EA028528B1 - Внесение глифосата для борьбы с сорняками у brassica - Google Patents

Abstract

В изобретении предусмотрены способы внесения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Brassica, толерантный к гербициду. Более конкретно, глифосатные средства обработки вносят на значительную часть растений Brassica, толерантных к гербициду, которые находятся на стадии, которая следует после стадии 2-6 листьев, такой как, например, значительная часть растений Brassica, толерантных к гербициду, которые находятся на стадии от 10% открытых цветков до приблизительно 10% стручков. В изобретении предусмотрены способы, при которых глифосат вносят на поздних стадиях развития Brassica.

Description

Настоящее раскрытие относится к области сельскохозяйственной биотехнологии и, более конкретно, к области трансгенных культурных растений и времени внесения гербицида.

Предпосылки изобретения

Биотехнологию применяли в отношении видов Вгаккюа по многим причинам, в том числе для улучшения разновидностей канолы, повышения урожая, переносимости стрессов, модифицированного потребления масел и других улучшенных признаков, таких как переносимость гербицида. Что касается переносимости гербицида при коммерческом производстве сельскохозяйственной культуры Вгаккюа, желательным является легкое и быстрое устранение нежелательных растений (т.е. сорняков) из поля с Вгаккюа. Одна такая система обработки предусматривала бы применение культурных растений, которые обладают переносимостью одного или нескольких гербицидов, так что при распылении гербицида на поле с культурными растениями с переносимостью гербицида культурные растения продолжали бы развиваться, тогда как сорняки, не обладающие переносимостью гербицида, погибали или серьезно повреждались.

Были разработаны разновидности канолы с переносимостью гербицида для устойчивости/переносимости определенных гербицидов. Возможность контролировать широкий спектр сорняков в случае канолы с устойчивостью к гербициду привела к быстрому внедрению такой технологии. Минимальная обработка почвы, повышенные урожаи и улучшенный контроль сорняков являются некоторыми примерами преимуществ технологии применения канолы с устойчивостью к гербициду. Однако известно, что реакция канолы на внесения гербицида сильно зависит от системы устойчивости к гербициду, которую применяют на конкретном поле.

Стратегическое планирование времени внесения гербицида для разновидностей канолы с переносимостью гербицида приводит к экономическому эффекту для производителей канолы, поскольку плотность сорняков и биомасса сорняков являются главными ограничениями в производстве канолы. Существует возможность нескольких внесений гербицидов у сельскохозяйственных культур канолы с устойчивостью к гербициду, и стадия сельскохозяйственной культуры является одним из главных показателей для определения подходящего времени внесения гербицида у канолы.

Настоящее раскрытие относится к способам применения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Вгаккюа, толерантный к гербициду, и, более конкретно, вид Вгаккюа, толерантный к глифосату.

Краткое описание изобретения

В данном документе предусмотрены способы внесения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Вгаккюа, толерантный к гербициду.

Первый аспект отражает способ применения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Вгаккюа, толерантный к гербициду. Способ включает нанесение глифосатного средства для обработки, содержащего эффективное количество глифосата, на популяцию растений Вгаккюа, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Вгаккюа находится приблизительно на стадии цветения, которая характеризуется наличием по меньшей мере от приблизительно 10% открытых цветков до приблизительно 10% на стадии стручков, или после стадии цветения, и где значительная часть открытых цветков или стручков не демонстрирует значительного изменения окраски после внесения глифосатного средства обработки.

В варианте осуществления растения Вгаккюа, толерантные к глифосату, экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (ОЛТ).

В варианте осуществления растения Вгаккюа, толерантные к глифосату, экпрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (ОАТ) в комбинации с ферментом, который обеспечивает переносимость гербицида глуфосината.

В варианте осуществления открытые цветки не демонстрируют значительное изменение окраски в течение 5 дней после внесения глифосатного средства обработки.

В варианте осуществления глифосатное средство обработки содержит в качестве активного ингредиента приблизительно 675, 900, 1350, 1800, 2025, 2700 или 3600 г глифосата в кислотном эквиваленте/га в виде однократного внесения.

В варианте осуществления глифосатное средство обработки содержит в качестве активного ингредиента до приблизительно 5400 г глифосата в кислотном эквиваленте/га в виде одного или нескольких кумулятивных внесений.

Другой аспект отражает способ применения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Вгаккюа, толерантный к глифосату. Способ включает нанесение одного или нескольких глифосатных средств обработки, содержащих эффективное количество глифосата, на популяцию растений Вгаккюа, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Вгаккюа находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и где толерантность к глифосату обусловлена экспрессией метаболизирующего глифосат фермента у растений Вгаккюа; и получение семян Вгаккюа от растений Вгаккюа,

- 1 028528 где значительная часть стручков не прекращают развития после внесения глифосатного средства обработки.

Другой аспект отражает способ предотвращения потери урожая или ухудшения урожая при уборке урожая из растений Вта88юа. Способ включает нанесение первого глифосатного средства обработки, содержащего эффективное количество глифосата, на популяцию растений Вта88юа, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Вта88юа находится на стадии семядольных листьев, и растения Вта881са экспрессируют метаболизирующий глифосат фермент; внесение одного или нескольких дополнительных глифосатных средств обработки, содержащих эффективное количество глифосата, на популяцию растений Вта88юа, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Вта88юа находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев; и получение семян Вта88юа от растений Вта88юа, где потери урожая минимизированы вследствие значительного снижения изменения окраски или прекращения развития стручков после одного или нескольких внесений глифосата на поздних стадиях.

В варианте осуществления растения Вта88юа экспрессируют глифосат ацетилтрансферазу (ОЛТ).

В варианте осуществления средний урожай Вта88юа снижен не более чем на 5% по сравнению с контрольным средством обработки.

Другой аспект настоящего раскрытия отражает способ борьбы с сорняками в поле. Способ включает высаживание популяции растений Вта88юа, толерантных к глифосату, в поле, где растения Вта88юа экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу; и нанесение глифосатного средства обработки на поле с Вга881са, содержащее один или несколько сорняков, где значительная часть растений Вта88юа находится на поздней стадии развития, выбранной из группы, состоящей из появления соцветий, цветения, развития и созревания семян, и тем самым значительно снижают рост сорняков на поле с Вта88юа.

Другой аспект настоящего раскрытия отражает способ борьбы в поле с заболеваниями популяции Вга881са, толерантной к глифосату. Способ включает нанесение глифосатного средства обработки на популяцию Вга881са в поле, где глифосатное средство обработки дополнительно содержит средство для борьбы с заболеваниями, выбранное из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов; и где значительная часть популяции Вта88юа находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и не экспрессирует нечуствительную 5-енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазу (ΕΡδΡδ), и где значительная часть популяции Вта88юа не демонстрирует значительного хлороза.

В варианте осуществления глифосатное средство обработки наносят после стадии первого цветка.

В варианте осуществления глифосатное средство обработки вносят на стадии приблизительно 10% цветков.

В другом варианте осуществления глифосатное средство обработки наносят на стадии роста канолы от приблизительно 60 до приблизительно 80 по шкале ВВСН.

Аспект настоящего раскрытия относится к способу уменьшения количества сорного материала во время уборки урожая семян Вта88юа популяции Вта88юа, толерантной к глифосату, в поле. Способ включает нанесение глифосатного средства обработки на популяцию Вта88юа в поле, где в поле насчитывается один или несколько сорняков, выбранных из группы, состоящей из осота и амаранта, где популяция Вта88юа находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и популяция Вта88юа не экспрессирует нечувствительную ΕΡδΡδ; и контроль роста сорняка перед уборкой урожая, так что количество сорного материала снижено во время уборки урожая.

Аспект настоящего раскрытия относится к способу борьбы с сорняками в позднем периоде в поле с сельскохозяйственной культурой Вта88юа без оказания отрицательного воздействия на урожай. Способ включает высаживание популяции растений Вта88юа, толерантных к глифосату, где растения экспрессируют метаболизирующий глифосат фермент, так что экспрессия фермента приводит к эффективной устойчивости к глифосату; внесение эффективного количества глифосата на растения Вта88юа, где значительная часть растений Вта88юа находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и где внесение глифосата не приводит к значительному хлорозу; и подавление роста сорняков в поле, и где урожай сельскохозяйственной культуры Вта88юа не снижается более чем на 5% по сравнению с контрольными растениями Вта88юа, не экспрессирующими метаболизирующий глифосат фермент.

В варианте осуществления глифосатное средство обработки содержит 1350-2700 г глифосата в кислотном эквиваленте/га и значительная часть растений Вта88юа находится на стадии приблизительно 10% цветков.

В варианте осуществления глифосатное средство обработки содержит 1350-3600 г глифосата в кислотном эквиваленте/га, и значительная часть растений Вта88юа находится на стадии приблизительно 10% цветков.

В другом варианте осуществления применение глифосата дополнительно включает средство для борьбы с заболеваниями, выбранное из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов.

В другом варианте осуществления применение глифосата дополнительно включает применение средства для поздней подкормки.

В другом варианте осуществления глифосат предварительно смешивают со средством для борьбы с заболеваниями, выбранным из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов.

Другой аспект настоящего раскрытия относится к способу повышения чистоты семян канолы. Спо- 2 028528 соб включает высаживание популяции растений канолы, толерантных к глифосату, в поле; внесение глифосата в поле, которое предположительно содержит один или несколько видов, не являющихся канолой, где растения канолы метаболизируют глифосат и не экспрессируют нечуствительную ΕΡδΡδ, и где значительная часть растений Вга881са находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев; и улучшение чистоты семян канолы при помощи подавления роста видов, не являющихся канолой, путем позднего внесения глифосата.

Другой аспект настоящего раскрытия отражает способ снижения стоимости уборки урожая Вга881са. Способ включает снижение популяции сорняков в поле с растущей Вга881са путем нанесения глифосата на популяцию растений Вга881са, толерантных к глифосату, которые характеризуются по меньшей мере 10% открытых цветков, и уборку урожая сельскохозяйственной культуры Вга881са, где растения Вга881са экспрессируют метаболизирующий глифосат фермент.

В варианте осуществления внесение глифосата не приводит к значительному хлорозу или некрозу растений Вга881са.

В другом варианте осуществления глифосат инактивируется в растениях Вга881са, в том числе в генеративной ткани.

Другой аспект настоящего раскрытия относится к способу борьбы с сорняками в поле с Вга881са. Способ включает нанесение второго глифосатного средства обработки на популяцию растений Вга881са, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Вга881са находится на стадии генеративного роста, и где растения Вга881са экспрессируют метаболизирующий глифосат фермент.

В другом варианте осуществления метаболизирующий глифосат фермент представляет собой СЛТполипептид.

В другом варианте осуществления растения Вга881са, толерантные к глифосату, не экспрессируют нечувствительную ΕΡδΡδ.

В другом варианте осуществления второе глифосатное средство обработки применяют в более низкой дозе, чем первое глифосатное средство обработки.

В другом варианте осуществления второе глифосатное средство обработки вносят в более высокой дозе, чем первое глифосатное средство обработки.

Другой аспект настоящего раскрытия относится к способу борьбы с сорняками, растущими в популяции сельскохозяйственной культуры Вга881са, толерантной к глифосату, причем сельскохозяйственная культура Вга881са экспрессирует фермент глифосат ацетилтрансферазу. Способ включает выращивание популяции Вга881са, толерантной к глифосату, в поле; внесение глифосата при норме приблизительно 900 г кислотного эквивалента (г к.э.)/га (га) в поле, которое предположительно содержит один или несколько видов сорняков, где растения Вга881са находятся на стадии от семядольных листьев до 6 листьев; и проведение второго внесения глифосата при норме приблизительно 900 г к.э./га, где растения Вга881са находятся на стадии после стадии 6 листьев.

Другой аспект настоящего раскрытия относится к способу борьбы с сорняками, растущими в популяции сельскохозяйственной культуры Вга881са с переносимостью глифосата, причем сельскохозяйственная культура Вга881са экспрессирует фермент глифосат ацетилтрансферазу. Способ включает выращивание популяции Вга881са, толерантной к глифосату, в поле; внесение глифосата при норме приблизительно 840 г к.э./га в поле, которое предположительно содержит один или несколько видов сорняков, где растения Вга881са находятся от стадии семядольных листьев до стадии 6 листьев; и осуществление второго внесения глифосата при норме приблизительно 840 г к.э./га, где растения Вга881са находятся на стадии после стадии 6 листьев.

Краткое описание графических материалов

Настоящее раскрытие можно более полно понять из следующего подробного описания и сопутствующих графических материалов, которые образуют часть настоящей заявки.

На фиг. 1 показаны данные по эффективности гербицида из экспериментов по распылению глифосата. На чертеже представлены восемь трансгенных линий. Процент некротической реакции сельскохозяйственной культуры показан на оси у, а виды обработок показаны на оси х. Показаны данные для 5 дней после обработки и 10 дней после обработки. Контроль представляет собой обработку с помощью традиционных гербицидов для снижения количества сорняков в контрольных участках.

На фиг. 2 показаны данные по эффективности гербицида для восьми трансгенных линий в случае шести различных глифосатных средств обработки. На оси х показан тип средства обработки. На оси у показан процент хлоротического повреждения.

На фиг. 3 показаны данные по эффективности гербицида для восьми трансгенных линий в случае четырех различных глифосатных средств обработки. На оси у показаны процентные доли урожая относительно 2Х средства обработки на стадиях 3-5 листьев. На оси х показаны различные типы средств обработки.

На фиг. 4 показаны данные по эффективности гербицида для семи СЛТ1-элементов при внесении глифосатных средств обработки. На оси х показан номер элемента. На оси у показан урожай (% от 2Х обработки).

- 3 028528

Подробное описание

Настоящее раскрытие относится к способам применения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Вга881са, толерантный к гербициду. В частности, глифосатные средства обработки наносят на значительную часть растений Вгаккюа, толерантных к гербициду, которые находятся на стадии, которая следует после стадии 2-6 листьев, такой как, например, значительная часть растений Вга881са, толерантных к гербициду, которые находятся на стадии от 10% открытых цветков до стадии приблизительно 10% стручков.

Настоящее раскрытие теперь будет более подробно описано ниже в данном документе со ссылкой на прилагаемые графические материалы, на которых показаны некоторые, но не все варианты осуществления настоящего раскрытия. В действительности, настоящее раскрытие можно осуществлять во многих различных формах и его не следует рассматривать как ограниченное вариантами осуществления, изложенными в данном документе; скорее, данные варианты осуществления представлены с тем, чтобы данное раскрытие соответствовало требованиям действующего законодательства. Одинаковые числа относятся к одинаковым элементам по всему документу.

Специалисту в данной области, к которой относится настоящее раскрытие, будут понятны множественные модификации и другие варианты осуществления настоящего раскрытия, изложенного в данном документе, при использовании идей, представленных в вышеприведенном описании и сопутствующих графических материалах. Таким образом, следует понимать, что настоящее раскрытие не должно ограничиваться конкретными раскрытыми вариантами осуществления, и подразумевается, что в объем прилагаемой формулы изобретения включены модификации и другие варианты осуществления. Хотя в данном документе используются специальные выражения, они используются только в общем и описательном смысле, а не в целях ограничения.

Единицы, префиксы и символы обозначены в их форме, принятой в Международной системе единиц (СИ). Если не указано иное, нуклеиновые кислоты записаны слева направо в ориентации от 5' к 3'; а аминокислотные последовательности записаны слева направо в ориентации от амино- до карбоксиконца. Числовые диапазоны, перечисляемые в описании, охватывают числа, определяющие диапазон, и включают каждое целое число в определенном диапазоне. Нуклеозиды могут называться в данном документе с помощью их однобуквенных символов, рекомендованных Комиссией по номенклатуре ШРАС-ШВМВ. Термины, определяемые далее, более полно определены со ссылкой на настоящее описание в целом. Заголовки разделов, представленные по всему описанию, представлены для удобства, а не для ограничения различных целей и вариантов осуществления настоящего раскрытия.

Раскрытие каждой ссылки, изложенной в данном документе, включено в данный документ посредством ссылки во всей полноте.

Используемые в данном документе и в прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если из контекста явно не следует иное. Таким образом, например, ссылка на растение включает множество таких растений; ссылка на клетку включает одну или несколько клеток и их эквиваленты, известные специалистам в данной области, и так далее.

Используемый в данном документе термин содержащий означает включающий, но без ограничений.

Используемый в данном документе термин Вга88юа означает любое растение Вга88юа и включает все разновидности растений, которые можно скрещивать с Вга88юа.

Используемый в данном документе термин растение включает растительные клетки, органы растений, протопласты растительных клеток, тканевые культуры растительных клеток, из которых можно регенерировать растения, растительные каллюсы, скопления растительных клеток и растительные клетки, которые являются интактными в растениях или частях растений, таких как зародыши, пыльца, семяпочки, семена, листья, цветки, ветви, плоды, стебли, корни, кончики корней, пыльники и т.п. Полученное зрелое семя может использоваться в качестве пищи, корма, топлива или в других коммерческих или промышленных целях, или с целью выращивания или воспроизводства вида. Потомство, варианты и мутанты регенерированных растений также включены в объем настоящего раскрытия.

Трансгенный объект получают при помощи трансформации растительных клеток с помощью гетерологичной(ых) ДНК-конструкции(й), в том числе кассеты экспрессии нуклеиновой кислоты, которая содержит представляющий интерес трансген, регенерации популяции растений из клеток, каждая из которых содержит вставленный трансген, и отбора конкретного растения, которое характеризуется вставкой в конкретном местоположении в геноме. Объект характеризуют фенотипически по экспрессии трансгена(ов). На генетическом уровне объект представляет собой часть набора генов растения. Термин объект также относится к потомству, полученному путем полового ауткросса между трансформантом и другой разновидностью, которая включает гетерологичную ДНК. Даже после повторных возвратных скрещиваний с реккурентным родителем вставленная ДНК и фланкирующая ДНК из трансформированного родителя присутствуют у потомства скрещивания в том же местоположении в хромосоме. Термин объект также относится к ДНК из исходного трансформанта, содержащей вставленную ДНК и фланкирующую последовательность, непосредственно прилегающую к вставленной ДНК, которая, как ожидается, передается потомству в результате полового скрещивания одной родительской линии, которая содер- 4 028528 жит вставленную ДНК (например, исходный трансформант и потомство, полученное в результате самоопыления), и родительской линии, которая не содержит вставленную ДНК.

В данном документе тестировали трансгенные объекты, экспрессирующие гены СЛТ1 и САТ2. САТ1, упомянутый в данном документе, представляет собой САТ-объект Втаккюа ΌΡ-073496-4 (международная патентная РСТ заявка № РСТ/и§2010/058011, включенная посредством ссылки). САТ2, упомянутый в данном документе, представляет собой другую трансгенную линию Втаккюа, экспрессирующую вариант САТ.

В отличие от растений Втаккюа, экспрессирующих нечувствительную ΕΡδΡδ, САТэкспрессирующие растения Втаккюа становятся способными переносить гербицид глифосат благодаря действию фермента глифосат ацетилтрансферазы, который инактивирует или обезвреживает глифосат в ходе одной ферментативной стадии. Ферментативное Ν-ацетилирование глифосата приводит к переносимости глифосата у растений Втаккюа, раскрытых в данном документе.

В данном документе демонстрируется эффективность глифосатных средств обработки на поздних генеративных стадиях (например, 10% открытых цветков) при сниженном/минимальном изменении окраски (хлороз) или некрозе, вместе с отсутствием значительного снижения урожая семян Втаккюа.

Термин зародышевая плазма относится к особи, группе особей или клону, представляющим генотип, разновидность, вид, или культуру, или их генетический материал.

Фраза гибридные растения относится к растениям, которые получают в результате скрещивания между генетически различными особями.

Повреждение растения можно измерять с применением нескольких параметров, таких как процент некротического повреждения и/или процент хлоротического повреждения.

Процент некротического повреждения описывает визуальную классификацию, основанную на процентной доле растений, которые имеют коричневые или желтеющие пятна, в результате обработки гербицидом, где 100% представляет полностью погибшее растение, а 0% обозначает, что коричневые или желтеющие пятна у обработанных растений отсутствовали.

Процент хлорозного повреждения описывает визуальную классификацию процентной доли растений с желтеющими апикальной меристемой, самыми молодыми листьями или старыми листьями, где 100% обозначает, что вся ткань является желтой, а 0% обозначает отсутствие желтеющей ткани у растений, обработанных гербицидом.

Процентная доля урожая относительно 2Х описывает урожай, полученный от САТ-объектов, обработанных соответствующими глифосатными гребицидными средствами обработки, по сравнению с теми же САТ-объектами, подвергнутыми воздействию раствора, содержащего 2Х средство глифосатной обработки, на стадии 3-5 листьев, выраженная как процентная доля 2Х обработки на стадии 3-5 листьев.

