EA015671B1

EA015671B1 - Производные бензофуранила как ингибиторы 5-нт6-рецептора

Info

Publication number: EA015671B1
Application number: EA200800071A
Authority: EA
Inventors: Патриция Кальдирола; Гари Йоханссон; Лори Сутин
Original assignee: Биовитрум Аб (Пабл)
Priority date: 2005-06-17
Filing date: 2006-06-15
Publication date: 2011-10-31
Also published as: CA2610383A1; ES2330145T3; US20060293361A1; IL187575A0; NZ563510A; CN101193885A; EP1896460A1; EP1896460B1; CN101193885B; JP2008543813A; IL187575A; NO20080354L; DE602006008002D1; DK1896460T3; MX2007015988A; WO2006134150A1; ZA200710468B; EA200800071A1; AU2006259082B2; US7582767B2

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), где Rи Rопределены в описании; к фармацевтическим препаратам, включающим данные соединения, и к применению соединений для профилактики и лечения болезненных состояний, относящихся к ожирению, диабету II типа и/или для уменьшения массы тела и снижения увеличения массы тела.

Description

Область техники

Настоящее изобретение относится к замещенным сульфонамидным соединениям, к фармацевтическим препаратам, включающим данные соединения и к применению данных соединений для профилактики и лечения болезненных состояний, относящихся к ожирению, диабету II типа и/или для уменьшения массы тела и снижения увеличения массы тела, а также в косметических целях.

Уровень техники

Ожирение представляет собой состояние, характеризующееся увеличением содержания жира в организме, приводящим к избыточной по сравнению с общепринятыми нормами массе тела. Ожирение является наиболее важным расстройством питания в западном мире и представляет собой наиболее важную проблему со здоровьем во всех индустриальных странах. Данное расстройство приводит к росту смертности вследствие увеличения частоты заболеваний, таких как сердечно-сосудистое заболевание, заболевание пищеварительного тракта, заболевание легких, рак и диабет II типа. Поиск соединений, которые снижают массу тела, продолжается в течение многих десятилетий. Одно направление исследований заключалось в активации серотонинергических систем либо путем прямой активации подтипов рецептора серотонина, либо путем ингибирования обратного захвата серотонина. Однако точный профиль требуемого подтипа рецептора неизвестен.

Серотонин (5-гидрокситриптамин или 5-НТ), ключевой медиатор периферической и центральной нервной системы, модулирует широкий спектр физиологических и патологических функций, включая тревогу, регуляцию сна, агрессию, питание и депрессию. Идентифицированы и клонированы многочисленные подтипы рецепторов серотонина. Один из них, 5-НТ₆-рецептор, был клонирован несколькими группами в 1993 (Киа!, М. е! а1. (1993) Вюсйет. Вюрйук. Кек. Соттип. 193: 268-276; 8еЬЬеп, М. е! а1. (1994) ИеигоКерог! 5: 2553-2557). Данный рецептор позитивно связан с аденилилциклазой и проявляет сродство к антидепрессантам, таким как клозапин. Недавно был описан эффект агониста 5-НТ₆ и антисмысловых олигонуклеотидов 5-НТ₆ по снижению потребления пищи крысами (Веп!1еу, 1.С. е! а1. (1999) Вг 1 Рйагтас. 8ирр1. 126, Р66; Веп!1еу, 1.С. е! а1. (1997) 1. Ркусйорйагтасо1. 8ирр1. А64, 255; ^оо11еу М.Ь. е! а1. (2001) Иеигорйагтасо1оду).

Идентифицированы соединения с повышенным сродством и селективностью к 5-НТ₆-рецептору, например, в \УО 00/34242 и в работе Наас, М. е! а1. (2006) 6-В|сус1ор|регахту1-1-агу18и1Гопу1т<1о1е8 апб 6В1сус1ор1рег1бту1-1-агуки1Гопу1шбо1ек бепуаОсек ак поуе1, ро!еп! апб ке1ес!1уе 5-НТ₆ гесер!ог ап!адошк!к. Вюогдашс & Меб1ста1 Сйет1к!гу Ье!!егк 10: 1719-1721 (2000).

XV О 2004/000828 и XVО 02/100822, оба на имя Вюуйгцт АВ, раскрывают сульфонамидные производные, которые связываются с 5-НТ6-рецептором и которые могут быть использованы для лечения болезненных состояний, относящихся к ожирению, диабету II типа.

Однако сульфонамидные производные по настоящему изобретению ранее описаны не были.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 представлены данные по влиянию на массу тела терапии соединением примера 1.

На фиг. 2 - данные по влиянию на потребление пищи терапии соединением примера 1.

Описание изобретения

Неожиданно было найдено, что соединения формулы (I) проявляют сродство и селективность к 5НТ6-рецептору в качестве антагонистов в низком наномолярном диапазоне, причем данные сродство и селективность являются неожиданно высокими по сравнению с соединениями, известными из уровня техники. Соединения по изобретению и их фармацевтически приемлемые соли обладают активностью антагонистов, агонистов и частичных агонистов 5-НТ₆-рецептора и, как полагают, потенциально могут найти применение для лечения или профилактики ожирения, диабета II типа, для уменьшения массы тела и снижения увеличения массы тела, а также для лечения или профилактики расстройств центральной нервной системы. Уменьшение массы тела и снижение увеличения массы тела (например, лечение расстройств, связанных с массой тела) достигается помимо прочего путем уменьшения потребления пищи. Использованный здесь термин расстройства, связанные с массой тела относится к расстройствам, вызванным дисбалансом между потреблением энергии и расходом энергии, приводящим к отклоняющейся от нормы (например, избыточной) массе тела. Такие расстройства, связанные с массой тела, включают ожирение.

