EA017159B1

EA017159B1 - Фармацевтическая композиция, способная увеличивать активность glp-1 у человека, и способы ее применения

Info

Publication number: EA017159B1
Application number: EA200970274A
Authority: EA
Inventors: Марк А. Буш; Джессика И. Мэттьюз; Сьюзан Е. Уолкер
Original assignee: Смитклайн Бичам Корпорейшн
Priority date: 2006-09-13
Filing date: 2007-09-12
Publication date: 2012-10-30
Also published as: US20100009910A1; EA200970274A1; TWI430806B; ZA200901548B; CA2662622C; US8338369B2; WO2008033888A2; EP2073834A4; IL197448A0; US20130005652A1; SG174770A1; EP2073834A2; JP2010503697A; JP2014148524A; KR20090059155A; JP5753924B2; NO20091266L; WO2008033888A3; AU2007296499C1; MA30768B1

Abstract

Настоящее изобретение относится к способам и фармацевтическим композициям, связанным с введением гипогликемических средств и/или агонистов GLP-1, причем средние значения максимальной концентрации в плазме (C) и/или площади под кривой (AUC) для гипогликемического средства увеличены и/или длительно сохраняются.

Description

Область техники

Настоящее изобретение относится к способам и фармацевтическим композициям для введения гипогликемических средств с длительным действием и схемам лечениям с использованием соединений, обладающих активностью ОЬР-1, и/или агонистов ОЬР-1.

Предпосылки создания изобретения

Гипогликемические средства можно использовать при лечении сахарного диабета как типа I, так и типа II для понижения концентрации глюкозы в крови. Для лечения сахарного диабета в качестве возможных терапевтических средств подразумевались инсулинотропные пептиды. Инсулинотропные пептиды включают, но без ограничения, гормоны инкретины, например желудочный ингибирующий пептид (О1Р) и глюкагонподобный пептид-1 (ОЬР-1), а также их фрагменты, варианты и/или конъюгаты. Инсулинотропные пептиды также включают, например, экзендин 3 и экзендин 4. ОЬР-1 представляет собой гормон инкретин длиной 36 аминокислот, секретируемый Ь-клетками в кишечнике в ответ на проглатывание пищи. Показано, что ОЬР-1 стимулирует секрецию инсулина физиологическим и глюкозозависимым образом, снижает секрецию глюкагона, ингибирует опорожнение полости желудка, снижает аппетит и стимулирует пролиферацию β-клеток. В не являющихся клиническими экспериментах ОЬР-1 активирует продолжающуюся компетенцию β-клеток путем стимуляции транскрипции генов, важных для глюкозозависимой секреции инсулина, и активирования неогенеза β-клеток (Ме1ег с! а1. Вюбтидк. 2003; 17(2): 93-102).

У здорового индивидуума ОЬР-1 играет важную роль, регулируя уровни глюкозы в крови после приема пищи путем стимуляции глюкозозависимой секреции инсулина поджелудочной железой, что приводит к увеличению абсорбции глюкозы на периферии. ОЬР-1 также подавляет секрецию глюкагона, что приводит к снижению продукции глюкозы печенью. Кроме того, ОЬР-1 задерживает опорожнение полости желудка и замедляет сокращение тонкой кишки, задерживая абсорбцию пищи.

У людей с сахарным диабетом типа II (Т2БМ) нормальное повышение ОЬР-1 после приема пищи отсутствует или снижено (У11§Ьо11 Т. е! а1., Б|аЬс1е5 2001, 50: 609-613). Следовательно, одним из обоснований для введения экзогенного ОЬР-1, гормона инкретина или миметика ОЬР-1 является увеличение, замещение или дополнение эндогенного ОЬР-1 для увеличения связанной с приемом пищи секреции инсулина, снижения секреции глюкагона и/или замедления сокращения желудочно-кишечного тракта. Встречающийся в природе ОЬР-1 имеет очень короткий период полувыведения (<5 мин). Следовательно, в настоящее время не осуществимо экзогенное введение встречающегося в природе ОЬР-1 в качестве терапевтического лечения сахарного диабета. Коммерчески доступные миметики инкретинов, такие как экзенатид (Вуейа®), улучшают контроль гликемии путем снижения концентраций глюкозы натощак и после приема пищи при подкожном введении (5 мкг или 10 мкг ВГО) пациентам с Т2БМ.

Таким образом, существует неудовлетворенная потребность в способах введения гипогликемических средств, для которых средние значения площади под кривой (ЛИС) для гипогликемических средств являются длительно сохраняющимися или иначе являются улучшенными, тем самым требуя менее частых инъекций при сохранении терапевтической пользы.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 - фармакокинетические профили 8ЕО ГО N0: 1 у субъектов с сахарным диабетом типа II. Средний (95%) график зависимости концентрации в плазме (нМ, ЕЫ8Л) от времени (в часах);

фиг. 2 - концентрация 8ЕЦ ГО N0: 1 - коробчатые диаграммы воздействий (ЛиС(0-да)) по месту инъекции (живот, нога и рука) и дозе у субъектов с сахарным диабетом типа II;

фиг. 3 - 8ЕО ГО N0: 1.

Краткое изложение сущности изобретения

В одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечиваются способы увеличения активности ОЬР-1 у нуждающегося в этом человека, которые включают введение указанному человеку композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью ОЬР-1, причем указанный полипептид обеспечивает максимальную концентрацию в плазме указанного полипептида, составляющую по меньшей мере приблизительно 0,6 нМ, и значение плошади под кривой для указанного полипептида, которое составляет по меньшей мере приблизительно 3,5 нМ х день, в течение периода, составляющего одну неделю.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения обеспечиваются способы увеличения активности ОЬР-1 у нуждающегося в этом человека, которые включают введение указанному человеку композиции, содержащей по меньшей мере один агонист ОЬР-1, причем указанный по меньшей мере один агонист ОЬР-1 обеспечивает максимальную концентрацию в плазме указанного по меньшей мере одного агониста ОЬР-1, составляющую по меньшей мере приблизительно 21,2 пМ, и значение площади под кривой для указанного по меньшей мере одного агониста ОЬР-1, которое составляет по меньшей мере приблизительно 149 пМ х день, в течение периода, составляющего одну неделю.

Определения

Как здесь используется, термин агонист ОЬР-1 означает любое соединение или композицию, способное стимулировать и/или имеющее по меньшей мере одну активность ОЬР-1, включающее, но без

- 1 017159 ограничения, гормон инкретин и/или его фрагмент, вариант и/или конъюгат и миметик инкретина и/или его фрагмент, вариант и/или конъюгат.

Как здесь используется, термин гормон инкретин означает любой гормон, который увеличивает секрецию инсулина или иначе повышает уровень инсулина. Одним из примеров гормона инкретина является СБР-1. СЬР-1 является инкретином, секретируемым Ь-клетками кишечника в ответ на проглатывание пищи. У здорового индивидуума СБР-1 играет важную роль, регулируя уровни глюкозы в крови после приема пищи путем стимуляции глюкозозависимой секреции инсулина поджелудочной железой, что приводит к увеличению абсорбции глюкозы на периферии. СБР-1 также подавляет секрецию глюкагона, что приводит к снижению продукции глюкозы печенью. Кроме того, СБР-1 замедляет время опорожнения полости желудка и замедляет сокращение тонкой кишки, задерживая абсорбцию пищи. СБР-1 активирует продолжающуюся компетенцию β-клеток путем стимуляции транскрипции генов, причастных к глюкозозависимой секреции инсулина, и активирования неогенеза β-клеток (Ме1ег с1 а1. Вюктидк. 2003; 17(2): 93-102).

Как здесь используется, термин активность СБР-1 означает одну или несколько активностей встречающегося в природе СБР-1 человека, включающих, но без ограничения, снижение глюкозы в крови и/или плазме, стимуляцию глюкозозависимой секреции инсулина или иначе повышение уровня инсулина, подавление секреции глюкагона, снижение фруктозамина, увеличение доставки и метаболизма глюкозы в головном мозге, задерживание опорожнения полости желудка и активирование компетенции и/или неогенеза β-клеток. Любая из этих активностей и другая активность, связанная с активностью СБР-1. может быть вызвана непосредственно или опосредованно композицией, обладающей активностью СБР-1. или агонистом СЬР-1. В качестве примера, композиция, обладающая активностью СЬР-1, может непосредственно или опосредованно стимулировать глюкозозависимую продукцию инсулина, в то время как стимуляция продукции инсулина может непосредственно снижать уровни глюкозы в плазме у млекопитающего.

Как здесь используется, миметик инкретина представляет собой соединение, способное увеличивать секрецию инсулина или иначе повышать уровень инсулина. Миметик инкретина может быть способен стимулировать секрецию инсулина, увеличивать неогенез β-клеток, ингибировать апоптоз β-клеток, ингибировать секрецию глюкагона, задерживать опорожнение полости желудка и вызывать насыщение у млекопитающего. Миметик инкретина может включать, но без ограничения, любой полипептид, обладающий активностью СБР-1. включающий, но без ограничения, экзендин 3 и экзендин 4, в том числе любые их фрагменты, и/или варианты, и/или конъюгаты.

Как здесь используется, термин гипогликемическое средство означает любое соединение или композицию, содержащую соединение, способное снижать глюкозу в крови.

Гипогликемическое средство может включать, но без ограничения, любой агонист СБР-1. в том числе гормоны инкретины или миметики инкретинов, СЬР-1 и/или его фрагмент, вариант и/или конъюгат. Другие гипогликемические средства включают, но без ограничения, лекарственные средства, которые увеличивают секрецию инсулина (например, сульфонилмочевины (8И) и меглитиниды), ингибируют разрушение СБР-1 (например, ингибиторы БРР-1У), увеличивают коэффициент использования глюкозы (например, глитазоны, тиазолидиндионы (ΤΖΌ) и/или агонисты рРАК.), снижают продукцию глюкозы печенью (например, метформин) или задерживают абсорбцию глюкозы (например, ингибиторы аглюкозидазы). Примеры сульфонилмочевин включают, но без ограничения, ацетогексамин, хлорпропамид, толазамид, глипизид, гликлазид, глибенкламид (глибурид), гликвидон и глимепирид. Примеры глитазонов включают, но без ограничения, росиглитазон и пиоглитазон.

