JPS62263123A - 新規免疫抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、Ｌ−１，４−シクロヘキサジエン−１−アラ
ニンを有効成分とする免疫抑制剤に関するものである。

〔従来の技術〕

従来免疫抑制剤として、アルキル化剤１代謝拮抗剤、抗
生物質、ステロイド剤１葉酸拮抗剤、植物アルカロイド
などが知られている。

〔本発明が屏決しようとする問題点〕

従来の免疫抑制剤のうち、ステロイド剤は消炎作用リン
パ球溶解作用等により免疫抑制を示すといわれ１作用が
多岐にわたるため、様々な創作ｍを伴うことは周知であ
る。その他の免疫抑制剤は。

いわゆる細胞毒性物質に属し、とりわけ核酸合成系に作
用するものが多く造皿器等の臓器に重篤な副作用を発現
し易いことが知られている。リンパ球等の免疫担当細胞
にのみ選択的に作用し、免疫抑制作用以外の副作用が可
及的に軽微な薬剤が望そこで発明者らは種々検討した結
果式（１）で表わされるＬ−１，４−７クロヘキサジエ
ンー１−アラニア　（Ｌ　−１，４−ｃｙｃｌｏｈｅｘ
ａｄｉｅｎｅ　−１−ａｌａｎｉｎｅ　）が先便抑制作
用を有することケ見い出した。

本発明は上記知見に基づき完成されたものである。

本発明で使用される式ＣＩ）のＬ−１，４−７クロヘキ
サジエンー１−アラニンはジャーナル・オプ・オルガニ
ック・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｏｆ　Ｏｒ−ｇ
ａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）　３５巻　１７７４ペ
一ジ％　１９６８年に記載されている公知化合物である
。（以下本発明の上記式〔１〕で示される化合物を「本
化合物」という。）より詳しくは本化合物およびその薬
理学上許容される塩を有効成分とする免疫抑制剤に関す
る。

本化合物は酸と塩を形成するが、塩を形成するための酸
としては１例えば薬理学上許容てれる酸であればよく１
例えば塩酸、硫酸、硝酸、リン酸などが好ましい。

本化合物が免疫抑制剤として用いられる場合は。

単独または賦形剤あるいは担体と混合して注射剤。

経口剤、または全開などとして投与される。賦形剤及び
担体としては薬剤学的に許容されるものが選ばれ、その
種類及び組成は投与経路や投与方法によって決まる。例
えば液状担体として水、アルコール類もしくは大豆油、
ピーナツ油、ゴマ油。

ミネラル油等の動植物油、または合成油が用いられる固
体担体としてマルトース、シュクロースなどの糖類、ア
ミノ酸類、ヒドロキシプロピルセルロースなど七ルロー
ス誘導体、ステアリン酸マグネシウムなどの有機酸塩な
どが使用される。注射剤の場合一般には生理食塩水、各
櫨緩貸液、グルコース、イノシトール、マンニトール等
の糖類溶液、エチレンクリコール、フロピレンゲリコー
ル。

ポリエチレングリコール等のグリコール類が望ましい。

また、イノシトール、マンニトール、グルコース、マン
ノース、マルトース、シュークロース等の糖類、フェニ
ルアラニン等のアミノ酸等の賦形剤と共に凍結乾燥製剤
とし、それを投与時に注射用の適当な溶剤１例えば滅菌
水、生理食塩水。

ブドウ糖液、電解質溶液、アミノ酸液等静脈投与用液体
に溶解して投与することもできる。

製剤中における本化合物の含量は製剤により種々異なる
が通常０．１〜１００重量％好ましくは１〜９８重量％
である。例えば注射液の場合には１通常０．１〜３０重
童チ、好ましくは１〜１０重量−の有効成分を含むよう
にすることがよい。経口投与する場合には、前記固体担
体もしくは液状担体とともに錠剤、カプセル剤、粉剤、
顆粒剤、液剤。

ドライシロップ剤等の形態で、用いられる。カプセル、
錠剤、顆粒、粉剤は一般に５〜１００重量％、好ましく
は２５〜９８重量％の有効成分を含む。

投与量は、患者の年令１体重、症状、治療目的等により
決定されるが、治掠量は一般に、非経口投与で１〜１０
（１１１Ｉ９／に！・日、経口投与で５〜ｓａａｍｙ／
Ｋｐ・日である。

