EA020135B1

EA020135B1 - Гидроксиметилпирролидины в качестве агонистов адренергических рецепторов бета 3

Info

Publication number: EA020135B1
Application number: EA201071169A
Authority: EA
Inventors: Ричард Бергер; Лехуа Чан; Скотт Д. Эдмондсон; Стефен Д. Гобле; Соокхее Николь Ха; Нам Фунг Кар; Ихор Е. Копка; Бин ЛИ; Грегори Дж. Мориэлло; Крис Р. Мойз; Дун-Мин Шэнь; Липин Ван; Чэн Чжу
Original assignee: Мерк Шарп Энд Домэ Корп.
Priority date: 2008-04-04
Filing date: 2009-04-02
Publication date: 2014-08-29
Also published as: JP5432846B2; DOP2010000294A; AR072043A1; EP2276756A1; ZA201006720B; JP2011201897A; CO6331440A2; WO2009124166A1; IL208215A; US20110028481A1; ME01988B; US20120258963A1; KR20120118086A; US8399480B2; CR20120282A; MA32257B1; ECSP10010518A; NI201000164A; BRPI0909768B1; PT2276756E

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (Iа), фармацевтическим композициям с указанными соединениями и способам их применения при лечении или предупреждении заболеваний, опосредуемых активацией адренорецептора β3.

Description

Функцией нижнего отдела мочевых путей является накопление и периодическое выделение мочи. Для этого требуется гармоническое сочетание накопления и рефлексов мочеиспускания, в которые вовлекается ряд афферентных и эфферентных нервных трактов, ведущих к модуляции центральных и периферических нейроэффекторных механизмов, и как результат - координированная регуляция симпатических и парасимпатических компонентов автономной нервной системы, а также соматических моторных трактов. Они непосредственно регулируют сократительное состояние мочевого пузыря (сжиматель) и гладкой мышцы мочевого пузыря и поперечно-полосатой мышцы уретрального сфинктера.

В гладкой мышце сжимателя различных видов, в том числе, человека, крысы, морской свинки, кролика, хорька, собаки, кошки, свиньи и примата, не являющегося человеком, присутствуют βадренергические рецепторы (βΑΚ). Однако фармакологические исследования показывают существование заметных видовых различий в подтипах рецепторов, опосредующих релаксацию изолированного сжимателя; у кошек и морских свинок преобладает β1ΑΚ, у кролика преобладает β2ΑΚ, и β3ΑΚ вносит вклад или преобладает в сжимателе собаки, крысы, хорька, свиньи, обезьяны и человека. Экспрессия подтипов βΛΚ в сжимателе человека и крысы проверена различными методами, и присутствие β3ΑΚ подтверждено с использованием гибридизации ίη δίΐιι и/или полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР, КТ-РСК).

Количественные ПЦР-анализы в реальном времени мРНК β1ΑΚ, β2ΑΚ и β3ΑΚ в ткани мочевого пузыря больных, подвергающихся радикальной цистэктомии, показывают преобладание мРНК β3ΑΚ (97%, сравните с 1,5% мРНК β1ΑΚ и 1,4% мРНК β2ΑΚ). Более того, экспрессия мРНК β3ΑΚ равнозначна в контрольных и закупоренных мочевых пузырях людей. Такие данные предполагают, что обструкция выхода из мочевого пузыря не приводит к даун-регуляции β3ΑΚ или к изменению релаксации сжимателя, опосредуемой β3ΑΚ. Также сравнивали реактивность β3ΑΚ в полосках мочевого пузыря, полученных во время цистэктомии или энтероцистопластики от пациентов, решивших иметь нормальную функцию мочевого пузыря, и от пациентов с гипорефлексией или гиперрефлексией сжимателя. Не наблюдали различий между степенью или силой релаксации, опосредуемой агонистом β3ΑΚ, что согласуется с концепцией, что активация β3ΑΚ является эффективным путем релаксации сжимателя в здоровом и болезненном состояниях.

Официальное свидетельство в поддержку важной роли β3ΑΚ в накоплении мочи следует из исследований ίη νίνο. После внутривенного введения крысам селективный агонист β3ΑΚ грызуна СБ316243 снижает давление в мочевом пузыре и в цистометрических исследованиях повышает емкость мочевого пузыря, что ведет к пролонгации интервала между мочеиспусканиями без повышения остаточного объема мочи.

Мочевой пузырь с повышенной активностью (ОАВ) характеризуется симптомами безотлагательности мочеиспускания с недержанием мочи или без него, как правило, связанными с частотой и никтурией. Распространенность ОАВ в Соединенных Штатах и Европе оценивается в 16-17% как среди женщин, так и среди мужчин в возрасте старше 18 лет. Мочевой пузырь с повышенной активностью наиболее часто классифицируется как идиопатический, но также может являться вторичным при неврологическом состоянии, обструкции выхода из мочевого пузыря и в других случаях. Из патофизиологической перспективы комплекс симптомов мочевого пузыря с повышенной активностью, когда связан с недержанием мочи, предполагает повышенную активность сжимателя. Показано, что безотлагательность мочеиспускания с недержанием мочи или без него отрицательно влияет как на социальное, так и на медицинское здоровье и представляет существенную нагрузку в смысле ежегодных расходов на медико-санитарную помощь. Более того, существующая лекарственная терапия против безотлагательности (с недержанием или без него) является субоптимальной, так как многие пациенты или не показывают адекватной реакции на существующее лечение и/или не способны переносить существующее лечение (например, сухость во рту, связанная с антихолинергической терапией). Поэтому существует потребность в новых хорошо переносимых способах лечения, которые эффективно лечат от частоты мочеиспускания, безотлагательности и недержания, или в виде монотерапии, или в сочетании с доступными видами терапии. Ожидается, что средства, которые релаксируют гладкую мышцу мочевого пузыря, такие как агонисты β3ΑΚ, будут эффективными для лечения таких расстройств мочеиспускания.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к новым агонистам β3ΑΚ, фармацевтическим композициям, содержащим их, а также к способам лечения или профилактики опосредуемых через β3ΑΚ расстройств с использованием таких новых соединений.

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединению структурной формулы 1а

- 1 020135

или его фармацевтически приемлемой соли или его стереоизомеру или фармацевтически приемлемой соли его стереоизомера, где η равен 0, 1 или 2;

Υ выбирают из группы, состоящей из:

(1) (С₁-С₅)-алкандиила и (2) связи;

Ζ выбирают из группы, состоящей из тиазолила, пиридила, дигидропиридила, 1,2,4-триазолила, 1,2,3-триазолила, пиримидинила, дигидропиримидинила, тетрагидропиримидинила, пиридазинила, дигидропиридазинила, пирролидинила, пиразолила,

К³ выбирают из группы, состоящей из:

(1) (С1-С₆)-алкила, (2) оксо и (3) -ΝΗ₂.

В одном воплощении соединения формулы 1а представляют собой соединения, где η равен 0, 1 или 2. В одном подмножестве данного воплощения η равен 0. В другом подмножестве η равен 1. В еще одном подмножестве η равен 2.

В одном воплощении соединения формулы 1а представляют собой соединения, где Υ представляет собой метилен, -СН(СН₃)- или связь. В одном их подмножестве Υ представляет собой метилен или -СН(СН₃)-. В другом их подмножестве Υ представляет собой связь.

В другом воплощении соединения формулы 1а представляют собой соединения, где Ζ выбирают из группы, состоящей из тиазолила, пиридила, дигидропиридила, 1,2,4-триазолила, 1,2,3-триазолила, пиримидинила, дигидропиримидинила, тетрагидропиримидинила, пиридазинила, дигидропиридазинила, пирролидинила, пиразолила

В другом воплощении соединения формулы 1а представляют собой соединения, где Ζ выбирают из группы, состоящей из тиазолила, пиридила, дигидропиридила, 1,2,4-триазолила, 1,2,3-триазолила, пиримидинила, дигидропиримидинила, тетрагидропиримидинила, пиридазинила, дигидропиридазинила, пир ролидинила и пиразолила.

В другом воплощении соединения формулы 1а представляют собой соединения, где Ζ выбирают из группы, состоящей из

В другом воплощении соединения формулы 1а представляют собой соединения, где К³ выбирают из группы, состоящей из:

(1) (С1-С₆)-алкила, (2) оксо и (3) -ΝΗ₂.

В одном подмножестве данного воплощения К³ представляет собой метил или этил. В другом подмножестве К³ представляет собой оксо. В другом подмножестве К³ представляет собой -ΝΗ₂.

В другом воплощении соединения формулы 1а представляют собой соединения со специфической стереоконфигурацией при указанном хиральном центре

В другом воплощении соединения формулы 1а представляют собой соединения со специфической стереоконфигурацией при указанных хиральных центрах, причем хиральный центр, помеченный звездочкой, представляет собой К или 8

- 2 020135

В одном подмножестве конфигурация при хиральном центре, помеченном звездочкой, представляет собой Б.

Используемый в данном описании термин алкил предназначен для обозначения как разветвленных, так и линейных насыщенных алифатических углеводородных групп с определенным числом атомов углерода, например метила (Ме), этила (Е1), н-пропила (Рг), н-бутила (Ви), н-пентила, н-гексила и их изомеров, таких как изопропил (изо-Рг), 1-изобутил (изо-бут), втор-бутил (втор-Ви), трет-бутил (третВи), изопентил, изогексил и т.п. Термин циклоалкил обозначает моноциклический насыщенный карбоцикл с определенным числом атомов углерода, например 3, 4, 5 или 6 атомами углерода. Примеры циклоалкила включают циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Термин алкандиил относится к линейному или разветвленному двухвалентному углеводородному радикалу с определенным числом атомов углерода. Термины алкендиил и алкиндиил относятся к линейным или разветвленным ненасыщенным двухвалентным углеводородным радикалам. Алкендиил характеризуется двойной углерод-углеродной связью, и алкиндиил характеризуется тройной углерод-углеродной связью. Примеры алкандиила включают, но не ограничиваются перечисленным, метилен (-СН₂-), этилен (-СН₂СН₂-), 1,1этандиил (-СН(СН₃)-), 1,2-пропандиил (-СН(СН₃)СН₂-), 2-метил-1,1-пропандиил (-СН[С(СН₃)₂])-); примеры алкендиила включают, но не ограничиваются перечисленным, 1,1-этендиил (-С(=СН₂)-), 1,2-этендиил (-СН=СН-) и 2-пропен-1,1-диил (-СН(СН=СН₂)-); примеры алкиндиила включают, но не ограничиваются перечисленным, 1,2-этиндиил (-С=С-) и 3-бутин-1,1-диил (-СН(СН₂С=СН)-). Примером галогензамещенного алкандиила является -С(СН₃)(Е)-.

Термин необязательно замещенный означает незамещенный или замещенный, и, следовательно, общие структурные формулы, описанные в данном описании, охватывают соединения, содержащие определенный необязательный заместитель, а также соединения, которые не содержат необязательный заместитель. Каждая переменная определяется независимо каждый раз, когда имеет место в определениях общих структурных формул.

Термины гало или галоген предназначены для включения фтора, хлора, брома и иода, если не указано иное. Предпочтительными являются фтор и хлор.

Термины карбоцикл или карбоциклический относятся к насыщенным, частично ненасыщенным и ароматическим циклам, имеющим в цикле только атомы углерода. Примеры включают, но не ограничиваются перечисленным, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, циклопентенил, циклогексенил, циклогексадиенил и фенил. Термин арил относится к ароматическому карбоциклу. В рамках определения Ζ термин бензольный цикл, конденсированный с (С₅-Сю)-карбоциклом включает, но не ограничивается перечисленным, нафтил, дигидронафтил, тетрагидронафтил, инданил, инденил, бензоциклогептен, тетрагидробензоциклогептен и т.п.; предпочтительно бензол конденсирован с (С₅-С₆)карбоциклом. Такой конденсированный цикл может присоединяться к остальной части молекулы через атом углерода в любом цикле.

Термины гетероцикл или гетероциклический относятся к насыщенным, частично ненасыщенным и ароматическим циклам, имеющим по меньшей мере один циклический гетероатом и по меньшей мере один циклический атом углерода; гетероцикл может присоединяться к остальной части молекулы через циклический атом углерода или циклический атом азота. Термины гетероарил или гетероарильный относятся к ароматическому гетероциклу. В рамках определения Ζ термин 5- или 6членный гетероцикл с 1-4 гетероатомами, выбранными из атомов кислорода, серы и азота включает, но не ограничивается перечисленным, пирролил, тиенил, фуранил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, триазолил, тетразолил, оксадиазолил, тиадиазолил, пирролидинил, тетрагидрофуранил, пиридинил, дигидропиридинил, тетрагидропиридинил, пиримидинил, дигидропиримидинил, тетрагидропиримидинил, пиразинил, дигидропиразинил, тетрагидропиразинил, пиридазинил, дигидропиридазинил, тетрагидропиридазинил, пиперидинил, пиперазинил, морфолинил, пиранил, дигидропиранил, тетрагидропиранил и т.п.

В случае термина (Я³)_п, а также любых других подобных обозначений, когда η равен 0, тогда Я³представляет собой водород; когда η больше 1, тогда при каждом появлении Я³ независимо выбирают из всех подходящих или указанных для Я³ групп.

Оптические изомеры - диастереомеры - геометрические изомеры - таутомеры

Соединения, описанные в данном описании, могут содержать асимметрический центр и, таким образом, могут существовать в виде энантиомеров. Когда соединения по изобретению обладают двумя или большим числом асимметрических центров, они также могут существовать в виде диастереомеров. Когда в формулах в изобретении связи хирального углерода отображаются в виде прямых линий, это понимается как то, что в формулах заключаются обе конфигурации хирального углерода (Я) и (Б), и, следова

- 3 020135 тельно, оба энантиомера и их смеси. Настоящее изобретение включает все такие возможные стереоизомеры как, по существу, чистые расщепленные энантиомеры, их рацемические смеси, а также смеси диастереомеров. Приведенная выше формула 1а показана без отличительной стереохимии в некоторых положениях. Настоящее изобретение включает все стереоизомеры соединений формулы 1а и их фармацевтически приемлемые соли.

Диастереомерные пары энантиомеров можно разделить, например, фракционной кристаллизацией из подходящего растворителя и полученную таким образом пару энантиомеров можно разделить на отдельные стереоизомеры обычными способами, например, с использованием оптически активной кислоты или основания в качестве расщепляющего агента или ВЭЖХ на хиральной колонке. Также любой энантиомер или диастереомер соединения общей формулы 1а может быть получен стереоспецифическим синтезом с использованием оптически чистых исходных материалов или реагентов известной конфигурации.

Когда соединения, описанные в данном описании, содержат олефиновые двойные связи, если не указано иное, такие двойные связи означают включение как Е, так и Ζ геометрических изомеров.

Некоторые из соединений, описанных в данном описании, могут существовать с различными точками присоединения водорода, и такие соединения называют таутомерами. Например, соединения, включающие карбонильные группы -СН₂С(О)- (кетогруппы), могут претерпевать таутомеризм с образованием гидроксилсодержащих групп -СН=С(ОН)- (енольные формы). Как кетоформы, так и енольные формы по отдельности, а также их смеси включены в объем настоящего изобретения.

Соли

Термин фармацевтически приемлемые соли относится к солям, полученным из фармацевтически приемлемых нетоксичных оснований или кислот. Когда соединение по настоящему изобретению представляет собой кислоту, его соответствующую соль можно обычно получить с фармацевтически приемлемым нетоксичным основанием, в том числе, неорганическими основаниями и органическими основаниями. Соли, полученные с такими неорганическими основаниями, включают соли алюминия, аммония, кальция, меди (одно- и двухвалентной), железа (3), железа (2), лития, магния, марганца (двух- и трехвалентного), калия, натрия, цинка и подобные соли. Предпочтительными являются соли аммония, кальция, магния, калия и натрия. Соли, полученные с фармацевтически приемлемыми нетоксичными органическими основаниями, включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, полученных как из встречающихся в природе, так и синтетических источников. Фармацевтически приемлемые органические нетоксичные основания, с которыми можно получить соли, включают, например, аргинин, бетаин, кофеин, холин, Ν,Ν'-дибензилэтилендиамин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2-диметиламиноэтанол, этаноламин, этилендиамин, Ν-этилморфолин, Ν-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, дициклогексиламин, лизин, метилглюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминовые смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин, трометамин и т.п.

Когда соединение по настоящему изобретению представляет собой основание, его соответствующую соль можно обычно получить с фармацевтически приемлемой нетоксичной неорганической и органической кислотой. Такие кислоты включают, например, уксусную, бензолсульфоновую, бензойную, камфорсульфоновую, лимонную, этансульфоновую, фумаровую, глюконовую, глутаминовую, бромоводородную, хлороводородную, изэтионовую, молочную, малеиновую, яблочную, миндальную, метансульфоновую, слизевую, азотную, памовую, пантотеновую, фосфорную, янтарную, серную, винную, птолуолсульфоновую кислоту и подобные кислоты. Предпочтительными являются лимонная, бромоводородная, хлороводородная, малеиновая, фосфорная, серная и винная кислоты.

Сольваты

Настоящее изобретение включает в свой объем сольваты соединений формулы 1а. Используемый в данном описании термин сольват относится к комплексу переменной стехиометрии, образованному растворенными веществом (т.е. соединением формулы 1а) или его фармацевтически приемлемой солью и растворителем, что не влияет на биологическую активность растворенного вещества. Примеры растворителей включают, но не ограничиваются перечисленным, воду, этанол и уксусную кислоту. Когда растворителем является вода, сольват известен как гидрат; гидраты включают, но не ограничиваются перечисленным, геми-, моно-, сескви-, ди- и тригидраты.

Пролекарства

Настоящее изобретение включает в свой объем применение пролекарств соединений по данному изобретению. Вообще, такие пролекарства будут представлять собой функциональные производные соединений по данному изобретению, которые могут легко превращаться ίη νίνο в требуемое соединение. Таким образом, в способах лечения по настоящему изобретению термин введение будет охватывать лечение различных описанных состояний соединением формулы 1а или соединением, которое может не являться соединением формулы 1а, но которое превращается в соединение формулы 1а ίη νίνο после введения пациенту. Обычные процедуры отбора и получения подходящих пролекарственных производных описаны, например, в Эскщп об Ргобгидк, сб. Н. Випбдаагб. Е15СУ1СГ. 1985.

- 4 020135

Использование

Соединения по настоящему изобретению являются сильными агонистами адренорецептора β3 и как таковые применимы при лечении или предупреждении заболеваний, расстройств или состояний, опосредуемых активацией адренорецептора β3. Таким образом, один аспект настоящего изобретения относится к способу лечения, регуляции или предупреждения таких заболеваний, расстройств или состояний у млекопитающего, который включает введение такому млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения формулы 1а. Термин млекопитающее включает человека и животных, не относящихся к человеку, таких как собаки и кошки и т.п. Заболевания, расстройства или состояния, в случае которых соединения по настоящему изобретению применимы для лечения или предупреждения, включают, но не ограничиваются перечисленным, (1) мочевой пузырь с повышенной активностью, (2) недержание мочи, (3) безотлагательность с недержанием мочи, (4) безотлагательность мочеиспускания, (5) сахарный диабет, (6) гипергликемию, (7) ожирение, (8) гиперлипидемию, (9) гипертриглицеридемию, (10) гиперхолестеринемию, (11) атеросклероз коронарной, мозговой и периферических артерий, (12) желудочно-кишечные расстройства, включающие пептическую язву, эзофагит, гастрит и дуоденит (в том числе, вызываемый Н. ру1оп), кишечные изъязвления (в том числе, воспалительное заболевание кишечника, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона и проктит) и желудочно-кишечные изъязвления, (13) нейрогенное воспаление дыхательных путей, включая кашель, астму, (14) депрессию, (15) заболевания предстательной железы, такие как доброкачественная гиперплазия предстательной железы, (16) синдром раздраженной толстой кишки и другие расстройства, нуждающиеся в пониженной подвижности кишок, (17) диабетическую ретинопатию, (18) преждевременные роды и (19) повышенное внутриглазное давление и глаукому.

Любой подходящий способ введения можно использовать для предоставления млекопитающему, в особенности, человеку, эффективной дозировки соединения по настоящему изобретению. Например, можно использовать пероральный, ректальный, местный, парентеральный, глазной, легочный, назальный и подобные пути. Лекарственные формы включают таблетки, пастилки, дисперсии, суспензии, растворы, капсулы, кремы, мази, аэрозоли и т.п. Предпочтительно соединения формулы 1а вводят перорально.

Эффективная дозировка активного ингредиента может изменяться в зависимости от определенного используемого соединения, способа введения, состояния, которое лечат, и тяжести состояния, которое лечат. Такая дозировка может быть легко установлена специалистом в данной области техники.

При лечении мочевого пузыря с повышенной активностью (ОАВ) одними соединениями по настоящему изобретению или в сочетании с другими средствами против ОАВ, как правило, удовлетворительные результаты получают, когда соединения по настоящему изобретению вводят в суточной дозировке от 0,01 до примерно 100 мг на кг массы тела животного, предпочтительно даваемой в однократной дозе или раздельных дозах два-шесть раз в сутки, или в форме с отсроченным высвобождением. В случае 70-кг взрослого человека общая суточная доза, как правило, будет составлять от примерно 0,7 до примерно 3500 мг, или специфичнее, от примерно 0,7 до примерно 2000 мг. Такая схема приема может быть отрегулирована для получения оптимального терапевтического отклика.

При лечении одного ожирения или в сочетании с диабетом и/или гипергликемией, как правило, удовлетворительные результаты получают, когда соединения по настоящему изобретению вводят в суточной дозировке от 0,01 до примерно 100 мг на кг массы тела животного, предпочтительно даваемой в однократной дозе или раздельных дозах два-шесть раз в сутки, или в форме с отсроченным высвобождением. В случае 70-кг взрослого человека общая суточная доза, как правило, будет составлять от примерно 0,7 до примерно 3500 мг. Такая схема приема может быть отрегулирована для получения оптимального терапевтического отклика.

При лечении сахарного диабета и/или гипергликемии, а также других заболеваний или расстройств, для которых применимы соединения формулы 1а, как правило, удовлетворительные результаты получают, когда соединения по настоящему изобретению вводят в суточной дозировке от 0,001 до примерно 100 мг на кг массы тела животного, предпочтительно даваемой в однократной дозе или раздельных дозах два-шесть раз в сутки, или в форме с отсроченным высвобождением. В случае 70-кг взрослого человека общая суточная доза, как правило, будет составлять от примерно 0,07 до примерно 350 мг. Такая схема приема может быть отрегулирована для получения оптимального терапевтического отклика.

В одном воплощении соединение по настоящему изобретению используют для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения заболевания или расстройства, опосредуемого активацией адренорецептора β3.

Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтическим композициям, включающим соединение формулы 1а и фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению включают соединение формулы 1а или его фармацевтически приемлемую соль как активный ингредиент и также могут содержать фармацевтически приемлемый носитель и, необязательно, другие терапевтические ингредиенты. Термин фармацевтически приемлемые соли относится к солям, полученным с фармацевтически приемлемыми нетоксичными основаниями или кислотами, включая неорганические основания или кислоты и органические основания или кислоты.

- 5 020135

Композиции включают композиции, подходящие для перорального, внутрипузырного, ректального, местного, парентерального (в том числе, подкожного, внутримышечного и внутривенного), глазного (офтальмического), легочного (назальной или трансбуккальной ингаляции) или назального введения, хотя наиболее подходящий путь в любом данном случае будет зависеть от характера и тяжести состояний, которые лечат, и природы активного ингредиента. Они обычно могут предоставляться в стандартной лекарственной форме, и их получают любым из способов, хорошо известных в области фармации.

При практическом использовании соединения формулы 1а в качестве активного ингредиента можно объединять при равномерном перемешивании с фармацевтическим носителем согласно обычным методам получения фармацевтических препаратов. Носитель может принимать самые разные формы, в зависимости от формы препарата, нужного для введения, например, перорального или парентерального (включая внутривенное). При получении композиций для пероральной лекарственной формы можно использовать любую обычную фармацевтическую среду, такую как, например, вода, гликоли, масла, спирты, корригенты, консерванты, красители и т.п. для жидких пероральных препаратов, таких как, например, суспензии, эликсиры и растворы; или такие носители, как крахмалы, сахара, микрокристаллическая целлюлоза, наполнители, агенты грануляции, смазывающие вещества, связующие вещества, вещества, способствующие рассыпанию, и т.п. в случае пероральных твердых препаратов, таких как, например, порошки, твердые и мягкие капсулы и таблетки, причем твердые пероральные препараты предпочтительнее жидких препаратов.

Из-за легкости введения таблетки и капсулы представляют наиболее выгодную пероральную лекарственную форму, и в таком случае, разумеется, используют твердые фармацевтические носители. При необходимости на таблетки может быть нанесено покрытие стандартными водными и неводными методами. Такие композиции и препараты должны содержать по меньшей мере 0,1% активного соединения. Процентное содержание активного соединения в таких композициях может, конечно, изменяться и обычно может составлять от примерно 2 до примерно 60 мас.% на единицу. Количество активного соединения в таких терапевтически применимых композициях является таким, что будет получаться эффективная дозировка. Активные соединения также можно вводить интраназально, в виде, например, жидких капель или спрея.

Таблетки, пилюли, капсулы и т.п. также могут содержать связующее вещество, такое как трагакантовая смола, аравийская камедь, кукурузный крахмал или желатин; эксципиенты, такие как дикальцийфосфат; вещество, способствующее рассыпанию, такое как кукурузный крахмал, картофельный крахмал, альгиновая кислота; смазывающее вещество, такое как стеарат магния; и подслащивающее средство, такое как сахароза, лактоза или сахарин. Когда стандартная лекарственная форма представляет собой капсулу, она может содержать кроме материалов указанных выше типов жидкий носитель, такой как жирное масло.

Могут присутствовать различные другие материалы в качестве покрытий или модифицирующие физическую форму стандартной лекарственной формы. Например, таблетки могут быть покрыты шеллаком, сахаром или тем и другим. Сироп или эликсир могут содержать, кроме активного ингредиента, сахарозу как подслащивающее вещество, метил- и пропилпарабены как консерванты, краситель и корригент, такие как вишневая или апельсиновая отдушка.

Соединения формулы 1а также можно вводить парентерально.

Растворы или суспензии указанных активных соединений можно получить в воде, соответствующим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза. Дисперсии также можно получить в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях в маслах. При обычных условиях хранения и применения такие препараты содержат консервант для предотвращения роста микроорганизмов.

Фармацевтические формы, подходящие для применения в качестве инъекций, включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для приготовления стерильных растворов или дисперсий для инъекций для немедленного применения. Во всех случаях форма должна быть стерильной и должна быть текучей до такой степени, чтобы могла легко применяться с помощью шприца. Она должна быть устойчива в условиях получения и хранения и должна быть защищена от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Носитель может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль), их подходящие смеси и растительные масла.

Соединения формулы 1а можно использовать в сочетании с другими лекарственными средствами, которые используют при лечении/предупреждении/подавлении или облегчении заболеваний или состояний, для которых применяют соединения формулы 1а. Такие другие лекарственные средства можно вводить способом и в количестве, обычно используемыми для них, одновременно или последовательно с соединением формулы 1а. Когда соединение формулы 1а используют одновременно с одним или несколькими другими лекарственными средствами, предпочтительна фармацевтическая стандартная лекарственная форма, содержащая такие другие лекарственные средства в дополнение к соединению формулы 1а. Соответственно, фармацевтические композиции по настоящему изобретению включают композиции, которые кроме соединения формулы 1а также содержат один или несколько других активных ингредиен

- 6 020135 тов. Примеры других активных ингредиентов, которые можно комбинировать с соединением формулы 1а, вводимые или раздельно, или в единых фармацевтических композициях, включают, но не ограничиваются перечисленным:

(a) лекарственные средства против повышенной активности мочевого пузыря, включающие (ί) антагонисты мускариновых рецепторов (например, толтеродин, оксибутинин, в том числе, 8-оксибутинин, гиосциамин, пропантелин, пропиверин, троспий, включая хлорид троспия, солифенацин, дарифенацин, имидафенацин, фезотеродин, темиверин, 8УТ-40776. 202405 от 61ахо8тййК1те, ΤΌ6301, КВХ9841, ΌΌΡ200, ΡΕΌ179 и другие антихолинергетики; см., например, И8 5382600, И8 3176019, И8 3480626, И8 4564621, И8 5096890, И8 6017927, И8 6174896, И8 5036098, И8 5932607, И8 6713464, И8 6858650 и ΌΌ 106643. См. также И8 6103747, И8 6630162, И8 6770295, И8 6911217, И8 5164190, И8 5601839, И8 5834010, И8 6743441, АО 2002000652, АО 200400414853; как будет понятно специалистам в данной области техники, такие лекарственные средства можно вводить перорально или местно в стандартных формах или формах с отсроченным высвобождением, таких как формы с отсроченным высвобождением толтеродина, с отсроченным высвобождением оксибутинина и трансдермального оксибутинина), (и) антагонисты ΝΚ-1 или ΝΚ-2 (например, апрепитант, цизолиртин, соединения, раскрытые в АО 2005/073191, АО 2005/032464, и другие описанные антагонисты ΝΚ-1), (ίίί) антагонисты альфаадренергических рецепторов (например, альфузозин, доксазозин, празозин, тамсулозин, теразозин и другие), (ίν) средства, открывающие калиевые каналы (например, кромакалим, пинацидил и другие), (ν) ванилоиды и другие модуляторы афферентных нервов - агонисты и антагонисты (например, капсаицин, резинифератоксин и другие), (νί) агонисты дофаминовых рецепторов Ό1 (например, перголинд), (νίί) ингибиторы повторного поглощения серотонина и/или норэпинефрина (например, дулоксетин), (νίίί) ингибиторы нервно-мышечного соединения высвобождения ацетилхолина (например, ботулинический токсин), (1х) блокаторы кальциевых каналов (например, дилитазем, нифедипин, верапамил и другие), (х) ингибиторы синтеза простагландина (например, флурбипрофен), (χί) антагонисты рецепторов гаммааминомасляной кислоты (например, баклофен), (χίί) вагинальные эстрогенные препараты, (χίίί) селективные ингибиторы повторного поглощения норэпинефрина, (χίν) агонисты 5-НТ2С, (χν) потенциалозависимый блокатор натриевых каналов, (χνί) антагонисты пуринергических рецепторов Р2Х (например, антагонисты Р2Х1 или Р2Х3), (χνίί) ингибиторы ΡΑΚ2, (χνίίί) ингибиторы фосфодиэстеразы (например, ингибиторы ΡΌΕ1, ΡΌΕ4 и ΡΌΕ5) и (χίχ) АТФ-чувствительные вещества, открывающие калиевые каналы;

(b) сенсибилизаторы инсулина, в том числе (ί) агонисты ΡΡΑΚγ, такие как глитазоны (например, троглитазон, пиоглитазон, энглитазон, МСС-555, ВКЬ49653 и т.п.), и соединения, раскрытые в АО 97/27857, 97/28115, 97/28137 и 97/27847; (ίί) бигуаниды, такие как метформин и фенформин;

(c) инсулин или миметики инсулина;

(4) сульфонилмочевины, такие как толбутамид и глипизид;

(е) ингибиторы α-глюкозидазы (такие как акарбоза);

(ί) средства, снижающие уровень холестерина, такие как (ί) ингибиторы НМО-СоА-редуктазы (ловастатин, симвастатин и правастатин, флувастатин, аторвастатин и другие статины), (ίί) вещества, усиливающие секрецию (холестирамин, колестипол и диалкиламиноалкильные производные сшитого декстрана), (ίί) никотиниловый спирт, никотиниловая кислота или ее соль, (ίίί) агонисты рецепторов пролифератора-активатора а, такие как производные фенофибриновой кислоты (гемфиброзил, клофибрат, фенофибрат и бензафибрат), (ίν) ингибиторы поглощения холестерина, например, бета-ситостерин и эзетимид, и ингибиторы ацил-СоА (холестерин-ацетилтрансферазы), например метиламид, (ν) пробукол, (νί) витамин Е и (νίί) тиромиметики;

(д) агонисты ΡΡΑΚδ, такие как раскрытые в АО 97/28149;

(11) соединения против ожирения, такие как фенфлурамин, дексфенфлурамин, фентермин, сибутрамин, орлистат и другие агонисты адренергических рецепторов β3;

(ΐ) средства, модифицирующие пищевое поведение, такие как антагонисты нейропептидов Υ (например, нейропептида Υ5), такие как раскрытые в АО 97/19682, АО 97/20820, АО 97/20821, АО 97/20822 и АО 97/20823;

О) агонисты ΡΡΑΚα, такие как описанные в АО 97/36579, Ο1αχο;

(k) агонисты ΡΡΑΚγ , такие как описанные в АО 97/10813; и (l) ингибиторы повторного поглощения серотонина, такие как флуоксетин и сертралин.

