ES2558779T3 - Derivados de 6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-4-ilamina útiles como inhibidores de ß-secretasa (BACE) - Google Patents

Derivados de 6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-4-ilamina útiles como inhibidores de ß-secretasa (BACE) Download PDF

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Henricus Jacobus Maria Gijsen
Michiel Luc Maria Van Gool
Juan Antonio Vega Ramiro
Francisca DELGADO-JIMÉNEZ
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Abstract

Un compuesto de Fórmula (I)**Fórmula** o uno de sus tautómeros o una de sus formas estereoisómeras, en donde R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, halo, ciano, alquilo C1-3, mono- y polihalo-alquilo(C1-3) y cicloalquilo C3-6; R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-3, cicloalquilo C3-6, mono- y polihalo-alquilo(C1-3) homoarilo y heteroarilo; X1, X2, X3, X4 son independientemente C(R4) o N, con la condición de que no más de dos de ellos representen N; cada R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, halo, alquilo C1-3, mono- y polihalo-alquilo(C1-3), ciano, alquiloxi C1-3, mono- y polihalo-alquiloxi(C1-3); L es un enlace o -N(R5)CO-, en donde R5 es hidrógeno o alquilo C1-3; Ar es homoarilo o heteroarilo; en donde el homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihalo-alquilo(C1-3), mono- y polihalo-alquiloxi(C1-3); el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, piracilo, piridacilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, oxazolilo y oxadiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihalo-alquilo(C1-3), mono- y polihalo-alquiloxi(C1-3); o una de sus sales por adición o uno de sus solvatos.

Description

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DESCRIPCION
Derivados de 6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-4-ilamina utiles como inhibidores de U-secretasa (BACE).
Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a nuevos derivados de 6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-4-il-amina como inhibidores de U-secretasa, tambien conocida enzima de escision de amiloide del sitio U, BACe, BACE1, Asp2 o memapsina 2. La invencion tambien se dirige a composiciones farmaceuticas que comprenden tales compuestos, a procedimientos para preparar tales compuestos y composiciones y al uso de tales compuestos y composiciones para la prevencion y el tratamiento de trastornos en los que esta implicada la U-secretasa, tales como la enfermedad de Alzheimer (AD, por sus siglas en ingles), el deterioro cognitivo leve, la senilidad, la demencia, la demencia con cuerpos de Lewy, el smdrome de Down, la demencia asociada con apoplejfa, la demencia asociada con enfermedad de Parkinson o la demencia asociada con amiloide U.
Antecedentes de la invencion
La enfermedad de Alzheimer (AD) es una enfermedad neurodegenerativa asociada con el envejecimiento. Los pacientes con AD sufren deficits cognitivos y perdida de memoria asf como problemas conductuales tales como ansiedad. Mas de 90% de los afectados de Ad tienen una forma esporadica del trastorno mientras que menos de 10% de los casos son familiares o hereditarios. En los Estados Unidos, aproximadamente 1 de cada l0 personas de 65 anos tiene AD, mientras que a los 85 anos, 1 de cada dos individuos esta afectado por AD. La esperanza de vida media desde el diagnostico inicial es de 7-10 anos, y los pacientes con AD requieren cuidados intensivos bien en una residencia, lo que es muy costoso, o bien por miembros de la familia. Con el numero en aumento de ancianos en la poblacion, la AD es un problema medico creciente. Las terapias actualmente disponibles para la AD tratan meramente los smtomas de la enfermedad e incluyen inhibidores de acetilcolinesterasa para mejorar las propiedades cognitivas asf como ansiolfticos y antipsicoticos para controlar los problemas conductuales asociados con esta dolencia.
Las caractensticas patologicas distintivas en el cerebro de pacientes con AD son ovillos neurofibrilares que se generan mediante hiperfosforilacion de protema tau y placas amilaceas que se forman mediante agregacion de peptido amiloide U 1-42 (AU 1-42). aB 1-42 forma oligomeros y a continuacion fibrillas, y finalmente placas amilaceas. Se cree que los oligomeros y las fibrillas son especialmente neurotoxicos y pueden provocar la mayona del dano neurologico asociado con la aD. Los agentes que evitan la formacion de AU 1-42 tienen el potencial de ser agentes modificadores de la enfermedad para el tratamiento de la AD. AU 1-42 se genera a partir de la protema precursora de amiloide (APP, por sus siglas en ingles), comprendida por 770 aminoacidos. El extremo N de AU 1-42 es escindido por U-secretasa (BACE), y a continuacion la Y-secretasa escinde el extremo C-terminal. Ademas de AU 1-42, la Y-secretasa tambien libera AU 1-40 que es el producto de escision predominante asf como AU 1-38 y AU 143. Estas formas de AU tambien se pueden agregar para formar oligomeros y fibrillas. Asf, se esperana que los inhibidores de BACE evitaran la formacion de AU 1-42 asf como AU 1-40, AU 1-38 y AU 1-43 y fueran agentes terapeuticos potenciales en el tratamiento de la AD.
Sumario de la invencion
La presente invencion se dirige a un compuesto de Formula (I)
imagen1
o uno de sus tautomeros o una de sus formas estereoisomeras, en donde
R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrogeno, halo, ciano, alquilo C1-3, mono- y polihalo-alquilo(C1-3) y cicloalquilo C3-6;
R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-3, cicloalquilo C3-6, mono- y polihalo-alquilo(C1_3) homoarilo y heteroarilo;
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X1, X2, X3, X4 son independientemente C(R4) o N, con la condicion de que no mas de dos ellos representen N; cada R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrogeno, halo, alquilo C1-3, mono- y polihalo-alquilo(C1-3), ciano, alquiloxi C1-3, mono-y polihalo-alquiloxi(Ci-3);
L es un enlace o -N(R5)CO-, en donde R5 es hidrogeno o alquilo C1-3;
Ar es homoarilo o heteroarilo;
en donde el homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihalo-alquilo(Ci-3), mono- y polihalo-alquiloxi(Ci-3);
el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, piracilo, piridacilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, oxazolilo y oxadiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihalo-alquilo(Ci-3), mono- y polihalo-alquiloxi(Ci-3); o
una de sus sales por adicion o uno de sus solvatos.
Es ilustrativa de la invencion una composicion farmaceutica que comprende un excipiente farmaceuticamente aceptable y cualquiera de los compuestos descritos anteriormente. Una ilustracion de la invencion es una composicion farmaceutica elaborada al mezclar cualquiera de los compuestos descritos anteriormente y un excipiente farmaceuticamente aceptable. Es ilustrativo de la invencion un procedimiento para elaborar una composicion farmaceutica que comprende mezclar cualquiera de los compuestos descritos anteriormente y un excipiente farmaceuticamente aceptable.
Otro ejemplo de la invencion es cualquiera de los compuestos descritos anteriormente para el uso en el tratamiento de: (a) enfermedad de Alzheimer, (b) deterioro cognitivo leve, (c) senilidad, (d) demencia, (e) demencia con cuerpos de Lewy, (f) smdrome de Down, (g) demencia asociada con apoplejfa, (h) demencia asociada con enfermedad de Parkinson y (i) demencia asociada con amiloide 13, en un sujeto que lo necesite.
Descripcion detallada de la invencion
La presente invencion se dirige a compuestos de Formula (I) como los definidos anteriormente en la presente memoria y sus sales farmaceuticamente aceptables y solvatos. Los compuestos de Formula (I) son inhibidores de la enzima 3-secretasa (tambien conocida como enzima de escision del sitio 3, BACE, BACE1, Asp2 o memapsina 2), y son utiles en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, el deterioro cognitivo leve, la senilidad, la demencia, la demencia asociada con apoplejfa, la demencia con cuerpos de Lewy, el smdrome de Down, la demencia asociada con enfermedad de Parkinson y la demencia asociada con amiloide 3, preferiblemente la enfermedad de Alzheimer, el deterioro cognitivo leve o la demencia, mas preferiblemente la enfermedad de Alzheimer.
En una realizacion de la presente invencion, R1 y R2 se seleccionan independientemente de hidrogeno y alquilo C1-3; X1, X2, X3, X4 son independientemente C(R4) en donde cada R4 se selecciona de hidrogeno y halo;
L es un enlace o -N(R5)CO-, en donde R5 es hidrogeno;
Ar es homoarilo o heteroarilo; en donde el homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3 y polihalo-alquiloxi(Ci-3);
el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo y piracilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3 y polihalo-alquiloxi(Ci-3); o una de sus sales por adicion de acido o uno de sus solvatos.
En otra realizacion de la presente invencion, R1 y R2 son hidrogeno;
X1, X2, X3, X4 son CH;
L es un enlace o -N(R5)CO-, en donde R5 es hidrogeno;
Ar es homoarilo o heteroarilo;
en donde el homoarilo es fenilo sustituido con cloro;
el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo y pirimidilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en cloro, fluoro, ciano, metilo y metoxi; o
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una de sus sales por adicion o uno de sus solvatos.
En otra realizacion, el atomo de carbono sustituido con R3tiene la configuracion R.
Definiciones
"Halo" indicara fluoro, cloro y bromo; "alquilo C1-3" indicara un grupo alquilo saturado lineal o ramificado que tiene 1, 2 o 3 atomos de carbono, p. ej. metilo, etilo, 1-propilo y 2-propilo; "alquiloxi C1-3" indicara un radical eter en el que el alquilo C1-3 es como se define anteriormente; "mono- y polihalo-alquilo(Ci-3)" indicara alquilo C1-3 como se define anteriormente, sustituido con 1, 2 3 o cuando sea posible con mas atomos de halo como se define anteriormente; "mono- y polihalo-alquiloxi(C1-3)" indicara un radical eter en el que el mono- y polihalo-alquilo(C1-3) es como se define anteriormente; "cicloalquilo C3-6" indicara ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo; "cicloalcanodiilo C3-6" indicara un radical bivalente tal como ciclopropanodiilo, ciclobutanodiilo, ciclopentanodiilo y ciclohexanodiilo.
El termino "sujeto", segun se usa en la presente memoria, se refiere a un animal, preferiblemente un mairnfero, lo mas preferiblemente un ser humano, que es o ha sido objeto de tratamiento, observacion o experimento.
El termino "cantidad terapeuticamente eficaz", segun se usa en la presente memoria, significa la cantidad de compuesto o agente farmaceutico activo que provoca la respuesta biologica o medica en un sistema tisular, un animal o un ser humano que esta siendo buscada por un investigador, veterinario, medico u otro profesional clrnico, que incluye el alivio de los srntomas de la enfermedad o el trastorno que se esta tratando.
Segun se usa en la presente memoria, se entiende que el termino "composicion" abarca un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, asf como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.
Anteriormente y posteriormente en la presente memoria, se entiende que el termino "compuesto de Formula (I)" incluye sus sales por adicion, sus solvatos y sus estereoisomeros.
Los terminos "estereoisomeros" o "formas estereoqrnmicamente isomeras", anteriormente y posteriormente en la presente memoria, se usan intercambiablemente.
La invencion incluye todos los estereoisomeros del compuesto de Formula (I) bien como un estereoisomero puro o bien como una mezcla de dos o mas estereoisomeros.
Los enantiomeros son estereoisomeros que son imagenes especulares que no son superponibles entre su Una mezcla 1:1 de un par de enantiomeros es un racemato o mezcla racemica.
Los diastereomeros (o diastereoisomeros) son estereoisomeros que no son enantiomeros, es decir no se relacionan como imagenes especulares. Si un compuesto contiene un doble enlace, los sustituyentes pueden estar en la configuracion E o Z. Si un compuesto contiene un grupo cicloalquilo disustituido, los sustituyentes pueden estar en la configuracion cis o trans. Por lo tanto, la invencion incluye enantiomeros, diastereomeros, racematos, isomeros E, isomeros Z, isomeros cis, isomeros trans y sus mezclas.
La configuracion absoluta se especifica segun el sistema de Cahn-Ingold-Prelog. La configuracion en un atomo asimetrico se especifica bien por R o bien por S. Los compuestos resueltos cuya configuracion absoluta no se conoce se pueden designar por (+) o (-) dependiendo de la direccion en la que hacen girar luz polarizada en un plano.
Cuando se identifica un estereoisomero espedfico, esto significa que dicho estereoisomero esta sustancialmente libre, es decir asociado con menos de 50%, preferiblemente menos de 20%, mas preferiblemente menos de 10%, aun mas preferiblemente menos de 5%, en particular menos de 2% y lo mas preferiblemente menos de 1%, de los otros isomeros. Asi, cuando un compuesto de Formula (I) se especifica, por ejemplo, como (R)-, esto significa que el compuesto esta sustancialmente libre del isomero (S); cuando un compuesto de Formula (I) se especifica, por ejemplo, como E, esto significa que el compuesto esta sustancialmente libre del isomero Z; cuando un compuesto de Formula (I) se especifica, por ejemplo, como cis, esto significa que el compuesto esta sustancialmente libre del isomero trans.
Los compuestos de Formula (I) coexisten en un equilibrio dinamico con los tautomeros de Formula (I-1).
Por otra parte, algunas de las formas cristalinas de los compuestos de la presente invencion pueden existir como polimorfos y como tales se entiende que estan incluidos en la presente invencion. Ademas, algunos de los compuestos de la presente invencion pueden formar solvatos con agua (es decir, hidratos) o disolventes organicos comunes, y se entiende que tales solvatos tambien estan abarcados dentro de esta invencion
Para el uso en medicina, las sales de los compuestos de esta invencion se refieren a "sales farmaceuticamente aceptables" atoxicas. Sin embargo, otras sales pueden ser utiles en la preparacion de compuestos segun esta invencion o de sus sales farmaceuticamente aceptables. Sales farmaceuticamente aceptables adecuadas de los
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compuestos incluyen sales por adicion de acidos que, por ejemplo, se pueden formar al mezclar una solucion del compuesto con una solucion de un acido farmaceuticamente aceptable tal como acido clorlmdrico, acido sulfurico, acido fumarico, acido maleico, acido sucdnico, acido acetico, acido benzoico, acido citrico, acido tartarico, acido carbonico o acido fosforico. Por otra parte, cuando los compuestos de la invencion soportan un resto acido, sales 5 farmaceuticamente aceptables de los mismos pueden incluir sales de metales alcalinos, p. ej., sales sodicas o potasicas; sales de metales alcalinoterreos, p. ej., sales calcicas y magnesicas; y sales formadas con ligandos organicos adecuados, p. ej., sales de amonio cuaternario.
Acidos representativos que se pueden usar en la preparacion de sales farmaceuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: acido acetico, acido 2,2-dicloroacetico, aminoacidos acilados, acido adfpico, acido 10 algmico, acido ascorbico, acido L-aspartico, acido bencenosulfonico, acido benzoico, acido 4-acetamidobenzoico, acido (+)-canforico, acido canforsulfonico, acido caprico, acido caproico, acido capnlico, acido cinamico, acido citrico, acido ciclamico, acido etano-1,2-disulfonico, acido etanosulfonico, acido 2-hidroxi-etanosulfonico, acido formico, acido fumarico, acido galactarico, acido gentisico, acido glucoheptonico, acido D-gluconico, acido D- glucuronico, acido L-glutamico, acido 13-oxo-glutarico, acido glicolico, acido hipurico, acido bromlmdrico, acido 15 clorlmdrico, acido (+)-L-lactico, acido (±)-DL-lactico, acido lactobionico, acido maleico, acido (-)-L-malico, acido
malonico, acido (±)-DL-mandelico, acido metanosulfonico, acido naftaleno-2-sulfonico, acido naftaleno-1,5- disulfonico, acido 1-hidroxi-2-naftoico, acido nicotmico, acido n^trico, acido oleico, acido orotico, acido oxalico, acido palmftico, acido pamoico, acido fosforico, acido L-piroglutamico, acido salicilico, acido 4-amino-salidlico, acido sebacico, acido estearico, acido sucdnico, acido sulfurico, acido tanico, acido (+)-L-tartarico, acido tiocianico, acido 20 p-toluenosulfonico, acido trifluorometilsulfonico y acido undecilenico. Bases representativas que se pueden usar en la preparacion de sales farmaceuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: amomaco, L- arginina, benetamina, benzatina, hidroxido calcico, colina, dimetiletanolamina, dietanolamina, dietilamina, 2- (dietilamino)-etanol, etanolamina, etilendiamina, W-metil-glucamina, hidrabamina, 1H-imidazol, L-lisina, hidroxido magnesico, 4-(2-hidroxietil)-morfolina, piperacina, hidroxido potasico, 1-(2-hidroxietil)-pirrolidina, amina secundaria, 25 hidroxido sodico, trietanolamina, trometamina e hidroxido de cinc.
Los nombres qrnmicos de los compuestos de la presente invencion se generan segun las reglas de nomenclatura acordadas por the Chemical Abstracts Service. Algunos de los compuestos segun la formula (I) tambien pueden existir en su forma tautomera. Se entiende que tales formas, aunque no se indiquen explfcitamente en la formula anterior, estan incluidas dentro del alcance de la presente invencion.
30 A. Preparacion de los compuestos finales
Procedimiento experimental 1
Los compuestos finales segun la Formula (I) se pueden preparar al hacer reaccionar un compuesto intermedio de Formula (II) con una fuente apropiada de amomaco tal como, por ejemplo, hidroxido amonico o amomaco acuoso, segun el esquema de reaccion (1), una reaccion que se realiza en un disolvente inerte para la reaccion adecuado, tal 35 como, por ejemplo, agua o metanol, bajo condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a de 60 a 90°C, por ejemplo durante de 4 a 100 horas. En el esquema de reaccion (1), todas las variables se definen como en la Formula (I).
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Esquema de Reaccion 1
40 Procedimiento experimental 2
Los compuestos finales segun la Formula (I-a) en la que L es -N(R5)CO- se pueden preparar al hacer reaccionar un compuesto intermedio de Formula (III-a) con un producto intermedio de Formula (IV) segun el esquema de reaccion (2), una reaccion que se realiza en un disolvente inerte para la reaccion adecuado, tal como, por ejemplo, N,N- dimetilformamida, en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, K3PO4, un catalizador de cobre tal 45 como, por ejemplo, CuI, y una diamina tal como, por ejemplo, (1R,2R)-(-)-1,2-diaminociclohexano, bajo condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a 180°C, por ejemplo durante 135 min., bajo
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irradiacion de microondas. En el esquema de reaccion (2), todas las variables se definen como en la Formula (I) y W es halo.
imagen3
Procedimiento experimental 3
Adicionalmente, los compuestos finales segun la Formula (I-a) se pueden preparar al hacer reacciona un compuesto intermedio de Formula (III-b) con un producto intermedio de Formula (V) segun el esquema de reaccion (3), una reaccion que se realiza en un disolvente inerte para la reaccion adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano o metanol, opcionalmente en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, W,A/-diisopropiletilamina, en presencia de un agente de condensacion tal como, por ejemplo, hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)- N,N,N',N'-tetrametiluronio o cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio, bajo condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a 25°C, por ejemplo durante 2 horas. En el esquema de reaccion (3), todas las variables se definen como en la Formula (I).
imagen4
Procedimiento experimental 4
Adicionalmente. los compuestos finales segun la Formula (I-a) se pueden preparar al hacer reaccionar un compuesto intermedio de Formula (III-b) con un producto intermedio de Formula (VI) segun el esquema de reaccion (4), una reaccion que se realiza en un disolvente inerte para la reaccion adecuado, tal como, por ejemplo, diclorometano, en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, piridina, bajo condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a 25°C, por ejemplo durante 2 horas. En el esquema de reaccion (4), todas las variables se definen como en la Formula (I) e Y es halo.
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Esquema de Reaccion 4 6
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Procedimiento experimental 5
Los compuestos finales segun la Formula (I-b) en la que L es un enlace se pueden preparar al hacer reaccionar un compuesto intermedio de Formula (III-a) con un producto intermedio de Formula (VII) segun el esquema de reaccion (5), una reaccion que se realiza en un disolvente inerte para la reaccion adecuado, tal como, por ejemplo, mezclas de disolventes inertes tales como, por ejemplo, 1,4-dioxano/etanol, en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, K2CO3, un catalizador de complejo de Pd tal como, por ejemplo, tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0), bajo condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a 80°C, por ejemplo durante 20 horas, o por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a 150°C, durante de 10 min. a 30 min. bajo irradiacion de microondas. En el esquema de reaccion (5), todas las variables se definen como en la Formula (I) y W es halo. R6 y R7 pueden ser hidrogeno o alquilo, o se pueden tomar juntos para formar, por ejemplo, un radical bivalente de Formula -CH2CH2-, -CH2CH2CH2- o-C(CH3)2C(CH3)2-.
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Procedimiento experimental 6
Los compuestos finales segun la Formula (I-c) en la que R1 es hidrogeno se pueden preparar a partir de los compuestos finales correspondientes de Formula (I-d) en la que R1 se selecciona del grupo que consiste en cloro, bromo y yodo, siguiendo procedimientos de reduccion conocidos en la tecnica segun el esquema de reaccion (6). Por ejemplo, dicha reduccion se puede llevar a cabo al agitar los reaccionantes bajo una atmosfera de hidrogeno y en presencia de un catalizador apropiado tal como, por ejemplo, paladio sobre carbon vegetal, platino sobre carbon vegetal, mquel Raney y catalizadores similares. Disolventes adecuados son, por ejemplo, agua, alcanoles, p. ej. metanol, etanol y similares, esteres, p. ej. acetato de etilo y similares. A fin de aumentar la velocidad de dicha reaccion de reduccion, puede ser ventajoso elevar la temperatura y/o la presion de la mezcla de reaccion. La hidrogenacion adicional no deseada de ciertos grupos funcionales en los reaccionantes y los productos de reaccion se puede prevenir mediante la adicion de un veneno del catalizador, tal como, por ejemplo, tiofeno y similares, a la mezcla de reaccion. En el esquema de reaccion (6), todas las variables se definen como en la Formula (I).
