KR20150087634A - 여드름 원인균 프로피오니박테리움 아크네스의 생장억제 효능을 가지는 락토바실러스 파라카제이 hy7301 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 - Google Patents

여드름 원인균 프로피오니박테리움 아크네스의 생장억제 효능을 가지는 락토바실러스 파라카제이 hy7301 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 Download PDF

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Abstract

본 발명은 여드름 원인균의 생장을 억제하는 효능을 가지는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품에 관한 것으로서, 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301은 여드름의 주요 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 생장억제 효과를 가지므로 이를 유효성분으로 함유하는 여드름 피부개선을 목적으로 한 약학적 조성물, 발효식품, 음료, 건강기능식품, 화장료 조성물 등으로 이용될 수 있다.

Description

여드름 원인균 프로피오니박테리움 아크네스의 생장억제 효능을 가지는 락토바실러스 파라카제이 HY7301 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 {The Lactobacillus paracasei HY7301 having bacteriolysis ability against Propionibacterium acnes and products containing thereof as effective component}
본 발명은 여드름 병원균에 대한 항균활성을 가지는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품에 관한 것으로, 보다 상세하게는 막걸리에서 분리한 유산균 중 여드름의 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionicbacterium acnes)의 생장억제 효능을 가지는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품에 관한 것이다.
일반적으로 막걸리는 쌀과 밀가루 등을 살균하여 물과 섞고 여기에 누룩을 접종하여 발효시키는 전통 술이다. 막걸리는 다른 주류와는 달리 유산(lactic acid)을 포함하는 다양한 유기산(organic acids)을 함유하고 있어 영양학적으로 우수하다고 여겨진다. 접종원인 누룩은 곰팡이와 효모로 구성되어 있으며 때에 따라 다른 세균의 생장을 억제하기 위해 류코노스탁(Leuconostoc)류, 락토바실러스(Lactobacillus)류의 유산균도 접종원으로 쓰인다(Bae SM. 2002. The technology of Korean traditional liquor making).
여드름은 주로 사춘기의 남녀에게 발생하며 안면, 상흉부, 배부 및 상지에 폐쇄성 또는 개방성 면포, 구진, 농포, 결절 등 다양한 피부병변을 나타내는 모낭피지선의 염증성 질환이다. 대부분의 피부질환이 생명에 지장이 없다 할지라도 환자의 정신 상태와 대인관계 및 일상생활에 중요한 영향을 미친다. 특히, 외부에 노출된 부위에 존재하고 반흔을 남기는 경우 대인관계에 영향을 받으며, 정신의학적인 문제로 우울, 불안, 사회적 고립, 사회불안, 신체 불만족을 초래할 수 있다. 따라서 여드름은 단순히 피부질환으로 간과할 문제가 아닌 인간 삶의 질에도 중요한 영향을 미칠 수 있다는 점을 알 수 있다(Rapp D. A et al., Anger and acne: implications for quality of life, patient satisfaction and clinical care., J. Dermatol., 2004).
여드름의 발병 원인은 아직 명확히 규명되어 있지 않으나, 유전적· 환경적 요인을 배제한다면 피지의 과다형성, 비정상적인 모낭각화증, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 증식 및 염증 반응 등이 관여하고, 그 외 호르몬이나 면역학적 요소도 영향을 미친다고 인정되고 있다(Toyoda M. and Morohashi M., Pathogenesis of acne., Med. Electron Microsc., 2001). 여드름 발생 기전을 살펴보면, 여드름 발생부위 모낭 지선에서 안드로겐이 과도하게 합성되면 모낭지선에 있는 피지선 세포 수용체와 안드로겐의 결합이 증가한다. 이렇게 되면 피지선 세포의 분열에 의해 생성되는 피지의 정상적인 조성이 변하여 피지 내 지방성분인 아실세라마이드의 리놀리산과 콜레스테롤의 함량이 감소되고 스쿠알린과 유리 지방산의 함량이 증가한다. 이러한 지방조성의 변화로 인하여 모낭 내의 콜레스테롤과 콜레스테롤 설페이트간의 불균형을 초래하여 모낭 내 각질 형성 세포간의 결합을 증진시켜 모낭 정체 각화증이 초래된다. 그 결과 모낭 내에 정체된 피지는 모낭을 막아 공기의 순환을 차단하게 되어 모낭 내부는 모낭 내부에 상재하는 혐기성 세균이 잘 자랄 수 있는 환경이 된다.
