) . Reakcijos mišiniui leista įgyti kambario temperatūrą per naktį. Tirpiklis išgarintas, o likutis užpiltas dietilo eteriu. Eterio tirpalas plautas vandeniu, išdžiovintas (MgSOJ ir išgarintas. Produktas išgrynintas chromatografija (silikagelis, heksanas/etilo acetatas 2:1).Butylitis in hexane (1.6 M, 6.25 mL, 10 mmol) was added to a solution of (2R) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropylpyrazine (1.84 g, 10.0 mmol) in dry THF (8 mL) in the presence of - 78 ° C. The mixture is stirred for 15 minutes. A solution of bis (chloromethyl) ether (0.67 g, 5.0 mmol) in dry THF (2 mL) was added. The reaction mixture was allowed to reach room temperature overnight. The solvent was evaporated and the residue was taken up in diethyl ether. The ether solution was washed with water, dried (MgSO4 and evaporated. The product was purified by chromatography (silica gel, hexane / ethyl acetate 2: 1)).
Išeiga: 0.65 g (32 %), gelton JH BMR (300 MHz, CDC13) δ:Yield: 0.65 g (32%), the yellow J H NMR (300 MHz, CDC1 3) δ:
s aliejus.s oil.
2.25 (2H, m), 3.58 (2H,2.25 (2H, m), 3.58 (2H,
s), 3.76 (2H, dd) , 3.83s), 3.76 (2H, dd), 3.83
16.4, 19.1, 30.1, 52.1, 52.2,16.4, 19.1, 30.1, 52.1, 52.2,
165.0.165.0.
56.9, 60.3, 72.5, 161.0,56.9, 60.3, 72.5, 161.0,
b) (S,S)-2,6-Diamino-4-oksaheptandikarboksirūgšties dimetilo diesterisb) Dimethyl diester of (S, S) -2,6-diamino-4-oxaheptandicarboxylic acid
Bis[ (2R,5S)-2,5-dihidro-3,6-dimetoksi-2-izopropil-5-pirazinil] metilo eteris (0.65 g, 1.49 mmol) ištirpintasBis [(2R, 5S) -2,5-dihydro-3,6-dimethoxy-2-isopropyl-5-pyrazinyl] methyl ether (0.65 g, 1.49 mmol) was dissolved
I ui metanolyje (5 ml), ir pridėta 0.25 M hidrochloro rūgšties (23.8 ml, 5.96 mmol). Mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį. Vandens/metanolio tirpalas ekstrahuotas dietilo eteriu. Tada pH sureguliuotas iki pH 10, pridedant amoniako, ir D-valino metilo esteris ekstrahuotas eteriu. Didžioji vandens dalis išgarinta. Likutis buvo naudojamas kitoje stadijoje be tolesnio gryninimo.1 L methanol (5 mL) and 0.25 M hydrochloric acid (23.8 mL, 5.96 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature overnight. The water / methanol solution was extracted with diethyl ether. The pH was then adjusted to pH 10 by the addition of ammonia and the D-valine methyl ester extracted with ether. Most of the water is evaporated. The residue was used in the next step without further purification.
BMR (300 MHz, DMSO-d6) δ:NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ:
3.72 (6H, s), 3.85 (4H, m), 4.23 (2H, t).3.72 (6H, s), 3.85 (4H, m), 4.23 (2H, t).
13C BMR (75 MHz, CDC13) δ: 13 C NMR (75 MHz, CDCl 3 ) δ:
52.8, 53.2, 68.9, 168.4.52.8, 53.2, 68.9, 168.4.
c) (S,S)-2,6-Diarttino~4-oksahepfcandikarboksirūgštis · 2HC1c) (S, S) -2,6-Diarttino ~ 4-oxa-hepcandicarboxylic acid · 2HCl
Dimetilo esteris, aprašytas aukščiau, deflegmuojamas 6M hidrochloro rūgštyje (5 ml) 3 valandas. Tirpalas išgarintas ir išdžiovintas užšaldant.The dimethyl ester described above is deflegmated in 6M hydrochloric acid (5 mL) for 3 hours. The solution was evaporated and freeze-dried.
Išeiga: 420 mg baltos kietos medžiagos.Yield: 420 mg of white solid.