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Un numero de productos intermedios y materias primas en las preparaciones precedentes son compuestos conocidos que se pueden preparar segun metodologfas conocidas en la tecnica para preparar dichos compuestos o similares y algunos productos intermedios son nuevos. Un numero de tales metodos de preparacion se describira posteriormente en la presente memoria con mas detalle.
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B. Preparacion de los compuestos intermedios Procedimiento experimental 7
Los productos intermedios segun la Formula (II) se pueden preparar al hacer reaccionar un compuesto intermedio de Formula (VIII) con un reactivo donante de azufre adecuado para la smtesis de tioamidas tal como, por ejemplo, pentasulfuro de fosforo o 2,4-disulfuro de 2,4-bis-(4-metoxifenil)-1,3-ditia-2,4-difosfetano [reactivo de Lawesson] segun el esquema de reaccion (7), una reaccion que se realiza en un disolvente inerte para la reaccion, tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano o tolueno, en presencia de una base adecuada tal como, por ejemplo, piridina, bajo condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a 100°C, por ejemplo durante 5 horas. En el esquema de reaccion (7), todas las variables se definen como en la Formula (I).
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Procedimiento experimental 8
Los productos intermedios segun la Formula (VIII-a) en la que L es un enlace se pueden preparar al hacer reaccionar un compuesto intermedio de Formula (IX-a) con un producto intermedio de Formula (VII) segun el esquema de reaccion (8), una reaccion que se realiza en una mezcla adecuada de disolventes inertes tales como, por ejemplo, 1,4-dioxano/agua, en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, Na2CO3 acuoso, un catalizador de complejo de Pd tal como, por ejemplo, tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0), bajo condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a 80°C, por ejemplo durante 20 horas o, por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a 150°C, por ejemplo durante de 15 a 30 min., bajo irradiacion de microondas. En el esquema de reaccion (8), todas las variables se definen como en la Formula (I) y W es halo. R6 y R7 pueden ser hidrogeno o alquilo, o se pueden tomar juntos para formar, por ejemplo, un radical bivalente de Formula -CH2CH2-, -CH2CH2CH2- o -C(CH3)2C(CH3)2-.
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Procedimiento experimental 9
Los productos intermedios segun la Formula (III-b) se pueden preparar a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Formula (III-a) siguiendo procedimientos de acoplamiento de tipo Buchwald-Hartwig conocidos en la tecnica segun el esquema de reaccion (9). Dicho acoplamiento se puede efectuar mediante el tratamiento de compuestos intermedios de Formula (III-a) con un producto intermedio de Formula (X) en un disolvente inerte para la reaccion adecuado, tal como, por ejemplo, etanol o mezclas de disolventes inertes tales como 1,2- dimetoxietano/agua/ etanol, en presencia de una base adecuada, tal como, por ejemplo, K3PO4 o Cs2CO3 acuosos, un catalizador de complejo de Pd tal como, por ejemplo, [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]-dicloropaladio(II) o trans- diacetato de bis(diciclohexilamino)paladio [DAPCy] bajo condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentar la
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mezcla de reaccion a 80°C, por ejemplo durante 20 horas o, por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a 130°C, por ejemplo durante 10 min. bajo irradiacion de microondas. En el esquema de reaccion (9), todas las variables se definen como en la Formula (I) y W es halo. R5 es hidrogeno o alquilo C1-3. Alternativamente, cuando R5 es hidrogeno, se pueden obtener asimismo productos intermedios de Formula (III-b) siguiendo una smtesis en dos etapas. En primer lugar, se puede realizar un acoplamiento de tipo Buchwald-Hartwig, bajo las condiciones conocidas por el experto en la tecnica, entre el producto intermedio (Ill-a) y una imina estable tal como benzofenonaimina. En la segunda etapa, el producto intermedio (III-b) se puede obtener como una amina primaria al tratar el producto acoplado, disuelto en un disolvente adecuado, tal como isopropanol, con un acido, tal como, por ejemplo, acido clortndrico, bajo condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a 25°C, por ejemplo durante 2 horas.
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Procedimiento experimental 10
Adicionalmente, los productos intermedios segun la Formula (III-b) en la que R5 es hidrogeno se pueden preparar a partir de los correspondientes productos intermedios de Formula (III-c) siguiendo procedimientos de reduccion de nitro en amino conocidos en la tecnica segun el esquema de reaccion (10). Por ejemplo, dicha reduccion se puede efectuar convenientemente en presencia de un agente reductor apropiado tal como cloruro de estano, cinc o hierro, en un disolvente inerte adecuado tal como etanol o mezclas de solucion acuosa de etanol/acido acetico o metanol/cloruro amonico, bajo condiciones de reaccion adecuadas, tales como a una temperatura conveniente, que vana tfpicamente entre 70°C y 110°C, durante un penodo de tiempo que asegure la terminacion de la reaccion. El experto en la tecnica apreciara que en el caso de que R1 y/o R2 en el producto intermedio (III-c) sea un halogeno seleccionado del grupo de cloro, bromo y yodo, y no deseado en el compuesto final, bajo las condiciones descritas anteriormente, tambien se puede producir un procedimiento de adicion-protonacion oxidativa, para dar el producto intermedio (III-b), donde R1 y/o R2 es hidrogeno. Alternativamente, dicha reduccion se puede llevar a cabo al agitar los reaccionantes bajo una atmosfera de hidrogeno y en presencia de un catalizador apropiado tal como, por ejemplo, paladio sobre carbon vegetal, platino sobre carbon vegetal, mquel Raney y catalizadores similares. Disolventes adecuados son, por ejemplo, agua, alcanoles, p. ej. metanol, etanol y similares, esteres, p. ej. acetato de etilo y similares. A fin de aumentar la velocidad de dicha reaccion de reduccion, puede ser ventajoso elevar la temperatura y/o la presion de la mezcla de reaccion. La hidrogenacion adicional no deseada de ciertos grupos funcionales en los reaccionantes y los productos de reaccion se puede prevenir mediante la adicion de un veneno de catalizador tal como, por ejemplo, tiofeno y similares, a la mezcla de reaccion. En el esquema de reaccion (10), todas las variables se definen como en la Formula (I).
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Esquema de Reaccion 10
Procedimiento experimental 11
Los compuestos de Formula (III-a) y (III-c) se pueden preparar generalmente siguiendo las etapas de reaccion mostradas en los esquemas de reaccion (11) y (12) posteriormente.
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A: Conversion de tioamida en amidina 5 B: Conversion de amida en tioamida (tionacion)
C: Ciclacion
D: Retirada de cualquier grupo protector de N E: Metalacion
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Los derivados de amidina en el esquema de reaccion (11) anterior se pueden preparar convenientemente a partir de los correspondientes derivados de tioamida siguiendo procedimientos de conversion de tioamida en amidina conocidos en la tecnica (etapa de reaccion A). Dicha conversion se puede efectuar convenientemente mediante el tratamiento de dichas tioamidas con una fuente de amomaco tal como, por ejemplo, cloruro amonico o amomaco acuoso, en un disolvente inerte para la reaccion adecuado tal como, por ejemplo, agua o metanol y similares, bajo condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a de 60 a 90°C, por ejemplo durante de 6 a 100 horas.
Los derivados de tioamida en el esquema de reaccion (11) anterior se pueden preparar a partir de derivados de amida siguiendo procedimientos de tionacion conocidos en la tecnica (etapa de reaccion B). Dicha conversion se puede efectuar convenientemente mediante el tratamiento de dichas amidas con un agente de tionacion tal como, por ejemplo, pentasulfuro de fosforo o 2,4-disulfuro de 2,4-bis-(4-metoxi-fenil)-1,3-ditia-2,4-difosfetano [reactivo de Lawesson], bajo condiciones netas o en un disolvente inerte para la reaccion tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano o 1,4-dioxano y similares, opcionalmente en presencia de una base adecuada como piridina, bajo condiciones termicas tales como, por ejemplo, calentar la mezcla de reaccion a de 50 a 100°C, por ejemplo durante 24 horas.
Los derivados de amida de Formula (IX-a) y (IX-c) en el esquema de reaccion (11) anterior se pueden preparar a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Formula (XII-a) y (XII-c) siguiendo procedimientos de ciclacion conocidos en la tecnica (etapa de reaccion C). Dicha ciclacion se puede efectuar convenientemente mediante el tratamiento de compuestos intermedios de Formula (XII-a) y (XII-c) con una base adecuada, tal como acetato potasico, en un disolvente de reaccion adecuado, tal como, por ejemplo, etanol y similares, a de 70°C a 100°C, durante un penodo de tiempo que asegure la terminacion de la reaccion.
Los productos intermedios de Formula (IX-a) en la que R2 es hidrogeno se pueden preparar a partir de un producto intermedio de Formula (IX-a-1) en la que R2 es nitro, mediante la reduccion del grupo nitro al amino, seguido por una reaccion de diazotizacion-desaminacion.
Los productos intermedios de Formula (IX-a) en la que R2 es difluorometilo se pueden preparar a partir de un producto intermedio de Formula (IX-a-2) en la que R2 es alcoxicarbonilo, mediante la conversion del grupo ester en un aldehfdo mediante uno de los varios metodos conocidos por el experto en la tecnica, seguido por la reaccion del grupo aldehfdo con DAST.
Los compuestos intermedios de Formula (XII-a) y (XII-c) en el esquema de reaccion (11) anterior se pueden preparar a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Formula (XIII-a) y (XIII-c) mediante la retirada del grupo protector que se lleva a cabo segun procedimientos conocidos por el experto en la tecnica (etapa de reaccion D).
El compuesto intermedio de Formula (XIII-c) en el esquema de reaccion (11) anterior se puede preparar a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Formula (XIV-c) siguiendo procedimientos de metalacion conocidos en la tecnica (etapa de reaccion E). Dicha metalacion se puede efectuar convenientemente mediante el tratamiento de compuestos intermedios de Formula (XIV-c) con una base adecuada, tal como diisopropilamida de litio, y un electrofilo adecuado como hielo seco o cloroformiato de etilo, en un disolvente de reaccion adecuado, tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano, a de -80°C a 0°C, durante un penodo de tiempo que asegure la terminacion de la reaccion.
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F: Alquilacion
G: Oxidacion de oxatiazolidina 5 H: Formacion de oxatiazolidina
Los productos intermedios segun la Formula (Xlll-a) y (XIV-c) en el esquema de reaccion (12) anterior se pueden preparar a partir de los correspondientes compuestos intermedios de Formula (XVI-a) y (XVI-c), en las que Z1 es un grupo protector de aminas tal como, por ejemplo, el grupo ferc-butoxicarbonilo, siguiendo procedimientos de alquilacion conocidos en la tecnica (etapa de reaccion F). Dicha alquilacion se puede efectuar convenientemente 10 mediante el tratamiento de (XV-a) y (XV-c), respectivamente, con los correspondientes compuestos intermedios de Formula (XVI-a) y (XVI-c) con una base adecuada tal como, por ejemplo, carbonato sodico o carbonato de cesio, en un disolvente inerte adecuado tal como, por ejemplo, W,W-dimetilformamida o dimetoxisulfoxido, a temperatura baja tal como, por ejemplo, 0°C durante 30 min. y a continuacion a una temperatura moderadamente alta tal como, por ejemplo, 100°C durante de 24 horas a 100 horas o, por ejemplo, calentando la mezcla de reaccion a 130°C, por 15 ejemplo durante de 30 min. a 45 min., bajo irradiacion de microondas.
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Los productos intermedios segun la Formula (XVI-a) y (XVI-c) en el esquema de reaccion (12) anterior se pueden preparar al hacer reaccionar los compuestos intermedios de Formula (XVII-a) y (XVII-c) siguiendo procedimientos de oxidacion conocidos en la tecnica (etapa de reaccion G). Dicha oxidacion se puede efectuar convenientemente mediante el tratamiento de los correspondientes compuestos intermedios de Formula (XVII-a) y (XVII-c) con un agente oxidante tal como, por ejemplo, peryodato sodico en un disolvente inerte adecuado tal como, por ejemplo, acetonitrilo/agua, en presencia de cloruro de rutenio (III), a una temperatura moderadamente alta tal como, por ejemplo, 25°C, por ejemplo durante 2 horas.
Los productos intermedios segun la Formula (XVII-a) y (XVII-c) en el esquema de reaccion (12) anterior se pueden preparar al hacer reaccionar los compuestos intermedios de Formula (XVIII-a) y (XVIII-c) siguiendo procedimientos de formacion de sulfamidato conocidos en la tecnica (etapa de reaccion H). Dicha transformacion se puede efectuar convenientemente mediante el tratamiento de los correspondientes compuestos intermedios de Formula (XVIII-a) y (XVIII-c) con cloruro de tionilo, en presencia de una base tal como, por ejemplo, piridina, en un disolvente inerte para la reaccion adecuado, tal como, por ejemplo, acetonitrilo, a una temperatura baja tal como, por ejemplo, -40°C, por ejemplo durante 30 min., y a continuacion a una temperatura moderadamente alta tal como, por ejemplo, 25°C, por ejemplo durante de 24 a 72 horas.
Los compuestos intermedios de Formula (XVIII-a) y (XVIII-c) en las que Z1 es un grupo protector de aminas tal como, por ejemplo, el grupo ferc-butoxicarbonilo, generalmente se pueden preparar siguiendo procedimientos de tipo Strecker conocidos en la tecnica descritos en la bibliograffa.
Farmacologfa
Los compuestos de la presente invencion y sus composiciones farmaceuticamente aceptables inhiben BACE y por lo tanto pueden ser utiles en el tratamiento o la prevencion de la enfermedad de Alzheimer (AD), el deterioro cognitivo leve (MCI), la senilidad, la demencia, la demencia con cuerpos de Lewy, la angiopatfa amiloide cerebral, la demencia por multiples infartos, el smdrome de Down, la demencia asociada con enfermedad de Parkinson y la demencia asociada con amiloide U.
La invencion se refiere a un compuesto segun la Formula general (I), una de sus formas estereoisomeras o una de sus sales por adicion de acido o base farmaceuticamente aceptables o uno de sus solvatos, para el uso como un medicamento.
La invencion tambien se refiere a un compuesto segun la Formula general (I), una de sus formas estereoisomeras o una de sus sales por adicion de acido o base farmaceuticamente aceptables o uno de sus solvatos, para el uso en el tratamiento o la prevencion de enfermedades o afecciones seleccionadas del grupo que consiste en AD, MCI, senilidad, demencia, demencia con cuerpos de Lewy, angiopatfa cerebral amiloide, demencia por multiples infartos, smdrome de Down, demencia asociada con enfermedad de Parkinson y demencia asociada con amiloide U.
La invencion tambien se refiere al uso de un compuesto segun la Formula general (I), una de sus formas estereoisomeras o una de sus sales por adicion de acido o base farmaceuticamente aceptables o uno de sus solvatos, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la prevencion de una cualquiera de las afecciones patologicas mencionadas anteriormente en la presente memoria.
Composiciones farmaceuticas
La presente invencion tambien proporciona composiciones para prevenir o tratar enfermedades en las que es beneficiosa la inhibicion de U-secretasa, tales como la enfermedad de Alzheimer (AD), el deterioro cognitivo leve, la senilidad, la demencia, la demencia con cuerpos de Lewy, el smdrome de Down, la demencia asociada con apoplejfa, la demencia asociada con enfermedad de Parkinson y la demencia asociada con amiloide U, comprendiendo dichas composiciones una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto segun la Formula (I) y un excipiente o diluyente farmaceuticamente aceptable.
Aunque es posible que el ingrediente activo se administre solo, es preferible presentarlo como una composicion farmaceutica. Segun esto, la presente invencion proporciona ademas una composicion farmaceutica que comprende un compuesto segun la presente invencion, junto con un excipiente o diluyente farmaceuticamente aceptable. El excipiente o diluyente debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la composicion y no perjudicial para sus receptores.
Las composiciones farmaceuticas de esta invencion se pueden preparar mediante cualquier metodo bien conocido en la tecnica de la farmacia. Una cantidad terapeuticamente eficaz del compuesto particular, en forma de base o en forma de sal por adicion, como el ingrediente activo se combina en una mezcla mtima con un excipiente farmaceuticamente aceptable, que puede tomar una variedad de formas dependiendo de la forma de preparacion deseada para la administracion. Estas composiciones farmaceuticas estan deseablemente en una forma de dosificacion unitaria adecuada, preferiblemente, para administracion sistemica tal como administracion oral, percutanea o parenteral; o administracion topica tal como a traves de inhalacion, un aerosol nasal, gotas oculares o
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a traves de una crema, un gel, un champu o similares. Por ejemplo, al preparar las composiciones en forma de dosificacion oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmaceuticos adecuados, tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones lfquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires y soluciones; o excipientes solidos tales como almidones, azucares, caolm, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de polvos, pfldoras, capsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administracion, los comprimidos y las capsulas representan la forma de dosificacion unitaria mas ventajosa, en cuyo caso obviamente se emplean excipientes farmaceuticos solidos. Para composiciones parenterales, el excipiente habitualmente comprendera agua esteril, al menos en gran parte, aunque se pueden incluir otros ingredientes, por ejemplo, para favorecer la solubilidad. Por ejemplo, se pueden preparar soluciones inyectables en las que el excipiente comprende solucion salina, solucion de glucosa o una mezcla de solucion salina y de glucosa. Se pueden preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear excipientes ffquidos, agentes de suspension y similares apropiados. En las composiciones adecuadas para la administracion percutanea, el excipiente comprende opcionalmente un agente mejorador de la penetracion y/o un agente humectante adecuado, opcionalmente combinados con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones menores, aditivos que no provocan efectos perjudiciales significativos en la piel. Dichos aditivos pueden facilitar la administracion a la piel y/o pueden ser utiles para preparar las composiciones deseadas. Estas composiciones se pueden administrar de diversos modos, p. ej., como un parche transdermico, como una pipeta o como una pomada.
Es especialmente ventajoso formular las susodichas composiciones farmaceuticas en una forma de dosificacion unitaria para la facilidad de administracion y la uniformidad de dosificacion. Forma de dosificacion unitaria, segun se usa en la memoria descriptiva y las reivindicaciones presentes, se refiere a unidades ffsicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias, que contienen cada una una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapeutico deseado asociada con el excipiente farmaceutico requerido. Ejemplos de tales formas de dosificacion unitarias son comprimidos (incluyendo comprimidos ranurados y revestidos), capsulas, pfldoras, bolsitas de polvos, obleas, soluciones o suspensiones inyectables, cucharaditas, cucharadas y similares, y sus multiplos segregados.
La dosificacion exacta y la frecuencia de administracion dependen el compuesto de Formula (I) particular usado, la afeccion particular que se trata, la gravedad de la afeccion que se trata, la edad, el peso, el sexo, el alcance del trastorno y el estado ffsico general del paciente particular asf como otra medicacion que este tomando el individuo, como es bien conocido por los expertos en la tecnica. Por otra parte, es evidente que dicha cantidad diaria eficaz se puede disminuir o incrementar dependiendo de la respuesta del sujeto tratado y/o dependiendo de la evaluacion del medico que prescriba los compuestos de esta invencion.
Dependiendo del modo de administracion, la composicion farmaceutica comprendera de 0,05 a 99% en peso, preferiblemente de 0,1 a 70% en peso, mas preferiblemente de 0,1 a 50% en peso del ingrediente activo, y de 1 a 99,95% en peso, preferiblemente de 30 a 99,9% en peso, mas preferiblemente de 50 a 99,9% en peso de un excipiente farmaceuticamente aceptable, basandose todos los porcentajes en el peso total de la composicion.
Los presentes compuestos se pueden usar para administracion sistemica, tal como administracion oral, percutanea o parenteral; o administracion topica tal como a traves de inhalacion, un aerosol nasal, gotas oculares o a traves de una crema, un gel, un champu o similares. Preferiblemente, los compuestos se administran oralmente. La dosificacion exacta y la frecuencia de administracion dependen del compuesto segun la Formula (I) particular usado, la afeccion particular que se trata, la gravedad de la afeccion que se trata, la edad, el peso, el sexo, el alcance del trastorno y el estado ffsico general del paciente particular asf como otra medicacion que este tomando el individuo, como es bien conocido para los expertos en la tecnica. Por otra parte, es evidente que dicha cantidad eficaz se puede reducir o incrementar dependiendo de la respuesta del sujeto tratado y/o dependiendo de la evaluacion del medico que prescribe los compuestos de esta invencion.
