ES2268786T3 - Ensayo de union usando antigenos embebidos en termoplastico. - Google Patents
Ensayo de union usando antigenos embebidos en termoplastico. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2268786T3 ES2268786T3 ES98940836T ES98940836T ES2268786T3 ES 2268786 T3 ES2268786 T3 ES 2268786T3 ES 98940836 T ES98940836 T ES 98940836T ES 98940836 T ES98940836 T ES 98940836T ES 2268786 T3 ES2268786 T3 ES 2268786T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- binding
- agent
- bonding agent
- solid material
- solid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 229920001169 thermoplastic Polymers 0.000 title claims abstract description 10
- 239000004416 thermosoftening plastic Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 59
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 56
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 56
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 28
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 100
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims abstract description 54
- 239000007767 bonding agent Substances 0.000 claims abstract description 47
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 42
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 41
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 claims abstract description 20
- 239000011343 solid material Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 17
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 60
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 26
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 26
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 25
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 22
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 21
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 20
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 14
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 13
- -1 polyethylene Polymers 0.000 claims description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 11
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 8
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 claims description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 6
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000001746 injection moulding Methods 0.000 claims description 4
- 102000036213 phospholipid binding proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108091011000 phospholipid binding proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 claims description 3
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 3
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010008748 Chorea Diseases 0.000 claims description 2
- 208000004248 Familial Primary Pulmonary Hypertension Diseases 0.000 claims description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 2
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 208000012601 choreatic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 claims description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 claims description 2
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 claims description 2
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 claims description 2
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 claims description 2
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 claims description 2
- 230000001359 rheumatologic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012815 thermoplastic material Substances 0.000 claims description 2
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 claims description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 48
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 48
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 35
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 description 24
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 23
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 17
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 11
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 11
- ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L disodium [3-[2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propoxy-oxidophosphoryl]oxy-2-hydroxypropyl] 2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COP([O-])(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 5
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005830 Polyurethane Foam Polymers 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 239000012768 molten material Substances 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000011049 pearl Substances 0.000 description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 239000011496 polyurethane foam Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012128 rapid plasma reagin Methods 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 2
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 2
- LFQCEHFDDXELDD-UHFFFAOYSA-N tetramethyl orthosilicate Chemical compound CO[Si](OC)(OC)OC LFQCEHFDDXELDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 1
- 208000031091 Amnestic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003343 Antiphospholipid Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108050001427 Avidin/streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010750 Metalloproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010063312 Metalloproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920000426 Microplastic Polymers 0.000 description 1
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 201000007023 Thrombotic Thrombocytopenic Purpura Diseases 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006986 amnesia Effects 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 238000000071 blow moulding Methods 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910010293 ceramic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000012809 cooling fluid Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000004815 dispersion polymer Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 201000007272 intracranial sinus thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical group 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 108010077055 methylated bovine serum albumin Proteins 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920000647 polyepoxide Polymers 0.000 description 1
- 239000004848 polyfunctional curative Substances 0.000 description 1
- 239000012985 polymerization agent Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000012719 thermal polymerization Methods 0.000 description 1
- 230000002885 thrombogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000002966 varnish Substances 0.000 description 1
- KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N vinyl-ethylene Natural products C=CC=C KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
- Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
- Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
- Y10S530/817—Entrapped within the carrier, e.g. gel, hollow fibre
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
- Y10T436/25375—Liberation or purification of sample or separation of material from a sample [e.g., filtering, centrifuging, etc.]
- Y10T436/255—Liberation or purification of sample or separation of material from a sample [e.g., filtering, centrifuging, etc.] including use of a solid sorbent, semipermeable membrane, or liquid extraction
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Un ensayo de unión para detectar la presencia de una pareja de unión que comprende: 1) poner en contacto una muestra que se sospecha que contiene una pareja de unión con un material sólido que contiene agente de unión durante un tiempo suficiente y en unas condiciones suficientes para permitir que una pareja de unión se una al agente de unión, donde el material sólido tiene un agente de unión disperso uniformemente en todo ello y embebido en su interior, donde el agente de unión no se acopla químicamente al material sólido y se une a una pareja de unión y donde el material sólido se obtiene solidificando un material fluido polimérico termoplástico que tiene un agente de unión sustancial disperso uniformemente en su interior y 2) detectar la presencia o ausencia de unión de la pareja de unión al agente de unión, donde el agente de unión se selecciona entre el grupo compuesto por: lípidos, fosfolípidos, ADN y ARN, y donde la pareja de unión es un componente que está libre en un líquido y se une al agente de unión embebido previamente para insolubilizarse.
Description
Ensayo de unión usando antígenos embebidos en
termoplástico.
\global\parskip0.930000\baselineskip
La presente invención se refiere a la
preparación de un antígeno inmovilizado y su uso en inmunoensayos
así como otras aplicaciones biomédicas.
Los inmunoensayos se han usado durante décadas
como medio para ensayar la presencia cualitativa y cuantitativa de
antígenos o anticuerpos en una muestra. Entre las técnicas de
inmunoensayo más habituales se incluyen una matriz en fase sólida a
la que se une un antígeno o anticuerpo. Aunque se conocen numerosos
métodos de unión de antígeno o anticuerpo a la fase sólida y muchos
se usan ampliamente, la técnica de unión sigue siendo una etapa
importante en la preparación de un inmunoensayo. De hecho, la
inmovilización de un anticuerpo o antígeno a la fase sólida es
normalmente una de las primeras etapas en la preparación de un
inmunoensayo.
Swan, et al. (BSI Corporation), Patente
de Estados Unidos 5.414.075, describen el acoplamiento químico de
una molécula diana, tal como fosfolípidos, a un soporte plástico tal
como poliestireno, usando un agente de acoplamiento químico
multifuncional.
Sharma, Patente de Estados Unidos Nº 4.360.358,
describe la formación de una fase sólida inmunológicamente activa
mediante la incorporación de un reactivo de bajo peso molecular, tal
como un hapteno, en un material que forma un polímero sólido. Este
polímero se recubre a su vez sobre una fase sólida. La base de la
fase sólida puede ser poliestireno. El material que forma un
polímero sólido incluye numerosos geles y similares.
Sterhan et al. (Biostar Medical Product,
Inc.), Patente Mundial 90/10227, describen la absorción de
cardiolipina, fosfolípidos y otros materiales sobre un soporte
sólido, tal como una placa con pocillos de plástico, que se
recubrió previamente con albúmina de suero bovino metilada.
Shah et al (Baxter Diagnostics Inc.),
Patente Mundial 91/10138, describe la absorción pasiva o el
acoplamiento químico de cardiolipina, fosfatidilcolina y/o
colesterol a placas de poliestireno para los propósitos de un ELISA
(ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas). Obsérvese que todo el
recubrimiento y acoplamiento ocurre después de que se haya formado
la placa de plástico.
Matsuura et al. (Yamasa Shoyu Kabushiki
Kaisha), Patente de Estados Unidos 5.506.110, describen la unión de
diversos fosfolípidos sobre una placa con pocillos de poliestireno
para los propósitos de un ELISA. Los antígenos se absorben
pasivamente sobre la fase sólida. Obsérvese la capacidad del ensayo
para distinguir entre diversos anticuerpos antifosfolipídicos.
Lostia et al. (Snam Progetti S.p.A.),
Patente de Estados Unidos Nº 4.031.201, describen la preparación de
fibras que incorporan anticuerpos o antígenos. Estas fibras se usan
con numerosos propósitos incluyendo como fase sólida en diversos
inmunoensayos. La sustancia activa, que puede ser un hapteno, se
mezcla con un polímero, y la mezcla se hace girar después en un
baño de coagulación para producir la fase sólida en forma de fibras.
Obsérvese que el polímero puede ser poliestireno. Las fibras son
porosas y contienen microcavidades.
Peters, Jr. et al. (SmithKline
Diagnostics, Inc.), Patente de Estados Unidos 5.013.669, describen
un inmunoensayo en el que antígeno o hapteno se acopla químicamente
a un polímero que forma un material sólido. Este material se
recubre sobre otro soporte sólido. El polímero es soluble en agua de
manera reversible y se une químicamente al antígeno/hapteno.
Sutton, (Eastman Kodak Company), Patente de
Estados Unidos 5.234.841, describen el recubrimiento de una fase
sólida, tal como poliestireno, con un antígeno/hapteno para usar en
un inmunoensayo. El material biológicamente activo se disuelve en
un disolvente y después se recubre sobre la fase sólida.
Bonacker, et al. (Behringwerke
Aktiengesells-chaft), Patente de Estados Unidos
4.118.349 describen inmunoensayos en los que el anticuerpo o
antígeno inmovilizado en la fase sólida se une químicamente a una
fase sólida de poliestireno. El anticuerpo o antígeno se acopla
químicamente al vehículo de poliestireno mediante un compuesto de
acoplamiento químico.
Yabusaki (Hana Biologies, Inc.), Patente de
Estados Unidos 4.459.362, describe un inmunoensayo para anticuerpos
para diversos fosfolípidos usando fosfolípidos en suspensión.
Hartdegen, et al. (W.R. Grace & Co.),
Patente de Estados Unidos 4.195.127, describen proteínas de
inmovilización que incluyen anticuerpos o antígenos, en un producto
espuma de poliuretano. El anticuerpo o antígeno se mezcla con un
monómero o prepolímero y se hace reaccionar con el mismo. El
conjugado químico del antígeno y prepolímero se polimeriza después
para formar la espuma de poliuretano. Esta fase sólida puede usarse
después para diversos usos. El anticuerpo o antígeno está acoplado
químicamente a la molécula polimérica.
\global\parskip0.990000\baselineskip
Nowinski, et al. (Genetic Systems
Corporation), Patentes de Estados Unidos 4.609.707 y 4.752.638,
describen la formación de un material sólido
polímero-anticuerpo o
polímero-antígeno mediante la reacción química del
anticuerpo o antígeno con un monómero directa o indirectamente para
formar un conjugado monómero/anticuerpo o antígeno, seguido de la
polimerización del monómero. El material puede usarse después como
fase sólida en inmunoensayos. La fase sólida puede tomar cualquier
forma.
