CN101516391A - 施用长效降血糖药的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及施用降血糖药和/或GLP－1激动剂的方法和药物组合物，其中所述降血糖药的平均最大血浆浓度(Cmax)数值和/或曲线下面积(AUC)数值升高和/或不变。

Description

施用长效降血糖药的方法

发明领域

本发明涉及施用长效降血糖药的方法和药物组合物，及使用具有GLP-1活性的化合物和/或GLP-1激动剂的治疗方案。

发明背景

降血糖药可用于治疗I型和II型糖尿病，以降低血液中的葡萄糖浓度。已有人暗示促胰岛素肽有可能成为治疗糖尿病的治疗剂。促胰岛素肽包括但不限于肠降血糖素激素(incretin hormones)，例如胃抑制性肽(gastric inhibitorypeptide，GIP)和胰高血糖素样肽-1(GLP-1)，及其片段、变体、和/或缀合物。促胰岛素肽还包括例如毒蜥外泌肽(exendin)3和毒蜥外泌肽4。GLP-1是一种由肠中的L细胞应答于食物摄取而分泌的、长36个氨基酸的肠降血糖素激素。已经显示，GLP-1以生理性和葡萄糖依赖性方式刺激胰岛素分泌，降低胰高血糖素分泌，抑制胃排空，降低食欲，和刺激β细胞增殖。在非临床实验中，GLP-1通过刺激对于葡萄糖依赖性胰岛素分泌重要的基因转录和通过促进β细胞新生来提升持续的β细胞感应性(competence)(Meier等，Biodrugs.2003；17(2)：93-102).

在健康个体中，GLP-1发挥重要的作用，即通过刺激胰腺的葡萄糖依赖性胰岛素分泌来调节餐后血液葡萄糖水平，导致外周葡萄糖吸收升高。GLP-1还遏制胰高血糖素分泌，导致肝葡萄糖输出降低。另外，GLP-1延迟胃排空并减缓小肠运动，以延迟食物吸收。

在II型糖尿病(T2DM)患者中，GLP-1的正常餐后上升缺失或降低(VilsbollT等，Diabetes.2001；50：609-613)。因而，施用外源GLP-1、肠降血糖素激素、或肠降血糖素模拟物的一个理由是增强、替换或补充内源GLP-1，以提高进餐相关胰岛素分泌、降低胰高血糖素分泌、和/或减缓胃肠运动。天然GLP-1具有很短的血清半衰期(＜5分钟)。因而，外源施用天然GLP-1作为糖尿病的治疗性处理目前是不可行的。商品化的肠降血糖素模拟物诸如Exenatide

在给T2DM患者皮下施用(5μg或10μg BID)后通过降低空腹和餐后葡萄糖浓度来改善血糖控制(glycemic control)。

如此，人们仍然需要开发这样的降血糖药施用方法，其中降血糖药的平均曲线下面积(AUC)数值能够得到维持或以其它方式得到改善，从而在维持治疗收益的同时减少所需的注射频率。

附图简要说明

图1。SEQ ID NO：1在II型糖尿病受试者中的药动学谱。血浆浓度(nMELISA)随时间(hr)的均值(95％)图。

图2。2型糖尿病患者中SEQ ID No：1浓度-暴露(AUC(_0-无穷))根据注射部位(腹部、腿部和臂部)和剂量的箱线图。

图3。SEQ ID NO：1。

发明概述

在本发明的一个实施方案中，提供了用于增强人体中的GLP-1活性的方法，该方法包括给所述人体施用包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物，其中所述多肽提供如下参数：所述多肽的最大血浆浓度为至少约0.6nM，所述多肽在一周时间段里的曲线下面积数值为至少约3.5nM x天。

在本发明的另一个实施方案中，提供了用于增强有所需要的人体中的GLP-1活性的方法，该方法包括给所述人体施用包含至少一种GLP-1激动剂的组合物，其中所述至少一种GLP-1激动剂提供如下参数：所述至少一种GLP-1激动剂的最大血浆浓度为至少约21.2pM；所述至少一种GLP-1激动剂在一周时间段里的曲线下面积数值为至少约149pM x天。

定义

“GLP-1激动剂”在用于本文时意为任何能够刺激和/或具有至少一种GLP-1活性的化合物或组合物，包括但不限于肠降血糖素激素和/或其片段、变体和/或缀合物及肠降血糖素模拟物和/或其片段、变体和/或缀合物。

“肠降血糖素激素”在用于本文时意为任何可加强胰岛素分泌或以其它方式提高胰岛素水平的激素。肠降血糖素激素的一个例子是GLP-1。GLP-1是由肠L细胞应答于食物摄取而分泌的肠降血糖素。在健康个体中，GLP-1发挥重要的作用，即通过刺激胰腺的葡萄糖依赖性胰岛素分泌来调节餐后血液葡萄糖水平，导致外周中葡萄糖吸收升高。GLP-1还遏制胰高血糖素分泌，导致肝葡萄糖输出降低。另外，GLP-1延迟胃排空时间并减缓小肠运动，以延迟食物吸收。GLP-1通过刺激牵涉葡萄糖依赖性胰岛素分泌的基因转录和通过促进β细胞新生来提升持续的β细胞感应性(Meier等，Biodrugs 2003；17(2)：93-102)。

“GLP-1活性”在用于本文时意为天然存在人GLP-1的一种或多种活性，包括但不限于降低血液和/或血浆葡萄糖、刺激葡萄糖依赖性胰岛素分泌或以其它方式提高胰岛素水平、遏制胰高血糖素分泌、降低果糖胺、提高对脑的葡萄糖投递和代谢、延迟胃排空、及提升β细胞感应性和/或新生。具有GLP-1活性的组合物或GLP-1激动剂可以直接地或间接地引起任何这些活性及其它与GLP-1活性有关的活性。举例而言，具有GLP-1活性的组合物可以直接地或间接地刺激葡萄糖依赖性，而对胰岛素生成的刺激可间接地降低哺乳动物中的血浆葡萄糖水平。

“肠降血糖素模拟物”在用于本文时是能够加强胰岛素分泌或以其它方式提高胰岛素水平的化合物。肠降血糖素模拟物可以能够在哺乳动物中刺激胰岛素分泌、提高β细胞新生、抑制β细胞凋亡、抑制胰高血糖素分泌、延迟胃排空和诱导饱满感。肠降血糖素模拟物可以包括但不限于任何具有GLP-1活性的多肽，包括但不限于毒蜥外泌肽3和毒蜥外泌肽4，包括它们的任何片段和/或变体和/或缀合物。

“降血糖药”在用于本文时意为任何能够降低血液葡萄糖的化合物或包含所述化合物的组合物。降血糖药可以包括但不限于任何GLP-1激动剂，包括肠降血糖素激素或肠降血糖素模拟物、GLP-1和/或其片段、变体和/或缀合物。其它降血糖药包括但不限于提高胰岛素分泌、(例如磺酰脲(SU)和氯茴苯酸(meglitinides))、抑制GLP-1分解(例如DPP-IV抑制剂)、提高葡萄糖利用(例如格列酮(glitazones)、噻唑烷二酮(TZD)和/或pPAR激动剂)、降低肝葡萄糖生成(例如二甲双胍(metformin))、和延迟葡萄糖吸收(例如α-葡糖苷酶抑制物)的药物。磺酰脲的例子包括但不限于醋酸己脲(acetohexamide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)、妥拉磺脲(tolazamide)、格列吡嗪(glipizide)、格列奇特(gliclazide)、格列本脲(glibenclamide)(glyburide)、格列喹酮(gliquidone)、和格列美脲(glimepiride)。格列酮的例子包括但不限于罗西格列酮(rosiglitazone)和吡格列酮(pioglitazone)。

