EA019499B1 - Производные атропоизомеров 2-пуринил-3-толилхиназолинона и способы применения - Google Patents

Abstract

Изобретение раскрывает соединения, композиции и способы лечения некоторых воспалительных состояний и/или онкологических заболеваний путем введения соединения, которое ингибирует PD-K-изоформы, в особенности дельта-изоформу. Оно дополнительно обеспечивает конкретные стереоизомеры соединения, полезные для реализации этих способов. В частности, соединение представляет собой оптически активный атропоизомер 2-((6-амино-9Н-пурин-9-ил)метил)-5-метил-3-о-толилхиназолин-4(3H)-она.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение лежит в области терапевтических средств и медицинской химии для лечения воспалительных состояний и/или онкологических нарушений с использованием соединений, которые ингибируют ферменты на основе фосфатидилинозитол-3,4,5-трифосфат-киназы δ (ΡΙ3Κδ) ίη νίνο. В особенности, изобретение касается соединений, композиций и способов лечения воспалительных состояний и/или онкологических нарушений с помощью обогащенного энантиомерно 2-((6-амино-9Н-пурин-9-ил)метил)-5метил-3 -о -то лилхиназолин-4(3Н) -она.

Клеточная сигнализация через 3'-фосфорилированные фосфоинозитиды была вовлечена в разнообразные клеточные процессы, например в злокачественную трансформацию, сигнализацию фактора роста, воспаление и иммунитет. Фермент, отвечающий за вырабатывание этих фосфорилированных продуктов сигнализации, фосфатидилинозитол-3-киназа (ΡΙ 3-киназа; ΡΙ3Κ), первоначально был идентифицирован как обладающее активностью вещество, связанное с вирусными онкобелками и с рецепторными тирозинкиназами фактора роста, которое фосфорилирует фосфатидилинозитол (ΡΙ) и его фосфорилированные производные по 3'-гидроксилу инозитольного кольца. Кроме того, активация ΡΙ3Κ, как полагают, является вовлеченной в разнообразные клеточные реакции, включающие рост клетки, дифференцировку и апоптоз.

Идентификация р110δ-изоформы фосфатидилинозитол-3-киназ (ΡΙ 3-киназы; ΡΙ3Κ) описана в публикации СНагИгу. с1 а1., 1. ΒίοΙ. СНет. (1997), 272:19236-19241. Было сделано наблюдение, что р110<5изоформа человека экспрессируется в тканях ограниченно. Она экспрессируется на высоких уровнях в лимфоцитах и в лимфоидных тканях, что позволяет предположить, что белок мог бы играть роль ΡΙ-3киназа-опосредованной сигнализации в иммунной системе. Кроме того, конкретные изоформы ΡΙ3Κ также могут играть роль ΡI3Κ-опосредованной сигнализации в некоторых раковых заболеваниях.

Воспалительные реакции в значительной мере связаны с инфлюксом лейкоцитов и/или с хемотаксисом лейкоцитов. Воспалительные реакции могут быть результатом инфекции, вызванной патогенными организмами и вирусами, неинфекционным средством, таким как травма или реперфузия после инфаркта миокарда или инсульта, иммунных реакций на чужеродные антигены и аутоиммунных заболеваний. Лейкоциты обеспечивают первую линию иммунной защиты от многих часто встречающихся микроорганизмов.

Ьее, с1 а1., ΕΆ8ΕΒ 1. (2006), 20:455-465 описывает доказательство того, что ингибирование ΡΙ3Κδ ослабляет аллергическое воспаление дыхательных путей и гиперчувствительность в моделях мышиной астмы, тем самым демонстрирует то, что селективные ингибиторы ΡΙ3Κδ являются полезными в лечении астмы и аллергических реакций, а также иммунных нарушений.

Что касается ракового заболевания, то соединения, которые экспрессируют относительно высокие уровни р110δ-изоформы, могут быть полезными в лечении главным образом раковых заболеваний кроветворной системы. р110в-Изоформа ΡI3Κ-фермента также может играть роль ΡI3Κ-опосредованной сигнализации в некоторых раковых заболеваниях, таких как солидные опухоли.

Существует необходимость в лечении ΡI3Κ-опосредованных нарушений, имеющих отношение к раковым заболеваниям и воспалительным состояниям. Настоящее изобретение обеспечивает конкретный изомер одного хиназолинового соединения, который является особенно полезным в лечении воспалительных состояний и ракового заболевания.

Раскрытие изобретения

Изобретение относится к селективным ингибиторам ΡΙ3Κδ и к способам лечения воспалительных состояний и раковых заболеваний посредством соединений, которые являются селективными ингибиторами ΡΙ3Κδ. В частности, соединения изобретения существуют в виде разделяемых атропоизомеров, и изобретение обеспечивает разделенные атропоизомеры, имеющие неожиданные преимущества над смесями атропоизомеров при применении в лечении воспаления. Соединения, композиции и способы изобретения являются терапевтически благотворными в лечении воспалительных состояний.

В одном аспекте изобретение обеспечивает оптически активное соединение, содержащее атропоизомер формулы 1(8)

- 1 019499

^η2Ν 1(8) или его фармацевтически приемлемую соль или сольват;

где атропоизомер формулы 1(8) присутствует в избытке относительно его соответственного энантиомера формулы 1(В)

н_гм _1(К)

В другом аспекте изобретение обеспечивает оптически активное соединение, содержащее атропоизомер формулы 1(В)

или его фармацевтически приемлемую соль или сольват;

где атропоизомер формулы 1(В) присутствует в избытке относительно его соответственного энантиомера формулы 1(8)

В еще одном аспекте изобретение обеспечивает композицию, содержащую оптически активное соединение, описанное в этом документе, и фармацевтически приемлемый носитель. В другом аспекте изобретение обеспечивает способ лечения состояния у млекопитающего, где состояние характеризуется воспалением. В некоторых вариантах осуществления состояние выбирают из группы, состоящей из хронических воспалительных заболеваний, состояний, связанных с отторжением трансплантированных тканей или органов, реакции трансплантат против хозяина (СУНЭ). из синдромов, связанных с полиорганными поражениями, острого гломерулонефрита, реактивного артрита, врожденной эмфиземы, хронического обструктивного заболевания легких (ΟΘΡΌ), кистозного фиброза, респираторного дистресссиндрома взрослых (ΆΚΌ8), ишемического реперфузионного повреждения, инсульта, ревматоидного артрита (ВЛ), остеоартрита (ОА), астмы, аллергического ринита, волчаночного нефрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, некротизирующего энтероколита, панкреатита, пневмоцистной пневмонии (РСР), воспалительного заболевания кишечника (ΙΒΌ), синдрома атипичной пневмонии (8АВ8), сепсиса, внебольничной пневмонии (САР), множественного склероза (М8), инфаркта миокарда, инфекции, связанной с респираторным синцитиальным вирусом (В8У), дерматита, острого гнойного менингита, термического повреждения, синдромов, связанных с трансфузией гранулоцитов, вызванной цитокинами токсичности и повреждения спинного мозга; где способ лечения такого состояния включает введение упомянутому млекопитающему терапевтически эффективного количества оптически активного

- 2 019499 атропоизомера, описанного в этом документе. В некоторых вариантах осуществления оптически активное соединение представлено формулой 1(8). В других вариантах осуществления оптически активное соединение представлено формулой 1(В).

В еще одном аспекте изобретение обеспечивает оптически активный атропоизомер, полученный хиральным хроматографическим разделением рацемической смеси, соединений формулы 1

или его фармацевтически приемлемую соль или сольват;

где рацемическую смесь соединений формулы 1 разделяют с использованием хиральной колонки с нормальной фазой, и два пика (максимума), А и В, разделены, где максимум А и максимум В представляют атропоизомеры 1(8) и 1(В) соответственно,

Η₂Ν ΗϊΝ _1(К) где полученный оптически активный атропоизомер в основном состоит из первого изомера, который элюируют из колонки. В некоторых вариантах осуществления полученный оптически активный атропоизомер состоит из соединения формулы 1(8) и, по существу, свободен от соединения формулы 1(В). В другом варианте осуществления полученный оптически активный атропоизомер состоит из соединения формулы 1(В) и, по существу, свободен от соединения формулы 1(8).

В еще одном дополнительном аспекте изобретение обеспечивает оптически активный атропоизомер, получаемый хиральным хроматографическим разделением рацемической смеси соединений формулы 1

или его фармацевтически приемлемую соль или сольват;

где рацемическую смесь соединений формулы 1 разделяют с использованием хиральной колонки с нормальной фазой, и два пика (максимума), А и В, разделены, где максимум А и максимум В представляют атропоизомеры 1(8) и 1(В) соответственно,

Η₂Ν кд) Η₂Ν !(_К) где полученный оптически активный атропоизомер в основном состоит из второго изомера, который элюируют из колонки.

- 3 019499

В другом аспекте изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие любое из оптически активных соединений, описанных в этом документе, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 показывает схему синтеза при получении рацемического соединения 1.

Фиг. 2 показывает кривые, полученные с помощью жидкостной хроматографии высокого давления (НРЬС), для введенного соединения 1, содержащие разделенные атропоизомеры, на хиральных колонках с нормальной фазой (фиг. 2А) или с обращенной фазой (фиг. 2В).

Фиг. 3 показывает кривые, полученные с помощью жидкостной хроматографии высокого давления (НРЬС), для разделенного введенного соединения 1 до препаративного хроматографического разделения (фиг. 3А), пик 1 (фиг. 3В), 1(8), и пик 2 (фиг. 3С), 1(В), для выделенных атропоизомеров после разделения с использованием способа разделения на колонках с нормальной фазой.

Фиг. 4 показывает данные по растворимости соединения 1 и разделенных атропоизомеров 1(8) и 1(В) в ряду водных растворителей.

Фиг. 5 показывает различия р110-активности различных изоформ, оцениваемые для рацемического соединения 1 и атропоизомеров 1(8) и 1(К), в биохимическом (фиг. 5А) и клеточном анализах (фиг. 5В).

Фиг. 6 показывает концентрацию атропоизомеров 1(8) и 1(К.) в плазме у крыс после перорального введения дозы рацемического соединения 1.

Фиг. 7 показывает концентрацию атропоизомеров 1(8) и 1(К.) в плазме у собак после перорального введения дозы рацемического соединения 1.

Фиг. 8 показывает концентрацию атропоизомеров 1(8) и 1(К.) в плазме у обследуемого человека после перорального введения дозы рацемического соединения 1.

Фиг. 9 показывает сравнение концентрации атропоизомеров 1(8) и 1(К.) в плазме у обследуемых крыс после внутривенного (фиг. 9А) или после перорального (фиг. 9В) введения доз соединений 1(8) или 1(В).

Фиг. 10 показывает сравнение концентрации атропоизомеров 1(8) и 1(К.) в плазме у обследуемых людей после однократного перорального введения дозы в 100 мг (фиг. 10А, 10В) или 10 мг (фиг. 10С, 10Ό) соединения 1(8) или 1(В).

Фиг. 11 показывает сравнение концентрации меченных радиоактивными ¹⁴С-изотопами атропоизомеров 1(8) и 1(К.) в плазме у обследуемых людей в течение 120 ч при ежедневном введении суточной дозы 25 мг рацемического соединения 1.

Фиг. 12 показывает аналитические кривые, полученные с помощью жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (ЬС-М8), для метаболитов в моче крыс после введения атропоизомера 1(8) (фиг. 12А) или атропоизомера 1(К.) (фиг. 12В).

Фиг. 13 показывает аналитические кривые метаболитов в плазме человека после введения атропоизомера 1(8) или атропоизомера 1(К), что испытано через 1 ч (фиг. 13А, 13В) или через 72 ч (фиг. 13С, 13Ό) после перорального введения.

Фиг. 14 показывает график зависимости индексов активности артрита от количества дней после введения дозы соединения, атропоизомера 1(8) в экспериментальных моделях коллагениндуцированного артрита у крыс.

Фиг. 15 показывает диаграмму уровней антиколлагеновых антител у крыс после введения субъектам дозы носителя, атропоизомера 1(8) или метотрексата.

Фиг. 16 показывает диаграмму интенсивностей рентгеновского излучения в произвольных единицах, полученных в ходе радиографического обследования крыс, обработанных либо носителем, либо атропоизомером 1(8), либо метотрексатом.

Фиг. 17Α-Ό показывают изображения, полученные в ходе гистопатологических исследований субъектов, обработанных носителем, либо атропоизомером 1(8), либо метотрексатом.

Подробное описание

Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, т.е. они имеют способность вращать плоскополяризованный свет. Префиксы ά и 1 или (+) и (-) применяют для обозначения знака вращения плоскополяризованного света соединением, где (-) или 1 означает то, что соединение является левовращающим. Соединение с префиксом (+) или ά является правовращающим. Что касается данной химической структуры, то эти соединения, называемые стереоизомерами, являются идентичными за исключением того, что они являются зеркальными отображениями друг друга. Стереоизомеры, которые являются зеркальными отображениями друг друга, также могут называться энантиомерами, и смесь таких изомеров часто называют энантиомерной смесью. Смесь энантиомеров (50:50) называют рацемической смесью или рацематом. Термины рацемическая смесь и рацемат относятся к эквимолярной смеси двух энантиомерных видов молекул, которые лишены оптической активности.

Термин хиральный относится к молекулам, которые имеют свойство неналагаемости партнера при зеркальном отображении, тогда как термин ахиральный относится к молекулам, которые являются налагаемыми на их партнера зеркального отображения.

Термин стереоизомеры относится к соединениям, которые имеют идентичную химическую

- 4 019499 структуру, но отличаются в отношении расположения атомов или групп в пространстве.

Термин энантиомеры, как он используется в этом документе, относится к двум стереоизомерам соединения.

Термин атропоизомеры относится к конформационным стереоизомерам, которые имеют место в том случае, когда вращение вокруг одинарной связи в молекуле предотвращено или сильно замедлено в результате пространственных взаимодействий с другими частями молекулы, и заместители на обоих концах одинарной связи являются асимметрическими, т.е. для них не требуется стереоцентр. В том случае, когда вращательный барьер вокруг одинарной связи является достаточно высоким и взаимопревращение между конформациями является достаточно медленным, то разделение и выделение изомерных видов молекул допустимо. Атропоизомеры представляют собой энантиомеры, не содержащие ни одного асимметрического атома.

Энергетический барьер к термической рацемизации атропоизомеров может быть определен посредством пространственного затруднения свободного вращения одной или более связей, образующих хиральную ось. Некоторые биарилсодержащие соединения проявляют атропоизомерию в том случае, когда вращение вокруг внутрикольцевой связи, не имеющей С2-симметрии, является ограниченным. Свободная энергия изомеризации (энантиомеризация) служит мерой стабильности внутрикольцевой связи в отношении вращения. Оптическое и термическое возбуждение могут способствовать рацемизации таких изомеров, зависящих от электронных и пространственных факторов.

Ортозамещенные бифенилсодержащие соединения могут проявлять такой тип конформационной, вращательной изомерии. Такие бифенилсодержащие соединения являются энантиомерными, хиральными атропоизомерами, где связь углерод-углерод (вр2-зр2), внутрикольцевая связь между фенильными кольцами имеет достаточно высокий энергетический барьер, чтобы предотвращать свободное вращение, и где заместители Х^У и ИАУ делают молекулу асимметрической.