本化合物は低毒性であり、また、いずれの化合物も連続
投与による毒性の蓄積性が小さいことが＃徴的である。

本化合物をマウス腹腔内に８００■／　Ｋｐの投与蓋で
１回投与しても何ら毒性の徴候はみられなかった。

〔作　用〕

本化合物は免役担当細胞であるマウスリンパ球の機能に
抑制作用を及ぼす。即ち、　Ｗａｉｔｈｅ等による方法
（Ｗａｉｔｈｅ　ｅｔａｌ、、　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏ
ｆ　ＫＸｐｅｒｉｍｅ−ｎ　Ｃａｌ工ｍ！ｎｕｎｏｌｏ
ｇ７頁２６，１．１９７８）に準じ。

リンパ球幼若化反応に対する作用を調べたところ本化合
物はＣｏｎ　Ａ　（フンカナバリンＡ）で刺激と受けた
Ｔリンパ球の幼若化と、ＬＰＳ（＋７ボポリサツカライ
ド）で刺減を受けた８９７７球の幼若化反応を著しく抑
制した。そこで’ｌ’　１７２７球に対する作用をイン
ビボ（ｉｎ　ｖｉｖｏ）で調べた。即ち。

Ｌａｇｒａｎｇｅ等の方法（Ｌａｇｒａｎｇｅ　ｅｅａ
ｌ、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆラウス遅延型過敏反応に対
する本化合物の作用を試験したところ、感作後４日間の
投与で遅延型過敏反応が抑制されることが判明した。ま
た、ｖｅｒｎｅ等の方法（Ｊｅｒｎｅ　ｅｔ　ａｌ、、
　ｌ”Ｃｅ１ｌ−ｂｏｕｎｄ　Ａｎｔｉｌｊｃｄｉｅｅ
Ｊ頁１０９〜１２２．１９６３）に準じて、羊赤血球を
抗原としたマウス牌細胞のプラーク形成能に与える影４
を訓べたところ１本化合物の抑制効果が認められた。こ
れは、本化合物がＢＩＪンパ球による抗体産生に抑制的
作用することを意味する。

以上の結果は１本化合物が８９７７球及びＴ　１７２７
球の機能を抑制することを示す。この抑制作用は、それ
ぞれ体液性免疫及び細旭性免疫の抑制を意味するので、
その異常先進が原因と考えられる臓器移植あるいは皮膚
移植に゛おける拒絶反応の抑制、各種の自己免疫が主た
る原因と考えられる自己免疫病例えば多発性硬化症、溶
血性貧血、工型糖尿病１重症筋無力症、橋本甲状腺炎、
ペーチェット症候群リウマチの治療またアレルギー疾患
の治療にも本化合物を有効成分とする免揉抑制剤は極め
て有用である。本化合物は従来の免疫抑制剤と異なる作
用模作が考えられるので、細胞毒性物質に属する抑制剤
に共通に認められる造血器障害等、またステロイドホル
モンで認められる胃潰瘍、白内障等の重篤な副作用はな
いと考えられ。

副作用の面でも大変すぐれている。

次に本化合物の薬理作用を試験例により具体的に説明す
る。

試験例１ 羊赤血球で感作したマウスの遅延型過敏反応に対する抑
制 ＣＤＦ１マウス（６週齢、雄性）の静脈内Ｋ。

羊赤血球１’Ｘ　１０５個を注射して予め感作した。

４日後、感作したマウスの足前に１×１０　個の羊赤血
球を皮下注射し１反応を訪起し、２４時間後の足聴の處
脹をノギスで測定した。本被験化合物は各用量（η／　
ｍｏｕｓｅ　）を、初感作の当日１時間後から４日間、
腹腔内に投与した。薬剤の代りに生理食塩水を投与した
群の腫脹の測定値を対照（１００％）として薬剤投与時
の腫脹の程度を表わした。表１に示すように１本化合物
は、遅延型過敏反応を強く抑制した。

表１ 本化合物の遅延型過敏反応に対する抑制投与量 η／ツウユ／８　　　足聴の腫脹度（−）Ｑ、ｌ　　　
　　　　　　　ＢＳ １・０　　　　　　　　７９ 対照（生理食塩水）　　　　１００ 試験例２ Ｃｏｎ　ＡによるＴ　リンパ球幼若化反応の抑制ＢＡＬ
Ｂ／＠マウスの詳細胞をマイクロプレートに２　Ｘ　１
０５個１０．２ｔｌ／ウエルになるように分注し、対照
群以外の各ウェルに各濃度の被験化合物を添加し、さら
にすべてのウェルにＣｏｎＡ１に５μｇ／ｄになるよう
加えたのち、この細胞浮遊液を３７℃で５％の炭酸ガス
培養器で７２時間培養した。リンパ球幼若化反応は、培
養終了の６時間前に３Ｈ−チミジンを１ＰＣ１／クエル
添加し、培養細胞への取込み量を液体シンチレーション
カウンターで測定した。Ｃｏｎ　Ａのみを添加したとき
の取込みカウントをＡｄｐｍ、　Ｃ０ｎＡ及び薬物を加
えたときのカウントｔ−Ｂｄｐｍとして　（１７Ｂｄｐ
ｍ　／Ａａｐｍ　）　Ｘ１００　の数値を、幼若化に対
する各薬物の抑制率とした。その結果を表２に示す。

