EA028340B1 - Лечение и профилактика инфекций, вызываемых helicobacter pylori у людей и животных, с помощью композиции, содержащей высушенные распылением клетки лактобактерий - Google Patents

Лечение и профилактика инфекций, вызываемых helicobacter pylori у людей и животных, с помощью композиции, содержащей высушенные распылением клетки лактобактерий Download PDF

Info

Publication number
EA028340B1
EA028340B1 EA201391823A EA201391823A EA028340B1 EA 028340 B1 EA028340 B1 EA 028340B1 EA 201391823 A EA201391823 A EA 201391823A EA 201391823 A EA201391823 A EA 201391823A EA 028340 B1 EA028340 B1 EA 028340B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
cells
spray
lactobacillus cells
dried
lactobacillus
Prior art date
Application number
EA201391823A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201391823A1 (ru
Inventor
Штефани Ариа
Детлеф Геллинг
Катерина Хольц
Кристиане Ланг
Original Assignee
Новозимс А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from EP11169137A external-priority patent/EP2532354A1/de
Application filed by Новозимс А/С filed Critical Новозимс А/С
Publication of EA201391823A1 publication Critical patent/EA201391823A1/ru
Publication of EA028340B1 publication Critical patent/EA028340B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/06—Anti-spasmodics, e.g. drugs for colics, esophagic dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/08—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for nausea, cinetosis or vertigo; Antiemetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Abstract

Изобретение относится к лечению и профилактике инфекций, вызываемых Helicobacter pylori у людей и животных, с помощью композиции, содержащей высушенные распылением клетки лактобактерий.