В варианте осуществления глифосат инактивируется ферментом глифосат ацетилтрансферазой врастении Втаккюа, в том числе в генеративной ткани, такой как открытые цветки и зеленые почки.

Десикация описывает процесс химической обработки растений средством (Кед1опе®), которое будет ускорять высушивание и созревание семян.

Используемый в данном документе термин пакетированный включает состояние, при котором несколько признаков присутствуют в одном растении (т.е. оба признака внедрены в ядерный геном, один признак внедрен в ядерный геном и один признак внедрен в геном пластиды, или оба признака внедрены в геном пластиды). В одном неограничивающем примере пакетированные признаки предусматривают молекулярный пакет, в котором последовательности физически граничат друг с другом. Используемый в данном документе признак относится к фенотипу, обусловленному конкретной последовательностью или группами последовательностей. Котрансформацию генов можно проводить с применением единых векторов для трансформации, содержащих несколько генов, или нескольких векторов, которые несут отдельные гены. Если последовательности пакетированы с помощью генетической трансформации растений, то представляющие интерес последовательности полинуклеотидов можно комбинировать в любое время и в любом порядке. Признаки можно вводить одновременно в протоколе котрансформации с представляющими интерес полинуклеотидами, которые обеспечены с помощью любой комбинации кассет трансформации. Например, если будут вводиться две последовательности, то эти две последовательности могут содержаться в отдельных кассетах для трансформации (транс) или содержаться в одной кассете для трансформации (цис). Экспрессия данных последовательностей может управляться одним промотором или различными промоторами. В определенных случаях может потребоваться введение кассеты для трансформации, которая будет подавлять экспрессию представляющего интерес полинуклеотида. Ее можно комбинировать с любой комбинацией других кассет супрессии или кассет сверхэкспрессии для получения требуемой комбинации признаков в растении. Кроме того, считается, что полинуклеотидные последовательности можно пакетировать в требуемом местоположении в геноме с применением системы для сайт-специфичной рекомбинации; см., например, публикации международных заявок №№ νθ 1999/25821, νθ 1999/25854, νθ 1999/25840, νθ 1999/25855 и νθ 1999/25853, раскрытия каждой из которых включены в настоящее изобретение с помощью ссылки.

В одном варианте осуществления вид Втаккюа с переносимостью гербицида может представлять собой САТ1-объект Втаккюа. Полинуклеотиды, приводящие к получению САТ1-объекта, можно встраи- 5 028528 вать в молекулярный пакет. Молекулярный пакет может содержать по меньшей мере один дополнительный полинуклеотид, который приводит к переносимости второго гербицида. Последовательность может приводить к переносимости глуфосината и может содержать ген ра1. Дополнительный полинуклеотид может обеспечивать переносимость гербицидов-ингибиторов ЛЬ§. Дополнительный полинуклеотид может обеспечивать переносимость дикамбы или ауксиновых гербицидов.

В других вариантах осуществления вид Вга551са, толерантный к гербициду, по настоящему раскрытию может характеризоваться одним или несколькими представляющими интерес признаками, и, в более конкретных вариантах осуществления, в растении можно пакетировать любую комбинацию представляющих интерес полинуклеотидных последовательностей для создания растений с требуемой комбинацией признаков.

Используемый в данном документе признак относится к фенотипу, обусловленному конкретной последовательностью или группами последовательностей. Например, полинуклеотиды переносимости гербицида можно пакетировать с любыми другими полинуклеотидами, кодирующими полипептиды с пестицидной и/или инсектицидной активностью, такими как токсичные белки ВасШиз 11шппщсп515 (описанные в патентах США №№ 5366892; 5747450; 5737514; 5723756; 5593881; Се15ег е! а1., (1986) Сепе 48:109; Ьее, е! а1., (2003) Арр1. Εηνίτοη. М1сгоЪю1. 69:4648-4657 (У1р3А); СаШ/ку, е! а1., (2001) Ас!а Сгуз1а11одт. Ό. Βίο1. Сту51а11одт. 57:1101-1109 (СгуЗВЫ) и Негтап, е! а1., (2004) I. Адпс. Ροοά Скеш. 52:27262734 (Сту1Р)), лектины (Уап Оашше, е! а1., (1994) Р1ап! Μο1. Βίο1. 24:825, пентин (описанный в патенте США № 5981722) и т.п. Полученные комбинации также могут включать несколько копий любого представляющего интерес полинуклеотида.

Вид Вта55юа, толерантный к гербициду, по настоящему раскрытию может содержать пакеты с другими признаками переносимости гербицида для создания трансгенного растения по настоящему раскрытию с дополнительно улучшенными свойствами. Другие полинуклеотиды переносимости гербицида, которые можно было бы применять в таких вариантах осуществления, включают таковые, приводящие к переносимости глифосата с помощью других механизмов действия, таких как, например, ген, который кодирует фермент глифосат-оксидоредуктазу, более подробно описанный в патентах США №№ 5776760 и 5463175. Другие признаки, которые можно было бы комбинировать с объектом по настоящему раскрытию, включают таковые, обусловленные полинуклеотидами, которые придают растению способность вырабатывать более высокий уровень 5-енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазы (ΕΡδΡδ), например, как подробнее описано в патентах США №№ 6248876 В1; 5627061; 5804425; 5633435; 5145783; 4971908; 5312910; 5188642; 4940835; 5866775; 6225114 В1; 6130366; 5310667; 4535060; 4769061; 5633448; 5510471; Ке. 36449; КЕ 37287 Е и 5491288 и публикациях международных заявок №№ ШО 97/04103; ШО 00/66746; ШО 01/66704 и ШО 00/66747. Другие признаки, которые можно было бы комбинировать с объектом по настоящему раскрытию, включают таковые, приводящие к переносимости сульфонилмочевины и/или имидазолинона, например, как подробнее описано в патентах США №№ 5605011; 5013659; 5141870; 5767361; 5731180; 5304732; 4761373; 5331107; 5928937 и 5378824 и публикации международной заявки № ШО 96/33270.

Вид Вта55юа, толерантный к гербициду, по настоящему раскрытию может содержать пакеты. Полинуклеотиды, кодирующие полипептиды, отдельно или пакетированные с одним или несколькими признаками устойчивости к насекомым, можно пакетировать с одним или несколькими дополнительными признаками, влияющими на затраты (например, устойчивость к гербициду, устойчивость к грибам, устойчивость к вирусам, переносимость стрессов, устойчивость к заболеваниям, мужская стерильность, сила стебля и т.п.), или признаками, влияющими на выход (например, повышенный урожай, модифицированные разновидности крахмала, улучшенный профиль масел, сбалансированные аминокислоты, высокое содержание лизина или метионина, повышенная усвояемость, улучшенное качество волокон, устойчивость к засухе и т.п.). Можно получать полный комплекс агротехнических признаков, обеспечивающих улучшенное качество сельскохозяйственной культуры, с возможностью гибкого и экономически эффективного контроля любого числа сельскохозяйственных вредителей.

Трансгены, пригодные для получения трансгенных растений, включают без ограничения следующие.

1. Трансгены, придающие устойчивость к насекомым или заболеванию.

(А) Гены устойчивости растения к заболеваниям. Защитные механизмы растений зачастую активируются посредством специфического взаимодействия между продуктом гена устойчивости к заболеваниям (К) в растении и продуктом соответствующего гена авирулентности (А\т) в патогене. Разновидность растений можно трансформировать с помощью клонированного гена устойчивости для разработки растений, которые устойчивы к специфическим штаммам патогена; см., например, 1ο^5, е! а1., (1994) δαепсе 266:789 (клонирование гена С£-9 томата, обеспечивающего устойчивость к С1аάο5рο^^иш ГиЬнш); МаШп, е! а1., (1993) 8аепсе 262:1432 (ген Ρ!ο томата, обеспечивающий устойчивость к Ρ5еиάοшοηа5 5уппдае рν. ЮшаЮ, кодирует протеинкиназу); Мшбп1ТО5. е! а1., (1994) Се11 78:1089 (ген ΚδΡ2 А^аЪ^άοр5^5, обеспечивающий устойчивость к Ρ5еиάοшοηа5 5утшдае), Μс^ο\γе11 апб Шοйеηάеη, (2003) Тгепб5 Вю!ескгок 21(4):178-83 и Тοуοάа, е! а1., (2002) Ттапвдешс Ке5. 11(6):567-82. Растение, устойчивое к заболеванию, представляет собой растение, которое более устойчиво к патогену в сравнении с растением дикого

- 6 028528 типа.

(B) Гены, кодирующие белок ВасШик ОшппщепкХ его производное или синтетический полипептид, смоделированный на его основе; см., например, СеЦег е! а1., (1986) Оеие 48:109, которые раскрывают клонирование и нуклеотидную последовательность гена дельта-эндотоксина В1. Более того, молекулы ДНК, кодирующие гены дельта-эндотоксина, можно приобрести в Американской коллекции типовых культур (Роквилл, Мэриленд), например, под номерами доступа АТСС 40098, 67136, 31995 и 31998. Другие неограничивающие примеры трансгенов ВаеШик Ошппщепкй разработанных при помощи методик генной инженерии, приведены в следующих патентах и заявках на патент и тем самым включены посредством ссылки для этой цели: патенты США №№ 5188960; 5689052; 5880275; 5986177; 6023013, 6060594, 6063597, 6077824, 6620988, 6642030, 6713259, 6893826, 7105332; 7179965, 7208474; 7227056, 7288643, 7323556, 7329736, 7449552, 7468278, 7510878, 7521235, 7544862, 7605304, 7696412, 7629504, 7705216, 7772465, 7790846, 7858849 и АО 1991/14778; АО 1999/31248; АО 2001/12731; АО 1999/24581 и АО 1997/40162, раскрытия каждого из которых включены в данный документ посредством ссылки.

(C) Полинуклеотид, кодирующий специфический для насекомых гормон или феромон, такой как экдистероид и ювенильный гормон, его вариант, миметик на его основе, или его антагонист или агонист; см., например, раскрытие Наттоск, е! а1., (1990) Ыа!иге 344:458 экспрессии в бакуловирусе клонированной эстеразы ювенильного гормона, деактиватора ювенильного гормона.

(Ό) Полинуклеотид, кодирующий специфический для насекомых пептид, который при экспрессии нарушает физиологию насекомого, на которого оказывают воздействие. Например, см. раскрытия Кедап, (1994) 1. Вю1. СЬет. 269:9 (экспрессионное клонирование приводит к ДНК, кодирующей рецептор диуретического гормона насекомых); Рга!!, е! а1., (1989) ВюсЬет. ВюрЬук. Кек. Сотт. 163:1243 (аллостатин, обнаруженный у О1р1ор!ега рип1а!а); СЬа!!орабЬуау, е! а1., (2004) СгЫса1 Ке\1е\ук ίη МюгоЪю1оду 30(1):3354; 2)аМопу, (2004) 1 Ыа! Ргоб 67 (2):300-310; СагЬш апб ОгоккЬбе-Ба, (2002) Тохюоп 40 (11):1515-1539; иккиБ, е! а1., (2001) Сигг Бсг 80 (7):847-853 и Уаксопсе1ок апб ОЬуейа, (2004) Тохюоп 44(4):385-403; см. также патент США № 5266317, Тота1кк1, е! а1., в котором раскрываются гены, кодирующие специфические для насекомых токсины.

(Е) Полинуклеотид, кодирующий фермент, ответственный за гипернакопление монотерпена, сесквитерпена, стероида, гидроксамовой кислоты, производного фенилпропаноида или другой небелковой молекулы с инсектицидной активностью.

(Р) Полинуклеотид, кодирующий фермент, вовлеченный в модификацию, в том числе посттрансляционную модификацию, биологически активной молекулы; например, гликолитический фермент, протеолитический фермент, липолитический фермент, нуклеаза, циклаза, трансаминаза, эстераза, гидролаза, фосфатаза, киназа, фосфорилаза, полимераза, эластаза, хитиназа и глюканаза, либо натуральные, либо синтетические; см. РСТ заявку АО 1993/02197 от имени Бсо!!, е! а1., в которой раскрыта нуклеотидная последовательность гена каллазы. Молекулы ДНК, которые содержат последовательности, кодирующие хитиназу, можно получить, например, из АТСС под номерами доступа 39637 и 67152; см. также Кгатег, е! а1., (1993) 1пкес! ВюсЬет. Мо1ес. Вю1. 23:691, где показана нуклеотидная последовательность кДНК, кодирующей хитиназу табачного бражника, и Ка^аИеск, е! а1., (1993) Р1ап! Мо1ес. Вю1. 21:673, где представлена нуклеотидная последовательность гена уби-4-2 полиубиквитина петрушки, и патенты США №№ 6563020; 7145060 и 7087810.

(О) Полинуклеотид, кодирующий молекулу, которая стимулирует сигнальную трансдукцию. Например, см. раскрытие в Во!е11а, е! а1., (1994) Р1ап! Мо1ес. Вю1. 24:757, нуклеотидных последовательностей клонов кДНК кальмодулина маша, и Опекк, е! а1., (1994) Р1ап! РЬукю1. 104:1467, где представлена нуклеотидная последовательность клона кДНК кальмодулина маиса.

(H) Полинуклеотид, кодирующий пептид с гидрофобным моментом; см. РСТ заявку АО 1995/16776 и патент США № 5580852, раскрывающие пептидные производные тахиплезина, которые ингибируют грибные патогены растений, и РСТ заявку АО 1995/18855, и патент США № 5607914 (раскрывает синтетические противомикробные пептиды, которые придают устойчивость к заболеваниям).

(I) Полинуклеотид, кодирующий мембранную пермеазу, каналообразователь или блокатор каналов. Например, см. раскрытие в 1аупек, е! а1., (1993) Р1ап! Бсг 89:43 гетерологичной экспрессии аналога цекропин-бета литического пептида для придания трансгенным растениям табака устойчивости к Ркеиботопак ко1апасеагит.

(1) Ген, кодирующий вирусный инвазивный белок или сложный токсин, полученный из него. Например, накопление белков вирусной оболочки в трансформированных растительных клетках придает устойчивость к вирусной инфекции и/или развитию заболевания, вызванного вирусом, из которого получен ген белка оболочки, а также родственными вирусами; см. ВеасЬу, е! а1., (1990) Апп. Кеу. РЬу!ора!Ьо1. 28:451. Устойчивость, опосредованную белком оболочки, придавали трансформированным растениям в отношении вируса мозаики люцерны, вируса мозаики огурца, вируса полосчатости табака, вируса X картофеля, вируса Υ картофеля, вируса гравировки табака, вируса погремковости табака и вируса табачной мозаики; там же.

(К) Полинуклеотид, кодирующий белок, останавливающий развитие, вырабатываемый в природе патогеном или паразитом. Так, грибные эндо-альфа-1,4-О-полигалактуроназы облегчают грибную коло- 7 028528 низацию и высвобождение питательных веществ растения путем солюбилизации гомо-альфа-1,4-Огалактуроназы клеточной стенки растения; см. ЬатЬ, е! а1., (1992) Вю/ТесЬпо1оду 10:1436. Клонирование и определение характеристик гена, который кодирует белок, ингибирующий эндополигалактуроназу бобов, описан в ТоиЬай, е! а1., (1992) Р1ап! 1. 2:367.

(Ь) Полинуклеотид, кодирующий белок, останавливающий развитие, вырабатываемый в природе растением. Например, Ьодетапп, е! а1., (1992) Вю/ТесЬпо1оду 10:305 показали, что трансгенные растения, экспрессирующие ген ячменя, инактивирующий рибосомы, обладали повышенной устойчивостью к грибковым заболеваниям.

(М) Гены, вовлеченные в реакцию системной приобретенной устойчивости (8АК), и/или гены, связанные с патогенезом; Впддк, (1995) Сиггеп! Вю1оду 5(2), Р1е!ег8е апй Уап Ьооп, (2004) Сигг. Θρίη. Р1ап! Вю. 7(4):456-64, и ЗотайсЬ, (2003) Се11 113 (7):815-6.

(Ν) Противогрибковые гены (Согпейккеп апй Ме1скег8, (1993) Р1. РЬу8ю1. 101:709-712, и Рагук, е! а1., (1991) Р1ап!а 183:258-264, и ВикЬпеП, е! а1., (1998) Сап. 1. оГ Р1ап! Ра!1. 20(2): 137-149); также см. публикации заявок на патент США №№ 09/950933; 11/619645; 11/657710; 11/748994; 11/774121 и патенты США №№ 6891085 и 730694 6. Киназы, подобные рецептору ЬукМ, для восприятия фрагментов хитина, как первый этап в защитной реакции растения против грибов-патогенов (И8 2012/0110696).

(O) Гены системы детоксикации, такие как кодирующие фумонизин, беауверицин, монилиформин и зеараленон и их структурно родственные производные. Например, см. патенты США №№ 5716820; 5792931; 5798255; 5846812;6083736;6538177;6388171 и 6812380.

(P) Полинуклеотид, кодирующий цистатин и ингибиторы цистеинпротеиназы; см. патент США № 7205453.

(0) Гены дефензинов; см. \\'О 2003/000863 и патенты США №№ 6911577; 6855865; 6777592 и 7238781.

(К) Гены, придающие устойчивость к нематодам; см., например, РСТ заявку \УО 1996/30517; РСТ заявку \\'О 1993/19181, \\'О 2003/033651 и Итотп, е! а1., (1998) Р1ап!а 204:472-479, УППаткоп. (1999) Сигг Орш Р1ап! Вю. 2(4):327-31; патенты США №№ 6284948 и 7301069 и гены т1К164 (№О 2012/058266).

(8) Гены, которые придают устойчивость к корневой гнили, вызываемой Рку!орк!кога, такие как Крк 1, Крк 1-а, Крк 1-Ь, Крк 1-с, Крк 1-й, Крк 1-е, Крк 1-к, Крк 2, Крк 3-а, Крк 3-Ь, Крк 3-с, Крк 4, Крк 5, Крк 6, Крк 7 и другие гены Крк; см., например, 81юетакег. е! а1., Рку!орк!кога Коо! Ко! Ке8181апсе Сепе Марршд ш 8оуЬеап, Р1ап! Сепоте IV СопГегепсе, 8ап И1едо, СаПГ. (1995).

(Т) Гены, которые придают устойчивость к бурой стеблевой гнили, такие как описанные в патенте США № 5689035, включенном посредством ссылки с этой целью.

(И) Гены, которые придают устойчивость к Со11е!о!пскит, такие как описанные в публикации заявки на патент США И8 2009/0035765, включенной посредством ссылки с этой целью. Они включают локус Ксд, который можно использовать как конверсию одного локуса.

2. Трансгены, которые придают устойчивость к гербициду.

(A) Полинуклеотид, кодирующий устойчивость к гербициду, который ингибирует конус нарастания или меристему, такой как имидазолинон или сульфонилмочевина. Иллюстративные гены в этой категории кодируют мутантный фермент АЬ8 и АНА8, как описано, например, у Ьее, е! а1., (1988) ЕМВО I. 7:1241 и М1к1, е! а1., (1990) Ткеог. Арр1. Сепе!. 80:449 соответственно; см. также патенты США №№ 5605011; 5013659; 5141870; 5767361; 5731180; 5304732; 4761373; 5331107; 5928937 и 5378824;заявку на патент США с серийным номером 11/683737 и публикацию международной заявки \УО 1996/33270.

