EA022649B1

EA022649B1 - ПРОИЗВОДНЫЕ 6,7-ДИГИДРОПИРАЗОЛО[1,5-a]ПИРАЗИН-4-ИЛАМИНА, ПРИГОДНЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ БЕТА-СЕКРЕТАЗЫ (BACE)

Info

Publication number: EA022649B1
Application number: EA201391251A
Authority: EA
Inventors: Андрес Авелино Трабанко-Суарес; Хенрикус Якобус Мария Гейсен; Михиль Люк Мария Ван Гол; Хуан Антонио Вега Рамиро; Франсиска Дельгадо-Хименес
Original assignee: Янссен Фармацевтика Нв
Priority date: 2011-03-01
Filing date: 2012-02-29
Publication date: 2016-02-29
Also published as: EP2681219A1; IL228158A0; NZ614551A; DK2681219T3; EP2681219B1; PL2681219T3; HRP20160030T1; AU2012222394A1; KR20140010052A; HK1188784A1; JP2014506907A; CN103415519B; US20140005200A1; CL2013002486A1; CN103415519A; BR112013022039A2; UA109800C2; MX338333B; US9346811B2; SG192963A1

Abstract

Изобретение относится к новым производным 6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-4-иламина в качестве ингибиторов бета-секретазы, также известной как фермент, расщепляющий предшественник амилоида по бета-сайту, ВАСЕ, ВАСЕ1, Asp2 или memapsin2. Изобретение также направлено на фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, на способы получения таких соединений и композиций и на применение таких соединений и композиций для предупреждения и лечения расстройств, в которые вовлечена бета-секретаза, таких как болезнь Альцгеймера (AD), умеренное когнитивное нарушение, угасание, деменция, деменция с тельцами Леви, синдром Дауна, деменция, ассоциированная с инсультом, деменция, ассоциированная с болезнью Паркинсона, или деменция, ассоциированная с бета-амилоидом.

Description

Настоящее изобретение относится к новым производным 6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-4иламина в качестве ингибиторов бета-секретазы, также известной как фермент, расщепляющий предшественник амилоида по бета-сайту, ВАСЕ, ВАСЕ1, А§р2 или тетар§1п2. Настоящее изобретение также направлено на фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, на способы получения таких соединений и композиций и на применение таких соединений и композиций для предупреждения и лечения расстройств, в которые вовлечена бета-секретаза, таких как болезнь Альцгеймера (АО), умеренное когнитивное нарушение, угасание, деменция, деменция с тельцами Леви, синдром Дауна, деменция, ассоциированная с инсультом, деменция, ассоциированная с болезнью Паркинсона, или деменция, ассоциированная с бета-амилоидом.

Предпосылки изобретения

Болезнь Альцгеймера (АО) представляет собой нейродегенеративное заболевание, ассоциированное со старением. Пациенты с АО страдают дефицитом когнитивных функций и потерей памяти, а также поведенческими проблемами, такими как тревожность. Более 90% пораженных АО имеют спорадическую форму расстройства, тогда как менее 10% случаев являются семейными или наследственными. В Соединенных Штатах приблизительно 1 из 10 людей в возрасте 65 лет имеет АО, тогда как в возрасте 85 лет один из каждых двух индивидов страдает АО. Средняя предполагаемая продолжительность жизни от первичного диагноза составляет 7-10 лет, и пациенты с АО нуждаются во всестороннем уходе либо в доме престарелых, что является очень дорогостоящим, либо осуществляемом членами семьи. При возрастающем количестве пожилых людей в популяции АО представляет собой растущую медицинскую проблему. Доступные в настоящее время виды терапии АО обеспечивают лечение только симптомов заболевания и включают ингибиторы ацетилхолинэстеразы для улучшения когнитивных свойств, а также анксиолитики и нейролептики для контроля поведенческих проблем, ассоциированных с этой болезнью.

Характерными патологическими признаками в головном мозге пациентов с АО являются нейрофибриллярные клубки, которые возникают в результате гиперфосфорилирования тау-белка, и амилоидные бляшки, которые образуются в результате агрегации пептида бета-амилоида 1-42 (АЬе1а 1-42). АЬе1а 1-42 образует олигомеры, и затем фибриллы, и, в конечном итоге, амилоидные бляшки. Олигомеры и фибриллы считаются особенно нейротоксичными и могут вызывать большинство неврологических повреждений, ассоциированных с АО. Средства, которые предупреждают образование АЬе1а 1-42, имеют потенциал, чтобы стать средствами, модифицирующими течение заболевания, для лечения АО. АЬе!а 1-42 образуется из белка-предшественника амилоида (АРР), состоящего из 770 аминокислот. Ν-конец АЬе1а 1-42 отщепляется бета-секретазой (ВАСЕ), и затем гамма-секретаза отщепляет С-концевую область. В дополнение к АЬе1а 1-42, гамма-секретаза также высвобождает АЬе1а 1-40, который является преобладающим продуктом расщепления, так же как АЬе!а 1-38 и АЬе!а 1-43. Эти формы АЬе!а также могут агрегироваться с образованием олигомеров и фибрилл. Таким образом, предполагается, что ингибиторы ВАСЕ будут предупреждать образование АЬе!а 1-42, а также АЬе!а 1-40, АЬе1а 1-38 и АЬе!а 1-43 и будут являться потенциальными терапевтическими средствами для лечения АО.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение направлено на соединение формулы (I)

или его стереоизомерную форму, где К¹ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена;

К² выбран из группы, состоящей из водорода, циано, С_р-3алкила, полигалоген-С_р-3алкила;

К³ выбран из группы, состоящей из С_р-3алкила, полигалоген-С_р-3алкила;

X¹ представляет собой С(К⁴), где К⁴ представляет собой водород, галоген;

X², X³, X⁴ представляют собой С(К⁴), где К⁴ представляет собой водород;

Ь представляет собой -^К⁵)СО-, где К⁵ представляет собой водород;

Аг представляет собой гетероарил;

гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, замещенного одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано; оксазолила, необязательно замещенного одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из С1_-3алкила или полигалоген-С_р-3алкила; пиразолила, замещенного полигалоген-С_р-3алкилом; пиразинила, замещенного С_р-3алкилокси, или его соль присоединения.

Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и любое из соединений, описанных выше, является иллюстрирующей настоящее изобретение. Иллюстрацией на- 1 022649 стоящего изобретения является фармацевтическая композиция, полученная путем смешивания любого из соединений, описанных выше, и фармацевтически приемлемого носителя. Иллюстрированием настоящего изобретения является способ получения фармацевтической композиции, включающий смешивание любого из соединений, описанных выше, и фармацевтически приемлемого носителя.

Примером настоящего изобретения является способ лечения расстройства, выбранного из группы, состоящей из болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения, угасания, деменции, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с инсультом, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, и деменции, ассоциированной с бета-амилоидом, предпочтительно болезни Альцгеймера, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества любого из соединений или фармацевтических композиций, описанных выше.

Другим примером настоящего изобретения является любое из соединений, описанных выше, для применения при лечении (а) болезни Альцгеймера, (Ь) умеренного когнитивного нарушения, (с) угасания, (ά) деменции, (е) деменции с тельцами Леви, (ί) синдрома Дауна, (д) деменции, ассоциированной с инсультом, (Ь) деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, и (ί) деменции, ассоциированной с бета-амилоидом, у субъекта, нуждающегося в этом.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение направлено на соединения формулы (I), определенные выше в данном документе, и их фармацевтически приемлемые соли. Соединения формулы (I) являются ингибиторами фермента бета-секретазы (также известного как фермент, расщепляющий по бета-сайту, ВАСЕ, ВАСЕ1, А§р2 или тетаркш 2) и являются пригодными для лечения болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения, угасания, деменции, деменции, ассоциированной с инсультом, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, и деменции, ассоциированной с бета-амилоидом, предпочтительно болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения или деменции, более предпочтительно болезни Альцгеймера.

В варианте осуществления настоящего изобретения

К¹ представляет собой водород;

К² независимо выбран из водорода и С_1-3алкила;

X¹, X², X³, X⁴ независимо представляют собой С(К⁴), где каждый К⁴ выбран из водорода и галогена;

Ь представляет собой -И(К⁵)СО-, где К⁵ представляет собой водород;

Аг представляет собой гетероарил;

где гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, замещенного одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано; оксазолила, необязательно замещенного одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из С_1-3алкила или полигалоген-С_1-3алкила; пиразолила, замещенного полигалоген-С_1-3алкилом; пиразинила, замещенного С_1-3алкилокси, или его соль присоединения.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения

К¹ и К² представляют собой водород;

X¹, X², X³, X⁴ представляют собой СН;

Аг представляет собой гетероарил;

где гетероарил представляет собой пиридил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из хлора, фтора, циано; или его соль присоединения.

В другом варианте осуществления атом углерода, замещенный К³, характеризуется К-конфигурацией.

Определения.

Галоген будет обозначать фтор, хлор и бром; С_1-3алкил будет обозначать насыщенную алкильную группу с прямой или разветвленной цепью с 1, 2 или 3 атомами углерода, например метил, этил, 1-пропил и 2-пропил; С_1-3алкилокси будет обозначать эфирный радикал, где С_1-3алкил является определенным выше; полигалоген-С_1-3алкил будут обозначать С_1-3алкил, определенный выше, замещенный 1, 2, 3 или, при наличии возможности, большим количеством атомов галогенов, определенных выше.

Используемое в данном документе выражение субъект относится к животному, предпочтительно млекопитающему, наиболее предпочтительно человеку, который является или являлся объектом лечения, наблюдения или эксперимента.

Используемое в данном документе выражение терапевтически эффективное количество означает такое количество активного соединения или фармацевтического средства, которое вызывает биологический или медицинский эффект в тканевой системе, у животного или человека, желаемый исследователем, ветеринаром, врачом или другим клиницистом, что включает облегчение симптомов заболевания или расстройства, лечение которого осуществляется.

Используемое в данном документе выражение композиция, как предполагается, охватывает продукт, содержащий определенные ингредиенты в определенных количествах, а также любой продукт, ко- 2 022649 торый является результатом, прямо или косвенно, сочетания определенных ингредиентов в определенных количествах.

Выше и ниже в данном документе выражение соединение формулы (I) следует понимать как включающее его соли присоединения и стереоизомеры.

Выражения стереоизомеры или стереохимически изомерные формы выше или ниже в данном документе используются взаимозаменяемо.

Настоящее изобретение включает все стереоизомеры соединения формулы (I) либо в виде чистого стереоизомера, либо в виде смеси двух или более стереоизомеров.

Энантиомеры являются стереоизомерами, которые представляют собой не совпадающие при наложении зеркальные отражения друг друга. Смесь пары энантиомеров при соотношении 1:1 представляет собой рацемат или рацемическую смесь.

Диастереомеры (или диастереоизомеры) представляют собой стереоизомеры, которые не являются энантиомерами, т.е. они не соотносятся как зеркальные отражения. Если соединение содержит двойную связь, заместители могут находиться в Е- или Ζ-конфигурации. Если соединение содержит двузамещенную циклоалкильную группу, заместители могут находиться в цис- или транс-конфигурации. Следовательно, настоящее изобретение включает энантиомеры, диастереомеры, рацематы, Е-изомеры, Ζ-изомеры, цис-изомеры, транс-изомеры и их смеси.

Абсолютная конфигурация определяется согласно системе по СаЬп-1пдоШ-Рге1од. Конфигурация при асимметричном атоме определяется либо как К, либо как 8. Растворенные соединения, абсолютная конфигурация которых неизвестна, можно обозначить (+) или (-) в зависимости от направления, в котором они вращают плоскополяризованный свет.

Если конкретный стереоизомер определен, это означает, что указанный стереоизомер, по существу, отделен, т.е. ассоциирован с менее 50%, предпочтительно менее 20%, более предпочтительно менее 10%, даже более предпочтительно менее 5%, в частности, менее 2% и наиболее предпочтительно менее 1% других изомеров. Таким образом, если соединение формулы (I), например, определено как (К), это означает, что данное соединение, по существу, отделено от (8)-изомера; если соединение формулы (I), например, определено как Е, это означает, что данное соединение, по существу, отделено от Ζ-изомера; если соединение формулы (I), например, определено как цис-, это означает, что данное соединение, по существу, отделено от транс-изомера.

Кроме того, некоторые кристаллические формы соединений по настоящему изобретению могут существовать в виде полиморфов, и в качестве таковых предполагается их включение в настоящее изобретение.

Касательно применения в медицине соли соединений по настоящему изобретению относятся к нетоксичным фармацевтически приемлемым солям. Другие соли, однако, могут быть пригодными при получении соединений согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемых солей. Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединений включают соли присоединения кислоты, которые, например, могут образоваться при смешивании раствора соединения с раствором фармацевтически приемлемой кислоты, такой как хлористо-водородная, серная, фумаровая, малеиновая, янтарная, уксусная, бензойная, лимонная, винная, угольная или фосфорная кислоты. Кроме того, если соединения по настоящему изобретению несут кислотный фрагмент, их подходящие фармацевтически приемлемые соли могут включать соли щелочных металлов, например соли натрия или калия; соли щелочноземельных металлов, например соли кальция или магния; и соли, образованные с подходящими органическими лигандами, например соли четвертичного аммония.

Типичные кислоты, которые можно применять при получении фармацевтически приемлемых солей, без ограничения, включают следующие: уксусную кислоту, 2,2-дихлоруксусную кислоту, ацилированные аминокислоты, адипиновую кислоту, альгиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, Ь-аспарагиновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, бензойную кислоту, 4-ацетамидобензойную кислоту, (+)-камфорную кислоту, камфорсульфоновую кислоту, каприновую кислоту, капроновую кислоту, каприловую кислоту, коричную кислоту, лимонную кислоту, цикламовую кислоту, этан-1,2дисульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, 2-гидроксиэтансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, фумаровую кислоту, галактаровую кислоту, гентизиновую кислоту, глюкогептоновую кислоту, Ό-глюконовую кислоту, Ό-глюкороновую кислоту, Ь-глутаминовую кислоту, бета-оксоглутаровую кислоту, гликолевую кислоту, гиппуровую кислоту, бромисто-водородную кислоту, хлористо-водородную кислоту, (+)-Ь-молочную кислоту, (±)-ОЬ-молочную кислоту, лактобионовую кислоту, малеиновую кислоту, (-)-Ь-яблочную кислоту, малоновую кислоту, (±)-ОЬ-миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, нафталин-1,5-дисульфоновую кислоту, 1-гидрокси-2нафтойную кислоту, никотиновую кислоту, азотную кислоту, олеиновую кислоту, оротовую кислоту, щавелевую кислоту, пальмитиновую кислоту, памоевую кислоту, фосфорную кислоту, Ь-пироглутаминовую кислоту, салициловую кислоту, 4-аминосалициловую кислоту, себациновую кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту, серную кислоту, таниновую кислоту, (+)-Ь-винную кислоту, тиоциановую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, трифторметилсульфоновую кислоту и ун- 3 022649 дециленовую кислоту. Типичные основания, которые можно применять при получении фармацевтически приемлемых солей, без ограничения, включают следующие: аммиак, Ь-аргинин, бенетамин, бензатин, гидроксид кальция, холин, диметилэтаноламин, диэтаноламин, диэтиламин, 2-(диэтиламино)этанол, этаноламин, этилендиамин, Ν-метилглюкамин, гидрабамин, 1Н-имидазол, Ь-лизин, гидроксид магния, 4-(2-гидроксиэтил)морфолин, пиперазин, гидроксид калия, 1-(2-гидроксиэтил)-пирролидин, вторичный амин, гидроксид натрия, триэтаноламин, трометамин и гидроксид цинка.

Химические названия соединений по настоящему изобретению были образованы в соответствии с правилами номенклатуры, принятыми Химической реферативной службой.

А. Получение конечных соединений.

Экспериментальная методика 1.

Конечные соединения согласно формуле (I) можно получить путем реакции промежуточного соединения формулы (II) с соответствующим источником аммиака, таким как, например, хлорид аммония или водный аммиак, согласно схеме реакции (1), причем реакция осуществляется в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, вода или метанол, при температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 60-90°С, например, в течение 4-100 ч. На схеме реакции (1) все переменные определены, как в формуле (I).

Экспериментальная методика 2.

Конечные соединения согласно формуле (Па), где Ь представляет собой -Ы(К.⁵)СО-, можно получить путем реакции промежуточного соединения формулы (Ш-а) с промежуточным продуктом формулы (IV) согласно схеме реакции (2), причем реакция осуществляется в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, Ν,Ν-диметилформамид, в присутствии подходящего основания, такого как, например, К₃РО₄, медного катализатора, такого как, например, Сиф и диамина, такого как, например, (1К,2К)-(-)-1,2-диаминоциклогексан, при температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 180°С, например, в течение 135 мин под микроволновым излучением. На схеме реакции (2) все переменные определены, как в формуле (I), и представляет собой галоген.

Экспериментальная методика 3.

Дополнительно, конечные соединения согласно формуле (Па) можно получить путем реакции промежуточного соединения формулы (Ш-Ь) с промежуточным продуктом формулы (V) согласно схеме реакции (3), причем реакция осуществляется в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, дихлорметан или метанол, необязательно в присутствии подходящего основания, такого как, например, Ν,Ν-диизопропилэтиламин, в присутствии конденсирующего средства, такого как, например, гексафторфосфат О-(7-азабензотриазол-1-ил)-Х,^№,№-тетраметилурония или хлорид 4-(4,6-диметокси1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния], при температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 25°С, например, в течение 2 ч. На схеме реакции (3) все переменные определены, как в формуле (I).

Экспериментальная методика 4.

Дополнительно, конечные соединения согласно формуле (Па) можно получить путем реакции промежуточного соединения формулы (Ш-Ь) с промежуточным продуктом формулы (VI) согласно схеме

- 4 022649 реакции (4), причем реакция осуществляется в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, дихлорметан, в присутствии подходящего основания, такого как, например, пиридин, при температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 25°С, например, в течение 2 ч. На схеме реакции (4) все переменные определены, как в формуле (I), и Υ представляет собой галоген.

Экспериментальная методика 5.

Конечные соединения согласно формуле (Ι-Ъ), где Ь представляет собой связь, можно получить путем реакции промежуточного соединения формулы (ΙΙΙ-а) с промежуточным продуктом формулы (VII) согласно схеме реакции (5), причем реакция осуществляется в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, смеси инертных растворителей, такие как, например, 1,4-диоксан/этанол, в присутствии подходящего основания, такого как, например, К₂СО₃, катализатора на основе комплекса Рй, такого как, например, тетракис-(трифенилфосфин)палладий(0), при температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 80°С, например, в течение 20 ч или, например, нагревание реакционной смеси при 150°С в течение от 10 до 30 мин под микроволновым излучением. На схеме реакции (5) все переменные определены, как в формуле (I), и представляет собой галоген. К⁶ и К⁷ могут представлять собой водород или алкил или, взятые вместе, могут образовать, например, бивалентный радикал формулы -СН₂СН₂-, -СН₂СН₂СН₂- или -С(СН₃)₂С(СН₃)₂-.

Экспериментальная методика 6.

Конечные соединения согласно формуле ^-с), где К¹ представляет собой водород, можно получить из соответствующих конечных соединений формулы (Пй), где К¹ выбран из группы, состоящей из хлора, брома и йода, следуя известным из уровня техники методикам восстановления, согласно схеме реакции (6). Например, указанное восстановление можно осуществлять путем перемешивания реагирующих веществ в атмосфере водорода и в присутствии соответствующего катализатора, такого как, например, палладий на угле, платина на угле, никель Ренея и подобные катализаторы. Подходящие растворители представляют собой, например, воду, алканолы, например метанол, этанол и т.п., сложные эфиры, например этилацетат и т.п. Для увеличения скорости указанной реакции восстановления может быть преимущественным повышение температуры и/или давления реакционной смеси. Нежелательное дополнительное гидрирование определенных функциональных групп в реагирующих веществах и продуктах реакции можно предотвратить путем добавления каталитического яда, такого как, например, тиофен и т.п., к реакционной смеси. На схеме реакции (6) все переменные определены, как в формуле (I).

Ряд промежуточных продуктов и исходных материалов в вышеприведенных методиках получения являются известными соединениями, которые можно получить согласно известным из уровня техники методикам получения указанных или подобных соединений, а некоторые промежуточные продукты являются новыми. Ряд таких способов получения будет более подробно описан ниже в данном документе.

- 5 022649

В. Получение промежуточных соединений.

Экспериментальная методика 7.

Промежуточные продукты согласно формуле (II) можно получить путем реакции промежуточного соединения формулы (VIII) с подходящим реагирующим веществом, являющимся донором серы, для синтеза тиоамидов, таким как, например, пентасульфид фосфора или 2,4-бис-(4-метоксифенил)-1,3дитиа-2,4-дифосфетан-2,4-дисульфид [реагент Лавессона] согласно схеме реакции (7), причем реакция осуществляется в реакционно-инертном растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран или толуол, в присутствии подходящего основания, такого как, например, пиридин, при температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 100°С, например, в течение 5 ч. На схеме реакции (7) все переменные определены, как в формуле (I).

Экспериментальная методика 8.

