ES2238083T3 - Composiciones de oligonucleotidos y procedimientos de modulacion de la expresion de la proteina b7. - Google Patents

Abstract

LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE A UNAS COMPOSICIONES Y PROCEDIMIENTOS DE DIAGNOSTICO, PREVENCION Y TRATAMIENTO DE TRASTORNOS Y DESARREGLOS INMUNITARIOS QUE SE PUEDEN TRATAR MEDIANTE LA MODULACION DE LA ACTIVACION DE LOS LINFOCITOS T. SEGUN LAS FORMAS DE REALIZACION PREFERIDAS DE ESTA INVENCION, SE UTILIZAN OLIGONUCLEOTIDOS QUE SE PUEDEN HIBRIDAR ESPECIFICAMENTE CON ACIDOS NUCLEICOS QUE CODIFICAN LAS PROTEINAS B7.

Description

Composiciones de oligonucleótidos y procedimientos de modulación de la expresión de la proteína B7.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a agentes de diagnóstico, reactivos de investigación y agentes terapéuticos para estados de enfermedad que responden a la modulación de la activación de las células T. En particular, esta invención se refiere a interacciones de oligonucleótidos antisentido con ciertos ácidos ribonucleicos mensajeros (ARNm) o ADN implicados en la síntesis de proteínas que modulan la activación de las células T. Se proporcionan los oligonucleótidos antisentido diseñados para hibridar con los ácidos nucleicos que codifican las proteínas B7. Se ha descubierto que estos oligonucleótidos conducen a la modulación de la actividad del ARN o el ADN, y por tanto a la modulación de la activación de las células T. Se producen efectos paliativos, terapéuticos y profilácticos. Asimismo la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden un oligonucleótido antisentido para una proteína B7 combinado con un segundo agente anti-inflamatorio, tal como un segundo oligonucleótido antisentido para una proteína que media las interacciones intercelulares, v.g., un molécula de proteína de adherencia intercelular (ICAM).

Antecedentes de la invención

La inflamación es una respuesta protectora localizada organizada por los tejidos en respuesta a una lesión, infección, o destrucción tisular que da como resultado la destrucción del agente infeccioso o dañino y el aislamiento del tejido lesionado. Una respuesta inflamatoria típica procede como sigue: reconocimiento de un antígeno como foráneo o reconocimiento de la lesión tisular, síntesis y liberación de mediadores inflamatorios solubles, reclutamiento de células inflamatorias hacia el sitio de infección o lesión tisular, destrucción y eliminación del organismo invasor o tejido dañado, y desactivación del sistema una vez que el organismo invasor o la lesión se ha resuelto. En muchas enfermedades humanas con un componente inflamatorio, los mecanismos homeostáticos, normales, que atenúan las respuestas inflamatorias son defectuosos, produciendo la lesión y destrucción de tejido normal.

Las interacciones célula-célula están implicadas en la activación de la respuesta inmune en cada una de las fases descritas antes. Uno de los eventos antes detectable en una respuesta inflamatoria normal es la adherencia de leucocitos al endotelio vascular, seguido de la migración de leucocitos fuera de la vasculatura hacia el sitio de la infección o la lesión. En general, las primeras células inflamatorias en aparecer en el sitio de la inflamación son los neutrófilos, seguido de los monocitos y los linfocitos. Las interacciones célula-célula también son críticas para la activación tanto de los linfocitos B (células B) como de los linfocitos T (células T) produciendo respuestas inmunes humorales y celulares intensificadas, respectivamente.

El sello del sistema inmune es su capacidad para distinguir entre lo propio (huésped) y lo ajeno (invasores foráneos). Esta notable especificidad manifestada por el sistema inmune está mediada principalmente por las células T. Las células T participan en la defensa del huésped frente a la infección pero también median la lesión del órgano de tejidos transplantados y contribuyen al ataque celular en la enfermedad injerto-versus-huésped (GVHD en sus siglas en inglés) y algunas enfermedades autoinmunes. Con el fin de inducir una respuesta inmune específica del antígeno, una célula T debe recibir señales liberadas por la célula presentadora de antígenos (APC en sus siglas en inglés). Las interacciones célula T-APC se pueden dividir en tres fases: adherencia celular, reconocimiento del receptor de las células T (TCR), y co-estimulación. Se requieren al menos dos señales discretas de un APC para la inducción de la activación de las células T. La primera señal es específica del antígeno y es proporcionada cuando el TCR interacciona con un antígeno en el contexto de una proteína del complejo de histocompatibilidad principal (MHC), o una proteína CD1 relacionada con el MHC, expresada sobre la superficie de un APC (representando "CD" "agrupación de diferenciación", un término utilizado para indicar diferentes moléculas de la superficie de las células T). La segunda señal (co-estimuladora) implica la interacción del antígeno superficial de las células T, CD28, con su ligando sobre el APC, que es un miembro de la familia B7 de proteínas.

CD28, un homodímero unido por disulfuro de un polipéptido de 44 kilodalton y un miembros de la superfamilia de las inmunoglobulinas, es uno de los principales receptores de la señal co-estimuladora principal de la superficie de una célula T en reposo para la activación de la célula T y la producción de citoquina (Allison, Curr. Opin. Immunol., 1994, 6, 414; Linsley y Ledbetter, Annu. Rev. Immunol., 1993, 11, 191; June y col., Immunol Today, 1994, 15, 321). La transducción de la señal a través de CD28 actúa sinérgicamente con la transducción de la señal de TCR para aumentar tanto la producción de interleuquina-2 (IL-2) como la proliferación de células T naive. B7-1 (también conocida como CD80) fue el primer ligando identificado para CD28 (Liu y Linsley, Curr. Opin. Immunol., 1992, 4, 265). B7-1 es expresada normalmente a bajos niveles sobre los APC, sin embargo, está sobrerregulada tras la activación por citoquinas o ligadura de moléculas de la superficie celular tales como CD40 (Lenschow y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, 90, 11054; Nabavi y col., Nature, 1992, 360, 266). Los estudios iniciales sugirieron que B7-1 era el ligando de CD28 que mediaba la co-estimulación (Reiser y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1992, 89, 271; Wu y col., J. Exp. Med., 1993, 178, 1789; Harlan y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1994, 91, 3137). Sin embargo, la posterior demostración de que los anticuerpos monoclonales anti-B7-1 (mAb) tenían efectos mínimos sobre las reacciones de linfocitos mixtos primarios y de que los ratones carentes de B7-1 respondían normalmente a los antígenos (Lenschow y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, 90, 11054; Freeman y col., Science, 1993, 262, 909) dio como resultado el descubrimiento de un segundo ligando para el receptor CD28, B7-2 (también conocido como CD86). En contraste con los mAb anti-B7-1, los mAb anti-B7-2 son potentes inhibidores de la proliferación de las células T y de la producción de citoquinas (Wu y col., J. Exp. Med., 1993, 178, 1789; Chen y col., J. Immnol., 1994, 152, 2105; Lenschow y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993, 90, 11054). La señalización B7:CD28 puede ser un componente necesario de otras rutas co-estimuladoras de las células T, tales como la señalización CD40:CD40L (ligando CD40) (Yang y col., Science, 1996, 273, 1862).

Además de unirse a CD28, B7-1 y B7-2 se unen a la proteína CTLA4 asociada a los linfocitos T citolíticos. CTLA4 es una proteína que está estructuralmente relacionada con CD28 pero es expresada sobre las células T solamente tras la activación (Linsley y col., J. Exp. Med., 1991, 174, 561). Se ha determinad que una forma recombinante soluble de CTLA4, CTLA4-Ig, es un inhibidor más eficiente de la interacción B7:CD28 que los anticuerpos monoclonales dirigidos contra CD28 o una proteína B7. El tratamiento in vivo con CTLA4-Ig da como resultado la inhibición de la formación de anticuerpos para los eritrocitos de oveja o antígeno soluble (Linsley y col., Science, 1992, 257, 792), la prolongación de la supervivencia del aloinjerto cardiaco y el xenoinjerto de islotes pancreáticos (Lin y col., J. Exp. Med., 1993, 178, 1801; Lenschow y col., 1992, Science, 257, 789; Lenschow y col., Curr. Opin. Immunol., 1993, 5(5), 747-52), y la supresión significativa de las respuestas inmunes en GVHD (Hakim y col., J. Immun., 1995, 155, 1760). Se ha propuesto que CD28 y CTLA4, aunque actúan ambos a través de receptores B7 comunes, sirven a funciones co-estimuladoras e inhibidoras diferentes, respectivamente (Allison y col., Science, 1995, 270, 932).

En la Solicitud de Patente Europea Núm. EP 0.600.591, publicada el 8 de Junio de 1994 (A2), se describe un método de inhibición del crecimiento de células tumorales en el que las células tumorales de un paciente son diseñadas recombinantemente ex vivo para expresar una proteína B7-1 y después re-introducidas en un paciente. Como resultado, se estimula una respuesta inmunológica frente a las células tumorales tanto transfectadas con B7 como no transfectadas.

En la Publicación Internacional Núm. WO 95/03408, publicada el 2 de Febrero de 1995, se describen ácidos nucleicos que codifican ligandos CTLA4/CD28 novedosos que co-estimulan la activación de las células T, incluyendo las proteínas B7-2. También se describen anticuerpos para las proteínas B7-2 y los métodos de producción de las proteínas B7-2.

En la Publicación Internacional Núm. WO 95/05464, publicada el 23 de Febrero de 1995, se describe un polipéptido, distinto de B7-1, que se une a CTLA4, CD28 o CTLA4-Ig. También se describen los métodos para obtener un ácido nucleico que codifica semejante polipéptido.

En la Publicación Internacional Núm. WO 95/06738, publicada el 9 de Marzo de 1995, se describen ácidos nucleicos que codifican las proteínas B7-2 (también conocidas como B70). También se describen anticuerpos para las proteínas B7-2 y métodos para producir las proteínas B7-2.

En la Solicitud de Patente Europea Núm. EP 0 643 077, publicada el 15 de Marzo de 1995 (A1), se describe un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a la proteína B7-2 (también conocida como B70). También se describen los métodos para producir anticuerpos monoclonales que se unen específicamente la proteína B7-2.

En la Patente de los Estados Unidos Núm. 5.434.131, expedida el 18 de Julio de 1995, se describe la proteína CTLA4 como un ligando para las proteínas B7. Asimismo se describen los métodos para producir proteínas de fusión de CTLA4 (v.g., CTLA4-Ig) y los métodos de regulación de las respuestas inmunes utilizando anticuerpos para las proteínas B7 o las proteínas CTLA4.

En la Publicación Internacional Núm. WO 95/22619, publicada el 24 de Agosto de 1995, se describen anticuerpos específicos para las proteínas B7-1 que no se unen a las proteínas B7-2. Asimismo se describen los métodos de regulación de las respuestas inmunes utilizando anticuerpos para las proteínas B7-1.

En la Publicación Internacional Núm. WO 95/34320, publicada el 21 de Diciembre de 1995, se describen los métodos para inhibir las respuestas de las células T utilizando un primer agente que inhibe un agente co-estimulador, tal como una proteína de fusión CTLA4-Ig, y un segundo agente que inhibe la adherencia celular, tal como un anticuerpo anti-LFA-1. Tales métodos son indicados por ser particularmente útiles para inhibir el rechazo de los tejidos u órganos transplantados.

En la Publicación Internacional Núm. WO 95/32734, publicada el 7 de Diciembre de 1995, se describen agentes formadores de puentes Fc\gammaRII que o bien evitan la sobre-regulación de las moléculas B7 o bien deterioran la expresión de ICMA-3 sobre las células presentadoras de antígenos. Entre tales agentes formadores de puentes Fc\gammaRII se incluyen proteínas tales como moléculas de IgG humana agregadas o fragmentos Fc de moléculas de IgG humana agregados.

En la Publicación Internacional Núm. WO 96/11279, publicada el 18 de Abril de 1996 (A2) y el 7 de Mayo de 1996 (A3), se describen virus recombinantes que comprenden secuencias genéticas que codifican (1) uno o más agentes imunoestimuladores, incluyendo B7-1 y B7-2, y (2) antígenos de un agente causante de una enfermedad. Asimismo se describen los métodos de tratamiento de enfermedades tales como los virus recombinantes.

Hasta la fecha, no hay agentes terapéuticos conocidos que regulen y prevengan eficazmente la expresión de las proteínas B7 tales como B7-1 y B7-2. De ese modo, hace tiempo que existe la necesidad de compuestos y métodos que modulen eficazmente las moléculas co-estimuladoras críticas tales como las proteínas B7. Se prevé que los oligonucleótidos capaces de modular la expresión de las proteínas B7 proporcionen una clase terapéutica novedosa de agentes anti-inflamatorios con actividad hacia una variedad de enfermedades inflamatorias o autoinmunes, o trastornos o enfermedades con un componente inflamatorio tales como el asma, la diabetes melitus juvenil, la miastenia grave, la enfermedad de Graves, la artritis reumatoide, el rechazo de aloinjertos, la enfermedad inflamatoria del intestino, la esclerosis múltiple, la psoriasis, el lupus eritematoso, el lupus eritematoso generalizado, la diabetes, la esclerosis múltiple, la dermatitis de contacto, la rinitis y diversas alergias. Además, los oligonucleótidos capaces de modular la expresión de las proteínas B7 proporcionarían un medio novedoso de manipulación de la proliferación de las células T ex vivo.

Compendio de la invención

Según la presente invención, se proporcionan oligonucleótidos que hibridan específicamente con ácidos nucleicos que codifican B7-1 o B7-2. Ciertos oligonucleótidos de la invención se diseñan para que se unan o bien directamente a un ARNm transcrito a partir del gen B7-1 o B7-2, o bien a una porción de ADN seleccionada del gen B7-1 o B7-2, modulando de ese modo la cantidad de proteína traducida a partir de un ARNm de B7-1 o B7-2 o la cantidad de ARNm transcrito a partir del gen B7-1 o B7-2, respectivamente.

Los oligonucleótidos pueden comprender secuencias de nucleótidos suficientes en identidad y número para efectuar una hibridación específica con un ácido nucleico concreto. Tales oligonucleótidos se describen comúnmente como "antisentido". Los oligonucleótidos "antisentido" se utilizan comúnmente como reactivos de búsqueda, coadyuvantes de diagnóstico, y agentes terapéuticos.

Se ha descubierto que los genes B7-1 y B7-2, que codifican las proteínas B7-1 y B7-2, respectivamente, son particularmente susceptibles a este enfoque. Como consecuencia de la asociación entre la expresión de B7 y la activación y proliferación de células T, la inhibición de la expresión de B7-1 o B7-2 conduce a la inhibición de la síntesis de B7-1 o B7-2, respectivamente, y de ese modo la inhibición de la activación y proliferación de las células T. Adicionalmente, los oligonucleótidos de la invención pueden ser utilizados para inhibir la expresión de uno de los diversos ARNm empalmados alternativamente de un transcrito de B7, dando como resultado la intensificación de la expresión de otros ARNm de B7 empalmados alternativamente. Semejante modulación es deseable para tratar diversos trastornos o enfermedades inflamatorias o autoinmunes, o trastornos o enfermedades con un componente inflamatorio como el asma, la diabetes melitus juvenil, la miastenia grave, la enfermedad de Graves, la artritis reumatoide, el rechazo de aloinjertos, la enfermedad inflamatoria del intestino, la esclerosis múltiple, la psoriasis, el lupus eritematoso, el lupus eritematoso generalizado, la diabetes, la esclerosis múltiple, la dermatitis de contacto, la rinitis, las diversas alergias, y los cánceres y sus metástasis. Semejante modulación es deseable adicionalmente para prevenir o modular el desarrollo de tales enfermedades o trastornos en un animal del que se sospecha que es, o se sabe que es, propenso a semejantes enfermedades o trastornos.

Aquí se proporcionan los métodos que comprenden poner en contacto animales con oligonucleótidos específicamente hibridables con los ácidos nucleicos que codifican las proteínas B7. Estos métodos son útiles como herramientas, por ejemplo, en la detección y determinación del papel de la expresión de la proteína B7 en diversas funciones celulares y procesos y afecciones fisiológicos, y para la diagnosis de las afecciones asociadas con semejante expresión. Tales métodos pueden ser utilizados para detectar la expresión de los genes de B7 (es decir, B7-1 o B7-2) y por tanto se cree que son útiles desde el punto de vista terapéutico como de diagnóstico. Se proporcionan aquí los métodos de modulación de la expresión de las proteínas B7 que comprenden poner en contacto animales con oligonucleótidos específicamente hibridables con un gen B7. Se cree que estos métodos son útiles tanto desde el punto de vista terapéutico como de diagnóstico como consecuencia de la asociación entre la expresión de B7 y la activación y proliferación de las células T. La presente invención también comprende métodos de inhibición de la activación de las células T asociada a B7 utilizando los oligonucleótidos de la invención. También se proporcionan los métodos de tratamiento de las afecciones en las cuales se produce una activación y proliferación de las células T anormal o excesiva. En estos métodos se emplean los oligonucleótidos de la invención y se cree que son útiles tanto terapéuticamente como en forma de herramientas de búsqueda clínica y de diagnóstico. Los oligonucleótidos de la presente invención también pueden ser utilizados con fines de búsqueda. Así, la hibridación específica manifestada por los oligonucleótidos de la presente invención puede ser utilizada para análisis, purificaciones, preparaciones de productos celulares y en otras metodologías que pueden ser apreciadas por los expertos normales en la técnica.

