EA031041B1 - Соединения 2,3,4,5-тетрагидропиридин-6-амин и 3,4-дигидро-2h-пиррол-5-амин - ингибиторы бета-секретазы - Google Patents

Abstract

Изобретение касается соединений 2,3,4,5-тетрагидропиридин-6-амина и 3,4-дигидро-2H-пиррол-5-амина - ингибиторов бета-секретазы, имеющих структуру, показанную в формуле (I), где радикалы определены в описании изобретения. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, к способам получения таких соединений и композиций и к применению таких соединений и композиций для предупреждения и лечения расстройств, в которых участвует бета-секретаза, таких как болезнь Альцгеймера (AD), умеренное когнитивное нарушение, старческое слабоумие, деменция, деменция с тельцами Леви, синдром Дауна, деменция, ассоциированная с инсультом, деменция, ассоциированная с болезнью Паркинсона, деменция, ассоциированная с бета-амилоидом, возрастная макулярная дистрофия, диабет 2 типа или метаболические расстройства.

Description

Изобретение относится к соединениям формулы (I), которая определена в настоящем документе выше, и их фармацевтически приемлемым солям и сольватам. Соединения формулы (I) являются ингибиторами фермента бета-секретазы (также известного как фермент, расщепляющий по бета-сайту, ВАСЕ, ВАСЕ1, Asp2 или мемапсин 2 или ВАСЕ2) и могут применяться в лечении болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения, старческого слабоумия, деменции, деменции, ассоциированной с инсультом, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции, ассоциированной с бета-амилоидом, и возрастной макулодистрофии, предпочтительно болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения или деменции, более предпочтительно болезни Альцгеймера, диабета 2 типа и других расстройств обмена веществ.

В варианте осуществления R₁ представляет собой метил.

В варианте осуществления R₂ представляет собой водород.

В варианте осуществления L представляет собой -NH-C(=O)-.

В варианте осуществления Ar представляет собой пиридинил или пиразинил, замещенный одним или двумя атомами галогена или С_1-3 алкилоксигруппой.

В варианте осуществления R₁ представляет собой метил, R₂ представляет собой водород, L представляет собой -NH-C(=O)- и Ar представляет собой пиридинил или пиразинил, замещенный одним или двумя атомами галогена или С_1-3алкилоксигруппой.

В варианте осуществления R₁ представляет собой метил, R₂ представляет собой водород, L представляет собой -NH-C(=O)- и Ar представляет собой 5-метоксипиразин-2-ил, 5-бромпиридин-2-ил, 5хлор-3-фторпиридин-2-ил или 5-цианопиридин-2-ил.

В варианте осуществления атом углерода, замещенный трифторметилом, имеет R-конфигурацию.

В варианте осуществления R₂ представляет собой фтор.

В варианте осуществления n равно 1.

В варианте осуществления R₁ представляет собой метил, R₂ представляет собой фтор, n равно 1, L представляет собой -ΝΗ-Ο=Ο)-, и Ar представляет собой 5-метоксипиразин-2-ил, 5-хлорпиридин-2-ил, 5-фторпиридин-2-ил, 5-цианопиридин-2-ил, 5-хлор-3-фторпиридин-2-ил или 1-дифторметилпиразол-3ил.

В еще одном дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), которая определена в настоящем документе выше, где четвертичный атом углерода, замещенный R₁, имеет конфигурацию, отображенную в структуре (I') ниже, где ядро из 2,3,4,5тетрагидропиридинила или 3,4-дигидро-2Н-пирролила находится в плоскости рисунка, R| спроецирована под плоскостью рисунка (связь показана в виде клина из параллельных линий >, и Ar выступает над плоскостью рисунка (связь показана жирной клиновидной линией >. Если Rj представляет собой метил, то четвертичный атом углерода имеет S-конфигурацию.

Галоген означает атом фтора, хлора и брома; С_!-3алкил означает прямую или разветвленную насыщенную алкильную группу из 1, 2 или 3 атомов углерода, например метил, этил, 1-пропил и 2-пропил; С1_-3алкилоксигруппа означает радикал простого эфира, в котором С_!-3алкил такой, как обозначен ранее; моно- и полигалогенС1_-3алкил означает С1_-3алкил, обозначенный ранее, замещенный 1, 2, 3 или, где возможно, большим числом атомов галогена, как обозначено ранее; моно- и полигалогенС1₃алкилоксигруппа означает радикал простого эфира, в котором моно- и полигалогенС1_-3алкил такой, как обозначен ранее.

Термин субъект, используемый в данном документе, относится к животному, предпочтительно к млекопитающему, наиболее предпочтительно к человеку, которое является или являлось объектом лечения, наблюдения или эксперимента.

- 3 031041

Термин терапевтически эффективное количество, используемый в данном документе, означает такое количество активного соединения или фармацевтического средства, которое вызывает биологический или медицинский ответ в системе тканей, у животного или человека, который стремится получить исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист, который включает облегчение симптомов заболевания или расстройства, подлежащего лечению.

Используемый в данном документе термин композиция предназначен для охвата продукта, содержащего определенные ингредиенты в определенных количествах, а также любого продукта, который получают, прямо или опосредованно, в результате комбинаций определенных ингредиентов в определенных количествах.

Ранее и далее в настоящем документе термин соединение формулы (I) следует понимать как включающее его соли присоединения, сольваты и стереоизомеры.

Термины стереоизомеры или стереохимические изомерные формы ранее и далее в настоящем документе используются взаимозаменяемо.

Настоящее изобретение включает все стереоизомеры соединения формулы (I) или в виде чистого стереоизомера, или в виде смеси из двух или более стереоизомеров.

Энантиомеры представляют собой стереоизомеры, которые представляют собой несовпадающие при наложении зеркальные отображения друг друга. Смесь 1:1 пары энантиомеров представляет собой рацемат или рацемическую смесь. Диастереомеры (или диастереоизомеры) представляют собой стереоизомеры, которые не являются энантиомерами, т.е. они не относятся к зеркальным отображениям. Если соединение содержит двойную связь, то заместители могут находиться в Е- или Z-конфигурации. Если соединение содержит дизамещенную циклоалкильную группу, заместители могут находиться в цис- или транс-конфигурации. Таким образом, настоящее изобретение включает энантиомеры, диастереомеры, рацематы, Е-изомеры, Z-изомеры, цис-изомеры, транс-изомеры и их смеси.

Абсолютную конфигурацию определяют в соответствии с системой Кана-Ингольда-Прелога. Конфигурация асимметричного атома обозначается либо R, либо S. Растворенные соединения, абсолютная конфигурация которых не известна, могут быть обозначены (+) или (-) в зависимости от направления, в котором они вращают плоскополяризованный свет.

Если указан конкретный стереоизомер, это означает, что указанный стереоизомер практически не содержит другие изомеры, т.е. связан с менее 50%, предпочтительно с менее 20%, более предпочтительно с менее 10%, еще более предпочтительно с менее 5%, в частности с менее 2% и наиболее предпочтительно с менее 1% других изомеров. Таким образом, если соединение формулы (I), например, указано как (R), то это означает, что соединение практически не содержит изомера (S); если соединение формулы (I), например, указано как Е, то это означает, что соединение практически не содержит Z-изомера; если соединение формулы (I), например указано как цис-, то это означает, что соединение практически не содержит транс-изомера.

Для применения в медицине соли соединений по изобретению относятся к нетоксичным фармацевтически приемлемым солям. Однако при получении соединений в соответствии с настоящим изобретением или их фармацевтически приемлемых солей могут быть применимыми и другие соли. Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединений включают соли присоединения кислоты, которые могут быть образованы, например, путем смешивания раствора соединения с раствором фармацевтически приемлемой кислоты, такой как хлористоводородная кислота, серная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, уксусная кислота, бензойная кислота, лимонная кислота, винная кислота, угольная кислота или фосфорная кислота. Кроме того, если соединения по настоящему изобретению имеют кислотный фрагмент, их пригодные фармацевтически приемлемые соли могут включать соли щелочных металлов, например соли натрия или калия; соли щелочно-земельных металлов, например соли кальция или магния; и соли, образованные с пригодными органическими лигандами, например соли четвертичного аммония.

Иллюстративные кислоты, которые можно применять в получении фармацевтически приемлемых солей, включают, без ограничения, следующие: уксусную кислоту, 2,2-дихлоруксусную кислоту, ацилированные аминокислоты, адипиновую кислоту, альгиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, Lаспарагиновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, бензойную кислоту, 4-ацетамидобензойную кислоту, (+)-камфорную кислоту, камфорсульфоновую кислоту, каприновую кислоту, капроновую кислоту, каприловую кислоту, коричную кислоту, лимонную кислоту, цикламовую кислоту, этан-1,2дисульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, 2-гидроксиэтансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, фумаровую кислоту, галактаровую кислоту, гентизиновую кислоту, глюкогептоновую кислоту, D-глюконовую кислоту, D-глюкуроновую кислоту, L-глутаминовую кислоту, бета-оксоглутаровую кислоту, гликолевую кислоту, гиппуровую кислоту, бромистоводородную кислоту, хлористоводородную кислоту, (+)-Ь-молочную кислоту, (TEDL-молочную кислоту, лактобионовую кислоту, малеиновую кислоту, (-l-L-яблочную кислоту, малоновую кислоту, (±)-DL-миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, нафталин-1,5-дисульфоновую кислоту, 1-гидрокси-2нафтойную кислоту, никотиновую кислоту, азотную кислоту, олеиновую кислоту, оротовую кислоту,

- 4 031041 щавелевую кислоту, пальмитиновую кислоту, памоевую кислоту, фосфорную кислоту, Lпироглутаминовую кислоту, салициловую кислоту, 4-аминосалициловую кислоту, себациновую кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту, серную кислоту, дубильную кислоту, (+)-С-винную кислоту, тиоциановую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, трифторметилсульфоновую кислоту и ундециленовую кислоту. Типичные основания, которые можно использовать в получении фармацевтически приемлемых солей без ограничения включают следующие: аммиак, L-аргинин, бенетамин, бензатин, гидроксид кальция, холин, диметилэтаноламин, диэтаноламин, диэтиламин, 2-(диэтиламино)этанол, этаноламин, этилендиамин, N-метилглюкамин, гидрабамин, Ш-имидазол, L-лизин, гидроксид магния, 4-(2гидроксиэтил)морфолин, пиперазин, гидроксид калия, 1-(2-гидроксиэтил)пирролидин, вторичный амин, гидроксид натрия, триэтаноламин, трометамин и гидроксид цинка.

Названия соединений по настоящему изобретению образовывали в соответствии с правилами номенклатуры, согласованными с Химической реферативной службой (CAS), с использованием программного обеспечения от Advanced Chemical Development, Inc., (ACD/Name product версия 10.01; сборка 15494, 1 декабря 2006) или в соответствии с правилами номенклатуры, согласованными с Международным союзом теоретической и прикладной химии (IUPAC), с использованием программного обеспечения от Advanced Chemical Development, Inc., (ACD/Name product версия 10.01.0.14105, октябрь 2006). В случае таутомерных форм составляли название изображенной таутомерной формы структуры. Другие не представленные таутомерные формы также включены в объем настоящего изобретения.

Соединения согласно формуле (I) могут находиться в динамическом равновесии с их таутомерной формой (I*) и образовывать неразделяемую смесь. Подразумевается, что такие таутомерные формы, хотя они явно и не указаны в приведенной выше формуле, включены в объем настоящего изобретения.

CF3 (As] ж,	HN^	CF3
H Rt''	ln rR1
R/
	(1)			(П

Получение соединений.

Экспериментальная методика 1.

Конечные соединения в соответствии с формулой (I-а) можно получать взаимодействием промежуточного соединения формулы (II) с соединением формулы (III) по схеме реакции (1) - реакции, которая проходит в подходящем инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, N,Nдиметилформамид, в присутствии подходящего основания, такого как, например, K₃PO₄, медного катализатора, такого как, например, CuI и диамина, такого как, например, (1R,2R)-(-)-1,2диаминоциклогексан, в температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 180°С, например в течение 135 мин под воздействием микроволнового излучения. На реакционной схеме (1) все переменные величины определены как в формуле (I), a W представляет собой галоген.

Реакционная схема 1.

Экспериментальная методика 2.

Кроме того, конечные соединения в соответствии с формулой (I-а) можно получать взаимодействием промежуточного соединения формулы (V) с соединением формулы (IV) по реакционной схеме (2) реакции, которая проходит в подходящем инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, дихлорметан, в присутствии подходящего основания, такого как, например, триэтиламин, в присутствии конденсирующего агента, такого как, например, O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'тетраметилуронийгексафторфосфат [HATU, CAS 148893-10-1] или 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)4-метилморфолиния хлорид [DMTMM, CAS 3945-69-5], в температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 25°С, например, в течение 2 ч. На реакционной схеме (2) все переменные величины определены как в формуле (I).

- 5 031041

Реакционная схема 2.

Экспериментальная методика 3.

Кроме того, конечные соединения в соответствии с формулой (I-а) можно получать взаимодействием промежуточного соединения формулы (V) с соединением формулы (VI) по реакционной схеме (3) реакции, которая проходит в подходящем инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, дихлорметан, в присутствии подходящего основания, такого как, например, пиридин, при комнатной температуре в течение 2 ч. На реакционной схеме (3) все переменные величины определены как в формуле (I), a Y представляет собой галоген.

Реакционная схема 3.

Экспериментальная методика 4.

Конечные соединения в соответствии с формулой (I-b) можно получать взаимодействием промежуточного соединения формулы (II) с соединением формулы (VII) по реакционной схеме (4) - реакции, которая проходит в подходящем инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, 1,4-диоксан, этанол или смеси инертных растворителей, таких как, например, 1/2-диметоксиэтан/вода/этанол иди 1,4-диоксан/вода, в присутствии подходящего основания, такого как, например, водные K₃PO₄, NaHCO₃ или Cs₂CO₃, катализатора - Pd-комплекса, такого как, например, [1,1'бис(дифенилфосфино)ферроцен] дихлорпалладий (II) [CAS 72287-26-4] или тетракис(трифенилфосфин) палладий(0) или транс-(бисдициклогексиламин)палладия диацетат [DAPCy, CAS 628339-96-8] в температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 80°С до завершения реакции, обычно в течение 2-20 ч, или, например, нагревание реакционной смеси при 130°С, например, в течение 10 мин под воздействием микроволнового излучения. На реакционной схеме (4) все переменные величины определены как в формуле (I), a W представляет собой галоген. R₃ и R₄ могут представлять собой водород или алкил, или могут быть объединены с образованием, например, двухвалентного радикала формулы -СН₂СН₂-, -СН₂СН₂СН₂-или -С (СН₃)₂С (СН₃)₂-.

Реакционная схема 4.

Экспериментальная методика 5.

Промежуточные соединения формулы (V) и (II) обычно можно получить, если следовать реакционным стадиям, показанным на реакционной схеме (5) ниже

- 6 031041

Реакционная схема 5.

А: Преобразование бромида в амин;

В: преобразование тиоамида в амидин;

С: преобразование амида в тиоамид (тионирование).

Промежуточные соединения формулы (V) на вышеуказанной реакционной схеме (5) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (II), следуя хорошо известной в этой области методике реакции сочетания, катализируемой медью (реакционная стадия А). Указанную реакцию сочетания можно проводить путем воздействия на указанные промежуточные соединения формулы (II) азидом натрия в подходящем инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, ДМСО, в присутствии смеси подходящих оснований, таких как, например, диметилэтилендиамин и Na₂CO₃, и медного катализатора, такого как CuI, в температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 110°С до завершения реакции, например, в течение 1 ч.

Промежуточные соединения формулы (II) на вышеуказанной реакционной схеме (5) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (VIII), следуя хорошо известным в этой области методикам преобразования тиоамида в амидин (реакционная стадия В). Указанное преобразование удобно проводить путем воздействия на промежуточные соединения формулы (VIII) аммиачной средой, такой как, например, хлорид аммония или водный аммиак, в подходящем инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, вода или метанол и подобные им, в температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 60°С, например в течение 6 ч.

