EA037093B1

EA037093B1 - Производное полиенового макролида

Info

Publication number: EA037093B1
Application number: EA201692508A
Authority: EA
Inventors: Кейсуке Миядзаки; Кендзи Такая; Такафуми Охара; Хидеки Сугимото; Манабу Фудзитани; Юки Огата; Наоюки Судзуки
Original assignee: Сионоги Энд Ко., Лтд.
Priority date: 2014-06-12
Filing date: 2015-06-12
Publication date: 2021-02-04
Also published as: US20190135847A1; TWI702223B; KR102106765B1; EP3156410A1; AU2015272398B2; BR112016028890A8; AU2015272398A1; MX2016015455A; JP6601818B2; CN106414473A; EP3156410A4; BR112016028890A2; TW201625655A; CA2951516C; IL249430A0; US10246478B2; EA201692508A1; IL249430B; US10696707B2; KR20170016957A

Abstract

Изобретение относится к соединениямили их фармацевтически приемлемым солям. Изобретение также раскрывает фармацевтическую композицию, обладающую противогрибковой активностью, содержащую в эффективном количестве указанные выше соединения или их фармацевтически приемлемые соли.

Description

(31) 2014-121341 (32) 2014.06.12 (33) JP (43) 2017.04.28 (86) PCT/JP2015/066976 (87) WO 2015/190587 2015.12.17 (71)(73) Заявитель и патентовладелец:

СИОНОГИ ЭНД КО., ЛТД. (JP) (72) Изобретатель:

Миядзаки Кейсуке, Такая Кендзи, Охара Такафуми, Сугимото Хидеки,

Фудзитани Манабу, Огата Юки, Судзуки Наоюки (JP) (74) Представитель:

Медведев В.Н. (RU) (56) JP-A-2207093

WO-A1-2013186384

JP-A-6504295

JP-A-56123794

WO-A1-2007096137

WO-A1-1993017034

WO-A1-2015054148

037093 Bl

037093 В1 или их фармацевтически приемлемым солям. Изобретение также раскрывает фармацевтическую композицию, обладающую противогрибковой активностью, содержащую в эффективном количестве указанные выше соединения или их фармацевтически приемлемые соли.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к производным полиеновых макролидов. В частности, настоящее изобретение относится к производным полиеновых макролидов, которые являются пригодными для использования при лечении или предотвращении грибковой инфекции у людей или животных.

Уровень техники

Амфотерицин В известен в качестве лекарственного средства, обладающего бактерицидным воздействием посредством связывания с эргостеролом клеточной мембраны грибков и образования отверстий в мембране, в течение продолжительного времени. Амфотерицин В используют в качестве препарата с использованием дезоксихолевой кислоты или липосом из-за его низкой растворимости в воде и высокой токсичности. Однако препарат с использованием дезоксихолевой кислоты по-прежнему имеет высокую токсичность, так что нельзя достигнуть удовлетворительного введения и долговременного лечения. Препарат с использованием липосом может в основном исключить возможность гепатотоксичности и нефротоксичности по сравнению с препаратом с использованием дезоксихолевой кислоты, но эффективного лечения по-прежнему не достигается из-за понижения эффективности лекарственного средства (непатентные документы 1, 2).

По этой причине пытаются осуществить химическую модификацию амфотерицина В для улучшения его растворимости в воде или исключения его токсичности. Например, описано производное амфотерицина В, имеющее амид в 16-м положении (патентные документы 1, 3, 4, 5, 10), и сложноэфирное производное (патентные документы 2, 6, 7, 9, 11). В дополнение к этому описывается производное амфотерицина В, имеющее модификацию амино в сахарной части, как патентные документы 1-4, 6-8 и 11. Однако производное амфотерицина В, имеющее структуру мочевины в 16-м положении, не описано в указанных выше документах (непатентный документ 3).

В дополнение к этому производные амфотерицина В, имеющие структуру мочевины в 16-м положении, где конечная группа мочевины представляет собой метил, амино или карбокси, представлены Martin D. Burke et al. на конгрессе American Chemical Society (ACS) 18 марта 2014 г. (непатентный документ 4), и такие производные описаны в патентном документе 11 и представлены как статья в научном журнале (непатентный документ 5). Там говорится, что производное амфотерицина В, имеющее аминогруппу в конечной части, имеет более низкую нефротоксичность, чем то, которое имеет карбоксигруппу в конечной части.

Ссылки на предыдущий уровень техники.

Патентный документ.

Патентный документ 1: WO 2007/096137.

Патентный документ 2: WO 2001/051061.

Патентный документ 3: WO 2001/009758.

Патентный документ 4: WO 93/17034.

Патентный документ 5: WO 96/32404.

Патентный документ 6: WO 96/35701.

Патентный документ 7: WO 99/51274.

Патентный документ 8: WO 91/07421.

Патентный документ 9: WO 2009/015541.

Патентный документ 10: JP H55-157598.

Патентный документ 11: WO 2015/054148.

Непатентный документ.

Непатентный документ 1: Antimicrobial Agents and Chemotherapy (1998), 42(9), 2391-2398.

Непатентный документ 2: Clinical Infectious Diseases (2007), 44(10), 1289-1297.

Непатентный документ 3: Natural Product Reports (2010), 27, 1329-1349.

Непатентный документ 4: 247th ACS National Meeting & Exposition Web Abstracts (http://www.acs.org/content/acs/en/meetings/spring-2014/program.html) ORGN 334 Non-toxic amphotericin В derivatization guided by ligand-selective allosteric effects strategy.

Непатентный документ 5: Nature chemical biology published online 01 June 2015.

Сущность изобретения

Проблемы, которые должны решаться изобретением.

Настоящее изобретение предназначено для того, чтобы предложить производные амфотерицина В, имеющие высокую противогрибковую активность против различных грибков. Предпочтительно настоящее изобретение предлагает производные, имеющие более низкую токсичность, такую как нефротоксичность, гепатотоксичность и/или острую токсичность.

Средства решения проблем.

Настоящее изобретение относится к соединению или его фармацевтически приемлемой соли, где соединение имеет следующую формулу:

- 1 037093

Настоящее изобретение также относится к соединению или его где соединение имеет следующую формулу:

фармацевтически приемлемой соли,

Настоящее изобретение также относится к соединению или его фармацевтически приемлемой соли, где соединение имеет следующую формулу:

Настоящее изобретение также относится к соединению или его фармацевтически приемлемой соли где соединение имеет следующую формулу:

Настоящее изобретение также относится фармацевтической композиции, обладающей противогрибковой активностью, содержащей в эффективном количестве упомянутое выше соединение или его фармацевтически приемлемую соль 6.

Настоящее изобретение также относится к применению фармацевтической композиции для лечения или предотвращении грибковой инфекции у людей или животных.

Сущность изобретения

Соединение по настоящему изобретению имеет противогрибковую активность против грибков. В дополнение к этому соединение по настоящему изобретению имеет применение в качестве лекарствен- 2 037093 ного препарата, и оно предпочтительно оказывает превосходные воздействия по одному из следующих пунктов или по их части:

а) низкая вероятность нефротоксичности,

b) низкая вероятность гепатотоксичности,

c) низкая вероятность острой токсичности,

d) высокая растворимость в воде,

e) низкая вероятность гемолитической токсичности,

f) низкая вероятность цитотоксичности.

Также настоящее изобретение предлагает полезные промежуточные соединения, пригодные для использования при эффективном приготовлении противогрибкового агента. Соединение (I) может быть легко приготовлено с использованием промежуточных соединений с высоким выходом и с помощью небольшого количества стадий.

Варианты осуществления изобретения

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может вводиться перорально или парентерально. Способы парентерального введения включают дермальное, подкожное, внутривенное, внутриартериальное, внутримышечное, внутрибрюшинное, чрезслизистое, ингаляционное, трансназальное, офтальмологическое введение, введение в ухо или вагинальное введение и тому подобное.

В случае перорального введения любые формы, которые обычно используются, такие как пероральные твердые препараты (например, таблетки, порошки, гранулы, капсулы, пилюли, пленки или чтолибо подобное), пероральные жидкие препараты (например, суспензия, эмульсия, эликсир, сироп, лимонад, спиртовой раствор, ароматическая вода, экстракт, отвар, тинктура или что-либо подобное) и тому подобное, могут приготавливаться в соответствии с обычным способом и вводиться. Таблетки могут представлять собой таблетки с сахарным покрытием, таблетки с пленочным покрытием, таблетки с энтеральным покрытием, таблетки с замедленным высвобождением, пастилки, подъязычные таблетки, буккальные таблетки, жевательные таблетки или перорально разрыхляемые таблетки. Порошки и гранулы могут представлять собой сухие сиропы. Капсулы могут представлять собой мягкие капсулы, микрокапсулы или капсулы с замедленным высвобождением.

В случае парентерального введения любые формы, которые обычно используются, такие как препараты для инъекций, для капельного внутривенного вливания, наружные препараты (например, офтальмологические капли, капли в нос, ушные капли, аэрозоли, ингаляции, примочки, вливание, линимент, жидкость для полоскания рта, спринцовка, мазь, пластырь, гель, крем, повязка, горячий компресс, наружный порошок, суппозиторий или что-либо подобное) и тому подобное, могут вводиться предпочтительно. Препараты для инъекций могут представлять собой эмульсии, тип которых представляет собой масло/вода, вода/масло, масло/вода/масло, масло/вода/масло или что-либо подобное.

Фармацевтическая композиция может приготавливаться посредством смешивания эффективного количества соединений по настоящему изобретению с различными фармацевтическими добавками, пригодными для использования в препарате, такими как наполнители, связующие вещества, увлажняющие агенты, разрыхлители, смазывающие вещества, разбавители и тому подобное. В дополнение к этому фармацевтическая композиция может предназначаться для пациентов детского возраста, для пациентов пожилого возраста, для серьезных случаев или для операций, с помощью соответствующего изменения эффективного количества соединения по настоящему изобретению, препарата и/или различных фармацевтических добавок. Педиатрические фармацевтические композиции предпочтительно вводятся пациентам в возрасте меньше 12 или 15 лет. В дополнение к этому педиатрические фармацевтические композиции могут вводиться пациентам, которым меньше 27 дней после рождения, от 28 дней до 23 месяцев после рождения, в возрасте от 2 до 11 лет, пациентам в возрасте от 12 до 16 лет или в возрасте от 18 лет. Гериатрические фармацевтические композиции предпочтительно вводятся пациентам, которые находятся в возрасте 65 лет или больше.

Хотя дозировка фармацевтической композиции по настоящему изобретению должна определяться с учетом возраста и массы тела пациента, типа и степени заболеваний, способа введения и тому подобное, обычная пероральная доза составляет 0,05-100, а предпочтительно 0,1-10 мг/кг/день. Для парентерального введения, хотя доза сильно изменяется вместе со способом введения, обычная доза составляет 0,00510, а предпочтительно 0,01-1 мг/кг/день. Доза может вводиться одной-несколькими порциями в день.

Соединения формулы (I) являются пригодными для использования в качестве терапевтического агента против грибковой инфекции, такой как гематогенная грибковая инфекция, грибковая болезнь дыхательной системы, грибковый менингит, диссеминированный микоз, под действием рода Aspergillus, рода Candida, рода Cryptococcus, рода Mucor, рода Absidia, рода Rhizopus, рода Rhizomucor, рода Cladosporium, рода Cladophialophora, рода Fonsecaea, рода Phialophora, рода Exophiala, рода Coccidioides, рода Histoplasma или рода Blastomyces.

Способы синтеза соединений по настоящему изобретению.

Например, соединения формулы (I) по настоящему изобретению могут быть получены с помощью общих способов синтеза, описанных ниже. Способы извлечения, очистки и тому подобное могут осуществляться с использованием способа, обычного для экспериментов органической химии. Поскольку для

- 3 037093 производного амфотерицина В осуществляется химическая модификация J¹, J², V¹, V² и L, они и будут упоминаться.

В качестве исходных материалов можно использовать коммерческие реагенты, или исходные материалы могут синтезироваться со ссылками на способы, известные в данной области.

В настоящем описании значение каждого сокращенного наименования является следующим:

Alloc - аллилоксикарбонил,

Alloc-Osu - аллил н-сукцинимидилкарбонат,

Alloc-Cl - аллилоксикарбонилхлорид,

АМВ - амфотерицин В,

Вос - трет-бутоксикарбонил,

CSA - 10-камфорсульфоновая кислота,

TBS - трет-бутилдиметилсилил,

DEAD - диэтилазодикарбоксилат,

DMAD - диметилазодикарбоксилат,

DMSO - диметилсульфоксид,

DIEA - N,N-диизопропилэтиламин,

DMF - N,N-диметилформамид,

DMA - N,N-диметилацетамид,

EDC - 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид,

NMP - N-метилпирролидон,

Fmoc - 9-флуоренилметилоксикарбонил,

Теос - 2-(триметилсилил)этоксиметилхлорид,

TBAF - тетрабутиламмонийфторид,

TFA - трифторуксусная кислота,

HATU - О-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилуроний гексафторфосфат,

Pd(PPh₃)4 - тетракис(трифенилфосфин)палладий(0),

PPTS - пиридиний р-толуолсульфонат,

РуВОР - (1Н-бензотриазол-1-илокси)трипирролизинофосфоний гексафторфосфат.

Общий способ синтеза 1-1.

Химическая формула 25

НоА^ 0 °^н ОН ^0 ноА^_ 0 он он ΧΑ^ΧΧ^ΧΧίχχ.^^^ аа Х.,-0·^ ноА^ 0 ОН ОН ноА 0 он он χΑ^χχ^χχ^χχ^χχ^ (XII)

Суон ОН ОН || ¹ Стадия 1 0 ________ оуэ^ ноуА nh₂ θ^Η он ОН ОН (Χ._νΑ 1 (И Стадия 2 0 0^- ноАА-_Он ^ΗΝ·γΟ CL ЛИЗ °^н 0- А^х^АА^он ОН ОН 0 0 Н Стадия 3 0 0 0^- ^аЬ Η0γΑ_0Η ^ΗΝγ-° 0 As ?^н 0- А хх ...--..I,.·-·-, ,....0 АГТ А о ОН ОН 0..1^/ Т н _;:Х...-Х·-^ Стадия 4 0 0 hqAA-oh HN^O 0 As

- 4 037093

Химическая формула 26

Стадия 1.

Соединение аа может быть синтезировано с помощью реакции, в которой третичный амин, такой как триэтиламин, DIEA, пиридин и тому подобное, и N-[2-(триметилсилил)этоксикарбонилокси]сукцинимид добавляют по каплям к коммерчески доступному амфотерицину В в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или к смеси этих растворителей в течение от 0,5 до 24 ч, предпочтительно от 1 до 5 ч при 20-30°С.

Стадия 2.

Соединение ab может быть синтезировано с помощью реакции, в которой камфорсульфоновую кислоту добавляют к соединению аа при охлаждении на льду, в растворителе, таком как тетрагидрофуран, простой эфир и тому подобное, или в смеси этих растворителей, содержащей метанол, в течение от 10 мин до 6 ч, предпочтительно от 30 мин до 3 ч при -30-10°С, предпочтительно от -15 до 0°С.

Стадия 3.

Соединение (XII) может быть синтезировано с помощью реакции, в которой третичный амин, такой как триэтиламин, DIEA, пиридин и тому подобное, и дифенилфосфорилазид взаимодействуют с соединением ab в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей в течение от 0,5 до 2 ч при 20-30°С, затем в течение от 1 до 6 ч, предпочтительно от 3 до 4 ч при 40-70°С, предпочтительно при 40-60°С.

Стадия 4.

Соединение ad может быть синтезировано с помощью реакции, в которой соединение, содержащее аминогруппу, представленную как X¹, такое как первичные амины, вторичные амины, гидразин, замещенный гидразин, алкоксиамин, аминокислота и тому подобное, которое является коммерчески доступным или может быть синтезировано в соответствии с известными способами, добавляют к соединению (XII) в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей в течение от 0,1 до 24 ч, предпочтительно от 1 до 12 ч при 2070°С, предпочтительно при 20-40°С.

Стадия 5.

Соединение ае может быть синтезировано с помощью реакции, в которой добавляют воду, и PPTS добавляют к соединению ad в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей в течение от 0,1 до 24 ч, предпочтительно от 1 до 6 ч при 20-40°С, предпочтительно при 20-30°С.

Стадия 6.

Соединение af может быть синтезировано с помощью повсеместно известной реакции снятия защиты карбаматной защитной группы с соединения ае в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей.

- 5 037093

Общий способ синтеза 1-2.

Химическая формула 27

Химическая формула 28

Стадия 1.

Соединение ba может быть синтезировано с помощью реакции, в которой третичный амин, такой как триэтиламин, DIEA, пиридин и тому подобное, и N-(аллилоксикарбонилокси)сукцинимид добавляют по каплям к коммерчески доступному амфотерицину В в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей в течение от

- 6 037093

0,5 до 24 ч, предпочтительно от 1 до 5 ч при 20-30°С.

Стадия 2.

Соединение bb может быть синтезировано с помощью реакции, в которой камфорсульфоновую кислоту добавляют к соединению ba при охлаждении на льду, в растворителе, таком как тетрагидрофуран, простой эфир и тому подобное, или в смеси этих растворителей, содержащей метанол, в течение от 10 мин до 6 ч, предпочтительно от 30 мин до 3 ч при -30-10°С, предпочтительно при -15-0°С.

Стадия 3.

Соединение (XIII) может быть синтезировано с помощью реакции, в которой третичный амин, такой как триэтиламин, DIEA, пиридин и тому подобное, и дифенилфосфорилазид взаимодействуют с соединением bb в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей, в течение от 0,5 до 2 ч при 20-30°С, затем в течение от 1 до 6 ч, предпочтительно от 3 до 4 ч при 40-70°С, предпочтительно при 40-60°С.

Стадия 4.

Соединение bd может быть синтезировано с помощью реакции, в которой соединение, содержащее аминогруппу, представленную как X¹, такое как первичные амины, вторичные амины, гидразин, замещенный гидразин, алкоксиамин, аминокислота и тому подобное, которое является коммерчески доступным или может быть синтезировано в соответствии с известными способами, добавляют к соединению (XIII) в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей в течение от 0,1 до 24 ч, предпочтительно от 1 до 12 ч при 2070°С, предпочтительно при 20-40°С.

Стадия 5.

Соединение be может быть синтезировано с помощью реакции, к которой добавляют воду, и добавляют PPTS к соединению bd в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей в течение от 0,1 до 24 ч, предпочтительно от 1 до 6 ч при 20-40°С, предпочтительно при 20-30°С.

Стадия 6.

Соединение af может быть синтезировано с помощью обычной известной реакции снятия защиты карбаматной защитной группы с соединения be в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей.

Общий способ синтеза 1-3.

Химическая формула 29

- 7 037093

Химическая формула 30

Стадия 1.

Третичный амин, такой как триэтиламин, DIEA, пиридин и тому подобное, и аллилоксикарбонилхлорид добавляют по каплям к коммерчески доступному амфотерицину В в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей в течение от 0,5 до 6 ч, предпочтительно от 2 до 3 ч при 0-20°С, предпочтительно при температуре внутри реакционной смеси, равной 0-4°С. При этом может быть синтезировано ангидридное промежуточное соединение са.

Соединение (X) может быть синтезировано посредством внутримолекулярной перегруппировки группы Alloc при нагреве до 20-40°С, предпочтительно до 20-30°С в течение от 0,5 до 6 ч, предпочтительно от 2 до 4 ч.

Стадия 2.

Третичный амин, такой как триэтиламин, DIEA, пиридин и тому подобное, и дифенилфосфорилазид взаимодействуют с (X) в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей при 20-30°С в течение от 0,5 до 2 ч, затем при 40-60°С в течение от 1 до 6 ч, предпочтительно от 2 до 4 ч. При этом может быть синтезировано соединение (XI).

Соединение (XI) может также использоваться как реагент для стадии 3 реакции в одной емкости без очистки.

Стадия 3.

Соединение, содержащее аминогруппу, такое как первичные амины, вторичные амины, гидразин, замещенный гидразин, алкоксиамин, аминокислота и тому подобное, которое является коммерчески доступным или может быть синтезировано в соответствии с известными способами, добавляют к соединению (XI) в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей при -20-50°С, предпочтительно при 20-40°С в течение от 0,1 ч до 4 дней, предпочтительно от 1 до 12 ч. При этом может быть синтезировано соединение cd.

Стадия 4.

Соединение af может быть синтезировано с помощью повсеместно известной реакции снятия защиты защитной группы, такой как аллилоксикарбонильная группа соединения cd, в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей.

- 8 037093

Общий способ синтеза 2.

Химическая формула 31

Стадия 1.

Соединение ag может быть синтезировано с помощью реакции, в которой соединение, содержащее аминогруппу, такое как первичные амины, вторичные амины, гидразин, замещенный гидразин, алкоксиамин, аминокислота и тому подобное, которое является коммерчески доступным или может быть синтезировано в соответствии с известными способами, добавляют к соединению af в растворителе, таком как DMF, DIEA, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей при -20-50°С, предпочтительно при 20-40°С в течение от 0,1 ч до 4 дней, предпочтительно от 1 до 12 ч.

Как рассмотрено выше, соединение (I), имеющее группу X, представленную -N(R^F)-СО-Х¹, может быть синтезировано с использованием промежуточного соединения по настоящему изобретению (X), (XI), (XII) или (XIII) с легкостью, с высоким выходом, с небольшим количеством стадий. Различные соединения (I) могут быть синтезированы из полученного соединения (I) посредством химической модификации гидроксичасти или части сахарной цепи и тому подобное, сердцевинной структуры в соответствии с известной реакцией.

Соединение (I), представленное как X, имеющее формулу (II), может также быть синтезировано посредством индуцирования реакции с помощью карбоксигруппы или изоцианатной группы.

Общий способ синтеза.

Химическая формула 32

- 9 037093

Стадия 1.

Соединение da может быть синтезировано с помощью реакции, в которой третичный амин, такой как триэтиламин, DIEA, пиридин и тому подобное, и аллилоксикарбонилхлорид или аллилоксикарбонилхлорид сложного сукцинимидного диэфира добавляют по каплям к коммерчески доступному амфотерицину В в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей при 20-40°С, предпочтительно при 20-30°С в течение от 0,5 до 6 ч, предпочтительно от 2 до 4 ч.

Стадия 2.

Активный сложный эфир синтезируют посредством взаимодействия соединения da с третичным амином, таким как триэтиламин, DIEA, пиридин и тому подобное, и с фосфониевым конденсирующим агентом, таким как PyBOP, BOP, BrOP, PyBrBOP и тому подобное, в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей при 0-20°С, предпочтительно при 0-10°С в течение от 0,5 до 4 ч, предпочтительно от 0,5 до 1 ч. После этого соединение db может быть синтезировано с помощью реакции, в которую добавляют натрий борогидрид или его эквиваленты, восстанавливающие агенты на основе бора, и они взаимодействуют при 0-20°С, предпочтительно при 0-10°С в течение от 0,5 до 4 ч, предпочтительно от 0,5 до 1 ч.

Стадия 3.

Соединение dc может быть синтезировано с помощью обычной известной реакции снятия защиты аллилоксикарбонильной группы с соединения db в растворителе, таком как DMF, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей.

Стадия 4.

Соединение dd может быть синтезировано с помощью реакции, в которой соединение, содержащее аминогруппу, такое как первичные амины, вторичные амины, гидразин, замещенный гидразин, алкоксиамин, аминокислота и тому подобное, которое является коммерчески доступным или может быть синтезировано в соответствии с известными способами, добавляют к соединению dc в растворителе, таком как DMF, DIEA, DMA, NMP, дихлорметан, тетрагидрофуран, ацетонитрил и тому подобное, или в смеси этих растворителей при -20-50°С, предпочтительно при 20-40°С в течение от 0,1 ч до 4 дней, предпочтительно от 1 до 12 ч.

Примеры

Настоящее изобретение будет описываться более подробно со ссылками на следующие далее примеры, справочные примеры и примеры исследований, но, не ограничиваясь этим.

Анализ ЯМР каждого примера осуществляют при 300 МГц с использованием DMSO-d₆ или CDCl₃.

Справочный пример 1. Синтез соединения Ш-а.

Химическая формула 33

- 10 037093

Стадия 1. Синтез соединения I-а.

Амфотерицин В (5 г, 5,41 ммоль) растворяют в DMF (25 мл) и добавляют триэтиламин (10 мл, 72,1 ммоль) и К-[2-(триметилсилил)этоксикарбонилокси]сукцинимид (3,51 г, 13,5 ммоль) и смесь перемешивают в течение одного часа при комнатной температуре. Добавляют простой диизопропиловый эфир и ацетонитрил и полученные в результате твердые продукты отфильтровывают. Соединение I-а (7,11 г) получают в виде сырого продукта посредством выпаривания в вакууме.

[M+Na]+=1090.

Стадия 2. Синтез соединения II-а.

Соединение I-а (2 г, 1,87 ммоль) растворяют в метаноле (20 мл) и перемешивают в течение 10 мин на ледяной бане. Добавляют камфорсульфоновую кислоту (0,609 г, 2,62 ммоль) и перемешивают в течение одного часа на ледяной бане. Метанол удаляют посредством выпаривания в вакууме и остаток растворяют в небольшом количестве метанола. Полученный в результате метанольный раствор добавляют по каплям к простому диизопропиловому эфиру (500 мл) с получением соединения II-а (1, 8 г, 89%).

Стадия 3. Синтез соединения Ш-а.

Соединение II-а (1,8 г, 1,66 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют дифенилфосфорилазид (1,075 мл, 4,99 ммоль) и триметиламин (1,2 мл, 8,32 ммоль) и смесь перемешивают в течение одного часа при комнатной температуре, а затем еще 3 ч при 40°С. Реакционную смесь преобразуют в порошок посредством добавления по каплям к смеси растворителей простого диизопропилового эфира и метанола. Полученный в результате остаток отфильтровывают с получением соединения Ш-а (1,37 г, 76%).

[M+Na] +=1101.

Справочный пример 2. Синтез соединения III-b.

Химическая формула 34

Стадия 1. Синтез соединения I-b.

Амфотерицин В (10,07 г, 10,9 ммоль) растворяют в N-метилпирролидоне (50 мл) и метаноле (50 мл) и добавляют N,N-диизопропилэтиламин (5,7 мл, 32,7 ммоль) и Alloc-OSu (2,6 г, 13,1 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч 30 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь добавляют к простому диизопропиловому эфиру/метанолу (10/1, 550 мл) и энергично перемешивают. Осажденный порошок отфильтровывают. Полученные в результате твердые продукты промывают простым изопропиловым эфиром и выпаривают в вакууме с получением соединения I-b (11,58 г) в виде сырого продукта. Время удерживания соединения I-b составляет 10,4 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-В7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм). Время удерживания исходных материалов амфотерицина В составляет 8,6 мин при таких же условиях.

[M+Na]+=1032,5.

- 11 037093

Стадия 2. Синтез соединения II-b.

Соединение I-b (9,8 г, 7,78 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (150 мл) и метаноле (150 мл) и охлаждают до 0°С. Добавляют камфорсульфоновую кислоту (1,5 г, 6,45 ммоль) на ледяной бане и смесь перемешивают в течение 2 ч 30 мин. Добавляют триэтиламин (1,12 мл, 6,45 ммоль) и реакцию гасят. Смесь выпаривают в вакууме до 50 мл с помощью роторного испарителя. Концентрированный раствор добавляют по каплям к смеси простой диэтиловый эфир/гексан (1/1, 1 л) при перемешивании. Полученные в результате твердые продукты отфильтровывают с получением соединения II-b (желтый порошок, 12,48 г). Время удерживания соединения II-b составляет 8,5 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-В7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

Стадия 3 Синтез соединения III-b.

Соединение II-b (7,17 г, 7,01 ммоль) растворяют в DMF (36 мл) и добавляют DIEA (7,35 мл, 42,1 ммоль) и дифенилфосфорилазид (4,52 мл, 21,4 ммоль) и смесь перемешивают в течение еще 1 ч при комнатной температуре, а затем перемешивают 3 ч при 50°С. Реакционную смесь добавляют по каплям к смеси растворителей простого диизопропилового эфира и метанола (10/1, 525 мл) с получением порошка. Полученные в результате твердые продукты отфильтровывают с получением соединения III-b (4,85 г, 87%). Время удерживания составляет 8,1 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-В7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

[M+Na]+=1041,4.