Los métodos descritos aquí también son útiles, por ejemplo, como herramientas de búsqueda clínica en la detección y determinación del papel de la expresión de B7-1 y B7-2 en diversas funciones del sistema inmune y procesos y afecciones fisiológicos, y para la diagnosis de las afecciones asociadas con su expresión. La hibridación específica manifestada por los oligonucleótidos de la presente invención puede ser utilizada para análisis, purificaciones, preparaciones de productos celulares y otras metodologías que pueden ser apreciadas por los expertos normales en la técnica. Por ejemplo, debido a que los oligonucleótidos de esta invención hibridan específicamente con los ácidos nucleicos que codifican las proteínas B7, se pueden construir fácilmente análisis sándwich y otros análisis para explotar este hecho. La detección de la hibridación específica de un oligonucleótido de la invención con un ácido nucleico que codifica una proteína B7 presente en una muestra puede ser alcanzada de una manera rutinaria. Semejante detección puede incluir marcar detectablemente un oligonucleótido de la invención mediante conjugación con una enzima, radiomarcaje o cualquier otro sistema de detección adecuado. Se pueden formular numerosos análisis en los que se emplea la presente invención, cuyos análisis comprenderán comúnmente poner en contacto una muestra de tejido o célula con un oligonucleótido de la presente invención marcado detectablemente en las condiciones seleccionadas para permitir la hibridación y medida de semejante hibridación mediante la detección de una marca, como aprecian los expertos normales en la técnica.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es un diagrama de barras que muestra el efecto inhibidor de los oligonucleótidos indicados sobre la expresión de la proteína B7-1 en células COS-7.

La Figura 2 es una curva dosis-respuesta que muestra el efecto inhibidor de los oligonucleótidos sobre la expresión en la superficie celular de la proteína B7-1. Línea continua, ISIS 13812; línea discontinua, ISIS 13800; línea de puntos, ISIS 13805.

La Figura 3 es un diagrama de barras que muestra el efecto inhibidor de los oligonucleótidos indicados sobre la expresión en la superficie celular de B7-2 en células COS-7.

La Figura 4 es un diagrama de barras que muestra el efecto inhibidor de los oligonucleótidos indicados, incluyendo ISIS 10373 (un 20-mero) e ISIS 10996 (un 15-mero) sobre la expresión en la superficie celular de B7-2 en células COS-7.

La Figura 5 es un diagrama de barras que muestra la especificidad de la inhibición de la expresión de la proteínas B7-1 y B7-2 por los oligonucleótidos. Barras sombreadas, niveles de B7-1; barras sombreadas en la dirección contraria, niveles de B7-2.

La Figura 6 es una curva dosis-respuesta que muestra el efecto inhibidor de los oligonucleótidos que tienen secuencias antisentido para ICAM-1 (ISIS 2302) o B7-2 (ISIS 10373) sobre la expresión en la superficie celular de las proteínas ICAM-1 y B7-2. Línea continua con X, niveles de proteína B7-1 sobre las células tratadas con ISIS 10373; línea discontinua con asteriscos, niveles de proteína ICAM-1 sobre células tratadas con ISIS 10373; línea continua con triángulos, niveles de proteína B7-1 sobre células tratadas con ISIS 2302; línea continua con cuadrados, niveles de proteína ICAM-1 sobre células tratadas con ISIS 10373.

La Figura 7 es un diagrama de barras que muestra el efecto de los oligonucleótidos indicados sobre la proliferación de las células T.

La Figura 8 es una curva dosis-respuesta que muestra el efecto inhibidor de los oligonucleótidos sobre la expresión de la proteína B7-2 murina en células COS-7. Línea continua con asteriscos, ISIS 11696; línea discontinua con triángulos, ISIS 11866.

La Figura 9 es un diagrama de barras que muestra el efecto de los oligonucleótidos ISIS 11696 e ISIS 11866 sobre la expresión en la superficie celular de la proteína B7-2 murina en células IC-21. Barras de la izquierda (en negro), sin oligonucleótido; barras del medio, oligonucleótido indicado 3 \muM; barras de la derecha, oligonucleótido indicado 10 \muM.

Descripción detallada de la invención

En la presente invención se emplean oligonucleótidos para su uso en la inhibición antisentido de la función del ARN y el ADN que codifican las proteínas B7 incluyendo B7-1 y B7-2. En la presente invención también se emplean oligonucleótidos que se diseñan para que hibriden específicamente con el ADN o el ARN mensajero (ARNm) que codifica tales proteínas y por último para modular la cantidad de tales proteínas transcrita a partir de sus respectivos genes. Semejante hibridación con el ARNm interfiere en el papel normal del ARNm y ocasiona una modulación de su función en las células. Entre las funciones del ARNm que van a ser interferidas se incluyen todas las funciones vitales tales como la translocación del ARN al sitio para la traducción de proteínas, la traducción de proteínas propiamente dicha a partir del ARN, el empalme del ARN para rendir una o más especies de ARNm, y posiblemente incluso la actividad catalítica independiente en la que puede estar comprometido el ARN. El efecto global de semejante interferencia en la función del ARNm es la modulación de la expresión de una proteína B7, donde la "modulación" representa un incremento (estimulación) o un descenso (inhibición) en la expresión de la proteína B7. En el contexto de la presente invención, la inhibición es la forma preferida de modulación de la expresión génica.

Los oligonucleótidos pueden comprender secuencias de nucleótidos suficientes en identidad y número para efectuar una hibridación específica con un ácido nucleico concreto. Tales oligonucleótidos que hibridan específicamente con una porción de la hebra sentido de un gen se describen comúnmente como "antisentido". Los oligonucleótidos antisentido son utilizados comúnmente como reactivos de búsqueda, coadyuvantes de diagnóstico, y agentes terapéuticos. Por ejemplo, los oligonucleótidos antisentido, que son capaces de inhibir la expresión génica con una especificidad exquisita, son utilizados a menudo por los expertos normales para esclarecer la función de genes concretos, por ejemplo para distinguir entre las funciones de diversos miembros de una ruta biológica. Este efecto inhibidor específico ha sido aprovechado, por lo tanto por los expertos en la técnica para su uso en la investigación.

La especificidad y la sensibilidad de los oligonucleótidos también es aprovechada por los expertos en la técnica para usos terapéuticos. Por ejemplo, en la siguientes patentes de los Estados Unidos se muestran métodos paliativos, terapéuticos y otros en los que se utilizan oligonucleótidos antisentido. La Patente de los Estados Unidos 5.135.917 proporciona oligonucleótidos antisentido que inhiben la expresión del receptor de interleuquina-1 humano. La Patente de los Estados Unidos 5.098.890 está dirigida a oligonucleótidos antisentido complementarios al oncogen c-myb y a las terapias con oligonucleótidos antisentido para ciertos estados cancerosos. La Patente de los Estados Unidos 5.087.617 proporciona métodos para tratar a pacientes con cáncer con oligonucleótidos antisentido. La Patente de los Estados Unidos 5.166.195 proporciona oligonucleótidos inhibidores del VIH. La Patente de los Estados Unidos 5.004.810 proporciona oligómeros capaces de hibridar con el ARNm del virus herpes simplex Vmw65 e inhibir la replicación. La Patente de los Estados Unidos 5.194.428 proporciona oligonucleótidos antisentido que tienen actividad antiviral frente al virus de la influenza. La Patente de los Estados Unidos 4.806.463 proporciona oligonucleótidos antisentido y métodos que los utilizan para inhibir la replicación del HTLV-III. La Patente de los Estados Unidos 5.286.717 proporciona oligonucleótidos que tienen una secuencia de bases complementaria a una porción de un oncogen. La Patente de los Estados Unidos 5.276.019 y la Patente de los Estados Unidos 5.264.423 están dirigidas a análogos de oligonucleótidos de fosforotioato utilizados para prevenir la replicación de ácidos nucleicos foráneos en células. La Patente de los Estados Unidos 4.689.320 está dirigida a oligonucléotidos antisentido como agentes antivirales específicos para CMV. La Patente de los Estados Unidos 5.098.890 proporciona oligonucleótidos complementarios a al menos una porción del transcrito de ARNm del gen c-myb humano. La Patente de los Estados Unidos 5.242.906 proporciona oligonucleótidos antisentido útiles en el tratamiento de infecciones por EBV latente.

Se prefiere dirigir los genes específicos para el ataque antisentido. "La dirección" de un oligonucleótido al ácido nucleico asociado, en el contexto de esta invención, es un procedimiento de múltiples etapas. El procedimiento comienza normalmente con la identificación de una secuencia de ácido nucleico cuya función va a ser modulada. Esta puede ser, por ejemplo, un gen celular (o ARNm transcrito a partir del gen) cuya expresión está asociada con un trastorno o estado de enfermedad concreto, o un ácido nucleico foráneo de un agente infeccioso. En la presente invención, la diana es un gen celular asociado con numerosos trastornos y enfermedades del sistema inmune (tales como la inflamación y las enfermedades autoinmunes), así como con reacciones inmunes ostensiblemente "normales" (tales como un rechazo en animales huésped de tejido transplantado), para el cual se desea modulación en ciertos casos. En el procedimiento de dirección también se incluye la determinación de una región (o regiones) dentro de este gen para que se produzca la interacción del oligonucleótido de manera que resulte el efecto deseado, ya sea la detección o la modulación de la expresión de la proteína. Una vez que la región diana ha sido identificada, se eligen los oligonucleótidos que son suficientemente complementarios a la diana, es decir, que hibridan suficientemente bien y con suficiente especificidad para dar el efecto deseado.

Generalmente, existen cinco regiones de un gen que pueden ser utilizadas como diana para la modulación antisentido: la región 5' no traducida (en adelante, "5'-UTR"), la región del codón de iniciación de la traducción (en adelante, "tIR"), el marco de lectura abierto (en adelante, "ORF"), la región del codón de terminación de la traducción (en adelante, "tTR") y la región no traducida 3' (en adelante, "3'-UTR"). Como es sabido en la técnica, estas regiones están dispuestas en una molécula de ARN mensajero en el siguiente orden (de izquierda a derecha, 5' a 3'): 5'-UTR, tIR, ORF, tTR, 3'-UTR. Como es sabido en la técnica, aunque algunos transcritos eucarióticos son traducidos directamente, muchos ORF contienen una o más secuencias, conocidas como "intrones", que son escindidas de un transcrito antes de que éste sea traducido; las porciones expresadas (no escindidas) del ORF son referidas como "exones" (Alberts y col. Molecular Biology of the Cell, 1983, Garland Publishing Inc., Nueva York, págs. 411-415). Además, debido a que muchos ORF eucarióticos tienen una longitud de mil nucleótidos o más, a menudo es conveniente subdividir el ORF v.g., en la región ORF 5', la región ORF central, y la región ORF 3'. En algunos casos, un ORF contiene uno o más sitios que pueden ser elegidos como diana debido a alguna trascendencia funcional in vivo. Entre los ejemplos de los últimos tipos de sitios se incluyen estructuras tallo-bucle intragénicas (ver, v.g., la Patente de los Estados Unidos Núm. 5.512.438) y, en las moléculas de ARNm que no han madurado, sitios de empalme intrón/exón. En el contexto de la presente invención, un sitio intragénico preferido es la región que abarca el codón de iniciación de la traducción del marco de lectura abierto (ORF) del gen. Debido a que, como es sabido en la técnica, el codón de iniciación de la traducción es típicamente 5'-AUG (en las moléculas de ARNm transcritas; 5'-ATG en la correspondiente molécula de ADN), el codón de iniciación de la traducción también es referido como "codón AUG", "codón de iniciación" o "codón de iniciación AUG". Una minoría de genes tiene un codón de iniciación con la secuencia de ARN 5'-GUG, 5'-UUG o 5'-CUG, y se ha demostrado que 5'-AUA, 5'-ACG y 5'-CUG funcionan in vivo. Además, 5'-UUU funciona como codón de iniciación de la traducción in vitro (Brigstock y col., Growth Factors, 1990, 4, 45; Gelbert y col., Somat. Cell. Mol. Genet., 1990, 16, 173; Gold and Stormo, en: Escherichia coli and Salmonella typhimurium: Cellular and Molecular Biology, Vol. 2, 1987, Neidhardt y col., eds., American Society for Microbiology, Washington, D.C., pág. 1303). Así, los términos "codón de iniciación de la traducción" y "codón de inicio" pueden abarcar muchas secuencias de codones, incluso aunque el aminoácido iniciador en cada caso es típicamente metionina (en eucariotas) o formilmetionina (procariotas). Asimismo se sabe en la técnica que los genes eucarióticos y procarióticos pueden tener dos o más codones de inicio alternativos, cualquiera de los cuales puede ser utilizado preferentemente para el inicio de la traducción en un tipo de célula o tejido concreto, o en una serie concreta de condiciones, con el fin de generar polipéptidos afines que tengan diferentes secuencias amino terminales (Markussen y col., Development, 1995, 121, 3723; Gao y col., Cancer Res., 1995, 55, 743; McDermott y col., Gene, 1992, 117, 193; Perri y col., J. Biol. Chem., 1991, 266, 12536; French y col., J. Virol., 1989, 63, 3270; Pushpa-Rekha y col., J. Biol. Chem., 1995, 270, 26993; Monaco y col., J. Biol. Chem., 1994, 269, 347; DeVirgilio y col., Yeast, 1992, 8, 1043; Kanagasundaram y col., Biochim. Biophys. Acta, 1992, 1171, 198; Olsen y col., Mol. Endocrinol., 1991, 5, 1246; Saul y col., Appl. Environ. Microbiol., 1990, 56, 3117; Yaoita y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1990, 87, 7090; Rogers y col., EMBO J., 1990, 9, 2273). En el contexto de la invención, el "codón de inicio" y el "codón de iniciación de la traducción" hacen referencia al codón o los codones que se utilizan in vivo para iniciar la traducción de una molécula de ARNm transcrita a partir de un gen que codifica una proteína B7, sin tener en cuenta la secuencia o las secuencias de tales codones. Asimismo se sabe en la técnica que un codón de terminación de la traducción (o "codón de terminación") de un gen puede tener de una a tres secuencias, es decir, 5'-UAA, 5'-UAG y 5'-UGA (las secuencias de ADN correspondientes son 5'-TAA, 5'-TAG y 5'-TGA, respectivamente). Los términos "región del codón de inicio" y "región del codón de iniciación de la traducción" hacen referencia a una porción de semejante ARNm o gen que abarca de aproximadamente 25 a aproximadamente 50 nucleótidos contiguos en cualquier dirección (es decir, 5' o 3') desde el codón de iniciación de la traducción. De un modo similar, los términos "región del codón de terminación" y "región de terminación de la traducción" hacen referencia a una porción de semejante ARNm o gen que abarca de aproximadamente 25 a aproximadamente 50 nucleótidos contiguos en cualquier dirección (es decir, 5' o 3') desde un codón de iniciación de la traducción.

En el contexto de esta invención, el término "oligonucleótido" hace referencia a un oligómero o polímero de ácido ribonucleico o ácido desoxirribonucleico. En este término se incluyen oligonucleótidos compuestos por bases nucleotídicas de origen natural, azúcares y enlaces interazúcar covalentes (esqueleto) así como oligonucleótidos que tienen porciones de origen no natural que funcionan de un modo similar. Tales oligonucleótidos modificados o sustituidos son preferidos a menudo frente a otras formas nativas debido a propiedades deseables tales como, por ejemplo, una absorción celular intensificada, una unión a la diana intensificada y un aumento de estabilidad en presencia de nucleasas.