Промежуточные соединения формулы (VIII) на вышеуказанной реакционной схеме (5) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (IX), следуя хорошо известным в этой области методикам тионирования (реакционная стадия С). Данное преобразование удобно проводить путем воздействия на промежуточные соединения формулы (IX) тионирующим реагентом, таким как, например, пентасульфид фосфора или 2,4-бис-(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4-дисульфид [реагент Лавессона, CAS 19172-47-5], в инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран или 1,4-диоксан и подобные им, в температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 50°С, например в течение 50 мин.

Экспериментальная методика 6.

Промежуточные соединения формулы (IX) обычно можно получить, если следовать реакционным стадиям, показанным на реакционной схеме (6) ниже

- 7 031041

Реакционная схема 6.

D: Удаление сульфинильной группы и внутримолекулярная лактамизация;

Е: присоединение реактива Гриньяра;

F: присоединение по Михаэлю;

G: образование сульфонилиминогруппы.

Промежуточное соединение формулы (IX) в приведенной выше реакционной схеме (6) можно получать из промежуточных соединений формулы (X), где R₅ представляет собой С_1-4алкил, путем удаления слульфинильной группы и последующей внутримолекулярной лактомизации (реакционная стадия D). Указанное превращение можно осуществить путем обработки промежуточного соединения формулы (X) подходящей кислотой, такой как, например, хлористоводородная кислота, в подходящем инертном растворителе, таком как, например, 1,4-диоксан, при подходящей температуре, например комнатной температуре, в течение времени, необходимого для завершения реакции, например, в течение 10 мин. Затем проводят внутримолекулярную циклизацию путем добавления водного основания, такого как, например, бикарбонат натрия, при подходящей температуре, обычно при комнатной температуре, до завершения реакции, например, в течение 30 мин.

Промежуточное соединение формулы (X), где R₅ представляет собой С_1-4алкил в приведенной выше реакционной схеме (6), можно получать из промежуточных соединений формулы (XI), где R₅ представляет собой С_1-4алкил, путем присоединения реактива Гриньяра (реакционная стадия Е). Указанное преобразование можно проводить путем воздействия на промежуточное соединение формулы (XI) подходящим реактивом Гриньяра, таким как, например, метилмагнийбромид, в присутствии добавки - кислоты Льюиса, такой как, например, эфират трифторида бора, в инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, ТГФ. Реакционную смесь перемешивают при подходящей температуре, например -78°С, до завершения реакции, например в течение 30 мин.

Промежуточное соединение формулы (XI), где R5 представляет собой С1-4алкил в приведенной выше реакционной схеме (6), можно получать из промежуточных соединений формулы (XII) путем присоединения по Михаэлю (реакционная стадия F). Указанное преобразование можно проводить путем воздействия на промежуточное соединение формулы (XII) подходящим акцептором Михаэля, таким как, например, этил-(2Е)-4,4,4-трифторбут-2-еноат, и подходящим основанием, таким как, например, третбутоксид калия, в инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, ТГФ. Реакционную смесь перемешивают при подходящей температуре, например -30°С, до завершения реакции, например в течение одного часа.

Промежуточные соединения формулы (XII) в приведенной выше реакционной схеме (6) можно получать взаимодействием промежуточного соединения формулы (XIII) и трет-бутилсульфинамида (реакционная стадия G), в подходящем инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, гептан или ТГФ, в присутствии подходящей кислоты Льюиса, такой как, например, тетраэтоксид титана, в температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 70°С, например, в течение периода, продолжительностью 16 ч.

На реакционной схеме (6) все значения переменных определены как в формуле (I), R₅ представляет собой С_1-4алкил и W представляет собой галоген.

Промежуточные соединения формулы (XIII) можно приобрести или синтезировать, используя известные в этой области методики реакций.

Экспериментальная методика 7.

Промежуточные соединения формулы (XIV) обычно можно получить, если следовать реакционным стадиям, показанным на реакционной схеме (7) ниже

(XVI) (XV) (XIV-а) ЧУ=галоген (XlV-b)W-Il

Реакционная схема 7.

В: Преобразование тиоамида в амидин;

С: преобразование амида в тиоамид (тионирование).

Промежуточные соединения формулы (XIV-а или b) на вышеуказанной реакционной схеме (7) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (XV), следуя хорошо известным в этой области методикам преобразования тиоамида в амидин (реакционная стадия В). Указанное преобразование удобно проводить путем воздействия на промежуточные соединения формулы (XV) аммиачной средой, такой как, например, хлорид аммония или водный аммиак, в подходящем инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, вода или метанол и подобные им, в темпе

- 8 031041 ратурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 60°С, например, в течение 6 ч, или нагревание реакционной смеси под воздействием микроволнового излучения при 120°С в течение 1 ч.

Промежуточные соединения формулы (XV) на вышеуказанной реакционной схеме (7) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (XVI), следуя хорошо известным в этой области методикам тионирования (реакционная стадия С). Данное преобразование удобно проводить путем воздействия на промежуточные соединения формулы (XVI) тионирующим реагентом, таким как, например, пентасульфид фосфора или 2,4-бис-(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4-дисульфид [реагент Лавессона, CAS 19172-47-5], в инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран или 1,4-диоксан и подобные им, в температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 50°С, например, в течение 2 ч.

На схеме реакции (7) все переменные величины определены как в формуле (I), a W представляет собой галоген или водород.

Экспериментальная методика 8.

Промежуточные соединения формулы (XVII) обычно можно получить, если следовать реакционным стадиям, показанным на реакционной схеме (8) ниже

Реакционная схема 8.

В: Преобразование тиоамида в амидин;

С: преобразование амида в тиоамид (тионирование);

G: восстановление нитрогруппы до аминогруппы;

Н: нитрование.

Промежуточные соединения формулы (XVII) на вышеуказанной реакционной схеме (8) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (XVIII), следуя хорошо известным в этой области методикам преобразования тиоамида в амидин (реакционная стадия В). Указанное преобразование удобно проводить путем воздействия на промежуточные соединения формулы (XVIII) аммиачной средой, такой как, например, хлорид аммония или водный аммиак, в подходящем инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, вода или метанол и подобные им, в температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 60°С, например, в течение 6 ч, или нагревание реакционной смеси под воздействием микроволнового излучения при 120°С в течение 1 ч.

Промежуточные соединения формулы (XVIII) на вышеуказанной реакционной схеме (8) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (XIX), следуя хорошо известным в этой области методикам тионирования (реакционная стадия С). Данное преобразование удобно проводить путем воздействия на промежуточные соединения формулы (XIX) тионирующим реагентом, таким как, например, пентасульфид фосфора или 2,4-бис-(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4-дифосфетан-2,4дисульфид [реагент Лавессона, CAS 19172-47-5], в инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран или 1,4-диоксан и подобные им, в температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 50°С, например, в течение 2 ч.

Промежуточные соединения формулы (XIX) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (XX), следуя известным в данной области методикам восстановления нитрогруппы до аминогруппы (реакционная стадия G) в соответствии с реакционной схемой (8). Указанную реакцию восстановления удобно проводить, следуя хорошо известным в этой области методикам каталитической гидрогенизации. Например, указанное восстановление можно осуществлять путем перемешивания промежуточных соединений формулы (XX) в атмосфере водорода и в присутствии соответствующего катализатора, такого как, например, палладий на угле, платина на угле, никель Ренея и подобные им катализаторы. Пригодными растворителями являются, например, вода, алканолы, например, метанол, этанол и

- 9 031041

т.п., сложные эфиры, например этилацетат и т.п. Для повышения скорости указанной реакции восстановления может быть предпочтительным повышение температуры и/или давления реакционной смеси.

Промежуточные соединения формулы (XX) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (XXI), следуя известным в данной области методикам нитрования (реакционная стадия Н) в соответствии с реакционной схемой (8). Указанное нитрование удобно проводить путем воздействия на соответствующие промежуточные соединения формулы (XXI) нитрующим реагентом, таким как, например, азотная кислота в присутствии подходящего протонирующего агента, такого как, например, серная кислота, при умеренной температуре, такой как, например, 25°С, например, в течение 2 ч.

На реакционной схеме (8) все переменные величины определены так же, как в формуле (I). Экспериментальная методика 9.

Промежуточные соединения формулы (XXII) обычно можно получить, если следовать реакционным стадиям, показанным на реакционной схеме (9) ниже

Реакционная схема 9.

I: Преобразование мезилата в метил;

J: преобразование спирта в мезилат;

К: восстановление сложного эфира до спирта;

L: присоединение по Михаэлю и внутримолекулярная лактамизация.

Промежуточные соединения формулы (XXII) на вышеуказанной реакционной схеме (9) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (XXIII), следуя хорошо известным в этой области методикам преобразования мезилата в метил (реакционная стадия I). Указанное преобразование удобно проводить путем воздействия на промежуточные соединения формулы (XXIII) восстановителем, таким как, например, борогидрид натрия или алюмогидрид лития, в инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, диметилформамид или тетрагидрофуран и подобные им, в температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 70°С, например, в течение 4 ч.

Промежуточные соединения формулы (XXIII) на вышеуказанной реакционной схеме (9) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (XXIV), следуя хорошо известным в этой области методикам преобразования спирта в мезилат (реакционная стадия J). Указанное преобразование удобно проводить путем воздействия на промежуточные соединения формулы (XXIV) подходящим реагентом, таким как, например, метансульфонилхлорид, в инертном по отношению к реакции растворителе, таком как, например, дихлорметан, в присутствии подходящего основания, такого как триэтиламин, при умеренной температуре, такой как, например, 0°С, в течение 2 ч.

Промежуточные соединения формулы (XXIV) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (XXV), следуя известным в данной области методикам восстановления сложного эфира до спирта (реакционная стадия К) в соответствии с реакционной схемой (9). Указанную реакцию восстановления удобно проводить путем воздействия на промежуточные соединения формулы (XXV) подходящим восстановителем, таким как, например, борогидрид натрия, в подходящем растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран и подобные ему, или в смесях растворителей, таких как, например, тетрагидрофуран и вода. Реакцию можно осуществлять при умеренной температуре, такой как, например, 0°С, в течение 2 ч.

Промежуточное соединение формулы (XXV) в приведенной выше реакционной схеме (9) можно получать из промежуточных соединений формулы (XXVI) путем реакции присоединения по Михаэлю и последующей внутримолекулярной лактомизацией (реакционная стадия L). Указанное преобразование можно проводить путем воздействия на промежуточное соединение формулы (XXVI) подходящим акцептором Михаэля, таким как, например, этил-(2Е)-4,4,4-трифторбут-2-еноат, и подходящим основанием, таким как, например, гидрид натрия, в инертном по отношению к реакции растворителе, таком как,

- 10 031041 например, ТГФ. Реакционную смесь перемешивают при подходящей температуре, например 0°С, до завершения реакции, например, в течение 6 ч.

На реакционной схеме (9) все переменные величины определены так же, как в формуле (I), Y представляет собой галоген или водород, и R₆ представляет собой метил или этил.

Экспериментальная методика 10.

В альтернативном случае промежуточные соединения формулы (XVII) можно получить, если следовать реакционным стадиям, показанным на реакционной схеме (10) ниже

G: Восстановление нитрогруппы до аминогруппы;

Н: нитрование.

Промежуточные соединения формулы (XVII) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (XXVII), следуя известным в данной области методикам восстановления нитрогруппы до аминогруппы (реакционная стадия G) в соответствии с реакционной схемой (10). Указанную реакцию восстановления удобно проводить, следуя хорошо известным в этой области методикам каталитической гидрогенизации. Например, указанное восстановление можно осуществлять путем перемешивания промежуточных соединений формулы (XXVII) в атмосфере водорода и в присутствии соответствующего катализатора, такого как, например, палладий на угле, платина на угле, никель Ренея и подобные им катализаторы. Пригодными растворителями являются, например, вода, алканолы, например, метанол, этанол и т.п., сложные эфиры, например этилацетат и т.п. Для повышения скорости указанной реакции восстановления может быть предпочтительным повышение температуры и/или давления реакционной смеси.

Промежуточные соединения формулы (XXVII) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (XIV-b), следуя известным в данной области методикам нитрования (реакционная стадия Н) в соответствии с реакционной схемой (10). Указанное нитрование удобно проводить путем воздействия на соответствующие промежуточные соединения формулы (XIV-b) нитрующим реагентом, таким как, например, азотная кислота, в присутствии подходящего протонирующего агента, такого как, например, серная кислота, при умеренной температуре, такой как, например, 0°С, например, в течение 30 мин.

На реакционной схеме (10) все переменные величины определены так же, как в формуле (I). Фармакология.

Соединения изобретения и их фармацевтически приемлемые композиции подавляют ВАСЕ и поэтому могут использоваться в лечении или предотвращении болезни Альцгеймера (AD), умеренного когнитивного нарушения (MCI), старческого слабоумия, деменции, деменции с тельцами Леви, церебральной амилоидной ангиопатии, мультиинфарктной деменции, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, сосудистой деменции, деменции, обусловленной заболеванием, ассоциированным с ВИЧ-инфекцией, деменции, обусловленной травмой головы, деменции, обусловленной болезнью Хантингтона, деменции, обусловленной болезнью Пика, деменции, обусловленной болезнью Крейтцфельда-Якоба, лобно-височной деменции, деменции боксеров, деменции, ассоциированной с бета-амилоидом, и возрастной и возрастной макулярной дистрофией, диабета 2 типа и других расстройств обмена веществ.

Подразумевается, что применяемый в данном документе термин лечение относится ко всем способам, которые могут предусматривать замедление, нарушение, подавление или прекращение прогрессирования заболевания или облегчение симптомов, но необязательно означает полное устранение всех симптомов.

Настоящее изобретение также относится к соединению общей формулы (I), его стереоизомерной форме или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты или основания для применения в лечении или предупреждении заболеваний или состояний, выбранных из группы, состоящей из AD, MCI, старческого слабоумия, деменции, деменции с тельцами Леви, церебральной амилоидной ангиопатии, мультиинфарктной деменции, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, деменции, ассоциированной с бета-амилоидом, и возрастной макулярной дистрофией, диабета 2 типа и других расстройств обмена веществ.

Настоящее изобретение также относится к соединению общей формулы (I), его стереоизомерной форме или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты или основания для применения в лечении, предупреждении, уменьшении интенсивности, контроле или снижении риска развития заболеваний или состояний, выбранных из группы, состоящей из AD, MCI, старческого слабоумия, де

- 11 031041 менции, деменции с тельцами Леви, церебральной амилоидной ангиопатии, мультиинфарктной деменции, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, деменции, ассоциированной с бета-амилоидом, и возрастной макулярной дистрофией, диабета 2 типа и других расстройств обмена веществ.

Как уже упоминалось выше в данном документе, термин лечение не обязательно означает полное устранение всех симптомов, а может также относиться к симптоматическому лечению любого из упомянутых выше расстройств. Ввиду применимости соединения формулы (I) представлен способ лечения субъектов, таких как теплокровные животные, в том числе люди, страдающих любым из указанных выше в настоящем документе заболеваний, или способ предупреждения у субъектов, таких как теплокровные животные, в том числе люди, любого из указанных выше в настоящем документе заболеваний.

Указанные способы предусматривают введение, т.е. системное или местное введение, предпочтительно пероральное введение субъекту, такому как теплокровное животное, в том числе человек, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), его стереоизомерной формы, его фармацевтически приемлемой соли присоединения или сольвата.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к способу предупреждения и/или лечения любого из упомянутых выше в настоящем документе заболеваний, предусматривающему введение терапевтически эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению нуждающемуся в этом субъекту.

Способ регуляции активности фермента, расщепляющего амилоид по бета-сайту, включающий в себя введение нуждающемуся в этом лечении субъекту терапевтически эффективного количества соединения согласно п.1 или фармацевтической композиции согласно п.10.