Промежуточные продукты согласно формуле (νΊΠ-а), где Ь представляет собой связь, можно получить путем реакции промежуточного соединения формулы ^Х-а) с промежуточным продуктом формулы (VII) согласно схеме реакции (8), причем реакция осуществляется в подходящей смеси инертных растворителей, такой как, например, 1,4-диоксан/вода, в присутствии подходящего основания, такого как, например, водный №'1₂СО₃. катализатора на основе комплекса Рй, такого как, например, тетракис(трифенилфосфин)палладий(0), при температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 80°С, например, в течение 20 ч или, например, нагревание реакционной смеси при 150°С, например, в течение 15-30 мин под микроволновым излучением. На схеме реакции (8) все переменные определены, как в формуле (I), и представляет собой галоген. К⁶ и К⁷ могут представлять собой водород или алкил, или, взятые вместе, могут образовать, например, бивалентный радикал формулы -СН₂СН₂-, -СН₂СН₂СН₂- или -С(СН₃)₂С(СН₃)₂-.

Экспериментальная методика 9.

Промежуточные продукты согласно формуле (Ш-Ь) можно получить из соответствующих промежуточных соединений формулы (Ш-а), следуя известным из уровня техники методикам сочетания по Бухвальду-Хартвигу, согласно схеме реакции (9). Указанное сочетание можно осуществлять путем обработки промежуточных соединений формулы (Ш-а) промежуточным продуктом формулы (X) в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, этанол или смеси инертных растворителей, такие как 1,2-диметоксиэтан/вода/этанол, в присутствии подходящего основания, такого как, например, водный К₃РО₄ или С8₂СО₃, катализатора на основе комплекса Рй, такого как, например, [1,Г-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П) или диацетат транс-бис-(дициклогексиламин)палладия [ЭАРСу], при температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 80°С, например, в течение 20 ч или, например, нагревание реакционной смеси при 130°С, например, в течение 10 мин под микроволновым излучением. На схеме реакции (9) все переменные определены, как в формуле (I), и представляет собой галоген. К⁵ представляет собой водород или С1_-3алкил. В альтернативном случае, если К⁵ представляет собой водород, промежуточные продукты формулы (Ш-Ь) также можно получить в результате двухэтапного синтеза. Вначале можно провести сочетание по Бухвальду-Хартвигу при условиях, известных специалисту в данной области техники, между промежуточным продуктом (Ш-а) и стабильным имином, таким как бензофенонимин. На втором этапе можно получить промежуточный продукт (Ш-Ь) в виде первичного амина путем обработки связанного продукта, растворенного в подходящем растворителе, таком как изопропанол, кислотой, такой как, например, хлористо-водородная кислота, при температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 25°С, например, в течение 2 ч.

- 6 022649

Экспериментальная методика 10

Дополнительно, промежуточные продукты согласно формуле (Ш-Ь), где К⁵ представляет собой водород, можно получить из соответствующих промежуточных продуктов формулы (ΙΙΙ-с), следуя известным из уровня техники методикам восстановления нитрогруппы до аминогруппы, согласно схеме реакции (10). Например, указанное восстановление можно беспрепятственно осуществлять в присутствии соответствующего восстанавливающего средства, такого как хлорид олова, цинк или железо, в подходящем инертном растворителе, таком как этанол или смеси этанол/уксусная кислота или метанол/водный раствор хлорида аммония, при подходящих условиях реакции, таких как при допустимой температуре, как правило, в диапазоне от 70 до 110°С, в течение периода времени для того, чтобы обеспечить завершение реакции. Специалист в данной области техники поймет, что в случае, если К¹ и/или К² в промежуточном продукте (ΙΙΙ-с) представляет собой галоген, выбранный из группы из хлора, брома и йода и являющийся нежелательным в конечном соединении, при описанных выше условиях также может осуществляться процесс окислительного присоединения-протонирования для обеспечения промежуточного продукта (ΙΙΙ-Ь), где К¹ и/или К² представляет собой водород. В альтернативном случае, указанное восстановление можно осуществлять путем перемешивания реагирующих веществ в атмосфере водорода и в присутствии соответствующего катализатора, такого как, например, палладий на угле, платина на угле, никель Ренея и подобные катализаторы. Подходящие растворители представляют собой, например, воду, алканолы, например метанол, этанол и т.п., сложные эфиры, например этилацетат и т.п. Для увеличения скорости указанной реакции восстановления может быть преимущественным повышение температуры и/или давления реакционной смеси. Нежелательное дополнительное гидрирование определенных функциональных групп в реагирующих веществах и продуктах реакции можно предотвратить путем добавления каталитического яда, такого как, например, тиофен и т.п., к реакционной смеси. На схеме реакции (10) все переменные определены, как в формуле (Ι).

Экспериментальная методика 11.

В общем, соединения формул (ΙΙΙ-а) и (ΙΙΙ-с) можно получить после этапов реакций, показанных на схемах реакции (11) и (12).

- 7 022649

где А: превращение тиоамида в амидин;

В: превращение амида в тиоамид (тионирование);

С: циклизация;

Ό: удаление любых Ν-защитных групп;

Е: металлирование.

Производные амидина из вышеприведенной схемы реакции (11) можно беспрепятственно получить из соответствующих производных тиоамида, следуя известным из уровня техники методикам превращения тиоамида в амидин (этап реакции А). Указанное превращение можно беспрепятственно осуществлять путем обработки указанных тиоамидов источником аммиака, таким как, например, хлорид аммония или водный аммиак, в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, вода или метанол и т.п., при температурных условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 60-90°С, например, в течение 6-100 ч.

Производные тиоамида из вышеприведенной схемы реакции (11) можно получить из амидных производных, следуя известным из уровня техники методикам тионирования (этап реакции В). Указанное превращение можно беспрепятственно осуществлять путем обработки указанных амидов средством для тионирования, таким как, например, пентасульфид фосфора или 2,4-бис-(4-метоксифенил)-1,3-дитиа-2,4дифосфетан 2,4-дисульфид [реагент Лавессона], в условиях без примесей или в реакционно-инертном растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран или 1,4-диоксан и т.п., необязательно в присутствии подходящего основания, такого как пиридин, при температурных условиях, таких как, например,

- 8 022649 нагревание реакционной смеси при 50-100°С, например, в течение 24 ч.

Амидные производные формул (З^-а) и (ΙΧ-с) из вышеприведенной схемы реакции (11) можно получить из соответствующих промежуточных соединений формул (ΧΙΙ-а) и (ΧΙΙ-с), следуя известным из уровня техники методикам циклизации (этап реакции С). Указанную циклизацию можно беспрепятственно осуществлять путем обработки промежуточных соединений формул (ΧΙΙ-а) и (ΧΙΙ-с) подходящим основанием, таким как ацетат калия, в подходящем реакционном растворителе, таком как, например, этанол и т.п., при 70-100°С в течение периода времени для того, чтобы обеспечить завершение реакции.

Промежуточные продукты формулы (ΙΧ-а), где К² представляет собой водород, можно получить из промежуточного продукта формулы (ΙΧ^-^, где К² представляет собой нитро, путем восстановления нитрогруппы до аминогруппы с последующей реакцией диазотирования-дезаминирования.

Промежуточные продукты формулы (ΙΧ-а), где К² представляет собой дифторметил, можно получить из промежуточного продукта формулы (К-а-2), где К² представляет собой алкоксикарбонил, путем превращения сложноэфирной группы в альдегидную посредством одного из нескольких способов, известных специалисту в данной области техники, с последующей реакцией альдегидной группы с ΌΑδΤ.

Промежуточные соединения формул (ΧΙΙ-а) и (ΧΙΙ-с) из вышеприведенной схемы реакции (11) можно получить из соответствующих промежуточных соединений формул (ΧΙΙΙ-а) и (ХШ-с) путем удаления защитной группы, которое осуществляется согласно способам, известным специалисту в данной области техники (этап реакции Ό).

Промежуточное соединение формулы (ΧΙΙΙ-с) из вышеприведенной схемы реакции (11) можно получить из соответствующих промежуточных соединений формулы (ΧΙν-с), следуя известным из уровня техники методикам металлирования (этап реакции Е). Указанное металлирование можно беспрепятственно осуществлять путем обработки промежуточных соединений формулы (ΧΙν-с) подходящим основанием, таким как диизопропиламид лития, и подходящим электрофилом, таким как твердая двуокись углерода или этилхлорформиат, в подходящем реакционном растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран, при -80-0°С в течение периода времени для того, чтобы обеспечить завершение реакции.

где Р: алкилирование;

- 9 022649

О: окисление оксатиазолидина;

Н: образование оксатиазолидина.

Промежуточные продукты согласно формулам (ΧΙΙΙ-а) и (Χΐν-с) из вышеприведенной схемы реакции (12) можно получить из соответствующих промежуточных соединений формул (XVI-а) и (Χνΐ-с), где Ζ¹ представляет собой защитную группу для аминов, такую как, например, третбутоксикарбонильная группа, следуя известным из уровня техники методикам алкилирования (этап реакции Р). Указанное алкилирование можно беспрепятственно осуществлять путем обработки (Χν-а) и (Χν-с), соответственно, соответствующими промежуточными соединениями формул (Χνΐ-а) и (Χνΐ-с), с подходящим основанием, таким как, например, карбонат натрия или карбонат цезия, в подходящем инертном растворителе, таком как, например, Ν,Ν-диметилформамид или диметоксисульфоксид, при низкой температуре, такой как, например, 0°С, в течение 30 мин и затем при умеренно высокой температуре, такой как, например, 100°С, в течение 24-100 ч или, например, нагревая реакционную смесь при 130°С, например, в течение 30-45 мин под микроволновым излучением.

Промежуточные продукты согласно формулам (Χνΐ-а) и (Χνΐ-с) из вышеприведенной схемы реакции (12) можно получить путем реакции промежуточных соединений формул (ΧνΐΙ-а) и (ΧνΐΙ-с), следуя известным из уровня техники методикам окисления (этап реакции О). Указанное окисление можно беспрепятственно осуществлять путем обработки соответствующих промежуточных соединений формул (ΧνΙΙ-а) и (ΧνΙΙ-с) окислителем, таким как, например, периодат натрия, в подходящем инертном растворителе, таком как, например, ацетонитрил/вода, в присутствии хлорида рутения(Ш) при умеренно высокой температуре, такой как, например, 25°С, например, в течение 2 ч.

Промежуточные продукты согласно формулам (ΧνΙΙ-а) и (ΧνΙΙ-с) из вышеприведенной схемы реакции (12) можно получить путем реакции промежуточных соединений формул (ΧνΙΙΙ-а) и (ΧνΙΙΙ-с), следуя известным из уровня техники методикам образования сульфамидата (этап реакции Н). Указанное превращение можно беспрепятственно осуществлять путем обработки соответствующих промежуточных соединений формул (ΧνΙΙΙ-а) и (ΧνΙΙΙ-с) тионилхлоридом в присутствии основания, такого как, например, пиридин, в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, ацетонитрил, при низкой температуре, такой как, например, -40°С, например, в течение 30 мин, и затем при умеренно высокой температуре, такой как, например, 25°С, например, в течение 24-72 ч.

В общем, промежуточные соединения формул (ΧνΙΙΙ-а) и (ΧνΙΙΙ-с), где Ζ¹ представляет собой защитную группу для аминов, такую как, например, трет-бутоксикарбонильная группа, можно получить, следуя известным из уровня техники методикам по 81гескег, описанным в литературе.

Фармакология.

Соединения по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые композиции ингибируют ВАСЕ и, следовательно, могут быть пригодными при лечении или предупреждении болезни Альцгеймера (АО), умеренного когнитивного нарушения (МС1), угасания, деменции, деменции с тельцами Леви, церебральной амилоидной ангиопатии, мультиинфарктной деменции, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, и деменции, ассоциированной с бета-амилоидом.

Настоящее изобретение относится к соединению согласно общей формуле (Ι), его стереоизомерной форме или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты или основания для применения в качестве лекарственного препарата.

Настоящее изобретение также относится к соединению согласно общей формуле (Ι), его стереоизомерной форме или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты или основания для применения при лечении или предупреждении заболеваний или состояний, выбранных из группы, состоящей из АО, МП, угасания, деменции, деменции с тельцами Леви, церебральной амилоидной ангиопатии, мультиинфарктной деменции, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, и деменции, ассоциированной с бета-амилоидом.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения согласно общей формуле (Ι), его стереоизомерной формы или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты или основания для получения лекарственного препарата для лечения или предупреждения любых болезненных состояний, упомянутых выше в данном документе.

Принимая во внимание полезность соединения формулы (Ι), обеспечивается способ лечения теплокровных животных, в том числе людей, страдающих любыми заболеваниями, упомянутыми выше в данном документе, или способ предупреждения таковых у теплокровных животных, в том числе людей.

Указанные способы включают введение, т.е. системное или местное введение, предпочтительно пероральное введение, эффективного количества соединения формулы (Ι), его стереоизомерной формы, его фармацевтически приемлемой соли присоединения теплокровному животному, в том числе человеку.

Способ лечения также может предусматривать введение активного ингредиента по схеме, включающей от одного до четырех приемов в сутки. В данных способах лечения соединения по настоящему изобретению предпочтительно являются составленными до введения. Описанные в данном документе ниже подходящие фармацевтические составы получены при помощи известных методик с применением хорошо известных и легко доступных ингредиентов.

Соединения по настоящему изобретению, которые могут быть подходящими для лечения или пре- 10 022649 дупреждения болезни Альцгеймера или ее симптомов, можно вводить отдельно или в сочетании с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами. Комбинированная терапия предусматривает введение одного фармацевтического дозированного состава, который содержит соединение формулы (I), и одного или нескольких дополнительных терапевтических средств наряду с введением соединения формулы (I), и каждого дополнительного терапевтического средства в его собственном отдельном фармацевтическом дозированном составе. Например, соединение формулы (I) и терапевтическое средство можно вводить пациенту вместе в одной пероральной дозированной композиции, такой как таблетка или капсула, или каждое средство можно вводить в отдельных пероральных дозированных составах.

Фармацевтические композиции.

Настоящее изобретение также обеспечивает композиции для предупреждения или лечения заболеваний, при которых ингибирование бета-секретазы является благоприятным, таких как болезнь Альцгеймера (АО), умеренное когнитивное нарушение, угасание, деменция, деменция с тельцами Леви, синдром Дауна, деменция, ассоциированная с инсультом, деменция, ассоциированная с болезнью Паркинсона, и деменция, ассоциированная с бета-амилоидом. При этом указанные композиции содержат терапевтически эффективное количество соединения согласно формуле (I) и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Наряду с тем, что возможно вводить активный ингредиент отдельно, предпочтительно предоставлять его в виде фармацевтической композиции. Соответственно, настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую соединение по настоящему изобретению вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Носитель или разбавитель должен быть приемлемым в смысле совместимости с другими ингредиентами композиции и не вредным для тех, кто ее получает.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно получить при помощи любых способов, хорошо известных в области фармации. Терапевтически эффективное количество определенного соединения, в форме основания или в форме соли присоединения, в качестве активного ингредиента объединено в однородной смеси с фармацевтически приемлемым носителем, который может находиться в большом разнообразии форм в зависимости от формы препарата, необходимой для введения. Желательно, данные фармацевтические композиции находятся в единичной лекарственной форме, подходящей предпочтительно для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение; или местного введения, такого как посредством ингаляции, назального спрея, глазных капель или при помощи крема, геля, шампуня или т.п. Например, при получении композиций в пероральной лекарственной форме можно использовать любую из обычных фармацевтических сред, таких как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п., в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие, разрыхлители и т.п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. По причине простоты их введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее преимущественную пероральную единичную лекарственную форму, в случае чего, разумеется, используются твердые фармацевтические носители. Применительно к парентеральным композициям носитель, как правило, будет содержать стерильную воду по меньшей мере по большей части, хотя можно включить другие ингредиенты, например, для того, чтобы способствовать растворимости. Например, можно получить растворы для инъекций, в которых носитель содержит солевой раствор, раствор глюкозы или смесь солевого раствора и раствора глюкозы. Также можно получить суспензии для инъекций, в случае чего можно использовать соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и т.п. В композициях, подходящих для чрескожного введения, носитель необязательно содержит средство, усиливающее проникновение, и/или подходящее смачивающее средство необязательно в сочетании с подходящими добавками любой природы при их незначительном содержании, причем эти добавки не приводят к любым значительным вредным эффектам по отношению к коже. Указанные добавки могут облегчать введение в кожу и/или могут быть целесообразными для получения необходимых композиций. Данные композиции можно вводить различными способами, например, в виде трансдермального пластыря, путем точечного нанесения или в виде мази.

Особенно преимущественным является составление вышеупомянутых фармацевтических композиций в единичной лекарственной форме для простоты введения и однородности дозирования. Единичная лекарственная форма, как используется в описании и формуле изобретения в данном документе, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных дозировок, причем каждая единица содержит предварительно определенное количество активного ингредиента, рассчитанное так, чтобы получить необходимый терапевтический эффект, совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких единичных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые или покрытые таблетки), капсулы, пилюли, пакеты с порошком, облатки, растворы для инъекций или суспензии, чайные ложки, столовые ложки и т.п. и их отдельные множества.

- 11 022649

Точная дозировка и частота введения зависят от применяемого конкретного соединения формулы (I), конкретного состояния, лечение которого осуществляется, тяжести состояния, лечение которого осуществляется, возраста, веса, пола, степени расстройства и общего физического состояния конкретного пациента, а также других лекарственных препаратов, которые может получать индивид, что является хорошо известным для специалистов в данной области техники. Кроме того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество можно снизить или увеличить в зависимости от реакции субъекта, подвергающегося лечению, и/или в зависимости от оценки врача, предписывающего соединения по настоящему изобретению.

В зависимости от способа введения фармацевтическая композиция будет содержать 0,05-99 вес.%, предпочтительно 0,1-70 вес.%, более предпочтительно 0,1-50 вес.% активного ингредиента и 1-99,95 вес.%, предпочтительно 30-99,9 вес.%, более предпочтительно 50-99,9 вес.% фармацевтически приемлемого носителя, причем все проценты основаны на общем весе композиции.

Соединения по настоящему изобретению можно применять для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение; или местного введения, такого как посредством ингаляции, назального спрея, глазных капель или при помощи крема, геля, шампуня или т.п. Предпочтительно соединения вводятся перорально. Точная дозировка и частота введения зависят от применяемого конкретного соединения согласно формуле (I), конкретного состояния, лечение которого осуществляется, тяжести состояния, лечение которого осуществляется, возраста, веса, пола, степени расстройства и общего физического состояния конкретного пациента, а также других лекарственных препаратов, которые может получать индивид, что является хорошо известным для специалистов в данной области техники. Кроме того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество можно снизить или увеличить в зависимости от реакции субъекта, подвергающегося лечению, и/или в зависимости от оценки врача, предписывающего соединения по настоящему изобретению.

Количество соединения формулы (I), которое можно объединить с материалом носителя с получением одной лекарственной формы, будет варьировать в зависимости от заболевания, лечение которого осуществляется, вида млекопитающих и конкретного способа введения. Однако в качестве общего указания подходящие стандартные дозы применительно к соединению по настоящему изобретению, например, могут предпочтительно содержать от 0,1 до приблизительно 1000 мг активного соединения. Предпочтительная стандартная доза составляет от 1 до приблизительно 500 мг. Более предпочтительная стандартная доза составляет от 1 до приблизительно 300 мг. Даже более предпочтительная стандартная доза составляет от 1 до приблизительно 100 мг. Такие стандартные дозы можно вводить более одного раза в сутки, например 2, 3, 4, 5 или 6 раз в сутки, но предпочтительно 1 или 2 раза в сутки, так что суммарная дозировка для взрослого весом 70 кг находится в диапазоне от 0,001 до приблизительно 15 мг/кг веса субъекта на введение. Предпочтительная дозировка составляет от 0,01 до приблизительно 1,5 мг/кг веса субъекта на введение, и такая терапия может продолжаться в течение ряда недель или месяцев и в некоторых случаях лет. Однако будет понятно, что определенный уровень дозы для любого конкретного пациента будет зависеть от различных факторов, в том числе активности определенного соединения, которое используется; возраста, веса тела, общего состояния здоровья, пола и рациона индивида, подвергающегося лечению; времени и пути введения; скорости экскреции; других лекарственных средств, введение которых осуществлялось ранее; и тяжести конкретного заболевания, терапия которого осуществляется, что будет хорошо понятным для специалистов в данной области техники.

Специалистам в данной области техники будет очевидно, что в некоторых случаях может быть необходимо применять дозировки вне этих диапазонов. Дополнительно, следует отметить, что клиницист или лечащий врач будет знать, как и когда начинать, прерывать, корректировать или завершать терапию в соответствии с индивидуальной реакцией пациента.

Следующие примеры предназначены для иллюстрирования, а не для ограничения объема настоящего изобретения.

Экспериментальная часть

Ниже в данном документе выражение АсОН означает уксусную кислоту, НС1 означает хлористо-водородную кислоту, АсОЕ! означает этилацетат, Ό0Μ означает дихлорметан, ΌΙΡΕ означает диизопропиловый эфир, ΌΜΡ означает Ν,Ν-диметилформамид, СО₂ означает диоксид углерода, ΌΜδΟ означает диметилсульфоксид, Е!₂О означает диэтиловый эфир, Ε!₃Ν означает триэтиламин, ЕЮН означает этанол, НРЮН означает изопропанол, ίΡτΝΗ₂ означает изопропиламин, ΜθΟΝ означает ацетонитрил, '^сОН означает метанол, №ЮН означает гидроксид натрия, ΝΗ₄Ο1 означает хлорид аммония, НН₃ означает аммиак, №НСО₃ означает бикарбонат натрия, №-1Н8О₄ означает гидросульфат натрия, №-ьСО₃ означает карбонат натрия, №₂8О₄ означает сульфат натрия, Н₂§О₄ означает серную кислоту, Μ§§Ο₄ означает сульфат магния, Си1 означает йодид меди, ТРА означает трифторметансульфоновую кислоту, КиО₂ означает оксид рутения, ΌΑδΤ означает диэтиламинотрифторид серы, ΌΒυ означает 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундек-7-ен, Ν₂ означает азот, водн. означает водный, мин означает минуты, т.пл. означает точку плавления, рац означает рацемический, К/ означает время удерживания, ТНР означает тетрагидрофуран, §РС означает сверхкритическую флюидную хроматографию.