Entre los ejemplos específicos de algunos oligonucleótidos modificados preferidos previstos para esta invención se incluyen aquellos que contienen fosforotioatos, fosforotriésteres, fosfonatos de metilo, enlaces interazúcar alquilo o cicloalquilo de cadena corta o enlaces interazúcar heteroatómicos o heterocíclicos de cadena corta. Son muy preferidos los oligonucleótidos con fosforotioatos y aquellos con esqueletos de CH_{2}-NH-O-CH_{2}, CH_{2}-N(CH_{3})-O-CH_{2} [conocido como esqueleto de metilen(metilimino) o MMI], CH_{2}-O-N(CH_{3})-CH_{2}, CH_{2}-N(CH_{3})-N(CH_{3})-CH_{2} y O-N(CH_{3})-CH_{2}-CH_{2}, donde el esqueleto de fosfodiéster nativo está representado como O-P-O-CH_{2}). Asimismo se prefieren oligonucleótidos que tienen estructuras con el esqueleto de la morfolina (Summerton y Weller, Patente de los Estados Unidos 5.034.506). Son adicionalmente preferidos los oligonucleótidos con esqueletos de NR-C(*)-CH_{2}-CH_{2}, CH_{2}-NR-C(*)-CH_{2}, CH_{2}-CH_{2}-NR-C(*), C(*)-NR-CH_{2}-CH_{2} y CH_{2}-C(*)-NR-CH_{2}, donde "*" representa O o S (conocido como esqueletos de amida; DeMesmaecker y col., WO 92/20823, publicada el 26 de Noviembre de 1992). En otras realizaciones preferidas, tales como el esqueleto de ácido nucleico peptídico (PNA), el esqueleto de fosfodiéster del oligonucleótido es remplazado por un esqueleto de poliamida, estando unidas las bases nucleotídicas directamente o indirectamente a los átomos de nitrógeno azoicos del esqueleto de poliamida (Nielsen y col., Science, 1991, 254, 1497; Patente de los Estados Unidos Núm. 5.539.082). Otros oligonucleótidos modificados preferidos pueden contener uno o más radicales azúcar sustituidos que comprenden uno de los siguientes en posición 2': OH, SH, SCH_{3}, F, OCN, OCH_{3}OCH_{3}, OCH_{3}O(CH_{2})_{n}CH_{3}, O(CH_{2})_{n}NH_{2} o O(CH_{2})_{n}CH_{3} donde n es de 1 a aproximadamente 10; alquilo inferior C_{1}-C_{10}, alcoxialcoxi, alquilo inferior sustituido, alcarilo o aralquilo; Cl; Br; CN; CF_{3}; OCF_{3}; O-, S-, o N-alquilo; O-, S-, o N-alquenilo; SOCH_{3}; SO_{2}CH_{3}; ONO_{2}; NO_{2}; N_{3}; NH_{2}; heterocicloalquilo; heterocicloalcarilo; amino-alquilamino; polialquilamino; sililo sustituido; un grupo que escinde ARN; un grupo informador; un intercalador; un grupo para mejorar las propiedades farmacocinéticas de un oligonucleótido; o un grupo para mejorar las propiedades farmacodinámicas de un oligonucleótido y otros sustituyentes que tengan propiedades similares. En una modificación preferida se incluyen 2'-metoxietoxi [2'-O-CH_{2}CH_{2}OCH_{3}, también conocido como 2'-O-(2-metoxietilo)] (Martin y col., Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486). Entre otras modificaciones preferidas se incluyen 2'-metoxi (2'-O-CH_{3}), 2'-propoxi (2'-OCH_{2}CH_{2}CH_{3}) y 2'-flúor (2'-F). También se pueden realizar modificaciones similares en otras posiciones del oligonucleótido, concretamente la posición 3' del azúcar del nucleótido terminal 3' y la posición 5' del nucleótido terminal 5'. Los oligonucleótidos también pueden tener miméticos de azúcares tales como ciclobutilos en lugar del grupo pentofuranosilo.

Los oligonucleótidos de la invención pueden incluir adicional o alternativamente modificaciones o sustituciones de las bases nucleotídicas. Según se utiliza aquí, entre las bases nucleotídicas "no modificadas" o "naturales" se incluyen adenina (A), guanina (G), timina (T), citosina (C) y uracilo (U). Entre las bases nucleotídicas modificadas se incluyen las bases nucleotídicas encontradas sólo infrecuente o transitoriamente en los ácidos nucleicos naturales, v.g., hipoxantina, 6-metiladenina, 5-metilcitosina, 5-hidroximetilcitosina (HMC), glicosil-HMC y gentobiosil-HMC, así como bases nucleotídicas sintéticas, v.g., 5-bromouracilo, 5-hidroximetiluracilo, 8-azaguanina, 7-desazaguanina, N^{6}(6-aminohexil)adenina y 2,6-diaminopurina [Kornberg, A., DNA Replication, 1974, W.H. Freeman & Co., San Francisco, 1974, págs. 75-77; Gebeyehu, G., y col., Nucleic Acids Res., 1987, 15, 4513).

Otra modificación adicional o preferida alternativa de los oligonucleótidos de la invención implica enlazar químicamente al oligonucleótido uno o más radicales lipófilos que intensifiquen la absorción celular del oligonucleótido. Tales radicales lipófilos pueden ser enlazados a un oligonucleótido en numerosas posiciones diferentes del oligonucleótido. Entre algunas de las posiciones preferidas se incluyen la posición 3' del azúcar del nucleótido terminal 3', la posición 5' del azúcar del nucleótido terminal 5', y la posición 2' del azúcar de cualquier nucleótido. La posición N^{6} de una base nucleotídica de purina también puede ser utilizada para enlazar un radical lipófilo a un oligonucleótido de la invención (Gebeyehu, G., y col., Nucleic Acids Res., 1987, 15, 4513). Entre tales radicales lipófilos se incluyen pero no están limitados a un radical de colesterilo (Letsinger y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553), ácido cólico (Manoharan y col., Bioorg. Med. Chem. Let., 1994, 4, 1053), un tioéter, v.g., hexil-S-tritiltiol (Manoharan y col., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306; Manoharan y col, Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765), un tiocolesterol (Oberhauser y col., Nucl. Acids Res., 1992, 20, 533), una cadena alifática, v.g., restos dodecanodiol o undecilo (Saison-Behmoaras y col., EMBO. J., 1991, 10, 111; Kabanov y col., FEBS Lett., 1990, 259, 327; Svinarchuk y col., Biochime, 1993, 75, 49), un fosfolípido, v.g., di-hexadecil-rac-glicerol o 1,2-di-O-hexadecil-rac-glicero-3-H-fosfonato de trietilamonio (Manoharan y col., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651; Shea y col. Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777), una cadena de poliamina o polietilenglicol (Manoharan y col., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969), o ácido adamantanoacético (Manoharan y col., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651), un radical palmitilo (Mishra y col., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229), o un radical octadecilamina o hexilamino-carbonil-oxicolesterol (Crooke y col., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923). Los oligonucleótidos que comprenden radicales lipófilos, y los métodos para preparar tales oligonucleótidos, se describen en las Patentes de los Estados Unidos Núm. 5.138.045, Núm. 5.218.105 y Núm. 5.459.255.

En la presente invención también se incluyen los oligonucleótidos que son oligonucleótidos quiméricos. Los oligonucleótidos "quiméricos" o "quimeras", en el contexto de esta invención, son oligonucleótidos que contienen dos o más regiones químicamente distintas, formada cada una de ellas al menos por un nucleótido. Estos oligonucleótidos contienen típicamente al menos una región en la que el oligonucleótido está modificado con el fin de conferir al oligonucleótido un aumento de resistencia a la degradación por nucleasa, un aumento de absorción celular, y/o un aumento de afinidad de unión para el ácido nucleico diana. Una región adicional del oligonucleótido puede servir como sustrato para enzimas capaces de escindir híbridos de ARN:ADN o ARN:ARN. A modo de ejemplo, la ARNasa H es una endonucleasa celular que escinde la hebra de ARN de un dúplex de ARN:ADN. La activación de la ARNasa H, da como resultado por lo tanto la escisión de la diana de ARN, intensificando enormemente la eficacia de la inhibición antisentido de la expresión del gen. La escisión de la diana de ARN puede ser detectada rutinariamente mediante electroforesis en gel, si fuera necesario asociada con mecanismos de hibridación de ácidos nucleicos conocidos en la técnica. A modo de ejemplos, tales "quimeras" pueden ser "espaciómeros", es decir, oligonucleótidos en los cuales una porción central (el "espacio") del oligonucleótido sirve como sustrato v.g., para la ARNasa H, y las porciones 5' y 3' (los "flancos") están modificadas de tal manera que tengan una mayor afinidad por la molécula de ARN diana pero sean incapaces de soportar la actividad nucleasa (v.g., sustituidas con 2'-fluoro- o 2'-metoxietoxi). En otras quimeras se incluyen "flancómeros", esto es, oligonucleótidos en los cuales la porción 5' del oligonucleótido sirve como sustrato v.g., para la ARNasa H, mientras la porción 3' está modificada de tal manera que tiene mayor afinidad por la molécula de ARN diana pero es incapaz de soportar la actividad nucleasa (v.g., sustituida con 2'-flúor- o 2'-metoxietoxi), o vice-versa.

Los oligonucleótidos según esta invención comprenden preferiblemente de aproximadamente 8 a aproximadamente 30 nucleótidos. Es más preferido que semejantes oligonucleótidos comprendan de aproximadamente 15 a 25 nucleótidos. Como es sabido en la técnica, un nucleótido es una combinación de base y azúcar adecuadamente unida a un nucleótido adyacente a través de un enlace fosfodiéster, fosforotioato u otro enlace covalente.

Los oligonucleótidos utilizados según esta invención pueden ser elaborados conveniente y rutinariamente por medio de mecanismos de síntesis en fase sólida bien conocidos. El equipo para semejante síntesis es vendido por numerosos proveedores incluyendo, por ejemplo, Applied Biosystems (Foster City, CA). Adicional o alternativamente se puede emplear cualquier otro medio para semejante síntesis conocido en la técnica. Asimismo se conoce la utilización de mecanismos similares para preparar otros oligonucleótidos tales como fosforotioatos y derivados alquilados.

Los oligonucleótidos de la presente invención pueden ser utilizados como compuestos terapéuticos, herramientas de diagnóstico y como reactivos y estuches de búsqueda. Se pretende que el término "usos terapéuticos" abarque usos profilácticos, paliativos y curativos en los que los oligonucleótidos de la invención se ponen en contacto con células animales ya sea in vivo o ex vivo. Cuando se ponen en contacto con células animales ex vivo, en el uso terapéutico se incluye la incorporación de tales células a un animal después del tratamiento con uno o más oligonucleótidos de la invención. Si bien no se desea estar ligado a una utilidad concreta, la modulación ex vivo v.g., de la proliferación de células T por los oligonucleótidos de la invención puede ser empleada, por ejemplo, en modalidades terapéuticas potenciales en las que se desea modular la expresión de una proteína B7 en APC. Como ejemplo, se espera que los oligonucleótidos que inhiben la expresión de las proteínas B7-1 intensifiquen la disponibilidad de proteínas B7-2 sobre la superficie de las APC, incrementando de ese modo el efecto co-estimulador de B7-2 sobre las células T ex vivo (Levine y col., Science, 1996, 272, 1939).

Para los usos terapéuticos, un animal del que se sospecha que tiene una enfermedad o trastorno que puede ser tratado o evitado modulando la expresión o actividad de una proteína B7 es tratado, por ejemplo, mediante la administración de oligonucleótidos según esta invención. Los oligonucleótidos de la invención pueden ser utilizados en composiciones farmacéuticas añadiendo una cantidad eficaz de un oligonucleótido a un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable. Los operarios de la especialidad han identificado composiciones de oligonucleótidos antisentido, tríplex y otras que son capaces de modular la expresión de genes implicados en enfermedades virales, fúngicas y metabólicas. Los oligonucleótidos antisentido han sido administrados a humanos de forma segura y en la actualidad están en desarrollo numerosas pruebas clínicas. De este modo se establece que los oligonucleótidos pueden ser instrumentos terapéuticamente útiles que pueden ser configurados para que sean útiles en regímenes de tratamiento para el tratamiento de células, tejidos y animales, especialmente humanos.

Los oligonucleótidos de la presente invención pueden ser utilizados adicionalmente para detectar la presencia de ácidos nucleicos específicos de B7 en una muestra de células o tejidos. Por ejemplo, se pueden preparar oligonucleótidos radiomarcados mediante marcaje con P^{32} en el extremo 5' con polinucleótido quinasa (Sambrook y col., Molecular Cloning. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, Volumen 2, pág. 10.59). Después los oligonucleótidos radiomarcados se ponen en contacto con muestras de células o tejidos que se sospecha que tienen ARN mensajero de B7 (y por tanto proteínas B7), y las muestras se lavan para separar el oligonucleótido no unido. La radiactividad que queda en la muestra indica la presencia de oligonucleótido unido, que a su vez indica la presencia de ácidos nucleicos complementarios al oligonucleótido, y pueden ser cuantificados utilizado un contador de centelleo u otro medio acostumbrado. La expresión de los ácidos nucleicos que codifican estas proteínas es detectada de este modo.

Los oligonucleótidos radiomarcados de la presente invención también pueden ser utilizados para realizar aurtorradiografías de tejidos para determinar la localización, distribución y cuantificación de proteínas B7 con fines de búsqueda, diagnósticos o terapéuticos. En tales estudios, se tratan secciones de tejidos con oligonucleótido radiomarcado y se lavan como se ha descrito antes, después se exponen a una emulsión fotográfica según los procedimientos de autorradiografía rutinarios. La emulsión, cuando se revela, produce una imagen de granos de plata sobre las regiones que expresan un gen B7. La cuantificación de los granos de plata permite la detección de la expresión de las moléculas del ARNm que codifica estas proteínas y permite la dirección de los oligonucleótidos a estas áreas.

Se pueden desarrollar análisis análogos para la detección mediante fluorescencia de la expresión de ácidos nucleicos de B7 utilizando los oligonucleótidos de la presente invención que están conjugados con fluoresceína u otras etiquetas fluorescentes en lugar del radiomarcaje. Tales conjugaciones se completan rutinariamente durante la síntesis en fase sólida utilizando amiditas marcadas fluorescentemente o columnas de vidrio de poro controlado (CPG). Las amiditas marcadas con fluoresceína y las CPG son asequibles v.g., de Glen Research, Sterling VA.

En la presente invención se emplean oligonucleótidos dirigidos a ácidos nucleicos que codifican las proteínas B7 y oligonucleótidos dirigidos a los ácidos nucleicos que codifican tales proteínas. También se pueden preparar estuches para la detección de la presencia o ausencia de expresión de una proteína B7. Tales estuches incluyen un oligonucleótido dirigido a un gen apropiado, es decir, un gen que codifica una proteína B7. Los estuches y formatos de análisis apropiados, tales como v.g., los análisis "sándwich", son conocidos en la técnica y pueden ser adaptados fácilmente para su uso con los oligonucleótidos de la invención. La hibridación de los oligonucleótidos de la invención con un ácido nucleico que codifica una proteína B7 puede ser detectada por medios conocidos en la técnica. Entre tales medios se pueden incluir la conjugación de una enzima al oligonucleótido, el radiomarcaje del oligonucleótido o cualquier otro sistema de detección adecuado. También se pueden preparar estuches para detectar la presencia o ausencia de una proteína B7.

En el contexto de esta invención, "hibridación" representa formación de puentes hidrógeno, que pueden ser puentes de hidrógeno de Watson-Crick, de Hoogsteen o de Hoogsteen inversos, entre nucleótidos complementarios. Por ejemplo, la adenina y la timina son bases nucleotídicas complementarias que se emparejan por medio de la formación de puentes de hidrógeno. "Complementario", según se utiliza aquí, hace referencia a la capacidad de emparejamiento preciso entre dos nucleótidos. Por ejemplo, si un nucleótido de una cierta posición de un oligonucleótido es capaz de formar puentes de hidrógeno con un nucleótido de la misma posición de una molécula de ADN o ARN, se considera que el oligonucleótido y el ADN o el ARN son complementarios entre sí en esa posición. El oligonucleótido y el ADN o ARN son complementarios entre sí cuando un número suficiente de posiciones correspondientes en cada molécula está ocupado por nucleótidos que pueden formar puentes de hidrógeno entre sí. De ese modo, "hibridable específicamente" y "complementario" son términos que se utilizan para indicar un grado suficiente de complementariedad o emparejamiento preciso tal que se produce una unión estable y específica entre el oligonucleótido y la diana de ADN o ARN. Se entiende en la técnica que un oligonucleótido no necesita ser complementario al 100% a su secuencia de ADN diana para que sea hibridable específicamente. Un oligonucleótido es hibridable específicamente cuando la unión del oligonucleótido a la molécula de ADN o ARN diana interfiere en la función normal del ADN o el ADN diana hasta ocasionar un descenso o pérdida de función, y hay un grado de complementariedad suficiente para evitar la unión no específica del oligonucleótido a secuencias no diana en condiciones en las que se desea la unión específica, es decir, en condiciones fisiológicas en el caso de los análisis in vivo o el tratamiento terapéutico, o en el caso de los análisis in vitro, en condiciones en las que se realizan los análisis.

Se cree que la formulación de composiciones terapéuticas y su posterior administración están en el conocimiento práctico de la técnica. En general, para los agentes terapéuticos, se administra a un paciente que necesita semejante terapia un oligonucleótido según la invención, comúnmente en un portador farmacéuticamente aceptable, a dosis que oscilan entre 0,01 \mug y 100 g por kg de peso corporal dependiendo de la edad del paciente y de la gravedad del trastorno o estado de enfermedad que esté siendo tratado. Adicionalmente, el régimen de tratamiento puede durar un período de tiempo que variará dependiendo de la naturaleza de la enfermedad o trastorno concreto, de su gravedad y de la condición global del paciente, y se puede prolongar de una vez al día a una vez cada 20 años. Tras el tratamiento, se controlan los cambios de condición del paciente y el alivio de los síntomas del trastorno o estado de enfermedad. La dosificación del oligonucleótido puede ser aumentada en caso de que el paciente no responda significativamente a los niveles de dosificación normales, o se puede disminuir la dosis si se observa un alivio de los síntomas del trastorno o estado de enfermedad, o si el trastorno o estado de enfermedad ha sido eliminado.

