ES2248618T3

ES2248618T3 - Inhibidor del factor xa.

Info

Publication number: ES2248618T3
Application number: ES02778933T
Authority: ES
Inventors: Gary Lowell Engel; Benjamin Alan Diseroad
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2001-06-12
Filing date: 2002-06-06
Publication date: 2006-03-16
Anticipated expiration: 2022-06-06
Also published as: AR036048A1; DE60206376T2; JP2004534062A; AU2002348501A1; ATE305452T1; DE60206376D1; WO2002100847A2; TWI257389B; PE20030198A1; EP1397348A2; US20040162295A1; MY137876A; EP1397348B1; SV2003001085A; WO2002100847A3

Abstract

Difumarato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina. De esta manera, considerada desde un aspecto, la invención proporciona difumarato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)- 4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina. Un nombre alternativo por el que puede conocerse el compuesto es 1H-indol-6-carboxamida, N-[(1R)-2-[4-(1-metil- 4-piperidinil)-1-piperazinil]-2-oxo-1-feniletil]-, (2E)-butenodioato (1:2) (sal). Se apreciará que el compuesto puede existir en forma racémica (D/L) o quiral y que el isómero D preferido puede administrarse en una forma racémica con el isómero L, o solo. La conformación D se refiere a la conformación de D-fenilglicina, a partir de la cual puede prepararse el compuesto. De acuerdo con otro aspecto, la presente invención proporciona difumarato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4- (1-metilpiperidin-4-il)piperizina en forma cristalina. Se ha descubierto que la sal difumarato puede obtenerse en al menos dos formas cristalinas diferentes, dependiendo del sistema disolvente usado para cristalizarla.

Description

Inhibidor del factor Xa.

Esta invención se refiere a un compuesto farmacéutico que es un inhibidor selectivo de la proteasa de serina, factor Xa, a composiciones farmacéuticas del mismo y a su uso en el tratamiento del cuerpo humano o del cuerpo de un animal.

Las proteasas de serina son un grupo de enzimas proteolíticas que tienen un mecanismo catalítico común caracterizado por un resto Ser particularmente reactivo. Los ejemplos de proteasas de serina incluyen tripsina, triptasa, quimotripsina, elastasa, trombina, plasmina, calicreína, Complemento C1, proteasa acrosomal, proteasa lisosomal, coconasa, proteasa \alpha-lítica, proteasa A, proteasa B, carboxipeptidasa II de serina, subtilisina, uroquinasa, factor VIIa, factor IXa y factor Xa. Durante varias décadas, se han investigado extensivamente las proteasas de serina y se conoce bien el valor terapéutico de los inhibidores de las proteasas de serina. De esta forma, por ejemplo, un inhibidor del factor Xa tiene valor como agente terapéutico como anticoagulante, por ejemplo, en el tratamiento o prevención de trastornos trombóticos. Es deseable el uso de un inhibidor del factor Xa como anticoagulante en vista de la selectividad de su efecto. Muchos anticoagulantes aprobados clínicamente se han asociado con acontecimientos adversos debido a la naturaleza no específica de sus efectos sobre la cascada de la coagulación.

En los documentos WO 99/11658 y WO 99/11657 se ha notificado que ciertos derivados de benzamidina y aminoisoquinolina que llevan una cadena lateral lipófila voluminosa son excelentes inhibidores de proteasas de serina, en particular, del factor Xa.

El 21 de diciembre de 2000, en el documento WO 00/76971 se describió otra serie de inhibidores de proteasa de serina. Estos compuestos poseen una diversidad de grupos aromáticos, tales como indolilo, en lugar de los grupos benzamidina y aminoisoquinolina encontrados en los compuestos de los documentos WO 99/11658 y WO 99/11657. Uno de los compuestos descritos específicamente, en el ejemplo 318, fue la 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina.

