EA036479B1 - Пептид, активирующий рецептор гпп-1 и рецептор глюкагона, фармацевтическая композиция на его основе и их применение для профилактики или лечения ожирения - Google Patents

Пептид, активирующий рецептор гпп-1 и рецептор глюкагона, фармацевтическая композиция на его основе и их применение для профилактики или лечения ожирения Download PDF

Info

Publication number
EA036479B1
EA036479B1 EA201791498A EA201791498A EA036479B1 EA 036479 B1 EA036479 B1 EA 036479B1 EA 201791498 A EA201791498 A EA 201791498A EA 201791498 A EA201791498 A EA 201791498A EA 036479 B1 EA036479 B1 EA 036479B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
peptide
obesity
glucagon
pharmaceutical composition
receptor
Prior art date
Application number
EA201791498A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201791498A1 (ru
Inventor
Сунг Юб Дзунг
Йоунг Дзин Парк
Дзонг Сук Ли
Дзае Хиук Чой
Чанг Ки Лим
Се Чанг Квон
Original Assignee
Ханми Фарм. Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ханми Фарм. Ко., Лтд. filed Critical Ханми Фарм. Ко., Лтд.
Publication of EA201791498A1 publication Critical patent/EA201791498A1/ru
Publication of EA036479B1 publication Critical patent/EA036479B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Изобретение относится к пептиду, содержащему аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 12, 13 или 14, где пептид активирует рецептор ГПП-1 и рецептор глюкагона. Изобретение также относится к фармацевтической композиции для профилактики или лечения ожирения, содержащей указанный пептид в качестве активного агента. Изобретение также относится к способу профилактики или лечения ожирения, включающему введение субъекту указанного пептида или указанной фармацевтической композиции, а также к применению указанного пептида или указанной фармацевтической композиции для профилактики или лечения ожирения. Пептид в соответствии с настоящим изобретением является более эффективным в отношении активации как рецепторов глюкагоноподобного пептида-1, так рецепторов глюкагона по сравнению с нативным глюкагоном и, таким образом, может найти широкое применение в качестве эффективного агента для лечения ожирения.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к новым производным глюкагона, имеющим превосходный эффект как в отношении рецепторов глюкагоноподобного пептида-1 (ГПП-1), так и в отношении рецепторов глюкагона, и к композиции для профилактики или лечения ожирения, содержащей в качестве активного ингредиента производное глюкагона.
Уровень техники
Современные экономические успехи и изменение образа жизни сопровождались большими изменениями в привычках питания. В частности, современные деловые люди набирают избыточный вес и страдают ожирением из-за высококалорийной пищи и недостаточной физической нагрузки. Согласно докладу Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) более одного миллиарда взрослых во всем мире имеют избыточный вес, среди них более трех миллионов - с клиническим диагнозом тяжелого ожирения, а 250 000 человек в Европе и 2,5 миллиона людей во всем мире ежегодно умирают от избыточного веса или ожирения (World Health Organization, Global Strategy on Diet, Physical Activity and Health, 2004).
Избыточный вес и ожирение повышают кровяное давление и уровень холестерина в крови, что становится причиной различных заболеваний, включая заболевания сердца, диабет, артрит и т.д., или приводят к осложнениям. Кроме того, избыточный вес и ожирение являются одними из основных причин, повышающих риск таких заболеваний, как артериосклероз, гипертония, гиперлипидемия и сердечные заболевания у детей и подростков, а также у взрослых.
Таким образом, сегодня ожирение признано серьезным недугом, распространенным во всем мире и являющимся причиной различных заболеваний. Однако, поскольку считается, что вылечить ожирение можно, приложив собственные усилия, пациенты, страдающие ожирением, оцениваются как люди с низким уровнем самоконтроля. Тем не менее, ожирение не является легко излечимым заболеванием, поскольку оно тесно связано с механизмами контроля аппетита и энергетического метаболизма. Соответственно для лечения ожирения одновременно требуются как приложение усилий самого пациента для контроля аппетита, так и лечение аномального механизма действия энергетического метаболизма. В связи с этим возникла необходимость в разработке лекарственного средства, способного лечить аномальный механизм действия.
В результате указанных выше усилий были разработаны лекарства против ожирения, такие как Римонабант (Sanofi-Aventis), Сибутрамин (Abbott), Контрав (Takeda), Орлистат (Roche) и т.д. Однако эти лекарства имели недостатки, такие как фатальные побочные реакции или небольшая эффективность лечения ожирения. Например, прием Римонабанта вызывает такую неблагоприятную реакцию, как расстройство центральной нервной системы, прием Сибутрамина и Контрава вызывает неблагоприятные реакции сердечно-сосудистой системы, а прием Орлистата приводит к снижению массы тела только примерно на 4 кг после его применения в течение года. Соответственно можно с уверенностью утверждать, что отсутствует лекарство против ожирения, которое можно безопасно назначать страдающим ожирением пациентам.
В этой связи были проведены активные исследования для разработки нового фармацевтического препарата, который позволил бы решить проблемы, возникающие при приеме обычных препаратов против ожирения, при этом в последнее время большое внимание уделяется производным глюкагона. Глюкагон секретируется поджелудочной железой, когда уровень глюкозы в крови падает в результате, например, медикаментозного лечения, заболевания, действия гормонов или дефицита фермента. Глюкагон сигнализирует печени о необходимости разложения гликогена до глюкозы и повышения уровня глюкозы в крови до нормального. Кроме того, имеются сообщения о том, что глюкагон является эффективным против ожирения, дополнительно к эффекту повышения уровня глюкозы в крови, за счет подавления аппетита и активации гормон-чувствительной липазы в жировых клетках, тем самым способствуя разложению жира.
Глюкагоноподобный пептид-1 (далее называемый ГПП-1), производное глюкагона, представляет собой вещество, находящееся на стадии разработки в качестве лекарственного средства для лечения гипергликемии у больных диабетом. ГПП-1 увеличивает синтез инсулина и способствует его секреции, подавляет секрецию глюкагона, подавляет опорожнение желудка, улучшает эффективность потребления глюкозы и подавляет желание приема пищи. Также известно, что эксендин-4, который секретируется ядовитой ящерицей и имеет аминокислотную последовательность, гомологичную примерно на 50% последовательности ГПП-1, облегчает состояние гипергликемии у больных диабетом, активируя рецептор ГПП-1. Однако существуют указания, что лекарства против ожирения, содержащие ГПП-1 или эксендин4, имеют побочные эффекты, такие как рвота и тошнота.
В связи с этим внимание привлек оксинтомодулин в качестве альтернативы ГПП-1, который может связываться как с ГПП-1, так и с глюкагоном. Оксинтомодулин представляет собой пептид, полученный из преглюкагона, предшественника глюкагона, и имеет такое же действие, как ГПП-1, а именно подавляет желание приема пищи, усиливает ощущение насыщения и способствует разложению жира, что повышает его потенциал в качестве средства против ожирения.
Однако недостаток оксинтомодулина или его производных заключается в необходимости ежедневного введения высоких доз этого вещества, что связано с коротким периодом его полувыведения in vivo
- 1 036479 и низкой эффективностью.
Раскрытие изобретения
Техническая задача.
Авторы настоящего изобретения, стремясь улучшить эффективность лечения ожирения одновременно уменьшая дозы, разработали производное глюкагона с частичной модификацией его аминокислотной последовательности и подтвердили его эффективное действие как на рецепторы глюкагона, так и на рецепторы ГПП-1, тем самым создав настоящее изобретение.
Решение проблемы
Настоящее изобретение создано с учетом вышеуказанных проблем, возникающих в предшествующем уровне техники, и целью настоящего изобретения является создание нового пептида, который является очень эффективным при лечении ожирения.
Другой целью настоящего изобретения является предоставление композиции, содержащей этот пептид, для профилактики или лечения ожирения.
