UA71621C2

UA71621C2 - Use of combined bacterial composition as dietary or pharmaceutical supplement for preventing or treating hyperoxaluria

Info

Publication number: UA71621C2
Application number: UA2001129040A
Authority: UA
Original assignee: Vsl Pharma Ltd
Priority date: 1999-05-28
Filing date: 2000-05-24
Publication date: 2004-12-15
Also published as: NO20015782D0; EA004257B1; NZ516020A; JP2003500451A; IL199437A0; DE60010456T2; EE200100618A; US20020061292A1; MXPA01012184A; US6562336B2; CN1365284A; BR0011038B1; TR200103439T2; ATE265857T1; BR0011038A; IL146703A; PT1181027E; JP4737836B2; WO2000072855A2; SK16612001A3

Description

Опис винаходу

Даний винахід відноситься до застосування видів і/або штамів бактерій, які будуть вказані нижче, для 2 отримання композиції для профілактики і/або лікування гіпероксалурії і порушень, пов'язаних з нею, а також отриманої таким чином композицій.

Відповідно, вказана композиція може приймати форму і виявляти активність дієтичної композиції або харчової добавки, або істинного лікарського препарату в залежності від підтримуючої або профілактичної, або безпосередньо терапевтичної дії, яку композиція призначена виявляти в залежності від конкретних індивідуумів, 70 для яких вона призначена. Дана профілактична або безпосередньо терапевтична дія може бути отримана внаслідок заселення вищезгаданих бактерій в кишечнику суб'єктів у разі ризику виникнення гіпероксалурії або порушень, пов'язаних з гіпероксалурією.

Гіпероксалурія виражається в надмірній присутності оксалатів в сечі (рівень оксалатів в сечі »4Омг/день).

Вона може виникати внаслідок генетичного дефекту, який змінює метаболізм гліоксилової кислоти з утворенням 12 оксалату замість гліцину, також вона може бути побічним ефектом надмірного споживання багатої оксалатами їжі, такої, як шпинат, какао, фундук, перець і чай, або лікування, наприклад, препаратами проти ожиріння (наприклад, ОКГІЗТАТ). Отже, очевидна корисність забезпечення харчовою добавкою, здатною знижувати або регулювати присутність оксалатів в сечі.

Гіпероксалурія представляє переважаючий чинник ризику відносно утворення конкрементів в нирках і може викликатися підвищеним всмоктуванням оксалатів з ободової кишки або перевантаженням нирок, викликаного гіпероксалурією, як це має місце при первинній гіпероксалурії (РН).

Рівень оксалатів в сечі, мабуть, представляє вирішальний чинник відносно утворення оксалатних конкрементів у пацієнтів з нормальним виділенням кальцію з сечею, і оксалатні конкременти можуть іноді також утворюватися у пацієнтів при діалізі при вираженій олігурії і без нирковокам'яній хвороби в анамнезі, що в с рамках даної роботи означає, що може мати місце супернасичення оксалатами навіть у разі мінімальної кількості (3 сечі.

Добове виділення оксалатів прямо пов'язане з об'ємом сечі, споживанням вітаміну С, масою тіла і, навпаки, з поглинанням кальцію.

У дослідженні Зийоп і УУаЇКег на групі людей з ідіопатичним утворенням оксалатних конкрементів при -- незначній гіпероксалурії неможливо було показати наявність якої-небудь значної зміни ниркової регуляції рівня с оксалатів, і був зроблений висновок про те, що було підвищене харчове навантаження оксалатами з можливим механізмом підвищеного всмоктування. о

Отже, у пацієнтів не з первинною гіпероксалурією найбільшу увагу необхідно приділяти підвищеному «-- всмоктуванню оксалатів в кишечнику, яке створює клінічну картину кишкової гіпероксалурії і часто 3о рецидивуючого утворення конкрементів в нирках. Фактично з 1968 року визнається, що нирковокам'яна хвороба в представляє ускладнення при захворюванні або резекції кишечнику.

