MX2013008111A - Derivados de oxazina y su uso en el tratamiento de transtornos neurologicos. - Google Patents

Derivados de oxazina y su uso en el tratamiento de transtornos neurologicos.

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Marina Tintelnot-Blomley
Siem Jacob Veenstra
Rainer Machauer
Konstanze Hurth
Heinrich Rueeger
Rainer Martin Lueoend
Ulf Neumann
Markus Voegtle
Michael Schaefer
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Abstract

La invención se refiere a novedosos compuestos heterocíclicos de la fórmula (I): (Ver Formula) en donde todas las variables son como se definen en la memoria descriptiva, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, a su uso médico, y a medicamentos que los comprenden.

Description

DERIVADOS DE OXAZINA Y SU USO EN EL TRATAMI ENTO DE TRASTORNOS NEU ROLÓGICOS La enfermedad de Alzheimer es un trastorno neurodegenerativo devastador. Sus formas esporádicas afectan a la población anciana (fuerte i ncremento en la incidencia en los mayores de 75 años de edad) ; en adición , hay diversas formas familiares con un establecimiento de la enfermedad en la cuarta o quinta década de vida . Patológ icamente, se caracteriza por la presencia de placas seniles extracelulares, y madejas neurofibrilares intracelulares en los cerebros de los pacientes. Los constituyentes n ucleares de las placas seniles son pequeños péptidos amiloides de 4 kDa . Éstos se generan mediante el procesamiento proteolítico de u na protetna transmembrana g rande, la proteína precursora de amiloide (APP). La disociación de la proteína precursora de amiloide (APP) mediante la beta-secretasa (BACE- 1 ) libera el fragmento APP-beta soluble, mientras q ue el término C de 99 aminoácidos de largo permanece atado a la membrana. Este fragmento C-terminal subsig u ientemente es procesado proteol ítícamente por la gamma-secretasa (un complejo de múltiples enzimas de membrana) para generar péptidos amiloides de d iversas longitudes, predominantemente de 40 y 42 aminoácidos de largo (Hardy J , Selkoe DJ (2002) Science; 297 (5580): 353-356) .
Si, bajo condiciones patológicas, la generación de estos péptidos se presenta a un índice incrementado , o si se altera su remoción del cerebro , las mayores concentraciones de péptido amiloide en el cerebro conducen a la formación de oligómeros, fibrilos, y eventualmente placas (Farris W y colaboradores (2007) Am. J. Pathol.; 171 (1): 241-251). Se ha demostrado que el depósito de péptidos amiloides y placas en el cerebro es el primer suceso mensurable en la patogénesis de la Enfermedad de Alzheimer, y que es el desencadenante de la pérdida de las sinapsis, de los contactos sinápticos, y de las neuronas (Grimmer T y colaboradores (2009) Neurobiology of Aging; 30 (12): 1902-1909). La atrofia cerebral causada por la pérdida masiva de neuronas es seguida por deterioros en la cognición, en la memoria, en la orientación, y en la capacidad para llevar a cabo las tareas de la vida diaria, es decir, una demencia clínicamente evidente (Okello A y colaboradores (2009) Neurology; 73 (10): 754-760).
BACE-1, también conocida como Asp2 o Memapsina 2, es una próteasa aspártica transmembrana altamente expresada en las neuronas. Se co-localiza con su sustrato de la proteína precursora de amiloide (APP) en el aparato de Golgi y en los compartimientos endocíticos (Willem M, Lammich S, Haass C (2009) Semin. Cell Dev. Biol; 20 (2): 175-182). Los estudios en los ratones con eliminación genética han demostrado la ausencia de formación del péptido amiloide, mientras que los animales son saludables y fértiles (Ohno M y colaboradores (2007) Neurobiol. Dis.; 26 (1): 134-145). La ablación genética de BACE-1 en los ratones que sobre-expresan la proteína precursora de amiloide (APP) ha demostrado la ausencia de formación de placa, y la reversión de los déficits cognitivos (Ohno M y colaboradores (2004) Neuron; 41 (1): 27-33). Los niveles de BACE- 1 son elevados en los cerebros de los pacientes con la enfermedad de Alzheimer esporádica (Hampel H, Shen y (2009) Scand. J. Clin.
Lab. Invest.; 69 (1): 8-12).
Tomados juntos, estos hallazgos sugieren que la inhibición de BACE-1 puede ser una estrategia terapéutica favorable para la enfermedad de Alzheimer.
La presente invención se refiere a novedosos derivados de oxazina que tienen una actividad inhibidora de BACE, a su preparación, a su uso médico, y a medicamentos que los comprenden.
De una manera más particular, en un primer aspecto, la invención se refiere a compuestos de la fórmula (I): en donde Ri, R2, R3, , 5 y Re se definen como para proporcionar un compuesto seleccionado a partir de: [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-cloro-3-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-d¡fluoro-met¡l-3,6-d¡h¡dro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-tris-deutero-metoxi-pirazin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenll]-amlda del ácido 3-amino-5-prop-2-iniloxi-pirazin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-pirazin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metil-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-fluoro-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-trideutero-metoxi-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-ciano-pir¡din-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-trideutero-metox¡-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4,5-difluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)- 4,5-difluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-trideutero-metoxi-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4,5-difluoro-fenil]-amida del ácido 4,6-dideutero-5-cloro-3-trideutero-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-met¡l-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-metoxi-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-difluoro-metoxi-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]- oxaz¡n-3-¡l)-4-fluoro-fenil]-am¡da del ácido 5-cloro-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-cloro-3-fluoro-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dih¡dro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-trideutero-metoxi-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dih¡dro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 2,5-dimetil-oxazol-4-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-tr¡fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-prop-2-iniloxi-pirazin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-ciano-pir¡din-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxaz¡n-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metil-3-metil-piridin-2 -carboxílico; [3-(5-amino-3>6-dimetil-6-tr¡fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-am¡no-5-difluoro-metil- pirazin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 4-difluoro-metil-6-metoxi-p¡ rid azi ?-3-carbox Mico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-trifluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-fluoro-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-trideutero-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico¡ [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-cloro-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihídro-2H-[1 ,4]-oxazin- 3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fen¡l]-amida del ácido 5-difluoro-metil-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-pirazin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3l6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin- 3-¡l)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-met¡l-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-trifluoro-metil-p¡ridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxaz¡n-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3,5-dicloro-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-ciano-piridin-2-carboxílico; N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-flu oro-fe nil]-6-metoxi-2-metil-nicotinam ida; N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-trideutero-metoxi-2-metil-nicotinamida; 2-amino-N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-etoxi-nicotinamida; 2-amino-N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxaz¡n-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-metoxi-nicotinamida; 2-arnino-N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro- 2H-[1 , 4]-oxaz¡ ?-3-il )-4-f lu o ro-f en i l]-6-trideutero-metox i-nicotina mida; 2-amino-N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-pentadeutero-etoxi-nicotinamida; N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-2-cloro-6-metoxi-nicotinamida; N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-2-cloro-6-etoxi-nicotinamida; 2-amino-N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-ciclopropil-metoxi-nicotinamida¡ y 2-amino-N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-(2,2,2-trifluoro-etoxi)-nicotinamida; y las sales farmacéuticamente aceptables de las mismas.
Los términos "un compuesto de la invención", "un compuesto de la fórmula I" y "agentes de la invención" se utilizan indistintamente a través de toda la descripción y pretenden significar la misma cosa, es decir, cualquier compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que caiga dentro de la definición del primer aspecto de la invención descrita anteriormente en la presente.
Tomando en cuenta uno o más de un átomo de carbono asimétrico, el cual puede estar presente en un compuesto de la fórmula I, un compuesto correspondiente de la fórmula I puede existir en una forma ópticamente activa pura o en la forma de una mezcla de isómeros ópticos, por ejemplo, en la forma de una mezcla racémica. Todos estos isómeros ópticos puros y todas sus mezclas, incluyendo las mezclas racémicas, son parte de la presente invención, como se define en el primer aspecto de la invención descrita anteriormente en la presente.
En una modalidad, se proporciona un compuesto de la invención como un estereoisomero aislado, en donde el compuesto tiene un estereocentro y el estereoisomero está en la configuración R.
En una modalidad, se proporciona un compuesto de la invención como un estereoisomero aislado, en donde el compuesto tiene un estereocentro y el estereoisomero está en la configuración S.
En una modalidad, se proporciona un compuesto de la invención como un estereoisomero aislado, en donde el compuesto tiene dos estereocentros y el estereoisomero está en la configuración R R.
En una modalidad, se proporciona un compuesto de la invención como un estereoisomero aislado, en donde el compuesto tiene dos estereocentros y el estereoisomero está en la configuración R S.
En una modalidad, se proporciona un compuesto de la invención como un estereoisómero aislado, en donde el compuesto tiene dos estereocentros y el estereoisómero está en la configuración S R.
En una modalidad, se proporciona un compuesto de la invención como un estereoisómero aislado, en donde el compuesto tiene dos estereocentros y el estereoisómero está en la configuración S S.
En una modalidad, se proporciona un compuesto de la invención, en donde el compuesto tiene uno o dos estereocentros, como una mezcla racémica.
Como se utiliza en la presente, el término "isómeros" se refiere a diferentes compuestos que tienen la misma fórmula molecular, pero difieren en el arreglo y configuración de los átomos. También como se utiliza en la presente, el término "un isómero óptico" o "un estereoisómero" se refiere a cualquiera de las diferentes configuraciones estereoisoméricas que pueden existir para un compuesto dado de la invención, e incluye isómeros geométricos. Se entiende que un sustituyente puede estar unido en un centro quiral de un átomo de carbono. Por consiguiente, la invención incluye enantiómeros, diaestereómeros o racematos del compuesto. Los "enantiómeros" son un par de estereoisómeros que son imágenes de espejo que no se pueden sobreponer uno del otro. Una mezcla de 1:1 de un par de enantiómeros es una mezcla "racémica". El término se utiliza para designar una mezcla racémica en donde sea apropiado. Los "diaestereoisómeros" son estereoisómeros que tienen cuando menos dos átomos asimétricos, pero que no son imágenes de espejo uno del otro. La estereoquímica absoluta se especifica de acuerdo con el sistema de Cahn-Ingold-Prelog R-S. Cuando un compuesto es un enantiómero puro, la estereoquímica en cada átomo de carbono quiral puede ser especificada por R o S. Los compuestos resueltos cuya configuración absoluta se desconoce, pueden ser designados con (+) o (-), dependiendo de la dirección (dextrógira o levógira) en que hagan girar la luz polarizada llana en la longitud de onda de la línea D de sodio. Algunos de los compuestos descritos en la presente contienen uno o más centros o ejes asimétricos, y por consiguiente, pueden dar lugar a enantiómeros, diaestereómeros, y otras formas estereoisoméricas que se pueden definir, en términos de la estereoquímica absoluta, como (R) o (S). La presente invención pretende incluir todos los posibles isómeros, incluyendo las mezclas racémicas, las formas ópticamente puras, y las mezclas de intermediarios. Los isómeros (R) y (S) ópticamente activos se pueden preparar utilizando sintones quirales o reactivos quirales, o se pueden resolver empleando técnicas convencionales. Si el compuesto contiene un doble enlace, el sustituyente puede ser de la configuración E o Z. Si el compuesto contiene un cicloalquilo disustituido, el sustituyente de cicloalquilo puede tener una configuración cis o trans.
Un compuesto de la fórmula I puede existir en una forma tautomérica. Todos estos tautómeros son parte de la presente invención.
En una modalidad de la invención, la invención se refiere a los compuestos de la fórmula (I): en donde R1 t R2, R 3 , R4 , R 5 y Re se definen como para proporcionar u n compuesto seleccionado a partir de: [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3 ,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-cloro-3-metoxi-metil-pirid ¡n-2-carboxilico; [3-((R)-5-amino-3-d ifluoro-metil-3,6-d ihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fen il]-amida del ácido 3-cloro-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3-d ifluoro-metil-3 ,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-tris-deutero-metoxi-pirazin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3-d ifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-prop-2-iniloxi-pirazin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3 ,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-1 H-pirrolo-[2 ,3-b]-piridin-6-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-pirazin-2-carboxilico; [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxaz¡n-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metil-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-fluoro-3-trideutero-metoxi-metil-pir¡din-2-carbo ílico; [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[ ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-trideutero-metoxi-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-pir¡din-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3-difluoro-met¡l-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-trideutero-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4,5-difluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-p¡ridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3- il)- , 5-d if luoro-fenil]-am ida del ácido 3-cloro-5-trideutero-metoxi-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4,5-difluoro-fenil]-amida del ácido 4,6-dideutero-5-cloro-3-trideutero-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-metoxi-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-difluoro-metoxi-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-cloro-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-cloro-3-fluoro-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-trideutero-metoxi-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 2,5-dimetil-oxazol-4- carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metox¡-3-metil-piri din -2 -carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-prop-2-iniloxi-pirazin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metil-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-d¡hidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-pirazin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-arnida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 4-difluoro-metil-6-metoxi-piridazin-3-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetM-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carbo ílico¡ [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-trifluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-fluoro-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-trideutero-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico¡ [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxaz¡n-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-pirid¡n-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H- [1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-cloro-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-di idro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihídro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metil-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-am¡no-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dih¡dro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-m eti l-p i razin-2 -carboxílico; [3-((R)-5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-met¡l-3,6-dihidro-2H- [1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-p i ri din -2 -carboxílico; [3-((R)-5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dih¡dro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metil-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-difluoro-metil- p¡r¡d¡n-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxaz¡n-3-il)-4-fluoro-fenil]-am¡da del ácido 3-cloro-5-trifluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3,5-dicloro-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-am ida del ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-ciano-piridin-2-carboxílico; N-[3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fen¡l]-6-metoxi-2-metil-nicotinamida; N-[3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-o azin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-trideutero-metoxi-2-metil-nicotinamida; 2-amino-N-[3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihid ro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-etoxi-nicotinamida; 2-amino-N-[3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-metoxi-nicotinamida; 2-amino-N-[3-((3R,6R)-5-amino-316-dimet¡l-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-trideutero-metoxi-nicotinamida; 2-amino-N-[3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihid ro-2H-[1 ,4]-oxaz¡n-3-¡ l)-4-flu oro-fe ni l]-6-pentadeu te ro-etoxi-nicotinamida; N-[3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-2-cloro-6-metoxi-nicotinamida; N-[3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-2-cloro-6-etoxi-nicotinamida; 2-amino-N-[3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-ciclopropil-metoxi-nicotinamida; y 2-amino-N-[3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-(2,2,2-trifluoro-etoxi)-nicotinamida; y las sales farmacéuticamente aceptables de las mismas.
Un compuesto de la fórmula I puede existir en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable. Todos los compuestos libres y las sales farmacéuticamente aceptables son parte de la presente invención.
Las sales se pueden preparar a partir de los compuestos libres de una manera conocida, y viceversa.
En una modalidad, la invención se refiere a cualquiera de los compuestos de la invención en forma libre. En otra modalidad, la invención se refiere a cualquiera de los compuestos de la invención en forma de sal farmacéuticamente aceptable. En una modalidad adicional, la invención se refiere a cualquiera de los compuestos de la invención en una forma de sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable. En todavía una modalidad adicional, la invención se refiere a cualquiera de los compuestos de la invención en una forma de sal de clorhidrato.
Como se utilizan en la presente, los términos "sal" o "sales" se refiere a una sal de adición de ácido de un compuesto de la invención. Las "sales" incluyen en particular las "sales farmacéuticamente aceptables". El término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a las sales que conservan la efectividad biológica y las propiedades de los compuestos de esta invención y, que típicamente no son biológicamente o de otra manera indeseables. En muchos casos, los compuestos de la presente invención son capaces de formar sales de ácidos en virtud de la presencia de grupos amino o de grupos similares a los mismos.
Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables se pueden formar con ácidos inorgánicos y con ácidos orgánicos, por ejemplo, las sales de acetato, aspartato, benzoato, besilato, bromuro/bromhidrato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, canforsulfonato, cloruro/clorhidrato, clorteofilonato, citrato, etan-disulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hipurato, yodhidrato/yoduro, ¡setionato, lactato, lactobionato, lauril-sulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metil-sulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/fosfato ácido/fosfato diácido, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, sulfosalicilato, tartrato, tosilato y trifluoro-acetato. Los ácidos inorgánicos a partir de los cuales se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, el ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico y ácido fosfórico. Los ácidos orgánicos a partir de los cuales se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, el ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metan-sulfónico, ácido etan-sulfónico, ácido toluen-sulfónico y ácido sulfosalicílico.
Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden sintetizar a partir de un compuesto progenitor mediante los métodos químicos convencionales. En términos generales, estas sales se pueden preparar mediante la reacción de las formas de base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado. Estas reacciones típicamente se llevan a cabo en agua o en un solvente orgánico, o en una mezcla de los dos. En términos generales, es deseable el uso de los medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol, o acetonitrilo, cuando sea practicable. Las listas de las sales adecuadas adicionales se pueden encontrar, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a Edición, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1985); y en "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" por Stahl y Wermuth (Wiley-VCH, einheim, Alemania, 2002).
Adicionalmente, los compuestos de la presente invención, incluyendo sus sales, también se pueden obtener en la forma de sus hidratos, o pueden incluir otros solventes utilizados para su cristalización. Los compuestos de la presente invención, inherentemente o por diseño, pueden formar solvatos con solventes farmacéuticamente aceptables (incluyendo agua); por consiguiente, se pretende que la invención abarque las formas tanto solvatadas como no solvatadas. El término "solvato" se refiere a un complejo molecular de un compuesto de la presente invención (incluyendo las sales farmacéuticamente aceptables del mismo) con una o más moléculas de solvente. Estas moléculas de solvente son aquéllas comúnmente utilizadas en la técnica farmacéutica, que son conocidas como inocuas para el receptor, por ejemplo, agua, etanol, y similares. El término "hidrato" se refiere al complejo en donde la molécula de solvente es agua.
Los compuestos de la presente invención, incluyendo las sales, hidratos y solvatos de los mismos, pueden formar, inherentemente o por diseño, polimorfos. Todos estos polimorfos son parte de la presente invención.
La presente invención incluye todos los compuestos de la fórmula I marcados con isótopos farmacéuticamente aceptables, en donde uno o más de un átomo es / son reemplazado(s) por uno o más de un átomo que tenga el mismo número atómico que, pero una masa atómica diferente de, aquél usualmente encontrado en la naturaleza. Los ejemplos de estos isótopos son aquéllos de carbono, tales como 11C, 3C o 4C, de cloro, tales como 36CI, de flúor, tales como 18F, de bromo, tales como 76Br, de hidrógeno, tales como 2H ó 3H, de yodo, tales como 123l,12 l, 125l o 13 l, de nitrógeno, tales como 13N o 5N, de oxígeno, tales como 150, 170 o 180, de fósforo, tales como 32P, o de azufre, tales como 35S. Un compuesto marcado de la fórmula I marcado con isótopo, se puede preparar mediante un proceso análogo a aquéllos descritos en los Ejemplos o mediante una técnica convencional conocida por los expertos en este campo, utilizando un reactivo o material de partida isotópicamente marcado apropiado. La incorporación de un isótopo más pesado, tal como 2H, puede proporcionar mayor estabilidad metabólica a un compuesto de la fórmula I, lo cual puede dar como resultado, por ejemplo, un aumento en la vida media in vivo del compuesto, o requerimientos de dosificación reducida. Ciertos compuestos de la fórmula I isotópicamente marcados, por ejemplo, aquéllos que incorporan un isótopo radioactivo, tal como 3H o 14C, se pueden utilizar en los estudios de distribución de fármacos o de sustratos en el tejido. Los compuestos de la fórmula I con un isótopo emisor de positrones, tal como 1C, 18F, 13N o 150, pueden ser útiles en los estudios de tomografía por emisión de positrones (PET) o de tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT), por ejemplo, para examinar las ocupaciones del sustrato por el receptor.
Los solvatos farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la invención incluyen aquéllos en donde el solvente de cristalización puede ser isotópicamente sustituido, por ejemplo, D20, d6-acetona, d6-DMSO.
Los compuestos de la invención que contienen grupos capaces de actuar como donadores y/o aceptores para los enlaces de hidrógeno, pueden ser capaces de formar co-cristales con los formadores de co-cristales adecuados. Estos co-cristales se pueden preparar a partir de los compuestos de la fórmula I mediante los procedimientos de formación de co-cristales conocidos. Estos procedimientos incluyen molienda, calentamiento, co-sublimación, co-fusión, o contacto en solución de los compuestos de la fórmula I con el formador de co-cristales bajo condiciones de cristalización, y el aislamiento de los co-cristales formados de esta manera. Los formadores de co-cristales adecuados incluyen aquéllos descritos en la Publicación Internacional Número WO 2004/078163. Por consiguiente, la invención proporciona además co-cristales, los cuales comprenden un compuesto de la fórmula I.
Los compuestos de la fórmula I también se pueden preparar mediante procesos convencionales adicionales, cuyos procesos son aspectos adicionales de la invención, por ejemplo, como se describe en los Ejemplos. Los materiales de partida son conocidos, se pueden preparar de acuerdo con los procedimientos convencionales empezando a partir de los compuestos conocidos, se pueden preparar a partir de los compuestos conocidos como se describe en los Ejemplos, o se pueden preparar empleando procedimientos análogos a aquéllos descritos en los Ejemplos.
Los compuestos de la fórmula I, en forma libre o en una forma de sal farmacéuticamente aceptable, referidos posteriormente en la presente con frecuencia como "agentes de la invención", exhiben valiosas propiedades farmacológicas, cuando se prueban in vitro o in vivo y, por consiguiente, son útiles en medicamentos, en terapia, o para utilizarse como productos químicos de investigación, por ejemplo, como compuestos de herramienta.
Por ejemplo, los agentes de la invención son inhibidores de las proteasas aspárticas, y se pueden utilizar para el tratamiento o la prevención de una condición, enfermedad o trastorno que involucre el procesamiento mediante estas enzimas. En particular, los agentes de la invención inhiben la beta-secretasa y, por consiguiente, la generación de beta-amiloide y la subsiguiente acumulación en oligómeros y fibrilos.
Las propiedades inhibidoras de un agente de la invención hacia las proteasas se pueden evaluar en las pruebas como se describen posteriormente en la presente.
Prueba 1: Inhibición de BACE-1 humana La BACE-1 recombinante (dominio extracelular, expresado en baculovirus, y purificado empleando los métodos convencionales) en concentraciones de 0.1 a 10 nM, se incuba con el compuesto de prueba en diferentes concentraciones durante 1 hora a temperatura ambiente en regulador de acetato de 10 a 100 mM, pH de 4.5, conteniendo CHAPS al 0.1 por ciento. Se agrega el sustrato peptldico sintético apagado por fluorescencia, derivado a partir de la secuencia de APP, y que contiene un par adecuado de fluoróforo- apagador, en una concentración final de 1 a 5 µ?, y se registra el aumento en la fluorescencia a una longitud de onda de excitación / emisión adecuada, en un espectrofluorímetro de microplaca durante 5 a 30 minutos en intervalos de 1 minuto. Los valores IC50 se calculan a partir del porcentaje de inhibición de la actividad de BACE-1 como una función de la concentración del compuesto de prueba.
Prueba 2: Inhibición de BACE-2 humana La BACE-2 recombinante (dominio extracelular, expresada en baculovirus y purificada empleando los métodos convencionales) en concentraciones de 0.1 a 10 nM se incuba con el compuesto de prueba en diferentes concentraciones durante 1 hora a temperatura ambiente en regulador de acetato de 10 a 100 mM, pH de 4.5, que contiene CHAPS al 0.1 por ciento. Se agrega el sustrato peptídico sintético apagado por fluorescencia, derivado a partir de la secuencia de la proteína precursora de amiloide (APP) y que contiene un par adecuado de fluoróforo-apagador, a una concentración final de 1 a 5 µ?, y se registra el aumento en la fluorescencia a una longitud de onda de excitación/emisión adecuada en un espectrofluorímetro de microplaca durante 5 a 30 minutos a intervalos de 1 minuto. Los valores IC50 se calculan a partir del porcentaje de inhibición de la actividad de BACE-2 como una función de la concentración del compuesto de prueba.
Prueba 3: Inhibición de la Catepsina D humana La catepsina D recombinante (expresada como procatepsina D en baculovirus, purificada empleando los métodos convencionales y activada mediante incubación en regulador de formato de sodio, pH de 3.7) se incuba con el compuesto de prueba en diferentes concentraciones durante 1 hora a temperatura ambiente en regulador de formato de sodio o de acetato de sodio a un pH adecuado dentro del intervalo de pH de 3.0 a 5.0. Se agrega el sustrato peptídico sintético de Mca-Gly-Lys-Pro-lle-Leu-Phe-Phe-Arg-Leu-Lys(DNP)-D-Arg-NH2, a una concentración final de 1 a 5 µ?, y se registra el aumento en la fluorescencia a una excitación de 325 nanómetros, y a una emisión de 400 nanómetros, en un espectrofluorímetro de microplaca durante 5 a 30 minutos, a intervalos de 1 minuto. Los valores IC50 se calculan a partir del porcentaje de inhibición de la actividad de catepsina D como una función de la concentración del compuesto de prueba.
Prueba 4: Inhibición de la liberación celular del péptido amiloide 1-40 Las células de ovario de hámster chino se transfectan con el gen humano para la proteína precursora de amiloide. Las células se aplican en una densidad de 8,000 células/pozo en placas de microtitulación de 96 pozos, y se cultivan durante 24 horas en el medio de cultivo celular DMEM que contiene suero fetal de becerro (FCS) al 10 por ciento. Se agrega el compuesto de prueba a las células en diferentes concentraciones, y las células se cultivan durante 24 horas en la presencia del compuesto de prueba. Los sobrenadantes se recolectan, y se determina la concentración del péptido amiloide 1-40 utilizando las técnicas de inmunoensayo del estado de la técnica, por ejemplo ELISA de emparedado, inmunoensayo de fluorescencia homogénea resuelta en el tiempo (HTRF), o inmunoensayo de electro-quimiluminiscencia. La potencia del compuesto se calcula a partir del porcentaje de inhibición de la liberación del péptido amiloide como una función de la concentración del compuesto de prueba.
Los agentes de la invención se probaron en cuando menos una de las pruebas anteriormente descritas.
Los compuestos de los Ejemplos muestran los siguientes valores IC50 promedio en la prueba 1 descrita anteriormente en la presente: Tabla A Los compuestos de los Ejemplos muestran los siguientes valores IC50 promedio en la prueba 4 descrita anteriormente en la presente: Tabla B Como se utiliza en la presente, el término "veh ículo farmacéuticamente aceptable" incluye cualq uiera y todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, tensoactivos, antioxidantes, conservadores (por ejemplo, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes ¡sotónicos, agentes retardantes de absorción, sales, conservadores, fármacos, estabilizantes de fármacos, aglutinantes, excipientes, agentes de desintegración, lubricantes, agentes edulcorantes, agentes saborizantes, tintes, y similares, y combinaciones de los mismos, como sería conocido por los expertos en este campo (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edición, Mack Printing Company, 1990, páginas 1289-1329). Excepto hasta donde cualquier vehículo convencional sea incompatible con el ingrediente activo, se contempla su uso en las composiciones terapéuticas o farmacéuticas.
El término "una cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto de la presente invención se refiere a una cantidad del compuesto de la presente invención que provocará la respuesta biológica o médica de un sujeto, por ejemplo, la reducción o inhibición de la actividad de un enzima o de una proteína, o que mitigará los síntomas, aliviará las condiciones, alentará o demorará el progreso de la enfermedad, o prevendrá una enfermedad, etc. En una modalidad no limitante, el término "una cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad del compuesto de la presente invención que, cuando se administra a un sujeto, es efectiva para: (1) cuando menos aliviar parcialmente, inhibir, prevenir y/o mitigar una condición o un trastorno o una enfermedad (i) mediada por de BACE-1 o (¡i) asociada con la actividad de BACE-1, o (iii) caracterizada por una actividad (normal o anormal) de BACE-1; o (2) reducir o inhibir la actividad de BACE-1. En otra modalidad no limitante, el término "una cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad del compuesto de la presente invención que, cuando se administra a una célula, o a un tejido, o a un material biológico no celular, o a un medio, es efectiva para cuando menos reducir o inhibir parcialmente la actividad de BACE-1. El significado del término "una cantidad terapéuticamente efectiva" como se ilustra en las modalidades anteriores para BACE-1, también se aplica mediante el mismo significado a cualesquiera otras proteínas / péptidos / enzimas relevantes, tales como BACE-2, o catepsina D.
Como se utiliza en la presente, el término "sujeto" se refiere a un animal. Típicamente el animal es un mamífero. Un sujeto también se refiere, por ejemplo, a primates (por ejemplo, seres humanos, masculinos o femeninos), reses, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, conejos, ratas, ratones, peces, aves, y similares. En ciertas modalidades, el sujeto es un primate. En todavía otras modalidades, el sujeto es un ser humano.
Como se utiliza en la presente, el término "inhibir", "inhibición" o "inhibiendo" se refiere a la reducción o supresión de una condición, síntoma, trastorno, o enfermedad dados, o a una disminución significativa en el valor de la actividad inicial de una actividad biológica o de un proceso.
Como se utiliza en la presente, el término "tratar", "tratando" o "tratamiento" de cualquiera enfermedad o trastorno, se refiere, en una modalidad, a mitigar la enfermedad o el trastorno (es decir, alentar o detener o reducir el desarrollo de la enfermedad o de cuando menos uno de los síntomas clínicos de la misma). En otra modalidad, "tratar", "tratando" o "tratamiento" se refiere a aliviar o mitigar cuando menos un parámetro físico, incluyendo aquéllos que puedan no ser discernibles por el paciente. En todavía otra modalidad, "tratar", "tratando" o "tratamiento" se refiere a modular la enfermedad o el trastorno, ya sea físicamente (por ejemplo, la estabilización de un síntoma discernible), fisiológicamente (por ejemplo, la estabilización de un parámetro físico), o ambos.