(B) Полинуклеотид, кодирующий белок для устойчивости к глифосату (устойчивость придают мутантные гены 5-енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазы (ЕР8Р8) и агоА соответственно) и другим соединениям с фосфоновыми группами, таким как глуфосинат (гены фосфинотрицин-ацетилтрансферазы (РАТ) и фосфинотрицин-ацетилтрансферазы (Ьаг) 81гер!отусе§ Ьудгоксорюик), и пиридинокси- или феноксипропионовым кислотам и циклогексонам (гены, кодирующие ингибитор АССазы); см., например, патент США № 4940835, 8ЬаЬ, е! а1., в котором раскрыта нуклеотидная последовательность формы ЕР8Р8, которая может придавать устойчивость к глифосату. В патенте США № 5627061, Ваггу, е! а1., также описаны гены, кодирующие ферменты ЕР8Р8; см. также патенты США №№ 6566587; 6338961; 6248876 В1; 6040497; 5804425; 5633435; 5145783; 4971908; 5312910; 5188642; 5094945, 4940835; 5866775; 6225114 В1; 6130366; 5310667; 4535060; 4769061; 5633448; 5510471; Ке. 36449; КЕ 37287 Е и 5491288 и публикации международных заявок ЕР 1173580; \УО 2001/66704; ЕР 1173581 и ЕР 1173582, которые включены в данный документ посредством ссылки для данной цели. Устойчивость к глифосату также придается растениям, которые экспрессируют ген, кодирующий фермент глифосат-оксидоредуктазу, как более подробно описано в патентах США №№ 5776760 и 5463175, которые включены в данный документ посредством ссылки с этой целью. Кроме того, устойчивость к глифосату может придаваться растениям посредством сверхэкспрессии генов, кодирующих глифосатЫ-ацетилтрансферазу; см., например, патенты США №№ 7462481; 7405074 и публикацию заявки на патент США № И8 2008/0234130. Молекулу ДНК, кодирующую мутантный ген агоА, можно получить под номером доступа АТСС 39256, а нуклеотидная последовательность мутантного гена раскрыта в патенте США № 4769061, Сотак В заявке ЕР № 0333033, Китайа, е! а1. и патенте США № 4975374, Соойтап, е! а1. раскрыты нуклеотидные последо- 8 028528 вательности генов глутаминсинтетазы, придающие устойчивость к гербицидам, таким как Ьфосфинотрицин. Нуклеотидная последовательность гена фосфинотрицин-ацетилтрансферазы представлена в заявках ЕР №№ 0242246 и 0242236, Ьеетаиь, е! а1.; Ие СгееГ, е! а1., (1989) Вю/ТесЬио1о§у 7:61, где описано получение трансгенных растений, которые экспрессируют химерные гены Ьат, кодирующие фосфинотрицин-ацетилтрансферазную активность; см. также патенты США №№ 5969213; 5489520; 5550318; 5874265; 5919675; 5561236; 5648477; 5646024; 6177616 В1 и 5879903, которые включены в данный документ посредством ссылки с этой целью. Иллюстративные гены, придающие устойчивость к феноксипропионовым кислотам и циклогексонам, таким как сетоксидим и галоксифоп, представляют собой гены Асс1-81, Асс1-82 и Асс1-83, описанные у Маг8йа11, е! а1., (1992) ТЬеог. Арр1. Сеие1. 83:435.

(С) Полинуклеотид, кодирующий белок, обеспечивающий устойчивость к гербициду, который ингибирует фотосинтез, такому как триазин (гены р§ЬА и §8+) и бензонитрил (ген нитрилазы). РтЬШа, е! а1., (1991) Р1ап! Се11 3:169 описывают трансформацию СЬ1атуботоиа8 с помощью плазмид, кодирующих мутантные гены р8ЬА. Нуклеотидные последовательности генов нитрилазы раскрыты в патенте США № 4810648, §!а1кет, и молекулы ДНК, содержащие эти гены, доступны под номерами доступа АТСС 53435, 67441 и 67442. Клонирование и экспрессия ДНК, кодирующей глутатион-§-трансферазу, описаны у Науе8, е! а1., (1992) Вюсйет. 1. 285:173.

(O) Полинуклеотид, кодирующий белок, обеспечивающий устойчивость к синтазе ацетогидроксикислот, которая, как было обнаружено, делает растения, которые экспрессируют этот фермент, устойчивыми к нескольким типам гербицидов, был введен в ряд растений (см., например, На!!оп, е! а1., (1995) Мо1 Сеи Сеие!. 24 6:419). Другие гены, которые придают устойчивость к гербицидам, включают ген, кодирующий химерный белок цитохрома Р4507А1 крысы и ΝΛΌΡΗ-цитохром Р450-оксидоредуктазы дрожжей (§Ыо!а, е! а1., (1994) Р1аи! РЬу8ю1 106:17), гены, кодирующие глутатионредуктазу и супероксиддисмутазу (Аоио, е! а1., (1995) Р1аи! Се11 РЬу8ю1 36:1687), и гены, кодирующие различные фосфотрансферазы (Иайа, е! а1., (1992) Р1аи! Мо1 Вю1 20:619).

(Е) Полинуклеотид, кодирующий устойчивость к гербициду, целенаправленно воздействующему на протопорфириноген-оксидазу (рго!ох), которая необходима для выработки хлорофилла. Фермент рго!ох служит в качестве мишени для ряда гербицидных соединений. Эти гербициды также ингибируют рост всех присутствующих различных видов растений, вызывая их полное разрушение. Разработка растений, характеризующихся измененной рго!ох-активностью, которые устойчивы к этим гербицидам, описана в патентах США №№ 6288306 В1; 6282837 В1 и 5767373 и публикации международной заявки \О 2001/12825.

(P) Ген ааб-1 (изначально из ЗрНидоЫит ЬетЫабоуоташ) кодирует белок арилоксиалканоатдиоксигеназу (ААО-!). Признак приводит к переносимости гербицидов на основе 2,4дихлорфеноксиуксусной кислоты и арилоксифеноксипропионата (обычно называемых фоп-гербициды, таких как квизалофоп). Ген ааб-1, как таковой, обеспечивающий переносимость гербицида у растений, впервые был раскрыт в \О 2005/107437 (см. также υδ 2009/0093366). Ген ааб-12, полученный от ИеНИа аабоуогащ, который кодирует белок арилоксиалканоат-диоксигеназу (ААВ-П), приводящий к переносимости гербицидов на основе 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты и пиридилоксиацетата посредством инактивации некоторых гербицидов с арилоксиалканоатным фрагментом, в том числе фенокси-ауксина (например, 2,4-Ό, МСРА), а также видов пиридилокси-ауксина (например, флуроксипир, триклопир).

(С) Полинуклеотид, кодирующий устойчивую к гербициду дикамба-монооксигеназу, раскрытый в публикации заявки на патент США 2003/0135879, для придания переносимости дикамбы.

(H) Полинуклеотидная молекула, кодирующая бромоксинилнитрилазу (Вхи), раскрытая в патенте США № 4810648, для придания переносимости бромоксинила.

(I) Полинуклеотидная молекула, кодирующая фитоен (стй), описанный у М18атеа, е! а1., (1993) Р1аи! 1. 4:833-840 и у М18ата, е! а1., (1994) Р1аи! 1. 6:481-489, для переносимости норфлуразона.

3. Трансгены, придающие измененные характеристики зернам или вносящие в них вклад.

(А) Измененные жирные кислоты, например, посредством следующего.

(1) Подавления стеароил-АСР для повышения содержания стеариновой кислоты в растении; см. КииИ/ои, е! а1., (1992) Ргос. №11. Асаб. δα. И8А 89:2624 и \О 1999/64579 (Гены для изменения липидных профилей в кукурузе (Сеие8 !о А1!ег ЫрШ Ртой1е8 ш Соги)).

(2) Повышения содержания олеиновой кислоты посредством модификации гена РАО-2 и/или снижения содержания линоленовой кислоты посредством модификации гена РАО-3 (см. патенты США №№ 6063947; 6323392; 6372965 и \\'О 1993/11245).

(3) Изменения содержания конъюгированных линоленовой или линолевой кислоты, например, как в \\'О 2001/12800.

(4) Изменения ЬЕС1, АСР, Иек1, §ирета11, тй р8, различных генов 1ра, таких как 1ра1, 1ра3, Ьр! или Ьдд!. Например, см. \О 2002/42424, \О 1998/22604, \О 2003/011015, \О 2002/057439, \О 2003/011015, патенты США №№ 6423886, 6197561, 6825397 и публикации заявки на патент США №№ И8 2003/0079247, υδ 2003/0204870 и Юуега-Мабпб, е! а1., (1995) Ргос. №!1. Асаб. δοΐ. 92:5620-5624.

(5) Генов, кодирующих дельта-8-десатуразу для получения длинноцепочечных полиненасыщенных жирных кислот (патент США № 8058571), дельта-9 десатуразу для снижения содержания насыщенных

- 9 028528 жиров (патент США № 8063269), Лб-десатуразу примулы для улучшения профилей омега-3-жирных кислот.

(6) Выделенных нуклеиновых кислот и белков, ассоциированных с регуляцией метаболизма липидов и сахаров, в частности белка липидного метаболизма (ЬМР), применяемых в способах получения трансгенных растений и модуляции уровней запасных веществ семени, в том числе липидов, жирных кислот, видов крахмала или запасных белков семени, и их применения в способах модуляции размера семени, количества семян, веса семян, длины корней и размера листьев растений (ЕР 2404499).

(7) Изменения экспрессии белка, индуцируемого сахарами 2 (ΗδΙ2), с высоким уровнем экспрессии в растении для повышения или снижения экспрессии ΗδΙ2 в растении. Повышение экспрессии ΗδΙ2 повышает содержание масла, тогда как понижение экспрессии ΗδΙ2 снижает восприимчивость к абсцизовой кислоте и/или повышает устойчивость к засухе (публикация заявки на патент США № 2012/0066794).

(B) Измененное содержание фосфора, например, посредством следующего.

(1) Введения гена, кодирующего фитазу, при этом будет улучшаться распад фитата, что приводит к большему количеству свободного фосфата в трансформированном растении. Например, см. Уап Иаг1шдяусИк е! а1., (1993) Сепе 127:87 относительно раскрытия нуклеотидной последовательности гена фитазы АкрегдШик тдег.

(2) Модуляции гена, который снижает содержание фитата. У маиса это, например, можно осуществлять при помощи клонирования, а затем повторного введения ДНК, ассоциированной с одним или несколькими аллелями, такими как аллели ЬРА, обнаруженные у мутантов маиса, характеризующихся низкими уровнями фитиновой кислоты, как, например, в АО 2005/113778, и/или посредством изменения активности инозитолкиназы, как в АО 2002/059324, публикации заявки на патент США № 2003/0009011, АО 2003/027243, публикации заявки на патент США № 2003/0079247, АО 1999/05298, патенте США № 6197561, патенте США № 6291224, патенте США № 6391348, АО 2002/059324, публикации заявки на патент США № 2003/0079247, АО 1998/45448, АО 1999/55882, АО 2001/04147.

(C) Измененные углеводы, на которые воздействовали, например, посредством изменения гена, кодирующего фермент, который воздействует на паттерн ветвления крахмала, или гена, изменяющего тиоредоксин, такого как ΝΤΚ и/или ТКХ (см. патент США № 6531648, который включен посредством ссылки с этой целью), и/или нокаута гамма-зеина или использования мутанта, такого как сз27, или ТИ8С27, или еп27 (см. патент США № 6858778 и публикацию заявки на патент США № 2005/0160488, публикацию заявки на патент США № 2005/0204418, которые включены посредством ссылки с этой целью); см. δΙιίΐΌ/а. е! а1., (1988) 1. Вас!егю1. 170:810 (нуклеотидная последовательность мутантного гена фруктозилтрансферазы δϋΌρΦ^^Ηδ), δ!е^ηте!ζ, е! а1., (1985) Мо1. Сеп. Сепе!. 200:220 (нуклеотидная последовательность гена левансахаразы ВасШш δυΠίΠίδ), Реп, е! а1., (1992) Вю/ТесЬпо1оду 10:292 (получение трансгенных растений, которые экспрессируют альфа-амилазу ВасШш 1^сЬеη^Γο^т^δ). ЕШо!, е! а1., (1993) Р1ап! Мо1ес. Вю1. 21:515 (нуклеотидные последовательности генов инвертазы томата), δοдаа^ά, е! а1., (1993) 1. Вю1. СЬет. 268:22480 (сайт-направленный мутагенез гена альфа-амилазы ячменя), и Ρίδ^Γ, е! а1., (1993) Р1ап! РЬуδ^ο1. 102:1045 (фермент ветвления крахмала эндосперма маиса II), АО 1999/10498 (улучшенная усвояемость и/или экстракция крахмала благодаря модификации иПР-Э-ксилоза-4-эпимеразы, РгадПе 1 и 2, КеИ, Ηί'ΉΕ С4Щ, патент США № 6232529 (способ получения семян с высоким содержанием масла путем модификации уровней крахмала (АСР) ). Гены модификации жирных кислот, упомянутые в данном документе, также можно применять для воздействия на содержание и/или состав крахмала благодаря взаимосвязи путей метаболизма крахмала и масла.

(Ό) Измененное содержание или состав антиоксидантов, как, например, изменение токоферола или токотриенолов. Например, см. патент США № 6787683, публикацию заявки на патент США № 2004/0034886 и АО 2000/68393, предусматривающие манипуляцию с уровнями антиоксидантов, и АО 2003/082899, благодаря изменению гомогентизатгеранил-геранилтрансферазы (Ь§§1).

(Е) Измененные незаменимые аминокислоты семян. Например, см. патент США № 6127600 (способ повышения накопления незаменимых аминокислот в семенах), патент США № 6080913 (бинарные способы повышения накопления незаменимых аминокислот в семенах), патент США № 5990389 (высокое содержание лизина), АО 1999/40209 (изменение аминокислотного состава семян), АО 1999/29882 (способы для изменения содержания аминокислот в белках), патент США № 5850016 (изменение аминокислотного состава семян), АО 1998/20133 (белки с повышенными уровнями незаменимых аминокислот), патент США № 5885802 (высокое содержание метионина), патент США № 5885801 (высокое содержание треонина), патент США № 6664445 (растительные ферменты биосинтеза аминокислот), патент США № 6459019 (повышенное содержание лизина и треонина), патент США № 6441274 (бета-субъединица растительной триптофансинтазы), патент США № 6346403 (ферменты метаболизма метионина), патент США № 5939599 (высокое содержание серы), патент США № 5912414 (повышенное содержание метионина), АО 1998/56935 (растительные ферменты биосинтеза аминокислот), АО 1998/45458 (сконструированный белок семени, имеющий более высокую процентную долю незаменимых аминокислот), АО 1998/42831 (повышенное содержание лизина), патент США № 5633436 (повышение содержания серосодержащих аминокислот), патент США № 5559223 (синтетические запасные белки с определенной струк- 10 028528 турой, содержащие программируемые уровни незаменимых аминокислот для улучшения питательной ценности растений), ΆΘ 1996/01905 (повышенное содержание треонина), ΆΘ 1995/15392 (повышенное содержание лизина), публикацию заявки на патент США № 2003/0163838, публикацию заявки на патент США № 2003/0150014, публикацию заявки на патент США № 2004/0068767, патент США № 6803498, \\'Ο 2001/79516.

4. Гены, создающие сайт для сайт-специфической интеграции ДНК.

Подразумевается введение сайтов РКТ, которые можно применять в системе РЬР/РКТ, и/или сайтов Ьох, которые можно применять в системе Сте/Ьохр. Например, см. ΡνζηίΚ. с1 а1., (2003) Р1ап1 Се11 Кер 21:925-932 и ΆΘ 1999/25821, которые включены в данный документ посредством ссылки. Другие системы, которые можно применять, включают рекомбиназу Οίη из фага Ми (Маекег, е1 а1., (1991) У1ск1 Скапб1ег, Тке Ма^ζе НапбЬоок ск. 118 (§ргтдег-Уег1ад 1994), рекомбиназу Ρίη из Е. сок (ЕпотоЮ, е1 а1., 1983) и систему К/К§ из плазмиды ρδΚί (Агакк е1 а1., 1992).

5. Гены, воздействующие на устойчивость к абиотическому стрессу.

В том числе без ограничений цветения, развития початка и семени, улучшения эффективности использования азота, измененной реактивности в отношении азота, устойчивости к засухе или ее переносимости, устойчивости к действию тепла или его переносимости, устойчивости к холоду или его переносимости, а также устойчивости к солям или их переносимости и повышенного урожая при стрессе.

(A) Например, см. ΆΘ 2000/73475, где эффективность использования воды изменена благодаря изменению малата; патенты США №№ 5892009, 5965705, 5929305, 5891859, 6417428, 6664446, 6706866, 6717034, 6801104, ΆΘ 2000/060089, ΆΘ 2001/026459, ΆΘ 2001/035725, ΆΘ 2001/034726, ΆΘ 2001/035727, ΆΘ 2001/036444, ΆΘ 2001/036597, ΆΘ 2001/036598, ΆΘ 2002/015675, ΆΘ 2002/017430, \\'Ο 2002/077185, ΆΘ 2002/079403, ΆΘ 2003/013227, ΆΘ 2003/013228, ΆΘ 2003/014327, ΆΘ 2004/031349, ΆΘ 2004/076638, ΆΘ 199809521.

(B) ΆΘ 199938977, описывающая гены, в том числе гены СВР, и факторы транскрипции, эффективные при ослаблении негативных эффектов замораживания, высокого содержания солей и засухи на растения, а также приводящие к другим положительным эффектам в отношении фенотипа растения.

(C) Публикация заявки на патент США № 2004/0148654 и ΆΘ 2001/36596, где в растениях изменяется содержание абсцизовой кислоты, что приводит к улучшенному фенотипу растения, такому как повышенный урожай и/или повышенная переносимость абиотического стресса.

(Ό) ΆΘ 2000/006341, ΆΘ 2004/090143, патенты США №№ 7531723 и 6992237, где экспрессия цитокинина модифицируется, что приводит к растениям с повышенной переносимостью стрессов, как, например, переносимостью засухи и/или повышенным урожаем; также см. ΆΘ 2002/02776, ΆΘ 2003/052063, ДР 2002/281975, патент США № 6084153, ΆΘ 2001/64898, патент США № 6177275 и патент США № 6107547 (улучшение использования азота и измененная реактивность в отношении азота).

(Е) Что касается изменения содержания этилена, см. публикацию заявки на патент США № 2004/0128719, публикацию заявки на патент США № 2003/0166197 и ΆΟ 2000/32761.

(Р) Что касается растительных факторов транскрипции или транскрипционных регуляторов, связанных с реакцией на абиотический стресс, см., например, публикацию заявки на патент США № 2004/0098764 или публикацию заявки на патент США № 2004/0078852.

(Ο) Гены, которые повышают экспрессию вакуолярной пирофосфатазы, такие как АУР1 (патент США № 8058515), для повышения урожая; нуклеиновая кислота, кодирующая полипептиды Н8РА4 или Н8РА5 (фактор теплового шока класса А4 или А5), полипептид белка транспортера олигопептидов (ОРТ4-подобный); пластохрон-2-подобный полипептид (РЬА2-подобный) или \Уи5ске1-родственный гомеобокс 1-подобный полипептид (\УОХ1-подобный) (публикация заявки на патент США № И8 2011/0283420).

(H) Подавление полинуклеотидов, кодирующих белки поли-(АДФ-рибоза)-полимеразы (РАКР) для модуляции запрограммированной клеточной смерти (патент США № 8058510), для повышения мощности.

(I) Полинуклеотид, кодирующий полипептиды ЭТР2Р для обеспечения устойчивости к засухе (публикация заявки на патент США № И8 2011/02 77181).

(1) Нуклеотидные последовательности, кодирующие белки АСС синтазы 3 (АС83) для модуляции развития, модуляции реакции на стресс и модуляции переносимости стрессов (публикация заявки на патент США № И8 2010/0287669).

(К) Полинуклеотиды, которые кодируют белки, которые приводят к фенотипу переносимости засухи ГОТР), для обеспечения устойчивости к засухе (ΆΟ 2012/058528).

Другие гены и факторы транскрипции, которые воздействуют на рост и агротехнические признаки растений, такие как урожайность, цветение, рост растения и/или структура растения, можно вводить или интрогрессировать в растения, см., например, ΆΟ 1997/49811 (ЬНУ), ΆΟ 1998/56918 (ΕδΌ4), ΆΟ 1997/10339 и патент США № 6573430 (ТРЬ), патент США № 6713663 (РТ), ΆΟ 1996/14414 (СОЫ), ΆΟ 1996/38560, ΆΟ 2001/21822 (УКШ), ΆΟ 2000/44918 (УКЫ2), ΆΟ 1999/49064 (ΟΙ), ΆΟ 2000/46358 (РК1), ΆΟ 1997/29123, патент США № 6794560, патент США № 6307126 (ОА1), ΆΟ 1999/09174 (Ό8 и КЫ), и ΆΟ 2004/076638, и ΆΟ 2004/031349 (факторы транскрипции).

- 11 028528

6. Гены, приводящие к повышению урожая.

(A) Трансгенное культурное растение, трансформированное при помощи нуклеиновой кислоты, кодирующей 1-аминоциклопропан-1-карбоксилатдезаминаза-подобный полипептид (АССЭР). где экспрессия последовательности нуклеиновой кислоты в культурном растении приводит к повышенному росту корней, и/или повышению урожая, и/или повышенной переносимости стрессов под влиянием факторов среды у растения, по сравнению с разновидностью дикого типа растения (патент США № 8097769).