Підвищене всмоктування оксалатів в кишечнику, яке називається кишковою гіпероксалурією (ЕНО), залежить щонайменше від двох механізмів. Перший пов'язаний з порушенням всмоктування жовчних солей при « захворюванні або резекції клубової кишки, що приводить до нестачі жовчних солей і порушення всмоктування З 50 жирів. Велика частина оксалатів в харчовому раціоні пов'язана з кальцієм і всмоктується погано, але жири, що с слабо всмоктуються зв'язують кальцій в просвіті кишечнику, знижуючи його кількість, пов'язану з оксалатом, і

Із» приводять до підвищеного всмоктування оксалатів. Другий механізм ЕНО пов'язаний з підвищеною проникністю ободової кишки для оксалатів, викликаної жирними кислотами, що слабо всмоктуються і жовчними солями, можливо погіршеної варіаціями епітеліальних оклюзивних сполук ободової кишки, викликаних зниженням рівня кальцію в просвіті. Дана гіпероксалурія пов'язана з мірою стеатореї і є незвичайною при резекціях клубової і кишки «ЗОсм. Знижене число бактерій, які метаболізують оксалати в ободовій кишці (Охаїобрасіег гогтідепев), а - також їх інгібування жовчними солями, що слабо всмоктуються, може, ймовірно, вносити свій внесок в розвиток

ЕНО. Нарешті, гіпероксалурію можна спостерігати при тривалому парентеральному харчуванні, а також у б пацієнтів з колектомією і при мінімальному пероральному прийомі їжі, можливо, за рахунок підвищеного синтезу ка 20 ендогенного оксалату.

Оксалати слабо розчинні у воді, але сеча може стати супернасиченою за рахунок присутності інгібіторів та кристалізації. Гіпероксалурія в поєднанні із зниженим об'ємом сечі і зниженими рівнями цих інгібіторів, призводить до утворення конкрементів в нирках.

Відкладення оксалатів в паренхімі нирок може викликати інтерстиціальний нефрит і нефрокальциноз з 25 гострою або хронічною нирковою недостатністю.

ГФ) Лікування пацієнтів з кальцієвими оксалатними конкрементами є комплексним і описується нижче.

Стадія 1 о Підвищене споживання рідин для виділення сечі Зл/день;

Харчовий раціон з низьким вмістом оксалатів (уникати шпинату, ревеню, буряка, фундука, чаю, коли, бо шоколаду, пшеничних висівок, полуниці);

Харчовий раціон з низьким рівнем жирів (5Ог/день);

Добавки кальцію (1-2г/день);

Холестирамін (по 4г чотири рази на день).

Стадія 2 (якщо конкременти виникають знову, незважаючи на лікування по стадії 1) бо Підлужування сечі і добавки цитратів (наприклад, цитрату калію, цитрату натрію - по ЗОмекв основи чотири рази на день);

Добавки магнію (для корекції рівнів в сечі);

Алопуринол ЗбОмг/день (якщо конкременти містять сечову кислоту).

Можливість шлунково-кишкової біологічної регуляції рівня оксалатів відома з 1955 року з даних по розкладанню оксалатів вмістом рубця корів, і пізніше, змішаною бактерійною флорою товстого кишечнику інших травоїдних.

Аїййзоп в 1985 році відніс специфічне розкладання оксалатів за рахунок ОхаїЇорасіег Гопаідепев, які заселяють товстий кишечник людини, а також інших тварин. 70 Пізніше Мо показав розкладання оксалатів в продуктах харчування в умовах іп мйго за допомогою

Еибрасіегіит. Іепічт УМІН-1.

Згодом було висловлене припущення про те, що відсутність Охаїорасіег Тгтідепез є чинником ризику відносно виникнення гіпероксалурії у пацієнтів з кістозним фіброзом.

Отже, кишкова гіпероксалурія є результатом підвищеного всмоктування оксалатів в кишечнику за рахунок 7/5 підвищеної проникності слизової або підвищеної розчинності і біодоступності оксалатів в фекаліях, коли вміст кальцію в харчовому раціоні знижений. Відсутність ОхаЇорасіег Тогтідепез може представляти новий патофізіологічний механізм, який важливий з точки зору терапії.