Справочный пример 3-1. Синтез соединения I-A и соединения II-A.

Химическая формула 35

Стадия 1. Синтез соединения I-A.

Амфотерицин В (5 г, 5,41 ммоль) растворяют в DMF (50 мл), с последующим добавлением DIEA (10 мл, 27,1 ммоль). Аллилоксикарбонилхлорид (3,51 г, 13,5 ммоль) добавляют по каплям при температуре 4°С или ниже под контролем и смесь перемешивают в течение 2 ч 50 мин на ледяной бане. После нагрева до комнатной температуры смесь перемешивают в течение 4 ч. Смесь добавляют по каплям к смеси растворителей из простого диизопропилового эфира/метанола (4/1, 500 мл). После чего смесь инкубируют при комнатной температуре, полученные твердые продукты отфильтровывают с получением соединения I-A (5,85 г). Время удерживания составляет 12,4 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-B7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

[М+Н]+=1093,9.

Стадия 2. Синтез соединения II-A.

Соединение I-A (5,28 г, 4,83 ммоль) растворяют в DMA (25 мл) с последующим добавлением DIEA (1,26 мл, 7,25 ммоль). Добавляют дифенилфосфорилазид (1,56 мл, 7,25 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч 20 мин при комнатной температуре и в дополнение к этому ее перемешивают в течение 2 ч при 50°С. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляют ацетонитрилом (25 мл) и добавляют простой диизопропиловый эфир (350 мл) . Полученные в результате твердые про- 12 037093 дукты отфильтровывают с получением соединения II-А (5,01 г) в виде желтого порошка. Время удерживания составляет 12,5 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая

0,1% PIC-B7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

Инфракрасная спектроскопия поглощения (ИК-спектр): 2141,85 (см^-1).

Элементный анализ: (C55H80N2O20)(C3H7NO)3,5(Н2О)1.

Вычисленное значение: С 57,72; Н 7,88; N 5,65 (%).

Реальное значение: С 57,81; Н 7,31; N 6,03 (%).

Справочный пример 3-2. Синтез соединения I-B, соединения II-B и соединения III-B

Химическая формула 36

Химическая формула 37

- 13 037093

Стадия 1. Синтез соединения I-B.

Амфотерицин В (10,00 г, 10,82 ммоль) растворяют в DMA (78 мл) с последующим добавлением DIEA (2,53 г, 19,58 ммоль). Добавляют осторожно по каплям 9-флуоренилметилоксикарбонилхлорид (5,32 г, 20,6 ммоль) при температуре 4°С или ниже под контролем на ледяной бане. После нагрева до комнатной температуры смесь перемешивают в течение 1 ч 30 мин. После чего смесь добавляют к смеси растворителей ацетонитрила (100 мл) и DMA (3,6 мл), добавляют по каплям простой диизопропиловый эфир (500 мл). Смесь инкубируют при комнатной температуре и фильтруют с получением сырого соединения I-B (15,92 г, 11,63 ммоль).

Стадия 2. Синтез соединения II-B.

Соединение I-B (10,00 г, 7,31 ммоль) растворяют в DMA (50 мл) и добавляют триметиламин (0,506 мл, 3,65 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч 40 мин при комнатной температуре. После добавления ацетонитрила (50 мл) добавляют по каплям простой диизопропиловый эфир (500 мл). После инкубирования при комнатной температуре полученный порошок отфильтровывают с получением сырого соединения II-B (8,79 г, 6,42 ммоль). Сырое соединение II-В (4,50 г, 3,29 ммоль) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с использованием смеси хлороформ/метанол (89/11) с получением соединения II-B (2,02 г, 1,48 ммоль). Время удерживания составляет 16,7 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь ацетонитрил/дистиллированная вода, содержащая 0,1% муравьиную кислоту=градиент от 20/80 до 90/10, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

[M+Na]+=1392.

Стадия 3. Синтез соединения III-B.

Соединение II-B (1,50 г, 1,10 ммоль) растворяют в THF/DMA (1/4, 7,5 мл) с последующим добавлением DIEA (325,5 мкл, 1,86 ммоль). Добавляют дифенилфосфорилазид (400,5 мкл, 1,86 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре, в дополнение к этому ее перемешивают в течение 9,5 ч при 40°С. После охлаждения до комнатной температуры добавляют по каплям ацетонитрил (25 мл). После инкубирования при комнатной температуре полученный порошок отфильтровывают с получением желтого порошка соединения III-B (0,59 г, 0,435 ммоль). Время удерживания составляет 17,2 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% муравьиной кислоты=градиент от 20/80 до 90/10, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

Инфракрасная спектроскопия поглощения (ИК-спектр): 2143 или 2165 (см^-1).

Пример 1. Синтез соединения I-1.

Химическая формула 38

ОАс АсОжфлОАс л ^А^А^ОАс АсО О ОАс

ОН

Стадия 1 Синтез соединения 1.

Пентаацетилманнозу (4 г, 10,25 ммоль) и N-бензилоксикарбониламинопропанол (4,29 г, 20,49 ммоль) растворяют в дихлорметане (20 мл) и добавляют комплекс трифторида бора и простого диэтилового эфира (10,39 мл, 82 ммоль) и смесь перемешивают в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем реакцию гасят посредством добавления насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и раствора 2 моль/л гидроксида натрия, реакционную смесь экстрагируют этилацетатом и органическую фазу промывают водой и насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан-этилацетат) с получением соединения 1 (2,55 г, 46%).

TLC (тонкослойная хроматография): Rf=0,3 (гексан/этилацетат=1/1).

Стадия 2. Синтез соединения 2.

Соединение 1 (2,55 г, 4,73 ммоль) растворяют в метаноле (10 мл), добавляют метоксид натрия (5,2 моль/л, 1,8 мл, 9,45 ммоль) и смесь перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре. После исчезновения исходных материалов добавляют Dowex, и смесь фильтруют и концентрируют и очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат, метанол) с получением соединения 2 (1,3 г, 74%).

TLC: Rf=0,2 (хлороформ/метанол=4/1).

Стадия 3. Синтез соединения 3.

Соединение (1,3 г, 3,5 ммоль) растворяют в метаноле (20 мл) и добавляют 5% Pd-C (373 мг, 0,175 ммоль) и смесь перемешивают в течение 15 ч при давлении водорода 1 атм. Смесь фильтруют и концен- 14 037093 трируют с получением 3-аминопропил-β-D-маннопиранозида (соединение 3, 840 мг). Сырое соединение используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Химическая формула 39

nh₂

Стадия 4. Синтез соединения I-1.

Соединение Ш-а (500 мг, 0,463 ммоль) и 3-аминопропил-в -D- маннопиранозид (соединение 3) (154 мг, 0,649 ммоль) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют DIEA (0,405 мл, 2,32 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре, а затем перемешивают в течение еще 2 дней при 40°С, а затем перемешивают в течение еще 6 ч при 55 °С. После исчезновения исходных материалов добавляют простой диизопропиловый эфир с получением порошка. Получают сырое соединение 4 (497 мг). Соединение 4 (470 мг, 0,357 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (3 мл), воде (3 мл) и DMF (0,3 мл) и добавляют PPTS (269 мг, 1,07 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Добавляют простой диизопропиловый эфир для образования порошка с получением сырого соединения 5 (465 мг). Полученное в результате соединение 5 (465 мг, 0,357 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (6 мл) и DMF (3 мл) и добавляют TBAF (1 моль/л, 1,78 мл) и смесь перемешивают в течение 3 дней при комнатной температуре. Из смеси удаляют масло посредством добавления простого диизопропилового эфира и очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=50/50/5-20/80/8). Полученные в результате твердые продукты снова растворяют в DMF (1 мл) и добавляют простой диизопропиловый эфир для отверждения. Получают соединение I-1 (44 мг, общий выход 8%).

LC/MS: 1158,6 [М+Н]+.

Элементный анализ: C56H91N3O22(C3H7N)0,9(Н2О)7,1.

Вычисленное значение: С 52,78; Н 8,40; N 4,09 (%).

Реальное значение: С 52,71; Н 8,40; N 4,08 (%).

Пример 2. Синтез соединения 1-3.

- 15 037093

Химическая формула 40

Соединение III-а (420 мг, 0,389 ммоль) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют 3-аминопропанол (175 мг, 2,34 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Из смеси удаляют масло посредством добавления простого диизопропилового эфира с получением сырого соединения 6 (365 мг) . Соединение 6 растворяют в тетрагидрофуране (2 мл), DMF (1 мл) и воде (0,5 мл) и добавляют PPTS (238 мг, 0,948 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Соединение 7 (360 мг) получают посредством добавления простого диизопропилового эфира с образованием порошка. Соединение 7 растворяют в DMF (5 мл) и добавляют TBAF (1 моль/л, 3,16 мл, 10 экв.) и смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После того как из реакционной смеси удаляют масло посредством добавления простого диизопропилового эфира, смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения I-3 (110 мг, общий выход 28%).

LC/MS: 996,9 [М+Н]+.

Элементный анализ: C50H81N3O17(C3H7NO)1(Н2О)4,3.

Вычисленное значение: С 55,51; Н 8,49; N 4,89 (%).

Реальное значение: С 55,53; Н 8,61; N 4,98 (%).

Пример 3. Синтез соединения I-4.

Химическая формула 41

- 16 037093

Соединение Ш-а (400 мг, 0,371 ммоль) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют 3фторпропаноламингидрохлорид (168 мг, 1,48 ммоль) и триметиламин (0,2 мл, 1,48 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Добавляют диизопропилэтиламин (0,26 мл, 1,48 ммоль) и смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. Сырое соединение 8 (260 мг, 0,225 ммоль) получают посредством добавления простого диизопропилового эфира для удаления масла. Соединение 8 (260 мг, 0,225 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (2 мл), DMF (1 мл) и воде (0,5 мл) и добавляют PPTS (169 мг, 0,674 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученное соединение 9 после добавления простого диизопропилового эфира для удаления масла используют на следующей стадии без дополнительной очистки. Соединение 9 (257 мг) растворяют в DMF (3 мл) и добавляют TBAF (1 моль/л, 2,2 мл) и смесь перемешивают в течение 24 ч при комнатной температуре. Из смеси удаляют масло посредством добавления простого диизопропилового эфира и ее очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения I-4 (54 мг, общий выход 15%).

LC/MS: 998,5 [М+Н]+.

Элементный анализ: (C50H80FN3O16)(C3H7NO)(Н2О)3.

Вычисленное значение: С 56,57; Н 8,33; N 4,98; F 1,69 (%).

Реальное значение: С 56,20; Н 8,64; N 4,94; F 2,16 (%).

Пример 4. Синтез соединения I-19.

Химическая формула 42

nh₂

Соединение III-b (2 г, 1,96 ммоль) растворяют в DMA (20 мл) и добавляют DIEA (2 мл, 11,7 ммоль) и ацетогидразид (0,58 г, 7,85 ммоль) и смесь перемешивают в течение 12 ч при 70°С. После преобразования в порошок с помощью смеси простой диизопропиловый эфир/метанол сырое соединение 10 (1,79 г) отфильтровывают. Сырое соединение 10 используют на следующей стадии без дополнительной очистки. Соединение 10 (1,79 г, 1,64 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (10 мл), DMF (5 мл) и воде (1,25 мл) и добавляют PPTS (2,05 г, 8,19 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакцию гасят триметиламином (1,36 мл, 9,82 ммоль). После концентрирования из смеси удаляют масло посредством добавления простого диизопропилового эфира. Смесь растворяют в хлороформе и метаноле. После добавления аминосиликагеля смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=80/20/2) с получением соединения 11 (2 95 мг, 17%). Соединение 11 (2 95 мг, 0,27 ммоль) растворяют в DMF (3 мл) и добавляют морфолин (0,24 мл, 2,7 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (93 мг, 0,091 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления смеси простой диизопропиловый эфир/метанол (10/1) получают соединение I-19 (160 мг, 59%) с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=90/10/1-4 0/60/6).

LC-MS (жидкостная хроматография - масс-спектрометрия: m/z 995,5 [М+Н]+.

Элементный анализ: (C49H78N4O17)(C3H7NO)(Н2О)3,7.

Вычисленное значение: С 55,03; Н 8,21; N 6,17 (%).

Реальное значение: С 54,97; Н 8,15; N 6,53 (%).

- 17 037093

Пример 5. Синтез соединения I-36.

Химическая формула 43

Стадия 1.

Соединение III-b (3,08 г, 1,87 ммоль) растворяют в DMA (20 мл) и добавляют аммиак (2 моль/л, метанольный раствор, 15 мл, 30 ммоль) и смесь перемешивают в течение 3 ч 20 мин при комнатной температуре. В дополнение к этому добавляют аммиак (2 моль/л, метанольный раствор, 15 мл, 30 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч 30 мин при 45 °С. К реакционной смеси добавляют смесь простой диизопропиловый эфир/метанол (10/1, 400 мл) с получением желтого порошка (2,14 г). Полученный в результате порошок растворяют в тетрагидрофуране (10 мл), DMF (5 мл) и воде (2,5 мл) и добавляют PPTS (0,778 г, 3,1 ммоль) и смесь перемешивают в течение 5 ч при комнатной температуре. Реакцию гасят посредством добавления триметиламина (0,429 мл, 3,1 ммоль). Реакционную смесь добавляют к смеси гексан/простой диэтиловый эфир (1/1, 1 л) с получением сырого соединения 12 (1,84 г) посредством преобразования в порошок. Время удерживания составляет 9,5 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-B7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

Стадия 2.

Соединение 12 (1,844 г, 1,804 ммоль) растворяют в DMF (11 мл) и добавляют DMF (11 мл), морфолин (0,47 мл, 0,54 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (104 мг, 0,009 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира смесь очищают посредством хроматографии с обращенной фазой (HP20ss, водный раствор хлористоводородной кислоты (0,5 мМ)/ацетонитрил=100/0-70/30). После лиофилизации получают соединение I-36 (126 мг, 8%). Время удерживания составляет 6,7 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-B7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

LC-MS: m/z 938,5 [М+Н]+.

Элементный анализ: (С47Н75Х3016)(НС1)0,7(Н2О)6.

Вычисленное значение: С 52,67; Н 8,25; N 3,92; Cl 2,32.

Реальное значение: С 52,97; Н 8,01; N 4,01; Cl 2,62.

- 18 037093

Пример 6. Синтез соединения I-40.

Химическая формула 44

Соединение I-А (1 г, 0,916 ммоль) растворяют в DMA (10 мл) и добавляют DIEA (0,24 мл, 1,37 ммоль) и дифенилфосфорилазид (0,295 мл, 1,37 ммоль) и смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. После преобразования в азид кислоты осуществляют перегруппировку Куртиуса посредством перемешивания в течение 30 мин при 50°С. Добавляют 2-аминопропан-1,3-диол (250 мг, 2,75 ммоль) и осуществляют его взаимодействие с генерируемым в реакционной смеси изоцианатом, и реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин. После удаления масла из смеси посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0, 5-50/50/5) с получением соединения 13 (180 мг, 17%). Соединение 13 (180 мг, 0,152 ммоль) растворяют в DMF (2 мл) и добавляют морфолин (0,13 мл, 1,52 ммоль) и Pd(PPh₃)4 (17 мг, 0,015 ммоль) и смесь перемешивают в течение 40 мин при комнатной температуре. В дополнение к этому добавляют Pd(PPh₃)₄ (17 мг, 0,015 ммоль) и смесь перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления смеси простой диизопропиловый эфир/метанол (10/1) смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=90/10/150/50/5) с получением соединения I-40 (76 мг, 49%).

LC-MS: 1012,4 [М+Н]⁺, 1034,5 [M+Na]⁺.

Элементный анализ: C50H81N3O18(C3H7NO)1,3(Н2О)4,1.

Вычисленное значение: С 54,81; Н 8,39; N 5,10 (%).

Реальное значение: С 54,85; Н 8,34; N 5,08 (%).

Пример 7. Синтез соединения I-59.

Химическая формула 45

Стадия 1.

Соединение I-A (500 мг, 0,458 ммоль) растворяют в DMF (1,5 мл) и добавляют DIEA (0,096 мл,

- 19 037093

0,549 ммоль) и дифенилфосфорилазид (0,118 мл, 0,549 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч 10 мин при комнатной температуре, в дополнение к этому ее перемешивают в течение 40 мин при 50°С. Добавляют О-метилгидроксиламин гидрохлорид (76 мг, 0,916 ммоль) и DIEA (0,19 мл, 1,1 ммоль) и смесь перемешивают в течение 80 мин при 50°С. После удаления масла из смеси посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0,5-85/15/1,5, содержащая 0,2% триэтиламин) с получением соединения 14 (163 мг, 17%).

LC-MS: 1158,5 [M+Na]+.

Стадия 2.

Соединение 14 (163 мг, 0,143 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (4 мл) и добавляют воду (0,4 мл). Добавляют морфолин (0,125 мл, 1,435 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (8 мг, 0,007 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. После концентрирования смесь выпаривают в вакууме. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения I-59 (60 мг, 43%).

LC-MS: m/z 968,5 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: C48H77N3O17(Н2О)3,5.

Вычисленное значение: С 55,91; Н 8,21; N 4,07 (%).

Реальное значение: С 55,95; Н 8,13; N 4,21 (%).

Пример 8. Синтез соединения I-65.

Химическая формула 46

трет-Бутанол (2,4 мл, 24,9 ммоль) растворяют в дихлорметане (20 мл) и охлаждают до -15°С. Добавляют хлорсульфонилизоцианат (2,2 мл, 24,9 ммоль) и смесь перемешивают в течение 5 мин при -15°С в качестве раствора А. С другой стороны, трет-бутил 2-аминоэтилкарбамат (2 г, 12,5 ммоль) растворяют в дихлорметане (20 мл), добавляют триэтиламин (1,7 мл, 12,5 ммоль) и охлаждают до -30°С. Раствор А добавляют к реакционной смеси, смесь перемешивают в течение 1 ч при -15°С с помощью контроля внутренней температуры. После гашения реакции с помощью насыщенного водного раствора аммония хлорида дихлорметан удаляют посредством выпаривания в вакууме и смесь экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают насыщенным раствором соли, сушат над сульфатом магния и фильтруют. Смесь конденсируют и фильтруют с получением соединения 15 (2,6 г, 61%). Соединение 15 растворяют в дихлорметане (20 мл) и добавляют смесь хлористоводородная кислота-диоксан (4 моль/л, 11,5 мл, 4 6 ммоль) и смесь перемешивают в течение 4 ч при комнатной температуре. Смесь конденсируют с получением соединения 16 (1,345 г, 7,66 ммоль).

Химическая формула 47

Соединение I-А (2,5 г, 2,289 ммоль) растворяют в DMA (12 мл) и добавляют DIE A (0,6 мл, 3,43 ммоль) и дифенилфосфорилазид (0,74 мл, 3,43 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре, в дополнение к этому ее перемешивают в течение 1 ч при 50°С. Раствор 2

- 20 037093 сульфамоиламиноэтиламина гидрохлорида (соединение 16, 1,345 г, 7,66 ммоль) и DIEA (1,6 мл, 9,16 ммоль) в DMA добавляют к смеси и смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Из смеси удаляют масло посредством добавления простого диизопропилового эфира и очищают ее с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0, 5-80/20/2) с получением соединения 17 (250 мг, 9%). Соединение 17 (250 мг) растворяют в DMF (3 мл) и добавляют морфолин (0,177 мл, 2,03 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (24 мг, 0,02 ммоль) и смесь перемешивают в течение одного часа при комнатной температуре. После преобразования в порошок с помощью смеси простой диизопропиловый эфир/метанол (10/1) полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-50/50/5) с получением соединения I-65 (216 мг, 62%).

LC-MS: m/z 1060,5 [М+Н]⁺, 1082,5 [M+Na]⁺.

Элементный анализ: C49H81N5O18S(Н2О)3,4(C3H7NO)0,4.

Вычисленное значение: С 52,40; Н 7,94; N 6,57; S 2,79 (%).

Реальное значение: С 52,40; Н 7,82; N 6,60; S 2,63 (%).

Пример 9. Синтез соединения I-47.

Химическая формула 48

растворяют в DMA

Соединение I-А (1 г, 0,916 ммоль) (5 мл) и добавляют DIEA (0,24 мл, 1,37 ммоль) и дифенилфосфорилазид (0,295 мл, 1,37 ммоль) и смесь перемешивают в течение 40 мин при комнатной температуре, в дополнение к этому ее перемешивают в течение 1 ч при 50°С. Добавляют метоксикарбонилгидразин (247 мг, 2,75 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Из смеси удаляют масло с помощью простого диизопропилового эфира и очищают ее с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0, 5-80/20/2) с получением соединения 18 (311 мг, 29%). Соединение 18 (311 мг, 0,264 ммоль) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют морфолин (0,46 мл, 5,2 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (61 мг, 0,052 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок с помощью смеси простой диизопропиловый эфир/метанол (10/1) полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-50/50/5) с получением соединения I-47 (89 мг, 33%).

LC-MS: m/z 1011,4 [М+Н]+, 1033,4 [M+Na]⁺.

Элементный анализ: (C49H78N4O18)(C3H7NO)(Н2О)4.

Вычисленное значение: С 54,01; Н 8,11; N 6,06 (%).

Реальное значение: С 54,00; Н 8,02; N 6,22 (%).

Пример 10. Синтез соединения I-78.

Химическая формула 49

Стадия 1. Синтез соединения 19.

1-Аллил 2-трет-бутил гидразин-1,2-дикарбоксилат (8,06 г, 37,3 ммоль) растворяют в дихлорметане (100 мл) и добавляют смесь гидрохлорид-диоксан (4 моль/л, 28 мл), смесь перемешивают в течение 4 ч

- 21 037093 при комнатной температуре. Полученный в результате преципитат отфильтровывают с получением Alloc гидразина гидрохлорида (5,2 г, 91%). Полученный в результате Alloc гидразин гидрохлорид (4 г, 2 6,2 ммоль) растворяют в этаноле и добавляют ацетофенон (4,6 мл, 39,3 ммоль) и смесь перемешивают в течение 6 ч при нагреве с обратным холодильником. После выпаривания в вакууме добавляют этилацетат и воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Затем органическую фазу промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия, органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и конденсируют. Полученные в результате твердые продукты промывают гексаном с получением соединения 19 (3,2 г, 56%).

Стадия 2. Синтез соединения 20.

Соединение 19 (1,9 г, 8,71 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (40 мл) . После добавления гидрида натрия на ледяной бане (60%, 3,48 г, 87 ммоль) добавляют 2-бромэтилдиметиламин (7,94 г, 52,2 ммоль) и смесь перемешивают в течение 6 дней. После гашения реакции посредством добавления воды реакционную смесь экстрагируют дихлорметаном. После промывки органической фазы насыщенным раствором соли органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и конденсируют. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии с получением соединения 20 (2,17 г, 86%).

Стадия 3. Синтез соединения 21.

Соединение 20 (2,16 г, 7,46 ммоль) растворяют в дихлорметане (10 мл) и метаноле (2 мл) и добавляют смесь хлористоводородная кислота - диоксан (4 моль/л, 5,6 мл). После перемешивания смеси смесь конденсируют. После растворения полученного в результате остатка в метаноле из смеси удаляют масло посредством добавления простого диизопропилового эфира с получением сырого соединения 21 (1,43 г). Сырое соединение 21 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Химическая формула 50

Соединение I-А (2 г, 1,83 ммоль) растворяют в DMA (5 мл) и добавляют DIEA (0,48 мл, 2,75 ммоль) и дифенилфосфорилазид (0,591 мл, 2,75 ммоль), смесь перемешивают в течение 2 ч 30 мин при комнатной температуре, в дополнение к этому ее перемешивают при нагреве в течение 2 ч при 50°С. Добавляют DIEA (1,92 мл,10,99 ммоль) и аллил 1-(2-(диметиламино)этил)гидразин-1-карбоксилат гидрохлорид 21 (1,43 г, 5,49 ммоль) и смесь перемешивают в течение 50 мин при комнатной температуре. Из смеси удаляют масло посредством добавления простого диизопропилового эфира. Полученные в результате смолистые твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0,5-80/20/2) с получением соединения 22 (960 мг, 41%). Соединение 22 (960 мг, 0,752 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют морфолин (0,65 мл, 7,52 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (87 мг, 0,0075 ммоль) и смесь перемешивают в течение 90 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок с помощью простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-20/80/8) с получением соединения I-78 (156 мг, 20%).

LC-MS: m/z 1024,5 [М+Н]+.

Элементный анализ: C51H85N5O16(C3H7NO)0,7(H2O)3,4.

Вычисленное значение: С 56,11; Н 8,57; N 7,02 (%).

Реальное значение: С 56,12; Н 8,45; N 7,02 (%).

- 22 037093

Пример 11. Синтез соединения I-70.

Химическая формула 51

Стадия 1. Синтез соединения 22.

2-(2-Аминоэтокси)изоиндолин-1,3-дион гидрохлорид (717 мг, 2,95 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (10 мл), и добавляют DIEA (0,542 мл, 3,10 ммоль) и N,N'-ди-Вос-1Н-пиразол-1-карбоксамидин (963 мг, 3,10 ммоль), смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. После добавления DMF (10 мл) смесь перемешивают в течение 20 ч, в дополнение к этому ее перемешивают в течение 3 ч 40 мин при 60°С. Реакцию гасят насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, и смесь экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой и насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и конденсируют. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=3/1) с получением соединения 22 (856 мг, 65%, белый пенистый твердый продукт).

TLC: Rf=0,3 (гексан/этилацетат=3/1).

Стадия 2. Синтез соединения 23.

Соединение 22 (427 мг, 0,952 ммоль) растворяют в дихлорметане (5 мл) и добавляют метилгидразин (0,053 мл, 1,00 ммоль) и смесь перемешивают в течение 4 ч 40 мин при комнатной температуре. После удаления полученных в результате белых твердых продукты посредством фильтрования полученный в результате фильтрат конденсируют с получением белой маслянистой жидкости. Полученную в результате жидкость очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=3/1-1/1) с получением соединения 23 (180 мг, 59%, бесцветная и прозрачная жидкость).

TLC: Rf=0,3 (гексан/этилацетат=1/1).

LC-MS: 319,4 [М+Н]+.

Стадия 3. Синтез соединения 24.

Соединение 23 (180 мг, 0,565 ммоль) растворяют в смеси хлористоводородная кислота - диоксан (4 моль/л, 1,4 мл) и смесь перемешивают в течение 1 ч 40 мин при комнатной температуре. После подтверждения исчезновения исходных материалов с помощью TLC растворитель удаляют посредством выпаривания в вакууме. Полученные в результате смолистые твердые продукты промывают гексаном и сушат в вакууме с получением соединения 24 (182 мг). Соединение 24 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Химическая формула 52

Стадия 1. Синтез соединения 25.

Соединение I-A (500 мг, 0,458 ммоль) растворяют в DMF (2 мл) и добавляют DIEA (0,088 мл, 0,504 ммоль) и дифенилфосфорилазид (0,108 мл, 0,504 ммоль), смесь перемешивают в течение 90 мин при комнатной температуре, в дополнение к этому ее перемешивают в течение 30 мин при 50°С. Добавляют DIEA (0,088 мл, 0,504 ммоль) и 2-гуанидинилэтилоксиамин дигидрохлорид (соединение 24, 163 мг, 0,504 ммоль), смесь перемешивают в течение 1 ч 40 мин при 50°С. Из смеси удаляют масло посредством до- 23 037093 бавления простого диизопропилового эфира и сушат посредством выпаривания в вакууме. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=90/10/1-85/15/1,5) с получением соединения 25 (209 мг, 38%).

LC-MS: m/z 1208,6 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Синтез соединения I-70.

Соединение 25 (200 мг, 0,166 ммоль) растворяют в DMF (5 мл) и морфолине (0,10 мл, 1,16 ммоль) и добавляют Pd(PPh₃)₄ (19,1 мг, 0,017 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок с помощью простого диизопропилового эфира полученный в результате остаток очищают посредством хроматографии с обращенной фазой (HP20ss, смесь ацетонитрил/водный раствор, содержащий 0,05% муравьиную кислоту=10/90-30/70) с получением соединения I70 (37 мг, 21%).

LC-MS: m/z 1039,5 [М+Н]⁺.

Пример 12. Синтез соединения I-99.