Se ha descubierto que la 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina es un inhibidor potente y selectivo del factor Xa, que tiene buena exposición oral y que posee un perfil farmacológico/toxicológico particularmente deseable. El compuesto y sus sales farmacéuticamente aceptables por lo tanto son potencialmente útiles para la profilaxis o tratamiento de trastornos trombóticos tales como, entre otros, trombosis venosas, embolia pulmonar, trombosis arterial, isquemia de miocardio, infarto de miocardio y trombosis cerebral. También son potencialmente beneficiosos en el tratamiento de la obstrucción aguda de vasos asociada con una terapia trombolítica y reestenosis, por ejemplo, después de una angioplastia coronaria transluminal o un injerto de bypass de las arterias coronarias o periféricas, y en el mantenimiento de la patencia del acceso vascular en pacientes con hemodiálisis a largo plazo.

Para considerarse como un candidato para el desarrollo adicional como agente farmacéutico, un compuesto no sólo debe poseer propiedades biológicas deseables, sino también propiedades físicas que lo adaptan para uso en la fabricación de un producto farmacéutico. En particular, el compuesto debe formar un sólido estable, preferiblemente cristalino, que pueda formularse y fabricarse fácilmente.

Se ha descubierto que el compuesto descrito en el ejemplo 318 del documento WO 00/76971, 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina, puede obtenerse en forma cristalina por cristalización en un sistema disolvente de cloroformo/acetato de etilo. Se descubrió que la forma cristalina era un solvato de cloroformo. Desafortunadamente, resultó difícil eliminar el cloroformo, que es indeseable en un producto farmacéutico, y en presencia de agua, el material cristalino tendía a convertirse en un gel.

También se ha preparado la sal monoclorhidrato de 1-indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina. La sal monoclorhidrato inicialmente se obtuvo como un sólido amorfo. Este sólido se cicló a través de la determinación de isotermas de presión de vapor, en las que el sólido inicialmente se licuó y después se deshidrató. Se descubrió que el material deshidratado era cristalino. Desafortunadamente, se descubrió que el material cristalino, al igual que el material amorfo, era higroscópico.

Sorprendentemente, ahora se ha descubierto una forma cristalina estable de una sal farmacéuticamente aceptable de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina. Se encontró disolviendo 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina en etanol al 95% a una temperatura de aproximadamente 50ºC, añadiendo dos equivalentes de ácido fumárico y dejando enfriar la solución resultante.

De esta manera, considerada desde un aspecto, la invención proporciona difumarato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina.

Un nombre alternativo por el que puede conocerse el compuesto es 1H-indol-6-carboxamida, N-[(1R)-2-[4-(1-metil-4-piperidinil)-1-piperazinil]-2-oxo-1-feniletil]-, (2E)-butenodioato (1:2) (sal).

Se apreciará que el compuesto puede existir en forma racémica (D/L) o quiral y que el isómero D preferido puede administrarse en una forma racémica con el isómero L, o solo. La conformación D se refiere a la conformación de D-fenilglicina, a partir de la cual puede prepararse el compuesto.

De acuerdo con otro aspecto, la presente invención proporciona difumarato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperizina en forma cristalina.

Se ha descubierto que la sal difumarato puede obtenerse en al menos dos formas cristalinas diferentes, dependiendo del sistema disolvente usado para cristalizarla.

La primera forma cristalina de la sal difumarato se ha preparado disolviendo la base libre en metanol o etanol al 95%, calentando la solución a aproximadamente 50ºC, añadiendo dos equivalentes de ácido fumárico en metanol o etanol al 95% y después dejando enfriar la mezcla resultante. Se descubrió que una sal, identificada como el difumarato, cristalizaba en forma de agujas finas. El análisis por calorimetría de exploración diferencial (DSF) reveló un punto de fusión rápido a aproximadamente 213ºC. El material cristalino se sometió a un análisis de difracción de rayos X en polvo. Se descubrió que el patrón de difracción de rayos X en polvo resultante contenía picos intensos y estrechos a 2\theta = 6,280, 7,830 y 19,513. Esta forma cristalina de la sal difumarato se denomina en lo sucesivo Forma I. En la Tabla 1 mostrada a continuación se proporciona un análisis más detallado de los picos. El patrón de difracción de rayos X en polvo se muestra en la Figura 1.

