EA028775B1

EA028775B1 - Производные 4-амино-6-фенил-6,7-дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-a]пиразина в качестве ингибиторов бета-секретазы (bace)

Info

Publication number: EA028775B1
Application number: EA201592307A
Authority: EA
Inventors: Дэниел Оельрих; Хенрикус Якобус Мария Гейсен
Original assignee: Янссен Фармацевтика Нв
Priority date: 2013-06-12
Filing date: 2014-06-12
Publication date: 2017-12-29
Also published as: BR112015030597A2; US20160130274A1; MX2015017155A; EP3008065B1; WO2014198854A1; AU2014280125B2; KR102243133B1; CA2911693A1; EP3008065A1; EA201592307A1; KR20160019893A; CA2911693C; CN105324383B; AU2014280125A1; US9751886B2; CN105324383A; MX366063B; JP6435321B2; ES2721073T3; JP2016520660A

Abstract

Настоящее изобретение относится к новым производным 6,7-дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-a]пиразин-6-ила формулы (I)где R-Rопределены в формуле изобретения, в качестве ингибиторов бета-секретазы, также известной как фермент, расщепляющий амилоид по бета-сайту, BACE, в частности BACE1 и/или BACE2 (где BACE1 также известен как Asp2 или мемапсин 2, и BACE2 также известен как Asp1, мемапсин 1 или DRAP). Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, к способам получения таких соединений и композиций и к применению таких соединений и композиций для предупреждения и лечения расстройств, в которые вовлечена бета-секретаза, таких как болезнь Альцгеймера (AD), умеренное когнитивное нарушение, старческое слабоумие, деменция, деменция с тельцами Леви, синдром Дауна, деменция, ассоциированная с инсультом, деменция, ассоциированная с болезнью Паркинсона, деменция альцгеймеровского типа, деменция, ассоциированная с накоплением бета-амилоида, возрастная макулодистрофия, диабет 2 типа и другие метаболические расстройства.

Description

Настоящее изобретение относится к новым производным 6,7-дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин6-ила в качестве ингибиторов бета-секретазы, также известной как фермент, расщепляющий амилоид по бета-сайту, ВАСЕ, в частности ВАСЕ1 и/или ВАСЕ2 (где ВАСЕ1 также известен как А§р2 или мемапсин 2, и ВАСЕ2 также известен как А§р1, мемапсин 1 или ΌΚΑΡ). Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения, к способам получения таких соединений и композиций и к применению таких соединений и композиций для предупреждения и лечения расстройств, в которые вовлечена бета-секретаза, выбранных болезни Альцгеймера (ΑΌ), умеренного когнитивного нарушения (МС1), нарушения памяти, старческого слабоумия, деменции, расстройства Альцгеймера с болезнью диффузных телец Леви, амилоидной ангиопатии, церебральной амилоидной ангиопатии, амилоидоза головного мозга (связанного и не связанного с возрастом), наследственной церебральной геморрагии с амилоидозом голландского типа, черепно-мозговой травмы (ΤΒΙ), височной эпилепсии (ТЬЕ), гипоксии, ишемии, нарушений метаболизма мозга, возрастной макулодистрофии, диабета 2 типа, амиотрофического бокового склероза (АЬ§), артериального тромбоза, аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний, рака, заболеваний сердечно-сосудистой системы, гипертензии, дерматомиозита, болезни, вызванной прионной инфекцией (болезни Крейтцфельда-Якоба) и заболеваний желудочно-кишечного тракта.

Предпосылки изобретения

Болезнь Альцгеймера (ΑΌ) представляет собой нейродегенеративное заболевание и является наиболее распространенной причиной деменции. Для ΑΌ характерными являются ранние проблемы с памятью и постепенное и прогрессивное ухудшение когнитивных функций, которые выходят за рамки нормального старения. Патологоанатомические исследования показали, что нейропатологические признаки заболевания включают внеклеточные амилоидные бляшки, главным образом состоящие из пептидов длинной от 38 до 43 аминокислот, называемые Αβ пептидом, и внутриклеточные нейрофибриллярные клубки с гиперфосфорилированным белком ΤΑυ в качестве характерного компонента.

Αβ пептиды образуются амилоидогенным путем из предшественника амилоидного белка (АРР). В рамках этого пути Αβ пептиды образуются посредством последовательного действия двух протеаз, β- и γ-секретазы. Активность β-секретазы проявляется ферментом 1, расщепляющим АРР по β-сайту, (ВАСЕ1), и ВАСЕ1-опосредованное расщепление АРР приводит к потере внеклеточного эктодомена АРР (δΑΡΡβ). Оставшийся мембраносвязанный С-концевой фрагмент (С99) далее подвергается действию γсекретазы, которая катализирует нетипичный протеолиз в пределах трансмембранного участка, что приводит к высвобождению внутриклеточного домена АРР (ΑΙΟΟ) в цитозоль и экзоцитозу Аβ пептидов во внеклеточное пространство. Большинство образованных Аβ имеют длину 40 аминокислотных остатков (Αβ40). Хотя форма из 42 остатков (Λβ42) является менее распространенной, она легче агрегирует с образованием фибрилл и в конечном итоге амилоидных бляшек.

Также исследования генетики человека дают веские основания предполагать, что Αβ играет ключевую роль в патогенезе ΑΌ наряду с патологией. На сегодняшний день, более 200 аутосомнодоминантных мутаций, которые приводят к семейной ΑΌ (ΡΑΌ) найдены в генах АРР и пресенилина, активной субъединицы γ-секретазы. Эти мутации всегда приводят либо к повышенному соотношению Аβ42 и Аβ40, либо гиперпродукции общего Аβ. Примечательно, что мутации ΡΑΌ в АРР найдены вблизи сайтов расщепления β- и γ-секретазой, и это делает АРР более подходящим субстратом для эндопротеолиза секретазами. Особое значение в данном случае представляют двойная (шведская) мутация Κ670Ν; М671Б и мутация Α673ν, которые находятся возле сайта расщепления β-секретазой и вызывают ΡΑΌ путем повышения действия β-секретазы и общей продукции Αβ. Интересно, что были идентифицированы генетические варианты, которые предохраняют от ΑΌ. Недавно было показано, что мутация в АРР с низкой частотой встречаемости, А673Т, замена в кодирующей последовательности, ассоциирована со сниженным риском ΑΌ и уменьшенным ослаблением когнитивных способностей в пожилом возрасте (Ιοηδδοη е! а1. 2012, ΝηΙηγο 488, 96-99). АРР, несущий замену А673Т, локализованную за две аминокислоты по отношению к сайту расщепления β-секретазой с С-конца, расщепляется β-секретазой менее эффективно, что приводит к ~40% снижению продукции Аβ ίη νίΐτο.

Расщепление АРР ферментом 1, расщепляющим АРР по бета-сайту, (ВАСЕ1) является ограничивающим скорость этапом образования Аβ пептида. ВАСЕ1 представляет собой мембраносвязанную аспартильную протеазу, которая проявляет оптимальную активность при слабо кислом рН. Хотя ВАСЕ1 локализован в различных органеллах, сообщается, что максимальной активностью он обладает в эндосомах и в меньшей степени в сети транс-Гольджи (ΤΟΝ), следовательно, наибольшее количество АРР поддается расщеплению ВАСЕ1 в эндоцитическом компартменте. Свидетельством того, что ВАСЕ-1 единственный представляет β-секретазную активность в головном мозге, являются наблюдения, согласно которым нокаутные по ВАСЕ-1 мыши полностью лишены как активности фермента β-секретазы, так и продукта β-расщепления, СТР99 (КоЬегбк е! а1., 2001, Нит. Мо1. Оепе! 10, 1317-1324, Ьио е! а1., 2001, Ναι. №иго8С1. 4, 231-232). Постоянные клинические исследования ингибиторов ВАСЕ1 подтверждают, что ВАСЕ1 единственный представляет β-секретазную активность в головном мозге человека, поскольку

- 1 028775 фармакологическое ингибирование ВАСЕ1 препятствует образованию Αβ.

Вскоре после открытия ВАСЕ1 была идентифицирована родственная мембраносвязанная аспарагиновая протеаза ВАСЕ2, последовательность которой на 64% аминокислот совпадает с ВАСЕ1. Хотя ВАСЕ2 способен образовывать Ав ίη νί!το, по-видимому, ίη νίνο, как уже отмечалось, этого не происходит. ВАСЕ1 и его гомолог ВАСЕ2 являются членами семейства пепсиноподобных аспарагиновых протеаз (катепсин Ό и Е, пепсин А и С, ренин, напсин А). Они представляют собой типичную структуру из двух функциональных частей с каталитическим сайтом, расположенным на границе между Ν- и С-концевой частью (Нопд е! а1., 2000, 8с1епсе 290, 150-153, Ок!егтапп е! а1., 2006, 1оита1 οί то1еси1аг Ъю1о§у, 355, (2), 249-61). ВАСЕ1 и 2 заякорены в клеточной мембране с помощью трансмембранного домена, который вместе с несколькими уникальными аминокислотными фрагментами и определенным образом расположенными тремя дисульфидными мостиками (Наши е! а1., 2000, 1. Βίο1. Сйет. 275, 21099-21106) отличает ВАСЕ от остальных членов семейства пепсина и дает возможность создавать довольно специфичные ингибиторы ВАСЕ1 и 2.

Наряду с АРР были описаны разновидности субстратов ВАСЕ1 и ассоциированных функций в С№ и периферических органах (Неттшд е! а1. 2009, ΡΕοδ ΟΝΕ 4, е8477, Кийп е! а1. 2012, ЕМВО 1. 31, 31573168; ΖΕου е! а1. 2012, 1. Βίο1. Сйет. 287, 25927-25940, δΐιιΐ/ег е! а1. 2013, 1. Βίο1. Сйет. 288, 10536-10547, рассмотренные в Уаккаг е! а1., 1. №игосйет. (2014) 10.1111/|пс.12715). Примерами субстратов ВАСЕ1 являются Ь1, СНЬ1, ОЬО1, РАМ, §ΕΖ6, 8ΕΖ6Ι.. 1а§1, ΝΚΟ1, ΝιΥβ2. УЕОРК1 и АРЬР1. Следовательно, ВАСЕ1 охватывает широкий спектр потенциальных физиологических функций, включающих, но не исключительно, клеточную дифференциацию, иммунорегуляцию, миелинизацию, синаптическое развитие и пластичность, гибель клеток, нейрогенез и аксональное наведение (^ап§ е! а1. Тгепйк ш РЕата^^^са1 8аепсек. Арг 2013, νο1 34, Νο. 4, рр. 215-225; Уап апй Уаккаг Ьапсе! №иго1. 2014, νο1. 13, рр. 319-329; Уап е! а1. 1. Акйешетк Όίκ. 2014, νο1. 38, Νο. 4, рр. 705-718).

Например, у нокаутных по ВАСЕ1 мышей потеря расщепления нейрегулина 1 (ΝΚΟ1) III типа приводила к нарушенной постнатальной миелинизации в ΡNА и ΟΝ8 (Р1еск е! а1. 2012, Сигг. А1/йеипег Кек. 9, 178-183; \УП1ет е! а1. 2009, 8етт. Се11 Эеу. Βίο1. 20, 175-182). Потеря расщепления ΝΚΟ1 I типа приводит к аномальному образованию нервно-мышечного веретена и его поддерживанию и ассоциированным дефектам координации движения (Сйеге! е! а1. 2013). Воздействие ВАСЕ1 на β-субъединицы потенциалзависимых натриевых каналов осуществляет контроль плотности КаУ каналов клеточной поверхности, нервной возбудимости и заторможенной восприимчивости (Кип е! а1. 2011, I. Βίο1. Сйет. 286, 81068116). Известно, что ВАСЕ1-зависимое расщепление СНЬ1 вовлечено в прорастание аксонов и выживание нейронов (Шик е! а1. 2004, I. Βίο1. Сйет. 279, 16083-16090). ΒАСΕ1-зависимое расщепление 1ад1 регулирует постнатальный нейрогенез и образование астроглии путем модулирования сигнального пути ΝοίΟι 1.

Таким образом, в дополнение к болезни Альцгеймера, синдрому Дауна и связанным с ними заболеваниями ингибирование ВАСЕ может найти терапевтическое и/или профилактическое лечебное применение при состояниях, таких как черепно-мозговая травма (ΤΒ^, височная эпилепсия (ТЬЕ), гипоксия, ишемия, клеточный стресс, нейровоспалительные расстройства, нарушения метаболизма мозга, возрастная макулодистрофия, синдром Шегрена, спиноцеребеллярная атаксия 1 типа, спиноцеребеллярная атаксия 7 типа, болезнь Уиппла и болезнь Вильсона, возрастная макулодистрофия, амиотрофический боковой склероз (АЬ8), артериальный тромбоз, аутоиммунные/воспалительные заболевания, заболевания сердечнососудистой системы, такие как инфаркт миокарда и инсульт, дерматомиозит, заболевания желудочно-кишечного тракта, мультиформная глиобластома, болезнь Грейвса, болезнь Хантингтона, миозит с включенными тельцами (ΓΒΜ), воспалительные реакции, саркома Капоши, болезнь Костманна, красная волчанка, макрофагальный миофасциит, ювенильный идиопатический артрит, гранулематозный артрит, злокачественная меланома, множественная миелома и ревматоидный артрит.

Также ВАСЕ2 характеризуется широким профилем экспрессии с относительно высокими уровнями экспрессии в большинстве типов различных клеток и органах периферии и низким уровнем экспрессии в астроцитах головного мозга. Как уже отмечалось, также ВАСЕ2 имеет широкий спектр субстратов, примером чего является исследование вышеупомянутых панкреатических островков (δΐπΐ/ег е! а1. 2013).

ВАСЕ2 экспрессируется в β-клетках поджелудочной железы, где он расщепляет Ттет27 (Ек!егйагу е! а1. Се11 Μе!аЪο1^кт 2011). Ингибирование ВАСЕ2, таким образом, может предусматривать потенциальный механизм, который приводит к увеличенной массе β-клеток, и потенциальный принцип действия в отношении лечения и предупреждения диабета 2 типа.

Известно также, что ВАСЕ2 участвует в расщеплении АРР (^ап§ е! а1. Тгепйк ш Ρйа^тасο1οд^са1 8шепсек, Арг 2013, νο1. 34, Νο. 4, рр. 215-225), ГО-1К2 (Кийп е! а1. I. Βίο1. Сйет. 2007, νο1. 282, Νο. 16, рр. 11982-11995) и белка меланоцитов, специфичного для пигментных клеток (РМЕЬ) (ΚοΟιίπ е! а1. ΡNАδ, .Типе 25, 2013, νο1. 110, Νο. 26, рр. 10658-10663), таким образом, указывая на потенциальное применение ингибиторов ВАСЕ2 при лечении синдрома Дауна, гипертензии, злокачественной меланомы и множественной меланомы. При раке молочной железы у человека ВАСЕ2 подвергается положительной регуляции (^п^й е! а1. Β^еак! Сапсег Кек.Тгеа!., 2003, νο1. 78, рр. 37-44), и, таким образом, ингибиторы

- 2 028775

ВАСЕ2 могут обеспечить потенциальную возможность лечения форм рака молочной железы.

Ингибиторы ВАСЕ1 и/или ВАСЕ2, таким образом, могут быть пригодными для терапевтического и/или профилактического лечения болезни Альцгеймера (ΑΌ), умеренного когнитивного нарушения, старческого слабоумия, деменции, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с инсультом, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, деменции, ассоциированной с накоплением бета-амилоида. В дополнение к болезни Альцгеймера и связанным с ней заболеваниям ингибирование ВАСЕ может найти терапевтическое и/или профилактическое лечебное применение при состояниях, таких как черепно-мозговая травма (ΤΒΙ), височная эпилепсия (ТЕЕ), гипоксия, ишемия, клеточный стресс, нейровоспалительные расстройства, нарушения метаболизма мозга, возрастная макулодистрофия, синдром Шегрена, спиноцеребеллярная атаксия 1 типа, спиноцеребеллярная атаксия 7 типа, болезнь Уиппла и болезнь Вильсона, возрастная макулодистрофия, амиотрофический боковой склероз (ΑΕ8), артериальный тромбоз, аутоиммунные/воспалительные заболевания, заболевания сердечно-сосудистой системы, такие как инфаркт миокарда и инсульт, дерматомиозит, заболевания желудочно-кишечного тракта, мультиформная глиобластома, болезнь Грейвса, болезнь Хантингтона, миозит с включенными тельцами (ΙΒΜ), воспалительные реакции, саркома Капоши, болезнь Костманна, красная волчанка, макрофагальный миофасциит, ювенильный идиопатический артрит, гранулематозный артрит, злокачественная меланома, множественная миелома и ревматоидный артрит, диабет 2 типа и другие метаболические расстройства, гипертензия, злокачественная меланома, и множественная миелома, и рак молочной железы.

В АО 2012/117027 (1ап88еп РЕагшасеибса Νν) производные 4-амино-6-фенил-6,7дигидропиразоло[1,5-а]пиразина раскрыты в качестве ингибиторов ВАСЕ. Пригодные в качестве ингибиторов ВАСЕ конденсированные производные аминодигидропиримидина описаны в АО 2012/057247 (8Εΐοηο§ΐ & Со., Είά.).