Como se utiliza en la presente, el término "prevención" de cualquier enfermedad o trastorno particular se refiere a la administración de un compuesto de la presente invención a un sujeto antes de que sean evidentes cualesquiera síntomas de esa enfermedad o de ese trastorno.
Como se utiliza en la presente, un sujeto está "en necesidad de" tratamiento si este sujeto se beneficiaría biológicamente, médicamente, o en su calidad de vida, a partir de dicho tratamiento.
Como se utiliza en la presente, el término un "agente" de la invención se utiliza de una manera intercambiable con el término un "compuesto" de la invención, y no tiene diferencia alguna en su significado.
Como se utiliza en la presente, el término "un," "uno," "el", y términos similares utilizados en el contexto de la presente invención (en especial en el contexto de las reivindicaciones), se deben interpretar para cubrir tanto el singular como el plural, a menos que se indique de otra manera en la presente o que sea claramente contradicho por el contexto. El uso de cualquiera y todos los ejemplos, o del lenguaje de ejemplo (por ejemplo, "tal como") proporcionados en la presente, pretende meramente iluminar mejor la invención y no presenta una limitación sobre el alcance de la invención reivindicada de otra manera.
Debido a sus propiedades inhibidoras hacia las proteasas, los agentes de la invención son útiles, por ejemplo, en el tratamiento o en la prevención de una variedad de estados psiquiátricos, psicóticos, neurológicos o vasculares discapacitantes, por ejemplo, de una condición, enfermedad o trastorno del sistema vascular o del sistema nervioso, en donde tenga una función la generación o acumulación de beta-amiloide, o, basándose en la inhibición de BACE-2 (enzima disociadora de APP en el sitio beta 2) o de catepsina D, las cuales son homólogos cercanos de las proteasas de aspartilo de tipo pepsina y de la beta-secretasa, y en la correlación de la expresión de BACE-2 o catepsina D con un potencial más tumorigénico o metastásico de células tumorales, como medicamentos contra el cáncer, por ejemplo, en la supresión del proceso de metástasis asociado con las células tumorales. Dicha condición, enfermedad o trastorno del sistema vascular o del sistema nervioso es ejemplificado por, e incluye, sin limitación, un trastorno de ansiedad, tal como trastorno de pánico con o sin agorafobia, agorafobia sin historia de trastorno de pánico, fobia a un animal u otra fobia específica, incluyendo una fobia social, trastorno de ansiedad social, ansiedad, trastorno obsesivo-compulsivo, un trastorno de estrés, incluyendo trastorno de estrés post-traumático o agudo, o un trastorno de ansiedad generalizada o inducida por sustancias; una neurosis; ataques; epilepsia, en especial ataques parciales, ataques simples, complejos o parciales que evolucionen hasta ataques secundariamente generalizados o hasta ataques generalizados [ataques de ausencia (típica o atípica), mióclónicos, clónicos, tónicos, tónicos-clónicos, o atónicos]; convulsiones; migraña; un trastorno afectivo, incluyendo un trastorno depresivo o bipolar, por ejemplo, un trastorno depresivo mayor de un solo episodio o recurrente, depresión mayor, un trastorno distímico, distimia, trastorno depresivo NOS, trastorno maniaco bipolar I o bipolar II o trastorno ciclotímico; un trastorno psicótico, incluyendo esquizofrenia o depresión; neurodegeneración, por ejemplo, neurodegeneración que se presente a partir de isquemia cerebral; un proceso degenerativo agudo, traumático o crónico del sistema nervioso, tal como enfermedad de Parkinson, síndrome de Down, demencia, por ejemplo, demencia senil, demencia con cuerpos de Lewy o una demencia fronto-temporal, un trastorno cognitivo, deterioro cognitivo, por ejemplo, deterioro cognitivo leve, deterioro de la memoria, una neuropatía amiloide, una neuropatía periférica, enfermedad de Alzheimer, síndrome de Gerstmann-Straeussler-Scheinker, enfermedad de Niemann-Pick, por ejemplo, enfermedad de Niemann-Pick tipo C, inflamación del cerebro, una lesión de cerebro, médula espinal, o de nervios, por ejemplo, lesión cerebral traumática (TBI), un trauma de nervios o un trauma de cerebro, amiloidosis vascular, hemorragia cerebral con amiloidosis, corea de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple o síndrome X frágil; agresividad; angiopatía amiloide cerebral; una encefalopatía, por ejemplo, encefalopatía espongiforme transmisible; embolia; un trastorno de atención, por ejemplo, trastorno de hiperactividad con déficit de atención; síndrome de Tourette; un trastorno del habla, incluyendo tartamudeo; un trastorno del ritmo circadiano, por ejemplo, en los sujetos que sufren de los efectos de jet lag (cambio de horario por viaje en avión) o turno de trabajo; dolor; nocicepción; comezón; emesis, incluyendo emesis aguda, demorada o anticipatoria, tal como emesis inducida por quimioterapia o radiación, mareo por el movimiento, o náusea o vómito post-operatorio; un trastorno en el comer, incluyendo anorexia nerviosa o bulimia nerviosa; síndrome premenstrual; un espasmo muscular o espasticidad, por ejemplo, en los pacientes parapléjicos; un trastorno del oído, por ejemplo, tinnitus o deterioro del oído relacionado con la edad; incontinencia urinaria; glaucoma; miositis de cuerpos de inclusión; o un trastorno relacionado con sustancias, incluyendo abuso o dependencia de sustancias, incluyendo un trastorno por abstinencia de una sustancia, tal como alcohol. Los agentes de la invención también pueden ser útiles para mejorar la cognición, por ejemplo, en un sujeto que sufra de una condición demenciante, tal como enfermedad de Alzheimer; como pre- medicación antes de anestesia o de una intervención médica menor, tal como endoscopía, incluyendo endoscopía gástrica; o como ligandos, por ejemplo, radioligandos o ligandos de tomografía por emisión de positrones (PET).
Para las indicaciones anteriormente mencionadas, la dosificación apropiada variará dependiendo, por ejemplo, del compuesto empleado como ingrediente farmacéutico activo, del huésped, del modo de administración, de la naturaleza y gravedad de la condición, enfermedad o trastorno, o del efecto deseado. Sin embargo, en general, se indica que se obtienen resultados satisfactorios en animales con una dosificación diaria de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 100, de preferencia de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 miligramos/kilogramo de peso corporal del animal. En los mamíferos superiores, por ejemplo en los seres humanos, una dosificación diaria indicada está en el intervalo de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 2,000, de preferencia de aproximadamente 2 a aproximadamente 200 miligramos de un agente de la invención, convenientemente administrados, por ejemplo, en dosis divididas hasta cuatro veces al día, o en una forma de liberación sostenida.
Un agente de la invención se puede administrar por cualquier vía convencional, en particular enteralmente, de preferencia oralmente, por ejemplo, en la forma de una tableta o cápsula, o parenteralmente, por ejemplo, en la forma de una solución o suspensión inyectable.
En un aspecto adicional, la invención se refiere a una composición farmacéutica, la cual comprende un agente de la invención como ingrediente activo en asociación con cuando menos un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable y opcionalmente en asociación con otras sustancias auxiliares, tales como inhibidores de las enzimas de citocromo P450, agentes que previenen la degradación de ingredientes farmacéuticos activos mediante el citocromo P450, agentes que mejoran o potencian la farmacocinética de los ingredientes farmacéuticos activos, agentes que mejoran o potencian la biodisponibilidad de los ingredientes farmacéuticos activos, y así sucesivamente, por ejemplo, jugo de toronja, quetoconazol o, de preferencia, ritonavir. Esta composición se puede fabricar de una manera convencional, por ejemplo, mediante la mezcla de sus componentes. Las formas de dosificación unitaria contienen, por ejemplo, de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1,000, de preferencia de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 miligramos de un agente de la invención.
Por consiguiente, en una modalidad de la invención, se proporciona una composición farmacéutica, la cual comprende un agente de la invención como ingrediente activo, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
En adición, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden configurar en una forma sólida (incluyendo, sin limitación, cápsulas, tabletas, pildoras, gránulos, polvos o supositorios), o en una forma líquida (incluyendo, sin limitación, soluciones, suspensiones o emulsiones). Las composiciones farmacéuticas se pueden someter a las operaciones farmacéuticas convencionales, tales como esterilización, y/o pueden contener diluyentes inertes, agentes lubricantes, o agentes reguladores convencionales, así como adyuvantes, tales como conservadores, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes y reguladores del pH, etc.
Típicamente, las composiciones farmacéuticas son tabletas o cápsulas de gelatina que comprenden al ingrediente activo junto con: a) diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa y/o glicina; b) lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, su sal de magnesio o de calcio y/o polietilenglicol; para tabletas también, c) aglutinantes, por ejemplo, silicato de magnesio y aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metil- celulosa, carboxi-metil-celulosa de sodio y/o polivinil- pirrolidona; si se desea, d) desintegrantes, por ejemplo, almidones, agar, ácido algínico o su sal sódica, o mezclas efervescentes; y/o e) absorbentes, colorantes, saborizantes y edulcorantes. Las tabletas pueden tener recubrimiento de película o recubrimiento entérico de acuerdo con los métodos conocidos en este campo.
Las composiciones adecuadas para su administración oral incluyen una cantidad efectiva de un compuesto de la invención en la forma de tabletas, grageas, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables, emulsión, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elíxires. Las composiciones pretendidas para uso oral se preparan de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica para la elaboración de composiciones farmacéuticas, y estas composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados a partir del grupo que consiste en agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, y agentes conservadores, con el objeto de proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y de buen sabor. Las tabletas pueden contener al ingrediente activo mezclado con excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos que sean adecuados para la elaboración de tabletas. Estos excipientes son, por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio, o fosfato de sodio; agentes de granulación o desintegrantes, por ejemplo almidón de maíz, o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo almidón, gelatina, o acacia; y agentes lubricantes, por ejemplo estearato de magnesio, ácido esteárico, o talco. Las tabletas no se recubren, o bien se recubren mediante técnicas conocidas para demorar la desintegración y absorción en el tracto gastrointestinal y de esta manera proporcionar una acción sostenida durante un período más largo. Por ejemplo, se puede emplear un material de demora de tiempo tal como monestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Las formulaciones para uso oral se pueden presentar como cápsulas de gelatina dura en donde se mezcla el ingrediente activo con un diluyente sólido inerte, por ejemplo carbonato de calcio, fosfato de calcio, o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en donde se mezcla el ingrediente activo con agua o con un medio oleoso, por ejemplo aceite de cacahuate, parafina líquida, o aceite de oliva.
Ciertas composiciones inyectables son soluciones o suspensiones isotónicas acuosas, y los supositorios se preparan convenientemente a partir de emulsiones o suspensiones grasas. Estas composiciones se pueden esterilizar y/o pueden contener adyuvantes, tales como agentes conservadores, estabilizantes, humectantes, o emulsionantes, promotores de solución, sales para regular la presión osmótica, y/o reguladores del pH. En adición, también pueden contener otras sustancias terapéuticamente valiosas. Estas composiciones se preparan de acuerdo con los métodos convencionales de mezcla, granulación, o recubrimiento, respectivamente, y contienen de aproximadamente el 0.1 al 75 por ciento, o contienen de aproximadamente el 1 al 50 por ciento del ingrediente activo.
Las composiciones adecuadas para aplicación transdérmica incluyen una cantidad efectiva de un compuesto de la invención con un vehículo adecuado. Los vehículos adecuados para su suministro transdérmico incluyen solventes farmacológicamente aceptables absorbibles para ayudar al paso a través de la piel del huésped. Por ejemplo, los dispositivos transdérmicos están en la forma de un parche, el cual comprende un miembro de respaldo, un depósito que contiene al compuesto opcionalmente con vehículos, opcionalmente una barrera de control de velocidad para suministrar el compuesto a la piel del huésped a una velocidad controlada y previamente determinada durante un periodo de tiempo prolongado, y elementos para asegurar el dispositivo a la piel.
Las composiciones adecuadas para aplicación tópica, por ejemplo a la piel y a los ojos, incluyen soluciones acuosas, suspensiones, ungüentos, cremas, geles, o formulaciones rociables, por ejemplo para suministrarse en aerosol o similar. Estos sistemas de suministro tópico serán apropiados en particular para aplicación dérmica, por ejemplo, para el tratamiento de cáncer de piel, por ejemplo, para su uso profiláctico en cremas solares, lociones, aerosoles, y similares. Por consiguiente, son adecuados en particular para utilizarse en formulaciones tópicas, incluyendo cosméticas, bien conocidas en este campo. Éstas pueden contener solubilizantes, estabilizantes, agentes mejoradores de la tonicidad, reguladores del pH, y conservadores.
Como se utiliza en la presente, una aplicación tópica también puede pertenecer a una inhalación o a una aplicación intranasal. De una manera conveniente se pueden suministrar en la forma de un polvo seco (ya sea solos, como una mezcla, por ejemplo como una mezcla seca con lactosa, o bien como una partícula componente mezclada, por ejemplo con fosfolípídos) a partir de un inhalador de polvo seco o una presentación de aspersión en aerosol a partir de un recipiente presurizado, bomba, aspersor, atomizador o nebulizador, con o sin el uso de un propelente adecuado.
La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas y formas de dosificación anhidras, las cuales comprenden los compuestos de la presente invención como ingredientes activos, debido a que el agua puede facilitar la degradación de ciertos compuestos.
Las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación anhidras de la invención se pueden preparar utilizando ingredientes anhidros o que contengan una baja humedad, y condiciones de baja humedad. Una composición farmacéutica anhidra se puede preparar y almacenar de tal manera que se mantenga su naturaleza anhidra. De conformidad con lo anterior, las composiciones anhidras de preferencia se empacan utilizando materiales que se sepa que previenen la exposición al agua, de tal forma que se puedan incluir en kits de formulación adecuados. Los ejemplos del empaque adecuado incluyen, pero no se limitan a, láminas herméticamente selladas, plásticos, recipientes de dosis unitaria (por ejemplo, frascos), paquetes de burbuja, y paquetes de tiras.
La invención proporciona además composiciones farmacéuticas y formas de dosificación que comprenden uno o más agentes que reducen la velocidad a la cual se descompondrá el compuesto de la presente invención como un ingrediente activo. Estos agentes, los cuales son referidos en la presente como "estabilizantes", incluyen, pero no se limitan a, antioxidantes, tales como ácido ascórbico, reguladores del pH, o reguladores de sales, etc.
De acuerdo con lo anterior, en un aspecto adicional, la invención se refiere a un agente de la invención para utilizarse como un medicamento, por ejemplo, para el tratamiento o la prevención de una condición, enfermedad o trastorno neurológico o vascular, en donde tenga una función la generación o acumulación de beta-amiloide, o para la supresión del proceso de metástasis asociado con las células tumorales. En una modalidad adicional, la invención se refiere a un agente de la invención para utilizarse en el tratamiento o en la prevención de una enfermedad o trastorno mediado por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D. En una modalidad, la invención se refiere a un agente de la invención para utilizarse en el tratamiento o en la prevención de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve.
En un aspecto adicional, la invención se refiere al uso de un agente de la invención como un ingrediente farmacéutico activo en un medicamento, por ejemplo, para el tratamiento o la prevención de una condición, enfermedad o trastorno neurológico o vascular, en donde tenga una función la generación o acumulación de beta-amiloide, o para la supresión del proceso de metástasis asociado con las células tumorales. En una modalidad adicional, la invención se refiere al uso de un agente de la invención como un ingrediente farmacéutico activo en un medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad o trastorno mediado por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D. En una modalidad, la invención se refiere al uso de un agente de la invención como un ingrediente farmacéutico activo en un medicamento para el tratamiento o la prevención de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve.
En un aspecto adicional, la invención se refiere al uso de un agente de la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una condición, enfermedad o trastorno neurológico o vascular, en donde tenga una función la generación o acumulación de beta-amiloide, o para la supresión del proceso de metástasis asociado con las células tumorales. En una modalidad adicional, la invención se refiere al uso de un agente de la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad o trastorno mediado por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D. En una modalidad, la invención se refiere al uso de un agente de la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento o la prevención de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve.
En un aspecto adicional, la invención se refiere a un método para el tratamiento o la prevención de una condición, enfermedad o trastorno neurológico o vascular, en donde tenga una función la generación o acumulación de beta-amiloide, o para la supresión del proceso de metástasis asociado con las células tumorales, en un sujeto que necesite dicho tratamiento, prevención o supresión, cuyo método comprende administrar a este sujeto una cantidad efectiva de un agente de la invención. En una modalidad, la invención se refiere a un método para modular la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D en un sujeto, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente de la invención. En otra modalidad, la invención se refiere a un método para el tratamiento o la prevención de una enfermedad mediada por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D, en un sujeto que necesite dicho tratamiento o prevención, cuyo método comprende administrar a este sujeto una cantidad efectiva de un agente de la invención. En todavía otra modalidad, la invención se refiere a un método para el tratamiento o la prevención de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve, en un sujeto que necesite dicho tratamiento o prevención, cuyo método comprende administrar a este sujeto una cantidad efectiva de un agente de la invención.
Un agente de la invención se puede administrar como el único ingrediente farmacéutico activo o como una combinación con cuando menos otro ingrediente farmacéutico activo efectivo, por ejemplo, en el tratamiento o en la prevención de una condición, enfermedad o trastorno neurológico o vascular, en donde tenga una función la generación o acumulación de beta-amiloide, o en la supresión del proceso de metástasis asociado con las células tumorales. Esta combinación farmacéutica puede estar en la forma de una forma de dosificación unitaria, cuya forma de dosificación unitaria comprende una cantidad previamente determinada de cada uno de los cuando menos dos componentes activos en asociación con cuando menos un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. De una manera alternativa, la combinación farmacéutica puede estar en la forma de un paquete que comprenda los cuando menos dos componentes activos por separado, por ejemplo, una envoltura o dispositivo dosificador adaptado para la administración concomitante o separada de los cuando menos dos componentes activos, en donde estos componentes activos se acomodan por separado. En un aspecto adicional, la invención se refiere a estas combinaciones farmacéuticas.
En un aspecto adicional, la invención, por consiguiente, se refiere a una combinación que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un agente de la invención y una segunda sustancia de fármaco, para su administración simultánea o en secuencia.
En una modalidad, la invención proporciona un producto que comprende un agente de la invención, y cuando menos otro agente terapéutico, como una preparación combinada para su uso simultáneo, separado, o en secuencia, en terapia. En una modalidad, la terapia es el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D. En una modalidad adicional, la terapia es el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve.
En una modalidad, la invención proporciona una composición farmacéutica, la cual comprende un agente de la invención y otro(s) agente(s) terapéutico(s). Opcionalmente, la composición farmacéutica puede comprender un excipiente farmacéuticamente aceptable, como se describe anteriormente.
En una modalidad, la invención proporciona un kit, el cual comprende dos o más composiciones farmacéuticas separadas, cuando menos una de las cuales contiene un agente de la invención. En una modalidad, el kit comprende medios para conservar por separado estas composiciones, tales como un recipiente, un frasco dividido, o un paquete de lámina dividido. Un ejemplo de este kit es un paquete de burbuja, como se utiliza típicamente para el empaque de tabletas, cápsulas y similares. El kit de la invención se puede utilizar para administrar diferentes formas de dosificación, por ejemplo, oral y parenteral, para administrar las composiciones separadas a diferentes intervalos de dosificación, o para titular las composiciones separadas una contra la otra. Para ayudar al cumplimiento, el kit de la invención típicamente comprende instrucciones para su administración.
En las terapias de combinación de la invención, el agente de la invención y el otro agente terapéutico pueden ser elaborados y/o formulados por los mismos o diferentes fabricantes. Más aún, el compuesto de la invención y el otro producto terapéutico se pueden poner juntos en una terapia de combinación: (i) antes de liberar el producto de combinación a los médicos (por ejemplo, en el caso de un kit que comprenda al compuesto de la invención y al otro agente terapéutico); (ii) por los médicos mismos (o bajo la guía del médico) poco antes de su administración; (iii) por los pacientes mismos, por ejemplo, durante la administración en secuencia del compuesto de la invención y el otro agente terapéutico. De conformidad con lo anterior, la invención proporciona un agente de la invención para utilizarse en el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D, en particular de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve, en donde el medicamento se prepara para su administración con otro agente terapéutico. La invención también proporciona el uso de otro agente terapéutico para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D, en particular de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve, en donde el medicamento se administra con un agente de la invención .
La invención también proporciona un agente de la invención para utilizarse en un método para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D, en particular de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve, en donde el agente de la invención se prepara para su administración con otro agente terapéutico. La invención también proporciona otro agente terapéutico para utilizarse en un método para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D, en particular de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve, en donde el otro agente terapéutico se prepara para su administración con un agente de la invención. La invención también proporciona un agente de la invención para utilizarse en un método para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D, en particular de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve, en donde el agente de la invención se administra con otro agente terapéutico. La invención también proporciona otro agente terapéutico para utilizarse en un método para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D, en particular de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve, en donde el otro agente terapéutico se administra con un agente de la invención.
La invención también proporciona el uso de un agente de la invención para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D, en particular de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve, en donde el paciente ha sido tratado previamente (por ejemplo, dentro de 24 horas) con otro agente terapéutico. La invención también proporciona el uso de otro agente terapéutico para el tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la actividad de BACE-1, BACE-2 o catepsina D, en particular de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve, en donde el paciente ha sido tratado previamente (por ejemplo, dentro de 24 horas) con un agente de la invención.
En una modalidad, la invención se refiere a un compuesto de la invención en combinación con otro agente terapéutico, en donde el otro agente terapéutico se selecciona a partir de: (a) inhibidores de acetil-colinesterasa, tales como donepezil (AriceptMR), rivastigmina (ExelonMR), y galantamina (Razadyne R); (b) antagonistas de glutamato, tales como memantina (Namenda R); (c) medicamentos antidepresivos para mal humor e irritabilidad, tales como citalopram (CelexaMR), fluoxetina (ProzacMR), paroxeína (Paxil R), sertralina (Zoloft R), y trazodona (Desyrel R)¡ (d) ansiolíticos para ansiedad, inquietud, comportamiento verbalmente alterador y resistencia, tales como lorazepam (AtivanMR), y oxazepam (SeraxMR); (e) medicamentos anti-psicóticos para alucinaciones, desilusiones, agresión, agitación, hostilidad y falta de cooperatividad, tales como aripiprazol (AbilifyMR), clozapina (ClozarilMR), haloperidol (Haldol ), olanzapina (ZyprexaMR), quetiapina (SeroquelMR), risperidona (RisperdalMR), y ziprasidona (GeodonMR); (f) estabilizantes del humor, tales como carbamazepina (TegretolMR), y divalproex (DepakoteMR); (g) agonistas nicotínicos alfa-7; (h) antagonistas de mGluR5; (i) agonistas de H3; y (j) vacunas de terapia de amiloides.
En otra modalidad, la invención proporciona una composición farmacéutica, la cual comprende: i) un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; ii) cuando menos un agente terapéutico seleccionado a partir de: a) inhibidores de acetil-colinesterasa, b) antagonistas de glutamato, c) medicamentos antidepresivos, d) ansiolíticos, e) medicamentos anti-psicóticos, (f) estabilizantes del humor, (g) agonistas nicotínicos alfa - 7, (h) antagonistas del receptor de glutamato metabotrópico 5 (mGluR5), (i) agonistas de H3, y (j) vacunas de terapia de amiloides; y iii) uno o más vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
Los siguientes ejemplos ilustran la invención.
Ejemplos Abreviaturas ACN acetonitrilo AcOH ácido acético aq. acuoso Boc terbutoxi-carbonilo t-Bu terbutilo t-BuOH terbutanol conc. concentrado DAST trifluoruro de dietil-amino-azufre (Et2N)2SF3 DCM dicloro-metano (DCM) DEAD azodicarboxilato de dietilo DIAD azodicarboxilato de di-isopropilo DIPEA di-isopropil-etil-amina DMF dimetil-formamida DMSO sulfóxido de dimetilo DPPF 1,1 '-bis-(difenil-fosfino)-ferroceno EDC clorhidrato de 1 -(3-dimetil-amino-propil)-3- etil-carbodi-imida eq. equivalente(s) ESI ionización por electroaspersión Et3N trietil-amina Et20 dietil-éter EtOAc acetato de etilo EtOH etanol h hora(s) Hex hexano HMDS hexametil-disilazano HOAt 1 -hidroxi-7-aza-benzotriazol HOBT hidroxi-benzotriazol HPLC cromatografía de líquidos de alto rendimiento LCMS cromatografía de líquidos con espectrometría de masas MeOH metanol min minuto(s) MS espectrometría de masas RMN espectrometría de resonancia magnética nuclear NP fase normal PE éter de petróleo PPh3 trifenil-fosfina Rf factor de retención (TLC) RP fase inversa Rt tiempo de retención rt temperatura ambiente sat. saturado soln. solución TB E terbutil-metil-éter TFA ácido trifluoro-acético THF tetrahidrofurano (THF) TLC cromatografía de capa delgada UPLC cromatografía de líquidos de ultra-alto rendimiento Información general de cromatografía Método de HPLC H1 (Rt HPLC-dimensiones de la columna: 3.0 x 30 milímetros.
HPLC-tipo de columna: Zorbax SB-C18, 1.8 mieras.
HPLC-eluyente: A) agua + ácido trifluoroacético al 0.05 por ciento por volumen; B) ACN + ácido trifluoroacético al 0.05 por ciento por volumen.
HPLC-gradiente: Del 30 al 100 por ciento de B en 3.25 minutos, flujo: = 0.7 mililitros / minuto.
Método de HPLC H2 (RtH2): HPLC-dimensiones de la columna: 3.0 x 30 milímetros.
HPLC-tipo de columna: Zorbax SB-C18, 1.8 mieras.
HPLC-eluyente: A) agua + ácido trifluoroacético al 0.05 por ciento por volumen; B) ACN + ácido trifluoroacético al 0.05 por ciento por volumen.
HPLC-gradiente: Del 0 al 100 por ciento de B en 3.25 minutos, flujo: = 0.7 mililitros / minuto.
Método de LCMS H3 (RtH3): HPLC-dimensiones de la columna: 3.0 x 30 milímetros.
HPLC-tipo de columna: Zorbax SB-C18, 1.8 mieras.
HPLC-eluyente: A) agua + ácido trifluoroacético al 0.05 por ciento por volumen, B) ACN + ácido trifluoroacético al 0.05 por ciento por volumen.
HPLC-gradiente: Del 10 al 100 por ciento de B en 3.25 minutos, flujo: = 0.7 mililitros / minuto.
Método de LCMS H4 (RtH4): HPLC-dimensiones de la columna: 3.0 x 30 milímetros.
HPLC-tipo de columna: Zorbax SB-C8, 1.8 mieras.
HPLC-eluyente: A) agua + ácido trifluoroacético al 0.05 por ciento por volumen, B) ACN + ácido trifluoroacético al 0.05 por ciento por volumen.
HPLC-gradiente: Del 10 al 95 por ciento de B en 2.00 minutos, 95 por ciento de B en 2.00 minutos, flujo = 0.7 mililitros / minuto.
Método de UPLC H5 (RtH5): HPLC-dimensiones de la columna: 2.1 x 50 milímetros.
HPLC-tipo de columna: Acquity UPLC HSS T3 C18, 1.7 mieras.
HPLC-eluyente: A) agua + ácido trifluoro-acético al 0.1 por ciento por volumen, B) ACN + ácido trifluoro-acético al 0.1 por ciento por volumen.
HPLC-gradiente: Del 5 al 100 por ciento de B en 1.5 minutos, flujo: = 1.0 mililitros / minuto.
Método de LCMS H6 (RtH6): HPLC-dimensiones de la columna: 3.0 x 30 milímetros.
HPLC-tipo de columna: Zorbax SB-C18, 1.8 mieras.
HPLC-eluyente: A) agua + ácido trifluoroacético al 0.05 por ciento por volumen; B) ACN + ácido trifluoroacético al 0.05 por ciento por volumen.
HPLC-gradiente: Del 40 al 100 por ciento de B en 3.25 minutos, flujo: = 0.7 mililitros / minuto.
Método de LCMS H7 (RtH7): HPLC-dimensiones de la columna: 3.0 x 30 milímetros.
HPLC-tipo de columna: Zorbax SB-C18, 1.8 mieras.
HPLC-eluyente: A) agua + ácido trifluoroacético al 0.05 por ciento por volumen; B) ACN + ácido trifluoroacético al 0.05 por ciento por volumen.
HPLC-gradiente: Del 50 al 100 por ciento de B en 3.25 minutos, flujo: = 0.7 mililitros / minuto.
Método de UPLC H8 (RtH8): HPLC-dimensiones de la columna: 2.1 x 50 milímetros.
HPLC-tipo de columna: Acquity UPLC HSS T3, 1.8 mieras. HPLC-eluyente: A) agua + ácido fórmico al 0.1 por ciento por volumen, B) acetonitrilo (ACN) + ácido fórmico al 0.1 por ciento.
HPLC-gradiente: Del 10 al 95 por ciento de B en 1.5 minutos, 1.0 minutos con el 95 por ciento de B, flujo = 1.2 mililitros / minuto.
HPLC-temperatura de la columna: 50°C Método de UPLC H9 (RtH9): HPLC-dimensiones de la columna:2.1 x 50 milímetros.
