CN103429589A - 噁嗪衍生物及其在治疗神经障碍中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)的游离形式或可药用盐形式的新杂环化合物，其中所有变量如本说明书中所定义；本发明还涉及所述化合物的制备方法、其医疗用途和包含它们的药物。

Description

噁嗪衍生物及其在治疗神经障碍中的用途
阿尔茨海默氏病为一种破坏性神经变性障碍。其散发形式(sporadicform)影响老年群体(在＞75岁年龄时发生率急剧上升)，此外，还有多种家族形式在人生第四或第五个十年期发病。病理上，其特征在于患者脑部细胞外老年斑以及细胞内神经原纤维缠结的存在。老年斑的核心成分为小的4kDa的淀粉样肽。其由大型跨膜蛋白质(淀粉样前蛋白(APP))的蛋白水解作用产生。由β-分泌酶(BACE-1)裂解APP释放可溶性APP-β片段，同时，99-氨基酸长的C-末端保持拴连在细胞膜上。随后此C-末端片段经γ-分泌酶(一种细胞膜多酶复合物)蛋白水解，产生多种不同长度的淀粉样肽，主要为40和42氨基酸长度(Hardy J，Selkoe DJ(2002)科学(Science)；297(5580)：353-356)。
在病态情况下，如果此类多肽的产生速率出现增长，或者其从脑部的除去受到干扰，那么增加的脑部淀粉样肽浓度导致形成低聚物、原纤维并最终导致斑块的形成(Farris W，等(2007)Am.J.Pathol.；171(1)：241-251)。报告显示，脑部淀粉样肽及斑块的沉积为阿尔茨海默氏病发病机理的第一个可测量事件，且为突触、突触触点和神经元减少的触发器(Grimmer T，等(2009)老化神经生物学(Neurobiology of Aging)；30(12)：1902-1909)。大量神经元减少导致脑部萎缩，随后是认知能力、记忆力、定位能力和进行日常生活工作能力的损伤，即临床表现为痴呆(Okello A，等(2009)神经学(Neurology)；73(10)：754-760)。
BACE-1，也被称为Asp2或Memapsin2，为在神经元中大量表达的跨膜天冬氨酸蛋白酶。其与其底物APP一起共同存在于高尔基体和内吞区室中(Willem M，Lammich S，Haass C(2009)Semin.Cell Dev.Biol；20(2)：175-182)。小鼠基因敲除研究证明，尽管动物健康且能生育，但是淀粉样肽形成缺失(Ohno M，等(2007)Neurobiol.Dis.；26(1)：134-145)。在APP-过量表达的小鼠中BACE-1的基因切除证明斑块形成缺失并且认知能力不足发生逆转(Ohno M，等(2004)神经元(Neuron)；41(1)：27-33)。发散阿尔茨海默氏病患者脑中BACE-1水平提高(Hampel H，Shen Y(2009)Scand.J.Clin.Lab.Invest.；69(1)：8-12)。
总之，这些发现表明，BACE-1的抑制可能为阿尔茨海默氏病治疗的有利策略。
本发明涉及新的具有BACE抑制活性的
Figure BDA0000380458050000022
嗪衍生物，涉及其制备方法、涉及其医药用途和包含此类衍生物的药物。
更具体而言，在第一个方面，本发明涉及式(I)的化合物及其可药用盐：
Figure BDA0000380458050000021
其中定义了R1、R2、R3、R4、R5和R6，从而提供了选自如下的化合物：
5-氯-3-甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-三-氘代-甲氧基-吡嗪-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-丙-2-炔氧基-吡嗪-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡嗪-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氟-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-三氘代甲氧基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-三氘代甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4，5-二氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氘代甲氧基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4，5-二氟-苯基]-酰胺；
4，6-二氘代-5-氯-3-三氘代甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4，5-二氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-甲氧基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-二氟甲氧基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氯-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氯-3-氟-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氘代-甲氧基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
2，5-二甲基-噁唑-4-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-丙-2-炔氧基-吡嗪-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡嗪-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
4-二氟甲基-6-甲氧基-哒嗪-3-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氟-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-三氘代甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氯-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡嗪-2-甲酸[3-(5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3，5-二氯-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
N-[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-甲氧基-2-甲基-烟酰胺；
N-[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-三氘代甲氧基-2-甲基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-乙氧基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-甲氧基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-三氘代甲氧基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-五氘代乙氧基-烟酰胺；
N-[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-2-氯-6-甲氧基-烟酰胺；
N-[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-2-氯-6-乙氧基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-环丙基甲氧基-烟酰胺；和
2-氨基-N-[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-(2，2，2-三氟-乙氧基)-烟酰胺。
术语“本发明的化合物”、“式I的化合物”和“本发明的活性剂”在本说明书上下文中可以互换使用且预以指同一物质，即任意的化合物或其可药用盐，它们都属于上文所述本发明第一个方面的定义。
由于在式I的化合物上可以存在一个或一个以上不对称碳原子，所以式I的相应化合物可以以纯旋光形式或光学异构体混合物的形式存在，例如外消旋混合物的形式。所有此类纯的旋光异构体和所有其混合物包括外消旋混合物都是在上文所述本发明第一个方面中定义的本发明的一部分。
在一个实施方案中，提供了为分离的立体异构体的本发明化合物，其中该化合物具有一个立体中心且所述立体异构体是R构型。
在一个实施方案中，提供了为分离的立体异构体的本发明化合物，其中该化合物具有一个立体中心且所述立体异构体是S构型。
在一个实施方案中，提供了为分离的立体异构体的本发明化合物，其中该化合物具有两个立体中心且所述立体异构体是R R构型。
在一个实施方案中，提供了为分离的立体异构体的本发明化合物，其中该化合物具有两个立体中心且所述立体异构体是R S构型。
在一个实施方案中，提供了为分离的立体异构体的本发明化合物，其中该化合物具有两个立体中心且所述立体异构体是S R构型。
在一个实施方案中，提供了为分离的立体异构体的本发明化合物，其中该化合物具有两个立体中心且所述立体异构体是S S构型。
在一个实施方案中，提供了本发明的化合物，其中该化合物具有一个或两个立体中心，为外消旋混合物。
本文中所用的术语“异构体”指具有相同分子式但不同原子排列和构型的不同化合物。同样，本文中使用的术语“光学异构体”或“立体异构体”指给定的本发明化合物可能存在的任意各种立体异构构型并且包括几何异构体。可以理解的是，取代基可能连接至碳原子的手性中心上。因此，本发明包括化合物的对映异构体、非对映异构体或外消旋体。“对映异构体”为一对镜像彼此不相互重叠的立体异构体。一对1：1混合的对映异构体为“外消旋的”混合物。适当时该术语用于指外消旋混合物。“非对映异构体”为至少含有两个不对称原子但彼此不为镜像的立体异构体。根据Cahn-lngold-Prelog R-S系统指定绝对立体化学。当化合物为纯对映异构体时，每个手性碳上的立体化学可以表示为R或S。绝对构型未知的拆分化合物根据其在钠D线波长处旋转平面偏振光的方向(右或左)可以由(+)或(-)表示。本文所述的某些化合物包含一或多个不对称中心或轴，并且可能因此产生对映异构体、非对映异构体和可根据绝对立体化学定义为(R)-或(S)-的其它立体异构形式。本发明意在包含所有此类可能的异构体，包括外消旋混合物、光学纯形式及中间体混合物。光学活性的(R)-和(S)-异构体可以采用手性合成子或手性试剂制备，或者可以采用常规技术拆分。如果化合物含有双键，那么取代基可为E或Z构型。如果化合物含有二取代的环烷基，那么该环烷基取代基可能具有顺式-或反式-构型。
式I化合物可以以互变异构形式存在。所有此类互变异构体均为本发明的一部分。
在本发明的一个实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物及其可药用盐：
Figure BDA0000380458050000081
其中定义了R1、R2、R3、R4、R5和R6，从而提供了选自如下的化合物：
5-氯-3-甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-三-氘代-甲氧基-吡嗪-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-丙-2-炔氧基-吡嗪-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡嗪-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氟-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-三氘代甲氧基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-三氘代甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4，5-二氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氘代甲氧基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4，5-二氟-苯基]-酰胺；
4，6-二氘代-5-氯-3-三氘代甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4，5-二氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-甲氧基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-二氟甲氧基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氯-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氯-3-氟-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氘代-甲氧基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
2，5-二甲基-噁唑-4-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-丙-2-炔氧基-吡嗪-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡嗪-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
4-二氟甲基-6-甲氧基-哒嗪-3-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氟-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-三氘代甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氯-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡嗪-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3，5-二氯-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
N-[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-甲氧基-2-甲基-烟酰胺；
N-[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-三氘代甲氧基-2-甲基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-乙氧基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-甲氧基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-三氘代甲氧基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-五氘代乙氧基-烟酰胺；
N-[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-2-氯-6-甲氧基-烟酰胺；
N-[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-2-氯-6-乙氧基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-环丙基甲氧基-烟酰胺；和
2-氨基-N-[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-(2，2，2-三氟-乙氧基)-烟酰胺。
式I化合物可以以游离形式或可药用盐形式存在。所有此类游离化合物和可药用盐均为本发明的一部分。
可以由游离化合物按照公知方式制备盐，反之亦然。
在一个实施方案中，本发明涉及游离形式的任意一种本发明的化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及可药用盐形式的任意一种本发明的化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及可药用酸加成盐形式的任意一种本发明的化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及盐酸盐形式的本发明的化合物。
本文使用的术语“盐”指本发明化合物的酸加成盐。“盐”尤其包括“可药用盐”。术语“可药用盐”指保留本发明化合物生物效能及性质的盐，并且其通常不在生物学上或其它方面不合需求。在许多情况下，本发明化合物可以凭借氨基和/或羧基或其他类似基团的存在形成酸式盐。
可药用酸加成盐可以采用无机酸和有机酸形成，例如，乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、chlortheophyllonate、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八烷酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。可以衍生盐的无机酸包括，例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸。可以衍生盐的有机酸包括，例如，乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸和磺基水杨酸。
本发明可药用盐可以采用母体化合物、通过常规化学方法合成。通常，此类盐可以通过游离酸形式的此类化合物与化学计量的适宜的酸反应制备。此类反应通常在水或有机溶剂或这两种溶剂的混合物中进行。如果可行的话，通常需要采用非水介质，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。其他适宜的盐的列表可参见如“Remington′s PharmaceuticalSciences(雷明顿药用科学)”，第20版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，(1985)；和Stahl和Wermuth“Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use(药用盐手册：性质、选择及用途)”(Wiley-VCH，Weinheim，德国，2002)。
此外，本发明化合物(包括其盐)同样可以以其水合物形式获得，或者包含用于结晶的其它溶剂。本发明化合物可以固有地或经设计与可药用溶剂(包括水)形成溶剂化物；因此，本发明包括溶剂化和非溶剂化形式。术语“溶剂化物”指一或多个溶剂分子与本发明化合物(包括其可药用盐)的分子复合物。此类溶剂分子为在药学领域中常用的那些，已知其对受体无害，例如，水、乙醇等。术语“水合物”指溶剂分子为水的复合物。
本发明化合物(包括其盐、水合物和溶剂化物)可以固有地或经设计形成多晶型物。所有此类多晶型物为本发明的一部分。
本发明包括所有可药用同位素标记的式I化合物，其中一或多个原子被与通常在自然中发现的原子具有相同原子序数但不同原子质量的一或多个原子代替。此类同位素的实例为：碳，如11C、13C或14C，氯，如36Cl，氟，如18F，溴，如76Br，氢，如2H或3H，碘，如123I、124I、125I或131I，氮，如13N或15N，氧，如15O、17O或18O，磷，如32p，或硫，如35S。同位素标记的式I化合物可以通过如实施例中所述的类似方法或通过本领域技术人员已知的常规技术，采用适当的同位素标记的试剂或原料制备。掺入较重同位素(如2H(D))可以使式I化合物具有更高的代谢稳定性，其可以使例如化合物的体内半衰期延长或者降低给药剂量。某些同位素标记的式I化合物(例如掺入放射性同位素如3H或14C)可以用于药物或底物-组织分布研究。含有正电子发射同位素(如11C、18F、13N或15O)的式I化合物可以用于正电子成像术(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)研究，例如检验底物-受体占有率。
根据本发明的可药用溶剂化物包括结晶溶剂可被同位素取代的那些，如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO。
本发明化合物，即含有可以充当氢键供体和/或受体的基团的化合物，能够与适当的共晶形成剂形成共晶。此类共晶可以通过已知的共晶形成方法由式I化合物制备。此类方法包括研磨、加热、共-升华、共熔，或在结晶条件下使式I化合物溶液与共晶形成剂接触并分离由此形成的共晶。适宜的共晶形成剂包括WO2004/078163中所述的那些。因此，本发明还提供了含有式I化合物的共晶。
还可以通过另外的常规方法制备式I的化合物，这些方法是本发明的另外的方面，例如实施例中所述。原料是已知的，可以根据常规方法用已知化合物为原料制备，可以如实施例中所述由公知化合物制备，或可以使用与实施例中所述类似的方法制备。
游离形式或可药用盐形式的式I化合物在下文中通常指“本发明活性剂”，其在体外或体内测定中显示出有价值的药理性质，因此可用在药物中、疗法中或用作研究的化学物质，例如用作工具化合物。
例如，本发明活性剂为天冬氨酸蛋白酶抑制剂并且可以用于治疗或预防此类酶在其中起作用的病症、疾病或障碍。具体而言，本发明活性剂能够抑制β-分泌酶，因此可以抑制β-淀粉体的产生及随后聚集形成低聚物和原纤维。
本发明活性剂对于蛋白酶的抑制性质可以根据下文所述实验进行评价。
实验1：对人类BACE-1的抑制作用
在室温下，于10-100mM、pH4.5、含有0.1％CHAPS的乙酸盐缓冲液中，将0.1-10nM浓度的重组体BACE-1(采用标准方法在杆状病菌中表达并纯化的细胞外域)与不同浓度的实验化合物一起温育1小时。加入合成的荧光-淬火的肽底物(衍生自APP序列并含有一个适宜的荧光团-淬火对)直至最终浓度为1-5μM，并且采用微板光谱-荧光计在适当的激发/发射波长下以1分钟间隔记录荧光的增加5-30分钟。由作为实验化合物浓度函数的BACE-1活性抑制百分比计算IC50值。
实验2：对人类BACE-2的抑制作用
在室温下，于10-100mM、pH4.5、含有0.1％CHAPS的乙酸盐缓冲液中，将0.1-10nM浓度的重组体BACE-2(采用标准方法在杆状病菌中表达并纯化的细胞外域)与不同浓度的实验化合物一起温育1小时。加入合成的肽底物(衍生自APP序列并含有一个适宜的荧光团-淬火对)直至最终浓度为1-5μM，并且采用微板光谱-荧光计在适当的激发/发射波长下以1分钟间隔记录荧光的增加5-30分钟。由作为实验化合物浓度函数的BACE-2活性抑制百分比计算IC50值。
实验3：对人类组织蛋白酶D的抑制作用
在室温下，于适宜pH(3.0-5.0)的甲酸钠或乙酸钠缓冲液中，将重组体组织蛋白酶D(采用标准方法在杆状病菌中表达并纯化的组织蛋白酶D，并通过在pH3.7的甲酸钠缓冲液中温育激活)与不同浓度的实验化合物一起温育1小时。加入合成的肽底物Mca-Gly-Lys-Pro-Ile-Leu-Phe-Phe-Arg-Leu-Lys(DNP)-D-Arg-NH2直至最终浓度为1-5μM，并且采用微板光谱-荧光计在325nm激发和400nm发射下以1分钟间隔记录荧光的增加5-30分钟。由作为实验化合物浓度函数的组织蛋白酶D-2活性抑制百分比计算IC50值。
实验4：对淀粉样肽1-40细胞释放的抑制作用
用编码淀粉样前体蛋白的基因对中华仓鼠卵细胞进行转染。将细胞以8000细胞/孔的浓度置于96孔微量滴定板中，在含有10％FCS的DMEM细胞培养基中培养24小时。将不同浓度的实验化合物加至细胞中，在实验化合物存在下培养细胞24小时。收集上清液，采用所属领域的免疫检测技术(例如夹心ELISA、均相时间分辨荧光(HTRF)免疫检测或电化学发光免疫测定)测定淀粉样肽1-40的浓度。由作为实验化合物浓度函数的淀粉样肽释放的抑制百分比计算化合物的效能。
在至少一种上述试验中测试本发明的活性剂。
实施例化合物显示如下的上文所述试验1中的IC50平均值：
表A
Figure BDA0000380458050000171
实施例化合物显示如下的上文所述试验4中的IC50平均值：
表B
Figure BDA0000380458050000181
本文所用的术语“可药用载体”包括本领域技术人员已知的任何以及全部溶剂、分散介质、包衣材料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延缓剂、盐类、防腐剂、药物、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、染色剂等，以及其组合(参见，例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明顿药用科学)，第18版。Mack Printing Company，1990，pp.1289-1329)。除了目前为止任何与活性成分不相容的常规载体以外，其他常规载体均可用于治疗组合物或药物组合物中。
术语本发明化合物的“治疗有效量”指引起个体生物或医学反应的本发明化合物的量，该反应例如为降低或抑制酶或蛋白活性，或者改善症状、减轻病症、减缓或者延缓疾病的进展，或者预防疾病等。在一个非限定性实施方案中，术语“治疗有效量”指当施用于个体时本发明化合物的量，所述量能有效地(1)至少部分地减轻、抑制、预防和/或改善(i)BACE-1介导的或(ii)与BACE-1活性有关的或(iii)特征在于BACE-1活性(正常的或非正常的)的病症、障碍或疾病；或者(2)减少或抑制BACE-1活性。在另一个非限定的实施方案中，术语“治疗有效量”指当施用于细胞、组织或非细胞生物原料或介质时本发明化合物的量，所述量能有效地至少部分地降低或抑制BACE-1活性。上文关于BACE-1实施方案中所述术语“治疗有效量”的含义同样也适用于任何其它相关蛋白/肽/酶，如BACE-2或组织蛋白酶D。
本文使用的术语“个体”指动物。该动物的典型为哺乳动物。个体还指例如灵长类动物(如，人类，包括雄性和雌性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、乌等。在某些实施方案中，个体为灵长类动物。在其它实施方案中，个体为人类。
本文使用的术语“抑制”指减少或抑制指定病症、症状或障碍或疾病，或者指显著减少生物活性或过程的基线活性。
在一个实施方案中，本文使用的术语“治疗”任何疾病或障碍指改善疾病或障碍(即，减缓或阻止或减轻疾病或至少一种其临床症状的发展)。在另一个实施方案中，“治疗”指减轻或改善至少一种包括患者可能没有辨别的物理参数。在另一个实施方案中，“治疗”指物理地(如可辨别症状的稳定)、生理地(物理参数的稳定)或两种皆有地调节疾病或障碍。
本文使用的术语“预防”任何特定疾病或障碍指在疾病或障碍的任意症状明显前将本发明的化合物施用于个体。
如本文使用，如果个体能够从此类治疗中在生物、医药或生活质量方面获益，那么该个体为“需要”治疗。
本文使用的术语本发明“活性剂”与术语本发明“化合物”可以交换使用并且在含义上没有差别。
如本文使用，在本发明上下文中(特别是在权利要求中)使用的术语“一个”、“一种”、“该”以及相似的术语，除在本文中另外说明或在上下文中明显相悖外，应当既包括其单数也包括复数形式。本文提供的任何及所有实例或示例语言(例如，如)只是用于更好地说明本发明，并且除另外说明外不对本发明的范围构成限制。