В одном воплощении соединение по настоящему изобретению и второе активное средство, описанное выше, используют при получении лекарственного средства для лечения или предупреждения заболевания или расстройства, опосредуемого активацией адренорецептора 83.

Соединения формулы 1а по настоящему изобретению можно получить согласно процедурам, показанным на следующих далее схемах и в примерах, с использованием соответствующих материалов, и также приведенным в качестве примеров в следующих далее конкретных примерах. Кроме того, используя процедуры, описанные в данном описании, специалист в данной области техники может легко получить другие соединения по настоящему изобретению, заявляемые в данном описании. Однако соедине

- 7 020135 ния, приведенные в примерах, не должны рассматриваться как образующие единственный вид, который рассматривается как изобретение. Примеры также иллюстрируют детали получения соединений по настоящему изобретению. Специалисты в данной области техники легко поймут, что для получения указанных соединений можно использовать различные изменения условий и процессов описанных далее процедур получения. Соединения по настоящему изобретению, как правило, выделяют в форме их фармацевтически приемлемых солей, таких как соли, описанные в данном описании выше. Свободные основания амины, соответствующие выделенным солям, можно получить нейтрализацией подходящим основанием, таким как водный раствор гидрокарбоната натрия, карбоната натрия, гидроксида натрия и гидроксида калия, и экстрагированием свободного амина органическим растворителем с последующим выпариванием. Свободное основание амин, выделенное таким способом, затем можно превратить в другую фармацевтически приемлемую соль растворением в органическом растворителе с последующим добавлением соответствующей кислоты и последующими выпариванием, осаждением или кристаллизацией. Все температуры приводятся в градусах по Цельсию, если не указано иное. Масс-спектры (МС) измеряют масс-спектроскопией с ионизацией электронным распылением.

Различные хроматографические методы можно использовать при получении соединений. Такие методы включают, но не ограничиваются перечисленным, высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), включая ВЭЖХ с нормальной, обращенной фазой и хиральной фазой; жидкостную хроматографию среднего давления (ЖХСД), сверхкритическую жидкостную хроматографию; препаративную тонкослойную хроматографию (преп. ТСХ); флэш-хроматографию на силикагеле или на силикагеле с обращенной фазой; ионообменную хроматографию и радиальную хроматографию. Все температуры приводятся в градусах по Цельсию, если не указано иное.

Выражение стандартные условия реакции пептидного сочетания означает сочетание карбоновой кислоты с амином с использованием кислотного активирующего агента, такого как ЕЭС, ЭСС и ВОР, в инертном растворителе, таком как дихлорметан, в присутствии катализатора, такого как НОВТ и НОАТ. Использование защитных групп для функциональных групп амина и карбоновой кислоты для облегчения нужного взаимодействия и минимизации нежелательных взаимодействий хорошо описано в документах. Условия, требуемые для удаления защитных групп, описаны в известных руководствах, таких как Отееие Т. апб кий Р.О.М., РгсИеебуе Отоирз ίη Огдашс 8уп1йе818, ίοΐιη \УПеу & 8оп8. 1пс., №\ν Уотк. ΝΥ, 1991. Группы ΜΟΖ и ВОС являются обычно используемыми защитными группами в органическом синтезе, и условия их удаления известны специалистам в данной области техники. Например, ΜΟΖ можно удалить каталитическим гидрированием в присутствии благородного металла или его оксида, такого как платина на активированном угле, в протонном растворителе, таком как метанол или этанол. В случаях, когда каталитическое гидрирование противопоказано из-за присутствия других потенциально реакционноспособных функциональных групп, удаления групп ΜΟΖ также можно достичь обработкой раствором трифторуксусной кислоты, хлороводородной кислоты или газообразным хлороводородом в растворителе, таком как дихлорметан, метанол или этилацетат. Удаление защитных групп ВОС осуществляют с помощью сильной кислоты, такой как трифторуксусная кислота, хлороводородная кислота, или газообразным хлороводородом в растворителе, таком как дихлорметан, метанол или этилацетат.

В заявке термины, приведенные далее, имеют указанные значения, если не отмечается иное.

Термин Значение

Ас - Ацил (СН₃С(О)-)

Водн. - Водный

Вп - Бензил

ВОС (Вос) - трет-Бутилоксикарбонил

ВОР Гексафторфосфат - бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония °С - Градус по Цельсию

Вычисл. или выч-но - Вычислено

Целит - Диатомовая земля целит™

ЭСС - Дициклогексилкарбодиимид

ЭСМ - Дихлорметан

ΌΙΕΑ - Ν,Ν-Диизопропилэтиламин

ΌΜΑΡ - 4-Диметиламинопиридин ДМФА - Ν,Ν-Диметилформамид ЕЭС - 1-Этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид Экв. или эквив. - Эквивалент(ы)

Е8-МС и ΕδΙ-МС - Масс-спектрометрия с ионизацией электронным распылением

Εΐ - Этил

ЕЮАс - Этилацетат г - Грамм(ы) час - Час(ы)

- 8 020135

НАТи - Гексафторфосфат О-(7-азабензотриазол-1-ил)-Н^№,№-тетраметилурония

НОАс - Уксусная кислота

НОАТ - 1-Гидрокси-7-азабензотриазол

НОВТ - 1-Гидроксибензотриазол

ВЭЖХ - Высокоэффективная жидкостная хроматография

ЖХ/МС или ЖХ-Масс - Жидкостная хроматография - масс-спектр л - Литр(ы)

М - Молярный(е)

Ме - Метил

МеОН - Метанол

МФ (МР) - Молекулярная формула мин - Минута(ы) мг - Миллиграмм(ы) мл - Миллилитр(ы) ммоль - Миллимоль(и) ΜΟΖ (Μοζ) п-Метоксибензилоксикарбонил Т.пл. - Температура плавления

МС - Масс-спектр нМ - Наномолярный ОТГ - Трифторметансульфонил Р11 - Фенил

Преп. - Препаративный(ая)

ВеГ. - Ссылка

г.1. или г1 - Комнатная температура

Насыщ. - Насыщенный

8СР СО₂8 - Жидкий диоксид углерода в сверхкритическом состоянии

ТВАР - Фторид тетрабутиламмония

ТВА1 - Иодид тетрабутиламмония

ТВЭР8 - трет-Бутилдифенилсилил

ТВ8, ТВЭМ8 - трет-Бутилдиметилсилил

ТЕА или Εΐ₃Ν - Триэтиламин

ТГ - Трифлат или трифторметансульфонат

ТФК - Трифторуксусная кислота

ТГФ - Тетрагидрофуран

ТСХ - Тонкослойная хроматография

ТМ8 - Триметилсилил

Приведенные ниже схемы реакций иллюстрируют способы, используемые при синтезе соединений формулы 1а по настоящему изобретению. Все заместители имеют значения, указанные выше, если не указано иное. Синтез новых соединений формулы 1а, которые являются предметом настоящего изобретения, можно осуществлять одним или несколькими схожими путями.

По схеме I коммерчески доступный 1-1 обрабатывают 1-2 М раствором винилсодержащего реактива Гриньяра или в безводном ТГФ или в эфире при температуре 0°С и нагревают до комнатной температуры в течение периода времени от 1 до 4 ч. Реакцию обычно осуществляют в инертном органическом растворителе, таком как ТГФ, и в атмосфере инертного газа, такого как азот. Продукт реакции представляет собой аллиловый спирт структурной формулы 1-2. Конверсии 1-2 в 1-3 можно достигнуть, подбирая нужный силилзащитный агент, такой как трет-бутилдиметилхлорид, и слабое органическое основание, такое как имидазол, и смешивая их при комнатной температуре от 4 до 16 ч. Окисление двойной связи посредством барботирования газа озона в течение периода времени до появления устойчивого синего цвета и последующее восстановление озонида посредством добавления избытка метилсульфида дают альдегид I4. Затем 1-4 обрабатывают или В-(+)-, или 8-(-)-2-метил-2-пропансульфинамидом в присутствии кислоты Льюиса, такой как сульфат меди или тетрахлорид титана, которая также действует как осушитель. Взаимодействие обычно осуществляют в инертном органическом растворителе, таком как дихлорметан, при температуре от комнатной до 40°С в течение 6-36 ч и продукт реакции представляет собой сульфинамид структурной формулы 1-5. Как и 1-1, 1-5 обрабатывают винилсодержащим реактивом Гриньяра в схожих условиях и в течение схожего времени и получают аллилсульфинамид 1-6. Для того чтобы селективно удалить сульфинамид, 1-6 обрабатывают безводным 4 М раствором НС1 в диоксане в течение не более 15 мин. Затем реакционную смесь разбавляют толуолом, концентрируют досуха и получают 1-7. Наконец, I7 превращают в 1-8 обработкой бензилхлорформиатом в присутствии безводного органического основания, такого как триэтиламин или диизопропилэтиламин, в инертном органическом растворителе, таком как ЭСМ. при 0°С с нагреванием до комнатной температуры в течение периода времени от 1 до 3 ч.

- 9 020135

Схема I

С другой стороны, альдегид 1-4 можно получить так, как показано на схеме II. Обработка 1-3 тетраоксидом осмия в присутствии Ν-оксида Ν-метилморфолина дает диол 1-9. Взаимодействие обычно осуществляют в смеси воды и ацетона и смесь тщательно обрабатывают для удаления токсичного тетраоксида осмия перед концентрированием раствора. Затем остаток 1-9 растворяют в смеси ацетон/вода (8:1) и обрабатывают периодатом натрия в течение периода времени от 8 до 24 ч при комнатной температуре, и получают альдегид 1-4 как на схеме I. Затем его доводят до конечного нужного промежуточного соединения 1-8 с использованием тех же процедур, какие описаны на схеме I.

Схема II

Схема III описывает синтез пирролидинового каркаса с использованием защищенного СВ/ аллиламида В8, описанного на схемах I и II. Виниловое соединение В8 можно ввести в реакцию метатезиса олефинов с промежуточным винилкетоном ^10 с использованием соответствующих катализаторов, применимых при метатезисе олефинов, известных специалистам в данной области техники. Подходящие катализаторы для получения соединения структурной формулы ^11 включают, но не ограничиваются перечисленным, катализаторы как ОгаЬЬк, так и Ζΐιαη и типа, известного как ОгаЬЬк-П и Ζΐιαη I или II. Гидрирование такого промежуточного соединения ^11 посредством обработки в атмосфере водорода с катализатором 10% палладием-на-угле в растворителе, таком как этилацетат или этанол, в течение 2-16 ч приводит к гидрированию олефина вместе с удалением защитных СВх-групп в дополнение к замыканию цикла через внутримолекулярное образование имина между свободным амином и кетоном и восстановлению имина с образованием пирролидинового цикла общей структуры ^12. В зависимости от выбора растворителя галогенозаместители арила могут или остаться, или быть удаленными в то же время, в зависимости от предпочтительного конечного промежуточного соединения.

Селективную защиту пирролидина Вос можно выполнить путем добавления к ^12 одного эквивалента трет-бутилдикарбоната (Вос₂О) в присутствии безводного органического основания, такого как триэтиламин (ТЕА). Взаимодействие обычно осуществляют в инертном органическом растворителе, таком как ТГФ, и в инертной атмосфере, такой как азот, и получают продукт структурной формулы ^13. В зависимости от выбора амида, сульфонамида или мочевины, ^13 можно превратить в каждое указанное соединение, используя соответствующий способ, известный специалистам в данной области техники для получения таких нужных соединений. В случае сульфонамидов ^13 можно обработать нужным сульфонилхлоридом, содержащим К⁶, в присутствии подходящего основания, такого как пиридин.

Используемый в данном описании К⁶ выбирают из:

(1) водорода, (2) (С1-Сю)-алкила, необязательно замещенного 1-5 группами, независимо выбранными из галогена, -ОК^а, -СО₂К^а -СОМГК .

(3) фенила, необязательно замещенного 1-3 группами, независимо выбранными из галогена, (С₁С₅)-алкила, необязательно замещенного 1-5 атомами галогена, и -ОК^а, и (4) 5- или 6-членного гетероцикла с 1-4 гетероатомами, выбранными из атомов кислорода, серы и азота, и где указанный гетероцикл необязательно орто-конденсирован с бензольным циклом и необязательно замещен 1-3 группами, независимо выбранными из галогена, (С1-С5)-алкила, необязательно замещенного 1-5 атомами галогена, и -ОК^а.

Взаимодействие обычно осуществляют в инертном органическом растворителе, таком как ДМФА, при температуре от комнатной до 80°С в течение периода 12-24 ч, и продукт реакции представляет собой сульфонамид структурной формулы ^14. В случае амидов ^13 можно обработать нужным ацетилхлори

- 10 020135 дом, содержащим К⁶, в присутствии подходящего основания, такого как ТЕА или ΌΙΕΑ. Взаимодействие обычно осуществляют в инертном органическом растворителе, таком как ДМФА, при комнатной температуре в течение периода 12-24 ч, и продукт реакции представляет собой амид структурной формулы I15. Наконец, мочевину можно получить, обрабатывая Ι-13 ί,ΌΙ или фосгеном в присутствии амина, содержащего К⁶, в течение периода времени от 1 до 24 ч при комнатной температуре и получить мочевину структурной формулы Ι-16. Удаление Вос и силилзащитной групп из Ι-14, Ι-15 и Ι-16 одновременно посредством обработки 6 М НС1 в водном метаноле при комнатной температуре в течение периода 12-24 ч дает конечные нужные продукты - амид, сульфонамид и мочевину, содержащие К⁶, показанные в общих структурных формулах Ι-17, Ι-18 и Ι-19.

Можно включить дополнительные стадии удаления защитных групп, если для облегчения протекания химических процессов необходимы защитные группы для группы К⁶, известные специалистам в данной области техники. Такие защитные группы могут включать тритильные группы, третбутилкарбаматные группы или другие группы, подходящие для защиты гетероциклических соединений или функциональных групп, присоединенных к группе К⁶, таких как аминогруппы, гидроксильные группы, карбоксильные группы, известных специалистам в данной области техники.

Альтернативный путь, показанный на схеме ГУ, описывает синтез, который дает как цис-, так и транс-пирролидины, которые разделяют перед получением конечного соединения.

Исходный 2-аминоарилпропан-1,3-диол (Ι-20) сначала защищают как полуацеталь с использованием ацетона в подходящем растворителе, таком как толуол, в присутствии кислоты, такой как птолуолсульфоновая кислота, и затем защищают амин обработкой трет-бутилдикарбонатом, и получают промежуточное соединение Ι-21. С использованием стандартных условий окисления по Сверну свободный первичный гидроксил превращают в альдегид Ι-22. Затем реакцией Виттига с (трифенилфосфоранилиден)ацетальдегидом альдегид удлиняют на два атома углерода, и полученную двойную связь восстанавливают гидрированием с палладием-на-угле, и получают Ι-23. Затем полученное промежуточное соединение подвергают второй реакции Виттига с бромидом (4-нитробензил)трифенилфосфония, и получают промежуточное соединение Ι-24, что создает возможность циклизации соединения через присоединение по Михаэлю по двойной связи после удаления защитной группы. Защита аминогруппы третбутилдикарбонатом содействует очистке и отделению субстрата для получения как цис-, так и трансизомеров Ι-25η и Ι-25Η соответственно. Гидрирование нитрогруппы до свободного амина дает нужные промежуточные соединения Ι-26η и Ι-26Η. Промежуточные соединения Ι-26η и Ι-26Η можно использовать для стандартных амидных сочетаний с использованием ЕЭС. однако может потребоваться селективная защита гидроксильной группы перед обработкой или ацил- или сульфонилхлоридами или фосгеном, когда идет превращение в мочевину.

- 11 020135

Схема V отражает в общих чертах синтез пирролидинового каркаса, который связывает пути на схемах I, III и IV, и дает пирролидиновый каркас с диастереоселективностью для пирролидина цис 28, 5К.

Реакцию Виттига используют для превращения альдегида Р22 со схемы IV в виниловый аналог Р27 через обработку бромидом метилтрифенилфосфония. После манипуляции с защитной группой, видной на промежуточном соединении Р28. схема становится конвергентной схеме III через промежуточное соединение Р8. Затем с использованием процедур, схожих с процедурами, описанными на схеме III, можно получить промежуточное соединение Σ-11. Оптимизация гидрирования за счет введения хлороводородной кислоты и показателя разбавления до концентрации 0,15-0,30 М дает преимущественно пирролидиновый каркас ^13а цис 28,5К.

Схема VI отражает в общих чертах способ синтеза промежуточного ацетилена методами химии альдолей для установления хиральности как гидроксильной группы, так и левой части пирролидина. Из указанной схемы следует, что такой промежуточный ацетилен можно использовать для синтеза как цис-, так и транс-пирролидинов.

Коммерчески доступный ^29 сначала обрабатывают триметилацетилхлоридом в присутствии слабого органического основания, такого как триэтиламин, при -25°С в течение 2 ч. Последовательное добавление к смеси безводного хлорида лития и/или (8)-(-)-4-бензил-, или (8)-(-)-4-фенил-2оксазолидинона и последующее постепенное нагревание до комнатной температуры в течение периода времени от 12 до 24 ч дают имид ^30. Взаимодействие обычно осуществляют в инертном органическом растворителе, таком как ТГФ, в инертной атмосфере, такой как азот. Спирт ^32 получают согласно процедурам, описанным в литературе (см. Еуаик е1 а1., I. Ат. СЬет. 8ос, 2002, 124, 392-394). Например, обработка Σ-30 безводным хлоридом магния, триэтиламином и соответствующим альдегидом Σ-31, таким как 3-хлорбензальдегид или бензальдегид, и хлортриметилсиланом при комнатной температуре в течение периода 72 ч дает триметилсилиловый эфир альдольного продукта ^32.

Взаимодействие обычно осуществляют в инертном органическом растворителе, таком как этилацетат, в инертной атмосфере, такой как азот. Обработка промежуточного соединения триметилсилилового эфира смесью трифторуксусной кислоты и метанола дает нужный спирт ^32. Гидролиз имида ^32 достигается обработкой пероксидом лития при 0°С в течение 15-18 ч. Затем надкислоту восстанавливают водным раствором сульфита натрия, и получают карбоновую кислоту ^33. Взаимодействие обычно осу

- 12 020135 ществляют в смеси инертного органического растворителя, такого как ТГФ, и воды в инертной атмосфере, такой как азот. Конверсии Σ-33 в Σ-34 можно достигнуть выбором нужного силилсодержащего защитного агента, такого как трет-бутилдиметилсилилтрифторметансульфонат, и его реакцией в присутствии слабого органического основания, такого как ΌΒυ, при 0°С в течение периода от 12 до 16 ч. Затем 1-34 можно обработать дифенилфосфорилазидом в присутствии слабого органического основания, такого как триэтиламин, в течение 6 ч при комнатной температуре. Добавление соответствующего спирта, такого как 4-метоксибензиловый спирт, с нагреванием при 100°С в течение периода от 12 до 16 ч дает соответствующий карбамат 1-35. Взаимодействие обычно осуществляют в инертном органическом растворителе, подобном толуолу, в инертной атмосфере, такой как азот. Материал образует основу, на которой можно синтезировать пирролидиновый каркас.

Схема VI

МдС(₂. ТЕА.

ТМЗС1, ЕЮАс

2) ТФКУМеОН

1) Н^ОгЛЮН

2) Ыа_гЗОэ

<-31 ί -л^г11он о

ЧАД ? о^° ||| '-52

ТГФ О “С

Ρ^,0-θΤΐ основание

ОСИ о^вс к¹⁰о о

1) ϋΡΡΑ. ТЕА толуол

2) (У’-ОН

К.Т. -100 “С

1-35

Схема VII отражает в общих чертах использование 1-35 для конверсии пирролидинового каркаса. Пирролидин получают замыканием цикла через внутримолекулярное восстановительное аминирование с образованием как цис-, так и транс-пирролидина. Разделение цис- и транс-пирролидина с последующим восстановлением нитрогруппы до амина дает конечный нужный пирролинанилин, используемый для синтеза аналогов. Алкин 1-35 можно ввести во взаимодействие в реакции типа перекрестного сочетания по Сонагашира с соответствующим коммерчески доступным арилгалогенидом 1-36 с образованием 1-37 с использованием соответствующих условий реакции, известных специалистам в данной области техники. Условия реакции могут включать использование катализаторов, таких как тетракис(трифенилфосфин)палладий(0), с иодидом меди(1) или без него в присутствии органического основания, такого как триэтиламин, или ацетат палладия(П), с органическим основанием, таким как ацетат тетрабутиламмония, в органическом растворителе, таком как ацетонитрил или ДМФА, в инертной атмосфере, такой как азот. Кетон 1-38 можно получить взаимодействием алкина 1-37 с пирролидином при температуре 80°С в растворителе, таком как ДМФА, в течение периода от 3 до 6 ч. Последующая обработка 10% водным раствором уксусной кислоты в течение периода 15-60 мин при комнатной температуре дает кетон 1-38. Защитную группу в карбамате 1-38 можно удалить с использованием соответствующих условий реакции, известных специалистам в данной области техники, и получить соответствующий амин, который затем подвергают внутримолекулярному замыканию цикла с кетоном, и получить имин 1-39. Условия реакции могут включать трифторуксусную кислоту в органическом растворителе, таком как дихлорметан, и хлороводородную кислоту в органическом растворителе, таком как эфир. Восстановления имина 1-39 можно достигнуть обработкой цианоборгидридом натрия в органическом растворителе, таком как метанол, при температуре 0°С в инертной атмосфере, такой как азот, в течение периода 18-24 ч. Это дает промежуточные соединения цис-пирролидин (1-40а) и транс-пирролидин (1-40Ь), которые можно разделить хроматографией на силикагеле. 1-40а является основным диастереомером, образовавшимся в реакции, и он является первым диастереомером, который элюируется из колонки. Защиты атома азота пирролидина 1-40а или 1-40Ь группой Вос достигают обработкой трет-бутилдикарбонатом в присутствии слабого органического основания, такого как триэтиламин. Взаимодействие обычно осуществляют в органическом растворителе, таком как дихлорметан, в инертной атмосфере, такой как азот, и получают продукт реакции структурной формулы 1-41а или 1-41Ь. Гидрирование промежуточного соединения 1-41а или 1-41Ь путем обработки с 10% палладием-на-угле в присутствии хлороводорода при давлении водорода от ~103,4 до ~344,7 кПа (15-50 ф/д²) в растворителе, таком как этилацетат или этанол, в течение периода времени 8-12 ч дает 1-42а или 1-42Ь. В зависимости от выбора условий галогенозаместители X в это время могут или оставаться, или удаляться, в зависимости от предпочтительного конечного промежуточного соединения.

- 13 020135

В некоторых случаях порядок осуществления реакционных схем может изменяться для облегчения взаимодействия или для того, чтобы избежать нежелательных продуктов реакции. Приведенные далее примеры даются для того, чтобы изобретение можно было понять более полно. Приведенные примеры являются только пояснительными и не должны рассматриваться как ограничивающие изобретение каким-либо образом.

Промежуточное соединение 1. Бензил[3-(2-оксобут-3-ен-1-ил)фенил]карбамат (1-1)

ί_1

Стадия А. Этил(3-{[бензилокси)карбонил]амино}фенил)ацетат

К раствору метил(3-аминофенил)ацетата (25 г, 140 ммоль) в 250 мл безводного ЭСМ добавляют ΌΙΕΑ (28,5 мл, 155 ммоль), и полученный раствор охлаждают до 0°С и помещают в атмосферу азота. Затем к такому охлажденному раствору добавляют бензилхлорформиат (21,1 мл, 148 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение ночи, позволяя нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь промывают 1 М НС1, водой и затем солевым раствором. Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме. В дополнительной очистке нет необходимости, и материал (44 г, 99%) используют как он есть на следующей стадии реакции. ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 314 (МН)⁺, 336 (МХа)'.

Стадия В. (3-{[Бензилокси)карбонил]амино}фенил)уксусная кислота

К раствору 44,0 г (140 ммоль) этил(3-{[бензилокси)карбонил]амино}фенил)ацетата (со стадии А) в ТГФ, этаноле и воде (1:1:1, 1500 мл) добавляют твердый ЫОН (16,8 г, 700 ммоль) и полученный раствор греют при 60°С на масляной бане в течение 3 ч. Смесь охлаждают до комнатной температуры в течение ночи и затем постепенно добавляют 40 мл концентрированной НС1, поддерживая температуру ниже 25°С, до тех пор, пока рН раствора не станет примерно 2-3. Экстрагируют смесь этилацетатом (3x750 мл), затем экстракты объединяют, и органическую фазу промывают водой и затем солевым раствором. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме. Указанное в заголовке соединение (24,7 г, 87%) используют на следующей стадии реакции без дополнительной очистки. ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 28 6 (МН)⁺, 308 (МХа)'.

- 14 020135

Стадия С. Бензил(3-{2-[метокси(метил)амино]-2-оксоэтил}фенил)карбамат

К суспензии 24,7 г (87 ммоль) (3-{[бензилокси)карбонил]амино}фенил)уксусной кислоты (со стадии В) в 200 мл дихлорметана добавляют триэтиламин (30,2 мл, 173 ммоль), что приводит к некоторому выделению тепла (+5°С), и суспензия становится раствором. После охлаждения в течение 10 мин к раствору добавляют НОВ1 (13,2 г, 87 ммоль) и гидрохлорид Ν,Ο-диметилгидроксиламина (8,5 г, 87 ммоль) и затем БОС (16,6 г, 87 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи в атмосфере азота. Раствор переносят в делительную воронку и промывают 1 М НС1, что вызывает образование эмульсии. Добавляют метанол для разрушения эмульсии и водную фазу отделяют. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме. Перекристаллизация остатка из 1000 мл 70% гексана в этилацетате (нагревание до температуры образования флегмы и последующее охлаждение до комнатной температуры в течение ночи) дает указанное в заголовке соединение (21 г, 74%) в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 329 (МН)⁺.

Стадия Ό. Бензил[3-(2-оксобут-3-ен-1-ил)фенил]карбамат (1-1)

К охлажденному до 0°С на бане со смесью воды и льда раствору 15 г (45,7 ммоль) бензил(3-{2[метокси(метил)амино]-2-оксоэтил}фенил)карбамата (со стадии С) в 1000 мл безводного ТГФ в атмосфере азота добавляют по каплям через канюлю 1,0 М раствор винилмагнийбромида (100 мл в ТГФ, 100 ммоль) и полученный раствор перемешивают в течение 1 ч при 0°С. Реакцию гасят постепенным добавлением 500 мл 1 М НС1, поддерживая температуру ниже 5°С, и смесь перемешивают в течение 30 мин. Затем смесь экстрагируют этилацетатом, и объединенные органические слои промывают водой, а затем солевым раствором. Затем органические слои сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают флэш-хроматографией на Вю!аде 75М с элюированием смесью 30% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение (11 г, 78%) в виде светло-желтого твердого вещества. ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 310 (МН)⁺, 332 (ΜΝι) + '|| ЯМР (500 МГц, ССС1_;) δ: 7,44-7,36 (м, 7Н), 7,18 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 6,70 (ушир.с, 1Н), 6,44 (дд, 1=10,5, 17,6 Гц, 1Н), 6,32 (дд, 1=1,1, 17,6 Гц, 1Н), 5,85 (дд, 1=1,1, 10,5 Гц, 1Н), 5,22 (с, 2Н), 3,86 (с, 2Н).

Промежуточное соединение 2. ((1В)-1-[(В)-{[трет-Бутил(диметил)силил]окси}(3-хлорфенил)метил]проп-2-ен-1 -ил)карбамат (1-2)

ϊζ2

Стадия А. 1-(3-Хлорфенил)проп-2-ен-1-ол

К охлажденному раствору 3-хлорбензальдегида (22,5 г, 160 моль) в 100 мл безводного ТГФ в инертной атмосфере азота постепенно через шприц добавляют 1,6 М раствор винилмагнийхлорида в ТГФ (100 мл, 160 ммоль), и раствор перемешивают в течение трех часов, оставляя нагреваться до комнатной температуры. Реакцию гасят насыщенным раствором хлорида аммония и органический слой отделяют, смесь экстрагируют этилацетатом (2x200 мл) и органические слои объединяют, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Очистка ЖХСД Ηοτίζοη с колонкой с силикагелем 40М+ с использованием элюирования с градиентом смесями 0-40% этилацетата в гексане дает указанное в заголовке соединение (22,4 г, 44%). т/ζ (Е8) 168, 170 (м, М+2)⁺, 190, 192 (ΜΝα, ΜΝα+2)'.

'|| ЯМР (500 МГц, ССС1_;) δ: 7,38 (с, 1Н), 7,35-7,22 (м, 3Н), 5,90 (ддд, 1=7,3, 10,0, 17,4 Гц, 1Н), 5,38 (д, 1=17,5 Гц, 1Н), 5,18 (д, 1=7,2 Гц, 1Н), 5,15 (д, 1=10,1 Гц, 1Н), 0,96 (с, 9Н), 0,18 (с, 3Н), 0,08 (с, 3Н).

Стадия В. трет-Бутил{[1-(3-хлорфенил)проп-2-ен-1-ил]окси}диметилсилан

К раствору 22,4 г (133 ммоль) 1-(3-хлорфенил)проп-2-ен-1-ола (со стадии А) в 90 мл безводного ДМФА добавляют трет-бутилдиметилсилилхлорид (20,0 г, 133 ммоль) и имидазол (18,1 г, 266 ммоль) и полученный раствор перемешивают в течение ночи в атмосфере азота при комнатной температуре. Смесь промывают водой и экстрагируют этилацетатом. Органический слой отделяют, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают колоночной флэшхроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 0-15% этилацетата в гексане и

- 15 020135 получают указанное в заголовке соединение (16,6 г, 46%). т/ζ (Εδ) 282, 284 (М, М+2)⁺; 151, 153 (МΟΤΒδ, Μ-ΟΤΒδ+2)⁺.

Стадия С. {[трет-Бутил(диметил)силил]окси}(3-хлорфенил)ацетальдегид

Через раствор 4,0 г (14,2 ммоль) трет-бутил{[1-(3-хлорфенил)проп-2-ен-1-ил]окси}диметилсилана (со стадии В) в дихлорметане, охлажденному до -78°С на бане сухой лед/ацетон, барботируют газ озон до тех пор, пока раствор не будет сохранять светло-синий цвет. Затем через раствор барботируют газ азот до тех пор, пока он не станет вновь прозрачным. К раствору добавляют метилсульфид, и полученную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Материал концентрируют в вакууме, остаток очищают ЖХСД Ηοήζοη на колонке с силикагелем 40М+ с элюированием с градиентом смесями 0-50% этилацетата в гексане, и получают продукт реакции (3,57 г, 89%).

Стадия Ό. Ν-[(1Ε)-2-{ [трет-Бутил(диметил)силил]окси}-2-(3-хлорфенил)этилиден]-2-метилпропан2-сульфинамид

К раствору 3,0 г (10,6 ммоль) {[трет-бутил(диметил)силил]окси}(3-хлорфенил)ацетальдегида (со стадии С) и 1,3 г (10,6 ммоль) (В или δ)-2-метил-2-пропансульфинамида в 50 мл безводного дихлорметана добавляют сульфат меди(11) (3,4 г, 21,2 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 16 ч. Реакционную смесь промывают водой и экстрагируют дихлорметаном. Органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают ЖХСД Ηοήζοη на колонке с силикагелем 40М+ с элюированием элюирующей системой с градиентом смесями 0-25% этилацетата в гексане и получают указанное в заголовке соединение (3,26 г, 80%). т/ζ (Εδ) 387, 390 (М, М+2)⁺.