HPLC-tipo de columna: Acquity UPLC HSS T3, 1.8 mieras.
HPLC-eluyente: A) agua + ácido fórmico al 0.05 por ciento por volumen + acetato de amonio 3.75 mM, B) acetonitrilo (ACN) + ácido fórmico al 0.04 por ciento por volumen.
HPLC-gradiente: Del 2 al 98 por ciento de B en 1.4 minutos, 98 por ciento de B en 0.45 minutos, flujo = 1.2 mililitros / minuto.
HPLC-temperatura de la columna: 50°C Método de UPLC H10 (RtHio): HPLC-dimensiones de la columna: 2.1 x 50 milímetros.
HPLC-tipo de columna: Acquity UPLC HSS T3, 1.8 mieras.
HPLC-eluyente: A) agua + ácido fórmico al 0.05 por ciento por volumen + acetato de amonio 3.75 mM, B) acetonitrilo (ACN) + ácido fórmico al 0.04 por ciento por volumen.
HPLC-gradiente: Del 2 al 98 por ciento de B en 1.4 minutos, 98 por ciento de B en 0.75 minutos, flujo = 1.2 mililitros / minuto.
HPLC-temperatura de la columna: 50°C Método de LCMS H11 (RtH ): HPLC-dimensiones de la columna 2.1 x 30 milímetros.
HPLC-tipo de columna: Ascentis Express C18, 2.8 mieras. HPLC-eluyente: A) agua + ácido fórmico al 0.05 por ciento por volumen + acetato de amonio 3.75 m , B) acetonitrilo (ACN) + ácido fórmico al 0.04 por ciento por volumen.
HPLC-gradiente: Del 2 al 98 por ciento de B en 1.4 minutos, 0.75 minutos con el 98 por ciento de B, flujo = 1.2 mililitros / minuto.
HPLC-temperatura de la columna. 50°C Método de UPLC H12 (RtHi2): HPLC-dimensiones de la columna 2.1 x 50 milímetros.
HPLC-tipo de columna: Acquity UPLC HSS T3 C18, 1.8 mieras.
HPLC-eluyente: A) agua + ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento por volumen, B) acetonitrilo (ACN) + ácido trifluoro-acético (TFA) al 0.1 por ciento por volumen.
HPLC-gradiente: Del 10 al 100 por ciento de minutos, flujo = 1.0 mililitro / minuto.
HPLC-temperatura de la columna Ejemplo 1 : [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H- [1 ,4]-oxazin-3-il)-4-f luoro-fenil]-amida del ácido 5-cloro-3-metox¡ metil-piridin-2-carboxílico a) 1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-etanona Una solución de di-isopropil-amina (17.78 mililitros, 126 mili-moles) en tetrahidrofurano (THF) (375 mililitros) se enfrió a -78°C. Se agregó por goteo una solución 1.6 M de BuLi en hexanos (79 mililitros, 126 milimoles). Después de 15 minutos, se agregó por goteo 4-bromo-1-fluoro-benceno (20 gramos, 114 milimoles), mientras que se mantenía la temperatura debajo de -60°C. Después de agitar durante 2.5 horas a -70°C, se agregó difluoro-acetato de etilo (13.22 mililitros). La mezcla se calentó a -40°C, y entonces se apagó vertiendo la mezcla sobre HCI 1M. La mezcla se extrajo con ligroína, se secó con MgS04.H20, se concentró, y se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice; hexano/del 5 al 15 por ciento de terbutil-metil-éter (TBME)), para dar el producto deseado como un líquido amarillo.
H-RMN (CDCI3, 360 MHz): d 8.09 (dd, 1H), 7.82-7.77 (m, 1H), 7.17 (t, 1H), 6.45 (t, 1H, CHF2). b) Terbutil-éster del ácido 1 -(5-bromo-2-fluoro-fenil)-1 -difluoro-metil-alil]-carbámico Una mezcla de 1 -(5-bromo-2-fluoro-fenil)-etanona (16 gramos, 63.2 milimoles), y N-terbutiloxi-carbonil-trifenil-imino-fosforano (26.3 gramos, 69.6 milimoles) se calentaron a 90°C en tolueno durante 18 horas. La mezcla se trituró con hexano, y se filtró para remover el óxido de trifenil-fosfina. El filtrado se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexano/del 1 al 5 por ciento de terbutil-metil-éter (TBME)), para dar 11.37 gramos (32.3 milimoles) del producto deseado como un aceite amarillo ligeramente impuro. TLC: Rf (Hexano / EtOAc, 6:1) = 0.65.
El producto se disolvió en tetrahidrofurano (THF) (100 mililitros), y se enfrió a -78°C. Se agregó por goteo bromuro de vinil-magnesio (48 mililitros de una solución 1 M en tetrahidrofurano (THF)), aunque la temperatura de la reacción no se dejó exceder de -60°C. La mezcla se agitó a -70°C durante 1 hora antes se dejó calentar hasta 0°C. La reacción se apagó con cloruro de amonio acuoso al 10 por ciento, y se extrajo con terbutil-metil-éter (TBME). La capa orgánica se lavó con salmuera, se trató con carbón activado y MgS04.H20, y se filtró sobre Celite. El filtrado se concentró y se cristalizó a partir de hexano, para dar el producto deseado como cristales incoloros.
HPLC: Rtm= 3.575 minutos; ESIMS [M + Na]+ =402/404(1 Br); 1H-RMN (CDCI3, 360 MHz): d 7.57 (dd, 1H), 7.51-7.45 (m, 1H), 7.00 (dd, 1H), 6.49 (t, 1H, CHF2), 6.21 (dd, 1H), 5.59 (d, 1H), 5.40 (dd, 1H), 5.25 (br, 1H), 1.40 (br s, 9H). c) Terbutil-éster del ácido [1 -(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2-difluoro-1 -hidroxi-metil-etil]-carbámico Una suspensión de terbutil-éster del ácido 1 -(5-bromo-2-fluoro-f e n i I ) - 1 -difluoro-metil-alil]-carbámico (10.99 gramos, 28.9 milimoles), y carbonato ácido de sodio (3.84 gramos, 43.4 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (200 mililitros), y metanol (MeOH) (80 mililitros), se enfrió a -78°C. Se introdujo una mezcla de 03 en gas de oxígeno hasta que persistió el color azul. El exceso de ozono se removió mediante burbujeo a través de gas de oxígeno durante 10 minutos. Se agregó NaBH4 (2.187 gramos, 57.8 milimoles) como un sólido en tres porciones. La mezcla se agitó durante 10 minutos a -78°C, y entonces se dejó calentar a 0°C. Después de 30 minutos, la mezcla se vertió sobre HCI 1N helado, y se extrajo con terbutil-metil-éter (TBME). La fase orgánica se lavó con HCI 1N, salmuera, se secó con MgS04.H20 y se evaporó. El producto crudo se cristalizó a partir de hexano, para dar el producto deseado como cristales incoloros.
TLC: Rf (Hexano / EtOAc, 4:1) = 0.29; HPLC: Rtm= 3.000 minutos; ESIMS [M + Na]+ =406/408(1 Br); 1H-RMN (DMSO-d6, 360 MHz): d 7.60-7.49 (m, 2H), 7.42 (br s, 1H), 7.180 (dd, 1H), 6.49 (t, 1H, CHF2), 5.27 (br s, 1H), 3.90 (br s, 2H), 1.35 (br s, 9H). d) N-[1 -(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2-difluoro-1 -hidroxi-metil-etil]-2-cloro-acetamida Una suspensión del terbutil-éster del ácido [1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2-difluoro-1 - hidroximetil-etil]-carbámico (10.22 gramos, 26.6 milimoles) en HCI 4N en dioxano (133 mililitros) se agitó durante dos horas a temperatura ambiente. La mezcla se evaporó, para dar la sal de clorhidrato de 2-amino-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-3,3-difluoro-propan-1-ol.
HPLC: RtH3= 2.550 minutos; ESIMS [M + H]+ =284,286(1 Br); El producto crudo se absorbió en dicloro-metano (DCM) (63 mililitros) y sosa acuosa al 10 por ciento (63 mililitros), y se agitó vigorosamente con enfriamiento con hielo. Se agregó por goteo una solución de cloruro de cloro-acetilo (3.34 mililitros, 42 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (10 mililitros). Se quitó el baño de hielo y se continuó la agitación durante 1 hora. La mezcla se diluyó con el terbutil-metil-éter (TBME) y agua. La fase orgánica se secó con MgS04.H20 y se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexano/del 25 al 33 por ciento de EtOAc), para dar el producto deseado como una resina ligeramente impura.
HPLC: RtH3= 3.336 minutos; ESIMS [M + H]+ =360/362/364 (1Br, 1CI); 1H-RMN (DMSO-d6, 360 Hz): d 8.78 (s, 1H), 7.62-7.53 (m, 2H), 7.19 (dd, 1H), 6.53 (t, 1H, CHF2), 5.43 (t, 1H), 4.27-4.02 (m, 4H). e) 5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-5-difluoro-metil-morfolin-3-ona Una solución de N-[1 -(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2-difluoro-1-hidroxi-metil-etil]-2-cloro-acetamida (9.59 gramos, 26.2 milimoles) en terbutanol (134 mililitros) se trató con KOtBu (3.58 gramos). La mezcla se calentó a reflujo durante 3 horas. Después de enfriarse, la mezcla se diluyó con EtOAc y HCI 1N. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con MgS04.H20, se filtró, y se evaporó. El producto se obtuvo como un cristal incoloro (terbutil-metil-éter (TBME)/hexano).
TLC: Rf (Hexano / EtOAc, 2:1) = 0.29; HPLC: RtH3= 2.950 minutos; ESI S [M + H]+ =324/326(1 Br); 1H-RMN (CDCI3, 360 MHz): d 7.61-7.55 (m, 2H), 7.09 (dd, 1H), 6.80 (br, 1H), 6.35 (t, 1H, CHF2), 4.37-4.17 (m, 4H). f) 5-difluoro-metil-5-(2-fluoro-fenil)-morfolin-3-ona La 5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-5-difluoro-metil-morfolin-3-ona (190 gramos, 586 milimoles), y acetato de sodio (57.7 gramos, 703 milimoles), se suspendieron en 1,850 mililitros de metanol. Eventualmente, se agregó Pd al 10 por ciento sobre carbón (18.7 gramos), y la mezcla de reacción se agitó en un aparato Parr en una atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente. Después de 60 minutos, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se evaporó. El residuo se disolvió en 2 litros de terbutil-metil-éter (TBME), se lavó con NaHC03 acuoso y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgS04.H20 y se evaporó, para dar 143.2 gramos del compuesto del título como un sólido blanco.
HPLC: Rtm = 0.792 minutos; ESIMS [M + H]+ = 246; 1H-RMN (CDCI3, 360 MHz): d 7.50-7.43 (m, 2H), 7.32-7.27 (m, 1H), 7.19 (dd, 1H), 6.62 (br, 1H), 6.37 (t, J = 54 Hz, 1H), 4.34 (d, 1H), 4.31 (d, 1H), 4.22 (d, 1H), 4.20 (d, 1H). g) 5-difluoro-metil-5-(2-fluoro-fenil)-morfolina-3-tiona Una mezcla de 5-difluoro-metil-5-(2-fluoro-fenil)-morfolin-3-ona (141 gramos, 575 milimoles), y reactivo de Lawesson (132 gramos, 316 milimoles) en 1,400 mililitros de tetrahidrofurano (THF) se calentó a 68°C durante 1 hora, se enfrió y entonces se evaporó. El residuo se disolvió en 1 litro de dicloro-metano (DC ), y se filtró sobre 2 kilogramos de gel de sílice con 10 litros de dicloro-metano (DCM), para dar 161 gramos del compuesto del título en la forma de una resina verdosa que se cristalizó lentamente. El compuesto se utilizó sin mayor purificación.
HPLC: Rtm = 1.799 minutos; ESIMS [M + H]+ = 262; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.42-7.35 (m, 1H), 7.28 (t, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.11 (dd, 1H), 6.29 (t, J = 54 Hz, 1H), 4.57 (d, 1H), 4.47 (d. 1H), 4.21 (d, 1H), 4.18 (d,1H). h) 5-difluoro-metil-5-(2-fluoro-fenil)-5,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il-amina La 5-difluoro-metil-5-(2-fluoro-fenil)-morfolina-3-tiona (160 gramos, 570 milimoles) se disolvió en 2.4 litros de una solución de 7 moles/litro de NH3 en metanol (MeOH) durante 6.5 horas, y después se dejó reposar durante la noche. La mezcla de reacción se evaporó y se absorbió en 2 litros de HCI 1N acuoso y 2 litros de terbutil-metil-éter (TBME). La fase acuosa se lavó con el terbutil-metil-éter (TBME), y se hizo básica a través de la adición de NaOH acuoso al 30 por ciento (300 mililitros), y algo de hielo. La mezcla se extrajo con dicloro-metano (DCM) tres veces, y las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2S04 y se concentraron al vacío. Se obtuvo el compuesto del título mediante cristalización a partir de dicloro-metano (DCM) / heptanos (128.45 gramos).
HPLC: RtH3 = 2.059 minutos; ESIMS [M + H]+ = 245; 1H-RMN (CDCI3, 360 MHz): d 7.77 (t, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 1H), 7.21 (t, 1H), 7.09 (dd, 1H), 6.19 (t, J = 54 Hz, 1H), 4.51 (br, 2H), 4.32, (d, 1H), 4.18 (d, 1H), 4.05 (d, 1H), 3.96 (d, 1H), 1.39 (s, 3H), 1.24 (s, 3H). i) 5-dif luoro-metil-5-(2-f luoro-5-nitro-fenil)-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina Se agregó nitrato de potasio (60.3 gramos, 596 milimoles) en porciones a 600 mililitros de ácido sulfúrico (T <20°C). Esta solución se agregó por goteo a una solución de 5-difluoro-metil-5-(2-fluoro-fenil)-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina (112 gramos, 459 mili-moles) en ácido sulfúrico (600 mililitros), mientras que se mantenía la temperatura de la reacción a <22°C con un baño de hielo. Después de agitar durante 1 hora, la mezcla se vertió sobre 10 kilogramos de hielo. Se agregó terbutil-metil-éter (TBME) (6 litros), y el pH se ajustó a 12-14 mediante la adición de NaOH acuoso al 30 por ciento (aproximadamente 5 litros). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo dos veces con terbutil-metil-éter (TBME). Las capas orgánicas combinadas se secaron con sulfato de sodio, y se evaporaron, para dar 130 gramos de un sólido amarillo que se utilizó adicionalmente sin purificación.
HPLC: RtH3 = 2.063 minutos; ESIMS [M + H]+ = 290; 1H-RMN (CDCI3, 360 MHz): d 8.71 (dd, 1H), 8.13 (dt, 1H), 7.13 (dd, 1H), 5.99 (t, J = 54 Hz, 1H), 4.55 (br, 2H), 4.33 (dd, 1H), 4.10 (d, 1H), 3.97 (d, 1H), 3.82 (dt, 1H). j) Terbutil-éster del ácido [5-difluoro-met¡l-5-(2-f luoro-5-nitro-fenil)-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico Una solución de 5-difluoro-metil-5-(2-fluoro-5-nitro-fenil)-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina (144.5 gramos, 500 milimoles), anhídrido de Boc (142 gramos, 650 milimoles), y di-isopropil-etil-amina (DIPEA) (131 mililitros, 749 milimoles) en 2,500 mililitros de tetrahidrofurano (THF), se agitó durante 3 días a temperatura ambiente. Todavía había material de partida restante. Se agregó anhídrido de Boc (56 gramos, 325 milimoles), la mezcla se calentó a 60°C, y se agitó durante 10 horas hasta que la reacción estuvo completa. La mezcla se evaporó, se disolvió en terbutil-metil-éter, se lavó con HCI acuoso 1N helado, agua, NaHC03 acuoso al 10 por ciento, y salmuera. La fase orgánica se secó con sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. El producto se purificó mediante cristalización a partir de dicloro-metano (DCM) / heptanos. Rendimiento 182.8 gramos de cristales blancos.
HPLC: RtHi = 3.259 minutos; ESIMS [M + Na]+ = 412; 1H-RMN (CDCIa, 360 MHz): d 8.70 (dd, 1H), 8.27 (dt, 1H), 7.34 (br, 1H), 7.25 (dd, 1H), 6.09 (t, J = 54 Hz, 1H), 4.85 (d, 1H), 4.58 (d, 1H), 4.49 (dd, 1H), 3.94 (dt, 1H). k) Terbutil-éster del ácido [5-(5-amino-2-fluoro-fenil)-5-difluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-M]-carbámico El terbutil-éster del ácido [5-difluoro-metil-5-(2-fluoro-5-nitro-fenil)-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico (180 gramos, 462 milimoles), y 17.61 gramos de Pd-C al 10 por ciento se suspendieron en tetrahidrofurano (THF) (1760 mililitros). La mezcla se agitó en un aparato Parr en una atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente. Después de 6 horas, la mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se evaporó. El residuo se cristalizó a partir de dicloro-metano (DCM) / heptanos, para proporcionar 157.6 gramos del compuesto del título como cristales color beige.
HPLC: RtH3 = 2.748 minutos; ESIMS [M + H]+ = 360; 1H-RMN (CDCI3, 360 MHz): d Espectro no interpretable debido a la presencia de una mezcla compleja de rotámeros.
I) Terbutil-éster del ácido [(R)-5-(5-amino-2-fluoro-fenil)-5-difluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4] -oxazi n -3 -M] -carbámico El producto racémico (terbutil-éster del ácido [5-(5-amino-2-fluoro-fenil)-5-difluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico (rae.)) se separó por medio de HPLC de preparación sobre una columna Chiralpak AD-H de 20 mieras (columna de HPLC de 8 x 100 x 48 milímetros), en un instrumento Bayer SMB CC50 utilizando la tecnología SMB con heptano/EtOH/MeOH, 70:20:10 como eluyente. El compuesto deseado fue el enantiómero (R) de elución más lenta. Rendimiento de 72.29 gramos del compuesto del título como una espuma incolora. Exceso enantiomérico (ee) = 99.3 por ciento; Rotación óptica: [a]D -97.5° (c=1, CHCI3) HPLC: RtH3 = 2.748 minutos; ESIMS [M + H]+ = 360; 1H-RMN (CDCI3, 360 MHz): d Espectro no interpretable debido a la presencia de una mezcla compleja de rotámeros. m) Terbutil-éster del ácido ((R)-5-{5-[(5-cloro-3-metoxi-metil-piridin-2-carbonil)-amino]-2-fluoro-fenil}-5-difluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-carbámico El ácido 5-cloro-3-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico (56 miligramos, 0.278 milimoles), terbutil-éster del ácido [(R)-5-(5-amino-2-fluoro-fenil)-5-difluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico (Ejemplo x, 100 miligramos, 0.278 milimoles), y HOAt (68.2 miligramos, 0.50 milimoles), se suspendieron en N,N-dimetil-formamida (DMF) (20 mililitros), y se enfriaron a 0°C. Se agregaron di-isopropil-etil-amina (DIPEA) (0.146 mililitros, 0.835 milimoles), y EDC (80 miligramos, 0.417 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. El producto crudo (592 miligramos) se pasó por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo), para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco vidriado. TLC Rf (5:1 de ciclohexano : acetato de etilo) = 0.31 ; MS: ESI+ 543, 545); 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 10.03 (s, br. 1H), 8.45 (m, 1H), 8.21 (m, 1H), 8.01 (m, 1H), 7.66 (m, 1H), 7.09 (m, 1H), 6.14 (t, 1H, CHF2), 5.09 (s, 2H), 4.79 (d, 1H), 4.56 (d, 1H), 4.38 (d, 1H), 3.95 (d, 1H), 3.55 (s, 3H), 1.49 (s, 9H). n) [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-¡l)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-cloro-3-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico A una solución del terbutil-éster del ácido ((R)-5-{5-[(5-cloro-3-metoxi-metil-piridin-2-carbonil)-amino]-2-fluoro-fenil}-5-difluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-carbámico (150 miligramos, 0.276 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (4 mililitros), se le agregó ácido trifluoro-acético (TFA) (0.35 mililitros, 4.54 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. El solvente se removió al vacío, y el residuo se diluyó con acetato de etilo y se vertió sobre una mezcla de amoníaco 2N/hielo. Las capas se separaron, y la fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. 116 miligramos. La cromatografía en gel de sílice (dicloro-metano (DCM)/metanol, 95:5 + amoníaco al 1 por ciento) proporcionó el compuesto del título. 102 miligramos.
TLC Rf=0.48 (dicloro-metano (DCM)/metanol, 95:5 + amoníaco al 1 por ciento); ESI+ MS 443, 445; HPLC-MS: RtH8= 1.87 minutos (99 por ciento de pureza, ESI + 443, 445); 1H-RMN (600 MHz, DMSO-D6): d 10.65 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.02 (m, 1H), 7.80 (m, 1H), 7.18 (m, 1H), 6.17 (m, 3H, CHF2, NH2 (amidina)), 4.88 (s, 2H), 4.14 (d, 1H), 4.02 (d, 1H), 3.95 (d, 1H), 3.88 (d, 1H), 3.41 (s, 3H).
Ejemplos 2 a 13: Los compuestos enlistados en la Tabla 1 se prepararon mediante un procedimiento análogo a aquél empleado en el Ejemplo 1.
Las sales de clorhidrato se obtuvieron a partir de soluciones de la base libre correspondiente mediante la adición de ácido clorhídrico en dioxano o de ácido clorhídrico en dietil-éter, y la evaporación de los solventes.
Tabla 1 Ejemplo 14: [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-M)-4,5-difluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico a) 1-(2,3-difluoro-fenil)-2,2-difluoro-etanona Una solución de 1 ,2-difluoro-benceno (49.74 gramos, 436 mili-moles) en 700 mililitros de tetrahidrofurano (THF) se enfrió a -70°C. Se agregó por goteo BuLi (solución 1.6 M en Hexanos, 272 mililitros, 436 milimoles), mientras que se mantenía una temperatura de la reacción <-60°C. Después de agitar durante 2.5 horas a -70°C, se agregó difluoro-acetato de etilo (48.3 mililitros, 436 milimoles), a una velocidad tal que la temperatura de la reacción no excediera de -45°C. Después de agitar durante 5 minutos, la mezcla se vertió sobre NH4CI acuoso al 10 por ciento y terbutil-metil-éter (TBME). La fase orgánica se lavó con NaHC03 acuoso al 5 por ciento, salmuera, y se secó con MgS04.H20. Los solventes se destilaron a presión atmosférica y el producto residual se destiló a 12 mmHg. La fracción que hirvió a 89-90°C se recolectó para dar 78.76 gramos de un líquido incoloro. 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 7.73 (t, 1H), 7.49 (q, 1H), 7.27 (m, 1H), 7.40 (t, J = 54 Hz,1H). b) (S)-2-(2,3-difluoro-fenil)-1,1-difluoro-3-n¡tro-propan-2-ol Una solución de 1 -(2,3-difluoro-fenil)-2,2-difluoro-etanona (21.8 gramos, 113 milimoles), y nitro-metano (61.2 mililitros, 1.135 moles) en 220 mililitros de dicloro-metano (DCM) se enfrió a -25°C. Se agregó el catalizador 1 (3.12 gramos, 5.67 milimoles), con agitación. La solución homogénea se almacenó a -20°C durante 4 días. El catalizador se removió mediante cromatografía sobre una pequeña columna de gel de sílice (dícloro-metano (DCM) / ( NH3 acuoso al 10 por ciento / EtOH) 99:1). La evaporación de los solventes dio 30.45 gramos el producto crudo como un aceite incoloro. El producto se purificó adicionalmente mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / dicloro-metano (DCM), del 50 al 100 por ciento), para dar 27.9 gramos del compuesto del título como un aceite incoloro. a[D] = + 13.4° (c = 1, CHCI3); HPLC: RtH3= 2.055 minutos; 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 7.52 (t, 1H), 7.33-7.20 (m, 2H), 6.00 (t, J = 54 Hz,1H), 5.30 (d, 1H), 5.01 (d, 1H), 4.21 (s, 1H). c) (S)-3-amino-2-(2,3-difluoro-fenil)-1,1-difluoro-propan-2-ol Una solución de (S)-2-(2,3-difluoro-fenil)-1 ,1 -difluoro-3-nitro-propan-2-ol (27.97 gramos, 110 milimoles) en 90 mililitros de AcOH se agregó por goteo a una suspensión bien agitada de polvo de Zn (72.3 gramos, 1.105 moles) en 200 mililitros de AcOH. La temperatura de la reacción se mantuvo a 35-45°C. Después de la adición, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se filtró sobre Celite, y se lavó con EtOAc. El filtrado y los lavados de EtOAc se evaporaron, el residuo se disolvió en EtOAc, y se agregó tanto NaOH acuoso 1N hasta que el pH de la capa acuosa hubo alcanzado aproximadamente 12. Las partes insolubles se disolvieron a través de la adición de un poco de NH3 acuoso saturado. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó con MgS04.H20, y se evaporó. El residuo se cristalizó a partir de terbutil-metil-éter (TBME)/hexanos, para proporcionar 22.4 gramos del compuesto del título como cristales blancos. HPLC: RtHi= 2.469 minutos [M + H]+ 224; 1H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz): d 7.46-7.37 (m, 2H), 7.21 (q, 1H), 6.16 (t, J = 54 Hz,1H), 6.1 (br, 1H), 3.06 (d, 1H), 3.02 (d, 1H), 4.21 (s, 1H). d) N-[(S)-2-(2,3-difluoro-fenil)-3,3-difluoro-2-hidroxi-propil]-2-nitro-bencen-sulfonamida Una solución de (S)-3-amino-2-(2,3-difluoro-fenil)-1 ,1 -difluoro-propan-2-ol (22.4 gramos, 100 milimoles), y piridina (40.6 mililitros, 502 milimoles) en 230 mililitros de dicloro-metano (DCM) se enfrió a + 5°C. Se agregó en porciones cloruro de 2-nitro-bencen-sulfonilo (23.36 gramos, 105 milimoles) (T<15°C). Después de la adición, la mezcla se agitó sin enfriamiento con hielo durante 1 hora. La mezcla se diluyó con el terbutil-metil-éter (TBME) y HCI 2N. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó con MgS04.H20, y se evaporó. El producto crudo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / dicloro-metano (DCM), del 15 al 30 por ciento, luego DCM / EtOH, del 0 al 3 por ciento), para dar 39.6 gramos del compuesto del título como una resina amarilla que se cristalizó al reposar.
HPLC: RtH3= 2.644 minutos [M + Na]+ 409; 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 8.10 (m, 2H), 7.86 (m, 1H), 7.76 (m, 2H), 7.38 (t, 1H), 7.19-7.07 (m, 2H), 6.03 (t, J = 54 Hz,1H), 5.67 (t, 1H), 3.88 (dd, 1H), 3.73 (dd, 1H), 3.41(s, 1H). e) (R)-2-difluoro-metil-2-(2,3-difluoro-fenil)-1-(2-nitro-bencen-sulfonil)-aziridina La N-[(S)-2-(2,3-difluoro-fenil)-3,3-difluoro-2-hidroxi-propil]-2-nitro-bencen-sulfonamida (39.65 gramos, 97 milimoles) se disolvió en 400 mililitros de tetrahidrofurano (THF) junto con PPh3 (30.6 gramos, 117 milimoles), se enfrió a 0-5°C, y se trató con una solución de DEAD en tolueno al 40 por ciento (53.4 mililitros, 117 milimoles) de una forma por goteo. Se continuó la agitación durante 3 horas mientras que se calentaba lentamente hasta la temperatura ambiente. La solución se diluyó con 400 mililitros de tolueno, se concentró para remover el tetrahidrofurano (THF), y se purificó directamente mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / dicloro-metano (DCM), del 50 al 70 por ciento), para dar el compuesto del título como una resina amarilla.
HPLC: RtH3= 3.096 minutos [M + Na]+ 413; 1H-RMN (CDCI3l 400 MHz): d 8.28-8.23 (m, 1H), 7.83-7.75 (m, 3H), 7.40 (t, 1H), 7.30-7.21 (m, 1H), 7.19-7.12 (m, 1H), 6.17 (t, J = 54 Hz,1H), 3.38 (s, 1H), 3.27 (s, 1H). f) (R)-2-(2,3-difluoro-fenil)-3,3-difluoro-2-(2-nitro-bencen-sulfonil-amino)-propil-éster de ácido acético Una solución de (R)-2-difluoro-metil-2-(2,3-difluoro-fenil)-1 -(2-nitro-bencen-sulfonil)-aziridina (4.78 gramos, 12.25 milimoles) en 50 mililitros de sulfóxido de dimetilo (DMSO) se trató con KOAc (2.404 gramos, 24.49 milimoles), y se agitó durante 2 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con agua dos veces, seguida por salmuera, y se secó con MgS04.H20. El producto crudo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / EtOAc, del 25 al 35 por ciento), para dar 4.6 gramos del compuesto del título como una resina incolora.
HPLC: RtH3= 2.906 minutos [M + Na]+ 473; H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 7.99 (d, 1H), 7.77-7.71 (m, 1H), 7.57 (m, 2H), 7.37-7.31 (m, 1H), 7.23-7.15 (m, 2H), 6.70 (s, 1H), 6.59 (t, J = 54 Hz,1H), 4.57 (d, 1H), 4.55 (d, 1H), 2.10 (s, 3H). 9) N-[(R)-1-(2,3-difluoro-fenil)-2,2-difluoro-1-hidroxi-metil-etil]-2-nitro-bencen-sulfonamida Una solución del (R)-2-(2,3-difluoro-fenil)-3,3-difluoro-2-(2-nitro-bencen-sulfonil-amino)-propil-éster de ácido acético (4.57 gramos, 10.15 milimoles) en 35 mililitros de metanol, se trató con LiOH acuoso (4M, 12.68 mililitros, 50.7 milimoles). La reacción fue ligeramente exotérmica. Después de 30 minutos, la mezcla se diluyó con agua salmuera y EtOAc. La capa orgánica se lavó con HCI 1N y salmuera, y se secó con MgS04.H20. La evaporación dio el compuesto del título como un sólido blanco, suficientemente puro para otras transformaciones.
