ES2263450T3 - Preparaciones de g-csf estabilizadas a largo plazo. - Google Patents

Preparaciones de g-csf estabilizadas a largo plazo.

Info

Publication number
ES2263450T3
ES2263450T3 ES00905397T ES00905397T ES2263450T3 ES 2263450 T3 ES2263450 T3 ES 2263450T3 ES 00905397 T ES00905397 T ES 00905397T ES 00905397 T ES00905397 T ES 00905397T ES 2263450 T3 ES2263450 T3 ES 2263450T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
csf
formulation
sample
amino acids
arginine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES00905397T
Other languages
English (en)
Inventor
Yasushi Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha SATO
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chugai Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2263450T3 publication Critical patent/ES2263450T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid, pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-aminoacids, e.g. alanine, edetic acids [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/29—Parathyroid hormone (parathormone); Parathyroid hormone-related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Signal Processing For Digital Recording And Reproducing (AREA)
  • Mechanical Treatment Of Semiconductor (AREA)
  • Amplifiers (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Una formulación de G-CSF estable que contiene uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en lisina, histidina, arginina, ácido aspártico, ácido glutámico, treonina y asparagina; uno o más aminoácidos seleccionados entre aminoácidos hidrófobos; y de 0, 01 a 4 mg/ml de metionina, teniendo dicha formulación una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras la prueba de almacenamiento a largo plazo a 25ºC durante 3 meses o una proporción residual de G-CSF de 90% o o más tras la prueba de almacenamiento a largo plazo a 40ºC durante 2 meses o una proporción residual de G-CSF de 90% o o más tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes o una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas y un contenido de G-CSF Met-oxidado de 1% o menos tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes o tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas.