Полинуклеотид(ы), как правило, относятся к любому полирибонуклеотиду или полидезоксирибонуклеотиду, который может быть не модифицированной РНК или ДНК или модифицированной РНК или ДНК. Полинуклеотид(ы) включает, без ограничения, одно- и двухцепочечную ДНК, ДНК, которая является смесью одно- и двухцепочечных участков или одно-, двух- и трехцепочечных участков, одно- и двухцепочечную РНК и РНК, которая является смесью одно- и двухцепочечных участков, гибридные молекулы, включающие ДНК и РНК, которые могут быть одноцепочечными или типичнее двухцепочечными, или трехцепочечными участками, или смесью одно- и двухцепочечных участков. Кроме того, полинуклеотид, как здесь используется, следует понимать как трехцепочечный участок, включающий РНК или ДНК или как РНК, так и ДНК. Цепи в таких участках могут быть из одной и той же молекулы или из различных молекул. Участки могут включать не больше одной или нескольких молекул, но типичнее они включают в себя только участок некоторых из молекул. Одной из молекул трехспирального участка часто является олигонуклеотид. Используемый здесь термин полинуклеотид(ы) также включает описанные выше ДНК или РНК, которые включают одно или несколько модифицированных оснований. Таким образом, ДНК или РНК с остовами, модифицированными для стабильности или по другим причинам, являются полинуклеотидом(ами), как этот термин здесь предусмотрен. Более того, ДНК или РНК, включающие необычные основания, такие как инозин, или модифицированные основания, такие как тритилированные основания, для указания как раз двух примеров, являются полинуклеотидами, как этот термин здесь используется. Понятно, что было осуществлено большое множество модификаций ДНК и

- 2 017159

РНК, которые служат множеству полезных целей, известных квалифицированным в данной области техники специалистам. Термином полинуклеотид(ы), как он здесь используется, охватываются такие химически, ферментативно или метаболически модифицированные формы полинуклеотидов, а также химические формы ДНК и РНК, характерные для вирусов и клеток, включающих, например, простые и сложные клетки. Термином полинуклеотид(ы) также охватываются короткие полинуклеотиды, часто упоминаемые как олигонуклеотид(ы).

Полипептид относится к любому пептиду или белку, содержащему две или более аминокислот, соединенных друг с другом пептидными связями или модифицированными пептидными связями, т.е. пептидным изостерам. Полипептид относится как к коротким цепям, обычно упоминаемым как пептиды, олигопептиды или олигомеры, так и к более длинным цепям, обычно упоминаемым как белки. Полипептиды могут содержать аминокислоты, отличные от 20 кодируемых генами аминокислот. Полипептиды включают аминокислотные последовательности, модифицированные или с помощью природных процессов, таких как посттрансляционный процессинг, или с помощью методов химических модификаций, которые хорошо известны в данной области техники. Такие модификации вполне описаны в текстах, служащих в качестве основы для обсуждения, и более подробных монограммах, а также в объемистой научной литературе. Модификации могут встречаться где угодно в полипептиде, в том числе пептидном остове, боковых цепях аминокислот или амино- или карбоксильных концах. Понятно, что один и тот тип модификации может присутствовать в одинаковых или варьирующих степенях в нескольких сайтах данного полипептида. Также данный полипептид может содержать множество типов модификаций. Полипептиды могут быть разветвленными в результате убиквитирования, и они могут быть циклическими, с разветвлением или без него. Циклические, разветвленные и разветвленные циклические полипептиды могут быть следствием посттрансляционных природных процессов или могут быть получены синтетическими способами. Модификации включают ацетилирование, ацилирование, ΆΌΡ-рибозилирование, аминирование, ковалентное присоединение флавина, ковалентное присоединение составляющей в виде гема, ковалентное присоединение нуклеотида или производного нуклеотида, ковалентное присоединение липида или липидного производного, ковалентное присоединение фосфотидилинозита, образование поперечных связей, циклизацию, образование дисульфидных связей, деметилирование, образование ковалентных поперечных связей, образование цистеина, образование пироглутамата, формилирование, гамма-карбоксилирование, гликозилирование, образование ΟΡΙ-привязки, гидроксилирование, йодирование, метилирование, миристиолирование, окисление, протеолитический процессинг, фосфорилирование, пренилирование, рацемизацию, котрансляционное включение селена, сульфатирование, опосредуемое транспортной РНК добавление аминокислот к белкам, такое как аргинилирование и убиквитирование. См., например, ΡΒΟΊΈΙΝ8 - δΤΒυΟΓϋΒΕ ΆΝΏ \Ю1.ЕСЕ'1.АН ΡΒΟΡΕΒΤΙΕδ, 2^пй Ей., Т.Е. Стеноп, А.Н. Ртеешаи апй Сотрапу, №\ν Уотк, 1993 и Ао1й. Ρ., ΡοδΙίΓαηδΙαΙίοηαΙ Ρ^оΐе^η МойШсайопк: Ρе^8ρесί^νе8 апй Его^ресК р§8. 1-12 ίη ΡΟδΤΤΗΑΧδΕΑΤΙΟΧΑΕ (ΌΥΑΕΡΧΤ ΜΟΌΙΡ^ΑΤΙΟΝδ ΟΡ ΡΒΟΊΈΙΝδ, В.С. 1окп8оп, Ей., Лсайетк Ρκβδ, №\ν Уотк, 1983; 8е1йет е! а1., Лпа1у818 Ют рто!еш тойШсайопз апй попрго1еш соЕасйтз, Мей. Епхушо1. (1990) 182: 626-646 и Вайап е! а1., ΡΐΌΚίπ 8упйе818: Ρο8й^аη81аΐ^οηа1 Мой1йсайопз апй Лдшд, Апп ΝΥ Асай. 8ск (1992) 663: 48-62.

Вариант, как этот термин здесь используется, представляет собой полинуклеотид или полипептид, который отличается от исходного полинуклеотида или полипептида, соответственно, но сохраняет существенные свойства. Типичный вариант полинуклеотида отличается по нуклеотидной последовательности от другого, исходного полинуклеотида. Изменения нуклеотидной последовательности варианта могут изменять или могут не изменять аминокислотную последовательность полипептида, кодируемого исходным полинуклеотидом. Изменения нуклеотидов могут приводить к заменам, добавлениям, делециям аминокислот, слияниям и укорочениям полипептида, кодируемого исходной последовательностью, как обсуждается ниже. Типичный вариант полипептида отличается по аминокислотной последовательности от другого, исходного полипептида. Как правило, различия ограничены, так что последовательности исходного полипептида и варианта весьма схожи в общем и идентичны во многих участках. Вариант и исходный полипептид могут отличаться по аминокислотной последовательности одной или несколькими заменами, добавлениями, делециями в любой комбинации. Замещенный или введенный остаток аминокислоты может быть или может не быть остатком, кодируемым генетическим кодом. Вариант полинуклеотида или полипептида может быть встречающимся в природе, таким как аллельный вариант, или он может быть вариантом, для которого не известно, чтобы он встречался в природе. Не встречающиеся в природе варианты полинуклеотидов и полипептидов могут быть получены с помощью мутационных методов или с помощью прямого синтеза. Варианты могут также включать, но без ограничения, полипептиды или их фрагменты, имеющие химическую модификацию одной или нескольких боковых групп их аминокислот. Химическая модификация включает, но без ограничения, добавление химических составляющих, создание новых связей и удаление химических составляющих Модификации при боковых группах аминокислот включают, но без ограничения, ацилирование ε-аминогрупп лизинов, Νалкилирование аргинина, гистидина или лизина, алкилирование карбоксильных групп глютаминовой или аспарагиновой кислоты и деамидирование глютамина или аспарагина. Модификации концевой амино

- 3 017159 группы включают, но без ограничения, удаление аминогруппы, Ν-модификации группой низшего алкила, двумя группами низших алкилов и ацильной группой. Модификации концевой карбоксильной группы включают, но без ограничения, приводящие к образованию амида, низшего алкиламида, диалкиламида и низшего алкилового эфира модификации. Кроме того, одна или несколько боковых групп или концевых групп могут быть защищены защитными группами, известными занимающимся белками химикам со средним уровнем компетентности.

Как здесь используется, фрагмент, когда используется со ссылкой на полипептид, представляет собой полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, которая является той же самой, что и часть, но не вся аминокислотная последовательность полного, встречающегося в природе полипептида. Фрагменты могут быть свободностоящими или быть включены в более большой полипептид, в котором они образуют часть или участок в виде одного непрерывного участка в одном более большом полипептиде. В качестве примера, фрагмент встречающейся в природе ОЬР-1 будет включать от 7 до 36 аминокислот от встречающихся в природе аминокислот 1-36. Кроме того, фрагменты полипептида могут также быть вариантами встречающейся в природе частичной последовательности. Например, фрагмент ОЬР-1, включающий аминокислоты 7-30 встречающегося в природе ОЬР-1, может также быть вариантом, имеющим замены аминокислот в пределах его частичной последовательности.

Как здесь используется, термин конъюгат или конъюгированный относится к двум молекулам, которые связаны друг с другом. Например, первый полипептид может быть ковалентно или нековалентно связан со вторым полипептидом. Первый полипептид может быть ковалентно связан с помощью химического линкера или может быть генетически связан со вторым полипептидом, причем первый и второй полипептид делят общий полипептидный остов.

Как здесь используется, термин последовательно ориентированные относится к двум или более полипептидам, которые граничат друг с другом в качестве части одной и той молекулы. Они могут быть связаны или ковалентно, или нековалентно. Два или более последовательно ориентированных полипептидов могут образовывать часть одного и того же полипептидного остова. Последовательно ориентированные полипептиды могут иметь прямую или обратную ориентацию и/или могут быть отделены другими аминокислотными последовательностями.

Как здесь используется, термин снижать или снижение глюкозы в крови или плазме относится к уменьшению количества глюкозы в крови, измеряемого в крови пациента после введения гипогликемического средства. Снижения глюкозы в крови или плазме можно определить и оценить для каждого индивидуума или в виде среднего изменения для группы субъектов. Кроме того, средние изменения глюкозы в крови или плазме можно определить и оценить для группы подвергнутых лечению субъектов в виде среднего изменения от базовой линии и/или в виде среднего изменения по сравнению со средним изменением глюкозы в крови или плазме в группе субъектов, которым вводили плацебо.