У цей час несподівано було встановлено, що наступні бактерії: Зігеріососсивз (Ппегторпйсшв, І асіорасіш5

Бгеміз, Іасіорасійи5 асідорпйив5, І асіорасіййз ріапіагит, Війдорасіегіцт іпбапіа, Війдорасіегіцт Іюпдит 2о 1 Війдорасіегішт Бгеме здатні до зростання в присутності оксалату і/або оксалату, що розкладається.

Отже, даний винахід забезпечує застосування щонайменше одного штаму наступних бактерій: Зігеріососсив

ІШепториййв5, Іасіорасійи5 ргемів, І асіорасійз асідорийи5, Іасіорасійв ріапіагит, Війдобасіегіит іптапіїз, Війдорасіегішт опдит і Війдорасіегцт бгеме для отримання дієтичної і/або фармацевтичної композиції для профілактики і/або лікування гіпероксалурії і порушень, пов'язаних з нею. сч

Переважно штамом І асіорасійи5 Бгеміз є штам І асіорасіїиз бгеміз СЮ2, що зберігається за Будапештською угодою в ОМ - Німецькій колекції мікроорганізмів і клітинних культур Стр, Вгашпеспмжмеїд, Німеччина, з 6 і) лютого 1998 року під інвентарним номером О5М 11988, або його мутанти або похідні.

Конкретніше, гіпероксалурія і порушення, пов'язані з нею, включають кишкову гіпероксалурію, утворення кальцієвих оксалатних каменів в нирках, гіпероксалурію внаслідок запальних захворювань кишечнику, ниркову -с де

Зо Недостатність, везикулярний калькулез, кардіопатію в результаті гіпероксалурії, кістозний фіброз і вульводинію.

Застосування винаходу включає застосування в області ветеринарії. с

Згідно з винаходом дієтична і/або фармацевтична композиції здатна заселяти вказаними бактеріями Ге кишечник суб'єктів при ризику виникнення гіпероксалурії або порушень в результаті гіпероксалурії, або порушень внаслідок утворення кальцієвих оксалатних конкрементів. --

Винахід також забезпечує дієтичну або фармацевтичну композицію, що включає щонайменше один штам ча наступних бактерії: Зігеріососсив Іпегторпіїсв, Ї асюрасійив Бгемів, Ї асюрасійив асідорпіов,

Ї асюрасійив ріапіагит, Війдорасіегіт іптапііз, Віїдорасіегіит Іюопдит і Війдорасіегішт Ббгеме.

Згідно з одним з втілень винаходу штам бігеріососсив (пегторпіїиз змішується з штамом І асіорасіїйшв, вибраним з групи, що складається з І асіорасійи8 Бгеміз, І асіорасійи5 асідорийиз і І асіорасійиз ріапіагит « або їх сумішей. Переважно штамом І асіорасійи5 Бгеміз є штам І асіорасійй5 Бгеміз СО2, що зберігається за з с Будапештською угодою в ЮО5М - Німецької колекції мікроорганізмів і клітинних культур Стр, Вгашйпзспуеїд,

Німеччина, з 6 лютого 1998 року під інвентарний номером О5М 11988, або його мутанти і похідні. ;» Згідно з іншим втіленням винаходу штам бігеріососсив (пеппорпйиз змішується з штамом Війдобасіегішт, вибраним з групи, що складається з Війдобрасіегішт іптапіїз, ВійДаорасіегішт Іопдит. і Віїйдорасіегішт бБгеме або їх сумішей. У цьому випадку переважно, щоб співвідношення між концентраціями Війдобасіегіт іптапіїів, -І Вітйдорасіегіцт Іопдит і Віїдобасіегішт ргеме в суміші, виражені в КОЕ/г композиції, переважно дорівнювали 11171. - Згідно з переважним втіленням співвідношення між концентраціями Зігеріососсив (пегторпййиз і бактерією

Ге» роду І асіорасіїш5, виражені в КОЕ/г композиції, рівно від 1000:1 до 1:1000, в той час, як співвідношення між 5р концентраціями Зігеріососсив (Пегаорпй5 і бактерією роду Війдобрасіегішт або сумішшю бактерій роду де Війдорасіегічт, виражені в КОЕ/г композиції, дорівнює від 1000:1 до 1:1000. - М Загальна концентрація бактерій переважно складає від 1097 до 1012 КОЕ/г композиції.