Description

Preparaciones de G-CSF estabilizados a largo plazo.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a formulaciones de G-CSF (factor de estimulación de colonias de granulocitos) y en particular, a formulaciones de G-CSF estabilizadas que presentan una baja pérdida del ingrediente activo y que tienen un bajo contenido de G-CSF Met-oxidado.
Antecedentes de la invención
G-CSF es una glucoproteína que tiene un peso molecular de aproximadamente 20.000 y que actúa sobre células precursoras de neutrófilos para promover su proliferación y diferenciación para maduración.
Dado que los autores de la invención han purificado G-CSF humano de alta pureza a través del cultivo de una línea celular recogida de células tumorales de un paciente con cáncer del lecho de la boca, se pudo clonar con éxito el gen G-CSF humano y, en el momento actual, se puede producir G-CSF humano recombinante en masa en microorganismos o células animales a través de técnicas de ingeniería genética. Los autores de la invención también han logrado convertir este G-CSF purificado en productos formulados suministrados al mercado como agentes antiinfecciosos (patente japonesa Nº 2116515).
G-CSF se utiliza en una cantidad muy reducida, es decir, normalmente se administra una formulación que contiene de 0,1 a 1000 \mug (preferiblemente de 5 a 500 \mug) de G-CSF de una vez a siete veces a la semana por adulto. No obstante, este G-CSF se adsorbe en las paredes de ampollas, jeringuillas o similares. G-CSF es inestable y susceptible de factores extrínsecos como la temperatura, la humedad, el oxígeno, rayos UV o similares experimentando cambios físicos o químicos, entre los que se incluyen asociación, polimerización u oxidación con el resultado de una pérdida sustancial de la actividad.
Así pues, se han obtenido diversos diseños de formulación para proporcionar formulaciones G-CSF estables al mercado. Por ejemplo, se han propuesto formulaciones que contienen al menos un miembro seleccionado del grupo que consiste en (a) al menos un aminoácido seleccionado entre treonina, triptofano, lisina, hidroxilisina, histidina, arginina, cisteína, cistina y metionina; (b) al menos un agente de reducción con contenido en azufre; o (c) al menos un antioxidante (patente japonesa Nº 2577744). Asimismo, se han propuesto formulaciones G-CSF que contienen un agente tensioactivo como, por ejemplo, un polisorbato como estabilizante (JPA Nº 146826/88).
Se han descrito también formulaciones G-CSF liofilizadas que contienen maltosa, rafinosa, sacarosa, trehalosa o un amino azúcar, que resultan ventajosas desde el punto de vista de la limitación de depósitos en el contenedor para suprimir cambios químicos (JPA Nº 504784/96).
Algunos productos que se distribuyen actualmente en el mercado contienen una proteína comúnmente utilizada como estabilizante como por ejemplo albúmina de suero humano o gelatina purificada para suprimir dichos cambios químicos o físicos. Sin embargo, la adición de una proteína como estabilizante conlleva problemas como la necesidad de un proceso muy complicado para eliminar la contaminación con virus.
Sin embargo, existe una mayor probabilidad de que se produzca G-CSF Met-oxidado en ausencia de dicha proteína, lo que conduciría al problema del deterioro.
Descripción de la invención
Uno de los objetos de la presente invención consiste en proporcionar una formulación G-CSF que es más estable incluso durante el almacenamiento a largo plazo y que tiene un bajo contenido en G-CSF Met-oxidado.
Como resultado de un cuidadoso estudio para alcanzar el objeto citado, los autores de la invención han completado la presente invención en función del hallazgo de que es posible obtener una formulación de G-CSF que presenta una alta proporción residual de G-CSF y un bajo contenido en G-CSF Met-oxidado incluso tras un almacenamiento a largo plazo añadiendo una combinación de aminoácidos específicos como estabilizante.
Por consiguiente, la presente invención proporciona una formulación de G-CSF estable que tiene una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras una prueba de almacenamiento a largo plazo a 25ºC durante 3 meses o una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras la prueba de almacenamiento a largo plazo a 40ºC durante 2 meses o una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras una prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes o una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras una prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas y un contenido de G-CSF Met-oxidado de 1% o menos tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes o tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas, conteniendo dicha formulación de G-CSF uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en lisina, histidina, arginina, ácido aspártico, ácido glutámico, treonina y asparagina; uno o más aminoácidos seleccionados entre aminoácidos hidrófobos y de 0,01 a 4 mg/ml de metionina.
La presente invención proporciona también dicha formulación de G-CSF en la que dicho aminoácido hidrófobo se selecciona entre fenilalanina, triptofano y leucina.
La presente invención proporciona asimismo dicha formulación de G-CSF que contiene uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en lisina, histidina, arginina, ácido aspártico y ácido glutámico; uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en fenilalanina, triptofano y leucina; y metionina.
La presente invención proporciona también dicha formulación de G-CSF que contiene fenilalanina, arginina y metionina.
La presente invención proporciona también dicha formulación G-CSF sustancialmente libre de proteína como estabilizante.
La presente invención proporciona también dicha formulación G-CSF en forma de una formulación liofilizada.
la presente invención proporciona también dicha formulación de G-CSF que contiene además manitol.
La presente invención proporciona también dicha formulación de G-CSF que contiene además un agente tensioactivo.
La presente invención proporciona también dicha formulación de G-CSF en la que dicho agente tensioactivo es un éster alquílico de polioxietilen sorbitano.
La presente invención proporciona también dicha formulación de G-CSF en la que dicho agente tensioactivo es Polisorbato 20 y/o 80.
La presente invención proporciona también dicha formulación de G-CSF que tiene un pH de 5 a 7.
La presente invención proporciona también dicha formulación de G-CSF que tiene un pH de 5,5 a 6,8.
La presente invención proporciona también dicha formulación de G-CSF que tiene un pH de 6,5.
La presente invención proporciona también dicha formulación de G-CSF en la que se produce G-CSF a partir de células CHO.
Breve descripción de los gráficos
La figura 1 muestra los cromatogramas de las muestras 34 y 36 ensayadas según el método 2 que se describe más adelante tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas.
La figura 2 muestra los cromatogramas de las muestras 34-36 ensayadas según el método 2 que se describe más adelante tras la preparación y tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes.
La figura 3 muestra los cromatogramas de HPLC de formulaciones de solución de hormona paratiroides ensayadas según el método presentado en el ejemplo 6 (almacenamiento a 50ºC durante 3 días), que demuestra que la adición de metionina tiene un efecto inhibidor frente a la oxidación de los radicales de metionina. En la figura 3, los picos máximos en el centro corresponden a PTH intacto y los picos designados Met-8 y Met-18 corresponden a PTH oxidado en el radical metionina 8º y el radical metionina 18º, respectivamente.
Modos de realización de la invención más preferibles
El G-CSF utilizado para las formulaciones según la presente invención incluye cualquier G-CSF humano de alta pureza. Específicamente, puede derivarse de fuentes naturales o se puede obtener por recombinación genética siempre y cuando tenga sustancialmente la misma actividad biológica que G-CSF de mamífero, en particular humano. El G-CSF recombinante genéticamente puede tener la misma secuencia de aminoácidos que la de G-CSF natural o puede contener supresión, sustitución o adición de uno o más aminoácidos en dicha secuencia de aminoácidos siempre y cuando tenga dicha actividad biológica. G-CSF en la presente invención se puede preparar a través de cualquier proceso, v.g., se puede extraer y purificar mediante diversas técnicas a partir de cultivos de una línea celular de tumor humano o se puede producir por ingeniería genética en células de E. coli, levadura, ovario de hámster chino (CHO), C127 o similares y extraerse después y purificar a través de distintas técnicas. Preferiblemente, se produce G-CSF en E. coli, levadura o células CHO por recombinación genética. Es sobre todo preferible producir G-CSF en células CHO por recombinación genética.
Preferiblemente, las formulaciones G-CSF de la presente invención están sustancialmente libres de proteínas como albúmina de suero humano o gelatina purificada como estabilizante.