Химическая формула 53

Соединение I-A (1 г, 0,916 ммоль) растворяют в DMF (8 мл) и добавляют DIEA (0,24 мл, 1,373 ммоль) и дифенилфосфорилазид (0,295 мл, 1,373 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Добавляют 2-амино-2-(гидроксиметил)пропан-1,3-диол (222 мг, 1,831 ммоль) и смесь перемешивают в течение 30 мин при 50°С. Из смеси удаляют масло посредством добавления простого диизопропилового эфира, и полученный в результате остаток сушат посредством выпаривания в вакууме. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3) с получением желтого порошка (262 мг, 24%).

LC-MS: m/z 1211,2[М+Н]+.

Полученный в результате желтый порошок растворяют в DMF (5 мл) и добавляют морфолин (0,19 мл, 2,17 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (25 мг, 0,022 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок с помощью простого диизопропилового эфира, полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=60/40/4) с получением соединения I-99 (110 мг, 48%).

LC-MS: m/z 1042,5 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: (C51H83N3O19)(C3H7NO)0,9(Н2О)2.

Вычисленное значение: С 56,38; Н 8,22; N 4,77 (%).

Реальное значение: С 56,16; Н 8,22; N 5,08 (%).

Пример 13. Синтез соединения I-101.

Химическая формула 54

- 24 037093

Соединение I-А (1 г, 0,916 ммоль) растворяют в DMA (5 мл) и добавляют DIEA (0,24 мл, 1,37 ммоль) и дифенилфосфорилазид (0,295 мл, 1,37 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре, в дополнение к этому ее перемешивают в течение 2 ч при 50°С. Добавляют 3аминобензамидо (374 мг, 2,753 ммоль) и бис-трибутилолово оксид (0,465 мл, 0,915 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч. Полученный в результате декантирования с добавлением простого диизопропилового эфира остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (CHCl₃/MeOH/H2O=80/20/2) с получением соединения 26 (160 мг, 14%). Соединение 26 (160 мг, 0,131 ммоль) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют морфолин (0,114 мл, 1,31 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (15 мг, 0,013 ммоль) и смесь перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, хлороформ/метанол/вода=90/10/1-70/30/3) с получением соединения I-101 (59 мг, 43%).

LC/MS: m/z 1057,6 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: C54H80N4O17(C3H7NO)0,4(Н2О)3,7.

Вычисленное значение: С 57,50; Н 7,88; N 5,34 (%).

Реальное значение: С 57,46; Н 7,83; N 5,37 (%).

Пример 14. Синтез соединения I-41.

Химическая формула 55

Соединение II-A (3 г, 2,75 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют циклопропанамин (157 мг, 2,75 ммоль), смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Из смеси удаляют масло с помощью простого диизопропилового эфира. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол=70/30) с получением соединения 14 (1 г, 31%). Соединение 14 (1 г) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют морфолин (0,76 мл, 8,72 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (50 мг, 0,044 ммоль), смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления смеси простой диизопропиловый эфир/метанол (10/1) полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-30/70/7) с получением соединения I-41 (159 мг, 19%).

LC-MS: m/z 978,3 [М+Н]+, 1000,4 [M+Na]+.

Элементный анализ: С50Н79К3016(СЗН7КО)0,7(Н2О)2, 2, [С52,1Н88,ЗКЗ,7О18,9].

FW: 1068,97.

Вычисленное значение: С 58,54; Н 8,33; N 4,85 (%).

Реальное значение: С 58,52; Н 8,25; N 4,83 (%).

Пример 15. Синтез соединения I-5.

Химическая формула 56

Соединение II-A (6 г, 5,5 ммоль) растворяют в DMA и добавляют гистамин (918 мг, 8,26 ммоль) и смесь перемешивают в течение нескольких часов при комнатной температуре. После удаления масла из

- 25 037093 смеси с помощью простого диизопропилового эфира полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Полученный в результате порошок (1,12 г) растворяют в DMA (8 мл) и добавляют морфолин (0,81 мл, 9,3 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (54 мг, 0,047 ммоль) и смесь перемешивают в течение 20 мин в атмосфере азота. После преобразования в порошок полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода) с получением соединения I-5 (370 мг, 6%).

LC-MS: m/z 1032,5 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: С52Н81№О16(С3НЖО)0,2(Н2О)2,5.

Вычисленное значение: С 57,86; Н 8,07; N 6,67 (%).

Реальное значение: С 57,87; Н 8,07; N 6,71 (%).

Пример 16. Синтез соединения I-56.

Химическая формула 57

Соединение II-A (13,1 г, 12,03 ммоль) растворяют в DMF (65 мл) и добавляют метансульфонилгидразин гидрохлорид (2,645 г, 18,04 ммоль) и DIEA (6,3 мл, 36,1 ммоль) и смесь перемешивают в течение 4 ч 25 мин при комнатной температуре. После удаления масла из смеси с помощью простого диизопропилового эфира полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода) с получением желтого порошка (1,05 г, 0,875 ммоль). Желтый порошок растворяют в DMF (10 мл) и добавляют морфолин (0,53 мл, 6,13 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (51 мг, 0,044 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. После преобразования смеси в порошок с помощью простого диизопропилового эфира смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=50/50/5) с получением соединения I-56 (284 мг, 0,062 ммоль).

LC-MS: m/z 1031,5 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: C48H78N4O18S (C3H7NO)0,1(Н2O)1,5.

Вычисленное значение: С 54,44; Н 7,73; N 5,39 (%).

Реальное значение: С 54,46; Н 7,69; N 5,37 (%).

Пример 17. Синтез соединения I-60.

Химическая формула 58

Соединение II-А (17,8 г, 16,3 ммоль) растворяют в DMA (54 мл) и добавляют DIEA (4,3 мл, 24,5 ммоль) и гидразинкарбоксиамид гидрохлорид (1,82 г, 16,3 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После удаления масла из смеси с помощью простого диизопропилового

- 26 037093 эфира полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол=92/8-70/30) с получением соединения 27 (5,56 г, 19%). Соединение 27 (5,56 г, 4,78 ммоль) растворяют в DMF (30 мл) и добавляют морфолин (2,5 мл, 28,7 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (166 мг, 0,143 ммоль), смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. После преобразования смеси в порошок с помощью простого диизопропилового эфира/метанол (10/1) смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-50/50/5) с получением соединения I-60 (1,85 г, 4%).

LC/MS:m/z 996,5 [М+Н]+.

Элементный анализ: C48H77N5O17(Н2О)4,4.

Вычисленное значение: С 53,61; Н 8,04; N 6,51 (%).

Реальное значение: С 53,60; Н 8,07; N 6,59 (%).

Пример 18. Синтез соединения I-74.

Химическая формула 59

АсО НО

30

Стадия 1. Синтез соединения 28.

2,3,4,6-тетра-О-ацетuл-α-D-глюкопиранозuлбромид (5,346 г, 13 ммоль) растворяют в дихлорметане (100 мл) и добавляют гидросульфат тетрабутиламмония (4,11 г, 13 ммоль) и в дополнение к этому добавляют раствор N-гидроксифталимида (10,6 г, 65 ммоль), растворенного в водном растворе карбоната натрия (1 ммоль/л, 100 мл). Смесь перемешивают в течение 20 ч при комнатной температуре. После промывки органической фазы, полученной посредством экстрагирования дихлорметаном, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным раствором соли смесь сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и конденсируют. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/этилацетат=9/1) с получением 2,3,4,6-тетра-Оацетuл-α-D-глюкопиранозилоксифталимида, соединение 28 (980 мг, белые пенистые твердые продукты).

TLC: Rf=0,5 (дихлорметан/этилацетат=9/1).

Стадия 2. Синтез соединения 29.

Соединение 28 (872 мг, 1,767 ммоль) растворяют в метаноле (18 мл) и добавляют гидразин моногидрат (0,086 мл, 1,767 ммоль). После перемешивания смеси в течение 20 мин при комнатной температуре смесь конденсируют. После добавления этилацетата и удаления примесей фильтрат конденсируют. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=1/2) с получением 2,3,4,6-тетра-О-ацетил-α-D-глюкопиранозилоксиамина, соединение 29 (516 мг, белые пенистые твердые продукты, 80%).

TLC: Rf=0,4 (гексан/этилацетат=1/2).

¹³С-ЯМР (CDCl3, 75 МГц) δ: 170,3, 169,8, 169,2, 169,1, 134,4, 123,7, 103,1, 72,7, 71,6, 69,5, 68,1, 61,6, 20,7, 20,6, 20,5; ¹Н-ЯМР (CDCl3, 300 МГц) δ: 6,1-5,8 (ушир., 2Н), 5,4-6,0 (м, 3Н), 4,72 (д, 1Н, J=8,1 Гц), 4,4-4,0 (м, 2Н), 3,8-3,6 (д, 1Н), 2,1-2,0 (м, 12Н).

Стадия 3. Синтез соединения 30.

Соединение 29 (508 мг, 1,398 ммоль) растворяют в метаноле (14 мл) и добавляют метоксид натрия (1 моль/л, 0,22 мл) и смесь перемешивают в течение 3 ч при 0°С. Добавляют Amberlite IR-120 и реакцию гасят с помощью нейтрализации. Добавляют воду и смесь фильтруют. Полученный в результате фильтрат конденсируют и лиофилизируют с получением соединения 30 (229 мг, светло-желтые твердые продукты, 80%).

¹Н-ЯМР (D2O, 300 МГц) δ: 7,58 (ушир., 2Н), 4,21 (д, 1Н, J=8,1 Гц), 3,7-2,9 (м, 6Н).

- 27 037093

Химическая формула 60

Стадия 1. Синтез соединения 31.

Соединение II-A (10,5 г, 9,64 ммоль) растворяют в DMA (60 мл) и добавляют DIEA (5,05 мл, 28,9 ммоль). Отдельно приготавливают раствор, в котором в-глюкоза-1-оксиамин (соединение 30) (2,258 г, 11,57 ммоль) растворяют в воде (10 мл) и DMA (5 мл) и приготовленный раствор добавляют к реакционной смеси. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре, в дополнение к этому ее перемешивают в течение 25 мин при 40°С. После удаления масла из смеси с помощью простого диизопропилового эфира полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0,5-85/15/1,5) с получением соединения 31 (2,43 г, 19%).

LC-MS: 1306,5 [М+Н]+.

Стадия 2. Синтез соединения I-74.

Соединение 16 (2,43 г, 1,892 ммоль) растворяют в DMF (30 мл) и добавляют морфолин (1,65 мл, 18,9 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (219 мг, 0,189 ммоль) и смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=85/15/1,5-30/70/7). Полученные в результате фракции конденсируют и лиофилизируют с получением соединения I-74 (818 мг, 39%).

LC/MS: m/z 1116,5 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: (C53H85N3O22)(Н2О)2,3.

Вычисленное значение: С 54,99; Н 7,80; N 3,63 (%).

Реальное значение: С 55,01; Н 7,88; N 3,48 (%).

Пример 19. Синтез соединения I-164.

Химическая формула 61

1, 1'-Карбонилдиимидазол (1,316 г, 8,11 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (10 мл). После добавления трет-бутил 2-аминоэтилкарбамата (0,984 мл, 6,24 ммоль) метанольный раствор (2 мл), содержащий 2-аминопропан-1,3-диол (0,569 г, 6,24 ммоль), добавляют к смеси и смесь перемешивают в течение 1 ч при 50°С, в дополнение к этому ее перемешивают в течение 1 ч при 65°С. После концентрирования смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения 32 (1,1 г, 64%). Соединение 32 (1,1 г, 3,97 ммоль) растворяют в метаноле (10 мл) и добавляют смесь хлористоводородная кислота - диоксан (4 ммоль/л, 16 мл) и смесь перемешивают в течение 2 ч. Смесь конденсируют с получением соединения 33 (1,09 г). Соединение 33 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Л-ЯМР (D2O, 300 МГц) δ: 3,9-3,7 (м, 1Н), 3,7-3,5 (м, 4Н), 3,4-3,35 (м, 2Н), 3,34 (с, 2Н), 3,15-3,05 (м, 2Н).

- 28 037093

Химическая формула 62

Соединение II-А (1,5 г, 1,377 ммоль) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют DIEA (0,481 мл, 2,75 ммоль) и гидрохлорид 1-(2-аминоэтил)-3-(1,3-дигидроксипропан-2-ил)мочевины (соединение 33) (294 мг, 1,377 ммоль) и смесь перемешивают в течение 30 мин. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0,5-85/15/1,5) с получением соединения 34 (450 мг, 26%). Соединение 34 (450 мг, 0,355 ммоль) растворяют в DMF (2,5 мл), и добавляют морфолин (0,31 мл, 3,55 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (21 мг, 0,018 ммоль) и смесь перемешивают в течение 40 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=50/50/5-20/80/8). Полученные в результате фракции конденсируют и лиофилизируют с получением соединения I-164 (120 мг, 28%).

LC/MS: m/z 1098,6 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: C53H87N5O19(C3H7NO)0,5(H2O)2,4.

Вычисленное значение: С 55,56; Н 8,15; N 6,54 (%).

Реальное значение: С 55,55; Н 8,07; N 6,56 (%).

Пример 20. Синтез соединения I-182.

Химическая формула 63

Стадия 1. Синтез соединения 35.

2,2-Диметил-1,3-диоксан-5-он (1 г, 7,68 ммоль) растворяют в дихлорметане (50 мл) и добавляют трет-бутил 2-аминоэтилкарбамат (1,354 г, 8,45 ммоль) и натрий триацетоксиборогидрид (2,117 г, 9,99 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч 40 мин при комнатной температуре. Добавляют N(аллилоксикарбонилокси)сукцинимид (2,469 г, 12,4 ммоль) и DIEA (6,71 мл, 38,4 ммоль), смесь перемешивают при комнатной температуре. После добавления воды и гашения реакции смесь экстрагируют дихлорметаном. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат=50/50-10/90) с получением соединения 35 (2,45 г, бесцветная жидкость, 89%).

TLC: Rf=0,6 (хлороформ/метанол=9/1).

‘H-ЯМР (CDCI3, 300 МГц) δ: 6,1-5,9 (м, 1Н), 5,4-5,2 (м, 2Н), 4,7-4,6 (м, 2Н), 4,2-3,9 (м, 4Н), 3,7-3,5 (ушир. , 2Н), 3,4-3,3 (ушир., 2Н), 1,5-1,3(м, 15Н).

Стадия 2. Синтез соединения 36.

Соединение 35 (2,45 г, 6,84 ммоль) растворяют в дихлорметане (30 мл) и добавляют смесь хлористоводородная кислота - диоксан (4 моль/л, 10,25 мл, 41 ммоль) и смесь перемешивают в течение 4 ч при комнатной температуре. Смесь конденсируют с получением соединения 36 (1,7 г). Соединение 36 ис

- 29 037093 пользуют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Химическая формула 64

Соединение II-А (1 г, 0,918 ммоль) растворяют в DMF (5 мл) и DIEA (0,64 ммоль) и добавляют соединение 36 (234 мг, 0,918 ммоль). Смесь перемешивают в течение одного часа при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0,5) с получением соединения 37 (240 мг, 10%). Соединение 37 (240 мг, 0,184 ммоль) растворяют в DMF (3 мл) и добавляют морфолин (0,24 мл, 2,75 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (11 мг, 0,009 ммоль) и смесь перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=505/50/5-20/80/8). Полученные в результате фракции конденсируют и лиофилизируют с получением соединения I-182 (67 мг, 26%).

LC/MS: m/z 1055,6 [М+Н]+, 1077,6 [M+Na]+.

Элементный анализ: C52H86N4O18(Н2О)3,0.

Вычисленное значение: С 56,30; Н 8,36; N 5,05 (%).

Реальное значение: С 56,35; Н 8,36; N 4,84 (%).

Пример 21. Синтез соединения I-208.

Химическая формула 65

Соединение II-А (1,32 г, 1,21 ммоль) растворяют в DMA (5 мл) и добавляют DIEA (0,42 мл, 2,42 ммоль) и 4-гидроксибутангидразид (143 мг, 1,21 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч 20 мин при комнатной температуре. Смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Полученные в результате твердые продукты (200 мг, 0,166 ммоль) растворяют в DMF (3 мл) и добавляют морфолин (0,144 мл, 1,657 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (9,5 мг, 0,0082 ммоль) и смесь перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре. Смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=90/10/1-50/50/5) с получением соединения I-208 (61 мг, 5%).

LC/MS: m/z 1039,56 [М+Н]+, 1061,6 [M+Na]+.

Элементный анализ: C51H82N4O18 (C3H7NO)0,3(Н2О)5,9.

Вычисленное значение: С 53,40; Н 8,28; N 5,16 (%).

Реальное значение: С 53,43; Н 8,15; N 5,21 (%).

- 30 037093

Пример 22. Синтез соединения I-219.

Химическая формула 66

Соединение II-А (10 г, 9,18 ммоль) растворяют в DMF (25 мл) и добавляют DIEA (4,81 ммоль) и гидроксиламин гидрохлорид (766 мг, 11,02 ммоль) и смесь перемешивают в течение 40 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол=70/30) с получением желтого порошка (2,1 г, 20%). Полученный в результате порошок растворяют в DMF (10 мл) и добавляют морфолин (1,63 мл, 18,71 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (216 мг, 0,187 ммоль) и смесь перемешивают в течение 40 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол=40/60-5/95) с получением соединения I-219 (530 мг, 30%).

LC/MS: m/z 954,4 [М+Н]⁺, 976,5 [M+Na]+.

Элементный анализ: C47H75N3O17(C3H7NO)0,5(Н2О)2,8.

Вычисленное значение: С 55,95(-0,02%); Н 8,14 (-0,01%); N 4,71 (-0,03%); О 31,20 (%).

Реальное значение: С 55,93; Н 8,13; N 4,68 (%).

Пример 23. Синтез соединения I-251.

Химическая формула 67

Соединение II-A (2,6 г, 2,387 ммоль) растворяют в DMA (10 мл) и добавляют 1-(гидроксиметил)-2гидрокси-этилоксиамин (811 мг, 2,86 ммоль) и оксид трибутилолова (1,46 мл, 2,86 ммоль), смесь перемешивают при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Полученный в результате порошок (250 мг, 0,209 ммоль) растворяют в NMP (3 мл) и добавляют морфолин (0,13 мл, 1,46 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (24,1 мг, 0,021 ммоль) и смесь перемешивают в течение 10 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол=90/10-70/30) с получением соединения I-251 (114 мг, 5%).

LC/MS: m/z 1028,4 [М+Н]+, 1050,4 [M+Na]+.

Элементный анализ: C50H81N3O19(C3H7NO)2,9(Н2О)1,9.

Вычисленное значение: С 55,32; Н 8,31; N 6,48 (%).

Реальное значение: С 55,30; Н 8,30; N 6,90 (%).

- 31 037093

Пример 24. Синтез соединения I-303.

Химическая формула 68

Стадия 1. Синтез соединения 38.

2,3,4,6-тетра-О-бензоил-манноза-1-О-трихлорацетимидат (4,19 г, 5,79 ммоль) и бензил 3гидроксиазетидин-1-карбоксилат (1 г, 4,83 ммоль) растворяют в дихлорметане (15 мл) и добавляют комплекс трифторида бора и простого диэтилового эфира (0,685 мл, 5,79 ммоль) при -20°С и смесь перемешивают в течение 2 ч на ледяной бане. После нагрева до комнатной температуры реакцию гасят насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и смесь экстрагируют этилацетатом. Смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения 38 (2,84 г, 74,9%).

TLC: Rf=0,2(гексан/этилацетат=2/1).

LC-MS: 785 [М+Н]+, 803 [M+Na]+.

Стадия 2. Синтез соединения 39.

Соединение 38 (2,71 г, 3,45 ммоль) растворяют в метаноле (20 мл) и тетрагидрофуране (20 мл) и добавляют метоксид натрия (1 моль/л, 0,345 мл) на ледяной бане и смесь перемешивают в течение 16 ч при комнатной температуре. После гашения реакции посредством добавления Amberlite (H)IRA смесь фильтруют и полученный фильтрат конденсируют. Полученный в результате смолистый конденсированный остаток перетирают с получением соединения 39 (1,017 г, 79,8%) в виде белого твердого продукта.

TLC: Rf=0,3 (хлороформ/метанол=5/1).

¹Н-ЯМР(D2О) δ:7,37 (ушир.с, 5Н), 5,06 (с, 2Н), 4,82 (с, 1Н), 4,57 (с, 1Н), 4,20 (ушир.с, 2Н), 4,0-3,5 (ушир., 8Н).

Стадия 3. Синтез соединения 40.

Соединение 39 (1,01 г, 2,73 ммоль) растворяют в метаноле (20 мл) и добавляют 10%Pd-C (200 мг, 0,188 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре в атмосфере водорода, при 1 атм. После подтверждения исчезновения материала с помощью TLC смесь фильтруют посредством Celite®. Полученный в результате фильтрат конденсируют. Полученный в результате остаток промывают гексаном с получением соединения 40 (597 мг, 92,8%) в виде белого твердого продукта.

LC-MS: 236 [М+Н]+.

Химическая формула 69

- 32 037093

Стадия 1. Синтез соединения 41.

Соединение II-A (2,284 г, 2,097 ммоль) растворяют в DMF (12 мл) и добавляют амин 40 для боковой цепи (0,592 г, 2,52 ммоль) и DIEA (1,1 мл, 6,29 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч 40 мин при комнатной температуре. После удаления масла из смеси с помощью простого диизопропилового эфира полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол=90/10-70/30) с получением соединения 41 (1,15 г, 41%).

LC/MS:m/z 1324 [М+Н]+.

Стадия 2. Синтез соединения I-303.

Соединение 41 (1,15 г, 0,865 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют морфолин (1,05 мл, 12,1 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (200 мг, 0,173 ммоль) и смесь перемешивают в течение 4 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения I-303 (187 мг, 18%).

LC-MS: 1156,5 [М+Н]⁺, 1178,5 [М+Na]⁺.

Элементный анализ: (C56H89N3O22)(Н2О)4(C3H7NO)0,3.

Вычисленное значение: С 54,66; Н 7,99; N 3,70 (%).

Реальное значение: С 54,63; Н 7,91; N 3,94 (%).

Пример 25. Синтез соединения I-310.

Химическая формула 70

Стадия 1. Синтез соединения 42.

К раствору трет-бутилоксикарбонилгидразина (11,35 г, 86 ммоль) в метаноле (70 мл) добавляют (R)-метилоксиран-2-карбоксилат (25,4 г, 249 ммоль). Смесь перемешивают в течение 24 ч при комнатной температуре. После концентрирования реакционной смеси остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=9/1-1/1) с получением соединения 42 (7,84 г, белый твердый продукт, 39%).

TLC: Rf=0,1 (гексан/этилацетат=1/1).

¹³С-ЯМР(CDC1₃, 100 МГц) δ:173,82, 157,36, 81,17, 68,92, 54,89, 52,49, 28,36, 14,21.

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ: 6,20 (ушир.с, 1Н), 4,30-4,20 (м, 1Н), 3,78 (с,3Н), 3, 25-3,10 (м, 2Н), 1,48 (с, 9Н).

Стадия 2. Синтез соединения 43.

К раствору соединения 42 (7,84 г, 33,5 ммоль) в дихлорметане (80 мл) добавляют DIEA (7,6 мл, 43,5 ммоль) и аллилоксикарбонилхлорид (4,26 мл, 40,2 ммоль). Смесь перемешивают в течение одного часа при комнатной температуре. Добавляют воду и этилацетат. После экстрагирования этилацетатом органическую фазу промывают водой. Раствор сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и конденсируют. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=1/1) с получением соединения 43 (9,38 г, бесцветная жидкость, 88%).

TLC: Rf=0,3 (гексан/этилацетат=1/1).

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ: 6,50 (ушир.с, 1Н), 5,9 (ушир.с, 1Н), 5,4-5,2 (м, 2Н), 4,63 (ушир.с, 2Н), 4,43 (с, 1Н), 4,40-3,8 (м, 3Н), 3,79(с, 3Н), 1,48(с, 9Н).

LC-MS: [М+Н]⁺=341,15.

Стадия 3. Синтез соединения 44.

К раствору соединения 43 (9,38 г, 29,5 ммоль) в дихлорметане (100 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (22,7 мл, 295 ммоль) на ледяной бане. Смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. После конденсирования с помощью роторного испарителя смесь конденсируют посредством добавления толуола. Полученный в результате остаток выпаривают в вакууме с получением соединения 44 (11,3 г, смолистая бесцветная жидкость).

TLC: Rf=0,1 (гексан/этилацетат=1/1).

¹Н-ЯМР (D2O, 400 МГц) δ: 5,9-5,8 (м, 1Н), 5,3-5,2 (м, 2Н), 4,61 (м, 2Н), 4,48 (м, 1Н), 3,92(м, 2Н), 3,65 (с, 3Н).

¹³С-ЯМР (D2O, 100 МГц) δ: 173,6, 162,8, 162,4, 131,5, 131,1, 119,0, 117,6, 114,7, 68,6, 68,4, 53,0, 52,9, 50,6.

- 33 037093

Химическая формула 71

Стадия 1. Синтез соединения 45.

К раствору соединения II-A (9,27 г,

8,51 ммоль) в DMF (40 мл) добавляют DIEA (10,4 мл, 59,6 ммоль), соединение 44 с амидом боковой цепи (5,35 г, 11,9 ммоль) и бис-трибутилолово оксид (0,867 ммоль, 1,70 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. После охлаждения до 4°С смесь взаимодействует в течение 4 дней при 4°С. Реакционный раствор снова суспендируют, через 4 дня раствор приобретает оранжевый цвет. К реакционной смеси добавляют простой диизопропиловый эфир (1 л)/метанол (30 мл) и смесь энергично перемешивают. Полученные в результате твердые продукты оранжевого цвета отфильтровывают. Твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0,5-90/10/1). Полученные в результате фракции конденсируют с получением соединения 45 (6,82 г, 5,22 ммоль, 61%) в виде порошка оранжевого цвета. Время удерживания соединения 17 согласно анализу ВЭЖХ составляет 11,8 мин (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-B7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

LC-MS: m/z 1308,6 [М+Н]+.

Стадия 2. Синтез соединения 46.

К раствору соединения 45 (10,03 г, 7,67 ммоль) в DMF (55 мл) добавляют морфолин (4,68 мл, 53,7 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (0,887 г, 0,767 ммоль). Смесь перемешивают в течение 40 мин при комнатной температуре в атмосфере азота. Твердые продукты, осажденные посредством добавления простого диизопропилового эфира (900 мл), отфильтровывают. Твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-5/95/5). Полученные в результате фракции конденсируют с получением соединения 46 (4,45 г, желтый порошок, 55%) в виде порошка оранжевого цвета. Время удерживания соединения 46 согласно анализу ВЭЖХ составляет 6,37 мин (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-B7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

LC-MS:m/z 1055,6 [M+H]⁺.

Стадия 3. Синтез соединения I-310.

Добавляют тетрагидрофуран (210 мл) и воду (11 мл) к соединению 46 (4,45 г, 4,22 ммоль) и добавляют водный раствор гидроксида натрия (0,5 моль/л, 12,65 мл, 6,33 ммоль) на ледяной бане. Смесь перемешивают в течение 1 ч при 0°С. После нейтрализации раствора посредством добавления по каплям водного раствора хлористоводородной кислоты (0,5 моль/л, 12,65 мл, 6,33 ммоль) смесь конденсируют с помощью роторного испарителя. После удаления всего тетрагидрофурана воду конденсируют до 30 мл. Смесь лиофилизируют с получением соединения I-310 (5,87 г). Время удерживания согласно анализу ВЭЖХ составляет 7,39 мин (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-В7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

- 34 037093

LC-MS: m/z 1041,6 [М+Н]+.

Элементный анализ: (C50H80N4O19)(NaCl)1,7(Н2О)2,8.

Вычисленное значение: С 50,42; Н 7,24; N 4,70; Na 3,28; Cl 5,06 (%).

Реальное значение: С 50,41; Н 7,21; N 4,75; Na 3,05; Cl 5,51 (%).

Пример 26. Синтез соединения I-246.

Химическая формула 72

Соединение II-А (2 г, 1,836 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют DIEA (3,21 мл, 18,36 ммоль) и 1Н-1,2,4-триазол-5-сульфонилгидразин гидрохлорид (0,733 г, 3,67 ммоль). Смесь перемешивают при 40°С. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученные твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением маслянистых твердых продуктов (200 мл). Твердые продукты растворяют в DMF (2 мл) и добавляют морфолин (0,139 мл, 1,59 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (9,2 мг, 0,008 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения I-246 (21 мг, 10%).

