ES2219530T3

ES2219530T3 - Compuestos aminotiolesteres, composiciones farmaceuticas y cosmeticas que los contienen y utilizaciones.

Info

Publication number: ES2219530T3
Application number: ES01940654T
Authority: ES
Inventors: Guy Fournet; Gerard Antony Quash; Jacques Gore
Original assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Current assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Priority date: 2000-05-31
Filing date: 2001-05-31
Publication date: 2004-12-01
Anticipated expiration: 2021-05-31
Also published as: DE60102925T2; DE60102925D1; AU2001274171A1; ATE264839T1; AR028122A1; WO2001092220A1; JP4855626B2; FR2809727A1; EP1296946A1; US20070032476A1; JP2003535076A; FR2809727B1; EP1296946B1; US8026231B2

Abstract

Compuesto, caracterizado por el hecho que corresponde con la fórmula en la cual: - R1 R2 y R3, independientemente, representan un radical alquilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono, saturado o insaturado, cíclico, lineal o ramificado o un radical arilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono, o un radical aralquilo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono o tomados juntos forman un ciclo alquilo saturado que tiene de 3 a 7 átomos de carbono, - R4 representa un radical alquilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono saturado o insaturado, cíclico, lineal o ramificado o un radical arilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono o un radical aralquilo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, - R5 y R6, independientemente, representan un radical alquilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono saturado o insaturado, cíclico, lineal o ramificado o un radical arilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono, o un radical aralquilo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono o tomados juntos forman con el átomo de nitrógeno unheterociclo nitrogenado saturado o insaturado que tiene de 2 a 6 átomos de carbono, opcionalmente sustituido por un oxígeno, un azufre o por un átomo de nitrógeno opcionalmente sustituido por un radical alquilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono saturado o insaturado, cíclico lineales o ramificados o un radical arilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono o un radical aralquilo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, - R7 representa un átomo de hidrógeno, un radical alquilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono saturado o insaturado cíclico, lineal o ramificado o un radical arilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono o un radical aralquilo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, y - X representa un ion halogenuro, o un anión nitrato, sulfato, sulfonato, carboxilato, tiocianato, o fosfato.

Description

Compuestos aminotiolésteres, composiciones farmacéuticas que los contienen y utilizaciones.

La presente invención tiene por objeto compuestos de aminotiolésteres de fórmula (I) así como su utilización como agentes inductores de la apoptosis celular. Los compuestos según la invención tienen una marcada actividad como agentes inductores de la apoptosis y encuentran sus aplicaciones más particularmente en el tratamiento tópico y sistémico de cánceres y precánceres, afecciones dermatológicas, reumáticas y oftalmológicas.

La presente invención tiene igualmente por objeto una composición farmacéutica o cosmética que contiene, como agente activo, al menos un compuesto de aminotioléster de fórmula (I), en un excipiente fisiológicamente aceptable.

Por el término "apoptosis", se entiende el fenómeno de muerte celular tal y como se ha descrito, entre otros autores, por KERR J.F.R. y col., J. Cancer, 265, 239 (1972). La apoptosis, que es una forma altamente selectiva de suicidio celular, se caracteriza por fenómenos morfológicos y bioquímicos fácilmente observables. Así, se observa una condensación de la cromatina asociada o no a una actividad endonucleásica, la formación de cuerpos apoptóticos y una fragmentación del ácido desoxirribonucléico (ADN) debida al hecho de la activación de las endonucleasas, en fragmentos de ADN de 180-200 pares de bases que dan un perfil fácilmente reconocible por electroforesis sobre gel de agarosa.

La apoptosis está implicada en el desarrollo, la diferenciación y la renovación de tejidos. La inducción de la apoptosis presenta pues un gran interés desde el punto de vista terapéutico, pero igualmente desde el punto de vista cosmético.

Una gran variedad de medicamentos anticancerosos naturales o sintéticos actualmente disponibles son compuestos inductores de la apoptosis.

Entre estos medicamentos antineoplásicos, se pueden citar los agentes alquilantes tales como la ciclofosfamida, las nitrosoureas tales como la 1,3-bis-(2-cloroetil)-1-nitrosourea (BCNU), los agentes intercalantes tales como la actinomicina D o la adriamicina, los análogos de las bases púricas o pirimidínicas tales como la 6-tioguanina y el 5-fluoruracilo, los inhibidores de la síntesis de novo de las bases púricas tales como el metotrexato y finalmente, los inhibidores de la polimerización de la tubulina tales el Taxol®.

Por otra parte, el solicitante ha propuesto ya, especialmente en la solicitud de patente WO 96/20701, utilizar un compuesto inductor de la apoptosis escogido entre metional, malonaldehído y cualquier factor que permita aumentar la tasa intracelular de estos compuestos, es decir que tenga una acción sobre el metabolismo del metional representado por memoria en la Figura 1 (QUASH y col., Biochem. J. 305, 1017 (1995)).

Se ha descrito igualmente, en esa misma solicitud de patente, como factor que aumenta la tasa intracelular del metional, inhibidores del ácido 4-metiltio-2-oxobutanoico (MTOB) transaminasa, compuestos de ésteres de L-metionina y de piridoxal. La MTOB transaminasa es una enzima implicada en la conversión del ácido 4-metiltio-2-oxobutanoico en metionina, la utilización de estos compuestos favorece la acumulación de MTOB, precursor directo del metional (Figura 1) (ROCH y col., Biochem. J. 313, 973 (1996)).

Uno de los principales inconvenientes de la utilización de estas sustancias es la ausencia de una actividad apoptótica selectiva de las células tumorales. Así, continúa siendo necesario disponer de moléculas que induzcan una apoptosis máxima en el tejido tumoral, afectando lo menos posible y de forma reversible a los tejidos sanos del organismo.

Con el fin de solventar esta ausencia de selectividad, el solicitante ha descrito en la solicitud de patente WO 98/44919, la utilización de derivados de aminotiolésteres, como el tioampal, dado que los inhibidores de la enzima aldehído deshidrogenasa (ALDH), enzima implicada en la conversión del metional en ácido metiltiopropiónico, favorecen así la acumulación de metional. Estos compuestos son inhibidores selectivos del crecimiento de células transformadas resistentes a la apoptosis debida al hecho de la sobreexpresión del gen bcl_{2}.

Tales compuestos están pues destinados más específicamente a tratar las patologías caracterizadas por una sobreexpresión del gen bcl_{2} tales como los cánceres de mama, linfomas de células B, leucemias, neuroblastomas, adenocarcinomas de próstata, prolactinomas y otros adenomas pituitarios.

Sin embargo, estos derivados de aminotiolésteres son delicados de preparar. En efecto, sus procedimientos de preparación presentan un rendimiento que no supera el 20%. La mayoría de estos compuestos presentan problemas de estabilidad y deben ser conservados a temperaturas de aproximadamente -20ºC para evitar su degradación.

Sería pues deseable, poner a punto nuevos compuestos que fueran estables y fáciles de preparar con buenos rendimientos y que permitieran inhibir de forma selectiva el crecimiento de células transformadas resistentes a la apoptosis debida al hecho de la sobreexpresión del gen bcl_{2}.

Este es el objeto de la presente invención que se refiere a nuevos compuestos de aminotiolésteres, que pueden estar representados por la fórmula general (I) siguiente:

1

en la cual

- R_{1} representa:

2

- R_{2} y R_{3}, independientemente, representan un radical alquilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono, saturado o insaturado, cíclico, lineal o ramificado o un radical arilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono, o un radical aralquilo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono o tomados juntos forman un ciclo alquilo saturado que tiene de 3 a 7 átomos de carbono,

- R_{4} representa un radical alquilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono saturado o insaturado, cíclico, lineal o ramificado o un radical arilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono o un radical aralquilo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono,

- R_{5} y R_{6}, independientemente, representan un radical alquilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono saturado o insaturado, cíclico, lineal o ramificado o un radical arilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono, o un radical aralquilo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono o tomados juntos forman con el átomo de nitrógeno un heterociclo nitrogenado saturado o insaturado que tiene de 2 a 6 átomos de carbono, opcionalmente sustituido por un oxígeno, un azufre o por un átomo de nitrógeno opcionalmente sustituido por un radical alquilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono saturado o insaturado, cíclico lineales o ramificados o un radical arilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono o un radical aralquilo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono,

- R_{7} representa un átomo de hidrógeno, un radical alquilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono saturado o insaturado cíclico, lineal o ramificado o un radical arilo que tiene de 1 a 7 átomos de carbono o un radical aralquilo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, y

- X representa un ion halogenuro, o un anión nitrato, sulfato, sulfonato, carboxilato, tiocianato, o fosfato.

Entre los radicales alquilos cíclicos que tiene de 3 a 7 átomos de carbono, se pueden citar especialmente los radicales ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo.

Entre los radicales alquilos saturados lineales que tienen de 1 a 7 átomos de carbono, se pueden citar especialmente los radicales metilo, etilo, n-propilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo o n-heptilo.