鉴于其对于蛋白酶的抑制特性，本发明活性剂可以用于治疗或预防各种使人丧失能力的精神病学状况、精神病状况、神经病状况或血管状况，例如血管系统的或神经系统的病症、疾病或障碍，该状况是由于β-淀粉体产生或聚集起作用的或者基于BACE-2(β-位APP-分裂酶2)或组织蛋白酶D的抑制产生的，BACE-2和组织蛋白酶D为胃蛋白酶-型天门冬胺酰蛋白酶和β-分泌酶的近同系物，并且基于BACE-2或组织蛋白酶D的表达与更具有致癌性或转移性潜力的肿瘤细胞的关联性，可以作为抗癌药物，如抑制与肿瘤细胞有关的转移过程。所述血管系统或神经系统的病症、疾病或障碍的示例包括但不限于焦虑症，如患有或不患有广场恐怖症的恐慌症、无恐慌症史的广场恐怖症、动物或其它具体的恐惧症(包括社交恐惧症、社交焦虑症、焦虑症、强迫症)、应激障碍(包括创伤后或急性应激障碍)或者广泛性或药物诱发型焦虑症；神经症；痉挛；癫痫，特别别是癫痫部分发作、简单或复杂或部分发作发展为继发广泛性痉挛或广泛性痉挛[失神性(典型或非典型)、肌阵挛性、阵挛性、强直性、强直阵挛性或无张力性痉挛]；抽搐；偏头痛；情感障碍，如抑郁或双相障碍，例如单次性或复发性重郁症、重郁症、轻郁症、心境恶劣、忧郁症NOS、双相I或双相II躁狂症或循环性情感障碍；精神障碍，包括精神分裂或抑郁；神经变性，例如脑缺氧引起的神经变性；急性、创伤或慢性的神经系统退化，如帕金森氏症、唐氏综合症、痴呆(例如老年性痴呆、路易体痴呆或额颞痴呆)、认知障碍、认知损伤(例如轻度认知损伤、记忆损伤)、淀粉样变性神经病、周围神经病、阿尔兹海默氏病、Gerstmann-Straeussler-Scheinker综合征、Niemann-Pick病(例如Niemann-Pick C型疾病)、脑部炎症、脑部、脊髓或神经损伤(例如创伤性脑损伤(TBI)、神经创伤或脑部创伤)、血管淀粉样变性、伴有淀粉样变性的脑部出血、亨廷顿氏舞蹈病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、多发性硬化或脆性X综合征；痒病；脑淀粉样血管病；脑病变，例如传染性海绵状脑病；中风；注意障碍，例如注意力不足过动症；妥瑞氏综合征；语言障碍，包括口吃；昼夜节律障碍，例如受时差或轮班困扰的个体；疼痛；伤害感受；瘙痒；呕吐，包括急性、延迟的或提早的呕吐，如化疗或辐射导致的呕吐、晕动病或术后的恶心或呕吐；饮食失调症，包括神经性厌食或神经性贪食；经前期综合征；肌肉痉挛或强直，例如半身麻痹患者患有的；听力障碍，例如耳鸣或年龄相关的听力损害；尿失禁；青光眼；包涵体肌炎；或者物质相关性障碍，包括物质滥用或依赖，包括如酒精的物质戒断障碍。本发明活性剂也可以用于增强认知能力，例如患有痴呆疾病(如阿尔茨海默氏病)的个体；作为麻醉或小型医疗介入前(如内窥镜检查，包括胃镜检查)的前驱药(pre-medication)；或者作为配体，例如放射性配体或正电子成像术(PET)配体。
对于上述适应症，适当的剂量取决于例如作为药用活性成分的化合物、宿主、施用模式、病症、疾病或障碍的性质和严重程度或者所需效果。但是，通常而言，约0.1-约100mg/kg动物体重的日剂量可以获得令人满意的结果，优选约1-约50mg/kg动物体重的日剂量。对于大型哺乳动物(例如人类)，推荐的方便施用的所示的本发明活性剂的日剂量范围为约0.5-约2000、优选约2-约200mg(例如每天以至多四次的分剂量或以缓释剂型施用)。
本发明活性剂可以通过任何常规途径施用，尤其是肠内施用，优选口服施用(例如以片剂或胶囊形式)或胃肠外施用(例如以可注射溶液或悬浮液的形式)。
在另一方面，本发明涉及药物组合物，该组合物含有作为活性成分的本发明活性剂和至少一种药学可接受载体或稀释剂，以及任选的其它辅助物质，该辅助物质为例如细胞色素P450酶抑制剂、阻止细胞色素P450降解活性药学成分的活性剂、改善或增强活性药学成分药学代谢动力学的活性剂、改善或增强活性药学成分生物利用度的活性剂等，例如葡萄柚汁、酮康唑，优选利托那韦。所述组合物可以采用常规方式生产，例如混合其各组分。单位剂量形式含有例如约0.1-约1000、优选约1-约500mg的本发明活性剂。
因此，在本发明的一个实施方案中，提供了药物组合物，其包含本发明的活性剂作为活性成分和可药用载体或稀释剂。
另外，本发明的药物组合物可以制备为固体形式(包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、散剂或栓剂)或液体形式(包括但不限于溶液、混悬剂或乳剂)。该药物组合物可以经受常规的制药操作(如消毒)和/或可以含有常规惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂以及辅剂(如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等)。
通常，药物组合物为含有活性成分以及下列成分的片剂或明胶胶囊：
a)稀释剂，如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其镁或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还有
c)粘合剂，如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如需要
d)崩解剂，如淀粉、琼脂、藻酸或其钠盐，或者泡腾混合物；和/或
e)吸附剂、着色剂、调味剂和甜味剂。
可以根据本领域已知的方法对片剂进行薄膜包衣或包肠溶衣。
口服施用的适宜组合物包含有效量的本发明化合物，该组合物可以为片剂、锭剂、水或油混悬剂、可分散的散剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊、糖浆剂或酏剂形式。用于口服使用的组合物通过药物组合物制备领域任何已知的方法制备，此类组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的成分以提供药用美观可口的制剂产品。片剂可以含有活性成分和适合制备片剂的无毒药学上可接受的赋形剂。此类赋形剂为，例如，惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；粒化剂和崩解剂，例如，玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如，淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂为不包衣的或者通过已知方法包衣以延缓在胃肠道中的崩解和吸收，从而提供长时间的延缓作用。例如，可以采用延时材料如单硬脂酸甘油酯或甘油二硬脂酸酯。口服使用的制剂可以为硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合；或者为软明胶胶囊，其中活性成分与水或油(例如花生油、液状石蜡或橄榄油)介质混合。
某些可注射的组合物为等渗水溶液或悬浮液，栓剂最好自脂肪乳剂或混悬液制备。所述组合物可以为灭菌的和/或含有辅剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，其还可以含有其它治疗有价值的物质。所述组合物可以分别通过常规的混合、粒化或包衣方法制备，并且含有约0.1-75％或约1-50％的活性成分。
透皮应用的适宜组合物包含有效量的本发明化合物和适宜载体。适合透皮递送的载体包括可吸收的可药用溶剂以帮助通过宿主皮肤。例如，透皮装置为绷带形式，该绷带形式包括背衬、包含所述化合物和任选的载体的储药层、任选的速率控制屏障(用以在延长的时间内以控制的预定速率下向宿主皮肤递送化合物)，以及将所述装置固定在皮肤上的工具。
适用于局部(例如皮肤和眼)应用的组合物包括水溶液、混悬液、软膏、乳膏、凝胶或喷雾制剂(例如通过气雾剂等递送)。此类局部递送系统尤其适用于皮肤应用，例如用于皮肤癌的治疗，如在防晒霜、洗剂、喷剂等中用于预防。因此，这些组合物尤其适用于本领域已知的局部用(包括美容用)制剂。此类制剂可含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
本文使用的局部应用可能还涉及吸入或鼻内应用。其可以便利地通过干粉吸入器以干粉形式(单独、作为混合物(例如与乳糖的干混料)或混合组分颗粒(如与磷脂一起))递送，或者通过使用或不使用适当的抛射剂的压力容器、泵、喷雾器、喷瓶或雾化器以气雾喷雾剂的形式递送。
由于水可能促进某些化合物的降解，所以，本发明还提供了含有作为活性成分的本发明化合物的无水药物组合物和剂型。
本发明的无水药物组合物和剂型可以采用无水或含低湿度的成分在低水分或低湿度条件下制备。无水药物组合物可以在维持无水性质的条件下制备和保存。因此，无水组合物采用已知可以阻止其暴露于水的材料进行包装，从而使其可以包含入适当的制剂套盒中。适当包装的实例包括但不限于密封箔、塑料包装、单位剂量容器(例如小玻璃瓶)、泡罩包装和条形包装。
本发明还提供了含有一种或多种降低作为活性成分的本发明化合物的分解速率的试剂的药物组合物和剂型。此类试剂(如本文中称为“稳定剂”)包括但不限于抗氧化剂(如抗坏血酸)、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。
根据上述，在另一方面，本发明涉及用作药物的本发明的活性剂，例如用于治疗或预防神经或血管病症、疾病或障碍，在所述病症、疾病或障碍中，β-淀粉体的产生和聚集起作用，或者用于抑制与肿瘤细胞有关的转移过程。在另一个实施方案中，本发明涉及用于治疗BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病或障碍的本发明的活性剂。在一个实施方案中，本发明涉及用于治疗阿尔兹海默病或轻度认知缺损的本发明的活性剂。
在另一方面，本发明涉及在药物中作为药用活性成分的本发明活性剂的用途，例如用于治疗或预防神经或血管病症、疾病或障碍，在所述病症、疾病或障碍中β-淀粉体的产生或聚集起作用，或者用于抑制与肿瘤细胞有关的转移过程。在另一个实施方案中，本发明涉及在药物中作为药用活性成分的本发明活性剂的用途，用于治疗或预防BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病或障碍。在一个实施方案中，本发明涉及在药物中作为药用活性成分的本发明活性剂的用途，用于治疗或预防阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损。
在另一方面，本发明涉及本发明活性剂用于制备药物的用途，该药物用于治疗或预防神经或血管病症、疾病或障碍，在所述病症、疾病或障碍中β-淀粉体的产生或聚集起作用，或者用于抑制与肿瘤细胞有关的转移过程。在另一个实施方案中，本发明涉及本发明药物组合物用于制备药物的用途，该药物用于治疗或预防BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病或障碍。在一个实施方案中，本发明涉及在药物中作为药用活性成分的本发明活性剂的用途，用于治疗或预防阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损。
在另一方面，本发明涉及用于治疗或预防需要此类治疗、预防或抑制的个体的神经或血管病症、疾病或障碍的方法，在所述病症、疾病或障碍中β-淀粉体的产生或聚集起作用，或者用于抑制与肿瘤细胞有关的转移过程的方法，该方法包括给此类个体施用有效量的本发明活性剂。在一个实施方案中，本发明涉及调节患者BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性的方法，该方法包括给个体施用治疗有效量的本发明活性剂。在另一个实施方案中，本发明涉及在需要治疗或预防的个体中治疗或预防由BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病的方法，该方法包括给此类个体施用有效量的本发明活性剂。在另一个实施方案中，本发明涉及在需要此类治疗或预防的个体中治疗或预防阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损的方法，该方法包括给此类个体施用有效量的本发明活性剂。
本发明活性剂可以作为单一活性药学成分或者作为与至少一种其它活性药学有效成分的组合产品施用，例如用于治疗或预防神经或血管病症、疾病或障碍，在所述病症、疾病或障碍中β-淀粉体的产生或聚集起作用，或者用于抑制与癌细胞有关的转移过程。此类药用组合产品可以为单位剂量形式，该单位剂量形式含有预定量的至少两种活性成分的每一种以及至少一种可药用载体或稀释剂。或者，药用组合产品可以为分别含有至少两种活性成分的包装产品形式，例如适用于共同或分别施用至少两种活性成分的包装或分配装置，其中这些活性成分为分别放置的。在另一方面，本发明涉及此类药学组合产品。
因此，在另一方面，本发明涉及含有治疗有效量的本发明活性剂和第二种药物的药用组合产品，用于同时或相继施用。
在一个实施方案中，本发明提供了含有本发明化合物和至少一种其它治疗活性剂的产物作为联合制剂，在治疗中同时、分别或相继使用。在一个实施方案中，治疗为治疗BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病或病症。在进一步的实施方案中，所述治疗为阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损的治疗。
在一个实施方案中，本发明提供了含有本发明活性剂和另一种治疗活性剂的药物组合物。任选地，该药物组合物可以包括如上所述的可药用的赋形剂。
在一个实施方案中，本发明提供含有两种或多种单独的药物组合物(其中至少一种含有本发明活性剂)的套盒。在一个实施方案中，该套盒含有分别保存所述组合物的装置，如容器、分开的瓶或分开的铝箔包装。所述套盒的实例为如泡罩包装，通常用于包装片剂、胶囊等。本发明套盒可以用于施用不同的剂量形式(例如经口和肠胃外)、用于以不同剂量间隔施用所述单独的组合物，或用于单独的组合物的相互滴定。本发明套盒通常含有施用说明以提高依从性。
在本发明的联合治疗中，本发明活性剂和其它治疗活性剂可以通过相同或不同的生产商制备和/或配制。此外，本发明化合物和其它治疗化合物可以一起组成联合疗法：(i)在将组合产品发放给医师前组合(例如，套盒含有本发明化合物和其它治疗活性剂的情况)；(ii)在施用前不久由医师自己组合(或者在医师指导下组合)；(iii)由患者自己组合，例如相继施用本发明化合物和其它治疗活性剂)。因此，本发明提供用于治疗BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病或病症、特别是阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损的本发明活性剂，其中该药物被制备为与另一种治疗活性剂一起施用。本发明还提供用于治疗BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病或病症、特别是阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损的另一种治疗活性剂的用途，其中该药物与本发明活性剂一起施用。
本发明还提供了用于治疗BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病或病症(特别是阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损)的方法中的本发明活性剂，其中本发明活性剂被制备为与另一种治疗活性剂一起施用。本发明还提供用于治疗BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病或病症的方法(特别是阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损)中的其它治疗活性剂，其中该其它治疗活性剂与本发明活性剂一起施用。本发明同样提供了用于治疗BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病或病症、特别是阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损的方法中的本发明活性剂，其中本发明活性剂与其它治疗活性剂一起施用。本发明同样提供用于治疗BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病或病症、特别是阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损的方法中的其它治疗活性剂，其中该其它治疗活性剂与本发明活性剂一起施用。
本发明同样提供本发明活性剂用于治疗BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病或病症、特别是阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损的用途，其中患者预先(例如24小时内)用另一种治疗活性剂进行治疗。本发明同样提供了另一种治疗活性剂用于治疗BACE-1、BACE-2或组织蛋白酶D活性介导的疾病或病症、特别是阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损的用途，其中患者预先(例如24小时内)用本发明活性剂进行治疗。
在一个实施方案中，本发明涉及与另一种治疗活性剂联合的本发明化合物，其中所述另一种治疗活性剂选自：
(a)乙酰胆碱酯酶抑制剂，如多奈哌齐(AriceptTM)、利斯的明(ExelonTM)和加兰他敏(RazadyneTM)；
(b)谷氨酸拮抗剂，如美金刚(NamendaTM)；
(c)对于低情绪和兴奋性的抗抑郁药物，如西酞普兰(CelexaTM)、氟西汀(ProzacTM)、帕罗西汀(PaxilTM)、舍曲林(ZoloftTM)和曲唑酮(DesyrelTM)；
(d)对于焦虑、坐立不安、口头破坏性行为和反抗的抗焦虑药，如劳拉西泮(AtivanTM)和奥沙西泮(SeraxTM)；
(e)对于幻觉、妄想、进攻、烦乱、敌意和不合作的安定药，如阿立哌唑(AbilifyTM)、氯氮平(ClozarilTM)、氟哌啶醇(HaldolTM)、奥氮平(ZyprexaTM)、喹硫平(SeroquelTM)、利培酮(RisperdalTM)和齐拉西酮(GeodonTM)；
(f)情绪稳定剂，如卡马西平(TegretolTM)和双丙戊酸(DepakoteTM)；
(g)烟碱α-7激动剂；
(h)mGluR5拮抗剂；
(i)H3激动剂；和
(j)淀粉样蛋白治疗疫苗。
在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含：
i)本发明的化合物或其可药用盐；
ii)至少一种治疗剂，其选自：
a)乙酰胆碱酯酶抑制剂；
b)谷氨酸拮抗剂；
c)抗抑郁药物；
d)抗焦虑药；
e)抗精神病药物；
(f)情绪稳定剂；
(g)烟碱α-7激动剂；
(h)mGluR5拮抗剂；
(i)H3激动剂；和
(j)淀粉样蛋白治疗疫苗；和
iii)一种或多种可药用载体或稀释剂。
以下实施例示例本发明。
实施例
缩写
ACN      乙腈
AcOH     乙酸
aq.      水
Boc      叔丁氧羰基
t-Bu     叔丁基
t-BuOH   叔丁醇
conc.    浓
DAST     二乙氨基三氟化硫(Et2N)2SF3
DCM      二氯甲烷
DEAD     偶氮二甲酸二乙酯
DIAD     偶氮二甲酸二异丙酯
DIPEA    二异丙基乙胺
DMF      二甲基甲酰胺
DMSO     二甲亚砜
DPPF     1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁
EDC      1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
eq.      当量
ESI      电喷雾电离
Et3N     三乙胺
Et2O     乙醚
EtOAc    乙酸乙酯
EtOH     乙醇
h        小时
Hex      己烷
HMDS     六甲基二硅氮烷
HOAt     1-羟基-7-氮杂-苯并三唑
HOBT     羟基-苯并三唑
HPLC     高效液相色谱法
LCMS     液相色谱与质谱联用
MeOH     甲醇
min      分钟
MS       质谱法
NMR      核磁共振光谱法
NP       正相
PE       石油醚
PPh3     三苯膦
Rf       保留因子(TLC)
RP       反相
Rt       保留时间
rt       室温
sat.     饱和
soln.    溶液
TBME     叔丁基-甲基-醚
TFA      三氟乙酸
THF      四氢呋喃
TLC      薄层色谱法
UPLC     超高效液相色谱法
通常色谱信息
HPLC方法H1(RtH1)：
HPLC-柱尺寸：3.0×30mm
HPLC-柱型：Zorbax SB-C18，1.8μm
HPLC-洗脱液：A)水+0.05Vol.-％TFA；B)ACN+0.05Vol.-％TFA
HPLC-梯度：3.25分钟30-100％B，流速=0.7ml/min
HPLC方法H2(RtH2)：
HPLC-柱尺寸：3.0×30mm
HPLC-柱型：Zorbax SB-C18，1.8μm
HPLC-洗脱液：A)水+0.05Vol.-％TFA；B)ACN+0.05Vol.-％TFA
HPLC-梯度：3.25分钟0-100％B，流速=0.7ml/min
LCMS方法H3(RtH3)：
HPLC-柱尺寸：3.0×30mm
HPLC-柱型：Zorbax SB-C18，1.8μm
HPLC-洗脱液：A)水+0.05Vol.-％TFA，B)ACN+0.05Vol.-％TFA
HPLC-梯度：3.25分钟10-100％B，流速=0.7ml/min
LCMS方法H4(RtH4)：
HPLC-柱尺寸：3.0×30mm
HPLC-柱型：Zorbax SB-C8，1.8μm
HPLC-洗脱液：A)水+0.05Vol.-％TFA，B)ACN+0.05Vol.-％TFA
HPLC-梯度：2.00分钟10-95％B，95％B2.00min，流速=0.7ml/min
UPLC方法H5(RtH5)：
HPLC-柱尺寸：2.1×50mm
HPLC-柱型：Acquity UPLC HSS T3 C18，1.7μm
HPLC-洗脱液：A)水+0.1Vol.-％TFA，B)ACN+0.1Vol.-％TFA
HPLC-梯度：1.5分钟5-100％B，流速=1.0ml/min
LCMS方法H6(RtH6)：
HPLC-柱尺寸：3.0×30mm
HPLC-柱型：Zorbax SB-C18，1.8μm
HPLC-洗脱液：A)水+0.05Vol.-％TFA；B)ACN+0.05Vol.-％TFA
HPLC-梯度：3.25分钟40-100％B，流速=0.7ml/min
LCMS方法H7(RtH7)：
HPLC-柱尺寸：3.0×30mm
HPLC-柱型：Zorbax SB-C18，1.8μm
HPLC-洗脱液：A)水+0.05Vol.-％TFA；B)ACN+0.05Vol.-％TFA
HPLC-梯度：3.25分钟50-100％B，流速=0.7ml/min
UPLC方法H8(RtH8)：
HPLC-柱尺寸：2.1x50mm
HPLC-柱型：Acquity UPLC HSS T3，1.8μm
HPLC-洗脱液：A)水+0.1Vol.-％甲酸，B)ACN+0.1％甲酸
HPLC-梯度：1.5min10-95％B，1.0min95％B，流速=1.2ml/min
HPLC-柱温度：50℃
UPLC方法H9(RtH9)：
HPLC-柱尺寸：2.1x50mm
HPLC-柱型：Acquity UPLC HSS T3，1.8μm
HPLC-洗脱液：A)水+0.05Vol.-％甲酸+3.75mM乙酸铵B)ACN+0.04Vol.-％甲酸
HPLC-梯度：1.4min2-98％B，0.45min98％B，流速=1.2ml/min
HPLC-柱温度：50℃
UPLC方法H10(RtH10)：
HPLC-柱尺寸：2.1x50mm
HPLC-柱型：Acquity UPLC HSS T3，1.8μm
HPLC-洗脱液：A)水+0.05Vol.-％甲酸+3.75mM乙酸铵B)ACN+0.04Vol.-％甲酸
HPLC-梯度：1.4min2-98％B，0.75min98％B，流速=1.2ml/min
HPLC-柱温度：50℃
LCMS方法H11(RtH11)：
HPLC-柱尺寸：2.1x30mm
HPLC-柱型：Ascentis Express C18，2.8μm
HPLC-洗脱液：A)水+0.05Vol.-％甲酸+3.75mM乙酸铵，B)ACN+0.04Vol.-％甲酸
HPLC-梯度：1.4min2-98％B，0.75min98％B，流速=1.2ml/min
HPLC-柱温度：50℃
UPLC方法H12(RtH12)：
HPLC-柱尺寸：2.1x50mm
HPLC-柱型：Acquity UPLC HSS T3，1.8μm
HPLC-洗脱液：A)水+0.1Vol.-％TFA，B)ACN+0.1Vol.-％TFA
HPLC-梯度：1.5min10-100％B，流速=1.0ml/min
HPLC-柱温度：35℃
实施例1：5-氯-3-甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1,4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺
Figure BDA0000380458050000331
a)1-(5-溴代-2-氟-苯基)-乙酮
将二异丙基胺(17.78ml，126mmol)在THF(375ml)中的溶液冷却至-78℃。滴加1.6M BuLi的己烷溶液(79ml，126mmol)。15分钟后，滴加4-溴代-1-氟苯(20g，114mmol)，同时保持温度低于-60℃。在-70℃搅拌2.5h后，加入二氟乙酸乙酯(13.22ml)。将该混合物温至-40℃，然后通过将该混合物倾倒在1M HCl上猝灭。用石油英萃取该混合物，用MgSO4.H2O干燥，浓缩，通过柱色谱法纯化(硅胶；己烷/5-15％TBME)，得到期望的产物，为黄色液体。
1H-NMR(CDCl3，360MHz)：δ8.09(dd，1H)，7.82-7.77(m，1H)，7.17(t，1H)，6.45(t，1H，CHF2)。
b)1-(5-溴代-2-氟-苯基)-1-二氟甲基-烯丙基]-氨基甲酸叔丁酯
将1-(5-溴代-2-氟-苯基)-乙酮(16g，63.2mmol)和N-叔丁氧羰基-三苯基亚氨基磷杂环丁烷(26.3g，69.6mmol)的混合物在90℃在甲苯中加热18h。将该混合物与己烷一起研磨，过滤，以除去氧化三苯膦。通过硅胶色谱法纯化滤液(己烷/1-5％TBME)，得到11.37g(32.3mmol)期望的产物，为淡黄色不纯油状物。TLC：Rf(己烷/EtOAc6：1)=0.65。
将产物溶于THF(100ml)，冷却至-78℃。滴加溴化乙烯基镁(48ml的1M THF溶液)，同时不使该反应体系的温度超过-60℃。将该混合物在-70℃搅拌1h，然后温至0℃。用10％氯化铵水溶液使反应停止，用TBME萃取。用盐水洗涤有机层，用活性炭和MgSO4.H2O处理，用硅藻土过滤。浓缩滤液，从己烷中结晶，得到期望的产物，为无色结晶。
HPLC：RtH1=3.575min；ESIMS[M+Na]+=402/404(1Br)；
1H-NMR(CDCl3，360MHz)：δ7.57(dd，1H)，7.51-7.45(m，1H)，7.00(dd，1H)，6.49(t，1H，CHF2)，6.21(dd，1H)，5.59(d，1H)，5.40(dd，1H)，5.25(br，1H)，1.40(br s，9H)。
c)[1-(5-溴代-2-氟-苯基)-2,2-二氟-1-羟基甲基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯
将1-(5-溴代-2-氟-苯基)-1-二氟甲基-烯丙基]-氨基甲酸叔丁酯(10.99g，28.9mmol)和碳酸氢钠(3.84g，43.4mmol)在DCM(200ml)和MeOH(80ml)中的混悬液冷却至-78℃。将O3在氧气中的混合物导入，直到持续出现蓝色为止。通过氧气发泡10分钟除去过量的臭氧。分三部分加入作为固体的NaBH4(2.187g，57.8mmol)。将该混合物在-78℃搅拌10min，温至0℃。30min后，将该混合物倾倒在冰冷1N HCl上，用TBME萃取。用1N HCl、盐水洗涤有机相，用MgSO4.H2O干燥，蒸发。使粗产物从己烷中结晶，得到期望的产物，为无色结晶。
TLC：Rf(己烷/EtOAc4：1)=0.29；
HPLC：RtH1=3.000min；ESIMS[M+Na]+=406/408(1Br)；
1H-NMR(DMSO-d6，360MHz)：δ7.60-7.49(m，2H)，7.42(br s，1H)，7.180(dd，1H)，6.49(t，1H，CHF2)，5.27(br s，1H)，3.90(br s，2H)，1.35(br s，9H)。
d)N-[1-(5-溴代-2-氟-苯基)-2,2-二氟-1-羟基甲基-乙基]-2-氯-乙酰胺
将[1-(5-溴代-2-氟-苯基)-2,2-二氟-1-羟基甲基-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(10.22g，26.6mmol)在4N HCl的二噁烷溶液(133ml)中的混悬液在rt搅拌2h。蒸发该混合物，得到2-氨基-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-3,3-二氟-丙-1-醇的盐酸盐。
HPLC：RtH3=2.550min；ESIMS[M+H]+=284,286(1Br)；
将粗产物溶于DCM(63ml)和10％苏打水(63ml)，在冰冷却下剧烈搅拌。滴加氯乙酰氯(3.34ml，42mmol)在DCM(10ml)中的溶液。除去冰浴，持续搅拌1h。用TBME和水稀释该混合物。用MgSO4.H2O干燥有机相，通过硅胶色谱法纯化(己烷/25-33％EtOAc)，得到期望的产物，为轻度不纯的树脂。
HPLC：RtH3=3.336min；ESIMS[M+H]+=360/362/364(1Br，1Cl)；