La cantidad de un compuesto de Formula (I) que se puede combinar con un material excipiente para producir una sola forma de dosificacion puede variar dependiendo de la enfermedad tratada, la especie de mairfffero y el modo particular de administracion. Sin embargo, como una norma general, las dosis unitarias adecuadas para los compuestos de la presente invencion pueden contener, por ejemplo, preferiblemente, entre 0,1 mg y aproximadamente 1.000 mg del compuesto activo. Una dosis unitaria preferida esta entre 1 mg y aproximadamente 500 mg. Una unidad mas preferida esta entre 1 mg y aproximadamente 300 mg. Una dosis unitaria aun mas preferida esta entre 1 mg y aproximadamente 100 mg. Tales dosis unitarias se pueden administrar mas de una vez al dfa, por ejemplo, 2, 3, 4, 5 o 6 veces al dfa, pero preferiblemente 1 o 2 veces al dfa, de modo que la dosificacion total para un adulto de 70 kg este en el intervalo de 0,001 a aproximadamente 15 mg por kg de peso del sujeto por administracion. Una dosificacion preferida es de 0,01 a aproximadamente 1,5 mg por kg de peso del sujeto por administracion, y tal terapia se puede prolongar durante un numero de semanas o meses, y en algunos casos, anos. Sin embargo, se entendera que el nivel de dosis espedfico para cualquier paciente particular dependera de una variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto espedfico empleado; la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del individuo que se trata; el tiempo y la via de administracion; la velocidad de excrecion; otros farmacos que hayan sido administrados previamente; y la gravedad de la enfermedad particular sometida a terapia, como es bien entendido por los expertos en la materia.
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Puede ser necesario usar dosificaciones fuera de estos intervalos en algunos casos, como sera evidente para los expertos en la tecnica. Ademas, se apunta que el profesional clmico o el medico responsable sabra como y cuando iniciar, interrumpir, ajustar o terminar la terapia junto con la respuesta del paciente individual.
Se entiende que los siguientes ejemplos ilustran pero no limitar el alcance de la presente invencion.
Parte experimental
Posteriormente en la presente memoria, el termino "AcOH" significa acido acetico, "HCl" significa acido clortffdrico, "AcOEt" significa acetato de etilo, "DCM" significa diclorometano, "DIPE" significa eter diisoprc^lico, "DMF" significa W,W-dimetilformamida, "CO2" significa dioxido de carbono, "DMSO" significa dimetilsulfoxido, "Et2O" significa eter dietilico, "Et3N" significa trietilamina, "EtOH" significa etanol, "iPrOH" significa isopropanol, "iPrNH2" significa isopropilamina, "MeCN" significa acetonitrilo, "MeOH" significa metanol, "NaOH" significa hidroxido sodico, "NH4Cl" significa cloruro amonico, "NH3" significa amomaco, "NaHCO3" significa bicarbonato sodico, "NaHSO4" significa hidrogenosulfato sodico, "Na2CO3" significa carbonato sodico, "Na2SO4" significa sulfato sodico, "H2SO4" significa acido sulfurico, "MgSO4" significa sulfato magnesico, "CuI" significa yoduro de cobre, "TFA" significa acido trifuorometanosulfonico, "RuO2" significa oxido de rutenio, "DAST" significa trifluoruro de dietilaminoazufre, "DBU" significa 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno, "N2" significa nitrogeno, "CO2" significa dioxido de carbono, "ac." significa acuoso, "min." significa minutos, "p.f." significa punto de fusion, "rac." significa racemico, "Rt" significa tiempos de retencion, "THF" significa tetrahidrofurano, "SFC" cromatograffa de fluidos supercnticos.
Las reacciones asistidas por microondas se realizaron en un reactor en modo simple: reactor de microondas Emrys™ Optimizer (Personal Chemistry A.B., actualmente Biotage).
Las reacciones de hidrogenacion se realizaron en un hidrogenador de flujo continuo H-CUBE® de ThalesNano Nanotechnology Inc.
La cromatograffa en capa fina (TLC) se llevo a cabo sobre placas de gel de silice 60 F254 (Merck) usando disolventes de calidad para reactivos. La cromatograffa en columna abierta se realizo sobre gel de sflice, tamano de parffcula 60 A, malla = 230-400 (Merck) bajo tecnicas estandar. La cromatograffa en columna de desarrollo rapido se realizo usando cartuchos listos para conectar de Merck, sobre gel de silice irregular, tamano de parffcula 15-40 pm (columnas de desarrollo rapido desechables de capa normal) sobre un sistema SPOT o LAFLASH de Armen Instrument.
Las rotaciones opticas se midieron en un polanmetro 341 de Perkin-Elmer con una lampara de sodio y se presentaron como sigue: [a]° (A, c g/100 ml, disolvente, T°C).
Las reacciones de flujo se realizaron en un dispositivo modular R2+R4 de Vapourtec disponible comercialmente.
Para los productos intermedios clave, asf como algunos compuestos finales, la configuracion absoluta de los centros quirales (indicada como R y/o S) se establecio a traves de la comparacion con muestras de configuracion conocida, o el uso de tecnicas anaffticas adecuadas para la determinacion de la configuracion absoluta, tales como VCD (dicrofsmo circular vibratorio) o cristalograffa de rayos X. Cuando la configuracion absoluta en el centro quiral se desconoce, se designa arbitrariamente R*.
Ejemplos
A. Preparacion de los productos intermedios Ejemplo A1
Preparacion del producto intermedio A1: rac-2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propionitrilo
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Se anadio cianuro de trimetilsililo (20 g, 200 mmol) a una solucion agitada de 3-bromo-acetofenona (20 g, 100 mmol) y NH4Cl (11 g, 200 mmol) en NH3/MeOH (400 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 4 dfas. El disolvente se evaporo a vacfo y el residuo se recogio en AcOEt (100 ml). El solido se deparo por filtracion y el filtrado se evaporo a vacfo para dar el producto intermedio A1 (20 g, 86% de rendimiento), que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
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El producto intermedio A1 (20 g, 88,9 mmol) se disolvio en HCl/MeOH (500 ml). La mezcla se sometio a reflujo 5 durante 4 dfas. Despues de enfriar hasta temperatura ambiente, se anadieron AcOEt (100 ml) y H2O (100 ml) y la mezcla se extrajo con AcOEt (2 x 100 ml). Las capas acuosas combinadas se basificaron con una solucion de NH3 hasta pH = 8 y se extrajeron con AcOEt (5 x 100 ml). Las capas organicas combinadas se secaron (Na2SO4), se filtraron y el disolvente se evaporo a vado para dar el producto intermedio A2 (10,6 g, 46% de rendimiento) como un aceite. LCMS: 258 [M+H]+; R 3,77 min. (metodo 7).
10 El siguiente producto intermedio se preparo segun los procedimientos sinteticos descritos en los ejemplos A1 - A2: Ejemplo A3
Preparacion del producto intermedio A3: rac-ester mefflico de acido 2-amino-2-(3-nitro-fenil)-propionico
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A partir de rac-2-amino-2-(3-nitro-fenil)-propionitrilo. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; 15 AcOEt/eter de petroleo) para dar el producto intermedio 3 (63%). LCMS: 225 [M+H]+; Rt: 0,98 min. (metodo 9).
Ejemplo A4
Preparacion del producto intermedio A4: rac-2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propan-1-ol
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Se anadio gota a gota hidruro de litio y aluminio (1 M en THF; 22 ml, 22 mmol) a una solucion agitada del producto 20 intermedio A2 (7,5 g, 29,1 mmol) en THF (200 ml) a -15°C. Se dejo que la mezcla se calentara hasta 0°C durante 1 hora. Se anadio mas THF (150 ml) y se anadio gota a gota una solucion saturada de Na2SO4 hasta que no se formo mas hidrogeno. Se anadio Na2SO4 anhidro y se dejo agitando durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla se filtro sobre tierra diatomacea, se lavo con THF y el disolvente se evaporo a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; solucion 7 M de NH3 en MeOH/DCM). Las 25 fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio A4 (5,70 g, 85% de rendimiento) como un aceite. LCMS: 230 [M+H]+; Rt: 0,69 min. (metodo 1).
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Se anadio en porciones borohidruro sodico (16,3 g, 429,4 mmol) a una solucion agitada del producto intermedio A3 5 (48,3 g, 214,7 mmol) en MeOH (500 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 10 horas. El disolvente
se evaporo a vado. El residuo se basifico con una solucion acuosa saturada de NaHCO3 hasta pH = 9 y se extrajo con AcOEt (3 x 200 ml). Las capas organicas se secaron (Na2SO4), se filtraron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio A5 (30,26 g, 72% de rendimiento). LCMS: 197 [M+H]+; Rt: 3,16 min. (metodo 8); p. f. 238,7-241,6°C (WRS-2A).
10 Ejemplo A6
Preparacion del producto intermedio A6: (R)-2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propan-1-ol
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Una muestra de producto intermedio A4 (15,4 g) se separo en los enantiomeros correspondientes mediante SCF preparativa en (Chiralpak® Daicel AD x 250 mm). Fase movil (CO2, MeOH con iPrNH2 al 0,2%) para dar el producto 15 intermedio A6 (7,21 g, 40% de rendimiento). lCmS: 230 [M+H]+; Rt: 0,71 min. (metodo 1); ao: -14,9 ° (589 nm, c 0,2946% p/v, MeOH, 20°C).
Ejemplo A7
Preparacion del producto intermedio A7: (R)-ester ferc-butilico de acido [1-(3-bromo-fenil)-2-hidroxi-1-metil-etil]- carbamico
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Se anadio en porciones carbonato de di-ferc-butilo (19,8 g, 90,7 mmol) a una solucion agitada del producto intermedio A6 (11,6 g, 50,4 mmol) en una mezcla de solucion saturada de NaHCO3 (100 ml) y THF (100 ml) a 0°C. La mezcla se agito a 0°C durante 10 min. y a temperatura ambiente durante 15 horas. La mezcla se enfrio en un bano de hielo/H2O y se acidifico con agitacion hasta pH = 1-2 con NaHSO4. La capa organica se separo y la capa
25 ac. se extrajo adicionalmente con AcOEt. Las capas organicas combinadas se separaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna corta (gel de sflice; AcOEt/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vado para dar el producto intermedio A7 (16,47 g, 99% de rendimiento) como un aceite incoloro que se solidifico al reposar. LCMS: 330 [M+H]+; Rt: 2,58 min. (metodo 1).
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Preparacion del producto intermedio A8: (R)-[3-(terc-butiloxicarbonil)-4-(3-bromo-fenil)-4-metil-[1,1,3]oxatiazolidin-2- oxido
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Una solucion del producto intermedio A7 (14,3 g, 43,3 mmol) en MeCN seco (80 ml) se anadio gota a gota a una solucion agitada de cloruro de tionilo (7,9 ml, 108,3 mmol) en MeCN seco (226 ml) enfriada hasta -40°C y bajo una atmosfera de N2. La mezcla de reaccion se agito durante 30 min. a -40°C antes de que se anadiera piridina (17,4 ml, 216,5 mmol). Se dejo que la reaccion se calentara hasta temperatura ambiente y se agito durante 64 horas. Los disolventes se evaporaron a vado. El residuo se trato con Et2O. Los solidos se filtraron y el filtrado se concentro a vado para dar el producto intermedio A8 (15,5 g, 95% de rendimiento) como un aceite rojo. El producto se uso en la siguiente reaccion sin purificacion adicional. LCMS: 393 [M+NH4]+; Rt: 3,4 min. (metodo 1).
Ejemplo A9
Preparacion del producto intermedio A9: (R)-[3-(terc-butiloxicarbonil)-4-(3-bromo-fenil)-4-metil-[1,1,3]oxatiazolidin- 2,2-dioxido
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Se anadio cloruro de rutenio (III) (85 mg, 0,41 mmol) a una solucion del producto intermedio A8 (15,3 g, 40,8 mmol) en una mezcla de MeCN y H2O (1:1) (438 ml) a 0°C, seguido por la adicion de peryodato sodico (13,1 g, 61,2 mmol). Se dejo que la reaccion se calentara hasta temperatura ambiente y se agito durante 2 horas. La mezcla se filtro a traves de tierra diatomacea y se lavo con AcOEt (125 ml). Se anadieron al filtrado H2O (125 ml) y AcOEt (250 ml). La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio A9 (14,4 g, 90% de rendimiento) como un solido blanco. LCMS: 409 [M+NH4]+; Rt: 3,3 min. (metodo 1); p. f. 133,1°C (FP90); aD: -35,6 ° (589 nm, c 0,55 P/v%, DMF, 20°C).
El siguiente producto intermedio se preparo segun los procedimientos sinteticos descritos en los ejemplos A7 - A9: Ejemplo A10
Preparacion del producto intermedio A10: rac-[3-(terc-butiloxicarbonil)-4-(3-nitro-fenil)-4-metil-[1,1,3]oxatiazolidin-2,2- dioxido
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Preparado a partir de rac-[3-(terc-butiloxicarbonil)-4-(3-nitro-fenil)-4-metil-[1,1,3]oxatiazolidin-2-oxido. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; DCM) para dar el producto intermedio A10 como un solido amarillo (95%). LCMS: 376 [M+NH4]+; Rt: 1,35 min. (metodo 2).
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Preparacion del producto intermedio A11: ester etnico de acido 2-[2-(3-bromo-fenil)-2R-terc-butoxicarbonilamino- propil]-2H-pirazol-3-carboxflico
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Se anadio carbonato de cesio (824 mg, 2,53 mmol) a una mezcla del producto intermedio A9 (0,661 g, 1,69 mmol) y ester etilico de acido 2H-pirazol-3-carboxflico (260 mg, 1,86 mmol) en DMSO (8 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 30 min. y a 110°C durante 3 horas. La mezcla se trato con una solucion saturada de acido citrico y DCM (20 ml) y se agito durante 2 horas. La fase organica se separo y se trato con H2O (10 ml) y se extrajo con DCM (2 x 10 ml). La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio A11 (186 mg, 24% de rendimiento) como un aceite incoloro. LCMS: 452 [M+H]+; Rt: 4,23 min. (metodo 3).
Ejemplo A12
Preparacion del producto intermedio A12: rac-ester terc-butilico de acido [2-(4-bromo-pirazol-1-il)-1-metil-1-(3-nitro- fenil)-etil]-carbamico
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Se anadio carbonato sodico (59 mg, 0,56 mmol) a una mezcla del producto intermedio A10 (100 mg, 0,28 mmol) y 4- bromo-1H-pirazol (53 mg, 0,36 mmol) en DMF (3 ml). La mezcla se agito a 130°C durante 2 horas. El disolvente se evaporo a vado. El residuo se trato con H2O (2 ml) y se extrajo con DCM (2 x 10 ml). La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio A12 (100 mg, 84% de rendimiento) como un solido blanco despues del tratamiento con Et2O fno. LCMS: 425 [M+H]+; Rt: 3,57 min. (metodo 3); p. f. 159,3°C (FP 90).
Ejemplo A13
Preparacion del producto intermedio A13: (R)-ester etflico de acido 2-[2-amino-2-(3-bromo-fenil)-propil]-2H-pirazol-3- carboxflico
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Se anadio acido trifluoroacetico (1 ml) a una solucion agitada del producto intermedio A11 (186 mg, 0,41 mmol) en DCM (5 ml) a 0°C. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. Los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio A13 (180 mg, 94% de rendimiento) como un aceite incoloro que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. LCMS: 352 [M+H]+; Rt: 2,69 min. (metodo 3).
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rac-acido 4-bromo-2-[2-terc-butoxicarbonilamino-2-(3-nitro-fenil)-propil]-
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Una solucion 2 M de diisopropilamida de litio en THF y heptano (0,25 ml, 0,49 mmol) se anadio a una solucion de producto intermedio A12 (100 mg, 0,24 mmol) en THF (3 ml) a - 78°C. La mezcla de reaccion se agito a -78°C durante 1 hora. A continuacion, se anadio hielo seco y la mezcla se calento hasta temperatura ambiente a lo largo de 2 horas. La mezcla se trato con una solucion saturada de NH4Cl y se extrajo con DCM (3 x 10 ml). La capa organica se separo, se seco, se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio A14 (60 mg, 54% de rendimiento) como un aceite incoloro. LCMS: 469 [M+H]+; Rt: 1,74 min. (metodo 3).
Ejemplo A15
Preparacion del producto intermedio A15: (R)-6-(3-bromo-fenil)-6-metil-6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,5-a]piracin-4-ona
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Se anadio acetato potasico (83 mg, 0,85 mmol) a una solucion del producto intermedio A13 (180 mg, 0,39 mmol) en EtOH (5 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a 90°C durante 5 horas. El disolvente se evaporo a vado. El residuo se trato con una solucion ac. 0,5 M de HCl y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio A15 (100 mg, 84% de rendimiento) como un aceite incoloro. LCMS: 306 [M+H]+; Rt: 2,01 min. (metodo 4).
Ejemplo A16
Preparacion del producto intermedio A16: rac-3-bromo-6-metil-6-(3-nitro-fenil)-6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,5-a]piracin-4- ona
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Metodo A
Se anadio acido trifluoroacetico (3 ml) a una solucion del producto intermedio A14 (200 mg, 0,4 mmol) en DCM (20 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. A continuacion, se anadio acetato potasico (59 mg, 0,06 mmol) en EtOH (3 ml). La mezcla se agito a 90°C durante 3 horas. Los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se trato con una solucion ac. 1 M de HCl (10 ml) y el producto se extrajo con AcOEt (4 x 20 ml). La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones
deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio A16 (120 mg, 19% de rendimiento) como un solido blanco. LCMS: 351 [M+H]+; Rt: 2,45 min. (metodo 5); p. f. 285,3°C (FP 9o).
Metodo B
Se anadio acido trifluoroacetico (100 ml) a una solucion agitada del producto intermedio A23 (6,5 g, 13,07 mmol) en 5 DCM (200 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 3 horas. El disolvente se evaporo a vado, a continuacion se anadieron acetato potasico (1,924 g, 19,60 mmol) y EtOH (100 ml) y la reaccion se agito a reflujo durante 4 horas. El producto en bruto se evaporo a vado y el residuo se trato con una solucion ac. 1 M de HCl hasta pH = 3. El producto en bruto se extrajo con AcOEt (3 x 50 ml), la fase organica se evaporo hasta sequedad y el producto en bruto se trato con EtOH y Et2O fnos para proporcionar el producto intermedio A16 como 10 un solido beige. Los disolventes combinados se evaporaron a vado y se purificaron mediante cromatograffa en columna (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para proporcionar una partida adicional del producto intermedio A16 como un solido blanco (cantidad combinada 4 g, 87%). LCMS: 351 [M+H]+; Rt: 1,65 min. (metodo 3).
Ejemplo A17
15 Preparacion del producto intermedio A17: (R)-6-[3-(5-cloro-piridin-3-il)-fenil]-6-metil-6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,5- a]piracin-4-ona
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Se anadio tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (34 mg, 0,029 mmol) a una suspension agitada del producto intermedio A15 (90 mg, 0,29 mmol) y acido 5-cloropiridin-3-boronico (55 mg, 0,35 mmol) en una mezcla de 1,4-dioxano (5 ml) y 20 una solucion saturada de Na2CO3 (3 ml) a temperatura ambiente bajo N2. La mezcla se agito a 150°C durante 15 min. bajo irradiacion de microondas. Despues de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se diluyo con H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado y se lavaron con EtOH y Et2O fnos 25 para dar el producto intermedio A17 (81 mg, 81% de rendimiento) como un solido blanco. LCMS: 339 [M+H]+; Rt: 0,89 min. (metodo 2).
Ejemplo A18
Preparacion del producto intermedio A18: (R)-6-[3-(5-cloro-piridin-3-il)-fenil]-6-metil-6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,5- a]piracino-4-tiona
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Se anadio pentasulfuro de fosforo (71 mg, 0,32 mmol) a una solucion del producto intermedio A17 (90 mg, 0,27 mmol) en piridina (4 ml) y la mezcla se calento a 100°C durante 5 horas. El disolvente se evaporo a vado y el producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna corta (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio A18 (60 mg, 63% 35 de rendimiento) como un aceite amarillo. LCMS: 355 [M+H]+; Rt: 2,4 min. (metodo 3).
Los siguientes productos intermedios se prepararon segun los procedimientos sinteticos descritos en el ejemplo A18:
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5 Preparado a partir del producto intermedio A16. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de s^lice; MeOH/DCM) para dar el producto intermedio A19 como un solido amarillo (87%). LCMS: 366 [M+H]+; Rt: 2,37 min. (metodo 3).
Ejemplo A20
Preparacion del producto intermedio A20: rac-6-(3-amino-fenil)-3-bromo-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-4- 10 ilamina
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Se anadio solucion ac. al 32% de NH3 (3 ml) a una mezcla agitada del producto intermedio A19 (600 mg, 1,63 mmol) en una solucion 7 M de NH3 en MeOH (5 ml) en un tubo cerrado hermeticamente. La mezcla se agito a 60°C durante 4 horas. Despues de enfriar hasta temperatura ambiente, los disolventes se evaporaron a vado. El producto en 15 bruto se disolvio en EtOH (20 ml) y se anadio cloruro de estano(II) (372 mg, 1,96 mmol). La mezcla se agito a 90°C durante 24 horas. Despues de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se filtro a traves de celita y el disolvente se evaporo a vado. El residuo se trato con una solucion ac. al 8% de NaOH (10 ml) y se extrajo con DCM (30 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. La capa organica se separo, se seco (Na2SO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna 20 de desarrollo rapido (gel de silice; solucion 7 M de NH3 en MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio A20 (200 mg, 38% de rendimiento) como un aceite amarillo. LCMS: 320 [M+H]+; Rt: 1,5 min. (metodo 6).