Стадия Е. Ν-{1-[{ [трет-Бутил(диметил)силил]окси}(3-хлорфенил)метил]проп-2-ен-1-ил}-2метилпропан-2-сульфинамид

К раствору 2,4 г (6,20 ммоль) №[(1Е)-2-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}-2-(3хлорфенил)этилиден]-2-метилпропан-2-сульфинамида (со стадии Ό) в 20 мл безводного ТГФ, охлажденному до 0°С, в атмосфере азота добавляют через шприц 1,6 М раствор винилмагнийхлорида в ТГФ (3,90 мл, 6,2 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение 1 ч. Смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают еще в течение часа. Реакцию гасят насыщенным раствором хлорида аммония и смесь экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические слои сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают ЖХСД Ηοήζοη на колонке с силикагелем 40М+ с элюированием элюирующей системой с градиентом смесями 0-35% этилацетата в гексане и получают все четыре диастереомера в виде отдельных изомеров.

По данным ЯМР четыре полученных продукта являются диастереомерами друг друга. Изомеры метят по мере их элюирования из колонки на силикагеле. Изомер, который элюирован первым, называют изомером 1, затем следуют изомеры 2, 3 и последний называют изомером 4.

Изомер 1: т/ζ (Εδ) 416, 418 (м, М+2)⁺, 438, 440 (ΜΝϋ, М№+2)⁺.

¹Н ЯМР (500 МГц, СИС1₃) δ : 7,32 (с, 1Н), 7,30 (ушир.д, 1=7,5, 1Н), 7,26 (ушир.д, 1=6,2 Гц, 2Н), 7,227,18 (м, 1Н), 5,60 (ддд, 1=7,3, 10,3, 17,4 Гц, 1Н), 5,15 (д, 1=10,3 Гц, 1Н), 5,00 (д, 1=17,3 Гц, 1Н), 4,57 (д, 1=7,4 Гц, 1Н), 3,98-3,94 (м, 2Н), 1,64 (ушир.с, 1Н), 1,23 (с, 9Н), 0,91 (с, 9Н), 0,08 (с, 3Η), -0,18 (с, 3Η).

Изомер 2: т/ζ (Εδ) 416, 418 (м, М+2)⁺, 438, 440 (ΜΝϋ, ΜΝα+2)⁺. ¹Η ЯМР (500 МГц, СОСЪ) δ: 7,337,31 (м, 2Н), 7,26 (ушир.д, 1=5,0 Гц, 2Н), 7,20-7,16 (м, 1Н), 5,44 (ддд, 1=7,2, 10,0, 17,4 Гц, 1Н), 5,26 (перекрывающийся д, 1=7,3 Гц, 1Н), 5,25 (перекрывающийся д, 1=17,3 Гц, 1Н), 4,84 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 4,02 (дт, 1=4,4, 7,8 Гц, 1Н), 3,80 (д, 1=4,4 Гц, 1Н), 1,20 (с, 9Н), 0,94 (с, 9Н), 0,14 (с, 3Η), -0,12 (с, 3Η).

- 16 020135

Изомер 3: т/ζ (Е8) 416, 418 (м, М+2)⁺, 438, 440 (МЫа, МЫа+2)⁺.

Ή ЯМР (500 МГц, С1)С1_;) δ : 7,32-7,29 (м, 2Н), 7,26-7,24 (м, 2Н), 7,22-7,20 (м, 1Н), 6,04 (ддд, 1=7,1, 10,4, 17,4 Гц, 1Н), 5,40 (д, 1=10,2 Гц, 1Н), 5,32 (д, 1=17,3 Гц, 1Н), 4,80 (д, 1=4,0 Гц, 1Н), 3,88-3,80 (м, 1Н), 3,55 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 1,09 (с, 9Н), 0,95 (с, 9Н), 0,09 (с, 3Н), -0,10 (с, 3Н).

Изомер 4: т/ζ (Е8) 416, 418 (м, М+2)⁺, 438, 440 (МЫа, МЫа+2)⁺ . Ή ЯМР (500 МГц, СОСЪ) δ : 7,32 (с, 1Н), 7,30 (ушир.д, 1=7,5, 1Н), 7,27-7,25 (м, 2Н), 7,21-7,18 (м, 1Н), 5,92 (ддд, 1=7,1, 10,3, 17,4 Гц, 1Н), 5,23 (д, 1=10,4 Гц, 1Н), 5,18 (д, 1=17,4 Гц, 1Н), 4,75 (д, 1=4,2 Гц, 1Н), 3,88-3,82 (м, 1Н), 3,33 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 1,19 (с, 9Н), 0,94 (с, 9Н), 0,09 (с, 3Н), -0,14 (с, 3Н).

Стадия Р. ((1К)-1-[(К)-{ [трет-Бутил(диметил)силил]окси}(3-хлорфенил)метил]проп-2-ен-1ил)карбамат (1-2)

К изомеру 1 (510 мг, 2,22 ммоль) Ы-{1-[{[трет-бутил(диметил)силил]окси}(3хлорфенил)метил]проп-2-ен-1-ил}-2-метилпропан-2-сульфинамида (со стадии Е) добавляют 5 мл безводного 4 М раствора НС1 в диоксане, и раствор перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют досуха, и добавляют толуол (2x5 мл) для азеотропного удаления избытка НС1. Затем остаток растворяют в безводном дихлорметане, создают инертную атмосферу азота, раствор охлаждают до 0°С на бане со смесью воды со льдом, и затем постепенно через шприц добавляют бензилхлорформиат (0,32 мл, 2,22 ммоль) и затем диизопропилэтиламин (1,19 мл, 6,66 ммоль) и полученный раствор перемешивают в течение 2 ч при 0°С. Раствор концентрируют в вакууме досуха, остаток очищают на препаративных пластинках (4х 1000 мкм) с элюированием смесью 20% этилацетата в гексане и получают указанное в заголовке соединение (703 мг, 71%). т/ζ (Е8) 446, 448 (м, М+2)⁺, 468, 470 (МЫа, МЫа+2)⁺. Ή ЯМР (500 МГц, СОСЪ) δ: 7,32 (с, 1Н), 7,30 (ушир.д, 1=7,5, 1Н), 7,27-7,25 (м, 2Н), 7,21-7,18 (м, 1Н), 5,92 (ддд, 1=7,1, 10,3, 17,4 Гц, 1Н), 5,23 (д, 1=10,4 Гц, 1Н), 5,18 (д, 1=17,4 Гц, 1Н), 4,75 (д, 1=4,2 Гц, 1Н), 3,88-3,82 (м, 1Н), 3,33 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 1,19 (с, 9Н), 0,94 (с, 9Н), 0,09 (с, 3Н), -0,14 (с, 3Н).

Промежуточные соединения различной стереохимии, родственные описанным выше, можно получить из соответствующих исходных веществ с использованием процедуры, описанной выше.

Промежуточное соединение 3. трет-Бутил-(5К)-2-(4-аминобензил)-5-[(К)-{[третбутил(диметил)силил] окси}(фенил)метил] пирролидин-1 -карбоксилат (1-3)

Стадия А. Бензил{4-[(3Е,5К,6К)-5-{ [(бензилокси)карбонил]амино-6-{ [трет-бутил(диметил)силил]окси} -6-(3 -хлорфенил)-2-оксогекс-3 -ен-1 -ил]фенил}карбамат

К раствору бензил[3-(2-оксобут-3-ен-1-ил)фенил]карбамата (1-1) (820 мг, 2,80 ммоль) и ((1К)-1-[К){[трет-бутил(диметил)силил]окси)(3-хлорфенил)метил]проп-2-ен-1-ил}карбамата (1-2) (500 мг, 1,12 ммоль) в 7 мл безводного дихлорметана добавляют катализатор Ζΐιηη I (740 мг, 1,12 ммоль) и полученный зеленый раствор греют при 40°С в течение ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь концентрируют досуха, остаток очищают на препаративных пластинках (4x1000 мкм) с элюированием смесью 40% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение (348 мг, 50%). т/ζ (Е8) 713, 715 (М, М+2)⁺, 735, 737 (МЫа, МЫа+2)⁺.

Стадия В. 4-({(5К)-5-[(К)-{ [трет-Бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]пирролидин-2ил}метил)анилин

- 17 020135

К раствору 328 мг (0,46 ммоль) бензил{4-[(3Е,5В,6В)-5-{[(бензилокси)карбонил]амино-6-{[третбутил(диметил)силил]окси}-6-(3-хлорфенил)-2-оксогекс-3-ен-1-ил]фенил}карбамата (со стадии А) в 25 мл этанола добавляют 10% палладий-на-угле, и суспензию помещают в атмосферу водорода при подаче водорода из баллона. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере водорода в течение 1 ч при комнатной температуре. ТСХ показывает, что реакция прошла полностью. Катализатор отфильтровывают с использованием шприца с фильтром из ПТФЭ, 0,45 мкм, СПтеп и промывают этанолом (4x5 мл). Фильтрат концентрируют в вакууме досуха, остаток очищают на препаративной пластинке (3x1000 мкм) с элюированием смесью 5% метанола в дихлорметане, и получают указанное в заголовке соединение (121 мг, 66%). т/ζ (Е8) 397 (МН)⁺.

Стадия С. трет-Бутил-(5В)-2-(4-аминобензил)-5-[(В)-{ [трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил] пирролидин-1 -карбоксилат (1-3)

К раствору 121 мг (0,315 ммоль) 4-({(5В)-5-[(В)-{[грет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]пирролидин-2-ил}метил)анилина (со стадии В) в 5 мл безводного ТГФ добавляют трет-бутилкарбонат (69 мг, 0,315 ммоль), а затем ΤΕΑ (44 мкл, 0,315 ммоль) и полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота в течение ночи. Реакционную смесь наносят непосредственно на препаративную пластинку (1500 мкм) и элюируют смесью 30% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение (100 мг, 64%). т/ζ (Ε8) 497 (МН)⁺, 397 (М-Вос)⁺.

Ή ЯМР (500 МГц, СОС1_;) δ: 7,40-7,30 (м, 5Н), 6,75-6,68 (м, 2Н), 6,56-6,51 (м, 2Н), 5,52-5,48 (м, 1Н), 5,32-5,28 (м, 1Н), 4,16-4,06 (м, 2Н), 3,88-3,82 (м, 1Н), 3,76-3,70 (м, 1Н), 3,55-3,48 (м, 2Н), 2,74 (ушир.д, 1=11,8 Гц, 1Н), 2,44 (ушир.д, 1=11,8 Гц, 1Н), 2,05-1,94 (м, 1Н), 1,90-1,82 (м, 1Н), 1,60 (с, 9Н), 1,50-1,42 (м, 1Н), 1,32-1,22 (м, 2Н), 1,10-1,02 (м, 1Н), 0,95 (с, 9Н), 0,08 (с, 3Н), -0,15 (с, 3Н).

Разделение промежуточных соединений 4а и 4Ь. трет-Бутил-(28,5В)-2-(4-аминобензил)-5-[(В)-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилат (1-4а) трет-Бутил-(2В, 5Κ) -2-(4-аминобензил) -5 - [(Κ) -{[трет-бутил(диметил)силил] окси}(фенил)метил] пирролидин-1-карбоксилат (1-4Ь)

Стадия А. 1рет-Бутил-(28,5В)-2-(4-аминобензил)-5-[(В)-{ [трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилат (1-4а) и трет-бутил-(2Κ,5Κ)-2-(4-аминобензил)-5-[(Κ)-{[третбутил(диметил)силил] окси}(фенил)метил] пирролидин-1 -карбоксилат (1-4Ь)

Промежуточное соединение 1-3 (трет-бутил-(5В)-2-(4-аминобензил)-5-[(В)-{[третбутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилат (смесь цис и транс, 4:1) растворяют в метаноле и очищают методом 8ЕС (сверхкритическая), Вегдег МиШдгат, с использованием элюента смеси 30% метанола:60% диоксида углерода, и два стереоизомера разделяют. Первый изомер, элюируемый из колонки, называют минорным изомером 1 и второй изомер называют основным изомером 2.

1-4а: т/ζ (Ε8) 497 (МН)⁺, 397 (М-Вос)⁺, '11 ЯМР (500 МГц, СОС1_;) δ: 7,40-7,30 (м, 5Н), 6,75-6,68 (м, 2Н), 6,56-6,51 (м, 2Н), 5,52-5,48 (м, 1Н), 5,32-5,28 (м, 1Н), 4,16-4,06 (м, 2Н), 3,88-3,82 (м, 1Н), 3,76-3,70 (м, 1Н), 3,55-3,48 (м, 2Н), 2,74 (ушир.д, 1=11,8 Гц, 1Н), 2,44 (ушир.д, 1=11,8 Гц, 1Н), 2,05-1,94 (м, 1Н), 1,90-1,82 (м, 1Н), 1,60 (с, 9Н), 1,50-1,42 (м, 1Н), 1,32-1,22 (м, 2Н), 1,10-1,02 (м, 1Н), 0,95 (с, 9Н), 0,92 (д, 1=11,8 Гц, 1Н), 0,12 (ушир.д, 1=14,0 Гц, 3Н), -0,04 (с, 3Н). Элюируется 8,70 мин на 8ЕС, изомер 2.

1-4Ь: т/ζ (Ε8) 497 (МН)⁺, 397 (М-Вос)⁺ Ή ЯМР (500 МГц, СОСЪ) δ: 7,40-7,30 (м, 5Н), 6,76-6,68 (м, 2Н), 6,56-6,51 (м, 2Н), 5,52-5,48 (м, 1Н), 5,32-5,28 (м, 1Н), 4,16-4,06 (м, 2Н), 3,88-3,82 (м, 1Н), 3,76-3,70 (м, 1Н), 3,60-3,46 (м, 2Н), 2,72 (ушир.д, 1=12,0 Гц, 1Н), 2,44 (ушир.д, 1=12,2 Гц, 1Н), 2,05-1,94 (м, 1Н), 1,90-1,82 (м, 1Н), 1,64 (с, 9Н), 1,50-1,42 (м, 1Н), 1,32-1,22 (м, 2Н), 1,10-1,02 (м, 1Н), 0,95 (с, 9Н), 0,14 (ушир.д, 1=13,8 Гц, 3Н), 0,09 (с, 3Н). Элюируется 7,78 мин на 8ЕС, изомер 1.

Синтез промежуточного соединения 4а и промежуточного соединения 4Ь. трет-Бутил-(28,5В)-2-(4-аминобензил)-5-[(В)-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилат (1-4а);

трет-бутил-(2В, 5В)-2-(4-аминобензил) -5 - [(Κ) -{[трет-бутил(диметил)силил] окси}(фенил)метил] пир

- 18 020135 ролидин-1-карбоксилат (1-4Ь)

Стадия А. (48)-3-Гекс-5-иноил-4-фенил-1,3-оксазолидин-2-он

К раствору 69,0 г (615 ммоль) 5-гексиновой кислоты и 214 мл (1540 ммоль) триэтиламина в 1,0 л безводного тетрагидрофурана при -25°С в атмосфере азота в течение 20 мин добавляют 83,0 мл (677 ммоль) триметилацетилхлорида. После добавления образуется белый осадок и полученную суспензию перемешивают в течение 2 ч. Затем последовательно добавляют 28,7 г (677 ммоль) безводного хлорида лития и 100,0 г (615,0 ммоль) (48)-4-фенил-1,3-оксазолидин-2-она и смесь постепенно нагревают до температуры окружающей среды в течение 12 ч. Все летучие вещества удаляют в вакууме, и остаток разбав ляют водой (1 л) и экстрагируют этилацетатом (3х 300 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором (250 мл), сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 5-50% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветного твердого вещества (135 г, 85,4%). Ή ЯМР (500 МГц, СПСР) : δ 7,40-7,37 (м, 2Н), 7,36-7,32 (м, 1Н), 7,31-7,28 (м, 2Н), 5,42 (дд, 1=8,9, 3,7 Гц, 1Н), 4,69 (т, 1=8,9 Гц, 1Н), 4,28 (дд, 1=9,2, 3,7 Гц, 1Н), 3,13-3,02 (м, 2Н), 2,24-2,21 (м, 2Н), 1,94 (т, 1=2,6 Гц, 1Н), 1,84 (квинтет, 1=7,1 Гц, 2Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 258,2 (МН)⁺.

Стадия В. (48)-3-{(2К)-2-[(8)-Гидрокси(фенил)метил]гекс-5-иноил}-4-фенил-1,3-оксазолидин-2-он

К раствору 56,8 г (221 ммоль) (48)-3-гекс-5-иноил-4-фенил-1,3-оксазолидин-2-она с описанной выше стадии А в 265 мл безводного этилацетата при перемешивании при температуре окружающей среды в атмосфере азота добавляют 6,31 г (66,2 ммоль) безводного хлорида магния, 61,5 мл (442 ммоль) триэтиламина, 26,9 мл (265 ммоль) бензальдегида и 42,3 мл (331 ммоль) хлортриметилсилана и полученную смесь перемешивают в течение 72 ч. Неоднородную реакционную смесь фильтруют через 300-мл слой силикагеля с элюированием еще 1 л этилацетата. Фильтрат упаривают в вакууме досуха и остаток суспендируют в 265 мл метанола и 10 мл трифторуксусной кислоты. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в атмосфере азота в течение 5 ч, на протяжении которых реакционная смесь становится однородной. Затем все летучие вещества удаляют в вакууме, остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 5-15% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (65,0 г, 81,2%).

Ή ЯМР (500 МГц, СИСЬ) : δ 7,30-7,28 (м, 8Н), 7,09-7,07 (м, 2Н), 5,42 (дд, 1=8,7, 3,7 Гц, 1Н), 4,764,72 (м, 1Н), 4,72-4,67 (м, 1Н), 4,65 (т, 1=8,7 Гц, 1Н), 4,18 (дд, 1=8,7, 3,7 Гц, 1Н), 3,05 (д, 1=7,8 Гц, 1Н), 2,24 (тд, 1=7,1, 2,5 Гц, 2Н), 2,00-1,93 (м, 2Н), 1,67-1,61 (м, 1Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 346,1 (МН-Н₂О)⁺, 386,0 (ΜΝα)⁺.

Стадия С. (2К)-2-[(8)-Гидрокси(фенил)метил]гекс-5-иновая кислота он о

К раствору 65,0 г (179 ммоль) (48)-3-{(2К)-2-[(8)-гидрокси(фенил)метил]гекс-5-иноил}-4-фенил1,3-оксазолидин-2-она с описанной выше стадии В в 1050 мл смеси безводного тетрагидрофурана с водой, 20 : 1, при перемешивании при 0°С в атмосфере азота добавляют 77,0 мл (894 ммоль) 35% водного раствора пероксида водорода со скоростью, достаточно медленной для того, чтобы поддерживать внутреннюю температуру ниже 3°С. Затем добавляют 395 мл (395 ммоль) 1,0 М водного раствора гидроксида лития со скоростью, достаточно медленной для того, чтобы поддерживать внутреннюю температуру реакционной смеси ниже 5°С, и полученную смесь перемешивают в течение 3 ч при 0°С. Реакцию гасят 755 мл (984 ммоль) 1,3 М водного раствора сульфита натрия со скоростью, достаточно медленной для того, чтобы поддерживать внутреннюю температуру смеси ниже 5°С. Все летучие вещества удаляют в

- 19 020135 вакууме и оставшуюся водную фазу экстрагируют этилацетатом (3x200 мл). Затем водную фазу охлаждают до 0°С и подкисляют 6 М соляной кислотой до тех пор, пока не достигнут рН 3. Затем водную фазу экстрагируют этилацетатом (3x300 мл) и объединенные органические слои промывают солевым раствором (100 мл), сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 5-10% этилацетата и 3% уксусной кислоты в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветной смолы (32,0 г, 82,0%).

'|| ЯМР (500 МГц, СОС13): δ 7,39-7,28 (м, 5Н), 4,85 (д, 1=8,2, 1Н), 3,03-2,97 (м, 1Н), 2,29-2,15 (м, 2Н), 1,97 (т, 1=2,5 Гц, 1Н), 1,93-1,82 (м, 1Н), 1,62-1,55 (м, 1Н). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 201,0 (МН-Н₂О)⁺.

Стадия Ό. (2К)-2-[(8)-{[трет-Бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]гекс-5-иновая кислота

К раствору 32,0 г (147 ммоль) (2К)-2-[(8)-гидрокси(фенил)метил]гекс-5-иновой кислоты с описанной выше стадии С в 500 мл безводного ацетонитрила при перемешивании при температуре окружающей среды в атмосфере азота добавляют 77,0 мл (513 ммоль) 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена и затем 66,3 г (440 ммоль) трет-бутилдиметилсилилхлорида в три приема в течение 10 мин. Реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч и затем упаривают в вакууме для удаления всех летучих веществ. Остаток разбавляют 300 мл дихлорметана и 100 мл воды. К смеси добавляют 1,0 М водного раствора соляную кислоту до тех пор, пока не достигнут рН 3. Фазы разделяют, и водную фазу экстрагируют дихлорметаном (2x100 мл). Объединенные органические слои промывают водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл) и затем сушат над сульфатом магния. После фильтрации и упаривания в вакууме остаток растворяют в 350 мл метанола и добавляют 350 мл (280 ммоль) 0,8 М водного раствора карбоната калия. Полученную смесь перемешивают в течение 1,5 ч и затем упаривают в вакууме для удаления всех летучих веществ. Остаток разбавляют 300 мл дихлорметана и водную фазу подкисляют 5,0 М водного раствора соляной кислотой до тех пор, пока не достигнут рН 3. Фазы разделяют и водную фазу экстрагируют дихлорметаном (2x100 мл). Объединенные органические слои промывают водой (50 мл) и солевым раствором (50 мл), затем сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 3-15% этилацетата в гексане и получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветного твердого вещества (42,3 г, 86,6%).

'|| ЯМР (500 МГц, СОС1₃): δ 7,36-7,27 (м, 5Н), 4,78 (д, 1=8,1, 1Н), 2,90-2,86 (м, 1Н), 2,19-2,11 (м, 1Н), 2,10-2,03 (м, 1Н), 1,90 (т, 1=2,6 Гц, 1Н), 1,75-1,67 (м, 1Н), 1,41-1,34 (м, 1Н), 0,83 (с, 9Н), 0,02 (с, 3Н), 0,27 (с, 3Н). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 333,2 (МН)⁺.

Стадия Е. 4-Метоксибензил-{(1Я)-1-[(К)-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]пент-4ин-1 -ил}карбамат

К раствору 40,0 г (120 ммоль) (2К)-2-[(8)-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]гекс-5иновой кислоты с описанной выше стадии Ό и 33,5 мл (241 ммоль) триэтиламина в 400 мл безводного толуола при температуре окружающей среды в атмосфере азота добавляют 37,5 мл (132 ммоль) дифенилфосфорилазида. Смесь перемешивают в течение 5 ч и затем добавляют 37,5 мл (301 ммоль) 4метоксибензилового спирта. Полученную смесь греют при 105°С в течение 16 ч, охлаждают до температуры окружающей среды и затем разбавляют 250 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Фазы разделяют, и водную фазу экстрагируют этилацетатом (2x150 мл). Объединенные органические слои промывают водой (100 мл) и солевым раствором (100 мл), затем сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 3-10% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла (50,9 г, 90,5%).

'|| ЯМР (500 МГц, СОС1₃): 7,28-7,21 (м, 7Н), 6,87 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 4,92 (с, 2Н), 4,77-4,59 (м, 2Н), 3,89-3,84 (м, 1Н), 3,81 (с, 3Н), 2,30-2,22 (м, 2Н), 1,95 (м, 1Н), 1,91-1,85 (м, 1Н), 1,57-1,50 (м, 1Н), 0,89 (с, 9Н), 0,06 (с, 3Н), -0,15 (с, 3Н). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 468,1 (МН)⁺, 490,0 (МХа)⁺.

Стадия Р. 4-Метоксибензил-[(1Я)-1-[(К)-{ [трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]-5-(4нитрофенил)пент-4-ин-1-ил] карбамат

- 20 020135

К раствору ацетилена (со стадии Е, 40 г, 80 ммоль) и 4-иоднитробензола (21,8 г, 88 ммоль) в безводном ДМФА (500 мл) добавляют триэтиламин (111 мл, 797 ммоль). Добавляют Рб(бррГ)С1₂ (1,95 г, 2,39 ммоль) и иодид меди(1) (910 мг, 4,78 ммоль) и смесь обезгаживают азотом (барботирование 15 мин), и полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч. Смесь выливают в воду (1200 мл) и экстрагируют Е1ОЛс (3x300 мл). Затем объединенные органические слои промывают водой (2x500 мл) и насыщенным раствором №1С1 (200 мл), сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Остаток очищают ЖХСД (Ηοήζοη Вю1аде 2х Е1а8Ь 651) с элюированием с градиентом смесями 0-30% этилацетата в гексане, и получают 41 г (84%) темно-красного масла.

'|| ЯМР (500 МГц, СИС1₃) : 8,11-8,04 (м, 2Н), 7,94-8,01 (м, 1Н), 7,38-7,21 (м, 8Н), 6,87 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 4,98 (с, 2Н), 4,77-4,59 (м, 2Н), 4,00-3,95 (м, 3Η), 3,81 (с, 3Η), 2,56 (т, 1=7,1 Гц, Н = 2Н), 2,00-1,95 (м, 1Н), 1,66-1,61 (м, 1Н), 0,93 (с, 9Н), 0,10 (с, 3Η), -0,10 (с, 3Η). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 589,3 (МН)⁺, 611,2 (МЫа)⁺.

Стадия С. 4-Метоксибензил-[(1В)-1-[(В)-{ [трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]-5-(4нитрофенил)-4-оксопентил]карбамат

К раствору нитрофенилацетилена (со стадии Е, 41 г, 65,5 ммоль) в ДМФА (40 мл) добавляют пирролидин (14 мл, 196,5 ммоль) и полученную смесь греют при 80°С в течение 3 ч. Смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют 10% раствор уксусной кислоты в воде (110 мл) и полученный раствор перемешивают при комнатной температуре еще в течение 3 ч. Смесь выливают в воду (300 мл) и экстрагируют Е1ОЛс (3x250 мл); объединенные Е1ОЛс слои промывают водой (2x250 мл) и насыщенным раствором №1С1 (100 мл), сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают Ηοήζοη Е1а§Ь 75 с элюированием с градиентом с повышением от 100% гексана до смеси 50% Е1ОЛс в гексане и получают 34 г (81%) темно-оранжевого масла.

'|| ЯМР (500 МГц, СИС1₃): 8,17-8,14 (м, 2Н), 7,32-7,23 (м, 9Н), 6,87 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 4,96 (д, 1=12,2 Гц, 1Н), 4,90 (д, 1=12,1 Гц, 1Н), 4,72 (д, 1=3 Гц, 1Н), 4,16-4,13 (м, 1Н), 3,81 (с, 3Η), 3,71-3,77 (м, 2Н), 2,652,52 (м, 2Н), 1,97-1,92 (м, 1Н), 1,72-1,60 (м, 1Н), 0,93 (с, 9Н), 0,05 (с, 3Η), -0,13 (с, 3Η).

Стадия Н. (2В,58)-2-[(В)-{ [трет-Бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]-5-(4-нитробензил)пирролидин и (2В,5В)-2-[(В)-{ [трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]-5-(4-нитробензил)пирролидин

К раствору кетоамина с защитной группой МО2 (со стадии С, 34 г, 56 ммоль) в ЭСМ (350 мл) добавляют ТФК (256 мл) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Раствор упаривают в вакууме, и остаток обрабатывают ЭСМ и насыщенным раствором МаИСО₃. Органический слой сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают. Остаток растворяют в МеОН (750 мл) и охлаждают до 0°С на бане со смесью воды со льдом. Затем добавляют цианоборгидрид натрия (21,2 г, 337 ммоль), и полученную смесь перемешивают в течение ночи, позволяя нагреваться до комнатной температуры. Реакцию гасят, добавляя воду, и органические летучие вещества удаляют в вакууме. Затем водный слой экстрагируют Е1ОЛс (х 2), и объединенные Е1ОЛс слои промывают насыщенным раствором №1С1. сушат над Мд8О₄, фильтруют и упаривают в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: градиент с повышением от 100% гексана до смеси 35% Е1ОЛс в гексане), и получают 16,4 г (63,4%) первого изомера (2В,58)-2-[(В)-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]-5-(4-нитробензил)пирролидина и 3,1 г (12%) второго изомера (2В,5В)-2-[(В){[трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]-5-(4-нитробензил)пирролидина.

Изомер 1 - ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 427,3 (МН)⁺ Изомер 2 - ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 427,3 (МН)⁺

- 21 020135

Стадия I. трет-Бутил-(2К,58)-2-[(К)-{ [трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]-5-(4нитробензил)пирролидин-1 -карбоксилат

К раствору (2К,58)-2-[(К)-{ [трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]-5-(4-нитробензил)пирролидина (12 г, 42,5 ммоль) в безводном ТГФ добавляют Вос-ангидрид (9,3 г, 42,5 ммоль), а затем ТЕА (17,76 мл, 127,4 ммоль) и полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 2 ч. Смесь промывают водой (100 мл) и экстрагируют этилацетатом (2x200 мл). Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают ЖХСД Нопхоп Вюбаде (колонка с силикагелем 651) с элюированием с градиентом смесями 2075% этилацетата в гексане, и получают нужный продукт. ЖХ-МС: т/ζ (Е§) 527,3 (МН)⁺, 549,2 (ΜΝα)'.

Стадия б. трет-Бутил-(2В,5В)-2-[(В)-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]-5-(4-нитробензил)пирролидин-1 -карбоксилат

Указанное в заголовке соединение получают таким же способом, как на стадии I, но заменяя цисизомер пирролидина на транс-изомер (2В,5В)-2-[(В)-{[трет-бутил (диметил)силил]окси}(фенил)метил]-5(4-нитробензил)пирролидина. ЖХ-МС: т/ζ (Е§) 527,3 (МН)⁺, 549,2 (ΜΝα)'.

Стадия К. трет-Бутил-(2§,5В)-2-(4-аминобензил)-5-[(В)-{ [трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил] пирролидин-1 -карбоксилат (1-4а)

В 500-мл качалочную колбу Парра загружают 10% Рб/С (4,75 г) и к нему добавляют 100 мл метанола, чтобы он закрыл катализатор. Затем к суспензии добавляют раствор промежуточного нитросоединения со стадии I (8,5 г, 18,5 ммоль) в метаноле (80 мл) и затем 15,4 мл 1,0 М раствора хлороводорода в метаноле. В реакционном сосуде создают давление водорода ~344,7 кПа (50 ф/д²) и смесь перемешивают в течение ночи. Берут аликвоту и анализируют ЖХ-МС, которая показывает, что реакция завершена.

Катализатор отфильтровывают с использованием целита, который промывают метанолом (2x100 мл). Фильтрат концентрируют досуха, и продукт реакции очищают ЖХСД Ηοηζοη (колонка с силикагелем 651) с элюированием с градиентом, поднимающимся от 0% до 30% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение (6,2 г, 72%). т/ζ (Е§) 497 (МН)⁺, 397 (М-Вос)⁺.

Ή ЯМР (500 МГц, С1)С1_;) δ: 7,38-7,29 (м, 5Н), 6,76-6,68 (м, 2Н), 6,55-6,50 (м, 2Н), 5,52-5,49 (м, 1Н), 5,30-5,27 (м, 1Н), 4,15-4,05 (м, 2Н), 3,86-3,81 (м, 1Н), 3,76-3,71 (м, 1Н), 3,55-3,47 (м, 2Н), 2,74 (ушир.д, 6=11,7 Гц, 1Н), 2,44 (ушир.д, 6=11,7 Гц, 1Н), 2,05-1,93 (м, 1Н), 1,90-1,83 (м, 1Н), 1,60 (с, 9Н), 1,50-1,42 (м, 1Н), 1,31-1,21 (м, 2Н), 1,10-1,02 (м, 1Н), 0,95 (с, 9Н), 0,92 (д, 6=11,8 Гц, 1Н), 0,13 (ушир.д, 6=14,0 Гц, 3Н), -0,05 (с, 3Н).