Преимущества, обеспечиваемые изобретением
Новый пептид по настоящему изобретению может существенно активировать как ГПП-рецепторы, так и рецепторы глюкагона по сравнению с нативным глюкагоном и является эффективным против ожирения даже при введении в небольших количествах и, следовательно, может найти широкое применение в качестве безопасного и эффективного средства для лечения ожирения.
Наилучшие варианты осуществления изобретения
Для достижения вышеуказанных целей в одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к пептиду, содержащему аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 12, 13 или 14, где пептид активирует рецептор ГПП-1 и рецептор глюкагона.
В одном из вариантов осуществления изобретения пептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12. В одном из вариантов осуществления изобретения пептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13. В одном из вариантов осуществления изобретения пептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.
В одном из вариантов осуществления изобретения пептид является эффективным против ожирения.
В одном из вариантов осуществления изобретения аминокислоты в положениях 12 и 16 или 16 и 20 пептида образуют кольцо.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции для профилактики или лечения ожирения, содержащей указанный пептид в качестве активного агента, при этом фармацевтическая композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.
В одном из вариантов осуществления изобретения фармацевтическая композиция дополнительно содержит другие фармацевтические ингредиенты, проявляющие профилактический или терапевтический эффект в отношении ожирения. В некоторых вариантах осуществления изобретения другие фармацевтические ингредиенты, проявляющие профилактический или терапевтический эффект в отношении ожирения, представляют собой агонист рецептора ГПП-1, агонист рецептора лептина, ингибитор ДИП-ГУ, антагонист рецептора Y5, антагонист рецептора меланин-концентрирующего гормона (МСН), агонист рецептора Y2/3, агонист рецептора МС3/4, ингибитор липазы желудка/поджелудочной железы, агонист 5НТ2с, агонист 3А-рецептора, агонист рецептора амилина, антагонист грелина или антагонист рецептора грелина.
Настоящее изобретение также относится к способу профилактики или лечения ожирения, включающему введение субъекту указанного пептида или указанной фармацевтической композиции.
Настоящее изобретение также относится к применению указанного пептида для профилактики или лечения ожирения, а также к применению указанной фармацевтической композиции для профилактики или лечения ожирения.
Пептид по настоящему изобретению может включать пептиды, производные пептида и его пептиды-миметики, которые могут активировать как рецепторы ГПП-1, так и рецепторы глюкагона вследствие модификации части аминокислоты(аминокислот) путем замещения.
Используемый в настоящем описании термин нативный глюкагон относится к нативному человеческому глюкагону, имеющему аминокислотную последовательность His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr (SEQ ID NO: 1).
Настоящее изобретение относится к пептидам, определенным выше в качестве производных нативного глюкагона, и определение пептидов, представленных в настоящем изобретении, предполагает, что они отличаются от нативного глюкагона только в положении(положениях) X в последовательностях, в которых имеется изменение(изменения).
В последовательности, представленной формулой 1, в соответствии с настоящим изобретением аминокислоты можно считать последовательно пронумерованными, начиная с первой аминокислоты до 29-й аминокислоты в обычном направлении от N-конца до С-конца. Соответственно описание положения в последовательности формулы 1 следует интерпретировать так же, как в описаниях положений нативного человеческого глюкагона и других молекул.
Используемый в настоящем описании термин пептид относится к соединению, представленному
- 2 036479 двумя или более аминокислотами, связанными пептидной связью(связями). Для целей настоящего изобретения пептид может относиться к пептиду, который является эффективным против ожирения за счет активации как рецепторов ГПП-1, так и рецепторов глюкагона.
В настоящем изобретении трехбуквенные коды, обычно используемые для обозначения различных аминокислот, таких как α-аминоизомасляная кислота (Aib), Sar(N-метилглицин) и α-метил-глутаминовая кислота, используются наряду с обычными однобуквенными или трехбуквенными кодами, обозначающими встречающиеся в природе аминокислоты.
Кроме того, аминокислоты, описанные в настоящем изобретении, имеют приведенные ниже сокращенные обозначения в соответствии с номенклатурой IUPAC-IUB.
Алании (A). Аргинин (R).
Аспарагин (N). Аспарагиновая кислота (D).
Цистеин (C) Глутаминовая кислота (E)
Глютамин (Q). Глицин (G).
Гистидин (H). Изолейцин (I).
Лейцин (L). Лизин (K).
Метионин (M). Фенилаланин (F).
Пролин (P). Серин (S).
Треонин (T). Триптофан (W).
Тирозин (Y). Валин (V).
Пептид, который имеет аминокислотную последовательность, представленную формулой 1, в соответствии с настоящим изобретением может включать любой пептид, который может активировать как рецепторы глюкагона, так и рецепторы ГПП-1 и который получен путем замещения, добавления, делеции или модификации после трансляции (например, метилированием, ацилированием, убиквитинированием и с помощью внутримолекулярных ковалентных связей) в аминокислотной последовательности глюкагона, приведенной в SEQ ID NO: 1.
Для замещения или добавления аминокислот можно использовать нетипичные или не встречающиеся в природе аминокислоты дополнительно к 20 аминокислотам, встречающимся в белках человека. Коммерческие поставщики нетипичных аминокислот включают Sigma-Aldrich, ChemPep, Genzyme Pharmaceuticals и т.д. Последовательности пептидов, включающие эти нетипичные аминокислоты и аминокислоты типичных пептидов, могут быть синтезированы или приобретены у коммерческих компанийпроизводителей пептидов, например у компании American Peptide или Bachem (USA) или Any gen (Korea) и т.д.
Для усиления действия пептида по настоящему изобретению на рецепторы глюкагона и рецепторы ГПП-1 в аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 1, первая аминокислота, гистидин, может быть замещена 4-имидазоацетилом путем удаления α-углерода гистидина, дезаминогистилидом путем удаления N-концевой аминогруппы, N-диметилгистидилом путем модификации Nконцевой аминогруппы двумя метильными группами, β-гидроксиимидазопропионилом путем замещения N-терминальной аминогруппы гидроксильной группой, β-карбоксиимидазопропионилом путем замещения N-концевой аминогруппы карбоксильной группой или тирозином.
Кроме того, в домене, который связывается с рецептором ГПП-1, может быть произведена замена на аминокислоту, которая может усилить гидрофобную связь и ионную связь. Кроме того, часть последовательности глюкагона может быть замещена аминокислотной последовательностью ГПП-1 или аминокислотной последовательностью эксендина-4 для увеличения активности рецептора ГПП-1.
Часть последовательности глюкагона также может быть замещена последовательностью, которая может усилить α-спираль. Предпочтительно аминокислота(аминокислоты) формулы 1 в положениях 10, 14, 16, 20, 24 и 28 может быть замещена аминокислотой(аминокислотами), такими как Tyr(4-Me), Phe, Phe(4-Me), Phe(4-Cl), Phe(4-CN), Phe(4-NO2), Phe(4-NH2), Phg, Pal, Nal, ΑΗ(2-τ№ημ) или Ala (бензотиенил), которые, как известно, способствуют образованию α-спирали, или их производными. Вид и количество аминокислот или их производных, добавляемых с этой целью, не ограничены.
Кроме того, предпочтительно, чтобы по меньшей мере одна аминокислота по меньшей мере в одной аминокислотной паре в положениях 10 и 14, 12 и 16, 16 и 20, 20 и 24 и 24 и 28 аминокислотной последовательности формулы 1 могла быть замещена глутаминовой кислотой или лизином, образуя в результате пару глутаминовая кислота-лизин, которая может образовывать кольцо, при этом количество вводимых таким образом колец также не ограничено.
В иллюстративном варианте осуществления аминокислотная последовательность глюкагона может быть замещена последовательностью, способной связываться с рецепторами ГПП-1, таким образом, чтобы пептид мог быть эффективным как в отношении рецепторов ГПП-1, так и в отношении рецепторов глюкагона.
