JP2000502571A

JP2000502571A - ペプチド免疫原

Info

Publication number: JP2000502571A
Application number: JP9530632A
Authority: JP
Inventors: クリツェク，フランツ; シュタットラー，ベーダ
Original assignee: ノバルティスアクチエンゲゼルシャフト
Priority date: 1996-03-01
Filing date: 1997-02-28
Publication date: 2000-03-07
Anticipated expiration: 2017-02-28
Also published as: PL328858A1; NO983999D0; DK0885244T3; DE69718150T2; SK284856B6; AU1879697A; JP3421970B2; KR100584051B1; NO321043B1; CN1174998C; DE69718150D1; SI0885244T2; DK0885244T4; KR100498198B1; RU2193413C2; HK1014962A1; CN1213380A; ES2190799T5; US6610297B1; ES2190799T3

Abstract

(57)【要約】 (ａ)モノクローナル抗ヒトＩｇＥ抗体ＢＳＷ１７により認識されるヒトＩｇＥ上の天然エピトープを模擬するペプチドの少なくとも一部分と(ｂ)そのペプチドに対する免疫応答を誘導する能力のある部分とを含む、免疫原性分子。それらは、特に、アレルギーやアトピー性皮膚炎などのＩｇＥ媒介疾患の処置用の医薬組成物、例えば、アレルギーに対するワクチンにおいて、またはその医薬組成物の製造用に、有用である。

Description

【発明の詳細な説明】ペプチド免疫原１．分野本発明は、ペプチド免疫原に関連し、通常、アレルゲンと結合した細胞結合ＩｇＥにより誘導されるマスト細胞および好塩基球の誘発(trigger)を引き起こし、生理学的に活性なメディエーターの放出、並びにアレルギーおよび炎症反応の調節に関与するサイトカインのde novo合成をもたらす、相互作用の阻害を目的とする。ＢＳＷ１７ミモトープペプチドの一部分を含む免疫原性分子およびその使用に関する。２．背景アレルギー症状は、生理学的に活性なメディエーター、特にヒスタミン、ロイコトリエンおよび酵素が細胞から周辺組織および血管構造へと放出されることによって起こる。これらのメディエーターは、通常、マスト細胞や好塩基球顆粒球として知られている特定の細胞で貯蔵されるかまたはde novo合成される。マスト細胞は動物組織全般に分散しているが、好塩基球は血管系内を循環している。これらの細胞は、特別な一連の事象が起こってメディエーターの放出を誘発しない限り、細胞内でメディエーターを合成し、貯蔵する。アレルギー反応を媒介する免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体の役割はよく知られている。ＩｇＥはポリペプチド鎖が複合配置したものであり、他の免疫グロブリンのように、互いにジスルフィド結合により“Ｙ”型に連結した２本の軽鎖と２本の重鎖からなる。各軽鎖は２つのドメインを持ち、１つの可変ドメイン（Ｖ_L ）は比較的不変のアミノ酸配列をもつ定常ドメイン（Ｃ_L）と呼ばれる１つのドメインに結合している。反対に、重鎖は１つの可変ドメイン(Ｖ_H)と、ＩｇＥの場合、４つの定常ドメイン（Ｃε１、Ｃε２、Ｃε３、Ｃε４としても知られているＣ_H１、Ｃ_H２、Ｃ_H３、Ｃ_H４）を持つ。この抗体の２つの“アーム”は、抗原結合を担い、ポリペプチド構造が変わる領域を持っており、Ｆab'フラグメント、またはジスルフィド結合により互いに連結した２つのＦab'アームを表すＦ( ab')２と呼ばれる。この抗体の“テイル”または中心軸は固定のまたは一定のペプチド配列を含有し、Ｆｃフラグメントと呼ばれる。このＦｃフラグメントは、抗体を他の免疫系分子または細胞と情報交換させることができる相互作用部位を含有する。Ｆｃ受容体は、免疫グロブリンＦｃ領域内で活性分子部位と特異的に結合する分子である。Ｆｃ受容体は、細胞の外部原形質膜内の内在性膜タンパク質として存在でき、または血漿または他の体液内を自由に循環する遊離の“可溶性”分子として存在できる。ヒトの系では、ＩｇＥの第３の重鎖定常領域ドメイン（Ｃε ３）の様々な部分やＦｃεＲＩαサブユニットの膜近位免疫グロブリン様ドメイン（α２）が関与する複合型タンパク質−タンパク質相互作用により、ＩｇＥと受容体ＦｃεＲＩとの高親和性結合が達成される。ＩｇＥ重鎖定常領域のＣε３ドメイン内の残基やＦｃεＲＩα受容体のα２ドメインに属する領域は結合にとって重要であるとみなされてきたが、結合プロセスの詳細な機序は、いまだ明らかでない。蛍光エネルギー伝達測定、並びにＸ線および中性子散乱法により、ヒトＩｇＥが折れ曲がり構造であり、これがＦｃε ＲＩに対するＩｇＥの独特の親和性の高さ（Ｋd〜１０^-10Ｍ）に寄与していると推測する実験的証拠が出されている。さらに、ＩｇＥ分子は２つのＣε３ドメイン上に受容体結合のために同一のエピトープを提供しているが、この折れ曲がり構造はまた、ＩｇＥと細胞結合または可溶性ＦｃεＲＩαとの等モル複合体に関わると仮定されている。この一価性は、アレルゲン不在下での受容体誘発を避けたいならば、機能的必須事項である（図１）。相互作用部位は、その機能にもよるが、既に露出していて、細胞性受容体に結合できる場合もある。あるいは、それらは、抗体が抗原に結合するまで隠れていることもあり、結合すると抗体はその構造を変え、その結果、他の活性部位が露出し、これらの活性部位が次いで特異的免疫活性を誘発できる。円偏光二色性スペクトルから得られたデータに基づき、受容体結合時にＣε３に影響を与える配座転位は、細胞表面上のＦｃε／ＦｃεＲＩ複合体の化学量論が１：１である説明として提案された。マスト細胞および好塩基球から生物体内へのヒスタミンのアレルギー性（免疫学的）放出の場合、ＩｇＥ分子は、そのＦｃ部分で細胞Ｆｃ受容体部位にはまり込むかまたは付着しなければならず、そうしてマスト細胞または好塩基球にＩｇＥを固定する。細胞結合ＩｇＥ分子のＦab'部分は、特定の適合性抗原（アレルゲン）によって架橋されなければならない。このような相互作用が起こると、マスト細胞または好塩基球が自動的に誘発されて、局所環境にヒスタミンを放出し、類似のアレルギー症状が現れる。その他の生化学的事象は、遅延相反応において起こり、その結果、サイトカインおよび他のメディエーターのde novo合成および放出をもたらす［Ravetch,J.V.,and J.P.Kinet,Ann.Rev.Immunol.9(1991)457-492]。アレルギー処置の常法は、抗ヒスタミンまたはステロイドを用いる全身治療または患者を脱感作させる試みがあり、これらの方法は、基本的なＩｇＥ−マスト細胞／好塩基球相互作用に向けられたものではない。その他の方法は、細胞表面上でＩｇＥ抗体がＦｃ受容体に結合するのを遮断でき、かつＩｇＥが既に結合している場合は結合部位からＩｇＥをはずすことができるポリペプチド鎖の産生に関するものである。更に、ＩｇＥＦｃ領域内の推定“エフェクター”部位の性質を明確にするための研究が行われており、このエフェクター部位は、メディエーター放出のためにマスト細胞／好塩基球を誘発する免疫学的シグナルを提供すると推定された。保護抗ＩｇＥワクチン作製用の免疫原として組換えＩｇＥフラグメントを使用することも試みられており、有効であることが示されている。このようなワクチンに対する主な反対意見は、免疫のために大きいＩｇＥフラグメントを使用すれば、阻害性抗体の産生を始めてしまうだけでなく、架橋もつくってしまい、それによって、患者におけるアナフィラキシー誘発性抗体を生み出すという恐れから起こっている（図２）。この問題を克服するための戦略は、可能性のある最も小さいＩｇＥフラグメントであって、理想的には、受容体結合部位のみからなり、結合後ＩｇＥ／Ｆｃε ＲＩ複合体内に埋め込まれるので、ワクチンによる免疫応答によってももはや架橋に接近できないようなＩｇＥフラグメントの同定を目指すものである。このような複合体分子全体を再構築する試みは、ＩｇＥ／ＦｃεＲＩ相互作用に関与する様々なＣε３領域の空間的距離からみて成功する見込みはないと思われる。３．発明の概要この度、“古典的な”ワクチン法に付随する固有の問題は、能動免疫用に、適当なキャリアーに結合させた化学的合成ペプチドまたは（例えば、オバルブミン、ＩｇＧ等との）組換え融合体構築物のいずれかとしてＢＳＷ１７ミモトープを使うことによって克服されることが分かった。ＢＳＷ１７は、Ｆｃε上の構成エピトープをＣε３内に存在する少なくともその一部で認識するモノクローナル抗体である。ハイブリドーマ細胞系列産生モノクローナル抗体ＢＳＷ１７は、１９９６年１２月１９日、微生物の寄託に関するブダペスト条約の規定の下、ＥＣＡＣＣに寄託番号９６１２１９１６で寄託されている。この抗体は、図３に要約したように、興味深い生物学的活性プロフィールを示す。