En algunos casos, puede ser más eficaz tratar a un paciente con un oligonucleótido de la invención junto con otras modalidades terapéuticas con el fin de aumentar la eficacia de un régimen de tratamiento. En el contexto de la invención, se pretende que el término "régimen de tratamiento" abarque las modalidades terapéutica, paliativa y profiláctica. En una realización preferida, los oligonucleótidos de la invención se utilizan junto con uno o más oligonucleótidos antisentido dirigidos a una molécula de adherencia celular (ICAM), preferiblemente a ICAM-1. Entre otros agentes anti-inflamatorios y/o inmunosupresores que se pueden utilizar combinados con los oligonucleótidos de la invención se incluyen, pero no están limitados a, proteínas ICAM solubles (v.g., sICAM-1), productos conjugados de anticuerpo-toxina, prednisona, metilprednisolona, azatioprina, ciclofosfamida, ciclosporina, interferones, simpatomiméticos, antihistaminas convencionales (antagonistas del receptor H_{1} de histamina, incluyendo, por ejemplo, maleato de bromfeniramina, maleato de clorfeniramina, maleato de dexclorfeniramina, tripolidina HCl, maleato de carbinoxamina, fumarato de clemastina, dimenhidrinato, difenhidramina HCl, difenilpiralina HCl, succinato de doxilamina, citrato de tripelenamina, tripelenamina HCl, ciclizina HCl, hidroxizina HCl, meclizina HCl, metdilazina HCl, prometazina HCl, tartrato de trimeprazina, maleato de azatadina, cicloheptadina HCl, terfenadina, etc.), antagonistas del receptor H_{2} de histamina (v.g. ranitidina). Ver, generalmente, The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 15ª Ed., Berkow y col., eds., 1987, Rahway, N.J., páginas 302-336 y 2516-2522). Cuando se utilizan con los compuestos de la invención, tales agentes pueden ser utilizados individualmente, sucesivamente, o combinados con uno o más de tales
agentes.

En otra realización preferida de la invención, se utiliza un oligonucleótido antisentido dirigido a una especie de ARNm de B7 (v.g., B7-1) combinado con un oligonucleótido antisentido dirigido a una segunda especie de ARNm de B7 (v.g., B7-2) con el fin de inhibir el efecto co-estimulador de las moléculas de B7 a un grado más extenso del que puede ser logrado con cualquier oligonucleótido utilizado individualmente. En una versión relacionada de esta realización, se combinan entre sí dos o más oligonucléotidos de la invención, dirigido cada uno a un ARNm de B7-1 o B7-2 empalmados alternativamente, con el fin de inhibir la expresión de ambas formas de los ARNm empalmados alternativamente. Se sabe en la técnica que, dependiendo de la especificidad del agente modulador empleado, la inhibición de una forma de un ARNm empalmado alternativamente puede no dar como resultado una reducción suficiente de la expresión para que se manifieste una condición dada. De este modo, tales combinaciones pueden ser deseadas, en algunos casos, para inhibir la expresión de un gen B7 concreto hasta un grado necesario para poner en práctica uno de los métodos de la invención.

Tras un tratamiento exitoso, puede ser deseable que el paciente experimente una terapia de mantenimiento para evitar la recurrencia del estado de enfermedad, en la cual el oligonucleótido es administrado a dosis de mantenimiento, que oscilan entre 0,01 \mug y 100 g por kg de peso corporal, una vez o más al día, a una vez cada 20 años. En el caso de un individuo que se sabe o se sospecha que tiene tendencia a una afección autoinmune o inflamatoria, se pueden lograr efectos profilácticos mediante la administración de dosis preventivas, que oscilan entre 0,01 \mug y 100 g por kg de peso corporal, una vez o más al día, a una vez cada 20 años. Del mismo modo, un individuo se puede volver menos susceptible a una afección inflamatoria que se espera que se produzca como resultado de algún tratamiento médico, v.g., enfermedad injerto versus huésped resultante del transplante de células, tejidos u órganos en el
individuo.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser administradas de numerosas maneras dependiendo de si se desea un tratamiento local o generalizado y del área que se vaya a tratar. La administración puede ser tópica (incluyendo oftálmica, vaginal, rectal, intranasal, transdérmica), oral o parenteral. En la administración parenteral se incluye el goteo intravenoso, la inyección subcutánea, intraperitoneal o intramuscular, o la administración intratecal o intraventricular.

Entre las formulaciones para la administración tópica se pueden incluir parches transdérmicos, pomadas, lociones, cremas, geles, gotas, supositorios, pulverizaciones, líquidos y polvos. Pueden ser necesarios o deseables portadores, bases acuosas, en polvo u oleosas, espesantes y similares farmacéuticos convencionales. También pueden ser útiles los condones recubiertos, los guantes y similares.

Entre las composiciones para la administración oral se incluyen polvos o gránulos, suspensiones o soluciones en agua o medios no acuosos, cápsulas, saquitos o tabletas. Pueden ser deseables espesantes, agentes aromatizantes, diluyentes, emulsionantes, coadyuvantes de dispersión o aglutinantes.

Entre las composiciones para la administración parenteral, intratecal o intraventricular se pueden incluir soluciones acuosas estériles que también pueden contener tampones, diluyentes y otros aditivos adecuados.

La dosificación depende de la gravedad y del grado de reacción del estado de enfermedad que se vaya a tratar, manteniéndose el tiempo de tratamiento de varios días a varios meses, o hasta que se efectúa la curación o se logra una disminución del estado de enfermedad. Los programas de dosificación óptimos pueden ser calculados a partir de las medidas de acumulación de fármaco en el organismo del paciente. Los expertos normales en la técnica pueden determinar fácilmente las dosificaciones óptimas, las metodologías de la dosificación y las tasas de repetición. Las dosificaciones óptimas pueden variar dependiendo de la potencia relativa de los oligonucleótidos individuales, y generalmente pueden ser estimadas basándose en las CE_{50} que se ha encontrado que son efectivas en modelos animales in vitro e in vivo. En general, la dosificación es de 0,01 \mug a 100 g por kg de peso corporal, y pueden ser administrados una vez o más al día, semanalmente, mensualmente o anualmente, o incluso una vez cada 2 a 20
años.

Ejemplos Ejemplo 1 Síntesis de ácidos nucleicos Oligonucleótidos

Los oligonucleótidos fueron sintetizados en un sintetizador de ADN automático utilizando la química de la fosforamidita normalizada con oxidación utilizando yodo. Las b-cianoetildiisopropil-fosforamiditas fueron adquiridas de Applied Biosystems (Foster City, CA). Para los oligonucleótidos de fosforotioato, se remplazó la botella de oxidación normalizada por una solución 0,2 M de 3H-1,2-benzoditiol-3-ona-1,1-dioxido en acetonitrilo para la tiación por etapas de los enlaces fosfito. La etapa de espera del ciclo de tiación fue incrementada a 68 segundos y estuvo seguida de la etapa de protección terminal.

Los oligonucleótidos de 2'-fluorofosforotioato de la invención fueron sintetizados utilizando 5'-dimetoxitritil-3'-fosforamiditas y preparados como se describe en la solicitud de patente de los Estados Unidos Núm. de Serie 463.358, presentada el 11 de Enero de 1990, y Núm. de Serie 566.977, presentada el 13 de Agosto de 1990, que están cedidas al mismo cesionario que la presente solicitud y que se incorporan aquí como referencia. Los 2'-fluoro-oligonucleótidos fueron preparados utilizando la química de la fosforamidita y una ligera modificación del protocolo de síntesis de ADN normalizado: la desprotección se efectuó utilizando amoníaco metanólico a la temperatura ambiente.

Los 2'-metoxi (2'-O-metil) oligonucleótidos de la invención fueron sintetizados utilizando 2'-metoxi-\beta-cianoetildiisopropil-fosforamiditas (Chemgenes, Needham, MA) y el ciclo normalizado para los oligonucleótidos no modificados, excepto que la etapa de espera después de la liberación del pulso de tetrazol y la base fue incrementado a 360 segundos. Otros 2'-alcoxi-oligonucleótidos son sintetizados mediante una modificación de este método, utilizando amiditas modificadas en 2' apropiadas tales como las asequibles de Glen Research, Inc., Sterling, VA. La base 3' utilizada para iniciar la síntesis era un 2'-desoxirribonucleótido. Los 2'-O-propiloligonucleótidos de la invención se preparan mediante una ligera modificación de este procedimiento.

Los 2'-metoxietoxi (2'-O-CH_{2}CH_{2}OCH_{3}) oligonucleótidos de la invención fueron sintetizados según el método de Martin, Helv. Chim. Acta 1995, 78, 486. Para facilitar la síntesis, el último nucleótido era un desoxinucleótido. Todas las 2'-O-CH_{2}CH_{2}OCH_{3}-citosinas eran 5-metilcitosinas, que fueron sintetizadas conforme a los siguientes procedimientos.

Síntesis de monómeros de 5-Metilcitosina 2,2'-Anhidro[1-(\beta-D-arabinofuranosil)-5-metiluridina]

Se añadieron 5-metiluridina (ribosiltimina, asequible comercialmente de Yamasa, Choshi, Japón) (72,0 g, 0,279 M), difenilcarbonato (90,0 g, 0,420 M) y bicarbonato de sodio (2,0 g, 0,024 M) a DMF (300 ml). La mezcla se calentó a reflujo con agitación, permitiendo que el gas de dióxido de carbono producido fuera liberado de una manera controlada. Al cabo de 1 hora, la solución ligeramente oscurecida fue concentrada a presión reducida. El jarabe resultante se vertió en éter dietílico (2,5 litros), con agitación. El producto formaba una goma. El éter fue decantado y el residuo disuelto en una cantidad mínima de metanol (aprox. 400 ml). La solución se vertió en éter de nueva aportación (2,5 litros) para rendir una goma rígida. El éter fue decantado y la goma secada en un horno de vacío (60ºC a 1 mm Hg durante 24 horas) para dar un sólido que se trituró hasta un polvo de color tostado claro (57 g, rendimiento bruto 85%). El material fue utilizado tal cual para reacciones adicionales.

2'-O-Metoxietil-5-metiluridina

Se añadieron 2,2'-anhidro-5-metiluridina (195 g, 0,81 M), tris(2-metoxietil)borato (231 g, 0,98 M) y 2-metoxietanol (1,2 litros) a un recipiente a presión de acero inoxidable de 2 litros y se colocaron en un baño de aceite precalentado a 160ºC. Después de calentar durante 48 horas a 155-160ºC, el recipiente se abrió y la solución se evaporó hasta sequedad y se trituró con MeOH (200 ml). El residuo se suspendió en acetona caliente (1 litro). Las sales insolubles se filtraron, se lavaron con acetona (150 ml) y después el producto filtrado se evaporó. El residuo (280 g) se disolvió en CH_{3}CN (600 ml) y se evaporó. Se cargó una columna de gel de sílice (3 kg) con CH_{2}Cl_{2}/acetona/MeOH (20:5:3) conteniendo Et_{3}NH al 0,5%. El residuo se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (250 ml) y se adsorbió sobre sílice (150 g) antes de cargarlo en la columna. El producto se hizo eluir con el disolvente de carga para dar 160 g (63%) de
producto.

2'-O-Metoxietil-5'-O-dimetoxitritil-5-metiluridina

Se evaporó 2'-O-metoxietil-5-metiluridina (160 g, 0,506 M) simultáneamente con piridina (250 ml) y el residuo seco se disolvió en piridina (1,3 litros). Se añadió una primera alícuota de cloruro de dimetoxitritilo (94,3 g, 0,278 M) y la mezcla se agitó a la temperatura ambiente durante una hora. Se añadió una segunda alícuota de cloruro de dimetoxitritilo (94,3 g, 0,278 M) y la reacción se agitó durante una hora más. Después se añadió metanol (170 ml) a la etapa de reacción. La HPLC mostró la presencia de aproximadamente un 70% de producto. El disolvente se evaporó y se trituró con CH_{3}CN (200 ml). El residuo se disolvió en CHCl_{3} (1,5 litros) y se extrajo con 2 x 500 ml de NaHCO_{3} saturado y 2 x 500 ml de NaCl saturado. La fase orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se evaporó. Se obtuvieron 275 g de residuo. El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice de 3,5 kg, se cargó y se hizo eluir con EtOAc/Hexano/Acetona (5:5:1) conteniendo Et_{3}NH al 0,5%. Las fracciones puras fueron evaporadas para dar 164 g de producto. Se obtuvieron aproximadamente 20 g más a partir de las fracciones impuras para dar un rendimiento total de 183 g (57%).

3'-O-Acetil-2'-O-metoxietil-5'-O-dimetoxitritil-5-metiluridina

Se combinaron 2'-O-metoxietil-5'-O-dimetoxitritil-5-metiluridina (106 g, 0,167 M), DMF/piridina (750 ml de una mezcla 3:1 preparada a partir de 562 ml de DMF y 188 ml de piridina) y anhídrido acético (24,38 ml, 0,258 M) y se agitaron a la temperatura ambiente durante 24 horas. La reacción se controló mediante TLC sofocando primero la muestra de TLC con la adición de MeOH. Una vez completada la reacción, como se evalúa mediante la TLC, se añadió MeOH (50 ml) y la mezcla se evaporó a 35ºC. El residuo se disolvió en CHCl_{3} (800 ml) y se extrajo con 2 x 200 ml de bicarbonato de sodio saturado y 2 x 200 ml de NaCl saturado. Las capas acuosas se sometieron a retroextracción con 220 ml de CHCl_{3}. Las capas orgánicas combinadas se secaron con sulfato de sodio y se evaporaron para dar 122 g de residuo (aprox. 90% de producto). El residuo se purificó sobre una columna de gel de sílice de 3,5 kg y se hizo eluir utilizando EtOAc/Hexano (4:1). Las fracciones de producto puro fueron evaporadas para rendir 96 g
(84%).

3'-O-Acetil-2'-O-metoxietil-5'-O-dimetoxitritil-5-metil-4-triazolouridina

Se preparó una primera solución disolviendo 3'-O-acetil-2'-O-metoxietil-5'-O-dimetoxitritil-5-metiluridina (96 g, 0,144 M) en CH_{3}CN (700 ml) y se dejó aparte. Se añadió trietilamina (189 ml, 1,44 M) a una solución de triazol (90 g, 1,3 M) en CH_{3}CN (1 litro), se enfrió a -5ºC y se agitó durante 0,5 horas utilizando un agitador suspendido. Se añadió POCl_{3} gota a gota, a lo largo de un período de 30 minutos, a la solución agitada mantenida a 0-10ºC, y la mezcla resultante se agitó durante 2 horas más. La primera solución se añadió a la última solución gota a gota, a lo largo de un período de 45 minutos. La mezcla de reacción resultante se almacenó durante la noche en una cámara fría. Las sales se filtraron de la mezcla de reacción y la solución se evaporó. El residuo se disolvió en EtOAc (1 litro) y los sólidos insolubles se separaron por filtración. El producto filtrado se lavó con 1 x 300 ml de NaHCO_{3} y 2 x 300 ml de NaCl saturado, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. El residuo se trituró con EtOAc para dar el compuesto del
título.

2'-O-Metoxietil-5'-O-dimetoxitritil-5-metilcitidina

Una solución de 3'-O-acetil-2'-O-metoxietil-5'-O-dimetoxitritil-5-metil-4-triazolouridina (103 g, 0,141 M) en dioxano (500 ml) y NH_{4}OH (30 ml) se agitó a la temperatura ambiente durante 2 horas. La solución en dioxano se evaporó y el residuo se sometió a destilación azeotrópica con MeOH (2 x 200 ml). El residuo se disolvió en MeOH (300 ml) y se transfirió a un recipiente a presión de acero inoxidable de 2 litros. Se añadió MeOH (400 mL) saturado con gas NH_{3} y el recipiente se calentó a 100ºC durante 2 horas (la TLC mostró una conversión completa). Los contenidos del recipiente se evaporaron hasta sequedad y el residuo se disolvió en EtOAc (500 ml) y se lavó una vez con NaCl saturado (200 ml). Las capas orgánicas se secaron sobre sulfato de sodio y el disolvente se evaporó para dar 85 g (95%) del compuesto del título.

N^{4}-Benzoil-2'-O-metoxietil-5'-O-dimetoxitritil-5-metilcitidina

Se disolvió 2'-O-metoxietil-5'-O-dimetoxitritil-5-metilcitidina (85 g, 0,134 M) en DMF (800 ml) y se añadió anhídrido benzoico (37,2 g, 0,165 M) con agitación. Después de agitar durante 3 horas, la TLC mostró que la reacción se había completado aproximadamente en un 95%. El disolvente se evaporó y el residuo se sometió a destilación azeotrópica con MeOH (200 ml). El residuo se disolvió en CHCl_{3} (700 ml) y se extrajo con NaHCO_{3} saturado (2 x 300 ml) y NaCl saturado (2 x 300 ml), se secó sobre MgSO_{4} y se evaporó para dar un residuo (96 g). El residuo se sometió a cromatografía sobre una columna de sílice de 1,5 kg utilizando EtOAc/Hexano (1:1) conteniendo Et_{3}NH al 0,5% como disolvente de elución. Las fracciones de producto puro fueron evaporadas para dar 90 g (90%) del compuesto del título.

