EA004257B1

EA004257B1 - Применение бактериальной комбинированной композиции для получения средства для профилактики и/или лечения гипероксалурии у людей и животных и способ профилактики и/или лечения указанного заболевания

Info

Publication number: EA004257B1
Application number: EA200101262A
Authority: EA
Inventors: Клаудио Де Симоне
Original assignee: Всл Фарма Лимитед
Priority date: 1999-05-28
Filing date: 2000-05-24
Publication date: 2004-02-26
Also published as: HU225134B1; ITRM990338A1; NO20015782D0; WO2000072855A2; NZ516020A; DE60010456T2; IT1309427B1; AU5101600A; IL199437A; CA2373255A1; JP2003500451A; SI1181027T1; IL146703A0; KR100781703B1; TR200103439T2; ATE265857T1; HUP0201409A2; DZ3165A1; MXPA01012184A; EE200100618A

Abstract

Раскрыто применение композиции, которая, в зависимости от потребителя, может быть в виде диетического, фармацевтического или ветеринарного средства и включает Streptococcus thermophilus и по меньшей мере один штамм следующих бактерий: Lactobacillus brevis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum и Bifidobacterium breve для профилактики и/или лечения гипероксалурии и нарушений, связанных с ней, а также представлен способ профилактики и/или лечения указанного заболевания путем введения пациенту 0,5-4 г/день указанной композиции.

Description

Настоящее изобретение относится к применению видов и/или штаммов бактерий, которые будут указаны ниже, для получения средства для профилактики и/или лечения гипероксалурии и нарушений, связанных с ней, а также к способу лечения указанного заболевания.

Соответственно, указанная композиция может принимать форму и проявлять активность диетической композиции или пищевой добавки или истинного лекарственного препарата в зависимости от поддерживающего или профилактического, или непосредственно терапевтического действия, которое композиция предназначена проявлять в зависимости от конкретных индивидуумов, для которых она предназначена. Данное профилактическое или непосредственно терапевтическое действие может быть получено в результате заселения вышеуказанных бактерий в кишечнике субъектов в случае риска возникновения гипероксалурии или нарушений, связанных с гипероксалурией.

Гипероксалурия выражается в избыточном присутствии оксалатов в моче (уровень оксалатов в моче >40 мг/день). Она может возникать в результате генетического дефекта, который изменяет метаболизм глиоксиловой кислоты с образованием оксалата вместо глицина, также она может быть побочным эффектом избыточного потребления богатой оксалатами пищи, такой как шпинат, какао, фундук, перец и чай, или лечения, например, препаратами против ожирения (например, ОРЫБТЛТ). Следовательно, очевидна полезность обеспечения пищевой добавкой, способной снижать или регулировать присутствие оксалатов в моче.

Гипероксалурия представляет преобладающий фактор риска в отношении образования конкрементов в почках и может вызываться повышенным всасыванием оксалатов из ободочной кишки или перегрузкой почек, вызванной гипероксалурией, как это имеет место при первичной гипероксалурии (РН).

Уровень оксалатов в моче, по-видимому, представляет решающий фактор в отношении образования оксалатных конкрементов у пациентов с нормальным выделением кальция с мочой, и оксалатные конкременты могут иногда также образовываться у пациентов при диализе при выраженной олигурии и без почечнокаменной болезни в анамнезе, что в рамках данной работы означает, что может иметь место супернасыщение оксалатами даже в случае минимального количества мочи.

Суточное выделение оксалатов прямо связано с объемом мочи, потреблением витамина С, массой тела и, наоборот, с поглощением кальция.

В исследовании 8ийоп и Аа1кет на группе людей с идиопатическим образованием оксалатных конкрементов при незначительной гипероксалурии невозможно было показать наличие какого-либо значительного изменения почечной регуляции уровня оксалатов, и был сделан вывод о том, что имелась повышенная пищевая нагрузка оксалатами с возможным механизмом повышенного всасывания.

