KR101084049B1 - 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 에스에스피. 불가리쿠스 에이치와이7901 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 - Google Patents

질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 에스에스피. 불가리쿠스 에이치와이7901 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 Download PDF

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Abstract

본 발명은 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물, 발효유, 음료 및 건강기능식품에 관한 것으로서, 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901은 과산화수소(H2O2)를 생산하여 질염 병원균인 칸디다 알비칸스(Candida albicans)와 가드너렐라 바지날리스(Gardnerella vaginalis)의 증식을 억제하는 효과가 있다.

Description

질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 에스에스피. 불가리쿠스 에이치와이7901 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품{Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus HY7901 having inhibitory effects against vaginalitis pathogens and products containing thereof as effective component}
본 발명은 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 신규의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901 및 이를 유효 성분으로 함유하는 약학적 조성물, 발효유, 음료 및 건강기능식품에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 과산화수소(H2O2)를 생산하여 질염의 주요 병원균인 칸디다 알비칸스(Candida albicans)와 가드너렐라 바지날리스(Gardnerella vaginalis)의 증식을 억제하는 활성을 갖는 신규의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물, 발효유, 음료 및 건강기능식품에 관한 것이다.
여성의 질 내부에는 다양한 세균, 효모 및 다른 미생물이 균형을 이루며 공존하고 있다. 건강한 질 생태계에는 유산균이 우점하고 있으며 젖산 생성 또는 과산화수소 생성으로 질의 산성 상태를 유지하며 다른 혐기성 세균 및 병원균의 생장을 억제하고 있다. 질 내 미생물의 균형은 항생제, 스트레스, 질병 및 호르몬 변화와 같은 외부인자에 의한 유산균 감소로 교란이 일어나 병원균의 과성장이 발생되기도 한다.
전 세계적으로 약 23억 명 정도의 여성은 최소한 평생에 한번 또는 매우 자주 곰팡이균으로 인한 감염으로 인해 고생하고 있다. 즉 여성인구의 약 3/4이 살아가면서 이런 종류의 감염을 겪게 되며, 이러한 여성 중 50%는 감염이 재발되는 경험을 한다. 국내에서도 산부인과 외래환자의 30~40%가 질 분비물 과다 분비 등의 증상을 호소한다. 이러한 증상은 치료를 하더라도 완치되지 않고 재발되는 경우가 많아 환자의 고통은 쉽게 해결되지 않는다. 또한 여성 질염의 60~90%가 감염이 되어도 증상이 없는 '무증상 감염'이라는 사실은 아주 중요하다. 약간 질 분비물이 증가한 듯한 증상 외에 다른 증상이 없고 불편하지 않으므로 질염에 감염된 사실을 몰라서 치료를 하지 않고 지내는 경우가 많다. 감염에 의한 질염은 크게 3가지 주요 원인으로 나뉘는데, 세균성 질염(Bacterial vaginosis, BV), 칸디다증 (Candida vaginitis, CV), 트리코모나스 질염(Trichomonas vaginalis)이다. 이중 세균성 질염은 최근 가장 흔한 질염으로 인식되고 있으며, 세균성 질염 환자로부터 분리한 질 분비물에서는 Atopobium vaginae, Megasphaera sp., Gardnerella vaginalis, Eggerthella sp., Clostridium-like sp., Prevotella bivia group, Peptostreptococcus micros, Prevotella sp. 등이 발견된 것으로 보고된 바 있으며, 특히 가드너렐라 바지날리스(Gardnerella vaginalis)는 주요 세균성 질염의 원인균으로 알려져 있다. 세균성 질염 다음으로 많이 나타나는 병징이 외음질 칸디다증이다. 질로부터 분리한 효모 균주의 85~95%가 칸디다 알비칸스(Candida albicans)이며 질 내 환경이 균형을 잃으면 빠르게 증식하여 흰색 혹은 황백색의 냉이 나오며 가렵고 따끔거리는 증상이 나타난다.