Стадия Ь. трет-Бутил-(2В,5В)-2-(4-аминобензил)-5-[(В)-{ [трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил] пирролидин-1 -карбоксилат (1-4Ь)

Указанное в заголовке соединение получают таким же способом, как на стадии К, но заменяя цисизомер пирролидина на транс-изомер трет-бутил-(2В,5В)-2-[(В)-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]-5-(4-нитробензил)пирролидин-1-карбоксилата. т/ζ (Е§) 497 (МН)⁺, 397 (МВос)^'.

- 22 020135 ¹Н ЯМР (500 МГц, С1)С1_;) δ: 7,41-7,30 (м, 5Н), 6,73-6,67 (м, 2Н), 6,56-6,50 (м, 2Н), 5,52-5,48 (м, 1Н), 5,33-5,28 (м, 1Н), 4,15-4,06 (м, 2Н), 3,86-3,81 (м, 1Н), 3,76-3,70 (м, 1Н), 3,59-3,46 (м, 2Н), 2,72 (ушир.д, 1=12,0 Гц, 1Н), 2,44 (ушир.д, 1=12,0 Гц, 1Н), 2,05-1,93 (м, 1Н), 1,90-1,82 (м, 1Н), 1,64 (с, 9Н), 1,49-1,42 (м, 1Н), 1,32-1,20 (м, 2Н), 1,10-1,02 (м, 1Н), 0,95 (с, 9Н), 0,14 (ушир.д, 1=13,7 Гц, 3Н), 0,10 (с, 3Н).

Указанные далее промежуточные соединения получают из соответствующих исходных веществ с использованием процедур, описанных выше для промежуточного соединения 1-4а.

Таблица 1.

Промежуточное соединение	Аг	Вычисл. масса	М8 (е/ζ) (МН)⁺
1-4с	X	514.30	515.30
ί-4ά		514.30	515.30
1-4е	’х г	532.30	533.30
Ϊ-4Γ		532.30	533.30

Указанные далее промежуточные соединения получают из соответствующих исходных веществ с использованием процедур, описанных выше для промежуточного соединения 1-4Ь.

Таблица 2.

νη₂

Промежуточное соединение	Аг	Вычисл. масса	М5 (е/ζ) (МН)⁺
ΐ-4§	X	514.30	515.30
ί-411		514.30	515.30

Промежуточное соединение 5. трет-Бутил-(5К)-2-(4-аминобензил)-5-[(К)-{[трет-бутил(диметил)силил] окси}(3 -хлорфенил)метил] пирролидин-1 -карбоксилат (1-5)

Стадия А. 4-({(5К)-5-[(К)-{ [трет-Бутил(диметил)силил]окси}(3-хлорфенил)метил]пирролидин-2ил}метил)анилин

К раствору 100 мг (0,15 ммоль) бензил{4-[(3Е,5К,6К)-5-{[(бензилокси)карбонил]амино-6-{[третбутил(диметил)силил]окси}-6-(3-хлорфенил)-2-оксогекс-3-ен-1-ил]фенил}карбамата (со стадии А, 1-3) в 8 мл этилацетата добавляют 10% палладий-на-угле и над суспензией создают атмосферу водорода водородом из баллона. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере водорода в течение 8 ч при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывают с использованием шприца с ПТФЭ фильтром СПшсп 0,45

- 23 020135 мкм и промывают его этилацетатом (4x2 мл). Фильтрат концентрируют в вакууме досуха, остаток очищают на препаративной пластинке (1000 мкм) с элюированием смесью 5% метанола в дихлорметане, и получают указанное в заголовке соединение (33 мг, 51%). т/ζ (Е8) 430, 432 (М, М+2)⁺.

Стадия В. трет-Бутил-(5К)-2-(4-аминобензил)-5-[(К)-{ [трет-бутил(диметил)силил]окси}(3хлорфенил)метил]пирролидинкарбоксилат (1-5)

К раствору 33 мг (0,07 ммоль) 4-({(5К)-5-[(К)-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}(3хлорфенил)метил]пирролидин-2-ил}метил)анилина (со стадии А) в 1 мл безводного ТГФ добавляют трет-бутилкарбонат (15,3 мг, 0,07 ммоль), а затем ТЕА (13 мкл, 0,07 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота в течение ночи. Реакционную смесь помещают непосредственно на препаративную пластинку (500 мкм) и элюируют смесью 30% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение (25 мг, 78%). т/ζ (Е8) 530, 532 (М, М+2)⁺, 430, 432 (МВос, М-Вос+2)⁺.

Промежуточное соединение 6. 4-{4-[4-(Трифторметил)фенил]-1,3-тиазол-2-ил}бензолсульфонилхлорид (1-6)

Промежуточное соединение 6 можно получить согласно процедурам, описанным в литературе, например, в Летой е! а1., Тей-Лебго!!. 2003, 59, 1317-1325.

Промежуточное соединение 7. 2-Метил-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-карбоновая кислота (ί-7)

Стадия А. Этил-2-метил-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-карбоксилат

К раствору этил-2-оксоциклопентан-2-карбоксилата (56 г, 359 ммоль) в хлороформе (500 мл), охлажденному до 0°С, добавляют бром (18,5 мл, 359 ммоль) в течение ~20 мин. По завершении добавления смеси позволяют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Газ азот барботируют через смесь в течение 90 мин для удаления большей части НВг. Смесь промывают водой (500 мл), насыщенным раствором Ν;·ιΗίΌ₃ (200 мл), сушат над Мд§О₄, фильтруют и упаривают. Остаток растворяют в Е1ОН (500 мл), добавляют тиоацетамид (26,9 г, 359 ммоль), смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч и затем кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Смесь охлаждают и упаривают, остаток обрабатывают ЭСМ и насыщенным раствором NаΗСО₃, органический слой промывают насыщенным раствором №С1, сушат над Мд§О₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают ЖХСД (Вю1аде Ηοπζοη: 2х РБА8Н 651), элюент: 100% гексана (450 мл), градиент с повышением от 100% гексана до смеси 25% этилацетата в гексане (1400 мл), затем смесь 25% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение (32 г, 42%) в виде темного масла.

¹Н ЯМР (500 МГц, СОС1_;) δ: 4,22 (кв., 1=7,0 Гц, 2Н), 3,96 (м, 1Н), 3,04 (м, 1Н), 2,88 (м, 1Н), 2,76 (м, 2Н), 2,70 (с, 3Η), 1,30 (т, 1=7,0 Гц, 3Η).

Стадия В. 2-Метил-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-карбоновая кислота (1-7)

К раствору 31,5 г (149 ммоль) этил-2-метил-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4карбоксилата (со стадии А) в ТГФ (450 мл) и метаноле (100 мл) добавляют раствор гидроксида лития (149 мл 1М раствора, 149 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Органические летучие вещества удаляют выпариванием, водный остаток экстрагируют ЕьО (2x250 мл) и подкисляют до рН 3, добавляя 1М НС1 (~170 мл), и насыщают твердым №С1. Смесь экстрагируют ЭСМ (3x250 мл), объединенные ЭСМ слои сушат над Мд§О₄, фильтруют и упаривают. Остаток растирают в ацетонитриле, твердое вещество отфильтровывают и сушат, и получают указанное в заголовке соединение (7,1 г, 26%) в виде не совсем белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (500 МГц, СЭСЕ) δ: 11,75 (ушир.с, 1Н), 4,02 (м, 1Н), 3,00 (м, 1Н), 2,90-2,66 (м, 6Н).

- 24 020135

Промежуточное соединение 8. 2-[(трет-Бутоксикарбонил)амино]-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-карбоновая кислота (1-8)

Стадия А. Этил-2-амино-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-карбоксилат

Указанное в заголовке соединение получают таким же способом, как промежуточное соединение (1-7), заменяя на стадии А тиоацетамид на тиомочевину. 'Н ЯМР (500 МГц, СЭС1₃) δ: 5,30 (ушир.с, 2Н), 4,21 (кв., 1=7,0, 2Н), 3,81 (м, 1Н), 2,91 (м, 1Н), 2,78 (м, 1Н), 2,66 (м, 2Н), 1,30 (т, 1=7,0, 3Н).

Стадия В. Этил-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4карбоксилат

К раствору 230 мг (1,08 ммоль) этил-2-амино-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4карбоксилата (со стадии А) в дихлорметане (5 мл) добавляют ди-трет-бутилдикарбонат (236 мг, 1,08 ммоль), триэтиламин (0,15 мл, 1,08 ммоль) и ΌΜΛΡ (13 мг, 0,11 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь промывают 1н НС1 (10 мл), насыщенным раствором №С1 (5 мл), сушат над МдБО₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают ЖХСД (Вю!аде Нопхоп: ЕЬЛБН 25+Б), элюент: 100% гексана (100 мл), градиент смеси 0-15% ЕЮЛс в гексане (900 мл), затем смесь 15% ЕЮЛс в гексане (500 мл), и получают указанное в заголовке соединение (160 мг, 47%) в виде белой пены.

^!Н ЯМР (500 МГц, СОСГ) δ: 9,23 (ушир.с, 1Н), 4,17 (кв., 1=7,1 Гц, 2Н), 3,95 (т, 1=6,6 Гц, 1Н), 3,04 (м, 1Н), 2,86 (м, 1Н), 2,76 (м, 2Н), 1,55 (с, 9Н), 1,23 (т, 1=7,1 Гц, 3Н).

Стадия С. 2-[(трет-Бутоксикарбонил)амино]-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4карбоновая кислота (1-8)

Указанное в заголовке соединение получают из этил-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-5,6-дигидро4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-карбоксилата (со стадии В) с использованием процедуры, аналогичной процедуре для стадии В при получении промежуточного соединения (1-7).

^!Н ЯМР (500 МГц, СОСГ) δ: 3,96 (м, 1Н), 3,06 (м, 1Н), 2,88 (м, 2Н), 2,71 (м, 1Н), 1,55 (с, 9Н).

Промежуточное соединение карбоновая кислота (1-9)

9. 2-(4-Фторфенил)-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-

Указанное в заголовке соединение получают с использованием процедур, аналогичных процедурам получения промежуточного соединения (1-7), заменяя на стадии А тиоацетамид на 4-фтортиобензамид.

^!Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-сГ) δ: 7,90 (м, 2Н), 7,29 (т, 1=8,7, 2Н), 3,81 (м, 1Н), 2,99 (м, 1Н), 2,86 (м, 1Н), 2,70-2,58 (м, 2Н).

Промежуточное соединение 10. 2-Метил-4,5,6,7-тетрагидро-1,3-бензотиазол-4-карбоновая кислота (1-10)

(Ι-1Ο)

Стадия А. Этил-2-метил-4,5,6,7-тетрагидро-1,3-бензотиазол-4-карбоксилат

К раствору этил-2-оксоциклогексанкарбоксилата (15 г, 88 ммоль) в безводном диэтиловом эфире (40 мл), охлажденному до 0°С, добавляют по каплям бром (4,5 мл, 88 ммоль) в течение 15 мин. По завершении добавления смеси позволяют нагреваться до комнатной температуры 90 мин. Смесь разбавляют ЕЮЛс (100 мл) и промывают насыщенным раствором ЫаНСО₃, насыщенным раствором ЫаС1, сушат над МдБО₄, фильтруют и упаривают. Остаток растворяют в этаноле (100 мл) и добавляют тиоацетамид (6,6 г, 88 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч и затем кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Смесь упаривают и остаток обрабатывают насыщенным раство

- 25 020135 ром NаНСΟ₃ и ЭСМ. Органический слой сушат над Мд§О₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают ЖХСД (Вю1аде Ηοηζοη: ЕЬА8Н 651), элюент: 100% гексана (500 мл), градиент смеси 0-25% ЕЮАс в гексане (1200 мл), затем смесь 25% ЕЮАс в гексане (1200 мл) и получают указанное в заголовке соединение (6,14 г, 31%) в виде бледно-оранжевого масла.

'Н ЯМР (500 МГц, СОС1_;) δ: 4,22 (кв., 1=7,1, 2Н), 3,84 (т, 1=5,5, 1Н), 2,80 (м, 1Н), 2,73 (м, 1Н), 2,65 (с, 3Н), 2,18 (м, 1Н), 2,11-1,95 (м, 2Н), 1,85 (м, 1Н), 1,29 (т, 1=7,1, 3Н).

Стадия В. 2-Метил-4,5,6,7-тетрагидро-1,3-бензотиазол-4-карбоновая кислота (1-10)

Указанное в заголовке соединение получают из этил-2-метил-4,5,6,7-тетрагидро-1,3-бензотиазол-4карбоксилата (со стадии А) согласно процедуре, описанной для стадии В при получении промежуточного соединения (1-7).

'|| ЯМР (500 МГц, СОС1_;) δ: 9,26 (ушир.с, 1Н), 3,81 (кв., 1=7,3 и 5,9, 1Н), 2,75 (м, 2Н), 2,68 (с, 3Н), 2,24 (м, 1Н), 2,18-2,01 (м, 2Н), 1,82 (м, 1Н).

Промежуточное соединение 11. 2-[(трет-Бутоксикарбонил)амино]-4,5,6,7-тетрагидро-1,3бензотиазол-4-карбоновая кислота (1-11) ^ног° о уд

ОХ™ (ί-11)

Стадия А. Этил-2-амино-4,5,6,7-тетрагидро-1,3-бензотиазол-4-карбоксилат

Указанное в заголовке соединение получают согласно процедурам, описанным для стадии А при получении промежуточного соединения (1-10), заменяя тиоацетамид на тиомочевину.

'|| ЯМР (500 МГц, ДМСО-б₆) δ: 9,28 (ушир.с, 2Н), 4,11 (кв., 1=7,3, 2Н), 3,71 (т, 1=5,0, 1Н), 2,57-2,39 (м, 2Н), 1,90 (м, 2Н), 1,78 (м, 1Н), 1,59 (м, 1Н), 1,17 (т, 1=7,3, 3Н).

Стадия В. 2-[(трет-Бутоксикарбонил)амино]-4,5,6,7-тетрагидро-1,3-бензотиазол-4-карбоновая кислота (ί-11)

Указанное в заголовке соединение получают из этил-2-амино-4,5,6,7-тетрагидро-1,3-бензотиазол-4карбоксилата (со стадии А) согласно процедурам, описанным для стадий В и С при получении промежуточного соединения (1-8).

'Н ЯМР (500 МГц, СОС1_;) δ: 3,70 (т, 1=5,2, 1Н), 2,74 (м, 1Н), 2,64 (м, 1Н), 2,25 (м, 1Н), 2,10-1,94 (м, 2Н), 1,87 (м, 1Н), 1,55 (с, 9Н).

Промежуточное соединение 12. Индан-1-карбоновая кислота (1-12)

Указанное в заголовке соединение получают согласно процедуре, описанной в литературе, в 1оита1 оГ Огдашс СКепиМп (2000), 65(4), 1132-1138.

Промежуточное соединение 13а и промежуточное соединение 13Ь. трет-Бутил-(28,5К)-2-(4-аминобензил)-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилат (1-13а); трет-бутил-(2К,5К)-2-(4-аминобензил)-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилат (1-13Ь)

Стадия А. трет-Бутил-(4К,5К)-2,2-диметил-4-[(1Е)-3 -оксопроп-1-ен-1 -ил] -5-фенил- 1,3-оксазолидин3-карбоксилат

К раствору трет-бутил-(48,5К)-4-формил-2,2-диметил-5-фенил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилата (20,9 г, 89,1 ммоль) в СН₂С1₂ (150 мл) добавляют (трифенилфосфоранилиден)ацетальдегид (27,1 г, 89,1 ммоль), и полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 40 ч. После удаления 1/3 растворителя добавляют достаточно гексана и полученное твердое вещество отфильтровывают. Флэш-хроматография на системе Вю1аде ^ηζοη® (силикагель, градиент смеси 0-20% этилацетата в гексане, затем смесь 20% этилацетата в гексане) дает 16,3 г (72%) названного в заголовке соединения в

- 26 020135 виде желтого масла. ЖХ/МС 354,3 (М+23).

Стадия В. трет-Бутил-(4К,5К)-2,2-диметил-4-(3-оксопропил)-5-фенил-1,3-оксазолидин-3-карбоксилат

К раствору трет-бутил-(4К,5К)-2,2-диметил-4-[(1Е)-3-оксопроп-1-ен-1 -ил] -5-фенил-1,3оксазолидин-3-карбоксилата (19,6 г, 59,1 ммоль) (со стадии А) в ацетоне (150 мл) добавляют 1,9 г 10% Рб/С и полученную суспензию перемешивают в атмосфере водорода из баллона при температуре окружающей среды в течение 24 ч. Твердое вещество отфильтровывают на целите и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток очищают флэш-хроматографией на системе Вю1аде Нопхоп® (силикагель, градиент смеси 0-20% этилацетата в гексане, затем смесь 20% этилацетата в гексане), и получают 11,5 г (58%) названного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. ЖХ/МС 356,3 (М+23).

Стадия С. трет-Бутил-(4К,5К)-2,2-диметил-4-[(3Е)-4-(4-нитрофенил)бут-3-ен-1-ил]-5-фенил-1,3оксазолидин-3-карбоксилат и трет-бутил-(4Κ,5Κ)-2,2-диметил-4-[(3Ζ)-4-(4-нитрофенил)бут-3-ен-1-ил]-5-

К раствору трет-бутил-(4Е,5К)-2,2-диметил-4-(3-оксопропил)-5-фенил-1,3-оксазолидин-3карбоксилата со стадии В (10,0 г, 30,0 ммоль) в СН₂С1₂ (200 мл) добавляют бромид (4нитробензил)трифенилфосфония (21,5 г, 45,0 ммоль), а затем ЕьЦ (8,36 мл, 60,0 ммоль). Красную реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 48 ч. В реакционную смесь вливают гексан (200 мл) и отфильтровывают твердое вещество. Флэш-хроматография на системе Вю1аде Нопхоп®® (силикагель, градиент смеси 0-10% этилацетата в гексане, затем смесь 10% этилацетата в гексане) дает 10,7 г (79%) названных в заголовке соединений (смесь цис- и трансизомеров) в виде бледно-желтой пены. ЖХ/МС 475,4 (М+23).

Стадия Ό. карбоксилат и карбоксилат трет-Бутил-(2К,58)-2-[(К)-гидрокси(фенил)метил]-5-(4-нитробензил)пирролидин-1трет-бутил-(2Е, 5Е) -2-[(Е) -гидрокси(фенил)метил] -5 -(4-нитробензил)пирролидин-1 -

К раствору полученной выше на стадии С смеси цис/транс (7,86 г, 17,4 ммоль) в этилацетате (100 мл) добавляют 50 мл 2н НС1 и полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 2 ч и затем при нагревании при 45°С в течение 3 ч. Летучие вещества удаляют при пониженном давлении. Полученное белое твердое вещество растворяют в Ν,Ν-диметилформамиде (100 мл) и добавляют 15,1 мл (86,7 ммоль) изо-Рт₂№£ Реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 7 ч. Затем добавляют ди-трет-бутилдикарбонат (4,55 г, 20,8 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение ночи. Добавляют воду (200 мл), и смесь экстрагируют этилацетатом (200 млх3). Объединенные органические слои сушат над Να₂8Ο.₁, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают флэш-хроматографией на системе Вю1аде Нопхоп®® (силикагель, градиент смеси 0-30% этилацетата в гексане), и получают названные в заголовке соединения - 1,61 г (22%) трет-бутил-(2Е,58)-2-[(К)-гидрокси(фенил)метил]-5-(4-нитробензил)пирролидин-1-карбоксилата (цис) и 3,9 г (54%) трет-бутил-(2Е,5К)-2-[(К)-гидрокси(фенил)метил]-5(4-нитробензил)пирролидин-1-карбоксилата (транс). ЖХ/МС 435,4 (М+23).

Стадия Е. трет-Бутил-(28,5К)-2-(4-аминобензил)-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1карбоксилат (1-13а)

К раствору полученного выше на стадии Ό (цис)трет-бутил-(2Е,58)-2-[(К)-гидрокси(фенил)метил]5-(4-нитробензил)пирролидин-1-карбоксилата (1,51 г, 3,66 ммоль) в этаноле (20 мл) добавляют 0,15 г 10% Рб/С и полученную суспензию перемешивают в атмосфере водорода из баллона при температуре окружающей среды в течение 5 ч. Фильтрация через целит и удаление растворителя дают 1,40 г (100%) названного в заголовке соединения в виде белой пены, которое используют без дополнительной очистки. ЖХ/МС 405,3 (М+23).

- 27 020135

Стадия Р. трет-Бутил-(2К,5К)-2-(4-аминобензил)-5-[(К.)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1карбоксилат (1-13Ь)

К раствору полученного выше на стадии Ό (транс)трет-бутил-(2К,5К)-2-[(К)гидрокси(фенил)метил]-5-(4-нитробензил)пирролидин-1-карбоксилата (3,90 г, 9,46 ммоль) в этаноле (40 мл) добавляют 0,4 г 10% РЕ/С и полученную суспензию перемешивают в атмосфере водорода из баллона при температуре окружающей среды в течение 6 ч. Твердое вещество отфильтровывают на целите. После удаления растворителя флэш-хроматография на системе Вю1адс Нопхоп® (силикагель, градиент смеси 030% этилацетата в гексане, затем смесь 30% этилацетата в гексане) дает 2,30 г (64%) названного в заголовке соединения в виде белой пены. ЖХ/МС 4 05,3 (М+23).

Промежуточное соединение 14.

(2Б)-1-(1,3-Бензотиазол-2-ил)пирролидин-2-карбоновая кислота (1-14) соон

К раствору 28 мг (0,24 ммоль) Ь-пролина в Ν,Ν-диметилформамиде (3 мл) при температуре окружающей среды добавляют 51 мг (0,24 ммоль) 2-бромбензотиазола, 100 мг (0,72 ммоль) карбоната калия и 6 мг (0,03 ммоль) иодида меди. Реакционную смесь перемешивают при 100°С в течение ночи. Затем смесь фильтруют и фильтрат очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смеси 060% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде). Чистые фракции лиофилизуют в течение ночи и получают 35 мг (60%) названного в заголовке соединения в виде светло-коричневого твердого вещества.

'|| ЯМР (ДМСО-Е₆): δ 7,78 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 7,45 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 7,28 (т, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,08 (т, 1=7,8 Гц, 1Н), 4,48 (д, 1=7,3 Гц, 1Н), 3,52-3,61 (м, 2Н), 2,37 (м, 1Н), 2,01-2,11 (м, 3Н), ЖХ/МС 249,3 (М+1).

Промежуточные соединения 15-22.

Перечисленные далее промежуточные соединения Ν-замещенные Ь-пролины получают из соответствующих исходных веществ с использованием процедур, описанных выше, и процедур, известных в технике.

Таблица 3

Промежуточное соединение	Стюуктуоа	Вычисл масса	М8 (Е/Ζ) (МН)⁺
ϊ-15	X Л®	260.12	260.76(М) 262.66(М+2)
ί-16	о О'”'	221.25	222.40
М7	о X НО-Ч-Г	225.67	225.42 (М) 227.06 (М+2)
1-18	о О'	270.12	269.98 (М) 271.92 (М+2)
Μ9	о Р	317.12	317.92
ί-20	X о ν=^Ν	248.30	249.30
Ϊ-21	О ³О< ноЧГ	198.24	199.15
ΐ-22	Вг нсДЛ	270.12	269.90 (М) 271.96 (М+2)

Промежуточное соединение 23. (6-Оксопиридазин-1(6Н)-ил)уксусная кислота (1-23)

- 28 020135

К раствору 3-хлор-6-оксопиридазин-1(6Н)-ил)уксусной кислоты (1 г, 5,30 ммоль, СНетВпбде) в 40 мл метанола добавляют 100 мг 10% палладия-на-угле, и полученную суспензию помещают в атмосферу водорода и энергично перемешивают в течение 4 ч при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывают в шприце на ПФТЭ фильтре СПтсп 0,45 мкм, и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток используют без дополнительной очистки.

¹Н ЯМР (Ό₂Ο): δ 9,07 (дд, 1=1,6, 3,9 Гц, 1Н), 7,59 (дд, 1=4,1, 9,4 Гц, 1Н), 7,14 (дд, 1=1,6, 9,3 Гц, 1Η), 4,97 (с, 2Н), ЖХ/МС 155,09 (М+1).

Промежуточное соединение 24. Получение 2-бром-5,6-дигидро-4Н-циклопента[б][1,3]тиазол-4карбоновой кислоты (1-24)

Стадия А. Этил-2-бром-5,6-дигидро-4Н-циклопента[б][1,3]тиазол-4-карбоксилат

К раствору трет-бутилнитрита (4,2 мл, 35,3 ммоль) и бромида меди(11) (6,3 г, 28,3 ммоль) в ацетонитриле (100 мл) добавляют по частям этил-2-амино-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4карбоксилат (5 г, 23,6 ммоль). По завершении добавления смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь выливают в 2 М Ηί'Ί (600 мл) и экстрагируют ΕιΟΑο (3x200 мл), объединенные ΕιΟΑο слои промывают 1 М Ηί'Ί (500 мл), водой (250 мл), насыщенным раствором ΝαΗί.Ό₃ (200 мл) и насыщенным раствором №1С1 (150 мл), сушат над Μ§δΟ₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают ЖХСД (Вю1аде Ηοήζοη: ΕήΑδΗ 40Μ), элюент: 100% гексана (100 мл), градиент с повышением от 100% гексана до смеси 25% ΕιΟΑο в гексане (750 мл), затем смесь 25% ΕιΟΑο в гексане (700 мл) и получают 1,87 г (29%) светло-оранжевого масла.

¹Н ЯМР (500 МГц СОСЬ) δ: 4,22 (кв., 1=7,1, 2Н), 4,00 (м, 1Н), 3,04-3,11 (м, 1Н), 2,88-2,94 (м, 1Н), 2,77 (кв., 1=7,3, 2Н), 1,31 (т, 1=7,1, 3Η).

Стадия В. 2-бром-5,6-дигидро-4Н-циклопента[б][1,3]тиазол-4-карбоновая кислота

Продукт со стадии А (4,92 г, 17,82 ммоль) растворяют в метаноле (20 мл) и раствор добавляют по каплям к смеси 5н раствора ΝαΟΗ (4,25 мл, 21,25 ммоль), воды (16 мл) и метанола (30 мл). По завершении добавления смесь перемешивают в течение 2 ч. Метанол удаляют выпариванием и рН оставшейся водной части доводят до ~2,5 концентрированной ΗΟ. Смесь насыщают твердым №С1 и экстрагируют ΕιΟΑο (х 3); объединенные ΕιΟΑο слои промывают насыщенным раствором №С1, сушат над Να₂δΟ.₄ и обрабатывают активированным углем в течение ночи. Профильтрованную смесь упаривают. Остаток растирают в ΕιΟΑο, твердое вещество отфильтровывают, и получают 1,94 г нужного продукта. Маточные жидкости упаривают и очищают ЖХСД с использованием градиента, повышающегося от 100% гексана до 100% ΕιΟΑο в гексане, и получают дополнительные 0,82 г названного в заголовке продукта (всего 2,76 г, 62%) в виде не совсем белого твердого вещества.

¹Η ЯМР (500 МГц СИСЬ) δ: 4,04 (м, 1Н), 3,02-3,08 (м, 1Н), 2,88-2,94 (м, 1Н), 2,78-2,83 (м, 2Н).

Промежуточное соединение 25.

Получение 2-{2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-1,3-тиазол-4-ил}-4-фторбутановой кислоты (1-25)

Стадия А.

3(2Н)-карбоксилат трет-Бутил-(2Е)-2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-4-(2-этокси-2-оксоэтил)-1,3-тиазол-

у_

К раствору этил-2-аминотиазол-4-ацетата (8 г, 43 ммоль) в ΩΟΜ (75 мл) добавляют ди-третбутилдикарбонат (20,63 г, 95 ммоль), основание Хюнига (16,51 мл, 95 ммоль) и ΌΜΑΡ (1,57 г, 12,89 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь промывают водой, насыщенным раствором ИаС1, сушат над Μ§δΟ₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают ЖХСД с использованием градиента, поднимающегося от 100% гексана до смеси 50% ΕιΟΑο в гексане, и получают указанное в заголовке соединение (12,5 г, 75%) в виде белого твердого вещества. 'Η ЯМР (500 МГц СИСЬ) δ : 7,02 (с, 1Н), 4,17 (кв., 1=7,3, 2Н), 3,73 (с, 2Н), 1,51 (с, 18Н), 1,25 (т, 1=7,3, 3Η).

- 29 020135

Стадия В. Этил-2-(2-[(трет-бутоксикарбонил)амино] -1,3-тиазол-4-ил)-4-фторбутаноат

Е

К раствору продукта реакции со стадии А (7,5 г, 19,4 ммоль) в безводном ТГФ (100 мл), охлажденному до -78°С, добавляют бутиллитий (8,54 мл 2,5 М раствор, 21,35 ммоль), затем 1-иод-2-фторэтан (6,75 г, 38,8 ммоль) и смесь перемешивают при -78°С в течение 1 ч и затем нагревают до комнатной температуры. Добавляют 10% мас./мас. раствор лимонной кислоты (21 мл) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь упаривают для удаления ТГФ, разбавляют водой (100 мл) и экстрагируют ΕΐОΑс (х3). Объединенные ΕΐОΑс слои промывают водой, насыщенным раствором №С1, сушат над Мд§О₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают ЖХСД; элюент: градиент, поднимающийся от 100% гексана до смеси 25% ΕΐОΑс в гексане. Дополнительная очистка препаративной ВЭЖХ на колонке с С18 с использованием градиента, поднимающегося от 100% воды до смеси 95% ацетонитрила в воде + 0,05% ТФК, дает указанное в заголовке соединение (500 мг, 7%).

Ή ЯМР (500 МГц СЭСЕ) δ: 8,22 (ушир.с, 1Н), 6,75 (с, 1Н), 4,32-4,57 (м, 2Н), 4,12-4,25 (м, 2Н), 3,95 (т, 1=7,5, 1Н), 2,40-2,52 (м, 1Н), 2,18-2,31 (м, 1Н), 1,56 (с, 9Н), 1,25 (т, 1=7,1, 3Н).

Стадия С. 2-{2-[(трет-Бутоксикарбонил)амино]-1,3-тиазол-4-ил}-4-фторбутановая кислота

К раствору продукта реакции со стадии В (100 мг, 0,3 ммоль) в смеси ТГФ (1 мл) и метанола (0,3 мл) добавляют раствор гидроксида лития (0,3 мл 1 М раствор, 0,3 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 90 мин. Добавляют 1н НС1 (0,3 мл, 0,3 ммоль) и смесь упаривают досуха. Оставшийся сырой продукт реакции используют сразу же без дополнительной очистки.

Промежуточное соединение 26.

Получение 2-фтор-5,6-дигидро-4Н-циклопента[4][1,3]тиазол-4-карбоновой кислоты (1-26)

Стадия А. Этил-2-фтор-5,6-дигидро-4Н-циклопента[4][1,3]тиазол-4-карбоксилат

Этил-2-амино-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-карбоксилат [со стадии А, промежуточное соединение 8] (2 г, 9,4 ммоль) растворяют во фторборной кислоте (5,17 г, 28,3 ммоль) и смесь охлаждают до температуры, несколько превышающей температуру ее замерзания (~5°С). Добавляют по частям тетрафторборат нитрозония (1,1 г, 9,4 ммоль) и смесь перемешивают при 0°С в течение 20 мин. Добавляют диэтиловый эфир (60 мл) и смесь перемешивают при -50°С в течение 30 мин. Смесь фильтруют и твердое вещество промывают диэтиловым эфиром и сушат на воздухе. Твердое вещество растворяют в толуоле (70 мл) и греют при 90°С в течение 30 мин. Смесь охлаждают и упаривают, сырой остаток очищают ЖХСД (элюент: градиент, поднимающийся от 100% гексана до смеси 40% ΕΐОΑс в гексане) и получают указанное в заголовке соединение (390 мг, 19%) в виде желтого масла.