LC/MS: m/z 1084,4 [М+Н]+.

Пример 27. Синтез соединения I-254.

Химическая формула 73

Стадия 1.

Бензил 1,3-гидроксипропан-2-ил карбамат (4,72 г, 21 ммоль) растворяют в дихлорметане (310 мл) и добавляют в-Э-маннопираноза-1,2,3,4,6-пентаацетат (24,5 г, 62,9 ммоль), и охлаждают смесь на ледяной бане. Добавляют по каплям комплекс трифторида бора и простого диэтилового эфира (8 мл, 62,9 ммоль). После перемешивания смеси в течение 1 ч добавляют комплекс трифторида бора и простого диэтилового эфира (0,8 мл, 6,29 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. После гашения реакции с помощью водного раствора насыщенного бикарбоната натрия смесь экстрагируют хлороформом (200 мл) два раза. Органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и конденсируют. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат) с получением соединения 47 (3,45 г, 18%).

TLC: Rf=0,4 (гексан/этилацетат=1/2).

LC-MS: 886,5 [М+Н]+.

Стадия 2.

Соединение 47 (3,36 г, 3,79 ммоль) растворяют в метаноле (30 мл), и добавляют метоксид натрия (1 моль/л, 3,79 мл) на ледяной бане. Смесь перемешивают в течение 1 ч при 0°С, в дополнение к этому ее перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Смесь нейтрализуют посредством добавления ионообменной смолы Amberlite IR-120B (форма Н⁺), фильтруют и конденсируют с получением соединения 48 (2,05 г, 98%).

TLC: Rf=0,1 (хлороформ/метанол=4/1).

- 35 037093

Стадия 3.

Соединение 48 (2,05 г, 3,73 ммоль) растворяют в метаноле (50 мл) и добавляют 10% Pd-C (200 мг, 0,188 ммоль). Смесь перемешивают в атмосфере водорода (1 атм.). Реакционную смесь фильтруют и конденсируют с получением соединения 49 (1,62 г). Соединение 49 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

LC-MS: 416,1 [М+Н]+.

Химическая формула 74

Н-А

N НАНос

ОН

NH₂

Соединение П-А (500 мг, 0,459 ммоль) растворяют в DMF (2 мл) и добавляют DIEA (0,241 мл, 1,38 ммоль) и 2-амино-1,3-пропандиил бис-α-D-маннопиранозид (соединение 49: 286 мг, 0,689 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при 40°С. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученные твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением твердых продуктов (220 мг, 0,146 ммоль). Твердые продукты растворяют в DMF (2 мл) и добавляют морфолин (0,127 мл, 1,462 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (51 мг, 0,044 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученные твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-10/90/9) с получением соединения I-254 (70 мг, 12%).

LC/MS: m/z 1336,6 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: (C62H101N3O28)(Н2О)9,5.

Вычисленное значение: С 49,39; Н 8,02; N 2,79 (%).

Реальное значение: С 49,29; Н 7,55; N 4,75; Na 3,14 (%).

Пример 27. Синтез соединения I-248.

Химическая формула 75

Ме/_Л НО^Х О он он Me Me⁴'' Н-А НО^ НО⁴' Ме_/х НОдЧ, О он он Me Me⁴''' 1-248

ОН _Л1, Alloc ^{он он} °-А=С=О О/ О _ЛМе НО⁴' Х^ОН Allo> ОН НОдЛдОН ^'Ч^Д^ОН О⁴ О \ /—о, он ^Η2Ν Л пН- 50 / о /*он _чо Т Т ( Ьн ¹ γΧ)Η ОН ^он он но. > он пи ΗθΑ^ο^Λ НО °^Н ОН t ж°Н Ду^х^Х1^л\ОН о 0/,./^ ОН ОН О/_х 2 Xf о^Лон ^VOH ^^^^γ н Η Р О/, .0. _ЛМе θ^Κ^ΟΗ НО⁴' Υ^ΟΗ но он νη₂ ^но

- 36 037093

Соединение II-А (240 мг, 0,220 ммоль) растворяют в DMF (2 мл) и добавляют DIEA (0,115 мл, 0,661 ммоль) и бис-α-D-маннопиранозид, 2-амино-2-[(a-D-маннопиранозилокси)метил]-1,3-пропан (соединение 50: 201 мг, 0,331 ммоль). Смесь перемешивают в течение 20 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученные твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением твердых продуктов (30 мг, 0,018 ммоль). Твердые продукты растворяют в DMF (1 мл) и добавляют морфолин (0,015 мл, 0,177 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (10 мг, 0,009 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч 15 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=50/50/5-10/90/9) с получением соединения I-248 (16 мг, 5%).

LC/MS: m/z 1529,3 [М+Н]+.

Пример 28. Синтез соединения I-260.

Химическая формула 76

Соединение II-А (2 г, 1,836 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют DIEA (1,28 мл, 7,34 ммоль) и (3R,4R)-пирролидин-3,4-диол (227 мг, 2,203 ммоль). Смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученные твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=85/15/1,5) с получением соединения 19 (37 9 мг, 17%) в виде коричневых твердых продуктов. Соединение 19 (379 мг, 0,318 ммоль) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют морфолин (0,277 мл, 3,18 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (18,4 мг, 0,016 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-10/90/9) с получением соединения I-260 (195 мг, 10%).

LC/MS: m/z 1024,5 [М+Н]+, 1046,6, [M+Na]+.

Элементный анализ: (C51H81N3O18)(Н2О)3,9.

Вычисленное значение: С 55,97; Н 8,18; N 3,84 (%).

Реальное значение: С 55,98; Н 8,25; N 3,97 (%).

Пример 29. Синтез соединения I-263.

Химическая формула 77

- 37 037093

Соединение II-A (2 г, 1,836 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют DIEA (1,6 мл, 9,18 ммоль) и 1-(метилсульфонил)циклопропанкарбонилгидразин гидрохлорид (394 мг, 1,836 ммоль). Смесь перемешивают при 40°С. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученные твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения 20 (576 мг, 25%) в виде коричневых твердых продуктов. Соединение 20 растворяют в DMF (5 мл) и добавляют морфолин (0,396 мл, 4,54 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (26 мг, 0,023 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения I-263 (307 мг, 58%).

LC/MS: m/z 1099,4 [М+Н]+, 1121,5, [M+Na]+.

Элементный анализ: C52H82N4O19S(C3H7NO)0,4(Н2О)2,8

Вычисленное значение: С 54,20; Н 7,73; N 5,23; S 2,72 (%).

Реальное значение: С 54,22; Н 7,68; N 5,23; S 2,76 (%).

Пример 30. Синтез соединения I-272.

Химическая формула 78

55

Стадия 1.

2-Триметилсилилэтилоксикарбонилгидразин (3,27 г, 18,55 ммоль) и 2,2-диметил-1,3-диоксан-5-он (2,414 г, 18,55 ммоль) растворяют в метаноле (20 мл). После перемешивания смеси при комнатной температуре смесь конденсируют. Смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=9/1) с получением соединения 51 (4,46 г, 83%) в виде белых твердых продуктов.

1И-ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ: 4,19 (м, 4Н),4,29 (т, 2Н, J=12 Гц), 1,26 (с, 6Н),1,05(т, 2Н, J=12 Гц), 0,04 (с, 9Н).

Стадия 2.

Соединение 51 (4,46 г, 15,5 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (100 мл) и добавляют LiBH₄(1,013 г, 46,5 ммоль) и метанол (10 мл) . После перемешивания смеси в течение 40 мин при 0°С добавляют LiBH4 (1,013 г, 46,5 ммоль) и в дополнение к этому смесь перемешивают при комнатной температуре. Реакцию гасят водой. После экстрагирования смеси этилацетатом смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения 52 (3,91 г, 87%).

Стадия 3.

Соединение 52 (3,91 г, 13,46 ммоль) растворяют в DMF (20 мл) и добавляют DIEA (3,29 мл, 18,85 ммоль) и в дополнение к этому добавляют аллилхлорформиат (1,72 мл, 16,16 ммоль) на ледяной бане. Смесь перемешивают при комнатной температуре. Реакцию гасят посредством добавления водного раствора насыщенного бикарбоната натрия и смесь экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой пять раз и сушат над сульфатом магния. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=4/1-3/2).

1И-ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ: 5,88 (м, 1Н), 5,30 (д, 1Н, J=16 Гц), 5,27 (м, 1Н), 4,62 (с, 2Н), 4,23 (м, 3Н), 3,97 (ушир., 4Н), 1,41 (с, 3Н), 1,40(с, 3Н), 1,01 (т, 2Н, J=8 Гц), 0,03 (с, 9Н).

Стадия 4.

Соединение 53 (1,73 г, 4,62 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (20 мл) и добавляют тетрабутиламмонийфторид (1 моль/л, 9,2 мл, 9,2 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакцию гасят водой и смесь экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой и насыщенным раствором соли и сушат над безводным сульфатом натрия. Остаток конденсируют с получением сырого соединения 54 (1,17 г).

1Н-ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ: 6,00-5,90 (м, 1Н), 5,32 (д, 1Н, J=16 Гц), 5,25 (д, 1Н, J=8 Гц), 4,62 (д, 2Н, J=4 Гц), 4,23 (м, 1Н), 4,13 (ушир., 2Н), 3,84 (ушир., 4Н), 1,51 (с, 3Н), 1,41 (с, 3Н).

Стадия 5.

Соединение 54 (1,17 г, 5,08 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (10 мл) и добавляют водный раствор 2 моль/л хлористоводородной кислоты (5,08 мл, 10,16 ммоль). После перемешивания смеси при

- 38 037093 комнатной температуре смесь конденсируют. Полученный в результате остаток растворяют в метаноле и очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол=1/1) с получением соединения 55 (1,02 г).

Химическая формула 79

Соединение II-А (3 г, 2,75 ммоль) растворяют в DMF (15 мл) и добавляют соединение 55 (524 мг, 2,75 ммоль) и DIEA (1,92 мл, 11,02 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный остаток грубо очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Полученный в результате порошок (соединение 56: 887 мг) растворяют в DMF (5 мл), и добавляют морфолин (0,6 мл, 6,93 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (40 мг, 0,035 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота. Полученные посредством добавления простого диизопропилового эфира (900 мл) твердые продукты отфильтровывают. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-10/90/9). Полученные в результате фракции конденсируют с получением соединения I-272 (213 мг, 0,176 ммоль, желтый порошок, 6%) в виде порошка оранжевого цвета.

LC/MS: m/z 1027,4 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: С50Н82К4018(СЗН7ЫО)0,5(Н2О)2,4.

Вычисленное значение: С 55,88 (0,02%); Н 8,22 (-0,05%); N 5,69 (-0,02%) (%).

Реальное значение: С 55,90; Н 8,17; N 5,67 (%).

Пример 31. Синтез соединения I-273.

Химическая формула 80

Трет-бутил трет-бутилоксикарбонилоксикарбамат (1,91 г, 8,19 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют 2-бромацетамид (1,243 г, 9,01 ммоль) и карбонат калия (1,471 г, 10,64 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре. После гашения реакции этилацетатом смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения 57 (898 мг, 38%). Соединение 57 растворяют в дихлорметане (20 мл) и добавляют смесь хлористоводородная кислота - диоксан (4 моль/л, 6,19 мл, 24,75 ммоль). После перемешивания смеси при комнатной температуре смесь конденсируют с получением соединения 58 (391 мг). Соединение 58 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

- 39 037093

Химическая формула 81

2-Гидроксиаминоамидацетат (соединение 58: 0,391 г, 3,08 ммоль) растворяют в DMF (15 мл) и добавляют DIEA (1,924 мл, 11,02 ммоль). После перемешивания смеси при комнатной температуре добавляют соединение II-A (3 г, 2,75 ммоль). Смесь перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный остаток грубо очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Полученные в результате твердые продукты (2,23 г, 1,891 ммоль) растворяют в DMF (4 мл), добавляют морфолин (1,65 мл, 18,91 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (109 мг, 0,095 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота. После отфильтровывания полученных в результате твердых продуктов посредством добавления простого диизопропилового эфира твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-10/90/9) с получением соединения I273 (341 мг, 16%) в виде желтого порошка.

LC/MS: m/z 1011,4 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: С49Н78Ы4О18(СЗН7КО)1,3(Н2О)1,9.

Вычисленное значение: С 55,71 (0,02%); Н 8,03 (-0,05%); N 6,51 (-0,02%) (%).

Реальное значение: С 55,73; Н 7,98; N 6,49 (%).

Пример 32. Синтез соединения I-281.

Химическая формула 82

Стадия 1.

Этил 1-(гидроксиметил)циклопропанкарбоксилат (500 мг, 3,47 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (20 мл) и добавляют трет-бутил трет-бутилоксикарбонилоксикарбамат (0,971 г, 4,16 ммоль), и трифенилфосфин (1,364 г, 5,20 ммоль), и добавляют DIAD (2,74 ммоль) на ледяной бане. Смесь перемешивают. После добавления силикагеля и конденсации смеси остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения 59 (1,29 г, 99%).

Стадия 2.

Соединение 59 (1,29 г, 3,61 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (10 мл) и добавляют водный раствор 2 моль/л гидроксида натрия (1,8 мл, 3,61 ммоль). Смесь перемешивают при нагреве с обратным холодильником. Смесь взаимодействует не только посредством гидролиза, но также посредством реакции уходящего карбоната при охлаждении до комнатной температуры. Добавляют этанол, и смесь конденсируют и отверждают с получением соединения 60 (914 мг). Соединение 60 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 3.

Соединение 60 (914 мг, 3,61 ммоль) растворяют в дихлорметане (20 мл) и добавляют смесь хлористоводородная кислота - диоксан (4 моль/л, 7,2 мл). После перемешивания смеси при комнатной температуре смесь конденсируют с получением соединения 61 (615 мг).

LC-MS: 132 [М+1].

- 40 037093

Химическая формула 83

Соединение II-A (2 г, 1,84 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют соединение 61 (615 мг, 3,67 ммоль) и DIEA (1,6 мл, 9,18 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный остаток грубо очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Полученные в результате твердые продукты (753 мг) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют морфолин (0,54 мл, 6,17 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (36 мг, 0,031 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота. Твердые продукты, полученные в результате добавления простого диизопропилового эфира, отфильтровывают. Полученные в результате твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-10/90/9). Полученные в результате фракции конденсируют с получением соединения I-2 81 (199 мг, 28%) в виде порошка оранжевого цвета.

LC/MS: m/z 1052,4 [М+Н]+.

Элементный анализ: C52H81N3O19(C3H7NO)1,3(Н2О)1,7.

Вычисленное значение: С 57,00; Н 8,00; N 5,11 (%).

Реальное значение: С 57,01; Н 8,01; N 5,17 (%).

Пример 33. Синтез соединения I-292.

Химическая формула 84

Стадия 1.

N-Бензил-N-(метоксиметил)-N-триметилсилилметиламин (10 г, 42,1 ммоль) растворяют в дихлорметане (150 мл) и добавляют диметилацетилендикарбоксилат (7,18 г, 50,5 ммоль) на ледяной бане. Смесь перемешивают. После добавления трифторуксусной кислоты (16,2 мл, 211 ммоль) и перемешивания реакцию гасят насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. После экстрагирования смеси дихлорметаном органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над безводным сульфатом натрия. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=9/1-1/1) с получением соединения 62 (5,87 г, 51%) в виде желтого масла.

¹Н-ЯМР (CDCl_3> 400 МГц) δ:7,33-7,27 (м, 5Н), 3,94 (с, 2Н), 3,82(с,4Н), 3,77 (с, 6Н).

Стадия 2.

Соединение 62 (5,36 г, 19,5 ммоль) растворяют в толуоле (76 мл) и добавляют 1хлорэтилхлорформиат (2,94 мл, 27,3 ммоль) на ледяной бане. Смесь перемешивают при нагреве с обратным холодильником. После подтверждения исчезновения материалов с помощью TLC полученный посредством выпаривания гелеобразный твердый продукт растворяют в метаноле (7 мл). Смесь перемешивают при нагреве с обратным холодильником для удаления бензильной группы. После охлаждения до комнатной температуры добавляют Вос₂О (9,04 мл, 38,9 ммоль) и DIEA (6,8 мл, 38,9 ммоль). Метанол удаляют посредством выпаривания и смесь экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водным раствором 0,2 моль/л хлористоводородной кислоты и насыщенным раствором соли и сушат над безводным сульфатом натрия. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=7/3) с получением соединения 63 (4,17 г, 75%) в виде бесцветного масла.

¹Н-ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ: 4,44 (д, 4Н, J=12 Гц), 3,82 (с, 6Н), 1,48 (с,9Н).

Стадия 3.

Соединение 63 (917 мг, 3,21 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (10 мл) и добавляют водный

- 41 037093 раствор 2 моль/л гидроксида натрия (4,82 мл) . Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. После нейтрализации смеси водным раствором 2 моль/л хлористоводородной кислоты (4,82 мл) и конденсации смесь растворяют в дихлорметане (15 мл). После добавления смеси хлористоводородная кислота - диоксан (4 моль/л, 3,2 мл) и перемешивания смеси при комнатной температуре смесь конденсируют с получением соединения 64 (600 мг). Соединение 64 используют в следующей реакции без очистки.

Химическая формула 85

Соединение 64 (355 мг, 1,83 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют DIEA (0,321 мл, 1,83 ммоль) и соединение II-A (2 г, 1,84 ммоль). Смесь перемешивают в течение нескольких часов при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира, полученный остаток грубо очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Полученные в результате твердые продукты (1,47 г) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют морфолин (1,03 мл, 11,8 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (68 мг, 0,059 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота. Твердые продукты, полученные в результате добавления простого диизопропилового эфира, отфильтровывают. Твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-10/90/9). Полученные в результате фракции конденсируют с получением соединения I-292 (13 мг, желтый порошок, 0,9%).

LC/MS: m/z 1078,5 [М+Н]+.

Элементный анализ: C53H79N3O20(C3H7NO)0,3(Н2О)4,4.

Вычисленное значение: С 54,89; Н 7,68; N 3,97 (%).

Реальное значение: С 54,90; Н 7,49; N 3,97 (%).

Пример 34. Синтез соединения I-309.

Химическая формула 86 θ О ^Of-Bu рА_0Н

BocHN'^NH2 --------► BocHN'^N> ---------h₂n'^N>

O^Of-Bu HCl О^он

66

Стадия 1.

трет-Бутил 2-бромацетат (2,2 мл, 15,1 ммоль) растворяют в DMF (10 мл), и добавляют DIEA (2,64 мл, 15,1 ммоль) и трет-бутил гидразинкарбоксилат (1 г, 7,57 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре. После добавления воды смесь экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой и насыщенным раствором соли и сушат над безводным сульфатом натрия. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=1/1) с получением соединения 65 (1,8 г, 66%) в виде белых твердых продуктов.

Стадия 2.

Соединение 1 (1,8 г, 4,99 ммоль) растворяют в дихлорметане (20 мл) и добавляют смесь хлористоводородная кислота-диоксан (4 моль/л, 5 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре и конденсируют с получением соединения 66 (1,01 г) в виде смолистых твердых продуктов. Соединение 66 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

- 42 037093

Химическая формула 87

Соединение II-А (2 г, 1,84 ммоль) растворяют в DMF (10 мл), и DIEA (0,321 мл, 1,84 ммоль) и добавляют соединение 66 (0,339 г, 1,836 ммоль). Смесь перемешивают в течение 40 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный остаток грубо очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Полученные в результате твердые продукты (1,51 г) растворяют в DMF (6 мл) и добавляют морфолин (1,06 мл, 12,2 ммоль) и Pd (PPh₃)₄ (71 мг, 0,061 ммоль). Смесь перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре в атмосфере азота. Твердые продукты, полученные в результате добавления простого диизопропилового эфира, отфильтровывают. Твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-10/90/9). Полученные в результате фракции конденсируют с получением соединения I-309 (174 мг, 7%) в виде оранжевого порошка.

LC/MS: m/z 1069,4 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: C51H80N4O20(C3H7NO)1,1(Н2О)0,4(МеОН)1,7.

Вычисленное значение: С 55,53 (-0,01%); Н 7,93 (0,01%); N 5,90 (0,02%) (%).

Реальное значение: С 55,52; Н 7,94; N 5,92 (%).

Пример 35. Синтез соединения I-278.

Химическая формула 88

Стадия 1.

Соединение II-A (2 г, 1,84 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют DIEA (1,6 мл, 9,18 ммоль) и метиламинооксиацетат (347 мг, 3,31 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч 20 мин при комнатной температуре. После добавления воды смесь перемешивают в течение 1 ч 30 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0,5-85/15/1,5) с получением желтого порошка (соединение 67: 300 мг, 13%). Время удерживания составляет 11,4 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-B7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

Стадия 2.

Соединение 67 (300 мг, 0,251 ммоль) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют морфолин (0,22 мл, 2,51 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (14,5 мг, 0,013 ммоль). Смесь перемешивают в течение 45 мин при комнатной температуре в атмосфере азота. Твердые продукты, полученные в результате добавления простого диизопропилового эфира, отфильтровывают. Твердые продукты очищают с помощью колоночной хромато- 43 037093 графии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=50/50/3-10/90/9). Полученные в результате фракции конденсируют с получением оранжевого порошка (141 мг, 0,137 ммоль). Порошок растворяют в тетрагидрофуране (12 мл) и метаноле (6 мл) и добавляют водный раствор 2 моль/л гидроксида натрия (0,21 мл, 0,412 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Смесь нейтрализуют водным раствором 2 моль/л хлористоводородной кислоты и разбавляют водой. После чего органический растворитель конденсируют, остаток лиофилизируют с получением соединения I-278 (190 мг, 55%). Время удерживания составляет 7,7 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-B7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

LC/MS: 1012,3 [М+Н]+.

Элементный анализ: C49H77N3O19(Н2О)6,1(NaCl)5.

Вычисленное значение: С 41,61; Н 6,36; N 2,97 (%).

Реальное значение: С 41,64; Н 6,65; N 3,34 (%).

Пример 36. Синтез соединения I-223.

Химическая формула 89

(R)-метил 2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-карбоксилат (1 г, 6,24 ммоль) растворяют в метаноле (10 мл) и добавляют гидразин моногидрат (0,303 мл, 6,24 ммоль). Смесь перемешивают в течение 4 ч при комнатной температуре. Добавляют Вос₂О (1,45 мл, 6,24 ммоль) и смесь перемешивают. После концентрирования смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением (R)трет-бутил 2-(2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-карбонил)гидразина карбоксилата (соединение 68: 490 мг, 30%).

¹Н-ЯМР (CDCl₃, 400 МГц) δ: 8,13 (с, 1Н), 6,44 (ушир., 1Н), 4,59 (м, 1Н), 4,30 (м, 1Н), 4,18(м, 1Н), 1,58(с, 3Н), 1,48 (с, 9Н), 1,40 (с, 3Н).

Соединение 68 растворяют в дихлорметане (10 мл), добавляют смесь хлористоводородная кислотадиоксан (4 моль/л, 1,883 мл, 7,53 ммоль). Смесь перемешивают и конденсируют с получением соединения 69. Соединение 69 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Химическая формула 90

Соединение II-А (1,961 г, 1,8 ммоль) растворяют в DMF и добавляют DIEA (1,57 мл, 9,00 ммоль) и соединение 69 (282 мг, 1,8 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0,5-85/15/1,5) с получением соединения 70 (750 мг, 34%). Соединение 70 (750 мг, 0,62 ммоль) растворяют в DMF (4 мл) и добавляют морфолин (0,54 мл, 6,2 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (35,8 мг, 0,031 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре в атмосфере азота. Твердые продукты, полученные в результате добавления простого диизопропилового эфира, отфильтровывают и очищают с помощью колоночной

- 44 037093 хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=50/50/3-10/90/9) с получением соединения I-223 (104 мг, 14%).

LC/MS: 1041,4 [М+Н]⁺, 1063,5 [M+Na]⁺.

Элементный анализ: C50H80N4O19(Н2О)4,5.

Вычисленное значение: С 53,51; Н 7,99; N 4,99 (%).

Реальное значение: С 53,53; Н 7,73; N 4,86 (%).

Пример 37. Синтез соединения I-298.

Химическая формула 91

Стадия 1.

1-трет-Бутил 3,4-диметил 1Н-пиррол-1,3,4(2Н,5Н)-трикарбоксилат (соединение 63: 1 г, 3,51 ммоль), синтезированный в примере 33, растворяют в диоксане (10 мл) и добавляют воду (10 мл) и калий осмиат (VI) дигидрат (65 мг, 0,175 ммоль). Смесь перемешивают на ледяной бане. Добавляют N-метилморфолин N-оксид (616 мг, 5,26 ммоль) и смесь перемешивают. Реакцию гасят с помощью водного раствора 10%-го гидросульфита натрия и смесь экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над безводным сульфатом натрия и полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=1/1) с получением соединения 71 (843 мг, 75%).

¹Н-ЯМР (CDCl3, 400 МГц) δ: 3,97 (д, 1Н, J=8 Гц), 3,90(д, 1Н, J=8 Гц), 3,79 (с,6Н), 3,72 (д, 2Н, J=8 Гц), 3,62 (д, 2Н, J=12 Гц), 1,49 (с, 9Н)

Стадия 2.

Соединение 71 (743 мг, 2,327 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (10 мл) и воде (5 мл) и добавляют водный раствор 2 моль/л гидроксида натрия (3,49 мл, 6,98 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь нейтрализуют водным раствором 2 моль/л хлористоводородной кислоты и конденсируют. Дихлорметан (20 мл) добавляют к полученному остатку и добавляют смесь хлористоводородная кислота-диоксан (4 моль/л, 2,3 мл). После перемешивания смеси при комнатной температуре смесь конденсируют с получением соединения 72 (530 мг) в виде смолистых твердых продуктов. Соединение 72 используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Химическая формула 92

Соединение 72 (530 мг, 2,33 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют DIEA (1,28 мл, 7,34 ммоль) и соединение II-A (2 г, 1,84 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0,5-85/15/1,5). Полученный в результате порошок 73 (706 мг, 0,551 ммоль) растворяют в DMF (3 мл) и добавляют морфолин (0,48 мл, 5,51 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (32 мг, 0,028 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре. Твердые продукты, полученные в результате добавления простого диизопропилового эфира, отфильтровывают. Твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=50/50/3-10/90/9) с получением соединения I-298 (43 мг, 7%).

LC/MS: 1112,4 [М+Н]+.

- 45 037093

Элементный анализ: C53H81N3O22(C3H7NO)0,2(Н2О)4,2.

Вычисленное значение: С 53,54; Н 7,61; N 3,73 (%).

Реальное значение: С 53,55; Н 7,54; N 3,8 0 (%).

Пример 38. Синтез соединения I-252.

Химическая формула 93

Соединение II-А (2 г, 1,836 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют DIEA (1,6 мл, 9,18 ммоль) и 3-аминооксетан-3-карбоновую кислоту (215 мг, 1,83 6 ммоль). Смесь перемешивают при 40°С в течение ночи. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Полученный в результате порошок (695 мг, 31%) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют морфолин (0,50 мл, 5,76 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (33 мг, 0,029 ммоль). Смесь перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре в атмосфере азота. Твердые продукты, полученные в результате добавления простого диизопропилового эфира, отфильтровывают. Полученные в результате твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-10/90/9) с получением соединения I-252 (58,4 мг, 8%).

LC/MS: 1038,4[М+Н]⁺.

Элементный анализ: C51H79N3O19(C3H7NO)0,7(Н2О)2,0(МеОН)1,8.

Вычисленное значение: С 55,74; Н 8,10; N 4,38 (%).

Реальное значение: С 55,72; Н 8,04; N 4,36 (%).

Пример 39. Синтез соединения I-307.