Згідно з винаходом, композиція може додатково включати або вводитися в комбінації з: речовинами, здатними зв'язувати оксалати в просвіті кишечнику, зокрема, холестираміном (наприклад, 0,5-4г/день) і органічними гідроколоїдами морського походження; вітамінами, зокрема, В; (наприклад, 20-20Омг/день) і С (наприклад, 0,1-2г/день); іФ) окислом магнію (наприклад, 50-6б0Омг/день); ко кальцієм (наприклад, 0,5-2г/день); алопуринолом (наприклад, 50-З0Омг/день); во ферментами, молочнокислими бактеріями, гормонами і діуретиками, імуномодуляторами, протипухлинними препаратами, ліпідами, підлужувачами сечі, підкислювачами сечі, насиченими і ненасиченими жирними кислотами і фосфоліпідами; препаратами, що приводять до гіпероксалурії як побічної дії, наприклад, препаратами проти ожиріння (наприклад, ОКГІЗТАТ). 65 В основному композицію можна вводити перорально або в просвіт кишечнику, або субаквально, у вигляді гранул, таблеток, капсул, супозиторіїв або клізми для кишечнику.

Винахід також забезпечує продукт харчування на основі шоколаду, какао, спаржі, томата, напоїв для питва/рідин, шпинату, волоських горіхів, фундука, клітковини, злакових, картоплі, чаю і арахісового масла, що містить щонайменше один штам бактерій, вибраний з Зігеріососсиз (Ппепторпйй5, Іасіорасійи5 Бгемів,

І асюрасійив5 асідорпйив5, І асіорасійиз ріапіагит, Війдорасіегіцт іпїапіївх, Війдорасіегішт Іопдит (|і

Війдорасіегішт бгеме, в кількості достатній для заселення кишечнику суб'єктів при ризику виникнення гіпероксалурії або порушень, виникаючих в результаті гіпероксалурії.

Нарешті, винахід забезпечує спосіб профілактики і/або лікування гіпероксалурії і порушень, пов'язаних з нею, введенням суб'єкту при ризику виникнення гіпероксалурії або порушення, виникаючого в результаті 70 гіпероксалурії, від 0,5 до 4г/день композиції згідно з винаходом. "Суб'єкти" в тому значенні, в якому цей термін тут використовується, включає людей і тварин загалом, і, зокрема, сільськогосподарських тварин, спортивних тварин і домашніх тварин.

Приклад 1

Чисті культури

Для наступного досліду використовували Війдорасіегішт іптапіїз, І асіорасійив8 асідорпійсв5в, І асіорасіив5 ріапіагит, І асіорасійив Бгемів і Зігеріососсив (пегторпіЇШв.

Всі штами зберігали ліофілізованими в холодильнику. Віїйдобасіегішт іпїапіїз культивували в бульйоні МА5 (Оіїсо)0,5906 глюкози, інкубували в анаеробних умовах при 37"С протягом 18год. в Саз Рак в атмосфері СО» і

Не», Гасіорасійив асідорпіШв і І асіорасіїйв ріапіатт в бульйоні МА5 (Оіїсо), інкубували при 377"С протягом 8год., ІГасіюобрасіїв Бгемів в бульйоні МАК (Оїїсо), інкубували при З0"С протягом 18год., і Згеріососсив

Іеторпінз в бульйоні МІ7 (Оіїсо)н0,59о лактози і інкубували при 37"С протягом 18год.