Entre los radicales alquilos saturados y ramificados que tienen de 1 a 7 átomos de carbono, se pueden citar especialmente los radicales i-propilo, t-butilo, 2-butilo, 2-pentilo, i-pentilo, 2-hexilo, 3-hexilo, 2-heptilo, 3-heptilo o i-heptilo.

Entre los radicales alquilos insaturados que tienen de 1 a 7 átomos de carbono, se pueden citar especialmente el radical alilo o vinilo.

Por radical aralquilo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono, se entiende un radical fenilo opcionalmente sustituido por radicales alquilos lineales o ramificados que tienen de 1 a 5 átomos de carbono unidos a una cadena alquilo lineal saturada que tiene de 1 a 5 átomos de carbono tales como radical bencilo opcionalmente sustituido por un radical alquilo que tiene de 1 a 5 átomos de carbono, los radicales 1-fenil etilo, 1-fenil propilo, 1-fenil butilo, 1-fenil pentilo.

Entre los radicales arilos que tienen de 1 a 7 átomos de carbono, se pueden citar especialmente los radicales fenilo, tolilo, clorofenilo, nitrofenilo, metoxifenilo, tiofeno o furano. Entre los heterociclos nitrogenados se pueden especialmente citar pirrolidina, piperidina, morfolina, tiamorfolina, piperazina, homopiperazina o N-metil piperazina.

Entre los halogenuros se pueden citar los fluoruros, cloruros, bromuros y en particular los yoduros.

\newpage

Entre los compuestos de fórmula (I) que entran en el marco de la presente invención, se pueden especialmente citar los siguientes:

Nº	Compuestos
1-	4-Dimetilamino-4-metil-pent-2-intioato de S-metilo
2-	Yoduro de 4-metil-4-trimetilamonio-pent-2-intioato
	de S-metilo
3-	4-Di-n-propilamino-4-metil-pent-2-intioato de S-metilo
4-	4-Metil-4-pirrodin-1-il-pent-2-intioato de S-metilo
5-	4-Metil-4-morfolin-4-il-pent-2-intioato de S-metilo

Según la presente invención, los compuestos de fórmula (1) más particularmente preferidos son aquellos que al menos una de las condiciones citadas a continuación se respeta:

- R_{2} y R_{3}, representan un radical metilo;

- R_{4} representa un radical metilo;

- R_{5} y R_{6}, independientemente, representan un radical alquilo que tiene de 1 a 3 átomos de carbono o tomados juntos forman con el átomo de nitrógeno un heterociclo nitrogenado elegido entre pirrolidina, piperidina o morfolina;

- R_{7} representa un radical metilo o un átomo de hidrógeno;

- y X representa un ion yoduro, un ion formiato o un ion carboxilato.

La presente invención tiene igualmente por objeto los procedimientos para la preparación de los compuestos de fórmula (I).

Los compuestos de fórmula (I) (R_{1} = N(R_{5}R_{6})) según la invención pueden obtenerse según el esquema de reacción mostrado en la figura 2. El procedimiento de síntesis consiste en hacer reaccionar el butillitio sobre una amina propargílica de fórmula (III) en THF. El acetiluro de litio intermedio formado se hace reaccionar con oxisulfuro de carbono (COS) seguido con yoduro de R_{4}I. Se obtiene así el tioléster de fórmula (I) (R_{1} = N(R_{5}R_{6})) con un rendimiento próximo al 70%.

Se puede igualmente realizar, como se muestra en la figura 3, la reacción del acetiluro de litio intermedio directamente sobre un ditiocarbonato de dialquilo o diarilo de fórmula (IV). Estos compuestos están abundantemente descritos, por ejemplo, cuando R4 representa un radical metilo [DOUGLASS, I.B., WARNER, G.H., 78, 6070-6071, (1956)].

La preparación de las aminas propargílicas de fórmula (III) puede realizarse según el método de HENNION, G.F., BOISELLE, A.P., J. Am. Chem. Soc., 26, 725-727, (1961). Como se presenta en la figura 4, este método consiste en una cloración del alcohol terciario de fórmula (V) en medio ácido clorhídrico en presencia de cobre y cloruro cuproso con un rendimiento próximo al 70%.

El alcohol puede prepararse, por ejemplo, a partir de la cetona de fórmula R_{2}COR_{3} y de un acetiluro.

El cloruro propargílico de fórmula (VI) se somete seguidamente a la acción de la amina de fórmula R_{5}NHR_{6} según [HENNION, G.F., NELSON, K.W., J. Am. Chem. Soc., 79, 2142-2144, (1957) y HENNION, G.F., HANZEL, R.F., J. Am. Chem. Soc., 82, 4908-4912, (1960)].

Los compuestos de fórmula (I) (R1 = N^{+}(R_{5}R_{6}R_{7}),X^{-}) según la invención, pueden ser sintetizados según el esquema de reacción de la figura 5. El procedimiento de síntesis consiste en hacer reaccionar el halogenuro R_{7}X (preferiblemente, el yoduro) o bien el ácido mineral u orgánico (R_{7} = H) sobre el compuesto de fórmula (I) (R_{1} = N(R_{5}R_{6}). Los rendimientos son próximos al 70%.

Así, dado que la síntesis de los compuestos de la solicitud de patente WO 98/44919 precisaba de una delicada etapa de desprotección de la amina propargílica que impedía la preparación a gran escala de estos compuestos, la síntesis de los compuestos de la presente invención presenta la ventaja de ser más simple y de poderse desarrollar a gran escala, con mejores rendimientos.

Estos nuevos compuestos presentan además la ventaja de ser más estables y sobre todo mucho más activos en la inhibición del crecimiento de células transformadas resistentes a la apoptosis debida al hecho de la sobreexpresión del gen bcl_{2} que los descritos en la solicitud de patente WO 98/44919, tales como el tioampal.

Los compuestos según la invención tienen igualmente la ventaja de ser activos en la inhibición del crecimiento de células transformadas resistentes a la apoptosis no solo debida al hecho de la sobreexpresión del gen bcl_{2} sino también debida al hecho de la expresión de enzimas ALDH (ALDH1, ALDH2 y/o ALDH3), la sobreexpresión del gen MDR "Multi Drug Resistant" o del gen BCL-X_{L} que amplía su campo de utilización.

Así, la presente invención se refiere igualmente a la utilización de al menos un derivado de aminotioléster de fórmula (I) para la preparación de una composición farmacéutica destinada a aumentar la inhibición de un carácter resistente a la inducción de la apoptosis de células transformadas, siendo este carácter debido al gen bcl_{2}, al gen MDR o al gen BCL-X_{L} presente en estas células, o a la actividad de la ALDH.

La presente invención se refiere igualmente al uso de al menos un derivado de aminotioléster de fórmula (I) para la preparación de una composición farmacéutica destinada a aumentar la elevación del carácter resistente a la quimioterapia, o a la radioterapia o a los antiandrógenos de las células transformadas.

Más particularmente, el carácter resistente a la quimioterapia o a los antiandrógenos de las células transformadas es debido al gen bcl_{2}, al gen BCL-X_{L} o al gen MDR presente en estas células o a la actividad de la enzima ALDH. Más particularmente, el carácter resistente a la radioterapia de las células transformadas se debe a la presencia del gen bcl_{2} o a la tasa elevada de glutatión en esas células.

En efecto, las enzimas aldehído deshidrogenasas (ALDH) catalizan la oxidación de diferentes aldehídos alifáticos y aromáticos en su correspondiente ácido carboxílico en presencia del cofactor NAD o NADP. Estas enzimas de diferentes subfamilias y especialmente las ALDH1, ALDH2 o ALDH3 están presentes en diferentes órganos y juegan un papel en la destoxificación de los xenobióticos. El aumento de la actividad de estas enzimas provoca una resistencia a los agentes anticancerígenos tal como la ciclofosfamida [MAGNI y col., Blood, 87, 1097-1103, (1996)].

Como se indicó en la solicitud de patente WO 98/44919, la utilización de un inhibidor de la actividad de la enzima ALDH1 permite aumentar la inhibición del carácter resistente a la quimioterapia o a los antiandrógenos inducidos por ALDH1.

Existen, en el seno de un tumor canceroso, ciertas células cancerosas denominadas Multi Drug Resistant (MDR) que tienen un carácter resistente a los agentes quimioterapéuticos. Entre las mismas, las células R7 que sobreexpresan el gen MDR se han descrito como resistentes a la daunorrubicina [JEANNESSON, P y col., Cancer Res., 50, 1231-1236, (1990)].

La línea celular LY-ar, células de linfomas de ratón, ha sido descrita como resistente a las radiaciones, contrariamente a las células LY-as que son sensibles a la radioterapia [MIRKOVIC, N. y col., 15, 1461-1470, (1997)]. Esta resistencia es debida a la sobreexpresión del gen bcl_{2}.