Se ha descubierto que la Forma 1 puede retirarse fácilmente por filtración, y es morfológicamente estable, incluso en condiciones de alta humedad relativa (por encima del 70%). Los resultados de los estudios de estabilidad se presentan en la Tabla 2 mostrada a continuación.

TABLA 1

\dotable{\tabskip\tabcolsep\hfil#\hfil\+#\hfil\+\hfil#\hfil\+#\hfil\+\hfil#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
 Ángulo \+  \hskip3,5cm  \+ Valor d \+   \hskip2,5cm  \+ % de
intensidad\cr  2-Thetaº \+ \+ Angstrom \+ \+ %\cr
\+\+\+\+\cr  6,28 \+ \+ 14,06278 \+ \+ 100\cr  7,83 \+ \+ 11,2814 \+
\+ 80,9\cr  8,047 \+ \+ 10,97827 \+ \+ 51,1\cr  10,354 \+ \+ 8,53661
\+ \+  5,4\cr  11,577 \+ \+ 7,63712 \+ \+ 15,5\cr  11,707 \+ \+
7,55314 \+ \+ 10,1\cr  12,146 \+ \+ 7,28071 \+ \+ 12,8\cr  14,381 \+
\+ 6,15405 \+ \+ 12,1\cr  14,599 \+ \+ 6,06232 \+ \+ 25,8\cr  15,087
\+ \+ 5,86757 \+ \+ 22,3\cr  15,647 \+ \+ 5,65872 \+ \+ 16,1\cr 
16,135 \+ \+ 5,48865 \+ \+ 3,2\cr  16,61 \+ \+ 5,33267 \+ \+ 26,2\cr
 17,075 \+ \+ 5,18873 \+ \+ 1\cr  17,705 \+ \+ 5,00543 \+ \+ 3,1\cr 
18,395 \+ \+ 4,81901 \+ \+ 15\cr  18,928 \+ \+ 4,68464 \+ \+ 8,5\cr 
19,513 \+ \+ 4,54547 \+ \+ 88,1\cr  20,672 \+ \+ 4,29321 \+ \+ 39\cr
 20,9 \+ \+ 4,2469 \+ \+ 28,2\cr  21,354 \+ \+ 4,15765 \+ \+ 3,4\cr 
22,238 \+ \+ 3,99418 \+ \+ 5,9\cr  22,899 \+ \+ 3,88038 \+ \+ 4,3\cr
 23,571 \+ \+ 3,77122 \+ \+ 23\cr  24,328 \+ \+ 3,65558 \+ \+
31,2\cr  25,014 \+ \+ 3,55687 \+ \+ 22,9\cr  25,311 \+ \+ 3,51589 \+
\+ 9,8\cr  25,76 \+ \+ 3,4556 \+ \+ 10,5\cr  26,602 \+ \+ 3,34803 \+
\+ 14,1\cr  27,915 \+ \+ 3,19351 \+ \+
8,3\cr}

TABLA 1 (continuación)

\dotable{\tabskip\tabcolsep\hfil#\hfil\+#\hfil\+\hfil#\hfil\+#\hfil\+\hfil#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
 Ángulo \+  \hskip3,5cm  \+ Valor d  \+   \hskip2,5cm  \+ % de
intensidad\cr  2-Thetaº \+ \+ Angstrom \+ \+ %\cr
\+\+\+\+\cr  28,939 \+ \+ 3,08279 \+ \+ 12,2\cr  30,94 \+ \+ 2,88781
\+ \+ 4,6\cr  31,571 \+ \+ 2,83149 \+ \+ 1,8\cr  33,378 \+ \+
2,65444 \+ \+ 1,9\cr  34,29 \+ \+ 2,61297 \+ \+ 2,8\cr  35,275 \+ \+
2,54221 \+ \+ 1\cr  36,577 \+ \+ 2,45468 \+ \+ 1,4\cr  38,214 \+ \+
2,35319 \+ \+ 1,8\cr  39,326 \+ \+ 2,28917 \+ \+
3,9\cr}