Ejemplo A21
Preparacion del producto intermedio A20: rac-6-(3-amino-fenil)-3-bromo-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-4- 25 ilamina y el producto intermedio A21: rac-3-bromo-6-metil-6-(3-nitro-fenil)-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-4-ilamina
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Se anadio una solucion ac. al 32% de NH3 (4 ml) a una mezcla agitada del producto intermedio A19 (3,8 g, 10,35 mmol) en una solucion 7 M de NH3 en MeOH (6 ml) en un tubo cerrado hermeticamente. La mezcla se agito a 100°C durante 6 horas. Despues de enfriar hasta temperatura ambiente, los disolventes se evaporaron a vado. El producto 30 en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado y el producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; solucion 7 M de NH3 en MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio 20 (100 mg, 3% de rendimiento), el producto intermedio 21 (200 mg, 6% de rendimiento) y una fraccion que contema una 35 mezcla de producto intermedio 20 y 21 (2,5 g). LCMS: A20: 322 [M+H]+, Rt: 0,87 min. (metodo 3); A21: 350 [M+H]+; Rt: 0,95 min. (metodo 2)
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Metodo A
Una solucion del producto intermedio A20 (200 mg, 0,62 mmol) en MeOH (30 ml) y Et3N (5 ml) se hidrogeno en un reactor H-Cube (1,2 ml/min, cartucho de 30 mm de paladio sobre carbono 10%, modo lleno de hidrogeno, 50°C, 3 ciclos). Los disolventes se concentraron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; solucion 7 M de NH3 en MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio 22 (100 mg, 66% de rendimiento) como un solido blanco. LCMS: 415 [M+H]+; Rt: 1,58 min. (metodo 3).
Metodo B
Se anadio cinc (1,33 g, 20,40 mmol) a la fraccion que contema una mezcla de los productos intermedios 20 y 21 descritos en el Ejemplo A21 (2,5 g, 7,46 mmol) en EtOH (100 ml) y AcOH (20 ml). La mezcla se agito a reflujo durante 24 horas. Despues de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se filtro a traves de celita y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; solucion 7 M de NH3 en MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el producto intermedio 22 (0,93 g, 52% de rendimiento) como un aceite amarillo que precipita al reposar.
Los siguientes productos intermedios se prepararon segun el procedimiento sintetico descrito en el ejemplo A14, usando cloroformiato de etilo en lugar de hielo seco:
Ejemplo A23
Preparacion del producto intermedio A23: rac-ester efflico de acido 4-bromo-2-[2-terc-butoxicarbonilamino-2-(3- nitrofenil)-propil]-2H-pirazol-3-carboxflico
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Preparado a partir del producto intermedio A12. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; AcOEt/heptano) para dar el producto intermedio A23 (65%). LCMS: 499 [M+H]+; Rt: 4,09 min. (metodo 3).
Ejemplo A24
Preparacion del producto intermedio A24: rac-ester ferc-bufflico de acido [1-metil-1-(3-nitro-fenil)-2-(3-trifluoro- metilpirazol-1-il)-etil]-carbamico
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Se anadio el producto intermedio A10 (2,5 g, 6,976 mmol) a una solucion agitada de 3-(trifluorometil)pirazol (1,234 g, 9,069 mmol) y carbonato potasico (1,928 g, 13,952 mmol) en DMF (175 ml) a temperatura ambiente. A continuacion,
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la mezcla se calento a 110°C durante 2 horas. El disolvente se evaporo y el residuo se trato con una solucion saturada de acido citrico (80 ml) y AcOEt (160 ml). La mezcla se agito durante 1 hora a temperatura ambiente. La capa organica se separo, se seco y se evaporo a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de s^lice; DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se evaporaron a vado para dar un aceite transparente, que, despues del tratamiento con Et2O fffo y reposo, precipito como un solido blanco (2 g, 69%).
Ejemplo A25
Preparacion del producto intermedio A25: rac-ester efflico de acido 2-[2-terc-butoxicarbonilamino-2-(3-nitrofenil)- propil]-5-trifluorometil-2H-pirazol-3-carbox^lico
imagen38
Preparado a partir del producto intermedio A24. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; AcOEt/heptano) para dar el producto intermedio A25 (51%). LCMS: 487 [M+H]+; Rt: 4,22 min. (metodo 3).
El siguiente producto intermedio se preparo segun el procedimiento sintetico descrito en el ejemplo A16 - Metodo B: Ejemplo A26
Preparacion del producto intermedio A26: rac-6-metil-6-(3-nitro-fenil)-2-trifluorometil-6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,5- a]piracin-4-ona
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Preparado a partir del producto intermedio A25. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM) para dar el producto intermedio A26 como un solido blanco (93%). LCMS: 339 [M-H]-; Rt: 2,21 min. (metodo 3). El siguiente producto intermedio se preparo segun el procedimiento sintetico descrito en el ejemplo A18 - A21:
Ejemplo A27
Preparacion del producto intermedio A27: rac-6-metil-6-(3-nitro-fenil)-2-trifluorometil-6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,5- a]piracina-4-tiona
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Preparado a partir del producto intermedio A26. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM) para dar el producto intermedio A27 como un solido amarillo (95%). LCMS: 355 [M-H]-; Rt: 1,29 min. (metodo 2).
5
Preparados a partir del producto intermedio A27. Cromatografia en columna de desarrollo rapido (gel de since; MeOH/DCM) para dar el producto intermedio A28 (16%) y el producto intermedio A29 (59%). LCMS: a28: 308 [M-H]; Rt: 0,77 min. (metodo 2); A29: 338 [M-H]"; Rt: 2,28 min. (metodo 3),
Ejemplo A29
10 Preparacion del producto intermedio A28: rac-6-(3-amino-fenil)-6-metil-2-trifluorometil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5- a]piracin-4-ilamina
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Se anadio hierro (272 mg, 4,87 mmol) a una mezcla del producto intermedio 29 (340 mg, 1 mmol) y NH4Cl (100 mg) en MeOH (20,4 ml) y H2O (6,8 ml). La reaccion se agito a 80°C durante 5 horas. El producto en bruto se enfrio y se 15 filtro sobre celita y el disolvente se evaporo a vacfo. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; solucion 7 M de NH3 en MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vacfo para proporcionar el producto intermedio 28 como un aceite transparente (260 mg, 84% de rendimiento). LCMS: 310 [M+H]+; Rt: 2,50 min. (metodo 5).
El siguiente producto intermedio A30 se preparo segun los procedimientos sinteticos descritos en los ejemplos A1 - 20 A4:
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Ejemplo A30
Preparacion del producto intermedio A30: rac-2-amino-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-propan-1-ol, el producto intermedio A31: (R)-2-amino-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-propan-1-ol y el producto intermedio A32 (S) (S)-2-amino-2-(5-bromo-2- fluoro-fenil)-propan-1-ol:
25
Preparados a partir de 1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-etanona.
Este material racemico se purifico adicionalmente mediante SFC preparativa en Chiralpak Diacel AD 20 pm (2.000 g), fase movil (heptano al 70%, EtOH al 30% con Et3N al 0,1%). Las fracciones deseadas para cada enantiomero se recogieron y se concentraron a vacfo para dar el producto intermedio A31 (44%) y el producto intermedio A32 (44%).
30 El siguiente producto intermedio se preparo segun los procedimientos sinteticos descritos en los ejemplo A7 - A12:
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5
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15
20
25
Preparacion del producto intermedio A33: (R)-[ester ferc-butflico de acido 1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(4-fluoro- pirazol-1-il)-1-metil-etil]-carbamico
imagen44
Preparado a partir del producto intermedio A31. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; AcOEt/heptano) para dar el producto intermedio A33 como un aceite transparente (55%). LCMS: 418 [M+H]+; Rt: 1,57 min. (metodo 2).
El siguiente producto intermedio se preparo segun el procedimiento sintetico descrito en el ejemplo A25:
Ejemplo A32
Preparacion del producto intermedio A34: ester etflico de acido (R)-2-[2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2- tercbutoxicarbonilamino-propil]-4-fluoro-2H-pirazol-3-carboxflico
imagen45
Preparado a partir del producto intermedio A33. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; AcOEt//heptano) para dar el producto intermedio A34 como un aceite transparente (67%). LCMS: 490 [M+H]+; Rt: 1,71 min. (metodo 2).
El siguiente producto intermedio se preparo segun el procedimiento sintetico descrito en el ejemplo A16 - Metodo B: Ejemplo A33
Preparacion del producto intermedio A35: (R)-6-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-3-fluoro-6-metil-6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,5- a]piracin-4-ona
imagen46
Preparado a partir del producto intermedio A34. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM) para dar el producto intermedio A35 como un aceite (90%). LCMS: 343 [M+H]+; Rt: 0,96 min. (metodo 2).
El siguiente producto intermedio se preparo segun el procedimiento sintetico descrito en el ejemplo A18:
imagen47
5 Preparado a partir del producto intermedio A35. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de s^lice; MeOH/DCM) para dar el producto intermedio A36 como un solido amarillo (85%). LCMS: 360 [M+H]+; Rt: 1,19 min. (metodo 2).
Ejemplo A35
Preparacion del producto intermedio A37: (R)-6-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-3-fluoro-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5- 10 a]piracin-4-ilamina
imagen48
Se anadieron solucion ac. al 32% de NH3 (1,5 ml) y una solucion 7 M de NH3 en MeOH (3 ml) al producto intermedio A36 (330 mg, 0,921 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a 100°C en un tubo cerrado hermeticamente durante 6 horas, y a continuacion, despues de enfriar, el disolvente se retiro a vado. El material en bruto se purifico 15 mediante cromatograffa en columna (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron para proporcionar el producto intermedio A37 como un aceite transparente (260 mg, 83%). LCMS: 343 [M+H]+; Rt: 1,03 min. (metodo 2).
Ejemplo A36
Preparacion del producto intermedio A38: (R)-6-[5-(benzhidriliden-amino)-2-fluoro-fenil]-3-fluoro-6-metil-6,7-dihidro- 20 pirazolo[1,5-a]piracin-4-ilamina
imagen49
Se anadio tolueno (58 ml) a una mezcla del producto intermedio A37 (3 g, 8,178 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio (749 mg, 0,818 mmol), 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo (1,528 g, 2,453 mmol) y ferc-butoxido sodico (1,415 g, 14,72 mmol) en un tubo cerrado hermeticamente bajo N2 a temperatura ambiente. La 25 mezcla se barrio con N2 durante unos pocos min. y a continuacion se anadio benzofenonaimina (2,745 ml, 16,356 mmol) y la mezcla se agito a 90°C durante 18 horas. La mezcla se concentro a vacfo y a continuacion la mezcla se diluyo con H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y el disolvente se concentro a vacfo. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vacfo para dar el producto 30 intermedio A38 como un solido amarillo claro (3 g, 83%). LCMS: 442 [M+H]+; Rt: 1,39 min. (metodo 2).
imagen50
5 Se anadio HCl al 37% (1,05 ml) a una solucion del producto intermedio A38 (3 g, 6,795 mmol) en iPrOH (78 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se concentro y a continuacion se trituro con Et2O. El solido se separo por filtracion y se recogio en iPrOH. Se anadio a esto NaHcO3 (5,709 g) y la mezcla se agito durante 1 hora, a continuacion se filtro y el filtrado se concentro a vado. El producto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y 10 se concentraron a vado para dar un aceite amarillo claro. El material se trato con una mezcla de DIPE/Et2O 3:1 para proporcionar el producto intermedio A39 como un solido amarillo (1,1 g, 58%). LCMS: 278 [M+H]+; Rt: 0,56 min. (metodo 2).
Ejemplo A38
Preparacion del producto intermedio A40: ester bendlico de acido (3-acetil-4-fluoro-fenil)-carbamico
15
imagen51
Se anadio cloroformiato de bencilo (3 ml, 21,5 mmol) a una mezcla de 1-(5-amino-2-fluorofenil)etanona (3 g, 19,6 mmol) y bromuro de tetrabutilamonio a temperatura ambiente. La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 24 horas, el producto en bruto se trato con AcOEt (50 ml) y H2O (50 ml), la fase organica se separo y se evaporo a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna (gel de sflice; MeOH/DCM). Las 20 fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para proporcionar el producto intermedio A40 como un solido de color crema (4,7 g, 84%). LCMS: 286 [M-H]"; Rt: 2,81 min. (metodo 3).
El siguiente producto intermedio se preparo segun el procedimiento sintetico descrito para la smtesis del producto intermedio A11:
Ejemplo A39
25 Preparacion del producto intermedio A41: rac-ester efflico de acido {3-[2-(4-bromo-pirazoM-il)-1-ferc- butoxicarbonilamino-1-metil-etil]-4-fluoro-fenil}-carbamico
imagen52
Preparado a partir del producto intermedio A40. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; AcOEt/heptano) seguido por lavado con DIPE para dar el producto intermedio A41 como un solido blanco (72%). 30 LCMS: 487 [M+H]+; Rt: 3,56 min. (metodo 3).
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Se anadio diisopropilamida de litio (2 M en ciclohexano/etilbenceno/THF, 7,36 ml, 14,721 mmol) a una solucion agitada del producto intermedio A41 (2,1 g, 4,327 mmol) en THF seco (66 ml) a -70°C bajo atmosfera de N2. La mezcla se agito a -70°C durante 1 hora, a continuacion se anadio cloroformiato de etilo (0,91 ml, 9,519 mmol) a -70°C y la reaccion se calento a -30°C durante 2 horas. El producto en bruto se desactivo con una solucion saturada de NH4Cl (30 ml) a -50°C y se calento hasta temperatura ambiente, el producto en bruto se extrajo con AcOEt (3 x 20 ml), la fase organica se evaporo a vacfo, se seco, el producto en bruto resultante se purifico mediante cromatografia en columna de desarrollo rapido (gel de silice; AcOEt/heptano). Las fracciones deseadas se recogieron y se evaporaron a vacfo para dar el producto intermedio A42 (1,6 g, 59%). LCMS: 631 [M+H]+; Rt: 4,22 min. (metodo 3).
El siguiente producto intermedio se preparo segun el procedimiento sintetico descrito en el Ejemplo A16 - Metodo B: Ejemplo A41
Preparacion del producto intermedio A43: rac-W-[3-(3-bromo-6-metil-4-oxo-5,7-dihidropirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4- fluoro-fenil]-N-etoxicarbonil-carbamato de etilo y el producto intermedio A44: rac-W-[3-(3-bromo-6-metil-4-oxo-5,7- dihidropirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]carbamato de etilo
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Preparados a partir del producto intermedio A42. Cromatografia en columna de desarrollo rapido (gel de silice; AcOEt/heptano) para dar el producto intermedio A43 como un solido blanco (52%) y el producto intermedio A44 como un solido color crema (20%). LCMS: A43: 485 [M+H]+; Rt: 2,15 min. (metodo 3); A44: 413 [M+H]+; Rt: 0,98 min. (metodo 2)
El siguiente producto intermedio se preparo segun el procedimiento sintetico descrito en el ejemplo A18:
Ejemplo A42
Preparacion del producto intermedio A45: rac-A/-[3-(3-bromo-6-metil-4-thioxo-5,7-dihidropirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4- fluoro-fenil]-N-etoxicarbonil-carbamato de etilo y el producto intermedio A46: rac-W-[3-(3-bromo-6-metil-4-thioxo-5,7- dihidropirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]carbamato de etilo
imagen55
Preparados a partir del producto intermedio A43 y A44. Cromatografia en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM) para dar el producto intermedio A45 como un solido amarillo (65%) y el producto intermedio A46 como un solido amarillo (28%). LCMS: A45: 501 [M+H]+; Rt: 2,70 min. (metodo 3); A46: 429 [M+H]+; Rt: 2,53 min. (metodo 3).
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El siguiente producto intermedio se prepare segun el procedimiento sintetico descrito en el ejemplo A35:
Ejemplo A43
Preparacion del producto intermedio A47: rac-ester etnico de acido [3-(4-amino-3-bromo-6-metil-6,7-dihidro- pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]-carbamico
imagen56
Preparado a partir de los productos intermedios A45 y A46. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sHice; MeOH/DCM) para dar el producto intermedio A47 como un solido color crema que se uso como tal en la siguiente etapa. El siguiente producto intermedio se preparo segun el procedimiento sintetico descrito en el ejemplo A22 - Metodo B:
Ejemplo A44
Preparacion del producto intermedio A48: rac-ester etnico de acido [3-(4-amino-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo [1,5- a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]-carbamico
imagen57
Preparado a partir del producto intermedio A47. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; solucion 7 M de NH3 en MeOH/DCM) para dar el producto intermedio A48 como un aceite (71%). LCMS: 322 [M+H]+; Rt: 0,63 min. (metodo 2).
Ejemplo A45
Preparacion del producto intermedio A49: 6-(5-amino-2-fluoro-fenil)-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-4- ilamina
imagen58
Se anadio el producto intermedio A48 (300 mg, 0,905 mmol) a una solucion de HCl (6 M en H2O, 17,1 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito a 110°C durante 35 horas, a continuacion el disolvente se retiro a vacfo y se trato con una solucion saturada de NaHCO3 y se extrajo con AcOEt (3x 10 ml). La capa organica se separo y se evaporo a vado. El material en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron hasta el producto intermedio A49 como un aceite transparente (160 mg, 68%). LCMS: 260 [M+H]+; Rt: 0,51 min. (metodo 3).
El siguiente producto intermedio se preparo segun el procedimiento sintetico descrito en el ejemplo A8:
Preparacion del producto intermedio A50: rac-ester ferc-bufilico de acido 4-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4-difluorometil-2- oxo-2A*4*-[1,2,3]oxatiazolidin-3-carbox^lico
imagen59
5 Preparado a partir de ester 1,1 -dimetiletilico de acido W-[1-(5-bromo-2-fluorofenil)-2,2-difluoro-1-
(hidroximetil)etil]carbamico. Producto intermedio A50 obtenido como un aceite amarillo (material en bruto, mezcla de diaestereoisomeros, 100%).
El siguiente producto intermedio se preparo segun el procedimiento sintetico descrito en el ejemplo A9:
Ejemplo A47
10 Preparacion del producto intermedio A51: rac-ester ferc-bufilico de acido 4-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-4-difluorometil- 2,2-dioxo-2A*6*-[1,2,3]oxatiazolidin-3-carboxflico
imagen60
Preparado a partir del producto intermedio A50. La trituracion en heptano seguida por cromatografia en columna (gel de silice; DCM) para dar el producto intermedio A51 como un solido blanco (78%). LCMS: 465 [M+NH4I+; Rt: 1,46 15 min. (metodo 2).
Ejemplo A48
Preparacion del producto intermedio A52: rac-1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2-difluoro-1-(5-metil-3-nitro-pirazol-1- ilmetil)-etilamina
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20 Se anadio DBU (5,1 ml, 34,103 mmol) a temperatura ambiente al producto intermedio A51 (6,8 g, 15,238 mmol) y 5- nitro-1H-pirazol-3-carboxilato de etilo (3,4 g, 18,365 mmol) en MeCN (150 ml). La mezcla resultante se agito 60°C durante 18 horas. A continuacion, el disolvente se evaporo a vado y se anadio al residuo HCl (4 M en dioxano, 40 ml) a temperatura ambiente. La solucion resultante se agito a temperatura ambiente durante 2 horas, a continuacion el disolvente se evaporo a vado. Se anadieron al residuo H2O y Na2CO3 sat. y la mezcla se extrajo con DCM. La 25 capa organica se seco (Na2SO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatografia en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; DCM en heptano 50/50). Las fracciones deseadas se recogieron y se evaporaron a vacfo para dar el producto intermedio 52 como una espuma pegajosa (4,6 g, 67%). LCMS: 453 [M+H]+; Rt: 1,46 min. (metodo 2).
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5 Se anadio DBU (4,126 ml, 27,6 mmol) a una mezcla agitada del producto intermedio A52 (4,15 g, 9,198 mmol) en MeCN (45 ml) en un tubo cerrado hermeticamente. La mezcla se agito a 150°C durante 30 min. bajo irradiacion de microondas. La mezcla se diluyo con NH4Cl al 10% y se extrajo con DCM. La capa organica se seco (Na2SO4), se filtro y el disolvente se evaporo a vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; AcOEt). Las fracciones deseadas se recogieron y se evaporaron a vado para dar el producto 10 intermedio A54 (2,48 g, 67%). LCMS: 405 [M-H]-; R: 1,10 min. (metodo 2).
Ejemplo A50
Preparacion del producto intermedio A54: rac-2-amino-6-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-6-difluorometil-6,7-dihidro-5H- pirazolo[1,5-a]piracin-4-ona
imagen63
15 El producto intermedio A53 (2,4 g, 5,924 mmol) se disolvio en MeOH (150 ml). La solucion se hidrogeno con un cartucho de RuO2 (50°C, lleno de hidrogeno, 1 ml/min). El disolvente se evaporo a vado y el residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vado para dar el producto intermedio A54 como un solido blancuzco (2,1 g, 94%). LCMS: 377 [M+H]+; R 0,74 min. (metodo 2).
20 Ejemplo A51
Preparacion del producto intermedio A55: rac-6-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-6-difluorometil-6,7-dihidro-5H-pirazolo[1,5- a]piracin-4-ona
imagen64
Una mezcla del producto intermedio A54 (1,8 g, 4,798 mmol), EtOH (36 ml) y H2SO4 (0,767 ml) se calento hasta 25 90°C. A continuacion, se anadio en porciones nitrito sodico (828 mg, 11,995 mmol) y la mezcla se agito a 90°C
durante 20 min. A continuacion, la mezcla se enfrio hasta temperatura ambiente, se vertio en Na2CO3 sat. y H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (Na2SO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vado para dar el producto intermedio A55 como un 30 solido blanco (1,25 g, 72%). LCMS: 403 [M+MeCN+H]+; R: 0,92 min. (metodo 2).
