EA024475B1

EA024475B1 - Композиции витамина в12 для интраназального применения

Info

Publication number: EA024475B1
Application number: EA201390623A
Authority: EA
Inventors: Кетан Р. Пател; Милан Р. Пател; Пракашчандра Дж. Шах
Original assignee: Троикаа Фармасьютикалз Лимитед
Priority date: 2010-10-29
Filing date: 2011-10-28
Publication date: 2016-09-30
Also published as: EP2632430B1; EA201390623A1; AR083658A1; CU20130062A7; AP2013006837A0; HUE039349T2; CO6801717A2; JP2013540805A; MY163106A; ES2686299T3; DK2632430T3; UA111342C2; BR112013010049A2; MX337365B; BR112013010049B1; PE20131137A1; PL2632430T3; CN103384513A; CU24142B1; CN103384513B

Abstract

Дефицит витамина В12 является очень распространенным в популяции. Основные причины дефицита витамина В12 включают в себя недостаток наследственных факторов и других интестинальных факторов (например, мальабсорбция), редкие генетические заболевания и неполноценное поступление внутрь. Настоящее изобретение относится к стабильной водной композиции для интраназального применения, содержащей метилкобаламин в концентрации от 500 мкг/0,1 мл до 1500 мкг/0,1 мл, вспомогательные растворители/солюбилизаторы или их смеси в воде, где вспомогательный растворитель/солюбилизатор выбран из гликофурола, пропиленгликоля, полиэтиленгликолей или их смесей и где рН данной композиции находится в диапазоне от приблизительно 6 до приблизительно 6,5 и вязкость составляет от 1 до 200 мПа∙с.

Description

Настоящее изобретение относится к интраназальным композициям класса производных витамина В12, таких как метилкобаламин, цианокобаламин и гидроксокобаламин, и к способу их получения.

Предпосылки создания изобретения

Дефицит витамина В12 является очень распространенным в популяции. Большие исследования, проведенные в Соединенных Штатах Америки и Великобритании, выявили, что около 6% людей, чей возраст старше или равен 60 годам, имеют дефицит витамина В12. Более того, в развивающихся странах, таких как Индия, этот дефицит является намного более распространенным, начинается с более раннего возраста и сохраняется на протяжении всей жизни. Исследование 441 мужчин среднего возраста в г. Пуна (Рипе) (Индия) выявило, что 67% этих мужчин имели низкую концентрацию витамина В12 (<150 пмоль/л). Среди городского среднего класса 81% имели низкую концентрацию витамина В12, и вегетарианцы имели в 4,4 раза более высокий риск низких концентраций витамина В12.

Основные причины дефицита витамина В12 включают в себя недостаток наследственных факторов и других интестинальных факторов (например, синдром недостаточного всасывания), редкие генетические заболевания и недостаточное восполнение. Следовательно, существует необходимость в преодолении дефицита В12 посредством дополнительного введения цианокобаламина, гидроксокобаламина или метилкобаламина различными путями, например, парентерально, перорально и тому подобное.

Пероральная терапия не подходит для всех пациентов, например, пациентам с недостатком наследственных факторов, состояниями, связанными с атрофией слизистой желудка, инвазией ленточными червями, и тому подобное. Для таких пациентов интраназальное введение было бы более целесообразным. Доставка лекарственных средств через интраназальный путь введения также предлагает эффективную доставку лекарственного средства в системный кровоток, что приводит в результате к лучшей терапевтической эффективности. Также известно, что для улучшенной системной доставки лекарственного средства через интраназальный путь введения необходимо, чтобы данное лекарственное средство было растворимым. Как правило, хорошо растворимое лекарственное средство считается хорошим кандидатом для такого лечения.

Структура метилкобаламина основана на корриновом кольце и имеет молекулярную формулу С63Н91СоИ13О14Р. Соединения, принадлежащие к классу вариантов витамина В12, также включают в себя цианокобаламин и гидроксикобаламин. Метилкобаламин имеет меньшую растворимость в воде по сравнению с цианокобаламином или гидроксокобаламином. В воде гидроксикобаламин имеет самую лучшую растворимость, тогда как метилкобаламин проявляет самую низкую растворимость.

Также известно, что метилкобаламин чрезвычайно подвержен деградации и, следовательно, является наименее стабильным среди всех производных витамина В12. С учетом быстрой деградации метилкобаламина, обычной практикой является введение большого избытка в диапазоне от 50 до 100% в жидких композициях метилкобаламина (например, инъекции), для компенсации потерь вследствие деградации при хранении. Избыток в такой высокой концентрации является нежелательным, поскольку может привести в результате к достаточно большим количествам продукта деградации, так как время существования данного продукта увеличивается.

Известно применение цианокобаламина в дозе по меньшей мере 500 мкг/0,1 мл в неделю посредством интраназального введения. Также известно применение метилкобаламина для лечения дефицита витамина В12, а также заболеваний, таких как синдром дефицита концентрации внимания с гиперактивностью (АИНИ). Тем не менее, он является менее предпочтительным по сравнению с другими производными кобаламина и не используется в коммерчески доступных интраназальных композициях из-за присущей ему проблемы плохой растворимости и высокой нестабильности.