지방 친화성이며 호기성 미생물인 스타필로코커스 에피더미스(Staphylococcus epidermis)는 외모낭 또는 모낭의 중간에서 성장하고, 혐기성 미생물인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)는 모낭의 안쪽에서 성장한다. 이때, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)가 과도하게 생장하면 지방 분해 효소와 화학주성인자를 분비하여 유리지방산을 만들고 백혈구가 모낭 주위에 모이게 하여 이들이 모낭벽을 자극한 후, 파괴하여 모낭 내용물이 진피 내로 유출됨으로 염증 반응을 일으켜 여드름과 같은 피부질환이 발생하게 한다(Koreck A. et al., The role of innate immunity in the pathogenesis of acne., Dermatology., 2003).
이에 본 발명자들은 막걸리에서 분리한 다양한 유산균 중 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301이 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 생장을 억제하는 효능이 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
대한민국 출원공개 제10-2011-0124029호(발명의 명칭: 항균활성 기능을 지닌 막걸리 유래 유산균으로부터 분비된 배양액, 출원공개일: 2011.11.16) 대한민국 출원공개 제10-2008-0031201호(발명의 명칭: 병원성 미생물에 대해 피부를 보호하기 위한 방법 및 수단, 출원공개일: 2008.04.08)
본 발명은 여드름의 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 생장을 억제하는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물, 발효유, 기능성 음료, 건강기능식품, 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 여드름의 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 생장을 억제하는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물, 발효유, 기능성 음료, 건강기능식품, 화장료 조성물을 제공하는 것을 특징으로 한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 균주를 분리하기 위하여 유통기한 내의 생막걸리 샘플을 십진희석하여 유산균 선택배지(BCP agar)에 접종하고 37℃에서 72시간 배양하였다. 유산균으로 추정되는 콜로니를 유산균 배양배지(MRS agar)에 2회 반복 계대하여 각 단일 콜로니를 얻었으며, 이렇게 형성된 균락 중에서 여드름 원인균에 항균활성을 갖는 균주를 선발하였다. 즉, 유산균이 증식된 MRS 배양물(culture broth) 10㎖을 원심분리하여 균체(cells)와 배양액(culture supernatant)을 분리하고, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 배양물에 첨가하여 생장 억제능을 확인하였다. 이렇게 항균 효과를 확인한 유산균주를 동정하고자 16S rDNA 분석을 통한 분자유전학적인 방법을 실시하여 그 결과를 하기의 표 1에 나타내었다.
Figure pat00001
상기의 표 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 신균주의 16S rDNA 유전자는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei)의 16S rDNA 유전자와 100% 일치하는 것으로 확인되어 본 발명자들은 이를 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301로 명명하고, 2013년 10월 8일자로 한국생명공연구원(기탁번호:KCTC 12502BP)에 기탁하였다.
본 발명에 따른 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 특성은 다음과 같다.
1)균의 형태
엠알에스(MRS) 한천평판배지에서 37℃, 2일간 배양했을 때 균의 특성
①세포의 형태: 간균
②운동성: 없음
③포자형성능: 없음
④그람(Gram) 염색: 양성
2)균락의 형태
엠알에스(MRS) 한천평판배지에서 37℃, 2일간 배양했을 때 균락의 형태
①형상: 원형
②융기: 볼록
③표면: 매끄러움(Smooth)
3)생리적 성질
①생육온도: 생장가능 생육온도 15~40℃
최적 생장온도 36~38℃
②생육 pH: 생장가능 생육 pH 5.0~7.5
최적 pH 6.0~6.5
③산소에 대한 영향: 통성혐기성
4)카탈라제: -
5)가스형성여부: -
6)15℃에서 생육: +
7)45℃에서 생육: +
8)인돌생산: -
9)젖산생산: +
10)당 발효 실험 및 동정
Biomerieux 사의 api 50 CH kit를 이용하여 당 발효 실험을 한 결과를 하기의 표 2에 나타내었다.