HPLC: RtH3= 2.516 minutos [M + Na]+ 431; 1H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz): d 8.67 (s, 1H), 7.91 (d, 1H), 7.80 (t, 1H), 7.74-7.67 (m, 2H), 7.37 (q, 1H), 7.30-7.24 (m, 1H), 7.19-7.12 (m, 1H), 6.69 (t, J = 54 Hz,1H), 5.44 (t, 1H), 3.98 (s, 2H), 2.10 (s, 3H). h) Etil-éster del ácido [(R)-2-(2, 3-difl uoro-feni l)-3,3-dif luoro-2-(2-nitro-bencen-sulfonil-am i no)-propoxi] -acético A una solución de N-[(R)-1 -(2,3-difluoro-fenil)-2,2-difluoro-1-hidroxi-metil-etil]-2-nitro-bencen-sulfonamida (2.59 gramos, 6.34 mili-moles), y acetato de rodio(ll), dímero (0.056 gramos, 0.127 mili-moles) en 41 mililitros de dicloro-metano (DCM), se le agregó diazoacetato de etilo (1.570 mililitros, 12.69 milimoles) en 7.4 mililitros de dicloro-metano (DCM) durante un período de 4 horas, utilizando una bomba de jeringa. La mezcla se agitó durante 1 hora, se diluyó con hexanos, y se pasó por cromatografía sobre una columna de gel de sílice (hexanos / dicloro-metano (DCM), del 50 al 100 por ciento), para dar 1.78 gramos del compuesto del título como una resina ligeramente impura color amarillo pálido.
HPLC: RtH4= 2.784 minutos [M + Na]+ 517; 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 7.95 (d, 1H), 7.70 (t, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.54 (t, 1H), 7.46 (t, 1H), 7.20-7.05 (m, 2H), 6.97 (s, 1H), 6.61 (t, J = 54 Hz,1H), 4.34-4.08 (m, 6H), 1.37-1.27 (m, 3H). i) (R)-5-dif luoro-metil-5-(2,3-difluoro-fenil)-morfolin-3-ona Una solución del etil-éster del ácido [(R)-2-(2,3-difluoro-fenil)-3,3-difluoro-2-(2-nitro-bencen-sulfonil-amino)-propoxi]-acético (2.46 gramos, 4.98 milimoles) en 25 mililitros de metanol, se trató con LiOH acuoso (4M, 6.22 mililitros, 24.88 milimoles). La reacción fue ligeramente exotérmica. Después de 30 minutos, la mezcla se diluyó con HCI 1N, salmuera, y EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó con gS0 .H20. La evaporación dio el compuesto del título como una resina amarilla, que se utilizó para otras transformaciones sin purificación. HPLC: RtH3= 2.575 minutos [ + Na]+ 489.
El producto se disolvió en 12 mililitros de EtOH y 6 mililitros de tetrahidrofurano (THF), se trató con tiofenol (1.1 gramos, 10 mili-moles), y NaOH 1 M (14.9 mililitros), y se calentó a 60°C durante 4 horas. La mezcla se enfrió y se lavó con terbutil-metil-éter (TBME). El pH se ajustó a 6-7 con HCI 1N, y se evaporó a sequedad. El producto residual se extrajo con EtOH (3 veces). Los extractos de etanol se evaporaron, para dar 1.69 gramos de una espuma amarilla. HPLC: RtHi= 3.478 minutos [M + H]+ 282.
Este producto se puso a reflujo en 50 mililitros de tolueno que contenía 2.5 mililitros de AcOH durante 18 horas. La mezcla se evaporó y el compuesto del título se aisló como un sólido blanco después de la cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / EtOAc, del 25 al 40 por ciento).
HPLC: RtH2= 2.673 minutos [M + H]+ 264; 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 7.33-7.19 (m, 4H), 6.68 (br s, 1H), 6.34 (t, J = 54 Hz,1H), 4.34-4.18 (m, 4H). j) (R)-5-difluoro-metil-5-(2,3-difluoro-fenil)-morfolina-3-tiona A una solución de (R)-5-difluoro-metil-5-(2,3-difluoro-fenil)-morfolin-3-ona (543 miligramos, 2.063 milimoles) en 6 mililitros de tetrahidrofurano (THF) se le agregó reactivo de Lawesson (459 miligramos, 1.135 milimoles), y la mezcla se agitó a 50°C durante 45 minutos. La mezcla se evaporó y se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc, del 10 al 15 por ciento), para dar 587 miligramos del compuesto del título como una resina incolora.
HPLC: RtH2= 3.124 minutos [M + H]+ 280; 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 8.43 (br s, 1H), 7.33-7.19 (m, 3H), 7.12 (t, 1H), 6.34 (t, J = 54 Hz,1H), 4.62 (d, 1H), 4.55 (d, 1H), 4.27 (s, 2H). k) (R)-5-difluoro-metil-5-(2,3-difluoro-fenil)-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina Una solución de la (R)-5-difluoro-metil-5-(2,3-difluoro-fenil)-morfolina-3-tiona en una solución de NH3/MeOH (7 moles/litro, 8.5 mililitros) se agitó en un recipiente sellado durante 4 horas. La mezcla se evaporó y se pasó por cromatografía sobre gel de sílice (DCM / (EtOH / NH3 acuoso saturado, 9:1) del 0 al 5 por ciento), para proporcionar 517 miligramos del compuesto del título como una resina incolora. HPLC: RtH2= 2.249 minutos [M + H]+ 263; 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 7.51 (t, 1H), 7.24-7.12 (m, 2H), 6.34 (t, J = 54 Hz,1H), 4.38 (d, 1H), 4.35 (d, 1H), 4.19 (d, 1H), 4.03 (d, 1H).
I) (R)-5-difluoro-metil-5-(2,3-difluoro-5-nitro-fenil)-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina A una solución agitada de (R)-5-difluoro-metil-5-(2,3-difluoro-fenil)-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina (508 miligramos, 1.937 milimoles) en 5 mililitros de H2S04 se le agregó KN03 (255 miligramos, 2.52 milimoles) en cuatro porciones (exotérmica). La solución resultante se agitó durante 20 minutos a temperatura ambiente, y entonces se vertió en agua helada. La mezcla se basificó mediante la adición de Na2C03 sólido (cuidado ! : espumación), y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera, se trató con algo de carbón y MgS04.H20, y se filtró sobre Celite. La evaporación del solvente dio el compuesto del título, que contenía el 6 por ciento de un regioisómero. El producto se utilizó sin mayor purificación.
HPLC: RtH2= 2.313 minutos [M + H]+ 308; ^-RM (CDCI3, 400 MHz): d 8.65 (s, 1H), 8.10 (t, 1H), 6.10 (t, J = 54 Hz,1H), 4.52-3.98 (m, 4H). m) Terbutil-éster del ácido [(R)-5-difluoro-metil-5-(2,3-difluoro-5-nitro-fenil)-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico A una solución de (R)-5-difluoro-metil-5-(2,3-difluoro-5-nitro-fenil)-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina (510 miligramos, 1.660 milimoles) en 5 mililitros de dicloro-metano (DCM), se le agregaron di-isopropM-etil-amina (DIPEA) (322 miligramos, 2.49 milimoles), y dicarbonato de diterbutilo (417 miligramos, 2.158 milimoles). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a 40°C. La mezcla de reacción se evaporó, y el compuesto del título se aisló como cristales blancos (terbutil-metil-éter (TBME) / hexanos). TLC (hexanos/ EtOAc, 6:1): Rf = 0.25; HPLC: RtH3= 3.475 minutos; ESIMS = [M + Na]+ 430; 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 8.55-8.51 (m, 1H), 8.14-8.08 (m, 1H), 7.43 (br s, 1H), 6.04 (t, J = 54 Hz,1H), 4.87 (d, 1H), 4.59 (d, 1H), 4.51 (dd, 1H), 3.95 (d, 1H), 1.52 (s, 9H). n) Terbutil-éster del ácido [(R)-5-(5-amino-2,3-difluoro-fenil)-5-difluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico Una solución del terbutil-éster del ácido [(R)-5-difluoro-metil-5-(2,3-difluoro-5-nitro-fenil)-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico (540 miligramos, 1.326 milimoles) en 3 mililitros de EtOH y 2 mililitros de tetrahidrofurano (THF), se agitó en una atmósfera de hidrógeno en la presencia de 140 miligramos de Pd-C al 5 por ciento "Degussa" E101 ND hasta que el análisis de LC- S indicó la conversión completa. La mezcla se inundó con nitrógeno, se diluyó con dicloro-metano (DCM), y se filtró sobre un cojín de Celite. El filtrado se evaporó y se purificó adicionalmente mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / EtOAc, del 25 al 50 por ciento), para dar el compuesto del título como una espuma incolora. TLC (hexanos / EtOAc, 2:1): Rf = 0.26; HPLC: RtH2= 3.057 minutos; ESIMS = [M + H]+ 378; 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz, señales amplias debidas a rotámeros): d 6.73 (m, 1H), 6.50 (m, 1H), 6.18 (t, J = 54 Hz,1H), 4.95-3.99 (m, 4H), 1.52 (s, 9H). o) Terbutil-éster del ácido ((R)-5-{5-[(5-ciano-3-metil-piridin-2-carbonil)-amino]-2,3-difluoro-fenil}-5-difluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-carbámico A una solución helada del terbutil-éster del ácido [(R)-5-(5-amino-2,3-difluoro-fenil)-5-d¡fluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico (113 miligramos, 0.299 milimoles), ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico (53.4 miligramos, 0.329 milimoles), y HOAt (65.2 miligramos, 0.479 milimoles) en 1.2 mililitros de ?,?-dimetil-formamida (DMF), se le agregaron 0.07 mililitros (0.39 milimoles) de EDC (base libre). La mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se agregaron agua y EtOAc, y la capa orgánica se lavó con NaHC03 acuoso saturado, salmuera, y se secó con MgS04.H20. El producto se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / EtOAc, del 15 al 20 por ciento), para dar 108 miligramos del compuesto del título como una espuma incolora. TLC (hexanos / EtOAc, 3:1): Rf = 0.31 ; HPLC: RtH3= 3.374 minutos; ESIMS = [M + H]+ 522; H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 10.12 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.20 (br t, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.40 (br s, 1H), 6.13 (t, J = 54 Hz,1H), 4.85 (d, 1H), 4.62 (d, 1H), 4.43 (d, 1H), 4.40 (d, 1H), 2.89 (s, 3H), 1.52 (s, 9H). p) [3-((R)-5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin- 3-il)-4,5-difluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico A una solución del terbutil-éster del ácido ((R)-5-{5-[(5-ciano-3-metil-piridin-2-carbonil)-amino]-2,3-difluoro-fen¡l}-5-difluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-carbámico (107 miligramos, 0.205 mili-moles) en 0.9 mililitros de dicloro-metano (DCM), se le agregaron por goteo 0.3 mililitros de ácido trifluoro-acético (TFA). La mezcla se agitó durante 1.5 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió cuidadosamente sobre sosa acuosa a aproximadamente el 10 por ciento, y EtOAc. La fase orgánica se lavó con NaHC03 acuoso saturado y salmuera, y se secó con Na2S04. El producto se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (DCM / (EtOH / NH3 acuoso saturado, 9:1) del 0 al 2 por ciento), para dar 81 miligramos del compuesto del título como un sólido blanco.
HPLC: RtH2 = 2.827 minutos; ESIMS [M + H]+ = 422; 1H-RMN (DMSO-d6, 600 MHz): 10.91 (s, 1H), 8.40 (s, 1 H) 8.98-8.94 (m, 1H), 7.82 (s, 1H), 6.19 (s, 2H), 6.13 (t, J = 54 Hz, 1H), 4.08 (d, 1H), 4.01 (d, 1H), 3.95 (d, 1H), 3.89 (d, 1H), 2.53 (s, 3H).
Ejemplos 15 a 16: Los compuestos enlistados en la Tabla 2 se prepararon mediante un procedimiento análogo a aquél empleado en el Ejemplo 14.
Las sales de clorhidrato se obtuvieron a partir de soluciones de la base libre correspondiente mediante la adición de ácido clorhídrico en dioxano o de ácido clorhídrico en dietil-éter, y la evaporación de los solventes.
Tabla 2 Ejemplo 17: Clorhidrato de [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-ciano-pirid¡n-2-carboxílico a) 2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-propan-2-ol A una solución de di-isopropil-amina (57.3 mililitros, 402 milimoles) en tetrahidrofurano (500 mililitros) se le agregó, bajo argón, una solución 1.6 M de nBuLi en hexano (260 mililitros, 416 milimoles) debajo de -50°C. Después de agitar durante 30 minutos a -75°C, se agregó 4-bromo-1 -fluoro-benceno (31.1 mililitros, 277 milimoles), mientras que se mantenía la temperatura debajo de -70°C. Después de agitar durante 2 horas a -75°C, se agregó acetona (41.2 mililitros, 554 milimoles), debajo de -65°C, y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a -75°C, se calentó hasta -50°C, y se vertió en una solución acuosa de NH4CI al 10 por ciento. La mezcla se extrajo con terbutil-metil-éter (TBME), las fases orgánicas se lavaron con una solución acuosa de KHS04, una solución saturada de NaHC03 y salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron. El producto crudo se cristalizó a partir de hexano, para proporcionar el compuesto del título como cristales blancos: TLC (hexano-EtOAc, 3:1): Rf = 0.45; HPLC: RtH5 = 1.045 minutos; 1 H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.74 (dd, 1H), 7.36 (m, 1H), 6.93 (dd, 1H), 2.04 (d, 1H), 1.63 (s, 6H). b) 4-bromo-1 -fluoro-2-isopropenil-benceno A una solución de 2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-propan-2-ol (119.7 gramos, 498 milimoles) en CH2CI2 (50 mililitros), se le agregó hidroquinona (2.74 gramos, 24.9 milimoles), y 250 mililitros de H3P04 al 85 por ciento. La mezcla de reacción resultante se agitó durante 3.5 horas a 50°C. La mezcla se vertió sobre agua helada, y se extrajo con CH2CI2. Las fases orgánicas se lavaron con NaOH acuoso 2N y agua, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron. El producto crudo se disolvió en hexano y se filtró a través de un surco de gel de sílice, para obtener, después de la concentración a 600 mbar, el compuesto del título como un aceite incoloro: TLC (hexano): Rf = 0.52; HPLC: RtH5 = 1.416 minutos; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.43 (dd, 1H), 7.37 (m, 1H), 6.94 (dd, 1H), 5.27 (d, 2H), 2.13 (s, 3H). c) (S)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-propano-1 ,2-diol A una suspensión de K3Fe(CN)6 (186 gramos, 561 milimoles), K2C03 (78 gramos, 561 milimoles), (DHQ)2-PHAL (1.311 gramos, 1.674 milimoles), y K2Os02(OH)4 (0.378 gramos, 1 milimol) en t-BuOH-H20, 1:1 (1600 mililitros), se le agregó 4-bromo-1 -fluoro-2-isopropenil-benceno (36 gramos, 167 milimoles) a 0°C, y la mezcla de reacción se agitó durante 14 horas a 0°C. Después de la adición cuidadosa de Na2S205 (100 gramos) a 0-5°C, la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora antes de la extracción con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con una solución de NaS303 al 5 por ciento y salmuera, se secaron sobre MgS0 , se filtraron, y se concentraron, para dar el compuesto del título como un sólido blanco: TLC (hexano-EtOAc, 1:1): Rf = 0.46; HPLC: RtH5 = 0.767 minutos; 1 H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.71 (dd, 1H), 7.27 (m, 1H), 6.83 (dd, 1H), 3.85 (d, 1H), 3.62 (d, 1H), 2.94 (s, 3H), 2.01 (s, 1H), 1.43 (s, 3H); ESIMS: 266, 268 [(M + NH4)+]. d) (S)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-metil-oxirano A una solución del (S)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-propano-1 ,2-diol (37.35 gramos, 150 milimoles) en CH2CI2 (400 mililitros) se le agregó, bajo argón, NEt3 (41.8 mililitros, 300 milimoles), y por goteo cloruro de mesilo (12.8 mililitros, 165 milimoles) a 0-5°C. Después de agitar durante 0.5 horas a 0-5°C, la mezcla de reacción se agregó a cold HCI 1N y se extrajo con CH2CI2. Los extractos combinados se lavaron con HCI 1N, H20 y una solución saturada de NaHC03, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron. El mesilato crudo se disolvió en terbutil-metil-éter (500 mililitros), y 200 mililitros de NaOH acuoso 2N y, después de agitar durante 2 horas a 25°C, la mezcla se extrajo con terbutil-metil-éter. Los extractos combinados se lavaron con una solución de NaH2P04 y salmuera, se secaron sobre gS04, se filtraron, y se concentraron, para proporcionar el enantiómero (S) como un aceite incoloro: 78 por ciento de exceso enantiomérico (Chiralpak AS-H 1218, hexano-EtOH, 97:3, 0.4 mililitros/minuto); TLC (hexano-EtOAc, 3:1): Rf = 0.69; HPLC: RtH5 = 1.186 minutos; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.46 (dd, 1H), 7.30 (m, 1H), 6.83 (dd, 1H), 2.88 (d, 1H), 2.72 (d, 1H), 1.59 (s, 3H). e) (S)-1 -azido-2-(5-bromo-2-f luoro-fenil)-propan-2-ol A una solución de (S)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-metil-oxirano (51.85 gramos, 224 milimoles) en EtOH (800 mililitros), se le agregaron NaN3 (36.8 gramos, 531 milimoles), NH4CI (60.6 gramos, 1122 milimoles), y 18-corona-6 (59.8 gramos, 224 milimoles), y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 6 horas. La mezcla de reacción se filtró y se concentró hasta la mitad de su volumen. El aceite residual se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con una solución saturada de NaHC03 y salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron, para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo claro: TLC (hexano-EtOAc, 1:1): Rf = 0.70; HPLC: RtH3 = 1.115 minutos; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.72 (dd, 1H), 7.32 (m, 1H), 6.85 (dd, 1H), 3.73 (d, 1H), 3.51 (d, 1H), 2.44 (s, 1H), 1.50 (s, 3H). f) (S)-1 -amino-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-propan-2-ol A una suspensión de LiAIH4 (4.65 gramos, 122 milimoles) en tetrahidrofurano (250 mililitros) se le agregó, bajo argón a 0-5°C, una solución de (S)-1 -azido-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-propan-2-ol (33.4 gramos, 122 milimoles) disuelto en tetrahidrofurano (150 mililitros) durante un período de 30 minutos. Después de agitar durante 1 hora a 0-5°C, la reacción se apagó mediante la adición cuidadosa de agua (4.7 mililitros), NaOH 4 N (4.7 mililitros), y agua (14.1 mililitros), y se agitó nuevamente durante 3 horas a 25°C. La suspensión blanca se secó con MgS04, se filtró, y se concentró. El producto solidificado se recristalizó a partir de terbutil-metil-éter/hexano, para proporcionar el compuesto del título como cristales color beige: 98 por ciento de exceso enantiomérico (Chiralpak AD-H hexano-EtOH, 75-25 + NEt3 al 0.05 por ciento); TLC (CH2CI2-MeOH 10:1): Rf = 0.10; HPLC: RtH5 = 0.558 minutos; ESIMS: 248, 250 [(M + H)+]¡ 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.76 (dd, 1H), 7.25 (m, 1H), 6.82 (dd, 1H), 4.16 (br s, 1H), 3.19 (d, 1H), 2.72 (d, 1H), 1.44 (s, 3H), 0.95 (br s, 2H). g) N-[(S)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-hidroxi-propil]-2-nitro-bencen-sulfonamida A una solución de (S)-1 -amino-2-(5-bromo-2-fluoro-fen¡l)-propan-2-ol (34.7 gramos, 140 milimoles) en tetrahidrofurano (400 mililitros), se le agregó cloruro de 2-nitro-bencen-sulfonilo (34.9 gramos, 154 milimoles) a 0-5°C, y después, NaOH acuoso 1N durante un período de 0.5 horas. La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a 20°C. La mezcla de reacción se diluyó con terbutil-metil-éter (TBME), y se lavó con agua y una solución de NaH2P04 y salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró, y se concentró, para proporcionar el compuesto del título después de la cristalización a partir de terbutil-metil-éter-hexano como cristales color beige: TLC (tolueno-EtOAc, 3:1): Rf = 0.51; HPLC: RtH5 = 1.118 minutos; ESIMS: 450, 452 [(M + NH4)+]; 1 H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.98 (m, 1H), 7.81 (m, 1H), 7.65 (m, 2H), 7.59 (dd, 1H), 7.24 (m, 1H), 6.79 (dd, 1H), 5.60 (t, 1H), 4.16 (br s, 1H), 3.55 (dd, 1H), 3.44 (dd, 1 H), 2.51 (s, 1H), 1.51 (s, 3H). h) (R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-metil-1 -(2-nitro-bencen-sulfonil)-aziridina A una solución de N-[(S)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-hidrox¡-propil]-2-nitro-bencen-sulfonamida (20.8 gramos, 48 milimoles) en CH2CI2 (400 mililitros), se le agregó PPh3 (19.2 gramos, 72.4 milimoles) a 0-5°C, y azodicarboxilato de dietilo (11.6 mililitros, 72.4 milimoles). La mezcla de reacción se agitó durante 24 horas a 25°C, y se concentró. Se obtuvo el compuesto del título después de la purificación cromatográfica sobre gel de sílice (hexano-EtOAc, 20:1 a 2:1) como cristales amarillos: TLC (tolueno-EtOAc, 3:1): Rf = 0.69; HPLC: RtH5 = 1-308 minutos; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.31 (m, 1H), 7.28 (m, 3H), 7.60 (dd, 1H), 7.42 (m, 1H), 6.91 (dd, 1H), 3.24 (s, 1H), 2.81 (s, 1H), 2.06 (s, 3H). i) Etil-éster del ácido (R)-2-[(R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(2-nitro-bencen-sulfonil-amino)-propoxi]-3,3,3-trifluoro-2-metil-propiónico A una suspensión de NaH (2.53 gramos, al 60 por ciento en aceite mineral, 63 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (160 mili-litros), se le agregó por goteo, bajo argón, etil-éster del ácido (R)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxi-2-metil-propiónico (11.99 gramos, 63 mili-moles), y después de agitar durante 0.5 horas a 20°C, (R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-metil-1 -(2-nitro-bencen-sulfonil)-aziridina (21.85 gramos, 52.6 milimoles). La reacción se mantuvo a 25°C durante 16 horas. La mezcla se agregó a HCI acuoso 2N frío, y el producto se extrajo con terbutil-metil-éter. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución saturada de NaHC03 y salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron. El sólido residual se recristalizó a partir de terbutil-metil-éter/hexano, para proporcionar el compuesto del título como cristales amarillos: TLC (hexano-EtOAc, 1:1): Rf = 0.59; HPLC: RtH5 = 1 444 minutos; ESIMS: 618, 620 [(M + NH4)+], 1 H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.83 (dd, 1H), 7.61 (m, 3H), 7.48 (dd, 1H), 7.27 (m, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.60 (dd, 1H), 4.33 (m, 2H), 3.84 (s, 2H), 1.84 (s, 3H), 1.57 (s, 3H), 1.33 (t, 3H). j) (R)-2-[(R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(2-nitro-bencen-sulfonil-amino)-propoxi]-3,3,3-trif luoro-2-metil-propionamida Una solución del etil-éster del ácido (R)-2-[(R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(2-n¡tro-bencen-sulfonil-amino)-propoxi]-3,3,3-tr¡fluoro-2-metil-propiónico (26.6 gramos, 44.2 milimoles) en NH3 7N en metanol (75 mililitros), se agitó durante 16 horas a 50°C. El solvente se removió bajo presión reducida, y el sólido residual se recristalizó a partir de Et20, para dar el compuesto del título como cristales amarillos: TLC (hexano-EtOAc, 1:1): Rf = 0.35; HPLC: RtH5 = 1.184 minutos; ESIMS: 589, 591 [(M + NH4)+]; 1 H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.85 (d, 1H), 7.64 (m, 3H), 7.44 (d, 1H), 7.41 (dd, 1H), 7.26 (m, 1H), 6.68 (br s, 1H), 6.57 (dd, 1H), 6.19 (s, 1H), 5.54 (br s, 1H), 4.24 (d, 1H), 3.93 (d, 1H), 1.79 (s, 3H), 1.67 (s, 3H). k) N-[(R)-1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-((R)-1-ciano-2,2,2-tr if I uoro-1-metil-etoxi)-1-metil-etil]-2-n i tro-be ncen-sulfonam ida A una solución de la (R)-2-[(R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(2-nitro-bencen-sulfon¡l-amino)-propox¡]-3,3,3-tr¡fluoro-2-met¡l-propionamida (20.83 gramos, 35.6 milimoles) en CH2CI2 (300 mililitros) se le agregó, bajo argón, NEt3 (12.5 mililitros, 89 milimoles), y a 0-5°C, anhídrido trifluoro-acético (6.15 mililitros, 42.7 milimoles). Después de agitar durante 4 horas a 25°C, la mezcla de reacción se agregó a una solución fría de NaHC03, y el producto se extrajo con CH2CI2. Los extractos combinados se lavaron con HCI acuoso 0.1 N frío, agua, y una solución saturada de NaHC03, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron, para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo, el cual se utilizó como tal para el siguiente paso: TLC (hexano-EtOAc, 1:1): Rf = 0.73; HPLC: RtH5 = 1.364 minutos; ESIMS: 571, 573 [(M + NH4)+]¡ 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.89 (d, 1H), 7.62 (ddd, 1H), 7.57 (ddd, 1H), 7.52 (m, 2H), 7.29 (m, 1H), 6.58 (dd, 1H), 6.19 (s, 1H), 4.17 (s, 2H), 1.81 (s, 3H), 1.72 (s, 3H).