여성의 질은 인간의 몸 가운데 락토바실러스(lactobacillus)가 많이 군집해 있는 조직으로서 장과 물리적 거리가 가깝고 미생물이 쉽게 자랄 수 있는 환경이 조성되어있다. 일반적으로 건강한 여성의 질은 다양한 종류의 락토바실러스가 군집하면서 질 내 pH를 4.5이하로 유지하고 있으며, 이는 다른 병원성 미생물의 생장을 억제하는 가장 중요한 방어 수단으로 알려져 있다. 또한, 질 내 락토바실러스에 의한 항균 물질의 생성(과산화수소, 박테리오신, antibacterial substance 등)에 의해 병원균이 억제되는 것으로 알려져 있으며, 유산균이 병원균의 질 상피세포 부착을 억제하는 것으로 알려져 있다. 기존에는 질염을 치료하는데 주로 설폰아미드류, 항생제 및 소독 약물이 이용되어 왔으나 이러한 항생제 처리는 유익균인 유산균에도 치명적이며 스타필로코커스(Staphylococcus)와 같은 병원균이 항생제 내성을 보이므로 처방의 문제점이 있다.
이에 본 발명은 질염의 주요 병원균인 칸디다 알비칸스와 가드너렐라 바지날리스의 증식을 억제할 수 있는 유산균을 탐색하던 중 원유에서 분리한 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901이 과산화수소 생산이 활발하고 질염 병원균의 증식을 억제하는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 신규의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물, 발효유, 음료 및 건강기능식품을 제공하는 데 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 과산화수소 생성능을 확인하고 병원균과 동시 배양 후 병원균의 증식 정도를 비교하여 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 신규의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물, 발효유, 음료 및 건강기능식품을 제공하는 것을 특징으로 한다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 균주는 원유에서 분리되었다. 멸균되지 않은 원유를 0.02% 소디움 아지드(sodium azide)가 포함된 엠알에스(MRS) 한천 배지에 접종하고 37℃에서 48시간 배양하였다. 배양 후 보이는 균락(colony)을 10㎕ 백금이를 사용하여 단일 균락만 취하여 다시 0.02% 소디움 아지드가 포함된 엠알에스 한천 배지에 배양하여 단일 균락임을 확인하였다. 이렇게 형성된 균락 중에서 과산화수소 생성능과 칸디다 알비칸스 및 가드너렐라 바지날리스의 생장을 억제하는 유산균을 선발하여 본 발명의 균주를 분리하였다.
본 발명에 따른 유산균의 특성은 다음과 같다.
1)균의 형태
엠알에스(MRS) 한천평판배지에서 37℃, 2일간 배양했을 때 균의 특성
① 세포의 형태: 간균
② 운동성: 없음
③ 포자형성능: 없음
④ 그람(Gram) 염색: 양성
2)균락의 형태
엠알에스(MRS) 한천평판배지에서 37℃, 2일간 배양했을 때 균락의 형태
① 형상: 부정형
② 융기: 볼록
③ 표면: 거칠음(rough)
3)생리적 성질
① 최적 생육온도: 36~38℃
② 최적 생육 pH: 6.0~6.5
③ 산소에 대한 영향: 통성혐기성
4)카탈라제: -
5)가스형성여부: -
6)15℃에서 생육: -
7)45℃에서 생육: +
8)인돌생산: -
9)젖산생산: +
10)16S rDNA 분석
16S rDNA 분석을 통한 분자유전학적인 방법을 실시하여 본 발명의 신균주를 동정하였다.
16S rDNA 염기 서열 분석 결과를 표 1에 나타내었다( <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast>).
Figure 112010025467032-pat00001
상기 표 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 신균주의 16S rRNA 유전자는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) 의 16S rRNA 유전자와 100% 일치하는 것으로 확인되었다.