Johnson, et al. (Miles Inc.), Patente de
Estados Unidos 4.822.747, describen la inmovilización de un reactivo
hapteno sobre una fase sólida y su uso en un inmunoensayo. La
referencia muestra que el hapteno debe acoplarse químicamente a
restos reactivos sobre la superficie externa del polímero. Es
interesante observar que Johnson, et al. subrayan la
necesidad de unión químicamente del hapteno a la fase sólida puesto
que los haptenos que no están unidos específicamente pueden lavarse
o lixiviarse lentamente de la fase sólida.
Walter, (Miles Laboratories, Inc.), Patente de
Estados Unidos 4.390.343, describen elementos analíticos de tipo
varilla de nivel donde el anticuerpo o antígeno/hapteno se
incorporan en un gel, tal como agarosa, gelatina o PVP.
Jirikowski, (Cytech Biomedicals), documento
WO-93/08471, se refiere a soportes poliméricos para
ensayos de unión y, en particular, a la potenciación de las
características de unión de los soportes poliméricos por
tratamiento con disolventes o medios mecánicos. Los soportes
poliméricos se fabrican típicamente a partir de un material
hidrófobo tal como un copolímero de poliestireno y butadieno.
Fuisz, (Fuisz Technologies), documento
WO-92/20329, describe productos enzimáticos que
comprenden una matriz que lleva enzimas, que suspende la enzima
para protección, suministro, dispersión y activación en el momento
deseado y en las condiciones seleccionadas.
Hampp et al., Bayer, documento
WO-92/04465 se refiere a un método para inmobilizar
macromolélulas orgánicas o biopolímeros que comprende mezclarlos
con una dispersión polimérica acuosa sin disolvente, aplicar esta
mezcla en forma de una película cohesiva a un sustrato (tal como un
biodetector) y secar cuidadosamente la película.
Ramanujam et al., (PHARMACIA), documento
WO-9417106 y documento WO-96/17083
se refiere a reactivos proteicos purificados en vehículos de cera.
Los reactivos proteicos pueden ser enzimas que modifican el ácido
nucleico tales como polimerasas, ligasas y enzimas de
restricción.
Avnir et al., (Yissum), documento
EP-439318, se refiere a vidrios solgel dopados para
métodos analíticos. En los ejemplos, se incorporan diversas
proteínas realizando la polimerización de
tetra-metoxisilano (TMOS) en su presencia.
Rubenstein, (Hybritech), documento
EP-437287 y documento EP-200381
describe fases sólidas para usar en ensayos de unión que comprenden
una matriz porosa en la que quedan atrapadas microesferas, llevando
las microesferas una pareja de unión. Las matrices porosas dentro
de las cuales pueden quedar atrapadas las microesferas incluyen
membranas de filtros que comprenden fibras de vidrio, nylon o
materiales cerámicos que tienen porosidad definida.
Los inmunoensayos para detectar sífilis se han
usado ampliamente durante décadas. Cada unidad de sangre y
pacientes de los que se sospecha que tienen cualquier enfermedad de
transmisión sexual se evalúan rutinariamente para sífilis mediante
inmunoensayo. Las técnicas para evaluar sangre para anticuerpos para
sífilis han incluido VDRL (Laboratorio de Investigación de
Enfermedades Venéreas), RPR (reagina rápida en plasma), fijación de
complementos, inmovilización/adherencia de treponemal, FTA
(anticuerpo treponemal fluorescente), ELISA y posiblemente también
otros muchos formatos de inmunoensayos. El inmunoensayo más antiguo
para fosfolípidos (PL) es la reacción de Wassermann (aprox. 1905)
que es un ensayo de fijación de complemento.
Krilis y McNeil, "Thrombosis Research",
Vol. 52, pág. 641 a 648 (1988), y Patente de Estados Unidos Nº
5.344.758 describen que los fosfolípidos están presentes o se
añaden a una acrilamida antes de que se añada el agente de
reticulación como se muestra en el método de Krilis en la columna
10, líneas 38-65 (estos son agentes de reticulación
tales como persulfato amónico o riboflavina). En este caso, los
fosfolípidos compiten con la química de reticulación del gel de
acrilamida porque comparten grupos reactivos idénticos, es decir,
C=O y NH_{2}. Por lo tanto, hay reticulación presente entre el
agente de unión de Krilis, los fosfolípidos y el gel o matriz. El
Ejemplo 1 de Krilis describe el proceso de preparación de una
columna cromatográfica de intercambio de iones mediante la mezcla
vigorosa de una mezcla lípido/acrilamida y la polimerización con
persulfato amónico. El gel se homogeneizó posteriormente y se cargó
en una columna de vidrio (véase columna 10, líneas
44-56). Por lo tanto, el ingrediente lipídico de
Krilis se polimeriza y se une a un gel de poliacrilamida. Las
estructuras químicas de acrilamida ("Gel Electrophoresis of
Proteins, editado por B.D. Hames y D. Rick-wood")
y la estructura de fosfolípidos, cardiolipina y fosfatidilserina se
analizan en la Patente de Krilis y en la Publicación Thrombosis
Research. La diacilfosfatida es la molécula estructural para todos
los fosfolípidos (grupos de cabeza). Son importantes los dobles
enlaces C=O que son los sitios reactivos (junto con los grupos
NH_{2} (amino)).
Por lo tanto, en Krilis et al, está claro
que el agente de unión interacciona con el material en fase sólida
que puede afectar a los sitios de unión del agente de unión.
De acuerdo con la presente invención, el
material polimérico se forma y reticula totalmente antes de la
adición del agente de unión de manera que no hay oportunidad para
la reticulación del material sólido con el agente de unión.
Todos los métodos de inmunoensayo dependen de la
unión del anticuerpo al antígeno. El antígeno para la serología de
la sífilis históricamente ha sido un extracto alcohólico de corazón
de ternera mezclado con colesterol. El antígeno (cardiolipina) se
adsorbía típicamente sobre partículas de carbono como fase sólida.
Aunque el antígeno no es perfecto, se ha demostrado su eficacia en
la protección del suministro sanguíneo.
Otras muchas enfermedades se han asociado
también o se han identificado detectando anticuerpos para los mismos
antígenos PL o para proteínas de unión a fosfolípidos. Los ejemplos
incluyen pacientes con lupus sistémico eritematoso (SLE) y un
subconjunto de pacientes identificados como que tienen síndrome
antifosfolipídico. Los hallazgos clínicos incluyen trombosis venosa
recurrente, trombosis arterial recurrente, absorción espontánea
recurrente, trombocitopenia, corea, epilepsia, livedo, hipertensión
pulmonar idiopática, demencia, amnesia, migrañas, y trombosis
senoidal. Véase Levine, S.R. y Brey, R.L, Lupus, Vol. 5, pág. 347
(1996). Otras enfermedades reumatológicas y colagenosas están
presentes también como anticuerpos característicos para PL en el
suero del paciente. En el campo del transplante de órganos humanos,
fundamentalmente el no funcionamiento del órgano puede aparecer
asociado también con la presencia de un anticuerpo antifosfolipídico
(aPA). Wagenknecht et al, Human Immunology, 49, pág.
27 (1996).
En consecuencia, hay una gran necesidad y numerosas aplicaciones para un inmunoensayo estandarizado para aPA.
En consecuencia, hay una gran necesidad y numerosas aplicaciones para un inmunoensayo estandarizado para aPA.
Se han usado ELISA durante 25 años para detectar
pequeñas cantidades de sustancias antigénicas. Hoy en día, muchos
sistemas ELISA usan placas de 96 pocillos de plástico (poliestireno)
(placas Microtiter) que se han adaptado y/o modificado para
proporcionar unión óptima de la sustancia antigénica para la que se
han producido los anticuerpos. Comenzando en los años 80, el ELISA
se seleccionó para usarlo para la detección de anticuerpos para
antígenos compuestos por PL y/o proteínas del plasma de unión a
PL.
El término "anticuerpo antifosfolipídico"
(aPA) se refieren al uso convencional de este término en el que
muchos anticuerpos para PL son realmente anticuerpos para proteínas
del plasma que se unen a fosfolípidos. Independientemente, los PL
se consideran como antígeno. Aunque no se desea ceñirse a ninguna
teoría, se cree que las proteínas de unión a fosfolípidos no se
unen a aPA en ausencia de otro componente tal como PL a menos que
los recipientes de plástico se traten específicamente, tal como
superficies plásticas irradiadas, lo que aumenta la unión de
ciertas proteínas de unión a fosfolípidos. Véase Mclntyre et
al, American Journal of Reproductive Immunology, 37:
pág. 101-110 (1997). Aunque la expresión
"anticuerpo antifosfolipídico" puede llevar a confusión, se
entiende bien en la técnica.
Desde su comienzo, los inmunoensayos usados para
la detección de un anticuerpo antifosfolipídico (aPA) en la sangre
de un paciente han tenido que vérselas con problemas relacionados
con la reproducibilidad, sensibilidad y cuantificación. Las
comparaciones interlaboratorio de cuantificación de aPA están
particularmente en desacuerdo. Véase Wagenknecht et al,
Clinical Immunology Newsletter,
15(2/3):28-38 (1995) para un artículo de
revisión de este tema. Un problema fundamental con todos los
sistemas ELISA y especialmente con el ELISA para aPA implica las
dos primeras etapas importantes en el ensayo; 1.
"recubrimiento" del material antigénico a la superficie de
plástico de los pocillos de la placa de microtitulación, y 2.
"bloqueo" con una sustancia proteica, a menudo albúmina de
suero bovino. La etapa de bloqueo puede retirar PL de la placa
debido a que la albúmina de suero y otras proteínas pueden unirse a
PL y, por lo tanto, compiten con la placa de plástico recubierta con
PL para la unión a PL. Adicionalmente, es difícil controlar la
etapa de bloqueo para evitar esta pérdida.
