ES2219344T3 - Composicion dietetica o farmaceutica para su uso en la prevencion o el tratamiento de la hiperoxaluria. - Google Patents

Abstract

Uso de una composición de combinación bacteriana que comprende como cepas bacterianas: (a) Streptococcus thermophilus, en una mezcla con (b) al menos una cepa bacteriana elegida del grupo compuesto por Lactobacillus brevis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum y Bifidobacterium breve , o mezclas de las mismas, para preparar una composición dietética, farmacéutica o veterinaria para la prevención y/o el tratamiento de la hiperoxaluria y de los trastornos relacionados con ésta.

Description

Composición dietética o farmacéutica para su uso en la prevención o el tratamiento de la hiperoxaluria.

La presente invención trata del uso de especies y/o cepas bacterianas, que se indicarán más tarde, para la preparación de una composición para la prevención y/o el tratamiento de la hiperoxaluria y de los trastornos relacionados con ésta, así como de la composición así obtenida.

Asimismo, dicha composición puede adoptar la forma y realizar la actividad de una composición dietética o de un complemento alimenticio o de un verdadero medicamento, dependiendo de si la acción que se pretende que ejerza la composición es complementaria o preventiva o verdaderamente terapéutica, dependiendo de los individuos concretos a los que está dirigida. Esta acción preventiva o verdaderamente terapéutica puede ser el resultado de la colonización, por dichas bacterias, del intestino de los sujetos con riesgo de sufrir hiperoxaluria o trastornos relacionados con la hiperoxaluria.

La hiperoxaluria consiste en la presencia excesiva de oxalatos en la orina (oxalatos en orina > 40 mg/die). Además de que puede ser causado por un defecto genético que altera el metabolismo del ácido glioxílico, con una formación de oxalato en lugar de glicina, puede ser un efecto secundario de la ingestión excesiva de alimentos ricos en oxalato, tales como espinacas, cacao, avellanas, pimienta y té, o del tratamiento con, por ejemplo, medicamentos antiobesidad (por ejemplo, ORLISTAT). De aquí la utilidad de proporcionar un complemento dietético capaz de reducir y regular la presencia de oxalatos en la orina.

La hiperoxaluria es un factor de riesgo predominante para la formación de cálculos renales, y puede ser causada por la excesiva absorción de oxalato en el colon o por una sobrecarga renal provocada por la hiperoxaluria, como en la hiperoxaluria primaria (HP).

El nivel de oxalato en orina parece constituir un signo fundamental con respecto a la formación de cálculos de oxalato cálcico, incluso en pacientes con una excreción urinaria de calcio normal, y los cálculos de oxalato cálcico también pueden formarse a veces en pacientes bajo una estricta diálisis oligúrica y sin un historial previo de patología nefrolítica en la que, dentro de este marco, puede haber una hipersaturación de oxalato incluso en una cantidad mínima de orina.

La excreción diaria de oxalato está relacionada con el volumen de orina, con la ingesta de vitamina C, con el índice de peso corporal y, de forma inversa, con la ingesta de calcio.

Un estudio de Sutton y Walker sobre una población de formadores de cálculos de oxalato cálcico idiopáticos con una ligera hiperoxaluria fue incapaz de demostrar cualquier alteración significativa del control renal de oxalato, y concluyó que había un aumento de la carga dietética de oxalato con un posible mecanismo de hiperabsorción.

Por lo tanto, en pacientes con hiperoxaluria no HP será necesario prestar la mayor atención a la absorción entérica de oxalato, que estimula el cuadro clínico de hiperoxaluria entérica y, a menudo, la producción recurrente de cálculos renales. De hecho, se ha reconocido desde 1968 que la nefrolitiasis es una complicación de una enfermedad o de la resección del intestino.