В патенте И8 № 4724231 описана интраназальная композиция цианокобаламина, растворенного в воде, присутствующего в концентрации 500 мкг/0,1 мл. Более того, композиции, раскрытые в указанном патенте, представлены в форме гелей, кремов, мазей, имеющих высокую вязкость в диапазоне 250010000 сП. Авторы данного изобретения выбрали высокий диапазон вязкости для повышения времени удержания данной композиции в назальной слизистой оболочке. Такие гели с высокой вязкостью затруднительно вводить в точной дозировке и вызывают дискомфорт у пациента на протяжении всего периода лечения.

В патентной заявке И8 20090012039 раскрыт способ использования интраназальной композиции метилкобаламина для лечения синдрома нарушения внимания. В указанной патентной заявке раскрыты композиции для интраназального применения, которые могут быть получены посредством растворения, диспергирования, смешивания или соединения метилкобаламина (с или без фолиновой кислоты) и необязательно фармацевтических наполнителей, таких как вода, физиологический раствор, водосодержащая декстроза, глицерин, этанол и тому подобное, для формирования раствора или суспензии. Упомянуто, что композиция для интраназального применения может также содержать в себе незначительные количества нетоксических вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие вещества, рН буферные вещества и тому подобное, например, ацетат натрия, сорбитан монолаурат, натрий ацетат триэтаноламин, олеат триэтаноламина, сорбат калия, глицерин, лецитин и тому подобное, в случае необходимости.

- 1 024475

В патенте υδ 7229636 раскрыты маловязкие водные композиции цианокобаламина для интраназальной доставки, имеющие значение рН в диапазоне от 4 до 6, с наиболее предпочтительным и иллюстративным диапазоном от 4,5 до 5,5. В данном патенте рассматриваются проблемы неприятной консистенции представленных на рынке интраназальных гелевых композиций (ΝΆδΟΟΒΑΒ) для обеспечения приемлемых маловязких интраназальных аэрозольных композиций цианокобаламина. Цианокобаламин был предпочтительнее, чем метилкобаламин, вследствие своей более высокой стабильности и легкости разработки композиции.

Несмотря на то что в предшествующем уровне техники раскрыты интраназальные композиции цианокобаламина и некоторые способы использования метилкобаламина, проблемы, касающиеся низкой растворимости, нестабильности метилкобаламина и, следовательно, их влияния на биодоступность для оптимизированной терапевтической эффективности, остаются неразрешенными. Более того, композиции с оптимизированной вязкостью и рН для эффективной интраназальной доставки остаются проблемой, и следовательно терапевтически эффективных коммерческих композиций метилкобаламина нет в наличии на рынке сбыта. Более того, было бы желательно обеспечить композиции для повышения биологической доступности композиций семейства производных витамина В12, для достижения улучшенной терапевтической эффективности.

Настоящее изобретение обеспечивает новые и стабильные интраназальные композиции метилкобаламина с оптимизированными концентрациями данного лекарственного средства в его растворимой форме и вязкостью данной композиции для достижения необходимой биодоступности для терапевтической эффективности. Также обеспечены новые комбинации других производных витамина В12, а именно цианокобаламина, со значительно более высокой биодоступностью по сравнению с составами из предшествующего уровня техники.

Задача изобретения

Основной задачей данного изобретения является обеспечение интраназальных композиций на основе производного витамина В12, такого как метилкобаламин.

Поставленная задача была решена за счет создания стабильной водной композиции для интраназального применения, содержащей метилкобаламин в концентрации от 500 мкг/0,1 мл до 1500 мкг/0,1 мл, вспомогательные растворители/солюбилизаторы или их смеси в воде, где вспомогательный растворитель/солюбилизатор выбран из гликофурола, пропиленгликоля, полиэтиленгликолей или их смесей и где рН данной композиции находится в диапазоне от приблизительно 6 до приблизительно 6,5 и вязкость составляет от 1 до 200 мПа-с.

В ещё одном варианте воплощения настоящего изобретения предложена стабильная водная композиция для интраназального применения, содержащая цианокобаламин в концентрации от 500 мкг/0,1 мл до 1500 мкг/0,1 мл, вспомогательные растворители/солюбилизаторы или их смеси в воде, и по меньшей мере, одно вещество, способствующее проникновению, где вспомогательный растворитель/солюбилизатор выбран из гликофурола, пропиленгликоля, полиэтиленгликолей или их смесей, где вещество, способствующее проникновению представляет собой гликохолат натрия, и где рН данной композиции составляет от приблизительно 4 до приблизительно 6, и вязкость составляет от приблизительно 1 до приблизительно 200 мПа-с.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает стабильную водную композицию для интраназального применения, содержащую метилкобаламин в концентрации от 500 мкг/0,1 мл до 1500 мкг/0,1 мл, вспомогательные растворители/солюбилизаторы или их смеси в воде, где вспомогательный растворитель/солюбилизатор выбран из гликофурола, пропиленгликоля, полиэтиленгликолей или их смесей, и где рН данной композиции находится в диапазоне от приблизительно 6 до приблизительно 6,5 и вязкость составляет от 1 до 200 мПа-с.

В предпочтительном варианте стабильная водная композиция содержит гликохолат натрия в качестве вещества, способствующего проникновению.