Las formulaciones G-CSF de la presente invención son muy estables en comparación con las formulaciones de G-CSF conocidas anteriormente, ya que tienen una proporción residual de G-CSF de 90% o más, preferiblemente 95% o más tras una prueba de almacenamiento a largo plazo a 25ºC durante 3 meses, o una proporción residual de G-CSF de 90% o más, preferiblemente 95% o más tras una prueba de almacenamiento a largo plazo a 40ºC durante 2 meses, o una proporción residual de G-CSF de 90% o más, preferiblemente 95% o más tras una prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes, o una proporción residual de G-CSF de 90% o más, preferiblemente de 95% o más tras una prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas y un contenido de G-CSF Met-oxidado de 1% o menos, preferiblemente por debajo del límite de detección tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes o tras la prueba acelerada a 60ºC durante
2 semanas.
Las formulaciones G-CSF de la presente invención constituyen una formulación de G-CSF que contiene uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en lisina, histidina, arginina, ácido aspártico, ácido glutámico, treonina y asparagina, preferiblemente uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en lisina, histidina, arginina, ácido aspártico y ácido glutámico; uno o más aminoácidos seleccionados entre aminoácidos hidrófobos, preferiblemente uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en fenilalanina, triptofano y leucina; y de 0,01 a 4 mg/ml de metionina.
Un ejemplo de formulaciones G-CSF de la presente invención es una formulación de G-CSF estable que tiene una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras una prueba de almacenamiento a largo plazo a 25ºC durante 3 meses o una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras una prueba de almacenamiento a largo plazo a 40ºC durante 2 meses o una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras una prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes o una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras una prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas y un contenido en G-CSF Met-oxidado de 1% o menos tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes o tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas, caracterizada por contener uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en lisina, histidina, arginina, ácido aspártico, ácido glutámico, treonina y asparagina, preferiblemente, uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en lisina, histidina, arginina, ácido aspártico y ácido glutámico; uno o más aminoácidos seleccionados entre aminoácidos hidrófobos, preferiblemente uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en fenilalanina, triptofano y leucina y de 0,01 a 4 mg/ml de metionina; y que tiene un
pH de 5-7.
Los aminoácidos utilizados en la presente invención incluyen aminoácidos libres y sales de los mismos, tales como sales sódicas, sales potásicas e hidrocloruros. Las formulaciones de la presente invención pueden contener variantes D-, L- y DL- de estos aminoácidos, más preferiblemente variantes L- y sales de las mismas.
La cantidad de aminoácidos que se añade a las formulaciones de la presente invención se puede determinar en un intervalo preferible utilizando el método de ensayo que se describe más adelante dependiendo del tipo de aminoácido utilizado. Generalmente, se añade una dosis final de 0,001 a 50 mg/ml. Por ejemplo, preferiblemente, se añade fenilalanina en una dosis de 0,1 a 25 mg/ml, más preferiblemente de 1 a 20 mg/ml, se añade preferiblemente arginina en una dosis de 0,1 a 25 mg/ml, más preferiblemente en un 1-20 mg/ml.
Las formulaciones de la presente invención pueden contener agentes isotonizantes, v.g., polietilen glicol; y azúcares como dextrano, manitol, sorbitol, inositol, glucosa, fructosa, lactosa, xilosa, manosa, maltosa, sacarosa y rafinosa. Es especialmente preferible manitol. La cantidad de manitol que se añade a las formulaciones es de 1 a 100 mg/ml, más preferiblemente de 5 a 60 mg/ml.
Las formulaciones de la presente invención pueden contener además agentes tensioactivos. Entre los ejemplos típicos de agentes tensioactivos se incluyen:
agentes tensioactivos no iónicos, v.g., ésteres de ácido graso de sorbitano, como monocaprilato de sorbitano, monolaurato de sorbitano, monopalmitato de sorbitano; ésteres de ácido graso de glicerina como monocaprilato de glicerina, monomiristato de glicerina, monoestearato de glicerina; ésteres de ácido graso de poliglicerina como monoestearato de decaglicerilo, diestearato de decaglicerilo, monolinoleato de decaglicerilo; ésteres de ácido graso de polioxietilen sorbitano como monolaurato de polioxietilen sorbitano, monooleato de polioxietilen sorbitano, monoestearato de polioxietilen sorbitano, monopalmitato de polioxietilen sorbitano, trioletato de polioxietilen sorbitano, tristearato de polioxietilen sorbitano; ésteres de ácido graso de polioxietilen sorbitol como tetraestearato de polioxietilen sorbitol, tetraoleato de polioxietilen sorbitol; ésteres de ácido graso de polioxietilen glicerina como monoestearato de polioxietilen glicerilo; ésteres de ácido graso de polietilen glicol como diestearato de polietilen glicol; éteres de polioxietilen alquilo como éter de polioxietilen laurilo; éteres alquílicos de polioxietilen polioxipropileno como éter glicólico de polioxietilen polioxipropileno, éter propílico de polioxietilen polioxipropileno, éter cetílico de polioxietilen polioxipropileno; éteres fenílicos de polioxietilen alquilo como éter fenílico de polioxietilen nonilo; aceites de ricino endurecidos de polioxietileno como aceite de ricino de polioxietileno; aceite de ricino endurecido de polioxietileno (aceite de ricino hidrogenado de polioxietileno); derivados de cera de abeja de polioxietileno como cera de abeja de polioxietilen sorbitol; derivados de lanolina de polioxietileno como polioxietilen lanolina; amidas de ácido graso de polioxietileno como amida de ácido polioxietilen esteárico que tiene una HLB de 6-18;
agentes tensioactivos aniónicos, v.g., sulfatos de alquilo que tienen un grupo alquilo de C10-18, como cetil sulfato sódico; laurilsulfato sódico; oleilsulfato sódico; éter sulfatos de polioxietilen alquilo que tienen un índice molar EO medio de 2-4 y un grupo alquilo de C10-18 como polioxietilen laurilsulfato sódico; sales de éster de ácido alquil sulfosuccínico que tienen un grupo alquilo de C8-18 como laurilsulfosuccinato sódico y
agentes tensioactivos naturales, v.g., lecitina; glicoerofosfolípidos; esfingofosfolípidos como esfingomielina; ésteres de ácido graso de sacarosa de ácidos grasos de C12-18. Se puede añadir uno o más de estos agentes tensioactivos en combinación a las formulaciones de la presente invención.
Entre los agentes tensioactivos preferibles se incluyen ésteres de ácido graso de polioxietilen sorbitano, más preferiblemente Polisorbatos 20, 21, 40, 60, 65, 80, 81, 85, siendo sobre todo preferibles polisorbatos 20 y 80.
La cantidad de los agentes tensioactivos que se añade a las formulaciones con contenido en G-CSF de la presente invención es típicamente de 0,0001-1 partes en peso por cada parte en peso de G-CSF, preferiblemente de 0,01-5 partes en peso por cada parte en peso de G-CSF, siendo sobre todo preferible de 0,2 a 2 partes en peso por cada parte en peso de G-CSF.
Preferiblemente, las formulaciones G-CSF de la presente invención tienen un pH de 5-7, más preferiblemente de 5,5 a 6,8, siendo aún más preferible de 6 a 6,7, y siendo sobre todo preferible 6,5.
Las formulaciones de G-CSF de la presente invención pueden contener además diluyentes, agentes solubilizantes, excipientes, modificadores de pH, agentes suavizantes, tampones, agentes de reducción del contenido en azufre, antioxidantes o similares, si se desea. Por ejemplo, entre los agentes de reducción del contenido en azufre se incluyen N-acetilcisteína, N-acetilhomocisteína, ácido tióctico, tiodiglicol, tioetanolamina, tioglicerol, tiosorbitol, ácido tioglicólico y sales de los mismos, tiosulfato sódico, glutationa y compuestos que contienen sulfhidrilo como ácido tioalcanoico que tiene de 1 a 7 átomos de carbono. Entre los antioxidantes se incluyen ácido eritórbico, dibutilhidroxitolueno, butilhidroxianisol, \alpha-tocoferol, acetato de tocoferol, ácido L-ascórbico y sales de los mismos, palmitato de L-ascorbilo, estearato de L-ascorbilo, bisulfito sódico, sulfito sódico, galato de triamilo, galato de propilo o agentes quelantes como tetraacetato de etilen diamina disódico (EDTA), pirofosfato sódico, metafosfato sódico,. Pueden incluirse otros componentes comúnmente añadidos como, por ejemplo, sales inorgánicas como cloruro sódico, cloruro potásico, cloruro cálcico, fosfato sódico, fosfato potásico, bicarbonato sódico; y sales orgánicas como citrato sódico, citrato potásico, acetato sódico.
Las formulaciones G-CSF de la presente invención incluyen formulaciones en solución, formulaciones liofilizadas, formulaciones deshidratadas por aspersión, etc. Las formulaciones liofilizadas son las más preferibles.
Las formulaciones de la presente invención se pueden preparar disolviendo estos componentes en un tampón acuoso conocido en la técnica de las formulaciones en solución, como por ejemplo tampones fosfato (preferiblemente, sistema de monohidrogen fosfato sódico-dihidrogen fosfato sódico) y/o tampones de citrato (preferiblemente, tampón de citrato sódico) para preparar una formulación en solución, o por liofilizado o deshidratación por aspersión de dicha solución preparada a través de procedimientos convencionales.
