ES2190799T5 - Inmunogenos peptidicos para vacunacion y tratamiento contra la alergia. - Google Patents
Inmunogenos peptidicos para vacunacion y tratamiento contra la alergia. Download PDFInfo
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Abstract
MOLECULAS INMUNOGENICAS QUE COMPRENDEN (A) AL MENOS UN RESTO DE UN PEPTIDO QUE MIMETIZA EL EPITOPO NATURAL SOBRE LA IGE HUMANA, RECONOCIDA POR EL ANTICUERPO MONOCLONAL ANTI IGE HUMANA BSW17, Y (B) UN RESTO CAPAZ DE RECHAZAR UNA RESPUESTA INMUNE CONTRA EL PEPTIDO. SON UTILES EN, O PARA LA PREPARACION DE, COMPOSICIONES FARMACEUTICAS, ESPECIALMENTE PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES MEDIADAS POR IGE, TALES COMO ALERGIAS Y DERMATITIS ATOPICA, POR EJEMPLO, VACUNAS CONTRA LA ALERGIA.
Description
Inmunógenos peptídicos para vacunación y
tratamiento contra la alergia.
La presente invención se relaciona con
inmunógenos peptídicos, y está dirigida a la inhibición de
interacciones que normalmente provocaría la activación de
mastocitos y basófilos inducida por la IgE unida a la célula
enlazada a un alérgeno dando como resultado la liberación de
mediadores farmacológicamente activos así como la nueva síntesis de
citoquinas involucradas en la regulación de reacciones alérgicas e
inflamatorias. Se relaciona con moléculas inmunogénicas incluida
una fracción del péptido mimótopo BSW17 y sus usos.
Los síntomas alérgicos son inducidos por la
liberación de mediadores farmacológicamente activos, notablemente
histamina, leucotrienos y enzimas, a partir de células dentro del
tejido circundante y estructuras vasculares. Estos mediadores son
normalmente almacenados o sintetizados nuevamente en células
especiales conocidas como mastocitos y granulocitos basófilos. Los
mastocitos se dispersan a través de todo el tejido animal mientras
que los basófilos circulan dentro del sistema vascular. Estas
células sintetizan y almacenan mediadores dentro de la célula, a
menos que ocurra una secuencia especializada de eventos para activar
su liberación.
El papel de los anticuerpos de inmunoglobulina E
(IgE) en la mediación de reacciones alérgicas es bien conocido. IgE
es un ordenamiento complejo de cadenas de polipéptido que, como en
otras inmunoglobulinas consta de dos cadenas livianas y dos cadenas
pesadas enlazadas juntas por medio de enlaces disulfuro en una
configuración en forma de "Y". Cada cadena liviana tiene dos
dominios, un dominio variable (V_{L}) enlazado a un dominio con
una secuencia de aminoácidos relativamente invariable llamado un
dominio constante (C_{L}). Las cadenas pesadas por el contrario,
tienen un dominio variable (V_{H}) y en el caso de IgE, cuatro
dominios constantes (C_{H}1, C_{H}2, C_{H}3, C_{H}4,
también conocidos como C_{\varepsilon}1, C_{\varepsilon}2,
C_{\varepsilon}2, C_{\varepsilon}4). Los dos "brazos" del
anticuerpo son responsables por el enlazamiento del antígeno,
teniendo regiones en donde la estructura del polipéptido varía, son
llamados fragmentos Fab' o (Fab')_{2} que representan dos brazos
Fab' enlazados juntos por medio de enlaces disulfuro. La "cola"
o eje central del anticuerpo contiene una secuencia fija o
constante de péptidos y es llamado el fragmento Fc. El fragmento Fc
contiene sitios interactivos que permiten que el anticuerpo se
comunique con otras moléculas del sistema inmune o células por
medio del enlazamiento a sus receptores Fc.
Los receptores Fc son moléculas que se enlazan
específicamente a sitios moleculares activos dentro de las regiones
Fc de la inmunoglobulina. Los receptores Fc pueden existir como
proteínas integrantes de la membrana dentro de una membrana
exterior del plasma de la célula o pueden existir como moléculas
"solubles" libres que circulan libremente en el plasma
sanguíneo o en otros fluidos corporales. En el sistema humano, el
enlazamiento de alta afinidad de IgE al Fc\varepsilonRI receptor
se logra por medio de una interacción compleja
proteína-proteína que involucra diferentes partes
del tercer dominio de la región constante de la cadena pesada
(C\varepsilon3) de IgE, y la membrana próxima, un dominio como el
de la inmunoglobulina (\alpha_{2}) de la subunidad
Fc\varepsilonRI\alpha.
Aunque se han identificado los residuos dentro
del dominio C\varepsilon3 de la región constante de cadena pesada
de IgE, y de las regiones que pertenecen al dominio \alpha2 del
receptor Fc\varepsilonRI\alpha, que son importantes para el
enlazamiento, aún no es claro el mecanismo detallado del proceso de
enlazamiento. La evidencia experimental obtenida por medio de
mediciones de transferencia de energía de fluorescencia así como de
rayos x y dispersión de neutrones ha mostrado que la IgE humana
adopta una estructura curvada que se especula que contribuye a la
única alta afinidad de IgE por Fc\varepsilonRI (Kd ~ 10^{-10}
M). Además, esta estructura curvada también está postulada de ser
la responsable por el complejo equimolar entre IgE y
Fc\varepsilonRI\alpha soluble o enlazado a la célula, aunque la
molécula de IgE proporcionaría epítopos idénticos sobre los dos
dominios C\varepsilon3 para el enlazamiento del receptor. Esta
monovalencia es una necesidad funcional si se debe evitar la
activación del receptor en ausencia del alérgeno (Figura 1). Los
sitios interactivos, dependiendo de su función, pueden estar
expuestos ya y por lo tanto ser capaces de enlazarse a los
receptores celulares. Alternativamente, pueden estar ocultos hasta
que el anticuerpo se enlace al antígeno, con lo cual el anticuerpo
puede cambiar de estructura y posteriormente exponer otros sitios
activos que pueden activar luego una actividad específica inmune.
Con base en los datos obtenidos a partir de los espectros de
dicroísmo circular, se ha propuesto un reordenamiento conformacional
que afecta a C\varepsilon3 por enlazamiento del receptor como una
explicación para la estequiometría 1:1 del complejo
Fc\varepsilon/Fc\varepsilonRI sobre la superficie celular.
Para la liberación alérgica (inmunológica) de
histamina dentro del organismo de mastocitos y basófilos, una
molécula de IgE debe enlazarse o unirse por si misma con su porción
de Fc al sitio del receptor celular de Fc, asegurando así la
molécula de IgE al mastocito o al basófilo. Las porciones de Fab' de
las moléculas de IgE enlazadas a la célula se deben entrelazar por
medio de un antígeno compatible particular (el alérgeno). Cuando
ocurre tal interacción, se activa automáticamente el mastocito o el
basófilo para liberar histamina al ambiente local, manifestando los
síntomas alérgicos familiares. Vienen después otros eventos
bioquímicos en una fase tardía de reacción que resulta en nueva
síntesis y liberación de citoquinas y de otros mediadores.
[Ravetch, J.V., y J.P. Kinet, Ann. Rev. Immunol. 9 (1991)
457-492].
\newpage
Los enfoques convencionales para el tratamiento
de la alergia han involucrado terapia sistémica con antihistaminas
o esteroides o intentos para desensibilizar a los pacientes; estos
enfoques no están dirigidos a la interacción básica
mastocito/basófilo-IgE. Otro enfoque se ha ocupado
de la producción de cadenas de polipéptidos capaces de bloquear el
enlazamiento del anticuerpo IgE con los receptores Fc sobre las
superficies de la célula y desplazando a IgE de los sitios de
enlazamiento sobre los que IgE ya está enlazada. Además, se han
llevado a cabo investigaciones con el propósito de definir la
naturaleza de un sitio "efector" putativo dentro de la región
Fc de IgE que se especuló que suministraba una señal inmunológica
que activa los mastocitos/basófilos para liberación del
mediador.
También se ha intentado el uso de fragmentos
recombinantes de IgE como inmunógenos para la generación de una
vacuna protectora anti-IgE que mostraron ser
efectivos. El argumento principal contra este tipo de vacuna
proviene de la posibilidad de que utilizando fragmentos grandes de
IgE para la inmunización se podría iniciar no solamente la
producción de anticuerpos inhibidores sino también generar
entrelazamiento y por lo tanto anticuerpos anafilactógenos en los
pacientes (Figura 2).
Una estrategia para superar este problema
apuntaría a la identificación del fragmento más pequeño posible de
IgE, que consiste idealmente únicamente en el sitio de enlazamiento
del receptor, que está sepultado dentro del complejo
IgE/Fc\varepsilonRI después del enlazamiento y por lo tanto no es
ya accesible para entrelazamiento por la respuesta inmune generada
por la vacuna. Los intentos para reconstruir tal entidad molecular
compleja parecen ser poco exitosos en vista de las distancias
espaciales de las diferentes regiones C\varepsilon3 involucradas
en la interacción IgE/Fc\varepsilonRI.
Se ha encontrado ahora que los problemas
intrínsecamente relacionados con el enfoque "clásico" de vacuna
se pueden superar por medio del uso de mimótopos BSW17 para
inmunización activa, ya sea como péptidos químicamente sintetizados
acoplados a portadores adecuados, o como construcciones
recombinantes de fusión (por ejemplo, con ovoalbúmina, IgE,
etc.).
BSW17 es un anticuerpo monoclonal que reconoce a
un epítopo conformacional sobre Fc\varepsilon, con al menos una
parte de él residiendo dentro de C\varepsilon3. La línea celular
de hibridoma que produce al anticuerpo monoclonal BSW17 ha sido
depositada el 19 de diciembre de 1996 en la ECACC de acuerdo a lo
previsto en el Tratado de Budapest sobre el depósito de
microorganismos, bajo el número de depósito 9612916. Este anticuerpo
muestra un perfil interesante de actividad biológica, como se
resume en la Figura 3. Los anticuerpos BSW17 o tipo BSW17 que
circulan dentro del sistema vascular protegen de las reacciones
alérgicas
- a)
- inhibiendo la activación de las mastocitos y de los basófilos a través de la inhibición competitiva de la interacción IgE/IgERI y
- b)
- disminuyendo los niveles en suero de IgE a través de la reducción de la expresión de la síntesis de IgE sobre el nivel de células B.
Los péptidos "mimótopo" BSW17 han sido
identificados ahora por medio de selección aleatoria de la
biblioteca de péptidos exhibida por el fago, esto es de los péptidos
que imitan al menos parte del epítopo conformacional del péptido
sobre la molécula de IgE. Se pueden utilizar péptidos mimótopo
sintetizados químicamente acoplados a una proteína inmunogénica
portadora, por ejemplo como vacunas para la generación específica
de anticuerpos en un huésped alérgico que inhibe la activación de
mastocitos/basófilos por medio del bloqueo del enlazamiento de
IgE/Fc\varepsilonRI\alpha y/o de la síntesis de IgE. Como
mimótopos de un anticuerpo anti-IgE ellos inducen
una respuesta inmune que resulta en la producción de anticuerpos
tipo BSW17 en el huésped. Ya que se ha demostrado que BSW17 es no
anafilactogénico, inhibidor para el enlazamiento de
IgE/Fc\varepsilonRI\alpha y de la síntesis de IgE sobre células
B, estos anticuerpos surgidos contra las vacunas basadas en el
mimótopo BSW17 tienen propiedades protectoras análogas. La respuesta
inmune es muy específica ya que, en contraste con el "enfoque
clásico de la vacuna", no están presentes fragmentos de proteína
derivados de IgE que pudieran generar anticuerpos de enlazamiento
cruzado en los pacientes inmunizados (Figura 4).