I) (2R,5R)-5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,5-dimetil-2-trifluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina A una solución de la N-[(R)-1 -(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-((R)-1-ciano-2,2,2-trifluoro-1-metil-etoxi)-1 -metil-etil]-2-nitro-bencen-sulfonamida (6.54 gramos, 11.8 milimoles), y N-acetil-cisteína (2.4 gramos, 26.0 milimoles) en metanol (80 mililitros), se le agregó K2C03 (3.62 gramos, 26.0 milimoles), y la mezcla de reacción se calentó a 80°C durante 16 horas. Después de la remoción del solvente, el residuo se disolvió en agua, y se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con una solución saturada de NaHC03 y salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron, para proporcionar el compuesto del título después de la purificación cromatográfica sobre gel de sílice (hexano-EtOAc, 10:1 a 1:2 conteniendo NEt3 al 0.03 por ciento) como un aceite amarillo: TLC (hexano-EtOAc, 1:1): Rf = 0.58; HPLC: RtH5 = 0.843 minutos; ESIMS: 369, 371 [(M + H)+]; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.66 (dd, 1H), 7.35 (m, 1H), 6.91 (dd, 1H), 3.97 (m, 2H), 1.53 (s, 3H), 1.49 (s, 3H). m) (2R,5R)-5-(2-fluoro-fenil)-2,5-dimetil-2-trifluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina Una solución de la (2R,5R)-5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,5-dimetil-2-trifluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina (1.66 gramos, 4.5 milimoles), y acetato de sodio (0.369 gramos, 4.5 milimoles) en metanol (50 mililitros) se hidrogenó sobre Pd-C al 10 por ciento durante 6 horas a 50°C. El catalizador se filtró sobre Celite, y el filtrado se concentró. El residuo se disolvió en una solución saturada de NaHC03, y se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron, para proporcionar el compuesto del título como un aceite incoloro: TLC (hexano-EtOAc, 1:1): Rf = 0.19; HPLC: RtH5 = 0.777 minutos; ESIMS: 291 [(M + H)+]; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.41 (dt, 1H), 7.26 (m, 1H), 7.11 (t, 1H), 7.05 (dd, 1H), 4.11 (dd, 1H), 3.94 (dd, 1H), 1.54 (s, 3H), 1.49 (s, 3H). n) (2R,5R)-5-(2-fluoro-5-nitro-fenil)-2,5-dimetil-2-trifluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina A una solución de la (2R,5R)-5-(2-fluoro-fenil)-2,5-dimetil-2-trifluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-íl-amina (1.035 gramos, 3.57 milimoles) en H2S04 (6 mililitros), se le agregó en porciones KN03 (0.379 gramos, 3.74 milimoles) bajo enfriamiento con agua helada. La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a 25°C, se diluyó con agua, y se basificó con K2C03 bajo enfriamiento. El producto se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con una solución saturada de NaHC03 y salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron. La purificación mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexano-EtOAc, 4:1 a 1:1 conteniendo NEt3 al 0.05 por ciento) dio el compuesto del título como un aceite amarillo claro: TLC (hexano-EtOAc, 1:1): Rf = 0.50; HPLC: RtH5 = 0.749 minutos; ESIMS: 336 [(M + H)+]; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.48 (dd, 1H), 8.14 (m, 1H), 7.15 (dd, 1H), 4.20 (br s, 2H), 4.04 (dd, 1H), 3.91 (dd, 1H), 1.54 (s, 3H), 1.49 (s, 3H). o) Terbutil-éster del ácido [(2R,5R)-5-(2-fluoro-5-nitro-fenil)-2,5-dimetil-2-trifluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico A una solución de la (2R,5R)-5-(2-fluoro-5-nitro-fenil)-2,5-dimetil-2-trifluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina (1.14 gramos, 3.4 milimoles) en ACN (20 mililitros), se le agregaron Boc20 (0.891 gramos, 4.08 milimoles), y NEt3 (0.72 mililitros, 5.1 mili- moles), y la mezcla se agitó durante 16 horas a 25°C. La mezcla de reacción se evaporó y el aceite residual se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexano-EtOAc, 20:1 a 7:3), para dar el compuesto del título después de la cristalización a partir de Et20-hexano como cristales color beige: TLC (hexano-EtOAc, 3:1): Rf = 0.37; HPLC: RtH5 = 1.355 minutos; ESIMS: 436 [(M + H)+]¡ 1 H-RMN (360 Hz, CDCI3): d 11.04 (br s, 1H), 8.24 (m, 2H), 7.30 (dd, 1H), 4.41 (dd, 1H), 4.11 (dd, 1H), 1.68 (s, 3H), 1.51 (s, 9H), 1.49 (s, 3H). p) Terbutil-éster del ácido [(2R,5R)-5-(5-amino-2-fluoro-fenil)-2,5-dimetil-2-trifluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico Una solución del terbutil-éster del ácido [(2R,5R)-5-(2-fluoro-5-nitro-fenil)-2,5-dimetil-2-trifluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico (0.98 gramos, 2.25 milimoles) en isopropanol-tetrahidrofurano, 2:1 (24 mililitros) se hidrogenó sobre Pd-C al 5 por ciento durante 4 horas a 50°C. El catalizador se filtró sobre Celite, y el filtrado se concentró, para proporcionar el compuesto del título, después de la cristalización a partir de terbutil-metil-éter-hexano, como cristales color beige: TLC (hexano-EtOAc, 1:1): Rf = 0.42; HPLC: RtH5 = 0.955 minutos; ESIMS: 406 [(M + H)+]; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 6.82 (dd, 1H), 6.52 (m, 2H), 4.30 (dd, 1H), 3.97 (dd, 1H), 3.06 (br s, 2H), 1.58 (s, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.46 (s, 9H). q) Terbutil-éster del ácido ((2R,5R)-5-{5-[(3-cloro-5-ciano-piridin-2-carbonil)-amino]-2-fluoro-fenil}-2,5-dimetil-2-tr¡fluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-carbámico A una solución del terbutil-éster del ácido [(2R,5R)-5-(5-amino- 2- fluoro-fenil)-2,5-dimetil-2-trifluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin- 3- il]-carbámico (82 miligramos, 0.20 milimoles) en N,N-d¡metil-formamida (DMF) (2 mililitros), se le agregaron ácido 3-cloro-5-ciano-piridin-2-carboxílico (47 miligramos, 0.26 milimoles), EDC-HCI (57 miligramos, 0.30 milimoles), HOAt (41 miligramos, 0.30 milimoles), y di-isopropil-etil-amina (DIPEA) (0.14 mililitros, 0.79 milimoles), y la mezcla de reacción se mantuvo a 25°C durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida, el residuo se disolvió en EtOAc, y se lavó con una solución saturada de NaHC03 y salmuera, se secó sobre MgS0 , se filtró, y se concentró. Se obtuvo el compuesto del título después de la purificación mediante cromatografía en columna por evaporación instantánea sobre gel de sílice (hexano-EtOAc, 20:1 a 1:1) como una espuma color amarillo claro. TLC (hexano-EtOAc, 2:1): Rf = 0.29; HPLC: RtH5 = 1.398 minutos; ESIMS: 570, 572 [(M + H)+]¡ 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 11.05 (br s, 1H), 9.74 (br s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.87 (m, 1H), 7.55 (dd, 1H), 7.16 (dd, 1H), 4.43 (d, 1H), 4.09 (d, 1H), 1.71 (s, 3H), 1.57 (s, 3H), 1.56 (m, 9H); 19F-RMN (360 MHz, CDCI3): d 74.3, 116.2. r) Clorhidrato de [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimet¡l-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-ciano-piridin-2-carboxílico A una solución del terbutil-éster del ácido ((2R,5R)-5-{5-[(3- cloro-5-ciano-piridin-2-carbonil)-amino]-2-fluoro-fenil}-2,5-dimetil-2-trifluoro-met¡l-5,6-d¡hidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-carbám¡co (105 miligramos, 0.166 milimoles) en CH2CI2 (1 mililitro), se le agregó ácido trifluoro-acético (TFA) (0.3 mililitros), y la mezcla de reacción se mantuvo a 25°C durante 2 horas. La reacción se agregó a una solución acuosa fría de K2C03 al 10 por ciento, y el producto se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron, para proporcionar la [3-((3R,6R)-5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-ciano-piridin-2-carboxílico como una espuma incolora. El compuesto del título se convirtió en su sal de clorhidrato mediante la disolución de la base libre en CH2CI2, la adición de 1.05 equivalentes de HCI 2N en Et20, la evaporación a sequedad, seguida por la cristalización a partir de CH2Cl2-Et20, para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco: TLC (CH2CI2- eOH 9:1): Rf =0.51; HPLC: RtH5= 0.939 minutos; ESIMS: 470, 472 [(M + H)+]¡ 1H-RMN (600 MHz, DMSO-d6): d 11.59 (s, 1H), 11.15 (s, 1H), 9.60 (d, 2H), 9.13 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 7.83 (m, 1H), 7.78 (dd, 1H), 7.36 (dd, 1H), 4.32 (d, 1H), 4.09 (d, 1H), 1.73 (s, 3H), 1.72 (s, 3H); 19F-R N (360 MHz, CDCI3): d 76.4, 116.4.
Ejemplos 18 a 36: Los compuestos enlistados en la Tabla 3 se prepararon mediante un procedimiento análogo a aquél empleado en el Ejemplo 17.
Tabla 3 Ejem plo 37: [3-(5-am i no-6,6-bis-fl uoro-meti l-3-meti 1-3,6-di hidro-2H-[1 ,4]-oxazi n-3-il)-4-fluoro-fenil]-am ida del ácido 5-ciano-3-metil-p¡ridin-2-carboxílico 3-f l uoro-2-fl uoro-meti l-2-trimetil -si la ni loxi-propionitril o A la 1 ,3-difluoro-propan-2-ona (8.5 gramos, 90 milimoles) , agregó por goteo durante 30 minutos, cianuro de TMS (8.97 gramos, 90 milimoles). La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d 4.55 (d, 2 H), 4.44 (d, 2 H), 0.28 (s, 9H); 9F-R N (376 MHz, CDCI3): d -226 (t). b) Ácido 3-fluoro-2-fluoro-metil-2-hidroxi-propiónico El 3-fluoro-2-fluoro-metil-2-trimetil-silaniloxi-propionitrilo (17.4 gramos, 90 milimoles) se trató con HCI al 37 por ciento (300 mililitros), y se calentó a un suave reflujo durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, y se concentró al vacío. El sólido obtenido de esta manera se volvió a disolver en 300 mililitros de etanol, y se concentró al vacío, y se secó en un alto vacio.
El sólido obtenido de esta manera (17 gramos) contenía una cantidad significativa de cloruro de amonio, y se utilizó sin mayor purificación. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-D6): d 7.3 - 7.0 (m, 4H), 6.5 - 5.6 (s, 1H), 4.58 - 4.43 (m, 4 H). 13C-RMN (150 MHz, DMSO-D6): d 171 (t), 85 (d), 83 (d), 75 (t). c) Etil-éster del ácido 3-fluoro-2-f luoro-metil-2-hidroxi-propiónico El ácido 3-fluoro-2-fluoro-metil-2-hidroxi-propiónico crudo (17 gramos) se disolvió en etanol (400 mililitros), y se agregó H2S04 (98 por ciento, 30 gramos). La mezcla de reacción se puso a reflujo durante 16 horas.
La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, y se filtró. La solución se trató cuidadosamente con 30 gramos de Na2C03 sólido, y la mezcla resultante se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se agregaron 400 mililitros de dicloro-metano (DCM), y la mezcla se filtró. La solución se concentró (50°C, 150 mbar), y se purificó adicionalmente mediante destilación (82°C, 20 mbar), para dar un líquido incoloro.
H-RMN (400 MHz, DMSO-D6): d 4.65 - 4.43 (m, 4H), 4.30 (q, 2H), 3.88 - 3.63 (s,1H), 1.30 (t, 3H). d) Etil-éster del ácido 2-[2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(2-nitro-bencen-sulfonil-am¡no)-propoxi]-3-fluoro-2-f luoro-metil-propiónico A una suspensión de NaH (1.62 gramos, 60 por ciento, 40.5 milimoles) en 75 mililitros de N.N-dimetil-formamida (DMF) se le agregó etil-éster del ácido 3-fluoro-2-fluoro-metil-2-hidroxi-propiónico (6.8 gramos, 40.5 milimoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, y entonces se agregó la 2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-metil-1 -(2-nitro-bencen-sulfonil)-aziridina racémica (14 gramos, 33.7 milimoles, de una manera análoga al Ejemplo 17, paso a-h)). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 días.
La mezcla de reacción se agregó a una solución fría de HCI acuoso 2N (250 mililitros), y el producto se extrajo con 250 mililitros de EtOAc 2 veces, se lavó con una solución de NaHC03 (250 mililitros) y salmuera (250 mililitros). La capa orgánica se secó sobre MgS04 y se concentró bajo presión reducida, para obtener un sólido grisáceo, el cual se trituró con metanol frío.
HPLC: RtH3= 1-26 minutos; ESIMS [M + H30]+= 600, 602; 1H-RMN (400 MHz, DMSO): d 8.40 (s, 1 H), 7.89 (d, 1H), 7.85 -7.60 (m, 3H), 7.45 (d, 1H), 6.91 (dd, 1H), 4.85 - 4.45 (m, 4H), 4.20 (q, 2H), 4.00 (d, 1H), 3.81 (d, 1H), 1.61 (s, 3H), 1.20 (t, 3H). e) 2-[2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(2-nitro-bencen-sulfonil-am¡no)-propoxi]-3-f luoro-2-f luoro-metil-propionamida El etil-éster del ácido 2-[2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(2-nitro-bencen-sulfonil-amino)-propoxi]-3-fluoro-2-fluoro-metil-propiónico (10 gramos, 17.14 milimoles) se disolvió en NH37 N en metanol (MeOH) (40 mililitros), y la mezcla de reacción amarilla se agitó a 50-55°C durante 16 horas en un frasco sellado.
La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida, para obtener un sólido amarillo pálido.
HPLC: RtH3= 1-05 minutos; ESIMS [M + H30]+ = 571, 573; 1H-RMN (400 MHz, DMSO): d 8.85 - 8.65 (s, 1H), 7.95 - 7.40 (m, 6H), 6.95 (m, 1H), 4.63 (d, 4H), 3.88 (m, 2H), 1.56 (s, 3H). f) N-[1 -(5-bromo-2-f luoro-fenil)-2-(ciano-b¡s-fluoro-metil-metoxi)-1 -metil-etil]-2-nitro-bencen-sulfonamida La 2-[2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(2-nitro-bencen-sulfonil-amino)-propoxi]-3-fluoro-2-fluoro-metil-propionamida (5 gramos, 9 milimoles) se suspendió en 150 mililitros dicloro-metano (DCM) seco. Se agregó N-metil-morfolina (2.5 mililitros). Se agregó TFAA (2.3 gramos, 10.8 milimoles) en 20 mililitros de dicloro-metano (DCM) por goteo durante 5 minutos. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. Se agregó IM-metil-morfolina (2.5 mililitros). Se agregó TFAA (2.3 gramos, 10.8 mili-moles) en 20 mililitros de dicloro-metano (DCM) por goteo durante 5 minutos.
La mezcla de reacción se agregó a una solución acuosa saturada fría de NaHCO3 (400 mililitros), y la mezcla se agitó durante 5 minutos a temperatura ambiente. Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo 2 veces con dicloro-metano (DCM) (100 mililitros). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con HCI 0.1 N frío (100 mililitros), agua (100 mililitros), y una solución saturada de NaHC03 (100 mililitros), se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron.
HPLC: RtH3= 1.17 minutos; ESIMS [M + H30]+ = 553, 555; H-RMN (400 MHz, CDCI3): d 7.89 (d, 1H), 7.70 - 7.47 (m, 4H), 7.31 (d, 1H), 6.59 (dd, 1H), 6.21 (s, 1H), 4.67 (m, 2H), 4.56 (m, 2H), 4.25 (d, 1H), 4.17 (d, 1H), 1.83 (s, 3H). g) 5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2-bis-fluoro-metil-5-meti 1-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina Una suspensión de la N-[1 -(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-(ciano-bis-fluoro-metil-metoxi)-1 -metil-etil]-2-nitro-bencen-sulfonamida (5 gramos, 9.32 milimoles), K2C03 (2.83 gramos, 20.51 milimoles), y ácido 2-acetil-amino-3-mercapto-propiónico (3.8 gramos, 23.31 mili-moles) en EtOH (100 mililitros), se puso a reflujo durante 16 horas.
La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, y se filtró. La solución se concentró para obtener una espuma amarilla sólida.
La espuma sólida se suspendió en una solución de Na2C03 al 10 por ciento (50 mililitros), y se extrajo con EtOAc (200 mililitros, 3 veces). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa de Na2C03 al 10 por ciento (50 mililitros), NaOH 1 M (50 mililitros), y salmuera (50 mililitros). La solución se secó sobre MgSO-?, se filtró, y se evaporó.
HPLC: RtH3= 1.17 minutos; ESIMS [M + H]+ = 351, 353; 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d 7.68 (dd, 1H), 7.33 (m, 1H), 6.89 (dd, 1H), 4.75 - 4.39 (m, 4H), 3.96 (d, 1H), 3.87 (d, 1H), 1.51 (s, 3H). h) Terbutil-éster del ácido [5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2-bis-fluoro-metil-5-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico La 5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2-bis-fluoro-metil-5-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina (3.3 gramos, 9.4 milimoles) se disolvió en 100 mililitros de dicloro-metano (DCM). Se agregó anhídrido de Boc (2.46 gramos, 11.48 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas.
La mezcla de reacción se trató con una solución acuosa de ácido cítrico al 10 por ciento (50 mililitros), y se agitó durante 5 minutos a temperatura ambiente. Las fases se separaron y las capas orgánicas se lavaron con una solución de NaHC03 (25 mililitros), y salmuera (25 mililitros). La solución se secó sobre MgS0 , se filtró, y se evaporó. El producto crudo se purificó por medio de cromatografía en gel de sílice, para proporcionar el compuesto del título como un sólido cristalino blanco. TLC (Hexano / EtOAc, 9:1): Rf=0.27; HPLC: RtH3= 1.27 minutos; ESIMS [M + H]+ = 451, 453; 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d 10.98 -10.94 (s, 1H), 7.43 (m, 2H), 6.98 (m, 1H), 5.04 - 4.88 (dd, 1H), 4.77 - 4.70 (m, 1H), 4.63 -4.43 (m, 3H), 4.06 (d, 1H), 1.67 (s, 3H), 1.53 (s, 9H). i) Terbutil-éster del ácido [5-(5-amino-2-fluoro-fenil)-2,2-bis-fluoro-metil-5-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico El terbutil-éster del ácido [5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2-bis-fluoro-metil-5-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico (2.27 gramos, 5.03 milimoles), la trans-N,N-dimetil-ciclohexan-1 ,2-diamina racémica (715 miligramos, 5.03 milimoles), ascorbato de sodio (400 miligramos, 2 milimoles), y NaN3 (2.62, 40.2 milimoles), se suspendieron en EtOH (100 mililitros) y H20 (43 mililitros). La mezcla de reacción se desgasificó, y se agregó Cul (383 miligramos, 2 milimoles) bajo N2. La mezcla de reacción se agitó a 70°C durante 45 minutos. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, y se agregaron agua (100 mililitros) y EtOAc (200 mililitros). Las fases se separaron, y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (200 mililitros). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua (250 mililitros), amoníaco acuoso al 5 por ciento (250 mililitros), y salmuera (250 mililitros). La capa orgánica se secó sobre Na2S04 anhidro, y la capa orgánica se concentró bajo presión reducida. El sólido obtenido se disolvió en etanol (50 mililitros), y se agregó Pd/C al 5 por ciento (350 miligramos, E101 N/D Degussa). La mezcla de reacción se desgasificó y se hidrogenó a 1.1 bar durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró y se concentró. El producto crudo se purificó por medio de cromatografía en gel de sílice (gradiente: Hexano/EtOAc al 6 por ciento — » Hexano/EtOAc al 48 por ciento), para proporcionar el compuesto del título como un sólido cristalino blanco: TLC (Hexano / EtOAc, 2:1): Rf=0.66; HPLC: RtH3= 1.07 minutos; ESIMS [M + H]+ = 388; 1H-RMN (400 MHz, DMSO): d 10.75 -10.72 (s, 1H), 6.90 (m, 1H), 6.50 (m, 2H), 5.10 - 5.03 (s, 1H), 5.04 - 4.40 (m, 4H), 4.32 -4.05 (dd, 2H), 1.60 (s, 3H), 1.42 (s, 9H). j) Terbutil-éster del ácido (5-{5-[(5-c¡ano-3-metil-piridin-2-carbonil)-amino]-2-fluoro-fenil}-2,2-bis-fluoro-metil-5-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-carbámico El terbutil-éster del ácido [5-(5-amino-2-fluoro-fenil)-2,2-bis-fluoro-metil-5-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico (400 miligramos, 1.03 milimoles), ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico (201 miligramos, 1.24 milimoles), HOAT (215 miligramos, 1.55 milimoles), y N-metil-morfolina (209 miligramos, 2.65 milimoles), se disolvieron en ?,?-dimetil-formamida (DMF) seca (10 mililitros). Se agregó EDC*HCI (297 miligramos, 1.55 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas.
La mezcla de reacción se trató con agua (30 mililitros) y EtOAc (50 mililitros), y se agitó durante 5 minutos a temperatura ambiente. Las fases se separaron, y las capas orgánicas se lavaron con una solución de NaHC03 (25 mililitros), y salmuera (25 mililitros). La solución se secó sobre Na2S04, se filtró, y se evaporó. El producto crudo se purificó por medio de cromatografía en gel de sílice, para proporcionar el compuesto del título como un sólido cristalino blanco. TLC (Hexano / EtOAc 7:3): Rf=0.39; HPLC: RtH3= 1.24 minutos; ESIMS [M + H]+ = 532; H-RMN (400 MHz, CDCI3): d 11.09 -11.01 (s, 1H), 10.01 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.80 (m, 1H), 7.58 (m, 1H), 7.12 (m, 1H), 5.06 - 4.90 (dd, 1H),), 4.76 (d, 1H), 4.67 - 4.45 (m, 3H), 4.10 (m, 1H), 2.83 (s, 3H), 1.72 (s, 3H), 1.54 (s, 9H). k) [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-¡l)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-met¡ I-piridin-2-carboxílico El terbutil-éster del ácido (5-{5-[(5-ciano-3-metil-piridin-2-carbonilla mi no]-2-fluoro-fen i l}-2,2-bis-fluoro-metil-5-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-carbámico (450 miligramos, 0.847 mili-moles) se disolvió en dicloro-metano (DCM) (8 mililitros). Se agregó por goteo ácido trifluoro-acético (TFA) (965 miligramos, 8.47 milimoles). La mezcla de reacción se agitó luego durante 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agregó a una solución acuosa fría de Na2C03 (50 mililitros). Se agregó dicloro-metano (DCM) (30 mililitros), y la mezcla de reacción se agitó durante 10 minutos. Las fases se separaron, y las capas orgánicas se lavaron con una solución de NaHCOa (25 mililitros), y salmuera (25 mililitros). La solución se secó sobre Na2S04, se filtró, y se evaporó, para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco.
HPLC: RtH3= 0.73 minutos; ESIMS [M + H]+ = 432; 1H-RMN (400 MHz, DMSO): d 10.70 -10.63 (br. s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.75 (m, 2H), 7.11 (m, 1H), 6.10 - 6.00 (s, 2H), 4.90 (dd, 1H),), 4.73 - 4.47 (m, 3H), 3.85 (dd, 2H), 2.51 (s, 3H), 1.40 (s, 3H).
Ejemplo 38: [3-((R)-5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico El producto racémico de la [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico (350 miligramos) se separó por medio de HPLC de preparación sobre una columna Chiralpak AD-H de 320 x 7.65 milímetros, utilizando n-heptano / iPrOH, 70 : 30 (+ dietil-amina al 0.05 por ciento) como eluyente.
El compuesto deseado fue el enantiómero (R) de elución más lenta (146 miligramos, sólido blanco, exceso enantiomérico (ee) = 100 por ciento (Detección a 210 nanómetros)).
Ejemplos 39 a 41 : Los compuestos enlistados en la Tabla 4 se prepararon mediante procedimientos análogos a aquéllos empleados en el Ejemplo 37 y en el Ejemplo 38.
Tabla 4 Ejemplo 42: [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-di-hidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-M)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico a) Etil-éster del ácido (5-bromo-2-f luoro-fenil)-oxo-acético Una solución de 22.80 mililitros (160 milimoles) de di-isopropil-amina en 400 mililitros de tetrahidrofurano (THF) se enfrió a -78°C. Se agregó por goteo una solución 1.6 de BuLi en hexanos (100 mililitros, 160 milimoles). Después de 15 minutos, se agregaron por goteo 25.45 gramos de 4-bromo-1 -fluoro-benceno (145 milimoles), mientras que se mantenía la temperatura debajo de -60°C. Después de agitar durante 2.5 horas a -70°C, se agregaron 21.7 mililitros de oxalato de dietilo (160 milimoles). La mezcla se calentó a -50°C. Después de 15 minutos, la temperatura se enfrió hasta -70°C nuevamente, y entonces la mezcla se vertió sobre 350 mililitros de HCI 1M. La mezcla se extrajo con Mgroína, se secó con MgS04.H20, se concentró, y se destiló a aproximadamente 6 mbar (punto de ebullición (b.p.) de 112°C a 115°C), para dar 31.58 gramos del producto deseado como un líquido amarillo.
H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 8.07 (dd, 1H), 7.77 (ddd, 1H), 7.12 (t, 1H), 4.47 (q, 2H), 1.44 (t, 3H). b) Etil-éster del ácido (R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-hidrox¡-3-nitro-propiónico A una solución enfriada a -25°C de 35.86 gramos (130 milimoles) de etil-éster del ácido (5-bromo-2-fluoro-fenil)-oxo-acético y 3.59 gramos (6.52 milimoles) del Catalizador 1 (CHX135): (R)-(6-hidroxi-quinolin-4-il)-(5-vinil-1 -aza-biciclo-[2.2.2]-oct-2-il)-metil-éster del ácido 3,5-bis-trifluoro-metil-benzoico (CAS registro: 1079392-85-0) en 360 mililitros de dicloro-metano (DCM), se le agregaron 70.3 mililitros (1.3 moles) de nitro-metano. La mezcla se mantuvo durante 3 días a -20°C hasta que el análisis de TLC mostró la conversión completa. El catalizador se removió pasando la mezcla de reacción sobre un pequeño cojín de gel de sílice (DCM / (EtOH/NH3 acuoso saturado, 9:1) 99:1). El producto crudo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/ EtOAc, del 5 al 15 por ciento), para dar 39.88 gramos del compuesto del título como un aceite incoloro. Exceso enantiomérico (ee) = 96 por ciento; HPLC: RtH3= 2.705 minutos; ESIMS [M + Na]+ = 358/360(1 Br); 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 7.84 (dd, 1H), 7.51 (ddd, 1H), 7.01 (dd,1H), 5.57 (d,1H), 4.86 (d,1H), 4.46-4.28 (m,2H), 1.33 (t,3H). c) Etil-éster del ácido (R)-3-amino-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-h id roxi -propión ico Se suspendió polvo de Zn (78 gramos, 1.187 moles) en 240 mililitros de AcOH utilizando un agitador mecánico. A esta suspensión se le agregó por goteo una solución del etil-éster del ácido (R)-2-(5- romo-2-fluoro-fenil)-2-hidroxi-3-nitro-propiónico (39.88 gramos, 119 milimoles) en 160 mililitros de AcOH, mientras que se mantenía la temperatura entre 30°C y 40°C con el uso de un baño de agua. Después de 15 minutos, la mezcla se filtró sobre Celite, y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró, se absorbió en EtOAc, y se lavó con una solución de sosa al 10 por ciento. Las partes insolubles se disolvieron mediante la adición de algo de NH3 acuoso. La capa orgánica se lavó con NaHC03 acuoso saturado y salmuera, y se secó con Na2S04. La evaporación dio 34 gramos del compuesto del título como un sólido blanco, suficientemente puro para su síntesis adicional. HPLC: RtH2= 2.397 minutos; ESIMS [M + H]+ = 306/308(1 Br); 1H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz): d 7.74 (dd, 1H), 7.54 (ddd, 1H), 7.14 (dd,1H), 4.17-4.03 (m,2H), 3.21 (d,1H), 2.87 (d,1H), 1.13 (t,3H). d) (R)-3-amino-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-propano-1 ,2-diol, clorhidrato Bajo una atmósfera de nitrógeno, se agregan por goteo 1.415 mililitros de BH3.SMe2 (limpio, 14.9 milimoles) a una solución del etil-éster del ácido (R)-3-amino-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-hidroxi-propiónico (1.52 gramos, 4.97 milimoles) en 15 mililitros de tetrahidrofurano (THF). La reacción es exotérmica con desprendimiento de gas. La mezcla se calienta a reflujo durante 3 horas. El exceso de borano se apaga mediante la adición cuidadosa de 3 mililitros de metanol. Se agrega más metanol, seguido por 3 mililitros de HCI acuoso 2M. La mezcla se evapora, se disuelve en 20 mililitros de metanol, y se evapora (2 veces). El residuo se cristaliza a partir de EtOH/EtOAc, para dar 907 miligramos del compuesto del título como cristales blancos. HPLC: RtHi= 2.451 minutos; ESIMS [M + H]+ = 264/266(1 Br); 1H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz): d 7.80 (br, 2H), 7.76 (dd, 1H), 7.58 (ddd, 1H), 7.19 (dd, 1H), 6.30 (s, 1H), 5.28 (br s, 1H), 3.72 (d, 1H), 3.63 (d, 1H), 3.26 (d, 1H), 3.14 (d, 1H). e) N-[(R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,3-dihidroxi-propil]-2-nitro-bencen-sulfonamida Una suspensión del (R)-3-amino-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-propano-1 ,2-diol, clorhidrato (790 miligramos, 2.63 milimoles), cloruro de 2-nitro-bencen-sulfonilo (583 miligramos, 2.63 milimoles), K2C03 (363 miligramos, 2.63 milimoles), y KHCO3 (562 miligramos, 5.26 milimoles) en 8 mililitros de acetonitrilo (ACN), se agitó durante 2 horas. La mezcla se dividió entre EtOAc y salmuera. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó con MgS04.H20, y se evaporó. La cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/ EtOAc, del 25 al 50 por ciento) dio 1.42 gramos del compuesto del título como una espuma incolora. HPLC: RtH2= 3.136 minutos; ESIMS [M + Na]+ = 371/373 (1Br); 1H-RMN (DMSO-d6, 400 MHz): d 7.96-7.90 (m, 2H), 7.87-7.79 (m, 2H), 7.65 (dd, 1H), 7.58 (br, 1H), 7.44 (ddd, 1H), 7.03 (dd, 1H), 5.60 (S.1H), 4.88 (t,1H), 3.67-3.57 (m,2H), 3.41 (d,1H), 3.31 (d,1H). f) (S)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-1 -(2-nitro-bencen-sulfonil)-2-(tetrahidro-piran-2-iloxi-metil)-aziridina A una solución helada de N-[(R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,3- dihidroxi-propil]-2-nitro-bencen-sulfonamida (1.40 gramos, 3.12 mili-moles), y dihidro-pirano (0.299 mililitros, 3.27 milimoles) en 14 mililitros de dicloro-metano (DCM), se le agregó CSA (36 miligramos, 0.156 milimoles). Después de calentar hasta la temperatura ambiente, la mezcla se agitó durante 2 horas. Se agregaron EtOAc y NaHC03 acuoso saturado, y la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con MgS04.H20, y se evaporó. La cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / EtOAc, del 25 al 35 por ciento) dio 1.52 gramos del compuesto del título como una resina incolora. TLC (hexanos / EtOAc, 2:1): Rf = 0.28; HPLC: RtH3= 3.348 minutos; ESIMS [M + Na]+ = 555/557 (1Br).