Description

Данное изобретение относится к высушенным распылением штаммам лактобактерий и/или клеток лактобактерий и их применению, в частности, в фармацевтических и/или диетических композициях для того, чтобы включить лекарственное средство или диетические добавки в лечение и профилактику инфекций, вызываемых НеНсоЬас!ет ργίοτί у людей и животных.
Пробиотические микроорганизмы включают клетки, которые оказывают благоприятный эффект на организм человека либо животного. Эти микроорганизмы содержатся в пробиотических композициях. Благоприятный эффект может проявляться, в частности, в улучшении микрофлоры желудочнокишечного тракта. При этом другие нежелательные микроорганизмы могут подавляться микрофлорой путем прямых взаимодействий между пробиотическими микроорганизмами и нежелательными микроорганизмами, путем прямых взаимодействий через снижение метаболизма нежелательных микроорганизмов продуктами жизнедеятельности пробиотических микроорганизмов или путем укрепления естественной иммунной системы. В целом, допускается, что основной механизм содержит как важный эффективный элемент конкурентоспособное заселение желудочно-кишечного тракта, в результате чего нежелательные микроорганизмы более не могут населять слизистую оболочку в опасных количествах либо вытесняются полностью.
Одна из групп пробиотических микроорганизмов формируется, к примеру, штаммами лактобактерий. Это типичные грамположительные, микроаэрофильные или анаэробные бактерии, которые ферментируют сахар с образованием кислот, в частности молочной кислоты.
Фармацевтическая композиция, содержащая среди прочего лактобактерии, известна из И8 5716615. Одно из применений этой композиции состоит в лечении болезней желудочно-кишечного тракта.
Штаммы лактобактерий, известные из νθ 2004/087891, подходят для получения фармацевтических или диетических композиций при лечении инфекций желудочно-кишечного тракта, вызванных НейсоЬас1ег ργίοτί.
Взаимодействие лактобактерий с НейсоЬас1ет ργίοτί описано среди всего прочего в публикациях \ν;·ιη§ е! а1., Ат. 1. С1ш. ΝιιΙγ. 80:737-41 (2004); Ре11еу е! а1., Век! Ртасйсе & КекеатсЬ Сйтса1 Оак!гоеп!его1оду 17 (5): 785-791 (2003); Са//а1о е! а1., 5>сапбта\аап 1оитиа1 οί ΝιιΙπΙίοη 48(1): 26-31 (2004) и Здоигак е! а1., Аррйеб апб Епу1топтеп!а1 М1стоЬю1оду 70 (1): 518-526 (2004).
НейсоЬас!ет ру1оп является спиралевидной бактерией, населяющей желудок, при этом уровень рН в желудке повышается благодаря выработке уреазы, которая таким образом защищает бактерии от желудочной кислоты. Бактерии проникают сквозь слизистую оболочку и осаждаются на клетках эпителия. Подобная инфекция активирует собственную иммунную систему организма, но при этом иммунная реакция является недостаточно эффективной для уничтожения бактерий, в результате чего возрастает интенсивность иммунной реакции, что приводит к хроническому воспалению и болезням, таким как гастрит, язва желудка и в конечном итоге к раку.
Процесс, при котором клетки объединяются друг с другом и формируют агломераты, называют агрегацией. Когда в образование агрегатов вовлечен лишь один тип клеток, говорят об автоагрегации или самоагрегации. Если в формировании агрегатов участвуют хотя бы два типа клеток, то такой процесс называется коагрегацией. В νθ 2007/073709 заявитель описывает коагрегаты лактобактерий с НейсоЬас!ег ру1оп, которые могут быть задействованы для профилактики, лечения и/или эрадикационной терапии инфекций, вызываемых НейсоЬас!ет ру1оп; в частности, было достигнуто уменьшение количества НейсоЬас!ет ру1оп. Более того, штаммы лактобактерий, соответствующие таким целям, описаны в патенте νθ 2007/073709 (зарегистрированном в Оеи!ксЬе 8атт1ипд уоп М1кгоогдат5теп ипб 2е11ки1!игеп ОтЬН (ΌδΜΖ), МаксЬегобег ^ед 1Ь, Ό-39124 Втаипксйетегд, Сегтапу), в частности, это ΌδΜ 17646, ΌδΜ 17647, 'ΌδΜ 17648, ΌδΜ 17649, ΌδΜ 17650, ΌδΜ 17651, ΌδΜ 17652 и ΌδΜ 17653.
Соответствующие клетки лактобактерий образуют коагрегаты при контакте с клетками НейсоЬас!ет ру1оп. Образование коагрегатов препятствует проникновению НейсоЬас!ет ру1оп в слизистую оболочку желудка. Клетки НейсоЬас!ет ру1оп, в частности поверхности этих клеток, блокируются клетками лактобактерий; таким образом, клетки НейсоЬас!ет ру1оп более не способны связываться с клетками желудочного эпителия. В результате предотвращения связывания НейсоЬас!ет ру1оп с клетками желудочного эпителия можно избежать воспалительных реакций. Заблокированные, а следовательно, инактивированные клетки НейсоЬас!ет ру1оп проходят через желудочно-кишечный тракт в виде коагрегатов и выводятся наружу. Таким образом, применяя соответствующие клетки лактобактерий, можно снизить количество или полностью уничтожить НейсоЬас!ет ру1оп в желудке. Применение клеток лактобактерий может быть как профилактическим, так и лечебным. Как бы то ни было, этот терапевтический подход требует усовершенствования.
Поэтому целью данного изобретения является разработка усовершенствованного способа для профилактики и лечения инфекций, вызываемых НейсоЬас!ет ру1оп. В частности, требуется такой способ, который обеспечил бы улучшенное образование коагрегатов, при котором заселение слизистой оболочки желудка НейсоЬас!ет ру1оп подавлялось/сокращалось бы значительно быстрее посредством образующихся коагрегатов.
О применении и получении высушенных распылением лактобактерий известно из предшествующих публикаций, к примеру Оатбшет е! а1., Сотратайуе 8шх1уа1 Ка!ек οί Нитап-Эепуеб РтоЬюйс Ьас!о- 1 028340
Ьасй1и8 рагаса8е1 апй Ь. 8а11уагш8 δίΓαίηδ йигшд Неа! Тгеа!теп! апй 8ргау Игушд (Сравнительный уровень выживаемости полученных из человеческого организма штаммов пробиотиков Ьас!оЬасШи8 рагаса8е1 и Ь. 8аПуагш8 при тепловой обработке и распылительной сушке), Лррйей апй Епу1гошеп1а1 М1сгоЬ1о1оду 66 (6): 2605-2612 (2000); Те1хе1га е! а1., 8шх1уа1 оГ Ьас!оЬасШи8 йе1Ьгиескй 88р. Ви1дапси8 Ео11о\утд §ргауИгушд (Жизнеспособность Ьас1оЬасШи8 йе1Ьгиескй 88р. Ви1дапси8 при высушенном распылении), 1. Иаиу δα 78:1025-1031 (1995) и То8 е! а1., 8ргау Игушд, Егее/е Эгу1пд. ог Егее/тд оГ Йпее йТГегеп! 1асйс аай Ьас1ег1а 8реае8 (Распылительная сушка, лиофильная сушка или вымораживание трех различных видов лактобактерий), 1опгпа1 оГ Еоой δοΐ., ^йеу-В1аск№е11 РиЬ1., 1пс. (υδ).
При этом нигде не описано применение высушенных распылением лактобактерий для образования коагрегатов с НеНсоЬас!ег ру1оп и, следовательно, возможность их применения в фармацевтических или диетических композициях.
Как ни удивительно, но усовершенствовать лечение и профилактику инфекций, вызываемых НейсоЬас!ег ру1оп, можно в случае, когда высушенные распылением клетки лактобактерий используются для коагрегации.
Особым преимуществом является то, что высушенные распылением клетки лактобактерий способны образовывать большие коагрегаты с НеНсоЬас!ег ру1оп и, таким образом, вызывать эффективное сокращение популяции Не1юоЬас!ег ру1огк Высушивание распылением клеток лактобактерий исключительно выгодно приводит к уменьшению размера клеток лактобактерий и отличается тем, что при этом происходит дополнительное разделение клеток. В противоположность другим способам высушивания или способам, не включающим высушивание, для высушивания распылением характерным является наличие отдельных клеток (моноклеток) или сдвоенных (димерных) клеток (фиг. 2б), а не образование цепей, объединяющих от двух до десяти клеток лактобактерий (фиг. 2а). Эти высушенные распылением клетки-зародыши после попадания в желудочную среду прекрасно подходят для непосредственного образования коагрегатов, в итоге получают полезные высокоплотные, компактные и эффективные коагрегаты, состоящие из клеток лактобактерий и НеНсоЬас!ег ру1оп, которые, к тому же, на протяжении фазы образования коагрегатов имеют низкое стерическое несоответствие. Согласно данному изобретению подобные высушенные распылением клетки лактобактерий обладают более высокой связывающей способностью применимо к НеНсоЬас!ег ру1оп чем, к примеру, те, которые можно получить согласно техническому описанию, содержащемуся в \УО 2007/073709. В результате более высокой связывающей способности большее число клеток НеНсоЬас!ег ру1оп может быть блокировано и связано меньшим количеством клеток лактобактерий. Также более высокая связывающая способность ведет к большей стабильности образующихся коагрегатов.
Еще одно преимущество состоит в том, что высушенные распылением клетки лактобактерий содержат в более высокой пропорции неживые клетки и/или фрагменты клеток лактобактерий, которые также способствуют спонтанному образованию коагрегатов. Содержание неживых клеток и/или фрагментов клеток лактобактерий может составлять более 80%, более 90% и даже 100%.
Согласно изобретению коагрегаты проходят желудочно-кишечный тракт и природным образом выводятся из организма. Даже в случае, когда инфицирование уже произошло, описанный в изобретении механизм действия высушенных распылением штаммов лактобактерий действенен, так как предотвращает дальнейшее инфицирование дополнительными бактериями НеНсоЬас!ег ру1оп; это облегчает борьбу с существующей инфекцией путем инактивации/выведения имеющихся в наличии бактерий Не1юоЬас!ег ру1ог1. Вдобавок, согласно изобретению штаммы лактобактерий, вероятно, способны снижать активность уреазы НеНсоЬас!ег ру1оп, таким образом, бактерии НеНсоЬас!ег ру1оп в коагрегатах лишены защиты от действия желудочной кислоты. В этом смысле достигается синергический эффект.
Особым преимуществом высушенных распылением штаммов или клеток лактобактерий является увеличение связывающей способности относительно Не1юоЬас!ег ру1оп (выше). Из-за того, что поверхность НеНсоЬас!ег ру1оп блокируется клетками лактобактерий, предотвращается проникновение НеПсоЬас!ег ру1оп в слизистую оболочку и, соответственно, возникновение вызываемых НеНсоЬас!ег ру1оп инфекций, в том числе и хронических воспалительных процессов, а также эффективно предотвращаются вторичные болезни, такие как гастрит, язва желудка и рак желудка.
Более того, согласно изобретению коагрегаты, содержащие высушенные распылением клетки лактобактерий и клетки Не1юоЬас!ег ру1оп, проявляют повышенную стабильность, поэтому большее количество НеНсоЬас!ег ру1оп может быть включено в эти коагрегаты и, вдобавок, не происходит повторного освобождения ранее связанных клеток НеНсоЬас!ег ру1оп, к примеру, вследствие сокращений желудка. Это преимущество позволяет использовать более низкую эффективную дозировку по сравнению с коагрегатами, описанными в предыдущих публикациях. Согласно изобретению высушенные распылением клетки лактобактерий обеспечивают также эффективное повышение растворимости в воде, таким образом, достигается лучшее распределение высушенных распылением клеток лактобактерий и образующихся коагрегатов в полости желудка.
Также заявители обнаружили, что высушивание распылением клеток лактобактерий предотвращает неконтролируемое образование агрегатов самими лактобактериями (автоагрегацию) либо оно, как минимум, резко снижается в сравнении со свежими высушенными не распылением лактобактериями. Связы- 2 028340 вающие участки для блокировки НеЬсоЪайег ру1оп оказываются занятыми из-за автоагрегации клеток лактобактерий друг с другом. Снижение или предотвращение автоагрегации, таким образом, приводит к более низкой эффективной дозировке используемых лактобактерий в сравнении с предыдущими публикациями.