El siguiente producto intermedio se preparo segun el procedimiento sintetico descrito en el Ejemplo A18:
5
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20
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30
imagen65
Preparado a partir del producto intermedio A55. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de s^lice; DCM) para dar el producto intermedio 56 como un solido amarillo (1,14 g, 88%). LCMS: 419 [M+MeCN+H]+; Rt: 1,19 min. (metodo 2).
Ejemplo A53
Preparacion del producto intermedio A57: rac-6-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-6-difluorometil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5- a]piracin-4-ilamina
imagen66
Una solucion del producto intermedio 56 (1,12 g, 2,977 mmol) en NH3 7 M en MeOH (30 ml) se agito bajo irradiacion de microondas durante 30 min. a 120°C. El disolvente se evaporo a vado y el residuo se trato con dCm y se lavo con solucion diluida de Na2CO3. La capa organica se separo, se seco (Na2SO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; solucion 7 M de NH3 en MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vado para dar el producto intermedio 57 como un solido amarillo (1,03 g, 96%). LCMS: 361 [M+H]+; Rt: 0,99 min. (metodo 2).
El siguiente producto intermedio se preparo segun los procedimientos sinteticos descritos en los Ejemplos A36 - A37:
Ejemplo A54
Preparacion del producto intermedio A58: rac-6-(5-amino-2-fluoro-fenil)-6-difluorometil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5- a]piracin-4-ilamina
Preparado a partir del producto intermedio A54. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; 7 M NH3 en MeOH/DCM) para dar el producto intermedio 58 como una espuma blancuzca (86%). LCMS: 296 [M+H]+; Rt: 0,61 min. (metodo 2).
Ejemplo A55
imagen67
Preparacion del producto intermedio A59: diamida de acido 1H-pirazol-3,5-dicarboxflico CONH2
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Se disolvio pirazol-3,5-dicarboxilato de dietilo (5,2 g, 24,5 mmol) en NH3 7 M en MeOH y la mezcla se calento a 70°C en un tubo cerrado hermeticamente durante 48 horas. A continuacion, el disolvente se evaporo para suministrar el producto intermedio A59 (3,74 g, 99%) como un solido.
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Preparacion del producto intermedio A60: 1H-pirazol-3,5-dicarbonitrMo
CN
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NC
Se anadio oxicloruro de fosforo (11,249 ml, 120,679 mmol) a una mezcla del producto intermedio 59 (3,72 g, 24,136 mmol) en MeCN (90 ml) a 0°C. La mezcla se agito en un tubo cerrado hermeticamente a 120°C durante 5 horas (hasta que el solido desaparecio). La reaccion se vertio en una mezcla de hielo/H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (Na2SO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vacfo para dar el producto intermedio A60 como un solido, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional. LCMS: 117 [M-H]-; Rt: 0,61 min. (metodo 2).
El siguiente producto intermedio se preparo segun los procedimientos sinteticos descritos en los Ejemplos A7 - A12: Ejemplo A57
Preparacion del producto intermedio A61: (R)-ester ferc-butilico de acido [1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(3,5-diciano- pirazol-1-il)-1-metil-etil]-carbamico
imagen70
Preparado a partir del producto intermedio A31. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de s^lice; AcOEt/DCM) para dar el producto intermedio A61 como una espuma (60%). LCMS: 467 [M+Nh4]+; Rt: 1,57 min. (metodo 2).
Ejemplo A58
Preparacion del producto intermedio A62: (R)-4-amino-6-(5-bromo-2-fluorofenil)-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5- a]piracino-2-carbonitrilo
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Se anadio acido trifluoroacetico (4 ml) a una mezcla agitada del producto intermedio A61 (4,483 g, 8,4 mmol) en DCM (40 ml) a temperatura ambiente. La mezcla se agito durante 20 horas a temperatura ambiente, a continuacion se basifico con una solucion sat. de Na2CO3 y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y se concentro a vacfo. El residuo se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; NH3 7 N en MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vacfo para suministrar el producto intermedio A62 (2,9 g, 99%). LCMS: 349 [M+H]+; Rt: 1,13 min. (metodo 2).
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5 La reaccion se dispuso en dos partidas. Se presenta la cantidad total de material usado. Se anadio CuI (342 mg, 1,795 mmol) a una suspension del producto intermedio A62 (500 mg, 1,436 mmol), azida sodica (284 mg, 4,308 mmol), W,W-dimetiletilendiamina (255 pl, 2,369 mmol) y Na2CO3 (457 mg, 4,308 mmol) en MeCN (10 ml) y la reaccion se desgasifico. La mezcla se calento a 110°C durante 4 horas y a continuacion a 120°C durante 2 horas adicionales. A continuacion, la mezcla se desactivo con HCl 1 M y la capa acuosa se basifico con NH4OH y se 10 extrajo con AcOEt (3x). Las capas organicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; solucion 7 N de NH3 en MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vacfo para dar el producto intermedio A63 (300 mg, 65%). LCMS: 285 [M+H]+; R 0,74 min. (metodo 2).
El siguiente producto intermedio se preparo segun los procedimientos sinteticos descritos en los Ejemplos A7 - A9, 15 A11, A13 y A15:
Ejemplo A60
Preparacion del producto intermedio A64: (R)-ester etflico de acido 6-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-6-metil-4-oxo-4,5,6,7- tetrahidro-pirazolo[1,5-a]piracin-2-carbox^lico
imagen73
20 Preparado a partir de pirazol-3,5-dicarboxilato de dietilo. El producto intermedio A64 se uso como un solido blanco en bruto en la reaccion posterior.
Ejemplo A61
Preparacion del producto intermedio A65: (R)-6-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-hidroximetil-6-metil-6,7-dihidro-5H- pirazolo[1,5-a]piracin-4-ona
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Se anadio borohidruro sodico (3,094 g, 81,774 mmol) a una solucion agitada del producto intermedio 64 (3,6 g, 9,086 mmol) en THF (10 ml) y MeOH (5 ml) a 0°C. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla se enfrio hasta 0°C, se trato con H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se seco (Na2SO4), se filtro y el disolvente se evaporo a vacfo para dar el producto intermedio A65 (3,2 g, 99%) como un solido blanco.
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Se anadio dioxido de manganeso (7 g, 80,5 mmol) a una solucion del producto intermedio A65 (3,2 g, 9,035 mmol) en cloroformo (48 ml). La mezcla de reaccion se agito a 62°C durante 4 horas. La mezcla se filtro a traves de celita y se lavo con DCM. La capa organica se concentro para dar el producto intermedio A66 como un solido apelusado naranja claro (2,3 g, 72%).
Ejemplo A63
Preparacion del producto intermedio A67: (R)-6-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-difluorometil-6-metil-6,7-dihidro-5H- pirazolo[1,5-a]piracin-4-ona
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Una solucion del producto intermedio A66 (2,3 g, 6,531 mmol) en DCM (50ml) y DAST (2,193 ml, 16,328 mmol) en DCM (50ml) se bombearon a traves de un dispositivo modular Vapourtec R2+R4 para qmmica de flujos, arrollamiento 10 ml a 80°C, Rt = 15 min. La solucion de salida se recogio sobre CaCO3. La solucion se filtro a traves de celita y se lavo con DCM, la capa organica se lavo con una solucion sat. de NaHCO3 y se extrajo con DCM. La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro a vacfo para dar el producto intermedio A67 (2,2 g, 90%) como un aceite pardo.
Ejemplo A64
Preparacion del producto intermedio A68: ('R)-6-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-difluorometil-6-metil-6,7-dihidro-5H- pirazolo[1,5-a]piracino-4-tiona
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Se anadio pentasulfuro de fosforo (1,871 g, 8,419 mmol) a una solucion del producto intermedio A67 (2,1 g, 5,613 mmol) en dioxano (1 ml) y la mezcla se calento a 100°C durante 18 horas. La mezcla se concentro a vacfo y se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vacfo para dar el producto intermedio A68 (2 g, 91%) como un aceite amarillo. LCMS: 392 [M+H]+; Rt: 1,29 min. (metodo 2).
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La reaccion se dispuso en dos partidas. Se presenta la cantidad total de material usado. Se anadio NH3 (2 M en EtOH, 30 ml, 60 mmol) al producto intermedio A69 (2 g, 5,125 mmol) y NH4Cl (2,173 g, 41 mmol). La mezcla se calento bajo irradiacion de microondas a 170°C durante 45 min. La mezcla se concentro y se anadieron otros 30 ml de NH3 (2 M en EtOH). La mezcla se calento bajo irradiacion de microondas a 170°C durante 45 min. Este procedimiento se repitio 4 veces durante una cantidad total de tiempo de 180 min. La mezcla se filtro y el filtrado se concentro a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vacfo para dar el producto intermedio A69 (1 g, 52%) como un aceite. LCMS: 375 [M+H]+; Rt: 1,11 min. (metodo 2).
El siguiente producto intermedio se preparo segun procedimientos sinteticos similares al descrito en el Ejemplo A59: Ejemplo A66
Preparacion del producto intermedio A70: ('RJ-6-(5-amino-2-fluoro-fenil)-2-difluorometil-6-metil-6,7-dihidro-
pirazolo[1,5-a]piracin-4-ilamina
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Preparado a partir del producto intermedio A69. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM) para dar el producto intermedio A70 como un aceite (51%). LCMS: 310 [M+H]+; Rt: 0,69 min. (metodo 2).
El siguiente producto intermedio se preparo segun procedimientos sinteticos similares al descrito en los Ejemplos A7 - A11, A48, A15 y A18:
Ejemplo A67
Preparacion del producto intermedio A71: ('RJ-6-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-3-fluoro-2,6-dimetil-6,7-dihidro-5H- pirazolo[1,5-a]piracino-4-tiona
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Preparada a partir de ester etflico de acido 4-fluoro-5-metil-1H-pirazol-3-carboxflico. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; AcOEt/DCM) para dar el producto intermedio A71 como un solido amarillo (92%). LCMS: 374 [M+H]+; Rt: 1,27 min. (metodo 2).
imagen81
5 Se anadio NH3 (2 M en EtOH, 10 eq.) a una solucion del producto intermedio 71 (2,4 g, 6,448 mmol) y NH4CI (4 eq.)
y la mezcla se calento a 85°C en un tubo cerrado hermeticamente durante 24 horas. El disolvente se evaporo a vado y el residuo se suspendio en DCM y se lavo con H2O. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. Se anadieron al residuo mas NH4Cl (4 eq.) seguido por NH3 (2 M en EtOH, l0 eq.) y la mezcla se calento a 85°C en un tubo cerrado hermeticamente durante 24 horas. Este procedimiento se 10 repitio cuatro veces mas para una cantidad total de NH3 (2 M en EtOH) de 276 ml, y 8,277 g de NH4CL A continuacion, el producto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vado para dar el producto intermedio A72 (960 mg, 42%) como un solido amarillo claro. LCMS: 357 [M+H]+; Rt: 1,11 min. (metodo 2).
El siguiente producto intermedio se preparo segun procedimientos sinteticos similares al descrito en los Ejemplos 15 A36 - A37:
Ejemplo A69
Preparacion del producto intermedio A73: ('R)-6-(5-amino-2-fluoro-fenil)-3-fluoro-2,6-dimetil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5- a]piracin-4-ilamina
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20 Preparado a partir del producto NH3 en MeoH/DCM) para dar el
El siguiente producto intermedio - A9, A48, A23, A16B. A18, A21,
Ejemplo A70
25 Preparacion del producto intermedio A74: ('R)-6-(5-amino-2-fluoro-fenil)-3-cloro-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5- a]piracin-4-ilamina
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Preparado a partir del producto intermedio A31. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM) seguida por trituracion en DIPE/Et2O para dar el producto intermedio A74 como un solido amarillo 30 (94%). LCMS: 294 [M+H]+; Rt: 1,13 min. (metodo 3).
intermedio A72. Cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; 7 N producto intermedio A73 como un solido amarillo claro (42%).
se preparo segun procedimientos sinteticos similares al descrito en los Ejemplos A7 A36, A37:
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Preparacion de los compuestos finales Ejemplo B1
Preparacion del compuesto 1: sal de trifluoroacetato de (R)-6-[3-(5-cloro-piridin-3-il)-fenil]-6-metil-6,7-dihidro- pirazolo[1,5-a]piracin-4-ilamina
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Se anadio una solucion ac. al 32% de NH3 (0,5 ml) a una mezcla agitada del producto intermedio A18 (60 mg, 0,17 mmol) en una solucion 7 M de NH3 en MeOH (1,5 ml) en un tubo cerrado hermeticamente. La mezcla se agito a 100°C durante 5 horas. Despues de enfriar hasta temperatura ambiente, los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna corta (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vado para suministrar una fraccion que se purifico adicionalmente mediante HPLC en fase inversa (Gradiente de 80% de solucion de TFA al 0,1% en H2O, 20% de CH3CN a 0% de solucion de TFA al 0,1% en H2O, 100% de CH3CN) y se trituraron con DIPE para dar el compuesto 1 (36 mg, 46% de rendimiento) como un solido blanco. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 6 ppm 1,79 (s, 3 H), 4,69 (d, J=13,6 Hz, 1 H), 5,25 (d, J=13,9 Hz, 1 H), 7,23 (d, J=2,3 Hz, 1 H), 7,45 (d an., J=8,7 Hz, 1 H), 7,52 (t, J=7,8 Hz, 1 H), 7,69 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 7,75 (d an., J=7,8 Hz, 1 H), 7,94 - 7,96 (m, 1 H), 8,28 (t, J=2,2 Hz, 1 H), 8,66 (d, J=2,3 Hz, 1 H), 8,88 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 9,28 (s an., 1 H), 9,87 (s an., 1 H), 11,06 (s an., 1 H).
Ejemplo B2
Preparacion del compuesto 2: rac-[3-(4-amino-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-fenil]-amida de acido 5- cloro-piridin-2-carboxflico
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Se anadio acido 5-cloro-piridin-2-carboxflico (71,8 mg, 0,68 mmol) a una solucion de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (137 mg, 0,5 mmol) en MeOH (4 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 min. A continuacion, la mezcla se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A22 (100 mg, 0,41 mmol) en MeOH (3 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 3 horas. La mezcla se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (Na2SO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se trituro con Et2O y a continuacion se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado y la fraccion resultante se purifico adicionalmente mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el compuesto 2 (21 mg, 13% de rendimiento) como un solido blanco. 1H NMR (500 MHz, CDCla) 6 ppm 1,67 (s, 3 H), 4,38 (d, J=13,3 Hz, 1 H), 4,53 (d, J=13,3 Hz, 1 H), 4,79 (s an., 2H), 6,72 (s an., 1 H), 7,24 (d an., J=7,8 Hz, 1 H), 7,34 (t, J=7,9 Hz, 1 H), 7,51 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 7,73 (dd, J=8,1, 1,2 Hz, 1 H), 7,85 - 7,90 (m, 2 H), 8,23 (d, J=8,4 Hz, 1 H), 8,55 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 9,86 (s an., 1 H).
Ejemplo B3
Preparacion del compuesto 3: rac-[3-(4-amino-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-fenil]-amida de acido
3,5-dicloro-piridin-2-carboxflico
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Se anadio acido 3,5-dicloro-piridin-2-carboxilico (112 mg, 0,58 mmol) a una solucion de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (176,2 mg, 0,64 mmol) en MeOH (5 ml). La mezcla se agito a temperatura
ambiente durante 5 min. A continuacion, la mezcla se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A22 (128 mg, 0,53 mmol) en MeOH (5 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 3 horas. La mezcla se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se 5 purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se trituro con Et2O y a continuacion se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el compuesto 3 (180 mg, 82% de rendimiento) como un solido blanco. 1H NMR (500 MHz, DMSO-cfe) 6 ppm 1,41 (s, 3 H), 4,12 - 4,45 (m, 2 H), 6,54 10 (s an., 2 H), 6,64 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 7,25 - 7,32 (m, 2 H), 7,45 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 7,63 (m, J=6,3, 2,5, 2,5 Hz, 1 H), 7,82 (s an., 1 H), 8,43 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 8,72 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 10,64 (s an., 1 H).
Ejemplo B4
Preparacion del compuesto 4: (R*)-[3-(4-amino-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-fenil]-amida de acido
3,5-dicloro-piridin-2-carboxflico y el compuesto 5: (S*)-[3-(4-amino-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)- 15 fenil]-amida de acido 3,5-dicloro-piridin-2-carboxflico
imagen87
Una muestra del compuesto 3 (0,58 g) se lavo con DCM frio y a continuacion con Et2O. Este compuesto racemico se separo a continuacion en los correspondientes enantiomeros mediante SFC preparativa en Chiralpak AD-H 5pm (250 x 20 mm), fase movil (0,3% de iPrNH2, 60% de CO2, 40% de EtOH). Las fracciones deseadas para cada
20 enantiomero se recogieron y se concentraron a vado para dar el compuesto 4 (152 mg, 26% de rendimiento). 1H
NMR (500 MHz, DMSO-d6) 6 ppm 1,41 (s, 3 H), 4,28 (s an., 2 H), 6,41 (s an., 2 H), 6,64 (d, J=1,4 Hz, 1 H), 7,30 (s, 2 H), 7,45 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 7,60 - 7,67 (m, 1 H), 7,83 (s, 1 H), 8,44 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 8,73 (d, J=2,3 Hz, 1 H), 10,65 (s an., 1 H) y el compuesto 5 (155 mg, 27% de rendimiento) 1H NmR (500 MHz, DMSO-cfe) 6 ppm 1,41 (s, 3 H), 4,28 (s, 2 H), 6,41 (s an., 2 H), 6,64 (d, J=0,9 Hz, 1 H), 7,26 - 7,33 (m, 2 H), 7,45 (d, J=1,4 Hz, 1 H), 7,59 - 7,69 (m, 1 H),
25 7,84 (s, 1 H), 8,44 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 8,73 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 10,65 (s an., 1 H) ambos como solidos blancos.
Ejemplo B5
Preparacion del compuesto 6: rac-[3-(4-amino-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-fenil]-amida de acido 5- ciano-piridin-2-carboxflico y el compuesto 7: (R*)-[3-(4-amino-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-fenil]- amida de acido 5-ciano-piridin-2-carboxflico y el compuesto 8: (S*)-[3-(4-amino-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5- 30 a]piracin-6-il)-fenil]-amida de acido 5-ciano-piridin-2-carboxflico
imagen88
Se anadio acido 5-ciano-piridin-2-carboxflico (187,8 mg, 1,27 mmol) a una solucion de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (412,9 mg, 1,49 mmol) en MeOH (20 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 min. A continuacion, la mezcla se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto 35 intermedio A22 (300 mg, 1,24 mmol) en MeOH (10 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se trituro con Et2O y a 40 continuacion se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; solucion 7 M de NH3 en MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se lavo con EtOH y Et2O y a continuacion se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado para dar el compuesto 6 (122 mg, 26% de rendimiento) como un solido color crema. 1H NMR (500 MHz, DMSO-cfe) 6 ppm 45 1,42 (s, 3 H), 4,31 (m, J=3,5 Hz, 2 H), 6,66 (s an., 2 H), 6,66 (d, J=1,7 Hz, 1 H), 7,26 - 7,33 (m, 2 H), 7,45 (d, J=2,0
Hz, 1 H), 7,78 (dt, J=6,9, 1,9 Hz, 1 H), 8,01 - 8,06 (m, 1 H), 8,29 (dd, J=8,1, 0,6 Hz, 1 H), 8,59 (dd, J=8,1, 2,0 Hz, 1 H), 9,18 - 9,22 (m, 1 H), 10,68 (s, 1 H). A continuacion, este compuesto racemico se purifico adicionalmente mediante SFC preparativa en Chiralpak AD-H 5pm (250 x 20 mm), fase movil (0,3% de iPrNH2, 60% de CO2, 40% de EtOH). Las fracciones deseadas para cada enantiomero se recogieron y se concentraron a vado para dar el 50 compuesto 7 (45,8 mg, 10% de rendimiento) 1H NMR (500 MHz, DMSO-cfe) 6 ppm 1,41 (s, 3 H), 4,21 -4,35 (m, 2 H),
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Ejemplo B6
Preparacion del compuesto 9: sal de trifluoroacetato de rac-[3-(4-amino-3-bromo-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5- a]piracin-6-il)-fenil]-amida de acido 5-ciano-piridin-2-carbox^lico
Se anadio acido 5-ciano-piridin-2-carboxflico (23,6 mg, 0,16 mmol) a una solucion de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (51,9 mg, 0,19 mmol) en MeOH (5 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 min. A continuacion, la mezcla se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A20 (50 mg, 0,16 mmol) en MeOH (5 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se trituro con Et2O y a continuacion se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vado y el residuo se purifico mediante HPLC preparativa (RP C18 XSelect 19 x 100 5 pm), fase movil (gradiente de 80% de solucion de TFA al 0,1% en H2O, 20% de CH3CN a 0% de solucion de TFA al 0,1% en H2O, 100% de CH3CN) para dar el compuesto 9 (9,8 mg, 11% de rendimiento) como un solido blanco. 1H NMR (500 MHz, DMSO-cfe) 6 ppm 1,75 (s, 3 H), 4,74 (d, J=13,9 Hz, 1 H), 5,09 (d, J=13,6 Hz, 1 H), 7,19 - 7,24 (m, 1 H), 7,40 (t, J=8,1 Hz, 1 H), 7,87 (dd, J=8,1, 1,2 Hz, 1 H), 7,88 (s, 1 H), 8,00 (s an., 1 H), 8,29 (dd, J=8,1, 0,6 Hz, 1 H), 8,60 (dd, J=8,4, 2,0 Hz, 1 H), 8,78 (s an., 1 H), 9,21 (dd, J=2,0, 0,9 Hz, 1 H), 9,70 (s an., 1 H), 10,89 (s, 1 H), 11,23 (s an., 1 H).