Estos compuestos presentan, por otra parte, la ventaja de inducir la apoptosis de una gran variedad células transformadas, que permite utilizarlas en la preparación de composiciones farmacéuticas destinadas al tratamiento de un gran número de patologías cancerosas pero igualmente de otras enfermedades, más particularmente las enfermedades relacionadas con una hiperproliferación celular, tales como las enfermedades autoinmunes o las alergias.

Aunque al inducir selectivamente la apoptosis de células transformadas, estos compuestos presentan además, en ciertos márgenes de concentraciones más elevados, propiedades de inducción de la apoptosis de las células normales, tales como las células MRC5. Esto permite utilizarlos en la preparación de composiciones cosméticas destinadas especialmente a la prevención o al tratamiento del envejecimiento cronológico o fotoinducido.

El objeto de la presente invención se refiere igualmente a los compuestos de fórmula (I) anteriores a título de medicamento. Los compuestos según la invención son particularmente adecuados para los siguientes campos de tratamiento:

1) en el tratamiento o la prevención de los estados cancerosos o precancerosos,

2) para tratar las afecciones dermatológicas relacionadas con un trastorno de la queratinización soportado sobre la diferenciación y sobre la proliferación, especialmente para tratar los acnés vulgares, comedones, polimorfos, rosáceas, acnés noduloquísticos, "conglobata", acnés seniles, acnés secundarios tales como acné solar, medicamentoso o profesional,

3) para tratar la ictiosis, los estados ictiosiformes, las queratodermias palmoplantares, las leucoplasias y los estados leucoplasiformes,

4) para tratar afecciones dermatológicas con un componente inmunoalérgico inflamatorio, con o sin problemas de proliferación celular, y especialmente todas las formas de psoriasis, ya sea cutánea, mucosa o ungular, e incluso el reumatismo psoriásico, o aún la atopía cutánea, tal como el eczema o la atopía respiratoria o incluso la hipertrofia gingival,

5) para tratar las proliferaciones dérmicas o epidérmicas que sean benignas o malignas, que sean o no de origen viral tales como verrugas vulgares, verrugas planas y epidermodisplasia verruguiforme, las papilomatosis orales o floridas, linfoma T, y proliferaciones que pueden estar inducidas por rayos ultra-violetas especialmente en el caso de los epiteliomas baso y espinocelulares, así como las lesiones cutáneas precancerosas tales como los queratoacantomas,

6) para tratar las dermatosis inmunes tales como el lupus eritematoso, las enfermedades inmunes con vesículas y las enfermedades del colágeno, tales como esclerodermia,

7) en el tratamiento de las afecciones dermatológicas o generales con componente inmunológico,

8) para luchar contra los problemas de la función sebácea tales como la hiperseborrea del acné o la seborrea simple,

9) en el tratamiento de los trastornos cutáneos debidos a una exposición a los rayos U.V. así como para reparar o luchar contra el envejecimiento de la piel, ya sea fotoinducido o cronológico o para reducir las pigmentaciones y las queratosis actínicas, o todas las patologías asociadas al envejecimiento cronológico o actínico,

10) para prevenir o tratar los problemas de la cicatrización o para evitar o para reparar las estrías,

11) en el tratamiento de las afecciones inflamatorias tales como la artritis,

12) en el tratamiento de cualquier afección de origen viral a nivel cutáneo o general, tal como el síndrome de Kaposis o las hepatitis, y

13) para el tratamiento de ciertos problemas oftalmológicos, especialmente las corneopatías.

En los campos terapéuticos aquí mencionados, los compuestos según la invención pueden ser ventajosamente empleados en combinación con compuestos 3-metiltiopropanoiltioésteres del ácido tióctico, metional, numerosos agentes antineoplásicos, retinoides, con corticoesteroides o estrógenos, asociados con antioxidantes, con \alpha-hidroxi o \alpha-ceto ácidos o sus derivados, con bloqueantes de los canales de potasio, asociados con otros medicamentos conocidos por interferir con el sistema inmunitario (por ejemplo, la ciclosporina, el FK 506, los glucocorticoides, los anticuerpos monoclonales, las citoquinas o los factores de crecimiento), en asociación con la vitamina D o con compuestos análogos de la vitamina D.

Entre los agentes antineoplásicos, se pueden citar dexametasona, ciclofosfamida, cisplatino, etopósido y BCNU (N,N-Bis(2-cloroetil)-N-nitrosourea), que son igualmente capaces de inducir la apoptosis.

Entre los 3-metiltiopropanoiltioésteres del ácido tióctico se pueden citar especialmente los compuestos descritos en la solicitud de patente EP 947503 y más particularmente el compuesto 21, es decir, el yoduro de 6-S, 8-S-bis(3-metiltiopropanoil)octanoato de (2'-trimetilamonioetilo) designado en adelante por Metmetlico.

En efecto, se ha puesto de evidencia un efecto sinérgico de los compuestos de la invención en su actividad antitumoral cuando son utilizados en asociación con un agente terapéutico antitumoral tal como el descrito en la solicitud de patente EP 947503.

Por retinoides, se entienden los ligandos receptores RAR o RXR, de tipo agonistas o antagonistas, naturales o sintéticos.

Entre las vitaminas D o sus derivados, se pueden citar especialmente los derivados de la vitamina D_{2} o D_{3} y en particular la 1,25-dihidroxivitamina D_{3}, los compuestos análogos de la vitamina D escogidos entre los compuestos descritos en las solicitudes de patente FR 98/13747, FR 99/14783 o FR 99/14781.

Entre los antioxidantes, se pueden citar especialmente \alpha-tocoferol, superóxidodismutasa, ubiquinol o ciertos quelatantes de metales.

Entre los \alpha-hidroxi- o \alpha-cetoácidos o sus derivados, se pueden citar especialmente cetoleucina, cetoisoleucina, la cetovalina, 2-oxobutirato, ácido 4-metiltio-2-oxobutanoico, ácidos láctico, málico, cítrico, glicólico, mandélico, tartárico, glicérico, o sus sales, amidas o ésteres.

Entre los bloqueadores de los canales de potasio, se pueden citar especialmente el Minoxidil (2,4-diamino-6-piperidino-pirimidin-3-óxido) y sus derivados.

El solicitante ha comprobado igualmente de forma inesperada y sorprendente una actividad sinérgica debida a la asociación de los compuestos según la invención.

La presente invención tiene igualmente por objeto nuevas composiciones farmacéuticas o cosméticas que contienen, como agente activo, una cantidad eficaz de al menos un nuevo compuesto objeto de la invención en un excipiente fisiológicamente aceptable.

La presente invención tiene pues, también, por objeto una composición farmacéutica destinada especialmente al tratamiento de las afecciones mencionadas anteriormente.

La presente invención se refiere igualmente a nuevas composiciones farmacéuticas para el tratamiento, la regresión y la prevención del cáncer, que contiene como agente terapéutico antitumoral, una cantidad eficaz de al menos un nuevo compuesto objeto de la presente invención solo o asociado con un agente terapéutico antitumoral escogido entre los descritos en la solicitud EP 947503.

La administración de los compuestos según la invención puede efectuarse por vía enteral, parenteral, tópica u ocular.

Por vía enteral, las composiciones farmacéuticas pueden presentarse bajo forma de comprimidos, cápsulas, grageas, jarabes, suspensiones, soluciones, polvos, gránulos, emulsiones, microesferas o nanoesferas o vesículas lipídicas o poliméricas que permiten una liberación controlada.

Por vía parenteral, la composición puede presentarse bajo forma de soluciones o suspensiones para perfusión o para inyección.

Los compuestos de fórmula (I) según la invención son generalmente administrados a una dosis diaria de aproximadamente 0,001 mg/kg a 100 mg/kg de peso corporal en 1 a 3 tomas.

Por vía tópica, la composición cosmética o farmacéutica a base de compuestos según la invención está destinada más particularmente al tratamiento de la piel del cuero cabelludo y de las mucosas y puede presentarse bajo forma de ungüentos, cremas, leches, pomadas, polvos, tampones embebidos, soluciones, geles, esprais, lociones o suspensiones. Puede igualmente presentarse bajo forma de microesferas o nanoesferas o vesículas lipídicas o poliméricas o parches poliméricos o hidrogeles que permiten una liberación controlada. En una variante, puede presentarse bajo forma de champú o de "después del champú" o de jabón.

Estas composiciones por vía tópica pueden presentar bajo forma anhidra, bajo forma acuosa o bajo forma de emulsión según la indicación terapéutica.

Para la vía ocular, son principalmente colirios.

Para una aplicación farmacéutica, los compuestos de fórmula (I) se utilizan por vía tópica o ocular a una concentración comprendida generalmente entre 0,0001% y 10% en peso, de preferencia entre 0,001 y 1% en peso, con respecto al peso total de la composición.