Следовательно, у пациентов не с первичной гипероксалурией наибольшее внимание необходимо обращать на повышенное всасывание оксалатов в кишечнике, которое создает клиническую картину кишечной гипероксалурии и часто рецидивирующего образования конкрементов в почках. Фактически с 1968 г. признается, что почечно-каменная болезнь представляет осложнение при заболевании или резекции кишечника.

Повышенное всасывание оксалатов в кишечнике, называемое кишечной гипероксалурией (ЕНО), зависит по меньшей мере от двух механизмов. Первый связан с нарушением всасывания желчных солей при заболевании или резекции подвздошной кишки, что приводит к недостатку желчных солей и нарушению всасывания жиров. Большая часть оксалатов в пищевом рационе связана с кальцием и всасывается плохо, но слабо всасывающиеся жиры связывают кальций в просвете кишечника, снижая его количество, связанное с оксалатом, и приводят к повышенному всасыванию оксалатов. Второй механизм ЕНО связан с повышенной проницаемостью ободочной кишки для оксалатов, вызванной слабо всасывающимися жирными кислотами и желчными солями, возможно ухудшенной вариациями эпителиальных окклюзивных соединений ободочной кишки, вызванных снижением уровня кальция в просвете. Данная гипероксалурия связана со степенью стеатореи и является необычной при резекциях подвздошной кишки <30 см. Пониженное число бактерий, которые метаболизируют оксалаты в ободочной кишке (Оха1оЬае!ет Ботш1депек), а также их ингибирование слабо всасывающимися желчными солями может, вероятно, вносить свой вклад в развитие ЕНО. Наконец, гипероксалурию можно наблюдать при длительном парентеральном питании, а также у пациентов с колэктомией и при минимальном пероральном приеме пищи, возможно, за счет повышенного синтеза эндогенного оксалата.

Оксалаты слабо растворимы в воде, но моча может стать супернасыщенной за счет присутствия ингибиторов кристаллизации. Гипероксалурия в сочетании с пониженным объемом мочи и пониженными уровнями этих ингибиторов, предрасполагает к образованию конкрементов в почках.

Отложение оксалатов в паренхиме почек может вызвать интерстициальный нефрит и нефрокальциноз с острой или хронической почечной недостаточностью.

Лечение пациентов с кальциевыми оксалатными конкрементами является комплексным и описывается ниже.

Стадия 1.

Повышенное потребление жидкостей для выделения мочи 3 л/день;

Пищевой рацион с низким содержанием оксалатов (избегать шпината, ревеня, свеклы, фундука, чая, колы, шоколада, пшеничных отрубей, клубники);

Пищевой рацион с низким уровнем жиров (50 г/день);

Добавки кальция (1-2 г/день);

Холестирамин (по 4 г четыре раза в день).

Стадия 2 (если конкременты возникают вновь, несмотря на лечение по стадии 1).

Подщелачивание мочи и добавки цитратов (например, цитрата калия, цитрата натрия = по 30 мэкв основания четыре раза в день);

Добавки магния (для коррекции уровней в моче);

Аллопуринол 300 мг/день (если конкременты содержат мочевую кислоту).

Возможность желудочно-кишечной биологической регуляции уровня оксалатов известна с 1955 г. из данных по разложению оксалатов содержимым рубца коров, и позднее, смешанной бактериальной флорой толстого кишечника других травоядных.

АШкои в 1985 г. отнес специфическое разложение оксалатов за счет Оха1оЬас1ет ίοηηίдепек, которые заселяют толстый кишечник человека, а также других животных.

Позднее Ио показал разложение оксалатов в продуктах питания в условиях ίη νίΐτο с помощью ЕиЬас1епит 1епШт νΐΗ-1.

Впоследствии было высказано предположение о том, что отсутствие Оха1оЬас1ет Γοηηίдепек является фактором риска в отношении возникновения гипероксалурии у пациентов с кистозным фиброзом.