당 0-24 사용 여부 당 25-49 사용 여부
0 Control - 25 에스큘린 +
1 글리세롤 - 26 살리신 +
2 Erythritol - 27 셀로비오스 +
3 D 아라비노스 - 28 말토스 +
4 L 아라비노스 - 29 유당 +
5 리보스 + 30 멜리비오스 -
6 D 크실로스 - 31 자당 +
7 L 크실로스 - 32 트레할로스 +
8 아도니톨 + 33 이눌린 -
9 β 메틸-D-크실로시드 - 34 멜레지토스 +
10 갈락토스 + 35 라피노스 -
11 포도당 + 36 전분 -
12 과당 + 37 글리코겐 -
13 만노스 + 38 크실리톨 -
14 소르보스 - 39 겐티오비오스 +
15 람노스 - 40 D 투라노스 +
16 둘시톨 - 41 D 라이소스 -
17 시노시톨 + 42 D 타가토스 +
18 만니톨 + 43 D 푸코스 -
19 소르비톨 + 44 L 푸코스 -
20 α-메틸-D-만노시드 - 45 D 아라비톨 -
21 α-메틸-D-클루코시드 - 46 L 아라비톨 -
22 N-아세틸-글루코사민 + 47 글루코나테 -
23 아미그달린 + 48 2-케토-글루코나테 -
24 아르부틴 + 49 5-케토-글루코나테 -
한편, 본 발명의 여드름 원인균에 항균활성을 갖는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 단독 또는 약제학적으로 사용되는 부형제들과 함께 약제학적으로 통상으로 사용되는 방법에 따라 정제, 캡슐제 등과 같은 제재형태로 제제화 하여 사용될 수 있다.
사람의 경우, 통상적인 1일 투여량은 1~30mg/kg 체중의 범위일 수 있고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 실제 투여량은 투여경로, 환자의 연령, 성별 및 체중, 건강상태 및 질환의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 한다.
물론, 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 유효성분으로 함유하는 여드름 원인균 생장억제 효능을 갖는 약학조성물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.
또한, 본 발명의 여드름 원인균 생장억제 효능을 갖는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 유효성분으로 포함하는 조성물은 식품, 식품첨가제, 음료, 음료첨가제, 발효유, 건강기능식품 등으로 사용될 수 있다. 식품, 식품첨가제, 음료, 음료첨가제, 또는 건강기능식품으로 사용되는 경우, 각종 식품류, 발효유, 육류, 음료수, 초콜렛, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 알코올 음료, 비타민 복합제, 주류 및 그 밖의 건강기능식품일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
특히, 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 유효성분으로 함유하는 여드름 원인균 생장억제 효능을 갖는 발효유는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 유산균, 유산균 배양액, 또는 유산균 초음파 파쇄액 및 혼합과즙시럽을 일정비율로 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃이하로 냉각한 후 용기에 포장하여 발효유를 제조한다.
또한, 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료는 혼합과즙시럽, 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 및 물을 일정한 비율로 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 기능성 음료를 제조한다.
또한, 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품은 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 포함하는 것 이외에 영양보조 성분으로 비타민 B1, B2, B5, B6, E 및 초산에스테르, 니코틴산 아미드, 올리고당 등이 첨가될 수 있으며 여타의 식품 첨가물이 첨가되어도 무방하다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물로 사용할 수 있다. 상기 화장료 조성물로 사용하는 경우에는 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 외에 기타 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 맞게 임의로 선정한 물질을 첨가할 수 있다. 예를 들어, 정제수, 유분, 계면활성제, 보습제, 고급 알코올, 증저점제, 킬레이트제, 색소, 지방산, 산화방지제, 방부제, 왁스, pH 조절제, 향료 등이 첨가될 수 있다.
또한, 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물의 제형은 특별히 제한되는 바가 없으며, 예를 들면, 영양 크림, 수렴 화장수, 유연 화장수, 로션, 에센스, 영양젤, 마사지 크림, 마스크 팩 등의 제형을 가질 수 있다.
본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301은 여드름 원인균의 생장억제 효과를 가지므로 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 유효성분으로 함유하는 여드름 피부개선을 목적으로 한 약학적 조성물, 발효식품, 음료, 건강기능식품, 화장료 조성물 등으로 이용될 수 있다.
도 1은 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 배양액(culture supernatant)을 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828의 액체 배지에 첨가하여 배양한 후 흡광도를 측정하여 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 생장 억제 정도를 나타낸 그래프이다.