表２ 本化合物のＣｏｎＡによる’Ｊ’　ＩＪンパ球幼若化反
応の抑制濃度（μｆ／ｄ）　　抑制率（％） ０・　８　　　　　　　　　　　　５３４．０　　　　
　　　　　　　　　７９２０．０　　　　　　　　　　
　　９５対照（薬剤無添加）　　　　　０ 上表から明らかなように本化合物はＴリンパ球幼若化反
応を強く抑制した。

試験例３ ＬＰＳ（リポポリサッカライド）によるＢリンパ球幼若
化反応の抑制 試験例２の方法に準じ（ただし、　Ｃ０ｎＡの代りに、
大１腸菌のＬＰＳを１ｏ　ｏ　１ｔｇ／ｌｄになるよう
加えた）、幼若化Ｂ細ノ泡に取り°こまｎた３Ｈ−チミ
ジン／量を測定した。被験化合物による抑制率を同様に
求めた。

表３に示すように１本化合物はＬＰＳによるＢリッツ球
幼若化を著しく抑制した。

表５ 本化合物のＬＰＳによるＢリッツ球幼若化の抑制濃度（
μｙ／ｍｔ）　　　　抑制率（％）０．８　　　　　　
　　　　　　　　　　２６４．０　　　　　　　　　　
　　　　　４　７２０．０　　　　　　　　９８ 対照（薬剤無添加）　　　　　０ 試験例４ 羊赤血球に対する抗体産生能の抑制 ＣＤＦ１マウス（５週齢、雌性）に羊赤血球１Ｘ１０　
　個を静脈内注射し免疫を施した。その当日１時間後よ
り４日間、被験化合物ｏ、ｏ１゜０・１及び１・０■／
ｍｏｕｓｅ・日をマウス腹腔内に投与した。４日後に牌
細胞を分離しそのプラーク形成細胞を計数した。対照群
（生理食塩水投与群）の測定値Ａとし、溶剤投与群にお
ける測定をＢとして、（１−Ｂ／Ａ）ｘｌｏｏｏａｉｔ
、抗体産生能の抑制率とした。

表４ 本化合物の羊赤血球に対する抗体産生能の抑制投与量（
ηｌ／マウス）　　抑制率（チ）１・　０　　　　　　
　　　　　　　　　　　　５５０・　１　　　　　　　
　　　　　　　　　５１０．０１　　　　　　　　　　
　　　　　１９対照（生理食塩水）　　　　　　　０ 本化合物は表４に示すように比較的低い投与量で抗体産
生能の抑制を示した。

〔発明の効果〕

上記したところから明らかなように１本化合物は急性毒
性が極めて弱く、かつ遅延型過敏反応の抑制作用　’ｌ
”　１７７７球および４３１Ｊンパ球の機能抑制作用、
羊赤血球に対する抗体産生能の抑制作用等の後れた免役
抑制作用を示し、従来の免役抑制剤と作用機作が異なる
と考えられ、副作用の少ない免役抑制剤と考えられる。

以下本発明を実施例により具体的に説明する。

実施例１ 本化合物の塩酸＠３０重量部に対し蒸留水を加え全ｉｔ
を２０００部としてこれを俗解後ミリポアフィルターＧ
Ｓタイプを用いて除ＭＰ遇する。

このＦ液２ｆｔ１０ｇｇのバイアルビンにとり凍結乾燥
し、１バイアルに化合物（１）の塩ば塩３０■を含む凍
結乾燥注射剤を得た。

実施例２ 顆粒剤 本化合物の塩酸塩５０重量部、乳糖６００ｉ。

結晶セルロース３３０部及びとドロキシプロビルセルロ
ーフ２０部をよく混和し、ロール型圧縮機（ローラーコ
ンパクタ−■）を用いて圧縮し、破砕して１．６メツシ
ユと６０メツシユの間に入るよう篩過し、顆粒とした。

実施例３ 錠剤 本化合物の垣酸塩３０重量部、結晶乳糖１２０部、結晶
セルロース１４７部及びステアリン酸マグネシウム３部
をＶ型混合機で打錠し、１１錠３００■の錠剤を得た。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. Ｌ−１，４−シクロヘキサジエン−１−アラニン及びそ
   の薬理学上許容される塩を有効成分とすることを特徴と
   する新規免疫抑制剤