EA028380B1 - Введение ингибитора фермента, активирующего nedd8, и гипометилирующего средства - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к способам лечения рака у пациентов с установленной необходимостью в таком лечении. Способы включают введение такому пациенту ингибитора NAE или его фармацевтически приемлемой соли, например ((1S,2S,4R)-4-(4-((1S)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-иламино)-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамата (MLN4924) или {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата (I-216) и гипометилирующего средства или его фармацевтически приемлемой соли, такого как азацитидин или децитабин. Также изобретены лекарственные средства для применения в лечении рака.

Description

(57) Настоящее изобретение относится к способам лечения рака у пациентов с установленной необходимостью в таком лечении. Способы включают введение такому пациенту ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли, например ((18,28,4К)-4-(4-((18)-2,3-дигидро-1Нинден-1-иламино)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамата (ΜΕΝ4924) или {(18,28,4К)-4-[(6-{[(1К,28)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксицикло пентил}метил сульфамата (1-216) и гипометилирующего средства или его фармацевтически приемлемой соли, такого как азацитидин или децитабин. Также изобретены лекарственные средства для применения в лечении рака.

Настоящая заявка заявляет приоритет по предварительной заявке США № 61/555049, поданной 3 ноября 2011 г.

Было продемонстрировано, что ингибирование фермента, активирующего ΝΕΌΌ8 (ΝΑΕ) вызывает смерть раковых клеток и ингибирует рост опухолей в моделях ксенотрансплантата. См., например, Т.А. Бойсу е! а1., Уинге. 2009, 458, 732-737; Т.А. Бойсу е! а1., С1ш. Сапсег Кек., 2009, 15 (12), 3912-3916; и ΙΕ. Вго\упе11 е! а1., Мо1. Се11, 2010, 37 (1), 102-111. Отчеты фазы I клинических исследований ингибитора ΝΑΕ включают К.Т. Б\уогбк е! а1., В1ооб, 2010, 115, 3796-3800; ББ. Каий е! а1., 1. С1ш. Опсо1, 2011, 29, реферат 3013; и Б. Вйайа е! а1., 1. Сйп. Опсо1, 2011, 29, реферат 8529. Ингибиторы ΝΑΕ описаны в заявках на патент США под номерами. 11/346469 (публ. № 2006/0189636, патент № 7951810), 11/700614 (публ. № 2007/0191293) и 11/890338 (публ. № 2008/0051404, патент № 8008307), каждая из вышеуказанных публикаций включена в настоящее описание в качестве ссылки во всей полноте. Если между любым из этих документов и настоящим описанием есть какое-либо несоответствие, то настоящее описание является контрольным.

Гипометилирующие средства были одобрены для лечения рака Управлением США по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и лекарственных средств (РИА). Например, препарат νΐΌΑΖΑ® (азацитидин для инъекций) показан для лечения пациентов со следующими подтипами миелодиспластических синдромов согласно франко-американо-британской классификации (ФАБ): рефрактерная анемия (РА) или рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами (если они сопровождаются нейтропенией или тромбоцитопенией или требуют проведения гемотрансфузий), рефрактерная анемия с избытком бластов (РАИБ), рефрактерная анемия с избытком бластов на стадии трансформации (РАИБ-Т) и хронический миеломоноцитарный лейкоз (ХММоЛ). Препарат ΩΑΡΌΟΕΝ® (децитабин для инъекций) показан для лечения пациентов с миелодиспластическими синдромами (МДС), включая пролеченных и непролеченных ранее, бе поуо и вторичных МДС всех подтипов согласно франко-американо-британской классификации (рефрактерная анемия, рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами, рефрактерная анемия с избытком бластов, рефрактерная анемия с избытком бластов на стадии трансформации и хронический миеломоноцитарный лейкоз) и групп промежуточного-1, промежуточного-2 и высокого риска согласно Международной прогностической балльной системы.

Как правило, для средств для лечения рака устанавливают наивысшую возможную дозу (МПД: максимальную переносимую дозу) потому что, как полагают, польза от лечения возрастает с дозой. См., например, Υ. Ып апб ν.Ρ БЙ1Й, Вюк!а!1кйск, 2001, 2 (2), 203-215. Синергическая комбинация средств, то есть комбинация средств, которая является более эффективной, чем ожидаемая эффективность составляющих, также без компаундирования побочных эффектов лечения, может обеспечить возможность доставлять даже большую эффективность с МПД. Таким образом, может быть желательным выявление синергических комбинаций противораковых средств для наиболее эффективного лечения онкологических больных без перегрузки пациента побочными эффектами.

В настоящее время было обнаружено, что введение ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли и гипометилирующего средства или его фармацевтически приемлемой соли обеспечивает синергический эффект. Синергические эффекты были обнаружены ш уйго и щ у1уо. Синергию ш уйго измеряли при помощи комбинаторного индекса (М.С. ВегепЪаит, 1. Тйеог. Вю1, 1985, 114, 413-431), как описано более подробно ниже. Синергию ш у1уо измеряли согласно способа определения синергии в отношении выживаемости или способа определения синергии в отношении роста опухоли, как описано более подробно ниже.

По меньшей мере один из аспектов настоящего изобретения относится к способам лечения рака, включающим введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного общего количества ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли и гипометилирующего средства или его фармацевтически приемлемой соли субъекту, нуждающемуся в таком лечении.

По меньшей мере один из аспектов настоящего изобретения также относится к применению ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли с гипометилирующим средством или его фармацевтически приемлемой солью для лечения рака у пациента, нуждающегося в таком лечении.

По меньшей мере один из аспектов настоящего изобретения относится к набору, содержащему по меньшей мере одно лекарственное средство для применения в лечении рака у субъекта с установленной в нем необходимостью. Например, набор может содержать по меньшей мере одно лекарственное средство, которое содержит по меньшей мере одну дозу ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли и инструкции по введению по меньшей мере одного лекарственного средства с гипометилирующим средством или его фармацевтически приемлемой солью; или набор может содержать по меньшей мере одно лекарственное средство, которое содержит по меньшей мере одну дозу гипометилирующего средства или его фармацевтически приемлемой соли и инструкции по введению лекарственного средства с ингибитором ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой солью. В различных вариантах реализации набор может содержать по меньшей мере одно лекарственное средство, которое содержит по меньшей мере одну дозу ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли и по меньшей мере одно лекарственное средство, которое содержит по меньшей мере одну дозу гипометилирующего

- 1 028380 средства или его фармацевтически приемлемой соли и инструкции по введению лекарственного средства. Более того, например, набор может содержать противораковые действующие средства, состоящие по меньшей мере из одного лекарственного средства, которое содержит по меньшей мере одну дозу ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли и по меньшей мере одно лекарственное средство, которое содержит по меньшей мере одну дозу гипометилирующего средства или его фармацевтически приемлемой соли; указанный набор для лечения рака дополнительно содержит инструкции по дозированию лекарственных средств для введения при лечении субъекта с установленной в них необходимостью.

По меньшей мере один из аспектов настоящего изобретения относится по меньшей мере к одному лекарственному средству для применения в лечении рака у субъекта, нуждающегося в таком лечении. Например, по меньшей мере одно лекарственное средство может содержать ингибитор ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемую соль, или гипометилирующее средство, или его фармацевтически приемлемую соль, или их комбинацию.

По меньшей мере один из аспектов настоящего изобретения относится к применению ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли в производстве по меньшей мере одного лекарственного средства для лечения рака, при этом ингибитор ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемую соль вводят с гипометилирующим средством или его фармацевтически приемлемой солью пациенту, нуждающемуся в таком лечении.

По меньшей мере один из аспектов настоящего изобретения относится к применению гипометилирующего средства или его фармацевтически приемлемой соли в производстве по меньшей мере одного лекарственного средства для лечения рака, при этом гипометилирующее средство или его фармацевтически приемлемую соль вводят с ингибитором ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой солью пациенту, нуждающемуся в таком лечении.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 показаны значения комбинаторного индекса отдельно для каждого из ингибиторов ΝΑΕ ΜΕΝ4924 и 1-216 в комбинации с азацитидином или децитабином в клеточных линиях НЬ60, ОС1М2, ΝΒ4 и ТНР-1.

На фиг. 2 показан график объема опухоли в зависимости от времени в модели подкожного ксенотрансплантата НЬ-60 после подкожного лечения только носителем, препаратом ΜΕΝ4924 в качестве единственного средства, азацитидином (Αζα) в качестве единственного средства и совместным введением (п.к.) ΜΕΝ4924 и азацитидина на 1, 4, 8, 11, 15 и 18 дни в указанных дозах.

На фиг. 3 показан график объема опухоли в зависимости от времени в модели подкожного ксенотрансплантата ТНР-1 после подкожного лечения только носителем, препаратом ΜΕΝ4924 в качестве единственного средства, азацитидином (Αζα) в качестве единственного средства и совместным введением (п.к.) ΜΕΝ4924 и азацитидина на 1, 4, 8, 11, 15 и 18 дни в указанных дозах.

На фиг. 4 показан график объема опухоли в зависимости от времени в модели подкожного ксенотрансплантата Οί'Ί-Μ2 после подкожного лечения только носителем, препаратом ΜΕΝ4924 в качестве единственного средства, азацитидином (Αζα) в качестве единственного средства и совместным введением (п.к.) ΜΕΝ4924 и азацитидина на 1, 4, 8, 11, 15 и 18 дни в указанных дозах.

На фиг. 5 показан график процентной доли выживаемости в зависимости от времени в диссеминированной модели НЬ60 после подкожного лечения только носителем, препаратом ΜΕΝ4924 в качестве единственного средства, азацитидином (Αζαί'.') в качестве единственного средства и совместным введением (п.к.) ΜΕΝ4924 и азацитидина на 22, 25, 29, 32, 36, 39 дни в указанных дозах.

В настоящем документе могут быть использованы следующие определения и сокращения.