Следовательно, кишечная гипероксалурия является результатом повышенного всасывания оксалатов в кишечнике за счет повышенной проницаемости слизистой или повышенной растворимости и биодоступности оксалатов в фекалиях, когда содержание кальция в пищевом рационе снижено. Отсутствие Оха1оЬас1ег Гог1шдепек может представлять новый патофизиологический механизм, который важен с точки зрения терапии.

В настоящее время неожиданно было установлено, что следующие бактерии: 81гер1ососсик 1йегторЫ1ик, Ьас1оЬасШик Ьгехчк, Ьас1оЬасИ1ик ас1борЫ1ик, ЬасЮЬасШик р1ап1атит, ВШбоЬас1епит ίпГап11к, В|ПбоЬас1епит 1опдит и ΒίΓίбоЬас1епит Ьгсхе способны к росту в присутствии оксалата и/или разлагающегося оксалата.

Следовательно, настоящее изобретение обеспечивает применение 81гер1ососсик (НегторЫ1ик и по меньшей мере одного штамма следующих бактерий: ЬасЮЬасШик Ьгехчк, Ьас1оЬасИ1ик ас1борЫ1ик, ЬасЮЬасШик р1ап1агит, ВШбоЬасЮпит шГапПк, В|ПбоЬас1егц.пп 1опдит и ΒίΓίбоЬас1епит Ьге\^ге для получения диетического и/или фармацевтического средства для профилактики и/или лечения гипероксалурии и нарушений, связанных с ней.

Предпочтительно штаммом ЬаскЬасШик Ьгехлк является штамм Ьас1оЬасШик Ьгехлк СЭ2, хранящийся по Будапештскому соглашению в Ό8Μ - Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур СтЫ1, Втаипксйете1д, Германия, с 6 февраля 1998 г. под инвентарным номером Ό8Μ 11988.

Конкретнее, гипероксалурия и нарушения, связанные с ней, включают кишечную гипероксалурию, образование кальциевых оксалатных камней в почках, гипероксалурию в результате воспалительных заболеваний кишечника, почечную недостаточность, везикулярный калькулез, кардиопатию в результате гипероксалурии, кистозный фиброз и вульводинию.

Применение изобретения включает применение в области ветеринарии.

Комбинированная диетическая и/или фармацевтическая композиция по изобретению способна заселять указанными бактериями кишечник субъектов при риске возникновения гипероксалурии или нарушений в результате гипероксалурии, или нарушений в результате образования кальциевых оксалатных конкрементов.

По одному воплощению изобретения штамм 8йер1ососсик 1йегшорЫ1ик смешивается со штаммом Ьас1оЬасШик, выбранным из группы, состоящей из Ьас1оЬасШик Ьгехчк, Ьас1оЬасй1ик ас1борЫ1ик и Ьас1оЬасШик р1ап1агит или их смесей. Предпочтительно штаммом ЬаскЬасИ1ик Ьге\ак является штамм ЬасЮЬасШик Ьге\ак СЭ2, хранящийся по Будапештскому соглашению в Ό8Μ - Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур СтЫ1, Втаипксйете1д, Германия, с 6 февраля 1998 г. под инвентарным номером Ό8Μ 11988.

По другому воплощению изобретения штамм 8йер1ососсик 1йегшорЫ1ик смешивается со штаммом В1Г1боЬас1ет1ит, выбранным из группы, состоящей из В|ПбоЬас1епит тГагШк, В|ПбоЬас1епит 1опдит и В|ПбоЬас1епит Ьге\^ге или их смесей. В данном случае предпочтительно, чтобы соотношения между концентрациями В|ПбоЬас1егшт шГапПк, В|ПбоЬас1епит 1опдит и В|ПбоЬас1епит Ьгсхе в смеси, выраженные в КОЕ/г композиции, предпочтительно равнялись 1:1:1.