Способ лечения может также включать введение активного ингредиента в режиме от одного до четырех раз в сутки. В таких способах лечения соединения в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно составлены перед введением. Как описано в данном документе ниже, подходящие фармацевтические составы получают с помощью известных процедур, с применением широко известных и общедоступных ингредиентов.

Соединения по настоящему изобретению, которые могут быть подходящими для лечения или предупреждения болезни Альцгеймера или ее симптомов, можно вводить отдельно или в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами. Комбинированная терапия предусматривает введение единого дозированного фармацевтического состава, который содержит соединение формулы (I) и одно или несколько дополнительных терапевтических средств, а также введение соединения формулы (I) и каждого дополнительного терапевтического средства в своем собственном отдельном дозированном фармацевтическом составе. Например, соединение формулы (I) и терапевтическое средство можно вводить пациенту вместе в единой дозированной композиции для перорального применения, такой как таблетка или капсула, или каждое средство можно вводить по отдельности в дозированных составах для перорального применения.

Специалисту в данной области хорошо известны альтернативные системы номенклатуры, нозологические подходы и системы классификации заболеваний или состояний, упоминаемых в данном документе. Например, в пятом издании Diagnostic & Statistical Manual of Mental Disorders (DSM-5™) Американской ассоциацией психиатров используются такие термины, как нейрокогнитивные расстройства (NCD) (как тяжелые, так и умеренные), в частности нейрокогнитивные расстройства, обусловленные болезнью Альцгеймера, обусловленные черепно-мозговой травмой (TBI), обусловленные болезнью диффузных телец Леви, обусловленные болезнью Паркинсона, или сосудистое NCD (как например, сосудистое NCD, характерное при множественных инфарктах). Такие термины могут применяться специалистом в данной области в качестве альтернативной номенклатуры для некоторых заболеваний или состояний, упоминаемых в настоящем документе.

Фармацевтические композиции.

В настоящем изобретении также представлены композиции для предупреждения или лечения заболеваний, при которых подавление бета-секретазы является благоприятным, таких как болезнь Альцгеймера (AD), умеренное когнитивное нарушение, старческое слабоумие, деменция, деменция с тельцами Леви, синдром Дауна, деменция, ассоциированная с инсультом, деменция, ассоциированная с болезнью Паркинсона, и деменция, ассоциированная с бета-амилоидом и возрастной макулярной дистрофией, диабет 2 типа и другие расстройства обмена веществ. Указанные композиции содержат терапевтически эффективное количество соединения согласно формуле (I) и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Хотя активный ингредиент можно вводить отдельно, предпочтительно, чтобы он был представлен в виде фармацевтической композиции. Следовательно, настоящее изобретение дополнительно предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую соединение в соответствии с настоящим изобретением вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Носитель или разбавитель должны быть приемлемыми в том смысле, что они должны быть совместимы с другими ингредиентами композиции и не быть вредными для пациентов, их получающих.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть получены любыми спосо

- 12 031041 бами, хорошо известными в области фармацевтики. Терапевтически эффективное количество конкретного соединения, в форме основания или в форме соли присоединения, в качестве активного ингредиента комбинируют в однородной смеси с фармацевтически приемлемым носителем, который может быть представлен в разнообразных формах в зависимости от формы препарата, который необходимо ввести. Желательно, чтобы эти фармацевтические композиции находились в стандартной лекарственной форме, предпочтительно подходящей для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение; или для местного введения, как, например, с помощью ингаляции, назального спрея, глазных капель или с помощью крема, геля, шампуня и т.п. Например, при получении композиций в виде лекарственной формы для перорального введения можно использовать любые обычные фармацевтические среды, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п., в случае жидких препаратов для перорального введения, таких как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и т.п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Благодаря своей простоте введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее преимущественные единичные лекарственные формы для перорального введения, в случае которых, несомненно, используют твердые фармацевтические носители. В случае композиций для парентерального введения носитель, как правило, по меньшей мере, в значительной степени будет включать в себя стерильную воду, хотя может включать и другие ингредиенты, например для улучшения растворимости. Например, можно получать растворы для инъекций, в которых носитель содержит физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Также можно получать суспензии для инъекций, в случае которых можно использовать соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и т.п. В композициях, подходящих для чрескожного введения, носитель необязательно содержит средство, улучшающее проникновение, и/или подходящее смачивающее средство, необязательно в комбинации с подходящими добавками любой природы в минимальных пропорциях, при этом добавки не оказывают никаких существенных вредных воздействий на кожу. Указанные добавки могут облегчать введение через кожу и/или могут быть полезными при получении требуемых композиций. Данные композиции можно наносить различными путями, например, в виде чрескожного пластыря, путем точечной обработки или в виде мази.

Особенно преимущественно для простоты введения и однородности дозирования составлять вышеупомянутые фармацевтические композиции в виде стандартной лекарственной формы. Стандартные лекарственные формы в контексте данного описания и формулы изобретения относятся к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единиц дозирования, при этом каждая единица содержит заранее определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые таблетки или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, пакеты с порошкообразным продуктом, пластинки, растворы или суспензии для инъекций, чайные ложки с верхом, столовые ложки с верхом и т.п., а также их отдельные кратные количества.

Точная дозировка и частота введения зависят от конкретного применяемого соединения формулы (I), конкретного состояния, подлежащего лечению, тяжести подлежащего лечению состояния, возраста, веса, пола, степени тяжести нарушения и общего физического состояния конкретного пациента, а также от другого медикаментозного лечения, которое возможно получает индивидуум, как это хорошо известно специалистам в данной области. Более того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество может быть снижено или увеличено в зависимости от реакции подвергаемого лечению субъекта и/или в зависимости от оценки врача, назначающего соединения согласно настоящему изобретению.

В зависимости от способа введения фармацевтическая композиция будет содержать массовую долю от 0,05 до 99%, предпочтительно от 0,1 до 70%, более предпочтительно от 0,1 до 50% активного ингредиента и от 1 до 99,95%, предпочтительно от 30 до 99,9%, более предпочтительно от 50 до 99,9% фармацевтически приемлемого носителя, при этом все процентные содержания приводятся в пересчете на общий вес композиции.

Соединения по настоящему изобретению можно применять для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение; или для местного введения, такого как с помощью ингаляции, назального спрея, глазных капель или с помощью крема, геля, шампуня или т.п. Соединения предпочтительно вводят перорально. Точная дозировка и частота введения зависят от конкретного применяемого соединения в соответствии с формулой (I), конкретного состояния, подвергаемого лечению, тяжести состояния, подвергаемого лечению, возраста, веса, пола, степени тяжести расстройства и общего физического состояния конкретного пациента, а также другого медикаментозного лечения, которое индивидуум может получать, что хорошо известно специалистам в данной области. Более того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество может быть снижено или увеличено в зависимости от реакции подвергаемого лечению субъекта и/или в зависимости от оценки врача, назначающего соединения согласно настоящему изобретению.

Количество соединения формулы (I), которое можно объединять с материалом носителя для получения лекарственной формы с однократной дозировкой, будет варьировать в зависимости от заболева- 13 031041 ния, подвергаемого лечению, вида млекопитающего и конкретного способа введения. Однако в качестве общего руководства подходящие стандартные дозы соединений по настоящему изобретению могут, например, предпочтительно содержать от 0,1 мг до приблизительно 1000 мг активного соединения. Предпочтительная стандартная доза составляет от 1 мг до примерно 500 мг. Более предпочтительная стандартная доза составляет от 1 мг до приблизительно 300 мг. Еще более предпочтительная стандартная доза составляет от 1 мг до приблизительно 100 мг. Такие стандартные дозы можно вводить более одного раза в сутки, например 2, 3, 4, 5 или 6 раз в сутки, но предпочтительно 1 или 2 раза в сутки, с тем, чтобы общая дозировка для взрослого человека массой 70 кг находилась в диапазоне от 0,001 до приблизительно 15 мг на кг веса субъекта в расчете на одно введение. Предпочтительная дозировка составляет от 0,01 мг на кг до приблизительно 1,5 мг на кг массы субъекта в расчете на одно введение, и такая терапия может продолжаться в течение нескольких недель или месяцев, а в некоторых случаях в течение нескольких лет. Однако следует понимать, что определенный уровень дозы для любого конкретного пациента будет зависеть от ряда факторов, в том числе активности определенного используемого соединения; возраста, веса тела, общего состояния здоровья, пола и режима питания индивидуума, подвергаемого лечению; времени и пути введения; скорости выведения; других лекарственных средств, которые были введены ранее; и тяжести конкретного заболевания, подвергаемого терапии, что хорошо понятно специалистам в данной области.

Типичной дозой может быть одна таблетка от 1 мг до приблизительно 100 мг или от 1 мг до приблизительно 300 мг, принимаемая один раз в сутки или несколько раз в сутки, или одна капсула или таблетка пролонгированного действия, принимаемая один раз в сутки и имеющая пропорционально более высокое содержание активного ингредиента. Эффекта пролонгированного действия можно достичь с помощью материалов капсулы, которые растворяются при различных значениях рН, с помощью капсул с медленным высвобождением при осмотическом давлении или с помощью любых иных известных средств, обеспечивающих контролируемое высвобождение.

В некоторых случаях может понадобиться применение дозировок вне этих диапазонов, что будет очевидно специалистам в данной области. Кроме того, следует отметить, что клиницист или лечащий врач будут знать, как и когда начинать, прерывать, корректировать или завершать терапию в соответствии с реакцией отдельного пациента.

В отношении композиций, способов и наборов, приведенных выше, специалисту в данной области будет понятно, что предпочтительными соединениями для применения в каждом из них являются такие соединения, отмеченные как предпочтительные выше. Еще более предпочтительными соединениями для композиций, способов и наборов являются соединения, приведенные в неограничивающих примерах ниже.

Экспериментальная часть.

Здесь и далее термин т.пл. означает температуру плавления, мин означает минуты, aq. означает водный, р.с. означает реакционную смесь, к.т. означает комнатную температуру, ТГФ означает тетрагидрофуран, ДМФА означает диметилформамид, DCM означает дихлорметан, EtOAc означает этилацетат, MeCN означает ацетонитрил, МеОН означает метанол, rac означает рацемический, насыщ. означает насыщенный, СКЖХ означает сверхкритическую жидкостную хроматографию, СКЖХ-МС означает сверхкритическую жидкостную хроматографию/масс-спектрометрию, ЖХ-МС означает жидкостную хроматографию/масс-спектрометрию, ГХ-МС означает газовую хроматографию/масс-спектрометрию, ВЭЖХ означает высокоэффективную жидкостную хроматографию, ОФ означает обращенно-фазовая, СЭЖХ означает сверхэффективную жидкостную хроматографию, R_t означает время удерживания (в минутах), [М+Н]⁺ означает массу протонированной молекулы соединения в форме свободного основания, DMTMM означает 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4метилморфолиния хлорид, Et₂O означает диэтиловый эфир, ДМСО означает диметилсульфоксид, ЯМР означает ядерный магнитный резонанс, LDA означает диизопропиламид лития, NH₄Cl означает хлорид аммония, MgSO₄ означает сульфат магния, NaHCO₃ означает бикарбонат аммония, HCl означает хлористоводородную кислоту, P₂S₅ означает пентасульфид фосфора, Na₂SO₄ означает сульфат натрия, CO₂ означает диоксид углерода, iPrNH₂ означает изопропиламин, NH₄HCO₃ означает гидрокарбонат аммония, iPrOH означает изопропанол, EtOH означает этанол и вес. означает весовой.

Для ключевых промежуточных соединений, как и для некоторых конечных соединений, абсолютную конфигурацию хиральных центров (обозначена как R и/или S) устанавливали посредством сравнения с образцами с известной конфигурацией или путем использования аналитических методик, пригодных для определения абсолютной конфигурации, таких как VCD (вибрационный круговой дихроизм) или рентгеноструктурная кристаллография.

А. Получение промежуточных соединений.

Пример А1.

Получение промежуточного соединения 1.

- 14 031041

Изопропоксид титана (IV) (65 г, 286 ммоль) добавляли к перемешанной смеси 3-бромацетофенона [(CAS 2142-63-4), 30 г, 150 ммоль] и да-2-метил-2-пропансульфинамида (21,9 г, 181 ммоль) в ТГФ (600 мл). Смесь перемешивали при 80°С в течение 16 ч. Смесь охлаждали до к.т. и добавляли воду. Полученную в результате смесь фильтровали через подушку из диатомовой земли. Фильтрат экстрагировали, используя EtOAc (3х). Объединение органические слои сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали, используя колоночную флэш-хроматографию (силикагель; элюент: гептан/EtOAc от 100/0 до 75/25). Требуемые фракции собирали и концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 1 (38 г, выход 79%) в виде желтого масла.

Пример А2.

Получение промежуточного соединения 2

Промежуточное соединение 1 (20,6 г, 68 ммоль) и этил-(2E)-4,4,4-трифторбут-2-еноат (10,2 мл, 68 ммоль) растворяли в ТГФ (950 мл) и охлаждали до -30°С в атмосфере азота. Трет-бутоксид калия (15,3 г, 136 ммоль) добавляли, поддерживая температуру при -30°С. Через один час реакцию гасили, используя насыщ. aq. раствор NH₄Cl (110 мл) и смеси давали нагреться до к.т. Полученную смесь экстрагировали, используя DCM (3х), и промывали солевым раствором (2х). Объединенные органические слои сушили (MgSO4), фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Остаток очищали, используя колоночную флэш-хроматографию (силикагель; элюент: гептан/EtOAc от 100/0 до 80/20). Требуемые фракции собирали и концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 2 (15,77 г, выход 46%).

Пример A3.

Получение промежуточного соединения 3

К перемешанному раствору промежуточного соединения 2 (15,8 г; 33,5 ммоль) в ТГФ (327 мл) в атмосфере азота при -78°С по каплям добавляли эфират трифторида бора (17,6 г, 67 ммоль). Через 5 мин добавляли метилмагнийбромид (1,4М, 120 мл, 167,6 ммоль) и смесь перемешивали при -78°С в течение 30 мин. Реакцию гасили добавлением насыщ. aq. раствора NaHCO₃ (120 мл) и смесь экстрагировали, используя DCM (3х). Объединенные органические слои сушили (MgSO₄), фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Остаток очищали, используя колоночную флэш-хроматографию (силикагель; элюент: гептан/EtOAc от 90/10 до 60/40). Требуемые фракции собирали и концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 3 (8,23 г, выход 50%).

Пример А4.

Получение промежуточного соединения 4

О

К промежуточному соединению 3 (8,23 г, 14,2 ммоль) медленно добавляли HCl (4М раствор в диоксане, 32 мл, 128 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 10 мин. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом и остаток растворяли в DCM (100 мл). Насыщ. aq. раствор NaHCO₃ добавляли до достижения рН 8 и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Смесь экстрагировали, используя DCM (3х) и объединенные органические слои сушили (MgSO₄), фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Остаток очищали, используя колоночную флэш-хроматографию (силикагель; элю

- 15 031041 ент: гептан/EtOAc от 100/0 до 45/55). Требуемые фракции отбирали и концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 4 (5,26 г, выход 93%) в виде смеси диастереоизомеров.

Пример А5.

Получение промежуточного соединения 5

S

К раствору промежуточного соединения 4 (5,26 г, 13,14 ммоль) в ТГФ (50 мл) при к.т. добавляли P₂S₅ (2,92 г, 13,14 ммоль). Смесь перемешивали при 60°С в течение 45 мин, затем охлаждали до к.т., отфильтровывали и органический растворитель выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали, используя колоночную флэш-хроматографию (силикагель; элюент: DCM). Требуемые фракции отбирали и выпаривали под вакуумом с получением промежуточного соединения 5 (3,94 г, выход 85%) в виде смеси диастереоизомеров (3:1).

Пример А6.

Получение промежуточного соединения 6

Промежуточное соединение 5 (1,67 г, 4,7 4 ммоль) растворяли в 7N аммиаке в МеОН (153 мл) и реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 16 ч. Затем растворитель выпаривали и неочищенный продукт очищали, используя колоночную хроматографию (силикагель; элюент: DCM/7М раствор аммиака в МеОН от 100/0 до 90/10). Требуемые фракции отбирали и концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 6 (1,46, выход 92%; смесь диастереоизомеров) в виде коричне ватого масла.