“多核苷酸”一般指任何多聚核糖核苷酸或多聚脱氧核糖核苷酸，其可以是未修饰的RNA或DNA，或者是经过修饰的RNA或DNA。“多核苷酸”包括但不限于单链和双链DNA，由单链和双链区混合而成的或者由单链、双链和三链区混合而成的DNA，单链和双链RNA，由单链和双链区混合而成的RNA，包含DNA和RNA的杂合分子，其中DNA和RNA可以是单链的，或者更通常的是双链的，或者三链的区域，或单链和双链区的混合物。另外，“多核苷酸”在用于本文时指包含RNA或DNA或RNA和DNA二者的三链区。此类区域中的各条链可以来自相同分子或来自不同分子。所述区域可以包括所述分子中一个或多个的整个，但更通常的是只牵涉所述分子中某一些的某个区域。三股螺旋区的分子之一常常是寡核苷酸。在用于本文时，术语“多核苷酸”还包括包含一个或多个经修饰碱基的如上所述DNA或RNA。如此，主链为了稳定性或为了其它原因而经过修饰的DNA或RNA是“多核苷酸”，正如该术语在本文中所意谓的。此外，包含不常见碱基(诸如肌苷)或经修饰碱基(诸如三苯甲基化碱基)的DNA或RNA(只举两个例子)是多核苷酸，正如该术语在本文中所使用的。应当领会，已经对DNA和RNA进行了极其多种修饰，适合于本领域技术人员知道的许多有用目的。术语“多核苷酸”在用于本文时涵盖此类在化学、酶或代谢上修饰形式的多核苷酸，以及病毒和细胞(包括例如简单的和复杂的细胞)特征性的化学形式的DNA和RNA。“多核苷酸”还涵盖常常称作寡核苷酸的短多核苷酸。

“多肽”指任何包含两个或更多彼此通过肽键或经修饰肽键(即肽等排体)相连接的氨基酸的肽或蛋白质。“多肽”指短链(常常称作肽、寡肽或寡聚物)和较长链(一般称作蛋白质)二者。多肽可以包含20种由基因编码的氨基酸以外的氨基酸。“多肽”包括通过天然过程(诸如翻译后加工)或通过本领域公知的化学修饰技术得到修饰的氨基酸序列。此类修饰在基础教科书中及在更详细的专著中以及在卷帙浩繁的研究文献中有充分说明。修饰可以发生在多肽中的任何地方，包括肽主链、氨基酸侧链及氨基或羧基末端。应当领会，可以在给定多肽中的数个位点处存在相同或不同程度的相同类型修饰。还有，给定多肽可以包含许多类型的修饰。多肽可以因为遍在蛋白化而是分支的，而且它们可以是环状的，有或没有分支。环状的、分支的和分支环状的多肽可以是翻译后天然过程的结果，或者可以通过合成方法来生成。修饰包括乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价附着、血红素模块的共价附着、核苷酸或核苷衍生物的共价附着、脂质或脂质衍生物的共价附着、磷脂酰肌醇的共价附着、交联、环化、二硫键形成、脱甲基化、共价交联的形成、半胱氨酸的形成、焦谷氨酸(pyroglutamate)的形成、甲酰化、γ-羧化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、肉豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯基化(prenylation)、外消旋、硒化(selenoylation)、硫酸化、tRNA介导的氨基酸向蛋白质的添加诸如精氨酰化、和遍在蛋白化。参见例如PROTEINS-STRUCTURE AND MOLECULARPROPERTIES，第2版，T.E.Creighton，W.H.Freeman and Company，New York，1993及Wold，F.，Posttranslational Protein Modifications：Perspectives andProspects，pp.1-12，于POSTTRANSLATIONAL COVALENTMODIFICATION OF PROTEINS，B.C.Johnson，编，Academic Press，New York，1983；Seifter等，“Analysis for protein modifications and nonprotein cofactors”，Meth.Enzymol.(1990)182：626-646及Rattan等，“Protein Synthesis：Posttranslational Modifications and Aging”，Ann NY Acad Sci(1992)663：48-62。

术语“变体”在用于本文时是分别与参照多核苷酸或多肽有差异但保留本质特性的多核苷酸或多肽。典型的多核苷酸变体与另一参照多核苷酸在核苷酸序列上有差异。变体的核苷酸序列中的变化可以改变或不改变由参照多核苷酸所编码的多肽的氨基酸序列。核苷酸变化可以导致由参照序列所编码的多肽中的氨基酸替代、添加、删除、融合和截短，如下文所讨论的。典型的多肽变体与另一参照多肽在氨基酸序列中有差异。通常，差异是有限的，所以参照多肽和变体的序列在整体上是密切相似的且在许多区域中是相同的。变体和参照多肽可以因一处或多处任意组合的替代、添加、删除而在氨基酸序列中有差异。替代或插入的氨基酸残基可以是或不是由遗传密码编码的。多核苷酸或多肽的变体可以是天然存在的，诸如等位变体，或者，它可以是已知非天然存在的变体。多核苷酸和多肽的非天然存在变体可以通过诱变技术或通过直接合成来生成。变体还可以包括但不限于其一个或多个氨基酸侧链基团具有化学修饰的多肽或其片段。化学修饰包括但不限于添加化学模块、创建新的键、及消除化学模块。氨基酸侧链基团处的修饰包括但不限于赖氨酸ε-氨基的酰化，精氨酸、组氨酸或赖氨酸的N-烃基化(alkylation)，谷氨酸或天冬氨酸羧酸基团的烃基化，及谷氨酰胺或天冬酰胺的脱酰胺化。末端氨基的修饰包括但不限于去氨基、N-低级烃基(lower alkyl)、N-二-低级烃基、和N-酰基修饰。末端羧基的修饰包括但不限于酰胺、低级烃基酰胺、二烃基酰胺、和低级烃基酯修饰。另外，一个或多个侧链基团、或末端基团可以用蛋白质化学普通技术人员知道的保护基团来保护。

在用于本文时，“片段”在提及多肽使用时指其氨基酸序列与完整的天然存在多肽的一部分相同，但非整个相同的多肽。片段可以是“自立的”(free-standing)或者被包含在更大多肽内而构成该更大多肽的一部分或一个区域(以单一更大多肽中的单一连续区域的形式)。举例而言，天然存在GLP-1的片段可包括天然存在的氨基酸1-36中的氨基酸7-36。另外，多肽的片段也可以是天然存在的部分序列的变体。例如，包含天然存在GLP-1的氨基酸7-30的GLP-1片段也可以是在其部分序列内具有氨基酸替代的变体。