- 12 022649

Реакции под воздействием микроволнового излучения осуществляли в однорежимном реакторе: микроволновом реакторе Етгу5™ ΘρΙίιηί/сг (Рег5опа1 СНст151гу А.В., в настоящее время Вю1аде).

Реакции гидрирования осуществляли в гидрогенизаторе с непрерывным потоком Н-СИВЕ® от ТНа1е5Ыапо Ыапо1есНпо1оду 1пс.

Тонкослойную хроматографию (ТЬС) осуществляли на пластинах Р254 с силикагелем 60 (Мегск) с применением чистых для анализа растворителей. Хроматографию на открытых колонках осуществляли на силикагеле, размер частиц 60 А, меш=230-400 (Мегск), при помощи стандартных методик. Колоночную флэш-хроматографию осуществляли с применением легко присоединяемых картриджей от Мегск на неоднородном силикагеле, размер частиц 15-40 мкм (одноразовые флэш-колонки с нормальным слоем), на системе 8РОТ или ЕАЕЕА8Н от Агтеп 1п51гитеп1.

Оптическое вращение измеряли на поляриметре Регкт-Е1тег 341 с натриевой лампой и представляли, как указано ниже: [α]° (λ, к. г/100 мл, растворитель, Т°С).

Реакции в потоке осуществляли в коммерчески доступном модульном устройстве Уароийес К2+К4.

Применительно к ключевым промежуточным продуктам, а также некоторым конечным соединениям абсолютную конфигурацию хиральных центров (указана как К и/или 8) определяли при помощи сравнения с образцами с известной конфигурацией или применения аналитических методик, подходящих для определения абсолютной конфигурации, таких как УСЭ (колебательный круговой дихроизм) или рентгеновская кристаллография. Если абсолютная конфигурация в хиральном центре неизвестна, она условно обозначается К*.

А. Получение промежуточных продуктов.

Пример А1.

Получение промежуточного продукта А1: рац-2-амино-2-(3-бромфенил)пропионитрила

Триметилсилилцианид (20 г, 200 ммоль) добавили к перемешанному раствору 3-бромацетофенона (20 г, 100 ммоль) и ЫН₄С1 (11 г, 200 ммоль) в ЫН₃/МеОН (400 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 дней. Растворитель выпарили ίη уасио и остаток поглотили АсОЕ1 (100 мл). Отфильтровывали твердое вещество и фильтрат выпарили ίη уасио с получением промежуточного продукта А1 (20 г, 86% выход), который использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

Пример А2.

Получение промежуточного продукта А2: метилового сложного эфира рац-2-амино-2-(3бромфенил)пропионовой кислоты

Промежуточный продукт А1 (20 г, 88,9 ммоль) растворили в НС1/МеОН (500 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 дней. После охлаждения до комнатной температуры добавили АсОЕ1 (100 мл) и Н₂О (100 мл) и смесь экстрагировали посредством АсОЕ1 (2x100 мл). Повысили основность объединенных водных слоев при помощи раствора ΝΗ₃ до рН 8 и экстрагировали посредством АсОЕ1 (5x100 мл). Объединенные органические слои высушили (Ыа₂8О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта А2 (10,6 г, 46% выход) в виде масла.

ЬСМ8: 258 [М+Н]+; Кр 3,77 мин (способ 7).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методикам синтеза, описанным в примерах А1-А2.

Пример Α3.

Получение промежуточного продукта А3: метилового сложного эфира рац-2-амино-2-(3нитрофенил)пропионовой кислоты

Из рац-2-амино-2-(3-нитрофенил)пропионитрила. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; АсОЕЕпетролейный эфир) с получением промежуточного продукта 3 (63%).

ЬСМ8: 225 [М+Н]+; Кр 0,98 мин (способ 9).

- 13 022649

Пример А4.

Получение промежуточного продукта А4: рац-2-амино-2-(3-бромфенил)пропан-1-ола но

Алюмогидрид лития (1 М в ТНР; 22 мл, 22 ммоль) добавили по каплям к перемешанному раствору промежуточного продукта А2 (7,5 г, 29,1 ммоль) в ТНР (200 мл) при -15°С. Смесь оставили медленно нагреваться до 0°С на протяжении 1 ч. Добавили больше ТНР (150 мл) и насыщенный раствор Ыа₂8О₄добавили по каплям до прекращения образования водорода. Добавили безводный Ыа₂8О₄ и оставили перемешиваться в течение ночи при комнатной температуре. Смесь отфильтровали через диатомовую землю, промыли ТНР и выпарили растворитель ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; 7 М раствор ΝΉ₃ в МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта А4 (5,70 г, 85% выход) в виде масла.

ЬСМЗ: 230 [М+Н]+; Кд 0,69 мин (способ 1).

Пример А5.

Получение промежуточного продукта А5: рац-2-амино-2-(3-нитрофенил)пропан-1-ола но

Борогидрид натрия (16,3 г, 429,4 ммоль) добавили порциями к перемешанному раствору промежуточного продукта А3 (48,3 г, 214,7 ммоль) в МеОН (500 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 ч. Растворитель выпарили ίη уасио. Повысили основность остатка при помощи насыщенного водного раствора ЫаНСО₃ до рН 9 и экстрагировали посредством АсОЕ1 (3x200 мл). Органические слои высушили (Ыа₂8О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта А5 (30,26 г, 72% выход).

ЬСМЗ: 197 [М+Н]+; Кд 3,16 мин (способ 8); т.пл. 238,7-241,6°С (№КЗ-2А).

Пример А6.

Получение промежуточного продукта А6: (К)-2-амино-2-(3-бромфенил)пропан-1-ола но

Образец промежуточного продукта А4 (15,4 г) разделили на соответствующие энантиомеры при помощи препаративной 8РС на (СШга1рак® Эа1се1 АО х250 мм). Подвижная фаза (СО₂, МеОН с 0,2% ιΡγΝΉ₂) с получением промежуточного продукта А6 (7,21 г, 40% выход).

ЬСМЗ: 230 [М+Н]+; Кд 0,71 мин (способ 1); л : -14,9° (589 нм, к. 0,2946% вес./об., МеОН, 20°С).

Пример А7.

Получение промежуточного продукта А7: трет-бутилового сложного эфира (К)-[1-(3-бромфенил)-2гидрокси-1-метилэтил]карбаминовой кислоты ,-Χ'-, О

но

Ди-трет-бутилдикарбонат (19,8 г, 90,7 ммоль) добавили порциями к перемешанному раствору промежуточного продукта А6 (11,6 г, 50,4 ммоль) в смеси насыщенного раствора NаНСО₃ (100 мл) и ТНР (100 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин и при комнатной температуре в течение 15 ч. Смесь охладили на ледяной/Н2О бане и повысили кислотность при перемешивании до рН 1-2 при помощи NаНδО₄. Органический слой отделили и водн. слой затем экстрагировали посредством АсОЕй Объединенные органические слои отделили, высушили (М§ЗО₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи хроматографии на коротких колонках (силикагель; АсОЕРОСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта А7 (16,47 г, 99% выход) в виде бесцветного масла, которое затвердело при выдерживании.

ЬСМЗ: 330 [М+Н]+; Кд 2,58 мин (способ 1).

- 14 022649

Пример А8.

Получение промежуточного продукта А8: (К)-[3-(трет-бутилоксикарбонил)-4-(3-бромфенил)-4метил-[1,1,3] оксатиазолидин-2 -оксида

Раствор промежуточного продукта А7 (14,3 г, 43,3 ммоль) в сухом МеСЫ (80 мл) добавили по каплям к перемешанному раствору тионилхлорида (7,9 мл, 108,3 ммоль) в сухом МеСЫ (226 мл), охлажденном до -40°С и в атмосфере Ν₂. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при -40°С перед добавлением пиридина (17,4 мл, 216,5 ммоль). Обеспечили нагревание реакции до комнатной температуры и перемешивали в течение 64 ч. Растворители выпарили ίη уасио. Остаток обработали Εΐ₂Ο. Твердые вещества отфильтровали и фильтрат сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта А8 (15,5 г, 95% выход) в виде красного масла. Продукт использовали в следующей реакции без дополнительной очистки.

ЬСМ8: 3 93 [М+ЫН₄]+; Κί: 3,4 мин (способ 1).

Пример А9.

Получение промежуточного продукта А9: (К)-[3-(трет-бутилоксикарбонил)-4-(3-бромфенил)-4метил- [1,1,3] оксатиазолидин-2,2-диоксида

Хлорид рутения(Ш) (85 мг, 0,41 ммоль) добавили к раствору промежуточного продукта А8 (15,3 г, 40,8 ммоль) в смеси МеСЫ и Н₂О (1:1) (438 мл) при 0°С с последующим добавлением периодата натрия (13,1 г, 61,2 ммоль). Обеспечили нагревание реакции до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Смесь отфильтровали через диатомовую землю и промыли АсОЕ1 (125 мл). К фильтрату добавили Н₂О (125 мл) и АсОЕ1 (250 мл). Органический слой отделили, высушили (Мд§О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта А9 (14,4 г, 90% выход) в виде белого твердого вещества.

ЬСМ8: 409 [М+ЫН₄]+; Κί: 3,3 мин (способ 1); т.пл. 133,1°С (РР90); α_ο: -35,6° (589 нм, к. 0,55% вес./об., СМС 20°С).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методикам синтеза, описанным в примерах А7-А9.

Пример А10.

Получение промежуточного продукта А10: рац-[3-(трет-бутилоксикарбонил)-4-(3-нитрофенил)-4метил-[1,1,3]оксатиазолидин-2,2-диоксида

Получили из рац-[3-(трет-бутилоксикарбонил)-4-(3-нитрофенил)-4-метил-[1,1,3]оксатиазолидин-2оксида. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; ОСМ) с получением промежуточного продукта А10 в виде желтого твердого вещества (95%).

ЬСМ8: 376 [М+ЫН₄]+; Κ_ί: 1,35 мин (способ 2).

Пример А11.

Получение промежуточного продукта А11: этилового сложного эфира 2-[2-(3-бромфенил)-2К-третбутоксикарбониламинопропил] -2Н-пиразол-3 -карбоновой кислоты

Карбонат цезия (824 мг, 2,53 ммоль) добавили к смеси промежуточного продукта А9 (0,661 г, 1,69 ммоль) и этилового сложного эфира 2Н-пиразол-3-карбоновой кислоты (260 мг, 1,86 ммоль) в ЭМ8О (8 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и при 110°С в течение 3 ч. Смесь обработали насыщенным раствором лимонной кислоты и ОСМ

- 15 022649 (20 мл) и перемешивали в течение 2 ч. Органическую фазу отделили, обработали Н₂О (10 мл) и экстрагировали посредством Ό0Μ (2x10 мл). Органический слой отделили, высушили (М§§0₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; Ό0Μ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта А11 (186 мг, 24% выход) в виде бесцветного масла.

ЬСМ8: 452 [М+Н]+; Кд 4,23 мин (способ 3).

Пример А12.

Получение промежуточного продукта А12: трет-бутилового сложного эфира рац-[2-(4бромпиразол-1 -ил)-1 -метил-1-(3 -нитрофенил)этил] карбаминовой кислоты

Карбонат натрия (59 мг, 0,56 ммоль) добавили к смеси промежуточного продукта А10 (100 мг, 0,28 ммоль) и 4-бром-1Н-пиразола (53 мг, 0,36 ммоль) в ΌΜΡ (3 мл). Смесь перемешивали при 130°С в течение 2 ч. Растворитель выпарили ίη уасио. Остаток обработали Н₂О (2 мл) и экстрагировали посредством ЭСМ (2x10 мл). Органический слой отделили, высушили (М§§0₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; ЭСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта А12 (100 мг, 84% выход) в виде белого твердого вещества после обработки холодным Εΐ₂Ο.

ЬСМ8: 425 [М+Н]+; Кд 3,57 мин (способ 3); т.пл. 159,3°С (РР 90).

Пример А13.

Получение промежуточного продукта А13: этилового сложного эфира (К)-2-[2-амино-2-(3бромфенил)пропил] -2Н-пиразол-3 -карбоновой кислоты

Трифторуксусную кислоту (1 мл) добавили к перемешанному раствору промежуточного продукта А11 (186 мг, 0,41 ммоль) в ЭСМ (5 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворители выпарили ίη уасио с получением промежуточного продукта А13 (180 мг, 94% выход) в виде бесцветного масла, которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

ЬСМЗ: 352 [М+Н]+; Кд 2,69 мин (способ 3).

Пример А14.

Получение промежуточного продукта А14: рац-4-бром-2-[2-трет-бутоксикарбониламино-2-(3нитрофенил)пропил] -2Н-пиразол-3 -карбоновой кислоты

М раствор диизопропиламида лития в ТНР и гептане (0,25 мл, 0,4 9 ммоль) добавили к раствору промежуточного продукта А12 (100 мг, 0,24 ммоль) в ТНР (3 мл) при -78°С. Реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 1 ч. Затем добавили твердую двуокись углерода и нагрели смесь до комнатной температуры на протяжении 2 ч. Смесь обработали насыщенным раствором МН₄С1 и экстрагировали посредством ЭСМ (3x10 мл). Органический слой отделили, высушили, отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта А14 (60 мг, 54% выход) в виде бесцветного масла.

ЬСМЗ: 469 [М+Н]+; Кд 1,74 мин (способ 3).

Пример А15.

Получение промежуточного продукта А15: (К)-6-(3-бромфенил)-6-метил-6,7-дигидро-5Нпиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-она

- 16 022649

Ацетат калия (83 мг, 0,85 ммоль) добавили к раствору промежуточного продукта А13 (180 мг, 0,39 ммоль) в ЕЮН (5 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 90°С в течение 5 ч. Растворитель выпарили ίη уасио. Остаток обработали 0,5 М водн. раствором НС1 и экстрагировали посредством ОСМ. Органический слой отделили, высушили (М§§О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта А15 (100 мг, 84% выход) в виде бесцветного масла.

ЬСМ8: 306 [М+Н]+; К₄: 2,01 мин (способ 4).

Пример А16.

Получение промежуточного продукта А16: рац-3-бром-6-метил-6-(3-нитрофенил)-6,7-дигидро-5Нпиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-она

Способ А.

Трифторуксусную кислоту (3 мл) добавили к раствору промежуточного продукта А14 (200 мг, 0,4 ммоль) в ΌΟΜ (20 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем добавили ацетат калия (59 мг, 0,06 ммоль) в ЕЮН (3 мл). Смесь перемешивали при 90°С в течение 3 ч. Растворители выпарили ίη уасио. Сырье обработали 1 М водн. раствором НС1 (10 мл) и продукт экстрагировали посредством ЛсОЕ1 (4x20 мл). Органический слой отделили, высушили (М§§О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта А16 (120 мг, 19% выход) в виде белого твердого вещества.

ЬСМ8: 351 [М+Н]+; Κ_ί: 2,45 мин (способ 5); т.пл. 285,3°С (ЕР 90).

Способ В.

Трифторуксусную кислоту (100 мл) добавили к перемешанному раствору промежуточного продукта А23 (6,5 г, 13,07 ммоль) в ОСМ (200 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Растворитель выпарили ίη уасио, затем добавили ацетат калия (1,924 г, 19,60 ммоль) и ЕЮН (100 мл) и реакцию перемешивали с обратным холодильником в течение 4 ч. Сырье выпарили ίη уасио и остаток обработали 1М водн. раствором НС1 до рН 3. Сырье экстрагировали посредством ЛсОЕ1 (3x50 мл), органическую фазу выпарили досуха и сырье обработали холодным ЕЮН и ЕьО с получением промежуточного продукта А16 в виде бежевого твердого вещества. Объединенные растворители выпарили ίη уасио и очистили при помощи колоночной хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением дополнительной порции промежуточного продукта А16 в виде белого твердого вещества (объединенное количество 4 г, 87%).

ЬСМ8: 351 [М+Н]+; Κ_ί: 1,65 мин (способ 3).

Пример А17.

Получение промежуточного продукта А17: (К)-6-[3-(5-хлорпиридин-3-ил)фенил]-6-метил-6,7-

Тетракис-(трифенилфосфин)палладий(0) (34 мг, 0,029 ммоль) добавили к перемешанной суспензии промежуточного продукта А15 (90 мг, 0,29 ммоль) и 5-хлорпиридин-3-бороновой кислоты (55 мг, 0,35 ммоль) в смеси 1,4-диоксана (5 мл) и насыщенного раствора №ьСО₃, (3 мл) при комнатной температуре в атмосфере Ν₂. Смесь перемешивали при 150°С в течение 15 мин под микроволновым излучением. После охлаждения до комнатной температуры смесь развели Н₂О и экстрагировали посредством ОСМ. Органический слой отделили, высушили (М§§О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ).

Необходимые фракции собрали, выпарили растворители ίη уасио и промыли холодным ЕЮН и ЕьО с получением промежуточного продукта А17 (81 мг, 81% выход) в виде белого твердого вещества.

ЬСМ8: 339 [М+Н]+; Κ_ί: 0,89 мин (способ 2).

- 17 022649

Пример А18.

Получение промежуточного продукта А18: (К)-6-[3-(5-хлорпиридин-3-ил)фенил]-6-метил-6,7дигидро-5Н-пиразоло [1,5-а] пиразин-4-тиона

Пентасульфид фосфора (71 мг, 0,32 ммоль) добавили к раствору промежуточного продукта А17 (90 мг, 0,27 ммоль) в пиридине (4 мл) и смесь нагревали при 100°С в течение 5 ч. Растворитель выпарили ίη уаеио и неочищенный продукт очистили при помощи хроматографии на коротких колонках (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уаеио с получением промежуточного продукта А18 (60 мг, 63% выход) в виде желтого масла.

ЬСМ8: 355 [М+Н]+; К,: 2,4 мин (способ 3).

Следующие промежуточные продукты получили согласно методикам синтеза, описанным в примере А18.

Пример А19.

Получение промежуточного продукта А19: рац-3-бром-6-метил-6-(3-нитрофенил)-6,7-дигидро-5Нпиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-тиона

Получили из промежуточного продукта А16. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; МеОН/ОСМ) с получением промежуточного продукта А19 в виде желтого твердого вещества (87%).

ЬСМ8: 366 [М+Н]+; К 2,37 мин (способ 3).

Пример А20.

Получение промежуточного продукта А20: рац-6-(3-амино-фенил)-3-бром-6-метил-6,7-

32% водн. раствор ΝΉ₃ (3 мл) добавили к перемешанной смеси промежуточного продукта А19 (600 мг, 1,63 ммоль) в 7 М растворе ΝΉ₃ в МеОН (5 мл) в запаянной пробирке. Смесь перемешивали при 60°С в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры растворители выпарили ίη уаеио. Неочищенный продукт растворили в ЕЮН (20 мл) и добавили хлорид олова(11) (372 мг, 1,96 ммоль). Смесь перемешивали при 90°С в течение 24 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь отфильтровали через целит и выпарили растворитель ίη уаеио. Остаток обработали 8% водн. раствором №ЮН (10 мл) и экстрагировали посредством ОСМ (30 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Органический слой отделили, высушили (№₂8О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уаеио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; 7 М раствор ΝΉ₃ в МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уаеио с получением промежуточного продукта А20 (200 мг, 38% выход) в виде желтого масла.

ЬСМ8: 320 [М+Н]+; К 1,5 мин (способ 6).

Пример А21.

Получение промежуточного продукта А20: рац-6-(3-аминофенил)-3-бром-6-метил-6,7дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-4-иламина и промежуточного продукта А21: рац-3-бром-6-метил-6-(3нитрофенил)-6,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-иламина

32% водн. раствор ΝΉ₃ (4 мл) добавили к перемешанной смеси промежуточного продукта А19 (3,8 г, 10,35 ммоль) в 7 М растворе ΝΉ₃ в МеОН (6 мл) в запаянной пробирке. Смесь перемешивали при 100°С в течение 6 ч. После охлаждения до комнатной температуры растворители выпарили ίη уаеио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали, выпарили растворители ίη уаеио и неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; 7 М раствор ΝΉ₃ в МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уаеио с получением промежуточного продукта 20 (100 мг, 3% выход), промежуточного продукта 21 (200 мг, 6% выход) и фракции, содержащей смесь промежуточ- 18 022649 ного продукта 20 и 21 (2,5 г).

ЬСМ8: А20: 322 [М+Н]+, К_!: 0,87 мин (способ 3); А21: 350 [М+Н]+; К_!: 0,95 мин (способ 2).

Пример А22.

Получение промежуточного продукта А22: рац-6-(3-аминофенил)-6-метил-6,7-

Способ А.

Раствор промежуточного продукта А20 (200 мг, 0,62 ммоль) в МеОН (30 мл) и Εΐ₃Ν (5 мл) гидрировали в реакторе Н-СиЬе (1,2 мл/мин, 30 мм картридж с 10% палладием на углероде, режим с использованием всего водорода, 50°С, 3 цикла). Растворители сконцентрировали ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; 7 М раствор ΝΗ₃ в МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта 22 (100 мг, 66% выход) в виде белого твердого вещества.