Ejemplo B7
Preparacion del compuesto 10: rac-[3-(4-amino-6-metil-2-trifluorometil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-fenil]- amida de acido 3,5-dicloro-piridin-2-carboxflico y el compuesto 11: (R*)-[3-(4-amino-6-metil-2-trifluorometil-6,7- dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-fenil]-amida de acido 3,5-dicloro-piridin-2-carboxflico y el compuesto 12: (S*)-[3-(4- amino-6-metil-2-trifluorometil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-fenil]-amida de acido 3,5-dicloro-piridin-2- carboxflico
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Se anadio acido 3,5-dicloro-2-piridincarboxflico (70 mg, 0,366 mmol) a una solucion de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (119 mg, 0,431 mmol) en MeOH (5 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 min. A continuacion, la mezcla se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A28 (111 mg, 0,359 mmol) en MeOH (5 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se trituro con Et2O, se trato con ultrasonidos, se filtro y se seco a vado a 50°C para dar el compuesto 10 (95 mg, 55% de rendimiento) como un solido blanco. A continuacion, este compuesto racemico se purifico adicionalmente mediante SFC preparativa en Chiralpak AD-H 5pm (250 x 20 mm), fase movil (0,3% de iPrNH2, 70% de CO2, 30% de iPrOH). Las fracciones deseadas para cada enantiomero se recogieron y se concentraron a vado para dar el compuesto 11 (40 mg, 23% de rendimiento). 1H NMR (400 MHz, DMSO-cfe) 6 ppm 1,42 (s, 3 H), 4,35 -4,47 (m, 2 H), 6,61 (s an., 2 H), 7,09 (s an., 1 H), 7,26 - 7,35 (m, 2 H), 7,59 - 7,67 (m, 1 H), 7,83 (s an., 1 H), 8,43 (d, J=2,1 Hz, 1 H), 8,72 (d, J=2,1 Hz, 1 H), 10,67 (s, 1 H) y el compuesto 12 (38 mg, 22% de rendimiento), para los que la 1H NMR estaba de acuerdo con la del compuesto 11.
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Se anadio acido 5-metoxipiracin-2-carboxflico (120 mg, 0,78 mmol) a una solucion de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfoMnio (233 mg, 0,841 mmol) en MeOH (5 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 min. A continuacion, la mezcla se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A39 (212 mg, 0,764 mmol) en MeOH (5 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se trituro con Et2O y a continuacion se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y se concentraron a vado para proporcionar un solido blanco. El solido se trato con DIPE para proporcionar el compuesto 13 (155 mg, 49%) como un solido blanco. 1H NMR (500 MHz, CDCh) 6 ppm 1,59 (s, 3 H), 4,06 (s, 3 H), 4,28 (d an., J=13,0 Hz, 1 H), 4,51 (d an., J=13,0 Hz, 1 H), 5,04 (s an., 2 H), 7,09 (dd, J=11,6, 9,0 Hz, 1 H), 7,36 (d, J=4,0 Hz, 1 H), 7,84 - 7,97 (m, 2 H), 8,12 (d, J=1,2 Hz, 1 H), 8,99 (d, J=1,2 Hz, 1 H), 9,51 (s an., 1 H).
Ejemplo B9
Preparacion del compuesto 14: rac-[3-(4-amino-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]-amida de acido 3,5-dicloro-piridin-2-carboxflico y el compuesto 15: (R*)-[3-(4-amino-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6- il)-4-fluoro-fenil]-amida de acido 3,5-dicloro-piridin-2-carboxflico y el compuesto 16: (S*)-[3-(4-amino-6-metil-6,7- dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]-amida de acido 3,5-dicloro-piridin-2-carboxflico
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Se anadio acido 3,5-dicloro-2-piridincarboxflico (75,5 mg, 0,393 mmol) a una solucion de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (128 mg, 0,463 mmol) en MeOH (5 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 min. A continuacion, la mezcla se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A49 (100 mg, 0,386 mmol) en MeOH (5 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se trituro con Et2O, se trato con ultrasonidos, se filtro y se seco a vado a 50°C. El compuesto resultante se purifico una vez mas mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; MeOH/DCM) para dar, despues del tratamiento con AcOEt y DIPE, el compuesto 14 (95 mg, 57% de rendimiento) como un solido blanco. Este compuesto racemico se purifico a continuacion mediante SFC preparativa en Chiralcel OJ-H 5 pm (250 x 20 mm), fase movil (0,3% de iPrNH2, 85% de CO2, 15% de EtOH). Las fracciones deseadas para cada enantiomero se recogieron y se concentraron a vado para dar el compuesto 15 (38 mg, 23% de rendimiento). 1H NMR (400 MHz, CDCh) 6 ppm 1,58 (s, 3 H), 2,52 (s an., 2 H), 4,41 (d an., J=13,2 Hz, 1 H), 4,62 (dd, J=13,2, 0,9 Hz, 1 H), 6,43 (d, J=2,1 Hz, 1 H), 7,08 (dd, J=11,7, 8,9 Hz, 1 H), 7,52 (d, J=2,1 Hz, 1 H), 7,81 (dd, J=6,9, 2,8 Hz, 1 H), 7,89 (d, J=2,1 Hz, 1 H), 7,94 (ddd, J=8,8, 4,1, 3,0 Hz, 1 H), 8,42 (d, J=2,1 Hz, 1 H), 9,71 (s an., 1 H) y el compuesto 16 (40 mg, 24% de rendimiento), para los que la 1H NMR estaba de acuerdo con la del compuesto 15.
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Preparacion del compuesto 17: rac-[3-(4-amino-6-difluorometil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]- amida de acido 5-metoxi-piracin-2-carbox^lico y el compuesto 18: (R*)-[3-(4-amino-6-difluorometil-6,7-dihidro- pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]-amida de acido 5-metoxi-piracin-2-carboxflico y el compuesto 19: (S*)-[3-(4- amino-6-difluorometil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]-amida de acido 5-metoxi-piracin-2- carbox^lico
Se anadio acido 5-metoxipiracin-2-carboxflico (187,9 mg, 1,219 mmol) a una mezcla de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (337 mg, 1,219 mmol) en MeOH (6 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 min. A continuacion, la mezcla se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A58 (300 mg, 1,016 mmol) en MeOH (4 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 1 hora, a continuacion se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. Parte del producto se precipito con DCM y el material en bruto restante se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; 7 M NH3 en MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado. El producto resultante se combino con el obtenido a partir de precipitacion y se trituro con heptano, se trato con ultrasonidos y se filtro, para proporcionar el compuesto 17 (278 mg, 62% de rendimiento) como un solido blanco. A continuacion, este compuesto racemico se purifico adicionalmente mediante SFC preparativa en Chiralcel OD-H 5 pm (250 x 20 mm), fase movil (0,3% de iPrNH2, 70% de CO2, 30% de EtOH). Las fracciones deseadas para cada enantiomero se recogieron y se concentraron a vado para dar el compuesto 18 (103 mg, 23% de rendimiento). 1H NMR (500 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 4,03 (s, 3 H) 4,58 (d an., J=13,6 Hz, 1 H) 4,75 (d an., J=13,6 Hz, 1 H) 6,27 (t, J=55,5 Hz, 1 H) 6,68 (d, J=2,0 Hz, 1 H) 6,93 (s an., 2 H) 7,20 (dd, J=11,8, 9,0 Hz, 1 H) 7,48 (d, J=2,0 Hz, 1 H) 7,78 (dt, J=8,4, 3,6 Hz, 1 H) 8,17 (dd, J=7,1, 2,7 Hz, 1 H) 8,42 (d, J=1,2 Hz, 1 H) 8,88 (d, J=1,2 Hz, 1 H) 10,51 (s, 1 H) y el compuesto 19 (102 mg, 23% de rendimiento), para los que la 1H NMR estaba de acuerdo con la del compuesto 18.
Ejemplo B11
Preparacion del compuesto 20: rac-[3-(4-amino-6-difluorometil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]- amida de acido 5-fluoro-piridin-2-carboxflico y el compuesto 21: (S*)-[3-(4-amino-6-difluorometil-6,7-dihidro- pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]-amida de acido 5-fluoro-piridin-2-carboxflico y el compuesto 22: (R*)-[3-(4- amino-6-difluorometil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]-amida de acido 5-fluoro-piridin-2- carboxflico
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Se anadio acido 5-fluoro-2-piridincarboxflico (74,5 mg, 0,528 mmol) a una mezcla de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (146 mg, 0,528 mmol) en MeOH (3 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 min. A continuacion, la mezcla se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A58 (130 mg, 0,44 mmol) en MeOH (2 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 1 hora, a continuacion se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y H2O y se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; 7 M NH3 en MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado. El producto resultante se trituro con heptano, se trato con ultrasonidos y se filtro, para proporcionar el compuesto 17 (112 mg, 60% de rendimiento) como un solido blanco. A continuacion, este compuesto racemico se purifico adicionalmente mediante SFC preparativa en una columna Chiralpak AD-H (5 pm, 250 x 20 mm), fase movil [70% de CO2, 30% de EtOH (+ 0,3% de iPrNH2)]. Las fracciones deseadas para cada enantiomero se recogieron y se concentraron a vado para dar el compuesto 21 (41 mg, 22% de rendimiento), para el que la 1H NMR estaba de acuerdo con la del compuesto 22, y el compuesto 22 (43 mg, 23% de rendimiento). 1H NMR (400 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 4,53 - 4,61 (m, 1 H), 4,74 (d an., J=13,4 Hz, 1 H), 6,26 (t, J=55,9 Hz, 1 H), 6,67 (d, J=1,8 Hz, 1 H), 6,93 (s an., 2 H), 7,20 (dd, J=12,0, 9,0 Hz, 1 H), 7,47 (d, J=1,8 Hz, 1 H), 7,79 (ddd, J=8,8, 3,9, 2,8 Hz, 1 H), 7,98 (td, J=8,7, 2,9 Hz, 1 H), 8,16 (dd, J=7,1, 2,7 Hz, 1 H), 8,21 (dd, J=8,8, 4,6 Hz, 1 H), 8,73 (d, J=2,8 Hz, 1 H), 10,62 (s an., 1 H).
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Se anadio acido 5-metoxipiracin-2-carbox^lico (95,4 mg, 0,619 mmol) a una mezcla de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfoMnio (171,3 mg, 0,619 mmol) en MeOH (3 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 30 min, a continuacion se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A63 (160 mg, 0,563 mmol) en MeOH (3 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 20 hora, a continuacion se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y se agito durante unos pocos minutos. A continuacion, la mezcla se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado, para proporcionar despues del secado el compuesto 23 (115 mg, 49% de rendimiento) como un solido. 1H NMR (500 MHz, CDCla) 6 ppm 1,58 (s, 3 H), 1,66 (s an., 2 H), 4,07 (s, 3 H), 4,47 (d an., J=13,6 Hz, 1 H), 4,66 (d an., J=13,3 Hz, 1 H), 6,81 (s an., 1 H), 7,09 (dd, J=11,6, 9,0 Hz, 1 H), 7,75 - 7,81 (m, 1 H), 7,97 (dd, J=7,1, 2,7 Hz, 1 H), 8,14 (s, 1 H), 9,00 (s, 1 H), 9,49 (s an., 1 H).
Ejemplo B13
Preparacion del compuesto 24: ('R)-[3-(4-amino-2-ciano-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]- amida de acido 5-fluoro-piridin-2-carboxflico
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Se anadio acido 5-fluoro-2-piridincarboxflico (87,4 mg, 0,619 mmol) a una mezcla de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-
1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (171,3 mg, 0,619 mmol) en MeOH (3 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 30 min., a continuacion se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A63 (160 mg, 0,563 mmol) en MeOH (3 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 20 horas, a continuacion se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y se agito durante unos pocos min. A continuacion, la mezcla se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado, para proporcionar un aceite que se trituro con DIPE. El solido resultante se filtro y se seco para suministrar el compuesto 24 (95 mg, 41% de rendimiento) como un solido. 1H NMR (400 MHz, CDCla) 6 ppm 1,58 (s an., 3 H) 4,46 (d an., J=13,4 Hz, 1 H) 4,66 (d, J=13,4 Hz, 1 H) 4,90 (s an., 2 H) 6,81 (s, 1 H) 7,10 (dd, J=11,8, 8,8 Hz, 1 H) 7,60 (td, J=8,3, 2,8 Hz, 1 H) 7,78 - 7,86 (m, 1 H) 7,96 (dd, J=7,1, 2,7 Hz, 1 H) 8,32 (dd, J=8,7, 4,5 Hz, 1 H) 8,45 (d, J=2,8 Hz, 1 H) 9,80 (s an., 1 H).
Ejemplo B14
Preparacion del compuesto 25: ('R)-[3-(4-amino-2-ciano-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]- amida de acido 1-difluorometil-1H-pirazol-4-carboxflico
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Se anadio acido 1-difluorometil-1H-pirazol-3-carboxilico (82,7 mg, 0,51 mmol) a una mezcla de cloruro de 4-(4,6- dimetoxi-1,3,5-triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (155 mg, 0,561 mmol) en MeOH (3 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 30 min, a continuacion se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A63 (145 mg, 0,51 mmol) en MeOH (3 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 3 horas,
a continuacion se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y se agito durante unos pocos min. A continuacion, la mezcla se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sHice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado, para proporcionar un 5 aceite que se trituro con heptano. El solido resultante se filtro y se seco para suministrar el compuesto 25 (100 mg, 46% de rendimiento) como un solido. 1H NMR (500 MHz, CDCfe) 6 ppm 1,58 (s, 3 H) 4,47 (d an., J=13,3 Hz, 1 H) 4,65 (d, J=13,3 Hz, 1 H) 4,94 (s an., 2 H) 6,81 (s, 1 H) 7,05 (d, J=2,6 Hz, 1 H) 7,09 (dd, J=11,6, 9,0 Hz, 1 H) 7,20 (t, J=60,4 Hz, 1 H) 7,69 - 7,75 (m, 1 H) 7,88 (d, J=2,6 Hz, 1 H) 7,91 (dd, J=6,8, 2,2 Hz, 1 H) 8,62 (s an., 1 H).
Ejemplo B15
10 Preparacion del compuesto 26: ('R)-[3-(4-amino-2-ciano-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro-fenil]- amida de acido 5-ciano-piridin-2-carboxflico
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Se anadio acido 5-ciano-2-piridincarboxilico (79,7 mg, 0,538 mmol) a una mezcla de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5- triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (163,8 mg, 0,592 mmol) en MeOH (3 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente
15 durante 30 min., a continuacion se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A63 (153 mg, 0,538 mmol) en MeOH (3 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 3 horas, a continuacion se trato con una solucion saturada de Na2CO3 y se agito durante unos pocos min. A continuacion, la mezcla se extrajo con DCM. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y los disolventes se evaporaron a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de silice;
20 MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado, para proporcionar un aceite que se trituro con heptano. El solido resultante se filtro y se seco para suministrar el compuesto 26 (63 mg, 28% de rendimiento) como un solido. 1H NMR (500 MHz, DMSO-cfe) 6 ppm 1,47 (s an., 3 H) 4,43 -4,55 (m, 2 H) 6,76 (s an., 2 H) 7,20 (dd, J=11,8, 9,0 Hz, 1 H) 7,27 (s an., 1 H) 7,71 - 7,79 (m, 1 H) 8,10 (d an., J=5,2 Hz, 1 H) 8,26 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 8,57 (dd, J=8,2, 1,6 Hz, 1 H) 9,18 (s an., 1 H) 10,81 (s an., 1 H).
25 Ejemplo B16
Preparacion del compuesto 27: ('R)-[3-(4-amino-2-difluorometil-6-metil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro- fenil]-amida de acido 5-fluoro-piridin-2-carboxflico
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Se anadio acido 5-fluoro-2-piridincarboxflico (68 mg, 0,485 mmol) a una mezcla de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5- 30 triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (148 mg, 0,533 mmol) en MeOH (3 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 min., a continuacion se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A70 (150 mg, 0,485 mmol) en MeOH (2 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 4 horas, a continuacion se concentro a vado en un bano frio. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (carga seca, gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los 35 disolventes se evaporaron a vado, para proporcionar un solido blancuzco, que se purifico adicionalmente mediante RP HPLC en C18 Sunfire (30 x 100 5pm). Fase movil: gradiente de 80% de solucion de TFA al 0,1% en H2O, 20% de CH3CN a 0% de solucion de TFA al 0,1% en H2O, 100% de CH3CN, dando el compuesto 27 (57 mg, 33%) como un solido blanco. 1H NMR (500 MHz, DMSO-cfe) 6 ppm 1,84 (s an., 3 H), 4,79 (d an., J=13,9 Hz, 1 H), 5,02 (d an., J=13,3 Hz, 1 H), 7,10 (t, J=54,3 Hz, 1 H), 7,30 (dd, J=12,0, 8,8 Hz, 1 H), 7,46 (s an., 1 H), 7,86 - 7,91 (m, 1 H), 7,93 40 (dd, J=7,5, 2,3 Hz, 1 H), 7,98 (td, J=8,7, 2,9 Hz, 1 H), 8,20 (dd, J=8,7, 4,6 Hz, 1 H), 8,73 (d, J=2,9 Hz, 1 H), 9,33 (s an., 1 H), 10,07 (s an., 1 H), 10,80 (s an., 1 H), 11,09 (s an., 1 H).
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5 Se anadio acido 5-metoxipiracin-2-carbox^lico (75 mg, 0,485 mmol) a una mezcla de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5- triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (148 mg, 0,533 mmol) en MeOH (3 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 min., a continuacion se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A70 (150 mg, 0,485 mmol) en MeOH (2 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 4 horas, a continuacion se concentro a vado en un bano frio. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en 10 columna de desarrollo rapido (carga seca, gel de sflice; MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado, para proporcionar un solido blancuzco, que se purifico adicionalmente mediante RP HPLC en C18 Sunfire (30 x 100 5um). Fase movil: gradiente de 80% de solucion de TFA al 0,1% en H2O, 20% de CH3CN a 0% de solucion de TFA al 0,1% en H2O, 100% de CH3CN, dando el compuesto 27 (32 mg, 12%) como un solido blanco. 1H NMR (500 MHz, DMSO-da) 8 ppm 1,85 (s an., 3 H) 4,03 (s, 3 H) 4,80 (d an., J=13,9 Hz, 1 H) 15 5,03 (d an., J=12,7 Hz, 1 H) 7,12 (t, J=54,3 Hz, 1 H) 7,31 (dd, J=11,8, 9,0 Hz, 1 H) 7,47 (s an., 1 H) 7,84 -7,90 (m, 1
H) 7,96 (dd, J=7,4, 2,2 Hz, 1 H) 8,42 (d, J=Hz, 1 H) 8,88 (d, J=1,4 Hz, 1 H) 9,32 (s an., 1 H) 10,09 (s an., 1 H) 10,70 (s, 1 H) 11,08 (s an., 1H).
Ejemplo B18
Preparacion del compuesto 29: ('R)-[3-(4-amino-3-fluoro-2,6-dimetil-6,7-dihidro-pirazolo[1,5-a]piracin-6-il)-4-fluoro- 20 fenil]-amida de acido 5-metoxi-piracin-2-carboxflico
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Se anadio acido 5-metoxipiracin-2-carboxilico (97 mg, 0,631 mmol) a una mezcla de cloruro de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5- triacin-2-il)-4-metilmorfolinio (175 mg, 0,631 mmol) en MeOH (2 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 min., a continuacion se enfrio hasta 0°C y se anadio una solucion del producto intermedio A73 (175 mg, 25 0,601 mmol) en MeOH (2 ml). La mezcla se calento hasta temperatura ambiente y se agito durante 24 horas. El
disolvente se retiro a vado y el residuo se suspendio en DCM y se trato con Na2CO3 sat. La capa organica se separo, se seco (MgSO4), se filtro y se concentro a vado. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa en columna de desarrollo rapido (gel de sflice; 7 M NH3 en MeOH/DCM). Las fracciones deseadas se recogieron y los disolventes se evaporaron a vado. El residuo se suspendio en Et2O. El precipitado se separo por filtracion y se seco 30 bajo vado a 50°C para dar el compuesto 29 (195 mg, 76%) como un solido blanco. 1H NMR (500 MHz, DMSO-cfe) 8 ppm 1,45 (s an., 3 H), 2,12 (s, 3 H), 4,02 (s, 3 H), 4,18 (d an., J=13,0 Hz, 1 H), 4,24 (d an., J=12,4 Hz, 1 H), 6,26 (s an., 2 H), 7,17 (dd, J=12,0, 8,8 Hz, 1 H), 7,68 - 7,77 (m, 1 H), 8,04 (d an., J=5,2 Hz, 1 H), 8,40 (d, J=1,2 Hz, 1 H), 8,87 (d, J=1,2 Hz, 1 H), 10,46 (s an., 1 H).