도 2는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 배양액(culture supernatant)을 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919의 액체 배지에 첨가하여 배양한 후 흡광도를 측정하여 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 생장 억제 정도를 나타낸 그래프이다.
도 3은 락토바실러스 파라카제이(L. paracsei) HY7301의 균체를 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828와 혼합 배양하여 배양물(culture broth)의 여드름 원인균과 유산균 수를 계수하여 생육 저해능을 나타낸 그래프이다.
도 4는 락토바실러스 파라카제이(L. paracsei) HY7301의 균체를 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919와 혼합 배양하여 배양물(culture broth)의 여드름 원인균과 유산균 수를 계수하여 생육 저해능을 나타낸 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 다음의 실시 예는 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니며, 본 발명의 기술적 사상의 범위 내에서 당업자에 의한 통상적인 변화가 가능하다.
<실시예 1>
락토바실러스 파라카제이( Lactobacillus paracasei ) HY7301을 포함한 동결건조분말의 제조
식품원료용 Proteose peptone #3, Yeast Extract, Beef Extract, 그리고 포도당을 첨가한 액체배지를 제조한 후 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 37℃에서 약 24시간 배양한 후 배양액을 원심분리하고 멸균된 생리식염수로 세척한 다음 멸균유에 분산시켰다. 그런 다음, 다시 동결 건조하여 동결건조 분말 그램(g)당 약 1010CFU 균수를 얻었다.
한편, 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301은 상기와 같이 동결 건조된 분말 형태 외에 배양물 형태로 제공될 수 있다.
<실시예 2>
락토바실러스 파라카제이( Lactobacillus paracasei ) HY7301을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 제조
본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 유효성분으로 함유하는 약학조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
정제의 제조
상기 실시예 1의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 포함한 동결건조 분말 100㎎, 옥수수전분 100㎎, 유당 100㎎ 및 폴리비닐피롤리돈 97㎎을 균질하게 혼합하여 습식과립법으로 과립화하고 스테아린산 마그네슘 2㎎을 가하여 혼합한 후 1정이 400㎎이 되도록 타정하였다.
캡슐제의 제조
상기 실시예 1의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 포함한 동결건조 분말 100㎎, 옥수수 전분 100㎎, 유당 100㎎, 스테아린산 마그네슘 2㎎을 완전히 혼합한 후 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 경질 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<실시예 3>
락토바실러스 파라카제이( Lactobacillus paracasei ) HY7301을 유효성분으로 함유하는 발효유의 제조
유산균 배양액과 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 및 혼합과즙시럽으로 구성된 발효유를 제조하는 방법은 다음과 같다.
먼저, 유산균 배양액은 원유 95.36중량%와 탈지분유(또는 혼합분유) 4.6중량%를 교반하여 15℃에서의 비중은 1.0473~1.0475, 적정산도는 0.200~0.220%, pH는 6.65~6.70, 20℃에서의 브릭스(Brixo)는 16.3~16.5% 정도가 되도록 혼합하였다. 혼합 후에 이를 UHT 열처리(135℃에서 2초간 살균)하고 40℃로 냉각한 뒤, 상기 실시예 1의 락토파실러스 파라카제이 (Lactobacillus paracasei) HY7301 동결건조분말을 0.02중량%씩 첨가하고 24시간 동안 배양하여 BCP 배지에서의 총 유산균수가 1.0 × 109cfu/㎖ 이상, 적정산도가 0.89~0.91%, pH는 4.55~4.65가 되도록 하여 제조하였다.
그 다음, 혼합과즙시럽은 액상과당 13중량%, 백설탕 5중량%, 혼합과즙농축액 56Brixo 10.9중량%, 펙틴 1.0중량%, 후레쉬 후르츠 믹스 에센스 0.1중량% 및 정제수 70중량%를 30~35℃에서 교반하여 혼합한 후 UHT 열처리(135℃에서 2초간 살균)한 후 냉각하여 제조하였다.
그런 다음, 상기 유산균배양액 69.5중량%와 상기 혼합과즙시럽 30.4중량%를 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각하여 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 유효성분으로 함유한 발효유를 제조하였다.
<실시예 4>
락토바실러스 파라카제이( Lactobacillus paracasei ) HY7301을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료의 제조
본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 및 혼합과즙시럽으로 구성된 기능성 음료를 제조하는 방법은 다음과 같다.