В ещё одном другом варианте настоящего изобретения предлагается стабильная водная композиция для интраназального применения, содержащая цианокобаламин в концентрации от 500 мкг/0,1 мл до 1500 мкг/0,1 мл, вспомогательные растворители/солюбилизаторы или их смеси в воде, и по меньшей мере, одно вещество, способствующее проникновению, где вспомогательный растворитель/солюбилизатор выбран из гликофурола, пропиленгликоля, полиэтиленгликолей или их смесей, где вещество, способствующее проникновению, представляет собой гликохолат натрия и где рН данной композиции составляет от приблизительно 4 до приблизительно 6 и вязкость составляет от приблизительно 1 до приблизительно 200 мПа-с.

В предпочтительном варианте стабильная композиция для интраназального применения содержит вспомогательные растворители/солюбилизаторы в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 35% вес./об.

В другом предпочтительно варианте предлагается стабильная композиция для интраназального применения, где количество вещества, способствующего проникновению, составляет не более 2,5%

- 2 024475 вес./об. в данной композиции.

Метилкобаламин имеет значительно более низкую растворимость в воде по сравнению с цианокобаламином или гидроксокобаламином. Для обеспечения оптимальной терапевтической полезности через интраназальный путь введения, необходимо повысить растворимость метилкобаламина так, чтобы данные растворы имели концентрацию в диапазоне от 500 мкг на 0,1 мл до 1500 мкг на 0,1 мл. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что увеличение растворимости вещества может быть достигнуто в требуемом диапазоне концентраций для получения растворов с контролируемой вязкостью, посредством разумно составленной рецептуры системы растворителей с использованием вспомогательных растворителей/солюбилизаторов, а именно гликофурола, пропиленгликоля, полиэтиленгликолей или их смесей, по отдельности или в комбинации с водой, где количество вспомогательных растворителей/солюбилизаторов составляет от 1 до 35% вес./об. Более того, данные композиции были оптимизированы в отношении их вязкости и рН для обеспечения максимального интраназального всасывания данного лекарственного средства для достижения оптимальной терапевтической эффективности и биодоступности с улучшенным соблюдением пациентом режима и схемы лечения.

В дополнение к данной системе растворителей, данная композиция включает в себя другие фармацевтически приемлемые инертные наполнители, выбранные, но не ограниченные этим, из группы наполнителей, содержащей в себе смачивающие вещества, такие как глицерин, и/или консерванты и/или антиоксиданты и/или вещества, способствующие проникновению, и/или мукоадгезивные вещества.

Консерванты по настоящему изобретению выбраны из бензалкония хлорида, метилпарабена, этилпарабена, пропилпарабена, бензойной кислоты, бензилового спирта, бронопола, бутилированного гидроксильного анизола, бутилированного гидроксильного толуола, хлорокрезола или изопропилового спирта или их комбинации.

Вещества, способствующие проникновению, по настоящему изобретению могут быть выбраны из солей желчных кислот, витамина Е ТРС8, алкилмальтозидов, неионных, анионных или амфотерных сурфактантов, имеющих величину НЬВ 8-14, или их комбинации. Неограничивающими примерами таких веществ, способствующих проникновению, являются гликохолат натрия, таурохолат натрия, додецилмальтозиды, тридецилмальтозиды или тетрадецилмальтозиды, или любая их комбинация. Вещества, способствующие проникновению, используют в количестве, не превышающем 2,5 мас.% данных композиций.

Мукоадгезивные вещества выбраны из синтетических полимеров, таких как производные целлюлозы (метилцеллюлоза, этилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия; полимеры поли(акриловой кислоты) (карбомеры или карбополы. поликарбофил), такие как карбопол 934; поли(гидроксиэтилметилакрилат); поли(этиленоксид); поли(винилпирролидон); поли(виниловый спирт). Мукоадгезивные вещества дополнительно отобраны из природных полимеров, таких как трагакант, альгинат натрия, камедь карайи, гуаровая камедь, ксантановая камедь, лектин, растворимый крахмал, желатин, пектин и хитозан, и в композиции они используются в количестве не более 5% в расчете на массу всей композиции.

Увлажнители выбраны из глицерина, лактата натрия, сорбита, ксилита, бутиленгликоля.

Авторы данного изобретения неожиданно обнаружили, что возможно получить желаемую вязкость приблизительно от 1 до 200 сП в результате разумной комбинации данных ингредиентов, в особенности данной системы растворителей, и в то же время обеспечить значительно повышенное трансназальное всасывание метилкобаламина. Данные композиции представлены в форме раствора, капель или аэрозольных упаковок, в контейнерах, содержащих многократные дозы, для доставки предопределенных объемов. Важно отметить, что несмотря на более низкую вязкость данных композиций по настоящему изобретению, они не обладают пониженной трансназальной абсорбцией лекарственного средства. Из предшествующего уровня техники известно, что композиции должны иметь высокую вязкость (в патенте И8 4724231 рекомендована вязкость от 2500 до 10000 сП) для обеспечения желаемого времени удержания на назальной слизистой оболочке. Настоящее изобретение обладает четко выраженными различиями с доктринами предшествующего уровня техники, однако обеспечивает идеальное равновесие между вязкостью, способностью к распылению, абсорбцией и повышенной биодоступностью.

Композиции по настоящему изобретению необязательно содержат в себе дополнительные фармацевтически приемлемые инертные наполнители, которые используются для дополнительного увеличения стабильности данных композиций. Неограничивающими примерами таких наполнителей являются хелатообразующие агенты, например натриевая ЭДТА, и/или антиоксиданты, которые не раздражают слизистую оболочку носа. Неограничивающим примером таких антиоксидантов является аскорбиновая кислота.