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Comp. N°
Ej. N° R1 R2 R3 X1 X3 ---L-Ar Estereoquimica de C4/sal
1
B1 H H CH3 CH CH V R/CF3COOH
2
B2 H H CH3 CH CH o "n-'V'S h ii i RS
3
B3 H H CH3 CH CH * ZI RS
4
B4 H H CH3 CH CH o "B ";n:Nl S*
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B4 H H CH3 CH CH o "a *Xx cK Cl R*
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B5 H H CH3 CH CH o "N'\ % H IA N RS
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B5 H H CH3 CH CH O H IA N R*
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B5 H H CH3 CH CH O "A % H II N S*
9
B6 Br H CH3 CH CH O "A ^ H II N RS / CF3COOH
Comp. N°
Ej. N° R1 R2 R3 X1 X3 ---L-Ar Estereoquimica de C4/sal
10
B7 H CF3 CH3 CH CH O a Yx RS
11
B7 H CF3 CH3 CH CH o "a Yl ci 'Cl R*
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B7 H CF3 CH3 CH CH o "a Yx Cl Cl S*
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B8 F H CH3 CH CH o -aV:i N OMe R
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B9 H H CH3 CF CH O "a Yx Cl Cl RS
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B9 H H CH3 CF CH o 'a Yx ci ' '^K~ci R*
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B9 H H CH3 CF CH o "a Yl cr' '^Yi S*
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B10 H H CHF2 CF CH o X Yi N "OMe RS
18
B10 H H CHF2 CF CH o ■Ay N OMe R*
19
B10 H H CHF2 CF CH o ■Ay N xOMe S*
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B11 H H CHF2 CF CH o ''nAtY H xaf RS
Comp. N°
Ej. N° R1 R2 R3 X1 X3 ---L-Ar Estereoquimica de C4/sal
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B11 H H CHF2 CF CH o As H U.F R*
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B11 H H CHF2 CF CH o ''N'SlS H M ' " F S*
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B12 H CN CH3 CF CH O Ni "N OMe R
24
B13 H CN CH3 CF CH O H [II ' F R
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B14 H CN CH3 CF CH o R
26
B15 H CN CH3 CF CH o y'x\ ^CN R
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B16 H CHF2 CH3 CF CH o ''N H [II F R / CF3COOH
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B17 H CHF2 CH3 CF CH o "SATn1 N OMe R / CF3COOH
29
B18 F CH3 CH3 CF CH O "aAfN;i N OMe R
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B11 H CF3 CH3 CH CH o V'A OMe RS
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B11 H CF3 CH3 CH CH o A"} N xOMe S*
Comp. N°
Ej. N° R1 R2 R3 X1 X3 ---L-Ar Estereoquimica de C4/sal
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B11 H CF3 CH3 CH CH A": lA OMe R*
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B2 F H CH3 CF CH O AX R
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B2 F H CH3 CF CH Av R
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B2 F H CH3 CF CH 0 Viv F3C 0 R
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B2 F H CH3 CF CH 0 A&- R
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B2 Cl H CH3 CF CH o 'A”:) "N OMe R
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B2 Cl H CH3 CF CH O AX R
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B16 H CHF2 CH3 CF CH o -n 'Sr'S R
40
B16 H CHF2 CH3 CF CH o . ,-N f a XA R
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B2 F CH3 CH3 CF CH o A':, RS
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B2 F CH3 CH3 CF CH o '...A , N f H N F R
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Comp. N°
Ej. N° R1 R2 R3 X1 X3 ---L-Ar Estereoquimica de C4/sal
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B6 H CN CH3 CF CH O R
C. Parte analttica
Resonancia magnetica nuclear (NMR)
Los espectros de 1H NMR se registraron en un espectrometro bien Bruker DPX-400 o bien Bruker AV-500 con secuencias pulsatorias estandar, que funcionaban a 400 MHz y 500 MHz, respectivamente. Los desplazamientos qmmicos (6) se presentan en partes por millon (ppm) relativas al tetrametilsilano (TMS), que se uso como patron interno
Metodo de LCMS
Para la caracterizacion por (LC)MS de los compuestos de la presente invencion, se usaron los siguientes metodos. Procedimiento general A para el instrumento Acquity-SQD
La medida por UPLC (cromatograffa de lfquidos de eficacia ultraalta, por sus siglas en ingles) se realizo usando un sistema de UPLC Acquity (Waters) que comprende un organizador muestreador, una bomba binaria con desgasificador, un horno de cuatro columnas, un detector de diodos en serie (DAD, por sus siglas en ingles) y una columna como la especificada en los metodos respectivos. El detector de MS se configuro con una fuente de ionizacion por electropulverizacion. Los espectros de masas se adquirieron en un detector SQD de un solo cuadripolo barriendo desde 100 hasta 1.000 en 0,1 segundos usando un retardo entre canales de 0,08 segundos. El voltaje de la aguja capilar fue 3,0 kV. El voltaje del cono fue 25 V para el modo de ionizacion positiva y 30 V para el modo de ionizacion negativa. Se uso nitrogeno como el gas nebulizador. La fuente de temperatura se mantuvo a 140°C. La adquisicion de datos se realizo con el programa MassLynx-Openlynx.
Metodo 1:
Ademas del procedimiento general A: Se llevo a cabo UPLC en fase inversa en una columna BEH-C18 (1,7 pm, 2,1 x 50 mm) de Waters, con un caudal de 1,0 ml/min, a 50°C, sin separacion al detector de MS. Las condiciones de gradiente usadas eran: 95% de A (solucion de acetato amonico de 0,5 g/l + 5% de acetonitrilo), 5% de B (acetonitrilo), a 40% de A, 60% de B en 3,8 minutos, a 5% de A, 95% de B en 4,6 minutos, mantenido hasta 5,0 minutos. Volumen de inyeccion 2,0 pl.
Metodo 2:
Ademas del procedimiento general A: Se llevo a cabo UPLC en fase inversa en una RRHD Eclipse Plus-C18 (1,8 pm, 2,1 x 50 mm) de Agilent, con un caudal de 1,0 ml/min, a 50°C sin separacion al detector de MS. Las condiciones de gradiente usadas eran: 95% de A (solucion de acetato amonico de 0,5 g/l + 5% de acetonitrilo), 5% de B (acetonitrilo), a 40% de A, 60% de B en 1,2 minutos, a 5% de A, 95% de B en 1,8 minutos, mantenido hasta 2,0 minutos. Volumen de inyeccion 2,0 pl.
Metodo 3:
Mismo gradiente que el metodo 1; columna usada: RRHD Eclipse Plus-C18 (1,8 pm, 2,1 x 50 mm) de Agilent. Procedimiento general B para instrumentos HP 1100-MS (TOF, SQD o MSD)
La medida de HPLC se realizo usando un sistema HP 1100 (Agilent Technologies) que comprende una bomba (cuaternaria o binaria) con desgasificador, un automuestreador, un horno de columna, un detector de diodos en serie (DAD) y una columna como la especificada en los metodos respectivos. El detector de MS (SQD, TOF o MSD) se configuro bien con una fuente de ionizacion por electropulverizacion o bien una fuente de ionizacion doble ESCI (electropulverizacion combinada con ionizacion qmmica a presion atmosferica). Se uso nitrogeno como el gas nebulizador. La temperatura de la fuente se mantuvo bien a 140°C o bien a 100°C. La adquisicion de datos se realizo bien con el programa MassLynx-Openlynx o bien el programa Chemsation-Agilent Data Browser.
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B1: Los espectros de masas se adquirieron en un detector MSD de un solo cuadripolo en modo APCI barriendo desde 100 hasta 1.000 en 0,99 segundos, tamano del paso de 0,30 y anchura del pico de 0,10 minutos. El voltaje de la aguja capilar fue 3,0 Kv, el voltaje del fragmentador fue 70V para los modos de ionizacion positiva y negativa y la intensidad de la corona fue 4 pA.
B2: Los espectros de masas se adquirieron en un detector SQD de un solo cuadripolo barriendo desde 100 hasta 1.000 en 0,1 segundos usando un retardo entre canales de 0,08 segundos. El voltaje de la aguja capilar fue 3,0 kV. El voltaje del cono fue 20 V para el modo de ionizacion positiva y 30 V para el modo de ionizacion negativa.
B3: Los espectros de masas se adquirieron en un detector de tiempo de vuelo (TOF) barriendo desde 100 hasta 750 en 0,5 segundos usando un tiempo de reposo de 0,3 segundos. El voltaje de la aguja capilar fue 2,5 kV para el modo de ionizacion positiva y 2,9 kV para el modo de ionizacion negativa. El voltaje del cono fue 20 V para los modos de ionizacion tanto positiva como negativa. Leucina-encefalina fue la sustancia estandar usada para la calibracion del patron de masa.
Metodo 4:
Ademas del procedimiento general B1: Se llevo a cabo HPLC en fase inversa en una columna Eclipse Plus-C18 (3,5 pm, 2,1 x 30 mm) de Agilent, con un caudal de 1,0 ml/min, a 60°C. Las condiciones de gradiente usadas eran: 95% de A (NH4AcO 6,5 mM en H2O/ACN 95/5), 5% de B (ACN), mantenido 0,2 minutos, a 100% de B en 3,0 minutos, mantenido hasta 3,15 minutos y equilibrado hasta las condiciones iniciales en 3,3 minutos hasta 5,0 minutos. Volumen de inyeccion 2 pl
Metodo 5:
Ademas del procedimiento general B2: Se llevo a cabo HPLC en fase inversa en una columna Eclipse Plus-C18 (3,5 pm, 2,1 x 30 mm) de Agilent, con un caudal de 1,0 ml/min, a 60°C. Las condiciones de gradiente usadas eran: 95% de A (NH4AcO 6,5 mM en H2O/ACN 95/5), 5% de B (ACN/ MeOH 1/1), a 100% de B en 5,0 minutos, mantenido hasta 5,15 minutos y equilibrado hasta las condiciones iniciales en 5,30 minutos hasta 7,0 minutos. Volumen de inyeccion 2 pl
Metodo 6:
Ademas del procedimiento general B3: Se llevo a cabo HPLC en fase inversa en una columna Eclipse Plus-C18 (3,5 pm, 2,1 x 30 mm) de Agilent, con un caudal de 1,0 ml/min, a 60°C. Las condiciones de gradiente usadas eran: 95% de A (NH4AcO 6,5 mM en H2O/ACN 95/5), 5% de B (ACN), mantenido 0,2 minutos, a 100% de B en 3,0 minutos, mantenido hasta 3,15 minutos y equilibrado hasta las condiciones iniciales en 3,3 minutos hasta 5,0 minutos. Volumen de inyeccion 2 pl
Procedimiento general C
La medida de HPLC se realizo usando un modulo Agilent 1100 que comprende una bomba, un detector de diodos en serie (DAD) (longitud de onda usada 220 nm), un calentador de columna y una columna como la especificada en los metodos respectivos posteriormente. El flujo procedente de la columna se dividio en un MSD Agilent Serie G1946C y G1956A. El detector de MS se configuro como API-ES (ionizacion por electropulverizacion a presion atmosferica). Los espectros de masas se adquirieron barriendo desde 100 hasta 1.000. El voltaje de la aguja capilar fue 2.500 V para el modo de ionizacion positiva y 3.000 V para el modo de ionizacion negativa. El voltaje de fragmentacion fue 50 V. La temperatura del gas de secado se mantuvo a 350°C con un flujo de 10 l/min.
Metodo 7:
Ademas del procedimiento general C: Se llevo a cabo HPLC en fase inversa en una columna YMC-Pack ODS-AQ, 50x2,0 mm 5pm con un caudal de 0,8 ml/min. Se usaron dos fases moviles (fase movil A: H2O con TFA al 0,1%; fase movil B: ACN con TFA al 0,05%). En primer lugar, se mantuvo 100% de A durante 1 minuto. A continuacion, se aplico un gradiente hasta 40% de A y 60% de B en 4 minutos y se mantuvo durante 2,5 minutos. Se usaron volumenes de inyeccion tfpicos de 2 pl. La temperatura del horno fue 50°C. (polaridad de MS: positiva).
Metodo 8:
Ademas del procedimiento general C: Se llevo a cabo HPLC en fase inversa en una columna Ultimate XB-C18, 50x2,1 mm 5pm con un caudal de 0,8 ml/min. Se usaron dos fases moviles (fase movil C: 10 mmol/l de NH4HCO3; fase movil D: ACN). En primer lugar, se mantuvo 100% de C durante 1 minuto. A continuacion, se aplico un
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gradiente hasta 40% de C y 60% de D en 4 minutos y se mantuvo durante 2,5 minutes. Se usaron volumenes de inyeccion tipicos de 2 pl. La temperatura del horno fue 5o°C. (polaridad de MS: positiva).
Procedimiento general D
La medida de UHPLC se realizo usando un sistema de LCMS Shimadzu 2010 que comprende una bomba, un detector de serie de fotodiodos (PDA, por sus siglas en ingles) (longitud de onda usada 220 nm), un horno de columna y una columna como la especificada en los metodos respectivos posteriormente. El flujo procedente de la columna se separo a un detector MSD Shimadzu 2010. El detector de MS se configuro con API-ES (ionizacion por electropulverizacion a presion atmosferica). Los espectros de masas de adquirieron barriendo desde 100 hasta 1.000. El voltaje interfacial fue 4.500 V para el modo de ionizacion positiva. El flujo del gas de nebulizacion fue 1,5 l/min. La temperatura del CDL (conducto de desolvatacion curvado con capilar calentado) fue 250°C y el voltaje del CDL fue 30 V. La temperatura del bloque calentador fue 200°C. El voltaje del detector fue 1.500 V.
Metodo 9
Ademas del procedimiento general D: Se llevo a cabo UHPLC en fase inversa en una columna Xtimate C18 (30* 2,1mm 3,0pm) con un caudal de 1,2 ml/min. Se usaron dos fases moviles (A: H2O con TFA al 0,15%; B: ACN con TFA al 0,75%). En primer lugar, se mantuvo 100% de A durante 1 min. A continuacion, se aplico un gradiente hasta 40% de A y 60% de B en 0,9 min., se mantuvo hasta 1,5 min. y se equilibro hasta las condiciones iniciales en 1,51 min. hasta 2,0 min. Se usaron volumenes de inyeccion tfpicos de 1,0 pl. La temperatura del horno fue 50°C. (polaridad de MS: positiva).
Procedimiento general E
La medida de LC se realizo usando un sistema de UPLC (cromatograffa de lfquidos de rendimiento ultraalto) Acquity (Waters) que comprende una bomba binaria con desgasificador, un automuestreador, un detector de diodos en serie (DAD) y una columna como la especificada en los metodos respectivos posteriormente, la columna se mantiene a una temperatura de 40°C. El flujo procedente de la columna se llevo hasta un detector de MS. El detector de MS se configuro con una fuente de ionizacion por electropulverizacion. Los espectros de masas se adquirieron en un espectrometro de masas de triple cuadripolo Quattro (Waters) al barrer desde 100 hasta 1.000 en 0,2 segundos usando un retardo entre barridos de 0,1 segundos. El voltaje de la aguja capilar fue 3 kV y la temperatura de la fuente se mantuvo a 130°C. El voltaje del cono fue 20V para el modo de ionizacion positiva y negativa. Se uso nitrogeno como el gas nebulizador. La adquisicion de datos se realizo con el programa MassLynx-Openlynx (Waters).
Metodo 10:
Ademas del procedimiento general E: Se llevo a cabo UPLC en fase inversa en una columna de fenilo-hexilo Acquity BEH (hterido puenteado de etilsiloxano/sflice) (1,7 pm, 2,1 x 100 mm) de Waters con un caudal de 0,343 ml/min. Se emplearon dos fases moviles (fase movil A: 95% de NH4AcO 7 mM/ 5% de ACN; fase movil B: 100% de ACN) para mover una condicion de gradiente desde 84,2% de A y 15,8% de B (mantenido durante 0,49 minutos) hasta 10,5% de A y 89,5% de B en 2,18 minutos, mantenido durante 1,94 min. y de nuevo hasta las condiciones iniciales en 0,73 min, mantenidas durante 0,73 minutos. Se uso un volumen de inyeccion de 2 ml.
Puntos de fusion
Los valores son bien valores maximos o bien intervalos de fusion, y se obtienen con incertidumbres experimentales que se asocian comunmente con este metodo analttico.
Aparato Mettler FP 81HT/FP90 - FP62 (indicado por FP90 y FP62 en la Tabla 2)
Para un numero de compuestos, los puntos de fusion se determinaron en tubos capilares abiertos en un aparato bien Mettler FP62 o bien Mettler FP81HT/FP90. Los puntos de fusion se midieron con un gradiente de temperatura de 1, 3, 5 o 10°C/minuto. La temperatura maxima fue 300°C. El punto de fusion se leyo de una pantalla digital.
Tabla 2: Datos analtticos - Rt significa tiempo de retencion (en min.), [M+H]+ significa la masa protonada del compuesto, metodo se refiere al metodo usado para la (LC)MS.
Comp. N°
Rt [M+H]+ Metodo Punto de Fusion
1
1,55 338 3 n.d.
2
1,6 381 3 n.d.
3
1,58 415 3 94,4°C (FP62)
4
2,25 415 10 212,2°C (FP62)
5
2,25 415 10 186,3°C (FP62)
6
1,18 372 3 221,6°C (FP62)
7
1,98 372 10 281,8°C (FP62)
8
1,99 372 10 248,8°C (FP62)
9
1,98 450 3 147,4°C (FP62)
10
3,60 483 5 >300°C (FP90)
11
2,90 483 10 147,8°C (FP62)
12
2,90 483 10 221,8°C (FP62)
13
0,97 414 2 99,4°C (FP90)
14
1,74 433 3 n.d.
15
2,37 433 10 >300°C (FP90)
16
2,37 433 10 >300°C (FP90)
17
1,90 432 3 263,4°C (FP90)
18
2,45 432 10 248°C (FP90)
19
2,45 432 10 279,9°C (FP90)
20
1,94 419 3 236,9°C (FP90)
21
2,48 419 10 n.d.
22
2,49 419 10 220,4°C (FP90)
23
2,26 421 3 276,3°C (FP90)
24
2,29 408 3 186,4°C (FP90)
25
2,23 433 3 180°C (FP90)
Comp. N°
Rt [M+H]+ Metodo Punto de Fusion
26
2,18 446 3 n.d.
27
2,14 428 3 n.d.
28
2,18 429 3 n.d.
29
2,25 415 3 >300°C (FP90)
30
3,31 446 5 n.d.
31
2,72 446 10 220,9°C (FP62)
32
2,72 446 10 220°C (FP62)
33
0,99 401 2 186°C (FP90)
34
1,47 387 3 187°C (FP62)
35
3,24 455 5 87,2°C (FP62)
36
2,75 401 5 109,8°C (FP62)
37
2,24 430 3 108,8°C (FP90)
38
2,32 417 3 >300°C (FP90)
39
2,53 449 3 n.d.
40
2,04 454 3 n.d.
41
2,18 415 3 n.d.
42
1,94 436 3 n.d.
43
1,86 394 3 n.d.
n.d. significa no determinado Metodos de SFCMS
Procedimiento general A para metodos de SFC-MS
La medida de SFC se realizo usando un sistema de SFC Analytical de Berger Instruments (Newark, DE, EE. UU. de
5 A.) que comprende un modulo de control de doble bomba (FCM-1200) para el aporte de dioxido de carbono (CO2) y
un modificador, un modulo de control termico para el calentamiento de la columna (TCM2100) con un control de temperature en el intervalo 1-150°C y valvulas de seleccion de la columna (Valco, VICI, Houston, TX, EE. UU. de A.) para seis columnas diferentes. El detector de serie de fotodiodos (Agilent 1100, Waldbronn, Alemania) esta equipado con una celula de flujo de alta presion (hasta 400 bar) y configurado con un automuestreador CTC LC Mini PAL
10 (Leap Technologies, Carrboro, Nc, EE. UU. de A.). Un espectrometro de masas ZQ (Waters, Milford, MA, EE. UU.
de A.) con una interfase de electropulverizacion Z ortogonal esta acoplado al sistema de SFC. El control de los instrumentos, la recogida de datos y el procesamiento se realizaron con una plataforma integrada que consistfa en el programa SFC ProNTo y el programa Masslynx.
Metodo 1
Ademas del procedimiento general A: La separacion quiral en SFC se llevo a cabo en una columna CHIRALPAK AD- H (4,6 mm x 500 mm) a 50°C con un caudal de 3,0 ml/min. La fase movil es CO2, 20% de MeOH (que contiene iPrNH2 al 0,2%) mantenido 15,00 min., modo isocratico.
5 Procedimiento general B
La medida de SFC se realizo usando un sistema de SFC Analytical de Berger instruments (Newark, DE, EE. UU. de A.) que comprende un modulo de control de fluidos de doble bomba FCM-1200 para aportar dioxido de carbono (CO2) y un modificador, un muestreador de lfquidos automatico CTC Analytics, un modulo de control termico TCM- 20000 para el calentamiento de la columna desde temperatura ambiente hasta 80°C. Se uso un detector de serie de 10 fotodiodos UV Agilent 1100 equipado con una celula de flujo de alta presion que soportaba hasta 400 bar. El flujo procedente de la columna se separo hasta un espectrometro de MS. El detector de MS se configuro con una fuente de ionizacion a presion atmosferica. Los siguientes parametros de ionizacion para el espectrometro de masas Waters ZQ son: corona: 9 pa, temperatura de la fuente: 140°C, cono: 30 V, temperatura de la sonda 450°C, extractor 3 V, gas de desolvatacion 400 l/h, gas del cono 70 l/h. Se uso nitrogeno como el gas nebulizador. La adquisicion de 15 datos se realizo con un sistema de datos MassLynx-Openlynx de Waters-Micromass.
Metodo 2
Ademas del procedimiento general B: La separacion quiral en SFC se llevo a cabo en una columna CHIRALPAK AD DAICEL (10 pm, 4,6 x 250 mm) a 35°C con un caudal de 3,0 ml/min. La fase movil es CO2, 60% de etanol, 40% de EtOH (que contiene iPrNH2 al 0,3%) mantenida 7 min.