Как здесь используется, термин увеличение активности ОЬР-1 относится к увеличению любой и всех из активностей, связанных со встречающимся в природе ОЬР-1. В качестве примера, увеличение активности ОЬР-1 можно определить после введения по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью ОЬР-1, субъекту и сравнить с активностью ОЬР-1 у того же субъекта до введения полипептида, обладающего активностью ОЬР-1, или в сравнении со вторым субъектом, которому вводится плацебо.

Как здесь используется, термин болезни, связанные с повышенной глюкозой в крови, относится, но без ограничения, к сахарному диабету типа I и типа II, непереносимости глюкозы, гипергликемии и болезни Альцгеймера.

Как здесь используется, термин совместное введение относится к введению двух или более соединений одному и тому же пациенту. Совместное введение таких соединений может быть одновременным или приблизительно в одно и то же время (например, в пределах одного и того же часа), или оно может быть в пределах нескольких часов или дней друг от друга. Например, первое соединение может вводиться один раз в неделю, в то время как второе соединение совместно вводится ежедневно.

Как здесь используется, максимальная концентрация в плазме или С_тах означает наивысшую измеряемую концентрацию вещества (например, полипептида, обладающего активностью ОЬР-1, или агониста ОЬР-1) в плазме млекопитающего после введения вещества млекопитающему.

Как здесь используется, площадь под кривой или АИС представляет собой площадь под кривой на графике зависимости концентрации вещества в плазме от времени. АИС может быть мерой интеграла мгновенных концентраций, взятого в интервале времени, и имеет единицы масса х время/объем, которые можно также выразить в виде молярная концентрация х время, например нМ х день. АИС обычно рассчитывают с помощью метода трапеций (например, линейного, линейного 1од). АИС обычно устанавливают для интервала времени от нуля до бесконечности, и указываются другие интервалы времени (например, АИС (11, 12), где 11 и 12 являются временем начала и конца для интервала). Таким образом, АИС_0-24ч, как здесь используется, относится к АИС в течение 24-часового периода, а АИС_0-4ч относится к АИС в течение 4-часового периода.

Как здесь используется, средневзвешенная АИС представляет собой АИС, поделенную на интер

- 4 017159 вал времени, взятый для расчета ЛИС. Например, средневзвешенная ЛиС₀.24ч будет представлять лис_о.24ч, поделенную на 24 ч.

Как здесь используется, доверительный интервал или С1 представляет собой интервал, в котором измерение или испытание соответствует установленной вероятности р, где р относится к 90 или 95% С1 и рассчитывается или для среднего арифметического, среднего геометрического, или, по меньшей мере, среднего наименьших квадратов. Как здесь используется, среднее геометрическое представляет собой среднее обратно преобразованных через возведение в степень значений в виде натуральных логарифмов, а среднее наименьших квадратов может также быть или может не быть средним геометрическим, но происходить из модели дисперсионного анализа (ΑΝΟνΑ), в которой используются определен. ные эффекты.

Как здесь используется, коэффициент вариации (Ον является мерой дисперсии, и он определяется как отношение стандартного отклонения к среднему значению. Его сообщают в виде процента (%) путем умножения вышеуказанного расчета на 100% (%θν).

Как здесь используется, Т_тах относится к времени, определяемому для достижения максимальной концентрации вещества в плазме млекопитающего после введения этого вещества млекопитающему.

Как здесь используется, период полувыведения из сыворотки или плазмы относится к времени, требуемому для подвергания метаболизму или удаления из сыворотки или плазмы млекопитающего с помощью нормальных биологических процессов половины количества вещества, введенного млекопитающему.

Подробное описание изобретения

В одном аспекте настоящего изобретения обеспечиваются способы увеличения активности СЬР-1 у человека, которые включают введение указанному человеку композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1, причем указанный полипептид обеспечивает максимальную концентрацию в плазме указанного полипептида, составляющую по меньшей мере приблизительно 0,6 нМ, и значение площади под кривой для указанного полипептида, которое составляет по меньшей мере приблизительно 3,5 нМх день, в течение периода, составляющего одну неделю. Как понятно в данной области техники, различные способы можно использовать для сбора, определения и оценки фармакокинетических данных, таких как концентрация активного компонента в крови, плазме и/или другой ткани. Как также понятно в данной области техники, различные способы можно использовать для сбора, определения и оценки различных фармакодинамических данных, таких как, но без ограничения, уровни глюкозы, инсулина, С-пептида, глюкагонов и других биомаркеров в крови и/или плазме, и/или другой ткани. В соответствии с настоящим изобретением по меньшей мере одним полипептидом, обладающим активностью СБР-1. может быть агонист СБР-1. Агонисты СБР-1 можно выбрать из группы, состоящей из гормона инкретина и/или его фрагмента, варианта и/или конъюгата и миметика инкретина и/или его фрагмента, варианта и/или конъюгата. В группу гормонов инкретинов включены СЬР-1 человека и/или его фрагменты, варианты и/или конъюгаты.

Вариант осуществления настоящего изобретения включает полипептид, который может быть, но без ограничения, СБР-1 или его фрагментом, вариантом и/или конъюгатом. Фрагменты, и/или варианты, и/или конъюгаты СЬР-1 настоящего изобретения обычно обладают по меньшей мере одной активностью СЬР-1. СБР-1 или его фрагмент, вариант и/или конъюгат могут включать сывороточный альбумин человека. Сывороточный альбумин человека может быть конъюгирован с СБР-1 или его фрагментом и/или вариантом. Гормон инкретин (такой как СБР-1) и/или миметик инкретина (такой как экзендин 3 и экзендин 4) и/или их фрагменты и/или варианты могут быть конъюгированы с сывороточным альбумином человека благодаря химическому линкеру до инъекции или могут быть химически связаны со встречающимся в природе сывороточным альбумином человека ίη νίνο (см., например, патенты США №№ 6593295 и 6329336, полностью включенные сюда посредством ссылки). В альтернативном случае сывороточный альбумин человека можно генетически слить с СЬР-1, и/или его фрагментом, и/или вариантом, или другим агонистом СЬР-1, таким как экзендин 3 или экзендин 4 и/или их фрагменты и/или варианты. Примеры СЬР-1 и его фрагментов и/или вариантов, генетически слитых с сывороточным альбумином человека, предоставлены в следующих РСТ-заявках: νΟ 2003/060071, \УО 2003/59934, \νθ 2005/003296, \νθ 2005/077042 (полностью включенных сюда посредством ссылки).

Полипептиды, обладающие активностью СЬР-1, могут включать по меньшей мере один фрагмент и/или вариант СБР-1 человека. Два встречающихся в природе фрагмента СБР-1 человека представлены в 8ЕО ΙΌ ΝΟ: 2.

- 5 017159

8 9 101112 13 14 15 1617

Н1з-А1а-С1и-С1у-Ткг-РИе-ТЬг-6ег-Азр-Уа1-Зег18 19 20 21 22 23 24 25 26 2728

2ег-Туг-Ъеи-01и-е1у-С1п-А1а-А1а-Ьуз-С1и-Р11е29 30 31 32 33 34 35 3637

11е-А1а-Тгр-Ьеи-Уа1-Ьуз-61у-Агд-Хаа (5Е<2 Ю N0.:2) где Хаа в положении 37 представляет собой С1у (в дальнейшем обозначаемый СЬР-1(7-37)) или -ΝΗ₂(в дальнейшем обозначаемый СЬР-1(7-36)). Фрагменты СЬР-1 могут включать, но без ограничения, молекулы СЬР-1, включающие аминокислоты 7-36 СЬР-1 человека (СЬР-1(7-36)), или альтернативно состоящие их этих аминокислот. Варианты СЬР-1 или их фрагменты могут включать, но без ограничения, одну, две, три, четыре, пять или более аминокислотных замен в СЬР-1 дикого типа или во встречающихся в природе фрагментах СЬР-1, показанных в 8ЕС ΙΌ ΝΟ: 2. Варианты СЬР-1 или фрагменты СЬР-1 могут включать, но без ограничения, замены остатка аланина, аналогичного аланину 8 СЬР-1 дикого типа, при этом такой аланин мутируют в глицин (в дальнейшем обозначаемый Л8С) (см., например, мутанты, раскрытые в патенте США № 5545618, полностью включенном сюда посредством ссылки).

В некоторых аспектах по меньшей мере один фрагмент и вариант СЬР-1 включает СЬР-1(7-36) (А8С) ) и генетически слит с сывороточным альбумином человека. В дальнейшем варианте осуществления полипептиды настоящего изобретения включают одну, две, три, четыре, пять или более последовательно ориентированных молекул СЬР-1 и/или его фрагментов и/или вариантов, слитых с Ν- или Сконцом сывороточного альбумина человека или его варианта. В других вариантах осуществления имеются такие полипептиды А8С, слитые с Ν- или С-концом альбумина или его варианта. Пример двух последовательно ориентированных фрагментов и/или вариантов СЬР-1(7-36)(А8С)), слитых с Ν-концом сывороточного альбумина человека, включает 8ЕС ГО ΝΟ: 1, которая представлена на фиг. 3. В другом аспекте по меньшей мере один фрагмент и вариант СЬР-1 включает по меньшей мере два СЬР-1(736)(А8С)), последовательно и генетически слитых с сывороточным альбумином человека. По меньшей мере два СЬР-1(7-36)(А8С)) могут быть генетически слиты с Ν-концом сывороточного альбумина человека. По меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1, может включать 8ЕС ГО ΝΟ: 1.