Пример А7.

Получение промежуточного соединения 7

Промежуточное соединение 6 (1 г, 2,98 ммоль) объединяли с азидом натрия (0,485 г, 7,46 ммоль), иодидом меди (0,71 г, 5,22 ммоль) и карбонатом натрия (0,632 г, 5,97 ммоль) в ДМСО (43 мл) и реакционную смесь дегазировали. После этого добавляли N.N'-диметилэтилендиамин (0,56 мл, 5,22 ммоль) и смесь нагревали при 110°С до завершения реакции. Р.с. охлаждали и добавляли DCM. Органический слой промывали водным раствором аммиака. Органический слой отделяли, высушивали (MgSO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (силикагель; элюент: DCM/7M раствор аммиака в МеОН от 100/0 до 80/20). Требуемые фракции отбирали и концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 7 (0,271 г, выход 31%, смесь диастереоизомеров).

Пример А8.

Получение промежуточного соединения 8

Изопропоксид титана (IV) (126 г, 552,99 ммоль) добавляли к перемешанной смеси 5-бром-2фторацетофенона [(CAS 198477-89-3), 120 г, 552,99 ммоль] и Щ)-2-метил-2-пропансульфинамида (67 г, 552,99 ммоль) в ТГФ (600 мл). Смесь перемешивали при 80°С в течение 16 ч. Смесь охлаждали до к.т. и добавляли воду. Полученную в результате смесь фильтровали через подушку из диатомовой земли. Фильтрат экстрагировали, используя EtOAc (3х). Объединенные органические слои сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали, используя колоночную флэшхроматографию (силикагель; элюент: петролейный эфир/EtOAc от 51/0 до 50/1). Требуемые фракции отбирали и концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 8 (100 г, выход 57%).

- 16 031041

Пример А9.

Получение промежуточного соединения 9

Промежуточное соединение 8 (100 г, 312,5 ммоль) и этил-(2Е)-4,4,4-трифторбут-2-еноат (53 г, 312,5 ммоль) растворяли в ТГФ (500 мл) и охлаждали до -78°С в атмосфере азота. Раствор LDA (625 мл, 312,5 ммоль) добавляли, поддерживая температуру при -78°С. После полного расходования исходных веществ реакцию гасили, используя насыщ. aq. раствор NH₄Cl (300 мл) и смеси давали нагреться до к.т. Полученную смесь экстрагировали, используя DCM (3х), и промывали солевым раствором (2х). Объединенные органические слои сушили (MgSO₄), фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом с получением промежуточного соединения 9 (100 г, выход 81%), которое использовали без дополнительной обработки в следующей реакции.

Пример А10.

Получение промежуточного соединения 10

Промежуточное соединение 10 получали согласно методике синтеза, аналогично описанной для синтеза промежуточного соединения 3. Используя промежуточное соединение 9 (120 г, 245,9 ммоль) в качестве исходного материала, получали промежуточное соединение 10 и использовали в полученном виде в следующей стадии (100 г, выход 80%).

Пример A11.

Получение промежуточного соединения 11 о

Промежуточное соединение 11 получали согласно методике синтеза, аналогично описанной для синтеза промежуточного соединения 4. Начиная с промежуточного соединения 10 (100 г, 198,4 ммоль), получали промежуточное соединение 11 (8,1 г, выход 12%).

Пример А12.

Получение промежуточного соединения 12

S

Промежуточное соединение 12 получали согласно методике синтеза, аналогично описанной для синтеза промежуточного соединения 5. Начиная с промежуточного соединения 11 (8 г, 18,98 ммоль), получали промежуточное соединение 12 в виде белого порошка (5,53 г, выход 79%).

Пример А13.

Получение промежуточного соединения 13

Промежуточное соединение 12 (5,53 г, 14,94 ммоль) растворяли в 7н. растворе аммиака в МеОН (482 мл) и р.с. перемешивали при 90°С в течение 16 ч, затем растворитель выпаривали и неочищенный продукт повторно растворяли в 7н. аммиака в МеОН (482 мл) и р.с. перемешивали при 90°С еще 24 ч до полного расходования исходных компонентов. Растворитель выпаривали и неочищенный продукт очищали, используя колоночную хроматографию (силикагель; элюент: DCM/7М раствор аммиака в МеОН от 100/0 до 90/10). Требуемые фракции собирали и концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 13 (5,073 г, выход 96%) в виде коричневатого масла.

- 17 031041

Пример А14.

Получение промежуточного соединения 14

Промежуточное соединение 14 получали согласно методике синтеза, аналогично описанной для синтеза промежуточного соединения 7. Начиная с промежуточного соединения 13 (5,073 г, 14,37 ммоль), получали промежуточное соединение 14 в виде светло-коричневого масла.

Пример А15.

Получение промежуточного соединения 15

Тионилхлорид (19.9 мл, 274,14 ммоль) вносили в смесь 2-амино-2-(5-бром-2-фторфенил)уксусной кислоты (CAS: 318269-93-1, 20 г, 80,63 ммоль) в EtOH (264 мл) при 0°С. Смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 16 ч, затем летучие компоненты удаляли под вакуумом и неочищенный продукт разбавляли насыщ. aq. раствором NaHCO₃. Продукт экстрагировали, используя DCM. Органический слой сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением желтого масла, которое очищали, используя колоночную хроматографию (силикагель; элюэнт: гептан/EtOAc от 100/0 до 50/50). Требуемые фракции собирали и концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 15 (14,22 г, 64%) в виде желтого масла.

Пример А16.

Получение промежуточного соединения 16

NaH (60% дисперсия в минеральном масле, 6,08 г, 152,06 ммоль) вносили в раствор промежуточного соединения 15 (13 г, 47,08 ммоль) в ТГФ (310 мл), охлажденный до 0°С. После перемешивания в течение 20 мин по каплям добавляли этил-4,4,4-трифторкротонат (24,7 мл, 164,79 ммоль) и смесь перемешивали в течение 2 ч. Затем смесь разбавляли водой и aq. слой экстрагировали, используя EtOAc. Органический слой отделяли, сушили над Na2SO4, фильтровали и растворители удаляли под вакуумом с получением твердого вещества желтого цвета, которое дополнительно очищали, используя колоночную хроматографию (силикагель; гептан/EtOAc от 100/0 до 60/40). Требуемые фракции собирали и концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 16 (13,4 г, 71%, рацемическая смесь) в виде твердого вещества желтого цвета.

Пример А17.

Получение промежуточного соединения 17 о

Борогидрид натрия (7,127 г, 188,37 ммоль) несколькими порциями добавляли к раствору промежуточного соединения 16 (15 г, 37,674 ммоль) в смеси ТГФ (344 мл) и воды (26 мл), охлажденному до 0°С. Смесь перемешивали 5 ч, затем разбавляли насыщ. aq. раствором NH₄Cl и aq. слой экстрагировали, используя EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель; гексан/EtOAc от 100/100 до 30/70). Требуемые фракции собирали и концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 17 (11,66 г, 87%, рацемическая смесь) в виде твердого вещества белого цвета.

Если использовать условия реакции, подобные описанным для синтеза промежуточного соединения 16 и промежуточного соединения 17, то промежуточное соединение 17 можно также получить в две стадии, начиная с доступного в продаже метил-2-амино-2-(5-бром-2-фторфенил)ацетатата (CAS:1218158-225).

- 18 031041

Пример А18.

Получение промежуточного соединения 18

К раствору промежуточного соединения 17 (400 мг, 1,12 ммоль) в DCM (10 мл), охлажденному до 0°С, добавляли метансульфонилхлорид (0,26 мл; 3,37 ммоль) и триэтиламин (0,47 мл; 3,37 ммоль) и смесь перемешивали 2 ч. Смесь разбавляли насыщ. aq. раствором NH₄Cl и aq. слой экстрагировали, используя EtOAc (3х). Органический слой отделяли, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт растворяли в ДМФА (10 мл) и добавляли борогидрид натрия (128 мг, 3,37 ммоль). Смесь нагревали при 70°С в течение 4 ч. Смесь разбавляли водой и aq. слой экстрагировали, используя EtOAc (3х). Органический слой отделяли, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель; элюэнт: гептан/EtOAc от 50/50 до 0/100) с получением промежуточного соединения 18 (220 мг, выход 58%, рацемическая смесь) в виде твердого вещества (т.пл. 166-168°С).

Пример А19.

Получение промежуточного соединения 19

К раствору промежуточного соединения 18 (170 мг, 0,50 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавляли P₂S₅ (89 мг, 0,40 ммоль) и смесь нагревали при 50°С в течение 2 ч. Полученную суспензию отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в 7М растворе аммиака в МеОН (1 мл) и добавляли 32% aq. раствор аммиака (2,5 мл). Смесь нагревали в течение 1 ч при 120°С под воздействием микроволнового излучения, затем ее разбавляли водой и экстрагировали, используя DCM (3х). Органический слой отделяли, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (силикагель; элюент: EtOAc/гексан/7М раствор аммиака в МеОН 30/90/10) с получением промежуточного соединения 19 (105 мг, выход 62%, рацемическая смесь) в виде твердого вещества (т.пл. 110-112°С).

Пример А20.

Получение промежуточного соединения 20

К суспензии 2-амино-2-(2-фторфенил)уксусной кислоты [(CAS 84145-28-8), 2,26 г, 13,37 ммоль] в МеОН (45 мл) по каплям добавляли тионилхлорид (1,27 мл, 17,4 ммоль) и смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником 18 ч. Смесь затем концентрировали под вакуумом, неочищенный продукт суспендировали в DCM (45 мл) и добавляли триэтиламин (3,72 мл, 26,7 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 10 мин, затем концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт суспендировали в Et2O, осадок удаляли фильтрацией и фильтрат концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 20 (2,35 г, выход 96%, рацемическая смесь).

Пример А21.

Получение промежуточного соединения 21 и промежуточного соединения 22

Гидрид натрия (60% в минеральном масле, 1,31 г, 32,75 ммоль) вносили в раствор промежуточного соединения 20 (2 г, 10,92 ммоль) в ТГФ (109 мл), охлажденный до 0°С. После перемешивания в течение 20 мин по каплям добавляли этил (2Е)-4,4,4-трифторбут-2-еноат (5,71 мл, 38,22 ммоль) и смесь переме

- 19 031041 шивали в течение 6 ч. Смесь разбавляли водой и aq. слой экстрагировали, используя EtOAc (3х). Органический слой отделяли, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель; элюент: гептан/EtOAc 50/50). Требуемые фракции собирали и концентрировали под вакуумом, получая промежуточное соединение 21 (1,36 г, выход 39%, рацемическая смесь) и промежуточное соединение 22 (765 мг, выход 23%, рацемическая смесь), оба в виде твердых веществ белого цвета (промежуточное соединение 21, т.пл. 161-163°С; промежуточное соединение 22, т.пл. 182-184°С).

Пример А22.

Получениепромежуточного соединения 23

Борогидрид натрия (340 мг, 9,0 ммоль) несколькими порциями добавляли к раствору промежуточ ного соединения 22 (550 мг, 1,80 ммоль) в смеси ТГФ:вода (18:1,5 мл), охлажденному до 0°С, и смесь перемешивали 2 ч. Смесь разбавляли насыщ. aq. раствором NH₄Cl и aq. слой экстрагировали, используя

EtOAc (3х). Органический слой отделяли, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель; элюент: гептан/EtOAc 70/30). Требуемые фракции собирали и концентрировали под вакуумом с получением промежуточного соединения 23 (4 90 мг, выход 98%, рацемическая смесь) в виде твердого вещества (т.пл. 170-172°С). Пример А23.

Получение промежуточного соединения 24

К раствору промежуточного соединения 23 (470 мг; 1,69 ммоль) в DCM (17 мл), охлажденному до 0°С, добавляли метансульфонилхлорид (0,39 мл; 5,1 ммоль) и триэтиламин (0,71 мл; 5,1 ммоль) и смесь перемешивали 2 ч. Смесь разбавляли насыщ. aq. раствором NH4Cl и aq. слой экстрагировали, используя EtOAc (3х). Органический слой отделяли, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт растворяли в ДМФА (17 мл), добавляли борогидрид натрия (192 мг, 5,07 ммоль) и смесь нагревали при 70°С в течение 4 ч. Смесь разбавляли водой и aq. слой экстрагировали, используя EtOAc (3х). Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель; элюэнт: гептан/EtOAc от 50/50 до 100/0) с получением промежуточного соединения 24 (322 мг, выход 73%, рацемическая смесь) в виде твердого вещества (т.пл. 179-181°С).

Пример А24.

Получение промежуточного соединения 25

К раствору промежуточного соединения 24 (500 мг; 1,91 ммоль) в серной кислоте (3,8 мл) добавляли азотную кислоту (дымящая 90%-ная, 0,2 мл) и смесь перемешивали 2 ч. Смесь охлаждали до 0°С, разбавляли водой и aq. слой экстрагировали, используя EtOAc (3х). Органический слой отделяли, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель; элюэнт: гептан/EtOAc от 50/50 до 100/0) с получением промежуточного соединения 25 (520 мг, выход 89%, рацемическая смесь) в виде твердого вещества (т.пл. 230-232°С).

Пример А25.

Получение промежуточного соединения 26

- 20 031041

К раствору промежуточного соединения 25 (520 мг, 1,70 ммоль) в МеОН (34 мл) добавляли палладий на угле (10% вес./вес., 90 мг, 50 мол.%). Смесь перемешивали в атмосфере водорода (1 атм) в течение ночи и затем фильтровали через диатомовую землю, а растворители выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (силикагель; элюент:MeOH/EtOAc) с получением промежуточного соединения 26 (450 мг, выход 96%, рацемическая смесь) в виде твердого вещества (т.пл. 134-136°С).

Пример А26.

Получение промежуточного соединения 27

К раствору промежуточного соединения 26 (450 мг, 1,63 ммоль) в ТГФ (16 мл) добавляли P₂S₅ (290 мг, 1,3 ммоль) и смесь нагревали при 50°С в течение 2 ч. Полученную суспензию отфильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в 7М растворе аммиака в МеОН (3,2 мл) и добавляли 32% aq. раствора аммиака (8 мл) и смесь нагревали 1 ч при 120°С под воздействием микроволнового излучения. Смесь затем разбавляли водой и экстрагировали, используя DCM (33х). Органический слой отделяли, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель; элюент: EtOAc/7M раствор аммиака в МеОН 90/10) с получением промежуточного соединения 27 (188 мг, выход 42%, рацемическая смесь) в виде твердого вещества (т.пл. 130-132°С).

В альтернативном случае промежуточное соединение 27 можно также получить, начиная с промежуточного соединения 24, следуя последовательности синтеза, сходной с последовательностью синтезов (в следующем порядке) промежуточного соединения 27, промежуточного соединения 25 и промежуточного соединения 26.

В. Получение конечных соединений.

Пример В1.

Получение соединения 1: (4R,6S)-6-метил-6-(3-пиримидин-5-илфенил)-4-(трифторметил)-3,4,5,6тетрагидропиридин-2-амин и соединения 2: (4S, 6S)-6-метил-6- (3-пиримидин-5-илфенил)-4(трифторметил)-3,4,5,6-тетрагидропиридин-2-амин

Промежуточное соединение 6 (0,284 г, 0,847 ммоль), 5-пиримидинилбороновую кислоту (0,157 г, 1,271 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин) палладий(0) (0,147 г, 0,127 ммоль) растворяли в смеси 1,4диоксана (12 мл) и aq. NaHCO₃ (насыщ. раствор, 1,5 мл). Полученную смесь продували азотом и нагревали при 80°С в течение 2 ч. Р.с. затем разбавляли водой и экстрагировали, используя DCM. Органический слой отделяли, высушивали (Na2SO4), фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель; элюент: DCM/7М раствор аммиака в МеОН от 100/0 до 90/10). Требуемые фракции собирали и концентрировали под вакуумом. Остаток затем очищали с помощью препаративной СКЖХ на Chiralpak® AD Daicel (20x250 мм, подвижная фаза: СО₂, МеОН с 0,2% iPrNH₂), получая соединение 1 (0,082 г, выход 29%) и другую фракцию, которую очищали дополнительно, используя препаративную ВЭЖХ (RP Vydac Denali C18-10 мкМ 200 г, 5 см; подвижная фаза: 0,25% раствор NH₄HCO₃ в воде, MeCN), получая соединение 2 (5 мг, выход 2%).