在用于本文时，“缀合物”或“缀合的”指彼此相结合的两个分子。例如，第一多肽可以共价地或非共价地结合第二多肽。第一多肽可以与化学接头共价结合，或者可以与第二多肽在基因上融合(genetically fused)，其中所述第一和第二多肽共享共同的多肽主链。

在用于本文时，“串联取向的”(tandemly oriented)指作为同一分子的一部分彼此相邻的两个或更多多肽。它们可以是共价地或非共价地相连接的。两个或更多串联取向的多肽可以构成同一多肽主链的一部分。串联取向的多肽可以具有顺的或反的取向，和/或可以由其它氨基酸序列分隔开。

在用于本文时，“降低”血液或血浆葡萄糖指在施用降血糖药后在患者的血液中观察到血液葡萄糖的量下降。血液或血浆葡萄糖的降低可以按照个体来测量和评估，或者可以作为一组受试者的变化均值来测量和评估。另外，可以对一组受治疗受试者测量和评估血液或血浆葡萄糖中的降低均值，即相对于基线的变化均值和/或与施用安慰剂的受试者的血液或血浆葡萄糖中的变化均值相比的变化均值。

在用于本文时，“增强GLP-1活性”或“GLP-1活性的增强”指一切(any andall)与天然存在的GLP-1的活性有关的活性升高。举例而言，GLP-1活性的增强可以在给受试者施用至少一种具有GLP-1活性的多肽之后加以测量，并与施用具有GLP-1活性的多肽之前的同一患者中的GLP-1活性比较或与施用安慰剂的第二受试者比较。

在用于本文时，“与血液葡萄糖升高有关的疾病”包括但不限于I型和II型糖尿病、葡萄糖耐受不良、高血糖症、和阿耳茨海默氏病(Alzheimer’s disease)。

在用于本文时，“共施用”在用于本文时指给同一患者施用两种或更多化合物。此类化合物的共施用可以是同时的或在大致相同的时间(例如在同一小时内)，或者可以是彼此相隔数小时或数天。例如，可以每周一次施用第一化合物，同时每天一次共施用第二化合物。

在用于本文时，“最大血浆浓度”或“Cmax”意为在给哺乳动物施用某物质(例如具有GLP-1活性的多肽或GLP-1激动剂)后在该哺乳动物的血浆中观察到的该物质的最高浓度。

在用于本文时，“曲线下面积”或“AUC”是某物质在血浆中的浓度对时间的曲线图中的曲线下面积。AUC可以是某时间区间里瞬间浓度的积分的度量，单位为质量x时间/体积，其也可以表述成摩尔浓度x时间，诸如nMx天。AUC典型地通过梯形法来计算(例如线性的、线性-对数)。通常给出零到无穷的时间区间的AUC，而指明其它时间区间(例如AUC(t1，t2)，其中t1和t2是区间的起始和终止时间)。如此，在用于本文时“AUC_0-24h”指在24小时时间段上的AUC，而“AUC_0-4h”指在4小时的时间段上的AUC。

在用于本文时，“AUC加权均值”(weighted mean AUC)是AUC除以计算该AUC的时间上的时间区间。例如，AUC_0-24h加权均值代表AUC_0-24h除以24小时。

在用于本文时，“置信区间”或“CI”是对应于给定概率p，测量或试验落在其中的区间，其中p指90％或95％CI且是在算术均值、几何均值、或最小二乘法均值周围计算得出的。在用于本文时，几何均值是自然对数换算的数值的均值，所述自然对数换算的数值通过取幂来反向换算，而最小二乘法均值同样可以是或不是几何均值，而是从使用固定效应(fixed effect)的方差(ANOVA)模型分析导出的。

在用于本文时，“变异系数(CV)”是分散的度量，而且定义为标准偏差对均值的比。它以百分比(％)来报告，即将上述计算结果乘以100(％CV)。

在用于本文时，“Tmax”指给哺乳动物施用某物质后观测到的该物质在该哺乳动物的血浆中达到最大浓度的时间。

在用于本文时，“血清或血浆半衰期”指给哺乳动物施用的物质中的半数通过正常生物学过程从哺乳动物的血清或血浆中被代谢或消除掉所需要的时间。

发明详述

在本发明的一个方面，提供了增强人体中的GLP-1活性的方法，该方法包括给所述人体施用包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物，其中所述多肽提供如下参数：所述多肽最大血浆浓度为至少约0.6nM；所述多肽在一周时间段里的曲线下面积数值为至少约3.5nM x天。正如本领域所理解的，可以采用各种方法来收集、测量和评估药动学数据，诸如血液、血浆和/或其它组织中的化合物浓度。同样如本领域所理解的，可以采用各种方法来收集、测量和评估各种药效学数据，诸如但不限于血液和/或血浆和/或其它组织中的葡萄糖、胰岛素、C肽、胰高血糖素和其它生物标志水平。依照本发明，至少一种具有GLP-1活性的多肽可以是GLP-1激动剂。GLP-1激动剂可以选自下组：肠降血糖素激素和/或其片段、变体和/或缀合物及肠降血糖素模拟物和/或其片段、变体和/或缀合物。肠降血糖素激素中包括人GLP-1和/或它们的片段、变体和/或缀合物。

本发明的一个实施方案包括可以是但不限于GLP-1或其片段、变体、和/或缀合物的多肽。本发明的GLP-1片段和/或变体和/或缀合物典型地具有至少一种GLP-1活性。GLP-1或其片段、变体、和/或缀合物可以包含人血清白蛋白。人血清白蛋白可以与GLP-1或其片段和/或变体偶联。人血清白蛋白可以在注射前与肠降血糖素激素(诸如GLP-1)和/或肠降血糖素模拟物(诸如毒蜥外泌肽3和毒蜥外泌肽4)和/或它们的片段和/或变体经由化学接头而缀合，或者，可以在体内与天然存在的人血清白蛋白化学连接(参见例如美国专利No.6,593,295和美国专利No.6,329,336，通过提及完整收入本文)。或者，可以将人血清白蛋白与GLP-1和/或它们的片段和/或变体或其它GLP-1激动剂诸如毒蜥外泌肽-3或毒蜥外泌肽-4和/或它们的片段和/或变体加以基因融合。与人血清白蛋白在基因上融合的GLP-1及其片段和/或变体的例子见下列PCT申请：WO 2003/060071，WO 2003/59934，WO 2005/003296，WO2005/077042(通过提及完整收入本文)。

具有GLP-1活性的多肽可以包含至少一个人GLP-1片段和/或变体。两个天然存在的人GLP-1片段呈现于SEQ ID NO：2。

7   8   9   10  11  12  13  14  15  16  17

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-

18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28

Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-

29  30  31  32  33  34  35  36  37

Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Xaa(SEQ ID NO：2)

其中：第37位Xaa是Gly(此后称作“GLP-1(7-37)”)或-NH₂(此后称作“GLP-1(7-36)”)。GLP-1片段可以包括但不限于包含人GLP-1的氨基酸7-36(GLP-1(7-36))或由其组成的GLP-1分子。GLP-1变体或其片段可以在野生型GLP-1中或者在SEQ ID NO：2所示的天然存在的GLP-1片段中包括但不限于一处、两处、三处、四处、五处或更多氨基酸替代。GLP-1变体或GLP-1片段可以包括但不限于与野生型GLP-1丙氨酸8同源的丙氨酸残基的替代，该丙氨酸被突变成甘氨酸(此后称作“A8G”)(参见例如美国专利No.5,545,618中披露的突变体，通过提及完整收入本文)。

