EA032330B1 - Способ обнаружения инфекции h. pylori - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к способу обнаружения инфекции Н. pylori у субъекта, а также соответствующему набору, при этом указанный способ включает обнаружение в образце, полученном от указанного субъекта, иммунного ответа, направленного против FliD, при этом указанный иммунный ответ включает антитело против FliD. Указанный способ включает осуществление реакции указанного образца с FliD или фрагментом FliD, причём указанный фрагмент имеет аминокислотную последовательность, которая достаточно длинная, чтобы было можно идентифицировать указанный фрагмент как фрагмент FliD и исключить то, что указанный фрагмент представляет собой фрагмент белка или полипептида, отличного от FliD, и при этом указанный образец выбран из группы, состоящей из сыворотки крови, плазмы крови, цельной крови и кала.

Description

Изобретение относится к способу обнаружения инфекции Η. ρνίοπ у субъекта, а также соответствующему набору, при этом указанный способ включает обнаружение в образце, полученном от указанного субъекта, иммунного ответа, направленного против Е1Ю, при этом указанный иммунный ответ включает антитело против Εΐίϋ. Указанный способ включает осуществление реакции указанного образца с Е1Ю или фрагментом Εΐίϋ, причём указанный фрагмент имеет аминокислотную последовательность, которая достаточно длинная, чтобы было можно идентифицировать указанный фрагмент как фрагмент Е1Ю и исключить то, что указанный фрагмент представляет собой фрагмент белка или полипептида, отличного от Е1Ю, и при этом указанный образец выбран из группы, состоящей из сыворотки крови, плазмы крови, цельной крови и кала.

Настоящее изобретение относится к способу обнаружения инфекции Не11соЬас!ег, в частности инфекции Н. ру1ог1, применению иммунного ответа в качестве биомаркера и набору для применения в способе обнаружения инфекции Не11соЬас!ег, в частности инфекции Н. ру1оп.

НейсоЬас!ет ру1оп (Н. ру1оп) - микроаэрофильная, грамотрицательная бактерия, имеющая форму спириллы, присутствующая приблизительно у половины населения земли и считающаяся специфичным для человека патогеном желудка (М1сйе!б, е! а1., 1999). У большинства зараженных индивидуумов развивается бессимптомный хронический гастрит. Однако у некоторых субъектов инфекция вызывает хронический гастрит, пептическую язву и атрофию и играет важную роль в развитии лимфомы лимфоидных тканей слизистых оболочек (МАЬТ-лимфомы), аденокарциномы желудка и первичной неходжкинской лимфомы желудка (8идапита, е! а1., 2001).

Всемирная организация здравоохранения отнесла Н. ру1ог1 к канцерогену группы I (Со!о, е! а1., 1999), и прямое доказательство канцерогенеза было продемонстрировано в ходе исследований на животных (Нопба, е! а1., 1998; Т. ^а!апаЬе, е! а1., 1998). Эрадикация Н. ру1ог1 может предотвратить развитие рака желудка у людей (Иетцта, е! а1., 2001). Рассматривались стратегии диагностика и лечение в популяциях с высоким риском рака желудка (Уатаока, е! а1., 1998). Однако подобный подход затруднен недостатком эффективных и доступных тест-систем, в особенности в странах с более низким социальноэкономическим положением. В таких странах применяют только серологические тесты, большинство из которых имеет такой недостаток, как низкие рабочие характеристики, или они плохо валидированы. В отношении серологических тестов на Н. ру1ог1 известны и описаны несколько специфичных единичных маркеров. Эти факторы применяют во многих диагностических подходах, но практически все из них имеют значительные ограничения, которые делают их непригодными для диагностики Н. ру1отк Например, цитотоксин-ассоциированный белок (СадА) является очень хорошо изученным белком Н. ру1ог1. Его кодирует сад-РА1 (островок патогенности цитотоксин-ассоциированного гена), и указанный белок описывают как онкогенный (Етапсо, е! а1., 2005; Мита!а-Кат1уа, е! а1., 2007). Этот белок также является высоко иммунногенным антигеном, из-за этого его часто используют как маркер для серологических тестов. Положительную пробу на СадА можно применять как индикатор вирулентности Н. ру1ог1, в связи с тем, что люди, инфицированные СадА-положительными штаммами, имеют повышенный риск развития гастродуоденальных заболеваний. Однако данный белок не походит в качестве единственного маркера, так как только подгруппа штаммов Н. ру1ог1 является СадА-положительными. Более того, положительная проба на СадА не является отличительным признаком инфекции в активной форме, так как у пациентов после избавления от Н. ру1ог1 сохраняются антитела к СадА в течение многих лет (Еиксош, е! а1., 1999). Таким образом, в серологических тестах этот белок всегда нужно комбинировать с другими подходящими антигенами, чтобы подтвердить положительный результат. Другим хорошо изученным белком Н. ру1ог1 является вакуолизирующий цитотоксин (УасА). Сообщалось, что он вызывает вакуолизацию в клетках, подвергнутых воздействию супернатантов Н. ру1ог1 или очищенного белка (Соует & В1а§ег, 1992). Ген уасА кодирует протоксин массой 140 кДа, в котором аминоконцевая сигнальная последовательность и фрагмент на карбоксильном конце протеолитически отщепляются в ходе секреции, в результате чего образуется активный белок с молекулярной массой 88 кДа, который собирается в гексамеры и образует пору (Моп!есиссо & бе Ветпатб, 2003). Данный белок состоит из двух разных областей. Сигнальная последовательность (§1а, §1Ь, §2) и средняя область (т1, т2), обе имеющие множество аллельных вариаций, которые вероятно регулируют цитотоксическую активность (АШейоп, е! а1., 1995). По причине повышенной вариабельности белка УасА он является непригодным для серологического тестирования.

Другой хорошо изученный белок Н. ру1ог1, СгоЕЬ, относится к семейству молекулярных шаперонов, которые необходимы для правильной укладки (фолдинга) многих белков в условиях стресса (Оипп, е! а1., 1992). В ходе различных исследований было показано, что этот белок является высококонсервативным среди различных штаммов Н. ру1ог1 и что его положительная серологическая реакция у инфицированных пациентов была даже выше, чем для СадА (МассЫа, е! а1., 1993; 8иегЬаит, е! а1., 1994). Кроме того, в ходе исследований, выполненных авторами настоящего изобретения, наблюдали, что положительную серологическую пробу по СгоЕЬ чаще обнаруживали у немецких пациентов с раком желудка по сравнению с аналогичными контрольными группами (неопубликованные данные). Кроме того, предполагается, что антитела против СгоЕЬ могут сохраняться дольше после связанной с болезнью потери инфекции Н. ру1ог1. Таким образом, СгоЕЬ может быть подходящим маркером для текущей или прошедшей инфекции и может помочь преодолеть занижение оценки риска развития связанного с Н. ру1ог1 рака желудка из-за клиренса инфекции (Сао е! а1., 2009).

Таким образом, проблемой, лежащей в основе настоящего изобретения, было обеспечение способа обнаружения инфекции Н. ру1ог1 с высокой чувствительностью и/или высокой специфичностью. Другой проблемой, лежащей в основе настоящего изобретения, было обеспечение анализа, который по сравнению с известными анализами, приводит к меньшему количеству ложноположительных и ложноотрицательных результатов, в частности, при подходах популяционного масштаба. Дополнительной проблемой, лежащей в основе настоящего изобретения, было обеспечение средства для осуществления указанных способов и анализов соответственно. Еще одной дополнительной проблемой, лежащей в основе настоя

- 1 032330 щего изобретения, было обеспечение биомаркера для пациентов, инфицированных Н. ργίοτί, при этом указанный биомаркер предпочтительно не проявляет никакой перекрестной реактивности с другими бактериями и любыми белками, пептидами или молекулами нуклеиновой кислоты, кодирующими, в частности, такие белки и пептиды.

Эти и другие проблемы, лежащие в основе настоящего изобретения, решены посредством сущности настоящего изобретения, изложенного в прилагаемых независимых пунктах формулы изобретения. Предпочтительные варианты реализации могут быть взяты из прилагающихся зависимых пунктов формулы изобретения.

Эти и другие проблемы, лежащие в основе настоящего изобретения, также решены посредством следующих вариантов реализации изобретения.

Вариант реализации 1.

Способ обнаружения инфекции Н. ργίοτί у субъекта, при этом указанный способ включает обнаружение в образце, полученном от указанного субъекта, иммунного ответа, направленного против ΕΙίΌ или фрагмента ΕΙίΌ, причём указанный фрагмент имеет аминокислотную последовательность, которая достаточно длинная, чтобы было можно идентифицировать указанный фрагмент как фрагмент ΕΙίΌ и исключить то, что указанный фрагмент представляет собой фрагмент белка или полипептида, отличного от Είίϋ, и при этом указанный образец выбран из группы, состоящей из сыворотки крови, плазмы крови, цельной крови и кала.

Вариант реализации 2.

Способ по варианту реализации 1, в котором если в образце от указанного субъекта обнаруживают иммунный ответ, направленный против ΕΙίΌ, то указанный субъект страдает от инфекции Н. ργίοτί, или указанный субъект перенес в прошлом инфекцию Н. ργίοτί.

Вариант реализации 3.

Способ по любому из вариантов реализации 1. 2, в котором если в образце от указанного субъекта не обнаруживают иммунный ответ, направленный против ΕΙίΌ, то указанный субъект не страдает от инфекции Н. ργίοτί.

Вариант реализации 4.

Способ по любому из вариантов реализации 1, 2, в котором если в образце от указанного субъекта не обнаруживают иммунный ответ, направленный против ΕΙίΌ, то указанный субъект перенес в прошлом инфекцию Н. ργίοτί.

Вариант реализации 5.

Способ по любому из вариантов реализации 1-4, в котором указанный иммунный ответ, направленный против ΕΙίΌ, является гуморальным иммунным ответом против ΕΙίΌ, предпочтительно ответ с участием анти-ΕΙίΌ антител.

Вариант реализации 6.

Способ по варианту реализации 5, в котором указанный иммунный ответ, направленный против ΕΙίΌ, является гуморальным иммунным ответом против ΕΙίΌ и при этом гуморальный иммунный ответ против ΕΙίΌ включает по меньшей мере одно антитело против ΕΙίΌ, выбранное из группы, включающей антитело 1дС и антитело 1дА.

Вариант реализации 7.

Способ по варианту реализации 5, в котором указанный иммунный ответ, направленный против ΕΙίΌ, является иммунным ответом с образованием анти-ΕΙίΌ антител и при этом иммунный ответ с образованием анти-ΕΙίΌ антител включает по меньшей мере одно антитело против ΕΙίΌ, выбранное из группы, включающей антитело 1дС и антитело 1дА.

Вариант реализации 8.

Способ по любому из вариантов реализации 1-7, в котором указанный субъект инфицирован Н. ργίοτί, экспрессирующим ΕΙίΌ.

Вариант реализации 9.

Способ по любому из вариантов реализации 1-8, в котором указанный субъект отличается от субъекта, который является иммуносупрессированным, предпочтительно указанный субъект отличается от субъекта, который получает иммуносупрессивную терапию.

Вариант реализации 10.

Способ по любому из вариантов реализации 1-9, в котором указанный способ дополнительно включает обнаружение одного или более антигенов Н. ργίοτί.

Вариант реализации 11.

Способ по варианту реализации 10, в котором один или несколько антигенов Н. ργίοτί выбраны из группы, включающей СадА, УасА, СгоЕС Ηρ 0231, ΙΗρ 0940 и ΗίτΑ.

Вариант реализации 12.

Способ по любому из вариантов реализации 1-11, в котором указанный способ включает вступление в реакцию образца с ΕΙίΌ или указанным фрагментом ΕΙίΌ.

Вариант реализации 13.

Способ по варианту реализации 13, в котором указанный способ включает вступление в реакцию

- 2 032330 указанного образца с полноразмерным ΕΙίΌ или фрагментом Ε1ίΌ, причём указанный фрагмент имеет аминокислотную последовательность, которая короче, чем аминокислотная последовательность полноразмерного ΕΙίΌ, при этом фрагмент ΕΙίΌ все еще активен как фактор вирулентности.

Вариант реализации 14.

Способ по любому из вариантов реализации 12-13, в котором иммунный ответ, направленный против ΕΙίΌ, содержит по меньшей мере одно из гуморальных соединений, способных взаимодействовать с ΕΙίΌ, и клеточное соединение, способное взаимодействовать с ΕΙίΌ, при этом по меньшей мере одно гуморальное соединение и/или клеточное соединение взаимодействует с ΕΙίΌ, предпочтительно по меньшей мере одно гуморальное соединение и/или клеточное соединение, взаимодействующее с ΕΙίΌ, образует продукт взаимодействия с ΕΙίΌ или указанным фрагментом ΕΙίΌ.

Вариант реализации 15.

Способ по варианту реализации 14, в котором указанный иммунный ответ, направленный против ΕΙίΌ, является гуморальным иммунным ответом против ΕΙίΌ и при этом в результате гуморального иммунного ответа против ΕΙίΌ образуется продукт взаимодействия с ΕΙίΌ или указанным фрагментом ΕΙίΌ.

Вариант реализации 16.

Способ по варианту реализации 14, в котором иммунный ответ, направленный против ΕΙίΌ, является иммунным ответом с образованием анти-ΕΙίΌ антител и в котором в результате иммунного ответа с образованием анти-ΕΙίΌ антител образуется продукт взаимодействия с белком ΕΙίΌ или указанным фрагментом ΕΙίΌ.

Вариант реализации 17.

Способ по варианту реализации 14, в котором иммунный ответ, направленный против ΕΙίΌ, включает по меньшей мере образование одного антитела против ΕΙίΌ и при этом антитело против ΕΙίΌ образует продукт взаимодействия с ΕΙίΌ.

Вариант реализации 18.

Способ по любому из вариантов реализации 14-17, в котором обнаруживают продукт взаимодействия.

Вариант реализации 19.

Способ по варианту реализации 18, в котором указанный продукт взаимодействия обнаруживают напрямую.

Вариант реализации 20.

Способ по варианту реализации 18, в котором указанный продукт взаимодействия обнаруживают косвенно.

Вариант реализации 21.

Способ по любому из вариантов реализации 1-20, в котором обнаружение происходит посредством твердофазного иммуноферментного анализа (ЕЬ18Л) или линейного иммуноанализа.

Вариант реализации 22.

Способ по любому из вариантов реализации 1-20, в котором обнаружение происходит посредством анализа латерального растекания.

Вариант реализации 23.

Способ по любому из вариантов реализации 1-22, в котором образец выбран из группы, включающей сыворотку, плазму и цельную кровь.

Вариант реализации 24.

Способ по любому из вариантов реализации 1-23, в котором указанным субъектом является человек.

Вариант реализации 25.

Способ по варианту реализации 24, в котором ΕΙίΌ, вступающий в реакцию с образцом, является ΕΙίΌ Н. ру1оп.

Вариант реализации 26.

Способ по варианту реализации 25, в котором ΕΙίΌ включает аминокислотную последовательность согласно 8ЕО ΙΌ N0: 1.

Вариант реализации 27.

Способ по любому из вариантов реализации 1-23, в котором указанным субъектом является свинья. Вариант реализации 28.

Способ по варианту реализации 27, в котором Ε1ίΌ, вступающий в реакцию с образцом, является ΕΙίΌ Н. 5Ш5.

Вариант реализации 29.

Способ по варианту реализации 28, в котором ΕΙίΌ включает аминокислотную последовательность согласно 8Е0 ΙΌ N0: 3.

Вариант реализации 30.

Способ по любому из вариантов реализации 1-23, в котором указанным субъектом является кошка. Предпочтительно указанная кошка выбрана из группы, включающей домашнюю кошку, дикую кошку, малую кошку и большую кошку.

- 3 032330

Вариант реализации 31.

Способ по варианту реализации 30, в котором Ρ1ίΌ, вступающий в реакцию с образцом, является белком ΡΙίΌ бактерии Н. Гебе.

Вариант реализации 32.

Способ по варианту реализации 31, в котором ΡΙίΌ включает аминокислотную последовательность согласно 8Еф ΙΌ N0: 5.

Вариант реализации 33.

Способ по любому из вариантов реализации 1-32, в котором чувствительность способа обнаружения инфекции Н. ρνίοπ у человека составляет более 90% и/или 97% или менее.

Вариант реализации 34.

Способ по любому из вариантов реализации 1-33, в котором специфичность способа обнаружения инфекции Н. ρνίοπ у человека составляет более 90% и/или 99% или менее.

Вариант реализации 35.

Применение присутствия у субъекта иммунного ответа, направленного против ΡΙίΌ, в качестве биомаркера.

Вариант реализации 36.

Применение согласно варианту реализации 35, при котором указанный биомаркер является биомаркером инфицирования субъекта Н. ρνίοπ.

Вариант реализации 37.

Применение согласно любому из вариантов реализации 35, 36, при котором указанный биомаркер является биомаркером инфицирования субъекта Н. ρνίοπ. при этом указанным субъектом является человек.

Вариант реализации 38.

Применение любого из вариантов реализации 35-37, при котором указанный биомаркер является прогностическим биомаркером.

Вариант реализации 39.

Применение любого из вариантов реализации 35-38, при котором указанный иммунный ответ является гуморальным иммунным ответом против ΡΙίΌ.

Вариант реализации 40.

Применение любого из вариантов реализации 35-39, при котором указанный иммунный ответ является иммунным ответом против белка ΡΙίΌ с образованием анти-ΡΙίΌ антител.

Вариант реализации 41.

Набор для применения в способе согласно любому из вариантов реализации 1, 7, 13, 21-23, включающий белок ΡΙίΌ или его фрагмент и твёрдую фазу, при этом ΡΙίΌ или его фрагмент прикреплены к указанной твёрдой фазе, где указанный фрагмент имеет аминокислотную последовательность, которая короче, чем аминокислотная последовательность полноразмерного ΡΙίΌ, при этом фрагмент ΡΙίΌ все еще активен как фактор вирулентности.

Вариант реализации 42.

Набор по варианту реализации 41, в котором по меньшей мере один дополнительный компонент выбран из группы, включающей буфер и/или листок-вкладыш с инструкцией.

Вариант реализации 43.

Набор по любому из вариантов реализации 41, 42, в котором ΡΙίΌ является полноразмерным белком ΡΙίΌ.

Вариант реализации 44.

Набор по любому из вариантов реализации 41, 42, в котором ΡΙίΌ включает аминокислотную последовательность и в котором указанная аминокислотная последовательность выбрана из группы, включающей аминокислотную последовательность согласно 8Еф ΙΌ N0: 1, аминокислотную последовательность согласно 8Еф ΙΌ N0: 3 и аминокислотную последовательность согласно 8Еф ΙΌ N0: 5.

Вариант реализации 45.

Набор по любому из вариантов реализации 41-44, в котором указанный набор подходит для применения или служит для применения в способе обнаружения инфекции Η.ρνίοπ у субъекта.

Вариант реализации 46.

Набор по варианту реализации 45, в котором указанный набор подходит для применения или служит для применения в способе по любому из вариантов реализации 1-34.

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что ΡΙίΌ, который является белком, также называемым гомолог ассоциированного с крюком белка 2, представляет собой маркер инфицирования субъекта Не11соЬас1ег и Н. ρνίοπ в частности. Авторы настоящего изобретения также с удивлением обнаружили, что ΡΙίΌ и/или иммунный ответ, направленный против Ρ1ίΌ, можно выгодно использовать как маркер в серологическом анализе, и в связи с этим соответственно в любом способе и анализе, который основывается на или использует образец, полученный от субъекта, проверяемого на инфекцию НейсцЬаСег и инфекцию Н. ρνίοπ в частности, при этом образец предпочтительно выбирают из группы, включающей образец сыворотки, образец плазмы, образец крови и образец кала. Наконец, авторы на

- 4 032330 стоящего изобретения с удивлением обнаружили, что инфицирование субъекта Не11соЬас1ет и Н. ρνίοπ. в частности, можно обнаружить. взяв за основу Ρ1ίΌ и/или нуклеиновую кислоту. кодирующую Ρ1ίΌ, при этом Ρ1ίΌ и/или нуклеиновая кислота, кодирующая Ρ1ίΌ, используется как единственный маркер. Другими словами, согласно настоящему изобретению инфицирование субъекта НейсоЬас1ег и Н. ру1оп в частности может быть диагностировано исключительно на основе и ссылаясь соответственно на наличие белка Ρ1ίΌ и/или нуклеиновой кислоты, кодирующей таковой. То же самое справедливо для иммунного ответа, направленного против Ρ1ίΌ, который развился у субъекта, инфицированного НеНсоЬас1ет и Н. ру1оп в частности. Согласно настоящему изобретению инфицирование субъекта НейсоЬасЮг и Н. ру1оп в частности может быть диагностировано исключительно на основе и ссылаясь соответственно на наличие иммунного ответа, направленного против Ρ1ίΌ, при этом у субъекта был сформирован иммунный ответ против Ρ1ίΌ. Дополнительное преимущество настоящего изобретения состоит в том, что иммунный ответ, направленный против Ρ1ίΌ, и белок Ρ1ίΌ как таковой могут быть обнаружены в образце, который, как правило, получают неинвазивными способами в отличие от множества известных способов обнаружения, где образец необходимо отобрать посредством инвазивного способа, такого как биопсия.

Специалист в данной области техники согласится, что настоящее изобретение, в целом, может применяться для обнаружения любой инфекции НейсоЬас1ет у субъекта, при условии, что подобный НейсоЬас!ег кодирует и/или экспрессирует Ρ1ίΌ. Специалист в данной области техники также согласится, что, как правило, отдельный вид субъектов, такой как, например, человек, инфицируется определенным видом НейсоЬас1ет. В случае, когда субъектом является человек, видом НеНсоЬас1ет является Н. ру1отг В случае, когда субъектом является свинья, видом НеНсоЬас1ет является Н. 8Ш8. В случае, когда субъектом является кошка, включая больших кошек, видом НеНсоЬас1ет является Н. ГеЙ8. Данное описание изобретения, в частности, относится к обнаружению Н. ру1оп у человека. Подобная ссылка на Н. ру1оп и человека, однако, сделана единственно с целью ясности изложения, и с учетом вышеуказанного любого варианта реализации, относящийся к Н. ру1оп и человеку, равнозначно применим к любому другому НеНсоЬас!ег, экспрессирующему Ρ1ίΌ или его гомолог, и любому другому виду субъекта. Предпочтительно другим видом субъекта является любое млекопитающее, которое страдает или возможно страдает от инфицирования НеНсоЬас1ет и гомологичным Н. ру1оп видом, при этом подобный НеНсоЬас1ет и гомологичный Н. ру1оп вид экспрессирует Ρ1ίΌ или его гомолог.

Специалист в данной области техники также согласится, что для каждого вида НейсоЬас1ег, как правило, существует несколько различных штаммов. Аминокислотная последовательность и последовательность нуклеиновой кислоты для белка Ρ1ίΌ у подобных штаммов вида НейсоЬас1ег, как правило, показывают высокую степень идентичности в отношении аминокислотной последовательности. Более конкретно, биоинформатический анализ показал, что аминокислотная последовательность Ρ1ίΌ присутствует и является высококонсервативной у всех (более 200) штаммов Н. ру1отг Гомологичность Ρ1ίΌ среди приблизительно 200 штаммов Н. ру1оп, которые были проанализированы авторами настоящего изобретения, составляет 97%. Интересно, что за исключением нескольких других, не являющихся пилори, видов НейсоЬасЮг с частичной гомологией, не существует других известных организмов, обладающих значительной геномной или протеомной гомологией с Ρ1ίΌ бактерии Н. ру1отг Сравнительный анализ белка Ρ1ίΌ Н. ру1оп показывает высокую консервативность Ρ1ίΌ у видов НейсоЬас1ет, тогда как он отличается от большинства белков других бактерий, так же как эукариотических организмов. Данный анализ вместе с предположением о высокой антигенности этого белка обеспечивает рациональное основание для фактического отсутствия перекрестной реактивности.

Кроме того, Ρ1ίΌ экспрессируется фактически всеми штаммами, которые инфицируют или способны инфицировать субъект. Это объясняет, почему согласно настоящему изобретению Ρ1ίΌ является маркером для фактически каждого штамма Н. ру1оп и, соответственно, каждого штамма вида НейсоЬас1ет, инфицирующего соответствующий вид субъекта. Другими словами, практически все Н. ру1опположительные пациенты демонстрируют иммунный ответ, направленный против Ρ1ίΌ.

Белок Ρ1ίΌ Н. ру1оп является существенным элементом в сборке функционального жгутика, и мутантные по белку Ρ1ίΌ штаммы являются полностью неподвижными. Флагеллин играет центральную роль в бактериальной подвижности и необходим для колонизации и персистенции инфекции Н. ру1оп (Еа!оп, е! а1., 1996). Подвижность Н. ру1ог1 является фактором вирулентности при патогенезе повреждения слизистой желудка (8. ^а1аиаЬе, е! а1., 1997). Ген Ρ1ίΌ Н. ру1оп кодирует белок массой 76 кДа (К1т, е! а1., 1999). Оперон Ρ1ίΌ Н. ру1оп содержит гены ПаС, Ρ1ίΌ и Ρ118 в заданном порядке под контролем сигма-28-зависимого промотора. Запись о Ρ1ίΌ бактерии Н. ру1оп можно найти в банках данных ИшΡΐΌΐΚΒ/8\νί58-ΡΐΌΐ под номером Р96786.4, предоставляющей среди прочего аминокислотную последовательность белка и мутации Ρ1ίΌ, обнаруженные у различных штаммов Н. ру1отг

Способ согласно настоящему изобретению обнаружения у субъекта инфекции НейсоЬас1ет, предпочтительно инфекции Н. ру1ог1, может быть охарактеризован как способ, включающий этап определения, содержит ли образец от субъекта иммунный ответ, направленный против Ρ1ίΌ, белок Ρ1ίΌ или нуклеиновую кислоту, кодирующую Ρ1ίΌ. Если образец от тестируемого субъекта содержит гуморальный ответ, направленный против Ρ1ίΌ, белок Ρ1ίΌ или нуклеиновую кислоту, кодирующую Ρ1ίΌ, то субъект страдает от инфекции НейсоЬас1ет, предпочтительно инфекции Н. ру1ог1, или перенес в прошлом инфек

- 5 032330 цию Нс11СоЬас1сг. предпочтительно инфекцию Н. ру1оп.

Способ согласно настоящему изобретению обнаружения у субъекта инфекции НейсоЬас!ег. предпочтительно инфекции Н. ру1ог1. может быть также применим по отношению к субъекту. у которого неизвестно. страдает ли он от инфекции НейсоЬас!ег. предпочтительно инфекции Н. ру1оп. или подобный субъект перенес инфекцию НеНсоЬас1ег. предпочтительно инфекцию Н. ру1оп. В этой степени настоящее изобретение относится в дополнительном аспекте к способам определения. страдает ли субъект от инфекции НейсоЬас!ег. предпочтительно инфекции Н. ру1оп. или перенес в прошлом инфекцию НейсоЬас1ег. предпочтительно инфекцию Н. ру1оп.

Предпочтительно используемое в настоящей заявке выражение в прошлом относится к моменту времени. который предшествует моменту времени. когда образец брали или берут у субъекта. при этом подобный образец является образцом. используемым в связи с различными аспектами и/или различными вариантами реализации настоящего изобретения и. в частности. при обнаружении Н. ру1оп и/или инфекции Н. ру1оп у субъекта и при диагностике Н. ру1оп и/или инфекции Н. ру1оп у субъекта.

В связи с различными аспектами настоящего изобретения и различными способами согласно настоящему изобретению в частности специалист в данной области техники согласится. что иммунный ответ и иммунный ответ с образованием анти-ΕΊίΌ антител. формирующийся у субъекта. инфицированного Не11соЬас!ег и Н.ру1оп в частности. сохраняется в течение нескольких лет. Преобладание подобного иммунного ответа с образованием анти-ΕΊίΌ антител. как правило. составляет примерно 50% после 1-5 лет после эрадикации Н.ру1оп. примерно 50% после 6-10 лет после эрадикации Н.ру1оп. примерно 25% после 11-15 лет после эрадикации Н.ру1оп и примерно 25% после 16-20 лет после эрадикации Н. ру1оп. В свете этого. субъект. которому поставили Н.ру1оп-положительный диагноз. может быть субъектом. который действительно страдает от инфекции Н. ру1оп в момент. когда был отобран образец. или субъектом. который перенес инфекцию Н. ру1оп в прошлом с все еще преобладающим иммунным ответом. направленным против ΕΊίΌ.

В тех случаях. когда иммунный ответ. направленный против ΕΊίΌ. является гуморальным иммунным ответом против Ρ1ίΌ и иммунным ответом с образованием анти-ИЮ антител в частности. антитела против Ρ1ίΌ. как правило. представлены иммуноглобулинами классов 1дС или 1дЛ. Эта классовая специфичность может быть использована при обнаружении анти-ИЮ антител путем применения антител к 1§С и/или 1дЛ в качестве обнаруживающих антител или захватывающих антител. В варианте реализации. где субъектом является человек. обнаруживающие антитела и захватывающие антитела являются предпочтительно антителами к 1дС человека и/или 1дЛ человека.

В связи с различными аспектами настоящего изобретения и различными способами согласно настоящему изобретению в частности способы могут в одном из вариантов реализации изобретения дополнительно включать обнаружение одного или более антигенов НейсоЬас!ег или нуклеиновой кислоты. кодирующей подобные антигены Не11соЬас!ег. В одном из вариантов реализации подобные антигены Не11соЬас!ег являются антигенами Н. ру1оп. В одном из других вариантов реализации антигены выбраны из группы. включающей СадА. УасА. СгоЕЬ. Нр 0231. 1Нр 0940 и Н1гА. которые хорошо известны в данной области техники и описаны. например. в УакооЬ Ί. е! а1. (УакооЬ Ί. е! а1.. Си! апб Ыуег. Уо1. 4. Ыо. 3. 8ер!етЬег 2010. рр. 345-350). 8аЬаг1й N. е! а1. (8аЬайй N. е! а1.. 1пЕес1юп апб ΙιηιηιιηίΙν. Ыоу. 2002. р. 64996503). Сао Ь. е! а1. (Сао Ь. е! а1.. Сапсег Кез 2009; 69: (15). Аидиз! 1. 2009. р. 6164 - 6170). Уатаока У. (Уатаока У.. Ί. Меб. МюгоЬю1. 2008 Мау; 57 (Р!5): 545-553). М1ей1ке 8. е! а1. (М1ей1ке 8. е! а1.. Ιη!. Ί. Сапсег: 87. 322-327 (2000)) и АИейоп ЕС. е! а1. (АШейоп ЕС. е! а1.. Сиггеп! МюгоЬю1оду. Уо1. 39(1999). рр. 211-218). Аминокислотная последовательность СадА раскрыта в настоящей заявке как последовательность 8ЕО ΙΌ N0: 7. нуклеотидная последовательность СадА раскрыта в настоящей заявке как последовательность 8ЕО ΙΌ N0:8. аминокислотная последовательность УасА раскрыта в настоящей заявке как последовательность 8ЕО ΙΌ N0: 9. нуклеотидная последовательность УасА раскрыта в настоящей заявке как последовательность 8ЕО ΙΌ N0:10. аминокислотная последовательность СгоЕЬ раскрыта в настоящей заявке как последовательность 8ЕО ΙΌ N0: 11. нуклеотидная последовательность СгоЕЬ раскрыта в настоящей заявке как последовательность 8Е0 ΙΌ N0:12. аминокислотная последовательность Нр0231 раскрыта в настоящей заявке как последовательность 8Е0 ΙΌ N0:13. нуклеотидная последовательность Нр0231 раскрыта в настоящей заявке как последовательность 8Е0 ΙΌ N0:14. аминокислотная последовательность ЕНр0940 раскрыта в настоящей заявке как последовательность 8Е0 ΙΌ N0:15. нуклеотидная последовательность ЕНр0940 раскрыта в настоящей заявке как последовательность 8Е0 ΙΌ N0:16. аминокислотная последовательность Н!гА раскрыта в настоящей заявке как последовательность 8Е0 ΙΌ N0:17 и нуклеотидная последовательность Н1гЛ раскрыта в настоящей заявке как последовательность 8ЕС ΙΌ N0:18.

В варианте реализации способа согласно настоящему изобретению. где инфекция НейсоЬас!ег и более предпочтительно инфекция Н. ру1оп обнаруживают у субъекта посредством обнаружения в образце от субъекта иммунного ответа. направленного против Ε1ΊΌ. и. в частности. анти-ИЮ антител в образце. образец и белок Ε1ΊΌ вступают в реакцию. В одном из вариантов реализации образец добавляют к Ε1ίΌ. Предпочтительно при подобном способе Ε1ίΌ прикреплен к твердой фазе. В рамках настоящего изобретения находится также то. что Ε1ίΌ добавляют к образцу. Предпочтительно Ε1ίΌ добавляют как раствор.

- 6 032330 более предпочтительно как водный раствор, такой как забуференный раствор. В предпочтительном варианте реализации Ε1ίΌ, вступающий в реакцию с образцом, прикреплен к твердой фазе. Специалист в данной области техники согласится, что ΕΙίΌ и образец вступают в реакцию при таких условиях, что если образец содержит иммунный ответ, направленный против ΕΙίΌ, и антитела против ΕΙίΌ в частности, то образуется продукт взаимодействия. Предпочтительно подобный продукт взаимодействия является комплексом ΕΙίΌ и антитела против ΕΙίΌ, содержащегося в образце.

Образованный таким образом продукт взаимодействия может быть обнаружен напрямую или косвенно. В варианте реализации настоящего изобретения, где продукт взаимодействия обнаруживают напрямую, ΕΙίΌ, вступающий в реакцию с образцом, содержит метку, которая позволяет обнаруживать ΕΙίΌ, в частности, при взаимодействии с антителом против ΕΙίΌ. Метки этого типа известны специалистам в данной области техники и охватывают радиоактивные метки, флуоресцентные метки, красители, наночастицы, такие как золото, и ферменты, такие как пероксидаза хрена. Дополнительными метками являются метки, раскрытые в настоящей заявке в связи с мечением антител. В варианте реализации, где продукт взаимодействия определяют косвенно, продукт взаимодействия затем вступает в реакцию с обнаруживающим агентом, при этом обнаруживающий агент специфически связывается с продуктом взаимодействия. Подобным обнаруживающим агентом может быть антитело, предпочтительно анти-1дО или анти-1дА антитело. Обнаруживающий агент сам, как правило, содержит метку, которая позволяет обнаруживать обнаруживающий агент, предпочтительно, когда обнаруживающий агент специфически связан с продуктом взаимодействия.