血管系内を循環するＢＳＷ１７またはＢＳＷ１７様抗体は、ａ）ＩｇＥ／ＩｇＥＲＩ相互作用の競合阻害によりマスト細胞および好塩基球の誘発を阻害し、ｂ）ＩｇＥ合成のダウンレギュレーションによりＢ細胞レベルで血清ＩｇＥレベルを下げることによってアレルギー反応から保護する。このたび、ＢＳＷ１７“ミモトープ”ペプチド、即ちＩｇＥ分子上で複合型構成エピトープの少なくとも一部を模擬するペプチドが、ペプチドファージディスプレイライブラリーのランダムスクリーニングによって同定された。免疫原性キャリアータンパク質に結合させた化学合成ミモトープペプチドは、例えば、ＩｇＥ／ＦｃεＲＩα結合および／またはＩｇＥ合成を遮断することにより、マスト細胞／好塩基球誘発を阻害する抗体をアレルギー性宿主において特異的に産生するためのワクチンとして使用できる。抗ＩｇＥ抗体のミモトープとして、これらは宿主内でＢＳＷ１７−様抗体の産生をもたらす免疫応答を誘導する。ＢＳＷ１７は、Ｂ細胞上でＩｇ／ＦｃεＲＩ結合およびＩｇＥ合成に対して非アナフィラキシー誘発的に阻害的であることが示されているため、ＢＳＷ１７ミモトープベースのワクチンに対して生じた抗体は、類似の保護特性を有する。この免疫応答は、“古典的ワクチン法”とは反対に、免疫患者において架橋抗体を産生し得るＩｇＥ由来のタンパク質フラグメントがなんら存在しないので、非常に特異的である（図４）。従って、本発明は、（ａ）ＢＳＷ１７ミモトープペプチドの少なくとも一部分および（ｂ）そのペプチドに対する免疫応答を誘導する能力のある分子を含む免疫原性分子に関し、以下簡単に“本発明の免疫原”と呼ぶ。成分（ａ）は、ＢＳＷ１７ミモトープペプチドの好ましくは５つまでの、好ましくは１または２の、特に１つの部分(moiety)からなる。成分（ｂ）は、好ましくは以下に述べるような常用の免疫原性キャリアー、特にＢＳＡまたはＫＬＨである。成分（ａ）中のＢＳＷ１７ミモトープペプチドは、好ましくは全部で約１５アミノ酸であり、それは、例えば、以後、配列(Ａ)ないし(Ｑ)(配列番号１ないし１７)の１つである。しかしながら、例えば、成分（ｂ）へのカップリングまたは更なるプロセシングを促進するために、ハプテン−キャリアー結合用の更なる成分も適切に含まれる。従って、ＢＳＷ１７ミモトープペプチドが環状であるとき、その２つの末端を、例えば、ジスルフィドブリッジを形成する更なる２つのシステイン残基によって結合させるか、あるいは、例えば、リジンと化学的に架橋させることができ、またＢＳＷ１７ミモトープペプチドが直鎖状であるとき、カルボキシ末端アミノ酸を、適宜、アミド化してブロックでき、アミノ末端アミノ酸を、適宜、アセチル化してブロックできる。更に、例えば、コンジュゲート (２)ないし(４)、(６)ないし(１１)、(１３)および(１４)として下記実施例８に開示した本発明の特定の免疫原について記載したように、成分（Ａ）中のＢＳＷ１７ミモトープペプチド部分、例えば、以後、好ましい部分(Ａ)ないし(Ｑ)を、本発明の免疫原中、２、３の、好ましくは１つまたは２つの別の補助基、例えば、アセチル、システインまたはリジンおよび／または別のカップリング基、例えば、ＤＣまたはＢＳＳによりフランクさせることができる。本発明の免疫原により誘導された抗体は、ハイブリドーマＢＳＷ１７により産生された抗体とは反対に、内因性であるので、患者、ヒトでは、予防処置用に使用することもできる。これらは、上記の成分（ａ）と（ｂ）を適切にカップリングさせることにより製造できる。４．詳細な説明本発明の免疫原は、例えぱ、ポリマーペプチドまたは組換え融合タンパク質の形態であり、そのため、ポリマーペプチドのモノマー成分または融合タンパク質の片方がＢＳＷ１７ミモトープペプチド（ａ）の一部分を構成し、ポリマーペプチドまたは融合タンパク質の残りの部分が免疫応答誘導部分（ｂ）を構成している。これらは、特に、少なくとも１つのＢＳＷ１７ミモトープペプチド部分（ａ）と免疫原性キャリアー部分（ｂ）のコンジュゲートの形態である。本発明の免疫原の好ましいＢＳＷ１７ミモトープペプチド部分、即ち、成分（ａ）は、実質的に、から選択されるアミノ酸配列から成るか、またはこれらを含有する。より好ましくは、上記(Ａ)、(Ｄ)および(Ｇ)、特に(Ａ)および(Ｄ)である。本発明はまた、上記定義の免疫原分子とアジュバントを含む医薬組成物、特にワクチンにも関する。また、本発明は、リガンド、即ち、“受動免疫”(下記参照)に使用されるＢＳＷ１７ミモトープペプチドに対することによってヒトＩｇＥ上のＢＳＷ１７に対する天然エピトープを認識する抗体または抗体由来のフラグメントにも関連する。即ち、上記定義のＢＳＷ１７ミモトープペプチドの一部分に特異的であるためＢＳＷ１７によって認識される天然エピトープを含むＩｇＥの重鎖上のアミノ酸配列とも反応性である抗体ドメインを含むリガンドに関連する。このようなリガンドは、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体として、好ましくは、Ｆab' フラグメントまたはそのＦ(ab')₂フラグメントの形態で、哺乳動物において産生させることができる。更に、本発明の免疫原の製法にも関連し、（ａ）ＢＳＷ１７ミモトープペプチドの少なくとも一部分を（ｂ）そのペプチドに対する免疫応答を誘導する能力のある分子と共有結合させることを含む。また、例えば、アレルギーやアトピー性皮膚炎などのＩｇＥ媒介疾患の処置における医薬品として使用するための上記免疫原性分子にも関する。更に、ＩｇＥ媒介疾患、特にアレルギーやアトピー性皮膚炎に対する医薬組成物、特にワクチンの製造における上記免疫原性分子の使用にも関する。更には、上記免疫原性分子の治療上有効量を処置の必要な患者に投与することを含む、アレルギーおよびアトピー性皮膚炎などのＩｇＥ媒介疾患に対する予防または治療免疫法にも関する。本発明の免疫原は、実質的に非細胞溶解性ヒスタミン放出を媒介する能力はないが、ＩｇＥのＦｃ領域の標的アミノ酸配列との強力な血清学的交差反応性を持つ抗体を誘導する能力がある。よって、これらはワクチンにおいてまたはワクチンとして有用である。免疫原の初回用量（例えば、約０.２mgから約５mg、特に約１mg）を、例えば、筋肉内投与し、次いで、同じものを１４から２８日後に反復（ブースター）投与する。用量は、もちろん、ある程度、患者の年齢、体重および健康状態次第で変わる。免疫は、“能動”または“受動”であり得る。 “能動”免疫では、患者に本発明の免疫原を与えると、抗ＩｇＥ応答が患者の免疫系によって能動的に誘導される。 “受動”免疫は、ポリクローナルまたはモノクローナルのいずれかの抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体をＩｇＥ媒介疾患罹病患者に、好ましくは注射で投与することにより達成される。ポリクローナル抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体は、本発明の免疫原を、好ましくはアジュバントを用いて非ヒト哺乳動物に投与し、得られた抗血清を収集することにより調製できる。ある期間にわたって注射を繰り返すことにより、力価を向上できる。抗体を誘発するのに使用できる哺乳動物の種類には特に何の限定もなく、一般に、ウサギまたはモルモットの使用が好まれるが、ウマ、ネコ、イヌ、ヤギ、ラット、ウシ、ヒツジなども使用できる。抗体の産生には、本発明の免疫原の一定量を、例えば、生理食塩水溶液で適切な濃度まで希釈し、得られた希釈溶液を完全フロイントアジュバントと混合して、懸濁液を調製する。この懸濁液を、一投与当たり本発明の免疫原約５０μgから約２５００μgを用いて哺乳動物、例えばウサギに、例えば、腹腔内投与する。この懸濁液は、免疫を効果的にするために、好ましくは、約２−３ヶ月、好ましくは約１ヶ月の期間にわたり、約２週間毎に投与する。最終投与から１ないし２週間経過後、免疫動物から血液を採取し、その血液を遠心して血清を単離することにより、抗体を回収する。モノクローナル抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体は、例えば、ヒトまたはネズミのものであってよい。好ましくは、患者をネズミモノクローナル抗体またはキメラヒト−マウス抗体(ヒトＦｃ領域とマウスＦab'領域を含む)由来のＦab'フラグメント調製物で処理して、外来動物免疫グロブリンに対する副作用を最小化する。 Milstein,C.,Nature 256[1975]495)の方法により、例えば、過免疫マウスの脾臓細胞と適切なマウス骨髄腫細胞系列とを融合することにより、調製できる。多くの方法が：（１）エップシュタイン−バールウイルス(ＥＢＶ)−形質転換Ｂ細胞；（２）Ｂリンパ球ハイブリダイゼーション用細胞系列；（３）ヒト−ネズミハイブリドーマ；（４）ヒト−ヒトハイブリドーマ；（５）ヒト×ヒト−マウスヘテロハイブリドーマ；および（６）レパートリークローニング（ファージディスプレイ）による生産物を含むヒトモノクローナル抗体を作製するのに利用できる。ヒト×ヒト−マウスヘテロハイブリドーマが最も好ましく、ヒトとネズミ両方の親細胞種の好ましい特性を組み合わせる必要がある。