N^{4}-Benzoil-2'-O-metoxietil-5'-O-dimetoxitritil-5-metilcitidino-3'-amidita

Se disolvió N^{4}-benzoil-2'-O-metoxietil-5'-O-dimetoxitritil-5-metilcitidina (74 g, 0,10 M) en CH_{2}Cl_{2} (1 litro). Se añadieron tetrazol-diisopropilamina (7,1 g) y 2-cianoetoxi-tetra(isopropil)fosfito (40,5 ml, 0,123 M) con agitación, en atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó durante 20 horas a la temperatura ambiente (la TLC mostró que la reacción se había completado en un 95%). La mezcla de reacción se extrajo con NaHCO_{3} saturado /1 x 300 ml) y NaCl saturado (3 x 300 ml). Los lavados acuosos se sometieron a retroextracción con CH_{2}Cl_{2} (300 ml), y los extractos se combinaron, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron. El residuo obtenido se sometió a cromatografía sobre una columna de sílice de 1,5 kg utilizando EtOAc/Hexano (3:1) como disolvente de elución. Las fracciones puras se combinaron para dar 90,6 g (87%) del compuesto del título.

Purificación

Tras la escisión de la columna de vidrio de poro controlado (Applied Biosystems) y el desbloqueo en hidróxido de amonio concentrado a 55ºC durante 18 horas, los oligonucleótidos fueron purificados mediante precipitación dos veces en NaCl 0,5 M con 2,5 volúmenes de etanol. La electroforesis en gel analítica se completó en acrilamida al 20%, urea 8 M, tampón Tris-borato 45 mM, pH 7,0. A partir de la electroforesis se evaluó que los oligodesoxinucleótidos y sus análogos fosforotioato eran más grandes que el 80% del material de longitud completa.

Una serie de oligonucleótidos con secuencias diseñadas para que hibridaran con las secuencias del ARNm de B7-1 humano (hB7-1) y murino (mB7-1) publicadas (Freeman y col., J. Immunol., 1989, 143, 2714, y Freeman y col., J. Exp. Med., 1991, 174, 625, 2714, respectivamente). Las secuencias y las modificaciones de estos oligonucleótidos, y la localización de cada uno de sus sitios diana sobre el ARNm hB7-1, se dan en las Tablas 1 y 2.

De un modo similar, se sintetizaron una serie de oligonucleótidos con secuencias diseñadas para que hibridaran con las secuencias de ARNm de B7-2 humano (hB7-2) y murino (mB7-2) publicadas (respectivamente, Azuma y col., Nature, 1993, 366, 76; Chen y col., J. Immunol., 1994, 152, 4929). Las secuencias y las modificaciones de estos oligonucleótidos, y la localización de cada uno de sus sitios diana sobre el ARNm hB7-2, se describen en las Tablas 3 y 4. Los oligonucleótidos antisentido dirigidos a ICAM-1, incluyendo ISIS 2302 (SEC ID NÚM: 17), han sido descritos en la Patente de los Estados Unidos Núm. 5.514.788 que fue expedida el 7 de Mayo de 1996. ISIS 1082 (SEC ID NÚM: 102) e ISIS 3082 (SEC ID NÚM: 101) han sido descritos previamente (Stepkowski y col., J. Immunol., 1994, 153, 5336).

Después de su clonación inicial, se ha informado acerca de eventos de empalme alternativos de transcritos de B7. El empalme alternativo referido para B7-1 es relativamente simple, ya que da como resultado mensajes ampliados en 5' con relación al extremo 5' de las secuencias de ADNc de B7-1 humanas y murinas referidas originalmente (Borriello y col., J. Immunol., 1994, 153, 5038; Inobe y col., J. Immunol., 1996, 157, 588). Con el fin de conservar la numeración de las secuencias de B7-1 encontradas en las referencias de B7-1 referidas inicialmente, se han asignado números negativos a las posiciones de estas prolongaciones 5' de las secuencias referidas inicialmente (comenzando por la posición -1, la base más próxima al extremo 3' de la prolongación 5') en las Tablas 1 y 2. La maduración de los transcritos de B7-2 murinos es considerablemente más compleja que la referida hasta ahora para B7-1; por ejemplo, se pueden producir al menos cinco ARNm de B7-2 murino diferentes, y al menos dos ARNm de B7-2 humano diferentes mediante eventos de empalme alternativo (Borriello y col., J. Immunol., 1995, 155, 5490; Freeman y col., WO 95/03408, publicado el 2 de Febrero de 1995; ver también Jellis y col., Immunogenet., 1995, 42, 85). La naturaleza de estos eventos de empalme es tal que se utilizan diferentes exones 5' para producir distintos ARNm de B7-2, cada uno de los cuales tiene una única secuencia 5' pero comparte una porción 3' que consta de algunas o de todas las secuencias de B7-2 referidas inicialmente. Como resultado, las posiciones dentro de las prolongaciones 5' de los mensajeros de B7-2 no pueden estar relacionadas únicamente con una posición dentro de la secuencia referida inicialmente. Por consiguiente, en la Tabla 3, se utilizan un grupo diferente de productos coordinados (correspondientes a los de la SEC ID NÚM: 1 de WO 95/03408) y, en la Tabla 4, el número de exones (dado por Borriello y col., J. Immunol., 1995, 155, 5490) para especificar la localización de secuencias elegidas como diana que no están incluidas en las secuencia de B7.2 referida inicialmente. Además, aunque estos mensajes prolongados en 5' contienen codones de inicio en el marco aguas arriba de los indicados en las secuencias publicadas inicialmente, para simplificar, semejantes codones de inicio potenciales adicionales no están indicados en la descripción de los sitios diana en las Tablas 1-4.

En las Tablas 1-4, se utilizan las siguientes abreviaturas: UTR, región no traducida; ORF, marco de lectura abierto; tIR, región de iniciación de la traducción; tTR, región de terminación de la traducción; FITC, isotiocianato de fluoresceína. Las modificaciones químicas se indican como sigue. Los restos que tienen modificaciones 2'-fluoro (2'F), 2'-metoxi (2'MO) o 2'-metoxietoxi (2'ME) están en negrita, estando indicado el tipo de modificación por las respectivas abreviaturas. A menos que se indique de otro modo, los enlaces entre restos son enlaces fosfodiéster: los enlaces fosforotioato están indicados por una "S" en la posición del superíndice (v.g., T^{S}A). Las posiciones de las dianas se numeran según Freeman y col., J. Immunol., 1989, 143:2714 (secuencia de ADNc de B7-1 humano; Tabla 1), Freeman y col., J. Exp. Med., 1991, 174, 625 (secuencia de ADNc de B7-1 murino; Tabla 2), Azuma y col., Nature, 1993, 366:76 (secuencia de ADNc de B7-2 humano; Tabla 3) y Chen y col., J. Immunol., 1994, 152: 4929 (secuencia de ADNc de B7-2 murino; Tabla 4). Los códigos de las bases nucleotídicas se dan en 37 C.F.R. \NAK 1.822(b)(1).

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Clones de ADNc

Se aisló un ADNc que codificaba la secuencia de B7-1 humana utilizando la transcripción inversa/reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR). Se sometió a transcripción inversa ARN poli A+ de células Daudi (Núm. de Acceso CCL 213) utilizando cebador oligo-dT en condiciones normalizadas. Tras una reacción de 30 minutos a 42ºC e inactivación con calor, la mezcla de reacción (20 \mul) se llevó a 100 \mul con agua. Después se amplificó una alícuota de 10 \mul de la reacción RT en una reacción PCR de 50 \mul utilizando el cebador 5'.

5'-GAT-CAG-GGT-ACC-CCA-AAG-AAA-AAG-TGA-TTT-GTC-ATT-GC-3' (sentido, SEC ID NÚM: 20), y el cebador 3',

5'-GAT-AGC-CTC-GAG-GAT-AAT-GAA-TTG-GCT-GAC-AAG-AC-3' (antisentido, SEC ID NÚM: 21).

Los cebadores incluían sitios de restricción únicos para la subclonación del producto de la PCR en el vector pcDNA-3 (Invitrogen, San Diego, CA). El cebador 5' fue diseñado para que fueran idéntico a las bases 1 a 26 de la secuencia de B7-1 humana publicada (Freeman y col., J. Immunol., 1989, 143, 2714; posiciones 13-38 del cebador) e incluye un sitio de restricción Kpn I (posiciones 7-12 del cebador) para su uso en la clonación. El cebador 3' fue diseñado para que fuera complementario a las bases 1450 a 1471 de la secuencia publicada para B7-1 (posiciones 14-35 del cebador) e incluye un sitio de restricción Xho I (posiciones 7-12 del cebador). Tras la PCR, la reacción fue extraída con fenol y precipitada utilizando etanol. El producto fue digerido con las enzimas de restricción apropiadas y el fragmento en toda su longitud purificado mediante gel de agarosa y ligado en el vector pcDNA-3 (Invitrogen, San Diego, CA) preparado mediante digestión con las mismas enzimas. El constructo resultante, pCB7-1, fue confirmado mediante mapeo de restricción y análisis de la secuencia de ADN utilizando procedimientos normalizados. Un clon B7-1 de ratón, pcmB7-1, fue aislado de una manera similar mediante RT-PCR del ARN aislado de una línea celular de linfocitos B murinos, 70Z3.

Asimismo se aisló un ADNc que codificaba la secuencia de B7-2 humana, posición 1 a 1391, mediante RT-PCR. Se sometió a transcripción inversa ARN poli A+ de células Daudi (Núm. de Acceso CCL 213) utilizando un cebador oligo-dT en condiciones normalizadas. Tras una reacción de 30 minutos a 42ºC e inactivación con calor, la mezcla de reacción (20 \mul) se llevó a 100 \mul con agua. Después se amplificó una alícuota de 10 \mul de la reacción RT en una reacción PCR de 50 \mul utilizando el cebador 5'.

5'-GAT-CAG-GGT-ACC-AGG-AGC-CTT-AGG-AGG-TAC-GG-3' (sentido, SEC ID NÚM: 1), y el cebador 3',

5'-GAT-AGC-CTC-GAG-TTA-TTT-CCA-GGT-CAT-GAG-CCA-3' (antisentido, SEC ID NÚM: 2).

El cebador 5' fue diseñado para que fuera idéntico a las bases 1 a 20 de la secuencia de B7-2 publicada (Azuma y col., Nature, 1993, 366, 76 y Número de Acceso de Genbank L25259; posiciones 13-32 del cebador) e incluye un sitio Kpn I (posiciones 7-12 del cebador) para su uso en la clonación. El cebador 3' fue diseñado para que fuera complementario a las bases 1370 a 1391 de la secuencia publicada para B7-2 (posiciones 13-33 del cebador) e incluye un sitio de restricción Xho I (posiciones 7-12 del cebador). Tras la PCR, la reacción fue extraída con fenol y precipitada utilizando etanol. El producto fue digerido Xho I y Kpn I, y el fragmento en toda su longitud purificado mediante gel de agarosa y ligado en el vector pcDNA-3 (Invitrogen, San Diego, CA) preparado mediante digestión con las mismas enzimas. El constructo resultante, pCB7-2, fue confirmado mediante mapeo de restricción y análisis de la secuencia de ADN utilizando procedimientos normalizados.

Se aisló un clon B7-2 de ratón, pcmB7-2, de una manera similar mediante RT-PCR de ARN aislado de células p388D1 utilizando un cebador 5',

5'-GAT-CAG-GGT-ACC-AAG-AGT-GGC-TCC-TGT-AGG-CA (sentido, SEC ID NÚM: 99), y el cebador 3',

5'-GAT-AGC-CTC-GAG-GTA-GAA-TTC-CAA-TCA-GCT-GA (antisentido, SEC ID NÚM: 100).

El cebador 5' era idéntico a las bases 1-20, mientras el cebador 3' es complementario a las bases 1096-1115, de la secuencia de B7-2 murina publicada (Chen y col., J. Immun., 1994, 152, 4929). Ambos cebadores incorporan los respectivos sitios para las enzimas de restricción encontrados en los otros cebadores 5' y 3' utilizados para preparar clones de ADNc. El producto de RT-PCR fue sometido a restricción con Xho I y Kpn I y ligado en pcDNA-3 (Invitrogen, San Diego, CA).

Otros clones de ADNc, correspondientes a los ARNm resultantes de eventos de empalme alternativos, son clonados

de una manera similar, utilizando cebadores que contienen los sitios de restricción apropiados y que tienen identidad (cebadores 4') o complementariedad (cebadores 3'), con el ARNm de B7 seleccionado.

Ejemplo 2 Modulación de la expresión de hB7-1 mediante oligonucleótidos

La capacidad de los oligonucleótidos para inhibir la expresión de B7-1 fue evaluada midiendo la expresión en la superficie celular de B7-1 en células COS-7 transfectadas mediante citometría de flujo.

Métodos

Se sembró un matraz T-175 a una confluencia del 75% con células COS-7 (Núm. de acceso ATCC CRL 1651). El plásmido pcB7-1 fue introducido en las células mediante transfección con fosfato de calcio normalizada. Tras una transfección de 4 horas, las células fueron tratadas con tripsina y sembradas en placas de 12 pocillos a una confluencia del 80%. Se permitió que las células se adhirieran al plástico durante 1 hora y luego se lavaron con solución salina tamponada con fosfato (PBS). Se añadió medio OptiMEM® (GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD) junto con 15 \mug/ml de Lipofectin® (GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD) y oligonucleótido a las concentraciones indicadas. Al cabo de cuatro horas más, las células se lavaron con solución salina tamponada con fosfato (PBS) y se incubaron con oligonucleótido de nueva aportación a la misma concentración en DMEM (Dulbecco y col., Virol., 1959, 8, 396; Smith y col., Virol., 1960, 12, 185) con suero de ternera fetal al 10% (FCS).

Con el fin de controlar los efectos de los oligonucleótidos sobre la expresión en la superficie celular de B7-1, se cosecharon células COS-7 tratadas mediante un breve tratamiento con tripsina 24-48 horas después del tratamiento con oligonucleótido. Las células se lavaron con PBS, después se resuspendieron en 100 \mul de tampón de tinción (PBS, BSA al 0,1%, azida al 0,1%) con 5 \mul de anticuerpo anti-B7-1 conjugado (es decir, anti-hCD80-FITC, Ancell, Bayport, MN; FITC: isotiocianato de fluoresceína). Las células fueron teñidas durante 30 minutos a 4ºC, lavadas con PBS, resuspendidas en 300 \mul que contenían paraformaldehído al 0,5%. Las células fueron cosechadas y los perfiles de fluorescencia determinados utilizando un citómetro de flujo.

Resultados

Los oligonucleótidos mostrados en la Tabla 1 fueron evaluados, en células COS-7 que expresaban transitoriamente el ADNc de B7-1, en cuanto a su capacidad para inhibir la expresión de B7-1. Los resultados (Figura 11) identificaron ISIS 13805, dirigido a la región del codón de iniciación de traducción, e ISIS 13812, dirigido a la región 3' no traducida (UTR), como los oligonucleótidos más activos con una inhibición de más del 50% de la expresión de B7-1. Estos oligonucleótidos son por lo tanto muy preferidos. ISIS 13799 (dirigido a la región 5' no traducida), ISIS 13802 (dirigida a la región 5' no traducida), ISIS 13806 y 13807 (ambos dirigidos a la región 5' del ORF), e ISIS 13810 (dirigido a la porción central del ORF) demostraron una inhibición del 35% al 50% de la expresión de B7-1. Por lo tanto estas secuencias también son preferidas.

El oligonucleótido ISIS 13800, que no mostraba esencialmente inhibición de la expresión de B7-1 en el análisis de citometría de flujo, e ISIS Núms. 13805 y 13812 fueron evaluados después en cuanto a su capacidad para inhibir la expresión en la superficie celular de B7-1 a diferentes concentraciones de oligonucleótido. Los resultados de estos análisis se muestran en la Figura 2. ISIS 13812 era un inhibidor superior de la expresión de B7-1 con una CI_{50} de aproximadamente 150 nM. ISIS 13800, dirigido a la 5' UTR, era esencialmente inactivo.

Ejemplo 3 Modulación de la proteínas hB7-2 mediante oligonucleótidos

En un rastreo inicial, se evaluó la capacidad de los oligonucleótidos hB7-2 para inhibir la expresión de B7-2 midiendo la expresión en la superficie celular de B7-2 en células COS-7 transfectadas mediante citometría de flujo. Los métodos utilizados eran similares a los dados en el Ejemplo 2, con las excepciones de que (1) las células COS-7 eran transfectadas con los plásmidos pbcB7-2 o BBG-58, un vector de expresión ICAM-1 humano (CD54) (R&D Systems, Minneapolis, MN) introducido en las células mediante transfección con fosfato de calcio normalizada, (2) los oligonucleótidos utilizados fueron los descritos en la Tabla 2, y (3) se utilizó un anticuerpo anti-B7-2 conjugado (es decir, anti-hCD86-FITC o anti-CD86-PE, Pharmningen, San Diego, CA; PE: ficoeritrina) durante la citometría de flujo.

Resultados

Los resultados se muestran en la Figura 3. A una concentración de 200 nM, ISIS 9133, ISIS 9139 e ISIS 10373 mostraban una actividad inhibidora del 50% o mejor y por lo tanto eran muy preferidos. Estos oligonucleótidos están dirigidos a la región 3' no traducida (ISIS 9133), la región del codón de iniciación de la traducción (ISIS 9139) y la región 5' no traducida (ISIS 10373). A la misma concentración, ISIS 10715, ISIS 10716 e ISIS 10721, que eran controles cifrados para ISIS 9133, ISIS 9139 e ISIS 10373, respectivamente, no mostraban actividad inhibidora. El tratamiento con ISIS 10367 e ISIS 10369 daba como resultado una inhibición de más de 25%, y por lo tanto estos oligonucleótidos también son preferidos. Estos oligonucleótidos están dirigidos a las regiones 5' (ISIS 10367) y 3' (ISIS 10369) no traducidas.