在有些方面，至少一种GLP-1片段和变体包含GLP-1(7-36(A8G))，而且是基因融合于人血清白蛋白的。在一个进一步的实施方案中，本发明的多肽包含一个、两个、三个、四个、五个、或更多个串联取向的GLP-1和/或其片段和/或变体分子，其融合至人血清白蛋白或其变体的N端或C端。其它实施方案中是这样的A8G多肽融合至白蛋白或其变体的N端或C端。融合至人血清白蛋白的N端的两个串联取向的GLP-1(7-36)(A8G)片段和/或变体的一个例子包含SEQ ID NO：1，如图3所示。在另一方面，至少一种GLP-1片段和变体包含至少两个串联的GLP-1(7-36(A8G))，而且与人血清白蛋白基因融合。可以将至少两个GLP-1(7-36(A8G))基因融合于人血清白蛋白的N端。至少一种具有GLP-1活性的多肽可以包含SEQ ID No：1。

GLP-1(7-37)变体可以表述成例如：Glu²²-GLP-1(7-37)OH，其表示正常见于GLP-1(7-37)OH第22位的甘氨酸被替换为谷氨酸的GLP-1变体；Val⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，其表示正常见于GLP-1(7-37)OH第8位的甘氨酸和正常见于第22位的甘氨酸分别被替换为缬氨酸和谷氨酸的GLP-1化合物。GLP-1变体的例子包括但不限于：

Val⁸-GLP-1(7-37)OH     Gly⁸-GLP-1(7-37)OH    Glu²²-GLP-1(7-37)OH

Asp²²-GLP-1(7-37)OH    Arg²²-GLP-1(7-37)OH   Lys²²-GLP-1(7-37)OH

Cys²²-GLP-1(7-37)OH               Val⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH          Val⁸-Asp²²-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Arg²²-GLP-1(7-37)OH          Val⁸-Lys²²-GLP-1(7-37)OH          Val⁸-Cys²²-GLP-1(7-37)OH

Gly⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Asp²²-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Arg²²-GLP-1(7-37)OH

Gly⁸-Lys²²-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Cys²²-GLP-1(7-37)OH          Glu²²-GLP-1(7-36)OH

Asp²²-GLP-1(7-36)OH               Arg²²-GLP-1(7-36)OH               Lys²²-GLP-1(7-36)OH

Cys²²-GLP-1(7-36)OH               Val⁸-Glu²²-GLP-1(7-36)OH          Val⁸-Asp²²-GLP-1(7-36)OH

Val⁸-Arg²²-GLP-1(7-36)OH          Val⁸-Lys²²-GLP-1(7-36)OH          Val⁸-Cys²²-GLP-1(7-36)OH

Gly⁸-Glu²²-GLP-1(7-36)OH          Gly⁸-Asp²²-GLP-1(7-36)OH          Gly⁸-Arg²²-GLP-1(7-36)OH

Gly⁸-Lys²²-GLP-1(7-36)OH          Gly⁸-Cys²²-GLP-1(7-36)OH          Lys²³-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Lys²³-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Lys²³-GLP-1(7-37)OH          His²⁴-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-His²⁴-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-His²⁴-GLP-1(7-37)OH          Lys²⁴-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Lys²⁴-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Lys²³-GLP-1(7-37)OH          Glu³⁰-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-37)OH          Asp³⁰-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Asp³⁰-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Asp³⁰-GLP-1(7-37)OH          Gln³⁰-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Gln³⁰-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Gln³⁰-GLP-1(7-37)OH          Tyr³⁰-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Tyr³⁰-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Tyr³⁰-GLP-1(7-37)OH          Ser³⁰-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Ser³⁰-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Ser³⁰-GLP-1(7-37)OH          His³⁰-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-His³⁰-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-His³⁰-GLP-1(7-37)OH          Glu³⁴-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Glu³⁴-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Glu³⁴-GLP-1(7-37)OH          Ala³⁴-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Ala³⁴-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Ala³⁴-GLP-1(7-37)OH          Gly³⁴-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Gly³⁴-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Gly³⁴-GLP-1(7-37)OH          Ala³⁵-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Ala³⁵-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Ala³⁵-GLP-1(7-37)OH          Lys³⁵-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Lys³⁵-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Lys³⁵-GLP-1(7-37)OH          His³⁵-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-His³⁵-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-His³⁵-GLP-1(7-37)OH          Pro³⁵-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Pro³⁵-GLP-1(7-37)OH          Gly⁸-Pro³⁵-GLP-1(7-37)OH          Glu³⁵-GLP-1(7-37)OH

Gly⁸-Glu³⁵-GLP-1(7-37)OH          Val⁸-Ala²⁷-GLP-1(7-37)OH          Val⁸-His³⁷-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Glu²²-Lys²³-GLP-1(7-37)OH    Val⁸-Glu²²-Glu²³-GLP-1(7-37)OH    Val⁸-Glu²²-Ala²⁷-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Gly³⁴-Lys³⁵-GLP-1(7-37)OH    Val⁸-His³⁷-GLP-1-(7-37)OH         Gly⁸-His³⁷-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Glu²²-Ala²⁷-GLP-1(7-37)OH    Gly⁸-Glu²²-Ala²⁷-GLP-1(7-37)OH    Val⁸-Lys²²-Glu²³-GLP-1(7-37)OH

Gly⁸-Lys²²-Glu²³-GLP-1(7-37)OH    Val⁸-Glu³⁵-GLP-1(7-37)OH

GLP-1变体还可以包括但不限于其一个或多个氨基酸侧链具有化学修饰的GLP-1或GLP-1片段。化学修饰包括但不限于添加化学模块、创建新的键、及消除化学模块。氨基酸侧链基团处的修饰包括但不限于赖氨酸ε-氨基的酰化，精氨酸、组氨酸或赖氨酸的N-烃基化(N-alkylation)，谷氨酸或天冬氨酸羧酸基团的烃基化(alkylation)，及谷氨酰胺或天冬酰胺的脱酰胺化(deamidation)。末端氨基的修饰包括但不限于去氨基(des-amino)、N-低级烃基(N-lower alkyl)、N-二-低级烃基(N-di-lower alkyl)、和N-酰基修饰。末端羧基的修饰包括但不限于酰胺、低级烃基酰胺、二烃基酰胺、和低级烃基酯修饰。另外，一个或多个侧链基团、或末端基团可以用蛋白质化学普通技术人员知道的保护基团来保护。