1H-NMR(DMSO-d6，360MHz)：δ8.78(s，1H)，7.62-7.53(m，2H)，7.19(dd，1H)，6.53(t，1H，CHF2)，5.43(t，1H)，4.27-4.02(m，4H)。
e)5-(5-溴代-2-氟-苯基)-5-二氟甲基-吗啉-3-酮
用KOtBu(3.58g)处理N-[1-(5-溴代-2-氟-苯基)-2,2-二氟-1-羟基甲基-乙基]-2-氯-乙酰胺(9.59g，26.2mmol)在叔丁醇(134ml)中的溶液。将该混合物回流加热3h。冷却后，用EtOAc和1N HCl稀释该混合物。用盐水洗涤有机相，用MgSO4.H2O干燥，过滤，蒸发。得到产物，为无色结晶(TBME/己烷)。
TLC：Rf(己烷/EtOAc2：1)=0.29；
HPLC：RtH3=2.950min；ESIMS[M+H]+=324/326(1Br)；
1H-NMR(CDC13，360MHz)：δ7.61-7.55(m，2H)，7.09(dd，1H)，6.80(br，1H)，6.35(t，1H，CHF2)，4.37-4.17(m，4H)。
f)5-二氟甲基-5-(2-氟-苯基)-吗啉-3-酮
将5-(5-溴代-2-氟-苯基)-5-二氟甲基-吗啉-3-酮(190g，586mmol)和乙酸钠(57.7g，703mmol)混悬于1850mL甲醇。最终加入10％披Pd活性炭(18.7g)，在Parr仪器中在氢气气氛中在rt振摇该反应混合物。60分钟后，用硅藻土过滤该反应混合物，蒸发。将残余溶于21的TBME，用NaHCO3水溶液和盐水洗涤。用MgSO4.H2O干燥有机层，蒸发，得到143.2g标题化合物，为白色固体。
HPLC：RtH1=0.792min；ESIMS[M+H]+=246；
1H-NMR(CDCl3，360MHz)：δ7.50-7.43(m，2H)，7.32-7.27(m，1H)，7.19(dd，1H)，6.62(br，1H)，6.37(t，J=54Hz，1H)，4.34(d，1H)，4.31(d，1H)，4.22(d，1H)，4.20(d，1H)。
g)5-二氟甲基-5-(2-氟-苯基)-吗啉-3-硫酮
将5-二氟甲基-5-(2-氟-苯基)-吗啉-3-酮(141g，575mmol)和Lawesson试剂(132g，316mmol)在1400ml THF中的混合物在68℃加热1h，冷却，然后蒸发。将残余物溶于1I DCM，用2kg硅胶与10l的DCM过滤，得到161g标题化合物，为呈绿色的树脂形式，缓慢结晶。将该化合物不经进一步纯化使用。
HPLC：RtH1=1.799min；ESIMS[M+H]+=262；
1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.42-7.35(m，1H)，7.28(t，1H)，7.19(t，1H)，7.11(dd，1H)，6.29(t，J=54Hz，1H)，4.57(d，1H)，4.47(d，1H)，4.21(d，1H)，4.18(d,1H)。
h)5-二氟甲基-5-(2-氟-苯基)-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺
将5-二氟甲基-5-(2-氟-苯基)-吗啉-3-硫酮(160g，570mmol)溶于2.4l的7mo1/1NH3的甲醇溶液6.5h，然后保持静置过夜，蒸发该反应混合物，溶于2l1N HCl水溶液和2l的TBME。用TBME洗涤水相，通过添加30％NaOH水溶液(300ml)和一些冰使其呈碱性。用DCM将该混合物萃取3次，用Na2SO4干燥合并的有机层，真空浓缩。通过从DCM/庚烷(128.45g)中结晶得到标题化合物。
HPLC：RtH3=2.059min；ESIMS[M+H]+=245；
1H-NMR(CDCl3，360MHz)：δ7.77(t，1H)，7.38-7.30(m，1H)，7.21(t，1H)，7.09(dd，1H)，6.19(t，J＝54Hz，1H)，4.51(br，2H)，4.32，(d，1H)，4.18(d，1H)，4.05(d，1H)，3.96(d，1H)，1.39(s，3H)，1.24(s，3H)。
i)5-二氟甲基-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺
将硝酸钾(60.3g，596mmol)逐步加入到600ml硫酸(T<20℃)中。将该溶液滴加到5-二氟甲基-5-(2-氟-苯基)-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺(112g，459mmol)在硫酸(600ml)中的溶液中，同时用冰浴保持反应温度<22℃。搅拌1h后，将该混合物倾倒在10kg冰上。加入TBME(6l)，通过添加30％NaOH水溶液(约5l)将pH调整至12-14。分离各相，用TBME将水相萃取2次。用硫酸钠干燥合并的有机层，蒸发，得到130g黄色固体，将其不经进一步纯化使用。
HPLC：RtH3=2.063min；ESIMS[M+H]+=290；
1H-NMR(CDCl3，360MHz)：δ8.71(dd，1H)，8.13(dt，1H)，7.13(dd，1H)，5.99(t，J=54Hz，1H)，4.55(br，2H)，4.33(dd，1H)，4.10(d，1H)，3.97(d，1H)，3.82(dt，1H)。
j)[5-二氟甲基-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯
将5-二氟甲基-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺(144.5g，500mmol)、Boc酸酐(142g，650mmol)和DIPEA(131ml，749mmol)在2500ml的THF中的溶液在rt搅拌3天。仍然有原料存在。加入Boc酸酐(56g，325mmol)，将该混合物加热至60℃，搅拌10h，直到反应完成为止。蒸发该混合物，溶于TBME，用冰冷的1N HCl水溶液、水、10％NaHCO3水溶液和盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机相，过滤，蒸发，通过从DCM/庚烷中结晶纯化产物。得到182.8g白色结晶。
HPLC：RtH1=3.259min；ESIMS[M+Na]+=412；
1H-NMR(CDCl3，360MHz)：δ8.70(dd，1H)，8.27(dt，1H)，7.34(br，1H)，7.25(dd，1H)，6.09(t，J=54Hz，1H)，4.85(d，1H)，4.58(d，1H)，4.49(dd，1H)，3.94(dt，1H)。
k)[5-(5-氨基-2-氟-苯基)-5-氟甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯
将[5-二氟甲基-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(180g，462mmol)和17.61g Pd-C10％混悬于THF(1760ml)。在Parr仪器中在氢气气氛中在rt振摇该混合物。6h后，用硅藻土过滤该反应混合物，蒸发。使残余物从DCM/庚烷中结晶，得到157.6g标题化合物，为浅褐色结晶。
HPLC：RtH3=2.748min；ESIMS[M+H]+=360；
1H-NMR(CDCl3，360MHz)：δ光谱不能判断归因于存在旋转异构体的复杂混合物。
1)[(R)-5-(5-氨基-2-氟-苯基)-5-二氟甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯
通过制备型HPLC、用Chiralpak AD-H20μm(8x100x48mm HPLC柱)、使用Bayer SMB CC50仪器、应用SMB技术与庚烷/EtOH/MeOH70：20：10作为洗脱液分离外消旋产物((rac.)[5-(5-氨基-2-氟-苯基)-5-二氟甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯)。期望的化合物是较为缓慢洗脱的(R)-对映体。得到72.29g标题化合物，为无色泡沫体。ee=99.3％；旋光度：[α]D-97.5°(c=1，CHCl3)
HPLC：RtH3=2.748min；ESIMS[M+H]+=360；
1H-NMR(CDCl3，360MHz)：δ光谱不能判断归因于存在旋转异构体的复杂混合物。
m)((R)-5-{5-[(5-氯-3-甲氧基甲基-吡啶-2-羰基)-氨基]-2-氟-苯基}-5-二氟甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-氨基甲酸叔丁酯
将5-氯-3-甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸(56mg，0.278mmol)、[(R)-5-(5-氨基-2-氟-苯基)-5-二氟甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(实施例x，100mg，0.278mmol)和HOAt(68.2mg，0.50mmol)混悬于DMF(20ml)，冷却至0℃。加入DIPEA(0.146ml，0.835mmol)和EDC(80mg，0.417mmol)，将该反应混合物在室温搅拌20h。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。用硅胶(环己烷/乙酸乙酯)对粗产物(592mg)进行色谱，得到标题化合物，为白色玻璃状固体。TLC Rf(5：1环己烷：乙酸乙酯)=0.31；
MS：ESI+543，545)；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ10.03(s，br.1H)，8.45(m，1H)，8.21(m，1H)，8.01(m，1H)，7.66(m，1H)，7.09(m，1H)，6.14(t，1H，CHF2)，5.09(s，2H)，4.79(d，1H)，4.56(d，1H)，4.38(d，1H)，3.95(d，1H)，3.55(s，3H)，1.49(s，9H)。
n)5-氯-3-甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺
向((R)-5-{5-[(5-氯-3-甲氧基甲基-吡啶-2-羰基)-氨基]-2-氟-苯基}-5-二氟甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.276mmol)在二氯甲烷(4ml)中的溶液中加入TFA(0.35ml，4.54mmol)，将该反应混合物在室温搅拌18h。真空除去溶剂，用乙酸乙酯稀释残余物，倾倒在氨2N/冰的混合物上。分离各层，用水和盐水洗涤有机相，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。对116mg进行硅胶色谱(二氯甲烷/甲醇95：5+1％氨)，得到标题化合物102mg。
TLC Rf=0.48(二氯甲烷/甲醇95：5+1％氨)；ESI+MS443，445；
HPLC-MS：RtH8=1.87min。(99％纯度，ESI+443，445)；
1H-NMR(600MHz，DMSO-D6)：δ10.65(s，1H)，8.68(s，1H)，8.10(s，1H)，8.02(m，1H)，7.80(m，1H)，7.18(m，1H)，6.17(m，3H，CHF2，NH2(脒))，4.88(s，2H)，4.14(d，1H)，4.02(d，1H)，3.95(d，1H)，3.88(d，1H)，3.41(s，3H)。
实施例2-13：通过与用于实施例1类似的方法制备表1中举出的化合物。
通过在二噁烷中添加盐酸或在乙醚中添加盐酸并且蒸发溶剂由相应的游离碱的溶液得到盐酸盐。
表1
Figure BDA0000380458050000401
Figure BDA0000380458050000411
Figure BDA0000380458050000421
Figure BDA0000380458050000431
Figure BDA0000380458050000441
实施例14：5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4,5-二氟-苯基]-酰胺
Figure BDA0000380458050000442
a)1-(2，3-二氟-苯基)-2,2-二氟-乙酮
将1,2-二氟苯(49.74g，436mmol)在700ml THF中的溶液冷却至-70℃。滴加Buli(1.6M的己烷溶液，272ml，436mmol)，同时维持反应温度＜-60℃。在-70℃搅拌2.5h后，以这样的速率加入二氟乙酸乙酯(48.3ml，436mmol)，使得反应温度不超过-45℃。搅拌5min后，将该混合物倾倒在10％NH4Cl水溶液和TBME上。用5％NaHCO3水溶液、盐水洗涤有机相，用MgSO4.H2O干燥。在大气压下蒸馏出溶剂，在12mmHg蒸馏残余物。采集在89-90℃沸腾的级分，得到78.76g无色液体。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ7.73(t，1H)，7.49(q，1H)，7.27(m，1H)，7.40(t，J=54Hz,1H)。
b)(S)-2-(2，3-二氟-苯基)-1,1-二氟-3-硝基-丙-2-醇
将1-(2，3-二氟-苯基)-2,2-二氟-乙酮(21.8g，113mmol)和硝基甲烷(61.2ml，1.135mol）在220ml DCM中的溶液冷却至-25℃。加入催化剂1(3.12g，5.67mmol)，同时搅拌。将均匀溶液贮存在-20℃4天。通过小硅胶柱色谱法除去催化剂(DCM/(10％NH3/EtOH水溶液)99：1)。蒸发溶剂，得到30.45g粗产物，为无色油状物。通过硅胶色谱法进一步纯化产物(己烷/DCM50-100％)，得到27.9g标题化合物，为无色油状物。α[D]=+13.4°(c=1，CHCl3)；
HPLC：RtH3=2.055min；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ7.52(t，1H)，7.33-7.20(m，2H)，6.00(t，J=54Hz,1H)，5.30(d，1H)，5.01(d，1H)，4.21(s，1H)。
c)(S)-3-氨基-2-(2，3-二氟-苯基)-1，1-二氟-丙-2-醇
将(S)-2-(2，3-二氟-苯基)-1,1-二氟-3-硝基-丙-2-醇(27.97g，110mmol)在90ml AcOH中的溶液滴加倒充分搅拌的加入Zn(72.3g，1.105mol)粉在200ml AcOH中的混悬液中。将反应温度保持在35-45℃。添加后，将该混合物在rt搅拌1h，用硅藻土过滤，用EtOAc洗涤，蒸发滤液和EtOAc洗涤液，将残余物溶于EtOAc，由此加入大量1N NaOH水溶液，直到水层的pH达到约12为止。通过添加少量饱和NH3水溶解不溶物。用盐水洗涤有机层，用MgSO4.H2O干燥，蒸发。使残余物从TBME/己烷中结晶，得到22.4g标题化合物，为白色结晶。HPLC：RtH1=2.469min[M+H]+224；
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ7.46-7.37(m，2H)，7.21(q，1H)，6.16(t，J=54Hz,1H)，6.1(br，1H)，3.06(d，1H)，3.02(d，1H)，4.21(s，1H)。
d)N-[(S)-2-(2,3-二氟-苯基)-3,3-二氟-2-羟基-丙基]-2-硝基-苯磺酰胺
在+5℃冷却(S)-3-氨基-2-(2，3-二氟-苯基)-1,1-二氟-丙-2-醇(22.4g，100mmol）和吡啶(40.6ml，502mmol)在230ml DCM中的溶液，分部分加入2-硝基-苯磺酰氯(23.36g，105mmol)(T＜15℃)。添加后，搅拌该混合物，不用冰冷却1h。用TBME和2N HCl稀释该混合物。用盐水洗涤有机层，用MgSO4.H2O干燥，蒸发。通过硅胶色谱法纯化粗产物(己烷/DCM15-30％，然后DCM/EtOH0-3％)，得到39.6g标题化合物，为黄色树脂，静置时结晶。
HPLC：RtH3=2.644min[M+Na]+409；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.10(m，2H)，7.86(m，1H)，7.76(m，2H)，7.38(t，1H)，7.19-7.07(m，2H)，6.03(t，J=54Hz,1H)，5.67(t，1H)，3.88(dd，1H)，3.73(dd，1H)，3.41(s，1H)。
e)(R)-2-二氟甲基-2-(2，3-二氟-苯基)-1-(2-硝基-苯磺酰基)-氮丙啶
将N-[(S)-2-(2，3-二氟-苯基)-3,3-二氟-2-羟基-丙基]-2-硝基-苯磺酰胺(39.65g，97mmol)与PPh3(30.6g，117mmol)溶于400ml THF，冷却至0-5℃，以滴加40％DEAD的甲苯溶液(53.4ml，117mmol)的方式处理。持续搅拌3h，同时缓慢温至rt。用400ml甲苯稀释该溶液，浓缩以除去THF，直接通过硅胶色谱法纯化(己烷/DCM50-70％)，得到标题化合物，为黄色树脂。
HPLC：RtH3=3.096min[M+Na]+413；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.28-8.23(m，1H)，7.83-7.75(m，3H)，7.40(t，1H)，7.30-7.21(m，1H)，7.19-7.12(m，1H)，6.17(t，J=54Hz,1H)，3.38(s，1H)，3.27(s，1H)。
f)乙酸(R)-2-(2，3-二氟-苯基)-3,3-二氟-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙基酯
用KOAc(2.404g，24.49mmol)处理(R)-2-二氟甲基-2-(2，3-二氟-苯基)-1-(2-硝基-苯磺酰基)-氮丙啶(4.78g，12.25mmol)在50ml DMSO中的溶液，搅拌2h。用EtOAc稀释该混合物，用水洗涤2次，然后用盐水洗涤，用MgSO4.H2O干燥。通过硅胶色谱法纯化粗产物(己烷/EtOAc25-35％)，得到4.6g标题化合物，为无色树脂。
HPLC：RtH3=2.906min[M+Na]+473；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ7.99(d，1H)，7.77-7.71(m，1H)，7.57(m，2H)，7.37-7.31(m，1H)，7.23-7.15(m，2H)，6.70(s，1H)，6.59(t，J=54Hz,1H)，4.57(d，1H)，4.55(d，1H)，2.10(s，3H)。
g)N-[(R)-1-(2，3-二氟-苯基)-2,2-二氟-1-羟基甲基-乙基]-2-硝基-苯磺酰胺
用LiOH水溶液(4M，12.68ml，50.7mmol)处理乙酸(R)-2-(2，3-二氟-苯基)-3,3-二氟-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙基酯(4.57g，10.15mmol)在35mlMeOH中的溶液。该反应适度放热。30min后，用水、盐水和EtOAc稀释该混合物。用1N HCl和盐水洗涤有机层，用MgSO4.H2O干燥。蒸发，得到标题化合物，为白色固体，纯度足以进行进一步转化。
HPLC：RtH3=2.516min[M+Na]+431；
1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.67(s，1H)，7.91(d，1H)，7.80(t，1H)，7.74-7.67(m，2H)，7.37(q，1H)，7.30-7.24(m，1H)，7.19-7.12(m，1H)，6.69(t，J=54Hz,1H)，5.44(t，1H)，3.98(s，2H)，2.10(s，3H)。
h)[(R)-2-(2，3-二氟-苯基)-3,3--二氟-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙氧基]-乙酸乙酯
在4h期限内使用注射泵向N-[(R)-1-(2，3-二氟-苯基)-2,2--二氟-1-羟基甲基-乙基]-2-硝基-苯磺酰胺(2.59g，6.34mmol)和乙酸铑(II)二聚体(0.056g，0.127mmol)在41ml DCM中的溶液中加入重氮基乙酸乙酯(1.570ml，12.69mmol)的7.4ml DCM溶液。将该混合物搅拌1h，用己烷稀释，用硅胶柱色谱(己烷/DCM50-100％)，得到1.78g标题化合物，为适度不纯的淡黄色树脂。
HPLC：RtH4=2.784min[M+Na]+517；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ7.95(d，1H)，7.70(t，1H)，7.60(d，1H)，7.54(t，1H)，7.46(t，1H)，7.20-7.05(m，2H)，6.97(s，1H)，6.61(t，J=54Hz,1H)，4.34-4.08(m，6H)，1.37-1.27(m，3H)。
i)(R)-5-二氟甲基-5-(2，3-二氟-苯基)-吗啉-3-酮
用LiOH水溶液(4M，6.22ml，24.88mmol)处理[(R)-2-(2，3-二氟-苯基)-3,3-二氟-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙氧基]-乙酸乙酯(2.46g，4.98mmol)在25ml MeOH中的溶液。该反应轻度放热。30min后，用1N HCl、盐水和EtOAc稀释该混合物。用盐水洗涤有机层，用MgSO4.H2O干燥。蒸发，得到标题化合物，为黄色树脂，不经进一步纯化用于进-步转化。HPLC：RtH3=2.575min[M+Na]+489。
将产物溶于12ml EtOH和6ml THF，用苯硫酚(1.1g，10mmol)和1MNaOH(14.9ml)处理，在60℃加热4h。冷却该混合物，用TBME洗涤。用1N HCl将pH调整至6-7，蒸发至干。用EtOH(3x)萃取残余物。蒸发乙醇萃取物，得到1.69g黄色泡沫体。HPLC：RtH1=3.478min[M+H]+282。
将该产物在包含2.5ml AcOH的50ml甲苯中回流18h。蒸发该混合物，进行硅胶色谱(己烷/EtOAc25-40％)后分离标题化合物，为白色固体。
HPLC：RtH2=2.673min[M+H]+264；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ7.33-7.19(m，4H)，6.68(br s，1H)，6.34(t，J=54Hz,1H)，4.34-4.18(m，4H)。
j)(R)-5-二氟甲基-5-(2，3-二氟-苯基)-吗啉-3-硫酮
向(R)-5-二氟甲基-5-(2，3-二氟-苯基)-吗啉-3-酮(543mg，2.063mmol)在6ml THF中的溶液中加入Lawesson试剂(459mg，1.135mmol)，将该混合物在50℃搅拌45min。蒸发该混合物，通过硅胶色谱法纯化(己烷/EtOAc10-15％)，得到587mg标题化合物，为无色树脂。
HPLC：RtH2=3.124min[M+H]+280；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.43(br s，1H)，7.33-7.19(m，3H)，7.12(t，1H)，6.34(t，J=54Hz,1H)，4.62(d，1H)，4.55(d，1H)，4.27(s，2H)。
k)(R)-5-二氟甲基-5-(2，3-二氟-苯基)-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺
将(R)-5-二氟甲基-5-(2，3-二氟-苯基)-吗啉-3-硫酮在NH3/MeOH溶液(7mol/L，8.5ml)中的溶液在密封容器内搅拌4h。蒸发该混合物，进行硅胶色谱(DCM/(EtOH/饱和NH3水9：1)0-5％)，得到517mg标题化合物，为无色树脂。HPLC：RtH2=2.249min[M+H]＋263；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ7.51(t，1H)，7.24-7.12(m，2H)，6.34(t，J=54Hz,1H)，4.38(d，1H)，4.35(d，1H)，4.19(d，1H)，4.03(d，1H)。
l)(R)-5-二氟甲基-5-(2，3-二氟-5-硝基-苯基)-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺
向搅拌的(R)-5-二氟甲基-5-(2，3-二氟-苯基)-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺(508mg，1.937mmol)在5ml H2SO4中的溶液中分4部分加入KNO3(255mg，2.52mmol)(放热)。将得到的溶液在rt搅拌20分钟，然后倾倒在冰水上。通过添加固体Na2CO3(谨慎!：发泡)碱化该混合物，用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，用一些活性炭和MgSO4.H2O处理，用硅藻土过滤。蒸发溶剂，得到标题化合物，包含6％区域异构体。不经进一步纯化使用产物。
HPLC：RtH2=2.313min[M+H]＋308；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.65(s，1H)，8.10(t，1H)，6.10(t，J=54Hz,1H)，4.52-3.98(m，4H)。
m)[(R)-5-二氟甲基-5-(2，3-二氟-5-硝基-苯基)-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯
向(R)-5-二氟甲基-5-(2，3-二氟-5-硝基-苯基)-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺(510mg，1.660mmol)在5ml DCM中的溶液中加入DIPEA(322mg，2.49mmol)和二碳酸二叔丁酯(417mg，2.158mmol)。将该反应混合物在40℃搅拌过夜。蒸发该反应混合物，分离标题化合物，为白色结晶(TBME/己烷)。TLC(己烷/EtOAc6：1)：Rf=0.25；
HPLC：RtH3=3.475min；ESIMS=[M+Na]＋430；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.55-8.51(m，1H)，8.14-8.08(m，1H)，7.43(br s，1H)，6.04(t，J=54Hz,1H)，4.87(d，1H)，4.59(d，1H)，4.51(dd，1H)，3.95(d，1H)，1.52(s，9H)。
n)[(R)-5-(5-氨基-2,3-二氟-苯基)-5-二氟甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯
将[(R)-5-二氟甲基-5-(2，3-二氟-5-硝基-苯基)-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(540mg，1.326mmol)在3ml EtOH和2ml THF中的溶液在氢气气氛中在140mg5％Pd-C″degussa″E101ND的存在下搅拌至LC-MS分析显示完全转化为止。给该混合物充氮气，用DCM稀释，用硅藻土垫过滤。蒸发滤液，通过硅胶色谱法进一步纯化(己烷/EtOAc25-50％)，得到标题化合物，为无色泡沫体。TLC(己烷/EtOAc2：1)：Rf=0.26；
HPLC：RtH2=3.057min；ESIMS=[M+H]＋378；
1H-NMR(CDCl3，400MHz，宽峰信号归因于旋转异构体)：δ6.73(m，1H)，6.50(m，1H)，6.18(t，J=54Hz,1H)，4.95-3.99(m，4H)，1.52(s，9H)。
o)((R)-5-{5-[(5-氰基-3-甲基-吡啶-2-羰基)-氨基]-2,3-二氟-苯基}-5-二氟甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-氨基甲酸叔丁酯
向[(R)-5-(5-氨基-2,3-二氟-苯基)-5-二氟甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(113mg，0.299mmol)、5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸(53.4mg，0.329mmol)、HOAt(65.2mg，0.479mmol)在1.2ml DMF中的冰冷溶液中加入0.07ml(0.39mmol)EDC(游离碱)。将该混合物在rt搅拌过夜。加入水和EtOAc，用饱和NaHCO3水溶液、盐水洗涤有机层，用MgSO4.H2O干燥。通过硅胶色谱法纯化产物(己烷/EtOAc15-20％)，得到108mg标题化合物，为无色泡沫体。TLC(己烷/EtOAc3：1)：Rf=0.31；
HPLC：RtH3=3.374min；ESIMS=[M+H]＋522；