3K BMR (300 MHz, D2O) δ: 3 K NMR (300 MHz, D 2 O) δ:
3.87 (2H, dd, J 10.8 Hz, J 3.2 Hz), 3.95 (2H, dd, J3.87 (2H, dd, J 10.8 Hz, J 3.2 Hz), 3.95 (2H, dd, J
10.8 Hz J 4.6 Hz), 4.13 (2H, dd J 3.2 ir 4.6 Hz).10.8 Hz J 4.6 Hz), 4.13 (2H, dd J 3.2 and 4.6 Hz).
13C BMR (75 MHz, CDC13) δ: 13 C NMR (75 MHz, CDCl 3 ) δ:
53.4, 68.40, 170.3.53.4, 68.40, 170.3.
uu
JI !JI!
d) (S,S)-2,6-Bis[(9-fluorenilmetoksikarbonil)amino]-4oksaheptandikarboksirūgštis (5 ml) . Tir9-fluorenilReakcija buvo atliekama azoto atmosferoje. (S,S)-2,6diamino-4-oksaheptandioinės rūgšties dihidrochlorido (200 μς, 0.75 mmol) suspensija heksametildisilazane (10 ml) ir chlorotrimetilsilane (1 ml) šildoma, esant 120°C, tris valandas ir gautas skaidrus tirpalas. Sililinančių reagentų perteklius atskirtas vakuume, o likutis ištirpintas sausame dichlormetane palas atšaldytas iki 0°C ir pridėta chloroformiato (425 mg, 1.65 mmol) tirpalo sausame dichlormetane (2 ml). Mišinys maišomas 2 valandas ir tada išgarintas. Likutis užpiltas THF (5 ml), ir pridėta 1 ml 0.1 M hidrochloro rūgšties. Mišinys maišomas 15 minučių ir tada išgarintas. Likutis užpiltas etilo acetatu. Organinė fazė plauta vandeniu, išdžiovinta (MgSO4) ir išgarinta. Produktas išgrynintas kolonėlės chromatografija (silicio dioksidas, chloroformas/ metanolis/ acto rūgštis 85:10:5).d) (S, S) -2,6-Bis [(9-fluorenylmethoxycarbonyl) amino] -4-oxaheptanedicarboxylic acid (5 mL). Tir9-fluorenylReaction was carried out under a nitrogen atmosphere. A suspension of (S, S) -2,6-diamino-4-oxa-heptanedioic acid dihydrochloride (200 μς, 0.75 mmol) in hexamethyldisilazane (10 mL) and chlorotrimethylsilane (1 mL) was heated at 120 ° C for three hours to give a clear solution. The excess of silylating reagents was removed in vacuo and the residue was dissolved in dry dichloromethane, cooled to 0 ° C, and a solution of chloroformate (425 mg, 1.65 mmol) in dry dichloromethane (2 mL) was added. The mixture was stirred for 2 hours and then evaporated. The residue was taken up in THF (5 mL) and 1 mL of 0.1 M hydrochloric acid was added. The mixture was stirred for 15 minutes and then evaporated. The residue was taken up in ethyl acetate. The organic phase was washed with water, dried (MgSO 4 ) and evaporated. The product was purified by column chromatography (silica, chloroform / methanol / acetic acid 85: 10: 5).
Išeiga: 310 mg (65 %), balta kieta medžiaga.Yield: 310 mg (65%) as a white solid.
XH BMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ:
3.7 (4H, m), 4.1 (2H, m), 4.25 (6H, m), 7.2-7.4 (10H,3.7 (4H, m), 4.1 (2H, m), 4.25 (6H, m), 7.2-7.4 (10H,
m) , 7.7 (4H, d) , 7.8 (4H, d) .m), 7.7 (4H, d), 7.8 (4H, d).
PAVYZDYS (S,S)-2,7-Diamino-4-azaoktandikarboksirūgštisEXAMPLE (S, S) -2,7-Diamino-4-azaoctandicarboxylic acid
a) (S,S)-2,7-Bis(tret-butiloksikarbonilamino)-4-azaoktandikarboks irūgš ti s (S)-4-Amino-2-tret-butiloksikarbonilamino sviesto rūgšties (1.03 g, 4.70 mmol) tirpalas acetonitrile (50 ml) .11 pridėtas į (S)-boc-serino-p-laktono (0.8 g, 4.27 mmol) tirpalą acetonitrile (50 ml) ir degazuotame HZO. Reakcijos terpės pH palaikomas apie 5,5 lašinant 1 M NaHCO3 ir maišant. Mišinys buvo maišomas 5 dienas kambario temperatūroje. pH buvo reguliuojamas, pridedant NaHCO3, ir reakcija valdoma PSC. Tirpikliai nudistiliuoti, likutis sutrintas į miltelius su chloroformu (5 ml), į kurį pridėta acto rūgšties, kad būtų gautas pH 5. Chloroformo tirpalas išgarintas, o produktas atskirtas chromatografija ant silikagelio ((CHCI3: MeOH 2:1).a) A solution of (S, S) -2,7-Bis (tert-butyloxycarbonylamino) -4-azaoctandicarboxylic acid (S) -4-amino-2-tert-butyloxycarbonylamino butyric acid (1.03 g, 4.70 mmol) in acetonitrile ( 50 ml) was added to a .11 (S) -boc-serine-p-lactone (0.8 g, 27.4 mmol) in acetonitrile (50 ml) and degassed solution of H z O. the reaction medium pH was adjusted to 5.5 dropwise with 1 M NaHCO 3 and stirring. The mixture was stirred for 5 days at room temperature. The pH was adjusted by addition of NaHCO 3 and the reaction was controlled by PSC. Nudistiliuoti solvents, the residue is pulverized with chloroform (5 ml), to which acetic acid was added to obtain pH 5. The chloroform solution was evaporated and the product was separated by chromatography on silica gel ((CHCl 3: MeOH 2: 1).