(B) Сверхэкспрессия гена белков цинковых пальцев маиса (Ζιη-ΖΈΡ1) с применением промотора, активного преимущественно в семенах, как было показано, усиливает рост растения, увеличивает количество зерен и общий вес зерен на растение (публикация заявки на патент США № 2012/0079623).

(C) Конститутивная сверхэкспрессия белка с доменом границ латеральных органов (ЬОВ) (ΖιηЬОВОР1) маиса, как было показано, увеличивает количество зерен и общий вес зерен на растение (публикация заявки на патент США № 2012/0079622).

(Ό) Улучшение признаков, связанных с урожаем, у растений посредством модуляции экспрессии у растения нуклеиновой кислоты, кодирующей У1М1 (вариант с метилированием 1)-подобный полипептид или УТС2-подобный (ΟΌΡ-Ь-галактоза-фосфорилаза) полипептид, или полипептид ΏυΡ1685, или АКР6подобный (восприимчивый к ауксину фактор) полипептид (\УО 2012/038893).

(Е) Модуляция экспрессии в растении нуклеиновой кислоты, кодирующей 5>1е20-подобный полипептид или его гомолог, позволяет растениям производить повышенный урожай относительно контрольных растений (ЕР 2431472).

Специалист в данной области техники знаком с протоколами для имитации условий засухи и для оценки выносливости к засухе у растений, которые были подвергнуты имитированным или естественным условиям засухи. Например, можно имитировать условия засухи путем обеспечения растений меньшим количеством воды, чем обычно требуется, или не обеспечивать их водой в течение некоторого периода времени, и можно оценивать засухоустойчивость путем поиска различий, связанных с физиологическим и/или физическим состоянием, в том числе (но без ограничений) мощностью, ростом, размером или длиной корней, или, в частности, цветом листьев или размером площади листьев. Другие методики оценивания засухоустойчивости включают измерение флуоресценции хлорофилла, показателей интенсивности фотосинтеза и показателей интенсивности газообмена.

Эксперимент со стрессом, вызванным засухой, может предусматривать хронический стресс (т.е. медленное высыхание) и/или может предусматривать два острых стресса (т.е. неожиданное удаление воды), разделенных днем или двумя днями восстановления.

Признаки переносимости гербицида.

В вид Вта881са по настоящему изобретению можно пакетировать, например, гидроксифенилпируватдиоксигеназами, которые представляют собой ферменты, которые катализируют реакцию, в которой пара-гидроксифенилпируват (НРР) превращается в гомогентизат. Молекулы, которые ингибируют этот фермент и которые связываются с ферментом для ингибирования превращения НРР в гомогентизат, являются пригодными в качестве гербицидов. Признаки, приводящие к переносимости таких гербицидов у растений, описаны в патентах США №№ 6245968 В1; 6268549 и 6069115 и публикации международной заявки № \УО 99/23886. Другие примеры подходящих признаков переносимости гербицида, которые можно было бы пакетировать у объекта по настоящему раскрытию, включают полинуклеотиды, кодирующие арилоксиалканоатдиоксигеназу (которая, как сообщается, приводит к переносимости 2,4-0 и других феноксиауксиновых гербицидов, а также арилоксифеноксипропианатных гербицидов, как описано, например, в публикации международной заявки \УО 05/107437), и полинуклеотиды, обеспечивающие переносимость дикамбы, как описано, например, в Негтап, с1 а1., (2005) ά. ΒίοΙ. СИет. 280:24759-24767.

Другие примеры признаков переносимости гербицида, которые можно было бы пакетировать, включают признаки, которые придают полинуклеотиды, кодирующие экзогенную фосфинотрицинацетилтрансферазу, как описано в патентах США №№ 5969213; 5489520; 5550318; 5874265; 5919675; 5561236; 5648477; 5646024; 6177616 и 5879903. Растения, содержащие экзогенную фосфинотрицинацетилтрансферазу, могут проявлять повышенную переносимость глуфосинатных гербицидов, которые ингибируют фермент глутаминсинтазу. Другие примеры признаков переносимости гербицида, которые можно было бы комбинировать у объекта, раскрытого в данном документе, включают признаки, которые придают полинуклеотиды, приводящие к измененной активности протопорфириноген-оксидазы (ρτοΐοχ), как описано в патентах США №№ 6288306 В1; 6282837 В1 и 5767373, и в публикации международной заявки \УО 01/12825. Растения, содержащие такие полинуклеотиды, могут проявлять повышенную переносимость любого из ряда гербицидов, которые целенаправленно воздействуют на фермент ρτοΐοχ (также называемые ингибиторы ρτοΐοχ).

Признаки переносимости ингибитора АЬ§ можно пакетировать у растений, раскрытых в данном документе. Используемый в данном документе полипептид переносимости ингибиторов АЬ§ предусматривает любой полипептид, который при экспрессии в растении придает переносимость по меньшей мере одному ингибитору АЬ§. Известно множество ингибиторов АЬ§, и они включают, например, гербицид на основе сульфонилмочевины, имидазолинона, триазолопиримидинов, пиримидинилокси(тио)бензоатов и/или сульфониламинокарбонилтриазолинона. Дополнительные ингибиторы АЬ§ из- 12 028528 вестны и раскрыты в других разделах данного документа. В данной области техники известно, что мутации АЬ§ делятся на различные классы в отношении переносимости сульфонилмочевин, имидазолинонов, триазолопиримидинов и пиримидинил(тио)бензоатов, в том числе мутации со следующими характеристиками: (1) широкая переносимость всех четырех этих групп; (2) переносимость имидазолинонов и пиримидинил(тио)бензоатов; (3) переносимость сульфонилмочевин и триазолопиримидинов и (4) переносимость сульфонилмочевин и имидазолинонов.

Можно использовать различные полипептиды переносимости ингибиторов АЬ§. Полинуклеотиды переносимости ингибиторов АЬ§ содержат по меньшей мере одну нуклеотидную мутацию, приводящую к замене одной аминокислоты в полипептиде АЬ§. Изменение происходит в одном из семи фактически консервативных участков ацетолактатсинтазы; см., например, НаПоп е! а1. (1995) Мо1еси1аг Сепейск апб Сепотек 246:419-425; Ьее е! а1. (1998) ЕМВО .Тоигпа1 7:1241-1248; Ма/иг е! а1. (1989) Апп. Кеу. Р1ап! Рйук. 40:441-470 и патент США № 5605011, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Полипептид переносимости ингибитора АЬ§ может кодироваться, например, локусами §иКА или §иКВ АЬ§. В конкретных вариантах осуществления полипептид переносимости ингибиторов АЬ§ включает мутант АЬ§ С3, мутант АЬ§ НКА, мутант §4 или мутант §4/НКА или любую их комбинацию. Известны различные мутации АЬ§, придающие переносимость различных гербицидов и групп (и/или подгрупп) гербицидов; см., например, Тгапе1 апб ХУгщШ (2002) Уееб §с1епсе 50:700-712; см. также патенты США №№ 5605011, 5378824, 5141870, 5013659, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте; см. также §ЕС ГО N0:65, содержащую последовательность НКА сои; §ЕС ГО N0:66, содержащую последовательность НКА маиса; и §ЕС ГО N0:67, содержащую последовательность НКА АгаЫборк1к; и §Еф ГО N0:86, содержащую последовательность НКА, используемую у хлопчатника. Мутация НКА в АЬ§ особенно применима. Мутация приводит к выработке полипептида ацетолактатсинтазы, который является устойчивым по меньшей мере к одному химическому типу ингибиторов АЬ§ по сравнению с белком дикого типа. Например, растение, экспрессирующее полипептид, устойчивый к ингибитору АЬ§, может обладать устойчивостью к дозе гербицида на основе сульфонилмочевины, имидазолинона, триазолопиримидинов, пиримидинилокси(тио)бензоатов и/или сульфониламинокарбонилтриазолинона, которая по меньшей мере в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 70, 80, 100, 125, 150, 200, 500 или 1000 раз выше, чем доза гербицида, которая вызвала бы повреждение у соответствующего контрольного растения. Полипептид, устойчивый к ингибитору АЬ§, содержит ряд мутаций. Дополнительно, растения с полипептидом ингибитором АЬ§ можно получать благодаря отбору естественных мутаций, которые придают переносимость глифосата.

Полипептид, устойчивый к ингибитору АЬ§, может обеспечить толерантность гербицидов на основе сульфонилмочевины и имидазолинона. Гербициды на основе сульфонилмочевины и имидазолинона подавляют рост высших растений путем блокирования ацетолактатсинтазы (АЬ§), также известной как синтаза ацетогидроксикислот (АНА§). Например, растения, содержащие конкретные мутации в АЬ§ (например, мутации §4 и/или НКА), обладают переносимостью гербицидов на основе сульфонилмочевины. Получение растений, толерантных к сульфонилмочевине и толерантных к имидазолинону, описано более полно в патентах США №№ 5605011; 5013659; 5141870; 5767361; 5731180; 5304732; 4761373; 5331107; 5928937 и 5378824; и в публикации международной заявки № УО 96/33270, которые включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте во всех отношениях. Полипептид, устойчивый к ингибитору АЬ§, может представлять собой ацетолактатсинтазу, толерантную к сульфонамиду (иначе известную как синтаза ацетогидроксикислот с переносимостью сульфонамида), или ацетолактатсинтазу, толерантную к имидазолинону (иначе известную как синтаза ацетогидроксикислот с переносимостью имидазолинона).

Растения Втакыса, толерантные к глифосату, экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (САТ), который можно комбинировать или пакетировать с ферментом ЕЧЧ.

Другими примерами признаков толерантности к гербициду, которые можно было бы комбинировать в виде Втаккюа, раскрытом в данном документе, включают признаки, придающие устойчивость к по меньшей мере одному гербициду у растения, такого как, например, растение Втаккюа или мелколепестник. Сорняки, толерантные к гербициду, известны в данной области техники как растения, которые варьируют в своей переносимости конкретных гербицидов; см., например, Сгееп апб УППашк, (2004) Согте1айоп оГ Согп (2еа таук) 1пЬгеб Кекропке !о №соки1Гигоп апб Мекойтопе, постер, представленный на ежегодной встрече У§§А в Канзас-сити, Миссури, 9-12 февраля 2004 г.; Сгееп, (1998) Уееб ТесЬпо1о§у 12:474-477; Сгееп апб Шпсй (1993) Уееб §с1епсе 41:508-516. Признак(и), ответственный(е) за такие виды переносимости, можно комбинировать с помощью скрещивания или путем других способов с объектом, раскрытым в данном документе, с получением растения по настоящему раскрытию, а также способов его применения.

Вид Втаккюа, раскрытый в данном документе, может характеризоваться по меньшей мере одним признаком, который приводит к образованию ряда требуемых комбинаций признаков, в том числе без ограничения признаков, требуемых для кормов животных, как, например, высокое содержание масла (например, патент США № 6232529); сбалансированное содержание аминокислот (например, хордотионины (патенты США №№ 5990389; 5885801; 5885802 и 5703409; патент США № 5850016); высокое со- 13 028528 держание лизина в ячмене (^Шаткой, с1 а1., (1987) Еиг. 1. ВюсНст. 165:99-106 и \УО 98/20122) и богатые метионином белки (Ребегкеп, е! а1., (1986) 1. ΒίοΙ. СЬет. 261:6279; КтЬата, е! а1., (1988) Сеие 71:359, и Микитига, е! а1., (1989) Р1ап! Мо1. ΒίοΙ. 12:123)); повышенная усвояемость (например, модифицированные запасные белки (заявка на патент США с серийным номером 10/053410, поданная 7 ноября 2001 г.) и тиоредоксины (заявка на патент США с серийным номером 10/005429, поданная 3 декабря 2001 г.)), раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки. Требуемые комбинации признаков также включают ЬРИС (низкое содержание линоленовой кислоты; см., например, Эуег. е! а1., (2002) Арр1. МютоЪю1. Вю!есЬпо1. 59:224-230) и ОЬСН (высокое содержание олеиновой кислоты; см., например, РегпапЬе/-Моуа, е! а1., (2005) 1. Адпс. Рооб СЬет. 53:5326-5330).

Вид Втакыса, раскрытый в данном документе, может дополнительно характеризоваться другими требуемыми признаками, такими как, например, гены детоксикации фумонизина (патент США № 5792931), гены авирулентности и устойчивости к заболеваниям (1опек, е! а1., (1994) §с1епсе 266:789; МагИп, е! а1., (1993) §с1епсе 262:1432; МшЬгшок, е! а1., (1994) Се11 78:1089), и признаками, требуемыми для обработки или получения продуктов, таких как модифицированные масла (например, гены десатуразы жирных кислот (патент США № 5952544; \УО 94/11516)); модифицированные разновидности крахмала (например, АИРС пирофосфорилазы (АСР-азы), крахмал-синтазы (δδ), крахмал-ветвящие ферменты (δΒΕ), и крахмал-деветвящие ферменты (δΌΒΕ)), и полимеры или биопластики (например, патент США № 5602321; бета-кетотиолаза, полигидроксибутиратсинтаза и ацетоацетил-СоА редуктаза (ЪсЬиЪеП, е! а1., (1988) 1. Βас!е^^ο1. 170:5837-5847), облегчающие экспрессию полигидроксиалканоатов (РНА)), раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки. Также можно комбинировать полинуклеотиды переносимости гербицида с полинуклеотидами, обеспечивающими агротехнические признаки, такие как мужская стерильность (например, см. патент США № 5583210), прочность стебля, время цветения, или признаки, связанные с техникой трансформации, такие как регуляция клеточного цикла или целенаправленное воздействие на гены (например, \УО 99/61619; \УО 00/17364; \УО 99/25821), раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки.

Эти пакетированные комбинации можно создавать любым способом, в том числе без ограничения скрещиванием растений с помощью любой традиционной методики или генетической трансформации. Если последовательности пакетированы с помощью генетической трансформации растений, то представляющие интерес полинуклеотидные последовательности можно комбинировать в любое время и в любом порядке. Признаки можно вводить одновременно в протоколе котрансформации с представляющими интерес полинуклеотидами, представленными любой комбинацией кассет трансформации. Например, если будут вводиться две последовательности, то эти две последовательности могут содержаться в отдельных кассетах для трансформации (транс) или содержаться в одной кассете для трансформации (цис). Экспрессия данных последовательностей может управляться одним промотором или различными промоторами. В определенных случаях может потребоваться введение кассеты для трансформации, которая будет подавлять экспрессию представляющего интерес полинуклеотида. Ее можно комбинировать с любой комбинацией других кассет супрессии или кассет сверхэкспрессии для получения требуемой комбинации признаков в растении. Кроме того, считается, что полинуклеотидные последовательности можно пакетировать в требуемом местоположении в геноме с применением системы для сайт-специфичной рекомбинации; см., например, №О99/25821, №О99/25854, №О99/25840, №О99/25855 и №О99/25853, все из которых включены в данный документ посредством ссылки.

Следует понимать, что используемый в данном документе термин трансгенный включает любую клетку, клеточную линию, каллюс, ткань, часть растения или растение, генотип которого был изменен в результате присутствия гетерологичной нуклеиновой кислоты, в том числе такие трансгенные объекты, которые исходно изменены таким образом, а также такие трансгенные объекты, которые созданы путем половых скрещиваний или бесполого размножения из исходного трансгенного объекта. Используемый в данном документе термин трансгенный не охватывает изменение генома (хромосомное или внехромосомное) с помощью традиционных способов селекции растений или встречающихся в природе событий, таких как случайное перекрестное опыление, инфекция, вызванная нерекомбинантным вирусом, трансформация нерекомбинантными бактериями, нерекомбинантная транспозиция или спонтанная мутация.

Трансформация относится к переносу фрагмента нуклеиновой кислоты в геном организмахозяина, что приводит к генетически стабильному наследованию. Организмы-хозяева, содержащие трансформированные фрагменты нуклеиновой кислоты, называются трансгенными организмами. Примеры способов трансформации растений включают трансформацию, опосредованную АдтоЪас!етшт (Ие Β^το, е! а1., (1987) Ме!Ь. Еп/уто1. 143:277), и техники трансформации с ускорением частиц или генной пушкой (К1е1п, е! а1., (1987) Иа!иге (Ьопбоп) 327:70-73; патент США № 4945050, включенные в данный документ посредством ссылки). Дополнительные способы трансформации раскрыты ниже.

Настоящее раскрытие предусматривает способы контроля сорняков в площадке возделывания, предотвращения развития или появления устойчивых к гербициду сорняков в площадке возделывания, производства сельскохозяйственной культуры и повышения безопасности сельскохозяйственной культуры. Термин контроль и его производные, например как в контроль сорняков, относится к одному или нескольким из подавления роста, прорастания, размножения и/или пролиферации сорняка, и/или унич- 14 028528 тожения, удаления, разрушения или иного уменьшения встречаемости и/или активности сорняка.

Используемая в данном документе площадка возделывания предусматривает любую область, в которой требуется выращивать растение. Такие площадки возделывания включают без ограничений поле, на котором возделывают растение (такое как нива, залежь, сад, управляемый лес, поле для возделывания фруктов и овощей и т.д.), теплица, вегетационная камера и т.д.

Если не указано иное, например, в конкретном эксперименте контроль, или контрольное растение, или контрольная растительная клетка обеспечивает точку отсчета для измерения изменений в фенотипе испытуемого растения или растительной клетки и может быть любым подходящим растением или растительной клеткой. Контрольное растение или растительная клетка могут представлять собой, например, (а) растение или растительную клетку дикого типа, т.е. с тем же генотипом, что и исходный материал для генетического изменения, которое приводит к испытуемому растению или клетке; (Ь) растение или растительную клетку с тем же генотипом, что и исходный материал, но которое было трансформировано нулевой конструкцией (т.е. конструкцией, которая не оказывает известного влияния на представляющий интерес признак, такой как конструкция, содержащая маркерный ген); (с) растение или растительную клетку, представляющие собой нетрансформированный сегрегант из числа потомства исследуемого растения или растительной клетки; (6) растение или растительную клетку, являющиеся генетически идентичными исследуемому растению или части растения, но которых не подвергают такой же обработке (например, обработке гербицидом), как исследуемое растение или растительную клетку; (е) само по себе исследуемое растение или растительную клетку в условиях, при которых представляющий интерес ген не экспрессируется; или (£) само по себе исследуемое растение или растительную клетку в условиях, при которых они не подвергаются конкретной обработке, как, например, гербицидом или комбинацией гербицидов и/или другими химическими веществами. В некоторых случаях подходящее контрольное растение или контрольная растительная клетка могут характеризоваться генотипом, отличным от исследуемого растения или растительной клетки, но могут иметь общие характеристики переносимости гербицида с исходным материалом для генетического (генетических) изменения(й), которое(ые) приводит(ят) к образованию исследуемого растения или клетки (см., например, Огееп, (1998) \Уееб ТесЬпо1оду 12:474-477; Огееп апб и1г1сН. (1993) \Уееб §с1епсе 41:508-516. В других вариантах осуществления в качестве контроля может применяться нуль-сегрегант, поскольку они являются генетически идентичными с ΌΡ-073496-4 за исключением трансгенной ДНК-вставки.

Классификация гербицидов (т.е. группировка гербицидов по классам и подклассам) хорошо известна в области техники и включает классификации от НКАС (Комитет по предупреждению резистентности к действию гербицидов) и ^§§А (Американское научное общество по борьбе с сорняками) (см. также, КеШпдег апб Ма11оту-§тйЬ, (1997) \Уееб ТесЬпо1оду 11:384-393). Сокращенную версию классификации от НКАС (с примечаниями, касающимися соответствующей группе по ^88А) можно найти в таблице 1 публикации международной РСТ заявки № РСТ/И82010/058011 (включенной в данный документ посредством ссылки).

Гербициды можно классифицировать по их механизму действия и/или участку приложения действия и также можно классифицировать по времени, в которое они вносятся (например, довсходовые или послевсходовые), по способу внесения (например, некорневое внесение или почвенное внесение) или по тому, каким образом они доставляются или воздействуют на растение. Например, тифенсульфуронметил и трибенурон-метил вносят на листья сельскохозяйственной культуры и они, в основном, там метаболизируются, тогда как римсульфурон и хлоримурон-этил, в основном, доставляются как через корни, так и через листья растения. Механизм действия в целом относится к метаболическому или физиологическому процессу в растении, который гербицид подавляет или по-иному нарушает, тогда как участок приложения действия в целом относится к физическому местоположению или биохимическому сайту в растении, на которые действует гербицид или с которыми он непосредственно взаимодействует. Гербициды можно классифицировать различными способами, в том числе по механизму действия и/или участку приложения действия.