Варианты СЬР-1(7-37) можно обозначить, например, в виде С1и²²-СЬР(7-37)ОН, что обозначает вариант СЬР-1, в котором глицин, обнаруживаемый в норме в положенли 22 СЬР-1(7-37)ОН, заменен глютаминовой кислотой; Уа1-С1и-СЬР(7-37)ОН обозначает соединение СЬР-1, в котором аланин, обнаруживаемый в норме в положении 8, и глицин, обнаруживаемый в норме в положении 22 СЬР-1(7-37)ОН, замены валином и глютаминовой кислотой соответственно. Примеры вариантов СЬР-1 включают, но без ограничения,

- 6 017159

Уа1⁸-СЬР-1(7-37)ОН	О1у⁸-ОЬР-1(7-37)ОН	О1и²²-ОЕР-1(7-37)О- Н
А8р®-(}им(7-37)он	Ат£²²-ОЬР-1(7-37)ОН	Еу8²²-ОЬР-1(7-37)ОН
Су8²²-СЬР-1(7-37)ОН	УаАОкА-СБР-1 (7-37)ОН	Уа1⁸-А8р²²-СтЬР-1(7-37)ОН
Уа1⁸-Ат§²²-ОЬР-1 (7-37)ОН	Уа1⁸-Ьу8²²-СЬР-1(7-37)С>Н	УаГ-СуА-СТР-] (7-37'ОН
61у⁸-61и²²-ОЕР-1 (7-37)ОН	<л1у⁸-Азр²²-СгЬР-1(7-3 7)ОН	О1у⁸-Аг§²²-ОЕР-1(7-37)ОН
01у⁸-Ьуз^и-ОЬР-1(7-37К>Н	С1у^а-Су8²²-ОЬР-1(7-37)ОН	О1и²²-С-ЬР-1(7-36)0Н
Азр^и-ОЬР-1(7-36)ОН	Аг§²²-аЬР-1(7-Зб)ОН	Ьу8²²-ОЬР-1(7-36)ОН
СуА <!ЕР 1(7-36.)ОН	Уа1⁸-О1и²²-ОЬР-1(7-36)ОН	У.А-АзрААР-1 (7-36)ОН
Уа1³-Ат А-СТР-1 (7-36)ОН	УА-ЕуА-СТ.Р-1(7-36)ОН	УаГ-СуА-ОЕР-1(7-36)ОН
С1у⁸-О1и^м-СЬР-1(7-36)ОН	О1у⁸-Азр²²-ОЕР-1(7-36)ОН	61у⁸-Аг§²²-ОЕР-1 (7-36)ОН
С1у⁸ЪуА-6ЬР- 1(7-36)ОН	С 1у Су А БЕГ’-1 (7-36)ОН	Ьу8²³-СгЬР-1(7-37)ОН
Уа1⁸-ЬуА-ОЬР-1 (7-37)ОН	а1у⁸-Еуя²³-ОЬР-1 (7-37)ОН	Н1з²⁴-СЕР-1(7-37)ОН
Уа1⁸-Н15^м-ОЬР-1(7-37ХЭН	О1у'^:-Н1£,^{; 1}-6ЬР-1 (7-37ХЭН	1уА-61 Г-117-37.ЮН
УА-ЕуА-СЯР-1 (7-3 7 )ОН	С1у³-Еуя^;’-<;ЕР-1 (7-37)ОН	С1и'^р-ОЕР-1(7-37)ОН
Уа1^!:-й1и'· СтЬР-1(7-3 7)ОН	С>1у⁸-О1и³⁰-С>ЕР-1(7-37)ОН	Азр³⁰-С>ЕР-1(7-37)ОН
УаР-Азр^-СЩР- 1(7-37)ОН	<31у⁸-А<ф³⁰-ОЕР-1 (7-3 7)0 Н	Ст1п³⁰-СгЕР-1(7-37)ОН
Уа1⁸-О1п’“-СЬР-1 (7-3 7)ОН	С1у⁸-С1п^!0-СФР- 1(7-37)ОН	Туг’°-СЕР-1(7-37)ОН
УяГ-Туг'АЗЕР-! (7-37)ОН	О1у'^!-Ту\|^;с‘-СтЕР-1 (7-37)ОН	5ет³⁽¹-СгЕР-1(7-37)ОН
УаГ-ЗегАСгЬР-1 (7-37)ОН	О1у⁸-Зсг^3<,-аЕР-1 (7-3 7)ОН	Н\|8³⁰-СтЕР-1(7-37)ОН
Уа1^!-Н18^,0-ОЬР- 1(7-37)ОН	С1у⁸-Н1з³⁰-ОЬР-1 (7-37)ОН	Οΐ4³⁴-ΟίΡ-Ι(7-37)ΟΗ
УаГЧИА-ГгЬр. 1 (7-37)ОН	61у⁸-С1и³⁴-СЕР-1 (7-37)ОН	А1а³⁴-СЕР-1(7-37)ОН
Уа1⁸-А1а^и-<ЗЕР-1 (7-37)ОН	С1у⁸-А!а³⁴-СЕР-1(7-37)ОН	<л1у¹⁴-<7Ы' 1<7-37)ОН
Уа1⁸-С1у⁵⁴-СЬР-1(7-37)ОН	О1у⁸-С1у³⁴-аЬР-1 (7-37)ОИ	А1а^3,-ОЕР-1(7-37)ОН
Уа]⁸-А1а³⁵-ОЕР-1 (7-37)ОН	Ο1ν⁸-Α];ι^3ί-ΟΙ .р-1 (7-37)ОН	ЕуА’-ОЕР-1{7-ЗуЮП
Уа!’-Еу5“-СЕР-1(7-37)ОН	СЛу’-Ьув^-ОЕР-1 (7-3 7)0Н	Н18³⁵-СЬР-1(7-37)ОН
Уа1⁸-Н18³⁵-СЬР-1(7-37К)Н	С1у⁸-Н18³⁵-ОЕР-1(7-37)ОН	Рго³⁵-ОЕР-1(7-37)ОН
Уа1⁸-Р10³⁵-аЬР-1(7-37)ОН	О1у⁸-Рго'⁵-ОЕР-1(7-37)ОН	О1и³⁵-ОЬР-1(7-37)ОН
О1у⁸-О1и³⁵-СЕР-1(7-37)ОН	Уа1⁸-А1а²’-6ЕР-1(7-37)ОН	Уа1⁸-Н18³⁷-ОЕР-1 (7-37)ОН
Уа1⁸-Сг1ц^2г-Ьу8²³-ОЬР- 1(7-37)ОН	Уа1⁸-О1и²²-С1и²³-ОЕР-1(7-3 7)ОН	Уа1⁸-СНи²²-А1а²⁷-ОБР-1 (7-37)ОН
ναϊΑτίΑ-ΙγΑΑίΕΡ-1 (7-37)ОН	Уа1⁸-Н1з³⁷-СЕР-1 - (7-37)ОН	О1у⁸-Н1А-ОЕР-1(7-37)ОН
νΒΐ’-ΟΚΑΑϊΒ^-ΟΕΡ-Ι (7-37)ОН 01у⁸-Ьу8²²-01и²³-ОЬР-1(7-37)ОН.	С1у⁸-О!ц²²-А1а²⁷-СгЕР-1 (7-3 7)ОН УаАсиА-ОЬР-1 (7-37)ОН	УаА1 λΑ-(Γι.ι^2:-6ΕΡ- 1(7-37)ОН

Варианты СБР-1 могут также включать, но без ограничения, СБР-1 или фрагменты СБР-1. имеющие химическую модификацию одной или нескольких боковых групп их аминокислот. Химическая модификация включает. но без ограничения. добавление химических составляющих. создание новых связей и удаление химических составляющих. Модификации боковых групп аминокислот включают. но без ограничения. ацилирование ε-аминогрупп лизинов. Ν-алкилирование аргинина. гистидина или лизина. алкилирование карбоксильных групп глютаминовой или аспарагиновой кислоты и деамидирование глютамина или аспарагина. Модификации концевой аминогруппы включают. но без ограничения. удаление аминогруппы. Ν-модификации группой низшего алкила. двумя группами низших алкилов и ацильной группой. Модификации концевой карбоксильной группы включают. но без ограничения. приводящие к образованию амида. низшего алкиламида. диалкиламида и низшего алкилового эфира модификации. Кроме того. одна или несколько боковых групп или концевых групп могут быть защищены защитными группами. известными занимающимся белками химикам со средним уровнем компетентности.

Фрагменты или варианты СБ-Р-1 могут также включать полипептиды. в которых одна или несколько аминокислот добавлены к Ν-концу и/или С-концу СЬР-1(7-37)ОН указанного фрагмента или варианта. Аминокислоты в СБ-Р-1. к Ν-концу или С-концу которого добавлены аминокислоты. обозначают тем же числом. что и соответствующую аминокислоту в СЬР-1(7-37)ОН. Например. Ν-концевая аминокислота соединения СБ-Р-1. полученного добавлением двух аминокислот к Ν-концу СЬР-1(7-37)ОН. находится в положении 5; а С-концевая аминокислота соединения СБ-Р-1. полученного добавлением одной аминокислоты к С-концу СЬР-1(7-37)ОН. находится в положении 38. Таким образом. положение 12 занимает фенилаланин. а положение 22 занимает глицин в обоих этих соединениях СБ-Р-1. как и в СЬР-1(7-37)ОН. Аминокислоты 1-6 СБ-Р-1 с аминокислотами. добавленными к Ν-концу. могут быть одинаковыми с аминокислотой в соответствующем положении СЬР-1(1-37)ОН или быть консервативной заменой аминокислоты в соответствующем положении СЬР-1(1-37)ОН. Аминокислоты 38-45 СБ-Р-1 с аминокислотами. добавленными к С-концу. могут быть одинаковыми с аминокислотой в соответствующем положении

- 7 017159 глюкагона или экзендина 4 или быть консервативной заменой аминокислоты в соответствующем положении глюкагона или экзендина 4.

В другом аспекте настоящего изобретения композицию, содержащую по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1, вводят человеку от одного раза в день до одного раза в месяц и могут вводить один раз в день, один раз каждые два дня, один раз каждые три дня, один раз каждые семь дней, один раз каждые четырнадцать дней, один раз каждые четыре недели и/или один раз в месяц. В другом аспекте человеку вводят первую дозу и вторую дозу композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1. Указанные первая и вторая дозы могут быть одинаковыми или могут быть различными. Каждая доза по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью СЬР-1, может включать от приблизительно 0,25 мкг до приблизительно 1000 мг указанного по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью СЬР-1. Дозы могут включать, но без ограничения, 0,25 мкг, 0,25, 1, 3, 6, 16, 24, 48, 60, 80, 104, 200, 400, 800 мг вплоть до приблизительно 1000 мг указанного по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью СЬР-1.