ヒト−マウスヘテロハイブリドーマ細胞系列は、Ｂ細胞融合に適したものになっている（Teng,N.N.M.etal. ,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80[1983]7308)。免疫用に用いる場合、抗体を宿主内へ、最も好便には、筋肉内注射により導入できる。宿主に受け入れられ、かつ宿主での不都合な副作用もワクチンでの有害作用も持たない常用の液体または固体ベヒクルを採用できる。リン酸緩衝化塩水（ＰＢＳ）は生理学的ｐＨ、例えば、約６.８ないし７.２、好ましくは約ｐＨ７ .０でベヒクルとして単独で、または水酸化アルミニウムベースのアジュバントなどの適切なアジュバントと共に使用できる。免疫原性抗原濃度は、一般に約０ .２５mlから約１ml、好ましくは約０.５mlの溶媒容量で、一注射当たり約５０μ gから約５００μg、好ましくは約２００μgから約３００μgの範囲であり得る。初期注射後に多回注射が必要であり、例えば、１年間隔で与えることができる。 “能動”免疫に関して、これはヒトで使用する場合に好まれるが、その他の哺乳動物種も、例えば、イヌのようにこれらの種のＩｇＥに対応する類似ミモトープを用いて同様に処理できる。本明細書の“免疫原性キャリアー”という用語は、宿主細胞において独立して免疫原性応答を誘発する特性を持ち、かつポリペプチド中の遊離のカルボキシル、アミノまたはヒドロキシル基と免疫原性キャリアー物質上の対応する基とのペプチドまたはエステル結合の形成により直接的に、あるいは常用の二官能性結合基により、または融合タンパク質として結合するかのいずれかでポリペプチドに共有結合できるような物質を含む。このようなキャリアーの例には、ＢＳＡなどのアルブミン、グロブリン、チログロブリン、ヘモグロビン、ヘモシアニン(特に、カギアナカサガイヘモシアニン［ＫＬＨ］)、回虫から抽出したタンパク質、例えば、J.Immun. 111[1973]260 -268，J.Immun. 122［1979］302-308，J.Immun. 98[1967]893-900，andAm.J.Phy siol. 199[1960]575-578に記載のような回虫抽出物またはそれらの精製産物、ポリリジン、ポリグルタミン酸、リジン−グルタミン酸コポリマー、リジンまたはオルニチン含有コポリマー等がある。最近、ジフテリア変性毒素または破傷風変性毒素を免疫原性キャリアー物質として使用して、ワクチンが産生されており(Lepow M.L.et al.,J.of Infectious Diseases 150［1984］402-406;Coen Beuvery,E.et al.，Infection and Immunity 40［1983］39-45)、これらの変性毒素物質もまた本発明では使用できる。ツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）は、(１)Ｔ細胞応答自身を誘導せず(即ち、実質的に“Ｔ細胞ハプテン ”である)、更に十分にプロセスされた抗原として挙動し、それ自体、Ｔ細胞により認識され、(２)結合認識モードにおいて最も強力なハプテン“キャリアー” の１つであることが知られており、(３)更に試験することなくヒトで使用できる、ことから、特に“能動”免疫スキームに利用するには好ましい。ハプテン−キャリアー結合剤としては、抗原の調製に常用されるものを使用でき、例えば、上述のものや下記の実施例に記載のものである。成分（ａ）を部分（ｂ）に共有結合させる本発明の方法は、既知の方法で遂行できる。よって、例えば、直接共有結合させる場合、ビス−Ｎ−スクシンイミジル誘導体、より好ましくはビス(スルホスクシンイミジル)スベレート（ＢＳＳ）を結合剤として利用するのが好ましい。グルタルアルデヒドまたはカルボジイミド、より好ましくはジシクロヘキシル−カルボジイミド（ＤＣ）または１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドもまたペプチド（ａ）を免疫原性キャリアー物質（ｂ）に共有結合させるのに使用できる。ハプテンおよびハプテン−キャリアー結合剤［即ち、成分(ａ)］およびキャリアー［即ち、成分(ｂ)］の量は、常法で容易に確認できる。キャリアーはハプテン重量の約１ないし約６倍、好ましくは約１ないし約５倍の量で使用し、ハプテン−キャリアー結合剤はハプテンモル当量の約５ないし約１０倍の量で使用するのが好ましい。反応後、キャリアーをハプテン−キャリアー結合剤を介してハプテンに結合させて、ペプチド−キャリアー複合体からなる所望の抗原を得る。得られた本発明の免疫原は、常法、例えば透析、ゲルろ過、分別沈殿等により容易に単離できる。出発物質の調製は、常法で実施できる。成分（ａ）として使用するのに適したペプチドは、例えば、ランダムペプチドファージディスプレイライブラリーのスクリーニングにより同定でき、例えば、常用の固相法により、例えば、環状ペプチドの場合、よく知られた“Ｆ−moc”法を採用する固相法により、容易に合成でき、また、ランダムに合成したペプチドのスクリーニングにより、ペプチド模擬体法を用いて同定してもよい。図面の説明：図１：ＩｇＥとその高親和性受容体ＩｇＥＲＩとの相互作用図２：“古典的な”抗ＩｇＥワクチン法図３：ＢＳＷ１７の生物学的活性プロフィール図４：ＢＳＷ１７ミモトープベースの免疫治療図５：ファージディスプレイＢＳＷ１７ミモトープはＢＳＷ１７を特異的に認識する。図６：ファージディスプレイＢＳＷ１７ミモトープはＩｇＥ／ＢＳＷ１７結合を阻害する。図７：化学的に合成したＢＳＷ１７ミモトープペプチドのＢＳＷ１７への結合図８ａ：ＢＳＷ１７による環状ＢＳＷ１７ミモトープＧＥＦＣＩＮＨＲＧＹＷＶＣＧＤＰＡ−ＫＬＨ（ＢＳＳ）コンジュゲート（ＳＤＳ２３６）およびＦｃε（５００−５０９）−ＫＬＨ（ＢＳＳ）コンジュゲート（ＳＤＳ２３７）の認識図８ｂ：ＢＳＷ１７による様々なＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートの認識図９ａ：ＢＳＷ１７によるＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲート［ＢＳＡ(ＤＣ)］およびＦｃε（５００−５０９）コンジュゲート[ＫＬＨ(グルタルアルデヒド)]の特異的認識図９ｂ：ＢＳＷ１７によるＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲート[ＫＬＨ(ＤＣ)；Ｌys]の特異的認識図10ａ：ＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲート（１）で免疫後にウサギにおいて誘導される抗ヒトＩｇＥ免疫応答図10ｂ：ＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲート（２）で免疫後にウサギにおいて誘導される抗ヒトＩｇＥ免疫応答図１１：免疫によりウサギにおいて産生された抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体の血清力価図１２：ＢＳＷ１７ミモトープ免疫ウサギにおける抗ヒトＩｇＥ応答のアイソタイプ特異性図１３：ＩｇＥ結合に対する、抗ＢＳＷ１７ミモトープ血清とＢＳＷ１７との競合図１４：ｈＩｇＥに対するアフィニティー精製抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体の結合図１５：ヒト血液細胞におけるアナフィラキシー誘発性に対する、ウサギ抗ＢＳＷ１７ミモトープ血清およびアフィニティー精製抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体の試験 −Ｒ２/０、Ｒ４/０：ＢＳＷ１７ミモトープワクチン接種前のウサギＲ２およびＲ４のプレ免疫血清； −Ｒ２/ＳＤＳ２１４、Ｒ４/ＳＤＳ２１３：一次免疫後６５日目のウサギＲ２およびＲ４の血清； −抗ＳＤＳ２１３、抗ＳＤＳ２１４；アフィニティー精製抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体； −Ｒ２/０ＰＣ、Ｒ４/０ＰＣ：ウサギ血清の存在下での陽性誘発対照（ＰＣ）。試料濃度：Ａ＝ml当たり０.１μg抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体(または完全なウサギ血清中の均等物）Ｂ＝ml当たり１.０μg抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体(または完全なウサギ血清中の均等物）Ｃ＝ml当たり５.０μg抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体(または完全なウサギ血清中の均等物）略号：５．実施例下記実施例には、本発明を例示説明しているが、その範囲を限定するものではなく、温度ディスプレイはセ氏温度である。実施例１：抗ＩｇＥモノクローナル抗体ＢＳＷ１７の抗アレルギー能ＢＳＷ１７ミモトープペプチドでの能動免疫によりヒト患者中で作られたＢＳＷ１７およびＢＳＷ１７様抗体の抗アレルギー能を試験するモデルとして、rhＩＬ−３と共に培養した骨髄細胞から得られたヒト好塩基球様細胞のヒスタミン放出に対するＢＳＷ１７の作用を示す。