먼저, 혼합과즙시럽은 액상과당 13중량%, 백설탕 2.5중량%, 갈색설탕 2.5중량%, 혼합과즙농축액 56Brixo 10.9중량%, 펙틴 1.0중량%, 후레쉬 후르츠 믹스 에센스 0.1중량% 및 정제수 70중량%를 30~35℃에서 교반하여 혼합한 후 UHT 열처리(135℃에서 2초간 살균)한 후 냉각하여 제조하였다.
그리고 상기의 방법으로 제조된 혼합과즙시럽 30.4중량%와 상기 실시예 1의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 동결건조분말 0.1중량% 및 나머지 정제수 69.5중량%를 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료를 제조하였다.
<실시예 5>
락토바실러스 파라카제이( Lactobacillus paracasei ) HY7301을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품의 제조
상기 실시예 1의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 동결건조 분말 0.1중량%에 영양보조성분(비타민 B1, B2, B5, B6, E 및 초산에스테르, 니코틴산 아미드) 및 올리고당을 상기 실시예 1의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 동결건조 분말 100중량부에 대하여 10중량부가 되도록 첨가하여 고속회전 혼합기에서 혼합하였다. 상기 혼합물 100중량부에 대하여 멸균 정제수 10중량부를 첨가, 혼합하고 직경 1~2mm의 과립상으로 성형하였다. 상기 성형된 과립은 40~50℃의 진공건조기에서 건조시킨 후 12~14 메쉬(mesh)를 통과시켜 균일하게 과립을 제조하였다. 상기와 같이 제조된 과립은 적당량씩 압출 성형되어 정제 또는 분말로 되거나 경질캡슐에 충전되어 경질캡슐제품으로 제조하였다.
<실시예 6>
락토바실러스 파라카제이( Lactobacillus paracasei ) HY7301을 유효성분으로 함유하는 화장료의 제조
유연화장수
상기 실시예 1의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 동결건조 분말 0.01중량%, 글리세린 3중량%, 부틸렌 글리콜 2중량%, 프로필렌 글리콜 2중량%, 카복시비닐폴리머 0.1중량%, 에탄올 10중량%, 트리에탄올아민 0.1중량% 및 잔량의 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수를 혼합하여 통상의 유연화장수 제조방법에 따라 제조하였다.
영양화장수
상기 실시예 1의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 동결건조분말 0.01중량%, 밀납 4중량%, 폴리소르베이트 60 1.5중량%, 소르비탄세스퀴올레이트 0.5중량%, 유동파라핀 5중량%, 스쿠알란 5중량%, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5중량%, 글리세린 3중량%, 부틸렌 글리콜 3중량%, 프로필렌 글리콜 3중량%, 카복시비닐폴리머 0.1중량%, 트리에탄올아민 0.2중량%, 잔량의 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수를 혼합하여 통상의 영양화장수 제조방법에 따라 제조하였다.
영양크림
상기 실시예 1의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 동결건조분말 0.01중량%, 밀납 10중량%, 폴리소르베이트 60 1.5중량%, 소르비탄세스퀴올레이트 0.5중량%, 유동파라핀 10중량%, 스쿠알란 5중량%, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5중량%, 글리세린 5중량%, 부틸렌 글리콜 3중량%, 프로필렌 글리콜 3중량%, 트리에탄올아민 0.2중량% 및 잔량의 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수를 혼합하여 통상의 영양크림 제조방법에 따라 제조하였다.
맛사지 크림
상기 실시예 1의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 동결건조분말 0.01중량%, 밀납 10중량%, 폴리소르베이트 60 1.5중량%, 소르비탄세스퀴올레이트 0.8중량%, 유동파라핀 40중량%, 스쿠알란 5중량%, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 4중량%, 글리세린 5중량%, 부틸렌 글리콜 3중량%, 프로필렌 글리콜 3중량%, 트리에탄올아민 0.2중량% 및 잔량의 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수를 혼합하여 통상의 맛사지 크림 제조방법에 따라 제조하였다.
팩
상기 실시예 1의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 동결건조분말 0.01중량%, 폴리비닐알콜 13중량%, 소듐카복시메틸셀룰로스 0.2중량%, 알란토인 0.1중량%, 에탄올 5중량%, 노닐페닐에테르 0.3중량% 및 잔량의 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수를 혼합하여 통상의 팩 제조방법에 따라 제조하였다.