Композиции интраназальных растворов метилкобаламина, раскрытые здесь, проявляют требуемую стабильность, при этом обеспечивая более низкие допустимые избытки.

Простое достижение солюбилизации не является достаточным условием для гарантии максимальной абсорбции лекарственного средства, такого как метилкобаламин. Параметры, такие как вязкость композиции, стабильность данного лекарственного средства в отношении срока годности, также должны быть оптимизированы для обеспечения необходимой трансназальной абсорбции и биодоступности для

- 3 024475 терапевтической эффективности.

Были приготовлены растворы, имеющие значение рН в диапазоне приблизительно от 3,75 до 7. Подходящие буферные системы, такие как цитратный буфер, можно использовать для достижения необходимого значения рН. Затем было необходимо определить влияние рН на интраназальную абсорбцию метилкобаламина.

Для оценки влияния рН на интраназальную абсорбцию метилкобаламина, были приготовлены растворы метилкобаламина и проведены исследования биодоступности для композиций, имеющих значение рН 3,75, 5 и 6,2. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что значение рН выше 6 является наиболее подходящим для обеспечения требуемой интраназальной абсорбции метилкобаламина. Результаты представлены в табл. 1 и 2 ниже.

Таблица 1

Ингредиенты	Тест А	Тест В	Тест С
Метилкобагамнн	500 мкг	500 мкг	500 мкг
Бензалконий хлорид	0.02 мг	0.02 мг	0.02 мг
Глицерин	2.23 мг	2.23 мг	2.23 мг
Гликофурол	ТОО «г	1.00 мг	1.00 мг
Дигидрат цитрата натрия	0.32 мг	0,32 мг	0.32 мг
Лимонная кислота безводная (5% вес/об)	достаточное количество	достаточное количество	достаточное количество
Вода	достаточное количество до 0.1 мп	достаточное количество до 0.1 ил	достаточное количество до 01 мл
рН доведен до	6.25	5.00	3,75

Результаты: ЛиСО-1 (пг.ч/мл) для мекобаламина с дозой 1500 мкг и адаптированной дозой 500 мкг с коррекцией исходного уровня представлена ниже.

Таблица 2

Тест	А11С0-1 (пг.ч/мл) (для дозы 1500 мкг)	АиСО-1 (пг.ч/мл) (для дозы, адаптированной до 500 мкг)
Тест А	8374.328	2791.44
Тест В	5120.904 .	1702.18
Тест С	4044.998	1348.33

Процесс приготовления композиций:

Все приготовление проводилось в условиях продувки азотом под натриевой лампой. Уровни растворенного кислорода поддерживали минимально возможными, предпочтительно приблизительно от 1 до 1,5 миллионных долей (м.д.). Данный процесс включает в себя следующие этапы:

ί) добавление гликофурола до 80% об/об в воде для экспериментальной серии;

ίί) растворение бензалкония хлорида и глицерина с перемешиванием;

ίίί) забуферивание данного раствора с помощью цитратного буфера;

ίν) добавление метилкобаламина при перемешивании до растворения;

ν) доведение рН до требуемой величины посредством добавления кислоты/щелочи;

νί) доведение объема данного раствора для получения желаемой концентрации 500 мкг на 0,1 мл назального раствора для опрыскивания.

Композиции по настоящему изобретению обычно включают в себя: лекарственное средство от 500 мкг/0,1 мл до 1500 мкг/0,1 мл; растворители (общее количество) 1-35%; увлажнитель 0-5%, мукоадгезивное вещество не более 5%; вещества, способствующие проникновению, не более 2,5%; консерванты не более 4%. Более того, как описано в данной спецификации, данные композиции могут дополнительно содержать в себе буферные ингредиенты для доведения рН до нужного значения в зависимости от используемого лекарственного средства.

Изучение биодоступности композиций

Изучение биодоступности аэрозолей для интраназального применения, приготовленных как описано выше, содержащих в себе 500 мкг/0,1 мл метилкобаламина, проводили среди здоровых людей в условиях ограничения пищи. По дизайну это исследование было открытое, рандомизированное, трехфазовое, трехвариантное, трехпоследовательное, исследование однократного введения, трехстороннее перекрестное сравнительное исследование биодоступности в условиях ограничения пищи у 6 здоровых взрослых людей.

Методы. Данное исследование проводили для определения сравнительной биодоступности трех экспериментальных препаратов посредством оценки параметров фармакокинетики, Стах, ЛиС'0-1. АиС'0-ίηΓ в условиях ограничения пищи у 6 здоровых, взрослых людей в рандомизированном перекрестном исследовании. Перед набором в исследуемую группу все субъекты были ознакомлены с письменным информированным согласием на участие в исследовании и могли прекратить свое участие в любое время на протяжении данного исследования. Данное исследование было разрешено институционной комиссией по этическим нормам поведения и проводилось в соответствии с Надлежащей Клинической Практикой и Хельсинской Декларацией (Сооб С1ийса1 РгасОсс апб 1Пс Иес1ата1юп оГ НекшЫ).

- 4 024475

Исследуемые препараты: (формула раскрыта в табл. 1)

Экспериментальный препарат (А): мекобаламин назальный спрей 500 мкг/0,1 мл.

