EA030590B1

EA030590B1 - Применение тиазолопиримидинона для лечения воспалительного заболевания кишечника

Info

Publication number: EA030590B1
Application number: EA201592159A
Authority: EA
Inventors: Чайтаня Датт; Виджай Чотайвале; Рам Гупта; Шиталкумар Замбад; Шайлеш Дешпанде; Джигнеш Котеча; Рамеш Гупта; Санджай Сривастава; Лаксмикант Чипа; Джайа Абрахам
Original assignee: Торрент Фармасьютикалз Лимитед
Priority date: 2013-05-14
Filing date: 2014-05-12
Publication date: 2018-08-31
Also published as: EA201592159A1; CY1121280T1; ES2712705T3; PH12015502560B1; KR102239649B1; TWI661828B; PL2996693T3; WO2014184631A1; MX2015015682A; US20170157129A1; PT2996693T; MY179215A; AU2014266968B2; IL242490B; JP6407974B2; SI2996693T1; US20160120801A1; BR112015028581A2; CA2912011A1; CN105209043A

Abstract

Изобретение касается фармацевтической композиции с низкой дозировкой, предпочтительно композиции для перорального применения, включающей терапевтически эффективное количество [(2-гидрокси-4-оксо-6,7,8,9-тетрагидро-4H,5H-10-тиа-1,4а-диазабензо[а]азулен-3-карбонил)амино]уксусной кислоты (соединение А) в диапазоне от 2,5 до 60 мг. Изобретение касается также способа лечения воспалительного заболевания кишечника у млекопитающих путем введения указанной фармацевтической композиции с низкой дозировкой. Кроме того, изобретение касается применения соединения А для приготовления фармацевтической композиции с низкой дозировкой для лечения воспалительного заболевания кишечника у млекопитающих.

Description

настоящее изобретение касается применения соединения А для приготовления фармацевтической композиции с низкой дозировкой для лечения воспалительного заболевания кишечника у млекопитающих.

Предшествующий уровень техники

Воспалительное заболевание кишечника (IBD) - это название группы заболеваний, вызывающих хроническое воспаление желудочно-кишечного тракта. Это идиопатическое заболевание, вызываемое нерегулируемым иммунным ответом на кишечную микрофлору хозяина. Протекание IBD может широко варьироваться, с перемежающимися периодами ремиссии, за которыми следуют периоды острого заболевания. Два главных типа IBD - это язвенный колит и болезнь Крона.

Язвенный колит поражает толстый кишечник и прямую кишку и в типичном случае поражает только самые глубокие слои слизистой оболочки, что выражается в виде непрерывных участков воспаления и образования язв, без сегментов нормальной ткани. Заболевание, при котором затрагиваются только наиболее дистальные участки толстого кишечника и прямой кишки, называют язвенным проктитом; заболевание участка ниже нисходящей ободочной кишки называют ограниченным или дистальным колитом; а заболевание всего толстого кишечника называют панколитом (Kathleen Head et al.; Altern. Med. Rev. 2003; 8(3):247-83).

Болезнь Крона является трансмуральным (поражающим все слои кишечника) воспалением, которое может поражать любой участок пищеварительного тракта ото рта до ануса, но главным образом наблюдается в терминальном отделе подвздошной кишки и/или в толстом кишечнике. Кишечное воспаление и язвообразование при болезни Крона является асимметричным и наблюдается в виде "лоскутов", вперемежку с областями здоровой ткани, и проникает глубоко в стенку кишечника, формируя гранулематозные повреждения. Было описано несколько категорий болезни Крона в зависимости от поражаемого участка желудочно-кишечного тракта и наблюдающейся симптоматики (Kathleen Head et al.; Altern. Med. Rev. 2004; 9(4):360-401). Симптомы часто более вариабельны, чем при язвенном колите, в зависимости от того, какая часть кишечника подвергается поражению.

Клинические симптомы IBD включают колики и боль в животе, кровавый понос, позывы к срочному опорожнению кишечника, чувство неполного освобождения кишечника, жар, потерю аппетита, потерю веса и анемию. Имеющиеся терапевтические стратегии для лечения IBD включают 5-аминосалицилат (месаламин), кортикостероиды, иммуномодуляторы, антибиотики и препараты, подавляющие активность фактора некроза опухолей (TNF). Наиболее часто применяемым лекарственным средством при IBD является месаламин, доступный в диапазоне дозировок от 250 мг до 2 г, которые рекомендуется принимать перорально по меньшей мере по 1 г в сутки или даже в более высокой дозировке. Хотя указанные терапевтические стратегии показали себя как эффективные, отсутствие реакции пациентов на 5-аминосалицилат, побочные эффекты, вызываемые высокими дозировками и длительным приемом кортикостероидов и отсутствием реакции на них, высокая стоимость и повышенный риск инфекции и злокачественных опухолей при использовании биологических агентов, в особенности при комбинировании с иммуномодуляторами, являются лимитирующими факторами (Cummins et al.; Lab Invest., 2013; 93:378383). Это показывает наличие пробелов в доступных видах терапии и усиливает потребность в разработке более новых терапевтических подходов к лечению IBD. Кроме того, как указано выше, IBD является хроническим заболеванием, и введение лекарств требуется в течение более продолжительного времени, например месаламин обычно рекомендуют принимать в течение 6-8 недель при общей суточной дозировке 4 г, при пероральном введении. Поэтому высокие дозировки лекарств в течение длительного времени могут отрицательно повлиять на согласие пациента.

Хотя точная этиология IBD еще не выявлена, исследователями было установлено, что при IBD усиливающийся метаболизм в тканях и васкулит приводят к хроническому воспалению слизистой и, в частности, к гипоксии эпителия, что вызывает активацию отвечающего на гипоксию фактора транскрипции гипоксия-индуцируемого фактора (HIF).

Защитная роль HIF-1 при колите у грызунов впервые была исследована в работе Karhausen et al. (J. Clin. Invest., 2004; 114:1098-1106). Условное удаление HIF-1a из эпителия толстого кишечника усиливает колит и барьерную дисфункцию как в оксазолон-индуцируемой, так и в тринитробензол-сульфокислотаиндуцируемой (TNBS) модели острого колита. Также известно, что активация HIF вызывает активацию набора генов-мишеней, связанных с поддержанием работы элементов кишечного барьера, таких как HSP70 и противовоспалительный цитокин интерлейкин (IL)-10 (Braat et al.; Clinical Gastroenterology and Hepatology 2006; 4:754-759).

HSP70 желудочно-кишечного тракта играет важную роль в защите целостности и поддержании работоспособности слизистой оболочки посредством стабилизации плотных контактов между клетками

- 1 030590

кишечного эпителия. Такая защита кишечного эпителия связана с ограниченной бактериальной транслокацией и уменьшением воспаления (Liedel J.L. et al., Pediatr. Res. 2011; 69:395-400). Также экспрессирование IL-10 напрямую связано с воспалительными нарушениями. Было показано, что у мышей с дефицитом IL-10 развивается хроническое заболевание кишечника, напоминающее болезнь Крона у людей, и внутрижелудочное введение линии рекомбинантной lactococcus lactis, вырабатывающей мышиный IL-10, предотвращает развитие колита у мышей с отключенной выработкой IL-10 и на 40% уменьшает воспаление при хроническом колите, вызванном декстран-сульфатом натрия (Braat et al.; Clinical Gastroenterology and Hepatology 2006; 4:754-759).

В WO 2009/002533 описан способ лечения IBD путем введения средства, ингибирующего активность HIF гидроксилазы. В указанном документе описаны пиридин-2-карбоксамид, хинолин-2карбоксамид и изохинолин-3-карбоксамид в качестве ингибиторов HIF гидроксилазы для лечения IBD. Описано, что соединение вводили ежедневно при интраперитонеальном дозировании, в TNBSиндуцированной животной модели колита при дозировке 20 и 40 мг/кг, и более высокая дозировка показала лучшую эффективность.