Краткое описание изобретения

Целью настоящего изобретения является обеспечение соединений с ингибиторной активностью в отношении ВАСЕ. Настоящее изобретение относится к производным 6,7-дигидро[1,2,3]триазоло[1,5а]пиразин-6-ила формулы (I)

и их стереоизомерным формам, где К¹ выбран из водорода и галогена;

К² представляет собой С]_-4алкил, необязательно замещенный одним или несколькими атомами фтора;

К³ в каждом случае представляет собой независимо выбранный галогеновый заместитель; п является целым числом, выбранным из 1 и 2;

К⁴ представляет собой

где К⁵ представляет собой гетероарил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, -ίΝ, С]_-4алкила, необязательно замещенного одним или несколькими галогеновыми заместителями, и С]_-4алкилокси, необязательно замещенного одним или несколькими галогеновыми заместителями;

где гетероарил является 5-членным ароматическим гетероциклом, выбранным из группы, состоящей из оксазола и пиразола; или является 6-членным ароматическим гетероциклом, выбранным из группы, состоящей из пиридинила, пиримидинила и пиразинила;

и их фармацевтически приемлемым солям присоединения и сольватам.

Иллюстрацией настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество любого из соединений, описанных выше. Иллюстрацией настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, полученная путем смешивания терапевтически эффективного количества любого из соединений, описанных выше, и фармацевтически приемлемого носителя. Иллюстрацией настоящего изобретения является способ получения фармацевтической композиции, предусматривающий смешивание терапевтически эффективного количества любого из соединений, описанных выше, и фармацевтически приемлемого носителя.

Примером настоящего изобретения является применение любого из соединений или фармацевтических композиций, описанных в настоящем документе, в качестве лекарственного средства, обладающего ингибирующей активностью в отношении бета-секретазы.

Примером настоящего изобретения является способ лечения или предупреждения расстройства,

- 3 028775 выбранного из группы, состоящей из болезни Альцгеймера (ΑΌ), умеренного когнитивного нарушения (МС1), нарушения памяти, старческого слабоумия, деменции, деменции с тельцами Леви, деменции с прогрессирующим нуклеарным параличом, деменции с кортикобазальной дегенерацией, смешанной деменции альцгеймеровского и сосудистого типа, расстройства Альцгеймера с болезнью диффузных телец Леви, амилоидной ангиопатии, церебральной амилоидной ангиопатии, мультиинфарктной деменции, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, сенильной деменции альцгеймеровского типа, сосудистой деменции, деменции, обусловленной заболеванием, ассоциированным с Ηΐν, деменции, обусловленной травмой головы, деменции, обусловленной болезнью Хантингтона, деменции, обусловленной болезнью Пика, деменции, обусловленной болезнью Крейтцфельда-Якоба, лобно-височной деменции, деменции боксеров, деменции, ассоциированной с накоплением бета-амилоида, амилоидоза головного мозга и других органов (связанного и не связанного с возрастом), наследственной церебральной геморрагии с амилоидозом голландского типа, черепномозговой травмы (ΤΒΙ), височной эпилепсии (ТЬЕ), гипоксии, ишемии, нарушений метаболизма мозга, возрастной макулодистрофии, диабета 2 типа, амиотрофического бокового склероза (АЬ§), артериального тромбоза, аутоиммунныхзаболеваний, воспалительных заболеваний, рака, заболеваний сердечнососудистой системы, гипертензии, дерматомиозита, болезни, вызванной прионной инфекцией (болезни Крейтцфельда-Якоба) и заболеваний желудочно-кишечного тракта, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества любого из соединений или фармацевтических композиций, описанных в настоящем документе.

Дополнительным примером настоящего изобретения является способ лечения нейрокогнитивного расстройства (Νί',Ό). выбранного из нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Альцгеймера, обусловленного черепно-мозговой травмой (ΤΒΐ), обусловленного болезнью с тельцами Леви, обусловленного болезнью Паркинсона, или сосудистого Νί',Ό (как например, сосудистого ΝΟΌ, присутствующего при множественных инфарктах), включающий введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества любого из соединений или фармацевтических композиций, описанных в настоящем документе.

Другим примером настоящего изобретения применение любого из соединений, описанных выше, для лечения или предупреждения заболевания или состояния, выбранного из нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Альцгеймера, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного черепно-мозговой травмой, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью диффузных телец Леви, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Паркинсона, сосудистого нейрокогнитивного расстройства и диабета 2 типа у нуждающегося в этом субъекта.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), которая определена в настоящем документе выше, и их фармацевтически приемлемым солям и сольватам. Соединения формулы (I) представляют собой ингибиторы фермента бета-секретазы (также известного как фермент, расщепляющий по бета-сайту, ВАСЕ, в частности, ВАСЕ1 (также известного как А§р2 или мемапсин 2) и/или ВАСЕ2 (также известного как А§р1, мемапсин 1 или ΌΚΑΡ)), и их можно применять в лечении или предупреждении болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения, старческого слабоумия, деменции, деменции, ассоциированной с инсультом, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, деменции, ассоциированной с накоплением бета-амилоида, возрастной макулодистрофии, диабета 2 типа и других метаболических расстройств, предпочтительно болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения или деменции, диабета 2 типа и других метаболических расстройств, более предпочтительно, болезни Альцгеймера и/или диабета 2 типа. Кроме того, соединения формулы (I) могут быть пригодными в лечении нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Альцгеймера, обусловленного черепно-мозговой травмой (ΤΒΙ), обусловленного болезнью с тельцами Леви, обусловленного болезнью Паркинсона, или сосудистого ΝΟΌ (как например, сосудистого ΝΟΌ, присутствующего при множественных инфарктах). В частности, соединения формулы (I) могут быть пригодными в лечении болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения, старческого слабоумия, деменции, деменции, ассоциированной с инсультом, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа и деменции, ассоциированной с накоплением бета-амилоида, предпочтительно болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения или деменции, более предпочтительно болезни Альцгеймера. Кроме того, соединения формулы (I) могут быть пригодными в лечении нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Альцгеймера, обусловленного черепномозговой травмой (ТВЦ, обусловленного болезнью с тельцами Леви, обусловленного болезнью Паркинсона, или сосудистого ΝΟΌ (как например, сосудистого ΝΟΌ, присутствующего при множественных инфарктах). В частности, соединения формулы (I) могут быть пригодными в лечении или предупреждении болезни Альцгеймера (или деменции альцгеймеровского типа, или нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Альцгеймера). В частности, соединения формулы (I) могут быть пригодными в лечении или предупреждении диабета 2 типа.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I),

- 4 028775 которая определена в настоящем документе выше, и к их стереоизомерным формам, где К¹ выбран из водорода и галогена;

К² представляет собой С_1-4алкил, необязательно замещенный одним или несколькими атомами фтор^а;

К³ в каждом случае представляет собой независимо выбранный галогеновый заместитель; η является целым числом, выбранным из 1 и 2;

К⁴ представляет собой

где К⁵ представляет собой гетероарил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, -СЫ, С_1-4алкила, необязательно замещенного одним или несколькими галогеновыми заместителями, и С_1-4алкилокси, необязательно замещенного одним или несколькими галогеновыми заместителями;

а также к их фармацевтически приемлемым солям присоединения и сольватам.

В одном варианте осуществления по настоящему изобретению К¹ представляет собой водород или галоген, в частности, водород, и остальные переменные являются такими, как определено в формуле (I) в настоящем документе.

В одном варианте осуществления по настоящему изобретению К² представляет собой С_1-4алкил, необязательно замещенный одни или несколькими галогеновыми заместителями, в частности, фторзаместителями, и остальные переменные являются такими, как определено в формуле (I) в настоящем документе.

В одном варианте осуществления по настоящему изобретению К² представляет собой С_1-4алкил, и остальные переменные являются такими, как определено в формуле (I) в настоящем документе.

В другом варианте осуществления по настоящему изобретению К⁴ является н у

К⁵ где К⁵ является гетероарилом, необязательно замещенным одним или несколькими заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы галогена, -СЫ, С_1-4алкила, необязательно замещенного одним или несколькими галогеновыми заместителями, и С1-4алкилокси, необязательно замещенного одним или несколькими галогеновыми заместителями;

где гетероарил является 5-членным ароматическим гетероциклом, выбранным из оксазола и пиразола; или является 6-членным ароматическим гетероциклом, выбранным из группы, состоящей из пиридинила, пиримидинила и пиразинила;

и остальные переменные являются такими, как определено в формуле (I) в настоящем документе.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), которая определена в настоящем документе выше, и к их стереоизомерным формам, где

К¹ представляет собой водород;

К² представляет собой С_1-4алкил, необязательно замещенный одним или несколькими галогеновыми заместителями, в частности, фтор-заместителями, более конкретно 1-3 фтор-заместителями; К³ представляет собой галоген, в частности фтор; и η равняется 1 или 2;

К⁴ представляет собой

где К⁵ представляет собой пиразол, пиридинил, пиримидинил или пиразинил, каждый из которых необязательно может быть замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы галогена, -СЫ, С_1-4алкила, необязательно замещенного 1-3 галогеновыми заместителями, в частности фтор-заместителями, и С_1-4алкилокси, необязательно замещенного 1-3 галогеновыми заместителями;

и к их фармацевтически приемлемым солям и сольватам.

К¹ представляет собой водород;

К² представляет собой С_1-4алкил;

К³ представляет собой галоген, в частности фтор; и

- 5 028775 η равняется 1;

К⁴ представляет собой где К⁵ представляет собой пиразол, пиридинил, пиримидинил или пиразинил, каждый из которых необязательно может быть замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы галогена, -ΟΝ и С_1-4алкилокси, необязательно замещенного одним или несколькими галогеновыми заместителями;

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), которая определена в настоящем документе выше, и к их стереоизомерным формам, где

К¹ представляет собой водород;

К² представляет собой С_1-4алкил; К³ представляет собой галоген, в частности, фтор; и η равняется 1;

К⁴ представляет собой .Ν.

X

к.⁵ где К⁵ представляет собой пиразол, пиридинил, пиримидинил или пиразинил, каждый из которых необязательно может быть замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы галогена, ^Ν и С_1-4алкилокси, необязательно замещенного одним или несколькими фтор-заместителями;

К¹ представляет собой водород;

К² представляет собой С_1-4алкил;

К³ представляет собой галоген, в частности фтор; и η равняется 1;

К⁴ представляет собой

где К⁵ представляет собой пиридинил, пиримидинил или пиразинил, каждый из которых необязательно может быть замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы галогена, ^Ν и С_1-4алкилокси;

В еще одном дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), которая определена в настоящем документе выше, где четвертичный атом углерода, замещенный К², имеет конфигурацию, отображенную в структуре (I') ниже, где 5,6-дигидроимидазо[1,5а]пиразин-3(2Н)-оновое ядро находится в плоскости рисунка, К² направлен назад относительно плоскости рисунка (связь показана в виде клина из параллельных линий Н ^{1 1} '), и Аг выступает над плоскостью рисунка (связь показана жирной клиновидной линией где Аг представляет собой в частности, Аг представляет собой

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), которая определена в настоящем документе выше, со структурой (Га)

- 6 028775

(1а'), и их стереоизомерным формам, где

К¹ представляет собой водород;

К² представляет собой С_1-4алкил, необязательно замещенный одним или несколькими галогеновыми заместителями, в частности фтор-заместителями, более конкретно 1 -3 фтор-заместителями;

п' равняется 0 или 1;

К⁴ представляет собой (а)

где К⁵ представляет собой пиразол, пиридинил, пиримидинил или пиразинил, каждый из которых необязательно может быть замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы галогена, -СН С_1-4алкила, необязательно замещенного 1-3 галогеновыми заместителями, в частности фтор-заместителями, и С_1-4алкилокси, необязательно замещенного 1-3 галогеновыми заместителями;

Конкретные соединения в соответствии с настоящим изобретением включают

Ν-{3-[(6К)-4-амино-б-метил-б,7дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-б-ил]-4-фторфенил}5-метоксипиразин-2-карбоксамид;

- 7 028775

Ν- {3- [ (6Κ) -4-амино-б-метил-6,7дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4-фторфенил}5-цианопиридин-2-карбоксамид;

Ν- {3- [ (6К)-4-амино-б-метил-6,7дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-б-ил]-4-фторфенил}5-фторпиридин-2-карбоксамид и Ν- {3- [ (6Я)-4-амино-б-метил-6,7дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4-фторфенил}5-хлорпиридин-2-карбоксамид;

М- {3- [ (6К)-4-амино-б-метил-6,7дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4-фторфенил}5-(2,2,2-трифторэтокси)пиразин-2-карбоксамид;

Ν- {3- [ (6Я)-4-амино-б-метил-6,7дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4-фторфенил}4- хлор-1-(дифторметил)-1Я-пиразол-3-карбоксамид;

М- {3- [ (6Я)-4-амино-б-метил-6,7дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4-фторфенил}5- (фторметокси)пиразин-2-карбоксамид;

(рац)-Ν- {3-[4-амино-б-(фторметил)-6,7дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4-фторфенил}5-фторпиридин-2-карбоксамид;

М- {3- [ (65)-4-амино-б-(фторметил)-6,7дигидро [1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-б-ил]-4-фторфенил}5-фторпиридин-2-карбоксамид;

Ν- {3- [ (6Я)-4-амино-б-(фторметил)-6,7дигидро [1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4-фторфенил}5-фторпиридин-2-карбоксамид и М-{3-[(6Я)-4-амино-б-метил-б,7дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4,5дифторфенил}-5-фторпиридин-2-карбоксамид и фармацевтически приемлемые соли и сольваты таких соединений.

Определения

Используемый в настоящем документе С_1-4алкил отдельно или как часть другой группы означает насыщенный, линейный или разветвленный углеводородный радикал с 1, 2, 3 или 4 атомами углерода, такой как метил, этил, 1-пропил, 1-метил, бутил, 1-метилпропил, 2-метил-1-пропил, 1,1-диметилэтил и т.п. С_1-4алкилокси будет означать эфирный радикал, где С_1-4алкил является таким, как определено в настоящем документе. Галоген будет обозначать фтор, хлор или бром. С_3-7циклоалкил будет обозначать циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.

Предполагается, что термин замещенный во всех случаях использования в настоящем изобретении означает, если не указано иное или четко не следует из контекста, что один или несколько атомов водорода, предпочтительно от 1 до 3 атомов водорода, или от 1 до 2 атомов водорода, или 1 атом водорода, на атоме или радикале, обозначенном с использованием выражения замещенный, замещены выбранным из указанной группы, при условии, что не превышается нормальная валентность, и что замещение дает в результате химически стабильное соединение, т.е. соединение, которое является достаточно устойчивым, чтобы выдержать выделение из реакционной смеси до пригодной степени чистоты и составление в терапевтическое средство.

Используемый в настоящем документе термин субъект относится к животному, предпочтительно к млекопитающему, наиболее предпочтительно к человеку, которое является или являлось объектом лечения, наблюдения или исследования.

Используемый в настоящем документе термин терапевтически эффективное количество означает, что количество активного соединения или фармацевтического средства, которое вызывает биологический или медицинский эффект в системе тканей у животного или человека, которого стремится достичь исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист, и который включает облегчение симптомов заболевания или расстройства, подлежащего лечению.

Используемый в настоящем документе термин композиция предназначен для охвата продукта,

- 8 028775 содержащего определенные ингредиенты в определенных количествах, а также любого продукта, который получают, прямо или опосредованно, в результате комбинирований определенных ингредиентов в определенных количествах.

Выше и ниже в настоящем документе термин соединение формулы (I) следует понимать как включающее его соли присоединения, сольваты и стереоизомеры.

Термины стереоизомеры или стереохимические изомерные формы ранее и далее в настоящем документе используются взаимозаменяемо.

Настоящее изобретение включает все стереоизомеры соединения формулы (I) или в виде чистого стереоизомера, или в виде смеси из двух или более стереоизомеров.

Энантиомеры являются стереоизомерами, которые представляют собой несовпадающие зеркальные отражения друг друга. Смесь 1:1 пары энантиомеров представляет собой рацемат или рацемическую смесь. Диастереомеры (или диастереоизомеры) представляют собой стереоизомеры, которые не являются энантиомерами, т.е. они не соотносятся как зеркальные отражения. Следовательно, настоящее изобретение включает энантиомеры, диастереомеры, рацематы.

Абсолютную конфигурацию определяют согласно системе Кана-Ингольда-Прелога. Конфигурация при асимметричном атоме обозначается либо К, либо 8. Растворенные соединения, абсолютная конфигурация которых не известна, могут быть обозначены (+) или (-) в зависимости от направления, в котором они вращают плоскополяризованный свет.

Если указан конкретный стереоизомер, это означает, что указанный стереоизомер практически чистый, т.е. связан с менее 50%, предпочтительно менее 20%, более предпочтительно менее 10%, еще более предпочтительно менее 5%, в частности менее 2% и наиболее предпочтительно менее 1% других изомеров. Таким образом, если соединение формулы (I) указано, например, как (К), это означает, что соединение практически не содержит (8)-изомер.