Соединения формулы (I)

Целью настоящего изобретения является соединение формулы (I)

- 1 015671 или его фармацевтически приемлемая соль, где К.¹ представляет метокси и К² представляет метил; либо К¹ представляет метокси и К² представляет гидроксиметил; либо К¹ представляет гидроксил и К²представляет метил. Соединения формулы (I) могут быть использованы сами по себе или, где когда удобно, как их фармацевтические приемлемые соли (кислые или основные аддитивные соли). Подразумевается, что фармацевтически приемлемые аддитивные соли, упомянутые выше, включают терапевтически активные нетоксичные соли присоединения кислоты и основания (аддитивные формы солей), которые способны образовывать данные соединения. Соединения, которые обладают основными свойствами, могут быть переведены в их фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли обработкой основной формы подходящей кислотой. Типовые кислоты включают неорганические кислоты, такие как хлористый водород, бромистый водород, йодистый водород, серная кислота, фосфорная кислота; и органические кислоты, такие как уксусная кислота, пропановая кислота, гидроксиуксусная кислота, молочная кислота, пировиноградная кислота, гликолевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, щавелевая кислота, бензолсульфоновая кислота, толуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, трифторуксусная кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, винная кислота, лимонная кислота, салициловая кислота, п-аминосалициловая кислота, памовая кислота, бензойная кислота, аскорбиновая кислота и тому подобное. Типичными основно-аддитивными формами солей являются натриевые, калиевые, кальциевые соли и соли с фармацевтически приемлемыми аминами, такими как, например, аммиак, алкиламины, бензатин, и аминокислотами, такими как, например, аргинин и лизин. Использованный здесь термин аддитивная соль также включает сольваты, которые способны образовывать данные соединения и их соли, такие как, например, гидраты, алкоголяты и тому подобное.

Для клинического применения соединения изобретения составляют в фармацевтические препараты для перорального, ректального, парентерального или другого способа введения. Фармацевтические препараты обычно получают смешением активного вещества или его фармацевтически приемлемой соли с обычными фармацевтическими эксципиентами. Препараты могут быть получены далее известными способами, такими как гранулирование, сжатие, микроинкапсулирование, нанесение распылением и так далее. Препараты могут быть получены обычными способами в виде лекарственных форм - таблеток, капсул, гранул, порошков, сиропов, суспензий, суппозиториев или инъекций. Жидкие препараты могут быть получены растворением или суспендированием активного вещества в воде или других подходящих наполнителях. Таблетки и гранулы могут быть покрыты слоем покрытия обычным способом.

Другой целью настоящего изобретения является вышеуказанное соединение для применения в терапии.

Другой целью настоящего изобретения является вышеуказанное соединение для применения в лечении или профилактике расстройства, связанного с 5-НТ₆-рецептором, такого как ожирение, диабет II типа и/или для уменьшения массы тела и снижения увеличения массы тела.

Другой целью настоящего изобретения является фармацевтический препарат, включающий вышеуказанное соединение в качестве активного ингредиента в комбинации с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

Другой целью настоящего изобретения является фармацевтический препарат, включающий вышеуказанное соединение для применения в лечении или профилактике расстройства, связанного с 5-НТ₆рецептором, такого как ожирение, диабет II типа и/или для уменьшения массы тела и снижения увеличения массы тела.

Другой целью настоящего изобретения является способ лечения или профилактики расстройства, связанного с 5-НТ₆-рецептором, такого как ожирение, диабет II типа и/или для уменьшения массы тела и снижения увеличения массы тела, который включает введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества вышеуказанного соединения.

Другой целью настоящего изобретения является способ модулирования активности 5-НТ₆рецептора, включающий введение нуждающемуся в нем субъекту эффективного количества вышеуказанного соединения.

Другой целью настоящего изобретения является применение вышеуказанного соединения для изготовления медикамента для использования в лечении или профилактике расстройства, связанного с 5НТ₆-рецептором, такого как ожирение, диабет II типа и/или для уменьшения массы тела и снижения увеличения массы тела.

Описанные здесь способы могут также включать стадии идентификации того, что субъект нуждается в лечении ожирения, диабета II типа или же нуждается в уменьшении массы тела и снижении увеличения массы тела.

Изобретение далее относится к применению в косметических целях одного или нескольких соединений любой из описанных здесь формул для того, чтобы вызвать снижение массы, а также фармацевтических препаратов, содержащих указанные соединения.

Кроме того, изобретение относится к нетерапевтическому способу улучшения внешнего вида тела млекопитающего, включающего человека, где способ включает пероральное введение указанному млекопитающему одного или нескольких соединений любой из описанных здесь формул.