Ejemplo 4 Modulación de ARNm hB7-2 mediante oligonucleótidos Métodos

Para los análisis de protección con ribonucleasa, se cosecharon células 18 horas después de completarse el tratamiento con oligonucleótido utilizando un estuche Totally RNA® (Ambion Austin, TX). Las sondas para el análisis fueron generadas a partir de plásmidos pcB7-2 linealizados mediante digestión con Bgl II) y pTRI-b-actina (Ambion Inc., Austin, TX). La transcripción in vitro del plásmido linealizado a partir del promotor SP6 fue realizada en presencia de \alpha-P^{32}-UTP (800 Ci/mmol) rindiendo un ARN antisentido complementario al extremo 3' de B7-2 (posición 1044-1391). La sonda fue purificada en gel después del tratamiento con ADNasa I para separar el molde de ADN. Los análisis de protección con ribonucleasa se llevaron a cabo utilizando un estuche RPA II® (Ambion) según las directrices del fabricante. Se hibridó el ARN total (5 \mug) durante la noche, a 42ºC, con 10^{5} CPM de la sonda B7-2 o una sonda de beta-actina de control. La reacción de hibridación se trató después, a 37ºC durante 30 minutos, con 0,4 unidades de ARNasa A y 2 unidades de ARNasa T1. El ARN protegido se hizo precipitar, se resuspendió en 10 \mul de tampón de carga en gel y se sometió a electroforesis en un gel de acrilamida al 6% con urea al 50% p/v a 20 W. El gel fue expuesto después y las calles fueron cuantificadas utilizando un PhosphorImager (Molecular Dynamics, Sunnyvale, CA) esencialmente según las instrucciones del fabricante.

Resultados

El grado de modulación del ARNm hB7-2 mediado por oligonucleótidos era análogo a los efectos observados para la proteína hB7-2 (Tabla 5). Como con los análisis de expresión de proteína (citometría de flujo), los oligonucleótidos más activos eran ISIS 9133, ISIS 9139 y 10373. Ninguno de los oligonucleótidos sometidos a ensayo tenía un efecto inhibidor sobre la expresión del ARNm de la b-actina en las mismas células.

TABLA 5 Actividades de los Oligonucleótidos Dirigidos al ARNm de hB7-2

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Ejemplo 5 Oligonucleótidos hB7-1 y hB7-2 adicionales

Se prepararon oligonucleótidos que tenían estructuras y/o secuencias que estaban modificadas en relación con los oligonucleótidos identificados durante el rastreo inicial. Estos oligonucleótidos fueron evaluados en cuanto a su capacidad para modular la expresión de B7-2 humana utilizando los métodos descritos en los Ejemplos anteriores.

También se preparó y se evaluó ISIS 10996, un oligonucleótido que tenía una secuencia de 15 nucleótidos derivada de la secuencia de 20 nucleótidos de ISIS 10373. ISIS 10996 comprende 15 nucleótidos, 5'-GCG-AGC-TCC-CCG-TAC (SEC ID NÚM: 90) contenidos en la secuencia de ISIS 10373. Tanto ISIS 10373 como 10996 se solapan con una estructura en tallo-bucle potencial localizada en el interior de mensaje de B7-2 que comprende las bases 1-67 de las secuencias de hB7-2 presentadas por Azuma y col. (Nature, 1993, 366, 76). Si bien no se pretende estar ligado a ninguna teoría concreta por lo que se refiere a su modo o sus modos de acción, ISIS 10373 e ISIS 10996 tienen el potencial de unirse en forma de falsos medios nudos del bucle 1 en una estructura secundaria dentro del ARN diana. En la Patente de los Estados Unidos 5.5152.438, que fue presentada el 30 de Abril de 1996, se describen métodos para modular la expresión génica mediante la formación de falsos medios nudos. Sin tener en cuenta su modo o sus modos de acción, a pesar de tener una menor longitud que ISIS 10373, el 15-mero ISIS 10996 es tan activo (o más) en el análisis de expresión de la proteína B7-2 que el 20-mero del cual deriva (Figura 4); ISIS 10721 es un control cifrado para ISIS 10373). Un 16-mero afín, ISIS 10889, también era activo en el análisis de expresión de la proteína B7-2. Sin embargo, un 14-mero (ISIS 10995), un 13-mero (ISIS-10994), un 12-mero (ISIS 10993), un 11-mero (ISIS 10992) y un 10-mero (ISIS 10991) estructuralmente afines mostraban poca o ninguna actividad en este análisis. ISIS 10996 fue transformado adicionalmente en las siguientes maneras.

Se prepararon derivados de ISIS 10996 que tenían sustituciones con 2'-metoxietoxi, incluyendo un derivado totalmente sustituido (ISIS 11539), "espaciómeros" (ISIS 11541 y 11543) y "flancómeros" (ISIS 11545 y 11547). Como se ha explicado en el Ejemplo 5, la sustitución con 2'-metoxietoxi evita la acción de algunas nucleasas (v.g., ARNasa H) pero intensifica la afinidad del oligonucleótido modificado por su molécula de ARN diana. Estos oligonucleótidos son sometidos a ensayo en cuanto a su capacidad para modular el mensaje hB7-2 o la función según los métodos de los Ejemplo 3, 4, 7 y 8.

Se prepararon derivados de ISIS 10996 con el fin de evaluar su capacidad para reclutar ARNasa L para una molécula de ARN diana, v.g., el mensaje hB7-2. La ARNasa L se une a, y es activada por, (2'-5')(A)_{n}, que es producido a su vez a partir de ATP por la (2'-5')(A)_{n}sintetasa tras la activación, v.g., por el interferón. La ARNasa L ha sido implicada en mecanismos antivirales y también en la regulación del crecimiento celular (Sawai, Chemica Scripta, 1986, 21, 169; Charachon y col., Biochemistry, 1990, 29, 2550). Se espera que la combinación de oligonucleótidos anti-B7 conjugados con (2'-5')(A)_{n} produzca la activación de la ARNasa L y su dirección hacia el mensaje B7 complementario a la secuencia de nucleótidos. Los siguientes oligonucleótidos tienen secuencias idénticas (es decir, que ISIS 10996) e idénticas "protecciones terminales" (2'-5')(A)_{4} en sus extremos 5': ISIS 12492, 12495, 12496 y 13107. Los restos adenosilo tienen grupos hidroxilo 3' y están conectados entre sí por enlaces fosforotioato. La porción (3'-5') del oligonucleótido, que es una secuencia complementaria a una porción del ARN B7-2 humano, está conjugada con la "protección terminal" (2'-5')(A)_{4} por medio de una conexión fosforotioato del resto 5' de la porción (3'-5') del oligonucleótido a un conector n-aminohexilo que está unido a la "protección terminal" por medio de otra conexión fosforotioato. Con el fin de someter a ensayo una variedad de oligonucleótidos químicamente diversos de este tipo en cuanto a su capacidad para reclutar ARNasa L para un mensaje específico, se realizaron diferentes modificaciones químicas en este grupo de cuatro oligonucleótidos como sigue: ISIS 12496 consta de oligonucleótidos no modificados en la porción (3'-5') del oligonucleótido. En ISIS 13107, las conexiones fosforotioato sustituyen a las conexiones fosfato encontradas en los ácidos nucleicos de origen natural. Las conexiones fosforotioato también se emplean en ISIS 12492 y 12495, que además tienen sustituciones 2'-metoxietoxi. Estos oligonucleótidos son sometidos a ensayo en cuanto a su capacidad para modular el mensaje o la función hB7-2 según los métodos de los Ejemplos 3, 4, 7 y 8.

Se prepararon y se evaluaron derivados de ISIS 10996 que tenían modificaciones en la posición 2'. Los oligonucleótidos modificados incluían ISIS 11539 (totalmente 2'-O-metilado); ISIS 11541 (que tenía "flancos" 2'-O-metilados y un "espacio" central de 7 bases), ISIS 11543 (flancos 2'-O-metilados con un espacio de 9 bases), ISIS 11545 (que tenía un flanco 5' 2'-O-metilado) e ISIS 11547 (que tenía un flanco 3' 2'-O-metilado). Los resultados de los análisis de los oligonucleótidos 2'-O-metilados fueron los siguientes. ISIS 11539, la versión totalmente 2'-O-metilada de ISIS 10996, no era activa en absoluto en el análisis de expresión de proteínas. Cada uno de los oligonucleótidos con espacios y flancos (ISIS 11541, 11543, 11545 y 11547) mostraban actividad a 200 nM (es decir, del 60 al 70% de expresión en relación con las células no tratadas), pero menos de la demostrada por el compuesto de origen, ISIS 10996 (es decir, aproximadamente el 50% de expresión). Se observaban resultados similares en los análisis de expresión de ARN.

Se preparó ISIS 10782, un derivado de ISIS 10373 al cual ha sido conjugado colesterol por medio de un conector n-aminohexilo 5'. Se ha informado que los radicales lipófilos tales como el colesterol intensifican la absorción por las células de oligonucleótidos en algunos casos, aunque el grado en el cual se intensifica la absorción, si lo hace, sigue siendo impredecible. ISIS 10782, y otros oligonucleótidos que comprenden radicales lipófilos, se someten a ensayo en cuanto a su capacidad para modular el mensaje o la función de B7-2 según los métodos de los Ejemplos 3, 4, 7 y 8.

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Se preparó una serie de derivados "espaciómeros" 2'-metoxietoxilados (aquí, "2'ME") y 2'-fluorados (aquí "2'F") de los oligonucleótidos de hB7-1 ISIS 12361 (ISIS Núms. 12348 y 12473, respectivamente), ISIS 12362 (ISIS Núms. 12349 y 12474), ISIS 12363 (ISIS Núms. 12350 y 12475), ISIS 12364 (ISIS Núms. 12351 y 12476), ISIS 12365 (ISIS Núms. 12352 y 12477), ISIS 12366 (ISIS Núms. 12353 y 12478), ISIS 12367 (ISIS Núm. 12354 y 12479), ISIS 12368 (ISIS Núms. 12355 y 12480), ISIS 12369 (ISIS Núms. 12356 y 12481) e ISIS 12370 (ISIS Núms. 12357 y 12482). Las porciones no modificadas en 2', centrales ("espacios") de estos derivados soportan la actividad ARNasa H cuando el oligonucleótido se une a su ARN diana, incluso aunque las porciones modificadas en 2' no lo hagan. Sin embargo, los "flancos" modificados en 2' de estos oligonucleótidos intensifican su afinidad hacia las moléculas de ARN diana (Cook, Capítulo 9, en: Antisense Research and Applications, Crooke y col., eds. CRC Press, Boca Ratón, 1993, págs. 171-172).

Otra modificación en 2' es la introducción de un grupo metoxi (MO) en esta posición. Como los oligonucleótidos modificados con 2'ME y 2'F, esta modificación evita la acción de la ARNasa H sobre los dúplex de tales oligonucleótidos y sus moléculas de ARN diana, pero intensifica la afinidad de un oligonucleótido por su molécula de ARN diana. ISIS 12914 y 12915 comprenden secuencias complementarias a la región 5' no traducida de moléculas de ARNm de hB7-1 alternativas, que surgen de eventos de empalme alternativos del transcrito de hB7-1 primario. Entre estos oligonucleótidos se incluyen modificaciones con 2'-metoxi, y la afinidad por la diana intensificada resultante de allí puede permitir una mayor actividad frente a moléculas de ARNm de B7-1 empalmadas alternativamente que pueden estar presentes de forma poco abundante en algunos tejidos (Inobe y col., J. Immun., 1996, 157, 582). De un modo similar, ISIS 13498 y 13499, que comprenden secuencias antisentido para otros ARNm de hB7-1 alternativos, incluyen modificaciones con 2'-metoxietoxi con el fin de intensificar su afinidad por sus moléculas diana, y se incorporan sustituciones 2'-metoxietoxi o 2'-metoxi en los oligonucleótidos ISIS 12912, 12913, 13496 y 13497. Estos oligonucleótidos son sometidos a ensayo en cuanto a su capacidad para modular hB7-1 esencialmente según los métodos del Ejemplo 2 o hB7-2 según los métodos de los Ejemplos 3, 4, 7 y 8, con la excepción de que, cuando es necesario, las células diana son transfectadas con un clon de ADNc correspondiente al transcrito B7 empalmado alternativamente apropiado.

Ejemplo 6 Especificidad de la modulación antisentido

Numerosos oligonucleótidos de la invención fueron evaluados en un análisis de citometría de flujo de la expresión en la superficie celular para determinar la especificidad de los oligonucleótidos para B7-1 en contraste con la actividad frente a B7-2. Entre los oligonucleótidos sometidos a ensayo en este análisis se incluían ISIS 13812, un inhibidor de la expresión de B7-1 (Figura 1; Ejemplo 2) e ISIS 10373, un inhibidor de la expresión de B7-2 (Figura 3; Ejemplo 3). Los resultados de este análisis se muestran en la Fig. 5. ISIS 13812 inhibe la expresión de B7-1 con poco o ningún efecto sobre la expresión de B7-2. Como también se observa en la Figura 5, ISIS 10373 inhibe la expresión de B7-2 con poco o ningún efecto sobre la expresión de B7-1. ISIS 13872 (SEC ID NÚM: 37, AGT-CCT-ACT-ACC-AGC-CGC-CT), un control cifrado de ISIS 13812, e ISIS 13809 (SEC ID NÚM: 51) estaban incluidos en estos análisis y no demostraron esencialmente actividad frente a B7-1 o B7-2.

Ejemplo 7 Modulación de la expresión de hB7-2 mediante oligonucleótidos en células presentadoras de antígenos

Se evaluó la capacidad de ISIS 10373 para inhibir la expresión del gen nativo B7-2 en células presentadoras de antígenos (APC) como sigue:

Métodos

Se cultivaron monocitos y se trataron con oligonucleótidos como sigue: Para las células dendríticas, se dispuso en capas sangre tratada con EDTA sobre Polymorphoprep® (1,113 g/ml; Nycomed, Oslo, Noruega) y se sedimentó a 500 x g durante 30 minutos a 20ºC. Se recogieron células mononucleares de la interfase. Las células fueron lavadas con PBS, con medio RPMI libre de suero (Moore y col., N.Y. J. Med., 1968, 68, 2054) y después con RPMI conteniendo suero bovino fetal al 5% (FBS). Se seleccionaron los monocitos mediante la adherencia a placas para el cultivo celular de plástico durante 1 hora a 37ºC. Tras la adherencia, se trataron las células con oligonucleótidos en RPMI libre de suero conteniendo Lipofectina® (8 \mug/ml). Al cabo de 4 horas, se lavaron las células. Después se añadió a las células RPMI conteniendo FBS al 5% y el oligonucleótido junto con interleuquina-4 (IL-4; R&D Systems, Minneapolis, MN) (66 ng/ml) y factor estimulador de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF; R&D Systems, Minneapolis, MN) (66 ng/ml) para estimular la diferenciación (Romani y col., J. Exp. Med., 1994, 180, 83, 1994). Las células fueron incubadas durante 48 horas, después de lo cual se midió la expresión en la superficie celular de diversas moléculas mediante citometría de flujo.

Las células mononucleares aisladas de sangre fresca fueron tratadas con oligonucleótido en presencia de lípido catiónico para promover la absorción celular. Como oligonucleótido de control, también se administró a las células ISIS 2302 (un inhibidor de la expresión de ICAM-1; SEC ID NÚM: 17). La expresión de la proteína B7-2 fue medida mediante citometría de flujo según los métodos del Ejemplo 2. Entre los anticuerpos monoclonales no descritos en los Ejemplos previos se incluían anti-hCD3 (Ancell, Bayport, MN) y anti-HLA-DR (Becton Dickinson, San Jose, CA).

Resultados

Como se muestra en la Figura 6, ISIS 10373 tiene un efecto inhibidor significativo sobre la expresión de B7-2 con una CI_{50} de aproximadamente 250 nM. ISIS 10373 tenía solamente un efecto significativo sobre la expresión de ICAM-1 incluso a una dosis de 1 \muM. ISIS 2302 (SEC ID NÚM: 17), un oligonucleótido de control que se ha demostrado que inhibe la expresión de ICAM-1, no tenía efecto sobre la expresión de B7-2, pero disminuía significativamente los niveles de ICAM-1 con una CI_{50} de aproximadamente 250 nM. En condiciones similares, ISIS 10373 no afectaba a la expresión en la superficie celular de B7-1, HLa-DR o CD3 medida mediante citometría de flujo.

Ejemplo 8 Modulación de la proliferación de las células T mediante oligonucleótidos

La capacidad de ISIS 2302 e ISIS 10373 para inhibir la proliferación de las células T fue evaluada como sigue. Se utilizaron monocitos tratados con oligonucleótidos y citoquinas (como en el Ejemplo 6) como células presentadoras de antígenos en un análisis de proliferación de las células T. Los monocitos diferenciados fueron combinados con células T CD4^{+} de un donador separado. Al cabo de 48 horas, se midió la proliferación mediante la incorporación de timidina [H^{3}].