Кроме того, некоторые кристаллические формы соединений по настоящему изобретению могут существовать в виде полиморфов, и в качестве таковых предполагается их включение в настоящее изобретение. В дополнение, некоторые из соединений по настоящему изобретению могут образовывать сольваты с водой (т.е. гидраты) или обычными органическими растворителями, при этом также предполагается, что такие сольваты охватываются объемом настоящего изобретения.

Что касается применения в медицине, соли соединений по настоящему изобретению относятся к нетоксичным фармацевтически приемлемым солям. Однако при получении соединений согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемых солей могут быть использованы другие соли. Пригодные фармацевтически приемлемые соли соединений включают соли присоединения кислоты, которые могут быть образованы, например, путем смешивания раствора соединения с раствором фармацевтически приемлемой кислоты, такой как хлористоводородная кислота, серная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, уксусная кислота, бензойная кислота, лимонная кислота, винная кислота, угольная кислота или фосфорная кислота. Кроме того, если соединения по настоящему изобретению имеют кислотный фрагмент, их пригодные фармацевтически приемлемые соли могут включать соли щелочных металлов, например, соли натрия или калия; соли щелочно-земельных металлов, например, соли кальция или магния; и соли, образованные с пригодными органическими лигандами, например, соли четвертичного аммония.

Иллюстративные кислоты, которые можно применять при получении фармацевтически приемлемых солей, включают без ограничения следующие: уксусную кислоту, 2,2-дихлоруксусную кислоту, ацилированные аминокислоты, адипиновую кислоту, альгиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, Ьаспарагиновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, бензойную кислоту, 4-ацетамидобензойную кислоту, (+)-камфорную кислоту, камфорсульфоновую кислоту, каприновую кислоту, капроновую кислоту, каприловую кислоту, коричную кислоту, лимонную кислоту, цикламовую кислоту, этан-1,2дисульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, 2-гидроксиэтансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, фумаровую кислоту, галактаровую кислоту, гентизиновую кислоту, глюкогептоновую кислоту, Ό-глюконовую кислоту, Ό-глюкуроновую кислоту, Ь-глутаминовую кислоту, бета-оксоглутаровую кислоту, гликолевую кислоту, гиппуровую кислоту, бромисто-водородную кислоту, хлористо-водородную кислоту, (+)-Ь-молочную кислоту, (±)-ОЬ-молочную кислоту, лактобионовую кислоту, малеиновую кислоту, (-)-Ь-яблочную кислоту, малоновую кислоту, (±)-ОЬ-миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, нафталин-1,5-дисульфоновую кислоту, 1-гидрокси-2нафтойную кислоту, никотиновую кислоту, азотную кислоту, олеиновую кислоту, оротовую кислоту, щавелевую кислоту, пальмитиновую кислоту, памовую кислоту, фосфорную кислоту, Ьпироглутаминовую кислоту, салициловую кислоту, 4-аминосалициловую кислоту, себациновую кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту, серную кислоту, дубильную кислоту, (+)-Ь-винную кислоту, тиоциановую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, трифторметилсульфоновую кислоту и ундециленовую кислоту. Иллюстративные основания, которые можно использовать при получении фармацевтически приемлемых солей, без ограничения включают следующие: аммиак, Ь-аргинин, бенетамин, бензатин, гидроксид кальция, холин, диметилэтаноламин, диэтаноламин, диэтиламин, 2-(диэтиламино)- 9 028775 этанол, этаноламин, этилендиамин, Ν-метилглюкамин, гидрабамин, 1Н-имидазол, Ь-лизин, гидроксид магния, 4-(2-гидроксиэтил)морфолин, пиперазин, гидроксид калия, 1-(2-гидроксиэтил)пирролидин, вторичный амин, гидроксид натрия, триэтаноламин, трометамин и гидроксид цинка.

Названия соединений по настоящему изобретению образовывали в соответствии с правилами номенклатуры, согласованными с Химической реферативной службой (СЛ8), с использованием программного обеспечения от Лйуапсей Сйеш1са1 Эеуе1оршеп1, ^с., (ЛСЭ/Ыаше ргойис! версия 10.01; сборка 15494, 1 декабря 2006 или ЛСП/Сйеш8ке1сй ргойис! версия 12.5; сборка 47877, 20 апреля 2011) или в соответствии с правилами номенклатуры, согласованными с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ШРЛС), с использованием программного обеспечения от Лйуапсей Сйеш1са1 Эеуе1оршеп!, ^с., (ЛСЭ/Ыаше ргойис! версия 10.01.0.14105, октябрь 2006). В случае таутомерных форм составляли название представленных таутомерных форм структуры. Другие не представленные таутомерные формы также включены в объем настоящего изобретения.

Получение соединений

А. Получение конечных соединений

Экспериментальная процедура 1.

Конечные соединения в соответствии с формулой (I), где К⁴ представляет собой -ЫНСОК⁵, называемой в настоящем документе ^-а), можно получать с помощью реакции промежуточного соединения формулы (П-а) с промежуточным соединением формулы (III) (схема реакции 1). Реакцию можно проводить в пригодном растворителе, таком как метанол (МеОН), в присутствии конденсирующего средства, такого как гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида или хлорид 4-(4,6-диметокси1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолина, в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, обычно к.т., в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.

Промежуточное соединение формулы (III) можно приобрести коммерческим путем или синтезировать согласно описанным в литературе процедурам. На схеме реакции 1 все переменные определены в формуле (I).

Экспериментальная процедура 2.

В качестве альтернативы, конечные соединения в соответствии с формулой (I), где К⁴ представляет собой -К⁶, называемой в настоящем документе ^-Ъ), можно получать с помощью реакции промежуточного соединения формулы ^ν-а) с промежуточным соединением формулы (У-а) (схема реакции 2). Реакцию можно проводить в пригодном растворителе, таком как 1,4-диоксан, в присутствии пригодного основания, такого как карбонат натрия (Ыа₂СО₃), в присутствии Рй-комплекса в качестве катализатора, такого как комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен-дихлорид палладия(П) в дихлорметане, в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, обычно 100°С, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.

Промежуточное соединение формулы (У-а) можно приобрести коммерческим путем или синтезировать согласно описанным в литературе процедурам. На схеме реакции 2 X представляет собой галоген, К^а и К^Ъ могут представлять собой водород или С].₄алкил или могут быть взяты вместе с образованием, например, бивалентного радикала формулы -СН₂СН₂-, -СН₂СН₂СН₂- или -С(СН₃)₂С(СН₃)₂-, и все другие переменные определены в формуле (I).

В. Получение промежуточных соединений

Экспериментальная процедура 3а.

Промежуточные соединения формулы (П-а) можно получать посредством катализируемой медью реакции конденсации промежуточного соединения формулы ^У-а) с азидом натрия в присутствии медного катализатора, такого как йодид медиД), в присутствии пригодного лиганда, такого как Ν,Ν'диметилэтилендиамин, в присутствии пригодного основания, такого как Ыа₂СО₃, и пригодного растворителя, такого как диметилсульфоксид (ДМСО). Дегазирование реакционной смеси инертным газом, таким как Ν2 или аргон, и нагревание реакционной смеси до высоких температур, как например, при приблизи- 10 028775 тельно 110°С, могут увеличить выход реакции. На схеме реакции 3 а X представляет собой галоген, и все другие переменные определены в формуле (I).

Экспериментальная процедура 3Ь.

Промежуточные соединения в соответствии с формулой (ΙΙ-Ь) можно получать из соответствующего промежуточного соединения формулы (Ιν-а) согласно известным в данной области техники процедурам связывания по типу Бухвальда-Хартвига между промежуточным соединением формулы (Ιν-а) и (VЬ), получая промежуточного соединения формулы (ΙΙ-Ь), с последующим гидролизом (ΙΙ-Ь), получая (IIа), в соответствии со схемой реакции 3Ь. Указанное связывание Бухвальда-Хартвига можно проводить при помощи обработки промежуточных соединений формулы (Ιν-а) промежуточным соединением формулы (ν-Ь) в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, толуол, в присутствии подходящего основания, такого как, например, трет-бутоксид натрия, катализатора на основе комплекса Ρά, такого как, например, трис(дибензилиденацетон)палладий(0) [Рб₂(бЬа)₃, САЗ 51364-51-3], фосфинового лиганда, такого как, например, рацемический 2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил [рац-ΒΙΝΑΡ, САЗ 98327-87-8] в термических условиях, таких как, например, нагревание реакционной смеси при 90°С, например в течение 18 ч. Гидролиз (ΙΙ-Ь) до (ΙΙ-а) можно осуществлять в кислых условиях, например, путем обработки НС1 в 2-пропаноле при комнатной температуре в течение 1-4 ч.

На схеме реакции 3Ь X представляет собой галоген, и все другие переменные определены в формуле ^(Ι).

Экспериментальная процедура 3 с.

Кроме того, промежуточные соединения в соответствии с формулой (ΙΙ-а) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (ΙΙ-с) согласно известным в данной области техники процедурам восстановления нитрогруппы до аминогруппы и в соответствии со схемой реакции 3 с. Указанное восстановление, в целях удобства, можно осуществлять путем обработки соответствующего промежуточного соединения формулы (ΙΙ-с) металлом-железом в присутствии пригодных солей присоединения, таких как хлорид аммония, в пригодном растворителе, таком как МеОН/вода, в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, обычно 70°С, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции. В качестве альтернативы, восстановление, в целях удобства, можно осуществлять согласно процедурам каталитического гидрирования. Например, указанное восстановление можно осуществлять путем перемешивания реагирующих веществ в атмосфере водорода и в присутствии соответствующего катализатора, такого как, например, палладий на угле, платина на угле, никель Ренея и им подобные катализаторы. Пригодными растворителями являются, например, вода, алканолы, например метанол, этанол и т.п., сложные эфиры, например этилацетат и т.п. Для повышения скорости указанной реакции восстановления может быть предпочтительным повышение температуры и/или давления реакционной смеси. Нежелательное дополнительное гидрирование определенных функциональных групп реагирующих веществ и продуктов реакции можно предотвратить добавлением к реакционной смеси каталитического яда, такого как, например, тиофен и т.п.

Промежуточные соединения формулы (ΙΙ-с) можно получать из соответствующих промежуточных

- 11 028775 соединений формулы (1У-Ь) согласно известным в данной области техники процедурам нитрования и в соответствии со схемой реакции 3 с. Указанное нитрование, в целях удобства, можно осуществлять путем обработки соответствующих промежуточных соединений формулы (1У-Ь) нитрующим средством, таким как, например, дымящая азотная кислота, при низкой температуре, такой как, например, 0°С, например, в течение 30 мин.

На схеме реакции 3 с все переменные определены в формуле (I).

Экспериментальная процедура 4.

Промежуточные соединения формулы (1У-с), где Ζ представляет собой водород или галоген, можно получать с помощью реакции промежуточного соединения формулы (VI) с подходящим источником аммиака, таким как, например, раствор аммиака в МеОН (схема реакции 4). Реакцию можно проводить в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как МеОН, в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, как правило, варьирующей в диапазоне от 50 до 90°С, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции. На схеме реакции 4 Ζ представляет собой водород или галоген, и все другие переменные определены в формуле (I).

Экспериментальная процедура 5.

Промежуточные соединения формулы (VI), где Ζ представляет собой водород или галоген, можно получать с помощью реакции промежуточного соединения формулы (νΠ-а) с реагентом, являющимся донором серы, подходящим для синтеза тиоамидов, таких как, например, пентасульфид фосфора. Реакцию можно проводить в реакционно-инертном растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран, в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, как правило, варьирующей в диапазоне от 50 до 90°С, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции. На схеме реакции 5 Ζ представляет собой водород или галоген, и все другие переменные определены в формуле (I).

Экспериментальная процедура 6а.

Промежуточные соединения формулы (νΠ-Ь) можно получать из промежуточного соединения формулы (νΜ-а) согласно известным в данной области техники процедурам циклизации. Указанную циклизацию, в целях удобства, можно осуществлять с помощью нагревания промежуточного соединения формулы ^Ш-а) в подходящем растворителе для реакции, таком как Ν,Ν-диметилформамид (ΌΜΡ), в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, обычно варьирующей в диапазоне от 80 до 120°С, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.

- 12 028775

Промежуточные соединения формулы (УШ-а) можно получать из промежуточного соединения формулы ^Х-а) с помощью удаления защитной группы, осуществляемого в соответствии с известными в области техники способами.

На схеме реакции 6а X представляет собой галоген, ΡΘ представляет собой защитную группу, К^спредставляет собой С_1-4алкил, и все другие переменные определены в формуле (I).

Экспериментальная процедура 6Ь.

Промежуточные соединения формулы (УП-с) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (УП-б) согласно известным в данной области техники процедурам декарбоксилирования. Указанное декарбоксилирование, в целях удобства, можно осуществлять с помощью обработки промежуточных соединений формулы (УП-б) подходящей кислотой, такой как, например, уксусная кислота, в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, обычно варьирующей в диапазоне от 100 до 120°С, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.

Промежуточные соединения формулы (УП-б) можно получать из соответствующих промежуточных соединений формулы (УП-е) согласно известным в данной области техники процедурам гидролиза сложного эфира до кислоты. Указанный гидролиз, в целях удобства, можно осуществлять путем обработки промежуточных соединений формулы (УП-е) подходящим основанием, таким как, например, гидроксид лития, в подходящем растворителе таком как, например, тетрагидрофуран и т.п., или смеси растворителей, такой как, например, тетрагидрофуран и вода. Реакцию можно проводить при умеренной температуре, такой как, например, к.т. в течение 2 ч.

Промежуточные соединения формулы (УП-е) можно получать из промежуточного соединения формулы (УШ-Ь) согласно известным в данной области техники процедурам циклизации. Указанную циклизацию, в целях удобства, можно осуществлять с помощью нагревания промежуточного соединения формулы (УШ-Ь) в присутствии подходящей соли, такой как, например, ацетат калия, в подходящем растворителе для реакции, таком как метанол, в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, обычно варьирующей в диапазоне от 80 и 90°С, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.

Промежуточные соединения формулы (УШ-Ь) можно получать из промежуточного соединения формулы ^Х-Ь) с помощью удаления защитной группы, осуществляемого в соответствии с известными в области техники способами.

На схеме реакции 6Ь Ζ представляет собой водород или галоген, ΡΘ представляет собой защитную группу, К^с представляет собой С1-4алкил, К^б представляет собой С1-4алкил, и все другие переменные определены в формуле (I).

Экспериментальная процедура 6с.

Промежуточные соединения формулы (УП-с), в качестве альтернативы, могут быть получены из промежуточного соединения формулы (Х-Ь) согласно известным в данной области техники процедурам циклизации. Указанную циклизацию, в целях удобства, можно осуществлять с помощью нагревания промежуточного соединения формулы (Х-Ь) в подходящем растворителе для реакции, таком как толуол, при приемлемой температуре, такой как, например, 70°С, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.

- 13 028775

Промежуточные соединения формулы (Х-Ь) можно получать из промежуточного соединения формулы (Х-а) согласно известным в данной области техники процедурам конденсации. Указанную конденсацию, в целях удобства, можно осуществлять с помощью реакции промежуточного соединения формулы (Х-а) с промежуточным соединением формулы (^Х-а) в подходящем растворителе, таком как дихлорметан (ЭСМ), в присутствии средства для конденсации, такого как Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (ЭСС), в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, обычно 0°С, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.

Промежуточное соединение формулы (ΧΙ-а) можно приобрести коммерческим путем или синтезировать согласно описанным в литературе процедурам. На схеме реакции 6с Ζ представляет собой водород или галоген, и все другие переменные определены в формуле (I).

Экспериментальная процедура 7а.

Промежуточные соединения формулы (ΙΧ-а) можно получать из промежуточного соединения формулы (Х-с) согласно известным в данной области техники процедурам циклоприсоединения. Указанное циклоприсоединение, в целях удобства, можно осуществлять с помощью реакции промежуточного соединения формулы (Х-с) с промежуточным соединением формулы (ΧΙ-Ь) в присутствии катализатора на основе рутения, такого как хлор(пентаметилциклопентадиэнил)бис(трифенилфосфин)рутений(11), в подходящем растворителе для реакции, таком как 1,4-диоксан, в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, обычно варьирующей в диапазоне от 40 до 80°С, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.

Промежуточное соединение формулы (ΧΙ-Ь) можно приобрести коммерческим путем или синтезировать согласно описанным в литературе процедурам. На схеме реакции 7а Χ представляет собой галоген, РО представляет собой защитную группу, К^с представляет собой С_1-4алкил, и все другие переменные определены в формуле (I).

Экспериментальная процедура 7Ь.

Промежуточные соединения формулы (ΙΧ-Ь) можно получать из промежуточного соединения формулы (Χ-ά) согласно известным в данной области техники процедурам циклоприсоединения. Указанное циклоприсоединение, в целях удобства, можно осуществлять с помощью реакции промежуточного соединения формулы (Χ-ά) с промежуточным соединением формулы (ΧΙ-с) в подходящем растворителе для реакции, таком как толуол, в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, обычно варьирующей в диапазоне от 90 до 110°С, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.