Эффективное количество относится к количеству соединения, которое оказывает терапевтиче

- 2 015671 ский эффект у подвергнутого лечению субъекта. Терапевтический эффект может быть объективным (то есть измеримым в определенном испытании или по определенному маркеру) или субъективным (то есть субъект указывает на или чувствует эффект).

Для клинического применения соединения изобретения составляют в фармацевтические препараты для перорального, ректального, парентерального или другого способа введения. Обычно количество активных веществ находится в диапазоне 0,1-95 мас.% препарата, предпочтительно в диапазоне 0,2-20 мас.% в препаратах для парентерального применения и предпочтительно в диапазоне от 1 до 50 мас.% в препаратах для перорального введения.

Типичная дневная доза активного вещества изменяется в широком диапазоне и будет зависеть от различных факторов, таких как, например, индивидуальные требования каждого пациента и путь введения. В целом пероральные и парентеральные дозировки будут находиться в диапазоне от 50 до 300 мг активного вещества в день, предпочтительно от 50 до 150 мг в день.

Способы получения

В другом аспекте изобретение относится к способам получения соединений любой из указанных здесь формул, включающим взаимодействие любого одного или нескольких соединений описанных здесь формул, включающим любые описанные здесь приемы. Соединения вышеуказанных формул могут быть получены обычными способами или по аналогии с ними и особенно согласно нижеприведенным способам или по аналогии с ними.

Соединения, используемые в вышеописанном синтетическом пути, могут включать, например, растворители, реагенты, катализаторы, защитные группы и реагенты удаления защитных групп. Вышеописанные способы могут также дополнительно включать стадии (либо до, либо после конкретно описанных здесь стадий) введения или удаления подходящих защитных групп, чтобы, в конечном счете, провести синтез соединений любой из вышеописанных формул, их солевых форм или препаратов, которые включают данные соединения или их солевые формы. Кроме того, для получения желаемых соединений могут быть реализованы различные синтетические пути в альтернативной последовательности или альтернативном порядке. Трансформации синтетической химии и методики работы с защитными группами (введение и удаление защиты), пригодные для использования в синтезе подходящих соединений, известны из уровня техники и включают, например, такие, которые описаны в работах Я. Ьагоск, Сотргейеп81уе Огдашс ТгапкГогтабопк, УСН РиЬйкйегк (1989); Т.У. Огееие апб Р.О.М. ХУиК Рго1есйуе Огоирк ίη Огдашс 8уп1йеы8, 2'¹ Еб., 1о1т ХУбеу апб 8опк (1991); Ь. Е1екег апб М. Е1екег, Е1екег апб Некег'к Яеадеп18 £ог Огдашс 8уШ11е818. 1о1т ХУбеу апб 8опк (1994); и Ь. Расщепе, еб., Епсус1ореб1а о£ ЯеадеШк £ог Огдашс 8уп111е818.1о1т ХУбеу апб 8опк (1995), и более поздние их издания.

Приведенные ниже конкретные примеры следует интерпретировать как иллюстративные и никоим образом не ограничивающие раскрытие. Не вдаваясь в дополнительные уточнения, предполагается, что специалист в данной области техники сможет, основываясь на приведенном здесь описании, использовать настоящее изобретение во всей его полноте. Все публикации, процитированные здесь, включены в виде ссылки во всей их полноте.

Пример 1.

М-[7-(4-пиперидинил)окси-1-бензофуран-5-ил]-2-метокси-5-метилбензолсульфонамид

Соединение примера 1 было получено следующим образом: 7-иод-Ы-(2-метокси-5-метилфенил)-1-бензофуран-5-сульфонамид получали, исходя из 2,3дигидробензофурана. Обработка хлорсульфоновой кислотой дает соответствующий сульфонилхлорид, который иодировали, используя монохлорид иода. Ароматизацию проводили, используя ΝΒ8, с получением 7-иод-№(2-метокси-5-метилфенил)-1-бензофуран-5-сульфонамида после обработки крезидином.

Гидролиз 7-иод-№(2-метокси-5-метилфенил)-1-бензофуран-5-сульфонамида в щелочном растворе, используя медь в качестве катализатора, приводит к 7-гидрокси-№(2-метокси-5-метилфенил)-1бензофуран-5-сульфонамиду. Реакция с содержащим метилкарбаматную защиту мезилатом 4гидроксипиридина, приводит к метил 4-[(5-{[(2-метокси-5-метилфенил)амино]сульфонил}-1бензофуран-7-ил)окси]пиперидин-1-карбоксилату, который гидролизуется в щелочном растворе, давая названное в заглавие соединение.

- 3 015671

Пример 2 (метаболит соединения примера 1).

И-[7-(4-пиперидинил)окси-1-бензофуран-5-ил]-5-гидроксиметил-2-метоксибензолсульфонамид. Пример 3 (метаболит соединения примера 1).

И-[7-(4-пиперидинил)окси-1-бензофуран-5-ил]-2-гидрокси-5-метилбензолсульфонамид.

Биологические испытания

Способность соединений по изобретению связываться с 5-НТ₆-рецептором и обладать фармацевтической применимостью может быть определена с использованием анализов ίη νίνο и ίη νίίτο, известных в данной области техники.