Химическая формула 94

Соединение II-А (2 г, 1,836 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют DIEA (1,283 мл, 7,34 ммоль) и (2S,4S)-4-гидроксипирролидин-2-карбоновую кислоту (241 мг, 1,836 ммоль). Смесь перемешивают при 40 °С в течение ночи. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. Полученный в результате порошок (1 г, 0,819 ммоль, 45%) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют морфолин (0,71 мл, 8,19 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (47 мг, 0,041 ммоль). Смесь перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре. Твердые продукты, полученные в результате добавления простого диизопропилового эфира, отфильтровывают. Полученные в результате твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-10/90/9) с получением соединения I-307 (124 мг, 13%).

LC/MS: 1052,5 [М+Н]+, 1074,5 [M+Na]⁺.

Элементный анализ: C52H81N3O19(C3H7NO)0,8(Н2О)1,8(МеОН)0,2.

Вычисленное значение: С 57,05; Н 7,98; N 4,63 (%).

Реальное значение: С 57,06; Н 7,97; N 4,60 (%).

Пример 40. Синтез соединения I-329.

- 46 037093

Химическая формула 95

Стадия 1.

Соединение I-A (10,3 г, 9,43 ммоль) растворяют в DMF (50 мл) и добавляют DIEA (2,47 ммоль) и дифенилфосфорилазид (3,04 мл, 14,1 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2 ч 30 мин при комнатной температуре и в дополнение к этому 90 мин при 50°С. Добавляют аммиак (7 моль/л, метанольный раствор, 4 мл) и смесь перемешивают в течение 35 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира (600 мл) полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=10/1/0,1) с получением соединения 74 (3,14 г, 30%).

Стадия 2.

Соединение 74 (3,14 г) растворяют в DMF (15 мл) и добавляют морфолин (1,73 мл, 19,8 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (328 мг, 0,284 ммоль). Смесь перемешивают в течение 90 мин при комнатной температуре в атмосфере азота. Твердые продукты, полученные в результате добавления простого диизопропилового эфира, отфильтровывают. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-50/50/9) с получением соединения I-36 (615 мг, 23%).

LC-MS: 938,9 [М+Н]⁺.

Стадия 3.

Соединение I-36 (614 мг, 0,656 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют DIEA (0,572 мл, 3,28 ммоль) и 1Н-пиразол-1-карбоксиимидамид гидрохлорид (480 мг, 3,28 ммоль). Смесь перемешивают в течение 22 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-30/70/7) с получением соединения I-329 (262 мг, 41%).

LC-MS: 980,5[М+Н]⁺.

Элементный анализ: (С48Н77К5016)(СЗН7КО)0,5(Н2О)4,4.

Вычисленное значение: С 54,25; Н 8,21; N 7,03 (%).

Реальное значение: С 54,26; Н 7,97; N 7,32 (%).

- 47 037093

Пример 41. Синтез соединения I-330.

Химическая формула 96

Соединение I-60 (200 мг, 0,201 ммоль) растворяют в DMF (1 мл) и добавляют DIEA (0,245 мл, 1,41 ммоль) и 1Н-пиразол-1-карбоксиимидамид гидрохлорид (206 мг, 1,41 ммоль). Смесь перемешивают в течение 24 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира порошок очищают посредством хроматографии с обращенной фазой (HP20ss, 0,05%-ный водный раствор муравьиной кислотой/ацетонитрил=90/10-70/30). Полученные в результате фракции конденсируют и лиофилизируют с получением соединения I-330 (119 мг, 58%).

LC-MS: 1038,5[М+Н]+.

Элементный анализ: (C49H78N7O17)(НСО2Н)0,5(С12Н11О4Р)0,3(Н2О)7(HCl)0,1.

Вычисленное значение: С 50,42; Н 7,68; N 7,75 (%).

Реальное значение: С 50,58; Н 7,51; N 7,55 (%).

Пример 42. Синтез соединения I-365.

Химическая формула 97

Стадия 1.

Соединение II-A (15,7 г, 14,41 ммоль) растворяют в DMF (75 мл) и добавляют DIEA (7,55 мл, 43,2 ммоль) и (S)-3-аминопропан-1,2-диол (1,97 г, 21,62 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2 ч 30 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный в результате порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением порошка (1,07 г, 6%). Полученный в результате порошок растворяют в DMF (10 мл) и добавляют морфолин (0,553 мл, 6,35 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (52,4 мг, 0,045 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2 ч 30 мин при комнатной температуре в атмосфере азота. Твердые продукты, полученные в результате добавления простого диизопропилового эфира, отфильтровывают. Твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения I-82 (882 мг, 6%).

LC-MS: 1012,4[М+Н]+, 1034,4[M+Na]+.

Стадия 2.

Соединение I-82 (365 мг, 0,361 мг) растворяют в DMF (3,6 мл) и добавляют DIEA (0,157 мл, 0,902 ммоль) и цианистый бромид (76 мг, 0,721 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч 40 мин при комнатной температуре. Добавляют DIEA (0,189 мл, 1,082 ммоль) и гидроксиламин гидрохлорид (75 мг, 1,08

- 48 037093 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч 40 мин. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=90/10/3-50/50/5) с получением соединения I-365 (93 мг, 24%).

LC-MS: 1071 [М+Н]+.

Элементный анализ: (C51H83N5O19)(C3H7NO)1,2(Н2О)4.

Вычисленное значение: С 53,32; Н 8,15; N 7,06 (%).

Реальное значение: С 53,59; Н 7,94; N 7,40 (%).

Пример 43. Синтез соединения I-368.

Химическая формула 98

Соединение I-82 (200 мг, 0,198 ммоль) растворяют в DMF (1 мл) и добавляют d-галактозу (71 мг, 0,395 ммоль) и уксусную кислоту (0,113 мл, 1,976 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2 ч 30 мин при комнатной температуре и в дополнение к этому в течение 3 ч при 40°С. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3) с получением соединения I-368 (11 мг, 5%).

LC-MS: 1174 [М+Н]+.

Пример 44. Синтез соединения I-361.

Химическая формула 99

Соединение I-82 (100 мг, 0,099 ммоль) растворяют в DMF (1 мл) и добавляют (2)-метил N'-циано-Nметилкарбамидтиоат (15,32 мг, 0,119 ммоль), DIEA (0,052 мл, 0,296 ммоль) и трифторметансульфонат серебра (30 мг, 0,119 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2 ч при 0°С. Добавляют (2)-метил N’циано-N-метилкарбамидтиоат (15,32 мг, 0,119 ммоль), трифторметансульфонат серебра (30 мг, 0,119 ммоль) и DIEA (0,052 мл, 0,296 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч 30 мин при 0°С, в дополнение к этому в течение 3 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира этот порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0,5-50/50/5)с получением соединения I-361 (27 мг, 25%).

LC-MS: 1093,5 [М+Н]+, 1115,5 [M+Na]+.

Элементный анализ: C53H84N6O18(Н2О)6,5(С6Н14О)0,5.

Вычисленное значение: С 53,32; Н 8,31; N 6,6 6 (%).

Реальное значение: С 53,45; Н 7,86; N 6,36 (%).

- 49 037093

Пример 45. Синтез соединения I-362.

Химическая формула 100

Соединение I-82 (98 мг, 0,097 ммоль) растворяют в DMF (1 мл) и добавляют EDC HCl (27,8 мг, 0,145 ммоль) и DMAP (1,183 мг, 0,009 ммоль). Смесь перемешивают в течение 4 ч при комнатной температуре. Добавляют DMAP (5,3 мг, 0,044 ммоль) и смесь перемешивают в течение 19 ч при комнатной температуре. Добавляют DIEA (0,034 мл, 0,194 ммоль), EDC HCl (37,1 мг, 0,194 ммоль) и DIEA (0,034 мл, 0,194 ммоль) и смесь перемешивают в течение 23 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=50/50/5) с получением соединения I-362 (45 мг, 39%).

LC-MS: 1167,6 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: C58H98N6O18(Н2О)6.

Вычисленное значение: С 54,62; Н 8,69; N 6,59 (%).

Реальное значение: С 54,79; Н 8,16; N 6,31 (%).

Пример 46. Синтез соединения I-380.

Химическая формула 101

Соединение I-223 (121 мг, 0,116 ммоль) растворяют в DMF (3 мл) и добавляют DIEA (0,20 мл, 1,162 ммоль) и цианистый бромид (42 мг, 0,397 ммоль). Смесь перемешивают в течение 50 мин при комнатной температуре. Добавляют гидроксиламин гидрохлорид (41 мг, 0,58 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=90/10/3-50/50/5) с получением соединения I-380 (80 мг, 54%).

LC-MS: 1099,5 [М+Н]⁺, 1121,6 [M+Na]⁺.

Элементный анализ: C51H82N6O20(C3H7NO)0,8(Н2О)3,9.

Вычисленное значение: С 52,23; Н 7,83; N 7,76 (%).

Реальное значение: С 52,17; Н 7,55; N 7,76 (%).

- 50 037093

Пример 47. Синтез соединения I-367.

Химическая формула 102

Соединение I-223 (108 мг, 0,104 ммоль) растворяют в DMF (2 мл) и добавляют DIEA (0,127 мл, 0,726 ммоль) и 1Н-пиразол-1-карбоксиимидамид гидрохлорид (106 мг, 0,726 ммоль). Смесь перемешивают в течение 24 ч при комнатной температуре. Добавляют 1Н-пиразол-1-карбоксиимидамид гидрохлорид (106 мг, 0,726 ммоль) и смесь перемешивают в течение 24 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3). Полученные в результате фракции конденсируют и лиофилизируют с получением соединения I-367 (74 мг, 59%).

LC-MS: 1083,3 [М+Н]+.

Элементный анализ: C51H82N6O19(C3H7NO)0,7(Н2О)3,4(CHCl3)0,4.

Вычисленное значение: С 51,68; Н 7,63; N 7,55 (%).

Реальное значение: С 51,64; Н 7,60; N 7,61 (%).

Пример 48. Синтез соединения I-385.

Химическая формула 103

Соединение I-82 (1 г, 0,998 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют 3-N(флуоренилметилоксикарбонил)-3-аминопропиональдегид (875 мг, 2,96 ммоль). После перемешивания смеси в течение 5 мин при комнатной температуре добавляют натрий цианоборогидрид (186 мг, 2,96 ммоль) и концентрированную хлористоводородную кислоту (0,165 мл, 1,976 ммоль). Смесь перемешивают в течение 24 ч при комнатной температуре. Добавляют 3-N-(флуоренилметилоксикарбонил)-3аминопропиональдегид (292 мг, 0,988 ммоль), натрий цианоборогидрид (93 мг, 1,48 ммоль) и концентрированную хлористоводородную кислоту (0,041 мл, 0,494 ммоль) и смесь перемешивают в течение 24 ч. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0,5-70/30/3). Полученные в результате твердые продукты (261 мг, 0,166 ммоль) растворяют в DMF (2,5 мл) и добавляют пиперидин (0,082 мл, 0831 ммоль) . Смесь перемешивают в течение 3 ч 50 мин при комнатной температуре. Добавляют простой диизопропиловый эфир и фильтруют, и смесь промывают простым диизопропиловым эфиром с получением соединения I-385 (178 мг, 0,158 ммоль, 16%) в виде желтых твердых продуктов. Время удерживания составляет 5,1 мин согласно анализу

- 51 037093

ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% Р1С-В7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

LC-MS: 1126,6[М+Н]⁺.

Элементный анализ: C56H95N5O18 (Н2О)3,5.

Вычисленное значение: С 5 6,55; Н 8,64; N 5,89 (%).

Реальное значение: С 56,76; Н 8,31; N 5,75 (%).

Пример 49. Синтез соединения I-388.

Химическая формула 104

Соединение I-219 (150 мг, 0,157 ммоль) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют DIEA (0,165 мМ, 0,943 ммоль) и цианистый бромид (33 мг, 0,31 ммоль). Смесь перемешивают в течение 55 мин при комнатной температуре. Добавляют N-метилгидроксиламин гидрохлорид (26 мг, 0,31 ммоль) и смесь перемешивают в течение 21 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-30/70/7) с получением соединения I-388 (23 мг, 27%).

LC-MS: 1026,5 [М+Н]⁺, 1048,5 [M+Na]⁺.

Элементный анализ: C49H79N5O18(C3H7NO)2(Н2О)9,5.

Вычисленное значение: С 49,17; Н 8,40; N 7,30 (%).

Реальное значение: С 49,00; Н 7,30; N 7,49 (%).

Пример 50. Синтез соединения I-387.

Химическая формула 105

Соединение I-251 (110 мг, 0,107 ммоль) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют DIEA (0,112 мл, 0,642 ммоль) и цианистый бромид (17 мг, 0,16 ммоль). Смесь перемешивают в течение одного часа 15 мин при комнатной температуре. Добавляют N-метилгидроксиламин гидрохлорид (26,8 мг, 0,32 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-30/70/7) с получением соединения I-387 (40 мг, 34%).

LC-MS: 1100,5 [М+Н]⁺, 1122,5 [M+Na]⁺.

Элементный анализ: C52H85N5O20(C3H7NO)0,3(H2O)3,5.

Вычисленное значение: С 53,61; Н 8,00; N 6,26 (%).

Реальное значение: С 53,65; Н 7,94; N 6,24 (%).

- 52 037093

Пример 51. Синтез соединения I-331.

Химическая формула 106

Соединение I-59 (250 мг, 0,258 ммоль) и 1Н-пиразол-1-карбоксиимидамид гидрохлорид (265 мг, 1,81 ммоль) растворяют в DMF (1 мл) и добавляют DIEA (0,316 мл, 1,81 ммоль). Смесь перемешивают в течение 25 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный порошок очищают посредством хроматографии с обращенной фазой (HP20ss, ацетонитрил/водный раствор, содержащий 0,05%-ную муравьиную кислоту=10/90-30/70). Полученные в результате фракции конденсируют и лиофилизируют с получением соединения I-331 (154 мг, 51%).

LC-MS: 1011,1 [М+Н]+.

Элементный анализ: (C49H79N5O17)(НСО2Н)0,4(Н2О)7,3.

Вычисленное значение: С 51,14; Н 8,20; N 6,04 (%).

Реальное значение: С 51,10; Н 7,81; N 6,13 (%).

Пример 52. Синтез соединения I-313.

Химическая формула 107

Стадия 1.

Соединение III-b (10 г, 9,81 ммоль) растворяют в DMA (30 мл) и добавляют метиламин (30% этанольный раствор, 2 г, 19,6 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления смеси простой диизопропиловый эфир/метанол получают сырой очищенный порошок (8,8 г). Без очистки сырой порошок растворяют в DMF (4 мл), тетрагидрофуране (16 мл), воде (2 мл) и добавляют PPTS (8,42 г, 33,5 ммоль). Смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. В дополнение к этому добавляют воду (2 мл) и PPTS (2,1 ммоль, 8,38 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч. Реакцию гасят посредством добавления триэтиламина (11,6 мл, 84 ммоль). После конденсации смеси и удаления масла с помощью простого диизопропилового эфира полученный остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3) с получением целевого вещества (3,85 г, 3,71 ммоль, 44%). Целевое вещество растворяют в DMF (20 мл) и добавляют морфолин (3,2 мл, 37,2 ммоль). Смесь дегазируют и заме- 53 037093 няют атмосферу газообразным азотом. Добавляют Pd (PPh₃)₄ (429 мг, 0,37 ммоль) и смесь перемешивают в течение 10 мин при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=65/35/3,5) с получением соединения 75 (1,1 г, 31%).

LC-MS: 952,5 [М+Н]⁺, 974,6 [M+Na]⁺.

Элементный анализ: C48H77N3O16(C3H7NO)(Н2О)2,4.

Вычисленное значение: С 57,33; Н 8,38; N 5,24 (%).

Реальное значение: С 57,35; Н 8,37; N 5,27 (%).

Стадия 2.

Соединение 75 (230 мг, 0,242 ммоль) и 4-формил-1-метилпиперидин гидрохлорид (119 мг, 0,725 ммоль) добавляют к DMF (2,4 мл) и добавляют метанол (0,7 мл), уксусную кислоту (0,4 мл) и NaBH₃CN (76 мг, 1,21 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию гасят посредством добавления Amberlite IRA-743 (630 мг). После фильтрования реакционной смеси смесь преобразуют в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира. Порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения I-313 (143 мг, 55%).

LC-MS: 1064,2 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: C55H90N4O16(Н2О)6,2.

Вычисленное значение: С 56,22; Н 8,78; N 4,77 (%).

Реальное значение: С 56,03; Н 8,48; N 5,02 (%).

Пример 53. Синтез соединения I-12.

Химическая формула 108

nh₂

Стадия 1. Синтез соединения 76.

Соединение III-b (1 г, 0,981 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют 2-(4пиридил)метиламин (0,299 мл, 2,94 ммоль). Смесь перемешивают в течение 3,5 ч при комнатной температуре. Добавляют 2-(4-пиридил)метиламин (0,299 мл, 2,94 ммоль) и смесь перемешивают в течение 23,5 ч при комнатной температуре. В дополнение к этому добавляют 2-(4-пиридил)метиламин (0,299 мл, 2,94 ммоль) и смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления смеси простого диизопропилового эфира/ацетонитрила твердые продукты отфильтровывают. Полученные в результате твердые продукты (1,09 г) растворяют в тетрагидрофуране (4 мл) и воде (1 мл). Добавляют PPTS (740 мг, 2,94 ммоль) и смесь перемешивают в течение 5 ч при комнатной температуре. После инкубирования смеси при 4°С в течение ночи смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. После гашения реакции посредством добавления триэтиламина (0,408 мл, 2,94 ммоль) смесь конденсируют и масло удаляют с помощью смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрил. После декантирования полученного масла полученное масло растворяют в смеси хлороформ/метанол. После удаления растворителя остаток растворяют в DMF. После преобразования в порошок посредством смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрил полученные твердые продукты отфильтровывают и промывают простым диизопропиловым эфиром с получением сырого соединения 76 (0,84 г).

Стадия 2. Синтез соединения I-12.

Сырой продукт соединения 2 (0,84 г) растворяют в DMF (8 мл), добавляют морфолин (0,131 мл, 1,509 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (61 мг, 0,053 ммоль). После дегазирования и продувки азотом смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. После преобразования реакционной смеси в порошок посредством смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрил смесь очищают посредством хромато- 54 037093 графии с обращенной фазой (HP20ss, смесь ацетонитрил/ водный раствор 0,5 ммоль/л хлористоводородной кислоты) с получением соединения I-12 (52,9 мг, 6,8%).

Элементный анализ: C53H80N4O16(HCl)0,17(Н2О)3,4(H2SO4)0,27.

Вычисленное значение: С 56,68; Н 7,85; N 4,99; Cl 0,54; S 0,77 (%).

Реальное значение: С 56,73; Н 7,51; N 4,85; Cl 0,54; S 0,78 (%).

MS(ESI) m/z: 1029,6(М+Н)⁺, 1051,6(M+Na)⁺.

Пример 54. Синтез соединения I-13.

Химическая формула 109

Стадия 1. Синтез соединения 77.

Соединение III-b (1 г, 0,981 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют бензиламин (0,322 мл, 2,94 ммоль). Смесь перемешивают в течение 27 ч при комнатной температуре. Добавляют бензиламин (0,215 мл, 1,96 ммоль) и смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. После преобразования реакционной смеси в порошок с помощью смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрил смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением сырого продукта (203 мг). Полученный в результате сырой продукт (200 мг) растворяют в тетрагидрофуране (3 мл) и воде (0,75 мл) и добавляют PPTS (66,9 мг, 0,266 ммоль). После перемешивания смеси в течение 2,5 ч при комнатной температуре смесь инкубируют при 4°С в течение ночи. Затем смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. После гашения реакции триэтиламином (0,039 мл, 0,284 ммоль) смесь инкубируют при 4°С в течение ночи. После преобразования в порошок посредством добавления смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрил полученные твердые продукты отфильтровывают и промывают простым диизопропиловым эфиром с получением сырого соединения 77 (0,195 мг).

Стадия 2.

Сырой продукт соединения 77 (193 мг) растворяют в N-метилпирролидоне (10 мл), смесь дегазируют и заменяют атмосферу газообразным азотом. Добавляют морфолин (0,030 мл, 0,347 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (14 мг, 0,012 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1,5 ч при комнатной температуре. После преобразования реакционной смеси в порошок с помощью смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрила порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (CHCl₃/MeOH/H₂O) с получением соединения I-13 (87,8 мг, 49,2%).

Элементный анализ: C54H81N3O16(Н2О)2,6(CHCl3)0,47(H2SO4)0,42.

Вычисленное значение: С 55,77; Н 7,32; N 3,51; Cl 4,27; S 1,08 (%).

Реальное значение: С 55,80; Н 7,52; N 3,58; Cl 4,26; S 1,15 (%).

MS(ESI) m/z:1028,6(М+Н)⁺, 1050,6(M+Na)⁺

- 55 037093

Пример 55. Синтез соединения I-390.

Химическая формула 110

Стадия 1. Синтез соединения 78.

Амфотерицин В (5 г, 5,41 ммоль) растворяют в DMF (100 мл) и добавляют пиридин (1,31 мл, 16,23 ммоль) и N-(9-флуоренилметоксикарбонилокси)сукцинимид (3,65 г, 10,82 ммоль). Смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. После этого добавляют пиридин (0,873 мл, 10,82 ммоль) и N(9-флуоренилметоксикарбонилокси)сукцинимид (1,83 г, 5,41 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученные твердые продукты отфильтровывают с получением сырого продукта соединения 78 (6,42 г).

Стадия 2. Синтез соединения I-390.

Соединение 78 (500 мг) растворяют в DMF (5 мл) и добавляют РуВОР (681 мг, 1,309 ммоль) и этилизопропиламин (0,229 мл, 1,309 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Добавляют (2)-4-диметиламинобензамидооксим (313 мг, 1,745 ммоль) и смесь перемешивают в течение 5 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрил полученные твердые продукты отфильтровывают и промывают простым диизопропиловым эфиром с получением сырого соединения (545,6 мг) . Полученное сырое соединение 79 (545,6 мг) растворяют в DMF (6 мл) и добавляют молекулярное сито 3А. Добавляют раствор 1 моль/л тетрабутиламмония фторида в тетрагидрофуране (0,625 мл, 0,625 ммоль) и смесь перемешивают в течение 8 ч при 45°С. После фильтрования реакционной смеси и удаления растворенных материалов смесь конденсируют. После преобразования в порошок посредством добавления смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрил (6/1) порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (CHCl₃/MeOH/H₂O) с получением соединения I-390 (94,2 мг, 27,2%).

Элементный анализ: C56H82N4O16(H2O)3,2.

Вычисленное значение: С 59,79; Н 7,92; N 4,98 (%).

Реальное значение: С 59,75; Н 7,73; N 4,90 (%).

MS(ESI) m/z: 1067,5(M+H)+.

- 56 037093

Пример 56. Синтез соединения I-391.

Химическая формула 111

Соединение 78 (500 мг), синтезируемое в качестве сравнительного соединения для стадии 1 примера 55, растворяют в DMF (5 мл) и добавляют РуВОР (681 мг, 1,309 ммоль) и этилизопропиламин (0,229 мл, 1,309 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Добавляют (Z)бензамидооксим (178 мг, 1,309 ммоль) и смесь перемешивают в течение 5 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрил полученные твердые продукты отфильтровывают и промывают простым диизопропиловым эфиром с получением сырого соединения 80 (485,9 мг). Сырое соединение 80 (485,9 мг) растворяют в DMF (7 мл) и добавляют молекулярное сито 3А. Добавляют раствор 1 моль/л тетрабутиламмония фторида в тетрагидрофуране (0,460 мл, 0,460 ммоль) и смесь перемешивают в течение 8 ч при 45°С. После этого добавляют раствор 1 моль/л тетрабутиламмония фторида в тетрагидрофуране (0,115 мл, 0,115 ммоль) и смесь перемешивают в течение 8 ч при 40°С. После фильтрования реакционной смеси и удаления растворенных материалов смесь конденсируют. После преобразования в порошок посредством добавления смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрил (6/1) порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (CHCl₃/MeOH/H₂O) с получением соединения I-391 (85,6 мг, 19,3%).

Элементный анализ: C54H77N3O16(H2O)2,3(CHC13)0,4.

Вычисленное значение: С 58,68; Н 7,42; N 3,77 (%).

Реальное значение: С 58,67; Н 7,42; N 3,85 (%).

MS(ESI) m/z:1024,5(M+H)+.

Пример 57. Синтез соединения I-392.

Химическая формула 112

- 57 037093

Сырое соединение 78 (1 г), синтезированное в качестве сравнительного соединения для стадии 1 примера 55, растворяют в DMF (10 мл) и добавляют РуВОР (1,36 г, 2,62 ммоль) и этилизопропиламин (0,457 мл, 2,62 ммоль). Смесь перемешивают в течение 4,5 ч при комнатной температуре. После этого добавляют (2)-4-пиридиламидоксим (479 мг, 3,49 ммоль) и смесь перемешивают в течение 3 дней при комнатной температуре. Добавляют РуВОР (227 мг, 0,436 ммоль) и этилизопропиламин (0,076 мл, 0,436 ммоль) и смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрил полученные твердые продукты отфильтровывают и промывают простым диизопропиловым эфиром с получением сырого соединения 81 (966,4 мг). Сырое соединение 81 (966 мг) растворяют в DMF (10 мл), и добавляют молекулярное сито 3А. Добавляют раствор 1 моль/л тетрабутиламмония фторида в тетрагидрофуране (1,145 мл, 1,145 ммоль) и смесь перемешивают в течение 8 ч при 45°С. После фильтрования реакционной смеси и удаления растворенных материалов смесь конденсируют. После преобразования в порошок посредством добавления смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрил (6/1) порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (CHC1₃/MeOH/H₂O) с получением соединения I-392 (200,6 мг, 23,4%).

Элементный анализ: C54H77N3O16(H2O)2,3(CHC13)0,4.

Вычисленное значение: С 56,32; Н 7,51; N 4,93; C1 2,81 (%).

Реальное значение: С 56,28; Н 7,51; N 5,07; C1 2,75 (%).

MS(ESI) m/z:1025,5(М+Н)⁺.

Пример 58. Синтез соединения I-393.

Химическая формула 113

Стадия 1. Синтез соединения 82.

Соединение I-A (1 г, 0,916 ммоль) растворяют в DMF (10 мл) и добавляют DIEA (1,12 мл, 6,41 ммоль) и аллилбромид (0,396 мл, 4,58 ммоль). Затем смесь перемешивают в течение 6 ч при комнатной температуре, добавляют DIEA (0,32 мл, 1,83 ммоль) и аллилбромид (0,079 мл, 0,916 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь добавляют к смеси простой диизопропиловый эфир/ацетонитрил (6/1, 200 мл) и перемешивают с получением твердых продуктов посредством фильтрования. Полученные в результате твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=96/4/0, 4) с получением соединения 82 (277 мг, 27%).

LC-MS: 1133,8 [М+Н]⁺, 1114,9 [М+Н-Н2О]⁺.

Стадия 2. Синтез соединения 83.

Соединение 82 (277 мг, 0,245 ммоль) растворяют в дихлорметане (8 мл) и добавляют периодинан Десса-Мартина (реактив Десса-Мартина: 114 мг, 0,269 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1,5 ч при 0°С. Добавляют периодинан Десса-Мартина (реактив Десса-Мартина: 21 мг, 0,049 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при 0°С. Реакционную смесь разбавляют насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют три раза дихлорметаном (20 мл). После промывки органической фазы

- 58 037093 водой и насыщенным раствором соли органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия. После фильтрования и конденсирования смеси остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0,5) с получением соединения 83 (91 мг, 33%).

LC-MS: 1112,8 [М+Н-Н2О]+.

Стадия 3. Синтез соединения I-393.

Соединение 83 (90 мг, 0,080 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (1 мл) и воде (0,1 мл) и добавляют димедон (56 мг, 0,398 ммоль) и тетракис (трифенилфосфин)палладий (0) (9,2 мг, 0,008 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре в атмосфере азота. После фильтрования реакционной смеси и промывки тетрагидрофураном собранный фильтрат конденсируют в вакууме. Остаток очищают посредством хроматографии с обращенной фазой (HP20ss, ацетонитрил/вода=95/5) с получением соединения I-393 с кетоном в 35-положении (12 мг, 17%).

LC-MS: m/z=922,9 [M+H]+.

Элементный анализ: (C47H71NO17)(Н2O)3,8(CH3CN)0,2.

Вычисленное значение: С 57,00; Н 7,99; N 1,68 (%).

Реальное значение: С 57,06; Н 7,85; N 2,00 (%).