El aumento de la absorción intestinal de oxalato, denominado hiperoxaluria entérica (HOE), depende al menos de dos mecanismos. El primero está relacionado con la malabsorción de las sales biliares en el íleon enfermo o reseccionado, que provoca una deficiencia de sales biliares y una malabsorción de las grasas. La mayoría del oxalato de la dieta está unido al calcio y apenas se absorbe, pero las grasas poco absorbidas se unen al calcio intraluminal, disminuyendo la cantidad unida a oxalato y provocando un aumento de la absorción de oxalato. El segundo mecanismo de la HOE está relacionado con un aumento de la permeabilidad del colon para el oxalato, provocado por ácidos grasos y sales biliares poco absorbidos, quizás agravado por variaciones en las uniones ocluyentes epiteliales del colon provocadas por el descenso del calcio intraluminal. Esta hiperoxaluria se relaciona con el grado de esteatorrea, y no es habitual con resecciones del íleon < 30 cm. Un recuento disminuido de las bacterias que metabolizan el oxalato del colon (Oxalobacter formigenes), así como su inhibición por sales biliares poco absorbidas, pueden asimismo contribuir a la HOE. Finalmente, puede observarse hiperoxaluria en pacientes con nutrición parenteral a largo plazo, también en pacientes colostomizados y con una ingesta mínima por vía oral, quizás debido al aumento en la síntesis de oxalato endógeno.

El oxalato es poco soluble en agua, pero la orina puede sobresaturarse por la presencia de inhibidores de la cristalización. La hiperoxaluria, combinada con un volumen de orina disminuido y niveles reducidos de estos inhibidores, predispone a los cálculos renales.

La deposición de oxalato en el parénquima renal puede causar nefritis intersticial y nefrocalcinosis, junto con una insuficiencia renal aguda o crónica.

El tratamiento de los pacientes con cálculos de oxalato cálcico es complejo, y se describe a continuación.

Etapa 1

Aumento de la ingesta de líquidos para una excreción urinaria de 3 l/día;

Dieta baja en oxalato (evitar las espinacas, el ruibarbo, la remolacha, las avellanas, el té, los refrescos de cola, el chocolate, el salvado de trigo, las fresas):

Dieta baja en grasas (50 g/día);

Complementos de calcio (1-2 g/día);

Colestiramina (4 g cuatro veces al día);

Etapa 2

(Si los cálculos reaparecen a pesar del tratamiento de la Etapa 1)

Alcalinización de la orina y complementos de citrato (por ejemplo, citrato potásico, citrato sódico = 30 mEq base cuatro veces al día);

Complementos de magnesio (para corregir los niveles urinarios);

Alopurinol 300 mg/día (si los cálculos contienen ácido úrico).

La posibilidad de manipulación gastrointestinal biológica del oxalato se conoce desde 1955 a partir de documentos sobre la destrucción del oxalato por el contenido del rumen de las vacas y, posteriormente, por una flora bacteriana mixta del intestino grueso de otros herbívoros.

Allison mencionó en 1985 el efecto específico de la degradación del oxalato por parte de Oxalobacter formigenes, que puebla el intestino grueso del hombre, así como de otros animales.

Más recientemente, Ito demostró la degradación del contenido de oxalato de los alimentos in vitro mediante Eubacterium lentum WIH-1.

Posteriormente, la ausencia de Oxalobacter formigenes se sugirió como un factor de riesgo de hiperoxaluria en pacientes con fibrosis quística.

La hiperoxaluria entérica es, por lo tanto, el resultado de la excesiva absorción entérica de oxalato a través de un aumento de la permeabilidad de la mucosa o de un aumento de la solubilidad y la biodisponibilidad del oxalato fecal, como cuando se reduce el contenido en calcio de la dieta. La ausencia de Oxalobacter formigenes puede añadir un nuevo mecanismo fisiopatológico que es importante desde el punto de vista terapéutico.

Ahora se ha averiguado, sorprendentemente, que las siguientes bacterias: Streptococcus thermophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum y Bifidobacterium breve son capaces de crecer en presencia de y/o degradar el oxalato.

Por lo tanto, la presente invención proporciona el uso de Streptococcus thermophilus en una mezcla con al menos una cepa de las siguientes bacterias: Lactobacillus brevis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum y Bifidobacterium breve para preparar una composición dietética y/o farmacéutica para la prevención y/o el tratamiento de la hiperoxaluria y los trastornos relacionados con ésta.