(а) Анализ на связывание 5-НТ₆

Для 5-НТ₆-рецептора эксперимент по определению сродства к связыванию проводили в клетках НЕК293, трансфецированных 5-НТ₆-рецептором, используя (3Н)-Ь8П в качестве меченого лиганда согласно общему способу, как описано Воекк Р.С. а! а1. №игорйагтасо1оду νοί. 36(4/5) 713-720, 1997.

Материалы

Культура клеток

Клеточную линию НЕК-293, трансфецированную 5-НТ₆-рецептором, культивировали в модифицированной по Дульбекко среде Игла, содержащей 5% диализированной эмбриональной телячьей сыворотки (С1Ьсо ВВЬ 10106-169), 0,5 мМ пирувата натрия и 400 мкг/мл генетицина (С-418) (С1Ьсо ВВЬ 10131019). Клетки пассировали 1:10 дважды в неделю.

Химикаты

Радиолиганд [³Н] ЬБИ 60-240 Ки/ммоль, полученный от Атегкйат Рйагтааа Вю1есй (Бакингемшир, Англия), находился в этаноле и хранился при -20°С. Соединения растворяли в 100% ДМСО и разводили связывающим буфером.

Использованные процессы и оборудование одноразового пользования

Соединения разводили в 96-луночных полипропиленовых планшетах Сок1аг с У-образным дном лунок (Согшпд 1пс. Со81аг, Нью-Йорк, США). Образцы инкубировали в Раскагб Ор0р1а1е (Раскагб ΙπκΙγγιтеШк В.У., Гронинген, Нидерланды). Общее количество добавленного радиолиганда измеряли в 24луночных планшетах Вагех от Раскагб (Раскагб 1п81гцтеп18 В.У., Гронинген, Нидерлады) в присутствии сцинтилляционной жидкости Мюгокст!™ 20 (Раскагб Вюкаепсе. Мериден, Коннектикут, США).

Буфер

Связывающий буфер состоял из 20 мМ НЕРЕ8, 150 мМ ИаС1, 10 мМ МдС1₂ и 1 мМ ΕΌΤΑ, рН 7,4.

Способы

Получение мембран

Клетки выращивали до приблизительно 90% конфлюэнтности в чашках для культивирования ПЛИС 24,5x24,5. Среду отсасывали и после промывания охлажденным льдом РВБ клетки соскабливали, используя 25 мл трис-буфера (50 мМ Тг1к-НС1, 1 мМ ΕΌΤΑ, 1 мМ ЕСТА, рН 7,4) и оконный скребок. Затем клетки разрушали гомогенизатором Ро1у1гоп, и оставшиеся твердые частицы удаляли низкоскоростным центрифугированием, 1000х д в течение 5 мин. В заключение мембраны отделяли высокоскоростным центрифугированием (20000х д), суспендировали в связывающем буфере и замораживали в аликвотах при -70°С.

Связывание радиолиганда

Замороженные клеточные мембраны размораживали, немедленно регомогенизировали, используя гомогенизатор Ро1у1гоп, и связывали со 8РА-гранулами агглютинина пшеничных зародышей (Атегкйат Ы1е 8с1епсек, Кардифф, Англия) в течение 30 мин при непрерывном встряхивании пробирок. По окончании связывания гранулы центрифугировали в течение 10 мин при 1000 д и впоследствии суспендировали в 20 мл связывающего буфера на каждый 96-луночный планшет. Затем инициировали реакцию связыва

- 4 015671 ния добавлением радиолиганда и тестируемых соединений к суспензии гранул-мембран. После инкубации при комнатной температуре аналитические планшеты подвергали сцинтилляционным измерениям. Следовали оригинальному δΡΆ-способу за исключением того, что мембраны получали из клеток НЕК239, экспрессирующих человеческий 5-НТ₆-рецептор, а не из клеток НеЬа (ΌίηΗ ΌΜ, Ζ3\\ΌΓκ1<ί ΡΟ, 6111 68, 8сй1асй1ег 8к, йахгкоп СР, 8тйй Μν. Уайбайоп оГ йитап 5-НТ₆ гесер!огк ехргеккеб ίη НеЬа се11 тетЬгапек: каНгайоп Ьшбшд к!иб1ек, рйагтасо1одюа1 ргоГбек οί к!апбагб СИ8 адеп!к апб 8ΡΑ беуе1ортеп(. Тйе Ир)ойп Сотрапу Тесйшса1 Керой 7295-95-064 1995;27 ЭесетЬег). Специфическое связывание [³Н] Ь8О являлось насыщаемым, тогда как неспецифическое связывание возрастало линейно с концентрацией добавленного радиолиганда. [³Н] Ь8О связывался с высоким сродством с 5-НТ₆-рецепторами. Величина К_б была оценена равной 2,6±0,2 нМ на основе четырех отдельных экспериментов.

