KR20170098977A

KR20170098977A - 비내 전달용 시아노코발라민 저점도 수성 제형

Info

Publication number: KR20170098977A
Application number: KR1020177023153A
Authority: KR
Inventors: 스티븐 씨. 퀘이; 제나이다 오. 고; 피터 씨. 에이프릴; 안토니 피. 실레노
Original assignee: 파 파마슈티컬, 인크.
Priority date: 2006-06-23
Filing date: 2006-06-23
Publication date: 2017-08-30
Also published as: IL248447A0; KR20090074722A; JP5769924B2; JP2009541312A; CA2656823C; AU2006344733A1; KR20140101010A; CA2656823A1; NO20090368L; AU2006344733B2; EP2035441A4; IL196038A0; WO2007149098A1; IL196038A; IL248447B; EP2035441A1; CN101600729A; ZA200900191B

Abstract

비내 투여에 적합한, 시아노코발라민 및 물을 포함하는 안정한 제약 시아노코발라민의 수용액은 약 1000 cPs 미만의 점도를 갖고 시아노코발라민의 근육내 주사에 비해 약 5% 이상의 비내 투여시 시아노코발라민의 생체이용률을 갖는다. 본 발명은 또한 뇌척수액 (CSF) 중 비타민 B12 대 혈청 중 비타민 B12의 평균 비율 (B12 CSF/B12 혈청 x 100)을 약 1.1 이상으로 증가시키도록, 시아노코발라민의 근육내 주사에 비해 5% 이상의 생체이용률을 갖는 시아노코발라민의 수용액의 충분한 양을 비내로 투여하는 것을 포함하는, 뇌척수액 (CSF) 중 비타민 B12 수준의 상승 방법에 관한 것이다.

Description

비내 전달용 시아노코발라민 저점도 수성 제형 {CYANOCOBALAMIN LOW VISCOSITY AQUEOUS FORMULATIONS FOR INTRANASAL DELIVERY}

비타민 B12는 필수적으로 음식으로 섭취해야 하고, 비타민 B12의 결핍은 염색체 복제 및 분열이 일어나는 임의의 세포에서의 결합있는 DNA 합성을 야기한다. 세포 턴오버(turnover)의 가장 빠른 속도를 갖는 조직이 가장 극적인 변화를 나타내기 때문에, 조혈계가 비타민 B12 결핍에 대해 특히 민감하다. B12 결핍의 초기 징후는 거대적아구성 빈혈이다. 음식으로 섭취된 B12는 위산 및 췌장 프로테아제의 존재하에 음식 및 침 결합 단백질로부터 방출되고, 위 내인성 인자에 결합한다. 비타민 B12-내인성 인자 복합체가 회장에 도달하면, 이는 점막 세포 표면 상의 수용체와 상호작용하고, 순환계로 능동적으로 운반된다. 적절한 내인성 인자, 담즙 및 중탄산나트륨 (적합한 pH)은 모두 비타민 B12의 회장 운반에 필요하다. 성인에서의 비타민 B12 결핍은 드물게는 결핍 식이의 결과이나; 오히려 통상적으로는 상기 흡수의 복잡한 순서의 한 또는 다른 측면에서의 결함을 반영한다. 무위산증 및 위 위축 또는 위 수술에 대해 이차적인 벽세포에 의한 내인성 인자의 감소된 분비는 성인에서의 비타민 B12 결핍의 통상적인 원인이다. 벽세포 또는 내인성 인자 복합체에 대한 항체는 또한 결핍의 생성에서 두드러진 역할을 할 수 있다. 많은 장 질환은 흡수를 방해할 수 있다. 비타민 B12 흡수장애는 췌장 장애 (췌장 프로테아제 분비의 손실), 세균 과다성장, 장 기생충, 스프루, 및 질환에 의한 또는 수술의 결과로서 회장 점막 세포에 대한 국소 손상과 함께 관찰된다. 성인에서 비타민 B12의 추천되는 1일 섭취는 2.4 ㎍이다.

비타민 B12의 네가지 주요 형태, 시아노코발라민, 히드록소코발라민, 메틸코발라민 및 아데노실코발라민이 있다. 메틸코발라민 및 아데노실코발라민은 불안정하고, 빛에 의해 손상된다. 따라서, 이들은 식이 보충제 또는 제약에서 사용하기에 부적합하고, 체내에서 시아노코발라민 또는 히드록소코발라민으로부터 형성될 수 있기 때문에 필수적이지 않다. 음식에서 발견되는 비타민 B12의 주요 형태는 히드록소코발라민이다. 치료적으로 사용되고 영양소 보충제에서 사용되는 주요 형태는 시아노코발라민이며, 이는 가장 안정한 형태이므로 합성하고 제제화하기에 가장 용이하기 때문이다.

비타민 B12의 결핍은 일반적으로 비타민 B12-내인성 인자 복합체 운반 메카니즘에서의 분해로 인한 소장에서 흡수되는 비타민의 무능력에 의해 유발되고, 따라서 비타민 B12는 전신으로 투여되어야 한다. 현재, 시아노코발라민의 치료량은 시아노코발라민의 근육내 또는 깊은 피하 주사에 의해 투여된다. 그러나, 환자는 비타민 B12의 수준을 유지하기 위해 추가 주사를 투여받도록 주기적으로 병원에 가야 한다. 그러나, 비내 겔 시아노코발라민 제제인 나스코발(NASCOBAL)®은 시아노코발라민이 유지 비타민 B12 치료요법으로서 비내로 투여되는, 현재 시판되는 제제이다. 그러나, 많은 환자는 비내 겔의 점조도가 불쾌하다는 것을 발견하고, 시아노코발라민을 함유하는 저점도 분무를 비내로 투여하는 것을 더 선호할 것이다.

선행 기술은 비타민 B12이 치료적으로 이로운 양으로 비내로 흡수되기 위해, 용액 중 B12의 농도가 1 중량% 초과이어야 한다는 것 (머쿠스(Merkus)의 미국 특허 제5,801,161호 (이하, "머쿠스") 참조), 또는 겔이 연장된 기간 동안 콧구멍에서 유지되도록 점성 겔로 비내로 투여되어야 한다는 것 (웨니그(Wenig)의 미국 특허 제4,724,231호 (이하, "웨니그"))을 제안하였다. 사실, 웨니그는 저점도 용액으로 비내로 투여되는 B12은 유용한 흡수를 허용하는 충분한 기간 동안 충분히 길게 코점막과 접촉하지 않는다고 언급하였다. 웨니그는 용액이 저점도를 갖는 경우 대부분의 B12가 폐기된다고 주장하였다. 머쿠스는 1% 초과의 히드록소코발라민의 농도를 갖는 히드록소코발라민의 비내 제형을 개발하였으나, 히드록소코발라민은 매우 불안정하여 짧은 반감기를 갖는다. 머쿠스는 시아노코발라민이 1% 초과의 농도에서 수용액 중에서 가용성이 아니기 때문에 히드록소코발라민을 선택하였다.

웨니그의 교시내용은 대상 개시물이 하기 본원에 기재된 바와 같이 비내 투여에 적합하고 효과적인 수성 형태의 시아노코발라민 제형을 교시하는데 실패하였다는 측면에서 명백하다. 웨니그는 2500 내지 6000 cPs의 웨니그에 의해 교시된 명백히 언급된 임계 범위 미만의 점도를 갖는 임의의 시아노코발라민 제형을 명확하게 교시하지 않는다. 특히, 웨니그는 비내 시아노코발라민 제형이 "약 2500 내지 6500 cps의 점도를 갖도록 충분한 양의 증점제를 함유할 것이나, 심지어 10,000 cps 까지의 더 점성인 조성물이 사용될 수 있다"라고 교시한다 (컬럼 2, 제37 내지 제39 줄, 강조 부가). 웨니그는 본 출원인에 의해 개시된 바와 같은 비내 시아노코발라민 제형의 더 낮은 점도로의 조정 또는 선택을 어디에도 교시하거나 제안하지 않았다. 대조적으로, 웨니그의 개시물은 약 1000 cPs 미만의 점도를 갖는 비내 시아노코발라민 제형을 직접적으로 교시하지 않는다. 웨니그에 의해 기재된 시아노코발라민 겔 조성물은 고려되는 모든 실시양태에서 이보다 매우 더 높은 점도를 갖는다. 그러므로, 웨니그는 "본 발명의 전형적인 조성물"이 "약 4500 cps"의 점도를 갖는다는 것을 교시한다 (컬럼 3, 제41 내지 제51 줄). 웨니그에 의해 제공된 보고된 실행 실시양태 각각 (점도 값이 제공되고 보고에 의하면 혈장 시아노코발라민 수준의 측정에 의해 생체이용률의 면에서 유효함)은 4000 cps, 3500-4000 cps 및 4000 cps의 점도를 각각 갖는다 (예를 들어, 실시예 1; 제형 A, B 및 C 참조). 상기 주목된 바와 같이, 웨니그는 "심지어 10,000 cps 까지의 더 점성인 조성물이 사용될 수 있다"는 것을 추가로 강조한다.

따라서, 웨니그의 개시된 비내 겔 제형을 수성 액체 (분무 또는 점적) 시아노코발라민 제형으로 치환하는 것에 대해 웨니그에 의해 제공된 교시나 제안은 명백하게 없었다. 또한, 웨니그는 시아노코발라민의 비-겔 (분말 및 수성) 제형이 비타민 B12 결핍의 치료를 위해 비내 투여에 비효과적이라는 것을 개시의 배경 부분에서 명백하게 교시하였다. 수성 제형에 대해, 웨니그는 예를 들어, 몬토(Monto) 등 (문헌 [Am. J. Med. Sci. 223:113, 1953; Arch. Int. Med. 93:219, 1954])에 의해 보고된 제안된 비타민 B12의 등장성 염화나트륨 수용액을 인용하였다. 웨니그는 분말 시아노코발라민 제형과 함께 상기 용액이 비타민 B12 결핍의 치료를 위한 비내 사용에 비효과적이며, 이는 하기 때문이라고 언급하였다:

대부분의 B12는 인후를 즉시 통과한다. 유용한 및 균일한 흡수를 허용하기에 충분한 기간 동안 코점막과 접촉하지 않는다. 그러므로, 투여된 대부분의 B12는 사실 폐기된다. (컬럼 1, 제63 내지 제68 줄).

