ES2264210T3 - Derivados de xantina para el tratamiento de la isquemia cerebral. - Google Patents

Abstract

El empleo de un derivado de xantina, seleccionado de un compuesto de fórmula (1): (Ver fórmula) y un compuesto de fórmula (2): (Ver fórmula) o una sal farmacéuticamente admisible de los mismos, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la isquemia cerebral.

Description

Derivados de xantina para el tratamiento de la isquemia cerebral.

La presente invención tiene que ver con un agente terapéutico para los trastornos neurodegenerativos.

La mayor parte de los compuestos utilizados conforme a la presente invención son compuestos conocidos, y se conocen su antagonismo hacia el receptor de adenosina A_{2}, acción anti-enfermedad de Parkinson, acción antidepresiva, acción antiasmática, acción inhibitoria en la absorción ósea y acción en la excitación central [Solicitud de Patente Japonesa Examinada Publicada Nº 26516/72, J. Med. Chem., 34, 1.431 (1991), J. Med. Chem., 36, 1.333 (1993), WO 92/06976, Solicitud de Patente Japonesa No Examinada Publicada Nº 211856/94, Solicitud de Patente Japonesa No Examinada Publicada Nº 239862/94, WO 95/23165, Solicitud de Patente Japonesa No Examinada Publicada Nº 16559/94 y WO 94/01114).

Sin embargo, se sabe que dichos compuestos tienen una acción inhibitoria en la neurodegeneración.

La presente invención se refiere al empleo de un derivado de xantina seleccionado de un compuesto de fórmula (1):

1

y un compuesto de fórmula (2):

2

o una sal farmacéuticamente admisible de los mismos, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la isquemia cerebral.

En una forma de realización preferida, el derivado de xantina está representado por la fórmula (1), o una sal farmacéuticamente admisible del mismo.

Las sales farmacéuticamente admisibles de compuestos de las fórmulas (1) y (2) incluyen sales por adición de ácidos, sales metálicas, sales amónicas, sales por adición de aminas orgánicas y sales por adición de aminoácidos farmacéuticamente admisibles.

Las sales por adición de ácidos farmacéuticamente admisibles de compuestos de las fórmulas (1) y (2) incluyen sales por adición de ácidos inorgánicos tales como clorhidrato, sulfato y fosfato, y sales por adición de ácidos orgánicos tales como acetato, maleato, fumarato, tartrato, citrato y metanosulfonato; las sales metálicas farmacéuticamente admisibles incluyen sales de metales alcalinos tales como la sal sódica y la sal potásica, sales de metales alcalinotérreos tales como la sal de magnesio y la sal cálcica, la sal de aluminio y la sal de zinc; las sales amónicas farmacéuticamente admisibles incluyen de amonio y de tetrametilamonio; las sales por adición de aminas orgánicas farmacéuticamente admisibles incluyen sales con morfolina y piperidina; y las sales por adición de aminoácidos farmacéuticamente admisibles incluyen sales con lisina, glicina y fenilalanina.

Los compuestos de las fórmulas (1) y (2) se pueden producir mediante los métodos revelados en las publicaciones mencionadas arriba, o conforme a los métodos. El compuesto deseado en el proceso puede ser aislado y purificado mediante métodos de purificación utilizados convencionalmente en la química orgánica sintética, tales como filtración, extracción, lavado, secado, concentración, recristalización y diversas clases de cromatografía.

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En el caso donde se desee una sal de un compuesto de las fórmulas (1) y (2), y se produzca en forma de una sal deseada, puede ser sometida a purificación tal cual. En el caso donde se produzca un compuesto de las fórmulas (1) y (2) en forma libre y se desee su sal, se disuelve o suspende en un disolvente apropiado, y después se puede añadir un ácido o una base a eso para formar la sal.

Los compuestos de las fórmulas (1) y (2) y las sales farmacéuticamente admisibles de los mismos pueden estar en forma de aductos con agua o diversos disolventes, los cuales se pueden utilizar satisfactoriamente como agentes terapéuticos de la presente invención.