В предпочтительных вариантах реализации способов согласно настоящему изобретению продукт взаимодействия определяют посредством твердофазного иммуноферментного анализа (ЕЬ18А) или радиоиммуноанализа, который известен специалистам в данной области техники (Еойкреюй Ε. апй ΖοιΕηδ Н. (ейк.), Вюапа1уйк, 8рек1гит АкайетЕсйег Уег1ад Не1йе1Ьегд, 1998). Способ ЕЬ18А может быть непрямым, сендвич-анализом, конкурентным или неконкурентным.

В альтернативных предпочтительных вариантах реализации способов согласно настоящему изобретению продукт взаимодействия обнаруживают посредством анализа латерального растекания, который также известен как иммуно-хроматографический анализ латерального растекания, который, например, описан в патенте США № 6485982. Подобный анализ латерального растекания в одном из вариантов реализации применяют при любом способе согласно настоящему изобретению, где присутствует любое антитело против Ε1ίΌ, и, соответственно, в образце, полученном от субъекта, обнаруживают антитела против Ε1ίΌ. Анализ латерального растекания описывается с целью иллюстрации варианта реализации способа согласно настоящему изобретению, где антитела против Ε1ίΌ обнаруживают в образце от субъекта, при этом субъектом является человек.

В основе технологии анализа латерального растекания лежит серия капиллярных подложек, таких как фрагменты пористой бумаги или полимера. Каждый из этих компонентов обладает способностью стремительно переносить жидкость, например сыворотку, плазму или кровь. Подушка для нанесения образца действует как губка и задерживает избыток жидкости образца. Когда подушка для нанесения образца насыщена, жидкость перемещается на подложку с конъюгатом, на которой расположены наночастицы, предпочтительно золотые наночастицы, конъюгированные с антителом к иммуноглобулину человека. Когда жидкость образца мигрирует к этому элементу, она растворяет частицы и в ходе одной общей реакции смесь образца с конъюгатом протекает через пористую структуру. Таким образом, антитело, иммобилизованное на поверхности наночастиц, связывается с 1дО человека, присутствующим в образце, в то время как мигрируя дальше через следующую капиллярную матрицу. На этом элементе, который, как правило, является гидрофобной мембраной подобной нитроцеллюлозе, антигены, также как и контроль (например, 1дО человека), иммобилизованы в качестве тестовых и контрольных линий. Как только 1дО человека, который сейчас связан с частицами конъюгата, достигнет этих линий, антиген, иммобилизованный на мембране, специфически захватит комплекс антитела. Спустя некоторое время частиц накопится все больше на месте прикрепления антигена и появится легко обнаруживаемая окрашенная полоса. В одном из вариантов реализации присутствует только один антиген, именуемый Ε1ίΌ. В другом варианте реализации кроме Ε1ίΌ присутствует один или более антигенов. Предпочтительно один или более антигенов выбирают из группы, включающей СадА, УасА, ОгоЕЬ, Нр0231, 1Нр 0940 и Н1гА.

В дополнительных альтернативных предпочтительных вариантах реализации способов согласно настоящему изобретению продукт взаимодействия обнаруживают посредством линейного иммуноанализа. Подобный линейный иммуноанализ, как правило, включает множество полосок. На упомянутых полосках фиксируют высокоочищенный рекомбинантный либо белок Ε1ίΌ, либо агент с возможностью взаимодействия, который способен взаимодействовать с Ε1ίΌ. Подобные полоски предпочтительно выполнены из нитроцеллюлозной мембраны. Эти полоски инкубируют с образцом, предпочтительно с разбавленным образцом сыворотки или плазмы, и на тестовых полосках антитела против Ε1ίΌ связываются с Ε1ίΌ в случае, когда Ε1ίΌ иммобилизован для обнаружения анти-РНО антител в образце, или Ε1ίΌ связывается с антителами против Ε1ίΌ в случае, когда антитела против Ε1ίΌ иммобилизованы для обнаружения Ε1ίΌ в образце. На втором этапе полоски инкубируют с антителами к иммуноглобулинам (1дО и 1дА), которые соединены с пероксидазой хрена. Специфически связанные антитела обнаруживают с помощью

- 7 032330 реакции окрашивания, катализируемой пероксидазой. Если произошла реакция антиген-антитело с образованием продукта взаимодействия, то появится темная полоса на полоске в соответствующей точке. В одном из вариантов реализации настоящего изобретения контрольные полосы на верхнем конце тестовых полосок представляют собой:

a) контрольную полосу прохождения реакции, находящуюся под номером полоски, которая должна показывать выполнение реакции для каждого образца;

b) контрольные полосы для конъюгата (1дС. 1дА), которые используют для проверки класса обнаруживаемых антител. Если, например, используют тестовую полоску для обнаружения антител класса 1дС. то конъюгат 1§С покажет четкую полосу;

c) контроль порогового значения. Интенсивность этой полосы позволяет оценить реактивность отдельных полос антигенов.

Анализ, имеющий такой принцип устройства, с антигенами, отличающимися от ΕΙίΌ, по существу, доступен от компании М1кгодеп ОтЬН, Нойрид, Германия, как гесотЬте Не11соЬас!ег 1дС или гесотЬте НейсоЬас!ег 1дА (ссылка: ййр://тетете.т1кгодеп.бе/ир1оаб8/!х_оет1кгодеп!аЬ1е8/ бокитеп!е/6АКГНР001ЕИ.рб£).

В одном из вариантов реализации способа согласно настоящему изобретению обнаружения у субъекта инфекции Не1юоЬас!ег и более предпочтительно инфекции Н. ру1огг где способ включает обнаружение в образце от субъекта белка Γ1ίΌ, Γ1ίΌ обнаруживают посредством масс-спектрометрии, которая, например, описана в Гойкреюй Г. апб йогЬах Н. (еб§.), В1оапа1уйк, 8рек!гит Акабетщсйег Уег1ад НеИе1Ьегд, 1998.

В этих вариантах реализации способов согласно настоящему изобретению, где Ε1ίΌ обнаруживают в образце от субъекта, агент с возможностью взаимодействия, образующий вместе с Ε1ίΌ продукт взаимодействия, предпочтительно выбран из группы, включающей антитело, аптамер и шпигельмер. Создание подобных агентов с возможностью взаимодействия находится в пределах квалификации специалиста в данной области техники.

Создание антитела, связывающегося, а конкретнее специфически связывающегося с Ε1ίΌ, хорошо известно специалисту в данной области техники и, например, описано в Наг1оте, Е., аиб Гапе, Ό., ΛπΙίЬоб1е§: А ЬаЬога!огу Мапиа1, Со1б 8рппд НагЬог ЬаЬога!огу, Со1б 8рппд НагЬог, ΝΥ, (1988). Предпочтительно применительно к настоящему изобретению можно использовать моноклональные антитела, которые можно получить согласно протоколу Сезаря Милыптейна и дополнительных разработок, основанных на нем. Используемое в настоящей заявке понятие антитела включает, но не ограничивается полными антителами, фрагментами антител или производными, такими как ГаЬ-фрагменты, Гс-фрагменты и одноцепочечные антитела, при условии, что они подходят и способны связывать белок Γ1ίΌ. Кроме моноклональных антител, можно использовать и/или создавать также поликлональные антитела. Создание поликлональных антител также хорошо известно специалисту в данной области техники и, например, описано в Наг1оте, Е., апб Ьапе, Ό., АпйЬоЛек: А ЬаЬога!огу Мапиа1, Со1б 8ргшд НагЬог ЬаЬога!огу, Со1б 8ргшд НагЬог, ΝΥ, (1988).

Антитела, которые можно использовать согласно настоящему изобретению, могут иметь один или несколько маркеров или меток. Подобные маркеры или метки могут быть полезны для обнаружения антитела. Предпочтительно маркеры и метки выбирают из группы, включающей авидин, стрептавидин, биотин, золото, ферменты, такие как пероксидаза хрена, и флуоресцеин, и используют, например, в способах ЕЫ8А. Эти и дополнительные маркеры, так же как способы, описаны в Наг1оте, Е., апб Ьапе, Ό., АпйЬоЛек: А ЬаЬога!огу Мапиа1, Со1б 8ргшд НагЬог ЬаЬога!огу, Со1б 8ргшд НагЬог, ΝΥ, (1988).

Аптамеры являются Ό-нуклеиновыми кислотами, которые являются либо одноцепочечными, либо двухцепочечными и которые специфически взаимодействуют с целевой молекулой, такой как Γ1ίΌ в настоящем изобретении. Получение или выбор аптамеров описан, например, в европейском патенте ЕР № 0533838. В основном выполняют следующие этапы. Во-первых, обеспечивают смесь нуклеиновых кислот, то есть потенциальных аптамеров, в которой каждая нуклеиновая кислота, как правило, включает сегмент из нескольких, предпочтительно по меньшей мере из восьми, последовательных рандомизированных нуклеотидов. Эта смесь затем вступает в контакт с целевой молекулой, при этом нуклеиновая кислота (кислоты) связывается с целевой молекулой, например, на основании повышенной аффинности к целевой молекуле или связывается с ней сильнее по сравнению с потенциальной смесью. После этого связывающуюся нуклеиновую кислоту (кислоты) отделяют от остатков смеси. При необходимости полученную таким образом нуклеиновую кислоту (кислоты) амплифицируют, используя, например, полимеразную цепную реакцию. Эти этапы могут быть повторены несколько раз с получением в конце смеси, имеющей повышенную долю специфически связывающихся с целевой молекулой нуклеиновых кислот, из которой при необходимости затем выбирают конечную связывающуюся нуклеиновую кислоту. Эти специфически связывающиеся нуклеиновые кислоты называются аптамерами. Очевидно, что на любом этапе способа создания или идентификации аптамеров могут быть отобраны образцы смеси отдельных нуклеиновых кислот для определения их последовательности с использованием стандартных методик. В рамках настоящего изобретения находится то, что аптамеры могут быть стабилизированы, например, путем введения определенных химических групп, которые известны специалисту в области создания

- 8 032330 аптамеров. Подобные модификации могут, например, состоять в введении аминогруппы в 2' положение остатка сахара нуклеотидов.

Создание или получение шпигельмеров, связывающихся, а конкретнее специфически связывающихся, с Ε1ίΌ в качестве целевой молекулы, основано на схожем принципе. Получение шпигельмеров описано в международной заявке на патент \УО 98/08856. Шпигельмеры являются Ь-нуклеиновыми кислотами, что означает, что они состоят из Ь-нуклеотидов, а не из Ό-нуклеотидов, как аптамеры. Шпильгельмерам свойственен тот факт, что они имеют очень высокую стабильность в биологической системе и по сравнению с аптамерами специфически взаимодействуют с целевой молекулой, против которой они направлены. С целью создания шпигельмеров создают гетерогенную популяцию Ό-нуклеиновых кислот, и эта популяция вступает в контакт с оптическим антиподом целевой молекулы, в настоящем случае, например, с Ό-энантиомером встречающегося в природе Ь-энантиомера белка Ε1ίΌ. После этого отделяют те Ό-нуклеиновые кислоты, которые не взаимодействуют с оптическим антиподом целевой молекулы. Однако те Ό-нуклеиновые кислоты, взаимодействующие с оптическим антиподом целевой молекулы, отделяют, при необходимости определяют и/или секвенируют, а затем синтезируют соответствующие Ьнуклеиновые кислоты на основе информации о последовательностях нуклеиновых кислот, полученной от Ό-нуклеиновых кислот. Эти Ь-нуклеиновые кислоты, которые в отношении последовательности идентичны вышеупомянутым Ό-нуклеиновым кислотам, взаимодействующим с оптическим антиподом целевой молекулы, будут специфически взаимодействовать с встречающейся в природе целевой молекулой, а не с оптическим антиподом таковой. Подобно способу создания аптамеров также возможно повторение по нескольку раз различных этапов создания шпигельмеров, таким образом увеличивая количество тех нуклеиновых кислот, которые специфически взаимодействуют с оптическим антиподом целевой молекулы.

В вариантах реализации способа согласно настоящему изобретению обнаружения инфекции НеНсоЬас1ет и более предпочтительно инфекции Н. ру1оп, у субъекта, где способ включает обнаружение в образце от субъекта нуклеиновой кислоты, кодирующей белок Ε1ίΌ, агент с возможностью взаимодействия выбирают из группы, включающей праймер и зонд. С учетом раскрытой в настоящей заявке нуклеотидной и аминокислотной последовательностей белка Ε1ίΌ разработка и приготовление подобных праймера и зонда находится в пределах квалификации специалиста (см., например, ЬоИзреюй Ε. апй 2отЬа§ Н. (ейк.), Вюапа1у11к, 8рек1тит Акайетксйет Уег1ад Не1йе1Ьегд, 1998). На подобный агент с возможностью взаимодействия можно поставить метку. Различные метки и способы мечения агента с возможностью взаимодействия известны специалисту в данной области техники. В одном из вариантов реализации метки являются такими же, как приведено выше в части, касающейся антител.

Продукт взаимодействия, включающий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую белок Ε1ίΌ или его фрагмент, и агент с возможностью взаимодействия, можно обнаружить с помощью средств, известных специалисту в данной области техники, и описанных, например, в ЬоЩреюй Е. апй 2отЬа§ Н. (ейк.), Вюапа1уйк, 8рек1шт Акайетксйет Уег1ад Не1йе1Ьегд, 1998.

В одном из вариантов реализации способа согласно настоящему изобретению обнаружения инфекции НеНсоЬас1ет и более предпочтительно инфекции Н. ру1оп у субъекта, где способ включает обнаружение в образце от субъекта нуклеиновой кислоты, кодирующей Ε1ίΌ, нуклеиновую кислоту, кодирующую Ε1ίΌ, обнаруживают посредством масс-спектрометрии, которая описана, например, в Ьойзреюй Е. апй 2отЬа§ Н. (ей§.), Вюапа1у11к, 8рек1тит Акайетксйет Ует1ад Не1йе1Ьегд, 1998.

В одном из вариантов реализации способа согласно настоящему изобретению обнаружения инфекции НеНсоЬас1ет и более предпочтительно инфекции Н. ру1оп у субъекта, где способ включает обнаружение в образце от субъекта, нуклеиновой кислоты, кодирующей Ε1ίΌ, нуклеиновую кислоту, кодирующую Ε1ίΌ, обнаруживают посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) в ее различных формах, которые описаны, например, в ЬоЩреюй Ε. апй 2отЬа§ Н. (ей§.), Вюапа1у11к, 8рек1шт Акайетксйет Уег1ад Не1йе1Ьегд, 1998. Альтернативно, нуклеиновую кислоту, кодирующую Ε1ίΌ, обнаруживают посредством гибридизационного анализа, как описано, например, в ЬоИзреюй Ε. апй 2отЬа§ Н. (ей§.), Вюапа1у11к, 8рек1тит Акайетксйет Уег1ад Не1йе1Ьегд, 1998.

Касательно тех аспектов настоящего изобретения, относящихся к биомаркеру, не вызовет возражений, что иммунный ответ, направленный против Ε1ίΌ, как описано в настоящей заявке, белок Ε1ίΌ и нуклеиновая кислота, кодирующая Ε1ίΌ, каждый из них действуют как прогностический биомаркер, так как наличие упомянутого иммунного ответа против Ε1ίΌ, как описано в настоящей заявке, белка Ε1ίΌ и/или нуклеиновой кислоты, кодирующей Ε1ίΌ, коррелирует с результатами гистологических анализов и воспалением у пациентов, не подвергавшихся лечению.

Специалист в данной области техники согласится, что с учетом представленного в настоящей заявке раскрытия изобретения конкретная разработка набора согласно настоящему изобретению находится в пределах квалификации специалиста в данной области. В одном из вариантов реализации настоящего изобретения набор является готовым к применению набором.

В дополнительном аспекте настоящего изобретения настоящее изобретение относится к применению агентов с возможностью взаимодействия, как раскрыто в настоящей заявке, для обнаружения Ε1ίΌ, как раскрыто в настоящей заявке.

- 9 032330

Предпочтительно использующееся в настоящей заявке понятие образец относится к образцу, сразу полученному от субъекта, или образцу, который был подготовлен перед использованием в связи с настоящим изобретением и, в частности, со способами согласно настоящему изобретению.

В одном из вариантов реализации различных аспектов настоящего изобретения и вариантах реализации настоящего изобретения субъект является субъектом, который предположительно страдает или подозревают, что он страдает от инфекции Н. ργίοτί.

В одном из вариантов реализации инфекция ΗοΙχοΕκΙΟΓ представляет собой инфицирование НейссЬас1:ег или предполагаемое или подозреваемое инфицирование Ней^Ьа^ег.

В одном из вариантов реализации любого аспекта настоящего изобретения, где первое соединение специфически взаимодействует или специфически связывается со вторым соединением, взаимодействие или связывание между упомянутым первым соединением и упомянутым вторым соединением характеризуется константой диссоциации К_с, составляющей 1 мкМ или менее, предпочтительно К_с, составляющей 0,25 мкМ или менее, и более предпочтительно К_с, составляющей 0,1 мкМ или менее.

Специалисту в данной области будет понятно, что те варианты реализации, где обнаруживают ΕΙίΌ, белок ΕΙίΌ может быть представлен или как полноразмерный ΕΙίΌ или фрагмент ΕΙίΌ или как фрагмент полноразмерного ΕΙίΌ. Предпочтительно использующееся в настоящей заявке понятие «полноразмерный ΕΗΌ» представляет собой синтезируемый НейтоЬаЛег белок ΕΙίΌ, который является активным в качестве фактора вирулентности. В одном из вариантов реализации настоящего изобретения полноразмерный ΕΙίΌ является предпочтительно белком ΕΙίΌ, синтезируемым Ней^Ьа^ег. Фрагмент полноразмерного ΕΙίΌ является фрагментом, аминокислотная последовательность которого короче, чем аминокислотная последовательность полноразмерного ΕΙίΌ, при этом фрагмент ΕΙίΌ все еще активен как фактор вирулентности. Фрагмент ΕΙίΌ предпочтительно является фрагментом ΕΙίΌ, предпочтительно полноразмерного ΕΙίΌ, при этом фрагмент имеет аминокислотную последовательность, которая достаточно длинная, чтобы позволить специалисту в данной области техники идентифицировать фрагмент как фрагмент ΕΙίΌ и полноразмерного ΕΙίΌ в частности и исключить возможность того, что фрагмент является фрагментом белка или полипептида, отличного от ΕΙίΌ и полноразмерного ΕΙίΌ в частности. В одном из предпочтительных вариантов реализации полноразмерный ΕΙίΌ включает аминокислотную последовательность согласно 8ЕЦ ΙΌ N0: 1.

Аналогичные замечания и определения применимы в равной степени к нуклеиновой кислоте, кодирующей ΕΙίΌ. В соответствии с этим специалисту в данной области будет понятно, что в тех вариантах реализации, где обнаруживают нуклеиновую кислоту, кодирующую ΕΙίΌ, нуклеиновая кислота, кодирующая ΕΙίΌ, может быть представлена как нуклеиновая кислота, кодирующая полноразмерный ΕΙίΌ, или как нуклеиновая кислота, кодирующая фрагмент ΕΙίΌ, или как нуклеиновая кислота, кодирующая фрагмент полноразмерного ΕΙίΌ. Предпочтительно использующееся в настоящей заявке понятие полноразмерный ΕΗΌ представляет собой синтезируемый Ней^Ьа^ег белок ΕΙίΌ, который является активным в качестве фактора вирулентности. В одном из вариантов реализации полноразмерный ΕΙίΌ является предпочтительно белком ΕΙίΌ, синтезируемым Ней^^Сет. Фрагмент полноразмерного ΕΙίΌ является фрагментом, аминокислотная последовательность которого короче, чем аминокислотная последовательность полноразмерного ΕΙίΌ, при этом фрагмент ΕΙίΌ все еще активен как фактор вирулентности. Фрагмент ΕΙίΌ предпочтительно является фрагментом ΕΙίΌ, предпочтительно полноразмерного ΕΙίΌ, при этом фрагмент имеет аминокислотную последовательность, которая достаточно длинная, чтобы позволить специалисту в данной области техники идентифицировать фрагмент как фрагмент ΕΙίΌ и полноразмерного ΕΙίΌ в частности и исключить возможность того, что фрагмент является фрагментом белка или полипептида, отличного от ΕΙίΌ и полноразмерного ΕΙίΌ в частности. В одном из предпочтительных вариантов реализации нуклеиновая кислота, кодирующая полноразмерный ΕΙίΌ, включает нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ΙΌ N0: 2.

Фрагмент нуклеиновой кислоты, кодирующей ΕΙίΌ, предпочтительно является фрагментом нуклеиновой кислоты, кодирующей ΕΙίΌ, предпочтительно полноразмерный ΕΙίΌ, при этом фрагмент нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, которая достаточно длинная, чтобы позволить специалисту в данной области техники идентифицировать фрагмент как фрагмент нуклеиновой кислоты, кодирующей ΕΙίΌ и полноразмерный ΕΙίΌ в частности, и исключить возможность того, что фрагмент нуклеиновой кислоты является фрагментом нуклеиновой кислоты, кодирующей белок или полипептид, отличный от ΕΙίΌ и полноразмерного ΕΙίΌ в частности.

Специалисту в данной области техники также будет понятно, что в тех вариантах реализации способов согласно настоящему изобретению, где обнаруживают иммунный ответ, направленный против ΕΙίΌ, как описано в настоящей заявке, ΕΙίΌ, который вступает в реакцию с соединениями, характерными для иммунного ответа против ΕΙίΌ, как описано в настоящей заявке, может быть белком ΕΙίΌ, синтезированным видом Ней^Ьа^ег, инфицирующим субъект или предположительно инфицирующим субъект, может быть полноразмерным ΕΙίΌ, как описано в настоящей заявке, или может быть фрагментом ΕΙίΌ, как описано в настоящей заявке. Кроме того, фрагмент ΕΙίΌ является в одном из вариантов реализации настоящего изобретения фрагментом ΕΙίΌ, имеющим более короткую аминокислотную последовательность, чем ΕΙίΌ, при этом фрагмент может быть использован в упомянутых вариантах реализации спосо

- 10 032330 бов согласно настоящему изобретению, вместе с тем допуская специфическое взаимодействие с соединениями, характерными для иммунного ответа против Ε1ίΌ, или специфическое обнаружение иммунного ответа против Ε1ίΌ, как описано в настоящей заявке.

В связи с настоящим изобретением праймер, имеющий целью нуклеиновую кислоту, кодирующую Ε1ίΌ, используемый в связи с различными аспектами настоящего изобретения и/или в связи с различными вариантами реализации настоящего изобретения выбран из группы, включающей праймер, включающий нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 21, праймер, включающий нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 22, праймер, включающий нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 23, праймер, включающий нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 24, праймер, включающий нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 25, праймер, включающий нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 26, праймер, включающий нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 27, и праймер, включающий нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 28. Предпочтительно праймер является комбинацией по меньшей мере двух праймеров, при этом первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 21, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 22;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 21, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 24;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 21, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 26;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 21, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 28;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 23, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 22;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 23, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 24;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 23, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 26;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 23, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 28;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 25, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 22;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 25, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 24;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 25, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 26;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 25, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 28;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 27, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 22;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 27, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 24;

первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 27, и второй праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 26; или первый праймер по меньшей мере из двух праймеров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8Е0 ГО N0: 27, и второй праймер по меньшей мере из двух прай

- 11 032330 меров является праймером, включающим нуклеотидную последовательность согласно 8ЕС ГО N0: 28.

Различные последовательности, на которые ссылаются в настоящей заявке, соединения, представленные упомянутыми последовательностями, организмы, из которых были взяты упомянутые последовательности, и в некоторых случаях указания на соответствующий номер записи последовательности в общедоступных банках данных обобщены в следующей табл. 1.

Таблица 1

8Е0 ГО N0: 1 является аминокислотной последовательностью белка Ε1ίΌ, экспрессируемого Н. ру1огг которая соответствует в Сеийапк номеру записи АС127464.1.

8Е0 ГО N0: 2 является нуклеотидной последовательностью (кодирующей ДНК) белка Ε1ίΌ, экспрессируемого Н. ру1огг которая соответствует в Сеийапк номеру записи СР001173.1.

8ЕС ГО N0: 3 является аминокислотной последовательностью белка Ε1ίΌ, экспрессируемого Н. 8Ш8, которая соответствует в банке данных NСΒI референтной последовательности АР_006563874.1.

8ЕС ГО N0: 4 является нуклеотидной последовательностью (кДНК) белка Ε1ίΌ, экспрессируемого Н. 8Ш8, которая соответствует в Сеийапк номеру записи А0СУ01000008.1.

8ЕС ГО N0: 5 является аминокислотной последовательностью белка Ε1ίΌ, экспрессируемого Н. £еЙ8, которая соответствует в банке данных NСΒI референтной последовательности УР_004073770.1.

8ЕС ГО N0: 6 является нуклеотидной последовательностью (кДНК) белка Ε1ίΌ, экспрессируемого Н. £еЙ8, которая соответствует в СепВапк номеру записи БС670179.2.

8ЕС ГО N0: 7 является аминокислотной последовательностью белка СадА штамма Н. ру1оп С27, которая соответствует в базе данных NСВI референтной последовательности УР_002266135.1.

8ЕС ГО N0: 8 является нуклеотидной последовательностью (кДНК) белка СадА штамма Н. ру1оп С27, которая соответствует в СепВапк номеру записи Ю318032.1.

8ЕС ГО N0: 9 является аминокислотной последовательностью белка УасА штамма Н. ру1оп С27, которая соответствует в базе данных NСВI референтной последовательности УР_002266461.1.

8ЕС ГО N0: 10 является последовательностью нуклеиновой кислоты (кДНК) белка УасА штамма Н. ру1оп С27, которая соответствует в банке данных NСВI референтной последовательности N^011333.1.

8ЕС ГО N0: 11 является аминокислотной последовательностью белка СгоЕЕ штамма Н. ру1оп С27, которая соответствует в базе данных NСВI референтной последовательности УР_002265651.1.

8ЕС ГО N0: 12 является нуклеотидной последовательностью (кДНК) белка СгоЕБ штамма о£ Н. ру1оп С27, которая соответствует в базе данных NСВI референтной последовательности N^011333.1.

8ЕС ГО N0: 13 является аминокислотной последовательностью белка Нр0231 штамма Н. ру1оп 26695, которая соответствует в базе данных NСВI референтной последовательности ИР_207029.1.

8ЕС ГО N0: 14 является нуклеотидной последовательностью (кДНК) белка Нр0231 штамма Н. ру1оп 26695, которая соответствует в базе данных NСВI референтной последовательности N^000915.1.

8ЕС ГО N0: 15 является аминокислотной последовательностью белка Шр0940 штамма Н. ру1оп 199, которая соответствует в базе данных NСВI референтной последовательности НР_223657.1.

8ЕС ГО N0: 16 является нуклеотидной последовательностью (кДНК) белка Шр0940 штамма Н. ру1оп 199, которая соответствует в базе данных NСВI референтной последовательности N^000921.1.

8ЕС ГО N0: 17 является аминокислотной последовательностью белка Н1гЛ штамма Н. ру1оп С27, которая соответствует в базе данных NСВI референтной последовательности УР_002266040.1.

8ЕС ГО N0: 18 является нуклеотидной последовательностью (кДНК) белка Н1гА штамма Н. ру1оп С27, которая соответствует в базе данных NСВI референтной последовательности N^011333.1.

8ЕС ГО N0: 19 является праймером, используемым при клонирование гена Е1ГО, полученного от Н. ру1оп.

8ЕС ГО N0: 20 является праймером, используемым при клонирование гена Е1ГО, полученного от Н. ру1оп.

8ЕС ГО N0: 21 является прямым праймером, используемым при ПЦР1 в примере 9.

8ЕС ГО N0: 22 является обратным праймером, используемым при ПЦР1 в примере 9.

8ЕС ГО N0: 23 является прямым праймером, используемым при ПЦР2 в примере 9.

8ЕС ГО N0: 24 является обратным праймером, используемым при ПЦР2 в примере 9.

8ЕС ГО N0: 25 является прямым праймером, используемым при ПЦР3 в примере 9.

8ЕС ГО N0: 26 является обратным праймером, используемым при ПЦР3 в примере 9.

8ЕС ГО N0: 27 является прямым праймером, используемым при ПЦР4 в примере 9.

8ЕС ГО N0: 28 является обратным праймером, используемым при ПЦР4 в примере 9.

Специалисту в данной области будет понятно, что в случае, когда нуклеотидная последовательность является последовательностью ДНК и, в частности, последовательностью кДНК, в настоящей заявке также раскрыта последовательность РНК, отличающаяся от такой последовательности ДНК и последовательности кДНК только тем, что остаток сахара представляет собой рибонуклеотид, а не дезоксирибонуклеотид.

Настоящее изобретение далее дополнительно проиллюстрировано следующими фигурами и примерами, которые не ограничивают объем защиты настоящего изобретения. Из упомянутых фигур и примеров могут быть взяты дополнительные признаки, варианты реализации и преимущества изобретения, где

- 12 032330 на фиг. 1 показан вариант реализации линейного иммуноанализа, применяемого в способах согласно настоящему изобретению для определения анти-ΕΙίΌ антител в образцах сыворотки, полученных от 20 пациентов, которые были диагностированы как Н. ру1ой-положительные по результатам гистологического анализа;

на фиг. 2 показан один из вариантов реализации анализа латерального растекания, который можно применять в способах согласно настоящему изобретению для обнаружения анти-ΕΙίΌ антител в образце, таком как цельная кровь, полученном от субъекта-человека, при этом на фиг. 2А показано схематическое изображение анализа, а на фиг. 2В представлен результат анализа;

на фиг. 3 показана диаграмма, указывающая на преобладание иммунного ответа, направленного против Ε1ίΌ в образцах, полученных от человека, как функции от количества лет после эрадикации Н. ру1оп;

на фиг. 4 показана ВОС-кривая для белка Ε1ίΌ по сравнению с двумя хорошо известными антигенами;

на фиг. 5 показан результат вестерн-блоттинга, обнаруживающего Ε1ίΌ при различных концентрациях с применением антисыворотки мыши к Ε1ίΌ, но не обнаруживается Тф или ГГТ;

на фиг. 6 показана серия саузерн-блотов с применением полимеразной цепной реакции 1 (ПЦР1), полимеразной цепной реакции 2 (ПЦР2), полимеразной цепной реакции 3 (ПЦР3), полимеразной цепной реакции 4 (ПЦР4) для обнаружения геномной ДНК в репрезентативных образцах, полученных от пациентов, которые были диагностированы как Н. ру1ой-положительные;

на фиг. 7 показан результат репрезентативного вестерн-блоттинга, выполненного с использованием полных лизатов белков культивируемой Н. ру1оп; и на фиг. 8 показан результат двух вестерн-блоттингов для определения, экпрессировался ли Ε1ίΌ микроорганизмами, указанными внизу под каждым из вестерн-блотов.

Пример 1. Клонирование гена Ε1ίΌ бактерии Н. ру1оп.

Все операции с ДНК выполняли при стандартных условиях, как описано 8ашЬгоок е! а1. (8атЬгоок, е! а1., 1989). Вкратце, ген Ε1ίΌ амплифицировали посредством ПЦР, используя геномную ДНК из штамма Н. ру1оп 199 в качестве матрицы. Следующие олигонуклеотиды применяли в качестве праймеров: 5'-САТ АТС ОСА АТА СОТ ТСА ТТА А-3' (8ЕО ΙΌ N0: 19) и 5'-СТС ОАО АТТ СТТ ТТТ АСС ССС ТСС-3' (8ЕС ΙΌ N0: 20). Используя данный подход, вводили сайт ΝάοΙ на 5'-конце прямых праймеров и сайт Х1о1 на 5-конце обратных праймеров. После амплификации ПЦР продукт (2058 пар оснований) лигировали в клонирующий вектор рТ257В/Т (1и8ТАс1оие™ РСВ С1ошид Κίΐ, ΜΒΙ РегшеШак, Литва). После этого вставку подтверждали с помощью ПЦР и секвенирования и клонировали ее в экспрессионный вектор РЕТ-28а(+) Оа^ен. США), используя ферменты рестрикции Ше1 и Хйо1.

Пример 2. Экспрессия, очистка и распознавание рекомбинантного Ε1ίΌ.

Компетентные клетки штамма Е. сой ВЬ21 (Р1адеи, США) трансформировали вектором рЕТ-28а(+)11ίΌ и высеивали на среду ЬВ с антибиотиком (канамицин, 50 мкг/мл). Экспрессию индуцировали путем добавления 1 ммоль/л изопропил-Р-О-1-тиогалактопиранозида (ИПТГ) при оптической плотности при 600 нм, составляющей 0,6. После 4 ч клетки собирали и проводили анализ белков полного лизата посредством электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПААГэлектрофорез). Растворимые белки с гистидиновой меткой очищали с помощью аффинной хроматографии (НщТгар сгибе, ОЕ Неаййсаге). В качестве второго этапа очистки и для замены буфера проводили гель-хроматографию (8ирегбех 75, ОЕ НеИйсаге). Необходимые фракции собирали и концентрировали с помощью центрифужного фильтрующего устройства (Мййроге) с порогом отсечения 10 кДа и хранили при -80°С. Очищенный рекомбинантный белок оценивали с помощью вестерн-блоттинга, используя антитело к гистидиновой метке, конъюгированное с пероксидазой хрена, а также антитело мыши к Н. ру1оп, конъюгированное с пероксидазой хрена (Р1егсе, Рокфорд, США), и обнаруживали с помощью системы ЕСЬ (ОЕ Неаййсаге, Уппсала, Швеция).

Амплификация гена Ε1ίΌ из ДНК штамма Н. ру1оп 199 выявила единичный продукт ПЦР массой 2,05 тысяч оснований (данные не показаны), который подтверждали секвенированием, и лигировали его в экспрессионный вектор рЕТ-28а(+). После трансформации в экспрессирующий штамм Е. сой ВЬ21 ИЕ3 и индукции ИПТГ можно было наблюдать четкую единичную полосу на вестерн-блоте, применяя коммерческую поликлональную антисыворотку к Н. ру1огг Белок очищали, как описано в материалах и способах, до чистоты более 90% (данные не показаны) и снова подтверждали с помощью вестерн-блоттинга (данные не показаны).