По предпочтительному воплощению соотношение между концентрациями 8йер1ососсик (НегторНПик и бактерией рода ЕасЮЬасШик, выраженные в КОЕ/г композиции, равно от 1000:1 до 1:1000, в то время, как соотношение между концентрациями 8йер1ососсик ШегторНПик и бактерией рода В|ПбоЬас1егшт или смесью бактерий рода ВШбоЬас1егшш, выраженные в КОЕ/г композиции, равно от 1000:1 до 1:1000.

Общая концентрация бактерий предпочтительно составляет от 10⁶ до 10¹² КОЕ/г композиции.

Согласно изобретению, композиция может дополнительно включать или вводиться в комбинации с

- веществами, способными связывать оксалаты в просвете кишечника, в частности, холестирамином (например, 0,5-4 г/день) и органическими гидроколлоидами морского происхождения;

- витаминами, в частности, В₆ (например, 20-200 мг/день) и С (например, 0,1-2 г/день);

- окисью магния (например, 50-600 мг/день);

- кальцием (например, 0,5-2 г/день);

- аллопуринолом (например, 50-300 мг/день);

- ферментами, молочно-кислыми бактериями, гормонами и диуретиками, иммуномодуляторами, противоопухолевыми препаратами, липидами, подщелачивателями мочи, подкислителями мочи, насыщенными и ненасыщенными жирными кислотами и фосфолипидами;

- препаратами, приводящими гипероксалурии в качестве побочного действия, например, препаратами против ожирения (например, ОВЬ18ТЛТ).

В основном композицию можно вводить перорально или в просвет кишечника, или субаквально, в виде гранул, таблеток, капсул, суппозиториев или клизмы для кишечника.

Изобретение также обеспечивает применение композиции, содержащей 81терФсоссик ШетторЫ1ик и по меньшей мере один штамм бактерий, выбранный из ЬасФЬасШик ЬтеуЕ, ЬасФЬасШик ааборЫ1ик, ЬасЮЬасШик р1аи1агиш, В|ПбоЬас1епит 1пГапйк, ВШбоЬайепит 1опдит и В|ПбоЬас1епит Ьгеуе, в количестве, достаточном для заселения кишечника субъектов при риске возникновения гипероксалурии или нарушений, возникающих в результате гипероксалурии в составе продукта питания на основе шоколада, какао, спаржи, томата, напитков для питья/жидкостей, шпината, грецких орехов, фундука, клетчатки, злаковых, картофеля, чая и арахисового масла.

Наконец, изобретение обеспечивает способ профилактики и/или лечения гипероксалурии и нарушений, связанных с ней, введением пациенту при риске возникновения гипероксалурии или нарушения, возникающего в результате гипероксалурии, от 0,5 до 4 г/день композиции по изобретению.

«Пациенты» в том смысле, в котором этот термин здесь используется, включает людей и животных в целом, и, в частности, сельскохозяйственных животных, спортивных животных и домашних животных.

Пример 1.

Чистые культуры.

Для следующего опыта использовали В1йбоЬайепит 1пГапйк, ЬасФЬасШик ас1борЫ1ик, ЬасФЬасШик р1ап1атит, ЬасФЬасШик Ьге\зк и 8йерФсоссик 111егтор1и1ик.

Все штаммы хранили лиофилизованными в холодильнике. ВШбоЬайепит шГапйк культивировали в бульоне МВ8 (И1Гсо)+0,5% глюкозы, инкубировали в анаэробных условиях при 37°С в течение 18 ч в Сак Рак в атмосфере СО₂ и Н₂, ЬасФЬасШик ас1борЫ1ик и ЬасФЬасШик р1ап1агшп в бульоне МВ8 (И1Гсо), инкубировали при 37°С в течение 18 ч, ЬасЮЬасШик Ьгеу1к в бульоне МВ8 (И1Гсо), инкубировали при 30°С в течение 18 ч, и 8йерФсоссик 1йетторЫ1ик в бульоне М17 (И1Гсо) + 0,5% лактозы и инкубировали при 37°С в течение 18 ч.