La invención también se relaciona con moléculas
inmunogénicas que contienen
- (a)
- al menos una fracción de un péptido mimótopo BSW17 (ECACC, número de acceso 96121916) hasta de 15 aminoácidos en total, que pueden incluir apropiadamente componentes adicionales par el enlazamiento de hapteno-portador, para facilitar el acoplamiento al componente (b) o un procesamiento adicional; o cuando el péptido mimótopo BSW17 es cíclico, puede tener los dos extremos juntos por medio de dos residuos adicionales de cisteína que forman un puente disulfuro, o están entrelazados químicamente; o cuando el péptido mimótopo BSW17 es lineal, puede tener el aminoácido del terminal carboxilo bloqueado en forma aminada y/o el aminoácido del terminal amino bloqueado en forma acetilada; o puede estar flanqueado por uno o dos grupos auxiliares y/o un grupo de acoplamiento adicional; y
- (b)
- una fracción capaz de provocar una respuesta inmune contra ese péptido, en donde la fracción del péptido mimótopo BSW17 consiste esencialmente de, o contiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre aquellas definidas en la reivindicación 1,
de aquí en adelante denominadas en
forma resumida como "los inmunógenos de la
invención".
El componente (a) consiste preferiblemente hasta
de cinco, preferiblemente uno o dos, especialmente una fracción de
un péptido mimótopo BSW17. El componente (b) es preferiblemente un
portador inmunogénico convencional como se expone más abajo,
especialmente BSA o KLH.
El péptido mimótopo BSW17 en el componente (a)
es preferiblemente hasta de aproximadamente 15 aminoácidos en
total, es una de las secuencias (A), (C), (D) o (G) hasta (Q) (SEQ.
ID. NO. 1, 3, 4 ó 7 hasta 17) a partir de ahora. Sin embargo, se
pueden incluir apropiadamente componentes adicionales para el
enlazamiento hapteno-portador, por ejemplo, para
facilitar el acoplamiento al componente (b) o un procesamiento
adicional. Por lo tanto, cuando el péptido mimótopo BSW17 es
cíclico, se pueden por ejemplo mantener juntos los dos extremos por
medio de dos residuos adicionales de cisteína formando un puente
disulfuro, o se pueden entrelazar químicamente los dos extremos,
por ejemplo con lisina, o cuando el péptido mimótopo BSW17 es
lineal, se puede bloquear convenientemente el aminoácido del
terminal carboxilo por medio de amidación, y/o se puede bloquear el
aminoácido del terminal amino por medio de acetilación. Además, las
fracciones del péptido mimótopo BSW17 en el componente (a), pueden
estar flanqueados en los inmunógenos de la invención por medio de
unos pocos, preferiblemente uno o dos, grupos adicionales
auxiliares, tales como acetilo, cisteína o lisina, y/o un grupo de
acoplamiento adicional, tal como DC o BSS, por ejemplo como se
expone para los inmunógenos específicos de la invención divulgados
en el Ejemplo 8 más abajo como los conjugados (2) hasta (4), (6)
hasta (11), (13) y (14).
Los anticuerpos producidos por los inmunógenos
de la invención, en contraste con los anticuerpos producidos por el
hibridoma BSW17, serán endógenos y por lo tanto, en un paciente
humano, pueden ser utilizados para tratamiento profiláctico.
Se pueden preparar por medio del acoplamiento
apropiado de los componentes (a) y (b) como se definió
anteriormente.
Los inmunógenos de la invención están, por
ejemplo, en la forma de un péptido polimérico o una proteína de
fusión recombinante, por lo cual un componente monomérico del
péptido polimérico, o un compañero de la proteína de fusión,
constituyen una fracción de un péptido mimótopo BSW17 (a) y el resto
del péptido polimérico o proteína de fusión constituye la fracción
que produce la respuesta inmune (b).
Ellos están especialmente en la forma de un
conjugado de al menos una fracción de péptido mimótopo BSW17 (a) y
una fracción portadora inmunogénica (b).
Las fracciones de péptido mimótopo BSW17, esto
es, el componente (a), de los inmunógenos de la invención consisten
esencialmente de, o contienen una secuencia de aminoácidos
seleccionada entre:
\vskip1.000000\baselineskip
Se prefieren especialmente (A), (D) y (G)
anteriores, especialmente (A) y (D).
La invención también se relaciona con
composiciones farmacéuticas, especialmente vacunas, que contienen
moléculas de inmunógeno como se definió anteriormente y un
adyuvante.
También se relaciona con ligandos, esto es,
anticuerpos o fragmentos derivados de allí dirigidos contra los
péptidos mimótopo BSW17 utilizados en "inmunización pasiva"
(ver más abajo), por lo cual el anticuerpo o los fragmentos de
anticuerpo también reconocen el epítopo natural para BSW17 sobre IgE
humana; especialmente, se relaciona con ligandos que contienen un
dominio de anticuerpo específico para una fracción de un péptido
mimótopo BSW17 como se definió anteriormente, por lo cual el dominio
del anticuerpo es reactivo también con la secuencia de aminoácidos
sobre la cadena pesada de IgE que comprende al epítopo natural
reconocido por BSW17. Tales ligandos se pueden generar en mamíferos
como anticuerpos monoclonales o policlonales; ellos están
preferiblemente en la forma de anticuerpos monoclonales,
preferiblemente en la forma de un fragmento Fab' o un fragmento
F(ab')_{2} del mismo.
Se relaciona también con un proceso para la
preparación de un inmunógeno de la invención, que comprende el
acoplamiento en forma covalente de:
- a)
- al menos una fracción de un péptido mimótopo BSW17 con
- b)
- una fracción capaz de producir una respuesta inmune contra el péptido.
También se relaciona con moléculas inmunogénicas
como se definió anteriormente, para el uso en la elaboración de un
compuesto farmacéutico para el tratamiento de enfermedades mediadas
por IgE tal como la dermatitis alérgica y atópica.
También se relaciona con el uso de moléculas
inmunogénicas como se definió anteriormente en la fabricación de
composiciones farmacéuticas, especialmente vacunas, contra
enfermedades mediadas por IgE, en particular dermatitis alérgica y
atópica.
Se relaciona además con un método de
inmunización profiláctico o curativo contra enfermedades mediadas
por IgE tal como las alergias por la dermatitis atópica árida que
comprende la administración de una cantidad terapéuticamente activa
de moléculas inmunogénicas como se definió anteriormente a un
paciente que requiera de tal tratamiento.
Los inmunógenos de la invención, aunque son
sustancialmente incapaces de mediar la liberación no citolítica de
histamina, son capaces de producir anticuerpos con fuerte
reactividad serológica cruzada con las secuencias de aminoácidos
objetivo de la región Fc de IgE. Ellos son útiles por lo tanto en, o
como vacunas.
La dosis inicial de inmunógeno (por ejemplo,
aproximadamente desde 0,2 mg hasta aproximadamente 5 mg,
especialmente aproximadamente 1 mg) se administra por ejemplo en
forma intramuscular, seguido por dosis de repetición (refuerzo) de
la misma, 14 a 28 días después. Las dosis dependerán desde luego en
cierta medida de la edad, el peso y de la salud general del
paciente. La inmunización puede ser "activa" o
"pasiva".
En la inmunización "activa", el paciente
recibe inmunógeno de la invención y por lo tanto se activa una
respuesta anti-hIgE inducida por el sistema
inmunológico del paciente.
La inmunización "pasiva" se logra por medio
de la administración de anticuerpos mimótopo
anti-BSW17, ya sean monoclonales o policlonales, a
un paciente que sufre de una enfermedad mediada por IgE,
preferiblemente por medio de una inyección.
Los anticuerpos policlonales mimótopo
anti-BSW17 se pueden preparar por medio de la
administración de inmunógeno de la invención, utilizando
preferiblemente un adyuvante, a un mamífero no humano y recolectando
el antisuero resultante. Se pueden obtener títulos mejorados por
medio de inyecciones repetidas durante un periodo de tiempo. No
existe una limitación particular a las especies de mamíferos que se
pueden utilizar para producir anticuerpos; se prefiere generalmente
el uso de conejos o de conejillos de indias, pero también se pueden
utilizar caballos, gatos, perros, cabras, cerdos, ratas, vacas,
ovejas, etc. En la producción de anticuerpos, se diluye por ejemplo
una cantidad definida de inmunógeno de la invención con solución
fisiológica salina en una concentración adecuada, y se mezclan las
soluciones diluidas resultantes con adyuvante completo de Freund
para preparar una suspensión. Se administra la suspensión a
mamíferos, por ejemplo en forma intraperitoneal, por ejemplo a un
conejo, utilizando aproximadamente desde 50 \mug hasta
aproximadamente 2500 \mug de inmunógeno de la invención por
administración. La suspensión se administra preferiblemente
aproximadamente cada dos semanas durante un período aproximadamente
hasta de 2 - 3 meses, preferiblemente aproximadamente de 1 mes, para
efectuar la inmunización. Se recupera el anticuerpo por medio de la
recolección de sangre del animal inmunizado después de trascurridas
1 a 2 semanas desde la última administración, centrifugando la
sangre y aislando el suero de la sangre.
Los anticuerpos monoclonales mimótopos
anti-BSW17 pueden ser por ejemplo de humano o de
múrido. Preferiblemente, el paciente será tratado con una
preparación de un fragmento Fab' de anticuerpo monoclonal de múrido
o un anticuerpo quimérico de humano-ratón (que
comprende la región Fc humana y región Fab' de ratón) para minimizar
cualquier reacción adversa para inmunoglobulina foránea animal. Los
anticuerpos monoclonales de múrido se pueden preparar por medio del
método de Köhler y Milstein (Köhler, G. y Milstein, C., Nature 256
[1975] 495), por ejemplo por medio de fusión de células de bazo de
ratones hiperinmunizados con una línea celular apropiada de mieloma
de ratón. Se pueden utilizar diferentes métodos para elevar los
anticuerpos monoclonales humanos, incluida la producción por medio
de:
- (1)
- células B transformadas por el virus de Epstein-Barr (EBV);
- (2)
- línea celular para hibridación de linfocitos B;
- (3)
- hibridomas de humano - múrido;
- (4)
- hibridomas de humano - humano;
- (5)
- heterohibridomas de humano - ratón x humano; y
- (6)
- repertorio de clonación (despliegue de fago).
Los heterohibridomas de humano - ratón x humano
son los más preferidos, e involucran la combinación de
características favorables tanto de tipos celulares parentales de
múrido como de humano. Las líneas celulares de heterohibridoma de
humano - ratón se han vuelto adecuadas para fusión de células B
(Teng, N.N.M. y colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80 [1983]
7308).