Los compuestos de fórmula (I) según la invención encuentran generalmente una aplicación en el campo cosmético, en particular en la higiene corporal y capilar y especialmente para las pieles con tendencia acnéica, para el tratamiento o la prevención de las estrías, en la protección contra los efectos nefastos del sol, para prevenir y/o luchar contra el envejecimiento fotoinducido o cronológico, o para luchar contra el aspecto graso de la piel o los cabellos.

La concentración en compuesto de fórmula (I) en las composiciones cosméticas puede estar comprendida entre 0,001 y 3% en peso con respecto al peso total de la composición.

Las composiciones farmacéuticas o cosméticas de acuerdo con la invención pueden, además, contener aditivos inertes o incluso farmacodinámicamente o cosméticamente activos o combinaciones de estos aditivos y especialmente: agentes humectantes; agentes despigmentantes tales como hidroquinona, ácido azelaico, ácido cafeico o ácido kojico; emolientes; agentes hidratantes como el glicerol, PEG 400, tiomorfolinona y sus derivados o urea; agentes antiseborreicos o antiacneicos, tales como la S-carboximetilcisteina, S-bencil-cisteamina, sus sales y sus derivados, o peróxido de benzoilo; antibióticos como la eritromicina y sus ésteres, neomicina, clindamicina y sus ésteres, las tetraciclinas; agentes antifúngicos tales como el ketoconazol o los polimetilen-4,5 isotiazolinonas-3; agentes que favorecen el rebrote de los cabellos, como el Minoxidil (2,4-diamino-6-piperidin-pirimidina-3-óxido) y sus derivados, Diazoxido (7-cloro 3-metil 1,2,4- benzotiadiazina 1,1-dioxido) y Fenitoina (5,4-difenil-imidazolidina 2,4-diona); agentes anti-inflamatorios no estereoideos; carotenoides y, principalmente el \beta-caroteno; agentes anti-psoriaticos tales como la antralina y sus derivados y en fin, los ácidos eicosa-5,8,11,14-tetrainoico y eicosa-5,8,11-trinoico, sus ésteres y sus amidas.

Las composiciones de acuerdo con la invención pueden igualmente contener agentes mejoradores del sabor, agentes conservantes tales como ésteres del ácido parahidroxibenzoico, agentes estabilizantes, agentes reguladores de la humedad, des agentes reguladores del pH, agentes modificadores de la presión osmótica, agentes emulsionantes, o filtros UV-A y UV-B.

Se entenderá que el experto en la técnica podrá escoger el o los compuestos opcionales a adicionar a estas composiciones de tal manera que las propiedades ventajosas ligadas intrínsecamente la presente invención no sean, o no sean sustancialmente, alteradas por la adición escogida.

Ahora, se van a dar, a título ilustrativo y sin ningún carácter limitativo, varios ejemplos de obtención de compuestos activos de fórmula (I) de acuerdo con la invención, así como ejemplos de ensayos de evaluación de la actividad biológica de los compuestos de fórmula (I) según la invención.

A. Ejemplos de compuestos Ejemplo 1 Procedimiento de preparación del 4-dimetilamino-4-metil-pent-2-intioato de S-metilo

A una solución de 0,85% de 3-dimetilamino-3-metil-but-1-ino [HIENNION, G.F., NELSON, KW. (1957) J. Am. Chem. Soc., 79, 2142-2144] (2,80 mmol) en 14 ml de tetrahidrofurano, se le adicionó en 5 minutos a -70ºC 4,07 ml (9,24 mmol) de una disolución 2,27 M de n-butil-litio en hexano. Después de 5 minutos el medio de reacción se llevó de nuevo a 0ºC y se agitó todavía 30 minutos a esta temperatura. Después de retornar a -70ºC, se adicionaron por cánula 2 ml de oxisulfuro de carbono previamente condensado y se agitó 30 minutos a -70ºC. El medio de reacción a continuación se llevó a 0ºC en 30 minutos luego se adicionaron 0,575 ml (9,24 mmol) de yoduro de metilo y se prosiguió la agitación durante 2 horas a 0ºC. Se diluyó en 250 ml de éter, se lavó con una disolución saturada de cloruro de sodio (3x30 ml), se secó sobre sulfato de sodio. Después de evaporación a vacío y purificación por cromatografía sobre gel de sílice (elución con una mezcla de éter de petróleo / acetato de etilo = 70 / 30) se aislaron 1,16 g del compuesto del ejemplo 1 en forma de aceite incoloro (rendimiento: 81%)

^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \nu = 1,42 (s, 6H, (CH_{3})_{2}C), 2,31 (s, 6H, (CH_{3})_{2}N), 2,39 (s, 3H, CH_{3}S).

Ejemplo 2 Procedimiento de preparación del yoduro de 4-metil-4-trimetilamonio-pent-2-intioato de S-metilo

A 0,184 g (0,99 mmol) del compuesto obtenido en el ejemplo 1 en 10 ml de acetato de etilo a temperatura ambiente se adicionaron 0,25 ml (4,02 mmol) de yoduro de metilo. La mezcla se dejó durante 4 días en la oscuridad. Se evaporó a vacío y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (elución con una mezcla de diclorometano / metanol 90 / 10). Así se aislaron 0,229 g del compuesto del ejemplo 2 (rendimiento 70%) en forma de sólido.

^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \nu = 1,96 (s, 6H, (CH_{3})_{3}C), 2,46 (s, 3H, CH_{3}S), 3,62 (s, 6H, (CH_{3})_{3}N).

Ejemplo 3 Procedimiento de preparación de 4-di-n-propilamino-4-metil-pent-2-intioato de S-metilo

Preparación idéntica a la descrita en el ejemplo 1 pero utilizando 3-di-n-propilamino-3-metil-but-1-ino [HENNION, G.F., HANZEL, R.F., J. Am. Chem. Soc., 82, 4908-4912, (1960)] en lugar de 3-dimetilamino-3-metil-but-1-ino. Escala: 2,8 mmol, purificación por cromatografía sobre gel de sílice (eluyente éter de petróleo / acetato de etilo = 95 / 5), rendimiento: 75%. Aceite incoloro.

^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \nu = 0,86 (t, J = 7,36, 6H, CH_{3}-CH_{2}), 1,46 (s, 6H, (CH_{3})_{2}C), 1,47 (m, 4H, CH_{3}-CH_{2}) 2,38 (s, 3H, CH_{3}S), 2,52 (m, 4H, CH_{2}N).

Ejemplo 4 Procedimiento de preparación de 4-metil-4-pirrodin-1-il-pent-2-intioato de S-metilo

Preparación idéntica a la descrita en el ejemplo 1 pero utilizando 3-metil-3-pirrodin-1-il-but-1-ino [HENNION, G.F., NELSON, K.W., J. Am. Chem. Soc., 79, 2142-2144, (1957)) en lugar de 3-dimetilamino-3-metil-but-1-ino. Escala: 2,8 mmol, purificación por cromatografía sobre gel de sílice (eluyente éter de petróleo / acetato de etilo 70 / 30), rendimiento 85%. Aceite incoloro.

^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \nu = 1,45 (s, 6H, (CH_{3})_{2}C), 3,81 (m, 4H, NCH_{2}-CH_{2}), 2,39 (s, 3H, CH_{3}S), 2,72 (m, 4H, CH_{2}N).

Ejemplo 5 Procedimiento de preparación de 4-metil-4-morfolin-4-il-pent-2-intioato de S-metilo

Preparación idéntica a la descrita en el ejemplo 1 pero utilizando 3-di-n-propilamino-3-metil-but-3-ino [HENNION, G.F., HANZEL, R.F., J. Am. Chem. Soc., 82, 4908-4912, (1960)] en lugar de 3-metil-3-morfolin-4-il-but-1-ino. Escala: 1,5 mmol, purificación por cromatografía sobre gel de sílice (eluyente éter de petróleo / acetato de etilo 60 / 40), rendimiento 73%. Sólido blanco.

^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}): \nu = 1,43 (s, 6H, (CH_{3})_{2}C), 2,40 (s, 3H, CH_{3}S), 2,65 (m, 4H, CH_{2}O), 3,97 (m, 4H, CH_{2}N).

B. Ejemplos de ensayos de evaluación de la actividad biológica de los compuestos de la invención Ejemplo 1 Efecto de los compuestos sobre el crecimiento de células transformadas o no transformadas a) Efecto de los compuestos sobre el crecimiento de células DU145 y BAF3 bcl_{2}

Las células utilizadas correspondieron a dos líneas celulares: células metastásicas de cáncer de próstata humano (DU145), y células linfoides murinas transfectadas por el gen bcl_{2} humano (BAF3 bcl_{2}).

El método operativo para los ensayos sobre DU145 fue el siguiente:

10^{5} células fueron incubadas en los diferentes pocillos de una microplaca en 1 ml de medio de cultivo.

Los compuestos fueron añadidos 4 horas después de depositar las células en los pocillos.

Al cabo de 72 horas, las células se prelavaron a diferentes tiempos. Las células DU145 fueron lavadas dos veces con PBS y recuperadas directamente con cloruro de sodio 0,1M.