En el ELISA para aPA, PL tal como cardiolipina,
fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilglicerol,
fosfatidildiglicerol, fosfatidilinositol, fosfatidilcolina y ácido
fosfatídico se usan para recubrir los pocillos de las placas. Esta
etapa de recubrimiento a menudo se realiza en presencia de
disolventes orgánicos, tales como cloroformo, que son deseables por
su capacidad para mantener los lípidos en disolución. Los
disolventes orgánicos son indeseables debido a que atacan el
plástico y pueden provocar una refracción de la luz no deseada
cuando los contenidos de la placa se miden para cambios en la
densidad óptica, es decir, en el color. También, se ha informado de
que hasta el 64% del antígeno fosfolipídico se retiró de la
superficie plástica durante el transcurso del ensayo. Véase
Smolarsky, Journal of Immunological Methods, 38: pág.
85-93 (1980). Los disolventes orgánicos no son
aceptables para ciertas sustancias proteicas que pueden
desnaturalizarse e inactivar sus propiedades de unión.
Después de aplicar PL a los pocillos, un segundo
problema puede ser la oxidación de los ácidos grasos que contienen
PL. La oxidación de ácidos grasos insaturados provoca que se
enrancien y/o reticulen. La reticulación por oxidación es el
principio básico que ocurre en el "secado" de pinturas y
barnices. Se ha demostrado que la oxidación altera las propiedades
antigénicas de algunos PL. Para evitar este problema, las placas de
ELISA para aPA a menudo se secan en atmósfera de nitrógeno o se
almacenan en recipientes cerrados herméticamente.
Un tercer problema es la pérdida de antígeno
recubierto debido al agente de bloqueo y a numerosas etapas de
lavado requeridas durante el transcurso del ELISA. Históricamente,
las múltiples etapas en una preparación de placa de ELISA para aPA
generan otros problemas y gastos tales como el coste del trabajo
intensivo de los procedimientos de puesta en marcha. Debido a la
falta de consenso acerca del recubrimiento con PL de la placa entre
laboratorios que realizan estos ensayos, la mala reproducibilidad
intra- e interlaboratorio se ha considerado un problema.
Existen problemas similares con la
inmovilización de otros antígenos y anticuerpos a superficies de
plástico. Otros ensayos de unión y otras superficies tienen
problemas similares. Independientemente del antígeno (o
anticuerpo), proteína, fosfolípido, carbohidrato (tal como antígenos
del grupo sanguíneo) o ácido nucleico, tienen todos ciertos
problemas inherentes cuando se inmovilizan sobre una superficie de
plástico, no siendo el menor de ellos la retención de sus
propiedades de unión.
Muchos plásticos no tratados son hidrófobos. Si
un agente de unión que se está inmovilizando tiene una proporción
hidrófoba, esta porción tenderá a adherirse a la superficie de
plástico si se usa un soluto vehículo acuoso. Dependiendo del
soluto y de las superficies utilizadas, la porción complementaria
del agente de unión tenderá a adherirse a la superficie de
plástico. En los inmunoensayos, la unión a
anticuerpo-antígeno ocurre sólo en una porción
específica de cada molécula. Esto mismo es cierto para otros ensayos
de unión receptor/ligando. Si esta porción está oscurecida por la
superficie del plástico, se inhibirá la unión. Esto puede conducir
a resultados irreproducibles menores que las concentraciones
verdaderas e incluso negativos falsos.
Existen problemas similares con la
inmovilización de cualquier ligando o receptor en un ensayo de
unión, unión de afinidad o sistema cromatográfico, inmovilización
de enzimas y para el recubrimiento de implantes médicos para
hacerlos más aceptables para el receptor.
La presencia de niveles de anticuerpo, antígeno
o ligando en una muestra biológica es indicativo de diversas
afecciones y es diagnósticamente importante. Por ejemplo, el
anticuerpo para PL en el suero puede ser indicativo de si una
infección permanece o si es probable un estado de enfermedad
autoinmune. Una exposición pasada al antígeno, tal como con una
infección de sífilis ya tratada, sin una infección actual activa
puede detectarse también aunque la valoración del anticuerpo
finalmente sea menor según pasa el tiempo, particularmente
valoraciones con IgM e IgA. Igualmente, los altos niveles de aPA se
correlacionan con la aparición adicional de trombosis en pacientes
con SLE. Para cuantificar el nivel de anticuerpo en la sangre, uno
debe tener un ensayo convencional reproducible ya que hay una
correlación entre el número de moléculas de antígeno sobre el
soporte sólido y el número de moléculas de anticuerpo unidas
resultante de la aplicación de la muestra.
La presente invención proporciona un ensayo de
unión para detectar la presencia de una pareja de unión de acuerdo
con las reivindicaciones adjuntas y usa una preparación convencional
y estable de parejas de unión que se reproduce fácilmente a gran
escala sin depender del uso cuidadoso por parte del operador de un
ensayo de unión en fase
sólida.
sólida.
La presente invención usa un agente de unión
inmovilizado uniforme capaz de unirse a e insolubilizar una pareja
de unión en un líquido de muestra.
La presente invención usa materiales en los que
el agente de unión se distribuye uniformemente a través de un
material sólido de manera que la distribución de agentes de unión
sobre la superficie sea de una cantidad predefinida.
La presente invención usa un agente de unión
inmovilizado que no se lixivie o eluya de una fase sólida.
La presente invención usa un agente de unión
inmovilizado donde una pareja de unión unida puede separarse y la
fase sólida puede reutilizarse para el mismo u otros propósitos.
La presente invención usa un agente de unión
inmovilizado para cromatografía de afinidad para separar una pareja
de unión predefinida deseada de una muestra.
La presente invención usa un inmunoensayo que
implica la unión de una pareja de unión al agente de unión
inmovilizado.
La presente invención usa antígenos
inmovilizados reutilizables o enzimas que se embeben en la fase
sólida.
La invención usa una mezcla de uno de las dos
sustancias de unión con un material plástico fluido que se endurece
después en una fase sólida. El agente de unión se embebe en la fase
sólida y la pareja de unión está inicialmente libre en un fluido.
La fase sólida con un agente de unión embebido por todo ello puede
usarse después en cualquier formato de inmunoensayo convencional
donde un agente de unión se embebe en una fase sólida.
Aunque los métodos de la técnica anterior para
recubrir superficies de plástico con antígenos PL no han sido
completamente satisfactorios, la presente invención evita el uso de
la etapa de recubrimiento que da como resultado variaciones en
recubrimiento, estabilidad sobre la superficie y resultados
inconsistentes. La pérdida de antígeno, como se ha observado
anteriormente, se elimina cuando el antígeno se embebe en la matriz
de fase polimérica. La presente invención mezcla el antígeno con un
material termoplástico que se calienta hasta un estado fundido. La
mezcla se usa después en inyección convencional y moldeo por soplado
para formar la fase sólida. El proceso proporciona una distribución
uniforme y una concentración constante de antígeno PL en el
material plástico.
La Fig. 1 es una vista en corte de un tubo de
ensayo con un agente de unión disperso por todo ello.
La Fig. 2 es el mismo tubo de ensayo después de
que un líquido de muestra que contiene una pareja de unión se añade
y se deja un tiempo suficiente para que la pareja de unión se una al
agente de unión.
La Fig. 3 es el mismo tubo de ensayo de la Fig.
2 después de lavarlo y añadir un agente de marcado (anticuerpo o
proteína G marcados) que se une a la pareja de unión insolubilizada
en el tubo de ensayo.
Las Fig. 4-8 son gráficos que
muestran datos para detectar aPA usando tubos que contienen PL
embebido en su interior.
Las figuras se dibujan para ilustrar ciertas
características de la invención y no se dibujan a escala con
respecto a los otros componentes. Además, ciertos componentes se
dibujan esquemáticamente cuando son posibles numerosos diseños y
formatos de ensayos diferentes para la realización práctica de la
invención.
Una realización de la presente invención se
refiere al uso en un ensayo de unión de agentes de unión
incorporados en sustratos en fase sólida, particularmente
materiales plásticos, los productos producidos por los mismos
(tales como tubos, perlas y placas multi-pocillo).
Aunque algunos ejemplos especificados implican un ELISA, la
presente invención no se limita a ningún formato de inmunoensayo
particular con la condición de que al menos uno de ligando,
receptor, anticuerpo, antígeno o hapteno esté embebido en una fase
sólida durante el inmunoensayo. De hecho, la presente invención
puede usarse para otros ensayos de unión, algunos de los cuales se
ejemplifican a continua-
ción.
ción.
El agente de unión se incorpora a un material
plástico para preparar un agente de unión embebido en fase sólida
para usar en un ensayo. En el sustrato en fase sólida 12, el agente
de unión 11 se distribuye uniformemente por todo ello y se embebe
en el sustrato en fase sólida 12. El sustrato en fase sólida 12
puede estar en la forma de un recipiente. Una muestra líquida 13
que contiene una pareja de unión 14 se añade al recipiente y la
pareja de unión se une al agente de unión. Como se representa en la
Fig. 2, la pareja de unión puede ser una molécula de anticuerpo que
se ha ampliado para facilitar la visualización. La muestra líquida
se decanta después, o se aspira y se lava. Un agente de marcado 15
se añade después al recipiente que se une a la pareja de unión 14.
El recipiente se decanta de nuevo o se aspira y se lava para retirar
cualquier agente de marcado no unido. El marcador 16 se detecta
después de una manera apropiada para el marcador particular. Cuando
se usa un marcador fluorescente, la presencia del marcador puede
observarse directamente exponiéndolo a las longitudes de onda de
luz apropiadas y observando la emisión de otras longitudes de onda
correspondientes al marcador fluorescente. El marcador puede
detectarse cualitativamente o medirse cuantitativamente y bien
unirse al sustrato en fase sólida o bien en el líquido retirado que
contiene agente de marcado sin unir.