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ10.12(s，1H)，8.76(s，1H)，8.20(br t，1H)，7.99(s，1H)，7.40(br s，1H)，6.13(t，J=54Hz，1H)，4.85(d，1H)，4.62(d，1H)，4.43(d，1H)，4.40(d，1H)，2.89(s，3H)，1.52(s，9H)。
p)5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4，5-二氟-苯基]-酰胺
向((R)-5-{5-[(5-氰基-3-甲基-吡啶-2-羰基)-氨基]-2,3-二氟-苯基}-5-二氟甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(107mg，0.205mmol)在0.9ml DCM中的溶液中滴加0.3ml TFA。将该混合物在rt搅拌1.5h。将该反应混合物谨慎地倾倒在约10％苏打水和EtOAc上。用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机相，用Na2SO4干燥。通过硅胶色谱法纯化产物(DCM/(EtOH/饱和NH3水9：1)0-2％)，得到81mg标题化合物，为白色固体。
HPLC：RtH2=2.827min；ESIMS[M+H]+=422；
1H-NMR(DMSO-d6，600MHz)：10.91(s，1H)，8.40(s，1H)8.98-8.94(m，1H)，7.82(s，1H)，6.19(s，2H)，6.13(t，J=54Hz，1H)，4.08(d，1H)，4.01(d，1H)，3.95(d，1H)，3.89(d，1H)，2.53(s，3H)。
实施例15-16：通过与用于实施例14类似的方法制备表2中举出的化合物。
通过在二噁烷中添加盐酸或在乙醚中添加盐酸并且蒸发溶剂由相应游离碱的溶液得到盐酸盐。
表2
Figure BDA0000380458050000521
实施例17：3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺盐酸盐
Figure BDA0000380458050000522
a)2-(5-溴代-2-氟-苯基)-丙-2-醇
在氩气气氛中在低于-50℃向二异丙基胺(57.3ml，402mmol)在THF(500ml)中的溶液中加入1.6M nBuLi的己烷溶液(260ml，416mmol)。在-75℃搅拌30min后，加入4-溴代-1-氟苯(31.1ml，277mmol)，同时保持温度低于-70℃。在-75℃搅拌2h后，在低于-65℃加入丙酮(41.2ml，554mmol)，将该反应混合物在-75℃搅拌1h，温至-50℃，倾倒在10％NH4Cl水溶液上。用TBME萃取该混合物，用KHSO4水溶液、饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。使粗产物从己烷中重结晶，得到标题化合物，为白色结晶：TLC(己烷-EtOAc3：1)：Rf=0.45；HPLC：RtH5=1.045min；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.74(dd，1H)，7.36(m，1H)，6.93(dd，1H)，2.04(d，1H)，1.63(s，6H)。
b)4-溴代-1-氟-2-异丙烯基-苯
向2-(5-溴代-2-氟-苯基)-丙-2-醇(119.7g，498mmol)在CH2Cl2(50ml)中的溶液中加入hydrochinone(2.74g，24.9mmol)和250ml85％H3PO4。将得到的反应混合物在50℃搅拌3.5h。将该混合物倾倒在冰水上，用CH2Cl2萃取。用2N NaOH水溶液和水洗涤有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。将粗产物溶于己烷，通过硅胶垫过滤，在600mbar浓缩后得到标题化合物，为无色油状物：TLC(己烷)：Rf=0.52；HPLC：RtH5=1.416min；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.43(dd，1H)，7.37(m，1H)，6.94(dd，1H)，5.27(d，2H)，2.13(s，3H)。
c)(S)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-丙-1,2-二醇
在0℃向K3Fe(CN)6(186g，561mmol)、K2CO3(78g，561mmol)、(DHQ)2-PHAL(1.311g，1.674mmol)和K2OsO2(OH)4(0.378g，1mmol)在t-BuOH-H2O1：1(1600ml)中的混悬液中加入4-溴代-1-氟-2-异丙烯基-苯(36g，167mmol)，将该反应混合物在0℃搅拌14h。在0-5℃谨慎添加Na2S2O5(100g)后，将该反应混合物搅拌1h，然后用EtOAc萃取。用5％NaS3O3溶液和盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物，为白色固体：TLC(己烷-EtOAc1：1)：Rf=0.46；HPLC：RtH5=0.767min；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.71(dd，1H)，7.27(m，1H)，6.83(dd，1H)，3.85(d，1H)，3.62(d，1H)，2.94(s，3H)，2.01(s，1H)，1.43(s，3H)；ESIMS：266，268[(M+NH4)＋]。
d)(S)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-甲基-环氧乙烷
在0-5℃在氩气气氛中向(S)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-丙-1,2-二醇(37.35g，150mmol)在CH2Cl2(400ml)中的溶液中加入NEt3(41.8ml，300mmol)，滴加甲磺酰氯(12.8ml，165mmol)。在0-5℃搅拌0.5h后，将该反应混合物加入到冷1N HCl中，用CH2Cl2萃取。用1N HCl、H2O和饱和NaHCO3溶液洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。将粗甲磺酸盐溶于TBME(500ml)和200ml2N NaOH水溶液，在25℃搅拌2h后，用TBME萃取该混合物。用NaH2PO4溶液和盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到(S)-对映体，为无色油状物：78％ee(Chiralpak AS-H1218，己烷-EtOH97：3，0.4mL/min)；TLC(己烷-EtOAc3：1)：Rf=0.69；HPLC：RtH5=1.186min；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.46(dd，1H)，7.30(m，1H)，6.83(dd，1H)，2.88(d，1H)，2.72(d，1H)，1.59(s，3H)。
e)(S)-1-叠氮基-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-丙-2-醇
向(S)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-甲基-环氧乙烷(51.85g，224mmol)在EtOH(800ml)中的溶液中加入NaN3(36.8g，531mmol)、NH4Cl(60.6g，1122mmol)和18-冠-6(59.8g，224mmol)，将该反应混合物回流加热6h。过滤该反应混合物，浓缩至其体积的一半。用EtOAc萃取残留油状物。用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物，为淡黄色油状物：TLC(己烷-EtOAc1：1)：Rf=0.70；HPLC：RtH3=1.115min；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.72(dd，1H)，7.32(m，1H)，6.85(dd，1H)，3.73(d，1H)，3.51(d，1H)，2.44(s，1H)，1.50(s，3H)。
f)(S)-1-氨基-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-丙-2-醇
在0-5℃在氩气气氛中在30min过程中向LiAIH4(4.65g，122mmol)在THF(250ml)中的混悬液中加入溶于THF(150ml)的(S)-1-叠氮基-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-丙-2-醇(33.4g，122mmol)。在0-5℃搅拌1h后，通过谨慎添加水(4.7ml)、4N NaOH(4.7ml)和水(14.1ml)使反应停止，在25℃再搅拌3h。用MgSO4干燥白色混悬液，过滤，浓缩。使固化产物从TBME-己烷中重结晶，得到标题化合物，为浅褐色结晶：98％ee(Chiralpak AD-H己烷-EtOH75-25+0.05％NEt3)；TLC(CH2Cl2-MeOH10：1)Rf=0.10；HPLC：RtH5＝0.558min；ESIMS：248，250[(M+H)＋]；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.76(dd，1H)，7.25(m，1H)，6.82(dd，1H)，4.16(br s，1H)，3.19(d，1H)，2.72(d，1H)，1.44(s，3H)，0.95(br s，2H)。
g)N-[(S)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-羟基-丙基]-2-硝基-苯磺酰胺
在0-5℃向(S)-1-氨基-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-丙-2-醇(34.7g，140mmol)在THF(400ml)中的溶液中加入2-硝基-苯磺酰氯(34.9g，154mmol)，然后在0.5h期限内加入1N NaOH水溶液。将该反应混合物在20℃搅拌2h。用TBME稀释该反应混合物，用水和NaH2PO4溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩，从TBME-己烷中结晶后得到标题化合物，为浅褐色结晶：TLC(甲苯-EtOAc3：1)：Rf=0.51；HPLC：RtH5=1.118min；ESIMS：450，452[(M+NH4)+]；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.98(m，1H)，7.81(m，1H)，7.65(m，2H)，7.59(dd，1H)，7.24(m，1H)，6.79(dd，1H)，5.60(t，1H)，4.16(br s，1H)，3.55(dd，1H)，3.44(dd，1H)，2.51(s，1H)，1.51(s，3H)。
h)(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-甲基-1-(2-硝基-苯磺酰基)-氮丙啶
在0-5℃向N-[(S)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-羟基-丙基]-2-硝基-苯磺酰胺(20.8g，48mmol)在CH2Cl2(400ml)中的溶液中加入PPh3(19.2g，72.4mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(11.6ml，72.4mmol)。将该反应混合物在25℃搅拌24h，浓缩。进行硅胶色谱纯化后得到标题化合物(己烷-EtOAc20：1-2：1)，为黄色结晶：TLC(甲苯-EtOAc3：1)：Rf=0.69；HPLC：RtH5=1.308min；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.31(m，1H)，7.28(m，3H)，7.60(dd，1H)，7.42(m，1H)，6.91(dd，1H)，3.24(s，1H)，2.81(s，1H)，2.06(s，3H)。
i)(R)-2-[(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙氧基]-3,3,3-三氟-2-甲基-丙酸乙酯
在氩气气氛中向NaH(2.53g60％的矿物油溶液，63mmol)在DMF(160ml)中的混悬液中滴加(R)-3,3,3-三氟-2-羟基-2-甲基-丙酸乙酯(11.99g，63mmol)，在20℃搅拌0.5h后，加入(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-甲基-1-(2-硝基-苯磺酰基)-氮丙啶(21.85g，52.6mmol)。将该反应体系保持在25℃16h。将该混合物加入到冷2N HCl水溶液中，用TBME萃取产物。用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。使残留固体从TBME-己烷中重结晶，得到标题化合物，为黄色结晶：TLC(己烷-EtOAc1：1)：Rf=0.59；HPLC：RtH5=1.444min；ESIMS：618，620[(M+NH4)＋]；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.83(dd，1H)，7.61(m，3H)，7.48(dd，1H)，7.27(m，1H)，6.73(s，1H)，6.60(dd，1H)，4.33(m，2H)，3.84(s，2H)，1.84(s，3H)，1.57(s，3H)，1.33(t，3H)。
j)(R)-2-[(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙氧基]-3,3,3-三氟-2-甲基-丙酰胺
将(R)-2-[(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙氧基]-3,3,3-三氟-2-甲基-丙酸乙酯(26.6g，44.2mmol)在7N NH3的MeOH溶液(75ml)中的溶液在50℃搅拌16h。减压除去溶剂，使残留固体从Et2O中重结晶，得到标题化合物，为黄色结晶：TLC(己烷-EtOAc1：1)：Rf=0.35；HPLC：RtH5=1.184min；ESIMS：589，591[(M+NH4)＋]；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.85(d，1H)，7.64(m，3H)，7.44(d，1H)，7.41(dd，1H)，7.26(m，1H)，6.68(br s，1H)，6.57(dd，1H)，6.19(s，1H)，5.54(br s，1H)，4.24(d，1H)，3.93(d，1H)，1.79(s，3H)，1.67(s，3H)。
k)N-[(R)-1-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-((R)-1-氰基-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-1-甲基-乙基]-2-硝基-苯磺酰胺
在氩气气氛中向(R)-2-[(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙氧基]-3，3，3-三氟-2-甲基-丙酰胺(20.83g，35.6mmol)在CH2Cl2(300ml)中的溶液中加入NEt3(12.5ml，89mmol)并且在0-5℃加入三氟乙酐(6.15ml，42.7mmol)。在25℃搅拌4h后，将该反应混合物加入到冷NaHCO3溶液中，用CH2Cl2萃取产物。用冷0.1N HCl水溶液、水和饱和NaHCO3溶液洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物，为黄色油状物，照此用于下一步：TLC(己烷-EtOAc1：1)：Rf=0.73；HPLC：RtH5=1.364min；ESIMS：571，573[(M+NH4)+]；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.89(d，1H)，7.62(ddd，1H)，7.57(ddd，1H)，7.52(m，2H)，7.29(m，1H)，6.58(dd，1H)，6.19(s，1H)，4.17(s，2H)，1.81(s，3H)，1.72(s，3H)。
l)(2R，5R)-5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，5-二甲基-2-三氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺
向N-[(R)-1-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-((R)-1-氰基-2，2，2-三氟-1-甲基-乙氧基)-1-甲基-乙基]-2-硝基-苯磺酰胺(6.54g，11.8mmol)和N-乙酰-半胱氨酸(2.4g，26.0mmol)在MeOH(80ml)中的溶液中加入K2CO3(3.62g，26.0mmol)，将该反应混合物在80℃加热16h。除去溶剂后，将残余物溶于水，用EtOAc萃取。用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩，进行硅胶色谱纯化后得到标题化合物(包含0.03％NEt3的己烷-EtOAc10：1-1：2)，为黄色油状物：TLC(己烷-EtOAc1：1)：Rf=0.58；HPLC：RtH5=0.843min；ESIMS：369，371[(M+H)+]；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.66(dd，1H)，7.35(m，1H)，6.91(dd，1H)，3.97(m，2H)，1.53(s，3H)，1.49(s，3H)。
m)(2R，5R)-5-(2-氟-苯基)-2，5-二甲基-2-三氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺
在50℃用10％Pd-C将(2R，5R)-5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，5-二甲基-2-三氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺(1.66g，4.5mmol)和乙酸钠(0.369g，4.5mmol)在MeOH(50ml)中的溶液氢化6h。用硅藻土过滤出催化剂，浓缩滤液。将残余物溶于饱和NaHCO3溶液，用EtOAc萃取。用盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物，为无色油状物：TLC(己烷-EtOAc1：1)：Rf=0.19；HPLC：RtH5=0.777min；ESIMS：291[(M+H)+]；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.41(dt，1H)，7.26(m，1H)，7.11(t，1H)，7.05(dd，1H)，4.11(dd，1H)，3.94(dd，1H)，1.54(s，3H)，1.49(s，3H)。
n)(2R，5R)-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-2，5-二甲基-2-三氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺
在冰水冷却下向(2R，5R)-5-(2-氟-苯基)-2，5-二甲基-2-三氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺(1.035g，3.57mmol)在H2SO4(6ml)中的溶液中分部分加入KNO3(0.379g，3.74mmol)。将该反应混合物在25℃搅拌2h，用水稀释，在冷却下用K2CO3碱化。用EtOAc萃取产物。用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。通过硅胶色谱法纯化(包含0.05％NEt3的己烷-EtOAc4：1-1：1)，得到标题化合物，为淡黄色油状物：TLC(己烷-EtOAc1：1)：Rf=0.50；HPLC：RtH5=0.749min；ESIMS：336[(M+H)+]；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.48(dd，1H)，8.14(m，1H)，7.15(dd，1H)，4.20(br s，2H)，4.04(dd，1H)，3.91(dd，1H)，1.54(s，3H)，1.49(s，3H)。
o)[(2R，5R)-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-2，5-二甲基-2-三氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯
向(2R，5R)-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-2，5-二甲基-2-三氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺(1.14g，3.4mmol)在ACN(20ml)中的溶液中加入Boc2O(0.891g，4.08mmol)和NEt3(0.72ml，5.1mmol)，将该混合物在25℃搅拌16h。蒸发该反应混合物，通过硅胶色谱法纯化残留油状物(己烷-EtOAc20：1-7：3)，从Et2O-己烷中结晶后得到标题化合物，为浅褐色结晶：TLC(己烷-EtOAc3：1)：Rf=0.37；HPLC：RtH5=1.355min；ESIMS：436[(M+H)+]；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ11.04(br s，1H)，8.24(m，2H)，7.30(dd，1H)，4.41(dd，1H)，4.11(dd，1H)，1.68(s，3H)，1.51(s，9H)，1.49(s，3H)。
p)[(2R，5R)-5-(5-氨基-2-氟-苯基)-2，5-二甲基-2-三氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯
在50℃用10％Pd-C将[(2R，5R)-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-2，5-二甲基-2-三氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(0.98g，2.25mmol)在异丙醇-THF2：1(24ml)中的溶液氢化4h。用硅藻土过滤出催化剂，浓缩滤液，从TBME-己烷中结晶后得到标题化合物，为浅褐色结晶：TLC(己烷-EtOAc1：1)：Rf=0.42；HPLC：RtH5=0.955min；ESIMS：406[(M+H)+]；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ6.82(dd，1H)，6.52(m，2H)，4.30(dd，1H)，3.97(dd，1H)，3.06(br s，2H)，1.58(s，3H)，1.48(s，3H)，1.46(s，9H)。
q)((2R，5R)-5-{5-[(3-氯-5-氰基-吡啶-2-羰基)-氨基]-2-氟-苯基)-2，5-二甲基-2-三氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-氨基甲酸叔丁酯
向[(2R，5R)-5-(5-氨基-2-氟-苯基)-2，5-二甲基-2-三氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(82mg，0.20mmol)在DMF(2ml)中的溶液中加入3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸(47mg，0.26mmol)、EDC-HCl(57mg，0.30mmol)、HOAt(41mg，0.30mmol)和DIPEA(0.14ml，0.79mmol)，将该反应混合物保持在25℃16h。减压浓缩该反应混合物，将残余物溶于EtOAc，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。通过硅胶闪蒸塔色谱法纯化后得到标题化合物(己烷-EtOAc20：1-1：1)，为淡黄色泡沫体。TLC(己烷-EtOAc2：1)：Rf=0.29；HPLC：RtH5=1.398min；ESIMS：570，572[(M+H)+]；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ11.05(br s，1H)，9.74(br s，1H)，8.79(s，1H)，8.19(s，1H)，7.87(m，1H)，7.55(dd，1H)，7.16(dd，1H)，4.43(d，1H)，4.09(d，1H)，1.71(s，3H)，1.57(s，3H)，1.56(m，9H)；19F-NMR(360MHz，CDCl3)：δ74.3，116.2。
r)3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺盐酸盐
向((2R，5R)-5-{5-[(3-氯-5-氰基-吡啶-2-羰基)-氨基]-2-氟-苯基)-2，5-二甲基-2-三氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(105mg，0.166mmol)在CH2Cl2(1ml)中的溶液中加入TFA(0.3ml)，将该反应混合物保持在25℃2h。将该反应体系加入到冷10％K2CO3水溶液，用EtOAc萃取产物。用盐水洗涤合并的有机萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩，得到3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-((3R，6R)-5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺，为无色泡沫体。通过将游离碱溶于CH2Cl2、添加1.05当量的2N HCl的Et2O溶液将标题化合物转化成其盐酸盐，蒸发至干，然后从CH2Cl2-Et2O中结晶，得到标题化合物，为白色固体：TLC(CH2Cl2-MeOH9：1)：Rf=0.51；HPLC：RtH5=0.939min；ESIMS：470，472[(M+H)+]；1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ11.59(s，1H)，11.15(s，1H)，9.60(d，2H)，9.13(s，1H)，8.84(s，1H)，7.83(m，1H)，7.78(dd，1H)，7.36(dd，1H)，4.32(d，1H)，4.09(d，1H)，1.73(s，3H)，1.72(s，3H)；19F-NMR(360MHz，CDCl3)：δ76.4，116.4。
实施例18-36：通过与用于实施例17类似的方法制备表3中举出的化合物。
表3
Figure BDA0000380458050000621
Figure BDA0000380458050000631
Figure BDA0000380458050000651
Figure BDA0000380458050000661
Figure BDA0000380458050000671
实施例37：5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6,6-双-氟甲基-3-甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺
Figure BDA0000380458050000672
a)3-氟-2-氟甲基-2-三甲基硅烷氧基-丙腈
在30min内向1,3-二氟-丙-2-酮(8.5g，90mmol)中滴加TMS-氰化物(8.97g，90mmol)。将该反应混合物在环境温度搅拌16h。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ4.55(d，2H)，4.44(d，2H)，0.28(s，9H)；
19F-NMR(376MHz，CDCl3)：δ-226(t)。
b)3-氟-2-氟甲基-2-羟基-丙酸
用37％HCl(300ml)处理3-氟-2-氟甲基-2-三甲基硅烷氧基-丙腈(17.4g，90mmol)，加热至适度回流3h。将该反应混合物冷却至环境温度，真空浓缩。将由此得到的固体再溶于300ml乙醇，真空浓缩，高度真空干燥。