Cuando se lo utiliza para inmunización, se puede
introducir el anticuerpo dentro del huésped más convenientemente
por medio de inyección intramuscular. Se puede emplear cualquier
vehículo sólido o liquido convencional que sea aceptable para el
huésped y no tenga efectos secundarios adversos sobre el huésped ni
efectos nocivos sobre la vacuna. Se puede utilizar una solución
salina amortiguada de fosfato (PBS), a pH fisiológico, por ejemplo
un pH aproximadamente de 6,8 a 7,2, preferiblemente aproximadamente
de 7,0, como vehículo, solo o con un adyuvante adecuado, tal como
un adyuvante con base en hidróxido de aluminio. La concentración de
antígeno inmunogénico puede variar aproximadamente desde 50 \mug
hasta aproximadamente 500 \mug, preferiblemente aproximadamente
desde 200 \mug hasta aproximadamente 300 \mug por inyección, en
un volumen de solvente generalmente aproximadamente desde 0,25 ml
hasta aproximadamente 1 ml, preferiblemente aproximadamente de 0,5
ml. Se requerirán inyecciones múltiples después de la inyección
inicial, y quizás suministradas por ejemplo en intervalos
anuales.
En lo concerniente a la inmunización
"activa", se la prefiere para uso humano, pero quizás se puedan
tratar otras especies de mamíferos en forma similar, utilizando
mimótopos análogos correspondientes a la IgE de estas especies,
como por ejemplo en el perro. El término "portador
inmunogénico" incluye aquí a aquellos materiales que tienen la
propiedad de producir en forma independiente una respuesta
inmunogénica en un animal huésped y que se pueda acoplar en forma
covalente a un polipéptido ya sea directamente a través de la
formación de enlaces peptídicos o éster entre grupos carboxilo,
amino o hidroxilo en el polipéptido y en los grupos correspondientes
sobre el material portador inmunogénico, o alternativamente por
medio del enlazamiento a través de un grupo de enlazamiento
bifuncional convencional, o como una proteína de fusión.
Los ejemplos de tales portadores incluyen:
albúminas, tal como BSA; globulinas; tiroglobulinas; hemoglobinas;
hemocianinas (particularmente Hemocianina de Lapa Ojo de Cerradura
[KLH]); proteínas extraídas de ascaris, por ejemplo extractos de
ascaris tales como aquellos descritos en J. Immun. 111 [1973]
260-268, J. Immun. 122 [1979]
302-308, J. Immun. 98 [1967]
893-900, y Am. J. Physiol. 199 [1960]
575-578 o productos purificados del mismo;
polilisina; ácido poliglutámico; copolímeros de lisina-ácido
glutámico; copolímeros que contienen lisina u ornitina; etc.
Recientemente, se han producido vacunas utilizando toxoide de
difteria o toxoide de tétanos como material portador inmunogénico
(Lepow M. L. y colaboradores, J. of Infectious Diseases 150 [1984]
402-406; Coen Beuvery, E. y colaboradores, Infection
and Immunity 40 [1983] 39-45) y estos materiales
toxoides pueden ser utilizados también en la presente invención. Se
prefiere particularmente a la proteína purificada derivada de la
tuberculina (PPD) para ser utilizada en el esquema de inmunización
"activa" ya que (1) no induce por si misma una respuesta de
células T (es decir, es en efecto un "hapteno de célula T"), y
sin embargo se comporta como un antígeno completamente procesado y
es reconocido por las células T como tal; (2) se sabe que es uno de
los más potentes "portadores" de hapteno en la forma de
reconocimiento enlazado; y (3) puede ser utilizada en humanos sin
análisis adicionales.
Como agentes de enlazamiento portadores de
hapteno, se pueden emplear aquellos convencionalmente utilizados en
la preparación de antígenos, por ejemplo aquellos expuestos
anteriormente, o en los Ejemplos de más abajo.
El proceso de la invención para acoplar
covalentemente al componente (a) a la fracción (b) se puede llevar
a cabo en una forma conocida. De esta forma, por ejemplo, para
acoplamiento covalente directo se prefiere utilizar derivados de
bis-N-succinimidilo, más
preferiblemente bis(sulfosuccinimidil)suberato (BSS)
como agente de acoplamiento. También se pueden utilizar
glutaraldehído o carbodiimida, más preferiblemente
diciclohexil-carbodiimida (DC) o
1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
para el acoplamiento covalente de un péptido (a) a material
portador inmunogénico (b).
Se pueden determinar fácilmente en forma
convencional las cantidades de hapteno y de agente de enlazamiento
portador-hapteno [esto es, del componente (a)] y del
portador [esto es, del componente (b)]. Se prefiere emplear al
portador en una cantidad aproximadamente de 1 hasta aproximadamente
6 veces, preferiblemente aproximadamente desde 1 hasta
aproximadamente 5 veces el peso del hapteno, y se emplea el agente
de enlazamiento portador-hapteno en una cantidad
aproximadamente de 5 hasta aproximadamente 10 veces el equivalente
molar del hapteno. Después de la reacción, se enlaza el portador al
hapteno a través del agente de enlazamiento
portador-hapteno para obtener al antígeno deseado
compuesto de un complejo portador-péptido. Se puede
aislar fácilmente el inmunógeno resultante de la invención en una
forma convencional, por ejemplo, por medio de diálisis, filtración
por gel, precipitación por fraccionamiento, etc.
La preparación de los materiales de partida se
puede efectuar en una forma convencional. Los péptidos apropiados
para ser usados como el componente (a) se pueden identificar, por
ejemplo, por medio de una selección aleatoria de la biblioteca de
péptidos exhibida por el fago, y fácilmente sintetizados, por
ejemplo, por medio de procedimientos convencionales en fase sólida,
por ejemplo, para péptidos cíclicos, por medio del procedimiento en
fase sólida empleando el procedimiento bien conocido
"F-moc", o se pueden identificar
alternativamente utilizando una estrategia peptidomimética por
medio de la selección de péptidos sintetizados en forma
aleatoria.
Los siguientes documentos ilustran los
antecedentes en el estado del arte citados en conexión con la
presente invención:
D1: Celltech
WO-A-95/14779; y
D2: Pasteur
WO-A-95/20606.
Figura 1: Interacción entre IgE y su receptor
IgERI de alta afinidad.
Figura 2: Metodología "clásica" de vacuna
anti-hIgE.
Figura 3: Perfil de actividad biológica de
BSW17.
Figura 4: Inmunoterapia con base en el mimótopo
BSW17
Figura 5: Mimótopos BSW17 desplegados por el
fago que reconocen específicamente BSW17
Figura 6: Mimótopos BSW17 desplegados por el
fago que inhiben el enlazamiento de IgE/BSW17
Figura 7: Enlazamiento de un péptido mimótopo
BSW17 sintetizado químicamente a BSW17
Figura 8a: Reconocimiento del conjugado
GEFCINHRGYWVCGDPA - KLH (BSS) (SDS 236) del mimótopo cíclico BSW17
y del conjugado Fc\varepsilon (500 - 509) - KLH (BSS) (SDS 237)
por BSW17.
Figura 8b: Reconocimiento de diferentes
conjugados del mimótopo BSW17 por parte de BSW17.
Figura 9a: Reconocimiento específico de los
conjugados del mimótopo BSW17 [BSA (DC)] y del conjugado [KLH
(glutaraldehído)] por BSW17.
Figura 9b: Reconocimiento específico de los
conjugados del mimótopo BSW17 [KLH (DC); Lys] por BSW17.
Figura 10a: Respuesta inmune de IgE
anti-humano inducida en ratones después de la
inmunización con conjugados del mimótopo BSW17 (1).
Figura 10b: Respuesta inmune de IgE
anti-humana inducida en conejos después de
inmunización con conjugados del mimótopo BSW17 (2).
Figura 11: Títulos en suero de anticuerpos de
mimótopo anti-BSW17 generados en conejos por
inmunización.
Figura 12: Especificidad del isótopo de la
respuesta de IgE anti-humana en conejos inmunizados
con mimótopo BSW17.
Figura 13: Competición de suero con mimótopo
anti-BSW17 con BSW17 para enlazamiento de IgE.
Figura 14: Enlazamiento de anticuerpos de
mimótopo anti-BSW17 purificados por afinidad a
hIgE.
Figura 15: Análisis de sueros con mimótopo
anti-BSW17 de conejo y anticuerpos de mimótopo
anti-BSW17 purificados por afinidad para la
anafilactogenicidad sobre células sanguíneas humanas:
- R2/0, R4/0: sueros pre inmunes de conejos R2
y R4 antes de vacunación con el mimótopo BSW17;
- R2/SDS214, R4/SDS213: sueros de conejos R2 y
R4, 65 días después de la inmunización principal;
- anti-SDS213,
anti-SDS214: anticuerpos de mimótopo
anti-BSW17 purificados por afinidad;
- R2/0 PC, R4/0 PC: control positivo de
activación (PC) en presencia de suero de conejo.
Concentraciones de la muestra:
- A =
- 0.1 \mug de anticuerpos del mimótopo anti - BSW17 (o equivalentes en sueros enteros de conejo) por ml
- B =
- 1,0 \mug de anticuerpos del mimótopo anti - BSW17 (o equivalentes en sueros enteros de conejo) por ml
- C =
- 5,0 \mug de anticuerpos del mimótopo anti - BSW17 (o equivalentes en sueros enteros de conejo) por ml.
\vskip1.000000\baselineskip
- Ac
- acetilo
- AMS
- sulfato de amonio
- BSA
- albúmina de suero bovino
- BSS
- bis(sulfosuccinimidil)suberato
- BSW17
- un anticuerpo monoclonal IgG dirigido contra el epítopo CH_{3} de IgE nativo (J. Knutti - Müller y colaboradores, Allergy 41 [1986] 457-465; S. Miescher y colaboradores, Int. Arch. Allergy Immunol. 105 [1994] 75)
- Péptido del mimótopo BSW17
- un péptido que imita al epítopo natural sobre IgE humana reconocido por el anticuerpo monoclonal BSW17 IgE anti-humano
- cfu
- unidades formadoras de colonias
- DC
- dihexilcarbodiimida
- EBV
- virus de Epstein-Barr
- ELISA
- ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas
- FceRI
- receptor I de alta afinidad para la región constante de IgE
- FCS
- suero fetal de ternera
- gam
- anti-ratón de cabra
- gar
- anti-conejo de cabra
- h
- humano(a)
- HEPES
- ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N'-2-etanosulfónico
- HRP
- peroxidasa de rábano (= POX)
- HSA
- albúmina de suero humano
- IgE
- inmunoglobulina E
- IPTG
- isopropil-\beta-D-tiogalactósido
- KLH
- hemocianina de lapa ojo de cerradura
- Le27
- un anticuerpo monoclonal de IgE anti-humana (Allergy [1986], ver más arriba; Int. Arch. Allergy Immunol. [1994] ver más arriba)
- Placas LB
- placas con medio Luria-Bertani
- Péptido mimótopo
- un péptido que imita al menos parte del epítopo conformacional de una molécula de anticuerpo
- PBS
- solución salina amortiguada con fosfato
- PEG
- polietilén glicol
- POX
- peroxidasa de rábano (= HRP)
- PPD
- proteína purificada derivada de tuberculina
- rh IL-3
- interleuquina-3 humana recombinante
- placas RIA
- placas de radioinmunoensayo
- RPMI1640
- medio de cultivo estándar para células (Sigma, St. Louis, EUA)
- Medio SB
- medio Bacto Sódico (Pharmacia, Uppsala, Suecia)
- sLt
- leucotrieno soluble
- TBS
- solución salina amortiguada con Tris
- VCS
- fago auxiliar VCS M13 (Stratagene, EUA).
\vskip1.000000\baselineskip
En los siguientes Ejemplos, que ilustran la
invención pero que de ninguna manera limitan su alcance, las
referencias a la temperatura se hacen en grados Celsius.