<시험예 1>
1-1. 락토바실러스 파라카제이( Lactobacillus paracasei ) HY7301 배양액의 여드름 원인균 프로피오니박테리움 아크네스( Propionibacterium acnes ) ATCC11828 균주에 대한 항균활성 측정
본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 배양액이 여드름 병원균의 생장에 미치는 항균활성을 액체배지(GAM broth) 배양법을 이용하여 측정하였다.
실험에 이용된 여드름 원인균은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828 균주를 사용하였다.
락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301이 증식된 MRS 배양물(culture broth) 10㎖을 4,000rpm으로 10분간 원심분리하고, 상층액 5㎖를 취해 0.45μm 필터에 여과하여 제균 시킨 후, 이를 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 배양액(culture supernatant)으로 사용하였다.
액체배지(GAM broth)는 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)를 배양하는 영양액체배지로 10㎖씩 준비하였다.
실험군으로는 액체배지(GAM broth)에 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828 균주를 1% 농도로 접종하고 24시간 동안 37℃에서 혐기배양한 후, 상기 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 배양액(culture supernatant) 1㎖를 첨가하여 유산균 배양액이 여드름 병원균의 생장에 미치는 영향을 관찰하였다.
대조군으로는 액체배지(GAM broth)에 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)를 1% 농도로 접종하고, 유산균을 배양하지 않은 MRS 배지만을 1㎖ 첨가하여 배지의 부피 차이에서 오는 실험 오차를 제거하였다.
비교군으로는 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828균주와 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 배양액을 접종하지 않은 액체배지(GAM broth)만을 사용하였다.
여드름 병원균의 생장 정도는 상기의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 배양물(culture broth)의 흡광도를 600nm에서 측정하여 비교하였다.
그 결과를 도 1에 나타내었다.
비교군(blank)은 무처리 상태의 흡광도를 나타내고,
대조군은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828 배양액의 흡광도를 나타내며,
실험군은 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 배양액을 처리한 배지에서의 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828 배양액의 흡광도를 나타낸다.
도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 미생물이 자라지 않은 상태인 비교군(blank)은 흡광도가 0.16 정도로 매우 낮고, 대조군(control)인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828 균주의 배양물의 흡광도는 1.5 정도로 높아졌다. 반면에, 대조군에 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 배양액(culture supernatant)을 첨가한 실험군은 흡광도가 1.2 수준으로 상당히 감소하였다.
이러한 사실을 통해, 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 배양액은 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828의 생장을 저해하는 효능이 있음을 확인할 수 있었다.
1-2. 락토바실러스 파라카제이( Lactobacillus paracasei ) HY7301 배양액의 여드름 원인균 프로피오니박테리움 아크네스( Propionibacterium acnes ) ATCC6919 균주에 대한 항균활성 측정
여드름 원인균으로 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 균주를 사용한 것을 제외하고는 상기 시험예 1-1과 동일한 방법으로 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 배양액이 여드름 병원균의 생장에 미치는 항균활성을 액체배지(GAM broth) 배양법을 이용하여 측정하였다.
그 결과를 도 2에 나타내었다.
비교군(blank)은 무처리 상태의 흡광도를 나타내고,
대조군은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 배양액의 흡광도를 나타내며,
실험군은 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 배양액을 처리한 배지에서의 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 배양액의 흡광도를 나타낸다.
도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 미생물이 자라지 않은 상태인 비교군(blank)은 흡광도가 0.16 정도로 매우 낮고, 대조군(control)인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 균주의 배양물의 흡광도는 1.4 정도로 높아졌다. 반면에, 대조군에 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 배양액(culture supernatant)을 첨가한 실험군은 흡광도가 1.3 수준으로 감소하였다.
이러한 사실을 통해, 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 배양액은 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919의 생장을 저해하는 효능이 있음을 확인할 수 있었다.
<시험예 2>
2-1. 락토바실러스 파라카제이( Lactobacillus paracasei ) HY7301 균체(cell)의 여드름 원인균 프로피오니박테리움 아크네스( Propionibacterium acnes ) ATCC11828 균주에 대한 항균활성 측정
본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 균체(cell)의 여드름 병원균에 대한 항균활성을 확인하였다.