Las formulaciones que contienen G-CSF estabilizadas de la presente invención se administran normalmente a través de rutas parenterales, tales como inyección (inyección subcutánea, intravenosa o intramuscular) o administración percutánea, mucosal, nasal o pulmonar, pero también se pueden administrar oralmente.
Las formulaciones G-CSF de la presente invención se envasan normalmente en contenedores de vidrio o plástico esterilizados y sellados y se disuelven en agua pura (agua esterilizada para inyección) antes de su uso.
La cantidad de G-CSF contenida en las formulaciones de la presente invención se puede determinar dependiendo del tipo de enfermedad que se va a tratar, la gravedad de la enfermedad, la edad del paciente u otros factores, pero generalmente oscila entre 1 y 1000 \mug/mL, preferiblemente de 10 a 800 \mug/mL, más preferiblemente de 50 a
500 \mug/mL.
Las formulaciones de la presente invención son clínicamente muy útiles ya que se ha observado que mejoran las funciones protectoras que se basan en la respuesta inmune, como por ejemplo la resistencia del paciente o la actividad cuando se les administra conjuntamente fármacos como antibióticos, agentes antibacterianos o agentes anticancerígenos en la quimioterapia de enfermedades infecciosas o cáncer. Por consiguiente, las formulaciones de la presente invención se pueden administrar en combinación con estos fármacos.
Tal como queda demostrado en el ejemplo a continuación, las formulaciones de G-CSF de la presente invención presentan una proporción residual muy buena de G-CSF tras la prueba de almacenamiento a largo plazo a 25ºC durante 3 meses o tras la prueba de almacenamiento a largo plazo a 40ºC durante 2 meses o tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes o tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas. Por otra parte, se observó un reducido contenido de G-CSF Met-oxidado tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes o la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas. Las formulaciones G-CSF de la presente invención tienen una proporción residual de G-CSF de 90% o más, preferiblemente, 95% o más tras la prueba de almacenamiento a largo plazo a 25ºC durante 3 meses, o una proporción residual de G-CSF de 90% o más, preferiblemente 95% o más tras la prueba de almacenamiento a largo plazo a 40ºC durante 2 meses, o una proporción residual de G-CSF de 90% o más, preferiblemente 95% o más tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes, o una proporción residual de G-CSF de 90% o más, preferiblemente de 95% o más tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas y un contenido de G-CSF Met-oxidado de 1% o menos, preferiblemente por debajo del límite de detección tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes o tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas.
\global\parskip0.900000\baselineskip
Se ha observado a partir de los resultados de los ejemplos que se exponen más adelante que la proporción residual de G-CSF en las formulaciones de la presente invención tras el almacenamiento a largo plazo a temperaturas normales se puede mejorar añadiendo uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en lisina, histidinia, arginina, ácido aspártico, ácido glutámico, treonina y asparagina y uno o más aminoácidos seleccionados entre aminoácidos hidrófobos y que el contenido de G-CSF Met-oxidado puede mantenerse por debajo del límite de detección por adición de metionina. Sin pretender ligarse a ninguna teoría específica, los autores de la invención asumen que la metionina añadida se oxida en lugar de los radicales de metionina de G-CSF de manera que disminuye el contenido de G-CSF oxidado.
Cuando se añade metionina a composiciones de una proteína fisiológicamente activa que tiene un radical metionina, que es más susceptible de producir una variante oxidada en el radical de metionina y tiene una actividad fisiológica en una pequeña cantidad, puede prevenirse que dicha proteína fisiológicamente activa produzca una variante oxidada en el radical metionina con arreglo a la presente invención. La adición de metionina parece especialmente efectiva cuando dicha composición de proteína fisiológicamente activa está libre de otras proteínas como estabilizantes o cuando dicha composición de proteína está liofilizada o en forma de una solución, ya que es más probable que se produzca la variante de dicha proteína oxidada en el radical metionina en tales casos.
Cuando se añaden uno o más aminoácidos distintos a la composición de la presente invención, se puede preparar también una composición estabilizada que contiene una proteína fisiológicamente activa que tiene un radical metionina, al que se inhibe de producir una variante oxidada en el radical metionina además de inhibir la descomposición, agregación o similar de la proteína fisiológicamente activa.
Entre los aminoácidos que se pueden añadir para este propósito se incluyen lisina, histidina, arginina, ácido aspártico, ácido glutámico, fenilalanina, triptofano, leucina, treonina, asparagina, preferiblemente histidina, arginina y fenilalanina.
Los ejemplos que se exponen a continuación ilustran con mayor detalle la presente invención, sin limitarla. Los especialistas en este campo podrán introducir diversos cambios y modificaciones en función de la descripción de la invención incluyéndose también dichos cambios y modificaciones en la presente invención.
Ejemplos Método de ensayo
Se prepararon soluciones de formulación que contenían los distintos componentes que se indican en las tablas 1 y 2 a continuación, y se filtraron asépticamente; a continuación, se cargó asépticamente 1 mL exactamente de cada una de ellas en un vial y se liofilizó. Una vez completado el liofilizado, se tapó completamente el vial para preparar formulaciones liofilizadas de G-CSF.
TABLA 1
G-CSF Fenilalanina Arginina Metionina Manitol Polisorbato 20 Tampón pH
Muestra 1 250 \mug 10 mg 10 mg 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 7,4
Muestra 2 250 \mug 10 mg 10 mg 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
G-CSF Fenilalanina Arginina Metionina Manitol Polisorbato 20 Tampón pH
Muestra 3 100 \mug 0 mg 0 mg 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 4 100 \mug 10 mg 0 mg 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 5 100 \mug 0 mg 10 mg 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 6 100 \mug 10 mg 10 mg 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
G-CSF Fenilalanina Arginina Metionina Manitol Polisorbato 20 Tampón pH
Muestra 7 250 \mug 0 mg 0 mg 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 8 250 \mug 10 mg 0 mg 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 9 250 \mug 0 mg 10 mg 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 10 250 \mug 10 mg 10 mg 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
TABLA 1 (continuación)
G-CSF Amino- Amino- Metionina Manitol Polisorbato 20 Tampón pH
ácido 1 ácido 2
Muestra 11 100 \mug Fenilalanina Lisina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 12 100 \mug Fenilalanina Histidina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 13 100 \mug Fenilalanina Arginina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 14 100 \mug Fenilalanina Ácido 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
aspártico
Muestra 15 100 \mug Fenilalanina Ácido 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
glutámico
Muestra 16 100 \mug Fenilalanina Serina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 17 100 \mug Fenilalanina Treonina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 18 100 \mug Fenilalanina Tirosina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 19 100 \mug Fenilalanina Asparagina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 20 100 \mug Fenilalanina Glutamina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
En cada uno de estos casos, se añadieron 10 mg de fenilalanina (equivalente a 60 mM). Se añadió aminoácido 2 en una cantidad equivalente a 60 mM (equimolar al aminoácido 1).
G-CSF Amino- Amino- Metionina Manitol Polisorbato 20 Tampón pH
ácido 1 ácido 2
Muestra 21 100 \mug Arginina Alanina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 22 100 \mug Arginina Valina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 23 100 \mug Arginina Leucina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 24 100 \mug Arginina Isoleucina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 25 100 \mug Arginina Metionina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 26 100 \mug Arginina Triptofano 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 27 100 \mug Arginina Fenilalanina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 28 100 \mug Arginina Prolina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 29 100 \mug Arginina Glicina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 30 100 \mug Arginina Serina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 31 100 \mug Arginina Treonina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 32 100 \mug Arginina Asparagina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 33 100 \mug Arginina Glutamina 0 50 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