그러므로, 웨니그는 2500-6500 cps의 임계 최소 범위 미만의 비내 시아노코발라민 제형의 감소하는 점도를 교시할 뿐만 아니라, 또한 웨니그에 의해 기재된 비내 겔 제형을 대체하는 수성 (분무 또는 점적) 조성물을 사용하는 것에 대한 예상을 명백하게 부정하였다. 웨니그는 이러한 제안된 변형을 직접 교시하지 않는 명확한 증거 및 논증을 제공하였다. 특히, 웨니그는 효과적인 비내 시아노코발라민 제형이 "점도가 약 2500 내지 6500 cps가 되도록 충분한 양의 증점제"를 가져야 한다는 것을 교시하였다 (상기) - 이는 웨니그가 "대부분의 B12이 흡수되도록 충분히 긴 기간 동안 비측 통로에서 유지되도록 충분한 점성"을 제형에 부여하는 임계 파라미터로서 기재한 것이다 (컬럼 2, 제24 내지 제29 줄). 이들 특성은 웨니그의 명백한 교시에 따라 시아노코발라민의 효과적인 비내 전달/생체이용률을 성취하기 위해 충분한 코점막 체류 시간을 나타내지 못한 비-겔 (액체 및 분말) 시아노코발라민 조성물의 특성에 대해 웨니그에 의해 직접적으로 대비된다.

비측 투여를 위한 유용한 시아노코발라민 제형의 개발을 위한 다른 시도에서, 문헌 [Garcia-Arieta et al., Biol. Pharm. Bull. 24: 1411-1416, 2001] (이하, "가르시아-아리에타 등")은 "시아노코발라민의 비측 흡수 증진제로서 분무-건조된 분말" (제목)을 기재하고 있다. 임의의 시아노코발라민 분무 및 점적 제형에 대한 가르시아-아리에타 등에 의한 개시물은 저자들이 액체 (분무 및 점적) 시아노코발라민 조성물이 비내 사용을 위해 실행불가능하다고 명백하게 보고한 비교 실험으로부터 유래된 것이다. 보다 구체적으로, 가르시아-아리에타 등은 2개의 실험 시아노코발라민 비측 용액 (0.1% 시아노코발라민을 함유하는 점적 및 분무; 다른 제형 파라미터는 특정되지 않음)과 함께 3개의 분무-건조된 비내 시아노코발라민 제형의 생체이용률을 시험하였다 (제1412 면, 우측 컬럼). 가르시아-아리에타 등은 시아노코발라민의 실험 비측 분무 및 점적 제형이 검출가능한 생체이용률을 얻지 않았음을 명백하게 보고하였다. 좌측 컬럼 제1415 면에 기재된 바와 같이, 가르시아-아리에타 등은 그의 실험으로부터 하기를 밝혀내었다:

"점적 및 분무의 어떠한 비측 용액도 토끼에서 혈청 코발라민의 기저 수준을 통계적으로 유의한 수준으로 증가시킬 수 없었다. 이는 흡수 증진제 없이 투여되는 경우 시아노코발라민이 비측 경로에 의해 거의 흡수되지 않거나, 임의의 점도-증진제의 결핍으로 인해 이들 제형이 그의 흡수에 충분한 긴 시간 동안 비강에서 유지되지 않는다는 것을 의미한다 (강조 제공)."

이들 보고는 상기 주목된 웨니그에 의한 결론과 밀접하게 일치하는 수성 저점도 시아노코발라민 제형의 비실행성을 명백하게 기재하였다. 따라서, 웨니그 및 가르시아-아리에타 등은 시아노코발라민의 비-겔 액체 비내 제형이 유용한 치료 결과를 성취하는데 비효과적이라고 이해되었음을 교시하였다. 웨니그는 시아노코발라민의 유용한 비내 겔 제형의 모든 증명된 실행 실시양태에 대해 2500 cps 초과 및 3500-4500 cps의 더 높은 범위의 임계 역치 점도를 명백하게 기재하였다. 가르시아-아리에타 등은 간단한 1% 수성 시아노코발라민 분무 및 점적 제형이 검출가능한 생체이용률을 수득하지 않았다는 직접적인 실험 증거를 추가로 제공하였다.

비타민 B12 결핍의 치료에 유용한 비내 제형을 제공하는 다른 시도에서, 문헌 [Slot et al., Gastroenterology 113:430-433, 1997] (이하, "슬롯(Slot) 등")은 히드록소코발라민의 비내 제형을 보고하였다. 현저하게, 슬롯 등은 히드록소코발라민이 비타민 B12 결핍의 치료를 위한 비타민 B12의 바람직한 형태이고, 시아노코발라민이 액체 비내 전달 제형 또는 방법에서 사용하기 위한 효과적인 또는 실용적인 치료제가 아니라는 것을 명백히 교시하였다. 상기 논의된 웨니그와 같이, 슬롯 등의 추천은 시아노코발라민의 등장성 염수 용액에 대한 상기 기재에서 "이들 제안은 어떠한 것도 임상적 실시에서 사후 점검을 밝혀내지 않았다. 명백하게, 결과는 매우 실용적이지 않다"고 언급하였다 (제432 면, 우측 컬럼). 슬롯 등은

"히드록소코발라민은 혈장 단백질에 보다 광범위하게 결합하고, 시아노코발라민보다 체내에서 더 긴 반감기를 갖는다. 결과로서, 히드록소코발라민은 체내에서 더 잘 유지되고, 따라서 덜 잦은 빈도의 투여를 필요로 한다. 또한, 시아노코발라민은 열대 약시가 있고 동시에 담배를 피는 환자 및 시신경병증과 함께 악성 빈혈이 있는 환자에서 금기되므로; 히드록소코발라민이 비타민 B12 결핍의 회복에서 일차 선택 약물이다 (제432 면, 우측 컬럼)."

라고 개시함으로써, 비타민 B12 결핍의 치료를 위한 비내 시아노코발라민 제형 및 방법을 추가로 교시하지 않는다.

비내 제형 및 방법에서 코발라민의 유용한 형태로서 시아노코발라민의 선택을 교시한 다른 선행 기술 문헌은 상기 논의된 머쿠스의 미국 특허 제5,801,161호이다. 슬롯 등의 교시와 유사하게, 머쿠스는 히드록소코발라민이 시아노코발라민과 비교하여 비타민 B12 결핍에 바람직한 치료제임을 명백히 언급하였다. 비측 제형의 특정 문맥에서, 머쿠스는

"비측 투여용 제형 중 비타민 B12의 가장 효과적인 농도는 1%보다 더 높다. 시아노코발라민에 의해 도달될 수 있는 최대 농도는 약 1%이다. 1% 초과의 농도는 히드록소코발라민에 의해서만 얻어질 수 있으며, 이는 그의 양호한 수용해도 때문이다. 히드록소코발라민 물질의 용해도는 10%만큼 높을 수 있고, 이는 히드록소코발라민이 사용되는 경우 부피 단위 당 비타민 B12가 약 10배까지 비측으로 투여되고 이어서 흡수될 수 있다 (컬럼 3, 제43 내지 제53 줄)."

고 강조하였다.

상기 교시내용을 기초로, 당업자는 저점도 시아노코발라민 제형 및 방법, 특히 비타민 B12 결핍의 치료를 위한 비내 투여용 효과적인 치료 도구로서 개발할 실제적 동기부여를 밝혀내지 못할 것이다. 전체로서 선행 기술을 고려하여, 본원에 개시된 바와 같이 비타민 B12 결핍의 완화에 충분한 시아노코발라민의 치료적으로 효과적인 전달/생체이용률을 성공적으로 성취하기 위해 본원에 기재된 시아노코발라민 제형 및 방법이 개발되고 사용될 수 있다는 단순히 합리적인 예상은 없었다. 웨니그 및 가르시아-아리에타 등은 저점도 액체 시아노코발라민 제형을 직접 교시하지 않는다. 웨니그는 2500 내지 4000 cps의 효과적인 비내 시아노코발라민에 대한 임계 최소 점도를 명백히 교시하였다. 웨니그 및 가르시아-아리에타 등은 비-겔 액체 시아노코발라민 제형이 비내 흡수를 위해 충분한 시간 동안 유지되지 않는다는 것을 교시하였다. 가르시아-아리에타 등은 1% 간단한 수성 시아노코발라민 제형의 비측 투여 후 유의한 생체이용률이 검출되지 않았다는 실험 결과를 구체적으로 보고하였다. 비내 액체 제형에서 사용하기 위한 코발라민의 활성 형태로서 시아노코발라민의 선택 및 농도에 대해 유사하게, 슬롯 등 및 머쿠스는 시아노코발라민이 비타민 B12 결핍의 치료용 비내 제형에서 히드록소코발라민과 비교하여 비효과적인 것으로 예상하거나 강하게 꺼려지는 것으로 집합적으로 교시하였다 (점도 고려로부터 독립적임). 이들 교시의 예시에서, 머쿠스는

"비타민 B12의 높고 효율적인 비내 흡수는 의학적 치료요법에서 이롭고, 시아노코발라민보다 유의하게 더 높은 수용해도를 나타내는 히드록소코발라민의 사용에 의해서만 얻어질 수 있다. 히드록소코발라민에 의해서만, 수성 매질 중 우수한 비측 조성물은 비타민 B12의 가장 높은 농도 및 결과적으로 비타민 B12의 훨씬 더 효율적인 비측 흡수를 갖도록 제조될 수 있다. 이러한 비측 제형은 환자에 의해 덜 빈번하게 섭취되어, 치료요법을 더 용이하고 덜 고가로 만들 수 있다 (컬럼 2, 제27 내지 제37 줄)."