Зачастую ген устойчивости гербицида, который приводит к толерантности к конкретному гербициду или другому химическому веществу у растения, экспрессирующего его, будет также приводить к толерантности к другим гербицидам или химическим веществам того же класса или подкласса, изложенным в сокращенной версии системы классификации от НКАС (см. табл. 1; международная патентная РСТ заявка № РСТ/и§2010/058011, включенная в данный документ посредством ссылки).

В определенных способах глифосат, отдельно или в комбинации с другим представляющим интерес гербицидом, можно вносить на растения Вгаккюа или их площадку возделывания. Неограничивающие примеры глифосатных составов изложены в табл. 1.

- 15 028528

Сравнение глифосатных составов

Таблица 1

Гербицид согласно зарегистрированной торговой марке	Производитель	Соль	Активного ингредиента на галлон	Кислотного эквивалента на галлон	Внесение: жидких унций/акр	Кислотного эквивалента на галлон
Коипбир Опдша1	Моп8ап1о	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
Коипбир Опдша1 II	Моп8ап1о	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
Коипбир Опдша1 МАХ	Моп8ап1о	Калиевая	5,5	4,5	22	0,773
Коипбир ЦЦгаМах	Моп8ап1о	Изопропиламинная	5	3,68	26	0,748
Коипбир ЦЦгаМах II	Моп8ап1о	Калиевая	5,5	4,5	22	0,773
Коипбир \Уеа!Ьегтах	Моп8ап1о	Калиевая	5,5	4,5	22	0,773
ТоисМоип	8у η цеп 1а	Диаммониевая	3,7	3	32	0,750
ТоисМои п Ηί ТесН	8упцеп1а	Калиевая	6,16	5	20	0,781
ТоисМои п То1а1	8упцеп1а	Калиевая	5,14	4,17	24	0,782
ГЭигапцо	Ρο\ν АцгоЗспепсез	Изопропиламинная	5,4	4	24	0,750
СПурЬотах	Ρο\ν АцгоЗспепсез	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
СПурЬотах Р1иа	Ρο\ν АцгоЗспепсез	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
СПурЬотах X КТ	Ρο\ν АцгоЗспепсез	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
О1у 8!аг Р1иа	А1НапцН/Ацп 8!аг	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
О1у 8!аг 5	А1НапцН/Ацп 8!аг	Изопропиламинная	5,4	4	24	0,750
О1у 81аг Ог1Ц1па1	А1НапцН/Ацп 8!аг	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
С1у-Р1о	М]сго Е1о	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
СгесЬ!	ΝπΗιγπι	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
Сгес1Ь Ех1га	ΝπΗιγπι	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
СгесЬ! Рио	ΝιιΙ'ηγπι	Изопропиламинная + моноаммониевая	4	3	32	0,750
СгесЬ! Рио Ех!га	ΝιιΙ'ηγπι	Изопропиламинная + моноаммониевая	4	3	32	0,750
Ех!га СгесЬ!	ΝιιΙ'ηγπι	Изопропиламинная	5	3,68	26	0,748
Согпег81опе	АцпНапсе	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
Согпег81опе Р1и8	АцпНапсе	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
С1у1о8	СЬепйпоуа	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
С1у 1о8 Х-ТКА	СЬепйпоуа	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
КаЫег	Не1епа	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
КаЫег Р1и8	Не1епа	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
МЬаце	СТАР	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
МЬаце Р1и8	СТАР	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
С1урЬо8а1е 41%	Не1т Адго Ц8А	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
Виссапеег	Тепког	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
Виссапеег Р1и8	Тепког	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
НопсЬо	Моп8ап1о	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
НопсЬо Р1и8	Моп8ап1о	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
С1у-4	Цшу.Сгор Рго!. А11	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
С1у-4 Р1и8	Цшу.Сгор Рго!. А11	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
С1еагОи! 41	СЬепйса1 Ргос1ис18 ТесЬ.	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
С1еагОи! 41 Р1и8	СЬепйса1 Ргос1ис18 ТесЬ.	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
δρίΐίίτβ	Соп!го1 δοϊιιΐίοπδ	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
8рййге РЬт8	Соп!го1 5о1и!юп8	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
С1урЬо8а1е 4	Рагтег8ауег.сот	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
Е8 С1урЬо8а1е РЬт8	Сго\утагк	Изопропиламинная	4	3	32	0,750
С1урЬо8а1е ΟιΊίτί па!	Οήίίίη, ЬЬС	Изопропиламинная	4	3	32	0,750

Другие подходящие гербициды и химические вещества для сельского хозяйства известны в данной области техники, такие как, например, описанные в ШО 2005/041654. Другие гербициды также включают биогербициды, такие как АНегпапа бе81гиеп8 §1ттоп8, Со11е1о1псНит §1оео8ропоб.е8 (Ρβηζ.) Ρβπζ. апб 8асс, ПгесЙ81ега топосега8 (МТВ-951), Муго1йесшт уегтсапа (А1Ъегйт & 8τ1ι\\τ'ΐηιΙζ) Эйтаг: Рпе8, Рйу1орй1йога ра1т1уога (Вий.) Вий. и Рисшта 1й1а8рео8 8сйиЬ. Комбинации различных гербицидов могут приводить к эффекту большему, чем аддитивный (т.е. синергическому), в отношении сорняков и/или эффекту, меньшему, чем аддитивный (т.е. эффекту антидота), в отношении сельскохозяйственных культур или других требуемых растений. В определенных случаях комбинации глифосата с другими гербицидами, имеющими подобный спектр контроля, но отличающийся механизм действия, будут особо предпочтительными для предотвращения развития устойчивых сорняков.

Способы дополнительно включают нанесение на сельскохозяйственную культуру и сорняки в поле достаточного количества по меньшей мере одного гербицида, который могут переносить семена и растения сельскохозяйственной культуры, такого как, например, глифосат, ингибитор гидроксифенилпируватдиоксигеназы (например, мезотрион или сулькотрион), ингибитор фитоен-десатуразы (например, дифлуфеникан), ингибитор синтеза пигмента, сульфонамид, имидазолинон, биалафос, фосфинотрицин, азафендик, бутаяенацил, сульфосат, глуфосинат, триазолопиримидин, пиримидинилокси(тио)бензоат или сулониламинокарбонилтриазолинон, ингибитор ацетил-Со-А- карбоксилазы, такой как квизалафоп-Рэтил, синтетический ауксин, такой как квинклорак, ΚΙΗ-485 или ингибитор рго!ох для контроля сорняков без нанесения существенного вреда культурным растениям.

В целом эффективное количество гербицида, вносимого на поле, является достаточным для селективного контроля сорняков без значительного воздействия на сельскохозяйственную культуру. Исполь- 16 028528 зуемый в данном документе сорняк относится к растению, которое является нежелательным на конкретном участке. Напротив, используемое в данном документе культурное растение относится к растению, которое является желательным на конкретном участке, такому как, например, растение Вта88юа. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления сорняк представляет собой растение, не являющееся культурным растением, или вид, не являющийся культурным видом. Сорняки можно классифицировать на две основные группы: однодольные растения и двудольные растения.

Многие виды растений можно контролировать (т.е. уничтожать или повреждать) при помощи гербицидов, описанных в данном документе. Соответственно способы по настоящему изобретению пригодны в борьбе с этими видами растений, где они являются нежелательными (т.е. где они представляют собой сорняки). Эти виды растений включают культурные растения, а также виды, обычно считаемые сорняками, в том числе без ограничения виды, такие как лисохвост мышехвостниковидный (Л1оресиги8 туО8игсн0с8). щетинник гигантский (Зе1апа ГаЬеп), росичка кроваво-красная (ОфИапа 8апдшпаЬ8), суринамская трава (ВгасЫапа ДеситЬеп8), овес дикий (Луеиа Га!иа), дурнишник пенсильванский (ХайЫит реп8у1уатсит), марь белая (СЬепороДшт а1Ьит), ипомея (1ротоеа сосстеа), амарант (ЛтагайЬи8 8рр.), канатник Теофраста (ЛЬиШюи 1НеорНга811), ежовник обыкновенный (ЕсЫпосЫоа сти8-даШ), бермудская трава (СупоДоп 4ас!у1оп), костер кровельный (Вготи8 1есЮгит), элевсина индийская (Е1еи8ше шФса), щетинник зеленый (§е1апа νίτίάί8), плевел многоцветковый (ЬоЬит тиШЯогит), джонсонова трава (ЗогдЬит Ьа1ереп8е), канареечник (ТЬа1ап8 ттог), метлица обыкновенная (Арега 8рюа^епЬ), шерстяк мохнатый (ЕпсЬ1оа νШо8а), сыть съедобная (Суреги8 е8си1еп1и8), звездчатка средняя (§1е11аг1а теФа), амброзия полыннолистная (АтЬго81а айет18иГоЬа), КосЫа 8сорапа, мелколепестник канадский (Сопу/а сапа0еп818), плевел жесткий (ЬоЬит пдИит), элевсина индийская (Е1еисше ш4юа), мелколепестник ворсистый (Сопу/а Ьопапеп818), подорожник ланцетолистный (Иайадо 1апсео1а1а), коммелина бенгальская (СоттеЬпа ЬепдЬа1еп818), вьюнок полевой (Со^оки1и8 аг\'еп818), сыть круглая (Суреги8 го1ипйи8), брунишия (ВтиптсЫа оνаΐа), сесбания рослая (Зе8Ьата ехаЬа!а), сенна туполистная (Зеппа оЫшГоЬа), подсолнечник реснитчатый (НеЬайЬи8 сШат18) и пробосцидея луизианская (Ρ^оЬо8С^άеа 1ош81атса). В других вариантах осуществления сорняк включает плевел с устойчивостью к гербициду, например плевел с устойчивостью к глифосату, плевел с устойчивостью к параквату, плевел с устойчивостью к ингибитору АСС-азы и плевел с устойчивостью к неселективному гербициду. В некоторых вариантах осуществления нежелательные растения находятся в непосредственной близости от культурных растений.

В некоторых вариантах осуществления растение Вга88юа по настоящему раскрытию незначительно повреждается при обработке глифосатом, вносимым на такое растение в дозе, эквивалентной норме по меньшей мере 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 150, 170, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1800, 2000, 2400, 3000, 3600, 4000, 4500, 5000, 5400 или более граммов или унций (1 унция = 29,57 мл) активного ингредиента, и коммерческого продукта, или гербицидного состава на акр или на гектар, в то время как соответствующее контрольное растение значительно повреждается под действием той же обработки.

В варианте осуществления Вга88юа с переносимостью глифосата находится на стадии роста, которая следует после стадии 6 листьев. В варианте осуществления Вга88юа с переносимостью глифосата находится на стадии роста первого цветка (ВВСН 60). В варианте осуществления Вга88юа с переносимостью глифосата находится на стадии роста 10% открытых цветков (ВВСН 61). В варианте осуществления Вга88юа с переносимостью глифосата находится на стадии роста 10% открытых цветков (ВВСН 71). В варианте осуществления внесение глифосата осуществляют приблизительно за 7-10 дней перед уборкой урожая.

Эффективное количество гербицида ингибитора АЬЗ включает по меньшей мере приблизительно 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 или более граммов или унций (1 унция= 29,57 мл) активного ингредиента на гектар. В других вариантах осуществления эффективное количество ингибитора АЬЗ включает по меньшей мере приблизительно 0,1-50, приблизительно 25-75, приблизительно 50-100, приблизительно 100-110, приблизительно 110-120, приблизительно 120-130, приблизительно 130-140, приблизительно 140-150, приблизительно 150-200, приблизительно 200-500, приблизительно 500-600, приблизительно 600-800, приблизительно 800-1000 или более граммов или унций (1 унция = 29,57 мл) активного ингредиента на гектар. Множество ингибиторов АЬЗ можно вносить на этих уровнях.

Эффективное количество сульфонилмочевины включает по меньшей мере 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 5000 или более граммов или унций (1 унция = 29,57 мл) активного ингредиента на гектар. В других вариантах осуществления эффективное количество сульфонилмочевины включает по меньшей мере приблизительно 0,1-50, приблизительно 2575, приблизительно 50-100, приблизительно 100-110, приблизительно 110-120, приблизительно 120-130, приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно

130-140,

170-180,

300-350,

500-550, приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно

140-150,

190-200,

350-400,

550-600, приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно

150-160, приблизительно 160-170, 200-250, приблизительно 250-300, 400-450, приблизительно 450-500, 600-650, приблизительно 650-700, приблизительно 700-800, приблизительно 800-900, приблизительно 900-1000, приблизительно 1000-2000

- 17 028528 или более граммов или унций (1 унция = 29,57 мл) активного ингредиента на гектар. Множество сульфонилмочевин можно вносить на этих уровнях.

Эффективное количество сульфониламинокарбонилтриазолинонов, триазолопиримидинов, пиримидинилокси(тио)бензоатов и имидазолинонов может включать по меньшей мере приблизительно 0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1500, 1550, 1600, 1650, 1700, 1800, 1850, 1900, 1950, 2000, 2500, 3500, 4000, 4500, 5000 или более граммов или унций (1 унция = 29,57 мл) активного ингредиента на гектар. В других вариантах осуществления эффективное количество сульфониламинокарбонилтриазолинов, триазолопиримидинов, пиримидинилокси(тио)бензоатов или имидазолинонов включает по меньшей мере приблизительно 0,1-50, приблизительно 25-75, приблизительно 50-100, приблизительно 100-110, приблизительно 110-120, приблизительно 120-130, приблизительно 130-140, приблизительно 140-150, приблизительно 150-160, приблизительно 160-170, приблизительно 170-180, приблизительно 190-200, приблизительно 200-250, приблизительно 250-300, приблизительно 300-350, приблизительно 350-400, приблизительно 400-450, приблизительно 450-500, приблизительно 500-550, приблизительно 550-600, приблизительно 600-650, приблизительно 650-700, приблизительно 700-800, приблизительно 800-900, приблизительно 900-1000, приблизительно 1000-2000 или более граммов или унций (1 унция = 29,57 мл) активного ингредиента на гектар.

Дополнительные диапазоны эффективных количеств гербицидов можно найти, например, в различных публикациях университетских служб внедрения достижений; см., например, Вегпагк8, с1 а1., (2006) Ошке Гог Уеек Мападетей ίη №Ъга8ка (\у\у\уаапгриЪ8.иг1.еки/8епкк/ес130); Кедкег, е1 а1., (2005) Скет1са1 Уеек Сойго1 Гог Не1к8 Сгор8, Ρа8ΐи^е8, Капде1апк, апк Ыопсгор1апк, Кап8а8 81а1е ишуегеку Лдпсикипк Ех1еп81оп §1акоп апк Согрога1е Е.х1еп8юп §егу1се; 2оШпдег, е1 а1., (2006) ЧоПк Эако1а Уеек Сойго1 Ошке, ЧоПк Эако1а Ех1еп8юп §егу1се апк 1ке 1о\уа 51а1е Ийуегеку Е.х1еп8юп на \у\у\у.\уеек8аа81а1е.еки. каждый из который включен в данный документ посредством ссылки.

В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия глифосат вносят на площадку возделывания и/или по меньшей мере на одно растение на площадке возделывания из расчета норм 8-32 унции кислотного эквивалента на акр, или из расчета норм от 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 до 30 унций кислотного эквивалента на акр на нижнем пределе диапазона внесения и от 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30 до 32 унций кислотного эквивалента на акр на верхнем пределе диапазона внесения (1 унция = 29,57 мл). В других вариантах осуществления глифосат вносят по меньшей мере из расчета 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или более унций активного ингредиента на гектар (1 унция = 29,57 мл). В некоторых вариантах осуществления настоящего раскрытия гербицид на основе сульфонилмочевины вносят на поле и/или по меньшей мере на одно растение в поле из расчета норм от 0,04 до 1,0 унции активного ингредиента на акр или из расчета норм от 0,1, 0,2, 0,4, 0,6 до 0,8 унции активного ингредиента на акр на нижнем пределе диапазона внесения и от 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 до 1,0 унции активного ингредиента на акр на верхнем пределе диапазона внесения (1 унция = 29,57 мл). В некоторых вариантах осуществления, как описано в данном документе, глифосатное средство обработки при необходимости можно вносить на поздней стадии развития канолы для контроля сорняков.

Как известно в данной области техники, гербициды на основе глифосата, как класс, содержат один активный ингредиент, однако активный ингредиент присутствует в виде одного из ряда различных солей и/или составов. Однако гербициды, которые, как известно, ингибируют ЛЬ§, варьируют по своему активному ингредиенту, а также их химическим составам. Специалист в данной области знаком с определением количества активного ингредиента и/или кислотного эквивалента, присутствующего в конкретном объеме, и/или веса гербицидного препарата.

Используют гербицид ингибитор ЛЬ§. Нормы, при каких гербицид ингибитор ЛЬ§ вносят на сельскохозяйственную культуру, часть сельскохозяйственной культуры, семя или площадку возделывания, могут представлять собой любые из норм, раскрытых в данном документе. В конкретных вариантах осуществления норма для гербицида ингибитора ЛЬ§ составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 5000 г а.и./га, от приблизительно 0,5 до приблизительно 300 г а.и./га или от приблизительно 1 до приблизительно 150 г а.и./га.

В целом конкретный гербицид вносят на конкретное поле (и любые растения, растущие на нем) не больше 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 раз в год или не больше 1, 2, 3, 4 или 5 раз за вегетационный период.

Под обработанный комбинацией или внесением комбинации гербицидов на сельскохозяйственную культуру, площадку возделывания или поле подразумевается, что конкретное поле, сельскохозяйственная культура или сорняк обрабатывают каждым из гербицидов и/или химических веществ, для которых указано, что они являются частью комбинации, чтобы достигнуть требуемого эффекта, т.е. чтобы сорняки подвергались селективному контролю, в то же время сельскохозяйственная культура повреждалась незначительно. В некоторых вариантах осуществления сорняки, которые являются восприимчивыми к каждому из гербицидов, проявляют повреждение в результате обработки каждым из гербицидов, который является аддитивным или синергическим. Внесение каждого гербицида и/или химического вещества может происходить одновременно или внесения могут происходить в разное время при условии, что требуемый эффект достигается. Кроме того, внесение может происходить до высаживания сельско- 18 028528 хозяйственной культуры.

Аддитивная гербицидная композиция характеризуется гербицидной активностью, которая приблизительно равна наблюдаемым активностям индивидуальных компонентов. Синергическая гербицидная комбинация обладает более высокой гербицидной активностью, чем можно было ожидать, исходя из наблюдаемых активностей индивидуальных компонентов при использовании по отдельности. Соответственно раскрытый в данном документе объект изобретения предусматривает синергическую гербицидную комбинацию, где степень контроля сорняков смеси превышает сумму контролей индивидуальных гербицидов. В некоторых вариантах осуществления степень контроля сорняков смеси превышает сумму контролей индивидуальных гербицидов на статистически значимую величину, в том числе, например, от приблизительно 1 до 5%, от приблизительно 5 до приблизительно 10%, от приблизительно 10 до приблизительно 20%, от приблизительно 20 до приблизительно 30%, от приблизительно 30 до 40%, от приблизительно 40 до приблизительно 50%, от приблизительно 50 до приблизительно 60%, от приблизительно 60 до приблизительно 70%, от приблизительно 70 до приблизительно 80%, от приблизительно 80 до приблизительно 90%, от приблизительно 90 до приблизительно 100%, от приблизительно 100 до 120% или больше. Кроме того, синергически эффективное количество гербицида относится к количеству одного гербицида, необходимому для вызывания синергического эффекта у другого гербицида, присутствующего в гербицидной композиции. Таким образом, термин синергист и его производные относятся к веществу, которое усиливает активность активного ингредиента (а.и.), т.е. вещества в составе, за счет которого получают биологический эффект, например, гербицида.

Для контроля нежелательных растений глифосат можно вносить до появления всходов, после появления всходов или до и после появления всходов на нежелательные растения или культурные растения, и/или гербицид ингибитор Ай§ (т.е. гербицид на основе сульфонилмочевины) вносят до появления всходов, после появления всходов или до и после появления всходов на нежелательные растения или культурные растения. В других вариантах осуществления глифосат и/или гербицид ингибитор Ай§ (т.е. гербицид на основе сульфонилмочевины) вносят вместе или вносят по отдельности. В еще одних вариантах осуществления синергическую гербицидную композицию вносят, например, на стадии (Ь), выше, по меньшей мере один раз перед высаживанием представляющей(их) интерес сельскохозяйственной(ых) культуры (культур), например, на стадии (а), выше.