Представленные выше данные показывают, что описанные ингибиторы HIF гидроксилазы могут иметь потенциал для лечения IBD у животных. Однако пока нет в наличии доказательств того, что ингибитор HIF гидроксилазы может быть эффективен для лечения IBD, особенно при пероральном введении, и пока на рынке нет лекарственного средства, представляющего собой ингибитор HTF гидроксилазы, которое могло бы применяться для эффективного лечения IBD.

В WO 2011/045811 описаны оксазоло- и тиазоло-производные в качестве ингибиторов HTF гидроксилазы для лечения анемии, ишемии или повреждения тканей, вызванного ишемическими нарушениями. В указанном документе описано, что соединение 10 было эффективно при хронической болезни почек (CKD) в высоких дозировках, таких как 20 мг/кг два раза в сутки (примерный эквивалент дозировки для человека - 450 мг/сутки), при интраперитонеальном введении больным животным.

В работе Jamadarkhana и соавторов в Am. J. of nephrology (2012, 36:208-218) описано, что соединение [(2-гидрокси-4-оксо-6,7,8,9-тетрагидро-4Н,5Н-10-тиа-1,4а-диазабензо[а]азулен-3-карбонил)амино]уксусная кислота, новый ингибитор HIF гидроксилазы, при интраперитонеальном введении показал эффективность в профилактике и лечении острого ишемического поражения почек (AKI).

В работе Jamadarkhana с соавторами и в WO 2011045811 предлагается применение ингибитора HIF гидроксилазы, [(2-гидрокси-4-оксо-6,7,8,9-тетрагидро-4Н,5Н-10-тиа-1,4а-диазабензо[а]азулен-3карбонил)амино]уксусной кислоты, для лечения анемии, ишемии или повреждения ткани, вызванного ишемическим нарушением, такого как CKD или AKI, с применением именно парентерального введения.

В настоящем изобретении описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой для непарентерального введения, предпочтительно для перорального введения, содержащая ингибитор HIF гидроксилазы, [(2-гидрокси-4-оксо-6,7,8,9-тетрагидро-4Н,5Н-10-тиа-1,4а-диазабензо[а]азулен-3-карбонил)амино]уксусную кислоту (далее по тексту именуемая соединение А), который применяется в диапазоне концентраций от 2,5 до 60 мг/день, для лечения воспалительного заболевания кишечника (далее по тексту именуемое IBD). В настоящем изобретении описан также способ лечения воспалительного заболевания кишечника у млекопитающих путем введения фармацевтических композиций с низкой дозировкой, содержащих терапевтически эффективное количество соединения А, которое эффективно в диапазоне низких дозировок от 2,5 до 60 мг/день.

Сущность изобретения

В одном аспекте настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, где указанная композиция эффективна в диапазоне дозировок от 2,5 до 60 мг/день для лечения IBD у млекопитающих.

В другом аспекте настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой для перорального введения, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, где указанная композиция эффективна в диапазоне дозировок от 2,5 до 60 мг/день для лечения IBD у млекопитающих.

В другом аспекте настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой, содержащая соединение А в количестве от 2,5 до 60 мг и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, где указанная композиция эффективна в лечении IBD у млекопитающих.

В другом аспекте настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой для перорального введения, содержащая соединение А в количестве от 2,5 до 60 мг и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, где указанная композиция эффективна в лечении IBD у млекопитающих.

- 2 030590

В другом аспекте настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, для лечения IBD у млекопитающих, где указанная композиция обеспечивает по меньшей мере 50%-ное локальное воздействие общего количества введенного указанного соединения.

В другом аспекте настоящего изобретения описан способ лечения IBD у млекопитающих путем введения фармацевтической композиции с низкой дозировкой, содержащей терапевтически эффективное количество соединения А.

В другом аспекте настоящего изобретения описано применение соединения А для приготовления фармацевтической композиции с низкой дозировкой для лечения IBD у млекопитающих.

Краткое описание фигур

Фиг. 1 - средняя оценка DAI (фиг. 1а), средняя макроскопическая оценка (фиг. 1b), средний процент изменения веса тела (фиг. 1с) и коэффициент выживаемости (фиг. 1d) в животной модели колита (TNBSиндуцированный колит у самцов BALB/c мышей) при пероральном введении фармацевтической композиции, содержащей соединение А или плацебо (композицию без соединения А);

фиг. 2 - средняя оценка DAI (фиг. 2а), средний процент изменения веса тела (фиг. 2b) и средняя оценка колита (фиг. 2с) в животной модели колита (DSS-индуцированный колит у самок BALB/c мышей) или здоровых животных, и экспрессирование HSP70 протеина в ткани толстого кишечника (фиг. 2d) в животной модели колита (DSS-индуцированный колит у самок BALB/c мышей) при пероральном введении фармацевтической композиции, содержащей соединение А или плацебо (композицию без соединения А);

фиг. 3 - распределение соединения А в тканях подвздошной кишки, слепой кишки и толстого кишечника после введения фармацевтической композиции, содержащей соединение А, перорально и интраперитонеально в животной модели колита (DSS-индуцированный колит у самок BALB/c мышей);

фиг. 4 - архитектура железистых полостей и воспалительных клеток в толстом кишечнике здоровых животных при пероральном введении плацебо (композиции без соединения А) (а); и при пероральном введении плацебо (композиции без соединения А) (b), 1 мг/кг композиции соединения А два раза в сутки (с) и 2,5 мг/кг композиции соединения А два раза в сутки (d) в животной модели колита (DSSиндуцированный колит у самок BALB/c мышей) после 10 дней введения;

фиг. 5 - вид кишечника в животной модели колита (TNBS-индуцированный колит у самцов BALB/c мышей) при пероральном введении два раза в сутки фармацевтической композиции, содержащей соединение А в дозировке 1 мг/кг, или носителя (плацебо - композиция без соединения А);

фиг. 6 - средний процент улучшения в оценке DAI (фиг. 6а) и макроскопической оценке (фиг. 6b) в животной модели колита (TNBS-индуцированный колит у самцов BALB/c мышей) при интраперитонеальном и пероральном введении фармацевтической композиции, содержащей соединение А;

фиг. 7 - мРНК экспрессирование IL-10, TNF-α и INF-γ в ткани толстого кишечника в животной модели колита (DSS-индуцированный колит у самок BALB/c мышей) при пероральном введении 2,5 мг/кг два раза в сутки (5 мг/кг/сутки) фармацевтической композиции, содержащей соединение А, или плацебо (композиция без соединения А);

фиг. 8 - архитектура железистых полостей и воспалительных клеток при пероральном введении плацебо (композиции без соединения А) (а), 1 мг/кг соединения А два раза в сутки (b) в животной модели колита (TNBS-индуцированный колит у самцов BALB/c мышей) после 6 дней введения.

Подробное описание изобретения

В следующих далее абзацах подробно описаны различные варианты осуществления настоящего изобретения. Во избежание двусмысленного толкования, специально оговаривается, что любой конкретный отличительный признак (признаки), описанные индивидуально в любом из последующих абзацев (или его части), можно комбинировать с одним или более другими отличительными признаками, описанными в одном или больше из остальных абзацев (или их части). Другими словами, в явной форме указывается, что отличительные признаки, описанные ниже индивидуально в каждом абзаце (или его части) представляют собой важные аспекты настоящего изобретения, которые можно рассматривать отдельно, а также комбинировать с другими важными аспектами настоящего изобретения, описанными в других частях настоящего описания, включая примеры и фигуры. Квалифицированному специалисту будет понятно, что настоящее изобретение охватывает такие комбинации отличительных признаков, которые не были подробно рассмотрены в настоящем тексте в целях краткости.