Išeiga: 0.92 g (53 %) baltos kietos medžiagos.Yield: 0.92 g (53%) of a white solid.
BMR (DMSO-d6, 300 MHz): 6NMR (DMSO-d 6, 300 MHz): 6
7.33 (d, J 6.3 Hz; 1H) , 6.27 (d, J 5.7 Hz; 1 H), 4.42 (d, J 7.5 Hz; 1 K), 4.15 (dd, Ji 10.5 Hz, J2 3.9 Hz; 1 H), 4.01 (d, J 6.3 Hz; 1H), 3.87 (pi s; 1 H), 2.78 (pi s;l H), 1.78-2.21 (m; 4H), 1.36 ir 1.35 (2 s; 18 H).7.33 (d, J 6.3 Hz; 1H), 6.27 (d, J 5.7 Hz, 1H), 4.42 (d, J 7.5 Hz, 1 K), 4.15 (dd, J i 10.5 Hz, J 2 3.9 Hz, 1H) ), 4.01 (d, J 6.3 Hz; 1H), 3.87 (pi s; 1H), 2.78 (pi s; 1H), 1.78-2.21 (m; 4H), 1.36 and 1.35 (2 s; 18 H) .
13C NMR {DMSO-d6, 75.43 MHz): δ13C NMR {DMSO-d 6, 75.43 MHz): δ
174.95, 155.74, 155.25, 79.58, 78.22, 78.04, 62.97,174.95, 155.74, 155.25, 79.58, 78.22, 78.04, 62.97,
56.42, 56.00, 51.17, 48.99, 38.14, 28.62, 28.46.56.42, 56.00, 51.17, 48.99, 38.14, 28.62, 28.46.
C17H31N3Os (405.45).C 17 H 31 N 3 O s (405.45).
b) (S,S)-2,7-Bis(tret-butiloksikarbonilamino)-4-(benziloksikarbonil)-4-azaoktandikarboksirūgštisb) (S, S) -2,7-Bis (tert-Butyloxycarbonylamino) -4- (benzyloxycarbonyl) -4-azaoctandicarboxylic acid
M NaHCO3 (5.9 ml, 5.92 mmol) ir benziloksikarbonilo chloridas (0.5 g, 0.42 ml, 2.96 mmol) pridėtas į (S,S)2,7-bis(tret-butiloksikarbcnilamino)-4-azaoktandikarboksirūgšties (0.6 g, 1.48 mmol) tirpalą dioksane (40 ml) ir H2O (30 ml), esant 0°C. Mišinys buvo maišomas, esant 0°C, tris valandas kambario temperatūroje - 6 valandas, išgarintas, likutis sutrintas į miltelius su chlon i .iu roformu (5 ml) ir acto rūgštimi iki pH 5. Chloroformo tirpalas išgarintas, o produktas atskirtas chromatografija ant silikagelio (CHCl3:MeOH 4:1).M NaHCO 3 (5.9 mL, 5.92 mmol) and benzyloxycarbonyl chloride (0.5 g, 0.42 mL, 2.96 mmol) were added to (S, S) 2,7-bis (tert-butyloxycarbonylamino) -4-azaoctanedicarboxylic acid (0.6 g, 1.48 mmol) ) in dioxane (40 mL) and H 2 O (30 mL) at 0 ° C. The mixture was stirred at 0 ° C for 3 hours at room temperature for 6 hours, evaporated, and the residue triturated with chloroform (5 ml) and acetic acid to pH 5. The chloroform solution was evaporated and the product was separated by chromatography on silica gel. (CHCl 3 : MeOH 4: 1).