Aunque el sustrato en fase sólida 12 en la forma
de un recipiente se describe como que es de plástico, puede
reconocerse que se pueden usar otros materiales. Igualmente, el
agente de unión 11 se muestra como punteado simplemente para
describir su distribución a través del sustrato en fase sólida. En
realidad, el agente de unión puede ser una molécula que es
relativamente mucho menor que los puntos mostrados. Igualmente, las
moléculas de anticuerpo usadas para la pareja de unión y agente de
marcado son realmente moléculas y se muestran mucho más grandes de
lo que son en realidad. Aún adicionalmente, el agente de marcado
puede ser más grande (en el ejemplo una perla) o más pequeño (en el
ejemplo de un átomo radioactivo) que el asterisco mostrado.
Los términos anticuerpo, antígeno, hapteno,
ligando y receptor se usan de manera intercambiable en toda esta
memoria descriptiva dependiendo de la aplicación particular
ilustrada. Todas estas se consideran sustancias de unión. Las
expresiones "agente de unión" y "pareja de unión" se usan
para incluir cualquiera de estos componentes. Para facilitar la
descripción, la expresión "agente de unión" se refiere al
componente que se embebe en la fase sólida y el término "pareja
de unión" se refiere al componente que está libre en un líquido y
que se une al agente de unión embebido previamente para
insolubilizarlo. El agente de unión de la invención se selecciona
entre lípidos, fosfolípidos, ADN y ARN.
No es necesario que todo el objeto tenga la
composición de fase sólida usada en la presente invención, en lugar
de ello, sólo es necesario preparar la porción de fase sólida en
contacto con la muestra líquida de dicho material. Por ejemplo, los
pocillos o una tira de pocillos de una placa
multi-pocillo pueden prepararse a partir de la
composición usada en la presente invención mientras que el resto de
la placa multi-pocillo puede prepararse a partir de
cualquier plástico convencional o incluso metal. Esta disposición
permite retirar un pocillo individual para análisis posterior.
También, como la composición usada en la presente invención es más
cara que el material en fase sólida sin el agente de unión, se
obtiene un beneficio económico resultante del uso de la combinación
para preparar ciertas partes que están en contacto con el líquido
que contiene la muestra.
Las etapas físicas implicas incluyen mezclar el
agente de unión con un material que ha de convertirse en la fase
sólida o sustrato. El material es un termoplástico y el agente de
unión a embeber se mezcla con una pequeña reserva de gránulos de
plástico y se calienta hasta que se funde o hasta que el agente de
unión puede mezclarse con el propio plástico fundido. La
uniformidad en la mezcla del agente de unión y los gránulos de
plástico se potenció debido a la electricidad estática generada
durante la mezcla que provocó un recubrimiento más uniforme sobre
los gránulos de plástico y una distribución uniforme por toda la
mezcla. El plástico fundido se forma después en un sustrato
plástico de cualquier forma deseada. El agente de unión se
distribuye por todo el sustrato plástico. No es necesario que
ocurra reacción química entre el sustrato plástico y el agente de
unión, ni es particularmente deseable una reacción química. Los
ejemplos de polímeros termoplásticos adecuados incluyen
poliestiereno, polietileno, polipropileno, policarbonato,
polietilentereftalato, poliéster (por ejemplo Dracon), poliuretano,
poliolefina, alcohol polivinílico, PVP y otros polímeros usados en
contacto con tejidos o fluidos biológicos.
Pueden usarse otros materiales plásticos tales
como polímeros termoestables. En una realización alternativa de
esta invención, el agente de unión se mezcla con los monómeros u
oligómeros que se calientan después para polimerizar o reticular la
composición, atrapando de esta manera el agente de unión. El agente
de unión se selecciona para que no participe en la reacción de
polimerización por reticulación. En una realización preferida, el
agente de unión se trata de manera que no participa en la reacción
de unión por polimerización.
El sustrato plástico puede prepararse también
mediante métodos de polimerización químicos, por luz ultravioleta u
otros métodos de polimerización no térmicos. Pueden añadirse
diversos endurecedores, clarificadores y plastificantes para dar al
sustrato sus propiedades físicas deseadas. En dicha situación, el
agente de unión puede mezclarse con un material formador de
sustrato (por ejemplo monómeros) antes de o simultáneamente con la
adición del agente de endurecimiento o el agente de polimerización.
Los ejemplos incluyen epoxis y algunos de los mismos polímeros
mostrados anteriormente como polímeros termoplásticos.
La fase sólida que contiene al agente de unión
tiene una ventaja clara respecto a otros componentes insolubilizados
en ensayos de unión convencionales. En la presente invención,
cuando el ensayo se completa, se puede separar la pareja de unión
unida usando ácido diluido, desnaturalización u otras técnicas más
rigurosas que no podrían usarse si el agente de unión simplemente
se adsorbiera a la fase sólida. Esto permite reutilizar la misma
fase sólida, lo que ahorra tiempo y esfuerzo de calibración de una
nueva fase sólida. La naturaleza única de embebido del agente de
unión en una fase sólida usada de acuerdo con la presente invención
permite exponer el agente de unión a condiciones químicas y/o
físicas inaceptables de cualquier otra manera.
Dependiendo de las propiedades del agente de
unión, el plástico y el molde u otro medio de formación, el agente
de unión puede concentrarse de manera natural en la superficie del
sustrato plástico formado. También, cuando el agente de unión tiene
porciones diferentes con propiedades diferentes, el agente de unión
puede mantenerse preferentemente en una configuración particular.
Por ejemplo, en un plástico hidrófobo, tal como poliestireno, un
sustrato de unión que tiene restos tanto hidrófilos como hidrófobos,
tal como un receptor de unión a la membrana de la célula proteica,
la porción hidrófila es más probable que se exponga a la superficie
del sustrato plástico. Esta orientación puede potenciarse usando un
molde más hidrófilo o fluido de refrigeración hidrófilo en contacto
con el sustrato
plástico.
plástico.
El agente de unión puede estar compuesto por un
componente adicional distinto de un resto de unión. En otra
realización de la presente invención, el agente de unión puede
acoplarse en primer lugar químicamente a otro compuesto químico que
se asocia fácilmente con el material que forma el sustrato de fase
sólida. Por ejemplo, cuando se usa un sustrato hidrófobo y un
presunto agente de unión muy hidrófilo, puede ser ventajoso hacer
reaccionar primero químicamente un resto hidrófobo con el presunto
agente de unión, de manera que una porción del agente de unión
total se mezcle fácilmente con el sustrato hidrófobo. Como
alternativa, se puede añadir un tensioactivo u otra composición al
material para hacer que la fase sólida ayude en la adherencia,
distribución y embebido del agente de unión del sustrato en fase
sólida. También, puede embeberse sólo un compuesto hidrófobo que
reaccione con y se una al agente posteriormente.
La cantidad de agente de unión presente en la
fase sólida puede variar ampliamente; por ejemplo, de
aproximadamente 0,00000001 a aproximadamente 500 partes en peso por
1000 partes en peso de material que forma la fase sólida. En una
realización preferida, el agente de unión está en el intervalo de
1,0 \mug/ml a 100 mg/ml.
Aunque todos los agentes de unión tienen ciertas
limitaciones de temperatura y químicas, el material que forma el
sustrato plástico puede elegirse o modificarse cuidadosamente para
acomodar esta temperatura y limitaciones químicas. Dependiendo del
agente de unión empleado puede elegirse juiciosamente un material
para que se convierta en sustrato sólido y las condiciones
necesarias para hacerlo solidificar.
Por ejemplo, ciertos poliestirenos se funden a
una temperatura relativamente baja. Estas temperaturas son
compatibles con agentes de unión fabricados a partir de
polinucleótidos y lípidos. De hecho, ciertos poliestirenos se
funden a temperaturas que sólo son dos veces tan calientes como las
usadas en la preparación de los antígenos antes de correrlos en un
gel de poliacrilamida, particularmente en la etapa de
desnaturalización por calor. La temperatura a la que el
poliestireno termoplástico se funde puede disminuirse adicionalmente
mediante la adición de diversos compuestos químicos. La
modificación de las propiedades físicas y ópticas de materiales
plásticos se conoce per se. La cantidad en peso del agente de
unión que se añade es muy pequeña comparada con la cantidad en peso
de plástico y, por lo tanto, es improbable que afecte
significativamente a sus propiedades. Puede decirse lo mismo para
usar otros materiales sustratos.
Puede usarse cualquiera de los formatos de
ensayo de unión convencionales con la condición de que el agente de
unión se embeba en primer lugar en una fase sólida antes de añadir
una pareja de unión. La literatura de patentes está llena de
docenas de formatos de unión diferentes en las técnicas de
inmunoensayo, ensayo de hibridación de ácido nucleico y ensayo de
unión bioespecífica. Los formatos de unión habituales incluyen
ensayos intercalados que se muestran en las Figs.
2-3. Los ensayos de unión competitiva pueden usarse
cuando una segunda pareja de unión, se añade antes, durante, o
después de añadir la pareja de unión de manera que compiten para
unirse al agente de unión. Como alternativa, puede usarse un agente
de marcado para unirse a la pareja de unión en competición con el
agente de unión. Normalmente, cualquiera de la pareja de unión o la
segunda pareja de unión se marcan directa o indirectamente mediante
un agente de marcado para facilitar la detección del marcador unido
o libre.
Una muestra se refiere a una composición que
contiene una pareja de unión que puede ser de cualquier fuente. La
pareja de unión, y quizás otros componentes, en la muestra se
solubilizan en un fluido antes de usar en un ensayo de unión de
acuerdo con la presente invención. La muestra es preferiblemente una
muestra biológica, más preferiblemente un fluido biológico.
Una de las sustancias de unión puede medirse
directamente mediante actividad enzimática o similar basado
únicamente en su presencia o su actividad potenciada o inhibida por
el agente de unión que se une a la pareja de unión. Por ejemplo, si
el agente de unión es una enzima y la pareja de unión es un
inhibidor (o viceversa), puede medirse directamente la presencia de
la pareja de unión en una muestra añadida. Igualmente, si una de las
sustancias de unión es una enzima que necesita un sustrato, fuente
de energía, cofactor o enzima o vitamina para su actividad, la
presencia de cualquiera de estos como sustancia de unión en una
muestra puede detectarse midiendo la actividad enzimática. Puede
usarse también el ensayo inverso para la presencia de la enzima.