Este producto se disolvió en 14 mililitros de tetrahidrofurano (THF) junto con PPh3 (838 miligramos, 3.19 milimoles), se enfrió hasta 0-5°C, y se trató con una solución de DEAD en tolueno al 40 por ciento (1.46 mililitros, 3.19 milimoles) de una forma por goteo. Se continuó la agitación durante 2.5 horas mientras que se calentaba lentamente hasta la temperatura ambiente. La solución se diluyó con 20 mililitros de tolueno, se concentró, y se purificó directamente mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / EtOAc, del 5 al 15 por ciento), para dar el compuesto del título como una resina incolora (1:1, mezcla de diaestereómeros). HPLC: RtH = 3.361 minutos; ESIMS [M + Na]+ = 537/539 (1Br); H-RMN (CDCI3, 400 MHz, 1:1, mezcla de diaestereómeros): d 8.32-8.27 (m, 1H), 7.81-7.76 (m, 3H), 7.71-7.65 (m, 1H), 7.46-7.42 (m, 1H), 6.95 (t, 1H), 5.74 y 5.62 (t, 1H), 4.36 y 4.34 (d, 1H), 4.12 y 4.10 (d, 1H), 3.74-3.57 (m, 1H), 3.52-3.44 (m, 1H), 3.52 y 3.35 (s, 1H), 2.99 y 2.94 (s, 1H). g) N-[(R)-1 -(5-bromo-2-fluoro-fenil)-1 -f luoro-metil-2-hidroxi-etil]-2-nitro-bencen-sulfonamida Una mezcla de la (S)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-1 -(2-nitro-bencen-sulfonil)-2-(tetrah¡dro-piran-2-iloxi-met¡l)-az¡r¡d¡na (1.08 gramos, 2.096 milimoles), y TBAF.3H20 (860 miligramos, 2.72 milimoles) en 11 mililitros de ?,?-dimetil-formamida (DMF), se agitó durante la noche. La mezcla se dividió entre salmuera y terbuti I-metil-éter (TBME). La capa orgánica se lavó con salmuera diluida (3 veces), se secó con MgS04.H20, y se evaporó, para dar 1.12 gramos de el mono-fluoro-éter de THP como una resina amarilla (1:1, mezcla de diaestereómeros). TLC (hexanos / EtOAc, 4:1): Rf = 0.26; HPLC: RtH4= 3.328 y 3.429 minutos; ESIMS [ + Na]+ = 557/559 (1Br). El producto se absorbió en 16 mililitros de metanol y 6 mililitros de tetrahidrofurano (THF) que contenían 49 miligramos (0.209 mili-moles) de CSA y se agitó. Después de 6 horas, la reacción se completó, y la mezcla homogénea se dividió entre EtOAc y NaHC03 acuoso saturado. La fase orgánica se lavó con NaHC03 acuoso saturado, se secó con MgS04.H20, y se evaporó. Se obtuvo el compuesto del título como cristales blancos (741 miligramos, terbutil-metil-éter (TBME)/hexanos). HPLC: RtH3= 2.733 minutos; ESIMS [M + Na]+ = 473/475 (1Br); 1H-RMN (DMSO-d6, 400 Hz): d 8.40 (s, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.77 (dt, 1H), 7.68-7.62 (m, 2H), 7.47-7.40 (m, 2H), 6.89 (dd, 1H), 5.38 (t, 1H), 5.07 (q, 1H), 4.94 (q, 1H), 3.89-3.73 (m, 2H). h) (R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-fluoro-metil-1-(2-n¡tro-bencen-sulfonil)-aziridina La N-[(R)-1-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-1 -fluoro-metil-2-hidroxi-etil]-2-nitro-bencen-sulfonamida (662 miligramos, 1.467 milimoles) se disolvió en 7 mililitros de tetrahidrofurano (THF) junto con PPh3 (462 miligramos, 1.76 milimoles), se enfrió a 0-5°C, y se trató con una solución de DEAD en tolueno al 40 por ciento (0.807 mililitros, 1.76 milimoles) de una forma por goteo. Se continuó la agitación durante 2.5 horas mientras que se calentaba lentamente hasta la temperatura ambiente. La solución se diluyó con 20 mililitros de tolueno, se concentró, y se purificó directamente mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / EtOAc, del 5 al 15 por ciento), para dar el compuesto del título como una resina incolora. HPLC: RtH3= 3.274 minutos; ESIMS [M + Na]+ = 455/457 (1Br); H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 8.34-8.30 (m, 1H), 7.84-7.80 (m, 3H), 7.68 (dd, 1H), 7.49 (ddd, 1H), 7.00 (t, 1H), 5.04 (d, 2H), 3.40 (s, 1H), 3.03 (d, 1H). i) Etil-éster del ácido 2-[(R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-3-fluoro-2-(2-nitro-bencen-sulfonil-amino)-propoxi]-3-f luoro-2-fluoro-metil -propión ico A una suspensión de NaH (78 miligramos, al 60 por ciento en aceite mineral, 1.94 milimoles) en N ,N-dimetil-formamida (DMF) (160 mililitros), se le agregó por goteo, bajo argón, el etil-éster del ácido 3-fluoro-2-fluoro-metil-2-hidroxi-propiónico (327 miligramos, 1.94 milimoles), y después de agitar durante 0.5 horas a 20°C, se agregó la (R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2-fluoro-metil-1 -(2 -ni tro -be n ce n-sulfonil)-aziridina (526 miligramos, 1.214 milimoles). La reacción se mantuvo a 25°C durante 16 horas. La mezcla se agregó a HCI 2N acuoso frío, y el producto se extrajo con terbutil-metil-éter (TBME). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución saturada de NaHC03 y salmuera, se secaron sobre MgS04.H20, se filtraron, y se concentraron. El compuesto residual se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / EtOAc, del 10 al 20 por ciento), para dar el compuesto del título como un sólido blanco. TLC (hexanos / EtOAc, 1:1): Rf = 0.59; HPLC RtH4 = 3.230 minutos; ESIMS [M + Na]+ = 623, 625 (1Br); 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 7.93 (dd, 1H), 7.75 (dt, 1H), 7.66 (dt, 1H), 7.44 (dt, 1H), 7.39 (dd, 1H), 7.35 (ddd, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.53 (dd, 1H), 5.33-4.62 (m, 6H), 4.39 (q, 2H), 4.19 (d, 1H), 4.14 (d, 1H), 1.37 (t, 3H). j) (R)-5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,5-tris-fluoro-metil-4-(2-nitro-bencen-sulfonil)-morfolin-3-ona A una solución del etil-éster del ácido 2-[(R)-2-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-3-fluoro-2-(2-nitro-bencen-sulfonil-amino)-propoxi]-3-fluoro-2-fluoro-metil-propiónico (462 miligramos, 0.768 milimoles) en 3 mililitros de metanol y 2 mililitros de tetrahidrofurano (THF), se le agregaron 0.96 mililitros (3.84 milimoles) de LiOH acuoso 4M. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se absorbió en HCI 1N y EtOAc. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con MgS0 .H20 y se evaporó, para dar 445 miligramos del ácido como un sólido blanco. HPLC RtH4= 3.230 minutos; ESIMS [M + Na]+ = 595, 597 (1Br). El ácido se suspendió en dicloro-metano (DCM) y se agregó N-metil-morfolina (263 miligramos, 2.60 milimoles), seguida por cloro-formato de etilo (141 miligramos, 1.300 milimoles) de una forma por goteo. La solución amarilla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se dividió entre HCI 1N y EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y NaHC03 acuoso al 10 por ciento, se secó con MgS04.H20, y se evaporó. La cristalización a partir de terbutil-metil-éter (TBME)/hexanos proporcionó el compuesto del título. TLC (hexanos / EtOAc, 3:1): Rf = 0.20; HPLC RtH4= 3.062 minutos; ESIMS [M + Na]+ = 577/579 (1Br); 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 8.30 (d, 1H), 7.83-7.74 (m, 4H), 7.57 (ddd, 1H), 7.08 (dd, 1H), 5.68 (dd, 1H), 5.47 (dd, 1H), 4.48 (ddd, 2H), 4.66 (dd, 1H), 4.60 (d, 1H), 4.51 (d, 1H), 4.39 (d, 1H). k) (R)-5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,5-tris-fluoro-metil-morfolin-3-ona Una mezcla de la (R)-5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,5-tris-fluoro-metil-4-(2-nitro-bencen-sulfonil)-morfolin-3-ona (365 miligramos, 0.657 milimoles), K2C03 (363 miligramos, 2.63 milimoles), y ácido tioglicólico (121 miligramos, 1.315 milimoles) en 3.5 mililitros de ?,?-dimetil-formamida (DMF), se agitó a 60°C durante 3 horas. La mezcla se diluyó con EtOAc y salmuera. La capa orgánica se lavó con NaHC03 acuoso saturado y salmuera, se secó con MgS04.H20, y se evaporó. El compuesto residual se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / EtOAc, del 10 al 25 por ciento), para dar el compuesto del título como un sólido blanco. TLC (hexanos / EtOAc, 3:1): Rf = 0.31; HPLC RtH2= 3.202 minutos; ESIMS [M + H]+ = 370/372 (1 x Br); 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 7.56-7.51 (m, 2H), 7.06 (dd, 1H), 6.85 (br, 1H), 4.98-4.30 (m, 8H).
I) (R)-5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,5-tris-fluoro-metil-morfolina-3-tiona A una solución de la (R)-5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,5-tris-fluoro-metil-morfolin-3-ona (141 miligramos, 0.381 milimoles), y hexametil-disiloxano (111 miligramos, 0.686 milimoles) en tolueno, se le agregó pentasulfuro de fósforo (102 miligramos, 0.457 mili-moles). La mezcla de reacción se calentó a 100°C, y se agitó durante 4 horas. Después de que la mezcla de reacción se hubo enfriado hasta la temperatura ambiente, se agregaron 1 mililitro de acetona y 1.42 mililitros de una solución acuosa de K2C03 (al 10 por ciento en peso/peso). Esta mezcla se agitó durante 90 minutos, y entonces se dividió entre agua y EtOAc. Las capas se separaron, se lavaron con NaOH 0.1 N, salmuera, y EtOAc. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre MgS04.H20, y se evaporaron. El producto crudo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / EtOAc, del 10 al 15 por ciento), para dar el compuesto del título como un sólido blanco: TLC (hexanos / EtOAc, 6:1): Rf = 0.38; HPLC RtH2= 3.553 minutos; ESIMS [M + H]+ = 386/388 (1 x Br); 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 8.62 (br, 1H), 7.56 (ddd, 1H), 7.47 (dd, 1H), 7.08 (dd, 1H), 5.12-4.70 (m, 6H), 4.95 (d, 1H), 4.33 (d, 1H). m) (R)-5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,5-tris-fluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il -amina La (R)-5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,5-tris-fluoro-metil-morfolina-3-tiona (134 miligramos, 0.347 milimoles) se disolvió en una solución de NH3 a 7 moles/litro en metanol (MeOH) (3 mililitros). El recipiente de reacción sellado se calentó a 80°C durante 3 días. La mezcla de reacción se evaporó y se purificó sobre una columna de gel de sílice mediante su elución con (hexanos / EtOAc, del 15 al 35 por ciento), para dar el compuesto del título como una resina incolora. TLC (hexanos / EtOAc, 3:1): Rf = 0.13; HPLC: RtH2 = 2.684 minutos; ESIMS [M + H]+ = 369/371 (1Br); H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 11.91 (s, 1H), 7.72 (dd, 1H), 7.54-7.45 (m, 2H), 7.08-6.96 (m, 2H), 5.20-4.25 (m, 8H). n) Terbutil-éster del ácido [(R)-5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,5-tris-fluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico A una solución de la (R)-5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,5-tris-fluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il-amina (113 miligramos, 0.306 milimoles) en 1 mililitro de dicloro-metano (DCM), se le agregaron di-isopropil-etil-amina (DIPEA) (60 miligramos, 0.46 milimoles), y dicarbonato de diterbutilo (87 miligramos, 0.4 mili-moles). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a 40°C. La mezcla de reacción se evaporó y se purificó sobre una columna de gel de sílice eluyendo con hexanos / terbutil-metil-éter (TBME), del 5 al 20 por ciento, para dar 132 miligramos del compuesto del título como una espuma incolora. TLC (hexanos / EtOAc, 9:1): Rf = 0.16; HPLC: RtH4= 3.123 minutos; ESIMS = [M + H]+ 469/471 (1Br); 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 11.22 (br s, 1H), 7.54-7.45 (m, 2H), 7.05 (dd, 1H), 5.06-4.34 (m, 8H), 1.53 (s, 9H). o) Terbutil-éster del ácido [(R)-5-(5-amino-2-fluoro-fenil)-2,2,5-tris-fluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico A una solución del terbutil-éster del ácido [(R)-5-(5-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,5-tris-fluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il]-carbámico (132 miligramos, 0.283 milimoies), y 40.2 miligramos (0.283 milimoies) de la trans-N,N'-dimetil-ciclohexano-1 ,2-diamina en 4 mililitros de EtOH, se le agregó una solución de 147 miligramos (2.26 milimoies) de azida de sodio y 22.4 miligramos (0.113 milimoies) de ascorbato de sodio en 1.6 mililitros de agua. La mezcla se desgasificó y se puso bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agregó Cul (21.5 miligramos, 0.113 milimoies), y la mezcla se calentó a 70°C. La suspensión inicialmente formada se convirtió en una solución azul homogénea. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se diluyó con el terbutil-metil-éter (TBME), y se lavó con NH4OH acuoso diluido y salmuera. La fase orgánica se secó con MgS04.H20 y se evaporó, para dar 128 miligramos de una resina amarilla, la cual consistió en una mezcla de un intermediario de azida y el compuesto del título. El producto se disolvió en 1.3 mililitros de EtOH y 0.2 mililitros de tetrahidrofurano (THF), se trató con 68 miligramos de Pd-C al 5 por ciento "Degussa" E101 ND, y se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno hasta que se hubo consumido el material de partida. La mezcla se diluyó con dicloro-metano (DCM), y se filtró sobre Celite. El producto se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / EtOAc, del 25 al 50 por ciento), para dar 71 miligramos del compuesto del título como una espuma incolora. HPLC: RtH2= 2.963 minutos; ESIMS = [ + H]+ 406; 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 6.93 (dd, 1H), 6.72-6.67 (m, 2H), 5.09-4.33 (m, 8H), 1.53 (s, 9H). p) Terbutil-éster del ácido ((R)-5-{5-[(5-ciano-3-metil-piridin-2-carbonil)-amino]-2-fluoro-fenil}-2,2,5-tris-fluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[ ,4]-oxazin-3-il)-carbámico A una solución helada del terbutil-éster del ácido [(R)-5-(5-amino-2-fluoro-fenil)-2,2,5-tris-fluoro-metil-5,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-¡l]-carbámico (71 miligramos, 0.176 milimoles), ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico (31.5 miligramos, 0.194 milimoles), HOAt (38.4 miligramos, 0.282 milimoles) en 0.72 mililitros de N,N-dimetil-formamida (DMF), se le agregaron 0.04 mililitros (0.23 mili-moles) de EDC (base libre). La mezcla se agitó a 0-5°C durante 1 hora, y durante 2 horas a temperatura ambiente. Se agregaron EtOAc y agua, y la capa orgánica se lavó con NaHC03 acuoso saturado, salmuera, y se secó con gS04.H20. El producto se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (hexanos / EtOAc, del 15 al 50 por ciento), para dar 94 miligramos del compuesto del título como una espuma incolora. TLC (hexano / EtOAc, 3:1): Rf = 0.18; HPLC: RtH3= 3.452 minutos; ESIMS = [M + H]+ 550; 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): d 11.28 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.92 (ddd, 1H), 7.71 (dd, 1H), 7.22 (dd, 1H), 5.05- 4.44 (m, 8H), 2.89 (s, 3H), 1.59 (s, 9H). q) [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico A una solución del terbutil-éster del ácido ((R)-5-{5-[(5-ciano-3-metil-pir¡d¡n-2-carbonil)-amino]-2-fluoro-fenil}-2,2,5-tris-fluoro-metil- 5.6- dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-carbámico (94 miligramos, 0.172 milimoles) en 0.75 mililitros de dicloro-metano (DCM), se le agregaron 0.25 mililitros de ácido trifluoro-acético (TFA). La mezcla se agitó durante 1 hora, se vertió sobre Na2C03 acuoso al 10 por ciento, y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó con Na2S04. El producto se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (DCM / (EtOH / NH3 acuoso, 9:1), del 0.5 al 1.5 por ciento), para dar 59 miligramos del compuesto del título como una espuma incolora. HPLC: RtH2= 2.850 minutos; ESIMS = [M + H]+ 450; H-RMN (DMSO-d6, 600 MHz): d 10.69 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.92 (m, 1H), 7.77 (m, 1H), 7.15 (dd, 1H), 6.33 (br s, 2H), 4.98-4.40 (m, 6H), 4.168d, 1H), 4.00 (d, 1H), 2.52 (s, 3H).
Ejemplos 43 a 45: El Ejemplo 43 de la Tabla 5 se hizo utilizando un procedimiento análogo a aquél empleado para preparar el Ejemplo 42, mientras que los Ejemplos 44 y 45 se hicieron utilizando un procedimiento análogo al empleado para preparar el Ejemplo 17.
Tabla 5 Los compuestos de la siguiente Tabla 6 también se pueden hacer empleando los proced imientos descritos anteriormente en la presente o proced imientos análogos a los mismos.
Tabla 6 [3-((R)-5-amino-6,6-bis-fluoro- [3-((R)-5-amino-6,6-bis-fluoro- metil-3-metil-3,6-dihidro-2H- metil-3-metil-3,6-dihid ro-2H- [1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]- amida del ácido 3-amino-5-amida del ácido 5-difluoro-metil- difluoro-metil-pirazin-2- 3-metil-piridin-2-carboxílico carboxilico [3-((R)-5-amino-6,6-bis-fluoro- [3-((R)-5-amino-6,6-bis-fluoro- metil-3-metil-3 ,6-dihidro-2H- metil-3-metil-3 ,6-d ihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]- [1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]- amida del ácido 3-amino-5- amida del ácido 3-amino-5- difluoro-metil-piridin-2- ciano-piridin-2-carboxílico carboxilico [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro- [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro- metil-3,6-dihidro-2 H-[1 ,4]- metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-oxazin-3-il)-4-fluoro-fen il]-amida 3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del del ácido 5-difluoro-metil-3- ácido 3-cloro-5-difluoro-metil- metil-piridin-2-carboxílico piridin-2-carboxílico [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro- [3-((R)-5-amino-3,6,6-tris-fluoro- metil-3,6-dihidro-2 H-[1 ,4]- metil-3,6-d ihid ro-2H-[1 ,4]-oxazin-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida 3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del del ácido 3-cloro-5-trifl uoro- ácido 3,5-d icloro-piridin-2- metil-piridin-2-carboxílico carboxílico [3-((R)-5-ami no-3,6,6-tris-fluoro- N-[3-((3R ,6R)-5-amino-3,6- metil-3,6-dihidro-2 H-[1 ,4]- dimetil-6-trifluoro-meti 1-3,6- Preparación de Intermediarios Los bloques de construcción de ácido sustituido estaban comercialmente disponibles, o bien se pueden preparar como se describe en la literatura o de una manera análoga, por ejemplo, DE19725802A1, Tetrahedron: Asymmetry 1999, 10(4), 679-687, Publicaciones Internacionales Números WO 2005063738, WO 2009091016, y WO 2010047372, Bioorg. Med. Chem. 2001, 9, 2061-2071, o se pueden preparar como se describe posteriormente en la presente o de una manera análoga. Ácido-1 : Ácido 5-cloro-3-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico a) (2,5-dicloro-piridin-3-il)-metanol Un matraz de fondo redondo de 100 mililitros se cargó con 2,5-dicloro-piridin-3-carbaldehído (Matrix Sci., 3.4 gramos, 19.32 mili-moles), seguido por la adición de etanol (50 mililitros). Se agregó borohidruro de sodio a temperatura ambiente en pequeñas porciones. Después de 1 hora, el material de partida se consumió, y la reacción se apagó cuidadosamente con la adición de ácido acético acuoso diluido. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, se lavó con una solución saturada de bicarbonato y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó, para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco.
TLC: Rf=0.43 (2:1 de ciclohexano:acetato de etilo); 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d 8.29 (d, 1H), 7.94 (d, 1H), 4.80 (d, 2H), 2.23 (triplete amplio no resuelto, 1H, OH). b) 2,5-dicloro-3-metoxi-metil-piridina A una solución de (2,5-dicloro-piridin-3-il)-metanol (1,000 miligramos, 5.62 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (DMF) seca (25 mililitros), se le agregó hidruro de sodio (245 miligramos, 5.62 milimoles, al 55 por ciento en aceite) a 0°C. Después de 15 minutos, se agregó yoduro de metilo (0.457 mililitros, 7.30 milimoles), y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se apagó con agua, y se diluyó con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de bicarbonato y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. El aceite amarillo crudo se pasó por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano:acetato de etilo, 83:17), para proporcionar el compuesto del título como un aceite transparente.
TLC: Rf=0.57 (5:1 ciclohexano:acetato de etilo); H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.25 (d, 1H), 7.82.(d, 1H), 4.48 (d, 2H), 3.51 (s, 3H). c) 5-cloro-3-metoxi-metil-piridin-2-carbonitrilo A una mezcla de la 2,5-dicloro-3-metoxi-metil-piridina (1,150 miligramos, 5.99 milimoles), cianuro de zinc (492 miligramos, 4.19 milimoles), y polvo de zinc (39.2 miligramos, 0.599 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (DMF) seca (18 mililitros), se le agregó el catalizador de aducto de (dppf)PdCI2 CH2CI2 (245 miligramos, 0.299 milimoles), bajo nitrógeno. La mezcla se calentó a 150°C durante 2 horas. Después de 2 horas, el material de partida se consumió y la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, y se lavó con una solución saturada de bicarbonato y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. El residuo oscuro crudo (960 miligramos) se pasó por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano:acetato de etilo, 80:20), para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo.
TLC: Rf=0.41 (3:1 ciclohexano:acetato de etilo); LC-MS: RtH9= 0.83 minutos. (100 por ciento puro, ESI+ 183, 185); 'H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.56 (d, 1H, H6), 7.95 (d, 1H, H4), 4.66 (s, 2H), 3.51 (s, 3H). d) Ácido 5-cloro-3-metoxi-met¡l-piridin-2-carboxílico Una suspensión del 5-cloro-3-metoxi-metil-piridin-2-carbonitrilo (100 miligramos, 0.548 milimoles) en NaOH 2N (2 mililitros) se agitó a 100°C durante 4 horas. La mezcla de reacción se lavó con dietil-éter y entonces se hizo ácida (pH de 5-6) con HCI 2M. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo, y la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó, para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco.
MS: ESI-200; LC-MS: RtH9= 0.58 minutos. (100 por ciento puro, ESI+ 202); 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 11.1 (s, amplia, 1H, COOH), 8.45 (d, 1H, H6), 8.25 (d, 1H, H4), 4.99 (s, 2H), 3.55 (s, 3H). Ácido-2: Ácido 3-amino-5-metoxi-pirazin-2-carboxílico a) Tri-deutero metil-éster del ácido 3-amino-5-tri-deutero- metoxi-pirazin-2-carboxílico A una solución de 0.217 mililitros (5.33 milimoles) de tetra-deutero-metanol en 7 mililitros de tetrahidrofurano (THF) se le agregaron, a 0°C, 94 miligramos (2.346 milimoles) hidruro de sodio al 60 por ciento en aceite, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de volverse a enfriar hasta 0°C, se agregaron 400 miligramos (2.132 milimoles) del metil-éster del ácido 3-amino-5-cloro-pirazin-2-carboxílico (GB 1248146), y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente, y se agitó durante cuatro días.
Se agregó NH4CI acuoso saturado, y la mezcla se extrajo con EtOAc, las capas orgánicas combinadas se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado, se secaron con Na2S04 y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano hasta ciclohexano/EtOAc, 1:3), para proporcionar el compuesto del título como un sólido incoloro.
HPLC: RtH9= 0.61 minutos; ESIMS [M + H]+ = 190.2; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): d 7.51 (s, 1H), 7.48 (br s, 2H). b) Ácido 3-amino-5-tri-deutero-metoxi-pirazin-2-carboxílico A una solución de 49 miligramos (0.259 milimoles) del tri-deutero-metil-éster del ácido 3-amino-5-tri-deutero-metoxi-pirazin-2-carboxílico en 2 mililitros de tetrahidrofurano (THF) se le agregaron 0.388 mililitros (0.388 milimoles) hidróxido de sodio 1N, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 60 horas. A la mezcla se le agregaron 0.363 mililitros (0.363 milimoles) de HCI 1N. Después de agitar durante 5 minutos, se agregó tolueno, y los solventes se evaporaron, para proporcionar el compuesto del título junto con cloruro de sodio como un sólido incoloro. La mezcla se utilizó para las reacciones de acoplamiento sin mayor purificación.
HPLC: RtH9= 0.50 minutos; ESIMS [M + H]+ = 173.1; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 7.22 (s, 1H). Ácido-3: Ácido 3-amino-5-prop-2-iniloxi-pirazin-2-carboxílico El compuesto del título se preparó mediante un procedimiento análogo al del Ácido-2 utilizando prop-2-in-1 -ol en lugar de tetra-deutero-metanol [Ácido-2, paso a)].
HPLC: RtH9= 0.59 minutos; ESIMS [M + H]+ = 194.1; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 7.58 (br. s, 2H), 7.48 (s, 1H), 4.96 (d, 2H), 3.58 (s, 1H). Ácido-4: Ácido 3-cloro-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carboxílico a) 1H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carbonitrilo A una mezcla de la 6-bromo-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridina (Synthesis, 1992, 661, ejemplo 3b) (788 miligramos, 4 milimoles), cianuro de zinc (329 miligramos, 2.80 milimoles), y polvo de zinc (26.2 miligramos, 0.4 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (DMF) seca (12 mililitros), se le agregó el catalizador de aducto de (dppf)PdCI2xCH2Cl2 (163 miligramos, 0.2 milimoles), bajo nitrógeno. La mezcla se calentó a 140°C durante 4 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, y se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. 1.04 gramos de un aceite amarillo oscuro. El producto crudo se pasó por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo, 3:1), para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco.
TLC Rf=0.35 (2:1 ciclohexano:acetato de etilo); LC-MS: RtH = 0.81 minutos. (100 por ciento de pureza, ESI + 144), API-ES+ 144; 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d 11.05 (s, 1H, NH), 8.08 (d, 1H), 7.71 (dd, 1H), 7.52 (d, 1H), 6.66 (m, 1H). b) Ácido 1 H-p¡rrolo-[2,3-b]-pir¡din-6-carboxílico Una suspensión del 1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carbonitrilo (690 miligramos, 4.82 milimoles) en NaOH 2M (12 mililitros) se agitó a 100°C durante 6 horas. La mezcla de reacción se lavó con dietil-éter, y la fase acuosa se hizo ligeramente ácida (pH de 6-7) con HCI concentrado. El sólido formado se filtró y se secó, para proporcionar el compuesto del título.
LC-MS: RtH8= 0.51 minutos. (100 por ciento de pureza, ESI + 163); H-RMN (400 MHz, DMSO-D6): d 12.78 (s, 1H), 12.01 (s, 1H), 8.08 (d, 1H), 7.80 (m, 1H), 7.73 (s, amplia, no resuelta, 1H), 6.56 (s, amplia, 1H). c) Ácido 3-cloro-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carboxílico Una solución del ácido 1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carboxílico (300 miligramos, 1.85 milimoles), y NCS (247 miligramos, 1.85 mili-moles) en ?,?-dimetil-formamida (DMF) seca (12 mililitros), se agitó bajo argón a temperatura ambiente durante 20 horas. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, y se lavó con salmuera. El precipitado formado se filtró, se lavó con acetato de etilo, y se secó, para proporcionar el compuesto del título como un sólido color café claro.
LC-MS: RtHs= 0.72 minutos. (100 por ciento de pureza, ESI + 197/199); H-RMN (400 MHz, DMSO-D6): d 13.03 (s, 1H), 12.43 (s, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.90 (d, 1H). Ácido-5: Ácido 3-(di-terbutoxi-carbonil-am¡no)-5-difluoro-metil-pirazin-2-carboxílico a) Metil-éster del ácido 3-amino-5-vinil-pirazin-2-carboxílico A una mezcla de 161 miligramos (0.86 milimoles) del metil-éster del ácido 3-amino-5-cloro-pirazin-2-carboxílico (GB 1248146), 0.352 mililitros (1.204 milimoles) de tributil-(vin¡l)-estaño, y 102 miligramos (2.498 milimoles) de cloruro de litio en N,N-dimetil-formamida (DMF), se le agregaron 30.2 miligramos (0.043 milimoles) de PdCI2(PPh3)2, y la mezcla se calentó a 85°C durante 2.5 horas. Después de enfriarse a temperatura ambiente, se agregó agua, y la mezcla se extrajo con EtOAc; las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y NaCI acuoso medio saturado, se secaron con Na2S04 y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano hasta ciclohexano/EtOAc, 1:9), para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo.
HPLC: RtH = 0.71 minutos; ESIMS [M + H]+ = 179.9; H-RM N (600 MHz, DMSO-d6): d 8.04 (s, 1H), 7.35 (br. s, 1H), 6.75 (dd, 1H), 6.38 (d, 1H), 5.70 (d, 1H), 3.84 (s, 3H). b) Metil-éster del ácido 3-(di-terbutoxi-carbonil-amino)-5-vinil-pirazin-2-carboxílico A una solución helada de 1.28 gramos (7.14 milimoles) del metil-éster del ácido 3-amino-5-vinil-pirazin-2-carboxílico en 45 mililitros de dicloro-metano (DCM), se le agregaron 8.58 gramos (39.3 milimoles) de Boc20, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos; entonces la mezcla se calentó a 40°C durante 4 horas. Después de enfriarse a temperatura ambiente, se agregó agua, y la mezcla se extrajo con dicloro-metano (DCM). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCI 0.5 N y NaCI acuoso saturado, se secaron con Na2S04, y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano + NEt3 al 5 por ciento hasta EtOAc + NEt3 al 5 por ciento), para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo.