Согласно изобретению распылительный способ приводит к морфологическим изменениям лактобактерий, так что возрастает их связывающая способность по отношению к НеЬсоЪайег ру1оп. вследствие чего становится возможным улучшенное образование коагрегатов.
Таким образом, изобретение относится к применению фармацевтической или диетической композиции, содержащей высушенные распылением клетки лактобактерий для профилактики и лечения вызываемых НеЬсоЪайег ру1оп инфекций у людей и животных, в частности у млекопитающих.
При дальнейшей модификации изобретения высушенные распылением клетки лактобактерий содержатся в композициях преимущественно в мономерной и/или димерной формах (выше, фиг. 2б).
Таким образом, изобретение также относится к применению такой композиции, в которой согласно изобретению а) клетки лактобактерий высушены распылением, б) полученные высушенные распылением клетки лактобактерий включены в состав физиологически совместимых носителей (типичные примеры физиологически совместимых носителей приведены ниже).
Также изобретение относится к применению такой композиции, в которой после применения ее к человеку или животному коагрегаты с НеЬсоЪайег ру1оп образуются непосредственно в желудочной среде и являются преимущественно большими и не меньшими чем 50 мкм, в частности большими и не меньшими чем 100 мкм, 150 мкм, большими чем 500 мкм, в частности предпочтительно большими чем 1000 мкм или 1100 мкм.
В понимании данного изобретения термин клетки лактобактерий (или лактобацилл, или в более широком смысле молочно-кислых бактерий) включает в себя те микроорганизмы, которым для ферментации молочной кислоты нужны углеводы, в частности глюкоза и лактоза, и которые для биосинтеза используют преимущественно гликолиз (путь Эмбдена-Мейергофа-Парнеса). С точки зрения таксономии, клетки лактобактерий относятся к семейству ЬайоЪайейасеае. Они являются грамположительными, неспорообразующими и в целом неподвижными. Клетки лактобактерий живут анаэробно, при этом они аэротолерантны, несмотря на то что не содержат каких-либо геминов (цитохром, каталазу) (8сЬ1егГег е! а1., 8ук!ет. Арр1. МюгоЪ.: 18, 461-467 (1995) ог Ь-иЮлс.] е! а1., 8ук!ет. Арр1. МюгоЪ. 15: 487-501 (1992)). Наличие клеток лактобактерий или их видов может быть определено по способу ферментации углеводов, в частности, с помощью теста АР1 (апа1уОса1 ргой1е шбех или АР1 - тест на идентификацию бактерий, разработанный ЪюМейеих). Согласно изобретению сюда входят, в частности, те виды, которые способны к гомоферментативному образованию молочной кислоты или гетероферментативному образованию молочной кислоты. Далее предпочтение отдается клеткам лактобактерий, отобранным из группы, включающей в себя ЬасЮЬасШик 1асЬк, Ьас1оЪасШик Ье1уеЬсик, Ьас1оЪасШик |епкепп, Ьас1оЪасШик айборЬЪик, ЬасЮЬасШик Ъи1дайсик, Ьас1оЪасШик ату1оуогик, Ьас1оЪасШик бе1ЪгиескЬ, Ьас1оЪасШик сакец Ьас1оЪасШик спкрайк, Ьас1оЪасШик даккеп, Ьас1оЪасШик щЬикопн, Ьас1оЪасШик рагасакек ЬаскоЪасШик рейокик, ЬасЮЪасШик гЬатпокик, ЬаскоЪасШик сшуакик апб ЬаскоЪасШик р1айагиш (все являются гомоферментативными), а также ЬаскоЪасШик Ьгеук, ЬаскоЪасШик ЪисЬпей, ЬаскоЪасШик Ггискгуогапк, ЬаскоЪасШик ЬЪдаМи, ЬаскоЪасШик Гегшейиш, ЬаскоЪасШик гейеп, ЬайоЪасШик утбексепк и ВШбоЬайегйт ЫПбит (все являются гетероферментативными). Типичные клетки лактобактерий, отвечающие требованиям заявителей, представлены штаммами Ό8Μ 17646, Ό8Μ 17647, Ό8Μ 17648, Ό8Μ 17649, Ό8Μ 17650, Ό8Μ 17651, Ό8Μ 17652 и Ό8Μ 17653 (выше). Предпочтительными согласно изобретению являются ЬайоЪасШик Гегтейит, ЬасЮЬасШик Ьгеук, ЬасЮЬасШик гейеп, ЬаскоЪасШик ЪисЬпей и ЬасЮЬасШик рейокик.
Также согласно изобретению используются те клетки лактобактерий, что включают производные, аналоги или мутанты, которые могут быть инактивированными, живыми или неживыми либо представленными в виде частей или фрагментов, например продуктов ферментного или механического распада (например, после френч-пресса и подобных приспособлений) клеток лактобактерий в той мере, пока они подходят для коагрегации.
Термины производные, аналоги, мутанты или инактивированные в данном случае включают клеточные или ферментные надосадочные жидкости, лизаты, фракции или экстракты из клеток лактобактерий при условии, что эти клеточные или ферментные надосадочные жидкости, лизаты, фракции или экстракты имеют преимущественно свойства лактобактериальных клеток/штаммов/ микроорганизмов в соответствии с изобретением. В связи с этим термин лизат так же, как и экстракт, обозначает в данном случае водный раствор или суспензию используемых в изобретении клеток микроорганизмов и включает в себя макромолекулы, например ДНК, РНК, белки, пептиды, липиды, углеводы и подобные и, в частности, клеточные остатки. Лизат преимущественно включает в себя еще и клеточную стенку или составляющие клеточной стенки. Способы получения лизатов в достаточной мере известны человеку, осведомленному в данной области; это, например, применение френч-пресса или ферментного лизиса - шаровой дробилки со стеклянными гранулами или железными шариками. Также клетки могут разрушаться ферментативно, физически или химически. Примерами ферментативного клеточного лизиса могут служить как индивидуальные ферменты, так и смесь ферментов, таких как протеа- 3 028340 зы, протеиназа К, липазы, гликозидазы; химический лизис может осуществляться ионофорами, такими детергентами, как додецилсульфат натрия, кислоты или основания; физический способ может осуществляться с помощью высоких давлений, таких как во френч-прессе, осмолярностей, температур или чередования холодных и горячих условий. Более того, можно комбинировать химический, физический и ферментативный способы.
Производные, аналоги, мутанты или инактивированные лактобактериальные клетки/ штаммы/микроорганизмы в соответствии с изобретением преимущественно обладают теми же самыми свойствами, что и упомянутые штаммы. В связи с этим у инактивированных (форм), производных или аналогов преимущественно отсутствует метаболическая активность.
Аналоги лактобактериальных клеток/штаммов/микроорганизмов согласно изобретению являются лизатами или фрагментами. Фрагменты лактобактериальных клеток/штаммов/микроорганизмов согласно изобретению представляют собой части клеток, например клеточную мембрану, макромолекулы, такие как ДНК, РНК, белки, пептиды, углеводы и подобные, равно как и клеточные остатки. Человеку, осведомленному в данной области, будет легко определить правильное значение терминов аналоги, фрагменты, производные или мутанты и интерпретировать эти термины согласно смыслу данного изобретения. Также для определения значения мутантов, производных, фрагментов или аналогов лактобактериальных клеток/штаммов/микроорганизмов человек, осведомленный в данной области, может обратиться к общедоступной стандартной литературе, в которой раскрываются способы, применяемые для получния мутантов, производных, фрагментов или аналогов.
Мутанты или генетически модифицированные разновидности либо производные являются генетически модифицированными, например, путем рекомбинантной ДНК-технологии (клонирование, секвенирование, трансформация рекомбинантных нуклеиновых кислот), физического мутагенеза, например, путем ультрафиолетового облучения, а также с помощью химических веществ, таких как этилметансульфонат. Для этой цели могут быть выбраны изменения в определенных свойствах как целенаправленно, так и через оценку совокупности полученных мутантов. Генетически модифицированные мутанты в соответствии с изобретением включают клетки микроорганизмов и рекомбинантные нуклеиновые кислоты в хромосомах и/или плазмидах бактерий. Модификации, осуществленные путем точечной мутации, могут дополнительно оказывать эффект на экспрессию/транскрипцию/трансляцию, как это происходит при спонтанных мутациях без прямой генетической манипуляции (см., к примеру, I. 8атЬтоок, Е.Р. Ртйясй, Т. Машайк, Со1б Мо1еси1аг е1ошпд: а 1аЬота1оту тапиа1 (Холодное молекулярное клонирование: лабораторное пособие)/8ртшд НагЬог БаЬогаЮгу Ргекк, 3гб ебйюп (2001)).
Все упомянутые микроорганизмы выше и далее по тексту именуются клетками лактобактерий.
Необходимые условия культивирования в человеческом желудке включают в себя уровень рН в диапазоне от 1.8 до 4.5 и присутствие пепсина, а также ЫаС1. Характерная для таких условий культивирования эталонная среда включает следующие компоненты: вода, ЫаС1 (5 г/л) и пепсин (3 г/л), в то время как уровень рН с помощью соляной кислоты доводится до 2.0 либо 4.0 с целью имитировать пустой или полный желудок.
Термин коагрегация в понимании данного изобретения обозначает образование клеточных агрегатов с размерами не менее 50 или 100 мкм и больше, содержащих согласно изобретению высушенные распылением клетки лактобактерий и клетки НейсоЬаШет ру1ой в суспензиях согласно следующим примерам и, в частности, в эталонной среде, как описано выше.
Термин высушенные распылением клетки лактобактерий в понимании данного изобретения означает, что клетки лактобактерий высушены с помощью распылительной сушки, при этом суспензия клеток лактобактерий, к примеру, состоит из мельчайших капелек и существует возможность получения порошка.
Согласно изобретению во время распылительной сушки раствор или суспензия, содержащая клетки лактобактерий, распыляется в горячий осушитель, где и высушивается. Смесь для распыления может быть представлена в виде раствора, эмульсии, суспензии или дисперсии. Она распылена на миллионы отдельных капелек с помощью форсунки или центрифуги, что приводит к существенному увеличению поверхности. Растворитель, такой как вода, мгновенно испаряется в горячем воздухе и удаляется. Более того, высушенными распылением остаются только клетки лактобактерий.
Способ распылительной сушки выделяется среди других способов сушки тем, что требует применения форсунки или подобных приспособлений, таких как одинарная форсунка, полоконусная форсунка, механическая форсунка, двойная форсунка внешнего смешивания, пневматическая форсунка, двойная форсунка внутреннего смешивания, распыливающий диск или ультразвуковой распылитель.
Способы распылительной сушки описаны в предыдущих публикациях и известны тем, кто осведомлен в данной области (см. Оатбшет е1 а1., Те1хейа е1 а1. (выше) или ЕР 74050 и ЕР 285682). Известны и описаны и соответствующие устройства, такие как распылительные мини-сушилки В-191 или В-290, разработанные ВисШ ЬаЬойесйшк АО (Германия) или 8Ό-6.3-Κ компании ОЕА №то (Дания). Известно также, что можно использовать дополнительные адьюванты и добавки.