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA 2 Estudio de estabilidad sobre la Forma 1

\dotable{\tabskip\tabcolsep\hfil#\hfil\+#\hfil\+\hfil#\hfil\+#\hfil\+\hfil#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
 Condición \+  \hskip3cm  \+ 7 Días \+  \hskip3cm  \+ 28 Días\cr
\+\+\+\+\cr  40ºC \+ \+ 100,5 \+ \+ 99,8\cr  50ºC \+ \+ 99,3 \+ \+
99,4\cr  70ºC \+ \+ 99,0 \+ \+ 100,2\cr  40ºC/75% HR \+ \+ 99,6 \+
\+ 99,5\cr  Luz \+ \+ 99,7 \+ \+
98,9\cr}

Notas:	% expresado con respecto al material almacenado a -70ºC.
	% HR significa el porcentaje de humedad relativa.

La segunda forma cristalina de la sal difumarato se preparó por cristalización en etanol acuoso al 50%. El material cristalino se sometió a un análisis de difracción de rayos X en polvo. Se descubrió que el patrón de difracción de rayos X en polvo resultante contenía picos intensos y estrechos a 2\theta = 8,833, 20,810 y 23,824. Esta forma cristalina de la sal difumarato se denomina en lo sucesivo Forma 2. En la Tabla 3 mostrada a continuación se proporciona un análisis más detallado de los picos. El patrón de difracción de rayos X en polvo se muestra en la Figura 1.

Se ha descubierto que la forma 2 es morfológicamente estable, incluso en condiciones de alta humedad relativa (por encima del 70%). Los resultados de los estudios de estabilidad se indican en la Tabla 4 mostrada a continuación.

Después de preparar la forma 2 por cristalización en etanol acuoso al 50%, se descubrió que esta forma también podía prepararse suspendiendo la forma 1 en agua y por cristalización en agua. La estabilidad en presencia de agua es deseable en un producto destinado a la formulación en una composición farmacéutica usando un procedimiento que lo pone en contacto con agua, tal como un procedimiento de granulación en húmedo usado en la preparación de un comprimido.

TABLA 3

\dotable{\tabskip\tabcolsep\hfil#\hfil\+#\hfil\+\hfil#\hfil\+#\hfil\+\hfil#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
 Ángulo \+  \hskip3,5cm \+ valor d \+  \hskip2,5cm \+ % de
intensidad\cr  2-Thetaº \+ \+ Angstrom \+ \+ %\cr
\+\+\+\+\cr  5,843 \+ \+ 15,11276 \+ \+ 5,6\cr  8,833 \+ \+ 10,0024
\+ \+ 92,5\cr  9,436 \+ \+ 9,36541 \+ \+ 9,5\cr  10,226 \+ \+
8,64333 \+ \+ 4,4\cr  11,807 \+ \+ 7,4888 \+ \+ 4,9\cr  14,312 \+ \+
6,18352 \+ \+ 5,5\cr  14,745 \+ \+ 6,00264 \+ \+
2,5\cr}

TABLA 3 (continuación)