Сорняки, которые может быть трудно контролировать с помощью только глифосата в полях, где выращивают сельскохозяйственную культуру (такую как, например, сельскохозяйственная культура Втаккюа), включают без ограничения следующие: мелколепестник канадский (например, Сопу/а сапайепык); плевел жесткий (например, Ьойит Т1§1йит); элевсина индийская (например, Е1еикше шйюа); плевел многоцветковый (например, Ьойит тиШйогит); мелколепестник ворсистый (например, Сопу/а Ьопапепык); подорожник ланцетолистный (например, Р1айадо 1апсео1а1а); амброзия полыннолистная (например, АтЬтоыа агЮппкйоПа); ипомея (например, 1ротоеа крр.); амарант (например, Атагапйшк крр.); вьюнок полевой (например, Сопуо1уи1ик агуепык); сыть съедобная (например, Сурегик екси1еп!ик); соттоп марь белая (например, Сйепоройшт а1Ьит); горец вьюнковый (например, Ро1удопшт сопуо1уи1ик); канатник Теофраста (например, АЬий1оп йюорйгакй); кохия (например, Кос1йа ксорапа) и коммелина (например, Соттейпа крр.). На участках, где обнаруживаются такие сорняки, растения Втаккюа с переносимостью другого гербицида являются особенно пригодными, поскольку обеспечивают возможность обработки поля (и, следовательно, любой сельскохозяйственной культуры, выращиваемой в поле) комбинациями гербицидов, которые будут вызывать неприемлемое повреждение культурных растений, которые не содержат обоих этих полинуклеотидов. Растения по настоящему раскрытию с преносимостью глифосата и других гербицидов, таких как, например, гербициды на основе сульфонилмочевины, имидахолинона, триазолопиримидина, пиримидинил(тио)бензоата и/или сульфониламинокарбонилтриазолинона, в дополнение характеризующиеся переносимостью по меньшей мере одного другого гербицида с другим механизмом действия или участком приложения действия, являются особенно пригодными в ситуациях, если сорняки характеризуются переносимостью по меньшей мере двух из тех же гербицидов, переносимостью которых характеризуются растения. Таким образом, растения по настоящему раскрытию создают возможность улучшенного контроля сорняков, которые характеризуются переносимостью нескольких гербицидов.

Другие широкоприменяемые средства обработки для контроля сорняков в полях, где выращивают современные коммерческие разновидности сельскохозяйственных культур (в том числе, например, растения Втаккюа), включают гербицид тифенсульфурон-метил на основе сульфонилмочевины (коммерчески доступен как Нагтопу СТ®). Однако одним недостатком тифенсульфурон-метила является то, что высокие нормы внесения, требуемые для стабильного контроля сорняков, часто вызывают повреждения сельскохозяйственной культуры, растущей в том же поле. Растения Втаккюа, характеризующиеся дополнительной переносимостью (в дополнение к глифосату), можно обрабатывать комбинацией глифосата и тифенсульфурон-метила, которые имеют преимущество, связанное с применением гербицидов с различными механизмами действия. Таким образом, сорняки, которые характеризуются переносимостью каждого гербицида по отдельности, контролируют комбинацией двух гербицидов, и улучшенные САТ1растения Втаккюа не будут значительно повреждаться в результате обработки.

- 19 028528

Другими гербицидами, которые применяют для контроля сорняков в полях, где выращивают современные коммерческие разновидности сельскохозяйственных культур (в том числе, например, растения Вга881са), являются гербицид на основе триазолопиримидина клорансулам-метил (коммерчески доступен как Рп81Ка1е®) и гербицид на основе имидазолинона имазаквин (коммерчески доступен как §серΙογ® ). Когда эти гербициды применяют по отдельности, они могут обеспечивать только минимальный контроль сорняков. Однако коммерческие разновидности сельскохозяйственных культур можно обрабатывать, например, комбинацией глифосата (например, Ροιιηύιιρ®® (изопропиламинная соль глифосата)), имазапира (в настоящее время коммерчески доступен как Аг8епа1®), хлоримурон-этила (в настоящее время коммерчески доступен как С1а881с®), квизалофоп-Р-этила (в настоящее время коммерчески доступен как Аззиге II®) и фомесафена (в настоящее время коммерчески доступен как Р1ехз1аг®). Эта комбинация имеет преимущество, связанное с применением гербицидов с различными механизмами действия. Таким образом, сорняки, характеризующиеся переносимостью только одного или нескольких из этих гербицидов, контролируются комбинацией из пяти гербицидов. Эта комбинация обеспечивает очень широкий спектр защиты от типа сорняков с переносимостью гербицида, которые, как можно ожидать, будут появляться и распространяться при современной практике контроля сорняков.

Поля, содержащие растения ВгаЧса с переносимостью, обусловленной метаболизированием глифосата, с переносимостью дополнительного гербицида также можно обрабатывать, например, комбинацией гербицидов, включающей глифосат, римсульфурон и дикамба или мезотрион. Эта комбинация может быть особенно пригодной при контроле сорняков, у которых развилась некоторая переносимость гербицидов, которые ингибируют АЬ§. Другая комбинация гербицидов, которая может быть особенно пригодной для контроля сорняков, включает глифосат и по меньшей мере один из следующих: метсульфурон-метил (коммерчески доступен как А11у®), имазапир (коммерчески доступен как Аг8епа1®), имазетапир, имазаквин и сульфентразон. Понятно, что любую из комбинаций, обсуждаемых выше или гделибо в данном документе, также можно применять для обработки участков в комбинации с любым другим гербицидом или веществом для применения в сельском хозяйстве.

Некоторые широко применяемые средства обработки для контроля сорняков в полях, где выращивают современные коммерческие сельскохозяйственные культуры (в том числе, например, ВгаЧса), включают глифосат (в настоящее время коммерчески доступен как Κουηάυρ®), римсульфурон (в настоящее время коммерчески доступен как Кебюке® или Ма1п.х®), дикамбу (коммерчески доступна как С1аг11у®), атразин и мезотрион (коммерчески доступен как СаШзЮ®). Эти гербициды иногда применяют по отдельности из-за слабой переносимости сельскохозяйственной культурой нескольких гербицидов. К сожалению, при применении по отдельности каждый из этих гербицидов имеет значительные недостатки. В частности, частота встречаемости сорняков, которые характеризуются переносимостью индивидуальных гербицидов, продолжает возрастать, что делает глифосат менее эффективным, чем требуется в некоторых ситуациях. Римсульфурон обеспечивает лучший контроль сорняков при высоких дозах, которые могут вызвать повреждения у сельскохозяйственной культуры, а альтернативы, такие как дикамба, зачастую являются более дорогими, чем другие широко применяемые гербициды.

Некоторые широко применяемые средства обработки для контроля сорняков в полях, где выращивают современные коммерческие сельскохозяйственные культуры, включают глифосат (в настоящее время коммерчески доступен как Κουηάυρ®), хлоримурон-этил, трибенурон-метил, римсульфурон (в настоящее время коммерчески доступен как Кебюке® или Ма1п.х®), имазетапир, имазапир и имазаквин. К сожалению, при применении по отдельности каждый из этих гербицидов имеет значительные недостатки. В частности, частота встречаемости сорняков, которые характеризуются переносимостью индивидуальных гербицидов, продолжает возрастать, что делает каждый индивидуальный гербицид менее эффективным, чем требуется в некоторых ситуациях. Однако растения Вгаззюа, которые характеризуются переносимостью глифосата благодаря экспрессии метаболизирующего глифосат фермента, такого как ОАТ, в комбинации с дополнительным признаком переносимости гербицида, можно обрабатывать комбинацией гербицидов, которые вызвали бы неприемлемое повреждение стандартной разновидности растения, в том числе комбинациями гербицидов, которые включают по меньшей мере один из упомянутых выше.

Различные комбинации гербицидов, фунгицидов и/или инсектицидов можно вносить с глифосатом вплоть до стадии уборки урожая канолы или по меньшей мере до стадии 10% цветков. Они включают, без ограничений, гербициды Εοηίΐΐΐ® (активный ингредиент клопиралид), клетодим (в настоящее время коммерчески доступен как 5е1ес1®, Сейшюп®), Εςυίηοχ® (тепралоксидим), Ми81ег® (этаметсульфуронметил) и Ρο38ΐ и11га® (сетоксидим). Эти фунгициды включают без ограничений Ьапсе® (боксалид), Рго1ше® (протиоконазол), УеШзап™, НеаЛше®, ΛδΙουηά®, ТШ®/пропиконазол, Риайг18®/азоксистробин, ипродионы (в настоящее время коммерчески доступны как Κονπιΐ®), ОиазИ®, Зегепайе® Мах™ (ВасШиз зиЫШз) и Λсаρе1а™. Эти инсектициды включают без ограничений ΡοΓδ^-ηι®, Оешз®, лямбда-цигалотрин (в настоящее время коммерчески доступен как Ма1а4сг®), диметоат (в настоящее время коммерчески доступен как Ьа^п® или Су^п®), циперметрин (Κίρ^τά®), малатион, Мοη^ΐο^®, перметрин (Ροиηсе®),

- 20 028528 δеν^η® ХЬК Р1и5, Сон-щеп®® и Βеηеν^а®.

Гербицид можно составлять и вносить на представляющий интерес участок, такой как, например, поле или площадка возделывания, любым подходящим способом. Гербицид можно вносить на поле в любой форме, такой как, например, раствор для распыления, или в виде твердого порошка или гранул. В конкретных вариантах осуществления гербицид или комбинация гербицидов, которые используются в способах, предусматривает баковую смесь или премикс. Гербицид также можно составлять, например, в виде гомогенной смеси гранул, полученной с применением технологии приготовления смесей (см., например, патент США № 6022552 под названием Однородные смеси пестицидных гранул (Ит&гш М1х1иге5 ο£ Ре5Йс1бе Сгапи1е5)). Технология приготовления смесей из патента США № 6022552 позволяет производить нерасслаивающуюся смесь (т.е. гомогеннную смесь гранул) составленных химических веществ для защиты сельскохозяйственной культуры в форме сухих гранул, которая делает возможной доставку индивидуальных смесей, разработанных для решения специальных проблем. Гомогенную смесь гранул можно транспортировать, обрабатывать, дополнительно разделять и вносить таким же способом, что и традиционные премикс-продукты, в которых несколько активных ингредиентов составлены в одной грануле.

Любой гербицидный состав, вносимый на САТ1-растение Вга551са, можно готовить в виде композиции для получения баковой смеси. В таких вариантах осуществления каждый ингредиент или комбинацию ингредиентов можно хранить отдельно друг от друга. Затем ингредиенты можно смешивать друг с другом перед внесением. Как правило, такое смешивание происходит незадолго перед внесением. При процессе приготовления баковой смеси каждый ингредиент перед смешиванием, как правило, находится в воде или подходящем органическом растворителе. Дополнительные рекомендации касательно технологии составления см. в Шοοб5, Тке ΡοπηιιΡιΙοΓ® ^ο^χ-Φτού^! Ροπη5 Γογ Μο®2ΓΠ АдпсиКиге Ре5Йс1бе Скеш15!гу апб Вю5аепсе, Тке Ροοб-Εην^^οηшеη! Ска11епде, Β^οοк5 апб ^ЪегК Еб5., Ргосеебшд5 ο£ !ке 9!к Iη!е^ηаί^οηа1 Со1щге55 οη Ре5Йс1бе Скеш15!гу, Тке Κο\χι1 δο^Κ ο£ Скеш15!гу, СашЪпбде, 1999, р. 120-133; см. также патент США № 3235361, от столбца 6, строки 16 до столбца 7, строки 19, и примеры 10-41; патент США № 3309192, от столбца 5, строки 43 до столбца 7, строки 62, и примеры 8, 12, 15, 39, 41, 52, 53, 58, 132, 138-140, 162-164, 166, 167 и 169-182; патент США № 2891855, от столбца 3, строки 66 до столбца 5, строки 17, и примеры 1-4; КНпдшап, Шееб Сοη!^ο1 а5 а δс^еηсе, 6ο1ιι'1 Шбеу апб δο^, 1пс., №\ν ΥογΚ 1961, р. 81-96, и Напсе, е! а1., Шееб Соп1го1 НаηбЪοοк, 8!к Еб., В1аск\уе11 δс^еηι^Γ^с РиЪ1юа1юп5, Охйэгб, 1989, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки в своей полноте.

Способы по настоящему раскрытию дополнительно создают возможность для разработки гербицидных комбинаций для применения с растениями Вга55юа. В таких способах оцениваются условия окружающей среды на площадке возделывания. Условия окружающей среды, которые можно оценивать, включают без ограничений проблемы загрязнения грунтовых и поверхностных вод, предполагаемое применение сельскохозяйственной культуры, переносимость, присущую сельскохозяйственной культуре, остаточные содержания в почве, сорняки, присутствующие на площадке возделывания, механический состав почвы, рН почвы, количество органического вещества в почве, оборудование для внесения и приемы механической обработки почвы. После оценки условий окружающей среды эффективное количество комбинации гербицидов можно вносить на сельскохозяйственную культуру, часть сельскохозяйственной культуры, семя сельскохозяйственной культуры или площадку возделывания.

Гербицид, вносимый на растения Вга55юа по настоящему раскрытию, служит для предотвращения начала роста восприимчивых сорняков и/или служит для нанесения повреждений у сорняков, произрастающих на представляющем интерес участке. В некоторых вариантах осуществления гербицид или гербицидная смесь оказывают такие эффекты на сорняки, поражающие сельскохозяйственные культуры, которые затем высаживают в представляющем интерес участке (т.е. поле или площадке возделывания). В способах по настоящему раскрытию внесение комбинации гербицидов не должно происходить в одно и то же время. При условии, что в поле, на котором посажена сельскохозяйственная культура, содержатся обнаруживаемые количества первого гербицида, и второй гербицид вносят в какой-то момент в течение периода, в котором сельскохозяйственная культура находится на площадке возделывания, считается, что сельскохозяйственная культура была обработана смесью гербицидов по настоящему раскрытию. Таким образом, способы по настоящему раскрытию охватывают внесение гербицидов, которые являются довсходовыми, послевсходовыми, с предпосевной заделкой и/или которые предусматривают обработку семян перед высаживанием.

Довсходовый относится к гербициду, который вносят на представляющий интерес участок (например, поле или площадку возделывания) перед тем, как растение явно появится над поверхностью почвы. Послевсходовый относится к гербициду, который вносят на участок после того, как растение явно появится над поверхностью почвы. В некоторых случаях термины довсходовый и послевсходовый используются в отношении сорняка на представляющем интерес участке, и в некоторых случаях эти термины используются в отношении культурного растения на представляющем интерес участке. При использовании в отношении сорняка, эти термины можно применять только для конкретного типа сорняка или вида сорняка, который присутствует или, как полагают, присутствует на представляющем интерес участке. Несмотря на то что любой гербицид можно вносить в довсходовом и/или послевсходовом

- 21 028528 средстве обработки, некоторые гербициды, как известно, являются более эффективными в контроле сорняка или сорняков при внесении либо до появления всходов, либо после появления всходов. Например, римсульфурон характеризуется как довсходовой, так и послевсходовой активностью, тогда как другие гербициды характеризуются преимущественно довсходовой (метолахлор) или послевсходовой (глифосат) активностью. Эти свойства конкретных гербицидов известны из уровня техники и их легко определит специалист в данной области. Кроме того, специалист в данной области с легкостью сможет выбрать подходящие гербициды и время внесения для применения с трансгенными растениями по настоящему раскрытию и/или на участках, на которых трансгенные растения по настоящему раскрытию планируют посадить. Предпосевная заделка предусматривает заделку соединений в почву перед высаживанием.

Таким образом, в настоящем раскрытии предусмотрены улучшенные способы выращивания сельскохозяйственной культуры и/или контроля сорняков. В настоящем раскрытии также предусмотрены способы выращивания сельскохозяйственной культуры и/или контроля сорняков, при этом они представляют собой способы без обработки почвы или с неглубокой обработки почвы (также называемые минимальная обработка почвы). В таких способах почву не возделывают или возделывают менее часто во время цикла выращивания по сравнению с традиционными способами; эти способы могут экономить средства, которые в ином случае затрачивались бы из-за дополнительного возделывания, включая трудозатраты и затраты на топливо.

Способы по настоящему раскрытию охватывают применение одновременных и/или последовательных внесений нескольких классов гербицидов. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему раскрытию предусматривают обработку растения по настоящему раскрытию, и/или представляющего интерес участка (например, поля или площадки возделывания), и/или сорняка только одним гербицидом или другим химическим веществом, таким как, например, гербицид глифосат.

Время, в которое гербицид вносят на представляющий интерес участок (и любые растения на нем), может быть важным для оптимизации контроля сорняков. Время, в которое гербицид вносят, может определяться с учетом размера растений, и/или стадии роста, и/или развития растений в представляющем интерес участке, например культурных растений или сорняков, растущих на участке. Стадии роста и/или развития растений известны из уровня техники. Таким образом, например, время, в которое гербицид или другое химическое вещество вносят в представляющий интерес участок, на котором растения выращиваются, может представлять собой время, в которое некоторые или все растения в конкретном участке достигли, по меньшей мере, конкретного размера, и/или стадии роста, и/или развития, или время, в которое некоторые или все растения в конкретном участке еще не достигли конкретного размера, и/или стадии роста, и/или развития.

Различные химические вещества, такие как гербициды, характеризуются различными остаточными эффектами, т.е. различными количествами времени, в течение которых обработка химическим средством или гербицидом продолжает оказывать эффект на растения, растущие на обработанном участке. Такие эффекты могут быть желательными или нежелательными, в зависимости от требуемого будущего предназначения обработанного участка (например, поля или площадки возделывания). Таким образом, схема чередования сельскохозяйственных культур может быть выбрана, исходя из остаточных эффектов обработок, которые будут применяться для каждой сельскохозяйственной культуры, и их эффектов в отношении сельскохозяйственной культуры, которая будет выращиваться на том же участке впоследствии. Специалисту в данной области знакомы методики, которые можно применять для оценки остаточного эффекта гербицида; например, в целом глифосат характеризуется очень небольшой остаточной активностью в почве или ее отсутствием, тогда как гербициды, которые действую с ингибированием АЬБ, варьируют по их уровням остаточной активности. Остаточные активности разнообразных гербицидов известны из уровня техники и, что также известно, варьируют в зависимости от разнообразных факторов окружающей среды, таких как, например, уровни почвенной влаги, температура, рН и состав почвы (структура и органическое вещество).

Более того, трансгенные растения по настоящему раскрытию могут обеспечивать улучшенную переносимость обработки дополнительными химическими веществами, обычно используемыми в отношении сельскохозяйственных культур в сочетании с гербицидными средствами обработки, такими как антидоты, вспомогательные вещества, такие как сульфонат аммония и маслянистый концентрат для сельскохозяйственных культур, и т.п. Термин антидот относится к веществу, которое при добавлении к гербицидному составу устраняет или снижает фитотоксические эффекты гербицида на определенные сельскохозяйственные культуры. Специалист в данной области техники будет понимать, что выбор антидота зависит, частично, от представляющего интерес культурного растения и конкретного гербицида или комбинации гербицидов, входящих в состав синергической гербицидной композиции. Иллюстративные антидоты, подходящие для применения с раскрытой в данном документе гербицидной композицией, включают без ограничений раскрытые в патентах США №№ 4808208; 5502025; 6124240 и публикациях заявок на патент США №№ 2006/0148647; 2006/0030485; 2005/0233904; 2005/0049145; 2004/0224849; 2004/0224848; 2004/0224844; 2004/0157737; 2004/0018940; 2003/0171220; 2003/0130120; 2003/0078167, раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки в своей полноте. Способы по настоящему раскрытию могут предусматривать применение гербицидов в комбинации с антидотами гер- 22 028528 бицидов, такими как беноксакор, ВС8 (1-бром-4-[(хлорметил)сульфонил]бензол), клоквинтосет-мексил, циометринил, дихлормид, 2-(дихлорметил)-2-метил-1,3-диоксолан (МО 191), фенхлоразол-этил, фенклорим, флуразол, флуксофеним, фурилазол, изоксадифен-этил, мефенпир-диэтил, метоксифенон ((4метокси-3-метилфенил)(3-метилфенил)-метанон), нафталиновый ангидрид (1,8-нафталиновый ангидрид) и оксабетринил для повышения безопасности сельскохозяйственной культуры. Эффективные в качестве антидота количества антидотов гербицидов можно вносить одновременно с соединениями по настоящему раскрытию или применять в качестве средств обработки семян. Следовательно, аспект настоящего раскрытия относится к применению смеси, содержащей глифосат, по меньшей мере один другой гербицид и эффективное в качестве антидота количество антидота гербицида.