이상에서와 같은 본 발명의 신균주의 형태학적 특성, 생리적 및 생장 특성 및 16S rDNA 분석을 통한 분자유전학적인 방법에 근거하여 동정한 결과, 본 발명의 신균주는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus)에 속한다는 것을 알 수 있었다. 따라서 본 발명자들은 본 발명의 신균주를 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901로 명명하고, 한국생명공학연구원 생물자원센터에 2010년 3월 29일자로 기탁하였다(기탁번호: KCTC 11675BP).
한편, 본 발명의 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 질염 치료 및 예방용 약학적 조성물은 단독 또는 약제학적으로 사용되는 부형제들과 함께 약제학적으로 통상으로 사용되는 방법에 따라 정제, 캡술제 등과 같은 제재형태로 제제화하여 사용될 수 있다.
사람의 경우, 통상적인 1일 투여량은 1~30㎎/kg 체중의 범위일 수 있고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 실제 투여량은 투여경로, 환자의 연령, 성별 및 체중, 건강상태 및 질환의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 한다.
물론, 본 발명의 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 질염 치료 및 예방용 약학적 조성물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.
또한, 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 질염 예방용 발효유는 유산균배양액, 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901 및 혼합과즙시럽을 일정비율로 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 용기에 포장하여 발효유를 제조한다.
또한, 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 질염 예방용 음료는 혼합과즙시럽, 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901 및 물을 일정한 비율로 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 기능성 음료를 제조한다.
또한, 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 질염 예방용 건강기능식품은 상기 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 포함하는 것 이외에 영양보조성분으로서 비타민 B1, B2, B5, B6, E 및 초산에스테르, 니코틴산 아미드, 올리고당 등이 첨가될 수 있으며 여타의 식품 첨가물이 첨가되어도 무방하다.
이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 질염 치료 및 예방을 목적으로 한 정장제, 발효식품 또는 건강기능식품으로 이용될 수 있다.
도 1은 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901 및 기타 락토바실러스가 칸디다 알비칸스의 증식을 억제하는 효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 다음의 실시예는 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니며, 본 발명의 기술적 사상의 범위 내에서 당업자에 의한 통상적인 변화가 가능하다.
<실시예 1>
락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 포함한 동결건조분말제조
본 발명의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901은 식품원료용 Proteose peptone #3, Yeast Extract, Beef Extract, 그리고 포도당을 첨가한 액체배지를 제조하여 37℃에서 약 16시간 배양한 후 배양액을 원심분리하고 멸균된 생리식염수로 세척한 다음 멸균유에 분산하였다. 다시 동결 건조하여 동결건조 분말 그램(g)당 약 1011cfu 균수를 얻었다. 이 동결건조 분말을 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 질염 치료 및 예방 소재로 사용하였다.
한편 본 발명의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901은 상기와 같이 동결건조된 분말 형태 또는 배양물 형태로 제공될 수 있다.
<실시예 2>
락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 제조
본 발명의 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 질염 치료 및 예방 효능을 갖는 약학 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
정제의 제조
실시예 1의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 포함한 동결건조분말 100㎎, 옥수수전분 100㎎, 유당 100㎎ 및 폴리비닐피롤리돈 97㎎을 균질하게 혼합하여 습식과립법으로 과립화하고 스테아린산 마그네슘 2㎎을 가하여 혼합한 후 1정이 400㎎이 되도록 타정하였다.
캡슐제의 제조
실시예 1의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 포함한 동결건조분말 100㎎, 옥수수 전분 100㎎, 유당 100㎎, 스테아린산 마그네슘 2㎎을 완전히 혼합한 후 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 경질 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<실시예 3>
락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 발효유의 제조
본 발명의 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 발효유를 제조하는 방법은 다음과 같다.