ЩФ - щелочная фосфатаза,

АЛТ - аланинаминотрансфераза,

ОМЛ - острый миелоидный лейкоз,

АЧН - абсолютное число нейтрофилов,

ΑΟΓ - аспартатаминотрансфераза,

Α^ - площадь под кривой зависимости концентрации в плазме от времени,

ППТ - площадь поверхности тела,

ПО - полный ответ,

МПП - метод постоянной переоценки,

СУР - цитохром Р450,

ДККЛ - диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома,

ДЛТ - дозолимитирующая токсичность,

БПФП - биохимические показатели функции печени,

ФВЛЖ - фракция выброса левого желудочка,

МДС - миелодиспластические синдромы,

ММ - множественная миелома,

МПД - максимальная переносимая доза,

ΝΑΕ - фермент, активирующий №668,

ΝΕΌΌ8 - экспрессируемый предшественниками нервных клеток, уменьшающийся по мере развития

- 2 028380 белок 8,

СДЛА - систолическое давление крови в легочной артерии,

ЧО - частичный ответ,

ОРД - один раз в день,

МРЛ - мелкоклеточный рак легкого.

Используемый в настоящем описании термин дозолимитирующая токсичность (ДЛТ) определяется как негативное событие, которое расценивается назначившим лечение врачом, как связанное с терапией МЬЫ4924, при этом назначивший лечение врач считает, что дозы необходимо ограничить в количестве или вообще остановить их введение. Примеры таких событий включают нейтропению 4 степени (АЧН < 500 клеток/мм³) продолжительностью более 7 последовательных дней, нейтропению 3 степени, осложненную сопутствующей лихорадкой и/или инфекцией, при этом лихорадка характеризуется оральной температурой > 38,5°С, тромбоцитопению 4 степени (количество тромбоцитов < 25000/мм³ но > 10000/мм³) продолжительностью более 7 последовательных дней, тромбоцитопению 3 степени, осложненную кровотечением, количество тромбоцитов < 10000/мм³ в любое время, тошноту 3 степени или выше и/или рвоту, несмотря на применение оптимальной противорвотной профилактики (при этом оптимальная противорвотная профилактика определяется как противорвотная схема, в которой применяют антагонист 5-НТ₃, назначаемый в стандартных дозах и в соответствии со стандартными схемами). Дексаметазон применять не следует из-за его влияния на индуцирование СУР3А, диарею 3 степени или выше, которая возникает, несмотря на максимальную поддерживающую терапию, снижение абсолютных показателей ФВЛЖ на > 10% до показателей < 50% (например, ФВЛЖ = 45% у пациента с исходным показателем ФВЛЖ = 55%), снижение ФВЛЖ до < 40%, увеличение СДЛА до > 50 мм.рт.ст. или в 3 раза от исходных показателей, любую другую негематологическую токсичность 3 степени или выше со следующими исключениями: артралгия/миалгия 3 степени, непродолжительная усталость (< 1 недели) 3 степени, лихорадка 3 степени, которая возникает при отсутствии нейтропении 3 степени или выше, или зарегистрированная инфекция после ежедневного введения МЬЫ4924, задержку лечения более чем на 1 неделю из-за отсутствия адекватного восстановления гематологической или негематологической токсичности, связанной с применением МЬЫ4924, токсичность, связанную с применением МЬЫ4924, которая требует пропуска каких-либо доз МЬЫ4924 во время цикла или прекращения терапии МЬЫ4924.

Используемый в настоящем описании термин клинически эффективное количество и терапевтически эффективное означает количество лекарственного средства, которое является достаточным при соответствующем введении пациенту в течение соответствующего периода времени для того, чтобы (а) вызывать обнаруживаемое снижение тяжести расстройства или состояния заболевания, подлежащего лечению; (б) ослаблять или облегчать у пациента симптомы заболевания или расстройства; или (в) замедлять или предотвращать прогрессирование или иным способом стабилизировать или пролонгировать стабилизацию расстройства или состояния заболевания, подлежащего лечению (например, для предотвращения дополнительного роста опухоли или подавления роста клеток рака).

При введении более одного лекарственного средства клинически эффективное общее количество или терапевтически эффективное общее количество означает, что сумма отдельных количеств каждого лекарственного средства отвечает определению клинически эффективного количества, даже если отдельные количества любого числа отдельных лекарственных средств не отвечают. Например, если 10 мг А не являются клинически эффективным количеством, а 20 мг В не являются клинически эффективным количеством, но введение 10 мг А + 20 мг В приводит в результате по меньшей мере к одному из результатов, перечисленных в определении клинически эффективного количества, тогда сумма 10 мг А + 20 мг В будет считаться клинически эффективным общим количеством.

В любой форме или композиции, вводимая доза(ы) или клинически эффективное (общее) количество могут быть выражены как количество(количества) лекарственного средства (лекарственных средств) на ПИТ пациента, например как мг/м².

Используемый в настоящем описании термин пациент означает человека с установленным диагнозом, демонстрирующего симптомы, или у которого по иным причинам предполагают поражение заболеванием, расстройством или состоянием и, таким образом, у него установлена необходимость в лечении, описанном в настоящем документе.

Используемые в настоящем описании иллюстративные термины включать, такой как, например и подобные (и их вариации, например, включает и включая, примеры), если не указано иное,

- 3 028380 предназначены быть неограничивающими. То есть если явно не указано иное, такие термины предназначены означать но, не ограничиваясь этим, например термин включающий означает включая, но, не ограничиваясь этим.

Используемый в настоящем описании термин площадь поверхности тела (ППТ) рассчитывают с использованием стандартной номограммы, например

Лекарственные средства - ингибиторы ΝΑΕ.

Сообщалось, что соединение ((1З,2З,4К)-4-(4-((1З)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-иламино)-7Нпирроло[2,3-б]пиримидин-7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат

также известное как ΜΕΝ4924, является ингибитором фермента, активирующего ΝΕΌΌ8 (ΝΑΕ). См., например, Т.А. Зоису βΐ а1., №Шге, 2009, 458, 732-737; Τ.Α. Зоиеу βΐ а1., СЕп. Сапсег Кез., 2009, 15 (12), 3912-3916; и Ι.Ε. Вго\упе11 βΐ а1., Мо1. Се11., 2010, 37(1), 102-111. Как обсуждалось выше, ΜΕΝ4924, его фармацевтически приемлемые соли, фармацевтические композиции ΜΕΝ4924 или его фармацевтически приемлемой соли, процессы синтеза и их полиморфные формы были описаны ранее. См., например, заявки на патент СшА под номерами 11/700614 (публ. №2007/0191293), 12/221399 (публ. № 2009/003бб78) и 12/779331 (публ. № 2011/0021544). Лекарственное вещество ΜΕΝ4924 (ΜΕΝ4924-ΛΒ) представляет собой гидрохлоридную соль ΜΕΝ4924, т.е. гидрохлорид ((1З,2З,4К)-4-(4-((1З)-2,3-дигидро-1Н-инден-1иламино)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамата.

Сообщалось, что соединение {(1З,2З,4К)-4-[(6-{[(1К,2З)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил] амино} пиримидин-4-ил)окси] -2-гидроксициклопентил}метил сульфамат

также известное как 1-216, является ингибитором ΝΑΕ. См. заявку на патент США № 13/592389, поданную 23 августа 2012 г., заявляющую приоритет по предварительной патентной заявке США № 61/526830, поданной 24 августа 2011 г., которые включены в настоящее описание в качестве ссылки во всей их полноте. Если между любым из этих документов и настоящим описанием есть какое-либо несоответствие, то настоящее описание является контрольным.

Лекарственные средства - гипометилирующие средства.

Азацитидин представляет собой 4-амино-1-в-И-рибофуранозил-8-триазин-2(1Н)-он (название согласно ШРАС 4-амино-1-в-О-рибофуранозил-1,3,5-триазин-2(1Н)-он)

Как обсуждалось выше, препарат νΐΌΑΖΑ® (азацитидин для инъекций, от компании Се1депе Согрогайоп (Саммит, Нью Джерси); νΐΌΑΖΑ® является зарегистрированным товарным знаком компании Се1депе Согрогайоп) показан и одобрен ΕΌΑ США для лечения пациентов со следующими подтипами миелодиспластических синдромов согласно франко-американо-британской классификации (ФАБ): рефрактерная анемия (РА) или рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами (если они сопровождаются нейтропенией или тромбоцитопенией или требуют проведения гемотрансфузий), рефрактерная анемия с избытком бластов (РАИБ), рефрактерная анемия с избытком бластов на стадии трансформации (РАИБ-Т) и хронический миеломоноцитарный лейкоз (ХММоЛ). Полная информация о назначении пре- 4 028380 парата νΐΩΑΖΑ® доступна во вкладыше коммерческой упаковки.

Децитабин представляет собой 4-амино-1-(2-дезокси-Р-О-эритропентофуранозил)-1,3,5-триазин2(1Н)-он

Препарат ΩΑίΌΟΕΝ® (децитабин для инъекций от компании Е1за1, 1пс., Вудклифф Лейк, Нью Джерси; ΩΑίΌΟΕΝ® является зарегистрированным товарным знаком компании 8ирегСеп, 1пс., Дублин, Калифорния) показан и одобрен ΕΩΛ США для лечения пациентов с миелодиспластическими синдромами (МДС), включая пролеченных и непролеченных ранее, йе ηονο и вторичных МДС всех подтипов, согласно франко-американо-британской классификации (рефрактерная анемия, рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами, рефрактерная анемия с избытком бластов, рефрактерная анемия с избытком бластов на стадии трансформации и хронический миеломоноцитарный лейкоз) и групп промежуточного-1, промежуточного-2, и высокого риска согласно Международной прогностической балльной системы. Полная информация о назначении препарата ΩΑίΌΟΕΝ® доступна во вкладыше коммерческой упаковки.

Введение соединения.

В настоящее время было обнаружено, что введение ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли и гипометилирующего средства или его фармацевтически приемлемой соли может обеспечить синергический эффект.

Ингибитор ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемую соль (ΝΑΕί) можно вводить в комбинации с гипометилирующим средством или его фармацевтически приемлемой солью (ГМС) в виде единой лекарственной формы или в виде отдельной лекарственной формы. При введении в виде отдельной лекарственной формы гипометилирующее средство или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить перед, в то же время или после введения ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли. Как используется в настоящем документе, введение в комбинации ΝΑΕί и ГМС относится не только к одновременному или последовательному введению двух средств, но также к введению обоих соединений в течение одного цикла лечения, как понятно специалисту в данной области техники.