Métodos

Para los análisis de proliferación de las células T, las células fueron aisladas de sangre completa tratada con EDTA como se ha descrito antes, excepto que se cosechó justo debajo de la interfase, una banda que migraba más rápido que contenía los linfocitos. Las células fueron lavadas como se describe en el Ejemplo 6 después de lo cual los eritrocitos fueron separados mediante lisis con NH_{4}Cl. Las células T fueron purificadas utilizando una columna de enriquecimiento en células T [R&D Systems, Minneapolis, MN] esencialmente según las directrices del fabricante. Las células T CD4^{+} fueron enriquecidas adicionalmente a partir de la población de células T completa mediante agotamiento de las células CD8^{+} con cuentas magnéticas conjugadas con anti-CD8 (AMAC, Inc., Westbrook, ME) según las directrices del fabricante. Se determinó que las células T eran >80% CD4^{+} mediante citometría de flujo utilizando mAb anti-CD4 conjugado con Cy-cromeno (PharMingen, San Diego, CA).

Las células presentadoras de antígenos (APC) fueron aisladas como se describe en el Ejemplo 6 y se trataron con mitomicina C (25 \mug/ml) durante 1 hora, después se lavaron 3 veces con PBS. Las APC (10^{5} células) fueron combinadas después con 4 x 10^{4} células T CD4+ en 350 \mul de medio de cultivo. Cuando se indicaba, también se añadía mAb CD3 purificado a una concentración de 1 \mug/ml. Durante las últimas 6 horas del período de incubación de 48 horas, se midió la proliferación determinando la absorción de 1,5 \muCi de timidina-[H^{3}] por pocillo. Las células fueron cosechadas sobre filtros y la radiactividad fue medida mediante recuento de centelleo.

Resultados

Como se muestra en la Figura 7, las células mononucleares que no eran tratadas con citoquina inducían ligeramente la proliferación de las células T, presumiblemente debido a los bajos niveles de moléculas co-estimuladoras expresados sobre las células. No obstante, cuando las células eran tratadas con citoquinas e inducidas para diferenciarse en células de tipo dendrítico, la expresión tanto de ICAM-1 como de B7-2 era fuertemente sobrerregulada. Esto daba como resultado una potente respuesta proliferativa de las células T que podía ser bloqueada o bien con oligonucleótidos anti-ICAM-1 (ISIS 2302) o bien oligonucleótidos anti-B7-2 (ISIS 10373) antes de la inducción de las células mononucleares. El oligonucleótido de control (ISIS 10721) tenía un efecto insignificante sobre la proliferación de las células T. Un tratamiento combinado con oligonucleótidos tanto anti-ICAM-1 (ISIS 2302) como anti-B7-2 (ISIS 10373) daba como resultado un descenso adicional de la respuesta de las células T.

Ejemplo 9 Modulación de genes B7 murinos mediante oligonucleótidos

Los oligonucleótidos (ver Tabla 4) capaces de inhibir la expresión de B7-2 murina expresada transitoriamente en células COS-7 fueron identificados de la siguiente manera. Se rastreó una serie de oligonucleótidos de fosforotioato complementarios a ADNc de B7-2 murino (mB7-2) en cuanto a su capacidad para reducir los niveles de mB7-2 (medidos mediante citometría de flujo como en el Ejemplo 2, excepto que un anticuerpo anti-mB7-2 conjugado (es decir, anti-mCD86-PE, PharMingen, San Diego, CA) en células COS-7 transfectadas con un clon de ADNc de mB7-2. Asimismo se puede obtener un anticuerpo anti-mB7-2 a partir del hibridoma depositado en la ATCC bajo el Núm. de acceso HB-253. Los oligonucleótidos (ver Tabla 2) capaces de modular la expresión de B7-2 murina son aislados de una manera similar, excepto que se utiliza un anticuerpo anti-mB7-2 conjugado junto con células COS-7 transfectadas con un clon de ADNc de mB7-1.

Para B7-2 murina, el oligonucleótido más activo identificado era ISIS 11696 (GGA-TTG-CCA-AGC-CCA-TGG-TG, SEC ID NÚM: 18), que es complementario a la posición 96-115 del ADNc, un sitio que incluye el codón de iniciación de la traducción (AUG). La Figura 8 muestra una curva dosis respuesta para ISIS 11696 y un control cifrado, ISIS 11866 (CTA-AGT-AGT-GCT-AGC-CGG-GA, SEC ID NÚM: 19). ISIS 11696 inhibía la expresión en la superficie celular de B7-2 en células COS-7 con una CI_{50} en el intervalo de 200-300 nM, mientras ISIS 11866 manifestaba una inhibición de menos del 20% a la concentración más elevada sometida a ensayo (1000 nM).

Con el fin de evaluar adicionalmente los oligonucleótidos antisentido B7-2 murinos, se utilizó la línea celular IC-21. La línea celular de monocitos/macrófagos IC-21 expresa tanto B7-1 como B7-2 murina (mB7-2) constitutivamente. Se puede lograr una inducción a doble de la expresión incubando las células en presencia de lipopolisacáridos (LPS; Gibco-BRL, Gaithersburg, MD) (Hathcock y col., Science, 1993, 262, 905).

Se sembraron células IC-21 (ATCC; Núm. de acceso TIB 186) a una confluencia del 80% en placas de 12 pocillos en medio DMEM con FCS al 10%. Se dejó que las células se adhirieran a la placa durante la noche. Al día siguiente, se separó el medio y las células se lavaron con PBS. Después se añadieron 500 \mul de OptiMem® (GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD) suplementado con 15 \mug/ml de Lipofectina® (GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD) a cada pocillo. Luego se añadieron los oligonucleótidos directamente al medio a las concentraciones indicadas. Tras incubar durante 4 horas, las células fueron lavadas con PBS e incubadas durante la noche en medio de cultivo suplementado con 15 \mug/ml de LPS. Al día siguiente, las células fueron cosechadas raspando, después fueron analizadas en cuanto a la expresión en la superficie celular mediante citometría de flujo.

ISIS 11696 e ISIS 11866 fueron administrados a las células IC-21 en presencia de Lipofectina® (GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD). Los resultados se muestran en la Figura 9. A una concentración de 10 \muM, ISIS 11696 inhibía la expresión de mB7-2 completamente (y disminuía los niveles de mB7-2 por debajo del nivel de expresión constitutivo), mientras el oligonucleótido de control cifrado, ISIS 11866, producía solamente una reducción del 40% en el nivel de expresión inducida. A una concentración de 3 \muM, los niveles de expresión inducida eran enormemente reducidos por ISIS 11696, mientras ISIS 11866 tenía un efecto pequeño.

Se prepararon los oligonucleótidos modificados, que comprenden sustituyentes en 2' (v.g., 2'-metoxi, 2'-metoxietoxi) y están dirigidos a transcritos alternativos de B7-1 murina (ISIS 12914, 12915, 13498, 13499) o B7-2 murina (ISIS 13100, 13100 y 13102). Estos oligonucleótidos son sometidos a ensayo en cuanto a su capacidad para modular B7 murina esencialmente según los métodos anteriores utilizando células IC-21 o COS-7 transfectadas con un clon de ADNc correspondiente al transcrito de B7 empalmado alternativamente apropiado.

Ejemplo 10 Modulación del rechazo de aloinjertos por oligonucleótidos

Se ha descrito previamente un modelo murino para evaluar compuestos en cuanto a su capacidad para inhibir el rechazo de aloinjerto de corazón (Stepkowski y col., J. Immunol., 1994, 153, 5336). Este modelo fue utilizado para evaluar la capacidad inmunosupresora de oligonucleótidos antisentido para proteínas B7 solos o combinados con oligonucleótidos antisentido para la molécula de adherencia intercelular-1 (ICAM-1).

Métodos

Los estudios sobre el rechazo de aloinjertos de corazón y los tratamientos con oligonucléotidos se realizaron esencialmente como se ha descrito previamente (Stepkowski y col., J. Immunol., 1994, 153, 5336). Entre los oligonucleótidos antisentido utilizados se incluían ISIS 11696, ISIS 3082 (dirigidos a ICAM-1) e ISIS 1082 (un oligonucleótido de control dirigido a la secuencia del gen UL-13 de herpesvirus). Las dosificaciones utilizadas fueron 1, 2, 2,5, 5 ó 10 mg/kg de oligonucleótido individual (como se indica más abajo); cuando se administraban combinaciones de oligonucleótidos, cada oligonucleótido era administrado a una dosificación de 1, 5 ó 10 mg/kg (dosificaciones de oligonucleótido totales de 2, 10 y 20 mg/kg, respectivamente). Los tiempos de supervivencia de los corazones transplantados y sus huéspedes fueron controlados y registrados.

Resultados

El tiempo medio de supervivencia para los ratones no tratados era de 8,2 \pm 0,8 días (7, 8, 8, 8, 9, 9 días). El tratamiento de los ratones durante 7 días con ISIS 1082 (SEC ID NÚM: 125, oligonucleótido de control no relacionado) reducía ligeramente los tiempos medios de supervivencia a 7,1 \pm 0,7 días (5 mg/kg/día; 6, 7, 7, 7, 8, 8) o 7,0 \pm 0,8 días (10 mg/kg/día; 6, 7, 7, 8). El tratamiento de los ratones durante siete días con el oligonucleótido ISIS 11696 de B7-2 murino (SEC ID NÚM: 108) aumentaba el tiempo medio de supervivencia a 9,3 días a dos dosis (2 mg/kg/día, 9,3 \pm 0,6 días, 9, 9, 10; 10 mg/kg/día, 9,3 \pm 1,3 días, 8, 9, 9, 11). El tratamiento de los ratones durante siete días con un oligonucleótido ICAM-1, ISIS 3082, también incrementaba la supervivencia media de los ratones a numerosas dosis. Específicamente, a 1 mg/kg/día, el tiempo medio de supervivencia (MSD) era de 11,0 \pm 0,0 (11, 11, 11); a 2,5 mg/kg/día, el MSD era de 12,0 \pm 2,7 (10, 12, 13, 16); a 5 mg/kg/día, el MSD era de 14,1 \pm 2,7 (10, 12, 12, 13, 16, 16, 17, 17); y, a 10 mg/kg/día, el MSD era de 15,3 \pm 5,8 (12, 12, 13, 24). Se observó algún efecto sinérgico cuando los ratones fueron tratados durante siete días con 1 mg/kg/día de cada uno de ISIS 3082 y 11696; el MSD era de 13,8 \pm 1,0 (13, 13, 14, 15).

Ejemplo 11 Detección de ácidos nucleicos que codifican las proteínas B7

Los oligonucleótidos son radiomarcados tras la síntesis mediante marcaje con P^{32} en el extremo 5' con polinucleótido quinasa. Sambrook y col., "Molecular Cloning. A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, Volumen 2, págs. 11.31. El oligonucleótido radiomarcado capaz de hibridar con el ácido nucleico que codifica una proteína B7 se pone en contacto con una muestra de tejido o célula en la que supuestamente hay expresión de la proteína B7 en condiciones en las que se puede producir hibridación específica, y la muestra se lava para separar el oligonucleótido no unido. Se mantiene un control similar en el que el oligonucleótido radiomarcado se pone en contacto con una muestra de tejido o célula normal en condiciones que permiten la hibridación específica, y la muestra se lava para separar el oligonucleótido que no se ha unido. La radiactividad restante en las muestras indica el oligonucleótido unido y se cuantifica utilizando un contador de centelleo u otro medio rutinario. Una gran cantidad de radiactividad restante en las muestras, en comparación con los tejidos o células de control, indica un incremento de la expresión de B7, mientras una cantidad menor de radiactividad en las muestras en relación con los controles indica un descenso de la expresión de un gen B7.

Los oligonucleótidos radiomarcados de la invención también son útiles en la autorradiografía. Una sección de tejidos que supuestamente expresan un gen B7 es tratada con oligonucleótido radiomarcado y lavada como se ha descrito antes, después es expuesta a una emulsión fotográfica según los procedimientos de autorradiografía normalizados. También se mantiene un control de una sección de tejido normal. La emulsión, cuando se revela, rinde una imagen de granos de plata sobre las regiones que expresan un gen B7, que es cuantificado. El grado de expresión de B7 se determina mediante comparación de los granos de plata observados con las muestras de control y ensayo.

En los análisis análogos para la detección fluorescente de la expresión de un gen B7 se utilizan oligonucleótidos de la invención que están marcados con fluoresceína u otras etiquetas fluorescentes. Los oligonucleótidos marcados son sintetizados en un sintetizador de ADN automatizado (Applied Biosystems, Foster City, CA) utilizando la química de la fosforamidita normalizada. Las b-cianoetildiisopropil-fosforamiditas son adquiridas de Applied Biosystems (Foster City, CA). Las amiditas marcadas con fluoresceína son adquiridas de Glen Research (Sterling, VA). La incubación del oligonucleótido y la muestra biológica se llevan a cabo como se ha descrito antes para los oligonucleótidos radiomarcados, excepto que, en lugar de un contador de centelleo, se utiliza un microscopio de fluorescencia para detectar la fluorescencia. Una mayor cantidad de fluorescencia en las muestras, en comparación con los tejidos o las células de control, indica un incremento de la expresión de un gen B7, mientras una cantidad menor de fluorescencia en las muestras en relación con los controles indica un descenso de la expresión de un gen B7.

(1) INFORMACIÓN GENERAL:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

SOLICITANTES: Clarence Frank Benett, Timothy A. Vickers

\vskip0.800000\baselineskip

(ii)

TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Composiciones de Oligonucleótidos y Métodos para la Modulación de la Expresión de Proteínas B7

\vskip0.800000\baselineskip

(iii)

NÚMERO DE SECUENCIAS: 125

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

DIRECCIONES DE CORRESPONDENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

DESTINATARIO: Law Offices of Jane Massey Licata

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

CALLE: 66 E. Main Street

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CIUDAD: Marlton

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

ESTADO: NJ

\vskip0.500000\baselineskip

(E)

PAÍS: Estados Unidos

\vskip0.500000\baselineskip

(F)

CÓDIGO POSTAL: 08053

\vskip0.800000\baselineskip

(v)

FORMA LEGIBLE CON EL ORDENADOR:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

TIPO DE MEDIO: DISQUETE, 3,5 PULGADAS, 1,44 MB ALMACENAMIENTO

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

ORDENADOR: IBM PS/2

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

SOPORTE LÓGICO: WORDPERFECT 5.1

\vskip0.800000\baselineskip

(vi)

DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

NÚMERO DE SOLICITUD: n/a

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

FECHA DE SOLICITUD: Adjunta

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CLASIFICACIÓN:

\vskip0.800000\baselineskip

(vii)

DATOS DE LA SOLICITUD ANTERIOR:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

NÚMERO DE SOLICITUD:

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

FECHA DE SOLICITUD:

\vskip0.800000\baselineskip

(viii)

INFORMACIÓN DEL APODERADO/AGENTE:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

NOMBRE: Jane Massey Licata

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

NÚMERO DE REGISTRO: 32.257

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

NÚMERO DE REFERENCIA/MARBETE: ISPH-0244

\vskip0.800000\baselineskip

(ix)

INFORMACIÓN DE TELECOMUNICACIÓN:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

TELÉFONO: (609) 779-2400

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TELEFAX: (609) 810-1454

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 1

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 32

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: No

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 1:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GATCAGGGTA CCAGGAGCCT TAGGAGGTAC GC

\hfill

32

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 2:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 33

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 2:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GATAGCCTCG AGTTATTTCC AGGTCATGAG CCA

\hfill

33

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 3

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 3:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TTCCAGGTCA TGAGCCATTA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 4

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 4:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CATAAGGTGT GCTCTGAAGT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 5

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 5:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TTACTCATGG TAATGTCTTT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 6

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 6:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

ATTAAAAACA TGTATCACTT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 7

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 7:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGAACACAGA AGCAAGGTGG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 8:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 8:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CCGTACCTCC TAAGGCTCCT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 9:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 9:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CCCATAGTGC GTTCACAAAT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 10:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 10:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCACAGCAGC ATTCCCAAGG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 11:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 11:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TTGCAAATTG GCATGGCAGG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 12:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 21

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 12:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TGGTATGGGC TTTACTCTTT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 13:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 13:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AAAAGGTTGC CCAGGAACGG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 14:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 14:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGGAGTCCTG GAGCCCCCTT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 15:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 15:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CCATTAAGCT GGGCTTGGCC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 16:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 16:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TGCGAGCTCC CCGTACCTCC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 17:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(x)

INFORMACIÓN DE LA PUBLICACIÓN:

\vskip0.500000\baselineskip

(H)

NÚMERO DE DOCUMENTO: US 5514788

\vskip0.500000\baselineskip

(I)

FECHA DE PRESENTACIÓN: 17-MAYO-1993

\vskip0.500000\baselineskip

(J)

FECHA DE PUBLICACIÓN: 07-MAYO-1996

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 17:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCCCAAGCTG GCATCCGTCA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 18:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 18:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGATTGCCAA GCCCATGGTG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 19:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 19:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CTAAGTAGTG CTAGCCGGGA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 20:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 38