Общее связывание при 3 нМ [³Н] Ε8Ό, концентрации радиолиганда, использованной в конкурентных экспериментах, типично составляло 6000 распадов в минуту, и специфическое связывание составляло более чем 70%. 5-НТ вызывал зависящее от концентрации ингибирование [³Н] Е8П-связывания с общим средним значением К₁, равным 236 нМ, при тестировании по двум различным препаратам мембран. Вариабельность между анализами по трем экспериментам показала СУ в 10% со средним значением К₁, равным 173 нМ (8Ό 30) и коэффициентом Хилла, равным 0,94 (8Ό 0,09). Разброс между анализами составлял 3% (п=4). Значения К₁ для соединения примера 1 представлены в табл. 3. Все немеченые лиганды смещали специфическое связывание [³Н] Ε8Ό зависящим от концентрации образом, хотя и с разными эффективностями. Порядок изменения эффективности для соединений был следующим: метиотепин (2 нМ > миансерин (190 нМ) » 5-НТ (236 нМ) > метисергид (482 нМ) > месулергид (1970 нМ).

Определение белка

Концентрации белка определяли с помощью ВюКаб РгоЕеш Аккау (ВгабГогб ΜΜ. Α гар1б апб кепк1йуе те(1юб Гог Не дцапйайоп оГ тюгодгат дцапййек оГ рго!ет и(1Нхлпд Не ргтс1р1е оГ рго!еш-буе Ьтбтд. Апа1 Вюсйет 1976;72:248-54. Бычий сывороточный альбумин использовали как стандарт.

Счет сцинтилляции

Радиоактивность измеряли в сцинтилляционном счетчике Раскагб ТорС’оиЩ™ (Раскагб 1пк1гитеп15. Мериден, Коннектикут, США) при эффективности счета, равной приблизительно 20%. Эффективность счета определяли в отдельных экспериментальных сериях.

Эксперименты с насыщением

В экспериментах с насыщением использовали по крайней мере 6 концентраций радиолиганда в двух экземплярах (0,1-20 нМ [³Н] Б8Э). Специфическое связывание рассчитывали как разницу между общим связыванием и неспецифическим связыванием, которое определяли как связывание радиолиганда в присутствии 5 мкМ лизурида. В_тах и константу диссоциации К_б определяли из нелинейнорегрессионного анализа, используя уравнение 1. Ь_и представляет собой несвязанную концентрацию радиолиганда, а у представляет собой связанное количество.

В пах Ιλι у -------ΙΜ + Κά (уравнение 1)

Конкурентные эксперименты

Общее и неспецифическое связывание радиолиганда определяли в восьми повторах каждого. Образцы, содержащие тестируемое соединение, анализировали дважды при 11 концентрациях. Инкубации проводили при комнатной температуре в течение 3 ч. Значение 1С₅₀, то есть концентрацию тестируемого соединения, которая ингибирует 50% специфического связывания радиолиганда, определяли нелинейнорегрессионным анализом, и значение К₁ рассчитывали, используя способ [Сйепд У.С. Вюсйет. Рйагтасо1. 22, 3099-3108, 19738] уравнения 2.

/Сзо *' = —Г

1+ „ ьл (уравнение 2)

Ь = концентрация радиолиганда;

Кб = сродство радиолиганда.

(а) Анализ на внутреннюю активность 5-НТ6

Антагонисты 5-НТ6-рецептора характеризовали измерением ингибирования 5-НТ-индуцированного увеличения сАМР в клетках НЕК293, экспрессирующих человеческий 5-НТ₆-рецептор (см. Воекк е( а1. (1997) Иеигорйагтасо1оду 36: 713-720). Вкратце, клетки НЕК293/5-НТ₆ высевали в покрытых полилизином 96-луночных планшетах с плотностью 25000/ячейку и выращивали в ΌΜΕΜ (модифицированной по Дульбекко среде Игла) (без фенолового красного), содержащей 5% диализированной эмбриональной телячьей сыворотки, в течение 48 ч при 37°С в инкубаторе с 5% СО₂. Затем среду отсасывали и заменяли на 0,1 мл среды для анализа (Напкк Ва1апсе 8аЙ 8о1ийоп, содержащий 20 мМ ΗΕΡΕ8, 1,5 мМ изобутилметилксантина и 1 мг/мл альбумина бычьей сыворотки). После добавления тестируемых веществ, растворенных в 50 мкл среды для анализа, клетки инкубировали в течение 10 мин при 37°С в инкубаторе с 5% СО2. Затем среду вновь отсасывали и определяли содержание сАМР, используя набор радиоактивного сАМР (Атегкйат Ρйа^тас^а Вю1есй, В1ОТКАК ΡΡΑ559). Эффективность антагонистов устанавливали

- 5 015671 количественно путем определения концентрации, которая вызывала 50% ингибирование 5-НТиндуцированного увеличения сАМР (при [5-НТ]=8-кратному ЕС₅₀), используя формулу 1С50,корр=1С50/(1 + [5НТ]/ЕС50).

Соединение примера 1 имеет селективное сродство к 5-НТ₆-рецепторам со значениями К₁ и 1С₅₀,_коррот 0,5 нМ до 5 мкМ или показывает % ингибирования [³Н] ЬБЭ > 20% при 50 нМ и является антагонистом, агонистом или частичным агонистом 5-НТ₆. Соединение примера 1 показывает хорошую селективность относительно 5-НТ_1а, 5-НТ_2а, 5-НТ_2Ь и 5-НТ_2с (значения см. в табл. 3).

Были использованы дополнительные анализы для соединения примера 1, см. табл. 1.