Ή ЯМР (500 МГц СОСУ) δ: 4,22 (кв., 1=7,1, 2Н), 3,93 (дд, 1=7,0 и 5,0, 1Н), 3,08 (м, 1Н), 2,91 (м, 1Н), 2,71 (м, 2Н), 1,31 (т, 1=7,1, 3Н).

Стадия В. 2-Фтор-5,6-дигидро-4Н-циклопента[4][1,3]тиазол-4-карбоновая кислота

К раствору продукта реакции со стадии А (100 мг, 0,456 ммоль) в смеси ТГФ (1,5 мл) и метанола (0,5 мл) добавляют раствор гидроксида лития (0,558 мл 1 М раствор, 0,588 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 90 мин. Добавляют 1н НС1 (0,558 мл, 0,558 ммоль) и смесь упаривают досуха. Оставшийся сырой продукт реакции используют сразу же без дополнительной очистки.

- 30 020135

Промежуточное соединение 27. Получение 6,7-дигидро-5Н-пирроло[1,2-б]тетразол-5-карбоновой кислоты (ί-27)

Стадия А. Метил-5-метокси-3,4-дигидро-2Н-пиррол-2-карбоксилат о

Метил-5-метокси-3,4-дигидро-2Н-пиррол-2-карбоксилат получают с использованием способа, описанного в работе \Уюк А., ВагИей Р. апб Όο1ρΗίη Ό., Некебса СЫтка, νο1. 54, Разе. 2 (1971).

Стадия В. Метил-6,7-дигидро-5Н-пирроло[1,2-б]тетразол-5-карбоксилат

К раствору исходного метил-5-метокси-3,4-дигидро-2Н-пиррол-2-карбоксилата (900 мг, 6,04 ммоль) в 4 мл уксусной кислоты добавляют азид натрия (975 мг, 12,08 ммоль) и полученную суспензию греют при 60°С и энергично перемешивают в течение 48 ч. Раствор охлаждают до комнатной температуры и разбавляют 35 мл этилового эфира. Добавляют твердый карбонат калия к раствору, который перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин. Твердое вещество отфильтровывают на воронке со стеклянным фильтром, промывают холодным этиловым эфиром, и фильтрат концентрируют в вакууме. После концентрирования до одной пятой объема твердое вещество, выпавшее в осадок во время концентрирования, отфильтровывают. Твердое вещество промывают один раз холодным эфиром (3 мл) и сушат в высоком вакууме в течение ночи, и получают указанное в заголовке соединение (308 мг, 31%). ЖХМС: т/ζ (Е8) = 169 (МН)⁺.

Стадия С. 6,7-Дигидро-5Н-пирроло[1,2-б]тетразол-5-карбоновая кислота

К раствору метил-6,7-дигидро-5Н-пирроло[1,2-б]тетразол-5-карбоксилата (300 мг, 1,78 ммоль) в смеси ТГФ/вода/МеОН добавляют ЬЮН (214 мг, 8,92 ммоль) и полученный раствор греют на масляной бане при 60°С в течение 16 ч (круглодонная колба, снабженная холодильником). Раствор охлаждают до комнатной температуры и концентрируют для удаления органических растворителей. Затем водный слой подкисляют до рН ~5 с использованием 2н НС1. Смесь концентрируют в вакууме досуха и подвергают азеотропной обработке с толуолом (2x20 мл) для уверенности в удалении всей воды. Материал используют без дополнительной очистки с хлоридом лития как побочным продуктом. ЖХ-МС: т/ζ (Е8) = 155 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 28. Получение 3-метил-6,7-дигидро-5Н-пирроло[2,1-с][1,2,4]триазол-7карбоновой кислоты (1-28)

Стадия А. Этил-3 -метил-6,7-дигидро-5Н-пирроло [2,1 -с] [ 1,2,4]триазол-7-карбоксилат

Ссылка: Ειιν'δοη Еб\\агб С. е! а1., Те!. Ье!!., 41 (2000), р. 4533-4536

Коммерчески доступный этил-2-оксопирролидин-3-карбоксилат (2,50 г, 15,91 ммоль) растворяют в 30 мл дихлорметана в 50-мл круглодонной колбе. К полученному раствору добавляют тетрафторборат триметилоксония (2,59 г, 17,5 ммоль) в виде твердого вещества и промывают 20 мл дихлорметана. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение двух часов, и ЖХ/МС показывает, что образовалось промежуточное соединение метил-5-метокси-3,4-дигидро-2Н-пиррол-4-карбоксилат. В этот момент в смесь вводят ацетогидразид (1,18 г, 15,91 ммоль) в виде твердого вещества, и полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Затем раствор концентрируют в вакууме для удаления всего дихлорметана, и затем остаток растворяют в 100 мл н-бутанола, и раствор кипятят с обратным холодильником на масляной бане, установленной на 120°С, в течение ночи. Раствор охлаждают до комнатной температуры и концентрируют в вакууме. Остаток очищают на шестнадцати 1500-мкм препаративных пластинках с силикагелем с элюированием системой растворителей дихлорметан:метанол, 90:10. Продукт реакции экстрагируют из силикагеля с использованием смеси дихлорметан:метанол, 85:15, что дает указанное в заголовке соединение (454 мг, 11%).

'|| ЯМР (500 МГц ДМСО-б₆) δ: 4,16-4,06 (м, 1Н), 4,00-3,88 (м, 1Н), 2,85-2,78 (м, 1Н), 2,29 (с, 3Н), 1,55 (дт, 1=6,7, 13,9 Гц, 2Н), 1,32 (дт, 1=6,7, 14,0 Гц, 2Н), 0,88 (т, 1=7,5 Гц, 3Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) = 196 (МН)⁺.

- 31 020135

Стадия В. 3-Метил-6,7-дигидро-5Н-пирроло[2,1-с][1,2,4]триазол-7-карбоновая кислота

К раствору этил-6,7-дигидро-5Н-пирроло[2,1-с][1,2,4]триазол-7-карбоновой кислоты (400 мг, 2,05 ммоль) в смеси ТГФ/вода/МеОН добавляют ООН (250 мг, 10,25 ммоль) и полученный раствор греют на масляной бане при 60°С в течение 16 ч (круглодонная колба, снабженная холодильником). Раствор охлаждают до комнатной температуры и концентрируют для удаления органических растворителей. Затем водный слой подкисляют до рН ~5 с использованием 2н НС1. Смесь концентрируют в вакууме досуха и подвергают азеотропной обработке с толуолом (2х 20 мл) для уверенности в удалении всей воды. Материал используют без дополнительной очистки с хлоридом лития как побочным продуктом. ЖХ-МС: т/ζ (Е8) = 168 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 29. Получение 3-метил-5,6,7,8-тетрагидро[1,2,4]триазоло[4,3а]пиридин-8-карбоновой кислоты (1-29)

Указанное в заголовке соединение получают с использованием процедур, аналогичных процедурам, описанным выше для получения промежуточного соединения 28 (1-28), заменяя этил-2-оксопирролидин3-карбоксилат на этил-2-оксопиперидин-3-карбоксилат. ЖХ-МС: т/ζ (Е8) = 182 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 30. Получение 3-метил-6,7-дигидро-5Н-пирроло[2,1-с][1,2,4]триазол-5карбоновой кислоты (1-30)

Указанное в заголовке соединение получают с использованием процедур, аналогичных процедурам, описанным выше для получения промежуточного соединения 28 (1-28), заменяя этил-2-оксопирролидин3-карбоксилат на метил-5-оксопирролидин-2-карбоксилат. ЖХ-МС: т/ζ (Е8) = 168 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 31. Получение [6-оксопиридазин-1(6Н)-ил]уксусной кислоты (1-31) ϊγΝ_ν0Ο₂Η

О

К раствору 3-хлор-[6-оксопиридазин-1(6Н)-ил]уксусной кислоты (1,00 г, 5,30 ммоль) в метаноле (40 мл) добавляют 100 мг 10% Рб/С. После перемешивания реакционной смеси при температуре окружающей среды в атмосфере Н₂ из баллона в течение 1 ч Рб отфильтровывают на целите. Фильтрат концентрируют в вакууме и очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смесей 0-40% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде). Удаление летучих веществ в вакууме дает указанное в заголовке соединение в виде белого кристаллического вещества.

Ή ЯМР (Э₂О): δ 8,06 (дд, 1=3,9, 1,4 Гц, 1Н), 7,56 (дд, 1=9,4, 3,9 Гц, 1Н), 7,12 (дд, 1=9,4, 1,5 Гц, 1Н), 4,95 (с, 2Н), ЖХ/МС 155,2 (М+1).

Промежуточное соединение 32. Получение [2-оксопиримидин-1(2Н)-ил]уксусной кислоты (1-32) о ν^αν№τ^οη

О о

К смеси гидрохлорида 2-гидроксипиримидина (1,00 г, 7,54 ммоль) и хлоруксусной кислоты (0,713 г, 7,54 ммоль) добавляют 5н раствор гидроксида натрия (4,5 мл). Реакционную смесь греют при 105°С в течение 2 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды и нейтрализации 2 М соляной кислотой (3,8 мл) кристаллизацией и фильтрацией собирают указанное в заголовке соединение в виде бледножелтого твердого вещества.

Ή ЯМР (ДМСО-б₆): δ 13,2 (с, 1Н), 8,59 (дд, 1=3, 9, 3,0 Гц, 1Н), 8,16 (дд, 1=6,4, 2,8 Гц, 1Н), 6,46 (дд, 1=6,4, 4,1 Гц, 1Н), 4,58 (с, 2Н), ЖХ/МС 155,2 (М+1).

Промежуточное соединение 33. Получение 2-[2-оксопиримидин-1(2Н)-ил]пропановой кислоты (1-33)

О !

О

К гидрохлориду 2-гидроксипиримидина (1,27 г, 9,54 ммоль) добавляют 5н раствор гидроксида натрия (5,7 мл), а затем (28)-2-бромпропановую кислоту (0,95 мл, 11 ммоль). Реакционную смесь греют при 80°С в течение 4 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды смесь нейтрализуют 2н соляной кислотой (4,8 мл) и затем непосредственно очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смесей 0-50% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде). Удаление летучих веществ в вакууме дает указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС 169,1 (М+1).

- 32 020135

Промежуточное соединение 34. Получение [6-оксопиримидин-1(6Н)-ил]уксусной кислоты (1-34)

О

V °

К пиримидин-4(3Н)-ону (0,608 г, 6,33 ммоль) добавляют 5н раствор гидроксида натрия (2,5 мл), а затем хлоруксусную кислоту (0,598 мл, 6,33 ммоль). Реакционную смесь греют при 105°С в течение 2 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды смесь нейтрализуют 2н соляной кислотой (3,2 мл), и затем непосредственно очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смесей 0-40% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде). Удаление летучих веществ в вакууме дает указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества.

Ή ЯМР (ДМСО-б₆) : δ 13,2 (с, 1Н), 8,43 (с, 1Н), 7,94 (д, 1=6,7 Гц, 1Н), 6,43 (д, 1=6,6 Гц, 1Н), 4,63 (с, 2Н), ЖХ/МС 155,1 (М+1).

Промежуточное соединение 35. Получение 2-[6-оксопиримидин-1(6Н)-ил]пропановой кислоты (1-35) о I

Λν\^οη

V о

К пиримидин-4(3Н)-ону (0,908 г, 9,45 ммоль) добавляют 5н раствор гидроксида натрия (3,8 мл), а затем (2К)-2-бромпропановую кислоту (0,95 мл, 11 ммоль). Реакционную смесь греют при 85°С в течение 1 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды смесь нейтрализуют 2 М соляной кислотой (5,2 мл) и затем непосредственно очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смесей 0-40% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде). Удаление летучих веществ в вакууме дает указанное в заголовке соединение в виде белого твердого ве щества.

Ή ЯМР (ДМСО-б₆): δ 8,48 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 7,88 (дд, 1=7,8, 2,8 Гц, 1Н), 6,12 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 5,04 (кв., 1=7,3 Гц, 1Н), 1,64 (д, 1=7,5 Гц, 3Н), ЖХ/МС 169,1 (М+1).

Промежуточное соединение 36. Получение [5-оксо-1,6-нафтиридин-6(5Н)-ил]уксусной кислоты (136)

К 1,6-нафтиридин-5(6Н)-ону (0,625 г, 4,28 ммоль) добавляют 5н раствор гидроксида натрия (1,7 мл), а затем хлоруксусную кислоту (0,404 мл, 4,28 ммоль). Реакционную смесь греют при 100°С в течение 2 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды и нейтрализации 2н соляной кислотой (2,1 мл) кристаллизацией и фильтрацией собирают указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества.

Ή ЯМР (ДМСО-б₆): δ 13,1 (с, 1Н), 8,94 (дд, 1=4,6, 1,8 Гц, 1Н), 8,51 (дд, 1=8,0, 1,6 Гц, 1Н), 7,72 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,52 (дд, 1=8,0, 4,6 Гц, 1Н), 6,72 (д, 1=7,6 Гц, 1Н), 4,72 (с, 2Н), ЖХ/МС 205,2 (М+1).

Промежуточное соединение 37. Получение [4-метил-6-оксопиридазин-1(6Н)-ил]уксусной кислоты (1-37)

Стадия А. Этил[4-метил-6-оксопиридазин-1(6Н)-ил]ацетат

5-Гидрокси-4-метилфуран-2(5Н)-он (1,19 г, 10,4 ммоль) и гидрохлорид этилгидразинацетата (1,61 г, 10,4 ммоль) в 95% этаноле (20 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Удаление растворигелей в вакууме с последующей очисткой с использованием системы Вю!аде Ηοηζοη® (смеси 0-50% этилацетата/гексан) дает этил[4-метил-6-оксопиридазин-1(6Н)-ил]ацетат в виде желтого кристаллического вещества. ЖХ/МС 219,2 (М+23).

Стадия В. [4-Метил-6-оксопиридазин-1(6Н)-ил]уксусная кислота

К этил[4-метил-6-оксопиридазин-1(6Н)-ил]ацетату (0,575 г, 2,93 ммоль) в тетрагидрофуране (3 мл), метаноле (2 мл) и воде (2 мл) добавляют 1н раствор гидроксида лития (2,9 мл). Реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 1,5 ч. После нейтрализации трифторуксусной кислотой реакционную смесь непосредственно очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смеси 0-45% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде). Чистые фракции лиофилизуют в течение ночи, и получают указанное в заголовке соединение. ЖХ/МС 169,2 (М+1).

- 33 020135

Промежуточное соединение 38. Получение 2-[4-метил-6-оксопиридазин-1(6Н)-ил]пропановой кислоты (ί-38)

_гсо₂н сн₃

К этил[4-метил-6-оксопиридазин-1(6Н)-ил]ацетату (0,132 г, 0,673 ммоль) в тетрагидрофуране (4 мл) при -78°С добавляют 1 М раствор литийгексаметилдисилазана (0,74 мл). Реакционную смесь перемешивают при -78°С в течение 15 мин и затем добавляют метилиодид (0,046 мл, 0,74 ммоль). После перемешивания при -78°С в течение 2 ч реакционную смесь нагревают до температуры окружающей среды в течение 0,5 ч. Удаление летучих веществ в вакууме с последующей очисткой с использованием системы Вю1адс НоШоп® (смеси 0-50% этилацетата/гексан) дает этил-2-[4-метил-6-оксопиридазин-1(6Н)ил]пропаноат в виде масла. К 88 мг (0,42 ммоль) полученного масла в тетрагидрофуране (0,3 мл), воде (0,2 мл) и метаноле (0,2 мл) добавляют 5н раствор гидроксида натрия (0,2 мл). Реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 3 ч, затем нейтрализуют 2н соляной кислотой и очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смеси 0-40% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде). Удаление летучих веществ в вакууме дает указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС 183,2 (М+1).

Промежуточные соединения 39 и 40. Получение 2-[6-оксопиридазин-1(6Н)-ил]пропановой кислоты и 2-(пиридазин-3-илокси)пропановой кислоты (1-39 и 1-40)

ΐ-39 ϊ-40

К 3(2Н)-пиридазинону (1,19 г, 12,3 ммоль) добавляют 5н раствор гидроксида натрия (4,9 мл), а затем (28)-бромпропановую кислоту (1,11 мл, 12,3 ммоль). Реакционную смесь греют при 90°С в течение 1 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды добавляют 2М соляную кислоту (6,2 мл) и реакционную смесь непосредственно очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смеси 0-40% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде). Продукт О-алкилирования 2-(пиридазин-3-илокси)пропановую кислоту элюируют быстро. Чистые фракции собирают, затем растворитель удаляют в вакууме, и получают два названных в заголовке соединения, оба в виде твердых веществ бледно-желтого цвета.

2-[6-Оксопиридазин-1(6Н)-ил]пропановая кислота (1-39): ¹Н ЯМР (Ό2Ο): δ 8,07 (дд, 1=4,1, 1,6 Гц, 1Н), 7,53 (дд, 1=9,3, 3,9 Гц, 1Н), 7,09 (дд, 1=9,4, 1,6 Гц, 1Н), 5,46 (м, 1Н), 1,64 (д, 1=7,3 Гц, 3Н). 2(Пиридазин-3-илокси)пропановая кислота (1-40): ¹Н ЯМР (Ό2Ο): δ 9,01 (д, 1=5,3 Гц, 1Н), 8,14 (дд, 1=9,1, 5,2 Гц, 1Н), 7,64 (д, 1=9,1 Гц, 1Н), 5,45 (кв., 1=7,2 Гц, 1Н), 1,86 (д, 1=7,1 Гц, 3Н).

Промежуточное соединение 41. Получение [2-оксопиразин-1(2Н)-ил]уксусной кислоты (1-41) о гю^онО

К пиразин-2(1Н)-ону (0,333 г, 3,47 ммоль) добавляют 5н раствор гидроксида натрия (2,1 мл), а затем хлоруксусную кислоту (0,524 г, 5,54 ммоль). Реакционную смесь греют при 100°С в течение 2 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды добавляют 2н соляную кислоту (3,5 мл) и реакционную смесь непосредственно очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смеси 0-40% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде). Чистые фракции лиофилизуют в течение ночи, и получают указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества. ЖХ/МС 155,2 (М+1).

Промежуточные соединения 42 и 43. Получение 2-[3-метил-6-оксопиридазин-1(6Н)-ил]пропановой кислоты и 2-[(6-метилпиридазин-3-ил)окси]пропановой кислоты (1-42 и 1-43)

ί-42 ί-43

К б-метилпиридазин-3(2Н)-ону (0,510 г, 4,63 ммоль) добавляют 5н раствор гидроксида натрия (1,85 мл), а затем 2-бромпропановую кислоту (0,709 г, 4,63 ммоль). Реакционную смесь греют при 90°С в течение 1 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды добавляют 2 М соляную кислоту (5,0 мл), и реакционную смесь непосредственно очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смеси 8-20% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде). Продукт О-алкилирования элюируют быстро. Чистые фракции собирают и лиофилизуют в течение ночи, и получают два названных в заголовке соединения. ЖХ/МС 183,2 (М+1). 2-[3-Метил-6оксопиридазин-1(6Н)-ил]пропановая кислота (ί-42): ¹Н ЯМР (ДМСО-б₆): δ 7,34 (д, 1=9,7 Гц, 1Н), 6,88 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 5,30 (кв., 1=7,3 Гц, 1Н), 2,26 (с, 3Н), 1,49 (д, 1=7,3 Гц, 3Н).

- 34 020135

2-[(6-Метилпиридазин-3-ил)окси]пропановая кислота (ί-43): ¹Н ЯМР (ДМСО-66) : δ 8,36 (д, 1=9,0 Гц, 1Н), 7,90 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 6,00 (кв., 1=6,6 Гц, 1Н), 2,90 (с, 3Н), 1,73 (д, 1=6,6 Гц, 3Н).

Промежуточное соединение 44. Получение [(68)-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-]пиримидин6-карбоновой кислоты (1-44)

Стадия А. Метил[(68)-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-]пиримидин-6-карбоксилат

Метил(28)-5-метокси-3,4-дигидро-2Н-пиррол-2-карбоксилат (4,19 г, 26,6 ммоль) и 3-азабицикло [4.2.1.0.^2,5]нон-7-ен-4-он (2,4 г, 17,8 ммоль) греют при 110°С в течение ночи. Очистка с использованием системы В1о!аде Нопхоп® (смеси 0-100% этилацетата/гексан) дает указанное в заголовке соединение метил [(68) -4-оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-*]пиримидин-6-карбоксилат и промежуточное соединение метил(78)-9-оксо-3,8-диазатетрацикло [9.2.1.0²’¹⁰0⁴’⁸]тетрадека-3,12-диен-7-карбоксилат. Промежуточное соединение греют при 150°С в течение 45 мин и получают указанное в заголовке соединение без дополнительной очистки. ЖХ/МС 195,2 (М+1).

Стадия В. [(68)-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-]пиримидин-6-карбоновая кислота

Метил[(68)-4-оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-*]пиримидин-6-карбоксилат (9,95 г, 51,2 ммоль) в тетрагидрофуране (60 мл) и метаноле (40 мл) и раствор гидроксида лития (3,32 г, 77 ммоль) в воде (40 мл) перемешивают при температуре окружающей среды в течение 1 ч. Добавляют 2н соляную кислоту (38,5 мл) для нейтрализации реакционной смеси, которую затем непосредственно очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смеси 0-40% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде). Продукт О-алкилирования элюируют быстро. Чистые фракции собирают и лиофилизуют в течение ночи, и получают указанное в заголовке соединение в виде бледно-желтого твердого вещества.

Ή ЯМР (ДМСО-б₆) : δ 7,89 (д, 1=6,6 Гц, 1Н), 6,24 (д, 1=6,6 Гц, 1Н), 4,92 (дд, 1=10,0, 3,1 Гц, 1Н), 3,12-2,99 (м, 2Н), 2,52 (м, 1Н), 2,11 (м, 1Н), ЖХ/МС 181,2 (М+1).

Промежуточное соединение 45. 5,6-Дигидро-4Н-пирроло[1,2-Ь]пиразол-6-карбоновая кислота (1-45)

Стадия Д. 7-(Триметилсилил)-5-оксогепт-6-иновая кислота

Данное промежуточное соединение получают согласно процедуре, описанной в Ыаууаг Ν.Κ., НШсйкоп Ό.Β., МагйисШ М.1., 1. Огд. Сйет., 1997, 62, 982.

Стадия В. (52)-5-[(трет-Бутоксикарбонил)гидразоно]-7-(триметилсилил)гепт-6-иновая кислота

К раствору 54,0 г (254 ммоль) 7-(триметилсилил)-5-оксогепт-6-иновой кислоты с описанной выше стадии Ав 750 мл 1РА при перемешивании в атмосфере азота добавляют 33,6 г (254 ммоль) третбутилкарбазата. Реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч при температуре окружающей среды и затем упаривают в вакууме для удаления всех летучих веществ. Это дает указанное в заголовке соединение в виде желтой смолы, которую используют без дополнительной очистки (77 г, 93%). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 327 (МН)⁺.

Стадия С. 4-[1-(трет-Бутоксикарбонил)-1Н-пиразол-3-ил]бутановая кислота

Вос

N4

НО₂С^-чХХ

К раствору 77,0 г (236 ммоль) (52)-5-[(трет-бутоксикарбонил)гидразоно]-7-(триметилсилил)гепт-6иновой кислоты с описанной выше стадии В в 500 мл ТГФ при перемешивании добавляют в течение 30

- 35 020135 мин 350 мл (350 ммоль) 1,0 М раствора фторида тетрабутиламмония в ТГФ. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 48 ч и затем упаривают в вакууме досуха. Остаток разбавляют 1 л 5% водного раствора уксусной кислоты и водную фазу экстрагируют этилацетатом (3х 350 мл). Объединенные органические слои промывают водой (2x100 мл) и солевым раствором (150 мл), сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме досуха. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием смесью 3% уксусной кислоты и 35% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде желтого масла (60 г, выход количественный). ЖХ-МС: т/ζ (ЕБ) 255 (МН)⁺.

Стадия Ό. трет-Бутил-3-[4-(бензилокси)-4-оксобутил]-1Н-пиразол-1-карбоксилат

Вос

К раствору 60,0 г (236 ммоль) 4-[1-(трет-бутоксикарбонил)-1Н-пиразол-3-ил]бутановой кислоты с описанной выше стадии С в 400 мл ДМФА при перемешивании добавляют 48,9 г (354 ммоль) карбоната калия, а затем добавляют по каплям 40,0 мл (300 ммоль) бензилбромида. Полученную смесь перемешивают в течение 24 ч, реакцию гасят водой и смесь экстрагируют этилацетатом (3х 300 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме досуха. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием смесью 30% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде желтого масла (55,6 г, 68,4%). ЖХ-МС: т/ζ (ЕБ) 345 (МН)⁺.

Стадия Е. трет-Бутил-3-[4-(бензилокси)-3-бром-4-оксобутил]-1Н-пиразол-1-карбоксилат

К раствору 27,5 г (80,0 ммоль) трет-бутил-3-[4-(бензилокси)-4-оксобутил]-1Н-пиразол-1карбоксилата с описанной выше стадии Ό в 250 мл безводного ТГФ при перемешивании при -78°С в атмосфере азота добавляют 88 мл (88 ммоль) 1,0 М раствора бис(триметилсилил)амида натрия в безводном ТГФ. Полученный темно-желтый раствор перемешивают в течение 1 ч при -78°С и затем добавляют по каплям в течение 5 мин 12 мл (96 ммоль) хлортриметилсилана. Полученную смесь перемешивают в течение 25 мин, на протяжении которых реакционная смесь становится светло-желтой. Затем добавляют 16 г (88 ммоль) Ν-бромсукцинимида в один прием, и полученную смесь перемешивают в течение 3 ч при 78°С и затем в течение 1 ч при постепенном нагревании до 0°С. Реакцию гасят насыщенным водным рас твором хлорида аммония и водную фазу экстрагируют этилацетатом (3x200 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме досуха, и получают указанное в заголовке соединение в виде желтой смолы. Сырой продукт реакции по ЯМР оказывается смесью 1:1 исходного вещества и нужного продукта и используется на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХ-МС: т/ζ (ЕБ) 424 (МН)⁺.

Стадия Е. Бензил-5,6-дигидро-4Н-пирроло[1,2-Ь]пиразол-6-карбоксилат

К раствору 16,9 г (40,0 ммоль) трет-бутил-3-[4-(бензилокси)-3-бром-4-оксобутил]-1Н-пиразол-1карбоксилата с описанной выше стадии Е в 50 мл дихлорметана при перемешивании добавляют 50 мл ТФК. Полученную смесь перемешивают в течение 2 ч при температуре окружающей среды и затем все летучие вещества выпаривают в вакууме. Затем остаток разбавляют 50 мл толуола и снова упаривают в вакууме для удаления всей оставшейся ТФК. Затем сырое вещество растворяют в 125 мл безводного ацетона, и постепенно в течение 15 мин добавляют 14,0 г (100 ммоль) твердого карбоната калия, а затем 1,2 г (8,0 ммоль) иодида натрия. Затем полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 16 ч, охлаждают до комнатной температуры и упаривают в вакууме досуха. Остаток разбавляют 100 мл на сыщенного водного раствора хлорида аммония и затем экстрагируют этилацетатом (3x100 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 10-80% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде прозрачной смолы (6,2 г, выход 64%). ЖХ-МС: т/ζ (ЕБ) 243 (МН)⁺.

Стадия С. 5,6-Дигидро-4Н-пирроло[1,2-Ь]пиразол-6-карбоновая кислота

В 100-мл круглодонную колбу в атмосфере азота загружают 0,600 мг (0,560 ммоль) 10 мас.% палладия на активированном угле и смачивают 10 мл этанола. Затем добавляют раствор 6,0 г (0,025 моль) бен

- 36 020135 зил-5,6-дигидро-4Н-пирроло[1,2-Ь]пиразол-6-карбоксилата с описанной выше стадии Р в 40 мл этанола, и смесь помещают в атмосферу водорода при давлении ~98,1 кПа (1 атм). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч и затем фильтруют через слой целита®. Слой промывают 20 мл этанола, фильтрат упаривают в вакууме и получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветного твердого вещества (3,7 г, выход количественный).

¹Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-б₆): δ 11,90 (ушир.с, 1Н), 7,44 (с, 1Н), 5,98 (с, 1Н), 4,87 (дд, 1=8,9, 3,7 Гц, 1Н), 2,94-2,82 (м, 3Н), 2,58-2,52 (м, 1Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 153 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 46. (38)-5-Оксо-1,2,3,5-тетрагидроиндолизин-3-карбоновая кислота (1-46)

Стадия А. Метиловый эфир (38,98)-5-оксо-1,2,3,5,6,8а-гексагидроиндолизин-3-карбоновой кислоты

Данное промежуточное соединение получают согласно процедурам, описанным в Наметан 8., 8а11е§ Н., Мишо А., ΤΛι^η Е., 1. Огд. СЬет., 2003, 68, 7219, и в Уа^ат К.6., СйатЬейт К., 1. Огд. СЬет., 2008, 73, 1661.

Стадия В. Метил-(38)-5-оксо-1,2,3,5-тетрагидроиндолизин-3-карбоксилат

К раствору 0,850 г (4,06 ммоль) метилового эфира (38,98)-5-оксо-1,2,3,5,6,8а-гексагидроиндолизин3-карбоновой кислоты с описанной выше стадии А в 50 мл дихлорметана при перемешивании добавляют 6,30 г (72,5 ммоль) оксида марганцаЦУ), и полученную смесь перемешивают в течение 12 ч при кипячении с обратным холодильником. Реакционную смесь охлаждают до температуры окружающей среды, фильтруют через слой целита® и затем твердое вещество промывают 100 мл дихлорметана. Фильтрат упаривают в вакууме досуха, остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 10-50% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде прозрачной смолы (0,47 г, выход 55%). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 194 (МН)⁺.

Стадия С. (38)-5-оксо-1,2,3,5-тетрагидроиндолизин-3-карбоновая кислота

К раствору 0,200 г (1,00 ммоль) метил-(38)-5-оксо-1,2,3,5-тетрагидроиндолизин-3-карбоксилата с описанной выше стадии В в 3 мл ТГФ при перемешивании добавляют 1,5 мл (1,5 ммоль) 1,0 М водного раствора ЫОН. Полученную смесь перемешивают в течение 2 ч при температуре окружающей среды и затем реакцию гасят 2,0 мл (2,0 ммоль) водного раствора 1,0 М соляной кислоты. Все летучие вещества выпаривают в вакууме и водную фазу экстрагируют смесью 30% ГРА в хлороформе (3x5 мл). Объединенные экстракты промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме и получают указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (0,17 г, 92%).

¹Н ЯМР (500 МГц, СОзОО): δ 7,53 (дд, 1=8,9, 7,1 Гц, 1Н), 6,38-6,35 (м, 2Н), 5,11 (дд, 1=9,7, 2,7 Гц, 1Н), 3,23-3,12 (м, 2Н), 2,62-2,53 (м, 1Н), 2,35-2,30 (м, 1Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 180 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 47. 2-(2-Бензиламино)-2-оксоэтил)-5,6-дигидро-4Н-циклопента[б]тиазол-4-карбоновая кислота (1-47)

Указанное в заголовке соединение получают согласно процедуре, используемой для получения 1-7, за исключением того, что вместо тиоацетамида используют 3-амино-№бензил-3-тиоксопанамид. ЖХМС: т/ζ (Е8) 317 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 48. 4-Хлор-5-пиримидинилуксусная кислота (1-48)

- 37 020135

Стадия А. Этил(4-хлор-5-пиримидинил)ацетат

С1

Данное вещество синтезируют согласно процедуре, описанной в Ζνιη;·ι11<ο\ν51<ί апб Рсипапп с1 а1., Агс1пу. Эсг. РИати-Шс, 1966, 299, 362.

Стадия В. 4-Хлор-5-пиримидинилуксусная кислота

С(

К раствору 0,6 г (3 ммоль) этил(4-хлор-5-пиримидинил) ацетата с описанной выше стадии А в 0,5 мл воды и 1,5 мл этанола добавляют 215 мг (5,11 ммоль) гидрата гидроксида лития. Реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 2 ч и затем концентрируют в вакууме для удаления всех летучих веществ. Остаток разбавляют 7 мл 2,0 М водной соляной кислоты, затем концен трируют в вакууме для удаления всех летучих веществ и получают указанное в заголовке соединение (0,43 г, 83%).