Пример В2.

Получение соединения 3: N-{3-[(2S,4R)-6-амино-2-метил-4-(трифторметил)-2,3,4,5-тетрагидропиридин-2-ил]фенил}-5-метоксипиразин-2-карбоксамид и соединения 4: N-{3-[(2S,4S)-6-амино-2-метил- 21 031041

4-(трифторметил)-2,3,4,5-тетрагидропиридин-2-ил]фенил}-5-метоксипиразин-2-карбоксамид

5-Метоксипиразин-2-карбоновую кислоту (0,064 г, 0,417 ммоль) растворяли в МеОН (15 мл) и добавляли DMTMM (0,147 г, 0,5 ммоль). После перемешивания смеси в течение 5 мин по каплям добавляли раствор промежуточного соединения 7 (0,113 г, 0,417 ммоль) в МеОН (5 мл) при 0°С и смесь перемешивали еще 4 ч. Растворитель выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель; элюент: DCM/7М раствор аммиака в МеОН от 100/0 до 90/10). Требуемые фракции собирали и концентрировали под вакуумом. Остаток затем очищали с помощью препаративной СКЖХ на Chiralpak® OD Daicel (20x250 мм, подвижная фаза: СО₂, МеОН с 0,2% iPrNH₂), получая соединение 3 (38 мг, выход 22%) и соединение 4 (14 мг, выход 8%).

Пример В3.

Получение соединения 5: N-[3-[(2S,4R)-6-амино-2-метил-4-(трифторметил)-4,5-дигидро-3Н-пиридин-2-ил]фенил]-5-хлор-3-фтор-пиридин-2-карбоксамид и соединения 6: N-[3-[(2S,4S)-6-амино-2-метил4-(трифторметил)-4,5-дигидро-3Н-пиридин-2-ил]фенил]-5-хлор-3-фтор-пиридин-2-карбоксамид

Следуя методике синтеза, сходной с методикой, используемой для синтеза соединения 2 и соединения 3, начиная с 5-хлор-3-фторпиридин-2-карбоновой кислоты, получали неочищенную смесь, которую далее очищали с помощью препаративной СКЖХ на Chiralcel® OD Daicel (20x250 мм; подвижная фаза: СО₂, МеОН с 0,2% iPrNH₂), получая соединение 5 (30 мг, выход 19%) и соединение 6 (10 мг, выход 6%).

Пример В4.

Получение соединения 7: N-[3-[(2S,4R)-6-амино-2-метил-4-(трифторметил)-4,5-дигидро-3Н-пиридин-2-ил]фенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид и соединения 8: N-[3-[(2S,4S)-6-амино-2-метил-4(трифторметил) -4,5 -дигидро-3Н-пиридин-2 -ил] фенил] -5 -цианопиридин-2 -карбоксамид

Следуя методике синтеза, сходной с методикой, используемой для синтеза соединения 2 и соединения 3, начиная с 5-циано-2-карбоновой кислоты, получали неочищенную смесь, которую далее очищали сначала с помощью препаративной ВЭЖХ на RP Vydac Denali С18 (10 мкМ 200 г, 5 см; подвижная фаза: 0,25% раствор NH₄HCO₃ в воде, MeCN), а затем препаративной СКЖХ на Chiralcel® OD Daicel (20x250 мм; подвижная фаза: СО₂, МеОН с 0,2% iPrNH₂), получая соединение 5 (30 мг, выход 19%) и соединение 6 (10 мг, выход 6%).

Пример В5.

Получение соединения 9: N-{3-[(2S,4R)-6-амино-2-метил-4-(трифторметил)-4,5-дигидро-3Нпиридин-2-ил]-4-фтор-фенил]-5-метоксипиразин-2-карбоксамид

- 22 031041

5-Метоксипиразин-2-карбоновую кислоту (0,157 г, 1,02 ммоль) растворяли в МеОН (30 мл) и добавляли DMTMM (0,299 г, 1,02 ммоль). После перемешивания смеси в течение 5 мин добавляли раствор промежуточного соединения 14 (0,28 г, 0,968 ммоль) в МеОН (10 мл) при 0°С и смесь перемешивали в течение ночи. Растворитель выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель; элюент: DCM/7М аммиак в МеОН от 100/0 до 92/8). Требуемые фракции собирали и концентрировали под вакуумом. Обработкой гептаном получали белый осадок, который сушили в течение ночи (вакуумный нагревательный шкаф, 50°С), получая соединение 9 (0,248 г, выход 60%).

Пример В6.

Получение соединения 14: (±)-(28*,3К*)-2-(4-фтор-[1,Г-бифенил]-3-ил)-2-метил-3-(трифторметил)3,4 -дигидро -2Н -пиррол-5 -амин

соединение 14: ©(RS); Сз(RS), один диастереоизомер (цис)тетракис(трифенилфосфин)палладий (16 мг, 0,014 ммоль) и 5-пиримидинилбороновую кислоту (35 мг, 0,28 ммоль) вносили в раствор racпромежуточного соединения 19 (48 мг, 0,14 ммоль) в смеси насыщ. aq. раствора NaHCO₃ и диоксана (2,8:2,4 мл) и смесь нагревали при 80°С в течение 2 ч. Смесь разбавляли водой и экстрагировали, используя DCM (3х). Органический слой отделяли, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и растворители выпаривали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель; элюент: DCM/7M аммиак в МеОН от 100/0 до 85/15) с получением соединения 14 (33 мг, выход 69%, рацемическая смесь, цис).

Пример В7.

Получение соединения 15: (±)-N-(3-((25*,3R*)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидро-2Нпиррол-2-ил)-4-фторфенил)-5-хлорпиколинамид, соединения 19: N-[3-[(2S,3R)-5-амино-2-метил-3(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-5-хлорпиридин-2-карбоксамид и соединения 20: N-[3-[(2R,3 S)-5-амино-2-метил-3 -(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил] -4-фторфенил] -5 хлорпиридин-2 -карбоксамид

соединение 15: ©(RS); ©(RS), один диастереоизомер (цис);

соединение 19: ©(S); ©(R), один диастереоизомер, чистый энантиомер; соединение 20: C2(R); C3(S), один диастереоизомер, чистый энантиомер.

5-Хлорпиколиновую кислоту (29 мг, 0,18 ммоль) вносили в раствор 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин2-ил)-4-метилморфолиния хлорида (64 мг, 0,22 ммоль) в МеОН (3,2 мл) при к.т. После перемешивания в течение 5 мин добавляли раствор rac-промежуточного соединения 27 в МеОН (3,2 мл) при 0°С и смесь перемешивали 16 ч. Растворитель выпаривали под вакуумом и неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель; элюэнт: DCM/ 7М аммиак в МеОН от 100/10 до 95/5). Требуемые фракции отбирали и концентрировали под вакуумом, получая соединение 15 (28 мг, выход 37%, рацемическая смесь) в виде твердого вещества белого цвета, которое далее очищали с помощью хиральной СКЖХ на Chiralcel® OD-H (20x250 мм; подвижная фаза: 60% СО₂, 40% EtOH с 0,3% iPrNH₂), получая соединение 19 (13 мг, выход 9%) и соединение 20 (14 мг, выход 9%).

Пример В8.

Получение соединения 16: (±)-N-[3-[(2S*,3R*)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропир

- 23 031041 рол-2-ил]-4-фторфенил]-2-метилоксазол-4-карбоксамид, соединения 35: N-[3-[(2R,3S)-5-амино-2-метил3 -(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил] -4-фторфенил] -2-метилоксазол-4-карбоксамид и соединения 36: N-[3-[(2S,3R)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-2-метилоксазол-4-карбоксамид

соединение 16: O₂(RS); Сз(RS), один диастереоизомер, (цис);

соединение 35: C₂(R); C₃(S), один диастереоизомер, чистый энантиомер; соединение 36: С₂^); O₃(R). один диастереоизомер, чистый энантиомер.

Следуя методике синтеза, сходной с методикой, используемой для синтеза соединения 15, начиная с 2-метоксазол-4-карбоновой кислоты, получали соединение 16 (70 мг, выход 28%) после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ на С18 Xbridge (30x100 мм, 5 мкм; подвижная фаза: градиент от 74% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде с рН 9, 26% MeCN до 58% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде с рН 9, 42% MeCN). Последующим разделением с помощью хиральной СКЖХ на Chiralpak® AD-H Daicel (20x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза 80% СО₂, 20% iPrOH с 0,3% iPrNH₂) получая соединение 35 (24 мг, выход 10%) и соединение 36 (29 мг, выход 12%).

Пример В9.

Получение соединения 17: (±)-N-[3-[(25*,3R*)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-5-метоксипиразин-2-карбоксамид, соединения 27: N-[3-[(2R,3S)-5-амино-2метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-5-метоксипиразин-2-карбоксамид и соединения 34: N-[3-[(2S,3R)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]5-метоксипиразин-2-карбоксамид

соединение 17: O_;(RS); G'dRS), один диастереоизомер, (цис);

соединение 27: C2(R); C3(S), один диастереоизомер, чистый энантиомер;

соединение 34: Q(S); GlfR), один диастереоизомер, чистый энантиомер.

Следуя методике синтеза, сходной с методикой, используемой для синтеза соединения 15, начиная с 5-метоксипиразин-2-карбоновой кислоты, получали соединение 17 (96 мг, выход 36%), которое далее очищали с помощью хиральной СКЖХ на Chiralcel® OD-Н Daicel (20x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза: 60% СО₂, 40% EtOH с 0,3% iPrNH₂), получая соединение 27 (30 мг, выход 11%) и соединение 34 (34 мг, выход 13%).

Пример В10.

Получение соединения 18: (±)-N-[3-[(25*,3R*)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид, соединение 25: N-[3-[(2R,3S)-5-амино-2-метил3 -(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил] -4-фторфенил] -5-цианопиридин-2-карбоксамид и соединения 26: N-[3-[(2S,3R)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид

соединение 18: G’₂(RS); C₃(RS), один диастереоизомер, (цис);

соединение 25: С₂(Л); С₃^), один диастереоизомер, чистый энантиомер;

соединение 26: С₂^); OlfR), один диастереоизомер, чистый энантиомер.

Следуя методике синтеза, сходной с методикой, используемой для синтеза соединения 15, начиная с 5-циано-2-карбоновой кислоты получали соединение 18 (80 мг, выход 30%) после очистки с помощью

- 24 031041 препаративной ВЭЖХ на С18 Xbridge (30x100 мм, 5 мкм; подвижная фаза: градиент от 74% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде с рН 9,26% MeCN до 58% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде с рН 9, 42% MeCN). Последующим разделением с помощью хиральной СКЖХ на Chiralcel® OD-H (20x250 мм, 5 мкм; подвижная фаза: 60% СО₂, 40% EtOH с 0,3% iPrNH₂) получали соединение 25 (30 мг, выход 11%) и соединение 26 (28 мг, выход 11%).

Пример В11.

Получение соединения 21: (±)-N-[3-[(2S*,3R*)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-3-метоксипиридин-2-амин, соединения 37: N-[3-[(2S,3R)-5-амино-2-метил-3(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-3-метоксипиридин-2-амин и соединения 28: N[3-[(2R,3S)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-3-метоксипиридин-2-амин

соединение 21: G_;(RS); G₃(RS). один диастереоизомер, (цис);

соединение 37: СД); СД), один диастереоизомер, чистый энантиомер; соединение 42: 9(R); СД), один диастереоизомер, чистый энантиомер.

Промежуточное соединение 27 (200 мг, 0,727 ммоль) растворяли в iPrOH (8,8 мл). Затем добавляли 2-бром-3-метоксипиридин (273 мг, 1,45 ммоль), а затем - H₂SO₄ (0,19 мл, 3,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 7 дней, затем охлаждали до к.т. и добавляли DCM и насыщ. раствор NaHCO₃. Продукт экстрагировали и органический слой сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом с получением желтого масла, которое очищали, используя колоночную хроматографию (силикагель; элюэнт: DCM/ 7М раствор аммиака в МеОН от 100/0 до 92/8). Требуемые фракции отбирали и концентрировали под вакуумом, получая твердое вещество желтого цвета, которое далее очищали, используя ОФ-ВЭЖХ на С18 XBridge (30x100 мм 5 мкм; подвижная фаза: градиент от 67% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде, рН 9, 33% MeCN до 50% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде, рН 9, 50% MeCN), получая соединение 21 (135 мг, 49%) в виде белого твердого вещества. Последующим разделением с помощью хиральной СКЖХ на Chiralpak® AD-H (5 мкм 250x20 мм; подвижная фаза: 80% СО₂, 20% EtOH с 0,3% iPrNH₂) получали соединение 37 (49 мг, 18%) и соединение 28 (51 мг, 18%).

Пример В12.

Получение соединения 22: (±)-2-[3-[(25*,3R*)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторанилино]пиридин-3-карбонитрил, соединения 38: 2-[3-[(2S,3R)-5-амино-2-метил-3(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторанилино]пиридин-3-карбонитрил и соединения 39: 2-[3[(2R,3S)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторанилино]пиридин-3карбонитрил

соединение 22: iXRS); С₃(Д), один диастереоизомер, (цис);

соединение 38: СД);СД), один диастереоизомер, чистый энантиомер; соединение 39: СД);СД), один диастереоизомер, чистый энантиомер.

Следуя методике синтеза, сходной с методикой, используемой для синтеза соединения 21, начиная с 2-хлорникотинонитрила, получали соединение 22 (27 мг, выход 10%) после очистки с помощью ОФВЭЖХ на С18 XBridge (30x100 мм, 5 мкм; подвижная фаза: градиент от 67% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде с рН 9, 33% MeCN до 50% 10 мМ раствора NH₄cO₃H в воде с рН 9,50% MeCN). Последующим разделением с помощью хиральной СКЖХ на Chiralcel® OD-H (5 мкм 250x20 мм; подвижная фаза: 70% СО2, 30% EtOH с 0,3% iPrNH2) получали две фракции, каждую из которых дополнительно очищали с помощью ОФ-ВЭЖХ на С18 XBridge (30x150 мм; подвижная фаза: градиент от 90% 0,5%-ного раствора NH₄CO₃H в воде, 10% MeCN до 0% 0,5%-ного раствора NH₄CO₃H в воде, 100% MeCN). Получали соединение 38 (7 мг, выход 3%) и соединение 39 (8 мг, выход 3%).

Пример В13.

Получение соединения 23: (±)-N-[3-[(2S*,3R*)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-5-(2-метоксиэтокси)пиразин-2-карбоксамид, соединения 29: N-[3-[(2R,3S)-5амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-5-(2-метоксиэтокси)пиразин-2

- 25 031041 карбоксамид и соединения 30: N-[3-[(2S,3R)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2ил]-4-фторфенил]-5-(2-метоксиэтокси)пиразин-2-карбоксамид

соединение 23: G'/RS); G’₃(RS). один диастереоизомер, (цис);

соединение 29: C₂(R); C₃(S), один диастереоизомер, чистый энантиомер; соединение 30: C₂(S); C₃(R), один диастереоизомер, чистый энантиомер.