単核細胞を、フィコール−ハイパーク密度沈殿法（１.０７７g/ml；４００g）により、大腿骨頭置換を必要とする患者の骨髄から調製する。５×１０⁵細胞/ml を１５％ＦＣＳおよび２ng/mlヒトrhＩＬ−３含有ＲＰＭＩ１６４０培地にて培養する。５％ＣＯ₂中３７℃で培養６日後、等容量のrhＩＬ−３含有培地を加える。１２日目に、細胞を回収し、受動感作およびヒスタミン放出アッセイに使用する。およそ５×１０⁵培養骨髄細胞をＨＡ緩衝液（２０ｍＭＨＥＰＥＳ；ｐＨ＝７.４；０.３mg/mlＨＳＡ）中、総容量１ml中５０倍過剰のモノクローナル抗ＩｇＥ抗体の存在下または不在下でヒトＩｇＥ５００ng/mlと共にインキュベーションする。３７℃で２時間インキュベーション後、細胞上清を用いて、受動感作中のヒスタミンを測定する。ヒスタミン放出を誘発するために細胞ペレットを用いる。直接的なヒスタミン放出の度合いを測定するために、受動感作した骨髄細胞をＨＣＭ緩衝液（０.６ＭＣaＣl₂および１ｍＭＭｇＣｌ₂を含有するＨＡ緩衝液）０.３mlに再懸濁し、アナフィラキシー誘発性モノクローナル抗ＩｇＥ抗体Ｌｅ２７０.１μg/mlと共にインキュベーションする。上清および細胞沈殿物中のヒスタミン量は、テクニコン・オートアナライザーＩＩ（Technicon，T arrytown，New York，USA）にて測定する。ヒスタミン放出割合を計算する［式：ヒスタミン放出（％）＝上清中のヒスタミン÷(上清中のヒスタミン＋細胞ペレット中のヒスタミン)×１００による］。受動感作中のヒスタミン放出割合を計算する［式：ヒスタミン放出（％）＝(受動感作後の)上清中のヒスタミン÷(( 誘発後の)上清中のヒスタミン＋(受動感作後の)細胞ペレット中のヒスタミン＋細胞ペレット中のヒスタミン)×１００による］。抗ＩｇＥ抗体特異的ヒスタミン放出を計算する［式：特異的ヒスタミン放出（％）＝総ヒスタミン放出％−自発ヒスタミン放出％による］。３つの独立した実験の結果は、表１に要約する。表１：感作骨髄細胞のヒスタミン放出に対する抗ＩｇＥ抗体の作用 ^*) rhＩＬ−３(２ng/ml)と共に培養したヒト骨髄細胞をＩｇＥ(０.５μ g/ml)またはＩｇＥおよび抗ＩｇＥ抗体(０.２５μｇ/ml)と共に受動感作させる。^** ) Ａ：感作中のヒスタミン放出Ｂ：モノクローナル抗ＩｇＥ抗体Ｌｅ２７(０.１μｇ/ml)で誘発後のヒスタミン放出表１のデータは明らかに、ＩｇＥおよびＢＳＷ１７と共にインキュベーションした骨髄細胞は、感作中にヒスタミンを放出しないが、Ｌｅ２７による連続誘発を阻害することを示している。ＩｇＥおよびＬｅ２７と共にインキュベーションした骨髄細胞は、ヒスタミンがこのアナフィラキシー誘発性モノクローナル抗体との第２インキュベーションの際にこれ以上放出されない程度まで、既に受動感作の際に誘発されている。しかしながら、いずれかのモノクローナル抗ＩｇＥの不在下で受動感作させた骨髄細胞は、Ｌｅ２７による連続誘発後に効果的にヒスタミンを放出する。ａ）ＢＳＷ１７自身は非アナフィラキシー誘発性であり、ｂ）ＢＳＷ１７は誘発要因により誘導されるヒスタミン放出からヒト好塩基球を保護する、と結論付けることができる。よって、ＢＳＷ１７ミモトープペプチドでの能動免疫によるアレルギー患者におけるＢＳＷ１７様抗体の産生は、免疫宿主をアレルギー反応の発症から保護することが期待できる。実施例２：ペプチドファージディスプレイライブラリーのランダムスクリーニングおよび陽性クローンの選択ＢＳＷ１７により特異的に認識されるバクテリオファージ粒子は、ファージペプチドｐＩＩＩおよびｐＶＩＩＩそれぞれに融合させた長さの６から１５アミノ酸残基の直鎖状または環状ランダムペプチドをディスプレイするファージライブラリーをバイオパンニング(biopanning)することにより同定される。ファージライブラリーを増幅するには、ＳＢ培地中ＯＤ₆₀₀＝１.０まで増殖させたＥ.coli ＸＬ−1ブルー液体培養物２mlを１０¹⁰ファージと共に室温で１５分間インキュベーションする。１０mg/mlテトラサイクリンおよび２０μg/mlカルベニシリン含有ＳＢ培地１０mlを加え、１０μl、１μlおよび０.１μlそれぞれを１００μ g/mlカルベニシリンを含有するＬＢプレートにまく。培養物を勢いよく振盪させながら３７℃で１時間インキュベーションし、次いで、１０μg/mlテトラサイクリンおよび５０μg/mlカルベニシリン含有ＳＢ培地１００mlを加え、インキュベーションを１時間続ける。ＶＣＳＭ１３ヘルパーファージ１０¹²cfuを加える。３７℃で勢いよく振盪させた後、カナマイシンを最終濃度７０μg/mlまで加え、インキュベーションを一晩続ける。４０００g、４℃で２０分間遠心後、上清を１２％ＮａＣｌおよび１６％ＰＥＧ８０００の氷冷滅菌ろ過溶液３８mlと混合し、氷上で３０分間冷却し、１００００g、４℃で３０分間遠心する。ファージペレットを１.５％カゼイン含有ＴＢＳ２mlに可溶化し、４℃で貯蔵する。バイオパンニング用にコスターＲＩＡプレート(Costar 3690)を０.１Ｍ炭酸緩衝液、ｐＨ９.６中２０μg/mlＢＳＷ１７と共に４℃で一晩コーティングし、その後、１. ５％カゼイン含有ＴＢＳでブロックする。ファージ２×１０¹¹cfuを加え、３７ ℃で２時間インキュベーションし、次いでＰＢＳ/０.１％ツイーン２０で１０回洗浄する。ウェルを水で濯ぎ、結合したファージを計２００μlの０.１ＭＨＣl 、ｐＨ２.２で１０分間溶出させる。溶出したファージを２Ｍトリス塩基で中和し、上記のように増幅させる。陽性クローンの選定のために、室温で１５分間第３ラウンドのパンニング後、ＳＢ培地中でＯＤ₆₀₀＝１.０まで増殖させたＥ.col i ＸＬ−1ブルー液体培養物５０μlを増幅ファージ１０^-8希釈物１μlとインキュベーションし、次いで１００μg/mlカルベニシリン含有ＬＢプレートにまき、一晩増殖させる。コロニーを無作為に摘出し、１００μg/mlカルベニシリン含有ＬＢプレートにまく。３７℃で４時間後、ＩＰＴＧ１０mＭに浸したニトロセルロースフィルターを上に乗せ、インキュベーションを３２℃で一晩続ける。フィルターを除去し、ＣＨＣｌ₃雰囲気中３７℃で３０分間インキュベーションする。細菌残骸は、フィルターを１００ml当たり５０ｍＭトリス、ｐＨ８、１５０ｍＭＮａＣｌ、５ｍＭＭｇＣｌ₂、３％ＢＳＡ、１００ＵＤＮＡアーゼＩおよび４０mgリゾチーム中で１時間インキュベーションすることによって除去し、１.５％カゼイン含有ＴＢＳ中でブロックし、１.５％カゼイン含有ＴＢＳ中ＢＳＷ１７−ＰＯＸ（ＰＯＸに結合させたＢＳＷ１７）と共に一晩インキュベーションする。フィルターは、ＴＢＳ、ＴＢＳ/０.５％ツイーン２０、次いでＴＢＳでそれぞれ１０分間洗浄する。染色のために、ストリップをml当り４−クロロ−１−ナフトール６００μgおよびＴＢＳ中０.０４２％過酸化水素中でインキュベーションする。実施例３：天然ＢＳＷ１７エピトープを模擬するペプチド（ＢＳＷ１７ミモトープペプチド）をディスプレイするファージ粒子の特性化７、８または９アミノ酸からなる環状ペプチドおよび１０および１５アミノ酸残基からなる直鎖状ペプチドそれぞれをディスプレイする様々なファージ粒子がＢＳＷ１７に結合することは分かっている。これらのペプチドをコードするＤＮＡのヌクレオチド配列を決定した。お互いのホモロジー並びにＦｃε内の相同領域に従い、ＢＳＷ１７によって認識される３グループのファージディスプレイペプチドをＤＮＡ配列から導き出すことができた。概略は表２に示す。表２：ＢＳＷ１７ミモトープファージによりディスプレイされるペプチド配列グループＡ：＋＝陽性荷電ｐ＝非荷電極性ｏ＝非極性ｎ＝対応する配列をディスプレイするクローン数 +(++),+/-＝ＢＳＷ１７による認識強度（即ち、それぞれ配列番号１８、１９、２０および２１）上記グループＡの第２ペプチド(配列番号１９)は、環化のために更に２つのＣys を持つペプチド(Ａ)(配列番号１)である。その他３つのペプチド、配列番号１８、配列番号２０および配列番号２１それぞれは、更に、同様にして調製したペプチドである。グループＢ：上記グループＢの３つのペプチドは、それぞれペプチド(Ｇ)(配列番号７)、(Ｈ) (配列番号８)および(Ｉ)(配列番号９)である。グループＣ：上記グループＣの７つのペプチドは、それぞれペプチド(Ｏ)(配列番号１５)、ペプチド(Ｊ)(配列番号１０)、更に２つのＣysを持つペプチド(Ｐ)(配列番号２２)、更に２つのＣysを持つペプチド(Ｌ)(配列番号２３)、更に２つのＣysを持つペプチド(Ｍ)(配列番号２４)、更に２つのＣysを持つペプチド(Ｎ)(配列番号２５) および更に２つのＣysを持つペプチド(Ｋ)(配列番号２６)である。フランキングＣysを含有するグループＣのペプチドは、強力なＢＳＷ１７結合剤である。グループＣ全体は、Ｆｃεとの配列ホモロジーを示さず、これらのペプチドは、ＢＳＷ１７エピトープのみを構造的に模擬する真正のミモトープである。表２から分かるように、グループＡのペプチドのカルボキシ末端部分は高度に保存されており、またアミノ末端部分は、もっと縮重しているが、陽性荷電の極性アミノ酸を含有する。