HPLC: RtH9= 1 15 minutos; ESIMS [M-Boc]+ = 280.3; RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 8.93 (s, 1H), 7.00 (dd, 1H), 6.51 (dd, 1H), 5.86 (dd, 1H), 3.88 (s, 3H), 1.34 (s, 18 H). c) Metil-éster del ácido 3-(di-terbutoxi-carbonil-amino)-5-formil-pirazin-2-carboxílico Una mezcla de 1 gramo (2.64 milimoles) del metil-éster del ácido 3-(di-terbutoxi-carbonil-amino)-5-vinil-pirazin-2-carboxílico y 0.332 gramos (3.95 milimoles) de bicarbonato de sodio en 45 mililitros de dicloro-metano (DCM) y 15 mililitros de metanol, se enfrió a -78°C, y se purgó con oxígeno durante 5 minutos. La mezcla de reacción se trató con ozono durante 40 minutos hasta que la mezcla se hizo azul. La mezcla de reacción se purgó con oxígeno durante 10 minutos y con nitrógeno durante 10 minutos, entonces se agregaron 0.487 mililitros (6.59 milimoles) de sulfuro de dimetilo a -78°C, y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con dicloro-metano (DCM), y se lavó con tiosulfato de sodio acuoso al 10 por ciento. La capa acuosa se extrajo con dicloro-metano (DCM), y las capas orgánicas combinadas se secaron con a2S04 y se evaporaron, para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo. El compuesto se utilizó para el siguiente paso sin mayor purificación.
H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 10.07 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 1.36 (s, 18H). d) Metil-éster del ácido 3-(di-terbutoxi-carbonil-amino)-5-difluoro-metil-pirazin-2-carboxílico A una solución helada de 550 miligramos (1.44 milimoles) del metil-éster del ácido 3-(di-terbutoxi-carbonil-amino)-5-formil-pirazin-2-carboxílico en 20 mililitros de dicloro-metano (DCM), se le agregaron por goteo, dentro de 1 hora, 0.798 mililitros (4.33 milimoles) de desoxo-flúor (al 50 por ciento en tetrahidrofurano (THF)). Se continuó la agitación a 0°C durante 2.5 horas, y entonces la mezcla de reacción se dejó a temperatura ambiente durante la noche. Se agregó bicarbonato de sodio acuoso saturado, y la mezcla se extrajo con EtOAc; las capas orgánicas combinadas se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado, se secaron con Na2S04 y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano + NEt3 al 5 por ciento hasta ciclohexano + NEt3 al 5 por ciento / EtOAc + NEt3 al 5 por ciento, 1:1), para proporcionar el compuesto del título como un sólido incoloro.
HPLC: RtH9= 1.14 minutos; ESIMS [2M + Na]+ = 829.6; 1H-RMN (600 MHz, DMSO-c/6): d 9.14 (s, 1H), 7.26 (t, 1H, CHF2), 3.92 (s, 3H), 1.33 (s, 18H). e) Ácido 3-(di-terbutoxi-carbonil-amino)-5-difluoro-metil-pirazin-2-carboxílico A una solución de 75 miligramos (0.186 milimoles) del metil-éster del ácido 3-(di-terbutoxi-carbonil-amino)-5-difluoro-metil-pirazin-2-carboxílico en 2 mililitros de tetrahidrofurano (THF), se le agregaron por goteo 0.205 mililitros (0.205 milimoles) de NaOH 1N, y la mezcla de reacción se agitó durante 1.5 horas. A la mezcla se le agregaron 0.186 mililitros (0.186 milimoles) de HCI 1N. Después de agitar durante 5 minutos, se agregó tolueno, y los solventes se evaporaron para proporcionar el compuesto del título junto con cloruro de sodio como un sólido incoloro. La mezcla se utilizó para las reacciones de acoplamiento sin mayor purificación.
HPLC: RtHi i= 0.89 minutos; ESIMS [M-Boc]+ = 290.0; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-c6): d 14.30 (br. s, 1H), 9.10 (s, 1H), 7.25 (t, 1H, CHF2), 1.33 (s, 18 H). Ácido-6: Ácido 5-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico a) 5-metoxi-3-metil-piridin-2-carbonitrilo A una solución de 5-hidroxi-3-metil-pirid¡n-2-carbonitrilo (CAS registro 228867-86-5) (1.5 gramos, 11.18 milimoles), y metanol (MeOH) (0.499 mililitros, 0.394 gramos, 12.30 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (100 mililitros), se le agregó, a 0°C, trifenil-fosfina (4.44 gramos, 16.77 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó durante 10 minutos a 0°C. Entonces se agregó una solución de DIAD (3.25 mililitros, 3.39 gramos, 16.77 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (50 mililitros). La mezcla de reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente, se diluyó con EtOAc, y se lavó con agua y salmuera. Las capas acuosas combinadas se volvieron a extraer con EtOAc, las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y el filtrado se concentró. Se obtuvo el compuesto del título después de la cromatografía por evaporación instantánea sobre gel de sílice (gradiente de ciclohexano / EtOAc, de 0 a 5 minutos 95:5, de 5 a 50 minutos 95:5 hasta 60:40).
HPLC: RtHio = 0.75 minutos; ESIMS: 149 [(M + H)+]; 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 8.22 (d, 1H), 7.08 (d, 1H), 3.92 (s, 3H), 2.55 (s, 3H). b) Ácido 5-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico Una solución de 5-metoxi-3-metil-piridin-2-carbonitrilo (3.41 gramos, 10.20 milimoles) en una solución acuosa de HCI concentrado (10 mililitros), se agitó durante 3.5 horas a 120°C. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, se diluyó con el terbutil-metil-éter (TBME), y se extrajo dos veces con agua. Las capas acuosas combinadas se lavaron con el terbutil-metil-éter (TBME), y se liofilizaron. El residuo se disolvió en agua, se agregó una solución acuosa de NaOH 1 M para ajustar el pH hasta 3, y la solución se extrajo 3 veces con dicloro-metano (DCM). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y el filtrado se concentró para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco, el cual se utilizó para el siguiente paso sin mayor purificación.
HPLC: RtHio = 0.40 minutos; ESIMS: 168 [(M + H)*]; H RMN (400 MHz, MeOD): d 8.14 (d, 1H), 7.36 (d, 1H), 3.94 (s, 3H), 2.65 (s, 3H). Ácido-7: Ácido 5-dif luoro-metil-3-metil-p¡ridin-2-carboxílico a) 2-cloro-5-difluoro-metil-3-metil-piridina A una solución previamente enfriada de 6-cloro-5-metil-piridin-3-carbaldehído (CAS registro 176433-43-5) (500 miligramos, 3.21 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (15 mililitros), se le agregó, a -78°C, DAST (0.632 mililitros, 0.777 gramos, 4.82 milimoles). La mezcla de reacción se agitó durante 18 horas a -78°C a temperatura ambiente, entonces se apagó a 0°C con una solución acuosa saturada de NaHC03, se diluyó con H20, y se extrajo con dicloro-metano (DCM). La capa orgánica se lavó con H20, se secó sobre Na2S04, se filtró, y el filtrado se concentró. Se obtuvo el compuesto del título como un aceite amarillo después de la cromatografía por evaporación instantánea sobre gel de sílice (gradiente de ciclohexano / EtOAc, de 0 a 5 minutos 100:0, de 5 a 40 minutos de 100:0 a 80:20).
HPLC: Rtmo= 0.94 minutos; ESIMS: 178 [(? + ??; 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 8.38 (d, 1H), 7.72 (d, 1H), 6.69 (t, 1H), 2.46 (s, 3H). b) 5-dif luoro-metil-3-metil-piridin-2-carbonitrilo Una solución de la 2-cloro-5-difluoro-metil-3-metil-piridina (337 miligramos, 1.898 milimoles), Zn(CN)2 (159 miligramos, 1.328 mili-moles), y Pd(PPh3)4 (132 miligramos, 0.114 milimoles) en N,N-dimetil-formamida (DMF) (10 mililitros), se agitó durante 10 minutos a 120°C en un reactor de microondas, se filtró sobre Hyflo, y se lavó con agua y salmuera. Las capas acuosas combinadas se volvieron a extraer con terbutil-metil-éter (TBME), las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y el filtrado se concentró. Se obtuvo el compuesto del título como un aceite amarillo después de la cromatografía por evaporación instantánea sobre gel de sílice (gradiente de ciclohexano / EtOAc, de 0 a 3 minutos 100:0, de 3 a 35 minutos de 100:0 a 80:20).
HPLC: Rtmo= 0.83 minutos; ESIMS: 169 [(M + H)+]; 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 8.68 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 6.75 (t, 1H), 2.65 (s, 3H). c) Ácido 5-dif luoro-metil-3-metil-piridin-2-carboxílico Una solución de 5-difluoro-metil-3-metil-p¡ridin-2-carbonitrilo (209 miligramos, 0.787 milimoles) en una solución acuosa de HCI concentrado (2 mililitros) se agitó durante 2 horas a 120°C en un tubo sellado. La mezcla de reacción se enfrió hasta la temperatura ambiente, se diluyó con el terbutil-metil-éter (TBME), y se extrajo dos veces con agua. Las capas acuosas combinadas se lavaron con el terbutil-metil-éter (TBME), y se liofilizaron. El residuo se disolvió en agua, se agregó una solución acuosa de NaOH 1 M para ajustar el pH a 2, y la solución se extrajo 3 veces con dicloro-metano (DCM). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y el filtrado se concentró para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco, el cual se utilizó para el siguiente paso sin mayor purificación.
HPLC: Rtmo= 0.49 minutos; ESI S: 188 [(M + H)+]; 1H RMN (400 MHz, MeOD): d 8.62 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 6.95 (t, 1H), 2.65 (s, 3H). Ácido-8: Ácido 5-fluoro-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico a) 2-cloro-5-fluoro-3-trideutero-metoxi-metil-piridina A una solución de (2-cloro-5-fluoro-piridin-3-il)-metanol (CAS: 870063-2-8; 950 miligramos, 5.88 milimoles) en N,N-dimetil-formamida (DMF) seca (25 mililitros), se le agregó hidruro de sodio (235 miligramos, 5.88 milimoles, al 60 por ciento en aceite) a 0°C. Después de 15 minutos, se agregó yodo-metano-D3 (1.11 gramos, 7.64 milimoles), y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción se apagó con agua, y se diluyó con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de bicarbonato y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. El aceite color café crudo se pasó por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano:acetato de etilo), para proporcionar el compuesto del título.
LC-MS: RtH8= 0.87 minutos. (100 por ciento de pureza, ESI + 179, 181); H-RMN (360 MHz, CDCI3): 8.18 (d, 1H), 7.64 (m, 1H), 4.52 (s, 2H). b) 5-fluoro-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carbonitrilo La 2-cloro-5-fluoro-3-trideutero-metoxi-metil-piridina (700 miligramos, 3.92 milimoles) se hizo reaccionar con polvo de zinc, cianuro de zinc, y el catalizador de (dppf)PdCI2, de una manera análoga a la del Ejemplo A1 c), para proporcionar el compuesto del título después de la cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/ acetato de etilo), para proporcionar el compuesto del título.
TLC Rf=0.42 (3:1 de ciclohexano:acetato de etilo); LC-MS: RtH8= 0.74 minutos (100 por ciento de pureza); API ES+ 170; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.49 (d, 1H), 7.72 (m, 1H), 4.71 (s, 2H). c) Ácido 5-f luoro-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico El 5-fluoro-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carbonitrilo (150 miligramos, 0.887 milimoles) se hidrolizó en NaOH 2N de una manera análoga a la del Ácido 1, paso d), para proporcionar el compuesto del título crudo.
LC-MS: RtHe= 0.58 minutos; (100 por ciento de pureza, ESI + 189); API ES+ 189; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 11.3 (amplia, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.01 (m, 1H), 5.03 (s, 2H). Ácido-9: Ácido 5-trideutero-metoxi-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico a) 5-trideutero-metoxi-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carbonitrilo A una solución de CD3OD (48 miligramos, 1.33 milimoles) en sulfóxido de dimetilo (DMSO) (2 mililitros), se le agregó hidruro de sodio (53.2 miligramos, 1.33 milimoles, al 60 por ciento en aceite) seguido, 10 minutos después, por 5-fluoro-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carbonitrilo (150 miligramos, 0.887 milimoles, Ácido-8 b)). La mezcla de reacción se calentó a 90°C durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, y se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó al vacío. El producto crudo se pasó por cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo), para proporcionar el compuesto del título.
TLC: Rf=0.21 (3:1 de ciclohexano:acetato de etilo); LC-MS: RtHe= 0.73 minutos, (93 por ciento de pureza, ESI + 185); API-ES+ 185; 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d 8.29 (d, 1H), 7.39 (d, 1H), 4.68 (s, 2H). b) Ácido 5-trideutero-metoxi-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico El 5-trideutero-metoxi-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carbonitrilo (80 miligramos, 0.434 milimoles) se hidrolizó en NaOH 2N (2 mililitros) de una manera análoga a la del Ácido 1, paso d), para proporcionar el compuesto del título crudo.
LC-MS: RtH8= 0.49 minutos; (100 por ciento de pureza, ESI + 204); API ES+ 204; H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.15 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 5.03 (s, 2H). Ácido-10: Ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico a) Terbutil-éster del ácido 5-bromo-3-nitro-piridin-2-carboxílico A una solución helada de 4.84 gramos (19.59 milimoles) del ácido 5-bromo-3-nitro-piridin-2-carboxílico (CAS 954240-89-2) en 59 mililitros de tetrahidrofurano (THF), se le agregaron 239 miligramos (1.96 milimoles) de DMAP, y 5.56 gramos (25.5 milimoles) de Boc20, y la mezcla de reacción se calentó a 60°C durante 3 horas. Después de enfriarse a 0°C se agregó bicarbonato de sodio acuoso medio saturado, y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y NaCI acuoso medio saturado, se secaron con Na2S04 y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano hasta ciclohexano/ EtOAc, 3:2), para proporcionar el compuesto del título como un sólido color beige pálido.
HPLC: RtH8= 1.17 minutos; ESIMS [M + H]+ = 304.1; 1H-RMN (600 MHz, DMSO-d6): d 9.11 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 1.53 (s, 9H). b) Terbutil-éster del ácido 5-ciano-3-nitro-piridin-2-carboxílico A una solución de 888 miligramos (2.93 milimoles) del terbutil-éster del ácido 5-bromo-3-nitro-piridin-2-carboxílico en 8.8 mililitros de ?,?-dimetil-formamida (DMF), se le agregaron 206 miligramos (1.76 milimoles) de cianuro de zinc y 2 miligramos (0.03 milimoles) de polvo de zinc. La mezcla se purgó con nitrógeno (3 veces), se agregaron 150 miligramos (0.293 milimoles) de bis-(tri-terbutil-fosfina)-paladio(O) , y la mezcla se calentó a 80°C durante 4 horas. Después de enfriarse a 0°C se agregó agua, y la mezcla se extrajo con EtOAc; las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaCI acuoso medio saturado, se secaron con Na2S04 y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano hasta ciclohexano/EtOAc, 1:4), para proporcionar el compuesto del título como un sólido color beige.
HPLC: RtH8= 1 04 minutos; ESIMS [M + H]+ = 248.0; 1H-RMN (600 MHz, DMSO-d6): d 9.39 (s, 1H), 9.29 (s, 1H), 1.55 (s, 9H). c) Terbutil-éster del ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico A una mezcla de 130 miligramos (0.522 milimoles) del terbutil-éster del ácido 5-ciano-3-nitro-piridin-2-carboxílico en 3 mililitros de agua, se le agregaron 0.149 mililitros (2.61 milimoles) de ácido acético; la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos, se agregaron 454 miligramos (2.61 milimoles) de ditionita de sodio, y se continuó la agitación durante 23 horas. Se agregaron 182 miligramos adicionales (1.043 milimoles) de ditionita de sodio, y la mezcla de reacción se agitó durante otras 48 horas. La mezcla se extrajo con dicloro-metano (DCM), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y NaCI acuoso saturado, se secaron con Na2S04 y se evaporaron, para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo. El producto se utilizó para el siguiente paso sin mayor purificación.
HPLC: RtH9= 0.86 minutos; ESIMS [M + H]+ = 220.2; 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 8.15 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 6.95 (br. s, 2H), 1.55 (s, 9H). d) Ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico A una mezcla de 60 miligramos (0.274 milimoles) del terbutil-éster del ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico y 0.358 mililitros (2.74 milimoles) de 1 ,3-dimetoxi-benceno, se le agregaron por goteo, dentro de 10 minutos, 0.59 mililitros (7.66 milimoles) de ácido trifluoro-acético (TFA), y la mezcla de reacción se agitó durante 6 horas. Se agregó tolueno, y los solventes se evaporaron, para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo. El producto se utilizó para el siguiente paso sin mayor purificación.
HPLC: RtH9= 0.38 minutos; ESIMS [M + H]+ = 164.1; 'H- N (400 MHz, DMSO-d6): d 13.05 (br. s, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.08 (br. s, 2H). Ácido-11 : Ácido 3-amino-5-difluoro-met¡l-piridin-2-carboxílico a) Terbutil-éster del ácido 5-difluoro-metil-3-nitro-piridin-2-carboxílico El compuesto del título se preparó mediante una secuencia de reacción análoga a la del Ácido-5 utilizando el ácido 5-bromo-3-nitro-piridin-2-carboxílico en lugar del metil-éster del ácido 3-amino-5-cloro-pirazin-2-carboxílico en el paso a), y omitiendo el paso b).
HPLC: RtH9= 1.07 minutos; ESIMS [M + H]+ = 275.3; 1H RMN (600 MHz, D SO-d6): d 9.18 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.31 (t, 1H, CHF2), 1.55 (s, 9H). b) Ácido 5-dif luoro-metil-3-nitro-piridin-2-carboxílico En una mezcla de 5 mililitros de dicloro-metano (DCM) y 2.5 mililitros de ácido trifluoro-acético (TFA), se disolvieron 345 mili-gramos (1.26 milimoles) del terbutil-éster del ácido 5-difluoro-metil-3-nitro-piridin-2-carboxílico, y la mezcla de reacción se agitó durante 4 horas. Se agregó tolueno, y los solventes se evaporaron para proporcionar el compuesto del título como un sólido incoloro.
HPLC: RtH9= 0.31 minutos; ESIMS [2M-H]" = 435.3; 1H-RMN (600 MHz, DMSO-í/6): d 14.59 (br. s, 1H), 9.16 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.31 (t, 1H, CHF2). c) Ácido 3-amino-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico A una solución de 265 miligramos (1.22 milimoles) de ácido 5-difluoro-metil-3-nitro-piridin-2-carboxílico en EtOH, se le agregaron 50 miligramos de Níquel de Raney (Degussa B113W), y la mezcla de reacción se mantuvo agitándose bajo una atmósfera de hidrógeno durante 16 horas. El catalizador se filtró (Celite), y se lavó con EtOH, y el filtrado se evaporó para proporcionar el compuesto del título como un sólido grisáceo.
HPLC: RtH9= 0.34 minutos; ESIMS [M + H]+ = 189.2; H-RMN (600 MHz, DMSO-of6): d 7.98 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.09 (t, 1H, CHF2), 7.02 (br. s, 2H). Ácido-12: Ácido 3-cloro-5-difluoro-metoxi-piridin-2-carboxílico a) 3-cloro-5-difluoro-metoxi-piridin-2-carbonitrilo, A una solución de 3-cloro-5-hidroxi-piridin-2-carbonitrilo (330 miligramos, 2.03 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (DMF) (10 mililitros), se le agregaron K2C03 (1.68 gramos, 12.2 milimoles), y cloro-difluoro-acetato de sodio (1.29 gramos, 8.1 milimoles), y la mezcla de reacción se calentó a 100°C durante 10 minutos. La mezcla de reacción fría se diluyó con el terbutil-metil-éter (TBME), y se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró, y se concentró. Se obtuvo el compuesto del título después de la cromatografía en columna por evaporación instantánea sobre gel de sílice (hexano hasta hexano-EtOAc, 1:1), como un aceite amarillo: TLC (hexano-EtOAc, 2:1): Rf =0.54; HPLC: RtH5= 0.966 minutos; ESIMS: 203, 205 [(M-H) ]; H RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.41 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 6.60 (t, 1H). b) Ácido 3-cloro-5-difluoro-metoxi-piridin-2-carboxíl¡co A una solución del 3-cloro-5-difluoro-metoxi-piridin-2- carbonitrilo (470 miligramos, 2.29 milimoles) en dioxano (18 mililitros), se le agregó NaOH 1N (8.0 mililitros, 8 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a 70°C. La mezcla de reacción fría se acidificó con HCI 4N, y se evaporó a sequedad. El residuo se suspendió en CH2CI2-MeOH, 8:1, se filtró, y se concentró, para proporcionar el compuesto del título como un aceite color amarillo.
HPLC: RtH5= 0.664 minutos; ESIMS: 222, 224 [(M-H)"]; 1H RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.38 (br s, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.06 (t, 1H). Ácido 13: Ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico a) Terbutil-éster del ácido 5-bromo-3-met¡l-p¡rid¡n-2-carboxílico A una solución de 10.20 gramos (47.2 milimoles) del ácido 5-bromo-3-metil-piridin-2-carboxílico y 20.61 gramos (94 milimoles) de dicarbonato de diterbutilo en 100 mililitros de tetrahidrofurano (THF), se le agregaron 0.577 gramos de DMAP. Inmediatamente se inició el desprendimiento de C02, y la mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Se agregaron terbutil-metil-éter (TBME) y NaHC03 acuoso saturado. Las capas se separaron, y la capa orgánica se lavó con NaHC03 acuoso saturado y salmuera, y se secó con MgS04.H20. La cromatografía sobre gel de sílice (hexanos/ EtOAc, del 1 al 7 por ciento) proporcionó el compuesto del título como un líquido amarillo.
HPLC: RtH3= 3.018 minutos; ESIMS [M + H]+ = 272, 274 (1 Br); 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.59 s, 1H), 7.77 (s, 1H), 2.52 (s, 3H), 1.65 (s, 9H). b) Terbutil-éster del ácido 5-bromo-3-metil-p¡ridin-2-carboxílico Una mezcla de 6.0 gramos (22.05 milimoles) del terbutil-éster del ácido 5-bromo-3-metil-piridin-2-carboxílico, 1.813 gramos (15.43 milimoles) de Zn(CN)2, 0.144 gramos de polvo de Zn (2.205 milimoles), y 0.571 gramos (0.551 milimoles) de Pd2(dba) 3.CHCI3 se suspendieron en 10 mililitros de ?,?-dimetil-formamida (DMF), bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agregó tBu3P (0.321 mililitros, 1.323 milimoles), y la mezcla se agitó durante 5 horas a 60°C. Después de enfriarse, la mezcla se diluyó con terbutil-metil-éter (TBME), se filtró sobre Celite, y se lavó con salmuera tres veces. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexanos/EtOAc, del 5 al 15 por ciento), para dar el compuesto del título como un sólido grisáceo. TLC (hexanos/ EtOAc, 3:1): Rf = 0.31; HPLC: RtH3= 2.431 minutos; ESIMS [M + Na]+ = 241; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.78 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 2.56 (s, 3H), 1.67 (s, 9H); Ft-IR: 2231 cm 1 (CN). c) Ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico A una solución de 8.50 gramos (38.9 milimoles) del terbutil-éster del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico en 51 mililitros (389 milimoles) de 1 ,3-dimetoxi-benceno, se le agregaron 85 mililitros de ácido trifluoro-acético (TFA), y se agitó durante 6.5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con tolueno y se evaporó. El residuo se absorbió en tolueno y se evaporó (2 veces). El producto se cristalizó a partir de terbutil-metil-éter (TBM E)/hexanos, para dar el compuesto del título como un polvo blanco. HPLC: RtHi= 2.314 minutos; ESIMS [M + Na]+ = 163; 1H-RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.77 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 2.87 (s, 3H). Ácido-14: Ácido 3-cloro-5-trideutero-metoxi-piridin-2-carboxílico a) 3-cloro-5-hidroxi-piridin-2-carbonitrilo A una solución desgasificada con argón del 5,6-dicloro-piridin-3-il-éster de ácido acético (4.87 gramos, 23.66 milimoles) en N,N-dimetil-formamida (DMF) (50 mililitros), se le agregaron Zn(CN)2 (1.278 gramos, 10.88 milimoles), polvo de zinc (0.07 gramos, 1.06 milimoles), y DPPF PdCI2 (0.996 gramos, 1.18 milimoles), y la mezcla de reacción resultante se calentó a 150°C durante 18 horas. La mezcla de reacción se diluyó con el terbutil-metil-éter (TBME) y agua, se filtró sobre Celite, y el producto se extrajo con terbutil-metil-éter (TBME). Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04, se filtraron, y se concentraron. Se obtuvo el compuesto del título después de la recristalización a partir de EtOAc-hexano como un sólido color beige: TLC (CH2CI2-MeOH 19:1): Rf =0.22; HPLC: RtH5= 0.677 minutos; ESIMS: 153,155 [(M-H)"]; 1H RMN (360 MHz, CD3OD): d 8.19 (d, 1H), 7.41 (d, 1H). b) 3-cloro-5-trideutero-metoxi-piridin-2-carbonitrilo A una solución del 3-cloro-5-hidroxi-piridin-2-carbonitrilo (0.855 gramos, 5.5 milimoles) en tetrahidrofurano (THF) (50 mililitros), se le agregaron, a 0°C, CD3OD (0.292 mililitros, 7.19 milimoles) y PPh3 (2.176 gramos, 8.30 milimoles), y después, por goteo, DIAD (1.613 mililitros, 8.30 milimoles). Después de agitar durante 1 hora a 0-5°C, la mezcla de reacción se concentró. Se obtuvo el compuesto del título después de la cromatografía en columna por evaporación instantánea sobre gel de sílice (tolueno-EtOAc, 3:1), como un sólido incoloro: TLC (tolueno-EtOAc, 1:1): Rf =0.57; HPLC: RtH5= 0.866 minutos; ESIMS: 172, 174 [(M + H)+]¡ 1H RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.30 (d, 1H), 7.31 (d, 1H). c) Ácido 3-cloro-5-trideutero-metoxi-piridin-2-carboxílico A una solución del 3-cloro-5-trideutero-metoxi-piridin-2-carbonitrilo (760 miligramos, 4.43 milimoles) en dioxano (10 mililitros), se le agregó NaOH 4N (11.07 mililitros, 44.3 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a 85°C. La mezcla de reacción fría se acidificó con HCI 4N, y se extrajo con EtOAc. Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO„, se filtraron, y se concentraron. Se obtuvo el compuesto del título después de la cristalización a partir de EtOAc-di-isopropil-éter como un sólido incoloro.
HPLC: RtHs= 0.538 minutos; ESIMS: 191,193 [(M + H)+]; 1H RMN (360 MHz, CDCI3): d 8.21 (d, 1H), 7.38 (d, 1H). Ácido-15: Ácido 5-dif luoro-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico a) 5-difluoro-metoxi-3-meti!-pirid¡n-2-carbonitrilo Una solución del 5-hidroxi-3-metil-piridin-2-carbonitrilo (Registro CAS 228867-86-5) (228 miligramos, 1.70 milimoles), cloro-difluoro-acetato de sodio (Registro CAS 1895-39-2) (518 miligramos, 3.40 milimoles), y K2C03 (705 miligramos, 5.10 milimoles) en ?,?'-dimetil-formamida (DMF) (7 mililitros), se agitó durante 0.5 horas a 100°C. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, y se lavó con una solución acuosa saturada de NH4CI y salmuera. Las capas acuosas se volvieron a extraer con EtOAc, las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y el filtrado se concentró. Se obtuvo el compuesto del título como un aceite Incoloro después de la cromatografía por evaporación instantánea sobre gel de sílice (ciciohexano / EtOAc, gradiente de 0 a 3 minutos 95:5, de 3 a 35 minutos de 95:5 a 60:40).
HPLC Rtmo = 0.87 minutos; ESIMS: 185 [(M + H)+]¡ 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 8.40 (d, 1 H), 7.45 (d, 1 H), 6.64 (t, 1 H), 2.61 (s, 3H). b) Ácido 5-dif luoro-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico A una solución del 5-difluoro-metoxi-3-metil-piridin-2-carbonitrilo (145 miligramos, 0.787 milimoles) en EtOH (5 mililitros), se le agregó una solución acuosa de NaOH 1M (2.5 mililitros). La mezcla de reacción se agitó durante 7 horas a 70°C, y entonces durante 9 horas a temperatura ambiente. Se diluyó con Et20 y se extrajo dos veces con agua. Las capas acuosas combinadas se volvieron a extraer con Et20, se acidificaron a un pH de 2 con HCI acuoso 1M, y se extrajeron dos veces con terbutil-metil-éter (TBME). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y el filtrado se concentró, para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco, el cual se utilizó para el siguiente paso sin mayor purificación.
HPLC Rtmo = 0.61 minutos; ESIMS: 204 [(M + H)+]; 1H RMN (400 MHz, MeOD): 8.32 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.06 (t, 1 H), 2.64 (s, 3H). Ácido-16: Ácido 5-cloro-4,6-dideutero-3-trideutero-metil-piridin-2-carboxílico Una suspensión de 500 miligramos (2.91 milimoles) del ácido 5-cloro-3-metil-piridin-2-carboxílico (CAS Nr.: 886365-46-4) en 9 mililitros de D20 (99,96 por ciento D) se trató con 1 mililitro de una solución al 40 por ciento de NaOD en D20. La solución homogénea se calentó en un recipiente de Teflón de 100 mililitros con un aparato de microondas Synthos 3000. La mezcla se calentó a 160°C durante 5 horas, y se enfrió. Los análisis de 1H-R N y MS del producto mostraron que la deuteración había progresado hasta un alto grado. Solamente hubo cantidades menores de derivados de tetradeutero presentes. La mezcla de reacción se acidificó hasta un pH de 3 con HCI 2N, y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se secó con MgSCvH20 y se evaporó, para dar el compuesto del título como un sólido blanco, suficientemente puro para otras transformaciones.