En cada uno de estos casos, se añadieron 10 mg de arginina (equivalente a 60 mM). Se añadió el aminoácido 2 en una cantidad equivalente a 60 mM (equimolar al aminoácido 1).
TABLA 2
G-CSF Phe Arg Met Manitol Polisorbato 20 Tampón pH
Muestra 34 100 \mug 10 mg 10 mg 0 mg 25 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 35 100 \mug 10 mg 10 mg 0,1 mg 25 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Muestra 36 100 \mug 10 mg 10 mg 1 mg 25 mg 0,1 mg Fosfato, pH 6,5
Se dejaron en reposo las formulaciones liofilizadas que contenían G-CSF preparadas asépticamente de este modo en una incubadora a 60ºC durante 2 semanas y 1 mes; a 50ºC durante 1, 2 y 3 meses; a 40ºC durante 2, 4 y 6 meses; y a 25ºC durante 3 y 6 meses.
Se disolvieron formulaciones aceleradas y no aceleradas en exactamente 1 mL de agua pura para preparar muestras de ensayo para los ensayos que se describen a continuación.
Se determinó la proporción residual de G-CSF (% residual) en cada vial a través del método 1, a continuación. Asimismo, se determinó el contenido de G-CSF Met-oxidado de cada vial a través del método 2 que se describe a continuación.
Método 1
Se sometió a ensayo el contenido de G-CSF de cada una de las muestras por cromatografía de líquidos de alta velocidad en fase inversa utilizando una columna de fase inversa C4 (4,6 mm x 250 mm, 300 angstroms) con una fase móvil que consistió en agua pura, acetonitrilo y ácido trifluoroacético. Se inyectó la cantidad equivalente de 5 \mug de G-CSF y se eluyó G-CSF con un gradiente de acetonitrilo y se detectó espectroscópicamente a una longitud de onda de 215 nm.
Se utilizó el contenido de G-CSF determinado según este método para calcular el porcentaje (%) de G-CSF residual con arreglo a la siguiente ecuación tras la aceleración a 60ºC durante 2 semanas y 50ºC durante 1 mes y tras el almacenamiento a 60ºC durante 2 semanas y 1 mes; 50ºC durante 1, 2, y 3 meses; 40ºC durante 2, 4, y 6 meses; y 25ºC durante 3 y 6 meses.
Proporción residual (%) = \frac{\text{contenido G-CSF tras aceleración durante período ensayo)}}{\text{(contenido G-CSF antes de aceleración)}} x 100
Método 2
Se sometió a ensayo en cada una de las muestras el G-CSF intacto y G-CSF Met-oxidado por cromatografía de líquidos de alta velocidad en fase inversa utilizando una columna de fase in inversa C4 (4,6 mm x 250 mm, 300 angstroms) con una fase móvil que consistió en agua pura, acetonitrilo y ácido trifluoroacético. Se eluyó G-CSF con un gradiente de acetonitrilo y se detectó espectroscópicamente a una longitud de onda de 215 nm.
Se utilizaron las áreas pico de G-CSF intacto y G-CSF Met-oxidado según este método para calcular el contenido de G-CSF Met-oxidado con arreglo a la siguiente ecuación tras la aceleración a 60ºC durante 2 semanas y 50ºC durante 1 mes.
Contenido de G-CSF Met-oxidado (%) = \frac{(G-CSF \ Met-oxidado)}{(G-CSF \ intacto)+(G-CSF \ Met-oxidado)} x 110
Ejemplo 1 Efecto de diferentes pH sobre la proporción residual de G-CSF
Se calculó la proporción residual de G-CSF en las muestras 1 y 2 preparadas a los diferentes pH que se muestra en la tabla 1 con arreglo a la ecuación que se muestra en el método 1 tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas y 50ºC durante 1 mes. En la tabla 3 se muestran los resultados.
TABLA 3
Muestra 1, pH 7,4 Muestra 2, pH 6,5
50ºC, 1 mes 97,7 99,7
60ºC, 2 semanas 95,8 97,1
Se observó una estabilidad comparable o mayor estabilidad con la formulación a un pH 6,5, en comparación con un pH 7,4.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 2 Efecto de diversos aminoácidos sobre la proporción residual de G-CSF (1)
Se calculó la proporción residual de G-CSF en las muestras 3-6 (contenido en G-CSF 100 \mug) y muestras 7-10 (contenido en G-CSF 250 \mug) preparadas con los diversos aminoácidos de la tabla 1 con arreglo a la ecuación que se muestra en el método 1 tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas y 50ºC durante 1 mes. En las tablas 4 y 5 se muestran los resultados.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 4
Muestra 3 Muestra 4 Muestra 5 Muestra 6
Fenilalanina No 10 mg No 10 mg
Arginina No No 10 mg 10 mg
50ºC, 1 mes 72,9% 84,8% 82,4% 98,3%
60ºC, 2 sem. 67,2% 77,9% 68,8% 95,0% 
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 5 Formulaciones que contienen 250 \mug G-CSF
Muestra 7 Muestra 8 Muestra 9 Muestra 10
Fenilalanina No 10 mg No 10 mg
Arginina No No 10 mg 10 mg
50ºC, 1 mes 76,6% 88,1% 96,3% 99,7%
60ºC, 2 sem 74,0% 78,1% 90,7% 97,1% 
\vskip1.000000\baselineskip
A cualquier contenido de G-CSF, se mejora la estabilidad en las formulaciones a las que se añade fenilalanina solamente o arginina solamente en comparación con formulaciones que no contienen aminoácido, pero en un grado insuficiente. Se observó una marcada mejora en la estabilidad al combinar fenilalanina con arginina.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3 Efecto de diversos aminoácidos en la proporción residual de G-CSF (2)
Se calculó la proporción residual de G-CSF que quedaba en las muestras 11-20 (que contenían fenilalanina como amino ácido 1 y cualquiera entre lisina, histidina, arginina, ácido aspártico, ácido glutámico, serina, treonina, tirosina, asparagina y glutamina como aminoácido 2) y las muestras 21-33 (que contenían arginina como aminoácido 1 y cualquiera entre alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, triptofano, fenilalanina, prolina, glicina, serina, treonina, asparagina y glutamina como aminoácido 2) preparadas con los distintos aminoácidos que se indica en la tabla 1, con arreglo a la ecuación que se ha indicado en el método 1 tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas y 50ºC durante 1 mes. En las tablas 6 y 7 se muestran los resultados.
TABLA 6
50ºC, 1 mes 60ºC, 2 semanas
Muestra 11 92,8% 91,2%
Muestra 12 98,8% 97,5%
Muestra 13 98,0% 96,0%
Muestra 14 95,7% 96,7%
Muestra 15 95,6% 94,0%
Muestra 16 88,4% 87,8%
Muestra 17 96,4% 90,7%
Muestra 18 84,6% 81,7%
Muestra 19 95,0% 95,3%
Muestra 20 89,8% 87,2% 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 7
50ºC, 1 mes 60ºC, 2 semanas
Muestra 21 89,0% 84,4%
Muestra 22 88,9% 86,5%
Muestra 23 96,3% 96,2%
Muestra 24 88,5% 89,3%
Muestra 25 95,5% 88,5%
Muestra 26 101,4% 98,6%
Muestra 27 97,0% 95,7%
Muestra 28 89,4% 82,5%
Muestra 29 90,9% 71,2%
Muestra 30 89,2% 85,2%
Muestra 31 90,6% 87,3%
Muestra 32 94,0% 88,6%
Muestra 33 90,1% 84,6% 
\vskip1.000000\baselineskip
Se observó una notable mejora en la estabilidad a largo plazo al combinar fenilalanina con lisina, fenilalanina con histidina, fenilalanina con arginina, fenilalanina con ácido aspártico, fenilalanina con ácido glutámico, fenilalanina con treonina o fenilalanina con asparagina, o al combinar arginina con leucina, arginina con triptofano o arginina con fenilalanina.
Ejemplo 4 Prueba de almacenamiento a largo plazo
Se calculó la proporción residual de G-CSF en muestras que contenían 100 \mug o 250 \mug de G-CSF y 10 mg de fenilalanina, 10 mg de arginina y 1 mg de metionina con arreglo a la ecuación que se muestra en el método 1 tras almacenamiento a 60ºC durante 2 semanas y 1 mes; 50ºC durante 1, 2 y 3 meses; 40ºC durante 2, 4 y 6 meses; y 25ª durante 3 y 6 meses. En la tabla 8 se muestran los resultados.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 8
G-CSF 60ºC 50ºC 40ºC 25ºC
(\mug) 2W^{1} 1M^{2} 1M 2M 3M 2M 4M 6M 3M 6M
100 98,3 96,2 99,9 100,1 95,9 101,0 100,0 98,8 97,0 98,0
250 97,2 94,5 98,7 98,0 96,7 99,4 99,3 98,1 98,5 100,6
1: semana
2: mes
Ambas formulaciones presentaron una excelente proporción residual de G-CSF.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 5 Efecto de la adición de aminoácidos sobre el contenido de G-CSF Met-oxidado
En la figura 1, se muestra un ejemplo de los cromatogramas de las muestras 34-36 preparadas con metionina en las diferentes cantidades que se indican en las tablas (con un contenido de una cantidad fija de fenilarginina y arginina y 0 mg, 0,1 mg o 1 mg de metionina) según el ensayo del método 2 tras la prueba de aceleración a 60ºC durante 2 semanas; y en la figura 2, se muestra un ejemplo de cromatogramas de dichas muestras según el ensayo según el método 2 inmediatamente después de la preparación y tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes.
Se observó el contenido de G-CSF Met-oxidado tanto inmediatamente después de la preparación como después del almacenamiento a 50ºC durante 1 mes de la muestra que no contenía metionina (muestra 34), al tiempo que se pudo inhibir completamente el contenido de G-CSF Met-oxidado completamente incluso tras el almacenamiento a largo plazo añadiendo 0,1 mg o más de metionina.
En la tabla 9 se muestran los resultados del contenido de G-CSF Met-oxidado calculado a través de la ecuación que se muestra en el método 2.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 9
Muestra 34 Muestra 35 Muestra 36
0 mg Met 0,1 mg Met 1 mg Met
50ºC, 1 mes 1,2% N.D. N.D.
60ºC, 2 semana 1,7% N.D. N.D.
N.D.: por debajo del límite de detección.
Por consiguiente, se pudo inhibir completamente el contenido de G-CSF Met-oxidado añadiendo 0,1 mg o más de metionina.
Aplicación industrial
Las formulaciones G-CSF de la presente invención son formulaciones estables que presentan una proporción residual de G-CSF muy alta incluso después del almacenamiento a largo plazo y pueden inhibir casi completamente la oxidación de G-CSF en radicales de metionina.