Изобретение также относится к применению фармацевтической и/или диетической композиции, содержащей согласно изобретению физиологически эффективную дозу высушенных распылением кле- 4 028340 ток лактобактерий и физиологически совместимый носитель. Фармацевтические композиции - это композиции, которые служат исключительно для терапевтических и профилактических целей и отличаются тем, что вдобавок к клеткам лактобактерий в них присутствуют адьюванты и/или вспомогательные вещества, обычные среди галеновых препаратов. Диетические композиции в понимании данного изобретения - это композиции, которые кроме высушенных распылением согласно изобретению клеток лактобактерий содержат пищевые продукты или продукты питания (см., к примеру (не полностью), Директиву ЕС 2002/46/ЕС от 10 июня, 2002 г.), и/или корм для домашних животных и/или сельскохозяйственных животных, и/или диетические добавки, необязательно содержащие адьюванты и добавочные вещества.
Также изобретение относится к использованию или применению высушенных распылением согласно изобретению клеток лактобактерий для получения фармацевтической или диетической композиции, либо лекарственного средства или диетической добавки, содержащих высушенные распылением клетки лактобактерий, либо фармацевтической или диетической композиции, в частности для профилактики и/или лечения болезней, вызываемых инфекцией Не1юоЪае1ег ру1оп, например желудочнокишечных заболеваний. Последние включают, в частности, гастрит, язву желудка и рак желудка. Также учитываются такие болезни и симптомы, как дискомфорт в животе, в частности дискомфорт в верхней части живота, тяжесть в желудке, желудочные спазмы, боль в животе, боль или давление в верхней части живота, ощущение жжения в верхней части живота, хронически повторяющиеся расстройства желудка, постоянное ощущение наполненности, снижение аппетита, боль в пустом желудке, вздутие живота, изжога, диарея, нерегулярный стул, недомогание, тошнота и рвота, пищевая непереносимость, нарушение всасывания, несварение желудка (функциональная диспепсия), гастрит, повреждения слизистой оболочки или гастродуоденальная язва.
Также изобретение касается дальнейшего применения высушенных распылением согласно изобретению клеток лактобактерий в качестве лекарственного средства либо диетической добавки, содержащих высушенные распылением клетки лактобактерий, или фармацевтической либо диетической композиции для уничтожения или эрадикационной терапии Не1юоЪае1ег ру1оп, необязательно в комбинации с другими подходящими активными ингредиентами, такими как антибиотики.
Фармацевтическая или диетическая композиция, в частности диетическая добавка или лекарственное средство (лекарство), согласно изобретению, могут характеризоваться содержанием высушенных
215 4812 распылением клеток лактобактерий в количестве от 10 до 10 , предпочтительно от 10 или 10 до 10 , в частности от 108 до 1010. Исходное количество в данном случае определяется применяемой единицей, к примеру, таблеткой. Композиция предназначается преимущественно для орального применения.
Согласно изобретению галеновы препараты, содержащиеся в фармацевтической или диетической композициях, в частности в диетической добавке или лекарственном средстве (лекарстве), могут быть получены способом, который широко практикуется в данной области. Подходящие твердые или жидкие галеновы формы препаратов включают, к примеру, гранулы, порошки, таблетки в сахарной оболочке, таблетки-(микро)капсулы, жесткие капсулы, суппозитории, сиропы, соки, суспензии или эмульсии, при получении которых используются стандартные адьюванты, такие как вспомогательные вещества, разрыхлители, связывающие вещества, глазировочные средства, вещества, способствующие набуханию, скользящие и смазывающие вещества, вкусовые добавки, подсластители и солюбилизаторы. Адьюванты, нуждающиеся в упоминании, включают стеарат магния, хлорид натрия, карбонат магния, диоксид титана, лактозу, маннит и другие сахара, тальк, молочный белок, желатин, крахмал, целлюлозу и соответствующие производные, животные и растительные жиры, такие как рыбий жир, подсолнечное масло, арахисовое или кунжутное масло, полиэтиленгликоли и растворители, такие как дистиллированная вода, и одноатомные и многоатомные спирты, такие как глицерин. Согласно изобретению фармацевтическая композиция может быть получена при смешивании как минимум одного штамма лактобактерий, используемых в соответствии с изобретением в определенной дозировке, с фармацевтически подходящим и физиологически совместимым носителем и, необязательно, с другими подходящими активными ингридиентами, добавками и адьювантами в определенных дозировках и в требуемой форме применения. Возможные носители включают, в частности, вещества, отобранные из группы, в которую входят мальтодекстрины, микрокристаллическая целлюлоза, крахмал, в частности кукурузный крахмал, фруктоза, лактоза, декстроза и комбинации этих веществ. Композиция может содержать от 0,1 до 95 вес.% или от 5 до 99,9 вес.% высушенных распылением клеток лактобактерий относительно общего количества клеток и носителя.
В случае диетической композиции и/или диетической добавки предусматривается, что композиция 215 412 810 может содержать от 10 до 10 , предпочтительно от 10 до 10 и более точно от 10 до 10 клеток лактобактерий. Исходное количество определяется применяемой единицей, например упаковкой продукта питания, продаваемой конечному потребителю. Физиологически совместимый носитель в общем случае будет представляться пищевыми продуктами, которые отобраны из группы, состоящей из молочных продуктов, кисломолочных продуктов, молока, йогурта, сыра, злаков, злаковых батончиков, хлебобулочных изделий, напитков и продуктов детского питания. Подходящими пищевыми продуктами и продуктами питания, включая воду, согласно изобретению, являются те, что перечислены, к примеру (не полностью), в Положении (ЕС) № 178/2002 от 28 января 2002 г.
- 5 028340
Изобретение также относится к способу получения фармацевтической и/или диетической композиции, согласно изобретению, в частности диетической добавки или лекарственного средства (лекарства), в которых высушенные распылением клетки лактобактерий смешаны с физиологически совместимым носителем и предназначены преимущественно для орального употребления.
Более того, изобретение также делает возможным такой способ получения композиции, в которой клетки лактобактерий являются (а) необязательно инокулированными и обогащенными, (б) ферментированными и (в) высушенными распылением, впоследствии смешанными с физиологически совместимым носителем и предназначенными преимущественно для орального употребления.
И, наконец, изобретение относится к способу профилактики или лечения людей или животных, в частности больных и находящихся в зоне риска пациентов или испытуемых, от заболеваний, вызванных инфицированием НейсоЬасБет ру1оп, в частности гастрита и язвы желудка, при котором пациент принимает эффективную дозу фармацевтической и/или диетической композиции, в соответствии с изобретением от одного до пяти раз на день. Применение может продолжаться ограниченный период времени, например от 1 до 30 недель, или без ограничения по времени. Последнее, в частности, подходит для перманентной профилактики и для предупреждения рецидивов.
Далее изобретение будет описано более детально, на конкретных примерах его применения, не исчерпывающих возможности изобретения.
Примеры и фигуры
Пример 1. Хранение используемых штаммов.
Штаммы лактобактерий сохраняли в замороженном состоянии. 1 мл культуры, культивированной до стационарной фазы (оптическая плотность на длине волны 600 нм или ОП600/мл - 4-8) в МКБ-среде (среда для культивирования лактобактерий по Ману, Рогозе и Шарпу) (55 г/л, рН 6,5; ΌίΙοο. США), смешивали с 500 мкл 50% стерильного раствора глицерина, после чего смесь замораживали при температуре -80°С.
НсПсоЬасЮг ру1оп сохраняли в замороженном состоянии. 1 мл культуры, культивированной до стационарной фазы в бруцеллярном бульоне (Вгисе11а Ьго1П) (28 г/л, рН 7,0; ΒΌ, США), с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (ВюсЬтот) смешивали с 500 мкл 50% стерильного раствора глицерина, после чего смесь замораживали при температуре -80°С.
Пример 2. Процесс получения высушенных распылением клеток лактобактерий.
Высушенные распылением лактобактерии, которые способны коагрегировать с НсЬсоЬасЮг ру1оп в условиях культивирования в человеческом желудочно-кишечном тракте, в частности в желудке, получали способом, описанным ниже.
Стартовую культуру 1 помещали в 15 мл реакционный резервуар в 10 мл МКБ-среды. Среду инокулировали свежекультивированными, глубокозамороженными, лиофилизированными или высушенными распылением клетками лактобактериальных штаммов. Стартовую культуру 1 выдерживали в анаэробных условиях на протяжении 24 ч при 37°С. Все количество стартовой культуры 1 использовали для инокуляции стартовой культуры 2. Стартовая культура 2 состояла из 240 мл МКБ-среды с добавлением 10 мл стартовой культуры 1. Стартовую культуру 2 выдерживали в анаэробных условиях 19 ч при 37°С. После этого для каждой стартовой культуры определяли оптическую плотность, уровень рН и КОЕ (колониеобразующие единицы).
Для ферментации лактобактерии использовали 5 л МКБ-среды. Ферментер, включая все необходимые компоненты, стерилизовали. Необходимые величины температуры и скорости смешивания составляли 37°С и 150 об/мин соответственно. Концентрация при инокуляции составляла 5%. По завершению процесса ферментации определяли число клеток, колониеобразующих единиц, уровень рН, оптическую плотность на длине волны 600 нм и концентрации глюкозы и соли молочной кислоты. После этого ферментативный бульон концентрировали десяти-двадцатикратно. После концентрат замораживали.
Перед высушиванием двадцатикратный концентрат размораживали и центрифугировали на протяжении 15 мин при 4300д. Потом клетки промывали 0,9% раствором ЫаС1 и снова центрифугировали на протяжении 15 мин при 4300д. После этого клетки перерастворяли в 500 мл 10% раствора ЫаС1.
Процесс распылительной сушки проводили в распылительной минисушке ВисЫ В-191. Температура на входе составляла 140°С. Температура на выходе составляла 86°С. Поток горячего воздуха составлял 500 л/ч. Мощность аспиратора составляла 75%, скорость накачки - 5%. Клеточную суспензию высушивали при описанных выше условиях, после чего извлекали высушенный распылением порошок лактобактерий.
Определяли полное число клеток, так же как и число жизнеспособных клеток лактобактериальных штаммов, приходящееся на 1 г высушенного распылением порошка. Микроскопические исследования высушенного распылением порошка (фиг. 2б) показали, что в нем клетки лактобактерий меньше, чем высушенные не распылением клетки лактобактерий (фиг. 2а), и что высушенные распылением клетки лактобактерий представлены в мономерной и димерной формах, в то время как высушенные не распылением клетки лактобактерий образуют более длинные цепи. Высушенные распылением клетки лактобактерий сохраняли для дальнейшего применения при температуре 4°С.
Пример 3. Сравнение коагрегации НсПсоЬасЮг ру1оп высушенными не распылением и высушенны- 6 028340 ми распылением штаммами или клетками лактобактерий в условиях желудочной среды.