Пространственное взаимодействие между Х:И, Х:У и/или У:У, Υ:ϋ является достаточно сильным, чтобы сделать энергетический максимум для плоской конформации. Два неплоских, аксиально хиральных энантиомера тогда существуют как атропоизомеры в том случае, когда их взаимопревращение является достаточно медленным для того, чтобы они могли быть выделены независимо друг от друга. В одном определении атропоизомерия, как определяют, имеет место там, где изомеры имеют период полураспада !_1/2, равный по меньшей мере 1000 с, где свободная энергия барьера составляет 22,3 ккал-моль^-1 (93,3 кДж-моль^-1) при 300 К (Ок1, М. Весей! Айуапсез ίη А1гор18отеп8т, Τορίεβ ίη 81егеосйет18!гу (1983), 14:1). Сплошные жирные линии и прерывистые линии на фигурах, показанных выше, указывают на те фрагменты или части молекулы, которые являются пространственно ограниченными (стесненными) вследствие вращательного энергетического барьера. Выделенные жирным шрифтом фрагменты находятся ортогонально над плоскостью страницы и пунктирные фрагменты находятся ортогонально ниже плоскости страницы. Плоская часть молекулы (левое кольцо в каждом из двух отраженных бифенилов) находится в плоскости страницы.

Соединения с аксиальной хиральностью, такие как хиральные бифенильные кольца, могут быть описаны с использованием конфигурационной номенклатуры. Например, 2,2'; 6,6'-тетразамещенным бифенилам присваивают конфигурационные дескрипторы как другим аксиально хиральным молекулам. Молекулы могут быть рассмотрены с любого конца хиральной оси и это приведет к одному и тому же конфигурационному дескриптору (В или 8). В том случае, когда, например, молекулу 2 рассматривают слева вдоль 1-1'-связи, то приходят к проекции 2.1, тогда как проекцию 2.2 получают в том случае, когда ту же самую молекулу теперь рассматривают справа вдоль 1'-1-связи. Эти проекции соответствуют конфигурации (8).

- 5 019499

Обозначение 8 присваивают путем последовательного применения правил наименования соединений с аксиальной хиральностью. Эти правила применяют, в первую очередь, к орто-заместителям бифенильного кольца. Два связанных кольца могут быть представлены горизонтальной и вертикальной линиями. Линии представляют собой два ортогональных кольца; и концы линий представляют собой заместители в четырех орто-положениях двух связанных колец. Эти линии, таким образом, соединяют каждую пару орто-заместителей. Две группы на ближайшем кольце (передняя линия) при рассмотрении имеют преимущество над двумя дальними группами. В пределах пары заместителям отдают преимущества с использованием тех же самых правил назначения приоритета, использованных для описания Я- и 8-энантиомеров хирального центра. Например, в проекции сверху формулы 2.1 вид позволяет рассматривать молекулу слева, идя вниз по оси от 1 к 1'. Близлежащее кольцо представлено сплошной жирной вертикальной линией, соединяющей -ОСН₃ и Н, которые пронумерованы соответственно 1 и 2, поскольку

-ОСН₃ имеет более высокий приоритет над Н. Горизонтальная линия представляет собой кольцо, содержащее ΝΟ₂ и СО₂Н, которые пронумерованы соответственно 3 и 4, исходя из их приоритета. Таким образом, последовательность 1 —2—>3 показывает конфигурационный дескриптор, который в этом примере представляет собой 8, так как следование в порядке числовой последовательности требует идти против часовой стрелки вокруг центра диаграммы. Так же как это делают для энантиомеров, пронумерованные заместители тогда берут подряд по ходу движения либо по часовой стрелке, либо против часовой стрелки вокруг точки, где пересекаются две линии. Если бы путь вокруг центральной точки проходил по часовой стрелке, то атропоизомер был бы обозначен как Я, точно так же, как это имеет место в отношении энантиомеров стереоцентра.

Такую же конфигурацию 8 получают при рассмотрении молекулы с противоположного конца оси 1-1', что показано на фиг. 3.2. Исходя из этого вида, кольцо, содержащее орто^О₂ и орто-СО₂Н, находится ближе к наблюдателю и является представленным сплошной жирной горизонтальной линией. Кольцо, содержащее орто-ОСН₃ и орто-Н, находится дальше от наблюдателя и представлено вертикальной линией.

В этом примере бифенила, с целью продемонстрировать назначения в соответствии с номенклатурой, выбраны только четыре орто-заместителя. В том случае, где два орто-заместителя в кольце являются идентичными, приоритет отдают при рассмотрении мета-заместителей в том же самом кольце.

Такой тип номенклатурного присваивания будет применен к атропоизомерам, описанным в этом документе. Например, соединению 3, которое является репрезентативным для части некоторых из описанных в этом документе соединений, таких как соединение 1(8), присваивают абсолютную конфигурацию 8, что показано ниже.

НзС сн₃

3.1 (3) ³·² (®)

Для целей изобретения атропоизомеры предпочтительно являются достаточно стабильными при хранении и используются без существенного термического взаимопревращения. Обычно атропоизомеры имеют полураспад, составляющий более 1 недели в том случае, когда они находятся в твердой форме при комнатной температуре.

В одном варианте осуществления соединение формулы 1, 2-((6-амино-9Н-пурин-9-ил)метил)-5- 6 019499 метил-3-о-толилхиназолин-4(3Н)-он, имеет два атропоизомера, представленных формулами 1(8) и 1(К). Формула 1 представляет собой смесь эквивалентных количеств двух атропоизомеров 1(8) и 1(К). Формула 1(К) представляет собой соответствующий энантиомер формулы 1(8), и наоборот.

НгИ

Как используется в этом документе, атропоизомер, по существу, свободный от его соответственного энантиомера, означает то, что композиция содержит по меньшей мере 90% по массе одного атропоизомера и 10% по массе или менее его стереоизомерного атропоизомера. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит по меньшей мере 95% по массе одного атропоизомера и 5% по массе или менее его стереоизомера. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит по меньшей мере 98% по массе одного атропоизомера и 2% по массе или менее его стереоизомера. Альтернативно, относительные количества преобладающего изомера и любого минорного энантиомера составляют по меньшей мере 9:1, или по меньшей мере 19:1, или по меньшей мере 98:2. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит по меньшей мере 99% по массе одного атропоизомера и 1% по массе или менее его стереоизомера. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит по меньшей мере 99,5% по массе одного атропоизомера и 0,5% по массе или менее его стереоизомера.

Атропоизомерные соединения изобретения обычно представляют собой твердые вещества и их необязательно очищают до получения степени чистоты, составляющей более чем приблизительно 90%, даже если они существуют в виде смеси атропоизомеров. В некоторых вариантах осуществления атропоизомерное соединение изобретения, по существу, не включает белковоподобные вещества, или любые вещества, имеющие молекулярную массу выше приблизительно 1000 а.е.м. (атомные единицы массы). Обычно, они имеют, по меньшей мере, степень чистоты 90% (химически чистые, независимо от оптической чистоты), и предпочтительно они являются химически чистыми по меньшей мере на 95%.

В некоторых вариантах осуществления в композициях и способах изобретения используют оптически активную форму описанных соединений, в каждом случае имеют в виду, что соединение является оптически активным и содержит преимущественно 8-стереоизомер, такой как 1(8), хотя он может содержать К-стереоизомер, такой как 1(К), в качестве минорного компонента. В других вариантах осуществления соединение является оптически активным и содержит преимущественно К-стереоизомер, такой как 1(К), хотя он может содержать 8-стереоизомер, такой как 1(8), в качестве минорного компонента. Для ясности, в том случае, когда в этом документе описывают дозировку соединения, дозировка относится к массе соединения, включающей каждый стереоизомер, который присутствует. Так, дозировка, составляющая 100 мг соединения 1(8), которая используется в этом документе, например, относится к массе смеси стереоизомеров, а не к массе конкретно 8-стереоизомера. Ее можно было бы отнести, например, к 100 мг смеси 8- и К-стереоизомеров с соотношением 9:1, которая могла бы содержать приблизительно 90 мг 8-стереоизомера, или к 100 мг смеси 8- и К-стереоизомеров с соотношением 19:1, которая могла бы содержать приблизительно 95 мг 8-стереоизомера.

В некоторых вариантах осуществления соединение предпочтительно представляет собой нерацемическую смесь, где 8-изомер является главным компонентом смеси. Обычно такая смесь будет содержать не более чем приблизительно 10% К-изомера, что означает, что соотношение 8- к К-изомерам составляет по меньшей мере приблизительно 9:1, и предпочтительно менее чем 5% К-изомера, что означает, что соотношение 8- к К-энантиомерам составляет по меньшей мере приблизительно 19:1. В некоторых вариантах осуществления соединение имеет менее 2% К-энантиомера, что означает, что оно имеет энантиомерный избыток, составляющий по меньшей мере приблизительно 96%. В некоторых вариантах осуществления соединение имеет энантиомерный избыток, составляющий по меньшей мере 98%. В некоторых

- 7 019499 вариантах осуществления соединение имеет энантиомерный избыток, составляющий по меньшей мере 99%.

В некоторых вариантах осуществления соединение предпочтительно представляет собой нерацемическую смесь, где В-изомер является главным компонентом смеси. Обычно такая смесь будет содержать не более чем приблизительно 10% 8-изомера, что означает, что соотношение В- к 8-изомерам составляет по меньшей мере приблизительно 9:1, и предпочтительно менее чем 5% 8-изомера, что означает, что соотношение В- к 8-энантиомерам составляет по меньшей мере приблизительно 19:1. В некоторых вариантах осуществления соединение имеет менее 2% 8-энантиомера, что означает, что оно имеет энантиомерный избыток, составляющий по меньшей мере приблизительно 96%. В некоторых вариантах осуществления соединение имеет энантиомерный избыток, составляющий по меньшей мере 98%. В некоторых вариантах осуществления соединение имеет энантиомерный избыток, составляющий по меньшей мере 99%.

Атропоизомер, который присутствует в избытке относительно его соответственного энантиомера или в виде энантиообогащенной смеси, означает, что атропоизомер присутствует в количестве, превышающем количество его энантиомера, что делает смесь атропоизомеров оптически активной. Обычно это означает, что соединение, присутствующее в избытке, преобладает над своим энантиомером по меньшей мере с соотношением 60/40.

Изобретение относится к селективным ингибиторам ΡΙ3Κδ и к способам лечения воспалительных состояний и/или онкологических нарушений посредством соединений, которые являются селективными ингибиторами ΡΙ3Κδ. В частности, соединения изобретения существуют в виде разделяемых атропоизомеров и изобретение обеспечивает разделенные атропоизомеры, имеющие удивительные преимущества над смесями атропоизомеров для применения в лечении воспаления. Соединения, композиции и способы изобретения являются терапевтически благотворными в лечении воспалительных состояний.

В одном аспекте изобретение обеспечивает оптически активное соединение, содержащее атропоизомер формулы 1(8) ^Η?^Ν 1(8) или его фармацевтически приемлемую соль или сольват;

где атропоизомер формулы 1(8) присутствует в избытке относительно его соответственного энантиомера формулы 1(В)

НгМ _1(К)

В одном варианте осуществления атропоизомер формулы 1(8), по существу, свободен от его соответственного атропоизомера формулы 1(В).

В еще одном аспекте изобретение обеспечивает оптически активное соединение, содержащее атропоизомер формулы 1(В)

- 8 019499

Η₂Ν или его фармацевтически приемлемую соль или сольват;

где атропоизомер формулы 1(Я) присутствует в избытке относительно его соответственного энантиомера формулы 1(8)

Η₂Ν

В некоторых вариантах осуществления атропоизомер формулы 1(Я), по существу, свободен от его соответственного атропоизомера формулы 1(8).

В другом аспекте изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую любое из оптически активных соединений, описанных в этом документе, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент. В конкретных вариантах осуществления оптически активное соединение представляет собой 1(8) или 1(Я). В других вариантах осуществления оптически активное соединение представляет собой 1(8). В дополнительных других вариантах осуществления оптически активное соединение представляет собой 1(Я).

В одном варианте осуществления композиция содержит терапевтически эффективное количество оптически активного атропоизомера для лечения состояния, где состояние характеризуется воспалением. В некоторых вариантах осуществления состояние выбирают из группы, состоящей из хронических воспалительных заболеваний, состояний, связанных с отторжением трансплантированных тканей или органов, реакции трансплантат против хозяина (СУНЭ). из синдромов, связанных с полиорганными поражениями, острого гломерулонефрита, реактивного артрита, врожденной эмфиземы, хронического обструктивного заболевания легких (ΟΘΡΌ), кистозного фиброза, респираторного дистресс-синдрома взрослых (ЛКО8), ишемического реперфузионного повреждения, инсульта, ревматоидного артрита (ЯЛ), остеоартрита (ОА), астмы, аллергического ринита, диабета, волчаночного нефрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, некротизирующего энтероколита, панкреатита, пневмоцистной пневмонии (РСР), воспалительного заболевания кишечника (ΙΒΌ), синдрома атипичной пневмонии (8АЯ8), сепсиса, внебольничной пневмонии (САР), множественного склероза (М8), инфаркта миокарда, инфекции, связанной с респираторным синцитиальным вирусом (Я8У), дерматита, острого гнойного менингита, термического повреждения, синдромов, связанных с трансфузией гранулоцитов, вызванной цитокинами токсичности, и повреждения спинного мозга. В некоторых вариантах осуществления оптически активное соединение представлено формулой 1(8). В других вариантах осуществления оптически активное соединение представлено формулой 1(Я).

В еще одном аспекте изобретение обеспечивает способ лечения состояния у млекопитающих, где состояние характеризуется воспалением. В некоторых вариантах осуществления состояние выбирают из группы, состоящей из хронических воспалительных заболеваний, состояний, связанных с отторжением трансплантированных тканей или органов, реакции трансплантат против хозяина (СУНЛ), из синдромов, связанных с полиорганными поражениями, острого гломерулонефрита, реактивного артрита, врожденной эмфиземы, хронического обструктивного заболевания легких (ΟΘΡΌ), кистозного фиброза, респираторного дистресс-синдрома взрослых (АКЭ8), ишемического реперфузионного повреждения, инсульта, ревматоидного артрита (ЯА), остеоартрита (ОА), астмы, аллергического ринита, диабета, волчаночного нефрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита, некротизирующего энтероколита, панкреатита, пневмоцистной пневмонии (РСР), воспалительного заболевания кишечника (ΙΒΌ), синдрома атипичной пневмонии (8АЯ8), сепсиса, внебольничной пневмонии (САР), множественного склероза (М8), инфаркта миокарда, инфекции, связанной с респираторным синцитиальным вирусом (Я8У), дерматита, острого гнойного менингита, термического повреждения, синдромов, связанных с трансфузией гранулоцитов, токсичности, вызванной цитокинами, и повреждения спинного мозга; где способ лечения