この電荷分布から、このアミノ末端での特徴の異なる１つのクローンがＢＳＷ１７にほんの非常に弱く結合するだけであることを証明しているため、ＢＳＷ１７認識の本質であるとわかる。重大な配列ホモロジーを持つアミノ酸の連続的ストレツチ(consecutive stretch)は、Ｆｃεではなんら見出すことができない。しかしながら、パターン類似性による整合により、これらのペプチドをＣε４ドメイン内の５００位から５０８位の範囲のアミノ酸ストレッチに割り当てることが可能である。このデカペプチドＦｃε５００−５０９は、Stanworth et al.[Lancet 336(1990)1279]により、受容体結合ＩｇＥによるマスト細胞誘発に関与すると仮定されている。グループＢに属するペプチドもまた、お互いに高度に相同である。更に、これらのアミノ末端部分はＦｃεのアミノ酸３７０−３７５位と殆ど同一である。この配列は、Ｃε３の部分であり、ＩｇＥのその高親和性受容体への結合に関与することが示されている領域を含有するかまたはその領域に隣接している。この事実は、ＢＳＷ１７によるＩｇＥ/ＩｇＥＲＩ相互作用の阻害を説明するものである。ＢＳＷ１７により認識される複合型(complex)構成エピトープは、ＩｇＥ分子のアミノ酸ストレッチ５００−５０８(Ｃε４内)および３７０−３７５(Ｃε３内)（E.A.Padlan and D.R.Davies,Molecul.Immunol. 23（1986）1063に従い番号付け）で表される立体構造を含有すると結論付けることができる。よって、免疫原性キャリアー分子に結合させた上記グループＡおよびＢのミモトープでの免疫により個体内で産生された抗体は、ＩｇＥがその高親和性受容体に結合したり、および/または標的細胞の顆粒消失を誘発するのを遮断することにより、アレルギー反応から保護するであろう。表のグループＣにまとめたペプチドは、お互いとも、またＦｃεとも何ら有意なホモロジーを示さない。従って、これらはＢＳＷ１７により認識される三次構造を模擬する“真正なミモトープ”を意味する。そのため、免疫原としてこれらのミモトープを使用しても、免疫宿主において抗アレルギー性ＢＳＷ１７様抗体の産生をもたらすであろう。ヒトＩｇＥ上のＢＳＷ１７エピトープに特異的に対するＢＳＷ１７様免疫応答の産生は、選択したミモトープについて下記実施例４から６に示す。実施例４：ＢＳＷ１７ミモトープペプチドをディスプレイするバクテリオファージは、ＢＳＷ１７によって特異的に認識されるファージ粒子によりディスプレイされるミモトープペプチド（表２のグループＡ：第１クローン＝図５のクローン１＝Ｃys−Ａrg−Ａrg−Ｈis−Ａsn−Ｔyr− Ｇly−Ｐhe−Ｔrp−Ｖal−Ｃys＝配列番号１８；第２クローン＝図５のクローン１８＝Ｃys−Ｉle−Ａsn−Ｈis−Ａrg−Ｇly−Ｔyr−Ｔrp−Ｖal−Ｃys＝配列番号１９）がＢＳＷ１７の抗原特異的超可変領域に結合することは、ＥＬＩＳＡによって示される。標準ＥＬＩＳＡ法に従い、ＢＳＷ１７１０μgと様々なモノクローナル抗体をコスタープレートのウェルにコーティングする。ＢＳＡでブロックした後、ファージ力価１０⁹cfu/mlのファージ感染細菌培養上清から得られるバクテリオファージ粒子を含有する標準ＥＬＩＳＡインキュベーション緩衝液１００μlと共にインキュベーションする。洗浄後、プレートをインキュベーション緩衝液中、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合抗Ｍ１３抗血清（Pharmacia,Uppsala,Sweden）５μgと共にインキュベーションする。インキュベーションは全て、室温で１時間実施する。最終洗浄後、コーティング化抗体に結合させたファージ粒子を、結合ＨＲＰ−抗Ｍ１３血清を介して標準ＥＬＩＳＡ法に従う発色基質展開により可視化する。図５は、ミモトープファージがＢＳＷ１７には非常に特異的に結合し、その他の抗体、例えば、モノクローナル抗Ｃε ３抗体でもあり、免疫原として組換えＣε３を用いることによって産生された８Ｅ７、３Ｇ９および５Ｈ１０、あるいはヒトＦｃεＲＩαの細胞外部分に対するもう一方のモノクローナル抗体を代表する５Ｈ５/Ｆ８には結合しないことを示している。陰性非抗体対照として組換えＦｃεＲＩα鎖および陽性対照として抗Ｍ１３抗血清でコーティングしたウェルが含まれる。実施例５：ＢＳＷ１７ミモトープペプチドをディスプレイするバクテリオファージは、ＢＳＷ１７のＩｇＥへの結合を競合的に阻害するミモトープ−ＢＳＷ１７相互作用の特異性は、ミモトープディスプレイファージ粒子の結合によりＢＳＷ１７／ＩｇＥ結合が妨げられることを示すことにより、更に立証される。細菌細胞を１０μg/mlテトラサイクリンおよび５０μg/mlカルベニシリン含有ＳＢにてＯＤ₆₀₀＝０.４まで増殖させ、次いで、ＶＣＳＭ１３ヘルパーファージを加え、３７℃で２時間インキュベーションを続ける。その後、カナマイシンを最終濃度７０μg/mlまで加え、インキュベーションを一晩続ける。ファージ粒子をポリエチレングリコールで沈殿させる。ソフトＲＩＡプレートを０.１Ｍカーボネート緩衝液、ｐＨ９.６中２０μg/mlＢＳＷ１７でコーティングし、次いで、１.５％カゼイン含有ＴＢＳでブロックする。ヒトＩｇＥをクロラミン−Ｔ法により¹²⁵Ｉ−標識し、ウェル当り１０００００cpmを、増加濃度の非標識ＩｇＥ(標準曲線)またはファージ粒子それぞれの存在下でＲＩＡプレートにコーティングしたＢＳＷ１７へ結合させるのに使用する。実験は全て室温で実施し、プレートは０.９％ＮａＣｌ＋０.０５％ツイーン２０で３回洗浄して数片に切断し、各ウェルはγ−カウンターで１分間測定した。ミモトープファージ（図６のＰｈＢＳＷ.６−９＝図５のクローン１＝ＣＲＲＨＮＹＧＦＷＶＣ＝配列番号１８；図６のＰｈＢＳＷ.２９−８＝図５のクローン１８＝ＣＩＮＨＲＧＹＷＶＣ＝配列番号１９)(上記実施例４参照)は、ＢＳＷ１７のＩｇEへの結合を阻害する。図６は、ＢＳＷ１７ミモトープディスプレイファージクローンの存在下での¹²⁵１−標識ＩｇＥのＢＳＷ１７への結合を示している。白丸は、非標識ＩｇＥによる標準阻害曲線を示しており、１０¹¹cfu/ml のファージ粒子の存在下での標識ＩｇＥ結合の阻害を見積もることができる。ファージクローンによって成される阻害は、非標識ＩｇＥ濃度１μg/mlおよび１. ７μg/mlにそれぞれ等しい。実施例６：ウサギをミモトープディスプレイファージクローンで免疫することによるエピトープ特異的免疫反応の誘導ＢＳＷ１７ミモトープベースのワクチン法の成否を試験するために、ＢＳＷ１７ミモトープペプチドをディスプレイするファージ粒子と対照であるヘルパーファージＶＣＳＭ１３それぞれにてウサギを免疫する。新たに調製したファージ粒子１０¹²cfuをＰＢＳに対して４℃で透析する。１mlを一次免疫用に完全フロイントアジュバントで乳化するか、またはブースター免疫用に不完全フロイントアジュバント１mlで乳化する。１４日毎に皮下的に免疫を繰り返す。第３ブースター免疫後、血液１２mlを採血し、ガラスバイアル中室温で4時間凝固させ、２０００gで１０分間遠心する。この上清をＥＬＩＳＡにより抗ヒトＩｇＥ抗体の存在について試験する。３つの異なる個体のヒトＩｇＥ(ＳＵＳ１１−ＩｇＥ；ＰＳ−ＩｇＥ；ＷＴ−ＩｇＥ)をＰＢＳに濃度５０μg/mlで希釈し、１μlずつニトロセルロース上に点加する。ニトロセルロースを１.５％カゼイン含有ＴＢＳ中で１時間ブロックする。ウサギ血清を１.５％カゼイン含有ＴＢＳで１：２００に希釈して、一晩インキュベーションする。ＴＢＳ、ＴＢＳ−０.０５％ツイーン２０およびＴＢＳで各１０分ずつ洗浄する。生じたヤギ抗ウサギＨＲＰを１ .５％カゼイン含有ＴＢＳで１：１０００に希釈し、４時間インキュベーションする。上記のように洗浄および染色を行う。表３に示したように、ＶＣＳＭ１３ファージで免疫した対照ウサギ並びに非免疫ウサギは、その血清中のヒトＩｇＥに対して弱い反応を示し、これは恐らく、天然の抗ウサギＩｇＥ自己抗体がヒトＩｇＥと交差反応することを反映している。しかしながら、バクテリオファージｐＶIIIコートタンパク質に対する大規模(massive)免疫応答に加えて、ＢＳＷ１７ミモトープファージで免疫したウサギの血清もまた、ヒトＩｇＥを特異的に認識する、強力に高レベルの抗体を含有する：表３：ＢＳＷ１７ミモトープディスプレイファージで免疫したウサギにおける抗ＩｇＥ応答これらの抗血清のＢＳＷ１７エピトープ特異性は、競合型ＥＬＩＳＡにて示すことができる：ニトロセルロースストリップを上記のように調製し、１.５％カゼイン含有ＴＢＳ中１：５０希釈で、ウサギ血清と共に一晩インキュベーションする。洗浄後、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したｍＡｂＢＳＷ１７(ＢＳＷ１７−ＨＲＰ)を１.５％カゼイン含有ＴＢＳ中１：５００００希釈で４時間加える。続いて洗浄および染色を上記のとおり実施する。