Пример 59. Синтез соединения I-393.

Химическая формула 114

Химическая формула 115

- 59 037093

Стадия 1.

Промежуточное соединение I-b (16,3 г, 16,23 ммоль) растворяют в DMF (100 мл) и добавляют аллилбромид (4,2 мл, 48 ммоль) и DIEA (14 мл, 81 ммоль). Смесь перемешивают в течение 5,5 ч при комнатной температуре. Добавляют аллилбромид (2,8 мл, 32,5 ммоль) и DIEA (5,7 мл, 32,5 ммоль) и смесь перемешивают в течение ночи. Реакционный раствор преобразуют в порошок посредством простого диизопропилового эфира (1,5 л) с получением соединения 85 (20,84 г).

Стадия 2.

Соединение 84 (10,48 г, 10 ммоль) суспендируют в метаноле (100 мл) и добавляют 1(диметоксиметил)-4-метоксибензол (9,2 мл, 54 ммоль) и CSA (1,533 г, 6,6 ммоль) . После перемешивания смеси в течение 1,5 ч при 0°С реакцию гасят триэтиламином (0,97 мл, 7 ммоль). После концентрирования реакционную смесь разбавляют этилацетатом и фильтруют. Полученную в результате органическую фазу промывают водой. После этого органическую фазу сушат над безводным сульфатом магния, органическую фазу конденсируют. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=99/1/0,1) с получением желто-коричневых твердых продуктов соединения 85 (5,14 г, 39%).

LC-MS: 1299,2 [М+Н]+.

Стадия 3.

Соединение 85 (5,1 г, 3,93 ммоль) растворяют в дихлорметане (70 мл) и добавляют периодинан Десса-Мартина (1,89 г, 4,32 ммоль) на ледяной бане. Смесь перемешивают в течение 1 ч 30 мин. Реакционную смесь разбавляют насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют дихлорметаном. Органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над безводным сульфатом натрия. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением оранжевокоричневых твердых продуктов соединения 86 (2,16 г, 42%). Присутствие кетона в 35-положении идентифицируется с помощью ¹³С-ЯМР и НМВС.

¹³С ЯМР (DMSO-d₆) δ 211,90 (35-С).

LC-MS: 1265,9 [М-СН₂О+Н]+, 1296,9 [М+Н]+.

Стадия 4.

Соединение 86 (0,96 г, 0,74 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (15 мл) и добавляют димедон (519 мг, 3,7 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (60 мг, 0,052 ммоль). Смесь перемешивают в течение 90 мин при комнатной температуре в атмосфере азота. Реакционную смесь конденсируют и растворяют ее в DMF (5 мл). Смесь добавляют по каплям к простому диизопропиловому эфиру. Полученные в результате твердые продукты отфильтровывают с получением соединения 87 (887 мг).

LC-MS: 1173,1 [М+Н]+.

Стадия 5.

Соединение 87 (887 мг, 0,757 ммоль) растворяют в DMF (3 мл) и добавляют смесь хлористоводородная кислота - метанол (3,5 моль/л, 2,6 мл, 9 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при 0°С. Добавляют смесь хлористоводородная кислота - метанол (3,5 моль/л, 0,8 57 мл, 3 ммоль) и метилгидразин (0,128 мл, 2,24 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч при 0°С. Реакцию гасят триэтиламином (1,67 мл, 12,1 ммоль) и реакционную смесь добавляют по каплям к простому диизопропиловому эфиру с получением соединения 88 (1,95 г).

Стадия 6.

Соединение 88 (709 мг, 0,75 ммоль) растворяют в DMF (8 мл) и добавляют воду (5 мл). Смесь охлаждают. Добавляют концентрированную хлористоводородную кислоту (0,667 мл, 8 ммоль) на ледяной бане и смесь перемешивают в течение 2 ч при 0°С. Реакционную смесь нейтрализуют посредством добавления триэтиламина (1,15 мл, 8,33 ммоль). После удаления тетрагидрофурана посредством концентрирования в вакууме смесь выливают в смесь простой диизопропиловый эфир - метанол (800 мл/30 мл). Смесь перемешивают в течение 10 мин при комнатной температуре. После фильтрования полученные твердые продукты очищают посредством хроматографии с обращенной фазой (HP20ss, ацетонитрил:вода=20:80-35:65) с получением соединения I-393 (46 мг, 7%).

LC-MS:922,9 [M+H]+.

- 60 037093

Пример 60. Синтез соединения I-394.

Химическая формула 116

Стадия 1. Синтез соединения 3.

Соединение 1 (1 г, 0,992 ммоль) растворяют в NMP (7 мл) и смесь охлаждают до 0°С. Добавляют (7азабензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфоний гексафторфосфат (542 мг, 1,042 ммоль) и DIEA (0,26 мл, 1,49 ммоль) и смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Добавляют натрий борогидрид (113 мг, 2,98 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. В дополнение к этому добавляют натрий борогидрид (75 мг, 1,98 ммоль) и смесь перемешивают в течение одного часа при комнатной температуре. Добавляют ацетон и смолу IRA743 (1 г), смесь перемешивают в течение одного часа при комнатной температуре. Смесь фильтруют с помощью Celite®. Из смеси удаляют масло посредством добавления простого диизопропилового эфира и остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=95/5/0, 5-80/20/2) с получением соединения 2 (232 мг, 24%). Соединение 2 (232 мг, 0,233 ммоль) растворяют в NMP (3 мл) и добавляют морфолин (0,142 мл, 1,63 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (27 мг, 0,023 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-70/30/5) с получением соединения 3 (81 мг, 38%).

LC-MS: m/z 910,5 [М+Н]+, 932,5[M+Na]+.

Стадия 2. Синтез соединения I-394.

Соединение 3 (200 мг, 0,220 ммоль) растворяют в DMF (2 мл) и добавляют 1Н-пиразол-1карбоксиимидамид гидрохлорид (169 мг, 1,15 ммоль) и DIEA (0,269 мл, 1,54 ммоль). Смесь перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. После преобразования в порошок посредством добавления простого диизопропилового эфира полученный порошок очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (аминосиликагель, смесь хлороформ/метанол/вода=70/30/3-50/50/5) с получением соединения I-394 (110 мг, 53%).

LC-MS: m/z 952,8 [М+Н]+.

Пример 61. Синтез соединения I-395.

Химическая формула 117

Синтез соединения I-395.

Соединение 3 (100 мг, 0,11 ммоль) растворяют в DMF (1 мл) и добавляют DIEA (0,096 мл, 0,55 ммоль), цианоген бромид (11,6 мг, 0,11 ммоль) и гидроксиламин гидрохлорид (7,64 мг, 0,11 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания смеси в течение 5 ч при комнатной температуре добав- 61 037093 ляют гидроксиламин гидрохлорид (1,53 мг, 0,022 ммоль). После перемешивания смеси в течение 15 ч при комнатной температуре добавляют простой изопропиловый эфир с получением твердых продуктов.

Полученные твердые продукты очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол/вода=50/45/5) с получением соединения I-395 (36 мг, 27%).

LC-MS: m/z 968,5 [М+Н]+.

Пример 62. Синтез соединения I-396.

Химическая формула 118

Стадия 1. Синтез соединения I-c.

Амфотерицин В (10 г, 9,7 4 ммоль) растворяют в диметилформамиде (25 мл) и метаноле (25 мл) и добавляют пиридин (9 мл, 112 ммоль) и Fmoc-OSu (9,20 г, 27,3 ммоль). Смесь перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Реакционный раствор выливают в простой изопропиловый эфир (1000 мл) и энергично перемешивают. Полученный в результате порошок отфильтровывают. Полученные твердые продукты промывают простым изопропиловым эфиром и сушат в вакууме с получением сырого соединения I-c (14,27 г). Время удерживания соединения I-c составляет 13 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-В7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм). Время удерживания исходных материалов амфотерицин В составляет 8,6 мин при таких же условиях.

Стадия 2. Синтез соединения I-396.

Соединение I-c (2 г, 1,745 ммоль) растворяют в Х,Х-диметилформамиде (18 мл) и добавляют РуВОР (2,72 г, 5,23 ммоль) и Х,Х-диизопропилэтиламин (1,52 мл, 8,72 ммоль). Добавляют соединение 49 (1,087 г, 2,62 ммоль), синтезированное в примере 27, и смесь перемешивают в течение 5 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь выливают в простой диизопропиловый эфир (300 мл) и энергично перемешивают. Полученный в результате порошок отфильтровывают и очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ:метанол, содержащая 10% воды=9:1-1:1-3:7) с получением соединения 1 (1,95 г, 72%). Время удерживания соединения 1 составляет 9,5 мин согласно анализу ВЭЖХ (смесь метанол/дистиллированная вода, содержащая 0,1% PIC-B7=градиент от 70/30 до 100/0, скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования=385 нм).

Стадия 3.

Соединение 1 (1,84 г, 1,192 ммоль) растворяют в Х,Х-диметилформамиде (10 мл) и добавляют пиперидин (1,18 мл, 11,92 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч на ледяной бане. Реакционную смесь выливают в простой диизопропиловый эфир (300 мл) и энергично перемешивают. Полученный в результате порошок отфильтровывают с получением сырых смолистых твердых продуктов (1,98 г) . Получен- 62 037093 ные в результате твердые продукты очищают посредством хроматографии с обращенной фазой (HP20ss, смесь ацетонитрил-вода). Полученные в результате фракции конденсируют и лиофилизируют с получением соединения I-396 (350 мг, 23%).

m/z 1321,7 [М+Н]⁺.

Элементный анализ: (C62H100N2O28) (Н2О)8,9.

Вычисленное значение: С 50,25; Н 8,01; N 1,89 (%).

Реальное значение: С 50,21; Н 7,91; N 2,53 (%).

Пример синтеза боковой цепи показан следующим образом.

Справочный пример 4. Синтез соединения 2 (боковая цепь соединения I-162).

Химическая формула 119

Стадия 1. Синтез соединения 2.

Соединение 1 (5,0 г, 12,1 ммоль) суспендируют в дихлорметане (50 мл) и добавляют хлористоводородную кислоту (4 моль/л, раствор в диоксане, 6 мл). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Полученные в результате твердые продукты отфильтровывают и сушат с получением соединения 2. Соединение 2 используют для синтеза соединения I-162 без очистки.

Справочный пример 5. Синтез соединения 4 (боковая цепь соединения I-169).

Химическая формула 120

Стадия 1. Синтез соединения 3.

Соединение 2, полученное на стадии 1 примера 1, и соединение 1 (1,0 г, 2,87 ммоль) растворяют в дихлорметане (10 мл) и добавляют триэтиламин (795 мл, 5,73 ммоль) и Alloc-OSu (1,0 г, 2,87 ммоль). Смесь перемешивают в течение 2,5 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляют посредством выпаривания в вакууме и смесь экстрагируют посредством добавления воды к остатку. После промывки органической фазы насыщенным водным раствором аммония хлорида и насыщенным раствором соли органическую фазу сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель выпаривают в вакууме и полученный остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат) с получением соединения 3 (760 мг, 67%).

1Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 3,26-3,46 (м, 3Н), 3,53-3,70 (м, 3Н), 4,20 (т, J=6,9 Гц, 1Н), 4,40 (д, J=6, 9 Гц, 2Н), 4,58 (д, J=6,0 Гц, 2Н), 5,05-5,09 (м, 1Н), 5,10-5,34 (м, 3Н), 5,90 (дат, J=17,0, 10,7, 5,8 Гц, 1Н), 7,31 (т, J=7,3, Гц, 2Н), 7,40 (т, J=7,3 Гц, 2Н), 7,58 (д, J=7,3 Гц, 2Н), 7,76 (д, J=7,3 Гц, 2Н).

Стадия 2. Синтез соединения 4.

Соединение 3 (790 мг, 1,99 ммоль) растворяют в дихлорметане (10 мл) и добавляют пиперидин (395 мл, 3,99 ммоль). Смесь перемешивают в течение 3,5 ч при комнатной температуре. После выпаривания растворителя в вакууме и растворения в метаноле масло из растворителя удаляют посредством добавления простого изопропилового эфира для удаления растворителя. Эту операцию повторяют два раза. Соединение 4 используют для синтеза соединения I-169 без очистки.

Справочный пример 6. Синтез соединения 12 (боковая цепь соединения I-163).

Химическая формула 121

Стадия 1. Синтез соединения 6.

Соединение 5 (3,27 г, 14,9 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (15 мл) и добавляют к смеси дифенилдиазометан (3,48 г, 17,9 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре. Реакционную смесь конденсируют и полученный остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат) с получением соединения 6 (5,17 г, 90%).

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,44 (с, 9Н), 1,56-1,60 (м, 2Н), 2,22-2,28 (м, 1Н), 3,27-3,30 (м, 1Н), 3,62-3,70 (м,

- 63 037093

2Н), 4,58-4,65 (м, 1Н), 5,38 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 6,90 (с, 1Н), 7,27-7,36 (м, 10Н).

Стадия 2. Синтез соединения 7.

Соединение 6 (2,1 г, 5,45 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (5 мл) и тетрагидрофуране (5 мл) и добавляют имидазол (816 мг, 12 ммоль) и TBS хлорид (985 мг, 6,54 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1ч при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. После промывки органической фазы водой и насыщенным раствором соли органическую фазу сушат над безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат) с получением соединения 7 (2,4 г, 88%).

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0,03 (с, 3Н), 0,05 (с, 3Н), 0,90 (с, 9Н), 1,49 (с, 9Н), 1,95-2,19 (м, 2Н), 3,55-3,64 (м, 1Н), 3,66-3,74 (м, 1Н), 4,52-4,60 (м, 1Н), 5,84 (д, J=7,0 Гц, 1Н), 6,95 (с, 1Н), 7,32-7,41 (м, 10Н).

Стадия 3. Синтез соединения 8.

Соединение 7 (2,45 г, 4,9 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (20 мл) и метаноле (10 мл) и смесь охлаждают до 0°С. Добавляют по каплям литий триэтилборогидрид (12 мл, раствор 2 моль/л, 23,9 ммоль) и смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. К смеси добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. После промывки органической фазы водой и насыщенным раствором соли органическую фазу сушат над безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат) с получением соединения 8 (2,4 г, 88%).

¹Н-ЯМР (CDCl3) δ: 0,08 (с, 6Н), 0,91 (с, 9Н), 1,44 (с, 9Н), 1,63-1,76 (м, 1Н), 1,79-1,89 (м, 1Н), 3,403,48 (м, 1Н), 3,58-3,69 (м, 2Н), 3,70-3,81 (м, 3Н), 5,40-5,50 (м, 1Н).

Стадия 4. Синтез соединения 9.

Соединение 8 (3,71 г, 11,6 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (20 мл) и добавляют фталимид (2,05 г, 13,9 ммоль), трифенилфосфин (3,65 г, 13,9 ммоль) и DMAD (5,16 мл, 13,9 ммоль, раствор 2,7 моль/л). Смесь перемешивают при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляют водный раствор насыщенного бикарбоната натрия и смесь экстрагируют этилацетатом. После промывки органической фазы водой и насыщенным раствором соли органическую фазу сушат над безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат) с получением соединения 9 (4,68 г, 90%).

Ή-ЯМР (CDCl3) δ: 0,07 (с, 3Н), 0,09 (с, 3Н), 0,91 (с, 9Н), 1,22 (с, 9Н), 1,63-1,71 (м, 1Н), 1,80-1,93 (м, 1Н), 3,70-3,86 (м, 4Н), 4,08-4,17 (м, 1Н), 5,12 (д, J=8,0 Гц, 1Н), 7,66-7,72 (м, 2Н), 7,80-7,86 (м, 2Н).

Стадия 5. Синтез соединения 11.

Соединение 9 (2,23 г, 4,97 ммоль) растворяют в дихлорметане (15 мл) и метаноле (1 мл) и добавляют хлористоводородную кислоту (4 моль/л раствор в диоксане, 5 мл). Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученные в результате твердые продукты отфильтровывают с получением соединения 10. Соединение 10 используют на следующей стадии без дополнительной очистки. Соединение 10 растворяют в дихлорметане (10 мл) и добавляют Alloc-OSu (1,11 г, 5,6 ммоль) и триэтиламин (1,55 мл, 11,1 ммоль). Смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. После промывки органической фазы водой и насыщенным раствором соли органическую фазу сушат над безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат) с получением соединения 11 (1,47 г, 99%).

1И-ЯМР (DMSO-06) δ: 1,50-1,70 (м, 2Н), 3,34-3,50 (м, 2Н), 3,52-3,66 (м, 2Н), 3,86-3,97 (м, 1Н), 4,204,37 (м, 2Н), 4,44 (т, J=5,0 Гц, 1Н), 5,03 (дкв, J=10,4, 1,5 Гц, 1Н), 5,14 (дд, J=17,3, 1,5 Гц, 1Н), 5,71 (ддт, J=17,3, 10,4, 5,5 Гц, 1Н), 7,08 (д, J=8,9 Гц, 1Н), 7,80-7,88 (м, 4Н).

Стадия 6. Синтез соединения 12.

Соединение 11 (1,47 г, 4,62 ммоль) растворяют в этаноле (10 мл) и добавляют гидразин гидрат (337 мл, 6,93 ммоль). Смесь перемешивают в течение 6 ч при 80°С. Реакционную смесь фильтруют и конденсируют с получением соединения 12. Соединение 12 используют для синтеза соединения I-163 без очистки.

Справочный пример 7. Синтез соединения 15 (боковая цепь соединения I-168).

Химическая формула 122

Стадия 1. Синтез соединения 14.

Соединение 9 (2,46 г, 5,48 ммоль) растворяют в этаноле (20 мл) и добавляют гидразин гидрат (533

- 64 037093 мл, 11 ммоль). Смесь перемешивают в течение 4 ч при 80°С. Реакционную смесь фильтруют и конденсируют с получением соединения 13. Полученное в результате соединение 13 растворяют в дихлорметане (10 мл) и добавляют Alloc-OSu (1,68 г, 8,4 ммоль) и DIEA (0,98 мл, 5,62 ммоль). Смесь перемешивают в течение 20 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь конденсируют. К смеси добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. После промывки органической фазы водой и насыщенным раствором соли органическую фазу сушат над безводным сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат) с получением соединения 14 (1,75 г, 77%).

¹Н-ЯМР (CDCI3) δ: 0,06 (с, 6Н), 0,90 (с, 9Н), 1,43 (с, 9Н), 1,59-1,70 (м, 1Н), 1,72-1,85 (м, 1Н), 3,203,31 (м, 1Н), 3,31-3,41 (м, 1Н), 3,65-3,83 (м, 4Н), 4,55 (д, J=5,5 Гц, 2Н), 5,19 (дд, J=10,4, 1,0 Гц, 1Н), 5,29 (дд, J=17,2, 1,0 Гц, 1Н), 5,35-5,43 (м, 1Н), 5,90 (ддт, J=17,2, 10,4, 5,5 Гц, 1Н).

Стадия 2. Синтез соединения 15.

Соединение 14 (1,75 г, 4,35 ммоль) растворяют в дихлорметане (10 мл) и метаноле (1 мл) и добавляют хлористоводородную кислоту (раствор 4 моль/л в диоксане, 2,2 мл). Смесь перемешивают в течение одного часа при комнатной температуре. Реакционную смесь конденсируют с получением соединения 15. Соединение 15 используют для синтеза соединения I-168 без очистки.

Справочный пример 8. Синтез соединения 18 (боковая цепь соединения I-225).

Химическая формула 123

17 18

Стадия 1. Синтез соединения 17.

Вос-гидразин (2,1 г, 15,9 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (20 мл). После охлаждения смеси до 0°С добавляют пиридин (4,1 мл, 50,8 ммоль) и п-нитрофенил хлорформиат (3,52 г, 17,5 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1,5 ч при 0°С. После этого добавляют соединение 16 (1,88 г, 20,7 ммоль) и DIEA (3,61 мл, 20,7 ммоль) и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляют в вакууме и полученный остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь хлороформ/метанол) с получением соединения 17 (2,9 г, 73%).

'H-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 1,38 (с, 9Н), 2,90-2,98 (м, 1Н), 3,10-3,51 (м, 4Н), 4,54 (т, J=5,7 Гц, 1Н), 4,77 (д, J=4,5 Гц, 1Н), 6,14-6,19 (м, 1Н), 7,72 (с, 1Н), 8,5' (с, 1Н).

Стадия 2. Синтез соединения 18.

Соединение 17 (2,9 г, 11,6 ммоль) растворяют в дихлорметане (30 мл) и добавляют хлористоводородную кислоту (4 моль/л, раствор в диоксане, 6 мл). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь конденсируют с получением соединения 18. Соединение 18 используют для синтеза соединения I-225 без очистки.

Справочный пример 9. Синтез соединения 21 (боковая цепь соединения I-233).

Химическая формула 124 он он он

Стадия 1. Синтез соединения 21.

Соединение 19 (1 г, 5,2 ммоль) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (5 мл), и добавляют Восгидразин (688 мг, 5,2 ммоль), DIEA (1,8 мл, 10,4 ммоль) и HATU (1,98 г, 5,2 ммоль). Смесь перемешивают в течение 17 ч при комнатной температуре. Из смеси удаляют масло посредством добавления простого диизопропилового эфира (50 мл), и растворитель удаляют с получением соединения 20. Полученное в результате соединение 20 суспендируют в дихлорметане (15 мл) и добавляют хлористоводородную кислоту (раствор в диоксане, 4 моль/л, 6 мл). Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтруют и сушат с получением соединения 21. Соединение 21 используют для синтеза соединения I-233 без очистки.

Справочный пример 10. Синтез соединения 24 (боковая цепь соединения I-240).

Химическая формула 125

23 24

Стадия 1. Синтез соединения 24.

Соединение 22 (2,75 г, 17,2 ммоль) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (10 мл), и добавляют Восгидразин (2,27 г, 17,2 ммоль), DIEA (6,0 мл, 34,3 ммоль) и HATU (6,53 г, 17,2 ммоль). Смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. Добавляют насыщенный водный раствор аммония хлорида и смесь экстрагируют хлороформом. После промывки органической фазы насыщенным раствором соли органическую фазу сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель удаляют в вакууме с по- 65 037093 лучением соединения 23. Полученный в результате остаток суспендируют в дихлорметане (15 мл) и добавляют хлористоводородную кислоту (4 моль/л, раствор в диоксане, 14 мл). Смесь перемешивают в течение 3,5 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтруют и сушат с получением соединения 24. Соединение 24 используют для синтеза соединения I-240 без очистки.

Справочный пример 11. Синтез соединения 27 (боковая цепь соединения I-247).

Химическая формула 126

Стадия 1. Синтез соединения 26.

Соединение 25 (1 г, 6,94 ммоль) растворяют в этаноле (1 мл) и добавляют гидразин моногидрат (0,371 мл, 7,63 ммоль). Смесь перемешивают в течение 6 дней при нагреве с обратным холодильником. После охлаждения смеси до комнатной температуры добавляют Вос₂О (3,54 мл, 15,3 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Полученный посредством выпаривания растворитель очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат) с получением соединения 26 (560 мг, 35%).

’И-ЯМР (CDC13) δ: 0,72-0,76 (м, 2Н), 1,26-1,31 (м, 2Н), 1,47 (с, 9Н), 3,23 (с, 1Н), 3,71 (с, 2Н), 6,66 (с, 1Н), 8,84 (с, 1Н).

Стадия 2. Синтез соединения 27.

Соединение 26 (500 мг, 2,17 ммоль) суспендируют в дихлорметане (10 мл) и добавляют хлористоводородную кислоту (4 моль/л, раствор в диоксане, 1 мл). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтруют и полученные твердые продукты сушат с получением соединения 27. Соединение 27 используют для синтеза соединения I-247 без очистки.

Справочный пример 12. Синтез соединения 30 (боковая цепь соединения I-256).

Химическая формула 127

Стадия 1. Синтез соединения 29.

Соединение 28 (2 г, 15,5 ммоль) растворяют в N,N-диметилформамиде (10 мл), и добавляют Восгидразин (2,05 г, 15,5 ммоль), HATU (5,89 г, 15,5 ммоль) и DIEA (5,41 мл, 31 ммоль). Смесь перемешивают в течение 16 ч при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляют в вакууме. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат) с получением остатка, содержащего соединение 29. Соединение 29 используют на следующей стадии без дополнительной очистки. Полученное в результате соединение 29 растворяют в дихлорметане (10 мл) и добавляют хлористоводородную кислоту (4 моль/л, раствор в диоксане, 15 мл). Смесь перемешивают в течение 7 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтруют, и полученные твердые продукты сушат с получением соединения 30. Соединение 30 используют для синтеза соединения I-256 без очистки.

Справочный пример 13. Синтез соединения 33 (боковая цепь соединения I-257).

Химическая формула 128

Стадия 1. Синтез соединения 32.

Соединение 31 (1 г, 9,8 ммоль) растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (20 мл) и добавляют Восгидразин (1,3 г, 9,8 ммоль), HATU (3,72 г, 9,8 ммоль) и DIEA (3,42 мл, 20 ммоль). Смесь перемешивают в течение 16 ч при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над безводным сульфатом магния, и растворитель удаляют в вакууме. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (смесь гексан/этилацетат) с получением соединения 32 (1,38 г, 65%).

'll-ЯМР (DMSO-d₆) δ: 0,86 (кв., J=3,8 Гц, 2Н), 1,01 (кв., J=3,8 Гц, 2Н), 1,40 (с, 9Н), 6,24 (с, 1Н), 8,62 (с, 1Н), 9,51 (с, 1Н).

Стадия 2. Синтез соединения 33.

Соединение 32 (1,3 г, 6,0 ммоль) растворяют в дихлорметане (10 мл) и добавляют хлористоводородную кислоту (4 моль/л, раствор в диоксане, 9 мл). Смесь перемешивают в течение 7 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтруют, и полученные твердые продукты сушат с получением соединения 33. Соединение 33 используют для синтеза соединения I-257 без очистки.

- 66 037093

Справочный пример 14. Синтез соединения 36 (боковая цепь соединения I-80).

Химическая формула 129

Стадия 1. Синтез соединения 35.

2-Гидроксиизоиндолин-1,3-дион растворяют в N,N-диметилформамиде (60 мл) и добавляют соединение 34 (5,86 г, 36 ммоль), карбонат калия (9,12 г, 66,0 ммоль) и бромид калия (1,78 г, 15 ммоль). Смесь перемешивают в течение 5 ч при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляют лед, полученный в результате остаток отфильтровывают и промывают водой с получением соединения 35 (5,16 г, 63%).

Масс-спектрометрия (М+1): 276.

Стадия 2. Синтез соединения 36.

Соединение 35 (2,202 г, 8 ммоль) растворяют в дихлорметане (40 мл) и добавляют метилгидразин. Смесь перемешивают в течение 2 ч. После концентрирования смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле. К конденсированному раствору добавляют 4 ммоль/л HCl/AcOEt (5 мл) с получением соединения 36 (1,08 г, 62%). Соединение 36 используют для синтеза соединения I-80 без очистки.

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ:4,56 (с, 2Н), 5,00-5,20 (ушир., 2Н), 5,40-5,80 (ушир., 2Н), 6,47 (с, 1Н).

Справочный пример 15. Синтез соединения 40 (боковая цепь соединения I-226).

Химическая формула 130

Стадия 1. Синтез соединения 38.

Раствор трет-бутил 3-аминоазетидин-1-карбоксилата (соединение 37: 1,26 г, 7 ммоль) в дихлорметане (6 мл) добавляют к раствору (6 мл) (R)-2,2-диметил-1,3-диоксолан-4-карбальдегида (1,00 г, 7,70 ммоль) в дихлорметане. После охлаждения реакционной смеси до 0°С добавляют натрий триацетоксиборогидрид (2,23 г, 10,5 ммоль). После перемешивания смеси в течение 4 ч при комнатной температуре смесь инкубируют в течение 12 ч. Добавляют насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, и смесь экстрагируют этилацетатом и промывают насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и конденсируют с получением соединения 38 (2 г, 99%).

Стадия 2. Синтез соединения 39.

После охлаждения раствора в дихлорметане (20 мл) соединения 38 (2 г, 6,98 ммоль) до 0°С добавляют триэтиламин (1,45 мл, 10,5 ммоль) и аллил хлорформиат (0,97 мл, 9,08 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После концентрирования добавляют воду. Смесь экстрагируют этилацетатом и промывают насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и конденсируют. Полученный в результате остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения 39 (1,34 г, 52%).