Предпочтительно пептид по настоящему изобретению может быть пептидом аминокислотной последовательности формулы 1, в которой
X1 представляет собой гистидин;
- 3 036479
X2 представляет собой α-метил-глутаминовую кислоту;
X15 представляет собой цистеин или аспарагиновую кислоту;
X16 представляет собой серин, глутаминовую кислоту или аспарагиновую кислоту;
X17 представляет собой аргинин, лизин, глутаминовую кислоту или цистеин;
X18 представляет собой цистеин, валин или аргинин;
X19 представляет собой аланин или валин;
X20 представляет собой глутамин, лизин или гистидин;
X21 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту или лейцин;
X23 представляет собой изолейцин или валин;
X24 представляет собой аргинин, глутаминовую кислоту или глутамин;
X27 представляет собой валин, лизин или метионин;
X28 представляет собой глутамин, лизин или аспарагин; и
X29 представляет собой лизин, глицин или треонин;
при условии, что аминокислотная последовательность, идентичная SEQ ID NO: 1, исключена.
Более предпочтительно пептид по настоящему изобретению может представлять собой пептид, включающий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 2-14.
Пептид по настоящему изобретению может быть получен стандартным синтетическим способом, с помощью системы экспрессии рекомбинантных генов или любым способом, известным в данной области. Соответственно аналог глюкагона в соответствии с настоящим изобретением может быть синтезирован множеством способов, включая следующие:
(a) поэтапный синтез пептида методом твердофазного или жидкофазного синтеза или путем сборки фрагментов, выделения конечного пептида с последующей очисткой;
(b) экспрессию конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид в клетке-хозяине, и выделение продукта экспрессии из культуры клеток-хозяев;
(c) осуществление экспрессии конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид, в пробирке, не содержащей клетки, и извлечение продукта экспрессии; или способ получения фрагментов пептида случайной комбинацией (а), (b) и (с), связывания фрагментов, тем самым восстанавливая соответствующий пептид.
Авторы настоящего изобретения подтвердили в экспериментах in vitro, что пептид по настоящему изобретению оказывает превосходное действие на рецепторы ГПП-1 и рецепторы глюкагона по сравнению с нативным глюкагоном (см. табл. 2). Кроме того, в экспериментах in vitro было подтверждено, что пептид по настоящему изобретению является очень эффективным в отношении подавления желания приема пищи на животной модели ожирения, тем самым демонстрируя, что пептид по настоящему изобретению может быть эффективным для лечения ожирения даже при введении в небольших количествах.
Соответственно пептид по настоящему изобретению является двойным агонистом, способным стимулировать образование цАМФ как в рецепторах ГПП-1, так и в рецепторах глюкагона и, предполагается, что он будет очень эффективным для лечения ожирения по сравнению с существующим глюкагоном. В этом отношении пептид по настоящему изобретению может быть более привлекательным при выборе средства для лечения ожирения и связанных с ожирением заболеваний.
Пептид по настоящему изобретению, являющийся двойным агонистом, может сочетать эффект ГПП-1 при приеме пищи и эффект глюкагона в метаболизме липидов и, таким образом, действовать синергически, ускоряя удаление скоплений липидов и приводя к непрерывному снижению массы тела. Синергический эффект двойного агониста может позволить снизить факторы риска развития сердечнососудистых заболеваний, таких как высокий уровень холестерина и ЛПНП, которые могут не оказывать никакого эффекта на массу тела.
Соответственно пептид по настоящему изобретению может быть использован в качестве фармацевтического лекарственного средства для профилактики увеличения веса, для снижения веса, снижения избыточного веса и для лечения не только ожирения, включая болезненное ожирение (например, путем регулирования аппетита, процесса еды, приема пищи, потребления калорий и/или потребления энергии), но также и связанных с ожирением заболеваний, включая, без ограничения, воспаление, связанное с ожирением, заболевание желчного пузыря, связанное с ожирением, вызванное ожирением апноэ во сне и состояние здоровья. Кроме того, пептид по настоящему изобретению может быть использован для лечения заболеваний, которые могут быть ассоциированы с ожирением, таких как метаболический синдром, гипертония, индуцирующая артериосклероз дислипидемия, атеросклероз, артериосклероз, ишемическая болезнь сердца, инсульт и т.д. Однако в отношении этих симптомов пептид по настоящему изобретению может действовать полностью или частично опосредовано через эффекты, связанные с весом тела, или может действовать независимо от них.
Для улучшения терапевтического эффекта производного глюкагона по настоящему изобретению его можно модифицировать с помощью традиционных способов в данной области техники, таких как модификация полимеров, таких как полиэтиленгликоль (ПЭГ), гликаны и т.д., или слияние с альбумином, перенос, использование жирных кислот, иммуноглобулина и т.д. Например, по меньшей мере одна
- 4 036479 боковая цепь аминокислоты в соединении по настоящему изобретению может быть конъюгирована с полимером in vivo с тем, чтобы увеличить растворимость и/или период полувыведения и/или биодоступность. Известно, что эти модификации уменьшают клиренс терапевтических белков и пептидов.
Предпочтительно полимер может быть водорастворимым (амфипатическим или гидрофильным), нетоксичным и фармацевтически неактивным и более предпочтительно может включать ПЭГ, гомополимер или сополимер ПЭГ, монометилзамещенный полимер ПЭГ (мПЭГ) или полиаминокислоту, такую как полилизин, полиаспарагиновую кислоту и полиглутаминовую кислоту.
Специалистам в данной области очевидно, что модифицированные таким образом производные глюкагона обладают лучшим терапевтическим эффектом, чем нативный глюкагон. Соответственно варианты производных глюкагона также включены в объем настоящего изобретения.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, кодирующему указанный пептид.
Используемый в настоящем описании термин гомология в отношении полинуклеотидов, относится к сходству с аминокислотной последовательностью дикого типа и нуклеотидной последовательностью дикого типа и включает последовательности генов по меньшей мере с 75% гомологией полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, предпочтительно по меньшей мере 85%, более предпочтительно по меньшей мере 90% и еще более предпочтительно по меньшей мере 95%. Эти оценки гомологичности можно выполнять невооруженным глазом или с помощью коммерчески доступной программы сравнения. Компьютерные программы, доступные на рынке, могут рассчитать процентную гомологию между двумя или более последовательностями. Гомологию (%) можно рассчитать по соседним последовательностям.
Пептид можно получить в большом количестве путем введения полинуклеотида, кодирующего пептид, в вектор с последующей его экспрессией.
Для экспрессии рекомбинантного вектора такого типа полинуклеотид по настоящему изобретению обычно вводят в соответствующий вектор с образованием клонирующего или рекомбинантного вектора, содержащего полинуклеотид, причем этот вектор также включен в объем настоящего изобретения.
Используемый в настоящем описании термин рекомбинантный вектор относится к ДНКконструкции, которая включает нуклеотидную последовательность полинуклеотида, кодирующего целевой пептид, которая функционально связана с соответствующей регуляторной последовательностью, способной экспрессировать целевой пептид в подходящей клетке-хозяине. Регуляторная последовательность может включать промотор, способный инициировать транскрипцию, операторную последовательность для регулирования транскрипции, последовательность, кодирующую соответствующий мРНК домен, связывающий рибосому, и последовательность регуляции терминации транскрипции и трансляции. Рекомбинантный вектор после введения в подходящую клетку-хозяина может реплицироваться или функционировать независимо от генома хозяина и может быть интегрирован непосредственно в геном.