表４から分かるように、様々な供給源由来のＩｇＥ調製物に対するＢＳＷ１７−ＨＲＰの結合は、ＢＳＷ１７ミモトープファージで免疫したウサギ由来の血清により阻害されるのに対し、ヘルパーファージで免疫したウサギ由来の血清は、いかなる阻害作用も示さない：表４：ＢＳＷ１７ミモトープファージで免疫したウサギの血清によるＢＳＷ１７ /ＩｇＥ相互作用の阻害次の実施例７および８では、抗アレルギーワクチン調製用の免疫原としてキャリアータンパク質に結合させた化学合成ミモトープペプチドを使用する成否を示す：実施例７：化学的に合成したＢＳＷ１７ミモトープペプチドは、高い親和性を持ってＢＳＷ１７に結合するＢＳＷ１７ミモトープファージのバクテリオファージ由来の部分は、ミモトープペプチド配列の生物学的活性を破壊することなく、省くことができることを確認するために、環状ＢＳＷ１７ミモトープオクタペプチド(Ａ)［更に２つのＣys を持つペプチド(Ａ)(配列番号１９)である、表２、グループＡ、第２クローンに直鎖形態で示す、ここでは更に７つの隣接バクテリオファージ由来アミノ酸残基Ｇly−Ｇlu−Ｐhe−および−Ｇly−Ａsp−Ｐro−Ａlaを環状ミモトープペプチドの正確な折りたたみを促進するために含まれるフランキング配列として含有する］を含む、次のペプチドを化学的に合成する：標準技術で合成後、このペプチドを、２つのシステインを介して環化し、ロドール・グリーンで蛍光標識する。ＥＬＩＳＡ条件下、マイクロタイタープレートウェル中で免疫した増加濃度のＢＳＷ１７への結合は、蛍光測定により測定し、図７に示す。実施例８：キャリアータンパク質に結合させた化学合成ＢＳＷ１７ミモトープペプチドは、ＢＳＷ１７により特異的に認識される様々なミモトープペプチドを化学的に合成し、免疫原性キャリアータンパク質に結合させる。結合反応は、下記の標準法に従い、ペプチドとキャリアータンパク質の質量比１：１で行う(Shan S．Wong，Chemistry of Protein Conjugationa nd Cross-linking ，CRC Press[1993])。次の変形結合型から得られたコンジュゲートを調製する： −グルタルアルデヒド結合 −ＤＣ(ジヘキシルカルボジイミド)結合 −ＢＳＳ[ビス(スルホスクシンイミジル)スベレート]結合 −リジン架橋得られたミモトープコンジュゲートは：（１）Ｐ１＝直鎖状ＫＴＫＧＳＧＦＦＶＦ−ＢＳＡ(グルタルアルデヒド) （２）Ｐ４＝直鎖状ＡｃＩＮＨＲＧＹＷＶＣ−ＢＳＡ(ＤＣ) （３）Ｐ５＝直鎖状ＡｃＲＳＲＳＧＧＹＷＬＷＣ−ＢＳＡ(ＤＣ) （４）ＳＡＦ１−ＫＬＨ＝環状ＧＥＦＣＩＮＨＲＧＹＷＶＣＧＤＰＡ−ＫＬＨ（ＤＣ）（５）ＳＡＦ２−ＫＬＨ＝直鎖状ＫＴＫＧＳＧＦＦＶＦ−ＫＬＨ(ＤＣ) （６）ＳＡＦ３−ＫＬＨ＝直鎖状ＶＮＬＰＷＳＦＧＬＥ−ＫＬＨ(ＤＣ) （７）ＳＡＦ３−Ｌys＝直鎖状ＶＮＬＰＷＳＦＧＬＥ−リジン架橋（８）ＳＡＦ４−ＫＬＨ＝直鎖状ＶＮＬＴＷＳＲＡＳＧ−ＫＬＨ(ＤＣ) （９）ＳＡＦ５−ＫＬＨ＝ＶＮＬＴＷＳ−ＫＬＨ(ＤＣ) （10）ＳＤＳ２１４＝環状ＧＥＦＣＲＲＨＮＹＧＦＷＶＣＧＤＰＡ−ＫＬＨ(ＢＳＳ）（11）ＳＤＳ２１３、ＳＤＳ２２７、ＳＤＳ２３６、ＳＤＳ２５２＝環状ＧＥＦＣＩＮＨＲＧＹＷＶＣＧＤＰＡ−ＫＬＨ（ＢＳＳ）（12）ＳＤＳ２３７、ＳＤＳ２５３＝直鎖状ＫＴＫＧＳＧＦＦＶＦ−ＫＬＨ(ＢＳＳ）（13）ＳＤＳ２４２、ＳＤＳ２５４＝直鎖状ＶＮＬＰＷＳＦＧＬＥ−ＫＬＨ(ＢＳＳ)および（14）ＳＤＳ２４３＝直鎖状ＶＮＬＴＷＳＲＡＳＧ−ＫＬＨ(ＢＳＳ) であり、(１)、(５)および(１２)は、それぞれグルタルアルデヒド、ＤＣおよびＢＳＳ結合により調製した参照免疫原分子であり；従って： (１)即ち、Ｐ１は、グルタルアルデヒド結合によりＢＳＡに結合させたヒトＩｇＥのアミノ酸５００−５０９、配列番号２８、The Lancet ［1990］前掲参照、であり；（５）即ち、ＳＡＦ２−ＫＬＨは、ＤＣ結合によりＫＬＨに結合させた同じペプチド、配列番号２８であり；そして、（１２）即ち、ＳＤＳ２３７およびＳＤＳ２５３は、ＢＳＳ結合によりＫＬＨに結合させた同じペプチド、配列番号２８である。その他のペプチドは、本発明の免疫原であり、即ち： −(２)(Ｐ４)は、Ｎ−アセチル化ペプチド(Ａ)(配列番号１)のＣ末端に更にＣys があるもの(配列番号２９)で、ＤＣ結合によりＢＳＡに結合させたものであり、 −(３)(Ｐ５)は、Ｎ−アセチル化ペプチド(Ｃ)(配列番号３)のＣ末端に更にＣys があるもの(配列番号３０)で、ＤＣ結合によりＢＳＡに結合させたものであり、 −(４)(ＳＡＦ１−ＫＬＨ)は、２つのフランキングＣysにより形成されるジスルフィドブリッジを介して環化した、実施例７のペプチド(配列番号３１)で、ＤＣ結合によりＫＬＨに結合させたものであり、 −(６)(ＳＡＦ３−ＫＬＨ)は、ＤＣ結合によりＫＬＨに結合させたペプチド(Ｇ) (配列番号７)であり、 −(７)(ＳＡＦ３−リジン)は、リジン架橋により結合させたペプチド(Ｇ)(配列番号７)であり、 −(８)(ＳＡＦ４−ＫＬＨ)は、ＤＣ結合によりＫＬＨに結合させたペプチド(Ｄ) (配列番号４)であり、 −(９)(ＳＡＦ５−ＫＬＨ)は、ＤＣ結合によりＫＬＨに結合させたペプチド(Ｑ) (配列番号１７)であり、 −(１０)(ＳＤＳ２１４)は、実施例７中のペプチドとして、同じ７つの隣接バクテリオファージ由来アミノ酸残基を持つ、表２のグループＡの第１ペプチド(配列番号３２)で、環化させ、ＢＳＳ結合によりＫＬＨに結合させたものであり、 −(１１)(ＳＤＳ２１３、ＳＤＳ２２７、ＳＤＳ２３６、ＳＤＳ２５２)は、上記 (４)(配列番号３１)と同じペプチドで、環化させ、ＢＳＳ結合によりＫＬＨに結合させたものであり、 −(１３)(ＳＤＳ２４２、ＳＤＳ２５４)は、ＢＳＳ結合によりＫＬＨに結合させたペプチド(Ｇ)(配列番号７)であり、 −(１４)(ＳＤＳ２４３)は、ＢＳＳ結合によりＫＬＨに結合させたペプチド(Ｄ) (配列番号４)である。図８aは、直鎖状ペプチドとして、ＫＬＨ(ＢＳＳ)に結合させた、環状ＢＳＷ１７ミモトープ−ＫＬＨ(ＢＳＳ)コンジュゲート(１１)、即ち、ＳＤＳ２３６と、Ｆｃε由来の“元の”エピトープモチーフ(１２)、即ち、ＳＤＳ２３７、即ち、Ｆｃε(５００−５０９)の両方が用量依存式にＢＳＷ１７によって認識されるのに対し、遊離のＫＬＨはなんら結合を示さないことを示す。マイクロタイタープレートウェルをＳＤＳ２３６、ＳＤＳ２３７または遊離のＫＬＨそれぞれ１μ gでコーティングし、増加濃度のＢＳＷ１７と共にインキュベーションした。結合抗体は、ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ(gamＩｇＧ−ＨＲＰ)で検出する。示されたデータは、非コーティング(ＢＳＡ−ブロックした)ウェルに対するバックグラウンド結合を引いた二重実験の平均を表す。図８ｂは、幾つかの化学結合法を用いてキャリアータンパク質に結合させた様々なＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートで得られたＥＬＩＳＡデータを要約したものである。マイクロタイタープレートウェルを、ミモトープコンジュゲートまたは遊離ＫＬＨそれぞれ５μgでコーティングし、１０μgのＢＳＷ１７と共にインキュベーションする。結合抗体は、gamＩｇＧ−ＨＲＰで検出する。示されたデータは、非コーティング(ＢＳＡ−ブロックした)ウェルに対するバックグラウンド結合を引いた二重実験の平均を表す。遊離のＫＬＨとは反対に、各ＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートは、ＢＳＷ１７によって認識されることが分かる。しかしながら、数週間にわたって繰り返し実験を行った結果、ＤＣを介して結合させたＫＬＨコンジュゲートは、あまり安定でなく、ＢＳＷ１７に対するその結合能を徐々に損失することが明らかになった。反対に、ＢＳＳ結合により得られたＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートは、＋４℃でも安定であることが判明した。図９ａおよび９ｂでは、ＫＬＨまたはＢＳＡに結合させたＢＳＷ１７ミモトープは、ＢＳＷ１７によって特異的に認識されるが、非関連モノクローナル抗体３Ｇ９(抗ヒトＣε３)や５Ｈ５／Ｆ８(抗ヒトＲＩα)によっては認識されないことを示す。再度、マイクロタイタープレートウェルを、このミモトープコンジュゲート各５μgでコーティングし、対応するモノクローナル抗体１０μgと共にインキュベーションする。結合抗体は、gamＩｇＧ−ＨＲＰで検出する。示されたデータは、非コーティング(ＢＳＡ−ブロックした)ウェルに対するバックグラウンド結合を引いた二重実験の平均を表す。実施例９：ウサギをＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートで免疫すると、抗ヒトＩｇＥ抗体のインビボ産生をもたらすＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートの免疫原性の特異性を確認するために、ウサギを下記に概説する一組のミモトープ/キャリアー調製物で免疫する：ウサギを、総容量５００μlのホスフェート緩衝化塩水(ＰＢＳdef.)に溶解させた対応するコンジュゲート調製物２００μgで皮下注射により免疫する。