El efecto sobre el crecimiento de las células DU145 se midió por dosificación de proteínas según el método de Lowry (LOWRY, O. H., ROSENBROUGH, N.J., FARR, A.L. y RANDALL, J. Biol. Chem. 193, 265-275, (1951)) y de ADN por el método de Hoechst (WEST, D.C., SATTAR, A. y KUMAR, S., Anal. Biochem. 147, 289-295, (1985)).

El método operativo utilizado para los ensayos sobre las células BAF3 bcl_{2} fue el siguiente:

10^{5} células fueron incubadas en los diferentes pocillos de una microplaca en 1 ml de medio de cultivo. Al cabo de 4 horas de incubación, se adicionaron los compuestos a ensayar en los pocillos conteniendo las células BAF3 bcl_{2}.

Para las células BAF3 bcl_{2}, se midió el crecimiento por recuento de células viables en presencia de Azul de Triptano al 0,1%. El testigo estaba constituido por tioampal, descrito en la solicitud de patente WO 98/44919.

Los resultados están recogidos en la siguiente tabla I:

TABLA I

3

La concentración IC_{50} es la concentración correspondiente a una inhibición del 50% del crecimiento de las células.

Estos resultados muestran que los valores de IC_{50} de los compuestos de la invención son muy inferiores a los obtenidos para el tioampal. Así, la inhibición del crecimiento de células DU145 y de células BAF3 bcl_{2} obtenidas con los compuestos según la invención es más fuerte que la inhibición obtenida con el tioampal.

Esta inhibición del crecimiento de células DU145 y de células BAF3 bcl_{2} es debido al menos en parte a un aumento de fenómenos de apoptosis de estas células.

Así estos resultados sugieren que los compuestos de la invención inducen más la apoptosis de las células DU145 y de células BAF3 bcl_{2} que el tioampal.

b) Efecto de los compuestos sobre el crecimiento de células L1210, L1210T, B16 y MRC5

Las células utilizadas correspondieron a diferentes líneas celulares: fibroblastos embrionarios normales de pulmón humano (MRC5), células de melanoma de ratón (B16), células de leucemia linfocitaria de ratón (L1210) y células L1210T obtenidas por infección de células L1210 por un vector retroviral que porta ADNc humano de ALDH1.

El método operativo utilizado para los ensayos sobre las células L1210 es el siguiente:

10^{5} células fueron incubadas en los diferentes pocillos de una microplaca en 1 ml de medio de cultivo. Al cabo de 4 horas de incubación, las compuestos a ensayar fueron adicionados en los pocillos que contenían las células L1210.

Para las células L1210, el crecimiento se midió por recuento de las células viables en presencia de Azul de Triptano al 0,1%.

El método operativo para los ensayos sobre las células B16 y MRC5 fue el siguiente:

Los compuestos a ensayar fueron adicionados 4 horas después del depósito de células en los pocillos. Al cabo de 72 horas, las células fueron prelavadas a diferentes temperaturas. Las células B16 y MRC5, fueron lavadas dos veces con PBS y recuperadas directamente con cloruro de sodio 0,1 M.

El efecto sobre el crecimiento de las células B16 y MRC5 se midió por dosificación de proteínas según el método de Lowry (LOWRY, O. H., ROSENBROUGH, N.J., FARR, A.L. y RANDALL, J. Biol. Chem. 193, 265-275, (1951)) y de ADN por el método de Hoechst (WEST, D.C., SATTAR, A. y KUMAR, S., Anal. Biochem. 147, 289-295, (1985)).

Los resultados se recogen en la siguiente tabla II

TABLA II

4

NE significa No Ensayado

Estos resultados muestran que los valores de IC_{50} de los compuestos de la invención son muy débiles y muy inferiores a los obtenidos para el tioampal. Así, la inhibición del crecimiento de las células L1210, L1210T, B16 y MRC5 obtenido con los compuestos según la invención es importante y mucho más fuerte que la inhibición obtenida con el tioampal.

Esta inhibición del crecimiento de las células L1210, L1210T, B16 y MRC5 es debido al menos en parte a un aumento de fenómenos de apoptosis de estas células. Así, estos resultados sugieren que los compuestos de la invención induzcan más la apoptosis de las células L1210, L1210T, B16 y MRC5 que el tioampal.

2 - Medida de la inducción de la apoptosis en las células BAF3-b0 y BAF3-bcl_{2} por los compuestos de la invención

Las células BAF3-bcl_{2} corresponden a células BAF3 (células linfocitarias de ratón) transfectadas por el gen bcl_{2}. Entre ellas, cuatro líneas denominadas H16, G18, B14 y G21 sobreexpresan el gen bcl_{2}.

En los que sigue, las células denominadas BAF3-b0 corresponden a células BAF3 no transfectadas con el gen bcl_{2}.

Mientras que las células BAF3-b0 experimentan apoptosis (más del 80% de las células) en ausencia de interleuquina 3 (IL3) en 16 horas [según COLLINS, M.K.L., MARVEL, J., MALDE, P. & LOPEZ-RIVAS, A., J. Exp. Med. 176, 1043-1051, (1992)], las células BAF3-bcl_{2} no presentan ningún signo de apoptosis en ausencia de IL3. Son pues resistentes a la apoptosis.

El modo operativo que se utilizó fue el siguiente:

Las células BAF3 o BAF3-bcl_{2}, puestas en cultivo en presencia de IL3, se marcaron por un método adaptado al descrito por WRIGHT, S. y col., J. Of Cell. Biochem. 48, 344-355, (1992).

10^{5} células/ml fueron incubadas con 4,62 KBq.ml^{-1} [^{3}H]-timidina durante 40 horas a 37ºC. Después de dos lavados con un medio de cultivo, se pusieron en cultivo 2,5-10^{6} células en presencia del compuesto a ensayar.

Después de la incubación durante 24 horas, estas células fueron recuperadas por centrifugación a 400 g durante 5 minutos y lavadas 3 veces en un tampón de PBS. Las células recuperadas en el fondo fueron lisadas en 2 ml de Triton X-100 al 0,1%, EDTA 20 mM, Tris 5 mM pH8 y centrifugadas a 30000 g a 4ºC durante 30 minutos.

Los sobrenadantes fueron recuperados y los fondos se disolvieron en 0,3 ml de NaOH al 0,5 N.

Se sometieron a contaje en un contador de centelleo alícuotas del medio de cultivo (1 ml), del sobrenadante (0,3 ml) y del fondo solubilizado (0,1 ml).

El porcentaje de fragmentos de ADN se calculó de la siguiente forma:

% de fragmentos de ADN =\frac{\text{dpm del medio de cultivo + dpm del sobrenadante}}{\text{dpm del medio de cultivo + dpm del sobrenadante + dpm del fondo solubilizado}}

(dpm = desintegración por minuto)

El porcentaje de fragmentación del ADN es una medida directa de la apoptosis experimentada por las células. Los resultados obtenidos se muestran en la tabla III.

TABLA III

5

Las células BAF3-b0 sirvieron de testigos. La apoptosis de estas células se indujo por adición del compuesto del ejemplo 1 y este fenómeno aumentó de forma dosis-dependiente.

Estos resultados muestran que la presencia de un compuesto de acuerdo con la invención permite aumentar la inhibición de la apoptosis debida al gen bcl_{2} en las líneas células H16, G18, B14 y G21 que sobreexpresan el gen bcl_{2}.

El método operativo del ensayo presentado en la siguiente tabla IV es idéntico al anterior con la única diferencia de que el tiempo de incubación fue de 6 horas en vez de 24 horas:

TABLA IV

	% de fragmentación de ADN en las células bcl_{2} H16
Conc. (\muM)	Tioampal	Ejemplo 1
50	0	2,15
100	1,6	0
200	7,6	30,4
400	16,4	83,8
600	26,5	81,5

La apoptosis de estas células estuvo inducida de forma mucho más importante con el compuesto del ejemplo 1 que con el tioampal, y ello de forma dosis-dependiente.

Estos resultados muestran que la presencia del compuesto según la invención permiten aumentar la inhibición de la apoptosis debida al gen bcl_{2} y ello de forma mucho más fuerte que los compuestos de la técnica anterior.

Ejemplo 2 Efecto de los compuestos sobre la actividad de ALDH1

El modo operativo utilizado se indica seguidamente:

Se preincubaron 260 mU de ALDH de levadura de pan a 37 o 0ºC en una mezcla de EDTA 1mM, KCl 100 mM, en tampón fosfato de sodio 60 mM pH 6 en un volumen final de 200 \mul.

En cada tubo conteniendo los 200 \mul de mezcla, se adicionó el compuesto a ensayar a la concentración de 400 \muM, con la excepción de una serie de control que no contenía compuesto a ensayar.

La incubación se efectuó a 0ºC o a 37ºC y se detuvo por adición de 100 \mug de BSA (albúmina de suero bovino) y de acetona a -20ºC a una concentración final de 80% para precipitar las proteínas (ALDH y BSA). Los tubos se dejaron estar a -20ºC durante 1 hora, después se centrifugaron a 10000 rpm durante 10 minutos, se lavaron con acetona al 80%.