Таблица 1. Дополнительные анализы, использованные для соединения примера 1

Анализ	Источник	Эталонное соединение	Библиография
₽1	Человеческие рекомбинантные клетки (клетки НЕК-293)	Атенолол	Σθνίη еГ а1. (2002)
р2	Человеческие рекомбинантные (8 £9 клетки)	1С1 118551	ЗтИЬ апб Те1С1ег (1999)
к (КОР)	Мозжечок морской свинки	0 50488	КгпоисЫ апй РазСегпак (1991)
5-НТЗ	Человеческие рекомбинантные (НЕК-293 клетки)	МОЗ 72222	Норе еТ а1. (1996)

Ссылки в табл. 1

ΕΕνίΝ, М.С., МАКЦЬТО, 8., ΜϋΝΤΑΝΕΚ, О., ΑΝΟΕΚ8ΟΝ, В. апД

ΜΑΟΝυ88ΟΝ, Υ. (2002) ТЬе тпуосагсНшп-ргоГесНхе СИу-49 νβτίαηί οί сЬе ЪеГа 1-аЦгепег(рс гесер1ог ехЫЬДз сопзШиЦуе β.οΐίνίίγ апй тсгеазес! ЦезепзЩгаНоп апЦ άοητη ге§и1айоп. <7. В1окС1гет. 277: 30429-30435

8ΜΙΤΗ, С. апД ΤΕΙΤΙ,ΕΗ, М. (1999) Ве1а-Ыос1<ег ββίβοΐΐνϊίγ а1 с1опеЦ Ьишап Ьет.а,-- апЦ ЬеГаз-айгепегрс гесерЩга. СапОоиазс. Огидз Тк.ет., 13 : 123-126.

кшоисш, К. αηά ΡΛ8ΤΕΗΝΛΚ, С.ТС. (1991) Ενίάβηοβ ίοτ κι ορίοίά гесер(ог тпиЮрИсИу ίη Н1е §шпеа ρί§ сегеЬеПит. Енг. 1. Рк.агтасо1., 207:135-141.

ТЮРЕ, А. О., РЕТЕК8, Д.А., ВКОТУВ, А.М., ЬАМВЕКТ, Д.Д. ап<1 ВЬАСКВиКЦ, Т.Р. (1996) СЬагас1ег1гаНоп οί а Ьишап 5-Ьус1гоху1гур1атшез гесер!ог (уре А 015’НТзК-А₃) зиЪитг зГаЫу ехргезаеН ίη НЕК 293 се!1з. ВгО. 5. РНагтасо!, 118: 1237-1245.

(с) Влияние на массу тела и потребление пиши

Способы и материалы Тестируемые соединения

Соединение примера 1 растворяли в 5% (мас./об.) РЕС 400, 0,2% Т\\сеп 80 + 10 мМ ацетатного натриевого буфера, рН 6. Соответствующий раствор использовали в качестве наполнителя. Стабильность растворов контролировали после хранения в течение 14 дней. Растворы готовили дважды в неделю и хранили в морозильной камере. Растворы анализировали на фактические концентрации и устанавливали, что они оставались сходными между двумя анализами.

Животные

Сто (100) самцов крыс Бргадие-ЭаМеу были выращены, используя диету с высоким содержанием жира, в БсапЬиг ВК АВ (Соллентуна, Швеция), которые по прибытию на станцию по уходу за животными фирмы Вюуйгцш весили приблизительно 700 г (возраст 17 недель). После прибытия крыс откармливали и взвешивали в течение приблизительно трех недель. Крыс содержали по одной в стандартных клетках при постоянных комнатных условиях (темп. 22+/-1°С, влажность 40-60%, цикл 12 ч свет/темнота, выключение света в 10 ч утра). Крысы получали тот же корм с высоким содержанием жира (45 ккал% жира, 4,7 ккал/г; Ό12451), который они получали в БсапЬиг. Корма приобретались у Векеагсй П1е15, 1пс., Нью-Джерси, США, состояли из шариков и хранились в сухих и прохладных условиях.

Проведение эксперимента

Отбирали откормленных пищей с высоким содержанием жира животных, которые приобрели наибольшую массу. Данная популяция весила 799±60 г. Отобранные сорок восемь (48) крыс были рандомизированы и поделены на пять терапевтических групп, чтобы получить насколько это возможно гомогенные группы по массе тела. Каждая терапевтическая группа состояла из 12 крыс: Группа 1 - наполнитель, Группа 2 - соединение примера 1-5 мг/кг (11 мкмоль/кг), Группа 3 - соединение примера 1-15 мг/кг (33 мкмоль/кг), Группа 4 - соединение примера 1-30 мг/кг (66 мкмоль/кг). Дополнительные девять (9) крыс

- 6 015671 выделили для измерения действия соединения и фармакокинетики в каждой дозировочной группе параллельно для седьмого и двадцать девятого дней. Исследование начинали измерением базисной линии в течение пяти дней, чтобы адаптировать крыс к методике проведения исследования и к экспериментаторам. Тестируемое соединение вводили перорально один раз в день в 9-10 ч утра в объеме 2,5 мл/кг, то есть в среднем 2 мл на (800 г) крысу. Шарики корма и вес тела взвешивали каждый день в связи с инъекциями (введениями). Бутылки с водой взвешивали раз в неделю. Взвешивания проводили на связанных с компьютером весах Мей1ег То1ебо РВ 5002. Все данные переводились в шаблон Ехсе1.