- 9 019499 такого состояния включает введение упомянутому млекопитающему терапевтически эффективного количества оптически активного атропоизомера, описанного в этом документе. В некоторых вариантах осуществления оптически активное соединение представлено формулой 1(8). В других вариантах осуществления оптически активное соединение представлено формулой 1(К). В некоторых вариантах осуществления млекопитающее представляет собой субъект, определяемый как нуждающийся в лечении нарушения. В некоторых вариантах осуществления млекопитающее представляет собой субъект, находящийся в группе риска, предрасположенной к такому состоянию, и соединение или композицию вводят для снижения или предупреждения возникновения воспаления. Способ настоящего изобретения может быть применен для терапевтического или профилактического лечения субъектов, которые имеют воспалительное состояние или могут быть подвержены воспалительному состоянию.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения состояния у млекопитающего, где состояние выбирают из группы, состоящей из аллергического ринита, астмы, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (СОРЦ), множественного склероза (М8), ревматоидного артрита (КА) и диабета, который включает введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения состояния у млекопитающего, где состояние выбирают из группы, состоящей из аллергического ринита, астмы, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (СОРЭ). множественного склероза (М8), ревматоидного артрита (КА) и диабета, который включает введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли, где атропоизомер, по существу, свободен от его соответствующего энантиомера.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения состояния у млекопитающего, где состояние выбирают из группы, состоящей из аллергического ринита, астмы, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (СОРЦ), множественного склероза (М8), ревматоидного артрита (КА) и диабета, который включает введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли, где атропоизомер, по существу, свободен от его соответствующего энантиомера и имеет энантиомерный избыток, составляющий по меньшей мере 90%.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения состояния у млекопитающего, где состояние выбирают из группы, состоящей из аллергического ринита, астмы, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (СОРЦ), множественного склероза (М8), ревматоидного артрита (КА) и диабета, который включает введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли, где атропоизомер, по существу, свободен от его соответствующего энантиомера и имеет энантиомерный избыток, составляющий по меньшей мере 98%.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения состояния у млекопитающего, где состояние выбирают из группы, состоящей из аллергического ринита, астмы, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (СОРЦ), множественного склероза (М8), ревматоидного артрита (КА) и диабета, который включает введение млекопитающему, нуждающемуся в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли, где атропоизомер, по существу, свободен от его соответствующего энантиомера и имеет энантиомерный избыток, составляющий по меньшей мере 99%.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения аллергического ринита у человека, который включает введение человеку, нуждающемуся в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества оптически активного атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли, где атропоизомер, по существу, свободен от его соответствующего энантиомера.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения астмы у человека, который включает введение человеку, нуждающемуся в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества оптически активного атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли, где атропоизомер, по существу, свободен от его соответствующего энантиомера.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения хронического обструктивного заболевания легких (СОРЦ) у человека, который включает введение человеку, нуждающемуся в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества оптически активного атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли, где атропоизомер, по существу, свободен от его соответствующего энантиомера.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения множественного склероза у человека, который включает введение человеку, нуждающемуся в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества оптически активного атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли, где атропоизомер, по существу, свободен от его соответствующего энантиомера.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения ревматоидного

- 10 019499 артрита у человека, который включает введение человеку, нуждающемуся в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества оптически активного атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли, где атропоизомер, по существу, свободен от его соответствующего энантиомера.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения диабета у человека, который включает введение человеку, нуждающемуся в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества оптически активного атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли, где атропоизомер, по существу, свободен от его соответствующего энантиомера.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения состояния у человека, где состояние выбирают из группы, состоящей из аллергического ринита, астмы, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (СОРЭ), множественного склероза (М8), ревматоидного артрита (КА) и диабета, который включает введение человеку, нуждающемуся в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества оптически активного атропоизомера, имеющего формулу 1(8) ^η2^ν 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли.

Примеры воспалительных состояний включают, но ими не ограничиваются, артритические заболевания, такие как ревматоидный артрит (КА), остеоартрит (ОА), подагрический артрит, спондилит, реактивный артрит; синдром Бехчета; сепсис; септический шок; эндотоксический шок; грамнегативный сепсис; грампозитивный сепсис; синдром токсического шока; синдром полиорганной недостаточности, вторичный септицемии, травма или кровотечение; офтальмические расстройства, включающие, но не ограниченные, аллергический конъюнктивит, весенний конъюнктивит, увеит и офтальмопатию, связанную с нарушением функции щитовидной железы; эозинофильную гранулему; легочные или респираторные состояния, включающие, но не ограниченные, астму, хронический бронхит, аллергический ринит, респираторный дистресс-синдром взрослых (АКЭ8), синдром атипичной пневмонии (8АК8), хронические воспалительные заболевания легких (например, хроническое обструктивное заболевание легких), силикоз, легочный саркоидоз, плеврит, альвеолит, васкулит, пневмонию, бронхоэктаз, врожденную эмфизему, легочное отравление кислородом; ишемическое реперфузионное повреждение, например, миокарда, мозга или конечностей; фиброз, включающий, но не ограниченный, кистозный фиброз; келоидное образование или образование рубцовой ткани; атеросклероз; аутоиммунные заболевания, включающие, но не ограниченные, системный волчаночный эритематоз (8ЬЕ), волчаночный нефрит, аутоиммунный тироидит, множественный склероз, некоторые формы диабета и синдром Рейно; нарушения, связанные с отторжением трансплантированных тканей или органов, включающие, но не ограниченные, реакцию трансплантат против хозяина (СУНЭ) и отторжение аллотрансплантата; хронический или острый гломерулонефрит; воспалительные заболевания кишечника, включающие, но не ограниченные, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит и некротизирующий энтероколит; воспалительный дерматит, включающий, но не ограниченный, контактный дерматит, атопический дерматит, псориаз и уртикарию; лихорадочное состояние и миалгии вследствие инфекции; воспалительные состояния центральной или периферической нервной системы, включающие, но не ограниченные, менингит (например, острый гнойный менингит), энцефалит и повреждение головного или спинного мозга, вследствие незначительной травмы; синдром Шегрена; заболевания, включающие диапедез лейкоцитов; алкогольный гепатит; бактериальную пневмонию; внебольничную пневмонию (САР); пневмоцистную пневмонию (РСР); заболевания, опосредованные образованием и активацией комплексов антиген-антитело; гиповолемический шок; инсулинозависимый сахарный диабет; острую и замедленную аллергическую реакцию; болезненные состояния вследствие дискразии и метастазирования лейкоцитов; термическое повреждение; синдромы, связанные с трансфузией гранулоцитов; токсичность, вызванную цитокинами; инсульт; панкреатит; инфаркт миокарда, инфекцию, вызванную респираторным синцитиальным вирусом (К8У); и повреждение спинного мозга.

В некоторых вариантах осуществления состояние выбирают из группы, состоящей из аллергического ринита, астмы, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (СОРЭ), множественного склероза (М8), ревматоидного артрита (КА) и диабета. В конкретных вариантах осуществления диабет представляет собой инсулинозависимый сахарный диабет или инсулинонезависимый сахарный диабет.

В еще одном аспекте изобретение обеспечивает способ лечения состояния у млекопитающего, где

- 11 019499 состояние представляет собой рак, который включает введение млекопитающему, который нуждается в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества соединения, описанного в этом документе. В некоторых вариантах осуществления рак представляет собой гемобластозу. В конкретном варианте осуществления гемобластоза представляет собой лейкемию, лимфому или множественную миелому. В других вариантах осуществления рак представляет собой солидную опухоль.

В некоторых вариантах осуществления лимфома представляет собой неоплазию зрелых В-клеток. В конкретных вариантах осуществления неоплазию зрелых В-клеток выбирают из группы, состоящей из Вклеточного хронического лимфоцитарного лейкоза/мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы; Вклеточного пролимфоцитарного лейкоза; лимфоплазмоцитарной лимфомы; лимфомы из клеток маргинальной зоны, такой как селезеночная В-клеточная лимфома из клеток маргинальной зоны (+/- ворсинчатые лейкоциты), узловая лимфома из клеток маргинальной зоны (+/- моноцитоидные В-клетки), и экстранодальная В-клеточная лимфома из клеток маргинальной зоны типа лимфоидной ткани слизистых оболочек (МАЬТ); волосатоклеточного лейкоза; миеломной болезни (болезнь Бенс-Джонса)/плазмацитомы; фолликулярной лимфомы, лимфомы из клеток фолликулярного центра; лимфомы из клеток мантийной зоны; диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (включая медиастинальную крупноклеточную В-клеточную лимфому, интраваскулярную крупноклеточную В-клеточную лимфому, первичную выпотную лимфому) и лимфомы Беркитта/лейкоза Беркитта.

В некоторых вариантах осуществления лимфому выбирают из группы, состоящей из множественной миеломы (ММ) и не-ходжкинской лимфомы (ΝΗΕ), лимфомы из клеток мантийной зоны (МСЬ), фолликулярной лимфомы, макроглобулинемии Вальденстрема (^М) или В-клеточной лимфомы и диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (ЭБВСБ).

В дополнительном конкретном варианте осуществления лейкемию выбирают из группы, состоящей из острого лимфоцитарного лейкоза (АЬБ), острого миелоидного лейкоза (АМЬ), хронического лимфоцитарного лейкоза (СЬЬ) и мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы (8ББ). Острый лимфоцитарный лейкоз также известен как острый лимфобластный лейкоз и может использоваться в этом документе взаимозаменяемо. Оба термина описывают тип рака, который начинается с белых кровяных клеток, лимфоцитов, в костном мозге.

В конкретных вариантах осуществления гемобластозу выбирают из группы, состоящей из острого лимфоцитарного лейкоза (АЬБ), острого миелоидного лейкоза (АМЬ), хронического лимфоцитарного лейкоза (СЬЬ), множественной миеломы (ММ) и не-ходжкинской лимфомы (ΝΉΕ). В некоторых вариантах осуществления не-ходжкинскую лимфому выбирают из группы, состоящей из диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы (БОВСБ), лимфомы из клеток мантийной зоны (МСБ), макроглобулинемии Вальденстрема (\УМ) и лимфоплазмоцитарной лимфомы.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения гемобластозы у млекопитающего, который включает введение млекопитающему, нуждающемуся в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества оптически активного атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли.

В дополнительных предпочтительных вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения состояния у млекопитающего, где состояние выбирают из группы, состоящей из острого лимфоцитарного лейкоза (АЬБ), острого миелоидного лейкоза (АМБ), хронического лимфоцитарного лейкоза (СББ), множественной миеломы (ММ) и не-ходжкинской лимфомы (ΝΗΕ), который включает введение млекопитающему, нуждающемуся в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества оптически активного атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения ракового заболевания у человека, где рак представляет собой лейкемию, лимфому или множественную миелому, который включает введение человеку, нуждающемуся в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества оптически активного атропоизомера, имеющего формулу

1(8) или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способ лечения состояния у млекопитающего, где раковое заболевание представляет собой солидную опухоль, который включает введение млекопитающему, нуждающемуся в лечении такого состояния, терапевтически эффективного количества оптически активного атропоизомера 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли.

В конкретных вариантах осуществления раковое заболевание представляет собой рак молочной же

- 12 019499 лезы, рак легких, рак толстой кишки или рак предстательной железы. В некоторых вариантах осуществления изобретение обеспечивает способы лечения солидной опухоли, которая связана с аномальной или нежелательной Р13Кв-опосредованной активностью в отношении клеточной сигнализации. В некоторых вариантах осуществления солидную опухоль выбирают из группы, состоящей из рака поджелудочной железы; рака мочевого пузыря; колоректального рака; рака молочной железы, включающего метастатический рак молочной железы; рака предстательной железы, включающего андрогенозависимый и андрогенонезависимый рак предстательной железы; рака почки, включающего, например, метастатическую почечно-клеточную карциному; гепатоцеллюлярного рака; рака легких, включающего, например, немелкоклеточный рак легких (Ы8СЬС), бронхоальвеолярную карциному (ВАС), и аденокарциному легких; рака яичников, включающего, например, эпителиальный или первичный перитонеальный рак; рака шейки матки; рака желудка; рака пищевода; ракового образования головы и шеи, включающего, например, плоскоклеточную карциному головы и шеи; меланомы; нейроэндокринного рака, включающего метастатические нейроэндокринные опухоли; опухолей мозга, включающих, например, глиому, анапластическую олигодендроглиому, мультиформную глиобластому взрослых, и анапластическую астроцитому взрослых; рака кости и саркомы мягких тканей.

В конкретных вариантах осуществления рак представляет собой рак молочной железы, рак яичников, рак легких, рак толстой кишки или рак предстательной железы.

В предпочтительных вариантах осуществления млекопитающее представляет собой человека.

В еще одном аспекте изобретение обеспечивает оптически активный атропоизомер, полученный хиральным хроматографическим разделением рацемической смеси соединений формулы 1

или его фармацевтически приемлемую соль или сольват;

где смесь соединений формулы 1 разделяют с использованием хиральной колонки с нормальной фазой, и два пика (максимума), А и В, являются разделенными, где максимум А и максимум В представляют атропоизомеры 1(8) и 1(В) соответственно

^нг^м 1(8) , и ^Η*^Ν 1(К) где преобладающий изомер в полученном оптически активном атропоизомере представляет собой первый изомер, который элюируют из колонки.

В некоторых вариантах осуществления полученный оптически активный атропоизомер преимущественно состоит из соединения формулы 1(8) и, по существу, свободен от соединения формулы 1(В). В другом варианте осуществления полученный оптически активный атропоизомер преимущественно состоит из соединения формулы 1(К) и, по существу, свободен от соединения формулы 1(8).

В еще одном дополнительном аспекте изобретение обеспечивает оптически активный атропоизомер, получаемый хиральным хроматографическим разделением рацемической смеси соединений формулы 1

- 13 019499

или его фармацевтически приемлемую соль или сольват;

где рацемическую смесь соединений формулы 1 разделяют с использованием хиральной колонки с нормальной фазой, и два пика (максимума), А и В, являются разделенными, где максимум А и максимум В представляют атропоизомеры 1(8) и 1(К) соответственно

НгЫ 1(₈) Η₂Ν ΐ(_Κ) где полученный оптически активный атропоизомер в основном состоит из второго изомера, который элюируют из колонки. В конкретных вариантах осуществления полученный оптически активный атропоизомер преимущественно состоит из соединения формулы 1(8) и, по существу, свободен от соединения формулы 1(К). В некоторых вариантах осуществления полученный преобладающий оптически активный атропоизомер в основном состоит из соединения формулы 1(К) и, по существу, свободен от соединения формулы 1(8).

В другом аспекте изобретение обеспечивает оптически активный атропоизомер, получаемый разделением рацемической смеси соединений формулы 1

или его фармацевтически приемлемую соль или сольват;

где оптически активный атропоизомер характеризуется более коротким временем удерживания на хиральной колонке с нормальной фазой при сравнении с его энантиомером.

В некоторых вариантах осуществления полученный оптически активный атропоизомер преимущественно состоит из соединения формулы 1(8) и, по существу, свободен от соединения формулы 1(К). В других вариантах осуществления полученный оптически активный атропоизомер является более медленно элюирующимся изомером (более продолжительное время удерживания), большей частью состоит из соединения формулы 1(К) и, по существу, свободен от соединения формулы 1(8).

В еще одном аспекте изобретение обеспечивает оптически активный атропоизомер, получаемый разделением рацемической смеси соединений формулы 1

- 14 019499

или его фармацевтически приемлемую соль или сольват;

где оптически активный атропоизомер характеризуется более продолжительным временем удерживания на хиральной колонке с нормальной фазой при сравнении с его энантиомером.

В некоторых вариантах осуществления полученный преобладающий оптически активный атропоизомер представляет собой соединения формулы 1(8) и, по существу, свободен от соединения формулы 1(К). В других вариантах осуществления полученный оптически активный атропоизомер является более быстро элюирующимся изомером (более короткое время удерживания), большей частью состоит из соединения формулы 1(К) и, по существу, свободен от соединения формулы 1(8).

В одном варианте осуществления соединение изобретения разделяют с использованием хиральной хроматографической колонки. В некоторых вариантах осуществления хиральная колонка имеет нормальную фазу. В альтернативных вариантах осуществления хиральная колонка имеет обращенную фазу.

Атропоизомеры формулы 1 разделяли способами жидкостной хроматографии высокого давления (НРЬС) с нормальной фазой, что дало в результате два разделенных пика (максимума). См. пример 2 и фиг. 2А для получения информации по характеристикам колонки и растворителей. Максимум, получаемый сначала при элюировании на 7,4 минутах, был отмечен как 1(8), и второй максимум, который получают при элюировании на 12,3 минутах, был помечен как 1(К). Абсолютная конфигурация каждого выделенного соединения была прояснена с помощью данных по рентгенографической кристаллографии. Первый максимум, получаемый при элюировании, был отнесен 8-конфигурации, которая показана в виде соединения 1(8), и второй максимум, получаемый при элюировании, был отнесен К-конфигурации, которая показана в виде соединения 1(К). Порядок получения максимумов при элюировании изменяется на обратный при использовании колонки с обращенной фазой, что описано в примере 2.