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Ejemplo
1
Se muestra como modelo para analizar la
capacidad antialérgica de los anticuerpos BSW17 y tipo BSW17,
generados en pacientes humanos por medio de inmunización activa con
péptidos mimótopos BSW17, el efecto de BSW17 sobre la liberación de
histamina de células humanas tipo basófilo, obtenidos a partir de
células de médula ósea cultivadas con rhIL-3.
Se preparan células mononucleares a partir de
médula ósea de pacientes que requieren del reemplazo de la cabeza
del hueso del fémur, por medio de sedimentación por gradiente de
densidad en Ficoll-Hypaque (1,077 g/ml; 400 g). Se
cultivan 5 x 10^{5} células/ml en medio RPMI1640 que contiene FCS
al 15% y 2 ng/ml de rhIL-3 humana. Después de 6
días de cultivo a 37ºC en CO_{2} al 5%, se añade un volumen igual
de medio que contiene rhIL-3. El día 12, se
recolectan las células y se las utiliza para sensibilización pasiva
y para el ensayo de liberación de histamina. Se incuban
aproximadamente 5 x 10^{5} células cultivadas de médula ósea en
amortiguador HA (HEPES 20 mM; pH = 7,4; 0,3 mg/ml de HSA) con 500
ng/ml de IgE humana en presencia o en ausencia de un exceso de 50
veces de anticuerpo monoclonal anti-IgE en un
volumen total de 1 ml. Después de incubación durante 2h a 37ºC, se
utilizan sobrenadantes celulares para medir la histamina durante la
sensibilización pasiva. Se utilizan los precipitados celulares para
activar la liberación de histamina. Para determinar el grado de
liberación directa de histamina se resuspenden las células de
médula ósea sensibilizadas en forma pasiva, en 0,3 ml de
amortiguador HCM (amortiguador HA que contiene CaCl_{2} 0,6 M y
MgCl_{2} 1 mM e incubado con 0,1 \mug/ml del anticuerpo
monoclonal Le27 anti-IgE. Se mide la cantidad de
histamina en el sobrenadante y en el sedimento celular en un
Technicon Autoanalyzer (Technicon, Tarrytown, Nueva York, EUA). Se
calcula el porcentaje de liberación de histamina [de acuerdo con la
fórmula: liberación de histamina (%) = histamina en el sobrenadante
dividido por la histamina en el sobrenadante + histamina en el
precipitado celular, multiplicado por 100]. Se calcula el
porcentaje de liberación de la histamina durante la sensibilización
pasiva [de acuerdo con la fórmula: liberación de histamina (%) =
histamina en el sobrenadante (después de sensibilización pasiva)
dividido por la histamina en el sobrenadante (después de la
activación) + histamina en el sobrenadante (después de
sensibilización) + histamina en el precipitado celular, multiplicado
por 100]. Se calcula la liberación de la histamina específica del
anticuerpo anti-IgE [de acuerdo con la fórmula:
liberación específica de histamina (%) =% de la liberación total de
histamina menos el% de liberación espontanea de histamina].
Los resultados de tres experimentos
independientes se resumen en la Tabla 1:
Los datos de la Tabla 1 muestran claramente que
las células de la médula ósea incubadas con IgE y BSW17 no liberan
histamina durante la sensibilización pero inhiben la activación
posterior con Le27. Las células de médula ósea incubadas con IgE y
Le27 están activadas ya durante la sensibilización pasiva hasta un
grado tal que no se puede liberar más histamina durante la segunda
incubación con este anticuerpo monoclonal anafilactogénico. Las
células de médula ósea sensibilizadas en ausencia de cualquier
anticuerpo monoclonal anti-IgE, sin embargo,
liberan efectivamente histamina después de la activación
subsiguiente con Le27.
Se puede concluir que a) BSW17 por si mismo es
no anafilactogénico y b) BSW17 protege a los basófilos humanos de
la liberación de histamina inducida por agentes de activación. Por
lo tanto, la generación de anticuerpos tipo BSW17 en pacientes
alérgicos por medio de inmunización activa con péptidos mimótopos
BSW17, se puede esperar que proteja a los huéspedes inmunizados del
desarrollo de reacciones alérgicas.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2
Las partículas de bacteriófago específicamente
reconocidas por BSW17 se identifican por medio de bioselección de
bibliotecas de fago que exhiben péptidos aleatorios lineales o
circulares de 6 a 15 residuos de aminoácidos de longitud fusionados
a los péptidos de fago pIII y pVIII, respectivamente. Para la
amplificación de las bibliotecas de fago, se incuban 2 ml de un
cultivo líquido de E. coli XL-I azul que se
desarrollaron en medio SB hasta OD_{600} = 1,0, con 10^{10}
fagos durante 15 minutos a temperatura ambiente. Se añaden 10 ml de
medio SB que contiene 10 mg/ml de tetraciclina y 20 \mug/ml de
carbenicilina y se siembran en placa 10 \mul, 1 \mul y 0,1
\mul, respectivamente, sobre placas LB que contienen 100 \mug/ml
de carbenicilina. Se incuba el cultivo a 37º con agitación vigorosa
durante una hora, luego se añaden 100 ml de SB que contienen 10
\mug/ml de tetraciclina y se añaden 50 \mug/ml de carbenicilina
y se continúa la incubación durante una hora. Se añaden 10^{12}
cfu del fago auxiliar VCS M13. Después de 2 horas con agitación
vigorosa a 37º, se añade kanamicina hasta una concentración final
de 70 \mug/ml y se continúa la incubación durante la noche.
Después de centrifugación a 4000 g y 4º durante 20 minutos, se
mezclan los sobrenadantes con 38 ml de una solución filtrada
estéril enfriada con hielo de NaCl al 12% y PEG 8000 al 12%, se
enfría sobre hielo durante 30 minutos y se centrifuga durante 30
minutos a 10000 g a 4º. Se solubiliza el precipitado de fago en 2 ml
de TBS que contiene caseína al 1,5% y se almacena a 4º. Para
bioselección, se recubren las placas RIA de Costar (Costar 3690)
durante la noche a 4º con 20 \mug/ml de BSW17 en amortiguador de
carbonato 0,1 M, pH 9,6, y después de eso se bloquea con TBS que
contiene caseína al 1,5%. Se añaden 2 x 10^{11} cfu de fagos y se
incuba a 37º durante 2 horas, luego se lava 10 veces con PBS/Tween
20 al 0,1%. Se enjuagan los pozos con agua y se eluyen los fagos
enlazados con un total de 200 \mul de HCl 0,1 M, pH 2,2 durante 10
minutos. Se neutralizan los fagos eluidos con base de Tris 2 M y se
amplifica como se describió anteriormente.
Para la selección de clones positivos se incuban
50 \mul de un cultivo líquido de E. coli XL-I azul
desarrollado en medio SB hasta OD_{600} = 1,0 con 1 \mul de una
dilución 10^{-8} de fagos amplificada después de la tercera ronda
de paneo durante 15 minutos a temperatura ambiente, luego se sembró
en placa sobre placas LB que contenían 100 \mug/ml de
carbenicilina y se cultivó durante la noche. Se escogen
aleatoriamente las colonias y se las siembra sobre placas LB que
contienen 100 \mug/ml de carbenicilina. Después de 4 horas a 37º,
se colocan los filtros de nitrocelulosa remojados con 10 mM de IPTG
sobre la superficie y se continúa la incubación durante la noche a
32º. Se remueven los filtros y se incuba a 37º durante 30 minutos en
una atmósfera de CHCl_{3}. Se remueven los residuos bacteriales
incubando los filtros en Tris 50 mM, pH 8, NaCl 150 mM, MgCl_{2}
5 mM, BSA al 3%, 100 U de ADNasa I y 40 mg de lisozima por 100 ml
durante 1 hora, se bloquea en TBS que contiene caseína al 1,5% y se
incuba durante la noche con BSW17-POX (BSW17
acoplado a POX) en TBS que contiene caseína al 1,5%. Se lavan los
filtros con TBS, TBS/Tween 20 al 0,5% y luego TBS durante 10 minutos
cada vez. Para colorear las tiras se incuban en 600 \mug de
4-cloro-1-naftol por
ml y 0,042% de peróxido de hidrógeno en TBS.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
Se ha encontrado que diferentes partículas de
fago que exhiben péptidos circulares que consisten de siete, ocho o
nueve aminoácidos y péptidos lineales que consisten de diez y quince
residuos de aminoácidos, respectivamente, se enlazan a BSW17. Se
determinó la secuencia de nucleótidos del ADN que codifica a estos
péptidos. De acuerdo a su homología entre ellos así como a las
regiones homólogas dentro de Fc\varepsilon, se podrían deducir 3
grupos de fagos que exhiben péptidos reconocidos por BSW17 a partir
de la secuencia de ADN. Se muestra un vistazo general en la
Tabla 2:
Tabla 2:
\vskip1.000000\baselineskip
El segundo péptido del grupo A anterior (Seq.
Id. No. 19) es el péptido (A) (Seq. Id. No. 1) con dos Cys
adicionales para circularización. Los otros tres péptidos, Seq. Id.
No. 18, Seq. Id. No. 20, y Seq. Id. No. 21, respectivamente, son
péptidos adicionales preparados en forma similar.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Como se puede observar a partir de la Tabla 2,
las partes con terminales carboxilo de los péptidos del grupo A
están altamente conservadas y las partes con terminales amino,
aunque más degeneradas, contienen aminoácidos polares cargados
positivamente. Esta distribución de carga parece ser esencial para
el reconocimiento de BSW17, ya que un clon que difiera en el
terminal amino de esta característica, demuestra únicamente un
enlace muy débil con BSW17. No se puede encontrar un alargamiento
consecutivo de aminoácidos con homología de secuencia significativa
en Fc\varepsilon. La alineación por similitud de patrón, sin
embargo, permite la distribución de estos péptidos para una
extensión de aminoácidos que va desde la posición 500 hasta la 508
dentro del domino C\varepsilon4. El decapéptido
Fc\varepsilon500-509 ha sido postulado por
Stanworth y colaboradores [Lancet 336 (1990) 1279] por estar
involucrado en la activación de mastocitos por medio de IgE enlazado
al receptor.
Los péptidos que pertenecen al grupo B son
también altamente homólogos entre sí. Además, su parte con terminal
amino es casi idéntica con las posiciones de los aminoácidos
370-375 de Fc\varepsilon. Esta secuencia es parte
de C\varepsilon3 y contiene o es adyacente a una región que ha
mostrado estar involucrada en el enlazamiento de IgE a su receptor
de alta afinidad. Este hallazgo explica la inhibición de la
interacción de IgE/IgERI por medio de BSW17.
Se puede concluir que el epítopo conformacional
complejo reconocido por BSW17 contiene estructuras conformacionales
representadas por las extensiones de aminoácidos
500-508 (dentro de C\varepsilon4) y
370-375 (dentro de C\varepsilon3) de la molécula
de IgE (numeración de acuerdo a E.A. Padlan y D.R. Davies, Molecul.
Immunol. 23 (1986) 1063). Los anticuerpos generados en un individuo
por inmunización con mimótopos de los grupos A y B anteriores
acoplados a una molécula portadora inmunogénica protegerán así de
reacciones alérgicas bloqueando el enlazamiento de IgE a su
receptor de alta afinidad y/o activará la desgranulación de las
células objetivo.
Los péptidos resumidos en el grupo C de la tabla
no exhiben homologías significativas entre sí ni con
Fc\varepsilon. Por lo tanto, ellos representan "mimótopos
genuinos" que imitan la estructura tridimensional reconocida por
BSW17. Utilizando estos mimótopos como inmunógenos también dará como
resultado la generación de anticuerpos antialérgicos tipo BSW17 en
el huésped inmunizado.