먼저, 유산균 배양액은 원유 95.36중량%와 탈지분유(또는 혼합분유) 4.6중량%를 교반하여 15℃에서의 비중은 1.0473~1.0475, 적정산도는 0.200~0.220%, pH는 6.65~6.70, 20℃에서의 브릭스(Brixo)는 16.3~16.5%정도가 되도록 혼합하였다. 혼합 후에 이를 UHT 열처리(135℃에서 2초간 살균)하고 40℃로 냉각한 뒤, 스트렙토코커스 써모필러스균과 유당분해효소(Valley laboratory, USA)를 각기 0.02중량%씩 첨가하고 6시간 동안 배양하여 BCP 배지에서의 총 유산균수가 1.0× 109 cfu/㎖ 이상, 적정산도가 0.89~0.91%, pH는 4.55~4.65가 되도록 하여 제조하였다.
그 다음, 혼합과즙시럽은 액상과당 13중량%, 백설탕 5중량%, 혼합과즙농축액 56Brixo 10.9중량%, 펙틴 1.0중량%, 후레쉬 후르츠 믹스 에센스 0.1중량% 및 정제수 70중량%를 30~35℃에서 교반하여 혼합한 후 UHT 열처리(135℃에서 2초간 살균)한 후 냉각하여 제조하였다.
그런 다음, 상기 유산균배양액 69.5중량%와 실시예 1의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 포함한 동결건조분말 0.1중량% 및 상기 혼합과즙시럽 30.4중량%를 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각하여 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 발효유를 제조하였다.
<실시예 4>
락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료의 제조
상기의 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료를 제조하는 방법은 다음과 같다.
먼저, 혼합과즙시럽은 액상과당 13중량%, 백설탕 2.5중량%, 갈색설탕 2.5중량%, 혼합과즙농축액 56Brixo 10.9중량%, 펙틴 1.0중량%, 후레쉬 후르츠 믹스 에센스 0.1중량% 및 정제수 70중량%를 30~35℃에서 교반하여 혼합한 후 UHT 열처리(135℃에서 2초간 살균)한 후 냉각하여 제조하였다.
그리고 상기의 방법으로 제조된 혼합과즙시럽 30.4중량%와 실시예 1의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 포함한 동결건조분말 0.1중량% 및 나머지 정제수 69.5중량%를 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 질염 예방 효능을 갖는 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 기능성음료를 제조하였다.
<실시예 5>
락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품의 제조
실시예 1의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 포함한 동결건조분말 0.1중량%에 영양보조성분(비타민 B1, B2, B5, B6, E 및 초산에스테르, 니코틴산 아미드) 및 올리고당을 상기의 실시예 1의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 포함한 동결건조분말 100중량부에 대하여 10중량부가 되도록 첨가하여 고속회전 혼합기에서 혼합하였다. 상기 혼합물에 멸균 정제수 10중량부를 첨가, 혼합하고 직경 1~2mm의 과립상으로 성형하였다. 상기 성형된 과립은 40~50℃의 진공건조기에서 건조시킨 후 12~14 메쉬(mesh)를 통과시켜 균일하게 과립을 제조하였다. 상기와 같이 제조된 과립은 적당량씩 압출 성형되어 정제 또는 분말로 되거나 경질캡슐에 충전되어 경질캡슐제품으로 제조하였다.
<시험예 1>
락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901의 과산화수소 생성활성
과산화수소 생성 정도를 살피기 위하여 엠알에스-티엠비 한천배지를 표 2(1L 당 배지 조성)와 같이 제조하였다. 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 엠알에스 액상배지를 이용하여 37℃에서 20시간 배양한 다음 엠알에스-티엠비 한천배지에 접종한 후 2일간 37℃에서 혐기 배양하였다. 배양 후 엠알에스-티엠비 한천배지를 공기 중에 30분간 노출 시키고 균락의 색깔 변화를 관찰하였다. 균락의 색깔이 푸른색으로 변하는 정도를 육안으로 관찰하여 3등급으로 나누었다.