一次免疫用に、試料を完全フロイントアジュバント(ウサギＲ１−Ｒ４)またはＴiter Ｍax(Sigma；ウサギ１−２０)と１：１で混合する。初期免疫の前に、血液試料５mlを採血する。初期注射後、２１日および２８日後に不完全フロイントアジュバントを用いてブースター免疫を実施する。２８日および４９日目に血液試料を採血し、全ての試料から血清を調製する。免疫ウサギにおける抗ヒトＩｇＥ免疫応答の産生は、ＥＬＩＳＡによって監視する。マイクロタイタープレートウェルをヒトＩｇＥ(ＳＵＳ−１１；ＪＷ８)５ μgでコーティングし、血清試料１００μlと共にインキュベーションし、ＥＬＩＳＡインキュベーション緩衝液で１：５０に希釈する。固定化ヒトＩｇＥが結合したウサギ抗体は、ヤギ抗ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ(gar ＩgＧ−ＨＲＰ)と共にインキュベーションすることにより検出される。測定したＯＤ₄₀₅値は、１：５０に希釈した、対応する各ウサギのプレ免疫血清で得られた情報により補正する。図１０ａおよび１０ｂに与えたデータは、二重測定の平均値を表す。図１０ａおよび１０ｂは、明らかに、ヒトＩｇＥに対する様々なＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートで免疫したウサギにおいて抗体が誘導されたことを示している。ＫＬＨキャリアー、免疫原として使用したペプチドおよびヒトＩｇＥそれぞれに関して新たに産生された抗体の血清力価はもまた、固定化ＫＬＨ、ミモトープペプチド−ＢＳＡコンジュゲートおよびヒトＩｇＥそれぞれとインキュベーションするための清連続希釈物を用いて、ＥＬＩＳＡによって測定される。このような血清力価測定の２つの実施例は、(１１)、即ち、ＳＤＳ２１３と(10)、即ち、ＳＤＳ２１４それぞれについて図１１に示す。上記実施例は、ＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートの抗ヒトＩｇＥ応答誘導用免疫原としての応用性を示す。実施例１０：ＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートで免疫したウサギで誘導された抗ｈＩｇＥ応答は、アイソタイプ特異的であり、かつＩｇＥ結合に対してＢＳＷ１７と競合する免疫したウサギにおける抗ヒトＩｇＥ免疫応答のアイソタイプ特異性はＥＬＩＳＡで監視する。マイクロタイタープレートウェルをヒトＩｇＥ(ＳＵＳ−１１) 、ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＭそれぞれ３μgでコーティングし、血清試料１００μｌと共にインキュベーションし、ＥＬＩＳＡインキュベーション緩衝液で１：５０に希釈する。固定化ヒトＩｇＥ抗体が結合したウサギ抗体は、ヤギgarＩｇＧ−ＨＲＰと共にインキュベーションすることにより検出される。測定したＯＤ₄₀₅値は、対応する各ウサギの１：５０に希釈したプレ免疫血清で得られた情報により補正する。図１２に与えたデータは、二重測定の平均値を表す。見たとおり、ＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートでの免疫によりウサギで産生された免疫応答は、(１０)、即ちＳＤＳ２１４で免疫したウサギの血清がヒトＩｇＭを部分的に認識する以外は、ＩｇＥに特異的である。競合型ＥＬＩＳＡでは、更に、ウサギ抗ＳＤＳ２１４抗血清がＩｇＥ結合に対してＢＳＷ１７と部分的に競合できることが示されている。マイクロタイタープレートウェルそれぞれをヒトＩｇＥ(ＳＵＳ−１１)１μgでコーティングし、５ μgのＢＳＷ１７か、またはＢＳＷ１７なしのインキュベーション緩衝液のいずれかでインキュベーションする。洗浄後、ＥＬＩＳＡインキュベーション緩衝液で１：５０に希釈した抗ＳＤＳ２１３抗血清１００μｌを二次インキュベーション用に加える。非処理固定化ヒトＩｇＥおよびＢＳＷ１７とプレインキュベーションしたＩｇＥが結合したウサギ抗体は、ヤギgarＩｇＧ−ＨＲＰと共にインキュベーションすることにより検出される。図１３に与えたデータは、二重測定の平均値を表す。実施例１１：ＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートでの免疫によりウサギで産生れた抗ｈＩｇＥ抗体は、アフィニティー試薬としてセファロースに結合させたミモトープペプチドを用いるアフィニティークロマトグラフィーにより精製できるこの実施例は、ＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートでの免疫によりウサギにおいて誘導された抗ｈＩｇＥ応答が、特異的抗ミモトープペプチド応答と同一であることを示す。ウサギポリクローナル抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体のイムノアフィニティー精製：ａ)硫酸アンモニウム沈殿：ウサギ抗血清(Bradford，BSA-Standard，BIO-RADによれば、総タンパク質６０ mg/ml)２２mlに、固体ＡＭＳ(２５％w/v)５.５gを加え、混合物を３時間撹拌し、室温で一晩インキュベーションする。１８０００rpm(Sorvall)で４５分間遠心して沈殿を除去し、２５％ＡＭＳ水溶液(w/v)２５mlで洗浄する。洗浄した沈殿を再度同じ条件で遠心し、ＰＢＳ、０.０５％ＮａＮ₃、ｐＨ７.２１０mlに溶解し、＋４℃で一晩、同じ緩衝液５１で透析する。ｂ)イムノアフィニティークロマトグラフィー：透析物を０.２μm Millex-GVフィルターユニット(Millipore)にてろ過し、５m gのＢＳＷ１７ミモトープペプチドＳＤＳ２２７に共有結合させたＣＨ−セファロース４Ｂ１０mlを充填したPharmacia XK16/30カラムにかけ、ＰＢＳ、０.０５％ＮａＮ₃を液相緩衝液として流速１ml/分で流す。カラムにかけ非結合タンパク質画分を溶出後、特異的に結合した抗体を０.１Ｍグリシン/ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ２.８で溶出する。溶出液(９ml中画分番号１２−２０)を撹拌下にトラップして３.３ＭＴＲＩＳ/ＨＡｃ、０.８％ＮａＮ₃、ｐＨ８.０(５０μl/ml)でｐＨ７ .４まで直ちに中和し、最終的に、４℃で一晩、ＰＢＳ、０.０５％ＮａＮ₃、ｐＨ７.２３１で透析する。総タンパク質は、Bradford，BSA-Standard(BIO-RAD) によれば、約１mg/mlである。カラムにかけた総タンパク質の回収率は、約０.７％である。アフィニティー精製ＩｇＧ画分は、ＥＬＩＳＡによりｈＩｇＥ結合について試験する。マイクロタイタープレートウェルを増加濃度のヒトＩｇＥ(ＪＷ８)でコーティングし、精製抗ＳＤＳ２１３抗血清および抗ＳＤＳ２１４抗血清それぞれ５μgと共にインキュベーションする。結合抗体は、garＩｇＧ−ＨＲＰで検出される。図１４に示したデータは、二重測定の平均値を表す。図から分かるように、抗ＢＳＷ１７ミモトープアフィニティーカラムで精製したＩｇＧ抗体は、用量依存的にヒトＩｇＥにより認識される。カラム通過させた試料では低いバックグラウンド結合活性のみ観測される。このデータは、ウサギにて誘導された抗ｈＩｇＥ活性は、ミモトープペプチドに対する抗体と同一である。実施例１２：ＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートで免疫後のウサギにおいて産生される抗ヒトＩｇＥ抗体は、ヒト血液細胞に対して非アナフィラキシー誘発性であるＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートでの免疫によりウサギにおいて産生した抗ＩｇＥ抗体は、ヒト血液好塩基球に対して非アナフィラキシー誘発性である。 Allschwil，Switzerland)を使用する。このアッセイでは、供給元の提示した実験プロトコールに従い、アナフィラキシー誘発剤により細胞を誘発する結果としてヒト好塩基球からの可溶性ロイコトリエン(ｓＬｔ)の放出が測定される。アッセイの情報は、その細胞を試験試料と共にインキュベーションした後のヒト白血球上清ml当り存在するpg ｓＬｔとして与え、これは標準曲線と比較して決定される。標準曲線は、競合型ＥＬＩＳＡにおいて標準ｓＬｔの連続希釈を用いて得られる。血液細胞調製物からの自発ｓＬｔ放出から得られたｓＬｔバックグラウンドレベル(ＰＢ＝“患者ブランク”)と所定の血液細胞調製物から放出され得る最大ｓＬｔ(ＰＣ＝“患者対照”；架橋抗ＩｇＥＲＩα抗体で細胞試料を誘発した後に得られる)は、それぞれ陰性および陽性対照として各試験に含まれる。ＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートで免疫したウサギの完全血清、並びに実施例１１に記載したアフィニティー精製抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体を、好塩基球誘発の存在およびアナフィラキシー誘発性抗ｈＩｇＥ抗体について試験する。