Промежуточное соединение формулы (ΧΙ-с) можно приобрести коммерческим путем или синтезировать согласно описанным в литературе процедурам. На схеме реакции 7Ь Ζ представляет собой водород или галоген, РО представляет собой защитную группу, К^с представляет собой С1-4алкил, Κ^ά представляет собой С1-4алкил, и все другие переменные определены в формуле (Ι).

- 14 028775

Экспериментальная процедура 8.

Промежуточные соединения формулы (Х-а) можно получать из промежуточного соединения формулы (Χ-ά) с помощью удаления защитной группы, осуществляемого в соответствии с известными в области техники способами.

Промежуточные соединения формулы (Χ-ά) можно получать согласно известным в данной области техники процедурам алкилирования из промежуточного соединения формулы (XII), где РС представляет собой защитную группу аминов, такую как, например, трет-бутоксикарбонильная группа. Указанное алкилирование, в целях удобства, можно осуществлять путем обработки (XII) азидом натрия, в подходящем инертном растворителе, таком как ΌΜΕ, в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, обычно варьирующей в диапазоне от 60 до 100°С, в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.

На схеме реакции 8 Ζ представляет собой водород или галоген, РС представляет собой защитную группу, и все другие переменные определены в формуле (I).

Экспериментальная процедура 9.

Промежуточные соединения формулы (XII) можно получать с помощью реакции промежуточного соединения формулы (XIV) согласно известным в данной области техники процедурам окисления. Указанное окисление, в целях удобства, можно осуществлять путем обработки промежуточного соединения формулы (XIV) окислителем, таким как, например, метапериодат натрия, в подходящем инертном растворителе, таком как, например, ацетонитрил/вода, в присутствии хлорида рутения (III) в подходящих условиях реакции, как, например, при приемлемой температуре, обычно к.т., в течение периода времени, обеспечивающего завершение реакции.

Промежуточные соединения формулы (XIV) можно получать с помощью реакции промежуточных соединений формулы (XIII) согласно известным в данной области техники процедурам образования сульфамидата. Указанное превращение, в целях удобства, можно осуществлять путем обработки промежуточного соединения формулы (XIII) тионилхлоридом в присутствии основания, такого как, например, пиридин, в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, ацетонитрил, при низкой температуре, такой как, например, -40°С, например, в течение 30 мин., а затем при умеренно высокой температуре, такой как, например, при 25°С, например, в течение от 24 до 72 ч.

Промежуточные соединения формулы (XIII), где X представляет собой галоген, и РС представляет собой защитную группу аминов, такую как, например, трет-бутоксикарбонильная группа, в общем, можно получать согласно известным в данной области техники описанным в литературе процедурам по ЗЛескег.

На схеме реакции 9 Ζ представляет собой водород или галоген, РС представляет собой защитную группу, и все другие переменные определены в формуле (I).

Фармакология

Соединения по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые композиции ингибируют ВАСЕ (ВАСЕ1 и/или ВАСЕ2) и, таким образом, могут быть пригодными в лечении или предупреждении болезни Альцгеймера (ΑΌ), умеренного когнитивного нарушения (МО), нарушения памяти, старческого слабоумия, деменции, расстройства Альцгеймера с болезнью диффузных телец Леви, амилоидной ангиопатии, церебральной амилоидной ангиопатии, мультиинфарктной деменции, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, сениль- 15 028775 ной деменции альцгеймеровского типа, сосудистой деменции, деменции, обусловленной заболеванием, ассоциированным с Ηΐν, деменции, обусловленной травмой головы, деменции, обусловленной болезнью Хантингтона, деменции, обусловленной болезнью Пика, деменции, обусловленной болезнью Крейтцфельда-Якоба, лобно-височной деменции, деменции боксеров, деменции, ассоциированной с накоплением бета-амилоида, амилоидоза головного мозга и других органов (связанного и не связанного с возрастом), наследственной церебральной геморрагии с амилоидозом голландского типа, черепно-мозговой травмы (ΤΒΙ), височной эпилепсии (ТЬЕ), гипоксии, ишемии, нарушений метаболизма мозга, возрастной макулодистрофии, диабета 2 типа, амиотрофического бокового склероза (ΑΣδ), артериального тромбоза, аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний, рака, заболеваний сердечно-сосудистой системы, гипертензии, дерматомиозита, болезни, вызванной прионной инфекцией (болезни КрейтцфельдаЯкоба) и заболеваний желудочно-кишечного тракта.

Подразумевается, что используемый в настоящем документе термин лечение относится ко всем способам, которые могут предусматривать замедление, нарушение, подавление или прекращение прогрессирования заболевания или облегчение симптомов, но не обязательно означает полное устранение всех симптомов.

Настоящее изобретение относится к применению соединения в соответствии с общей формулой (Ι) его стереоизомерной формы или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты или основания в качестве лекарственного средства, обладающего ингибирующей активностью в отношении бета-секретазы.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения в соответствии с общей формулой (Ι), его стереоизомерной формы или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты или основания для применения в лечении или предупреждении заболеваний или состояний, выбранных из группы, состоящей из болезни Альцгеймера (ΑΌ), умеренного когнитивного нарушения (МС1), нарушения памяти, старческого слабоумия, деменции, деменции с тельцами Леви, деменции с прогрессирующим нуклеарным параличом, деменции с кортикобазальной дегенерацией, смешанной деменции альцгеймеровского и сосудистого типа, расстройства Альцгеймера с болезнью диффузных телец Леви, амилоидной ангиопатии, церебральной амилоидной ангиопатии, мультиинфарктной деменции, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, сенильной деменции альцгеймеровского типа, сосудистой деменции, деменции, обусловленной заболеванием, ассоциированным с Ηΐν, деменции, обусловленной травмой головы, деменции, обусловленной болезнью Хантингтона, деменции, обусловленной болезнью Пика, деменции, обусловленной болезнью Крейтцфельда-Якоба, лобно-височной деменции, деменции боксеров, деменции, ассоциированной с накоплением бета-амилоида, амилоидоза головного мозга (связанного и не связанного с возрастом), наследственной церебральной геморрагии с амилоидозом голландского типа, черепно-мозговой травмы (ΤΒΙ), височной эпилепсии (ЕЬЕ), гипоксии, ишемии, нарушений метаболизма мозга, возрастной макулодистрофии, диабета 2 типа, амиотрофического бокового склероза (ΑΣδ), рассеянного склероза (М§), артериального тромбоза, аутоиммунных/воспалительных заболеваний, рака, такого как рак молочной железы, заболеваний сердечно-сосудистой системы, таких как инфаркт миокарда и инсульт, гипертензии, дерматомиозита, болезни, вызванной прионной инфекцией (болезни Крейтцфельда-Якоба) и заболеваний желудочно-кишечного тракта.

Специалисту в данной области хорошо известны альтернативные системы номенклатуры, нозологические подходы и системы классификации для заболеваний или состояний, упоминаемых в настоящем документе. Например, в пятом издании Ωίαβηο^Ιίο & δίαΐίδΐίοαΐ Мапиа1 о£ Мейа1 Экогйегх (Б8М-5™) Американской ассоциации психиатров используются такие термины, как нейрокогнитивные расстройства (Νί'Ό) (как тяжелые, так и легкие), в частности нейрокогнитивные расстройства, обусловленные болезнью Альцгеймера, обусловленные черепно-мозговой травмой (ΤΒΙ), обусловленные болезнью диффузных телец Леви, обусловленные болезнью Паркинсона, или сосудистое Νί'Ό (как например, сосудистое ΝΟΌ, присутствующее при множественных инфарктах). Такие термины могут применяться специалистом в данной области в качестве альтернативной номенклатуры для некоторых заболеваний или состояний, упоминаемых в настоящем документе.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения в соответствии с общей формулой (Ι), его стереоизомерной формы или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты или основания для получения лекарственного препарата для лечения или предупреждения любого из болезненных состояний, упомянутых выше в настоящем документе.

Настоящее изобретение также относится к соединению в соответствии с общей формулой (Ι), его стереоизомерной форме или его фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты или основания для применения с целью лечения, предупреждения, облегчения симптомов, контроля или снижения риска возникновения заболеваний или состояний, выбранных из группы, состоящей из болезни Альцгеймера (ΑΌ), умеренного когнитивного нарушения (МС1), нарушения памяти, старческого слабоумия, деменции, деменции с тельцами Леви, деменции с прогрессирующим нуклеарным параличом, деменции с кортикобазальной дегенерацией, смешанной деменции альцгеймеровского и сосудистого типа, расстройства Альцгеймера с болезнью диффузных телец Леви, амилоидной ангиопатии, церебральной ами- 16 028775 лоидной ангиопатии, мультиинфарктной деменции, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, сенильной деменции альцгеймеровского типа, сосудистой деменции, деменции, обусловленной заболеванием, ассоциированным с Ην, деменции, обусловленной травмой головы, деменции, обусловленной болезнью Хантингтона, деменции, обусловленной болезнью Пика, деменции, обусловленной болезнью Крейтцфельда-Якоба, лобно-височной деменции, деменции боксеров, деменции, ассоциированной с накоплением бета-амилоида, амилоидоза головного мозга и других органов (связанного и не связанного с возрастом), наследственной церебральной геморрагии с амилоидозом голландского типа, черепно-мозговой травмы (ТВЦ, височной эпилепсии (ТЬЕ), гипоксии, ишемии, нарушений метаболизма мозга, возрастной макулодистрофии, диабета 2 типа, амиотрофического бокового склероза (АЬ§), рассеянного склероза (М§), артериального тромбоза, аутоиммунных/воспалительных заболеваний, рака, такого как рак молочной железы, заболеваний сердечнососудистой системы, таких как инфаркт миокарда и инсульт, гипертензии, дерматомиозита, болезни, вызванной прионной инфекцией (болезни Крейтцфельда-Якоба) и заболеваний желудочно-кишечного тракта; или для применения с целью лечения, предупреждения, облегчения симптомов, контроля или снижения риска возникновения заболеваний или состояний, выбранных из нейрокогнитивных расстройств, обусловленных болезнью Альцгеймера, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного черепномозговой травмой, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью диффузных телец Леви, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Паркинсона, сосудистого нейрокогнитивного расстройства или диабета 2 типа.

Как уже упоминалось выше в настоящем документе, термин лечение не обязательно означает полное устранение всех симптомов, а может также относиться к симптоматическому лечению любого из упомянутых выше расстройств. Ввиду применимости соединения формулы (I) представлен способ лечения субъектов, таких как теплокровные животные, в том числе люди, страдающих любым из указанных выше в настоящем документе заболеваний, или способ предупреждения у субъектов, таких как теплокровные животные, в том числе люди, любого из указанных выше в настоящем документе заболеваний.

Указанные способы предусматривают введение, т.е. системное или местное введение, предпочтительно пероральное введение субъекту, такому как теплокровное животное, в том числе человек, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), его стереоизомерной формы, его фармацевтически приемлемой соли присоединения или сольвата.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к способу предупреждения и/или лечения любого из упомянутых выше в настоящем документе заболеваний, предусматривающему введение терапевтически эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению нуждающемуся в этом субъекту.

Способ лечения может также предусматривать введение активного ингредиента согласно режиму приема от одного до четырех раз в день. В таких способах лечения соединения в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно составлены до введения. Как описано в настоящем документе ниже, пригодные фармацевтические составы получают с помощью известных процедур с применением широко известных и общедоступных ингредиентов.

Соединения по настоящему изобретению, которые могут быть пригодными для лечения или предупреждения болезни Альцгеймера (или согласно альтернативной номенклатуре деменции альцгеймеровского типа или нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Альцгеймера) или ее симптомов, можно вводить отдельно или в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами. Комбинированная терапия предусматривает введение единого дозированного фармацевтического состава, который содержит соединение формулы (I) и одно или несколько дополнительных терапевтических средств, а также введение соединения формулы (I) и каждого дополнительного терапевтического средства в своем собственном отдельном дозированном фармацевтическом составе. Например, соединение формулы (I) и терапевтическое средство можно вводить пациенту вместе в единой дозированной композиции для перорального применения, такой как таблетка или капсула, или каждое средство можно вводить по отдельности в дозированных составах для перорального применения.

Фармацевтические композиции

Настоящее изобретение также предусматривает композиции для предупреждения или лечения заболеваний, при которых ингибирование бета-секретазы является целесообразным, выбранных из группы, состоящей из болезни Альцгеймера (АО), умеренного когнитивного нарушения (МСЦ, нарушения памяти, старческого слабоумия, деменции, расстройства Альцгеймера с болезнью диффузных телец Леви, амилоидной ангиопатии, церебральной амилоидной ангиопатии, амилоидоза головного мозга (связанного и не связанного с возрастом), наследственной церебральной геморрагии с амилоидозом голландского типа, черепно-мозговой травмы (ТВЦ, височной эпилепсии (ТЬЕ), гипоксии, ишемии, нарушений метаболизма мозга, возрастной макулодистрофии, диабета 2 типа, амиотрофического бокового склероза (АЬ§), артериального тромбоза, аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний, рака, заболеваний сердечно-сосудистой системы, гипертензии, дерматомиозита, болезни, вызванной прионной инфекцией (болезни Крейтцфельда-Якоба), и заболеваний желудочно-кишечного тракта. В соответствии с альтернативными номенклатурами настоящее изобретение предусматривает композиции для предупреж- 17 028775 дения или лечения заболеваний, при которых ингибирование бета-секретазы является целесообразным, таких как нейрокогнитивное расстройство, обусловленное болезнью Альцгеймера, обусловленное черепно-мозговой травмой (ТЫ), обусловленное болезнью с тельцами Леви, обусловленное болезнью Паркинсона, или сосудистое Νί',Ό (как например, сосудистое Νί',Ό присутствующее при множественных инфарктах). Указанные композиции содержат терапевтически эффективное количество соединения согласно формуле (I) и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Хотя активный ингредиент можно вводить отдельно, предпочтительно, чтобы он был представлен в виде фармацевтической композиции. Следовательно, настоящее изобретение дополнительно предусматривает фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Носитель или разбавитель должны быть приемлемыми в том смысле, что они должны быть совместимы с другими ингредиентами композиции и не быть вредными для получающих их пациентов.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть получены любыми способами, хорошо известными в области фармацевтики. Терапевтически эффективное количество конкретного соединения, в форме основания или в форме соли присоединения, в качестве активного ингредиента комбинируют в однородной смеси с фармацевтически приемлемым носителем, который может быть представлен в разнообразных формах в зависимости от формы препарата, который необходимо ввести. Желательно, чтобы эти фармацевтические композиции находились в стандартной лекарственной форме, предпочтительно подходящей для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение; или для местного введения, как, например, с помощью ингаляции, назального спрея, глазных капель или с помощью крема, геля, шампуня и т.п. Например, при получении композиций в пероральной лекарственной форме можно использовать любую общепринятую фармацевтическую среду, такую как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п., в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, настои и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, скользящие вещества, связующие вещества, средства для улучшения распадаемости таблеток и т.п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Благодаря своей простоте введения таблетки и капсулы представляют наиболее предпочтительные стандартные лекарственные формы для перорального введения, в случае которых, несомненно, используют твердые фармацевтические носители. В случае композиций для парентерального применения носитель будет, как правило, по меньшей мере, в значительной степени включать стерильную воду, хотя может включать и другие ингредиенты, например, для улучшения растворимости. Например, можно получать растворы для инъекций, в которых носитель включает физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Также можно получать суспензии для инъекций, в случае которых можно использовать подходящие жидкие носители, суспендирующие средства и т.п. В композициях, подходящих для чрескожного введения, носитель необязательно включает средство, улучшающее проникновение, и/или подходящее смачиваемое средство, необязательно в комбинации с подходящими добавками любой природы в минимальных пропорциях, при этом добавки не оказывают никаких особенно вредных воздействий на кожу. Указанные добавки могут облегчать введение через кожу и/или могут быть полезными при получении необходимых композиций. Данные композиции можно вводить различными способами, например, в виде трансдермального пластыря, путем точечного нанесения или в виде мази.

Особенно предпочтительно для простоты введения и однородности дозирования составлять вышеупомянутые фармацевтические композиции в стандартные лекарственные формы. Стандартные лекарственные формы, как применяется в описании и формуле изобретения в настоящем документе, относятся к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единиц дозирования, при этом каждая единица содержит заранее определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые таблетки или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, пакеты с порошкообразным продуктом, пластинки, растворы или суспензии для инъекций, чайные ложки, столовые ложки и т.п., а также их отдельные множества.

Точная дозировка и частота введения зависят от конкретного применяемого соединения формулы (I), конкретного состояния, подвергаемого лечению, тяжести состояния, подвергаемого лечению, возраста, массы, пола, степени расстройства и общего физического состояния конкретного пациента, а также от другого медикаментозного лечения, которое индивидуум может получать, что хорошо известно специалистам в данной области. Более того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество можно уменьшать или увеличивать в зависимости от реакции субъекта, подвергаемого лечению, и/или в зависимости от оценки врача, назначающего соединения по настоящему изобретению.

В зависимости от способа введения фармацевтическая композиция будет содержать от 0,05 до 99 вес.%, предпочтительно от 0,1 до 70 вес.%, более предпочтительно от 0,1 до 50 вес.% активного ингредиента и от 1 до 99,95 вес.%, предпочтительно от 30 до 99,9 вес.%, более предпочтительно от 50 до 99,9 вес.% фармацевтически приемлемого носителя, при этом все процентные содержания приводятся в расчете на общий вес композиции.