Išeiga: 0.39 g (50 %) baltos kietos medžiagos.Yield: 0.39 g (50%) of a white solid.
XH BMR (DMSO-d6, 300 MHz): δ 1 H NMR (DMSO-d 6 , 300 MHz): δ
13C BMR (DMSO-d6, 75.43 MHz): δ 13 C NMR (DMSO-d 6 , 75.43 MHz): δ
177.42, 177.38, 161.20, 160.63, 160.16, 142.20, 133.48, 132.91, 132.78, 83.55, 83.14, 70.76, 70.40, 59.39,177.42, 177.38, 161.20, 160.63, 160.16, 142.20, 133.48, 132.91, 132.78, 83.55, 83.14, 70.76, 70.40, 59.39,
56.44, 53.61, 42.30, 36.01, 33.28.56.44, 53.61, 42.30, 36.01, 33.28.
C25H37N3O10 (539.58) .C25H37N3O10 (539.58).
c) (S,S)-2,7-Diamino-4-benziloksikarbonil-4-azaoktandikarboksirūgštis (S,S)-2,7-Bis(tret-butiloksikarbonilo)-4-benzoloksikarbonil-4-azaoktandikarboksirūgštis (0.29 g, 0.37 mmol) ištirpinta THF (10 ml), tirpalas maišomas kambario temperatūroje 2 valandas, ir TFA buvo nudistiliuotas, gautas pavadinimo junginys, kuris naudojamas kitoje stadijoje be tolesnio gryninimo.c) (S, S) -2,7-Diamino-4-benzyloxycarbonyl-4-azaoctanedicarboxylic acid (S, S) -2,7-Bis (tert-butyloxycarbonyl) -4-benzoloxycarbonyl-4-azaoctandicarboxylic acid (0.29 g, 0.37 g) mmol) dissolved in THF (10 mL), the solution was stirred at room temperature for 2 hours and TFA was distilled off to give the title compound which was used in the next step without further purification.
d) (S,S)-Benziloksikarbonil-2,7-bis(9-fluorenil-metoksi-karbonil)-4-azaoktandikarboksirūgštis (S, S)-2,7-Diamino-4-benziloksikarbonil-4-azaoktandikar~ boksirūgštis (0.2 g, 0.37 mmol) ištirpinta dioksane (10 ml) ir H2O (10 ml), pridėta 9-fluorenilmetilchloroformiato (0.29 g,d) (S, S) -Benzyloxycarbonyl-2,7-bis (9-fluorenyl-methoxycarbonyl) -4-azaoctandicarboxylic acid (S, S) -2,7-Diamino-4-benzyloxycarbonyl-4-azaoctandicarboxylic acid ( 0.2 g, 0.37 mmol) dissolved in dioxane (10 mL) and H 2 O (10 mL) were added 9-fluorenylmethyl chloroformate (0.29 g,
1.11 mmol) ir 1M NaHCO3 (2.96 ml, 2.96 mmol), maišant 0°C temperatūroje, ir maišymas tęsiamas 10 valandų kambario temperatūroje, po to tirpikliai nugarinti. Likusi kieta medžiaga buvo sutrinta į miltelius su chloroformu (5 ml), o pH buvo palaikomas apie 5, pridedant acto rūgšties. Tirpalas paskui išgarintas ir produktas atskirtas chromatografija ant silikagelio (AcOEt:heksanas:AcOH 10:10:1).1.11 mmol) and 1M NaHCO 3 (2.96 mL, 2.96 mmol) were stirred at 0 ° C and stirring was continued for 10 hours at room temperature, after which the solvents were evaporated. The remaining solid was triturated with chloroform (5 mL) and the pH was maintained at about 5 by the addition of acetic acid. The solution was then evaporated and the product was separated by chromatography on silica gel (AcOEt: hexane: AcOH 10: 10: 1).
Išeiga: 0.1 g (35 %) kaip balta medžiaga.Yield: 0.1 g (35%) as a white solid.
2H BMR (DMSO-dg, 300 MHz): δ 2 H NMR (DMSO-d 6, 300 MHz): δ
7.21-7.44, 7.61-7.91 (m, 22H), 6.88 (d, J 6.3 Hz; 1H),7.21-7.44, 7.61-7.91 (m, 22H), 6.88 (d, J 6.3 Hz, 1H),
4.96 (s, 2H), 4.56'(dd, J 10.8 Hz, J 3.3 Hz; 1H), 3.944.28 (m, 8H), 3.08 (d, J 5.7 Hz; 2H) , 1.86-1.98 (m,4.96 (s, 2H), 4.56 '(dd, J 10.8 Hz, J 3.3 Hz; 1H), 3.944.28 (m, 8H), 3.08 (d, J 5.7 Hz, 2H), 1.86-1.98 (m,
1H)., 1.69-1.82 (m; 1H) .1H)., 1.69-1.82 (m; 1H).