\dotable{\tabskip\tabcolsep\hfil#\hfil\+#\hfil\+\hfil#\hfil\+#\hfil\+\hfil#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
 Ángulo \+  \hskip3,5cm  \+ valor d \+  \hskip2,5cm  \+ % de
intensidad\cr  2-Thetaº \+ \+ Angstrom \+ \+ %\cr
\+\+\+\+\cr  15,207 \+ \+ 5,82159 \+ \+ 9,5\cr  16,94 \+ \+ 5,22959
\+ \+ 2,5\cr  17,54 \+ \+ 5,05196 \+ \+ 3,4\cr  17,815 \+ \+ 4,97472
\+ \+ 2,6\cr  18,575 \+ \+ 4,77277 \+ \+ 10,2\cr  18,825 \+ \+
4,71005 \+ \+ 6,7\cr  19,144 \+ \+ 4,63231 \+ \+ 3,7\cr  19,708 \+
\+ 4,50099 \+ \+ 2,7\cr  20,81 \+ \+ 4,26508 \+ \+ 100\cr  23,824 \+
\+ 3,73184 \+ \+ 90,9\cr  24,507 \+ \+ 3,62937 \+ \+ 7,3\cr  25,986
\+ \+ 3,42603 \+ \+ 3,3\cr  30,314 \+ \+ 2,94599 \+ \+ 1,9\cr 
31,832 \+ \+ 2,80888 \+ \+ 1,4\cr  33,025 \+ \+ 2,71013 \+ \+ 1,6\cr
 33,366 \+ \+ 2,68322 \+ \+ 1,5\cr  36,106 \+ \+ 2,48562 \+ \+
1,3\cr}

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TABLA 4 Estudio de estabilidad sobre la Forma 2

\dotable{\tabskip\tabcolsep\hfil#\hfil\+#\hfil\+\hfil#\hfil\+#\hfil\+\hfil#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
 Condición \+  \hskip3cm  \+ 7 Días \+  \hskip3cm  \+ 28 Días\cr
\+\+\+\+\cr  70ºC \+ \+ 99,1 \+ \+ 99,0\cr  40ºC/75% HR \+ \+ 99,3
\+ \+
99,6\cr}

Los patrones de difracción de rayos X en polvo se obtuvieron en un difractómetro de rayos X Siemens D5000 equipado con una fuente de CuK (\lambda = 1,54056) funcionando a una carga de tubo de 50 KV y 40 mA. El tamaño de la ranura de divergencia fue de 1 mm, la ranura de recepción de 1 mm y la ranura del detector de 0,1 mm. Los datos se recogieron por un detector Kevex de estado sólido (SiLi). Cada muestra se exploró entre 4 y 35 grados (2-theta) con un tamaño de etapa de 0,02 grados y una velocidad máxima de exploración de 3 seg/etapa.

Los especialistas en la técnica del análisis de difracción de rayos X en polvo apreciarán que los valores exactos medidos para 2\theta (o las distancias interplanares d correspondientes) pueden variar dependiendo de la muestra particular analizada y del aparato y del procedimiento de análisis particular usados.

La 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina puede prepararse por el procedimiento descrito en el documento WO 00/76971 o como se describe en los siguientes ejemplos.

Se entenderá que la sal difumarato de acuerdo con la invención puede aislarse en forma de solvatos (que pueden o pueden no ser fisiológicamente tolerables), y por lo tanto, que todos tales solvatos se incluyen dentro del alcance de la presente invención. Se apreciará que un solvato que no es filológicamente tolerable sin embargo puede ser útil en la fabricación de un producto farmacéutico, por ejemplo, en una etapa de purificación.

La sal difumarato de la invención puede administrarse por cualquier vía conveniente, por ejemplo, en el tracto gastrointestinal (por ejemplo, por vía rectal u oral), la nariz, los pulmones, la musculatura, el sistema vascular o por vía transdérmica. La sal difumarato puede administrarse en cualquier forma de administración conveniente, por ejemplo, comprimidos, polvos, cápsulas, soluciones, dispersiones, suspensiones, jarabes, pulverizaciones, supositorios, geles, emulsiones, parches, etc. Tales composiciones pueden contener componentes convencionales en las preparaciones farmacéuticas, por ejemplo, diluyentes, vehículos, modificadores del pH, edulcorantes, agentes voluminosos y agentes activos adicionales. Preferiblemente, para inyección o infusión, las composiciones serán estériles y estarán en una forma de solución o suspensión adecuada. Tales composiciones forman un aspecto adicional de la invención.