Соединения по настоящему изобретению можно применять для системного введения, такого как

- 18 028775 пероральное, чрескожное или парентеральное введение; или для местного введения, такого как с помощью ингаляции, назального спрея, глазных капель или с помощью крема, геля, шампуня или т.п. Соединения предпочтительно являются перорально вводимыми. Точная дозировка и частота введения зависят от конкретного применяемого соединения в соответствии с формулой (I), конкретного состояния, подвергаемого лечению, тяжести состояния, подвергаемого лечению, возраста, массы, пола, степени расстройства и общего физического состояния конкретного пациента, а также другого медикаментозного лечения, которое индивидуум может получать, что хорошо известно специалистам в данной области. Более того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество можно уменьшать или увеличивать в зависимости от реакции субъекта, подвергаемого лечению, и/или в зависимости от оценки врача, назначающего соединения по настоящему изобретению.

Количество соединения формулы (I), которое можно объединять с материалом носителя для получения лекарственной формы с однократной дозировкой, будет варьировать в зависимости от заболевания, подвергаемого лечению, вида млекопитающего и конкретного способа введения. Однако в качестве общего руководства подходящие стандартные дозы соединений по настоящему изобретению могут, например, предпочтительно содержать от 0,1 до приблизительно 1000 мг активного соединения. Предпочтительная стандартная доза составляет от 1 до приблизительно 500 мг. Более предпочтительная стандартная доза составляет от 1 до приблизительно 300 мг. Еще более предпочтительная стандартная доза составляет от 1 мг до приблизительно 100 мг. Такие стандартные дозы можно вводить более одного раза в сутки, например, 2, 3, 4, 5 или 6 раз в сутки, но предпочтительно 1 или 2 раза в сутки, чтобы общая дозировка для взрослого человека весом 70 кг была в диапазоне от 0,001 до приблизительно 15 мг на кг веса субъекта за введение. Предпочтительная дозировка составляет от 0,01 до приблизительно 1,5 мг на кг массы субъекта за введение, и такая терапия может продолжаться в течение нескольких недель или месяцев, а в некоторых случаях в течение нескольких лет. Однако следует понимать, что определенный уровень дозы для любого конкретного пациента будет зависеть от ряда факторов, в том числе активности определенного используемого соединения; возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола и режима питания индивидуума, подвергаемого лечению; время и пути введения; скорости выведения; других лекарственных средств, которые были введены ранее; и тяжести конкретного заболевания, подвергаемого терапии, что хорошо понятно специалистам в данной области.

Типичной дозой может быть одна таблетка от 1 мг до приблизительно 100 мг или от 1 мг до приблизительно 300 мг, принимаемая один раз в сутки или несколько раз в сутки, или одна капсула или таблетка пролонгированного действия, принимаемая один раз в сутки и содержащая пропорционально более высокое содержание активного ингредиента. Эффекта пролонгированного высвобождения можно достичь с помощью материалов капсулы, которые растворяются при различных значениях рН, с помощью капсул с медленным высвобождением при осмотическом давлении, или с помощью любых иных известных средств, обеспечивающих контролируемое высвобождение.

В некоторых случаях может понадобиться применение дозировок вне этих диапазонов, что будет очевидно специалистам в данной области. Кроме того, следует отметить, что клиницист или лечащий врач будут знать, как и когда начинать, прерывать, корректировать или завершать терапию в соответствии с реакцией отдельного пациента.

В отношении композиций и способов, представленных выше, специалисту в данной области будет понятно, что предпочтительными соединениями для применения в каждом являются такие соединения, которые указаны как предпочтительные выше. Еще более предпочтительными соединениями для композиций и способов являются соединения, представленные в примерах ниже.

Экспериментальная часть

Следующие примеры предназначены для иллюстрации, но не ограничивают объем настоящего изобретения.

Химия

Некоторые способы получения соединений по настоящему изобретению проиллюстрированы в следующих примерах. Если не указано иное, все исходные материалы получали от частных поставщиков и применяли без дополнительной очистки.

Далее в настоящем документе Вос означает трет-бутилоксикарбонил; ΟΙ означает химическую ионизацию; ΌΑΌ означает детектор на диодной матрице; ЭСМ означает дихлорметан; 'ТОРЕ означает диизопропиловый эфир; ΌΜΡ означает Ν,Ν-диметилформамид; ДМСО означает диметилсульфоксид; ЕьО означает диэтиловый эфир; ΕιΟΑΕ' означает этилацетат; ЕЮН означает этанол; ЕЗ означает электрораспыление; ч. означает часы; ЭРгОН означает изопропанол; л означает литр; ЬКМЗ означает масс-спектрометрию/спектры низкого разрешения; НРЬС означает высокоэффективную жидкостную хроматографию; НКМЗ означает масс-спектры/спектрометрию высокого разрешения; МеОН означает метанол; Ν^Α^' означает ацетат аммония; экв. означает эквивалент; КР означает обращенно-фазовый; к.т. означает комнатную температуру; т.пл. означает температуру плавления; мин. означает минуты; с означает секунду(секунды); ТОР означает времяпролетный; нас. означает насыщенный; ЗРС означает сверхкритическую жидкостную хроматографию; раств. означает раствор, ΤΕΑ означает триэтиламин; ТНР означает тетрагидрофуран, (±)-ΒINΑΡ означает 2,2'- 19 028775 бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафталин, ЭСС означает Ν,Ν-дициклогексилкарбодиимид, ΌΜΤΜΜ означает хлорид 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолина; КЗ после ассиметрических центров в химических структурах означает рацемический.

Тонкослойную хроматографию (ТЬС) проводили на пластинках со слоем силикагеля 60 Р254 (Мегск) с применением растворителей, чистых для анализа. Хроматографию на открытых колонках осуществляли на силикагеле с размером частиц 230-400 меш (Мегск) при 60 А с применением стандартных методик. Нормально-фазовую автоматическую колоночную флэш-хроматографию проводили с использованием Вю1аде® 18о1ега™ 4 или Вю1аде® ЗР-1. Обращенно-фазовую автоматическую колоночную флэш-хроматографию проводили с использованием (а) полупрепаративной системы ΟΓΕδΟΝ®, приводимой в действие с помощью программного обеспечения Ттйийоп®, оснащенной колонкой РЬепотепех Оетт® С18 100А (длина 100 мм х Σ.ϋ. 30 мм; частицы 5 мкм) при 25°С, со скоростью потока 40 мл/мин. или (Ь) полупрепаративной системы ΟΓΕδΟΝ®, приводимой в действие с помощью программного обеспечения Широт!. оснащенной колонкой РЬепотепех Оет1ш® С18 100А (длина 100 мм х Σ.ϋ. 21,2; частицы 5 мкм) при 25°С, со скоростью потока 20 мл/мин.

Для ключевых промежуточных соединений, а также для некоторых конечных соединений, абсолютную конфигурацию хиральных центров (обозначенную как К и/или З) устанавливали посредством сравнения с образцами с известной конфигурацией или путем использования аналитических методик, пригодных для определения абсолютной конфигурации, таких как УСЭ (колебательный круговой дихроизм) или рентгеноструктурная кристаллография.

Синтез промежуточных соединений

Промежуточное соединение 1 Ц-1).

Трет-бутиловый сложный эфир (К)-[2-азидо-1-(5-бром-2-фторфенил)-1-метилэтил]карбаминовая кислота Ц-1)

К раств. 1,1-диметилэтилового сложного эфира (4К)-4-(5-бром-2-фторфенил)-4-метил-1,2,3оксатиазолидин-3-карбоновой кислоты [САЗ 1398113-03-5] (5 г, 12,2 ммоль) в ΌΜΡ (40 мл) добавляли азид натрия (2,38 г, 36,6 ммоль). Смесь перемешивали при 80°С в течение 2 ч. Затем добавляли нас. раств. лимонной кислоты и смесь перемешивали в течение 4 ч. Растворитель выпаривали ίη уасио. Добавляли воду и экстрагировали ΌΟΜ. Органический слой отделяли, высушивали (Μ§3Ο₄), фильтровали и растворители выпаривали ίη уасио с получением промежуточного соединения Σ-1 (4,5 г, 99%), которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Промежуточное соединение 2 Ц-2).

Метиловый сложный эфир (К)-3-[2-(5-бром-2-фторфенил)-2-трет-бутоксикарбониламинопропил]3Н-[1,2,3]триазол-4-карбоновой кислоты Ц-2)

К хлор(пентаметилциклопентадиэнил)бис-(трифенилфосфин)рутению(П) (39 мг, 0,04 ммоль) в 1,4диоксане (9 мл) добавляли промежуточное соединение Σ-1 (0,91 г, 2,4 ммоль) и метилпропиолат (0,22 мл, 2,4 ммоль) в 1,4-диоксане (9 мл). Флакон продували азотом и смесь перемешивали при 60°С в течение 6 ч. Добавляли метилпропиолат (0,22 мл, 2,4 ммоль) и хлор(пентаметилциклопентадиэнил)бис(трифенилфосфин)рутений(П) (39 мг, 0,04 ммоль). Смесь перемешивали при 60°С в течение 16 ч. Затем добавляли дополнительное количество метилпропиолата (0,22 мл, 2,4 ммоль) и хлор(пентаметилциклопентадиэнил)бис-(трифенилфосфин)рутения(П) (39 мг, 0,04 ммоль). Смесь перемешивали при 60°С в течение 16 ч. Растворитель выпаривали ίη уасио. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (диоксид кремния; ЕЮАс в гептане от 0/100 до 30/70). Собирали необходимые фракции и растворители выпаривали ίη уасио с получением промежуточного соединения Е2 (228 мг, 20%).

Промежуточное соединение 3 Ц-3).

Метиловый сложный эфир (К)-3-[2-амино-2-(5-бром-2-фторфенил)пропил]-3Н-[1,2,3]триазол-4карбоновой кислоты Ц-3)

- 20 028775

К раств. промежуточного соединения Ι-2 (154 мг, 0,34 ммоль) в ЭСМ (3,1 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (1,3 мл, 16,8 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Растворитель выпаривали ΐη уасио. Добавляли ЭСМ и органическую фазу промывали нас. раств. ΝαΙ 1С()₃. Органический слой отделяли, высушивали (М§80₄), фильтровали и растворители выпаривали ΐη уасио с получением промежуточного соединения Ι-3 (120 мг, чистота 93%, колич.), которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Промежуточное соединение 4 (Ι-4).

(К)-6-(5-Бром-2-фторфенил)-6-метил-6,7-дигидро-5Н-[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-4-он (Ι-4 )

Промежуточное соединение Ι-3 (1,7 г, 4,76 ммоль) в ОМБ (42 мл) перемешивали при 100°С в течение 48 ч. Растворитель выпаривали ΐη уасио. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (диоксид кремния; ЕЮЛс в ОСМ от 0/100 до 20/80). Собирали необходимые фракции и растворители выпаривали ΐη уасио с получением промежуточного соединения Ι-4 (1,12 г, 72%) в виде белого порошка.

Промежуточное соединение 5 (Ι-5).

(К)-6-(5-Бром-2-фторфенил)-6-метил-6,7-дигидро-5Н-[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-4-тион (Ι-5)

К смеси пентасульфида фосфора (2,19 г, 9,9 ммоль) и промежуточного соединения Ι-4 (1,07 г, 3,3 ммоль) добавляли ТНБ (20,4 мл). Смесь перемешивали при 70°С в течение 30 мин. Затем добавляли ЕЮЛс и смесь фильтровали через диатомитовую землю. Растворитель выпаривали ΐη уасио и неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (диоксид кремния; ЕЮЛс в гептане от 0/100 до 100/0). Собирали необходимые фракции и растворители выпаривали ΐη уасио с получением промежуточного соединения Ι-5 (882 мг, 78%).

Промежуточное соединение 6 (Ι-6).

(К)-6-(5-Бром-2-фторфенил)-6-метил-6,7-дигидро-5Н-[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-4-он (Ι-6)

В запечатанной пробирке раств. промежуточного соединения Ι-5 (880 мг, 2,6 ммоль) в 7М раств. аммиака в МеОН (44 мл) перемешивали при 70°С в течение 16 ч. Затем растворитель выпаривали ΐη уасио и добавляли свежеприготовленный 7М раств. аммиака в МеОН (44 мл). Смесь перемешивали при 70°С в течение 24 ч. Затем растворитель выпаривали ΐη уасио. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэшхроматографии (диоксид кремния; 7 М раствор аммиака в МеОН в 1)СМ от 0/100 до 15/85). Собирали необходимые фракции собирали и растворители выпаривали ΐη уасио. Твердое вещество растворяли в ЕЮЛс и промывали нас. раств. №НСО₃. Органический слой отделяли, высушивали (М§80₄), фильтровали и растворители выпаривали ΐη уасио с получением промежуточного соединения Ι-6 (759 мг, 91%) в виде белого твердого вещества.

Промежуточное соединение 7 (Ι-7).

(К)-6-(5-Амино-2-фторфенил)-6-метил-6,7-дигидро-5Н-[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-4-он (Ι-7)

К раств. промежуточного соединения Ι-6 (650 мг, 2,0 ммоль) в ДМСО (29 мл) добавляли азид на- 21 028775 трия (326 мг, 5,0 ммоль), йодид меди (I) (4 77 мг, 2,5 ммоль) и Ка₂СОз (425 мг, 4,0 ммоль). После того, как смесь была полностью дегазирована, добавляли Ν,Ν'-диметил-этилендиамин (0,38 мл, 3,5 ммоль). Смесь перемешивали при 110°С в течение 5 ч. Смесь разводили ИСМ и промывали раств. ΝΗ₃. Водную фазу экстрагировали несколько раз ИСМ/10%МеОН и ЕЮАс/ТНЕ 1:1. Органический слой отделяли, высушивали (М§8О₄), фильтровали и растворители выпаривали ΐη уасио. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (диоксид кремния; 7 М раствор аммиака в МеОН в ИСМ от 0/100 до 5/95). Собирали необходимые фракции и растворители выпаривали ΐη уасио с получением промежуточного соединения 1-7 (357 мг, 68%).

Промежуточное соединение 8 (1-8).

К раствору промежуточного соединения 1-1 (3,2 г, 8,57 ммоль) в 1,4-диоксане (11 мл) добавляли 4 М раствор НС1 в 1,4-диоксане (21 мл, 85,74 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 24 ч. Излишек НС1 удаляли путем барботирования азота через реакционную смесь. Затем реакционную смесь охлаждали до 0°С и нас. водн. раствор №11СО₃ добавляли до тех пор, пока рН не становился основным. Водный слой экстрагировали с помощью ЕЮАс.

Органический слой отделяли, высушивали (М§8О₄), фильтровали и растворители выпаривали ΐη уасио с получением промежуточного соединения 1-8 (2,12 г, 91%) в виде бесцветного масла.

Промежуточное соединение 9 (1-9).

К раствору ИСС (2,54 г, 12,30 ммоль) в ИСМ (30 мл) при 0°С добавляли пропиоловую кислоту (0,71 мл, 11,5 ммоль). По каплям добавляли раствор промежуточного соединения 1-8 (2,1 г, 7,69 ммоль) в ИСМ (20 мл) и реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч. Осадок отфильтровывали и промывали ИСМ. Фильтрат концентрировали ΐη уасио, поддерживая температуру ниже 25°С, до тех пор, пока не оставался небольшой объем (5-10 мл) раствора. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (диоксид кремния; ИСМ). Собирали необходимые фракции и растворители выпаривали ΐη уасио, поддерживая температуру ниже 25°С, с получением промежуточного соединения 1-9 (2,2 г, 89%).

Промежуточное соединение 10 (1-10).

Промежуточное соединение 1-9 (2,2 г, 6,77 ммоль) перемешивали в толуоле (220 мл) при 70°С в течение 18 ч.

Растворитель выпаривали ΐη уасио. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэшхроматографии (диоксид кремния; ЕЮАс в ИСМ от 0/100 до 40/60). Собирали необходимые фракции и растворители выпаривали ΐη уасио с получением промежуточного соединения 1-10 (2,15 г, 98%) в виде белого твердого вещества.

Промежуточное соединение 11 (1-11).

К смеси промежуточного соединения 1-10 (1,8 г, 5,16 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладия(0) (0,472 г, 0,52 ммоль), (±)-ΒΙΝΑΡ (0,965 г, 1,55 ммоль) и трет-бутоксида натрия (0,893 г, 9,30 ммоль) в атмосфере Ν2 при к.т. добавляли толуол (36 мл). После того, как смесь была полностью дегазирована, добавляли имин бензофенона (1,7 мл, 10,33 ммоль). Смесь перемешивали при 90°С в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали ΐη уасио и неочищенное вещество разводили водой и экстрагировали ИСМ. Органический слой отделяли, высушивали (М§8О₄), фильтровали и растворители выпаривали ΐη уасио. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (диоксид кремния; МеОН в ИСМ от 0/100 до 10/90). Собирали необходимые фракции и растворители

- 22 028775 выпаривали ίη уасио с получением промежуточного соединения ^11 (1,63 г, 73%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Промежуточное соединение 12 (^12).