Ή ЯМР (500 МГц, С1)_;О1)) δ: 8,88 (с, 1Н), 8,70 (с, 1Н), 3,96 (с, 2Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е/8) 173 (МН)⁺. Промежуточное соединение 49. 4-Метокси-5-пиримидинилуксусная кислота (1-49)

ОСН_Э

Стадия А. Метил(4-метокси-5-пиримидинил)ацетат

В растворе 0,250 г (1,25 ммоль) этил(4-хлор-5-пиримидинил)ацетата (см. 1-48, стадия А) в 10 мл абсолютного метанола растворяют 0,060 г (2,50 ммоль) металлического натрия. Полученный раствор греют микроволновым излучением при 120°С в течение 10 мин. Все летучие вещества удаляют в вакууме, остаток разбавляют насыщенным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют дихлорметаном (3x10 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме досуха, и получают указанное в заголовке соединение в виде прозрачной смолы (0,21 г, 93%).

’Н-ЯМР (500 МГц, (ΊΤΟΙ)) δ: 8,72 (с, 1Н), 8,35 (с, 1Н), 3,96 (с, 2Н), 4,01 (с, 3Н), 3,70 (с, 3Н), 3,57 (с, 2Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е/8) 183 (МН)⁺.

Стадия В. 4-Метокси-5-пиримидинилуксусная кислота

К раствору 0,21 г (1,14 ммоль) метил(4-метокси-5-пиримидинил) ацетата с описанной выше стадии А в 0,5 мл воды и 1,5 мл этанола при перемешивании добавляют 81 мг (1,9 ммоль) гидрата гидроксида лития. Реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 2 ч и затем концентрируют в вакууме для удаления всех летучих веществ. Остаток разбавляют 3 мл 2,0 М водной соляной кислоты, затем концентрируют в вакууме для удаления всех летучих веществ, и получают указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества (191 мг, 90%).

’Н-ЯМР (500 МГц, С1)_;О1)) δ: 8,72 (с, 1Н), 8,35 (с, 1Н), 4,01 (с, 3Н), 3,57 (с, 2Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е/8) 169 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 50. 2-(4-Метоксипиримидин-5-ил)пропановая кислота (1-50)

К охлажденному до -78°С раствору 5,8 г (29 ммоль) этил(4-хлор-5-пиримидинил)ацетата (см. 1-48, стадия А) в 75 мл безводного ТГФ при перемешивании в атмосфере азота добавляют 15,2 мл (30,4 ммоль) 2 М раствора диизопропиламида лития в безводном ТГФ. Полученную смесь перемешивают в течение 15 мин и затем в течение 5 мин добавляют 2,26 мл (36,1 ммоль) иодметана. Реакционную смесь перемешивают в течение 15 мин, нагревают до -20°С в течение 45 мин и затем нагревают до -0°С в течение 15 мин. Затем реакцию гасят насыщенным раствором хлорида аммония, и смесь экстрагируют 50 мл

- 38 020135 дихлорметана. Органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием смесью 20% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение (1,9 г, 31%).

'Н-ЯМР (500 МГц, СО₃ОЭ) δ : 8,88 (с, 1Н), 8,74 (с, 1Н), 4,17 (м, 2Н), 1,58 (д, 1=7 Гц, 3Η), 1,29 (т, 1=7 Гц, 3Η). ЖХ-МС: т/ζ (Е/8) 215 (МН)⁺.

Стадия В. Метил-2-(4-метоксипиримидин-5-ил)пропаноат

В растворе 0,250 г (1,17 ммоль) этил-2-(4-хлорпиримидин-5-ил)пропаноата с описанной выше стадии А в 5 мл абсолютного метанола растворяют 0,054 г (2,34 ммоль) металлического натрия. Полученный раствор греют микроволновым излучением при 120°С в течение 10 мин. Все летучие вещества удаляют в вакууме, остаток разбавляют насыщенным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют дихлорметаном (3x10 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме досуха, и получают указанное в заголовке соединение в виде прозрачной смолы (0,21 г, 93%).

'Н-ЯМР (500 МГц, С1)_;О1)) δ : 8,65 (8 1Н), 8,36 (с, 1Н), 4,0 (с, 3Η), 3,9 (кв., 1=7 Гц, 2Н), 3,66 (с, 3Η), 1,58 (д, 1=7 Гц, 3Η). ЖХ-МС: т/ζ (Е/8) 197 (МН)⁺.

Стадия С. 2-(4-Метоксипиримидин-5-ил)пропановая кислота

К раствору 0,21 г (1,06 ммоль) метил-2-(4-метоксипиримидин-5-ил)пропаноата с описанной выше стадии В в 0,5 мл воды и 1,5 мл этанола при перемешивании добавляют 81 мг (1,9 ммоль) гидрата гидроксида лития. Реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 2 ч и затем концентрируют в вакууме для удаления всех летучих веществ. Остаток разбавляют 3 мл 2,0 н соляной кислоты, затем концентрируют в вакууме для удаления всех летучих веществ и получают указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества (70 мг, 36%).

'Н-ЯМР (500 МГц, С1)_;О1)) δ: 8,67 (с, 1Н), 8,4 (с, 1Н), 4,07 (с, 3Η), 3,9 (кв., 1=7 Гц, 2Н), 1,58 (д, 1=7 Гц, 3Η). ЖХ-МС: т/ζ (Е/8) 183 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 51. 2-(2-Оксопиридин-1(2Н)-ил)пропановая кислота (1-51)

Стадия А. трет-Бутил-2-(2-оксопиридин-1(2Н)-ил)пропаноат

К раствору 9,5 г (0,10 моль) 2-гидроксипиридина в 250 мл ДМФА при перемешивании добавляют 16,6 г (0,120 моль) карбоната калия, а затем 25,0 г (0,120 моль) трет-бутилового эфира 2бромпропионовой кислоты. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 7 ч и затем разбавляют 1 л воды. Водную фазу экстрагируют этилацетатом (3ж 200 мл), и объединенные органические слои промывают водой (2x100 мл) и солевым раствором (100 мл), сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием смесью 25% этилацетата в гексане и получают указанное в заголовке соединение в виде прозрачной смолы (16 г, 72%). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 224 (МН)⁺.

Стадия В. 2-(2-Оксопиридин-1(2Н)-ил)пропановая кислота

К суспензии 16,6 г (74,4 ммоль) трет-бутил-2-(2-оксопиридин-1(2Н)-ил)пропаноата с описанной выше стадии А в 10 мл безводного 1,4-диоксана при перемешивании в атмосфере азота добавляют 150 мл 4,0 М раствора хлороводорода в 1,4-диоксане. Полученный раствор перемешивают в течение ночи при температуре окружающей среды, затем упаривают в вакууме досуха, и получают указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (12,4 г, выход количественный). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 168 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 52. 2-(2-Оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пропановая кислота (1-52)

- 39 020135

Стадия А. Бензил(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)ацетат о

^ВпОА'^м'^Дч° о '—I

К раствору 1,0 г (6,9 ммоль) (2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)уксусной кислоты в 10 мл безводного ДМФА при перемешивании добавляют 1,0 г (7,6 ммоль) карбоната калия, а затем 1,0 мл (8,3 ммоль) бензилбромида. Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч, и затем реакцию гасят водой. Водную фазу экстрагируют этилацетатом (3x25 мл), и объединенные органические слои промывают водой (2x10 мл) и солевым раствором (10 мл), сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием смесью 50% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (0,50 г, 31%). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 236 (МН)⁺.

Стадия В. Бензил-2-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пропаноат

К раствору 0,50 г (2,1 ммоль) бензил(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)ацетата с описанной выше стадии А в 15 мл безводного ТГФ при перемешивании при -78°С в атмосфере азота добавляют 1,2 мл (2,4 ммоль) 2 М раствора диизопропиламида лития в безводном ТГФ. Полученный желтый раствор перемешивают в течение 15 мин при -78°С и затем добавляют 0,0360 г (2,551 ммоль) иодметана. Полученную смесь перемешивают в течение 2 ч с постепенным нагреванием до температуры окружающей среды и затем реакцию гасят насыщенным раствором хлорида аммония. Водную фазу экстрагируют этилацетатом (3x20 мл) и объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме досуха. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием смесью 40% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде прозрачной смолы (0,37 г, 70%). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 250 (МН)⁺.

Стадия С. 2-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пропановая кислота

В 25-мл круглодонную колбу в атмосфере азота загружают 0,030 г (0,028 ммоль) 10 мас.%, палладия на активированном угле и смачивают 2 мл этанола. Затем добавляют раствор 0,37 г (1,5 ммоль) бензил-2-(2-оксо-1,3-оксазолидин-3-ил)пропаноата с описанной выше стадии В в 10 мл этанола и смесь помещают в атмосферу водорода при давлении водорода ~98,1 кПа (1 атм). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч и затем фильтруют через слой целита®. Слой промывают 20 мл этанола, фильтрат упаривают в вакууме и получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветного твердого вещества (0,24 г, выход количественный).

Ή-ЯМР (500 МГц, С‘1)_;О1)) δ: 4,60-4,30 (м, 3Н), 3,80-3,60 (м, 2Н), 1,45 (д, 1=3,5, 3Н). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 160 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 53. 2-(2Н-1,2,3-Триазол-2-ил)пропановая кислота (1-53)

Промежуточное соединение 53 получают из 2Н-1,2,3-триазол-2-илуксусной кислоты с использованием процедуры, аналогичной процедуре, используемой для получения 1-51. ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 142,2 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 54. Соль трифторуксусной кислоты 6,7-дигидро-5Нциклопента[Ь]пиридин-7-карбоновой кислоты (1-54)

К охлажденному (0°С) 1,6 М раствору н-бутиллития в гексане (16 мл, 25 ммоль) добавляют 3,9 мл (25 ммоль) Ν,Ν,Ν',Ν'-тетраметилэтилендиамина, а затем раствор 3,0 мл (25 ммоль) 2,3циклопентенпиридина в 5 мл безводного тетрагидрофурана. Полученную смесь нагревают до температуры окружающей среды в течение 15 мин и затем через реакционную смесь в течение 1 ч барботируют газ осушенный диоксид углерода. Затем выпавшее в осадок твердое вещество отфильтровывают, и сырое твердое вещество очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смеси 0-40% 0,01% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,01% трифторуксусной кислоты в воде), и получают указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (2,0 г, 50%). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 164,1 (МН)⁺.

- 40 020135

Промежуточное соединение 55. 2-Оксо-2,5,6,7-тетрагидро-1Н-циклопента[Ь]пиридин-7-карбоновая кислота (ί-55)

НО

Стадия А. Метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[Ь]пиридин-7-карбоксилат

К раствору 1,0 г (6,1 ммоль) промежуточного соединения 54 в смеси 10 мл метанола и 10 мл диэтилового эфира при 0°С в атмосфере азота добавляют 9,0 мл (18 ммоль) 2,0 М раствора (триметилсилил)диазометана в диэтиловом эфире. После перемешивания в течение 5 мин реакцию гасят 2 мл ледяной уксусной кислоты. Все летучие вещества выпаривают в вакууме, остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием смесью 50% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде желтой смолы (1,0 г, 92%). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 177,1 (МН)⁺.

Стадия В. 1-Оксид метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[Ь]пиридин-7-карбоксилата

К охлажденному (0°С) раствору 1,53 г (8,47 ммоль) метил-6,7-дигидро-5Н-циклопента[Ь]пиридин7-карбоксилата с описанной выше стадии А в 30 мл дихлорметана добавляют 1,61 г (9,31 ммоль) мСРВА. Раствор перемешивают в течение 1 ч, и затем реакцию гасят 50 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Слои разделяют, и водную фазу экстрагируют дихлорметаном (3х50 мл). Объединенные органические экстракты промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтру ют и упаривают в вакууме, и получают указанное в заголовке соединение в виде светло-коричневого твердого вещества, которое используют без дополнительной очистки. ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 194,2 (МН)⁺.

Стадия С. Метил-2-хлор-6,7-дигидро-5Н-циклопента[Ь]пиридин-7-карбоксилат

К охлажденному (0°С) раствору 0,21 мл (2,28 ммоль) оксихлорида фосфора в 0,2 мл безводного ДМФА добавляют по каплям в течение 10 мин раствор 1,1 г (5,69 ммоль) 1-оксида метил-6,7-дигидро5Н-циклопента[Ь]пиридин-7-карбоксилата с описанной выше стадии В в 15 мл хлороформа. Полученный раствор нагревают до температуры окружающей среды и затем кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч. Смесь охлаждают и выливают в 30 мл холодной воды. Водный раствор экстрагируют диэтиловым эфиром (3х 30 мл) и затем один раз 30 мл дихлорметана. Объединенные органические слои сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Полученный коричневый остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием смесью 50% этилацетата в гексане и получают указанное в заголовке соединение в виде светло-коричневого твердого вещества (0,30 г, 25%). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 212,0 (МН)⁺.

Стадия Ό. 2-оксо-2,5,6,7-тетрагидро-1Н-циклопента[Ь]пиридин-7-карбоновая кислота

К 15 мл смеси тетрагидрофурана, метанола и 1,0н водного раствора ООН в соотношении 3:1:1 добавляют 0,242 г (1,14 ммоль) метил-2-хлор-6,7-дигидро-5Н-циклопента[Ь]пиридин-7-карбоксилата с описанной выше стадии С. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 1 ч. Раствор упаривают в вакууме, и полученный светло-коричневый остаток очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ΥМС Ρаск Ργο С18, колонка Ι/О. 100х 20 мм, градиент смеси 0-60% 0,01% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,01% трифторуксусной кислоты в воде), и получают указанное в заголовке соединение в виде коричневого масла (184 мг, 90%). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 180,0 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 56. 2-(3-Метил-1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пропановая кислота (1-56)

Стадия Α. трет-Бутил-2-(3-метил-1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пропаноат

К раствору 3-метил-1Н-1,2,4-триазола (7,3 г, 88 ммоль) в ДМФА (75 мл) добавляют К₂СО₃ (60,7 г,

- 41 020135

439 ммоль) и трет-бутиловый эфир 2-бромпропановой кислоты (14,6 мл, 88 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляют ЕЮАс (500 мл) и промывают водой (х3) и затем солевым раствором. Органический слой сушат над Мд8О₄ и концентрируют. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле с элюированием смесями ЕЮАс/изогексан (20-100%) и получают 13 г сырого продукта в виде смеси региоизомеров 3:1. Смесь очищают на СЫга1се1 ОЭ с градиентом от 4 до 30% 1РА/гептан. Затем первые два пика отделяют на колонке с СЫга1се1 ОЭ с изократическим элюированием смесью 4% 1РА/гептан. Второй пик собирают как нужный отдельный стереоизомер (В или 8) (трет-бутиловый эфир 2-(3-метил-1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пропановой кислоты) (3,5 г, 19%).

’Н-ЯМР (500 МГц, СЭСЕ) δ 8,05 (с, 1Н), 4,90 (кв., 1=7 Гц, 1Н), 2,35 (с, 3Н), 1,72 (д, 1=7 Гц, 3Н), 1,40 (с, 9Н). Вычислено Е81-МС для С₁₀Н₁₇^О₂: точная масса 211,13; найдено 156,05 (-трет-Ви).

Стадия В. 2-(3-Метил-1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пропановая кислота но' трет-Бутил-2-(3-метил-1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пропаноат (1,0 г, 4,7 ммоль) растворяют в 4 М растворе НС1 в диоксане (100 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Продукт концентрируют при пониженном давлении и сушат в высоком вакууме, и получают (В или 8) трет-бутил-2(3-метил-1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пропаноат в виде соли НС1 (850 мг). Вычислено Е81-МС для СЩ^Оу точная масса 155,07; найдено 156,05.

Промежуточное соединение 57. 2-(1-Метил-1Н-пиразол-3-ил)пропановая кислота (1-57)

Н'

Стадия А. Бензилпропиолат

К раствору 17,0 г (233 ммоль) пропиоловой кислоты в 600 мл безводного ДМФА добавляют 39,9 г (233 ммоль) бензилбромида, а затем добавляют по частям 76,0 г (233 ммоль) Св₂СО₃. После перемешивания при комнатной температуре в течение 24 ч реакцию гасят насыщенным водным раствором хлорида аммония и смесь экстрагируют ЕЮЛс (3x200 мл). Объединенные экстракты промывают водой и затем солевым раствором и сушат над безводным сульфатом натрия. Затем смесь фильтруют через слой силикагеля, промывая гексаном, фильтрат упаривают при пониженном давлении и получают сырой продукт реакции. Сырой продукт очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 0-20% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла (13,8 г, 35%). Ή ЯМР (СПС1₃, 500 МГц) δ 7,41 (м, 5Н), 5,25 (с, 2Н), 2,92 (с, 1Н).

Стадия В. Бензил-2- (трибутилстаннил)акрилат

К раствору 6,42 г (40,1 ммоль) бензилпропиолата с описанной выше стадии А в 25 мл безводного ТГФ добавляют 0,93 г (0,80 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия(0), а затем в течение 15 мин раствор 12,6 г (42,1 ммоль) гидрида трибутилолова в 25 мл безводного ТГФ. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток фильтруют через слой целита®, который затем промывают гексаном. Фильтрат концентрируют в вакууме, сырой продукт очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 0-15% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла (13 г, 73%).

Ή ЯМР (СПС1₃, 500 МГц) δ 7,39 (м, 5Н), 6,99 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 5,98 (д, 1=2,7 Гц, 1Н), 5,20 (с, 2Н), 1,47 (м, 6Н), 1,30 (м, 6Н), 0,96 (м, 6Н), 0,89 (т, 1=7,4 Гц, 9Н).

Стадия С. Бензил-2-(1-метил-1Н-пиразол-3-ил)акрилат

К раствору 0,30 г (1,4 ммоль) 3-иод-1-метил-1Н-пиразола в 3 мл безводного ТГФ добавляют раствор 0,82 г (1,8 ммоль) бензил-2-(трибутилстаннил)акрилата с описанной выше стадии В в 1 мл безводного ТГФ, 0,18 г (0,15 ммоль) тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) и 0,14 г (1,4 ммоль) хлорида меди(1). Реакционную смесь греют при 55°С в течение 12 ч, охлаждают и упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в 10 мл смеси 1:1 гексана и ЕЮАс и затем фильтруют через слой целита®. Слой промывают 15 мл смеси 1:1 гексана и ЕЮАс и объединенные фильтраты упаривают досуха. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 0-80% ЕЮАс в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла (0,23 г, 66%). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 265 (МАа)'.

Стадия Ό. 2-(1-Метил-1Н-пиразол-3-ил)пропановая кислота

К 0,10 мг (0,093 ммоль) 10% палладия-на-угле добавляют раствор (0,23 г, 0,93 ммоль) полученного выше на стадии С бензил-2-(1-метил-1Н-пиразол-3-ил)акрилата в 6 мл метанола. Полученную суспензию перемешивают в атмосфере водорода (~98,1 кПа (1 атм)) в течение ночи. Остаток фильтруют через слой целита® и слой промывают холодным метанолом. Объединенные фильтраты упаривают при пониженном давлении, и получают указанное в заголовке соединение в виде не совсем белой смолы (0,11 г, 76%).

- 42 020135

ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 155 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 58. 2-(1,3-Тиазол-2-ил)пропановая кислота (1-58)

Стадия А. Этил-2-(1,3-тиазол-2-ил)пропаноат

Этил-2-(1,3-тиазол-2-ил)пропаноат получают согласно процедуре, описанной в Эопбош А., ЭаН'Оссо Т., 61апсаг1о Р., Родадпо1о Μ., Мебю1 А., Те1гайебгоп Ьейегв, 1984, 25, 3633-3636.

Стадия В. 2-(1,3-Тиазол-2-ил)пропановая кислота

К раствору 0,26 г (1,5 ммоль) этил-2-(1,3-тиазол-2-ил)пропаноата с описанной выше стадии А в 15 мл метанола добавляют 3,0 мл (15 ммоль) 5,0 М водного раствора гидроксида натрия. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение ночи. Реакционную смесь упаривают в вакууме для удаления метанола, и водную фазу подкисляют 2н соляной кислотой до достижения рН 4. Водный раствор очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смеси 0-25% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде). Чистые фракции лиофилизуют в течение ночи, и получают указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (0,17 г, 71%). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 158 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 59. 2-(3-Метил-1Н-пиразол-5-ил)пропановая кислота (1-59)

Стадия А. Этил-2-метил-3,5-диоксогексаноат

Этил-2-метил-3,5-диоксогексаноат получают согласно процедуре, описанной в 8о11аб1е С., Сейго1б Ν., Ма1дпап 1., Еиг. 1. Огд. Сйет., 1999, 2309-2314.

Стадия В. Этил-2-(3-метил-1Н-пиразол-5-ил)пропаноат

К раствору 18,6 г (100 ммоль) этил-2-метил-3,5-диоксогексаноата с описанной выше стадии А в 200 мл ТГФ и 50 мл воды добавляют 3,45 мл (110 ммоль) безводного гидразина. Двухфазную реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение ночи и затем упаривают в вакууме досуха. Сырой желтый остаток растворяют в смеси этилацетата и воды и пропускают через слой 50 г силикагеля. Затем фильтрат упаривают в вакууме досуха, остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 0-100% этилацетата в гексане и получают указанное в заголовке соединение в виде желтого масла (1,89 г, 10%).

Ή ЯМР (СПС1₃, 500 МГц) δ 7,26 (с, 1Н), 5,98 (с, 1Н), 4,20-4,12 (м, 2Н), 3,81 (кв., 1=7,3 Гц, 1Н), 2,28 (с, 3Н), 1,51 (д, 1=7,3 Гц, 3Н), 1,25 (т, 1=7,1 Гц, 3Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 183 (МН)⁺.

Стадия С. 2-(3-Метил-1Н-пиразол-5-ил)пропановая кислота

К раствору 1,24 г (6,8 ммоль) этил-2-(3-метил-1Н-пиразол-5-ил)пропаноата с описанной выше стадии В в 20 мл метанола и 5 мл воды добавляют 1,5 мл (7,5 ммоль) водного 5,0 М раствора гидроксида натрия. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 2,5 ч и затем упаривают в вакууме для удаления метанола. Водную фазу экстрагируют этилацетатом (2x75 мл) и подкисляют 2н соляной кислотой до достижения рН 4. Водный раствор экстрагируют этилацетатом (5х 50 мл), объединенные органические слои сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают, и получают указанное в заголовке соединение в виде желтой смолы (0,80 г, 76%).

Ή ЯМР (СБС1з, 500 МГц) δ 10,23 (ушир.с, 1Н), 7,26 (с, 1Н), 5,97 (с, 1Н), 3,87 (кв., 1=7,3 Гц, 1Н), 2,26 (с, 3Н), 1,59 (д, 1=7,3 Гц, 3Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 155 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 60. 2-(1Н-Пиразол-5-ил)пропановая кислота (1-60)

Промежуточное соединение 60 получают из коммерчески доступных этилформиата и этил-2-метил3-оксобутаноата с использованием процедуры, аналогичной процедуре, используемой для получения промежуточного соединения 59.

Ή ЯМР (СОС1₃, 500 МГц) δ 7,50 (с, 1Н), 7,13 (ушир.с, 1Н), 6,22 (с, 1Н), 3,95 (кв., 1=7,3 Гц, 1Н), 1,63 (д, 1=7,3 Гц, 3Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 141 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 61. (2-оксо-1,3-оксазинан-3-ил)уксусная кислота (1-61)

О ϊ О

Стадия А. 1,3-Оксазинан-2-он

К раствору 4,75 г (29,3 ммоль) 1,1'-карбонилдиимидазола в 260 мл безводного дихлорметана добавляют 4,6 мл (27 ммоль) ОША, а затем 2,00 г (27 ммоль) 3-аминопропан-1-ола. Полученную смесь пере

- 43 020135 мешивают при температуре окружающей среды в течение ночи и затем реакцию гасят насыщенным водным раствором хлорида аммония. Слои разделяют, и водную фазу экстрагируют дихлорметаном (2x30 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 5-15% метанола в этилацетате, и получают указанное в заголовке соединение в виде прозрачной смолы (0,20 г, 7,6%).

'|| ЯМР (500 МГц, СЭСЕ,) δ : 6,12 (ушир.с, 1Н), 4,29 (т, 1=5,4 Гц, 2Н), 3,36 (тд, 1=6,2, 2,3 Гц, 2Н), 2,00-1,95 (м, 2Н).

Стадия В. Метил(2-оксо-1,3-оксазинан-3-ил)ацетат

Раствор 0,20 г (2,0 ммоль) 1,3-оксазинан-2-она с описанной выше стадии Ав 2 мл безводного ДМФА загружают в 10-мл круглодонную колбу, содержащую 0,13 г (3,2 ммоль) 60% суспензии гидрида натрия в минеральном масле в атмосфере азота. После перемешивания в течение 10 мин добавляют в один прием 0,37 г (2,4 ммоль) метилбромацетата и реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Затем реакцию гасят 5 мл насыщенного водного раствора хлорида аммония и затем смесь разбавляют 20 мл воды. Полученную суспензию экстрагируют этилацетатом (3х 10 мл) и объединенные органические слои промывают водой (2x3 мл) и солевым раствором (1x3 мл) и сушат над сульфатом магния. Смесь фильтруют, упаривают, остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием смесью 5% метанола в этилацетате и получают указанное в заголовке соединение в виде прозрачного масла (0,068 г, 20%).

'|| ЯМР (500 МГц, СОС1_;) δ: 4,28 (т, 1=5,4 Гц, 2Н), 4,03 (с, 2Н), 3,70 (с, 3Н), 3,36 (т, 1=6,2 Гц, 2Н), 2,08-2,04 (м, 2Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 174 (МН)⁺.

Стадия С. (2-Оксо-1,3-оксазинан-3-ил)уксусная кислота

К раствору 0,068 г (0,39 ммоль) метил(2-оксо-1,3-оксазинан-3-ил) ацетата с описанной выше стадии В в 6 мл ТГФ, 2 мл воды и 2 мл метанола добавляют 0,60 мл (1,2 ммоль) водного 2,0 М раствора гидроксида натрия. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 3 ч и затем упаривают в вакууме для удаления метанола и ТГФ. Водную фазу подкисляют 2н соляной кислотой до достижения рН 2 и затем экстрагируют смесью 30% изопропилового спирта в хлороформе (3x10 мл). Объединенные органические слои сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают, и получают указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества (0,06 г, 99%).

'|| ЯМР (ΕΙλΟΙλ 500 МГц) δ: 4,32 (т, 1=5,4 Гц, 2Н), 4,03 (с, 2Н), 3,41 (т, 1=6,2 Гц, 2Н), 2,10-2,05 (м, 2Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 160 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 62.

(3-Метил-2-оксотетрагидропиримидин-1(2Н)-ил)уксусная кислота (1-62) о

о О

Стадия А. 1-Метилтетрагидропиримидин-2(1Н)-он

К раствору 10,1 г (62,4 ммоль) 1,1'-карбонилдиимидазола в 113 мл безводного дихлорметана добавляют 10,0 мл (56,7 ммоль) Э1ЕА, а затем 5,00 г (56,7 ммоль) Чметилпропан-1,3-диамина. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение ночи и затем реакцию гасят насыщенным водным раствором хлорида аммония. Слои разделяют и водную фазу экстрагируют дихлорметаном (2x50 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 5-15% метанола в этилацетате, и получают указанное в заголовке соединение в виде прозрачной смолы (0,700 г, 10,0%).

+ ЯМР (500 МГц, СОС1_;) δ: 4,69 (ушир.с, 1Н), 3,30-3,27 (м, 2Н), 3,24 (т, 1=6,0 Гц, 2Н), 2,92 (с, 3Н), 1,96-1,92 (м, 2Н).

Стадия В. трет-Бутил(3-метил-2-оксотетрагидропиримидин-1(2Н)-ил)ацетат

Раствор 0,30 г (2,6 ммоль) 1-метилтетрагидропиримидин-2(1Н)-она с описанной выше стадии А в 5 мл безводного ДМФА загружают в 10-мл круглодонную колбу, содержащую 0,16 г (4,2 ммоль) 60% суспензии гидрида натрия в минеральном масле в атмосфере азота. После перемешивания в течение 10 мин добавляют в один прием 0,62 г (3,2 ммоль) трет-бутилбромацетата, и реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Затем реакцию гасят 5 мл насыщенного водного раствора хлорида аммония, и затем смесь разбавляют 20 мл воды. Полученную суспензию экстрагируют этилацетатом (3x10 мл) и объединенные органические слои промывают водой (2x3 мл) и солевым раствором (1x3 мл) и сушат над сульфатом магния. Смесь фильтруют, упаривают, остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 0-5% метанола в этилацетате и получают указанное в заголовке соединение в виде прозрачного масла (0,090 г, 15%).

+ ЯМР (500 МГц, СОС1_;) δ: 3,88 (с, 2Н), 3,23 (т, 1=6 Гц, 2Н), 3,20 (т, 1=6 Гц, 2Н), 2,84 (с, 3Н), 1,941,89 (м, 2Н), 1,37 (с, 9Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 229 (МН)⁺.

Стадия С. (3-Метил-2-оксотетрагидропиримидин-1(2Н)-ил)уксусная кислота

- 44 020135

К раствору 0,090 г (0,39 ммоль) трет-бутил(3-метил-2-оксотетрагидропиримидин-1(2Н)-ил)ацетата с описанной выше стадии В в 4 мл безводного дихлорметана добавляют 1 мл ТФК. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 6 ч, затем упаривают в вакууме досуха и получают указанное в заголовке соединение в виде не совсем белой смолы (0,68 г, 99%). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 173 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 63. (3-Метил-2-оксоимидазолидин-1-ил)уксусная кислота (1-63) о

о I--------1 (3-Метил-2-оксоимидазолидин-1-ил)уксусную кислоту получают из коммерчески доступного Νметилэтан-1,2-диамина с использованием процедуры, аналогичной процедуре, используемой для получения промежуточного соединения 62. 'Н ЯМР (500 МГц, СЭСЕ) δ 7,21 (ушир.с, 1Н), 3,96 (с, 2Н), 3,483,42 (м, 2Н), 3,39-3,59 (м, 2Н), 2,80 (с, 3Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 159 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 64. 2-(3-Метил[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-8-ил)пропановая кислота (1-64)

Стадия Α. №-(3-Бромпиридин-2-ил)ацетогидразид

К раствору 0,800 г (3,38 ммоль) 2,3-дибромпиридина в 10 мл безводного 1,4-диоксана добавляют 0,325 г (10,1 ммоль) безводного гидразина и полученную смесь греют при 85°С в течение 8 ч. Реакционную смесь охлаждают до температуры окружающей среды и затем упаривают в вакууме досуха. Сырой остаток растворяют в безводном дихлорметане и раствор в атмосфере азота охлаждают до -78°С на бане с сухим льдом и ацетоном. Затем добавляют 1,0 мл (6,8 ммоль) триэтиламина, а затем 0,210 г (2,72 ммоль) ацетилхлорида. Полученную смесь нагревают до температуры окружающей среды в течение 20 мин и затем все летучие вещества удаляют в вакууме. Остаток суспендируют в 20 мл воды и экстрагируют этилацетатом (3х 10 мл). Объединенные экстракты промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают, и получают указанное в заголовке соединение (0,18 г, 23%). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 230, 232 (МН)⁺ и 188, 190 (МН-СОСН₃)⁺.

Стадия В. 8-Бром-3-метил[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин

К раствору 0,17 г (0,74 ммоль) №-(3-бромпиридин-2-ил)ацетогидразида с описанной выше стадии А в 40 мл безводного толуола добавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 20 ч с использованием ловушки Дина-Старка. Реакционную смесь охлаждают до температуры окружающей среды и затем упаривают в вакууме досуха, и получают указанное в заголовке соединение (0,13 г, 84%). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 212, 214 (МН)⁺.