Экспериментальный препарат (В): мекобаламин назальный спрей 500 мкг/0,1 мл.

Экспериментальный препарат (С): мекобаламин назальный спрей 500 мкг/0,1 мл.

Оценка перед исследованием. Среди участников были проведены скрининг демографических данных, медицинского анамнеза, физическое обследование, ЭКГ в 12 стандартных отведениях, формула крови, биохимический анализ, серологический анализ, исследование мочи и скрининг мочи на лекарственные вещества.

Введение лекарства

Участники получали каждое лечение (мекобаламин назальный спрей) в перекрестном режиме в соответствии с рандомизированным графиком введения препарата, с отмывочным периодом по меньшей мере 7 дней между каждой стадией.

После ночного голодания в течение 10 ч субъектам вводили предусмотренную по графику дозу Экспериментального препарата (А), или Экспериментального препарата (В), или Экспериментального препарата (С), которые вводили интраназальным путем под наблюдением медицинского персонала.

Заполнения (активация) назального спрея

Перед введением первой дозы насос был заполнен. Для заполнения насоса насадку помещали между первым и вторым пальцами, большой палец размещен на дне бутылки. Данный блок накачивали плотно и быстро до первого появления спрея. Насос заполняли дополнительно 2 раза, и назальный спрей был готов к использованию.

Процедура введения

Участников исследования просили отклонить немного голову назад для более легкого введения назального спрея. Затем спрей распыляли три раза глубоко внутрь носового отверстия. Участников исследования просили оставаться в той же позиции в течение двух минут, для того чтобы доза не вытекла.

Мониторинг участника в течение исследования: физическое обследование, мониторинг показателей жизненно важных функций и самочувствие контролировали в момент времени 0,00 ч (до введения дозы), 2,00, 5,00, 12,00, 24,00 и 36,00 ч (после введения дозы) ±30 мин, а также при необходимости.

Оценка после исследования: ЭКГ в 12 стандартных отведениях, формула крови, биохимический анализ и анализ мочи проводили после последнего забора образца крови в период-Ш, или в момент прекращения/выбывания субъекта из данного исследования.

Размещение. Приблизительно за 12 ч до введения лекарства и до 36 ч после введения лекарства.

Питание. Стандартное питание было обеспечено участникам исследования в моменты времени 4,00, 8,00, 12,00, 25, 29 и 33 ч после введения дозы в каждом периоде лечения.

Сбор образцов

Общее количество образцов крови: Двадцать (20) на период лечения.

Время сбора образцов: -10,00, -06,00, 0,00 ч (образцы перед введением дозы для изначального уровня), 0,50, 0,75, 1,00, 1,25, 1,50, 1,75, 2,00, 2,50, 3,00, 4,00, 5,00, 6,00, 8,00, 12,00, 18,00, 24,00 и 36,00 ч (после введения лекарства). Образцы крови собирали в янтарного цвета/покрытую алюминиевой фольгой вакуумную пробирку.

Общая кровопотеря. Образец крови объемом 0,5 мл собирали, и 0,1 мл выбрасывали перед каждым забором образцов, что составляет 306 мл. В общей сложности приблизительно 326 мл крови (в том числе 20 мл, забранные для клинических лабораторных тестов перед введением и после исследования) было взято у каждого участника исследования, на протяжении всех периодов.

Обработка образцов. Образцам крови давали свернуться в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем центрифугировали при 4000±300 об/мин в течение 10 мин. Сыворотку отделяли и быстро перемещали в подходящего размера, янтарного цвета полипропиленовые с завинчивающейся крышкой пробирки (предварительно маркированные кодом исследования и кодом образца), в двух экземплярах. Все образцы хранили в морозильном аппарате для глубокого замораживания, с поддержанием температуры -20°С±5°С.

Фармакокинетические параметры

Первичные параметры: Стах, ЛиС0-1. ΛυΟ-ίηΓ

Вторичные параметры: Р/, ке, Ттах

Аналитический метод

Концентрацию мекобаламина в сыворотке измеряли посредством предварительно утвержденного аналитического метода.

Статистическая оценка

ΑΝΟνΑ, два односторонних критерия для сравнительного анализа и анализ коэффициентов для нетрансформированных и логарифмически преобразованных фармакокинетических параметров Стах, АИС0-1, АИС0-1ПГ были осуществлены. Поскольку все параметры указывали на схожие заключения, АиС0-1 (пг.ч/м), наиболее релевантный параметр для терапевтической полезности приводится в результатах для иллюстративных композиций.

- 5 024475

Это исследование проводили для метилкобаламина в дозе 1500 мкг, и статистический анализ был проведен для дозы 1500 мкг, а также для адаптированной дозы 500 мкг. Кривая средняя концентрация в сыворотке-время для дозы 1500 мкг представлена на фиг. 1, а кривая средняя концентрация в сывороткевремя для откорректированных данных для однократной дозы 500 мкг представлена на фиг. 2. Средние площади под кривой (АИС0-Т) для дозы 1500 и для 500 мкг экспериментальных препаратов представлены в табл. 2.

Результаты: АИС0-Т (пг.ч/мл) для мекобаламина в дозе 1500 мкг и адаптированной дозы 500 мкг с коррекцией изначального уровня представлено ниже.