Активность соединения 1 и атропоизомеров 1(8) и 1(К) ίη νίίτο имеют сходные профили в ингибировании различных изоформ р110, что показано на фиг. 5А и 5В. Все три соединения проявляют селективное ингибирование р1105 и в биохимическом анализе (фиг. 5А), и в клеточном анализе (фиг. 5В). Хотя оказывается, что эффективность (действенность) соединений 1(8) и 1(К) ίη νίίτο является схожей, однако существуют неожиданные различия ίη νίνο, наблюдаемые для 1(8) и 1(К), которые обнаружены в фармакокинетических исследованиях, в основном относящиеся к увеличенному времени воздействия 1(8) и к сниженному времени воздействия 1(К) на субъект.

Для того чтобы выполнить фармакокинетические исследования, соединение 1 метят радиоактивным изотопом с использованием метки ¹⁴С на ортометильной группе фенила в положении 3 хиназолино вого кольца.

Соединение 1, меченное радиоактивным изотопом

Меченые рацемическую смесь или разделенные атропоизомеры вводили обследуемым крысам, собакам и людям с использованием пероральных и внутривенных (ί.ν.) путей. Соединения растворяли в полиэтиленгликоле 100 (РЕС) с тем, чтобы любое различие в скоростях растворения не могло бы играть роль в фармакокинетическом профиле соединений. Незначительные различия растворимости между 1(8) и 1(К) наблюдали в разнообразных водных растворах, что сведено вместе на фиг. 4. После введения соединения у субъектов брали пробы плазмы крови во времени и оценивали методами аналитической жидкостной хроматографии высокого давления (НРБС), разработанными для идентифицирования соединения 1(8) или 1(К) и для измерения концентрации соединения 1(8) или 1(К), присутствующего в пробе. Получили, что наиболее представленным изомером, обнаруженным в плазме, является соединение 1(8), которое обусловливает 70-80% воздействия на субъект.

- 15 019499

Фиг. 6 показывает концентрацию 1(8) и 1(В) в плазме крови в течение 24 ч после того, как крысамсамкам перорально ввели однократную дозу рацемического соединения 1, составляющую 50 мг/кг. Через 4 ч после введения дозы концентрация 1(8) постоянно увеличивается в крови и через 8 ч после введения дозы средняя концентрация 1(В) составляет приблизительно одну четверть концентрации 1(В). Это демонстрирует различие воздействия соединений 1(8) и 1(В) ίη νίνο при пероральном введении крысам, где этот субъект имеет увеличенное воздействие 1(8) по сравнению с 1(В).

Фиг. 7 показывает концентрацию 1(8) и 1(В) в плазме крови в течение 24 ч после того, как собакамсамкам перорально ввели однократную дозу рацемического соединения 1, составляющую 50 мг/кг. Приблизительно через 1 ч после введения дозы достигают максимального значения концентрации 1(8) и 1(В). На тот момент концентрация 1(В) составляет менее половины концентрации 1(8). Это демонстрирует различие воздействия соединений 1(8) и 1(В) ίη νίνο при пероральном введении собакам, где этот субъект имеет увеличенное воздействие 1(8) по сравнению с 1(В). Такие большие различия в фармакокинетическом поведении не были предсказуемыми.

Фиг. 8 показывает концентрацию 1(8) и 1(В) в плазме крови в течение 72 ч после того, как обследуемым людям перорально ввели однократную дозу рацемического соединения 1, составляющую 100 мг. Через 2 ч после введения дозы достигают максимального значения концентрации 1(8) и 1(В). На момент достижения максимального значения концентрации концентрация 1(В) составляет менее половины концентрации 1(8), которая, в свою очередь, обусловливает приблизительно 70% воздействия на животного. Хотя концентрации обоих соединений после того момента постоянно снижаются, через 72 ч после введения дозы концентрация соединения 1(8) превышает намного более чем в 10 раз концентрацию 1(В). Это демонстрирует неожиданное различие воздействия соединений 1(8) и 1(В) ίη νίνο при пероральном введении людям, где субъект имеет увеличенное воздействие соединения 1(8) по сравнению с 1(В). Кроме того, оказывается, что период полураспада для 1(8) составляет величину, выходящую за точку момента времени 72 ч. Период полураспада для соединения 1(8), составляющий несколько дней у людей, превышает период полураспада у собак. Продолжительный период полураспада для соединения 1(8) у людей предусматривает более низкую дозировку введения. Сниженные вводимые дозировки также могут снижать нежелательные побочные эффекты соединения у субъекта, при наличии таковых, и обеспечивают преимущество по сравнению с введением рацемической смеси или по сравнению с введением 1(В).

Фиг. 9 показывает концентрацию соединений 1(8) и 1(В) в плазме крови в течение периода времени 24 ч после введения крысам-самкам однократной дозы 1(8) или 1(В) (1,5 мг/кг) либо с использованием однократной болюсной внутривенной (ί.ν.) дозы (фиг. 9А), либо пероральной дозы (фиг. 9В). В исследовании с внутривенным введением в момент времени 4 ч уровень воздействия 1(В) составляет приблизительно одну пятую часть концентрации 1(8). В момент времени 24 ч концентрация обоих соединений является очень низкой и находится в пределах экспериментальной ошибки. Концентрация 1(8) в плазме крови крыс, которым соединения были введены перорально, как было показано, сильно превышала концентрацию 1(В) в момент времени 12 ч. Это демонстрирует различие воздействия соединений 1(8) и 1(В) ίη νίνο при внутривенном, либо при пероральном введении крысам, где субъект имеет увеличенное воздействие 1(8) по сравнению с 1(В).

Табл. 1 сводит вместе основные фармакокинетические параметры для соединений 1(8) и 1(В) после однократного болюсного внутривенного (ί.ν.) введения дозы крысам-самкам 8ргадие Эа\\!еу (8Ό). Наиболее примечательным является величина периода полураспада (Т1/2) для соединения 1(В), которая превышает приблизительно в 2,8 раз величину периода полураспада либо для атропоизомера 1(8), либо для рацемической смеси 1. Соединение 1(В) имеет значение объема распределения в терминальной фазе (νζ) выведения, равное 14833 мл/кг, которое превышает приблизительно в 2,6 раза значение νζ и для 1(8), и для рацемической смеси.

Таблица 1

Параметр	Соединение 1(5) (1,5 мг/кг)	Соединение 1 (Р.) (1,5 мг/кг)	Соединение 1 (3 мг/кг)
Т1/2 (час)	2,5±1,6	7,0+1,1	2,5+0,7
СЬ (мл/час/кг)	1838±503	1476+85	1560+180
У2 (мл/кг)	5773±2740	14883±2034	5397±1568
АЦСаН (нг/млхчас)	865±212	1010+55	1971+243

СЬ - очищение;

АиСа11 - площадь под кривой для всех значений

Различия соединений 1(8) и 1(В) ίη νίνο изучают на обследуемых людях. Фиг. 10А и 10В показывают графики зависимости концентрации соединений 1(8) и 1(В) в плазме крови, нанесенные относительно периода времени 72 ч после введения однократной, пероральной дозы атропоизомеров, равной

- 16 019499

100 мг. Максимальная концентрация 1(8) в 2 раза превышает максимальную концентрацию для 1(К). Хотя концентрация соединений в плазме крови снижается в течение периода времени 72 ч, разница концентраций двух соединений сохранялась, если дополнительно не увеличивалась. Эта разница концентрации соединения в крови, как оказывается, увеличивается, так как концентрация соединения 1(8) снижается более постепенно во времени, тогда как соединение 1(К), как оказывается, должно быть удалено из крови сравнительно более быстро. При дозе 10 мг максимальная концентрация соединения 1(8) в плазме крови по-прежнему приблизительно в два раза превышает максимальную концентрацию соединения 1(К), см. фиг. 10С и 10Ό.

Фиг. 11 отражает концентрацию меченного радиоактивным изотопом ¹⁴С соединения 1(8) и 1(К) в плазме цельной крови. Субъектам вводили дозу рацемической смеси 1(8) и 1(К), равную 25 мг, каждый день в течение 7 дней. На 4 день к дозе добавляют 40 нКи меченого соединения 1(8) или меченого соединения 1(К) (общая дозировка по-прежнему составляла 25 мг рацемической смеси, поскольку количество меченого вещества было менее 0,1 мг, то оно не оказывало существенного влияния на дозировку). Фиг. 11 показывает фармакокинетический профиль для всего меченного радиоактивным изотопом вещества, начиная с того момента, когда вещество с добавлением известного количества аналита было введено на 4 день, и продолжая в течение нескольких дней после этого.

Оба соединения в этом испытании быстро достигали значений их максимальных концентраций и начинали неуклонное снижение концентрации в кровотоке. После 1 дня количество соединения 1(К), равное приблизительно 500 нэкв./мл, составляет приблизительно одну четвертую часть концентрации соединения 1(8), которая, в свою очередь, составляет приблизительно 2000 нэкв./мл. Более быстрое снижение концентрации соединения 1(К) в крови по сравнению с соединением 1(8) становится еще более выраженным в момент времени через 50 ч после введения дозы, где концентрация соединения 1(8) в плазме крови находится между 500 и 1000 нэкв./мл в сравнении с концентрацией соединения 1(К), которая составляет приблизительно 10-50 нэкв./мл. Концентрация соединения 1(К) снижается более быстро, чем концентрация соединения 1(8), что отражено посредством более резкого наклона кривой для соединения 1(К) по сравнению с плавным и пологим наклоном для соединения 1(8) на фиг. 11.

В табл. 2 сведены вместе значения периода полураспада, С_тах, и ЛИС (площадь под кривой), полученные в группе обследуемых людей, для соединений 1(8) и 1(К), исходя из данных, представленных на фиг. 11. В момент времени 64 ч соединение 1(8) имеет период полураспада в 6 раз более продолжительный, чем период полураспада для соединения 1(К), которое имеет значение периода полураспада менее 11 ч. Значение С_тах для 1(8) в два раза больше, чем значение С_тах для 1(К), и значение ЛИС для 1(8) превосходит значение ЛИС для 1(К) более чем в 4 раза. Эти результаты демонстрируют, что соединение 1(8) имеет неожиданный и очень отличающийся фармакокинетический профиль в сравнении с соединением 1(К) в группе людей после перорального введения дозы. Соединение 1(8) имеет значительно более длительный период полураспада, а также увеличенные значения С_тах и ЛИС; таким образом, соединение 1(8) производит большее воздействие на людей по сравнению с соединением 1(К). Соединение 1(8), следовательно, дает неожиданные преимущества и над соединением 1(К), и над рацемической смесью, и лечение человека посредством соединения 1(8) может обеспечить более высокий, более стабильный уровень активного лекарственного средства в плазме, чем лечение посредством соединения 1(К) или рацемата, и одновременно снижает воздействие на субъект других веществ или метаболитов 1(К).

Таблица 2

	Т1/2 [час] (период полураспада)	Стах [нэкв./мл]	АиСросдедняя [нэкв.*час/мл]
Соединение 1	69,9+26,6	2780+1163	51032+22333
Соединение 1(3)	63,9	3930	90511
Соединение 1(К)	10,6	1946	21676

Не будучи связанными с теорией, пониженное воздействие соединения 1(К) по сравнению с 1(8) позволяет предположить различие в поглощении организмом и выведении из организма для двух соединений. Согласно измерениям с использованием жидкостной хроматографии в сочетании с массспектрометрией (БС-М8), соединение 1(К) преимущественно выводится с мочой. Также, 1(Е). как было показано, имеет больший объем распределения, νζ, и имеет более высокую скорость выделения и более низкую скорость поглощения по сравнению с 1(8). Соединение 1(К) также может быстрее метаболизироваться, чем 1(8). Независимо от причин соединение 1(К) является намного менее доступным в плазме (кровотоке), чем 1(8) при пероральном введении, и соединение 1(8) обеспечивает намного более стабильное воздействие лекарственного средства и более слабое воздействие метаболитов.

Еще одним возможным объяснением различия воздействия является то, что соединения 1(К) и 1(8) взаимопревращаются во времени. После введения соединения 1(К), оказывается, что приблизительно

- 17 019499

14% соединения 1(В) превращается в 1(8) в плазме крови за 4 ч, тогда как введение 1(8) привело к менее чем 1%-ному превращению 1(8) в 1(В) за 4 ч. Однако такая небольшая величина превращения могла бы объяснить лишь долю различия степеней воздействия ίη νίνο, и другие факторы, такие как селективное выведение соединения 1(В), вероятно, играют основную роль в пониженной степени воздействия 1(В).

Различия соединений 1(8) и 1(В) ίη νίνο распространяются на метаболические продукты. Например, после перорального введения однократной дозы либо атропоизомера 1(8), либо 1(В), составляющей 50 мг/кг, брали пробы мочи у крыс и анализировали на предмет метаболитов. Фиг. 12А и 12В показывают результаты анализа обнаруженных в моче метаболитов, проведенного посредством жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (ЬС-М8). Крысы, которых подвергали воздействию соединения 1(8), давали, главным образом, одно соединение, представленное максимумом на 13,4 минуте, и другое соединение, представленное намного меньшим максимумом на 14,5 минуте. С другой стороны, аналитические кривые для мочи крыс, которым вводили соединение 1(В), характеризуются тремя основными максимумами на 13,5, 14,4 и на 15,6 минутах и небольшим максимумом на 12,1 минуте. Это демонстрирует то, что соединение 1(В) метаболизируется ίη νίνο с вырабатыванием большего количества метаболических продуктов по сравнению с соединением 1(8) и позволяет предположить, что два атропоизомера не метаболизируются в организме точно одинаковым образом.

Фиг. 13Ά-13Ό дополнительно иллюстрируют неожиданную стабильность соединения 1(8) ίη νίνο по сравнению с 1(В). Для этих испытаний субъекту-человеку перорально вводят либо меченное радиоактивным изотопом соединение 1(8), либо меченное радиоактивным изотопом соединение 1(В). Пробы плазмы брали у субъекта через 1 ч и через 72 ч после введения и анализировали на предмет содержания меченных радиоактивным изотопом соединений. При проведении анализа использовали НРЬС-условия, которые известны для разделения соединения 1(8) (элюирование на приблизительно 21-22 минутах) от 1(В), поэтому за любыми взаимопревращениями этих видов молекул можно было наблюдать. Это также позволяет различить эти два вещества и основные метаболиты, образованные из них ίη νίνο.

Меченные радиоактивными изотопами соединения выделяли из плазмы крови человека и анализировали посредством НРЬС через 1 ч и через 72 ч после введения любого из двух меченных радиоактивным изотопом соединений, что показано на фиг. 13Α-13Ό. Для подтверждения идентичности максимумов в качестве стандарта времени удерживания на каждом спектре дается УФ-кривая, но важными данными, которые получают в ходе наблюдения, являются сигналы радиоактивной метки С-14, которые показаны небольшими квадратами, в момент времени удерживания для соединений 1(8), 1(В). и для известных метаболитов этих соединений. На фиг. 13А имеются два максимума, наблюдаемые как сигнал радиоактивной метки, соответствующие соединению 1(8) (большой пик на приблизительно 22 минуте) и метаболиту (небольшой пик на приблизительно 14 минуте). На фиг. 13В имеются две доминирующие точки в данных сигналов радиоактивной метки С-14, соответствующие соединению 1(В) на 22 минуте, и метаболиту на 14 минуте. В этом случае уровень метаболита является почти таким же большим, как и уровень соединения 1(В), даже через 1 ч после введения соединения 1(В). Таким образом, соединение 1(8) приводит к образованию меньшего количества метаболитов, чем соединение 1(В), в плазме человека, и остается большей частью неизмененным через 1 ч. В момент времени 72 ч количество метаболитов, образованных из 1(8), по-прежнему меньше, чем количество исходного соединения 1(8), фиг. 13С. Оказывается, что небольшое количество 1(В) присутствует в этот момент времени, так как можно предположить, что некоторое взаимопревращение 1(8) в 1(В) может протекать ίη νίνο. Для 1(В) в момент времени 72 ч в основном обнаруживают метаболиты и видят очень немного 1(В); фактически, оказывается, что 1(8) может присутствовать в большем количестве, чем 1(В), опять же, если предполагать, что может происходить небольшое взаимопревращение: см. фиг. 13Ό.