El agente de unión y la pareja de unión pueden
tener una amplia variedad de estructuras químicas, con la condición
de que se unan entre sí de una manera que no sea fácil de desunir
mediante un simple lavado. La unión es preferiblemente una unión
específica aunque puede ser de una naturaleza más general. Las
fuerzas electrostáticas (por ejemplo, fuerzas de van der Waals),
químicas (enlace covalente) y físicas (buen ajuste dimensional)
pueden estar implicadas o constituir las propiedades de unión.
La afinidad de unión y la avidez pueden variar
dependiendo de las necesidades requeridas para cada aplicación. Por
ejemplo, para algunos ensayos, puede ser esencial una unión
altamente específica. Para otras técnicas, puede necesitarse en
lugar de ello una propiedad de unión más genérica. Por lo tanto,
puede ser deseable un número grande de sustancias embebidas.
Estos componentes que pueden unirse pueden ser
proteínas (incluyendo lipoproteínas, glicoproteínas,
metaloproteínas, fragmentos y subunidades), más preferiblemente
anticuerpos o fragmentos de los mismos (Fab, Fc, Fab2, etc.),
antígenos, enzimas, hormonas, receptores celulares, microorganismos
o partículas virales. Otras estructuras químicas tales como
lípidos, polisacáridos (especialmente antígenos bacterianos,
antígenos de grupo sanguíneo mayoritario y minoritario), vitaminas,
sustratos enzimáticos, coenzimas, co-factores, iones
metálicos unidos, polinucleótidos y otros compuestos orgánicos
(tales como un metabolito, ciclodextrina, monosacárido o agente
quelante) pueden usarse como pareja de unión. El agente de unión y/o
pareja de unión puede ser una fracción de una molécula con la
condición de que retenga las propiedades de unión.
Para la mayoría de formatos de ensayo de unión,
es necesario un agente de marcado además del agente de unión y de
la pareja de unión para determinar si las dos sustancias de unión
realmente se unen entre sí. El agente de marcado es una
composición, normalmente un compuesto químico conjugado que tiene
dos propiedades. En primer lugar, el agente de marcado debe
contener un marcador; en segundo lugar el agente de marcado debe
unirse física o químicamente a la pareja de unión o al agente de
unión. Típicamente, estas dos propiedades pertenecen a diferentes
porciones del agente de marcado, donde las dos porciones están
acopladas químicamente juntas.
Los ejemplos de marcadores adecuados incluyen:
un resto radioactivo, una enzima o porción de la misma, un sustrato
enzimático, un resto fluorescente, un resto quimioluminiscente, un
inactivador, un resto que refleja o adsorbe luz u otra radiación
electromagnética, una partícula magnética, paramagnética o
supermagnética, un compuesto químico detectable por resonancia
magnética, una partícula sólida porosa o lámina o cualquier resto
que sea fácilmente detectable directamente o que interaccione con
otra sustancia (tal como otro resto químico, un iniciador de
polimerización, etc.) que da como resultado un cambio
detectable.
Los ejemplos de la porción del agente de marcado
que se unen a la pareja de unión incluyen: un anticuerpo, un
antígeno, un hapteno, proteína A o G, ADN, un adsorbente de la
pareja de unión o agente de unión, biotina, avidina/estreptavidina
y restos que reaccionan químicamente con la pareja de unión o el
agente de unión.
El agente de detección puede estar en varias
porciones tales como anticuerpo IgG de conejo
anti-ratón marcado con la enzima glucosa oxidasa y
por separado libre en otra solución, la enzima glucosa sustrato, una
segunda enzima peroxidasa, y
3,3',5,5'-tetrametilbencidina como cromógeno.
La fase sólida que contiene el agente de unión
usada en el ensayo de la invención puede usarse como un adsorbente
sin separación cromatográfica. En esta situación, es deseable
retirar una pareja de unión de una muestra líquida porque es tóxico
o indeseable de otra manera. Para dicha adsorción, la muestra
líquida se pone en contacto con la fase sólida que contiene agente
de unión en condiciones que permiten la unión, y después el sólido
y el líquido se separan. Los ejemplos incluyen el uso de
eritrocitos, plaquetas, células o líneas celulares, o versiones
liofilizadas de las mimas como agente de unión para unirse y
absorber sustancias de unión no específicas que pueden interferir
con el ensayo. La fase sólida que contiene agentes de unión puede
regenerarse después separando la pareja de unión unida usando
extremos de pH, condiciones iónicas e incluso productos químicos
y/o condiciones rigurosas.
En otra realización de la presente invención, el
agente de unión embebido en la fase sólida puede usarse para
detectar o separar partículas grandes.
De una manera similar, las pequeñas partículas
sólidas que contienen el agente de unión pueden usarse en ensayos
de aglutinación para una pareja de unión en una muestra. Sin
embargo, en dicho ensayo, es preferible que la pareja de unión sea
capaz de unirse a dos o más sitios de unión o puede añadirse otro
reactivo capaz de unirse a dos o más parejas de unión o agentes de
unión para inducir la aglutinación aparente de las partículas
dependiendo de si la pareja de unión está presente o no en la
muestra.
Aún otra realización de la presente invención
implica numerosos ensayos de hibridación de polinucleótidos y
técnicas para detectar o secuenciar polinucleótidos diana en una
muestra. En este sistema, la fase sólida contiene un polinucleótido
como agente de unión. La pareja de unión es el polinucleótido diana
como una pareja de unión que puede unirse mediante hibridación al
agente de unión. Las etapas de detección se conocen per se
en el campo de ensayo de hibridación de ADN.
La fase sólida que constituye el sustrato
plástico puede moldearse en cualquier forma tal como partículas,
perlas, tubos, placas multi-pocillo, etc. La fase
sólida puede ser monolítica o porosa dependiendo de la pareja de
unión potencial y las cantidades de agente de unión y pareja de
unión presentes que se van a unir. La fase sólida es, preferible y
ventajosamente, ópticamente transparente.
La capacidad para impregnar satisfactoriamente
artículos de plástico con un antígeno seleccionado entre el grupo
compuesto por lípidos, fosfolípidos, ADN, y ARN puede conducir a
muchas ventajas en la tecnología ELISA así como en otras
aplicaciones biomédicas, tanto diagnósticas como clínicas. Con
respecto a antígenos de PL, la impregnación en procesos plásticos
puede mejorar el ELISA:
1) Proporcionando una distribución uniforme y
concentraciones constantes de antígeno en los pocillos de la
placa.
2) Eliminando la pérdida de antígeno durante los
procedimientos de lavado.
3) Acortando el tiempo de ensayo y disminuyendo
la cantidad de trabajo del tecnólogo.
4) Proporcionando mejoras en la consistencia y
estandarización intra- e interlaboratorio.
5) Permitiendo la reutilización del artículo
plástico para ensayos y/o procedimientos adicionales. Otros
beneficios de esta tecnología son la fabricación de perlas de
plástico impregnadas con antígeno para purificación de afinidad de
anticuerpos específicos y proteínas o receptores de plasma de unión
a PL. La inclusión de PL en plásticos usados para dispositivos
médicos, por ejemplo, válvulas artificiales e injertos en vasos
proporcionaría una superficie más natural o biológica, es decir,
menos trombogénica, para el contacto con fluidos corporales.
Ejemplo
1
Cinco libras (2,27 kg) de perlas de poliestireno
y 500 mg de cardiolipina liofilizada se mezclaron mediante una
varilla de acero en un recipiente de acero inoxidable. Esta mezcla
fue facilitada por electricidad estática mientras la cardiolipina
se distribuía minuciosamente por toda la reserva de gránulos de
poliestireno. La mezcla se extruyó en una hélice calentada que
fundió el poliestireno y lo inyectó en un molde para tubos cónicos
de 50 cc.
El material fundido solidificó por enfriamiento.
El tubo cónico acabado se retiró después del molde y estaba
preparado para el uso inmediato sin la adición de ningún
recubrimiento antigénico.
Ejemplo
2
Los tubos producidos en el Ejemplo 1 se
bloquearon después incubando una solución de albúmina de suero
bovino al 10% en los tubos durante una hora a temperatura ambiente.
Los tubos bloqueados se ensayaron para determinar si la
cardiolipina retenía sus propiedades antigénicas y de unión a la
proteína del plasma y funcionaba normalmente en condiciones
adecuadas para ELISA. Las muestras de suero líquido que se sabe que
contenían aPA y muestras de suero líquido que se sabe que no
contenían aPA se diluyeron 1:20, 1:50, 1:100 y 1:400 y se añadieron
a diferentes tubos y condiciones ajustadas que permiten la unión
anticuerpo-antígeno durante 40, 80 y 120 minutos.
El líquido se decantó del tubo y el interior de los tubos se lavó
con cuidado cuatro veces para retirar cualquier anticuerpo unido.
Un anticuerpo de cabra o de ratón monoclonal marcado con enzima
(fosfatasa alcalina o peroxidasa de rábano picante) dirigido a IgG
humana, A o M se añadió al tubo y se dejó que se uniera a cualquier
anticuerpo humano presente durante una hora. El anticuerpo marcado
se decantó después desde el tubo y el interior del tubo se lavó con
cuidado cuatro veces para retirar cualquier anticuerpo marcado no
unido. Se añadieron al tubo los reactivos de ensayo que contenían
un sustrato apropiado para cada enzima. Después de hacer reaccionar
con las enzimas, el sustrato formó directa o indirectamente un
producto que es espectrofotométricamente detectable. Para las
muestras que no contenían aPA, sólo el fondo fue
espectrofotométricamente detectable. Los datos se muestran
gráficamente en las
Figs. 4-7.
Figs. 4-7.