Термин "[(2-гидрокси-4-оксо-6,7,8,9-тетрагидро-4Н,5Н-10-тиа-1,4а-диазабензо[а]азулен-3-карбонил)амино]уксусная кислота" или "соединение А" при использовании в настоящем тексте означает [(2-гидрокси-4-оксо-6,7,8,9-тетрагидро-4Н,5Н-10-тиа-1,4а-диазабензо[а]азулен-3-карбонил)амино]уксусную кислоту в виде свободного соединения или ее фармацевтически приемлемых солей или полиморфа или сложного эфира. Любые из перечисленных форм могут быть кристаллическими или аморфными.

Термин "воспалительное заболевание кишечника или IBD" при использовании в настоящем тексте означает состояние, к которому приводит воспаление эпителия, в частности эпителия желудочнокишечного тракта. Он включает такие состояния, как язвенный колит, болезнь Крона, коллагенозный

- 3 030590

колит, лимфоцитарный колит, ишемический колит, воспаление в отключенной кишке, синдром Бехчета и неопределенный колит.

Термин "эффективное количество", "терапевтически эффективное количество" или "эффективная дозировка" при использовании в настоящем тексте означает количество или дозировку соединения А, которого достаточно для инициирования терапевтического ответа у млекопитающих, включая человека.

Термин "млекопитающее" означает человека или животное, включая обезьяну, приматов, собак, кошек, лошадей или коров и т.д., предпочтительно человека.

Термин "диапазон дозировок" или "диапазон" в настоящем тексте означает терапевтически эффективный диапазон дозировок соединения А, который подходит для введения млекопитающему.

Термин "низкая дозировка" в настоящем тексте означает общую суточную дозировку для млекопитающего, предпочтительно человека, которая меньше 100 мг в сутки, предпочтительно меньше 60 мг в сутки, более предпочтительно меньше 50 мг в сутки. Пересчет дозировки для различных типов млекопитающих, включая человека, можно провести в соответствии с рекомендациями FDA, доступными на сайте www.fda.gov. Для человека средним весом считается 70 кг.

Термин "практически нерастворимая" при использовании в настоящем тексте означает, что по меньшей мере 75% композиции нерастворимо при рН ниже 5. Предпочтительно по меньшей мере 80% композиции нерастворимо при рН ниже 5. Более предпочтительно по меньшей мере 90% композиции нерастворимо при рН ниже 5.

Термин "системное воздействие" при использовании в тексте означает доступность соединения А, включая его активные метаболиты, при их наличии, в кровеносной системе млекопитающего.

Термин "локальное воздействие" при использовании в настоящем тексте означает доступность соединения А, включая его активные метаболиты, при их наличии, в пораженном сайте или области заболевания или в их непосредственной близости.

Термин "верхний отдел ЖКТ" означает часть ЖКТ, включающую пищевод, желудок и двенадцатиперстную кишку. Термин "нижний отдел ЖКТ" означает остальную часть ЖКТ.

Применение единственного числа в контексте описания настоящего изобретения (особенно в контексте формулы изобретения) следует понимать как охватывающее и единственное, и множественное число, если иное не указано явно или с очевидностью не следует из контекста.

В настоящем изобретении описано, что фармацевтическая композиция с низкой дозировкой соединения А эффективна в диапазоне дозировок от 2,5 до 60 мг/день для лечения IBD. В настоящем изобретении описан также способ лечения IBD у млекопитающих путем введения фармацевтической композиции с низкой дозировкой, содержащей терапевтически эффективное количество соединения А. Соединение А представляет собой ингибитор HIF гидроксилазы, описанный в WO 2011/45811, для лечения анемии, ишемии или повреждения тканей, вызванного ишемической болезнью, при парентеральном введении. В указанной заявке на патент описано, что соединение 10 показало эффективность при хронической болезни почек (CKD), в дозировке 20 мг/кг два раза в сутки (примерная дозировка для человека 450 мг/сутки), при интраперитонеальном введении больным животным.

Авторы изобретения обнаружили, что низкий диапазон дозировок от 2,5 до 60 мг/сутки представляет собой оптимальный диапазон дозировок, при котором достигается целевой терапевтический эффект, при не-парентеральном введении, предпочтительно при пероральном введении, для лечения IBD.

IBD, которое можно лечить путем введения терапевтически эффективного количества соединения А по настоящему изобретению, включает такие состояния, как язвенный колит, болезнь Крона, коллагенозный колит, лимфоцитарный колит, ишемический колит, воспаление в отключенной кишке, синдром Бехчета и неопределенный колит. Любые другие заболевания, которые включают воспаление эпителия, также входят в объем настоящего изобретения.

В предшествующем уровне техники не предпринималось попыток перорального введения, и главным образом описывалось парентеральное введение в качестве предпочтительного пути введения ингибиторов HIF гидроксилазы для лечения IBD. Из предшествующего уровня техники квалифицированному в данной области специалисту известно, что эффективное количество любого соединения главным образом зависит от концентрации действующего вещества в кровеносной системе/плазме. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что дозировка от 2,5 до 60 мг соединения А является эффективной дозировкой для лечения IBD, при пероральном введении. Неожиданно было обнаружено, что когда фармацевтическая композиция, содержащая соединение А, вводилась перорально, а также интраперитонеально (IP), то пероральное введение было более эффективно и обеспечивало больший терапевтический эффект, чем интраперитонеальное введение, при гораздо меньшем системном воздействии (концентрация в кровеносной системе/плазме) и высоком уровне воздействия на целевую ткань, по сравнению с IP-введением, при лечении IBD. Таким образом, в настоящем изобретении описана улучшенная терапевтическая эффективность с повышением степени безопасности.

Так, в одном варианте осуществления настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, где указанная композиция эффективна в диапазоне дозировок от 2,5 до

- 4 030590

60 мг/день для лечения IBD у млекопитающих.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, где указанная композиция эффективна в лечении IBD у млекопитающих при введении в диапазоне дозировок от 2,5 до 60 мг/день.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой, содержащая соединение А в количестве от 2,5 до 60 мг и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, где указанная композиция эффективна в лечении воспалительного заболевания кишечника у млекопитающих.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения описан способ лечения IBD у млекопитающих путем введения фармацевтической композиции с низкой дозировкой, содержащей терапевтически эффективное количество соединения А.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения описан способ лечения IBD у млекопитающих путем введения фармацевтической композиции с низкой дозировкой, содержащей терапевтически эффективное количество соединения А, где указанная композиция эффективна в диапазоне дозировок от 2,5 до 60 мг/день.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения описан способ лечения IBD у млекопитающих путем введения фармацевтической композиции с низкой дозировкой, содержащей соединение А в диапазоне от 2,5 до 60 мг. Указанная фармацевтическая композиция с низкой дозировкой дополнительно содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения описано применение соединения А для приготовления фармацевтической композиции с низкой дозировкой для лечения IBD у млекопитающих.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения описано применение соединения А для приготовления фармацевтической композиции с низкой дозировкой для лечения IBD у млекопитающих, где указанная композиция эффективна в диапазоне дозировок от 2,5 до 60 мг/день.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения описано применение соединения А в диапазоне от 2,5 до 60 мг для приготовления фармацевтической композиции с низкой дозировкой для лечения IBD у млекопитающих. Указанная фармацевтическая композиция с низкой дозировкой дополнительно содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества.

Предпочтительно в настоящем изобретении описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой для не-парентерального введения, такого как пероральное введение соединения А.