La generación de una respuesta inmune como la de
BSW17 dirigida específicamente contra el epítopo BSW17 sobre la IgE
humana es mostrada para mimótopos seleccionados en los siguientes
Ejemplos 4 a 6.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
El enlazamiento de péptidos mimótopo exhibidos
por las partículas de fago (grupo A de la Tabla 2: primer clon =
clon 1 en la Fig. 5 =
Cys-Arg-Arg-His-Asn-Tyr-Gly-Phe-Trp-Val-Cys
= Seq. Id. No. 18; segundo clon = clon 18 en la Fig. 5 =
Cys-Ile-Asn-His-Arg-Gly-Tyr-Trp-Val-Cys
= Seq. Id. No. 19) a las regiones hipervariables específicas del
antígeno de BSW17 se demuestra por medio de ELISA. Se recubren los
pozos de las placas COSTAR con 10 \mug de BSW17 y con diferentes
anticuerpos monoclonales siguiendo los procedimientos estándar de
ELISA. Después de bloquear con BSA se incuban los pozos con 100
\mul de amortiguador estándar de incubación para ELISA que
contienen partículas de bacteriófago obtenidas a partir de los
sobrenadantes del cultivo bacteriano infectado con fago, con un
título de fago de 10^{9} cfu/ml. Después de lavar, se incuban las
placas con 5 \mug de antisuero anti-M13 acoplado
a peroxidasa de rábano (HRP) (Pharmacia, Uppsala, Suecia) en
amortiguador de incubación. Todas las incubaciones se llevan a cabo
a temperatura ambiente durante 1 hora. Después del lavado final, se
visualizan las partículas de fago enlazadas a los anticuerpos
recubiertos a través del suero anti-M13 enlazado a
HRP por medio del desarrollo de un sustrato cromogénico siguiendo el
procedimiento estándar de ELISA. La Figura 5 muestra que los fagos
mimótopo se enlazan muy específicamente a BSW17 y a ningún otro
anticuerpo, tal como 8E7, 3G9 y 5H10 que son también anticuerpos
monoclonales anti-C\varepsilon3 y que han sido
generados por medio del uso de C\varepsilon3 recombinante como
inmunógeno, ni a 5H5/F8 que representa a otro anticuerpo monoclonal
que está dirigido contra la porción extracelular de
Fc\varepsilonRI\alpha. Se incluyen como control negativo sin
anticuerpo, la cadena \alpha de Fc\varepsilonRI recombinante, y
como control positivo, pozos recubiertos con antisuero policlonal
anti-M13.
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Ejemplo
5
La especificidad de la interacción mimótopo -
BSW17 se demuestra adicionalmente mostrando que la unión de las
partículas de fago que exhiben al mimótopo interfiere con el
enlazamiento BSW17/IgE. Las células bacterianas se desarrollan en
SB que contiene 10 \mug/ml de tetraciclina y 50 \mug/ml de
carbenicilina hasta OD_{600} = 0.4, luego se añade el fago
auxiliar VCS M13 y se incuba en forma continua durante 2 horas a
37º. Luego se añade Kanamicina hasta una concentración final de 70
\mug/ml y se continúa la incubación durante la noche. Se
precipitan las partículas de fago con polietilén glicol. Se recubren
las placa blandas RIA con 20 \mug/ml de BSW17 en amortiguador de
carbonato 0,1 M pH 9,6 y luego se bloquea con TBS que contiene
caseína al 1,5%. Se marca con ^{125}I la IgE humana por medio del
método con cloramina-T y se utilizan 100000 cpm por
pozo para enlazar a BSW17 recubierto con las placas RIA en
presencia de concentraciones crecientes de IgE no marcada (curva
estándar) o partículas de fago, respectivamente. Todos los
experimentos se llevan a cabo a temperatura ambiente y se lavan las
placas 3 veces con NaCl al 0,9% + Tween 20 al 0,05%, se corta en
pedazos y se midió cada pozo en un contador \gamma durante
1
minuto.
minuto.
Los fagos mimótopo (PhBSW.6-9 en
la Fig. 6 = clon 1 de la Fig. 5 = CRRHNYGFWVC = Seq. Id. No. 18;
PhBSW.29-8 en la Fig. 6 = clon 18 de la Fig. 5 =
CINHRGYWVC = Seq. Id. No. 19) (ver el Ejemplo 4 anterior) inhiben el
enlazamiento de BSW17 a IgE. La Figura 6 muestra el enlazamiento de
IgE marcada con ^{125}I a BSW17 en presencia de los clones de
fago que exhiben al mimótopo BSW17. Los círculos cerrados muestran
una curva estándar de inhibición por medio de IgE no marcada para
permitir una estimación de la inhibición del enlazamiento de IgE
marcada en presencia de 10^{11} cfu/ml de partículas de fago. La
inhibición lograda con los clones de fago es igual a las
concentraciones de la IgE no marcada de 1 \mug/ml y 1,7 \mug/ml,
respectivamente.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
6
Para analizar la posibilidad de un método de
vacunación con base en un mimótopo BSW17, se inmunizan conejos con
partículas de fago que exhiben péptidos mimótopo BSW17 y al fago
auxiliar VCS M13 como control, respectivamente. Se dializan
10^{12} cfu de partículas de fago preparadas en forma fresca
contra PBS a 4ºC. Se emulsiona 1 ml con adyuvante completo de
Freund para la primera inmunización, o con 1 ml de adyuvante
incompleto de Freund para refuerzo. Se repite la inmunización en
forma subcutánea cada 14 días. Después del tercer refuerzo, se
toman 12 ml de sangre, coagulados durante 4 horas a temperatura
ambiente en viales de vidrio y centrifugados durante 10 minutos a
2000 g. Los sobrenadantes se analizan por la presencia de
anticuerpos de IgE anti-humana por medio de ELISA.
Se diluye IgE humana de tres individuos diferentes
(SUS11-IgE; PS-IgE;
WT-IgE), en PBS en una concentración de 50
\mug/ml y se salpican manchas con alícuotas de 1 \mul sobre
nitrocelulosa. Se bloquea la nitrocelulosa en TBS que contiene
caseína del 1,5% durante 1 hora, se diluye el suero de Conejo 1:200
en TBS que contiene caseína al 1,5% y se incuba durante la noche. El
lavado se realiza en TBS, TBS-Tween 20 al 0,05% y
TBS durante 10 minutos cada uno. El desarrollo de
HRP-anticonejo de cabra se diluye 1:1.000 en TBS
que contiene caseína al 1,5% y se incuba durante 4 horas. El lavado
y la coloración se llevan a cabo como se describió. Como se muestra
en la Tabla 3, los conejos de control inmunizados con el fago VCS
M13, así como los conejos no inmunizados muestran una reacción
débil contra IgE humana en sus sueros, reflejando presumiblemente
la reacción cruzada de los anticuerpos IgE anticonejo de ocurrencia
natural con IgE humana. Sin embargo, además de una respuesta inmune
masiva a la proteína de recubrimiento pVIII del bacteriófago, los
sueros de conejos inmunizados con fagos mimótopo BSW17 también
contienen niveles muy elevados de anticuerpos que reconocen
específicamente IgE
humana:
humana:
\vskip1.000000\baselineskip
Se puede demostrar la especificidad del epítopo
BSW17 de estos antisueros en un ELISA de competición: se preparan
tiras de nitrocelulosa como se describió anteriormente y se incuba
con suero de conejo en una dilución 1:50 en TBS que contiene
caseína al 1,5% durante la noche. Después de lavar, se añade mAb
BSW17 marcado con peroxidasa de rábano (BSW17-HRP)
en una dilución 1:50000 en TBS que contiene caseína al 1,5% durante
4 horas. El lavado y coloración se llevan a cabo posteriormente
como se describió. Como se puede observar a partir de la Tabla 4,
el enlazamiento de BSW17-HRP a preparaciones de IgE
de diferentes fuentes se inhibe por los sueros de los conejos
inmunizados con fagos mimótopo BSW17, mientras que el suero de los
conejos inmunizados con fago auxiliar no muestra ningún efecto
inhibidor:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En los siguientes Ejemplos 7 y 8, se muestra la
posibilidad de utilizar péptidos mimótopos sintetizados químicamente
acoplados a proteína portadora como inmunógeno para la preparación
de una vacuna antialérgica:
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
7
Para confirmar que la porción derivada del
bacteriófago de los fagos mimótopo BSW17 se puede omitir sin
destruir la actividad biológica de la secuencia del péptido
mimótopo, se sintetiza químicamente el siguiente péptido, que
comprende al octapéptido mimótopo cíclico BSW17 (A) [mostrado en
forma lineal en la Tabla 2, Grupo A, segundo clon como péptido (A)
con dos Cys adicionales (Seq. Id. No. 19), y que contiene aquí los 7
residuos de aminoácidos adyacentes adicionales derivados del
bacteriófago Gly-Glu-Phe- y
-Gly-Asp-Pro-Ala
como secuencias flanqueadoras incluidas para facilitar el correcto
plegado del péptido mimótopo circular]:
(Seq. Id. No.
27)Gly-Glu-Phe-Cys-De-Asn-His-Arg-Gly-Tyr-Trp-Val-Cys-Gly-Asp-Pro-Ala
{}\hskip0.5cm
Después de la síntesis por medio de una técnica
estándar, se torna cíclico este péptido a través de las dos
cisteínas y marcadas por fluorescencia con Verde Rhodol. El
enlazamiento para incrementar las concentraciones de BSW17
inmovilizado en pozos de una placa de microtitulación bajo
condiciones de ELISA se determina por medio de mediciones de
fluorescencia y es mostrado en la Figura 7.
\newpage
Ejemplo
8
Se sintetizan químicamente diferentes péptidos
mimótopo y se acoplan a proteínas portadoras inmunogénicas. Las
reacciones de acoplamiento se llevan a cabo con una proporción de
masa 1:1 de péptido y proteína portadora, siguiendo los
procedimientos estándar (Shan S. Wong, Chemistry of Protein
Conjugation and Cross-linking, CRC Press
[1993]). Los conjugados obtenidos a partir de las siguientes
variantes de acoplamiento se preparan por:
- -
- acoplamiento de glutaraldehído
- -
- acoplamiento de DC (dihexilcarbodiimida)
- -
- acoplamiento de BSS [bis(sulfosuccinimidil)suberato]
- -
- entrelazamiento de lisina
\vskip1.000000\baselineskip
Los conjugados resultantes del mimótopo son:
- (1)
- P1 = KTKGSGFFVF - BSA (glutaraldehído) lineal
- (2)
- P4 = AcINHRGYWVC - BSA (DC) lineal
- (3)
- P5 = AcRSRSGGYWLWC - BSA (DC) lineal
- (4)
- SAF1-KLH = GEFCINHRGYWVCGDPA - KLH (DC) cíclico
- (5)
- SAF2-KLH = KTKGSGFFVF - KLH (DC) lineal
- (6)
- SAF3-KLH = VNLPWSFGLE - KLH (DC) lineal
- (7)
- SAF3-Lys = entrelazamiento lineal VNLPWSFGLE - lisina
- (8)
- SAF4-KLH = VNLTWSRASG - KLH (DC) lineal
- (9)
- SAF5-KLH = VNLTWS - KLH (DC)
- (10)
- SDS214 = GEFCRRHNYGFWVCGDPA - KLH (BSS) cíclico
- (11)
- SDS213, SDS227, SDS236, SDS252 = GEFCINHRGYWVCGDPA - KLH (BSS) cíclico
- (12)
- SDS237, SDS253 = KTKGSGFFVF - KLH (BSS) lineal
- (13)
- SDS242, SDS254 = VNLPWSFGLE - KLH (BSS) lineal y
- (14)
- SDS243 = VNLTWSRASG - KLH (BSS) lineal,
\vskip1.000000\baselineskip
por lo cual (1), (5) y (12) son moléculas de
inmunógeno de referencia preparadas respectivamente, por medio de
acoplamiento de glutaraldehído, DC y BSS; por lo tanto:
(1), esto es P1, son los aminoácidos
500-509 de la IgE humana, Seq. Id. No. 28, ver The
Lancet [1990] más arriba, acoplados a BSA por medio del
acoplamiento de glutaraldehído;
(5), esto es SAF2-KLH, es ese
mismo péptido, Seq. Id. No. 28, acoplado a KLH por medio del
acoplamiento de DC; y
(12), esto es SDS237 y SDS253, es ese mismo
péptido, Seq. Id. No. 28, acoplado a KLH por medio del acoplamiento
de BSS.