В другом аспекте настоящего изобретения композиция, содержащая по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1, обеспечивает максимальную концентрацию в плазме, составляющую по меньшей мере от приблизительно 0,6 до приблизительно 319 нМ полипептида, обладающего активностью СЬР-1, и значение площади под кривой, составляющее по меньшей мере от приблизительно 3,5 до приблизительно 193,6 нМ х день, в течение периода, составляющего одну неделю, для полипептида, обладающего активностью СЬР-1. В некоторых случаях период полувыведения из сыворотки полипептида, обладающего активностью СЬР-1, составляет от приблизительно 4 до приблизительно 7 дней. В другом аспекте значение Т_тах полипептида, обладающего активностью СЬР-1, составляет от приблизительно 1 дня до приблизительно 5 дней. В некоторых случаях композиция, содержащая по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1, обеспечивает максимальную концентрацию в плазме, составляющую по меньшей мере от приблизительно 8 до приблизительно 54 нМ, указанного по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью СЬР-1, и значение ЛИС (неделя 1), составляющее по меньшей мере от приблизительно 29 нМ х день до приблизительно 245 нМ х день, в течение периода, составляющего одну неделю, для указанного по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью СЬР-1. В другом аспекте композиция, содержащая указанный по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1, обеспечивает максимальную концентрацию в плазме, составляющую по меньшей мере от приблизительно 8 до приблизительно 54 нМ указанного по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью СЬР-1, и значение ЛИС (0-гс>) после однократной дозы, составляющее по меньшей мере от приблизительно 99 до приблизительно 637 нМ х день, после однократной дозы указанного по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью СЬР-1.

Любой человек, которому вводится композиция, содержащая по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1, в соответствии с настоящим изобретением может иметь гипергликемию, непереносимость глюкозы и/или сахарный диабет, который может быть Τ2ΌΜ. Также обеспечиваются способы, в которых указанный по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР1, снижает глюкозу в плазме у указанного человека, причем средневзвешенное значение ЛИС_0-24ч для глюкозы в плазме значительно уменьшено в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю, по сравнению с плацебо после введения указанной композиции, содержащей указанный по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1, в популяционной группе людей с Τ2ΌΜ. Средневзвешенная ЛИС_0-24ч для глюкозы в плазме, которую можно определить в виде изменения от базовой линии, по сравнению с изменением у субъектов, которым вводили плацебо, может быть уменьшена на от приблизительно 20 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-32,4, -7,8) до по меньшей мере приблизительно 49 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-76,6, -21,4) или более в течение курса, составляющего по меньшей мере одну неделю после введения по меньшей мере одной дозы указанной композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1, в популяционной группе людей с Τ2ΌΜ. Снижение глюкозы в плазме может зависеть от дозы. Кроме того, указанный по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1, снижает глюкозу в плазме у указанного человека, причем глюкоза в плазме натощак может быть значительно снижена в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1, в популяционной группе людей с Τ2ΌΜ. Среднее значение глюкозы в плазме натощак может быть уменьшено в популяционной группе людей с Τ2ΌΜ на от приблизительно 7 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-25,9, +11,2) до приблизительно 50,7 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-75,4, -26,0) или более при определении в виде изменения от базовой линии по сравнению с плацебо. Среднее значение глюкозы в плазме натощак может быть уменьшено на от приблизительно 4 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-16,5, +8,2) до приблизительно 35 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-54,1, -15,6) или более при определении в виде изменения от базовой линии. Кроме того, глюкоза в плазме после приема пищи (средняя ЛИС_0-4ч) может быть снижена на от приблизительно 6 мг/дл с 95% доверительным интервалом

- 8 017159 (-27,2, +14,9) до приблизительно 53 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-64,7, -40,8) или более по сравнению с базовой линией в течение курса, составляющего по меньшей мере одну неделю после введения по меньшей мере одной дозы указанной композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью СЬР-1, в популяционной группе людей с Τ2ΌΜ. Также обеспечиваются способы, в которых указанный полипептид, обладающий активностью СЬР-1, снижает фруктозамин в плазме у указанного человека, поскольку изменение от базовой линии по сравнению с плацебо у указанного человека уменьшено по меньшей мере на приблизительно 34 мкМ/л в течение курса, составляющего по меньшей мере две недели после введения по меньшей мере одной дозы указанной композиции, содержащей указанный по меньшей мере один полупептид, обладающий активностью СЬР-1. Полипептиды настоящего изобретения, обладающие активностью СЬР-1, можно вводить подкожно в ногу, руку или живот указанного человека.

Здесь также обеспечиваются применения по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью СЬР-1, для производства лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с повышенной глюкозой в крови, включающих, но без ограничения, сахарный диабет типа II, причем указанный полипептид готовят для введения так, чтобы он обеспечивал максимальную концентрацию в плазме указанного полипептида, составляющую по меньшей мере приблизительно 0,6 нМ, и значение площади под кривой для указанного полипептида, которое составляет по меньшей мере приблизительно 3,5 нМ х день, в течение периода, составляющего одну неделю.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения обеспечиваются способы увеличения активности СЬР-1 у человека, которые включают введение указанному человеку композиции, содержащей по меньшей мере один агонист СЬР-1, причем указанный по меньшей мере один агонист СЬР-1 обеспечивает максимальную концентрацию в плазме указанного по меньшей мере одного агониста СЬР1, составляющую по меньшей мере от приблизительно 21,2 до приблизительно 51,6 пМ или более, и значение площади под кривой для указанного по меньшей мере одного агониста СЬР-1, которое составляет по меньшей мере от приблизительно 149 до приблизительно 361 пМ х день, в течение периода, составляющего одну неделю. В одном аспекте агонист СЬР-1 обеспечивает максимальную концентрацию в плазме указанного по меньшей мере одного агониста СЬР-1, составляющую по меньшей мере приблизительно 1,4 нМ, и значение площади под кривой для указанного по меньшей мере одного агониста СЬР-1, которое составляет по меньшей мере приблизительно 8 нМ х день, в течение периода, составляющего одну неделю. Агонист СЬР-1 выбирают из группы, состоящей из гормона инкретина и/или его фрагмента, варианта и/или конъюгата и миметика инкретина и/или его фрагмента, варианта и/или конъюгата. В другом аспекте период полувыведения из сыворотки по меньшей мере одного агониста СЬР-1 составляет от приблизительно 4 до приблизительно 7 дней. Значение Т_тах указанного по меньшей мере одного агониста СЬР-1 составляет от приблизительно 1 дня до приблизительно 5 дней.

В одном аспекте настоящего изобретения человек, подвергаемый лечению по меньшей мере одним агонистом СЬР-1, может иметь гипергликемию и/или сахарный диабет. Человек может иметь Τ2ΌΜ.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения обеспечиваются способы, в которых указанная композиция, содержащая указанный агонист СЬР-1, снижает глюкозу в плазме у указанного человека, причем средневзвешенное значение АИС_0-24ч для глюкозы в плазме у указанного человека клинически и статистически значительно уменьшено в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей указанный по меньшей мере один агонист СЬР-1. Средневзвешенное значение АИС_0-24ч для глюкозы в плазме, которое можно определить в виде изменения от базовой линии, по сравнению с плацебо у указанного человека может быть уменьшено по меньшей мере на приблизительно 5, 10, 15 и/или 20 мг/дл в течение курса, составляющего по меньшей мере одну неделю после введения по меньшей мере одной дозы указанной композиции, содержащей указанный по меньшей мере один агонист СЬР-1. В других аспектах указанная композиция, содержащая указанный агонист СЬР-1, снижает глюкозу в плазме у указанного человека, причем глюкоза в плазме натощак у указанного человека клинически и статистически значительно снижена в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей указанный по меньшей мере один агонист СЬР-1. В другом аспекте обеспечиваются способы, в которых указанная композиция, содержащая указанный агонист СЬР-1, снижает глюкозу в плазме у указанного человека, причем глюкоза в плазме после приема пищи снижается после введения по меньшей мере одной дозы указанной композиции, содержащей указанный по меньшей мере один агонист СЬР-1.

В другом аспекте настоящего изобретения композицию, содержащую агонист СЬР-1, вводят один раз каждые семь дней. В альтернативном случае композицию, содержащую агонист СЬР-1, можно вво дить один раз в день, один раз каждые два дня, один раз каждые три дня, один раз каждые две недели, один раз каждые четыре недели и/или один раз в месяц. Агонист СЬР-1 можно вводить несколькими путями, известными в данной области техники, включающими, но без ограничения, подкожную инъекцию, внутримышечную инъекцию, внутривенную инъекцию, в слизистую оболочку, перорально и/или с помощью ингаляции. В другом аспекте настоящего изобретения композиция, содержащая агонист СЬР-1,

- 9 017159 дополнительно содержит одно или несколько соединений, выбираемых из группы, состоящей из лиганда рецептора, активируемого при пролиферации пероксисом, (РРАК), тиазолидиндиона (например, глитазонов), метформина, инсулина и сульфонилмочевины. В другом аспекте обеспечиваются способы, включающие стадию совместного введения по меньшей мере одного агониста СЬР-1 с одним или несколькими соединениями, выбираемыми из группы, состоящей из лиганда рецептора, активируемого при пролиферации пероксисом, (РРАК), тиазолидиндиона, ингибиторов ΌΡΡ-ΐν, метформина, инсулина и сульфонилмочевины. Композиция, содержащая по меньшей мере один агонист СЬР-1, может содержать одно или несколько из этих соединений помимо по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью СЬР-1. Кроме того, обеспечиваются способы снижения уровней глюкозы в крови у нуждающегося в этом человека, которые включают введение указанному человеку композиции, содержащей по меньшей мере один агонист СЬР-1, причем указанный человек соблюдает диету для контролирования глюкозы.

Настоящим изобретением также обеспечивается применение по меньшей мере одного агониста СЬР-1 для производства лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с повышенной глюкозой в крови, включающих, но без ограничения, сахарный диабет типа ΐΐ, причем указанный по меньшей мере один агонист СЬР-1 готовят для введения так, чтобы он обеспечивал максимальную концентрацию в плазме указанного по меньшей мере одного агониста СЬР-1, составляющую по меньшей мере приблизительно 21,2 пМ, и значение площади под кривой для указанного по меньшей мере одного агониста СЬР-1, которое составляет по меньшей мере приблизительно 149 пМх день, в течение периода, составляющего одну неделю, Настоящим изобретением обеспечиваются способы лечения заболеваний, связанных с повышенной глюкозой в крови, включающих, но без ограничения, сахарный диабет типа ΐΐ, используя СЬР-1 и обладающие активностью СЬР-1 полипептиды, описанные здесь. Также обеспечивается применение агониста СЬР-1 и обладающих активностью СЬР-1 полипептидов для производства лекарственного средства, которое готовят для введения в каждом из способов лечения, описанных здесь. Также здесь обеспечиваются фармацевтические композиции, способные увеличивать активность СЬР-1 у человека, содержащие обладающий активностью СЬР-1 полипептид и/или агонист СЬР-1 и приготовленные для способов и применений, описанных здесь.