36.63, 37.74.36.63, 37.74.
C45H41N3O10 (783.83).C 45 H 41 N 3 O 10 (783.83).
IIII
:..11: .. 11
Kietos fazės peptidų sintezėSolid phase peptide synthesis
Kietos fazės peptido sintezė atliekama iš esmės pagal fluorenilmetoksi karbonilo (Fmoc)-poliamido sintezės principus (Atherton and Sheppard, Solid phase peptide synthesis: a practical approach, Oxford: IRL Press at Oxford University Press, 1989). Buvo panaudotos prekyboje turimos sintetinės dervos; periodine sinteze arba rankomis, arba naudojant pusiau automatinį prietaisą (Labortec Peptide Synthesizer 5P 650) jos buvo polistireno su rūgšties labilaus (Wang, J. Amer. Chem. Soc., 95, 1328-1333, 1973) arba rūgšties hiperlabilaus ryšio agentais (Merger et ai., Tetrahedron Letters 29, 4005-4008, 1988) . Alternatyviai, peptidai sukonstruoti visiškai automatiškai ant takių dervų (Atherton et ai., J. Chem. Soc.. Chem. Commun., 1151-2, 1981), panaudojant LKB Biolynx 4170 automatinį peptidų sintezatorių. Buvo įsigytos dervos, kurios jau turėjo apsaugotą reikalingą C-galinę Fmoc-aminorūgšties liekaną. Grandinės pailginimas pasiektas įvairiai su šoninės grandinės apsaugotais Fmoc-aminorūgšties pentafluorenilo esteriais (Kisfaludy and Schoen, Synthesis. 325-327,Solid phase peptide synthesis is performed essentially according to the principles of fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc)-polyamide synthesis (Atherton and Sheppard, Solid phase peptide synthesis: a practical approach, Oxford: IRL Press at Oxford University Press, 1989). Commercially available synthetic resins were used; they were polystyrene with acid labile (Wang, J. Amer. Chem. Soc., 95, 1328-1333, 1973) or acid hyperlabile coupling agents (Merger) by periodic synthesis either manually or using a semi-automatic device (Labortec Peptide Synthesizer 5P 650). et al., Tetrahedron Letters 29, 4005-4008, 1988). Alternatively, peptides are constructed completely automatically on fluid resins (Atherton et al., J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1151-2, 1981) using an LKB Biolynx 4170 automated peptide synthesizer. Resins that already had the protected required C-terminal Fmoc-amino acid residue were purchased. Chain elongation was achieved in various ways with side chain protected Fmoc-amino acid pentafluorenyl esters (Kisfaludy and Schoen, Synthesis. 325-327).
1983), panaudojant aktyvaciją su dicikloheksil’karbodiimido (DDC)/1-hidroksibenzotriazolu (HOBt) (Koenig and Geiger, Chem Ber., 103, 2034-2040, 1970) arba panaudojant prijungimo reagentą PyBOP (Coste et <1,, Tetrahedron Lett. 31, 205-208, 1990). Lizino šoninės grandinės amino grupė buvo apsaugota t-butiloksikarbonilu, glutamino arba asparagino rūgšties šoninės grandinės karboksilo grupės buvo apsaugotos kaip t-butilo esteriai.1983) using activation with dicyclohexylcarbodiimide (DDC) / 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (Koenig and Geiger, Chem Ber. 103, 2034-2040, 1970) or using the coupling reagent PyBOP (Coste et <1, Tetrahedron Lett). ., 31, 205-208, 1990). The amino group of the lysine side chain was protected as t-butyloxycarbonyl, the carboxyl groups of the glutamine or aspartic acid side chain were protected as t-butyl esters.