Las proteínas precipitadas se disolvieron en 358 \mul de agua y se adicionaron inmediatamente al complejo de reacción constituido por EDTA 1 mM, KCl 100 mM, NAD 2,35 mM en tampón fosfato de sodio 60 mM pH 8,5.

La reacción se inició por adición de propanal 2 mM y se midió la densidad óptica (OD) a 340 nm para T = 0 y para T = 5, 10, 20 y 30 minutos.

La actividad de la enzima se midió por variación de la densidad óptica \Delta OD por minuto (QUASH G. y col., Enzymology and molecular biology of carbonyl metabolism, Weiner y col. eds., Kluwer Academic/Plenum Publishers, Nueva York, 97-106)

Los resultados obtenidos se presentan en la figura 6.

El porcentaje de actividad (A%) de la enzima ALDH1 obtenido a diferentes tiempos de preincubación con el compuesto del ejemplo 1 a 0ºC (representado por \blacksquare) o a 37ºC representado por \blacktriangle) o bien sin preincubación con el compuesto del ejemplo 1 a 0ºC (representado por \Delta) o a 37ºC representado por \kappa) y medido en función del tiempo t (expresado en minutos).

Cuando la preincubación con el compuesto del ejemplo 1 se efectuó a la temperatura de 0ºC, no hubo efecto de inhibición del compuesto del ejemplo 1 sobre la actividad de la enzima. En efecto, las dos curvas obtenidas con o sin incubación preincubación con el compuesto del ejemplo 1 son superponibles. Esto se explica por el hecho de que a esta temperatura, el compuesto del ejemplo 1 no pudo ser metabolizado por la ALDH1. De este hecho, no ha podido establecerse la formación de enlaces covalentes entre el principio activo formado tras la ruptura y la enzi-
ma.

En cambio, cuando la preincubación con el compuesto del ejemplo 1 se efectuó a la temperatura de 37ºC, la enzima ALDH1 metabolizó el compuesto del ejemplo 1 y se unió por enlaces covalentes, y se observó un efecto de inhibición de la actividad de la enzima. Este efecto aumentó en función del tiempo de preincubación por el compuesto del ejemplo 1.

Estos resultados mostraron que los compuestos según la invención permitían disminuir la actividad la ALDH, y presentaban la ventaja de ser de tipo "suicida" (unión covalente irreversible con la enzima ALDH), permitiendo así aumentar la resistencia a los agentes anticancerígenos.

Ejemplo 3 Efecto de los compuestos sobre las células R7 que sobreexpresan el gen MDR

Las células K562 utilizadas en este ensayo no sobreexpresan el gen MDR y sirven de testigo, son células de leucemia mieloide humana. Contrariamente a las células R7, células cancerosas que sobreexpresan el gen MDR.

El objeto del presente ensayo es poner de evidencia el efecto de los compuestos de la invención sobre estas células R7.

El método operativo utilizado se indica seguidamente:

10^{5} células fueron incubadas en los diferentes pocillos de una microplaca en 1 ml de medio de cultivo. Se adicionaron por una parte células R7 y por otra, células K562.

Al cabo de 4 horas de incubación, el compuesto a ensayar (ejemplo 1 de acuerdo con la invención, por una parte y daunorrubicina, por otra) se adicionó en los pocillos que contenían las células.

Al cabo de 72 horas, las células se prelavaron a diferentes tiempos.

El crecimiento de las células se midió por recuento de células viables en presencia de Azul de Triptano al 0,1%.

Los resultados se muestran en las figuras 7 y 8.

Las Figuras 7 y 8 representan respectivamente el porcentaje de inhibición (I%) por la daunorrubicina y el compuesto del ejemplo 1 del crecimiento de las células R7 y K562, obtenido a concentraciones crecientes. Los resultados obtenidos con las células K562 están representados por \blacklozenge y los obtenidos con las células R7 por \blacktriangle.

Estos resultados muestran que la daunorrubicina no tiene ningún efecto sobre la inhibición del crecimiento de las células R7 que sobreexpresan el gen MDR a concentraciones a las cuales inhibe el crecimiento de las células K562.

En cambio, el compuesto del ejemplo 1 inhibe de forma muy importante el crecimiento de las células R7. El efecto de la inhibición sobre el crecimiento de las células R7 es incluso superior al efecto de la inhibición obtenido a las mismas concentraciones sobre el crecimiento de las células K562.

Estos resultados muestran que los compuestos de acuerdo con la invención permiten aumentar la resistencia a la quimioterapia debida al gen MDR.

Ejemplo 4 Efecto de la asociación de un compuesto según la invención y de un compuesto escogido entre los descritos en la solicitud de patente EP 947503 sobre el crecimiento de las células DU145

En la solicitud de patente EP 947503, se ha descrito que los derivados del metional comprenden el metional acoplado por unión tio-éster con el ácido tióctico que presentan una fuerte actividad apoptótica selectiva para las células transformadas y tumorales. Entre estos compuestos, se pueden citar el yoduro de 6-S,8-S-bis-(3-metiltiopropanoil)octanoato de (2'-trimetilamonio etilo) (compuesto 21 de este documento) designado como metmetlico.

El modo operativo utilizado se indica seguidamente:

Las células utilizadas corresponden a células metastásicas de cáncer de próstata humanas DU145.

10^{5} células DU145 se incubaron en diferentes pocillos de una microplaca en 1 ml de medio de cultivo.

Los compuestos a ensayar se adicionaron 4 horas después del depósito de las células en los pocillos. Al cabo de 72 horas, las células se prelavaron a diferentes tiempos. Las células se lavaron dos veces con PBS y se recuperaron directamente con cloruro de sodio 0,1M.

Los productos ensayados son el compuesto del ejemplo 1, el metmetlico y su mezcla.

Los resultados se recogen en la Tabla V.

TABLA V

Compuesto (concentración)	% de inhibición del crecimiento de las
	células DU145
Ejemplo 1 (2 \muM)	5,8
Ejemplo 1 (3 \muM)	16,1
Ejemplo 1 (4 \muM)	22,4

(Continuación)

Compuesto (concentración)	% de inhibición del crecimiento de las
	células DU145
Metmetlico (25 \muM)	0
Metmetlico (50 \muM)	0
Ejemplo 1 (2 \muM) + Metmetlico (25 \muM)	14,7
Ejemplo 1 (2 \muM) + Metmetlico (50 \muM)	20,7
Ejemplo 1 (3 \muM) + Metmetlico (25 \muM)	26,9
Ejemplo 1 (3 \muM) + Metmetlico (50 \muM)	36,9
Ejemplo 1 (4 \muM) + Metmetlico (25 \muM)	44,4
Ejemplo 1 (4 \muM) + Metmetlico (50 \muM)	41.3

Los resultados muestran que el compuesto del ejemplo 1 sólo inhibe el crecimiento de las células DU145. En cambio, el metmetlico sólo no tiene efecto inhibidor sobre el crecimiento de estas células DU145 a las concentraciones utilizadas en este ejemplo.

La asociación de un compuesto según la invención y de un compuesto descrito en la solicitud de patente EP947503 inhibe de forma sinérgica el crecimiento de células DU145. Estos resultados demuestran la posibilidad de utilizar estos compuestos en asociación con dosis claramente inferiores a las utilizables cuando se utilizan solas.

Ejemplo 5 Efecto de la asociación de los compuestos según la invención sobre el crecimiento de células DU145 o células normales

10^{5} células normales de próstata humana o 10^{5} células cancerosas de próstata humana (DU145) se incubaron en los diferentes pocillos de una microplaca en 1 ml de medio de cultivo.

Los compuestos se adicionaron 4 horas después del depósito de las células en los pocillos.

Al cabo de 72 horas, las células se prelavaron a diferentes tiempos. Las células DU145 o las células normales se lavaron dos veces con PBS y se recuperaron directamente con cloruro de sodio 0,1 M.

El efecto sobre el crecimiento de las células DU145 o las células normales se midió por la dosificación de proteínas según el método de Lowry (LOWRY, O. H., ROSENBROUGH, N.J., FARR, A.L. y RANDALL, J. Biol. Chem. 193, 265-275, (1951)) y de ADN por el método de Hoechst (WEST, D.C., SATTAR, A. y KUMAR, S., Anal. Biochem. 147, 289-295, (1985)).

TABLA VI

Producto a ensayar (concentración)	% de inhibición de células normales	% de inhibición de
	de próstata humana	células DU145
Ejemplo 1 (2 \muM)	3,7	21,3
Ejemplo 5 (2 \muM)	1,3	25,2
Ejemplo 5 (1 \muM)	0	14,3
Ejemplo 1 (2 \muM) + Ejemplo 5 (2 \muM)	6,1	67,7
Ejemplo 1 (2 \muM) + Ejemplo 5 (1 \muM)	2,8	53,8

La asociación de las compuestos según la invención inhiben de forma sinérgica el crecimiento de las células cancerosas sin incidencia notable sobre el crecimiento de células normales, lo que permite aumentar aún la actividad y la selectividad de los compuestos según la invención frente a las células transformadas. Estos resultados demuestran la posibilidad de utilizar estos compuestos en asociación a dosis inferiores a las utilizables cuando se utilizan solos.