Клетки лактобактерий культивировали в закрытых 15 мл пробирках в ΜΚδ-среде при 37°С на протяжении 24 ч. Высушенный распылением порошок перерастворяли в фосфатно-солевом буферном растворе при концентрации 10 мг/мл для исследования высушенных распылением лактобактерий. НейсоЬас1ет ру1оп культивировали на протяжении приблизительно двух дней в колбах Эрленмейера при микроаэрофильных условиях в бруцеллярном бульоне (28 г/л, рН 7,0; ВИ, США) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (ВюсЬтош) при 37°С. После культивирования микроскопическим способом анализировали клеточную морфологию НейсоЬайет ру1отк Испытания проводили с клетками, которые обладали сигмоидальной или сферической морфологией. Также исследовали культуры со смешанной морфологией.
Соответствующие клетки собирали путем центрифугирования при 3200д на протяжении 10 мин, а надосадочную жидкость удаляли. Клетки лактобактерий однократно промывали в 5 мл буфера и перерастворяли в 5 мл фосфатно-солевого буферного раствора (содержащего 1,5 г/л Иа2НРО4-2Н2О, 0,2 г/л КН2РО4 и 8,8 г/л ИаС1). Клетки НейсоЬайет ру1оп однократно промывали в 5 мл фосфатно-солевого буферного раствора и перерастворяли в 5 мл искусственного желудочного сока (содержащего 5 г/л ИаС1 и 3 г/л пепсина (81дша)). Для соответствующих клеток измеряли величину ОП600 и приводили ее к значению 2 для НейсоЬайет ру1оп и значению 4 для лактобактерий путем добавления искусственного желудочного сока и фосфатно-солевого буферного раствора соответственно.
По 2,5 мл полученных таким образом суспензий каждого вида клеток (НейсоЬайет ру1оп/ лактобактерий) смешивали, после чего смесь взбалтывали от 10 с до 10 мин. Результат определяли визуально благодаря значительной флоккуляции в образцах, содержащих НейсоЬайет ру1оп и лактобактерии, и анализировали микроскопически.
На фиг. 1а представлена микрофотография коагрегатов, содержащих НейсоЬайет ру1оп и высушенные не распылением клетки лактобактерий штамма Ό8Μ 17648. На фиг. 16 представлена микрофотография коагрегатов, содержащих НейсоЬайет ру1оп и высушенные распылением клетки лактобактерий штамма Ό8Μ 17648. Эти коагрегаты значительно больше коагрегатов, содержащих высушенные не распылением клетки лактобактерий. Контрольные эксперименты, относящиеся к самоагрегации, проводили отдельно; в них анализировали соответствующие культуры, содержащие по отдельности НейсоЬайет ру1ог1 и лактобактерии. Ни коагрегации, ни самоагрегации не наблюдали на фиг. 1в, 1г и 1д. На фиг. 1в представлена микрофотография свежекультивированных клеток лактобактерий Ό8Μ 17648 в искусственных условиях, имитирующих желудочную среду. На фиг. 1г представлена микрофотография высушенных распылением клеток лактобактерий штамма Ό8Μ 17648 в искусственных условиях, имитирующих желудочную среду. На фиг. 1д представлена микрофотография свежекультивированных клеток Не1юоЬайет ру1оп в искусственных условиях, имитирующих желудочную среду.
Пример 4. Испытание стабильности коагрегатов между высушенными распылением клетками лактобактерий и клетками НейсоЬайет ру1отк
Как и в примере 3, проводили эксперименты по испытанию стабильности коагрегатов в естественных условиях. Коагрегаты между клетками лактобактерий и НейсоЬайет ру1оп, образующиеся после пятиминутного взбалтывания, подвергали воздействию сил трения путем пипетирования суспензии на протяжении 1 мин или интенсивного взбалтывания на протяжении 2 мин. После этого размер коагрегатов анализировали микро- и макроскопически. Размеры коагрегатов, содержащих высушенные распылением клетки лактобактерий и НейсоЬайет ру1оп, не уменьшились, в то время как размеры коагрегатов высушенных не распылением клеток лактобактерий и НейсоЬайет ру1оп уменьшились.
Пример 5. Получение фармацевтической композиции, содержащей штаммы лактобактерий согласно изобретению.
Клетки одного или нескольких штаммов лактобактерий, использующихся в изобретении, приготавливали по примерам 1 и 2 и высушивали распылением. Затем высушенный распылением порошок измельчали до размеров частиц не более 1 мм в диаметре. Полученные гранулы смешивали со вспомогательными веществами и/или адьювантами с применением следующих пропорций (в вес.%): 20% гранул, 2% диоксида кремния (8у1ой АЬ-ΙΡΡ, ОКА.СЕ ИауШкои), 1% стеарата магния (ΜΡ-2-У, Аскгок), 77% микрокристаллической целлюлозы (Ауюе1 РН 112, ΡΜС).
Смешивание проводили в микромиксере СшШесЬ в позиции 70, уровень II. Все компоненты добавляли одновременно. Смешивание проводили приблизительно 120 с. После этого полученную смесь сжимали с применением серийного таблеточного пресса при обычных условиях, при этом использовали низкую силу сжатия (<10 кН) для получения таблеток весом приблизительно 500 мг. В каждой таблетке содержалось примерно от 108 до 1010 высушенных распылением клеток лактобактерий.
Пример 6. Сравнение коагрегации НейсоЬайет ру1оп высушенными не распылением и высушенными распылением штаммами или клетками лактобактерий с применением разного количества клеток лактобактерий.
Клетки лактобактерий культивировали в закрытых 15 мл пробирках в ΜΚ8-среде при 37°С на протяжении 24 ч. Высушенный распылением порошок перерастворяли в фосфатно-солевом буферном растворе при концентрации 10 мг/мл для исследования высушенных распылением клеток лактобактерий.
- 7 028340
НеНеоЪае1ег ру1оп культивировали на протяжении приблизительно двух дней в колбах Эрленмейера при микроаэрофильных условиях в бруцеллярном бульоне (28 г/л, рН 7,0; ΒΌ, США) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (ВюеЬгош) при 37°С. После культивирования микроскопическим способом анализировали клеточную морфологию НеНеоЪае1ег ру1оп. Испытания проводили с клетками, которые обладали сигмоидальной или сферической морфологией. Также исследовали культуры со смешанной морфологией.
Соответствующие клетки собирали путем центрифугирования при 3,200д на протяжении 10 мин, а надосадочную жидкость удаляли. Клетки лактобактерий однократно промывали в 5 мл буфера и перерастворяли в 5 мл фосфатно-солевого буферного раствора (содержащего 1,5 г/л Ыа2НРО4-2Н2О, 0,2 г/л КН2РО4 и 8,8 г/л ЫаС1). Клетки НеНеоЪае1ег ру1оп однократно промывали в 5 мл фосфатно-солевого буферного раствора и перерастворяли в 5 мл искусственного желудочного сока (содержащего 5 г/л ЫаС1 и 3 г/л пепсина (Зщша)). Для соответствующих клеток измеряли величину ОП600 и приводили ее к значению 2 для НеНеоЪае1ег ру1оп и значению 4 для лактобактерий путем добавления искусственного желудочного сока и фосфатно-солевого буферного раствора соответственно.
Определение количества клеток для суспензий лактобактерий проводили с помощью счетной камеры Тома, а разжижение проводили таким образом, чтобы получить разное количество клеток. По 2,5 мл полученных таким образом суспензий каждого вида клеток (НеНеоЪае1ег ру1оп/лактобактерий) смешивали, после чего смесь взбалтывали на протяжении 5 мин. По окончании двухминутной выдержки результат определяли визуально благодаря значительной флоккуляции в образцах, содержащих НеНеоЪае1ег ру1ог1 и лактобактерии; также результат определяли микроскопически (фигуры не приведены). 1 мл набирали из фазы, не содержащей коагрегаты (надосадочная жидкость; осадочные коагрегаты) так, чтобы оценить количество коагрегатов, и определяли величину ОП600. Используя формулу
Степень коагрегации, % _(ОЯН . ру1ог1 ОШлактобактерии) +лактобактер1, (^-^Н.рукш + ΟΠ:ΐααηο6ααιιψί4^ хЮО определяли степень коагрегации (в %). На фиг. 3 и 4 показана степень коагрегации свежекультивированных и высушенных распылением клеток лактобактерии штамма Ό3Μ 17648 по отношению к НеНеоЪае1ег ру1ог1. 0% соответствуют ОП600 НеНеоЪае1ег ру1оп (в надосадочной жидкости) без добавления клеток лактобактерий (отсутствие коагрегации или осаждения вследствие коагрегации). 100% степень агрегации соответствует максимальной степени коагрегации, т.е. ОП600, равной нулю, или ОП600 среды, не содержащей клетки (все клетки НеНеоЪае1ег ру1оп осаждаются вследствие коагрегации, и в надосадочной жидкости клетки НеНеоЪае1ег ру1оп не регистрируются путем измерения ОП).
При одинаковом количестве клеток степень коагрегации высушенных распылением клеток лактобактерии с НеНеоЪае1ег ру1оп более чем в два раза превышает соответствующую величину для свежекультивированных клеток (фиг. 3 и 4).
Описание фигур
На фиг. 1а показаны коагрегаты, содержащие свежекультивированные не высушенные распылением клетки лактобактерий штамма Ό3Μ 17648 и НеНеоЪае1ег ру1оп (размеры коагрегатов от 40 мкм и больше) в искусственных условиях, имитирующих желудочную среду.
На фиг. 1б показан очень большой коагрегат, содержащий высушенные распылением клетки лактобактерий штамма Ό3Μ 17648 и НеНеоЪае1ег ру1оп (размеры коагрегатов от 150 мкм и больше) в искусственных условиях, имитирующих желудочную среду.
Фиг. 1в-1д служат для контроля экспериментов.
На фиг. 1в показаны свежекультивированные клетки лактобактерий штамма Ό3Μ 17648 в искусственных условиях, имитирующих желудочную среду. Самоагрегация не наблюдается.
На фиг. 1г показаны высушенные распылением клетки лактобактерий штамма Ό3Μ 17648 в искусственных условиях, имитирующих желудочную среду. Самоагрегация не наблюдается.
На фиг. 1д показаны свежекультивированные клетки НеНеоЪае1ег ру1оп в искусственных условиях, имитирующих желудочную среду. Самоагрегация не наблюдается. (фиг. 1а-д увеличены в 1000 раз).
На Фиг. 2а и 2б показана морфология клеток лактобактерий.
На фиг. 2а показаны высушенные не распылением клетки лактобактерий. Клетки образовывают цепи, содержащие от 2 до 10 клеток.
На фиг. 2б показаны высушенные распылением клетки лактобактерий. Клетки находятся в мономерной и димерной формах (от 1 до 2 клеток) и значительно меньше, чем высушенные не распылением клетки.
Фиг. 3. Сравнение степени коагрегации свежекультивированных и высушенных распылением клеток лактобактерий штамма Ό3Μ 17648 по отношению к НеНеоЪае1ег ру1оп. В каждом случае для тестов использовали 1.4х108 клеток лактобактерий. При одинаковом количестве клеток степень коагрегации с НеНеоЪае1ег ру1оп высушенных распылением клеток лактобактерий более чем вдвое превышает таковую для свежекультивированных клеток. 0% соответствует ОП600 НеНеоЪае1ег ру1оп (в надосадочной жидко- 8 028340 сти) без добавления клеток лактобактерий (отсутствие коагрегации или осаждения вследствие коагрегации). 100% степень агрегации соответствует максимальной степени коагрегации, т.е. ОП600, равной нулю, или ОП600 среды, не содержащей клетки (все клетки Не1юоЪас1ег ру1оп осаждаются вследствие коагрегации, и в надосадочной жидкости клетки Не11соЪас1ет ру1оп не регистрировали путем измерения ОП).
Фиг. 4. Сравнение степени коагрегации свежекультивированных и высушенных распылением клеток лактобактерий штамма Ό8Μ 17648 по отношению к Не1юоЪас1ег ру1отк В каждом случае для тестов использовали разное количество клеток лактобактерий. Степень коагрегации с Не11соЪас1ет ру1оп высушенных распылением клеток лактобактерий вдвое превышает таковую для свежекультивированных клеток. 0% соответствует ОП600 Не1юоЪас1ег ру1оп (в надосадочной жидкости) без добавления клеток лактобактерий (отсутствие коагрегации или осаждения вследствие коагрегации). 100% степень агрегации соответствует максимальной степени коагрегации, т.е. ОП600, равной нулю, или ОП600 среды, не содержащей клетки (все клетки Не1юоЪас1ег ру1оп осаждаются вследствие коагрегации, и в надосадочной жидкости клетки Не11соЪас1ет ру1оп не регистрировали путем измерения ОП).