Sintetinės dervos, nešančios reikalingą N-deblokuotą Cgalinę liekaną, buvo acilintos 1/2 ekvivalento, Fmocapsaugota diaminokarboksilo rūgštimi, pridedant DCC irSynthetic resins carrying the required N-deprotected C-terminal residue were acylated with 1/2 equivalent of Fmocoprotected diaminocarboxylic acid by addition of DCC and
KGBt, Reakciją užbaigus, reagentų perteklius buvo nuplautas. Peptidilinė derva paveikta dar kartą DCC/HOBt, if f . IU.· kad būtų prijungtos karboksilo grupės, kurios galėjo likti laisvos. Po šios stadijos derva nuplauta metanoliu, kad būtų dezaktyvuotos bet kurios karboksilo grupės, negalinčios susijungti su derva sujungtomis amino grupėmis. Galiausiai, amino grupių perteklius acetilinamas. Peptido sintezė paskui buvo tęsiama kaip įprasta.KGBt, After the reaction was completed, excess reagent was washed off. Peptidyl resin exposed again to DCC / HOBt, if f. IU · to attach carboxyl groups which may have remained free. After this step, the resin was washed with methanol to deactivate any carboxyl groups that cannot bind to the resin-bound amino groups. Finally, the excess amino groups are acetylated. Peptide synthesis was then continued as usual.
Po visiško reikalingų sekų ant kietos fazės sudarymo, 10 peptidai skaldomi iš sintezės dervų su kartu einančiu šoninės grandinės deblokavimu, panaudojant trifluoracto rūgštį, į kurią buvo pridėti tinkami valantys chemikalai (King et ai., Int. J._Peptide Protein Res., 35,After complete formation of the required sequences on the solid phase, 10 peptides are cleaved from the synthesis resins with concurrent side-chain deprotection using trifluoroacetic acid to which the appropriate cleaning chemicals have been added (King et al., Int. J.Peptide Protein Res. 35,
255-268, 1990). Po išgarinimo, peptidai atskirti, nusodinant dietilo eteriu ir išdžiovinant. Gryninimas atliktas preparatyvine atvirkščios fazės skystine chromatografija255-268, 1990). After evaporation, the peptides were separated by precipitation with diethyl ether and drying. Purification was by preparative reverse-phase liquid chromatography
LentelėTable
Bendros struktūros peptidų (Pyr-Glu-Asp)2-tiltelio liekana- (Lys-OH)2 analizės duomenysAnalysis of peptides of general structure (Pyr-Glu-Asp) 2- bridging residue (Lys-OH) 2
JI HJI H
I Lentelė (tęsinys)Table I (continued)
(2 izomeras) C-4-vic-glikolis (3 izomeras) C-3-Aminas(Isomer 2) C-4-vic-glycol (Isomer 3) C-3-Amine
C-3-Eteris aNurodo pavyzdžius bMetodai yra išreikšti kaip mobilios fazės B A 5 gradientai per laiką, pvz., 10-40-20 nurodo gradientą, prasidedanti ties 10 ir besibaigiantį ties 40 % B per .20 minučių. Mobilios fazės: A) 0.1 % TFA B) 0.1 % TFA % MeCN. Kolonėlė: Vydac TP54, O.x25 cm, 5 μιη dalelės, 100A pora; srautas 1 ml/min.C-3-Ether a Specifies examples b Methods are expressed as gradients of mobile phase BA 5 over time, e.g. 10-40-20 refers to a gradient beginning at 10 and ending at 40% B in .20 minutes. Mobile phases: A) 0.1% TFA B) 0.1% TFA% MeCN. Column: Vydac TP54, O.x25 cm, 5 μιη particles, 100A pair; flow rate of 1 ml / min.