На двадцать восьмой день отбирали образцы крови для определения сывороточной глюкозы, инсулина, лептина, свободных жирных кислот, триглицеридов, холестерина, НОБ, БЭБ, АБАТ, АБАТ и мочевины. Также определяли гематокрит. Диссектировали и взвешивали эпидидимальную белую жировую ткань, печень и икроножную мышцу.

Фармакокинетика

Описанные выше животные-спутники для воздействия на плазму (3 животных/доза) получали пероральную терапию 5, 15 и 30 мг/кг/бад - Пример 1. На 7 день образцы крови отбирали из хвостовой вены во временных точках: до введения дозы, через 10, 30 мин, 1, 2, 3, 4, 6, 8 или 24 ч после введения дозы. У животных в терапевтической группе 15 мг/кг/бад новые образцы крови отбирали на 28 день в соответствующих временных точках, как в 7 день. Образцы крови (примерно 150 мкл) собирали в гепаринизированные пробирки и помещали на лед до проведения центрифугирования (4000 об/мин, 5 мин, +4°С). До проведения анализа плазму хранили при -20°С. Образцы крови анализировали НРБС и тандемной масс-спектрометрией с ионизацией электроспреем.

Статистика

Потребление пищи и воды и данные по массе тела рассчитывали в граммах и % значений, отвечающих основному обмену, и выражали как среднее +/- ББ и/или +/- БЕМ. Значение, отвечающее основному обмену, в день до начала терапии (день 0) считали репрезентативным, поскольку усреднение значений по всем дням, предшествующим терапии, не меняло результатов.

Данные по массе тела и потреблению пищи статистически анализировали двойным одномерным анализом АИОУА с повторяющимися измерениями (терапия х время) с последующим одинарным анализом ΛΝϋνΛ для сравнения между терапевтическими группами в выбранных временных точках. Измерения клинической биохимии анализировали одинарным анализом АNΟVА с последующим 1-тестом Даннета для проверки значимости терапевтических групп против контроля с наполнителем. Различие между двумя группами рассматривалось как значимое, если Р <0,05. Статистические оценки проводили, используя БРББ для \Ушбо\\ъ.

Результаты Влияние на массу тела

Цель долгосрочного исследования заключалась в том, чтобы установить, приведет ли пролонгированный период терапии, равный четырем неделям, к сохраняющемуся снижению массы тела и, кроме того, в определении минимально эффективной дозы. Дозы выбирали, основываясь на предыдущих срочных и долгосрочных исследованиях с соединением примера 1. Масса тела уменьшалась значительно за счет введения соединения примера 1 на протяжении всего периода терапии (группы с повторенным АNΟVА Р(3,42) = 12,6; Р <0,001) (фиг. 1). Снижение массы тела составляло 3,9, 3,7 и 6,9% для доз 5, 15 и 30 мг/кг, соответственно (1-тест Даннета Р <0,001 для всех групп против наполнителя) (см. табл. 2).

Таблица 2. Сводка о влиянии 28-дневной терапии соединением примера 1 на массу тела ΌΙΘ-крыс

	Однократно перорально мг/кг	η	Масса тела Среднее (г) начальная	50	Масса тела Среднее (г) день 28	5ϋ	Приобретенная масса тела Среднее (г)	Уменьшение грамм	Среднее значение, отвечающее основному обмену (%) день 28		Р	Уменьшение % наполнителя
Наполнитель		12	807	47	867	42	60		107,5	2,1
Пример 1	5	12	816	76	845	82	29	-31	103,5	2,1	Р<0,001	3,9
Пример 1	15	12	804	60	834	65	30	-30	103,7	1,9	Р<0,001	3,7
Пример 1	30	10	806	85	810	76	4	-57	100,6	3,2	Р<0,001	6,9

Приобретенная масса тела рассчитана как масса в 28 день - начало; Уменьшение означает граммы или % против наполнителя в день 28.

Значения Р основаны на значениях, отвечающих основному обмену, (%), используя 1-тест Даннета.

Влияние на потребление пищи

Соединение примера 1 значительно уменьшало потребление пищи на протяжении первых семи дней, как показано на фиг. 2 (группы с повторенным АNΟVА Р(3, 42) = 9,887; Р<0,001). 1-Тест Даннета показал, что дозы 15 и 30 мг/кг значительно отличались от наполнителя (Р<0,001), тогда как доза 5 мг/кг - нет. Таким образом, минимально эффективной дозой является 15 мг/кг. Влияние на прием пищи ослаблялось в период с 8 по 14 дни, но оставалось пониженным в течение остальной части периода терапии, хотя не было статистически значимым (группы Р(3, 42) = 2,459; Р<0,076). Среднее снижение по дням с 15 по 28 составляло 7-12%, но только наибольшая доза действительно достигала статистической значимости (Р<0,035).