Abajo se muestran detalles adicionales de compuestos de las fórmulas (1) y (2).

Compuesto 1

(E)-1,3-dietil-8-(3,4-dimetoxiestiril)-7-metilxantina (Solicitud de Patente Japonesa No Examinada Publicada Nº 2118
56/94)

Punto de fusión: 190'4-191'3ºC

Análisis elemental: C_{20}H_{24}N_{4}O_{4}

Calculado (%): C, 62'48; H, 6'29; N, 14'57

Encontrado (%): C, 62'52; H, 6'53; N, 14'56

IR (BrK) \numáx (cm^{-1}): 1697, 1655, 1518

RMN (CDCl_{3}, 270 MHz) \delta (ppm): 7'74 (1H, d, J= 15'5 Hz), 7'18 (1H, dd, J= 8'3, 1'9 Hz), 7'08 (1H, d, J= 1'9 Hz), 6'89 (1H, d, J= 8'3 Hz), 6'77 (1H, d, J= 15'5 Hz), 4'21 (2H, q, J= 6'9 Hz), 4'09 (2H, q, J= 6'9 Hz), 4'06 (3H, s), 3'96 (3H, s), 3'93 (3H, s), 1'39 (3H, t, J= 6'9 Hz), 1'27 (3H, t, J= 6'9 Hz).

Compuesto 2

(E)-1,3-dietil-8-(3-metoxi-4,5-metilendioxiestiril)-7-metilxantina (Solicitud de Patente Japonesa No Examinada Publicada Nº 211856/94)

Punto de fusión: 201'5-202'3ºC

Análisis elemental: C_{20}H_{22}N_{4}O_{5}

Calculado (%): C, 60'29; H, 5'57; N, 14'06

Encontrado (%): C, 60'18; H, 5'72; N, 13'98

IR (BrK) \numáx (cm^{-1}): 1694, 1650, 1543, 1512, 1433

RMN (DMSO-d_{6}, 270 MHz) \delta (ppm): 7'58 (1H, d, J= 15'8 Hz), 7'23 (1H, d, J= 15'8 Hz), 7'20 (1H, d, J= 1'0 Hz), 7'09 (1H, d, J= 1'0 Hz), 6'05 (2H, s), 4'09-4'02 (2H, m), 4'02 (3H, s), 3'94-3'89 (2H, m), 3'89 (3H, s), 1'25 (3H, t, J= 7'2 Hz), 1'13 (3H, t, J= 6'9 Hz).

A continuación, se muestra la actividad farmacológica del compuesto (1) mediante los Ejemplos de Ensayo siguientes.

Ejemplo de Ensayo 1

Acción Inhibitoria en la Neurodegeneración

Se condujo el experimento según el método de Sundström y col. [Brain. Res. Bulletin, 21, 257-263 (1998)].

En el experimento, se utilizaron ratones macho C57BL/6NCrj de 9 a 10 semanas de edad (suministrados por Nippon Charles River). Durante el periodo de crianza preliminar, los animales fueron mantenidos en un laboratorio a temperatura ambiente (22 a 24ºC) bajo una humedad del 50 al 60%, y dejado alimento y agua a discreción.

Se disolvió clorhidrato de 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina [abreviado de ahora en adelante como MPTP HCl (RBI Co., Ltd.)] en salino fisiológico, a una concentración de 4 mg/ml. Se suspendió un compuesto de ensayo a una concentración de 1 mg/ml en dimetilsulfóxido (DMSO) al 3%. Cada grupo de ensayo constaba de 9 a 10 animales, y a un grupo de control se le dio salino fisiológico intraperitonealmente, y a un grupo de administración con MPTP HCl y un grupo de administración con MPTP HCl + compuesto de ensayo se les dio intraperitonealmente MPTP HCl (40 mg/kg).