Используемым в данном документе вспомогательным веществом является любой материал, добавленный в раствор или состав для распыления для модифицирования действия химического вещества для сельского хозяйства или физических свойств раствора для распыления; см., например, Огееп апб Роу, (2003) Аб]иуап1к: Тоо1к Гог Епкапсшд НегЫшбе РегТогтапсе, в \Уееб Вю1оду апб МападетеШ. еб. 1пбег|Н (К1итеег Асабепис РиЬкккегк, Тке №1кег1апбк). Вспомогательные вещества можно классифицировать или подразделять на активаторы, подкисляющие средства, буферы, добавки, адгезивы, противофлокулирующие средства, противовспениватели, пеноудаляющие средства, антифризы, аттрактанты, основные смеси, хелатирующие средства, очистители, окрашивающие средства или красители, средства для сочетаемости, сорастворители, связывающие средства, масляные концентраты для сельскохозяйственных культур, средства для отложения, детергенты, диспергирующие средства, средства для контроля уноса капель воздухом, эмульгаторы, средства для снижения испарения, разбавители, удобрения, пенные маркеры, компоненты составов, инертные вещества, увлажняющие средства, метилированные масла из семян, концентрированные СОС, полимеры, модифицированные растительные масла, средство для проникновения, репелленты, концентраты нефтяного масла, консерванты, средства устойчивости к осадкам, удерживающие добавки, солюбилизаторы, поверхностно-активные вещества, средства для распределения, клеящие средства, адгезивные средства, синергисты, загустители, средства содействия перераспределению, средства для защиты от УФ, растительные масла, средства обработки воды и смачивающие средства.

В дополнение, растения Вгаккюа с переносимостью по настоящему раскрытию можно обрабатывать смесью гербицидов, а также одним или несколькими другими инсектицидами, фунгицидами, немтоцидами, бактерицидами, акарицидами, регуляторами роста, хемостерилянтами, химическими сигнальными веществами, репеллентами, аттрактантами, феромонами, стимуляторами питания или другими биологически активными соединениями или энтомопатогенными бактериями, вирусами или грибами с образованием многокомпонентной смеси, обеспечивающий даже более широкий спектр сельскохозяйственной защиты. Примеры таких сельскохозяйственных защитных средств, которые можно применять в способах по настоящему раскрытию, включают: инсектициды, такие как абамектин, ацефат, ацетамиприд, амидофлумет (δ-1955), авермектин, азадирахтин, азинфос-метил, бифентрин, бифеназат, бупрофезин, карбофуран, картап, хлорфенапир, хлорфлуазурон, хлорпирифос, хлорпирифос-метил, кромафенозид, клотианидин, цифлуметофен, цифлутрин, бета-цифлутрин, цигалотрин, лямбда-цигалотрин, циперметрин, циромазин, дельтаметрин, диафентиурон, диазинон, диелдрин, дифлубензурон, димефлутрин, диметоат, динотефуран, диофенолан, эмамектин, эндосульфан, эсфенвалерат, этипрол, фенотиокарб, феноксикарб, фенпропатрин, фенвалерат, фипронил, флоникамид, флубендиамид, флуцитринат, тау-флювалинат, флуфенерим (ИК-50701), флуфеноксурон, фонофос, галофенозид, гексафлумурон, гидраметилнон, имидаклоприд, индоксакарб, изофенфос, люфенурон, малатион, метафлумизон, метальдегид, метамидофос, метидатион, метомил, метопрен, метоксихлор, метофлутрин, монокротофос, метоксифенозид, нитенпирам, нитиазин, новалурон, новифлумурон (ΧΌΕ-007), оксамил, паратион, паратион-метил, перметрин, форат, фозалон, фосме, фосфамидон, пиримикарб, профенофос, профлутрин, пиметрозин, пирафлупрол, пиретрин, пиридалил, пирипрол, пирипроксифен, ротенон, рианодин, спиносад, спиродиклофен, спиромезифен (ΕδΝ 2060), спиротетрамат, сульпрофос, тебуфенозид, тефлубензурон, тефлутрин, тербуфос, тетрахлорвинфос, тиаклоприд, тиаметоксам, тиодикарб, тиосултап-натрий, тралометрин, триазамат, трихлорфон и трифлумурон; фунгициды, такие как ацибензолар, альдиморф, амисулбром, азаконазол, азоксистробин, беналаксил, беномил, бентиаваликарб, бентиаваликарб-изопропил, биномиал, бифенил, битертанол, бластицидин-δ, бордосская смесь (трехосновный сульфат меди), боксалид/никобифен, бромуконазол, бупиримат, бутиобат, карбоксин, карпропамид, каптафол, каптан, карбендазим, хлоронеб, хлороталонил, хлозолинат, клотримазол, хлорокись меди, соли меди, такие как сульфат меди и гидроксид меди, циазофамид, цифлунамид, цимоксанил, ципроконазол, ципродинил, дихлофлуанид, диклоцимет, дикломезин, диклоран, диэтофенкарб, дифеноконазол, диметоморф, димоксистробин, диниконазол, диниконазол-М, динокап, дискостробин, дитианон, додеморф, додин, эконазол, этаконазол, эдифенфос, эпоксиконазол, этабоксам, этиримол, этридиазол, фамоксадон, фенамидон, фенаримол, фенбуконазол, фенкарамид, фенфурам, фенгексамид, феноксанил, фенпиклонил, фенпропидин, фенпропиморф, ацетат фентина, гидроксид фентина, фербам, ферфуразоат, феримзон, флуазинам, флудиоксонил, флуметовер, флуопиколид, флуоксастробин, флуквинконазол, флуквинконазол, флузилазол, флусульфамид, флутоланил, флутриафол, фолпет, фосетил-алюминий, фуберидазол, фуралаксил, фураметпир, гексаконазол, гимексазол, гуа- 23 028528 затин, имазалил, имибенконазол, иминоктадин, иодокарб, ипконазол, ипробенфос, ипродион, ипроваликарб, изоконазол, изопротиолан, касугамицин, крезоксим-метил, манкозеб, мандипропамид, манеб, мапанипирин, мефеноксам, мепронил, металаксил, метконазол, метасульфокарб, метирам, метоминостробин/феноминостробин, мепанипирим, метрафенон, миконазол, миклобутанил, нео-азозин (метанарсонат трехвалентного железа), нуаримол, октилинон, офурас, орисастробин, оксадиксил, оксолиновая кислота, окспоконазол, оксикарбоксин, паклобутразол, пенконазол, пенцикурон, пентиопирад, перфуразоат, фосфоновая кислота, фталид, пикобензамид, пикоксистробин, полиоксин, пробеназол, прохлораз, процимидон, пропамокарб, пропамокарб-гидрохлорид, пропиконазол, пропинеб, проквиназид, протиоконазол, пираклостробин, приазофос, пирифенокс, пириметанил, пирифенокс, пиролнитрин, пироквилон, квинконазол, квиноксифен, квинтозен, силтиофам, симеконазол, спироксамин, стрептомицин, сера, тебуконазол, техразен, теклофталам, текназен, тетраконазол, тиабендазол, тифлузамид, тиофанат, тиофанатметил, тирам, тиадинил, толклофос-метил, толилфлуанид, триадимефон, триадименол, триаримол, триазоксид, тридеморф, триморфамид, трициклазол, трифлоксистробин, трифорин, тритиконазол, униконазол, валидамицин, винклозолин, цинеб, цирам и зоксамид; нематоциды, такие как альдикарб, оксамил и фенамифос; бактерициды, такие как стрептомицин; акарициды, такие как амитраз, хинометионат, хлоробензилат, цихексатин, дикофол, диенохлор, этоксазол, феназаквин, фенбутатин оксид, фенпропатрин, фенпироксимат, гекситиазокс, пропаргит, пиридабен и тебуфенпирад, и биологические средства, в том числе энтомопатогенные бактерии, такие как ВасШив Йшппщепв1в виЬвр. Λίζα\ναί. ВасШив Йшппщепв1в виЬвр. Кшйакг, и инкапсулированные дельта-эндотоксины ВасШив Йшппщепв1в (например, Се11сар, МРУ, МРУП); энтомопатогенные грибы, такие как гриб, вызывающий зеленую мускардину; и энтомопатогенные вирусы, в том числе бакуловирус, вирус ядерного полиэдроза (ΝΡν), такой как ΗζΝΡν, АГЫРУ; и вирус гранулеза (СУ), такой как СрСУ. Весовые соотношения этих разнообразных объектов смешивания с прочими композициями (например, гербицидами), применяемыми в способах по настоящему раскрытию, как правило, составляют от 100:1 до 1:100 или от 30:1 до 1:30, от 10:1 до 1:10 или от 4:1 до 1:4.

Таким образом, в способах по настоящему раскрытию используют гербицид или гербицидную комбинацию, и они могут дополнительно предусматривать применение инсектицидов, и/или фунгицидов, и/или других химических веществ для сельского хозяйства, таких как удобрения. Применение таких комбинированных средств обработки по настоящему раскрытию может расширять спектр активности против дополнительных видов сорняков и подавлять пролиферацию любых устойчивых биотипов.

Способы по настоящему раскрытию могут дополнительно предусматривать применение регуляторов роста растений, таких как авиглицин, ^(фенилметил)-1Н-пурин-6-амин, этефон, эпохолеон, гиббереллиновая кислота, гиббереллин А4 и А7, белок-гарпин, мепикват-хлорид, прогексадион кальция, прогидрожасмон, нитрофенолят натрия и тринексапак-метил, и организмов, модифицирующих рост растений, таких как штамм ВР01 ВасШив сегеив.

Способы, описанные в данном документе, также обеспечивают средства для минимизации неблагоприятных агротехнических последствий, являющихся результатом позднего развития сорняков. Контроль сорняков, которые растут во время поздних стадий развития канолы, может приводить к меньшему количеству соломы, меньшему количеству биологического вещества и усовершенствованным сельскохозяйственным работам по уборке урожая, что, в конечном итоге, приводит к положительным агротехническим последствиям для растениевода. Заболевания, которые могут усиливаться вследствие роста сорняков в поле во время поздних стадий роста канолы, включают без ограничений черную ножку, фузариозный вилт и склеротиниоз. С помощью контроля роста сорняков на поздних стадиях развития канолы заболевания канолы можно контролировать лучше. Следовательно, внесение глифосатного средства обработки на поздней стадии развития канолы может обеспечивать средства для лучшего контроля заболеваний канолы.

Стадии роста канолы.

Шкалу стадий роста, называемую десятичная система ВВСН, можно применять для классификации различных стадий роста канолы (Ме1ег, и ей), СгоМН §1адев оГ топо-апй ШсоЩейопоив р1аи!в, 2. ЕйШоп (2001) (Рейега1 Вю1ощса1 КевеагсН Сейте Гог АдгюйШге апй Рогевйу, ВегНп апй Вгаипвсйтещ; ЬапсавЫге, Р.Б., Н. В1еПю1йег, Р. Ьапде1иййеске, КТ. Уап Беп Воот, Ε. ХУеЬег ипй А. ХУШеп-Вегдег, Ап ишГогтйеата1 сойе Гог дгоМН в1адев оГ сгорв апй \геейв. Апп. арр1. Вю1. 119, 561-601). Шкала ВВСН для канолы описывает девять основных стадий роста для канолы и соответствующие коды и описания. Шкала поделена на основные стадии роста: прорастание, развитие листьев, образование боковых побегов, удлинение стебля, появление соцветий, цветение, развитие плодов, созревание и увядание и дополнительно подразделяется на подгруппы. Стадии роста по ВВСН изложены в табл. 2.

- 24 028528

Таблица 2

Фенологические стадии роста и ВВСИ-опознавательные ключи для канолы

Основные стадии роста	Код	Описание
0: Прорастание	00	Сухое семя
01	Начало набухания семени
03	Набухание семени завершено
05	Первичный корешок появился из семени
07	Гипокотиль с семядольными листьями появились из семени
08	Гипокотиль с семядольными листьями растет по направлению к поверхности почвы
09	Всходы: семядольные листья появились над поверхностью почвы
1: Развитие листьев1
10	Семядольные листья полностью расправились
11	Первый лист расправился
12	2 листа расправились
13	3 листа расправились
1 .	Стадии продолжаются до ...
19	9 или больше листьев расправились
2: Образование боковых побегов	20	Боковые побеги отсутствуют
21	Начало развития боковых побегов: первый боковой побег различим
22	2 боковых побега различимы
23	3 боковых побега различимы
2 .	Стадии продолжаются до ...
29	Конец развития боковых побегов: 9 или более боковых побегов различимы
3: Удлинение стебля2	30	Начало удлинения стебля: междоузлия отсутствуют (розетка)
31	1 явно удлиненное междоузлие
32	2 явно удлиненных междоузлия
33	3 явно удлиненных междоузлия
3 .	Стадии продолжаются до ...
39	9 или более явно удлиненных междоузлий
5: Появление соцветий	50	Цветочные почки присутствуют, однако заключены в листья
51	Цветочные почки видны сверху (зеленая почка)
52	Цветочные почки свободны, на одном уровне с самыми молодыми листьями
53	Цветочные почки поднялись над самыми молодыми листьями
55	Отдельные цветочные почки (главное соцветие) видны, но остаются закрытыми
57	Отдельные цветочные почки (вторичные соцветия) видны, но остаются закрытыми
59	Первые лепестки видны, цветочные почки остаются закрытыми (желтая почка)
6: Цветение	60	Первые цветки открыты
61	10% цветков на главной кисти открыты, главная кисть удлиняется
62	20% цветков на главной кисти открыты
63	30% цветков на главной кисти открыты
64	40% цветков на главной кисти открыты
65	Полное цветение: 50% цветков на главной кисти открыты, старые лепестки опадают
67	Цветение ослабевает: большая часть лепестков опала

- 25 028528

	69	Конец цветения
7: Развитие плодов	71	10% стручков достигли конечного размера
72	20% стручков достигли конечного размера
73	30% стручков достигли конечного размера
74	40% стручков достигли конечного размера
75	50% стручков достигли конечного размера
76	60% стручков достигли конечного размера
77	70% стручков достигли конечного размера
78	80% стручков достигли конечного размера
79	Почти все стручки достигли конечного размера
8: Созревание	80	Начало созревания: семена зеленые, заполняют полость стручка
81	10% стручков созрели, семена темные и твердые
82	20% стручков созрели, семена темные и твердые
83	30% стручков созрели, семена темные и твердые
84	40% стручков созрели, семена темные и твердые
85	50% стручков созрели, семена темные и твердые
86	60% стручков созрели, семена темные и твердые
87	70% стручков созрели, семена темные и твердые
88	80% стручков созрели, семена темные и твердые
89	Полное созревание: почти все стручки созрели, семена темные и твердые
9: Увядание	97	Растения мертвые и сухие
99	Собранный продукт

¹⁼Удлинение стебля может происходить ранее стадии 19; в этом случае переходить к стадии 20;

²=явно удлиненное междоузлие и развивается между листом и и листом и+1.

Варианты осуществления настоящего раскрытия дополнительно определены в следующих примерах. Следует понимать, что эти примеры представлены только с целью иллюстрации. Из вышеприведенного описания и данных примеров специалист в данной области может установить необходимые характеристики настоящего раскрытия и без отступления от его сути и объема может выполнить различные изменения и модификации вариантов осуществления настоящего раскрытия для адаптации его к различным способам применения и условиям. Таким образом, различные модификации вариантов осуществления настоящего раскрытия в дополнение к представленным и описанным в данном документе будут очевидны для специалистов в данной области из вышеизложенного описания. Такие модификации так же, как предполагается, находятся в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.

Экспериментальная часть

Пример 1. Испытания эффективности гербицида в отношении САТ-объектов для определения урожая.

Полевые испытания разрабатывали как схему с расщепленными делянками, при этом глифосатные средства обработки служили основным фактором, а элементы как субделянки. Схему с расщепленными делянками применяли потому, что в каждом местоположении оценивали более одного внесения глифосатного средства обработки, при этом в индивидуальную делянку вносили различное средство обработки. В схеме с расщепленными делянками рандомизировали уровни основного фактора делянки (внесения глифосатного средства обработки) и факторы субделянки (элементы индивидуальных объектов) в пределах главных делянок.

Применяли следующие обработки глифосатом, как подробно описано ниже, на различных стадиях роста. В этих тестах 1Х внесение глифосатного средства обработки составляло 675 г к.э./га, 2Х внесение глифосатного средства обработки составляло 1350 г к.э./га, 3Х внесение глифосатного средства обработки составляло 2025 г к.э./га и 4Х внесение глифосатного средства обработки составляло 2700 г к.э./га в виде активного ингредиента глифосата. Все средства обработки вносили с применением механического опрыскивателя. Например, в обработке 1, ниже, 2Х семядольные листья описывает обработку из расче- 26 028528 та 1350 г к.э./га глифосата на стадии роста семядольных листьев. Различные средства обработки тестировали на протяжении двухлетнего периода, и они описаны ниже.

Средства обработки, протестированные в год 1:

1) 2Х семядольные листья,

2) 2Х стадия 3-5 листьев,

3) 2Х семядольные листья + 2Х стадия 3-5 листьев,

4) 2Х семядольные листья + 2Х выбрасывание цветоноса ВВСН55,

5) 4Х семядольные листья,

6) 4Х стадия 3-5 листьев.

Средства обработки, протестированные в год 2:

1) 1Х семядольные листья + 1Х стадия 3-5 листьев,

2) 2Х семядольные листья + 2Х стадия 3-5 листьев,

3) 1Х семядольные листья + 1Х зеленая почка ВВСН51,

4) 2Х семядольные листья + 2Х зеленая почка ВВСН51,

5) 1Х семядольные листья + 1Х 10% цветков ВВСН61,

6) 2Х семядольные листья + 2Х 10 % цветков ВВСН61.

Для уменьшения роста сорняков на контрольных делянках по мере необходимости применяли традиционные гербициды или механическую прополку сорняков. В контрольные делянки глифосат не носили и применяли их как контроль/основу, с которой сравнивали другие внесения глифосатного средства обработки. Контрольные делянки могли содержать один или несколько сорняков, присутствующих во время вегетационного периода. Контроль основан на традиционных гербицидах, которые зарегистрированы для применения у всех разновидностей канолы.

Делянки считали высохшими, когда 60-70% семян поменяли цвет с зеленого на черный. Уборку комбайном проводили через 5-14 дней после десикации в зависимости от погодных условий. На каждой делянке урожай убирали по отдельности. Влажность и вес регистрировали непосредственно на комбайне. Урожай определяли для САТ1-объекта.

В тесте использовали различные местоположения. Испытания оценивали по 10 местоположениям и в год 1, и в год 2. Местоположения включали несколько участков в зонах с коротким, средним и длинным вегетационным периодом по обоим годам.

Объект, который тестировали, представлял собой объект ЭР-73496-4 (САТ1) канолы (международная патентная РСТ заявка № РСТ/и§2010/058011, включенная посредством ссылки).

Пример 2. Испытания эффективности гербицида в отношении САТ-объектов для определения хлороза.

Полевые испытания разрабатывали как схему с расщепленными делянками, при этом глифосатные средства обработки служили основным фактором, а элементы как субделянки. Элементы рандомизировали в пределах фактора расщепления, и расщепление рандомизировали в пределах повторности.

Применяли следующие обработки глифосатом, как подробно описано ниже, на различных стадиях роста. В этих тестах 1Х внесение глифосатного средства обработки составляло 675 г к.э./га, 2Х внесение глифосатного средства обработки составляло 1350 г к.э./га, 3Х внесение глифосатного средства обработки составляло 2025 г к.э./га, и 4Х внесение глифосатного средства обработки составляло 2700 г к.э./га. Все средства обработки вносили с применением механического опрыскивателя. Например, в обработке 1, ниже, 2Х семядольные листья описывает обработку из расчета 1350 г к.э./га глифосата на стадии роста семядольных листьев. Различные средства обработки тестировали на протяжении двухлетнего периода, и они описаны ниже.

Средства обработки, протестированные в год 2:

1) 2Х семядольные листья,

2) 2Х стадия 3-5 листьев,

3) 2Х семядольные листья + 2Х стадия 3-5 листьев,

4) 2Х семядольные листья + 2Х выбрасывание цветоноса ВВСН55,

5) 4Х семядольные листья,

6) 4Х стадия 3-5 листьев.

Средства обработки, протестированные в год 2:

1) 1Х семядольные листья + 1Х стадия 3-5 листьев,

2) 2Х семядольные листья + 2Х стадия 3-5 листьев,

3) 1Х семядольные листья + 1Х зеленая почка ВВСН51,

4) 2Х семядольные листья + 2Х зеленая почка ВВСН51,

5) 1Х семядольные листья + 1Х 10% цветков ВВСН61,

6) 2Х семядольные листья + 2Х 10 % цветков ВВСН61.

Контрольные обработки применяли в качестве сравнений (см. пример 1).