본 발명의 전반적 분야에 대한 다른 선행 기술에서, 데일(Deihl)의 미국 특허 제4,525,341호는 비타민의 비내 투여 방법을 개시하나, 시아노코발라민만을 함유하는 특정 제형을 기재하거나 또는 실시하지 않았다.

국제 특허 출원 제PCT/US86/00665호, 공개 번호 제WO 86/05987호는 시아노코발라민으로서 비타민 B12를 함유하는 비측 분무 조성물을 개시한다. 그러나, 모든 특정 분무 제형은 보존제로서 수은 화합물을 함유하나, 본 개시물은 수은 화합물의 존재를 필요로 하였다. 염화벤잘코늄 및 클로로부탄올을 비롯한 다른 보존제가 또한 언급되었다. 상기 언급된 바와 같이, 시아노코발라민을 함유하는 비내 겔, 나스코발®은 현재 미국 워싱턴주 보텔의 나스테크 파마슈티컬 캄파니 인크.(Nastech Pharmaceutical Company Inc.)에 의해 제조되고 시판되고 있다. 이는 과거에 B12이 결핍되었으나 근육내 주사를 통해 B12의 수준이 회복된 환자에서 비타민 B12의 수준을 유지하는데 매우 효과적이다. 그러나, 많은 환자는 겔의 점조도가 코에서 불쾌하다는 것을 발견하고, 더 낮은 점도를 갖고 수은 화합물을 함유하지 않은 비내 제형을 선호할 것이다. 그러므로, 비타민 B12를 위한 유지 치료요법으로서 사용되는, 저점도를 갖고 임의로 수은 화합물을 함유하지 않고 충분한 생체이용률을 갖는 시아노코발라민의 제약상 안정한 수용액의 제조에 대한 필요성이 존재한다.

본 발명은 비내 투여에 적합하고, 약 1000 cPs 미만의 점도를 갖고, 시아노코발라민의 근육내 주사의 약 5% 이상, 특정 실시양태에서 6% 또는 7% 이상의 생체이용률을 갖는 시아노코발라민의 안정한 제약 용액을 제공함으로써 상기 필요성을 충족시킨다.

대안적 실시양태에서, 본 발명의 치료상 또는 제약상 효과적인 제형은 시아노코발라민, 시트르산, 시트르산나트륨 및 물을 포함할 수 있으며, 여기서 점도는 1000 cPs 미만이고, 시아노코발라민의 용액은 시아노코발라민의 근육내 주사의 생체이용률의 약 5% 이상, 특정 실시양태에서 약 6% 또는 7% 이상의 생체이용률을 갖는다. 특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 시아노코발라민의 용액은 시아노코발라민의 근육내 주사의 생체이용률의 약 8%, 9%, 10%, 11% 또는 12% 이상의 생체이용률을 갖는다. 특정 실시양태에서, 용액은 수은 및 수은-함유 화합물이 본질적으로 없다.

도 1A는 맞물리지 않은 구동장치를 갖는, 본 발명의 시아노코발라민 용액을 함유하는 비측 분무 펌프 키트를 나타낸다.
도 1B는 맞물린 구동장치를 갖고 본 발명의 시아노코발라민 용액의 분무 연기를 배출하는, 본 발명의 시아노코발라민 용액을 함유하는 비측 분무 펌프 키트를 나타낸다.
도 2는 분무 펌프 키트의 구동장치에 의해 생성되는 분무 패턴을 나타낸다.

본 발명의 범위 내의 특정 조성물은 점막 건조를 억제하고 자극을 방지하기 위해 보습제를 함유할 것이다. 소르비톨, 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 다양한 보습제가 사용될 수 있다. 예시적인 유용한 보습제는 글리세린이다.

보존제는 조성물의 저장수명을 증가시키기 위해 일반적으로 사용된다. 보존제의 예로는 벤질 알콜, 클로로부탄올 및 염화벤잘코늄이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 예시적인 실시양태에서, 보존제는 염화벤잘코늄이다. 보존제의 적합한 농도는 총 중량을 기준으로 0.002% 내지 2.0%일 것이나, 선택된 작용제에 의존하여 상당히 다양할 수 있다.

예시적 제형은 시아노코발라민 0.5% (총 중량 %), 시트르산 0.12%, 시트르산나트륨 0.32%, 글리세린 2.23%, 염화벤잘코늄 0.02% 및 물 96.79%의 농도를 갖는다. 다른 상세한 실시양태에서, 정제수 중 시트르산나트륨, 시트르산, 글리세린 및 염화벤잘코늄을 갖는 시아노코발라민의 500 mcg/0.1 mL 용액 2.3 mL를 함유하는 시아노코발라민의 비측 분무 용액은 분무 어플리케이터에 제공된다. 이 문맥에서 예시적 분무 용액은 4.5 내지 5.5의 pH를 갖는다. 초기 프라이밍 후, 예시적 분무 펌프 스프레이는 시아노코발라민 평균 500 mcg을 전달하고, 병에 함유된 분무 용액 2.3 mL는 비측 분무의 8회의 용량을 전달할 것이다.

본 발명의 다른 실시양태는 1000 cPs 미만의 점도를 갖고, 시아노코발라민의 근육내 주사의 생체이용률의 약 5% 이상, 특정 실시양태에서 약 6% 또는 7% 이상의 생체이용률을 갖는 시아노코발라민의 수용액을 코에 주입하는 것을 포함하는, 시아노코발라민의 투여 방법이다. 특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 시아노코발라민의 용액은 시아노코발라민의 근육내 주사의 생체이용률의 약 8%, 9%, 10%, 11% 또는 12% 이상의 생체이용률을 갖는다. 보다 상세한 실시양태에서, 본 발명의 방법에 따라 투여되는 시아노코발라민 용액은 수은 및 수은-함유 화합물이 본질적으로 없다. 이 문맥에서, "본질적으로 없다"는 일반적으로 특정 물질의 2 중량% 미만을 갖는 용액을 의미하나, 다른 측면에서 용액은 예를 들어, 수은 또는 수은-함유 화합물이 통상적인 검출 방법을 사용하여 용액에서 검출가능하지 않도록 물질의 1 중량%, 0.05 중량%, 0.01 중량% 미만을 함유하거나, 또는 물질이 완전히 없을 것이다.

본 발명은 추가로 뇌척수액 (CSF) 중 비타민 B12 대 혈청 중 비타민 B12의 평균 비율 (B12 CSF/B12 혈청 x 100)을 약 1.1 이상으로 증가시키도록, 시아노코발라민의 근육내 주사에 비해 7% 이상의 생체이용률을 갖는 시아노코발라민의 용액을 비내로 투여하는 것을 포함하는, 뇌척수액 (CSF) 중 비타민 B12 수준의 상승 방법에 관한 것이다. 보다 상세한 실시양태에서, CSF 중 B12 수준 대 혈청 중 B12 수준의 비율이 1.9 이상이 되도록 B12 CSF 수준이 증가된다.

본 발명의 방법은 추가로 시아노코발라민 용액이 분무로서 구동장치 팁을 통해 개체의 코로 투여되는 것을 포함하며, 여기서 특정 실시양태에서 분무는 하기 특성 중 하나 이상을 갖는다: 구동장치 팁으로부터 3.0 cm의 높이에서 측정시 약 1.0 내지 약 1.4의 분무 패턴 타원율; 또는 분무는 소적의 약 5% 미만이 10 ㎛ 미만의 크기인 소적을 생성하고; 분무는 약 35.3 mm의 분무 패턴 장축 및 약 30.8 mm의 단축을 갖고; 분무에 의해 생성된 소적의 50%는 26.9 ㎛ 이하의 크기이거나; 분무에 의해 생성된 소적의 90%는 55.3 ㎛ 이하의 크기이거나; 또는 분무에 의해 생성된 소적의 10%는 12.5 ㎛ 이하의 크기이다.

[발명의 상세한 설명]

하기 정의는 본 발명의 이해에 도움이 될 수 있다.

"약"은 언급되는 명목상 값의 + 또는 - 20%의 근사치를 나타내는 상대적인 용어를 지칭한다. 본원의 대상인 약물학 및 임상 의약 및 유사 분야에 대해, 근사치의 상기 수준은 상기 값이 중요하거나 또는 더 좁은 범위를 요구한다고 구체적으로 언급되지 않는 한 적절하다.

"코점막"은 혈관화되고 입인두 및 동(sinus)의 경계로 내부로 연장된 코의 전정의 내층을 지칭한다.

"수성"은 물에 형성된 용액을 지칭하나, 더 적은 양의 다른 공용매를 함유할 수 있다.

"생체이용률"은 활성 성분 또는 활성 잔기가 약물 생성물로부터 흡수되고 작용 부위에서 이용가능하게 되는 비율 및 정도로서 정의된다 [21 CFR §320.1 (a)].

"시아노코발라민의 근육내 주사에 대한 비내 분무의 생체이용률"은 주사된 시아노코발라민의 동일한 양과 비교하여 전신 혈관계에 의해 흡수되는 비내 용량의 퍼센트 양을 의미한다. 예를 들어, 시아노코발라민 100 ㎍을 함유하는 시아노코발라민의 용액의 근육내 주사가 100% 생체이용률을 갖는 것으로 가정할 때, 시아노코발라민의 비내 용량이 100 ㎍을 함유하고 시아노코발라민의 근육내 주사의 생체이용률의 5% 이상, 특정 실시양태에서 약 6% 또는 7% 이상을 갖는 경우, 시아노코발라민 5 ㎍, 6 ㎍ 또는 7 ㎍ 이상이 혈관구조로 흡수될 것이다. 유사하게, 시아노코발라민의 비내 용량이 500 ㎍을 함유하고, 비내 제형이 7% 이상의 생체이용률을 갖는 경우, 시아노코발라민 35 ㎍ 이상이 혈관구조로 흡수될 것이다.