Después de 1 hora, al grupo de control y al grupo de administración con MPTP HCl se les dio oralmente Tween al 0'3%, y al grupo de administración con MPTP HCl + compuesto de ensayo se le dio oralmente el compuesto de ensayo (10 mg/kg). Después de 1 semana, los animales fueron decapitados, y se extrajo el striatum de allí, bajo enfriamiento con hielo. El striatum fue almacenado en un ultracongelador (< -80ºC) antes del experimento de unión.

Se condujo un ensayo de unión de [^{3}H]-mazindol en el método siguiente. Se puso un striatum y 300 \mul de tampón (120 mM de ClNa, 5 mM de ClK, 50 mM de Tris, pH 7'9) en un tubo de microcentrífuga, y se homogeneizó mediante un homogeneizador portátil S-203 (fabricado por Iuchi), y se centrifugó a 15.000 rpm, 4ºC, durante 5 minutos (mediante KUBOTA 1710). Los precipitados fueron suspendidos en 300 \mul de tampón y centrifugados después nuevamente a 15.000 rpm, 4ºC, durante 5 minutos. Los precipitados fueron suspendidos en 500 \mul de tampón y distribuidos después en cuatro tubos de ensayo, en porciones de 100 \mul. La suspensión restante (100 \mul) se utilizó para la cuantificación de proteínas. Para determinar la unión no específica, a dos tubos de ensayo de los cuatro se añadió maleato de nomifensina (RBI Co., Ltd.) (concentración final: 10 \muM) como inhibidor de la recaptación de dopamina. Se inició la reacción de unión añadiendo 25 \mul de [^{3}H]-mazindol (concentración final: 10 nM) (Spec. Act. 888 GBq/mmol, un producto de NET). Se incubó la mezcla durante 1 hora bajo enfriamiento con hielo, y el homogenado de striatum fue absorbido sobre un filtro de vidrio (Whatman, GF/B) en un recolector celular, y lavado tres veces con 5 ml de tampón. Se midió la radiactividad en el filtro de vidrio con un contador de centelleo líquido. Para cada striatum, se determinó la unión de [^{3}H]-mazindol restando el promedio de la unión no específica de [^{3}H]-mazindol del promedio de la unión total de [^{3}H]-mazindol.

La cuantificación de proteínas fue conducida mediante el empleo de un juego de ensayo de proteínas DC Bio-Rad (Bio-Rad Co., Ltd.), con albúmina de suero bovino (Sigma Co., Ltd.) como estándar. La unión específica de [^{3}H]-mazindol se expresó como la cantidad de [^{3}H]-mazindol unido por unidad de peso de proteína, y para cada grupo (9 a 10 animales) se determinó la media \pm el error típico.

En la Tabla 1, los resultados están expresados en términos de la cantidad de [^{3}H]-mazindol unido específicamente (fmol/mg de proteína) en el striatum.

TABLA 1

Grupos de ensayo
Control	1.140'3 \pm 50'0
MPTP HCl	616'3 \pm 32'8 ***
MPTP HCl + compuesto 1	950'9 \pm 54'1 **
Control	1.219'3 \pm 66'4
MPTP HCl	621'2 \pm 27'7 ***
MPTP HCl + compuesto 2	794'9 \pm 28'5 *
* \hskip0.5cm p< 0'01 (comparado con el grupo al que se le dio MPTP HCl solamente)
** \hskip0.3cm p< 0'001 (comparado con el grupo al que se le dio MPTP HCl solamente)
*** \hskip0.1cm p< 0'001 (comparado con el grupo de control)
\hskip0.7cm (n = 9 a 10; prueba de la suma de rangos de Wilcoxon)

Según los resultados del ensayo, la reducción de la cantidad de [^{3}H]-mazindol unido específicamente por la administración de MPTP HCl fue inhibida por el compuesto 1. Esto es, se reveló que el compuesto 1 exhibe una acción inhibitoria en la degeneración de las neuronas dopaminérgicas.