ЬСМ8: 415 [М+Н]+; К,: 1,58 мин (способ 3).

Способ В.

Цинк (1,33 г, 20,40 ммоль) добавили к фракции, содержащей смесь промежуточных продуктов 20 и 21, описанных в примере А21 (2,5 г, 7,46 ммоль), в ЕЮН (100 мл) и АсОН (20 мл). Смесь перемешивали с обратным холодильником в течение 24 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь отфильтровали через целит и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; 7 М раствор ΝΠ₃ в МеОНЮСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта 22 (0,93 г, 52% выход) в виде желтого масла, которое выпадает в осадок при выдерживании.

Следующие промежуточные продукты получили согласно методике синтеза, описанной в примере А14, с использованием этилхлорформиата вместо твердой двуокиси углерода.

Пример А23.

Получение промежуточного продукта А23: этилового сложного эфира рац-4-бром-2-[2-третбутоксикарбониламино-2-(3 -нитрофенил)пропил] -2Н-пиразол-3 -карбоновой кислоты

Получили из промежуточного продукта А12. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; АсОЕ!/гептан) с получением промежуточного продукта А23 (65%).

ЬСМ8: 499 [М+Н]+; К,: 4,09 мин (способ 3).

Пример А24.

Получение промежуточного продукта А24: трет-бутилового сложного эфира рац-[1-метил-1-(3нитрофенил)-2-(3-трифторметилпиразол-1-ил)этил]карбаминовой кислоты

Промежуточный продукт А10 (2,5 г, 6,976 ммоль) добавили к перемешанному раствору 3-(трифторметил)пиразола (1,234 г, 9,069 ммоль) и карбоната калия (1,928 г, 13,952 ммоль) в ОМЕ (175 мл) при комнатной температуре. Затем смесь нагревали при 110°С в течение 2 ч. Растворитель выпарили и остаток обработали насыщенным раствором лимонной кислоты (80 мл) и АсОЕ! (160 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Органический слой отделили, высушили и выпарили ίη уасио. Сырье очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; ЭСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили ίη уасио с получением прозрачного масла, которое после обработки холодным Е!₂О и выдерживания выпало в осадок в виде белого твердого вещества (2 г, 69%).

- 19 022649

Пример А25.

Получение промежуточного продукта А25: этилового сложного эфира рац-2-[2-третбутоксикарбониламино-2-(3 -нитрофенил)пропил] -5 -трифторметил-2Н-пиразол-3 -карбоновой кислоты

Получили из промежуточного продукта А24. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; АсОЕЕгептан) с получением промежуточного продукта А25 (51%).

ЬСМ8: 487 [М+Н]+; К 4,22 мин (способ 3).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методике синтеза, описанной в примере А16 - способ В.

Пример А26.

Получение промежуточного продукта А26: рац-6-метил-6-(3-нитрофенил)-2-трифторметил-6,7-

Получили из промежуточного продукта А25. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; МеОН/ОСМ) с получением промежуточного продукта А26 в виде белого твердого вещества (93%).

ЬСМ8: 339 [М-Н]^-; К 2,21 мин (способ 3).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методике синтеза, описанной в примере А18-А21.

Пример А27.

Получение промежуточного продукта А27: рац-6-метил-6-(3-нитрофенил)-2-трифторметил-6,7дигидро-5Н-пиразоло [1,5-а] пиразин-4-тиона

Получили из промежуточного продукта А26. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; МеОН/ОСМ) с получением промежуточного продукта А27 в виде желтого твердого вещества (95%).

ЬСМ8: 355 [М-Н]^-; К 1,29 мин (способ 2).

Пример А28.

Получение промежуточного продукта А28: рац-6-(3-аминофенил)-6-метил-2-трифторметил-6,7дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-4-иламина и промежуточного продукта А29: 6-метил-6-(3-нитрофенил)2-трифторметил-6,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-иламина

Получили из промежуточного продукта А27. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; МеОН/ОСМ) с получением промежуточного продукта А28 (16%) и промежуточного продукта А29 (59%).

ЬСМ8: А28: 308 [М-Н]^-; КР: 0,77 мин (способ 2); А29: 338 [М-Н]^-; КР: 2,28 мин (способ 3).

Пример А29.

Получение промежуточного продукта А28: рац-6-(3-аминофенил)-6-метил-2-трифторметил-6,7-

Железо (272 мг, 4,87 ммоль) добавили к смеси промежуточного продукта 29 (340 мг, 1 ммоль) и ΝΗ.·|Ο (100 мг) в МеОН (20,4 мл) и Н₂О (6,8 мл). Реакцию перемешивали при 80°С в течение 5 ч. Сырье

- 20 022649 охладили, отфильтровали через целит и растворитель выпарили ίη уасио. Остаток очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; 7 М раствор ΝΉ₃ в МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта 28 в виде прозрачного масла (260 мг, 84% выход).

ЬСМ8: 310 [М+Н]+; Кд 2,50 мин (способ 5).

Следующий промежуточный продукт А30 получили согласно методикам синтеза, описанным в примерах А1-А4.

Пример А30.

Получение промежуточного продукта А30: рац-2-амино-2-(5-бром-2-фторфенил)пропан-1-ола, промежуточного продукта А31: (К)-2-амино-2-(5-бром-2-фторфенил)пропан-1-ола и промежуточного продукта А32 (8) (8)-2-амино-2-(5-бром-2-фторфенил)пропан-1-ола

Получили из 1-(5-бром-2-фторфенил)этанона. Этот рацемический материал затем дополнительно очистили при помощи препаративной 8РС на СЫга1рак Э1асе1 АО, 20 мкм (2000 г), подвижная фаза (70% гептан, 30% ЕЮН с 0,1% Εΐ₃Ν). Необходимые фракции для каждого энантиомера собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта А31 (44%) и промежуточного продукта А32 (44%).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методикам синтеза, описанным в примере А7-А12.

Пример А31.

Получение промежуточного продукта А33: трет-бутилового сложного эфира (К)-[1-(5-бром-2фторфенил)-2-(4-фторпиразол-1-ил)-1-метилэтил]карбаминовой кислоты

Получили из промежуточного продукта А31. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; АсОЕРгептан) с получением промежуточного продукта А33 в виде прозрачного масла (55%).

ЬСМ8: 418 [М+Н]+; Кд 1,57 мин (способ 2).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методике синтеза, описанной в примере

А25.

Пример А32.

Получение промежуточного продукта А34: этилового сложного эфира (К)-2-[2-(5-бром-2фторфенил)-2-третбутоксикарбониламинопропил]-4-фтор-2Н-пиразол-3-карбоновой кислоты

Получили из промежуточного продукта АЗЗ. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; АсОЕР/гептан) с получением промежуточного продукта А34 в виде прозрачного масла (67%).

ЬСМ8: 490 [М+Н]+; Кд 1,71 мин (способ 2).

Пример А33.

Получение промежуточного продукта А35: (К)-6-(5-бром-2-фторфенил)-3-фтор-6-метил-6,7дигидро-5Н-пиразоло [1,5-а] пиразин-4-она р-

Получили из промежуточного продукта А34. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; МеОН/ОСМ) с получением промежуточного продукта А35 в виде масла (90%).

ЬСМ8: 343 [М+Н]+; Кд 0,96 мин (способ 2).

А18.

- 21 022649

Пример А34.

Получение промежуточного продукта А36: (К)-6-(5-бром-2-фторфенил)-3-фтор-6-метил-6,7дигидро-5Н-пиразоло [1,5-а] пиразин-4-тиона

Получили из промежуточного продукта А35. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; МеОН/ОСМ) с получением промежуточного продукта А36 в виде желтого твердого вещества (85%).

ЬСМ8: 360 [М+Н]+; К 1,19 мин (способ 2).

Пример А35.

Получение промежуточного продукта А37: (К)-6-(5-бром-2-фторфенил)-3-фтор-6-метил-6,7-

32% водн. раствор ΝΗ₃ (1,5 мл) и 7 М раствор ΝΗ₃ в МеОН (3 мл) добавили к промежуточному продукту А36 (330 мг, 0,921 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 100°С в запаянной пробирке в течение 6 ч, затем после охлаждения растворитель удалили ίη уасио. Неочищенный материал очистили при помощи колоночной хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали с получением промежуточного продукта А37 в виде прозрачного масла (260 мг, 83%).

ЬСМ8: 343 [М+Н]+; К 1,03 мин (способ 2).

Пример А36.

Получение промежуточного продукта А38: (К)-6-[5-(бензгидрилиденамино)-2-фторфенил]-3-фтор6-метил-6,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-иламина

Толуол (58 мл) добавили к смеси промежуточного продукта А37 (3 г, 8,178 ммоль), трис-(дибензилиденацетон)дипалладия (749 мг, 0,818 ммоль), 2,2'-бис-(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтила (1,528 г, 2,453 ммоль) и трет-бутоксида натрия (1,415 г, 14,72 ммоль) в запаянной пробирке в атмосфере Ν2 при комнатной температуре. Смесь продали Ν2 в течение нескольких минут, затем добавили бензофенонимин (2,745 мл, 16,356 ммоль) и смесь перемешивали при 90°С в течение 18 ч. Смесь сконцентрировали ίη уасио, затем смесь развели Н₂О и экстрагировали посредством БСМ. Органический слой отделили, высушили (М§§О₄), отфильтровали и растворитель сконцентрировали ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта А38 в виде бледно-желтого твердого вещества (3 г, 83%).

ЬСМ8: 442 [М+Н]+; К 1,39 мин (способ 2).

Пример А37.

Получение промежуточного продукта А39: (К)-6-(5-амино-2-фторфенил)-3-фтор-6-метил-6,7-

37% НС1 (1,05 мл) добавили к раствору промежуточного продукта А38 (3 г, 6,795 ммоль) в 1РгОН (78 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь концентрировали и затем растерли с Е1₂О. Отфильтровали твердое вещество и перенесли в 1РгОН. К нему добавили NаНСО₃(5,709 г) и смесь перемешивали в течение 1 ч, затем отфильтровали и фильтрат сконцентрировали ίη уасио. Продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением бледно-желтого масла. Материал обработали смесью Б1РЕ/Е1₂О 3:1 с получением промежуточного продукта А39 в виде желтого твердого вещества (1,1 г, 58%).

ЬСМ8: 278 [М+Н]+; К 0,56 мин (способ 2).

- 22 022649

Пример А38.

Получение промежуточного продукта А40: бензилового сложного эфира (3-ацетил-4фторфенил)карбаминовой кислоты

Бензилхлорформиат (3 мл, 21,5 ммоль) добавили к смеси 1-(5-амино-2-фторфенил)этанона (3 г, 19,6 ммоль) и бромида тетрабутиламмония при комнатной температуре. Реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч, сырье обработали АсОЕ! (50 мл) и Н₂О (50 мл), органическую фазу отделили и выпарили ίη уасио. Сырье очистили при помощи колоночной хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта А40 в виде кремового твердого вещества (4,7 г, 84%).

ЬСМ8: 286 [М-Н]^-; К_!: 2,81 мин (способ 3).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методике синтеза, описанной для синтеза промежуточного продукта А11.

Пример А39.

Получение промежуточного продукта А41: этилового сложного эфира рац-{3-[2-(4-бромпиразол-1ил)-1 -трет-бутоксикарбониламино-1 -метилэтил] -4-фторфенил}карбаминовой кислоты

Получили из промежуточного продукта А40. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; АсОЕКгептан) с последующей промывкой Э1РЕ с получением промежуточного продукта А41 в виде белого твердого вещества (72%).

ЬСМ8: 487 [М+Н]+; К_!: 3,56 мин (способ 3).

Пример А40.

Получение промежуточного продукта А42: рац-этил-2-[2-[5-[бис-(этоксикарбонил)амино]-2фторфенил] -2-(трет-бутоксикарбониламино)пропил] -4-бромпиразол-3 -карбоксилата

Диизопропиламид лития (2 М в циклогексане/этилбензоле/ТНР, 7,36 мл, 14,721 ммоль) добавили к перемешанному раствору промежуточного продукта А41 (2,1 г, 4,327 ммоль) в сухом ТНР (66 мл) при -70°С в атмосфере Ν₂. Смесь перемешивали при -70°С в течение 1 ч, затем добавили этилхлорформиат (0,91 мл, 9,519 ммоль) при -70°С и реакцию нагревали при -30°С в течение 2 ч. Сырье погасили насыщенным раствором ΝΗ.·|0 (30 мл) при -50°С и нагрели до комнатной температуры, сырье экстрагировали посредством АсОЕ! (3x20 мл), органическую фазу выпарили ίη уасио, высушили, полученное в результате сырье очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; АсОЕРгептан). Необходимые фракции собрали и выпарили ίη уасио с получением промежуточного продукта А42 (1,6 г, 59%).

ЬСМ8: 631 [М+Н]+; К_!: 4,22 мин (способ 3).

Пример А41.

Получение промежуточного продукта А43: рац-этил-Ю[3-(3-бром-6-метил-4-оксо-5,7дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4-фторфенил]-Юэтоксикарбонилкарбамата и промежуточного продукта А44: рац-этил-Ю[3-(3-бром-6-метил-4-оксо-5,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4фторфенил] карбамата

Получили из промежуточного продукта А42. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; АсОЕРгептан) с получением промежуточного продукта А43 в виде белого твердого вещества (52%) и промежуточного продукта А44 в виде кремового твердого вещества (20%).

ЬСМ8: А43: 485 [М+Н]+; К_!: 2,15 мин (способ 3); А44: 413 [М+Н]+; К_!: 0,98 мин (способ 2).

- 23 022649

А18.

Пример А42.

Получение промежуточного продукта А45: рац-этил-Ы-[3-(3-бром-6-метил-4-тиоксо-5,7дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4-фторфенил]-Ы-этоксикарбонилкарбамата и промежуточного продукта А46: рац-этил-Ы-[3-(3-бром-6-метил-4-тиоксо-5,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4фторфенил]карбамата

Получили из промежуточного продукта А43 и А44. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; МеОН/ОСМ) с получением промежуточного продукта А45 в виде желтого твердого вещества (65%) и промежуточного продукта А46 в виде желтого твердого вещества (28%).

ЬСМ8: А45: 501 [М+Н]+; К,: 2,70 мин (способ 3); А46: 429 [М+Н]+; К,: 2,53 мин (способ 3).

А35.

Пример А43.

Получение промежуточного продукта А47: этилового сложного эфира рац-[3-(4-амино-3-бром-6метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4-фторфенил]карбаминовой кислоты

Получили из промежуточных продуктов А45 и А46. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; МеОН/ОСМ) с получением промежуточного продукта А47 в виде кремового твердого вещества, который использовали в качестве такового на следующем этапе.

Следующий промежуточный продукт получили согласно методике синтеза, описанной в примере А22 - способ В.

Пример А44.

Получение промежуточного продукта А48: этилового сложного эфира рац-[3-(4-амино-6-метил-6,7дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4-фторфенил]карбаминовой кислоты

Получили из промежуточного продукта А47. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; 7 М раствор ΝΗ₃ в МеОН/ОСМ) с получением промежуточного продукта А48 в виде масла (71%).

ЬСМ8: 322 [М+Н]+; К,: 0,63 мин (способ 2).

Пример А45.

Получение промежуточного продукта А49: 6-(5-амино-2-фторфенил)-6-метил-6,7дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-иламина

Промежуточный продукт А48 (300 мг, 0,905 ммоль) добавили к раствору НС1 (6 М в Н₂О, 17,1 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 110°С в течение 35 ч, затем растворитель удалили ίη уасио, обработали насыщенным раствором NаНСО₃ и экстрагировали посредством АсОЕ1 (3x10 мл). Органический слой отделили и выпарили ίη уасио. Неочищенный материал очистили при помощи колоночной хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали с получением промежуточного продукта А49 в виде прозрачного масла (160 мг, 68%).

ЬСМ8: 260 [М+Н]+; К,: 0,51 мин (способ 3).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методике синтеза, описанной в примере А8.

- 24 022649

Пример А46.

Получение промежуточного продукта А50: трет-бутилового сложного эфира рац-4-(5-бром-2фторфенил)-4-дифторметил-2-оксо-2-Х⁴-[1,2,3]оксатиазолидин-3-карбоновой кислоты

Получили из 1,1-диметилэтилового сложного эфира ^[1-(5-бром-2-фторфенил)-2,2-дифтор-1(гидроксиметил)этил]карбаминовой кислоты. Промежуточный продукт А50 получили в виде желтого масла (неочищенный материал, смесь диастереоизомеров, 100%).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методике синтеза, описанной в примере А9.

Пример А47.

Получение промежуточного продукта А51: трет-бутилового сложного эфира рац-4-(5-бром-2фторфенил)-4-дифторметил-2,2-диоксо-2-Х⁶-[1,2,3]оксатиазолидин-3-карбоновой кислоты

Получили из промежуточного продукта А50. Растирание в гептане, за которым следует колоночная хроматография (силикагель; ОСМ) с получением промежуточного продукта А51 в виде белого твердого вещества (78%).

ЬСМ8: 465 ρ^Ν^; К 1,46 мин (способ 2).

Пример А48.

Получение промежуточного продукта А52: рац-1-(5-бром-2-фторфенил)-2,2-дифтор-1-(5-метил-3нитропиразол-1-илметил)этиламина

К промежуточному продукту А51 (6,8 г, 15,238 ммоль) и этил 5-нитро-1Н-пиразол-3-карбоксилату (3,4 г, 18,365 ммоль) в МеСN (150 мл) добавили ΌΒυ (5,1 мл, 34,103 ммоль) при комнатной температуре. Полученную в результате смесь перемешивали при 60°С в течение 18 ч. Затем растворитель выпарили ίη уасио и к остатку добавили НС1 (4 М в диоксане, 40 мл) при комнатной температуре. Полученный в результате раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем растворитель выпарили ίη уасио. К остатку добавили Н₂О и насыщ. №-ьСО₃ и смесь экстрагировали посредством ОСМ. Органический слой высушили (№₂8О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; ОСМ в гептане 50/50). Необходимые фракции собрали и выпарили ίη уасио с получением промежуточного продукта 52 в виде клейкой пены (4,6 г, 67%).

ЬСМ8: 453 [М+Н]+; К_Р: 1,46 мин (способ 2).

Пример А49.

Получение промежуточного продукта А53: рац-6-(5-бром-2-фторфенил)-6-дифторметил-2-нитро6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,5-а]пиразин-4-она

ΌΒυ (4,126 мл, 27,6 ммоль) добавили к перемешанной смеси промежуточного продукта А52 (4,15 г, 9,198 ммоль) в МеСN (45 мл) в запаянной пробирке. Смесь перемешивали при 150°С в течение 30 мин под микроволновым излучением. Смесь развели 10% МН₄С1 и экстрагировали посредством ОСМ. Органический слой высушили (№₂8О₄), отфильтровали и выпарили растворитель ίη уасио. Остаток очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; АсОЕ)). Необходимые фракции собрали и выпарили ίη уасио с получением промежуточного продукта А54 (2,48 г, 67%).

ЬСМ8: 405 [М-Н]^-; К_Р: 1,10 мин (способ 2).

- 25 022649

Пример А50.

Получение промежуточного продукта А54: рац-2-амино-6-(5-бром-2-фторфенил)-6-дифторметил6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,5-а]пиразин-4-она

Промежуточный продукт А53 (2,4 г, 5,924 ммоль) растворили в МеОН (150 мл). Раствор гидрировали при помощи картриджа с КиО₂ (50°С, весь водород, 1 мл/мин). Растворитель выпарили ίη уасио и остаток очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта А54 в виде грязно-белого твердого вещества (2,1 г, 94%).

ЬСМ8: 377 [М+Н]+; Κ_ί: 0,74 мин (способ 2).

Пример А51.

Получение промежуточного продукта А55: рац-6-(5-бром-2-фторфенил)-6-дифторметил-6,7дигидро-5Н-пиразоло [1,5-а] пиразин-4-она

Смесь промежуточного продукта А54 (1,8 г, 4,798 ммоль), ЕЮН (36 мл) и Н₂8О₄ (0,767 мл) нагрели до 90°С. Нитрит натрия (828 мг, 11,995 ммоль) затем добавили порциями и смесь перемешивали при 90°С в течение 20 мин. Затем смесь охладили до комнатной температуры, перелили к насыщ. Ыа₂СО₃ и Н₂О и экстрагировали посредством ОСМ. Органический слой отделили, высушили (Ыа₂8О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта А55 в виде белого твердого вещества (1,25 г, 72%).

ЬСМ8: 403 [М+МеСЫ+Н]+; Κ_ί: 0,92 мин (способ 2).

А18.

Пример А52.

Получение промежуточного продукта А56: рац-6-(5-бром-2-фторфенил)-6-дифторметил-6,7дигидро-5Н-пиразоло [1,5-а] пиразин-4-тиона

Получили из промежуточного продукта А55. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; ОСМ) с получением промежуточного продукта 56 в виде желтого твердого вещества (1,14 г, 88%).

ЬСМ8: 419 [М+МеСЫ+Н]+; Κ_ί: 1,19 мин (способ 2).

Пример А53.