Следуя методике синтеза, сходной с методикой, используемой для синтеза соединения 15, начиная с 5-(2-метоксиэтокси)-2-пиразинкарбоновой кислоты, получали соединение 23 (150 мг, выход 18%) после очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ на С18 XBridge (30x100 мм, 5 мкм; подвижная фаза: градиент от 74% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде с рН 9, 26% MeCN до 58% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде с рН 9, 42% MeCN). Дополнительным разделением сначала с помощью ахиральной СКЖХ на CYANO (6 мкм 150x21,2 мм; подвижная фаза: 80% СО₂, 20% iPrOH с 0,3% iPrNH₂), а затем с помощью хиральной СКЖХ на Chiralcel® OD-H (5 мкм 250x20 мм; подвижная фаза: 70% СО₂, 30% EtOH с 0,3% iPrNH₂) получали соединение 29 (27 мг, выход 3%) и соединение 30 (29 мг, выход 4%).

Пример В14. Получение соединения 24: (±)-Ы-[3-[(25*,3И*)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-5-(2,2,2-трифторэтокси)пиразин-2-карбоксамид, соединения 31: N[3-[(2И,3Б)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-5-(2,2,2трифторэтокси)пиразин-2-карбоксамид и соединения 32: N-[3-[(2S,3R)-5-амино-2-метил-3(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фторфенил]-5-(2,2,2-трифторэтокси)пиразин-2-карбоксамид

соединение 24: С₂(ИБ); С₃(ИБ), один диастереоизомер, (цис);

соединение 31: C₂(R); C₃(S), один диастереоизомер, чистый энантиомер; соединение 32: С₂(Б); СТИ), один диастереоизомер, чистый энантиомер.

Следуя методике синтеза, сходной с методикой, используемой для синтеза соединения 15, начиная с 5-(2,2,2-трифторэтокси)пиразин-2-карбоновой кислоты получали соединение 24 (27 мг, выход 18%) после очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ на С18 XBridge (30x100 мм, 5 мкм; подвижная фаза: градиент от 67% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде с рН 9, 33% MeCN до 50% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде с рН 9, 50% MeCN). Дополнительным разделением с помощью хиральной СКЖХ на Chiralcel® OD-H (5 мкм 250x20 мм; подвижная фаза: 70% СО₂, 30% EtOH с 0,3% iPrNH₂) получали соединение 31 (9 мг, выход б%) и соединение 32 (10 мг, выход 6%).

Пример В15.

Получение соединения 40: (±)-Ы-[3-[(2Б*,3И*)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фтор-фенил]-5-бромпиридин-2-карбоксамид, соединения 33: №[3-[(2И,3Б)-5-амино-2-метил3 -(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил] -4-фторфенил] -5-бромпиридин-2-карбоксамид и соединения 41: №[3-[(2Б,3И)-5-амино-2-метил-3-(трифторметил)-3,4-дигидропиррол-2-ил]-4-фтор-фенил]-5-бромпиридин-2-карбоксамид

соединение 40: С₂(ИБ); С₃(ИБ), один диастереоизомер, (цис);

соединение 33: C₂(R); C₃(S), один диастереоизомер, чистый энантиомер;

соединение 41: С₂(Б); С₃(И), один диастереоизомер, чистый энантиомер.

Следуя методике синтеза, сходной с методикой, используемой для синтеза соединения 15, начиная

- 26 031041 с 5-(2,2,2-трифторэтокси)пиразин-2-карбоновой кислоты получали соединение 40 (140 мг, выход 21%) после очистки с помощью ОФ-ВЭЖХ на С18 XBridge (30x100 мм 5 мкм; подвижная фаза: градиент от 67% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде с рН 9, 33% MeCN до 50% 10 мМ раствора NH₄CO₃H в воде с рН 9, 50% MeCN). Дополнительным разделением с помощью хиральной СКЖХ на Chiralcel® OD-H (5 мкм 250x20 мм; подвижная фаза: 60% СО₂, 40% EtOH с 0,3% iPrNH₂) получали соединение 33 (54 мг, выход 8%) и соединение 41 (57 мг, выход 8%).

Соединения 1-13 в табл. 1 и соединения 14-41 в табл. 2 представляют собой перечень соединений, аналогичным образом полученных согласно одному из приведенных выше примеров. В случае, если не указана форма соли, соединение получали в виде свободного основания. № прим. означает номер примера, в соответствии с протоколом которого соединение было синтезировано. № соед. означает номер соединения.

Таблица 1

Соед. №	№ прим.	R2	---L-Ar	стереохимия
1	Б1	н	О N	X(R);Х(3) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
2	Б1	н	'О N	X(3);С6(3) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
3	Б2	н	Al	X (S) ;Х (R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
4	Б2	н	Αχ	Х(3) ;Х (3) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
5	БЗ	н	Αχ	X(3);С4(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
€	БЗ	и	Αχ	C2(S) ;Х (S) ; Один диастереоизомер Чистый энантиомер
7	Б4	н	Αχ.	X(Ξ);С4(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
8	Б4	н	Αχ	X(S) ;С4 (3) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
9	Б5	F	Αχ	X(S);С4(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
10	Б5	F	Αχ.	Х(3) ;X(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер

- 27 031041

11	В5	F	х.	С2(S);С4(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
12	Е5	F	X.	С2(3);С4(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
13	В5	F		С,(S);С4(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер

Таблица 2

'Ar

Соед. №	№ прим.	R2	---L-Ar	стереохимия
14	В6	F	О	С, (RS);С3(RS) Один диастереоизомер (ЦИС)
15	В7	F	X.	C2(RS);С3(RS) Один диастереоизомер (ЦИС)
16	Е8	F	Хг	С2(RS);С3(RS) Один диастереоизомер (ЦИС)
17	В9	F	+Х	C2(RS);С3(RS) Один диастереоизомер (ЦИС)
18	В10	F	=х,	C2(RS);С3(RS) Один диастереоизомер (ЦИС)
19	В7	F		C2(S) ;C3(R) Один диастереоизомер (цис)
20	В7	F	X,	C2(R) ;С3 (Ξ) Один диастереоизомер Чистый энантиомер

- 28 031041

21	Bll	F	AC 1	С2 (RS) ;С3(RS) Один диастереоизомер (цис)
22	B12	F	H ,-N___N. JO	С2 (RS) ;С3(RS) Один диастереоизомер (цис)
23	B13	F	Al 0	С2 (RS) ;С3(RS) Один диастереоизомер (Цис/транс: 92/8)
24	B14	F	Ax^	С,(3) ;C3(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
25	BIO	F	A	C2(R) ;С3 (S) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
26	BIO	F	A	С2(3);С3(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
27	B9	F	Αχ	С,(R);C3(S) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
28	Bll	F	» 1	С,(R);C3(S) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
29	B13	F	Ax о	C2(R);C3(S) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
30	B13	F	Ак~ч	С, (S) ;C3(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
31	B14	F	Ат	C2(R);C3(S) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
32	B14	F	А1 ~	C2(S) ;С3 (R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер

- 29 031041

33	Е15	F	от	C2(R);C3(3) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
34	В9	г		C2(S);C3(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
35	В8	F	Ау	C2(R);C3(S) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
36	В8	F	Λν	C2(S);C3(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
37	В11	F	00 1	С2(3);С3(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
3S	В12	F	io	С2(S);С3(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
39	В12	F	io	С2(R);С3(S) Один диастереоизомер Чистый энантиомер
40	В15	F	ОТ	C2(RS);C5(RS) Один диастереоизомер (ЦИС)
41	Е11	F		C,(S);C3(R) Один диастереоизомер Чистый энантиомер

С. Аналитическая часть.

ЖХ-МС (жидкостная хроматография/масс-спектрометрия).

ЖХ-МС, общая методика.

Измерения в ходе высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) проводили с помощью насоса для ЖХ, детектора на диодной матрице (DAD) или УФ-детектора и колонки, как описано в соответствующих способах. При необходимости включали дополнительные детекторы (см. приведенную ниже таблицу способов).

Поток из колонки направляли в масс-спектрометр (МС), который был оснащен источником ионизации при атмосферном давлении. В компетенции специалиста в данной области находится установка настраиваемых параметров (например, диапазона сканирования, минимального времени измерения и т.п.) с целью получения ионов, обеспечивающих определение номинального моноизотопного молекулярного веса (MB) соединения и/или точного моноизотопного молекулярного веса. Сбор данных проводили с помощью соответствующего программного обеспечения.

Соединения описаны по их экспериментальному времени удерживания (R_t) и ионам. Если в таблице данных не указано иное, то указанный молекулярный ион соответствует [М+Н]⁺ (протонированной молекуле) и/или [М-Н]^- (депротонированной молекуле). В случае, если соединение непригодно к непосредственной ионизации, указан тип аддукта (т.е. [M+NH4]⁺, [М+НСОО]^-, [М+СН3СОО]^- и т.п.). Для молекул со сложными изотопными распределениями (например, Br, Cl) описанное значение является таким значением, которое получено для наименьшей массы изотопа. Все результаты получали с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с применяемым способом.

Здесь и далее СЭЖХ или UPLC означает сверхэффективную жидкостную хроматографию, DAD - детектор на диодной матрице, SQD - одиночный квадрупольный детектор, QTOF квадрупольный-времяпролетный, RT - комнатная температура, ВЕН - гибридный мостиковый этилсилоксан/двуокись кремния, CSH гибрид с заряженной поверхностью.

- 30 031041

Коды способов ЖХ-МС

Таблица 3

Код способа	Прибор	Колонка	Подвижная фаза	Градиент	Поток Т колонки	ремя анализа
			А: 10мм	От 95% А до
	Waters:	Waters :
	Acquity®		CH5COONH4 в	5% А за 1,3	0, 8
1	BEH CIS	95% Η,Ο+5%	МИН . ,
СЭЖХ® -	(1,7 цм,	55
	MeCN	удерживание в
	DAD/SQD	2,1 + 50 мм)	В: MeCN	течение 7 мин
		Agilent:	A: 95%	От 95% А до
	Waters : Acquity®	Eclipse	CH5COONH4	5¾ А за 4 ,6	1
2	Plus C18	6, 5 мм +	МИН,
СЭЖХ® -	RRHD (1, 8	удерживание в	50
	5% MeCN,
	DAD/SQD	цм, 2,1x50	B: MeCN	течение 0,4
		MM)		мин
	Waters :
	Acquity®			От 95% А до
	Waters:	A: 95%	58 А за 4,6
	IClass	CSH™ C18	CH3COONH4 6,5		1
3	СЭЖХ® -	МИН,
	MM +
	(1,7 |лм,	удерживание в	50
	5% MeCN
	DAD/Хе VO	течение 0,4
2,1x50 мм)
	G2-S	B: MeCN	МИН
	QTOF
				84,2¾ А в течение 0,49 мин до 10,5¾ А через 2,18
	Waters :
		Waters:		мин,
	Acquity	ВЕН C18	A: 95%	удерживание в	0,343
4	СЭЖХ® -	(1,7 μΜ,	CHjCOoNH9 7	течение 1,94
	DAD/Quat	mm/5% MeCN		40	,2
		2,1x100		мин, снова до
	tro	MM)	B: MeCN	84,2% А через
	Micro™		0,73 мин.
				удерживание в
				течение 0,73
				мин.
				От 95% А до
	Waters :	Waters:	A: 95%
		5¾ А за 4,6	1
5	Acquity®	CSH™ C18	CH3COONH4 6,5	МИН,
IClass	MM + 5¾ MeCN
	(1,7 цм,	удерживание в
	СЭЖХ ® -
		2r 1x50 мм)	B: MeCN	течение 0,4	50
	DAD/SQD		МИН

Поток выражен в мл/мин; температура колонки (Т) в °С; время анализа в минутах.

Точки плавления.

Значения представляют собой либо максимальные значения, либо диапазоны температур плавления, и их получают с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с данным аналитическим способом.

- 31 031041

Аналитические данные

Таблица 4

№ соед.	Rt	[М+Н]*	[М-Н] -	Способ	Т. пл	(°C)
1	0,61	335		1	ш. д.
2	0, 66	335		1		О .
3	0,8	408		1	171,93
4	0,82	408		1	138,66
5	0,85	429		1	ш.	Д.
6	0,87	429		1	ш* д*
7	0,76	402		1	н.	О ,
8	0,81	402		1	н.	о.
9	0,88	426		1	ш.	д.
10	0,86	420		1	205, 8
11	0,95	429		1	н.	о,
12	0,89	413		1	199,22
13	0,85	434		1	139,83
14	1,04	339		2	н.	о,
15	1,78	415,0946	(-0,ЗмДа)		3	240,62
16	1,26	385,1284	(-0,ЗмДа)		3	207,05
17	1,58	412,1394	(-0,2мДа)		3	н.	о.
18	1, 51	406,1288	(-0,ЗмДа)		3	253,81
19	2,49	415	413	4	н.	о,
20	2,50	415	413	4	н.	о.
21	1,80	383,1498 (+0,ЗмДа)		3	184,20
22	1,54	—	376,1187 (+0,1мДа)	3	н.	о,
23	1,51	456	454	5	165,48

- 32 031041

24	2, 05	480,1270 (+0,0мДа)		3	213	,21
25	2,25	406	404	4	н.	О .
26	2,25	406	4 04	4	н,	о.
27	2,27	412	410	4	н,	о.
28	2, 40	383	381	4	н.	о.
29	2,28	456	4 54	4	н *	о*
30	2,27	456	454	4	н.	о.
31	2, 60	480	478	4	н.	о.
32	2, 62	480	478	4	н *	о*
33	2, 48	459	457	4	н.	о.
34	2,27	412	410	4	н.	о.
35	2, 07	385	383	4	н.	о.
36	2, 06	385	383	4	н,	о.
37	2,40	383	381	4	н,	о.
38	2,29	378	376	4	н.	о.
39	2,29	378	376	4	н *	о*
40	1, 90	459,0467 (+2,4мДа)		3	243	,40
41	2,48	459	4 57	4	н *	О*

н.о. означает не определено, ш.д. означает широкий диапазон.

Температура плавления (т.пл.) и ЖХ/МС: R_t означает время удерживания (в минутах), [М+Н]⁺ означает массу протонированной молекулы соединения, [М-Н]^- означает массу депротонированной молекулы соединения, способ относится к способу, используемому для (ЖХ)МС. Для некоторых соединений определяли точную массу.

Углы оптического вращения.

Углы оптического вращения измеряли на поляриметре Perkin-Elmer 341 с натриевой лампой и обозначали следующим образом: [α]° (λ, с г/100 мл, растворитель, Т°С).

[α]_λ ^Ι= (100α) / (1 х с), где 1 означает длину пробега в дм, а с означает концентрацию в г/100 мл для образца при температуре Т (°С) и длине волны λ (нм). Если используемая длина волны света составляет 589 нм (D-линия натрия), то вместо этого можно использовать символ D. Всегда следует приводить знак направления вращения (+ или -). В случае использования данного уравнения концентрацию и растворитель всегда приводят в круглых скобках после угла вращения. Угол вращения указывают в градусах, а единицы концентрации не приводят (принято, что они представлены в г/100 мл).

- 33 031041

Таблица 5

Аналитические данные - значения оптического вращения для энантиомерно чистых соединений

№ соед.	«и (°>	Длина волны (нм)	Концентрация вес«/об. %	Растворитель	Темп. СО
1	-35, 82	589	0,268	ДМФА	20
3	-24,77	589	0,222	ДМФА	20
9	+99,2	589	0, 375	ДМФА	20
10	+121	589	0,3	ДМФА	20
11	+70	589	0,25	ДМФА	20
12	+103,6	589	0,25	ДМФА	20
13	+80, 8	589	0,25	ДМФА	20
19	+2 9,9	589	0, 5	ДМФА	20
20	-30, 4	589	0,5	ДМФА	20
25	+36, 1	589	0, 5	ДМФА	20
26	-44,7	589	0,5	ДМФА	20
27	+ 40, 9	589	0,5	ДМФА	20
28	+35, 6	589	0, 5	ДМФА	20
29	+ 39, 3	589	0,5	ДМФА	20
30	-35, 0	589	0, 8	ДМФА	20
31	+2 0,2	589	0,5	ДМФА	20
32	-17, 0	589	0,5	ДМФА	20
33	+38,7	589	0, 5	ДМФА	20
34	-34,7	589	0,5	ДМФА	20
35	-23,5	589	0, 5	ДМФА	20
36	+18, 5	589	0,5	ДМФА	20
37	-46, 3	589	0,5	ДМФА	20
38	+1,5	589	0,7	МеОН	20
39	-1,0	589	0,7	МеОН	20
40	н. о.	589	0, 5	ДМФА	20
41	-30, 0	589	0,5	ДМФА	20

Способы СКЖХ-МС.