Ejemplo de Ensayo 2

Prueba de Toxicidad Aguda

Se suministraron compuestos de ensayo, oral o intraperitonealmente, a grupos de ratones macho de la cepa ddy pesando 20 \pm 1 g, cada grupo constando de tres ratones. Siete días después de la administración, se observó la mortalidad para determinar la dosis letal mínima (DLM) de cada compuesto.

El valor DLM del compuesto 1 fue mayor de 1.000 mg/kg para administración oral.

Los compuestos de las fórmulas (1) y (2), o las sales farmacéuticamente admisibles de los mismos, tienen una acción inhibitoria en la neurodegeneración, y son útiles como agentes terapéuticos para el trastorno neurodegenerativo isquemia cerebral.

Los compuestos de las fórmulas (1) y (2), o las sales farmacéuticamente admisibles de los mismos, pueden ser utilizados tal cual o en forma de composiciones farmacéuticas diversas. Las composiciones farmacéuticas utilizadas conforme a la presente invención se pueden preparar mezclando uniformemente una cantidad eficaz de compuesto de las fórmulas (1) ó (2), o una sal farmacéuticamente admisible de los mismos como principio activo, con soportes farmacéuticamente admisibles. Las composiciones farmacéuticas están, preferentemente, en una forma de dosificación unitaria para administración rectal, administración oral o parenteral (incluyendo subcutánea, intravenosa e intramuscular), etc.

Para preparar una composición farmacéutica para administración oral, se puede utilizar cualquier soporte útil farmacéuticamente admisible. Por ejemplo, utilizando agua se pueden preparar preparaciones líquidas para administración oral, tales como una suspensión y un jarabe; azúcares tales como sacarosa, sorbitol y fructosa; glicoles tales como polietilénglicol y propilénglicol; aceites tales como aceite de sésamo, aceite de oliva y aceite de soja; conservantes tales como p-hidroxibenzoato; saborizantes tales como aroma de frambuesa y menta, etc. Se pueden preparar polvos, píldoras, cápsulas y comprimidos utilizando excipientes tales como lactosa, glucosa, sacarosa y manitol; agentes desintegrantes tales como almidón y alginato sódico; lubricantes tales como estearato magnésico y talco; aglutinantes tales como alcohol polivinílico, hidroxipropilcelulosa y gelatina; surfactantes tales como ésteres de ácidos grasos; plastificantes tales como gelatina, etc. Los comprimidos y las cápsulas son las dosis unitarias orales más útiles debido a la facilidad de administración. Para preparar comprimidos y cápsulas, se utilizan soporte farmacéuticos sólidos.

Se pueden preparar preparaciones inyectables utilizando soportes tales como agua destilada, una solución salina, una solución de glucosa, y una mezcla de una solución salina y una solución de glucosa. La preparación se puede ser preparada en forma de solución, suspensión o dispersión conforme a un método convencional, utilizando un auxiliar apropiado.

Los compuestos de las fórmulas (1) y (2), o una sal farmacéuticamente admisible de los mismos, pueden ser administrados oralmente en la forma farmacéutica descrita antes, o parenteralmente como inyección. La dosis eficaz y programa de administraciones varía dependiendo del modo de administración, edad, peso, y síntomas del paciente, etc. Sin embargo, generalmente los compuestos de las fórmulas (1) ó (2), o una sal farmacéuticamente admisible de los mismos, se administran en una dosis de 1 a 900 mg/60 kg/día, preferentemente en una dosis de 1 a 200 mg/60 kg/día.

En los ejemplos siguientes se describen algunas formas de realización de la presente invención.

Ejemplos

Ejemplo 1

Comprimidos

De una manera convencional, se prepararon comprimidos teniendo la composición siguiente.