Таким образом, в другом варианте осуществления настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой для перорального введения, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, где указанная композиция эффективна в диапазоне дозировок от 2,5 до 60 мг/день для лечения IBD у млекопитающих.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой для перорального введения, содержащая соединение А в количестве от 2,5 до 60 мг и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, где указанная композиция эффективна в лечении воспалительного заболевания кишечника у млекопитающих.

Эффективная дозировка соединения А для лечения IBD по настоящему изобретению находится в диапазоне от 2,5 до 60 мг/день, или составляет эквивалентную дозировку в случае присутствия в виде соли или сложного эфира. Предпочтительно дозировка соединения А составляет от 4,5 до 50 мг, наиболее предпочтительно дозировка соединения А составляет от 4,5 до 40 мг. Эффективная дозировка в контексте настоящего изобретения включает также очевидные модификации указанного диапазона дозировок в любую сторону, которые не обеспечивают дополнительного значительного терапевтического эффекта и/или снижают побочные эффекты в сравнении с указанным диапазоном дозировок.

Было обнаружено, что указанный выше диапазон дозировок представляет собой оптимальный эффективный диапазон дозировок, при котором максимально эффективная концентрация в целевом сайте достигается при минимальном системном воздействии, и таким образом обеспечивает терапевтическое действие при лечении IBD с повышенной степенью безопасности. Таким образом, в настоящем изобретении описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой, при введении которой достигается меньшее системное воздействие, но большее локальное воздействие соединения А.

Так, в другом варианте осуществления изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, для лечения IBD у млекопитающих, где указанная композиция обеспечивает по

- 5 030590

меньшей мере 50%-ное локальное воздействие общего количества введенного указанного соединения.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения описан способ лечения IBD у млекопитающих путем введения фармацевтической композиции с низкой дозировкой, содержащей терапевтически эффективное количество соединения А, где указанная композиция обеспечивает по меньшей мере 50%-ное локальное воздействие общего количества введенного указанного соединения. Указанная фармацевтическая композиция с низкой дозировкой дополнительно содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества.

В другом варианте осуществления изобретения описано применение соединения А для приготовления фармацевтической композиции с низкой дозировкой для лечения IBD у млекопитающих, где указанная композиция обеспечивает по меньшей мере 50%-ное локальное воздействие общего количества введенного указанного соединения. Указанная фармацевтическая композиция с низкой дозировкой дополнительно содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению обеспечивает по меньшей мере 50%ное локальное воздействие общего количества введенного соединения А. Предпочтительно композиция обеспечивает по меньшей мере 60%-ное локальное воздействие общего количества введенного соединения А. Наиболее предпочтительно композиция обеспечивает по меньшей мере 70%-ное локальное воздействие общего количества введенного соединения.

Предпочтительно фармацевтическая композиция с низкой дозировкой по настоящему изобретению представляет собой не-парентеральную композицию; наиболее предпочтительно фармацевтическая композиция с низкой дозировкой представляет собой композицию для перорального применения.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой для немедленного высвобождения, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, для лечения IBD у млекопитающих.

Предпочтительно в настоящем изобретении описана композиция с низкой дозировкой для непарентерального введения, в особенности композиция для перорального применения для немедленного высвобождения соединения А, для лечения IBD у млекопитающих, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, где соединение А эффективно в диапазоне дозировок от 2,5 до 60 мг.

Было замечено, что композиция по настоящему изобретению показывает синергетический эффект, когда для приготовления препарата соединения А применяется фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества.

В другом варианте осуществления изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой, содержащая соединение А в количестве от 2,5 до 60 мг и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, где разбавитель, в случае его применения, присутствует в количестве 10-98 вес.% от общего веса композиции; связующее вещество, в случае его применения, присутствует в количестве 1-20 вес.% от общего веса композиции; разрыхлитель, в случае его применения, присутствует в количестве 0,1-15 вес.% от общего веса композиции; регулятор кислотности, в случае его применения, присутствует в количестве 0,01-20 вес.% от общего веса композиции, и смазывающее вещество, в случае его применения, присутствует в количестве 0,02-5 вес.% от общего веса композиции.

Кроме того, фармацевтически приемлемый носитель по настоящему изобретению может представлять собой любые вспомогательные вещества, необходимые для приготовления композиции по настоящему изобретению, такие как глидант, ингибитор кристаллизации, поверхностно-активное вещество, пленкообразующий полимер, пластификатор, буферный агент или комплексообразователь. Любые из перечисленных вспомогательных веществ могут применяться по отдельности или в комбинации с аналогичными/другими вспомогательными веществами. Любые из указанных носителей могут применяться в количестве, подходящем для приготовления композиции по настоящему изобретению.

Разбавитель выбран из порошкообразной целлюлозы, микрокристаллической целлюлозы, силикатированной микрокристаллической целлюлозы, крахмала, двузамещенного фосфата кальция, двузамещенного фосфата натрия, тризамещенного фосфата натрия; сахаров, таких как декстроза, лактоза или сахароза; сахарных спиртов, таких как маннит, сорбит, ксилит или эритрит; или их смесей. Разбавитель может присутствовать в количестве от 10 до 98 вес.% от общего веса композиции.

Связующее вещество выбрано из крахмала, такого как маисовый крахмал, кукурузный крахмал, прежелатинизированный крахмал; производных целлюлозы, таких как порошкообразная целлюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, гидроксипропил метилцеллюлоза, этилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропил целлюлоза, полиэтиленгликоль, гидроксиэтил целлюлоза; поливинилпирролидона, желатина, полиметакрилатов, альгината натрия, смол, синтетических полимеров или их смесей. Связующее

- 6 030590

вещество может присутствовать в количестве от 1 до 20 вес.% от общего веса композиции.

Ингибитор кристаллизации представляет собой вещество, которое в значительной степени подавляет выпадение в осадок соединения А. Ингибитор кристаллизации может представлять собой меглумин, полиоксиэтилен-полиоксипропилен блок-сополимеры и т.п. Ингибитор кристаллизации может присутствовать в количестве от 0,01 до 20 вес.% от общего веса композиции.

Смазывающее вещество или глидант выбрано из талька, стеарата металла, такого как стеарат магния, стеарат кальция, стеарат цинка, коллоидного диоксида кремния, тонко измельченного диоксида кремния, стеариновой кислоты, гидрированного растительного масла, глицерил пальмитостеарата, глицерил моностеарата, глицерил бегената, стеарилфумарата натрия, трисиликата магния; или их смесей. Смазывающее вещество или глидант может присутствовать в количестве от 0,02 до 5 вес.% от общего веса композиции.

Поверхностно-активное вещество выбрано из одного или больше неионогенных или ионогенных (т.е. катионных, анионных или цвиттер-ионных) поверхностно-активных веществ, подходящих для применения в фармацевтических композициях. Подходящие поверхностно-активные вещества включают сложные эфиры жирных моно-кислот с полиоксиэтилен сорбитаном, такие как продающиеся под торговой маркой Tween®; лаурилсульфат натрия, полиоксиэтиленовые производные касторового масла, такие как продающиеся под торговой маркой Cremophor®, полиэтоксилированные жирные кислоты и их производные, пропиленгликолевые сложные эфиры жирных кислот, стирол и производные стирола; сложные эфиры жирных кислот и сорбитана и их производные, сложные эфиры сахаров, полиоксиэтиленполиоксипропилен блок-сополимеры, такие как продающиеся под торговой маркой Poloxamer®, соевый лецитин, или их смеси. Поверхностно-активное вещество может присутствовать в количестве от 0,01 до 20 вес.% от общего веса композиции.