Квалифицированному специалисту известны различные способы определения и расчета фармакокинетических (например, но без ограничения, С_тах, АИС, Т_тах, периода полувыведения из сыворотки) и фармакодинамических (например, но без ограничения, уровней глюкозы в сыворотке, плазме и крови) параметров, описанных здесь. Кроме того, квалифицированному специалисту известны различные способы осуществления статистических сравнений (например, но без ограничения, сравнений изменения от базовой линии после обработки и/или сравнений среди групп обработок) и/или анализа фармакокинетических и фармакодинамических параметров, описанных здесь. Кроме того, квалифицированный специалист знает и способен использовать различные другие способы сбора и анализа фармакокинетических, фармакодинамических и других клинических данных.

Примеры

Следующие примеры иллюстрируют различные не ограничивающие аспекты этого изобретения. Для следующих примеров, если не указано иное, 8ЕС Ш N0: 1 готовили в концентрации 25 мг/мл из лиофилизированной формы, содержащей 2,8% маннита, 4,2% трегалозы дигидрата, 0,01% полисорбата 80, 20 мМ фосфатного буфера при рН 7,2. Содержащие 8ЕС Ш N0: 1 композиции разводили водой для инъекции, как только необходимо для соответствующего введения дозы.

Пример 1.

Представлено одиночное слепое, контролируемое плацебо исследование возрастающей дозы фармацевтической композиции, содержащей 8ЕС Ш N0: 1 (0,25-104 мг), вводимой подкожно в живот здоровых субъектов.

Для исследования было зарегистрировано тридцать девять здоровых, являющихся мужчинами и женщинами субъектов. Пять групп здоровых субъектов получали дважды один раз в неделю следующие увеличивающиеся дозы фармацевтической композиции, содержащей 8ЕС Ш N0: 1, инъецируемой подкожно в живот: группа 1 (0,25+1 мг); группа 2 (3+6 мг) ; группа 3 (16+24 мг); группа 4 (48+60 мг) и группа 5 (80+104 мг). В группах 1-4 при рандомизации 6 субъектов получали активный компонент, и при рандомизации 2 субъекта получали плацебо. В группе 5 при рандомизации 5 субъектов получали активный компонент, и при рандомизации 2 субъекта получали плацебо.

Таким образом, 29 субъектов получали активное лечение и 10 субъектов получали плацебо. Воздействия фармацевтической композиции, содержащей 8ЕС Ш N0: 1, увеличивались пропорциональным по отношению к большей дозе образом в течение проверяемого диапазона доз. Период полувыведения 8ЕС Ш N0: 1 составлял приблизительно 7 дней для всех доз, при этом Т_тах находилось в диапазоне от 2 до 4 дней.

Фармакокинетические параметры у здоровых субъектов, которые получали активный компонент, суммированы в табл. 1. Фармакокинетические данные для субъектов, которые получали плацебо, не суммировались. АИС (неделя 1) представляет площадь под кривой зависимости концентрации от времени, рассчитанную от времени введения первой дозы в течение одной недели после введения первой дозы.

- 10 017159

ЛИС (неделя 2) представляет площадь под кривой зависимости концентрации от времени, рассчитанную от времени введения второй дозы в течение одной недели после введения второй дозы. С_тах (неделя 1) представляет максимальную измеряемую концентрацию от времени введения первой дозы в течение одной недели после введения первой дозы. С_тах (неделя 2) представляет максимальную измеряемую концентрацию от времени введения второй дозы в течение одной нэдели после введения второй дозы.

Таблица 1

Сводка фармакокинетических параметров у здоровых субъектов

Доза (мг) (неделя 1 + неделя 2)	N	лис (неделя 1} (нМ у день)	дис (неделя 2) ΐнМ * день )	Стах (неделя 1) (ни)	Стах (неделя 2} (нМ)
Группа 1 0/25 + 1	6	МС	3,5 (64,7)	N2	0, 64 (46,2)
Группа 2 3+6	6	10,7(31,61	39,1 (19,2)	Ί , 9(37,4 )	6,6 (22,21
Группа 3 16 + 24	6	75,9 (29,2)	181 (38,2)	18,3 (26,6)	30, 0(44, I)
Группа 4 48 + 60	6	296 (50,2}	714 (17,8)	54, 1 (52,3)	123 (17,6)
Группа 5 80 + 104	5	668 (33,5)	1936 (22, 4)	122 (29, 2)	319(22,7)

Данные, представленные в виде среднего геометрического (% СУ)

N0 - не рассчитано - концентрации ниже предела количественного анали

Пример 2.

Представлено одиночное слепое, контролируемое плацебо, исследование многократных доз у субъектов с Τ2ΌΜ. Для исследования было зарегистрировано пятьдесят четыре являющихся мужчинами и женщинами субъектов. Субъекты или находились на диете для осуществления контроля, или принимали метформин, сульфонилмочевину или комбинацию метформина и сульфонилмочевины. Субъекты, принимающие метформин и/или сульфонилмочевину до начала исследования, прекращали лечение для вымывания этих средств за 2 недели до введения первой дозы. Субъекты получали при рандомизации или плацебо, или фармацевтическую композицию, содержащую 8ЕЦ ΙΌ N0: 1, с помощью подкожной инъекции в живот один раз в неделю в течение двух недель следующим образом: группа 1 (9+9 мг; 4 плацебо, 14 активных лечений); группа 2 (16+16 мг; 5 плацебо; 12 активных лечений); группа 3 (32+32 мг; 5 плацебо, 14 активных лечений). Сорок субъектов при р>андомизации получали активное компонент, и четырнадцать субъектов при рандомизации получали плацебо.

Пятьдесят три субъекта завершили исследование. Один субъект, который в результате рандомизации должен был получать активное лечение в группе 2, был выведен из исследования до введения второй дозы (16 мг). Второй субъект, который в результате рандомизации должен был получать активное лечение в группе 2, получил только первую дозу (16 мг). Этот второй субъект не был включен в фармакокинетические анализы. Три субъекта подвергались введению ошибочной дозы (два субъекта для введения плацебо и один субъект, который в результате рандомизации должен был получать активное лечение в группе 3 (32 мг)). Подвергнутые введению ошибочной дозы субъекты не включались в какие-либо фармакокинетические анализы.

Для всех доз период полувыведения 8ЕЦ ΙΌ N0: 1 составлял приблизительно 4-6 дней. Т_тах находилось в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 5 дней после введения дозы без четкой зависимости от дозы. Фармакокинетические параметры у субъектов, которые получали активный компонент, суммированы на фиг. 1 и табл. 2. Субъекты, которые в результате рандомизации получали плацебо, не включены в фиг. 1 или табл. 2.

Таблица 2

Сводка фармакокинетических параметров у субъектов с Т20М, которые получали активный компонент

Доза (мг) Концентрация при инъекции	N	дис (неделя 1) (нМ * день)	дис (неделя 2) (нМ х день)	Стах (неделя 1} (нМ)	Стах (неделя 2) (нМ)
9 мг + 9 мг	14	51 (45)	86 (43)	11,3(51,4)	14,5 (43,4)
16 мп + 16 мг	12	42 ¢90)¹	84 ¢40)²	11,4(59,7)¹	16,0 (29,З)²
32 мг + 32 мг	13	58 (78)	122 (55)	12,0 (76,2)	21,1 (52,7)

Данные, представленные б виде среднего геометрического (% СУ)

1. п = 11

2. п = 10

Пример 3.

В этом примере представлены фармакодинамические профили субъектов, описанных в примере 2. Субъекты получали подкожные инъекции доз плацебо или фармацевтической композиции, содержащей 8ЕЦ ΙΌ N0: 1, вводимых один раз в неделю в течение двух недель следующим образом: группа 1 (9+9 мг; 14 плацебо, 4 активных лечений); группа 2 (16+16 мг; 5 плацебо; 12 активных лечений); группа 3 (32+32 мг; 5 плацебо, 14 активных лечений). Дозы вводились субъектам в день 1 и день 8. Оценивались

- 11 017159 эффекты 8Е0 ΙΌ N0: 1 на глюкозу и фруктозамин у субъектов с Τ2ΌΜ. Субъекты с Τ2ΌΜ или находились на диете для осуществления контроля, или принимали метформин, сульфонилмочевину или комбинацию метформина и сульфонилмочевины и прекращали лечения для вымывания этих средств за 2 недели до введения первой дозы. Профили глюкозы натощак и в течение 24 ч оценивались на базовой линии и в течение 24 ч после введения первой и второй дозы. Фруктозамин оценивали на базовой линии и при визите в день 13, день 21 и для конечного контроля (в день 56 или день 63) после введения дозы.

В фармакодинамические анализы были включены все субъекты, получившие правильное рандомизированное лечение. Один субъект в группе 2 правильно получил дозу в день 1, но был выведен из исследования до введения второй дозы. Этот субъект был включен в фармакокинетические анализы для получения данных, собранных до дня 1, и был исключен из фармакодинамических сводок после введения дозы в день 8. Два субъекта, которые в результате рандомизации должны были получать плацебо, но ошибочно подверглись срединному введению дозы, были исключены из всех фармакодинамических анализов. Один субъект, который в результате рандомизации должен был получать активный компонент в дозе 32 мг, был подвергнут введению ошибочной дозы и исключен из всех фармакодинамических анализов.

При всех уровнях доз наблюдались клинически и статистически значимые снижения средневзвешенных значений глюкозы в течение 24 ч и концентраций глюкозы в плазме натощак (ЕРС). Связанные с глюкозой данные продемонстрированы в табл. 3.