В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к лечению рака у пациента путем введения пациенту ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли (ΝΑΕί) и гипометилирующего средства или его фармацевтически приемлемой соли (ГМС) в соответствии с 28-дневным циклом следующим образом: вводят ΝΑΕί на 1, 4, 8 и 11 дни; вводят ГМС на 1, 2, 3, 4, 5, 8 и 9 дни. Необязательно, первый цикл составляет 35 дней с введением ΝΑΕί на 1, 4, 11 и 15 дни и введением ГМС на 8, 9, 10, 11, 12, 15 и 16 дни с последующими циклами из 28 дней, как описано в предыдущем предложении.

В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к лечению рака у пациента путем введения пациенту ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли (ΝΑΕί) и гипометилирующего средства или его фармацевтически приемлемой соли (ГМС) в соответствии с 28-дневным циклом следующим образом: вводят ΝΑΕί на 1, 3 и 5 дни и вводят ГМС на 1, 2, 3, 4, 5, 8 и 9 дни. Необязательно, первый цикл составляет 35 дней с введением ΝΑΕί на 1, 3 и 5 дни и введением ГМС на 8, 9, 10, 11, 12, 15 и 16 дни с последующими циклами из 28 дней, как описано в предыдущем предложении.

В различных вариантах реализации ΝΑΕί может представлять собой ((18,28,4К)-4-(4-((18)-2,3дигидро-1Н-инден-1-иламино)-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат (ΜΕΝ4924) или {(18,28,4К)-4-[(6-{[(1К,28)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат (1-216). По меньшей мере в одном варианте реализации ΝΑΕί представляет собой ΜΕΝ4924. По меньшей мере в одном варианте реализации ΝΑΕί представляет собой 1-216.

В различных вариантах реализации ГМС может представлять собой азацитидин или децитабин. По меньшей мере в одном варианте реализации ГМС представляет собой азацитидин. По меньшей мере в одном варианте реализации ГМС представляет собой децитабин.

В различных вариантах реализации ΜΕΝ4924 вводят в комбинации с азацитидином. В различных вариантах реализации ΜΕΝ4924 вводят в комбинации с децитабином. В различных вариантах реализации 1-216 вводят в комбинации с азацитидином. В различных вариантах реализации 1-216 вводят в комбинации с децитабином.

В различных вариантах реализации ΝΑΕί вводят в дозе, составляющей около 20, 30, 40, 45, 50, 60 или 75 мг/м². В различных вариантах реализации ГМС вводят в дозе, составляющей около 75 мг/м².

В различных вариантах реализации ΝΑΕί вводят внутривенно. В различных вариантах реализации ΝΑΕί вводят перорально. В различных вариантах реализации ΝΑΕί вводят подкожно. В различных вари- 5 028380 антах реализации ГМС вводят внутривенно или подкожно.

В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к лечению рака у пациента путем введения пациенту ΝΑΕί и гипометилирующего средства ГМС в соответствии с 28-дневным циклом следующим образом: вводят ΝΛΕί на 1, 4, 8 и 11 дни и вводят ГМС на 1, 2, 3, 4, 5, 8 и 9 дни; при этом ΝΛΕί представляет собой ΜΕΝ4924, а ГМС представляет собой азацитидин; при этом ΜΕΝ4924 вводят внутривенно в дозе, составляющей около 20, 30, 40, 45, 60 или 75 мг/м²; при этом азацитидин вводят в дозе, составляющей около 75 мг/м²; и при этом рак представляет собой гематологическое злокачественное заболевание. В различных вариантах реализации гематологическое злокачественное заболевание представляет собой острый миелоидный лейкоз (ОМЛ) или миелодиспластические синдромы (МДС). В различных вариантах реализации гематологическое злокачественное заболевание представляет собой ОМЛ. В различных вариантах реализации гематологическое злокачественное заболевание представляет собой МДС.

В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к лечению рака у пациента путем введения пациенту ΝΛΕί и гипометилирующего средства ГМС в соответствии с 28-дневным циклом следующим образом: вводят ΝΛΕί на 1, 3 и 5 дни и вводят ГМС на 1, 2, 3, 4, 5, 8 и 9 дни; при этом ΝΛΕί представляет собой ΜΕΝ4924, а ГМС представляет собой азацитидин; при этом ΜΕΝ4924 вводят внутривенно в дозе, составляющей около 20, 30, 40, 45, 50, 60 или 75 мг/м²; при этом азацитидин вводят в дозе, составляющей около 75 мг/м²; и при этом рак представляет собой гематологическое злокачественное заболевание. В различных вариантах реализации гематологическое злокачественное заболевание представляет собой острый миелоидный лейкоз (ОМЛ) или миелодиспластические синдромы (МДС). В различных вариантах реализации гематологическое злокачественное заболевание представляет собой ОМЛ. В различных вариантах реализации гематологическое злокачественное заболевание представляет собой МДС.

Лекарственное средство; фармацевтические композиции.

Лекарственное средство может быть фармацевтически приемлемой солью. В некоторых вариантах реализации такие соли получают из неорганических или органических кислот или оснований. Обзор подходящих солей см., например, в публикации Вегде е! а1., 1. РЬатт. δει., 1977, 66, 1-19 и К.етшд1ои: ТЬе δοίοηοο апб Ртаейее о£ РЬаттаеу, 20-е изд., А. Оеииато (ред.), Прршеой ХУПЬапъ & ХУПкиъ (2000).

Примеры подходящих кислотно-аддитивных солей включают ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, лукогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпроприонат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат.

Примеры подходящих основно-аддитивных солей включают соли аммония; соли щелочных металлов, такие как соли натрия и калия; соли щелочно-земельных металлов, такие как соли кальция и магния; соли, образованные органическими основаниями, например соли дициклогексиламина, Ν-метил-Эглюкамин и соли аминокислот, например аргинина, лизина и т.п.

Например, Вегде перечисляет следующие одобренные ΡΌΑ коммерчески доступные соли: анионы: ацетаты, безилат (бензолсульфонат), бензоат, бикарбонат, битартрат, бромид, эдетат кальция (этилендиаминтетраацетат), камсилат (камфорсульфонат), карбонат, хлорид, цитрат, дигидрохлорид, эдетат (этилендиаминтетраацетат), эдизилат (1,2-этандисульфонат), эстолат (лаурилсульфат), эзилат (этансульфонат), фумарат, глюцептат (глюкогептонат), глюконат, глутамат, гликоллиларсанилат (гликолламидофениларсонат), гексилрезорцинат, гидрабамин (Я,№-ди(дегидроабиэтил)этилендиамин), гидробромид, гидрохлорид, гидроксинафтоат, йодид, изетионат (2-гидроксиэтансульфонат), лактат, лактобионат, малат, малеат, манделат, мезилат (метансульфонат), метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, напсилат (2-нафталинсульфонат), нитрат, памоат (эмбонат), пантотенат, фосфат/дифосфат, полигалактуронат, салицилат, стеарат, субацетат, сукцинат, сульфат, таннат, тартрат, теоклат(8-хлортеофиллинат) и триэтиодид; органические катионы: бензатин (Ν,Ν'-дибензилэтилендиамин), хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, меглумин (Ν-метилглюкамин) и прокаин; и катионы металлов: алюминий, кальций, литий, магний, калий, натрий и цинк.

Вегде дополнительно перечисляет следующие не одобренные ΡΌΑ коммерчески доступные (за пределами США) соли: анионы: адипат, альгинат, аминосалицилат, ангидрометиленцитрат, ареколин, аспартат, бисульфат, бутилбромид, камфорат, диглюконат, дигидробромид, дисукцинат, глицерофосфат, гемисульфат, гидрофторид, гидройодид, метиленбис(салицилат), нападизилат (1,5-нафталиндисульфонат), оксалат, пектинат, персульфат, фенилэтилбарбитурат, пикрат, пропионат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат; органические катионы: бенетамин (Ν-бензилфенэтиламин), клемизол (1-р-хлорбензил-2пирролилдин-1'-илметилбензимидазол), диэтиламин, пиперазин и трометамин (трис(гидроксиметил) аминометпн); и катионы металлов: барий и висмут.

Используемый в настоящем описании термин фармацевтически приемлемый носитель относится к материалу, который совместим с субъектом-реципиентом (млекопитающим, например человеком) и

- 6 028380 подходит для доставки активного средства к целевому участку без прекращения активности средства. Связанные с носителем токсичность или побочные эффекты, если таковые имеются, являются, например, соразмерными с рациональным соотношением риск/польза для использования активного средства по назначению.

Фармацевтические композиции для применения по настоящему изобретению могут быть изготовлены способами, такими как, например, способы обычного гранулирования, смешивания, растворения, инкапсулирования, лиофилизации или эмульгирования среди прочих. Композиции могут быть изготовлены в различных формах, включая гранулы, преципитаты, взвеси, порошки, включая высушенные вымораживанием, высушенные с помощью центрифугирования или высушенные распылительной сушкой порошки, аморфные порошки, таблетки, капсулы, сироп, суппозитории, инъекции, эмульсии, эликсиры, суспензии или растворы. Составы могут содержать стабилизаторы, модификаторы рН, поверхностноактивные вещества, солюбилизирующие средства, модификаторы биодоступности и их комбинации.

Фармацевтически приемлемые носители, которые могут быть использованы в композиции настоящего изобретения, включают иониты, окись алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как человеческий сывороточный альбумин, буферные вещества, такие как фосфаты или карбонаты, глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия, смесь частичных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, вода, соли или электролиты, такие как протаминсульфат, динатрийгидрофосфат, калийгидрофосфат, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрийкарбоксиметилцеллюлоза, полиакрилат, воски, блок-полимеры полиэтилена и полиоксипропилена и ланолин.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению сформулированы для фармацевтического введения млекопитающему, такому как человек. Такие композиции можно вводить перорально, парентерально, путем аэрозольной ингаляции, местно, ректально, назально, трансбуккально, вагинально или через имплантированный резервуар.