Preferiblemente, la cepa de Lactobacillus brevis es la cepa CD2 de Lactobacillus brevis depositada en el DSM-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania, el 6 de febrero de 1998, con número de acceso DSM 11988 conforme al acuerdo de Budapest, o mutantes y derivadas de la misma.

Más particularmente, la hiperoxaluria y los trastornos relacionados con ella comprenden la hiperoxaluria entérica, la litiasis renal de oxalato cálcico, las hiperoxalurias por enfermedades inflamatorias intestinales, la insuficiencia renal, la calculosis vesical, la cardiopatía por hiperoxaluria, la fibrosis quística y la vulvodinia.

El uso de la invención incluye el uso en el campo veterinario.

Según la invención, la composición dietética y/o farmacéutica es capaz de colonizar, con dichas bacterias, el intestino de los sujetos con riesgo de hiperoxaluria o trastornos por hiperoxaluria, o trastornos por litiasis renal de oxalato cálcico.

La invención proporciona asimismo una composición dietética o farmacéutica que comprende como cepas bacterianas las siguientes bacterias: (a) Streptococcus thermophilus en una mezcla con (b) la cepa CD2 de Lactobacillus brevis, depositada en el DSM-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania, el 6 de febrero de 1998, con número de acceso DSM 11988 conforme al acuerdo de Budapest, o mutantes y derivadas de la misma, y opcionalmente, al menos una cepa bacteriana elegida del grupo consistente en Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum y Bifidobacterium breve.

Según una realización de la invención, una cepa de Streptococcus thermophilus se combina con la cepa CD2 de Lactobacillus brevis.

Según otra realización de la invención, una cepa de Streptococcus thermophilus, junto con la cepa CD2 de Lactobacillus brevis, se combina con una cepa de Bifidobacterium elegida del grupo compuesto por Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum y Bifidobacterium breve, o sus mezclas. En este caso, preferiblemente, las proporciones entre las concentraciones de Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum y Bifidobacterium breve en la mezcla, expresadas en UFC/g de composición, son preferiblemente 1:1:1.

Según una realización preferible, la proporción entre las concentraciones de Streptococcus thermophilus y las de las bacterias del género Lactobacillus, expresadas en UFC/g de composición, es desde 1.000:1 hasta 1:1.000, mientras que la proporción entre las concentraciones de Streptococcus thermophilus y de la bacterias del género Bifidobacterium o de la mezcla de bacterias del género Bifidobacterium, expresadas en UFC/g de composición, es desde 1.000:1 hasta 1:1.000.

La concentración total de bacterias es preferiblemente desde 10^{6} hasta 10^{12} UFC/g de composición.

Según la invención, la composición puede además contener o ser administrada en combinación con:

- sustancias capaces de unirse al oxalato en el lumen intestinal, en particular, la colestiramina (por ejemplo, 0,5-4 g/die) e hidrocoloides orgánicos de origen marino,

- vitaminas, en particular, la B_{6} (por ejemplo, 20-200 mg/die) y C (por ejemplo, 0,1-2 g/die),

- óxido de magnesio (por ejemplo, 50-600 mg/die),

- calcio (por ejemplo, 0,5-2 g/die),

- alopurinol (por ejemplo, 50-300 mg/die),

- enzimas, bacterias lácticas, hormonas y diuréticos inmunomoduladores, anticancerígenos, lípidos, alcalinizadores de la orina, acidificadores de la orina, ácidos grasos saturados e insaturados y fosfolípidos,

- medicamentos que tengan la hiperoxaluria como efecto secundario, por ejemplo, medicamentos antiobesidad (por ejemplo, ORLISTAT).

Generalmente, la composición puede administrarse por vía oral o por vía intraluminal o mediante enteroclisis en forma de gránulos, comprimidos, cápsulas, supositorios o mediante un enteroclismo.

La invención también proporciona un alimento basado en chocolate, cacao, espárragos, tomate, bebidas/líquidos, espinacas, nueces, avellanas, fibra, cereales, patata, té y manteca de cacahuete, que contiene una cantidad de Streptococcus thermophilus con Lactobacillus brevis CD2 y, opcionalmente, al menos una cepa bacteriana elegida de entre Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum y Bifidobacterium breve, suficientes para colonizar el intestino de sujetos en riesgo de hiperoxaluria o trastornos derivados de la hiperoxaluria.