cNurodo HPLC pikų integraciją (λ=215 nm) c Indicates HPLC peak integration (λ = 215 nm)
IIII
II
1UJ·1UJ ·
LentelėTable
Bendros struktūros peptidų (Pyr-Glu-Asp)2-tiltelio liekana-(Lys-OH)2 aminorūgšties analizės duomenysAmino acid analysis data for the general structure peptide (Pyr-Glu-Asp) 2- bridging residue (Lys-OH) 2
aNurodo pavyzdžius a Specifies examples
PAVYZDYSEXAMPLE
Peptido sintezė: (pGlu-Glu-Asp)2-(E)-DHs(Lys)2 Peptide Synthesis: (pGlu-Glu-Asp) 2 - (E) -DHs (Lys) 2
Peptidas sintezuotas, panaudojant Labortec peptidų sintezatorių. Fmoc-Lys(Boc)-Sasrino polimeras (1.0 g, 0.6 mmol; BAchem A.G.; pakeitimas 0.6 mmol/g) sudėtas į 100 ml reakcijos kolbą. Fmoc-DHs (150 mg; 0.23 mmol), DCC (290 mg, 1.4 mmol) ir HOBt (211 mg, 1.4 mmol) DMF'e (20 ml) pridėta į polimerą, ir reakcijai leista vykti 9 valandas. Papildomai buvo pridėta DCC (1.4 mmol) ir HOBt (1.4 mmol), ir reakcijai leista vykti dar 2 valandas. Tada polimeras nuplautas CH2C12, 30 % MeOH/CH2Cl2 ir DMF. Laisvos amino grupės polimere acetilintos, panaudojant 10 % Ac2O / DMF (3x per 1 valandą; neigiamas Kaiser'io testas).The peptide was synthesized using the Labortec peptide synthesizer. Fmoc-Lys (Boc) -Sasrin polymer (1.0 g, 0.6 mmol; BAchem AG; substitution 0.6 mmol / g) was placed in a 100 mL reaction flask. Fmoc-DHs (150 mg, 0.23 mmol), DCC (290 mg, 1.4 mmol) and HOBt (211 mg, 1.4 mmol) in DMF (20 mL) were added to the polymer and allowed to react for 9 hours. Additional DCC (1.4 mmol) and HOBt (1.4 mmol) were added and the reaction allowed to proceed for a further 2 hours. The polymer was then washed with CH 2 Cl 2 , 30% MeOH / CH 2 Cl 2, and DMF. The free amino groups in the polymer were acetylated using 10% Ac 2 O / DMF (3x in 1 hour; Kaiser negative test).
Likusi sintezė buvo atliekama pagal standartinę metodiką panaudojant Fmoc-Asp (OtBu)-Opfp (1.35 g, 2.3 mmol), Fmoc-Glu (OtBu)-Opfp (1.35 g, 2.3 mmol) ir pGlupentachlorfenilo esterį (0.86 g, 2.3 mmol). HOBt (35 mg,The remainder of the synthesis was carried out according to the standard procedure using Fmoc-Asp (OtBu) -Opfp (1.35 g, 2.3 mmol), Fmoc-Glu (OtBu) -Opfp (1.35 g, 2.3 mmol) and pGlupentachlorophenyl ester (0.86 g, 2.3 mmol). HOBt (35 mg,
2.3 mmol) pridėta kiekvienoje prijungimo stadijoje, kuriai leista vykti 1 valandą. Prijungimo pabaiga nustatyta neigiamu Kaiser'io testu. Po sujungimo su Fmocamino rūgštimi, polimeras nuplautas DMF'u, apsauginė grupė atskelta 20 % piperidino tirpalu DMF'e ir polimeras vėl nuplautas DMF'u. Po galutinio prijungimo, polimeras nuplautas MeOH/CH2Cl2 ir CH2C12. Išdžiovinto polimero-peptido svoris buvo 1 g. Peptidas atskeltas nuo polimero TFA: CH2C12 1:1, tirpalas išdžiovintas vandenyje, filtruotas užšaldant; išeiga mg šio produkto nukreipta prepaužšaldant, likutis ištirpintas (0.45 μ), o filtratas išdžiovintas2.3 mmol) was added at each coupling step which was allowed to proceed for 1 hour. The end of the connection was determined by a negative Kaiser test. After coupling with Fmocamic acid, the polymer was washed with DMF, the protecting group was removed with 20% piperidine in DMF, and the polymer was again washed with DMF. After final coupling, the polymer was washed with MeOH / CH 2 Cl 2 and CH 2 Cl 2 . The weight of the dried polymer-peptide was 1 g. The peptide was separated from the polymer by TFA: CH 2 Cl 2 1: 1, the solution was dried in water, filtered by freezing; Yield of mg of this product was directed by freeze-drying, the residue was dissolved (0.45 μ) and the filtrate was dried
430 mg. Tolesniam gryninimui 100 ištirpinta vandenyje (0.5 ml) ir ratyvinei AVSC, panaudojant 2.1x15 cm Beckman Ultrasphere ODS kolonėlę ir tirpalus A 0.1 % TFA H2O, B 0.1 %430 mg. For further purification, 100 was dissolved in water (0.5 mL) and a rotary AVSC using a 2.1x15 cm Beckman Ultrasphere ODS column and solutions A 0.1% TFA H 2 O, B 0.1%
TFA MeCN:H2O 40:60. Gradientas buvo 0-15 % B, 120 miIITFA MeCN: H 2 O 40:60. The gradient was 0-15% B, 120 miII
II
ΙΙίίΗ nučių, srauto greitis 5 ml/min. 19 mg gryno peptido (>95 %) buvo gauta po išdžiovinimo šaldant. FAB-MS:Flow rate, 5 ml / min. 19 mg of pure peptide (> 95%) was obtained after freeze-drying. FAB-MS:
[M+H] 1169.3.[M + H] 1169.3.