Используемый в настоящем описании термин парентерально включает подкожный, внутривенный, внутрибрюшинный, внутримышечный, внутрисуставной, внутрисиновиальный, интрастернальный, интратекальный, внутрипеченочный, в очаг поражения и интракраниальный способ введения инъекции или инфузии. В некоторых вариантах реализации композиции вводят перорально, внутривенно или подкожно. В некоторых вариантах реализации композиции вводят перорально. В некоторых вариантах реализации композиции вводят внутривенно. Указанные составы могут быть разработаны с кратковременным действием, с быстрым высвобождением или с пролонгированным действием. Кроме того, композиции можно вводить местными, а не системными способами, такими как введение (например, путем инъекции) в место локализации опухоли.

Фармацевтические составы могут быть приготовлены в виде жидких суспензий или растворов с использованием жидкости, например масла, воды, спирта и их комбинаций. Могут быть включены солюбилизирующие средства, такие как циклодекстрины. Для перорального или парентерального введения могут быть добавлены фармацевтически пригодные поверхностно-активные вещества, суспендирующие средства или эмульгирующие средства. Суспензии могут включать масла, такие как арахисовое масло, кунжутное масло, хлопковое масло, кукурузное масло и оливковое масло. Препараты в форме суспензии могут также содержать сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат, изопропилмиристат, глицериды жирных кислот и ацетилированные глицериды жирных кислот. Составы в форме суспензии могут включать спирты, такие как этанол, изопропиловый спирт, гексадециловый спирт, глицерин и пропиленгликоль; простые эфиры, такие как поли(этиленгликоль); нефтяные углеводороды, такие как минеральное масло и вазелин, и воду.

Стерильные инъекционные формы этих фармацевтических композиций могут представлять собой водные или масляные суспензии. Эти суспензии могут быть составлены в соответствии со способами, известными в данной области техники с использованием подходящих диспергирующих или увлажняющих средств и суспендирующих средств. Стерильный препарат для инъекций может также быть стерильным раствором или суспензией для инъекций в нетоксичном, приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе, таком как, например, раствор в 1,3-бутандиоле. Среди иллюстративных носителей и растворителей, которые могут быть использованы, находится вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды обычно используют стерильные нелетучие масла. С этой целью может быть использовано любое мягкое нелетучее масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, пригодны для приготовления препаратов для инъекций, так же как и природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, например, в их полиоксиэтилированных вариантах. Эти масляные растворы или суспензии могут также содержать длинноцепочечный спиртовой разбавитель или диспергирующее средство, такое как карбоксиметилцеллюлоза или подобные диспергирующие средства, которые обычно используют в составе фармацевтически приемлемых лекарственных форм, включая эмульсии и суспензии. Другие обычно используемые поверхностно-активные вещества, такие как Твин, Спан и другие эмульгаторы или усилители биодоступности, которые обычно используют при изготовлении фармацевтически приемле- 7 028380 мых твердых, жидких или других лекарственных форм, также могут быть использованы для целей композиции. Соединения могут быть составлены для парентерального введения путем инъекции, например, путем болюсной инъекции или непрерывной инфузии. Стандартная лекарственная форма для инъекций может находиться в ампулах или в многодозовых контейнерах.

Например, в различных вариантах реализации настоящего изобретения, ΝΛΕί представляет собой лекарственный продукт для инъекций ΜΡΝ4924 (ΜΡΝ4924-ΙΌΡ). ΜΡΝ4929-ΙΌΡ входит в состав лекарственного средства вместе со следующими наполнителями: лимонная кислота; гидроксид натрия; сульфобутилэфиры циклодекстрина, соли натрия (Сар11ко1®) и вода для инъекций. По меньшей мере в одном варианте реализации ΜΡΝ4929-ΙΌΡ состоит из 10 мг/мл ΜΕΝ4924 (в виде свободного основания) в растворе, содержащем 50 мМ цитратного буфера и 100 мг/мл сульфобутилового эфира β-цикло декстрина, рН 3,3.

При разбавлении ΜΡΝ4924-ΙΌΡ в солевом растворе возникали проблемы со стабильностью. ΜΡΝ4924-ΙΌΡ может быть использован в течение периода повторного исследования, указанного в сертификате анализа. На практике ΜΡΝ4924-ΙΌΡ хранили в холодильнике при температуре 5±3°С. Каждый стеклянный флакон типа Ι, который номинально содержит 5 мл компаундированного стерильного раствора, герметично закупоривали пробкой из бутилового каучука с покрытием из Тейои® и запечатывали сверху алюминиевым колпачком с отрывной пластмассовой накладкой РНр-Ой®.

В различных вариантах реализации настоящего изобретения ГМС представляет собой азацитидин. Азацитидин является коммерчески доступным препаратом νΙΌΛΖΛ® (азацитидин для инъекций), который поставляется в виде лиофилизированного порошка в одноразовых флаконах по 100 мг. За дополнительной информацией о препарате νΤΟΛΖΆ® обращаться к вкладышу в упаковке.

Эти фармацевтические композиции можно вводить перорально в любой приемлемой для перорального введения лекарственной форме, включая капсулы, таблетки, водные суспензии или растворы. Когда для перорального применения необходимы водные суспензии, активный ингредиент может быть объединен с эмульгирующими и суспендирующими средствами. При желании также могут быть добавлены определенные подсластители, ароматизаторы или красители. Для перорального введения в форме капсулы, пригодные разбавители включают лактозу и высушенный кукурузный крахмал. В случае таблеток для перорального применения, используемые обычно носители, включают лактозу и кукурузный крахмал. Также обычно добавляют смазывающие средства, такие как стеарат магния. Покрытия могут быть использованы для различных целей, например, чтобы скрыть вкус, чтобы влиять на место растворения или поглощения или для того, чтобы продлить действие лекарственного средства. Покрытия могут наноситься на таблетку или на гранулированные частицы для использования в капсуле.

Кроме того, эти фармацевтические композиции можно вводить в форме суппозиториев для ректального введения. Они могут быть приготовлены путем смешивания средства с подходящим нераздражающим носителем, который является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре и, следовательно, будет плавиться в прямой кишке с высвобождением лекарственного средства. Такие материалы включают масло какао, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.

Эти фармацевтические композиции можно также применять местно, например, когда цель лечения включает области или органы, легко доступные для местного нанесения, включая заболевания глаз, кожи или нижнего отдела кишечника. Подходящие для местного применения составы могут быть легко приготовлены для каждой из этих областей или органов.

Местное применение для нижнего отдела кишечника может быть осуществлено с помощью композиции в форме ректальных суппозиториев (см. выше) или в форме подходящей композиции для клизмы. Также можно применять местные трансдермальные пластыри. Для местного применения фармацевтические композиции могут быть составлены в виде подходящей мази, содержащей активный компонент, суспендированный или растворенный в одном или нескольких носителях. Носители для местного применения соединений настоящего изобретения включают минеральное масло, жидкий вазелин, белый вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, соединение полиоксипропилена, эмульгирующий воск и воду. Кроме того, фармацевтические композиции могут быть сформулированы в виде подходящего лосьона или крема, содержащего активный(ые) компонент(ы), суспендированный или растворенный по меньшей мере в одном фармацевтически приемлемом носителе. Подходящие носители включают минеральное масло, сорбитан моностеарат, полисорбат 60, воск цетиловых эфиров, цетеариловый спирт, 2октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.

Для офтальмологического применения фармацевтические композиции могут быть составлены в виде микронизированных суспензий в изотоническом стерильном физиологическом растворе с установленным уровнем рН, или, например, в виде растворов в изотоническом стерильном физиологическом растворе с установленным уровнем рН, с консервантом или без, таким как хлорид бензилалкония. Кроме того, для офтальмологического применения фармацевтические композиции могут быть введены в состав мази, такой как вазелин.

Фармацевтические композиции можно также вводить при помощи назального аэрозоля или ингаляции. Такие композиции могут быть приготовлены в соответствии со способами, известными в области

- 8 028380 фармацевтических композиций и могут быть приготовлены в виде растворов в физиологическом растворе с использованием бензилового спирта или других подходящих консервантов, усилителей абсорбции для повышения биодоступности, фторуглеводородов и/или других обычных солюбилизирующих или диспергирующих средств.

Раскрытые в настоящем документе способы могут быть использованы для лечения заболеваний, расстройств и состояний при которых ингибирование активности фермента ΝΑΕ является пагубным для выживаемости и/или роста больных клеток или ткани (например, клетки, чувствительные к ингибированию ΝΑΕ; ингибирование активности ΝΑΕ разрушает механизмы заболевания, снижение активности ΝΑΕ стабилизирует белки, которые являются ингибиторами механизмов болезни, снижение активности ΝΑΕ приводит к ингибированию белков, которые являются активаторами механизмов заболевания). Заболевания, расстройства и состояния также могут включать в себя те, которые требуют эффективной активности куллина и/или убиквитинирования, эту активность можно регулировать путем уменьшения активности фермента ΝΑΕ.

Например, раскрытые в настоящем документе способы могут быть пригодны в лечении расстройств, вызывающих клеточную пролиферацию, включая расстройства, которые требуют эффективного метаболического пути куллин-зависимого убиквитинирования и протеолиза (например, убиквитинпротеасомный метаболический путь) для поддержания и/или прогрессирования болезненного состояния. Способы настоящего изобретения могут быть пригодны в лечении расстройств, опосредованных белками (например, активация ΝΕκΒ, активация р27^Кф, активация ρ2ΐ'^νΛΙ''^,;ΙΡι. активация р53), которые регулируются активностью ΝΑΕ. Репрезентативные расстройства включают пролиферативные расстройства, особенно онкологические заболевания и воспалительные расстройства (например, ревматоидный артрит, воспалительные заболевания кишечника, астму, хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ), остеоартрит, дерматоз (например, атопический дерматит, псориаз), сосудистые пролиферативные расстройства (например, атеросклероз, рестеноз) аутоиммунные заболевания (например, рассеянный склероз, отторжение ткани и органа)); а также воспаление, связанное с инфекцией (например, иммунные ответы), нейродегенеративные расстройства (например, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, заболевание двигательных нейронов, невропатический болевой синдром, расстройства триплетного повтора, астроцитома и нейродегенерация в результате заболевания печени алкогольной этиологии), ишемическое повреждение (например, инсульт) и кахексия (например, ускоренный распад белков мышц, сопровождающий различные физиологические и патологические состояния (например, повреждение нерва, голодание, лихорадка, ацидоз, ВИЧ-инфекция, раковое заболевание и некоторые эндокринопатии)).