Claims (16)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Применение композиции, содержащей высушенные распылением клетки лактобактерий для лечения и профилактики инфекций, вызываемых Не1юоЪас1ег ру1оп у людей и животных.
  2. 2. Применение по п.1, в котором высушенные распылением клетки лактобактерий находятся в мономерной и/или димерной формах.
  3. 3. Применение по пп.1 и 2, в котором а) клетки лактобактерий высушены распылением и б) полученные высушенные распылением клетки лактобактерий добавлены в физиологически совместимый носитель.
  4. 4. Применение по п.3, в котором размеры коагрегатов не меньше чем 50 мкм и, в частности, больше чем 500 мкм.
  5. 5. Применение по любому из предыдущих пунктов, в котором клетки лактобактерий отобраны из группы, состоящей из Еас1оЪас111и8 1асЙ8, Еас1оЪас111и8 Ье1уейси8, Еас1оЪас111и8 )еп5епи. Еас1оЪас111и8 ашборЫ1и8, Еас1оЪас111и8 Ъи1даг1си8, Еас1оЪасШи8 ату1оуоти8, Еас1оЪас111и8 бе1Ъгиескп, Еас1оЪас111и8 са8е1, Еас1оЪасШи8 сг18ра1и8, Еас1оЪас111и8 да88егк Еас1оЪас111и8 )оЬи8опй, Еас1оЪас111и8 ратаса8е1, Еас1оЪас111и8 реп1о8И8, Еас1оЪас111и8 тЬатпо8И8, Еас1оЪасШи8 сшуа1и8 и Еас1оЪасШи8 р1ап1атит, Еас1оЪас111и8 Ътеу18, Ьас1оЪасШи8 ЬисНпегк Еас1оЪас111и8 1гис1гуогап8, Еас1оЪас111и8 Ы1датбй, Еас1оЪасШи8 кеттеШит, Еас1оЪасШи8 геШеп, Еас1оЪасШи8 мпс^се^ Ό8Μ 17646, Ό8Μ 17647, Ό8Μ 17648, Ό8Μ 17649, Ό8Μ 17650, Ό8Μ 17651, Ό8Μ 17652, Ό8Μ 17653, предпочтительно Еас1оЪасШи8 кеттеШит, ЬаШоЪасШш Ъгеу18, ЬаскоЪасй1и8 теи1ег1, Еас1оЪас111и8 ЪисЬпеп и Еас1оЪас111и8 реп1о8И8.
  6. 6. Применение по любому из предыдущих пунктов, в котором указанная композиция находится, в частности, в составе пищевых продуктов, и/или кормах для домашних животных и/или сельскохозяйственных животных, и/или диетических добавок и необязательно содержит адьюванты и добавочные вещества.
  7. 7. Применение по любому из предыдущих пунктов для эрадикационной терапии НеЬсоЪаШет ру1оп в комбинации с дополнительными подходящими активными ингредиентами, такими как антибиотики.
  8. 8. Способ получения композиции, лекарственного средства или диетической добавки, содержащих высушенные распылением клетки лактобактерий, в котором клетки лактобактерий ферментируют и высушивают распылением и полученные клетки лактобактерий смешивают с физиологически совместимым носителем.
  9. 9. Способ по п.8, в котором клетки лактобактерий предварительно инокулируют и обогащают.
  10. 10. Применение высушенных распылением клеток лактобактерий для получения фармацевтической и/или диетической композиции для профилактики и/или лечения болезней, вызванных инфицированием НеБсоЪаШет ру1отк
  11. 11. Применение по п.10, где болезни, вызванные инфицированием НеЬсоЪаШет ру1оп, выбирают из следующих: болезни желудочно-кишечного тракта, такие как гастрит, язва желудка и рак желудка, дискомфорт в животе, в частности дискомфорт в верхней части живота, тяжесть в желудке, желудочные спазмы, боль в животе, боль или давление в верхней части живота, ощущение жжения в верхней части живота, хронически повторяющиеся расстройства желудка, постоянное ощущение наполненности, снижение аппетита, боль в пустом желудке, вздутие живота, изжога, диарея, нерегулярный стул, недомогание, тошнота и рвота, пищевая непереносимость, нарушение всасывания, несварение желудка (функциональная диспепсия), гастрит, повреждения слизистой оболочки или гастродуоденальная язва.
  12. 12. Применение высушенных распылением клеток лактобактерий для эрадикационной терапии Не11соЪас1ег ру1отк
  13. 13. Применение по п.12, в котором высушенные распылением клетки лактобактерий применяют в комбинации с дополнительными подходящими активными ингредиентами, такими как антибиотики.
  14. 14. Применение лекарственного средства или диетической добавки, содержащих высушенные рас- 9 028340 пылением клетки лактобактерий, для профилактики или лечения заболеваний, вызванных инфицированием НейсоЬас1ег ру1оп.
  15. 15. Применение по п.14, в котором заболевания, вызванные инфицированием НейсоЬае1ег ру1оп, представляют собой следующие: заболевания желудочно-кишечного тракта, такие как гастрит, язва желудка и рак желудка, дискомфорт в животе, дискомфорт в верхней части живота, тяжесть в желудке, желудочные спазмы, боль в животе, боль или давление в верхней части живота, ощущение жжения в верхней части живота, хронически повторяющиеся расстройства желудка, постоянное ощущения наполненности, снижение аппетита, боль в пустом желудке, вздутие живота, изжога, диарея, нерегулярный стул, недомогание, тошнота и рвота, пищевая непереносимость, нарушение всасывания, несварение желудка (функциональная диспепсия), гастрит, повреждения слизистой оболочки или гастродуоденальная язва.
  16. 16. Применение по п.14 или 15, в котором лекарственное средство применяют при эрадикационной терапии НейсоЬас1ег ру1оп в комбинации с дополнительными подходящими активными ингредиентами, такими как антибиотики.
EA201391823A 2011-06-08 2012-06-08 Лечение и профилактика инфекций, вызываемых helicobacter pylori у людей и животных, с помощью композиции, содержащей высушенные распылением клетки лактобактерий EA028340B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11169137A EP2532354A1 (de) 2011-06-08 2011-06-08 Sprühgetrocknete Lactobacillus Stämme / Zellen und deren Verwendung gegen Helicobacter Pylori
EP11185851 2011-10-19
PCT/EP2012/060948 WO2012168468A1 (de) 2011-06-08 2012-06-08 Sprühgetrocknete lactobacillus stämme / zellen und deren verwendung gegen helicobacter pylori