El compuesto 1 (40 g) se mezcló con 286'8 g de lactosa y 60 g de almidón de patata, seguido por la adición de 120 g de una solución acuosa de hidroxipropilcelulosa al 10%. La mezcla resultante fue amasada, granulada, y secada después por un método convencional. Se tamizaron los gránulos para producir gránulos utilizados para fabricar comprimidos. Después de mezclar los gránulos con 1'2 g de estearato magnésico, la mezcla fue hecha comprimidos conteniendo cada uno 20 mg de principio activo, utilizando una comprimidora (Modelo RT-15, Kikusui) teniendo punzones de 8 mm de diámetro.

En la Tabla 2 se muestra la prescripción.

TABLA 2

Compuesto 1	20 mg
Lactosa	143'4 mg
Almidón de patata	30 mg
Hidroxipropilcelulosa	6 mg
Estearato magnésico	0'6 mg
	20 mg

Ejemplo 2

Cápsulas

De una manera convencional, se prepararon cápsulas teniendo la composición siguiente.

El compuesto 1 (200 mg) se mezcló con 995 g de Avicel y 5 g de estearato magnésico. La mezcla fue puesta en cápsulas duras del nº 4, teniendo cada una capacidad de 120 mg, utilizando una llenadora de cápsulas (Modelo LZ-64, Zanasi), para dar cápsulas conteniendo cada una 20 mg de principio activo.

En la Tabla 3 se muestra la prescripción.

TABLA 3

Compuesto 1	20 mg
Avicel	99'5 mg
Estearato magnésico	0'5 mg
	120 mg

Ejemplo 3

Inyecciones

De una manera convencional, se prepararon inyecciones teniendo la composición siguiente.

Se disolvió compuesto 1 (1 g) en 100 g de aceite soja purificado, seguido por la adición de 12 g de lecitina de yema de huevo purificada y 25 g de glicerina para inyección. La mezcla resultante fue ajustada hasta 1.000 ml con agua destilada para inyección, mezclada a fondo, y emulsificada mediante un método convencional. Se sometió la dispersión resultante a filtración aséptica utilizando filtros de membrana desechables, y se puso asépticamente en viales de vidrio en porciones de 2 ml, para dar inyecciones conteniendo 2 mg de principio activo por vial.

En la Tabla 4 se muestra la prescripción.

TABLA 4

Compuesto 1	2 mg
Aceite de soja purificado	200 mg
Lecitina de yema de huevo purificada	24 mg
Glicerina para inyección	50 mg
Agua destilada para inyección	1'72 ml
	2'00 ml

Ejemplo 4

Supositorios anales

De una manera convencional, se prepararon formulaciones para administración rectal, teniendo la composición siguiente.

Se fundieron Witepsol^{®} H15 (678'8 g, fabricado por Dynamit Nobel, Ltd.) y Witepsol® E75 (290'9 g, fabricado por Dynamit Nobel, Ltd.) a 40-50ºC. En la mezcla fundida resultante se mezclaron y dispersaron, uniformemente, compuesto 1 (2'5 g), dihidrógenofosfato potásico (13'6 g) e hidrógenofosfato disódico (14'2 g). La dispersión resultante fue vertida en moldes de plástico para supositorios, y se enfrió gradualmente para dar supositorios anales conteniendo 2'5 mg de principio activo por formulación.

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En la Tabla 5 se muestra la prescripción.

TABLA 5

Compuesto 1	2'5 mg
Witepsol H15	678'8 mg
Witepsol E75	290'9 mg
Dihidrógenofosfato potásico	13'6 mg
Hidrógenofosfato disódico	14'2 mg
	1.000 mg

La presente invención proporciona un agente terapéutico para el trastorno neurodegenerativo isquemia cerebral.

Claims (2)

1. El empleo de un derivado de xantina, seleccionado de un compuesto de fórmula (1):

3

y un compuesto de fórmula (2):

4

o una sal farmacéuticamente admisible de los mismos, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la isquemia cerebral.

2. El empleo conforme a la reivindicación 1, en donde el derivado de xantina está representado por la fórmula (1), o una sal farmacéuticamente admisible del mismo.