К раствору промежуточного соединения ^11 (2,1 г, 4,95 ммоль) в изопропаноле (21 мл) добавляли водн. раствор НС1 (37% в Н₂О, 4,1 мл, 4 9,47 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Смесь концентрировали т уасио и остаток растирали в Εί₂Ο. Твердое вещество отфильтровывали и растворяли в изопропаноле. Добавляли ЫаНСО₃ (0,415 г, 4,95 ммоль) и смесь перемешивали в течение 1 ч. до тех пор, пока рН не становился основным. Смесь отфильтровали и фильтрат концентрировали ίη уасио. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (диоксид кремния; 7 М раствор ΝΗ₃ в МеОН в ОСМ от 0/100 до 20/80). Собирали необходимые фракции и растворители выпаривали ίη уасио с получением промежуточного соединения ^12 (1,2 г, 93%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Промежуточное соединение 13 (^13).

Промежуточное соединения ^13 получали согласно процедуре синтеза, аналогично описанной для синтеза промежуточного соединения Σ-1. Начиная с трет-бутил-(4К)-4-(5-бром-2,3-дифторфенил)-4метил-2,2-диоксо-оксатиазолидин-3-карбоксилата (6,5 г, 15,18 ммоль, полученного аналогично процедуре, описанной для синтеза [САЗ 1398113-03-5] в ШО 2012/120023) получали промежуточное соединение ^13 (6 г, 100%) в виде бесцветного масла.

Промежуточное соединение 14 (^14).

К раствору промежуточного соединения ^13 (5,2 г, 13,29 ммоль) в толуоле (50 мл) добавляли диметила ацетилендикарбоксилат (1,6 мл, 13,29 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 110°С в течение 18 ч. Растворитель выпаривали ίη уасио с получением промежуточного соединения ^14 (колич. выход 12,5 г), которое использовали как есть на следующей стадии реакции.

Промежуточное соединение 15 (^15).

К НС1 (4М в диоксане, 37,5 мл, 150 ммолей) добавляли промежуточное соединение ^14 (12,5 г, 15 ммолей) и реакционную смесь перемешивали при к. т. в течение 2 ч. Растворитель выпаривали ίη уасио с получением промежуточного соединения ^15 (колич. выход 8,5 г), которое использовали как есть на следующей стадии реакции.

Промежуточное соединение 16 (^16).

К раствору промежуточного соединения ^15 (8,5 г, 15,02 ммоль) в МеОН (62 мл) добавляли ацетат калия (4,423 г, 45,06 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 90°С в запечатанной пробирке в те- 23 028775 чение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали и растворитель выпаривали ίη уасио. Неочищенный продукт суспендировали в ИСМ и промывали водой. Органический слой отделяли, высушивали (Мд8О₄), фильтровали и растворители выпаривали ίη уасио с получением промежуточного соединения Σ-16 (4,8 г, 76%), которое использовали как есть на следующей стадии реакции.

Промежуточное соединение 17 (Σ-17).

К раствору промежуточного соединения Σ-16 (4,8 г, 11,37 ммоль) в ТНЕ (76 мл) добавляли раствор гидроксида лития (0,816 г, 34,10 ммоль) в воде (19 мл). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Затем органический слой удаляли. К водному слою добавляли 1 н. НС1 до тех пор, пока рН не равнялся 2. Осадок собирали при помощи фильтрации, промывали водой и высушивали (вакуумная печь, 50°С) с получением промежуточного соединения Σ-17 (3,9 г, 89%).

Промежуточное соединение 18 ^-18).

Раствор промежуточного соединения Σ-17 (3,33 г, 8,60 ммоль) в уксусной кислоте (10 мл, 172,03 ммоль) перемешивали при 120°С в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали ίη уасио и неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (диоксид кремния; ЕЮЛс в ИСМ от 0/100 до 40/60). Собирали необходимые фракции и растворители выпаривали ίη уасио с получением промежуточного соединения Σ-18 (2,9 г, 98%).

Промежуточное соединение 19 ^-19).

Промежуточное соединение Σ-19 получали согласно процедуре синтеза, аналогично описанной для синтеза промежуточного соединения Σ-5. Исходя с промежуточного соединения Σ-18 (3,7 г, 10,78 ммоль) получали промежуточное соединение Σ-19 (3,5 г, 90%).

Промежуточное соединение 20 ^-20).

Промежуточное соединения Σ-20 получали согласно процедуре синтеза, аналогично описанной для синтеза промежуточного соединения Σ-6. Начиная с промежуточного соединения Σ-19 (3,5 г, 9,74 ммоль) получали промежуточное соединение Σ-20 (3,4 г, 82%).

Промежуточное соединение 21 ^-21).

Промежуточное соединения Σ-21 получали согласно процедуре синтеза, аналогично описанной для синтеза промежуточного соединения Е7. Начиная с промежуточного соединения Σ-20 (0,35 г, 0,82 ммоль) получали промежуточное соединение Σ-21 (0,15 г, 66%).

Промежуточное соединение 22 ^-22).

ρ

/С (1-22)

Промежуточное соединение Σ-22 получали согласно последовательности синтеза аналогично опи- 24 028775 санной для синтеза 1,1-диметилэтилового сложного эфира (4К)-4-(5-бром-2-фторфенил)-4-метил-1,2,3оксатиазолидин-3-карбоновой кислоты [СА8 1398113-03-5], начиная с 2-фтор-1-(2-фторфенил)этанона [СА8 1402412-84-3].

Промежуточное соединение 23 (1-23).

Согласно последовательности синтеза, включающей процедуры, аналогично используемым для синтеза (в следующем порядке) промежуточного соединения 1-13, промежуточного соединения 1-14, промежуточного соединения 1-15, промежуточного соединения 1-16, промежуточного соединения 1-17, промежуточного соединения 1-18, промежуточного соединения 1-5 и промежуточного соединения 1-6 получали промежуточное соединение 1-23, начиная с промежуточного соединения 1-22.

Промежуточное соединение 24 (1-24).

Промежуточное соединение 1-23 (0,8 г, 3,04 ммоль) добавляли к дымящей азотной кислоте (10 мл, 233,36 ммоль) при 0°С и реакционную смесь перемешивали при данной температуре в течение 30 мин. К реакционной смеси добавляли ледяную воду и добавляли водн. 50% раств. ЫаОН до тех пор, пока рН не становился основным. Водный слой экстрагировали с помощью БСМ. Органический слой высушивали (Мд8О₄), фильтровали и выпаривали ΐπ уасио с получением промежуточного соединения 1-24 (0,3 г, 32%) в виде твердого вещества.

Промежуточное соединение 25 (1-25).

Промежуточное соединение 1-24 (0,41 г, 1,33 ммоль) растворяли в МеОН (45 мл) и воде (14 мл). Добавляли железо (0,6 г, 10,74 ммоль) и хлорид аммония (0,56 г, 10,47 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 1 ч. Затем дополнительно добавляли железо (0,6 г, 10,74 ммоль) и хлорид аммония (2,11 г, 39,45 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение дополнительных 2 ч. После охлаждения реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю и промывали МеОН, Н₂О и ЕЮАс. Фильтрат концентрировали ΐπ уасио и остаток растворяли нас. водн. раствором ЫаНСО₃ и ЕЮАс. Органический слой отделяли, высушивали (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали ΐπ уасио с получением промежуточного соединения 1-25 (150 мг, 40%), которое использовали как есть на следующей стадии реакции.

Конечные соединения

Пример Е1.

Ы-{3-[(6К)-4-амино-6-метил-6,7-дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4-фторфенил}-5-фторпиридин-2-карбоксамид (соединение 1)

К промежуточному соединению 1-7 (75 мг, 0,3 ммоль) в МеОН (1,5 мл) при к.т. добавляли 1М водный раств. НС1 (0,29 мл, 0,3 ммоль). Затем добавляли 5-фтор-2-пиридинкарбоновую кислоту (41 мг, 0,3 ммоль) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид (66 мг, 0,4 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Добавляли нас. раст. Ыа₂СО₃ и смесь экстрагировали ОСМ. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, высушивали (Мд8О₄), фильтровали и растворители выпаривали ΐπ уасио. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (диоксид кремния; 7 М раствор аммиака в МеОН в ОСМ от 0/100 до 10/90). Собирали необходимые фракции и растворители выпаривали ΐπ уасио с получением соединения 1 в виде белого твердого вещества (79 мг, 71%).

- 25 028775

Пример Е2.

Ы-{3-[(6К)-4-амино-6-метил-6,7-дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4-фторфенил}-4-хлор1-(дифторметил)-1Н-пиразол-3-карбоксамид (соединение 5)

К ΏΜΤΜΜ (0,117 г, 0,423 ммоль) в МеОН (2 мл) добавляли 4-хлор-1-(дифторметил)-1Н-пиразол-3карбоновую кислоту (0,083 г, 0,423 ммоль). После перемешивания смеси в течение 5 мин добавляли раствор промежуточного соединения 1-12 (0,1 г, 0,384 ммоль) в МеОН (2 мл) при 0°С и смесь перемешивали в течение 24 ч. Растворитель выпаривали ίη уаеио. Остаток затем суспендировали в ЭСМ и обрабатывали нас. водн. раств. Ыа₂СО₃. Органический слой отделяли, сушили (М§8О₄), фильтровали и растворители выпаривали ίη уаеио. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (силикагель; 7М раствор аммиака в МеОН/ЭСМ от 0/100 до 5/95). Необходимые фракции собирали и концентрировали ίη уаеио. Далее продукт очищали с помощью препаративной НРБС (КР, С18 ХВпбде 30x100, 5 мкм), подвижная фаза (градиент от 90% 0,1% до 0% 0,1% ЫН₄НСО₃/ЫН₄ОН, рН 9, раствор в воде, 10% МеСЫ). Собирали необходимые фракции и продукт экстрагировали ЭСМ. Органический слой отделяли, высушивали (М§8О₄), фильтровали и концентрировали ίη уаеио. Остаток высушивали на протяжении ночи (вакуумная печь, 50°С) с получением соединения 5 (53 мг, выход 31%) в виде бледножелтого твердого вещества.

Пример Е3.

Ы-{3-[(6К)-4-амино-6-метил-6,7-дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4,5-дифторфенил}-5фторпиридин-2-карбоксамид (соединение 8)

Р

К промежуточному соединению 1-21 (150 мг, 0,54 ммоль) в МеОН (4 мл) при к.т. добавляли 5М раств. НС1 в 2-пропаноле (0,11 мл, 0,54 ммоль). Затем добавляли 5-фтор-2-пиридинкарбоновую кислоту (76 мг, 0,54 ммоль) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид (124 мг, 0,65 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Добавляли нас. водн. раств. Ыа₂СО₃ и смесь экстрагировали ЭСМ. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, высушивали (М§8О₄), фильтровали и растворители выпаривали ίη уаеио. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэшхроматографии (диоксид кремния; 7М раствор аммиака в МеОН в ЭСМ от 0/100 до 5/95). Собирали необходимые фракции и растворители выпаривали ίη уаеио с получением твердого вещества, которое суспендировали в ΏΙΡΕ, фильтровали и высушивали (вакуумная печь, 50°С) с получением соединения 8 в виде белого твердого вещества (160 мг, 74%).

Пример Е4.

(Рац)-Ы-{3-[4-амино-6-(фторметил)-6,7-дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4-фторфенил}5-фторпиридин-2-карбоксамид (соединение 9),

Ы-{3-[(6К)-4-амино-6-(фторметил)-6,7-дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4-фторфенил}-5фторпиридин-2-карбоксамид (соединение 10),

Ы-{3-[(68)-4-амино-6-(фторметил)-6,7-дигидро[1,2,3]триазоло[1,5-а]пиразин-6-ил]-4-фторфенил}-5фторпиридин-2-карбоксамид (соединение 11).

- 26 028775

К промежуточному соединению Е25 (250 мг, 0,90 ммоль) в МеОН (7 мл) при к.т. добавляли НС1 (6М в 1РгОН, 0,23 мл, 1,35 ммоль). Затем добавляли 5-фтор-2-пиридинкарбоновую кислоту (139 мг, 0,99 ммоль) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид (224 мг, 1,17 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Добавляли нас. водн. раств. Ыа₂СО₃ и смесь экстрагировали БСМ. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, высушивали (Мд8О₄), фильтровали и растворители выпаривали ш νасиο. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной флэшхроматографии (диоксид кремния; 7М раствор аммиака в МеОН в БСМ от 0/100 до 3/97). Собирали необходимые фракции и растворители выпаривали ш νасиο с получением соединения 9 в виде рацемата (115 мг, 32%). Данный продукт затем очищали с помощью препаративной 8ЕС на СЫга1рак Б1асе1 АО (20x250 мм), подвижная фаза (СО₂, МеОН с 0,4% ίΙΑΝΙΕ), с получением соединения 10 (40 мг, 11%) и соединения 11 (40 мг, 11%).

В табл. 1 ниже приведены дополнительные соединения формулы (I).

Таблица 1

Следующие соединения получали согласно способам, приведенным в качестве примера в экспериментальной части (прим. №). Соединения, приведенные в качестве примера и описанные в экспериментальной части, обозначены звездочкой*.

№ соед.	Прим. №	К¹	к²	К³	К⁴
1	Е1*	н	Ме (К)	а-Р	--ΝΗ Ν=\
2	Е1	н	Ме (К)	а-Р	--ΝΗ Ν=\ ^сы
3	Е1	н	Ме (К)	а-Р	--ΝΗ Ν=\ О ^—N ⁴
4	Е1	н	Ме (К)	а-Р	--ΝΗ Ν=\
5	Е2	н	Ме (К)	а-Р	χΑ С1
6	Е2	н	Ме (К)	а-Р	н —Ν Ν=χ О X— N \ Р
7	Е1	н	Ме (К)	а-Р	Н —N N=4 о \_Ν
8	ЕЗ	н	Ме (К)	а-Р, Ь-Р	--ΝΗ Ν=\
9	Е4	н	СН₂Р (КЗ)	а-Р	--ΝΗ Ν=\
10	Е4	н	СН₂Р (Ю	а-Р	--ΝΗ Ν=\
11	Е4	н	СН₂Р (8)	а-Р	--ΝΗ Ν=\

Аналитическая часть ЬСМ8

Общая процедура ЬСМ8

Измерения в ходе высокоэффективной жидкостной хроматографии (НРЬС) проводили с помощью насоса для ЬС, детектора на диодной матрице (БАБ) или УФ-детектора и колонки, как определено в соответствующих способах. При необходимости включали дополнительные детекторы (см. приведенную ниже таблицу способов).

Поток из колонки направляли в масс-спектрометр (М8), который был оснащен источником ионизации при атмосферном давлении. В компетенции специалиста в данной области находится установка настраиваемых параметров (например, диапазона сканирования, минимального времени измерения и т.д.) с целью получения ионов, дающих возможность определения номинального моноизотопного молекулярного веса (М^) соединения. Сбор данных проводили с помощью соответствующего программного обеспечения.

Соединения описывали по их экспериментальному времени удерживания (К_!) и ионам. Если не указано иное, в таблице данных указанный молекулярный ион соответствует [М+Н]+ (протонированная мо- 27 028775 лекула) и/или [М-Н] (депротонированная молекула). В случае, если соединение не было непосредственно способно к ионизации, указывают тип аддукта (т.е. [М+НН₄]⁺, [М+НСОО]^- и т.д.). Для молекул со сложными изотопными распределениями (Вг, С1 и т.п.) описанное значение является таковым, которое получено для наименьшей изотопной массы. Все результаты получали с экспериментальными погрешностями, которые обычно ассоциированы с применяемым способом.

Далее в настоящем документе δρϋ означает одиночный квадрупольный детектор, ”Μ8ϋ^π означает масс-селективный детектор, к.т.” означает комнатную температуру, ВЕН” означает мостиковый гибрид этилсилоксан/диоксид кремния, ΌΛΌ означает детектор на диодной матрице, Ηδδ означает диоксид кремния повышенной прочности, Р-ТоГ' означает квадрупольные времяпролетные массспектрометры, СЕИО означает хемилюминесцентный азотный детектор, ΕΕδΌ означает испарительный детектор светорассеяния.

Таблица 2а

Коды способов ^СΜδ (поток выражен в мл/мин.; температура колонки (Т) в °С; время анализа в минутах)

Код способа	Прибор	Колонка	Подвижная фаза	Градиент	Поток Т колонки	Время анализа
1	Иабегз: Асдиъбу® иРЪС® - ΌΑΌ и 5<2ϋ	Иабегз : ВЕН С18 (1,7 мкм, 2,1*50 мм)	А: 10 мМ СНзСО(ЖН₄ в 95% НгО+5% СНзСЫ В: СНзСЫ	От 95% А до 5% А за 1,3 мин., выдерживание в течение 0,7 мин.	0, 8 55	2
2	Иабегз: Асдиъбу® иРЪС® - ΌΑΌ и 3<2Ό	Иабегз: СЗН™ С18 (1,7 мкм, 2,1x50 мм)	А: 95% б,5 мМ СНзСО(ЖН₄+5% СНзСЫ, В: СНзСЫ	От 95% А до 5% А за 4,6 мин., удерживание в течение 0,4 мин.	1 50	5
3	Иабегз: Асчиббу® иРЪС® - ΌΑΌ и 5ζ)Ρ	Иабегз: НЗЗ ТЗ (1,8 мкм, 2,1*100 мм)	А: 10 мМ СНзСО(ЖН₄ в 95% НгО+5% СНзСЫ В: СНзСЫ	От 100% А до 5% А за 2,10 мин., до 0% А за 0,90 мин., до 5% А за 0,5 мин.	0, 8 55	3,5

Точки плавления

Значения представляют собой максимальные значения либо диапазоны точек плавления, и их получают с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с данным аналитическим способом.