Пример 3. Получение и очистка специфического антитела к рекомбинантному Ε1ίΌ.

Взрослого белого новозеландского кролика иммунизировали очищенным белком в соответствии с протоколом Нау е! а1. с небольшими модификациями (Нау, е! а1., 2002). Вкратце, иммунизацию выполняли путем внутримышечных инъекций 250 мкг очищенного рекомбинантного белка (0,5 мл) с таким же объемом (0,5 мл) полного адъюванта Фрейнда. Для повторных иммунизаций кролика стимулировали 125 мкг очищенного белка, приготовленного в том же объеме (0,5 мл) неполного адъюванта Фрейнда 4, 6, 8 и 10 недель спустя. В качестве негативного контроля брали образец сыворотки перед иммунизацией. На

- 13 032330 конец, две недели спустя после последней иммунизации собирали кровь и отделяли сыворотки. Поликлональное антитело класса 1дС очищали с помощью аффинной хроматографии на сорбенте ЗерЬагоке4В с использованием колонок с конъюгированным рекомбинантным Ε1ίΌ, подготовленными в соответствии с протоколом производителя (РЬагташа, 1988). Экспрессию белка Ε1ίΌ бактерии Н. ру1оп (штамм 199) обнаруживали посредством вестерн-блоттинга, применяя супернатант после ультразвука с концентрацией белка 50 мкг/мл. Поликлональное антитело кролика класса 1дС, индуцированное против рекомбинантного белка Ε1ίΌ, использовали как первое антитело (разведение 1:5000), антитело овцы к 1дС кролика, меченное пероксидазой хрена, (Научно-исследовательский институт Авиценны, Тегеран, Иран) как второе антитело (разведение 1:3000) и для обнаружения использовали систему ЕСЬ (СЕеп, е! а1., 2001).

Кроме того, чтобы протестировать антигенные свойства рекомбинантного Ε1ίΌ и сравнить их с нативным белком, получали поликлональную антисыворотку кролика. Титры антител определяли уже после третьей иммунизации, и после четвертой иммунизации они достигали высоких уровней, подтверждая хорошую иммуногенность Ε1ίΌ. Антисыворотка кролика была способна распознавать очищенный рекомбинантный Ε1ίΌ и Е1Ю в лизате Н. ру1оп (данные не показаны).

Пример 4. Разработка ЕЫ8А.

Планшеты для ЕЫ8А покрывали 100 мкл рекомбинантного белка Е1Ю с концентрацией 1 мкг/мл в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) и инкубировали при 4°С в течение ночи. Покрытые лунки блокировали ФСБ, содержащим 2,5% бычьего сывороточного альбумина (БСА, 81дта), в течение 2 ч при 37°С. Все Н. ру1ог1-положительные и Н. ру1оп-отрицательные серологические образцы, использованные в ходе этого исследования, тестировали на наличие антител к Е1Ю, применяя оптимальное разведение сывороток пациентов (разведение 1:100) в качестве первого антитела, антитело к 1дС человека, конъюгированное с пероксидазой хрена, (Рго те да, Мангейм, Германия) (разведение 1:100) в качестве второго антитела и 3,3',5,5'- тетраметилбензидин (ТМБ) в качестве субстрата. Кроме того, были оставлены непокрытые лунки в качестве контроля для каждой сыворотки. Результат ЕЫ8А для образца сыворотки пациента признавался положительным, если значение его оптической плотности при 450 нм было выше среднего значения плюс 3 стандартных отклонения отрицательных образцов сыворотки (СЕеп, е! а1., 2001).

Пример 5. Разработка линейного иммуноанализа Ε1ίΌ.

Подготовили линейный иммуноанализ, основанный на рекомбинантных белках Н. ру1оп, иммобилизованных на нитроцеллюлозе. По сравнению с ЕЫ8А принцип анализа позволяет идентифицировать специфические антитела к различным антигенам Н. ру1оп посредством раздельного нанесения различных единичных антигенов.

Рекомбинантный Е1Ю иммобилизовывали на полосках нитроцеллюлозной мембраны вместе с другими высокоочищенными рекомбинантными антигенами Н. ру1оп (СадА, УасА, СгоЕЬ, ИгеА (уреаза А), НсрС (цистеин-богатый белок С) (М1!!е1 е! а1., 2003) и гамма-глутамилтрансферазой (ГГТ). Подходящие условия для линейного иммуноанализа рекомбинантного Ε1ίΌ определяли эмпирически с выбором стандартных образцов сыворотки из описанной ранее исследуемой выборки, включающей 20 Н. ру1опположительных образцов по результатам гистологического анализа и 20 Н. ру1оп-отрицательных образцов по результатам гистологического анализа. Оптимальную концентрацию антигена и идеальный выбор добавок, таких как детергент, дитиотреитол и ЫаС1, подбирали для каждого антигена путем повторяющихся циклов линейного иммуноанализа и тестирования. Условия, при которых происходит наилучшее представление антигенных эпитопов и оптимальное связывание с мембраной, наблюдаемое по превосходному проявлению полосы и наилучшему разделению отрицательных и положительных образцов, выбирали для создания идеальных спецификаций первых партий продукта. Добавляли контрольные полосы на верхний конец полоски, включающий антитела кролика к 1дС/1дМ/1дА человека в качестве контроля инкубации и антитела человека класса 1дС, 1дМ или 1дА в качестве контроля конъюгата, а также контроль порогового значения, который позволяет оценить реактивность отдельных полос антигенов.

После сканирования и денситометрического анализа интенсивностей полос, контроль использовали как внутренний стандарт для оценки отношений для каждой полосы. Как правило, контрольные полосы порогового значения достигают значений между 20 и 30, тогда как яркие положительные полосы могут достигать значения до 600 единиц. Каждая полоса, достигающая значения выше значения для индивидуального контроля каждой полоски, считается положительной (отношение больше 1).

Соответствующий линейный иммуноферментный анализ представлен на фиг. 1.

Пример 6. Прототип анализа латерального растекания для диагностирования инфекции Н. ру1оп.

С использованием указанных выше материалов был разработан анализ латерального растекания, основывающийся на принципах, раскрытых в настоящей заявке, которые относятся к разработке анализа латерального растекания.

Прототип подобного латерального жидкостного анализа изображен на фиг. 2, при этом на фиг. 2А показано схематическое изображение анализа, а на фиг. 2В отражен результат анализа образца, полученного от человека, с помощью анализа латерального растекания, где обнаруживали антитела против Ε1ίΌ.

Как можно видеть из фиг. 2А, в анализе использовали наночастицы золота, покрытые антителами к 1дС человека. Рекомбинантный Ε1ίΌ, как и рекомбинантный СадА присутствовали в качестве антигенов. 1дС человека так же иммобилизовали, он служил в качестве контроля. Пористая структура была образо

- 14 032330 вана нитроцеллюлозой. Контрольная полоса указывала на надлежащую работу системы. Полоса ΡΙίΌ указывала на то, что у пациента активная инфекция или инфекция, которую недавно начали лечить. Полоса СадА в случае активной инфекции (+Ρ11Ό полоса) указывает на то, что эту инфекцию нужно лечить.

Пример 7. Анализы образцов, полученных от человека.

Всего участвовало в исследовании шестьсот восемнадцать (618) пациентов (308 мужчин, 310 женщин). Получив объяснение цели исследования, было получено информированное согласие от каждого пациента, и был взят образец крови во время эндоскопического исследования перед началом какого-либо лечения. Сыворотки отделяли и хранили при -20°С. Диагностирование инфекции основывали на результатах гистопатологии как золотого стандарта. Пациенты считались Н. ρу1ο^^-положительными, если результаты гистопатологии был положительным. Все пациенты тестировались с помощью линейного иммуноанализа на ΡΙίΌ и выборка из 246 сывороток тестировали с помощью ЕЫ8А на Ρ1ίΌ, как описано выше, и с помощью линейного иммуноанализа, как описано выше.

В табл. 2 показаны результаты применения упомянутого ЕЫ8А на Ρ1ίΌ. Конкретнее в табл. 2 показан серологический ответ в способе ЕИ18А, сравнивающий Н. ρу1ο^^-отрицательных и Н. ργΙοΓΪположительных пациентов.

Таблица 2

	Результаты гистологического анализа	Итого
Отрицательный	Положительный
Результаты ЕЫ8А
	Отрицательный	73	8	81
	Положительный	3	162	165
Итого		76	170	246

В табл. 3 показаны результаты применения линейного иммуноанализа для выборки из группы пациентов. Конкретнее в табл. 3 показан серологический ответ на ΡΙίΌ при линейном иммуноанализе, сравнивающий Н. ρу1ο^^-отрицательных и Н. ρу1ο^^-положительных пациентов.

_____________________________________________________________________________Таблица 3

	Результаты гистологического анализа	Итого
Отрицательный	Положительный
Результаты линейного иммуноанализа Отрицательный	76	14	90
	Положительный	0	156	156
Итого		76	170	246

С помощью способа ЕЫ8А на ΡΙίΌ среди 170 заявленных положительных образцов обнаружили 165 положительных образцов, тогда как среди 76 заявленных отрицательных образцов 73 повторно подтвердили как отрицательные согласно ЕЫ8А (табл. 2). Совокупно применение ΡΙίΌ в диагностировании инфекции Н. ργΙοΓΐ, основанном на ЕЫ8А, обладает специфичностью в 96% и чувствительностью в 97%. Интересно, что пять случаев, которые согласно результатам ЕЫ8А были отрицательными, имели также низкие, но почти положительные оценки при линейном иммуноанализе, которые были немногим выше порогового значения (отношения от 1,2 к 2,2). Один из них также считали Н. ρу1ο^^-отрицательным по результатам линейного иммуноанализа, хотя другие четыре были положительными по результатам линейного иммуноанализа, вступая в реакцию с несколькими другими антигенами (данные не показаны). Важно отметить, что только один образец был отрицательным по результатам обоих тестов.

Вся группа из 618 пациентов (часть из которых была протестирована с помощью ЕЫ8А) анализировали с использованием линейного иммуноанализа, как гуморальный ответ, направленный против Ρ1ίΌ. Высокая чувствительность (97,4%) линейного иммуноанализа, при котором выявлено 310 пациентов с положительными результатами из 318 пациентов, оцененных положительно по результатам гистопатологии, тогда как специфичность линейного анализа достигает 99% (табл. 2). Результаты пациентов, у которых были получены противоречивые результаты, тщательно изучили. 8 сывороток были отрицательными по результатам линейного иммуноанализа на Ρ1ίΌ, но показали реактивность по отношению к другим антигенам, что свидетельствует о том, что в этом случае действительно ΡΙίΌ не был распознан как антиген. Среди этих 8 образцов у одного совсем не было реакции на ΡΙίΌ полосе. Семь имели слабую реактивность, которая была чуть ниже порогового значения (отношения между 0,6 и 0,95), и четыре из них имели слабую реактивность против всех других распознанных антигенов в целом (не показано). Все три образца, в которых ΡΙίΌ дал ложноположительный результат, также показали реактивность с другими полосами. Все эти полосы, включая Ρ1ίΌ, были сравнительно слабыми, но четко выше порогового значения.

- 15 032330

По результатам анализа указанных образцов определяли преобладание иммунного ответа с образованием анти-ΕΊΐΙ) антител как функцию количества лет после эрадикации. Результат показан на фиг. 3. Как можно видеть из фиг. 3, всё еще сохраняется преобладание иммунного ответа с образованием антиΕ1ΪΌ антител приблизительно на уровне 25% спустя 16-20 лет после эрадикации Н. ру1оп.

По результатам анализа указанных образцов подготовили кривые ошибок (КОС-кривые) для Ε1ΪΌ, СадА и ИгеА. Результат показан на фиг. 4. Из фиг. 4 очевидно, что Ε1ΪΌ имеет преимущество по сравнению с двумя известными антигенами, используемыми ранее при обнаружении инфекции Н. ру1оп.

Пример 8. Биоинформатический анализ последовательностей Ε1ΪΌ.

Применяя средства биоинформатики, провели крупномасштабное сравнение белка Ε1ΪΌ штамма Н. ру1ог1 027 с другими организмами, преимущественно прокариотами. Этот анализ показал более 97% гомологии между более 200 штаммами Н. ру1оп.

Результаты показаны в табл. 4.

Таблица 4

Поме .....

Р запис Название Дли Идентичн Резуль

и	записи	Названия белка	Организм	на	ость	тат
Β5Ζ7Β	Β5Ζ7Β5ΗΕ	Предполагаемый жгутиковый
5	БРСЗ	ассоциированный с крюком белок 2	НейсоЬас!ег ру1оп (штамм 027)	685	100.0%	3412
юкьк	ДЖЕК. 1 НЕ	Предполагаемый жгутиковый
1	ЬРХ	ассоциированный с крюком белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-27	685	99.0%	3383
Ι9ΚΡ8	Ι9Κ.Ρ80ΗΕ
0	БРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас!ег ру1оп Нр А-20	685	99.0%	3381
ЮМУ	ЮМУ71Н	Предполагаемый жгутиковый
71	ЕБРХ	ассоциированный с крюком белок 2	НейсоЬас!ег ру1оп Нр А-27	685	99.0%	3379
ЮЦБб	•ЮОБ62НЕ
2	ЬРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас!ег ру1оп Нр Н-11	685	99.0%	3375
Ι0Α5Ρ	Ί0Α5Ρ7ΗΕ
7	БРХ	Жгутиковый копирующий белок	НеНсоЬас!ег ру1оп Нр А-9	685	98.0%	3372
	10ΐυ02_ΗΕ
.югиог	ЬРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас(ег ру1оп Νζ)4228	685	99.0%	3371
К2Б7	К2Б7Н4Н	Жгутиковый ассоциированный с крюком
Н4	ЕБРХ	белок 2	НейсоЬас!ег ру1оп К0366	685	98.0%	3370
ЮТрК 10Т0К4НЕ	Предполагаемый жгутиковый
4	ЬРХ	ассоциированный с крюком белок 2	НейсоЬас!ег ру1оп Нр Р-30	685	99.0%	3369
М7КТ	Μ7ΚΊΊ4Η	Жгутиковый ассоциированный с крюком
14	ЕБРХ	белок 2	НейсоЬас!ег ру1оп ЕГМВ О1	685	98.0%	3367
К2Б53	К2Б537 НЕ	Жгутиковый ассоциированный с крюком
7	БРХ	белок 2	НейсоЬас!ег ру1оп К055а	685	99.0%	3367
ТО8А	ТО8АМ4Н	Жгутиковый ассоциированный с крюком
М4	ЕБРХ	белок 2	НейсоЬас!ег ру1оп Нр Р-15Ь	685	99.0%	3367
ТОМ13	ТОМ138НЕ	Предполагаемый жгутиковый
8	БРХ	ассоциированный с крюком белок 2	НейсоЬас!ег ру1оп Нр Н-45	685	99.0%	3367
Ι9\Υν	Ι9\νν\Υ7_Η
ΧΥ7	ЕБРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас!ег ру1оп Нр Р-15	685	99.0%	3367
кгки	К2КЦЕ2Н	Жгутиковый ассоциированный с крюком
Е2	ЕБРХ	белок 2	НейсоЬас!ег ру1оп КОЗОЬ	685	99.0%	3365
Ι0ΕΗ8	Ι0ΕΗ82ΗΕ
2	БРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас!ег ру1оп РеСап18	685	98.0%	3365
Н8Н4	Н8Н4Е1Н
Е1	ЕБРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас!ег ру1оп ЕБ837	685	98.0%	3362
Κ2ΕΝ	Κ2ΕΝΟ6Η	Жгутиковый ассоциированный с крюком
Об	ЕБРХ	белок 2	НейсоЬас!ег ру1оп К038Ь	685	98.0%	3361
Ό0Ι88	Ό0Ι888 ΗΕ	Жгутиковый ассоциированный с крюком
8	БР1	белок 2	НейсоЬас!ег ру1оп (штамм 51)	685	98.0%	3360
Ν4Τ9	Ν4Τ9Β5Η	Жгутиковый ассоциированный с крюком
В5	ЕБРХ	белок 2	НейсоЬас!ег ру1оп Нр А-11	685	98.0%	3359

- 16 032330

Ε1ΡΖΕ 2	Ε1ΡΖΕ2ΗΕ БРМ	Жгутиковый копирующий белок	НеНсоЬасШг ру1оп (штамм 8ΙΜ180)	685	98.0%	3358
ιοινυ	ιοινυδΗΕ
8	БРХ	Жгутиковый копирующий белок		НейсоЬас1ег ру1оп N04099	685	98.0%	3358
ТОЕПЕ	60ΓΟΕ4ΗΕ	Предполагаемый	жгутиковый
4	БРХ	ассоциированный с крюком белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-16	685	98.0%	3358
Ц1СТ	Ц1СТВ8Н	Предполагаемый	жгутиковый	НейсоЬас1ег ру1оп (штамм
Β8	ЕЬРН	ассоциированный с крюком белок 2	НРАО1)	685	98.0%	3357
Е8ЦР	Ε8()ΡΝ8_Η			НеНсоЬасШг ру1оп (штамм
N8	ЕБРК	Жгутиковый копирующий белок		Ей1шаша75)	685	98.0%	3355
кгки	Κ2ΚυΧ6_Η	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
Х6	ЕЬРХ	белок 2		НейсоЬас1ег ру1оп К32Ь	685	98.0%	3355
Κ2ΚΜ	Κ2ΚΜυ9_Η	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
υ9	ЕЬРХ	белок 2		НейсоЬас1ег ру1оп К037с	685	98.0%	3355
тонпт	ТОНПТЗНЕ
3	БРХ	Жгутиковый копирующий белок		НейсоЬас1ег ру1оп СРУ1124	685	98.0%	3355
Ι9ΧΕ5	Ι9ΧΕ52ΗΕ	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
2	БРХ	белок 2		НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-74	685	98.0%	3355
Ι9Η4Η	Ι9Η4Η5ΗΕ	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
5	БРХ	белок 2		НейсоЬас1ег ру1оп Нр А-26	685	98.0%	3355
ϋ7ΕΕ	ϋ7ΕΕΑ9_Η	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
Α9	ЕБРЗ	белок 2		НейсоЬас1ег ру1оп (штамм В8)	685	98.0%	3354
Ι9υ§7	19и§75_НЕ	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
5	БРХ	белок 2		НеНсоЬас1ег ру1оп Нр Н-9	685	98.0%	3354
Β9ΧΖ	Β9ΧΖΚ1Η
ΚΙ	ЕЬРХ	Предполагаемый неспецифический белок	НеНсоЬас1ег ру1оп В128	685	98.0%	3354
ТО19Ц	1019Ц0НЕ
0	БРХ	Жгутиковый копирующий белок		НеПсоЬас1ег ру1оп N04076	685	98.0%	3353
Ι9()ΖΒ	Ι9ΡΖΒ4ΗΕ
4	ЕРХ	Жгутиковый копирующий белок		НейсоЬасШг ру1оп N04110	685	98.0%	3353
Ο2Μ3	О2МЗРЗН
Ρ3	ЕЬРХ	Жгутиковый копирующий белок		НеНсоЬас1ег ру1оп Рипо120	685	98.0%	3352
ΕΙΡΒ	Е1ЦВВ7Н			НеНсоЬасЗег ру1оп (штамм
Β7	ЕБРС	Жгутиковый копирующий белок		Сиг20)	685	98.0%	3351
ТОБК	6ОЬКМ5_Н
Μ5	ЕЬРХ	Жгутиковый копирующий белок		НеПсоЬас1ег ру1оп Нр Н-43	685	98.0%	3351
Ε6ΝΚ	Ε6ΝΚΤ1Η
ΤΙ	ЕЕРЦ	Жгутиковый копирующий белок		НеНсоЬас1ег ру1оп (штамм Г57)	685	98.0%	3350
Μ3Μ	МЗМУК5_	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
νΚ5	НЕБРХ	белок 2		НеНсоЬас1ег ру1оп ОАМ114ΑΪ	685	98.0%	3350
Κ2ΚΚ	К2ККХ5Н	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
Χ5	ЕЬРХ	белок 2		НеНсоЬас1ег ру1оп КО 18с	685	98.0%	3350
Κ2ΚΕ	К2КЕЦ1Н	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
Ωΐ	ЕЬРХ	белок 2		НеНсоЬас1ег ру1оп К056а	685	98.0%	3350

- 17 032330

ΙΟΙΟΝ ТОКЖ4_НЕ

4	ЬРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас1ег ру1оп N(^4216	685	98.0%	3349
Е681О	Ε681Ο8ΗΕ	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
8	ЬРЕ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп (штамм 35А)	685	98.0%	3348
19УЖ	19УЖ2НЕ	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
2	ЬРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-13Ь	685	98.0%	3348
Ι9\ΥΤ5	19\¥Т57_НЕ	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
7	ЬРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-13	685	98.0%	3348
Ι9υΐ6	191Л61НЕ
1	ЬРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас1ег ру1оп Нр А-14	685	98.0%	3348
ВбТЬУ	ВбЛ/УбНЕ	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
6	ЬР2	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп (штамм Р12)	685	98.0%	3347
Κ2Κ5	К2К5Г9Н	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
Ε9	ЕЬРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп К046\¥а	685	98.0%	3347
19Х1Л	19ХШ1-НЕ	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
1	ЬРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп СРУ1313	685	98.0%	3347
19РУ1	19РУ13НЕ	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
3	ЬРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп СРУ6311	685	98.0%	3347
19РШ	Ι9ΡΕΒ.1ΗΕ
1	ЬРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас1ег ру1оп СРУ6261	685	98.0%	3347
Ь8У\¥	Ь8У\У83_Н
83	ЕЬРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас1ег ру1оп А45	685	98.0%	3346
Κ7Υ5	Κ7Υ5Κ8Η
Κ8	ЕЬРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас1ег ру1оп Ак1ауИ<117	685	98.0%	3346
ТОТ 14	ТОТ145НЕ	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
5	ЬРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп Нр М2	685	98.0%	3346
Ι9Τ4Ζ	Ι9Τ4Ζ9ΗΕ	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
9	ЬРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-44	685	98.0%	3346
Ε8(2Γ	Е8ОЕО7Н		НейсоЬас1ег ру1оп (штамм
Ω7	ЕЬР7	Жгутиковый копирующий белок	1псйа7)	685	98.0%	3345
С7ВХ	С7ВХ84Н	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
84	ЕЬРВ	белок 2 Εΐίϋ	НейсоЬас1ег ру1оп (штамм В38)	685	98.0%	3345
Ι9ΧΥ7Ζ	Ι9\ν7Ζ2_ΗΕ	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
2	ЬРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-2	685	98.0%	3345
ΙΟΖΒΑ	Ι0ΖΒΑ9ΗΕ
9	ЬРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас1ег ру1оп Р79	685	98.0%	3345
Γ4Ό5Ι	Γ4Ό5Ι7ΗΕ	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
7	ЬРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп 83	685	98.0%	3345
Β9χυ	В9ХЦМ1Н
ΜΙ	ЕЬРХ	Предполагаемый неспецифический белок НейсоЬас1ег ру1оп 98-10	685	98.0%	3345
		Жгутиковый ассоциированный с	крюком НейсоЬас1ег ру1оп (штамм
Ρ9678	ЕЬШНЕЕР	белок 2 (НАР2) (Копирующий	белок АТСС 700392 / 26695)
6	У	филамента) (Жгутиковый копирующий белок) (Сашру1оЬас1ег ру1оп)	685	98.0%	3345
Μ38Ό	Μ38ΌΙ9Η	Жгутиковый ассоциированный с	крюком НейсоЬас1ег ру1оп
19	ЕЬРХ	белок 2	ОАМсМзТОбВ	685	98.0%	3344

- 18 032330

Ι9ΧΑ	19ХАиЗ_Н
из	ЕЬРХ	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-23	685	98.0%	3344
Ι9ΡΤΝ	Ι9ΡΤΝ1ΗΕ
1	БРХ	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ρνίοπ ΟΡΥ6271	685	98.0%	3344
О2М8	О2М8С7Н
С7	ЕЬРХ	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп Рипо135	685	98.0%	3344
Е1()6Р	Ε1ζ)6Ρ5_ΗΕ				НеНсоЬасЩг ру1оп (штамм
5	ЬРР	Жгутиковый копирующий белок			РеСап4)	685	98.0%	3343
мзк	Μ3Κ\ΥΤ6_	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком
\¥Т6	НЕБРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп ОАМ119ΒΪ	685	98.0%	3343
ΙΟΖΟΥ	ΙΟΖΟΥ9ΗΕ				НейсоЬас1ег ру1оп ΝΟΤΟ 11637
9	БРХ	Жгутиковый копирующий белок			= ССиО 17874	685	98.0%	3343
Ι2ΌΡΤ	Ι2ΌΕΤ2ΗΕ
2	БРХ	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп ΧΖ274	685	98.0%	3342
Ε6ΝΚ	Ε6ΝΚΟ5Η
Ό5	ЕЬРЕ	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп (штамм Е32)	685	98.0%	3341
Ε6ΝΙ8	Ε6ΝΙ85ΗΕ
5	ЬРК	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп (штамм ЕЗО)	685	98.0%	3341
Ι9ΖΡ8	Ι9ΖΡ80ΗΕ	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком
0	БРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп Ν()4161	685	98.0%	3341
Ι9ΚΚ	Ι9ΚΚΜ1Η	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком
М1	ЕЬРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп Нр А-17	685	98.0%	3341
Σ0Α0Ν	Ι0Α0Ν9_ΗΕ	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком
9	БРХ	белок			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-26	685	97.0%	3340
19(^0	19СЮН5Н	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком
Н5	ЕЙРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ρνίοπ N04053	685	98.0%	3340
Ό6ΧΡ	ϋόΧΡΖΙΗ	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком	НейсоЬас1ег ру1оп (штамм
Ζ1	БИРУ	белок 2			ν225ά)	685	98.0%	3339
Μ5ΥΖ	Μ5ΥΖΕ4Η	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком
Ь4	ЕБРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп СгАМс1г181241	685	97.0%	3339
Μ5Υ	Μ5ΥΜΑ1	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком
МА1	НЕБРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп САМсЫС! 14ΐ	685	97.0%	3339
Μ4ΖΝ	Μ4ΖΝΑ5Η
А5	ЕБРХ	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп ОКЗ10	685	97.0%	3339
Μ3ΝΝ	Μ3ΝΝ80_Η	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком
80	ЕБРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ246ΑΪ	685	97.0%	3339
мзмв	Μ3ΜΒΝ7_	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком
N7	НЕБРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ105ΑΪ	685	97.0%	3339
	Ι98784 ΗΕ
198784	БРХ	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-28	685	98.0%	3339
Ι0Ε4Κ	Ι0Ε4Κ1ΗΕ
1	БРХ	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп 8Ы417	685	98.0%	3339
	ТОР747 НЕ	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком
Σ0Ρ747	БРХ	белок			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-23	685	97.0%	3338

- 19 032330

Ι0Ν2Η 0	1ΌΝ2Η0ΗΕ ЬРХ	Жгутиковый белок	ассоциированный с	крюком	НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-4	685	97.0%	3338
ЮЕЭ4	Ι0ΕΌ42ΗΕ
2	ЬРХ	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп 8Ы112	685	98.0%	3338
М788	М788О1Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
ΟΙ	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΟΡΥ1662	685	97.0%	3337
Μ5Υ9	Μ5Υ955 Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком	НейсоЬас1ег ру1оп
55	ЕЬРХ	белок 2				ОАМсШз! 17 Αΐ	685	97.0%	3337
Μ4ΖΚ	Μ4ΖΚΑ3Η
АЗ	ЕЬРХ	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп ОК113	685	98.0%	3337
МЗЬА	МЗЬАЗЗН	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
33	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ОАМ231 Αΐ	685	97.0%	3337
Ι9ΖΟΟ	Ι9Ζ0Ο2ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
2	ЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-28Ь	685	97.0%	3337
Ι983Μ	Ι983Μ7ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
7	ЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-24	685	98.0%	3337
Ι0Ε\ν	10Е\¥О9_Н
09	ЕЬРХ	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп НЦР-В14	685	97.0%	3337
МЗР8	МЗР8О4Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
04	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ96ΑΪ	685	97.0%	3336
	10и813_НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
ιου8ΐ3	ЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-ЗЬ	685	97.0%	3336
ιοκυδ	Ι0Κυ82_ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
2	ЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-5Ь	685	97.0%	3336
ΐοροϋ	Ι0Ρ0Ό5ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
5	ЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-4	685	97.0%	3336
ТОР8В	ТОР8В5НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
5	ЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-3	685	97.0%	3336
Ι9Υ93	Ι9Υ932 ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
2	ЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-4с	685	97.0%	3336
Ι9Χ\ν	Ι9Χ\Υ(34_Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Ω4	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Ρ-4ά	685	97.0%	3336
Ε6ΝΟΙ	Ε6ΝΟΙ6ΗΕ
6	ЬР1	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп (штамм Р16)	685	97.0%	3334
Μ3ΡΌ	Μ3ΡΌΓ1Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
ΡΙ	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ80ΑΪ	685	97.0%	3334
Μ3<35	МЗР5В9Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Β9	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ42ΑΪ	685	97.0%	3334
Μ3Ρ64	МЗР646 НЕ Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
6	ЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп САМ245Αΐ	685	97.0%	3334
МЗЬУ	МЗЬУ71_Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
71	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ОАМ112ΑΪ	685	97.0%	3334
МЗЬб	МЗЬ655_Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
55	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΘΑΜΙΟΙΒίν	685	97.0%	3334

- 20 032330

Е188К 1	Е188К1НЕ БР9	Жгутиковый белок	ассоциированный	с	крюком	НейсоЬас1ег ру1оп (штамм 908)	685	97.0%	3333
Е1РУ1	Е1РУ14НЕ					НейсоЬас1ег ру1оп (штамм
4	БРТ	Жгутиковый копирующий белок			8а1464)	685	98.0%	3333
ΌΟΙΖΟ	Ό01ΖΟ3_ΗΕ
3	БР5	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп (штамм 52)	685	97.0%	3333
МЗК8	МЗК844 Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
44	ЕЕРХ	белок 2				НеисоЬасгег ру1оп НР116ΒΪ	685	97.0%	3333
мзко	Μ3ΒΌ05Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
05	ЕБРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ264ΑΪ	685	97.0%	3333
МЗМ1	МЗМ119Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
19	ЕБРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ103ΒΪ	685	97.0%	3333

101156НЕБ

101156 РХ Жгутиковый копирующий белок НейсоЬас1ег ру1оп СРУ3281 685 98.0% 3333

10А18 10А185НЕ Жгутиковый ассоциированный с крюком

БРХ белок НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-16 685 97.0% 3333

Ι0Ε947 НЕ

Ι0Ε947	БРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас1ег ру1оп 8Ы169	685	98.0%	3333
Е21ЕТ	Е21ЕТ0НЕ	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
0	БР9	белок	НейсоЬас1ег ру1оп 2018	685	97.0%	3333
Е21АТ	Е21АТ7НЕ	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
7	БР9	белок	НейсоЬас1ег ру1оп 2017	685	97.0%	3333
		Жгутиковый ассоциированный	с крюком
()9ΖΕ9	ЕЕШНЕБР	белок 2 (НАР2) (Копирующий белок НейсоЬас1ег ру1оп (штамм 199)
1	1	филамента) (Жгутиковый копирующий белок) (Сашру1оЬас1ег ру1оп 199)	685	97.0%	3333
Μ3ΝΙ	Μ3ΝΠ30Η	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
Ό0	ЕБРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ270Α8Ϊ	685	97.0%	3332
тоос	тооси5_н	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
и5	ЕБРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-6	685	97.0%	3332
19У40	19У408 НЕ
8	БРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-10	685	97.0%	3332
юизо	ТОиЗО8_НЕ	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
8	БРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-62	685	97.0%	3331
198БЗ	198Ь37_НЕ	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
7	БРХ	белок	НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-29	685	97.0%	3331
Е8()М	Е8()М56_Н		НейсоЬас1ег ру1оп (штамм
56	ЕЙР4	Жгутиковый копирующий белок	ОашЫа94/24)	685	97.0%	3330
Μ5ΥΝ	Μ5ΥΝΥ6Η	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
Уб	ЕБРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜο1ι18136ΐ	685	97.0%	3330
МЗТ()	МЗТ()89_Н	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
89	ЕБРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп ΗΡ260ΒΪ	685	97.0%	3330
М3()1	МЗ()1У4_Н	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
У4	ЕБРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ260ΒΪ	685	97.0%	3330
М3(}2	МЗР2Б5Н	Жгутиковый ассоциированный	с крюком
Б5	ЕБРХ	белок 2	НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ263ΒΕΪ	685	97.0%	3330

- 21 032330

МЗМ5 83	Μ3Μ583 Η ЕЙРХ	Жгутиковый белок 2	ассоциированный	с	крюком	НейсоЬас1ег ру1оп ОАМ115Αΐ	685	97.0%	3330
ТО8ЕХ	ТО8ЕХ5НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
5	БРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-25с	685	97.0%	3330
тоне	тонооон	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
ΩΟ	ЕЙРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-25Й	685	97.0%	3330
	Ι9Χ9Ι1ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
19X911	БРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-25	685	97.0%	3330
19УСТ	19УСТ9_НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
9	БРХ	белок				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-19	685	97.0%	3330
М3 87	М387О6Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Об	ЕЙРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ОАМ83Т	685	97.0%	3329
МЗРЕ	МЗРЕУ1Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
VI	ЕБРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΗΑΜ244ΑΪ	685	97.0%	3329
МЗР9	МЗР9ГЗН	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
ЕЗ	ЕЙРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ83ΒΪ	685	97.0%	3329
Μ3ΝΡ	Μ3ΝΡΟ4_Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
С4	ЕЙРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ОАМ118ΒΪ	685	97.0%	3329
Κ8ΟΥ	Κ8ΟΥ42Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
42	ЕЙРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜΙΟΟΑΐ	685	97.0%	3329
тоиги	тоири9НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
9	БРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр М9	685	97.0%	3329
ТОТ5Р	ТОТ5РЗНЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
3	БРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр М4	685	97.0%	3329
ТОВЕЕ	ТОКЕЬЗНЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
3	БРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-24с	685	97.0%	3329
	ТО1743_НЕЬ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
ТО1743	РХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр М5	685	97.0%	3329
	ТОШ2_НЕЬ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
ТОШ2	РХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр М3	685	97.0%	3329
ТОЮК	ТОНГК5НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
5	БРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр М1	685	97.0%	3329
Ι9ΖΥΡ	Ι9ΖΥΡ3ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
3	БРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Мб	685	97.0%	3329
	19ХЛ6НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
19ХЛ6	БРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-24Ь	685	97.0%	3329
М31Л8	М31Л84НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
4	БРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп НР260ВГЙ	685	97.0%	3328
мзи8	мзи8ро_н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Е0	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΗΡ250Β8Ϊ	685	97.0%	3328
МЗТ9	МЗТ9М6Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Мб	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΗΡ250Α8Ϊ	685	97.0%	3328
МЗТ4	Μ3Τ443 Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
43	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру!оп НР250А8Й	685	97.0%	3328