Раскрытые в настоящем документе способы могут быть пригодны, например, для лечения рака. Используемый в настоящем описании термин рак относится к клеточному расстройству, характеризующемуся неконтролируемой или с нарушенным регулированием клеточной пролиферацией, снижением клеточной дифференциации, патологической способностью вторгаться в окружающие ткани и/или способностью создавать новообразование в эктопических участках. Термин рак включает твердые опухоли и опухоли, происходящие из кроветворной ткани. Термин рак охватывает заболевания кожи, тканей, органов, костей, хрящей, крови и сосудов. Термин рак дополнительно охватывает первичные и метастатические раковые заболевания.

В некоторых вариантах реализации рак представляет собой твердую опухоль. Примеры твердых опухолей, которые можно лечить с помощью способов настоящего изобретения, включают рак поджелудочной железы; рак мочевого пузыря; колоректальный рак; рак молочной железы, включая метастатический рак молочной железы; рак предстательной железы, включая андроген-зависимый и андрогеннезависимый рак предстательной железы; рак почки, включая, например, метастатическую почечноклеточную карциному; гепатоцеллюлярный рак; рак легкого, включая, например, мелкоклеточный рак легкого (МРЛ), немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), бронхиолоальвеолярную карциному (БАК) и аденокарциному легкого; рак яичников, включая, например, прогрессирующий эпителиальный или первичный перитонеальный рак; рак шейки матки; рак желудка; рак пищевода; рак головы и шеи, включая, например, плоскоклеточный рак головы и шеи; меланому; нейроэндокринный рак, включая метастатические нейроэндокринные опухоли; опухоли головного мозга, включая, например, глиому, анапластическую олигодендроглиому, мультиформную глиобластому взрослых и анапластическую астроцитому взрослых; рак костей и саркому мягких тканей.

В некоторых вариантах реализации рак представляет собой гематологическое злокачественное заболевание. Примеры гематологических злокачественных заболеваний включают острый миелоидный лейкоз (ОМЛ); хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ), включая ХМЛ в фазе акселлерации и ХМЛ в бластной фазе (ХМЛ-БФ); острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ); хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ); болезнь Ходжкина (БХ); неходжкинскую лимфому (НХЛ), включая фолликулярную лимфому и лимфому из клеток зоны мантии; В-клеточную лимфому; Т-клеточную лимфому; множественную миелому (ММ); макроглобулинемию Вальденстрема; миелодиспластические синдромы (МДС), включая рефрактерную анемию (РА), рефрактерную анемию с кольцевыми сидеробластами (РАКС), (рефрактерную анемию с избытком бластов (РАИБ) и РАИБ на стадии трансформации (РАИБ-Т) и миелопролиферативные синдромы.

- 9 028380

В некоторых вариантах реализации врач может поставить пациенту диагноз преимущественно одного типа рака. В некоторых вариантах реализации врач может поставить пациенту диагноз наличия более одного типа рака. В некоторых вариантах реализации диагноз представляет собой преимущественно один тип миелодиспластических синдромов. В некоторых вариантах реализации диагноз представляет собой более одного типа миелодиспластических синдромов.

В некоторых вариантах реализации способы настоящего изобретения применяют для лечения пациента, имеющего раковую опухоль, или с риском развития, или испытывающего рецидив раковой опухоли, такой как колоректальный рак, рак яичников, рак легких, рак молочной железы, рак желудка, рак предстательной железы и рак поджелудочной железы. В некоторых вариантах реализации способы настоящего изобретения применяют для лечения пациента, имеющего гематологический рак, или с риском развития, или испытывающего рецидив гематологического рака, такого как ОМЛ, ХМЛ, ХМЛ-БФ, ОЛЛ или ХЛЛ.

Для более полного понимания настоящего изобретения представлены нижеследующие примеры. Эти примеры являются только иллюстративными и в любом случае не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

Примеры

1. Анализы жизнеспособности клеток ίη νίΐίο.

В протоколе исследования использовали черные/прозрачные 384-луночные планшеты Вюсоа!™, покрытые поли-Э-лизином (Ββεΐοη Пюктзощ Франклин Лейкс, Нью-Джерси). Соответствующий ингибитор ΝΑΕ растворяли в ДМСО и вносили в лунки с использованием устройства обработки жидкости ЕсНо (ЕаЬсу1е, Саннивейл, Калифорния). Клеточные линии НЕ60 и ТНР-1 были получены из АТСС (Американской коллекции типовых культур, Манассас, Вирджиния), в то время как линии ΝΒ4 и ОС1М2 были получены из Ό8ΜΖ (Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур ОтЪН, Брауншвейг, Германия). В лунки каждого планшета добавляли клеточную суспензию из одной из линий. Часть лунок использовали в качестве положительных контролей (не добавляли соединение), в то время как другую часть лунок использовали в качестве отрицательных контролей (не добавляли клетки). Планшеты инкубировали в течение 72 ч, а затем измеряли жизнеспособность клеток с помощью анализа АТРЕйе (РегктЕ1тег, Уолтем, Массачусетс).

Статистические анализы.

Нормализация. Данные жизнеспособности нормализовались отдельно для каждого планшета путем масштабирования данных таким образом, чтобы медиана отрицательных контролей была равна 0, а медиана положительных контролей была равна 100. Более формально (7, - медиана ((/)

V 1=100 -=медиана (и+) - медиана (£/) где V) представляет собой нормализованную жизнеспособность ί-й лунки, Ц) представляет собой необработанные измерения жизнеспособности, медиана (ϋ_-) представляет собой медиану отрицательных контролей, а медиана (и+) представляет собой медиану положительных контролей. После нормализации контроли утилизировали.

Модель поверхности отклика и приведение в соответствие. Модель поверхности отклика использовалась для того, чтобы описать взаимосвязь между нормализованной жизнеспособностью и концентрацией лекарственного средства. Пусть для данного планшета

С = (С,//,) + (С_в//₂) х = (С,//,)/С £,пах = ^Е\ +Е2Х + Е3Х² +Е4Х³

I = 1 + /₃х(1-х) = 5, + 8₂х + 8₃х² + 84х³ Е = 100-Лтах(1 + (//С)^хГ' _{+ошибка} где Е₁, Е₂, Е₃, Е₄, Ι₁, Ι₂, 1₃, 8₁, 8₂, 8₃ и 8₄ являются параметрами, С_А и С_В представляют собой соответствующие концентрации лекарственных средств А и В, а V представляет собой показатель нормализованной жизнеспособности. Предполагалось, что значения ошибок были независимыми и одинаково распределенными нормальными случайными величинами. Эта модель представляет собой продолжение уравнения Хилла (Α.ν. Ηί11, Е Рйузю1., 1910, 40, ίν-νίί), которое обычно используется для моделирования эффекта одного лекарственного средства. Данные приводили в соответствие с этой моделью посредством способа максимального правдоподобия с помощью программы статистического программного обеспечения К К ^еνе1οртеηΐ Соге Теат (2008) (К: язык программирования и программная среда для статистических расчетов. К Фонд статистических расчетов, Вена, Австрия. Ι8ΒΝ 3-900051-07-0, иКЬ Ьйр://^^^.Крго_)ес!.огд).

Контроль качества. К планшетам применяли три типа контроля качества. Вначале проверили, что

- 10 028380 изменение положительных контролей и среднее значение отрицательных контролей были незначительными. Затем проверили, что новые данные согласуются с данными предыдущих исследований с одним лекарственным средством. И, наконец, проанализировали соответствие остатков поверхности отклика, чтобы гарантировать, что остаточная сумма квадратов достаточно мала. Все эти виды контроля качества были основаны на числовых порогах для принятия решения прошел/не прошел, и те же пороговые значения были использованы для всех планшетов в исследовании. Если планшет не проходил любой вид контроля качества, его удаляли из анализа.

Измерение синергии ίη νίΐτο. В качестве показателя синергии лекарственных средств был использован комбинаторный индекс (М.С. ВегепЬаиш, Е ТНеог. ΒίοΙ, 1985, 114, 413-431). Комбинаторный индекс вычисляют на основе изоболограммы, которая представляет собой срез поверхности доза-ответ при постоянной жизнеспособности. Для настоящего анализа используют 50% изоболограмму, которая является контуром дозы, обладающей 50% жизнеспособностью. Величины ЕС50_А и ЕС50_В определяются, как соответствующие дозы лекарственных средств А и В по одному, обладающие жизнеспособностью 50%. Для точки (Ό_Α, Ό_Β) по 50% изоболограмме, комбинаторный индекс определяют как (Э_А/ЕС50_А) + (Э_В/ЕС50_В). Поскольку выбор (Ό_Α, Ό_Β) может быть произвольным, используют ограничительное условие Э_А/ Ό_β= ЕС50_а/ЕС50_в. Если комбинаторный индекс равен менее 1, это означает, что изоболограмма вогнута внутрь, и что сочетание лекарственных средств является синергическим. Наоборот, если комбинаторный индекс более 1, 50% изоболограмма выгнута наружу, указывая на антагонизм. В способе более точного анализа, который применяется в соответствии с настоящим изобретением, значения комбинаторного индекса в диапазоне 0,8-1,2 считаются аддитивными. Это правило предотвращает классификацию небольших отклонений от аддитивности, как синергичность.