Объект, который тестировали, представлял собой объект трансформации ЭР-73496-4 (САТ1) канолы.

Определяли процент хлороза. Визуальную классификацию хлороза на растениях проводили во вре- 27 028528 мя указанного периода (т.е. 3-5 дней) после внесения распылением. Пожелтение апикальной меристемы, самых молодых листьев или старых листьев указывало на хлоротическое повреждение, индуцированное гербицидом. 100%= вся ткань желтая, 0% = нет признаков желтеющей ткани.

Показатели хлороза были следующими.

Гербицидное повреждение - хлороз (Ыпс1):

3-5 дней (Н1ЫСЬ_5) описывает визуальную классификацию хлороза через 5 дней после обработки,

7-10 дней (Н1ЫСЬ_10) описывает визуальную классификацию хлороза через 10 дней после обработки,

14-21 дней (Н1ЫСЬ_21) описывает визуальную классификацию хлороза через 21 день после обработки,

21-30 дней (Н1ЫСЬ_30) описывает визуальную классификацию хлороза через 30 дней после обработки.

Значения от 0 до 100%.

Пример 3. Испытания эффективности гербицида в отношении САТ-объектов для определения некроза.

Полевые испытания разрабатывали как схему с расщепленными делянками, при этом глифосатные средства обработки служили основным фактором, а элементы как субделянки. Элементы рандомизировали в пределах фактора расщепления, и расщепление рандомизировали в пределах повторности.

Применяли следующие обработки глифосатом, как подробно описано ниже, на различных стадиях роста. В этих тестах 1Х внесение глифосатного средства обработки составляло 675 г к.э./га, 2Х внесение глифосатного средства обработки составляло 1350 г к.э./га, 3Х внесение глифосатного средства обработки составляло 2025 г к.э./га, и 4Х внесение глифосатного средства обработки составляло 2700 г к.э./га. Все средства обработки вносили с применением механического опрыскивателя. Например, в обработке 1, ниже, 2Х семядольные листья описывает обработку из расчета 1350 г к.э./га глифосата на стадии роста семядольных листьев. Различные средства обработки тестировали на протяжении двухлетнего периода, и они описаны ниже.

Средства обработки, протестированные в год 2:

1) 2Х семядольные листья,

2) 2Х стадия 3-5 листьев,

3) 2Х семядольные листья + 2Х стадия 3-5 листьев,

4) 2Х семядольные листья + 2Х выбрасывание цветоноса ΒΒί'Ή55,

5) 4Х семядольные листья,

6) 4Х стадия 3-5 листьев.

Средства обработки, протестированные в год 2:

1) 1Х семядольные листья + 1Х стадия 3-5 листьев,

2) 2Х семядольные листья + 2Х стадия 3-5 листьев,

3) 1Х семядольные листья + 1Х зеленая почка ΒΒΟΠ51,

4) 2Х семядольные листья + 2Х зеленая почка ΒΒΟΠ51,

5) 1Х семядольные листья + 1Х 10% цветков ΒΒ^61,

6) 2Х семядольные листья + 2Х 10 % цветков ΒΒίΉ61.

Обработки традиционными химическими веществами применяли в качестве одного из контролей (см. пример 1).

Процентную долю некроза определяли следующим образом. Визуальную классификацию мертвой ткани на растениях проводили во время указанного периода (т.е. 3-5 дней) после внесения распылением. Коричневые или желтеющие пятна представляют собой ранние признаки разрушения. Сухая коричневая ткань представляет собой далеко зашедшее разрушение. 100% = полностью погибшее растение, 0% = нет признаков погибшей ткани.

Показатели некроза были следующими.

Реакция сельскохозяйственной культуры на гербицид - некроз (Ыппе):

3-5 дней (НШЫЕ_5) описывает визуальную классификацию некроза через 5 дней после обработки гербицидом,

7-10 дней (Н1ЫЫЕ_10) описывает визуальную классификацию некроза через 10 дней после обработки гербицидом,

14-21 дней (НШЫЕ_21) описывает визуальную классификацию некроза через 21 день после обработки гербицидом,

21-30 дней (НШЫЕ_30) описывает визуальную классификацию некроза через 30 дней после обработки гербицидом.

Значения от 0 до 100%.

Объект, который тестировали, представлял собой объект трансформации ИР-73496-4 (САТ1) канолы.

- 28 028528

Пример 4. Внесение глифосата на поздних стадиях на ОАТ-объекты.

Внесения глифосата на поздних стадиях представляют собой внесения глифосата на более поздних стадиях роста, чем указано на этикетке глифосата. Одной из целей оценки реакции сельскохозяйственной культуры ОАТ1-канолы после указанной на текущей этикетке глифосата стадии роста было протестировать, значительно ли влияет на урожай реакция какой-либо сельскохозяйственной культуры, наблюдаемая в отношении обработок гербицидом, по сравнению с контрольной обработкой. В год 1 расширенное окно внесения глифосата составляли 2Х семядольные листья + 2Х выбрасывание цветоноса ВВСН55; 2Х обработка во время стадии семядольных листьев и дополнительная 2Х обработка во время стадии роста растения, когда отдельные цветочные почки (главное соцветие) различимы, но остаются закрытыми. В год 2 расширенное окно обработок включало 1Х семядольные листья, 1Х зеленая почка ВВСН51; 2Х семядольные листья, 2Х зеленая почка ВВСН51; 1Х семядольные листья, 1Х 10% цветков ВВСН61 и 2Х семядольные листья, 2Х 10% цветков ВВСН61.

Пример 5. Сравнение ОАТ 1 с контрольными обработками и контрольными вариантами.

Реакция сельскохозяйственной культуры была подобной для 3 гибридных генетических фонов в год 1 в случае расширенного окна обработок 2Х семядольные листья и 2Х выбрасывание цветоноса ВВСН55. Все три гибрида, оцениваемые в одном местоположении, демонстрировали 1% хлороза. Один гибридный генетический фон характеризовался 3% хлороза во втором местоположении, и реакция сельскохозяйственной культуры на эту обработку в виде позднего внесения в оставшихся восьми местоположениях отсутствовала. Полное восстановление этого незначительного временного хлороза наблюдали через 10 дней после внесения глифосата, и не было значительных отличий в урожае по сравнению с контрольной обработкой. Четыре ОАТ-экспрессирующих генетических фона канолы, оцениваемые с помощью расширенного окна внесения глифосатных средств обработки в год 2, не характеризовались какойлибо реакцией сельскохозяйственной культуры. Обработки, включавшие расщепленные внесения 1Х семядольные листья и 1Х ВВСН51 (стадия зеленой почки); 1Х семядольные листья и 1Х ВВСН61 (стадия 10% цветков) для четырех генетических фонов, не привели к снижению урожая по сравнению с контрольной обработкой. Кроме того, другие две обработки в виде позднего расщепленного внесения 2Х глифосата (1350 г к.э./га), проводимые на тех же стадиях роста, не привели к снижению урожая по сравнению с контрольной обработкой. В сравнении с контролями, ОАТ1 не демонстрировали снижения урожая при Х обработке.

Пример 6. Сравнение ОАТ 2 с контрольными обработками и контрольными вариантами.

ОАТ2-объекты подвергали испытаниям эффективности гербицида вместе с ОАТ1 в качестве диагонального контроля в 9 различных местоположениях. Испытания эффективности гербицида состояли из 6 обработок, которые включали: контроль без глифосата, 2Х, 4Х или 8Х глифосат, применяемый на стадии 3-5 листьев (1Х=675 г к.э./га), 2Х, применяемый во время стадии 3-5 листьев и во время стадии зеленой почки (+2Х зеленая почка), и 2Х, применяемый во время стадии 3-5 листьев и во время 10% цветения (+2Х 10% цветение). Индуцированное гербицидом некрозное и хлорозное повреждение регистрировали на стадиях листьев через 5, 10, 21 и 30 ЭЛТ (дней после обработки). После 10 ЭЛТ не наблюдали никакого повреждения, и наблюдали минимальное индуцированное гербицидом некротическое повреждение даже при нормах распыления 8Х (фиг. 1). Незначительное хлоротическое повреждение наблюдали у обоих протестированных ОАТ1- и ОАТ2-объектов даже при нормах распыления 8Х, и как во время стадии зеленой почки, так и во время стадии 10% цветения (фиг. 2). Урожай, полученный при различных обработках, выражали как процент от 2Х обработки на стадии 3-5 листьев. Воздействие 2Х внесения глифосата на стадии 3-5 листьев и во время стадии зеленой почки или 10% цветения приводило к отсутствию ощутимых отличий в урожае по сравнению с соответствующей 2Х обработкой у обоих ОАТ1 и ОАТ2 (фиг. 3). Внесение 4Х глифосата на стадии 3-5 листьев приводило к 6-8% снижению урожая по сравнению с 2Х обработкой, и при норме 8Х урожай снижался на 10-12% у обработанных объектов по сравнению с 2Х обработкой (фиг. 3).

Пример 7. Внесение глифосата на поздних стадиях на ОАТ-элементы.

ОАТ1-элементы подвергали испытаниям эффективности гербицида, которые включали 2Х внесение глифосатного средства обработки, применяемое на стадии 3-5 листьев (1Х=900 г к.э./га), и 2Х, применяемое во время стадии 3-5 листьев и во время стадии первого цветка (ВВСН60). Урожай, полученный при различных обработках, выражали как процент от 2Х обработки на стадии 3-5 листьев. Воздействие 2Х внесения глифосата на стадии 3-5 листьев и во время стадии первого цветка приводило к отсутствию ощутимых отличий в урожае по сравнению с соответствующей 2Х обработкой у всех ОАТ1-элементов (фиг. 4). Также в ответ на обработку не наблюдали значительного некроза/хлороза, вызванных обработкой гербицидом, и значительного прекращения развития стручков или бледных цветков.

Пример 8. Внесение глифосата после стадии 10% цветения.

Расширенное окно обработок может включать 4Х внесения глифосата при 20% открытых цветков на главной кисти (ВВСН62) и 2Х внесения глифосата при 30% открытых цветков на главной кисти (ВВСН63). Эти обработки могут позволять растениеводам осуществлять эффективный контроль живучих сорняков для контроля сорняков при помощи более высоких норм внесения глифосата и расширенного контроля сорняков на стадиях роста раннего цветения. Внесение глифосата на этих стадиях может

- 29 028528 приводить к превосходному контролю сорняков и, следовательно, более высокому урожаю после созревания, что, таким образом, приводит к экономическим выгодам для производителей канолы.

Все публикации и заявки на патенты, упомянутые в описании, ориентированы на уровень специалиста в области техники, к которой принадлежит настоящее раскрытие. Все публикации и заявки на патент включены в данный документ посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация или заявка на патент конкретно и отдельно была включена посредством ссылки.

Хотя в целях ясности понимания вышеприведенное раскрытие было довольно подробно описано посредством иллюстрации и примера, очевидно, что на практике можно осуществлять определенные изменения и модификации в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.

Claims (31)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ применения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Вгак81са, толерантный к гербициду, где способ включает нанесение глифосатного средства обработки, содержащего эффективное количество глифосата, на популяцию растений Вга881са, толерантных к глифосату;

   где значительная часть растений Вга881са находится приблизительно на стадии цветения, которая характеризуется наличием по меньшей мере от 10% открытых цветков до 10% на стадии стручков, или после стадии цветения и где значительная часть открытых цветков или стручков не демонстрирует значительного изменения окраски после внесения глифосатного средства обработки;

   где растения Вгаккка, толерантные к глифосату, экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (САТ).
2. 2. Способ по п.1, где растения Вгаккка, толерантные к глифосату, экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (САТ) в комбинации с ферментом, который обеспечивает переносимость гербицида глуфосината.
3. 3. Способ по п.1, где открытые цветки не демонстрируют значительного изменения окраски в течение 5 дней после нанесения глифосатного средства обработки.
4. 4. Способ по п.1, где глифосатное средство обработки в качестве активного ингредиента содержит 675, 900, 1350, 1800, 2025, 2700 или 3600 г глифосата в кислотном эквиваленте/га в виде однократного применения.
5. 5. Способ по п.1, где глифосатное средство обработки содержит в качестве активного ингредиента до 5400 г глифосата в кислотном эквиваленте/га в виде одного или нескольких кумулятивных внесений.
6. 6. Способ внесения глифосата для улучшения контроля сорняков в поле, содержащем вид Вгаккюа, толерантный к глифосату, причем способ включает:

   (a) нанесение одного или нескольких глифосатных средств обработки, содержащих эффективное количество глифосата, на популяцию растений Вгаккюа, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Вгаккюа находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и где устойчивость к глифосату обусловлена экспрессией фермента глифосат ацетилтрансферазы (САТ) у растений Вгаккюа;

   (b) получение семян Вгаккюа от растений Вгаккюа, где значительная часть стручков не прекращает развития после обработки глифосатом.
7. 7. Способ предотвращения потери урожая или ухудшения урожая при сборе растений Вгаккюа, где способ включает:

   (a) применение первого глифосатного средства обработки, содержащего эффективное количество глифосата, на популяцию растений Вгаккюа, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Вга881са находится на стадии семядольных листьев и растения Вгаккка экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (САТ);

   (b) нанесение одного или нескольких дополнительных глифосатных средств обработки, содержащих эффективное количество глифосата, на популяцию растений Вгаккюа, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Вга881са находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев;

   (c) получение семян Вга881са из растений Вгаккюа, где потеря урожая минимизирована вследствие значительного снижения изменения окраски или прекращения развития стручков после одного или нескольких внесений глифосата на поздних стадиях.
8. 8. Способ по п.7, где средний урожай Вгаккка снижен не более чем на 5% по сравнению со средством для контрольной обработки.
9. 9. Способ борьбы с сорняками в поле, где способ включает:

   (a) высаживание популяции растений Вга881са, толерантных к глифосату, в поле, где растения Вгак81са экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу;

   (b) нанесение глифосатного средства обработки на поле с Вгаккка, содержащее один или несколько сорняков, где значительная часть растений Вга881са находится на поздней стадии развития, выбранной из группы, состоящей из появления соцветий, цветения, развития и созревания семян, и, как следствие, значительное снижение роста сорняков на поле с Вгаккюа.
10. 10. Способ борьбы с заболеваниями в популяции Вгаккгса, толерантной к глифосату, в поле, где

    - 30 028528 способ включает нанесение глифосатного средства обработки на популяцию Вн^юа в поле, где растения Вн^юа экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу и глифосатное средство обработки дополнительно содержит средство для борьбы с заболеваниями, выбранное из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов;

    где значительная часть популяции Вн^юа находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, не экспрессирует нечувствительную ЕРδРδ и значительная часть популяции Вн^юа не демонстрирует значительного хлороза.
11. 11. Способ по п.10, где глифосатное средство обработки наносят после стадии первого цветка.
12. 12. Способ по п.10, где глифосатное средство обработки наносят на стадии 10% цветков.
13. 13. Способ по п.10, где глифосатное средство обработки наносят на стадии роста канолы от 60 до 80 по шкале ВВСИ.
14. 14. Способ снижения сорного материала во время уборки урожая семян Вг^юа популяции Вн^юа, толерантной к глифосату, в поле, где способ включает:

    (a) нанесение глифосатного средства обработки на популяцию Ви^юа в поле, где растения Ви^юа экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу и в поле насчитывается один или несколько сорняков, выбранных из группы, состоящей из осота и амаранта, и где популяция Ви^юа находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и популяция Вн^юа не экспрессирует нечувствительную ЕРδРδ;

    (b) подавление роста сорняка перед уборкой урожая таким образом, что количество сорного материала снижено во время уборки урожая.
15. 15. Способ контроля сорняков в поздний период в поле с сельскохозяйственной культурой Ви^юа без оказания отрицательного воздействия на урожай, где способ включает:

    (a) высаживание популяции растений Ви^юа, толерантных к глифосату, где растения экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (САТ) таким образом, что экспрессия фермента приводит к эффективной переносимости глифосата;

    (b) нанесение эффективного количества глифосата на растения Ви^юа, где значительная часть растений Ви^юа находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев, и где внесение глифосата не приводит к значительному хлорозу;

    (c) подавление роста сорняков в поле и где урожай сельскохозяйственной культуры Ви^юа не снижен более чем на 5% по сравнению с контрольными растениями Ви^юа, не экспрессирующими фермент глифосат ацетилтрансферазу.
16. 16. Способ по п.15, где глифосатное средство обработки содержит 1350-2700 г глифосата в кислотном эквиваленте/га и значительная часть растений Б^аδδ^са находится на стадии 10% цветков.
17. 17. Способ по п.15, где глифосатное средство обработки содержит 1350-3600 г глифосата в кислотном эквиваленте/га и значительная часть растений Б^аδδ^са находится на стадии 10% цветков.
18. 18. Способ по п.15, где применение глифосата дополнительно включает средство для борьбы с заболеваниями, выбранное из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов.
19. 19. Способ по п.15, где применение глифосата дополнительно включает применение средства для поздней подкормки.
20. 20. Способ по п.15, где глифосат предварительно смешивают со средством для борьбы с заболеваниями, выбранными из группы, состоящей из инсектицидов, фунгицидов и пестицидов.
21. 21. Способ повышения чистоты семян канолы, где способ включает:

    (a) высаживание популяции растений канолы с переносимостью глифосата в поле;

    (b) внесение глифосата в поле, которое предположительно содержит один или несколько видов, не являющихся канолой, где растения канолы метаболизируют глифосат и не экспрессируют нечувствительную ЕРδРδ и где значительная часть растений Ви^юа находится на стадии, которая следует после стадии 6 листьев;

    (c) улучшение чистоты семян канолы путем подавления роста видов, не являющихся канолой, за счет позднего внесения глифосата.
22. 22. Способ снижения затрат на уборку урожая Б^аδδ^са. где способ включает снижение популяции сорняков в поле с растущей Ви^юа путем нанесения глифосата на популяцию растений Ви^юа, толерантных к глифосату, которые характеризуются по меньшей мере 10% открытых цветков, и уборку урожая сельскохозяйственной культуры Ви^юа, где растения Вп^юа экспрессируют фермент глифосат ацетилтрансферазу (САТ).
23. 23. Способ по п.22, где применение глифосата не приводит к значительному хлорозу или некрозу растений Вн^юа.
24. 24. Способ по п.22, где глифосат инактивируется в растениях Ви^юа, в том числе в генеративной ткани.
25. 25. Способ борьбы с сорняками в поле Ви^юа, где способ включает нанесение второго глифосатного средства обработки на популяцию растений Ви^юа, толерантных к глифосату, где значительная часть растений Ви^юа находится на стадии генеративного роста и где растения Ви^юа экспрессируют

    - 31 028528 фермент глифосат ацетилтрансферазу (САТ).
26. 26. Способ по п.25, где фермент глифосат ацетилтрансфераза (САТ) представляет собой САТполипептид.
27. 27. Способ по п.25, где растения Вгакк1са, толерантные к глифосату, не экспрессируют нечувствительную ΕΡδΡδ.
28. 28. Способ по п.25, где второе глифосатное средство обработки вносят в более низкой дозе, чем первое глифосатное средство обработки.
29. 29. Способ по п.25, где второе глифосатное средство обработки вносят в более высокой дозе, чем первое глифосатное средство обработки.
30. 30. Способ борьбы с сорняками, растущими в популяции сельскохозяйственной культуры Вгакк1са, толерантной к глифосату, причем сельскохозяйственная культура Вгакк1са экспрессирует фермент глифосат ацетилтрансферазу, где способ включает:

    (a) выращивание популяции Вгакк1са, толерантной к глифосату, в поле;

    (b) нанесение глифосата при норме приблизительно 900 г к.э./га на поле, которое предположительно содержит один или несколько видов сорняков, где растения Вгаккюа находятся на стадии от семядольных листьев до 6 листьев;

    (c) осуществление второго внесения глифосата при норме 900 г к.э./га, где растения Вгаккюа находятся на стадии, которая следует после стадии 6 листьев.
31. 31. Способ борьбы с сорняками, растущими в популяции сельскохозяйственной культуры Вгаккюа, толерантной к глифосату, причем сельскохозяйственная культура Вгаккюа экспрессирует фермент глифосат ацетилтрансферазу, где способ включает:

    (a) выращивание популяции Вгаккюа, толерантной к глифосату, в поле;

    (b) нанесение глифосата при норме 840 г к.э./га на поле, которое предположительно содержит один или несколько видов сорняков, где растения Вгаккюа находятся на стадии от семядольных листьев до 6 листьев;

    (c) осуществление второго внесения глифосата при норме 840 г к.э./га, где растения Вгаккюа находятся на стадии, которая следует после стадии 6 листьев.