"안정성"은 저장 중에, 시간에 따라 생성물의 품질 특성에 상당히 영향을 미치는 것으로 고려되는, 파라미터 (예를 들어, 농도, 분해, 점도, pH 또는 입자 크기를 포함하나 이에 제한되지 않음)에서 측정된 임의의 조성 변화는 불안정성을 나타낸다. 유사한 맥락에서, 생성물의 품질 특성에 상당히 영향을 미치는 것으로 고려되지 않는 변화는 안정성을 암시한다. 안정성이 측정되는 기간은 조성물의 의도된 유용성에 의존하여 상대적이다. 더 높은 온도에서의 가속된 안정성은 종종 실제 측정되는 것보다 더 긴 기간에 걸친 안정성의 외삽의 더 빠른 방법으로서 선택된다.

"제약상 허용되는"은 지시된 투여 경로에 의해 인간 또는 포유동물에게 투여시 상기 화합물의 투여에 의해 얻어지는 이점과 불균형한 유해한 반응을 유발시키지 않는 조성물을 지칭한다.

"포유동물"은 유선에서 분비된 우유에 의해 어린 새끼를 기르고, 통상적으로 어느정도 털이 덮힌 피부를 갖는 임의의 부류의 온혈 고등 척추동물을 포함할 수 있으며, 비제한적으로 인간 및 비인간 영장류, 그의 유년 개체, 예를 들어 유아 개체 및 청소년 개체, 수컷 및 암컷 둘 모두를 포함하고, 말, 소, 양 및 염소와 같은 목축 종, 및 개, 고양이, 마우스, 래트, 기니아 피그 및 토끼를 비롯한 연구 및 가축 종을 포함한다. "환자" 또는 "대상체"는 본원에서 "포유동물"과 상호교환적으로 사용된다.

"비내 전달"은 주로 비강의 점막을 통해 약물을 전달하는 것을 의미할 수 있다. 이는 위, 중간 및 내부 비갑개 및 비인두를 포함한다. 후각 영역이 비갑개의 위 (상부 1/3)에 집중되어 있다는 것에 주목한다. 섬모 작용은 입인두를 향해 물질을 뒤로 밀어내어, 비측 전정에 침착된 물질이 후두를 통과하기 전에 코점막에 접촉하게 한다.

"실질적으로 없는"은 본 발명의 조성물 중 특정 활성 성분의 수준을 지칭하며, 여기서 특정 활성 성분은 조성물 중 활성 성분의 총 중량을 기준으로 20 중량% 미만, 바람직하게는 10 중량% 미만, 보다 바람직하게는 5 중량% 미만, 가장 바람직하게는 1 중량% 미만을 구성한다.

본원에서 유용한 것으로 밝혀진 전달 비히클은 비측 용액 및 겔을 위해 통상적으로 사용되는 구동장치 분배기를 포함한다. 이 기술의 실시양태는 다중 용량, 단일 용량, 계량 용량, 어린이에게 안전한 일회용 분배기 및 그의 키트를 포함한다.

본원에서 사용되는 "혈장 중 시아노코발라민의 피크 농도 (C_max)", "혈장 중 시아노코발라민의 농도 대 시간 곡선하면적 (AUC)", "혈장 중 비타민의 최대 혈장 농도에서의 시간 (t_max)"는 당업자에게 공지된 약물동력학 파라미터이다 (문헌 [Laursen et al, Eur. J. Endocrinology, 135: 309-315, (1996)]). "농도 대 시간 곡선"은 비내, 피하 또는 다른 비경구 투여 경로에 의해 대상체에게 시아노코발라민의 투여량의 투여 후 시간에 대한 대상체의 혈청 중 시아노코발라민의 농도를 측정한다. "C_max"는 대상체에게 시아노코발라민의 단일 투여량 후 대상체의 혈청 중 시아노코발라민의 최대 농도이다. 용어 "t_max"는 대상체에게 시아노코발라민의 단일 투여량의 투여 후 대상체의 혈청 중 시아노코발라민의 최대 농도에 도달하는 시간이다.

본원에서 사용되는 "혈장 중 시아노코발라민의 농도 대 시간 곡선하면적 (AUC)"은 선형 사다리꼴 공식에 따라 잔류 면적의 부가에 의해 계산된다. 2개의 투여량 사이의 23%의 감소 또는 30%의 증가는 90%의 확률로 검출될 것이다 (유형 II 오차 β = 10%). "전달 속도" 또는 "흡수 속도"는 최대 농도 (C_max)에 도달하는 시간 (t_max)의 비교에 의해 예측된다. C_max 및 t_max는 비모수 방법을 사용하여 분석된다. 피하, 정맥내 및 비내 시아노코발라민 투여의 약물동력학의 비교는 분산 분석 (ANOVA)에 의해 수행하였다. 쌍별 비교에 대해, 봉페로니(Bonferroni)-홀메스(Holmes) 순열 방법을 유의도의 평가에 사용하였다. 3개의 비측 용량 간의 용량-반응 관계는 회귀 분석에 의해 예측하였다. P <0.05에서 유의한 것으로 고려되었다. 결과는 평균 값 +/- SEM로서 제공된다 (문헌 [Laursen et al., 1996]).

상기 기재된 시아노코발라민 용액은 점적 또는 분무 형태로 코점막에 투여되도록 고안된다. 그러나, 바람직한 투여 방식은 분무 형태, 즉, 미분된 소적 형태이다. 적합한 분무 펌프의 예는 독일 라돌프젤 소재의 파이퍼 게엠베하(Pfeiffer GmbH)에 의해 제조된 파이퍼 스프레이 펌프 모델 #63385이다.

시아노코발라민의 비측 투여

시아노코발라민은 본 발명에 따라 비측 분무를 사용하여 비내로 투여된다. 이 부분에서, 하기 정의가 유용하다.

에어로졸 - 적절한 밸브 시스템의 활성화시 방출되는 치료 활성 성분을 함유하고 압력하에 포장된 제품.

계량된 에어로졸 - 각각 활성화시 분무의 균일한 양을 전달하는 계량된 용량 밸브를 포함하는 가압된 투여량 형태.

분말 에어로졸 - 적절한 밸브 시스템의 활성화시 방출되는 분말 형태의 치료 활성 성분을 함유하고 압력하에 포장된 제품.

분무 에어로졸 - 습윤 분무로서 제품을 배출하는데 필요한 힘을 제공하는 분사제로서 압축 기체를 사용하는 에어로졸 제품; 이는 일반적으로 수성 용매 중 의약제의 용액에 적용가능함.

분무 - 공기 또는 증기의 제트에 의해 미세 분할된 액체.

계량된 분무 - 각각 활성화시 특정량의 분무를 분배하는 밸브를 포함하는 비가압된 투여량 형태.

현탁액 분무 - 액체 비히클에 분산된 고체 입자를 거친 소적의 형태로 또는 미분된 고체로서 함유하는 액체 제제.

약물 전달 장치 ("DDD")로서 계량된 비측 분무 펌프에 의해 방출되는 에어로졸 분무의 유체 동력학 특징. 분무 특징은 새로운 및 기존의 비측 분무 펌프에 대한 연구 및 개발, 안정성 시험 절차 및 품질 보증의 식약청 ("FDA")의 승인에 필요한 규제 제출의 필요 부분이다.

분무의 기하형태의 완전한 특징은 비측 분무 펌프의 전반적인 수행의 최상의 지표인 것으로 밝혀졌다. 특히, 분무 장치의 발산 각 (연기 기하형태)의 측정; 분무의 단면 타원율, 균일성 및 입자/소적 분포 (분무 패턴); 및 전개되는 분무의 시간 진전은 비측 분무 펌프의 특징화에서 가장 대표적인 수행 양인 것으로 밝혀졌다. 품질 보증 및 안정성 시험 중에, 연기 기하형태 및 분무 패턴 측정은 비측 분무 펌프에 대한 승인된 데이타 기준으로 점조도 및 일치의 증명을 위한 중요한 식별자이다.

정의

연기 높이 - 선형 흐름의 파괴로 인해 연기 각이 비선형이 되는 시점에서의 구동장치 팁으로부터의 측정치. 디지털 영상의 시각 시험을 기초로, 분무 패턴의 가장 먼 측정점과 일치하는 폭에 대한 측정점을 확립하기 위해, 본 연구에 대해 30 mm의 높이가 한정된다.

장축 - COMw를 통과하는 적합한 분무 패턴 내에서 그릴 수 있는 가장 긴 현 (기본 단위 mm).

단축 - COMw를 통과하는 적합한 분무 패턴 내에서 그릴 수 있는 가장 짧은 현 (기본 단위 mm).

타원율 - 장축 대 단축의 비율.

D₁₀ - 샘플의 총 액체 부피의 10%가 더 작은 직경의 소적으로 구성된 소적의 직경 (㎛).

D₅₀ - 샘플의 총 액체 부피의 50%가 더 작은 직경의 소적으로 구성된 소적의 직경 (㎛). 질량 중앙 직경이라고도 공지됨.

D₉₀ - 샘플의 총 액체 부피의 90%가 더 작은 직경의 소적으로 구성된 소적의 직경 (㎛).

펼침 - 분포 폭의 측정치. 값이 더 작을수록 분포가 더 좁다. 펼침은

로서 계산된다.

RSD % - 상대적 표준 편차 %. 일련의 값의 평균으로 나누고 100을 곱한 표준 편차. CV %라고도 공지됨.

시아노코발라민 비측 분무 키트

본 발명은 비측 분무 키트를 사용하여 시아노코발라민 용액을 투여하는 방법 및 시아노코발라민 비측 분무 키트를 추가로 포함한다.