Стадия С. Бензил-2-(3 -метил[ 1,2,4]триазоло [4,3-а]пиридин-8-ил)акрилат

К раствору 0,13 г (0,61 ммоль) 8-бром-3-метил[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридина с описанной выше стадии В в 4 мл безводного ТГФ добавляют раствор 0,36 г (0,80 ммоль) бензил-2(трибутилстаннил)акрилата (см. промежуточное соединение 62, стадия В) в 1 мл безводного ТГФ, 0,11 г (0,09 ммоль) тетракис (трифенилфосфин)палладия(0) и 0,0 67 г (0,67 ммоль) хлорида меди(1). Реакционную смесь греют при 60°С в течение 6 ч, охлаждают и фильтруют через слой целита®. Слой промывают 15 мл дихлорметана и объединенные фильтраты упаривают досуха. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 0-6% метанола в этилацетате, и получают указанное в заголовке соединение (0,13 г, 73%). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 294 (МН)⁺.

Стадия Ό. 2-(3-Метил[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-ил) пропановая кислота

К 0,040 г (0,038 ммоль) 10% палладия-на-угле добавляют раствор (0,080 г, 0,27 ммоль) полученного выше на стадии С бензил-2-(3-метил[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-8-ил)акрилата в 4 мл метанола. Полученную суспензию перемешивают в атмосфере водорода (~98,1 кПа (1 атмосфера)) в течение 6 ч. Остаток фильтруют через слой целита® и слой промывают холодным метанолом. Объединенные фильтраты упаривают при пониженном давлении, и получают указанное в заголовке соединение (0,043 г, 77%). ЖХМС: т/ζ (Е8) 206 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 65.

4-Метокси-2-(1Н-пиразол-1-ил)бутановая кислота (1-65) о

Стадия А. Метил-4-метокси-2-(1Н-пиразол-1-ил)бутаноат

К охлажденному (78°С) раствору 1,32 г (10,0 ммоль) метил-4-метоксибутаноата в 15 мл безводного ТГФ при перемешивании в атмосфере азота добавляют 10,5 мл (10,5 ммоль) 1,0 М раствора ЫНМОЗ в тетрагидрофуране. Полученную смесь перемешивают в течение 1 ч и затем добавляют 1,09 г (10 ммоль)

- 45 020135 хлортриметилсилана. После перемешивания в течение 20 мин добавляют 1,78 г (10,0 ммоль) твердого Νбромсукцинимида и смесь перемешивают в течение 2 ч при -78°С и затем постепенно в течение 40 мин нагревают до температуры окружающей среды. Реакцию гасят насыщенным водным раствором хлорида аммония и затем водную фазу экстрагируют этилацетатом (2x20 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают в вакууме досуха. Сырой остаток растворяют в 15 мл ДМФА, и добавляют 5,5 г (40 ммоль) карбоната калия, а затем 3,4 г (50 ммоль) 1Н-пиразола. Полученную смесь греют при 80°С в течение 40 мин и затем охлаждают до температуры окружающей среды. Реакционную смесь разбавляют 75 мл воды и экстрагируют этилацетатом (3ж 50 мл). Объединенные экстракты промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме досуха. Сырой остаток очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смеси 0-75% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде), и получают указанное в заголовке соединение (0,26 г, 13%). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 199 (МН)⁺.

Стадия В. 4-Метокси-2-(1Н-пиразол-1-ил)бутановая кислота

К раствору 0,045 г (0,23 ммоль) метил-4-метокси-2-(1Н-пиразол-1-ил)бутаноата с описанной выше стадии А в 2 мл метанола добавляют раствор 0,032 г (0,57 ммоль) гидроксида калия в 0,5 мл воды. Смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 1,5 ч и затем подкисляют 2н соляной кислотой до достижения рН 4. Смесь упаривают для удаления всех летучих веществ и затем экстрагируют этилацетатом. Объединенные экстракты промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают досуха, и получают указанное в заголовке соединение (0,040 г, 95%). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 185 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 66. (58)-6,7-Дигидро-5Н-пирроло[1,2-Ь][1,2,4]триазол-5-карбоновая кислота (1-66)

Стадия Α. (58)-1-Амино-5-[(тритилокси)метил]пирролидин-2-он

К охлажденному (0°С) раствору 0,550 г (1,54 ммоль) (8)-тритилгидроксиметилпирролидинона в 10 мл 1,2-диметоксиэтана в атмосфере азота добавляют 0,123 г (3,08 ммоль) 60% суспензии гидрида натрия в минеральном масле. После перемешивания в течение 30 мин добавляют небольшими порциями в течение 30 мин раствор 0,828 г (3,85 ммоль) 2-[(аминоокси)сульфонил]-1,3,5-триметилбензола в 5 мл диэтилового эфира. Реакционную смесь нагревают до температуры окружающей среды в течение ночи и затем фильтруют. Фильтровальный слой промывают диэтиловым эфиром и фильтрат последовательно промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и солевым раствором. Затем органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме и получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветного твердого вещества. Полученное твердое вещество загрязнено минеральным маслом из суспензии гидрида натрия и имеет массу 0,6 г (выход количественный). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 395 (М+Ха)⁺.

Стадия В. (58)-5-[(Тритилокси)метил]-6,7-дигидро-5Н-пирроло[1,2-Ь][1,2,4]триазол

К раствору 0,540 г (1,45 ммоль) (58)-1-амино-5-[(тритилокси)метил]пирролидин-2-она с описанной выше стадии А в 5 мл безводного ДМФА при перемешивании добавляют 0,327 г (7,25 ммоль) формамида, а затем 0,050 г (0,36 ммоль) хлорида цинка(11). Полученную смесь греют при 160°С в течение 48 ч, охлаждают до температуры окружающей среды и разбавляют 25 мл этилацетата. Раствор последовательно промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой и солевым раствором и органический слой сушат над сульфатом магния. Затем смесь фильтруют, упаривают в вакууме досуха, остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 0-100% этилацетата в гексане, и получают указанное в заголовке соединение (0,27 г, 49%). ЖХ-МС: т/ζ (Ε8) 382 (МН)⁺.

Стадия С. (58)-6,7-Дигидро-5Н-пирроло[1,2-Ь][1,2,4]триазол-5-илметанол

Продукт с описанной выше стадии В 0,27 г (0,71 ммоль) (58)-5-[(тритилокси)метил]-6,7-дигидро5Н-пирроло[1,2-Ь][1,2,4]триазола растворяют в 35 мл 4,0 М раствора хлороводорода в безводном 1,4диоксане. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин, реакцию гасят 20 мл метанола и затем смесь упаривают в вакууме досуха. Остаток очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18;

- 46 020135 градиент смеси 0-90% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде) и получают указанное в заголовке соединение (0,050 г, 50%). ЖХ-МС: т/ζ (ЕБ) 140 (МН)⁺.

Стадия Ό. (5Б)-6,7-Дигидро-5Н-пирроло[1,2-Ь][ 1,2,4]триазол-5-карбоновая кислота

К раствору 0,025 г (0,18 ммоль) (5Б)-6,7-дигидро-5Н-пирроло[1,2-Ь][1,2,4]триазол-5-илметанола с описанной выше стадии С в 1 мл водного фосфатного буфера, рН 6,7, и 1 мл ацетонитрила при перемешивании добавляют 0,0020 г (0,013 ммоль) 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксила, 0,033 г (0,36 ммоль) хлорита натрия (33 мг, 0,036 ммоль) и 0,0044 мл (0,003 6 ммоль) гипохлорита натрия. Полученную смесь перемешивают при 35°С в течение 72 ч и затем концентрируют в вакууме досуха. Остаток растворяют в 1 мл (4 ммоль) 4,0 М раствора хлороводорода в безводном 1,4-диоксане и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смеси 0-70% 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,1% трифторуксусной кислоты в воде) и получают указанное в заголовке соединение в виде соли ТФК. Затем продукт растворяют в 1 мл 4,0 М раствора хлороводорода в безводном 1,4-диоксане и концентрируют в вакууме, и получают указанное в заголовке соединение в виде соли гидрохлорида. ЖХ-МС: т/ζ (ЕБ) 154 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 67. 2-(1,3-Тиазол-4-ил)пропановая кислота (1-67)

Стадия А. Этил-2-(1,3-тиазол-4-ил)пропаноат

К охлажденному (0°С) раствору 43,3 г (300 ммоль) этил-2-метилацетоацетата в 270 мл хлороформа добавляют по каплям в течение 30 мин раствор 15,5 мл (300 ммоль) брома в 30 мл хлороформа. По завершении добавления смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Через реакционную смесь барботируют воздух в течение 70 мин, затем раствор сушат над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают, и получают 66,0 г (99,0%) бледно-оранжевого масла. К охлажденной (0°С) смеси 40,0 г (180 ммоль) полученного промежуточного соединения и 10,7 мл (269 ммоль) формамида в 400 мл безводного 1,4-диоксана добавляют 15,0 г (67,2 ммоль) пентасульфида фосфора. Смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 1,5 ч и затем греют при 93°С в течение 2,5 ч. После охлаждения до температуры окружающей среды в течение ночи все летучие вещества удаляют в вакууме, и остаток подщелачивают, добавляя насыщенный водный раствор бикарбоната натрия. Водную фазу экстрагируют дихлорметаном (3x300 мл) и объединенные органические слои промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, водой и солевым раствором и затем сушат над сульфатом магния. Смесь фильтруют, упаривают, остаток очищают ЖХСД (Вю!аде НоГОоп 2х х ЕЬЛБН 651), элюент: 100% гексана (450 мл), затем градиент, повышающийся от 100% гексана до смеси 25% ЕЮЛс в гексане (2400 мл), затем смесь 25% ЕЮЛс в гексане (1200 мл) и получают указанное в заголовке соединение в виде оранжевого масла (20,0 г, 60,0%).

^!Н ЯМР (500 МГц, С1)С1_;) δ : 1,24 (т, 4=7,1, 3Н), 1,58 (д, 1=7,3, 3Н), 4,05 (кв., 1=7,3, 1Н), 4,17 (м, 2Н), 7,18 (д, 1=1,3, 1Н), 8,76 (д, 1=1,6, 1Н).

Стадия В. 2-(1,3-Тиазол-4-ил)пропановая кислота

Раствор 5,0 г (27 ммоль) этил-2-(1,3-тиазол-4-ил)пропаноата с описанной выше стадии А в 25 мл метанола добавляют по каплям к смеси 6,6 мл (33 ммоль) водного 5н раствора №ЮН, воды (16 мл) и метанола (30 мл). По завершении добавления смесь перемешивают в течение 2 ч. Метанол удаляют выпариванием, и доводят рН оставшейся водной смеси до ~2,5 концентрированной соляной кислотой. Смесь насыщают твердым хлоридом натрия и экстрагируют ЕЮЛс (3x100 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом натрия и обрабатывают активированным углем в течение ночи. Смесь фильтруют и упаривают, и получают указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества (4,0 г, 95%). ^!Н ЯМР (500 МГц, СЧХ'Ь) δ: 1,63 (д, 1=7,3, 3Н), 4,11 (кв., 1=7,3), 7,25 (д, 1=1,8, 1Н), 8,88 (д, 1=1,8, 1Н), 10,25 (ушир.с, 1Н).

Промежуточные соединения 68 и 69. (4Я)-5,6-Дигидро-4Н-циклопента[й][1,3]тиазол-4-карбоновая кислота (ί-68) и (4Б)-5,6-дигидро-4Н-циклопента[4][1,3]тиазол-4-карбоновая кислота (1-69)

Промежуточные соединения 68 и 69 получают из этил-2-оксоциклопентанкарбоксилата с использованием процедуры, аналогичной процедуре, используемой для получения промежуточного соединения 47. Два энантиомера разделяют с помощью БЕС (БирегсгШса1 Е1шй СТютаЮщарНу) СО₂ Б с использованием колонки ЛЭ-Н, 10% МеОН/90% СО₂, 2,1 мл/мин, 10000 кПа (100 бар), 40°С. Элюирующийся первым энантиомер (4Б)-5,6-дигидро-4Н-циклопента[4][1,3]тиазол-4-карбоновую кислоту обозначают как

- 47 020135 промежуточное соединение 68 (ί-68), и второй элюируемый энантиомер (4К)-5,6-дигидро-4Нциклопента[б][1,3]тиазол-4-карбоновую кислоту обозначают как промежуточное соединение 69 (1-69).

Ή ЯМР (500 МГц, СЭСР) δ: 2,59-2,68 (м, 1Н), 2,71-2,79 (м, 1Н), 2,83-2,90 (м, 1Н), 2,92-3,00 (м, 1Н), 3,86 (м, 1Н), 8,82 (с, 1Н), 12,45 (с, 1Н).

Промежуточное соединение 70. 2-(1,3-Тиазол-4-ил)бутановая кислота (1-70)

2-(1,3-Тиазол-4-ил)бутановую кислоту получают из коммерчески доступных 1,3-тиазол-4илуксусной кислоты и этилиодида с использованием процедуры, аналогичной процедуре, используемой для получения промежуточного соединения 26.

Ή ЯМР (500 МГц, С1)С1_;) δ: 0,95 (т, 1=7,3, 3Н), 1,25 (т, 1=7,3, 3Н), 1,95-2,05 (м, 1Н), 2,08-2,17 (м, 1Н), 3,88 (т, 1=7,6, 1Н), 4,15-4,23 (м, 2Н), 7,22 (д, 1=1,8, 1Н), 8,77 (д, 1=1,8, 1Н).

Промежуточное соединение 71. 4-Метил-1Н-1,2,3-триазол-1-илуксусная кислота (1-71)

Стадия А. Этил[4-метил-5-(триметилсилил)-1Н-1,2,3-триазол- Рил]ацетат

К раствору 2,0 г (18 ммоль) 1-(триметилсилил)-1-проина в толуоле (20 мл) добавляют 2,3 г (18 ммоль) этилазидоацетата. Реакционную смесь греют при 120°С в течение ночи и затем охлаждают до температуры окружающей среды. Все летучие вещества удаляют при пониженном давлении, остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 5-25% ацетона в гексане, и получают указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла (0,77 г, 18%).

Ή ЯМР (500 МГц, СОСР) : δ 5,01 (с, 2Н), 4,2 (м, 2Н), 2,25 (с, 3Н), 1,22 (м, 3Н), 0,295 (с, 9Н).

Стадия В. Этил[4-метил-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]ацетат

К раствору 0,77 г (3,2 ммоль) этил[4-метил-5-(триметилсилил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]ацетата с описанной выше стадии А в 2 мл ТГФ добавляют 1,3 мл (32 ммоль) раствора 50% фтороводородной кислоты в воде. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч и затем упаривают в вакууме досуха. Затем добавляют 5 мл 2,0 н раствора аммиака в метаноле, затем смесь снова упаривают в вакууме досуха. Смесь растворяют в дихлорметане, фильтруют и затем упаривают в вакууме и получают указанное в заголовке соединение в виде прозрачной смолы (0,51 г, 93%).

Ή ЯМР (500 МГц, С1)С1_;) δ: 7,5 (с, 1Н), 5,05 (с, 2Н), 4,23 (м, 2Н), 2,30 (с, 3Н), 1,30 (м, 3Н).

Стадия С. [4-Метил-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]уксусная кислота

К раствору 0,51 г (3,0 ммоль) этил[4-метил-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]ацетата с описанной выше стадии В в тетрагидрофуране (10 мл) и метаноле (6 мл) добавляют 6 мл (6 ммоль) водного 1,0 М раствора гидроксида лития. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 1 ч. Реакционную смесь нейтрализуют 8 мл 2н соляной кислоты и затем упаривают для удаления всех летучих веществ. Водную фазу экстрагируют этилацетатом, объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают досуха, и получают указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (0,40 г, 95%). ЖХ/МС 142 (М+1).

Промежуточное соединение 72. 2-[4-(Метоксикарбонил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]пропановая кислота (1-72)

Промежуточное соединение 73. 2-[5-(Метоксикарбонил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]пропановая кислота (1-73)

Стадия А. Метил-1-(2-трет-бутокси-1-метил-2-оксоэтил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксилат и метил-1(2-трет-бутокси-1-метил-2-оксоэтил)-1Н-1,2,3-триазол-5-карбоксилат

К раствору 1,87 г (22,3 ммоль) метилпроп-2-иноата в 40 мл толуола добавляют 1,9 г (11 ммоль) трет-бутил-2-азидопропаната. Реакционную смесь греют при 100°С в течение 3 ч и затем охлаждают до температуры окружающей среды. Все летучие вещества удаляют при пониженном давлении, сырой остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 5-25% ацетона в гексане, и получают названные в заголовке соединения.

Метил-1-(2-трет-бутокси-1-метил-2-оксоэтил)-1Н-1,2,3-триазол-4-карбоксилат (более низкий КГ) (1,4 г, 50%).

Ή ЯМР (500 МГц, С1)С1_;) δ: 8,30 (с, 1Н), 5,46-5,41 (м, 1Н), 4,11 (с, 3Н), 1,83 (д, 3Н), 1,47 (с, 9Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 256 (МН)⁺.

Метил-1-(2-трет-бутокси-1-метил-2-оксоэтил)-1Н-1,2,3-триазол-5-карбоксилат (более высокий КГ) (0,45 г, 16%).

- 48 020135 *Η ЯМР (500 МГц, С1)С1_;) δ: 8,15 (с, 1Н), 5,77-5,72 (м, 1Н), 3,90 (с, 3Η), 1,95 (д, 1=7,3 Гц, 3Η), 1,41 (с, 9Н). ЖХ-МС: т/ζ (Εδ) 256 (МН)⁺.

Стадия В. (ί-72): 2-[4-(Метоксикарбонил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]пропановая кислота

К раствору 0,55 г (2,2 ммоль) метил-1-(2-трет-бутокси-1-метил-2-оксоэтил)-1Н-1,2,3-триазол-4карбоксилата с описанной выше стадии А в 3 мл безводного 1,4-диоксана при перемешивании добавляют 2,7 мл (11 ммоль) 4,0 М раствора хлороводорода в 1,4-диоксане. Полученную смесь перемешивают в течение 1 ч, затем упаривают досуха, и получают указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества (0,40 г, 93%).

¹Н ЯМР (500 МГц, СИХЮ) δ: 8,67 (с, 1Н), 5,60 (кв., 1=7,3 Гц, 1Н), 3,90 (с, 3Η), 1,88 (д, 1=7,3 Гц, 3Η). ЖХ-МС: т/ζ (Εδ) 200 (МН)⁺.

Стадия В. (ί-73). 2-[5-(Метоксикарбонил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]пропановая кислота

К раствору 0,40 г (1,6 ммоль) метил-1-(2-трет-бутокси-1-метил-2-оксоэтил)-1Н-1,2,3-триазол-5карбоксилата с описанной выше стадии А в 3 мл безводного 1,4-диоксана при перемешивании добавляют 2,7 мл (11 ммоль) 4,0 М раствора хлороводорода в 1,4-диоксане. Полученную смесь перемешивают в течение 1 ч, затем упаривают досуха, и получают указанное в заголовке соединение в виде не совсем белого твердого вещества (0,27 г, 87%). ЖХ-МС т/ζ (Εδ) 200 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 74. 2-[4-(Аминокарбонил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]пропановая кислота (1-74)

2-[4-(Аминокарбонил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил]пропановую кислоту получают из коммерчески доступных пропиоламида и трет-бутил-2-азидопропаната с использованием процедуры, аналогичной процедуре, используемой для получения промежуточного соединения 52.

¹Η ЯМР (500 МГц, С1);С)1)) δ: 8,48 (с, 1Н), 5,50 (кв., 1=7,3 Гц, 1Н), 1,85 (д, 1=7,3 Гц, 3Η). ЖХ-МС: т/ζ (Εδ) 185 (МН)⁺.

Промежуточные соединения 75 и 76.

2-(4-Метил-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропановая кислота (1-75) и 2-(5-метил-1Н-1,2,3-триазол-1ил)пропановая кислота (1-76)

ί-75 ί-76

Стадия А. Метил-2-[4-метил-5-(триметилсилил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропаноат и метил-2-[5метил-4 -(триметилсилил)-1 Н- 1,2,3-триазол-1 -ил)пропаноат

К раствору 1,9 г (17 ммоль) триметил(проп-1-ин-1-ил)силана в 20 мл толуола добавляют 2,3 г (18 ммоль) метил-2-азидопропаноата. Реакционную смесь греют при 120°С в течение 3 ч. Смесь охлаждают и растворитель выпаривают при пониженном давлении. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 5-25% ацетона в гексане и получают названные в заголовке соединения как смесь метил-2-[4-метил-5-(триметилсилил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропаноата и метил-2-[5-метил-4-(триметилсилил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропаноата в соотношении ~6:1 в виде бесцветного масла (3,0 г, 80%). ЖХ-МС т/ζ (Εδ) 242 (МН)⁺.

Стадия В. Метил-2-(4-метил-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропаноат и метил-2-(5-метил-1Н-1,2,3-триазол1-ил)пропаноат

К раствору 1,3 г (5,4 ммоль) метил-2-[4-метил-5-(триметилсилил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропаноата и метил-2-[5-метил-4-(триметилсилил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропаноата с описанной выше стадии А в 2 мл ТГФ добавляют 2,2 мл (54 ммоль) раствора 50% фтороводородной кислоты в воде. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин и затем упаривают в вакууме досуха. Затем добавляют 8 мл 2,0 н раствора аммиака в метаноле и затем смесь снова упаривают в вакууме досуха. Смесь растворяют в дихлорметане, фильтруют и затем упаривают в вакууме, и получают названные в заголовке соединения как смесь метил-2-(4-метил-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропаноата и метил-2-(5-метил1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропаноата в соотношении ~8:1. Смесь представляет собой прозрачную смолу (0,67 г, 73%). ЖХ-МС т/ζ (Εδ) 170 (МН)⁺.

Стадия С. 2-(4-Метил-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропановая кислота и 2-(5-метил-1Н-1,2,3-триазол-1ил)пропановая кислота

К раствору 0,76 г (4,5 ммоль) метил-2-(4-метил-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропаноата и метил-2-(5метил-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропаноата с описанной выше стадии В в 12 мл этанола добавляют 13,5 мл (13,5 ммоль) водного 1,0 М раствора гидроксида лития. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 1 ч. Реакционную смесь подкисляют 2н соляной кислотой до достижения рН 4 и затем упаривают для удаления всех летучих веществ. Водную фазу экстрагируют этилаце

- 49 020135 татом, объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают досуха, и получают названные в заголовке соединения как смесь 2-(4-метил-1Н1,2,3-триазол-1-ил)пропановой кислоты и 2-(5-метил-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)пропановой кислоты в соотношении ~8:1. Смесь представляет собой не совсем белое твердое вещество (0,50 г, 58%). ЖХ-МС т/ζ (Е8) 156 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 77. трет-Бутил-(28,5К)-2-(4-{[(28)-2-аминопропаноил]амино}бензил)5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилат (1-77)

Стадия А. трет-Бутил-(28,5К)-2-{4-[((9Н-флуорен-9-илокси)карбонил]амино}пропаноил)амино] бензил} -5-[(К)-гидрокси(фенил)метил] пирролидин-1 -карбоксилат

К раствору 1,85 г (4,82 ммоль) промежуточного соединения 1-13а в 20 мл дихлорметана добавляют 1,0 мл (7,24 ммоль) триэтиламина, а затем 1,67 г (5,07 ммоль) коммерчески доступного 9Н-флуорен-9-ил[(18)-2-хлор-1-метил-2-оксоэтил]карбамата. Полученную смесь перемешивают в течение 1,5 ч, и затем все летучие вещества удаляют в вакууме. Остаток разбавляют водой и затем экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают, и получают сырое указанное в заголовке соединение, которое используют без дополнительной очистки (3,2 г). ЖХ-МС т/ζ (Е8) 676 (МН)⁺.

Стадия В. трет-Бутил-(28,5К)-2-(4-{ [(28)-2-аминопропаноил]амино}бензил)-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил] пирролидин-1 -карбоксилат

К раствору 3,15 г (4,65 ммоль) трет-бутил-(28,5К)-2-(4-{[(28)-2-{[(9Н-флуорен-9илокси)карбонил] амино } пропаноил)амино] бензил} -5 - [(К)-гидрокси(фенил)метил] пирролидин-1 карбоксилата с описанной выше стадии А в 3 мл безводного ТГФ при перемешивании добавляют 0,396 г (4,65 ммоль) пиперидина. Полученную смесь перемешивают при 35°С в атмосфере азота в течение 2 ч, затем все летучие вещества удаляют в вакууме и получают сырое указанное в заголовке соединение, которое используют без дополнительной очистки. ЖХ-МС т/ζ (Е8) 454 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 78. трет-Бутил-(28,5К)-2-[(К)-гидрокси(фенил)метил]-5-(4-{[(28)-2(метиламино)пропаноил] амино}бензил)пирролидин-1 -карбоксилат (1-78)

Стадия А. трет-Бутил-(28,5К)-2-[4-({(28)-2-[[(9Н-флуорен-9-илокси)карбонил](метил)амино}пропаноил}амино)бензил]-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилат

К раствору 0,192 г (0,5 ммоль) промежуточного соединения 17 в 4 мл дихлорметана при перемешивании в атмосфере азота добавляют 0,203 г (0,625 ммоль) коммерчески доступной (28)-2-[[(9Н-флуорен9-илокси)карбонил](метил)амино]пропановой кислоты, а затем 0,014 г (0,10 ммоль) 1-гидрокси-7азабензотриазола и 0,144 г (0,750 ммоль) гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида. Полученную суспензию перемешивают при температуре окружающей среды в течение 24 ч. Сырую реакционную смесь разбавляют 25 мл дихлорметана, промывают водой и затем сушат над сульфатом магния. Смесь фильтруют и упаривают в вакууме досуха, и получают сырое указанное в заголовке соединение, которое используют без дополнительной очистки. ЖХ-МС т/ζ (Е8) 690 (МН)⁺.

Стадия В. трет-Бутил-(28,5К)-2-[(К)-гидрокси(фенил)метил]-5-(4-{ [(28)-2-(метиламино)пропаноил] амино}бензил)пирролидин-1 -карбоксилат

К раствору 0,410 г (0,593 ммоль) трет-бутил-(28,5К)-2-[4-({(28)-2-[[(9Н-флуорен-9илокси)карбонил](метил)амино}пропаноил}амино)бензил]-5-[(К)-гидрокси(пиридин-3-ил)метил]пирролидин-1-карбоксилата с описанной выше стадии А в 3 мл безводного ТГФ добавляют 0,152 г (1,78 ммоль) пиперидина. Полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 24 ч и затем разбавляют 25 мл дихлорметана. Смесь промывают водой и затем сушат над сульфатом магния. Смесь фильтруют и упаривают в вакууме досуха, и получают сырое указанное в заголовке соединение, которое используют без дополнительной очистки. ЖХ-МС т/ζ (Е8) 468 (МН)⁺.

Промежуточное соединение 79. трет-Бутил-(28,5К)-2-[(К)-гидрокси(фенил)метил]-5-(4-{[(2К)-2(метиламино)пропаноил]амино}бензил)пирролидин-1-карбоксилат (1-79)

Промежуточное соединение 79 получают из промежуточного соединения 1-13а и коммерчески дос

- 50 020135 тупной (2К)-2-[[(9Н-флуорен-9-илокси)карбонил](метил)амино]пропановой кислоты, следуя процедуре, описанной для синтеза промежуточного соединения 78. ЖХ-МС т/ζ (Е8) 468 (МН)⁺.

Промежуточные соединения 80а и 80Ь. трет-Бутил-(28,5К)-2-(4-амино-3-бромбензил)-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1карбоксилат (1-80а);

трет-бутил-(2К,5К)-2-(4-амино-3-бромбензил)-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1карбоксилат (1-80Ь)

Стадия А. трет-Бутил-(28,5К)-2-(4-амино-3-бромбензил)-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин1-карбоксилат (1-80а)

61Н_г

К раствору трет-бутил-(28,5К)-2-(4-аминобензил)-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1карбоксилата (промежуточное соединение 1-13а, 214 мг, 0,559 ммоль) в ДМФА (2 мл), охлажденному до 0°С на бане со смесью лед/вода, добавляют ΝΒ8 (100 мг, 0,559 ммоль) и полученный раствор перемешивают в течение 1,5 ч, позволяя нагреваться до комнатной температуры. Смесь упаривают в вакууме, остаток очищают ЖХСД на Вю1адс Ηοηζοη с использованием градиента смесей 0-40% этилацетата в гексане, и получают продукт реакции (232 мг, 90%) в виде белой пены. ЖХ-МС т/ζ (Е8) 483 (МУ1)' и 485 (М№1+2)'.

Стадия В. трет-Бутил-(2К,5К)-2-(4-амино-3-бромбензил)-5-[(К)-гидрокси(фенил)ме-

К раствору трет-бутил-(2К,5К)-2-(4-аминобензил)-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1карбоксилата (промежуточное соединение 1-13Ь, 108 мг, 0,282 ммоль) в ДМФА (1,5 мл), охлажденному до 0°С на бане со смесью лед/вода, добавляют ΝΒ8 (55,3 мг, 0,311 ммоль), и полученный раствор перемешивают в течение 3 ч, позволяя нагреваться до комнатной температуры. Смесь упаривают в вакууме, остаток очищают ЖХСД на Вю1адс Ηοηζοη с использованием градиента смесей 0-40% этилацетата в гексане, и получают продукт реакции (83,9 мг, 64%) в виде белой пены. ЖХ-МС т/ζ (Е8) 483 (МЧ1)' и 485 (М№1+2)'.

Биологические анализы

Описанные далее анализы ίη νίίτο подходят для скрининга соединений, которые обладают активностью селективного агониста β3.

Функциональный анализ

Продуцирование сАМР в ответ на лиганд измеряют согласно ВнгЮп с1 а1. (1991, Α^οηίδΐ-ίηά^βά беδοηδίΐίζηΐίοη οΓ Ό2 бοрат^ηе гесерФт ίη йитаη Υ-79 ^еΐ^ηοЬ1а8ΐοта се118, Мο1. РИататок, ν.3229: 650-658) со следующими модификациями. Продуцирование сАМР измеряют с использованием иммуноанализа однородного резонансного перехода энергии разрешенной во времени флуоресценции (ΕΑΝΕΈ™ , Регкт Е1тег) согласно инструкциям изготовителей. Клетки яичника китайского хомячка (СНО), устойчиво трансфицированные клонированным β-адренергическим рецептором (β1, β2 или β3), собирают после 3суточного субкультивирования. Харвестирование клеток осуществляют с помощью бесферментных сред для диссоциации (8рес1а1йу Меб1а). Затем клетки считают и ресуспендируют в буфере для анализа (сбалансированный солевой раствор Хэнкса с добавлением 5 мМ ИЕРЕ8, 0,1% Β8Α), содержащем ингибитор фосфодиэстеразы (1ВМХ, 0,6 мМ). Реакцию инициируют, смешивая 6000 клеток в 6 мкл с 6 мкл антител к сАМР, меченных А1еха Ейюг (набор ΕΑΝΕΈ™ ), которые затем добавляют в лунку для анализа, содержащую 12 мкл соединения (разведенного в буфере для анализа до конечной концентрации 2Х). Реакция протекает в течение 30 мин при комнатной температуре и обрывается путем добавления 24 мкл буфера для детекции (набор ΕΑΝί,Έ™ ). Затем аналитический планшет инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре и проводят измерения разрешенной во времени флуоресценции на аппарате для прочтения планшетов Регкт Е1тег Епу15ЮП или равноценном приборе. Неизвестный уровень сАМР определяют путем сравнения уровней флуоресценции со стандартной кривой для сАМР.

- 51 020135

Не селективный полный (3-адренергический лиганд агонистов изопротеренол используют для всех трех рецепторов для определения максимальной стимуляции. Селективный лиганд β-адренергического рецептора (ΑΚ) (33 человека (8)-Ν-[4-[2-[ [2-гидрокси-3-(4-гидроксифенокси)пропил]амино]этил]фенил]4-иодбензолсульфонамид используют в качестве контроля во всех анализах. Изопротеренол титруют в конечной концентрации в анализе от 10^-10 до 10^-5 М, и селективный лиганд (8)-№[4-[2-[[2-гидрокси-3-(4гидроксифенокси)пропил]амино]этил]фенил]-4-иодбензолсульфонамид титруют к рецептору (33 в концентрации от 10^-10 до 10^-5 М. Неизвестные лиганды титруют ко всем 3 подтипам β-адренергических рецепторов в конечной концентрации в анализе от 10^-10 до 10^-5 М для определения ΕС5₀. ЕС₅₀ определяют как концентрацию соединения, которая дает 50% активацию от ее собственного максимума. Данные анализируют с использованием Мютозой Εχсе1 и СгарНаб Ρπδΐη или специально разработанного пакета программ для анализа данных.