Общая методика А для способов СКЖХ-МС.

Измерения в ходе СКЖХ проводили с применением аналитической системы хроматографии со сверхкритической подвижной фазой, укомплектованной насосом для двухкомпонентных смесей для доставки диоксида углерода (CO₂) и модификатора, автоматическим дозатором, термостатом для колонок с переключающим клапаном для нагревания колонки от комнатной температуры до 80°С, детектором на диодной матрице, оснащенным проточной кюветой для работы под высоким давлением, выдерживающей значения до 400 бар. Поток из колонки направляли в масс-спектрометр (МС), который был оснащен источником ионизации при атмосферном давлении. В компетенции специалиста в данной области техники находится установка настраиваемых параметров (например, диапазона сканирования, минимального времени измерения и т.п.) с целью получения ионов, обеспечивающих определение номинального моноизотопного молекулярного веса (MB) соединения. Сбор данных проводили с помощью соответствующего программного обеспечения.

Способ 1.

В дополнение к общей методике А. Хиральное разделение в ходе СКЖХ проводили на колонке CHIRALCEL OD-H (4,6х250 мм) при 030°С с расходом 3,0 мл/мин. Подвижная фаза представляет собой СО₂, 25% МеОН (содержащего 0,2% iPrNH₂) с удерживанием 18 мин, до 15-50% МеОН (содержащего 0,2% iPrNH₂) с удерживанием 4,10 мин.

Способ 2.

- 34 031041

В дополнение к общей методике А. Хиральное разделение в ходе СКЖХ проводили на колонке CHIRALCEL OD-H (4,6x250 мм) при 030°С с расходом 3,0 мл/мин. Подвижная фаза представляет собой СО₂, 35% МеОН (содержащего 0,2% iPrNH₂) с удерживанием 15 мин.

Таблица 6 Аналитические способы СКЖХ-МС

Способ	Коленка	Подвижная фаза	Поток	T	Давление
3	Chiralcel OD-E, 150x4,6 мм, 5 мкм, Daicel	CO2/EtOH(0,3¾ IPrNH2) 70/30	3	35	100
4	Chiralcel OD-E, 150x4,6 мм, 5 мкм, Daicel	CO2/EtOH(0,3% IPrNH2) 60/40	3	35	100
5	Chiralpak AD-H, 150x4,6 мм, 5мкм, Daicel	CO2/EtOH(0,3¾ IPrNH2) 80/20	3	35	100
6	Chiralpak AD-H, 150x4,6 мм, 5mkm, Daicel	CO2/iPrOH(0, 3¾ IPrNH2) 80/20	3	35	100

(Расход указан в мл/мин; температура колонки (Т) в°С; давление в бар).

Таблица 7

Аналитические данные СКЖХ

№ соед.	Rt	[M+H] +	% площади по УФ	Способ	Порядок элюирования изомеров
3	5,74	408	100	1	А
4	10, 47	408	100	1	В
7	4,58	4 02	100	2	А
б	8,55	4 02	100	2	в
19	2,30	415	100	3	А
20	3,54	415	100	3	в
25	1,97	406.	100	4	А
26	4,09	406	100	4	В
27	2,52	412	100	3	А
28	2,36	383	100	5	В
29	1,62	456	100	3	А
30	2,36	456	100	3	В
31	2,13	480	100	3	А
32	4,29	480	100	3	в
33	2,79	459	100	3	А
34	4,56	412	98,8	3	в
35	2,14	385	100	6	А
36	3, 02	385	100	6	В
37	1,62	383	100	5	А
38	2,73	378	100	5	А
39	5,19	378	100	5	в
41	4,37	459	99,7	3	в

R_t означает время удерживания (в минутах), [М+Н]⁺ означает массу протонированной молекулы соединения, способ относится к способу, применяемому для анализа энантиомерно чистых соединений с помощью (СКЖХ)МС.

Порядок элюирования изомеров. А означает первый элюируемыи изомер; В означает второй элюи

- 35 031041 руемыи изомер.

ЯМР.

Для ряда соединений 'H ЯМР спектры регистрировали на Bruker Avance III с магнитом Ultrashield 300 МГц, на спектрометре Bruker DPX-400, работающем при 400 МГц, на Bruker Avance I, работающем при 500 МГц, на Bruker DPX-360, работающем при 360 МГц, или на спектрометре Bruker Avance 600, работающем при 600 МГц, с использованием хлороформа-d (дейтерированного хлороформа, CDCl₃) или ДМСО-d,·, (дейтерированного ДМСО, диметилД₆-сульфоксида) в качестве растворителя. Химические сдвиги (δ) регистрировали в миллионных долях (м.д. или ppm) относительно тетраметилсилана (TMS), который применяли в качестве внутреннего стандарта.

Таблица 7a

Результаты 'H ЯМР

Соед. №

Результат ^{* 1 2}Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆) 3 ppm 1,4 8 (t, 7=12,8 Гц, 1 Η), 1,50 (s, 3 Η),

1,99-2, 05 (τη, 1 Η), 2,06-2,12 (πι, 1 Η), 2,25-2,33 (m, 1 Η), 2,41 (d,

7-12,3 Гц, 1 Η), 5,79 (br. s., 2 Η), 7,44-7,51 (m, 2 Η), 7,58-7,65 (m, 1 Η), 7,70-7,75 (m, 1 Η), 9,11 (s, 2 Η), 9,18 (s, 1 Η).

(400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ ppm 1,50 (t, 7=13,1 Гц, 1 H) , 1, 53-1,57 (m,

H), 2,11-2,32 (m, 2 H) , 2,42 (ddd, 7=16,8, 5,8, 1,5 Гц, 1 H) , 2,77 (br. s., 1 H) , 7,43 (dt, 7=7,5, 1,5 Гц, 1 H) , 7,49 (t, 7=7,7 Гц, 1 H) , 7,55 (dt, <7=7,8, 1,5 Гц, 1 H) , 7,72 (t, <7=1,6 Гц, 1 H), 8,96 (s,

H) , 9,20 (s, 1 H) .

(360 МГц, DMSO-d₆) S ppm 1,41-1,50 (m, 1 H) , 1,46 (s, 3 H), 2,01-2,14 (m, 2 H) , 2,21 (br. d, <7=12,7 Гц, 1 H) , 2,29 (d, <7=11,5 Гц, 1 H) , 4,02 (s, 3 H) , 5,79 (br. s., 2 H) , 7,10 (br. d, 7=7,8 Гц, 1 H) , 7,29

It,	7=7, 9	Гц, 1 Η), 7,73	(t, 7=1,9 Гц, 1 Η), 7,76 (br. d, 7=8,0 Гц,
1 Η)	, 8,42	(d, 7=1,3 Гц,	1 Η) , 8, 90 (d, <7=1, 3 Гц,	1 Η) , 10,39 (br.
Ξ * ,	1 Η) .
(360	МГц,	ХЛОРОФО PM- d) δ	ppm 1,49 (t, <7=13,3 Гц,	1 Η), 1,53 (s, 3

H) , 2,15-2,29 (m, 2 H) , 2,41 (dd, <7=16,5, 5,7 Гц, 1 H) , 2,64-2,84 (m, 1 H), 3,30 (br. s., 2 H) , 4,07 (s, 3 H) , 7,24 (d, 7=7,7 Гц, 1 H), 7,36 (t, 7=7,9 Гц, 1 H) , 7,71 (ddd, 7=8,0, 2,1, 1,00 Гц, 1 H) , 7,78 (t, 7=1,9 Гц, 1 H) , 8,15 (d, 7=1,3 Гц, 1 H) , 9,03 (d, 7=1,3 Гц,

1 Η), 9,54	(br ♦ s . , 1	H) .
(360 МГц,	DMSO-dJ 6	ppm (	,37-1,46 (m, 1 H),	1,50-1,56 (m	3	H)
1,98-2,12	(m, 2 H) ,	2,31	(br. d, <7=11,0 Гц,	1 H), 2, 44	(br	d
<7=12,8 Гц,	1 H), 4,	02 (я.	3 H) , 5,85 (br.	s., 2 H) , 7,	14	(dd

7=12,0, 8,8 Гц, 1 Η), 7,59 (dd, 7=7,6, 2,8 Гц, 1 Η), 7,76 (ddd, 7=8,8, 4,2, 2,8 Гц, 1 Η), 8,42 (d, 7=1,3 Гц, 1 Η), 8,88 (d, 7=1,3 Гц, 1 Η), 10,44 (br. s., 1 Η).

- 36 031041 (500 МГц, DM3C-7-; δ ppm 1,49 (s, 3H) , 2,64 (dd, 7^17,0, 2,2 Гц, 1H) , 3,11-3,21 (m, 2H), 6,26 (br, 2H), 7,30 (dd, 7=11,7, 8,4 Гц, 1H) ,

7,73 (ddd, 7=8,4, 4,5, 2,5 Гц, 1H) , 8,06 (dd, 7=7,3, 2,4 Гц, 1H) , 9,01 (s, 2H), 9,18 (s, 1H).

(400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ ppm 1,60 (s, 3H), 2,87 (dd, 7=16,6, 2,6 Гц, 1H), 3,07-3,16 (m, 1H), 3,21-3,33 (m, 1H) , 4,66 (br, 2H) , 7,04 (dd, ,7=11,2, 8,9 Гц, 1H) , 7,75 (dd, 7=6,7, 2,8 Гц, 1H) , 7,86 (dd, 7=8,4,

2,4 Гц, 1H), 8,05 (ddd, 7-8,4, 4,2, 3,0 Гц, 1H) , 8,23 (dd, 7=8,4,

0,6 Гц, 1H), 8,54 (dd, 7=2,3, 0,5 Гц, 1H) , 9,85 (br, 1H) .

(500 МГц, DMSO- d₆) δ ppm 1,44 (s, 3 H) , 2,50 (s, 3 H) , 2,61 (dd, 7=16,9, 2,5 Гц, 1 H), 3,09 (dd, 7=16,8, 8,7 Гц, 1 H) , 3,21-3,34 (m,

H) , 6,11 (s, 2 H) , 7,04 (dd, 7=11,4, 8,8 Гц, 1 H) , 7,64 (ddd, 7=9,0, 4,3, 2,9 Гц, 1 H) , 8,07 (dd, 7=6,9, 2,9 Гц, 1 H) , 8,59 (s, 1 H), 10,02 (s, 1H) (500 МГц, DMSO- d₆) δ ppm 1,63 (br. s., 3 H), 2,80 (d, 7=16,8 Гц, 1 H) , 3,22 (dd, 7=17,1, 9,0 Гц, 1 H), 3,50 (br. s., 1 H) , 4,02 (s, 3 H), 7,14 (dd, J=ll,6, 9,0 Гц, 1 H) , 7,33 (br. s., 2 H), 7,80 (br. s., 1 H) , 8,14 (dd, 7=7,2, 2,6 Гц, 1 H) , 8,40 (d, 7=1,4 Гц, 1 H) , 8,88 (d, 7=1,4 Гц, 1 H) , 10,52 (br. s., 1 H) (400 МГц, DMSO- dj S ppm 1,45 (s, 3 H) , 2,62 (dd, 7=16,9, 2,3 Гц, 1 H) , 3,11 (dd, 7=16,8, 8,7 Гц, 1 H) , 3,23-3,36 (m, 1 H) , 6,16 (br. s,

H) , 7,10 (dd, 7=11,3, 8,8 Гц, 1 H) , 7,72 (ddd, 7=8,8, 4,4, 3,0 Гц,

(s, 3 H) , 2,62

1,45 s, 1

Гц,

H), (dd,

Гц,

H) , 7, 17 (dd, 7=7,9, 5,1 Гц,

(400 (dd,

ЯМР

- 37 031041 (500 МГц, DMSO- d₆) 6 ppm 1,45 (s, 3 H) , 2,62 (dd, J=16, 8, 2,4 Гц, 1

H) , 3,09 (dd, <7=17,2, 9,1 Гц, 1 H) , 3,22-3,35 (m, 1 H) , 3,31 (s, 3

H), 3,69-3, 73 (m, 2 H) , 4,49-4,54 (m, 2 H) , 6,14 (br. s, 2 H) , 7,07 (dd, <7=11,4, 8,7 Гц, 1 H) , 7,68 (ddd, J=8,6, 4,2, 2,9 Гц, 1 H) , 8,16

(dd.	<7=6,	9, 2,	8 Гц, 1 Η)	, 8,40 (d.	J=l,2 Гц, 1 H)r 8,84	(d.	<7=1,4
Гц,	1 Н) ,	10,41 (br. s, 1	Η)
(400	МГц,	DMSO	- ) δ ppm	1,45 (s, 3	Η) , 2,62 (dd, <7=16, 9,	2,3	Гц, 1
Н),	3, 10	(dd,	<7=16,8, 8,	7 Гц, 1 Η)	, 3,22-3,36 (η, 1 Η),	5,	16 (q.
<7=8,	8 Гц,	2 Η)	, 6,14 (br	s, 2 Η),	7,08 (dd, ^11,6, 8,8	ГЦ,	1 Н) ,
7,69	(ddd	, <7=9	,0, 4,4, 2,	8 Гц, 1 Η)	8,2 0 (dd, <7=7,1, 2,7	Гц,	1 Н) ,

8,60 (d, <7=1,4 Гц, 1 H), 8,90 (d, <7=1,4 Гц, 1 H) , 10,52 (br. s,1 H) (500 МГц, DMSO- d_e) δ ppm 1,46 (s, 3 H) , 2,63 (dd, <7=16,8, 2,3Гц, 1

H), 3,10 (dd, <7=16,8, 8,7 Гц, 1 H) , 3,31 (s, 3 H) , 3,24-3,37(m, 1

H), 3,69-3,75 (m, 2 H) , 4,50-4, 56 (m, 2 H) , 6,23 (br. £., 2 H) , 7,08 (dd, <7Μ1,6, 8,7 Гц, 1 H), 7,66-7,72 (m, 1 H) , 8,19 (dd, <7=7,1, 2,7

Гц, 1 H) , 8,42 (d, <7=1,4 Гц, 1 H) , 8,85 (d, <7=1,2 Гц, 1 H) ,10,42 (br. s, 1 H) (500 МГц, DMSO- de) δ ppm 1,45 (s, 3H) , 2,62 (dd, J=16,8, 2,3 Гц,

1H), 3,10 (br dd, J=16,9, 8,5 Гц, 1H) , 3,19-3,31 (m, 1H) , 6,15 (br s, 2H), 7,08 (dd, 0=11,4, 8,8 Гц, 1H) , 7,67-7,75 (m, 1H) , 8,06(d.