\vskip1.000000\baselineskip
Los otros péptidos son inmunógenos de la
invención, especialmente:
- -
- (2) (P4) es un péptido N-acetilado (A) (Seq. Id. No. 1) con una Cys adicional en el C-terminal (Seq. Id. No. 29), acoplado a BSA por medio del acoplamiento de DC;
- -
- (3) (P5) es un péptido N-acetilado (C) (Seq. Id. No. 3) con una Cys adicional en el C-terminal (Seq. Id. No. 30), acoplado a BSA por medio del acoplamiento de DC;
- -
- (4) (SAF1-KLH) es el péptido del Ejemplo 7 (Seq. Id. No. 31), tornado en cíclico a través de un puente disulfuro formado por medio de las dos Cys de flanqueo, y acoplado a KLH por medio del acoplamiento de DC;
- -
- (6) (SAF3-KLH) es el péptido (G) (Seq. Id. No. 7), acoplado a KLH por medio del acoplamiento de DC;
- -
- (7) (SAF3-Lys) es el péptido (G) (Seq. Id. No. 7), acoplado por medio de entrelazamiento de lisina
- -
- (8) (SAF4-KLH) es el péptido (D) (Seq. Id. No. 4), acoplado a KLH por medio del acoplamiento de DC;
- -
- (9) (SAF5-KLH) es el péptido (Q) (Seq. Id. No. 17), acoplado a KLH por medio del acoplamiento de DC;
- -
- (10) (SDS214) es el primer péptido del grupo A en la Tabla 2, con los mismos 7 residuos de aminoácidos adyacentes derivados del bacteriófago como el péptido en el Ejemplo 7 (Seq. Id. No. 32), ciclizado, y acoplado a KLH por medio del acoplamiento de BSS;
- -
- (11) (SDS213, SDS227, SDS236, SDS252) es el mismo péptido de (4) anterior (Seq. Id. No. 31), ciclizado, y acoplado a KLH por medio del acoplamiento de BSS;
- -
- (13) (SDS242, SDS254) es el péptido (G) (Seq. Id. No. 7), acoplado a KLH por medio del acoplamiento de BSS; y
- -
- (14) (SDS243) es el péptido (D) (Seq. Id. No. 4), acoplado a KLH por medio del acoplamiento de BSS.
\vskip1.000000\baselineskip
La Figura 8a muestra que tanto el conjugado
mimótopo cíclico BSW17 - KLH (BSS) (11), esto es SDS236, y el
motivo del epítopo "original" derivado de Fc\varepsilon (12),
esto es SDS237, esto es Fc\varepsilon (500-509)
acoplado como péptido lineal a KLH (BSS), son reconocidos por BSW17
en una forma que depende de la dosis, mientras que KLH libre no
muestra enlazamiento, los pozos de la placa de microtitulación están
recubiertos con 1 \mug cada uno de SDS236, SDS237 o KLH libre e
incubados con concentraciones crecientes de BSW17. El anticuerpo
enlazado se detecta con IgG-HRP antiratón de cabra
(gamIgG-HRP). Los datos mostrados representan el
promedio de los duplicados menos el enlazamiento de fondo a los
pozos no recubiertos (bloqueados con BSA).
La Figura 8b resume los datos del ELISA
obtenidos con diferentes conjugados de mimótopo BSW17 acoplados a
la proteína portadora utilizando diferentes procedimientos químicos
de acoplamiento. Los pozos de la placa de microtitulación se
recubren con 5 \mug cada uno de los conjugados de mimótopo, o KLH
libre, y se incuba con 10 \mug de BSW17. El anticuerpo enlazado
se detecta con gamIgG-HRP. Los datos mostrados
representan el promedio por duplicado menos el enlazamiento de
fondo para los pozos no recubiertos (bloqueado con BSA). En
contraste con KLH libre, se encuentra que cada conjugado del
mimótopo BSW17 es reconocido por BSW17. Sin embargo, a partir de
experimentos repetidos llevados a cabo durante varias semanas se
hace claro que los conjugados de KLH acoplados a través de DC son
menos estables y gradualmente pierden su capacidad de enlazamiento a
BSW17. En contraste, los conjugados del mimótopo BSW17 obtenidos
por medio del acoplamiento de BSS prueban ser estables aún
a +4º.
a +4º.
En las Figuras 9a y 9b se observa que los
mimótopos BSW17 acoplados a KLH o BSA son específicamente
reconocidos por BSW17 y no por los anticuerpos monoclonales no
relacionados 3G9 (C\varepsilon3 antihumano) y 5H5/F8 (RI\alpha
antihumano). Nuevamente, se recubren los pozos de la placa de
microtitulación con 5 \mug cada uno de los conjugados de mimótopo
mostrados e incubados con 10 \mug del correspondiente anticuerpo
monoclonal. El anticuerpo enlazado se detecta con
gamIgG-HRP. Los datos mostrados representan el
promedio por duplicado menos el enlazamiento de fondo a pozos no
recubiertos (bloqueados con BSA).
\newpage
Ejemplo
9
Para confirmar la especificidad de la
inmunogenicidad de los conjugados de mimótopo BSW17, se inmunizan
conejos con un conjunto de preparaciones de mimótopo/portador como
se reseña más adelante:
Los conejos se inmunizan con 200 \mug de la
preparación correspondiente del conjugado disuelta en un volumen
total de 500 \mul de solución salina amortiguada con fosfato (PBS
def.) por medio de una inyección subcutánea. Para la primera
inmunización, se mezclan las muestras 1:1 con adyuvante completo de
Freund (conejos R1 - R4) o TiterMax (Sigma; conejos 1 - 20). Antes
de la inmunización inicial, se toman muestras de sangre de 5 ml.
Los refuerzos se llevan a cabo los días 21 y 28 después de la
primera inyección utilizando adyuvante incompleto de Freund. Las
muestras de sangre se toman los días 28 y 49 y se prepara el suero a
partir de todas las muestras.
La generación de una respuesta inmune de IgE
antihumana en los conejos inmunizados se monitorea por medio de
ELISA: se recubren los pozos de la placa de microtitulación con 5
\mug de IgE humana (SUS11; JW8) y se incuba con 100 \mul de
muestras de suero, diluidas 1:50 con amortiguador de incubación para
ELISA. Los anticuerpos de conejo enlazados por la IgE humana
inmovilizada se detectan por medio de incubación con
IgG-HRP anticonejo de cabra
(garIgG-HRP). Los valores medidos de OD_{405} se
corrigen por medio de la lectura obtenida con suero preinmune de
cada conejo correspondiente, diluido 1:50. Los datos dados en las
Figuras 10a y 10b representan los valores promedio de mediciones
por duplicado. Las Figuras 10a y 10b claramente demuestran la
inducción de anticuerpos en conejos inmunizados con diferentes
conjugados de mimótopo BSW17 que son dirigidos contra IgE
humana.
Los títulos en suero de los anticuerpos
recientemente generados con respecto al portador KLH, a los péptidos
utilizados como inmunógeno e IgE humana, respectivamente, se
determinan también por medio de ELISA, utilizando diluciones
seriales en suero para incubación con KLH inmovilizado, conjugado
BSA - péptido mimótopo e IgE humana, respectivamente. Dos ejemplos
de tales determinaciones del título en suero son mostradas en la
Figura 11, por (11), esto es, SDS 213, y por (10), esto es, SDS
214, respectivamente.
El Ejemplo anterior demuestra la aplicabilidad
de los conjugados de mimótopo BSW17 como inmunógenos para la
inducción de una respuesta de IgE antihumana.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
10
La especificidad del isotipo de la respuesta
inmune de IgE antihumana en los conejos inmunizados es monitoreada
por ELISA: se recubren cada uno de los pozos de la placa de
microtitulación con 3 \mug de IgE humana (SUS11), IgA, IgG, e
IgM, respectivamente, y se incuba con 100 \mul de muestras de
suero, diluidas 1:50 con amortiguador de incubación para ELISA. Los
anticuerpos de conejo enlazados por los anticuerpos humanos
inmovilizados se detectan por medio de incubación con
garIgG-HRP de cabra. Los valores medidos de
OD_{405} se corrigen por medio de la lectura obtenida con suero
preinmune diluido 1:50 de cada conejo correspondiente, diluido 1:50.
Los datos dados en la Figura 12 representan los valores promedio de
mediciones por duplicado. Como se puede observar, la respuesta
inmune generada en conejos por medio de la inmunización con
conjugados de mimótopo BSW17 es específica para IgE, aparte de un
reconocimiento parcial de IgM humana por el suero del conejo
inmunizado con (10), esto es,
SDS 214.
SDS 214.
En un ELISA de competición se muestra
adicionalmente que el antisuero anti-SDS214 de
conejo es capaz de competir parcialmente con BSW17 por el
enlazamiento de IgE. Se recubren cada uno de los pozos de la placa
de microtitulación con 1 \mug de IgE humana
(SUS-11) y se incuba ya sea con 5 \mug de BSW17 o
con el amortiguador de incubación sin BSW17. Después del lavado, se
añaden 100 \mul de antisuero anti-SDS213, diluido
1:50 con amortiguador de incubación para ELISA, para una segunda
incubación. Los anticuerpos de conejo enlazados por IgE humana
inmovilizada no tratada e IgE preincubada con BSW17 se detectan por
medio de incubación con garIgG-HRP de cabra. Los
datos suministrados en la Figura 13 representan los valores promedio
de las mediciones por
duplicado.
duplicado.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
11
Este Ejemplo demuestra que la respuesta
anti-hIgE inducida en conejos por medio de
inmunización con conjugados de mimótopo BSW17 es idéntica a la
respuesta específica del péptido anti-mimótopo.
Purificación por inmunoafinidad de anticuerpos
policlonales de mimótopoanti-BSW17 de conejo:
A 22 ml de antisuero de conejo (60 mg/ml de
proteína total de acuerdo con Bradford,
BSA-Standard, BIO-RAD) se le añaden
5,5 g de AMS sólido (25% p/v), se agita la mezcla durante 3 horas y
se incuba durante la noche a temperatura ambiente. Se remueve el
precipitado por medio de centrifugación a 18000 rpm (Sorvall)
durante 45 minutos y se lava con 25 ml de una solución acuosa de
AMS al 25% (p/v). Se centrifuga el precipitado lavado nuevamente
bajo las mismas condiciones, se lo disuelve en 10 ml de PBS,
NaN_{3} al 0,05%, pH 7,2, y se dializa contra 5 l del mismo
amortiguador durante la noche a +4º.