락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301이 증식된 MRS 배양물(culture broth) 10㎖을 4,000rpm으로 10분간 원심분리하여 상층액을 제거하고, 남은 균체를 saline buffer 10㎖로 2회 세척하고 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301이 약 1X109cfu/㎖ 농도가 되도록 식염수에 용해하여 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 균체로 사용하였다.
대조군으로는 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828 균주만을 액체배지(GAM broth)에 1% 농도로 접종 후 37℃에서 배양한 것을 이용하였다.
실험군으로는 상기 대조군에 상기 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 균체를 1% 농도로 접종하여 동시 배양한 후 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828와 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 균수를 측정하여 비교하였다.
프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828의 균수는 선택배지인 DRC agar(Differential Reinforced Clostridial Agar)를, 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 균수는 락토바실러스 선택배지인 SL agar에 접종하여 계수하였다.
그 결과를 도 3에 나타내었다.
대조군은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828 만 접종한 균수 결과를 나타내고,
실험군은 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 균체와 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828를 배양한 균수 결과를 나타낸다.
도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828만을 배양한 대조군에서는 프로피오니박테리움 선택배지(DRC agar)에서 균수가 로그값으로 9 이상을 나타냈고, 유산균 선택배지(SL agar)에서는 제로값을 나타냈다. 반면에, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828와 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 동시에 배양한 실험군에서는 프로피오니박테리움 선택배지(DRC agar)에서는 균수가 로그값 8로 감소하였고, 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 균수가 로그값 8로 높게 나타났다.
이러한 사실을 통해, 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828의 생장을 억제하고 균수를 감소시켜 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828에 대한 강한 항균활성을 가짐을 확인할 수 있었다.
2-2. 락토바실러스 파라카제이( Lactobacillus paracasei ) HY7301 균체(cell)의 여드름 원인균 프로피오니박테리움 아크네스( Propionibacterium acnes ) ATCC6919 균주에 대한 항균활성 측정
여드름 원인균으로 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919를 사용한 것을 제외하고는 상기 시험예 2-1과 동일한 방법으로 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301 균체(cell)의 여드름 병원균에 대한 항균활성을 확인하였다.
그 결과를 도 4에 나타내었다.
대조군은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 만 접종한 균수 결과를 나타내고,
실험군은 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 균체와 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919를 배양한 균수 결과를 나타낸다.
도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919만을 배양한 대조군에서는 프로피오니박테리움 선택배지(DRC agar)에서 균수가 로그값 9 이상을 나타냈고, 유산균 선택배지(SL agar)에서는 제로값을 나타냈다. 반면에, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919와 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301을 동시에 배양한 실험군에서는 프로피오니박테리움 선택배지(DRC agar)에서는 균수가 로그값 8로 감소하였고, 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301의 균수가 로그값 8로 높게 나타났다.
이러한 사실을 통해, 본 발명의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919의 생장을 억제하고 균수를 감소시켜 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828에 대한 강한 항균활성을 가짐을 확인할 수 있었다.
한국생명공학연구원 KCTC12502BP 20131008

Claims (8)

  1. 여드름 원인균 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)의 생장억제 효능을 가지는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301(기탁번호: KCTC 12502BP).
  2. 제1항에 있어서,
    상기 여드름 원인균 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)는 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828 또는 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919인 것을 특징으로 하는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301(기탁번호: KCTC 12502BP).
  3. 제1항의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301(기탁번호: KCTC 12502BP)을 유효성분으로 함유하는 여드름피부 개선용 약학조성물.
  4. 제1항의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301(기탁번호: KCTC 12502BP)을 유효성분으로 함유하는 발효유.
  5. 제1항의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301(기탁번호: KCTC 12502BP)을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료.
  6. 제1항의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301(기탁번호: KCTC 12502BP)을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품.
  7. 제1항의 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301(기탁번호: KCTC 12502BP)을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 영양 크림, 수렴 화장수, 유연 화장수, 로션, 에센스, 영양젤, 립스틱, 파운데이션, 아이쉐도우, 팻취, 마스트 쉬트, 마사지 크림 및 마스크 팩 중에서 선택된 어느 하나의 제형을 가지는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) HY7301(기탁번호: KCTC 12502BP)을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
KR1020140007814A 2014-01-22 2014-01-22 여드름 원인균 프로피오니박테리움 아크네스의 생장억제 효능을 가지는 락토바실러스 파라카제이 hy7301 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 KR20150087634A (ko)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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