Рекомбинантный вектор, используемый в настоящем изобретении, не ограничен особыми условиями, если он реплицируется в клетке-хозяине, и может быть сконструирован с помощью любого вектора, известного в данной области. Примерами обычных векторов, которые могут быть использованы, включают дикого типа или рекомбинантные плазмиды, космиды, вирусы и бактериофаги. Например, в качестве вектора на основе фага или космиды могут быть использованы pWE15, M13, MBL3, MBL4, IXII, ASHII, APII, t10, t11, Charon4A, Charon21A и т.д. В качестве плазмидного вектора можно использовать плазмиды на основе pBR, pUC, pBluescriptII, pGEM, pTZ, pCL и плазмиду на основе рЕТ. Векторы, используемые в настоящем изобретении, не ограничены конкретными векторами, может использоваться любой вектор, известный в данной области.
Рекомбинантный вектор может быть использован для трансформации клетки-хозяина для получения пептида по настоящему изобретению. Помимо этого, в качестве части настоящего изобретения трансформированную клетку можно использовать для амплификации фрагментов нуклеиновых кислот или репликации векторов по настоящему изобретению или можно использовать культивируемую клеточную линию или клеточную линию, используемую для продуцирования рекомбинантного пептида по настоящему изобретению.
Используемый в настоящем описании термин трансформация относится к введению рекомбинантного вектора, включающего полинуклеотид, кодирующий целевой белок, в клетку-хозяина таким образом, что целевой белок, кодируемый полинуклеотидом, может быть экспрессирован в клеткехозяине. Не имеет значения, вставлен ли полинуклеотид в хромосому или находится вне хромосомы, если трансформированный полинуклеотид может быть экспрессирован в клетке-хозяине.
Кроме того, полинуклеотид включает ДНК и РНК, которые кодируют целевой белок. Полинуклеотид можно вводить в любом виде, если полинуклеотид может быть экспрессирован после введения в клетку-хозяина. Например, полинуклеотид может быть введен в клетку-хозяина в виде кассеты экспрессии, которая представляет собой геномную структуру, включающую все существенные функции, необходимые для самоэкспрессии. Кассета экспрессии, как правило, включает промотор, который функционально связан с полинуклеотидом, сигнал терминации транскрипции, домен, связывающий рибосому, и сигнал терминации трансляции. Кассета экспрессии может представлять собой самореплицирующийся
- 5 036479 вектор экспрессии. Кроме того, сам полинуклеотид может быть введен в клетку-хозяина и функционально связан с последовательностью, необходимой для его экспрессии в клетке-хозяине, без ограничений.
Кроме того, используемый в настоящем описании термин функционально связанный относится к состоянию, в котором промоторная последовательность, инициирующая и опосредующая транскрипцию целевого белка, кодирующего полинуклеотид, функционально связана с последовательностью гена.
Клетка-хозяин, подходящая для настоящего изобретения, не ограничена конкретными клетками, при условии, что клетка-хозяин может экспрессировать полинуклеотид по настоящему изобретению. Примеры клеток-хозяев, которые можно использовать в настоящем изобретении, включают Escherichia sp., такие как Е. coli; Bacillus sp., такие как Bacillus subtilis; Pseudomonas sp., такие как Pseudomonas putida; дрожжи, такие как Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae и Schizosaccharomyces pombe; клетки насекомых, таких как Spodoptera frugiperda (SF9); и клетки животных, такие как CHO, COS, BSC и т.д.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для профилактики или лечения ожирения, содержащей указанный пептид в качестве активного ингредиента.
Используемый в настоящем описании термин профилактика относится к любому действию, приводящему к подавлению или задержке начала развития ожирения путем введения пептида или фармацевтической композиции по настоящему изобретению, а термин лечение относится к любому действию, приводящему к улучшению симптоматики ожирения или благоприятному изменению путем введения пептида или фармацевтической композиции по настоящему изобретению.
Используемый здесь термин введение означает введение конкретного вещества пациенту соответствующим образом. Путь введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению, хотя и не имеет особых ограничений, может быть любым традиционным путем введения, если фармацевтическая композиция может достигать целевой ткани в организме, например внутрибрюшинным, внутривенным, внутримышечным, подкожным, внутрикожным, пероральным, местным, интраназальным, внутримышечным, интраректальным введением и т.д.
Используемый здесь термин ожирение относится к состоянию здоровья, при котором в организме накапливается избыточный жир, при этом человек считается тучным, когда индекс массы тела (ИМТ, значение, полученное путем деления веса человека в килограммах, на квадрат роста, измеренный в метрах) равен 25 или выше. Ожирение обычно вызвано дисбалансом энергии вследствие превышения потребления калорий над расходом энергии. Ожирение является метаболическим заболеванием, которое может вызывать развитие диабета и гиперлипидемии, повысить риск возникновения сексуальной дисфункции, артрита и сердечно-сосудистых заболеваний, а в некоторых случаях также связано с возникновением рака.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может включать фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель или разбавитель.
Используемый здесь термин фармацевтически приемлемый относится к достаточному количеству, которое может демонстрировать терапевтический эффект, при этом не вызывая появления каких-либо неблагоприятных реакций, и может быть легко определено специалистами в данной области по показателям, известным в области медицины, таким как тип заболеваний, подлежащих лечению, возраст пациента, вес, пол, чувствительность к лекарствам, путь введения, количество введений, лекарственное средство(средства), которое следует комбинировать или принимать одновременно с другими и т.д.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно включать фармацевтически приемлемый носитель. Для перорального введения фармацевтически приемлемый носитель может включать, без ограничения, связующее, лубрикант, дезинтегратор, наполнитель, солюбилизатор, диспергирующий агент, стабилизатор, суспендирующий агент, краситель и отдушки. Для введения в виде инъекций смесь также может содержать буферный агент, консервант, анальгетик, солюбилизатор, изотонический агент и стабилизатор. Для местного введения фармацевтически приемлемый носитель может включать основание, наполнитель, лубрикант, консервант и т.д.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть составлена в виде различных лекарственных форм в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Например, для перорального введения фармацевтическая композиция может быть составлена в виде таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и т.д. Для введения с помощью инъекций фармацевтическая композиция может быть приготовлена в ампулах в виде стандартной лекарственной формы или в виде мультидозовой препаративной формы. Фармацевтическая композиция также может быть приготовлена в виде растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул и препаратов длительного действия.
С другой стороны, примеры носителей, наполнителей и разбавителей, подходящих для фармацевтической композиции по настоящему изобретению, могут включать лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, аравийскую камедь, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, минеральные масла и т.д. Кроме того, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно включать наполнители, антикоагулянты, лубриканты, увлажнители, отдушки, антисептики и т.д.
Помимо этого, фармацевтическая композиция может быть приготовлена в виде лекарственной
- 6 036479 формы, выбранной из группы, состоящей из таблеток, пилюль, порошков, гранул, капсул, суспензий, жидкого лекарственного средства для внутреннего применения, эмульсий, сиропов, стерильных водных растворов и на основе неводных растворителей, лиофилизированных составов и суппозиториев.
Кроме того, фармацевтическая композиция может быть составлена в виде лекарственной формы, подходящей для однократного введения в тело пациента традиционным способом, предпочтительно в виде препарата, пригодного для введения пептидного лекарственного средства, и может быть введена перорально или парентерально, подкожно, внутривенно, внутримышечно, внутриартериально, интрамедуллярно, интратекально, интравентрикулярно, внутрилегочно, внутрикожно, подкожно, внутрибрюшинно, интраназально, внутрижелудочно, локально, сублингвально, внутривагинально или интраректально согласно традиционному методу введения, без ограничения.
Пептид также можно использовать в смеси с различными носителями, такими как солевой раствор или органический растворитель, разрешенными для применения в фармацевтических препаратах. Для повышения стабильности или абсорбции пептид можно использовать вместе с углеводами, такими как глюкоза, сахароза или декстран, или антиоксидантами, такими как глутатион, хелатирующие агенты, низкомолекулярные белки или другие стабилизаторы и т.д.