Анализ связывания

Соединения также анализируют с рецепторами β 1 и β2 для определения селективности. Все анализы связывания проводят с использованием мембран, полученных из клеток СНО, рекомбинантно экспрессирующих рецепторы β1 или β2. Клетки выращивают в течение 3-4 суток после деградации; присоединившиеся клетки промывают ΡΒ8 и затем лизируют на льду в 1 мМ трис, рН 7,2, в течение 10 мин. Колбы вычищают для извлечения клеток, и затем клетки гомогенизируют с использованием гомогенизатора тефлон/стекло. Мембраны собирают центрифугированием при 38000х д в течение 15 мин при 4°С. Осевшие мембраны ресуспендируют в буфере ТМЕ (50 мМ трис, рН 7,4, 5 мМ МдС1₂, 2 мМ ЭДТК) в концентрации 1 мг белка/мл. Можно получить крупные партии мембран, распределить по аликвотам и хранить при -70°С до одного года без потери потенциала. Анализ связывания осуществляют, инкубируя вместе мембраны (2-5 мкг белка), меченый радиоактивным изотопом ¹²⁵1-цианопиндолол ('^Ι-ΟΎΡ, 45 пМ), 200 мкг гранул \νθΑ-ΡνΤ 8ΡΑ (ΟΕ НеаХЬсате) и испытываемые соединения в конечных концентрациях, колеблющихся от 10^-10 до 10^-5 М, в конечном объеме 200 мкл буфера ТМЕ, содержащего 0,1% Β8Α. Аналитический планшет инкубируют в течение 1 ч при встряхивании при комнатной температуре и затем помещают в сцинтилляционный счетчик Ρе^к^η Б1тег Ττί1πχ. Планшеты перед подсчетом оставляют в счетчике Ττί1πχ в темноте приблизительно на 10 ч. Данные анализируют с использованием 4параметрического нелинейного регрессионного анализа с использованием или программы СгарНаб Ρπδΐη. или специально разработанного пакета программ для анализа данных. 1С50 определяют как концентрацию соединения, способную ингибировать на 50% связывание меченного радиоактивной меткой вещества (¹²⁵Ι^ΥΡ). Селективность соединения в отношении рецептора β3 можно определить, вычисляя отношение (1С50 β1 ΑΚ)/^5ο β3 ΑΚ).

Пример 1. 2-(2-Амино-1,3-тиазол-4-ил)-Щ4-({(5К)-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирроли-

Стадия А. трет-Бутил-(5К)-2-(4-{ [(2-амино-1,3-тиазол-4-ил)ацетил]амино}бензил)-5-[(К)-{ [третбутил(диметил)силил] окси}(фенил)метил] пирролидин-1 -карбоксилат

К раствору 10 мг трет-бутил-(5К)-2-(4-аминобензил)-5-[(К)-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилата (1-3) (смесь цис/транс, 5:1, 0,02 ммоль) и (2-амино1,3-тиазол-4-ил)уксусной кислоты (3,18 мг, 0,02 ммоль) в 0,5 мл безводного ДМФА добавляют 0,5 М раствор НОΑΐ в ДМФА (0,04 мл, 0,02 ммоль), а затем БЭС (5,8 мг, 0,03 ммоль) и ΌΙΕΑ (3,5 мкл, 0,02 ммоль). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 16 ч. Смесь промывают водой и экстрагируют дихлорметаном (2х2 мл). Органические слои объединяют, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают на пластинке для препаративной ТСХ (500 мкМ) с элюированием смесью 5% МеОН в дихлорметане, и получают продукт реакции (10,3 мг, 81%). т/ζ (Ε8) 637 (МН)⁺, 659 ιΛΙΝαι.

Стадия В. 2-(2-Амино-1,3-тиазол-4-ил)-№[4-({(5К)-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидинил}метил)фенил]ацетамид

К раствору 7 мг (0,01 ммоль) трет-бутил-(5К)-2-(4-{[(2-амино-1,3-тиазол-4-ил)ацетил]амино}бензил)-5-[(К)-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилата

- 52 020135 (со стадии А) в 0,20 мл метанола добавляют 0,20 мл концентрированной НС1 и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Проводят азеотропную обработку с толуолом (2х) для удаления воды. Остаток растворяют в смеси ацетонитрил/вода/МеОН (9:1:1) и очищают на установке ВЭЖХ СПюп с элюированием с градиентом смесями 0-50% ацетонитрил/вода с буфером 0,05% ТФК. Фракции, содержащие продукт реакции, объединяют, замораживают и лиофилизуют, и получают белую пену (3,3 мг, 71%). т/ζ (Е8) 423 (МН)⁺. (Смесь ~5:1).

¹Н ЯМР (500 МГц, С1)_;О1)) δ: 7,56 (ушир.д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,44 (д, 7,8 Гц, 2Н), 7,39 (т, 1=7,6 Гц, 2Н) 7,35-7,32 (м, 0,8Н), 7,32-7,29 (м, 0,2Н второстепенный изомер), 7,26 (д, 1=8,0 Гц, 1,7Н), 7,14 (д, 1=8,1 Гц, 0,3 Н второстепенный изомер), 6,67 и 6,66 (ушир.с, 0,2/0,8Н, составляющие в сумме 1Н), 4,72 (д, 1=8,5 Гц, 1Н), 3,80-3,70 (м, 4Н) 3,14 (дд, 1=6,1, 13,8 Гц, 1Н), 2,95 (дд, 1=9,1, 13,8 Гц, 1Н), 2,08-2,00 (м, 1Н), 1,861,74 (м, 3Н).

С использованием биологических анализов, описанных выше, определяют, что функциональная активность соединения примера 1 в отношении человеческого β3 составляет от 1 до 10 нМ.

Пример 2. 2-(2-Амино-1,3-тиазол-4-ил)-№[4-({(28,5К)-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидинил } метил) фенил] ацетамид

Стадия А. трет-Бутил-(28,5К)-2-(4-{ [(2-амино-1,3-тиазол-4-ил)ацетил]амино}бензил)-5-[(К)-{ [третбутил (диметил)силил] окси}(фенил)метил] пирролидин-1 -карбоксилат

Указанное в заголовке соединение получают из трет-бутил-(28,5К)-2-(4-аминобензил)-5-[(К){[трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилата (1-4а) и (2-амино-1,3тиазол-4-ил)уксусной кислоты согласно процедуре примера 1, стадия А. Сырой продукт очищают на пластинке для препаративной ТСХ с элюированием смесью 5% МеОН в дихлорметане, и получают продукт реакции (4,1 мг, 21%). т/ζ (Е8) 637 (МН)⁺, 659 (ММ)'.

Стадия В. 2-(2-Амино-1,3-тиазол-4-ил)-№[4-({(28,5К)-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидинил } метил) фенил] ацетамид

Указанное в заголовке соединение получают из 4 мг трет-бутил-(28,5К)-2-(4-{[(2-амино-1,3-тиазол4-ил)ацетил]амино}бензил)-5-[(К)-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}(фенил)метил]пирролидин-1карбоксилата (со стадии А) согласно процедуре примера 1, стадия В. Сырой продукт очищают на установке ВЭЖХ СПюп с элюированием с градиентом смесями 0-50% ацетонитрил/вода с буфером 0,05% ТФК. Фракции, содержащие продукт реакции, объединяют, замораживают и лиофилизуют, и получают белую пену (3,3 мг, 71%). т/ζ (Е8) 423 (МН)⁺.

¹Н ЯМР (500 МГц, С1)_;О1)) δ: 7,55 (ушир.д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,44 (д, 7,8 Гц, 2Н), 7,39 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,35-7,33 (м, 1Н), 7,25 (д, 1=8,0 Гц, 2Н), 6,65 (ушир.с, 1Н), 4,72 (д, 1=8,5 Гц, 1Н), 3,80-3,72 (м, 4Н), 3,14 (дд, 1=6,1, 13,8 Гц, 1Н), 2,96 (дд, 1=9,1, 13,8 Гц, 1Н), 2,07-2,00 (м, 1Н), 1,85-1,73 (м, 3Н).

С использованием биологических анализов, описанных выше, определяют, что функциональная активность соединения примера 2 в отношении человеческого β3 составляет от 1 до 10 нМ.

Пример 3. 2-Амино-№[4-{((28,5К)-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-2-ил}метил)фенил]5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-карбоксамид

Стадия А. трет-Бутил-(28,5К)-2-(4-[({2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-ил}карбонил)амино]бензил}-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1-карбо ксилат

220 мг (0,58 ммоль) трет-бутил-(28,5К)-2-(4-аминобензил)-5-[(К)К раствору

- 53 020135 гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилата (1-13а) и 164 мг (0,58 ммоль) 2-[(третбутоксикарбонил)амино]-5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-карбоновой кислоты (1-8) в безводном ДМФА (5 мл) добавляют БЭС (165 мг, 0,86 ммоль), НОВ! (132 мг, 0,86 ммоль) и основание Хюнига (0,3 мл, 1,7 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь выливают в воду (50 мл) и экстрагируют ΕίΟΛο (3ж 30 мл), объединенные ΕίΟΛο слои промывают водой (2x50 мл), насыщенным раствором №1С1 (25 мл), сушат над Мд§О₄, фильтруют и упаривают. Остаток очищают ЖХСД (Вю!аде Нопхоп: ΕΕ-ΑδΜ 25+М), элюент: 100% гексана (100 мл), градиент смесей 0-35% ΕΐΟΑο в гексане (750 мл), затем 35% ΕΐΟΑο в гексане (600 мл). Диастереоизомеры разделяют хиральной ВЭЖХ на колонке с ΑΏ (элюент: смесь 25% ΙΡΑ в гептане) на изомер, который элюируется первым (134 мг, 36%), и изомер, который элюируется вторым (126 мг, 34%), оба в виде белой пены.

Стадия В. 2-Амино-N-[4-{((2§,5Κ)-5-[(Κ)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-2-ил}метил)фенил]5,6-дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-карбоксамид

ОН _нN θ

Н

К раствору 126 мг (0,19 ммоль) трет-бутил-(28,5Н)-2-(4-[({2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-5,6дигидро-4Н-циклопента[а][1,3]тиазол-4-ил}карбонил)амино]бензил}-5-[(Е)-гидрокси(фенил)метил]пирролидин-1-карбоксилата (со стадии А, изомер, который элюируется вторым) в ЭСМ (3 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (3,0 мл, 38 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь упаривают и пропускают через картридж 8СХ с элюированием 2 М раствором ΝΉ₃ в метаноле для получения основания в свободном виде. Продукт очищают препаративной ТСХ 2x [20x20 смx100 мкм], элюент смесь 15% МеОН в ЭСМ + 1% ХН₄ОН, продукт лиофилизуют, и получают указанное в заголовке соединение (65 мг, 75%) в виде белого распушенного твердого вещества, т/ζ (Ε8) 449 (МН)⁺.

Ή ЯМР (500 МГц, ДМСО-а₆) δ: 10,00 (с, 1Н), 7,51 (д, 1=8,2, 2Н), 7,30 (м, 4Н), 7,21 (т, 1=6,9, 1Н), 7,12 (д, 1=8,2, 2Н), 6,86 (с, 1Н), 4,23 (д, 1=7,3, 1Н), 3,78 (м, 1Н), 3,21 (м, 1Н), 3,10 (м, 1Н), 2,78 (м, 1Н), 2,66 (м, 2Н), 2,57 (м, 2Н), 2,49 (м, 1Н), 1,59 (м, 1Н), 1,40 (м, 1Н), 1,39 (м, 2Н).

Из продукта со стадии А [изомера, который элюируется первым] (134 мг, 0,207 ммоль) удаляют защитную группу подобным образом, и получают указанное в заголовке соединение (44 мг, 48%) в виде белого распушенного твердого вещества. т/ζ (Ε8) 449 (МН)⁺.

С использованием биологических анализов, описанных выше, определяют, что функциональная активность соединения примера 3 в отношении человеческого β3 составляет менее 1 нМ.

Примеры 4-10.

С использованием процедур, схожих с процедурами, описанными выше, из соответствующих исходных веществ получают соединения примеров 4-10.

С использованием биологических анализов, описанных выше, определяют функциональную активность каждого соединения в отношении человеческого β3 и указывают в таблице, приведенной далее.

Таблица 4.

Пойме» №	К	МУ/	Μ8 (Ε8) (ΜΗ)*	Связывание человеческого 83
4	νΧο	468.56	469.50	1-ЮнМ
5	τύ	418.49	419.24	1-ЮнМ
6	тД	432.53	433.50	1-10нМ
7	νόο	468.56	469.52	1 -ЮнМ
8	νό	418.50	419.48	1 -10 нМ
9	Ύ'ό	418.50	419.48	1-ЮнМ
10	ΊΤ0	417.51	418.50	1 -ЮнМ

- 54 020135

Пример 11. №(4-(((28,5К)-5-((К)-Гидрокси(фенил)метил)пирролидин-2-ил)метил)фенил)-2-(3метил-1Н-1,2,4-триазол-1 -ил)пропанамид

Смесь 1-13а (2,00 г, 5,23 ммоль), 1-56 2-(3-метил-1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пропановой кислоты (1,00 г, 5,23 ммоль), НОА1 (1,307 мл, 0,784 ммоль) и ЕОС (2,005 г, 10,46 ммоль) в ДМФА (20 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 10 мин. Реакцию гасят водным раствором бикарбоната натрия, и смесь экстрагируют Е1ОАс. Сырой продукт реакции очищают колоночной хроматографией (0-3% МеОН (10% N^0^ в ЭСМ). После упаривания продукт очищают дополнительно хиральной ВЭЖХ (колонка с АО, смесь 30% 1РА/гептан), и получают чистое промежуточное соединение с защитной группой Ьос, которое растворяют в минимальном объеме диоксана, и добавляют 4 М раствор НС1 в диоксане. После 2 ч пребывания при комнатной температуре реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, и получают соль НС1 названного в заголовке соединения. ВЭЖХ с обращенной фазой (0,1% NН₄ОН в Н₂О, МеСЦ) дает указанное в заголовке соединение в форме нужного свободного основания.

Ή-ЯМР (500 МГц, СО₃ОО) δ 8,51 (с, 1Н), 7,49 (д, 1=13 Гц, 2Н), 7,35-7,29 (м, 4Н), 7,26-7,20 (м, 4Н),

5,20 (кв., 1=7,5 Гц, 1Н), 4,20 (д, 1=7,5 Гц, 1Н), 3,27-3,22 (м, 2Н), 2,80-2,72 (м, 2Н), 2,34 (с, 3Н), 1,82 (д, 1=7,5 Гц, 3Н), 1,79-1,73 (м, 1Н), 1,52-1,48 (м, 3Н). Е81-МС, вычислено для С₂₄Н₂₉^О₂: точная масса 419,23, найдено 420,35.

С использованием биологических анализов, описанных выше, определяют, что функциональная активность соединения примера 11 в отношении человеческого β3 составляет от 1 до 10 нМ.

Примеры 12 и 13. (38)-№[4-({(28,5К)-5-[(К)-Гидрокси(фенил)метил]пирролидин-2-ил}метил)фенил]-5-оксо-1,2,3,5-тетрагидроиндолизин-3-карбоксамид (пример 12) и (3Κ)-Ν-[4-({(28,5Κ)-5-[(Κ)гидрокси(фенил)метил] пирролидин-2-ил}метил)фенил] -5-оксо-1,2,3,5-тетрагидроиндолизин-3 карбоксамид (пример 13)

Стадия А. трет-Бутил-(2К,58)-2-[(К)-гидрокси(фенил)метил]-5-[4-({[(3§)-5-оксо-1,2,3,5тетрагидроиндолизин-3-ил]карбонил}амино)бензил]пирролидин-1-карбоксилат (изомер 1) и трет-бутил(2К,58)-2-[(К)-гидрокси(фенил)метил]-5-[4-({[(3К)-5-оксо-1,2,3,5-тетрагидроиндолизин-3-ил]карбонил}амино)бензил]пирролидин-1-карбоксилат (изомер 2)

К раствору 0,610 г (1,60 ммоль) промежуточного соединения 1-13а и 0,300 г (1,67 ммоль) промежуточного соединения 1-46 в 3,2 мл безводного Ν,Ν-диметилформамида в атмосфере азота добавляют 0,033 г (0,24 ммоль) 1-гидрокси-7-азабензотриазола, а затем 0,336 г (1,75 ммоль) гидрохлорида 1-(3диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида. Полученную суспензию перемешивают при температуре окружающей среды в течение 30 мин, реакцию гасят водой, и смесь экстрагируют этилацетатом (3х 10 мл). Объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Сырой остаток очищают хроматографией на силикагеле с элюированием с градиентом смесями 50-100% этилацетата в гексане и получают названные в заголовке соединения в виде смеси диастереомеров в соотношении 97:3. Два диастереомера разделяют хиральной ВЭЖХ с использованием колонки Э|асе1 СН1КАЬРАСК® АО® (элюент: смесь 40% 1РА в гептане). Диастереомер, который элюируется первым, называют изомером 2, и он представляет собой бесцветное твердое вещество (0,020 г, 2,3%). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 544,2 (МН)⁺. Диастереомер, который элюируется вторым, называют изомером 1, и он представляет собой бесцветное твердое вещество (0,650 г, 75%). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 544,2 (МН)⁺.

Стадия В (пр. 12). (38)-№[4-({(28,5К)-5-[(К)-Гидрокси(фенил)метил]пирролидин-2ил}метил)фенил]-5-оксо-1,2,3,5-тетрагидроиндолизин-3-карбоксамид

К раствору 0,500 г (0,920 ммоль) изомера 1 с описанной выше стадии А в 2 мл изопропанола в атмосфере азота добавляют 4,0 мл 4,0 М раствора безводного хлороводорода в 1,4-диоксане. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч и затем упаривают в вакууме досуха. Сырую реакционную смесь очищают ВЭЖХ с обращенной фазой (ТМС Рго-Рас С18; градиент смеси 0-75% 0,01% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле/0,01% трифторуксусной кислоты в воде). Чистые фракции лиофилизуют в тече

- 55 020135 ние ночи и затем растворяют в смеси 10 мл хлороформа и 4 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. Двухфазную смесь энергично перемешивают в течение 10 мин и затем слои разделяют. Водную фазу экстрагируют хлороформом (3x10 мл), объединенные органические слои промывают солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме, и получают указанное в заголовке соединение (пример 12) в виде белого твердого вещества (0,39 г, 95%).

^!Н-ЯМР (500 МГц, СИ₃ОИ) δ 7,89 (с, 1Н), 7,54 (дд, 1=8,8, 7,2 Гц, 1Н), 7,50 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,347,29 (м, 4Н), 7,26-7,23 (м, 1Н), 7,20 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 6,38-3,36 (м, 2Н), 5,24 (дд, 1=9,4, 2,8 Гц, 1Н), 4,20 (д, 1=7,8 Гц, 1Н), 3,35-3,23 (м, 3Н), 3,19-3,12 (м, 1Н), 2,82-2,71 (м, 2Н), 2,60-2,51 (м, 1Н), 2,37-2,32 (м, 1Н), 1,79-1,72 (м, 1Н), 1,52-1,43 (м, 3Н). ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 444,0 (МН)⁺.

Стадия В (пр. 13). (3К)-Ы-[4-({(28,5К)-5-[(К)-Гидрокси(фенил)метил]пирролидин-2ил}метил)фенил]-5-оксо-1,2,3,5-тетрагидроиндолизин-3-карбоксамид

Используют ту же самую процедуру для удаления защитной группы из изомера 2 с описанной выше стадии А, и получают указанное в заголовке соединение (пример 13) в виде отдельного диастереомера. ЖХ-МС: т/ζ (Е8) 444,0 (МН)⁺.

С использованием биологических анализов, описанных выше, определяют, что функциональная активность соединений примеров 12 и 13 в отношении человеческого (33 составляет от 1 до 10 нМ и менее 1 нМ, соответственно.

Пример 14. (68)-Ν-[4-({ (28,5К)-5-[(К)-Гидрокси(фенил)метил]пирролидин-2-ил}метил)фенил]-4оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-6-карбоксамид

Стадия А.

трет-бутил-(2К,58)-5-[(К)-гидрокси(фенил)метил]-5-[4-({[(68)-4-оксо-4,6,7,8тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-6-ил]карбонил}амино)бензил]пирролидин-1-карбоксилат

К раствору 1-13а (21,4 г, 55,9 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (100 мл) при 0°С добавляют (68)-4оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-6-карбоновую кислоту (1-44, 11,1 г, 61,5 ммоль), а затем 1-гидроксибензотриазол (7,55 г, 55,9 ммоль), гидрохлорид №(3-диметиламинопропил)-Ы'этилкарбодиимида (16,1 г, 84,0 ммоль) и Ν,Ν-диизопропилэтиламин (29,2 мл, 168 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре от 0°С до температуры окружающей среды в течение 2 ч. Добавляют воду (600 мл) и смесь экстрагируют дихлорметаном (600 млх2). Объединенные органические слои сушат над Να₂8Ο.₄. После удаления летучих веществ остаток очищают с использованием системы Вюйщс НоГОоп®® (0-5%, затем 5% метанола со смесью 10% аммиака/дихлорметан) и получают указанное в заголовке соединение, которое содержит 8% второстепенного диастереомера. Соединение очищают дополнительно сверхкритической жидкостной хроматографией (хиральная колонка А8, 40% метанола) и получают указанное в заголовке соединение в виде бледно-желтого твердого вещества (22,0 г, 72%).

'|| ЯМР (СИС1₃): δ 9,61 (с, 1Н), 7,93 (д, 1=6, 6 Гц, 1Н), 7,49 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,35-7,28 (м, 5Н), 7,13 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 6,40 (д, 1=6,7 Гц, 1Н), 5,36 (д, 1=8,6 Гц, 1Н), 4,38 (м, 1Н), 4,12-4,04 (м, 2Н), 3,46 (м, 1Н), 3,15-3,06 (м, 2Н), 2,91 (дд, 1=13,1, 9,0 Гц, 1Н), 2,55 (м, 1Н), 2,38 (м, 1Н), 1,71-1,49 (м, 13Н). ЖХ-МС 567,4 (М+23).

Стадия В. (68)-Ы-[4-({(28,5К)-5-[(К)-Гидрокси(фенил)метил]пирролидин-2-ил}метил)фенил]-4оксо-4,6,7,8-тетрагидропирроло[1,2-а]пиримидин-6-карбоксамид

К раствору промежуточного соединения со стадии А (2,50 г, 4,59 ммоль) в дихлорметане (40 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (15 мл). Реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 1,5 ч. После удаления летучих веществ добавляют насыщенный раствор NаНСΟ₃ для получения величины рН 8-9. Затем смесь экстрагируют дихлорметаном. Объединенные органические слои сушат над №ь8О₄. После концентрирования и кристаллизации из смеси метанол/ацетонитрил получают указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (1,23 г, 60%).

- 56 020135 ^!Н ЯМР (ДМСО-а₆): δ 10,40 (с, 1Н), 7,91 (д, 1=6,7 Гц, 1Н), 7,49 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,32-7,26 (м, 4Н),

7.21 (м, 1Н), 7,15 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 6,23 (д, 1=6,7 Гц, 1Н), 5,11 (дд, 1=9,6, 2,9 Гц, 1Н), 5,10 (ушир., 1Н),

4.21 (д, 1=7,1 Гц, 1Н), 3,20-3,00 (м, 4Н), 2,66-2,51 (м, 3Н), 2,16 (м, 1Н), 1,57 (м, 1Н), 1,38 (м, 1Н), 1,29-1,23 (м, 2Н). ЖХ-МС 445,3 (М+1).

С использованием биологических анализов, описанных выше, определяют, что функциональная активность соединения примера 14 в отношении человеческого β3 составляет от 11 до 100 нМ.

Примеры 15-41.

С использованием процедур, схожих с процедурами, описанными выше, из соответствующих исходных веществ получают примеры соединений, перечисленные далее. Диастереомеры разделяют хиральной ВЭЖХ с использованием способов, описанных ниже.

Способ А.

Диастереомеры разделяют ВЭЖХ с использованием колонки с СЫга1РАК АО с элюированием смесями растворителей 1РА, ацетонитрила или этанола или в гептане, или в гексане, причем первым элюируется изомер, помеченный как изомер 1, и вторым элюируется изомер, помеченный как изомер 2.

Способ В.

Диастереомеры разделяют ВЭЖХ с использованием хиральной колонки с СЫга1СНЬ ΟΌ с элюированием смесями растворителей 1РА, ацетонитрила или этанола или в гептане, или в гексане, причем первым элюируется изомер, помеченный как изомер 1, и вторым элюируется изомер, помеченный как изомер 2.

Способ С.

Диастереомеры разделяют ВЭЖХ с использованием хиральной колонки Рик1е (0)-^^^-0 с элюированием смесями растворителей 1РА, ацетонитрила или этанола или в гептане или в гексане, причем первым элюируется изомер, помеченный как изомер 1, и вторым элюируется изомер, помеченный как изомер 2.

Способ Ό. Диастереомеры разделяют ВЭЖХ с использованием хиральной колонки Э1асе1 СН1ΚΑΠΟΈΕΑ® 01® с элюированием смесями растворителей 1РА или этанола или в гептане, или в гексане, причем первым элюируется изомер, помеченный как изомер 1, и вторым элюируется изомер, помеченный как изомер 2.

Способ Е. Диастереомеры разделяют ВЭЖХ с использованием хиральной колонки Э|асе1 СН1КАЬРАК® А8® с элюированием смесями растворителей 1РА или этанола или в гептане, или в гексане, причем первым элюируется изомер, помеченный как изомер 1, и вторым элюируется изомер, помеченный как изомер 2.

Таблица 5.

- 57 020135

Пример №	В	МУУ	МС (Е8) (МН)*	Хиральная колонка	Функцион. в отношении человеческого 33
15	νη₂о ν=Χ г/-⁵	436.58	437.50	А	Менее 1 нМ
16	МН_г О №=\	436.58	437.80	А	Менее 1 нМ
17	5? .Ν=^^ΝΗ2 1л® Изомер 1	448.59	449.50	А	1-10 нМ
18	л +ν^ΝΗ2 ая Изомер 2	448.59	449.50	А	Менее 1 нМ
19	$ у^^СНз Изомер 1	447.60	448.60	А	1-10 нМ
20	Изомер 2	447.60	448.60	А	Менее 1 нМ
21	А£»	433.39	434.40	Получено ИЗ исходного хирального материала	Менее 1 нМ
22	о ^[^^Νχ=Ν Изомер 1	432.53	433.50	А	1-10 нМ
23	Изомер 2	432.53	433.50	А	1-10 нМ
24	1 У\ Изомер 1	432.53	433.50	В	1-10 нМ
25	° V^м Изомер 2	432.53	433.50	В	Менее 1 нМ
26	о +__чм=^ Изомер 1	432.53	433.50	В	1-10 нМ

- 58 020135

27	Изомер2	432.53	433.50	В	1-10 нМ
28	° Изомер 1	446.55	447.53	Е	1-10 нМ
29	Изомер 2	446.55	447.53	Е	1-10 нМ
30	\| х==м Изомер 1	482.53	483.50	ϋ	1-10 нМ
31	А_ц т—' \| Изомер 2	482.53	483.50	ϋ	Менее 1 нМ
32	о нм -¾ а^> Изомер 1	405.50	406.46	С	1-10 нМ
33	О ΗΝ-χ ΧγΧ Изомер 2	405.50	406.46	С	1-10 нМ
34	о нм^А А^? Изомер 1	419.52	420.46	С	1-10 нМ
35	О ΗΝ-4 А^г Изомер 2	419.52	420.46	с	1-10 нМ
36	0 №А А^Х Изомер 1	405.50	406.46	А	1-10 нМ
37	Изомер 2	405.50	406.46	А	1-10 нМ
38	О Ν==\ ΑγΟ Изомер 1	404.32	405.50	А	1-10 нМ
39	О №\ Α^νΑ Изомер 2	404.52	405.50	А	1-10 нМ
40	лъ Изомер 1	431.54	432.50	А	1-10 нМ
41	О X. ΑΌ Изомер 2	431.54	432.50	А	1-10 нМ

Хотя изобретение описано и поясняется со ссылкой на некоторые определенные его воплощения, специалистам в данной области техники будет понятно, что можно осуществить различные изменения, модификации и замены без отхода от сущности и объема изобретения. Например, могут быть применимы иные эффективные дозировки, чем определенные дозировки, указанные выше в данном описании, как следствие изменений чувствительности млекопитающего, которого лечат, в случае любого из показаний для активных веществ, используемых в данном изобретении, указанных выше. Подобным образом, наблюдаемые специфические фармакологические реакции могут изменяться согласно и в зависимости от выбранного определенного активного соединения или от присутствия фармацевтических носителей, а также от типа используемого препарата, и такие ожидаемые изменения или различия в результатах рассматриваются в соответствии с целями и практическим применением настоящего изобретения. Поэтому подразумевается, что изобретение определяется формулой изобретения, которая следует далее, и что такая формула изобретения толкуется настолько расширительно, насколько это обосновано.

- 59 020135

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ или его фармацевтически приемлемая соль, или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль его стереоизомера, в которой п равен 0, 1 или 2;

Υ выбирают из группы, состоящей из:

(1) (С1-С₅)алкандиила и (2) связи;

Ζ выбирают из группы, состоящей из тиазолила, пиридила, дигидропиридила, 1,2,4-триазолила, 1,2,3-триазолила, пиримидинила, дигидропиримидинила, тетрагидропиримидинила, пиридазинила, дигидропиридазинила, пирролидинила, пиразолила

К³ выбирают из группы, состоящей из:

(1) (С1-С₆)алкила, (2) оксо и (3) -ΝΉ₂.
2. Соединение по п.1, где Υ представляет собой метилен, -СН(СН₃)- или связь.
3. Соединение формулы 1а или его фармацевтически приемлемая соль, или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль его стереоизомера, в которой п равен 0, 1 или 2,

Υ выбирают из группы, состоящей из метилена, -СН(СН₃)- и связи,

Ζ выбирают из группы, состоящей из тиазолила, пиридила, дигидропиридила, 1,2,4-триазолила, пиримидинила, дигидропиримидинила, пиридазинила, дигидропиридазинила, пиразолила и К³ выбирают из группы, состоящей из:

(1) метила, (2) оксо и (3) -ΝΉ2.
4. Соединение, выбранное из группы, состоящей из

- 60 020135

- 61 020135 или его фармацевтически приемлемая соль, или его фармацевтически приемлемый стереоизомер,

- 62 020135 или фармацевтически приемлемая соль его стереоизомера.
5. Соединение по п.4, выбранное из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемая соль, или его фармацевтически приемлемый стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль его стереоизомера.
6. Фармацевтическая композиция для лечения или предупреждения заболевания или расстройства, опосредуемого активацией адренорецептора β3, включающая соединение по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
7. Способ лечения или предупреждения заболевания или расстройства, опосредуемого активацией адренорецептора β3, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по п.1.
8. Способ по п.7, где заболевание или расстройство выбирают из группы, состоящей из: (1) повышенной активности мочевого пузыря, (2) недержания мочи, (3) безотлагательности мочеиспускания с недержанием мочи и (4) безотлагательности мочеиспускания.
9. Применение соединения по п.1 при получении лекарственного средства для лечения или предупреждения заболевания или расстройства, опосредуемого активацией адренорецептора β3.
10. Соединение формулы или его фармацевтически приемлемая соль, или его фармацевтически приемлемый стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль его стереоизомера.
11. Соединение формулы или его фармацевтически приемлемая соль, или его фармацевтически приемлемый стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль его стереоизомера.

Евразийская патентная организация, ЕАПВ

Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2