Следовательно, относительное содержание метаболита после введения дозы меченного радиоактивным изотопом соединения 1(В) позволяет предположить, что соединение 1(В) метаболизируется в организме человека сравнительно быстро. Значительно более низкие уровни метаболита в пробах плазмы, содержащих соединение 1(8), предполагает более низкие уровни метаболизма, и более высокая концентрация соединения 1(8) через 72 ч после введения показывает, что этот изомер обеспечивает более длительное воздействие однократной дозы.

Соединение 1(8) дает преимущества, связанные с более длительным периодом полураспада ίη νίνο, со сниженным количеством вводимой дозы и с увеличенным временем воздействия ίη νίνο. Однако фармакокинетические характеристики для соединения 1(В) также обеспечивают некоторые преимущества при его применении в некоторых ситуациях и для некоторых субъектов. Другой фармакокинетический профиль для соединения 1(В) обеспечивает более медленную доставку соединения 1(8), которое имеет более длительный период полураспада. Например, превращение 1(В) в 1(8), что рассматривалось ранее, может обеспечивать путь доставки с замедленным/отсроченным воздействием соединения 1(8), с укороченным периодом воздействия высокой концентрации активного лекарственного средства в плазме вследствие короткого периода полураспада соединения 1(В). Таким образом, более медленно изменяющийся профиль в начальный момент для соединения 1(В) может быть преимущественным в том случае, когда желательным является лекарственное средство, которое имеет профиль с большей площадью под кривой (ЛИС), а не лекарственное средство с большим значением С_тах, или в том случае, когда жела

- 18 019499 тельным является сравнительно быстрое выведение из организма (короткий период полураспада). В связи с вышеизложенным, в некоторых вариантах осуществления соединения, композиции и способы изобретения включают 1(В). В предпочтительных вариантах осуществления особенно для лечения воспалительных состояний или гематологических раковых заболеваний, соединения, композиции и способы изобретения включают 1(8).

Хиральное разделение энантиомеров может быть выполнено методами жидкостной хроматографии высокого давления (НРЬС), кристаллизации или применения ферментов. В этом документе описывают методы хирального разделения, в которых применяют НРЬС для обеспечения соединений изобретения. Например, смеси атропоизомеров формулы 1 могут быть разделены на соединения с формулами 1(8) и 1(К). С целью рассмотрения, разделенные атропоизомеры соединения 1, которые извлекают посредством хроматографического разделения с нормальной фазой и элюируют за время 8,7 и 13,0 мин, что описано в примере 3, будут называться как атропоизомеры соответственно 1(8) и 1(В).

Среднему специалисту в данной области будет понятно, что для разделения на индивидуальные атропоизомеры могут быть использованы многие типы приборов, колонок и элюентов. Подходящие приборы для НРЬС укомплектовывают и настраивают в соответствии со способами, хорошо известными средним специалистам в данной области. Такой комплект в любом случае включает насос, порт ввода пробы и детектор.

Хроматографические колонки могут быть охарактеризованы как колонки с нормальной фазой или как колонки с обращенной фазой. Как правило, колонки с нормальной фазой имеют полярную неподвижную фазу, а колонки с обращенной фазой имеют неполярную неподвижную фазу. Подходящие хиральные колонки могут быть закуплены предварительно заполненными насадкой или могут быть заполнены средним специалистом в данной области. Подходящие хиральные колонки включают хиральные колонки СН1КАЬРЛК®1А, ΙΒ, ΑΌ-Н, А8, ΑΌ-КН, А8-НН и 1С, а также СНЖАЬСЕЬ®ОВ-Н, ОВ-Н, ОЕ, ОС, О1-КН и ОТ которые могут быть закуплены в компании СЫта1 Тсс11по1од1С5 1пс., 730 8рппдйа1с Опус. РО Вох 564, Е.хЮп, Ра. 19341. Композиция для заполнения колонок СН1ВАБРАК®1А представляет собой трис-(3,5-диметилфенилкарбамат)амилозы, иммобилизованный на силикагеле размером 5 мкМ. Среднему специалисту в данной области будет ясно, что многие другие хиральные колонки, закупленные у других поставщиков, могут быть пригодны для разделения изомеров изобретения. Материал для заполнения также может быть закуплен с различным размером бусин. Подходящие размеры бусин для препаративного разделения составляют приблизительно 20 мкм в диаметре или менее. Подходящие размеры бусин для аналитического разделения составляют приблизительно 10 мкм в диаметре или менее.

Среднему специалисту в данной области будет понятно, что соответственная подвижная фаза, используемая в методе НРЬС, может быть выбрана из различных комбинаций и соотношений растворителей. Подходящую подвижную фазу определяют в соответствии со способами, хорошо известными средним специалистам в данной области. Подвижная фаза может включать органические растворители, такие как алканы, спирты, простые эфиры, хлорированные растворители, такие как вода, и забуференная вода. Неограничивающие примеры органических растворителей включают гексаны, н-гексан, метанол, этанол, бутанол, изобутанол, пропанол, изопропанол (1РА), ацетонитрил, Ν,Ν-диметилформамид (ΌΜΕ), тетрагидрофуран (ТНЕ), метил-трет-бутиловый эфир, трихлорметан, дихлорметан, хлороформ, 1,4-диоксан, толуол, ацетон, метилацетат и этилацетат. Для основных или кислотных образцов для оптимизирования хирального разделения в подвижную фазу может быть внедрена добавка. В качестве оснований могут быть использованы первичные амины, такие как диэтиламин (ЭЕА). диизопропиламин, бутиламин и триэтиламин (ТЕА). Неограничивающие примеры кислот включают серную кислоту, трифторуксусную кислоту, хлористо-водородную кислоту, уксусную кислоту и муравьиную кислоту. Также могут быть использованы другие неорганические добавки в подвижную фазу, такие как КРЕ₆, №1С1О₄. Ν;·ιΒΕ₄. NаН₂РО₄. Неограничивающие примеры смесей для подвижной фазы включают смесь метанол/этанол/ЭЕА с соотношением 50:50:0,2; смесь гексаны/этанол/ОЕА с соотношением 70:30:0,1; смесь гексаны/изопропанол/ОЕА с соотношением 70:30:0,1; смесь гексаны/изопропанол/ОЕА с соотношением 40:60:0,06 и смесь вода/ацетонитрил с соотношением 50:50, 60:40 или 70:30. Неограничивающие примеры подвижных фаз, используемых для скрининга основных соединений в обращенно-фазовом варианте, включают смесь борат/ацетонитрил с соотношением 30:70 (рН 9) и смесь 100 мМ водный раствор КРЕ₆/ацетонитрил с соотношением 30:70.

Описание аналитических или препаративных хроматографических способов можно увидеть в примерах 2 и 3 соответственно.

Относительные эффективности соединений в качестве ингибиторов ферментной активности (или другой биологической активности) могут быть установлены путем определения концентраций, при которых соединение ингибирует активность до заранее заданной степени, затем путем сравнения результатов. Обычно предпочтительно определяют концентрацию, которая ингибирует 50% активности в биохимическом анализе, т.е. 50%-ингибирующая концентрация или 1С₅₀. Определения 1С₅₀ могут быть выполнены с использованием обычно применяемых методов, известных в данной области. Как правило, значение 1С₅₀ может быть определено путем измерения активности данного фермента в присутствии изу

- 19 019499 чаемого ингибитора, который берут в различных концентрациях. Экспериментально полученные значения ферментной активности затем наносят на график относительно используемых концентраций ингибитора. Концентрацию ингибитора, которая показывает 50% ферментную активность (в сравнении с активностью в отсутствие какого-либо ингибитора), принимают за значение 1С₅₀. Аналогично, другие ингибирующие концентрации могут быть определены с помощью соответственных определений активность. Например, в некоторых заданиях может быть желательно установление 90% ингибирующей концентрации, т.е. 1С₉₀.

Лечение, как используют в этом документе, относится к предупреждению возникновения нарушения у животного, которое может быть предрасположено к этому нарушению, но у которого еще не выявили наличие такого нарушения; к ингибированию нарушения, например, к замедлению или купированию (прекращению) его развития; к смягчению действия симптомов нарушения, например, к вызыванию его обратного развития или ликвидации; или к улучшению состояния, т.е. к снижению тяжести симптомов, сопутствующих этому нарушению. Нарушение, как подразумевают, охватывает внутренние нарушения, заболевания, медицинские показания, синдромы и т.п., без ограничения.

Способы изобретения охватывают различные методы лечения субъекта-животного, предпочтительно млекопитающего, более предпочтительно примата и еще более предпочтительно человека. В число млекопитающих, которые могут быть подвергнуты лечению, входят, например, люди, домашние животные (комнатные животные-питомцы), в том числе собаки и кошки; сельскохозяйственные животные, в том числе рогатый скот, лошади, овцы, свиньи и козы; лабораторные животные, в том числе крысы, мыши, кролики, морские свинки и нечеловекообразные приматы; и виды животных, обитающих в зоопарке. Немлекопитающие включают, например, виды птиц, виды рыб, виды рептилий и земноводных. Как правило, любой субъект, которому могло бы быть лучше от приема соединений и композиций изобретения, подходит для назначения способа изобретения.

Методы для составления и введения фармацевтических композиций могут быть обнаружены в Яетίηβίοη'δ РйагтасеиЕса1 8с1еисе8, 18111 Εά., Маск РнЫМппд Со, Еайоп РА, 1990. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть изготовлены с использованием любого обычно применяемого способа, например с использованием смешения, растворения, гранулирования, изготовления драже, отмучивания, эмульгирования, инкапсулирования, захватывания, формования волокна из расплава, сушки с распылением или процессов лиофилизации. Оптимальный фармацевтический состав может быть определен специалистом в данной области в зависимости от пути введения и желательной дозировки. Такие составы могут влиять на физическое состояние, стабильность, скорость высвобождения ίη νίνο и на скорость клиренса введенного средства. В зависимости от состояния, которое подлежит вылечиванию, эти фармацевтические композиции могут быть составлены и введены системно или локально.

Фармацевтические композиции составляют так, чтобы они содержали подходящие фармацевтически приемлемые носители и необязательно могли включать в себя эксципиенты и вспомогательные вещества, которые облегчают технологическую переработку активных соединений в препараты, которые могут быть использованы фармацевтически. Способ введения, как правило, будет определять природу носителя. Например, составы для парентерального введения могут содержать водные растворы активных соединений в водорастворимой форме. Носители, подходящие для парентерального введения, могут быть выбраны из физиологического раствора, забуференного физиологического раствора, декстрозы, воды и других физиологически совместимых растворов. Предпочтительные носители для парентерального введения представляют собой физиологически совместимые буферные растворы, такие как раствор Хэнка, раствор Рингера или физиологически совместимый забуференный физиологический раствор. Для введения в ткань или в клетку в составе используют проникающие вещества (пенетранты), подходящие для проникновения в конкретный барьер. Такие проникающие вещества, как правило, известны в данной области. Для препаратов, содержащих белки, состав может включать стабилизирующие вещества, такие как полиолы (например, сахарозу), и/или поверхностно-активные вещества (например, неионогенные поверхностно-активные вещества) и т.п.

Альтернативно, составы для парентерального применения могут содержать дисперсии или суспензии активных соединений, приготовленные в виде соответствующих масляных суспензий для инъекций. Подходящие липофильные растворители или носители включают жирные масла, такие как сезамовое масло, и синтетические сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, или липосомы. Водные суспензии для инъекций могут содержать вещества, которые повышают вязкость суспензии, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, сорбит или декстран. Необязательно, суспензия также может содержать подходящие стабилизаторы или средства, которые повышают растворимость соединений, что позволяет приготовить высококонцентрированные растворы. Водные полимеры, которые обеспечивают рН-чувствительную солюбилизацию и/или замедленное высвобождение активного вещества, также могут быть использованы в покрытиях или в матричных структурах, например метакриловые полимеры, такие как серии ΕυΩΡΑΟΙΤ®, доступные в компании Яойт Атепса 1пс. (Р|5са1а\\ау, Νί). Также могут быть использованы эмульсии, например дисперсии типа масло-в-воде и типа вода-вмасле, необязательно стабилизированные эмульгирующим агентом или дисперсантом (поверхностноактивные вещества; сурфактанты). Суспензии могут содержать суспендирующие вещества, такие как

- 20 019499 этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленовые сложные эфиры сорбита и сорбитана, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар, трагакантовая камедь и их смеси.

Липосомы, содержащие активное вещество, также могут быть применены для парентерального введения. Липосомы, как правило, получают из фосфолипидов или других липидных веществ. Композиции в липосомной форме также могут содержать другие ингредиенты, такие как стабилизаторы, консерванты, эксципиенты и т.п. Предпочтительные липиды включают фосфолипиды и фосфатидил-холины (лецитины), и те и другие природные и синтетические. Способы образования липосом известны в данной области. См., например, публикацию ΡϊΌδοοΙΙ (Ей.), МеИойз ίη Се11 Вю1оду, νο1. ΧΙν, р. 33, Асайешю ΡΐΌ88, №\ν Уогк (1976).

Фармацевтические композиции, содержащие вещество в дозировках, приемлемых для перорального введения, могут быть составлены с использованием фармацевтически приемлемых носителей, хорошо известных в данной области. Препараты, составленные для перорального введения, могут находиться в форме таблеток, пилюль, капсул, кашет, драже, крахмальных облаток, драже, лекарственных леденцов, жидкостей, гелей, сиропов, шлама/кашицы, эликсиров, суспензий или порошков. Для иллюстрации фармацевтические препараты для перорального применения могут быть получены путем соединения активных соединений с твердым эксципиентом, необязательно путем размалывания/растирания получающейся в результате смеси, и путем переработки смеси в гранулы, после добавления подходящих вспомогательных веществ, если желательно, с получением таблеток или сердцевин драже. Пероральные составы могут применять жидкие носители, сходные по типу с жидкими носителями, описанными для парентерального применения, например забуференные водные растворы, суспензии и т.п.

Предпочтительные пероральные составы включают таблетки, драже и желатиновые капсулы. Эти препараты могут содержать один или более эксципиентов, которые включают, без ограничения:

a) разбавители, такие как сахара, в том числе лактозу, декстрозу, сахарозу, маннит или сорбит;

b) связующие вещества, такие как алюмосиликат магния, кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал и т.д.;

c) целлюлозные вещества, такие как метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза и карбоксиметилцеллюлоза натрия, поливинилпирролидон, камеди, такие как аравийская камедь и трагакантовая камедь, и белки, такие как желатин и коллаген;

й) распадающиеся или солюбилизирующие вещества, такие как сшитый поливинилпирролидон, крахмалы, агар, альгиновая кислота или ее соль, например альгинат натрия, или шипучие композиции;

е) лубриканты, такие как диоксид кремния, тальк, стеариновая кислота или ее магниевая или кальциевая соль, и полиэтиленгликоль;

ί) ароматизирующие и подслащивающие вещества;

д) окрашивающие вещества или пигменты, например, для идентифицирования продукта или для охарактеризовывания количества (дозировки) активного соединения; и

Н) другие ингредиенты, такие как консерванты, стабилизаторы, вещества, способствующие набуханию, эмульгирующие вещества, вещества, способствующие растворению, соли для регулирования осмотического давления, и буферные растворы.