Регулятор кислотности по настоящему изобретению представляет собой любое вещество, которое поддерживает рН композиции, предпочтительно на уровне выше 3. Регулятор кислотности является органическим или неорганическим веществом. Неограничивающими примерами такого вещества являются меглумин, NaOH, KOH, NH₃, гидроксид аммония, карбонаты, такие как карбонат натрия или карбонат калия и т.п. Регулятор кислотности включает также буферный агент. Регулятор кислотности может присутствовать в количестве от 0,01 до 20 вес.% от общего веса композиции.

Буферный агент выбран из фосфатов, таких как фосфат натрия, дигидрофосфат натрия, дигидрофосфата натрия дигидрат, гидрофосфат натрия, гидрофосфата натрия додекагидрат, фосфат калия, дигидрофосфат калия и гидрофосфат калия; борной кислоты и боратов, таких как борат натрия и борат калия; лимонной кислоты и цитратов, таких как цитрат натрия и динатрия цитрат; ацетатов, таких как ацетат натрия и ацетат калия; карбонатов, таких как карбонат натрия и гидрокарбонат натрия, и т.п. Буферный агент может присутствовать в количестве от 0,01 до 20 вес.% от общего веса композиции.

Разрыхлитель представляет собой натрия крахмал гликолят, кросповидон, натрия кроскармелозу и т.п. Разрыхлитель может присутствовать в количестве от 0,1 до 15 вес.% от общего веса композиции.

Комплексообразователь выбран из циклодекстринового класса молекул, таких как циклодекстрины, содержащие от шести до двенадцати глюкозных фрагментов, особенно альфа-циклодекстрин, бетациклодекстрин, гамма-циклодекстрин или их производные, такие как гидроксипропил бетациклодекстрины, или их смеси. Комплексообразователь может присутствовать в количестве от 0,1 до 20 вес.% от общего веса композиции.

Пленкообразующие полимеры выбраны из гидроксипропил метилцеллюлозы, метилцеллюлозы, этилцеллюлозы, полиэтиленгликоля, гидроксипропил целлюлозы, повидона, полидекстрозы, лактозы, мальтодекстрина, акрилового полимера или их смесей. Пленкообразующие полимеры могут присутствовать в количестве от 0,1 до 10 вес.% от общего веса композиции.

Композиция с немедленным высвобождением по настоящему изобретению может не иметь покрытия или иметь подходящее нанесенное покрытие.

В альтернативном варианте осуществления настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой, содержащая соединение А для лечения IBD у млекопитающих, где композиция обеспечивает контролируемое высвобождение соединения А.

Композиция с контролируемым высвобождением по настоящему изобретению представляет собой композицию с модифицированным высвобождением, композицию с пролонгированным высвобождением, композицию с отсроченным высвобождением или композицию с сайт-специфичной доставкой соединения А. Композицию с контролируемым высвобождением готовят с применением подходящего количества по меньшей мере одного фармацевтически приемлемого носителя, который обеспечивает контролируемое высвобождение соединения А. Предпочтительно композиция с контролируемым высвобождением по изобретению представляет собой композицию с отсроченным высвобождением.

Так, в другом варианте осуществления настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой для перорального введения, содержащая соединение А и по меньшей мере

один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, для лечения IBD у млекопитающих, где

- 7 030590

указанная композиция практически нерастворима при рН ниже 5.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой для перорального введения, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества, для лечения IBD у млекопитающих, где указанная композиция высвобождает по меньшей мере 50% указанного соединения in vivo при рН выше 5.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению высвобождает по меньшей мере 50% указанного соединения in vivo при рН выше 5, предпочтительно фармацевтическая композиция по настоящему изобретению высвобождает по меньшей мере 60% указанного соединения in vivo при рН выше 5, наиболее предпочтительно фармацевтическая композиция по настоящему изобретению высвобождает по меньшей мере 70% указанного соединения in vivo при рН выше 5.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой для перорального введения, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель для лечения IBD, где указанный носитель подходит для контролируемого высвобождения указанного соединения. Предпочтительно указанный носитель подходит для замедленного высвобождения соединения А.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой для перорального введения, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, подходящий для замедленного высвобождения, для лечения IBD у млекопитающих, где указанный носитель присутствует в количестве по меньшей мере 1 вес.% от общего веса композиции. Предпочтительно указанный носитель присутствует в количестве по меньшей мере 2 вес.% от общего веса композиции, более предпочтительно указанный носитель присутствует в количестве по меньшей мере 10 вес.% от общего веса композиции, наиболее предпочтительно указанный носитель присутствует в количестве по меньшей мере 20 вес.% от общего веса композиции.

В настоящем изобретении описана фармацевтическая композиция с низкой дозировкой для замедленного высвобождения, содержащая соединение А и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, подходящий для замедленного высвобождения, для лечения IBD у млекопитающих.

Термин "фармацевтически приемлемый носитель, подходящий для контролируемого высвобождения" включает одно или больше вспомогательных веществ, которые способствуют контролируемому высвобождению соединения А. Такие вспомогательные вещества включают полимерные или неполимерные соединения, предпочтительно полимерные соединения. Такие полимерные соединения могут представлять собой водорастворимые полимеры или нерастворимые в воде полимеры.

"Водорастворимый полимер", применяющийся в описанной композиции, представляет собой полимер, который растворяется или набухает в воде. Он предпочтительно растворяется и/или набухает в воде при комнатной температуре. Неограничивающие примеры включают простые эфиры целлюлозы, гидроколлоид (смолу), поливиниловый спирт и поливинил пирролидон. Простые эфиры целлюлозы включают карбоксиметил целлюлозу, метилцеллюлозу, гидроксиэтил целлюлозу, гидроксипропил целлюлозу, гидроксибутил целлюлозу, гидроксиэтилметил целлюлозу, гидроксиэтилэтил целлюлозу, гидроксипропилметил целлюлозу, гидроксипропилэтил целлюлозу, гидроксибутилметил целлюлозу, гидроксибутилэтил целлюлозу, карбоксиметил целлюлозу и их соли. Гидроколлоид (смола) включает гуаровую камедь, альгиновую кислоту и ее фармацевтически приемлемые соли, например альгинат натрия, и ксантановую камедь.

"Нерастворимые в воде полимеры", применяющиеся в описанной композиции, представляют собой полимеры, которые практически нерастворимы в воде, и включают простые эфиры целлюлозы, такие как этилцеллюлоза, бутилцеллюлоза, ацетат целлюлозы, ацетат бутират целлюлозы, этилен-винилацетат сополимер, поливидон ацетат, поливинил ацетат, поливинил бутират, полиметакрилаты, включая этилакрилат/метилметакрилатные сополимеры, и сополимеры метакрилата аммония, включая коммерчески доступные дисперсии, такие как Kollicoat® MAE30DP, Eudragit® RL30D, Eudragit® NE30D и Eudragit®RS30D.

Фармацевтически приемлемый носитель, подходящий для замедленного высвобождения, представляет собой любой носитель, который способствует высвобождению соединения А в нижнем отделе ЖКТ, или который существенно уменьшает высвобождение соединения А в верхнем отделе ЖКТ.

"Фармацевтически приемлемый носитель, подходящий для замедленного высвобождения" включает одно или больше вспомогательных веществ, которые способствуют замедленному высвобождению соединения А. Такие вспомогательные вещества включают полимерные и неполимерные соединения, предпочтительно полимерные соединения. Такие вспомогательные вещества могут быть рН-зависимыми или рН-независимыми; предпочтительно применяют рН-зависимые соединения. Такие вспомогательные вещества включают производные целлюлозы, производные акриловой кислоты, сополимеры малеиновой кислоты, поливинильные производные и т.п.