HPLC: Rtm= 2.820 minutos; ESIMS [M + H]+ = 177 (5D); 1H-RMN (360 MHz, D20): d impurezas no deuteradas. Ácido-17: 4-dif luoro-metil-6-metoxi-piridazin-3-carboxilato de sodio a) Etil-éster del ácido 2-diazo-4,4-difluoro-3-oxo-butírico A una solución del etil-éster del ácido 4,4-d¡fluoro-3-oxo-butírico (5.0 gramos, 29 milimoles), y 4-acetil-amino-bencen-sulfonil-azida (7.95 gramos, 32 milimoles) en acetonitrilo (ACN) (50 mililitros), se le agregó, a 0°C, NEt3 (6.1 mililitros, 43,8 milimoles) dentro de 30 minutos. La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a 0-5°C, y durante la noche a 25°C, luego se diluyó con el terbutil-metil-éter (TBME), y se filtró. El filtrado se lavó con NaH2P04 acuoso al 10 por ciento y salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró, y se concentró. Se obtuvo el compuesto del título después de la cromatografía en columna por evaporación instantánea sobre gel de sílice (hexano hasta hexano-TBME, 1:1), como un aceite color amarillo.
TLC (hexano-TBME 1:1): Rf =0.46; RMN (360 MHz, CDCI3): d 6.62 (t, 1H), 4.38 y 4.24 (q, 2H),1.38 y 1.31 (t, 3H). b) 1-metil-éster de 5-etil-éster del ácido (E)-4-diazo-3-difluoro-metil-pent-2-enodioico A una solución del etil-éster del ácido 2-diazo-4,4-difluoro-3-oxo-butírico (0.5 gramos, 2.6 milimoles) en Et20 (10 mililitros), se le agregó metoxi-carbonil-metilen-trifenil-fosforano (1.3 gramos, 3.9 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó durante 3 días a 25°C. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de gel de sílice, y se concentró, para proporcionar el compuesto del título después de la purificación mediante cromatografía en columna por evaporación instantánea sobre gel de sílice (hexano hasta hexano-TBME, 1:1), como un aceite color amarillo.
TLC (hexano-TBME, 1:1): Rf =0.60; 1H RMN (360 MHz, CDCI3): d 6.82 (t, 1H), 6.32 (s, 1H), 4.29 (q, 2H), 3.79 (s, 3H), 1.34 (t, 3H). c) Etil-éster del ácido 4-dif luoro-metil-6-metoxi-piridazin-3-carboxílico A una solución del 1 -metil-éster de 5-etil-éster del ácido (E)-4-diazo-3-difluoro-metil-pent-2-enodioico (0.18 gramos, 0.78 milimoles) en Et20 (10 mililitros), se le agregó PPh3 (0.31 gramos, 1.18 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó durante 3 días a 25°C. La mezcla de reacción se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna por evaporación instantánea sobre gel de sílice (hexano hasta hexano-TBME, 1:1), para obtener el compuesto del título como un aceite color amarillo.
TLC (hexano-TBME, 1:1): Rf =0.31; HPLC: RtH5= 0.877 minutos; H RMN (360 MHz, CDCI3): d 7.41 (t, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.52 (q, 2H), 4.25 (s, 3H), 1.45 (t, 3H). d) 4-difluoro-metil-6-metoxi-piridazin-3-carboxilato de sodio A una solución del etil-éster del ácido 4-difluoro-metil-6-metoxi-piridazin-3-carboxílico (0.13 gramos, 0.56 milimoles) en dioxano (2 mililitros), se le agregó NaOH 4N (0.7 mililitros, 2.8 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó durante 0.5 horas a 25°C. Después de la adición de HCI 4N (0.56 mililitros, 2.24 milimoles), la mezcla de reacción se evaporó a sequedad. El producto crudo se volvió a disolver en ?,?-dimetil-formamida (DMF), y se concentró nuevamente para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo claro, el cual se utilizó como tal en el siguiente paso.
HPLC: RtH5= 0.420 minutos; ESIMS: 203 [(M-H) ]. Ácido-18: Ácido 5-ciano-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico a) Ácido 5-cloro-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico El ácido 5-cloro-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico se preparó a partir de (2,5-dicloro-piridin-3-il)-metanol de una manera análoga a la secuencia del Ácido-1, pasos a) a d), utilizando yoduro de trideutero-metilo en lugar de yoduro de metilo en el paso de alquilación b).
LC-MS: RtHe= 0.77 minutos. (100 por ciento de pureza, ES+ 205, 207), API ES-203, 205; H-RMN (400 MHz, CDCI3): d 8.47 (d, 1H), 8.27 (m, 1H), 4.87 (s, 2H). b) Bencil-éster del ácido 5-cloro-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico Una mezcla del ácido 5-cloro-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico (100 miligramos, 0.489 milimoles), y 2-bencil-1 ,3-diciclohexil-isourea (169 miligramos, 0.538 milimoles) en tolueno (2 mililitros), se agitó a 90°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se filtró y se evaporó al vacío. La cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo) proporcionó el compuesto del título.
LC-MS: RtHe= 1.15 minutos. (100 por ciento de pureza, ES+ 295, 297); H-RMN (400 MHz, CDCI3): d 8.85 (d, 1H), 8.10 (d, 1H), 7.50 (m, 2H), 7.40 (m, 3H), 5.46 (s, 2H), 4.82 (s, 2H). c) Bencil-éster del ácido 5-ciano-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico El bencil-éster del ácido 5-cloro-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico (120 miligramos, 0.407 milimoles) se hizo reaccionar con polvo de zinc (2.66 miligramos, 0.04 milimoles), cianuro de zinc (28.7 miligramos, 0.244 milimoles), y catalizador de bis-(tri-terbutil-fosf¡na)-paladio(0) (20.81 miligramos, 0.041 mili-moles) de una manera análoga, a 80°C, durante 3 horas, como para el Ácido 1, paso c), para proporcionar el compuesto del título después de la cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo). TLC Rf=0.40 (3:1 ciclohexano:acetato de etilo); LC-MS: RtHe= 1 04. (100 por ciento, ES+ 286); H-RMN (400 MHz, CDCI3): d 8.87 (d, 1H), 8.39 (d, 1H), 7.50 (m, 2H), 7.40 (m, 3H), 5.47 (s, 2H), 4.82 (s, 2H). d) Ácido 5-ciano-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico Una solución del bencil-éster del ácido 5-ciano-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico (50 miligramos, 0.175 milimoles) en etanol (1.8 mililitros) se hidrogenó durante 18 horas sobre Pd/C (al 10 por ciento, 18.65 miligramos), a temperatura ambiente y a presión atmosférica. La mezcla de reacción se filtró y se evaporó al vacío. El residuo se dividió entre dietil-éter y una solución de NaOH 2N. La fase acuosa se hizo ácida con una solución de HCI 2N, y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se concentró al vacío, para proporcionar el compuesto del título como un sólido vidriado.
LC-MS: RtH8= 0.48 minutos. (100 por ciento de pureza, ES- 194); 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d 8.81 (d, 1H), 8.60 (m, 1H), 5.05 (s, 2H). Ácido-19: Ácido 3-cloro-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico a) Terbutil-éster del ácido 5-bromo-3-cloro-piridin-2-carboxílico A una solución helada de 11.82 gramos (50 milimoles) del ácido 5-bromo-3-cloro-piridin-2-carboxílico (CAS 1189513-51-6) en 150 mililitros de tetrahidrofurano (THF), se le agregaron 611 miligramos (5 milimoles) de DMAP y 14.19 gramos (65 milimoles) de Boc20, y la mezcla de reacción se calentó a 60°C durante 3 horas. Después de enfriarse a 0°C, se agregó bicarbonato de sodio acuoso medio saturado, y la mezcla se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaCI acuoso medio saturado, se secaron con Na2S04 y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano hasta ciclohexano/EtOAc, 1:1), para proporcionar el compuesto del título como un aceite incoloro.
HPLC: RtH8= 1 22 minutos; ESIMS [M-tBu]+ = 237.8; 1H-RMN (600 MHz, DMSO-c(6): d 8.73 (d, 1H), 8.52 (d, 1H), 1.55 (s, 9H). b) Terbutil-éster del ácido 3-cloro-5-vinil-piridin-2-carboxílico Una mezcla de 1.755 gramos (6 milimoles) del terbutil-éster del ácido 5-bromo-3-cloro-piridin-2-carboxílico y 884 miligramos (6.6 milimoles) de trifluoro-(vinil)-borato de potasio en 18 mililitros de dioxano, se purgó con nitrógeno, se agregaron 1.67 mililitros (12 milimoles) de trietil-amina y 153 miligramos (0.3 milimoles) de bis-(tri-terbutil-fosfina)-paladio(O), y la mezcla se calentó a 80°C durante 0.5 horas. Después de enfriarse a temperatura ambiente y de agregar EtOAc, la mezcla se filtró a través de Hyflo, y el filtrado se evaporó. El residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (ciclohexano hasta ciclonexano/EtOAc, 7:3), para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo pálido.
HPLC: RtH8= 1.13 minutos; ESIMS [M-tBu]+ = 184.0; H-RMN (600 MHz, DlvlSO-de): d 8.64 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 6.79 (dd, 1H), 6.18 (d, 1H), 5.56 (d, 1H), 1.55 (s, 9H). c) Ácido 3-cloro-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico El compuesto del título se preparó mediante una secuencia de reacción análoga a la del Ácido-5, pasos c) y d), utilizando el terbutil-éster del ácido 3-cloro-5-vinil-piridin-2-carboxílico en lugar del metil-éster del ácido 3-(di-terbutoxi-carbonil-amino)-5-vinil-pirazin-2-carboxílico [Ácido-5, paso c)], seguida por la disociación del terbutil-éster de una manera análoga al procedimiento del Ácido-11 , paso b).
HPLC: RtH9= 0.41 minutos; ESIMS [M + H]+ = 207.8; 1H RMN (600 Hz, DMSO-d6): 14.30 (br. s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.20 (t, 1H, CHF2). Ácido-20: Ácido 3-cloro-5-trideutero-metoxi-d¡deutero-metil-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carboxílico a) 1 -tri-isopropil-silanil-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-5-deutero-carbaldehído A una solución del 1 -tri-isopropil-silanil-1 H-pirrolo-[2,3]-piridin- 5-bromuro (18.8 gramos, 53.2 milimoles, CAS: 858116-66-2), se le agregó por goteo butil-litio (23.4 mililitros, 58.5 milimoles, 2.5 molar en hexano) a -78°C bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de agitar durante 45 minutos a esta temperatura, se agregó lentamente deutero-D1 -DMF (6.26 mililitros, 80 milimoles, 98 por ciento de Armar) en tetrahidrofurano (THF) (5 mililitros), y el baño de enfriamiento se removió 15 minutos después de que la adición estuvo completa. La reacción se apagó a 0°C mediante la adición de ácido acético 1N acuoso (5 mililitros), y se diluyó con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. 17.1 gramos (94 por ciento de rendimiento). TLC Rf = 0.55 (5:1 de ciclohexano:acetato de etilo). LC-MS RtHg= 1.54 minutos. (89 por ciento de pureza, ES+ 304), API MS ES+ 304. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): 8.79 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 7.42 (d, 1H), 6.72 (d, 1H), 1.89 (septeto, 3H), 1.15 (d, 18H). Se utilizó crudo en el siguiente paso. b) (1 -tri-isopropil-silanil-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-5-il)-dideutero-metanol A una solución del 1-tri-isopropil-silanil-1 H-pirrolo-[2,3]-piridin- 5-deutero-carbaldehído (17.1 gramos, 50.1 milimoles) en etanol (250 mililitros), se le agregó borodeuteriuro de sodio (2.6 gramos, 62.2 milimoles), a temperatura ambiente. Se continuó la agitación durante 2 horas, y la reacción se apagó cuidadosamente con ácido acético 1N. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, y se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. 18 gramos de aceite. La cromatografía en gel de sílice (89:11 de ciclohexano: acetato de etilo) proporcionó el compuesto del título como un sólido blanco. 12.55 gramos (82 por ciento de rendimiento). TLC Rf = 0.46 (2:1 de ciclohexano:acetato de etilo). LC-MS RtHg= 1.40 minutos. (100 por ciento de pureza, ES+ 307). API MS ES+ 307.
H-RMN (400 MHz, CDCI3): 8.29 (d, 1H), 7.91 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 1.88 (septeto, 3H), 1.15 (d, 18H). c) 5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-1 -tri-isopropil-silanil-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridina A una solución del (1 -tri-isopropil-silanil-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-5-il)-dideutero-metanol (5 gramos, 16.31 milimoles) en N,N-dimetil-formamida (DMF) seca (125 mililitros), se le agregó hidruro de sodio (718 miligramos, 17.94 milimoles, al 60 por ciento en aceite) a 0°C. Después de 15 minutos, se agregó D3-yoduro de metilo (1.354 mililitros, 21.21 milimoles), y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se apagó con agua, y se diluyó con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. 4 gramos de un aceite amarillo. La cromatografía en gel de sílice (85:15 de ciclohexano:acetato de etilo) proporcionó el compuesto del título. 3.235 gramos (61.3 por ciento de rendimiento). TLC Rf = 0.55 (2:1 de ciclohexano:acetato de etilo). LC-MS RtHe= 1-68 minutos. (96 por ciento de pureza, ES+ 324). 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): 8.26 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.33 (d, 1H), 6.56 (d, 1H), 1.88 (septeto, 3H), 1.15 (d, 18H). d) 5-trideutero-metox¡-dideutero-metil-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridina A una solución de la 5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-1 -tri-isopropil-silanil-1 H-pirrolo-[2,3-b]-pirid¡na (3.253 gramos, 10.05 mili-moles) en tetrahidrofurano (THF) seco (20 mililitros), se le agregó TBAF 1M en tetrahidrofurano (THF) (10.56 mililitros, 10.56 mili-moles). La reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió en agua, y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. 4.31 gramos. La cromatografía en gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo) proporcionó el compuesto del título. 791 miligramos (47.1 por ciento de rendimiento). TLC Rf = 0.13 (1:2 de ciclohexano:acetato de etilo). LC-MS RtH8= 0.54 minutos. (100 por ciento de pureza, ES+ 168). API MS ESI+ 168. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): 10.50 (amplia s, 1H), 8.36 (d, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.40 (m, 1H), 6.53 (m, 1H). e) 7-óxido de 5-trideutero-metoxi-d¡deutero-metil-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridina A una solución de la 5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridina (780 miligramos, 4.66 milimoles) en DME (20 mililitros), se le agregó m-CPBA (1127 miligramos, 6.53 milimoles) a 0°C. Se continuó la agitación a temperatura ambiente durante la noche. El solvente se removió al vacío, y el producto crudo se suspendió en agua, y el pH se ajustó a 9 con una solución saturada de carbonato de potasio. Se continuó la agitación y la solución acuosa se saturó con cloruro de sodio, y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. 988 miligramos de un aceite color café, el cual se utilizó sin purificación en el siguiente paso. LC-MS RtHs= 0.52 minutos. (73 por ciento de pureza, ES+ 184). API MS ESI+ 184. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): 12.81 (amplia s, 1H), 8.26 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.41 (m, 1H), 6.55 (m, 1H). f) (6-bromo-5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-pirrolo-[2,3-b]-piridin-1 -il)-fenil-metanona Las soluciones de bromuro de benzoílo (1.319 mililitros, 11.19 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (2 mililitros), y HMDS (0.938 mililitros, 4.48 milimoles) en dicloro-metano (DC ) (1 mililitro), se agregaron simultáneamente por goteo a una solución del 7-óxido de 5-trideu tero -metoxi-dideutero-meti 1-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridina (988 miligramos, 4.48 milimoles) en dicloro-metano (DCM) (3 mililitros), bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se continuó la agitación a temperatura ambiente durante la noche. Precipitación blanca. Después de 18 horas de agitación, la mezcla se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se evaporó. 652 miligramos de un aceite color café. La cromatografía en gel de sílice (ciclohexano / EtOAc) proporcionó el compuesto del título. 326 miligramos (21 por ciento de rendimiento). LC-MS RtH8= 1.27 minutos, (pureza del 90 por ciento, ES+ 350/352).
?-RMN (400 MHz, CDCI3): 8.01(s, 1H), 7.91 (dd, 2H), 7.77 (d, 1H), 7.64 (t, 1H), 7.53 (t, 2H), 6.56 (d, 1H). g) 6-bromo-5-trideutero-metox¡-dideutero-metil-pirrolo-[2,3-b]-piridina A una solución de la (6-bromo-5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-pirrolo-[2,3-b]-piridin-1 -il)-fenil-metanona (320 miligramos, 0.91 milimoles) en metanol (MeOH) (8 mililitros), se le agregó una solución de NaOH 2M (4.57 mililitros, 9.14 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 días. El sólido blanco formado en la reacción se filtró y se secó. 124 miligramos. El filtrado se evaporó al vacío, se diluyó con acetato de etilo, y se lavó con una solución saturada de bicarbonato de sodio y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. 55 miligramos. Sólidos combinados: 179 miligramos (80 por ciento de rendimiento). LC-MS RtHe= 0.84 minutos. (85 por ciento de pureza, ES+ 246/248).
H-RMN (400 MHz, CDCI3): 10.78 (amplia s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.44 (m, 1H), 6.53 (m, 1H). h) 6-c¡ano-5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-pirrolo-[2,3-b]-piridina Una mezcla de la 6-bromo-5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-pirrolo-[2,3-b]-piridina (120 miligramos, 0.488 milimoles), zinc (0.319 miligramos, 4.88 micromoles), y cianuro de zinc (34.4 miligramos, 0.293 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (DMF) seca (1.5 mililitros), se desgasificó con argón en un frasco para microondas de 4 mililitros durante 20 minutos. Se agregó bis-(tri-terbutil-fosfina)-paladio(O) (24.92 miligramos, 0.049 milimoles), y el frasco se selló y se calentó a 80°C durante 4 horas. La mezcla de reacción se vertió en una mezcla de agua/hielo/acetato de etilo, y la capa orgánica se lavó dos veces con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. La cromatografía en gel de sílice (ciclohexano / EtOAc) del producto crudo (164 miligramos) proporcionó el compuesto del título como un sólido blanco. 71 miligramos (76 por ciento de rendimiento). LC-MS RtHe= 0.73 minutos. (100 por ciento de pureza, ES+ 193).
H-RMN (400 MHz, CDCI3): 10.14 (amplia s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.66 (m, 1H), 6.64 (m, 1 H). i) Ácido 5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carboxílico Una suspensión de la 6-ciano-5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-pirrolo-[2,3-b]-piridina (70 miligramos, 0.364 milimoles) en NaOH 2M (2 mililitros) se agitó a 100°C durante 18 horas. La mezcla de reacción se lavó con dietil-éter, y la capa acuosa se hizo ácida (pH 6-7) con una solución de HCI 2M. El sólido blanco formado se filtró y se lavó con agua. 63 miligramos de un sólido blanco. El filtrado se extrajo con acetato de etilo, se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, y se evaporó. 12 miligramos de un sólido blanco. Sólidos combinados: 75 miligramos de un sólido blanco (98 por ciento de rendimiento). LC-MS RtH8= 0.60 minutos. (100 por ciento de pureza, ES+ 212).
?-RMN (400 MHz, CDCI3): 8.48 (s, 1H), 7.60 (m, 1H), 6.67 (m, 1H). j) Ácido 3-cloro-5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carboxílico A una solución del ácido 5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carboxílico (70 miligramos, 0.331 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (DMF) seca (12 mililitros), se le agregó NCS (44.3 miligramos, 0.331 milimoles), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas bajo argón. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, y se lavó con salmuera. El precipitado formado se filtró, se lavó con acetato de etilo, y se secó al vacío. El residuo (300 miligramos) se agitó en agua, y la parte insoluble se filtró, proporcionando 20 miligramos (25 por ciento de rendimiento) de un sólido amarillo claro. LC-MS RtHe= 0.78 minutos. (100 por ciento de pureza, ES-244). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-D6): 13.04 (s, 1H), 12.28 (amplia s, 1H, NH), 8.06 (s, 1H), 7.91 (d, 1H). Ácido-21 : Ácido 5-trideutero-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico El ácido 5-trideutero-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico se preparó mediante una secuencia de reacción análoga a la del Ácido-6, utilizando CD3OD en lugar de metanol en el primer paso; HPLC: Rtmo = 0.42 minutos; ESIMS: 171 [(M + H)+]¡ 1H RMN (400 MHz, MeOD): d 8.13 (d, 1H), 7.36 (d, 1H), 2.65 (s, 3H). Ácido-22: Ácido 5-fluoro-3-metil-piridin-2-carboxílico a) 5-fluoro-3-metil-piridin-2-carbonitrilo Una solución de 2-cloro-5-fluoro-3-metil-piridina (CAS 38186-84-4, 408 miligramos, 2.750 milimoles), Zn(CN)2 (230 miligramos, 1.923 milimoles), y Pd(PPh3)4 (190 miligramos, 0.165 milimoles) en ?,?-dimetil-formamida (DMF) (8 mililitros), se agitó a 120°C durante 0.5 horas en un reactor de microondas. La mezcla de reacción se filtró sobre Hyflo, se diluyó con el terbutil-metil-éter (TBME) y H20, y se extrajo con salmuera. Las fases acuosas se volvieron a extraer con terbutil-metil-éter (TBME), las fases orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y se concentraron. La cromatografía por evaporación instantánea sobre gel de sílice (hexano-EtOAc, de 100:0 a 80:20) proporcionó el compuesto del título.
HPLC: RtHi2= 0.72 minutos; 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d 8.42 (d, 1H), 7.42-7.39 (m, 1H), 2.61 (s, 3H). b) Ácido 5-fluoro-3-metil-piridin-2-carboxílico El 5-fluoro-3-metil-piridin-2-carbonitrilo (254 miligramos, 1.866 milimoles) en HCI acuoso concentrado (1.5 mililitros) se agitó en un frasco de vidrio sellado a 120°C durante 2 horas. La mezcla de reacción se basificó con NaOH sólido, y se extrajo dos veces con terbutil-metil-éter (TBME). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con H20. Las fases acuosas combinadas se acidificaron a un pH de 2 con HCI acuoso 2M, y se extrajeron tres veces con terbutil-metil-éter (TMBE), se secaron sobre Na2S04, se filtraron, y se concentraron. El producto crudo se utilizó en el siguiente paso sin mayor purificación.
HPLC: RtHi2= 0.48 minutos; ESIMS [M + H]+ = 156; 'H RMN (400 MHz, CD3OD): d 8.37 (d, 1H), 7.63 (dd, 1H), 2.64 (S, 3H).
Catalizador 1: (S)-(6-hidroxi-quinolin-4-il)-((1 S,2R,4S,5R)-5-vinil-1 -aza-biciclo-[2.2.2]-oct-2-il)-metil-éster del ácido 3,5-bis-trifluoro-metil -benzoico a) (S)-(6-tri-isopropil-silaniloxi-quinolin-4-il)-((1 S,2R,4S,5R)-5- vinil-1-aza-biciclo-[2.2.2]-oct-2-il)-metil-éster del ácido 3,5-bis-trifluoro-metil -benzoico A una solución del (S)-(6-tri-isopropil-silaniloxi-quinolin-4-il)-((1S,2R,4S,5R)-5-vinil-1-aza-biciclo-[2.2.2]-oct-2-il)-metanol (Deng y colaboradores, J. Amer. Chem. Soc. 2006, 128, 732; CAS Nr.: 876269-55-5; 3.22 gramos, 6.90 milimoles), y Et3N (1.442 mililitros, 10.35 milimoles) en dicloro-metano (DCM), se le agregó por goteo cloruro de 3,5-bis-trifluoro-metil-benzoílo (2.480 gramos, 8.97 mili-moles). TLC (hexanos / (EtOAc / MeOH, 95:5) 1:1): Rf = 0.44; HPLC: RtH5= 3.256 minutos; ESIMS [M + H]+ = 707; 1H-RMN (DMSO-d6, 360 MHz): d 8.76 (d, 1H), 8.53 (s, 2H), 8.00 (d, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.41 (d, 1H), 6.49 (d, 1H), 6.09 (ddd, 1H), 5.11 (d, 1H), 5.07 (d, 1H), 3.59 (q, 1H), 2.85-2.73 (m, 2H), 2.65-2.56 (m, 2H), 2.33-2.23 (m, 1H), 1.96-1.50 (m, 5H), 1.38-1.25 (m, 3H), 1.10 (d, 18H). b) (S)-(6-hidroxi-quinolin-4-il)-((1 S,2R,4S,5R)-5-vinil-1 -aza-biciclo-[2.2.2]-oct-2-il)-metil-éster del ácido 3,5-bis-trif luoro-metil-benzoico A una solución del compuesto catalizador 1a) (4.88 gramos, 6.90 milimoles) en 50 mililitros de tetrahidrofurano (THF), se le agregó por goteo HF-Py (1.8 mililitros, 68 milimoles). La reacción fue ligeramente exotérmica, y la solución amarilla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con EtOAc, y se lavó con NaHC03 acuoso saturado (3 veces) y salmuera. La capa orgánica se secó con Na2S04 y se evaporó.
El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (hexanos / (EtOAc / metanol, 20:1), del 30 al 75 por ciento), para dar el compuesto del título como un sólido amarillo pálido. TLC (hexanos / (EtOAc / metanol al 5 por ciento], 1:3): Rf = 0.28; HPLC: RtH3= 2.464 minutos [M + H]+ 551; H-RMN (DMSO-d6, 600 MHz): d 10.20 (s, 1H), 8.72 (d, 1H), 8.58 (s, 2H), 8.51 (s, 1H), 7.89 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.33 (d, 1H), 6.49 (d, 1H), 6.07 (ddd, 1H), 5.10 (d, 1H), 5.07 (d, 1H), 3.50-3.43 (m, 1H), 2.88-2.73 (m, 2H), 2.67-2.50 (m, 2H), 2.23 (q, 1H), 1.93-1.83 (m, 1H), 1.78 (s, 1H), 1.70-1.61 (m 1H), 1.60-1.52 (m, 1H), 1.50-1.44 (m, 1H).

Claims (6)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de la fórmula (I): en donde R,, R2, R3, R4, 5 y R6 se definen como para proporcionar un compuesto seleccionado a partir de: [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-cloro-3-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-d¡hidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-tris-deutero-metoxi-pirazin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-prop-2-iniloxi-pirazin-2-carboxílico; [3-(5-amino 3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-pirazin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metil-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-fluoro-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-trideutero-metoxi-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[ ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-trideutero-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3- il)- , 5-d i I uo ro-fe ni l]-a mida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4,5-difluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-trideutero-metoxi-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3-difluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4,5-difluoro-fenil]-amida del ácido 4,6-dideutero-5-cloro-3-trideutero-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-metoxi-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-difluoro-metoxi-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-cloro-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-cloro-3-fluoro-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-tr¡deutero- metoxi-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-¡l)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 2,5-dimetil-oxazol-4-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metoxi-3-metil-piridin-2-carboxíl¡co; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-prop-2-iniloxi-pirazin-2-carboxílico; [3-(5-amino-316-dimet¡l-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metil-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-pirazin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 4-difluoro-met¡l-6-metoxi-piridazin-3-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-trideutero-metoxi-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-trideutero-metoxi-dideutero-metil-1 H-pirrolo-[2,3-b]-piridin-6-carbo ilico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-trifluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-fluoro-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-trideutero-metox¡-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-d¡hidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metox¡-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H- [1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fen¡l]-amida del ácido 5-cloro-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-ciano-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metil-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-am¡no-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dih¡dro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-¡l)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-pirazin -2 -carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-6,6-bis-fluoro-metil-3-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2 -carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 5-difluoro-metil-3-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-difluoro-metil-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxaz¡n-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-trifluoro-metil- piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dih¡dro-2H-[1 ,4]-oxaz¡n-3-M)-4-fluoro-fen¡l]-amida del ácido 3,5-dicloro-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-am¡da del ácido 3-amino-5-ciano-piridin-2-carboxílico; [3-(5-amino-3,6,6-tris-fluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-amida del ácido 3-cloro-5-ciano-piridin-2-carboxílico; N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-metoxi-2-metil-nicotinarnida; N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-trideutero-metoxi-2-metil-nicotinamida; 2-amino-N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-etoxi-nicotinamida; 2-amino-N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-metoxi-nicotinamida; 2-amino-N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-trideutero-metoxi-nicotinamida; 2-amino-N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxaz¡n-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-pentadeutero-etoxi-nicotinamida; N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fen¡l]-2-cloro-6-metox¡-nicot¡namida; N-[3-(5-amino-3,6-dimetM-6-trifluoro-metM-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-2-cloro-6-etoxi-nicotinamida; 2-amino-N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxaz¡n-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-ciclopropil-metox¡-nicotinamida; y
2-amino-N-[3-(5-amino-3,6-dimetil-6-trifluoro-metil-3,6-dihidro-2H-[1 ,4]-oxazin-3-il)-4-fluoro-fenil]-6-(2,2,2-trifluoro-etoxi)-nicotinamida; y las sales farmacéuticamente aceptables de las mismas. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para utilizarse como un medicamento.
3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para utilizarse en el tratamiento o en la prevención de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve.
4. Una composición farmacéutica, la cual comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como ingrediente activo, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
5. El uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento o la prevención de la enfermedad de Alzheimer o del deterioro cognitivo leve.
6. Una combinación que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y una segunda sustancia de fármaco, para su administración simultánea o en secuencia.
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