Таблица 3

Тест	А11С0-1 (пг.ч/мл) (для дозы 1500 мкг)	АиСО-1 (пг.ч/мл) (для дозы, адаптированной до 500 мкг)
Тест А	8374.328	2791.44
ТестВ	5120.904	1702.18
Тест С	4044,998	1348.33

Результаты исследования биодоступности для всех трех композиций показали, что тестовый препарат А обеспечивает максимальную трансназальную доставку метилкобаламина. Стоит отметить, что доступность метилкобаламина существенно увеличивается при повышении рН от 3,75 до 6,25. Диаграммы для дозы 1500 мкг, а также для дозы, доведенной до 500 мкг, представлены на фиг. 1 и 2.

Неожиданно было обнаружено, что диапазон рН для благоприятной абсорбции метилкобаламина составлял 5-7, с наиболее предпочтительной величиной рН от 5,5 до 7, где величина рН 6,25 является самой подходящей для максимальной абсорбции. Можно отметить, что значения рН выше 7 не являются предпочтительными, поскольку высокое значение рН способствует росту патогенных бактерий в носовом ходе.

Также было неожиданно обнаружено, что добавление веществ, способствующих проникновению, таких как соли желчных кислот, витамин Е ТРС8 (й-альфа-токоферил полиэтиленгликоль 1000 сукцинат), или алкилмальтозидов, таких как додецилмальтозиды, тридецилмальтозиды или тетрадецилмальтозид, или их любых комбинаций, в значительной степени воздействует на абсорбцию и биодоступность метилкобаламина, когда данная композиция доставляется интраназально.

Соответственно, композицию метилкобаламина без вещества, способствующего проникновению (Тест Ό), сравнивали с композицией метилкобаламина с 2% веществом, способствующим проникновению (Тест Е), для оценки эффекта данного вещества, способствующего проникновению, на интраназальную абсорбцию метилкобаламина. Значение рН этих композиций доводили до 6,25±0,25. Составы этих экспериментальных препаратов раскрыты в таблице ниже. Кроме того, см. фиг. 1 и 2.

Таблица 4

Ингредиенты	Тест О	ТестЕ
Метилкобаламин	500 мкг	500 мкг
Бензалконий хлорид	0.02 мг	0.02 мг
Глицерин	2.23 мг	2.23 мг
Гликофурол	1.00 мг	1.00 мг
Гликохолат натрия	-	2.00 мг
Дигидрат цитрата натрия	0.32 мг	0.32 мг
Лимонная кислота безводная (5% вес/об)	достаточное количество	достаточное количество
Вода	достаточное количество до 0,1 мл	достаточное количество до 0,1 мл
рН доведен до	6.23	6.28

Таблица 5

Тест	Измеренный компонент	Аисо-Ι (пг.ч/мл) (скорректированный исходный уровень)
Тест ϋ	Метилкобаламин	22323.09
Общий В12	18651.79
Тест Е	Метилкобаламин	897877.47
ОбщийВ12	37399.75

Данные результаты неожиданно показали, что трансназальное проникновение метилкобаламина было повышено значительно в присутствии малого количества вещества, способствующего проникновению. Это было дополнительно подтверждено результатами исследования, в котором оценивалась концентрация общего витамина В12 в плазме. Поскольку было обнаружено, что более высокие концентрации гликохолата натрия вызывают раздражение полости носа, было предпочтительно довести концентрацию гликохолата натрия до не более чем 2,5% вес./об. в данных составах.

Были приготовлены составы, схожие с Тестовым препаратом Е, с различными концентрациями гликохолата натрия, а именно 2% вес./об., 1,5% вес./об. и 1% вес./об., и была проведена их оценка в отношении трансназальной абсорбции метилкобаламина в трехстороннем исследовании биоэффективности. Ре- 6 024475 зультаты данного исследования, свидетельствующие об уровнях общего витамина В12, представлены ниже.

Таблица 6

Тест	Измеренный компонент	АиСО-1 (пг.ч/мл) (скорректированный исходный уровень)
Композиция с 2% гликохолатом натрия	Общий В12	43446.58
Композиция с 1,5% гликохолатом натрия	Общий В12	27748.35
Композиция с 1% глихохолатом натрия	Общий В12	208134.59

Результаты вышеописанного исследования, что также представлено на фиг. 5, отчетливо демонстрируют, что введение 1% вес./об. гликохолата натрия в результате приводит к более высокой абсорбции метилкобаламина по сравнению с 2% вес./об. гликохолатом натрия. Другими словами, абсорбция повышается, когда количество пенетранта снижено с 2 до 1% вес./об. Соответственно, уменьшение количества вещества, способствующего проникновению, приводит в результате к более высокой абсорбции.

Другая серия экспериментов была проведена для оценки роли вещества, способствующего проникновению, такого как гликохолат натрия, в композициях, содержащих в себе цианокобаламин или гидроксокобаламин.

Трехстороннее исследование биоэквивалентности было проведено для оценки действия гликохолата натрия на интраназальную абсорбцию цианокобаламина, а также для сравнения уровней метилкобаламина, продуцируемых соответствующими композициями. Препараты, подвергнутые исследованию биовалентности, включали в себя композиции цианокобаламина, полученные с использованием гликохолата натрия в соответствии с настоящим изобретением (Тест О), реализуемую на рынке композицию интраназального спрея цианокобаламина (Па8соЪа1-иЗА) и композицию метилкобаламина по настоящему изобретению (Тест Р). Формулы Тестового препарата Р и Тестового препарата О раскрыты в таблице ниже.