GLP-1片段或变体还可以包括所述片段或变体的GLP-1(7-37)OH的N端和/或C端添加一个或多个氨基酸的多肽。N端或C端添加了氨基酸的GLP-1中的氨基酸以与GLP-1(7-37)OH中相应氨基酸相同的数字来表示。例如，通过在GLP-1(7-37)OH的N端添加两个氨基酸得到的GLP-1化合物的N端氨基酸位于第5位；而通过在GLP-1(7-37)OH的C端添加一个氨基酸得到的GLP-1化合物的C端氨基酸位于第38位。如此，这两种GLP-1化合物中第12位都由苯丙氨酸占据而第22位都由甘氨酸占据，正如GLP-1(7-37)OH中那样。N端添加了氨基酸的GLP-1的氨基酸1-6可以与位于GLP-1(1-37)OH相应位置的氨基酸相同或是其保守替代。C端添加了氨基酸的GLP-1的氨基酸38-45可以与位于胰高血糖素或毒蜥外泌肽-4相应位置的氨基酸相同或是其保守替代。

在本发明的另一方面，从每天一次到每月一次给人体施用包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物，而且可以每天一次、每两天一次、每三天一次、每七天一次、每14天一次、每四周一次和/或每月一次施用。在另一方面，给人体施用第一剂和第二剂包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物。所述第一剂和所述第二剂可以是相同的，或者可以是不同的。每一剂的至少一种具有GLP-1活性的多肽可以包含约0.25μg-约1000mg所述至少一种具有GLP-1活性的多肽。各剂可以包括但不限于0.25μg、0.25mg、1mg、3mg、6mg、16mg、24mg、48mg、60mg、80mg、104mg、20mg、400mg、800mg直至约1000mg所述至少一种具有GLP-1活性的多肽。

在本发明的另一方面，包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物所提供的具有GLP-1活性的多肽的最大血浆浓度为至少约0.6nM-约319nM，而具有GLP-1活性的多肽在一周时间段里的曲线下面积数值为至少约3.5-约1936nM x天。在有些情况中，具有GLP-1活性的多肽的血清半衰期是约4-约7天。在另一方面，具有GLP-1活性的多肽的Tmax数值是约1天-约5天。在有些情况中，包含所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物所提供的所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的最大血浆浓度为至少约8nM-约54nM，且所述至少一种具有GLP-1活性的多肽在一周时间段里的AUC(第1周)数值为至少约29nM x天-约245nM x天。在另一方面，包含所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物在单个剂量的所述至少一种具有GLP-1活性的多肽之后所提供的所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的最大血浆浓度为至少约8nM-约54nM，所提供的单剂后AUC(0-∞)数值为至少约99nM x天-约637nM x天。

依照本发明施用包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物的任何人体可以具有高血糖症、葡萄糖耐受不良、和/或糖尿病，其可以是T2DM。还提供了这样的方法，其中所述至少一种具有GLP-1活性的多肽降低所述人体中的血浆葡萄糖，其中在给T2DM人群样本施用所述包含所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物后，血浆葡萄糖的AUC_0-24h加权均值在约1周的时间段里与安慰剂相比显著降低。在给T2DM人群样本施用至少一剂所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物后至少一周的时程里，血浆葡萄糖的AUC_0-24h均值(其可以作为相对于基线的变化来测量)与施用安慰剂的受试者中的变化相比可以降低约20mg/dL(其95％置信区间(-32.4，-7.8))至至少约49mg/dL(其95％置信区间(-76.6，-21.4))或更多。血浆葡萄糖中的降低可以是剂量依赖性的。另外，所述至少一种具有GLP-1活性的多肽降低所述人体中的血浆葡萄糖，其中空腹血浆葡萄糖可以在给T2DM人群样本施用所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物后约一周的时间段里显著降低。在T2DM人群中，空腹血浆葡萄糖均值(作为相对于基线的变化来测量)与安慰剂相比可以降低约7mg/dL(其95％置信区间(-25.9，+11.2)至约50.7mg/dL(其95％置信区间(-75.4，-26.0))或更多。空腹血浆葡萄糖均值(作为相对于基线的变化来测量)可以降低约4mg/dL(其95％置信区间(-16.5，+8.2))至约35mg/dL(其95％置信区间(-54.1，-15.6))或更多。另外，在给T2DM人群样本施用至少一剂所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物后至少一周的时程里，餐后血浆葡萄糖(AUC_0-4h均值)与基线相比可以降低约6mg/dL(95％置信区间(-27.2，+14.9))至约53mg/dL(95％置信区间(-64.7，-40.8))或更多。还提供了这样的方法，其中与所述人体的安慰剂相比，所述具有GLP-1活性的多肽降低所述人体中的血浆果糖胺(作为相对于基线的变化)，在施用至少一剂所述包含所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物后至少两周的时程里降低了至少约34μM/L。本发明的具有GLP-1活性的多肽可以在所述人体的腿部、臂部、或腹部进行皮下施用。

本文中还提供了至少一种具有GLP-1活性的多肽在制备用于治疗与血液葡萄糖升高有关的疾病的药物中的用途，所述与血液葡萄糖升高有关的疾病包括但不限于II型糖尿病，其中所述多肽配制成供施用，以提供至少约0.6nM的所述多肽的最大血浆浓度和至少约3.5nM x天的所述多肽在一周时间段里的曲线下面积数值。

在另一个实施方案中，提供了用于增强人体中的GLP-1活性的方法，该方法包括给所述人体施用包含至少一种GLP-1激动剂的组合物，其中所述至少一种GLP-1激动剂所提供的所述至少一种GLP-1激动剂的最大血浆浓度为至少约21.2pM-约51.6pM或更大，所提供的所述至少一种GLP-1激动剂在一周时间段里的曲线下面积数值为至少约149pM x天-约361pM x天。在一个方面，GLP-1激动剂所提供的所述至少一种GLP-1激动剂的最大血浆浓度为至少约1.4nM，所提供的所述至少一种GLP-1激动剂在一周时间段里的曲线下面积数值为至少约8nM x天。GLP-1激动剂选自下组：肠降血糖素激素和/或其片段、变体和/或缀合物及肠降血糖素模拟物和/或其片段、变体和/或缀合物。在另一方面，至少一种GLP-1激动剂的血清半衰期是约4-约7天。所述至少一种GLP-1激动剂的Tmax数值是约1天-约5天。

在本发明的一个方面，接受至少一种GLP-1激动剂治疗的人体可患有高血糖症和/或糖尿病。所述人体可患有T2DM。

在另一个实施方案中，提供了这样的方法，其中所述包含所述GLP-1激动剂的组合物降低所述人体中的血浆葡萄糖，且其中所述人体的血浆葡萄糖的AUC_0-24h加权均值在施用所述包含至少一种GLP-1激动剂的组合物后约一周的时间段里在临床上和统计上显著降低。所述人体的安慰剂相比，作为相对于基线的变化而测量的血浆葡萄糖AUC_0-24h加权均值与在施用至少一剂所述包含至少一种GLP-1激动剂的组合物后至少一周的时程里可以降低至少约5mg/dL、10mg/dL、15mg/dL和/或20mg/dL。在其它方面，所述包含所述GLP-1激动剂的组合物降低所述人体中的血浆葡萄糖，其中所述人体的空腹血浆葡萄糖在施用所述包含至少一种GLP-1激动剂的组合物后约一周的时间段里在临床上和统计上显著降低。在另一方面，提供了这样的方法，其中所述包含GLP-1激动剂的组合物降低所述人体中的血浆葡萄糖，且其中餐后血浆葡萄糖在施用至少一剂所述包含至少一种GLP-1激动剂的组合物后降低。