由此得到的固体(17g)包含大量氯化铵，不经进一步纯化使用。
1H-NMR(400MHz，DMSO-D6)：δ7.3-7.0(m，4H)，6.5-5.6(s，1H)，4.58-4.43(m，4H)。
13C-NMR(150MHz，DMSO-D6)：δ171(t)，85(d)，83(d)，75(t)。
c)3-氟-2-氟甲基-2-羟基-丙酸乙酯
将粗3-氟-2-氟甲基-2-羟基-丙酸(17g)溶于乙醇(400ml)，加入H2SO4(98％，30g)。将该反应混合物回流16h。
将该反应混合物冷却至环境温度，过滤。谨慎地用30g固体Na2CO3处理该溶液，将得到的混合物在室温搅拌30min。加入400ml DCM，过滤该混合物。浓缩该溶液(50℃，150mbar)，进一步通过蒸馏纯化(82℃，20mbar)，得到无色液体。
1H-NMR(400MHz，DMSO-D6)：δ4.65-4.43(m，4H)，4.30(q，2H)，3.88-3.63(s，1H)，1.30(t，3H)。
d)2-[2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙氧基]-3-氟-2-氟甲基-丙酸乙酯
向NaH(1.62g，60％，40.5mmol)在75ml DMF中的混悬液中加入3-氟-2-氟甲基-2-羟基-丙酸乙酯(6.8g，40.5mmol)。将该反应混合物在环境温度搅拌30min，然后加入外消旋2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-甲基-1-(2-硝基-苯磺酰基)-氮丙啶(14g，33.7mmol，与实施例17步骤a-h)类似)。将该反应混合物在环境温度搅拌2天。
将该反应混合物加入到冷2N HC1水溶液(250ml)中，用2x250mlEtOAc萃取产物，用NaHCO3溶液(250ml)和盐水(250ml)洗涤。用MgSO4干燥有机层，减压浓缩，得到黄白色固体，将其与冷甲醇一起研磨。
HPLC：RtH3＝1.26min；ESIMS[M+H3O]+＝600，602；
1H-NMR(400MHz，DMSO)：δ8.40(s，1H)，7.89(d，1H)，7.85-7.60(m，3H)，7.45(d，1H)，6.91(dd，1H)，4.85-4.45(m，4H)，4.20(q，2H)，4.00(d，1H)，3.81(d，1H)，1.61(s，3H)，1.20(t，3H)。
e)2-[2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙氧基]-3-氟-2-氟甲基-丙酰胺
将2-[2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙氧基]-3-氟-2-氟甲基-丙酸乙酯(10g，17.14mmol)溶于7N NH3的MeOH溶液(40ml)，将黄色反应混合物在50-55℃在密封小瓶中搅拌16h。
减压浓缩该反应混合物，得到淡黄色固体。
HPLC：RtH3＝1.05min；ESIMS[M+H3O]+＝571，573；
1H-NMR(400MHz，DMSO)：δ8.85-8.65(s，IH)，7.95-7.40(m，6H)，6.95(m，IH)，4.63(d，4H)，3.88(m，2H)，1.56(s，3H)。
f)N-[1-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-(氰基-双-氟甲基-甲氧基)-1-甲基-乙基]-2-硝基-苯磺酰胺
将2-[2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙氧基]-3-氟-2-氟甲基-丙酰胺(5g，9mmol)混悬于150ml干DCM。加入N-甲基-吗啉(2.5ml)。在5min内将TFAA(2.3g，10.8mmol)滴加到20ml DCM中。将该反应混合物在环境温度搅拌40min。加入N-甲基-吗啉(2.5ml)。在5min内将TFAA(2.3g，10.8mmol)滴加到20ml DCM中。
将该反应混合物加入到冷NaHCO3饱和水溶液中(400ml)，将该混合物在RT搅拌5min。分离各相，用2x DCM(100ml)萃取水相。用冷0.1NHCl(100ml)、水(100ml)和饱和NaHCO3溶液(100ml)洗涤合并的有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。
HPLC：RtH3＝1.17min；ESIMS[M+H3O]+＝553，555；
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.89(d，1H)，7.70-7.47(m，4H)，7.31(d，1H)，6.59(dd，1H)，6.21(s，1H)，4.67(m，2H)，4.56(m，2H)，4.25(d，1H)，4.17(d，1H)，1.83(s，3H)。
g)5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2,2-双-氟甲基-5-甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺
将N-[1-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-(氰基-双-氟甲基-甲氧基)-1-甲基-乙基]-2-硝基-苯磺酰胺(5g，9.32mmol)、K2CO3(2.83g，20.51mmol)和2-乙酰氨基-3-巯基-丙酸(3.8g，23.31mmol)在EtOH(100ml)中的混悬液回流16h。将该反应混合物冷却至RT，过滤。浓缩该溶液，得到黄色固体泡沫。
将该固体泡沫混悬于10％Na2CO3溶液(50ml)，用EtOAc(3x200ml)萃取。用10％Na2CO3水溶液(50ml)、1M NaOH(50ml)和盐水(50ml)洗涤合并的有机层。用MgSO4干燥该溶液，过滤，浓缩。
HPLC：RtH3＝1.17min；ESIMS[M+H]+＝351，353；
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.68(dd，1H)，7.33(m，1H)，6.89(dd，1H)，4.75-4.39(m，4H)，3.96(d，1H)，3.87(d，1H)，1.51(s，3H)。
h)[5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2,2-双-氟甲基-5-甲基-5,6-二氢-2H-[1,4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯
将5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2,2-双-氟甲基-5-甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺(3.3g，9.4mmol)溶于100ml DCM。加入Boc-酸酐(2.46g，11.48mmol)，将该反应混合物在环境温度搅拌16h。
用10％柠檬酸水(50m1)溶液处理该反应混合物，在RT搅拌5min。分离各相，用NaHCO3溶液(25m1)和盐水(25m1)洗涤有机层。用MgSO4干燥该溶液，过滤，蒸发。通过硅胶色谱法纯化粗产物，得到标题化合物，为白色结晶固体。TLC(己烷/EtOAc9∶1)：Rf=0.27；
HPLC：RtH3＝1.27min；ESIMS[M+H]+＝451，453；
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ10.98-10.94(s，1H)，7.43(m，2H)，6.98(m，1H)，5.04-4.88(dd，1H)，4.77-4.70(m，1H)，4.63-4.43(m，3H)，4.06(d，1H)，1.67(s，3H)，1.53(s，9H)。
i)[5-(5-氨基-2-氟-苯基)-2,2-双-氟甲基-5-甲基-5,6-二氢-2H-[1,4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯
将[5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2,2-双-氟甲基-5-甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(2.27g，5.03mmol)、外消旋-反式-N,N-二甲基环己烷-1,2-二胺(715mg，5.03mmol)、抗坏血酸钠(400mg，2mmol)、NaN3(2.62，40.2mmol)混悬于EtOH(100ml)和H2O(43ml)。给该反应混合物脱气，在N2气氛中加入CuI(383mg，2mmol)。将该反应混合物在70℃搅拌45min。将该反应混合物冷却至RT，加入水(100ml)和EtOAc(200ml)。分离各相，用EtOAc(200ml)萃取水相。用水(250ml)、5％氨水(250ml)和盐水(250ml)洗涤合并的有机相。用无水Na2SO4干燥有机层，减压浓缩有机层。将得到的固体溶于乙醇(50ml)，加入Pd/C5％(350mg，E101N/DDegussa)。给该反应混合物脱气，在环境温度在1.1巴氢化1h。过滤该反应混合物，浓缩。通过硅胶色谱法纯化粗产物(梯度：己烷/EtOAc6％→己烷/EtOAc48％)，得到标题化合物，为白色结晶固体：TLC(己烷/EtOAc2∶1)：Rf＝0.66；
HPLC：RtH3＝1.07min；ESIMS[M+H]+＝388；
1H-NMR(400MHz，DMSO)：δ10.75-10.72(s，1H)，6.90(m，1H)，6.50(m，2H)，5.10-5.03(s，1H)，5.04-4.40(m，4H)，4.32-4.05(dd，2H)，1.60(s，3H)，1.42(s，9H)。
j)(5-{5-[(5-氰基-3-甲基-吡啶-2-羰基)-氨基]-2-氟-苯基}-2,2-双-氟甲基-5-甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-氨基甲酸叔丁酯
将[5-(5-氨基-2-氟-苯基)-2，2-双-氟甲基-5-甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(400mg，1.03mmol)、5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸(201mg，1.24mmol)、HOAT(215，1.55mmol)和N-甲基-吗啉(209mg，2.65mmol)溶于干DMF(10ml)。加入EDC＊HCl(297mg，1.55mmol)，将该反应混合物在环境温度搅拌3h。
用水(30ml)和EtOAc(50ml)处理该反应混合物，在RT搅拌5min。分离各相，用NaHCO3溶液(25ml)和盐水(25ml)洗涤有机层。用Na2SO4干燥该溶液，过滤，蒸发。通过硅胶色谱法纯化粗产物，得到标题化合物，为白色结晶固体。TLC(己烷/EtOAc7∶3)：Rf＝0.39；
HPLC：RtH3＝1.24min；ESIMS[M+H]+＝532；
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ11.09-11.01(s，1H)，10.01(s，1H)，8.71(s，1H)，7.93(s，1H)，7.80(m，1H)，7.58(m，1H)，7.12(m，1H)，5.06-4.90(dd，1H)，)，4.76(d，1H)，4.67-4.45(m，3H)，4.10(m，1H)，2.83(s，3H)，1.72(s，3H)，1.54(s，9H)。
k)5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6,6-双-氟甲基-3-甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺
将(5-{5-[(5-氰基-3-甲基-吡啶-2-羰基)-氨基]-2-氟-苯基}-2,2-双-氟甲基-5-甲基-5,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(450mg，0.847mmol)溶于DCM(8ml)。滴加TFA(965，8.47mmol)。然后将该反应混合物在环境温度搅拌2h。将该反应混合物加入到冷Na2CO3水溶液(50ml)中。加入DCM(30ml)，将该反应混合物搅拌10min。分离各相，用NaHCO3溶液(25ml)和盐水(25ml)洗涤有机层。用Na2SO4干燥该溶液，过滤，蒸发，得到标题化合物，为白色固体。
HPLC：RtH3＝0.73min；ESIMS[M+H]+＝432；
1H-NMR(400MHz，DMSO)：δ10.70-10.63(br.s，1H)，8.96(s，1H)，8.37(s，1H)，7.75(m，2H)，7.11(m，1H)，6.10-6.00(s，2H)，4.90(dd，1H)，)，4.73-4.47(m，3H)，3.85(dd，2H)，2.51(s，3H)，1.40(s，3H)。
实施例38：5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-6,6-双-氟甲基-3-甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺
Figure BDA0000380458050000721
通过制备型-HPLC、用Chiralpak AD-H320x7.65mm柱、采用正庚烷/iPrOH70∶30(+0.05％二乙胺)作为洗脱液分离外消旋产物5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6,6-双-氟甲基-3-甲基-3,6-二氢-2H-[l，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺(350mg)。
期望的化合物是较为缓慢洗脱的(R)-对映体(146mg，白色固体，ee=100％(在210nm检测))。
实施例39-41：通过与用于实施例37和实施例38类似的方法制备表4中举出的化合物。
表4
Figure BDA0000380458050000731
Figure BDA0000380458050000741
实施例42：5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺
a)(5-溴代-2-氟-苯基)-氧代-乙酸乙酯ligroin
将22.80ml(160mmol)二异丙基胺在400ml THF中的溶液冷却至-78℃。滴加1.6M BuLi的己烷溶液(100ml，160mmol)。15分钟后，滴加25.45g的4-溴代-1-氟苯(145mmol)，同时保持温度低于-60℃。在-70℃搅拌2.5h后，加入21.7ml草酸二乙酯(160mmol)。将该混合物温至-50℃。15min后，再将温度冷却至-70℃，然后将该混合物倾倒在350ml1M HCl上。用石油英萃取该混合物，用MgSO4.H2O干燥，浓缩，在约6mbar(b.p.112-115℃)蒸馏，得到31.58g期望的产物，为黄色液体。1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.07(dd，1H)，7.77(ddd，1H)，7.12(t，1H)，4.47(q，2H)，1.44(t，3H)。
b)(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-羟基-3-硝基-丙酸乙酯
向在-25℃冷却的35.86g(130mmol)(5-溴代-2-氟-苯基)-氧代-乙酸乙酯和3.59g(6.52mmol)催化剂1(CHX135)：3，5-双-三氟甲基-苯甲酸(R)-(6-羟基-喹啉-4-基)-(5-乙烯基-1-氮杂-双环[2.2.2]辛-2-基)-甲酯(CAS登记号：1079392-85-0)在360ml DCM中的溶液中加入70.3ml(1.3mol)硝基甲烷。将该混合物在-20℃保持3天，直到TLC分析显示完全转化为止。通过使该反应混合物通过小硅胶垫(DCM/(EtOH/饱和NH3水9：1)99：1)除去催化剂。通过硅胶色谱法纯化粗产物(己烷/EtOAc5-15％)，得到39.88g标题化合物，为无色油状物。E.e.96％；HPLC：RtH3=2.705min；ESIMS[M+Na]+=358/360(1Br)；1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ7.84(dd，1H)，7.51(ddd，1H)，7.01(dd，1H)，5.57(d，1H)，4.86(d，1H)，4.46-4.28(m，2H)，1.33(t，3H)。
c)(R)-3-氨基-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-羟基-丙酸乙酯
使用机械搅拌器将Zn粉(78g，l.187mol)混悬于240ml AcOH。将(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-羟基-3-硝基-丙酸乙酯(39.88g，119mmol)在160ml AcOH中的溶液滴加倒该混悬液中，同时使用水浴保持温度在30-40℃。15min后，用硅藻土过滤该混合物，用EtOAc洗涤。浓缩滤液，溶于EtOAc，用10％苏打溶液洗涤。通过添加一些NH3水溶解任意不溶部分。用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机层。用Na2SO4干燥。蒸发，得到34g标题化合物，为白色固体，其纯度足以进行进一步合成。HPLC：RtH2=2.397min；ESIMS[M+H]+=306/308(1Br)；1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ7.74(dd，1H)，7.54(ddd，1H)，7.14(dd，1H)，4.17-4.03(m，2H)，3.21(d，1H)，2.87(d，1H)，1.13(t，3H)。
d)(R)-3-氨基-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-丙-1，2-二醇盐酸盐
在氮气气氛中将1.415ml BH3.SMe2(净，14.9mmol)滴加到(R)-3-氨基-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-羟基-丙酸乙酯(1.52g，4.97mmol)在15ml THF中的溶液中。反应放热，放出气体。将该混合物加热至回流3h。通过谨慎添加3ml MeOH使过量硼烷猝灭。再加入MeOH，然后加入3ml2M HCl水溶液。蒸发该混合物，溶于20ml MeOH，蒸发(2x)。使残余物从EtOH(EtOAc中结晶，得到907mg标题化合物，为白色结晶。HPLC：RtH1=2.451min；ESIMS[M+H]+=264/266(1Br)；1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ7.80(br，2H)，7.76(dd，1H)，7.58(ddd，1H)，7.19(dd，1H)，6.30(s，1H)，5.28(br s，1H)，3.72(d，1H)，3.63(d，1H)，3.26(d，1H)，3.14(d，1H)。
e)N-[(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，3-二羟基-丙基]-2-硝基-苯磺酰胺
将(R)-3-氨基-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-丙-1，2-二醇盐酸盐(790mg，2.63mmol)、2-硝基-苯磺酰氯(583mg，2.63mmol)、K2CO3(363mg，2.63mmol)和KHCO3(562mg，5.26mmol)在8ml ACN中的混悬液搅拌2h。使该混合物在EtOAc与盐水之间分配。用盐水洗涤有机层，用MgSO4.H2O干燥，蒸发。进行硅胶色谱(己烷/EtOAc25-50％)，得到1.42g标题化合物，为无色泡沫体。HPLC：RtH2=3.136min；ESIMS[M+Na]+=37l/373(1Br)；1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ7.96-7.90(m，2H)，7.87-7.79(m，2H)，7.65(dd，1H)，7.58(br，1H)，7.44(ddd，1H)，7.03(dd，1H)，5.60(s，1H)，4.88(t，1H)，3.67-3.57(m，2H)，3.41(d，1H)，3.31(d，1H)。
f)(S)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-1-(2-硝基-苯磺酰基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧基甲基)-氮丙啶
向冰冷的N-[(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，3-二羟基丙基]-2-硝基-苯磺酰胺(1.40g，3.12mmol)和二氢吡喃(0.299ml，3.27mmol)在14ml DCM中的溶液中加入CSA(36mg，0.156mmol)。温至rt后，将该混合物搅拌2h。加入EtOAc和饱和NaHCO3水溶液，用盐水洗涤有机相，用MgSO4.H2O干燥，蒸发。进行硅胶色谱(己烷/EtOAc25-35％)，得到1.52g标题化合物，为无色树脂。TLC(己烷/EtOAc2：1)：Rf=0.28；HPLC：RtH3=3.348min；ESIMS[M+Na]+=555/557(1Br)。
将该产物与PPh3(838mg，3.19mmol)一起溶于14ml THF，冷却至0-5℃，以滴加方式用40％DEAD的甲苯溶液(1.46ml，3.19mmol)处理。持续搅拌2.5h，同时缓慢温至rt。用20ml甲苯稀释该溶液，浓缩，直接通过硅胶色谱法纯化(己烷/EtOAc5-15％)，得到标题化合物，为无色树脂(1：1的非对映异构体混合物)。HPLC：RtH4=3.361min；ESIMS[M+Na]+=537/539(1Br)；1H-NMR(CDCl3，400MHz，1：1的非对映异构体混合物)：δ8.32-8.27(m，1H)，7.81-7.76(m，3H)，7.71-7.65(m，1H)，7.46-7.42(m，1H)，6.95(t，1H)，5.74和5.62(t，1H)，4.36和4.34(d，1H)，4.12和4.10(d，1H)，3.74-3.57(m，1H)，3.52-3.44(m，1H)，3.52和3.35(s，1H)，2.99和2.94(s，1H)。
g)N-[(R)-1-(5-溴代-2-氟-苯基)-1-氟甲基-2-羟基-乙基]-2-硝基-苯磺酰胺
将(S)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-1-(2-硝基-苯磺酰基)-2-(四氢-吡喃-2-基氧基甲基)-氮丙啶(1.08g，2.096mmol)和TBAF.3H2O(860mg，2.72mmol)在11ml DMF中的混合物搅拌过夜。使该混合物分配在盐水与TBME之间。用稀盐水洗涤有机层(3x)，用MgSO4.H2O干燥，蒸发，得到1.12g一氟THP醚，为黄色树脂(1：1的非对映异构体混合物)。TLC(己烷/EtOAc4：1)：Rf=0.26；HPLC：RtH4=3.328和3.429min；ESIMS[M+Na]+=557/559(1Br)。将产物溶于16ml MeOH和包含49mg(0.209mmol)CSA的6ml THF，搅拌。6h后，反应完成，使该均匀混合物分配在EtOAc与饱和NaHCO3水溶液之间。用饱和NaHCO3水溶液洗涤有机相，用MgSO4.H2O干燥，蒸发。得到标题化合物，为白色结晶(741mg，TBME/己烷)。HPLC：RtH3=2.733min；ESIMS[M+Na]+=473/475(1Br)；1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ8.40(s，1H)，7.88(d，1H)，7.77(dt，1H)，7.68-7.62(m，2H)，7.47-7.40(m，2H)，6.89(dd，1H)，5.38(t，1H)，5.07(q，1H)，4.94(q，1H)，3.89-3.73(m，2H)。
h)(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-氟甲基-1-(2-硝基-苯磺酰基)-氮丙啶
将N-[(R)-1-(5-溴代-2-氟-苯基)-1-氟甲基-2-羟基-乙基]-2-硝基-苯磺酰胺(662mg，1.467mmol)与PPh3(462mg，1.76mmol)一起溶于7ml THF，冷却至0-5℃，以滴加方式用40％DEAD的甲苯溶液(0.807ml，1.76mmol)处理。持续搅拌2.5h，同时缓慢温至rt。用20ml甲苯稀释该溶液，浓缩，直接通过硅胶色谱法纯化(己烷/EtOAc5-15％)，得到标题化合物，为无色树脂。HPLC：RtH3=3.274min；ESIMS[M+Na]+=455/457(1Br)；1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ8.34-8.30(m，1H)，7.84-7.80(m，3H)，7.68(dd，1H)，7.49(ddd，1H)，7.00(t，1H)，5.04(d，2H)，3.40(s，1H)，3.03(d，1H)。
i)2-[(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-3-氟-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙氧基]-3-氟-2-氟甲基-丙酸乙酯
向NaH(78mg，60％的矿物油溶液，1.94mmol)在DMF(160ml)中的在氩气气氛中混悬液中滴加3-氟-2-氟甲基-2-羟基-丙酸乙酯(327mg，1.94mmol)，在20℃搅拌0.5h后，加入(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-2-氟甲基-1-(2-硝基-苯磺酰基)-氮丙啶(526mg，1.214mmol)。将该反应体系保持在25℃16h。将该混合物加入到冷的2N HCl水溶液中，用TBME萃取产物。用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤合并的有机层，用MgSO4.H2O干燥，过滤，浓缩。通过硅胶色谱法纯化残留化合物(己烷/EtOAc10-20％)，得到标题化合物，为白色固体。TLC(己烷/EtOAc1：1)：Rf=0.59；HPLC RtH4=3.230min；ESIMS[M+Na]+=623，625(1Br)；1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.93(dd，1H)，7.75(dt，1H)，7.66(dt，1H)，7.44(dt，1H)，7.39(dd，1H)，7.35(ddd，1H)，6.94(s，1H)，6.53(dd，1H)，5.33-4.62(m，6H)，4.39(q，2H)，4.19(d，1H)，4.14(d，1H)，1.37(t，3H)。
j)(R)-5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-4-(2-硝基-苯磺酰基)-吗啉-3-酮
向2-[(R)-2-(5-溴代-2-氟-苯基)-3-氟-2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-丙氧基]-3-氟-2-氟甲基-丙酸乙酯(462mg，0.768mmol)在3ml MeOH和2mlTHF中的溶液中加入0.96ml(3.84mmol)4M LiOH水溶液。将该混合物在rt搅拌30min。将该反应混合物溶于1N HCl和EtOAc。用盐水洗涤有机相，用MgSO4.H2O干燥，蒸发，得到445mg酸，为白色固体。HPLCRtH4=3.230min；ESIMS[M+Na]+=595，597(1Br)。将该酸混悬于DCM，加入N-甲基吗啉(263mg，2.60mmol)，然后以滴加方式加入氯甲酸乙酯(141mg，1.300mmol)。将得到的黄色溶液在rt搅拌1h。使该反应混合物分配在1N HCl与EtOAc之间。用盐水和10％NaHCO3水溶液洗涤有机层，用MgSO4.H2O干燥，蒸发。从TBME/己烷中结晶，得到标题化合物。TLC(己烷/EtOAc3：1)：Rf=0.20；HPLC RtH4=3.062min；ESIMS[M+Na]+=577/579(1Br)；1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.30(d，1H)，7.83-7.74(m，4H)，7.57(ddd，1H)，7.08(dd，1H)，5.68(dd，1H)，5.47(dd，1H)，4.48(ddd，2H)，4.66(dd，1H)，4.60(d，1H)，4.51(d，1H)，4.39(d，1H)。