- 22 032330

М3 то ш	МЗТОШН ЕЬРХ	Жгутиковый белок 2	ассоциированный	с	крюком	НейсоЬас1ег ру1оп ΗΡ250ΑΕϊν	685	97.0%	3328
Μ38\Υ	М38\¥Е6_Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Е6	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΗΡ250ΒΕΐν	685	97.0%	3328
М38Р	М38Р57Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
57	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΗΡ250ΑΓΐΐΐ	685	97.0%	3328
М3 86	М386Е4Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Е4	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΗΡ250ΒΕΐΐΐ	685	97.0%	3328
МЗК7	МЗК7Т2Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Т2	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп НР250АЕЙ	685	97.0%	3328
мзру	МЗ(2У83_Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
83	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ260Β8Ϊ	685	97.0%	3328
М3 <38	МЗ(2841_Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
41	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп НР250ВЕЙ	685	97.0%	3328
М3 (2(2	мз(2(2б4_н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
64	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΗΡ250ΒΕΪ	685	97.0%	3328
М3(261 Μ3ζ)6Ι7_ΗΕ Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
7	БРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ОАМ250Т	685	97.0%	3328
Μ3Νν	Μ3ΝΎ58Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
58	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ252ΒΪ	685	97.0%	3328
Μ3ΝΚ	Μ3ΝΚΟ5Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
С5	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ОАМ252Т	685	97.0%	3328
мзьг	Μ3ΕΖΧ8Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Х8	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ250ΑΕΪ	685	97.0%	3328
,ЮСЕ(2	ТОСБРЗНЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
3	БРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр А-16	685	97.0%	3328
Ι9ΧΤΖ	Ι9ΧΤΖ6ΗΕ
6	БРХ	Жгутиковый копирующий белок			НейсоЬас1ег ру1оп СРУ1962	685	98.0%	3328
вгит	В2иТ80_Н					НейсоЬас1ег ру1оп (штамм
80	ЕБР8	Жгутиковый копирующий белок			8Ы470)	685	97.0%	3327
Μ78\Υ	Μ78\Υ73_Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
73	ЕЬРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-1	685	97.0%	3327
МЗР12	МЗР129 НЕ Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
9	БРХ	белок 2				НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ254ΑΪ	685	97.0%	3327

Ι9Ρ985 НЕ

Ι9Ρ985	БРХ	Жгутиковый копирующий белок		НейсоЬас1ег ру1оп ΕΡΥ608 Ι 685	97.0%	3326
Κ7ΥΑ	Κ7ΥΑ88Η
88	ЕЬРХ	Жгутиковый копирующий белок		НейсоЬас1ег ру1оп Ак1ау1к86 685	97.0%	3325
Μ3ΚΙ	МЗКПС8Н	Жгутиковый	ассоциированный с	крюком
К8	ЕЬРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ93ΒΪ 685	97.0%	3324
ТОМ8	10М8и8_Н	Жгутиковый	ассоциированный с	крюком
и8	ЕЬРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп Нр А-6 685	97.0%	3324
Μ3ΝΟ	Μ3ΝΟΡ1Η	Жгутиковый	ассоциированный с	крюком
Р1	ЕЬРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп ОАМ265В8Й 685	97.0%	3323

- 23 032330

Μ3ΚΖ М7	Μ3ΚΖΜ7_ НЕЕРХ	Жгутиковый белок 2	ассоциированный	с	крюком	НеНсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ120ΑΪ	685	97.0%	3323
мзри	мзрирбн	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Об	ЕЬРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ρνίοπ ΘΑΜ249Τ	685	97.0%	3322
МЗРС	МЗРСБ7Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Ь7	ЕЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ239ΒΪ	685	97.0%	3322
Μ3Ν	Μ3ΝΜ23Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
М23	ЕЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп ОАМ121 Ап	685	97.0%	3322
ιοι\νκ	Ι0ΙΧΥΚ3ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
3	ЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп Νζ)4200	685	97.0%	3322
ТОРЕР	ТОРЕРОНЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
0	ЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп Нр Р-1	685	97.0%	3321
Ι9ΧΡ8	Ι9ΧΡ87ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
7	ЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп Нр Р-1Ь	685	97.0%	3321
Ι0Ν25	Ι0Ν254_ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
4	ЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп Нр Н-3	685	97.0%	3320
мзи8	МЗи8В7_Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
В7	ЕЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп НР260АЕЙ	685	97.0%	3319
мзиг	МЗи287_Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
87	ЕЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп ΗΡ260ΑΕΪ	685	97.0%	3319
мзкь	Μ3ΚΕΙ9Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
19	ЕЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп НР260А8Й	685	97.0%	3319
М3 (^7	МЗ<3751_Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
51	ЕЬРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп ОАМ268Вй	685	97.0%	3319
МЗР4	мзР4из_н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
из	ЕЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ260Α8Ϊ	685	97.0%	3319
М3 IX	МЗЕЕЕ6Н	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Еб	ЕЬРХ	белок 2				НеПсоЬас1ег ру1оп 6ΑΜ20 Ι Αΐ	685	97.0%	3318
	ТО1Т98НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Ι0ΙΤ98	ЕРХ	белок 2				НеисоЬасгег ру1оп Нр А-5	680	98.0%	3318
Ι98ϋ(3	Ι98ϋ(26_ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
6	ЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп Нр Н-30	677	97.0%	3314
Ι0ΒΝΒ	Ι0ΒΝΒ3 ΗΕ Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
3	ЕРХ	белок				НеНсоЬас1ег ру1оп Нр Н-42	680	97.0%	3311
О2МЕ	Θ2ΜΕΟ6Η
Об	ЕЕРХ	Жгутиковый копирующий белок			НеНсоЬас1ег ру1оп 8ΝΤ49	685	97.0%	3311
тоивр	ТОЦВРЗНЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
3	БРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп Нр Р-2Ь	677	97.0%	3308
Ι9(2ΝΒ	Ι9ζ)ΝΒ9ΗΕ Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
9	ЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп Νζ)4044	685	96.0%	3302
Ι9ΖΖΜ	Ι9ΖΖΜ5 НЕ Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
5	БРХ	белок 2				НеПсоЬас1ег ру1оп Нр А-4	677	97.0%	3300
М78Н	М78ННЗН	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
НЗ	ЕЕРХ	белок 2				НеНсоЬас1ег ру1оп ССН133	677	97.0%	3297

- 24 032330

Ι9ΉΑ	Ι9ΊΊΑ1ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
1	ЕРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп Нр А-8	677	97.0%	3297
Μ3Ν	Μ3ΝΜΧΥ6_	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
М\¥6	НЕЕРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп ΟΑΜ210ΒΪ	685	96.0%	3296
19УЬ0	19УЬ06_НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
6	ЕРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-11Ь	677	97.0%	3293
Ι9ΧΥ86	Ι9ΧΥ867 ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
7	ЕРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-11	677	97.0%	3293
ТОРС8	10РС82НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
2	ЕРХ	белок			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-34	677	97.0%	3292
19УШ	19УШ4НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
4	ЕРХ	белок			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-21	677	97.0%	3292
ТОРУ6	10РУ65НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
5	ЕРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-8	677	97.0%	3291
19 ΥΗ	Ι9ΥΗΜ9Η	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
Μ9	ЕЕРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-8Ь	677	97.0%	3291
тоти	ιοτυχνοΗ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
χνο	ЕЕРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Р-41	677	97.0%	3289
1ΌΝ8Κ	1ΌΝ8Κ5ΗΕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
5	ЕРХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-18	677	97.0%	3289
ίΟΒΑΕ	ЮВАЕЗ-НЕ	Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
3	ЕРХ	белок			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-36	677	97.0%	3289
	Ι0ΕΙ78 ΗΕΕ Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком
10Ы78	РХ	белок 2			НейсоЬас1ег ру1оп Нр Н-41	677	96.0%	3278
Ε80Κ	Е8ОКУЗН				НейсоЬас1ег ру1оп (штамм
УЗ	ЕЬРХУ	Жгутиковый копирующий белок		8ои111А1'пса7)	685	95.0%	3264
ζ)Ι7Υ0 017Υ06 ΗΕ Жгутиковый	ассоциированный	с	крюком НейсоЬас1ег астопусЫз (штамм
6	ЙАН	белок			ЗйееЬа)	685	94.0%	3249
					НейсоЬас1ег ру1оп (штамм
Κ4ΝΚ	Κ4ΝΒ82Η				АТСС 700392 / 26695)
82	ΕΕΡΥ	Жгутиковый копирующий белок		(Сашру1оЬас1ег ру1оп)	674	97.0%	3190
Κ4ΝΕ	Κ4ΝΕ36Η
36	ЕЕРХ	Жгутиковый копирующий белок		НейсоЬас1ег ру1оп ΚΪ12	674	97.0%	3190

Κ4ΝΗ Κ4ΝΗ9ΗΕ

9	ЕРХ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас1ег ру1оп КИТ	674	97.0%	3190
мзру	МЗСУУ4Н	Жгутиковый ассоциированный с	крюком
У4	ЕЕРХ	белок 2 (Фрагмент)	НейсоЬас1ег ру1оп ОАМ71 Αΐ	647	97.0%	3146
ЮЕТ	Ι0ΕΤΧΥ0Η		НейсоЬас1ег се1огиш (штамм
ΧΥΟ	ЕЕСМ	Жгутиковый копирующий белок	АТСС ВАА-540 / ΜΙΤ 99-5656)	685	88.0%	3065
ГОЕМ	Ι0ΕΜΚ1Η		НейсоЬас1ег се1огиш (штамм
К1	ЕЕС0	Жгутиковый копирующий белок	АТСС ВАА-429 / ΜΙΤ 00-7128)	685	81.0%	2861
Е7АТ)	Е7АОСЗН	Жгутиковый ассоциированный с	крюком НейсоЬас1ег ЕеНз (штамм АТСС
СЗ	ЕЕГС	белок	49179/ЖТС 12436/С81)	684	63.0%	2190
Ε7ΓΥΙ	Ε7ΡΥΙ69Η
6	ΕΕΙ	Жгутиковый копирующий белок	НейсоЬас1ег 8Ш8 Н81	689	61.0%	2158

- 25 032330

Р8КТ НЗ	Р8КТНЗН ЕБВС	Жгутиковый ассоциированный белок Ρΐίϋ	с	крюком НейсоЬас1ег Ыггогегопй (штамм	59.0%	2091
СШ-1)	694
К4КН	К4КНРЗН	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком
РЗ	ЕЙНЕ	белок Ρΐίϋ		НейсоЬас1ег йейшаппй А8В1.4	691	58.0%	2073
				НейсоЬас1ег шиз!е1ае (штамм
				АТСС 43772 / ЙМС 18044 /
эзис	Ό3υθΜ5_Η	Предполагаемый	жгутиковый МПС 12198 / 12198)
М5	ЕЕМ1	ассоциированный с крюком белок 2	(Сашру1оЬас1ег шиз!е1ае)	674	52.0%	1778
О7У11	07У119НЕ	Жгутиковый копирующий белок филамента НейсоЬас1ег йерайсиз (штамм
9	ЙНР	Ρΐίϋ		АТСС 51449/ЗВ 1)	682	51.0%	1698
12РОС	12РОС5НЕ			НейсоЬас1ег стаесй (штамм
5	БСР	Жгутиковый копирующий белок		РАОибИ)	682	51.0%	1690
Ι7ΟΖΙ	Ι7ΟΖΙ09Η			НейсоЬас1ег стаесй АТСС ВАА-
0	ΕΕΙ	Жгутиковый копирующий белок		847	682	51.0%	1689
Е4УН	Ε4ΥΗΕ69
Б6	НЕЙ1	Жгутиковый крюк-белок 2		НейсоЬас1ег стаесй ССиО 18818	682	51.0%	1689
Ν2Β(^	Ν2Β0Ν79
N7	НЕЙ1	Неспецифический белок		НейсоЬас1ег ЫНз \¥1\¥а	679	45.0%	1589
СЗХГ)	СЗХОТ19
Т1	НЕЙ1	Жгутиковый копирующий белок		НейсоЬас1ег ЫНз АТСС 43879	679	45.0%	1583
(^7МА	О7МАМЗ_	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком \Уо1те11а зисстодепез (штамм
М3	\ΥΟΕ8υ	белок 2		АТСС 29543 / Ό8Μ 1740 / ЙМС	682	45.0%	1479
				7466 / МПС 11488 / ЕОС 602\Υ)
				(νΐΗπο зисстодепез)
С5ЕХ	С5ЕХР09Н			НейсоЬас1ег риПошт ΜΙΤ 98-
Р0	ΕΕΙ	Жгутиковый крюк-белок 2		5489	685	39.0%	1272
		Жгутиковый ассоциированный	с	крюком
Ο5Ζ\Υ	Ο5Ζ\ΥΤ4_9	белок		НейсоЬас1ег сапас1епз1з ΜΙΤ 98-
Т4	ΗΕΕΙ	(Жгутиковый крюк-белок 2)		5491	689	39.0%	1262
Н5УЕ	Н5УЕС0Н	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком НейсоЬас1ег Ыггогегопй ССиСг
СО	ΕΕΒΙ	белок Ρΐΐϋ		35545	458	53.0%	1185
СЗХБ	СЗХЕ84 9Н	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком НейсоЬас1ег хутдЬатепзГ
84	ΕΕΙ	белок 2		АТСС ВАА-430	689	37.0%	1175
Н5УЕ	Н5УЕС1Н	Жгутиковый ассоциированный	с	крюком НейсоЬас1ег Ыггогегопй ССиСг
С1	ΕΕΒΙ	белок Ρΐΐϋ		35545	231	66.0%	807
Н8С81	Н8С811С			С атру1 оЬ ас!ег ΐ е) иш зиЬ зр.) е) иш
1	Амти	Жгутиковый копирующий белок		ЙМС! 9872	645	27.0%	474
				Сатру1оЬас1ег 1ап (штамм
В9КО	В9КОА6С	Жгутиковый копирующий белок филамента КМ2100 / Ό67 / АТСС ВАА-
А6	АМЙК	Ρΐΐϋ		1060)	766	26.0%	471
		Эффлюксный переносчик	8МК-типа,
С6КО	С6КОО29	обеспечивающий множественную
02	ΡΚΟΤ	лекарственную устойчивость		Сатру1оЬас1ег зйохуае КМ3277	577	29.0%	465
Ό2ΜΧ	ϋ2ΜΧ77_Ο	Жгутиковый ассоциированный	с	крю ком С атру1 оЬ ас!ег ΐ е) иш зиЬ зр.) е) иш
77	Амти	белок		414	642	28.0%	461

- 26 032330

М3108 3	Μ3Ι083 9Ρ КОТ	Жгутиковый копирующий белок	Сашру1оЬас1ег зЬосуае СС57С	577	28.0%	457
Н78А	Н78А14_С
14	АМСО	Жгутиковый копирующий белок	Сашру1оЬас1ег сой 84-2	644	26.0%	452
Ό2Μ8	О2М844_С	Жгутиковый ассоциированный с	крю ком С ашру1 оЬ ас!ег ΐ е) иш зиЬ зр.) е) иш
44	АМЮ	белок Εΐίϋ	1336	647	26.0%	451
Н7ХВ	Н7ХВН0С		СатруРЬасШщещт зиЬзр. )е)ит
НО	АМЮ	Жгутиковый копирующий белок	ЙМС 23216	648	26.0%	451
Η7ΥΚ	Η7ΥΚΝ9Ο		СатруРЬасШщещт зиЬзр. ΐ ерш
N9	АМЮ	Жгутиковый копирующий белок	ЬМО 23357	648	27.0%	449

ЗиИипшопаз бепйпйсапз (штамм АТСС 33889 / Ό8Μ

1251) (ТЫопмсгозрйа

ЦЗОШ цзои48_§и (Жгутиковый ассоциированный с крюком бепйпйсапз (штамм АТСС

ЫЖ белок 2)-подобный белок 33889 / Ό8Μ 1251)) 462 31.0% 441

Η8Β\Υ В9	Н8В\¥В9_С	солирующий белок	Сашру1оЬас1ег)е)иш зиЬзр. )е)иш
АМЮ	Жгутиковый I	1213	642	27.0%	447
Η8Α\Υ	Н8А\¥Ш_С			СатруРЬасШщерш зиЬзр. ΐ ерш
N7	АМЮ	Жгутиковый копирующий белок	1997-11	643	26.0%	447
Α3ΖΌ	Α3ΖΌΚ2 С	Жгутиковый	ассоциированный с	крю ком С атру1 оЬ ас!ег ΐ е) иш зиЬ зр.) е) иш
К2	АМЮ	белок Εΐίϋ		НВ93-13	643	26.0%	447
				Сатру1оЬас1ег )е)иш зиЬзр.
Α7Η4Ι	А7Н4П СА Жгутиковый	ассоциированный с	крюком боу1е1 (зйат АТСС ВАА-1458 /
4	мю	белок Εΐίϋ		КМ4099/269.97)	646	26.0%	447
Α3ΥΚΙ	АЗУК13С	Жгутиковый	ассоциированный с	крю ком С атру1 оЬ ас!ег ΐ е) иш зиЬ зр.) е) иш
3	АМЮ	белок Εΐίϋ		260.94	642	25.0%	442
Н7\¥Е	Н7\¥ЕН0_С
НО	АМСО	Жгутиковый копирующий белок	Сатру1оЬас1ег сой Н8	637	26.0°/о	441
				Сатру1оЬас1ег)е)иш зиЬзр. ΐ ерш
Е1РЙ	Е1РЕЦ8С	Жгутиковый	ассоциированный с	крюком зегсбуре Н821 (штамм М1 /
Ω8	ΑΜΙΜ	белок 2		99/308)	643	27.0%	441

Пример 9. Наличие и экспрессия белка ΕΗΌ в Н. ру1оп.

Образцы.

В исследовании участвовали 81 образец Н. ру1оп. полученные от пациентов. Образцы диагностировали как Н. ру1оп-положительные посредством стандартного бактериального культивирования на селективных пластинках. В ходе такого тестирования бактерии выращивали на чашках с кровяным агаром Уилкинса-Чалгрена в микроаэробных условиях (10% СО₂. 5% О₂. 8.5% N2 и 37°С) в течение 36 ч и подтверждали биохимическим анализом положительный результат анализа на оксидазу. каталазу и уреазу. Часть культивированных бактерий использовали для выделения ДНК. а остаток применяли для приготовления лизата белков для вестерн-блоттинга.

Поликлональная антисыворотка мыши к ΕΗΌ.

Трёх мышей линии С57ББ6 иммунизировали 3 раза (еженедельно) 30 мкг рекомбинантного белка Ε11Ό бактерии Н. ру1оп в качестве антигена и 10 мкг холерного токсина в качестве адъюванта. повторно суспендировали в ФСБ. Через одну неделю после последней иммунной стимуляции мышей обескровили и сыворотку объединили. Антигенность и специфичность объединенной сыворотки тестировали с помощью вестерн-блоттинга.

Вестерн-блоттинг.

С целью установки оптимальных условий анализа различные концентрации рекомбинантного белка Ε11Ό. также как и других рекомбинантных контрольных белков (Т1д (Тпддег £ас!ог (ТотЬ е! а1.. 1997)) и ГТТ). созданных и очищенных при одинаковых условиях. наносили на 8% гель. содержащий ДСН. После блоттинга белков на нитроцеллюлозной мембране (Ака!тап/СЕ Неа1!ксаге. Фрайбург. Германия). мембраны блокировали в 5% обезжиренном молоке в течение 1 ч при комнатной температуре и инкубировали в течение ночи с различными разведениями антисыворотки в качестве первичных антител. После инкубации мембран с антителами мыши класса ^С. меченными пероксидазой хрена. полосы обнаруживали. добавляя реагенты системы ЕСЬ Аез!егп Б1о!!шд Бе!ес!юп.

Результаты показаны на фиг. 5. где на правой стороне показанного геля. содержащего ДСН. указаны антиген и его количество. нанесенное на отдельные дорожки. Использовали оптимальное разведение (1:2000) антисыворотки мыши.

ПЦР анализ наличия открытой рамки считывания белка Ε11Ό в геноме Н. ру1оп.

Разработали четыре варианта ПЦР на основе последовательности ДНК белка Ε1ΪΌ в качестве объек

- 27 032330 та согласно последовательности 8Е^ ΙΌ ΝΟ: 2. Специфичность каждой пары праймеров, как указано в табл. 5, была подтверждена ВйА8Т-аналнзом напротив всех бактериальных нуклеотидных последовательностей банка генов. Проводили ПЦР, используя ДНК Н. ру1ог1 в качестве положительного контроля и геномную ДНК других 10 микроорганизмов в качестве отрицательного контроля. Проводили ПЦР с использованием мастер-микса СоТад-полимеразы (Рготеда), температуры отжига в 56°С и временем элонгации 30 с.

Таблица 5

Праймеры, использованные для ПЦР анализа

	Прямой праймер	Обратный праймер	Длина ампликона (пар оснований)
ПЦР1	АОС ТСА ТТА ООО СТТ ООС АО (8Ε()ΙΟΝΟ: 21)	ОСТ СОС ОСТ САА СОС АТС (8Е(2 Ш ΝΟ: 22)	246
ПЦР2	АТС АСО ОАС ОСТ АСС ААТ СО (8Е() Ш ΝΟ: 23)	АОО ОАС ТТС АТС САТ ОСТ СС (8Е(2 Ш ΝΟ: 24)	288
ПЦРЗ	САС АСА СОС ТАТ САТ ТСА АОС (8Е(2 Ш ΝΟ: 25)	ССС ОСТ ОАТ САС АТС АТТ ОАС (8Е(2 Ш ΝΟ: 26)	300
ПЦР4	СОС ТАА ССТ САТ АСА ТОО АОО (8Е(2 Ш ΝΟ: 27)	ТАА ОСО ОСА ААО СОС ТСС О (8Е(2 Ш ΝΟ: 28)	150

Результаты.

Открытая рамка считывания белка Ρ1ΪΌ присутствует во всех изолятах Н. ру1ог1, полученных от пациентов (культивированные бактерии, выделенные из образцов биопсий пациентов). Наличие открытой рамки считывания белка Ρ1ΪΌ можно подтвердить всеми четырьмя вариантами ПЦР, использованными для этого анализа. Результаты проведенных ПЦР1, ПЦР2 и ПЦР3 для ДНК, выделенных из 81 образца Н. ру1ог1, были в целом положительными. В то время как результат ПЦР4 был положительным для 79 образцов (фиг. 6). Специфичность анализа подтверждали применением ДНК, выделенной из Р. аегидтоза (АТСС 27813), К1еЬ§1е11а оху!оса (АТСС 700324), Сапб1ба а1Ь1сап§ (АТСС 90028), Еп!гососси§ Гаесайз (АТСС 29292), 8!гер. Сгоир А (АТСС 19615), 8.!йурй1типит (АТСС 13311), 8.аигеи§ (АТСС 25923), 8.ер1бегт1б18 (АТСС 18228), Н.тйиепзае (АТСС 49247) и Е.сой (АТСС 25922).

Как можно видеть на фиг. 6, показывающей результаты репрезентативного ПЦР-анализа, проведенного с использованием геномной ДНК, которая выделена из культивируемых клеток Н. ру1ог1, выделенных из образцов биопсий пациентов, открытая рамка считывания белка Ρ1ΪΌ присутствует почти во всех изолятах Н. ру1ог1. Таким образом, результаты ПЦР подтверждают наличие Ρ1ΪΌ в геномной ДНК. На фиг. 6 числа над дорожками обозначают внутренний номер образца.

Касательно обнаружения Ρ1ΪΌ белка в образцах, полученных от пациентов, которых диагностировали как Н. ру1оп-положительных, белок Ρ1ΪΌ обнаруживают в 97,5% образцов. Применяя вестернблоттинг можно показать, что экспрессию белка Ρ1ΪΌ обнаруживают в 79 из 81 лизата белков Н. ру1ог1. Результаты показаны на фиг. 7. На фиг. 7 числа над дорожками обозначают внутренний номер образца.

Специфичность анализа подтверждали с помощью отрицательных результатов, когда лизаты белков из других микроорганизмов анализировали посредством вестерн-блоттинга. Результаты этого анализа показаны на фиг. 8. Как можно видеть на фиг. 8, кроме рекомбинантного Ρ1ΪΌ с меткой стрептавидина (дорожка 2 в обоих вестерн-блотах) и без метки стрептавидина (дорожка 3 в обоих вестерн-блотах), лизаты белков, полученные из Р. аегидтоза (АТСС 27813) (левый вестерн-блот, дорожка 4), К1еЬ§1е11а оху!оса (АТСС 700324) (левый вестерн-блот, дорожка 5), Сапб1ба а1Ысап§ (АТСС 90024) (левый вестернблот, дорожка 6), Еп!егососсиз Гаесайз (АТСС 29292) (левый вестерн-блот, дорожка 7), 8!гер!ососси§ Сгоир А (АТСС 19615) (левый вестерн-блот, дорожка 8), 8. !йурй1тигшт (АТСС 13311) (правый вестернблот, дорожка 4), 8. аигеиз (АТСС 25923) (правый вестерн-блот, дорожка 5), 8. ер1бегт1б18 (АТСС 18228) (правый вестерн-блот, дорожка 6), Н. тйиепзае (АТСС 49247) (правый вестерн-блот, дорожка 7) и Е. сой (АТСС 25922) (правый вестерн-блот, дорожка 8).

В настоящем описании изобретения присутствуют ссылки на различные документы известного уровня техники, полные ссылки которых представлены ниже и которые включены в настоящую заявку посредством ссылки.

АтоШ, I. С., ΗίΐζΙβΓ, I., & Ми11ег, А. (2012). ТНе 1тшипошос1и1а1огу Ргорегйез о£Не11соЬас1ег ру1оп СопРег Рго1ес1юп Адатз! А11егд1с апс! Сйготс 1пйатта1огу ΌΐβοπΙεΓβ. Ргоп! Се111п1ес!

М1сгоЫо1, 2, 10.

А1ИеПоп, I С., Сао, Р., Реек, К. М., 1г., Титтиги, М. К., В1азег, М. к, & Соуег, Т. Й. (1995).

Мо8а1С18т ϊη уасио1айпд су!о!охт а11е1ез о£ НеНсоЬас1ег ру1оп. АззосхаПоп оГ зресШс уасА

1урез ννΐίΗ су!о!охт ргодисйоп апс! рерйс и1сегайоп. 1 Βΐοΐ Скет, 270(30), 17771-17777.

- 28 032330

СЬеп, Υ., \¥апд, I., & 8Ы, й. (2001). [Ιη νίΐΐΌ з(иЬу о(' (Ье Ь1о1о§1са1 асйуЖез апс! 1шшипо§ешс11у о(' гесотЬтап! асШезт о£НейоЬас(ег ру1оп гНраА]. гЬопуЬиа Υΐ Хие 2а ΖΗΐ, 81(5), 276-279.

Соуег, Т. Й., & В1азег, Μ. 1. (1992). Рипйсайоп апс! сЬагас(епга(юп о(' Ле уасио! аЬпд ΐοχίη йот НеНсоЬас(ег ру1оп. ΙΒίοΙ СЬет, 267(15), 10570-10575.

ϋιιηη, В. Ε., Коор, К. Μ., 2ηά, 8ипд, С. С., 8Ьагта, 8. А., Регег-Регег, О. I., & В1азег, Μ. 1. (1992). Мепййсайоп апс! рипйсайоп о(' а српбО ИеаГ зЬоск рго(ет Ьото1од (гот НейсоЬас(ег ру1оп. 1п(ес( 1ттип, 60(5), (946-(95(.

Еа(оп, К. А., 8иегЬаит, 8., 1озепЬапз, С., & Кгакохука, 8. ((996). Со1отгайоп о('§по(оЬ1ойс ρί§1ε(8 Ьу НеНсоЬас(ег ру1оп с1ейс1еп1 ίη ΐ\νο йадеШп депез. 1п(ес( 1ттип, 64(7), 2445-2448.

Егапсо, А. Т., 1згае1, Ό. А., \УазЫпд(оп, М. К., КпзЬпа, и., Еох, 1. О., Кодегз, А. В., е( а1. (2005). Асйуайоп о£Ье(а-са(етп Ьу сагстодетс НейсоЬас(ег ру1оп. Ргос №11 Асас! 8οΐ и 8 А,(02(30), (0646-(065(.

Еизсот, М., Уайа, Ό., МепедаШ, М., ЕаппеШ, 8., Е1дига, Ν., Ηοΐίοη, 1., е( а1. ((999). Апй-СадА геасйуйу ϊη НейсоЬас(ег ру1оп-педайуе зиЬ)ес(з: а сотрапзоп о(' (Ьгее Л(Гегеп( тейюЬз. О1д ϋΐ8 8οΐ, 44(8), (69(-(695.

Оао, й., М1сЬе1, А., \¥еск, Μ. Ν., АгпсЙ, V., Ра\у1йа, М., & Вгеппег, Н. (2009). НейсоЬас(ег ру1оп тЕесйоп апс! даз(пс сапсег пзк: еуа1иайоп οί 15Н. ру1оп рго(етз άβίβπηΐηβά Ьу ηονβΐ ти1йр1ех 8его1оду. Сапсег Кез, 69((5), 6(64-6(70.

Οοίο, Т., ΝΐδΗΐζοηο, А., Еирока, Т., 1ке\уак1,1., Мйипе, К., & Иази, М. ((999). Йоса1 зесге(огу 1ттипод1оЬи1т А апс! розйттитгайоп даз(п(18 согге1а(е χνίΐΗ рго(есйоп адатз( НеНсоЬас(ег ру1оп тГесйоп айег ога1 уасстайоп о('пн се. 1п(ес( 1ттип, 67(5), 253(-2539.

Нау, Е. С., λΥεδίννοοά, О. Μ. К., Νείδοη, Р. Ν., & Нийзоп, Й. (2002). Ргасйса1 1ттипо1оду: \УИеу-В1аск\¥е11.

Нопс1а, 8., Еирока, Т., ТоИеЬа, М., 8а(оЬ, К., ΝΐδΗΐζοηο, А., & Иази, М. ((998). ϋενείορκηεηί о£НеНсоЬас(ег ру1оп-тс1исеЬ даз(пс сагстота ίη МопдоНап дегЬйз. Сапсег Кез, 58((9), 42554259.

Κίκη, 1. 8., СЬапд, 1. Н., СЬипд, 8.1., & Уит, 1. 8. ((999). Мо1еси1аг с1отпд апс! сЬагас(епгайоп о(' (Ье НеНсоЬас(ег ру1оп Είϋ депе, ап еззепйа1 (ас(ог ίη йадеПаг з(гис(иге апс! тоЫйу. 1 Вас(епо1, (8((22), 6969-6976.

Μίίίεΐ Р. К. Е., йие(Ьу й., КетЬагЛ С., 1о11ег Н. (2003). ϋείεοίίοη оЕ ЫдЬ (йегз оЕ апйЬоЬу адатз( НейсоЬас(ег суз(ете-псЬ рго(етз А, В, С, апс! Ε ίη НейсоЬас(ег ру1оп-т(ес(еЬ тЬМЬиак. С1т. О1адп. йаЬ. ТттипоЕ (0:542- 545.

- 29 032330

МассЫа, О., Маззопе, А., Виггош, Ό., Соуассц А., Сепз1ш, 8., & Карриой, К. (1993). Тйе НзрбО ρΐΌΐείη о£ НеНсоЬас!ег ру1оп: з!гис!иге ап б 1шшипе гезропзе ίη райеп!з \νίΛ даз!гобиобепа1 б18еазе8. Мо1 М1сгоЫо1, 9(3), 645-652.

М1сйеЛ, Р., Кге188, С., ΚοΐΙοίΤ, К. Б., Рог!а, Ν., В1апсо, Е Б., ВасЬшапп, Ό., е! а1. (1999). Ога1 тшишгайоп \νίΛ игеазе апб ЕзсйепсЫа соН йеа!-1аЫ1е еп!его!охт ΐδ за£е апб 1шшиподешс ίη НейсоЬас!ег ру1оп-1п£ес!еб абиЕз. Оаз!гоеп!его1оду, 116(4), 804-812.

Моп!есиссо, С., & бе Вегпагб, М. (2003). Мо1еси1аг апб се11и1аг шесйашзшз о£ асйоп о£ Ле уасио1айпд ογίοίοχίη (УасА) апб пеЛгорйб-асЙуайпд рго!ет (ΗΡ-ΝΑΡ) νίαιίεηοε £ас!огз о£ НейсоЬас!ег ру1оп. МтсгоЬез 1п£ес!, 5(8), 715-721.

Мига!а-Каш1уа, Ν., КигазЫша, Υ., Те1зЫка!а, Υ., УашайазЫ, Υ., 8айо, Υ., ЕПдазЫ, Н., е! а1. (2007). НеНсоЬас!ег ру1оп С ад А т!егас!з ν/ϊΐΐι Е-сабЬепп апб бегеди1а!ез Ле Ье!а-са!ешп 81§па1 Ла! ргошо!ез т!езйпа1 !гап8Й1йегепйайоп ίη §аз!пс ер1ЛеНа1 се11з. Опсодепе, 26(32), 46174626.

ОегЛ, М., 8ипбдшз!, Μ., ΗίίζΙεη Б, Епд1ег, Ό. В., Агпо1б, Б С., КеЛег, 8., е! а1. (2012). ОСбепуеб ΙΕ-18 бпуез Тгед бйТегепйайоп, шиппе НеНсоЬас!ег ру1оп-зрес1йс 1шшипе Л1егапсе, апб азЛша рго!есйоп. I С1ш 1пуез!, 122(3), 1082-1096.