J=8, 1 Гц, 1Н),	8,18 (dd, J=6,9,	2,6 Гц, 1H), 8	,32 (dd, 0	=8,4,	2,3
Гц, 1Н), 8,84 (d	, J=l,7 Гц, 1H),	10,56 (s, 1H)
ХН ЯМР (400МГц,	DMSO-d6) 6=9,16	(s, 1H), 8,31	(dd, <7=1, 8	4,9	Гц,
1Н), 8,05 (dd,	<7=2,1, 7,6 Гц, 1H), 7,75 (dd,	<7=3,0, 6,9	Гн,	1H) ,
7,49 (td, <7=4,3	7,3 Гц, 1H) , 7	,01 (dd, <7=8,8,	11,3 Гц,	1H),	6, 87
(dd, <7=4,9, 7,6	Гц, 1H), 6,09 (s	, 2H), 3,33-3,21 (m, 1H),	3,10	(dd.
<7=8,7, 16,8 Гц,	1H), 2, 60 (br dd,	7=2,5, 16,9 Гц,	1H), 1,44	(£, 3H).
*Н ЯМР (500МГц,	DMSO-d6) δ=10,56	(s, 1H), 8,84	(d, <7=1,7	Гц,	1H) ,
8,32 (dd, <7=2,3,	8,4 Гц, 1H) , 8,18 (dd, <7=2,6, 6	, 9 Гц, 1H),	8,06	(d.
<7=8,1 Гц, 1H),	7,75-7,67 (m, 1H) , 7,08 (dd, J	=8,8, 11,4	ГЦ,	1H) ,
6,15 (br s, 2H)	, 3,31-3,19 (m,	1H), 3,10 (br	dd, <7=8,5,	16,9	гц,
1H), 2,62 (dd, J	=2,3, 16,8 Гц, 1H	), 1,45 (s, 3H)

D. Фармакологические примеры.

Соединения, предложенные в настоящем изобретении, являются ингибиторами АРРрасщепляющего по бета-сайту фермента 1 (ВАСЕ1). Полагают, что ингибирование ВАСЕ1, аспарагиновой протеазы, является существенным для лечения болезни Альцгеймера (AD). Полагают, что продуцирование и накопление бета-амилоидных пептидов (Абета) из белка-предшественника бета-амилоида (АРР) играет ключевую роль в возникновении и прогрессировании AD. Абета образуется из белкапредшественника амилоида (АРР) в результате последовательного расщепления на N- и С-концах домена Абета бета-секретазой и гамма-секретазой соответственно.

Ожидается, что соединения формулы (I) будут действовать главным образом на ВАСЕ1 в силу своей способности подавлять ферментативную активность. Поведение таких ингибиторов, тестируемых с помощью биохимического анализа на основе резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET) и клеточного анализа aLisa на клетках SKNBE2, описанных ниже и подходящих для выявления таких соединений и, в частности, соединений в соответствии с формулой (I), показано в табл. 8 и 9.

Биохимический анализ на основе FRET для ВАСЕ1.

Данный анализ представляет собой анализ на основе резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET). Субстратом для данного анализа является полученный из АРР пептид из 13 аминокислот, который содержит шведскую мутацию Lys-Met/Asn-Leu сайта расщепления бета-секретазой белкапредшественника амилоида (АРР). Данный субстрат также содержит два флуорофора: (7метоксикумарин-4-ил)уксусную кислоту (Мса), которая является донором флуоресценции с длиной волны возбуждения 320 нм и излучения 405 нм, и 2,4-динитрофенил (Dnp), который является соответствующим акцептором-гасителем. Расстояние между этими двумя группами выбирали таким образом, чтобы при световом возбуждении энергия флуоресценции донора в значительной степени гасилась акцепто- 38 031041 ром посредством резонансного переноса энергии. При расщеплении с помощью ВАСЕ1 флуорофор Мса отделяется от гасящей группы Dnp, восстанавливая полный выход флуоресценции донора. Увеличение флуоресценции линейно зависит от степени протеолиза.

Способ 1.

Вкратце, в 384-луночном формате рекомбинантный белок ВАСЕ1 при конечной концентрации 1 мкг/мл инкубировали в течение 120 мин при комнатной температуре с 10 мкМ субстрата в инкубационном буфере (40 мМ цитратного буфера, рН 5,0, 0,04% PEG, 4% ДМСО) в отсутствие или в присутствии соединения. Далее величину протеолиза непосредственно измеряли путем измерения флуоресценции в момент Т=0 и Т=120 (возбуждение при 320 нм и излучение при 405 нм). Результаты выражали в RFU (относительных единицах флуоресценции) как разницу между Т120 и Т0.

Кривую наилучшего приближения подбирали при помощи методики суммы наименьших квадратов для графика зависимости % мин контроля от концентрации соединения. На его основании можно получать значение IC₅₀ (ингибирующей концентрации, вызывающей ингибирование 50% активности).

LC=медиана значений низкого контроля =низкий контроль: реакция без фермента;

НС=медиана значений высокого контроля =высокий контроль: реакция с ферментом % эффекта=100-[(образец-LC)/(HC-LC)· 100] % контроля=(образец/НС)-100 % мин контроля=(образец-LC)/(HC-LC)·100.

Способ 2.

Вкратце, в 384-луночном формате рекомбинантный белок ВАСЕ1 в конечной концентрации 0,04 мкг/мл инкубировали в течение 450 мин при комнатной температуре с 20 мкМ субстрата в буфере для инкубации (50 мМ цитратного буфера рН 5,0, 0,05% PEG) в присутствии соединения или ДМСО. Далее величину протеолиза непосредственно измеряли путем измерения флуоресценции (возбуждение при 320 нм и излучение при 405 нм) для разных интервалов времени инкубации (0, 30, 60, 90, 120 и 450 мин). Для каждого эксперимента кривую времени (каждые 30 мин от 0 до 120 мин) применяли для определения времени при котором мы обнаруживаем наиболее низкий фоновый сигнал высокого контроля. Уровень сигнала в данной точке времени (Тх) применяли для вычитания из сигнала при 450 мин. Результаты выражали в RFU в виде разницы между Т450 и Тх.

Кривую наилучшего приближения подбирали при помощи методика наименьших квадратов для графика зависимости % мин контроля от концентрации соединения. На его основании можно получать значение IC₅₀ (ингибирующей концентрации, вызывающей ингибирование 50% активности).

LC=медиана значений низкого контроля =низкий контроль: реакция без фермента;

НС=медиана значений высокого контроля =высокий контроль: реакция с ферментом % эффекта=100-[(образец-LC)/(HC-LC)· 100] % контроля=(образец/НС)-100 % мин контроля=(образец-LC)/(HC-LC)·100.

Приведенные в качестве примера следующие соединения тестировали, главным образом, как описано выше, и они проявляли следующую активность.

- 39 031041

Таблица 8

№ соед.	Биохимический анализ на основе FRET - Способ 1 р1С50	Биохимический анализ на основе FRET - Способ 2 р1С50
1	5, 83	5,99
2	4, 74	<5
3	7,5	7,6
4	<4,52	<5
5	7, 50	7,74
6	5, 31	5,79
7	7, 49	7,69
8	5, 01	5,17
9	7, 41	8,12
10	7, 44	8,44
11	7, 51	8,58
12	7,29	7,81
13	7, 41	8,21
14	н. т.	<5
15	н» т.	6,31
16	н. т.	5,94
17	н. т.	6, 06
18	н. т.	6,42
19	н. т.	6,52
20	н. т.	<5
21	н. т.	5,62
22	н. т.	5, 43
23	н. Т .	6, 11
24	н. т.	6, 10
25	н. т.	6,74
26	н. т.	<5
27	н. т.	6, 41
28	н. т.	5,92
29	н. т.	6,35
30	н. т.	<5
31	н. Т .	6,34
32	н. т.	<5
33	н. Т .	6, 64
34	н. т.	<5
35	н. т.	<5
36	н. т.	5,99
37	н. т.	<5
38	н. т.	<5
39	н. Т .	5,53
40	н. т.	6, 49
41	н. Т .	<5

н.т. означает не тестировали.

- 40 031041

Клеточный анализ aLisa на клетках SKNBE2.

В двух анализах aLisa количественно определяли уровни общего Абета и Абета 1-42, продуцируемых и секретируемых в среду клеток SKNBE2 нейробластомы человека. Анализ основан на SKNBE2 нейробластомы человека, экспрессирующих белок-предшественник амилоида дикого типа (hAPP695). Соединения разбавляли и добавляли к этим клеткам, инкубировали в течение 18 ч, а затем осуществляли измерения количества Абета 1-42 и общего Абета. Общий Абета и Abeta 1-42 измеряли, используя сендвич aLisa. aLisa представляет собой сэндвич-анализ с использованием биотинилированного антитела AbN/25, связанного с покрытыми стрептавидином гранулами, и антитела Ab4G8 или cAb42/26, конъюгированного с груналами-акцепторами, для определения общего Абета и Абета 1-42 соответственно. В присутствии общего Абета или Абета 1-42 гранулы приближаются друг к другу. Возбуждение гранулдоноров вызывает высвобождение молекул синглетного кислорода, что запускает каскад переноса энергии на гранулы-акцепторы, приводящий в результате к излучению света. Излучение света измеряли после 1 ч инкубирования (возбуждение при 650 нм и излучение при 615 нм).

Кривую наилучшего приближения подбирали при помощи метода суммы наименьших квадратов для графика зависимости % мин контроля от концентрации соединения. На его основании можно получать значение IC₅₀ (ингибирующей концентрации, вызывающей ингибирование 50% активности).

LC=медиана значений низкого контроля =низкий контроль: клетки, предварительно инкубированные без соединения, без биотинилированного Ab в aLisa

НС=медиана значений высокого контроля =высокий контроль: клетки, предварительно инкубированные без соединения % эффекта=100-[(образец-LC)/(HC-LC)· 100] % контроля=(образец/НС)-100 % мин контроля=(образец-LC)/(HC-LC)·100.

Приведенные в качестве примера следующие соединения тестировали, главным образом, как описано выше, и они проявляли следующую активность.

Таблица 9

№ соед.	Клеточный аналиа aLisa на клетках SKNBE2 Абета 42 р1С50	Клеточный анализ aLisa на клетках SKNBE2
Abeta,	общий pICso
1	6, 53	6, 58
2	5,37	5,4
3	8,02	8,06
4	5, 63	5,71
5	7,62	7,68
6	5,7	5,73

- 41 031041

7	7,62	7, 62
S	5,64	5, 6
9	8,28	8,23
10	8,37	8, 42
11	8,63	8,7
12	8,12	8, 11
13	7,65	7,62
14	5,05	5,08
15	7	6,89
16	6,60	6,62
17	6,77	6,75
18	7,17	7, 19
19	7,21	7,09
20	5,05	5, 08
21	6,41	и* т.
22	6,11	и. т.
23	6, 46	и* т.
24	6,38	н. т.
25	7,22	н, т.
26	<5, 05	н* т.
27	7,00	н. т.
28	6,4 6	и* т.
29	6,82	н. т.
30	<5, 05	н, т.
31	6,59	н. т.
32	<5, 05	н. т.
33	7,44	и* т.

н. т. означает не тестировали.

Биохимический анализ на основе FRET для ВАСЕ2.

Данный анализ представляет собой анализ на основе резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET). Субстрат для данного анализа содержит шведскую мутацию Lys-Met/Asn-Leu сайта расщепления белка-предшественника амилоида (АРР) бета-секретазой. Данный субстрат также содержит два флуорофора: (7-метоксикумарин-4-ил)уксусную кислоту (Мса), которая является донором флуоресценции с длиной волны возбуждения 320 нм и излучения 405 нм, и 2,4-динитрофенил (Dnp), который является соответствующим акцептором-гасителем. Расстояние между этими двумя группами выбирали таким образом, чтобы при световом возбуждении энергия флуоресценции донора в значительной степени гасилась акцептором посредством резонансного переноса энергии. При расщеплении бета-секретазой, флуорофор Мса отделяется от гасящей группы Dnp, возобновляя полный выход флуоресценции донора. Увеличение флуоресценции линейно зависит от степени протеолиза.

Вкратце, в 384-луночном формате рекомбинантный белок ВАСЕ2 в конечной концентрации 0,4 мкг/мл инкубировали в течение 450 мин при комнатной температуре с 10 мкм субстрата в буфере для инкубации (50 мМ цитратного буфера, рН 5,0, 0,05% PEG, без ДМСО) в отсутствие или в присутствии соединения. Далее величину протеолиза непосредственно измеряли путем измерения флуоресценции в момент Т=0 и Т=450 (возбуждение при 320 нм и излучение при 405 нм). Результаты выражали в RFU (относительных единицах флуоресценции) в виде разницы между Т450 и Т0.

Кривую наилучшего приближения подбирали при помощи метода наименьших квадратов для графика зависимости % мин контроля от концентрации соединения. На его основании можно получать значение IC₅₀ (ингибирующей концентрации, вызывающей ингибирование 50% активности).

LC=медиана значений низкого контроля =низкий контроль: реакция без фермента

- 42 031041

НС=медиана значений высокого контроля =высокий контроль: реакция с ферментом % эффекта=100-[(образец-LC)/(HC-LC)· 100] % контроля=(образец/НС)-100 % мин контроля=(образец-LC)/(HC-LC)·100.

Приведенные в качестве примера следующие соединения тестировали, главным образом, как описано выше, и они проявляли следующую активность.

Таблица 10

Claims (15)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы (I) или его стереоизомерная форма, где n равно 0 или 1;

   Ri представляет собой водород, С1_-Залкил, циклопропил, моно- и полигалоген-С1_-3алкил;

   R2 представляет собой водород или фтор;

   L представляет собой связь или -NHCO-;

   Ar представляет собой арил или гетероарил;

   где арил представляет собой фенил или фенил, замещенный одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, С_1-3алкила, С_1-3алкилоксигруппы, моно- и полигалоген-С_1-3алкила, моно- и полигалоген-С_1-3алкилоксигруппы; и где гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, пиримидила, пиразила, пиридазила, фуранила, тиенила, пирролила, пиразолила, имидазолила, триазолила, тетразолила, тиазолила, изотиазолила, тиадиазолила, оксазолила, изоксазолила и оксадиазолила, каждый из которых необязательно замещен одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, цианогруппы, С_1-3алкила, С_2-3алкинила, С_1-3алкилоксигруппы, моно- и полигалоген-С_1-3алкила, моно- и полигалоген-С₁₃алкилоксигруппы и С_1-3алкилокси-С_1-3алкилоксигруппы, или его фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты.
2. 2. Соединение по п.1, где R₁ представляет собой метил.
3. 3. Соединение по п.1, где R₂ представляет собой водород.
4. 4. Соединение по п.1, где L представляет собой -NH-C(=O)-.

   - 43 031041
5. 5. Соединение по п.1, где Ar представляет собой пиридинил или пиразинил, замещенный одним или двумя атомами галогена или С1-3алкилоксигруппой.
6. 6. Соединение по п.1, где R₁ представляет собой метил, R₂ представляет собой водород, L представляет собой -NH-C(=O)- и Ar представляет собой пиридинил или пиразинил, замещенный одним или двумя атомами галогена или С_1-3алкилоксигруппой.
7. 7. Соединение по п.1, где Ri представляет собой метил, R₂ представляет собой водород, L представляет собой -NH-C(=O)- и Ar представляет собой 5-метоксипиразин-2-ил, 5-бромпиридин-2-ил, 5-хлор-3фторпиридин-2-ил или 5-цианопиридин-2-ил.
8. 8. Соединение по п.1, где R₂ представляет собой фтор.
9. 9. Соединение формулы 1, где n равен 1.
10. 10. Соединение по п.1, где R₁ представляет собой метил, R₂ представляет собой фтор, n равно 1, L представляет собой -NH-C(=O)- и Ar представляет собой 5-метоксипиразин-2-ил, 5-хлорпиридин-2-ил, 5фторпиридин-2-ил, 5-цианопиридин-2-ил, 5-хлор-3-фторпиридин-2-ил или 1-дифторметилпиразол-3-ил.
11. 11. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения согласно п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
12. 12. Способ получения фармацевтической композиции, включающий в себя перемешивание фармацевтически приемлемого носителя с терапевтически эффективным количеством соединения согласно п. 1.
13. 13. Применение соединения по любому из пп.1-10 для лечения, предупреждения или профилактики болезни Альцгеймера (AD), умеренного когнитивного нарушения, старческого слабоумия, деменции, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с инсультом, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции, ассоциированной с бета-амилоидом, возрастной макулярной дистрофии, диабета 2 типа или расстройств обмена веществ.
14. 14. Способ лечения расстройства, выбранного из группы, состоящей из болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения, старческого слабоумия, деменции, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с инсультом, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции, ассоциированной с бета-амилоидом, возрастной макулярной дистрофии, диабета 2 типа и расстройств обмена веществ, включающий в себя введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения согласно п. 1 или фармацевтической композиции согласно п.11.
15. 15. Способ регуляции активности фермента, расщепляющего амилоид по бета-сайту, включающий в себя введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения согласно п. 1 или фармацевтической композиции согласно п.11.

    О