Для каждого условия был выполнен двусторонний 1-тест, чтобы определить, отличался ли средний комбинаторный индекс от 1. Для корректировки результирующих р-значений для многократной проверки гипотез был использован способ Бенджамини-Хохберга (Υ. Веп_)ат1ш апб Υ. НосЬЬетд, 1. К. §1а1. Зое. Зепс5 В (§1а1. Ме1Ьобо1), 1995, 57 (1), 289-300). Скорректированное р-значение ниже 0,05 считалось статически значимым. Для того чтобы классифицировать комбинацию, как синергическую, авторы изобретения потребовали обязательного выполнения трех критериев: средний комбинаторный индекс для условия должен быть меньше 1, различие должно быть статистически значимым, и комбинаторный индекс должен быть за пределами диапазона (0,8, 1,2). Этот третий критерий предупреждал классификацию небольших отклонений от аддитивности, как синергию. Комбинации, для которых р-значение было выше 0,05 или комбинаторный индекс находился в пределах диапазона (0,8, 1,2), классифицировали как аддитивные.

Анализы жизнеспособности клеток были использованы для оценки эффекта комбинации ίη νίΙΐΌ для каждого из двух ингибиторов ΝΑΕ: ΜΕΝ4924 и 1-216 с каждым из двух гипометилирующих средств: азацитидином и децитабином, на четырех клеточных линиях: НЬ60, ОС1М2, ΝΒ4 и ТНР-1. На фиг. 1 показан комбинаторный индекс для всех исследований, прошедших контроль качества среди каждой тестируемой комбинации. Результаты расположены по условию. Ниже в табл. 1 приведен список среднего комбинаторного индекса, скорректированного р-значения и заключение для каждой определенной комбинации. Как показано в табл. 1, все восемь комбинаций ингибитора ΝΑΕ и гипометилирующего средства продемонстрировали синергический эффект на обеих клеточных линиях ОС1М2 и ΝΒ4. На линии НЬ60 оба ингибитора ΝΑΕ продемонстрировали синергию с децитабином и показали аддитивный эффект с азацитидином. На линии ТНР-1 оба ингибитора ΝΑΕ продемонстрировали аддитивный эффект с азацитидином. В связи с отсутствием активности единственного средства децитабина на линию ТНР-1 комбинаторный индекс для исследований ίη νίΙΐΌ ингибиторов ΝΑΕ и децитабина на линию ТНР-1 не мог быть рассчитан.

- 11 028380

Таблица 1

Краткое изложение значений комбинаторного индекса

Ингиби тор ΝΑΕ	Г ипометилиру ющее средство	Клеточ ная линия	Количес тво прошед ших планшет ов	Средний комбинатор ный индекс	Скорректиров анное Р- значение	Заключен ие
ΜΙ2Ν49 24	Децитабин	НБ60	6	0,45	6,2x10’4	Синергия
1-216	Децитабин	НЬ60	4	0,46	5,8x10'3	Синергия
Μ6Ν49 24	Азацитидин	НЬ60	5	1,03	1,1x10·'	Аддитивн ость
1-216	Азацитидин	НЬ60	3	0,97	4,9x10’'	Аддитивн ость
ΜΕΝ49 24	Децитабин	ОС1М2	7	0,52	1,4x10’4	Синергия
1-216	Децитабин	ОС1М2	5	0,45	4,0x1ο'5	Синергия
ΜΕΝ49 24	Азацитидин	ОС1М2	5	0,44	4,8х10'6	Синергия
1-216	Азацитидин	ОС1М2	3	0,41	2,7x10'3	Синергия
ΜΙ.Ν49 24	Децитабин	ΝΒ4	5	0,61	1,4x10'4	Синергия
1-216	Децитабин	ΝΒ4	4	0,61	2,7х10'3	Синергия
ΜΕΝ49 24	Азацитидин	ΝΒ4	4	0,52	5,8х10'3	Синергия

1-216	Азацитидин	ΝΒ4	4	0,56	5,3x10’3	Синергия
ΜΙ/Ν49 24	Децитабин	ТНР-1	4	нд	нд	нд
1-216	Децитабин	ТНР-1	4	нд	нд	нд
Μ6Ν49 24	Азацитидин	ТНР-1	4	1,10	2,4x10’2	Аддитивн ость
1-216	Азацитидин	ТНР-1	4	1,11	2,7x10'2	Аддитивн ость

На фиг. 1 показаны значения комбинаторного индекса для каждого планшета, расположенные по условию (т.е. данная комбинация лекарственных средств, применяемая к данной клеточной линии). Эти результаты были обобщены путем расчета среднего комбинаторного индекса для каждого условия, как показано в табл. 1.

2. Модели эффективности в опухоли ΐη νίνο.

Модель подкожных ксенотрансплантатов.

Субъекты исследования. Опухолевые клетки линии НЬ-60 (2х10⁶) в 100 мкл забуференного фосфатом физиологического раствора с Матригель™ (ΒΌ Вюзщепеез, Бедфорд, Массачусетс) асептически вводили при помощи инъекции в подкожное пространство правой боковой спинной поверхности самкам

- 12 028380 голых мышей линии Νογ (в возрасте 5-8 недель, Сйаг1ез К1уег ЬаЬогаЮпез, Уилмингтон, Массачусетс) с помощью иглы 26 калибра. Опухолевые клетки линии ТНР-1 (2,5 х10⁶) или ОС1-М2 (5х10⁶) в 100 мкл забуференного фосфатом физиологического раствора с Матригель™ асептически вводили при помощи инъекции в подкожное пространство правой боковой спинной поверхности самкам мышей линии СВ.17 8СГО (в возрасте 5-8 недель, Сйаг1ез Ктуег ЬаЬогаЮпез) с помощью иглы 26 калибра.

Начиная с седьмого (7) дня после инокуляции, опухоли измеряли два раза в неделю, используя штангенциркуль. Объемы опухолей рассчитывали с использованием стандартных способов (0,5 х (длина х ширина²)). После того как опухоли достигали объема около 200 мм³, мышей рандомизировали в группы по 10 и вводили подкожно при помощи инъекции соединение-ингибитор (200 мкл) в различных дозах и схемах, при этом первый день введения дозы определяли как день 1. Все контрольные группы получали только носитель. Размер опухоли и массу тела измеряли примерно два раза в неделю в течение всего срока исследования. Мышей умерщвляли, когда объем опухоли достигал 10% от их массы тела, или когда средний объем опухоли в группе лечения или в контрольной группе составлял около 2000 мм³. Схема введения доз лекарственных средств для каждого исследования являлась следующей: МЙ-^924 и азацитидин вводили раздельно или совместно путем подкожной инъекции на 1, 4, 8, 11, 15 и 18 дни в указанных дозах. За ростом опухоли продолжали наблюдать после периода введения доз. Зарегистрированный средний объем опухоли в зависимости от времени показан на фиг. 2-4.

Статистические анализы синергии в отношении роста опухоли в моделях подкожного ксенотрансплантата.

Для моделей ТНР-1 и ОС1-М2 анализировали измерения с 0 до 21 дня. Для модели НЬ60 использовали измерения с 0 до 14 дня, так как у некоторых мышей после 14 дня опухоли превышали допустимый объем. Ко всем объемам опухоли добавляли 1 перед 1од₁₀ преобразованием. Эти значения сравнивали между группами лечения для оценки того, были ли различия в тенденциях с течением времени статистически значимыми. Для сравнения пар групп лечения следующую модель смешанных эффектов линейной регрессии приводили в соответствие с данными при помощи способа максимального правдоподобия

где №ук представляет собой 1од₁₀ объема опухоли в точке времени ί у животного к при лечении ί, У;_0к представляет собой 1од₁₀ объема опухоли на 0 день у животного к при лечении ί, день представляет собой среднецентрированную точку времени и рассматривается в качестве постоянной переменной и е^_к представляет собой остаточную ошибку. Для учета повторных измерений у того же животного с течением времени применяют пространственную ковариационную матрицу степенной зависимости. Условия взаимодействия, а также условия деньД если они не являются статистически значимыми, удаляют.

Тест отношения правдоподобия используют для оценки того, демонстрирует ли данная пара групп лечения различия, которые являются статистически значимыми. -2 1од правдоподобия полной модели сравнивают с моделью без каких-либо условий лечения (упрощенная модель) и разницу значений исследуют с помощью теста хи-квадрат. Степени свободы теста рассчитывают как разность между степенями свободы полной модели и упрощенной модели.

В дополнение к статистической значимости была найдена мера величины эффекта для каждого лечения. Прогнозируемые различия в 1од объемах опухолей (№ц_к-№_30к) в зависимости от времени берут из вышеуказанной модели для расчета значений средней площади под кривой (АИС) для каждой группы лечения. Значение бАИС рассчитывают следующим образом:

средняя (АиС_контроль) -средняя(АиС лечение) алис=1ооI средняя (АиС_{контроль})|

Для анализов синергии наблюдаемые различия в 1од объемах опухолей используют для расчета значений АИС для каждого животного. В тех случаях, когда животное в группе лечения удаляют из исследования, последний наблюдаемый объем опухоли продвигают через все последующие моменты времени. Для повышения надежности анализа синергии, к значениям АИС из каждой группы лечения применяют следующую процедуру. Пусть х будет множеством значений АИС для данной группы лечения. Диапазон интересов определяют как (медиана(х) - 5 * ΜΑϋ(χ), медиана(х) + 5 * МАЭ(х)).

Здесь МАО является медианой абсолютного отклонения х. Если какое-либо значение в множестве х выпадает за пределы этого диапазона, то это значение заменяют на ближайшее пограничное значение. Процедура была неитеративной, так что диапазон был рассчитан только один раз для каждой группы лечения.

Оценку синергии в баллах для комбинации лечений А и В определяют как

100 * (средняя(АиСдв) - средняя(АиС_А) - средняя(АиСв) + средняя(АиС_ктр)) / средняя(АиС_Ктр) где АИС_Ав, АИС_а, АИС_в и АИС_с11 представляют собой значения АИС для животных в группе комбинированной терапии, группе А, группе В и в контрольной группе соответственно. Стандартную ошибку

- 13 028380 оценки синергии рассчитывают на основе колебаний значений ЛиС у животных. Для определения того, существенно ли отличается оценка синергии в баллах от нуля, используют двухсторонний 1-тест. Если Рзначение находится ниже 0,05, а оценка синергии в баллах меньше нуля, то комбинация считается синергической. Если Р-значение находится выше 0,05, то комбинация считается аддитивной.