k)(R)-5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-吗啉-3-酮
将(R)-5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-4-(2-硝基-苯磺酰基)-吗啉-3-酮(365mg，0.657mmol)、K2CO3(363mg，2.63mmol)和巯基乙酸(121mg，1.315mmol)在3.5ml DMF中的混合物在60℃搅拌3h。用EtOAc和盐水稀释该混合物。用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机层，用MgSO4.H2O干燥，蒸发。通过硅胶色谱法纯化残留化合物(己烷/EtOAc10-25％)，得到标题化合物，为白色固体。TLC(己烷/EtOAc3：1)：Rf=0.31；HPLC RtH2=3.202min；ESIMS[M+H]+=370/372(1x Br)；1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.56-7.51(m，2H)，7.06(dd，1H)，6.85(br，1H)，4.98-4.30(m，8H)。
l)(R)-5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-吗啉-3-硫酮
向(R)-5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-吗啉-3-酮(141mg，0.381mmol)和六甲基二硅氧烷(111mg，0.686mmol)在甲苯中的溶液中加入五硫化磷(102mg，0.457mmol)。将该反应混合物加热至100℃，搅拌4h。将该反应混合物冷却至室温后，加入1ml丙酮和1.42ml K2CO3水溶液(10％w/w)。将该混合物搅拌90分钟，然后分配在水与EtOAc之间。分离各层，用0.1N NaOH、盐水和EtOAc洗涤。合并有机层，用MgSO4.H2O干燥，蒸发。通过硅胶色谱法纯化粗产物(己烷/EtOAc10-15％)，得到标题化合物，为白色固体：TLC(己烷/EtOAc6：1)：Rf=0.38；HPLC RtH2=3.553min；ESIMS[M+H]+=386/388(1x Br)；1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.62(br，1H)，7.56(ddd，1H)，7.47(dd，1H)，7.08(dd，1H)，5.12-4.70(m，6H)，4.95(d，1H)，4.33(d，1H)。
m)(R)-5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺
将(R)-5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-吗啉-3-硫酮(134mg，0.347mmol)溶于7mol/l NH3的甲醇溶液(3ml)。将密封反应容器加热至80℃3天。蒸发该反应混合物，用硅胶柱纯化，用(己烷/EtOAc15-35％)洗脱，得到标题化合物，为无色树脂。TLC(己烷/EtOAc3：1)：Rf=0.13；HPLC：RtH2=2.684min；ESIMS[M+H]+=369/371(1Br)；1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ11.91(s，1H)，7.72(dd，1H)，7.54-7.45(m，2H)，7.08-6.96(m，2H)，5.20-4.25(m，8H)。
n)[(R)-5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯
向(R)-5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基胺(113mg，0.306mmol)在1ml DCM中的溶液中加入DIPEA(60mg，0.46mmol)和二碳酸二叔丁酯(87mg，0.4mmol)。将该反应混合物在40℃搅拌过夜。蒸发该反应混合物，用硅胶柱纯化，用己烷/TBME5-20％洗脱，得到132mg标题化合物，为无色泡沫体。TLC(己烷/EtOAc9：1)：Rf=0.16；HPLC：RtH4=3.123min；ESIMS=[M+H]+469/471(1Br)；1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ11.22(br s，1H)，7.54-7.45(m，2H)，7.05(dd，1H)，5.06-4.34(m，8H)，1.53(s，9H)。
o)[(R)-5-(5-氨基-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯
向[(R)-5-(5-溴代-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(132mg，0.283mmol)和40.2mg(0.283mmol)反式-N，N’-二甲基环己烷-1，2-二胺在4ml EtOH中的溶液中加入147mg(2.26mmol)叠氮化钠和22.4mg(0.113mmol)抗坏血酸钠在1.6ml水中的溶液。给该混合物脱气，置于氮气气氛中。加入CuI(21.5mg，0.113mmol)，将该混合物在70℃加热。最初形成的混悬液变成均匀蓝色溶液。将该混合物冷却至rt，用TBME稀释，用稀NH4OH水溶液和盐水洗涤。用MgSO4.H2O干燥有机相，蒸发，得到128mg黄色树脂，由叠氮化物中间体和标题化合物的混合物组成。将该产物溶于1.3ml EtOH和0.2ml THF，用68mg5％Pd-C″Degussa″E101ND处理，在氢气气氛中搅拌至原料耗尽为止。用DCM稀释该混合物，用硅藻土过滤。通过硅胶色谱法纯化产物(己烷/EtOAc25-50％)，得到71mg标题化合物，为无色泡沫体。HPLC：RtH2=2.963min；ESIMS=[M+H]+406；1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ6.93(dd，1H)，6.72-6.67(m，2H)，5.09-4.33(m，8H)，1.53(s，9H)。
p)((R)-5-{5-[(5-氰基-3-甲基-吡啶-2-羰基)-氨基]-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-氨基甲酸叔丁酯
向冰冷的[(R)-5-(5-氨基-2-氟-苯基)-2，2，5-三-氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(71mg，0.176mmol)、5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸(31.5mg，0.194mmol)、HOAt(38.4mg，0.282mmol)在0.72ml DMF中的溶液中加入0.04ml(0.23mmol)EDC(游离碱)。将该混合物在0-5℃搅拌1h，在rt搅拌2h。加入EtOAc和水，用饱和NaHCO3水溶液、盐水洗涤有机层，用MgSO4.H2O干燥。通过硅胶色谱法纯化产物(己烷/EtOAc15-50％)，得到94mg标题化合物，为无色泡沫体。TLC(己烷/EtOAc3∶1)：Rf=0.18；HPLC：RtH3=3.452min；ESIMS=[M+H]+550；1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ11.28(s，1H)，10.12(s，1H)，8.76(s，1H)，7.99(s，1H)，7.92(ddd，1H)，7.71(dd，1H)，7.22(dd，1H)，5.05-4.44(m，8H)，2.89(s，3H)，1.59(s，9H)。
q)5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((R)-5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺
向((R)-5-{5-[(5-氰基-3-甲基-吡啶-2-羰基)-氨基]-2-氟-苯基}-2，2，5-三-氟甲基-5，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(94mg，0.172mmol)在0.75ml DCM中的溶液中加入0.25ml TFA。将该混合物搅拌1h，倾倒在10％Na2CO3水溶液上，用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥。通过硅胶色谱法纯化产物(DCM/(EtOH/NH3水9∶1)0.5-1.5％)，得到59mg标题化合物，为无色泡沫体。HPLC：RtH2=2.850min；ESIMS=[M+H]+450；
1H-NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.69(s，1H)，8.98(s，1H)，8.39(s，1H)，7.92(m，1H)，7.77(m，1H)，7.15(dd，1H)，6.33(br s，2H)，4.98-4.40(m，6H)，4.168d，1H)，4.00(d，1H)，2.52(s，3H)。
实施例43-45：使用与制备实施例42类似的方法制备表5中的实施例43，而使用与制备实施例17类似的方法制备实施例44和45。
表5
还可以使用上文所述的方法或与之类似的方法制备下表6中的化合物。
表6
Figure BDA0000380458050000841
Figure BDA0000380458050000851
Figure BDA0000380458050000861
中间体的制备
取代的酸结构单元是商购的或可以如文献中所述或按照与例如DE19725802A1、Tetrahedron：Asymmetry1999，10(4)，679-687、WO2005063738、WO2009091016、WO2010047372、Bioorg.Med.Chem.2001，9，2061-2071中所述类似的方式制备，或可以如下文所述或按照类似方式制备。
酸-1：5-氯-3-甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸
a)(2，5-二氯-吡啶-3-基)-甲醇
向100ml圆底烧瓶中添加2，5-二氯吡啶-3-甲醛(Matrix Sci.，3.4g，19.32mmol)，然后添加乙醇(50ml)。在室温分小部分加入硼氢化钠。1h后，原料耗尽，通过添加稀乙酸水溶液谨慎地使反应停止。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发，得到标题化合物，为白色固体。
TLC：Rf=0.43(2∶1环己烷∶乙酸乙酯)；
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.29(d，1H)，7.94(d，1H)，4.80(d，2H)，2.23(宽峰，不可拆分的三重峰，1H，OH)。
b)2，5-二氯-3-甲氧基甲基-吡啶
在0℃向(2，5-二氯-吡啶-3-基)-甲醇(1000mg，5.62mmol)在干DMF(25ml)中的溶液中加入氢化钠(245mg，5.62mmol，55％的油溶液)。15分钟后，加入碘甲烷(0.457ml，7.30mmol)，在室温持续搅拌过夜。用水使该反应混合物猝灭，用乙酸乙酯稀释。用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤有机相，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。对粗黄色油状物进行硅胶色谱(环己烷∶乙酸乙酯83∶17)，得到标题化合物，为澄清油状物。
TLC：Rf=0.57(5∶1环己烷∶乙酸乙酯)；
1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.25(d，1H)，7.82(d，1H)，4.48(d，2H)，3.51(s，3H)。
c)5-氯-3-甲氧基甲基-吡啶-2-腈
在氮气气氛中向2，5-二氯-3-甲氧基甲基-吡啶(1150mg，5.99mmol)、氰化锌(492mg，4.19mmol)和锌粉(39.2mg，0.599mmol)在干DMF(18ml)中的溶液中加入(dppf)PdCl2CH2Cl2加合物催化剂(245mg，0.299mmol)。将该混合物在150℃加热2小时。2h后，原料耗尽，用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。对粗深色残余物(960mg)进行硅胶色谱(环己烷∶乙酸乙酯80∶20)，得到标题化合物，为黄色固体。
TLC：Rf=0.41(3∶1环己烷∶乙酸乙酯)；
LC-MS：RtH9=0.83min.(100％纯，ESI+183，185)；
1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.56(d，1H，H6)，7.95(d，1H，H4)，4.66(s，2H)，3.51(s，3H)。
d)5-氯-3-甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸
将5-氯-3-甲氧基甲基-吡啶-2-腈(100mg，0.548mmol)在2N NaOH(2ml)中的混悬液在100℃搅拌4小时。用乙醚洗涤该反应混合物，然后用2M HCl使呈酸性(pH5-6)。用乙酸乙酯萃取水层，用盐水洗涤有机相，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发，得到标题化合物，为白色固体。
MS：ESI-200；LC-MS：RtH9=0.58min.(100％纯，ESI+202)；
1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ11.1(s，宽峰，1H，COOH)，8.45(d，1H，H6)，8.25(d，1H，H4)，4.99(s，2H)，3.55(s，3H)。
酸-2：3-氨基-5-甲氧基-吡嗪-2-甲酸
a)3-氨基-5-三-氘代-甲氧基-吡嗪-2-甲酸三-氘代甲酯
在0℃向0.217ml(5.33mmol)四-氘代甲醇在7ml THF中的溶液中加入94mg(2.346mmol)60％氢化钠的油溶液，将该混合物在室温搅拌1h。重新冷却至0℃后，加入400mg(2.132mmol)3-氨基-5-氯-吡嗪-2-甲酸甲酯(GB1248146)，将该混合物温至室温，搅拌4天。
加入饱和NH4Cl水溶液，用EtOAc萃取该混合物，用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，蒸发。通过硅胶色谱法纯化残余物(环己烷-环己烷/EtOAc1∶3)，得到标题化合物，为无色固体。
HPLC：RtH9=0.61min；ESIMS[M+H]+=190.2；
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.51(s，1H)，7.48(br s，2H)。
b)3-氨基-5-三-氘代-甲氧基-吡嗪-2-甲酸
向49mg(0.259mmol)3-氨基-5-三-氘代-甲氧基-吡嗪-2-甲酸三-氘代甲酯在2ml THF中的溶液中加入0.388ml(0.388mmol)1N氢氧化钠，将该混合物在室温搅拌60h。向该混合物中加入0.363ml(0.363mmol)1NHCl，搅拌5min后，加入甲苯，蒸发溶解，得到标题化合物与氯化钠，为无色固体。将该混合物不经进一步纯化用于偶合反应。
HPLC：RtH9=0.50min；ESIMS[M+H]+=173.1；
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.22(s，1H)。
酸-3：3-氨基-5-丙-2-炔氧基-吡嗪-2-甲酸
通过与酸-2类似的方法、使用丙-2-炔-1-醇而不是四-氘代甲醇[酸-2步骤a]]制备标题化合物。
HPLC：RtH9=0.59min；ESIMS[M+H]+=194.1；
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.58(br.s，2H)，7.48(s，1H)，4.96(d，2H)，3.58(s，1H)。
酸-4：3-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸
a)1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-腈
在氮气气氛中向6-溴代-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(Synthesis，1992，661，实施例3b)(788mg，4mmol)、氰化锌(329mg，2.80mmol)和锌粉(26.2mg，0.4mmol)在干DMF(12ml)中的混合物中加入(dppf)PdCl2xCH2Cl2加合物催化剂(163mg，0.2mmol)。将该混合物在140℃加热4h。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。1.04g暗黄色油状物。对粗产物进行硅胶色谱(环己烷/乙酸乙酯3：1)，得到标题化合物，为白色固体。
TLC Rf=0.35(2：1环己烷：乙酸乙酯)；
LC-MS：RtH11=0.81min.(100％纯度，ESI+144)，API-ES+144；
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ11.05(s，1H，NH)，8.08(d，1H)，7.71(dd，1H)，7.52(d，1H)，6.66(m，1H)。
b)1H-比咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸
将1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-腈(690mg，4.82mmol)在NaOH2M(12ml)中的混悬液在100℃搅拌6h。用乙醚洗涤该反应混合物，用浓HCl使水相呈适度酸性(pH6-7)。过滤出形成的固体，干燥，得到标题化合物。
LC-MS：RtH8=0.51min.(100％纯度，ESI+163)；
1H-NMR(400MHz，DMSO-D6)：δ12.78(s，1H)，12.01(s，1H)，8.08(d，1H)，7.80(m，1H)，7.73(s，宽峰，未拆分，1H)，6.56(s，宽峰，1H)。
c)3-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸
将1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸(300mg，1.85mmol)和NCS(247mg，1.85mmol)在干DMF(12ml)中的溶液在氩气气氛中在室温搅拌20h。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用盐水洗涤。过滤出形成的沉淀，用乙酸乙酯洗涤，干燥，得到标题化合物，为淡棕色固体。
LC-MS：RtH8=0.72min.(100％纯度，ESI+197/199)；
1H-NMR(400MHz，DMSO-D6)：δ13.03(s，1H)，12.43(s，1H)，8.07(d，1H)，7.96(d，1H)，7.90(d，1H)。
酸-5：3-(二叔丁氧羰基-氨基)-5-二氟甲基-吡嗪-2-甲酸
a)3-氨基-5-乙烯基-吡嗪-2-甲酸甲酯
向161mg(0.86mmol)3-氨基-5-氯-吡嗪-2-甲酸甲酯(GB1248146)、0.352ml(1.204mmol)三丁基(乙烯基)锡和102mg(2.498mmol)氯化锂在DMF中的混合物中加入30.2mg(0.043mmol)PdCl2(PPh3)2，将该混合物加热至85℃2.5h。冷却至室温后，加入水，用EtOAc萃取该混合物，用水和半饱和NaCl水溶液洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，蒸发。通过硅胶色谱法纯化残余物(环己烷-环己烷/EtOAc1：9)，得到标题化合物，为黄色固体。
HPLC：RtH11=0.71min；ESIMS[M+H]+=179.9；
1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ8.04(s，1H)，7.35(br.s，1H)，6.75(dd，1H)，6.38(d，1H)，5.70(d，1H)，3.84(s，3H)。
b)3-(二叔丁氧羰基-氨基)-5-乙烯基-吡嗪-2-甲酸甲酯
向冰冷的1.28g(7.14mmol)3-氨基-5-乙烯基-吡嗪-2-甲酸甲酯在45ml DCM中的溶液中加入8.58g(39.3mmol)Boc2O，将该混合物在室温搅拌30min，然后将该混合物加热至40℃4h。冷却至室温后，加入水，用DCM萃取该混合物。用0.5N HCl和饱和NaCl水溶液洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，蒸发。通过硅胶色谱法纯化残余物(环己烷+5％NEt3-EtOAc+5％NEt3)，得到标题化合物，为黄色固体。
HPLC：RtH9=1.15min；ESIMS[M-Boc]+=280.3；
1H NMR(400MHz，DMSo-d6)：δ8.93(s，1H)，7.00(dd，1H)，6.51(dd，1H)，5.86(dd，1H)，3.88(s，3H)，1.34(s，18H)。
c)3-(二叔丁氧羰基-氨基)-5-甲酰基-吡嗪-2-甲酸甲酯
将1g(2.64mmol)3-(二叔丁氧羰基-氨基)-5-乙烯基-吡嗪-2-甲酸甲酯和0.332g(3.95mmol)碳酸氢钠在45ml DCM和15ml MeOH中的混合物冷却至-78℃，用氧气净化5min。用臭氧处理该反应混合物40min，直到该混合物变成蓝色为止。用氧气将该反应混合物净化10min，用氮气净化10min，然后在-78℃加入0.487ml(6.59mmol)二甲硫，将该混合物温至室温，用DCM稀释该混合物，用10％硫代硫酸钠水溶液洗涤。用DCM萃取水层，用Na2SO4干燥合并的有机层，蒸发，得到标题化合物，为黄色油状物。将该化合物不经进一步纯化用于下一步。
1H-NMR(400MHz，DMSo-d6)：δ10.07(s，1H)，9.24(s，1H)，3.94(s，3H)，1.36(s，18H)。
d)3-(二叔丁氧羰基-氨基)-5-二氟甲基-吡嗪-2-甲酸甲酯
在1h内向冰冷却的550mg(1.44mmol)3-(二叔丁氧羰基-氨基)-5-甲酰基-吡嗪-2-甲酸甲酯在20ml DCM中的溶液中滴加0.798ml(4.33mmol)Deoxofluor(50％的THF溶液)。在0℃持续搅拌2.5h，然后将使该反应混合物达到室温过夜。加入饱和碳酸氢钠水溶液，用EtOAc萃取该混合物，用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，Na2SO4用干燥，蒸发。通过硅胶色谱法纯化残余物(环己烷+5％NEt3-环己烷+5％NEt3/EtOAc+5％NEt31：1)，得到标题化合物，为无色固体。
HPLC：RtH9=1.14min；ESIMS[2M+Na]+=829.6；
1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.14(s，1H)，7.26(t，1H，CHF2)，3.92(s，3H)，1.33(s，18H)。
e)3-(二叔丁氧羰基-氨基)-5-二氟甲基-吡嗪-2-甲酸
向75mg(0.186mmol)3-(二叔丁氧羰基-氨基)-5--二氟甲基-吡嗪-2-甲酸甲酯在2ml THF中的溶液中滴加0.205ml(0.205mmol)1N NaOH，将该反应混合物搅拌1.5h。向该混合物中加入0.186ml(0.186mmol)1NHCl，搅拌5min后，加入甲苯，蒸发溶剂，得到标题化合物与氯化钠，为无色固体。将该混合物不经进一步纯化用于偶合反应。
HPLC：RtH11=0.89min；ESIMS[M-Boc]+=290.0；
1H-NMR(400MHz，DMSo-d6)：δ14.30(br.s，1H)，9.10(s，1H)，7.25(t，1H，CHF2)，1.33(s，18H)。
酸-6：5-甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸
a)5-甲氧基-3-甲基-吡啶-2-腈
在0℃向5-羟基-3-甲基-吡啶-2-腈(CAS登记号228867-86-5)(1.5g，11.18mmol)和甲醇(0.499ml，0.394g，12.30mmol)在THF(100ml)中的溶液中加入三苯膦(4.44g，16.77mmol)，将该反应混合物在0℃搅拌10min。然后加入DIAD(3.25ml，3.39g，16.77mmol)在THF(50ml)中的溶液，将该反应混合物在rt搅拌18h，用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤。再用EtOAc萃取合并的水层，用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，浓缩滤液。进行硅胶快速色谱后得到标题化合物(环己烷/EtOAc梯度0-5min95：5，5-50min95：5-60：40)。
HPLC：RtH10=0.75min；ESIMS：149[(M+H)十]；
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.22(d，1H)，7.08(d，1H)，3.92(s，3H)，2.55(s，3H)。
b)5-甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸
将5-甲氧基-3-甲基-吡啶-2-腈(3.41g，10.20mmol)在浓HCl水溶液(10ml)中的溶液在120℃搅拌3.5h。将该反应混合物冷却至rt，用TBME稀释，用水萃取2次。用TBME洗涤合并的水层，冻干。将残余物溶于水，将1M NaOH水溶液加入以调整pH至3，用3x DCM萃取该溶液。用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，浓缩滤液，得到标题化合物，为白色固体，将其不经进一步纯化用于下一步。
HPLC：RtH10=0.40min；ESIMS：168[(M+H)+]；
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ8.14(d，1H)，7.36(d，1H)，3.94(s，3H)，2.65(s，3H)。
酸-7：5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸
a)2-氯-5-二氟甲基-3-甲基-吡啶
在-78℃向预冷却的6-氯-5-甲基-吡啶-3-甲醛(CAS登记号176433-43-5)(500mg，3.21mmol)在DCM(15ml)中的溶液中加入DAST(0.632ml，0.777g，4.82mmol)。将该反应混合物在-78℃搅拌18h至rt，然后在0℃用饱和NaHCO3水溶液猝灭，用H2O稀释，用DCM萃取。用H2O洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩滤液。进行硅胶快速色谱后得到标题化合物，为黄色油状物(环己烷/EtOAc梯度0-5min100：0，5-40min100：0-80：20)。
HPLC：RtH10=0.94min；ESIMS：178[(M+H)十]；
1H NMR(400MHz，CDCl3)：8.38(d，1H)，7.72(d，1H)，6.69(t，1H)，2.46(s，3H)。
b)5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-腈
将2-氯-5--二氟甲基-3-甲基-吡啶(337mg，1.898mmol)、Zn(CN)2(159mg，1.328mmol)和Pd(PPh3)4(132mg，0.114mmol)在DMF(10ml)中的溶液在120℃在微波中搅拌10min，用hyflo过滤，用水和盐水洗涤。再用TBME反萃取合并的水层，用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，浓缩滤液。进行硅胶快速色谱(环己烷/EtOAc梯度0-3min100：0，3-35min100：0-80：20)后得到标题化合物，为黄色油状物。
HPLC：RtH10=0.83min；ESIMS：169[(M+H)十]；
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.68(s，1H)，7.84(s，1H)，6.75(t，1H)，2.65(s，3H)。
c)5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸
将5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-腈(209mg，0.787mmol)在浓HCl水溶液(2ml)中的溶液在120℃在密封试管内搅拌2h。将该反应混合物冷却至rt，用TBME稀释，用水萃取2次。用TBME洗涤合并的有机层，冻干。将残余物溶于水，将1M NaOH水溶液加入以调整pH至2，用3x DCM萃取该溶液。用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，浓缩滤液，得到标题化合物，为白色固体，不经进一步纯化用于下一步。
HPLC：RtH10=0.49min；ESIMS：188[(M+H)十]；
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ8.62(s，1H)，7.98(s，1H)，6.95(t，1H)，2.65(s，3H)。
酸-8：5-氟-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸
a)2-氯-5-氟-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶
在0℃向(2-氯-5-氟吡啶-3-基)-甲醇(CAS：870063-2-8；950mg，5.88mmol)在干DMF(25ml)中的溶液中加入氢化钠(235mg，5.88mmol，60％的油溶液)。15分钟后，加入碘甲烷-D3(1.11g，7.64mmol)，在室温持续搅拌4h。用水使该反应混合物猝灭，用乙酸乙酯稀释。用碳酸氢钠溶液和盐水洗涤有机相，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。用硅胶对粗棕色油状物进行色谱(环己烷：乙酸乙酯)，得到标题化合物。
LC-MS：RtH8=0.87min.(100％纯度，ESI+179，181)；
1H-NMR(360MHz，CDCl3)：8.18(d，1H)，7.64(m，1H)，4.52(s，2H)。
b)5-氟-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-腈
使2-氯-5-氟-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶(700mg，3.92mmol)与锌粉、氰化锌和(dppf)PdCl2催化剂按照与实施例A1c)类似的方式反应，进行硅胶色谱(环己烷/乙酸乙酯)后得到标题化合物，得到标题化合物。
TLC Rf=0.42(3：1环己烷：乙酸乙酯)；
LC-MS：RtH8=0.74min.(100％纯度)；APl ES+170；
1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.49(d，1H)，7.72(m，1H)，4.71(s，2H)。
c)5-氟-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸
按照与酸1步骤d)类似的方式使5-氟-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-腈(150mg，0.887mmol)在2N NaOH中水解，得到粗标题化合物。
LC-MS：RtH8=0.58min；(100％纯度，ESI+189)；API ES+189；
1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ11.3(宽峰，1H)，8.36(d，1H)，8.01(m，1H)，5.03(s，2H)。
酸-9：5-三氘代甲氧基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸
a)5-三氘代甲氧基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-腈
向CD3OD(48mg，1.33mmol)在DMSO(2ml)中的溶液中加入氢化钠(53.2mg，1.33mmol，60％的油溶液)，10分钟后，加入5-氟-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-腈(150mg，0.887mmol，酸-8b))。将该反应混合物在90℃加热1h。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用水和盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤，真空蒸发。对粗产物进行硅胶色谱(环己烷/乙酸乙酯)，得到标题化合物。
TLC：Rf＝0.21(3：1环己烷：乙酸乙酯)；
LC-MS：RtH8=0.73min，(93％纯度，ESI+185)；API-ES+185；
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：68.29(d，1H)，7.39(d，1H)，4.68(s，2H)。
b)5-三氘代甲氧基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸
按照与酸1步骤d)类似的方式使5-三氘代甲氧基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-腈(80mg，0.434mmol)在NaOH2N(2ml)中水解，得到粗标题化合物。
LC-MS：RtH8=0.49min；(100％纯度，ESI+204)；API ES+204；
1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.15(d，1H)，7.70(d，1H)，5.03(s，2H)。
酸-10：3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸
a)5-溴代-3-硝基-吡啶-2-甲酸叔丁酯
向冰冷的4.84g(19.59mmol)的5-溴代-3-硝基-吡啶-2-甲酸(CAS954240-89-2)在59ml THF中的溶液中加入239mg(1.96mmol)DMAP和5.56g(25.5mmol)Boc2O，将该反应混合物加热至60℃3h。冷却至0℃后，加入半饱和碳酸氢钠，用EtOAc萃取该混合物。用水和半饱和NaCl水溶液洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，蒸发。通过硅胶色谱法纯化残余物(环己烷-环己烷/EtOAc3：2)，得到标题化合物，为浅褐色固体。
HPLC：RtH8=1.17min；ESIMS[M+H]+=304.1；
1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.11(s，1H)，8.92(s，1H)，1.53(s，9H)。
b)5-氰基-3-硝基-吡啶-2-甲酸叔丁酯
向888mg(2.93mmol)的5-溴代-3-硝基-吡啶-2-甲酸叔丁酯在8.8mlDMF中的溶液中加入206mg(1.76mmol)氰化锌和2mg(0.03mmol)锌粉。用氮气净化该混合物(3次)，加入150mg(0.293mmol)双(三叔丁膦)钯(0)，将该混合物加热至80℃4h。冷却至0℃后，加入水，用EtOAc萃取该混合物，用半饱和NaCl水溶液洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，蒸发。通过硅胶色谱法纯化残余物(环己烷-环己烷/EtOAc1：4)，得到标题化合物，为浅褐色固体。
HPLC：RtH8＝1.04min；ESIMS[M+H]+＝248.0；
1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.39(s，1H)，9.29(s，1H)，1.55(s，9H)。
c)3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸叔丁酯
向130mg(0.522mmol)的5-氰基-3-硝基-吡啶-2-甲酸叔丁酯在3ml水的混合物中加入0.149ml(2.61mmol)乙酸，将该混合物在室温搅拌20min，加入454mg(2.61mmol)连二亚硫酸钠，持续搅拌23h。再加入182mg(1.043mmol)连二亚硫酸钠，将该反应混合物再搅拌48h。用DCM萃取该混合物，用水和饱和NaCl水溶液洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，蒸发，得到标题化合物，为黄色固体。将产物不经进一步纯化用于下一步。
HPLC：RtH9＝0.86min；ESIMS[M+H]+＝220.2；
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.15(d，1H)，7.61(d，1H)，6.95(br.s，2H)，1.55(s，9H)。
d)3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸
在10min内向60mg(0.274mmol)的3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸叔丁酯和0.358ml(2.74mmol)的1，3-二甲氧基苯的混合物中滴加0.59ml(7.66mmol)TFA，将该反应混合物搅拌6h。加入甲苯，蒸发溶剂，得到标题化合物，为黄色固体。将产物不经进一步纯化用于下一步。
HPLC：RtH9＝0.38min；ESIMS[M+H]+＝164.1；
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.05(br.s，1H)，8.16(d，1H)，7.64(d，1H)，7.08(br.s，2H)。
酸-11：3-氨基-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸
a)5-二氟甲基-3-硝基-吡啶-2-甲酸叔丁酯
通过与酸-5类似的反应顺序、在步骤a)中使用5-溴代-3-硝基-吡啶-2-甲酸而不是3-氨基-5-氯-吡嗪-2-甲酸甲酯并且不使用步骤b)制备标题化合物。
HPLC：RtH9＝1.07min；ESIMS[M+H]+＝275.3；
1H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ9.18(s，1H)，8.82(s，1H)，7.31(t，1H，CHF2)，1.55(s，9H)。
b)5-二氟甲基-3-硝基-吡啶-2-甲酸
在5ml DCM和2.5ml TFA的混合物中溶解345mg(1.26mmol)5-二氟甲基-3-硝基-吡啶-2-甲酸叔丁酯，将该反应混合物搅拌4h。加入甲苯，蒸发溶剂，得到标题化合物，为无色固体。
HPLC：RtH9＝0.31min；ESIMS[2M-H]-＝435.3；
1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ14.59(br.s，1H)，9.16(s，1H)，8.80(s，1H)，7.31(t，1H，CHF2)。
c)3-氨基-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸
向265mg(1.22mmol)5-二氟甲基-3-硝基-吡啶-2-甲酸在EtOH中的溶液中加入50mg阮内镍(Degussa B113W)，将该反应混合物在氢气气氛中保持振摇16h。过滤出催化剂(硅藻土)，用EtOH洗涤，蒸发滤液，得到标题化合物，为黄白色固体。
HPLC：RtH9＝0.34min；ESIMS[M+H]+＝189.2；
1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ7.98(s，1H)，7.39(s，1H)，7.09(t，1H，CHF2)，7.02(br.s，2H)。
酸-12：3-氯-5-二氟甲氧基-吡啶-2-甲酸
a)3-氯-5-二氟甲氧基-吡啶-2-腈
向3-氯-5-羟基-吡啶-2-腈(330mg，2.03mmol)在DMF(10ml)中的溶液中加入K2CO3(1.68g，12.2mmol)和氯二氟乙酸钠(1.29g，8.1mmol)，将该反应混合物在100℃加热10min。用TBME稀释冷反应混合物，用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。进行硅胶闪蒸塔色谱后得到标题化合物(己烷-己烷-EtOAc1∶1)，为黄色油状物：TLC(己烷-EtOAc2∶1)：Rf＝0.54；
HPLC：RtH5＝0.966min；ESIMS：203，205[(M-H)-]；
1H NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.41(d，1H)，7.61(d，1H)，6.60(t，1H)。
b)3-氯-5-二氟甲氧基-吡啶-2-甲酸
向3-氯-5-二氟甲氧基-吡啶-2-腈(470mg，2.29mmol)在二噁烷(18ml)中的溶液中加入1N NaOH(8.0ml，8mmol)，将该反应混合物在70℃搅拌过夜。用4N HCl酸化冷反应混合物，蒸发至干。将残余物混悬于CH2Cl2-MeOH8∶1，过滤，浓缩，得到标题化合物，为黄色油状物。
HPLC：RtH5＝0.664min；ESIMS：222，224[(M-H)-]；
1H NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.38(br s，1H)，7.82(d，1H)，7.06(t，1H)。
酸13：5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸
a)5-溴代-3-甲基-吡啶-2-甲酸叔丁酯
向10.20g(47.2mmol)5-溴代-3-甲基-吡啶-2-甲酸和20.61g(94mmol)二碳酸二叔丁酯在100ml THF中的溶液中加入0.577g DMAP。即刻开始放出CO2，将该混合物在RT搅拌2h。加入TBME和饱和NaHCO3水溶液。分离各层，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机层，用MgSO4.H2O干燥。进行硅胶色谱(己烷/EtOAc1-7％)，得到标题化合物，为黄色液体。
HPLC：RtH3＝3.018min；ESIMS[M+H]+＝272，274(1Br)；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.59s，1H)，7.77(s，1H)，2.52(s，3H)，1.65(s，9H)。
b)5-溴代-3-甲基-吡啶-2-甲酸叔丁酯
在氮气气氛中将6.0g(22.05mmol)的5-溴代-3-甲基-吡啶-2-甲酸叔丁酯、1.813g(15.43mmol)Zn(CN)2、0.144g Zn粉(2.205mmol)和0.571g(0.551mmol)Pd2(dba)3.CHCl3混悬于10ml DMF。加入tBu3P(0.321ml，1.323mmol)，将该混合物在60℃搅拌5h。冷却后，用TBME稀释该混合物，用硅藻土过滤，用盐水洗涤3次。通过硅胶柱色谱法纯化粗产物(己烷/EtOAc5-15％)，得到标题化合物，为黄白色固体。TLC(己烷/EtOAc3∶1)：Rf＝0.31；HPLC：RtH3＝2.431min；ESIMS[M+Na]+＝241；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.78(s，1H)，7.88(s，1H)，2.56(s，3H)，1.67(s，9H)；Ft-IR：2231cm-1(CN)。
c)5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸
向8.50g(38.9mmol)5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸叔丁酯在51ml(389mmol)1，3-二甲氧基苯中的溶液中加入85ml TFA，搅拌6.5h。用甲苯稀释该反应混合物，蒸发。将残余物溶于甲苯，蒸发(2x)。使产物从TBME/己烷中结晶，得到标题化合物，为白色粉末。HPLC：RtH1＝2.314min；ESIMS[M+Na]+＝163；1H-NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.77(s，1H)，8.07(s，1H)，2.87(s，3H)。
酸-14：3-氯-5-三氘代-甲氧基-吡啶-2-甲酸
a)3-氯-5-羟基-吡啶-2-腈
向氩气脱气的乙酸5，6-二氯-吡啶-3-基酯4.87g，23.66mmol)在DMF(50ml)中的溶液中加入Zn(CN)2(1.278g，10.88mmol)、锌粉(0.07g，1.06mmol)和DPPF PdCl2(0.996g，1.18mmol)，将得到的混合物在150℃加热18h。用TBME和水稀释该反应混合物，用硅藻土过滤，用TBME萃取产物。用盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。从EtOAc-己烷中重结晶后得到标题化合物，为浅褐色固体：TLC(CH2Cl2-MeOH19∶1)：Rf＝0.22；HPLC：RtH5＝0.677min；ESIMS：153，155[(M-H)-]；
1H NMR(360MHz，CD3OD)：δ8.19(d，1H)，7.41(d，1H)。
b)3-氯-5-三氘代-甲氧基-吡啶-2-腈
在0℃向3-氯-5-羟基-吡啶-2-腈(0.855g，5.5mmol)在THF(50ml)中的溶液中加入CD3OD(0.292ml，7.19mmol)和PPh3(2.176g，8.30mmol)，然后滴加DIAD(1.613ml，8.30mmol)。在0-5℃搅拌1h后，浓缩该反应混合物。进行硅胶闪蒸塔色谱后得到标题化合物(甲苯-EtOAc3∶1)，为无色固体：TLC(甲苯-EtOAc1∶1)：Rf＝0.57；
HPLC：RtH5＝0.866min；ESIMS：172，174[(M+H)+]；1H NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.30(d，1H)，7.31(d，1H)。
c)3-氯-5-三氘代-甲氧基-吡啶-2-甲酸
向3-氯-5-三氘代-甲氧基-吡啶-2-腈(760mg，4.43mmol)在二噁烷(10ml)中的溶液中加入4N NaOH(11.07ml，44.3mmol)，将该反应混合物在85℃搅拌过夜。用4N HCl酸化冷反应混合物，用EtOAc萃取。用盐水洗涤合并的萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。从EtOAc-二异丙基醚中结晶后得到标题化合物，为无色固体。
HPLC：RtH5＝0.538min；ESIMS：191，193[(M+H)+]；
1H NMR(360MHz，CDCl3)：δ8.21(d，1H)，7.38(d，1H)。
酸-15：5-二氟甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸
a)5-二氟甲氧基-3-甲基-吡啶-2-腈
将5-羟基-3-甲基-吡啶-2-腈(CAS登记号228867-86-5)(228mg，1.70mmol)、氯二氟乙酸钠(CAS登记号1895-39-2)(518mg，3.40mmol)和K2CO3(705mg，5.10mmol)在DMF(7ml)中的溶液在100℃搅拌0.5h。用EtOAc稀释该反应混合物，用饱和NH4Cl水溶液和盐水洗涤。再用EtOAc萃取水层，用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，浓缩滤液。进行硅胶快速色谱后得到标题化合物(环己烷/EtOAc梯度0-3min95∶5，3-35min95∶5-60∶40)。
HPLC RtH10＝0.87min；ESIMS：185[(M+H)+]；
1H NMR(400MHz，CDCl3)：8.40(d，1H)，7.45(d，1H)，6.64(t，1H)，2.61(s，3H)。
b)5-二氟甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸
向5-二氟甲氧基-3-甲基-吡啶-2-腈(145mg，0.787mmol)在EtOH(5ml)中的溶液中加入1M NaOH水溶液(2.5ml)。将该反应混合物在70℃搅拌7h，然后在室温搅拌9h。用Et2O稀释，用水萃取2次。再用Et2O反萃取合并的水层，用1M HCl水溶液酸化至pH2，用TBME萃取2次。用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，浓缩滤液，得到标题化合物，为白色固体，不经进一步纯化用于下一步。
HPLC RtH10＝0.61min；ESIMS：204[(M+H)+]；
1H NMR(400MHz，MeOD)：8.32(d，1H)，7.61(d，1H)，7.06(t，1H)，2.64(s，3H)。
酸-16：5-氯-4，6-二氘代-3-三氘代甲基-吡啶-2-甲酸
用1ml40％NaOD的D2O溶液处理500mg(2.91mmol)的5-氯-3-甲基-吡啶-2-甲酸(CAS Nr.：886365-46-4)在9ml D2O(99，96％D)中的混悬液。将该均匀溶液在配有Synthos3000微波仪器的100ml特氟隆容器中加热。将该混合物在160℃加热5h，冷却。对产物的1H-NMR和MS分析显示，氘代已经进行至高程度。仅存在少量四氘代衍生物。用2N HCl将该反应混合物酸化至pH3，用EtOAc萃取。用MgSO4.H2O干燥有机相，蒸发，得到标题化合物，为白色固体，纯度足以用于进一步转化。
HPLC：RtH1＝2.820min；ESIMS[M+H]+＝177(5D)；
1H-NMR(360MHz，D2O)：δ非氘代杂质。
酸-17：4-二氟甲基-6-甲氧基-哒嗪-3-甲酸钠
a)2-重氮基-4，4-二氟-3-氧代-丁酸乙酯
在0℃在30min内向4，4-二氟-3-氧代-丁酸乙酯(5.0g，29mmol)和4-乙酰基氨基-苯磺酰基叠氮化物(7.95g，32mmol)在ACN(50mL)中的溶液中加入NEt3(6.1mL，43，8mmol)。将该反应混合物在0-5℃搅拌2h，在25℃搅拌过夜，然后用TBME稀释，过滤。用10％NaH2PO4水溶液和盐水洗涤滤，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。进行硅胶闪蒸塔色谱后得到标题化合物(己烷-己烷-TBME1∶1)，为黄色油状物。
TLC(己烷-TBME1∶1)：Rf＝0.46；
1H NMR(360MHz，CDCl3)：δ6.62(t，1H)，4.38和4.24(q，2H)，1.38和1.31(t，3H)。
b)(E)-4-重氮基-3-二氟甲基-戊-2-烯二酸5-乙酯1-甲酯
向2-重氮基-4，4-二氟-3-氧代-丁酸乙酯(0.5g，2.6mmol)在Et2O(10mL)中的溶液中加入甲氧基羰基亚甲基-三苯基磷环丁烷(1.3g，3.9mmol)，将该反应混合物在25℃搅拌3天。通过硅胶垫过滤该反应混合物，浓缩，进行硅胶闪蒸塔色谱纯化后得到标题化合物(己烷-己烷-TBME1∶1)，为黄色油状物。
TLC(己烷-TBME1∶1)：Rf＝0.60；
1H NMR(360MHz，CDCl3)：δ6.82(t，1H)，6.32(s，1H)，4.29(q，2H)，3.79(s，3H)，1.34(t，3H)。
c)4-二氟甲基-6-甲氧基-哒嗪-3-甲酸乙酯
向(E)-4-重氮基-3-二氟甲基-戊-2-烯二酸5-乙酯1-甲酯(0.18g，0.78mmol)在Et2O(10ml)中的溶液中加入PPh3(0.31g，1.18mmol)，将该反应混合物在25℃搅拌3天。浓缩该反应混合物，通过硅胶闪蒸塔色谱法(己烷-己烷-TBME1∶1)纯化，得到标题化合物，为黄色油状物。
TLC(己烷-TBME1∶1)：Rf＝0.31；
HPLC：RtH5＝0.877min；
1H NMR(360MHz，CDCl3)：δ7.41(t，1H)，7.13(s，1H)，4.52(q，2H)，4.25(s，3H)，1.45(t，3H)。
d)4-二氟甲基-6-甲氧基-哒嗪-3-甲酸钠
向4-二氟甲基-6-甲氧基-哒嗪-3-甲酸乙酯(0.13g，0.56mmol)在二噁烷(2ml)中的溶液中加入4N NaOH(0.7ml，2.8mmol)，将该反应混合物在25℃搅拌0.5h。添加4N HCl(0.56mL，2.24mmol)后，将该反应混合物蒸发至干。将粗产物再溶于DMF，再浓缩，得到标题化合物，为淡黄色固体，将其照此用于下一步。
HPLC：RtH5＝0.420min；ESIMS：203[(M-H)-]。
酸-18：5-氰基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸
a)5-氯-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸
按照与酸-1步骤a)-d)类似顺序的方式、在烷基化步骤b)中使用三氘代甲基碘而不是碘甲烷由(2，5-二氯-吡啶-3-基)-甲醇制备5-氯-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸。
LC-MS：RtH8＝0.77min.(100％纯度，ES+205，207)，API ES-203，205；
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.47(d，1H)，8.27(m，1H)，4.87(s，2H)。
b)5-氯-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸苄酯
将5-氯-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸(100mg，0.489mmol)和2-苄基-1，3-二环己基-异脲(169mg，0.538mmol)在甲苯(2ml)中的混合物在90℃搅拌3。过滤该反应混合物，真空蒸发。进行硅胶色谱(环己烷/乙酸乙酯)，得到标题化合物。
LC-MS：RtH8＝1.15min.(100％纯度，ES+295，297)；
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.85(d，1H)，8.10(d，1H)，7.50(m，2H)，7.40(m，3H)，5.46(s，2H)，4.82(s，2H)。
c)5-氰基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸苄酯
按照与酸1步骤c)类似的方式使5-氯-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸苄酯(120mg，0.407mmol)与锌粉(2.66mg，0.04mmol)、氰化锌(28.7mg，0.244mmol)和双(三叔丁膦)钯(0)催化剂(20.81mg，0.041mmol)在80℃反应3h，在进行硅胶色谱(环己烷/乙酸乙酯)后得到标题化合物。TLC Rf＝0.40(3：1环己烷：乙酸乙酯)；
LC-MS：RtH8＝1.04.(100％，ES+286)；
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.87(d，1H)，8.39(d，1H)，7.50(m，2H)，7.40(m，3H)，5.47(s，2H)，4.82(s，2H)。
d)5-氰基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸
在室温和大气压下用Pd/C(10％，18.65mg)将5-氰基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸苄酯(50mg，0.175mmol)在乙醇(1.8ml)中的溶液氢化18小时。过滤该反应混合物，真空蒸发。使残余物分配在乙醚与2N NaOH溶液之间。用2N HCl溶液使水相呈酸性，用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机相，用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，得到标题化合物，为玻璃状固体。
LC-MS：RtH8＝0.48min.(100％纯度，ES-194)；
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.81(d，1H)，8.60(m，1H)，5.05(s，2H)。
酸-19：3-氯-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸
a)5-溴代-3-氯-吡啶-2-甲酸叔丁酯