Ejemplo
3
Tubos de 50 cc de polipropileno que contenían
antígeno de cardiolipina se prepararon también de la misma manera
que en el Ejemplo 1 excepto que se sustituyó el poliestireno con
polipropileno. Los tubos que contenían polipropileno se usaron
después en un ELISA usando las mismas técnicas y reactivos que en el
Ejemplo 2. Aunque los resultados fueron menores a aquellos usando
poliestireno, el ensayo fue satisfactorio para la detección
cualitativa y cuantitativa de aPA en muestras de suero.
Ejemplo
4
Después de realizar el inmunoensayo del Ejemplo
2 o 3, el contenido de anticuerpo de los tubos se separó lavando en
un tampón de pH 2,5. Los tubos impregnados con cardiolipina se
reutilizaron después y los resultados fueron esencialmente los
mismos. Incluso después de usarlos una tercera vez, la variación fue
menor del 5% respecto a los datos obtenidos usando tubos vírgenes.
Por lo tanto, las propiedades antigénicas de TL no se vieron
afectadas por la fabricación del artículo plástico y la posterior
separación de los anticuerpos.
Ejemplo
6
Cinco libras (2,27 kg) de gránulos de reserva de
poliestireno se mezclan con 50 ng de oligonucleótido liofilizado
con una cola poli-T que tiene una longitud media
mayor de aproximadamente 1,0 kb mediante una varilla de acero en un
recipiente de acero inoxidable de una manera similar a la del
Ejemplo 1 para distribuir uniformemente el oligonucleótido por
todos los gránulos de poliestireno. La mezcla se extruye en una
hélice calentada que funde el poliestireno e inyecta la mezcla en
un molde para tubos cónicos de 50 cc.
El material fundido solidifica por enfriamiento.
El tubo cónico acabado se retira después del molde y está listo
para el uso inmediato sin la adición de ningún recubrimiento de
polinucleótido.
Ejemplo
7
Los tubos producidos en el Ejemplo 6 se llenan
después con tampón de hibridación que contiene 0,5 ng de ADN de
muestra que tiene una longitud media de aproximadamente 600 pb y una
secuencia complementaria al oligonucleótido embebido en el
plástico. El ADN de muestra se tiene incorporado digoxigenen en
aproximadamente el 10% de los TTP en la secuencia de muestra de
ADN. Los tubos de control omiten la adición del ADN de muestra. Los
tubos se sitúan en un baño de agua hirviendo hasta que la
temperatura del tampón de hibridación permanece por encima de 90ºC
durante dos minutos. Los tubos se retiran y se dejan enfriar a la
temperatura de hibridación óptima para el oligonucleótido y
permanecen a esta temperatura durante 60 minutos. El líquido se
decanta de los tubos y se lava con una serie de tampones con alto
contenido salido. Los tubos se bloquean con albúmina de suero
bovino al 10%, un agente de bloqueo, durante 30 minutos a
temperatura ambiente. Después, el agente de bloqueo se decanta, se
añade el anticuerpo para digoxigenen marcado con fosfatasa alcalina
que contiene tampón y se incuba a temperatura ambiente durante 60
minutos. Los tubos se lavan 3 veces con un tampón de solución
salina. Se añade paranitro-fenilfosfato en tampón
dietanolamina y los tubos se incuban en la oscuridad durante 60
minutos. La cantidad de color desarrollado se determina
espectrofotométricamente y se compara con tubos de control en los
que no se añade ADN de muestra para determinar la presencia de
fosfatasa alcalina que indica que los tubos con ADN incorporado
sirven eficazmente como fase sólida para un ensayo de unión a
ADN.
Ventajosamente, el método de preparación del
sustrato en fase sólida que contiene el agente de unión que tiene
un agente de unión disperso uniformemente por todo un material
sólido puede realizarse a temperaturas de fusión altas,
preferiblemente temperaturas mayores de 100ºC. Por ejemplo, el
proceso de la invención puede realizarse a 226ºC para poliestireno,
232ºC para propileno y 246ºC para policarbonato. El método de
preparación del sustrato en fase sólida que contiene el agente de
unión es preferiblemente un método de moldeo por inyección y
preferiblemente el proceso de moldeo por inyección se realiza
sustancialmente en ausencia de agua.
Claims (16)
1. Un ensayo de unión para detectar la
presencia de una pareja de unión que comprende: 1) poner en
contacto una muestra que se sospecha que contiene una pareja de
unión con un material sólido que contiene agente de unión durante
un tiempo suficiente y en unas condiciones suficientes para permitir
que una pareja de unión se una al agente de unión, donde el
material sólido tiene un agente de unión disperso uniformemente en
todo ello y embebido en su interior,
donde el agente de unión no se acopla
químicamente al material sólido y se une a una pareja de unión y
donde el material sólido se obtiene solidificando un material
fluido polimérico termoplástico que tiene un agente de unión
sustancial disperso uniformemente en su interior y 2) detectar la
presencia o ausencia de unión de la pareja de unión al agente de
unión,
donde el agente de unión se selecciona entre el
grupo compuesto por: lípidos, fosfolípidos, ADN y ARN, y donde la
pareja de unión es un componente que está libre en un líquido y se
une al agente de unión embebido previamente para
insolubilizarse.
2. El ensayo de unión de la reivindicación 1,
en el que el material sólido que contiene el agente de unión se
obtiene mediante 1) mezclando un material fluido que se ha
convertido en un material sólido con un agente de unión de manera
que el agente de unión se distribuye uniformemente dentro del
material fluido para formar una mezcla o, alternativamente, mezclar
el agente de unión con un material termoplástico o sólido y después
calentar hasta que se funda y 2) solidificar y conformar la mezcla
para formar un material sólido que contiene agente de unión.
3. El ensayo de unión de acuerdo con la
reivindicación 1 o 2 en el que el material fluido contiene un
monómero u oligómero que forma un material sólido cuando se
polimeriza o reticula y donde el agente de unión se selecciona o se
trata de manera que no participa en dicha polimerización o
reticulación.
4. El ensayo de unión de acuerdo con la
reivindicación 3 en el que el monómero u oligómero se polimeriza o
reticula por calor o mediante la adición de un compuesto
químico.
5. El ensayo de unión de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que el material
sólido se obtiene usando un proceso de moldeo por inyección.
6. El ensayo de unión de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en el que la detección de
la presencia o ausencia de unión de la pareja de unión al agente de
unión comprende poner en contacto un agente de marcado con la
muestra o con el material sólido que contiene la pareja de unión
antes o después de que la muestra se ponga en contacto con el
material sólido que contiene el agente de unión.
7. El ensayo de unión de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en el que las parejas de
unión pueden separarse del material sólido mediante la aplicación de
un ácido o mediante cambios en el pH o condiciones iónicas para
preparar el material para reutilizarlo en ensayos de unión.
8. El ensayo de unión de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en el que el material
sólido que contiene el agente de unión comprende uno o más polímeros
termoplásticos seleccionados entre el grupo compuesto por
poliestireno, polietileno, polipropileno, policarbonato,
polietilentereftalato, poliéster, poliuretano, poliolefina, alcohol
polivinílico y polivinilpirrolidona.
9. El ensayo de unión de acuerdo con la
reivindicación 8, en el que el material sólido que contiene el
agente de unión comprende poliestireno o polipropileno.
10. El ensayo de unión de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en el que dicho material
en fase sólida que contiene agente de unión comprende al menos parte
de un recipiente diseñado para contener la muestra.
11. El ensayo de unión de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el material
sólido que contiene el agente de unión es un recipiente que se usa
en sistemas ópticos de detección automática.
12. El ensayo de unión de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que el material
sólido está en una forma de perla, tubo, pocillo o placa
multi-pocillo.
13. El ensayo de unión de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 en el que el agente de
unión está liofilizado.
14. El ensayo de unión de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que el ensayo se
realiza para la detección de antígenos fosfolipídicos.
15. El ensayo de unión de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en el que el ensayo se
realiza para la detección de proteínas de unión a fosfolípidos.