Желатиновые капсулы включают капсулы ριΜι-Πΐ, изготовленные из желатина, а также мягкие, закрытые капсулы, изготовленные из желатина и покрытия, такого как глицерин или сорбит. Капсулы ризЬ-й! могут содержать активный(ые) ингредиент(ы), смешанный(е) с наполнителями, связующими веществами, лубрикантами и/или стабилизаторами и т.д. В мягких капсулах активные соединения могут быть растворены или суспендированы в подходящих жидкостях, таких как жирные масла, жидкий парафин, или жидкий полиэтиленгликоль со стабилизаторами или без таковых. Сердцевины драже могут быть снабжены подходящими покрытиями, такими как концентрированные растворы сахара, которые также могут содержать гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, гель-карбопол, полиэтиленгликоль, и/или диоксид титана, растворы для получения глазури, и подходящие органические растворители или смеси растворителей.

Фармацевтическая композиция может быть обеспечена в форме фармацевтически приемлемой соли соединения изобретения. Соли часто являются более растворимыми в водных или других протонных растворителях, чем соответствующие формы свободных кислот или оснований. Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны в данной области. Соединения, которые содержат кислотные фрагменты, могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с подходящими катионами. Подходящие фармацевтически приемлемые катионы включают, например, катионы щелочных металлов (например, натрий или калий) и катионы щелочно-земельных металлов (например, кальций или магний).

Соединения изобретения, которые содержат основные фрагменты, могут образовывать фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот посредством подходящих кислот. Например, Вегде, е1 а1., I Ρ1ι;·ιηη. 8с1. (1977), 66:1, подробно описывают фармацевтически приемлемые соли. Соли могут быть получены ίη δίΐιι во время конечного выделения и очистки соединений изобретения или отдельно посредством реакционного взаимодействия функциональной группы свободного основания с подходящей кислотой.

- 21 019499

Репрезентативные соли присоединения кислот включают, но ими не ограничиваются, ацетат, адипат, альгинат, цитрат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, камфорно-кислая соль, камфоросульфонат, циннамат, диглюконат, формиат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, фумарат, гиппурат, гидроксиацетат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат (изотионат), лактат, малеат, малонат, манделат, метансульфонат или сульфат, никотинат, 2нафталинсульфонат, оксалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, пируват, сукцинат, тартрат, тиоцианат, фосфат или гидрофосфат, глутамат, бикарбонат, салицилат, пара-толуолсульфонат и ундеканоат.

Примеры неорганических кислот включают хлористо-водородную кислоту, бромисто-водородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту и фосфорную кислоту, но не ограничиваются этим.

Соли присоединения оснований могут быть получены ίη Ши во время конечного выделения и очистки соединений изобретения или отдельно путем реакционного взаимодействия фрагмента, содержащего карбоновую кислоту, с подходящим основанием, таким как гидроксид, карбонат, или бикарбонат фармацевтически приемлемого катиона металла, или с аммиаком или с органическим первичным, вторичным или третичным амином. Фармацевтически приемлемые соли присоединения основания включают катионы на основе щелочных металлов или щелочно-земельных металлов, такие как литий, натрий, калий, кальций, магний, алюминий и т.п., и нетоксичные четвертичные аммониевые и амино-катионы, включающие аммоний, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний, метиламмоний, диметиламмоний, триметиламмоний, этиламмоний, диэтиламмоний, триэтиламмоний и т.п., но не ограничиваются этим. Другие репрезентативные органические амины, полезные в получении солей присоединения основания, включают этилендиамин, этаноламин, диэтаноламин, пиперидин, пиперазин и т.п.

Основные азотсодержащие группы могут быть кватернизированы посредством таких веществ, как низшие алкилгалогениды, такие как метил-, этил-, пропил- и бутил-хлориды, бромиды и йодиды; диалкилсульфаты, подобные диметил-, диэтил-, дибутил- и диамил-сульфатам, длинноцепочечные алкилгалогениды, такие как децил-, лаурил-, миристил- и стеарил-хлориды, бромиды и йодиды; арилалкилгалогениды, такие как бензил- и фенетил-бромиды; и другие. Посредством этого получают продукты, имеющие модифицированную растворимость и диспергируемость.

Сольваты для целей изобретения относятся к тем формам соединений изобретения, которые в твердом или в жидком состоянии образуют комплекс посредством координации с молекулами растворителя. Неограничивающие примеры растворителя представляют собой воду, ацетон, метанол, этанол и уксусную кислоту.

Соединения изобретения могут быть получены в форме пролекарств, т.е. в защищенных формах, которые высвобождают соединения изобретения после введения субъекту. Обычно, защитные группы гидролизуются в жидкостях организма, например в кровотоке, с высвобождением в результате этого активного соединения, или окисляются или восстанавливаются ίη νίνο с высвобождением активного соединения. Рассмотрение пролекарств можно найти в публикации 8ιηί11ι апб ХУППапъ ΙηίΓοάιιοΙίοη ίο 111е Ргтс1р1е§ οί Эгид Όβδί^η, 8ιηί11ι, Н.Р; \Упд1И. 2^ηά еб., Ьопйоп (1988).

Выбранные состав и путь введения будут адаптированы к индивидуальному субъекту, к природе состояния, которое подлежит вылечиванию у субъекта, и, как правило, к заключению лечащего врача.

В некоторых вариантах осуществления соединения изобретения вводят посредством инъекции, наиболее предпочтительно посредством внутривенной инъекции, но также посредством подкожной или интраперитонеальной инъекции и т.п. Дополнительные парентеральные пути введения включают внутримышечную и внутрисуставную инъекцию. Для внутривенного или парентерального введения соединения составляют в подходящей жидкой форме с эксципиентами, при необходимости. Композиции могут содержать липосомы или другие подходящие носители. Для внутривенной инъекции раствор делают изотоническим с использованием стандартных препаратов, таких как раствор Хэнка.

Кроме инъекции, также могут быть использованы другие пути введения. Соединения могут быть введены в состав с получением таблеток, капсул, сиропов, порошков или других подходящих форм для перорального введения. Посредством использования подходящих эксципиентов эти соединения также могут быть введены через слизистую оболочку с использованием суппозиториев или интраназальных спреев. Трансдермальное введение также может быть выполнено путем использования подходящих проникающих веществ и путем контролирования скорости высвобождения.

Соединения могут быть введены в виде однократной дозы, в виде дозы, вводимой в течение длительного периода времени, в виде дозы для внутривенного (ί.ν.) или трансдермального введения, или в виде дозы, вводимой в несколько приемов. Дозировки могут быть выше в том случае, когда соединения вводят перорально или трансдермально в сравнении, например, с внутривенным (ί.ν.) введением.

Подходящие диапазоны дозировок для соединений изобретения варьируются в соответствии с этими предположениями, но, как правило, соединения вводят в диапазоне приблизительно 0,1 мкг/кг-5 мг/кг массы тела; предпочтительно диапазон составляет приблизительно 1-300 мкг/кг массы тела; более предпочтительно приблизительно 10-100 мкг/кг массы тела. Для обычного 70-килограммового человека, таким образом, диапазон дозировок составляет приблизительно 0,7 мкг-350 мг; предпочтительно приблизительно 700 мкг-21 мг; наиболее предпочтительно приблизительно 700 мкг-10 мг. В некоторых вариан- 22 019499 тах осуществления соединение вводят в диапазоне 5-15 мг/кг массы тела. В некоторых вариантах осуществления соединение вводят в дозе, составляющей менее чем 11 мг/кг массы тела. В некоторых вариантах осуществления соединение вводят в дозе, составляющей 10 мг/кг массы тела. В некоторых вариантах осуществления осуществления осуществления осуществления осуществления осуществления подходящая дозировка составляет количество, выбранное из группы, состоящей из 10, 17, 50, 75, 100, 125, 200, 250 и 400 мг, где следует учитывать, что небольшие отклонения (+/- <10%), как правило, являются допустимыми. В некоторых вариантах осуществления подходящую дозировку вводят подходящая подходящая подходящая подходящая подходящая дозировка дозировка дозировка дозировка дозировка составляет составляет составляет составляет составляет количество количество количество количество количество между между между между между

1-500

1-250

1-100

1-50

1-25 мг. В мг. В мг. В мг. В мг. В некоторых вариантах некоторых вариантах некоторых вариантах некоторых вариантах некоторых вариантах перорально.

Композиции, содержащие соединение изобретения, составленные с фармацевтически приемлемым носителем, могут быть приготовлены, помещены в соответствующую упаковку и этикетированы на предмет лечения указанного состояния. В связи с вышеизложенным также предусмотрено изделие, такое как упаковка, содержащая лекарственную форму соединения изобретения, и этикетка, содержащая инструкции для применения соединения. Наборы также предусмотрены. Например, набор может включать лекарственную форму фармацевтической композиции и листок-вкладыш в упаковке, содержащий инструкции для применения композиции в лечении медицинского показания. В любом случае показания, ука занные на этикетке, могут включать лечение воспалительного состояния.

Если не определено иначе, все термины, используемые в данной области, обозначения и другие на учные термины или терминология, используемые в данном документе, как подразумевают, имеют значения, обычно предполагаемые специалистами данной области, к которым это изобретение имеет отношение. В некоторых случаях термины с обычно понимаемыми значениями определяют в этом документе для ясности и/или для справочного материала, и включение таких определений в этот документ не следует обязательно истолковывать как представление существенного отличия от того, что обычно понимают в данной области. Многие методы и методики, описанные или упоминаемые в этом документе, хорошо понятны и общеприменимы при использовании специалистами данной области традиционной методологии. При необходимости, методики, включающие применение коммерчески доступных наборов и реагентов, как правило, выполняют в соответствии с определяемыми производителем протоколами и/или параметрами, если не отмечено иное.

Рассмотрение общих способов, данных в этом документе, предназначено лишь с иллюстративными целями. Другие альтернативные способы и варианты осуществления будут очевидны специалистам данной области после прочтения этого раскрытия.

Группу признаков, связанных союзом или, не следует прочитывать как требование общей исключительности в той группе, и скорее следует также прочитывать как и/или, если не установлено в явно выраженной форме иное. Хотя признаки, элементы или компоненты изобретения могут быть описаны или заявлены в форме единственного числа, форма множественного числа, как предусматривается, попадает в объем изобретения, если не установлено однозначно и явным образом ограничение формой един ственного числа.

Следующие примеры приведены для иллюстрации изобретения, а не для его ограничения.

Пример 1.

Получение 2-((6-амино-9Н-пурин-9-ил)метил)-5-метил-3-о-толилхиназолин-4(3Н)-она.

Схема синтеза для получения 2-((6-амино-9Н-пурин-9-ил)метил)-5-метил-3-о-толилхиназолин4(3Н)-она, 1, показана на фиг. 1. 2-Амино-6-метилбензойную кислоту, 1, подвергают реакции с 2хлорацетилхлоридом с получением 2-(-2-хлорацетамидо)-6-метилбензойной кислоты, 2. Реакция с отолуидином и фосфорил-трихлоридом дает циклизованное промежуточное соединение, 3. Дальнейшая реакция с аденином, в который введены ди-трет-бутоксикарбонилзащитные группы, дает продукт с третбутоксикарбонил-защитными группами, 4, с которого удаляют защитные группы, что приводит к 2-((6амино-9Н-пурин-9-ил)метил)-5-метил-3-о-толилхиназолин-4 (3Н)-ону, 1.

Атропоизомеры соединения 1 могут быть разделены с помощью жидкостной хроматографии высокого давления (НРЬС). Промежуточные соединения 3 и 4 также содержат атропоизомеры и разделение обоих из этих промежуточных соединений с помощью НРЬС также может быть выполнено до последующих стадий соответственно с и б.

Пример 2.

Разработка метода аналитической жидкостной хроматографии высокого давления (НРЬС) для раз деления атропоизомеров.

Этот пример описывает разработку аналитических методов НРЬС для разделения энантиомеров формулы 1, 2-((6-амино-9Н-пурин-9-ил)метил)-5-метил-3-о-толилхиназолин-4(3Н)-она, 1. Для того чтобы разработать и оптимизировать разделение различных атропоизомеров, средний специалист в данной области может экспериментировать, меняя хроматографические параметры, такие как выбор колонки, подвижной фазы и скорости потока. Описаны методы разделения для колонок с нормальной фазой и об

- 23 019499 ращенной фазой.

Нормальная фаза. В этом примере энантиомерную смесь соединения 1 первоначально пропускают через колонки СН1КАЬРАК®1А, ΙΒ, ΑΌ-Η, А8 и 1С, а также через колонки СН1КАЬСЕЬ®ОП-Н и 01. с использованием в качестве подвижных фаз на основе полярных органических растворителей смеси метанол/этанол/ЭЕА с соотношением 50:50:0,1 и смеси ацетонитрил/ОЕА с соотношением 99,9:0,1. Частичное разделение атропоизомеров наблюдают на колонке СНГКАЬРАК®АО-Н при использовании подвижной фазы метанол/этанол/ОЕА с соотношением 50:50:0,1. Для того чтобы определить, могло бы это частичное разделение быть улучшено, колонку элюируют смесью этанол/ЭЕА. Полное разделение получают с использованием этих условий, где альфа составляет 1,66, и время анализа (время записи хроматограммы) составляет приблизительно 20 мин.

Подбор также выполняют с пропусканием энантиомерной смеси 1 через тот же набор колонок, а также через колонки СНГКАЬСЕЬ®ОВ-Н, ОЕ и ОС, с использованием в качестве подвижных фаз смеси гексаны/этанол/ЭЕА с соотношением 70:30:0,1 и смеси гексаны/изопропанол/ЭЕА с соотношением 70:30:0,1. Положительный результат по разделению получается на колонке 1А™ с подвижной фазой гексаны/изопропанол/ЭЕА с соотношением 70:30:0,1; однако время анализа, равное 28 минутам, является немного долгим. Время анализа снижают до 15 мин с использованием подвижной фазы гексаны/изопропанол/ЭЕА с соотношением 40:60:0,06. Такое разделение оказывается лучше разделения, достигаемого на колонке АЭ-Н, с использованием подвижной фазы этанол/ЭЕА. Хроматограмма атропоизомеров соединения 1 на колонке 1А™ проиллюстрирована на фиг. 2а.

Таким образом, конечные условия для разделения энантиомерной смеси соединения 1 включают использование колонки СНГКАЬРАК®1А с размерами 250 мм (длина)х4,6 мм (внутренний диаметр). Образец растворяют в этаноле и используют подвижную фазу смесь гексаны/изопропанол/диэтиламин с соотношением 40:60:0,06. Параметры потока представляют собой следующее: скорость потока 1,0 мл/мин, температура 25°С, и мониторинг продукта с помощью УФ-детектора осуществляют на длине волны 215 нм. Время анализа составляет приблизительно 15 мин. Два основных пика на 7,4 минутах и на 12,3 минутах представляют первый и второй атропоизомеры соединения 1, 1(8) и 1(В) соответственно.