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,33 (с, 3Н), 1,42 (с, 3Н), 1,61 (с, 9Н), 3,25-3,30 (м, 1Н), 3,53-3,70 (м, 1Н), 4,004,20 (м, 7Н), 4,50-4,62 (м, 3Н), 5,26 (дд, J=12 Гц, 24 Гц, 2Н), 5,87-5,96 (м, 1Н).

Стадия 3. Синтез соединения 40.

Концентрированную хлористоводородную кислоту (3 мл) добавляют к раствору соединения 5 (1,34 г, 3,62 ммоль) в толуоле (3 мл) и тетрагидрофуране (2 мл) и смесь перемешивают в течение 3 ч при 65 °С. После этого добавляют концентрированную хлористоводородную кислоту (3 мл) и смесь перемешивают в течение 1,5 ч при 70°С. Соединение 40 получают посредством азеотропной отгонки с толуолом. Соединение 40 используют для синтеза соединения I-226 без очистки.

Справочный пример 16. Синтез соединения 44 (боковая цепь соединения I-227).

Химическая формула 131

- 67 037093

Стадия 1. Синтез соединения 42.

трет-Бутилгидразин карбоксилат (37,5 г, 283 ммоль) добавляют к этанольному раствору (67 мл) соединения 41 (7 г, 94 ммоль) и смесь перемешивают в течение 3 дней при комнатной температуре. После концентрирования смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения 42 (13,6 г, 70%).

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,51 (с, 9Н), 2,50-3,00 (м, 2Н), 3,50-3,60 (м, 3Н), 3,65-3,70 (м, 1Н), 3,71-3,90 (м, 1Н), 4,00-4,50 (ушир.,1Н), 6,30-6,40 (ушир.,1Н).

Стадия 2. Синтез соединения 43.

Аллил 2,5-диоксопирролидин-1-ил карбонат (219 мг, 1,1 ммоль) добавляют к раствору соединения 42 (206 мг, 1 ммоль) в тетрагидрофуране (2 мл) и смесь перемешивают в течение 12 ч при комнатной температуре. Добавляют аллил 2,5-диоксопирролидин-1-ил карбонат (299 мг, 1,5 ммоль) и смесь перемешивают в течение 8 ч. После концентрирования смесь очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением соединения 43 (142 мг, 49%).

1Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,54 (с, 9Н), 1,70-1,75 (ушир., 1Н), 3,80-3,98 (м, 4Н), 3,99-4,02 (м, 1Н), 4,86-4,74 (ушир., 2Н), 4,82-4,90 (м, 2Н), 5,27-5,42 (м, 2Н), 5,88-5,90 (м, 1Н).

Стадия 3. Синтез соединения 44.

Раствор в дихлорметане (0,5 мл) соединения 43 (58,1 мг, 0,2 ммоль) охлаждают до 0°С. Добавляют трифторуксусную кислоту (0,3 мл) и смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. После концентрирования соединение 44 используют для синтеза соединения I-227.

Справочный пример 17. Синтез соединения 47 (боковая цепь соединения I-244).

Химическая формула 132

Стадия 1. Синтез соединения 46.

После охлаждения до 0°С суспензионного раствора соединения 45 (1,24 г, 6 ммоль) в смеси тетрагидрофуран:дихлорметан=1:1 (24 мл) добавляют N,N-диизопропилэтиламин (5,24 мл, 30 ммоль) и йодметан (3,75 мл, 60 ммоль). Смесь перемешивают в течение 4 ч при комнатной температуре. После концентрирования смесь экстрагируют посредством добавления воды. После промывки органической фазы насыщенным раствором соли органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и конденсируют с получением соединения 46 (1,02 г, 77%).

1Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,46 (с, 9Н), 1, 62-1,73 (ушир., 1Н), 2,55 (д, J=12 Гц, 2H), 2,67 (с, 3Н), 2,80 (т, J=12 Гц, 1H), 3,48-3,60 (ушир., 1Н), 3,50-3,80 (м, 2Н), 5,58-5,60 (ушир., 1Н).

Стадия 2. Синтез соединения 47.

После охлаждения до 0°С раствора соединения 11 (551 мг, 2,5 ммоль) в дихлорметане (5 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (3,8 мл). Смесь перемешивают в течение 40 мин при 10°С. После этого смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 40 мин. Добавляют трифторуксусную кислоту (1,9 мл) и смесь перемешивают в течение 40 мин при комнатной температуре. Соединение 47 получают посредством азеотропной отгонки с толуолом. Соединение 47 используют для синтеза соединения I-244 без очистки.

Справочный пример 18. Синтез соединения 51 (боковая цепь соединения I-255).

Химическая формула 133

Стадия 1. Синтез соединения 49.

Соединение 48 (5,93 г, 55,9 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (25 мл) и добавляют 2,2диметоксипропан (10,27 мл, 84 ммоль) и п-толуолсульфоновую кислоту (1,063 г, 5,59 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч при 50°С. После этого смесь инкубируют в течение 12 ч. Добавляют карбонат калия (1,54 г, 11,2 ммоль) и смесь перемешивают в течение 30 мин. Смесь фильтруют и конденсируют. Добавляют насыщенный раствор соли и смесь экстрагируют хлороформом. Органическую фазу промывают насыщенным раствором соли, сушат над сульфатом магния и фильтруют и конденсируют с получением соединения 40.

Стадия 2. Синтез соединения 50.

Добавляют N-гидроксифталимид (6,36 г, 39,0 ммоль), трифенилфосфин (11,8 г, 45,0 ммоль) к раствору соединения 49 (4,39 г, 30 ммоль), в тетрагидрофуране (80 мл) и смесь охлаждают до 0°С. Добавляют диизопропил азодикарбоксилат (8,75 мл, 45,0 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч. После концентрирования сырое соединение 50, полученное с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, используют в следующей реакции.

- 68 037093

Стадия 3. Синтез соединения 51.

После охлаждения раствора (15 мл) соединения 15 (628 мг, 2,5 ммоль) в смеси дихлорметан:метанол=2:1 добавляют метилгидразин (0,146 мл, 2,75 ммоль). После перемешивания смеси в течение одного часа смесь конденсируют с получением соединения 51. Соединение 51 используют для синтеза соединения I-255 без очистки.

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 1,80-2,00 (м, 1Н), 3,40 (д, J=8 Гц, 4Н), 3,52 (д, J=8 Гц, 2Н).

Следующие соединения синтезируются в приведенных выше примерах. No. в таблицах означает № соединения; LC-MS в таблицах означает молекулярную массу каждого из соединений, измеренную с помощью жидкостной колоночной хроматографии/масс-спетрометрического анализа; Метод означает метод жидкостной колоночной хроматографии/масс-спектрометрического анализа.

Метод А.

Колонка: ACQUITY UPLC ВЕН С18 (1,7 мкм, 2,1x50 мм) (Waters).

Температура колонки: комнатная температура.

Скорость потока: 0,4 мл/мин.

Длина волны УФ-детектирования: 20-400 нм.

Подвижная фаза: [А] водный раствор с 0,1% муравьиной кислоты, [В] раствор в ацетонитриле с 0,1% муравьиной кислоты.

Градиент: линейный градиент 10-95% [В] в течение 8 мин.

Ионизация: ESI (электрораспылительная ионизация) положительная/отрицательная.

Метод В.

Колонка: ACQUITY UPLC ВЕН С18 (1,7 мкм, 2,1x50 мм) (Waters).

Скорость потока: 0,8 мл/мин.

Длина волны УФ-детектирования: 200-400 нм.

Градиент: линейный градиент 5-100% [В] в течение 3,5 мин, и выдерживают 100% [В] в течение 0,5 мин.

Ионизация: ESI положительная/отрицательная.

Химическая формула 134

Структура и физические свойства соединения (XIV) показаны ниже.

Таблица 1

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-1	ОН НО н	1158.6 [М + Н] +	В
1-2		1008.4 [М + Н]+, 1030.5 [М + №] +	А
1-3	н	996.9 [М + Н] +	В
1-4	н	998.5 [М + Н] +	В
1-5	н н	1032.5 [М + Н] +	А
1-6	ι 1 k. NH Н	1062.5 [М + Н] +	В
1-7		1023.6 [М + Н] +	А
1-8		1065.6 [М + Н] +	В
1-9		1033.4 [М + Н] +	В

- 69 037093

Таблица 2

No.	X¹	LC-MS	Метод
I-10		966.5 [Μ + Η] +	В
1-11	X ^χ·° Η	1070.5 [Μ+Η]+, 1092.5 [M + Na] +	А
1-12		1029.6 [М+Н]+, 1051.6 [M + Na] +	А
1-13	р ¹	1028.6 [М+Н]+, 1050.6 [M + Na] +	А
1-14	d	1029.6 [М + Н] +	В
1-15	Η	1043.5 [М + Н] +	А
1-16	Η	1035.6 [М + Н] +	А
1-17		1083.9 [М + Н] +	В

Таблица 3

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-18		1184.9 [М + Н] +	В
1-19	Н У	995.5 [М + Н] +	А
1-20	^н ГП Н о	1057.7 [М + Н] +	В
1-21	J F н	1020.5 [М + Н] +	В
1-22	О хХ	1082.6 [М + Н] +	в
1-23	—\ о	1148.8 [М + Н] +	в
1-24	In	1141.6 [М + Н] +	в

- 70 037093

Таблица 4

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-25		1140.7 [М + Н] +	В
1-26	9	1237.9 [М + Н] +	в
1-27	. ХУ н	1136.7 [М + Н] +	в
1-28	ЛЛ	1173.9 [М + Н] +	в
1-29		1082.7 [М + Н] +	в
1-30	<4qXJ	1082.7 [М + Н] +	в

Таблица 5

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-31	н	1026.4 [М + Н] +	А
1-32		1036.9 [М + Н] +	В
1-33	^>4'^ХЧ\у'>ОН ^н НО	1012.8 [М + Н] +	В
1-34	ь	1102.8 [М + Н] +	В
1-35	н	1094 [М + Н] +	В
1-36	Лчн₂	938.5 [М + Н] +	А
1-37	^нЧ-Х	996.2 [М + Н]+, 1018.3 [M + Na] +	А
1-38	н^^Ччо*	1024.6 [М + Н] +	А
1-39	С___он	1026.6 [М + Н]+, 1048.6 [M + Na] +	А

- 71 037093

Таблица 6

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-40	ОН н	1012.4 [М + Н]+_г 1034.5 [M + Na] +	В
1-41		978.3 [М + Н]+, 1000.4 [M + Na] +	А
1-42	1	1071.6 [М + Н] +	В
1-43	Η Η	981.4 [М + Н] +	А
1-44	Н о	1058.7 [М + Н] +	В
1-45	н г Π Н О	1058.7 [М + Н] +	В
1-46	^н \ ίϊ Н о	1058.7 [М + Н] +	В
1-47	^н о	1011.4 [М + Н]+_г 1033.4 [M + Na] +	А
1-48	н	1035.6 [М + Н] +	А

Таблица 7

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-49	/	1035.7 [М + Н] +	В
1-50	/	1035.7 [М + Н] +	в
1-51	н	1009.5 [М + Н]+_г 1031.5 [M + Na] +	А
1-53	^Х	1023.7 [М + Н] +	А
1-54		1049.7 [M + HJ +	в
1-55		1038.6 [М + Н]+, 1060.6 [M + Na] +	А
1-56	О	1031.5 [М + Н] +	А
1-57	н	1014.5 [М + Н] +	А
1-58	н	981.4 [М + Н] +	А

- 72 037093

Таблица 8

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-59	<4>^ Η	968.5 [Μ + Η] +	А
1-60	<4-U^H‘ Η (з	996.5 [Μ + Η] +	А
1-61	Η	994.5 [Μ + Η]+, 1016.5 [Μ + №] +	А
1-62		1007.5 [Μ + Η]+, 1029.5 [M + Na] +	А
1-63	4-° Η	1012.5 [Μ + Η] +	А
1-64	Η /О ο	1059.5 [M + HJ+, 1081.5 [M+Na] +	А
1-65	^н У° Η	1060.5 [Μ + Η]+, 1082.5 [M + Na] +	А
1-66	<4-0 Η	1036.5 [Μ + Η]+, 1058.5 [M + Na] +	А
1-67	<4 Φ уН; ^Η ΗΝ	1023.5 [Μ + Η] +	А
1-68	I ^χο ο	1067.5 [Μ + Η] +	А

Таблица 9

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-69	Н Н	1034.5 [М + Н] +	А
1-70	νη₂ н н	1039.5 [М + Н] +	А
1-71	°ф^н' <4-0 ° н	1100.4 [М + Н]+_г 1122.5 [M + Na] +	А
1-72	о ^<4 н	1099.4 [М + Н]+, 1121.5 [M + Na] +	А
1-73	н	1026.5 [М + Н] +	А
1-74	он хАф^ОН ^Н уХн Soh	1116.5 [М + Н] +	А
1-75	<4-°^™ н	998.4 [М + Н] +	А
1-76	<4-0 н	1066.6 [M + HJ +	А
1-77		1010.5 [М + Н] +	А

- 73 037093

Таблица 10

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-78	Η ι	1024.5 [Μ + Η] +	А
1-79	Η I	1025.7 [Μ + Η] +	А
1-80	Η	1066.5 [Μ + Η] +	А
1-81	Α 1 Η	1009.6 [M + HJ+, 1031.6 [M + Na] +	А
1-82	^н но	1012.4 [Μ + Η]+, 1034.4 [M + Na] +	В
1-83	η 1 ΌΗ	1026.5 [Μ + Η] +	А
1-84	ο II	1082.5 [Μ + Η]+, 1104.5 [M + Na] +	А
1-85	Η ο	1024.5 [Μ + Η]+, 1046.5 [M + Na] +	А
I 86	Ζ Доп Η ο	1010.5 [Μ + Η] +	А
1-87	Η ο	1040.4 [M + HJ+, 1062.5 [M + Na] +	А

Таблица 11

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-88	н	1040.6 [М + Н]+, 1062.6 [M + Na] +	А
1-89	н о Н о	1053.5 [М + Н]+, 1075.5 [M + Na] +	А
1-90	^нХн/Г	995.5 [М + Н] +	А
1-91	н о J м II н^о	1067.5 [М + Н]+, 1089.5 [M + Na] +	А
1-92	н	1032.4 [М + Н]+, 1054.4 [M + Na] +	А
1-93	н ^н Н/Г	1024.4 [М + Н]+, 1046.4 [M + Na] +	А
1-94	н ^fV	1182.5 [М + Н]+, 1204.5 [M + Na] +	А
1-95	^Н nh₂	1080.4 [М + Н]+, 1102.4 [M + Na] +	А
1-96		1048.5 [М + Н]+, 1070.5 [M + Na] +	А

- 74 037093

Таблица 12

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-97	О . ___„ ^н °Л	1102.4 [M + H]+, 1124.4 [M + Na] +	А
1-98	о	1129.6 [M + H] +	А
1-99	он эк?;	1042.5 [M + H] +	А
1-100	О н 1	1037.5 [М + Н] +	А
1-101	^н Η/*!	1057.6 [М + Н] +	А
1-102		977.4 [М + Н] +	А
1-103	Η	1024.6 [М + Н] +	А
1-104	Ο^	1058.6 [М + Н] +	А

Таблица 13

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-105	^н у	1003.5 [М + Н] +	А
1-106	А. А^н₂Н о	1009.6 [М + Н] +	А
1-107	но 'W	1046.5 [М + Н]+, 1068.4 [М + №] +	А
1-109	он	1072.5 [М + Н] +	А
1-110	h₂n	1071.6 [М + Н] +	А
1-111	н ЭэА	1009.6 [М + Н] +	А
1-112	н о	1124.6 [М + Н] +	А
1-113	νη₂	1071.6 [М + Н] +	А

- 75 037093

Таблица 14

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-114	Н/4 О	1071.6 [M + H]+, 1093.6 [M + Na] +	A
1-115	О J Js^² H b	1045.5 [M + H] +	A
1-116		1116.6 [M + H] +	A
1-117	H r^O %V^H· H о	1124.6 [M + H] +	A
1-118	H ^H 4/	1081.6 [M + H] +	A
1-119	^H HO	1012.5 [M + H] +	A
1-120	bpQ	1063.6 [M + H] +	A

Таблица 15

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-121		1030.6 [M + H]+, 1052.6 [M + Na] +	A
1-122		1061.6 [M + H] +	A
1-123	H Q Η H	1130.7 [M + H] +	A
1-124	H ^H ^F F	1098.6 [M + H] +	A
1-125	H F	1098.6 [M + H] +	A
1-126	НО'Х/	1044.6 [M + H] +	A
1-127	H	1050.6 [M + H]+, 1072.6 [M + Na] +	A
1-128	к /ч/ ¹ h	1051.7 [M + H] +	A

- 76 037093

Таблица 16

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-129	Х'Хон н	1026.6 [М + Н] +	А
1-130	nh₂	1025.6 [М + Н]+, 1047.6 [M + Na] +	А
I 131	^н С/	1035.6 [М + Н]+, 1057.6 [M + Na] +	А
1-132	н	1076.5 [М + Н] +	А
1-133	н	995.6 [М + Н]+, 1017.6 [M + Na] +	А
1-134	н / ™	1061.7 [М + Н] +	А
1-135	н	1049.6 [М + Н] +	А
1-136	н	1045.5 [М + Н]+, 1067.5 [M + Na] +	А

Таблица 17

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-137		1101.6 [М + Н]+, 1123.6 [M + Na] +	А
1-138	4	1058.6 [М + Н]+, 1080.6 [M + Na] +	А
1-139		1010.5 [М + Н] +	А
1-140	^н	1072.6 [М + Н] +	А
1-141	h₂n^Z	1107.6 [М + Н] +	А
1-142	н	1023.6 [М + Н] +	А
1-143	7'	1044.5 [М + Н] +	А
1-144	он ^н	1025.5 [М + Н] +	В

- 77 037093

Таблица 18

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-145	Λ·^,^ΝΗ- А/ V)	1035.6 [Μ + Η] +	В
1-146	он Η	1026.6 [M + HJ +	А
1-147	^н На Η₂νΑ^	1059.6 [Μ + Η] +	А
1-148	Η Η	995.5 [Μ + Η] +	А
I 149	у Η ο	1025.6 [Μ + Η] +	А
1-150	Η ^н Ό	1059.6 [Μ + Η] +	А
1-151	Η он ^Η ο	1069.6 [Μ + Η] +	А
1-152	^Η	1045.6 [Μ + Η] +	А
1-153	η₂ν у Ху Η	1064.5 [Μ + Η] +	А

Таблица 19

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-154	jL NH <Α,.ΠχΝΗ₂Н S	1075.5 [М + Н] +	А
1-155		1069.6 [М + Н] +	А
1-156	Η ^H o'	1087.6 [М + Н] +	А
1-157	Н	1034.5 [М + Н] +	А
1-158		1051.6 [М + Н] +	А
1-159		1021.6 [М + Н] +	А
1-160	Η ^н о	1038.6 [М + Н] +	А
1-161	^н но	1026.5 [М + Н] +	А
1-162	^Н НгЫ	1011.5 [М + Н] +	А

- 78 037093

Таблица 20

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-163	^H	1025.6 [M + H] +	A
1-164	AA ^н о 1 OH	1098.6 [M + H] +	A
I 165	H	1037.5 [M + H] +	A
1-166		994.5 [M + H] +	A
1-167	H	1064.6 [M + H] +	A
1-168	nh₂ H	1025.5 [M + H] +	A
I 169	nh₂ H	1011.5 [M + H] +	A
I 170	C-L^OH	1008.4 [M + H] +	A
1-171	. H H^—// Η N—V	1022.5 [M + H] +	A

Таблица 21

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-172	H^	1043.5 [М + Н] +	А
1-173	^H LcA Η,Ν	1044.5 [М + Н] +	А
1-174	Η	1069.5 [М + Н]+, 1091.5 [M + Na] +	А
1-175	^H ηνΥ	1020.5 [М + Н] +	А
1-176	^νΆΑ I	1071.5 [М + Н] +	А
1-177	он НО ^н но	1100.5 [М + Н] +	А
1-178	н	1024.5 [М + Н]+, 1046.6 [M + Na] +	А
1-179	1 н	1039.5 [М + Н]+, 1061.6 [M + Na] +	А

- 79 037093

Таблица 22

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-180		1030.5 [M + Na] +	А
1-181	н	963 [М + Н] +	А
1-182	н ^н L Sdh	1055.6 [Μ + Η]+, 1077.6 [M + Na] +	А
1-183	nh₂ н Ч- Η,Ν^Ο	1095.5 [M + H] +	А
1-184	8	1044.4 [M + H] +	А
1-185	С	1109.5 [М + Н]+, 1131.5 [M + Na] +	А
1-186	н ^н нгЧ	1022.5 [М + Н] +	А
1-187	^н U л	1060.4 [М + Н] +	А

Таблица 23

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-188		1097.5 [М + Н] +	А
1-189		1021.5 [М + Н] +	А
1-190	он он ^Н НО но	1102.4 [М + Н] +	А
1-191	Н/Ч ^н^Л^⁰	1037.4 [М + Н] +	А
1-192		1096.4 [М + Н] +	А
1-193	н < /	1038.5 [М + Н] +	А
I 194	^н Н о	1143.4 [М + Н] +	А
1-195	η₂ν н	1064.5 [М + Н] +	А

- 80 037093

Таблица 24

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-196	_г ^он н	1118.5 [Μ + Η] +	Α
1-197	н ^н О Н/1	1073.4 [Μ + Η] +	Α
1-198	н г П ^н О HjN	1073.6 [Μ + Η] +	Α
1-199	nh₂ Η Η	1038.6 [M + HJ +	Α
1-200	γ=% Η Αν νη₂ο	1111.6 [Μ + Η]+, 1133.6 [Μ + №] +	Α
1-201	ο он	1036.5 [Μ + Η] +	Α
1-202	ο J Α~ΟΗ Η	1036.5 [Μ + Η] +	Α
1-203	но. .ο Ρ ΝΗ, Η	1053.3 [Μ + Η]+, 1075.4 [M + Na] +	Α

Таблица 25

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-204	^Η ΗΟ^	1022.4 [M + HJ +	А
1-205	^н ΗΟ^·^-0	1024.4 [М + Н]+, 1046.4 [M + Na] +	А
1-206		1052.6 [M + H] +	А
1-207	ΗΟ^_^ Η	1022.6 [M + H] +	А
1-208	Η он	1039.5 [М + Н]+, 1061.6 [M + Na] +	А
1-209	Η	1023.5 [М + Н] +	А
1-210	Η Q 1	1038.6 [М + Н] +	А
1-211	Η ο	1023.5 [М + Н]+, 1045.6 [M + Na] +	А
1-212	HjN	997.8 [М + Н] +	В
1-213		1026.9 [М + Н] +	В

- 81 037093

Таблица 26

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-214	н \—J ^н ο⁷/^⁰	1083.4 [М + Н]+, 1105.4 [M + Na] +	А
1-215	Η Η ^Η S	1026.3 [М + Н]+_г 1048.4 [M + Na] +	А
1-216	Η Η Υ/ΊΊ ^{Μ s} \	1088.4 [М + Н]+, 1110.4 [M + Na] +	А
1-217	^Η s	1139.5 [М + Н]+, 1161.5 [M + Na] +	А
1-218	^н о	1012.4 [М + Н] +	А
1-219	да°^нн	954.4 [М + Н]+, 976.5 [M + Na] +	А
1-220	Н Н ^NH2 ^н о	1053.5 [М + Н] +	А
1-221	худа	1073.5 [М + Н] +	А
1-222	гЧ^х^у но н	1067.5 [М + Н]+, 1089.5 [M + Na] +	А

Таблица 27

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-223	н он (Ч да Н У	1041.4 [М + Н]+, 1063.5 [M + Na] +	А
1-224	Р I Z ^zz\ Р¹	1074.4 [М + Н] +	А
1-225	н н он Н о	1070.4 [М + Н]+, 1192.4 [M + Na] +	А
1-226	Н но	1067.5 [М + Н]+, 1089.5 [M + Na] +	А
I 227	Н ОН н	1027.4 [М + Н] +	А
1-228	н н н о	1010.4 [М + Н] +	А
1-229	Η Н ОН ^н о	1088.4 [М + Н]+, 1110.4 [M + Na] +	А
1-230	°_хуОН он	1052.4 [М + Н] +	А
1-231	о н	1056.4 [М + Н]+, 1078.5 [M + Na] +	А

- 82 037093

Таблица 28

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-232	Н \ Но^{1 н}	1053.6 [М + Н]+, 1075.6 [M+Na] +	А
1-233	Н НО /^^ОНЛ ?! TI \ /“«ОН Н О < он	1027.6 [M + HJ+, 1049.7 [M + Na] +	А
1-234	Н ° мн г-г ° ^н А	1117.5 [М + Н] +	В
1-235	он н	1025.5 [М + Н]+, 1047 [M+Na] +	А
1-236	он —К/>^нн	1028.6 [М + Н] +	А
1-237	^н о но	1055.5 [М + Н]+, 1077.6 [М + №] +	А
1-238	/Х/»н н ГТ VyM н о	1027.6 [М + Н]+, 1049.7 [M + Na] +	А
1-239	^н II Н о	1079.6 [М + Н] +	А
1-240	он Н о	1055.6 [М + Н] +	А

Таблица 29

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-241		1088.5 [М + Н] +	А
1-242	Н он он ^н о но но	1131.4 [М + Н] +	А
1-243	'Мх'ои ^н о	1011.3 [М + Н] +	А
1-244	1 он <4^·—Хх°^нн	1041.4 [М + Н] +	А
1-245	Н ОН	1083.4 [М + Н] +	А
1-246	ΗΝ^Ζ<%:;νη ν^' ‘КУ''S н _о/^о	1084.4 [М + Н] +	А
1-247	х+КСн Н О	1051.4 [М + Н] +	А

- 83 037093

Таблица 30

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-248	НО но HO ^он о ноАун н __ОН о У-он НГ он	1529.3 [М + Н] +	А
1-249	о он н	1040.4 [М + Н]+, 1062.5 [M + Na] +	А
1-250	γγ^γ\_,ΟΗ ^н но о	1040.4 [М + Н]+, 1062.5 [M + Na] +	А
1-251	н 1 \зн	1028.4 [М + Н]+, 1050.4 [M + Na] +	А
1-252	Н Л-он	1038.4 [M + HJ +	А
1-253	^н о НО	1069.4 [М + Н] +	А
1-254	ОН <Ήη ОН к/⁰ ЧхАрИ J. А- О JL НО * \j^V>H ΌΗ НО 1 ΌΗ	1336.6 [М + Н] +	А

Таблица 31

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-255	ОН н	1042.4 [М + Н]+, 1064.5 [M + Na] +	А
1-256	Αν*/ ^н о νη₂	1064.5 [М + Н]+, 1086.5 [M + Na] +	А
1-257	н V7 н 0	1037.4 [М + Н]+, 1059.5 [M + Na] +	А
1-258	^н	1019.6 [М + Н] +	А
1-259	о J II ^<>j'^X\x^x>OH ^н но	1026.5 [М + Н] +	А
1-260	Ήα* он	1024.5 [М + Н]+, 1046.6 [M + Na] +	А
1-261	^н о	1053.5 [М + Н]+, 1075.6 [М + №] +	А
1-262	^^^^..лОН он	1024.3 [М + Н] +	А
1-263	н V7 vyy Н й O's	1099.4 [М + Н]+, 1121.5 [M + Na] +	А
1-264	<Ή ^^γ^ΌΗ 1 но Н^	1027.5 [М + Н]+, 1049.6 [M + Na] +	А

- 84 037093

Таблица 32

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-265	ОН 1 nh₂	1027.4 [М + Н] +	В
1-266	Л-^он1	968.4 [М + Н]+, 990.4 [M + Na] +	в
1-267	он	996.5 [М + Н] +	в
1-268	Α^Ι^^^^ΟΗ н 1 ΌΗ	1025.4 [М + Н] +	в
1-269	^н Л—/ ^он ^но‘ Ьн	1086.4 [М + Н]+, 1108.5 [M + Na] +	А
1-270	н	1037.4 [М + Н]+, 1059.5 [M + Na] +	А
I 271	он НО У^н Н	1160.5 [М + Н]+, 1182.6 [M + Na] +	А
1-272	н н 1 Soh	1027.4 [М + Н] +	А
1-273	Х/\^О ОН NH₂	1011.4 [М + Н] +	А

Таблица 33

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-274	«у.—^он 1 ОН	998.4 [М + Н]+, 1020.4 [M+Na] +	А
1-275	ЛуУ^уУУэн он ^но	1028.4 [М + Н] +	в
1-276		1012.5 [М + Н] +	В
1-277	СЗч(ЭН о	1095.5 [М + Н] +	А
1-278	н	1012.3 [М + Н] +	А
1-279	1 но	982.4 [М + Н] +	В
1-280	он	996.4 [М + Н] +	В
1-281	о гС Х~°^н он	1052.4 [М + Н] +	В
1-282	1	982.5 [М + Н] +	В
1-283	о ^>—он	1022.4 [М + Н]+, 1044.5 [М + №] +	А

- 85 037093

Таблица 34

No.	X^L	LC-MS	Метод
1-284	О	1022.4 [М + Н]+, 1044.5 [M + Na] +	А
1-285	н ^н о	1011.4 [М + Н] +	А
1-286	н г— HN К й	1095.5 [М + Н] +	А
1-287	°^^он Χγ·^ΟΗо	1054.4 [М + Н] +	В
1-288	но о	1039.5 [М + Н] +	В
1-289	^.Λ-ΟΗ Л-он о	1052.4 [М + Н] +	В
1-290	^ΧΧ⁰¹⁴он	1024.4 [М + Н] +	В
1-291	°^^он ^н но	1040.4 [М + Н] +	А

Таблица 35

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-292	А-ЧС ОН Д-он о	1078.5 [Μ + Η] +	В
1-293	о Ухэн кХ^онН о	1054.4 [Μ + Η] +	в
1-294	АУ ⁴он /)—он о	1080.4 [Μ + Η] +	в
1-295	о но но	1042.4 [Μ + Η]+, 1064.5 [M + Na] +	А
1-296	о	1052.5 [Μ + Η]+, 1074.5 [M + Na] +	А
1-297	°W^H Н о	1068.4 [Μ + Η]+, 1090.5 [M + Na] +	А
1-298	ζ °§jz° ^το ΖΧ/· \ /ο ¹	1112.4 [Μ + Η] +	В

- 86 037093

Таблица 36

No.	X¹	LC-MS	Метод
1-299		1036.4 [М + Н] +	В
1-300	_О7°Н	1050.4 [М + Н] +	в
1-301	о^^н	1050.4 [М + Н] +	в
1-302	о Н о	1070.4 [M + HJ +	в
1-303	он yW v-4-4-4x°^h	1156.5 [М + Н]+, 1178.5 [M + Na] +	А
1-304	Н НО	1052.5 [М + Н]+, 1074.5 [M + Na] +	А
1-305	—з'он ОН	1038.5 [M + HJ +	А
1-306	Ам-Л о \ A LL ¹—^Х^ЛЭН	1034.4 [M + HJ +	А

Таблица 37

No.	X^L	LC-MS	Метод
1-307	Ο=γ ОН	1052.5 [M + HJ+, 1074.5 [М + №] +	А
1-308	<4хуон О=( ОН	1052.5 [M + HJ+, 1074.6 [M + Na] +	А
1-309	О II ухзн <4-4 н 1 оФэн	1069.4 [М + Н] +	А
1-310	н он <4--хЧ-^он Н о	1041.6 [М + Н] +	А
1-311	он ^н но	1026.6 [М + Н] +	А

Химическая формула 135

Структура и физические свойства соединения (XV) показаны ниже.