Мышиные модели ксенотрансплантата используют для ίη νίνο оценки эффекта комбинированного лечения ингибитора ΝΑΕ препарата ΜΕΝ4924 и гипометилирующего средства азацитидина. На фиг. 2-4 показан объем опухоли в зависимости от времени в трех моделях подкожного ксенотрансплантата после лечения носителем в качестве единственного средства, препаратом ΜΕΝ4924 в качестве единственного средства, азацитидином (Αζα) в качестве единственного средства и совместным введением (п.к.) ΜΣΝ4924 и азацитидина на 1, 4, 8, 11, 15 и 18 дни в указанных дозах.

В модели подкожного ксенотрансплантата НЬ-60 (фиг. 2), ΜΕΝ4924 и азацитидин в качестве единственного средства оказывали незначительное влияние на рост опухоли. В отличие от этого совместное введение доз ΜΣΝ4924 и азацитидиана привело к регрессии опухоли со статистической оценкой синергии.

В модели ксенотрансплантата ТНР-1 (фиг. 3), азацитидин в качестве единственного средства оказывал незначительное влияние на рост опухоли, тогда как препарат ΜΣΝ4924 в качестве единственного средства подавлял рост опухоли. В отличие от этого совместное введение доз ΜΣΝ4924 и азацитидина привело к регрессии опухоли. Несмотря на статистическую оценку аддитивности в этой модели, а не синергии, фигура четко показывает преимущество комбинации: подавление роста опухоли (одно средство) по сравнению с регрессией опухоли при применении комбинации.

Дополнительной демонстрацией улучшенной активности в ТНР-1 является задержка возобновления роста опухоли при применении комбинации по сравнению с применением каждого средства по отдельности. Дополнительное преимущество, обеспечиваемое лечением комбинацией относительно лечения одним средством, было статистически значимым, как показано в табл. 3Ь (Р-значение < 0,05).

В модели подкожного ксенотрансплантата Ο6Τ-Μ2 (фиг. 4) ΜΣΝ4924 и азацитидин в качестве единственного средства подавляли рост опухоли. В отличие от этого совместное введение доз ΜΣΝ4924 и азацитидина привело к регрессии опухоли со статистической оценкой синергии.

Диссеменированная модель ксенотрансплантата.

Субъекты исследования. Опухолевые клетки линии НЬ-60 (1 х 10⁷) в 100 мкл среды ΙΜΏΜ инокулировали в латеральную вену самкам мышей линии СВ-17 8СГО (в возрасте 8-10 недель, СЬаНез ΚίνβΓ ЬаЬога1опез, Уилмингтон, Массачусетс) с помощью иглы 27 калибра. На 20 день после инокуляции мышей рандомизировали в группы по 10. Начиная с 22 дня мышам вводили подкожно носитель, 180 мг/кг ΜΕΝ4924, 10 мг/кг азацитидина или комбинацию 180 мг/кг ΜΕΝ4924 и 10 мг/кг азацитидина, с использованием той же схемы два раза в неделю, которая описана в исследованиях подкожного ксенотрансплантата (введение дозы на 22, 25, 29, 32, 36, 39 дни). За потерей массы тела и признаками заболевания, включая парез или паралич задних конечностей и появление пальпируемых и внутренних твердых опухолей у мышей наблюдали по меньшей мере два раза в неделю. Регистрировали день, на который животное умирает или его умерщвляют из-за тяжести болезней. Время выживаемости показано на фиг. 5.

Статистический анализ синергии для выживаемости в диссеминированной модели ксенотрансплантата.

Чтобы определить синергию в отношении времени выживаемости, для каждой группы лечения рассчитывают среднее время выживаемости и соответствующие стандартные ошибки. Синергию выживаемости определяют как средняя(выживаемостьАв) - средняя(выживаемость_А) - средняя(выживаемость_в) + средняя(выживаемость_ктр) где выживаемость^, выживаемость_А, выживаемость_В, и выживаемость_ктр представляют собой время выживаемости животных в группе комбинированного лечения, группе А, группе В и контрольной группе соответственно. Стандартную ошибку синергии выживаемости находят путем добавления стандартной ошибки каждого из четырех условий в квадрате. Для определения того, существенно ли отличается выживаемость от нуля, используют двухсторонний Ζ-тест. Если Р-значение находится ниже 0,05, а синергия выживаемости больше нуля, то комбинация считается синергической. Если Р-значение находится выше 0,05, то комбинация считается аддитивной.

На фиг. 5 показана выживаемость в зависимости от времени в диссеминированной модели ксенотрансплантата, в которой клетки линии НЬ-60 инокулируют посредством внутривенной инъекции и мышей лечат носителем, препаратом ΜΕΝ4924 в качестве единственного средства, азацитидином в качестве единственного средства и совместным введением п.к. ΜΕΝ4924 и азацитидина, начиная на 22 день после инокуляции в указанных дозах, с использованием той же схемы два раза в неделю, которая описана для исследований на фиг. 2-4. В диссеминированной модели НЬ-60 (фиг. 5) ΜΕΝ4924 и азацитидин, применяемые в качестве единственного средства, оба увеличивали среднее время выживаемости по сравнению с контрольной группой (8,4 дня увеличения для ΜΕΝ4924 и 21,1 дня увеличения для азацитидина). Комбинация ΜΕΝ4924 и азацитидина увеличивала среднее время выживаемости на 36,7 дней, что

- 14 028380 на 7,2 дней дольше, чем можно было бы ожидать от аддитивной комбинации (фиг. 5). Синергия выживаемости является статистически значимой.

Таблица 2а

Оценка синергии для подкожных ксенотрансплантатных опухолей НЕ60

Вид лечения	Оценка синергии	Стандартная ошибка оценки синергии	Р- значение	Оценка
ΜΙ/Ν4924 180 мг/кг + азацитидин 15 мг/кг	-54,8	17,6	0,005	Синергия

Таблица 2Ь

Парные сравнения групп лечения для подкожных ксенотрансплантатных опухолей линии НЕ60

Эталон	Лечение	алис	Р-значение для различия эффектов
ΜΕΝ4924 180 мг/кг	ΜΕΝ4924 180 мг/кг + азацитидин 15 мг/кг	118,3	<0,001
азацитидин 15 мг/кг	ΜΙ2Ν4924 180 мг/кг + азацитидин 15 мг/кг	112,9	<0,001

Таблица 3а

Оценка синергии для подкожных ксенотрансплантатных опухолей ТНР-1

Вид лечения	Оценка синергии	Стандартная ошибка оценки синергии	Р- значение	Оценка
ΜΕΝ4924 180 мг/кг + азацитидин 10 мг/кг	-40,5	21,4	0,078	Аддитивность

Таблица 3Ь

Парные сравнения групп лечения для подкожных ксенотрансплантатных опухолей линии ТНР-1

Эталон	Лечение	алис	Р-значение для различия эффектов
МЫЧ4924 180 мг/кг	МИЧ4924 180 мг/кг + азацитидин 10 мг/кг	882,2	<0,001
азацитидин 10 мг/кг	ΜΙ244924 180 мг/кг + азацитидин 10 мг/кг	221,1	<0,001

Таблица 4а

Оценка синергии для подкожных ксенотрансплантатных опухолей ОС1-М2

Вид лечения	Оценка синергии	Стандартная ошибка оценки синергии	Р- значение	Оценка
ΜΕΝ4924 180 мг/кг + азацитидин 5 мг/кг	-52,1	15,1	0,002	Синергия

- 15 028380

Таблица 4Ь

Парные сравнения групп лечения для подкожных ксенотрансплантатных опухолей линии ОС1-М2

Эталон	Лечение	али С	Р-значение для различия эффектов
ΜΙ/Ν4924 180 мг/кг	ΜΕΝ4924 180 мг/кг + азацитидин 5 мг/кг	545,5	<0,001
азацитидин 5 мг/кг	ΜΣΝ4924 180 мг/кг + азацитидин 5 мг/кг	767,6	<0,001

Таблица 5 а

Среднее время выживаемости для мышей в диссеминированной модели ксенотрансплантата линии НЪ-60

Вид лечения	Время средней	Стандартная ошибка
	выживаемости (дни)	времени средней выживаемости (дни)
Носитель	48,1	1,0
ΜΙ,Ν4924 180 мг/кг	56,5	0,7
азацитидин 10 мг/кг	69,2	2,1
ΜΙ/Ν4924 180 мг/кг + азацитидин 10 мг/кг	84,8	2,4

Таблица 5Ь

Оценка синергии для времени выживаемости в диссеминированной модели ксенотрансплантата линии НЬ-60

Вид лечения	Синергия выживаемости (дни)	Стандартная ошибка синергии выживаемости (дни)	Р- значение	Оценка
ΜΕΝ4924 180 мг/кг + азацитидин 10 мг/кг	7,2	3,4	0,036	Синергия

Предполагаемое введение лекарственного средства.

Пример.

Перед использованием флаконы с ΜΕΝ4924-ΙΏΡ нагревают до условий окружающей среды (от 15 до 30°С), помещая их в комнатную температуру. Ускоренные способы нагревания, такие как водяная баня, не использовались и не должны использоваться. Препарат ΜΕΝ4924-ΙΟΡ является стабильным при комнатной температуре в течение 8 ч перед разбавлением.

Каждый флакон ΜΕΝ4924-ΙΏΡ номинально содержит 5 мл (50 мг ΜΕΝ4924 в виде свободного основания). Используя стерильную технику извлекают из флакона(ов) соответствующий объем лекарственного средства и вводят в пакет для ВВ вливания объемом 250 мл, содержащий 5% раствор глюкозы, который затем осторожно несколько раз переворачивают с целью перемешивания. При хранении при комнатной температуре, подготовленный пакет для ВВ введения с ΜΡΝ4924-ΙΟΡ необходимо использовать в течение 6 ч. Альтернативно, подготовленный пакет для ВВ введения является химически стабильным и может храниться вплоть до 24 ч при температуре 5±3°С. После 24 ч хранения при температуре 5±3°С подготовленный пакет для ВВ введения необходимо использовать в течение 6 ч по достижении

- 16 028380 комнатной температуры. В течение всего процесса приготовления дозы флакон не следует встряхивать.