Для ряда соединений точки плавления определяли с помощью устройства ^δС823е (Мей1ег-То1ебо) (а) или с помощью устройства МеШег То1ебо ЕР 62 (Ь). Точки плавления измеряли при градиенте температуры 30°С/мин. Максимальная температура составляла 400°С.

Таблица 2Ь

Данные анализа - Κι означает время удерживания (в минутах), [М+Н]+ означает протонированную массу соединения, причем способ относится к способу, который применяли для (^С)Μδ

№ соед.	Нд	[М+Н] +	Способ	Точка плавления
1	0,72	384	1	н.опр.
2	0,70	391	1	н.опр.
3	0,71	397	1	н.опр.
4	0,79	400	1	н.опр.
5	1,40	439	2	171,1°С
б	1,76	465	2	163,4°С
7	0,73	415	1	н.опр.
8	0, 80	402	1	н.опр.
9	1,29	402	3	н.опр.
10	1,40	402	3	н.опр.
11	1,40	402	3	н.опр.

н.опр. означает не определяли

Оптическое вращение

Оптическое вращение измеряли на поляриметре Регкт-Е1шег 341 с натриевой лампой и обозначали следующим образом: [ььь]у*°С (с г/100°мл, растворитель).

- 28 028775

Таблица 3

Аналитические данные - значения оптического вращения для энантиомерно чистых соединений

№ соед.	«в (°)	Длина волны (нм)	Концентрация, вес/об., %	Растворитель	Темп. (°С)
5	+ 46, 1	589	0,51	ΌΜΓ	20
6	+ 71,0	589	0,45	ΌΜΓ	20

ЯМР

Для ряда соединений спектры ¹Н ЯМР регистрировали на Вгикег ΌΡΧ-360 с рабочей частотой при 360 МГц или на Вгикег Луапсе I с рабочей частотой при 500 МГц с использованием хлороформа-ά (дейтерированного хлороформа, СЭС1₃) или ДМСО-б₆ (дейтерированного ДМСО, диметилсульфоксида-б₆) в качестве растворителя. Химические сдвиги (δ) регистрировали в частях на миллион (ч/млн) относительно тетраметилсилана (ТМ8), который использовали в качестве внутреннего стандарта.

Таблица 4. Результаты ¹Н ЯМР №

соед,

Результаты ^гН ЯМР

ЗН) , 4,66	(с, 2 Н) ,
,8 Гц, 1Н),	7,66-7,79
1, 8,02 (с,	1Н), 8,08
5=8,6, 4,6	Гц, 1Н) ,
ЗН) , 4,66	(с, 2Н),

6,82 (уш.с, 2Н), 7,19 (дд, 5=12,1, (м, 1Н) , 7,98 (тд, 5=8,8, 2,9 Гц, (дд, 5=7,3, 2,6 Гц, 1Н) , 8,21 (д

8,73 (д, 5=2,9 Гц, 1Н), 10,59 (с, 1Н).

(360 МГц, ДМСО-с/б) δ ч/млн 1,47 (с, ЗН)

6,82 (уш.с, 2Н) , 7,21 (дд, 5=12,1, 8,8 Гц, 1Н) , 7,64-7,82 (м, 1Н) , 8,02 (с, 1Н) , 8,11 (дд, 5=7,3, 2,6 Гц, 1Н) , 8,26 (д, 5=8,1 Гц, 1Н) , 8,58 (дд, 5=8,1, 1,5 Гц, 1Н) , 9,109,29 (м, 1Н), 10,81 (с, 1Н).

(360 МГц, ДМСО-5б) δ ч/млн 1,47 (с, ЗН) , 4,02 (с, ЗН) , 4,66 (с, 2Н) , 6,82 (уш.с, 2Н) , 7,19 (дд, 5=12,1, 8,8 Гц, 1Н) , 7, 64-7,78 (м, 1Н) , 8,02 (с, 1Н) , 8,08 (дд, 5=7,5, 2,7 Гц, 1Н) , 8,41 (д, 5=1,5 Гц, 1Н) , 8,87 (д, 5=1,5 Гц,

1Н), 10,48 (с, 1Н).

(360 МГц, ДМСО-5б) δ ч/млн 1,47 (с, ЗН) , 4,66 (с, 2Н) , (Д,

(с,	2Н) ,	7,20 (дд,	5=12,1, 8,8	Гц, 1Н) ,	7,69-7,80
1Н) , 8	, 02	(с, 1Н), 8,	08 (дд, 5=7,3	, 2, б Гц,	1Н), 8,13
5=8, 1	ГЦ,	1Н), 8,20	(дд, 5=8,4,	2,6 Гц,	1Н) , 8,78
5=2, 6	, о, '	7 Гц, 1Н),	10, 65 (с, 1Н) .
МГц,	ХЛОРОФОРМ-5) ё	> ч/млн 1,58	(с, ЗН),	4,61 (д,
, 5 Гц,	1Н)	, 4,86 (дд	, 5=16,5, 8,4	Гц, 2Н),	4,90 (д,
,2 Гц,	1Н)	, 7,11 (дд,	. 5=11,6, 8,7	Гц, 1Н),	7,76-7,82
1Н),	7,86	(с, 1Н),	7,99 (дд, 5=	=6,9, 2,6	Гц, 1Н),

(м,

8,21-8,33 (м, 1Н) , 9,00 (д, 5=1,4 Гц, 1Н) , 9,48 (с, 1Н) . (360 МГц, ДМСО-с?б) δ ч/млн 1,48 (с, ЗН) , 4,58-4,74 (м,

2Н) , 6,20 (д, 5=51,6 Гц, 2Н) , 6,82 (уш.с, 2Н) , 7,20 (дд, 5=12,1, 8,8 Гц, 1Н) , 7, 65-7,79 (м, 1Н) , 8,02 (с, 1Н) , 8,09 (дд, 5=7,3, 2,6 Гц, 1Н) , 8,58 (д, 5=1,5 Гц, 1Н) , 8,94 (д, 5=1,5 Гц, 1Н) , 10,60 (с, 1Н) .

МГц,	ХЛОРОФОРМ-5) δ ч/млн 1,58	(с, ЗН),	4,58	(д,
5 Гц,	1Н) , 4,93 (д, 5=13,2 Гц,	1Н) , 7,51-	-7,71	(м,
7,87	(с, 1Н), 7,98 (ддд, 5=11,5,	. 6,8, 2,6	Гц,	1Н) ,
(дд,	5=8,6, 4,6 Гц, 1Н) , 8,45	(Д, 5=2,6	ГЦ,	1Н),

9, 83 (с, 1Н) .

(360 МГц, ДМСО-5б) δ ч/млн 4,47 (д, 5=47,2, 9,1 Гц, 1Н) , 4,72 (дд, 5=47,6, 9,9 Гц, 1Н) , 4,88 (дд, 5=24,5, 13,5 Гц, 2Н) , 7,05 (с, 2Н) , 7,22 (дд, 5=11,7, 8,8 Гц, 1Н) , 7,79 (ддд, 5=8,8, 4,3, 2,7 Гц, 1Н) , 7,98 (тд, 5=8,8, 2,9 Гц, 1Н) , 8,03 (с, 1Н) 8,11 (дд, 5=7,3, 2,6 Гц, 1Н) , 8,21 (дд,

5=8,8, 4,8 Гц, 1Н) , 8,73 (д, 5=2,9 Гц, 1Н) , 10,65 (с, 1Н) .

- 29 028775

Фармакологические примеры

Предусмотренные в настоящем изобретении соединения являются ингибиторами фермента 1, расщепляющего АРР по бета сайту (ВАСЕ1). Полагают, что ингибирование ВАСЕ1, аспарагиновой протеазы, является существенным для лечения болезни Альцгеймера (АО). Полагают, что продуцирование и накопление бета-амилоидных пептидов (Абета) из белка-предшественника бета-амилоида (АРР) играет ключевую роль в возникновении и прогрессировании АО. Абета образуется из предшественника амилоидного белка (АРР) в результате последовательного расщепления на Ν- и С-концах домена Абета бетасекретазой и гамма-секретазой, соответственно.

Предполагается, что соединения формулы (I) действуют главным образом на ВАСЕ1 благодаря своей способности ингибировать ферментативную активность. Поведение таких ингибиторов, тестируемых с помощью биохимического анализа на основе резонансного переноса энергии флуоресценции (РРЕТ) и клеточного анализа аЫка на клетках 8ΚΝΒΕ2, описанных ниже и которые являются подходящими для выявления таких соединений и, в частности, соединений в соответствии с формулой (I), показано в табл. 3 и 4.

Биохимический анализ на основе ЕКЕТ для ВАСЕ1

Данный анализ представляет собой анализ на основе резонансного переноса энергии флуоресценции (РРЕТ). Субстратом для данного анализа является полученный из АРР пептид из 13 аминокислот, который содержит 'шведскую' мутацию Ъу5-Мс1/Л5п-Ъси сайта расщепления предшественника амилоидного белка (АРР) бета-секретазой. Данный субстрат также содержит два флуорофора: (7метоксикумарин-4-ил)уксусную кислоту (Мса), которая является донором флуоресценции с длиной волны возбуждения 320 нм и излучением при 405 нм, и 2,4-динитрофенил (Опр), который является соответствующим акцептором-гасителем. Расстояние между этими двумя группами выбирали таким образом, чтобы при световом возбуждении энергия флуоресценции донора в значительной степени гасилась акцептором посредством резонансного переноса энергии. При расщеплении с помощью ВАСЕ1 флуорофор Мса отделяется от гасящей группы Опр, восстанавливая полный выход флуоресценции донора. Увеличение флуоресценции линейно зависит от степени протеолиза.

Способ 1

Вкратце, в 384-луночном формате рекомбинантный белок ВАСЕ1 при конечной концентрации 1 мкг/мл инкубировали в течение 120 минут при комнатной температуре с 10 мкМ субстрата в буфере для инкубации (40 мМ цитратного буфера, рН 5,0, 0,04% РЕС, 4% ДМСО) в отсутствие или в присутствии соединения. Далее величину протеолиза непосредственно измеряли путем измерения флуоресценции в момент Т=0 и Т=120 (возбуждение при 320 нм и излучение при 405 нм). Результаты выражали в РРИ (относительных единицах флуоресценции) в виде разницы между Т120 и Т0.

Кривую наилучшего приближения подбирали при помощи методики суммы наименьших квадратов для графика зависимости % мин. контроля от концентрации соединения. На его основании можно получать значение 1С₅₀ (ингибирующей концентрации, вызывающей ингибирование 50% активности).

ЬС = медиана значений низкого контроля;

= низкий контроль: реакция без фермента;

НС = медиана значений высокого контроля;

= высокий контроль: реакция с ферментом;

% эффекта = 100-[(образец-ЕС)/(НС-ЬС)*100];

% контроля = (образец /НС)*100;

% мин. контроля = (образец-ЕС)/(НС-ЬС)*100.

Способ 2.

Вкратце, в 384-луночном формате рекомбинантный белок ВАСЕ1 в конечной концентрации 0,04 мкг/мл инкубировали в течение 450 минут при комнатной температуре с 20 мкМ субстрата в буфере для инкубации (50 мМ цитратного буфера рН 5,0, 0,05% РЕС) в присутствии соединения или ДМСО. Далее величину протеолиза непосредственно измеряли путем измерения флуоресценции (возбуждение при 320 нм и излучение при 405 нм) при разных моментах времени инкубации (0, 30, 60, 90, 120 и 450 мин). Для каждого эксперимента кривую времени (каждые 30 мин, от 0 до 120 мин) применяли для определения времени при обнаружении наиболее низкого фонового сигнала высокого контроля. Уровень сигнала в данный момент времени (Тх) применяли для вычитания из сигнала на 450 мин. Результаты выражали в РРИ в виде разницы между Т450 и Тх.

ЬС = медиана значений низкого контроля;

= низкий контроль: реакция без фермента;

НС = медиана значений высокого контроля;

= высокий контроль: реакция с ферментом;

% эффекта = 100-[(образец-ЕС)/(НС-ЬС)*100];

% контроля = (образец /НС)*100;

- 30 028775 % мин. контроля = (образец-ЬС)/(НС-ЬС)*100.

Приведенные в качестве примера следующие соединения тестировали, главным образом, как описано выше, и они проявляли следующую активность.

Таблица 5

н.т. означает не тестировали

Клеточный анализ аЫ§а на клетках 8ΚΝΒΕ2 для ВАСЕ1

В двух анализах аЫза количественно определяли уровни общего Абета и Абета 1-42, продуцированных и секретированных в среду клеток δΚNΒЕ2 нейробластомы человека. Анализ основан на клетках δΚNΒЕ2 нейробластомы человека, экспрессирующих предшественник амилоидного белка дикого типа (НЛРР695). Соединения разводили и добавляли к этим клеткам, инкубировали в течение 18 ч, а затем осуществляли измерения количества Абета 1 -42 и общего Абета. Количество общего Абета и Абета 1 -42 измеряли с помощью сэндвич- аЫза. аЫза представляет собой сэндвич-анализ с использованием биотинилированного антитела ЛЬМ25, связанного с покрытыми стрептавидином гранулами, и антитела АЬ4О8 или сАЬ42/26, конъюгированного с гранулами-акцепторами, для определения общего Абета и Абета 1-42 соответственно. В присутствии общего Абета или Абета 1-42 гранулы приближаются друг к другу. Возбуждение гранул-доноров вызывает высвобождение молекул синглетного кислорода, что запускает каскад переноса энергии на гранулы-акцепторы, приводящий в результате к излучению света. Излучение света измеряли спустя 1 ч после инкубирования (возбуждение при 650 нм и излучение при 615 нм).

Кривую наилучшего приближения подбирали при помощи методики суммы наименьших квадратов для графика зависимости % мин контроля от концентрации соединения. На его основании можно получать значение ГС₅₀ (ингибирующей концентрации, вызывающей ингибирование 50% активности).

ЬС = медиана значений низкого контроля;

= низкий контроль: клетки, предварительно инкубированные без соединения, без биотинилированного АЬ в аЫза;

НС = медиана значений высокого контроля;

= высокий контроль: клетки, предварительно инкубированные без соединения;

% эффекта = 100-[(образец-ЬС)/(НС-ЬС)*100];

% контроля = (образец/НС)*100;

% мин контроля = (образец-ЬС)/(НС-ЬС)*100.

Таблица 6

№ соед.	Клеточный анализ аЫза на клетках 3ΚΝΒΕ2, Абета 42, р1С₅о	Клеточный анализ осВтза на клетках 3ΚΝΒΕ2, Общий Абета, р1С₅о
1	8,35	8,49
2	8,96	8, 98
3	8,74	8,79
4	8,77	8, 88
5	8,43	8,51
6	8,28	8,32
7	8,87	8,86
8	8,33	8,35
9	7,24	7,25
10	7,61	7, 61
11	5,38	5, 35

- 31 028775

Биохимический анализ на основе ЕК.ЕТ для ВАСЕ2

Данный анализ представляет собой анализ на основе резонансного переноса энергии флуоресценции (ЕКЕТ). Субстрат для данного анализа содержит 'шведскую' мутацию Ьуз-Ме1/Азп-Ееи сайта расщепления предшественника амилоидного белка (АРР) бета-секретазой. Данный субстрат также содержит два флуорофора: (7-метоксикумарин-4-ил)уксусную кислоту (Мса), которая является донором флуоресценции с длиной волны возбуждения 320 нм и излучением при 405 нм, и 2,4-динитрофенил (Όηρ), который является соответствующим акцептором-гасителем. Расстояние между этими двумя группами выбирали таким образом, чтобы при световом возбуждении энергия флуоресценции донора в значительной степени гасилась акцептором посредством резонансного переноса энергии. При расщеплении бетасекретазой флуорофор Мса отделяется от гасящей группы Όηρ, возобновляя полный выход флуоресценции донора. Увеличение флуоресценции линейно зависит от степени протеолиза.

Вкратце, в 384-луночном формате рекомбинантный белок ВАСЕ2 в конечной концентрации 0,4 мкг/мл инкубировали в течение 450 мин при комнатной температуре с 10 мкМ субстрата в буфере для инкубации (50 мМ цитратного буфера, рН 5,0, 0,05% РЕО, без ДМСО) в отсутствие или в присутствии соединения. Далее величину протеолиза непосредственно измеряли путем измерения флуоресценции в момент Т=0 и Т=450 (возбуждение при 320 нм и излучение при 405 нм). Результаты выражали в КЕИ (относительных единицах флуоресценции) в виде разницы между Т450 и Т0.