Таблица 7

Ингредиенты	Тест Р	Тест С
Метилкобаламин	500 мкг
Цианокобаламин -	--	500
Бензалконий хлорид	0.02 иг	0,02 мг
Глицерин	2.23 мг	2.23 мг
Гликофурол	1.00 «г	1.00 мт
Гликохолат натрия	1.00 мг	1.00 «г
Дигидрат цитрата натрия	0.32 мг	0.32 _мг
Лимонная кислота безводная (5% вес/об)	достаточное количество	достаточное количество
Вода	достаточное количество до 0,1 мл	достаточное количество до 0,1 мл

Концентрацию метилкобаламина в плазме, а также общего витамина В12, измеряли для оценки действия вводимого метилкобаламина относительно цианокобаламина для интраназальных композиций. Назальный спрей №ксоЪа1® представляет собой раствор цианокобаламина в виде спрея для доставки в слизистую оболочку носа. Каждая бутылка назального спрея №ксоЪа1 содержит в себе 2,3 мл 500 мкг/0,1 мл раствора цианокобаламина с цитратом натрия, лимонной кислотой, глицерином и бензалкония хлоридом в дистиллированной воде. Оценивали реализуемый на рынке препарат цианокобаламина (№ксоЪа1). а затем Тестовые препараты Р и О были приготовлены в соответствии с настоящим изобретением, для введения эквивалентного количества метилкобаламина и цианокобаламина, соответственно, для тщательного сравнения биодоступности данных двух препаратов.

Величина рН №ксоЪа1 была равна 5, и следовательно значение рН препарата цианокобаламина по настоящему изобретению (Тест О) было доведено приблизительно до 4,96. Результаты исследования биоэквивалентности представлены ниже, а также на фиг. 6 и 7. Значение рН препарата метилкобаламина было доведено до 6,25±0,25.

Таблица 8

Тест	Измеренный компонент	АиСО-1 (пг.ч/мл) (скорректированный исходный уровень)
Тест Р	Метилкобаламин	43376.84
ОбщийВ12	47913.54
ТестО	Метилкобаламин	-3314.79

	ОбщийВ12	67567.87
МазсоЬа]	Метилкобаламин	461.5
ОбщийВ12	30022.68

Неожиданно было обнаружено, что композиция цианокобаламина, содержащая в себе гликохолат

- 7 024475 натрия, приготовленная в соответствии с настоящим изобретением, индуцировала более чем двойную биодоступность общего витамина В12 по сравнению с реализуемым на рынке спреем циано кобаламина (Ыа8СоЬа1). Более того, уровни общего витамина В12 в композиции метилкобаламина по настоящему изобретению (Тест Р) были значительно более высокими по сравнению с ЫаксоЬа1.

Также было обнаружено, что композиция метилкобаламина по настоящему изобретению (Тест Р) индуцировала значительно более высокие уровни метилкобаламина по сравнению с двумя другими композициями цианокобаламина. Уместно только отметить, что композиция метилкобаламина в соответствии с настоящим изобретением обеспечивает высокие уровни метилкобаламина, который является активным коферментом витамина В12.

Данные результаты однозначно доказывают, что интраназальная композиция, содержащая в себе цианокобаламин по меньшей мере с одним веществом, способствующим проникновению, необязательно консервантом, хелатообразующим агентом, увлажнителем или их комбинацией, с рН от приблизительно 4 до приблизительно 6 и вязкостью приблизительно 1-200 сП, обеспечивает существенно увеличенную системную доставку данного лекарственного средства, в результате приводя к повышенной эффективности терапии без ущерба для соблюдения пациентом режима и схемы лечения, или стабильности данной композиции. Данное изобретение далее проиллюстрировано следующими неограничивающими примерами.

Пример 1

Ингредиенты	Количество
Метилкобаламин	500 мкг
Бензалконий хлорид	0.02 мг
Глицерин	2.23 мг
Гликофурол	1.00 мг
Дигидрат цитрата натрия	0.32 мг
Безводная лимонная кислота (5% вес/об)	достаточное количество
Дистиллированная вода	достаточное количество до 0,1 мл

Значение рН данной композиции было доведено до 6,25±0,5, и вязкость данной композиции составляла 1,28 сП.

Пример 2

Ингредиенты	Количество
Метилкобаламин	500 мкг
Бензалконий хлорид	0.02 мг
Глицерин	2.23 мг
Гликофурол	1,00 мг
Гликохолат натрия	2.00 мг
Дигищрат цитрата натрия	0.32 мг
Безводная лимонная кислота (5% вес/об)	достаточное количество
Дистиллированная вода	достаточное количество до 0,1 мл
изменение рН до	6.28

Значение рН данной композиции было доведено до 6,25±0,5, и вязкость данной композиции составляла 2,3 сП.

Пример 3 ____

Ингредиенты	Количество
Метилкобаламин	500 мкг
Бензалконий хлорид	0.02 мг
Глицерин	2.23 мг
Гликофурол	1.00 мг
Гликохолат натрия	1.00 мг
Дигидрат цитрата натрия	0.32 мг
Безводная лимонная кислота (5% вес/об)	достаточное количество
Вода	достаточное количество до 0,1 мл

Значение рН данной композиции было доведено до 6,25±0,5, и вязкость данной композиции составляла 1,57 сП.