Considerado desde este aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende la sal difumarato de acuerdo con la invención junto con al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica también puede comprender opcionalmente al menos un agente antitrombótico y/o trombolítico adicional. El compuesto puede, con ventaja, formar parte de una terapia de combinación con un anticoagulante con un modo de acción diferente o con un agente trombolítico.

Considerado desde un aspecto adicional, la invención proporciona el uso de la sal difumarato de acuerdo con la invención para la fabricación de un medicamento para uso en un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano o del cuerpo de un animal no humano (por ejemplo, el cuerpo de un mamífero, un ave o un reptil) para combatir (es decir, tratar o prevenir) una afección que responde a dicho inhibidor.

La dosis del compuesto de la invención dependerá de la naturaleza y gravedad de la afección a tratar, la vía de administración y el tamaño y la especie del paciente. Sin embargo, en general, se administrarán cantidades de 0,01 a 100 \mumol/kg por peso corporal.

La invención se describirá a continuación adicionalmente haciendo referencia a los siguientes ejemplos no limitantes.

Parte experimental

Las abreviaturas usadas siguen la nomenclatura IUPAC-IUB. A lo largo de todos esto documento se usan las siguientes abreviaturas: Boc (terc-butiloxicarbonilo), MeOH (metanol), API-MS (espectro de masas de pulverización iónica), THF (tetrahidrofurano), DSC (calorimetría de exploración diferencial) y TGA (análisis gravimétrico térmico).

Todas las concentraciones de solución se expresan como %Vol./%Vol. a menos que se indique otra cosa. Los reactivos se obtuvieron a partir de una diversidad de fuentes comerciales.

IR significa que se obtuvo un espectro infrarrojo. ^{1}RMN, RMN, 1H-RMN o 1H RMN significa que se obtuvo un espectro de resonancia magnética de protón.

API-MS (espectro de masas de ionización química a presión atmosférica) se obtuvo en un PESciex API 15OEX con un nebulizador calentado y nitrógeno como gas reactivo en modo de ion positivo.

Ejemplo 1 Preparación de la Forma 1 del difumarato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina

La sal difumarato se prepara convenientemente disolviendo la base libre en metanol o etanol al 95% y calentando a aproximadamente 50ºC (por ejemplo, a una concentración de 460 mg en 15 ml). Después se añaden dos equivalentes molares de ácido fumárico (por ejemplo, 232,2 mg) (por ejemplo, como una solución 0,25 M en metanol o como una suspensión en 3 ml de etanol al 95%). Después de la refrigeración y cristalización, y del aislamiento y secado, el producto se obtiene como agujas cristalinas finas, con un punto de fusión estrecho a aproximadamente 213ºC por DSC.

Ejemplo 2 Preparación de la Forma 2 del difumarato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina

La sal difumarato (15 mg) se disuelve en etanol acuoso al 50% (EtOH:H_{2}O/50:50) usando sonicación para ayudar a la disolución. Después el disolvente se deja evaporar a temperatura ambiente durante una noche.

Ejemplo 2a Preparación de la Forma 2 por Suspensión de la Forma 1 en Agua

Se suspendieron 1,5 g de la Forma 1 de difumarato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina en 10 ml de agua destilada y se agitó durante 24 horas. La suspensión se espesó después de 5-6 horas, pero la agitación se mantuvo durante el tiempo restante. La suspensión se centrifugó para aislar el sólido. El sólido se lavó con ciclohexano y se secó a temperatura ambiente al vacío. El análisis del producto por difracción de rayos X en polvo demostró que el sólido ya no era la Forma 1 y se había convertido en la Forma 2.

Ejemplo 2b Preparación de la Forma 2 por Cristalización en Agua

Se suspendieron 2,5 g de difuramato de 1-(indol-6-carbonil-d-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina en 25 ml de agua. La suspensión después se calentó a aproximadamente 60-70ºC y se agitó hasta que se obtuvo una solución transparente. La solución transparente después se dejó enfriar a temperatura ambiente durante 1 noche, con agitación. Al día siguiente, se recogieron los cristales por filtración y se secaron al vacío a 40ºC.