Получение промежуточного продукта А57: рац-6-(5-бром-2-фторфенил)-6-дифторметил-6,7дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-иламина

Раствор промежуточного продукта 56 (1,12 г, 2,977 ммоль) в 7 М ЫН₃ в МеОН (30 мл) перемешивали под микроволновым излучением в течение 30 мин при 120°С. Растворитель выпарили ίη уасио и остаток обработали ОСМ и промыли разведенным раствором Ыа₂СО₃. Органический слой отделили, высушили (Ыа₂8О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; 7 М раствор ЫН₃ в МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта 57 в виде желтого твердого вещества (1,03 г, 96%).

ЬСМ8: 361 [М+Н]+; Κ_ί: 0,99 мин (способ 2).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методикам синтеза, описанным в примерах А36-А37.

- 26 022649

Пример А54.

Получение промежуточного продукта А58: рац-6-(5-амино-2-фторфенил)-6-дифторметил-6,7дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-иламина

ИЧУ<^СНРг

МНг рЛ^Р

Получили из промежуточного продукта А54. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; 7 М ΝΉ₃ в МеОН/ОСМ) с получением промежуточного продукта 58 в виде грязно-белой пены (86%).

ЬСМЗ: 296 [М+Н]+; Кд 0,61 мин (способ 2).

Пример А55.

Получение промежуточного продукта А59: диамида 1Н-пиразол-3,5-дикарбоновой кислоты

Диэтилпиразол-3,5-дикарбоксилат (5,2 г, 24,5 ммоль) растворили в 7 М ΝΉ₃ в МеОН и смесь нагревали при 70°С в запаянной пробирке в течение 48 ч. Затем растворитель выпарили с получением промежуточного продукта А59 (3,74 г, 99%) в виде твердого вещества.

Пример А56.

Получение промежуточного продукта А60: 1Н-пиразол-3,5-дикарбонитрила

Оксихлорид фосфора (11,249 мл, 120,679 ммоль) добавили к смеси промежуточного продукта 59 (3,72 г, 24,136 ммоль) в МеСN (90 мл) при 0°С. Смесь перемешивали в запаянной пробирке при 120°С в течение 5 ч (до исчезновения твердого вещества). Реакцию перелили к смеси льда/Н2О и экстрагировали посредством ОСМ. Органический слой отделили, высушили Ща₂ЗО₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио с получением промежуточного продукта А60 в виде твердого вещества, которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

ЬСМЗ: 117 [М-Н]^-; Кд 0,61 мин (способ 2).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методикам синтеза, описанным в примерах А7-А12.

Пример А57.

Получение промежуточного продукта А61: трет-бутилового сложного эфира (К)-[1-(5-бром-2фторфенил)-2-(3,5-дицианопиразол-1 -ил) -1 -метилэтил] карбаминовой кислоты

Получили из промежуточного продукта А31. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; АсОЕРОСМ) с получением промежуточного продукта А61 в виде пены (60%).

ЬСМЗ: 467 [М+ЯН₄]+; Кд 1,57 мин (способ 2).

Пример А58.

Получение промежуточного продукта А62: (К)-4-амино-6-(5-бром-2-фторфенил)-6-метил-6,7дигидропиразоло [1,5-а]пиразин-2-карбонитрила

К перемешанной смеси промежуточного продукта А61 (4,483 г, 8,4 ммоль) в ОСМ (40 мл) при комнатной температуре добавили трифторуксусную кислоту (4 мл). Смесь перемешивали в течение 20 ч при комнатной температуре, затем повысили основность при помощи насыщ. раствора №ьСО₃ и экстрагировали посредством ОСМ. Органический слой отделили, высушили (МдЗО₄), отфильтровали и сконцентрировали ίη уасио. Остаток очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; 7 М ΝΉ₃ в МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта А62 (2,9 г, 99%).

ЬСМЗ: 349 [М+Н]+; Кд 1,13 мин (способ 2).

- 27 022649

Пример А59.

Получение промежуточного продукта А63: (К)-4-амино-6-(5-амино-2-фторфенил)-6-метил-6,7дигидропиразоло [1,5-а] пиразин-2-карбонитрила

Реакцию осуществляли в двух равных порциях. Представлено общее количество используемого материала. Си! (342 мг, 1,795 ммоль) добавили к суспензии промежуточного продукта А62 (500 мг, 1,436 ммоль), азида натрия (284 мг, 4,308 ммоль), Ν,Ν'-диметилэтилендиамина (255 мкл, 2,369 ммоль) и №-1₂СО₃ (457 мг, 4,308 ммоль) в ΜеСN (10 мл) и реакцию дегазировали. Смесь нагревали при 110°С в течение 4 ч, затем при 120°С в течение дополнительных 2 ч. Затем смесь гасили 1 М НС1, и повысили основность водного слоя при помощи ΝΗ₄ΟΗ, и экстрагировали посредством АсОЕ! (3х). Объединенные органические слои высушили (Мд§О₄), отфильтровали и сконцентрировали. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; 7 М раствор ΝΗ₃ в МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта А63 (300 мг, 65%).

ЬСМ8: 285 [М+Н]+; К₃: 0,74 мин (способ 2).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методикам синтеза, описанным в примерах А7-А9, А11, А13 и А15.

Пример А60.

Получение промежуточного продукта А64: этилового сложного эфира (К)-6-(5-бром-2-фторфенил)6-метил-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидропиразоло[1,5-а]пиразин-2-карбоновой кислоты

Получили из диэтилпиразол-3,5-дикарбоксилата.

Промежуточный продукт А64 использовали в виде неочищенного белого твердого вещества в последующей реакции.

Пример А61.

Получение промежуточного продукта А65: (К)-6-(5-бром-2-фторфенил)-2-гидроксиметил-6-метил6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,5-а]пиразин-4-она

Борогидрид натрия (3,094 г, 81,774 ммоль) добавили к перемешанному раствору промежуточного продукта 64 (3,6 г, 9,086 ммоль) в ТНР (10 мл) и МеОН (5 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь охладили до 0°С, обработали Н₂О и экстрагировали посредством ЭСМ. Органический слой высушили (№₂8О₄), отфильтровали и выпарили растворитель ίη уасио с получением промежуточного продукта А65 (3,2 г, 99%) в виде белого твердого вещества.

Пример А62.

Получение промежуточного продукта А66: (К)-6-(5-бром-2-фторфенил)-6-метил-4-оксо-4,5,6,7тетрагидропиразоло [1,5-а] пиразин-2 -карбальдегида

Диоксид марганца (7 г, 80,5 ммоль) добавили к раствору промежуточного продукта А65 (3,2 г, 9,035 ммоль) в хлороформе (48 мл). Реакционную смесь перемешивали при 62°С в течение 4 ч. Смесь отфильтровали через целит и промыли ЭСМ. Органический слой концентрировали с получением промежуточного продукта А66 в виде светло-оранжевого рыхлого твердого вещества (2,3 г, 72%).

- 28 022649

Пример А63.

Получение промежуточного продукта А67: (К)-6-(5-бром-2-фторфенил)-2-дифторметил-6-метил6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,5-а]пиразин-4-она ρ

Раствор промежуточного продукта А66 (2,3 г, 6,531 ммоль) в ЭСМ (50 мл) и ΌΑ8Τ (2,193 мл, 16,328 ммоль) в ЭСМ (50 мл) прокачали через модульное устройство для химических реакций в потоке Уароийес К2+К4, змеевик 10 мл, при 80°С, К=15 мин. Выходной раствор собрали с помощью СаСО₃. Раствор отфильтровали через целит и промыли ЭСМ. органический слой промыли насыщ. раствором ЫаНСО₃ и экстрагировали посредством ЭСМ. Органический слой высушили над Ыа₂8О₄, отфильтровали и сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта А67 (2,2 г, 90%) в виде коричневого масла.

Пример А64.

Получение промежуточного продукта А68: (К)-6-(5-бром-2-фторфенил)-2-дифторметил-6-метил6,7 -дигидро -5Н-пиразоло[1,5-а] пиразин-4 -тио на

Пентасульфид фосфора (1,871 г, 8,419 ммоль) добавили к раствору промежуточного продукта А67 (2,1 г, 5,613 ммоль) в диоксане (1 мл) и смесь нагревали при 100°С в течение 18 ч. Смесь сконцентрировали ίη уасио и очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; ЭСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта А68 (2 г, 91%) в виде желтого масла.

ЬСМ8: 392 [М+Н]+; Кр 1,29 мин (способ 2).

Пример А65.

Получение промежуточного продукта А69: (К)-6-(5-бром-2-фторфенил)-2-дифторметил-6-метил6,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-иламина

Реакцию осуществили в двух равных порциях. Представлено общее количество используемого материала. ЫН₃ (2 М в ЕЮН, 30 мл, 60 ммоль) добавили к промежуточному продукту А69 (2 г, 5,125 ммоль) и ЫН₄С1 (2,173 г, 41 ммоль). Смесь нагревали под микроволновым излучением при 170°С в течение 45 мин. Смесь сконцентрировали и добавили еще 30 мл ЫН₃ (2 М в ЕЮН). Смесь нагревали под микроволновым излучением при 170°С в течение 45 мин. Эту процедуру повторили 4 раза при общем количестве времени 180 мин. Смесь отфильтровали и фильтрат сконцентрировали ίη уасио. Сырье очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ЭСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта А69 (1 г, 52%) в виде масла.

ЬСМ8: 375 [М+Н]+; Кр 1,11 мин (способ 2).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методикам синтеза, подобным той, которая описана в примере А59.

Пример А66.

Получение промежуточного продукта А70: (К)-6-(5-амино-2-фторфенил)-2-дифторметил-6-метил6,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-иламина

- 29 022649

Получили из промежуточного продукта А69. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; МеОН/ОСМ) с получением промежуточного продукта А70 в виде масла (51%).

ЬСМ8: 310 [М+Н]+; К,: 0,69 мин (способ 2).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методикам синтеза, подобным той, которая описана в примерах А7-А11, А48, А15 и А18.

Пример А67.

Получение промежуточного продукта А71: (К)-6-(5-бром-2-фторфенил)-3-фтор-2,6-диметил-6,7дигидро-5Н-пиразоло [1,5-а] пиразин-4-тиона

Получили из этилового сложного эфира 4-фтор-5-метил-1Н-пиразол-3-карбоновой кислоты. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; ЛсОЕ1/ОСМ) с получением промежуточного продукта А71 в виде желтого твердого вещества (92%).

ЬСМ8: 374 [М+Н]+; К,: 1,27 мин (способ 2).

Пример А68.

Получение промежуточного продукта А72: (К)-6-(5-бром-2-фторфенил)-3-фтор-2,6-диметил-6,7-

ΝΉ₃ (2 М в ЕЮН, 10 экв.) добавили к раствору промежуточного продукта 71 (2,4 г, 6,448 ммоль) и МН₄С1 (4 экв.) и смесь нагревали при 85°С в запаянной пробирке в течение 24 ч. Растворитель выпарили ίη уасио, остаток суспендировали в ОСМ и промыли Н₂О. Органический слой отделили, высушили (Мд§О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. К остатку добавили больше МН₄С1 (4 экв.) с последующим ΝΉ₃ (2 М в ЕЮН, 10 экв.) и смесь нагревали при 85°С в запаянной пробирке в течение 24 ч. Этот процесс повторили еще четыре раза при общем количестве ΝΉ₃ (2 М в ЕЮН) 276 мл и 8,277 г МН₄С1. Затем продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением промежуточного продукта А72 (960 мг, 42%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

ЬСМ8: 357 [М+Н]+; К,: 1,11 мин (способ 2).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методикам синтеза, подобным той, которая описана в примерах А36-А37.

Пример А69.

Получение промежуточного продукта А73: (К)-6-(5-амино-2-фторфенил)-3-фтор-2,6-диметил-6,7-

Получили из промежуточного продукта А72. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; 7М ΝΉ₃ в МеОН/ОСМ) с получением промежуточного продукта А73 в виде бледно-желтого твердого вещества (42%).

Следующий промежуточный продукт получили согласно методикам синтеза, подобным той, которая описана в примерах А7-А9, А48, А23, А16В, А18, А21, А36, А37.

Пример А70.

Получение промежуточного продукта А74: (К)-6-(5-амино-2-фторфенил)-3-хлор-6-метил-6,7-

Получили из промежуточного продукта А31. Колоночная флэш-хроматография (силикагель; МеОН/ОСМ) с последующим растиранием в О1РЕ/Е1₂О с получением промежуточного продукта А74 в виде желтого твердого вещества (94%).

- 30 022649

ЬСМ8: 294 [М+Н]+; Κ_ί: 1,13 мин (способ 3).

Получение конечных соединений.

Пример В1.

Получение соединения 1: трифторацетатной соли (К)-6-[3-(5-хлорпиридин-3-ил)фенил]-6-метил6,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-4-иламина

Добавили 32% водн. раствор Ν^ (0,5 мл) к перемешанной смеси промежуточного продукта А18 (60 мг, 0,17 ммоль) в 7 М растворе Ν^ в МеОН (1,5 мл) в запаянной пробирке. Смесь перемешивали при 100°С в течение 5 ч. После охлаждения до комнатной температуры выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи хроматографии на коротких колонках (силикагель; МеОН/ЭСМ). Необходимые фракции охладили и сконцентрировали ίη уасио с получением фракции, которую дополнительно очистили при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ (градиент от 80% 0,1% раствора ТЕА в Н₂О, 20% СНзСN до 0% 0,1% раствора ТЕА в Н₂О, 100% ί'Ή,ί’Ν) и растерли с ΌΙΡΕ с получением соединения 1 (36 мг, 46% выход) в виде белого твердого вещества.

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-б₆) δ ч./млн 1,79 (с, 3Н), 4,69 (д, ί=13,6 Гц, 1Н), 5,25 (д, >13,9 Гц, 1Н), 7,23 (д, 6=2,3 Гц, 1Н), 7,45 (шир.д, 1=8,7 Гц, 1Н), 7,52 (т, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,69 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 7,75 (шир.д, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,94-7,96 (м, 1Н), 8,28 (т, 1=2,2 Гц, 1Н), 8,66 (д, 1=2,3 Гц, 1Н), 8,88 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 9,28 (шир.с, 1Н), 9,87 (шир.с, 1Н), 11,06 (шир.с, 1Н).

Пример В2.

Получение соединения 2: [3-(4-амино-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6ил)фенил]амида рац-5-хлорпиридин-2-карбоновой кислоты

Добавили 5-хлорпиридин-2-карбоновую кислоту (71,8 мг, 0,68 ммоль) к раствору хлорида 4-(4,6диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (137 мг, 0,5 ммоль) в МеОН (4 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем смесь охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А22 (100 мг, 0,41 ммоль) в МеОН (3 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч. Смесь обработали насыщенным раствором №-ьС.'О₃, и Н₂О и экстрагировали посредством ЭСМ. Органический слой отделили, высушили (№₂8О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт растерли с ЕьО и затем очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ЭСМ). Необходимые фракции собрали, выпарили растворители ίη уасио и полученную в результате фракцию дополнительно очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ЭСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением соединения 2 (21 мг, 13% выход) в виде белого твердого вещества.

Ή ЯМР (500 МГц, СЭС1₃) δ ч./млн 1,67 (с, 3Н), 4,38 (д, 1=13,3 Гц, 1Н), 4,53 (д, 1=13,3 Гц, 1Н), 4,79 (шир.с, 2Н), 6,72 (шир.с, 1Н), 7,24 (шир.д, ί=7,8 Гц, 1Н), 7,34 (т, ί=7,9 Гц, 1Н), 7,51 (д, ί=2,0 Гц, 1Н), 7,73 (дд, 1=8,1, 1,2 Гц, 1Н), 7,85-7,90 (м, 2Н), 8,23 (д, ί=8,4 Гц, 1Н), 8,55 (д, ί=2,0 Гц, 1Н), 9,86 (шир.с, 1Н).

Пример В3.

Получение соединения 3: [3-(4-амино-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6ил)фенил]амида рац-3,5-дихлорпиридин-2-карбоновой кислоты

Добавили 3,5-дихлорпиридин-2-карбоновую кислоту (112 мг, 0,58 ммоль) к раствору хлорида 4(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (176,2 мг, 0,64 ммоль) в МеОН (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем смесь охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А22 (128 мг, 0,53 ммоль) в МеОН (5 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч. Смесь обработали насыщенным раствором №₂СО₃ и Н₂О и экстрагировали посредством ЭСМ. Органический слой отделили, высушили (М§§О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; МеОН/ЭСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт растерли с Е!₂О и затем очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; МеОН/ЭСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением соединения 3 (180 мг, 82% выход) в виде белого твердого вещества.

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-б₆) δ ч./млн 1,41 (с, 3Н), 4,12-4,45 (м, 2Н), 6,54 (шир.с, 2Н), 6,64 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 7,25-7,32 (м, 2Н), 7,45 (д, ί=2,0 Гц, 1Н), 7,63 (м, 1=6,3, 2,5, 2,5 Гц, 1Н), 7,82 (шир.с, 1Н),

- 31 022649

8,43 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 8,72 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 10,64 (шир.с, 1Н).

Пример В4.

Получение соединения 4: [3-(4-амино-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6ил)фенил]амида (К*)-3,5-дихлорпиридин-2-карбоновой кислоты и соединения 5: [3-(4-амино-6-метил-6, 7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)фенил]амида (8*)-3,5-дихлорпиридин-2-карбоновой кислоты

Образец соединения 3 (0,58 г) промыли холодным ЭСМ и затем Εΐ₂Ο. Данное рацемическое соединение затем разделили на соответствующие энантиомеры при помощи препаративной 8РС на СЫга1рак АО-Н, 5 мкм (250x20 мм), подвижная фаза (0,3% ιΡγΝΉ₂, 60% СО₂, 40% ЕЮН). Необходимые фракции для каждого энантиомера собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением соединения 4 (152 мг, 26% выход);

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-й₆) δ ч./млн 1,41 (с, 3Н), 4,28 (шир.с, 2Н), 6,41 (шир.с, 2Н), 6,64 (д, 1=1,4 Гц, 1Н), 7,30 (с, 2Н), 7,45 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 7,60-7,67 (м, 1Н), 7,83 (с, 1Н), 8,44 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 8,73 (д, 1=2,3 Гц, 1Н), 10,65 (шир.с, 1Н), и соединения 5 (155 мг, 27% выход);

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-й₆) δ ч./млн 1,41 (с, 3Н), 4,28 (с, 2Н), 6,41 (шир.с, 2Н), 6,64 (д, 1=0,9 Гц, 1Н), 7,26-7,33 (м, 2Н), 7,45 (д, 1=1,4 Гц, 1Н), 7,59-7,69 (м, 1Н), 7,84 (с, 1Н), 8,44 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 8,73 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 10,65 (шир.с, 1Н), оба в виде белых твердых веществ.

Пример В5.

Получение соединения 6: [3-(4-амино-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6ил)фенил]амида рац-5-цианопиридин-2-карбоновой кислоты, соединения 7: [3-(4-амино-6-метил-6,7дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)фенил]амида (К*)-5-цианопиридин-2-карбоновой кислоты и соединения 8: [3 -(4-амино-6-метил-6,7-дигидропиразоло [ 1,5-а]пиразин-6-ил)фенил]амида (8*)-5 -цианопиридин-2-карбоновой кислоты

Добавили 5-цианопиридин-2-карбоновую кислоту (187,8 мг, 1,27 ммоль) к раствору хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (412,9 мг,1,49 ммоль) в МеОН (20 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем смесь охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А22 (300 мг,1,24 ммоль) в МеОН (10 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Смесь обработали насыщенным раствором №-ьСО₃, и Н₂О и экстрагировали посредством ЭСМ. Органический слой отделили, высушили (МдЗО₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт растерли с ЕьО и затем очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; 7 М раствор ΝΉ₃ в МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт промыли ЕЮН и ЕьО и затем очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением соединения 6 (122 мг, 26% выход) в виде кремового твердого вещества.

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-й₆) δ ч./млн 1,42 (с, 3Н), 4,31 (м, 1=3,5 Гц, 2Н), 6,66 (шир.с, 2Н), 6,66 (д, 1=1,7 Гц, 1Н), 7,26-7,33 (м, 2Н), 7,45 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 7,78 (дт, 1=6,9, 1,9 Гц, 1Н), 8,01-8,06 (м, 1Н), 8,29 (дд, 1=8,1, 0,6 Гц, 1Н), 8,59 (дд, 1=8,1, 2,0 Гц, 1Н), 9,18-9,22 (м, 1Н), 10,68 (с, 1Н).

Данное рацемическое соединение затем дополнительно очистили при помощи препаративной 8РС на СЫга1рак АО-Н, 5 мкм (250x20 мм), подвижная фаза (0,3% ιΡγΝΉ₂, 60% СО₂, 40% ЕЮН). Необходимые фракции для каждого энантиомера собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением соединения 7 (45,8 мг, 10% выход);

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-й₆) δ ч./млн 1,41 (с, 3Н), 4,21-4,35 (м, 2Н), 6,39 (шир.с, 2Н), 6,64 (шир.с, 1Н), 7,26-7,35 (м, 2Н), 7,45 (д, 1=1,2 Гц, 1Н), 7,78 (шир.д, 1=7,2 Гц, 1Н), 8,05 (шир.с, 1Н), 8,30 (д, 1=8,1 Гц, 1Н), 8,60 (дд, 1=8,1, 2,0 Гц, 1Н), 9,20-9,22 (м, 1Н), 10,68 (с, 1Н), и соединения 8 (46,5 мг, 10% выход);

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-й₆) δ ч./млн 1,41 (с, 3Н), 4,29 (шир.с, 2Н), 6,41 (шир.с, 2Н), 6,64 (д, 1=1,7 Гц, 1Н), 7,27-7,34 (м, 2Н), 7,45 (д, 1=1,7 Гц, 1Н), 7,77-7,80 (м, 1Н), 8,05 (шир.с, 1Н), 8,30 (дд, 1=8,2, 0,7 Гц, 1Н), 8,60 (дд, 1=8,1, 2,0 Гц, 1Н), 9,19-9,24 (м, 1Н), 10,68 (с, 1Н), оба в виде белого твердого вещества.