Объем введений и количество введений фармацевтической композиции по настоящему изобретению могут быть определены в соответствии с типом лекарственного средства, используемого в качестве активного ингредиента, наряду с другими факторами, такими как заболевание, подлежащее лечению, путь введения, возраст пациента, пол, вес, тяжесть заболевания и т.д.
Общая эффективная доза композиции по настоящему изобретению может вводиться пациенту в виде разовой дозы или в виде многократной дозы в течение длительного периода времени в соответствии с используемым протоколом лечения. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может иметь различное содержание активного ингредиента в зависимости от тяжести заболевания. Предпочтительно общая доза пептида по настоящему изобретению может составлять от 0,0001 мкг до 500 мг на 1 кг веса тела пациента. Однако, что касается дозы пептида, то эффективная доза определяется с учетом различных факторов, таких как возраст пациента, вес, состояние здоровья, пол, тяжесть заболевания, диета и скорость экскреции и т.д. Специалисты в данной области могут определить соответствующую эффективную дозу, исходя из конкретного применения композиции по настоящему изобретению.
Лекарственные формы, пути введения и способы введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению не имеют конкретных ограничений при условии, что фармацевтическая композиция проявляет эффект согласно настоящему изобретению.
Так как для фармацевтической композиции по настоящему изобретению характерны длительное действие и хороший титр in vivo, то количество и частота введений фармацевтической композиции по настоящему изобретению могут быть значительно уменьшены.
Фармацевтическая композиция может вводиться отдельно или в комбинации с другими фармацевтическими препаратами, проявляющими профилактический или терапевтический эффект в отношении ожирения. Фармацевтическая композиция, проявляющая профилактический или терапевтический эффект в отношении ожирения, может включать, без ограничения, агонист рецептора ГПП-1, агонист рецептора лептина, ингибитор ДПП-IV, антагонист рецептора Y5, антагонист рецептора меланинконцентрирующего гормона (МСН), агонист рецептора Y2/3, агонист рецептора МС3/4, ингибитор липазы желудка/поджелудочной железы, агонист 5НТ2с, агонист 3A-рецептора, агонист рецептора амилина, антагонист грелина и/или антагонист рецептора грелина и т.д.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу профилактики или лечения ожирения, включающему введение субъекту пептида или фармацевтической композиции, содержащей пептид.
Используемый здесь термин субъект относится к субъекту с подозрением на ожирение или находящемуся под угрозой развития ожирения и, в частности, к млекопитающим, включая людей, крыс и крупный рогатый скот, при этом субъектом может быть, без ограничений, любой субъект, которого можно лечить пептидом по настоящему изобретению. Введение фармацевтической композиции, содержащей пептид по настоящему изобретению, может приводить к эффективному лечению субъекта с подозрением на ожирение, причем ожирение является таким, как описано выше.
Терапевтический способ по настоящему изобретению может включать введение фармацевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей пептид. Общая суточная доза композиции может быть определена врачом в результате соответствующего медицинского осмотра, и композицию можно вводить один раз или в виде нескольких дробных доз. Однако с учетом цели настоящего изобретения конкретная терапевтически эффективная доза композиции для любого конкретного пациента может варьировать в зависимости от различных факторов, хорошо известных в области медицины, включая тип и степень ответа, которые должны быть получены, конкретные композиции в зависимости от того, используются ли с ними другие агенты, возраст пациента, массу тела, состояние здоровья, пол и диету, время и путь введения, скорость выведения композиции, продолжительность лечения, другие препараты, используемые в комбинации или одновременно с композицией по настоящему изобретению, и другие факторы, известные в области медицины.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению пептида для получения фарма- 7 036479 цевтического лекарственного средства для профилактики или лечения ожирения.
Режимы выполнения изобретения
Далее настоящее изобретение описано более подробно со ссылкой на приведенные ниже примеры.
Однако эти примеры даны только в качестве иллюстрации, и изобретение не ограничивается этими примерами.
Пример 1. Получение клеточных линий для активации in vivo.
Получение клеточных линий, демонстрирующих ответ цАМФ на ГПП-1.
Реакцию ПЦР проводили с использованием открытой рамки считывания (ОРС) кДНК (OriGene Technologies, Inc., USA) гена рецептора человека ГПП-1, используемой в качестве матрицы, вместе с прямым и обратным праймерами, представленными в SEQ ID NO: 15 и 16, которые включают сайты рестрикции для HindIII и EcoRI соответственно.
В частности, проводили реакцию ПЦР (денатурация при 95°С в течение 60 с, отжиг при 55°С в течение 60 с и удлинение при 68°С в течение 30 с), включающую 30 циклов. Продукт ПЦР подвергали электрофорезу в 1,0%-ном агарозном геле и из него элюировали фрагмент размером 405 п.о.
Прямой праймер 5'-CCCGGCCCCCGCGGCCGCTATTCGAAATAC-3'.
Обратный праймер 5'-GAACGGTCCGGAGGACGTCGACTCTTAAGATAG-3'.
Продукт ПЦР клонировали в известный вектор для экспрессии генов в клетках животных, x0GC/dhfr (патент Кореи № 10-0880509, также упоминаемый далее), для конструирования рекомбинантного вектора x0GC/GLP1R.
Полученный таким образом рекомбинантный вектор x0GC/GLP1R трансформировали в клетки клеточной линии яичников китайского хомячка СНО DG44, которые культивировали в среде DMEM/F12, содержащей 10% FBS, с использованием липофектамина (Invitrogene, USA), после чего проводили отбор и культивирование в селективной среде, содержащей G418 (1 мг/мл) и метотрексат (10 нМ). Из них отбирали линии моноклональных клеток, из которых окончательно отбирали линии клеток, демонстрирующие хороший ответ цАМФ на ГПП-1 в дозозависимом режиме.
Получение клеточных линий, демонстрирующих ответ цАМФ на глюкагон.
Реакцию ПЦР проводили с использованием открытой рамки считывания (ОРС) кДНК (OriGene Technologies, Inc., USA) гена рецептора глюкагона человека, используемой в качестве матрицы, вместе с прямым и обратным праймерами, представленными в SEQ ID NO: 17 и 18, которые включают сайты рестрикции для EcoRI и XhoI соответственно.
В частности, проводили реакцию ПЦР (денатурация при 95°С в течение 60 с, отжиг при 55°С в течение 60 с и удлинение при 68°С в течение 30 с), включающую 30 циклов. Продукт ПЦР подвергали электрофорезу в 1,0%-ном агарозном геле и из него элюировали фрагмент размером 435 п.о.
Прямой праймер 5'-CAGCGACACCGACCGTCCCCCCGTACTTAAGGCC-3'.
Обратный праймер 5'-CTAACCGACTCTCGGGGAAGACTGAGCTCGCC-3'.
Продукт ПЦР клонировали в известный вектор для экспрессии генов в клетках животных x0GC/dhfr для конструирования рекомбинантного вектора x0GC/GCCR.
Полученный таким образом рекомбинантный вектор x0GC/GCCR трансформировали в клетки клеточной линии яичников китайского хомячка СНО DG44, которые культивировали в среде DMEM/F12, содержащей 10% FBS, с использованием липофектамина (Invitrogene, USA), после чего проводили отбор и культивирование в селективной среде, содержащей G418 (1 мг/мл) и метотрексат (10 нМ). Из них отбирали линии моноклональных клеток, из которых окончательно отбирали линии клеток, демонстрирующие хороший ответ цАМФ на глюкагон в дозозависимом режиме.
Пример 2. Синтез производных глюкагона.
Для разработки производного глюкагона с хорошим действием как на рецепторы GLP-1, так и на рецепторы глюкагона в аминокислотной последовательности нативного глюкагона, представленной в SEQ ID NO: 1, выполняли замещения для получения аминокислотной последовательности, которая имеет способность связываться с ГПП-1, и синтезировали производные глюкагона, представленные в приведенной ниже табл. 1.