在本发明的另一方面，每七天一次施用包含GLP-1激动剂的组合物。或者，可以每天一次、每两天一次、每三天一次、每两周一次、每四周一次和/或每月一次施用包含GLP-1激动剂的组合物。可以通过本领域已知的数种路径来施用GLP-1激动剂，包括但不限于皮下注射、肌肉内注射、静脉内注射、经粘膜、经口、和/或通过吸入。在本发明的另一方面，包含GLP-1激动剂的组合物进一步包含一种或多种选自下组的化合物：过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR)配体、噻唑烷二酮(例如格列酮)、二甲双胍、胰岛素、和磺酰脲。在另一方面，提供了这样的方法，其包括与一种或多种选自下组的化合物共施用至少一种GLP-1激动剂：过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR)配体、噻唑烷二酮、DPP-IV抑制剂、二甲双胍、胰岛素、和磺酰脲。包含至少一种GLP-1激动剂的组合物可以在至少一种具有GLP-1活性的多肽之外包含一种或多种这些化合物。另外，提供了用于降低有所需要的人体中的血液葡萄糖水平的方法，该方法包括给所述人体施用包含至少一种GLP-1激动剂的组合物，其中所述人体正在进行控制葡萄糖的节食(on a diet for controlling glucose)。

本发明还提供了至少一种GLP-1激动剂在制备用于治疗与血液葡萄糖升高有关的疾病的药物中的用途，所述与血液葡萄糖升高有关的疾病包括但不限于II型糖尿病，其中所述至少一种GLP-1激动剂配制成供施用，以提供至少约21.2pM的所述至少一种GLP-1激动剂最大血浆浓度和至少约149pM x的所述至少一种GLP-1激动剂在一周时间段里的曲线下面积数值。

本发明提供了使用如本文所述的GLP-1和具有GLP-1活性的多肽治疗与血液葡萄糖升高有关的疾病的方法，所述与血液葡萄糖升高有关的疾病包括但不限于II型糖尿病。还提供了GLP-1激动剂和具有GLP-1活性的多肽在制备药物中的用途，所述药物配制成供在本文所述的每一种治疗方法中施用。本文中还提供了能够增强人体中的GLP-1活性的药物组合物，其包含具有GLP-1活性的多肽和/或GLP-1激动剂，且配制成供本文所述方法和用途之用。

熟练技术人员会理解用于测量和计算本文所述药动学(例如但不限于Cmax、AUC、Tmax、血清半衰期)和药效学(例如但不限于血清、血浆和血液葡萄糖水平)参数的各种方法。另外，熟练技术人员会理解用于进行本文所述药动学和药效学参数的统计比较(例如但不限于自基线到治疗后的变化的比较和/或各治疗组间的比较)和/或分析的各种方法。另外，熟练技术人员会理解且能够采用用于收集和分析药动学、药效学和其它临床数据的各种其它方法。

实施例

下列实施例例示本发明的多个非限制性方面。对于下列实施例，除非另有说明，SEQ ID NO：1自含2.8％甘露醇、4.2％二水合海藻糖、0.01％聚山梨醇酯80、20mM pH7.2的磷酸盐缓冲液的冻干形式配制成25mg/mL。包含SEQ ID NO：1的组合物根据相应剂量给药的需要用注射用水稀释。

实施例1

这是一项单盲式、以安慰剂为对照的剂量上升研究，其中将包含SEQ IDNO：1(0.25mg-104mg)的药物组合物皮下施用于健康受试者的腹部。

有39名健康男性和女性受试者参加了研究。五组健康受试者通过腹部皮下注射接受如下两剂每周一次的、剂量上升的包含SEQ ID NO：1的药物组合物：第1组(0.25mg+1mg)；第2组(3mg+6mg)；第3组(16mg+24mg)；第4组(48mg+60mg)；和第5组(80mg+104mg)。在第1-4组中，有6名受试者随机化接受活性化合物，有2名受试者随机化接受安慰剂。在第5组中，有5名受试者随机化接受活性化合物，有2名受试者随机化接受安慰剂。这样，有29名受试者接受活性治疗，有10名受试者接受安慰剂。对包含SEQ ID NO：1的药物组合物的暴露在所测试的剂量范围里以大于与剂量成正比的方式增加。对于所有剂量，SEQ ID NO：1的半衰期是大约7天，Tmax范围为2-4天。

接受活性化合物的健康受试者中的药动学参数总结于表1。接受安慰剂的受试者的药动学数据未总结。AUC(Wk 1)表示自第一剂的时刻起至第一剂后一周时止计算得到的浓度对时间曲线下面积。AUC(Wk 2)表示自第二剂的时刻起至第二剂后一周时止计算得到的浓度对时间曲线下面积。Cmax(Wk 1)表示自第一剂的时刻起至第一剂后一周时止观察到的最大浓度。Cmax(Wk 2)表示自第二剂的时刻起至第二剂后一周时止观察到的最大浓度。

实施例2

这是在T2DM受试者中进行的一项单盲式、以安慰剂为对照的多剂量研究。有54名男性和女性受试者参加了研究。受试者或是接受了饮食控制，或是服用二甲双胍、磺酰脲、或二甲双胍与磺酰脲的组合。在研究开始之前就服用二甲双胍和/或磺酰脲的受试者在第一剂前2周从这些治疗中淘汰出去。受试者如下随机化接受腹部皮下注射每周一次、持续两周的安慰剂或包含SEQ ID NO：1的药物组合物：第1组(9mg+9mg；4名安慰剂，14名活性剂)；第2组(16mg+16mg；5名安慰剂，12名活性剂)；第3组(32mg+32mg；5名安慰剂，14名活性剂)。有40名受试者随机化接受活性剂治疗，有14名受试者随机化接受安慰剂。

有53名受试者完成了研究。第2组中有一名随机化接受活性剂治疗的受试者在施用第二剂(16mg)之前退出了研究。第2组中另有一名随机化接受活性剂的受试者只接受了第一剂(16mg)。这名受试者没有包括在药动学分析中。有3名受试者被错误给药(第3组中2名安慰剂受试者和1名随机化接受活性剂治疗的受试者(32mg))。被错误给药的受试者没有包括在任何药动学分析中。

对于所有剂量，SEQ ID NO：1的半衰期是大约4-6天。Tmax范围为服药后约1-约5天，没有明显的剂量依赖性。接受活性化合物的受试者的药动学参数总结于图1和表2。随机化接受安慰剂的受试者没有包括在图1或表2中。

实施例3

此实施例中提供了实施例2中所述受试者的药效学谱。受试者接受安慰剂或包含SEQ ID NO：1的药物组合物的皮下注射，如下每周一次、持续两周：第1组(9mg+9mg；4名安慰剂，14名活性剂)；第2组(16mg+16mg；5名安慰剂，12名活性剂)；第3组(32mg+32mg；5名安慰剂，14名活性剂)。受试者在第1天和第8天给药。评估了SEQ ID NO：1对T2DM受试者中的葡萄糖和果糖胺的效应。T2DM受试者或是在控制饮食或是在服用二甲双胍、磺酰脲、或二甲双胍和磺酰脲的组合，并自第一剂前2周起放弃了这些治疗。在基线及第一剂和第二剂后24小时评估了空腹和24小时葡萄糖谱。在基线和第3天、第21天和最后一次给药后随访(第56天或第63天)时评估了果糖胺。