비측 분무 키트는 도 1A, 1B 및 도 2에 의해 예시된다. 도 1A 및 1B는 맞물리기 전 (도 1A) 및 맞물린 후 (도 1B) 비측 분무 장치 (10)를 나타낸다. 시아노코발라민 비측 분무 키트 (10)는 용기, 이 경우 시아노코발라민 제형이 위치된 병 (12), 및 병 (12)에 부착되고, 병 (12) 중 시아노코발라민의 용액과 유동적으로 연결된 구동장치 (14)를 포함한다. 구동장치 (14)가 구동하거나 또는 맞물리는 경우, 구동장치의 팁 (15)을 통해 시아노코발라민의 분무 연기 (16)를 가압한다. 분무 연기는 시아노코발라민의 용액의 소적을 포함한다. 분무 패턴은 연기의 예정된 높이 위의 분무 연기 (16)의 절단면의 사진을 찍음으로써 결정된다. 분무 연기는 또한 구동장치 (14)에서 떠날 때 방출 각 (20)을 갖는다. 분무 연기 (16)의 분무 패턴은 도 2에 나타낸다. 도 2의 분무 패턴은 타원이고, 장축 (24) 및 단축 (26)을 갖는다.

한 예시적 실시양태에서, 구동장치는 구동장치 팁으로부터 3.0 cm의 높이에서 측정시 약 1.0 내지 약 1.4의 분무 패턴 타원율을 갖는 시아노코발라민 용액의 분무를 생성한다. 특정 실시양태에서, 시아노코발라민 용액의 소적의 5% 미만은 10 ㎛ 미만의 크기이고, 분무 패턴은 각각 25 및 40 mm의 단축 및 장축을 갖고, 소적의 50%는 26.9 ㎛ 이하의 크기이고, 소적의 90%는 55.3 ㎛ 이하의 크기이고, 소적의 10%는 12.5 ㎛ 이하의 크기이다.

상기 주목된 바와 같이, 본 발명은 다양한 질환, 장애 및 질병의 치료 또는 예방을 위한 포유동물 대상체에게 시아노코발라민의 비내 전달을 위한 개선된 방법 및 조성물을 제공한다. 본 발명의 방법에 따른 치료 및 예방에 적절한 포유동물 대상체의 예로는 인간 및 비인간 영장류, 말, 소, 양 및 염소와 같은 목축 종, 및 개, 고양이, 마우스, 래트, 기니아 피그 및 토끼를 비롯한 연구 및 가축 종이 포함되나 이에 제한되지 않는다.

예시적 치료요법 방법에서, 본 발명의 시아노코발라민 비측 분무는 근육내 비타민 B12 치료요법 후 경감 상태인 환자의 혈액 상태의 유지에 관한 것일 수 있다. 예를 들어, 초기 치료 요법은 환자에게 엽산 1 내지 5 mg과 함께 약 1 내지 2주 동안 시아노코발라민의 100 ㎍의 근육내 주사를 1일마다 투여하는 것을 포함할 수 있다. 시아노코발라민의 근육내 주사는 100 ㎍을 초과해서는 안되며, 이는 100 ㎍ 초과의 용량이 혈장으로부터 소변으로 급속하게 청소되고, 비타민 B12의 더 많은 양의 투여가 비타민의 더 많은 양의 더 많은 체류를 야기하지 않을 것이기 때문이다. 본 발명의 방법 및 조성물을 사용하는 치료는 다음과 같이 초기 치료요법의 상기 과정 후 가담될 수 있다.

본원에 기재된 시아노코발라민 분무를 사용하는 시아노코발라민 100 ㎍의 1개월마다 1회 주사 대신에, 환자는 예를 들어 시아노코발라민 500 ㎍을 함유하는 비측 분무의 용량을 1주마다 1회 또는 2회 자가투여한다. 비내 시아노코발라민의 유지 치료요법은 비타민 B12 결핍으로 진단된 임의의 환자를 위한 것이나, 특히 엄격한 채식주의자 (소위, 동물성 제품을 먹지 않는 채식주의자)에서 발생하는 악성 빈혈 및 비타민 B12의 식이 결핍의 치료를 위한 것이다. 본 발명의 시아노코발라민 용액을 사용하는 유지 시아노코발라민 치료요법은 또한 내인성 인자가 분비되는 위 또는 내인성 인자가 B12 흡수를 촉진하는 회장에 대한 구조적 또는 기능적 손상으로부터 기인하는 비타민 B12의 흡수장애를 앓는 환자를 위해 지시된다. 이들 질병에는 열대 스프루 및 비열대 스프루 (특발성 지방성 설사, 글루텐-유도 장병증)가 포함된다.

본 발명의 시아노코발라민 용액을 사용하는 유지 시아노코발라민 치료요법은 또한 내인성 인자의 부적절한 분비, 위 점막을 파괴하는 병소 (부식성 광범위 신생물의 소화), 및 다양한 정도의 위 위축과 관련된 많은 질병 (예컨대 다발성 경화증, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV) 감염 특정 내분비 장애, 철 결핍 및 부분 위절제술)으로부터 기인한 비타민 B12의 흡수장애를 앓는 환자를 위해 지시된다. B12 결핍을 야기하는 구조적 병소에는 회장염, 회장 절제, 크론병 및 악성종양이 포함된다. 비타민 B12 결핍은 또한 장 기생충에 의한 경쟁 및 비타민에 대한 항대사물질이 신생물의 치료에서 사용되는 경우 발생되는 비타민 B12의 부적절한 이용의 결과일 수 있다.

본 발명의 비내 시아노코발라민 용액은 또한 예를 들어, 임신, 갑상선중독, 용혈성 빈혈, 출혈, 악성종양, 간 및 신장 질환으로 인해 비타민 B12의 정상적인 수준 초과를 필요로 하는 개체에게 사용될 수 있다.

상기 주목된 바와 같이, 본 발명은 비내 투여에 적합하고, 약 1000 cPs 미만의 점도를 갖고, 비내로 투여시 시아노코발라민의 근육내 주사의 생체이용률의 5%, 6% 또는 7% 이상의 생체이용률을 갖는 시아노코발라민의 안정한 제약 용액을 제공한다. 비내 제형은 물 및 시아노코발라민 이외에, 4 내지 6, 바람직하게는 약 5의 pH를 유지하기 위해 완충제, 점막의 건조를 억제하기 위해 임의의 보습제, 및 임의의 보존제를 종종 포함할 것이다.

특정 예시적 실시양태에서, 본 발명에 따른 조성물은 시아노코발라민, 시트르산, 시트르산나트륨 및 물을 포함하며, 여기서 점도는 1000 cPs 미만이고, 시아노코발라민의 용액은 시아노코발라민의 근육내 주사의 생체이용률의 5%, 6% 또는 7% 이상, 특정 실시양태에서, 적어도 약 8%, 9%, 10%, 11%, 또는 12% 이상의 생체이용률을 갖는다.

특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 조성물은 점막의 건조를 억제하고 자극을 방지하기 위해 보습제를 함유할 것이다. 예를 들어 소르비톨, 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤을 비롯한 임의의 다양한 보습제가 사용될 수 있다. 예시적 보습제는 글리세린이다.

보존제는 일반적으로 조성물의 저장수명을 증가시키도록 사용된다. 보존제의 예로는 벤질 알콜, 파라벤 티메로살, 클로로부탄올, 염화벤즈에토늄 및 염화벤잘코늄이 포함된다. 본 발명의 제형 및 방법 내에서 유용한 예시적 보존제는 염화벤잘코늄이다. 보존제의 적합한 농도는 총 중량을 기준으로 0.002% 내지 2%일 것이나, 선택되는 작용제에 의존하여 상당히 다양할 수 있다.

특정 예시적 실시양태에서, 본 발명에 따른 제형은 약 0.5% (총 중량 %) 농도의 시아노코발라민, 약 0.12% 농도의 시트르산, 약 0.32% 농도의 시트르산나트륨, 약 2.23% 농도의 글리세린, 약 0.02% 농도의 염화벤잘코늄, 및 96.79% 농도의 물을 갖는다.

본 발명 내에서 유용한 다른 완충제 조합에는 인산일칼륨 및 인산이나트륨; 프탈산수소칼륨 및 수산화나트륨; 및 아세트산나트륨 및 아세트산이 포함되나 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 다른 실시양태는 1000 cPs 미만의 점도을 갖고, 시아노코발라민의 근육내 주사에 비해 약 5%, 6% 또는 7% 이상의 생체이용률을 갖는 시아노코발라민의 수용액을 코에 주입하는 것을 포함하는, 시아노코발라민의 투여 방법이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 시아노코발라민 용액의 생체이용률은 시아노코발라민의 근육내 주사의 생체이용률에 비해 적어도 약 8%, 9%, 10%, 11% 및 12% 이상이다.

본 발명은 추가로 뇌척수액 (CSF) 중 비타민 B12 대 혈청 중 비타민 B12의 평균 비율 (B12 CSF/B12 혈청 x 100)을 약 1.1 이상으로 증가시키도록, 시아노코발라민의 근육내 주사에 비해 약 7% 이상의 생체이용률을 갖는 시아노코발라민의 용액을 비내로 투여하는 것을 포함하는, 뇌척수액 (CSF) 중 비타민 B12 수준의 상승 방법에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, B12 CSF 수준은 CSF 중 B12 대 혈청 중 B12의 비율이 1:9 이상이 되도록 증가된다.

이는 비타민 B12 결핍이 신경계에 대한 비가역적 손상을 야기할 수 있기 때문에 본 발명의 중요한 실시양태이다. 유수 뉴런의 진행성 팽윤, 탈수초 및 뉴런 세포 사망은 척주 및 대뇌 피질에서 관찰된다. 이는 손 및 발의 감각이상, 결과로서의 불안정성과 함께 진동 및 위치 감각의 감소, 감소된 깊은 건 반사, 및 후기 단계에서, 혼돈, 우울, 기억 상실 및 중심 시력 상실을 비롯한, 광범위한 신경학적 징후 및 증상을 야기한다. 환자는 망상, 환각 또는 심지어 현성 정신병을 나타낼 수 있다. 신경학적 손상은 조혈의 변화로부터 분리될 수 있기 때문에, 비타민 B12 결핍은 빈혈이 아니더라도 치매 및 정신 장애가 있는 노인 환자에서 발생할 수 있는 것으로서 고려되어야 한다. 그러므로, CSF 중 비타민 B12의 수준의 증가와 관련된 본 발명의 실시양태는 신경학적 환자에 대해 매우 큰 이점을 가질 수 있다. 그러므로, 본 발명에 따른 비타민 B12의 비내 투여는 알츠하이머병, 치매 및 다발성 경화증과 같은 질환의 치료에 사용될 수 있다.