Производные целлюлозы включают ацетат сукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, фталат гидроксиметилэтилцеллюлозы, ацетат фталат целлюлозы, ацетат

- 8 030590

сукцинат целлюлозы, ацетат малеат целлюлозы, ацетат тримеллиат целлюлозы, бензоат фталат целлюлозы, пропионат фталат целлюлозы, фталат метилцеллюлозы, карбоксиметилэтилцеллюлозу, фталат этилгидроксиэтилцеллюлозы и т.п.

Производные акриловой кислоты включают сополимер стирола и акриловой кислоты, сополимер метилакрилата и акриловой кислоты, сополимер метилакрилата и метакриловой кислоты, сополимер бутилакрилата, стирола и акриловой кислоты, сополимер метилакриловой кислоты и метилметакрилата (например, торговые марки Eudragit® L 100 и Eudragit® S), сополимер метакриловой кислоты и этилакрилата (например, торговая марка Eudragit L® 100-55), сополимер метилакрилата, метакриловой кислоты и октилакрилата, и т.п.

Полимеры на основе сополимера малеиновой кислоты включают сополимер винилацетата и малеинового ангидрида, сополимер стирола и малеинового ангидрида, сополимер стирола и моноэфира малеиновой кислоты, сополимер винилметилового эфира и малеинового ангидрида, сополимер этилена и малеинового ангидрида, сополимер винилбутилового эфира и малеинового ангидрида, сополимер акрилонитрила, метилакрилата и малеинового ангидрида, сополимер бутилакрилата, стирола и малеинового ангидрида и т.п.

Полимеры на основе поливинильного производного включают фталат поливинилового спирта, фталат поливинилацеталя, фталат поливинилбутилата, фталат поливинилацетоацеталя и т.п.

Фармацевтические композиции могут дополнительно содержать вспомогательные вещества, такие как красители, выбранные из известных красителей F.D. & С. и D. & С, диоксида титана и т.п.

Предпочтительным способом введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению млекопитающим является не-парентеральный, наиболее предпочтительно - пероральный способ введения, но, альтернативно, ректальный способ введения также может применяться для введения описанной композиции.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, не содержащая какого-либо фармацевтически приемлемого носителя, также является частью настоящего изобретения.

Описанная в настоящем тексте фармацевтическая композиция может применяться в любой подходящей форме, такой как таблетка, капсула, порошок, раствор для перорального приема, суспензия, гель для ректального применения, пена для ректального применения, клизма для ректального применения или суппозиторий и т.п.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения описан способ получения фармацевтической композиции с низкой дозировкой по настоящему изобретению.

Композицию по настоящему изобретению можно получить любым известным в данной области способом, таким как смешивание соединения А с фармацевтически приемлемыми носителями. Альтернативно, можно применять методы влажного гранулирования или сухого гранулирования для получения композиции по настоящему изобретению.

Альтернативно, композицию по настоящему изобретению можно приготовить в форме препарата с матриксной основой, в котором соединение А диспергировано в матриксе. Альтернативно, на частицы, содержащие соединение А, можно наносить покрытие в виде фармацевтически приемлемых носителей. Возможные типы частиц включают гранулы, пеллеты, минитаблетки, микрочастицы или бусины.

Квалифицированный специалист в данной области может приготовить композиции для ректального применения.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения описан способ лечения IBD у млекопитающих путем введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения описано применение соединения А для приготовления фармацевтической композиции с низкой дозировкой по настоящему изобретению.

Фармацевтическую композицию с низкой дозировкой по настоящему изобретению можно вводить один раз в сутки или два раза в сутки, для достижения терапевтического эффекта. Предпочтительно фармацевтическую композицию с низкой дозировкой по настоящему изобретению вводят два раза в сутки для достижения терапевтического эффекта.

Фармацевтическая композиция с низкой дозировкой, содержащая соединение А по настоящему изобретению, может дополнительно содержать другое средство, подходящее для лечения IBD, включая иммуномодуляторы или противовоспалительные лекарственные средства. Альтернативно, фармацевтическую композицию можно вводить вместе с другими средствами, подходящими для лечения IBD, включая иммуномодуляторы или противовоспалительные лекарственные средства.

Настоящее изобретение можно проиллюстрировать приведенными далее примерами, которые не должны пониматься как ограничивающие объем настоящего изобретения.

- 9 030590

Пример 1а.

Компонент_Кол-во вспомогательного вещества в мг

Композиции Соединение А	i 2,5	ii 10	iii 40
Маннит	20,63	22,5	-
Меглумин	0,63	2,50	10,00
Микрокрист, целлюлоза	55,63	42,50	10,00
Стеарат магния	ГО	1,0	1,0
Полисорбат	-	-	2,0
НРМС	1,0	1,0	Ι,ο
Натрия крахмал гликолят	4,63	6,50	14,0
Гидроксипропил целлюлоза	1,о	Ι,ο	1,0
Тальк	0,40	0,40	0,40
Диоксид титана	1,00	1,00	1,00

Микрокристаллическую целлюлозу (МСС), маннит, меглумин и натрия крахмал гликолят (SSG) просеивали с соединением А и смешивали в сухом состоянии в высокоскоростном смесителе (RMG) в течение 10 мин с последующим гранулированием с водой в RMG. После сушки гранул при 60-70°C в сушилке с псевдоожиженным слоем (FBD) гранулам придавали определенный размер в вибрационном грануляторе, после чего перешивали примерно 5 мин. Полученные гранулы смешивали со смесью МСС, маннита и SSG для получения композиций i и ii. Полученную смесь покрывали смазывающим слоем с применением стеарата магния в блендере в течение примерно 5 мин, затем формовали в таблетки на ротационном таблеточном прессе. Наносили на полученные таблетки защитный слой из раствора НРМС, НРС, талька и диоксида титана в воде. Аналогичную методику применяли для композиции iii.

Пример 1b.

Композиции Соединение А	i 2,5	ii 10	iii 40
Микрокристаллическая целлюлоза	55,63	42,50	10,00
Маннит	20,63	22,50	10,00
Меглумин	0,63	2,50	10,00
Натрия крахмал гликолят	4,63	6,50	14,00
Стеарат магния	1,00	1,00	1,00
НРМС	1,00	1,00	1,00
Гидроксипропил целлюлоза (НРС)	1,00	1,00	1,00
Тальк	1,63	1,63	1,63
Диоксид титана	1,00	1,00	1,00
Сополимер метакриловой кислоты и	2 46	2 46	2 46
этилакрилата (1:1) дисперсия 30%
Пропиленгликоль	0,74	0,74	0,74

Микрокристаллическую целлюлозу (МСС), маннит, меглумин и натрия крахмал гликолят (SSG) просеивали с соединением А и смешивали в сухом состоянии в высокоскоростном смесителе (RMG) в течение 10 мин с последующим гранулированием с водой в RMG. После сушки гранул при 60-70°C в сушилке с псевдоожиженным слоем (FBD) гранулам придавали определенный размер в вибрационном грануляторе, после чего перешивали примерно 5 мин. Полученные гранулы смешивали со смесью МСС, маннита и SSG для получения композиций i и ii, и только с SSG - для получения композиции ш. Полученную смесь покрывали смазывающим слоем с применением стеарата магния в блендере в течение примерно 5 мин, затем формовали в таблетки на ротационном таблеточном прессе. Наносили на полученные таблетки защитный слой из раствора НРМС, НРС, талька и диоксида титана в воде, на который затем наносили кишечнорастворимую оболочку, содержащую сополимер метакриловой кислоты и этилакрилата (1:1) в виде 30%-ной дисперсии, пропиленгликоль и тальк. Полученные таблетки хранили во флаконе из HDPE.