Ораго, Р., Ми11ег, Б, КоПап, А., Уа1епгие1а, Р., ΥϋδεΙενΐΛ, А., Оагаа-бе 1а Оиагба, К., е! а1. (1999). 8его1од1са1 гезропзе !о НеНсоЬас!ег ру1оп гесошЫпап! апйдепз ίη СЛПеап Л£ес!еб райеЛз \νίΛ биобепа1 и1сег, поп-и1сег бузрерз1а апб даз!пс сапсег. ΑΡΜΙ8,107(12), 1069-1078. Р11агшас1а. (1988). АШпйу сЬгота!одгарЬу ЕКВ Вю!ес1то1оду Цррза1а, 8\уебеп.

8атЬгоок, I., Еп!зсй, Е., & Машайз, Т. (1989). Мо1еси1ег С1оптд: А БаЬога!огу Мапие1, Воок 1: Νε\ν Уогк: Со1б 8рппд НаЛог ЕаЬога!огу Ргезз.

8иегЬаит, 8., ТЫЬегде, Ε М., Капзаи, Б, Ееггего, К. Е., & БаЫдпе, А. (1994). НеНсоЬас!ег ру1оп НзрА-йзрВ йеа!-зйоск депе с1из!ег: пискойбе зедиепсе, ехргеззюп, ри!айуе йипсйоп апб ттиподешсйу. Мо1 М1сгоЫо1, 14(5), 959-974.

8идапита, М., Кигизи, М., ОкаЬе, 8., 8иеока, Ν., УозЫба, М., \Уака!зи1б, Υ., е! а1. (2001). НейсоЬас!ег ру1оп тетЬгапе рго!ет 1: а пе\у сагстодешс 1ас!ог о£НеНсоЬас!ег ру1оп. Сапсег Кез, 61(17), 6356-6359.

ТотЬ Е Г., е! а1. 1997. Тйе сотр1е!е депоте зедиепсе о£ Ле даз!пс раЛодеп НеНсоЬас!ег ру1огШа!иге, 7; 388(6642):539-47.

иетига, Ν., ОкатоЛ, 8., Уатато!о, 8., Ма!зитига, Ν., УатадисЫ, 8., УатаЮбо, М., е! а1. (2001). НеНсоЬас!ег ру1оп тйесйоп апб Ле беуе1ортеп! ой даз!пс сапсег. N Епд1 I Меб, 345(11), 784- 789.

- 30 032330

Цгйа, Υ., Ыке, К., Τοπΐ, Ν., К1кисЫ, Υ., Кигака1а, Н., Капда, Ε., εΐ а1. (2004). Сошрапзоп о£ зегит 1§А апд 1дО апйЬосНез 1ог декесдпд НеНсоЬаскег ру1оп ίηίεεΐίοη. Ιηΐειτι Мей, 43(7), 548552.

\Уа1апаЬе, 8., Така§1, А., Тада, и., КаЬи, А. М., Кода, Υ., Каппуа, 8., εΐ а1. (1997). Су1о1ох1сйу апд ιηοΐίΐίΐν о£НеНсоЬас1ег ру1оп. I СНп Оа81гоеп1его1, 25 8ирр1 1, 8169-171.

\Уа1апаЬе, Т., Тада, М., Хада1, Н., 8азак1, 8., & №као, М. (1998). НеНсоЬаскег ру1оп ίηίεεΐίοη шдисез дазШс сапсег ίη шопдоНап дегЬПз. Оаз1гоеп1его1оду, 115(3), 642-648.

Уатаока, У., Кодаша, Т., Кка, М., кпашзЫ, I., КазЫша, К., & СгаЬат, ϋ. Υ. (1998).

Ке1адопзЫр о£уасА депо!урез о£НеНсоЬас1ег ру1оп ΐο садА зШиз, ογΐοΐοχίη ргодисдоп, апд сНшса1 оЩсоте. НеНсоЬас1ег, 3(4), 241-253.

Уап, I., Ыапд, 8. Н., Мао, Υ. Г., П, Ь. XV., & П, 8. Р. (2003). Сопз1гисдоп о£ехргеззюп 8уз1етз £ог ЙаА апд 11 аВ депез о£ НеНсоЬаскег ру1оп апд де1егттадоп о£ 1ттипогеасдуйу апд апддешсйу о£ гесотЬтап! ρΐΌΐείηδ. \Уог1д I Оаз1гоеп1его1, 9(10), 2240-2250.

Уап, I., & Мао, Υ. Г. (2004). Соп81гисдоп о£ а ргокагуодс ехргеззюп зуз1ет о£уасА депе апд декесдоп о£ уасА депе, УасА ρΐΌΐείη ίη НеНсоЬаскег ру1оп ΐ8о1акез апд апЬУасА апдЬоду ίη радеШз' зега. \¥ог!д 1 Оаз1гоеп1его1, 10(7), 985-990.

Признаки настоящего изобретения, раскрытые в описании изобретения, перечне последовательностей, формуле изобретения и/или чертежах, могут по отдельности и в любой их комбинации быть материалом для воплощения изобретения в различных его формах.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> Мюнхенский технический университет <120> Способ обнаружения инфекции Н. ру1ог1 <130> О 10023 РСТ <150> ЕР 13 004 038.9 <151> 2013-08-13 <160> 28 <170> РабепЫп версия 3.3 <210> 1 <211> 685 <212> РКТ <213> Н. ру1ог1 <220>

<221> М13С_ЕЕАТиКЕ <223> Н. ру1ог1 штамм 027 <400> 1

Меб А1а 1

11е

О1у

Зег 5

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи О1у Ьеи О1у Зег Ьуз Уа1

Ьеи

10

15

Азп

Туг

Азр

Уа1

11е

Азр

Ьуз

Ьеи

Ьуз

Азр

А1а

Азр

О1и

Ьуз

А1а

Ьеи

20

25

30

11е

А1а

Рго

Ьеи

Азр

Ьуз

Ьуз

Меб

О1и

О1п

Азп

Уа1

О1и

Ьуз

О1п

Ьуз

35

40

45

- 31 032330

А1а

Ьеи 50

Уа1

О1и

11е

Ьуз

ТЬг 55

Ьеи

Ьеи

5ег

5ег

Ьеи 60

Ьуз

О1у

Рго

Уа1

Ьуз

ТЬг

Ьеи

5ег

Азр

Туг

5ег

ТЬг

Туг

11е

5ег

Агд

Ьуз

5ег

Азп

Уа1

65

70

75

80

ТЬг

О1у

Азр

А1а

Ьеи

5ег

А1а

5ег

Уа1

О1у

А1а

О1у

Уа1

Рго

11е

О1п

85

90

95

Азр

11е

Ьуз

Уа1

Азр

Уа1

О1п

Азп

Ьеи

А1а

О1п

О1у

Азр

11е

Азп

О1и

100

105

110

Ьеи

О1у

А1а

Ьуз

Рке

5ег

5ег

Агд

Азр

Азр

11е

Рке

5ег

О1п

Уа1

Азр

115

120

125

ТЬг

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Рке

Туг

ТЬг

О1п

Азп

Ьуз

Азр

Туг

А1а

Уа1

Азп

11е

130

135

140

Ьуз

А1а

О1у

МеЬ

ТЬг

Ьеи

О1у

Азр

Уа1

А1а

О1п

5ег

11е

ТЬг

Азр

А1а

145

150

155

160

ТЬг

Азп

О1у

О1и

Уа1

МеЬ

О1у

11е

Уа1

МеЬ

Ьуз

ТЬг

О1у

О1у

Азп

Азр

165

170

175

Рго

Туг

О1п

Ьеи

МеЬ

Уа1

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

ТЬг

О1у

О1и

Азр

Азп

Агд

180

185

190

11е

Туг

Рке

О1у

5ег

Н1з

Ьеи

О1п

5ег

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Азп

Ьуз

Азп

А1а

195

200

205

Ьеи

5ег

Ьеи

О1у

Уа1

Азр

О1у

5ег

О1у

Ьуз

5ег

О1и

Уа1

5ег

Ьеи

Азп

210

215

220

Ьеи

Ьуз

О1у

А1а

Азр

О1у

Азп

ТЬг

Н1з

О1и

Уа1

Рго

11е

МеЬ

Ьеи

О1и

225

230

235

240

Ьеи

Рго

О1и

5ег

А1а

5ег

11е

Ьуз

О1п

Ьуз

Азп

ТЬг

А1а

11е

О1п

Ьуз

245

250

255

А1а

11е

О1и

О1п

А1а

Ьеи

О1и

Азп

Азр

Рго

Азп

Рке

Ьуз

Азр

Ьеи

11е

260

265

270

А1а

Азп

О1у

Азр

11е

5ег

11е

Азр

ТЬг

Ьеи

Н1з

О1у

О1у

О1и

5ег

Ьеи

275

280

285

11е

11е

Азп

Азр

Агд

Агд

О1у

О1у

Азп

11е

О1и

11е

Ьуз

О1у

5ег

Ьуз

- 32 032330

290

295

300

А1а 305

Ьуз

О1и

Ьеи

О1у

Рке 310

Ьеи

О1п

ТЬг

ТЬг

ТЬг 315

О1п

О1и

5ег

Азр

Ьеи 320

Ьеи

Ьуз

5ег

5ег

Агд

ТЬг

11е

Ьуз

О1и

О1у

Ьуз

Ьеи

О1и

О1у

Уа1

11е

325

330

335

5ег

Ьеи

Азп

О1у

О1п

Ьуз

Ьеи

Азр

Ьеи

Ьуз

А1а

Ьеи

ТЬг

Ьуз

О1и

О1у

340

345

350

Азп

ТЬг

5ег

О1и

О1и

Азп

ТЬг

Азр

А1а

11е

11е

О1п

А1а

11е

Азп

А1а

355

360

365

Ьуз

О1и

О1у

Ьеи

5ег

А1а

Рке

Ьуз

Азп

А1а

О1и

О1у

Ьуз

Ьеи

Уа1

11е

370

375

380

Азп

5ег

Ьуз

ТЬг

О1у

МеЕ

Ьеи

ТЬг

11е

Ьуз

О1у

О1и

Азр

А1а

Ьеи

О1у

385

390

395

400

Ьуз

А1а

5ег

Ьеи

Ьуз

Азр

Ьеи

О1у

Ьеи

Азп

А1а

О1у

МеЕ

Уа1

О1п

5ег

405

410

415

Туг

О1и

А1а

5ег

О1п

Азр

ТЬг

Ьеи

Рке

МеЕ

5ег

Ьуз

Азп

Ьеи

О1п

Ьуз

420

425

430

А1а

5ег

Азр

5ег

О1п

Рке

ТЬг

Туг

Азп

О1у

Уа1

5ег

11е

ТЬг

Агд

Рго

435

440

445

ТЬг

Азп

О1и

Уа1

Азп

Азр

Уа1

11е

Азп

О1у

Уа1

Азп

11е

ТЬг

Ьеи

О1и

450

455

460

О1п

ТЬг

ТЬг

О1и

Рго

Азп

Ьуз

Рго

А1а

11е

11е

5ег

Уа1

5ег

Агд

Азр

465

470

475

480

Азп

О1п

А1а

11е

11е

Азр

5ег

Ьеи

Ьуз

О1и

Рке

Уа1

Ьуз

А1а

Туг

Азп

485

490

495

О1и

Ьеи

11е

Рго

Ьуз

Ьеи

Азр

О1и

Азр

ТЬг

Агд

Туг

Азр

А1а

Азр

ТЬг

500

505

510

Ьуз

11е

А1а

О1у

11е

Рке

Азп

О1у

Уа1

О1у

Азр

11е

Агд

ТЬг

11е

Агд

515

520

525

5ег

5ег

Ьеи

Азп

Азп

Уа1

Рке

5ег

Туг

5ег

Уа1

Н1з

ТЬг

Азр

Азп

О1у

530

535

540

- 33 032330

Уа1 545

О1и

Бег

Ьеи МеЬ

Ьуз 550

Туг

О1у

Ьеи

Бег

Ьеи 555

Азр

Азр

Ьуз

О1у

Уа1 560

МеЬ

Бег

Ьеи

Азр

О1и

А1а

Ьуз

Ьеи

Бег

Бег

ТЪг

Ьеи

Азп

Бег

Азп

Рго

565

570

575

Ьуз

А1а

ТЪг

О1п

Азр

РЪе

РЪе

Туг

О1у

Бег

Азр

Бег

Ьуз

Азр

МеЬ

О1у

580

585

590

О1у

Агд

О1и

11е

Н1з

О1п

О1и

О1у

11е

РЪе

Бег

Ьуз

РЪе

Азп

О1п

Уа1

595

600

605

11е

А1а

Азп

Ьеи

11е

Азр

О1у

О1у

Азп

А1а

Ьуз

Ьеи

Ьуз

11е

Туг

О1и

610

615

620

Азр

Бег

Ьеи

Азр

Агд

Азр

А1а

Ьуз

Бег

Ьеи

ТЪг

Ьуз

Азр

Ьуз

О1и

Азп

625

630

635

640

А1а

О1п

О1и

Ьеи

Ьеи

Ьуз

ТЪг

Агд

Туг

Азп

11е

МеЬ

А1а

О1и

Агд

РЪе

645

650

655

А1а

А1а

Туг

Азр

Бег

О1п

11е

Бег

Ьуз

А1а

Азп

О1п

Ьуз

РЪе

Азп

Бег

660

665

670

Уа1

О1п

МеЬ

МеЬ

11е

Азр

О1п

А1а

А1а

А1а

Ьуз

Ьуз

Азп

675

680

685

<210> 2 <211> 2058 <212> ДНК <213> Н. ру1ог1 <220>

<221> т1зс_£еаЪиге <223> Н. ру1ог1 штамм 027 <400> 2 аЬддсааЬад аЬЬдасаадс дадсааааЬд аааддсссдд асаддсдаЬд даЬдЬдсааа дасдаЬаЁЁЬ дссдЬЬааЬа дЬЬсаЬЬаад ЬЬааддасдс ЬЬдаааадса ЁЬаааасдсЬ сдЬЬдадЬдс аЬЁЬадсдса ЁЬадссаадЬ ЬЬааадсадд сЁсаЬЬаддд сдаЬдааааа аааадсссЬЬ 55сдда55а5 дадЬдЬдддд аддсдаЬаЬЬ ддаЬассасд ааЬдасЁЁЬа сЁЬддсадЬа дсдЬЬааЬсд дЬадаааЬЬа 5ссас55а5а дсЬддсдЬдс аасдаасЬад с5сааа5555 ддсдаЬдЬдд аддЬЁЁЬдаа сссссЬЬада ааасдсЬссЬ Ьсадссдааа сЁаЬЬсаада дддсдаааЬЬ асасдсаааа сЬсааадсаЬ

ЬЬасдаЬдЬд саадааааЬд 55са5с5с5а аадсааЬдЬЬ саЬЬааадЬд 55с55саада сааддасЬас сасддасдсЬ

120

180

240

300

360

420

480

- 34 032330

ассааЕддсд	аадЕдаЕддд	саЕЕдЕдаЕд	аааасаддад	ддааЕдассс	сЕассааЕЕа	540
аЕддЕдааЕа	ссааааасас	сддсдаадас	аассдсаЕсЕ	аЕЕЕЕддсЕс	асассЕссаа	600
ЕссасдсЕса	сЕаасааааа	сдсссЕЕЕсЕ	ЕЕдддддЕЕд	аЕддаадсдд	ааададЕдаа	660
дЕдадЕЕЕда	аЕЕЕаааддд	ддсЕдаЕддд	аасасдсаЕд	аадЕссссаЕ	саЕдсЕадад	720
сЕсссЕдааа	дсдсЕЕсЕаЕ	сааасааааа	аасассдсда	Ессааааадс	даЕададсад	780
дсЕЕЕадааа	асдасссЕаа	ЕЕЕЕааадас	ЕЕдаЕсдсЕа	аЕддддаЕаЕ	ЕЕссаЕадас	840
асЕсЕЕсаЕд	ддддддааЕс	ЕЕЕааЕсаЕЕ	ааЕдасаддс	дЕдддддааа	саЕЕдаааЕЕ	900
ааадддадса	аддсЕааада	дсЕЕдддЕЕЕ	ЕЕдсааасса	ссасссаада	аадсдаЕЕЕд	960
ЕЕааааадсЕ	сЕсдсассаЕ	ЕааададддЕ	аааЕЕадаад	дддЕааЕЕад	сЕЕдааЕддс	1020
сааааасЕдд	аЕЕЕаааадс	сЕЕаассааа	дадддсааса	ссадсдаада	ааасасадас	1080
дсЕаЕсаЕЕс	аадсдаЕЕаа	сдсЕааадаа	ддсЕЕдадЕд	сдЕЕЕааааа	сдссдааддс	1140
аадсЕЕдЕда	ЕсааЕЕсЕаа	аассддааЕд	сЕаасдаЕЕа	адддсдадда	сдсЕЕЕаддс	1200
ааддссадЕЕ	ЕдааддаЕЕЕ	дддЕЕЕдаас	дсЕддсаЕдд	ЕдсааЕсЕЕа	ЕдаадсЕЕса	1260
саадасасдс	ЕЕЕЕЕаЕдЕс	ЕаадааЕЕЕд	сааааадсда	дсдаЕЕсдса	аЕЕсасЕЕаЕ	1320
ааЕддддЕда	дсаЕсасасд	ссссасЕааЕ	даддЕсааЕд	аЕдЕдаЕЕаа	сддддЕЕааЕ	1380
аЕсасЕЕЕад	адсааассас	ададссЕааЕ	ааассЕдсда	ЕЕаЕсадсдЕ	дадсадддас	1440
ааЕсаадсса	ЕЕаЕадасад	ссЕЕааадаа	ЕЕЕдЕсааад	ссЕаЕааЕда	дсЕЕаЕсссЕ	1500
ааасЕадаЕд	аадасасдсд	ЕЕаЕдасдсЕ	дасасЕаааа	ЕсдсЕдддаЕ	ЕЕЕЕаасддс	1560
дЕдддсдаЕа	ЕЕсдсассаЕ	ЕадаЕссЕсЕ	сЕЕааЕаасд	ЕдЕЕЕЕсЕЕа	ЕадсдЕдсаЕ	1620
асддаЕаасд	дддЕадааад	сЕЕдаЕдааа	ЕасдддсЕЕа	дЕЕЕадасда	ЕаадддсдЕд	1680
аЕдадЕЕЕад	аЕдаддсЕаа	аЕЕдадЕадс	ассЕЕаааЕЕ	сЕаасссЕаа	адсдасЕсаа	1740
даЕЕЕЕЕЕсЕ	аЕдддадсда	ЕадсааддаЕ	аЕддддддса	дадаааЕсса	ссаададддс	1800
аЕЕЕЕЕЕсЕа	ааЕЕсааЕса	адЕсаЕсдсЕ	ааЕсЕсаЕад	аЕддадддаа	сдсЕаааЕЕа	1860
аадаЕЕЕаЕд	аадаЕЕсссЕ	адасададас	дсЕаааадсЕ	Едассааада	сааадаааас	1920
дсЕсаададс	ЕЕЕЕааааас	ссдсЕасаас	аЕсаЕддсдд	адсдсЕЕЕдс	ддсЕЕаЕдас	1980
адссаааЕсЕ	сЕааадссаа	ЕсаааааЕЕс	ааЕЕссдЕдс	аааЕдаЕдаЕ	сдаЕсаадсд	2040
дсддсЕаааа	адааЕЕаа					2058

<210>

<211>

<212>

<213>

<400>

689

РКТ

Н. зшз

МеЕ А1а 11е О1у Ьуз Ьеи 5ег 5ег Ьеи О1у 11е О1у 5ег Ьуз Уа1 Ьеи

- 35 032330

Азп

Туг Азр

Уа1 20

11е Азр

Ьуз

Ьеи

Ьуз 25

5ег

А1а

Азр

О1и

Ьуз 30

ТЬг

МеЬ

Уа1

А1а

Рго

11е

Азр

Агд

Ьуз

МеЬ

О1и

Уа1

Азп

Ьеи

О1и

Ьуз

О1п

Ьуз

35

40

45

А1а

Ьеи

Уа1

О1и

11е

Ьуз

ТЬг

Ьеи

Ьеи

А1а

Азп

Ьеи

Ьуз

А1а

Рго

Уа1

50

55

60

5ег

А1а

Ьеи

ТЬг

Азр

Туг

5ег

ТЬг

Туг

ТЬг

5ег

Агд

5ег

5ег

5ег

Уа1

65

70

75

80

5ег

5ег

О1у

А1а

Ьеи

Ьуз

А1а

5ег

Уа1

5ег

Рго

О1у

11е

Рго

Уа1

О1п

85

90

95

Азр

11е

Ьуз

Уа1

О1и

Уа1

О1и

Азр

Ьеи

А1а

О1п

О1у

Азр

11е

Азп

О1и

100

105

110

Уа1

О1у

ТЬг

Н1з

Рке

Агд

Азр

Агд

Азр

Азр

А1а

Рке

5ег

О1п

А1а

Азп

115

120

125

ТЬг

Ьуз

Ьеи

Н1з

Рке

Туг

ТЬг

Азп

Азп

Ьуз

Азп

Туг

ТЬг

Уа1

Азп

11е

130

135

140

Ьуз

А1а

О1у

Ме-Ь

5ег

Уа1

О1у

Азр

Уа1

А1а

О1п

А1а

11е

ТЬг

Азр

А1а

145

150

155

160

ТЬг

О1у

О1у

О1и

Уа1

МеЬ

О1у

11е

Уа1

МеЬ

Ьуз

ТЬг

О1у

О1у

Азр

Ьуз

165

170

175

Рго

Туг

О1п

Ьеи

МеЬ

11е

Азп

ТЬг

Ьуз

Азп

Рго

О1у

А1а

Азп

Азп

Агд

180

185

190

Ьеи

Туг

Рке

О1у

5ег

5ег

Уа1

11е

5ег

ТЬг

Ьеи

А1а

5ег

Азр

А1а

Рго

195

200

205

11е

Азп

Ьеи

А1а

11е

О1у

О1у

ТЬг

ТЬг

А1а

Азр

О1у

Ьуз

5ег

ТЬг

О1и

210

215

220

Азр

Азр

Рке

Рке

11е

Ьуз

Уа1

Ьуз

Азр

Азр

Ьуз

О1у

О1и

Уа1

Уа1

Ьуз

225

230

235

240

11е

Рго

11е

5ег

Ьеи

Азп

Ьеи

Азр

Ьуз

А1а

5ег

Уа1

О1п

Азр

Ьуз

Азп

245

250

255

- 36 032330

Ьуз

А1а

Ьеи

О1п 260

ТЪг

А1а

11е

Ьуз

Ьуз 265

А1а

Ьеи

О1и Азр

Азп 270

А1а

О1п

ТЪг

Ьуз

Азр

Ьеи

Уа1

Азр

5ег

О1у

О1п

11е

Азп

11е

О1у

Ьеи

11е

Азп

275

280

285

Азр

О1у

Ьуз

5ег

Ьеи

Уа1

Ьеи

Азп

Азр

О1п

Агд

О1у

Ьеи

О1и

Уа1

О1и

290

295

300

Уа1

О1у

О1у

А1а

Ьуз

А1а

А1а

О1и

Ьеи

О1у

РЪе

Уа1

Ьуз

ТЪг

Ьуз

5ег

305

310

315

320

Азр

О1п

О1и

Азр

Ьеи

Ьеи

Ьуз

О1у

ТЪг

А1а

О1у

11е

А1а

5ег

О1у

О1п

325

330

335

11е

Ьуз

О1у

ТЪг

11е

Азп

РЪе

Азп

О1у

О1п

А1а

11е

Азп

Ьеи

О1у

А1а

340

345

350

11е

ТЪг

А1а

ТЪг

О1у

Азп

5ег

5ег

Азр

А1а

Азп

А1а

О1п

А1а

11е

Уа1

355

360

365

Ьуз

А1а

11е

Азп

О1у

11е

О1п

О1у

Ьеи

Н1з

А1а

5ег

Ьеи

О1у

ТЪг

Азр

370

375

380

О1у

Ьуз

Ьеи

11е

Ьеи

Азп

5ег

О1и

5ег

О1у

О1и

Ьеи

Агд

11е

ТЪг

О1у

385

390

395

400

Уа1

О1у

А1а

Азр

О1у

Ьуз

А1а

А1а

Уа1

Азп

5ег

Ьеи

О1у

Ьеи

5ег

О1и

405

410

415

О1у

Ьеи

5ег

О1п

5ег

Туг

А1а

Ьуз

Ьеи

Н1з

Азр

Ьеи

РЪе

А1а

РЪе

Ьуз

420

425

430

Ьуз

Ьеи

О1п

5ег

А1а

5ег

Азр

А1а

Агд

РЪе

ТЪг

Туг

Азп

О1у

А1а

ТЪг

435

440

445

11е

ТЪг

Агд

Рго

ТЪг

Азп

О1и

Уа1

Азп

Азр

Уа1

11е

Азп

О1у

Уа1

5ег

450

455

460

Ьеи

5ег

Ьеи

Ьеи

А1а

Ьуз

ТЪг

О1и

Рго

О1у

Ьуз

Рго

А1а

11е

11е

5ег

465

470

475

480

11е

ТЪг

Агд

Азр

5ег

Ьуз

А1а

11е

Уа1

Азр

Н1з

Уа1

Ьуз

О1и

РЪе

Уа1

485

490

495

Ьуз

А1а

Туг

Азп

А1а

Ьеи

11е

Рго

Ьуз

Ьеи

Азр

О1и

ТЪг

ТЪг

Агд

Туг

500

505

510

- 37 032330

Азр

Рго Азр 515

ТЬг

Ьуз

11е

А1а

О1у Уа1 520

Рке Азп

О1у

Уа1 525

О1у

Азр

11е

Агд

ТЬг

11е

Агд

5ег

5ег

11е

Азп

Азп

А1а

11е

А1а

Рке

ТЬг

11е

ТЬг

530

535

540

ТЬг

А1а

Ьуз

О1у

Уа1

Азр

5ег

Ьеи

МеЬ

Ьуз

Туг

О1у

11е

ТЬг

Ьеи

Азр

545

550

555

560

О1и

Н1з

О1у

Ьуз

МеЬ

5ег

Ьеи

Азр

О1и

5ег

Агд

Ьеи

ТЬг

Азп

А1а

Ьеи

565

570

575

Азп

А1а

Азр

Рго

О1п

А1а

А1а

О1п

Азр

Рке

Рке

Туг

О1у

О1у

Азр

11е

580

585

590

Ьуз

5ег

МеЬ

О1у

О1у

Ьуз

О1и

11е

Н1з

О1п

Азр

О1у

11е

Рке

11е

Ьуз

595

600

605

Ьеи

Азр

Ьуз

Уа1

Ьеи

О1п

О1у

Ьеи

Уа1

Азр

О1у

О1у

Азп

А1а

Агд

Ьеи

610

615

620

Ьуз

Ьеи

Туг

О1и

Азр

5ег

Ьеи

Азр

О1п

Азр

А1а

Ьуз

Азп

Ьеи

Агд

Агд

625

630

635

640

Азр

Ьуз

О1и

Азп

А1а

МеЬ

О1и

МеЬ

Ьеи

Ьуз

ТЬг

Агд

Туг

Азр

МеЬ

МеЬ

645

650

655

А1а

О1и

Агд

Рке

А1а

А1а

Туг

Азр

О1и

Агд

11е

5ег

Ьуз

А1а

Азп

Ьуз

660

665

670

5ег

Рке

Азр

А1а

Уа1

О1п

МеЬ

МеЬ

11е

Азр

О1п

А1а

А1а

А1а

Ьуз

Ьуз

675

680

685

Азп <210> 4 <211> 2070 <212> ДНК <213> Н. зибз <400> 4

аЬддсдаЬЬд	дааадЬЬаад	ЬЬсЬЬЬаддд	аЬЬдддадса	аддЬЬЬЬааа	сЬасдаЬдЬд	60
аЬЬдаЬааас	ЬЬаааадсдс	ЬдаЬдааааа	асЬаЬддЬдд	сЬсссаЬЬда	ЬсдаааааЬд	120
даадЬсааЬс	ЬЬдаааааса	аааддсЬЬЬа	дЬЬдадаЬЬа	ааасЬЬЬдсЬ	ЬдссааЬсЬЬ	180
ааадсдсссд	ЬЬадЬдсЬЬЬ	аасддаЬЬаЬ	ЬсаасЬЬаЬа	сдадссдсад	ЬадсадЬдЬд	240

- 38 032330

адсадЕддад	сдсЕЕааадс	садЕдЕаадс	ссдддЕаЕсс	сЕдЕдсаада	ЕаЕЕааадЕа	300
даадЕЕдадд	аЕЕЕддсЕса	аддсдаЕаЕЕ	ааЕдаадЕсд	дЕасасаЕЕЕ	ЕададаЕсдс	360
даЕдаЕдссЕ	ЕЕадссаадс	Еаасассааа	ЕЕасасЕЕЕЕ	аЕассааЕаа	ЕааааасЕас	420
асадЕсааЕа	ЕЕааддсЕдд	ЕаЕдадЕдЕа	ддсдаЕдЕсд	сссаадссаЕ	ЕасадаЕдсЕ	480
асддддддсд	аддЕдаЕддд	даЕЕдЕдаЕд	аааассдддд	дддаЕааасс	сЕаЕсадЕЕа	540
аЕдаЕЕааЕа	сЕааааассс	сддддсЕааЕ	аассдсЕЕдЕ	аЕЕЕЕддсЕс	ЕадЕдЕЕаЕЕ	600
ЕсЕасЕсЕЕд	сЕадЕдаЕдс	дссЕаЕЕааЕ	ЕЕадссаЕад	ддддсасЕас	ЕдсадаЕддд	660
аааадЕасад	аадаЕдаЕЕЕ	ЕЕЕЕаЕЕааа	дЕЕааадаЕд	аЕаадддсда	адЕддЕЕааа	720
аЕсссЕаЕЕа	дЕсЕЕааЕсЕ	ЕдаЕааддсЕ	ЕсЕдЕдсаад	аЕаааааЕаа	адсссЕдсаа	780
асадсЕаЕЕа	ааааадсссЕ	ададдаЕааЕ	дсасааасса	аадассЕадЕ	адаЕадсдда	840
садаЕсааЕа	ЕсддЕЕЕдаЕ	ЕааЕдаЕддс	аааЕсЕЕЕад	ЕасЕЕаасда	Есааададдд	900
ЕЕадаадЕЕд	аадЕЕддддд	адсЕааадса	дсЕдаасЕад	дЕЕЕЕдЕЕаа	аасЕаааЕса	960
даЕсаадаад	аЕЕЕасЕсаа	аддсасадса	дддаЕЕдсаЕ	ссддЕсаааЕ	саадддсасЕ	1020
аЕЕааЕЕЕЕа	аЕдддсаадс	саЕЕааЕЕЕа	ддддсЕаЕса	ссдсаасддд	сааЕЕсЕадс	1080
даЕдсЕаасд	сЕсаадссаЕ	сдЕЕааадсс	аЕЕааЕддса	ЕЕсаадддЕЕ	дсасдсЕЕсЕ	1140
ЕЕаддсасдд	асдддаааЕЕ	ааЕссЕЕааЕ	адЕдааадсд	дсдадЕЕдсд	ЕаЕаассддЕ	1200
дЕдддддссд	аЕддЕааадс	ддсЕдЕаааЕ	адЕЕЕаддЕЕ	ЕдЕсЕдаддд	сЕЕаадссаа	1260
ЕссЕаЕдсЕа	ааЕЕасасда	ЕсЕсЕЕЕдсс	ЕЕЕаааааас	ЕасааадЕдс	сЕсЕдаЕдсЕ	1320
адаЕЕЕасЕЕ	асааЕддЕдс	дасааЕсасс	сдсссЕасаа	аЕдаддЕааа	сдаЕдЕдаЕЕ	1380
аасддЕдЕаЕ	сЕЕЕдадЕЕЕ	аЕЕадссааа	асЕдадссдд	дЕааассадс	саЕЕаЕЕадс	1440
аЕЕасссдсд	асадЕааддс	саЕЕдЕЕдаЕ	саЕдЕЕааад	ааЕЕЕдЕсаа	адссЕаЕааЕ	1500
дсаЕЕааЕсс	сЕааасЕада	Едааасаасс	сдЕЕасдаЕс	садаЕасЕаа	ааЕЕдссддс	1560
дЕдЕЕЕааЕд	дсдЕддддда	ЕаЕссдсаса	аЕЕсдсЕсЕЕ	сааЕЕааЕаа	ЕдссаЕЕдсЕ	1620
ЕЕЕасааЕса	саасддсЕаа	аддЕдЕддаЕ	адЕсЕсаЕда	адЕаЕдддаЕ	ЕасасЕЕдаЕ	1680
дадсаЕддаа	адаЕдадсЕЕ	адаЕдададс	адасЕсасаа	асдсдсЕЕаа	ЕдссдаЕсса	1740
саадссдсЕс	аадаЕЕЕсЕЕ	сЕаЕддЕддс	даЕаЕЕаааа	дЕаЕдддддд	ЕааддадаЕЕ	1800
сассаадасд	ддаЕЕЕЕЕаЕ	саадЕЕадаЕ	ааадЕЕЕЕдс	ааддЕЕЕддЕ	сдаЕддЕддЕ	1860
аасдсдаддЕ	ЕдаадЕЕаЕа	сдаддаЕЕсЕ	ЕЕадаЕсаад	асдсЕааааа	ЕЕЕдадаада	1920
даЕааддада	аЕдсааЕдда	даЕдсЕЕааа	асссдЕЕаЕд	асаЕдаЕддс	адаасдсЕЕЕ	1980
дсадсЕЕаЕд	аЕдадсдЕаЕ	ЕЕсЕааддсд	ааЕаааЕссЕ	ЕЕдаЕдсддЕ	дсадаЕдаЕд	2040
аЕсдаЕсаад	садссдссаа	ааадааЕЕаа				2070