Среды.

Для приготовления культуральных сред, содержащих 10 и 20 мМ оксалата аммония (ВИН), к 10 мл основной среды (составленной следующим образом: 10 г протеозного пептона № 3 (Ийсо) + 5 г дрожжевого экстракта (Ийсо) + 1 мл Твина-80 (Ийсо) + 2 г КН₂РО₄ (ВИН) + 5 г ацетата натрия (ВИН) + 2 г дигидрогенцитрата аммония (МЕВСК) + 0,05 г Мд8О₄ · 7Н₂О (МЕВСК) + 0,05 г Мп8О₄ (МЕВСК) + вода до 500 мл и стерилизованного при 121°С в течение 15 мин) добавляли 10 мл растворов следующих сахаров и оксалата аммония, стерилизованных пропусканием через фильтр 0,45 мкм, а именно:

для Ь. ас1борЫ1ик, Ь. р1айатит и Ь. Ьтеу1к

1А: 20 мМ оксалата аммония + 40 г/л глюкозы (ВИН)

1В: 40 мМ оксалата аммония + 40 г/л глюкозы для 8. ЛетторЫ1ик

2А: 20 мМ оксалата аммония + 40 г/л глюкозы + 10 г/л лактозы (Ийсо)

2В: 40 мМ оксалата аммония + 40 г/л глюкозы + 10 г/л лактозы для В. шГапйк

3А: 20 мМ оксалата аммония + 50 г/л глюкозы

3В: 40 мМ оксалата аммония + 50 г/л глюкозы.

После смешивания пробы, помеченные А, содержали 10 мМ оксалата аммония, в то время, как пробы, помеченные В, содержали 20 мМ оксалата аммония.

Культуральные бульоны затем засевали 10% свежей культурой и инкубировали в соответствующих для каждого описанного выше штамма условиях.

В каждой растущей бульонной культуре подсчитывали число микроорганизмов, находящихся в культуральных средах в соответствующих условиях и, в частности:

- В. шГапйк на агаре ННИ (Н1 МеФа ЬаЬогаЮпек) инкубировали в анаэробных условиях при 37°С в течение 3 суток;

Ί

- Ь. ас1борЫ1и8 на агаре МВ8 (ΌίΓοο) инкубировали в анаэробных условиях при 37°С в течение 3 суток;

- Ь. р1аи!ашт. и Ь. Ьгсуй на агаре МВ8 (Эйсо) инкубировали в анаэробных условиях при 37°С в течение 3 суток;

- 8. !йетторЫ1и8 на агаре М17 (ЭГсо) инкубировали при 37°С в течение 2 суток.

Определение щавелевой кислоты.

Подготовка проб.

Бульонные культуры пастеризовали при 90°С в течение 15 мин, затем центрифугировали при 5000 об/мин в течение 10 мин и, наконец, супернатант фильтровали через фильтр 0,45 мкм.

Метод.

Концентрацию щавелевой кислоты определяли с помощью набора «Щавелевая кислота» (Воейппдет Маппйеш), специфичного для данной кислоты. Анализ проводили на спектрофотометре (Реткш Е1тег - Ьатйба 5) при 340 нм.

Результаты.

Как следует из табл. 1, приведенной ниже, все штаммы в основном растут в присутствии 10 мМ оксалата аммония, в то время как концентрация 20 мМ частично ингибирует рост микробов, особенно в случае Ь. ашборййиз и 8. 1йегторййик.

Однако, вероятно, корреляция между ростом бактерий и разложением оксалата отсутствует. Так, Ь. р1ап!ашт и Ь. Ьгесй вызывают незначительное, если вообще таковое имеется, разложение оксалата, даже если они показывают значительный рост.