向11.82g(50mmol)的5-溴代-3-氯-吡啶-2-甲酸(CAS1189513-51-6)在150ml THF中的冰冷溶液中加入611mg(5mmol)DMAP和14.19g(65mmol)Boc2O，将该反应混合物加热至60℃3h。冷却至0℃后，加入半饱和碳酸氢钠水溶液，用EtOAc萃取该混合物。用半饱和NaCl水溶液洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，蒸发。通过硅胶色谱法纯化残余物(环己烷-环己烷/EtOAc1：1)，得到标题化合物，为无色油状物。
HPLC：RtH8＝1.22min；ESIMS[M-tBu]+＝237.8；
1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ8.73(d，1H)，8.52(d，1H)，1.55(s，9H)。
b)3-氯-5-乙烯基-吡啶-2-甲酸叔丁酯
用氮气净化1.755g(6mmol)5-溴代-3-氯-吡啶-2-甲酸叔丁酯和884mg(6.6mmol)三氟(乙烯基)硼酸钾在18ml二噁烷中的混合物，加入1.67ml(12mmol)三乙胺和153mg(0.3mmol)双(三叔丁膦)钯(0)，将该混合物加热至80℃0.5h。冷却至室温和添加EtOAc后，通过Hyflo过滤该混合物，蒸发滤液。通过硅胶色谱法纯化残余物(环己烷-己烷/EtOAc7：3)，得到标题化合物，为黄色油状物。
HPLC：RtH8＝1.13min；ESIMS[M-tBu]+＝184.0；
1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ8.64(s，1H)，8.24(s，1H)，6.79(dd，1H)，6.18(d，1H)，5.56(d，1H)，1.55(s，9H)。
c)3-氯-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸
通过与酸-5步骤c)和d)类似的反应顺序、使用3-氯-5-乙烯基-吡啶-2-甲酸叔丁酯而不是3-(二叔丁氧羰基-氨基)-5-乙烯基-吡嗪-2-甲酸甲酯[酸-5步骤c]]、然后按照与酸-11步骤b)方法类似的方式裂解叔丁基酯制备标题化合物。
HPLC：RtH9＝0.41min；ESIMS[M+H]+＝207.8；
1H NMR(600MHz，DMSO-d6)：14.30(br.s，1H)，8.78(s，1H)，8.34(s，1H)，7.20(t，1H，CHF2)。
酸-20：3-氯-5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸
a)1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-氘代甲醛
在-78℃在氮气气氛中向1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3]吡啶-5-溴化物的溶液(18.8g，53.2mmol，CAS：858116-66-2)中滴加丁基锂(23.4ml，58.5mmol，2.5molar的己烷溶液)。在该温度搅拌45分钟后，缓慢加入氘代-D1-DMF(6.26ml，80mmol，98％，来自Armar)的THF(5ml)溶液，添加完成后15分钟除去冷却浴。在0℃通过添加1N乙酸水溶液(5ml)使反应停止，用乙酸乙酯稀释。用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤有机相，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。17.1g(94％收率)。TLC Rf＝0.55(5：1环己烷：乙酸乙酯)。LC-MS RtH9＝1.54min.(89％纯度，ES+304)，API MS ES+304。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：8.79(d，1H)，8.40(d，1H)，7.42(d，1H)，6.72(d，1H)，1.89(七重峰，3H)，1.15(d，18H)。将粗品用于下一步。
b)(1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-二氘代甲醇
在室温向1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3]吡啶-5-氘代甲醛(17.1g，50.1mmol)在乙醇(250ml)中的溶液中加入氘化硼钠(2.6g，62.2mmol)。持续搅拌2h，用1N乙酸谨慎地使反应停止。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。18g油状物。进行硅胶色谱(89：11环己烷：乙酸乙酯)，得到标题化合物，为白色固体。12.55g(82％收率)。TLC Rf＝0.46(2：1环己烷：乙酸乙酯)。LC-MS RtH9＝1.40min.(100％纯度，ES+307)。API MS ES+307。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：8.29(d，1H)，7.91(d，1H)，7.35(d，1H)，6.57(d，1H)，1.88(七重峰，3H)，1.15(d，18H)。
c)5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶
在0℃向(1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)-二氘代甲醇(5g，16.31mmol)在干DMF(125ml)中的溶液中加入氢化钠(718mg，17.94mmol，60％的油溶液)。15分钟后，加入D3-碘甲烷(1.354ml，21.21mmol)，在室温持续搅拌3h。用水使该反应混合物猝灭，用乙酸乙酯稀释。用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤有机相，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。4g黄色油状物。进行硅胶色谱(85：15环己烷：乙酸乙酯)，得到标题化合物。3.235g(61.3％收率)。TLC Rf＝0.55(2：1环己烷：乙酸乙酯)。LC-MS RtH8＝1.68min.(96％纯度，ES+324)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：8.26(d，1H)，7.88(d，1H)，7.33(d，1H)，6.56(d，1H)，1.88(七重峰，3H)，1.15(d，18H)。
d)5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶
向5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(3.253g，10.05mmol)在干THF(20ml)中的溶液中加入TBAF的1M的THF溶液(10.56ml，10.56mmol)。将该反应体系在室温搅拌18h。将该反应混合物倾入水，用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机相，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。4.31g。进行硅胶色谱(环己烷/乙酸乙酯)，得到标题化合物。791mg(47.1％收率)。TLC Rf＝0.13(1：2环己烷：乙酸乙酯)。LC-MSRtH8＝0.54min.(100％纯度，ES+168)。API MS ESI+168。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：10.50(宽峰s，1H)，8.36(d，1H)，7.98(d，1H)，7.40(m，1H)，6.53(m，1H)。
e)5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶7-氧化物
在0℃向5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(780mg，4.66mmol)在DME(20ml)中的溶液中加入m-CPBA(1127mg，6.53mmol)。在室温持续搅拌过夜。真空除去溶剂，将粗产物混悬于水，用饱和碳酸钾溶液将pH调整至9。持续搅拌，用氯化钠饱和该水溶液，用乙酸乙酯萃取。用硫酸钠干燥有机相，过滤，蒸发。988mg棕色油状物，不经进一步纯化用于下一步。LC-MS RtH8＝0.52min.(73％纯度，ES+184)。APIMS ESI+184。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：12.81(宽峰s，1H)，8.26(d，1H)，7.68(d，1H)，7.41(m，1H)，6.55(m，1H)。
f)(6-溴代-5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-吡咯并[2，3-b]吡啶-1-基)-苯基-甲酮
在氩气气氛中在rt在30分钟内将苯甲酰溴(1.319ml，11.19mmol)在二氯甲烷(2ml)和HMDS(0.938ml，4.48mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液同时滴加到5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶7-氧化物(988mg，4.48mmol)在二氯甲烷(3ml)中的溶液中。在室温持续搅拌过夜。白色沉淀。18h搅拌后，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤该混合物，用硫酸镁干燥，过滤，蒸发。52mg棕色油状物。进行硅胶色谱(环己烷/EtOAc)，得到标题化合物。326mg(21％收率)。LC-MS RtH8＝1.27min.(90％纯度，ES+350/352)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：8.01(s，1H)，7.91(dd，2H)，7.77(d，1H)，7.64(t，1H)，7.53(t，2H)，6.56(d，1H)。
g)6-溴代-5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-吡咯并[2，3-b]吡啶
向(6-溴代-5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-吡咯并[2，3-b]吡啶-1-基)-苯基-甲酮(320mg，0.91mmol)在甲醇(8ml)中的溶液中加入2M NaOH溶液(4.57ml，9.14mmol)，将该反应混合物在rt搅拌2天。过滤出反应中形成的白色固体，干燥。124mg。真空蒸发滤液，用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤，蒸发。55mg。合并固体：179mg(80％收率)。LC-MS RtH8＝0.84min.(85％纯度，ES+246/248)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：10.78(宽峰s，1H)，8.06(s，1H)，7.44(m，1H)，6.53(m，1H)。
h)6-氰基-5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-吡咯并[2，3-b]吡啶
在4ml微波小瓶中用氩气给6-溴代-5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-吡咯并[2，3-b]吡啶(120mg，0.488mmol)、锌(0.319mg，4.88μmol)和氰化锌(34.4mg，0.293mmol)在干DMF(1.5ml)中的混合物脱气20分钟。加入双(三叔丁膦)钯(0)(24.92mg，0.049mmol)，密封小瓶，在80℃加热4h。将该反应混合物倾入水/冰/乙酸乙酯混合物，用盐水将有机层洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。对粗产物(164mg)进行硅胶色谱(环己烷/EtOAc)，得到标题化合物，为白色固体。71mg(76％收率)。LC-MS RtH8＝0.73min.(100％纯度，ES+193)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：10.14(宽峰s，1H)，8.15(s，1H)，7.66(m，1H)，6.64(m，1H)。
i)5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸
将6-氰基-5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-吡咯并[2，3-b]吡啶(70mg，0.364mmol)在2M NaOH(2ml)中的混悬液在100℃搅拌18h。用乙醚洗涤该反应混合物，用2M HCl溶液使水层呈酸性(pH6-7)。过滤出白色固体，用水洗涤。63mg白色固体。用乙酸乙酯萃取滤液，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发。12mg白色固体。合并的固体：75mg白色固体(98％收率)。LC-MS RtH8＝0.60min.(100％纯度，ES+212)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)：8.48(s，1H)，7.60(m，1H)，6.67(m，1H)。
j)3-氯-5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸
向5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸(70mg，0.331mmol)在干DMF(12ml)中的溶液中加入NCS(44.3mg，0.331mmol)，在氩气气氛中将该反应混合物在rt搅拌20小时。用乙酸乙酯稀释该反应混合物，用盐水洗涤。过滤出形成的沉淀，用乙酸乙酯洗涤，真空干燥。在水中搅拌残余物(300mg)，过滤出不溶物，得到20mg(25％收率)淡黄色固体。LC-MS RtH8＝0.78min.(100％纯度，ES-244)。1H-NMR(400MHz，DMSO-D6)：13.04(s，1H)，12.28(宽峰s，1H，NH)，8.06(s，1H)，7.91(d，1H)。
酸-21：5-三氘代甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸
按照与酸-6类似的反应顺序、在第一步中使用CD3OD而不是甲醇制备5-三氘代甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸；HPLC：RtH10＝0.42min；ESIMS：171[(M+H)+]；
1H NMR(400MHz，MeOD)：δ8.13(d，1H)，7.36(d，1H)，2.65(s，3H)。
酸-22：5-氟-3-甲基-吡啶-2-甲酸
a)5-氟-3-甲基-吡啶-2-腈
将2-氯-5-氟-3-甲基-吡啶(CAS38186-84-4，408mg，2.750mmol)、Zn(CN)2(230mg，1.923mmol)和Pd(PPh3)4(190mg，0.165mmol)在DMF(8ml)中的溶液在120℃在微波中搅拌0.5h。用hyflo过滤该反应混合物，用TBME和H2O稀释，用盐水萃取。再用TBME反萃取水相，用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，浓缩。进行硅胶快速色谱(己烷-EtOAc100：0-80：20)，得到标题化合物。
HPLC：RtH12＝0.72min；1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.42(d，1H)，7.42-7.39(m，1H)，2.61(s，3H)。
b)5-氟-3-甲基-吡啶-2-甲酸
将在浓HCl水溶液(1.5ml)中的5-氟-3-甲基-吡啶-2-腈(254mg，1.866mmol)在密封玻璃小瓶内在120℃搅拌2h。用固体NaOH碱化该反应混合物，用TBME萃取2次。用H2O洗涤合并的有机相。用2M HCl水溶液将合并的水相酸化至pH2，用TMBE萃取3次，用Na2SO4干燥，过滤，浓缩。将粗产物不经进一步纯化用于下一步。
HPLC：RtH12＝0.48min；ESIMS[M+H]+＝156；1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ8.37(d，1H)，7.63(dd，1H)，2.64(s，3H)。
催化剂1：3，5-双-三氟甲基-苯甲酸(S)-(6-羟基-喹啉-4-基)-((1S，2R，4S，5R)-5-乙烯基-1-氮杂-双环[2.2.2]辛-2-基)-甲酯
a)3，5-双-三氟甲基-苯甲酸(S)-(6-三异丙基硅烷基氧基-喹啉-4-基)-((1S，2R，4S，5R)-5-乙烯基-1-氮杂-双环[2.2.2]辛-2-基)-甲酯
向(S)-(6-三异丙基硅烷基氧基-喹啉-4-基)-((1S，2R，4S，5R)-5-乙烯基-1-氮杂-双环[2.2.2]辛-2-基)-甲醇(Deng等人，J.Amer.Chem.Soc.2006，128，732；CAS Nr.：876269-55-5；3.22g，6.90mmol)和Et3N(1.442ml，10.35mmol)在DCM中的溶液中滴加3，5-双-三氟甲基-苯甲酰氯(2.480g，8.97mmol)。TLC(己烷/(EtOAc/MeOH95：5)1：1)：Rf＝0.44；HPLC：RtH5＝3.256min；ESIMS[M+H]+＝707；1H-NMR(DMSO-d6，360MHz)：δ8.76(d，1H)，8.53(s，2H)，8.00(d，1H)，7.73(d，1H)，7.59(s，1H)，7.41(d，1H)，6.49(d，1H)，6.09(ddd，1H)，5.11(d，1H)，5.07(d，1H)，3.59(q，1H)，2.85-2.73(m，2H)，2.65-2.56(m，2H)，2.33-2.23(m，1H)，1.96-1.50(m，5H)，1.38-1.25(m，3H)，1.10(d，18H)。
b)3，5-双-三氟甲基-苯甲酸(S)-(6-羟基-喹啉-4-基)-((1S，2R，4S，5R)-5-乙烯基-1-氮杂-双环[2.2.2]辛-2-基)-甲酯
向化合物催化剂1a)(4.88g，6.90mmol)在50ml THF中的溶液中滴加HF-Py(1.8ml，68mmol)。该反应体系适度放热，将得到的黄色溶液在rt搅拌30min。用EtOAc稀释该混合物，用饱和NaHCO3水溶液(3x)和盐水洗涤。用Na2SO4稀释有机层，蒸发。
通过硅胶柱色谱法纯化粗产物(己烷/(EtOAc/MeOH20：1)30-75％)，得到标题化合物，为淡黄色固体。TLC(己烷/(EtOAc/MeOH5％]1：3)：Rf＝0.28；HPLC：RtH3＝2.464min[M+H]+551；1H-NMR(DMSO-d6，600MHz)：δ10.20(s，1H)，8.72(d，1H)，8.58(s，2H)，8.51(s，1H)，7.89(d，1H)，7.61(d，1H)，7.49(s，1H)，7.33(d，1H)，6.49(d，1H)，6.07(ddd，1H)，5.10(d，1H)，5.07(d，1H)，3.50-3.43(m，1H)，2.88-2.73(m，2H)，2.67-2.50(m，2H)，2.23(q，1H)，1.93-1.83(m，1H)，1.78(s，1H)，1.70-1.61(m1H)，1.60-1.52(m，1H)，1.50-1.44(m，1H)。

Claims (6)

1.式(I)的化合物及其可药用盐
Figure FDA0000380458040000011
其中定义了R1、R2、R3、R4、R5和R6，从而得到选自如下的化合物：
5-氯-3-甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-三-氘代-甲氧基-吡嗪-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-丙-2-炔氧基-吡嗪-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡嗪-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氟-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-三氘代甲氧基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-三氘代甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4,5-二氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氘代甲氧基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4,5-二氟-苯基]-酰胺；
4,6-二氘代-5-氯-3-三氘代甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3-二氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4,5-二氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-甲氧基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-二氟甲氧基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氯-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氯-3-氟-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氘代-甲氧基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
2，5-二甲基-噁唑-4-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-丙-2-炔氧基-吡嗪-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3，6-二氢-2H-[1,4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡嗪-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
4-二氟甲基-6-甲氧基-哒嗪-3-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-三氘代甲氧基甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氘代甲氧基-二氘代甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-6-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氟-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6-二甲基-6-三氟-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-三氘代甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6,6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲氧基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6,6-双-氟甲基-3-甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氯-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6,6-双-氟甲基-3-甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6，6-三-氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6,6-双-氟甲基-3-甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡嗪-2-甲酸[3-(5-氨基-6,6-双-氟甲基-3-甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6,6-双-氟甲基-3-甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-6，6-双-氟甲基-3-甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
5-二氟甲基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3，6，6-三-氟甲基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-二氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6，6-三-氟甲基-3,6-氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-三氟甲基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6，6-三-氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3，5-二氯-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6，6-三-氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氨基-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6，6-三-氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
3-氯-5-氰基-吡啶-2-甲酸[3-(5-氨基-3,6，6-三-氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-酰胺；
N-[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-甲氧基-2-甲基-烟酰胺；
N-[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-三氘代甲氧基-2-甲基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-乙氧基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-甲氧基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-三氘代甲氧基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-五氘代乙氧基-烟酰胺；
N-[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-2-氯-6-甲氧基-烟酰胺；
N-[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-2-氯-6-乙氧基-烟酰胺；
2-氨基-N-[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-环丙基甲氧基-烟酰胺；和
2-氨基-N-[3-(5-氨基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氢-2H-[1，4]噁嗪-3-基)-4-氟-苯基]-6-(2，2,2-三氟-乙氧基)-烟酰胺。
2.根据权利要求1的化合物或其可药用盐，用作药物。
3.根据权利要求1的化合物或其可药用盐，用于治疗或预防阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损。
4.药物组合物，其包含作为活性成分的根据权利要求1的化合物或其可药用盐和可药用载体或稀释剂。
5.根据权利要求1的化合物或其可药用盐在制备用于治疗或预防阿尔茨海默氏病或轻度认知缺损的药物中的用途。
6.组合产品，其包含治疗有效量的根据权利要求1的化合物或其可药用盐和第二种药物，用于同时或依次施用。
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