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201391823A1 EA201391823A1 (ru) 2014-04-30
EA028340B1 true EA028340B1 (ru) 2017-11-30

Family

ID=46489179

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201391823A EA028340B1 (ru) 2011-06-08 2012-06-08 Лечение и профилактика инфекций, вызываемых helicobacter pylori у людей и животных, с помощью композиции, содержащей высушенные распылением клетки лактобактерий

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20140147427A1 (ru)
EP (1) EP2717890B1 (ru)
JP (1) JP6062931B2 (ru)
CN (1) CN103648511B (ru)
BR (1) BR112013031325A2 (ru)
EA (1) EA028340B1 (ru)
ES (1) ES2600963T3 (ru)
MX (1) MX354047B (ru)
PL (1) PL2717890T3 (ru)
WO (1) WO2012168468A1 (ru)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014122175A1 (en) * 2013-02-07 2014-08-14 Lonza Ltd. Composition comprising lactobacillus and a carrier
DE202014101285U1 (de) 2014-02-13 2015-03-06 Maria Clementine Martin Klosterfrau Vertriebsgesellschaft Mbh Zusammensetzung zur Behandlung von Magenbeschwerden
US20160143317A1 (en) * 2014-11-24 2016-05-26 Nutrition Physiology Company, Llc Lactic acid bacterium as pet dietary supplement
JP2016150904A (ja) * 2015-02-16 2016-08-22 サントリーホールディングス株式会社 抗腫瘍剤
JP6339526B2 (ja) * 2015-05-22 2018-06-06 アサヒグループホールディングス株式会社 筋肉の分解抑制剤
CN105132329B (zh) * 2015-09-14 2019-04-16 西南民族大学 一种可预防胃溃疡的发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum strain Lee及其保健用途
GB2544481B (en) * 2015-11-16 2019-12-11 Century International Enterprises Ltd A wearable article and a method for producing a wearable article
CN109310718B (zh) * 2016-06-20 2022-06-17 株式会社明治 上消化道内菌群改善剂
KR101873899B1 (ko) * 2016-08-09 2018-07-03 씨제이제일제당(주) 락토바실러스 살리바리우스 cjls1511, 상기 균 또는 이의 사균체를 포함하는 동물 사료 첨가제 조성물, 및 상기 사균체의 제조 방법
WO2018187838A1 (en) * 2017-04-11 2018-10-18 Servatus Ltd Methods for the treatment of inflammation and inflammatory conditions
CN107361232A (zh) * 2017-06-21 2017-11-21 安徽和盛伟业饲料有限公司 一种防治仔鸡冬季腹泻的饲料
CN108403725B (zh) * 2018-05-22 2021-02-09 浙江海正药业股份有限公司 用于治疗消化道溃疡的组合物及其应用
US11617772B2 (en) * 2018-09-11 2023-04-04 Direct Digital Llc Nutritional supplements and therapeutic compositions comprising probiotics
AU2019365399A1 (en) * 2018-10-24 2021-04-22 Novozymes A/S Probiotic supplement for metabolic health comprising lactobacillus
EP4063474A4 (en) * 2019-11-19 2024-01-24 Inbiolev S L METHOD FOR TREATING MUST AND WINE AND PRODUCT FOR CARRYING OUT THE PROCESS
CN111357841A (zh) * 2020-03-26 2020-07-03 湖南营养树生物科技有限公司 一种抗幽门螺旋杆菌的益生菌白茶的制备方法
CN111471626A (zh) * 2020-05-29 2020-07-31 江南大学 一株能够抑制幽门螺杆菌的瑞士乳杆菌及其应用
CN111548970B (zh) * 2020-05-29 2021-03-26 江南大学 一株能够预防和/或治疗幽门螺杆菌感染的卷曲乳杆菌
CN112314951A (zh) * 2020-12-04 2021-02-05 王立强 一种可抗幽门螺杆菌的组合物及其制备方法
CN114561313B (zh) * 2021-08-26 2022-09-13 佛山市孛特碧欧微生物科技有限公司 格氏乳杆菌及其应用
CN116004456B (zh) * 2022-12-27 2023-10-27 广西爱生生命科技有限公司 一株抑制幽门螺旋杆菌感染的罗伊氏乳杆菌a21325及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1112692A1 (en) * 1999-06-24 2001-07-04 Meiji Milk Products Company Limited Drinks and foods capable of eliminating i helicobacter pylori /i
WO2007073709A1 (de) * 2005-12-22 2007-07-05 Organobalance Gmbh Neue lactobacillus stämme und deren verwendung gegen helicobacter pylori
WO2008039531A1 (en) * 2006-09-27 2008-04-03 Little Calumet Holdings, Llc Probiotic oral dosage forms
WO2008060198A1 (en) * 2006-11-17 2008-05-22 Sca Hygiene Products Ab Lactobacillus fermentum ess-1, dsm17851 and its use for the treatment and/or prevention of candidiasis and urinary tracrinfections