- 39 032330 <210>

<211>

<212>

<213>

684

РКТ

Н. ЬеИз <400> 5

МеЕ 1

А1а

Уа1

О1у

О1п 5

Ьеи

5ег

5ег

Ьеи

О1у 10

11е

О1у

5ег

Ьуз

Уа1 15

Ьеи

Азп

Туг

Азр

Уа1

11е

Азр

Ьуз

Ьеи

Ьуз

Ьуз

А1а

Азр

О1и

Азп

ТЬг

МеЕ

20

25

30

Уа1

Ьуз

Рго

11е

О1и

Агд

Ьуз

МеЕ

О1и

А1а

Азп

Ьеи

О1и

Ьуз

О1п

Ьуз

35

40

45

А1а

Ьеи

Уа1

О1и

11е

О1п

ТЬг

Ьеи

Ьеи

О1у

Азп

Ьеи

Агд

ТЬг

Рго

Уа1

50

55

60

Агд

А1а

Ьеи

5ег

Азр

Туг

5ег

ТЬг

Туг

ТЬг

А1а

Агд

Н1з

5ег

Азп

Уа1

65

70

75

80

ТЬг

О1у

Азр

А1а

Ьеи

Ьуз

Уа1

5ег

Уа1

5ег

Рго

О1у

11е

Рго

11е

О1п

85

90

95

Азп

11е

Ьуз

Уа1

Азр

Уа1

О1и

5ег

Ьеи

А1а

О1п

О1у

Азр

11е

Азп

О1и

100

105

110

Уа1

О1у

ТЬг

Н1з

Рке

5ег

5ег

Агд

Азр

Азр

5ег

Рке

А1а

О1п

Рке

Азр

115

120

125

ТЬг

ТЬг

Ьеи

Н1з

Рке

Туг

ТЬг

Азп

Н1з

О1п

Азр

Туг

А1а

Уа1

Ьуз

11е

130

135

140

Ьуз

А1а

О1у

МеЕ

ТЬг

Ьеи

5ег

Азр

Уа1

А1а

О1п

А1а

11е

ТЬг

Азр

А1а

145

150

155

160

ТЬг

Азр

О1у

Ьуз

Уа1

МеЕ

О1у

11е

Уа1

МеЕ

Ьуз

ТЬг

О1у

О1у

Азп

Ьуз

165

170

175

Рго

Туг

О1п

Ьеи

МеЕ

11е

Азп

5ег

Ьуз

О1у

ТЬг

О1у

А1а

Азр

Азп

Агд

180

185

190

11е

Рке

Рке

О1у

5ег

5ег

Уа1

11е

5ег

Н1з

Ьеи

5ег

Азп

Азр

А1а

ТЬг

195

200

205

11е

Азп

Ьеи

О1и

А1а

Ьуз

5ег

О1и

ТЬг

Ьуз

Рго

О1и

Азр

Азр

Рке

Рке

210

215

220

- 40 032330

11е 225

Ьуз

Уа1

Н1з

Азр

О1и 230

О1п

Азп

Уа1

11е

О1и 235

11е

Рго

11е

А1а

Ьеи 240

Ьуз

Ьеи

О1п

О1у

5ег

11е

О1и

5ег

Ьуз

Азп

А1а

А1а

Ьеи

Агд

А1а

А1а

245

250

255

11е

О1п

Ьуз

А1а

Ьеи

О1и

Азр

Азп

Рго

А1а

ТЬг

Ьуз

5ег

Ьеи

А1а

Азр

260

265

270

Азп

О1у

О1п

Ьеи

Азп

Уа1

О1у

Уа1

11е

Азп

О1и

О1у

Ьуз

5ег

Ьеи

Уа1

275

280

285

11е

Азп

Азр

Ьуз

Агд

О1у

Ьеи

5ег

Уа1

О1и

Уа1

О1у

О1у

А1а

Ьуз

А1а

290

295

300

Агд

О1и

Ьеи

О1у

Рке

11е

О1п

Азр

Ьуз

5ег

О1п

А1а

О1и

О1у

Азр

Ьеи

305

310

315

320

Ьеи

Ьуз

А1а

Ьеи

ТЬг

А1а

Рго

О1п

5ег

О1у

Ьуз

11е

Ьуз

О1у

11е

11е

325

330

335

5ег

Ьеи

Азп

О1у

О1п

Азп

11е

Азр

МеЬ

О1у

А1а

11е

ТЬг

А1а

О1и

Н1з

340

345

350

Азп

5ег

5ег

О1п

Азр

Азп

А1а

Азп

А1а

Ьеи

11е

Ьуз

А1а

Уа1

Азп

О1у

355

360

365

11е

А1а

О1у

Ьеи

5ег

А1а

5ег

Уа1

О1у

А1а

Азр

О1у

Ьуз

Ьеи

Уа1

Ьеи

370

375

380

Азп

5ег

А1а

5ег

О1у

О1п

Ьеи

Агд

Ьеи

ТЬг

О1у

А1а

Азп

А1а

О1и

О1у

385

390

395

400

Ьуз

Ьуз

А1а

Ьеи

Ьуз

Азр

Ьеи

О1у

Ьеи

5ег

О1и

О1у

Рке

5ег

Агд

5ег

405

410

415

Туг

А1а

Азп

А1а

О1п

О1и

Ьеи

Рке

5ег

Уа1

Ьуз

Азп

Ьеи

О1п

5ег

А1а

420

425

430

5ег

Азр

А1а

Ьуз

Рке

ТЬг

Туг

Азп

О1у

А1а

5ег

11е

ТЬг

Агд

Рго

ТЬг

435

440

445

Азп

О1и

Уа1

Азп

Азр

Уа1

11е

Азп

О1у

Уа1

5ег

Ьеи

5ег

Ьеи

Ьеи

О1у

450

455

460

ТЬг

ТЬг

О1и

Рго

О1у

Ьуз

О1у

А1а

Уа1

Уа1

5ег

11е

ТЬг

Агд

Азр

Азр

465

470

475

480

- 41 032330

Ьуз

А1а

11е

11е

Азр Азп 485

Уа1

Ьуз

О1и

РЪе 490

Уа1

Ьуз

А1а

Туг

Азп 495

О1и

Ьеи

МеЬ

Рго

Ьуз

Ьеи

Азр

О1и

ТЪг

ТЪг

Агд

Туг

Азр

Рго

Азр

ТЪг

Агд

500

505

510

11е

А1а

О1у

11е

РЪе

Азп

О1у

Уа1

Бег

Азр

11е

Агд

ТЪг

11е

Агд

Бег

515

520

525

Бег

Ьеи

11е

Бег

А1а

Уа1

ТЪг

РЪе

ТЪг

11е

ТЪг

Азп

Бег

Ьуз

О1у

Уа1

530

535

540

А1а

Бег

Ьеи

МеЬ

Ьуз

Туг

О1у

11е

МеЬ

Ьеи

Азр

Азр

Н1з

О1у

Ьуз

МеЬ

545

550

555

560

Бег

Ьеи

Азр

О1и

Бег

Агд

Ьеи

А1а

Бег

А1а

11е

Азп

А1а

Азр

Рго

О1п

565

570

575

О1у

ТЪг

О1п

Азр

РЪе

РЪе

Туг

О1у

Бег

Азр

Уа1

Ьуз

Бег

МеЬ

О1у

О1у

580

585

590

Ьуз

О1и

ТЪг

Н1з

О1п

Азр

О1у

11е

РЪе

О1и

Агд

Уа1

Азр

Ьуз

Уа1

Ьеи

595

600

605

А1а

Азп

Ьеи

Уа1

Азр

О1у

О1у

Н1з

А1а

Агд

Ьеи

Ьуз

Ьеи

Туг

О1и

Азр

610

615

620

Бег

Ьеи

Азр

О1п

Азр

А1а

Ьуз

Бег

Ьеи

Ьуз

Ьуз

Азр

Ьуз

О1и

Азп

А1а

625

630

635

640

МеЬ

О1и

Ьеи

Ьеи

Ьуз

ТЪг

Агд

Туг

Азр

11е

МеЬ

А1а

О1и

Агд

РЪе

А1а

645

650

655

А1а

Туг

Азр

О1и

О1п

11е

Бег

Ьуз

А1а

Азп

Агд

Бег

РЪе

Азп

А1а

Уа1

660

665

670

О1п

МеЬ

МеЬ

11е

Азр

О1п

А1а

А1а

А1а

Ьуз

Ьуз

Азп

675

680

<210> 6 <211> 2055 <212> ДНК <213> Н. ЕеИз

<400> 6
аЬддсадЬад	ддсааЬЬаад	ЖсЁЖддда	аЬЬддЬадса	аадЬЬЬЬааа	сЬасдаЬдЬд	60
аЬсдаЬаадс	ЬЬаааааадс	ддасдаааас	асдаЬддЬЬа	аасссаЬсда	дадааадаЬд	120

- 42 032330

даддссаабб	бадаааааса	аааадсссбб	дбадааабсс	ааасбббдсб	бдддаабббд	180
сдсасассбд	бсададсбсб	аадсдаббаб	бссасббаба	садсбадаса	бадсаабдба	240
ассддддабд	сдсббааадб	дадбдбдадб	ссдддбабсс	ссаббсаааа	бабсааадбд	300
дабдбадада	дбббадсаса	дддддабабб	аабдаддбдд	дсасбсаббб	бадсбссада	360
дасдасбсдб	ббдсдсадбб	бдабасбасб	ббдсаббббб	абассаабса	бсаддаббас	420
дсддббаааа	ббааадсбдд	дабдассбба	адсдабдбсд	сбсаддсааб	сасддабдсб	480
асбдабддса	аддбдабддд	даббдбдабд	аааассдддд	ддаабааасс	сбабсадсба	540
абдабсааба	дбаадддсас	дддсдсддаб	аабсдбабсб	бббббддббс	бадбдбсабс	600
бсссабббда	дсаабдабдс	дассаббааб	ббадаадсса	ададсдадас	ааадссбдад	660
дабдаббббб	ббабсааадб	дсабдасдаа	саааабдбда	бадаааббсс	бабсдсбсбс	720
аадббдсадд	дсбсбаббда	дадбааааас	дсддсбсбдс	дбдсадссаб	ссааааадсс	780
ббададдаба	абсссдсбас	аааабсббба	дсадасаабд	ддсадббааа	бдбдддддбс	840
абсаабдадд	дбааабсббб	ддбдабсааб	дабааасдад	дбббдадсдб	ададдбаддд	900
ддддсбаадд	сдсдсдаасб	аддбббсабс	саадабаааб	сссаадсбда	дддбдаббба	960
сбаааадссс	бсассдсссс	дсаабсбддс	аадабсааад	дсаббаббад	бсбдаабдда	1020
саааасаббд	асабдддддс	дабсасадсб	даасабаабб	сбадбсаада	саасдсбаас	1080
дсбсбдабба	аадсбдбсаа	бддсаббдса	ддбббдадсд	сдбсбдбддд	сдсддабддд	1140
аадббадбдс	бсаабадбдс	садсдддсаа	ббасдсббаа	ссддадсбаа	бдсададддб	1200
аааааддсбс	бсааадаббб	аддссбсбса	даддддббба	дссдсбсбба	бдсбаабдсб	1260
саадаасбсб	бббсбдббаа	ааасббасад	адбдсбадсд	абдсбааабб	бассбасааб	1320
ддддсбадба	бсасдсдссс	бассаабдаа	дббаабдабд	бааббаабдд	сдбдбсббба	1380
адбббдсбад	дсасаасада	дссдддсаад	ддддсбдббд	бдадсабсас	асдадабдас	1440
ааддсдабса	бсдабаабдб	сааададббб	дбсааадссб	абаабдадбб	дабдссаааа	1500
ббадабдада	ссасссдбба	сдабссддас	асаадааббд	ссдддабсбб	баабддадбд	1560
адсдабабсс	дсасбабссд	сбсббсасбб	абсадбдсад	ббасббббас	аабсасбааб	1620
адсаадддсд	бддсбадсбб	дабдаадбаб	дддабсабдс	бадабдасса	бддсаадабд	1680
адбббадасд	ааадссдбсб	бдсбадсдса	абсаасдссд	абссдсаадд	сасссаадас	1740
ббсббббабд	даадсдабдб	даададбабд	дддддсаадд	ааасссасса	адабддаабс	1800
бббдадсдсд	бддабааадб	бббддсбааб	ббддбсдабд	дбддбсабдс	дсдбббдаад	1860
сбсбабдаад	асбсбсбада	бсаадабдсс	аааадссбса	ааааадабаа	ададаасдсб	1920
абддадббаб	бааааасссд	сбабдасабс	абддсададс	дббббдсбдс	сбабдасдад	1980
садабббсба	аддсбаассд	абсабббаас	дсбдбдсада	бдабдабсда	бсаадсбдсб	2040

- 43 032330 дсЕаадаааа асЕаа

2055

<210>	7
<211>	1230
<212>	РЕТ
<213>	Н. ру1ог1

<220>
<221>	М15С_РЕАТиКЕ
<223>	Н. ру1ог1 штамм 027
<400>	7

МеЕ 1

ТЪг Азп

О1и

ТЪг 5

11е

Азп

О1п О1п

Рго 10

О1п

ТЪг

О1и

А1а

А1а 15

РЪе

Азп

Рго

О1п

О1п

РЪе

11е

Азп

Азп

Ьеи

О1п

Уа1

А1а

РЪе

Ьеи

Ьуз

Уа1

20

25

30

Азр

Азп

А1а

Уа1

А1а

Еег

Туг

Азр

Рго

Азр

О1п

Ьуз

Рго

11е

Уа1

Азр

35

40

45

Ьуз

Азп

Азр

Агд

Азр

Азп

Агд

О1п

А1а

РЪе

Азп

О1у

11е

Еег

О1п

Ьеи

50

55

60

Агд

О1и

О1и

Туг

Еег

Азп

Ьуз

А1а

11е

Ьуз

Азп

Рго

А1а

Ьуз

Ьуз

Азп

65

70

75

80

О1п

Туг

РЪе

Еег

Азр

РЪе

11е

Азр

Ьуз

Еег

Азп

Азп

Ьеи

11е

Азп

Ьуз

85

90

95

Азр

А1а

Ьеи

11е

Азр

Уа1

О1и

Еег

Еег

ТЪг

Ьуз

Еег

РЪе

О1п

Ьуз

РЪе

100

105

110

О1у

Азр

О1п

Агд

Туг

О1п

11е

РЪе

ТЪг

Еег

Тгр

Уа1

Еег

Н1з

О1п

Азп

115

120

125

Азр

Рго

Еег

Ьуз

11е

Азп

ТЪг

Агд

Еег

11е

Агд

Азп

РЪе

МеЕ

О1и

Азп

130

135

140

11е

11е

О1п

Рго

Рго

11е

Рго

Азр

Азр

Ьуз

О1и

Ьуз

А1а

О1и

РЪе

Ьеи

145

150

155

160

Ьуз

Еег

А1а

Ьуз

О1п

Еег

РЪе

А1а

О1у

11е

11е

11е

О1у

Азп

О1п

11е

165

170

175

Агд

ТЪг

Азр

О1п

Ьуз

РЪе

МеЕ

О1у

Уа1

РЪе

Азр

О1и

Еег

Ьеи

Ьуз

О1и

180

185

190

- 44 032330

Агд

О1п

О1и 195

А1а О1и

Ьуз

Азп

О1у О1у 200

Рго

ТЬг

О1у

О1у 205

Азр

Тгр

Ьеи

Азр

11е

Рке

Ьеи

5ег

Рке

11е

Рке

Азр

Ьуз

Ьуз

О1п

5ег

5ег

Азр

Уа1

210

215

220

Ьуз

О1и

А1а

11е

Азп

О1п

О1и

Рго

Уа1

Рго

Н1з

Уа1

О1п

Рго

Азр

11е

225

230

235

240

А1а

ТЬг

ТЬг

ТЬг

ТЬг

Азр

11е

О1п

О1у

Ьеи

Рго

Рго

О1и

А1а

Агд

Азр

245

250

255

Ьеи

Ьеи

Азр

О1и

Агд

О1у

Азп

Рке

5ег

Ьуз

Рке

ТЬг

Ьеи

О1у

Азр

МеЕ

260

265

270

О1и

МеЕ

Ьеи

Азр

Уа1

О1и

О1у

Уа1

А1а

Азр

11е

Азр

Рго

Азп

Туг

Ьуз

275

280

285

Рке

Азп

О1п

Ьеи

Ьеи

11е

Н1з

Азп

Азп

А1а

Ьеи

5ег

5ег

Уа1

Ьеи

МеЕ

290

295

300

О1у

5ег

Н1з

Азп

О1у

11е

О1и

Рго

О1и

Ьуз

Уа1

5ег

Ьеи

Ьеи

Туг

О1у

305

310

315

320

О1у

Азп

О1у

О1у

Рго

Ьуз

А1а

Ьуз

Н1з

Азр

Тгр

Азп

А1а

ТЬг

Уа1

О1у

325

330

335

Туг

Ьуз

Азр

О1п

О1п

О1у

Азп

Азп

Уа1

А1а

ТЬг

11е

11е

Азп

Уа1

Н1з

340

345

350

МеЕ

Ьуз

Азп

О1у

5ег

О1у

Ьеи

Уа1

11е

А1а

О1у

О1у

О1и

Ьуз

О1у

11е

355

360

365

Азп

Азп

Рго

5ег

Рке

Туг

Ьеи

Туг

Ьуз

О1и

Азр

О1п

Ьеи

ТЬг

О1у

5ег

370

375

380

О1п

Агд

А1а

Ьеи

5ег

О1п

О1и

О1и

11е

Агд

Азп

Ьуз

Уа1

Азр

Рке

МеЕ

385

390

395

400

О1и

Рке

Ьеи

А1а

О1п

Азп

Азп

А1а

Ьуз

Ьеи

Азр

Азп

Ьеи

5ег

О1и

Ьуз

405

410

415

О1и

О1и

О1и

Ьуз

Рке

Агд

Азп

О1и

11е

Ьуз

Азр

Рке

О1п

Ьуз

Азр

5ег

420

425

430

Ьуз

А1а

Туг

Ьеи

Азр

А1а

Ьеи

О1у

Азп

Азр

Агд

11е

А1а

Рке

Уа1

5ег

435

440

445

- 45 032330

Ьуз

Ьуз 450

Азр

ТЬг

Ьуз

Н1з

5ег 455

А1а

Ьеи

11е

ТЬг

О1и 460

Рке

О1у

Азп

О1у

Азр

Ьеи

5ег

Туг

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Азр

Туг

О1у

Ьуз

Ьуз

А1а

Азр

Ьуз

А1а

465

470

475

480

Ьеи

Азр

Агд

О1и

Ьуз

Азп

Уа1

ТЬг

Ьеи

О1п

О1у

Азп

Ьеи

Ьуз

Н1з

Азр

485

490

495

О1у

Уа1

МеЕ

Рке

Уа1

Азр

Туг

5ег

Азп

Рке

Ьуз

Туг

ТЬг

Азп

А1а

5ег

500

505

510

Ьуз

Азп

Рго

Азп

Ьуз

О1у

Уа1

О1у

Уа1

ТЬг

Азп

О1у

Уа1

5ег

Н1з

Ьеи

515

520

525

О1и

А1а

О1у

Рке

5ег

Ьуз

Уа1

А1а

Уа1

Рке

Азп

Ьеи

Рго

Азр

Ьеи

Азп

530

535

540

Азп

Ьеи

А1а

11е

ТЬг

5ег

Ьеи

Уа1

Агд

Агд

Азр

Ьеи

О1и

Азр

Ьуз

Ьеи

545

550

555

560

11е

А1а

Ьуз

О1у

Ьеи

5ег

Рго

О1п

О1и

ТЬг

Азп

Ьуз

Ьеи

Уа1

Ьуз

Азр

565

570

575

Рке

Ьеи

5ег

5ег

Азп

Ьуз

О1и

Ьеи

Уа1

О1у

Ьуз

А1а

Ьеи

Азп

Рке

Азп

580

585

590

Ьуз

А1а

Уа1

А1а

О1и

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

О1у

Азп

Туг

Азр

О1и

Уа1

Ьуз

595

600

605

О1п

А1а

О1п

Ьуз

Азр

Ьеи

О1и

Ьуз

5ег

Ьеи

Ьуз

Ьуз

Агд

О1и

Агд

Ьеи

610

615

620

О1и

Ьуз

О1и

Уа1

А1а

Ьуз

Ьуз

Ьеи

О1и

5ег

Ьуз

5ег

О1у

Азп

Ьуз

Азп

625

630

635

640

Ьуз

МеЕ

О1и

А1а

Ьуз

5ег

О1п

А1а

Азп

5ег

О1п

Ьуз

Азр

О1и

11е

Рке

645

650

655

А1а

Ьеи

11е

Азп

Ьуз

О1и

А1а

Азп

Агд

О1и

А1а

Агд

А1а

11е

ТЬг

Туг

660

665

670

А1а

О1п

Азп

Ьеи

Ьуз

О1у

11е

Ьуз

Агд

О1и

Ьеи

5ег

Азр

Ьуз

Ьеи

О1и

675

680

685

Азп

Уа1

Азп

Ьуз

Азп

Ьеи

Ьуз

Азр

Рке

5ег

Ьуз

5ег

Рке

Азр

О1и

Рке

- 46 032330

690

695

700

Ьуз 705

Азп

О1у

Ьуз

Азп

Ьуз 710

Азр

Рке

Зег

Ьуз

Зег 715

О1и

О1и

ТЬг

Ьеи

Ьуз 720

А1а

Ьеи

Ьуз

О1у

Зег

Уа1

Ьуз

Азр

Ьеи

О1у

11е

Азп

Рго

О1и

Тгр

11е

725

730

735

Зег

Ьуз

Уа1

О1и

Азп

Ьеи

Азп

А1а

А1а

Ьеи

Азп

О1и

Рке

Ьуз

Азп

О1у

740

745

750

Ьуз

Азп

Ьуз

Азр

Рке

Зег

Ьуз

Уа1

ТЬг

О1п

А1а

Ьуз

Зег

Азр

Ьеи

О1и

755

760

765

Азп

Зег

Уа1

Ьуз

Азр

Уа1

11е

11е

Азп

О1п

Ьуз

Уа1

ТЬг

Азр

Ьуз

Уа1

770

775

780

Азр

Азп

Ьеи

Азп

О1п

А1а

Уа1

Зег

Уа1

А1а

Ьуз

А1а

ТЬг

О1у

Азр

Рке

785

790

795

800

Зег

Агд

Уа1

О1и

О1п

А1а

Ьеи

А1а

Азр

Ьеи

Ьуз

Азп

Рке

Зег

Ьуз

О1и

805

810

815

О1п

Ьеи

А1а

О1п

О1п

А1а

О1п

Ьуз

Азп

О1и

Азр

Рке

Азп

ТЬг

О1у

Ьуз

820

825

830

Азп

Зег

А1а

Ьеи

Туг

О1п

Зег

Уа1

Ьуз

Азп

О1у

Уа1

Азп

О1у

ТЬг

Ьеи

835

840

845

Уа1

О1у

Азп

О1у

Ьеи

Зег

Ьуз

А1а

О1и

А1а

ТЬг

ТЬг

Ьеи

Зег

Ьуз

Азп

850

855

860

Рке

Зег

Азр

11е

Ьуз

Ьуз

О1и

Ьеи

Азп

А1а

Ьуз

Ьеи

О1у

Азп

Рке

Азп

865

870

875

880

Азп

Азп

Азп

Азп

Азп

О1у

Ьеи

Ьуз

Азп

Зег

ТЬг

О1и

Рго

11е

Туг

А1а

885

890

895

Ьуз

Уа1

Азп

Ьуз

Ьуз

Ьуз

А1а

О1у

О1п

А1а

А1а

Зег

Рго

О1и

О1и

Рго

900

905

910

11е

Туг

А1а

О1п

Уа1

А1а

Ьуз

Ьуз

Уа1

Азп

А1а

Ьуз

11е

Азр

Агд

Ьеи

915

920

925

Азп

О1п

11е

А1а

Зег

О1у

Ьеи

О1у

Уа1

Уа1

О1у

О1п

А1а

Уа1

О1у

Рке

930

935

940

- 47 032330

Рго

Ьеи

Ьуз

Агд

Н1з

Азр

Ьуз

Уа1

О1у Азр

Ьеи

5ег

Ьуз Уа1

О1у

О1п

945

950

955

960

5ег

Уа1

5ег

Рго

О1и

Рго

11е

Туг

А1а Ткг

11е

Азр

Азр Ьеи

О1у

О1у

965

970

975

Рго

Рке

Рго

Ьеи

Ьуз

Агд

Н1з

Азр

Ьуз Уа1

О1у

Азр

Ьеи 5ег

Ьуз

Уа1

980

985

990

О1у

Ьеи

5ег

Уа1

5ег

Рго

О1и

Рго

11е Туг А1а Ткг 11е Азр Азр Ьеи

995

1000

1005

О1у

О1у 1010

Рго

Рке

Рго

Ьеи

Ьуз 1015

Агд

Н1з

Азр

Ьуз

Уа1 1020

О1у

Азр

Ьеи

5ег

Ьуз

Уа1

О1у

Ьеи

5ег

Агд

О1и

О1п

О1п

Ьеи

Ьуз

О1п

Ьуз

11е

1025

1030

1035

Азр

Азп

Ьеи

5ег

О1п

А1а

Уа1

5ег

О1и

А1а

Ьуз

А1а

О1у

Рке

Рке

1040

1045

1050

О1у

Азп

Ьеи

О1и

О1п

ТЬг

11е

Азр

Азп

Ьеи

Ьуз

Азр

5ег

А1а

Ьуз

1055

1060

1065

Азп

Азп

Рго

Уа1

5ег

Ьеи

Тгр

А1а

О1и

О1у

А1а

Ьуз

Ьуз

Уа1

Рго

1070

1075

1080

А1а

5ег

Ьеи

5ег

А1а

Ьуз

Ьеи

Азр

Азп

Туг

А1а

ТЬг

Азп

5ег

Н1з

1085

1090

1095

ТЬг

Агд

11е

Азп

5ег

Азп

11е

О1п

5ег

О1у

А1а

11е

Азп

О1и

Ьуз

1100

1105

1110

А1а

ТЬг

О1у

МеЬ

Ьеи

ТЬг

О1п

Ьуз

Азп

Рго

О1и

Тгр

Ьеи

Ьуз

Ьеи

1115

1120

1125

Уа1

Азп

Азр

Ьуз

11е

Уа1

А1а

Н1з

Азп

Уа1

О1у

5ег

Уа1

Рго

Ьеи

1130

1135

1140

Ьеи

О1и

Туг

Азр

Ьуз

11е

О1у

Рке

Азп

О1п

Ьуз

5ег

МеЬ

Ьуз

Азр

1145

1150

1155

Туг

5ег

Азр

5ег

Рке

Ьуз

Рке

5ег

ТЬг

О1и

Ьеи

Азп

Азп

А1а

Уа1

1160

1165

1170

Ьуз

Азр

Уа1

Ьуз

5ег

О1у

Рке

ТЬг

О1п

Рке

Ьеи

А1а

Азп

А1а

Рке

1175

1180

1185

- 48 032330

5ег ТАг 1190

О1у Туг

Туг

Агд

Ьеи 1195

А1а О1у О1и

Азп

А1а 1200

О1и

Н1з

О1у

11е

Ьуз

Азп

Уа1

Азп

Ткг

Ьуз

О1у

О1у

5ег

Ьуз

Азп

Ьеи

Ьуз

О1у

1205

1210

1215

Ьеи

Агд

Азп

Ткг

Ьуз

Азп

А1а

Ьуз

ТЬг

ТЬг

Рго

Суз

1220

1225

1230

<210> 8 <211> 3726 <212> ДНК <213> Н. ру1ог1 <220>

<221> т1зс_£еаЬиге <223> Н. ру1ог1 штамм 027 <400> 8 ааддадааас асссдсадса сЬЬсаЬЬЬда сЬЬЬЬдаЬдд ссааааадаа асааЬсЬсаЬ ассдааЬЬЬЬ сдаЬссдааа сададЬЬЬЬЬ даасддаЬса аааааааЬдд асааааааса адссадаЬаЬ ЬдсЬЬдаЬда ЬЬдадддЬдЬ асдсЬсЬдЬс ЬаЬЬдЬаЬдс аЬааадасса дЬддсЬЬадЬ аадаадасса ааЬдасЬаас аЬЬЬаЬсааЬ ЬссЬдаЬсаа ааЬсЬсдсаа ЬсадЬаЬЬЬЬ ЬдаЬдЬддаа сасаадЬЬдд ЬЬЬЬаЬддаа даааЬсЬдсс ааадЬЬсаЬд ададссЬасЬ аЬсЬЬсЬдаЬ адссасЬасЬ ааддддЬааЬ сдсЬдасаЬЬ ЬЬсЬдЬдЬЬа дддсааЬддЬ асааддЬаас саЬадсаддЬ асЬсасаддс дааасЬаЬЬд ааЬсЬЬсаад ааассааЬсд ЬЬаадддаад ЬсадасЬЬЬа ЬсЬЬссасаа дЬдЬсссаЬс ааЬаЬсаЬас ааасааЬсЬЬ ддсдЬдЬЬЬд ддЬддддаЬЬ дЬсааадаад ассассдаса ЬЬЬЬсЬаааЬ даЬссЬааЬЬ аЬддддадЬс ддЬЬЬЬддад ааЬдЬддсЬа ддЬдадааад Ьсасаасдад ассаасаасс ЬадсЬЬЬЬсЬ ЬЬдаЬаадаа ааЬасЬссаа ЬсааЬаадад ададсЬЬЬса аааасдаЬсс аасссссЬаЬ ЬЬдсаддааЬ аЬдааЬссЬЬ ддЬЬддаЬаЬ сааЬсааЬса ЬасааддсЬЬ ЬсасЬсЬЬдд асаадЬЬсаа аЬааЬддсаЬ ссаадсасда сааЬааЬЬаа ддаЬЬаасаа саЬЬдадЬса асааассдаа ЬаадсЬЬдаЬ сдаЬадддаЬ ЬааадсдаЬс сааЬдаЬЬЬа даааЬЬЬддд дЬсЬааааЬс ссаЬдаЬдас ЬаЬсаЬаддд дааадааадд ЬЬЬЬЬЬаЬса адаассадЬЬ ассдссЬдаа сдаЬаЬддаа ЬсааЬЬаЬЬд адаассЬдаа ЬЬддаасдсс ЬдЬдсаЬаЬд сссЬадЬЬЬЬ адаададаЬс дсддсЬЬЬЬа аасдсЬдЬсд аасаддсаад аааааЬссЬа аЬсаасааад даЬсадсдЬЬ аасасссдаЬ ааадааааад ааЬсаааЬсс саадаадсад ЬЬЬаЬаЬЬЬд ссЬсаЬдЬсс ЬсЬадддаЬЬ аЬдЬЬадаЬд аЬЬсасааЬа ааадЬЬЬсаЬ ассдЬЬддЬЬ ааааасддса ЬаЬсЬсЬаса сдааасаааа

120

180

240

300

360

420

480

540

600

660

720

780

840

900

960

1020

1080

1140

1200

- 49 032330

ЬадаЬЬЬсаЬ	ддааЬЬЬсЬЬ	дсасааааса	аЬдсЬаааЬЬ	адасаасЬЬд	адсдадааад	1260
адааадаааа	аЬЬссдаааЬ	дадаЬЬаадд	аЬЬЬссаааа	адасЬсЬаад	дсЬЬаЬЬЬад	1320
асдсссЬадд	дааЬдаЬсдЬ	аЬЬдссЬЬЬд	ЬЬЬсЬааааа	адасссаааа	саЬЬсадсЬЬ	1380
ЬааЬЬасЬда	дЬЬЬддЬаад	ддддаЬЬЬда	дсЬасасЬсЬ	сааадаЬЬаЬ	дддаааааад	1440
садаЬааадс	ЬЬЬадаЬадд	дадаааааЬд	ЬсасЬсЬЬса	аддЬаассЬа	ааасаЬдаЬд	1500
дсдЬдаЬдЬЬ	ЬдЬЬдаЬЬаЬ	ЬсЬааЬЬЬса	ааЬасассаа	сдссЬссаад	ааЬсссааЬа	1560
адддЬдЬадд	сдЬЬасдааЬ	ддсдЬЬЬссс	аЬЬЬадасдс	аддсЬЬЬадс	ааддЬадсЬд	1620
ЬсЬЬЬааЬЬЬ	дссЬдаЬЬЬа	ааЬааЬсЬсд	сЬаЬсасЬад	ЬЬЬсдЬаадд	сддаасЬЬад	1680
аддаЬааасЬ	ааЬЬдсЬааа	ддаЬЬдассс	сасаадаадс	ЬааЬаадсЬЬ	аЬсааадаЬЬ	1740
ЬЬЬЬдадсад	саасааадаа	ЬЬддЬЬддаа	аадсЬЬЬааа	сЬЬсааЬааа	дсЬдЬадсЬд	1800
асдсЬааааа	сасаддсаас	ЬаЬдасдадд	Ьдаааааадс	ЬсадааадаЬ	сЬЬдаааааЬ	1860
сЬсЬааддаа	асдададсаЬ	ЬЬададааад	аадЬададаа	ааааЬЬддад	адсаааадсд	1920
дсаасааааа	ЬааааЬддаа	дсаааадсЬс	аадсЬаасад	ссааааадаЬ	дадаЬЬЬЬЬд	1980
сдЬЬдаЬсаа	ЬааададдсЬ	ааЬададасд	саададсааЬ	сасЬЬасдсЬ	сааааЬсЬЬа	2040
ааддсаЬсаа	аадддааЬЬд	ЬсЬдаЬааас	ЬЬдааааЬаЬ	саасаадааЬ	ЬЬдааадасЬ	2100
ЬЬадЬаааЬс	ЬЬЬЬдаЬдаа	ЬЬсаааааЬд	дсаааааЬаа	ддаЬЬЬсадс	ааддсадаад	2160
ааасдсЬааа	адсссЬЬааа	ддсЬсддЬда	аадаЬЬЬадд	ЬаЬсааЬссд	дааЬддаЬЬЬ	2220
саааадЬЬда	ааассЬЬааЬ	дсадсЬЬЬда	аЬдасЬЬсаа	аааЬддсааа	ааЬааддаЬЬ	2280
ЬсадсааддЬ	аасдсаадса	аааадсдасс	ЬЬдааааЬЬс	сдЬЬааадаЬ	дЬдаЬсаЬса	2340
аЬсаааадаЬ	аасддаЬааа	дЬЬдаЬдаЬс	ЬсааЬсаадс	ддЬаЬсадЬд	дсЬааадсаа	2400
сдддЬдаЬЬЬ	садЬадддЬа	дддсаадсдЬ	ЬадссдаЬсЬ	саааааЬЬЬс	Ьсаааддадс	2460
ааЬЬддсЬса	асааасЬсаа	аааааЬдааа	дЬЬЬсааЬдЬ	Ьддааааааа	ЬсЬдаааЬаЬ	2520
аЬсааЬссдЬ	ЬаадааЬддЬ	дЬдаасддаа	сссЬадЬсдд	ЬааЬдддЬЬа	ЬсЬсаадсад	2580
аадссасаас	ЬсЬЬЬсЬааа	аасЬЬЬЬсдд	асаЬсаадаа	ададЬЬдааЬ	дсаааасЬЬЬ	2640
ЬЬддаааЬЬЬ	сааЬаасааЬ	аасааЬааЬд	ддсЬсааааа	садсасадаа	сссаЬЬЬаЬд	2700
сЬааадЬЬаа	Ьааааадааа	асаддасаад	ЬадсЬадссс	Ьдаадаассс	аЬЬЬаЬдсЬс	2760
аадЬЬдсЬаа	аааддЬаааЬ	дсаааааЬЬд	ассаасЬсаа	Ьсаадсадса	адЬддЬЬЬсд	2820
дЬддЬдЬадд	дсаадсадсд	ддсЬЬсссЬЬ	Ьдааааддса	ЬдаЬааадЬЬ	даЬдаЬсЬса	2880
дЬааддЬадд	дсдаЬсддЬЬ	адсссЬдаас	ссаЬЬЬаЬдс	ЬасааЬЬдаЬ	даЬсЬсддсд	2940
дассЬЬЬссс	ЬЬЬдаааадд	саЬдаЬааад	ЬЬдаЬдаЬсЬ	садЬааддЬа	дддсдаЬсдд	3000
ЬЬадсссЬда	асссаЬЬЬаЬ	дсЬасааЬЬд	аЬдаЬсЬсдд	сддассЬЬЬс	ссЬЬЬдаааа	3060