ЕС = медиана значений низкого контроля;

= низкий контроль: реакция без фермента;

НС = медиана значений высокого контроля;

= высокий контроль: реакция с ферментом;

% эффекта = 100-[(образец-ЬС)/(НС-ЬС)*100];

% контроля = (образец/НС)*100;

% мин контроля = (образец-ЬС)/(НС-ЬС)*100.

Таблица 7

№ соед.	Биохимический анализ на основе ГНЕТ для ВАСЕ2, р1С₅о
1	8,48
2	8,27
3	7,81
4	8,56
5	8,73
6	7,22
7	7,78
8	8,52
9	8, 08

10	8,49
11	6, 3

Демонстрация эффективности ίη νίνο

Средства по настоящему изобретению, снижающие уровень Ав, можно применять для лечения АО у млекопитающих, например, у людей, или, в альтернативном случае, могут проявлять эффективность на животных моделях, таких как, но без ограничения, мышь, крыса или морская свинка. У млекопитающего может быть не выявлена АЭ, или оно может не иметь генетической предрасположенности к АЭ, но может быть трансгенным таким образом, что у него сверхпродуцируется и в итоге накапливается Ав подобно тому, как это наблюдается у людей, пораженных АО.

Средства, снижающие уровень Ав, можно вводить в любой стандартной форме с помощью любого стандартного способа. Например, без ограничений, средства, снижающие уровень Ав, могут быть представлены в форме раствора, таблеток или капсул, которые можно принимать перорально или инъекционно. Средства, снижающие уровень Ав, можно вводить в любой дозе, достаточной для значительного снижения уровней Ав в крови, плазме крови, сыворотке крови, цереброспинальной жидкости (С8Е) или головном мозге.

Чтобы определить, будет ли однократный прием средства, снижающего уровень Ав, снижать уровни Ав ίη νίνο, использовали нетрансгенных грызунов, например мышей или крыс. Животных, которых подвергали обработке средством, снижающим уровень Ав, обследовали и сравнивали с теми, которых не

- 32 028775 подвергали обработке или подвергали обработке средой, и уровни растворимого Αβ42, Αβ40, Αβ 38 и Αβ 37 количественно определяли с помощью технологии выявления электрохемилюминесценции Мезо 8са1е Рхзсоуегу (М8Р). Периоды обработки варьировали от часов (ч.) до дней и их корректировали на основе результатов снижения уровня Αβ, как только можно было установить время проявления эффекта.

Представлен стандартный протокол для измерения снижения уровня Αβ ΐη У1уо, но он представляет собой только один из многих вариантов, которые можно применять для оптимизации уровней выявляемого Αβ. Например, соединения, снижающие уровень Αβ, составляли с 20% СарЙ5о1® (сульфобутиловым эфиром β-циклодекстрина) в воде или 20% гидроксипропил-β-циклодекстрина. Средства, снижающие уровень Αβ, вводили в виде однократной пероральной дозы или любым приемлемым путем введения животным, которых подвергали голоданию в течение ночи. Через 4 ч животных умерщвляли и анализировали уровни Αβ.

Кровь собирали посредством декапитации и обескровливания в пробирки для сбора образцов, обработанные ΕΌΤΑ. Кровь центрифугировали при 1900д в течение 10 минут (мин.) при 4°С, и плазму отделяли и подвергали сверхбыстрой заморозке для дальнейшего анализа. Головной мозг отделяли от черепа и заднего мозга. Отделяли мозжечок и разделяли левое и правое полушарие. Левое полушарие хранили при -18°С для количественного анализа уровней исследуемых соединений. Правое полушарие промывали буфером на основе забуференного фосфатом солевого раствора (РВ8), и моментально замораживали на сухом льду, и хранили при -80°С до гомогенизации для биохимических анализов.

Мышиные мозги от нетрансгенных животных повторно суспендировали в 8 объемах 0,4% ΌΕΑ (диэтиламина)/50 мМ ЫаС1, содержащих ингибиторы протеазы (КосНе-11873580001 или 04693159001), на грамм ткани, например, к 0,158 г мозга добавляли 1,264 мл 0,4% ΌΕΑ. Все образцы гомогенизировали в системе Раз1Ргер-24 (МР ВюшеШсаР) с использованием лизирующей матрицы Ό (МРВю №6913-100) при 6 м/с в течение 20 с. Гомогенаты центрифугировали при 20800хд в течение 5 мин и супернатанты собирали. Супернатанты центрифугировали при 221,300хд в течение 50 мин. Полученную в результате высокоскоростного центрифугирования надосадочную жидкость затем переносили в новые пробирки Эппендорфа. Девять частей супернатанта нейтрализовали 1 частью 0,5 М ТП5-НС1, рН 6,8, и использовали для определения количества Αβ.

Для определения количества Αβ 42, Αβ40, Αβ38 и Αβ37 в растворимой фракции гомогенатов головного мозга выполняли одновременное специфичное выявление Αβ 42, Αβ40, Αβ38 и Αβ37 с использованием технологии мультиплексного выявления электрохемолюминесценции М8Э. В данном анализе очищенными моноклональными антителами, специфичными к Αβ37 (^К^/Αβ37/3), Αβ38

(]&]ΡΗΌ/Αβ38/5), Αβ40 (^КΡ/сΑβ40/28) и Αβ 42 (^КΡ/сΑβ42/26) покрывали квадруплексные планшеты М8Э. Вкратце, готовили стандарты (раствор синтетического Αβ42, Αβ40, Αβ38 и Αβ37) в 1,5-мл пробирках Эппендорфа в иНгасиКиге в конечных концентрациях в диапазоне от 10000 до 0,3 пг/мл. Образцы и стандарты совместно инкубировали с меченными сульфо-меткой антителами к ΣΕΡ/τΑβ^ на Ν-конце Αβ в качестве детекторного антитела. Затем добавляли 50 мкл смесей конъюгат/образец или конъюгат/стандарты в покрытый антителами планшет. Обеспечивали инкубирование планшета в течение ночи при 4°С с тем, чтобы обеспечить возможность образования комплекса антитело-амилоид. После этого инкубирования и последующих стадий промывки анализ заканчивали путем добавления буфера для считывания согласно инструкциям изготовителя (Мезо 8са1е Э15соуегу, Гейтерсберг, Мэриленд).

8υ^ΡО-ΤΑΟ излучает свет в результате электрохимической стимуляции, инициируемой на электроде. Для считывания сигнала использовали устройство М8Р 8еНог 8^000.

По сравнению с необработанными животными, в этой модели было бы преимущественным снижение уровня Αβ, в частности, снижение уровня Αβ по меньшей мере на 10%, более конкретно снижение уровня Αβ по меньшей мере на 20%.

Результаты

Результаты приведены в табл. 8 (значение для необработанных животных в качестве контроля (контр.) устанавливали как 100).

Таблица 8

№ соед.	Αβ40 (% от контр.) Среднее	Αβ42 (% от контр.) Среднее	Доза	Путь введения	Время после введения
1	47	47	10	5 . с.	2 ч.
1	73	55	10	5 . с.	4 ч.
2	44	44	10	5 . С .	2 ч.
2	61	50	10	3 . с.	4 ч.
8	56	56	10	3 . с.	2 ч.
8	136	105	10	3 . с.	4 ч.
10	95	79	10	р.о.	2 ч.
10	116	87	10	р.о.	4 ч.

з.с. означает подкожно; р.о. означает перорально

- 33 028775

Примеры возможных композиций

Используемый в случае всех данных примеров активный ингредиент относится к конечному соединению формулы (I), его фармацевтически приемлемым солям, его сольватам и стереохимическим изомерным формам.

Типичные примеры прописей для состава по настоящему изобретению представляют собой следующие.

1. Таблетки

Активный ингредиент Дикальция фосфат

Лактоза

Тальк

Стеарат магния Картофельный крахмал от 5 до 50 мг

0 мг

0 мг мг мг до 200 мг

В данном примере активный ингредиент можно заменять таким же количеством любого из соединений согласно настоящему изобретению, в частности таким же количеством любого из приведенных в качестве примера соединений.

2. Суспензия

Водную суспензию для перорального введения получают таким образом, что каждый 1 мл содержит от 1 до 5 мг одного из активных соединений, 50 мг карбоксиметилцеллюлозы натрия, 1 мг бензоата натрия, 500 мг сорбита и воды до 1 мл.

3. Форма для инъекций

Композицию для парентерального введения получают путем перемешивания 1,5 вес.% активного ингредиента по настоящему изобретению в 10 об.% пропиленгликоля в воде.

4. Мазь

Активный ингредиент Стеариловый спирт Ланолин

Белый вазелин от 5 до 1000 мг г

г г

Вода до 100 г

Допустимые варианты не следует рассматривать как отклонение от объема настоящего изобретения. Будет очевидно, что специалисты в данной области могут изменять описанное таким образом изобретение различными способами.

Claims

1. Соединение формулы (I) или его стереоизомерная форма, где К¹ выбран из водорода и галогена;

К² представляет собой С_1-4алкил, необязательно замещенный одним или несколькими атомами фтора;

К⁴ представляет собой где К⁵ представляет собой гетероарил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, -СН, С_1-4алкила, необязательно замещенного одним или несколькими галогеновыми заместителями, и С_1-4алкилокси, необязательно замещенного одним или несколькими галогеновыми заместителями;

где гетероарил является 5-членным ароматическим гетероциклом, выбранным из группы, состоящей из оксазола и пиразола; или является 6-членным ароматическим гетероциклом, выбранным из груп- 34 028775 пы, состоящей из пиридинила, пиримидинила и пиразинила;

или его фармацевтически приемлемая соль присоединения или сольват.

2. Соединение по п.1, имеющее конфигурацию, представленную в формуле (I') где Αγ представляет собой п, К¹, К², К³ и К⁴ определены в п.1.

3. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 или 2 и фармацевтически приемлемый носитель.

4. Способ получения фармацевтической композиции по п.3, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемый носитель тщательно смешивают с терапевтически эффективным количеством соединения по п.1 или 2.

5. Применение соединения по п.1 или 2 в качестве лекарственного средства, обладающего ингибирующей активностью в отношении бета-секретазы.

6. Применение фармацевтической композиции по п.3 в качестве лекарственного средства, обладающего ингибирующей активностью в отношении бета-секретазы.

7. Применение соединения по п.1 или 2 для лечения или предупреждения болезни Альцгеймера (ΑΌ), умеренного когнитивного нарушения (МС1), нарушения памяти, старческого слабоумия, деменции, расстройства Альцгеймера с болезнью диффузных телец Леви, амилоидной ангиопатии, церебральной амилоидной ангиопатии, амилоидоза головного мозга (связанного и не связанного с возрастом), наследственной церебральной геморрагии с амилоидозом голландского типа, черепно-мозговой травмы (ΤΒΙ), височной эпилепсии (ΤΕΕ), гипоксии, ишемии, нарушений метаболизма мозга, возрастной макулодистрофии, диабета 2 типа, амиотрофического бокового склероза (ΑΣδ), артериального тромбоза, аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний, рака, заболеваний сердечно-сосудистой системы, гипертензии, дерматомиозита, болезни, вызванной прионной инфекцией (болезни КрейтцфельдтаЯкоба), и заболеваний желудочно-кишечного тракта.

8. Применение фармацевтической композиции по п.3 для лечения или предупреждения болезни Альцгеймера (ΑΌ), умеренного когнитивного нарушения (МС1), нарушения памяти, старческого слабоумия, деменции, расстройства Альцгеймера с болезнью диффузных телец Леви, амилоидной ангиопатии, церебральной амилоидной ангиопатии, амилоидоза головного мозга (связанного и не связанного с возрастом), наследственной церебральной геморрагии с амилоидозом голландского типа, черепно-мозговой травмы (ΤΒΙ), височной эпилепсии (ΤΕΕ), гипоксии, ишемии, нарушений метаболизма мозга, возрастной макулодистрофии, диабета 2 типа, амиотрофического бокового склероза (ΑΣδ), артериального тромбоза, аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний, рака, заболеваний сердечно-сосудистой системы, гипертензии, дерматомиозита, болезни, вызванной прионной инфекцией (болезни КрейтцфельдтаЯкоба), и заболеваний желудочно-кишечного тракта.

9. Применение по п.7 или 8, где деменция выбрана из деменции с тельцами Леви, деменции с прогрессирующим нуклеарным параличом, деменции с кортикобазальной дегенерацией, смешанной деменции альцгеймеровского и сосудистого типа, мультиинфарктной деменции, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, сенильной деменции альцгеймеровского типа, сосудистой деменции, деменции, обусловленной заболеванием, ассоциированным с вирусом иммунодифицита человека (Ηΐν), деменции, обусловленной травмой головы, деменции, обусловленной болезнью Хантингтона, деменции, обусловленной болезнью Пика, деменции, обусловленной болезнью Крейтцфельдта-Якоба, лобно-височной деменции, деменции боксеров, деменции, ассоциированной с накоплением бета-амилоида, рак представляет собой рак молочной жедезы, заболевание сердечно-сосудистой системы представляет собой инфаркт миокарда или инсульт.

10. Применение по п.7 или 8 для лечения или предупреждения болезни Альцгеймера или диабета 2 типа.

11. Применение соединения по п. 1 или 2 для лечения или предупреждения заболевания или состояния, выбранного из нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Альцгеймера, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного черепно-мозговой травмой, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью диффузных телец Леви, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Паркинсона, сосудистого нейрокогнитивного расстройства и диабета 2 типа.

12. Применение фармацевтической композиции по п.3 для лечения или предупреждения заболевания или состояния, выбранного из нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Альцгеймера, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного черепно-мозговой травмой, нейрокогнитивного

- 35 028775 расстройства, обусловленного болезнью диффузных телец Леви, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Паркинсона, сосудистого нейрокогнитивного расстройства и диабета 2 типа.

13. Применение по п.11 или 12, где заболевание или состояние представляет собой нейрокогнитивное расстройство, обусловленное болезнью Альцгеймера, или диабет 2 типа.

14. Способ лечения или предупреждения расстройства, выбранного из группы, состоящей из болезни Альцгеймера (ΑΌ), умеренного когнитивного нарушения (МС!). нарушения памяти, старческого слабоумия, деменции, расстройства Альцгеймера с болезнью диффузных телец Леви, амилоидной ангиопатии, церебральной амилоидной ангиопатии, амилоидоза головного мозга (связанного и не связанного с возрастом), наследственной церебральной геморрагии с амилоидозом голландского типа, черепномозговой травмы (ТЫ), височной эпилепсии (ТЬЕ), гипоксии, ишемии, нарушений метаболизма мозга, возрастной макулодистрофии, диабета 2 типа, амиотрофического бокового склероза (АЬ§), артериального тромбоза, аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний, рака, заболеваний сердечнососудистой системы, гипертензии, дерматомиозита, болезни, вызванной прионной инфекцией (болезни Крейтцфельдта-Якоба), и заболеваний желудочно-кишечного тракта у субъекта, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или 2.

15. Способ лечения или предупреждения расстройства, выбранного из группы, состоящей из болезни Альцгеймера (ΑΌ), умеренного когнитивного нарушения (МЫ), нарушения памяти, старческого слабоумия, деменции, расстройства Альцгеймера с болезнью диффузных телец Леви, амилоидной ангиопатии, церебральной амилоидной ангиопатии, амилоидоза головного мозга (связанного и не связанного с возрастом), наследственной церебральной геморрагии с амилоидозом голландского типа, черепномозговой травмы (ТЫ), височной эпилепсии (ТЬЕ), гипоксии, ишемии, нарушений метаболизма мозга, возрастной макулодистрофии, диабета 2 типа, амиотрофического бокового склероза (АЬ§), артериального тромбоза, аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний, рака, заболеваний сердечнососудистой системы, гипертензии, дерматомиозита, болезни, вызванной прионной инфекцией (болезни Крейтцфельдта-Якоба), и заболеваний желудочно-кишечного тракта у субъекта, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.3.

16. Способ по п.14 или 15, где деменция выбрана из деменции с тельцами Леви, деменции с прогрессирующим нуклеарным параличом, деменции с кортикобазальной дегенерацией, смешанной деменции альцгеймеровского и сосудистого типа, мультиинфарктной деменции, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, сенильной деменции альцгеймеровского типа, сосудистой деменции, деменции, обусловленной заболеванием, ассоциированным с вирусом иммунодифицита человека (Ηΐν), деменции, обусловленной травмой головы, деменции, обусловленной болезнью Хантингтона, деменции, обусловленной болезнью Пика, деменции, обусловленной болезнью Крейтцфельдта-Якоба, лобно-височной деменции, деменции боксеров, деменции, ассоциированной с накоплением бета-амилоида, рак представляет собой рак молочной железы, заболевание сердечно-сосудистой системы представляет собой инфаркт миокарда или инсульт.

17. Способ лечения или предупреждения заболевания или состояния, выбранного из нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Альцгеймера, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного черепно-мозговой травмой, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью диффузных телец Леви, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Паркинсона, сосудистого нейрокогнитивного расстройства или диабета 2 типа, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества соединения по п.1 или 2.

18. Способ лечения или предупреждения заболевания или состояния, выбранного из нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Альцгеймера, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного черепно-мозговой травмой, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью диффузных телец Леви, нейрокогнитивного расстройства, обусловленного болезнью Паркинсона, сосудистого нейрокогнитивного расстройства или диабета 2 типа, включающий введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.3.