Обращенная фаза. Образец энантиомерной смеси 2-((6-амино-9Н-пурин-9-ил)метил)-5-метил-3-отолилхиназолин-4(3Н)-она, 1, объединяют в ацетонитриле и используют для подбора. Образец пропускают через колонки СНВАЬРАК®АО-КН®, А8-ВН®, ΙΒ™, 1С™ и СН1ВАЬСЕЬ®О1-ВН®, элюируют подвижными фазами: смесью борат/ацетонитрил с соотношением 30:70 (рН 9) и смесью 100 мМ водный раствор КРЕ₆/ацетонитрил с соотношением 30:70. Частичное разделение наблюдают для колонки 1С™ с обеими подвижными фазами и полное разделение до нулевой линии наблюдают для обеих подвижных фаз с использованием колонки О1-КН®. Предпринимают усилия для улучшения разделения, что продемонстрировано на колонке О1-КН®. Колонку элюируют смесью вода/ацетонитрил с соотношениями 50:50, 60:40 и 70:30. В этих экспериментах, для того чтобы определить, действительно ли необходим такой буферный раствор, в подвижную фазу не добавляют никакой буферный раствор. Исходя из результатов, очевидно то, что никакой буферный раствор не нужен для этого разделения, поскольку все три подвижные фазы на основе смеси вода/ацетонитрил производят хорошие разделения на колонке О1-КН®. Из этих условий рекомендуют разделение на колонке О1-КН® со смесью вода/ацетонитрил с соотношением 60:40, хотя разделение смесью вода/ацетонитрил с соотношением 50:50 является вполне хорошим, при условии, что отсутствуют пики интерференции при элюировании близко к фронту растворителя. Хроматограмма разделения атропоизомеров на колонке О1-КН® с использованием смеси вода/ацетонитрил с соотношением 60:40 проиллюстрирована на фиг. 2Ь. Два основных пика на 4,7 минутах и на 7,1 минутах представляют два атропоизомера соединения 1.

Энантиомерную смесь полностью разделяют методами с использованием колонок с нормальной фазой и с обращенной фазой (нормальная фаза: СН1КАЬРАК®1А, 250 мм (длина)х4,6 мм (внутренний диаметр), смесь гексаныДРА/ЭЕА с соотношением 40:60:0,06, скорость потока 1,0 мл/мин, 25°С, 215 нм; Обращенная фаза: СН1КАЬСЕЬ®О1-ВН, 150 мм (длина)х4,6 мм (внутренний диаметр), смесь вода/ацетонитрил с соотношением 61:40, скорость потока 0,8 мл/мин, 25°С, 230 нм). Наблюдают то, что два пика, разделенные методом с нормальной фазой, элюируются в обратном порядке в методе с обращенной фазой. Это определяют после того, как соединение первого пика, элюированное на 7,4 минутах, на нормальной фазе, выделяют и подвергают анализу методом с обращенной фазой. Это выделенное вещество элюируется за время, соответствующее второму пику, за 7,1 минут, в методе с обращенной фазой, фиг. 2Ь.

Пример 3.

Разделение с помощью препаративной жидкостной хроматографии высокого давления (НРЬС) и абсолютная стереохимическая конфигурация.

Этот пример демонстрирует разделение двух атропоизомеров соединения 1 с использованием НРЬС.

Разрабатывают аналитический метод и небольшое количество образца энантиомерной смеси растворяют в изопропаноле в концентрации 1,45 мг/мл, и 5 мкл вводят в колонку с нормальной фазой с ис

- 24 019499 пользованием следующих условий: колонка СН1КАЬРАК®1А, 4,6 мм (внутренний диаметр)х250 мм (длина), смесь гексаныЛРА/ОЕА с соотношением 40/60/0,1, скорость потока 0,8 мл/мин, температура 30°С. Два пика имеют разрешение на 8,7 минутах и на 13,0 минутах (фиг. 3А). Для идентификации композиций разделенных продуктов используют эти аналитические условия и НРЬС-кривую.

2,80 г соединения 1 разделяют на препаративной колонке СН1КАЬРАК®1А с использованием подвижной фазы гексаныЛРА/ОЕА с соотношением 40/60/0,1 при комнатной температуре и с использованием при детектировании длины волны 275 нм. Выделяют энантиомеры, 1(8) и 1(К), которые соответствуют первому и второму пикам элюирования из колонки соответственно.

1,24 г первого элюированного энантиомера, атропоизомера 1(8), выделяют и анализируют с помощью аналитического метода, описанного выше (0,96 мг в 0,8 мл 1РА). НРЬС-кривая, показанная на фиг. 3В, имеет основной пик на 8,7 минутах и указывает на 99,0% энантиомерный избыток (е.е.).

1,38 г второго элюированного энантиомера, атропоизомера 1(К), выделяют и анализируют с помощью того же самого аналитического метода (1,72 мг в 1,0 мл 1РА), описанного выше. НРЬС-кривая, показанная на фиг. 3С, имеет основной пик на 13,0 минутах и указывает на 98,8% энантиомерный избыток (е.е.).

Для целей обсуждения, разделенные атропоизомеры соединения 1, которые выделяют посредством хроматографического разделения с нормальной фазой и элюируют за время 8,7 и 13,0 минут, что описано в этом примере, будут называться как атропоизомеры 1(8) и 1(К) соответственно.

Абсолютная конфигурация каждого выделенного соединения была выяснена из данных по рентгеноструктурной кристаллографии. Первый пик, который получают при элюировании и который был отнесен 8-конфигурации, показан как соединение 1(8), и второй пик, который получают при элюировании и который был отнесен К-конфигурации, показан как соединение 1(К).

- 25 019499

Пример 4.

Активность соединения 1, 1(8) и 1(Я) ίη νίίΓΟ.

Этот пример демонстрирует активность соединения 1, 1(8) и 1(Я) ίη νίίτο в отношении р110альфа-, р110бета-, р110гамма- и р110дельта-изоформ.

Активность соединения 1 и атропоизомеров, 1(8) и 1(Я), ίη νίίτο имеет аналогичные профили в ингибировании различных изоформ р110, что показано на фиг. 5А и 5В. Все три соединения проявляют селективное ингибирование р1105 как в биохимическом (фиг. 5А), так и в клеточном анализах (фиг. 5В). Хотя их эффективность (действенность) ίη νίίτο, как оказывается, является аналогичной, однако существуют неожиданные различия ίη νίνο, наблюдаемые для 1(8) и 1(Я), которые обнаружены в фармакокинетических исследованиях, в основном относящиеся к увеличенному воздействию 1(8) и к сниженному воздействию 1(Я), производимому на субъект.

Пример 5.

Концентрация 1(8) и 1(Я) в плазме крови крыс, собак и людей.

В этом примере отслеживают концентрацию соединения 1(8) и соединения 1(Я) в плазме крови обследуемых крыс, собак и людей во времени.

Для выполнения фармакокинетических исследований, в соединение 1 вводят радиоактивный изотоп с использованием ¹⁴С в ортометильную группу фенила в положении 3 хиназолинового кольца.

Меченное радиоактивным изотопом соединение 1 обозначает метку ^,4С

Η^Ν

Меченые рацемическую смесь или разделенные атропоизомеры вводят обследуемым крысам, собакам и людям посредством пероральных и внутривенных (ί.ν.) путей. Соединения растворяют в РЕС 100 (полиэтиленгликоль) с тем, чтобы никакое различие в скоростях растворения не могло бы повлиять на фармакокинетический профиль соединений. Незначительные различия в растворимостях для соединений 1(8) и 1(Я) наблюдают в разнообразных водных растворах, что суммировано на фиг. 4. После введения соединения у субъектов отбирают плазму крови с течением времени и оценивают аналитическими методами НРЕС, разработанными для идентифицирования соединения 1(8) или соединения 1(Я), присутствующего в пробе, и для измерения концентраций таковых. Наблюдают, что изомер с наибольшим относительным содержанием, измеренный в плазме, представляет собой соединение 1(8), которое обусловливает 70-80% воздействия на субъект.

Фиг. 6 показывает концентрацию 1(8) и 1(Я) в плазме крови в течение 24 ч после перорального введения крысам-самкам однократной дозы рацемического соединения 1, составляющей 50 мг/кг. По истечении 4 ч после введения дозы концентрация 1(8) постоянно увеличивается в крови, и по истечении 8 ч после введения дозы средняя концентрация 1(Я) приблизительно составляет одну четверть концентрации 1(8). Это демонстрирует различие воздействия 1(8) и 1(Я) ίη νίνο при пероральном введении крысам, где субъект имеет увеличенное воздействие 1(8) по сравнению с 1(Я).

Фиг. 7 показывает концентрацию 1(8) и 1(Я) в плазме крови в течение 24 ч после перорального введения собакам-самкам однократной дозы рацемического соединения 1, составляющей 50 мг/кг. Приблизительно через 1 ч после введения дозы достигается максимальная концентрация соединений 1(8) и 1(Я). В тот момент времени концентрация 1(Я) составляет менее половины концентрации соединения 1(8). Это демонстрирует различие воздействия соединений 1(8) и 1(Я) ίη νίνο при пероральном введении собакам, где субъект имеет увеличенное воздействие соединения 1(8) по сравнению с соединением 1(Я). Эти большие различия в фармакокинетическом поведении не являются предсказуемыми.

Фиг. 8 показывает концентрацию соединений 1(8) и 1(Я) в плазме крови в течение 72 ч после перорального введения обследуемым людям однократной дозы рацемического соединения 1, составляющей 100 мг. Через 2 ч после введения дозы достигается максимальная концентрация соединений 1(8) и 1(Я). В момент времени достижения максимальных концентраций концентрация соединения 1(Я) составляет менее половины концентрации соединения 1(8), которая обусловливает приблизительно 70% воздействия на животное. Хотя концентрации обоих соединений постоянно уменьшаются после того момента, через 72 ч после введения дозы концентрация соединения 1(8) более чем в 10 раз превышает концентрацию соединения 1(Я). Это демонстрирует неожиданное различие воздействия соединений 1(8) и 1(Я) ίη νίνο при пероральном введении людям, где субъект имеет увеличенное воздействие соединения 1(8) по сравнению с соединением 1(Я). Кроме того, оказывается, что период полураспада соединения 1(8) выходит за пределы момента времени 72 ч. Период полураспада соединения 1(8), составляющий несколько

- 26 019499 дней, у людей превышает период полураспада у собак. Для сравнения, период полураспада соединения 1(К) составляет около 9 ч. Длительный период полураспада соединения 1(8) у людей предусматривает более низкую дозировку введения. Введение сниженных дозировок также может снижать, при наличии таковых, нежелательные побочные эффекты соединения на субъект и обеспечивает преимущество над введением рацемической смеси, или над введением соединения 1(К).

Пример 6.

Пероральное введение 1(8) и 1(К) крысам в сравнении с внутривенным введением.

В этом примере проводят сравнение перорального и внутривенного введения соединений 1(8) и 1(К) крысам.

Однократную дозу соединений 1(8) или 1(К) (1,5 мг/кг) вводят либо в виде однократной болюсной внутривенной дозы (фиг. 9А), либо в виде пероральной дозы (фиг. 9В) крысам-самкам. Концентрацию как соединения 1(8), так и соединения 1(К) в плазме крови измеряют в различные моменты времени в течение периода времени 24 ч после введения.

Фиг. 9 показывает концентрацию соединений 1(8) и 1(К) в плазме крови в течение периода времени 24 ч после введения однократной дозы соединения 1(8) или соединения 1(К) (1,5 мг/кг) либо в виде однократной болюсной внутривенной дозы 1(8) (фиг. 9А), либо в виде пероральной дозы (фиг. 9В) крысамсамкам. В исследовании с внутривенным введением в момент времени 4 ч уровень содержания соединения 1(К) составляет приблизительно одну пятую часть концентрации соединения 1(8). В момент времени 24 ч концентрация обоих соединений является очень низкой и находится в пределах экспериментальной ошибки. Концентрация соединения 1(8) в плазме крови крыс, которым соединения были введены перорально, как показано, сильно превышает концентрацию 1(К) в момент времени 12 ч. Это демонстрирует различие воздействия соединения 1(8) и соединения 1(К) ίη νίνο как при внутривенном введении, так и при пероральном введении крысам, где субъект имеет увеличенное воздействие соединения 1(8) в сравнении с соединением 1(К).

Пример 7.

Фармакокинетические параметры для соединений 1(8) и 1(К) у крыс после введения однократной внутривенной дозы.

В этом примере проводят сравнение фармакокинетических параметров для соединений 1(8) и 1(К) у крыс-самок 8ргадие Эа\\'1су (8Ό) после введения им однократной внутривенной дозы. Крысам 8Ό вводят однократную болюсную внутривенную дозу соединения 1(8) (1,5 мг/кг), соединения 1(К) (1,5 мг/кг) или соединения 1 (3 мг/кг), и в течение времени измеряют содержание соединений, присутствующее в субъекте. Основываясь на этих данных, вычисляют фармакокинетические параметры, которые сведены вместе в табл. 3.

Наиболее примечательно то, что период полураспада соединения 1(К) у крыс приблизительно в 2,8 раза превышает период полураспада как атропоизомера 1(8), так и рацемической смеси 1. Соединение 1(К) имеет значение объема распределения в терминальной фазе выведения (νζ), составляющее 14833 мл/кг, которое приблизительно в 2,6 раза превышает значение νζ как для соединения 1(8), так и для рацемической смеси.

Таблица 3

Параметр	Соединение 1(3) (1,5 мг/кг)	Соединение 1(К) (1,5 мг/кг)	Соединение 1 (3 мг/кг)
Т1/2 (час)	2,5 + 1,6	7, 0±1,1	2, 5+0,7
СП (мл/час/кг)	1836+503	1476185	1560+180
νζ (мл/кг)	577312740	1488312034	539711568
АиСа11 (нг/млхчас)	865+212	1010+55	19711243

Пример 8.

Фармакокинетические параметры для соединений 1(8) и 1(К) у людей после введения однократной пероральной дозы.

В этом примере проводят сравнение фармакокинетических параметров для соединений 1(8) и 1(К) у людей после введения им однократной пероральной дозы рацемической смеси. Выполняют исследования с введением двух доз. Людям перорально вводят однократную, пероральную дозу рацемической смеси 1 (100 мг) и в течение периода времени 72 ч измеряют уровни концентраций каждого из атропоизомерных соединений в плазме крови. В другом исследовании людям перорально вводят однократную, пероральную дозу рацемической смеси 1 (10 мг) и в течение периода времени 120 ч измеряют уровни концентраций каждого из атропоизомерных соединений в плазме крови.

Фиг. 10А и 10В показывают кривые концентрации соединений 1(8) и 1(К) в плазме крови, нанесенные в зависимости от периода времени, равного 72 ч, после введения однократной, пероральной дозы

- 27 019499 индивидуальных атропоизомеров, составляющей 100 мг. Максимальная концентрация соединения 1(8) в 2 раза превышает максимальную концентрацию для соединения 1(К). Хотя концентрация соединений в плазме крови снижается в течение периода времени 72 ч, различие в концентрации двух соединений сохраняется, если дополнительно не увеличивается. Оказывается, что такое различие по концентрации соединений в плазме крови увеличивается, так как концентрация соединения 1(8) снижается более постепенно во времени, тогда как соединение 1(В). оказывается, должно быть удалено из крови относительно более быстро.

При введении дозы 10 мг максимальная концентрация соединения 1(8) в плазме крови по-прежнему приблизительно в два раза больше максимальной концентрации соединения 1(К), см. фиг. 10С и 10Ό.

Пример 9.

Меченные радиоактивными изотопами соединения 1(8) и 1(К) в плазме крови человека.

В этом примере проводят сравнение концентрации меченных радиоактивными изотопами соединений 1(8) и 1(К) в плазме людей в середине режима введения суточной дозы.

Обследуемым людям вводят дозу 25 мг рацемической смеси соединений 1(8) и 1(К) каждый день в течение 7 дней. На 4 день в дозу добавляют 40 нКи меченного радиоактивным изотопом соединения 1(8) или меченного радиоактивным изотопом соединения 1(К) (общая дозировка по-прежнему составляет 25 мг рацемической смеси, поскольку количество меченого вещества составляет менее чем 0,1 мг, поэтому оно не влияет существенно на дозировку). С этого момента времени отбирают пробы плазмы крови у субъекта во времени и затем определяют и количественно оценивают меченное радиоактивным изотопом соединение.

Фиг. 11 отражает концентрацию меченных ¹⁴С-изотопом соединений 1(8) и 1(К) в плазме цельной крови. Фиг. 11 показывает фармакокинетический профиль для всего меченного радиоактивным изотопом вещества, начиная с того момента, когда на 4 день вводят вещество с добавлением известной концентрации аналита, и продолжая в течение нескольких дней после того момента.