- 8 024475

Пример 4

Ингредиенты	Количество
Метилкобаламин	500 мкг
Бензалконий хлорид	0.02 мг
Глицерин	2.23 мг
Гликофурол	1.00 мг
Гликохолат натрия	1.50 мг
Дигадрат цитрата натрия	0.32 мг
Безводная лимонная кислота (5% вес/об)	достаточное количество
Бода	достаточное количество до 0,1 мл

Значение рН данной композиции было доведено до 6,25±0,5, и вязкость данной композиции составляла 2,0 сП.

Пример 5

Ингредиенты	Количество
Метилкобаламин	500 мкг
Бензалконий хлорид	0,02 мг
Глицерин	2.23 мг
Гликофурол	1.00 мг
Гликохолат натрия	0.50 мг
Дигидрат цитрата натрия	0.32 мг
Безводная лимонная кислота (5% вес/об)	достаточное количество
Вода	достаточное количество до 0,1 мл

Значение рН данной композиции было доведено до 6,25±0,5, и вязкость данной композиции составляла 1,43 сП.

Пример 6

Ингредиенты	Количество
Метилкобаламин	500 мкг
Бензалконий хлорид	0.02 мг
Глицерин	5 мг
Гликофурол	30 мг
Дигидрат цитрата натрия	0.32 мг
Безводная лимонная кислота (5% вес/об)	достаточное количество
Вода	достаточное количество до 0,1 мл

Значение рН данной композиции было доведено до 6,25±0,5, и вязкость данной композиции составляла 8 сП.

Пример 7

Ингредиенты	Количество
Цианокобаламин	500 мкг
Бензалкония хлорид	0,02 мг
Глицерин	2.23 мг
Гликофурол	1,00 мг
Гликохолат натрия	1.00 мг
Дигадрат цитрата натрия	0.32 мг
Безводная лимонная кислота (5% вес/об)	достаточное количество
Вода	достаточное количество до 0,1 мл

Значение рН данной композиции было доведено до 4,5±0,5 в соответствии с представленным на рынке препаратом цианокобаламина. Вязкость данной композиции составляла 1,6 сП.

- 9 024475

Пример 8

Ингредиенты	Количество
Метилкобаламин	500 мкг
Бензалконий хлорид	0,02 мг
Глицерин	2.23 мг
Гликофуро л	1.00 мг
СагЬоро1 934Р	0.30 мг
Дигидрат цитрата натрия	0.32 мг
раствор ИаОН (1% вес/об)	достаточное количество
Вода	достаточное количество до 0,1 мл

Значение рН данной композиции было доведено до 6,25±0,5, и вязкость данной композиции составляла 10 сП.

Пример 9

Ингредиенты	Количество
Метилкобаламин	500 мкг
Бензалконий хлорид	0.02 мг

Глицерин	5 мг
Пропиленгликоль	10 мг
Дигадрат цитрата натрия	0.32 мг
Безводная лимонная кислота (5% вес/об)	достаточное количество
Вода	достаточное количество до 0,1 мл

Значение рН данной композиции было доведено до 6,25±0,5, и вязкость данной композиции была в диапазоне в соответствии с настоящим изобретением.

Пример 10

Ингредиенты	Количество
Метилкобаламин	500 мкг
Бензалконий хлорид	0.02 мг
Глицерин	5 мг
Полиэтиленгликоль	15 мг
Дигидрат цитрата натрия	0.32 мг
Безводная лимонная кислота (5% вес/об,	достаточное количество
Вода	достаточное количество до 0,1 мл

Композиции с существенно более высокой вязкостью могут быть приготовлены при повышении уровня карбопола, полиэтиленгликоля.

Claims

1. Стабильная водная композиция для интраназального применения, содержащая метилкобаламин в концентрации от 500 мкг/0,1 мл до 1500 мкг/0,1 мл, вспомогательные растворители/солюбилизаторы или их смеси в воде, где вспомогательный растворитель/солюбилизатор выбран из гликофурола, пропиленгликоля, полиэтиленгликолей или их смесей и где рН данной композиции находится в диапазоне от приблизительно 6 до приблизительно 6,5 и вязкость составляет от 1 до 200 мПа-с.

2. Стабильная водная композиция по п.1, которая дополнительно содержит гликохолат натрия в качестве вещества, способствующего проникновению.

3. Стабильная водная композиция для интраназального применения, содержащая цианокобаламин в концентрации от 500 мкг/0,1 мл до 1500 мкг/0,1 мл, вспомогательные растворители/солюбилизаторы или их смеси в воде и по меньшей мере одно вещество, способствующее проникновению, где вспомогательный растворитель/солюбилизатор выбран из гликофурола, пропиленгликоля, полиэтиленгликолей или их смесей, где вещество, способствующее проникновению, представляет собой гликохолат натрия и где рН данной композиции составляет от приблизительно 4 до приблизительно 6 и вязкость составляет от приблизительно 1 до приблизительно 200 мПа-с.

4. Стабильная композиция для интраназального применения по любому из пп.1-3, где вспомогательные растворители/солюбилизаторы содержатся в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 35% вес./об.

5. Стабильная композиция для интраназального применения по любому из пп.1-3, где количество

- 10 024475 вещества, способствующего проникновению, составляет не более 2,5% вес./об. в данной композиции.