Середовища

Для приготування культуральних середовищ, що містять 10мММ і 20мМ оксалату амонію (ВОН), до 1Омл основного середовища (складеного таким чином; 10г протеозного пептону Мо3 (Оіїсо)н5г дріжджового екстракту с ов (Оіїсо)німл Твіну-80 (Ойсо)2г КНоРО); (ВОН)нОг ацетату натрію (ВОН)2г дигідрогенцитрату амонію (МЕКСК)нОО5г МаЗО»Х. 7820 (МЕКСК)нО5г МиЗО, (МЕКСК)нвода до 500мл і стерилізованого при 12170 і) протягом 15хв.) додавали 1Омл розчинів наступних цукрів і оксалату амонію, стерилізованих пропусканням через фільтр О0,45мкм, а саме: для ГІ. асідорпінв, І. ріапіагит і Ї.. Бгемів «- зо 1А: 20мММ оксалату амонію -40г/л глюкози (ВОН) 18: 40мММ оксалату амоніюна4Ог/л глюкози для 5 (ПегторпйЙив5 с 2А: 20мММ оксалату амонію «40г/л глюкози «10г/л лактози (Оіїсо) Ге 28: 40ММ оксалату амоніюна4Ог/л глюкози 10г/л лактози для В.іпгапіїв --

ЗА: 20мММ оксалату амонію 50г/л глюкози ї-

ЗВ: 40мММ оксалату амонію 50г/л глюкози.

Після змішування проби, помічені А, містили 10ММ оксалату амонію, в той час, як проби, помічені В, містили 20ММ оксалату амонію.

Культуральні бульйони потім засівали 1095 свіжою культурою і інкубували у відповідних для кожного « описаного вище штаму умовах. в с У кожній зростаючій бульйонний культурі підраховували число мікроорганізмів, що знаходяться в культуральних середовищах у відповідних умовах і, зокрема: ;» В.Іптапіїз на агарі ННО (НІ Меасіа І арогайгієз) інкубували в анаеробних умовах при 37"С протягом З діб;

І.асідорпіїиз на агарі МА (Оіїїсо) інкубували в анаеробних умовах при 37"С протягом З діб; 45 .ріапіагит і І.Бгеміз на агарі МА5 (Оїїсо) інкубували в анаеробних умовах при 37"С протягом З діб; -І Запеторнпіїиз на агарі МІ 7 (Оїїсо) інкубували при 37"С протягом 2 діб.

Визначення щавлевої кислоти - Підготовка проб

Ге» Бульйонні культури пастеризували при 907С протягом 15хв., потім центрифугували при 5000об./хв. протягом

Охв. і нарешті супернатант фільтрували через фільтр 0,45мкм. де Метод як Концентрацію щавлевої кислоти визначали за допомогою набору "Щавлева кислота" (Воепгіпдег МаппНеїт), специфічного для даної кислоти. Аналіз проводили на спектрофотометрі (Регкіп ЕІтег - атбраа 5) при З4Онм.

Результати

Як випливає з таблиці 1, приведеної нижче, все штами в основному ростуть в присутності Л0ММ оксалату амонію, в той час, як концентрація 20мММ частково інгібує зростання мікробів, особливо у випадку І. .асідорпйив5

Ф) і 5Іегторпішв. ка Однак, ймовірно, кореляція між зростанням бактерій і розкладанням оксалату відсутня. Так, І.ріапіагит і

І.ргеміз викликають незначне, якщо взагалі таке є, розкладання оксалату, навіть якщо вони показують значне бо Зростання.

З іншого боку, І асідорпйив і 5 пегторпйив розкладають оксалат при обох концентраціях, незважаючи на знижене зростання в присутності 20ММ оксалату амонію. Нарешті, В.іптапіїз виявляє дуже хорошу активність відносно деградації і не інгібується під дією оксалату в будь-якій концентрації. 65 Таблиця 1

Жневежюєтня то | Кнуевеоюстання.