- 87 037093

Таблица 38

Таблица 39

No.	X¹	Y	LC-MS	Метод
1-317			1046.2 [M + H] +	В
1-318	*^4	ηνΪ ό Η	1049.3 [M + H] +	в
1-319	н	ηνΪ о.	1049.6 [М + Н] +	в
1-320	н	ηνΪ О”	1049.5 [М + Н] +	в
1-321	'VT	ηνΪ ΗΟ^γ-⁰¹⁴но-к..^он%н	1159.5 [М + Н] +	в

- 88 037093

Таблица 40

No.	X¹	Υ	LC-MS	Метод
1-322	Η <4^ н 1	QX I	1101.5 [Μ + Η] +	В
1-323	Υτ	ηνΪνη₂IT ΝΗ	1037.5 [Μ + Η] +	в
1-324	Ат	X 1	1080.5 [Μ + Η] +	в
1-325	<Ан₂	1	1023.5 [Μ + Η] +	в
1-326	Η ^Η 4/4	1	1081.5 [Μ + Η] +	в
1-327	1 Η	τ X 1	1094.5 [Μ + Η]+, 1116.5 [M + Na] +	А

Таблица 41

No.	X¹	Y	LC-MS	Метод
1-328	н	// у	1115.7 [M + H] +	В
1-329	«Ан₂	HN^NH₂NH	980.5 [M + H] +	A
1-330	х^х ^н Н/М	ΗΝγ4Η₂NH	1038.5 [M + H] +	A
1-331		hn^nh₂NH	1010.6 [M + H] +	A
1-332	1 А~^	NH	1051.5 [M + H] +	A
1-333	н	hn^nh nh₂	1054.5 [M + H] +	A
1-334	н	NH	1036.5 [M + H] +	A

- 89 037093

Таблица 42

No.	X¹	У	LC-MS	Метод
1-335	Η н 1	ΗΝχχΡ Η₂Ν ΝΗ_Ζ	1109.6 [М + Н]+, 1131.6 [M + Na] +	А
1-336	о	ηνΪ,ο -ιν'Ύ. 4jh₂	1159.5 [М + Н] +	В
1-337	Η н 1	ΗΝ^χίΟ Чн₂	1123.6 [М + Н]+, 1145.6 [M + Na] +	А
1-338	н	нТ О νη₂	1145.5 [М + Н] +	А
1-339	Vr	ΗΝ^Ο H₂N	1109.5 [M + HJ+	А

Таблица 43

No.	X¹	У	LC-MS	Метод
1-340	<XlH₂	н7.о	1066.5 [Μ + Η] +	А
1-341	Н // о	HN,___νη₂Π ΝΗ	1073.4 [Μ + Η] +	В
1-342		Чээ	1079.5 [Μ + Η] +	А
1-343	о А _Л II н	HN^NH νη₂	1051.6 [Μ + Η] +	А
1-344	о J II н	Υ 1	1094.6 [Μ + Η] +	А
1-345	^н о	ΗΝ^ρ 1	1080.6 [Μ + Η] +	А
1-346	γΧ.^\>ιη₂н о	ηΧ^νη νη₂	1037.5 [Μ + Η] +	А

- 90 037093

Таблица 44

No.	X¹	Y	LC-MS	Метод
1-347	^н h₂n	7 1	1109.6 [M + HJ+, 1131.6 [M + Na] +	А
1-348	н ^Н Η₂Ν	HN^hlH nh₂	1066.7 [М + Н] +	А
1-349	^Н НО	ηνΪ Φ	1145.5 [М + Н] +	А
1-350	^н НО	^нУ^н₂NH	1054.5 [М + Н] +	А
1-351	^н НО	1	1097.5 [М + Н] +	А
1-352	^н НО	нгГ ΗοΛγΡΠ НО 'Су** ОН	1160.5 [М + Н] +	А

Таблица 45

No.	X¹	Y	LC-MS	Метод
1-353	—ΌΗ ^н НО		1145.5 [M + H] +	A
1-354	^н НО	НьГхр НоХ	1112.5 [M + HJ +	A
1-355	<Сч'---у^он ^н но	мн₂	1069.5 [M + H] +	В
1-356	н	ΗΝ^4Η₂NH	1054.5 [M + H] +	A
1-357	^Η4-κΓ	HN^NH nh₂	1038.6 [M + H] +	В
1-358	^нЧнсГ	1	1081.7 [M + H] +	В

- 91 037093

Таблица 46

No.	X¹	Υ	LC-MS	Метод
1-359	^н но	ΗΝ^ΝΗ ΗΝ^	1068.7 [Μ + Η] +	В
1-360	^н но	ΗΝ,___νη₂ ΝΗ	1111.8 [Μ + Η] +	в
1-361	<>М ^н НО	ζ Ν ζ.—( / А	1093.5 [М + Н]+, 1115.5 [M + Na] +	А
1-362	^н НО	^Ην> ΗΝ	1167.6 [М + Н] +	А
1-363	н η ^н о^	τ HN^^)	1170.6 [М + Н] +	А

Таблица 47

No.	X¹	Y	LC-MS	Метод
1-364	^н но	HN^P	1151.6 [M + H] +	A
1-365	<>41 ^н НО	ΗνΙ/ΙΗ, П НО^	1071 [M + H] +	В
1-366	^н НО	^χΝΙΗ, τι ^NX^\|	1061.8 [M-H₂O + H] +	В
1-367	н он Н О	πΐ^Η νη₂	1083.3 [M + H] +	A
1-368	Н НО	I 0	1174 [M + H] +	В
1-369	Н О	⁴Ϊ^ΝΗ₂NH	1093.4 [M + H] +	A

- 92 037093

Таблица 48

No.	X¹	Y	LC-MS	Метод
1-370	н ГУ ^АС ^н °нУ	ΐ^ΝΗ nh₂	1106.4 [Μ + Η]+, 1128.6 [M + Na] +	A
1-371	Н О	Ύ ην^νη νη₂	1079.5 [Μ + Η] +	A
1-372	Ά^Ηн	ηνΥ^νη νη₂	996.4 [Μ + Η]+, 1018.5 [M + Na] +	A
1-373	г\.ОН н	ηΪνη₂11 ^νόη	1012.4 [M + HJ +	A
1-374	^н о	ην1νη₂IT ΝΗ	1053.5 [M + H] +, 1075.6 [M + Na] +	A
1-375	⁽Хм'^х° \А>ОН ^н 1 ΌΗ	ΗΤ0Η ΝΗ₂	1070.5 [M + H]+, 1092.5 [M + Na] +	A
1-376	^^Ύ^ΟΗ ^н L Sdh	ην!νη₂II ^ΝΌη	1086.5 [M + H]+, 1108.6 [M + Na] +	A
1-377	ОН ^Н Μ™ ΌΗ	HN^JH νη₂	1158.5 [M + H]+, 1180.6 [M + Na] +	A

Таблица 49

No.	X¹	Y	LC-MS	Метод
1-378	OH aa/¹ ^н о A \Аон Sdh	hn1nh₂11 ⁿoh	1174.5 [M + H] +	A
1-379	H H о	hn^nh ^h%h	1069.4 [M + H] +	A
1-380	H OH ^^^Ax^OH H о	hn^nh ^h%h	1099.5 [M + H]+, 1121.6 [M + Na] +	A
1-381	A⁰” 1	ηνΥ^η nh₂	1010.4 [M + H]+, 1032.5 [M + Na] +	A
1-382	^r<Xj^A^^OHh □	ηνΪ о^^тэн	1054.4 [M + H] +	A
1-383	H	ά nh₂ nh₂	1066.8 [M + H] +	В
1-384	^H HO		1040.5 [M + H] +	A

- 93 037093

Таблица 50

No.	X¹	Υ	LC-MS	Метод
1-385	^н но	Ун^Ун₂	1126.6 [М + Н] +	А
1-386		^Нг^Н₂	1110.6 [М + Н] +	В
1-387	rK^V^OH н 1 ΌΗ	/ > Ζ	1100.5 [M + HJ+, 1122.5 [M + Na] +	А
1-388	он н	7 A* g	1026.5 [М + Н]+, 1048.5 [M + Na] +	А
1-389	н	А~\	1054.5 [М + Н] +	А

Таблица 51

No.	X	Y	LC-MS	Метод
1-390			1067.5 [М+Н]+	В
1-391	Кмо °N	'иНг	1024.5 [М+Н]+	в
1-392		*nh₂	1025.5 [М+Н]+	в
1-394		ηνΪνη₂L	952.8 [М+Н]+	А
1-395		HN^^/JH NH НО^	968.5 [М+Н]+	А
1-396	ОН НО. JL /)Н н Ίρ । т Υ >0 он о \—он Н/ он		1321.7 [М+Н]+	А

В дополнение к этому получают следующие соединения.

Таблица 52

No.	Структура	LC-MS	Метод
1-393	он ι НО Ок 1 О ОН ОН он он о,, JL он т и ° 'ъ/Э К...,'*' но ^М^дзн nh₂	922.9 [М + Н] +	В

Структуры AmBMU, AmBCU и AmBAU, описанные в непатентных документах 4, 5 и в патентном документе 11, показаны ниже.

- 94 037093

Таблица 53

AmBMU	Г Π Α^ Α^ Α^ Α^ 1 ⁰ НОжХ О ОН ОН ОН ОН 0₄ А_к1А/ 9 \ N N ^{Н Н} О/, но⁴'' у*он nh₂
AmBCU	( 1 ii ι Υι I ^{0 0} НОкА, о он ОН он он ο₄.Α_νΑ_νΑ_οη 1 1 н н '' °СС но⁴' да^он νη₂
AmBAU	НОжА, О ОН ОН ОН ОН О/, νη₂ V Ύ Ν Ν ^ν L^XX^XX^XX^^ ^{Η Η} Ο_Ζ/ χΟ > но⁴'' ν^ΟΗ νη₂

- 95 037093

Таблица 55

No .	С. albicans АТСС90028 MIC (мкг/мл)	A. flavus АТСС204304 MIC (мкг/мл)	A. fumigatus АТСС204305 MIC (мкг/мл)
1-202	0,5	0,5	1
1-218	0,25	0,5	1
1-227	0,5	0,5	1
1-230	0,5	0,5	1
1-237	0,5	0,5	1
1-240	0,5	0,5	1
1-250	0,5	0,5	1
1-259	0,5	0,5	1
1-260	0,5	0,5	1
1-261	0,5	0,5	1
1-266	0,25	0,5	0,5
1-272	0,25	0,5	0,5
1-273	0,25	0,5	0,5
1-274	0,5	0,5	0,5
1-275	0,5	1	0,5
1-276	0,5	0,5	0,5
1-278	0,5	0,5	0,5
1-284	0,5	0,5	1
1-298	0,5	1	0,5
1-310	0,5	0,5	1
1-311	0,5	0,5	0,5

Таблица 56

No.	С. albicans АТСС90028 MIC (мкг/мл)	A. flavus АТСС204304 MIC (мкг/мл)	A. fumigatus АТСС204305 MIC (мкг/мл)
1-325	0,25	0,5	1
1-326	0,25	1	1
1-330	0,25	1	1
1-331	0,25	1	1
1-343	0,25	0,5	1
1-344	0,5	0,5	1
1-346	0,5	0,5	1
1-350	0,25	0,5	0,5
1-367	0,25	0,5	1
1-380	0,5	0,5	1
1-383	0,25	1	1

Результаты для соединений в качестве сравнительного примера показаны ниже.

- 96 037093

Таблица 57

No.	С. albicans АТСС90028 MIC (мкг/мл)	A. flavus АТСС204304 MIC (мкг/мл)	A. fumigatus АТСС204305 MIC (мкг/мл)
AmBMU	0,5	1	1
AmBCU	0,5	1	1
AmBAU	0,5	1	1

Пример исследования 2-1. Исследование гемолитической активности.

Нефротоксические потенциалы соединений по настоящему изобретению, за исключением соединений, в которых X представляет собой -N(R^F)-СО-Х¹ и X¹ представляет собой группу, представленную формулой (III), и Т представляет собой -N(R^a5)-, исследуют с помощью исследования гемолитической активности in vitro при условиях, при которых верхний предел составляет 50, 80, 100 или 200 мкмоль/л, как необходимая концентрация для 50% гемолиза (IC₅₀).

Дефибринированную стерильную кровь центрифугируют при 700xg в течение 3 мин и супернатант удаляют с получением 100% эритроцитов. После промывки физиологическим солевым раствором промытые эритроциты суспендируют в среде (сбалансированная среда Эрла, соль натрия, бикарбонат 0,1 г/л L-глютамина без фенольного красного) и разбавляют до 5% (5% суспензия в RBC).

Промытую кровь разбавляют до 5% в воде для инъекций (раствор для полного гемолиза) и используют в качестве показателя оптической плотности для полного гемолиза.

Используют раствор соединения по настоящему изобретению в DMSO (несколько разбавлений и дублирующие разбавления, начиная от 2,5, 4, 5 или 10 ммоль/л) DMSO в качестве отрицательного контроля и амфотерицина В в качестве положительного контроля, и каждые 5 мкл этих соединений добавляют в лунку V-образной формы микропланшета 96-луночного типа. Наконец, максимальная концентрация раствора соединений по настоящему изобретению в DMSO составляет 50, 80, 100 или 200 мкмоль/л при добавлении 245 мкл среды или 5% суспензии в RBC в лунку.

250 мкл раствора для полного гемолиза добавляют в другую лунку и микропланшет инкубируют при 37°С при концентрации СО₂ 5% в течение 1 ч.

После инкубирования каждые 100 мкл супернатантов в лунках собирают посредством центрифугирования микропланшета при 300xg в течение 5 мин и помещают в лунку 96-луночного микропланшета типа с плоской формой дна. Коэффициент поглощения каждого супернатанта измеряют на длине волны 540 нм.

Процент гемолиза вычисляют с использованием следующего уравнения. Концентрацию, необходимую для 50% гемолиза (IC₅₀), вычисляют на основании процента гемолиза. Малость IC₅₀ показывает, что соединение имеет потенциальную токсичность для почек

Гемолиз (%) = (CR - VM) х 100 л (VL - VR) где

CR - коэффициент поглощения 5% суспензии в RBC, инкубируемой вместе с растворами соединений по настоящему изобретению, в DMSO;

V M - коэффициент поглощения среды, инкубируемой вместе с растворами соединений по настоящему изобретению, в DMSO;

V L - коэффициент поглощения раствора для полного гемолиза;

V R - коэффициент поглощения 5% суспензии в RBC, инкубируемой вместе с DMSO.

Результаты показаны ниже. Способ гемолиза в таблице означает любые исследования, где верхняя концентрация для указанной выше IC₅₀ составляет 50, 80, 100 или 200 мкмоль/л. Обозначения >50, >80, >100 или >200 в таблице означает, что указанное значение выше IC₅₀ превышает каждую из верхних концентраций.

- 97 037093

Таблица 58

No.	Гемолиз IC50 (мкмоль/л)	Способ гемолиза	No.	Гемолиз IC50 (мкмоль/л)	Способ гемолиза
1-5	94	100	1-54	>80	80
1-6	75	100	1-55	>50	50
1-7	81	100	1-62	50	100
1-8	96	100	1-81	>50	50
1-9	>100	100	1-93	>50	50
1-10	>100	100	1-105	>200	200
1-11	>50	50	1-146	>50	50
1-15	>80	80	1-207	>100	100
1-17	>80	80	1-212	>100	100
1-18	>80	80	1-213	>100	100
1-21	>80	80	1-226	>50	50
1-22	>80	80	1-231	>50	50
1-23	79	80	1-234	>50	50
1-24	>80	80	1-241	>50	50
1-38	>50	50	1-249	>50	50
1-39	>80	80	1-250	>50	50
1-40	>80	80	1-252	>50	50
1-41	>50	50	1-254	>50	50
1-48	>80	80	1-255	>50	50
1-49	>80	80	1-258	>50	50
1-50	>80	80	1-259	>50	50
1-51	>80	80	1-279	>50	50
1-53	>80	80	1-280	>50	50
1-282	>50	50	1-328	>50	100

Таблица 59

No.	Гемолиз IC50 (мкмоль/л)	Способ гемолиза	No.	Гемолиз IC50 (мкмоль/л)	Способ гемолиза
1-283	>50	50	1-365	>50	50
1-284	>50	50	1-366	>50	50
1-291	>50	50	1-368	>50	50
1-295	>50	50	1-390	>50	50
1-303	>50	50	1-391	>50	50
1-311	>50	50	1-392	>50	50
1-314	>80	100	1-396	>100	100
1-327	>50	100

Пример исследования 2-2. Исследования гемолитической активности.

Нефротоксические потенциалы соединений по настоящему изобретению, в которых X представляет собой -N(R^F)-CO-X1 и X¹ представляет собой группу, представленную формулой (III), и Т представляет собой -N(R^a5)-, исследуют посредством исследования гемолитической активности in vitro при условии, что верхний предел составляет 200 мкмоль/л, как необходимая концентрация для 50% гемолиза (IC₅₀).

Дефибринированную стерильную кровь центрифугируют при 700xg в течение 3 мин и супернатант удаляют с получением 100% эритроцитов. После промывки физиологическим солевым раствором промытые эритроциты суспендируют в среде (сбалансированная среда Эрла, соль натрия, бикарбонат, 0,1 г/л L-глютамина, без фенольного красного), и разбавляют до 5% (5% суспензия в RBC).

Используют раствор соединения по настоящему изобретению в DMSO (несколько разбавлений и дублирующие разбавления, начиная от 2,5, 4, 5 или 10 ммоль/л), DMSO в качестве отрицательного контроля, и раствор амфотерицина В в качестве положительного контроля, и каждые 5 мкл этих соединений добавляют в лунку V-образной формы микропланшета 96-луночного типа. Наконец, максимальная концентрация раствора в DMSO соединений по настоящему изобретению составляет 50, 80, 100 или 200 мкмоль/л при добавлении 245 мкл среды или 5% суспензии в RBC в лунку.

- 98 037093

Гемолиз (%) = (CR - VM) х 100 л (VL - VR) где

Результаты показаны ниже. >200 в таблице означает, что указанное выше значение IC₅₀ превышает верхнюю концентрацию 200 мкмоль/л.

Таблица 60

No .	Гемолиз IC50 (мкмоль/л)	Способ гемолиза	No.	Гемолиз IC50 (мкмоль/л)	Способ гемолиза
1-19	>200	200	1-224	>200	200
1-43	>200	200	1-225	>200	200
1-44	>200	200	1-228	>200	200
1-45	>200	200	1-229	>200	200
1-47	>200	200	1-232	>200	200
1-60	>200	200	1-233	>200	200
1-78	>200	200	1-237	>200	200
1-123	>200	200	1-238	>200	200
1-124	>200	200	1-239	>200	200
1-125	>200	200	1-240	>200	200
1-194	>200	200	1-242	>200	200
1-197	>200	200	1-243	>200	200
1-198	>200	200	1-245	>200	200
1-209	>200	200	1-246	>200	200
1-214	>200	200	1-247	>200	200
1-215	>200	200	1-253	>200	200
1-216	>200	200	1-256	>200	200
1-217	>200	200	1-257	>200	200
1-218	>200	200	1-261	>200	200
1-220	>200	200	1-263	>200	200
1-221	>200	200	1-272	>200	200
1-223	>200	200	1-310	>200	200

Результаты сравнительного примера показаны ниже.

Таблица 61

	Гемолиз IC50 (мкмоль/л)	Способ гемолиза
АтВ	1, 6	200
AmBMU	129, 8	200
AmBAU	58	200

Пример исследования 3. Анализ цитотоксичности.

Цитотоксичность соединений по настоящему изобретению оценивают посредством автоматического измерения количеств клеток с использованием анализатора клеточных изображений, Toxinsight® (Thermofisher Scientific).

- 99 037093

Клетки HepG2 высевают в 384-луночные черные планшеты (100000 клеток/мл), и они получают возможность для присоединения в течение приблизительно 24 ч при 37°С в инкубаторе с увлажненным СО₂. Исследуемые соединения и положительный контроль (fungizone®) сначала растворяют как концентрированные исходные растворы 20 ммоль/л в DMSO и добавляют в культурную среду до конечной концентрации 1,6, 3,1, 6,3, 12,5, 25, 50, 100 мкмоль/л. Лунку с отрицательным контролем обрабатывают одним только DMSO. После экспонирования каждого исследуемого соединения в течение приблизительно 71 ч в каждую лунку добавляют Hoechst 33342 для окрашивания ядер, разбавленный в D-PBS до конечной концентрации, 1 мкг/ мл, а после этого фиксируют 4%-ным раствором параформальдегида. Количество клеток, окрашенных Hoechst 33342, считают с помощью Toxinsight® (Thermofisher Scientific) в каждой лунке. Вычисляют среднее значение количества клеток и стандартное отклонение (SD) (N=4). Самую низкую концентрацию цитотоксичности оценивают как концентрацию, показывающую уменьшение количества клеток больше чем на 2SD по сравнению с контрольными значениями для носителя. Меньшие количества клеток показывают, что риск цитотоксичности выше.

Результаты показаны ниже.

Таблица 62

No.	Цитотоксичность (мкмоль/л)
1-214	>100
1-215	>100
1-216	>100
1-253	>100
1-310	>100

Таблица 63

	Цитотоксичность (мкмоль/л)
АтВ	<1, 6
AmBMU	12,5
AmBCU	25,2
AmBAU	51,0

Пример исследования 4. Исследования гемолитической активности.

Уровень экспрессирования маркерных генов для нефротоксичности определяют посредством количественной RT-PCR для оценки нефротоксичности соединения по настоящему изобретению. Соединение по настоящему изобретению или носитель вводят внутривенно мышам, и их почки изолируют. После удаления почечной оболочки все почки разрезают на две равные половинки и хранят при -80°С в RNAlater® (Ambion) до использования. Образцы измельчают и гомогенизируют в QIAzol Lysis Reagent с помощью TissueLyser (Qiagen), и РНК в целом извлекают с использованием RNeasy® Mini kit (Qiagen). Общие концентрации РНК определяют при считывании OD260 с помощью измерителя поглощения.

Уровень экспрессирования следующих целевых генов определяют с использованием одностадийной количественной PCR в реальном времени: Kim1, Timp1 и Lcn2. РНК в целом (80 нг/2 мкл) используют в качестве шаблона, и TaqMan Gene Expression Assays (Applied Biosystems, для Havcr1 (Kim1), Assay ID: Mm00506686_m1; Timp1, Mm01341361_m1; Lcn2, Mm01324470_m1) или TaqMan Endogenous Controls (Gapdh, предварительно подготовленный реагент для анализа, поставляется ABI, Applied Biosystems) используют в качестве наборов ген-специфичных зондов и праймеров. Количественную RTPCR осуществляют с использованием QuantiTect™ Probe RT-PCR kit (Qiagen), и уровни транскрипции количественно определяются с помощью Applied Biosystems 7900HT Fast Real Time PCR System (Applied Biosystems). Условия обратной транскрипции и амплификации устанавливаются следующим образом: 50°С в течение 30 мин, 95°С в течение 15 мин, а затем следуют 40 циклов при 95°С в течение 15 с и при 60°С в течение 1 мин. Полученное в результате пороговое значение для цикла (Ct) обрабатывают на основе сравнительного способа Ct (ΔΔΟ Method), где Gapdh используют в качестве эндогенного эталонного гена для нормировки уровня экспрессирования целевых генов.

ΔCt вычисляют следующим образом: Ct, Gapdh - Ct, целевой ген.

ΔΔCt вычисляют следующим образом: ΔCt, обработанный образец - ΔCt, среднее значение для контрольного образца с носителем.

Более высокие значения ΔΔCt показывают более высокие скорости экспрессии целевого гена и, следовательно, высокий риск нефротоксичности. Когда значения ΔΔCt для двух третей целевых генов показывают >3, это считается положительной нефротоксичностью.

Результаты показаны ниже.

- 100 037093

Отметка * в указанной выше таблице показывает, что все мыши для 3 случаев при дозе 16 мг/кг гибнут. Это показывает, что AmBAU имеет вероятность острой токсичности.

Промышленное применение.

Соединение по настоящему изобретению имеет противогрибковую активность против грибков. Следовательно, соединение по настоящему изобретению является пригодным для использования при предотвращении или лечении различных инфекций, связанных с грибками (примеры: глубокий микоз, гематогенная грибковая инфекция, респираторный микоз, грибковый менингит, диссеминированный микоз и тому подобное).

Claims

1. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение имеет следующую формулу:

rh₂

2. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение имеет следующую формулу:

гтн₂

3. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение имеет следующую формулу:

RH₃

4. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение имеет следующую формулу:

- 101 037093

5. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение имеет следующую формулу:

6. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение имеет следующую формулу:

7. Фармацевтическая композиция, обладающая противогрибковой активностью, содержащая в эффективном количестве соединение или его фармацевтически приемлемую соль по любому из пп.1-6.

8. Применение фармацевтической композиции по п.7 для лечения или предотвращении грибковой инфекции у людей или животных.

Е^ра Евразийская патентная организация, ЕАПВ