20 Tabla 3: Datos analtticos de SFC - Rt significa tiempo de retencion (en min), [M+H]+ significa la masa protonada del compuesto, metodo se refiere al metodo usado para el analisis de SFC/MS de compuestos enantiomeramente puros.
Comp. N°
Rt [M+H]+ % Area UV Metodo Orden de Elucion de Isomeros* ee (%)
Producto intermedio A6(S)
5,35 230 100 1 A -
Producto intermedio A6(R)
6,88 230 100 1 B -
4
3,17 415 100 2 A -
5
4,17 415 100 2 B -
7
1,92 372 100 2 A -
8
3,05 372 100 2 B -
11
4,95 483 100 3 B -
12
4,01 483 100 3 A -
15
4,14 433 100 4 A -
16
5,17 433 100 4 B -
18
3,07 432 100 5 A -
19
4,15 432 100 5 B -
21
2,81 419 100 3 A -
22
4,17 419 100 3 B -
Comp. N°
Rt [M+H]+ % Area UV Metodo Orden de Elucion de Isomeros* ee (%)
27
4,37 433 89,33 6 A 79
28
4,97 446 70,11 7 A 40
31
3,33 446 100 3 A -
32
3,90 446 99,44 3 B -
39
5,20 449 91,51 6 A 83
40
3,40 454 93,61 7 A 88
*A significa el primer isomero que se eluye. B significa el segundo isomero que se eluye. El ee se evaluo en el caso de compuestos enantiomeramente no puros.
Rotaciones opticas:
5 Las rotaciones opticas se midieron en un polanmetro Perkin-Elmer 341 con una lampara de sodio y se presentan como sigue: [a]AtC(c g/100 ml, disolvente).
Tabla 4: Datos analtticos - Valores de la rotacion optica para compuestos enantiomeramente puros
Comp. N°
ao (°) Longitud de onda (nm) Concentracion p/v% Disolvente Temp. (° C)
4
+20,3 589 0,56 DMF 20
5
-31,6 589 0,5 DMF 20
7
-70,7 589 0,45 DMF 20
8
+45,6 589 0,41 DMF 20
11
12,0 589 0,50 MeOH 20
12
-18,8 589 0,50 MeOH 20
13
83,7 589 0,55 DMF 20
18
136,8 589 0,51 DMF 20
19
-140,8 589 0,50 DMF 20
21
-126,7 589 0,51 DMF 20
22
115,2 589 0,54 DMF 20
23
144,4 589 0,50 DMF 20
24
111,4 589 0,51 DMF 20
25
121,1 589 0,50 DMF 20
5
10
15
20
25
30
Comp. N°
ao (°) Longitud de onda (nm) Concentracion p/v% Oisolvente Temp. (° C)
29
111,0 589 0,51 DMF 20
31
17,9 589 0,50 MeOH 20
32
-26,4 589 0,50 MeOH 20
33
56,6 589 0,65 DMF 20
35
81,5 589 0,50 DMF 20
37
29,2 589 0,52 DMF 20
38
14,8 589 0,49 DMF 20
41
65,2 589 0,50 DMF 20
42
77,1 589 0,50 DMF 20
n.d. significa no determinado
Ejemplos farmacologicos
Los compuestos proporcionados en la presente invencion son inhibidores de la enzima de escision de APP en el sitio p 1 (BACE1). Se cree que la inhibicion de BACE1, una proteasa aspartica, es importante para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer (AD). Se cree que la produccion y acumulacion de peptidos de amiloide p (Ap) a partir de la protema precursora de amiloide p (APP) representa un papel clave en el comienzo y la progresion de la AD. El Ap se produce a partir de la protema precursora de amiloide (APP) mediante escision secuencial del extremo N y C del dominio de Ap por p-secretasa y Y-secretasa, respectivamente.
Se espera que los compuestos de Formula (I) tengan su efecto sustancialmente en BACE1 en virtud de su capacidad para inhibir la actividad enzimatica. Se muestran en la Tabla 3 el comportamiento de tales inhibidores probado usando un ensayo basado en transferencia de energfa por resonancia de fluorescencia (FRET, por sus siglas en ingles) y un ensayo de alisa celular en celulas SKNBE2 descritos posteriormente y que son adecuados para la identificacion de tales compuestos, y mas particularmente los compuestos segun la Formula (I).
Ensayo bioqmmico basado en FRET
Este ensayo es un ensayo basado en transferencia de energfa por resonancia de fluorescencia (FRET). El sustrato para este ensayo es un peptido de 13 aminoacidos derivado de APP que contiene la mutacion “sueca” Lys-Met/Asn- Leu del sitio de escision de 13-secretasa de la protema precursora de amiloide (APP). Este sustrato tambien contiene dos fluoroforos: el acido (7-metoxicumarin-4-il)acetico (Mca) es un donante fluorescente con una longitud de onda de excitacion a 320 nm y emision a 405 nm y el 2,4-dinitrofenilo (Dnp) es un aceptor desactivante patentado. La distancia entre esos dos grupos se ha seleccionado de modo que al excitar con luz, la energfa de fluorescencia del donante sea desactivada significativamente por el aceptor, a traves de transferencia de energfa de resonancia. Al escindir mediante BACE1, el fluoroforo Mca se separa del grupo desactivante Dnp, restaurando todo el rendimiento de fluorescencia del donante. El incremento en la fluorescencia esta relacionado linealmente con la velocidad de proteolisis (Koike H et al. J. Biochem. 1999, 126, 235-242). Brevemente, en un formato de 384 pocillos se incuba protema BACE1 recombinante en una concentracion final de 1 pg/ml durante 120 min. a temperatura ambiente con 10 pm de sustrato en tampon de incubacion (tampon de citrato 40 mM pH 5,0, PEG al 0,04%, DMSO al 4%) en ausencia o presencia de compuesto. A continuacion, la cantidad de proteolisis se mide directamente mediante medida de la fluorescencia a T=0 y T=120 (excitacion a 320 nm y emision a 405 nm). Los resultados se expresan en RFU, como diferencia entre T120 y T0. Una curva mejor ajustada se ajusta mediante un metodo de suma minima de cuadrados a la grafica de % Control min. frente a concentracion de compuesto. A partir de esta, se puede obtener un valor de IC50 (concentracion inhibidora que provoca 50% de inhibicion de la actividad).
LC = Mediana de los valores de control bajo
= Control bajo: Reaccion sin enzima
HC = Mediana de los valores de control alto = Control alto: Reaccion con enzima % Efecto = 100-[(muestra-LC)/(HC-LC) * 100]
% Control = (muestra(HC)*100 5 % Control min = (muestra-LC)/(HC-LC)*100
Los siguientes compuestos ejemplificados se probaron esencialmente como se describe anteriormente y exhibieron la siguiente actividad :
Tabla 5
Comp. N°
Ensayo bioquimico basado en FRET PIC50
1
6,28
2
7,08
3
7,33
4
4,67
5
7,43
6
7,25
7
7,75
8
4,86
9
5,1
10
7,2
11
7,55
12
5,06
13
7,14
14
7,45
15
7,73
16
5,98
17
7,24
18
7,65
19
5,01
Comp. N°
Ensayo bioquimico basado en FRET PIC50
20
7,18
21
<4,52
22
7,59
23
7,4
24
7,49
25
7,56
26
7,31
27
7,22
28
7,16
29
7,09
30
6,77
31
4,97
32
7,20
33
7,19
34
7,23
35
6,91
36
7,04
37
5,86
38
6,03
39
7,39
40
7,28
41
6,93
42
7,12
43
7,53
Ensayo celular de alisa en celulas SKNBE2
En dos ensayos de alisa, se cuantifican los niveles de Ap total y Ap42 producidos y secretados al medio de celulas SKNBE2 de neuroblastoma humano. El ensayo se basa en las SkNbE2 de neuroblastoma humano que expresan la protema precursora de amiloide natural (hAPP695). Los compuestos se diluyen y se anaden a estas celulas, se 5 incuban durante 18 horas y a continuacion se toman medidas de AU42 y AUtotal. AUtotal y AU42 se miden mediante alisa tipo sandwich. alisa es un ensayo tipo sandwich que usa anticuerpo AbN/25 biotinilado empalmado a cuentas revestidas con estreptavidina y cuentas aceptoras conjugadas a anticuerpo Ab4G8 o cAb42/26 para la deteccion de AUtotal y AU42, respectivamente. En presencia de AUtotal o AU42, las cuentas se aproximan mucho. La excitacion de las cuentas donantes provoca la liberacion de moleculas de oxfgeno singlete, lo que desencadena una cascada 10 de transferencia de energfa en las cuentas aceptoras, dando como resultado emision de luz. La emision de luz se mide despues de 1 hora de incubacion (excitacion a 650nm y emision a 615nm).
Una curva mejor ajustada se ajusta mediante un metodo de suma minima de cuadrados a la grafica de % Control min. frente a concentracion de compuesto. A partir de esta, se puede obtener un valor de IC50 (concentracion inhibidora que provoca 50% de inhibicion de la actividad).
15 LC = Mediana de los valores de control bajo
= Control bajo: celulas preincubadas sin compuesto, sin Ab biotinilado en el alisa
HC = Mediana de los valores de control alto
= Control alto: celulas preincubadas sin compuesto
% Efecto = 100-[(muestra-LC)/(HC-LC) * 100]
20 % Control = (muestra(HC)*100
% Control min = (muestra-LC)/(HC-LC)*100
Los siguientes compuestos ejemplificados se probaron esencialmente como se describe anteriormente y exhibieron la siguiente actividad :
Tabla 6
Ensayo celular de alisa en celulas SKNBE2 Ensayo celular de alisa en celulas SKNBE2
Comp. N°
AU42 AUtotal
pIC50 pIC50
1
7,03 7
2
8,49 8,61
3
8,49 8,47
4
5,84 5,84
5
8,59 8,55
6
8,24 8,29
7
8,66 8,69
8
6,13 6,13
9
6,00 6,06
Comp. N°
Ensayo celular de alisa en celulas SKNBE2 AB42 pIC50 Ensayo celular de alisa en celulas SKNBE2 Afttotal pIC50
10
7,78 7,81
11
7,94 8,01
12
5,64 5,75
13
8,17 8,26
14
8,87 8,93
15
9,33 9,37
16
7,66 7,74
17
7,40 7,48
18
7,52 7,54
19
5,28 5,13
20
7,07 7,18
21
<5 <5
22
7,17 7,21
23
8,75 8,71
24
8,48 8,41
25
8,88 8,87
26
8,83 8,84
27
8,15 8,17
28
8,28 8,20
29
7,79 7,77
30
7,43 7,45
31
5,58 5,61
32
7,76 7,84
33
8,09 8,14
5
10
15
20
25
30
Ensayo celular de alisa en celulas SKNBE2 Ensayo celular de alisa en celulas SKNBE2
Comp. N°
AB42 Afttotal
pIC50 pIC50
34
7,83 7,78
35
7,33 7,30
36
7,56 7,53
37
6,03 6,07
38
6,16 6,22
39
8,61 8,59
40
8,42 8,37
41
7,69 7,67
42
8,02 7,99
43
8,72 8,70
n.t. significa no probado
Demostracion de la eficacia in vivo
Los agentes de disminucion del peptido Ap de la invencion se pueden usar para tratar la AD en mairnferos tales como seres humanos o alternativamente demostrar eficacia en modelos en animales tales como, pero no limitados a, el raton, la rata o la cobaya. El mamffero puede no estar diagnosticado de AD, o pueden no tener una predisposicion genetica a la AD, pero puede ser transgenico de modo que sobreproduzca y finalmente deposite Ap de un modo similar al observado en seres humanos afectados de AD
Los agentes de disminucion del peptido Ap se pueden administrar en cualquier forma estandar usando cualquier metodo estandar. Por ejemplo, pero no limitado a, los agentes de disminucion del peptido Ap pueden estar en la forma de un lfquido, comprimidos o capsulas que se toman oralmente o mediante inyeccion. Los agentes de disminucion del peptido Ap se pueden administrar en cualquier dosis que sea suficiente para reducir significativamente los niveles de Ap en la sangre, el plasma sangumeo, el suero, el fluido cerebroespinal (CSF) o el cerebro.
Para determinar si una administracion aguda de un agente de disminucion del peptido Ap42 reducfa los niveles de peptido Ap in vivo, se usaron roedores, p. ej. ratones o ratas, no transgenicos. Los animales tratados con el agente de disminucion del peptido Ap fueron examinados y comparados con los no tratados o tratados con vehfculo y los niveles cerebrales de Ap42 soluble y Ap total se cuantificaron mediante tecnicas estandar, por ejemplo, usando ELISA. Los penodos de tratamiento variaron de horas (h) a dfas y se ajustaron basandose en los resultados de la disminucion de Ap42 una vez que se pudiera establecer un transcurso del tiempo de comienzo del efecto.
Se muestra un protocolo tfpico para medir la disminucion de Ap42 in vivo, pero solo es una de muchas variaciones que se podnan usar para optimizar los niveles de Ap detectable. Por ejemplo, los compuestos de disminucion del peptido Ap se formularon en hidroxipropil-p-ciclodextrina al 20%. Los agentes de disminucion del peptido Ap se administraron como una sola dosis oral (p.o.) o una sola dosis subcutanea (s.c.) a animales mantenidos en ayunas durante la noche. Despues de un cierto tiempo, habitualmente 2 o 4 h (como se indica en la Tabla 7), los animales fueron sacrificados y se analizaron los niveles de Ap42.
Se recogio sangre mediante decapitacion y exsanguinaciones en tubos de recogida tratados con EDTA. La sangre se centrifugo a 1.900 g durante 10 minutos (min.) a 4°C y el plasma se recupero y se congelo instantaneamente para el analisis posterior. El cerebro se extirpo del craneo y el rombencefalo. El cerebelo se extirpo y el hemisferio izquierdo y derecho se separaron. El hemisferio izquierdo se almaceno a -18°C para el analisis cuantitativo de los niveles de compuesto de prueba. El hemisferio derecho se enjuago con tampon de solucion salina tamponada con
5
10
15
20
25
fosfato (PBS) e inmediatamente se congelo sobre hielo seco y se almaceno a -80°C hasta la homogeneizacion para los ensayos bioqmmicos.
Cerebros de ratones de animales no transgenicos se resuspendieron en 8 volumenes de DEA (dietilamina) al 04%/NaCl 50 mM que conteman inhibidores de proteasa (Roche-11873580001 o 04693159001) por gramo de tejido, p. ej., para 0,158 g de cerebro, anadanse 1,264 ml de DEA al 0,4%. Todas las muestras se homogeneizaron en el sistema FastPrep-24 (MP Biomedicals) usando una matriz de lisis D (MPBio #6913-100) a 6 m/s durante 20 segundos. Los homogenados se centrifugaron 221.300 x g durante 50 min. Los sobrenadantes de alta velocidad resultantes se transfirieron a continuacion a tubos de Eppendorf recientes. Nueve partes de sobrenadante se neutralizaron con 1 parte de Tris-HCl 0,5 M pH 6,8 y se usaron para cuantificar AUtotal y AU42.
Para cuantificar la cantidad de AUtotal y AU42 en la fraccion soluble de los homogenados de cerebro, se usaron ensayos de inmunoabsorcion con enzimas ligadas. Brevemente, los patrones (una dilucion de Ap1-40 y Ap1-42 sinteticos, Bachem) se prepararon en un tubo de Eppendorf de 1,5 ml en Ultraculture, con concentraciones finales que variaban de 10.000 a 0,3 pg/ml. Las muestras y los patrones se coincubaron con anticuerpo N-terminal marcado con HRPO para la deteccion de AU42 y con el anticuerpo de dominio medio biotinilado 4G8 para la deteccion de AUtotal. A continuacion, se anadieron 50 pl de mezclas de conjugado/muestra o conjugado/patrones a la placa revestida con anticuerpo (los anticuerpos de captura reconocen selectivamente el extremo C-terminal de AU42, anticuerpo JRF/cAU42/26, para la deteccion de AU42, y el extremo N de AU, anticuerpo JRF/rAU/2, para la deteccion de AUtotal). La placa de dejo incubar durante la noche a 4°C a fin de permitir la formacion del complejo anticuerpo- amiloide. Despues de esta incubacion y las etapas de lavado posteriores, el ELISA para la cuantificacion de AU42 se acabo mediante la adicion de sustrato de peroxidasa fluorogenico Quanta Blu segun las instrucciones del fabricante (Pierce Corp., Rockford, Il). Se realizo una lectura despues de 10 a 15 min. (excitacion 320 nm/emision 420 nm).
Para la deteccion de AUtotal, se anadio un conjugado de estreptavidina-peroxidasa, seguido 60 min. despues por una etapa de lavado adicional y la adicion de sustrato de peroxidasa fluorogenico Quanta Blu segun las instrucciones del fabricante (Pierce Corp., Rockford, Il). Se realizo una lectura despues de 10 a 15 min. (excitacion 320 nm/emision 420 nm).
En este modelo, sena ventajoso al menos 20% de disminucion de AU42 en comparacion con animales no tratados.
Los siguientes compuestos ejemplificados se probaron esencialmente como se describe anteriormente y exhibfan la siguiente actividad:
Tabla 7:
Comp. N°
AP42 (%Ctrl)_Media Aptotal (%Ctrl)_Media Dosis Via de administracion Tiempo despues de la administracion
7
88 101 30 mg/kg p.o. 4 h
11
89 84 30 mg/kg p.o. 4 h
23
45 39 10 mg/kg p.o. 4 h
24
16 31 30 mg/kg p.o. 4 h
24
66 59 5 mg/kg p.o. 4 h
27
55 61 10 mg/kg p.o. 4 h
28
39 50 10 mg/kg p.o. 4 h
29
59 58 10 mg/kg p.o. 4 h
Comp. N°
AP42 (%Ctrl)_Media Aptotal (%Ctrl)_Media Dosis V^a de administracion Tiempo despues de la administracion
32
53 58 30 mg/kg p.o. 2 h
33
49 20 100 mg/kg s.c. 4 h
n.t. significa no probado; s.c. significa subcutanea ; p.o. significa oral

Claims (5)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    1. Un compuesto de Formula (I)
    imagen1
    o uno de sus tautomeros o una de sus formas estereoisomeras, en donde
    R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrogeno, halo, ciano, alquilo C1-3, mono- y polihalo-alquilo(Ci-3) y cicloalquilo C3-6;
    R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrogeno, alquilo C1-3, cicloalquilo C3-6, mono- y polihalo-alquilo(C1-3) homoariloy heteroarilo;
    X1, X2, X3, X4 son independientemente C(R4) o N, con la condicion de que no mas de dos de ellos representen N; cada R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrogeno, halo, alquilo C1-3, mono- y polihalo-alquilo(C1-3), ciano, alquiloxi C1-3, mono-y polihalo-alquiloxi(C1-3);
    L es un enlace o -N(R5)CO-, en donde R5 es hidrogeno o alquilo C1-3;
    Ar es homoarilo o heteroarilo;
    en donde el homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihalo-alquilo(C1-3), mono- y polihalo-alquiloxi(C1-3);
    el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo, piracilo, piridacilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, triazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, oxazolilo y oxadiazolilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3, mono- y polihalo-alquilo(C1-3), mono- y polihalo-alquiloxi(C1-3); o
    una de sus sales por adicion o uno de sus solvatos.
  2. 2. El compuesto segun la reivindicacion 1, en el que,
    R1 y R2 se seleccionan independientemente de hidrogeno y alquilo C1-3;
    X1, X2, X3, X4 son independientemente C(R4) en donde cada R4 se selecciona de hidrogeno y halo;
    L es un enlace o -N(R5)CO-, en donde R5 es hidrogeno;
    Ar es homoarilo o heteroarilo;
    en donde el homoarilo es fenilo o fenilo sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3y polihalo-alquiloxi(C1-3);
    heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo, pirimidilo y piracilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halo, ciano, alquilo C1-3, alquiloxi C1-3 y polihalo-alquiloxi(C1-3); o
    una de sus sales por adicion de acido o uno de sus solvatos.
  3. 3. El compuesto segun la reivindicacion 1, en el que,
    R1 y R2 son hidrogeno;
    X1, X2, X3, X4 son CH;
    L es un enlace o -N(R5)CO-, en donde R5 es hidrogeno;
    Ar es homoarilo o heteroarilo;
    5 en donde el homoarilo es fenilo sustituido con cloro;
    el heteroarilo se selecciona del grupo que consiste en piridilo y pirimidilo, cada uno opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en cloro, fluoro, ciano, metilo y metoxi; o
    una de sus sales por adicion o uno de sus solvatos.
  4. 4. El compuesto segun la reivindicacion 1, en el que el atomos de carbono sustituido con R3tiene la configuracion R.
    10 5. Una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto como el
    definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un excipiente farmaceuticamente aceptable.
  5. 6. Un procedimiento para preparar una composicion farmaceutica como la definida en la reivindicacion 5, caracterizado por que un excipiente farmaceuticamente aceptable se mezcla mtimamente con una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto como el definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.
    15 7. Un compuesto como el definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para el uso en el tratamiento, la
    prevencion o la profilaxis de la enfermedad de Alzheimer (AD), el deterioro cognitivo leve, la senilidad, la demencia, la demencia con cuerpos de Lewy, el srndrome de Down, la demencia asociada con apoplejfa, la demencia asociada con enfermedad de Parkinson o la demencia asociada con amiloide U.
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