- 32 022649

Пример В6.

Получение соединения 9: трифторацетатной соли [3-(4-амино-3-бром-6-метил-6,7дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил) фенил] амида рац-5-цианопиридин-2-карбоновой кислоты

Добавили 5-цианопиридин-2-карбоновую кислоту (23,6 мг, 0,16 ммоль) к раствору хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (51,9 мг, 0,19 ммоль) в МеОН (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем смесь охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А20 (50 мг, 0,16 ммоль) в МеОН (5 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Смесь обработали насыщенным раствором №-1₃СО₃, и Н₂О и экстрагировали посредством ЭСМ. Органический слой отделили, высушили (Мд§О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; МеОН/ЭСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт растерли с ЕьО и затем очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; МеОН/ЭСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио и остаток очистили при помощи препаративной ВЭЖХ (КР С18 X§е1есΐ 19x100, 5 мкм), подвижная фаза (градиент от 80% 0,1% раствора ТрА в Н₂О, 20% СНзСN до 0% 0,1% раствора ТРА в Н₂О, 100% СН₃,С%). с получением соединения 9 (9,8 мг, 11% выход) в виде белого твердого вещества.

^!Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-й₆) δ ч./млн 1,75 (с, 3Н), 4,74 (д, ί=13,9 Гц, 1Н), 5,09 (д, >13,6 Гц, 1Н), 7,19-7,24 (м, 1Н), 7,40 (т, ί=8,1 Гц, 1Н), 7,87 (дд, ί=8,1, 1,2 Гц, 1Н), 7,88 (с, 1Н), 8,00 (шир.с, 1Н), 8,29 (дд, 1=8,1, 0,6 Гц, 1Н), 8,60 (дд, ί=8,4, 2,0 Гц, 1Н), 8,78 (шир.с, 1Н), 9,21 (дд, ί=2,0, 0,9 Гц, 1Н), 9,70 (шир.с, 1Н), 10,89 (с, 1Н), 11,23 (шир. с, 1Н).

Пример В7.

Получение соединения 10: [3-(4-амино-6-метил-2-трифторметил-6,7-дигидропиразоло[1,5а]пиразин-6-ил)фенил]амида рац-3,5-дихлорпиридин-2-карбоновой кислоты, соединения 11: [3-(4-амино6-метил-2-трифторметил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)фенил]амида (К*)-3,5-дихлорпиридин2-карбоновой кислоты и соединения 12: [3-(4-амино-6-метил-2-трифторметил-6,7-дигидропиразоло[1,5а]пиразин-6-ил)фенил]амида (8*)-3,5-дихлорпиридин-2-карбоновой кислоты

Добавили 3,5-дихлор-2-пиридинкарбоновую кислоту (70 мг, 0,366 ммоль) к раствору хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (119 мг, 0,431 ммоль) в МеОН (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем смесь охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А28 (111 мг, 0,359 ммоль) в МеОН (5 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Смесь обработали насыщенным раствором №-1₃СО₃, и Н₂О и экстрагировали посредством ЭСМ. Органический слой отделили, высушили (Мд§О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; МеОН/ЭСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт растерли с Е1₂О, обработали ультразвуком, отфильтровали и высушили ίη уасио при 50°С с получением соединения 10 (95 мг, 55% выход) в виде белого твердого вещества. Данное рацемическое соединение затем дополнительно очистили при помощи препаративной §РС на СЫга1рак АЭ-Н, 5 мкм (250x20 мм), подвижная фаза (0,3% ίΡΓΝΉ₂, 70% СО₂, 30% 1РгОН). Необходимые фракции для каждого энантиомера собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением соединения 11 (40 мг, 23% выход);

^!Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-й₆) δ ч./млн 1,42 (с, 3Н), 4,35-4,47 (м, 2Н), 6,61 (шир.с, 2Н), 7,09 (шир.с, 1Н), 7,26-7,35 (м, 2Н), 7,59-7,67 (м, 1Н), 7,83 (шир.с, 1Н), 8,43 (д, ί=2,1 Гц, 1Н), 8,72 (д, ί=2,1 Гц, 1Н), 10,67 (с, 1Н), и соединения 12 (38 мг, 22% выход), для которого 'Н ЯМР соответствовал такому соединению 11.

Пример В8.

Получение соединения 13: [3-(4-амино-3-фтор-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4фторфенил]амида (К)-5-метоксипиразин-2-карбоновой кислоты

Добавили 5-метоксипиразин-2-карбоновую кислоту (120 мг, 0,78 ммоль) к раствору хлорида 4-(4,6диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (233 мг, 0,841 ммоль) в МеОН (5 мл). Смесь переме- 33 022649 шивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем смесь охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А39 (212 мг, 0,764 ммоль) в МеОН (5 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Смесь обработали насыщенным раствором №-ьСО₃ и Н₂О и экстрагировали посредством ЭСМ. Органический слой отделили, высушили (М§8О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт растерли с Е1₂О и затем очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением белого твердого вещества. Твердое вещество обработали ЭРЕ с получением соединения 13 (155 мг, 49%) в виде белого твердого вещества.

'Н ЯМР (500 МГц, С1)С1_;) δ ч./млн 1,59 (с, 3Н), 4,06 (с, 3Н), 4,28 (шир.д, 1=13,0 Гц, 1Н), 4,51 (шир.д, 1=13,0 Гц, 1Н), 5,04 (шир.с, 2Н), 7,09 (дд, 1=11,6, 9,0 Гц, 1Н), 7,36 (д, 1=4,0 Гц, 1Н), 7,84-7,97 (м, 2Н), 8,12 (д, 1=1,2 Гц, 1Н), 8,99 (д, 1=1,2 Гц, 1Н), 9,51 (шир.с, 1Н).

Пример В9.

Получение соединения 14: [3-(4-амино-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4фторфенил]амида рац-3,5-дихлорпиридин-2-карбоновой кислоты, соединения 15: [3-(4-амино-6-метил6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4-фторфенил]амида (К*)-3,5-дихлорпиридин-2-карбоновой кислоты и соединения 16: [3-(4-амино-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4фторфенил]амида (8*)-3,5-дихлорпиридин-2-карбоновой кислоты

Добавили 3,5-дихлор-2-пиридинкарбоновую кислоту (75,5 мг, 0,393 ммоль) к раствору хлорида 4(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (128 мг, 0,463 ммоль) в МеОН (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем смесь охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А49 (100 мг, 0,386 ммоль) в МеОН (5 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Смесь обработали насыщенным раствором №-ьСО₃, и Н₂О и экстрагировали посредством ЭСМ. Органический слой отделили, высушили (М§8О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт растерли с Е1₂О, обработали ультразвуком, отфильтровали и высушили ίη уасио при 50°С. Полученное в результате соединение еще раз дополнительно очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ) с получением, после обработки АсОЕ1 и ЭРЕ, соединения 14 (95 мг, 57% выход) в виде белого твердого вещества. Данное рацемическое соединение затем дополнительно очистили при помощи препаративной 8РС на СФга1се1 О1-Н, 5 мкм (250x20 мм), подвижная фаза (0,3% ιΡγΝΉ₂, 85% СО₂, 15% ЕЮН). Необходимые фракции для каждого энантиомера собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением соединения 15 (38 мг, 23% выход);

'Н ЯМР (400 МГц, СПСР) δ ч./млн 1,58 (с, 3Н), 2,52 (шир.с, 2Н), 4,41 (шир.д, 1=13,2 Гц, 1Н), 4,62 (дд, 1=13,2, 0,9 Гц, 1Н), 6,43 (д, 1=2,1 Гц, 1Н), 7,08 (дд, 1=11,7, 8,9 Гц, 1Н), 7,52 (д, 1=2,1 Гц, 1Н), 7,81 (дд, 1=6,9, 2,8 Гц, 1Н), 7,89 (д, 1=2,1 Гц, 1Н), 7,94 (ддд, 1=8,8, 4,1, 3,0 Гц, 1Н), 8,42 (д, 1=2,1 Гц, 1Н), 9,71 (шир.с, 1Н), и соединения 16 (40 мг, 24% выход), для которого ¹Н ЯМР соответствовал такому соединению 15.

Пример В10.

Получение соединения 17: [3-(4-амино-6-дифторметил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4фторфенил]амида рац-5-метоксипиразин-2-карбоновой кислоты, соединения 18: [3-(4-амино-6дифторметил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4-фторфенил]амида (К*)-5-метоксипиразин-2карбоновой кислоты и соединения 19: [3-(4-амино-6-дифторметил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6ил)-4-фторфенил]амида (8*)-5-метоксипиразин-2-карбоновой кислоты

Добавили 5-метоксипиразин-2-карбоновую кислоту (187,9 мг, 1,219 ммоль) к смеси хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (337 мг, 1,219 ммоль) в МеОН (6 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем смесь охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А58 (300 мг, 1,016 ммоль) в МеОН (4 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч, затем обработали насыщенным раствором №-ьСО₃, и Н₂О и экстрагировали посредством ЭСМ. Органический слой отделили, высушили (М§8О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Часть продукта осадили посредством ЭСМ и оставшийся неочищенный материал очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; 7 М ΝΉ₃ в МеОН/ОСМ).

- 34 022649

Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио. Полученный в результате продукт объединили с продуктом, полученным после осаждения, и растерли с гептаном, обработали ультразвуком и отфильтровали с получением соединения 17 (278 мг, 62% выход) в виде белого твердого вещества. Данное рацемическое соединение затем дополнительно очистили при помощи препаративной 8ЕС на СЫга1се1 ОЭ-Н. 5 мкм (250x20 мм), подвижная фаза (0,3% ίΡΓΝΠ. 70% СО₂, 30% ЕЮН). Необходимые фракции для каждого энантиомера собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением соединения 18 (103 мг, 23% выход);

¹Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б₆) δ ч./млн 4,03 (с, 3Н), 4,58 (шир.д, 1=13,6 Гц, 1Н), 4,75 (шир.д, 1=13,6 Гц, 1Н), 6,27 (т, 1=55,5 Гц, 1Н), 6,68 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 6,93 (шир.с, 2Н), 7,20 (дд, 1=11,8, 9,0 Гц, 1Н), 7,48 (д, 1=2,0 Гц, 1Н), 7,78 (дт, 1=8,4, 3,6 Гц, 1Н), 8,17 (дд, 1=7,1, 2,7 Гц, 1Н), 8,42 (д, 1=1,2 Гц, 1Н), 8,88 (д, 1=1,2 Гц, 1Н), 10,51 (с, 1Н), и соединения 19 (102 мг, 23% выход), для которого 'Н ЯМР соответствовал такому соединению 18.

Пример В11.

Получение соединения 20: [3-(4-амино-6-дифторметил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4фторфенил]амида рац-5-фторпиридин-2-карбоновой кислоты, соединения 21: [3-(4-амино-6дифторметил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)-4-фторфенил]амида (8*)-5-фторпиридин-2карбоновой кислоты и соединения 22: [3-(4-амино-6-дифторметил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6ил)-4-фторфенил]амида (К*)-5-фторпиридин-2-карбоновой кислоты

Добавили 5-фтор-2-пиридинкарбоновую кислоту (74,5 мг, 0,528 ммоль) к смеси хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (146 мг, 0,528 ммоль) в МеОН (3 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем смесь охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А58 (130 мг, 0,44 ммоль) в МеОН (2 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч, затем обработали насыщенным раствором №-ьСО₃, и Н₂О и экстрагировали посредством ОСМ. Органический слой отделили, высушили (Мд8О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; 7 М ΝΉ₃ в МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио. Полученный в результате продукт растерли с гептаном, обработали ультразвуком и отфильтровали с получением соединения 17 (112 мг, 60% выход) в виде белого твердого вещества. Данное рацемическое соединение затем дополнительно очистили при помощи препаративной 8ЕС на колонке СЫга1рак ЛО-Н (5 мкм, 250x20 мм), подвижная фаза [70% СО₂, 30% ЕЮН (+0,3% ιΡγΝΉ₂)]. Необходимые фракции для каждого энантиомера собрали и сконцентрировали ίη уасио с получением соединения 21 (41 мг, 22% выход), для которого ¹Н ЯМР соответствовал такому соединению 22, и соединения 22 (43 мг, 23% выход).

^!Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ ч./млн 4,53-4,61 (м, 1Н), 4,74 (шир.д, 1=13,4 Гц, 1Н), 6,26 (т, 1=55,9 Гц, 1Н), 6,67 (д, 1=1,8 Гц, 1Н), 6,93 (шир.с, 2Н), 7,20 (дд, 1=12,0, 9,0 Гц, 1Н), 7,47 (д, 1=1,8 Гц, 1Н), 7,79 (ддд, 1=8,8, 3,9, 2,8 Гц, 1Н), 7,98 (тд, 1=8,7, 2,9 Гц, 1Н), 8,16 (дд, 1=7,1, 2,7 Гц, 1Н), 8,21 (дд, 1=8,8, 4,6 Гц, 1Н), 8,73 (д, 1=2,8 Гц, 1Н), 10,62 (шир.с, 1Н).

Пример В12.

Получение соединения 23: [3-(4-амино-2-циано-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)4-фторфенил]амида (К)-5-метоксипиразин-2-карбоновой кислоты

Добавили 5-метоксипиразин-2-карбоновую кислоту (95,4 мг, 0,619 ммоль) к смеси хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (171,3 мг, 0,619 ммоль) в МеОН (3 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем ее охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А63 (160 мг, 0,563 ммоль) в МеОН (3 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 20 ч, затем обработали насыщенным раствором №₃СО₃ и перемешивали в течение нескольких минут. Затем смесь экстрагировали посредством ОСМ. Органический слой отделили, высушили (Мд8О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением после высушивания соединения 23 (115 мг, 49% выход) в виде твердого вещества.

^!Н ЯМР (500 МГц, СОС1₃) δ ч./млн 1,58 (с, 3Н), 1,66 (шир.с, 2Н), 4,07 (с, 3Н), 4,47 (шир.д, 1=13,6 Гц, 1Н), 4,66 (шир.д, 1=13,3 Гц, 1Н), 6,81 (шир.с, 1Н), 7,09 (дд, 1=11,6, 9,0 Гц, 1Н), 7,75-7,81 (м, 1Н), 7,97 (дд, 1=7,1, 2,7 Гц, 1Н), 8,14 (с, 1Н), 9,00 (с, 1Н), 9,49 (шир.с, 1Н).

- 35 022649

Пример В13.

Получение соединения 24: [3-(4-амино-2-циано-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)4-фторфенил]амида (К)-5-фторпиридин-2-карбоновой кислоты

Добавили 5-фтор-2-пиридинкарбоновую кислоту (87,4 мг, 0,619 ммоль) к смеси хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (171,3 мг, 0,619 ммоль) в МеОН (3 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем ее охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А63 (160 мг, 0,563 ммоль) в МеОН (3 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 20 ч, затем обработали насыщенным раствором №-ьСО₃ и перемешивали в течение нескольких минут. Смесь затем экстрагировали посредством ОСМ. Органический слой отделили, высушили (М§§О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением масла, которое растерли с О1РЕ. Полученное в результате твердое вещество отфильтровали и высушили с получением соединения 24 (95 мг, 41% выход) в виде твердого вещества.

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ ч./млн 1,58 (шир.с, 3Н), 4,46 (шир.д, 1=13,4 Гц, 1Н), 4,66 (д, 1=13,4 Гц, 1Н), 4,90 (шир.с, 2Н), 6,81 (с, 1Н), 7,10 (дд, 1=11,8, 8,8 Гц, 1Н), 7,60 (тд, 1=8,3, 2,8 Гц, 1Н), 7,78-7,86 (м, 1Н), 7,96 (дд, 1=7,1, 2,7 Гц, 1Н), 8,32 (дд, 1=8,7, 4,5 Гц, 1Н), 8,45 (д, 1=2,8 Гц, 1Н), 9,80 (шир.с, 1Н).

Пример В14.

Получение соединения 25: [3-(4-амино-2-циано-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)4-фторфенил]амида (К)-1-дифторметил-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты

Добавили 1-дифторметил-1Н-пиразол-3-карбоновую кислоту (82,7 мг, 0,51 ммоль) к смеси хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (155 мг, 0,561 ммоль) в МеОН (3 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем ее охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А63 (145 мг, 0,51 ммоль) в МеОН (3 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч, затем обработали насыщенным раствором №-ьСО₃ и перемешивали в течение нескольких минут. Смесь затем экстрагировали посредством ОСМ. Органический слой отделили, высушили (М§§О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением масла, которое растерли с гептаном. Полученное в результате твердое вещество отфильтровали и высушили с получением соединения 25 (100 мг, 4 6% выход) в виде твердого вещества.

Ή ЯМР (500 МГц, СОС1₃) δ ч./млн 1,58 (с, 3Н), 4,47 (шир.д, 1=13,3 Гц, 1Н), 4,65 (д, 1=13,3 Гц, 1Н), 4,94 (шир.с, 2Н), 6,81 (с, 1Н), 7,05 (д, 1=2,6 Гц, 1Н), 7,09 (дд, 1=11,6, 9,0 Гц, 1Н), 7,20 (т, 1=60,4 Гц, 1Н), 7,69-7,75 (м, 1Н), 7,88 (д, 1=2,6 Гц, 1Н), 7,91 (дд, 1=6,8, 2,2 Гц, 1Н), 8,62 (шир.с, 1Н).

Пример В15.

Получение соединения 26: [3-(4-амино-2-циано-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6-ил)4-фторфенил]амида (К)-5-цианопиридин-2-карбоновой кислоты

Добавили 5-циано-2-пиридинкарбоновую кислоту (79,7 мг, 0,538 ммоль) к смеси хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (163,8 мг, 0,592 ммоль) в МеОН (3 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем ее охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А63 (153 мг, 0,538 ммоль) в МеОН (3 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч, затем обработали насыщенным раствором №-ьСО₃ и перемешивали в течение нескольких минут. Затем смесь экстрагировали посредством ОСМ. Органический слой отделили, высушили (М§§О₄), отфильтровали и выпарили растворители ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением масла, которое растерли с гептаном. Полученное в результате твердое вещество отфильтровали и высушили с получением соединения 26 (63 мг, 28% выход) в виде твердого вещества.

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-ίί.) δ ч./млн 1,47 (шир.с, 3Н), 4,43-4,55 (м, 2Н), 6,76 (шир.с, 2Н), 7,20 (дд, 1=11,8, 9,0 Гц, 1Н), 7,27 (шир.с, 1Н), 7,71-7,79 (м, 1Н), 8,10 (шир.д, 1=5,2 Гц, 1Н), 8,26 (д, 1=8,1 Гц, 1Н),

- 36 022649

8,57 (дд, 1=8,2, 1,6 Гц, 1Н), 9,18 (шир.с, 1Н), 10,81 (шир.с, 1Н).

Пример В16.

Получение соединения 27: [3-(4-амино-2-дифторметил-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин6-ил)-4-фторфенил]амида (К)-5-фторпиридин-2-карбоновой кислоты

Добавили 5-фтор-2-пиридинкарбоновую кислоту (68 мг, 0,485 ммоль) к смеси хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (14 8 мг, 0,533 ммоль) в МеОН (3 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем ее охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А70 (150 мг, 0,485 ммоль) в МеОН (2 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч, затем сконцентрировали ίη уасио на холодной бане. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (сухая загрузка, силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением грязнобелого твердого вещества, которое дополнительно очистили при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ на С18 §ипйте (30х 100, 5 мкм). Подвижная фаза: градиент от 80% 0,1% раствора ТРА в Н₂О, 20% СНзСN до 0% 0,1% раствора ТРА в Н₂О, 100% СН₃СК при этом получили соединение 27 (57 мг, 33%) в виде белого твердого вещества.

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-а₆) δ ч./млн 1,84 (шир.с, 3Н), 4,79 (шир.д, 1=13,9 Гц, 1Н), 5,02 (шир.д, 1=13,3 Гц, 1Н), 7,10 (т, 1=54,3 Гц, 1Н), 7,30 (дд, 1=12,0, 8,8 Гц, 1Н), 7,46 (шир.с, 1Н), 7,86-7,91 (м, 1Н), 7,93 (дд, 1=7,5, 2,3 Гц, 1Н), 7,98 (тд, 1=8,7, 2,9 Гц, 1Н), 8,20 (дд, 1=8,7, 4,6 Гц, 1Н), 8,73 (д, 1=2,9 Гц, 1Н), 9,33 (шир.с, 1Н), 10,07 (шир.с, 1Н), 10,80 (шир.с, 1Н), 11,09 (шир.с, 1Н).

Пример В17.