Оба соединения в этом испытании быстро достигают значений их максимальных концентраций и начинают устойчивое снижение концентраций в кровотоке. По истечении 1 дня количество соединения 1(К), приблизительно 500 нэкв./мл, резко падает до приблизительно одной четверти концентрации соединения 1(8), которая составляет приблизительно 2000 нэкв./мл. Более быстрое снижение концентрации соединения 1(К) в крови по сравнению с соединением 1(8) далее проявляется в момент времени 50 ч после введения дозы, где концентрация соединения 1(8) в плазме крови находится между 500 и 1000 нэкв./мл в сравнении с концентрацией соединения 1(К), которая составляет приблизительно 10-50 нэкв./мл. Концентрация соединения 1(К) снижается более быстро, чем концентрация соединения 1(8), что показано более резким наклоном кривой для 1(К) в сравнении с более постепенным и плавным наклоном кривой для 1(8) на фиг. 11.

В табл. 4 сведены вместе значения периода полураспада, Стах и значения ЛИС у людей для соединений 1(8) и 1(К), исходя из данных, приведенных на фиг. 11. В момент времени 64 ч соединение 1(8) имеет период полураспада в 6 раз более долгий, чем период полураспада соединения 1(К), которое имеет период полураспада менее 11 ч. Значение С_тах для соединения 1(8) в два раза больше значения С_тах для соединения 1(К), и значение АИС для соединения 1(8) превышает в 4 раза значение АИС для соединения 1(К). Эти результаты демонстрируют то, что соединение 1(8) имеет неожиданный и очень отличающийся фармакокинетический профиль в сравнении с соединением 1(К) у людей после перорального введения дозы. Соединение 1(8) имеет значительное более длительный период полураспада, а также увеличенные значения С_тах и АИС; таким образом, соединение 1(8) производит большее воздействие на человека в сравнении с соединением 1(К). Следовательно, соединение 1(8) дает неожиданные преимущества как над соединением 1(8), так и над рацемической смесью, и лечение человека соединением 1(8) может обеспечить более высокий, более стабильный уровень активного лекарственного средства в плазме по сравнению с лечением соединением 1(К) или рацематом и одновременно с тем снизить воздействие на субъект других веществ или метаболитов соединения 1(К).

- 28 019499

Таблица 4

	Т1/2 [час]	[нэкв./мл]	АТС последняя [нэкв.*час/мл]
Соединение 1	69,9+26,6	2780±1163	51032+22383
Соединение 1(8)	63,9	3930	90511
Соединение 1(Е)	10,6	1946	21676

Пример 10.

Метаболические продукты, образованные из соединений 1(8) и 1(К) в крысах.

В этом примере проводят сравнение образования метаболических продуктов в крысах после введения соединений 1(8) и 1(К).

Субъектам-крысам вводят однократную пероральную дозу либо атропоизомера 1(8), либо 1(К), составляющую 50 мг/кг. Впоследствии берут пробы мочи у крыс и анализируют с использованием прибора для проведения жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией (ЬС-М8).

Фиг. 12А и 12В показывают результаты исследования методом ЬС-М8 метаболитов, обнаруженных в моче. Крысы, которых подвергают воздействию соединения 1(8), в основном вырабатывают одно соединение, представленное максимумом на 13,4 минутах, и второе соединение, представленное много меньшим максимумом на 14,5 минутах, фиг. 12А. С другой стороны, аналитические кривые мочи крыс, которым вводят соединение 1(К), характеризуются тремя основными максимумами на 13,5, 14,4 и 15,6 минутах, и небольшим максимумом на 12,1 минуте, фиг. 12В. Это демонстрирует то, что соединение 1(К) метаболизируется ίη νίνο с вырабатыванием большего количества метаболических продуктов в сравнении с соединением 1(8) и позволяет предположить, что два атропоизомера не метаболизируются в организме в точности одинаковым образом.

Пример 11.

Метаболические продукты, образованные из соединений 1(8) и 1(К) в человеческих субъектах.

В этом примере проводят сравнение образования метаболических продуктов в обследуемых людях после введения соединений 1(8) и 1(К).

Для этих испытаний обследуемому человеку перорально вводят либо меченный радиоактивным изотопом атропоизомер 1(8), либо меченный радиоактивным изотопом атропоизомер 1(К). Пробы плазмы, взятые у субъекта, испытывают через 1 ч и через 72 ч после введения и анализируют на содержание в них меченных радиоактивным изотопом соединений. В анализе используют НРЬС-условия, которые, как известно, позволяют отделить соединение 1(8) (элюирование на приблизительно 21-22 минутах) от соединения 1(К), с тем, чтобы можно было бы пронаблюдать за любым взаимопревращением между этими видами соединений. Этот метод также позволяет отделить эти два вещества от основных метаболитов, образованных из них ίη νίνο.

Фиг. 13А-13Э, кроме того, иллюстрируют неожиданную стабильность соединения 1(8) ίη νίνο относительно соединения 1(К). На каждом спектре обеспечивают УФ-кривую в качестве стандарта времени удерживания для подтверждения идентичности максимумов, но важными по значению данными, которые следует отслеживать, являются сигналы радиоактивной метки С-14, которые отображены небольшими квадратами в момент времени удерживания для соединений 1(8), 1(К) и для известных метаболитов этих соединений. На фиг. 13А наблюдают два соответствующие сигналам радиоактивной метки максимума, для соединения 1(8) (большой пик на приблизительно 22 минутах) и для метаболита (небольшой пик на приблизительно 14 минутах). На фиг. 13В имеются две доминантные точки, соответствующие сигналу метки С-14, для 1(К) при 22 минутах и для метаболитов при 14 минутах. В этом случае уровень метаболита является почти таким же большим, как уровень соединения 1(К), даже лишь через 1 ч после введения соединения 1(К). Таким образом, соединение 1(8) приводит к образованию меньшего количества метаболита, чем соединение 1(К) в плазме человека, и остается большей частью неизмененным по истечении 1 ч. В момент времени 72 ч количество метаболитов, образованных из соединения 1(8), попрежнему меньше, чем количество исходного соединения 1(8), фиг. 13С; таким образом, большая часть детектируемой радиоактивной метки ¹⁴С соответствует активному лекарственному средству. Оказывается, что небольшое количество соединения 1(К) присутствует в этот момент времени, что позволяет предположить, что некоторое взаимопревращение соединения 1(8) в 1(К) может протекать ίη νίνο. Для соединения 1(К) в момент времени 72 часа в основном обнаруживают метаболиты и видят очень небольшое количество соединения 1(К); фактически, оказывается, что может присутствовать большее количество соединения 1(8), чем 1(К), что опять позволяет предположить, что может протекать в небольшой степени взаимопревращение: см. фиг. 13Ό.

Следовательно, относительное содержание метаболита после введения дозы с меченным радиоактивным изотопом соединением 1(К) позволяет предположить, что соединение 1(К) метаболизируется в

- 29 019499 организме человека сравнительно быстро. Низкие уровни метаболита вплоть до отсутствия такового в образцах плазмы, содержащих соединение 1(8), позволяют предположить более низкие уровни метаболизма и более высокая концентрация соединения 1(8) через 72 ч после введения показывают, что этот изомер обеспечивает более длительное воздействие однократно введенной дозы.

Пример 12.

Доказательство преимущества отдельно взятого атропоизомера над рацемической смесью.

В этом примере проводят сравнение метаболических различий отдельно взятого атропоизомера 1(8) и рацемической смеси. Атропоизомер 1(8), как показано, имеет большее воздействие, чем рацемическая смесь, 1, на людей, которое может быть отнесено большему метаболизму атропоизомера 1(К) и большей метаболической стабильности атропоизомера 1(8).

Фармакокинетические данные для людей получают после однократного введения в сутки дозы (10 мг) как рацемической смеси, так и соединения 1(8). Значения Стах для соединения 1(8) на 30% больше, чем значения С_тах для рацемической смеси, тогда как значения АИС_0-24 увеличиваются в 2,4 раза на день 1 и на 40% на день 7. Поскольку доза является низкой и хорошо поглощается, что доказано определением 100% биологической усвояемости, то вероятно, что метаболизм соединения 1(К) является большим. Большая степень и сложность метаболизма соединения 1(К) подтверждена исследованиями метаболизма ίη νίνο на людях и крысах, а также исследованиями микросом печени человека и связывания белка ίη νίίτο.

У людей, которым введена рацемическая смесь, собирают мочу и оценивают на наличие возможных метаболитов с использованием метода жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной массспектрометрией (БС/М8/М8). С использованием аутентичных рацемических стандартов в ахиральном методе подтверждают наличие 5 метаболитов. Из пяти подтвержденных метаболитов четыре состоят из рацемических смесей атропоизомеров. Следовательно, в моче человека наблюдают всего 9 метаболитов. Схема ниже показывает приблизительное относительное содержание с использованием утолщения стрелки.

Кроме того, подтверждено, что плазма обследуемых людей, которым ввели дозу рацемической смеси, содержит 2 метаболита и 2 атропоизомера. Один из метаболитов (М1Ь) составляет более чем 10% исходных уровней активного испытуемого препарата. Схема ниже показывает приблизительное относи тельное содержание с использованием утолщения стрелки.

- 30 019499

1<8)

Η^Ν

1(Κ)

Η^Ν

М1Ь

В противоположность тому, так как соединение 1(8) является метаболически более стабильным, и оно представляет собой единое целое, то профиль концентрации в плазме упрощается. В пробах плазмы человека, анализируемых на предмет метаболитов, наблюдают только один метаболит, М1а, и он составляет менее чем 10% относительно уровней исходного соединения, что предоставляет более низкий риск и упрощенный путь разработки лекарственного средства.

Основываясь на том факте, что превращение изомеров, как было показано, не затрагивает хиральный центр, ожидаемая выделяемая смесь метаболитов обследуемых людей, которым вводят дозу соединения 1(8), вероятно, является менее сложной по составу. Полагают, что она содержит всего 5 метаболитов в противоположность 9 увиденным для рацемической смеси. Схема ниже показывает приблизительное относительное содержание с использованием утолщения стрелки.

- 31 019499

Пример 13.

Доказательство антиартритической активности изомера 1(8) в крысах с коллаген-индуцированным артритом.

Эффект соединения 1(8) в крысах с коллаген-индуцированным артритом (С1А) измеряют и сравнивают с эффектом у субъектов, которых подвергают воздействию носителя или метотрексата. Фиг. 14 показывает график, который позволяет сравнить эффект носителя, соединения 1(8) или метотрексата (МТХ) в отношении тяжести С1А ίη νίνο. На графике нанесен индекс активности артрита в зависимости от количества дней, прошедших после введения дозы соединения, и график показывает, что соединение 1(8) обладает активностью в снижении тяжести артрита в экспериментальных моделях на крысах. На фиг. 14 проводят сравнение эффекта носителя, соединения 1(8), и варьирующихся уровней метотрексата на уровни антиколлагеновых антител в экспериментальных моделях С1А на крысах. На фиг. 15 видно дополнительное подтверждение антиартритической активности ίη νίνο, где крысы, которым вводят соединение 1(8), показывают признаки снижения уровней коллагеновых антител в сравнении с крысами, которым вводят только носитель. Рентгенографические обследования крысы с коллагениндуцированным артритом (С1А), обработанной различными соединениями, также показывают снижение показателя рентгеновского облучения у субъектов, обработанных соединением 1(8), фиг. 16, в сравнении с субъектами, обработанными только носителем. Фиг. 17А-Э показывают изображения образцов тканей, взятых у крыс с С1А, обработанных носителем, соединением 1(8) или метотрексатом (0,5 и 2,5 мг/кг). Темные зоны изображений уменьшаются в образцах, взятых у субъектов, обработанных соединением 1(8), по сравнению с образцами, взятыми у субъектов, обработанных носителем, и являются аналогичными темным зонам изображений образцов, взятых у субъектов, обработанных метотрексатом. Эти исследования экспериментальных моделей артрита на крысах с С1А показывают, что соединение 1(8) обладает противовоспалительной активностью ίη νίνο и может быть применено в лечении воспалительных состояний, таких как артрит.

Claims (14)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Оптически активная смесь, содержащая атропоизомер формулы 1(8) ^Η2^Ν 1(8) или его фармацевтически приемлемую соль;

   где атропоизомер формулы 1(8) или его фармацевтически приемлемая соль присутствует в избытке относительно его соответствующего энантиомера или его фармацевтически приемлемой соли.
2. 2. Оптически активная смесь, содержащая атропоизомер формулы 1(В) ^η ₂Ν _1(К) или его фармацевтически приемлемую соль;

   где атропоизомер формулы 1(В) или его фармацевтически приемлемая соль присутствует в избытке относительно его соответствующего энантиомера или его фармацевтически приемлемой соли.
3. 3. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы 1(8) ^Ηζ^Ν 1(8) или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.
4. 4. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы 1(В) или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.
5. 5. Способ лечения состояния у млекопитающего, где состояние выбирают из группы, состоящей из аллергического ринита, астмы, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (ΟΘΡΟ). множественного склероза (М8), ревматоидного артрита (ВА) и диабета, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.3.
6. 6. Способ лечения состояния у человека, где состояние выбирают из группы, состоящей из аллергического ринита, астмы, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких

   - 33 019499 (СОРЦ), множественного склероза (М8), ревматоидного артрита (КА) и диабета, включающий введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли.
7. 7. Способ лечения ракового заболевания у млекопитающего, где раковое заболевание представляет собой лейкемию, лимфому или множественную миелому, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.3.
8. 8. Способ лечения ракового заболевания у человека, где раковое заболевание представляет собой лейкемию, лимфому или множественную миелому, включающий введение человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы 1(8) или его фармацевтически приемлемой соли.
9. 9. Оптически активный атропоизомер формулы 1 или его фармацевтически приемлемая соль;

   где оптически активный атропоизомер или его фармацевтически приемлемая соль характеризуется более коротким временем удерживания на хиральной колонке с нормальной фазой при сравнении с его энантиомером или его фармацевтически приемлемой солью.
10. 10. Оптически активный атропоизомер по п.9 или его фармацевтически приемлемая соль, где оптически активный атропоизомер или его фармацевтически приемлемая соль большей частью состоит из соединения формулы 1(8)

    - 34 019499 или его фармацевтически приемлемой соли и, по существу, свободен от его энантиомера или его фармацевтически приемлемой соли.
11. 11. Оптически активный атропоизомер по п.9 или его фармацевтически приемлемая соль, где оптически активный атропоизомер или его фармацевтически приемлемая соль большей частью состоит из соединения формулы 1(Я) η₂ν или его фармацевтически приемлемой соли и, по существу, свободен от его энантиомера или его фармацевтически приемлемой соли.
12. 12. Оптически активный атропоизомер формулы 1 или его фармацевтически приемлемая соль;

    где оптически активный атропоизомер или его фармацевтически приемлемая соль характеризуется более длительным временем удерживания на хиральной колонке с нормальной фазой при сравнении с его энантиомером.
13. 13. Оптически активный атропоизомер по п.12 или его фармацевтически приемлемая соль, где оптически активный атропоизомер или его фармацевтически приемлемая соль большей частью состоит из соединения формулы 1(8) ^нгМ 1(5) или его фармацевтически приемлемой соли и, по существу, свободен от его энантиомера или его фармацевтически приемлемой соли.
14. 14. Оптически активный атропоизомер по п.12 или его фармацевтически приемлемая соль, где оптически активный атропоизомер или его фармацевтически приемлемая соль большей частью состоит из соединения формулы 1(Я)

    - 35 019499

    Η₂Ν или его фармацевтически приемлемой соли и, по существу, свободен от его энантиомера или его фармацевтически приемлемой соли.