- 8 036479
Таблица 1
SEQ ID NO Аминокислотная последовательность
SEQ ID NO: 1 HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT
SEQ ID NO: 2 HXQGTFTSDYSKYLDEKCAKEFIQWLVNT
SEQ ID NO: 3 HXQGTFTSDYSKYLDEKCVKLFIQWLVNT
SEQ ID NO: 4 HXQGT FT S DYSKYLDEKCAKE FVEWLVNT
SEQ ID NO: 5 HXQGT FT S DYSKYLDEKCAHE FVEWLVNT
SEQ ID NO: 6 HXQGTFTSDYSKYLDSKCAHEFVEWLVNT
SEQ ID NO: 7 HXQGTFTSDYSKYLDSKCVHEFIEWLKNT
SEQ ID NO: 8 HXQGTFTSDYSKYLDSKCAHEFIEWLKNK
SEQ ID NO: 9 HXQGTFTSDYSKYLDSECAHEFIEWLKQG
SEQ ID NO: 10 HXQGT FT S DYSKYLDDKCAHE FVEWLVNT
SEQ ID NO: 11 HXQGTFTSDYSKYLDEECAKEFIRWLKKG
SEQ ID NO: 12 HXQGT FT S DYSKYLCEKRAKE FVQWLMNT
SEQ ID NO: 13 HXQGTFTSDYSKYLDECRAKEFVQWLMNT
SEQ ID NO: 14 HXQGT FT S DYSKYLDEKCAKE FVQWLMNT
В приведенной выше табл. 1 аминокислота, обозначенная как X в последовательностях SEQ ID NO: 2-14, представляет собой α-метилглутаминовую кислоту, которая является не встречающейся в природе аминокислотой, а остаток лизина в этих последовательностях может образовывать кольцо с остатком глутаминовой кислоты.
Пример 3. Измерение in vitro активности производных глюкагона.
Для измерения активности против ожирения производных глюкагона, синтезированных в примере 2, измеряли in vitro клеточную активность производных глюкагона с использованием трансформированных клеточных линий, полученных в примерах 1-1 и 1-2.
Трансформированные клеточные линии получали таким образом, чтобы ген рецептора ГПП-1 человека и ген рецептора глюкагона человека могли экспрессироваться в CHO соответственно с подходящей для измерения активностью ГПП-1 и глюкагона. Соответственно активность производных глюкагона, синтезированных в соответствии с настоящим изобретением, измеряли, используя трансформированные клеточные линии соответственно.
В частности, трансформированные клеточные линии субкультивировали два или три раза в неделю путем добавления в 96-луночный планшет аликвот в количестве 1 х 105 клеток/лунка и культивировали в течение 24 ч соответственно.
Клетки культуры промывали буферным раствором Кребса-Рингера, содержащим бикарбонат (КРБ), суспендировали в 40 мл буферного раствора KRB, содержащего 1 мМ 3-изобутил-1-метилксантин (IBMX), и оставляли при комнатной температуре на 5 мин.
Нативный глюкагон (SEQ ID NO: 1) или производные глюкагона (представленные пептидами с SEQ ID NO: 12-14) в соответствии с настоящим изобретением подвергали серийному 5-кратному разведению в диапазоне от 1000 до 0,02 нМ, добавляли туда 40 Мл вышеуказанных клеток и культивировали в CO2 инкубаторе при 37°С в течение 1 ч.
Затем к соответствующим полученным растворам добавляли 20 мл буфера для лизиса клеток, и клеточные лизаты наносили на набор для анализа цАМФ (Molecular Device, USA) для измерения концентрации цАМФ, вычисляли значения EC50 и сравнивали между собой. Результаты показаны в приведенной ниже табл. 2.
Таблица 2
Тестовый материал EC50 (hM)
Рецепторы человека ГПП-1 Рецепторы человека ГПП
ГПП-1 0,36 >1000
Глюкагон >1000 1,48
SEQ ID NO:12 0, 96 1,38
SEQ ID NO:13 0,27 0,23
SEQ ID NO:14 0, 17 0,38
Как показано в приведенной выше табл. 2, производные глюкагона в соответствии с настоящим изобретением показали превосходные эффекты как в отношении рецепторов ГПП-1, так и в отношении рецепторов глюкагона по сравнению с нативным глюкагоном, представленным в SEQ ID NO: 1.
Известно, что глюкагон является эффективным в лечении ожирения благодаря активации рецепторов ГПП-1 и рецепторов глюкагона, тем самым подавляя аппетит, улучшая ощущение сытости и способствуя лизису жировых клеток. Поскольку как показано в настоящем описании, производные глюкагона согласно настоящему изобретению обладают превосходными эффектами in vitro как в отношении рецеп- 9 036479 торов ГПП-1, так и в отношении рецепторов глюкагона по сравнению с нативным глюкагоном, эти производные глюкагона могут быть использованы в качестве более эффективного агента для лечения ожирения по сравнению с существующим глюкагоном.
Хотя предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения были раскрыты с целью иллюстрации, специалисты в данной области поймут, что возможны различные модификации, добавления и замены, не выходящие за рамки и сущность изобретения, раскрытую в прилагаемой формуле изобретения.

Claims (12)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Пептид, содержащий аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 12, 13 или 14, где пептид активирует рецептор ГПП-1 и рецептор глюкагона.
  2. 2. Пептид по п.1, в котором пептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
  3. 3. Пептид по п.1, в котором пептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13.
  4. 4. Пептид по п.1, в котором пептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.
  5. 5. Пептид по любому из предыдущих пунктов, где пептид является эффективным против ожирения.
  6. 6. Пептид по п.1, в котором аминокислоты в положениях 12 и 16 или 16 и 20 пептида образуют кольцо.
  7. 7. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения ожирения, содержащая пептид по любому из пп.1-6 в качестве активного агента и дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый носитель.
  8. 8. Фармацевтическая композиция по п.7, дополнительно содержащая другие фармацевтические ингредиенты, проявляющие профилактический или терапевтический эффект в отношении ожирения.
  9. 9. Фармацевтическая композиция по п.8, где другие фармацевтические ингредиенты, проявляющие профилактический или терапевтический эффект в отношении ожирения, представляют собой агонист рецептора ГПП-1, агонист рецептора лептина, ингибитор ДПП-IV, антагонист рецептора Y5, антагонист рецептора меланин-концентрирующего гормона (МСН), агонист рецептора Y2/3, агонист рецептора МС3/4, ингибитор липазы желудка/поджелудочной железы, агонист 5НТ2с, агонист 3A-рецептора, агонист рецептора амилина, антагонист грелина или антагонист рецептора грелина.
  10. 10. Способ профилактики или лечения ожирения, включающий введение субъекту пептида по любому из пп.1-6 или фармацевтической композиции по любому из пп.7-9.
  11. 11. Применение пептида по любому из пп.1-6 для профилактики или лечения ожирения.
  12. 12. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.7-9 для профилактики или лечения ожирения.