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3897307A (en) * 1974-10-23 1975-07-29 Hansens Lab Inc Stabilized dry cultures of lactic acid-producing bacteria
DE3135329A1 (de) 1981-09-05 1983-03-24 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Verfahren zur herstellung von trockenpulvern oxidationsempfindlicher substanzen
DE3770940D1 (de) 1987-04-06 1991-07-25 Hoffmann La Roche Verfahren zur herstellung von vitaminpraeparaten.
US5716615A (en) 1992-02-10 1998-02-10 Renata Maria Anna Cavaliere Vesely Dietary and pharmaceutical compositions containing lyophilized lactic bacteria, their preparation and use
JP4509250B2 (ja) * 1999-06-24 2010-07-21 明治乳業株式会社 Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ除菌性医薬品
FR2801316B1 (fr) * 1999-11-18 2005-03-25 Rhodia Food Procede de sechage des bacteries
JP3363438B2 (ja) * 2000-05-02 2003-01-08 ビオフェルミン製薬株式会社 噴霧乾燥による菌体乾燥物
EE04580B1 (et) * 2001-06-29 2006-02-15 Tartu �likool Mikroorganismi tüvi Lactobacillus fermentum ME-3 kui antimikroobne ja antioksüdantne probiootikum
US7101565B2 (en) * 2002-02-05 2006-09-05 Corpak Medsystems, Inc. Probiotic/prebiotic composition and delivery method
DE60238663D1 (de) * 2002-04-05 2011-02-03 Nestle Sa Zusammensetzungen und Verfahren zur Verbesserung von Lipidassimilation in Haustieren
CA2526861A1 (en) 2003-04-02 2004-10-14 Axcan Pharma S.A. Lactobacillus fermentum strain and uses thereof
CA2622951A1 (en) * 2005-09-28 2007-04-05 Nordisk Rebalance A/S Treatment of ibd and ibs using both probiotic bacteria and fermented cereal as treatment effectors
ES2578261T3 (es) * 2007-05-18 2016-07-22 Nestec S.A. Lactobacillus johnsonii para prevenir infecciones postoperatorias
EP2206505B1 (en) * 2008-06-26 2013-07-31 Shinwa Pharmaceutical Co., Ltd. Nano-level lactic acid bacterium

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1112692A1 (en) * 1999-06-24 2001-07-04 Meiji Milk Products Company Limited Drinks and foods capable of eliminating i helicobacter pylori /i
WO2007073709A1 (de) * 2005-12-22 2007-07-05 Organobalance Gmbh Neue lactobacillus stämme und deren verwendung gegen helicobacter pylori
WO2008039531A1 (en) * 2006-09-27 2008-04-03 Little Calumet Holdings, Llc Probiotic oral dosage forms
WO2008060198A1 (en) * 2006-11-17 2008-05-22 Sca Hygiene Products Ab Lactobacillus fermentum ess-1, dsm17851 and its use for the treatment and/or prevention of candidiasis and urinary tracrinfections

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LORCA GRACIELA L. ET AL.: "Lactobacillus acidophilus autolysins inhibit helicobacter pylori in vitro", CURRENT MICROBIOLOGY, SPRINGER, BOSTON, vol. 42, 1 January 2001 (2001-01-01), Boston, pages 39 - 44, XP002970548, ISSN: 0343-8651, DOI: 10.1007/s002840010175 *
NAOMI UEMURA, SHIRO OKAMOTO, SOICHIRO YAMAMOTO, NOBUTOSHI MATSUMURA, SHUJI YAMAGUCHI, MICHIO YAMAKIDO, KIYOMI TANIYAMA, NAOMI SASA: "Helicobacter pylori Infection and the Development of Gastric Cancer", NEW ENGLAND JOURNAL OF MEDICINE, NEW ENGLAND JOURNAL OF MEDICINE, vol. 345, no. 11, 13 September 2001 (2001-09-13), pages 784 - 789, XP055037354, ISSN: 00284793, DOI: 10.1056/NEJMoa001999 *
SERVIN, A.L.: "Antagonistic activities of lactobacilli and bifidobacteria against microbial pathogens", FEMS MICROBIOLOGY REVIEWS, ELSEVIER, AMSTERDAM; NL, vol. 28, no. 4, 1 October 2004 (2004-10-01), AMSTERDAM; NL, pages 405 - 440, XP004564881, ISSN: 0168-6445 *
SOBALA G M, ET AL: "Acute Helicobacter pylori infection: clinical features, local and systemic immune response, gastric mucosal histology, and gastric juice ascorbic acid concentrations.", GUT, BRITISH MEDICAL ASSOCIATION, LONDON,, UK, vol. 32, no. 11, 1 November 1991 (1991-11-01), UK, pages 1415 - 1418, XP002682923, ISSN: 0017-5749, DOI: 10.1136/gut.32.11.1415 *
TO B. C. S., ETZEL M. R.: "SPRAY DRYING, FREEZE DRYING, OR FREEZING OF THREE DIFFERENT LACTIC ACID BACTERIA SPECIES.", JOURNAL OF FOOD SCIENCE, WILEY-BLACKWELL PUBLISHING, INC., US, vol. 62., no. 03., 1 January 1997 (1997-01-01), US, pages 576 - 578 + 585., XP002038914, ISSN: 0022-1147, DOI: 10.1111/j.1365-2621.1997.tb04434.x *

Also Published As

Publication number Publication date
EA201391823A1 (ru) 2014-04-30
BR112013031325A2 (pt) 2017-06-06
CN103648511A (zh) 2014-03-19
US20140147427A1 (en) 2014-05-29
JP2014518897A (ja) 2014-08-07
MX2013014340A (es) 2014-07-09
EP2717890B1 (de) 2016-08-10
MX354047B (es) 2018-02-09
EP2717890A1 (de) 2014-04-16
ES2600963T3 (es) 2017-02-13
JP6062931B2 (ja) 2017-01-18
PL2717890T3 (pl) 2017-12-29
CN103648511B (zh) 2018-12-07
WO2012168468A1 (de) 2012-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA028340B1 (ru) Лечение и профилактика инфекций, вызываемых helicobacter pylori у людей и животных, с помощью композиции, содержащей высушенные распылением клетки лактобактерий
RU2466185C2 (ru) ПРОБИОТИЧЕСКИЙ ШТАММ Bifidobacterium longum, ПРОБИОТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ ШТАММА Bifidobacterium longum
US7846711B2 (en) Lactobacillus strains and uses thereof
ES2451618T3 (es) Matriz de proteína maleable y usos de estas
US20080102061A1 (en) Use hydrolyzed medium containing microorganisms medicinally
KR101100043B1 (ko) 항염증 효능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 에이취와이7711 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품
KR20060073937A (ko) 안정한 액상 촉생제 조성물, 그의 제조 및 응용
JPH0656680A (ja) 凍結乾燥された乳酸菌を含有する栄養学的及び／又は薬学的組成物、それらの調製及び使用
US11376289B2 (en) Composition and uses thereof
KR102084350B1 (ko) 용암해수 미네랄 코팅 프로바이오틱스의 제조방법 및 이를 이용한 용암해수 미네랄 코팅 프로바이오틱스
TWI689585B (zh) 新穎乳酸菌株及包含新穎乳酸菌株之免疫賦活劑
CN111011856A (zh) 用于缓解胃病的组合物、其制备方法及用于缓解胃病的食品
NO327862B1 (no) Sammensetning som innbefatter alkalisk sfingomyelinase av bakterielt opphav for anvendelse som et dietetisk preparat, ernaeringstilskudd eller farmasoytisk produkt, samt anvendelse av denne alkaliske sfingomyelinase for fremstilling av et dietetisk preparat, et ernaeringstilskudd eller et farmasoytisk produkt.
KR20210022221A (ko) 면역 조절능력과 혈중콜레스테롤 감소 능력이 모두 뛰어난 비피도박테리엄 롱검 아종 균주 및 이의 용도
AU2011212513B2 (en) Improvement of immunomodulatory properties of Lactobacillus strains
JP5209294B2 (ja) インターロイキン１２産生促進剤
BR122022016606B1 (pt) Lactobacillus paracasei mortos pelo aquecimento, medicamento, alimento ou bebida, ração, agente promotor da produção de il-12 e uso
KR102617297B1 (ko) 클로스트리디움 디피실리 감염의 치료 또는 예방용 조성물
KR102246957B1 (ko) 장내 세균총에 유익한 효능을 가진 유산균을 활용한 면역력 향상 기능성 첨가물 및 그 제조방법
JP5436991B2 (ja) ラクトバチルス・プランタラムの菌体又は培養物を有効成分とするインスリン抵抗性改善剤
KR102244732B1 (ko) 프로바이오틱 초산균인 아세토박터 파스테리아누스 mglv 및 이의 면역조절 효과
RU2264451C2 (ru) Биопрепарат &#34;бифистим от 3 месяцев до 3 лет&#34; для профилактики и лечения дисбактериозов и инфекционнных болезней желудочно-кишечного тракта у детей в возрасте от 3 месяцев до 3 лет, биологически активная добавка к пище &#34;бифистим от 3 месяцев до 3 лет&#34; для профилактики дисбактериозов и восстановления микрофлоры желудочно-кишечного тракта после антибиотикотерапии и других неблагоприятных воздействий у детей в возрасте от 3 месяцев до 3 лет и консорциум бифидобактерий для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта у детей в возрасте от 3 месяцев до 3 лет
KR20150087634A (ko) 여드름 원인균 프로피오니박테리움 아크네스의 생장억제 효능을 가지는 락토바실러스 파라카제이 hy7301 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품
CN116942706A (zh) Akkermansia muciniphila在制备预防、治疗和/或辅助治疗肠炎的产品中的应用
JP6594623B2 (ja) ノロウイルス感染予防剤