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: No

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 20:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GATCAGGGTA CCCCAAAGAA AAAGTGATTT GTCATTGC

\hfill

38

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 21:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 35

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 21:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GATAGCCTCG AGGATAATGA ATTGGCTGAC AAGAC

\hfill

35

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 22:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 22:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGGTAAGACT CCACTTCTGA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 23:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 23:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGGTCTCCAA AGGTTGTGGA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 24:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 24:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GTTCCTGGGT CTCCAAAGGT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 25:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 25:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

ACACACAGAG ATTGGAGGGT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 26:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 26:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCTCACGTAG AAGACCCTCC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 27:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 27:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGCAGGGCTG ATGACAATCC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 28:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 28:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TGCAAAACAG GCAGGGCTGA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 29:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 29:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AGACCAGGGC ACTTCCCAGG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 30:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 30:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CCTGCCTCCG TGTGTGGCCC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 31:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 31:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GACCAGCCAG CACCAAGAGC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 32:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 32:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CCACAGGACA GCGTTGCCAC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 33:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 33:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CCGGTTCTTG TACTCGGGCC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 34:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 34:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CCAACCAGGA GAGGTGAGGC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 35:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 35:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGCAAAGCAG TAGGTCAGGC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 36:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 36:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCCTCATGAT CCCCACGATC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 37:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 37:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AGTCCTACTA CCAGCCGCCT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 38:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 38:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TCAGGGTAAG ACTCCACTTC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 39:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 39:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AGGGTGTTCC TGGGTCTCCA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 40:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 40:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CTCCGTGTGT GGCCCATGGC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 41:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 41:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGATGGTGAT GTTCCCTGCC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 42:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 42:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TGAGAAAGAC CAGCCAGCAC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 43:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 43:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGGCGCAGAG CCAGGATCAC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 44:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 44:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGCCCAGGAT GGGAGCAGGT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 45:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 45:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AGGGCGTACA CTTTCCCTTC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 46:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 46:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CAGCCCCTTG CTTCTGCGGA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 47:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 47:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AAGGAGAGGG ATGCCAGCCA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 48:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 22

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 48:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CTGTTACTTT ACAGAGGGTT TG

\hfill

22

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 49:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 25

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 49:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CTTCTGTTAC TTTACAGAGG GTTTG

\hfill

25

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 50:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 21

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 50:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CTGTTACTTT ACAGAGGGTT T

\hfill

21

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 51:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 51:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCCCTCGTCA GATGGGCGCA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 52:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 52:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AGTCCTACTA CCAGCCGCCT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 53:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 53:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AGTAAGAGTC TATTGAGGTA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 54:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 54:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGTTGAGTTT CACAACCTGA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 55:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 55:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GTCCACAGAA TGGAACAGAG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 56:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 56:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGCATCCACC CGGCAGATGC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 57:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 57:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TGGATGGCAT CCACCCGGCA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 58:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 58:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AGGCACCTCC TAGGCTCACA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 59:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 59:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCCAATGGAG CTTAGGCACC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 60:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 60:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CATGATGGGG AAAGCCAGGA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 61:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 61:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AATTGCAAGC CATAGCTTCA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 62:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 62:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CGGCAAGGCA GCAATACCTT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 63:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 63:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CCCAGCAATG ACAGACAGCA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 64:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 64:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGTCTGAAAG GACCAGGCCC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 65:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 65:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TGGGAAACCC AAGGAAGCAA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 66:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 66:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGCTTTGGGA AACCCCCGGA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 67:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 67:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TCAGATTCAG GATCCTGGGA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 68:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 68:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CCCAGGTGAA GTCCTCTGAC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 69:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 69:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CTGCGCCGAA TCCTGCCCCA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 70:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 70:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CAGGCCCGAA GGTAAGGCTG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 71:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 71:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TCAGCTAGCA CGGTGCTGAA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 72:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 72:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGCCCAGCAA ACTTGCCCGT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 73:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 73:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CCACCACAGT GGGCTCAGCC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 74:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 19

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 74:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGCCATGAGG GCAATCTAA

\hfill

19

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 75:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 21

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 75:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GTGGCCATGA GGGCAATCTA A

\hfill

21

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 76:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 76:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GATTTAACAT TTGGCGCCCA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 77:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 77:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AAAGTTACAA CATTATATCT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 78:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 78:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AGTGCGATTC TCAAACCTAC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 79:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 16

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 79:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TATTTGCGAG CTCCCC

\hfill

16

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 80:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 15

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 80:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TATTTGCGAG CTCCC

\hfill

15

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 81:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 14

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 81:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TATTTGCGAG CTCC

\hfill

14

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 82:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 82:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CGACAGCTCC TGCGCTCCTC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 83:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 16

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 83:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AGCTCCCCGT ACCTCC

\hfill

16

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 84:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 16

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 84:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TGCGAGCTCC CCGTAC

\hfill

16

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 85:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 10

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 85:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CTCCCCGTAC

\hfill

10

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 86:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 11

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 86:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCTCCCCGTA C

\hfill

11

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 87:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 12

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 87:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AGCTCCCCGT AC

\hfill

12

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 88:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 88:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GAGCTCCCCG TAC

\hfill

13

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 89:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 14

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 89:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CGAGCTCCCC GTAC

\hfill

14

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 90:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 15

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 90:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCGAGCTCCC CGTAC

\hfill

15

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 91:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 13

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 91:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCGAGCTCCC CGT

\hfill

13

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 92:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 15

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 92:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCCGCCGCCA AGTCT

\hfill

15

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 93:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 24

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 93:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GAGAAGCAAA GCTTTCACCC TGTG

\hfill

24

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 94:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 22

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 94:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GAAGCAAAGC TTTCACCCTG TG

\hfill

22

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 95:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 19

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 95:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCAAAGCTTT CACCCGTGT

\hfill

19

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 96:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 24

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 96:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CTCCCCGTAC CTCCTAAGGC TCCT

\hfill

24

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 97:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 22

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 97:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CCCCGTACCT CCTAAGGCTC CT

\hfill

22

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 98:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 19

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 98:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CGTACCTCCT AAGGCTCCT

\hfill

19

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 99:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 32

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: No

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 99:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GATCAGGGTA CCAAGAGTGG CTCCTGTAGG CA

\hfill

32

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 100:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 32

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: No

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 100:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GATAGCCTCG AGGTAGAATT CCAATCAGCT GA

\hfill

32

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 101:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 32

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(x)

INFORMACIÓN DE LA PUBLICACIÓN

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

AUTORES: Stepkowski, Stanislaw M.

\hskip4,7cm Tu, Zizheng

\hskip4,7cm Condon, Thomas P.

\hskip4,7cm Bennett, C. Frank

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TÍTULO: Bloqueo del Rechazo de Aloinjerto de Corazón mediante Oligonucleótido Antisentido de la Molécula de Adherencia Intercelular-1 Solo o Combinado con Otras Modalidades Inmunosupresoras

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

REVISTA: The Journal of Immunology

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

VOLUMEN: 153

\vskip0.500000\baselineskip

(F)

PAGINAS: 5336-5346

\vskip0.500000\baselineskip

(G)

FECHA: 01-DIC-1994

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 101:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TGCATCCCCC AGGCCACCAT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 102:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 21

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(x)

INFORMACIÓN DE LA PUBLICACIÓN

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

AUTORES: Stepkowski, Stanislaw M.

\hskip4,7cm Tu, Zizheng

\hskip4,7cm Condon, Thomas P.

\hskip4,7cm Bennett, C. Frank

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TÍTULO: Bloqueo del Rechazo de Aloinjerto de Corazón mediante Oligonucleótido Antisentido de la Molécula de Adherencia Intercelular-1 Solo o Combinado con Otras Modalidades Inmunosupresoras

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

REVISTA: The Journal of Immunology

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

VOLUMEN: 153

\vskip0.500000\baselineskip

(F)

PAGINAS: 5336-5346

\vskip0.500000\baselineskip

(G)

FECHA: 01-DIC-1994

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 102:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCCGAGGTCC ATGTCGTACG C

\hfill

21

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 103:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 103:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

ACACGTCTACA GGAGTCTGG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 104:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 104:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CAAGCCCATG GTGCATCTGG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 105:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 105:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CTGGGGTCCA TCGTGGGTGC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 106:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 106:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CCGTGCTGCC TACAGGAGCC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 107:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 107:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGTGCTTCCG TAAGTTCTGG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 108:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 108:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGATTGCCAA GCCCATGGTG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 109:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 109:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CTAAGTAGTG CTAGCCGGGA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 110:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 110:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TGCGTCTCCA CGGAAACAGC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 111:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 111:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GTGCGGCCCA GGTACTTGGC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 112:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 112:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

ACAAGGAGGA GGGCCACAGT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 113:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 113:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TGAGAGGTTT GGAGGAAATC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 114:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 114:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GATAGTCTCT CTGTCAGCGT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 115:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 115:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GTTGCTGGGC CTGCTAGGCT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 116:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 116:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CTAGGTCTCG TCGTCGGTGG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 117:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 117:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TCTCACTGCC TTCACTCTGC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 118:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 21

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 118:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GTACCAGATG AAGGTTATCA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 119:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 119:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

CTTTGGAGAT TATTCGAGTT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 120:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 120:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCAAGTGTAA AGCCCTGAGT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 121:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 121:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

AGAATTCCAA TCAGCTGAGA

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 122:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 122:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TCTGAGAAAC TCTGCACTTC

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 123:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 123:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

TCCTCAGGCT CTCACTGCCT

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 124:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 20

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 124:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GGTTGTTCAA GTCCGTGCTG

\hfill

20

\vskip1.000000\baselineskip

(2) INFORMACIÓN PARA LA SEC ID NÚM: 125:

\vskip0.800000\baselineskip

(I)

CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:

\vskip0.500000\baselineskip

(A)

LONGITUD: 21

\vskip0.500000\baselineskip

(B)

TIPO: Ácido Nucleico

\vskip0.500000\baselineskip

(C)

CUALIDAD DE LA HEBRA: Sencilla

\vskip0.500000\baselineskip

(D)

TOPOLOGÍA: Lineal

\vskip0.800000\baselineskip

(iv)

ANTI-SENTIDO: Si

\vskip0.800000\baselineskip

(xi)

DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NÚM: 125:

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

GCCGAGGTCC ATGTCGTAGC C

\hfill

21

Claims (20)

1. Un oligonucleótido que comprende de 20 a 30 nucleótidos conectados por enlaces covalentes donde dicho oligonucleótido tiene una secuencia hibridable específicamente con un ácido nucleico que codifica la proteína B7-1 humana y dicho oligonucleótido modula la expresión de dicha proteína B7-1 humana, comprendiendo dicha secuencia de nucleótidos la SEC ID NÚM: 36.

2. Un oligonucleótido que comprende de 20 a 30 nucleótidos conectados por enlaces covalentes donde dicho oligonucleótido tiene una secuencia hibridable específicamente con un ácido nucleico que codifica la proteína B7-2 humana y dicho oligonucleótido modula la expresión de dicha proteína B7-2 humana, comprendiendo dicha secuencia de nucleótidos la SEC ID NÚM: 3, la SEC ID NÚM: 9 o la SEC ID NÚM: 16.

3. El oligonucleótido de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde al menos uno de dichos enlaces covalentes es un enlace covalente modificado.

4. El oligonucleótido de la reivindicación 3, donde dicho enlace covalente modificado se selecciona del grupo formado por un enlace fosforotioato, un enlace fosfotriéster, un enlace metilfosfonato, un enlace metilen(metilimino), un enlace morfolino, un enlace amida, un enlace poliamida, un enlace inter-azúcar alquilo de cadena corta, un enlace inter-azúcar cicloalquilo, un enlace inter-azúcar heteroatómico de cadena corta y un enlace inter-azúcar heterocíclico.

5. El oligonucleótido de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde al menos uno de dichos nucleótidos tiene un radical azúcar modificado.

6. El oligonucleótido de la reivindicación 5, donde dicho radical azúcar es una modificación en la posición 2' de cualquier nucleótido, la posición 3' del nucleótido 3'-terminal o la posición 5' del oligonucleótido 5' terminal.

7. El oligonucleótido de la reivindicación 6, donde dicha modificación se selecciona del grupo formado por una sustitución de un grupo azido por un grupo hidroxilo 3' y una sustitución de un átomo de hidrógeno por un grupo hidroxilo 3' o 5'.

8. El oligonucleótido de la reivindicación 6, donde dicha modificación es una sustitución o una adición en la posición 2' de un radical seleccionado del grupo formado por -OH, -SH, -SCH3, -F, -OCN, -OCH3OCH3, -OCH3O(CH2)nCH3, -O(CH,),NH, o O(CH2)nCH3 donde n es de 1 a aproximadamente 10; un grupo alquilo inferior C_{1}-C_{10}, un grupo alcoxialcoxi, un grupo alquilo inferior sustituido, un grupo alcarilo sustituido, o un grupo aralquilo sustituido, -Cl, -Br, -CN, -CF3, -OCF3, un grupo O-alquilo, un grupo S-alquilo, un grupo N-alquilo; un grupo O-alquenilo, un grupo S-alquenilo, un grupo N-alquenilo, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, un grupo heterocicloalquilo, un grupo heterocicloalcarilo, un grupo aminoalquilamino, un grupo polialquilamino, un grupo sililo sustituido, un grupo que escinde ARN, un grupo informador, un intercalador de ADN, un grupo para mejorar las propiedades farmacocinéticas de un oligonucleótido, un grupo para mejorar las propiedades farmacodinámicas de un oligonucleótido, un grupo metoxietoxi y un grupo metoxi.

9. El oligonucleótido de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde al menos uno de dichos nucleótidos tiene una base nucleotídica modificada.

10. El oligonucleótido de la reivindicación 9, donde dicha base nucleotídica modificada se selecciona del grupo formado por hipoxantina, 5-metilcitosina, 5-hidroximetilcitosina, glicosil 5-hidroximetilcitosina, gentiobiosil 5-hidroximetilcitosina, 5-bromouracilo, 5-hidroximetiluracilo, 6-metiladenina, N6-(6-aminohexil)adenina, 8-azaguanina, 7-desazaguanina y 2,6-diaminopurina.

11. Un oligonucleótido de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde dicho oligonucleótido comprende al menos un radical lipófilo que intensifica la absorción celular de dicho oligonucleótido.

12. El oligonucleótido de la reivindicación 11, donde dicho radical lipófilo se selecciona del grupo formado por un radical colesterol, un radical colesterilo, ácido cólico, un tioéter, un tiocolesterol, una cadena alifática, un fosfolípido, una cadena poliamínica, una cadena de polietilenglicol, ácido adamantanoacético, un radical palmitilo, un radical octadecilamino y un radical hexilamino-carbonil-oxicolesterol.

13. Una composición farmacéutica que comprende un oligonucleótido de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2 y un portador farmacéuticamente aceptable.

14. Una composición farmacéutica que comprende un oligonucleótido de la reivindicación 11 y un portador farmacéuticamente aceptable.

15. Una composición farmacéutica que comprende:

(a)

un agente anti-inflamatorio o inmunosupresor seleccionado del grupo formado por una proteína ICAM soluble, un producto conjugado anticuerpo-toxina, prednisona, metilprednisolona, azatioprina, ciclofosfamida, ciclosporina, un interferón, un agente simpatomimético, un antagonista del receptor de histamina H_{1}, y un antagonista del receptor de histamina H_{2};

(b)

un oligonucleótido de la reivindicación 1 o la reivindicación 2; y

(c)

un portador farmacéuticamente aceptable;

16. Una composición farmacéutica que comprende:

(a)

un oligonucleótido que comprende de 8 a 30 nucleótidos conectados mediante enlaces covalentes, donde al menos uno de dichos enlaces covalentes es un enlace distinto de un enlace fosfodiéster, donde dicho oligonucleótido tiene una secuencia específicamente hibridable con un ácido nucleico que codifica una proteína ICAM y dicho oligonucleótido modula la expresión de dicha proteína ICAM;

(b)

un oligonucleótido de la reivindicación 1 o la reivindicación 2; y

(c)

un portador farmacéuticamente aceptable.

17. Una composición farmacéutica que comprende:

(a)

un oligonucleótido de la reivindicación 1;

(b)

un oligonucleótido de la reivindicación 2; y

(c)

un portador farmacéuticamente aceptable.

18. Una composición farmacéutica que comprende:

(a)

un agente anti-inflamatorio o inmunosupresor seleccionado del grupo formado por una proteína ICAM soluble, un producto conjugado anticuerpo-toxina, prednisona, metilprednisolona, azatioprina, ciclofosfamida, ciclosporina, un interferón, un agente simpatomimético, un antagonista del receptor de histamina H_{1}, un antagonista del receptor de histamina H_{2} y un oligonucleótido que modula la expresión de una proteína ICAM;

(b)

un oligonucleótido de la reivindicación 1;

(c)

un oligonucleótido de la reivindicación 2; y

(d)

un portador farmacéuticamente aceptable;

19. Un oligonucleótido según la reivindicación 1 o la reivindicación 2 para su uso en terapia.

20. El uso de un oligonucleótido según la reivindicación 1 o la reivindicación 2 en la fabricación de un medicamento para tratar la inflamación o una enfermedad autoinmune en un animal.