С другой стороны, Ь. ас1борй11и8 и 8. 1йегторййик разлагают оксалат при обеих концентрациях, несмотря на пониженный рост в присутствии 20 мМ оксалата аммония. Наконец, В. ίηΓηηΙίδ проявляет очень хорошую активность в отношении деградации и не ингибируется под действием оксалата в любой концентрации.

Таблица 1

Щавелевая кислота	10 мМ	20 мМ
	Разложение %	Содержание микробов (КОЕ/мл х 10⁶)	Разложение, %	Содержание микробов (КОЕ/мл х 10⁶)
		Ϊ0	Конечный рост		Ϊ0	Конечный рост
Ь.ЙЮТ18	0.94	27	130	0.73	27	120
Ь.асИорййив	11.79	25	130	3.41	25	52
Ер1ап1агит	1.42	32	270	0.00	32	230
8.!йетторЫ1и8	2.31	2.5	28	3.06	2.5	9
В.шГапйз	5.26	36	300	2.18	36	230

Пример 2. Случаи.

После полученного согласия 7 пациентам с гипероксалурией вводили 8!тер!ососси8 1йегшорййик перорально по 6 г в день в течение 3 недель, и оксалурию оценивали в течение 24 ч на нулевой момент времени и через 3 недели.

Оксалаты в моче определяли стандартными методами, используемыми в клинической биохимии, и выражали в мг оксалатов в моче, собранной в течение 24 ч.

Через 3 недели результаты по оксалемии были следующими:

Пациент	До	После
1	50	7
2	47	30
3	41	31
4	95	56
5	62	14
6	58	34
7	49	12

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение бактериальной комбинированной композиции, включающей в качестве штаммов бактерий (а) 8!тер!ососси8 !йетторЫ1и8 в смеси с (й) по меньшей мере одним штаммом бактерий, выбранным из группы, состоящей из Еас!ойасй1и8 йтеу18, Ьас!ойасШи8 асйорййиз, ЬасФйасШиз р1аи!агит, В1йбойас!етшт ίηΓηηΙίδ. В1йбойас!етшт 1опдит и В1йбойас!егшт йгеуе или их смесей, для получения диетического, фармацевтического или ветеринарного средства для профилактики и/или лечения гипероксалурии и нарушений, связанных с ней.
2. Применение по п.1, где штаммом Ьас!ойасШиз йтеу18 является штамм Ьас!ойасШи8 йгеνίδ ΟΌ2 1)8\1 11988.
3. Применение по п.1, где соотношение концентраций В1йбойас!етшт 1пГапЙ8, В1йбойас1егшт 1опдит и В1йбойас!егшт йге\^ге в смеси, выраженных в КОЕ/г композиции, равно 1:1:1.
4. Применение по пп.1-2, где соотношение концентраций 81гер1ососсн8 1йегтор1нй18 и

Совершенно очевидно, что у пациентов с высокими уровнями оксалатов в моче, лечение привело к заметному снижению концентраций оксалатов.

штамма Ьас1оЬасШи8, выраженных в КОЕ/г композиции, равно от 1000:1 до 1:1000.
5. Применение по п.1, где соотношение концентраций 81гер1ососсиз (НегторНПиз и штамма ВШбоЬас1егшт, выраженных в КОЕ/г композиции, равно от 1000:1 до 1:1000.
6. Способ профилактики и/или лечения гипероксалурии и нарушений, связанных с ней, который включает введение пациенту, в случае необходимости, от 0,5 до 4 г/день бактериаль ной комбинированной композиции, включающей (a) 81гер1ососсиз (НегторНПиз в смеси с (b) по меньшей мере одним штаммом бактерий, выбранным из группы, состоящей из ЬасоЬасШиз Ьгеущ, Ьас1оЬасШи8 ас1борЫ1и8, ЬасФЬасШиз р1аи1агит, ВШбоЬас1егшт ίηΓηπίικВгМоЬас1егшт 1опдит и ВШбоЬас1егшт Ьгеуе или их смесей.