Профиль растворения in vitro для таблеток, приготовленных согласно примеру 1b, тестировали в 900 мл имитации кишечного сока натощак (FaSSIF), имеющей рН 5, т.е. 50 мМ ацетат натрия/FaSSIF при 37°C. Для имитации условий in vivo, растворение проверяли в искусственном кишечном соке, имеющем рН 5, с ферментами, такими как FaSSIF. FaSSIF или имитацию кишечного сока натощак готовили согласно USP. Также оценивали растворение in vitro при более низком рН, таком как 0,1н. раствор HCl. Полученные результаты просуммированы в табл. 1.

- 10 030590

Таблица 1

Композиция	Растворение в 0.1н. HCl, 75 об/мин, 900 мл, 37°С	Растворение в 50 мМ ацетат натрия/FaSSIF. pH 5,0, 75 об/мин, 900 мл, 37°С, через временные интервалы, в минутах
Время	1 ч	2 ч		0	5	10	15	20	30	45
Пр lb (i)	0	0	Ацетат натрия	0	0,0	16,1	78,8	78,8	96,6	101,2
Пр lb (i)	0	0	FaSSIF	0	5,7	7,9	17,9	59,5	78,4	87,7
Пр lb (ii)	0	0	Ацетат натрия	0	0,0	18,4	59,0	75,7	93,4	99,1
Пр lb (ii)	0	0	FaSSIF	0	0,0	0,0	12,6	76,2	97,9	101,6
Пр lb (iii)	0	0	Ацетат натрия	0	0,0	7,7	43,9	76,1	98,6	98,0
Пр lb (iii)	0	0	FaSSIF	0	0,0	0,0	0,0	14,4	62,7	97,8

Приведенные в табл. 1 результаты показывают, что композиция по настоящему изобретению практически нерастворима при кислом рН, в частности при рН ниже 5, и композиция высвобождает соединение А в нижнем отделе ЖКТ, т.е. при рН выше 5.

Пример 2. Композиция для внутриректального введения.

Компонент	Кол-во вспомогательных веществ, %
Соединение А	2,5-60 мг
Poloxamer 407	10-30%
Полиэтиленгликоль	15-30¾.
Гидрофосфат калия	0-5%

Пример 3. Подготовка модели TNBS-индуцированного колита.

Животное с TNBS (2,4,6-тринитробензолсульфокислота) индуцированным колитом является принятой моделью IBD. Самцов мышей BALB/c держали без еды 16 ч и вводили им 0,1 мл раствора TNBS (содержащего 1,5 мг TNBS в 50%-ном этаноле) ректально на 4 см вглубь ануса с помощью гибкого полиэтиленового катетера под изофлурановой анестезией. Сразу после введения TNBS, мышей выдерживали 45-60 с в вертикальном положении головой вниз для гарантии удерживания и распределения раствора TNBS в толстом кишечнике животного. (Fiorucci et al, Immunity, 2002; Vol. 17; 769-780).

Пример 4. Оценка фармакокинетики соединения А в модели TNBS-индуцированного колита (интраперитонеальное (IP) введение и пероральное (РО) введение).

Фармацевтическую композицию, содержащую соединение А, вводили мышам с TNBSиндуцированным колитом (вызван согласно примеру 3) в дозировке 1 мг/кг соединения А два раза в сутки, при объеме дозирования 10 мл/кг интраперитонеально и перорально. Введение дозировки начинали в день, предшествующий TNBS-индуцированию колита (день -1). Образцы крови тестируемых животных отбирали перед введением пятой дозы (0 мин) и в разные моменты времени после введения пятой дозы. Образцы крови центрифугировали в пределах 1 ч после отбора при 4000 об/мин в течение 10 мин при 4°C и отделяли плазму. Образцы плазмы анализировали на предмет концентрации соединения А методом LC-MS/MS. Фармакокинетические параметры соединения А вычисляли методом анализа без учета компартментов с применением программы Phoenix WinNolin version 6,2. Результаты изучения фармакокинетики просуммированы в табл. 2.

Таблица 2

Параметр	Единица	Перорально	Интраперитонеально
Смаке	нг/мл	13,20	399,24
AUCo 12	час*нг/мл	63,08	255,91

Пример 5. Эффективность фармацевтической композиции соединения А в модели TNBSиндуцированного колита (пероральное (РО) введение).

Фармацевтическую композицию, содержащую соединение А, вводили перорально мышам с TNBSиндуцированным колитом (вызван согласно примеру 3) в дозировке 1 мг/кг соединения А два раза в сутки, при объеме дозирования 10 мл/кг. Дозирование начинали в день, предшествующий индуцированию (день -1) TNBS колита. Оценивали вызванные лечением уменьшение потери веса тела, улучшение индекса активности болезни (DAI, суммарная оценка от 0 до максимума 12, учитывающая потерю веса тела, консистенцию фекалий и присутствие или отсутствие скрытой крови в фекалиях), более здоровое состояние кишечника (макроскопическая оценка) и показатель выживаемости у животных в течение 6 дней после начала дозирования (с -1-го дня по 4-й день) для проверки эффективности соединения А. Вес тела отслеживали ежедневно, DAI оценивали в день 2 и день 4, а повреждения кишечника (макроскопическая оценка и гистопатологическая оценка) оценивали по степени повреждения кишечника. Гистопатологическую оценку повреждения кишечника проводили на срезах ткани кишечника, зафиксированных в формалине, окрашенных гематоксилином и эозином, при 10-кратном увеличении с применением микроскопа Leica® DM2500, по окончании исследования. Группе на плацебо давали аналогичную композицию без соединения А. Результаты показаны на фиг. 1a-1d. (*p<0,05 в сравнении с плацебо/носителем {композиция без соединения А}), фиг. 5 и 8.

- 11 030590

Наблюдение.

Данные в табл. 2 ясно показывают, что при эквивалентной дозировке соединения А пероральное введение обеспечивает более низкую системную концентрацию по сравнению с IP введением, но пероральное дозирование тем не менее показывает эффективность (фиг. 1a-1d). Результаты на фиг. 1, фиг. 5 и фиг. 8 показывают, что композиция соединения А обеспечивает терапевтические преимущества благодаря улучшению индекса активности болезни, снижению степени повреждения кишечника, снижения скорости потери веса и повышения показателя выживаемости у больных животных.

Пример 6. Сравнительная эффективность фармацевтической композиции соединения А при введении перорально и интраперитонеально.

Аналогично методике, описанной выше в примере 5, вводили фармацевтическую композицию соединения А два раза в сутки мышам с TNBS-индуцированным колитом, интраперитонеально и перорально. Подвергшихся лечению животных оценивали на предмет улучшения индекса активности болезни и более здорового кишечника (макроскопическая оценка). Полученные результаты просуммированы на фиг. 6а и 6b.

Наблюдение. Приведенные на фиг. 6а и 6b данные показывают, что пероральное введение соединения А обеспечивает лучшую терапевтическую эффективность, по сравнению с IP введением, даже в более низких дозировках.

Пример 7. Эффективность фармацевтической композиции соединения А в модели колита, индуцированного DSS (декстран сульфат натрия).

5% DSS (MW-36000-50000), растворенного в питьевой воде, вводили самкам BALB/c мышей в течение 11 дней (Gunther et al., The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 1999; Vol. 292, No. 1; 22-30), после чего следовал период без введения DSS до дня 14. Фармацевтическую композицию, содержащую соединение А, вводили указанным животным с 5 до 14 день в дозировке 1 и 2,5 мг/кг соединения А два раза в сутки, при объеме дозирования 10 мл/кг, перорально (РО). Группе на плацебо вводили аналогичную композицию без соединения А. Плацебо (композицию без соединения А) также вводили здоровым животным, которым давали только питьевую воду, и в качестве плацебо служила вода. Оценивали вызванные лечением уменьшение потери веса тела, улучшение индекса активности болезни (DAI, суммарная оценка от 0 до максимума 12, учитывающая потерю веса тела, консистенцию фекалий, и присутствие или отсутствие скрытой крови в фекалиях), и гистопатологию кишечника (оценка) у животных в течение 10 дней после начала дозирования (с 5-го дня по 14-й день) для проверки эффективности соединения А. Вес тела отслеживали ежедневно, DAI оценивали раз в два дня, а гистопатологическую оценку повреждения кишечника проводили на срезах ткани кишечника, зафиксированных в формалине, аналогично примеру 5. Полученные результаты просуммированы на фиг. 2а-2с. (*р<0,05 в сравнении с плацебо (5% DSS)) и фиг. 4.