본 발명의 예시적 제형은 하기를 포함한다:

시아노코발라민 비측 분무 500 mcg/0.1 mL

제형:

성분	비측 용액 양 (% w/w)
시아노코발라민, USP	0.50
시트르산 무수물, USP	0.12
시트르산나트륨 이수화물, USP	0.32
글리세린, USP	2.23
염화벤잘코늄 (50%), NF	0.04
정제수 적량	100.0

시아노코발라민 비측 분무에 사용될 수 있는 대안적 완충계 및 양

	양 (% w/w)
1) 시트르산-포스페이트 완충제
시트르산 무수물, USP	0.240
이염기성 인산나트륨 무수물	0.357
2) 아세테이트 완충제
아세트산나트륨 무수물, USP	0.220
빙초산, USP	0.064
3) 포스페이트 완충제
일염기성 인산칼륨 무수물, NF	0.483
이염기성 인산나트륨 무수물	0.004

본 발명의 비내 제형은 임의의 분무 병 또는 주사기를 사용하여 투여될 수 있다. 바람직한 비측 분무 병은 "안전성 클립이 있는 비측 분무 펌프, 파이퍼 SAP #60548이며, 이는 분출 당 0.1 mL의 용량을 전달하고, 36.05 mm의 딥튜브 길이를 갖는다. 이는 미국 뉴저지주 소재의 파이퍼 어브 아메리카 어브 프린스톤(Pfeiffer of America of Princeton)으로부터 구매할 수 있다.

하기 실시예는 제한 없이 예시에 의해 제공된다.

[실시예]

실시예 1

나스코발 ® 및 시아노코발라민의 근육내 주사와 본 발명의 비내 시아노코발라민 용액의 비교

도입

나스코발® (시아노코발라민, USP)은 등가의 비타민 B12 활성을 갖는 비타민 B12의 합성 형태이다. 화학명은 5,6-디메틸-벤즈이미다졸릴 시아노코바미드이다. 현재, 나스코발® (시아노코발라민, USP)은 자가-투여 비측 겔로서 시판된다. 주가가능한 비타민 B12 치료요법 후 경감 상태인 비타민 B12 흡수장애가 있는 대상체에서 나스코발® (시아노코발라민, USP)의 추천되는 용량은 1주마다 1회 비내로 투여되는 500-㎍이다.

비타민 B12 결핍은 위장관계에 대한 구조적 또는 기능적 손상 및 비타민 B12의 식이 결핍으로부터 야기되는 비타민 B12의 흡수장애를 비롯한 많은 원인을 갖는다.

본 연구의 목적은 비타민 B12 비측 겔 대 비측 분무의 생물등가를 비교하고, 정상적인 건강한 남성 및 여성 대상체에서 공복 상태에서 비타민 B12의 3개의 제제의 상대적인 생체이용률을 평가하는 것이다.

비내 시아노코발라민 겔은 500 ㎍의 용량에 대해 승인되었다. 본 연구는 또한 동일한 500 ㎍ 용량 및 100 ㎍의 근육내 용량으로 시아노코발라민 비측 분무를 사용하였다.

연구 목적

정상적인 건강한 남성 및 여성 대상체에서 공복 상태에서 단일 비내-투여 분무, 단일 비내-투여 겔 (나스코발®), 및 단일 근육내-투여 비타민 B12의 약물동력학 프로파일의 비교.

연구 계획

전반적인 연구 고안 및 계획

본 연구는 공복 상태의 정상적인 건강한 남성 및 여성 대상체에서 비내 (IN) 분무 (500-㎍), 겔 (나스코발®) (500-㎍) 및 근육내 (IM) 주사 (100-㎍)를 통해 투여된 비타민 B12의 단일 기관 개방 3원 (3-치료, 6-순열) 교차 약물동력학 연구이었으며, 다음과 같다:

치료 A: 500-㎍ 비타민 B12의 단일 IN 분무 투여. 비내 제형은 본 발명의 예시적 실시양태를 포함하고, 0.5% (총 중량 %) 농도의 시아노코발라민, 0.12% 농도의 시트르산, 0.32% 농도의 시트르산나트륨, 2.23% 농도의 글리세린, 0.04% 농도의 50% 염화벤잘코늄 용액, 및 96.79% 농도의 물을 함유하였다.

치료 B: 500-㎍ 비타민 B12 (나스코발®)의 단일 IN 겔 투여.

치료 C: 100-㎍ 비타민 B12의 단일 IM 투여.

대상체는 각 한정 기간에 걸쳐 비타민 B12-비함유 식이를 섭취하였다. 후속적 치료는 이전 치료 용량 투여 후 14일 이후에 투여하였다.

치료

투여된 치료

8시간 공복 후 기간 I, II 및 III의 1일째에, 6개의 순열 중 1개로 PPD 디벨롭먼트 바이오스태티스티션(PPD Development Biostatistician)에 의해 생성된 무작위화를 기초로, 대상체에게 500-㎍ 비타민 B12의 단일 IN 분무 (치료 A), 500-㎍ 비타민 B12 (나스코발®)의 단일 IN 겔 (치료 B), 또는 100-㎍ 비타민 B12의 단일 IM 투여 (치료 C)를 투여하였다. 모든 기간 후, 모든 대상체는 교차 방식으로 각 치료를 투여받았다. 14일의 세척 기간으로 3개의 투여 기간을 분리하였다.

1일째 아침에, 치료 A에 할당된 대상체에게 비타민 B12 500 ㎍의 단일 IN 분무를 투여하였다. 치료 B에 할당된 대상체에게 비타민 B12 (나스코발®) 500 ㎍의 단일 IN 겔을 투여하였다. 치료 C에 할당된 대상체에게 비타민 B12 100 ㎍의 단일 IM을 투여하였다. 음식 (물을 포함하지 않음)으로부터 밤새 공복 (즉, 8시간 이상) 후 용량을 투여하고, 투여후 4시간 이상 동안 음식 (물을 포함하지 않음)으로부터 공복시켰다.

임상 기관에서 한정하였으나, 다른 연구-관련 활동과 겹치지 않는 예정된 시간에서 대상체에게 표준화된 비타민 B12-결핍 식이를 투여하였다. 등록된 식이요법학자는 식이를 설정하고, 음식 재료를 식이 일지에 따라 유지하였다. 연구 중에 식이 보충제는 허용되지 않았다. 대상체는 수속 전에 72시간 동안 알콜-함유, 그레이프프루트-함유 또는 카페인-함유 음식 또는 음료의 소비를 중단하였다.

연구 변수

각 대상체에 대해, 가능한 시점에 모델 독립적 접근법에 따라 치료 A, B 및 C로부터 비타민 B12의 혈청 농도를 기준으로 하기 약물동력학 파라미터를 계산하였다: C_max, T_max 및 AUC₀ _-t

약물동력학 측정

5-mL 황색-뚜껑 배큐테이너(Vacutainer)® 헤모가드(Hemogard)™ 배출된 혈청 분리기 수집 튜브를 사용하여 직접 정맥천자를 통해 및/또는 내재 카테터를 통해, 비타민 B12 수준의 PK 분석용 혈액 샘플을 수집하였다. -1일째 0, 6 및 12시에, 및 1일째 0시에 (즉, 투여전); 투여후 30분; 1, 1.5, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 18, 24, 36, 48, 60, 72, 84 및 96시에 각 기간 동안 비타민 B12 수준의 PK 분석용 혈액 샘플을 수집하였다.

측정의 적절성

본 연구에서 사용되는 약물동력학 파라미터는 전형적으로 생물등가의 평가에 사용되는 것이었다. 생물등가의 모든 평가는 AUC₀ _-t, T_max 및 C_max (시험 대 기준 치료)의 비교를 기초로 하였다.

AUC는 약물 생체이용률의 정도의 측정치이고, 전신 순환에 도달한 약물의 총량을 반영한다.

C_max는 약물 투여 후 얻어진 최대 혈청 농도를 나타내고, 치료 반응을 제공하기 위해 충분한 약물이 전신 순환에 도달하였음을 나타내는 지표를 제공한다. 또한, C_max는 가능한 독성 약물 수준의 경고를 제공한다.

T_max를 계산하고 중앙값 ± 범위로서 표시하였다.

약물동력학 변수

각 대상체에 대해, 가능한 시점에 모델 독립적 접근법 (Ref. 1)에 따라 치료 A, B 및 C로부터 비타민 B12의 혈청 농도를 기준으로 하기 약물동력학 파라미터를 계산하였다:

C_max 최대 관찰된 농도.

t_max 최대 농도에서의 시간

AUC₀ _-t 선형 사다리꼴 공식에 의해 계산된, 0시부터 마지막 측정가능한 농도의 시간까지의 농도-시간 곡선하면적.

SAS (SAS Inst., 버전 8.02)를 사용하여 약물동력학 계산을 수행하였다.

샘플 크기의 결정 및 프로토콜에서 계획된 통계적 방법

통계적 및 분석적 계획/ 약물동력학 분석

혈청 샘플 중 비타민 B12의 수준은 pg/mL로서 측정하였다. 검출의 정량화가능한 한계 미만의 혈청 농도 값은 0으로서 처리하였다. 약물동력학 파라미터의 모든 계산에서 예정된 샘플링 시간보다 실제 샘플링 시간을 사용하였다. 그러나, 표시의 용이성을 위해, 표, 목록 및 도면에서의 결과의 표시에는 예정된 샘플링 시간을 사용하였다.

농도 데이타로부터, 섹션 8.4.3.에 기재된 바와 같이 비구획 약물동력학 파라미터 (AUC₀ _-t, C_max, T_max)를 계산하였다.