Se filtra el dializado sobre una unidad de
filtración Millex-GV de 0,2 \mum (Millipore) y se
lo aplica a una columna de Pharmacia XK16/30 rellena con 10 ml de
CH-Sefarosa 4B acoplada en forma covalente a 5 mg
del péptido mimótopo BSW17 SDS227 con una velocidad de flujo de 1
ml/min con PBS, NaN_{3} al 0,05% como amortiguador para la
corrida. Después de la aplicación y de la elución de la fracción de
proteína no enlazada, se eluye específicamente anticuerpo enlazado
con amortiguador de glicina 0,1 M/HCl pH 2,8. Se atrapa el eluato
(fracciones #12-20 en 9 ml) bajo agitación para
neutralización inmediata a pH 7,4 con TRIS/HAc 3,3 M, NaN_{3} al
0,8%, pH 8,0 (50 \mul/ml) y finalmente se dializa contra 3 l de
PBS, NaN_{3} al 0,05%, pH 7,2 durante la noche a 4º. La proteína
total es aproximadamente de 1 mg/ml de acuerdo con Bradford, BIgG
Standard (BIO-RAD). La recuperación de proteína
total aplicada es aproximadamente del 0,7%.
Las fracciones de IgG purificadas por afinidad
se analizan para el enlazamiento de hIgE por medio de ELISA. Los
pozos de la placa de microtitulación se recubren con concentraciones
crecientes de IgE humana (JW8) y se incuba con 5 \mug del
antisuero purificado anti-SDS-213 y
el antisuero anti-SDS-214,
respectivamente. Se detecta el anticuerpo enlazado con
garIgG-HRP. Los datos mostrados en la Figura 14
representan los valores promedio de los duplicados. Como se puede
observar a partir de la Figura, los anticuerpos IgG purificados
sobre la columna de afinidad del mimótopo anti -BSW17 son
reconocidos en forma dependiente con la dosis por la IgE humana.
Únicamente se observa una baja actividad de enlazamiento de fondo
con muestras que fluyen a través de la columna. Estos datos
demuestran que la actividad anti-hIgE inducida en
los conejos es idéntica con los anticuerpos dirigidos contra el
péptido mimótopo.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
12
Se muestra aquí que los anticuerpos
anti-IgE generados en conejos por medio de
inmunización con conjugados de mimótopo BSW17 son no
anafilactogénicos sobre basófilos en sangre humana. Como sistema de
prueba, se utiliza el kit de ELISA CAST sLt comercialmente
disponible (Bühlmann AG, Allschwil, Suiza). En este ensayo, la
liberación de leucotrieno soluble (sLt) de basófilos humanos, como
consecuencia de la activación de las células por medio de agentes
anafilactogénicos, se determina siguiendo el protocolo experimental
suministrado por proveedor. La lectura del ensayo se da como \mug
de sLt presentes por ml de sobrenadante de leucocitos humanos
después de incubación de las células con la muestra de prueba, como
se determina por medio de la comparación con una curva estándar. Se
obtiene la curva estándar utilizando una dilución serial de sLt
estándar en un ELISA de competición. Los niveles de fondo de sLt
resultantes de la liberación espontánea de sLt de la preparación de
leucocitos (PB = "paciente como blanco") y máximos de sLt que
se pueden liberar a partir de una preparación dada de leucocitos
(PC = "paciente de control"; obtenidos después de la activación
de las muestras celulares con un anticuerpo de entrelazamiento
anti-IgERI\alpha) están incluidos en cada prueba
como controles negativo y positivo, respectivamente.
Los sueros completos de conejos inmunizados con
conjugados de mimótopo BSW17 así como los anticuerpos de mimótopo
anti-BSW17 purificados por afinidad descritos en el
Ejemplo 11 son analizados por la presencia de la activación de
basófilos y por lo tanto por los anticuerpos
anti-hIgE anafilactogénicos. Como fuente de
basófilos, se utiliza sangre humana entera recientemente tomada de
un donante sano y procesada estrictamente de acuerdo con el
protocolo del kit CAST para ELISA. Los resultados se resumen en la
Figura 15 y muestran que ni el suero de conejo no purificado que
contiene los anticuerpos anti-hIgE generados por
medio de inmunización con conjugados de mimótopo BSW17, ni los
anticuerpos de mimótopo anti - BSW17 purificados por afinidad,
tienen la capacidad de activar células sanguíneas humanas para
liberación de leucotrieno; ellos son por lo tanto no
anafilactogénicos. Este es un prerrequisito absoluto para la
aplicación de mimótopos BSW17 en una vacuna antialérgica humana.
\vskip1.000000\baselineskip
Este listado de referencias citado por el
solicitante es únicamente para conveniencia del lector. No forma
parte del documento europeo de la patente. Aunque se ha tenido gran
cuidado en la recopilación, no se pueden excluir los errores o las
omisiones y la OEP rechaza toda responsabilidad en este sentido.
- \bullet WO 9514779 A [0041]
- \bullet EP 9790513642116 A [0087]
- \bullet WO 9520606 A [0041]
- \bullet GB 9604412 A [0087]
- \bullet EP 9701013 W [0087]
- \bullet GB 9617702 A [0087]
\bulletRAVETCH, J.V.; J.P.
KINET. Ann. Rev. Immunol, 1991, vol. 9,
457-492 [0006]
\bulletKÖHLER, G.; MILSTEIN, C.
Nature, 1975, vol. 256, 495 [0033]
\bulletTENG, N.N.M. y colaboradores,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, vol. 80, 7308
[0033]
\bulletJ. Immun., 1973, vol.
111, 260-268 [0036]
\bulletJ. Immun., 1979, vol.
122, 302-308 [0036]
\bulletJ. Immun., 1967, vol.
98, 893-900 [0036]
\bulletAm. J. Physiol., 1960,
vol. 199, 575-578 [0036]
\bulletLEPOW M. L. y colaboradores,
J. of Infectious Diseases, 1984, vol. 150,
402-406 [0036]
\bulletCOEN BEUVERY, E. y
colaboradores, Infection and Immunity, 1983, vol. 40,
39-45 [0036]
\bulletJ.KNUTTI-MÜLLER
y colaboradores, Allergy, 1986, vol. 41,
457-465 [0044]
\bullet S. MIESCHER y colaboradores,
Int. Arch. Allergy Immunol, 1994, vol. 105, 75
[0044]
\bulletSTANWORTH y colaboradores,
Lancet, 1990, vol. 336, 1279 [0054]
\bullet E.A.PADLAN; D.R.DAVIES.
Molecul. Immunol, 1986, vol. 23, 1063 [0056]
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Novartis AG
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: Schwarzwaldallee 215
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Basilea
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Suiza
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): CH-4058
\vskip0.500000\baselineskip
- (G)
- TELÉFONO: 61-324 5269
\vskip0.500000\baselineskip
- (H)
- TELEFAX: 61-322 7532
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: INMUNÓGENOS PÉPTIDOS
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 32
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- FORMA QUE PUEDE LEERSE EN EL COMPUTADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: Disco flexible
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- COMPUTADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: PatentIn Release #1.0, Versión #1.25 (EPO)
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- DATOS DE LA SOLICTUD ACTUAL:
\vskip0.500000\baselineskip
- NÚMERO DE LA SOLICITUD: WO PCT/EP97/01013 (EP 97 905 136.4 - 2116)
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- DATOS DE LA SOLICITUD ANTERIOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: GB 9604412.8
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE PRESENTACIÓN: 1 DE MARZO DE 1996
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- DATOS DE LA SOLICTUD ANTERIOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: GB 9617702.7
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE PRESENTACIÓN: 22 DE AGOSTO DE 1996
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm13
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 8 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm14
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 3:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 3:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm15
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 4:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 4:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 5:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 5:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm17
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 6:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 6:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 7:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 7:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 8:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 8:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 9:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 9:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 10:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 10:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm22
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 11:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 11:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm23
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 12:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 12:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm24
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 13:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 13:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm25
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 14:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 7 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 14:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 15:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 15 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 15:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm27
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 16:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 16:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm28
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 17:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 6 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 17:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm29
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 18:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 18:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm30
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 19:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 19:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm31
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 20:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 20:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm32
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 21:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 21:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm33
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 22:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 22:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm34
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 23:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 23:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm35
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 24:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 24:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm36
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 25:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 25:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm37
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 26:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 26:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 27:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 17 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 27:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 28:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 10 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 28:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 29:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 9 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 29:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 30:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 11 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 30:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm42
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 31:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 17 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 31:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm43
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 32:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- ENTRELAZAMIENTO: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: ambas
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- HIPOTÉTICA: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- TIPO DE FRAGMENTO: interno
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ. ID NO: 32:
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm44
Claims (12)
1. Una molécula inmunogénica que comprende
- (a)
- al menos una fracción de un péptido mimótopo BSW17, que tiene el número de acceso 96121916 en ECACC, de hasta 15 aminoácidos en total, que pueden incluir apropiadamente componentes adicionales para el enlazamiento de hapteno-portador, para facilitar el acoplamiento al componente (b) o un procesamiento adicional; o cuando el péptido mimótopo BSW17 es cíclico, puede tener los dos extremos juntos por medio de dos residuos adicionales de cisteína que forman un puente disulfuro, o están entrelazados químicamente; o cuando el péptido mimótopo BSW17 es lineal, puede tener el aminoácido del terminal carboxilo bloqueado en forma aminada y/o el aminoácido del terminal amino bloqueado en forma acetilada; o puede estar flanqueado por uno o dos grupos auxiliares y/o un grupo de acoplamiento adicional; y
- (b)
- una fracción capaz de provocar una respuesta inmune contra ese péptido, en donde la fracción de péptido mimótopo BSW17 consiste esencialmente de, o contiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre
2. Una molécula inmunogénica de acuerdo con la
reivindicación 1 en la forma de un péptido polimérico o una
proteína recombinante de fusión, por medio de la cual un compuesto
monomérico del péptido polimérico, o un compañero de la proteína de
fusión, constituyen la fracción de un péptido mimótopo BSW17, y el
resto del péptido polimérico o proteína de fusión constituyen la
fracción que produce la respuesta inmune.
3. Una molécula inmunogénica de acuerdo con la
reivindicación 1 en la forma de un conjugado de un péptido mimótopo
BSW17 y un portador inmunogénico.
4. Una molécula inmunogénica de acuerdo con la
reivindicación 1 en donde la fracción de péptido mimótopo BSW17
consiste de, o contiene la secuencia de aminoácidos
- Ile-Asn-His-Arg-Gly-Tyr-Trp-Val
- (A) {}\hskip0.5cm (Seq. Id. No. 1)
5. Una molécula inmunogénica de acuerdo a la
reivindicación 4 que es cíclica, especialmente con los extremos
sostenidos juntos por medio de dos residuos adicionales de cisteína
que forman un puente disulfuro e incluye componentes adicionales
para facilitar el acoplamiento al componente (b) o a un
procesamiento adicional.
6. La molécula inmunogénica de acuerdo a la
reivindicación 1 en donde la fracción de péptido mimótopo BSW17 (a)
tiene la secuencia de aminoácidos
(Seq. Id. No.