Наблюдение. Результаты на фиг. 2 и 4 показывают, что композиция соединения А обеспечивает терапевтические преимущества благодаря снижению скорости потери веса, улучшению индекса активности болезни, снижению степени повреждения кишечника, и сохранению архитектуры ткани у больных животных.

Пример 8. Распределение соединения А в тканях в модели колита, индуцированного DSS.

5% DSS (MW-36000-50000) раствор в питьевой воде вводили самкам BALB/c мышей в течение 7 дней. Фармацевтическую композицию, содержащую соединение А, вводили этим животным два раза в сутки, начиная с 5-го дня, перорально в дозировке 1 мг/кг соединения А и интраперитонеально в дозировке 0,25 мг/кг соединения А, при объеме дозирования 10 мл/кг.

Через 6 ч после первого дозирования на 7-й день введения композиции животных умерщвляли, проводили перфузию всего тела через сердце с применением холодного физиологического раствора с фосфатным буфером, после чего брали образцы интересующих тканей, которые далее промывали физиологическим раствором с фосфатным буфером для удаления остатков содержимого ЖКТ. Концентрацию соединения А в плазме и тканях оценивали с применением метода LC-MS/MS. Полученные результаты просуммированы на фиг. 3.

Наблюдение. Полученные данные ясно показывают, что при 4-кратной разнице в дозировке, вводимой перорально и интраперитонеально, среднее воздействие соединения А на целевые ткани при пероральном введении в 6-21 раз выше, чем достигается при интраперитонеальном введении.

Пример 9. Экскреция соединения А с фекалиями.

5% DSS (MW-36000-50000) раствор в питьевой воде вводили самкам BALB/c мышей на протяжении всего времени эксперимента в течение 9 дней. Однократное введение фармацевтической композиции, содержащей соединение А в дозировке 1 мг/кг, при объеме дозирования 10 мл/кг, осуществляли перорально на 5-й день. Собирали фекалии в течение 96 ч после введения композиции. Собранные фекалии анализировали на содержание соединения А методом LC-MS/MS. Полученные результаты просуммированы в табл. 3.

- 12 030590

Таблица 3

Животное номер	Общее кол-во соединения А в фекалиях (мкг)	Кол-во введенного соединения А (мкг)	% Выведения с фекалиями
1	12,71	25,00	50,88
2	12,08	19,00	63,60
3	15,34	24,00	63,92
4	13,71	22,00	62,35
5	12,63	24,00	52,66
Средний % выведения с фекалиями		58,68
SD			6,37

Наблюдение. Приведенные выше в табл. 3 результаты показывают, что более 50% соединения А выводится с фекалиями, когда композицию для перорального применения по настоящему изобретению вводят больным животным.

Пример 10. Экспрессирование HSP70 в толстом кишечнике.

Эффект перорального введения фармацевтической композиции соединения А на экспрессирование HSP70 проверяли в модели колита, вызванного DSS.

5% DSS (MW-36000-50000) раствор в питьевой воде вводили самкам BALB/c мышей в течение 5 дней. Однократное введение соединения А осуществляли на 5-й день. Композицию, содержащую соединение А, вводили в дозировке 2,5 мг/кг при объеме дозирования 10 мл/кг перорально (РО). Группе на плацебо вводили аналогичную композицию без соединения А. Через 6 ч после введения животных умерщвляли и готовили экстракт ткани всего толстого кишечника. Белки отделяли на SDS-PAGE, затем проводили иммуноблоттинг с применением HSP70 антител. Полученные результаты представлены на фиг. 2d.

Наблюдение. Было обнаружено, что пероральное введение фармацевтической композиции соединения А приводило к выраженному индуцированию HSP70 в толстом кишечнике в сравнении с соответствующим плацебо (композиция без соединения А).

Пример 11. Экспрессирование маркера воспаления в толстом кишечнике.

Влияние перорального введения фармацевтической композиции соединения А на экспрессирование интерлейкина (IL)-10, TNF-α и интерферона (INF)-y mRNA оценивали в модели колита, вызванного DSS.

Фармацевтическую композицию, содержащую соединение А, вводили в дозировке 2,5 мг/кг два раза в сутки с 5 по 14 день, мышам с DSS-индуцированным колитом (вызван согласно примеру 7) перорально (РО). Животных умерщвляли на 14-й день и готовили экстракт ткани всего толстого кишечника. Экспрессирование интерлейкина (IL)-10, TNF-α и интерферона (INF)-y мРНК наряду с экспрессированием 18S рРНК мониторили с применением геноспецифических праймера и зондов (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) в режиме реального времени количественной полимеразной цепной реакцией на ABI 7900 НТ (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Экспрессию мРНК нормализовали относительно экспрессии 18S рРНК. Группе на плацебо давали аналогичную композицию без соединения А. Результаты, приведенные на фиг. 7, выражали как кратность индуцирования относительно плацебо (композиция без соединения А).

Наблюдение. Было обнаружено, что пероральное введение фармацевтической композиции соединения А приводит к уменьшению экспрессирования про-воспалительных цитокинов, TNFa и INFy, и росту экспрессирования противовоспалительного цитокина IL-10.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение [(2-гидрокси-4-оксо-6,7,8,9-тетрагидро-4Н,5Н-10-тиа-1,4а-диазабензо[а]азулен-3карбонил)амино]уксусной кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли для приготовления фармацевтической композиции для лечения воспалительного заболевания кишечника у млекопитающих.
2. Применение по п.1, при котором фармацевтическая композиция содержит [(2-гидрокси-4-оксо6,7,8,9-тетрагидро-4Н,5Н-10-тиа-1,4а-диазабензо[а]азулен-3-карбонил)амино]уксусную кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль в количестве от 2,5 до 60 мг.
3. Применение по пп.1, 2, при котором фармацевтическая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и смазывающего вещества.
4. Способ лечения воспалительного заболевания кишечника у млекопитающих, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество [(2гидрокси-4-оксо-6,7,8,9-тетрагидро-4Н,5Н-10-тиа-1,4а-диазабензо[а]азулен-3-карбонил)амино]уксусной кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли.
5. Способ по п.4, в котором фармацевтическая композиция содержит [(2-гидрокси-4-оксо-6,7,8,9тетрагидро-4Н,5Н-10-тиа-1,4а-диазабензо[а]азулен-3-карбонил)амино]уксусную кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль в количестве от 2,5 до 60 мг.
6. Способ по п.4, в котором фармацевтическая композиция вводится в диапазоне дозировок [(2гидрокси-4-оксо-6,7,8,9-тетрагидро-4Н,5Н-10-тиа-1,4а-диазабензо[а]азулен-3-карбонил)амино]уксусной

- 13 030590

кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли от 2,5 до 60 мг/день.
7. Способ по пп.4-6, в котором фармацевтическая композиция дополнительно содержит по меньшей

мере один фармацевтически приемлемый носитель, выбранный из разбавителя, связующего вещества, разрыхлителя, регулятора кислотности и/или смазывающего вещества.

День 2 День 4

Плацебо □ Соединение А