Preparación de Intermedios

La 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina puede prepararse por el procedimiento del Ejemplo 318 del documento WO 00/76971. Como alternativa, puede prepararse a partir de Boc-D-Phg-OH y 1-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina como se describe más adelante.

Intermedio 1

1-Boc-D-fenilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina

Se suspendieron Boc-D-Phg-OH (40,0 g, 159,2 mmol) y 1-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina (32,1 g, 175,1 mmol) en diclorometano anhidro (1,5 l) en una atmósfera de N_{2}. La mezcla después se enfrió a -15ºC en un baño de hielo/MeOH. Se añadió lentamente trietilamina (26,6 ml, 191,0 mmol), manteniendo la temperatura a -15ºC, seguido de la adición lenta de cianofosfato de dietilo (29,0 ml, 191,0 mmol), manteniendo de nuevo la temperatura a -15ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante una noche. Después, la reacción se inactivó con la adición de NaHCO_{3} saturado (500 ml) y las capas se separaron. Después, la capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 1 l). Las capas orgánicas se reunieron, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron al vacío, dando un aceite bruto. La purificación usando cromatografía ultrarrápida (Biotage) con 7,5% (NH_{3} 2 M en MeOH) en THF dio 53,6 g (81%) del compuesto del título.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 7,33 (m, 5H), 7,12 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,53 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 3,31 (m, 5H), 2,72 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 2,3 (m, 3H), 2,09 (s, 3H), 2,03-1,86 (m, 2H), 1,76 (dt, J = 9,7, 1,8 Hz, 2H), 1,56 (m, 2H), 1,36 (s, 9H).

IS-MS, m/e 416,27 (M+1)

La HPLC quiral indicó que no se produjo racemización.

Intermedio 2

Triclorhidrato de 1-D-Fenilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina

Se disolvió 1-Boc-D-fenilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)-piperazina (49,6 g, 119,1 mmol) en MeOH anhidro (1 l)
y se burbujeó HCl (gas) a través de la solución durante 2 h y 15 minutos, indicando la formación de un precipitado blanco. Los disolventes se retiraron al vacío, dando 48,3 g (95%) del compuesto del título en forma de una espuma blanquecina.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 12,08 (s a, 1H), 11,03 (s a, 1H), 8,92 (s a, 2H), 8,79 (s a, 1H), 7,54 (m, 2H), 7,47 (m, 3H), 5,66 (s, 1H), 4,49 (m, 1H), 4,26 (d a, 1H), 3,91 (s a, 2H), 3,5-2,8 (m, 9H), 2,69 (s, 3H), 2,4-1,8 (m, 4H). IS-MS, m/e 316,24 (M+1).

Intermedio 3

1-(Indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina

Se suspendieron ácido indol-6-carboxílico (16,0 g, 99,3 mmol) y triclorhidrato de 1-D-fenilglicinil-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina (42,3 g, 99,3 mmol) en diclorometano anhidro (1 l) en una atmósfera de N_{2}. Después, la mezcla se enfrió a -15ºC en un baño de hielo/MeOH. Se añadió lentamente trietilamina (58,1 ml, 416,9 mmol), manteniendo la temperatura a -15ºC, seguido de la adición lenta de cianofosfonato de dietilo (18,1 ml, 119,1 mmol), manteniendo la temperatura a -15ºC. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante una noche. Después, la reacción se inactivó por la adición de NaHCO_{3} saturado (500 ml) y las capas se separaron. Después, la capa acuosa se extrajo con diclorometano (3 x 500 ml). Las capas orgánicas se reunieron, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron hasta dar un aceite bruto. La purificación se realizó usando cromatografía ultrarrápida (Biotage), eluyendo con 8,3% (NH_{3} 2 M en MeOH) en CHCl_{3}. Las fracciones que contenían el producto se combinaron y se concentraron al vacío, dando 45,1 g (99%) del compuesto del título.