16. El ensayo de unión de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que el ensayo se
realiza para la detección de anticuerpos asociados con un estado
seleccionado entre el grupo compuesto por lupus sistémico
eritematoso, trombosis venosa, trombosis arterial recurrente,
absorción espontánea recurrente, trombocitopenia, corea, epilepsia,
livedo, hipertensión pulmonar idiopática, afecciones reumatológicas
y enfermedades colagenosas.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/909,889 US6177282B1 (en) | 1997-08-12 | 1997-08-12 | Antigens embedded in thermoplastic |
| US909889 | 1997-08-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2268786T3 true ES2268786T3 (es) | 2007-03-16 |
Family
ID=25427986
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES98940836T Expired - Lifetime ES2268786T3 (es) | 1997-08-12 | 1998-08-12 | Ensayo de union usando antigenos embebidos en termoplastico. |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6177282B1 (es) |
| EP (2) | EP1005652B1 (es) |
| JP (1) | JP2001512832A (es) |
| AU (1) | AU753093B2 (es) |
| CA (1) | CA2300381A1 (es) |
| DE (1) | DE69835154T2 (es) |
| DK (1) | DK1005652T3 (es) |
| ES (1) | ES2268786T3 (es) |
| WO (1) | WO1999008113A1 (es) |
Families Citing this family (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7018798B2 (en) * | 1997-08-12 | 2006-03-28 | Embedded Concepts, Llc | Nucleic acid antigens embedded in thermoplastic |
| US6177282B1 (en) * | 1997-08-12 | 2001-01-23 | Mcintyre John A. | Antigens embedded in thermoplastic |
| US6713309B1 (en) | 1999-07-30 | 2004-03-30 | Large Scale Proteomics Corporation | Microarrays and their manufacture |
| US7407668B2 (en) * | 2002-01-24 | 2008-08-05 | Boston Scimed, Inc. | Medical articles having enzymatic surfaces for localized therapy |
| JP4758342B2 (ja) * | 2003-06-03 | 2011-08-24 | キャンティマー インコーポレイテッド | 相変化センサー |
| WO2005041662A1 (en) * | 2003-10-03 | 2005-05-12 | Visionary Biomedical, Inc. | Method for treating collagenous tissue |
| US20050191644A1 (en) * | 2003-10-06 | 2005-09-01 | Research Organization of Information and Systems, President | Methods for detecting biopolymers; biochips; methods for immobilizing antibodies; and substrates to which antibodies are immobilized |
| CN1934233B (zh) * | 2003-10-28 | 2015-02-04 | 塞克姆公司 | 清洁溶液和蚀刻剂及其使用方法 |
| US20070141552A1 (en) * | 2004-04-28 | 2007-06-21 | Warren William L | Automatable artificial immune system (AIS) |
| US8298824B2 (en) | 2004-04-28 | 2012-10-30 | Sanofi Pasteur Vaxdesign Corporation | Methods of evaluating a test agent in a diseased cell model |
| US20060275270A1 (en) * | 2004-04-28 | 2006-12-07 | Warren William L | In vitro mucosal tissue equivalent |
| US7785883B2 (en) * | 2004-04-28 | 2010-08-31 | Vax Design Corp. | Automatable artificial immune system (AIS) |
| US7709256B2 (en) * | 2004-04-28 | 2010-05-04 | Vaxdesign Corp. | Disease model incorporation into an artificial immune system (AIS) |
| US7855074B2 (en) | 2004-04-28 | 2010-12-21 | Vaxdesign Corp. | Artificial immune system: methods for making and use |
| US7771999B2 (en) * | 2004-04-28 | 2010-08-10 | Vaxdesign Corp. | Disease model incorporation into an artificial immune system (AIS) |
| US8071373B2 (en) | 2004-04-28 | 2011-12-06 | Sanofi Pasteur Vaxdesign Corp. | Co-culture lymphoid tissue equivalent (LTE) for an artificial immune system (AIS) |
| US8030070B2 (en) * | 2004-04-28 | 2011-10-04 | Sanofi Pasteur Vaxdesign Corp. | Artificial lymphoid tissue equivalent |
| US7785806B2 (en) * | 2004-04-28 | 2010-08-31 | Vaxdesign Corporation | Method for determining the immunogenicity of an antigen |
| WO2007061793A2 (en) | 2005-11-18 | 2007-05-31 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by THE SECRETARY OF THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SCIENCES, CENTERS FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION | Modified cardiolipin and uses therefor |
| US8778619B2 (en) | 2005-11-18 | 2014-07-15 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Oxidized cardiolipin and uses to detect cardiolipin antibodies |
| AU2006331504A1 (en) * | 2005-12-21 | 2007-07-05 | Vaxdesign Corporation | In vitro germinal centers |
| ATE531793T1 (de) * | 2005-12-21 | 2011-11-15 | Sanofi Pasteur Vaxdesign Corp | Eine poröse membran gerät, das die differenzierung von monozyten in dendritische zellen fördert |
| US8642307B2 (en) * | 2006-05-25 | 2014-02-04 | Nalge Nunc International Corporation | Cell culture surface chemistries |
| EP2409714A1 (en) * | 2006-06-27 | 2012-01-25 | Sanofi Pasteur VaxDesign Corporation | Models for vaccine assessment |
| US8171270B2 (en) * | 2006-12-29 | 2012-05-01 | Intel Corporation | Asynchronous control transfer |
| WO2009048661A1 (en) * | 2007-07-16 | 2009-04-16 | Vaxdesign Corporation | Artificial tissue constructs comprising alveolar cells and methods for using the same |
| US9328172B2 (en) * | 2008-04-05 | 2016-05-03 | Single Cell Technology, Inc. | Method of obtaining antibodies of interest and nucleotides encoding same |
| WO2014202680A1 (de) * | 2013-06-18 | 2014-12-24 | THERMOSOME GmbH | Stereospezifische lipide zur lokoregionären therapie mit langzeitzirkulierenden stimuli-sensitiven nanocarriersystemen |
| JP2015083969A (ja) * | 2013-09-19 | 2015-04-30 | 株式会社リコー | 検査装置、転写材、検査装置の製造方法、及び検査方法 |
| US9757330B2 (en) | 2013-10-18 | 2017-09-12 | Industrial Technology Research Institute | Recipe for in-situ gel, and implant, drug delivery system formed thereby |
| JP7110360B2 (ja) | 2017-10-09 | 2022-08-01 | テルモ ビーシーティー バイオテクノロジーズ，エルエルシー | 凍結乾燥方法 |
| US10191036B1 (en) | 2018-03-22 | 2019-01-29 | NUB4U, Inc. | System for detecting and removing biological analytes in fluids |
| JP7541993B2 (ja) | 2019-03-14 | 2024-08-29 | テルモ ビーシーティー バイオテクノロジーズ，エルエルシー | 凍結乾燥用ローディングトレイ組立体、凍結乾燥システム及び凍結乾燥方法 |
| CN117288948B (zh) * | 2023-06-19 | 2024-06-04 | 无锡嘉润诊断技术有限公司 | 抗凝血酶原抗体检测试剂盒 |
Family Cites Families (64)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4118349A (en) | 1971-05-12 | 1978-10-03 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Process for the manufacture of polystyrene latex compounds |
| US3766013A (en) * | 1971-08-24 | 1973-10-16 | American Cyanamid Co | Preparation of water-insoluble carrier bound enzymes |
| US3767790A (en) * | 1972-02-11 | 1973-10-23 | Nat Patent Dev Corp | Microorganisms |
| IT1008202B (it) * | 1974-07-31 | 1976-11-10 | Lostia Onofrio | Fibre inglobanti anticorpi antige ni antisieri procedimento per la loro preparazione e loro impieghi |
| US4195127A (en) * | 1975-06-10 | 1980-03-25 | W. R. Grace & Co. | Process for immobilizing proteins |
| US4360358A (en) | 1980-03-07 | 1982-11-23 | Yash Sharma | Immunoassay with solid phase having coating containing blood platelet substitute |
| US4407957A (en) * | 1981-03-13 | 1983-10-04 | Damon Corporation | Reversible microencapsulation of a core material |
| US4390343A (en) | 1981-07-06 | 1983-06-28 | Miles Laboratories, Inc. | Multilayer analytical element having an impermeable radiation diffusing and blocking layer |
| US4459362A (en) | 1982-02-02 | 1984-07-10 | Hana Biologics, Inc. | Immunoassay of phospholipid, such as phosphatidyl choline, in fluids such as amniotic |
| US4738724A (en) * | 1983-11-04 | 1988-04-19 | Warner-Lambert Company | Method for forming pharmaceutical capsules from starch compositions |
| US4752638A (en) * | 1983-11-10 | 1988-06-21 | Genetic Systems Corporation | Synthesis and use of polymers containing integral binding-pair members |
| US4609707A (en) * | 1983-11-10 | 1986-09-02 | Genetic Systems Corporation | Synthesis of polymers containing integral antibodies |
| US4673438A (en) * | 1984-02-13 | 1987-06-16 | Warner-Lambert Company | Polymer composition for injection molding |
| IL72924A (en) * | 1984-09-12 | 1988-07-31 | I D L International Diagnostic | Preparations for use in solid phase immunoassays comprising monoclonal antibodies covalently embedded in their immobilized hybridoma cells |
| US4656035A (en) * | 1984-12-21 | 1987-04-07 | University Of Tennessee Research Corporation | Method of separating blood platelets |
| CA1272127A (en) * | 1985-04-04 | 1990-07-31 | Hybritech Incorporated | Solid phase system for use in ligand-receptor assays |
| US5785989A (en) * | 1985-05-01 | 1998-07-28 | University Utah Research Foundation | Compositions and methods of manufacturing of oral dissolvable medicaments |
| US5288497A (en) * | 1985-05-01 | 1994-02-22 | The University Of Utah | Compositions of oral dissolvable medicaments |
| US5200270A (en) * | 1986-02-25 | 1993-04-06 | Toyo Soda Manufacturing Co., Ltd. | Carrier for a biologically active component for immunoassay or enzymatic reaction |
| DE3637421C1 (de) * | 1986-11-03 | 1987-10-29 | Nerbe Plus Ges Fuer Medizinisc | Reaktionsgefaess fuer die Blutgerinnungsreaktion |
| US5723588A (en) * | 1986-11-04 | 1998-03-03 | Protein Polymer Technologies, Inc. | Protein-enriched thermoplastics |
| US4822747A (en) * | 1986-12-09 | 1989-04-18 | Miles Inc. | Polyacrylamide gel particles having hapten moieties bound thereto as immunoassay reagent |
| DE3887145T2 (de) * | 1987-05-29 | 1994-04-28 | North Sydney Area Health Serv | Medizinische Testvorrichtung. |