所有接受正确随机化治疗的受试者都包括在药效学分析中。第2组中有1名受试者在第1天接受了正确给药，但在第二剂之前退出了。该受试者被包括在第8天之前收集的数据的药动学分析中，但被排除在第8天服药后的PD总结之外。有2名随机化接受安慰剂而被错误给药的受试者被排除在所有药效学分析之外。第3组中有1名随机化接受32mg活性化合物的受试者被错误给药，且被排除在所有药效学分析之外。

在所有剂量水平上均观察到24小时葡萄糖加权均值和空腹血浆葡萄糖(FPG)浓度在临床上和统计上显著降低。葡萄糖数据显示于表3。

在给药后第13天和第21天在所有剂量水平都看到果糖胺的显著降低。由于SEQ ID NO：1的估计半衰期，预期最后一次随访(第56天或第63天)不会有降低。接受活性化合物的T2DM受试者中的果糖胺与安慰剂受试者的比较总结于表4。

实施例4

这是在健康志愿者和T2DM受试者中进行的一项标签开放式(open-label)、随机化的单剂量研究。有62名男性和女性受试者参加了研究。T2DM受试者或是在进行饮食控制，或是在服用二甲双胍或噻唑烷二酮，且在整个研究过程继续进行他们先前的治疗。T2DM受试者通过皮下注射接受包含SEQ ID NO：1的药物组合物，其为16mg(腹部(N＝8)；臂部(N＝7)；或腿部(N＝7))或64mg(腹部(N＝8)；臂部(N＝8)；或腿部(N＝8))的单剂。健康志愿者通过腹部皮下注射接受16mg(N＝8)或64mg(N＝8)活性化合物。这样，有16名健康的正常志愿者接受活性化合物，有46名T2DM受试者接受活性化合物。

在T2DM受试者中，所有注射部位之间暴露是相当的，而且暴露以稍大于正比的方式增加。暴露在健康受试者和T2DM受试者之间是相当的。浓度谱和AUC箱线图分别呈现于图1和图2。药动学参数总结于表5。AUC(Wk 1)表示自给药的时刻起至给药后一周时止计算得到的浓度对时间曲线下面积。AUC(0-∞)表示自服药的时刻起根据SEQ ID NO：1的清除速率外推至无穷时间的浓度对时间曲线下面积。对于6名接受16mg剂量水平的受试者，可用的数据无法估算SEQ ID NO：1的清除速率。因此，不可能外推至无穷时间，也没有为这些受试者计算AUC(0-∞)。

实施例5

此实施例中提供了实施例4中所述受试者的药效学谱。在此研究中调查了单个剂量的包含SEQ ID NO：1的药物组合物的药效学谱，包括SEQ IDNO：1对T2DM受试者中的葡萄糖、胰岛素、胰高血糖素和C肽的效应。T2DM受试者或是在控制饮食，或是在服用二甲双胍或噻唑烷二酮，且在整个研究中继续进行先前的治疗。受试者如下接受单个剂量的包含SEQ ID NO：1的药物组合物：对16名健康的正常志愿者通过腹部皮下注射施用单剂16mg或64mg，或者对46名T2DM在臂部、腿部或腹部施用单剂16mg或64mg，如实施例4所述。给药后48小时在早餐前评估空腹葡萄糖。在给药后48小时在早餐后4小时里评估餐后(4小时)葡萄糖谱。

每个施用剂量的葡萄糖降低在各注射部位间是一致的。在64mg的剂量观察到餐后葡萄糖(4小时葡萄糖加权均值)和空腹血浆葡萄糖(FPG)在临床上和统计上显著的降低。葡萄糖数据显示于表6。

本申请要求优先权的任何专利申请都通过提及以上文关于某些出版物和参考文献所述方式完整收入本文。

序列表

<110>史密丝克莱恩比彻姆公司(SmithKline Beecham Corporation)

<120>施用长效降血糖药的方法

<130>PU62137

<140>Unknown

<141>2007-09-12

<150>60/825,472

<151>2006-09-13

<160>2

<170>FastSEQ for Windows Version 4.0

<210>1

<211>645

<212>PRT

<213>人类(Homo Sapiens)

<400>1

His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly

 1               5                  10                  15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg His Gly

            20                  25                      30

Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala

        35                  40                      45

Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Asp Ala His Lys

    50                  55                      60

Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys

65                  70                  75                  80

Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe

                85                  90                  95

Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr

            100                 1051                    110

Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr

        115                 120                     125

Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr

    130                 135                     140

Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu

145                 150                     155             160

Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val

                165                     170                 175

Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu

            180                     185                 190

Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr

        195                     200                 205

Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala

    210                     215                 220

Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro

225                     230                 235             240

Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln

                    245                 250                255

Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys

                260                 265                 270

Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe

            275                 280                 285

Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu

        290                 295                 300

Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu

    305                 310                 315             320

Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys

                    325                 330                 335

Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu

                340                 345                 350

Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp

            355                 360                 365

Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp

    370                 375                 380

Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp

385                 390                 395                 400

Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr

                405                 410                 415

Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys

            420                 425                 430

Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile

        435                 440                 445

Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln

    450                 455                 460

Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr

465                 470                 475                 480

Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys

                485                 490                 495

Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr

            500                 505                 510

Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro

        515                 520                 525

Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg

    530                 535                 540

Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys

545                 550                 555                 560

Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu

                565                 570                 575

Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu

            580                 585                 590

Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met

        595                 600                 605

Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys

    610                 615                 620

Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser Gln

625                 630                 635                 640

Ala Ala Leu Gly Leu

                645

<210>2

<211>31

<212>PRT

<213>人类(Homo Sapiens)

<220>

<221>变体

<222>31

<223>Xaa＝任一种氨基酸

<400>2

His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly

 1               5                  10                  15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Xaa

            20                  25                  30

Claims (47)

1.一种用于增强人体中GLP-1活性的方法，该方法包括给所述人体施用包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物，其中所述多肽提供：所述多肽的最大血浆浓度为至少约0.6nM；所述多肽在一周时间段里的曲线下面积数值为至少约3.5nM x天。

2.权利要求1的方法，其中所述至少一种具有GLP-1活性的多肽包含至少一种GLP-1激动剂。

3.权利要求2的方法，其中所述至少一种GLP-1激动剂选自下组：肠降血糖素激素和/或其片段、变体和/或缀合物，及肠降血糖素模拟物和/或其片段、变体和/或缀合物。

4.权利要求1的方法，其中所述至少一种具有GLP-1活性的多肽包括至少一种与人血清白蛋白融合的人GLP-1片段和/或变体。

5.权利要求4的方法，其中所述至少一种GLP-1片段和变体包括GLP-1(7-36(A8G))。

6.权利要求5的方法，其中所述至少一种GLP-1片段和变体与人血清白蛋白在基因上融合。

7.权利要求6的方法，其中所述至少一种GLP-1片段和变体包含至少两个串联的GLP-1(7-36(A8G))，并且与人血清白蛋白在基因上融合。

8.权利要求7的方法，其中所述至少两个GLP-1(7-36(A8G))与人血清白蛋白的N末端在基因上融合。

9.权利要求1的方法，其中所述至少一种具有GLP-1活性的多肽包含SEQID No：1。

10.权利要求1的方法，其中每七天一次给所述人体施用所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物。