Получение соединения 28: [3-(4-амино-2-дифторметил-6-метил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин6-ил)-4-фторфенил]амида (К)-5-метоксипиразин-2-карбоновой кислоты

Добавили 5-метоксипиразин-2-карбоновую кислоту (75 мг, 0,485 ммоль) к смеси хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (148 мг, 0,533 ммоль) в МеОН (3 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем ее охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А70 (150 мг, 0,485 ммоль) в МеОН (2 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч, затем сконцентрировали ίη уасио на холодной бане. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэш-хроматографии (сухая загрузка, силикагель; МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио с получением грязнобелого твердого вещества, которое дополнительно очистили при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ на С18 διιηΓίΐΌ (30х 100, 5 мкм). Подвижная фаза: градиент от 80% 0,1% раствора ТРА в Н₂О, 20% СНзСN до 0% 0,1% раствора ТРА в Н₂О, 100% СН₃СК при этом получили соединение 27 (32 мг, 12%) в виде белого твердого вещества.

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-а₆) δ ч./млн 1,85 (шир.с, 3Н), 4,03 (с, 3Н), 4,80 (шир.д, 1=13,9 Гц, 1Н), 5,03 (шир.д, 1=12,7 Гц, 1Н), 7,12 (т, 1=54,3 Гц, 1Н), 7,31 (дд, 1=11,8, 9,0 Гц, 1Н), 7,47 (шир.с, 1Н), 7,847,90 (м, 1Н), 7,96 (дд, 1=7,4, 2,2 Гц, 1Н), 8,42 (д, 1=1,4 Гц, 1Н), 8,88 (д, 1=1,4 Гц, 1Н), 9,32 (шир.с, 1Н), 10,09 (шир.с, 1Н), 10,70 (с, 1Н), 11,08 (шир.с, 1Н).

Пример В18.

Получение соединения 29: [3-(4-амино-3-фтор-2,6-диметил-6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-6ил)-4-фторфенил]амида (К)-5-метоксипиразин-2-карбоновой кислоты

Добавили 5-метоксипиразин-2-карбоновую кислоту (97 мг, 0,631 ммоль) к смеси хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния (175 мг, 0,631 ммоль) в МеОН (2 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин, затем ее охладили до 0°С и добавили раствор промежуточного продукта А73 (175 мг, 0,601 ммоль) в МеОН (2 мл). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 24 ч. Растворитель удалили ίη уасио и остаток суспендировали в ЭСМ и обработали насыщ. №-1₃С'О₃. Органический слой отделили, высушили (Мд§О₄), отфильтровали и сконцентрировали ίη уасио. Неочищенный продукт очистили при помощи колоночной флэшхроматографии (силикагель; 7 М ΝΉ₃ в МеОН/ОСМ). Необходимые фракции собрали и выпарили растворители ίη уасио. Остаток суспендировали в ЕьО. Осадок отфильтровали и высушили под вакуумом при 50°С с получением соединения 29 (195 мг, 76%) в виде белого твердого вещества.

- 37 022649 'ίί ЯМР (500 МГц, ДМСО-а₆) δ ч./млн 1,45 (шир.с, 3Н), 2,12 (с, 3Н), 4,02 (с, 3Н), 4,18 (шир.д, 1=13,0 Гц, 1Н), 4,24 (шир.д, 1=12,4 Гц, 1Н), 6,26 (шир.с, 2Н), 7,17 (дд, 1=12,0, 8,8 Гц, 1Н), 7,68-7,77 (м, 1Н), 8,04 (шир.д, 1=5,2 Гц, 1Н), 8,40 (д, 1=1,2 Гц, 1Н), 8,87 (д, 1=1,2 Гц, 1Н), 10,46 (шир.с, 1Н).

Таблица 1 р² )=Ν / 1

Соед. №	Прим. №	к¹	к²	к³	п?^-		---Ь-Аг	С₄ стереохимия/соль
1	В1	н	н	СН₃	СН	СН		Е/СРзСООН
2	В2	н	н	СНз	СН	СН	•Λχ	КЗ
3	ВЗ	н	н	СНз	СН	СН	о Ух	ЕЗ
4	В4	н	н	СН₃	СН	СН	-¾ _С\|А-Х-_С1	3*
5	Б4	н	н	сщ	СН	СН		Е*
6	Б5	н	н	СНз	СН	СН	Ух ^;Ν	ЕЗ
7	Б5	н	н	СНз	СН	СН	Ух ⁴Ν	Е*

8	В5	н	н	СНз	СН	СН	х.	3*
9	В6	Вг	н	СН,	СН	СН	Ух	КЗ/СР₃СООН
10	В7	н	СРз	СНз	СН	СН	δ η !! 4	Е5
11	В7	н	СР₃	СНз	СН	СН	0 ΐί Υ % и II 1	Е*
12	В7	н	СРз	СН₃	СН	СН	X	5*
13	В8	Р	н	СНз	СН	СН	N ОМе	Е
14	ВЭ	н	н	СНз	СР	СН	δ '-Ах и II 1	ЕЗ
15	ВЭ	н	н	СНз	СР	СН	0 ~-νΧ_Γ% н II 1 С1	Е*
16	Б9	н	н	СНз	СР	СН	δ -νΛλ η II 4	3*
17	В10	н	н	СНР₂	СР	СН	Уа 'Ν ОМе	ΕΞ

- 38 022649

18	В10	н	н	СНР₂	СР	сн	м'ом?	Κ*
19	вю	н	н	снг₂	СР	сн	Ά^Νχ Х ог/е	Ξ*
20	Б11	н	н	СНР₂	СР	сн	о Αχ	Ε3
21	В11	н	н	СНР₂	СР	сн	X,	Κ*
22	В11	н	н	СНР₂	СР	сн	-Χ	3*
23	В12	н	СИ	СН₃	СР	сн	'Λ^ΝΧ моме	κ
24	В13	н	СЫ	СН₃	СР	сн	Х\	Ε
25	В14	н	СЫ	СЩ	СР	сн	ό Ζ Η ί N-“4 Ρ	Ε
26	Б15	н	СЫ	СНз	СР	сн	Χα	Ε
27	В16	н	СНР₂	СНз	СР	сн	δ ’Χ	к/срзсоон

СНР₂

Άϊ

N оме

Е/СР₃СООН

В17

Β18

СН₃

СР сн

СН₃ сн сн

ХГ

Ν^-ОМе

Е5

В11

СР₃

СН₃

СН сн

5*

СН₃ сн сн

Αϊ

СР сн

В2 сн₃

СР сн ~й ΐ у35

В2

СНз

СР сн

XX

Хо

Р₃С

В2

СН₃

СР сн

С1

СР

А;

- 39 022649

С. Аналитическая часть.

Ядерный магнитный резонанс (ЯМР).

'Н ЯМР-спектры зарегистрировали либо на спектрометре Вгикег ΌΡΧ-400, либо на Вгикег АУ-500 с помощью стандартных импульсных режимов, работающих при 400 и 500 МГц соответственно. Химические сдвиги (δ) в сторону слабых полей относительно тетраметилсилана (ТМ8), который использовали в качестве внутреннего стандарта, представили в частях на миллион (ррт, ч./млн).

ЬСМ8-способ.

Для (ЬС)М8-характеристики соединений по настоящему изобретению применяли следующие способы.

Общая методика А для прибора АссцШу^ОО.

Измерение с помощью ИРЬС (сверхэффективной жидкостной хроматографии) провели с применением системы АссЦ-Шу ИРЬС (^Уа1ег5). включающей пробоотборник, насос для двухкомпонентных смесей с дегазатором, четырехколоночный термостат, детектор на диодной матрице (ИАО) и колонку, как определено в соответствующих способах. М8-детектор оснастили источником электрораспылительной ионизации. Масс-спектры получили на одиночном квадрупольном детекторе 8ЦИ путем сканирования от 100 до 1000 за 0,1 с с применением межканальной задержки 0,08 с. Напряжение капиллярной иглы составляло 3,0 кВ. Напряжение на конусе составляло 25 В для режима положительной ионизации и 30 В для режима отрицательной ионизации. Азот использовали в качестве распылительного газа. Температуру источника поддерживали при 140°С. Сбор данных провели с помощью программного обеспечения [М^Еупх-Орсгйупх.

Способ 1.

В дополнение к общей методике А: обращенно-фазовую ИРЬС провели на колонке ВЕН-С18 (1,7 мкм, 2,1x50 мм) от \Уа1ег5 со скоростью потока 1,0 мл/мин, при 50°С без разделения к М8-детектору. Применяемые градиентные условия: 95% А (0,5 г/л раствор ацетата аммония + 5% ацетонитрил), 5% В (ацетонитрил), до 40% А, 60% В через 3,8 мин, до 5% А, 95% В через 4,6 мин, удерживали до 5,0 мин. Объем вводимой пробы составил 2,0 мкл.

Способ 2.

В дополнение к общей методике А: обращенно-фазовую ИРЬС провели на ККНИ ЕсПр5е Р1и5-С18 (1,8 мкм, 2,1x50 мм) от АдЛей со скоростью потока 1,0 мл/мин, при 50°С без разделения к М8-детектору. Применяемые градиентные условия: 95% А (0,5 г/л раствор ацетата аммония + 5% ацетонитрил), 5% В (ацетонитрил), до 40% А, 60% В через 1,2 мин, до 5% А, 95% В через 1,8 мин, удерживали до 2,0 мин. Объем вводимой пробы составил 2,0 мкл.

Способ 3.

Такой же градиент, как для способа 1; применяемая колонка: ККНИ ЕсПр5е Р1и5-С18 (1,8 мкм, 2,1x50 мм) от АдЛей.

Общая методика В для приборов НР 1100-М8 (ТОР, 8ЦИ или М8И).

Измерение с помощью ВЭЖХ провели с применением системы НР 1100 (АдЛей Тес1то1од1е5). включающей насос (для четырехкомпонентных или двухкомпонентных смесей) с дегазатором, автоматический дозатор, колоночный термостат, детектор на диодной матрице (ИАО) и колонку, как определено в соответствующих способах. М8-детектор (8ОЭ, ТОР или М8И) оснастили либо источником электрораспылительной ионизации, либо источником Е8С1 двойной ионизации (электрораспыление в сочетании с химической ионизацией при атмосферном давлении). Азот использовали в качестве распылительного газа. Температуру источника поддерживали либо при 140°С, либо при 100°С. Сбор данных провели либо с помощью программного обеспечения Ма55^уηx-Ореη1уηx, либо программного обеспечения СНепъаЛои-АдИей Эа1а Вго\\'5ег.

В1: Масс-спектры получили на одиночном квадрупольном М8И-детекторе в режиме АРС1 путем сканирования от 100 до 1000 за 0,99 с, шаг 0,30 и ширина пика 0,10 мин. Напряжение капиллярной иглы составляло 3,0 кВ, напряжение фрагментора составляло 70 В для режимов положительной и отрицательной ионизации, и интенсивность короны составляла 4 мкА.

В2: Масс-спектры получили на одиночном квадрупольном детекторе 8ЦИ путем сканирования от 100 до 1000 за 0,1 с с применением межканальной задержки 0,08 с. Напряжение капиллярной иглы составляло 3,0 кВ. Напряжение на конусе составляло 20 В для режима положительной ионизации и 30 В для режима отрицательной ионизации.

В3: Масс-спектры получили на времяпролетном (ТОР) детекторе путем сканирования от 100 до 750 за 0,5 с с использованием времени пребывания 0,3 с. Напряжение капиллярной иглы составляло 2,5 кВ для режима положительной ионизации и 2,9 кВ для режима отрицательной ионизации. Напряжение на конусе составляло 20 В как для режима положительной, так и режима отрицательной ионизации. Лейцин-энкефалин был стандартным веществом, применяемым для калибровки при помощи фиксированной массы.

- 40 022649

Способ 4.

В дополнение к общей методике В1: обращенно-фазовую ВЭЖХ провели на колонке Ескрке Р1и8-С18 (3,5 мкм, 2,1x30 мм) от АдПеп! со скоростью потока 1,0 мл/мин, при 60°С. Применяемые градиентные условия: 95% А (6,5 мМ ЯЩАсО в Η^Μ£Ν 95/5), 5% В (АСЩ, удерживали 0,2 мин, до 100% В через 3,0 мин, удерживали до 3,15 мин и уравновесили до начальных условий при 3,3 мин до 5,0 мин. Объем вводимой пробы составил 2 мкл.

Способ 5.

В дополнение к общей методике В2: обращенно-фазовую ВЭЖХ провели на колонке Ескрке Р1и8-С18 (3,5 мкм, 2,1x30 мм) от АдПеп! со скоростью потока 1,0 мл/мин, при 60°С. Применяемые градиентные условия: 95% А (6,5 мМ ЯЩАсО в Н₂О/АС№ 95/5), 5% В (АСМ МеОН 1/1), до 100% В через 5,0 мин, удерживали до 5,15 мин и уравновесили до начальных условий при 5,30 мин до 7,0 мин. Объем вводимой пробы составил 2 мкл.

Способ 6.

В дополнение к общей методике В3: обращенно-фазовую ВЭЖХ провели на колонке Ескрке Р1и8-С18 (3,5 мкм, 2,1x30 мм) от АдПеп! со скоростью потока 1,0 мл/мин, при 60°С. Применяемые градиентные условия: 95% А (6,5 мМ ΝΠ-АсО в Η₂О/АСN 95/5), 5% В (АСЩ, удерживали 0,2 мин, до 100% В через 3,0 мин, удерживали до 3,15 мин и уравновесили до начальных условий при 3,3 мин до 5,0 мин. Объем вводимой пробы составил 2 мкл.

Общая методика С.

Измерение с помощью ВЭЖХ провели с применением модуля АдПеп! 1100, включающего насос, детектор на диодной матрице (ΌΆΌ) (применяемая длина волны 220 нм), нагреватель колонки и колонку, как определено в соответствующих способах ниже. Поток из колонки разделили в АдПеп! М8Э Зепе5 О1946С и О1956А. М8-детектор оснастили АР1-Е8 (электрораспылительная ионизация при атмосферном давлении). Масс-спектры получили путем сканирования от 100 до 1000. Напряжение капиллярной иглы составляло 2500 В для режима положительной ионизации и 3000 В для режима отрицательной ионизации. Напряжение фрагментации составляло 50 В. Температуру сушильного газа поддерживали при 350°С при потоке 10 л/мин.

Способ 7.

В дополнение к общей методике С: обращенно-фазовую ВЭЖХ провели на колонке УМС-Раск ОЭ5>-АО. 50x2,0 мм, 5 мкм, со скоростью потока 0,8 мл/мин. Применяли две подвижные фазы (подвижная фаза А: Н₂О с 0,1% ТРА; подвижная фаза В: АСN с 0,05% ТРА). Сперва 100% А выдержали в течение 1 мин. Затем применили градиент до 40% А и 60% В через 4 мин и выдержали в течение 2,5 мин. Применяли обычные объемы вводимой пробы 2 мкл. Температура термостата составляла 50°С. (Полярность М§: положительная).

Способ 8.

В дополнение к общей методике С: обращенно-фазовую ВЭЖХ провели на колонке ИШта1е УВ-С18, 50x2,1 мм, 5 мкм, со скоростью потока 0,8 мл/мин. Применили две подвижные фазы (подвижная фаза С: 10 ммоль/л НН₄НСО₃; подвижная фаза Ό: АСЩ. Сперва 100% С выдержали в течение 1 мин. Затем применили градиент до 40% С и 60% Ό через 4 мин и выдержали в течение 2,5 мин. Применили обычные объемы вводимой пробы 2 мкл. Температура термостата составляла 50°С. (Полярность М§: положительная).

Общая методика Ό.

Измерение с помощью ИНРЬС провели с применением системы ЗЫтаб/и 2010 ЬСМ§, включающей насос, детектор с фотодиодной матрицей (РЭА) (применяемая длина волны 220 нм), колоночный термостат и колонку, как определено в соответствующих способах ниже. Поток из колонки разделили в детектор ЗЫтаб/и 2010 М8Э. М8-детектор оснастили АР1-Е8 (электрораспылительная ионизация при атмосферном давлении). Масс-спектры получили путем сканирования от 100 до 1000. Напряжение на границе раздела фаз составляло 4500 В для режима положительной ионизации. Скорость потока распылительного газа 1,5 л/мин. Температура СИЬ (закругленная линия десольватации с нагретым капилляром) составляла 250°С, а напряжение СИЬ составляло 30 В. Температура термоблока составляла 200°С. Напряжение детектора составляло 1500 В.

Способ 9.

В дополнение к общей методике Ό: обращенно-фазовую ИНРЬС провели на колонке Xί^таΐе С18 (30x2,1 мм, 3,0 мкм) со скоростью потока 1,2 мл/мин. Применили две подвижные фазы (А: Н₂О с 0,15% ТРА; В: АСN с 0,75% ТРА). Сперва 100% А выдержали в течение 1 мин. Затем применили градиент до 40% А и 60% В через 0,9 мин, удерживали до 1,5 мин и уравновесили до начальных условий при 1,51 мин до 2,0 мин. Применили обычные объемы вводимой пробы 1 мкл. Температура термостата составляла 50°С. (Полярность М§: положительная).

- 41 022649

Общая методика Е.

Измерение с помощью ЬС провели с применением системы ИРЬС (сверхэффективной жидкостной хроматографии) Асцийу (^а1ег§), включающей насос для двухкомпонентных смесей с дегазатором, автоматический дозатор, детектор на диодной матрице (ИЛИ) и колонку, как определено в соответствующих способах ниже, причем колонку выдерживали при температуре 40°С. Поток из колонки подвели к М8-детектору. М8-детектор оснастили источником электрораспылительной ионизации. Масс-спектры получили на тройном квадрупольном детекторе масс-спектрометра ОиаПго (\Уа1ег5) путем сканирования от 100 до 1000 за 0,2 с с применением задержки между сканированиями 0,1 с. Напряжение капиллярной иглы составляло 3 кВ и температуру источника поддерживали при 130°С. Напряжение на конусе составляло 20 В для режима положительной и отрицательной ионизации. Азот использовали в качестве распылительного газа. Сбор данных провели с помощью программного обеспечения Ма88^уηx-Оρеη1уηx (^а1ег8).

Способ 10.

В дополнение к общей методике Е: обращенно-фазовую ИРЬС провели на колонке \Уа1ег5 Лсцийу ВЕН (мостиковый гибрид этилсилоксана/кремнезема) с фенилгексилом (1,7 мкм, 2,1x100 мм) со скоростью потока 0,343 мл/мин. Две подвижные фазы (подвижная фаза А: 95% 7 мМ 7 мМ ЫН₄ЛсО/5% АСЫ; подвижная фаза В: 100% АСИ) использовали для запуска условий градиента от 84,2% А и 15,8% В (выдерживали 0,49 мин) до 10,5% А и 89,5% В через 2,18 мин, выдерживали в течение 1,94 мин и вернули к начальным условиям через 0,73 мин, выдержали 0,73 мин. Использовали объем вводимой пробы 2 мл.

Точки плавления.

Значения представляли собой либо значения пика, либо диапазоны плавления, и были получены с экспериментальными неточностями, которые обычно связаны с этим аналитическим способом.

Аппарат МеЙег РР 81НТ/РР90 - РР62 (указан РР90 и РР62 в табл. 2).

Для ряда соединений определили точки плавления в открытых капиллярных трубках либо на аппарате МеЙег РР62, либо Мей1ег РР81НТ/РР90. Точки плавления измерили при температурном градиенте 1, 3, 5 или 10°С/мин. Максимальная температура составила 300°С. Точку плавления считали с цифрового дисплея.

- 42 022649

Данные анализа

Таблица 2

Соед, К'	Κι	[М+Н] ⁺	Способ	Точка плавления
1	1, 55	338	3	Н.О.
2	1,6	381	3	Н.о.
3	1,58	415	3	94,4’С (ГР62)
4	2,25	415	10	212,2’С (РР62)
5	2,25	415	10	186,3°С (РР62)
6	1,10	372	3	221,6°С (РР62)
7	1, 98	372	10	281,8°С (РР62)
8	1,99	372	10	248,8’С (РР62)
Э	1, 98	450	3	147,4°С (РР62)
10	3,60	483	5	>300С (РР90)
11	2,90	483	10	147,8°С (РР62)
12	2,90	483	10	221,8°С (РР62)
13	0,97	414	2	99,4°С (РР90)
14	1,74	433	3	Н.О.
15	2,37	433	10	>300“С (ГР90)
16	2,37	433	10	>300°С (РР90)
17	1,90	432	3	263,4°С (ГР90)
18	2,45	432	10	248°С (РР90)
19	2,45	432	10	279,9°С (РР90)
20	1,94	419	3	236,9°С (РР90)
21	2,48	419	10	Н.О.
22	2,49	419	10	220,4’С (РР90)
23	2,26	421	3	276,З’С (РР90)
24	2,29	408	3	186,4“С (РР90)
25	2,23	433	3	180’С (РР90)
26	2,18	446	3	Н.О.
27	2,14	428	3	н.о.
28	2,18	429	3	Н.О.
29	2,25	415	3	>300°С (ГР90)

30	3,31	446	5	Н.О.
31	2,72	446	10	220,9°С (РР62)
32	2,72	446	10	220’С (РР62)
33	0,99	401	2	186°С (РР90)
34	1,47	387	3	187’С (РР62)
35	3,24	455	5	87,2’С (РР62)
36	2,75	401	5	109,8°С (РР62)
37	2,24	430	3	108,8°С (РР90)
38	2,32	417	3	>300°С (РР90)
39	2,53	44 9	3	Н.О.
40	2,04	454	3	н.о.
41	2,18	415	3	н.о.
42	1, 94	436	3	н.о.
43	1,86	3 94	3	н.о.

н.о. означает не определена.

К₄ означает время удерживания (в мин).