Срамашт 10001420013200002000001000001 83600025

Вапеторнйшв | 28 1256112811306 12519

Приклад 2

Випадки

Після отриманої згоди 7 пацієнтам з гіпероксалурією вводили Зігеріососсив (пеппорпйиз перорально по бг в день протягом З тижнів, і оксалурію оцінювали протягом 24год. на нульовий момент часу і через З тижні.

Оксалати в сечі визначали стандартними методами, що використовуються в клінічній біохімії, і виражали в мг оксалатів в сечі, зібраній протягом 24год.

Через З тижні результати по оксалемії були наступними:

Пацієнт До Після. сч в вм о

Абсолютно очевидно, що у пацієнтів з високими рівнями оксалатів в сечі, лікування привело до помітного зниження концентрацій оксалатів. «-- сч

Claims

Формула винаходу (Се)

1. Застосування бактерійної комбінованої композиції, що включає штами бактерій -- (а) Зігеріососсиз (пептпорпйЙшив в суміші з ї- (Б) щонайменше одним штамом бактерій, вибраним з групи, що складається з Іасіорасіїйиз бБгемів, І асюрасійив5 асідорпйив5, І асіорасійиз ріапіагит, Війдорасіегіцт іпїапіївх, Війдорасіегішт Іопдит (|і Війдобасіегіт Бгеме або їх сумішей, для отримання дієтичної, фармацевтичної або ветеринарної композиції для профілактики і/або лікування « Піпероксалурії і порушень, пов'язаних з нею. з с 2. Застосування за п. 1, де штамом І асіорасіїїиз Бргеміз є штам І асіорасіййз Бгеміз СО2, що зберігається за Будапештською угодою в Ю5М - Німецькій колекції мікроорганізмів і клітинних культур Стр, Брауншвейг, ;» Німеччина, з 6 лютого 1998 року під інвентарним номером О5М 11988, або його мутанти або похідні.

З. Застосування за п. 1, де співвідношення концентрацій Війдорасіегішт іптапіїз, Війдобасіегіт Іопдит | Війдорасіегіит Бгеме в суміші, виражених в КОЕ/г композиції, дорівнює 1:11. -І 4. Застосування за пп. 1, 2, де співвідношення концентрацій Зігеріососсиз (Пегторпіз і штаму І асюбрасійшв5, виражених в КОЕ/г композиції, дорівнює від 1000:1 до 1:1000.

- 5. Застосування за п. 1, де співвідношення концентрацій Зігеріососсиз (Ппепторийиз і штаму Ге» Війдоврасіегічт, виражених в КОЕ/г композиції, дорівнює від 100021 до 1:1000.

6. Дієтична/фармацевтична бактерійна комбінована композиція, що включає штам бактерій ю (а) Зігеріососсиз (пептпорпйЙшив в суміші з як (Б) штамом І асіобасіїїиз Бгеміз СЮ2, що зберігається за Будапештською угодою в ЮОЗМ - Німецькій колекції мікроорганізмів і клітинних культур Стр, Брауншвейг, Німеччина, з б лютого 1998 року під інвентарним номером О5М 11988, або його мутантом або похідним і, необов'язково, щонайменше з одним штамом бактерій, вибраним ов З групи, що складається з І асюрасійив асідорпії5, Іасіорасіййз ріапіагит, Війдобасіегішт іптапіів, Війдобасіегіит Іопдит і Виїдобасіегішт Бгеме або їх сумішей. Ф) 7. Спосіб профілактики і/або лікування гіпероксалурії і порушень, пов'язаних з нею, який включає введення ка тварині у разі необхідності від 0,5 до 4 г/день бактерійної комбінованої композиції, що включає (а) Зігеріососсиз (пептпорпйЙшив в суміші з во (Б) щонайменше одним штамом бактерій, вибраним з групи, що складається з Іасіорасіїйиз бБгемів, І асюрасійив5 асідорпйив5, І асіорасійиз ріапіагит, Війдорасіегіцт іпїапіївх, Війдорасіегішт Іопдит (|і Війдобасіегішт Бгеме або їх сумішей. Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних 65 мікросхем", 2004, М 12, 15.12.2004. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України.