Claims (14)

1. Una formulación de G-CSF estable que contiene uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en lisina, histidina, arginina, ácido aspártico, ácido glutámico, treonina y asparagina; uno o más aminoácidos seleccionados entre aminoácidos hidrófobos; y de 0,01 a 4 mg/ml de metionina,
teniendo dicha formulación una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras la prueba de almacenamiento a largo plazo a 25ºC durante 3 meses o una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras la prueba de almacenamiento a largo plazo a 40ºC durante 2 meses o una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes o una proporción residual de G-CSF de 90% o más tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas y un contenido de G-CSF Met-oxidado de 1% o menos tras la prueba acelerada a 50ºC durante 1 mes o tras la prueba acelerada a 60ºC durante 2 semanas.
2. La formulación de G-CSF de la reivindicación 1 en la que dicho aminoácido hidrófobo se selecciona entre fenilalanina, triptofano y leucina.
3. La formulación de G-CSF de la reivindicación 1 que contiene uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en lisina, histidina, arginina, ácido aspártico y ácido glutámico; uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en fenilalanina, triptofano y leucina; y metionina.
4. La formulación de G-CSF de la reivindicación 1 que contiene fenilalanina, arginina y metionina.
5. La formulación de G-CSF de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 que está sustancialmente libre de proteína como estabilizante.
6. La formulación de G-CSF de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en forma de formulación liofilizada.
7. La formulación de G-CSF de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 que contiene además manitol.
8. La formulación de G-CSF de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 que contiene además un agente tensioactivo.
9. La formulación de G-CSF de la reivindicación 8 en la que dicho agente tensioactivo es un éster alquílico de polioxietilen sorbitano.
10. La formulación de G-CSF de la reivindicación 9 en la que dicho agente tensioactivo es Polisorbato 20 y/o 80.
11. La Formulación de G-CSF de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, que tiene un pH 5-7.
12. La formulación de G-CSF de la reivindicación 11, que tiene un pH de 5,5 a 6,8.
13. La formulación de G-CSF de la reivindicación 12, que tiene un pH de 6,5.
14. La formulación de G-CSF de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 en la que G-CSF es producido a partir de células CHO.
ES00905397T 1999-03-01 2000-02-29 Preparaciones de g-csf estabilizadas a largo plazo. Expired - Lifetime ES2263450T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP11-52314 1999-03-01
JP11052314A JP2000247903A (ja) 1999-03-01 1999-03-01 長期安定化製剤