HOBt = HidroksibenzotriazolasHOBt = Hydroxybenzotriazole
Pfp = PentafluorfenilasPfp = Pentafluorophenyl
Fmoc = 9-FluorenilmetoksikarbonilasFmoc = 9-Fluorenylmethoxycarbonyl
Boc = t-ButoksikarbonilasBoc = t-Butoxycarbonyl
DCC = Dicikloheksilkarbodiimidas (E)-DHs = (S,S)-2,7-Diamino-(E)-okt-4-eno-l,8-dikarboksilo rūgštisDCC = Dicyclohexylcarbodiimide (E) -DHs = (S, S) -2,7-Diamino- (E) -oct-4-eno-1,8-dicarboxylic acid
I JUKJUK
Claims (8)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB929211674A GB9211674D0 (en) | 1992-06-02 | 1992-06-02 | Peptide compounds |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
LTIP607A LTIP607A (en) | 1995-01-31 |
LT3614B true LT3614B (en) | 1995-12-27 |
Family
ID=10716407
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
LTIP607A LT3614B (en) | 1992-06-02 | 1993-06-02 | Peptide compounds, method for the preparation and use thereof |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
GB (1) | GB9211674D0 (en) |
LT (1) | LT3614B (en) |
ZA (1) | ZA933868B (en) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0112656A2 (en) | 1982-11-26 | 1984-07-04 | Nycomed As | Peptide compounds |
WO1988003535A1 (en) | 1986-11-06 | 1988-05-19 | Nycomed As | Peptide compounds |
WO1990002753A1 (en) | 1988-09-16 | 1990-03-22 | Hafslund Nycomed Bioreg As | Peptide compounds |
EP0408371A1 (en) | 1989-07-14 | 1991-01-16 | Smithkline Beecham Corporation | Hemoregulatory peptides |
-
1992
- 1992-06-02 GB GB929211674A patent/GB9211674D0/en active Pending
-
1993
- 1993-06-02 LT LTIP607A patent/LT3614B/en not_active IP Right Cessation
- 1993-06-02 ZA ZA933868A patent/ZA933868B/en unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0112656A2 (en) | 1982-11-26 | 1984-07-04 | Nycomed As | Peptide compounds |
WO1988003535A1 (en) | 1986-11-06 | 1988-05-19 | Nycomed As | Peptide compounds |
WO1990002753A1 (en) | 1988-09-16 | 1990-03-22 | Hafslund Nycomed Bioreg As | Peptide compounds |
EP0408371A1 (en) | 1989-07-14 | 1991-01-16 | Smithkline Beecham Corporation | Hemoregulatory peptides |
Non-Patent Citations (11)
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ZA933868B (en) | 1994-06-14 |
LTIP607A (en) | 1995-01-31 |
GB9211674D0 (en) | 1992-07-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
IE56362B1 (en) | Peptide compounds | |
FI92209B (en) | A process for the preparation of therapeutically useful peptide compounds | |
GB2208294A (en) | Cyclosporins | |
JPH01151598A (en) | Peptide | |
US4438029A (en) | Synthetic peptides | |
JPS61143399A (en) | Basic v1-basoplesine antagonistic agent | |
EP0673388B1 (en) | Double chain peptide compounds having hemoregulatory activity | |
LT3614B (en) | Peptide compounds, method for the preparation and use thereof | |
LT3613B (en) | Peptide compounds, method for the preparation and use thereof | |
US5629293A (en) | Single chain peptide compounds having hemoregulatory activity | |
JPH08502029A (en) | Oligopeptides collagen derivatives and their use in the prevention of secondary cataracts | |
US5731289A (en) | Double-chain hemoregulatory peptides | |
EP0722459B1 (en) | Hemoregulatory penta- or hexapeptides | |
JP3190758B2 (en) | Peptide derivatives and their uses | |
JPH06298797A (en) | Peptide derivative and its use | |
GB1568195A (en) | Synthetc peptides | |
JPH0717999A (en) | Peptide derivative and use thereof | |
JPS63303999A (en) | Vasopressin antagonist | |
JPH0597890A (en) | Peptide derivative and its use | |
JPH05320191A (en) | Peptide derivative and its use | |
JPH06321987A (en) | Peptide derivative and its use | |
JPH0641193A (en) | Peptide derivative and its use | |
JPH0770183A (en) | Peptide derivative and its use |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM9A | Lapsed patents |
Effective date: 19960602 |