| US4827944A (en) | 1987-07-22 | 1989-05-09 | Becton, Dickinson And Company | Body fluid sample collection tube composite |
| US5236703A (en) * | 1987-08-20 | 1993-08-17 | Virex Inc. | Polymeric substrates containing povidone-iodine as a control release biologically active agent |
| US5258503A (en) * | 1987-09-08 | 1993-11-02 | Kanegafuchi Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Autoantibody adsorbent and apparatus for removing autoantibodies using the same |
| US5277915A (en) * | 1987-10-30 | 1994-01-11 | Fmc Corporation | Gel-in-matrix containing a fractured hydrogel |
| US5234841A (en) * | 1987-12-18 | 1993-08-10 | Eastman Kodak Company | Methods of preparing a polymeric latex composition and water-insoluble biological reagent |
| US5013669A (en) * | 1988-06-01 | 1991-05-07 | Smithkline Diagnostics, Inc. | Mass producible biologically active solid phase devices |
| FR2635019B1 (fr) * | 1988-08-02 | 1992-06-12 | Centre Nat Rech Scient | Materiau capable de fixer les substances biologiques, et ses applications notamment comme support de chromatographie d'affinite |
| SE8900130L (sv) * | 1989-01-16 | 1990-07-17 | Klaus Mosbach | Konceptet att med hjaelp av molekylavtrycksmetoden framstaella konstgjorda antikroppar genom imprinting av t ex antigener samt att framstaella konstgjorda entzymer genom imprintning med transition state analoger |
| EP0460097A4 (en) | 1989-02-27 | 1992-03-11 | Biostar Med Prod | Method and diagnostic test kit for detection of anti-cardiolipin |
| US5428008A (en) * | 1989-04-14 | 1995-06-27 | Prp, Inc. | Therapeutic composition of micellar structures capable of promoting hemotasis |
| US5318899A (en) * | 1989-06-16 | 1994-06-07 | Cor Therapeutics, Inc. | Platelet aggregation inhibitors |
| US5324519A (en) * | 1989-07-24 | 1994-06-28 | Atrix Laboratories, Inc. | Biodegradable polymer composition |
| CA2044142A1 (en) * | 1989-10-19 | 1991-04-20 | Eiji Matsuura | Carrier for binding of anti-phospholipid antibodies, an immunoassay method using the same and a kit therefor |
| US5580770A (en) * | 1989-11-02 | 1996-12-03 | Alliedsignal Inc. | Support containing particulate adsorbent and microorganisms for removal of pollutants |
| CA2046606A1 (en) | 1989-12-27 | 1991-06-28 | Dinesh O. Shah | Method to immobilize cardiolipin, phosphatidyl choline and cholesterol to solid phase and immunoassay |
| IL93134A (en) * | 1990-01-23 | 1997-11-20 | Yissum Res Dev Co | Doped sol-gel glasses for obtaining chemical interactions |
| CA2058769C (en) * | 1990-04-06 | 1999-03-02 | Steven Anthony Krilis | Methods for determining phospholipids and antibodies thereof |
| DE4027728A1 (de) * | 1990-08-31 | 1992-03-05 | Bayer Ag | Immobilisierung von organischen makromolekuelen oder biopolymeren in einer polymermembran |
| EP0584228B1 (en) * | 1991-05-17 | 2000-07-12 | Biovail Technologies Ltd. | A method of producing thermoplastic polymeric material |
| WO1993001494A1 (en) * | 1991-07-12 | 1993-01-21 | Toxi Lab, Inc. | Method and apparatus for improved solid phase extraction |
| AU2605592A (en) * | 1991-10-15 | 1993-04-22 | Atrix Laboratories, Inc. | Polymeric compositions useful as controlled release implants |
| US5424219A (en) * | 1991-10-25 | 1995-06-13 | Cytech Biomedical, Inc. | Method of performing assays for biomolecules and solid supports for use in such methods |
| SE9103234D0 (sv) * | 1991-11-04 | 1991-11-04 | Bjoern Ekberg | Foerfarande foer separering av enantiomerer av aryloxipropanolaminderivat och kiralt fastfaskromatografimaterial foer anvaendning vid foerfarandet |
| US5413924A (en) * | 1992-02-13 | 1995-05-09 | Kosak; Kenneth M. | Preparation of wax beads containing a reagent for release by heating |
| US5372719A (en) * | 1992-03-30 | 1994-12-13 | Perseptive Biosystems, Inc. | Molecular imaging |
| US5414075A (en) | 1992-11-06 | 1995-05-09 | Bsi Corporation | Restrained multifunctional reagent for surface modification |
| US6022748A (en) * | 1997-08-29 | 2000-02-08 | Sandia Corporation - New Mexico Regents Of The University Of California | Sol-gel matrices for direct colorimetric detection of analytes |
| AU6029694A (en) * | 1993-01-19 | 1994-08-15 | Pharmacia P-L Biochemicals, Inc. | Storage and delivery of purified protein reagents with carrier wax |
| US5599660A (en) * | 1993-01-19 | 1997-02-04 | Pharmacia Biotech Inc. | Method and preparation for sequential delivery of wax-embedded, inactivated biological and chemical reagents |
| AU5997194A (en) * | 1993-02-03 | 1994-08-29 | A. James Farmilo | Automated histo-cytochemistry apparatus and encapsulation system for processing biological materials |
| US5472852A (en) * | 1993-09-15 | 1995-12-05 | Oklahoma Medical Research Foundation | Assay for detection of selective Protein C inhibition by patients |
| US6127154A (en) * | 1994-02-10 | 2000-10-03 | Mosbach; Klaus | Methods for direct synthesis of compounds having complementary structure to a desired molecular entity and use thereof |
| US5994110A (en) * | 1995-02-10 | 1999-11-30 | Mosbach; Klaus | Methods for direct synthesis of compounds having complementary structure to a desired molecular entity and use thereof |
| US5739244A (en) * | 1994-03-23 | 1998-04-14 | Fisk; Donald | Polymer composition containing prime starch |
| US5582907A (en) * | 1994-07-28 | 1996-12-10 | Pall Corporation | Melt-blown fibrous web |
| AT401653B (de) * | 1994-10-05 | 1996-11-25 | Avl Verbrennungskraft Messtech | Verfahren zur immobilisierung biologischer komponenten in einer polymermatrix sowie biosensoren unter verwendung derartiger immobilisate |
| ATE246212T1 (de) * | 1995-05-26 | 2003-08-15 | Igen Inc | Molekular geprägten perl polymere und stabilisierte suspensionspolymerisation von diesen in perfluorkohlstoff flussigkeiten |
| US6027721A (en) * | 1996-05-20 | 2000-02-22 | Cytotherapeutics, Inc. | Device and method for encapsulated gene therapy |
| US6054142A (en) * | 1996-08-01 | 2000-04-25 | Cyto Therapeutics, Inc. | Biocompatible devices with foam scaffolds |
| US7018798B2 (en) * | 1997-08-12 | 2006-03-28 | Embedded Concepts, Llc | Nucleic acid antigens embedded in thermoplastic |
| US6177282B1 (en) * | 1997-08-12 | 2001-01-23 | Mcintyre John A. | Antigens embedded in thermoplastic |
-
1997
- 1997-08-12 US US08/909,889 patent/US6177282B1/en not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-08-12 CA CA002300381A patent/CA2300381A1/en not_active Abandoned
- 1998-08-12 EP EP98940836A patent/EP1005652B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-12 ES ES98940836T patent/ES2268786T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-12 JP JP2000506530A patent/JP2001512832A/ja active Pending
- 1998-08-12 DK DK98940836T patent/DK1005652T3/da active
- 1998-08-12 EP EP06113434A patent/EP1715342A1/en not_active Withdrawn
- 1998-08-12 WO PCT/US1998/016575 patent/WO1999008113A1/en not_active Ceased
- 1998-08-12 AU AU89022/98A patent/AU753093B2/en not_active Ceased
- 1998-08-12 DE DE69835154T patent/DE69835154T2/de not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-03-17 US US09/528,181 patent/US6872576B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-09-28 US US10/950,509 patent/US20050042774A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20050042774A1 (en) | 2005-02-24 |
| AU753093B2 (en) | 2002-10-10 |
| JP2001512832A (ja) | 2001-08-28 |
| AU8902298A (en) | 1999-03-01 |
| EP1005652B1 (en) | 2006-07-05 |
| DE69835154D1 (de) | 2006-08-17 |
| US6872576B1 (en) | 2005-03-29 |
| CA2300381A1 (en) | 1999-02-18 |
| US6177282B1 (en) | 2001-01-23 |
| EP1715342A1 (en) | 2006-10-25 |
| DK1005652T3 (da) | 2006-10-30 |
| DE69835154T2 (de) | 2007-06-06 |
| EP1005652A4 (en) | 2002-06-26 |
| WO1999008113A1 (en) | 1999-02-18 |
| EP1005652A1 (en) | 2000-06-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2268786T3 (es) | Ensayo de union usando antigenos embebidos en termoplastico. | |
| JP7659905B2 (ja) | Ｎｍｄａｒ自己抗体を検出及び単離するためのｎｍｄａ受容体コンストラクト | |
| CA1149277A (en) | Process for determining immuno-complexes | |
| AU610818B2 (en) | Blood typing via immunological device | |
| FI102921B (fi) | Menetelmä biologisesti aktiivisten reagenssien valmistamiseksi sukkiin i-imidiä sisältävistä polymeereistä, analyysielementti ja menetelmiä n iiden käyttämiseksi | |
| JPH087213B2 (ja) | 固相への蛋白質固定化法、分析測定法及び固相 | |
| CA2544262A1 (en) | Gel-shell beads with adsorbed or bound biomolecules | |
| JP2732124B2 (ja) | 固相免疫検定用品及び該品を利用した検定法 | |
| Bereli et al. | Antibody purification by concanavalin A affinity chromatography | |
| JP4531252B2 (ja) | 粒子を使用した分析法および本方法を行うための試験キット | |
| JP2708590B2 (ja) | 生物学的に活性な分子が固定化された酵素膜，ｅｌｉｓａ膜，センサ膜 | |
| JPH01209370A (ja) | 免疫活性物質の測定法及び測定試薬 | |
| JP2001330614A (ja) | 生物活性を付与した固相およびその製造方法 | |
| KR102855663B1 (ko) | 3d 프린팅을 이용한 신속 면역진단 키트와 그 제조방법 | |
| JPS58221166A (ja) | 免疫化学的測定用担体および該担体を使用した測定試薬 | |
| US7018798B2 (en) | Nucleic acid antigens embedded in thermoplastic | |
| PT599803E (pt) | Processo para a identificacao de anticorpos e antigenes | |
| JP2001228156A (ja) | 梅毒抗体検出用免疫分析装置 | |
| JP2002311033A (ja) | リン脂質固相化方法及びリン脂質固相化検査用基材 | |
| JP3938627B2 (ja) | リジン親和性物質の測定方法 | |
| JPH01187460A (ja) | 自己免疫疾患診断試薬 | |
| JPH0368673B2 (es) | ||
| JPH1090264A (ja) | 免疫学的診断試薬 | |
| JPS5934155A (ja) | 免疫分析素子 | |
| JPS62503123A (ja) | 免疫複合物の検定のための方法および物品 |