EA201791498A 2014-12-30 2015-12-30 Пептид, активирующий рецептор гпп-1 и рецептор глюкагона, фармацевтическая композиция на его основе и их применение для профилактики или лечения ожирения EA036479B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020140193691A KR102418477B1 (ko) 2014-12-30 2014-12-30 글루카곤 유도체
PCT/KR2015/014481 WO2016108617A1 (en) 2014-12-30 2015-12-30 Glucagon derivatives

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201791498A1 EA201791498A1 (ru) 2017-10-31
EA036479B1 true EA036479B1 (ru) 2020-11-16

Family

ID=56284668

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201791498A EA036479B1 (ru) 2014-12-30 2015-12-30 Пептид, активирующий рецептор гпп-1 и рецептор глюкагона, фармацевтическая композиция на его основе и их применение для профилактики или лечения ожирения

Country Status (20)

Country Link
US (3) US10513550B2 (ru)
EP (1) EP3240802B1 (ru)
JP (1) JP6758297B2 (ru)
KR (1) KR102418477B1 (ru)
CN (1) CN107250155B (ru)
AR (1) AR103323A1 (ru)
AU (1) AU2015372767B2 (ru)
BR (1) BR112017013845A2 (ru)
CA (1) CA2972001A1 (ru)
EA (1) EA036479B1 (ru)
HK (1) HK1246323A1 (ru)
IL (1) IL253001B (ru)
MX (1) MX2017008715A (ru)
NZ (1) NZ733649A (ru)
PH (1) PH12017501205A1 (ru)
SG (2) SG10201906912VA (ru)
TW (1) TWI696631B (ru)
UA (1) UA122967C2 (ru)
WO (1) WO2016108617A1 (ru)
ZA (1) ZA201704328B (ru)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11135271B2 (en) * 2014-12-30 2021-10-05 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivatives with improved stability
EP3322437B1 (en) 2015-06-30 2024-01-17 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivative and a composition comprising a long acting conjugate of the same
TWI622596B (zh) 2015-10-26 2018-05-01 美國禮來大藥廠 升糖素受體促效劑
BR112018013525A2 (pt) 2015-12-31 2018-12-04 Hanmi Pharm. Co., Ltd. conjugado de longa atuação de agonista de receptor de glucagon/glp-1/gip triplo e composição farmacêutica
WO2024038067A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy comprising long acting glp-1/glucagon and npy2 receptor agonists

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009058734A1 (en) * 2007-10-30 2009-05-07 Indiana University Research And Technology Corporation Compounds exhibiting glucagon antagonist and glp-1 agonist activity
KR20090096498A (ko) * 2007-01-05 2009-09-10 씨오브이엑스 테크놀로지스 아일랜드 리미티드 글루카곤-유사 단백질-1 수용기(ｇｌｐ-1ｒ) 작용제 화합물
KR20120052973A (ko) * 2009-07-13 2012-05-24 질랜드 파마 에이/에스 아실화 글루카곤 유사체
WO2012169798A2 (en) * 2011-06-10 2012-12-13 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
US20130035285A1 (en) * 2010-03-26 2013-02-07 Novo Nordisk A/S Novel glucagon analogues

Family Cites Families (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
EP0904107B1 (en) 1996-03-18 2004-10-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
AU749815B2 (en) 1998-03-06 2002-07-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Protein-free preparations
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6677136B2 (en) 2000-05-03 2004-01-13 Amgen Inc. Glucagon antagonists
GB0121709D0 (en) 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
US7217845B2 (en) 2002-11-25 2007-05-15 Sun Bio, Inc. Bifunctional polyethylene glycol derivatives
GB0300571D0 (en) 2003-01-10 2003-02-12 Imp College Innovations Ltd Modification of feeding behaviour
CA2513213C (en) 2003-01-22 2013-07-30 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US7772188B2 (en) 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US20050176108A1 (en) 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
WO2005035761A1 (en) 2003-10-16 2005-04-21 Compugen Ltd. Splice variants of preproglucagon, glucagon-like peptide-1 and oxyntomodulin
US8263084B2 (en) 2003-11-13 2012-09-11 Hanmi Science Co., Ltd Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate
KR101135244B1 (ko) 2007-11-29 2012-04-24 한미사이언스 주식회사 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물
US20090238838A1 (en) 2003-11-13 2009-09-24 Hanmi Pharm. Ind. Co. Ltd. Insulinotropic peptide conjugate using an immunoglobulin fc
WO2005047334A1 (en) 2003-11-13 2005-05-26 Hanmi Pharmaceutical. Co., Ltd. Igg fc fragment for a drug carrier and method for the preparation thereof
BRPI0518761A2 (pt) 2004-12-02 2008-12-09 Domantis Ltd fusço de droga, conjugado de droga, Ácido nucleico recombinante, construÇço de Ácido nucleico, cÉlula hospedeira, mÉtodo para produzir uma fusço de droga, composiÇço farmacÊutica, droga, mÉtodo de tratamento e/ou prevenÇço de uma condiÇço em um paciente, mÉtodo de retardo ou prevenÇço de progressço de doenÇa, e, mÉtodo para diminuir a absorÇço de alimentos por um paciente
BRPI0606992A2 (pt) 2005-02-11 2009-07-28 Amylin Pharmaceuticals Inc análogo e polipeptìdeos hìbridos de gip com propriedades selecionáveis
KR100754667B1 (ko) 2005-04-08 2007-09-03 한미약품 주식회사 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물
PT1891105E (pt) 2005-06-13 2012-06-27 Imp Innovations Ltd Análogos de oxintomodulina e seus efeitos sobre o comportamento da alimentação
GB0511986D0 (en) 2005-06-13 2005-07-20 Imp College Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
EP2330124B1 (en) 2005-08-11 2015-02-25 Amylin Pharmaceuticals, LLC Hybrid polypeptides with selectable properties
US20090297496A1 (en) 2005-09-08 2009-12-03 Childrens Hospital Medical Center Lysosomal Acid Lipase Therapy for NAFLD and Related Diseases
JP5297817B2 (ja) 2006-02-22 2013-09-25 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション オキシントモジュリン誘導体
EP2474318A1 (en) 2006-06-07 2012-07-11 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
KR100880509B1 (ko) 2006-10-16 2009-01-28 한미약품 주식회사 재조합 단백질의 대량 생산을 위한 신규한 벡터, 발현세포주 및 이를 이용한 재조합 단백질의 생산 방법
GB0624868D0 (en) 2006-12-13 2007-01-24 Imp Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
TWI428346B (zh) 2006-12-13 2014-03-01 Imp Innovations Ltd 新穎化合物及其等對進食行為影響
JP2008169195A (ja) 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
CA2677932A1 (en) 2007-02-15 2008-08-21 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
US20100196405A1 (en) 2007-07-10 2010-08-05 Kingman Ng GLP-1 Fc FUSION PROTEIN FORMULATION
CN106106497B (zh) 2007-07-27 2022-02-22 拜耳知识产权有限责任公司 三元活性化合物结合物
CN101765976B (zh) 2007-08-07 2014-03-12 富士通株式会社 错误检测装置和错误校正/错误检测解码装置和方法
WO2009033739A2 (en) 2007-09-11 2009-03-19 Mondobiotech Laboratories Ag Use of a peptide as a therapeutic agent
EP2214700A4 (en) 2007-11-02 2012-08-22 Janssen Biotech Inc HALF-SYNTHETIC GLP-1 PEPTIDE FUSION CONSTRUCTS, METHOD AND USES
WO2009099763A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Indiana University Research And Technology Corporation Ester-based peptide prodrugs
CL2009001424A1 (es) * 2008-06-17 2010-04-30 Univ Indiana Res & Tech Corp Peptido tipo glucagon; dimero que comprende dos de dichos peptidos; composicion farmaceutica que lo comprende; y su uso para tratar diabetes o inducir perdida de peso.