27)Gly-Glu-Phe-Cys-Ile-Asn-His-Arg-Gly-Tyr-Trp-Val-Cys-Gly-Asp-Pro-Ala
{}\hskip0.5cm
y es cíclica, especialmente es el
péptido
Ile-Asn-His-Arg-Gly-Tyr-Trp-Val
(A) con los dos extremos sostenidos juntos por medio de dos
residuos adicionales de cisteína que forman un puente disulfuro e
incluye a los componentes adicionales
Gly-Glu-Phe- y
-Gly-Asp-Pro-Ala
para facilitar el enlazamiento y el acoplamiento
hapteno-portador.
7. Una composición farmacéutica que comprende
una molécula inmunogénica de acuerdo a cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6 y un adyuvante.
8. Un ligando que comprende un dominio de
anticuerpo específico para una fracción de un péptido mimótopo
BSW17 que tiene el número de acceso 96121916 en ECACC como se define
en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, por medio del cual el
dominio del anticuerpo es reactivo también con la secuencia de
aminoácidos sobre la cadena pesada de IgE que contiene al epítopo
natural reconocido por BSW17.
9. Un ligando de acuerdo a la reivindicación 8
que está en la forma de un anticuerpo monoclonal o un fragmento
Fab' o F(ab')_{2} del mismo.
10. Un proceso para la preparación de una
molécula inmunogénica de acuerdo con la reivindicación 1 que
comprende el acoplamiento apropiado de
- (a)
- una fracción de un péptido mimótopo BSW17 que tiene el número de acceso 96121916 en ECACC con
- (b)
- una fracción capaz de producir una respuesta inmune contra ese péptido.
11. Una molécula inmunogénica como se define en
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para el uso en la
fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento de
enfermedades mediadas por IgE.
12. El uso de una molécula inmunogénica como se
define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en la fabricación
de una vacuna contra la alergia.
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|---|---|---|---|---|
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| AU3158900A (en) * | 1999-02-25 | 2000-09-14 | Smithkline Beecham Biologicals (Sa) | Immunogens comprising a peptide and a carrier derived from h.influenzae protein |
| CN1520423A (zh) * | 1999-02-25 | 2004-08-11 | ʷ��˿�������ȳ�ķ����˾ | 来源于IgE的Cε3或Cε4区的抗原决定基或拟表位,其拮抗物,及其治疗用途 |
| GB9908533D0 (en) * | 1999-04-14 | 1999-06-09 | Novartis Ag | Organic compounds |
| CA2405290C (en) * | 2000-04-13 | 2011-06-21 | Bio Life Science Forschungs Und Entwicklungsgesellschaft Mbh | Vaccine against cancerous diseases |
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| ES2394293T3 (es) * | 2001-02-28 | 2013-01-30 | Bio Life Science Forschungs- Und Entwicklungsges.M.B.H. | Vacuna contra cánceres que están asociados con el oncogén HER-2/neu |
| EP1239032A1 (en) * | 2001-03-02 | 2002-09-11 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lactic acid bacteria as agents for treating and preventing allergy |
| JP2003047482A (ja) | 2001-05-22 | 2003-02-18 | Pfizer Prod Inc | 非アナフィラキシー誘発性ＩｇＥワクチン |
| WO2003015716A2 (en) | 2001-08-13 | 2003-02-27 | Ige Therapeutics, Inc. | Immunoglobulin e vaccines and methods of use thereof |
| US7115266B2 (en) | 2001-10-05 | 2006-10-03 | Cytos Biotechnology Ag | Angiotensin peptide-carrier conjugates and uses thereof |
| US20050226894A1 (en) * | 2002-01-15 | 2005-10-13 | Jensen-Jarolim Erika | Oral vaccination |
| CN1668637B (zh) | 2002-07-17 | 2010-05-26 | 希托斯生物技术股份公司 | 使用衍生自ap205外壳蛋白的病毒样颗粒的分子抗原阵列 |
| US6932971B2 (en) | 2002-07-18 | 2005-08-23 | Cytos Biotechnology Ag | Hapten-carrier conjugates and uses thereof |
| BR0312792A (pt) | 2002-07-19 | 2005-05-03 | Cytos Biotechnology Ag | Composições de vacinas contendo séries antigênicas de amilóide beta1-6 |
| US7425620B2 (en) | 2002-08-14 | 2008-09-16 | Scott Koenig | FcγRIIB-specific antibodies and methods of use thereof |
| US20050065136A1 (en) * | 2003-08-13 | 2005-03-24 | Roby Russell R. | Methods and compositions for the treatment of infertility using dilute hormone solutions |
| US20050239757A1 (en) * | 2004-04-21 | 2005-10-27 | Roby Russell R | Hormone treatment of macular degeneration |
| US20060025390A1 (en) * | 2004-07-28 | 2006-02-02 | Roby Russell R | Treatment of hormone allergy and related symptoms and disorders |
| ITMI20052517A1 (it) * | 2005-12-29 | 2007-06-30 | Lofarma Spa | Varianbtio ipoallergeniche dell'allergene maggiore bet v 1 di polline di betula verrucosa |
| EP2029173B1 (en) | 2006-06-26 | 2016-07-20 | MacroGenics, Inc. | Fc riib-specific antibodies and methods of use thereof |
| EP2012122A1 (en) * | 2007-07-06 | 2009-01-07 | Medigene AG | Mutated parvovirus structural proteins as vaccines |
| US8865179B2 (en) * | 2008-01-26 | 2014-10-21 | Swey-Shen Alexchen | Aptameric IgE peptides in a protein scaffold as an allergy vaccine |
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| RU2761431C9 (ru) * | 2020-10-26 | 2022-04-18 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научный центр "Институт иммунологии" Федерального медико-биологического агентства России (ФГБУ "ГНЦ Институт иммунологии" ФМБА России) | Рекомбинантный полипептид на основе аллергена пыльцы березы и аллергена яблока в качестве вакцины от аллергии |
Family Cites Families (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2602443A1 (de) | 1975-04-04 | 1976-10-21 | Univ California | Biologisch aktive polypeptide |
| US4171299A (en) | 1975-04-04 | 1979-10-16 | The Regents Of The University Of California | Polypeptide agents for blocking the human allergic response |
| DE2861593D1 (en) | 1977-06-29 | 1982-03-11 | Beecham Group Plc | Peptides, pharmaceutical compositions containing the peptides and a process for the preparation of the peptides |
| JPS5944399A (ja) | 1982-09-07 | 1984-03-12 | Takeda Chem Ind Ltd | 新規ｄｎａ |
| GB8616166D0 (en) * | 1986-07-02 | 1986-08-06 | Research Corp Ltd | Polypeptide competitor |
| US4892827A (en) | 1986-09-24 | 1990-01-09 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Recombinant pseudomonas exotoxins: construction of an active immunotoxin with low side effects |
| EP0269455A3 (en) | 1986-11-28 | 1989-09-06 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Highly purified fused protein comprising human ige fc fragment and production thereof |
| EP0344211A4 (en) | 1987-02-20 | 1990-03-12 | Imclone Systems Inc | MONOCLONAL ANTIBODIES IN VACCINE COMPOSITIONS. |
| CA1336818C (en) | 1987-04-16 | 1995-08-29 | International Institute Of Cellular And Molecular Pathology | Treatment of allergy and composition thereof |
| WO1989003430A1 (en) | 1987-10-13 | 1989-04-20 | Terrapin Diagnostics, Ltd. | Method to produce immunodiagnostic reagents |
| GB8727045D0 (en) | 1987-11-19 | 1987-12-23 | Research Corp Ltd | Immunoglobulin e competitor |
| US5449760A (en) | 1987-12-31 | 1995-09-12 | Tanox Biosystems, Inc. | Monoclonal antibodies that bind to soluble IGE but do not bind IGE on IGE expressing B lymphocytes or basophils |
| US5342924A (en) | 1987-12-31 | 1994-08-30 | Tanox Biosystems, Inc. | Extracellular segments of human ε immunoglobulin anchoring peptides and antibodies specific therefor |
| GB8910263D0 (en) | 1989-05-04 | 1989-06-21 | Ciba Geigy Ag | Monoclonal antibodies specific for an immunoglobulin isotype |
| GB8913737D0 (en) | 1989-06-15 | 1989-08-02 | Univ Birmingham | A novel anti-allergy treatment |
| CA2074089C (en) | 1990-01-23 | 2001-04-10 | Tse-Wen Chang | Extracellular segments of human e immunoglobulin anchoring peptides and antibodies specific therefor |
| WO1991019001A1 (en) | 1990-05-25 | 1991-12-12 | British Technology Group Ltd | Immunodiagnostic assay for rheumatoid arthritis |
| US5258289A (en) | 1990-09-05 | 1993-11-02 | Davis Claude G | Method for the selecting of genes encoding catalytic antibodies |
| GB9101550D0 (en) | 1991-01-24 | 1991-03-06 | Mastico Robert A | Antigen-presenting chimaeric protein |
| ATE233813T1 (de) * | 1991-08-14 | 2003-03-15 | Genentech Inc | Veränderte immunglobuline für spezifische fc- epsilon rezeptoren |
| US5965709A (en) * | 1991-08-14 | 1999-10-12 | Genentech, Inc. | IgE antagonists |
| SE9102808L (sv) * | 1991-09-26 | 1993-03-27 | Lars T Hellman Inst F Immunolo | Vaccin, foer humant bruk, vars avsedda effekt aer att lindra symptomen eller foerhindra uppkomsten av ige-medierade allergiska reaktioner |
| GB9125024D0 (en) | 1991-11-25 | 1992-01-22 | Kirby Julian | Rheumatoid arthritus treatment |
| JPH06113881A (ja) | 1992-10-07 | 1994-04-26 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ヒト型モノクローナル抗ペプチド抗体及びこれをコードするｄｎａ |
| JP3795914B2 (ja) | 1993-04-27 | 2006-07-12 | ユナイテッド・バイオメディカル・インコーポレイテッド | ワクチン用免疫原性ｌｈｒｈペプチド構築体および合成普遍免疫刺激器 |
| US5759551A (en) | 1993-04-27 | 1998-06-02 | United Biomedical, Inc. | Immunogenic LHRH peptide constructs and synthetic universal immune stimulators for vaccines |
| CA2160786A1 (en) | 1993-05-14 | 1994-11-24 | James C. Marsters, Jr. | Ras farnesyl transferase inhibitors |
| GB9320897D0 (en) | 1993-10-11 | 1993-12-01 | Peptide Therapeutics Ltd | Compounds useful in anti-allergy treatment |
| GB9324013D0 (en) * | 1993-11-22 | 1994-01-12 | 3I Res Expl Ltd | Polypeptides |
| FR2715304B1 (fr) * | 1994-01-26 | 1996-04-26 | Merieux Serums Vaccins Pasteur | Vaccin anti-allergique. |
| AU2195395A (en) | 1994-03-28 | 1995-10-17 | United Biomedical Inc. | Synthetic peptide based immunogens for the treatment of allergy |
| US5962634A (en) | 1994-07-08 | 1999-10-05 | Thomas Jefferson University | IgE antagonists |
| CA2203165A1 (en) | 1994-10-25 | 1996-05-02 | United Biomedical, Inc. | Synthetic ige membrane anchor peptide immunogens for the treatment of allergy |
| AU6532498A (en) | 1996-12-06 | 1998-06-29 | United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, The | Inhibition of ige-mediated allergies by a human ige-derived oligopeptide |
| EP0955311A3 (en) | 1998-04-09 | 2000-08-16 | Idexx Laboratories, Inc. | Peptide vaccine for canine allergy |
| TWI229679B (en) | 1998-06-20 | 2005-03-21 | United Biomedical Inc | Artificial T helper cell epitopes as immune stimulators for synthetic peptide immunogens |
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