11.权利要求1的方法，其中每14天一次给所述人体施用所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物。

12.权利要求1的方法，其中每4周一次给所述人体施用所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物。

13.权利要求1的方法，其中每月一次给所述人体施用所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物。

14.权利要求1的方法，其中给所述人体施用所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物的第一剂和第二剂。

15.权利要求14的方法，其中所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物的第一剂和第二剂是相同的。

16.权利要求14的方法，其中所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物的第一剂包含约0.25mg-约1000mg的至少一种具有GLP-1活性的多肽。

17.权利要求14的方法，其中所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物的第二剂包含约0.25mg-约1000mg的至少一种具有GLP-1活性的多肽。

18.权利要求1的方法，其中所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物提供：所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的最大血浆浓度为至少约0.6nM-约319nM；所述至少一种具有GLP-1活性的多肽在一周时间段里的曲线下面积数值为至少约3.5nM x天-约1936nM x天。

19.权利要求1的方法，其中所述包含所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物提供：所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的最大血浆浓度为至少约8nM-约54nM；所述至少一种具有GLP-1活性的多肽在一周时间段里的AUC(第1周)数值为至少约29nM x天-约245nM x天。

20.权利要求1的方法，其中所述包含所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物提供：所述至少一种具有GLP-1活性的多肽最大血浆浓度为至少约8nM-约54nM，所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的在一周时间段里的单剂后AUC(0-∞)数值为至少约99nM x天-约637nM x天。

21.权利要求1的方法，其中所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的血清半衰期是约4天-约7天。

22.权利要求1的方法，其中所述至少一种具有GLP-1活性的多肽的Tmax数值是约1天-约5天。

23.权利要求1的方法，其中所述人体具有高血糖症。

24.权利要求1的方法，其中所述人体具有糖尿病。

25.权利要求23的方法，其中所述人体具有II型糖尿病。

26.权利要求25的方法，其中所述至少一种具有GLP-1活性的多肽降低所述人体中的血浆葡萄糖，其中作为相对于基线的变化而测量的血浆葡萄糖AUC_0-24h加权均值在施用所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物后约1周的时间段内与所述人体的安慰剂相比在临床上和统计上显著降低。

27.权利要求26的方法，其中作为相对于基线的变化而测量的血浆葡萄糖AUC_0-24h加权均值在施用至少一剂所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物后至少一周的时程里与所述人体的安慰剂相比降低了至少约20mg/dL。

28.权利要求25的方法，其中所述至少一种具有GLP-1活性的多肽降低所述人体中的血浆葡萄糖，其中作为相对于基线的变化而测量的空腹血浆葡萄糖在施用所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物后约1周的时间段里与所述人体的安慰剂相比在临床上和统计上显著降低。

29.权利要求28的方法，其中所述作为相对于基线的变化而测量的空腹血浆葡萄糖在施用至少一剂所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物后至少一周的时程里与所述人体的安慰剂相比降低了至少约7.0mg/dL。

30.权利要求25的方法，其中所述作为相对于所述人体的基线的变化而测量的空腹血浆葡萄糖在施用至少一剂所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物后至少一周的时程里降低了至少约4mg/dL。

31.权利要求25的方法，其中所述至少一种具有GLP-1活性的多肽降低所述人体中的血浆葡萄糖，其中作为相对于所述人体的基线的变化而测量的餐后血浆葡萄糖AUC_0-4h在施用至少一剂所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物后至少一周的时程里降低了至少约6.0mg/dL。

32.权利要求25的方法，其中所述至少一种具有GLP-1活性的多肽降低所述人体中的果糖胺，其中作为相对于基线的变化的血浆果糖胺与所述人体的安慰剂相比在施用至少一剂所述包含至少一种具有GLP-1活性的多肽的组合物后至少两周的时程里降低了至少约34μM/L。

33.权利要求25的方法，其中在所述人体的腿部、臂部、或腹部用所述具有GLP-1活性的多肽进行皮下施用。

34.一种用于增强人体中的GLP-1活性的方法，该方法包括给所述人体施用包含至少一种GLP-1激动剂的组合物，其中所述至少一种GLP-1激动剂提供：所述至少一种GLP-1激动剂的最大血浆浓度为至少约21.2pM，所述至少一种GLP-1激动剂在一周时间段里的曲线下面积数值为至少约149pM x天。

35.权利要求34的方法，其中所述至少一种GLP-1激动剂提供：所述至少一种GLP-1激动剂的最大血浆浓度为至少约1.4nM，所述至少一种GLP-1激动剂在一周时间段里的曲线下面积数值为至少约8nM x天。

36.权利要求34的方法，其中所述至少一种GLP-1激动剂选自下组：肠降血糖素激素和/或其片段、变体和/或缀合物，及肠降血糖素模拟物和/或其片段、变体和/或缀合物。

37.权利要求34的方法，其中所述至少一种GLP-1激动剂的血清半衰期是约4天-约7天。

38.权利要求34的方法，其中所述至少一种GLP-1激动剂的Tmax数值是约1天-约5天。

39.权利要求34的方法，其中所述人体具有高血糖症。

40.权利要求34的方法，其中所述人体具有糖尿病。

41.权利要求40的方法，其中所述人体具有II型糖尿病。

42.权利要求34的方法，其中所述至少一种GLP-1激动剂降低所述人体中的血浆葡萄糖，其中所述人体的血浆葡萄糖AUC_0-24h加权均值在施用包含所述至少一种GLP-1激动剂的所述组合物后约1周的时间段里在临床上和统计上显著降低。

43.权利要求34的方法，其中所述至少一种GLP-1激动剂降低所述人体的血浆葡萄糖，其中所述人体的空腹血浆葡萄糖在施用包含所述至少一种GLP-1激动剂的所述组合物后约1周的时间段里在临床上和统计上显著降低。

44.权利要求34的方法，其中所述至少一种GLP-1激动剂降低所述人体的血浆葡萄糖，其中所述人体的餐后血浆葡萄糖在施用包含所述至少一种GLP-1激动剂的所述组合物后约1周的时间段里在临床上和统计上显著降低。

45.权利要求34的方法，其中以选自下组的给药方案施用所述包含所述至少一种GLP-1激动剂的组合物：每天一次、每两天一次、每三天一次、每七天一次、每四周一次、和每月一次。

46.一种能够增强人体中的GLP-1活性的药物组合物，其包含至少一种具有GLP-1活性的多肽，其中所述多肽在施用给人体时提供：所述多肽的最大血浆浓度为至少约0.6nM，所述多肽在一周时间段里的曲线下面积数值为至少约3.5nM x天。

47.一种能够增强人体中的GLP-1活性的药物组合物，其包含至少一种GLP-1激动剂，其中所述至少一种GLP-1激动剂提供：所述至少一种GLP-1激动剂的最大血浆浓度为至少约21.2pM，所述至少一种GLP-1激动剂在一周时间段里的曲线下面积数值为至少约149pM x天。

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