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2263450T3 true ES2263450T3 (es) 2006-12-16

Family

ID=12911333

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES00905397T Expired - Lifetime ES2263450T3 (es) 1999-03-01 2000-02-29 Preparaciones de g-csf estabilizadas a largo plazo.

Country Status (16)

Country Link
US (1) US6908610B1 (es)
EP (2) EP1700605B1 (es)
JP (2) JP2000247903A (es)
KR (2) KR100731559B1 (es)
CN (3) CN1879875B (es)
AT (1) ATE326233T1 (es)
AU (1) AU772604B2 (es)
CA (1) CA2381229C (es)
CY (1) CY1105528T1 (es)
DE (1) DE60028037T2 (es)
DK (1) DK1197221T3 (es)
ES (1) ES2263450T3 (es)
HK (3) HK1045652A1 (es)
PT (1) PT1197221E (es)
TW (1) TWI232749B (es)
WO (1) WO2000051629A1 (es)

Families Citing this family (76)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2395438C (en) * 1999-12-24 2009-10-13 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Dry compositions containing hydrophobic amino acid
EP1260230A4 (en) * 2000-02-29 2008-08-06 Chugai Pharmaceutical Co Ltd LONG-TERM STABILIZED PREPARATIONS
DE60109625T3 (de) * 2000-05-15 2017-08-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Flüssige arzneizubereitung enthaltend ein erythropoietin derivat
CA2420850A1 (en) * 2000-09-01 2003-02-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Solution formulations having long-term stability
US8703126B2 (en) 2000-10-12 2014-04-22 Genentech, Inc. Reduced-viscosity concentrated protein formulations
EP1324776B2 (en) 2000-10-12 2018-03-21 Genentech, Inc. Reduced-viscosity concentrated protein formulations
US20030104996A1 (en) * 2001-08-30 2003-06-05 Tiansheng Li L-methionine as a stabilizer for NESP/EPO in HSA-free formulations
DE10149030A1 (de) * 2001-10-05 2003-04-10 Viscum Ag Stabile galenische gefriergetrocknete Arzneimittelzubereitung von rViscumin
AU2002351756A1 (en) 2001-12-21 2003-07-15 Novo Nordisk Health Care Ag Liquid composition of factor vii polypeptides
KR20040065278A (ko) * 2001-12-21 2004-07-21 노보 노르디스크 에이/에스 변경된 인자 ⅶ 폴리펩티드의 액체 조성물
ATE477810T1 (de) * 2002-02-28 2010-09-15 Nipro Corp Stabilisierte albumin-zubereitungen
US20040009918A1 (en) * 2002-05-03 2004-01-15 Hanne Nedergaard Stabilised solid compositions of modified factor VII
AU2003240438A1 (en) 2002-06-21 2004-01-06 Novo Nordisk A/S Stabilised solid compositions of factor vii polypeptides
US6803046B2 (en) * 2002-08-16 2004-10-12 Bracco International B.V. Sincalide formulations
EP1541165A4 (en) * 2002-08-27 2009-06-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd METHOD FOR STABILIZING PROTEIN PREPARATION
EP1598074B1 (en) 2003-02-28 2019-01-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Stabilized protein-containing formulations
CA2518327A1 (en) * 2003-03-18 2004-09-30 Novo Nordisk Health Care Ag Liquid, aqueous, pharmaceutical compositions of factor vii polypeptides
US7897734B2 (en) * 2003-03-26 2011-03-01 Novo Nordisk Healthcare Ag Method for the production of proteins
ES2349779T5 (es) * 2003-04-04 2013-11-26 Genentech, Inc. Formulaciones de anticuerpos y de proteínas a concentración elevada
AU2004241698A1 (en) * 2003-05-23 2004-12-02 Novo Nordisk Health Care Ag Protein stabilization in solution
JP5306597B2 (ja) * 2003-07-01 2013-10-02 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 第ｖｉｉ因子ポリペプチドの液体水性薬学的組成物
FR2857267B1 (fr) * 2003-07-09 2006-03-10 Lab Francais Du Fractionnement Formulation stabilisante et solubilisante pour les proteines cryoprecipitables.
DE10333317A1 (de) * 2003-07-22 2005-02-17 Biotecon Therapeutics Gmbh Formulierung für Proteinarzneimittel ohne Zusatz von humanem Serumalbumin (HSA)
ES2574581T3 (es) * 2003-08-14 2016-06-20 Novo Nordisk Health Care Ag Composición farmacéutica líquida acuosa de polipéptidos de tipo Factor VII
EP1685160A1 (en) * 2003-11-10 2006-08-02 Arriva-Prometic Inc. Dry recombinant human alpha 1-antitrypsin formulation
PT1684719E (pt) * 2003-11-14 2012-02-03 Baxter Int Composições de alfa-1-antitripsina e métodos de tratamento utilizando estas composições
TR201809670T4 (tr) * 2003-12-19 2018-07-23 Novo Nordisk Healthcare Ag Faktör VII polipeptitlerinin stabilize edilmiş kompozisyonları.
DE202004020676U1 (de) * 2004-03-10 2005-11-10 Bioceuticals Arzneimittel Ag Erythropoietin-Flüssigformulierung
JP2005310840A (ja) 2004-04-16 2005-11-04 Toshiba Corp 磁気ランダムアクセスメモリ
US20060293243A1 (en) * 2005-06-17 2006-12-28 Navneet Puri Stable, buffered, pharmaceutical compositions including motilin-like peptides
US7534753B2 (en) * 2006-01-12 2009-05-19 Air Products And Chemicals, Inc. pH buffered aqueous cleaning composition and method for removing photoresist residue
TW200806317A (en) * 2006-03-20 2008-02-01 Wyeth Corp Methods for reducing protein aggregation
EP1997505A4 (en) * 2006-03-22 2013-02-13 Chugai Pharmaceutical Co Ltd PREPARATION OF ERYTHROPOIETIN SOLUTION
SI2142174T1 (sl) * 2007-04-05 2011-04-29 Sandoz Ag Stabilne vodne G-CSF formulacije
US20080286471A1 (en) * 2007-05-18 2008-11-20 Doubleday Marc D Protective gel for an electrical connection
JP5513380B2 (ja) * 2007-06-25 2014-06-04 アムジエン・インコーポレーテツド 肝細胞増殖因子に対する特異的結合剤の組成物
KR101087017B1 (ko) 2007-07-10 2011-12-09 (주)메디톡스 보툴리눔 독소의 안정성이 개선된 약제학적 액상 조성물
PE20091174A1 (es) * 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
WO2009087081A2 (de) 2008-01-09 2009-07-16 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Neue insulinderivate mit extrem verzögertem zeit-/wirkungsprofil
EP2684570A1 (en) * 2008-09-10 2014-01-15 F. Hoffmann-La Roche AG Compositions and methods for the prevention of oxidative degradation of proteins
BR122013025625B1 (pt) 2008-10-17 2021-08-03 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Composição farmacêutica, seu uso e método de preparação da mesma, kit e dispositivo
CA2754528A1 (en) 2009-03-06 2010-09-10 Genetech, Inc. Antibody formulation
MY159565A (en) 2009-11-13 2017-01-13 Sanofi Aventis Deutschland Pharmaceutical composition comprising a glp-1 agonist and methionine
DK2498802T3 (en) 2009-11-13 2015-04-13 Sanofi Aventis Deutschland Pharmaceutical composition comprising a GLP-1 agonist, insulin and a methionine
EP3295957B1 (en) * 2010-01-15 2019-08-07 Kirin-Amgen, Inc. Anti il-17ra antibody formulation and therapeutic regimens for treating psoriasis
TWI505838B (zh) 2010-01-20 2015-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Stabilized antibody solution containing
SI2542257T1 (en) 2010-03-01 2018-01-31 Bayer Healthcare Llc Optimized monoclonal antibodies against Tissue Factor Pathway Inhibitor (TFPI)
EP2399572A1 (en) 2010-06-22 2011-12-28 Sandoz AG Long-term storage of non-glycosylated recombinant human G-CSF
HUE031181T2 (en) 2010-08-30 2017-06-28 Sanofi Aventis Deutschland Use of AVE0010 for the manufacture of a medicament for the treatment of type 2 diabetes
AR083006A1 (es) 2010-09-23 2013-01-23 Lilly Co Eli Formulaciones para el factor estimulante de colonias de granulocitos (g-csf) bovino y variantes de las mismas
CN102028661B (zh) * 2010-12-31 2012-05-23 山东新时代药业有限公司 聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子冻干粉针剂及其制备方法
US9821032B2 (en) 2011-05-13 2017-11-21 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin
KR101983982B1 (ko) 2011-08-29 2019-05-30 사노피-아벤티스 도이칠란트 게엠베하 2형 당뇨병 환자의 혈당 조절에 사용하기 위한 약제학적 병용물
AR087744A1 (es) 2011-09-01 2014-04-16 Sanofi Aventis Deutschland Composicion farmaceutica para uso en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa
EP2827951A4 (en) * 2012-03-21 2016-07-13 Futurestem Llc COMBINATION THERAPY TO IMPROVE THE HEALING OF JOINTS, TIGHTS AND TAPES
US9592297B2 (en) 2012-08-31 2017-03-14 Bayer Healthcare Llc Antibody and protein formulations
US8613919B1 (en) 2012-08-31 2013-12-24 Bayer Healthcare, Llc High concentration antibody and protein formulations
TWI780236B (zh) 2013-02-04 2022-10-11 法商賽諾菲公司 胰島素類似物及/或胰島素衍生物之穩定化醫藥調配物
ES2694328T3 (es) 2013-03-12 2018-12-19 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Composición acuosa líquida
PT2968466T (pt) * 2013-03-13 2018-10-22 Hoffmann La Roche Formulações de oxidação reduzida
US20140314778A1 (en) 2013-03-13 2014-10-23 Genentech, Inc. Formulations with reduced oxidation
SI2968467T1 (sl) * 2013-03-13 2020-11-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Pripravki z zmanjšano oksidacijo
WO2015076285A1 (ja) * 2013-11-21 2015-05-28 協和メデックス株式会社 血清又は血漿中の低密度リポ蛋白の凍結乾燥による変性抑制剤及び変性抑制方法
BR112016013832A2 (pt) 2014-01-09 2017-08-08 Sanofi Sa Uso de análogo e/ou derivado de insulina, formulação farmacêutica e processo para a preparação da mesma, kit e dispositivo médico
WO2015104310A1 (en) 2014-01-09 2015-07-16 Sanofi Stabilized pharmaceutical formulations of insulin aspart
CN105960249B (zh) 2014-01-09 2021-03-16 赛诺菲 胰岛素类似物和/或胰岛素衍生物的稳定化药物制剂
CN104524553B (zh) * 2014-12-12 2015-07-29 薛传校 一种长效促排卵注射液
CN107206058A (zh) 2014-12-12 2017-09-26 赛诺菲-安万特德国有限公司 甘精胰岛素/利西拉来固定比率配制剂
TWI748945B (zh) 2015-03-13 2021-12-11 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 第２型糖尿病病患治療
TW201705975A (zh) 2015-03-18 2017-02-16 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 第２型糖尿病病患之治療
US11110063B2 (en) 2017-08-25 2021-09-07 MAIA Pharmaceuticals, Inc. Storage stable sincalide formulations
WO2019059302A1 (ja) * 2017-09-22 2019-03-28 旭化成ファーマ株式会社 安定性に優れるテリパラチド含有液状医薬組成物
CN109627300B (zh) * 2019-02-18 2022-08-05 浙江新银象生物工程有限公司 Nisin溶液稳定剂开发及应用
US20230190880A1 (en) * 2020-03-30 2023-06-22 Sichuan Luzhou Buchang Bio-Pharmaceutical Co., Ltd. Formulations of Human Parathyroid Hormone (PTH) and Methods for Producing Same
WO2023066988A1 (en) 2021-10-19 2023-04-27 Sandoz Ag Glass container with low aluminum content and gas overlay to prevent oxidation of sensitive therapeutic agents
CN115624187B (zh) * 2022-12-08 2023-04-04 北京第一生物科技开发有限公司 牛脾肽粉在改善睡眠中的用途