Таблица 3

Снижения глюкозы натощак и в течение 24 часов у субъектов с Т2ОМ, которые получали активный компонент, по сравнению с плацебо

	Доза 5Е<) ΙΟ N0: 1 (мг)
Группа 1	(N=14)	Группа 2 (N=12)	Группа 3 (N=14)
		9	9+9	16	16=16	32	32=32

РРС (95% С1)	-7,36 (-25,9,+11,2)	-23.8 (-47,9, -0,28)	-22,9 (-40,7, -5,0)	-32,5 (-57,3, -7,7)	-26,7 (-46,32. -7,06)	-50.7 (-75.4, -26,0)
Аис₀._м(95% С1)	-25,2 (-43,0, 6,4)	-31,0 (-55,6, -6,4)	-28,0 (-45,7,-10.3)	-34,8 (-60,6, -8,9)	-34.8 (-54,1, -15,5)	-56,4 (-82,2, -30,5)

Значения глюкозы в мг/дл; Изменение от базовой линии по сравнению с плацебо

Для всех уровней доз наблюдались значительные снижения фруктозамина в день 13 и день 21 после введения дозы. Снижений не ожидали при визите для конечного контроля (в день 56 или день 63) вследствие оцененного периода полувыведения 8Е0 ΙΌ N0: 1. Сравнения фруктозамина у субъектов с Τ2ΌΜ, которые получали активный компонент, по сравнению с получавшими плацебо субъектами суммированы в табл. 4.

Таблица 4

Сводка о фруктозамине у субъектов с Τ2ΌΜ, которые получали активный компонент, по сравнению с получавшими плацебо субъектами

	Дозы (мг)
	9 мг	1 б мг	32 мг
Параметр	Получаемое методами наименьших квадратов различие (95% С1)	Получаемое методами наименьших квадратов различие (95% СП	Получаемое методами наименьших квадратов различие (95% С1)
День 13	-34,3 (-61,6, -7,16)	-35,5 (-66,0, -5, 05)	-37,0 {-66, 1, -7,83)
День 21	-26,7 (-57,3, 3,93}	-26,9 {-61,2, 7,43)	-49,6 (-82,3, -16,8)
Конечный контроль	35,62 (9, 68, 59, 6)	5, 70 (-22,3, 33, 7)	12,47 1-14,2, 39,2)
Значения фруктозамина в мкмоль/л; плацебо	Изменение от базовой	линии по сравнению с

Пример 4.

Предложено рандомизированное исследование однократной дозы с доступной маркировкой на здоровых добровольцах и субъектах с Τ2ΌΜ. Для этого исследования было зарегистрировано шестьдесят два являющихся мужчинами и женщинами субъекта. Субъекты с Τ2ΌΜ находились или на диете для осуществления контроля, на метформине, или на тиазолидиндионе и продолжали подвергаться своим прежним лечениям в течение исследования. Субъекты с Τ2ΌΜ получали фармацевтическую композицию, содержащую 8Е0 ΙΌ N0: 1, с помощью подкожной инъекции в виде однократных доз, составляющих 16 мг (в живот (N=8); руку (N=7) или ногу (N=7)) или 64 мг (в живот (N=8); руку (N=8) или ногу (N=8)). Здоровые добровольцы получали или 16 мг (N=8), или 64 мг (N=8) активного компонента с помощью подкожной инъекции в живот. Таким образом, 16 здоровых, нормальных добровольцев получали активный компонент, и 46 субъектов с Τ2ΌΜ получали активный компонент.

У субъектов с Τ2ΌΜ воздействия были сравнимыми по всем местам инъекций и увеличивались умеренно пропорциональным по отношению к большей дозе образом. Воздействия были сравнимыми между здоровыми субъектами и субъектами с Τ2ΌΜ. Профили концентраций и коробчатые диаграммы ЛИС представлены на фиг. 1 и 2 соответственно. Фармакокинетические параметры суммированы в табл.

5. АИС (неделя 1) представляет площадь под кривой зависимости концентрации от времени, рассчитан

- 12 017159 ную от времени введения дозы в течение одной недели после введения дозы. ЛиС(О-да) представляет площадь под кривой зависимости концентрации от времени, рассчитанную от времени введения дозы, экстраполированного до бесконечности на основе скорости элиминации 8ЕЦ Ш N0: 1. Для шести субъектов, получающих уровень дозы в 16 мг, имеющиеся данные не позволили осуществить оценку скорости элиминации 8ЕЦ Ш N0: 1. Поэтому экстраполяция до бесконечности была невозможна, и для этих субъектов ЛИС(О-да) не рассчитывали.

Таблица 5

Сводка фармакокинетических параметров у здоровых субъектов и у субъектов с

Т2ЭМ

Доза (мг)	Популяция	Место инъекции	N	АОС(неделя 1} (нМ х день)	Аис(О-да)	Стах	(нМ)
{нМ х	день}
	Здоровая	Живот	8	62,5 (16)	133¹	(24)	15	(37)
16 иг		Живот	8	29,9(101)	99, 6¹	(37)	8,4 (136)
Т2РМ	Рука	7	35,3 (99)	118¹	(36)	8, 8	(70)
		Нога	7	57,8 (39)	117¹	(29)	14	(56)
	Здоровая	Живот	8	245 (23)	590	(23)	53	(22)
64 мг		Живот	8	218(53)	562	(39)	49	(40)
Т2БМ	Рука	8	238 (22)	637	(26)	54	(23)
		Нога	8	213 (69)	555	(49)	50	(54)

Пример 5.

В этом примере предоставлены фармакодинамические профили субъектов, описанных в примере 4. Фармакодинамические профили однократной дозы фармацевтической композиции, содержащей 8ЕЦ Ш N0:1, подвергались изучению в этом исследовании и включали эффекты 8ЕЦ Ш N0:1 на глюкозу, инсулин, глюкагон и С-пептид у субъектов с Τ2ΌΜ. Субъекты с Τ2ΌΜ находились или на диете для осуществления контроля, на метформине, или на тиазолидиндионе и продолжали подвергаться своим прежним лечениям в течение исследования. Субъекты получали однократную дозу фармацевтической композиции, содержащей 8ЕЦ Ш N0: 1, следующим образом: однократные дозы, составляющие 16 или 64 мг, вводили с помощью подкожной инъекции(й) в живот 16 здоровым, нормальным добровольцам или вводили в руку, ногу или живот 46 субъектам с Τ2ΌΜ, как описано в примере 4. Глюкозу натощак оценивали через 48 ч после введения дозы до завтрака. Профили глюкозы после приема пищи (в течение 4 ч) оценивали через 48 ч после введения дозы в течение 4-часового периода после завтрака.

Для каждой введенной дозы снижения глюкозы были единообразными по местам инъекций. Клинически и статистически значимые снижения глюкозы после приема пищи (средневзвешенного значения глюкозы в течение 4 ч) и глюкозы в плазме натощак (ТРО) наблюдали при дозе 64 мг. Связанные с глюкозой данные продемонстрированы в табл. 6.

Таблица 6 Снижения глюкозы натощак и после приема пищи (в течение 4 часов) у субъектов с Т20М по сравнению с базовой линией

	16 мг Живот	16 мг Рука	16 мг Нога	64 мг Живот	64 мг Рука	64 мг Нога
	N=8	N=7	N=7	N=8	N=8	N=8
ЕРО (95% С Г)	-21,1 (-41,5,-0,75)	'13,1 (-26,1,-0,1 5)	-4,1 (-16,5,+8,2)	-34,9 (-54,1,-15, 6)	-21.5 (-26,7, -16,3)	-29,3 (-43,0,-15,5)
дис_1М(95% С1)	-16,1 (-44,5+12,2 )	-6,0 (-27,2,+14,9)	-10,8 (-27,2,+5,6)	-52,5 (-82,0, -23,0)	-41.3 (-70,9,-11,7)	-52,8 (-64,7, -40,8)

Любая заявка на патент, на приоритет которой притязает эта заявка, также полностью включена сюда посредством ссылки образом, описанным выше для некоторых публикаций и ссылок.

- 13 017159

Список последовательностей <110> 3т11ЫК11пе ВеесЬат СогрогаЬюп <120> Способы введения гипогликемических средстЕ с длительным действием <130> Р062137 <140> Неизвестный <141> 2007-09-12 <150> 60/825,472 <151> 2006-09-13 <160> 2 <170> ГазЬБЕф для версии 4,0 ИьпЦоыз <210> 1 <211> 645 <212> Белок <213> Ното Заргепз <400> 1