통계적 분석

구체적으로 확인하지 않는 한, 모든 통계적 시험을 0.05 유의도 수준에서 수행하였다. 연속적 파라미터의 요약 통계는 수 (N), 평균, 중앙값, SD 및 범위로 구성되었다.

각 시점에서의 비타민 B12의 수준에 대한 및 계산된 약물동력학 파라미터에 대한 처리에 의해 기술 통계를 얻고, 표를 작성하였다.

시험 (치료 A - 비측 분무) 대 기준 (치료 B - 겔)에 대해 생물등가를 평가하였다.

분산 분석 (ANOVA, Ref. 2)을 수행하고, 시험/기준의 비율에 대해 90% 신뢰구간을 생성하였다. C_max 및 AUC₀ _-t는 분석 전에 전환된 자연 로그 (log_e)였다. log 스케일로 평균 간의 차이에 대한 90% 신뢰구간의 진수를 취함으로써 기하 평균 비율에 대한 상응하는 90% 신뢰구간을 얻었다.

log_e-전환 C_max 및 AUC₀ _-t의 90% 신뢰구간의 최저 경계가 80% 이상인 경우, 시험 (치료 A)은 기준 (치료 B)에 비해서 열등하지 않은 것으로 가정하였다. log_e-전환 C_max 및 AUC_o _-t의 90% 신뢰구간의 최저 경계가 80% 미만인 경우, 비열등성이 확립될 수 없다고 가정하였다.

오차항으로서 순열 내에서 대상체에 대한 평균 제곱 오차 (MSE)를 사용하여 순열 효과를 시험하였다. ANOVA 모델로부터 MSE에 대해 모든 다른 주요 효과를 시험하였다.

시험군 (치료 A 및 B - 각각 비측 분무 및 겔) 및 기준군 (치료 C - IM)에 대해 생체이용률을 평가하였다. 기준군 (치료 C) 평균에 대한 시험군 (치료 A 및 B) 평균의 비율에 대한 90% 신뢰구간을 시험함으로써 상대적인 생체이용률을 평가하였다.

T_max에 대해, 시험군 및 각 기준군 사이에 차이가 존재하는가를 결정하기 위해 윌콕스 매칭된 쌍 방법을 사용하여 분석을 실행하였다.

요약 - 결론

약물동력학 결과:

2개의 IN 제형에 대한 상대적인 생체이용률은 0.9715이었다. 치료 A (분무) 대 치료 C (IM)를 비교시 생체이용률은 0.6105이고, 치료 B (겔) 대 치료 C (IM)를 비교시 0.6284이었다.

분무 제형 및 겔 제형의 약물동력학 프로파일은 C_max (각각 1480 pg/mL, 1670 pg/mL) 및 AUC₀ _-t (각각 92000 pg*hr/mL, 97000 pg*hr/mL)에 대해 유사하였다. 또한, 분무 및 겔 IN 제형 간의 T_max에 대한 중앙값 차이는 15분 미만이었다 (-0.24). IM 제형에 대한 C_max 값은 2개의 IN 제형에 대한 C_max 값보다 유의하게 더 높았다 (p<0.0001).

생물등가는 C_max 및 AUC₀ _-t를 기준으로 겔 데이타와 관련하여 비타민 B12 IN 분무에 대해 확립하였다. 분무 및 겔 제형에 대한 log_e-전환 C_max 및 AUC₀ _-t에 대한 90% 신뢰구간은 80% 내지 125% 범위내에 포함되었다. 또한, 신뢰구간의 최저 경계가 AUC₀ _-t 및 C_max 둘 모두에 대해 80% 초과이기 때문에, 2개의 IN 제형을 비교시 비열등성을 가정할 수 있었다.

결론:

● 2개의 IN 제형에 대한 상대적인 생체이용률은 0.9715이었다. 치료 A (분무) 대 치료 C (IM)에 대한 생체이용률은 0.6105이었고, 치료 B (겔) 대 치료 C (IM)를 비교시 0.6284이었다.

● 분무 제형 및 겔 제형의 약물동력학 프로파일은 C_max (각각 1480 pg/mL, 1670 pg/mL) 및 AUC₀ _-t (각각 92000 pg*hr/mL, 97000 pg*hr/mL)에 대해 유사하였다. 또한, 분무 및 겔 IN 제형 간의 T_max에 대한 중앙값 차이는 15분 미만이었다 (-0.24). IM 제형에 대한 C_max 값은 2개의 IN 제형에 대한 C_max 값보다 유의하게 더 높았다 (p<0.0001).

● 비타민 B12 분무 제형 및 비타민 B12 겔 제형 간의 생물등가는 AUC₀ _-t 및 C_max에 대한 log_e-전환 90% 신뢰구간을 사용하여 확립하였다. 분무 및 겔 제형에 대한 log_e-전환 C_max 및 AUC₀ _-t에 대한 90% 신뢰구간은 0.80 내지 1.25 범위내에 포함되었다. 2개의 IN 제형 (치료 A 대 치료 B)에 대해 비열등성을 가정할 수 있었다.

모든 비타민 B12 제형은 안정하였고, 건강한 남성 및 여성 지원자에 의해 잘 관용되었다.

상기 주목된 바와 같이, 본 발명의 특정 실시양태에서, 본 발명의 비내 시아노코발라민 제형의 최소 상대적인 또는 비교 생체이용률 (예를 들어, 병렬식 시험에서, 대상체에게 비교가능한 용량의 근육내 시아노코발라민 또는 비내 시아노코발라민을 투여하고, 허위 또는 플라시보 제제가 투여된 적합한 대조군 대상체에 대해 혈장 또는 CSF 시아노코발라민의 농도에 대해 시험함)은 근육내 주사에 의해 성취된 생체이용률의 5%, 6% 또는 7% 이상일 것이고, 몇몇 경우에, 적어도 8%, 9%, 10%, 11% 또는 12% 이상일 것이다.

본원은 본 발명의 방법 및 조성물의 이들 예상치못한 수행 특성을 명시하는 상세한 비교 생체이용률 연구 및 결과를 제공한다. 상기 기재된 바와 같이, 2개의 예시적 비내 (IN) 제형에 대한 상대적인 생체이용률은 0.9715이었다. 치료 A (분무) 대 치료 C (근육내 = IM)를 비교시 상대적인 생체이용률은 0.6105이었고, 치료 B (겔) 대 치료 C (IM)를 비교시 0.6284이었다. 비교된 시아노코발라민 분무 제형 및 겔 제형의 약물동력학 프로파일은 C_max (각각 1480 pg/mL, 1670 pg/mL) 및 AUC₀ _-t (각각 9200 pg*hr/mL, 9700 pg*hr/mL)에 대해 유사하였다. 또한, 분무 및 겔 IN 제형 간의 T_max에 대한 중앙값 차이는 15분 미만이었다 (-0.24). IM 제형에 대한 C_max 값은 2개의 IN 제형에 대한 C_max 값보다 유의하게 더 높았다 (p<0.0001).

이들 데이타가 시아노코발라민의 IN 대 IM 생체이용률에 대한 비교 AUC 값의 형태로 직접적으로 표현되지 않았지만, 상대적인 AUC 값은 상기 제공된 데이타로부터 용이하고 정확하게 유도가능하다. 특히, 상기 제공된 비교 생체이용률 연구 결과는 IM 시아노코발라민 생체이용률에 비해 예시적 분무 시아노코발라민 제형의 "상대적인 생체이용률" 비율, 및 IM 생체이용률에 비해 예시적 겔 제형의 "상대적인 생체이용률" 비율이 각각 0.6105 및 0.6284임을 나타낸다. 이들 값은 명목상 용량을 기준으로 AUC의 기하 평균의 자연 로그의 비율을 나타낸다. 이들 데이타는 비내 제공된 500 ㎍ 및 IM에 의해 제공된 100 ㎍의 용량을 기준으로 적절한 다중 용량으로 통상적인 실시에 따라 표준화된 용량이었다. 당업자는 이들 데이타를 용이하게 이해할 것이며, 용량 표준화된 데이타가 약 5%, 6% 또는 7% 이상의 개시된 상대적인 최소 상대적인 생체이용률에 합리적으로 상응하는, 본 발명의 IN 시아노코발라민 용액 및 IM-투여 간의 생체이용률의 비율을 얻는다는 것을 충분히 이해할 것이다. 이는 IN 분무 및 IM 주사에 대한 용량 표준화된 상대적인 AUC 값을 유도하는 표준 수학 공식에 의해 결정될 수 있다. 상기 제공된 실시예에서, 이 표준 식/결과는 0.6105 X 100 ㎍/500 ㎍ X 100 = 12%; 또는 0.12의 IN 분무 및 IM 주사 간의 AUC의 비율이었다. 또한, 실제 산술 AUC는 예시적 IN 시아노코발라민 분무 및 겔에 대해 각각 92000 및 97000 pg*hr/mL로서 상기 제공된다. 유사하게, 이들 데이타는 본원에 따라 IM 주사된 연구 비교측정기에 대해 상응하는 AUC를 명시한다. 예를 들어, IM에 대한 AUC에 대한 산술 평균은 147155 pg*hr/mL (상기 제공된 비율로부터 가역적인 수학적 조작에 의해 용이하게 유도됨 - 예를 들어 분무에 대해, 92000/147155 = 0.62 비율)로서 계산하였다. 용량이 표준화되는 경우, 이들 데이타는 본원에 기재된 범위 내 예시적 상대적인 생체이용률 값 (IM 시아노코발라민 생체이용률에 비해 본 발명의 IN 시아노코발라민 제형에 대해 7% 이상, 다른 실시양태에서, 적어도 9%, 10%, 11% 또는 12% 이상)에 직접 상응한다.

실시예 2

본원은 또한 건강한 남성 및 비임신 여성 지원자에서 비내 및 근육내 투여 후 뇌척수액 (CSF)으로의 비타민 B12의 흡수를 비교하는, 비맹검 단일 용량 평행 군 연구의 결과를 제공한다. 본 연구는 두 제형 모두에 의해 생성되는 CSF 수준 대 혈장 수준을 비교하였다.