[М+Н]+ означает массу протонированного соединения, причем способ относится к способу, применяемому для (ЬС)МЗ.

- 43 022649

8РСМ§-способы.

Общая методика А для §РС-М§-способов.

Измерение с помощью 8РС провели с применением аналитической системы §РС от Вегдег ПМгитеШх (Ньюарк, Делавэр, США), включающей модуль контроля насоса для двухкомпонентных смесей (РСМ-1200) для доставки диоксида углерода (СО2) и модификатора, модуль термического контроля для нагревания колонки (ТСМ2100) с регулировкой температуры в диапазоне 1-150°С и переключатели колонок (Уа1со, УК} Хьюстон, Техас, США) для шести различных колонок. Детектор с фотодиодной матрицей (АдПеШ 1100, Вальдброн, Германия) оборудовали проточной кюветой высокого давления (до 400 бар) и оснастили автоматическим дозатором СТС ЬС Мий РАЬ (Ьеар ТесЬпо1од1е8, Каррборо, Северная Каролина, США). Масс-спектрометр ΖΡ (Аа!ег8, Милфорд, Массачусетс, США) с поверхностью ортогонального Ζ-электрораспыления соединили с 8РС-системой. Регулировку прибора, сбор данных и обработку осуществили с помощью интегрированной платформы, состоящей из программного обеспечения §РС РгоЭТо и программного обеспечения Ма881упх.

Способ 1.

В дополнение к общей методике А: хиральное разделение в §РС провели на колонке СЫга1рак АО-Н (4,6x500 мм) при 50°С со скоростью потока 3,0 мл/мин. Подвижная фаза представляла собой СО₂, 20% МеОН (содержащая 0,2% 1Р^Н₂), причем выдержали 15 мин, изократический режим.

Общая методика В.

Измерение с помощью 8РС провели с применением аналитической системы §РС от Вегдег ^Ритейь (Ньюарк, Делавэр, США), включающей РСМ-1200 модуль контроля рабочей жидкости насоса для двухкомпонентных смесей для доставки диоксида углерода (СО₂) и модификатора, автоматический дозатор для жидких проб СТС Апа1у1ю8, модуль термического контроля ТСМ-20000 для нагревания колонки от комнатной температуры до 80°С. Использовали детектор с фотодиодной матрицей АдПеШ 1100 υν, оборудованный проточной кюветой высокого давления, установленного до 400 бар. Поток из колонки разделили в М§-спектрометр. М§-детектор оснастили источником ионизации при атмосферном давлении. Параметры ионизации для масс-спектрометра Аа1ег8 ΖΡ были следующими: корона: 9 мкА, температура источника: 140°С, конус: 30 В, температура зонда 450°С, экстрактор 3 В, газ-осушитель 400 л/ч, газ через конус 70 л/ч. В качестве распылительного газа использовали азот. Сбор данных провели с помощью системы обработки данных Аа!ег8-Мюгота88 Ма88Ьупх-Ореп1упх.

Способ 2.

В дополнение к общей методике В: хиральное разделение в §РС провели на колонке СЫга1рак АО ОАШЕЬ (10 мкм, 4,6x250 мм) при 35°С со скоростью потока 3,0 мл/мин. Подвижная фаза представляет собой СО₂, 60% этанол, 40% Е!ОН (содержащая 0,3% 1Р^Н₂), причем выдержали 7 мин.

- 44 022649

Данные анализа ЗРС

Таблица 3

Соед. №	Е₍	[М+Н] ·	υν площадь, %	Способ	Порядок элюирования изомера*	ее (%)
Промежуточный продукт А6(3)	5,35	230	100	1	А	-
Промежут очный продукт А6(й)	6,88	23 0	100	1	^в	-
4	3,17	415	100	2	А	-
5	4,17	415	100	2	в
7	1,92	3 72	100	2	А	-
8	3,05	3 72	100	2	В	-
11	4,95	483	100	3	В	-
12	4,01	483	100	3	А	-
15	4,14	433	100	4	А	-
16	5,17	433	100	4	в	-
18	3,07	432	100	5	А
19	4,15	432	100	5	В	-
21	2,81	419	100	3	А	-
22	4,17	419	100	3	Б	-
27	4,37	433	89,33	6	А	79
28	4,97	446	70,11	7	А	40
31	3,33	446	100	3	А	-
32	3,90	446	99,44	3	В	-
39	5,20	449	91,51	6	А	83
40	3,40	454	93,61	7	А	88

*А означает первый изомер, который элюируется.

В означает второй изомер, который элюируется. ее рассчитали в случае соединений, не являющихся энантиомерно чистыми.

К₄ означает время удерживания (в мин).

[М+Н]+ означает массу протонированного соединения, причем способ относится к способу, применяемому для анализа энантиомерно чистых соединений с помощью ЗРС/МЗ.

Оптическое вращение

Оптическое вращение измерили на поляриметре Регкш-Е1тег 341 с натриевой лампой и представляли, как указано ниже: |α|_λ' ^С (к. г/100 мл, растворитель).

- 45 022649

Таблица 4

Данные анализа - значения оптического вращения для энантиомерно чистых соединений

Соед. №	ОСп	Длина волны (нм)	Концентрация, вес +/об + %	Растворитель	Темп. СО
4	+ 20,3	589	0,56	ЦМР	20
5	-31,6	589	0,5	ϋΜΡ	20
7	-70,7	589	0,45	ПМР	20
8	+ 45,6	589	0,41	ПМР	20
11	12,0	589	0,50	меон	20
12	-18,8	589	0,50	МеОН	20
13	83,7	589	0, 55	ПМР	20
18	136,8	589	0,51	ЦМР	20
19	-140,8	589	0,50	ЦМР	20
21	-126,7	589	0,51	ЦМР	20
22	115,2	589	0,54	ЦМР	20
23	144,4	589	0,50	ЦМР	20
24	111,4	589	0,51	ΏΜΓ	20
25	121,1	589	0,50	ЦМР	20
29	111,0	589	0,51	ϋΜΓ	20
31	17,9	589	0,50	МеОН	20
32	-26,4	589	0,50	МеОН	20
33	56,6	589	0,65	ЦМР	20
35	81,5	589	0,50	ЦМР	20
37	29,2	589	0,52	ЦМР	20
38	14 _{ 8	589	0,49	ПМР	20
41	65,2	589	0,50	ЦМР	20
42	77,1	589	0,50	ΏΜΓ	20

н.о. означает не определена.

Фармакологические примеры.

Соединения, представленные в настоящем изобретении, являются ингибиторами АРР-расщепляющего по β-сайту фермента 1 (ВАСЕ1). Полагают, что ингибирование ВАСЕ1, аспарагиновой протеазы, является существенным для лечения болезни Альцгеймера (АО). Полагают, что продуцирование и накопление β-амилоидных пептидов (Λβ) из белка-предшественника β-амилоида (АРР) играет ключевую роль в возникновении и развитии АО. Ав продуцируется из белка-предшественника амилоида (АРР) путем последовательного расщепления на Ν- и С-концах Ав домена β-секретазой и λ-секретазой соответственно.

Предполагается, что соединения формулы (Ι) действуют главным образом на ВАСЕ1 в силу своей способности ингибировать ферментативную активность. Поведение таких ингибиторов, которые протестировали с помощью биохимического анализа на основе резонансного переноса энергии флуоресценции (ЕКЕТ) и клеточного анализа айка на клетках 8КЫВЕ2, которые описаны ниже и которые являются подходящими для идентификации таких соединений и, конкретнее, соединений согласно формуле (Ι), показано в табл. 3.

Биохимический анализ на основе ЕКЕТ.

Данный анализ основан на резонансном переносе энергии флуоресценции (ЕКЕТ). Субстратом для этого анализа является образованный из АРР 13-аминокислотный пептид, который содержит шведскую мутацию ^у8-Меί/А8η-^еи сайта расщепления белка-предшественника амилоида (АРР) β-секретазой. Этот субстрат также содержит два флуорофора: (7-метоксикумарин-4-ил)уксусную кислоту (Мса), которая является донором флуоресценции с длиной волны возбуждения 320 нм и излучения 405 нм, и 2,4-динитрофенил (Όηρ), который является соответствующим гасителем-акцептором. Расстояние между этими двумя группами выбрали так, что при возбуждении света энергия флуоресценции донора в значительной степени гасится акцептором посредством резонансного переноса энергии. При расщеплении с помощью ВАСЕ1 флуорофор Мса отделяется от гасящей группы Όηρ, восстанавливая полный выход флуоресценции донора. Усиление флуоресценции линейно связано со скоростью протеолиза (Кодке Н. е!

- 46 022649 а1. 1. ВюсЬет. 1999, 126, 235-242).

Вкратце, в 384-луночном формате рекомбинантный белок ВАСЕ1 при конечной концентрации 1 мкг/мл инкубируют в течение 120 мин при комнатной температуре с 10 мкм субстрата в инкубационном буфере (40 мМ цитратный буфер, рН 5,0, 0,04% РЕО, 4% ЭМ8О) в отсутствие или в присутствии соединения. Далее величину протеолиза непосредственно измеряют путем измерения флуоресценции при Т=0 и Т=120 (возбуждение при 320 нм и излучение при 405 нм). Результаты выражают в КРИ как разницу между Т120 и Т0.

Кривую наилучшего приближения подбирают при помощи методики наименьших квадратов для графика зависимости % мин контроля от концентрации соединения. Из него можно получить значение 1С₅₀ (ингибирующая концентрация, вызывающая 50% ингибирование активности).

ЬС = медиана значений низкого контроля, низкий контроль: реакция без фермента;

НС = медиана значений высокого контроля, высокий контроль: реакция с ферментом, % эффекта = 100-[(образец-ЬС)/(НС-ЬС)х 100], % контроля = (образец/НС)х 100, % мин контроля = (образец-ЬС)/(НС-ЬС)х 100.

Осуществили тестирование следующих соединений, представленных в качестве примера, главным образом, как описано выше, и они показали следующую активность.

- 47 022649

Таблица 5

№ соед.	Биохимический анализ на основе ЕР.ЕТ р1С₅₀
1	6,28
2	7, 08
3	7,33
4	4,67
5	7,43
6	7,25
7	7,75
8	4,86
9	5,1
10	7,2
11	7,55

12	5,06
13	7,14
14	7,45
15	7,73
16	5,98
17	7,24
18	7,65
19	5,01
20	7,18
21	<4,52
22	7,59
23	7,4
24	7,49
25	7,56
26	7,31
27	7,22
28	7,16
29	7,09
30	6,77
31	4,97
32	7,20
33	7,19
34	7,23
35	6,91
36	7,04
37	5,86
38	6,03
39	7,39
40	7,28
41	6,93
42	7,12
43	7,53

- 48 022649

Клеточный анализ ЕЮа на клетках 8ΚΝΒΗ2.

В двух анализах ЕЮа количественно определили уровни общего Ав и Ав42, продуцированных и секретированных в среду клеток 8КНВЕ2 нейробластомы человека. Анализ основан на клетках §КЯВЕ2 нейробластомы человека, экспрессирующих белок-предшественник амилоида дикого типа (ЕАРР695). Соединения разводят и добавляют к этим клеткам, инкубируют в течение 18 ч и затем осуществляют измерения Αβ42 и общего Αβ. Общий Αβ и Αβ42 измеряют с помощью сэндвич-анализа ЕЮа. ЕЮа представляет собой сэндвич-анализ, в котором используется биотинилированное антитело ΑΕΝ/25. прикрепленное к покрытым стрептавидином гранулам, и гранулы акцептора, конъюгированные с антителом Α64Ο8 или сΑЬ42/26, для выявления общего Αβ и Αβ42 соответственно. В присутствии общего Αβ или Αβ42 гранулы приближаются друг к другу. Возбуждение гранул донора вызывает высвобождение молекул синглетного кислорода, что запускает каскад переноса энергии на гранулы акцептора, что приводит к свечению. Свечение измеряют спустя 1 ч инкубирования (возбуждение при 650 нм и излучение при 615 нм).

ЬС = медиана значений низкого контроля, низкий контроль: клетки предварительно инкубируют без соединения, без биотинилированного ΑΕ в Ейка;

НС = медиана значений высокого контроля, высокий контроль: клетки предварительно инкубируют без соединения, % эффекта = 100-[(образец-ЬС)/(НС-ЬС)х100], % контроля = (образец/НС)х 100, % мин контроля = (образец-ЬС)/(НС-ЬС)х 100.

- 49 Таблица 6

№ соед.	Клеточный анализ аНза на клетках ΞΚΝΒΕ2 АБ42	Клеточный анализ аНза на клетках 5КИВЕ2 Общий Αβ р1С50
1	7,03	7
2	8,45	8, 61
3	8,49	8,47
4	5,84	5,84
5	8,59	8,55
6	8,24	8,29
7	8,66	8,69
8	6,13	6,13
9	6,00	6,06
10	7,78	7,81
11	7,94	8,01
12	5,64	5,75
13	8, 17	8,26
14	8, 87	8, 93
15	9,33	9,37
16	7,66	7,74
17	7,40	7,48
18	7, 52	7,54
19	5,28	5,13
20	7,07	7,18
21	<5	<5
22	7, 17	7,21
23	8,75	8,71
24	8,48	8,41
25	8,88	8,87
26	8, 83	8,84
27	8,15	8,17
28	8,28	8,20
29	7,79	7,77

30	7,43	7,45
31	5,58	5,61
32	7,76	7,84
33	8,09	8,14
34	7,83	7,78
35	7,33	7,30
36	7,56	7,53
37	6,03	6,07
38	6,15	6,22
39	8,61	8,59
40	8,42	8,37
41	7,69	7,67
42	8,02	7,99
43	8,72	8,70

н.т. означает не тестировали.

- 50 022649

Демонстрация эффективности ίη У1уо.

Средства, снижающие уровень ΛΌ-пептида, по настоящему изобретению можно применять для лечения ΛΌ у млекопитающих, таких как люди, или, в альтернативном случае, для демонстрирования эффективности на животных моделях, таких как, но без ограничения, мышь, крыса или морская свинка. У млекопитающего может не выявляться АО или оно может не иметь генетической предрасположенности к АО, но может быть трансгенным, так что у него сверхпродуцируется и в итоге накапливается Ав подобно тому, как это наблюдается у людей, пораженных АО.

Средства, снижающие уровень Ав-пептида, можно вводить в любой стандартной форме с помощью любого стандартного способа. Например, но без ограничения, средства, снижающие уровень Ав-пептида, могут быть в форме раствора, таблеток или капсул, которые можно принимать перорально или инъекционно. Средства, снижающие уровень Ав-пептида, можно вводить в любой дозе, достаточной для того, чтобы значительно снизить уровни Ав-пептидов в крови, плазме крови, сыворотке, цереброспинальной жидкости (СЗР) или головном мозге.

Для того чтобы определить, будет ли однократный прием средства, снижающего уровень Ав42-пептида, снижать уровни Ав-пептида ίη У1уо, использовали нетрансгенных грызунов, например мышей или крыс. Животных, которых подвергли обработке средством, снижающим уровень Ав-пептида, обследовали и сравнивали с теми, которые не были подвергнуты обработке или были подвергнуты обработке средой, и осуществили количественный анализ уровней растворимого Ав42 и общего Ав в головном мозге с помощью стандартных методик, например с использованием ЕЫЗА. Периоды обработки варьировали от часов (ч) до дней и их скорректировали на основе результатов снижения уровня Ав42, как только можно было установить время возникновения эффекта.

Стандартный протокол для измерения снижения уровня Ав42 ίη У1уо представлен, но это только один из многих вариантов, которые можно применять для оптимизации уровней выявляемого Ав. Например, соединения, снижающие уровень Ав пептида, были составлены в 20% гидроксипропил-вциклодекстрине. Средства, снижающие уровень Ав-пептида, ввели в однократной дозе перорально (п.о.) или в однократной дозе подкожно (п.к.) животным, которых не кормили в течение ночи. По истечении определенного времени, как правило 2 или 4 ч (как показано в табл. 7), животных умерщвляли и исследовали уровни Ав42.

Кровь собрали посредством декапитации и обескровливания в пробирки для сбора образцов, обработанные ЕИТА. Кровь центрифугировали при 1900хд в течение 10 мин (мин) при 4°С, отделили плазму и подвергли сверхбыстрой заморозке для дальнейшего исследования. Г оловной мозг отделили от черепа и заднего мозга. Отделили мозжечок и разделили левое и правое полушарие. Левое полушарие сохранили при -18°С для количественного исследования уровней тестовых соединений. Правое полушарие промыли буфером на основе забуференного фосфатом солевого раствора (РВЗ), моментально заморозили на сухом льду и сохранили при -80°С до гомогенизации для биохимических анализов.

Мышиные мозги от нетрансгенных животных повторно суспендировали в 8 объемах 0,4% ИЕА (диэтиламина)/50 мМ №С1, содержащих ингибиторы протеазы (Косбе-11873580001 или 04693159001), на 1 г ткани, например, к 0,158 г мозга добавляют 1,264 мл 0,4% ИЕА. Все образцы гомогенизировали в системе Ра§1Ргер-24 (МР ВютеФсак) с использованием лизирующей матрицы Ό (МРВю #6913-100) при 6 м/с в течение 20 с. Гомогенаты центрифугировали при 221, 300хд в течение 50 мин. Полученную при высоких скоростях надосадочную жидкость затем перенесли в новые пробирки Эппендорфа. Девять частей надосадочной жидкости нейтрализовали 1 частью 0,5 М Тп5-НС1. рН 6,8 и использовали для определения количества общего Ав и Ав42.

Для определения количества общего Ав и Ав42 в растворимой фракции гомогенатов головного мозга использовали иммуноферментные анализы. Вкратце, приготовили стандарты (раствор синтетического Ав 1-40 и Ав 1-42, Васбет) в 1,5 мл пробирках Эппендорфа в иИгасибиге с конечными концентрациями в диапазоне 10000-0,3 пг/мл. Образцы и стандарты совместно инкубировали с антителом, меченным НКРО по Ν-концу, для выявления Ав42 и с антителом 408 на основе биотинилированного среднего домена для выявления общего Ав. Затем 50 мкл смесей конъюгат/образец или конъюгат/стандарты добавили на планшет, покрытый антителами (иммобилизированные антитела селективно распознают С-концевую область Ав42, антитело ^КР/СΛР42/26 для выявления Ав42, и Ν-конец Ав, антитело ТКР/гАв/2 для выявления общего Ав). Обеспечили инкубирование планшета в течение ночи при 4°С с тем, чтобы обеспечить возможность образования комплекса антитело-амилоид. Вслед за этими этапами инкубирования и последующей отмывки ЕЫЗА для количественного анализа Ав42 завершили добавлением флуорогенного субстрата фиаШа В1и для пероксидазы согласно инструкциям изготовителя (Р1егсе Согр., Рокфорд, Иллинойс). Считывание осуществили спустя 10-15 мин (возбуждение при 320 нм/излучение при 420 нм).

Для выявления общего Ав добавили стрептавидин-пероксидазный конъюгат, после чего спустя 60 мин последовали дополнительный этап отмывки и добавление флуорогенного субстрата фиаШа В1и для пероксидазы согласно инструкциям изготовителя (Ргегсе Согр., Рокфорд, Иллинойс). Считывание

- 51 022649 осуществили спустя 10-15 мин (возбуждение при 320 нм/излучение при 420 нм).

В этой модели по меньшей мере 20% снижение уровня Λβ42 по сравнению с животными, которые не были подвергнуты обработке, будет преимущественным.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I) или его стереоизомерная форма, где К¹ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена;

К² выбран из группы, состоящей из водорода, циано, С^алкила, полигалоген-С^алкила;

К³ выбран из группы, состоящей из С^алкила, полигалоген-С^алкила;

X¹ представляет собой С(К⁴), где К⁴ представляет собой водород, галоген;

X², X³, X⁴ представляют собой С(К⁴), где К⁴ представляет собой водород;

Ь представляет собой -^К⁵)СО-, где К⁵ представляет собой водород;

Аг представляет собой гетероарил, где гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, замещенного одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано; оксазолила, необязательно замещенного одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из С1_-3алкила или полигалоген-С1_-3алкила; пиразолила, замещенного полигалоген-С1_-3алкилом; пиразинила, замещенного С1_-3алкилокси;

или его соль присоединения.
2. Соединение по п.1, где

К¹ и К² представляют собой водород;

Аг представляет собой гетероарил;

гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридила, замещенного одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано; пиразила, замещенного С1-3алкилокси; или его соль присоединения.
3. Соединение по п.1, где

К¹ и К² представляют собой водород;

X¹, X², X³, X⁴ представляют собой СН;

Аг представляет собой гетероарил, где гетероарил представляет собой пиридил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из группы, состоящей из хлора, фтора, циано; или его соль присоединения.
4. Соединение по п.1, где атом углерода, замещенный К³, характеризуется К-конфигурацией.

- 52 022649
5. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-4 и фармацевтически приемлемый носитель.
6. Способ получения фармацевтической композиции по п.5, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемый носитель равномерно смешивают с терапевтически эффективным количеством соединения по любому из пп.1-4.
7. Применение соединения по любому из пп.1-4 при лечении, предупреждении или профилактике болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения, угасания, деменции, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с инсультом, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, или деменции, ассоциированной с β-амилоидом.
8. Способ лечения расстройства, выбранного из группы, состоящей из болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения, угасания, деменции, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с инсультом, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, и деменции, ассоциированной с β-амилоидом, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-4 или фармацевтической композиции по п.5.