C. Ejemplos de formulación 1) Vía oral

(a) Se preparó la composición siguiente bajo la forma de un comprimido de 0,2 g

Compuesto del ejemplo 1

\dotl

0,005 g

Almidón pregelatinizado

\dotl

0,065 g

Celulosa microcristalina

\dotl

0,075 g

Lactosa

\dotl

0,050 g

Estearato de magnesio

\dotl

0,005 g

(b) Se preparó una suspensión bebible, destinada a ser acondicionada en ampollas de 5 ml

Compuesto del ejemplo 2

\dotl

0,001 g

Glicerina

\dotl

0,500 g

Sorbitol al 70%

\dotl

0,500 g

Sacarinato de sodio

\dotl

0,010 g

Parahidroxibenzoato de metilo

\dotl

0,040 g

Aroma c.s.

Agua purificada c.s.p

\dotl

5 ml

(c) Se preparó la formulación siguiente destinada a ser acondicionada en cápsulas:

Compuesto del ejemplo 1

\dotl

0,01 mg

Compuesto del ejemplo 5

\dotl

0,01 mg

Ciclosporina

\dotl

0,050 g

Almidón de maíz

\dotl

0,060 g

Lactosa c.s.p.

\dotl

0,300 g

Las cápsulas utilizadas están constituidas por gelatina, óxido de titanio y un conservador.

2) Vía tópica

(a) Se preparó la crema Agua en Aceite no iónica siguiente:

Compuesto del ejemplo 1

\dotl

0,100 g

Mezcla de alcoholes de lanolina emulsionados, de ceras y de aceites refinados, vendido por la Socie- {}\hskip0,4cm dad BDF bajo la denominación "Eucerina anhidra"

\dotl

39,900 g

Parahidroxibenzoato de metilo

\dotl

0,075 g

Parahidroxibenzoato de propilo

\dotl

0,075 g

Agua desmineralizada estéril c.s.p

\dotl

100,000 g

(b) Se preparó un gel llevando a cabo la formulación siguiente:

Compuesto del ejemplo 1

\dotl

0,00 1 g

Eritromicina base

\dotl

4,000 g

Butilhidroxitolueno

\dotl

0,050 g

Hidroxipropilcelulosa vendida por la sociedad Hercules bajo la denominación de "KLUCEL HF"

\dotl

2,000 g

Etanol (A 950) c.s.p.

\dotl

100,000 g

(c) Se preparó una loción procediendo a la mezcla de los ingredientes siguientes:

Compuesto del ejemplo 2

\dotl

0,030 g

Propilén glicol

\dotl

5,000 g

Butilhidroxitolueno

\dotl

0,100 g

Etanol (al 95º) c.s.p.

\dotl

100,000 g

(d) Se preparó una composición cosmética contra los efectos nefastos del sol procediendo a la mezcla de los ingredientes siguientes:

Compuesto del ejemplo 1

\dotl

1,00 g

Bencilidén alcanfor

\dotl

4,00 g

Triglicéridos de ácidos grasos

\dotl

31,00 g

Monoestearato de glicerol

\dotl

6,00 g

Ácido esteárico

\dotl

2,00 g

Alcohol cetílico

\dotl

1,20 g

Lanolina

\dotl

4,00 g

Conservadores

\dotl

0,30 g

Propilén glicol

\dotl

2,00 g

Trietanolamina

\dotl

0,50 g

Perfume

\dotl

0,40 g

Agua desmineralizada c.s.p.

\dotl

100,00 g

(e) Se preparó la crema Aceite en Agua no iónica siguiente:

Compuesto del ejemplo 3

\dotl

0,500 g

Ácido retinoico

\dotl

0,020 g

Alcohol cetílico

\dotl

4,000 g

Monoestearato de glicerol

\dotl

2,500 g

Estearato de PEO 50

\dotl

2,500 g

Manteca de butirospermo

\dotl

9,200 g

Propilén glicol

\dotl

2,000 g

Parahidroxibenzoato de metilo

\dotl

0,075 g

Parahidroxibenzoato de propilo

\dotl

0 075 g

Agua desmineralizada estéril c.s.p.

\dotl

100,000 g

(f) Se preparó un gel tópico procediendo a la mezcla de los ingredientes siguientes:

Compuesto del ejemplo 4

\dotl

0,050 g

Etanol

\dotl

43,000 g

-tocoferol

\dotl

0,050 g

Polímero carboxivinílico vendido bajo la denominación "Carbopol 941" por la sociedad "Goodrich"

\dotl

\hbox{0,500 g}

Trietanolamina en solución acuosa al 20% en peso

\dotl

3,800 g

Agua

\dotl

9,300 g

Propilén glicol c.s.p.

\dotl

100,000 g

(g) Se preparó une crema Aceite en Agua llevando a cabo la formulación siguiente:

Compuesto del ejemplo 4

\dotl

0,020 g

17-valérato de betametasona

\dotl

0,050 g

S-carboximetil cisteina

\dotl

3,000 g

Estearato de polioxietileno (40 moles de óxido de etileno) vendido bajo la denominación de "Myrj {}\hskip0,4cm 52" por la sociedad "ATLAS"

\dotl

4,000 g

Monolaurato de sorbitán, polioxietilenado con 20 moles de óxido de etileno vendido bajo la deno- {}\hskip0,4cm minación "Tween 20" por la sociedad "ATLAS"

\dotl

1,800 g

Mezcla de mono y diestearato de glicerol vendido bajo la denominación de "Geleol" por la so- {}\hskip0,4cm ciedad "GATTEFOSSE"

\dotl

4,200 g

Propilén glicol

\dotl

10,000 g

Butilhidroxianisol

\dotl

0,010 g

Butilhidroxitolueno

\dotl

0,020 g

Alcohol cetoestearílico

\dotl

6,200 g

Conservador

\dotl

c.s.

Perhidroescualeno

\dotl

18,000 g

Mezcla de triglicéridos caprílico-cáprico vendido bajo la denominación de "Miglyol 812" por la {}\hskip0,4cm sociedad "DYNAMIT NOBEL"

\dotl

4,000 g

Trietanolamina (99% en peso)

\dotl

2,500 g

Agua c.s.p.

\dotl

100,000 g

(h) Se preparó la crema del tipo Aceite en Agua siguiente:

Ácido láctico

\dotl

5,000 g

Compuesto del ejemplo 2

\dotl

0,020 g

Estearato de polioxietileno (40 moles de óxido de etileno) vendido bajo la denominación "Myrj {}\hskip0,4cm 52" por la sociedad "ATLAS"

\dotl

4,000 g

Monolaurato de sorbitán, polioxietilenado con 20 moles de óxido de etileno vendido bajo la de- {}\hskip0,4cm nominación de "Tween 20" por la sociedad "ATLAS"

\dotl

1,800 g

Mezcla de mono y diestearato de glicerol vendido bajo la denominación de "Geleol" por la socie- {}\hskip0,4cm dad "GATTEFOSSE"

\dotl

4,200 g

Propilén glicol

\dotl

10,000 g

Butilhidroxianisol

\dotl

0,010 g

Butilhidroxitolueno

\dotl

0,020 g

Alcohol cetoestearílico

\dotl

6,200 g

Conservadores

\dotl

c.s.

Perhidroescualeno

\dotl

18,000 g

Mezcla de triglicéridos caprílico-cáprico vendido bajo la denominación de "Miglyol 812" por la so- {}\hskip0,4cm ciedad "DYNAMITE NOBEL"

\dotl

4,000 g

Agua c.s.p.

\dotl

100,000 g

(i) Se preparó el ungüento anhidro siguiente:

Compuesto del ejemplo 1

\dotl

5,00 g

Aceite de vaselina

\dotl

50,00 g

Butilhidrotolueno

\dotl

0,05 g

vaselina blanca c.s.

\dotl

100 g 3) Vía intralesional

(a) Se preparó la composición siguiente:

Compuesto del ejemplo 3

\dotl

0,002 g

Oleato de etilo cs

\dotl

10 g

(b) Se preparó la composición siguiente:

Compuesto del ejemplo 1

\dotl

0,05%

Polietilén glicol

\dotl

20%

Disolución de NaCl al 0,9%

\dotl

cs 100

(e) Se preparó la composición siguiente:

Compuesto del ejemplo 3

\dotl

2,5%

Polietilén glicol 400

\dotl

20%

Disolución de NaCl al 0,9%

\dotl

cs 100 4) Vía intravenosa

(a) Se preparó le composición inyectable siguiente:

Compuesto del ejemplo 1

\dotl

0,001%

Metmetlico

\dotl

0,01%

Polietilén glicol 400

\dotl

20%

Disolución de NaCl al 0,9%

\dotl

cs 100

(b) Se preparó la composición inyectable siguiente:

Compuesto del ejemplo 2

\dotl

0,01%

Polietilén glicol 400

\dotl

20%

Disolución de NaCl al 0,9%

\dotl

cs 100

(c) Se preparó la composición de ciclodextrina siguiente:

Compuesto del ejemplo 3

\dotl

0,1 mg

Ciclodextrina

\dotl

0,10 g

Agua para inyección c.s.p.