- 7 015671

Таблица 3. Биологические данные для соединения примера 1. Ιη νίίτο связывание с человеческим 5-НТ₆-рецептором

Анализ	Мишень	Результаты
Связывание (К,)	5-НТ6	1,2 нМ
Функция (ингибирование сАМР-ой активации 5-НТ)	5-НТ6	2,1 нМ
Селективное связывание (ГО)	5-НТ1а	>1000 нМ (1400 нМ)
5-НТ1Ь	>1000 мМ (3600 нМ)
5-НТ2а	>1000 нМ (5600 нМ)
5-НТ2Ь	440 нМ
5-НТ2с	>1000 нМ (2300 нМ)
Ингибирование 1 мкМ связывания %	βΐ	26, 26
β₂	62, 39
к (КОР)	46, 61 (К_± = 120 нМ, ЕС50 = 3700 нМ)
5-НТЗ	61, 71 (К, 190 нМ)

В табл. 4-6 приведены некоторые значения для соединения известного уровня техники по аналогии со значениями, приведенными в табл. 3 для соединения примера 1.

Таблица 4. Значения, приведенные для примера 148 (гидрохлорид Ы-(7-пиперазин-1-илбензофуран-5-ил)-1-нафтилсульфонамида) из XVО 02/100822. В примере 148 ΝΗ-часть сульфонамидной группы связана с бензофурановым кольцом.

Данные табл. 4 свидетельствуют, что соединение примера 1 обладает большей селективностью к 5НТ₆ относительно 5-НТ2а, 5-НТ2Б и 5-НТ2с по сравнению с соединением примера 148, раскрытым в νθ 02/100822.

Чтобы достичь хорошей селективности к 5-НТ₆ относительно 5-НТ2а, 5-НТ2Б и 5-НТ2с, Κίсвязывание для последних рецепторов должно быть по крайней мере в 100 раз больше по сравнению с 5НТ6-связыванием.

Таблица 5. Значения, приведенные для соединения А (гидрохлорида [7-(пиперидин-4-илокси)бензофуран-5-ил]амида 5-хлортиофен-2-сульфоновой кислоты) и соединения В (Ν-[7-(4пиперидинилокси)-1-бензофуран-5-ил]-2-трифторметилбензолсульфонамида), охватываемых (защищенных), но не раскрытых конкретно в νθ 2004/000828. В обоих соединениях А и В ΝΗ-часть сульфонамидной группы связана с бензофурановым кольцом.

Данные табл. 5 свидетельствуют, что соединение примера 1 обладает как большей селективностью к 5-НТ₆ относительно 5-НТ2а, 5-НТ2Б и 5-НТ2с, так и лучшими значениями β₁, β₂, к (КОР) и 5-НТ3- 8 015671 ингибирования по сравнению с Соединениями А и В, защищенными АО 2004/000828.

Чтобы достичь хорошей селективности к 5-НТ₆ относительно β₁, β₂, к (КОР) и 5-НТ3, % ингибирования для последних должен быть < 70% при 1 мкМ.

Таблица 6. Значения, приведенные для соединения С (№[7-(4-пиперидинил)окси-1-бензофуран-5ил]-2-метокси-6-метилбензолсульфонамида) и соединения Ώ (№[7-(3-пиперидинил)окси-1-бензофуран-5ил]-2-метокси-5-метилбензолсульфонамида), охватываемых ('защищенных), но не раскрытых конкретно в АО 2004/000828. В обоих соединениях С и О 8О₂-часть сульфонамидной группы связана с бензофурановым кольцом.

Мишень	Соединение С	Соединение 0
5-НТб - Κί	26 нМ	14 нМ
5-НТ6 - £Κί	51 нМ	37 нМ
5-НТ2а - Κί	1000 нМ	917 нМ
5-НТ2Ь - Κί	600 нМ	1450 нМ
5-НТ2с - Κί	1250 нМ	1370 нМ

Данные табл. 6 свидетельствуют, что соединение примера 1 обладает большей селективностью к 5НТ₆ относительно 5-НТ2а, 5-НТ2Б и 5-НТ2с по сравнению с соединениями С и от, защищенными в АО 2004/000828.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где К¹ представляет метокси и К² представляет метил; либо К¹ представляет метокси и К² представляет гидроксиметил; либо К¹ представляет гидроксил и К²представляет метил.
2. Применение соединения по п.1 для лечения или профилактики расстройства, связанного с 5-НТ₆рецептором, такого как ожирение, диабет II типа, для уменьшения массы тела и снижения увеличения массы тела.
3. Фармацевтический препарат для лечения или профилактики расстройства, связанного с 5-НТ₆рецептором, включающий соединение по п.1 в качестве активного ингредиента в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.
4. Фармацевтический препарат по п.3 для лечения или профилактики расстройства, такого как ожирение, диабет II типа, для уменьшения массы тела и снижения увеличения массы тела.
5. Способ лечения или профилактики расстройства, связанного с 5-НТ₆-рецептором, такого как ожирение, диабет II типа, для уменьшения массы тела и снижения увеличения массы тела, который включает введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по п.1.
6. Способ модулирования активности 5-НТ₆-рецептора, включающий введение субъекту, нуждающемуся в нем, эффективного количества соединения по п.1.
7. Применение соединения по п.1 для изготовления медикамента для использования в лечении или профилактике расстройства, связанного с 5-НТ₆-рецептором, такого как ожирение, диабет II типа, для уменьшения массы тела и снижения увеличения массы тела.

О Евразийская патентная организация, ЕАПВ

Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2