- 50 032330

ддсаЕдаЕаа	адЕЕдаЕдаЕ	сЕсадЕаадд	ЕадддсЕЕЕс	аадддадсаа	сааЕЕдааас	3120
адаадаЕЕда	саадЕЕсдаЕ	саадсддЕаЕ	садаадсЕаа	адЕаддЕЕаЕ	ЕЕЕддсааЕс	3180
Еададсааас	даЕадасаад	сЕсааадаЕЕ	сЕдсааааЕа	сааЕассаЕд	ааЕсЕаЕддд	3240
сЕдааадЕдс	ааааааадЕд	ссЕдсЕадЕЕ	ЕдЕсадсдаа	аЕЕддасааЕ	ЕасдсЕасЕа	3300
асадссасас	асдсаЕЕааЕ	адсааЕаЕсс	ааааЕддадс	ааЕсааЕдаа	ааадсдассд	3360
дЕаЕдсЕаас	дсааааааас	ссЕдадЕддс	ЕсаадсЕсдЕ	дааЕдаЕаад	аЕсдЕЕдсас	3420
аЕааЕдЕддд	аадсдЕЕссЕ	ЕЕдЕсададЕ	аЕдаЕааааЕ	ЕддсЕЕсаас	садаадааЕа	3480
ЕдааадаЕЕа	ЕЕсЕдаЕЕсд	ЕЕсаадЕЕЕЕ	ссассаадЕЕ	даасааЕдсЕ	дЕаааадаса	3540
ЕЕаадЕсЕдд	сЕЕЕасдсаа	ЕЕЕЕЕадсса	аЕдсаЕЕЕЕс	ЕасаддаЕаЕ	ЕасЕдсЕЕдд	3600
сдддддаааа	ЕдсддадсаЕ	ддааЕсаааа	аЕдЕЕааЕас	ааааддЕддЕ	ЕЕссаааааЕ	3660
сЕЕаааддаЕ	ЕааддааЕас	сааааасдса	аааассдссс	сЕЕдсЕаааа	дсадддддЕЕ	3720
ЕЕЕЕаа						3726

<210> 9 <211> 1294 <212> РЕТ <213> Н. ру1ог1 <220>

<221> М15С_ЕЕАТиЕЕ <223> Н. ру1ог1 штамм 027 <400> 9

МеЕ 1

О1и

11е

О1п

О1п 5

ТЬг

Н1з

Агд

Ьуз

МеЕ 10

Азп

Агд

Рго

Ьеи

Уа1 15

5ег

Ьеи

Уа1

Ьеи

А1а

О1у

А1а

Ьеи

11е

5ег

А1а

11е

Рго

О1п

О1и

5ег

Н1з

20

25

30

А1а

А1а

РЬе

РЬе

ТЬг

ТЬг

Уа1

11е

11е

Рго

А1а

11е

Уа1

О1у

О1у

11е

35

40

45

А1а

ТЬг

О1у

ТЬг

А1а

Уа1

О1у

ТЬг

Уа1

5ег

О1у

Ьеи

Ьеи

5ег

Тгр

О1у

50

55

60

Ьеи

Ьуз

О1п

А1а

О1и

О1и

А1а

Азп

Ьуз

Азп

Рго

Азр

Ьуз

Рго

Азр

Ьуз

65

70

75

80

Уа1

Тгр

Агд

11е

О1п

А1а

О1у

Ьуз

О1у

РЬе

Азп

О1и

РЬе

Рго

Азп

Ьуз

85

90

95

О1и

Туг

Азр

Ьеи

Туг

Ьуз

5ег

Ьеи

Ьеи

5ег

5ег

Ьуз

11е

Азр

О1у

О1у

100

105

110

- 51 032330

Тгр

Азр

Тгр 115

О1у Азп

А1а

А1а Агд 120

Н1з

Туг

Тгр

Уа1

Ьуз 125

О1у

О1у

О1п

Тгр

Азп

Ьуз

Ьеи

О1и

Уа1

Азр

МеЕ

Ьуз

Азр

А1а

Уа1

О1у

ТЪг

Туг

Ьуз

130

135

140

Ьеи

5ег

О1у

Ьеи

Агд

Азп

РЪе

ТЪг

О1у

О1у

Азр

Ьеи

Азр

Уа1

Азп

МеЕ

145

150

155

160

О1п

Ьуз

А1а

ТЪг

Ьеи

Агд

Ьеи

О1у

О1п

РЪе

Азп

О1у

Азп

5ег

РЪе

ТЪг

165

170

175

5ег

Туг

Ьуз

Азр

А1а

А1а

Азр

Агд

ТЪг

ТЪг

Агд

Уа1

Азп

РЪе

Азп

А1а

180

185

190

Ьуз

Азп

11е

5ег

11е

Азр

Азп

РЪе

Уа1

О1и

11е

Азп

Азп

Агд

Уа1

О1у

195

200

205

5ег

О1у

А1а

О1у

Агд

Ьуз

А1а

5ег

5ег

ТЪг

Уа1

Ьеи

ТЪг

Ьеи

О1п

А1а

210

215

220

5ег

О1и

О1у

11е

ТЪг

5ег

Азр

Ьуз

Азп

А1а

О1и

11е

5ег

Ьеи

Туг

Азр

225

230

235

240

О1у

А1а

ТЪг

Ьеи

Азп

Ьеи

А1а

5ег

5ег

5ег

Уа1

Ьуз

Ьеи

МеЕ

О1у

Азп

245

250

255

Уа1

Тгр

МеЕ

О1у

Агд

Ьеи

О1п

Туг

Уа1

О1у

А1а

Туг

Ьеи

А1а

Рго

5ег

260

265

270

Туг

5ег

ТЪг

11е

Азп

ТЪг

5ег

Ьуз

Уа1

ТЪг

О1у

О1и

Уа1

Азп

РЪе

Азп

275

280

285

Н1з

Ьеи

ТЪг

Уа1

О1у

Азр

Ьуз

Азп

А1а

А1а

О1п

А1а

О1у

11е

11е

А1а

290

295

300

5ег

Азп

Ьуз

ТЪг

Н1з

11е

О1у

ТЪг

Ьеи

Азр

Ьеи

Тгр

О1п

5ег

А1а

О1у

305

310

315

320

Ьеи

Азп

11е

11е

А1а

Рго

Рго

О1и

О1у

О1у

Туг

Ьуз

Азр

Ьуз

Рго

Азп

325

330

335

Азп

ТЪг

Рго

5ег

О1п

5ег

О1у

ТЪг

Ьуз

Азп

Азр

Ьуз

Азп

О1и

5ег

А1а

340

345

350

Ьуз

Азп

Азр

Ьуз

О1п

О1и

5ег

5ег

О1п

Азп

Азп

5ег

Азп

ТЪг

О1п

Уа1

- 52 032330

355

360

365

11е

Азп 370

Рго

Рго Азп

5ег

ТЬг 375

О1п

Ьуз

ТЬг О1и

11е 380

О1п

Рго

ТЬг

О1п

Уа1

11е

Азр

О1у

Рго

Рке

А1а

О1у

О1у

Ьуз

Азр

ТЬг

Уа1

Уа1

Азп

11е

385

390

395

400

Азп

Агд

11е

Азп

ТЬг

Азп

А1а

Азр

О1у

ТЬг

11е

Агд

Уа1

О1у

О1у

Рке

405

410

415

Ьуз

А1а

5ег

Ьеи

ТЬг

ТЬг

Азп

А1а

А1а

Н1з

Ьеи

Н1з

11е

О1у

Ьуз

О1у

420

425

430

О1у

Уа1

Азп

Ьеи

5ег

Азп

О1п

А1а

5ег

О1у

Агд

ТЬг

Ьеи

Ьеи

Уа1

О1и

435

440

445

Азп

Ьеи

ТЬг

О1у

Азп

11е

ТЬг

Уа1

Азр

О1у

Рго

Ьеи

Агд

Уа1

Азп

Азп

450

455

460

О1п

Уа1

О1у

О1у

Туг

А1а

Ьеи

А1а

О1у

5ег

5ег

А1а

Азп

Рке

О1и

Рке

465

470

475

480

Ьуз

А1а

О1у

Уа1

Азр

ТЬг

Ьуз

Азп

О1у

ТЬг

А1а

ТЬг

Рке

Азп

Азп

Азр

485

490

495

11е

5ег

Ьеи

О1у

Агд

Рке

Уа1

Азп

Ьеи

Ьуз

Уа1

Азр

А1а

Н1з

ТЬг

А1а

500

505

510

Азп

Рке

Ьуз

О1у

11е

Азр

ТЬг

О1у

Азп

О1у

О1у

Рке

Азп

ТЬг

Ьеи

Азр

515

520

525

Рке

5ег

О1у

Уа1

ТЬг

Азр

Ьуз

Уа1

Азп

11е

Азп

Ьуз

Ьеи

11е

ТЬг

А1а

530

535

540

5ег

ТЬг

Азп

Уа1

А1а

Уа1

Ьуз

Азп

Рке

Азп

11е

Азп

О1и

Ьеи

11е

Уа1

545

550

555

560

Ьуз

ТЬг

Азп

О1у

11е

5ег

Уа1

О1у

О1и

Туг

ТЬг

Н1з

Рке

5ег

О1и

Азр

565

570

575

11е

О1у

5ег

О1п

5ег

Агд

11е

Азп

ТЬг

Уа1

Агд

Ьеи

О1и

ТЬг

О1у

ТЬг

580

585

590

Агд

5ег

11е

Рке

5ег

О1у

О1у

Уа1

Ьуз

Рке

Ьуз

5ег

О1у

О1и

Ьуз

Ьеи

595

600

605

- 53 032330

Уа1

11е 610

Азр

О1и

РЪе

Туг

Туг 615

Бег

Рго

Тгр Азп

Туг 620

РЪе

Азр

А1а

Агд

Азп

Уа1

Ьуз

Азп

Уа1

О1и

11е

ТЪг

Агд

Ьуз

РЪе

А1а

Бег

Бег

ТЪг

Рго

625

630

635

640

О1и

Азп

Рго

Тгр

О1у

ТЪг

Бег

Ьуз

Ьеи

МеЬ

РЪе

Азп

Азп

Ьеи

ТЪг

Ьеи

645

650

655

О1у

О1п

Азп

А1а

Уа1

МеЬ

Азр

Туг

Бег

О1п

РЪе

Бег

Азп

Ьеи

ТЪг

11е

660

665

670

О1п

О1у

Азр

РЪе

11е

Азп

Азп

О1п

О1у

ТЪг

11е

Азп

Туг

Ьеи

Уа1

Агд

675

680

685

О1у

О1у

Ьуз

Уа1

А1а

ТЪг

Ьеи

Бег

Уа1

О1у

Азп

А1а

А1а

А1а

МеЬ

МеЬ

690

695

700

РЪе

Азп

Азп

Азр

11е

Азр

Бег

А1а

ТЪг

О1у

РЪе

Туг

Ьуз

Рго

Ьеи

11е

705

710

715

720

Ьуз

11е

Азп

Бег

А1а

О1п

Азр

Ьеи

11е

Ьуз

Азп

ТЪг

О1и

Н1з

Уа1

Ьеи

725

730

735

Ьеи

Ьуз

А1а

Ьуз

11е

11е

О1у

Туг

О1у

Азп

Уа1

Бег

ТЪг

О1у

ТЪг

Азп

740

745

750

Бег

11е

Бег

Азп

Уа1

Азп

Ьеи

О1и

О1и

О1п

РЪе

Ьуз

О1и

Агд

Ьеи

А1а

755

760

765

Ьеи

Туг

Азп

Азп

Азп

Азп

Агд

МеЬ

Азр

ТЪг

Суз

Уа1

Уа1

Агд

Азп

ТЪг

770

775

780

Азр

Азр

11е

Ьуз

А1а

Суз

О1у

МеЬ

А1а

11е

О1у

Азп

О1п

Бег

МеЬ

Уа1

785

790

795

800

Азп

Азп

Рго

Азр

Азп

Туг

Ьуз

Туг

Ьеи

11е

О1у

Ьуз

А1а

Тгр

Ьуз

Азп

805

810

815

11е

О1у

11е

Бег

Ьуз

ТЪг

А1а

Азп

О1у

Бег

Ьуз

11е

Бег

Уа1

Туг

Туг

820

825

830

Ьеи

О1у

Азп

Бег

ТЪг

Рго

ТЪг

О1и

Азп

О1у

О1у

Азп

ТЪг

ТЪг

Азп

Ьеи

835

840

845

Рго

ТЪг

Азп

ТЪг

ТЪг

Азп

Азп

А1а

Агд

Бег

А1а

Азп

Туг

А1а

Ьеи

Уа1

850

855

860

- 54 032330

Ьуз 865

Азп

А1а

Рго

Рке

А1а 870

Н1з

5ег А1а

ТЬг

Рго 875

Азп

Ьеи

Уа1

А1а

11е 880

Азп

О1п

Н1з

Азр

Рке

О1у

ТЬг

11е

О1и

5ег

Уа1

Рке

О1и

Ьеи

А1а

Азп

885

890

895

Агд

5ег

Ьуз

Азр

11е

Азр

ТЬг

Ьеи

Туг

ТЬг

Н1з

5ег

О1у

Уа1

О1п

О1у

900

905

910

Агд

Азр

Ьеи

Ьеи

О1п

ТЬг

Ьеи

Ьеи

11е

Азр

5ег

Н1з

Азр

А1а

О1у

Туг

915

920

925

А1а

Агд

О1п

МеЕ

11е

Азр

Азп

ТЬг

5ег

ТЬг

О1у

О1и

11е

ТЬг

Ьуз

О1п

930

935

940

Ьеи

Азп

А1а

А1а

ТЬг

Азр

А1а

Ьеи

Азп

Азп

11е

А1а

5ег

Ьеи

О1и

Н1з

945

950

955

960

Ьуз

ТЬг

5ег

О1у

Ьеи

О1п

ТЬг

Ьеи

5ег

Ьеи

5ег

Азп

А1а

МеЕ

11е

Ьеи

965

970

975

Азп

5ег

Агд

Ьеи

Уа1

Азп

Ьеи

5ег

Агд

Ьуз

Н1з

ТЬг

Азп

Н1з

11е

Азр

980

985

990

5ег Рке А1а О1п Агд Ьеи О1п А1а

Ьеи Ьуз О1у О1п Агд Рке А1а 5ег

995

1000

1005

Ьеи

О1и 1010

5ег

А1а

А1а

О1и

Уа1 1015

Ьеи

Туг

О1п

Рке

А1а 1020

Рго

Ьуз

Туг

О1и

Ьуз

Рго

ТЬг

Азп

Уа1

Тгр

А1а

Азп

А1а

11е

О1у

О1у

А1а

5ег

1025

1030

1035

Ьеи

Азп

Азп

О1у

О1у

Азп

А1а

5ег

Ьеи

Туг

О1у

ТЬг

5ег

А1а

О1у

1040

1045

1050

Уа1

Азр

А1а

Туг

Ьеи

Азп

О1у

О1и

Уа1

О1и

А1а

11е

Уа1

О1у

О1у

1055

1060

1065

Рке

О1у

5ег

Туг

О1у

Туг

5ег

5ег

Рке

5ег

Азп

Агд

А1а

Азп

5ег

1070

1075

1080

Ьеи

Азп

5ег

О1у

А1а

Азп

Азп

А1а

Азп

Рке

О1у

Уа1

Туг

5ег

Агд

1085

1090

1095

11е

Рке

А1а

Азп

О1п

Н1з

О1и

Рке

Азр

Рке

О1и

А1а

О1п

О1у

А1а

1100 1105 1110

- 55 032330

Ьеи

О1у 1115

5ег

Азр

О1п

5ег

5ег 1120

Ьеи

Азп

Рке

Ьуз

5ег 1125

А1а

Ьеи

Ьеи

О1п

Азр

Ьеи

Азп

О1п

5ег

Туг

Н1з

Туг

Ьеи

А1а

Туг

5ег

А1а

А1а

1130

1135

1140

ТЬг

Агд

А1а

5ег

Туг

О1у

Туг

Азр

Рке

А1а

Рке

Рке

Агд

Азп

А1а

1145

1150

1155

Ьеи

Уа1

Ьеи

Ьуз

Рго

5ег

Уа1

О1у

Уа1

5ег

Туг

Азп

Н1з

Ьеи

О1у

1160

1165

1170

5ег

ТЬг

Азп

Рке

Ьуз

5ег

5ег

5ег

Азп

О1п

Уа1

А1а

Ьеи

Ьуз

Азп

1175

1180

1185

О1у

5ег

5ег

5ег

О1п

Н1з

Ьеи

Рке

Азп

А1а

Азп

А1а

Азп

Уа1

О1и

1190

1195

1200

А1а

Агд

Туг

Туг

Туг

О1у

Азр

ТЬг

5ег

Туг

Рке

Туг

МеЕ

Азп

А1а

1205

1210

1215

О1у

Уа1

Ьеи

О1п

О1и

Рке

А1а

Агд

Рке

О1у

5ег

Азп

Азп

А1а

А1а

1220

1225

1230

5ег

Ьеи

Азп

ТЬг

Рке

Ьуз

Уа1

Азп

ТЬг

А1а

Агд

Азп

Рго

Ьеи

Азп

1235

1240

1245

ТЬг

Н1з

А1а

Агд

Уа1

МеЕ

МеЕ

О1у

О1у

О1и

Ьеи

О1п

Ьеи

А1а

Ьуз

1250

1255

1260

О1и

Уа1

Рке

Ьеи

Азп

Ьеи

О1у

Уа1

Уа1

Туг

Ьеи

Н1з

Азп

Ьеи

11е

1265

1270

1275

5ег

Азп

11е

О1у

Н1з

Рке

А1а

5ег

Азп

Ьеи

О1у

МеЕ

Агд

Туг

5ег

1280

1285

1290

Рке

<210>	10
<211>	3885
<212>	ДНК
<213>	Н. ру1ог1
<220>
<221>	т1зс_£еаЕиге
<223>	Н. ру1ог1 штамм 027

- 56 032330

<400> 10 абддааабас	аасааасаса	ссдсаааабд	аабсдсссбб	бадбббсбсб	сдббббадса	60
ддадсдббаа	ббадсдссаб	ассдсаадаа	адбсабдссд	ссбббббсас	дассдбдабс	120
аббссадсса	ббдббддддд	бабсдссаса	ддсассдсбд	баддаасддб	сбсадддсбб	180
сббадсбддд	ддсбсаааса	адссдаадаа	дсдаабаааа	асссддасаа	асссдабааа	240
дбббддсдса	ббсаадсадд	ааааддсббб	аабдааббсс	сбаасаадда	абасдасбба	300
басааабссс	ббббабссад	баадаббдаб	ддаддббддд	асбдддддаа	сдссдсбадд	360
саббаббддд	бсаааддсдд	дсаабддаас	аадсббдаад	бддабабдаа	адасдсбдба	420
дддасббаба	аасбабсадд	дсббадааас	бббасбддбд	дддабббада	бдбсаабабд	480
сааааадсса	сбббасдсбб	дддссааббс	аабддсаабб	сбббсасаад	сбабааддаб	540
дсддсбдабс	дсассасдад	ддбдаабббс	аасдсбаааа	абабсбсааб	бдабаабббб	600
дбадааабса	абаабсдбдб	дддббсбдда	дссдддадда	аадссадсбс	басддббббд	660
асбббдсаад	сббсадаадд	дабсасбадс	дабааааасд	сбдааабббс	бсбббабдаб	720
ддсдссасдс	бсаабббддс	ббсаадсадс	дббаааббаа	бдддбаабдб	дбддабдддс	780
сдбббдсааб	асдбдддадс	дбабббддсс	ссббсабаса	дсасдабааа	сасббсаааа	840
дбаасадддд	аадбдааббб	баассассбс	асбдббддсд	абааааасдс	сдсбсаадсд	900
ддсаббабсд	сбадсаасаа	дасбсабабб	ддсасасбдд	абббдбддса	аадсдссддд	960
ббааасабба	бсдсбссбсс	сдааддбддс	бабааддаба	аассбаабаа	бассссббсб	1020
сааадбддса	сбааааасда	сааааабдаа	адсдсбаааа	асдасаааса	адададсадб	1080
саааабааба	дбаасасбса	ддбсаббаас	ссасссааба	дсасдсаааа	аасадааабб	1140
саасссасдс	аадбсаббда	бдддссбббб	дсдддсддса	аадасасддб	бдбсаабабс	1200
аассдсабса	асасбаасдс	бдабддсасд	аббададбдд	дадддбббаа	адсббсбсбб	1260
ассассаабд	сддсбсаббб	дсабабсддс	аааддсддбд	бсаабсбдбс	саабсаадсд	1320
адсдддсдса	сссббббадб	ддаааабсба	ассдддааба	бсассдббда	бдддссббба	1380
ададбдааба	абсаадбддд	бддсбабдсб	ббддсаддаб	саадсдсдаа	ббббдааббб	1440
ааддсбддбд	бддабасбаа	ааасддсаса	дссасбббса	абаасдабаб	бадссбддда	1500
адабббдбда	абббаааддб	ддабдсбсаб	асадсбаабб	ббаааддбаб	бдабасдддб	1560
аабддбддбб	бсаасассбб	адаббббадб	ддбдббасад	асааадбсаа	бабсаасаад	1620
сбсабсасдд	сббссасбаа	бдбддссдбб	ааааасббса	асаббаабда	аббдаббдбб	1680
аааассаабд	ддабаадбдб	дддддаабас	асбсабббба	дсдаадабаб	аддсадбсаа	1740
бсдсдсабса	абассдбдсд	бббддааасб	ддсасбаддб	саабсббббс	бдддддбдбс	1800
ааабббаааа	дсддсдаааа	аббддббаба	дабдадбббб	асбабадссс	ббддааббаб	1860

- 57 032330

ЕЕЕдасдсЕа	ддааЕдЕЕаа	аааЕдЕЕдаа	аЕсассадаа	ааЕЕсдсЕЕс	ЕЕсаасссса	1920
даааасссЕЕ	ддддсасаЕс	аааасЕЕаЕд	ЕЕЕааЕааЕс	ЕаасссЕддд	ЕсааааЕдсд	1980
дЕсаЕддасЕ	аЕадЕсааЕЕ	ЕЕсаааЕЕЕа	ассаЕссаад	дддаЕЕЕЕаЕ	саасааЕсаа	2040
ддсасЕаЕса	асЕаЕсЕддЕ	ссдаддсддд	ааадЕддсаа	ссЕЕаадсдЕ	аддсааЕдса	2100
дсадсЕаЕда	ЕдЕЕЕааЕаа	ЕдаЕаЕадас	адсдсдассд	даЕЕЕЕасаа	ассдсЕсаЕс	2160
аадаЕЕааса	дЕдсЕсаада	ЕсЕсаЕЕааа	ааЕасададс	аЕдЕЕЕЕаЕЕ	дааадсдааа	2220
аЕсаЕЕддЕЕ	аЕддЕааЕдЕ	ЕЕсЕасаддЕ	ассааЕадса	ЕЕадЕааЕдЕ	ЕааЕсЕадаа	2280
дадсааЕЕса	аададсдссЕ	адсссЕЕЕаЕ	аасаасааЕа	ассдсаЕдда	ЕасЕЕдЕдЕд	2340
дЕдсдаааЕа	сЕдаЕдасаЕ	ЕааадсаЕдс	ддЕаЕддсЕа	ЕсддсааЕса	аадсаЕддЕд	2400
ааЕаасссЕд	асааЕЕасаа	дЕаЕсЕЕаЕс	ддЕааддсаЕ	ддаааааЕаЕ	аддсаЕсадЕ	2460
аааасддсЕа	асддсЕсЕаа	ааЕЕЕсддЕд	ЕаЕЕаЕЕЕад	дсааЕЕсЕас	дссЕасЕдад	2520
ааЕддЕддса	аЕассассаа	сЕЕасссасс	аасассасЕа	аЕааЕдсдсд	ЕЕсЕдсЕаас	2580
ЕасдсссЕсд	Едаадаасдс	ЕссЕЕЕсдсЕ	сасадЕдсса	сЕссЕааЕЕЕ	адЕсдсЕаЕс	2640
ааЕсадсаЕд	аЕЕЕЕддсас	ЕаЕЕдааадс	дЕдЕЕЕдааЕ	ЕддсЕаассд	сЕсЕааадаЕ	2700
аЕЕдасасдс	ЕЕЕаЕасЕса	ЕЕсаддсдЕд	сааддЕаддд	аЕсЕсЕЕаса	аассЕЕаЕЕд	2760
аЕЕдаЕадсс	аЕдаЕдсддд	ЕЕаЕдссада	саааЕдаЕЕд	аЕаасасаад	сассддЕдаа	2820
аЕсассааас	ааЕЕдааЕдс	ддссасЕдас	дсЕЕЕаааса	асаЕадссад	ЕЕЕададсаЕ	2880
аааассадсд	дсЕЕдсааас	ЕЕЕдадсЕЕд	адЕааЕдсда	ЕдаЕЕЕЕааа	ЕЕсЕсдЕЕЕа	2940
дЕсааЕсЕсЕ	ссаддаадса	сассаассаЕ	аЕЕдасЕсдЕ	ЕсдсЕсаасд	сЕЕасаадсЕ	3000
ЕЕааааддсс	ааадаЕЕсдс	ЕЕсЕЕЕадад	адсдсддсад	аадЕдЕЕдЕа	ЕсааЕЕЕдсс	3060
ссЕаааЕаЕд	ааааассЕас	сааЕдЕЕЕдд	дсЕаасдсЕа	ЕЕдддддадс	дадсЕЕдааЕ	3120
ааЕддсддса	асдсЕЕсаЕЕ	дЕаЕддсаса	адЕдссддЕд	ЕадасдсЕЕа	ссЕЕааЕддд	3180
даадЕддаад	ссаЕЕдЕддд	сдддЕЕЕдда	адсЕаЕддЕЕ	аЕадсЕсЕЕЕ	ЕадЕааЕсдЕ	3240
дсдаасЕсЕс	ЕЕаасЕсЕдд	ддсЕааЕаас	дсЕааЕЕЕЕд	дсдЕдЕаЕад	ссдЕаЕЕЕЕЕ	3300
дсЕаассадс	аЕдааЕЕЕда	ЕЕЕЕдаадсЕ	сааддддсдс	ЕадддадЕда	ЕсааЕсаадс	3360
ЕЕдааЕЕЕса	ааадЕдсЕсЕ	асЕдсаадаЕ	ЕЕдааЕсааа	дсЕаЕсаЕЕа	ЕЕЕадссЕаЕ	3420
адсдсЕдсаа	саададсдад	сЕаЕддЕЕаЕ	дасЕЕЕдсдЕ	ЕЕЕЕсаддаа	сдсЕЕЕадЕд	3480
ЕЕаааассаа	дсдЕдддсдЕ	дадсЕаЕаас	саЕЕЕаддЕЕ	саассаасЕЕ	Еаааадсадс	3540
адсааЕсаад	ЕддсЕЕЕдаа	аааЕддсЕсЕ	адсадЕсадс	аЕсЕаЕЕсаа	сдсЕаасдсЕ	3600
ааЕдЕддаад	сдсдсЕаЕЕа	ЕЕаЕддддас	асЕЕсаЕасЕ	ЕсЕаЕаЕдаа	сдсЕддадЕЕ	3660
ЕЕасаададЕ	ЕсдсЕсдсЕЕ	ЕддаЕсЕааЕ	аасдссдсдЕ	сЕЕЕааасас	сЕЕЕааадЕд	3720

- 58 032330

ааЕассдсЕс	дсаасссЕЕЕ	аааЕасссаЕ	дссададЕда	ЕдаЕдддЕдд	ддааЕЕдсаа	3780
ЕЕадсЕааад	аадЕдЕЕЕЕЕ	дааЕЕЕдддс	дЕЕдЕЕЕаЕЕ	ЕдсасааЕЕЕ	даЕЕЕссааЕ	3840
аЕаддссаЕЕ	ЕсдсЕЕссаа	ЕЕЕаддааЕд	аддЕаЕадЕЕ	ЕсЕаа		3885

<210>	11
<211>	546
<212>	РЕТ
<213>	Н. ру1ог1

<220>
<221>	М15С_РЕАТиКЕ
<223>	Н. ру1ог1 штамм 027
<400>	11

МеЕ 1

А1а

Ьуз

О1и

11е 5

Ьуз

РЬе

Еег Азр

Еег А1а Агд 10

Азп

Ьеи

Ьеи 15

РЬе

О1и

О1у

Уа1

Агд

О1п

Ьеи

Н1з

Азр

А1а

Уа1

Ьуз

Уа1

ТЬг

МеЕ

О1у

Рго

20

25

30

Агд

О1у

Агд

Азп

Уа1

Ьеи

11е

О1п

Ьуз

Еег

Туг

О1у

А1а

Рго

Еег

11е

35

40

45

ТЬг

Ьуз

Азр

О1у

Уа1

Еег

Уа1

А1а

Ьуз

О1и

11е

О1и

Ьеи

Еег

Суз

Рго

50

55

60

Уа1

А1а

Азп

МеЕ

О1у

А1а

О1п

Ьеи

Уа1

Ьуз

О1и

Уа1

А1а

Еег

Ьуз

ТЬг

65

70

75

80

А1а

Азр

А1а

А1а

О1у

Азр

О1у

ТЬг

ТЬг

ТЬг

А1а

ТЬг

Уа1

Ьеи

А1а

Туг

85

90

95

Еег

11е

РЬе

Ьуз

О1и

О1у

Ьеи

Агд

Азп

11е

ТЬг

А1а

О1у

А1а

Азп

Рго

100

105

110

11е

О1и

Уа1

Ьуз

Агд

О1у

МеЕ

Азр

Ьуз

А1а

А1а

О1и

А1а

11е

11е

Азп

115

120

125

О1и

Ьеи

Ьуз

Ьуз

А1а

Еег

Ьуз

Ьуз

Уа1

О1у

О1у

Ьуз

О1и

О1и

11е

ТЬг

130

135

140

О1п

Уа1

А1а

ТЬг

11е

Еег

А1а

Азп

Еег

Азр

Н1з

Азп

11е

О1у

Ьуз

Ьеи

145

150

155

160

11е

А1а

Азр

А1а

МеЕ

О1и

Ьуз

Уа1

О1у

Ьуз

Азр

О1у

Уа1

11е

ТЬг

Уа1

165

170

175

- 59 032330

О1и О1и А1а Ьуз

О1у

11е

О1и Азр

О1и 185

Ьеи Азр

Уа1

Уа1

О1и 190

О1у

МеЬ

180

О1п

РАе

Азр

Агд

О1у

Туг

Ьеи

5ег

Рго

Туг

РАе

Уа1

ТАг

Азп

А1а

О1и

195

200

205

Ьуз

МеЬ

ТАг

А1а

О1п

Ьеи

Азр

Азп

А1а

Туг

11е

Ьеи

Ьеи

ТАг

Азр

Ьуз

210

215

220

Ьуз

11е

5ег

5ег

МеЬ

Ьуз

Азр

11е

Ьеи

Рго

Ьеи

Ьеи

О1и

Ьуз

ТАг

МеЬ

225

230

235

240

Ьуз

О1и

О1у

Ьуз

Рго

Ьеи

Ьеи

11е

11е

А1а

О1и

Азр

11е

О1и

О1у

О1и

245

250

255

А1а

Ьеи

ТАг

ТАг

Ьеи

Уа1

Уа1

Азп

Ьуз

Ьеи

Агд

О1у

Уа1

Ьеи

Азп

11е

260

265

270

А1а

А1а

Уа1

Ьуз

А1а

Рго

О1у

РАе

О1у

Азр

Агд

Агд

Ьуз

О1и

МеЬ

Ьеи

275

280

285

Ьуз

Азр

11е

А1а

Уа1

Ьеи

ТАг

О1у

О1у

О1п

Уа1

11е

5ег

О1и

О1и

Ьеи

290

295

300

О1у

Ьеи

5ег

Ьеи

О1и

Азп

А1а

О1и

Уа1

О1и

РАе

Ьеи

О1у

Ьуз

А1а

О1у

305

310

315

320

Агд

11е

Уа1

11е

Азр

Ьуз

Азр

Азп

ТАг

ТАг

11е

Уа1

Азр

О1у

Ьуз

О1у

325

330

335

Н1з

5ег

Азр

Азр

Уа1

Ьуз

Азр

Агд

Уа1

А1а

О1п

11е

Ьуз

ТАг

О1п

11е

340

345

350

А1а

5ег

ТАг

ТАг

5ег

Азр

Туг

Азр

Ьуз

О1и

Ьуз

Ьеи

О1п

О1и

Агд

Ьеи

355

360

365

А1а

Ьуз

Ьеи

5ег

О1у

О1у

Уа1

А1а

Уа1

11е

Ьуз

Уа1

О1у

А1а

А1а

5ег

370

375

380

О1и

Уа1

О1и

МеЬ

Ьуз

О1и

Ьуз

Ьуз

Азр

Агд

Уа1

Азр

Азр

А1а

Ьеи

5ег

385

390

395

400

А1а

ТАг

Ьуз

А1а

А1а

Уа1

О1и

О1и

О1у

11е

Уа1

11е

О1у

О1у

О1у

А1а

405

410

415

А1а

Ьеи

11е

Агд

А1а

А1а

О1п

Ьуз

Уа1

Н1з

Ьеи

Азп

Ьеи

Н1з

Азр

Азр

420

425

430

- 60 032330

О1и

Ьуз

Уа1 435

О1у

Туг

О1и

11е

11е 440

Меб

Агд

А1а

11е

Ьуз 445

А1а

Рго

Ьеи

А1а

О1п

11е

А1а

11е

Азп

А1а

О1у

Туг

Азр

О1у

О1у

Уа1

Уа1

Уа1

Азп

450

455

460

О1и

Уа1

О1и

Ьуз

Н1з

О1и

О1у

Н1з

Рке

О1у

Рке

Азп

А1а

Зег

Азп

О1у

465

470

475

480

Ьуз

Туг

Уа1

Азр

Меб

Рке

Ьуз

О1и

О1у

11е

11е

Азр

Рго

Ьеи

Ьуз

Уа1

485

490

495

О1и

Агд

11е

А1а

Ьеи

О1п

Азп

А1а

Уа1

Зег

Уа1

Зег

Зег

Ьеи

Ьеи

Ьеи

500

505

510

ТЬг

ТЬг

О1и

А1а

ТЬг

Уа1

Н1з

О1и

11е

Ьуз

О1и

О1и

Ьуз

А1а

А1а

Рго

515

520

525

А1а

Меб

Рго

Азр

Меб

О1у

О1у

Меб

О1у

О1у

Меб

О1у

О1у

Меб

О1у

О1у

530

535

540

Меб Меб

545

<210> 12 <211> 1641 <212> ДНК <213> Н. ру1ог1
<220> <221> т1зс_£еабиге <223> Н. ру1ог1 штамм 027
<400> 12 абддсаааад	ааабсааабб	ббсадабадб	дсаадааасс	ббббабббда	аддсдбдада	60
саасбссабд	абдсбдбсаа	адбаассабд	дддссаадад	дсаддаабдб	дббдаббсаа	120
аааадсбабд	дсдсбссаад	сабсассааа	дабддсдбда	дсдбддсбаа	ададаббдаа	180
ббаадббдсс	сддбддсбаа	сабдддсдсб	саасбсдбба	аададдбадс	дадсаааасс	240
дсбдабдсбд	ссддсдабдд	сасдассаса	дсдассдбдс	бддсббабад	сабббббааа	300
дааддбббда	ддаабабсас	ддсбддддсб	аасссбаббд	аадбдааасд	аддсабддаб	360
ааадссдсбд	аадсдабсаб	саабдадсбб	аааааадсда	дсаааааадб	аддсддбааа	420
даадааабса	сссаадбадс	дассабббсб	дссаасбссд	абсасаабаб	сдддааасбс	480
абсдсбдасд	сбабддаааа	адбдддбааа	дабддсдбда	бсасбдббда	ададдсбаад	540
ддсаббдаад	асдааббада	бдбсдбадаа	ддсабдсааб	ббдабададд	сбабсбсбсс	600