La invención proporciona finalmente el uso para la prevención y/o el tratamiento de la hiperoxaluria y los trastornos relacionados con ésta mediante la administración, a un sujeto en riesgo de hiperoxaluria o de un trastorno derivado de la hiperoxaluria, de entre 0,5 y 4 g/die de la composición anterior.

Los "sujetos" en este contexto incluyen seres humanos y animales, en general, y, en particular, animales de granja, animales de deporte y mascotas.

Ejemplo 1 Cultivos puros

Para este experimento se emplearon Bifidobacterium infantis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus brevis y Streptococcus thermophilus.

Todas las cepas se almacenaron liofilizadas en un entorno refrigerado. Bifidobacterium infantis se cultivó en caldo MRS (DIFCO) + glucosa al 0,5%, se incubó anaeróbicamente a 37ºC durante 18 horas en Gas Pak con una atmósfera de CO_{2} y H_{2}, los Lactobacillus acidophilus y Lactobacillus plantarum en caldo MRS (DIFCO), se incubaron a 37ºC durante 18 horas, el Lactobacillus brevis en caldo MRS (DIFCO), se incubó a 30ºC durante 18 horas, y el Streptococcus thermophilus en caldo MI7 (DIFCO) + un 0,5% de lactosa, y se incubó a 37ºC durante 18 horas.

Medios

Para la preparación de los medios de cultivo que contenían oxalato amónico (BDH) 10 mM y 20 mM, se añadieron a 10 ml de medio base (formulado como sigue: 10 g de proteasas peptona nº 3 (DIFCO) + 5 g de extracto de levadura (DIFCO) + 1 ml de Tween 80 (DIFCO) + 2 g de KH_{2}PO_{4} (BDH) + 5 g de acetato sódico (BDH) + 2 g de dihidrogenocitrato amónico (MERCK) + 0,05 g de MgSO_{4} \cdot 7 H_{2}O (MERCK) + 0,05 g de MnSO_{4} (MERCK) + agua, c.s.p. 500 ml, y se esterilizó a 121ºC durante 15 min), 10 ml de las siguientes disoluciones de azúcares y oxalato amónico, esterilizadas con un filtro de 0,45 \mum, a saber:

para L. acidophilus, L. plantarum y L. brevis

1A: oxalato amónico 20 mM + 40 g/l de glucosa (BDH)

1B: oxalato amónico 40 mM + 40 g/l de glucosa

para S. thermophilus

2A: oxalato amónico 20 mM + 40 g/l de glucosa + 10 g/l de lactosa (DIFCO)

2B: oxalato amónico 40 mM + 40 g/l de glucosa + 10 g/l de lactosa

para B. infantis

3A: oxalato amónico 20 mM + 50 g/l de glucosa

3B: oxalato amónico 40 mM + 50 g/l de glucosa

Después de mezclar, las muestras con la etiqueta A contenían oxalato amónico 10 mM, mientras que las muestras con la etiqueta B contenían oxalato amónico 20 mM.

Entonces los caldos de cultivo se inocularon al 10% con un cultivo fresco y se incubaron en las condiciones adecuadas para cada cepa, descritas anteriormente.

Cada caldo de cultivo crecido se sometió a un recuento del número de microorganismos contenidos en el medio de cultivo en las condiciones adecuadas, y en particular:

- B. infantis en agar HHD (HI Media Laboratories), incubado anaeróbicamente a 37ºC durante 3 días;

- L. acidophilus en agar MRS (DIFCO), incubado anaeróbicamente a 37ºC durante 3 días;

- L. plantarum y L. brevis en agar MRS (DIFCO), incubado anaeróbicamente a 37ºC durante 3 días;

- S. thermophilus en agar MI7 (DIFCO), incubado a 37ºC durante 2 días.

Determinación del ácido oxálico Preparación de la muestra

Los caldos de cultivo se pasteurizaron a 90ºC durante 15 min, después se centrifugaron a 5.000 rpm durante 10 min y finalmente el sobrenadante se filtró con un filtro de 0,45 \mum.