\dotl

10,00 g

(d) Se preparó la composición de ciclodextrina siguiente:

Compuesto del ejemplo 4

\dotl

0,01 g

2-hidroxipropil ciclodextrina

\dotl

0,10 g

Agua para inyección c.s.p.

\dotl

10,00

Claims

1. Compuesto, caracterizado por el hecho que corresponde con la fórmula general (I) siguiente:

6

en la cual:

- R_{1} representa:

7

2. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque el radical alquilo cíclico que tiene de 1 a 7 átomos de carbono se elige entre el radical ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo.

3. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el radical alquilo saturado lineal o ramificado se elige entre el radical metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, 2-butilo, t-butilo, n-pentilo, 2-pentilo, i-pentilo, n-hexilo, 2-hexilo, 3-hexilo, n-heptilo, 2-heptilo, 3-heptilo o i-heptilo.

4. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el radical arilo se elige entre el radical fenilo, tolilo, clorofenilo, nitrofenilo, metoxifenilo, tiofeno o furano.

5. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el radical heterociclo nitrogenado se elige entre pirrolidina, piperidina, morfolina, tiomorfolina, piperazina, homopiperazina o N-metil piperazina.

6. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el radical alquilo insaturado que tiene de 1 a 7 átomos de carbono se elige entre el radical alilo o vinilo.

7. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el radical aralquilo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono se elige entre el radical bencilo opcionalmente sustituido por un radical alquilo que tiene de 1 a 5 átomos de carbono, los radicales 1-fénil etilo, 1-fenil propilo, 1-fenil butilo, 1-fenil pentilo.

8. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el ion halogenuro se elige entre fluoruro, cloruro, bromuro o yoduro.

9. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque se elige entre:

- 4-dimetilamino-4-metil-pent-2-intioato de S-metilo;

- yoduro de 4-metil-4-trimetilamonio-pent-2-intioato de S-metilo;

- 4-di-n-propilamino-4-metil-pent-2-intioato de S-metilo;

- 4-metil-4-pirrodin-1-il-pent-2-intioato de S-metilo;

- y 4-metil-4-morfolin-4-il-pent-2-intioato de S-metilo.

10. Compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque presenta al menos una de las características siguientes:

- R_{2} y R_{3}, representan un radical metilo;

- R_{4} representa un radical metilo;

- R_{7} representa un radical metilo o un átomo de hidrógeno;

- y X representa un ion yoduro, un ion formiato o un ion carboxilato.

11. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 a título de medicamento.

12. Utilización de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento:

1) de los estados cancerosos o precancerosos,

2) de las afecciones dermatológicas relacionadas con un trastorno de la queratinización soportado sobre la diferenciación y sobre la proliferación, especialmente para tratar los acnés vulgares, comedones, polimorfos, rosáceas, acnés noduloquísticos, "conglobata", acnés seniles, acnés secundarios tales como acné solar, medicamentoso o profesional, y/o

3) de la ictiosis, los estados ictiosiformes, las queratodermias palmoplantares, las leucoplasias y los estados leucoplasiformes, y/o

4) de afecciones dermatológicas con un componente inmunoalérgico inflamatorio, con o sin problemas de proliferación celular, y especialmente psoriasis, reumatismo psoriásico, eczema, atopía respiratoria e hipertrofia gingival, y/o

5) de proliferaciones dérmicas o epidérmicas benignas o malignas, de origen viral o no, tales como verrugas vulgares, verrugas planas y epidermodisplasia verruguiforme, las papilomatosis orales o floridas, linfoma T, y proliferaciones que pueden estar inducidas por rayos ultra-violetas especialmente en el caso de los epiteliomas baso y espinocelulares, así como las lesiones cutáneas precancerosas tales como los queratoacantomas, y/o

6) de las dermatosis inmunes tales como el lupus eritematoso, las enfermedades inmunes con vesículas y las enfermedades del colágeno, tales como esclerodermia, y/o

7) de las afecciones dermatológicas o generales con componente inmunológico, y/o

8) de problemas de la función sebácea tales como la hiperseborrea del acné o la seborrea simple, y/o

9) de los trastornos cutáneos debidos a una exposición a los rayos U.V., del envejecimiento fotoinducido o cronológico de la piel, o pigmentaciones y queratosis actínicas, o patologías asociadas al envejecimiento cronológico o actínico, y/o

10) de los problemas de la cicatrización o las estrías, y/o

11) de las afecciones inflamatorias tales como la artritis, y/o

12) de las afecciones de origen viral a nivel cutáneo o general, tales como el síndrome de Kaposis o las hepatitis, y/o

13) del problemas oftalmológicos, especialmente corneopatías.

13. Utilización de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de los cancerosos o precancerosos.

14. Composición, caracterizada porque comprende, en un soporte fisiológicamente aceptable, al menos uno de los compuestos según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

15. Composición según la reivindicación 14, caracterizada por el hecho de que contiene el compuesto activo en una cantidad eficaz para inducir la apoptosis de las células transformadas en el organismo de un humano o animal.

16. Composición farmacéutica según la reivindicación 14, caracterizada por el hecho que contiene el compuesto activo en una cantidad eficaz para aumentar la inhibición de un carácter resistente a la inducción de la apoptosis de células transformadas, siendo este carácter debido al gen bcl2, o al gen MDR, o al gen BCL-X_{L}, o a la enzima ALDH presente en estas células.

17. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16, caracterizada porque la concentración del o de los compuesto(s) está comprendida entre 0,0001% y 10% en peso con relación al peso total de la composición.

18. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 17, caracterizada porque comprende entre otros al menos un compuesto elegido entre los 3-metiltiopropanoiltioésteres del ácido tióctico.

19. Composición según la reivindicación 18, caracterizada porque comprende el yoduro de 6-S,8-S-bis(3-metiltiopropanoil)octanoato de (2'-trimetilamonio etilo).

20. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 19 caracterizada porque comprende al menos 4-dimetilamino-4-metil-pent-2-intioato de S-metilo y 4-metil-4-morfolin-4-il-pent-2-intioato de S-metilo.

21. Utilización, para la preparación de una composición destinada a inducir la apoptosis de las células transformadas, de al menos un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

22. Utilización, para la preparación de una composición destinada a aumentar la inhibición de un carácter resistente a la inducción de la apoptosis de células transformadas, siendo este carácter debido al gen bcl2, o al gen MDR, o al gen BCL-X_{L}, o a la enzima ALDH presente en estas células, de al menos un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

23. Utilización, para la preparación de una composición farmacéutica destinada a aumentar la inhibición del carácter resistente a quimioterapia, a radioterapia o a los antiandrógenos de células transformadas, de al menos un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

24. Utilización según la reivindicación 23, caracterizado porque el carácter resistente a quimioterapia, radioterapia o antiadrógenos de células transformadas es debido al gen bcl2 presente en estas células.

25. Utilización según la reivindicación 23, caracterizado porque el carácter resistente a quimioterapia o antiadrógenos de células transformadas es debido al gen MDR presente en estas células.

26. Utilización según la reivindicación 23, caracterizado porque el carácter resistente a quimioterapia o antiadrógenos de células transformadas es debido al gen BCL-X_{L} presente en estas células.

27. Utilización según la reivindicación 23, caracterizado porque el carácter resistente a quimioterapia o antiadrógenos de células transformadas es debido a la actividad de la enzima ALDH.

28. Utilización de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, sólo o en mezcla con un compuesto elegido entre los 3-metiltiopropanoiltioésters del ácido tióctico, para la preparación de una composición farmacéutica destinada al tratamiento, a la regresión y/o a la prevención de tumores cancerosos.

29. Utilización según la reivindicación 28, caracterizado porque el 3-metiltiopropanoiltioéster del ácido tióctico es el yoduro de 6-S,8-S-bis(3-metiltiopropanoil)octanoato de (2'-trimetilamonio etilo).

30. Procedimiento de tratamiento cosmético consistente en aplicar sobre la piel o el cuero cabelludo una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 14 a 20.

31. Procedimiento según la reivindicación 30, caracterizado porque se destina a la limpieza de la piel y más particularmente a la pieles con tendencia acneica o del cuero cabelludo, al tratamiento o la prevención de las estrías, a la protección contra los efectos nefastos del sol, a la prevención y/o la lucha contra el envejecimiento foto-inducido o cronológico o para la lucha contra el aspecto graso de la piel o de los cabellos.