^{1}H RMN )DMSO-d_{6}) \delta 11,35 (s, 1H), 8,65 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,60-7,45 (m, 5H), 7,40-7,25 (m, 3H), 6,48 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 6,09 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 3,5 (m, 3H), 2,72 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 2,40 (m, 2H), 2,09 (s, 3H), 2,05 (m, 2H), 1,77 (dt, J = 1,1, 10,2 Hz, 2H), 1,59 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 1,31 (m, 2H).

^{13}C RMN (DMSO-d_{6}) \delta 168,0, 166,4, 138,0, 135,1, 129,9, 128,4, 128,2, 128,0, 127,6, 126,6, 119,4, 118,1, 111,5, 101,2, 79,1, 60,6, 54,7, 53,7, 48,5, 48,3, 45,8, 45,4, 42,2, 27,7, 27,6.

IS-MS, m/e 459,26 (M+1).

[\alpha]^{20}_{D} = -73,08 (c = 0,02, MeOH).

Se aisló una porción de la base libre en un sistema de disolventes de cloroformo-acetato de etilo en forma de material cristalino que era birrefringente por microscopía. A partir de DSC y TGA se descubrió que el material era un solvato que contenía 0,5 ml de cloroformo por mol de base libre. Se descubrió que el solvato de cloroformo tenía una ancha endotermia a aproximadamente 148-158ºC, seguido de una endotermia más estrecha (pico a 194,4ºC) como el punto de fusión de la base libre desolvatada.

Ejemplo comparativo 1

Clorhidrato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina

A una solución de la 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina (14,5 g, 31,6 mmol) en diclorometano anhidro (300 ml) y MeOH anhidro (150 ml) a 0ºC se le añadió HCl en Et_{2}O (32,2 ml, 32,2 mmol). Después de aproximadamente 5 min, el disolvente se retiró al vacío, dando 15,1 g (96%) del compuesto del título.

^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 11,40 (s, 1H), 10,3 (s a, 1H), 8,68 (m, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,6-7,4 (m, 5H), 7,4-7,3 (m, 3H), 6,48 (s, 1H), 6,11 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,08 (s a, 1H), 3,6-1,5 (m a, 15H), 2,66 (s, 3H).

IS-MS, m/e 459,26 (M+1).

[\alpha]^{20}_{D} = -83,67 (c = 0,01, MeOH).

Análisis para C_{27}H_{33}N_{5}O_{2}\cdot1,1HCl\cdot1,7H_{2}O:

	Calculado:	C, 61,03; H, 7,30; N, 13,18; Cl, 7,34;
	Encontrado:	C, 60,95; H, 6,91; N, 13,03; Cl, 7,00.

Se descubrió que el producto preparado por el procedimiento anterior era la sal mono-clorhidrato y que era amorfo. El análisis por microscopía mostró partículas no vítreas birrefringentes; y el análisis por DSC no pudo revelar un punto de fusión, lo cual concuerda con un material amorfo. Usando un sistema de flujo de microbalanza, el material original se cicló mediante de una determinación de isotermia a presión de vapor, en la que el material se licuó y después se dejó deshidratar. Después de la deshidratación, se formaron cristales que eran birrefringentes por microscopía; y se demostró un punto de fusión de aproximadamente 174ºC para el material higroscópico recién cristalizado.

Claims

1. Difumarato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina.

2. Difumarato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina en forma cristalina.

3. Difumarato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina en forma cristalina que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con picos intensos y estrechos a 2\theta = 6,280, 7,830 y 19,513.

4. Difumarato de 1-(indol-6-carbonil-D-fenilglicinil)-4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazina en forma cristalina que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo con picos intensos y estrechos a 2\theta = 8,833, 20,810 y 23,824.

5. Una composición farmacéutica, que comprende la sal difumarato de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, junto con al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

6. La sal difumarato de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para uso en terapia.

7. Uso de la sal difumarato de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno trombótico.

8. Una composición farmacéutica que comprende la sal difumarato de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para uso para combatir un trastorno trombótico.