Procedimiento

Se determinó el contenido en ácido oxálico mediante el equipo de "ácido oxálico" (Boehringer Mannheim) específico para este ácido. El análisis se realizó con un espectrofotómetro (Perkin Elmer - Lambda 5) a 340 nm.

Resultados

Como puede apreciarse a partir de la Tabla 1, a continuación, todas las cepas se desarrollan generalmente en presencia de oxalato amónico 10 mM, mientras que una concentración de 20 mM inhibe parcialmente el crecimiento microbiano, especialmente en el caso de L. acidophilus y S. thermophilus.

Sin embargo, no parece haber una relación entre el desarrollo bacteriano y la degradación del oxalato. Así, L. plantarum y L. brevis provocan poca o ninguna degradación del oxalato, incluso si muestran un crecimiento significativo.

Por otro lado, L. acidophilus y S. thermophilus degradan el oxalato a ambas concentraciones, a pesar del reducido crecimiento en presencia de oxalato amónico 20 mM. Finalmente, B. infantis muestra una actividad de degradación muy buena, y no se ve inhibido por el oxalato a ninguna de las dos concentraciones.

TABLA 1

1

Ejemplo 2

(Comparativo)

Casos

Tras un consentimiento informado, se administró, a 7 pacientes con hiperoxaluria, Streptococcus thermophilus por vía oral, 6 g al día durante 3 semanas, y se determinó la oxaluria en 24 horas en el tiempo 0 y después de 3 semanas.

El oxalato en orina se determinó mediante procedimientos estándar empleados en química clínica, y se expresó como mg de oxalato en orina recogidos en un periodo de tiempo de 24 horas.

Después de 3 semanas, los resultados de la oxalemia fueron los siguientes:

Paciente	Antes	Después
1	50	7
2	47	30
3	41	31
4	95	56
5	62	14
6	58	34
7	49	12

Está claro que en los pacientes con elevados niveles de oxalato en orina, el tratamiento consiguió una notable reducción de los niveles de oxalato.

Claims (7)

1. Uso de una composición de combinación bacteriana que comprende como cepas bacterianas:

(a) Streptococcus thermophilus, en una mezcla con

(b) al menos una cepa bacteriana elegida del grupo compuesto por Lactobacillus brevis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum y Bifidobacterium breve , o mezclas de las mismas,

para preparar una composición dietética, farmacéutica o veterinaria para la prevención y/o el tratamiento de la hiperoxaluria y de los trastornos relacionados con ésta.

2. El uso de la Reivindicación 1, en el que la cepa de Lactobacillus brevis es la cepa CD2 de Lactobacillus brevis depositada en el DSM-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania, el 6 de febrero de 1998, con número de acceso DSM 11988 conforme al acuerdo de Budapest, o mutantes y derivadas de la misma.

3. El uso de la Reivindicación 1, en el que la proporción entre las concentraciones de Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum y Bifidobacterium breve en la mezcla, expresadas en UFC/g de composición, son 1:1:1.

4. El uso de las Reivindicaciones 1-2, en el que la proporción entre la concentración de Streptococcus thermophilus y la de la cepa de Lactobacillus, expresada en UFC/g de composición, es desde 1.000:1 hasta 1:1.000.

5. El uso de la Reivindicación 1, en el que la proporción entre las concentraciones de Streptococcus thermophilus y la de la cepa de Bifidobacterium, expresada en UFC/g de composición, es desde 1.000:1 hasta 1:1.000.

6. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, que comprende la administración a un animal en necesidad de la misma de entre 0,5 y 4 g/die de dicha composición de combinación bacteriana.

7. Una composición de combinación bacteriana dietética/farmacéutica que comprende como cepas bacterianas:

(a) Streptococcus thermophilus, en una mezcla con

(b) la cepa CD2 de Lactobacillus brevis depositada en el DSM-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania, el 6 de febrero de 1998, con número de acceso DSM 11988 conforme al acuerdo de Budapest, o mutantes y derivadas de la misma, y opcionalmente, al menos una cepa bacteriana elegida del grupo compuesto por Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum y Bifidobacterium breve o mezclas de las mismas.