엠알에스 배지 55g
3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘
(3,3',5,5',-tetramethylenzidine)		 250㎎
0.05% hemin 10㎖
0.5% vitamin K in 95% EtOH 0.2㎖
1 mg/mL peroxidase 10㎖
한천 15g
DW 1000㎖
또한, 락토바실러스(Lactobacillus) sp. KY16-11, 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) CS332, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) HLAB4-14, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) L18, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) L141204, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) L307도 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901과 동일한 방법으로 과산화수소 생성활성을 시험하였다.
그 결과를 표 3에 나타내었다.
표 3에 락토바실러스(Lactobacillus) sp. KY16-11, 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) CS332, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) HLAB4-14, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) L18, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) L141204, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) L307 및 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 각각 'KY16-11', 'CS332', 'HLAB4-14', 'L18', 'L141204', 'L307'및 'HY7901'로 표시하였다.
균주 과산화수소 생성능
KY16-11 +
CS332 ++
HLAB4-14 ++
L18 ++
L141204 ++
L307 +++
HY7901 +++
상기 표 3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901은 과산화수소생성이 활발하게 일어남을 확인할 수 있었다.
<시험예 2>
락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901의 칸디다 알비칸스( Candida albicans )의 증식 억제활성
락토바실러스 델브루키 HY7901은 엠알에스 액상배지(Difco, USA)를 이용하여 37℃에서 20시간 배양하여 시험에 사용하였으며, 칸디다 알비칸스는 Sabouraud Dextrose 액체배지(Difco, USA)를 이용하여 25℃에서 20시간 진탕배양하여 시험에 사용하였다. 엠알에스 한천배지를 metal borer를 얹은 플레이트에 분주하고 굳힌 후 위에 칸디다 알비칸스를 106 CFU/mL 수준으로 접종한 Sabouraud dextrose soft 한천배지(0.7% 한천) 5㎖을 중층하였다. 배지가 굳으면 metal borer를 제거하고 여분의 엠알에스 한천 배지로 바닥을 메운 후 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901의 배양물 약 200㎕를 채워 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 엠알에스 한천배지에 나타나는 칸디다 알비칸스의 생장억제환의 크기를 측정하였다. 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901에 의한 칸디다 알비칸스의 억제 활성은 생성된 억제환의 지름에서 metal borer의 지름을 뺀 길이(mm)로 나타내었다.
또한, 락토바실러스(Lactobacillus) sp. KY16-11, 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) CS332, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) HLAB4-14, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) L18에 대하여 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901과 동일한 방법으로 칸디다 알비칸스의 증식 억제 활성을 시험하였다.
그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에 락토바실러스(Lactobacillus) sp. KY16-11, 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) CS332, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) HLAB4-14, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) L18 및 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 각각 'KY16-11', 'CS332', 'HLAB4-14', 'L18' 및 'HY7901'로 표시하였다.
도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901은 질염 병원균인 칸디다 알비칸스의 증식을 저해하는 능력이 가장 높았다.
<시험예 3>
혼합배양에 의한 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901의 칸디다 알비칸스의 증식 억제활성
락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901은 엠알에스 액상배지(Difco, USA)를 이용하여 37℃에서 20시간 배양하여 시험에 사용하였으며, 칸디다 알비칸스는 Sabouraud Dextrose 액체배지(Difco, USA)를 이용하여 25℃에서 20시간 진탕배양하여 시험에 사용하였다. 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901과 칸디다 알비칸스를 각각 107 CFU/㎖ 수준으로 엠알에스 액체배지에 접종하였다. 그리고 37℃에 50rpm으로 20시간 동안 진탕배양한 다음 칸디다 알비칸스의 균수를 측정하였다. 칸디다 알비칸스의 균수 측정은 시료를 희석액을 이용하여 십진 희석한 다음 포테이토 덱스트로우즈 한천배지(Difco, USA)에 도말한 후 25℃에서 2일간 배양하였다. 배양이 완료된 후 한천배지 상에 형성된 균락을 계수하였다.