JP5753779B2 (ja) 2008-06-17 2015-07-22 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 生理学的ｐＨの緩衝液中で向上した溶解性及び安定性を示すグルカゴン類縁体
WO2010013012A2 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Lund University Bioscience Ab Novel polypeptides and uses thereof
WO2010033240A2 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Carbohydrate-based drug delivery polymers and conjugates thereof
WO2010033220A2 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Modified therapeutics peptides, methods of their preparation and use
FR2936441B1 (fr) 2008-09-26 2012-12-07 Rhodia Operations Article polyamide composite
KR20110126591A (ko) 2008-12-15 2011-11-23 질랜드 파마 에이/에스 글루카곤 유사체
WO2010071807A1 (en) 2008-12-19 2010-06-24 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based glucagon superfamily peptide prodrugs
LT2393828T (lt) 2009-02-03 2017-01-25 Amunix Operating Inc. Prailginti rekombinantiniai polipeptidai ir juos apimančios kompozicijos
WO2010096052A1 (en) 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
AU2010225523B2 (en) 2009-03-20 2012-05-24 Hanmi Science Co., Ltd. Method for preparing a site-specific physiologically active polypeptide conjugate
MX2011009798A (es) 2009-03-20 2011-12-08 Amgen Inc Inmunoglobulinas portadoras y usos de las mismas.
SG176858A1 (en) 2009-06-16 2012-02-28 Univ Indiana Res & Tech Corp Gip receptor-active glucagon compounds
US20120294855A1 (en) 2009-11-03 2012-11-22 Eli Lilly & Company Glp-1 receptor agonist compounds for obstructive sleep apnea
US20120269830A1 (en) 2009-12-07 2012-10-25 Lawrence Horowitz Conjugates with improved pharmacokinetic properties
US8703701B2 (en) * 2009-12-18 2014-04-22 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
AR079345A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina
US20130157953A1 (en) * 2010-01-20 2013-06-20 Zealand Pharma A/S Treatment of cardiac conditions
EP2528618A4 (en) 2010-01-27 2015-05-27 Univ Indiana Res & Tech Corp GLUCAGON ANTAGONISTE AND GIP AGONISTS CONJUGATES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF METABOLISM DISEASES AND ADIPOSITAS
AR081066A1 (es) 2010-04-02 2012-06-06 Hanmi Holdings Co Ltd Conjugado de insulina donde se usa un fragmento de inmunoglobulina
JP6050746B2 (ja) 2010-05-13 2016-12-21 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションIndiana University Research And Technology Corporation Ｇタンパク質共役受容体活性を示すグルカゴンスーパーファミリーのペプチド
KR20130102470A (ko) 2010-06-24 2013-09-17 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 아미드계 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 프로드러그
KR101337797B1 (ko) 2010-07-14 2013-12-06 한미사이언스 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬 결합체 액상 제제
KR101382593B1 (ko) 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
KR101383976B1 (ko) 2010-09-06 2014-04-10 파나소닉 주식회사 표시 장치 및 그 제어 방법
CN101974077A (zh) 2010-09-15 2011-02-16 南京瑞年天平医药科技有限公司 一种新颖的多肽化合物
KR101303388B1 (ko) 2010-10-26 2013-09-03 한미사이언스 주식회사 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제
KR101767570B1 (ko) 2010-10-26 2017-08-14 한미사이언스 주식회사 항 비만 펩타이드의 지속형 결합체
CN102010473A (zh) 2010-11-10 2011-04-13 曹鹏 重组胃泌酸调节素融合蛋白及其制备和应用
EP2654774A4 (en) 2010-12-22 2015-07-01 Marcadia Biotech Inc METHOD FOR THE TREATMENT OF METABOLISM DISEASES AND ADIPOSITAS WITH GIP AND GLP-1 RECEPTOR ACTIVE PUCIDIDES ON GLUCAGON BASIS
EP2492749A1 (en) 2011-02-28 2012-08-29 Rohm and Haas Electronic Materials LLC Photoresist compositions and methods of forming photolithographic patterns
KR101161526B1 (ko) 2011-05-16 2012-07-02 숭실대학교산학협력단 연료전지용 촉매전극을 위한 코어/쉘 구조의 나노 지지체 및 그 제조방법
CN109306015B (zh) * 2011-06-17 2022-04-26 韩美科学株式会社 包括泌酸调节肽和免疫球蛋白片段的结合物以及其应用
RU2014101697A (ru) 2011-06-22 2015-07-27 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Коагонисты рецепторов глюкагона/glp-1
KR101665009B1 (ko) 2012-03-09 2016-10-11 한미사이언스 주식회사 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
BR112014025951A2 (pt) 2012-04-19 2017-07-11 Opko Biologics Ltd variantes de oxintomodulina de longa ação e métodos de produção do mesmo
RU2015101697A (ru) * 2012-06-21 2016-08-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Аналоги глюкагона, обладающие активностью рецептора gip
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
KR101373563B1 (ko) 2012-07-25 2014-03-12 전북대학교산학협력단 Ｔｏｆ-ｍｒａ를 이용한 혈류특성 및 ｍｒ-신호강도구배(전단율) 유도방법
AR092873A1 (es) * 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
CA2890324C (en) 2012-11-06 2021-02-23 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Liquid formulation of protein conjugate comprising the oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
AU2014255608B2 (en) * 2013-04-18 2018-01-25 Novo Nordisk A/S Stable, protracted GLP-1/glucagon receptor co-agonists for medical use
JP6137046B2 (ja) 2014-05-09 2017-05-31 信越化学工業株式会社 単量体、高分子化合物、レジスト材料及びパターン形成方法
TWI772252B (zh) 2014-09-16 2022-08-01 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
WO2019171352A2 (en) 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090096498A (ko) * 2007-01-05 2009-09-10 씨오브이엑스 테크놀로지스 아일랜드 리미티드 글루카곤-유사 단백질-1 수용기(ｇｌｐ-1ｒ) 작용제 화합물
WO2009058734A1 (en) * 2007-10-30 2009-05-07 Indiana University Research And Technology Corporation Compounds exhibiting glucagon antagonist and glp-1 agonist activity
KR20120052973A (ko) * 2009-07-13 2012-05-24 질랜드 파마 에이/에스 아실화 글루카곤 유사체
US20130035285A1 (en) * 2010-03-26 2013-02-07 Novo Nordisk A/S Novel glucagon analogues
WO2012169798A2 (en) * 2011-06-10 2012-12-13 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same

Also Published As

Publication number Publication date
AU2015372767A1 (en) 2017-07-13
CN107250155B (zh) 2021-08-10
IL253001A0 (en) 2017-08-31
JP6758297B2 (ja) 2020-09-23
IL253001B (en) 2022-04-01
NZ733649A (en) 2024-07-26
US20220025012A1 (en) 2022-01-27
US11254724B2 (en) 2022-02-22
UA122967C2 (uk) 2021-01-27
EP3240802A1 (en) 2017-11-08
BR112017013845A2 (pt) 2018-01-02
PH12017501205A1 (en) 2017-10-18
US20200140515A1 (en) 2020-05-07
EP3240802A4 (en) 2018-10-10
EP3240802B1 (en) 2021-07-21
TWI696631B (zh) 2020-06-21
SG10201906912VA (en) 2019-09-27
HK1246323A1 (zh) 2018-09-07
TW201632546A (zh) 2016-09-16
US20180002395A1 (en) 2018-01-04
CN107250155A (zh) 2017-10-13
ZA201704328B (en) 2021-01-27
US10513550B2 (en) 2019-12-24
WO2016108617A1 (en) 2016-07-07
MX2017008715A (es) 2017-11-17
AU2015372767B2 (en) 2020-07-16
EA201791498A1 (ru) 2017-10-31
KR102418477B1 (ko) 2022-07-08
SG11201705130XA (en) 2017-07-28
JP2018505153A (ja) 2018-02-22
US12018060B2 (en) 2024-06-25
AR103323A1 (es) 2017-05-03
KR20160082026A (ko) 2016-07-08
CA2972001A1 (en) 2016-07-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2020201322B2 (en) Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
KR102291020B1 (ko) 안정성이 증가된 글루카곤 유도체
US12018060B2 (en) Glucagon derivatives
NZ755534B2 (en) Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
NZ717174B2 (en) Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
NZ740049B2 (en) Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
NZ734808B2 (en) Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): KG TJ TM