好塩基球源として、健常ドナーのヒト全血を新たに採血したものを使用し、ＣＡＳＴｓＬｔＥＬＩＳＡキットのプロトコールに従い、厳密に処理する。その結果は、図１５にまとめてあり、ＢＳＷ１７ミモトープコンジュゲートでの免疫により産生した抗ｈＩｇＥ抗体を含有する非精製ウサギ血清またはアフィニティー精製抗ＢＳＷ１７ミモトープ抗体のいずれも、ヒト血液細胞にロイコトリエン放出を誘発させる能力を持たないこと、よって、これらは非アナフィラキシー誘発性であることを示している。このことは、ヒト抗アレルギーワクチンにＢＳＷ１７ミモトープを応用する際の絶対的な必要条件である。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９８年４月３日（１９９８．４．３）【補正内容】請求の範囲１．(ａ)成分(ｂ)へのカップリングまたは更なるプロセシングを促進するために、ハプテン−キャリアー結合用の更なる成分を適切に含み得るか；または、ＢＳＷ１７ミモトープペプチドが環状であるとき、その２つの末端を、ジスルフィドブリッジを形成する更に２つのシステイン残基よって結合させるか、または化学的に架橋させることができ、あるいはＢＳＷ１７ミモトープペプチドが直鎖状であるとき、カルボキシ末端アミノ酸をアミド化形態でブロックさせ、および／またはアミノ末端アミノ酸をアセチル化形態でブロックさせることができるか；または、１または２つの補助基および／または別のカップリング基によりフランクさせることができる、全部で１５アミノ酸のＢＳＷ１７ミモトープペプチドの少なくとも一部分と、 (ｂ)そのぺプチドに対する免疫応答を誘導する能力のある部分とを含み、成分(ａ)はＬys−Ｔhr−Ｌys−Ｇly−Ｓer−Ｇly−Ｐhe−Ｐhe−Ｖal−Ｐhe以外である、免疫原性分子。２．ポリマーペプチドまたは組換え融合タンパク質の形態であるため、ポリマーペプチドの１つのモノマー化合物または融合タンパク質の片方がＢＳＷ１７ミモトープペプチドの一部分を構成し、ポリマーペプチドまたは融合タンパク質の残りの部分が免疫応答誘導部分を構成している、請求の範囲第１項に記載の免疫原性分子。３．ＢＳＷ１７ミモトープペプチドと免疫原性キャリアーのコンジュゲートの形態である、請求の範囲第１項に記載の免疫原性分子。４．ＢＳＷ１７ミモトープペプチド部分が、実質的に、から選択されるアミノ酸配列から成るか、またはこれらを含有する、請求の範囲第１項に記載の免疫原性分子。５．ＢＳＷ１７ミモトープペプチド部分(ａ)がアミノ酸配列Ｇly−Ｇlu−Ｐhe−Ｃys−Ｉle−Ａsn−Ｈis−Ａrg−Ｇly−Ｔyr−Ｔrp−Ｖal− Ｃys−Ｇly−Ａsp−Ｐro−Ａla(配列番号２７)を有し、かつ環状である、即ち、それは、２つの末端を、ジスルフィドブリッジを形成する更に２つのシステイン残基により結合させたペプチドＩle−Ａsn−Ｈis−Ａrg−Ｇly−Ｔyr−Ｔrp−Ｖ al(Ａ)であり、ハプテン−キャリアー結合とカップリングを促進するための更なる成分Ｇly−Ｇlu−Ｐhe−および−Ｇly−Ａsp−Ｐro−Ａlaを含む、請求の範囲第１項に記載の免疫原性分子。６．請求の範囲第１項ないし５項のいずれか１項に記載の免疫原性分子とアジュバントを含む、医薬組成物。７．請求の範囲第１項ないし５項のいずれか１項に定義したＢＳＷ１７ミモトープペプチドの一部分に特異的であるため、またＢＳＷ１７により認識される天然エピトープを含むＩｇＥの重鎖上のアミノ酸配列と反応性である抗体ドメインを含む、リガンド。８．モノクローナル抗体またはそのＦａｂ’またはＦ(ａｂ’)₂フラグメントの形態である、請求の範囲第７項に記載のリガンド。９．(ａ)ＢＳＷ１７ミモトープペプチドの一部分と(ｂ)そのペプチドに対する免疫応答を誘導する能力のある部分とを適切に結合させることを含む、請求の範囲第１項に記載の免疫原性分子の製法。１０．ＩｇＥ媒介疾患の処置における医薬として使用するための、請求の範囲第１項ないし５項のいずれか１項に定義した免疫原性分子。１１．アレルギーに対するワクチンの製造における、請求の範囲第１項ないし５項のいずれか１項に定義した免疫原性分子の使用。【手続補正書】【提出日】１９９９年３月３日（１９９９．３．３）【補正内容】 (１)明細書２４頁下から３行目に、「次のペプチドを化学的に合成する：」とある後にを挿入する。 (２)請求の範囲別紙の通り請求の範囲１．(ａ)成分(ｂ)へのカップリングまたは更なるプロセシングを容易化するためにハプテン−キャリアー結合用の成分を更に適切に含むか、またはＢＳＷ１７ミモトープペプチドが環状であるとき、ジスルフィドブリッジを形成する２つの付加的システイン残基を保持するか、または化学的に架橋された２つの末端を有するか、またはＢＳＷ１７ミモトープペプチドが直鎖状であるとき、アミド化形態でブロックされたカルボキシ末端アミノ酸および／またはアセチル化形態でブロックされたアミノ末端アミノ酸を有するか、または１または２つの補助基および／または付加的カップリング基によりフランクれていることもある、全部で１５個を超えないアミノ酸のＢＳＷ１７ミモトープペプチドの少なくとも部分と、 (ｂ)そのペプチドに対する免疫応答を誘導する能力のある部分とを含み、成分(ａ)がＬys−Ｔhr−Ｌys−Ｇly−Ｓer−Ｇly−Ｐhe−Ｐhe−Ｖal−Ｐhe以外のものである、免疫原性分子。２．ＢＳＷ１７ミモトープペプチド部分が、から選択されるアミノ酸配列から本質的に成るか、または含有する、請求項１に記載の免疫原性分子。３．ＢＳＷ１７ミモトープペプチド部分(ａ)がアミノ酸配列Ｇly−Ｇlu−Ｐhe−Ｃys−Ｉle−Ａsn−Ｈis−Ａrg−Ｇly−Ｔyr−Ｔrp−Ｖal− Ｃys−Ｇly−Ａsp−Ｐro−Ａla(配列番号２７)を有し、かつ環状であるもの、すなわちジスルフィドブリッジを形成する２つの付加的システイン残基を保持する２つの末端を有するペプチドＩle−Ａsn−Ｈis−Ａrg−Ｇly−Ｔyr−Ｔrp−Ｖal (Ａ)であって、ハプテン−キャリアー結合とカップリングを容易化するための更なる成分Ｇly−Ｇlu−Ｐhe−および−Ｇly−Ａsp−Ｐro−Ａlaを含むものである、請求項１に記載の免疫原性分子。４．請求項１〜３のいずれかに記載の免疫原性分子とアジュバントを含む、医薬組成物。５．請求項１〜３のいずれかに記載のＢＳＷ１７ミモトープペプチドの部分に特異的であり、ＢＳＷ１７により認識される天然エピトープを含むＩｇＥの重鎖上のアミノ酸配列とも反応性である抗体ドメインを含む、リガンド。６．アレルギーに対するワクチンの製造における、請求項１〜３のいずれかに記載の免疫原性分子の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 14/00 Ｃ０７Ｋ 14/00 16/00 16/00 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．(ａ)ＢＳＷ１７ミモトープペプチドの少なくとも一部分と (ｂ)そのペプチドに対する免疫応答を誘導する能力のある部分とを含む、免疫原性分子。２．ＢＳＷ１７ミモトープペプチドが環状であるため、その各末端はジスルフィドブリッジを形成する更に２つのシステイン残基よって結合しているか、または各末端は化学的に架橋しているか、またはＢＳＷ１７ミモトープペプチドが直鎖状であるため、カルボキシ末端アミノ酸をアミド化により適宜ブロックでき、および／またはアミノ末端アミノ酸をアセチル化により適宜ブロックできる、請求の範囲第１項に記載の免疫原性分子。３．ポリマーペプチドまたは組換え融合タンパク質の形態であるため、ポリマーペプチドの１つのモノマー化合物または融合タンパク質の片方がＢＳＷ１７ミモトープペプチドの部分を構成しており、かつポリマーペプチドまたは融合タンパク質の残りの部分が免疫応答誘導部分を構成している、請求の範囲第１項に記載の免疫原性分子。４．ＢＳＷ１７ミモトープペプチドと免疫原性キャリアーのコンジュゲートの形態である、請求の範囲第１項に記載の免疫原性分子。５．ＢＳＷ１７ミモトープペプチド部分が、実質的に、から選択されるアミノ酸配列から成るか、またはそれらを含有する、請求の範囲第１項に記載の免疫原性分子。６．請求の範囲第１項ないし５項のいずれか１項に記載の免疫原性分子とアジュバントを含む、医薬組成物。７．請求の範囲第１項ないし５項のいずれか１項に定義したＢＳＷ１７ミモトープペプチドの一部分に特異的であるため、ＢＳＷ１７により認識される天然エピトープを含むＩｇＥの重鎖上のアミノ酸配列と反応性である抗体ドメインを含む、リガンド。８．モノクローナル抗体またはそのＦab'またはＦ(ab')₂フラグメントの形態である、請求の範囲第７項に記載のリガンド。９．(ａ)ＢＳＷ１７ミモトープペプチドの一部分と(ｂ)そのペプチドに対する免疫応答を誘導する能力のある部分とを適切に結合させることを含む、請求の範囲第１項に記載の免疫原性分子の製法。１０．ＩｇＥ媒介疾患の処置における医薬として使用するための、請求の範囲第１項ないし５項のいずれか１項に定義した免疫原性分子。１１．アレルギーに対するワクチンの製造における、請求の範囲第１項ないし５項のいずれか１項に定義した免疫原性分子の使用。