Инструкции по подготовке, восстановлению и распределению азацитидина предоставлены во вкладыше в упаковке азацитидина (νΐΌΑΖΑ®).

Количество вводимого Μ6Ν4924 и азацитидина основано на площади поверхности тела (ППТ). ИНТ рассчитывают с использованием стандартной номограммы на 1-й день 1-го цикла и при последующих посещениях, если пациент испытывает >5% изменения массы тела по сравнению с массой, которая использовалась для последнего расчета ППТ.

Пациент получает препарат Μ6Ν4924. разведенный 5% глюкозой в пакете для ВВ введения емкостью 250 мл посредством 60-минутной инфузии. Препарат Μ6Ν4924 необходимо вводить через центральный или периферический венозный доступ. Инфузия может быть замедлена или остановлена и начата повторно из-за любых связанных с инфузией реакций. Общее время инфузии не должно превышать 6 ч с момента разведения.

Все содержимое пакета для ВВ введения с препаратом Μ6Ν4924 будут вводить путем инфузии с постоянной скоростью в течение 1 ч. Чтобы убедиться, что весь препарат Μ6Ν4924 попадает в организм, инфузионную линию сразу после введения промоют 5% раствором глюкозы.

Инструкции по введению азацитидина предоставлены во вкладыше в упаковке азацитидина (νΐΌΛΖΛ®).

Несмотря на то, что ДЛТ во время лечения могут возникнуть в любой момент, только ДЛТ, возникающие во время 1-го цикла лечения, обязательно повлияют на решения относительно увеличения дозы, роста уровня дозы или определения промежуточных уровней доз. Пациенты находятся под наблюдением в отношении видов токсичности, связанных с лечением, на протяжении всех циклов терапии.

Продолжительность циклов будет составлять 28 дней. Азацитидин будут вводить по схеме 5 дней введения/2 дня перерыв/2 дня введения, т.е. на 1, 2, 3, 4, 5, 8 и 9 дни. Препарат Μ6Ν4924 будут вводить на 1, 3 и 5 дни. Пациенты получат оба средства на 1, 3 и 5 дни. Препарат ΜΤΝ4924 можно вводить в дозе, составляющей 20, 30, 40, 45, 50, 60 или 75 мг/м². Азацитидин будут вводить ВВ или ПК в дозе 75 мг/м².

В необязательном варианте реализации препарат ΜΕΝ4924 будут вводить на 1, 8 и 15 дни.

Необязательно, продолжительность циклов будет составлять 28 дней, за исключением 1-го цикла, в который будет включен 7-дневный вводный период, во время которого не будут вводить азацитидин, таким образом общая продолжительность 1-го цикла составит 35 дней. В соответствии с этой схемой азацитидин будут вводить по схеме 5 дней введения/2 дня перерыв/2дня введения на дни с 8 по 12 и дни 15 и 16 в 1-м цикле и на 1, 2, 3, 4, 5, 8 и 9 дни во всех последующих циклах. В соответствии с этой схемой ΜΕΝ4924 будут вводить на 1, 3 и 5 дни.

В другом необязательном варианте реализации ΜΕΝ4924 будут вводить на 1, 4, 11 и 15 дни только 1-го цикла, что даст один 35-дневный цикл; во всех последующих циклах ΜΕΝ4924 будут вводить на 1, 3 и 5 дни, каждый цикл длится 28 дней. В соответствии с этой необязательной схемой пациенты получат оба средства на 11 и 15 дни 1-го цикла и на 1, 3 и 5 дни последующих циклов. ΜΕΝ4924 будут вводить в дозе, составляющей 20, 30, 40, 45, 50, 60 или 75 мг/м². Азацитидин будут вводить ВВ или ПК (согласно решению врача) в дозе 75 мг/м².

Пациенты будут получать азацитидин в виде ВВ или ПК инъекции (см. вкладыш в упаковке азацитидина [νΐΌΛΖΆ®] относительно подробностей введения). В те дни, когда следует вводить оба препарата - ΜΕΝ4924 и азацитидин, инфузию ΜΕΝ4924 будут начинать в диапазоне времени от 15 до 60 мин после завершения введения азацитидина. Оценку основных показателей состояния организма в эти дни будут проводить перед введением дозы азацитидина, перед введеним дозы ΜΕΝ4924 и после введения дозы ΜΕΝ4924.

Claims (29)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ лечения рака, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного общего количества ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли и гипометилирующего средства или его фармацевтически приемлемой соли.
2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что гипометилирующее средство представляет собой азацитидин или децитабин или их фармацевтически приемлемую соль.
3. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что гипометилирующее средство представляет собой азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль.
4. 4. Способ по п.2, отличающийся тем, что гипометилирующее средство представляет собой децитабин или его фармацевтически приемлемую соль.
5. 5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что ингибитор ΝΑΕ представляет собой ((18,2§,4К)-4-(4-((1§)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-иламино)-7Н-пирроло[2,3-б]пиримидин-7-ил)-2гидроксициклопентил)метил сульфамат или {(1§,2§,4К)-4-[(6-{[(1К,2§)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат или их фарма- 17 028380 цевтически приемлемую соль.
6. 6. Способ по п.5, отличающийся тем, что ингибитор ΝΑΕ представляет собой ((18.28.4К.)-4-(4-((18)2,3-дигидро-1Н-инден-1 -иламино)-7Н-пирроло [2,3-й]пиримидин-7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат или его фармацевтически приемлемую соль.
7. 7. Способ по п.5, отличающийся тем, что ингибитор ΝΑΕ представляет собой {(18,28,4К)-4-[(6{[(1К,28)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2гидроксициклопентил}метил сульфамат или его фармацевтически приемлемую соль.
8. 8. Способ по п.6, отличающийся тем, что ((18,28,4К)-4-(4-((18)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-иламино)7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат или его фармацевтически приемлемую соль вводят в каждый из дней на 1, 3 и 5 дни 28-дневного цикла.
9. 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что ((18,28,4К)-4-(4-((18)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-иламино)7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат или его фармацевтически приемлемую соль вводят в дозе, составляющей около 20 мг/м².
10. 10. Способ по п.8, отличающийся тем, что ((18,28,4К)-4-(4-((18)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-иламино)7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат или его фармацевтически приемлемую соль вводят в дозе, составляющей около 30 мг/м².
11. 11. Способ по п.8, отличающийся тем, что ((18,28,4К)-4-(4-((18)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-иламино)7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин 7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат или его фармацевтически приемлемую соль вводят в дозе, составляющей около 40 мг/м².
12. 12. Способ по п.8, отличающийся тем, что ((18,28,4К)-4-(4-((18)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-иламино)7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин 7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат или его фармацевтически приемлемую соль вводят в дозе, составляющей около 50 мг/м².
13. 13. Способ по п.8, отличающийся тем, что ((18,28,4К)-4-(4-((18)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-иламино)7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат или его фармацевтически приемлемую соль вводят в дозе, которая находится в диапазоне от около 20 до около 30 мг/м².
14. 14. Способ по любому из пп.8-13, отличающийся тем, что ((18,28,4К)-4-(4-((18)-2,3-дигидро-1Нинден-1-иламино)-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат или его фармацевтически приемлемую соль вводят внутривенно.
15. 15. Способ по любому из пп.8-13, отличающийся тем, что ((18,28,4К)-4-(4-((18)-2,3-дигидро-1Нинден-1-иламино)-7Н-пирроло[2,3-й]пиримидин-7-ил)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат или его фармацевтически приемлемую соль вводят подкожно.
16. 16. Способ по любому из пп.1-3 и 5-15, отличающийся тем, что гипометилирующее средство представляет собой азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль и его вводят в каждый из дней 1, 2, 3, 4, 5, 8 и 9 28-дневного цикла.
17. 17. Способ по п.16, отличающийся тем, что азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в дозе, составляющей около 75 мг/м².
18. 18. Способ по п.16 или 17, отличающийся тем, что азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль вводят подкожно.
19. 19. Способ по п.16 или 17, отличающийся тем, что азацитидин или его фармацевтически приемлемую соль вводят внутривенно.
20. 20. Способ по любому из пп.1-19, отличающийся тем, что ингибитор ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемую соль вводят в комбинации с гипометилирующим средством или его фармацевтически приемлемой солью в виде единой лекарственной формы.
21. 21. Способ по любому из пп.1-19, отличающийся тем, что ингибитор ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемую соль вводят в комбинации с гипометилирующим средством или его фармацевтически приемлемой солью в виде отдельных лекарственных форм.
22. 22. Способ по любому из пп.1-21, отличающийся тем, что рак представляет собой гематологическое злокачественное заболевание.
23. 23. Способ по п.22, отличающийся тем, что рак представляет собой острый миелоидный лейкоз (ОМЛ).
24. 24. Способ по п.22, отличающийся тем, что рак представляет собой миелодиспластический синдром (МДС).
25. 25. Способ по п.24, отличающийся тем, что миелодиспластический синдром (МДС) выбран из группы, включающей рефрактерную анемия (РА), рефрактерную анемию с кольцевыми сидеробластами (РАКС), (рефрактерную анемию с избытком бластов (РАИБ) и РАИБ на стадии трансформации (РАИБ Т).
26. 26. Способ по п.25, отличающийся тем, что рак представляет собой комбинацию миелодиспластических синдромов.
27. 27. Способ по п.22, отличающийся тем, что рак выбран из группы, включающей хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ), острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), болезнь Ходжкина (БХ), неходжкинскую лимфому (НХЛ), Т-клеточную лимфому, множественную миелому (МДС), миелопролиферативный синдром (ММ), макроглобулинемию Вальденстрема.
28. 28. Способ по п.27, отличающийся тем, что рак представляет собой комбинацию типов рака, ука- 18 028380 занных в п.27.
29. 29. Применение ингибитора ΝΑΕ или его фармацевтически приемлемой соли с гипометилирующим средством или его фармацевтически приемлемой солью для лечения рака у пациента, нуждающегося в этом.