18세 이상의 36명의 건강한 남성 및 비임신 여성 대상체를 연구에 참여시켰다. 18명의 대상체에게 0.1 mL 분무로서 전달되는 500 mcg의 단일 비내 용량을 투여하고, 18명의 대상체에게 근육내로 전달되는 100 mcg의 단일 근육내 용량을 투여하였다. 각 대상체는 임상 기관을 1개월의 기간 내에 3회 방문하였다. 이들 방문은 스크리닝 방문, 1회 투여 방문 및 최종 방문으로 구성되었다.

각 투여 후, 각 대상체는 CSF의 총 4.0 mL (4개의 튜브, 튜브 당 1.0 mL)의 보상에 의해 오직 1회 요추 천자를 받았다. 대상체의 1/3은 투여후 60분에 CSF 샘플을 수집하게 하였고, 대상체의 1/3은 투여후 90분에 CSF 샘플을 수집하게 하였고, 대상체의 1/3은 투여후 120분에 CSF 샘플을 수집하게 하였다.

상기 외에, 투여일에, 투여전, 및 투여후 5, 10, 15 및 20분에 및 0.5, 1, 1 ½, 2, 3, 4, 6 및 8시간에 7 mL 혈액 샘플을 취하였다 (폐기 전).

뇌척수액을 총 비타민 B12 함량에 대해 평가하였다. 본원에 기재된 연구 목적은 근육내 (IM) 및 비측 투여 후 혈액 및 CSF에 존재하는 비타민 B12의 양을 측정하는 것이었다.

기준 및 시험 제품

기준 제품: 시아노코발라민 100 mcg 근육내 주사.

시아노코발라민 주사 (USP)는 근육내 또는 피하 주사를 위한 시아노코발라민 (비타민 B12)의 멸균 용액이었다. 1 mL 각각은 시아노코발라민 1,000 mcg을 함유하였다.

시험 제품: 비타민 B12 비측 분무 = 500 mcg/0.1 mL 분무. 본 연구에서의 시아노코발라민 비내 수용액은 0.5% (총 중량 %) 농도의 시아노코발라민, 0.12% 농도의 시트르산, 0.32% 농도의 시트르산나트륨, 2.23% 농도의 글리세린, 0.04% 농도의 50% 염화벤잘코늄 용액, 및 96.79% 농도의 물을 함유하였다.

비타민 B12 비측 분무는 1 용량을 전달하기 위해 2.3 mL 병으로서 제공하였다: 1 용량 당 500 mcg/0.1 mL.

비내 투여 전, 모든 대상체에게 적절한 투여 기술 및 연구의 전반적인 수행의 오리엔테이션을 제공하였다.

대상체에게 그의/그녀의 코를 약하게 풀라고 지시하였다. 대상체는 앉은 자세를 유지하고, 연구 직원의 지시하에 대상체가 콧구멍에 프라이밍된 IN 어플리케이터를 삽입하게 하였다. 투여 중에, 반대측 콧구멍을 집게 손가락으로 막았다. 투여를 위해 그의 머리를 약간 뒤로 젖히고 투여 즉시 완반하게 코를 들이마시면서 그의 머리를 똑바른 위치로 되돌리도록 대상체에게 지시하였다. 이 프로토콜에 따라, 비타민 B12 분무 0.1 mL 용량을 각 대상체의 비강으로 방출하였다 (용량은 하나의 콧구멍에 대해 단일 적용임). IN 치료 후 1시간 동안 코를 풀지 않도록 대상체에게 지시하였다.

투여 후, 각 대상체는 CSF의 4.0 mL (4개의 튜브, 튜브 당 1.0 mL)의 보상을 포함하여, 요추 천자를 받았다. 대상체의 1/3은 투여후 60분에 CSF 샘플을 수집하게 하였고, 대상체의 1/3은 투여후 90분에 CSF 샘플을 수집하게 하였고, 대상체의 1/3은 투여후 120분에 CSF 샘플을 수집하게 하였다. 투여 후 적절한 시간에, 연구자는 환자를 요추 천자에 적절하게 위치시켰다. 요추 영역을 준비하고, 통상적인 무균 방식으로 덮었다. 국소 마취를 사용하였다 (1% 크실로카인, 1 내지 5 mL). 적절한 마취 상태에 도달시, 연구자에 의해 적절한 수준에서 척추 바늘 (20 또는 22G)을 척추관에 도입하였다. CSF 샘플을 투여 후 60, 90 또는 120분에 수집하였다. 각 환자로부터 CSF 총 4.0 mL를 수집하고, 4개의 개별 수집 튜브로 분포시켰다. 환자 식별자에 의해 튜브를 적절하게 표지하고, 생물분석용 분석을 위해 제출하였다. CSF 수집의 완료시, 척추 바늘을 제거하였다.

CSF 중 비타민 B12 농도를 사용하여 CSF 및 혈청 둘 모두에서 비타민 B12의 수준을 결정하고, 유효한 TOSOH Nex. 1A 절차를 이용하여 비타민 B12의 결정을 위해 분석하였다.

결과 및 결론

데이타는 비타민 B12의 근육내 주사를 받은 개체보다 비타민 B12의 비내 투여를 받은 개체에서 비타민 B12 대 혈청의 비율이 더 높았음을 나타내었다.

비타민 B12의 비내 투여를 받은 개체에서 평균 비율 (B12 CSF/B12 혈청 x 100)은 1.1 내지 1.9 범위이었으나, 비타민 B12의 근육내 주사를 받은 개체에서 평균 비율은 0.17 내지 0.24 범위이었다. 비내 투여가 비타민 B12의 근육내 주사에 비해 혈청 중 약 7 내지 12%의 생체이용률을 가질 뿐이라는 점에서 이것은 놀라운 결과이다. 이는 비타민 B12의 비내 투여가 근육내 주사보다 훨씬 더 효과적으로 CSF에 도달한다는 것을 나타낸다.

실시예 3

시아노코발라민 용액의 제조

본 발명의 시아노코발라민 용액의 4000 g 배치(batch)를 제조하였으며, 이는 500 mcg/용액 0.1 g의 농도를 가졌다.

출발 물질

I. 제형 기록

성분명	이론적 중량 (g)
시아노코발라민, USP	20.0
시트르산, USP (무수물)	4.8
시트르산나트륨, USP (이수화물)	12.8
글리세린, USP	89.2
염화벤잘코늄 용액, NF (50%)	1.6
정제수, USP	3871.6*

물 3871.6 g을 스테인레스 스틸 용기에 위치시키고, 이를 핫 플레이트 상에 위치시켰다. 물을 약 30℃로 가열하고 교반하였다. 가열된 물에 시트르산나트륨 12.8 g을 첨가하면서, 물을 300 rpm에서 5분 동안 교반하였다. 그 후, 시트르산 4.8 g을 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 이 혼합물에 시아노코발라민 20.0 g을 첨가하고, 30분 동안 30℃에서 300 rpm에서 교반하였다. 그 후, 핫 플레이트의 전원을 껐다. 글리세린 89.2 g을 첨가하고, 5분 동안 300 rpm에서 교반하였다. 그 후, 시아노코발라민 용액에 50 중량%의 염화벤잘코늄을 함유하는 수용액 1.6 g을 첨가하고, 이를 용액에 첨가하고, 5분 동안 300 rpm에서 교반하였다. 그 후, pH를 측정하고, pH가 4.5 내지 5.5 범위가 아닌 경우 조정하였다. 추가 물을 첨가하여, 용액의 중량을 4000 g으로 맞추었다.

실시예 4

본 실시예에는 치료적으로 효과적인 혈장 농도를 생성하기에 충분한 농도로 연어 시아노코발라민의 수용액을 포함하는 본 발명의 예시적 제약 조성물이 기재되어 있으며, 이는 상기 용액의 에어로졸을 생성하는 구동장치를 통해 전달되고, 여기서 상기 에어로졸의 분무 패턴 타원율은 구동장치 팁으로부터 30 cm 거리의 높이에서 측정시 1.00 내지 1.40이다.

에어로졸의 부피는 약 5 ㎕ 내지 1.0 ml, 바람직하게는 20 내지 200 ㎕일 수 있다.

이 시험 방법에는 스프레이뷰(SprayView) NSP 시스템을 사용하여 시아노코발라민 비측 용액 제형의 연기 기하형태를 특징화하기 위한 절차가 기재되어 있다. 연기 기하형태는 미국 특허 제6,665,421호 및 2003년 1월 23일에 공개된 미국 특허 출원 공개 제20030018416호에 기재된 방법에 따라 인테그레이티드 스프레이뷰 NSx 액츄에이션 스테이션 (미국 메사추세츠주 서드버리 소재의 이미지 썸 엔지니어링, 인크.(Image Therm Engineering, Inc.))가 장착된 스프레이뷰(SprayView) 고속 광학 분무 특징화 시스템 (스프레이뷰 NSP)을 사용하여 특징화하였다.

표 1의 제형을 사용하여, 분출 당 0.1 mL의 용량을 전달하고 36.05 mm의 딥튜브 길이를 갖는 안정성 클립이 있는 비측 분무 펌프, 파이퍼 SAP #65550를 갖는 3 mL 병에서 제형의 분무 특징화 및 소적 크기.

소적 크기 데이타는 하기 표에 나타낸다.

비측 분무 병 및 파이퍼 SAP #60548에 대한 소적 크기

		D₁₀	D₅₀	D₉₀	펼침	% < 10 마이크로미터
1 mL	연어 시아노코발라민	12.5	26.9	55.3	1.6	5.1

분무 패턴 결과는 하기 나열된다:

분무 패턴		장축	단축	타원율
활성	3 mL	35.3 mm	30.8 mm	1.14

Claims

비내 투여에 적합하고, 1000 cPs 미만의 점도를 갖고, 비내 투여시 시아노코발라민의 근육내 주사에 대해 5% 이상의 시아노코발라민의 생체이용률을 갖고, 시아노코발라민 및 물을 포함하는, 시아노코발라민의 안정한 제약 수용액의 용도.