- 61 032330

ссЕЕаЕЕЕЕд	Еаасдаасдс	ЕдадааааЕд	ассдсЕсааЕ	ЕддаЕаасдс	ЕЕасаЕссЕЕ	660
ЕЕаасддаЕа	ааааааЕсЕс	ЕадсаЕдааа	дасаЕссЕсс	сдсЕаЕЕдда	ааааассаЕд	720
ааададддса	аассдсЕЕЕЕ	ааЕсаЕсдсЕ	даадасаЕЕд	адддсдаадс	ЕЕЕаасдасЕ	780
сЕадЕддЕда	аЕаааЕЕаад	аддсдЕдЕЕд	ааЕаЕсдсад	сддЕЕааадс	ЕссаддсЕЕЕ	840
ддддасадда	даааадаааЕ	дсЕсааадас	аЕсдсЕдЕЕЕ	Еаассддсдд	ЕсаадЕсаЕЕ	900
адсдаадааЕ	ЕдддсЕЕдад	ЕсЕадаааас	дсЕдаадЕдд	адЕЕЕЕЕадд	сааадссдда	960
аддаЕЕдЕда	ЕЕдасааада	саасассасд	аЕсдЕадаЕд	дсаааддсса	ЕадсдаЕдаЕ	1020
дЕЕааадаса	дадЕсдсдса	ааЕсаааасс	саааЕЕдсаа	дсасдасаад	сдаЕЕаЕдас	1080
ааадаааааЕ	Едсаадааад	дЕЕддссааа	сЕсЕсЕддсд	дЕдЕддсЕдЕ	даЕЕааадЕд	1140
ддсдсЕдсда	дЕдаадЕдда	ааЕдааадад	аааааадасс	дддЕддаЕда	сдсдЕЕдадс	1200
дсдасЕааад	сддсддЕЕда	адааддсаЕЕ	дЕдаЕЕддсд	дсддЕдсддс	ЕсЕЕаЕЕсдс	1260
дсддсЕсааа	аадЕдсаЕЕЕ	дааЕЕЕасас	даЕдаЕдааа	аадЕдддсЕа	ЕдаааЕсаЕс	1320
аЕдсдсдсса	ЕЕааадсссс	аЕЕадсЕсаа	аЕсдсЕаЕса	аЕдссддЕЕа	ЕдаЕддсддЕ	1380
дЕддЕсдЕда	аЕдаадЕада	аааасасдаа	дддсаЕЕЕЕд	дЕЕЕЕаасдс	ЕадсааЕддс	1440
аадЕаЕдЕдд	асаЕдЕЕЕаа	адааддсаЕЕ	аЕЕдассссЕ	ЕаааадЕада	ааддаЕсдсЕ	1500
ЕЕдсааааЕд	сддЕЕЕсддЕ	ЕЕсаадссЕд	сЕЕЕЕаасса	садаадссас	сдЕдсаЕдаа	1560
аЕсааадаад	ааааадсддс	сссддсааЕд	ссЕдаЕаЕдд	дЕддсаЕддд	сддЕаЕддда	1620
ддсаЕдддсд	дсаЕдаЕдЕа	а				1641

<210> 13 <211> 265 <212> РЕТ <213> Н. ру1ог1 <220>

<221> М15С_ЕЕАТиЕЕ <223> Н. ру1ог1 26695 <400> 13

МеЕ 1

11е

Ьеи

Агд

А1а 5

Еег

Уа1

Ьеи

Еег

А1а 10

Ьеи

Ьеи

Ьеи

Уа1

О1у Ьеи 15

О1у

А1а

А1а

Рго

Ьуз

Н1з

Еег

Уа1

Еег

А1а

Азп

Азр

Ьуз

Агд

МеЕ

О1п

20

25

30

Азр

Азп

Ьеи

Уа1

Еег

Уа1

11е

О1и

Ьуз

О1п

ТЪг

Азп

Ьуз

Ьуз

Уа1

Агд

35

40

45

11е

Ьеи

О1и

11е

Ьуз

Рго

Ьеи

Ьуз

Еег

Еег

О1п

Азр

Ьеи

Ьуз

МеЕ

Уа1

- 62 032330

Уа1 65

11е

О1и

Азр

Рго

Азр 70

ТЬг

Ьуз

Туг

Азп

11е 75

Рго

Ьеи

Уа1

Уа1

5ег 80

Ьуз

Азр

О1у

Азп

Ьеи

11е

11е

О1у

Ьеи

5ег

Азп

11е

Рке

Рке

5ег

Азп

85

90

95

Ьуз

5ег

Азр

Азр

Уа1

О1п

Ьеи

Уа1

А1а

О1и

ТЬг

Азп

О1п

Ьуз

Уа1

О1п

100

105

110

А1а

Ьеи

Азп

А1а

ТЬг

О1п

О1п

Азп

5ег

А1а

Ьуз

Ьеи

Азп

А1а

11е

Рке

115

120

125

Азп

О1и

11е

Рго

А1а

Азр

Туг

А1а

11е

О1и

Ьеи

Рго

5ег

ТЬг

Азп

А1а

130

135

140

А1а

Азп

Ьуз

Азр

Ьуз

11е

Ьеи

Туг

11е

Уа1

5ег

Азр

Рго

МеЕ

Суз

Рго

145

150

155

160

Н1з

Суз

О1п

Ьуз

О1и

Ьеи

ТЬг

Ьуз

Ьеи

Агд

Азр

Н1з

Ьеи

Ьуз

О1и

Азп

165

170

175

ТЬг

Уа1

Агд

МеЕ

Уа1

Уа1

Уа1

О1у

Тгр

Ьеи

О1у

Уа1

Азп

5ег

А1а

Ьуз

180

185

190

Ьуз

А1а

А1а

Ьеи

11е

О1п

О1и

О1и

МеЕ

А1а

Ьуз

А1а

Агд

А1а

Агд

О1у

195

200

205

А1а

5ег

Уа1

О1и

Азр

Ьуз

11е

5ег

11е

Ьеи

О1и

Ьуз

11е

Туг

5ег

ТЬг

210

215

220

О1п

Туг

Азр

11е

Азп

А1а

О1п

Ьуз

О1и

Рго

О1и

Азр

Ьеи

Агд

ТЬг

Ьуз

225

230

235

240

Уа1

О1и

Азп

ТЬг

ТЬг

Ьуз

Ьуз

11е

Рке

О1и

5ег

О1у

Уа1

11е

Ьуз

О1у

245

250

255

Уа1

Рго

Рке

Ьеи

Туг

Н1з

Туг

Ьуз

А1а

260

265

<210>	14
<211>	798
<212>	ДНК
<213>	Н. ру1ог1
<220>
<221>	т1зс_£еаЕиге

- 63 032330 <223> Н. ру1ог1 26695

<400> 14 аЁдаЬаЁЬаа	дадсдадЬдЬ	дЬЬдадсдсд	ЁЬасЁЁсЁЬд	ЬаддсЬЬадд	ддсадссссЬ	60
ааасаЬЬсад	ЁЁЬсадсЬаа	Ьдасааасдд	аЬдсаддаЬа	аЁЁЬадЬдад	сдЬдаЬЬдаа	120
ааасадасса	аЬаааааддЬ	дсдЁаЬЁЁЬа	даааЬсааас	сЁЁЬааааЬс	ЬадссаддаЬ	180
ЬЬаааааЬдд	ЁсдЬЁаЁЬда	адаЬссддас	асЬаааЬаса	аЬаЬсссдсЬ	ЬдЬддЬдадЬ	240
ааддаЬддЬа	аЁЬЁааЁсаЬ	адддсЬЬадс	аасаЁаЬЁсЬ	ЬЬадсааЬаа	аадсдаЬдаЬ	300
дЬдсааЬЬад	ЬЬдсадааас	сааЬсааааа	дЁЬсаадсЬс	ЬЬаасдссас	ссаасааааЬ	360
адсдсдаааЬ	ЬдаасдсЬаЬ	ЁЬЁЁааЬдаа	аЬассддсЬд	аЁЬаЁдсдаЬ	ададЬЬдссс	420
ЬсЬасЬаасд	сЬдсаааЬаа	ддаЬааааЬс	сЁЬЁаЁаЁЬд	ЁсЁсЬдаЬсс	саЬдЬдссса	480
саЬЬдссааа	аададсЬсас	ЬааасЬЬадд	даЁсаЬЁЬаа	аадаааасас	сдЬдадааЬд	540
дЬсдЬддЬдд	ддЬддсььдд	ддЬсааЬЬса	дсЬаааааад	сддсЁЁЬааЬ	ссаадаадаа	600
аЬддсдааад	сЬадддсЬад	дддадсдадс	дЬддаадаЬа	адаЁсЬсЁаЬ	ЬсЬЬдаааад	660
аЬЁЁаЁЬсса	сссааЬасда	ЁаЁЬаасдсЬ	сааааададс	сЁдаадаЬЁЬ	асдсасЬааа	720
дЬддааааЬа	ссасЬааааа	даЁЬЁЁЬдаа	ЬсЬддсдЬда	ЁЁаадддЬдЬ	дссЁЁЁсЁЬа	780
ЁассаЁЬаЬа	аддсаЬда					798

<210> 15 <211> 325 <212> РЕТ <213> Н. ру1ог1 <220>

<221> М15С_РЕАТиКЕ <223> Н. ру1ог1 Э99 <400> 15

МеЬ 1

Рго

Ткг

11е

Азр 5

Рке

Ткг

Рке

Суз

О1и 10

11е

Азп

Рго

Ьуз

Ьуз 15

О1у

Рке

О1у

О1у

А1а

Азп

О1у

Азп

Ьуз

11е

Еег

Ьеи

Рке

Туг

Азп

Азп

О1и

20

25

30

Ьеи

Туг

МеЬ

Уа1

Ьуз

Рке

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Еег

Ткг

Н1з

Ьуз

О1и

МеЬ

35

40

45

Еег

Туг

Ткг

Азп

О1у

Суз

Рке

Еег

О1и

Туг

Уа1

А1а

Суз

Н1з

11е

Уа1

50

55

60

Азп

Еег

Ьеи

О1у

Ьеи

Ьуз

Уа1

О1п

О1и

Ткг

Ьеи

Ьеи

О1у

Ткг

Туг

Ьуз

65

70

75

80

- 64 032330

Азп

Ьуз

11е

Уа1

Уа1 85

А1а

Суз

Ьуз

Азр

Рке 90

ТЬг

ТЬг

Н1з

О1п

Туг 95

О1и

Ьеи

Уа1

Азр

Рке

Ьеи

5ег

Ьеи

Ьуз

Азп

ТЬг

МеЬ

11е

О1и

Ьеи

О1и

Ьуз

100

105

110

5ег

О1у

Ьуз

Азр

ТЬг

Азп

Ьеи

Азп

Азр

Уа1

Ьеи

Туг

А1а

11е

Азр

Азп

115

120

125

О1п

Н1з

Рке

11е

О1и

Рго

Ьуз

Уа1

Ьеи

Ьуз

Суз

Рке

Рке

Тгр

Азр

МеЬ

130

135

140

Рке

Уа1

А1а

Азр

ТЬг

Ьеи

Ьеи

О1у

Азп

Рке

Азр

Агд

Н1з

Азп

О1у

Азп

145

150

155

160

Тгр

О1у

Рке

Ьеи

Агд

А1а

5ег

Азп

5ег

Ьуз

О1и

Туг

О1п

11е

А1а

Рго

165

170

175

11е

Рке

Азр

Суз

О1у

5ег

Суз

Ьеи

Туг

Рго

О1п

А1а

Азр

Азр

Уа1

Уа1

180

185

190

Суз

О1п

Ьуз

Уа1

Ьеи

5ег

Азп

11е

Азр

О1и

Ьеи

Азп

А1а

Агд

11е

Туг

195

200

205

Азп

Рке

Рго

О1п

5ег

11е

Ьеи

Ьуз

Азр

Азр

Азп

Азр

Ьуз

Ьуз

11е

Азп

210

215

220

Туг

Туг

Азр

Рке

Ьеи

ТЬг

О1п

ТЬг

Азп

Азп

Ьуз

Азр

Суз

Ьеи

Азр

А1а

225

230

235

240

Ьеи

Ьеи

Агд

11е

Туг

Рго

Агд

11е

Азр

МеЬ

Азп

Ьуз

11е

Н1з

5ег

11е

245

250

255

11е

Азр

Азп

ТЬг

Рго

Рке

МеЬ

5ег

О1и

11е

Н1з

Ьуз

О1и

Рке

Ьеи

Н1з

260

265

270

ТЬг

МеЬ

Ьеи

Азр

О1и

Агд

Ьуз

5ег

Ьуз

11е

11е

Азр

Уа1

А1а

Н1з

ТЬг

275

280

285

Агд

А1а

11е

О1и

Ьеи

5ег

Ьеи

О1п

Н1з

Ьуз

О1п

А1а

Н1з

5ег

Азп

Рго

290

295

300

Туг

Азр

Азп

А1а

Азр

Азр

Ьеи

Азр

Азп

5ег

Азп

О1и

Туг

ТЬг

Рго

ТЬг

305

310

315

320

Рго

Ьуз

Агд

Агд

Агд

325

- 65 032330

<210>	16
<211>	978
<212>	ДНК
<213>	Н. ру1ог1

<220>
<221> т1зс_£еаЕиге <223> Н. ру1ог1 Д99
<400> 16 аЕдссаасса	ЕЕдаЕЕЕЕас	ЕЕЕЕЕдЕдад	аЕЕаасссЕа	аааааддЕЕЕ	Едддддадса	60
ааЕддаааЕа	аааЕЕадсЕЕ	аЕЕЕЕаЕааЕ	ааЕдаасЕсЕ	асаЕддЕсаа	аЕЕссссссЕ	120
аадссЕЕсЕа	сасаЕааада	ааЕдЕссЕаЕ	ассааЕддЕЕ	дЕЕЕЕадЕда	аЕаЕдЕадса	180
ЕдЕсаЕаЕад	ЕсааЕадсЕЕ	аддсЕЕааад	дЕЕсаадааа	саЕЕдсЕадд	сасЕЕаЕааа	240
ааЕааааЕсд	ЕддЕЕдсЕЕд	ЕааадаЕЕЕЕ	ассасссаЕс	ааЕасдадсЕ	ЕдЕадаЕЕЕЕ	300
сЕаадЕсЕаа	ааааЕасЕаЕ	даЕЕдааЕЕа	даааааЕсад	дсааадасас	ЕааЕЕЕдааЕ	360
даЕдЕдсЕЕЕ	аЕдссаЕада	ЕаассадсаЕ	ЕЕЕаЕЕдадс	саааадЕЕЕЕ	ааааЕдЕЕЕс	420
ЕЕЕЕдддаЕа	ЕдЕЕЕдЕадс	адаЕасаЕЕд	сЕаддЕааЕЕ	ЕЕдаЕаддса	ЕааЕддЕааЕ	480
ЕдддддЕЕсЕ	ЕаададссЕс	аааЕЕсаааа	дааЕаЕсааа	ЕадсЕсссаЕ	ЕЕЕЕдаЕЕдЕ	540
ддсЕсЕЕдЕс	ЕаЕассссса	адсЕдаЕдаЕ	дЕддЕаЕдсс	ааааадЕЕЕЕ	аадЕааЕаЕЕ	600
даЕдаасЕса	аЕдсааддаЕ	ЕЕаЕааЕЕЕс	ссссааЕсЕа	ЕсЕЕаааада	ЕдасаасдаЕ	660
аааааааЕЕа	асЕасЕаЕда	ЕЕЕсЕЕаасЕ	сааассааЕа	аЕааадаЕЕд	ссЕЕдаЕдса	720
сЕасЕЕадда	ЕаЕасссасд	саЕадаЕаЕд	ааЕааааЕсс	аЕЕсааЕЕаЕ	ЕдаЕаасаса	780
сссЕЕЕаЕда	дсдаааЕаса	сааадааЕЕЕ	ЕЕасаЕасаа	ЕдсЕЕдаЕда	аадааааЕса	840
аадаЕЕаЕад	аЕдЕадсаса	сасЕададсЕ	аЕЕдадЕЕаЕ	ссЕЕасааса	сааасаадсЕ	900
сасЕсааасс	сЕЕаЕдасаа	сдсадаЕдаЕ	ЕЕадасааЕЕ	ссааЕдааЕа	сасссссаса	960

ссЕаадсдЕа дасдаЕаа 978

<210> <211> <212> <213>

17 476 РЕТ Н. ру1ог1

<220> <221> <223>	М15С_РЕАТиЕЕ Н. ру1ог1 штамм 027
<400>	17

МеЕ МеЕ Ьуз Ьуз ТЪг Ьеи Рке 11е Оег Ьеи А1а Ьеи А1а Ьеи Оег Ьеи

5 10 15

- 66 032330

Азп

А1а

О1у Азп 20

11е

О1п

11е

О1п

Азп 25

МеЬ

Рго

Ьуз

Уа1

Ьуз 30

О1и

Агд

Уа1

Бег

Уа1

Рго

Бег

Ьуз

Азр

Азр

ТЪг

11е

Туг

Бег

Туг

Н1з

Азр

Бег

35

40

45

11е

Ьуз

Азр

Бег

11е

Ьуз

А1а

Уа1

Уа1

Азп

11е

Бег

ТЪг

О1и

Ьуз

Ьуз

50

55

60

11е

Ьуз

Азп

Азп

РЪе

11е

О1у

О1у

О1у

Уа1

РЪе

Азп

Азр

Рго

РЪе

РЪе

65

70

75

80

О1п

О1п

РЪе

РЪе

О1у

Азр

Ьеи

О1у

О1у

МеЬ

11е

Рго

Ьуз

О1и

Агд

МеЬ

85

90

95

О1и

Агд

А1а

Ьеи

О1у

Бег

О1у

Уа1

11е

11е

Бег

Ьуз

Азр

О1у

Туг

11е

100

105

110

Уа1

ТЪг

Азп

Азп

Н1з

Уа1

11е

Азр

О1у

А1а

Азр

Ьуз

11е

Ьуз

Уа1

ТЪг

115

120

125

11е

Рго

О1у

Бег

Азп

Ьуз

О1и

Туг

Бег

А1а

ТЪг

Ьеи

Уа1

О1у

ТЪг

Азр

130

135

140

Бег

О1и

Бег

Азр

Ьеи

А1а

Уа1

11е

Агд

11е

ТЪг

Ьуз

Азр

Азп

Ьеи

Рго

145

150

155

160

ТЪг

11е

Ьуз

РЪе

Бег

Азр

Бег

Азп

Азр

11е

Бег

Уа1

О1у

Азр

Ьеи

Уа1

165

170

175

РЪе

А1а

11е

О1у

Азп

Рго

РЪе

О1у

Уа1

О1у

О1и

Бег

Уа1

ТЪг

О1п

О1у

180

185

190

11е

Уа1

Бег

А1а

Ьеи

Азп

Ьуз

Бег

О1у

11е

О1у

11е

Азп

Бег

Туг

О1и

195

200

205

Азп

РЪе

11е

О1п

ТЪг

Азр

А1а

Бег

11е

Азп

Рго

О1у

Азп

Бег

О1у

О1у

210

215

220

А1а

Ьеи

11е

Азр

Бег

Агд

О1у

О1у

Ьеи

Уа1

О1у

11е

Азп

ТЪг

А1а

11е

225

230

235

240

11е

Бег

Ьуз

ТЪг

О1у

О1у

Азп

Н1з

О1у

11е

О1у

РЪе

А1а

11е

Рго

Бег

245

250

255

Азп

МеЬ

Уа1

Ьуз

Азр

11е

Уа1

ТЪг

О1п

Ьеи

11е

Ьуз

ТЪг

О1у

Ьуз

11е

260

265

270

- 67 032330

О1и Агд

О1у 275

Туг

Ьеи О1у

Уа1

О1у Ьеи 280

О1п

Азр

Ьеи

5ег 285

О1у

Азр

Ьеи

О1п

Азп

5ег

Туг

Азр

Азп

Ьуз

О1и

О1у

А1а

Уа1

Уа1

11е

5ег

Уа1

О1и

290

295

300

Ьуз

Азр

5ег

Рго

А1а

Ьуз

Ьуз

Уа1

О1у

11е

Ьеи

Уа1

Тгр

Азр

Ьеи

11е

305

310

315

320

ТЪг

О1и

Уа1

Азп

О1у

Ьуз

Ьуз

Уа1

Ьуз

Азп

ТЪг

Азп

О1и

Ьеи

Агд

Азп

325

330

335

Ьеи

11е

О1у

5ег

МеЬ

Ьеи

Рго

Азп

О1п

Агд

Уа1

ТЪг

Ьеи

Ьуз

Уа1

11е

340

345

350

Агд

Азр

Ьуз

Ьуз

О1и

Агд

ТЪг

РЪе

ТЪг

Ьеи

ТЪг

Ьеи

А1а

О1и

Агд

Ьуз

355

360

365

Азп

Рго

Азп

Ьуз

Ьуз

О1и

ТЪг

11е

5ег

А1а

О1п

Азп

О1у

А1а

О1п

О1у

370

375

380

О1п

Ьеи

Азп

О1у

Ьеи

О1п

Уа1

О1и

Азр

Ьеи

ТЪг

О1п

Ьуз

ТЪг

Ьуз

Агд

385

390

395

400

5ег

МеЬ

Агд

Ьеи

5ег

Азр

Азр

Уа1

О1п

О1у

Уа1

Ьеи

Уа1

5ег

О1п

Уа1

405

410

415

Азп

О1и

Азп

5ег

Рго

А1а

О1и

О1п

А1а

О1у

РЪе

Агд

О1п

О1у

Азп

11е

420

425

430

11е

ТЪг

Ьуз

11е

О1и

О1и

11е

О1и

Уа1

Ьуз

5ег

Уа1

А1а

Азр

РЪе

Азп

435

440

445

Н1з

А1а

Ьеи

О1и

Ьуз

Туг

Ьуз

О1у

Ьуз

Рго

Ьуз

Агд

РЪе

Ьеи

Уа1

Ьеи

450

455

460

Азр

Ьеи

Азп

О1п

О1у

Туг

Агд

11е

11е

Ьеи

Уа1

Ьуз

465

470

475

<210>	18
<211>	1431
<212>	ДНК
<213>	Н. ру1ог1
<220>
<221>	т1зс_£еаЬиге
<223>	Н. ру1ог1 027

- 68 032330

<400> 18 аЕдаЕдаааа	ааасссЕЕЕЕ	ЕаЕсЕсЕЕЕд	дсЕЕЕадсдЕ	ЕаадсЕЕдаа	ЕдсдддсааЕ	60
аЕссаааЕсс	аааасаЕдсс	сааадЕЕааа	дадсдадЕда	дЕдЕссссЕс	ЕааадасдаЕ	120
асдаЕсЕаЕЕ	сЕЕассасда	ЕЕсЕаЕЕаад	даЕЕсдаЕЕа	аадсддЕддЕ	дааЕаЕсЕсЕ	180
асЕдаааада	адаЕЕааааа	сааЕЕЕЕаЕа	ддЕддсддЕд	ЕдЕЕЕааЕда	ссссЕЕЕЕЕс	240
саасааЕЕЕЕ	ЕЕддддаЕЕЕ	дддсддсаЕд	аЕсссЕааад	ааадааЕдда	аадддсЕЕЕа	300
ддсадсддсд	ЕааЕсаЕЕЕс	ЕааадаЕддс	ЕаЕаЕЕдЕаа	сЕаасаасса	ЕдЕдаЕЕдаЕ	360
ддЕдсддаЕа	адаЕЕааадЕ	ЕассаЕЕсса	дддадсааЕа	аададЕаЕЕс	сдсЕасЕЕЕа	420
дЕаддсассд	аЕЕсЕдааад	сдаЕЕЕадсс	дЕдаЕЕсдса	ЕсасЕааада	сааЕсЕдссс	480
ассаЕсаааЕ	ЕсЕсЕдаЕЕс	ЕаасдаЕаЕЕ	ЕсадЕдддсд	аЕЕЕддЕЕЕЕ	ЕдсдаЕЕддЕ	540
аасссЕЕЕЕд	дсдЕдддЕда	аадсдЕЕасЕ	сааддсаЕЕд	ЕЕЕсадсдсЕ	сааЕаааадс	600
дддаЕЕддда	ЕсаасадсЕа	ЕдааааЕЕЕс	аЕЕсааасад	асдсЕЕссаЕ	сааЕссЕдда	660
ааЕЕссддсд	дсдсЕЕЕааЕ	ЕдаЕадссдЕ	ддадддЕЕад	ЕддддаЕсаа	ЕассдссаЕЕ	720
аЕсЕсЕаааа	ссдддддсаа	ссасддсаЕЕ	ддсЕЕЕдсса	ЕсссЕЕсЕаа	саЕддЕЕааа	780
даЕаЕЕдЕаа	сссаасЕсаЕ	саааассддЕ	аадаЕЕдааа	даддЕЕасЕЕ	дддсдЕдддс	840
ЕЕдсаадаЕЕ	Едадсддсда	ЕЕЕдсааааЕ	ЕсЕЕаЕдаса	аЕааадаадд	ддсддЕадЕс	900
аЕЕадсдЕад	ааааадасЕс	ЕссддсЕааа	ааадЕаддда	ЕЕЕЕддЕдЕд	ддаЕЕЕдаЕс	960
асЕдаадЕса	аЕдддааааа	ддЕЕааааас	асдааЕдадЕ	ЕаадаааЕсЕ	ааЕсддсЕсс	1020
аЕдсЕассса	аЕсааададЕ	аассЕЕаааа	дЕсаЕЕадад	асаааааада	асдсасЕЕЕс	1080
асссЕсасЕс	ЕЕдсЕдааад	дааааасссЕ	аасаааааад	ааассаЕЕЕс	ЕдсЕсаааас	1140
ддсдсдсаад	дссааЕЕдаа	сдддсЕЕсаа	дЕадаадаЕЕ	Еаасссаааа	аассаааадд	1200
ЕсЕаЕдсдЕЕ	ЕдадсдаЕда	ЕдЕЕсааддд	дЕЕЕЕадЕсЕ	сЕсаадЕдаа	ЕдааааЕЕсс	1260
ссадсададс	аадсЕддсЕЕ	Еаддсааддс	ааЕаЕсаЕса	саааааЕЕда	ададаЕЕдаа	1320
дЕдаааадсд	ЕЕдсддаЕЕЕ	ЕаассаЕдсЕ	ЕЕадаааадЕ	аЕаааддсаа	асссааасда	1380
ЕЕсЕЕадЕЕЕ	ЕадаЕЕЕдаа	ЕсааддЕЕаЕ	аддаЕсаЕЕЕ	ЕддЕдаааЕд	а	1431

<210> <211> <212> <213>	19 22 ДНК Искусственная
<220> <223>	Синтетический
<400>	19
саЕаЕддсаа ЕаддЕЕсаЕЕ аа

- 69 032330 <210> 20 <211> 24 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Синтетический <400> 20 сЕсдадаЕЕс ЕЕЕЕЕадссд сЕдс <210> 21 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер <400> 21 адсЕсаЕЕад ддсЕЕддсад <210> 22 <211> 18 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер <400> 22 дсЕсдсдсЕс аасдсаЕс <210> 23 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер <400> 23 аЕсасддасд сЕассааЕдд <210> 24 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер <400> 24 адддасЕЕса ЕдсаЕдсЕсс

<210>	25
<211>	21
<212>	ДНК

- 70 032330 <213> Искусственная <220>

<223> Праймер <400> 25 сасадасдсЕ аЕсаЕЕсаад с

<210>	26
<211>	21
<212>	ДНК
<213>	Искусственная
<220> <223>	Праймер
<400>	26
сссдсЕдаЕс асаЕсаЕЕда с

<210> <211> <212> <213>	27 21 ДНК Искусственная
<220> <223>	Праймер
<400>	27
сдсЕаассЕс аЕадаЕддад д

<210> 28 <211> 19 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер <400> 28

Еаадсддсаа адсдсЕссд

Claims (10)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ обнаружения инфекции Н. ру1оп у субъекта, при этом указанный способ включает обнаружение в образце, полученном от указанного субъекта, иммунного ответа, направленного против Ε1ίΌ, причём указанный иммунный ответ представляет собой присутствие антитела против Ε1ίΌ, при этом указанный способ включает осуществление реакции указанного образца с Ε1ίΌ или фрагментом Ε1ίΌ, причём указанный фрагмент имеет аминокислотную последовательность, которая достаточно длинная, чтобы было можно идентифицировать указанный фрагмент как фрагмент Ε1ίΌ и исключить то, что указанный фрагмент представляет собой фрагмент белка или полипептида, отличного от Ε1ίΌ, и при этом указанный образец выбран из группы, состоящей из сыворотки крови, плазмы крови, цельной крови и кала.
2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный способ включает осуществление реакции указанного образца с полноразмерным Ε1ίΌ или фрагментом Ε1ίΌ, причём указанный фрагмент имеет аминокислотную последовательность, которая короче, чем аминокислотная последовательность полноразмерного Ε1ίΌ, при этом фрагмент Ε1ίΌ все еще активен как фактор вирулентности.
3. 3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанное антитело против Ε1ίΌ представляет собой антитело ΙβΟ и/или антитело ΙβΑ.
4. 4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что указанное обнаружение осуществляют по- 71 032330 средством твердофазного иммуноферментного анализа (ЕБ18А), анализа латерального растекания или линейного иммуноанализа.
5. 5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает обнаружение одного или более антигенов Не11соЬас!ег, предпочтительно Н. ру1оп, при этом один или более антигенов выбраны из группы, состоящей из СадА, УасА, СгоЕЬ, Нр 0231, Шр 0940 и Н1гА.
6. 6. Применение набора, содержащего Ε1ΪΏ или его фрагмент и твёрдую фазу, при этом Ε1ΪΏ или его фрагмент прикреплены к указанной твёрдой фазе, в способе по любому из пп.1-5, причём указанный фрагмент имеет аминокислотную последовательность, которая достаточно длинная, чтобы было можно идентифицировать указанный фрагмент как фрагмент Ε1ΪΏ и исключить то, что указанный фрагмент является фрагментом белка или полипептида, отличного от Ε1ΪΏ.
7. 7. Применение по п.6, где указанный набор дополнительно содержит буфер и/или листок-вкладыш с инструкцией.
8. 8. Применение по п.6 или 7, отличающееся тем, что указанный набор содержит полноразмерный Ε1ΪΏ или фрагмент Ε1ΪΏ, причём указанный фрагмент имеет аминокислотную последовательность, которая короче, чем аминокислотная последовательность полноразмерного Ε1ΪΏ, при этом фрагмент Ε1ΪΏ все еще активен как фактор вирулентности.
9. 9. Набор для применения в способе согласно любому из пп.1-5, указанный набор содержит полноразмерный Ε1ΪΏ или его фрагмент и твёрдую фазу, при этом Ε1ΪΏ или его фрагмент прикреплены к указанной твёрдой фазе, где указанный фрагмент имеет аминокислотную последовательность, которая короче, чем аминокислотная последовательность полноразмерного Ε1ΪΏ, при этом фрагмент Ε1ΪΏ все еще активен как фактор вирулентности.
10. 10. Набор по п.9, отличающийся тем, что указанный набор дополнительно содержит буфер и/или листок-вкладыш с инструкцией.