또한, 락토바실러스(Lactobacillus) sp. KY16-11, 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) CS332, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) HLAB4-14, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) L18에 대하여도 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901과 동일한 방법으로 칸디다 알비칸스의 억제 활성을 시험하였다.
Sabouraud Dextrose 액체배지(Difco, USA)를 이용하여 25℃에서 20시간 진탕배양한 칸디다 알비칸스 만을 107 CFU/㎖ 수준으로 엠알에스 액체배지에 접종한 것을 대조군으로 준비하였다.
그 결과는 표 4에 나타내었다.
표 4에 락토바실러스(Lactobacillus) sp. KY16-11, 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) CS332, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) HLAB4-14, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) L18 및 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 각각 'KY16-11', 'CS332', 'HLAB4-14', 'L18'및'HY7901'로 표시하였다.
Figure 112010025467032-pat00002
상기 표 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901이 칸디다 알비칸스의 사멸을 가장 높게 유도하는 것을 확인할 수 있었다.
<시험예 4>
락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901의 가드너렐라 바지날리스( Gardnerella vaginalis )의 증식 억제 활성
락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901은 엠알에스 액상배지(Difco, USA)를 이용하여 37℃에서 20시간 배양하여 시험에 사용하였다. 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901의 배양액을 원심분리(4000 rpm, 10분)한 뒤 배양액을 0.22μm 크기의 필터에 통과시켜 균을 완전히 제거하였다. 제균된 배양액 1mL를 9mL의 쿡드 미트(Cooked meat, Difco, USA) 액체 배지에 넣고 여기에 5% 농도로 혈액(sheep blood)을 첨가하여 가드너렐라 바지날리스의 배지를 만들었다.
대조군으로는 엠알에스 액체배지 1mL를 9mL의 쿡드 미트 배지에 섞은 것을 이용하였다. 가드너렐라 바지날리스는 위의 배양 배지를 이용하여 37℃에서 20시간 배양한 다음 희석액을 이용하여 십진희석하고 5% 농도로 혈액을 첨가한 Casman's 한천 배지에 접종하였다. 37℃에서 2일간 배양한 뒤 한천배지 상에 형성된 균락을 계수하였다.
또한, 락토바실러스(Lactobacillus) sp. KY16-11, 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) CS332, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) HLAB4-14, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) L18에 대하여도 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901과 동일한 방법으로 가드너렐라 바지날리스의 억제 활성을 시험하였다.
그 결과를 표 5에 나타내었다.
표 5에 락토바실러스(Lactobacillus) sp. KY16-11, 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) CS332, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) HLAB4-14, 락토바실러스 게서리(Lactobacillus gasseri) L18 및 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스 HY7901을 각각 'KY16-11', 'CS332', 'HLAB4-14', 'L18'및'HY7901'로 표시하였다.
유산균 가드너렐라 바지날리스의 생균수(Log10 CFU/ml)
대조군 9.68
KY16-11 9.87
CS332 9.70
HLAB4-14 9.35
L18 9.99
HY7901 8.55
표 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스HY7901은 가드너렐라 바지날리스의 증식을 억제하는 것을 확인할 수 있었다.
한국생명공학연구원 KCTC11675 20100329

Claims (7)

  1. 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 신규의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901(기탁번호: KCTC 11675BP).
  2. 제1항에 있어서,
    상기 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901은 과산화수소 생성이 활발한 것을 특징으로 하는 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 신규의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 질염 병원균은 칸디다 알비칸스(Candidia albicans)및 가드너렐라 바지날리스(Gardnerella vaginalis)인 것을 특징으로 하는 질염 병원균의 증식을 억제하는 활성을 갖는 신규의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901.
  4. 상기 제1항의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 질염 치료 및 예방용 약학적 조성물.
  5. 상기 제1항의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 질염 예방용 발효유.
  6. 상기 제1항의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 질염 예방용 음료.
  7. 상기 제1항의 락토바실러스 델브루키 ssp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus) HY7901을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 질염 예방용 건강기능식품.
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