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3228502A1 (de) * 1982-07-30 1984-02-02 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Verfahren zur herstellung des c1-inaktivators und seine verwendung
JP2577744B2 (ja) * 1986-07-18 1997-02-05 中外製薬株式会社 安定な顆粒球コロニ−刺激因子含有製剤
DE3729863A1 (de) * 1987-09-05 1989-03-16 Boehringer Mannheim Gmbh Stabilisierte erythropoietin-lyophilisate
JP2974722B2 (ja) * 1990-04-03 1999-11-10 帝国臓器製薬株式会社 カルシトニン注射液
US5272135A (en) 1991-03-01 1993-12-21 Chiron Ophthalmics, Inc. Method for the stabilization of methionine-containing polypeptides
GB9120304D0 (en) * 1991-09-24 1991-11-06 Erba Carlo Spa Stable pharmaceutical compositions containing a granulocyte macrophage colony stimulating factor
US5192743A (en) 1992-01-16 1993-03-09 Genentech, Inc. Reconstitutable lyophilized protein formulation
JPH05331071A (ja) * 1992-01-17 1993-12-14 Asahi Chem Ind Co Ltd カルシトニン遺伝子関連ペプチド類の凍結乾燥組成物および安定化法
IL107887A (en) * 1992-12-08 2003-07-06 Ambi Inc Stabilized lanthionine containing bacteriocin compositions
DE4242863A1 (de) * 1992-12-18 1994-06-23 Boehringer Mannheim Gmbh Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von G-CSF
US5358708A (en) * 1993-01-29 1994-10-25 Schering Corporation Stabilization of protein formulations
US5780431A (en) * 1996-09-20 1998-07-14 Neurobiological Technologies, Inc. Pharmaceutical formulations of corticotropin releasing factor having improved stability in liquid form
TW518235B (en) * 1997-01-15 2003-01-21 Akzo Nobel Nv A gonadotropin-containing pharmaceutical composition with improved stability on prolong storage
HUP0203133A3 (en) * 1999-10-04 2005-07-28 Chiron Corp Emeryville Stabilized liquid polypeptide-containing pharmaceutical compositions

Also Published As

Publication number Publication date
WO2000051629A1 (fr) 2000-09-08
KR20050099637A (ko) 2005-10-14
KR100656125B1 (ko) 2006-12-12
EP1197221A4 (en) 2003-01-29
DE60028037D1 (de) 2006-06-22
ATE326233T1 (de) 2006-06-15
JP2000247903A (ja) 2000-09-12
TWI232749B (en) 2005-05-21
KR20010102469A (ko) 2001-11-15
CA2381229A1 (en) 2000-09-08
EP1197221A1 (en) 2002-04-17
CN101537173A (zh) 2009-09-23
HK1046239A1 (en) 2003-01-03
HK1098963A1 (en) 2007-08-03
KR100731559B1 (ko) 2007-06-22
HK1045652A1 (zh) 2002-12-06
CY1105528T1 (el) 2010-07-28
CN1879875A (zh) 2006-12-20
AU772604B2 (en) 2004-05-06
US6908610B1 (en) 2005-06-21
DK1197221T3 (da) 2006-11-13
EP1700605A3 (en) 2007-06-13
AU2695400A (en) 2000-09-21
CN1342087A (zh) 2002-03-27
PT1197221E (pt) 2006-08-31
DE60028037T2 (de) 2006-12-21
CN1879875B (zh) 2010-08-25
JP4607336B2 (ja) 2011-01-05
HK1046239B (zh) 2006-08-18
EP1700605B1 (en) 2014-04-30
EP1197221B1 (en) 2006-05-17
CA2381229C (en) 2010-10-26
EP1700605A2 (en) 2006-09-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2263450T3 (es) Preparaciones de g-csf estabilizadas a largo plazo.
US7163671B2 (en) Long-term stabilized formulations
ES2267140T3 (es) Preparacion de una solucion de eritropoyetina estabilizada con aminoacidos.
ES2353496T3 (es) Productos farmacéuticos en solución que contienen anticuerpos.
JP2007204498A (ja) 長期安定化製剤
US7998929B2 (en) Solution preparations stabilized over long time
KR100389726B1 (ko) 안정한 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제
JP4454571B2 (ja) 蛋白非添加製剤