Н13

С1у

С1и

С1у

ТЬг

РЬе

ТЬг

Зег

Азр

νβΐ

Зег

5ег

Туг

Беи

61и

С1у

1

5

10

15

С1п

А1а

Вуз

С1и

РЬе

Не

А1а

Тгр

Беи

Уа1

Буз

С1у

Агд

Н13

С1у

20

25

30

С1и

С1у

ТЬг

РЬе

ТЬг

Зег

Азр

Уа1

5ег

Туг

Веи

Е1и

<31 у

С1п

А1а

35

40

45

А1а

Вуз

С1и

РЬе

Не

А1а

Тгр

Беи

Уа1

Ьуз

С1у

Агд

Азр

А1а

Н13

Буз

50

55

60

5ег

С1и

Уа1

А1а

Низ

Агд

РЬе

Буз

Азр

Беи

С1у

<31и

С1и

Азп

РЬе

Буз

65

70

75

80

А1а

Бец

Уа1

Веи

Не

А1а

РЬе

А1а

С1п

Туг

Беи

С1п

Суз

Рго

РЬе

85

90

95

61и

Азр

Н13

Уа1

Ьуз

Беи

Уа1

Азп

С1и

Уа1

ТЬг

С1и

РЬе

А1а

Ьуз

ТЬг

100

105

110

Суз

Уа1

А1а

Азр

С1и

5ег

А1а

С1и

Азп

Суз

Азр

Ьуз

5ег

Беи

Η1Ξ

ТЬг

115

120

125

Вен

РЬе

С1у

Азр

Ьуз

Беи

Суз

ТЬг

Уа1

А1а

ты

Веи

Агд

С1и

ТЬг

Туг

130

135

140

С1у

С1и

МеЬ

А1а

Азр

Суз

А1а

Буз

С1п

(Пи

Рго

С1и

Агд

Азп

С1и

145

150

155

160

Суз

РЬе

Беи

С1п

Н13

Буз

Азр

Азп

Рго

Азп

Беи

Рго

Агд

Беи

Уа1

165

170

175

Агд

Рго

С1и

Уа1

Азр

Уа1

МеЬ

Суз

ТЬг

А1а

РЬе

Ньз

Азр

Азп

С1и

61и

180

185

190

ТЬг

РЬе

Беи

Буз

Ьуз

Туг

Беи

Туг

(Пи

Не

А1а

Агд

Н.13

Рго

Туг

195

200

205

РЬе

Туг

А1а

Рго

С1и

Беи

РЬе

А1а

Буз

Агд

Туг

Ьуз

А1а

210

215

220

РЬе

ТНг

С1и

Суз

С1П

А1а

Азр

Ьуз

А1а

Суз

Беи

Рго

225

230

235

240

Вуз

Веи

Азр

С1и

Беи

Агд

Азр

С1и

(Пу

Буз

А1а

Зег

5ег

А1 а

Буз

С1п

245

250

255

Агд

Беи

Ьуз

Суз

А1а

5ег

Беи

61п

Ьуз

РЬе

С1у

61 и

Агд

А1а

РЬе

Ьуз

- 14 017159

260

265

270

А1а

Тгр

А1а

Уа1

А1а

Агд

Беи

Зег

С1п

Агд

РНе

Рго

Буз

А1а

С1и

РЬе

275

280

285

А1а

С1и

Уа1

Зег

Буз

Беи

Уа1

ТНг

Азр

Беи

ТНг

Буз

Уа1

Чйз

ТНг

С1и

290

295

300

Суз

ΗΪ3

С1у

Азр

Беи

С1и

Суз

А1а

Азр

Агд

А1а

Азр

Беи

305

310

315

320

А1а

Буз

Тус-

Не

Суз

С1и

Азп

С1п

Азр

Зег

Не

Зег

Буз

Беи

Буз

325

330

335

С1п

Суз

С1и

Оуз

Рго

Беи

С1и

Буз

Зег

Н13

Суз

Не

А1а

С1и

340

345

350

Уа1

О1и

Азп

Азр

С1и

Меб

Рго

А1а

Азр

Беи

Рго

Зег

Беи

А1а

Азр

355

360

365

РНе

Уа1

С1и

Зег

Буз

Азр

Уа1

Суз

Буз

Азп

Туг

А1а

С1и

А1а

Буз

Азр

370

375

380

Уа1

РЬе

Беи

С1у

Меб

РЬе

Беи

Туг

С1и

Туг

А1а

Агд

Н1з

Рго

Азр

385

390

395

400

Туг

Зег

Уа1

Беи

Агд

Беи

А1а

Буз

ТЬг

Туг

С1и

ТНг

405

410

415

Беи

С1и

Буз

Суз

А1а

Азр

Рго

Ηίβ

С1и

Суз

Туг

А1а

Буз

420

425

4 30

Уа1

РНе

Азр

С1и

РЬе

Буз

Рго

Беи

Уа1

С1и

Рго

31 п

Азп

Беи

Г1е

435

440

445

Буз

С1п

Азп

Суз

Б1и

Беи

РЬе

С1и

С1п

Беи

С1у

С1и

Туг

Буз

РНе

С1п

450

455

4 60

Азп

А1а

Беи

Уа1

Агд

Туг

ТЬг

Буз

Уа1

Рго

51П

Уа1

Зег

ТЬг

4 65

470

475

480

Рго

ТЬг

Беи

Уа1

С1и

Уа1

Зег

Агд

Азп

Беи

С1у

Буз

Уа 1

С1у

Зег

Буз

485

490

495

Суз

Буз

ΗΪ3

Рго

С1и

А1а

Буз

Агд

Меб

Рго

Суз

А1а

<31и

Азр

туг

500

505

510

Беи

Зег

Уа1

Беи

Азп

С1п

Беи

Суз

Уа1

Беи

Н1з

С1и

Буз

ТЬг

Рго

515

520

525

Уа1

Зег

Азр

Агд

Уа1

ТЬг

Буз

Суз

ТНг

С1и

Зег

Беи

Уа1

Азп

Агд

530

535

540

Агд

Рго

Суз

РЬе

Зег

А1а

Беи

С1и

Уа1

Азр

С1и

ТЬг

Туг

Уа1

Рго

Буз

545

550

555

560

С1и

РНе

Азп

А1а

С1и

ТЬг

РЬе

ТНг

РНе

Н15

А1а

А5р

Не 1

Суз ТНг 1

Беи

5 65

570

575

Зег

<31и

Буз

С1и

Агд

С1п

Не 1

Буз Буз 61п ТЬг А1а 1

беи '

73.1 С1и 1

Беи

580

5Θ5

590

Уа1

Буз

Н13

Буз

Рго

Буз

А1а

ТЬг

Буз

С1и

С1п

Беи

Буз

А1а

Уа1

Меб

595

600

605

Азр

РЬе

А1а

РЬе

Уа1

С1и

Буз

Суз

Буз

А1а

Азр

Буз

610

615

620

С1и

ТНг

Суз

РНе

А1а

С1и

С1у

Буз

Беи

Уа1

А1а

Зег

С1п

625

630

635

640

А1а

Беи

С1у

Беи

645

<210> 2 <211> 31 <212> Белок <213> Ното ЗарБепз <220>

<221> ВАРИАНТ <222> 31 <223> Хаа = любая аминокислота <400> 2

Н13 1

А1а

С1и

С1у

ТЬг 5

РЬе

ТЬг

Зег

Азр

Уа1 10

Зег

Туг

Беи

С1и С1у 15

С1п

А1а

Буз

<31и

РЬе

Не

А1а

Тгр

Беи

Уа1

Буз

С1у

Агд

хаа

20

25

30

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims

1. Способ увеличения активности СЬР-1 у человека, который включает введение указанному чело

- 15 017159 веку композиции, содержащей полипептид с ОЬР-1 активностью и с аминокислотной последовательностью 8ЕО ГО N0:1, обеспечивающей максимальную концентрацию в плазме указанного полипептида по меньшей мере от приблизительно 8 до приблизительно 54 нМ 8Е0 ГО N0:1 и значение АИС(О-да) для указанного полипептида после введения однократной дозы по меньшей мере от приблизительно 99 до приблизительно 637 нМ х день.

2. Способ по п.1, дополнительно включающий введение указанному человеку по меньшей мере одной дозы композиции, содержащей полипептид с ОЬР-1 активностью и с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:1, содержащей от приблизительно 0,25 до приблизительно 104 мг.

3. Способ по п.2, где период полувыведения из сыворотки полипептида с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:1 является от приблизительно 4 до приблизительно 7 дней.

4. Способ по п.2, где значение Т_тах полипептида ОЬР-1 с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:1 составляет от приблизительно 1 до приблизительно 5 дней.

5. Способ по п.1, в котором указанный человек имеет гипергликемию.

6. Способ по п.1, в котором указанный человек имеет диабет.

7. Способ по п.1, в котором указанный человек имеет сахарный диабет типа II.

8. Способ по п.2, дополнительно включающий введение полипептида с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:1 один раз в неделю.

9. Способ по п.1, причем средневзвешенное значение АИС_0-24ч для глюкозы в плазме, определенное в виде изменения от базовой линии, по сравнению с плацебо у указанного человека клинически и статистически значительно уменьшено в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:1.

10. Способ по п.9, где средневзвешенное значение АИС_0-24ч для глюкозы в плазме, определенного в виде изменения от базовой линии, по сравнению с плацебо у указанного человека снижается по меньшей мере на приблизительно 20 мг/дл в течение курса лечения, составляющего по меньшей мере одну неделю после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью 8ЕО ГО N0:1.

11. Способ по п.1, где клинически и статистически значительно снижается содержание глюкозы в плазме натощак у указанного человека в виде изменения от базовой линии по сравнению с плацебо в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:1.

12. Способ по п.11, где снижается содержание глюкозы в плазме натощак у указанного человека по меньшей мере приблизительно на 7,0 мг/дл в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:1.

13. Способ по п.11, где снижается содержание глюкозы в плазме натощак у указанного человека по меньшей мере приблизительно на 4 мг/дл в виде изменения от базовой линии в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:1.

14. Способ по п.11, где снижается средневзвешенное значение АИС_0-4ч для глюкозы в плазме у указанного человека после приема пищи, определенное в виде изменения от базовой линии по меньшей мере на приблизительно 6,0 мг/дл в течение курса лечения, составляющего по меньшей мере одну неделю после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью 8ЕО ГО N0:1.

15. Способ по п.1, где содержание фруктозамина в плазме у указанного человека, определенное как изменение от базовой линии по сравнению с плацебо, снижается по меньшей мере приблизительно на 34 мкМ/л в течение периода, составляющего по меньшей мере две недели после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:1.

16. Способ лечения сахарного диабета типа II у человека, включающий введение указанному человеку фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:1, обеспечивающей максимальную концентрацию в плазме, указанного полипептида, составляющую по меньшей мере от приблизительно 8 до приблизительно 54 нМ и значение АИС(0-да) для указанного полипептида после введения однократной дозы по меньшей мере от приблизительно 99 до приблизительно 637 нМ х день.

17. Способ по п.16, в котором указанная композиция дополнительно включает маннит, трегалозы дигидрат, полисорбат 80 и фосфатный буфер.

18. Способ по п.17, дополнительно включающий введение полипептида с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:1 в концентрации 25 мг/мл.

19. Способ по п.17, дополнительно включающий подкожное введение полипептида с аминокислотной последовательностью 8Е0 ГО N0:1 в дозе от приблизительно 0,25 до приблизительно 104 мг.

20. Фармацевтическая композиция, способная увеличивать активность ОЬР-1 у человека, содержа

- 16 017159 щая полипептид с аминокислотной последовательностью 8ЕЦ ГО N0:1 и обеспечивающая максимальную концентрацию в плазме полипептида по меньшей мере от приблизительно 8 до приблизительно 54 нМ и значения ЛиС(0-да) для указанного полипептида после введения однократной дозы человеку, составляющее по меньшей мере от приблизительно 99 до приблизительно 637 нМ х день.

Фармакокинетический профиль 8ЕЦ ГО N0: 1 у субъектов с сахарным диабетом типа II. Средний (95%) график зависимости концентрации в плазме (нМ, ЕЫ8Л) от времени (в часах)

Воздействие 8ЕЦ ГО N0: 1 - коробчатые диаграммы воздействий (ЛиС(0-да)) по месту инъекции (живот, нога и рука) и дозе у субъектов с сахарным диабетом типа II